PT1489082E - Compostos intermediários - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "COMPOSTOS INTERMEDIÁRIOS" 1. Campo da invenção A presente invenção é paraherquamidas substituídas que são úteis como agentes antiparasitários. 2. Descrição do Estado da técnica A marcfortinas compostos são conhecidos, veja-se Journal of the Chemical Society Chemical Communications, 601-602 (1980) para Marcfortina A e Tetrahedron Letters, 22, 1977-1980 ((1981) for Marcfortinas B e C. Estes compostos são metabolitos fúngicos de Penicillium roqueforti. A marcfortinas são estruturalmente relacionadas às paraherquamidas que são também compostos conhecidos.

As paraherquamidas são reveladas em Tetrahedron Letters, 22, 135-136 (1981), e Journal of Antibiotics, 44, 492-497 (1991).Patentes U.S. 4.866.060 e 4.923.867 revelam a utilização das marcfortinas A, B, e C, e certos derivados dos mesmos como úteis para o tratamento e prevenção de doenças parasitárias em animais. O documento WO 92/22555 (publicado em 23 de Dezembro de 1992) genericamente descreve um derivado de marcfortina ou paraherquamida (isto é, fórmula parcial (III) substituída na posição 14 com metilo ou metilo e hidroxi, no entanto não é fornecida nenhuma descrição de como preparar tais compostos 14-metil-14-hidroximarcfortina.

The Journal of Antibiotics, 43, 1380-1386 (1990) revela Paraherquamida A que tem a seguinte estrutura: 2

Marcfortina A tem a seguinte estrutura:

Marcfortina C tem a seguinte estrutura:

Marcfortina D tem a seguinte estrutura: 3 3

CHj 0 documento WO 91/09961 (publicado em 11 de Julho de 1991) revela vários derivados de marcfortina e paraherquamida, e óxidos de 12a-N dos mesmos, bem como a produção de VM 29919 (paraherquamida) e a produção de VM 55596 (o óxido de 12a-N de paraherquamida) entre outros de Penicillium Sp. IMI 332995.

A Patente US 4.873.247 revela derivados de paraherquamida e um estirpe de Penicillium charlessi MF 5123 (ATCC 20841) para a produção de paraherquamida. A

Patente US 4.978.656 (bem como os documentos EP 390532-A, ΕΡ-301742-Am) revela vários derivados sintéticos de paraherquamida bem como a produção de paraherquamida a partir de Penicillium charlessi MF 5123 (ATCC 20841). A publicação Internacional WO 92/22555 (publicado em 23 de dezembro de 1992) genericamente revela compostos 14a-hidroximarcfortina e um processo que usa os compostos 14-hidroxi-14-metilmarcfortina para a produção de fármacos antiparasitários. No entanto, não dá a descrição de qualquer meio de preparação de compostos de 14a-hidroximarcfortina ou 14a-hidroxi-14β-metilmarcfortina. A Publicação Internacional W094/29319 revela várias 14-substituído marcfortinas e derivados das mesmas.

Os compostos 15-alquil-14-hidroxi (III) onde ni é 0 são conhecidos, veja-se a Publicação Internacional W094/29319.

SUMÁRIO DE INVENÇÃO São revelados compostos de 14-hidroxi-2-deoxoparaherquamida de fórmula (XXV) (XXV) 4 ÇH$

>CHg CHj em que R14 é hidrogénio ou C1-4 alquilo; e Ris é hidrogénio ou C1-4 alquilo; e os óxidos de N e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Os compostos reivindicados são preparados por meio de processos conhecidos aos peritos na especialidade a partir de materiais de partida conhecidos aos peritos na especialidade ou que podem facilmente ser preparados a partir compostos conhecidos por meio de métodos conhecidos aos peritos na especialidade. Química conhecida é usada em materiais de partida conhecidos em novas sequências para produzir os novos compostos da invenção. 0 ESQUEMA A revela o processo preferido para produzir os compostos 15-alquil-14-hidroxi (III). 0 composto 14-hidroxi-a,β-insaturado de partida (I) é conhecido, veja-se a Publicação Internacional W094/29319. Os compostos 14-hidroxi-a,β-insaturados (I) podem ser transformados aos correspondentes compostos 15-alquil-17-oxo (II) por meio de reacção com um agentes alquilantes tal como um reagente de Grignard ou alquilcupratos; é preferido que o reagente alquilante ser um reagente de Grignard da fórmula CH3-(CH2) ni-Mg-X0, onde n1 é de 0 a 3 e X0 é halogénio. É preferido que n2 seja 1 e X0 seja -Br. 0 processo preferido é fazer reagir o composto 14-hidroxi-a,β-insaturados (I) com brometo de etilmagnésio e iodeto de cobre (I) sob condições 1,4-adição padrão para produzir os compostos 15-alquil-17-οχο (II). Os compostos 15-alquil-17-oxo (II) são então reduzidos por meios conhecidos aos peritos na 5 especialidade para a redução de um grupo carbonilo a uma fracção alquileno tal como redução com complexo de borano e sulfureto dimetilo ou outra redução de agentes tal como complexo borano e THF ou hidreto de litio e alumínio. É preferido que o complexo de borano e sulfureto de dimetilo seja usado para a redução. Com os compostos 15-alquil-14-hidroxi (III), é preferido que ηχ seja 1. Os compostos 15-alquil-14-hidroxi (III) onde nx é 0 são conhecidos, veja-se a Publicação Internacional W094/29319. 0 ESQUEMA D revela um processo para produzir os compostos de 15-alquilo paraherquamida B (XIII). Os compostos de 15-alquil-14-hidroxi de partida (III) são oxidados aos compostos de 15-alquil-16,16-dioxo Marcfortina A correspondentes (XI) por meio de reacção com oxigénio na presença de um catalisador tal como platina em carbono. Os compostos de 15-alquil-16,17-dioxo Marcfortina A (XI) então têm o anel de dioxo de seis membros reduzido a um anel de cinco membros produz os compostos 15-alquil-l6-oxo paraherquamida B (XII) por meio de tratamento com um perácido preferentemente perácido m-cloro benzóico. Os compostos de 15-alquil-l6-oxo paraherquamida B (XII) então têm o grupo 16-oxo removido pela utilização de um agente de redução, preferentemente hidreto de litio alumínio /cloreto de alumínio para dar os compostos desejados de 15-alquilo paraherquamida B (XIII). Com os compostos de 15-alquilo paraherquamida B (XIII), é preferido que ni seja 0. O ESQUEMA H revela um processo para produzir as correspondentes 14-hidroxi 2-deoxoparaherquamidas (XXV).

Alternativamente, e preferentemente, os derivados de 14-hidroxi-2-desoxoparaherquamida B (XXV) podem ser preparados em 40-70 % de rendimento por meio de processo exposto no ESQUEMA O. O ESQUEMA O revela que a amida (XXVI) é feita reagir com um cloroformato de alquilo apropriado ou derivado anidrido por meio de tratamento com hidreto de potássio ou hidreto de sódio para fornecer a correspondente 6 imida (XXVII), que é reduzida com borohidreto de sódio para dar o correspondente composto 2-hidroxi (XXVIII) . Na imida (XXVII) o azoto em N-l tem que ser protegido (veja-se R17 de fórmula XXVII) como é conhecido aos peritos na especialidade até após a redução do C-2 carbonilo. Os grupos de protecção preferidos incluem fenilo, 4-nitrofenilo e t-butilfluorenilmetilo. 0 composto 2-hidroxi (XXVIII) é então desprotegido por meio de vários métodos conhecidos aos peritos na especialidade para dar o correspondente composto 1,2-desidro (XXIX), que pode ser reduzido com borohidreto de sódio para dar as correspondentes 2-desoxomarcfortina (XXIII), 14-hidroxi-2-desoxoparaherquamida B e 14-hidroximarcfortina A (XXV) em 40-70 % de rendimento global. Quando Ri7 é t-butilo, um maneira mais curta de obter a 14-hidroxi-2-desoxoparaherquamida B (XXV) é por fazer reagir a imida (XXVII) com borohidreto de sódio submetendo a refluxo em glyme ou diglyme.

Os compostos ΑΝΤΙPARASITÁRIOS refere-se a e inclui 14-hidroxi-2-desoxoparaherquamida B (XXV), the óxidos de N dos mesmos e farmaceuticamente aceitável sais dos mesmos onde tal exist.

Os compostos ΑΝΤΙPARASITÁRIOS são aminas, e como tal formam sais de adição de ácido quando são feitos reagir com ácidos de suficiente força. Sais farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de tanto ácidos inorgânicos como orgânicos. Os sais farmaceuticamente aceitáveis são preferidos às correspondentes aminas livres uma vez que produzem compostos que são mais água solúvel e mais cristalina. Os sais farmaceuticamente aceitáveis preferidos incluem sais dos seguintes ácidos metanosulfónico, clorídrico, bromídrico, sulfúrico, fosfórico, nítrico, benzóico, cítrico, tartárico, fumárico, maleico, CH3-(CH2)n-COOH onde n é 0 a 4, HOOC- (CH2) n-COOH onde n é como definido acima. 7

Os compostos ΑΝΤΙPARASITÁRIOS são aminas e por as fazer reagir com perácidos tal como ácido m-cloroperbenzóico os correspondentes óxidos de 12a-N são obtidos como é conhecido aos peritos na especialidade.

Os compostos ANTIPARASITÁRIOS desta invenção são inesperadamente potentes agentes antiparasitários contra endo e ecto parasitas, particularmente helmintos e artrópodes, que causam numerosas doenças parasitárias em seres humanos, animais, e plantas.

As doenças parasitárias podem ser causadas por endoparasitas ou ectoparasitas. Endoparasitas são aqueles parasitas que vivem dentro do corpo do hospedeiro, dentro de um órgão (tal como o estômago, pulmões, coração, intestinos, etc.) ou simplesmente sob a pele. Ectoparasitas são aqueles parasitas que vivem na superfície externa do hospedeiro, mas ainda retira nutrientes do hospedeiro.

As doenças endoparasitárias geralmente referidas como helmintíase são devido a infecção do hospedeiro com vermes parasitas conhecido como helmintos. A helmintíase é um problema económico mundial prevalente e sério devido a infecção de animais domésticos tal como suíno, ovelha, cavalos, gado, cabras, cães, gatos, e aves. Muitas destas infecções são causadas pelo grupo de vermes descrito como nematodes que causam doenças em várias espécies de animais em todo o mundo. Estas doenças são com frequência graves e podem resultar na morte do animal infectado. Os géneros mais comuns de nematodes que infectam os animais referidos acima são Haemonchus, Trichostrongilus, Ostertagia, Nematodirus, Cooperia, Ascaris, Bunostomum, Oesophagostomum, Chabertia, Trichuris, Strongilus, Trichonema, Dictyocaulus, Capillaria, Heterakis, Toxocara, Ascaridia, Oxiuris, Ancilostoma, Uncinaria, Toxascaris, e Parascaris. Muitos parasitas são específicos de espécies (infectam somente um hospedeiro) e a maioria também têm um local preferido de infecção dentro do animal. Assim

Haemonchus e Ostertagia primariamente infectam o estômago enquanto Nematodirus e Cooperia guase sempre atacam os intestinos. Outros parasitas preferem-se a residir no coração, olhos, pulmões, vasos sanguíneos, e similares enquanto ainda outros são parasitas subcutâneos. A helmintíase pode levar a fraqueza, perda de peso, anemia, dano intestinal, malnutrição, e dano a outros órgãos. Se estas doenças forem deixadas sem tratamento pode resultar na morte do animal.

Infecções por artrópodes ectoparasitas tais como carrapatos, ácaros, piolho, moscas de estábulo, moscas-do-chifre, varejeiras, pulgas, e similares são também um problema sério. A infecção por estes parasitas resulta em perda de sangue, lesões de pele, e pode interferir com os hábitos de alimentação normais assim causando perda de peso. Estas infecções podem também resultar em transmissão de doenças graves tal como encefalite, anaplasmose, varíola suína, e similares que podem ser fatais.

Animais podem ser infectados por diversas espécies de parasitas ao mesmo tempo uma vez que a infecção por um parasita pode enfraquecer o animal e torna-lo mais susceptível a infecção por uma segunda espécie de parasita. Assim um composto com um amplo espectro de actividade é particularmente vantajoso no tratamento de estas doenças. Os compostos ANTIPARASITÁRIOS têm inesperadamente alta actividade contra estes parasitas, e além disso, são também activos contra Dirofilaria em cães, Nematospiroides e Syphacia em roedores, insectos mordedores e larvas de dípteros migratórias tal como Hypoderma sp. em gado, e Gastrophilus em cavalos.

Os compostos ANTIPARASITÁRIOS são também úteis contra endo e ecto parasitas que causam doenças parasitárias em seres humanos. Exemplos de tais endoparasitas que infectam o homem incluem parasitas gastrointestinais dos géneros Ancilostoma, Necator, Ascaris, Strongiloides, Trichinella, 9

Capillaria, Trichuris, Enterobius, e similares. Outros endoparasitas que infectam o homem são encontrados no sangue ou em outros órgãos. Exemplos de tal parasitas são os vermes de filária Wucheria, Brugia, Onchocerca, e similares bem como estágios extra intestinais dos vermes intestinais Strongilides e Trichinella. Ectoparasitas que parasitam os seres humanos incluem artrópodes tal como carrapatos, pulgas, ácaros, piolho, e similares e, como com animais domésticos, as infecções por estes parasitas pode resultar em transmissão de doenças graves e mesmo fatais. Os compostos ANTIPARASITÁRIOS são activos contra estes endo e ecto parasitas e para além disso são também activo contra insectos mordedores e outras pragas dípteras que incomodam seres humanos. Os compostos ANTIPARASITÁRIOS quando administrada por via oral ou parentérica são administrados a um taxa de dosagem de desde 0,05 até 20 mg/kg de animal peso corporal.

Os compostos ANTIPARASITÁRIOS são também úteis contra pragas domésticas comuns tais como Blatella sp. (barata), Tineola sp. (traças), Attagenus sp. (besouro do carpete), Musca domestica (mosca doméstica) e contra Solenopsis Invicta (formiga de fogo importada).

Os compostos ANTIPARASITÁRIOS são além disso úteis contra pragas de agricultura tal como afídios (Acyrthiosiphon sp.), gafanhotos, e bicudo do algodoeiro bem como contra pragas de insectos que atacam grãos armazenados tal como Tribolium sp. e contra estágios imaturos de insectos que vivem no tecido vegetal. Os compostos ANTIPARASITÁRIOS são também úteis como um nematocida para o controlo de nematodes de solo que podem ser agriculturalmente importantes.

Para utilização como um agente antiparasitário em animais os compostos ANTIPARASITÁRIOS podem ser administradas internamente por via oral ou por injecção, ou topicamente como um remédios líquidos ou como um champô. 10

Para administração oral, os compostos ANTIPARASITÁRIOS pode ser administrada em cápsula, comprimido, ou forma de pistola doseadora ou alternativamente podem ser misturadas na alimentação dos animais. As cápsulas, comprimidos, e pistolas doseadoras são compreendidas do ingrediente activo em combinação com um apropriado veiculo portador tal como amido, talco, estearato de magnésio, ou fosfato de di-cálcio. Estas formas farmacêuticas unitárias são preparadas por meio de mistura intima do ingrediente activo com adequada ingredientes inertes em pó fino incluindo diluentes, cargas, agentes desintegrantes, agentes de suspensão, e/ou aglutinantes tal que uma solução de mistura uniforme ou suspensão é obtida. Um ingrediente inerte é um que não reagirá com os compostos ANTIPARASITÁRIOS e que é não tóxico ao animal a ser tratado. Ingredientes inertes adequados incluem amido, lactose, talco, estearato de magnésio, gomas vegetais e óleos, e similares. Estas formulações podem conter uma quantidade amplamente variável dos ingredientes activos e inactivos dependendo de numerosos factores tais como o tamanho e tipo das espécies animais a ser tratadas e o tipo e gravidade da infecção. O ingrediente activo pode também ser administrado como um aditivo à alimentação simplesmente misturar os compostos ANTIPARASITÁRIOS com o alimento ou por aplicar o composto à superfície do alimento. Alternativamente o ingrediente activo pode ser misturado com um portador inerte e a composição resultante pode então ser misturada com o alimento ou alimentada directamente ao animal. Portadores inertes adequados incluem farinha de milho, farinha de cítricos, resíduos de fermentação, grãos de soja, grãos secos e similares. Os ingredientes activos são intimamente misturados com estes portadores inertes por meio de moagem, agitação, trituração, ou tombamento tal que a composição final contém desde 0,001 até 5,0 % em peso do ingrediente activo. 11

Os compostos ΑΝΤΙPARASITÁRIOS podem alternativamente ser administrados por via parentérica por meio de injecção de uma formulação que consiste em ingrediente activo dissolvido num portador inerte liquido. Injecção pode ser intramuscular, intra-ruminal, intratraqueal, ou subcutânea. A formulação injectável consiste no ingrediente activo misturado com um portador inerte liquido apropriado. Portadores liquidos aceitáveis incluem os óleos vegetais tal como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de gergelim e similares bem como solventes orgânicos tais como solcetal, glicerol formal e similares. Como uma alternativa, as formulações aquosas parentéricas podem também ser usadas. Os óleos vegetais são os portadores liquidos preferidos. As formulações são preparadas pela dissolução ou suspensão do ingrediente activo no portador liquido tal que a formulação final contém desde 0,005 até 20 % em peso do ingrediente activo.

Aplicação tópica dos compostos ANTIPARASITÁRIOS é possível através da utilização de um medicamento líquido ou um shampoo que contém os compostos ANTIPARASITÁRIOS como uma solução ou suspensão aquosa. Estas formulações geralmente contêm um agente de suspensão tal como bentonita e normalmente também conterão um agente antiespumante. Formulações que contêm desde 0,005 até 20 % em peso do ingrediente activo são aceitáveis. As formulações preferidas são aquelas que contêm desde 0,5 até 5 % em peso dos compostos ANTIPARASITÁRIOS.

Os compostos ANTIPARASITÁRIOS são primariamente úteis como agentes antiparasitários para o tratamento e/ou prevenção de helmintíase em animais domésticos tais como gado, ovelha, cavalos, cães, gatos, cabras, suíno, e aves. São também úteis na prevenção e tratamento de infecções parasitárias destes animais por ectoparasitas tal como carrapatos, ácaros, piolho, pulgas e similares. São também eficazes no tratamento de infecções parasitárias de seres 12 humanos. No tratamento de tais infecções os compostos ANTIPARASITÁRIOS podem ser usados individualmente ou em combinação com entre si ou com outros agentes antiparasitários não relacionados. A dosagem dos compostos ANTIPARASITÁRIOS requeridos para melhores resultados depende de diversos tais como a espécie e o tamanho do animal, o tipo e a gravidade da infecção, o método de administração e os COMPOSTOS ANTIPARASITÁRIOS particulares usados. A administração oral dos compostos ANTIPARASITÁRIOS uma nível dose de desde 0,005 até 50 mg por kg de peso corporal do animal numa dose única ou em várias doses espaçadas um poucos dias, geralmente dá bons resultados. Uma dose única de um dos compostos ANTIPARASITÁRIOS normalmente dá excelente controlo, no entanto doses repetidas podem ser dadas para combater a re-infecção ou para espécies de parasita que são incomumente persistentes. As técnicas para administrar os compostos ANTIPARASITÁRIOS a animais são conhecidas aos peritos no campo veterinário.

Os compostos ANTIPARASITÁRIOS podem também ser usados para combater pragas de agricultura que atacam lavouras no campo ou em armazenamento. Os compostos ANTIPARASITÁRIOS são aplicados para tais usos como sprays, pós, emulsões e similares às plantas em crescimento ou as lavouras colhidas. As técnicas para aplicar os compostos ANTIPARASITÁRIOS desta maneira são conhecidos aos peritos na especialidade de agricultura. A dosagem exacta e frequência de administração depende dos COMPOSTOS ANTIPARASITÁRIOS particulares usados, a condição particular a ser tratada, a gravidade da condição a ser tratada, a idade, o peso, a condição física geral do particular paciente, outra medicação que o indivíduo possa estar a tomar como é bem conhecido aos peritos na especialidade e pode ser mais precisamente determinada pela medição do nível em sangue ou concentração dos compostos ANTIPARASITÁRIOS no sangue do paciente e/ou a resposta do 13 paciente à condição particular a ser tratada.

DEFINIÇÕES E CONVENÇÕES

As definições e explicações a seguir são para os termos como é utilizado por todo este documento incluindo tanto a memória descritiva como as reivindicações.

I. CONVENÇÕES PARA AS FÓRMULAS E DEFINIÇÕES DE VARIÁVEIS A fórmula químicas que representam vários compostos ou fragmentos moleculares na memória descritiva e reivindicações pode conter substituintes variáveis além de características estruturais expressamente definidas. Estes substituintes variáveis são identificados por uma letra ou uma letra seguida por um subscrito numérico, por exemplo, "Zi" ou "Ri" onde "i" é um número inteiro. Estes substituintes variáveis são monovalentes ou bivalentes, isto é, representam um grupo unido à fórmula por uma ou duas ligações químicas. Por exemplo, um grupo Zl representaria uma variável bivalente se estivesse unido à fórmula CH3-C (=Zi)H. Grupos Ri e Rj representariam substituintes variáveis monovalentes se estivessem unidos à fórmula CH3-CH2-C(Ri) (Rj)-H. Quando as fórmulas químicas são desenhadas de uma maneira linear, tal como aquelas acima, os substituintes variáveis contidos em parênteses são unidos ao átomo imediatamente à esquerda da variável substituinte abrangida entre parêntesis. Quando dois ou mais substituintes variáveis consecutivos são abrangidos em parênteses, cada um dos substituintes variáveis consecutivos é ligado ao átomo imediatamente anterior à esquerda que não é abrangido entre parênteses. Assim, na fórmula acima, tanto Ri como Rj são ligados ao átomo de carbono anterior. Também, para qualquer molécula com um sistema estabelecido de numeração de átomo de carbono, tal como esteróides, estes átomos de carbono são designados como Ci, onde "i" é o número inteiro correspondente ao número de átomo de carbono. Por exemplo, C6 representa a posição 6 ou número de átomo de carbono no núcleo esteróide 14 como tradicionalmente designado pelos peritos na especialidade de química de esteróide. Do mesmo modo o termo "R6" representa um substituinte variável (monovalente ou bivalente) na posição C6. Fórmulas químicas ou porções das mesmas desenhadas de uma maneira linear representam átomos numa cadeia linear. 0 símbolo em geral representa uma ligação entre dois átomos na cadeia. Assim CH3-0-CH2-CH(Ri)-CH3 representa um composto 2-substituído-l-metoxipropano. De uma maneira similar, o símbolo "=" representa uma dupla ligação, por exemplo, CH2=C(Ri)-0-CH3, e o símbolo representa uma tripla ligação, por exemplo, HC=C-CH(Ri)-CH2-CH3. Grupos carbonilo são representados em uma de duass maneira: -C0-ou —C (=0)—, com a primeiro sendo preferido para simplicidade. Fórmulas químicas de compostos cíclicos (anel) ou fragmentos moleculares podem ser representadas de uma maneira linear. Assim, o composto 4-cloro-2-metilpiridina pode ser representado de maneira linear por N*=C(CH3) -CH=CC1-CH=C*H com a convenção de que os átomos marcados com um asterisco (*) são ligados entre si resultando na formação de um anel. Do mesmo modo, o fragmento molecular cíclico, 4-(etil)-1-piperazinilo pode ser representado por —N*— (CH2) 2-N (C2H5)-CH2-C*H2.

Uma estrutura rígida cíclica (anel) para quaisquer compostos no presente documento define uma orientação com respeito ao plano do anel para substituintes unidos a cada átomo de carbono do composto rígido cíclico. Para compostos saturados que têm dois substituintes unidos a um átomo de carbono que é parte de um sistema cíclico, -C(Xi) (X2)- os dois substituintes podem estar em uma posição axial ou equatorial com relação ao anel e podem mudar entre axial/equatorial. No entanto, a posição dos dois substituintes com relação ao anel e entre si permanece fixa. Enquanto substituinte às vezes pode estar no plano do 15 anel (equatorial) em vez de acima ou abaixo do plano (axial), um substituinte está sempre acima do outro. Em fórmulas estruturais químicas que representam tais compostos, um substituinte (Xi) que está "abaixo" de outro substituinte (X2) será identificado como a estar na configuração alfa (a) e é identificados por uma união por linha quebrada, pontilhada ou hachurada lao átomo de carbono, isto é, pelo símbolo "---" ou 0 correspondente substituinte unido "acima" (X2) do outro (Xi) é identificado como a estar na configuração beta (β) e é indicada por um uma união por linha contínua ao átomo de carbono.

Quando um substituinte variável é bivalente, as valências podem ser tomadas juntamente ou separadamente ou ambos na definição da variável. Por exemplo, uma variável Ri unida a um átomo de carbono como -C(=Ri)- poderia ser bivalente e ser definida como oxo (assim a formar um grupo carbonilo (-C0-) ou como dois substituintes variáveis monovalentes unidos separadamente α-Ri-j e β-Ri-k. Quando uma variável bivalente, Ri, é definida que consiste em dois substituintes variáveis monovalentes, a convenção usada to define a variável bivalente é da forma "cx-Ri-j : β-Ri-k" ou algum variante do mesmo. Em tal caso tanto α -Ri-j como β-Ri-k são unidos ao átomo de carbono para dar -C(a-Ri-j) (β-Ri-k)-. Por exemplo, quando a variável bivalente R6, C(=R6)- é definida que consiste em dois substituintes variáveis monovalentes, os dois substituintes variáveis monovalentes são α -R6-i : β-Ρ6-2···θί-Ρ6-9: β-Ρ6-10, etc, dando -C (oí-R6—i) ( β—R6—2) —... —C (a—Re-g) (β-Re-io) etc. Do mesmo modo, para a variável bivalente Rn, -C(=Rn)-, dois substituintes variáveis monovalentes são α-Rin:β-Β.11-2 . Para um substituinte de anel para o qual separados α e β orientações não existem (por exemplo, devido à presença de uma dupla ligação carbono-carbono no anel), e para um substituinte unido a um átomo de carbono que não é parte de 16 um anel a convenção acima é ainda usada, mas as designações a e β são omitidas.

Igual que uma variável bivalente pode ser definida como dois substituintes variáveis monovalentes separados, dois substituintes variáveis monovalentes separados podem ser definidos que são tomados juntamente para formar uma variável bivalente. Por exemplo, na fórmula - Ci(R±)H- C2(Rj)H- (Ci e C2 definem arbitrariamente um primeiro e segundo átomo de carbono, respectivamente) Ri e Rj podem ser definidos por ser tomados juntamente para formar (1) uma segunda ligação entre C2 e C2 ou (2) um grupo bivalente tal como oxa (-0-) e a fórmula deste modo descreve um epóxido. Quando Ri e Rj são tomados juntamente para formar uma entidade mais complexa, tal como o grupo -X-Y-, então a orientação da entidade é tal que Cl na fórmula acima é unido a X e C2 é unido a Y. Assim, por convenção a designação "... Ri e Rj são tomados juntamente para formar -CH2—CH2-0-C0-..." significa uma lactona em que o carbonilo é unido a C2. No entanto, quando designado "... Rj e Ri são tomados juntamente para formar -C0-0-CH2-CH2- a convenção significa uma lactona em que o carbonilo é unido a C2. 0 conteúdo de átomos de carbono de substituintes variáveis é indicado de uma de duas maneiras. 0 primeiro método usa um prefixo à totalidade do nome da variável tal como "C1-C4", onde ambos "1" e "4" são números inteiros que representam o número mínimo e máximo de átomos de carbono na variável. 0 prefixo é separado da variável por um espaço. Por exemplo, "C1-C4 alquil" representa alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, (incluindo formas isoméricas dos mesmos a menos que um indicação expressa ao contrário seja dada) . Sempre que este prefixo único é dado, o prefixo indica a totalidade do conteúdo de átomos de carbono da variável a ser definida. Assim C2-C4 alcoxicarbonilo descreve um grupo CH3- (CH2) n-0-C0- onde n é zero, um ou dois. Pelo segundo método o conteúdo de átomos de carbono 17 17 é indicada em parenteses de somente cada porção da definição separadamente a abranger a designação "Ci-Cj" e a colocar imediatamente (não colocando espaço) antes da porção da definição a ser definida. Por esta convenção opcional (C1-C3)alcoxicarbonilo tem o mesmo significado como C2-C4 alcoxicarbonilo por que o "C1-C3" se refere somente ao conteúdo de átomos de carbono do grupo alcoxi. De forma similar enquanto tanto C2~C6 alcoxialquilo como (C1-C3) alcoxi (C1-C3) alquilo definem grupos alcoxialquilo que contêm desde 2 até 6 átomos de carbono, as duas definições diferem uma vez que a primeira definição permite que a porção alcoxi ou alquilo sozinha contenha 4 ou 5 átomos de carbono enquanto a última definição limita estes grupos a 3 átomos de carbono.

Quando as reivindicações contêm um substituinte regularmente complexo (cíclico), no final da frase que nomeia/designa esse substituinte particular estará um notação em (parenteses) que corresponderá ao mesmo nome/designação num dos esquemas que também representarão a fórmula estrutural química desse substituinte particular. II. DEFINIÇÕES COMPOSTOS ΑΝΤΙPARASITÁRIOS refere-se a e inclui compostos 14-hidroxi 2-deoxoparaherquamida (XXV), óxidos de N dos mesmos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos onde tais existam.

Todas as temperaturas são em graus Centígrados. THF refere-se a tetrahidrofurano.

Solução salina refere-se a uma solução de cloreto de sódio aquosa saturada.

Cromatografia (coluna e flash cromatografia) refere-se a purificação/separação de compostos expressa como (suporte, eluente). É entendido que as fracções apropriadas são agrupadas e concentradas para dar os compostos desejados. RMN refere-se a espectroscopia de ressonância 18 magnética nuclear (protão), desvios químicos são notificados em redução de campo em ppm (õ) a partir de tetrametilsilane. MS refere-se a espectrometria de massa expressa como m/e, mz ou massa/unidade de carga. [M + H]+ refere-se ao ião positivo de um parente mais um átomo de hidrogénio. EI refere-se a impacto de electrões. Cl refere-se a ionização química. FAB refere-se a bombardeamento rápido átomo. HRMS refere-se a espectrometria de massa de alta resolução.

Farmaceuticamente aceitável refere-se a aquelas propriedades e/ou substâncias que são aceitáveis ao paciente desde um ponto de vista farmacológico/toxicológico e à química farmacêutica de fabrico desde um ponto de vista físico/ químico com relação à composição, formulação, estabilidade, aceitação do paciente e biodisponibilidade.

Sais de anião farmaceuticamente aceitáveis incluem sais dos seguintes ácidos metanosulfónico, clorídrico, bromídrico, sulfúrico, fosfórico, nítrico, benzóico, cítrico, tartárico, fumárico, maleico, CH3-(CH2) n-COOH onde n é de 0 a 4, HOOC- (CH2) n-COOH onde n é como definido acima.

Quando pares de solvente são usados, as razões de solventes usada são volume/volume (v/v).

Quando a solubilidade de um sólido num solvente é usada a razão do sólido para o solvente é peso/volume (p/v) .

EXEMPLOS

Sem elaboração adicional, acredita-se que um perito na especialidade pode, usando a descrição anterior, praticar a presente invenção ao seu grau mais completo. Os seguintes exemplos pormenorizados descrevem como preparar os vários compostos e/ou realizar os vários processos da invenção e são para serem interpretados como meramente ilustrativos, e não limitações da divulgação anterior de nenhuma maneira 19 possível. Os peritos na especialidade reconhecerão prontamente variações apropriadas dos procedimentos ambos para os reagentes e para condições de reacção e técnicas. Procedimento N° 1 Produção e Isolamento de Processo de Fermentação de Semente Marcfortina A:

As fermentações de semente são inoculadas usando plugues de agar de isolado de Penicillium sp. UC 7780 (NRRL 18887) armazenado em azoto líquido. Três plugues são descongelados e usados como inoculo. GS-7 é composto de glucose e farinha de semente de algodão (vendida sob a marca comercial "Pharmamedia" por Traders Protein, Procter & Gamble Oilseed Products Co., Memphis, TN, EUA). Água de torneira não suplementada é usada para hidratar os componentes de meio e o meio é ajustado até o pH = 7,2 com hidróxido de amónio. O meio é dispensado em balões de sistema fechado não reflectido a 300 ml por balão de 1000 ml, e esterilizado por meio de autoclave a 121° durante 30 minutos. Cada balão de sistema fechado contendo 300 ml de meio GS-7 é inoculado com três plugues de agar de Penicillium sp. UC 7780 (NRRL 18887) e agitado num agitador giratório a 250 rpm durante 36 h a 22°.

Processo de Fermentação de Semente Secundário:

As culturas de semente maduras são usadas como inoculo para o meio secundário numa taxa de semente de 0,3 %. O meio secundário é composto de monohidrato de glucose (vendido sob a marca comercial Cerelose por C.P.C. International) 25 g, farinha de semente de algodão (vendida sob a marca comercial "Pharmamedia") 25 g, MgCl2*6H20 329,8 mg, MnS04*H20 11,4 mg, FeS04-7H20 3,2 mg, Na2Mo04*2H20 1,8 mg, CaCl2*2H20 367, 6 mg, NaCl 84,2 mg, KC1 5,8 mg, ZnS04‘7H20 0, 1 mg, CoCl2‘6H20 0, 1 mg, CuS04-5H20 3, 1 mg, e anti-espuma de silicone (vendida sob a marca comercial SAG-471 Antifoam) 0,5 ml por litro de água de grau de osmose reversa. Os componentes de meio suficientes para 200 litros de meio de semente secundário são hidratados em água de 20

grau de osmose reversa a um volume q.s. de 190 litros num fermentador de 250 L. Após a formulação, o pH do meio é ajustado até o pH 7,2 com NH4OH, e então o meio é esterilizado a 121 °C durante 30 minutos. Dois balões de sistema fechado da cultura de semente primária madura são usados como inoculo numa taxa de semente de 0,3 %. A cultura de semente secundária é incubada a 22 °C, com 125 sim de aeração, 5 psig de contrapressão, e 250 rpm durante 36 horas.

Processo de Fermentação de Produção: O meio de produção é composto de melaço de beterraba 50 g, farinha de peixe (vendida sob a marca comercial Menhaden Select Fish Meai) 16 g, extracto de levedura (vendida sob a marca comercial Fidco) 10 g, MgCl2*6H20 329, 8 mg, MnS04*H20 11,4 mg, FeS04-7H20 3,29 mg, Na2Mo04*2H20 1,8 mg, CaCl2*2H20 367, 6 mg, NaCl 84,2 mg, KC1 5,8 mg,

ZnS04-7H20 0, 1 mg, CoC12-6H20 0, 1 mg, CuS04*5H20 3, 1 mg, e anti-espuma de silicone (vendida sob a marca comercial SAG-471 Antifoam) 0,5 ml por litro de água de grau de osmose reversa.

Os componentes de meio suficiente para 5,000 litros de meio são hidratados em água de grau de osmose reversa a um volume q.s. de 4,700 litros num fermentador de 5,000 L. Após a formulação, o pH do meio é ajustado até o pH 7,0 com KOH, e então o meio é esterilizado a 123 °C durante 30 minutos. A cultura de semente secundária madura é usada como inoculo numa taxa de semente de 1,0 %. A cultura é incubada a 22 °C, com 2,500 sim de aeração, 5 psig de contrapressão, e 250 rpm durante 96 horas.

Isolamento de Marcfortina A: O volume de fermentação de 4900 L é colhido por meio da passagem através de um misturador de cisalhamento alto ao recipiente de colheita. Em seguida à transferência, 4 % p/v de terra diatomácea e 1/2 volume de cloreto de metileno são adicionados. A solução colhida é então filtrada usando 21 uma prensa de filtro. 0 bolo de filtro é lavado 2 vezes com um volume de 10 % de cloreto de metileno. O filtrado obtido é decantado para remover a fase de água (aquosa) . A fase de cloreto de metileno rico em produto restante é então concentrada a um volume de 44 L. O concentrado é então polido usando um volume de concentrado de 20 % (9 L) de cloreto de metileno e terra diatomácea num filtro. O concentrado polido de 53 L é purificado mais para separar Marcfortina A de outros componentes por meio de cromatografia em sílica gel e cristalização.

Antes da cromatografia, o concentrado polido é dividido em quatro alíquotas aproximadamente iguais. Cada alíquota é submetida a cromatografia numa coluna recentemente empacotada de 9" de diâmetro preparada a partir de 25 Kg de sílica gel seca (volume de leito de 59 L). As colunas carregadas são eluídas com 120 L de 10 % de acetona em cloreto de metileno, 120 L de 20 % de acetona em cloreto de metileno, 120 L de 30 % de acetona em cloreto de metileno, 160 L de 40 % de acetona em cloreto de metileno, e 130 L de acetona que colhem os eluatos de 30 e 40 % como fracções de 20 L. Os eluatos são monitorizados por TLC, usando, por exemplo, um sistema de solvente compreendido de 6 % de isopropanol e 0,3 % de hidróxido de amónio em cloreto de metileno para desenvolver placas de sílica gel Whatman LK6DF. As fracções de Marcfortina A (contendo uma quantidade pequena de Marcfortina D que se submete a cromatografia com D) são cristalizadas a partir de acetona. As fracções apropriadas (40-100 L) são concentradas sob pressão reduzida a um volume de aproximadamente 5 L. A solução (ou suspensão leve) é então transferida a um evaporador giratório e a concentração continuada sob pressão reduzida. Diversas porções de 1 L de acetona são adicionadas durante o curso da concentração até o cloreto de metileno ser completamente deslocado. A suspensão de 22 acetona resultante (volume de aproximadamente 1 L) é refrigerada durante a noite, e os cristais de Marcfortina A são colhidos e lavados com diversas porções pequenas de acetona fria, e secos sob vácuo. Tais cristais podem ser contaminados com diversas percentagens de Marcfortina D. A recristalização repetida a partir de cloreto de metileno/acetona (que desloca o cloreto de metileno como descrito) propicia Marcfortina A pura.

Isolamento de marcfortina D: 0 volume de fermentação de 4900 L é colhido por meio da passagem através de um misturador de cisalhamento alto ao recipiente de colheita. Em seguida à transferência, 4 % p/v de terra diatomácea e 1/2 volume de cloreto de metileno são adicionados. A solução colhida é então filtrada usando uma prensa de filtro. O bolo de filtro é lavado 2 vezes com um volume de 10 % de cloreto de metileno. O filtrado obtido é decantado para remover a fase de água (aquosa) . A fase de cloreto de metileno rico em produto restante é então concentrada a um volume de 44 L. O concentrado é então polido usando um volume de concentrado de 20 % (9 L) de cloreto de metileno e terra diatomácea num filtro. O concentrado polido de 53 L é purificado mais para separar Marcfortina A de outros componentes por meio de cromatografia em silica gel e cristalização.

Antes da cromatografia, o concentrado polido é dividido em quatro alíquotas aproximadamente iguais. Cada aliquota é submetida a cromatografia numa coluna recentemente empacotada de 9" de diâmetro preparada a partir de 25 Kg de silica gel seca (volume de leito de 59 L). As colunas carregadas são eluidas com 120 L de 10 % de acetona em cloreto de metileno, 120 L de 20 % de acetona em cloreto de metileno, 120 L de 30 % de acetona em cloreto de metileno, 160 L de 40 % de acetona em cloreto de metileno, e 130 L de acetona que colhem os eluatos de 30 e 40 % como 23 fracções de 20 L. Os eluatos são monitorizados por TLC, usando, por exemplo, um sistema de solvente compreendido de 6 % de isopropanol e 0,3 % de hidróxido de amónio em cloreto de metileno para desenvolver placas de sílica gel Whatman LK6DF. As fracções de marcfortina A contendo marcfortina D são concentradas. Um grama deste material é dissolvido em ácido fórmico (20 ml, 93 %) e deixado em repouso a 20-25° durante 16 h. Após os componentes voláteis serem removidos com pressão reduzida, o resíduo é submetido a cromatografia em sílica gel (1:20 MeOH:CH2Cl2) para dar marcfortina D (100 mg) como um sólido branco. A estrutura do produto pode ser confirmada por espectroscopia de RMN e espectrometria de massa. HRMS (FAB) M/Z [M+H] calculado para C28H35N3O3 + H: 462,2756; medido: 462,2739.

Procedimento IA Produção e Isolamento de Marcfortinas A e C.

Processo de Fermentação de Semente Primário:

As fermentações de semente são inoculadas usando plugues de agar de isolado de Penicillium sp. UC 7780 (NRRL 18887) armazenado em azoto líquido. Três plugues são descongelados e usados como inoculo durante 100 ml de GS-7 meio de semente. GS-7 é composto de glucose e farinha de semente de algodão (vendida sob a marca comercial "Pharmamedia" por Traders Protein, Procter & Gamble Oilseed Products Co., Memphis, TN, EUA) cada um adicionado numa concentração de 25 g/L de água de torneira. Após a formulação, o pH de GS-7 é ajustado até 7,2 usando NH4OH. O meio é submetido a autoclave em volumes de 100 ml em balões de fermentação não reflectidos de 500 ml durante 30 min. GS-7 estéril é inoculado como descrito acima e agitado a 250 rpm durante 35-58 h a 23 °C.

Processo de Fermentação de Produção (balão de agitação):

As culturas de semente maduras são usadas como inoculo para o meio de produção numa taxa de semente de 1 %. O meio de produção é composto de glucose 45 g, caseína 24 enzimaticamente digerida (vendida sob a marca comercial Peptonized Milk Nutrient por Sheffield Products, Norwich, N.Y., EUA) 25 g, extracto de levedura (vendida sob a marca comercial BACTO Yeast Extract Code: 0127 por Difco

Laboratories, Detroit, MI) 2,5 g por litro de água de torneira. Após a formulação, o pH do meio de produção é ajustado até 7,0 usando hidróxido de potássio. Este meio é então submetido a autoclave durante 30 min em volumes de 100 ml contidos em balões de fermentação reflectidos de 500 ml. O meio de produção estéril é inoculado como descrito acima, e agitado durante 7-14 dias a 250 rpm a 21 °C. Processo de Fermentação de Produção (tanques de Labraferm): As culturas de semente maduras são usadas como inoculo para o meio de produção estéril numa taxa de semente de 0,5 %. O meio de produção é descrito acima. Após o ajuste do pH até 7,0 usando KOH, 10 L deste meio são submetidos a autoclave durante 90 min em tanques de Labraferm de 12 L (New Brunswick Scientific Co., Inc.). Os tanques são inoculados numa taxa de semente de 0,5 % e agitados a 500 rpm a 20 °C durante 5-9 dias. A taxa de fluxo de ar é mantida entre 10-15 L/min.

Isolamento de Marcfortinas A e C: O caldo de fermentação completo (35 L) é macerado a velocidade baixa num misturador Waring comercial grande e então misturado com um volume igual de cloreto de metileno. A mistura é armazenada durante a noite sob refrigeração e então submetida a centrifugação para quebrar a emulsão. A camada de cloreto de metileno limpa resultante é retirada por drenagem e evaporada sob pressão reduzida. Uma solução concentrada do resíduo (37,4 g) em cloreto de metileno é aplicada a uma coluna de suspensão de sílica gel (1 Kg) empacotada em cloreto de metileno. A coluna é eluída com concentrações crescentes de acetona em cloreto de metileno (10 %, 20 %, 30 %, 40 %, e 50 % de acetona) . As fracções são monitorizadas por TLC e fracções apropriadas evaporadas 25 e cristalizadas a partir de acetona para dar Marcfortina A e Marcfortina C.

Procedimento 1B Produção e Isolamento de Marcfortinas A

e C

Processo de Fermentação de Semente:

As fermentações de semente são inoculadas usando plugues de agar de isolado de Penicillium sp. UC 7780 (NRRL 18887) armazenado em azoto liquido. Três plugues são descongelados e usados como inoculo durante 100 ml de GS-7 meio de semente. GS-7 é composto de glucose e farinha de semente de algodão (vendida sob a marca comercial "Pharmamedia" por Traders Protein, Procter & Gamble Oilseed Products Co., Memphis, TN, EUA) cada um adicionado numa concentração de 25 g/L de água de torneira. Após a formulação, o pH de GS-7 é ajustado até 7,2 usando NH4OH. O meio é submetido a autoclave em volumes de 100 ml em balões de fermentação não reflectidos de 500 ml durante 30 min. GS-7 estéril é inoculado como descrito acima e agitado a 250 rpm durante 35-58 h a 23 °C.

Processo de Fermentação de Produção (Balão de Agitação):

As culturas de semente maduras são usadas como inoculo para o meio de produção numa taxa de semente de 1 %. O meio de produção é composto de glucose 20 g, glicerol 15 ml, farinha de semente de algodão (vendida sob a marca comercial "Pharmamedia" por Traders Protein, Procter & Gamble Oilseed Products Co., Memphis, TN, EUA) 20 g, soybean meai 10 g, e K2HP04 3 g por litro de água de torneira. Após a formulação, o pH do meio de produção é ajustado até 6,8 usando hidróxido de potássio. Este meio é então submetido a autoclave durante 30 min em volumes de 100 ml contidos em balões de fermentação reflectidos de 500 ml. O meio de produção estéril é inoculado como descrito acima, e agitado durante 7-14 dias a 250 rpm a 21 °C. Processo de Fermentação de Produção (tanques de Labraferm): As culturas de semente maduras são usadas como inoculo 26 para o meio de produção estéril numa taxa de semente de 0,5 %. O meio de produção é descrito acima. Após o ajuste do pH até 7,0 usando KOH, 10 L deste meio são submetidos a autoclave durante 90 min em tanques de Labraferm de 12 L (New Brunswick Scientific Co., Inc.). Os tanques são inoculados numa taxa de semente de 0,5 % e agitados a 500 rpm a 20 °C durante 5-9 dias. A taxa de fluxo de ar é mantida entre 10-15 L/min.

Isolamento de Marcfortinas A e C: O caldo de fermentação completo (35 1) é macerado a velocidade baixa num misturador Waring comercial grande e então misturado com um volume igual de cloreto de metileno. A mistura é armazenada durante a noite sob refrigeração e então submetida a centrifugação para quebrar a emulsão. A camada de cloreto de metileno limpa resultante é retirada por drenagem e evaporada sob pressão reduzida. Uma solução concentrada do residuo (37,4 g) em cloreto de metileno é aplicada a uma coluna de suspensão de sílica gel (1 Kg) empacotada em cloreto de metileno. A coluna é eluída com concentrações crescentes de acetona em cloreto de metileno (10 %, 20 %, 30 %, 40 %, e 50 % de acetona) . As fracções são monitorizadas por TLC e fracções apropriadas evaporadas e cristalizadas a partir de acetona para dar Marcfortina A e Marcfortina C. Síntese de marcfortinas 14-substituídas O tratamento de marcfortina A (Fórmula la, Esquema I) com iodeto de cianogénio produz uma mistura (Fórmula 5) de 16a-iodo-17β-cianomarcfortina A e 16β-ίοάο-17α- cianomarcfortina A que pode ser separada por meio de cromatografia em sílica gel. Dehidroiodinação desta mistura com hidróxido de potássio em metanol leva a 16,17-dehidro-17-cianomarcfortina A (Fórmula 6) que é oxidada por dióxido de selénio a 17-cetomarcfortina A (Fórmula 7). A introdução de uma ligação dupla entre C15 e C16 é conseguida por selenação da posição-16 (cloreto de fenil selenilo e LDA) 27 seguido por oxidação do intermediário selénio com peróxido de hidrogénio. Eliminação subseguente do ácido fenilselénico dá 15,16-dehidro-17-cetomarcfortina A (Fórmula 8) . Este composto é um intermediário chave na sintese de 14a-hidroximarcfortina A (Fórmula 10) a gual pode ser convertida por meio de duas vias sintéticas distintas.

Na primeira via, a oxidação alilica da posição-14 deste material usando bis(trimetilsilil)amida de potássio e 2-fenilsulfonil-3-feniloxaziridina é acompanhada por oxidação da posição-16 para dar uma mistura das 14a-hidroxi-15, 16-dehidro-17-cetomarcfortina A (Fórmula 9a) e 14, 15-dehidro-l6-hidroxi-17-cetomarcfortina A (Fórmula 9b) requeridas. Estes dois produtos são separados por meio de cromatografia em silica gel. O composto de Fórmula 9a é reduzido por meio de hidreto de litio alumínio em THF a 14a-hidroximarcfortina A (Fórmula 10), um composto do título desta divulgação de invenção. Alternativamente, o composto de Fórmula 8 (Esquema J) é oxidado com dióxido de selénio em dioxano para propiciar uma mistura 2:1 de 14a-hidroxi-15,16-dehidro-17-cetomarcfortina A (Fórmula 9a) e 15,16-dehidro-14,17-dicetomarcfortina A (Fórmula 11). Estas são separadas por meio de cromatografia em sílica gel. Cada um destes compostos é independentemente convertido a 14a-hidroxi-17-cetomarcfortina A (Fórmula 12a) : o composto de Fórmula 9a por redução da ligação dupla 15,16 com litio trietilborohidreto; o composto de Fórmula 11 por redução do carbonilo na posição 14 com borohidreto de litio. No último caso, uma guantidade igual de 14p-hidroxi-17-cetomarcfortina A (Fórmula 12b) é também produzida a qual é removível por meio de cromatografia. O composto de fórmula 12a é reduzido com complexo de tetrahidrofurano (THF) borano para dar 14a-hidroximarcfortina A (Fórmula 10). 14a-Hidroxi-15,16-dehidro-17-cetomarcfortina A (Fórmula 9a, Esquema K) é reduzido com trietilboro-hidreto 28 de lítio a 14a-hidroxi-17-cetomarcfortina A (Fórmula 12a). Esta é transformada por meio de uma oxidação de Swern usando cloreto de oxalilo e DMSO a 14,17-dicetomarcfortina A (Fórmula 13). 0 tratamento com brometo de metilmagnésio numa reacção de Grignard produz uma mistura de 14a-hidroxi-14p-metil-17-cetomarcfortina A (Fórmula 14a) e 14p-hidroxi-14cx-metil-17-cetomarcf ortina A (Fórmula 14b) que são separadas por meio de cromatografia em sílica gel. A razão dos produtos é dependente do solvente usado: cloreto de metileno dá uma razão de 6:1, enquanto THF dá uma razão de >50:1, respectivamente. A redução do composto de Fórmula 13a com hidreto de lítio alumínio dá 14a-hidroxi-14p-met-ilmarcfortina A (Fórmula 15). A oxidação de Swern de 14cx-hidroximarcf ort ina A (Fórmula 10, Esquema L) proporciona 14-cetomarcfortina A (Fórmula 16), que é reduzida com borohidreto de sódio a 14-β-hidroximarcfortina A (Fórmula 17) . O tratamento de 14-cetomarcf ort ina A (Fórmula 16) com brometo de etilmagnésio numa reacção de Grignard produz 14a-hidroxi-14-etilmarcfortina A (Fórmula 19). O tratamento de 14a-hidroximarcfortina A (Fórmula 10) com ácido m-cloroperoxibenzóico produz N-óxido de 14a-hidroximarcfortina A (Fórmula 18) . 14p-metilmarcfortina A pode ser preparada a partir de 14a-hidroxi-14β-metil-marcfortina A por meio de dehidroxilação. Assim, 14a-hidroxi-14β-metilmarcfortina A é tratada com fenilclorotionoformato na presença de base. Este derivado de tionoformato de 14α-1ιίάηοχί-14β-ιτιβίί1ιτΐ3ησίοηΡίη3 A é reduzido com tri-n-butilestanho hidreto para produzir 14β-metilmarcfortina A.

Alternativamente, 14a-hidroximarcfortina A pode ser sintetizada a partir de marcfortina A (Esquema M). O tratamento de marcfortina A com bicarbonato de sódio e iodo em tetrahidrofurano aquoso produz 17-cetomarcfortina A (Fórmula 7), que pode ser disulfenilado usando LDA e 29 disulfeto de fenilo para dar 16-ditiofenil-17-ceto marcfortina A (Fórmula 20, ESQUEMA M) em 60 % de rendimento a partir de marcfortina A. A oxidação com ácido m-cloroperoxibenzóico produz 16-tiofenil-16-sulfoxifenil-17-cetomarcfortina A (Fórmula 21), que elimina em submissão a refluxo de tolueno para produzir 15,16-dehidro-l6-tiofenil-17-cetomarcfortina A (Fórmula 22). O tratamento subsequente com ácido m-cloroperoxibenzóico produz 15,16-dehidro-16-sufoxifenil-17-cetomarcfortina A (Fórmula 23) , que passa por rearranjo usando dietil amina em metanol para produzir 15,16-dehidro-14a-hidroxi-17-cetomarcfortina A (Fórmula 9a) . 14cx-Hidroxi-15oí-metilmarcf ort ina A (Fórmula 35,

Esquema N) pode ser sintetizada a partir de 15,16-dehidro-14cx-hidroxi-17-cetomarcfortina A (Fórmula 9a, Esquema N) . Assim, 15, 16-dehidro-14cx-hidroxi-17-cetomarcf ortina A (Fórmula 9a) é tratada com brometo de metilmagnésio ou dimetilcobre de litio para produzir 15a-metil-14a-hidroxi-17-cetomarcfortina A (Fórmula 34) , que é reduzido com complexo de borano-dimetilsulfeto para produzir 15cx-metil-14a-hidroximarcfortina A (Fórmula 35) . 15a-Metil-14a- hidroxi-17-cetomarcfortina A (Fórmula 34) é transformada por meio de uma oxidação de Swern usando cloreto de oxalilo e DMSO a 15a-metil-14,17-dicetomarcfortina A (Fórmula 36). 0 tratamento com brometo de metilmagnésio numa reacção de Grignard produz 15a-Metil-14oí-hidroxi-14 β-ιηβόί1-17- cetomarcfortina A (Fórmula 37), que é reduzida com complexo de borano-dimetilsulfeto para produzir 15a-metil-14a- hidroxi-14β-metilmarcfortina A (Fórmula 38).

Estes procedimentos anteriormente descritos podem ser usados para produzir derivados de marcfortina B, C e D14-substituidos. PREPARAÇÃO 1 16-Iodo-17-cianomarcfortina A como uma mistura de diastereómeros (Fórmula 5)

Iodeto de cianogénio sólido (11,7 g, 76,5 mmol) é 30 adicionado a uma solução de marcfortina A (10,5 g, 22 mmol) em CHC13 (150 ml) e a mistura de reacção aquecida sob refluxo até a totalidade da marcfortina A ter sido consumida (cerca de 5 h) . A solução preta resultante é arrefecida até 20-25°, diluida com CH2C12 (100 ml), lavada com NaHC03 sat, e então lavada com uma solução de Na2S03. A fase orgânica é separada, seca em MgS04, e concentrada até a secura. O sólido bruto resultante é submetido a cromatografia em sílica gel (3:2-EtOAc: hexano) para dar 16-Iodo-17-cianomarcfortina A (12,5 g, 90 %) como um sólido branco polvorento. A estrutura do produto pode ser confirmada por espectroscopia de ressonância magnética nuclear e espectrometria de massa. PREPARAÇÃO 2 16,17-Dehidro-17-cianomarcfortina A (Fórmula 6) 16-Iodo-17-cianomarcfortina A (9,5 g, 15 mmol) é dissolvida em MeOH (150 ml), e KOH aquoso (45 %, 3 ml) é adicionado. A mistura de reacção é agitada a 20-25° durante 2 h. Água é adicionada e o precipitado branco resultante colhido por filtração, lavado com água, e seco durante a noite sob vácuo para dar 16,17-Dehidro-17-cianomarcfortina A (6,6 g, 75 %) como um pó branco. A estrutura do produto pode ser confirmada por espectroscopia de ressonância magnética nuclear e espectrometria de massa. MS (FAB) M/Z [M+H] : 501. PREPARAÇÃO 3 17-Cetomarcfortina A (Fórmula 7)

Dióxido de selénio (2,9 g, 26 mmol) é adicionado a uma solução de 16,17-Dehidro-17-cianomarcfortina A (6,0 g, 10 mmol) em 95 % EtOH (100 ml) e a mistura de reacção agitada a 20-25° durante 2 h. A reacção é extinta por meio da adição de NaHC03 sat (100 ml) . A mistura resultante é extraída com CH2C12 (2 x 200 ml) . Os extractos são combinados, secos (MgS04) , e concentrados para dar 7 g de produto bruto. Este material é purificado por meio de cromatograf ia em sílica gel (EtOAc) para dar 17- 31 cetomarcfortina A (3,6 g, 75 %) como um sólido branco. A estrutura do produto pode ser confirmada por espectroscopia de ressonância magnética nuclear e espectrometria de massa. HRMS (FAB) M/Z [M+H] calculado para C28H33N3O5+H: 492,2498; medido: 492,2478.

Alternativamente, e mais preferentemente, o composto do titulo pode ser sintetizado usando ácido p-toluenosulfónico. Assim, monohidrato de ácido p- toluenosulfónico (1 g) é adicionado a uma solução de 16,17-dehidro-17-cianomarcfortina A (10 g) em 95 % de MeOH (50 ml) e a mistura de reacção agitada a 20-25° durante 1 h. Trietil amina (2 ml) é adicionada à mistura e o solvente foi evaporado. O resíduo é triturado com solução de carbonato de sódio aquoso a 10 % (100 ml) e o sólido é filtrado e seco para dar o composto do título como um sólido (90 % de rendimento). A estrutura do produto pode ser confirmada por espectroscopia de ressonância magnética nuclear e espectrometria de massa. PREPARAÇÃO 4 15,16-Dehidro-l7-cetomarcfortina A (Fórmula 8)

Uma solução de diisopropilamida de lítio é preparada a partir de uma solução de n-butil lítio (1,6 M, 9,9 ml, 15,4 mmol) em hexano e diisopropilamina (2,2 ml, 15,7 mmol). Esta é diluída com tetrahidrofurano anidro (THF, 20 ml) e arrefecida a -78°. Uma solução de 17-cetomarcfortina A (2,0 g, 4,1 mmol) em THF anidro (20 ml) é adicionada gota a gota e a mistura de reacção deixada que se aquecesse até -40° durante 1 h. A mistura é de novo arrefecida até -78° e tratada gota a gota com cloreto de fenil selénio (19 mg, 5,2 mmol) em THF (10 ml) . Após 5 min a reacção é extinta com NaHC03 sat, extraída com CH2C12, seca (MgS04) , e concentrada para dar um sólido amarelo que pode ser usado sem purificação adicional. Este material é dissolvido em THF (150 ml) e tratado com H202 (30 %, 1,5 ml) a 0°. O banho de arrefecimento é removido e a mistura de reacção 32 agitada durante 30 min a 20-25°. A reacção é extinta por meio da adição de NaOH (1 N, 100 ml) . A mistura é extraída com CH2C12 (2 X 200 ml). Os extractos são combinados, secos (MgS04), e concentrados para dar produto bruto. Este material é purificado por meio de cromatografia em sílica gel (EtOAc) para dar 15,16-dehidro-17-cetomarcfortina A (1,3 g, 65 %) como um sólido branco. A estrutura do produto é confirmada por meio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear e espectrometria de massa. HRMS (FAB) M/Z [M+H] calculado para C28H31N305+H: 490,2342; medido: 490,2345. PREPARAÇÃO 5 14a-Hidroxi-15,16-dehidro-17-cetomarcfortina A (Fórmula 9a) Usando Oxaziridine Chemistry

Uma solução de bis(trimetilsilil)amida de potássio em tolueno (0,5 Μ, 1 ml, 0,5 mmol) é adicionada gota a gota a uma solução de 15,16-dehidro-17-cetomarcfortina A (66 mg, 0,14 mmol) em THF (2 ml) a -78°. A solução turva amarela pálida resultante é deixada que se aquecesse até -40° durante 1 h. A mistura de reacção é arrefecida -78°, agitada 15 min, e então tratada por meio da adição gota a gota de uma solução de 2-fenilsulfonil-3-feniloxaziridina (42 mg, 0,16 mmol) em THF (2 ml). A mistura é agitada 5 min após o qual a reacção é extinta por meio da adição de NaHC03. A mistura é extraída com CH2C12 (2 x 25 ml) . Os extractos são combinados, secos (MgS04) , e concentrados para dar bruto material. Este é purificado por meio de cromatografia de camada fina preparativa (sílica gel, EtOAc) para dar 14a-Hidroxi-15,16-dehidro-17- cetomarcf ortina A (8 mg, 12 %) como um sólido branco. A estrutura pode ser confirmada por espectroscopia de ressonância magnética nuclear e espectrometria de massa. HRMS (FAB) M/Z [M+H] calculado para C28H31N306+H: 506, 2291; medido: 506,2280. 14,15-Dehidro-l6-hidroxi-17- cetomarcfortina A (14 mg, 20 %) é também obtido a partir da camada. A sua estrutura pode ser confirmada por 33 espectroscopia de ressonância magnética nuclear.

PREPARAÇÃO 6 14cx-Hidroxi-15,16-dehidro-17-cetomarcfortina A (Fórmula 9a), 15,16-dehidro-14,17-dicetomarcfortina A (Fórmula 11) e 14,15-dehidro-16,17-dicetomarcfortina A (Fórmula 24) Usando Dióxido de selénio 15,16-Dehidro-17-cetomarcfortina A (1,29 g, 2,6 mmol) é dissolvida em p-dioxano (30 ml) e tratada com dióxido de selénio (390 mg). A mistura é submetida a refluxo durante 1 h e o solvente evaporado a vácuo. O resíduo é triturado com cloreto de metileno (30 ml) e filtrada. O filtrado é concentrado, e o resíduo submetido a cromatografia em sílica gel (1:20 MeOH:EtOAc) para dar 14a-hidroxi-15, 16-dehidro-17-cetomarcfortina A (430 mg, 32 %) como um sólido. 15.16- Dehidro-14,17-dicetomarcfortina A (Fórmula 11, 212

mg, 16 %) é também obtido a partir da cromatografia. 14,15-Dehidro-16,17-dicetomarcfortina A (Fórmula 24, 106 mg, 8 %) é também obtida a partir da cromatografia. A estrutura destes produtos pode ser confirmada por espectroscopia de ressonância magnética nuclear e espectrometria de massa. PREPARAÇÃO 7 15,16-dehidro-l4,17-dicetomarcfortina A (Fórmula 11) 14a-Hidroxi-15,16-dehidro-17-cetomarcfortina A (60 mg, Fórmula 9a) é dissolvida em cloreto de metileno (10 ml) e tratada com dióxido de manganês (60 mg). A mistura é agitada a 20-25° durante lhe concentrada. A cromatografia de camada fina preparativa do resíduo em sílica gel (50 % cloreto de metileno em EtOAc) propiciou 15,16-dehidro-

14.17- dicetomarcfortina A (Fórmula 11, 35 mg, 60 %). A estrutura destes produtos pode ser confirmada por espectroscopia de ressonância magnética nuclear e espectrometria de massa. PREPARAÇÃO 8 14a-hidroximarcfortina A (Fórmula 10) 14a-Hidroxi-15,16-dehidro-17-cetomarcfortina A (20 mg, 0, 040 mmol) é dissolvida em THF (5 ml) e tratada com uma solução de hidreto de lítio alumínio (1 M, 0,11 ml, 0,11 34 mmol) em THF a 0o. A mistura é agitada durante 0,5 h a 0o após o qual uma solução de NaHC03 (10 %) é adicionada. A mistura é extraída com CH2C12 (2 x 10 ml). Os extractos são combinados, secos (MgS04) , e o solvente removido sob pressão reduzida. A cromatografia de camada fina preparativa do resíduo em sílica gel (10 % de MeOH em

EtOAc) dá o composto do título, HRMS (FAB, M/Z) [M+H] calculado para C28H35N305+H = 494,2655, medido = 494,2653. PREPARAÇÃO 9 14a-Hidroxi-17-cetomarcfortina A (Fórmula 12a)

14a-Hidroxi-15,16-dehidro-17-cetomarcfortina A (fórmula 9a, 50 mg, 0,1 mmol) é dissolvida em THF (5 ml) e tratadas com uma solução de trietilborohidreto de lítio em THF (1 M, 0,7 ml) a -78°. A mistura é agitada durante 0,5 h a - 78°. A reacção é extinta por meio da adição de MeOH (1 ml), e a mistura é concentrada. O sólido resultante é submetido a cromatografia em sílica gel (1:20 MeOH:CH2Cl2) para dar 14a-hidroxi-17-ceto marcfortina A (43 mg, 86 %) como um sólido branco. A estrutura do produto pode ser confirmada por espectroscopia de RMN e espectrometria de massa. HRMS (FAB) M/Z [M+H] calculado para C28H33N306 + H: 508,2447; medido: 508,2437. PREPARAÇÃO 10 Preparação de 14a-hidroxi-17-cetomarcfortina A (Fórmula 12a) a partir de 15,16-dehidro-14,17-dicetomarcfortina A (Fórmula 11) 15,16-Dehidro-14,17-dicetomarcfortina A (470 mg, 0,93 mmol) é dissolvida em THF e tratada com uma solução de borohidreto de lítio em THF (1 M, 2 ml) a temperatura ambiente. A mistura é agitada durante 2 h após o qual uma solução de NaHC03 (10 %) é adicionada. A mistura é extraída com CH2C12 (2 x 20 ml). Os extractos são combinados, secos (MgS04) , e o solvente evaporado. O resíduo contém uma mistura dos dois epímeros que são facilmente separados por meio de cromatografia em sílica gel (1:20 MeOH: EtOAc): 14a-hidroxi-17-cetomarcfortina A (90 mg, 19 %) e 14β- 35 hidroxi-17-cetomarcfortina A (94 mg, 20 %) . A estrutura de ambos produtos pode ser confirmada por espectroscopia de RMN e espectrometria de massa.

PREPARAÇÃO 11 Preparação de 14a-hidroximarcfortina A (Fórmula 10) a partir de 14a-hidroxi-17-cetomarcfortina A (Fórmula 12a) 14a-Hidroxi-17-cetomarcfortina A (413 mg, 0,81 mmol) é dissolvida em THF (20 ml) e tratada com uma solução de complexo de borano THF em THF (1 M, 2,43 ml) a 0o. A mistura é agitada durante 2,25 h. A mistura é agitada durante 0,5 h após o qual MeOH (3 ml) é adicionado. Após o solvente ser evaporado, o resíduo é submetido a cromatografia em sílica gel (1:16 MeOH: EtOAc) para dar 14a-hidroximarcf ortina A (250 mg, 92 % de rendimento com base no material de partida recuperado) e 14a-hidroxi-17-cetomarcfortina A (material de partida, 140 mg, 34 %). PREAPARAÇÃO 12 14,17-Dicetomarcfortina A (Fórmula 13)

Uma solução de cloreto de oxalilo (40 ml) em CH2C12 anidro (5 ml) é tratada com sulfóxido de dimetilo (45 ml) a -78°. A mistura é agitada durante lha -78°. Uma solução de 14oí-hidroxi-17-cetomarcf ortina A (27 mg) em CH2C12 (2 ml) é adicionada gota a gota. A mistura de reacção é agitada 20 min a -78°. Trietilamina (0,3 ml) é adicionada à mistura de reacção que é deixada que se aquecesse até a temperatura ambiente durante 20 min. A mistura é dividida em partições entre 10 % de Na2C03 (10 ml) e CH2C12 (10 ml) . A camada orgânica é seca (MgS04) e concentrada. O resíduo é submetido a cromatografia em sílica gel (1:20 MeOH:CH2Cl2) para dar 14,17-Dicetomarcfortina A (22 mg, 80 %) como um sólido branco. A estrutura do produto pode ser confirmada por espectroscopia de RMN e espectrometria de massa. HRMS (FAB) M/Z [M+H] calculado para C28H3iN306 + H: 506, 2291; medido: 506,2280.

PREPARAÇÃO 13 14cx-Hidroxi-14β-metil-17-cetomarcfortina A (Fórmula 14a) 36

Uma solução de 14,17-Dicetomarcfortina A (16 mg, 0,032 mmol) em CH2C12 (5 ml) a -78° é tratada com uma solução de brometo de metilmagnésio (3 M, 0,16 ml, 0,48 mmol) em Et20 a -78°. A mistura resultante é agitada durante 0,5 h a -78°. A reacção é extinta por meio da adição de 10 % de

Na2C03 (umas poucas gotas). A mistura foi diluída com CH2C12 (10 ml), seca (MgS04) , e concentrada. O resíduo é submetido a cromatografia em sílica gel (1:20 MeOH:CH2C12) para dar 14a-hidroxi-14 p-metil-17-cetomarcf ortina A (8 mg, 50 %,

Rf=0,25) como um sólido branco. A estrutura do produto pode ser confirmada por espectroscopia de RMN e espectrometria de massa. HRMS (FAB) M/Z [M+H] calculado para C29H35N306 + H: 522,2604; medido: 522,2620. Também obtido a partir da camada é 14p-hidroxi-14a-metil-17-cetomarcfortina A (1,2 mg, 7 %, Rf=0,4) como um sólido branco. A estrutura do produto pode ser confirmada por espectroscopia de RMN e espectrometria de massa. HRMS (FAB) M/Z [M+H] calculado para C29H35N306 + H: 522,2604; medido: 522,2630. A razão de 6:1 de produtos assim obtida é aumentada a mais de 50:1 e o rendimento aumentado a 80 % guando THF é usado como o solvente de reacção no lugar de CH2C12. PREPARAÇÃO 14 14a-hidroxi-14β-metilmarcfortina A (Fórmula 15)

Uma solução de 14a-hidroxi-14p-metil-17-ceto-marcfortina A (5 mg, 0,01 mmol) em THF (5 ml) é tratada com uma solução de Hidreto de lítio alumínio (1M, 0,03 ml, 0,03 mmol) em THF a 0o. A mistura é agitada durante 0,5 h a 0o após o gual uma solução de NaHC03 (10 %) é adicionada. A mistura é extraída com CH2C12 (2x5 ml). Os extractos são combinados, secos (MgS04), e o solvente evaporado. A cromatografia de camada fina preparativa do resíduo em sílica gel (1:20 MeOH:CH2Cl2) propiciou 14o(-hidroxi-14p-metilmarcfortina A (2 mg, 40 %) . A estrutura do produto pode ser confirmada por espectroscopia de RMN e 37 espectrometria de massa. HRMS (FAB) M/Z [M+H] calculado para C29H37N3O5 + H: 508,2811; medido: 508,2816. PREPARAÇÃO 15 14-Cetomarcfortina A (Fórmula 16)

Uma solução de cloreto de oxalilo (150 ml) em CH2C12 anidro (20 ml) é tratada com DMSO (170 ml) a -78°. A mistura é agitada durante lha -78°. Uma solução de 14a-hidroximarcfortina A (110 mg) em CH2C12 (5 ml) é adicionada gota a gota. A mistura de reacção é agitada 20 min a -78°. Trietilamina (1 ml) é adicionada à mistura de reacção que é deixada que se aquecesse até a temperatura ambiente durante 20 min. A mistura é dividida em partições entre 10 % de

Na2C03 (20 ml) e CH2C12 (20 ml) . A camada orgânica é seca (MgS04) e concentrada. O resíduo é submetido a cromatografia em sílica gel (1:25 MeOH:CH2Cl2) para dar 14-cetomarcfortina A (82 mg, 75 %) como um sólido branco. A estrutura do produto pode ser confirmada por espectroscopia de RMN e espectrometria de massa. HRMS (FAB) M/Z [M+H] calculado para C28H33N305 + H: 492,2498; medido: 492,2510. PREPARAÇÃO 16 14β-Hidroximarcfortina A (Fórmula 17)

Uma solução de 14-cetomarcfortina A (10 mg) em MeOH (2 ml) é tratada com borohidreto de sódio (5 mg) a 0o. A mistura é agitada durante 0,5 h a 0 o após o qual uma solução de NaHC03 (10 %) é adicionada. A mistura é extraída com CH2C12 (2 x 10 ml). Os extractos são combinados, secos (MgS04) , e o solvente evaporado. A cromatografia de camada fina preparativa do resíduo em sílica gel (1:16 MeOH:EtOAc) propicia 14β-hidroximarcfortina A (5 mg, 50 %). A estrutura do produto pode ser confirmada por espectroscopia de RMN e espectrometria de massa. HRMS (FAB) M/Z [M+H] calculado para C28H35N305 + H: 494,2655; medido: 494,2653. PREPARAÇÃO 17 N-óxido de 14a-hidroximarcfortina A (Fórmula 18)

Uma solução de 14a-hidroximarcfortina A (15mg) em CH2C12 (3 ml) é tratada com ácido m-cloroperoxibenzóico (15 mg) a 0o. Após a mistura ser agitada durante 0,5 h a 0 °C, 38

tratada com trietil amina (30 ml) e concentrada. A cromatografia de camada fina preparativa do resíduo em sílica gel (1:8 MeOH:CH2Cl2) propicia N-óxido de 14a-hidroximarcfortina A (12 mg, 80 %) . A estrutura do produto pode ser confirmada em espectrometria de massa. HRMS (FAB) M/Z [M+H] calculado para C28H35N3O6 + H: 510,2604; medido: 510,2615. PREPARAÇÃO 18 14a-Hidroxi-14β-etilmarcfortina A (Fórmula 19)

Uma solução de 14-cetomarcfortina A (25 mg, 0,05 mmol) em THF (5 ml) a -7 8° é tratada com uma solução de brometo de etilmagnésio (3 M, 0,15 ml, 0,45 mmol) em Et20 a -78°. A mistura resultante é agitada durante 0,5 h a -78°. A mistura de reacção é deixada que se aquecesse até a temperatura ambiente durante 20 min. A reacção é extinta por meio da adição de 10 % de Na2C03 (umas poucas gotas). A mistura foi diluída com CH2C12 (10 ml), seca (MgS04), e concentrada. O resíduo é submetido a cromatografia em sílica gel (1:20 MeOH:CH2Cl2) para dar 14α-1ιίόηοχί-14β-etilmarcfortina A (10 mg, 45 %) como um sólido branco. A estrutura do produto pode ser confirmada por espectroscopia de RMN e espectrometria de massa. HRMS (FAB) M/Z [M+H] calculado para C30H39N3O5 + H: 522,2968; medido: 522,2983. PREPARAÇÃO 19 Preparação de 14β-metilmarcfortina A a

partir de 14a-hidroxi-14β-metilmarcfortina A

Uma solução de bis (trimetilsilil)amida de potássio em tolueno (0,5 Μ, 1 ml, 0,5 mmol) é adicionada gota a gota a uma solução de 14a-hidroxi-14β-metilmarcfortina A (66 mg, 0,14 mmol) em THF (2 ml) a -78°. A solução turva amarela pálida resultante é deixada que se aquecesse até -40° durante 1 h. A mistura de reacção é arrefecida -78°, agitados 15 min, e então tratada por meio da adição gota a gota de uma solução de fenilclorotionoformato (0,094 ml, 0,7 mmol) em THF (2 ml). Após 10 min o banho de gelo seco é removido. Após reacção adicional durante 3 h, a reacção é 39 extinta por meio da adição de NaHC03. A mistura é extraída com CH2C12 (2 x 25 ml). Os extractos são combinados, secos (MgS04) , e concentrados para dar bruto material. Este é purificado por meio de cromatografia de camada fina preparativa (sílica gel, EtOAc) para dar 14oí-0-fenoxitiocarbonil-14β-metilmarcfortina A. A uma solução de 14a-0-fenoxitiocarbonil-14β-met ilmarcf ort ina A (64 mg, 0,1 mmol) em tolueno (5 ml) é adicionado AIBN (3,3 mg) seguido por adição de hidreto de tributilestanho (54 pL, 0,2 mmol). A mistura é submetida a refluxo durante 3 h. Após o solvente ser evaporado, o resíduo é purificado por meio de cromatografia de camada fina preparativa (sílica gel, EtOAc) para dar 14β-metilmarcfortina A. A estrutura pode ser confirmada por espectroscopia de ressonância magnética nuclear e espectrometria de massa. PREPARAÇÃO 20 Uma Síntese Alternativa De 17-cetomarcfortina A (Fórmula 7) A marcfortina A (65 g, 0,136 mol) e bicarbonato de sódio (137 g, 1,63 mol) em tetrahidrofurano (THF, 2 L) e água (1,25 L) em refluxo é adicionado iodo (206 g, 0,81 mol) gota a gota em THF (1,25 1) num período de uma hora. (Alternativamente, a mistura pode ser agitada a temperatura ambiente durante 16 horas.) Após ser deixada para arrefecer lentamente até a temperatura ambiente (2,5 h) , a reacção é extinta com saturados sódio tiosulfate (Na2S203, 1,5 L) e extraída com acetato de etilo (2 X 1 L) . As camadas orgânicas combinadas são lavadas com tiosulfato de sódio saturado (1 L) , secas (MgS04) , filtradas, evaporadas e secas durante a noite no forno a vácuo (65 °C) para dar 62 g de bruto 17-cetomarcfortina A (Fórmula 7) como um sólido amarelo . XH RMN (300 MHz, CDC13) : 8 7,68 (s, 1H) , 6, 80 (d t—1 6, 70 (d, 1H) , 6, 32 (d, 1H), 4,90 (d, 1H) , 3, 75 (q 2H) , 3, 23 (t, 1H) , 3, 09 (s, 3H), 2,80 (d, 1H) , 2, 65 (d t—1 2, 49-2,21 (m, 2H) , 2,08 (d, 1H), 1, 98- -1,45 (m r 5H) 40 1,46 (s, 3H), 1,44 (s, 3H) , 1,09 (s, 3H) , 0,90 (s, 3H) .

Alternativamente, IC1 pode ser usado ao invés de iodo. PREPARAÇÃO 21 16-Ditiofenil-17-cetomarcfortina A (Fórmula 20) A 17-cetomarcfortina A bruta (5 g, 10,2 mmol) é adicionada via uma cânula em THF (150 ml) a -78 °C a uma solução de LDA que foi preparada por meio da adição de n-BuLi (1,6 M, 24,8 ml, 0,04 mol) gota a gota a diisopropil amina (5,7 ml, 0,041 mol) a 0 °C em THF (100 ml). A mistura de reacção é deixada para aquecer lentamente até -50 °C numa hora. A mistura castanha-vermelha turva resultante é então tratada com disulfeto de fenilo (4,4 g, 0,02 mol). A reacção é imediatamente extinta com solução saturada de bicarbonato de sódio (100 ml) e extraída com cloreto de metileno (CH2C12, 300 ml). A fase orgânica foi seca (MgS04) , concentrada (8 g), e submetida a cromatografia em sílica gel (120 g, 60 % de acetato de etilo / hexano como eluente) para produzir o composto do título como um sólido branco pé ro la (4 , 4 g, 61 % de marcfortina A) . FAB- -MS 708 : (M++ H); RMN (3 0 0 MH z, CDC13) 8 7, 74 (s, 1H) , 7,7 1 (d, 2H) , 7, 64 (d f 2H) , 7,45- -7,30 (m, 6H) , 6, 81 (d, 1H) , 6, 72 (d, 1H) , 6, 32 (d, 1H) , 4, 91 (d, 1H) , 3,70 (q, 2H) , 3,16 (t, 1H) , 3, 01 (s, 3H) , 2,75 (d, 1H) , 2,53 (dt, 1H) , 2,35 (dt, 1H) , 2, 15- -1,50 (m, 5H) , 1,4 7 (s , 3H) , 1,45 (s, 3H) , 1, 06 (s, 3H), 0,82 (s, 3H). PREPARAÇÃO 22 16-Tiofenil-l6-sulfoxifenil-17- cetomarcfortina A (Fórmula 21) A 16-ditiofenil-17-cetomarcfortina A (10 g, 14 mmol) em CH2C12 (250 ml) a -78 °C sob uma atmosfera de azoto é adicionado ácido m-cloroperoxibenzóico (m-CPBA, 64 %, 4,2 g, 15,5 mmol) gota a gota em CH2C12 (200 ml) durante 15 minutos. A reacção é imediatamente extinta com tiosulfato de sódio saturado (200 ml) , diluída com NaHC03 saturado (200 ml) , e extraída em CH2C12 (200 ml) . Secagem (MgS04) , seguido por concentração sob pressão reduzida dá 11 g de 41

bruto 16-tiofenil-l6-sulfoxifenil-17-cetomarcfortina A (Fórmula 21). ΤΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 8,0-7,29 (m, 11H) , 6, 80 (d, 1H), 6,70 (d, 1H), 6, 31 (d, 1H) , 4, 90 (d, 1H) 3, 68 (d, 1H) , 3,41 (d, 1H) , 3,14 (t, 1H) , 3, 07 (s, 3H) , 2, 82 (dt, 1H), 2,80-2,i 65 (m, 2H) , 2, 16 (dt, 1H) , 2,05-1,1 (m, 4H) , 1,47 (s, 3H) , 1,43 (s, 3H) , 0, 96 (s, 3H) , 0, 83 (s, 3H) . PREPARAÇÃO 23 16-Tiofenil-15,16-dehidro-17-cetomarcfortina A (Fórmula 22) A 16-tiofenil-l6-sulfoxifenil-17-cetomarcfortina A bruta (Fórmula 21, 11 g) é submetida a refluxo em tolueno

(250 ml) durante 45 minutos, arrefecida até a temperatura ambiente, diluída com bicarbonato de sódio saturado (300 ml) e extraída com EtOAc (300 ml). A camada orgânica é seca (MgS04) e concentrada para dar 10,6 g de 16-tiofenil-15,16-dehidro-17-cetomarcfortina A bruta (Fórmula 22) . FAB-MS 5 98 (M++ H) ; HRMS M/Z (M++ H, C 34h35n3o5s + h4 ) , calc 598, 2376, obsd . 598 ,2387 . XH RMN (300 MHz, CDC13) 8,18 (s 1H) , 7,55-7,45 (m, 2H) , 7,29 -7,45 (m, 3H) , 6, 83 (d, 1H) 6,70 (d, 1H), 6,34 (d, 1H) , 5, 92 (dt, 1H) , 4, 91 (d, 1H) 3, 87 (q, 2H), 3,30 (dd, 1H) , 3,21 (t, 1H) , 3, 08 (s, 3H) 2,80 (d, 1H), 2,35 (dd, 1H) , 2, 10 (d, 1H) , 2,03 (dd, 1H) 1,78 (dd, 1H), 1,46 (s, 3H) , 1,44 (s, 3H) , 1,11 (s, 3H) 0,88 (s, 3H). PREPARAÇÃO 24 16-Sulfoxifenil-15,16-dehidro-17-cetomarcfortina A (Fórmula 23) A 16-tiofenil-15,16-dehidro-17-cetomarcfortina A bruta (Fórmula 22, 10,6 g) em cloreto de metileno (300 ml) a -78 °C é adicionado m-CPBA (64 %, 2,8 g) gota a gota em CH2C12 (125 ml) . A reacção é extinta com tiosulfato de sódio saturado (300 ml) e bicarbonato de sódio saturado (300 ml), então extraída em cloreto de metileno (300 ml) . A camada orgânica é seca (MgS04) , filtrada e concentrada para dar 13 g de 16-sulfoxifenil-15,16-dehidro-17-cetomarcfortina A bruta (Fórmula 23). ΤΗ RMN (300 MHz, CDC13) 7,75-7,3 (m, 42 5H) , 6, 81 (s, 1H) , 6,75-6,6 (m, 2H) , 6,31 (d, t—1 r 90 (d, 1H) , 3, 78- -3, 58 ! (m, 2H) , 3,22 (t, 1H) , 2, 98 (s, 3H), 2, 88- 2,45 (m, 2H) , 2,12-1,55 (m, 5H) , 1,46 (s, 3H), 1, 44 (s, 3H) , 1, 12 (s, 3H) , 0,88 (s, 3H) . PREPARAÇÃO 25 14a-Hidroxi-15,16-dehidro-17-cetomarcfortina A (Fórmula 9a) A 16-sulfoxifenil-15,16-dehidro-17-cetomarcfortina A bruta (Fórmula 23, 13 g) em MeOH aquoso (10/1, 300 ml) é adicionada dietil amina (15 ml). Após o refluxo durante 0,5 h a mistura de reacção é arrefecida até a temperatura ambiente, diluída com água (450 ml) , e extraída em CH2C12 (500 ml) . Secagem (MgS04) , seguido por concentração e cromatograf ia em sílica gel (130 g, 30 % de acetona / CH2C12 como eluente) produz 14cx-hidroxi-15, 16-dehidro-17-marcfortina A (Fórmula 9a, 3, 6 g, 50 % de rendimento a partir de 16-ditiofenil-17-ceto marcfortina A) como um sólido branco. PREPARAÇÃO 26 14oí-Hidroxi-14 | 3-vinilmarcfortina A (Fórmula 30)

Uma solução de 14-cetomarcfortina A (200 mg, 0,4 mmol) em THF (5 ml) a -7 8° é tratada com uma solução de brometo de vinilmagnésio (1 M, 4,0 ml, 4 mmol) em THF a -78°. A mistura resultante é agitada durante 2 h a -78° e aquecida até a temperatura ambiente. É agitada a temperatura ambiente durante 2 h. A reacção é extinta por meio da adição de 10 % de Na2C03 (3 ml) . A mistura foi diluída com CH2C12 (30 ml) , lavada com solução de cloreto de amónio saturado, seca (MgS04) , e concentrada. O resíduo é submetido a cromatografia em sílica gel (6:4 hexano: acetona) para dar 14α-ϊιίόηοχί-14β-νίηί1ιτΐ3^ίοηόίη3 A (120 mg, 60 %, Rf=0,45) como um sólido branco. RMN (300 MHz, CDC13) δ 7,86 (s, NH) , 6,78 & 6,67 (d, J = 8,1 Hz, C4-H & C5-H) , 6,32 (d, J = 7,7 Hz, C24-H) , 6,58 (dd, J = 17,4, 10,9 Hz, 1H, vinil), 5,43 (d, J = 17,4 Hz, 1H, vinil), 5,18 (d, J = 10,9 Hz, 1H, vinil), 4,89 (d, J = 7,7 Hz, C25-H) , 43 3,7 (1, 1Η), 3,11 (s, 3H, N-Me) , 2,95 (t, 1H, C20-H) , 2,8- 1,5 (m, 12H), 1,44 (s, 6H, C27-H & C28-H) , 1,08 (s, 3H) , 0,82 (s, 3H) . MS (FAB) M/Z [Μ + H] : 520 PREPARAÇÃO 27 N-óxido de 14a-Hidroxi-14β-metilmarcfortina A (Fórmula 32)

Uma solução de 14a-hidroximarcfortina A (30 mg) em CH2C12 (3 ml) é tratada com ácido m-cloroperoxibenzóico (20 mg) a 0o. Após a mistura ser agitada durante 0,5 h, então é dividida em partições entre bicarbonato de sódio aquoso a 5 % (10 ml) e cloreto de metileno (20 ml) . As camadas são separadas e a camada aquosa extraída com cloreto de metileno (10 ml). Os extractos combinados são secos com sulfato de magnésio, filtrados, e evaporados sob vácuo a 0 °C, tratados com trietil amina (30 pL) e concentrados para produzir o composto do título como um sólido (20 mg) . ΤΗ RMN (300 MHz r CD 3od) δ 6, 91 & 6, 70 (d, J = 8,1 Hz, C4 -H & Cs-H) , 6, 36 (d r J = 7, 7 Hz, c24- H) , 4, 91 (d, J = 7,7 Hz, c25-h ), 4 , 08 & 3, 7 6 (AB q, J = 12 , 9 Hz, 2H, Ci2-H), 3,5 -3,1 (m, 4H) , 3, 12 (s , 3H, N-Me), 2,8 -i, 6 ( m, 7H) , 1,46 & 1,44 (2 s, 6H, C27~ H & c28-h) , 1,50 (s, 3H, c4 4-Me), 1,20 (s, 3H) , 00 CTi o (s, 3H) PREPARAÇÃO 28 14a-Hidroxi-15oí-metilmarcfortina A (Fórmula 35) 14a-Hidroxi-15a-metil-17-cetomarcfortina A (90 mg, 0,18 mmol) é dissolvida em THF (10 ml) e tratada com complexo de borano sulfureto de dimetilo (12 M, 0,18 ml) a 0o. A mistura é agitada durante 2 h a 0o, então MeOH (0,4 ml) é adicionado e agitado por um adicional de 1 h. Após o solvente ser evaporado, o resíduo é submetido a cromatografia em sílica gel (30:70 acetona: cloreto de metileno) para dar 14a-hidroxi-15a-metilmarcfortina A (20 mg) como um sólido. ΤΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 8,39 (s, NH), 6,79 & 6,70 (d, J = 8,1 Hz, C4-H & C5-H) , 6,36 (d, J = 7,7

Hz, C24-H), 4,91 (d, J = 7,7 Hz, C25-H) , 3,81 (1, 1H, C14-H) , 3,67 (d, 1H, J = 11,7 Hz, C12-H) , 3,03 (t, 1H, C20-H) , 3,11 44 (s, 3H, N-Me) , 2,68 & 1,86 (d, 2H, J = 15,7 Hz, Ci0-H) , 2,7-1,2 (m, 8H), 1,44 (2s, 6H, C27-H & C28-H) , 1,02 (d, 3H, J = 6,8 Hz, Cis-Me), 1,11 (s, 3H) , 0,85 (s, 3H) . HRMS (FAB) M/Z [M+H] calculado para C29H37N3O5 + H: 508,2811; medido: 508,2840. PREPARAÇÃO 29 14,17-diceto-15o(-metilmarcfortina A (Fórmula 36)

Uma solução de cloreto de oxalilo (40 pL) em CH2C12 anidro (5 ml) é tratada com DMSO (45 pL) a -78°. A mistura é agitada durante lha -78°. Uma solução de 14cx-hidroxi-15a-metil-17-cetomarcf ort ina A (27 mg) em CH2C12 (2 ml) é adicionada gota a gota. A mistura de reacção é agitada 20 min a -78°. Trietilamina (0,3 ml) é adicionada à mistura de reacção que é deixada que se aquecesse até a temperatura ambiente durante 20 min. A mistura é dividida em partições entre 10 % de Na2C03 (10 ml) e CH2C12 (10 ml) . A camada orgânica é seca (MgS04) e concentrada. 0 resíduo é submetido a cromatografia em sílica gel (1:20 MeOH:CH2Cl2) para dar 14, 17-Dicetomarcf ort ina A (22 mg, 80 %) como um sólido branco. A estrutura do produto pode ser confirmada por espectroscopia de RMN e espectrometria de massa. HRMS (FAB) M/Z [M+H] calculado para C28H31N306 + H: 506, 2291; medido: 506,2280. PREPARAÇÃO 30 14a-hidroxi-14β-ιη6όί1-15α-ιηβόϊ1-17-cetomarcfortina A (Fórmula 37)

Uma solução de 14,17-Diceto-15a-metilmarcfortina A (25 mg, 0,05 mmol) em CH2C12 (5 ml) a -78° é tratada com uma solução de brometo de metilmagnésio (3 M, 0,2 ml, 0,6 mmol) em Et20 a -78°. A mistura resultante é agitada durante 0,5 h a -78°. A reacção é extinta por meio da adição de 10 % de Na2C03 (umas poucas gotas). A mistura foi diluída com CH2C12 (10 ml), seca (MgS04) , e concentrada. O resíduo é submetido a cromatograf ia em sílica gel (1:25 MeOH:CH2Cl2) para dar 14a-hidroxi-14p-metil-15a-metil-17-cetomarcfortina A (16 mg, 62 %) como um sólido branco. ΤΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 45 8,13 (s, 1H) , 6,78 (d, 1H) , 6,70 (d, 1H) , 6, 33 (d, 1H) 4, 91 (d, 1H) , 3,75 (q, 2H) , 3,16 (t, 1H) , 3, 05 (s, 3H) 2,78 (d, 1H) , 2,68-2 ,57 (m, 1H), 2, 42-2, 0 (m, 6H) , 1, 64 (s 3H) , 1,45 i (s, 3H) , 1,44 (s , 3H) , 1,11 (s, 3H) , 1, 04 (d 3H) , 0, 92 (d, 3H) . PREPARAÇÃO 31 14a-hidroxi-14p-metil-15a-metilmarcfortina A (Fórmula 38) 14a-Hidroxi-14 β-met i 1-15a-meti 1-17-cetomarcf ort ina A (15 mg, 0,028 mmol) é dissolvida em THF (10 ml) e tratada com complexo de borano sulfureto de dimetilo (10 M, 0,02 ml) a 0o. A mistura é agitada durante 2 h a 0o, então MeOH (0,4 ml) é adicionado e agitado por mais 1 h. Após o solvente ser evaporado, o resíduo é submetido a cromatografia em sílica gel (30:70 acetona: cloreto de metileno) para dar 14a-hidroxi-14β-metil-15a-metilmarcfortina A (4 mg, 29 %) como um sólido. XH RMN (300 MHz, CDC1 3) δ 7, 82 (s, 1H) , 6, 79 (d, 1H) , 6, 67 (d, 1H) , 6,33 (d, 1H) , 4,90 (d, 1H) , 3, 65 (d, 1H) , 3,09 (s, 3H) , 2, 98 (t, 1H) , 2, 69 (d, 1H) , 2 , 60-2 !. .22 (m, 7H) , 2,06 (dd, 1H) , 1,87 (d, 1H) , 1,85 -1,75 (m, 1H) , 1,44 (s, 6H) , 1,43 (s, 3H), : 1,10 (s, 3H), 0 , 94 (d , 3H) , 0, 86 (s, , 3H) . EXEMPLO 1 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 15a-Etil-14a-Hidroxi-17-oxomarcfortina A (II) A iodeto de cobre (I) (0,18 g, 0,95 mmol) em THF (10 ml) a 0 °C é adicionado brometo de etilmagnésio (1 M em THF, 2 ml, 2 mmol) gota a gota. Em seguida 0,25 h de agitação a 0 °C a reacção é tratada gota a gota com 14a-hidroxi-15,16-dehidro-17-oxomarcfortina A (I, 0,1 g, 0,2 mmol) em THF (5 ml) a 0 °C. A mistura de reacção é extinta 1 h depois com cloreto de amónio (saturado, 25 ml) então extraída em acetato de etilo (2 x 25 ml) . Os extractos orgânicos combinados são secos com sulfato de magnésio, filtrados, e concentrados sob pressão reduzida para dar um resíduo. O resíduo é submetido a cromatografia (sílica gel; metanol/cloreto de metileno (4/96) para dar o composto do 46 título, RMN (400 MHz, CDC13) 7,75, 6, 80, 6,70, 6,32, 4, 91, 4,66, 3,75, 3,20, 3,06, 2,79, 2,09, 2,40-1,50, 1,48, 1,44, 1,11, 1,02 e 0,90 δ; MS (FAB, M/Z) [Μ + H] = 536. EXEMPLO 2 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 15o(-Etil-14a-hidroximarcfortina A (III) 15a-Etil-14a-hidroxi-17-oxomarcfortina A (I, EXEMPLO 1, 40 mg, 0,075 mmol) é dissolvida em THF (5 ml) e tratada com complexo de borano sulfureto de dimetilo (10 M, 0,08 ml, 0,8 mmol) a 0 °C. A mistura é agitada durante 1 h a 0 °C então extinta com metanol (0,2 ml) e agitada por um adicional 0,25 h a 20-25°. O solvente é removido para dar o resíduo que é submetido a cromatografia (sílica gel; metanol/cloreto de metileno (4/96)) para dar o composto do título, RMN (400 MHz, CDCI3) 7,85, 6, 80, 6, 67, 6,33, 4,90, 3, 92, 3, 67, 3, 10, 3, 01, 2, 69, 1,87, 2, 65 - 1,20, LD i—1 \—1 CM \—1 1—1 0,97 e 0, 8 8 8; HRMS (FAB, M/Z) [M + H] calculado para C30H39N3O5 + H = 522,2968, medido = 522,2958. EXEMPLO 3 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 14a-Hidroxi-15a-vinil-17-oxomarcfortina A (IV)

Em seguida ao procedimento geral do EXEMPLO 1 e fazendo variações não críticas, mas usando brometo de vinilmagnésio (1 M em THF, 39,5 ml, 0,04 mol) no lugar de brometo de etilmagnésio, o composto do título é obtido, RMN (400 MHz, CDCI3) 7, 69, 6, 80, 6,71, 6,32, 4, 91, 6, 11-5, 95, 5,32-5,20, 4,50, 3,21, 3,08, 3,07-3,0, 2,80, 2,10, 2,66, 2,32, 2,20-1,80, 1,46, 1,44, 1,11 e 0,89 δ. EXEMPLO 4 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 14o(-Hidroxi-15oí-(1', 2'-dihidroxietil)-17-oxomarcfortina A (V)

Solução de tetróxido de ósmio (2,5/97,5) em 2-metil-2-propanol, 1,9 ml), N-óxido de 4-metilmorfolina (1,9 g, 0,016 mol) e 14a-hidroxi-15a-vinil-17-oxomarcfortina A (IV, EXEMPLO 3, 1,9 g, 0,0035 mol) são combinados e agitados

durante 6 h a 20-25° em acetona/água (9/1, 100 ml) . A reacção é dividida em partições entre água (200 ml) e cloreto de metileno (250 ml) . A camada orgânica é seca em 47 sulfato de magnésio, filtrada, e concentrada sob pressão reduzida para dar resíduo. 0 resíduo é submetido a cromatografia (sílica gel; metanol/cloreto de metileno (10/90)) para dar o composto do título, HRMS (FAB, M/Z) [M + H] calculado para C30H37N3O8 + H = 568,2659, medido = 568,2670. EXEMPLO 5 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 14oí-Hidroxi-15cx-hidroximetil-17-oxomarcfortina A (VI) A 14a-hidroxi-15a-(1',2'-dihidroxietil)-17- oxomarcfortina A (V, EXEMPLO 4, 1 g, 1,8 mmol) em etanol (100 ml) a 0 °C é adicionado periodato de sódio (0,68 g em 40 ml de água) gota a gota. Em seguida 10 minutos de agitação a 0 °C, borohidreto de sódio é adicionado e a mistura resultante é agitada por mais 10 minutos a 0 °C. A mistura de reacção é extinta com solução salina (150 ml) e extraída em cloreto de metileno (200 ml). O extracto orgânico é seco com sulfato de magnésio, filtrado, e concentrado sob pressão reduzida para dar resíduo é que submetido a cromatografia (sílica gel; metanol/cloreto de metileno (5/95) ) para dar o composto do título, RMN (400 MHz, CDCI3) 7, 73, 6, 81, 6, 71, 6, 32, 4, 92, 4,72, 4,06, 3, 83, 3, 76, 3, 21, 3, 06, 2, 90-2,30, 2,80, 2, 10, 2,22, 2, 01, 1,46, 1,44, 1,12 e 0,89 õ; MS (FAB, M/Z) [Μ + H] = 538. EXEMPLO 6 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 15o(-Fluoromet il-14a-hidroxi-17-oxomarcfortina A (VII) 14a-hidroxi-15cx-hidroximetil-17-oxomarcf ortina A (VI, EXEMPLO 5, 0,06 g, 0,1 mmol), fluoreto de tetrabutilamónio (1 M em THF, 0,66 ml, 0,66 mmol) e fluoreto de p-toluenosulfonilo (0,075 g, 0,43 mol) são combinados e

submetidos a refluxo em THF (10 ml) durante 0,5 h. A mistura é arrefecida e concentrada. O concentrado é submetido a cromatografia (sílica gel) para dar o composto do título, RMN (400 MHz, CDC13) 7, 93, 6, 80, 6, 70, 6, 32, 4, 90, 4,80-4,50, 4, 67, 3, 75, 3,21, 3, 06, 2,78, 2, 15, 2,70-1,50, 1,46, 1,44, 1,12 e 0,89 õ. 48 EXEMPLO 7 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 15a-Fluorometil-14a-hidroximarcfortina A (VII) 15a-Fluorometil-14a-hidroxi-17-oxomarcfortina A (VII, EXEMPLO 6, 15 mg, 0,027 mmol) é dissolvida em THF (5 ml) e tratada com complexo de borano-tetrahidrofurano (1 M em THF, 0,15 ml, 0,15 mmol) a 0 °C. A mistura é agitada durante 1,5 h a 0 °C então extinta com metanol (0,75 ml) e agitada por mais 0,25 h a 20-25°. O solvente é removido para dar um resíduo. O resíduo é submetido a cromatografia (sílica gel; metanol/cloreto de metileno (5/95)) para dar o composto do título, RMN (400 MHz, CDC13) 7,57, 6,80, 6,68, 6,33, 4, 90, 4,75-4,30, 4, 09, 4,80, 3, 50, 3, 12, 3, 05, 2,70, 1,88, 2,80-1,40, 1,45, 1,44, 1,12 e 0,86 δ; HRMS (FAB, M/Z) [Μ + H] calculado para C29H36FN305 + H = 526,2717, medido = 526,2727. EXEMPLO 8 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 14,15-Dehidro-15- metilmarcfortina A (IX)

Trifluoreto de dietilaminoenxofre (DAST, 0,15 ml, 1,1 mmol) é adicionado gota a gota a 20-25° a 14a-hidroxi-15a-metilmarcfortina A (III, n3 = 0, 0,2 g, 0,39 mmol) que é dissolvida em cloreto de metileno (15 ml) . Em seguida a 5 min de agitação a mistura de reacção é dividida em partições entre água (25 ml) e cloreto de metileno (25 ml). A camada orgânica é seca em sulfato de magnésio, filtrada, concentrada sob pressão reduzida, e submetida a cromatografia (sílica gel) para dar o composto do título, RMN (400 MHz, CDC13) 7,67, 6, 00 ^0 i—1 00 6, 33, 4, 90, 5, 46 3,66, 3,14, 3,10, 2,70, 1,88, 2,75-2,54, 2,30, 1, 92, 1,78 i—1 ^0 1—1 1,12 e 0,86 δ. EXEMPLO 9 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 14,15-Dehidro-l6a hidroxi-15-metilmarcfortina A (X)

Dióxido de selénio (8 mg, 0,07 mmol) e 14,15-dehidro-15-metilmarcfortina A (IX, EXEMPLO 8, 30 mg, 0,06 mmol) são submetidos a refluxo em p-dioxano durante 1,5 h. Concentração sob pressão reduzida seguida por cromatografia 49 (sílica gel) dá o composto do título, RMN (400 MHz, CDC13) 7, 60, 6, 81, 6, 69, 6, 32, 4, 90, 5, 55, 3, 75, 2,53, 3, 67, 3, 14, 3, 10, 2,88-2,70, 2,30, 1, 90, 1, 95-1,50, 1,46, 1,45, 1,11, e 0,87 8; MS (FAB, M/Z) [Μ + H] = 506. EXEMPLO 10 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 14a-hidroxi-16,17-dioxo-15oí-metilmarcfortina A (XI) 14cx-Hidroxi-15oí-metilmarcf ort ina A (III, 100 mg) é dissolvida em dioxano/água (3/1: 20 ml) e tratada com platina em carbono (10 %, lg) . A mistura resultante é colocada sob oxigénio (usando um balão) e agitada durante 16 h a 20-25°. Após o catalisador ser retirado por filtração a solução é dividida em partições entre solução aguosa de bicarbonato de sódio (10 %) e cloreto de metileno. A camada orgânica é separada, seca em magnésio sulfate e concentrada. O concentrado é submetido a cromatografia (sílica gel; metanol/cloreto de metileno (5/95)). Quando as fracções apropriadas são agrupadas e concentradas quatro compostos são obtidos: (1) 14a-hidroxi-16,17-dioxo-15a-metilmarcfortina A, RMN (400 MHz, CDC13) 8,35, 6, 82, 6,71, 6,32, 4, 90, 4,53, 3, 90, 3,76, 3, 4-3,3, 3,26, 3,00, 2,80, 2,14, 2,20, 1,98, 1,45, 1,43, 1,31, 1,12 e 0,86 õ; HRMS (FAB, M/Z) [Μ + H] calculado para C2 H3 N307 + H = 536,2397, medido = 536,2392; (2) 14a-hidroxi-l6-oxo- 15a-metilparaherquamida B, RMN (400 MHz, CDC13) 7,81, 6,82, 6,72, 6,33, 4, 91, 4, 94, 3,73, 3,53, 3,4-3,3, 3,26, 3, 06, 2, 82, 2, 04, 2, 9-2,8, 1, 9-2,1, 1,46, 1,44, 1,27, 1, 11 e 0,88 δ; HRMS (FAB, M/Z) [Μ + H] calculado para C28H33N306 + H = 508,2447, medido = 508,2453, (3) 14a-hidroxi-17-oxo-15a- metilmarcfortina A, RMN (400 MHz, CDC13) 7,89, 6,80, 6,71, 6, 32, 4, 91, 4,35, 3, 65, 3,20, 3, 06, 2,79, 2, 09, 1, 9-2,5, 1,46, 1,44, 1,13, 1,12 e 0,88 δ; (4) 14a-hidroxi-l6- hidroxi-17-oxo-15a-metilmarcfortina A HRMS (FAB, M/Z) [M + H] calculado para C29H35N307 + H = 538,2553, medido = 538,2544. EXEMPLO 11 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 14oí-hidroxi-l 6-oxo-15oí- 50 metilparaherquamida B (XII) 14a-Hidroxi-16,17-dioxo-15a-metilmarcfortina A (XI, EXEMPLO 10) é dissolvida em cloreto de metileno (5 ml) e tratada com ácido m-cloroperbenzóico (65 % puro, 30 mg) . A mistura resultante é agitada a 20-25° durante 1,5 h. A mistura é dividida em partições entre cloreto de metileno (20 ml) e carbonato de potássio (10 %, solução aquosa, 20 ml) . A camada orgânica é separada, seca em sulfato de magnésio e concentrada. 0 concentrado é submetido a cromatografia (sílica gel; metanol/cloreto de metileno (5/95)) para dar o composto do título, RMN (400 MHz, CDC13) RMN (400 MHz, CDC13) 7, 81, 6, 82, 6,72, 6,33, 4, 91, 4, 94, 3,73, 3,53, 3,4-3,3, 3,26, 3, 06, 2,82, 2,04, 2, 9-2,8, 1, 9- 2,1, 1,46, 1,44, 1,27, 1,11 e 0,88 δ . EXEMPLO 12 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 14o(-Hidroxi-15oí-metilparaherquamida B (XIII)

Hidreto de lítio alumínio (1 M solução em THF, 0,21 ml) em THF (10 ml) a -60° é tratado com cloreto de alumínio (15 mg, 3 porções). A mistura é agitada e aquecida até -25° e 14a-hidroxi-16-oxo-15a-metilparaherquamida B (XII, EXEMPLO 11) é adicionado lentamente (20 mg, 2 ml em THF). A mistura é agitada a -25° durante 20 min. Metanol (0,8 ml) seguido por cianoborohidreto de sódio (50 mg) são adicionados à mistura. A mistura resultante é aquecida até 20-25° e concentrada. O concentrado é dividido em partições entre cloreto de metileno (20 ml) e carbonato de potássio (10 % de solução aquosa, 20 ml) . A camada orgânica é separada, seca em sulfato de magnésio e concentrada. O concentrado é submetido a cromatografia (sílica gel; actona/hexano (40/60)) para dar o composto do título, RMN (400 MHz, CDCI3) 7,56, 6, 82, 6, 69, 6, 32, 4, 90, 4,42, 3, 64, 2, 62, 3, 08, 3, 04, 2, 9-1,5, 1,46, 1,45, 1, 12, 1,08 e 0,86 δ; HRMS (FAB, M/Z) [Μ + H] calculado para C28H35N3O5 + H = 494,2662, medido = 494,2655.

EXEMPLO 13 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 16,17-dioxomarcfortina A 51 (XV), 16-oxoparaherquamida B (XVI), 15-hy-droxi-l6-

oxoparaherquamida B, 15,16-dioxoparaherquamida B

Marcfortina A (XIV, 1,1 g, 2,3 mmol) é dissolvida em dioxano/água (3/1, 150 ml) e tratada com Paládio em carbono (10 %, 10 g) . A mistura resultante é agitada sob uma atmosfera de oxigénio (balão de oxigénio) a 20-25° durante 48 h. O catalisador é retirado por filtração e a mistura resultante é dividida em partições entre cloreto de metileno e água. A fase orgânica é separada, seca em sulfato de magnésio, filtrada, e evaporada sob pressão reduzida para dar um resíduo. O resíduo é submetido a cromatografia (sílica gel; acetona/cloreto de metileno, 30/70) para dar: (1) 16, 17-dioxomarcfortina A, RMN (400 MHz, CDCI3) 7,69, 6, 81, 6,74, 6,32, 4, 92, 3, 95, 3, 80, 3,32, 3, 15, 3,14- 2,70, 2,19-1,86, 1,47, 1,45, 1,12 e 0,88 õ; (2) 16-oxoparaherquamida B, RMN (400 MHz, CDC13) 7,81, 6, 80, 6,71, 6,32, 4, 91, 3, 74, 3, 52, 3, 29, 3, 08, 3, 0-2, 85, 2, 80, 2, 00, 2,55-2,49, 2, 08-1,75, 1,46, 1,44, 1,10 e 0,88 δ; HRMS (FAB, M/Z [M+H] ) calculado para C27H31N3O5+ H = 478,2342, medido = 478,2384; (3) 15-hidroxi-l6-oxoparaherquamida B, RMN é complicado pelos diastereómeros. HRMS (FAB M/Z [M+H]) calculado para C27H3iN306+ H = 494,2291, medido = 494,2292; (4) 15,16-dioxoparaherquamida B, RMN (400 MHz, CDC13) 7, 60, 6, 83, 6, 74, 6, 32, 4, 92, 4,12, 3, 84-3, 70, 3, 46, 3, 14, 2, 89, 2,13, 2,50, 2,25, 1, 95, 1,47, 1,45, 1, 11 e 0,90 δ; HRMS (FAB M/Z [M+H]) calculado para C27H29N3O6+ H =: 492,2134, medido = 492,2141. EXEMPLO 14 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 14,15-Dehidro-l6-oxoparaherquamida B (XVII)

Uma mistura de diisopropilamida de lítio que é preparada a partir de n-butil lítio (1,6 M em hexano, 1,2 mmol, 0,78 ml) e diisopropilamina (1,3 mmol, 0,17 ml) em THF (4 ml) é arrefecida até -60°. Uma mistura de 16-oxo- 52 paraherquamida B (XVI, EXEMPLO 13, 0,15 g, 0,3 mmol) em THF (1,5 ml) é adicionada gota a gota e a mistura de reacção foi deixada que se aquecesse até -20° durante 0,25 h. 2 A mistura é tratada gota a gota com fenilselenilo cloreto (0,075 g, 0,39 mmol) em THF (1 ml), então extinta 5 min depois com bicarbonato de sódio saturado (20 ml). A mistura de reacção é extraída em cloreto de metileno (30 ml), seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para dar um sólido que é usado sem purificação adicional. Este material é dissolvido em THF (8 ml) e tratado com peróxido de hidrogénio (30 %, 0,12 ml) a 0 °C. O banho de arrefecimento é removido e a mistura de reacção agitada durante 0,25 h a 20-25°. A reacção é extinta com hidróxido de sódio (1 N, 10 ml), extraída em cloreto de metileno (30 ml), seco em sulfato de magnésio, filtrada, concentrada sob pressão reduzida e submetida a cromatografia (sílica gel; metanol/cloreto de metileno, 5/95) para dar o composto do título, RMN (400 MHz, CDCI3) 7,78, 7,36, 6, 25, 6, 81, 6, 70, 6, 32, 4, 91, 3, 96, 3, 60, 3, 36, 3, 09, 2,88, 2,09, 2,36, 1,56, 1,46, 1,45, 1,06 e 0,88 δ; HRMS (FAB, M/Z) [M+H] calculado para C27H29N3O5+H = 476, 2185, medido = 476,2195. EXEMPLO 15 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 14a-Hidroxi-15a-metil-2-desoxomarcfortina A (XXI) A 14a-hidroxi-15a-metil-17-oxomarcfortina A (XIX, 21 g, 0,04 mol) em THF (1,3 L) a 0 °C é adicionado complexo de borano sulfureto de dimetilo (12 M, 40 ml, 0,48 mol) gota a gota. A mistura resultante é agitada durante 2,5 h a 0 °C então extinta com metanol (50 ml) lentamente gota a gota. O solvente é removido sob pressão reduzida para dar um resíduo é que submetido a cromatografia (sílica gel; metanol/cloreto de metileno, 3/97) para dar 14a-hidroxi-15cx-metilmarcf ortina A e 14a-hidroxi-15a-met il-2-desoxomarcf ortina A, RMN (400 MHz, CDC13) δ 6, 66, 6, 40, 6,29, 4,79, 3, 92, 3, 41, 3, 78, 3, 55, 2, 92, 2, 62, 2,35, 2,25, 53

2,26, 2, 15, 2,10-1,40, 1,40, 1,04, 1, 02, 0, 89, 0,91; HRMS (FAB, m/z) [M+H] calculado para C29H39N3O4 + H = 494,3019, medido = 494,3208. EXEMPLO 16 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 2-Desoxomarcfortina A (XXIII) A marcfortina A (XXII, 0,16 g, 0,335 mmol) em THF (25 ml) a 0 °C é adicionado complexo de alano-N,N-dimetiletilamina (0,5 M, 2,6 ml, 13,4 mmol) gota a gota. A mistura resultante é agitada durante 1 h a 0 °C então extinta com metanol (5 ml) lentamente gota a gota. O solvente é então removido sob pressão reduzida para dar o resíduo que foi submetido a cromatografia (sílica gel; acetona/cloreto de metileno, 30/70) para dar o composto do título, RMN (400 MHz, CDC13) δ 6, 67, 6, 40, 6,29, 4,79, 3, 91, 3, 40, 3,57, 2,36, 2, 95, 2,30-2, 05, 1, 95-1,25, 1,39, 0,88, 0,85; CMR (CDC13, 100 MHz) 8 175, 40, 146,26, 143, 77, 139, 74, 137,06, 126, 78, 120, 11, 114, 88, 114,19, 79, 67, 63,66, 61,13, 61,05, 60,74, 56,23, 54,68, 45,77, 41,92, 32,15, 31, 94, 31,83, 30,30, 26,28, 26, 19, 23, 38, 21,13, 19,75; HRMS (FAB, m/z) [M+H] calculado para C28H37N3O3 + H = 464,2913, medido = 464,2929.

EXEMPLO 17 C-2-deoxoparaherquamida A A paraherquamida A (0,05 g, 0,1 mmol) em tetrahidrofurano (THF, 6 ml) a 20-25° sob uma atmosfera de azoto é adicionado complexo de alano-N,N-dimetilamina (0,5 M em tolueno, 2 ml, 1 mmol) gota a gota. A mistura resultante de reacção é agitada durante 0,5 h então extinta com metanol (1 ml) . A mistura é concentrada sob pressão reduzida para dar resíduo é que purificado por meio de cromatografia (sílica gel; acetona/cloreto de metileno (30/70)) para dar o composto do título, RMN (400 MHz, CDCI3) 6, 69, 6,30, 4, 80, 3, 94, 3,51, 3,39, 3, 19, 2, 92, 2,53, 2,38-2,12, 2,08, 1,95-1,74, 1,65, 1,43, 0,92 & 0,89 δ; HRMS (FAB, M/Z [M+H] calculado para C28 H37 N3 04 + H = 480,2862, medido = 480,2869. 54 EXEMPLO 18 PARA REFERÊNCIA SOMENTE N(l)-

Fenoxicarbonilmarcfortina A (XXVII)

Marcfortina A (XXVI, 2,4 g, 5,0 mmol) em THF (120 ml) e hidreto de potássio (35 peso %, 0,7 g, 6,2 mmol) são agitados durante lha 20-25°. A esta mistura fenilcloro formato (1,2 ml, 9,6 mmol) é adicionado. A mistura é agitada durante 0,5 h, extinta com carbonato de potássio solução (10 %, 50 ml) e extraída em acetato de etilo (150 ml) . A camada orgânica é seca em sulfato de magnésio, filtrada, e concentrada. O resíduo é triturado com éter/hexano e o precipitado é filtrado, colhido e seco para dar o composto do título como um sólido, RMN (400 MHz, CDC13) 0,89, 1,08, 1,2-3, 0, 1,45, 1,49, 3, 06, 3, 69, 4,83, 6,26, 6, 89 e 7,2-7,5 δ; HRMS (FAB, m/z) [M+H] calculado para C35H39N306 + H+ = 598,2917, medido = 598,2919. EXEMPLO 19 PARA REFERÊNCIA SOMENTE N(l)-terc-Butoxicarbonilmarcfortina A (XXVII)

Marcfortina A (XXVI) em THF/cloreto de metileno (50 ml/50 ml) e hidreto de potássio (35 peso %, 0,62 g, 5,5 mmol) são agitados durante lha 20-25°. A esta mistura dicarbonato de di-terc-butilo (3,4 g, 15,6 mmol) é adicionado. A mistura é agitada durante 0,5 h, extinta com carbonato de potássio solução (10 %, 50 ml) e extraída em acetato de etilo (150 ml) . A camada orgânica é separada e seca em sulfato de magnésio, filtrada, e concentrada. O concentrado é triturado com éter/hexano e o precipitado é filtrado, colhido e seco para dar o composto do título, RMN (400 MHz, CDC13) 0, 83, 1, 05, 1,2-3, 0, 1,46, 1,53, 1,59, 3, 12, 3, 67, 4,85, 6, 28 e 6,82 δ; HRMS (FAB, m/z) [M+H] calculado para C35H43N306C + H+ = 578,3230, medido = 578,3230. EXEMPLO 20 PARA REFERÊNCIA SOMENTE N(l)-4'-Nitrofenoxicarbonilmarcfortina A (XXVII)

Em seguida ao procedimento geral dos EXEMPLOS 18 e 19 e fazendo variações não críticas, mas usando 4- 55 nitrofenilcloro formato (423 mg, 2,1 mmol), o composto do título é obtido, RMN (400 MHz, CDC13) 0,89, 1,08, 1,2-3, 0, 1,45, 1,49, 3, 06, 3, 69, 4,83, 6,26, 6, 92, 7,50 e 8,33 δ; HRMS (FAB, m/z) [M+H] calculado para C35H38N408 + H+ = 643,2767, medido = 643,2766. EXEMPLO 21 PARA REFERÊNCIA SOMENTE N(l)-9'-Fluorenilmetiloxicarbonilmarcfortina A (XXVII)

Em seguida ao procedimento geral dos EXEMPLOS 18-20 e fazendo variações não críticas, mas usando 9-fluorenil-metilo cloroformato (1,6 g, 6 m mol), o composto do título é obtido, seleccionados RMN (400 MHz, CDC13) 7,78, 7, 66, 7,42, 6, 89, 6,20, 4,82, 4,70-4, 60, 4,39, 3, 16, 2,85, 1,45 e 1,43 δ; MS (FAB, m/z) [M+H] = 700. EXEMPLO 22 PARA REFERÊNCIA SOMENTE N(l)-te_rc-Butoxicarbonilparaherquamida A (XXVII)

Paraherquamida A (XXV, 70 mg, 0,14 mmol) em THF (10 ml) e hidreto de potássio (35 peso %, 0,062 g, 0,55 mmol) são agitados durante 2 h a 20-25°. A esta mistura dicarbonato de di-terc-butilo (86 mg, 0,42 mmol) é adicionado. A mistura é agitada durante 0,5 h, extinta com 10 % carbonato de potássio solução (50 ml) , e extraída em acetato de etilo (150 ml) . A camada orgânica é seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada. O concentrado é purificado por meio de cromatografia de camada fina preparativa (metanol/cloreto de metileno, 5/95) para dar o composto do título, RMN (400 MHz, CDC13) 0,89, 1,02, 1,42, 1,46, 1,59, 1, 63, 1,2-3, 3, 3, 06, 3, 69, 4,83, 6,26 e 6,80 δ. EXEMPLO 23 PARA REFERÊNCIA SOMENTE N(l)-4'-Nitrofenoxicarbonilparaherquamida A (XXVII)

Em seguida ao procedimento geral do EXEMPLO 22 e fazendo variações não críticas, mas usando 4-nitrofenilcloroformato (814 mg, 4,2 mmol), o composto do título é obtido, RMN (400 MHz, CDC13) 0, 85, 0, 94, 1,2-3, 9, 1,40, 1,47, 3, 02, 4,79, 5, 85, 6,18, 6, 88, 7,35 e 8,29 δ; HRMS (FAB, m/z) [M+H] calculado para C35H38N409 + H+ = 56 659,2717, medido = 659,2732. EXEMPLO 24 PARA REFERÊNCIA SOMENTE N(l)-4'-Nitrofenoxicarbonil-14a-hidroxi-14β-metilmarcfortina A (XXVII) 14oí-Hidroxi-14β-metilmarcfortina A (XXVI, n = 2, R14 =

Me, R15 — H, Ri6 — OH, 0,188 g, 0,37 mmol) em THF (30 ml ) e hidreto de sódio (60 peso g, 0 f 0,075 g, 1,875 mmo 1) são agitados durante 2 h a 20 -25°. A esta mistura 4- nitrofenilcloroformato (150 mg, 0,74 mmol) é adicionado . A mistura é agitada durante 0,5 h, extinta com solução de tampão com pH 7 (15 ml) e extraída em acetato de etilo (50 ml) . A camada orgânica é separada e seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada para dar 0 composto do título, RMN (400 MHz, CDCI3) 0,92, 1, 07, 1,2-3,0, 1,44, 1,47, 1,48, 3,13, 3, 67, 4, 87, 6,25, 6, 92, 7,50 e 8,35 δ; HRMS (FAB, m/z) [M+H] calculado para C36 H42N409 + H+ = 673,2873, medido = 673,2866.)

EXEMPLO 25 PARA REFERÊNCIA SOMENTE N(l)-4'-Nitrof enoxicarbonil-14cx-hidroxi-15oí-met ilmarcf ort ina A (XXVII

Em seguida aos procedimentos gerais dos EXEMPLOS 18-24 e fazendo variações não críticas, mas usando 14a-Hidroxi-15a-met ilmarcf ortina A (XXVI, n = 2, R14 = H, R15 = Me, Ri6 = OH, 1,98 g, 3,9 mmol) e 4-nitrofenilcloro-formato (150 mg, 0,74 mmol), o composto do título é obtido, RMN (400 MHz, CDC13) 0, 92, 1,02, 1, 09, 1,2-3, 0, 1,44, 1,47, 3, 14, 3, 68, 3, 95, 4, 87, 6,24, 6, 92, 7,50 e 8,34 δ; HRMS (FAB, m/z) [M+H] calculado para C35H4oN409 + H+ = 673,2873, medido = 673,2866. EXEMPLO 26 PARA REFERÊNCIA SOMENTE N(1)-Fenoxicarbonil-2a-hidroxi-2-desoxomarcfortina A (XXVIII) N(1)—Fenoxicarbonilmarcfortina A (EXEMPLO 18, 2,4 g, 4,0 mmol) é dissolvida em metanol (100 ml) e tratada com borohidreto de sódio (540 mg) a 0 o durante 15 min. A mistura de reacção é extinta com carbonato de potássio (10 57 %, 100 ml) . O precipitado resultante é seco para dar o composto do titulo, RMN (400 MHz, CDC13) 0, 85, 0, 92, 1,3- 2,7, 1,37, 1,48, 3, 06, 3, 18, 3, 43, 3, 61, 4,75, 5, 87, 6, 28, 6,84 e 7,2-7,5 δ; HRMS (FAB, m/z) [M+H] calculado para C35H41N306 + H+ = 600,3073, medido = 600,3080 . EXEMPLO 27 PARA REFERÊNCIA SOMENTE N(l)-4'-Nitrofenoxicarbonil-2a-hidroxi-2-desoxomarcfortina A (XXVIII)

Em seguida ao procedimento geral do EXEMPLO 26 e usando N(1)-4'-Nitrofenoxicarbonilmarcfortina A (EXEMPLO 20, 0,5 g, 0,78 mmol) o composto do titulo é obtido, RMN (400 MHz, CDC13) 0,82, 0,89, 1,3-2,7, 1,39, 1,47, 3, 06,

3, 18, 3, 59, 4,78, 5, 85, 6,20, 6,84, 7,36 e 8,28 δ; HRMS (FAB, m/z) [M+H] calculado para C35H40N4O8+ H+ = 645,2924, medido = 649,2925. EXEMPLO 28 PARA REFERÊNCIA SOMENTE N(l)-9'-

Fluorenilmetiloxicarboni1-2a-hidroxi-2-desoxomarcfortina A (XXVIII)

Em seguida ao procedimento geral do EXEMPLO 26 e fazendo variações não criticas, mas usando N(l)-9'-fluorenilmetiloxicarbonilmarcfortina A (EXEMPLO 21, 30 mg, 0,043 mmol) o composto do titulo é obtido, RMN seleccionado (400 MHz, CDCI3) 7, 88-7,20, 6,72, 6, 64, 6,38, 4,76, 4,28, 3,01, 2,85 e 2,60 δ. EXEMPLO 29 PARA REFERÊNCIA SOMENTE N(l)-4'-

Nitrofenoxicarbonil-2a-hidroxi-2-desoxoparaherquamida A (XXVIII)

Em seguida ao procedimento geral do EXEMPLO 26 e fazendo variações não criticas, mas usando N(l)-4'-Nitrofenoxicarbonilparaherquamida A (EXEMPLO 23, 1,0 g, 1,52 mmol) o composto do titulo é obtido, RMN (400 MHz, CDC13) 0,85, 0,93, 1,3-2,7, 1,40, 1,47, 1,63, 3,02, 3,2- 3, 6, 4,79, 5, 85, 6, 18, 6, 88, 7,35 e 8,28 δ; HRMS (FAB, m/z) [M+H] calculado para C35H4oN409 + H+ = 661,2873, medido = 661,2877. 58 EXEMPLO 30 PARA REFERÊNCIA SOMENTE N(l)-4'-

Nitrofenoxicarbonil-14oí-hidroxi-14 | 3-metil-2a-hidroxi-2-desoxomarcfortina A (XXVIII)

Em seguida ao procedimento geral do EXEMPLO 26 e fazendo variações não criticas, mas usando N(l)-4'-Nitrofenoxicarboni1-14a-hidroxi-14 β-metilmarcfortina A (EXEMPLO 24, 180 mg, 0,27 mmol) the title com pound é obtido, RMN (400 MHz, CDC13) 0,85, 0, 91, 1,3-2,7, 1,40, 1,45, 1,48, 3,09, 3, 1-3,7, 4,79, 5, 88, 6,21, 6, 87, 7,36 e 8,29 δ; HRMS (FAB, m/z) [M+H] calculado para C36H42N409 + H+ = 675,3030, medido = 675,3031. EXEMPLO 31 PARA REFERÊNCIA SOMENTE N(l)-4'-

Nitrofenoxicarbonil-14a-hidroxi-15a-metil-2a-hidroxi-2-desoxomarcfortina A (XXVIII)

Em seguida ao procedimento geral do EXEMPLO 26 e fazendo variações não criticas, mas usando N(l)-4'-Nitrofenoxicarboni1-14a-hidroxi-15a-metilmarcfortina A (EXEMPLO 25, 2 g, 2,97 mmol) o composto do titulo é obtido, RMN (400 MHz, CDC13) 0, 85, 0, 92, 1,01, 1,3-2,7, 1,39, 1,48, 3, 05, 3, 1-3, 7, 4,79, 5, 86, 6, 19, 6, 87, 7,36 e 8,29 δ; HRMS (FAB M/Z) [M+H] calculado para + H+ = C36H42N409; 675, 3030 medido = 675,3036. EXEMPLO 32 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 1,2-Dehidromarcfortina A (XXIX) Método A.

N(1)-Fenoxicarbonil-2a-hidroxi-2-desoxomarcfortina A (XXVIII, EXEMPLO 26, 1 g, 1,67 mmol) é dissolvida em glyme (15 ml) e tratadas com hidróxido de sódio (1 N, 20 ml). A mistura é submetida a refluxo durante 1-2 h. Após a mistura ser arrefecida até 20-25°, carbonato de potássio (10 %, 60 ml) é adicionado. 0 precipitado resultante é colhido e seco para dar o composto do titulo, RMN (400 MHz, CDC13) 0,67, 1,25, 1,3-2,7, 1,44, 1,47, 3,04, 3,70, 4,91, 6,48, 6,95 e 8,18 δ; HRMS (FAB M/Z) [M+H] calculado para C28H35N303 + H+ = 462,2756, medido = 462,2762. 59 Método B. N(1)-4'-Nitrofenoxicarbonil-2a-hidroxi-2-desoxomarcfortina A (XXVIII, EXEMPLO 27, 50 mg, 0,08 mmol) é dissolvida em glyme (1 ml), e tratada com hidróxido de sódio (1 N, 1 ml) . A mistura é agitada durante lha 20-25°. Após carbonato de potássio (10 %, 5 ml) ser adicionado à mistura, este é extraído em acetato de etilo (20 ml). A camada orgânica é separada e seca em sulfato de magnésio e concentrada para dar o composto do título. Método C. A N(1)-9'-fluorenilmetiloxicarbonil-2a-hidroxi-2- desoxomarcfortina A (XXVIII, EXEMPLO 28, 30 mg, 0,043 mmol) em DMF (3 ml) a 20-25° é adicionado fluoreto de tetrabutilamónio (1,0 M em THF, 0,04 ml, 0,04 mmol) gota a gota. Em seguida de 10 min de agitação a mistura de reacção é extinta com carbonato de potássio (10 %, 30 ml) e extraída em acetato de etilo (30 ml) . O extracto orgânico é seco em sulfato de magnésio, filtrado e concentrado para dar o resíduo que é submetido a cromatografia (sílica gel; metanol/cloreto de metileno, 5/95) para dar o composto do título. EXEMPLO 33 1,2-Dehidroparaherquamida A (XXIX)

Em seguida aos procedimentos gerais do EXEMPLO 32, métodos A e B e fazendo variações não críticas, mas usando N (1)-4'-nitrofenoxicarbonil-2a-hidroxi-2- desoxoparaherquamida A (XXVII I, EXEMPLO 29, 880 mg, 1,33 mmol) o composto do título é obtido, RMN (400 MHz, CDC13) 0, 69, 1,22, 1,3-2,7, 1,43, 1,45, 1, 66, 2, 97, 3,22, 3, 62, 4,90, 6,29, 6,94 e 8,13 δ; HRMS (FAB M/Z) [M+H] calculado para C28H35N304 + H+ = 478,2705, medido = 478,2717. EXEMPLO 34 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 1,2-Dehidro-14oí-hidroxi-14β-metilmarcfortina A (XXIX)

Em seguida aos procedimentos gerais do EXEMPLO 32, métodos Um e B e fazendo variações não críticas, mas usando N (1) -4' -Nitrofenoxicarbonil-14a-hidroxi-15cx-metil-2a- 60 hidroxi-2-desoxomarcfortina A (XXVIII, EXEMPLO 31, 150 mg, 0,22 mmol) o composto do título é obtido, RMN (400 MHz, CDC13) 0, 68, 1,21, 1,3-2,7, 1,44, 1,46, 1,47, 3, 05, 3, 65, 4,91, 6,46, 6,93, e 8,19 δ. EXEMPLO 35 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 1,2-Dehidro-14o(-hidroxi-15oí-metilmarcfortina A (XXIX)

Em seguida aos procedimentos gerais do EXEMPLO 32, métodos Um e B e fazendo variações não críticas, mas usando N (1)-4'-nitrofenoxicarbonil-14a-hidroxi-15a-metil-2a-hidroxi-2-desoxomarcfortina A (XXVIII, EXEMPLO 31, 2 g, 2,96 mmol) o composto do título é obtido, RMN (400 MHz, CDCI3) 0, 69, 1, 04, 1,24, 1,3-2,7, 1,45, 1,47, 3, 02, 3, 69, 3, 85, 4, 92, 6, 48, 6, 95 e 8,19 δ. EXEMPLO 36 PARA REFERÊNCIA SOMENTE 2-Desoxomarcfortina A (XXIV) Método A. 1.2- Dehidromarcfortina A (XXIV, EXEMPLO 32, 220 mg, 0,48 mmol) é dissolvida em metanol (10 ml) e tratadas com borohidreto de sódio (30 mg) a 0o durante 15 min. A mistura de reacção é extinta com carbonato de potássio (10 %, 20 ml). O precipitado resultante é seco para dar o composto do titulo, RMN (400 MHz) é o mesmo que o do EXEMPLO 16. Método B. N(1)-terc-Butoxicarbonilmarcfortina A (XXVII, EXEMPLO 19, 100 mg, 0,17 mmol) é dissolvida em diglyme (5 ml) e tratada com borohidreto de sódio (20 mg) a 20-25°. A mistura é então aquecida até refluxo durante 0,5 h. Após a mistura ser arrefecida até 20-25°, carbonato de potássio (10 %, 10 ml) é adicionado. O precipitado resultante é seco para dar o composto do titulo. EXEMPLO 37 2-Desoxoparaherquamida A (XXX) Método A. 1.2- Dehidroparaherquamida A (XXIX, EXEMPLO 33, 1,5 g,

3, 14 mmol) é dissolvida em metanol (30 ml) e tratada com borohidreto de sódio (250 mg) a 0° durante 15 min. A 61

mistura de reacção é extinta com carbonato de potássio (10 %, 60 ml) e extraída em acetato de etilo (100 ml) . O extracto orgânico é seco em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada para dar o resíduo que é submetido a cromatografia (sílica gel; metanol/cloreto de metileno, 5/95) para dar o composto do título, RMN (400 MHz) é o mesmo que o do EXEMPLO 17. Método B. N(1)-terc-Butoxicarbonilparaherquamida A (XXVII, EXEMPLO 22, 30 mg, 0,05 mmol) é dissolvida em glyme (2 ml)

e tratadas com borohidreto de sódio (20 mg) a 20-25°. A mistura é então aquecida to refluxo durante 4 h. Após a mistura ser arrefecida até 20-25°, carbonato de potássio (10 %, 5 ml) é adicionado, e extraído em acetato de etilo (10 ml) . A camada orgânica é seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada para dar o resíduo que é submetido a cromatografia (sílica gel; metanol/cloreto de metileno, 5/95) para dar o composto do título. Método C.

A paraherquamida A (XXVI, 1 g, 2 mmol) em THF (destilado de benzofenona e potássio metal, 40 ml) sob uma atmosfera de azoto é adicionado hidreto de sódio (60 % em óleo, 0,24 g, 6 mmol) em uma porção. A mistura de reacção resultante é agitada durante 0,75 h a 20-25°, arrefecida até 0° e tratada com 9-fluorenilmetilcloroformato (0,8 g, 3 mmol) em uma porção. A reacção é extinta 5 minutos depois com um solução de tampão fosfato (pH = 7, adquirida de EM Science, 40 ml) diluída com água (40 ml) e extraída em acetato de etilo (2 x 50 ml) . Os extractos orgânicos combinados são secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para dar a N(l)-9'- fluorenil-metiloxicarbonilparaherquamida A bruta (XXVII, 1,4 g, 2 mmol) que é dissolvido em metanol, arrefecida até 0° e tratada com borohidreto de sódio (0,3 g, 7,9 mmol) em uma porção. A reacção é extinta 10 minutos depois com 62 bicarbonato de sódio (saturados, 100 ml) e extraída em acetato de etilo (2 x 50 ml) . Os extractos orgânicos combinados são secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para dar a N(l)-9'-fluorenilmetil-oxicarbonil-2a-hidroxi-2- desoxoparaherquamida A bruta (XXVIII, 1,4 g, 2 mmol) que é dissolvida em THF (50 ml) a 20-25° e tratada com fluoreto de tetrabutilamónio (1,0 M em THF, 8 ml, 8 mmol) . Em seguida 0,5 h de agitação, a mistura de reacção é extinta com água (50 ml) e extraída em acetato de etilo (2 x 50 ml). Os extractos orgânicos combinados são secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para dar 1,2-dehidroparaherquamida A (XXIX, 0,96 g, 2 mmol). Este composto é dissolvido em metanol a 0° e tratado com borohidreto de sódio (0,5 g, 13 mmol) em uma porção. A reacção é extinta 10 minutos depois com bicarbonato de sódio (solução aquosa saturada, 100 ml) e extraída em acetato de etilo (2 x 50 ml) . Os extractos orgânicos combinados são secos em sulfato de magnésio, filtrados, concentrados sob pressão reduzida e submetidos a cromatografia (sílica gel; acetona/cloreto de metileno, 30/70) para dar o composto do título.

63 ESQUEMA A

64 ESQUEMA D

ocra) 65 ESQUEMA Η

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66 ESQUEMA I

Fórmula 10

67ESQUEMAJ

Fórmula 12a Fórmula 12b

Fórmula 10

68 ESQUEMA K

Fórmuís 15

69 ESQUEMA I

Fórmula 19 70 ESQUEMA Μ

Formula Sa

71ESQUEMA N

Fórmula 38

Fórmula 3? 72 esquema η

(XXVIt) 0000 73

REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de referências citadas pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente Europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente citados na descrição • US 4866060 A [0003] • US 4923867 A [0003] • WO 9222555 A [0004] [0012] • WO 9109961 A [0010] • US 4873247 A [0011] • US 4978656 A [0011] • EP 390532 A [0011] • EP 301742 A [0011] • WO 9429319 A [0013] [0014] [0017]

Literatura não relacionada com patentes, citada na descrição • Journal of the Chemical Society Chemical Communications, 1980, 601-602 [0002] • Tetrahedron Letters, 1981, vol. 22, 1977-1980 [0002] • Tetrahedron Letters, 1981, vol. 22, 135-136 [0003] • Journal of Antibiotics, 1991, vol. 44, 492-497 [0003] • The Journal of Antibiotics, 1990, vol. 43, 1380-1386 [0005]

Claims (3)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto de fórmula (XXV)

σαν> em que R14 é hidrogénio ou Ci_4 alquilo; e Ris é hidrogénio ou Ci_4 alquilo; ou um óxido de N ou sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

2. Um composto de acordo com a reivindicação 1, em que o sal f armaceuticamente aceitável é um sal de ácido metanosulfónico, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico, ácido benzóico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido fumárico, ácido maleico, CH3- (CH2) cu4-COOH ou HOOC- (CH2) 0-4-COOH.

3. Um composto de acordo com a reivindicação 1 que é 2-desoxoparaherquamida A.