PT1685131E

PT1685131E - ''pirido-7-pirimidin-7-onas substituídas com hidroxialquino''

Info

Publication number: PT1685131E
Application number: PT04797601T
Authority: PT
Inventors: David Michael Goldstein
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 2003-11-13
Filing date: 2004-11-04
Publication date: 2007-05-31
Also published as: RU2006120486A; CN100455582C; US20080119497A1; AU2004289428B2; RU2348632C2; DE602004005238D1; EP1685131A1; US20050107408A1; TW200526657A; EP1685131B1; KR20060086417A; US7348331B2; CA2544247A1; DK1685131T3; PL1685131T3; HRP20070132T3; ES2281843T3; KR100816321B1; CO5690600A2; JP2007510686A

Description

Descrição "PIRIDO-7-PIRIMIDIN-7-ONAS SUBSTITUÍDAS COM HIDROXIALQUILO" A presente invenção é relativa a píridopírírnídínas e aos seus derivados. Em particular, a presente invenção proporciona 7-oxo-pirido[2,3-d]pirimidinas 2,6- dissubstítuídas, um processo para o seu fabrico, preparações farmacêuticas que as contêm, e as suas utilizações.

Proteinoquinases activadas por mitógeno (MAP) são uma família de serina/treomna quinases dirigidas à prolina que actívam os seus substratos por fosforilação dupla. As quinases são activadas por uma variedade de sinais incluindo stress nutricional e osmótico, luz UV, factores de crescimento, endotoxína e citoquinas inflamatórias. Um grupo de MAP quinases é o grupo da p38 quínase que inclui diversas isoformas (por exemplo, ρ38α, ρ39β, ρ38γ e ρ38δ). As p38 quinases são responsáveis por fosforilar e actívar factores de transcriptação bem como outras quinases, e são activadas por stress físico e químico, citoquinas pró-inflamatórias e lípopolissacárido bacter.iano.

De maior importância, mostrou-se que os produtos da p38 fosforilação mediavam a produção de citoquinas inflamatórias, incluindo TNF e IL-1, e cicloxigenase-2. Cada uma destas citoquinas foi implicada em numerosos estados e situações de doença. Por exemplo, TNF-α é uma citoquina produzida principalmente por monócitos e macrófagos activados: A sua produção excessiva ou desregulada foi implicada como tendo um papel causal na patogénese da artrite reumatóíde. Maís recentemente, mcstrou-se que a inibição da produção do TM’ tem uma ampla 2 aplicação no LraLamento da inflamação, da doença inflamatória do intestino, da esclerose múltipla e da asma. TNF foi também impl como, entre outros, HIV, incluindo herpes simplex cado em infecções virais, tais infiuenza vírus, e herpes vírus vírus tipo 1 ÍHSV-1), herpes simplex vírus tipo 2 (HSV-2), citomegalovírus (CMV), varicela-zoster vírus (VZV), Epstein-Barr vírus, herpes vírus humano 6 (HHV-6), herpes vírus humano 7 (HHV-7), herpes vírus humano 8 (HHV-8), pseudoraiva e rinotraqueíte.

De modo semelhante, IL-1 é produzido por monócitos e macrófagos activados, e desempenha um papel em muitas respostas patofisiológicas, incluindo a artrite reumatóide, a febre e a redução da absorção do osso.

Adicionalmente, o envolvimento do p38 foi implicado no acidente vascular cerebral, na doença de Alzheimer, na osteoartrite, na lesão do pulmão, no choque séptico, na angíogénese, na dermatite, na psoríase e na dermatite atópíca. J. Εχρ. Opin. Ther. Patents, 2000, 10 (1). A inibição destas cítoquinas por inibição da p38 quínase é benéfica no controlo, na redução e no alívio de muitos destes estados de doença.

Certas S-aril-pírido[2,3-d]pirimidin-7-onas, -7-iminas e -7-tionas são apresentadas como inibidores da proliferação celular mediada pela proteína tirosina quínase na WO 96/34867. Outras S-aril-pirido[2,3-d]piirimidínas e naftirídínas são também apresentadas como inibidores da tirosina quínase na WO 96/15128. 6-alquil-pírído[2,3-d] pirim.idin-7-onas são apresentadas como inibidores de quinases dependentes da ciclína na WO 98/33798. Certas 4- cn amino-pir.idopirimídinas são apresentadas como inibídores da reductase do di-hídrofolato na EP 0 278 686 A 1.

Uma concretização da presente invenção proporciona compostos da fórmula I.

em que X1 é 0, C-0 ou S(0)n, em que n é 0, 1 ou 2;

Ar1 é arilo ou heteroarilo; R1 é alcoxialquílo, alquilo, cícioalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, hidroxialquilo ou hídroxicícloalquilo; e

Fr é hidroxialquilo, oxoalquilo ou hídroxicícloalquilo.

Enquanto é sabido que certas piriác-7-pirimidin-7-onas substituídas são activas num teste enzimático in vitrc-contra p38 (ver, por exemplo, US-20G3-0171584-A 1 que aqui se incorpora na íntegra, por referência), surpreendente e inesperadamente, o presente inventor descobriu que, num teste de produção de cisterna em sangue humano completo induzida por um lipopolissacárido (LPS), Compostos da Fórmula I têm uma actividade significativamente maior do que compostos que foram apresentados anteriormente.

Compostos da Fórmula I são inibídores de proteinoquínases e apresentam uma actividade eficaz contra p38 in vivo. São selectívos contra a p38 quínase em relação a quinases dependentes da ciclina e a tirosina qumases. Portanto, os compostos da presente invenção podem ser utilizados para o tratamento de doenças mediadas pelas 4 citoquinas pro-inflamatórias tais como TNF e IL-1. Assim, uma outra característíca da presente intenção proporciona a utilização de um Composto da Fórmula I para a produção de um medicamento para o tratamento de doenças mediacas por p38 ,

Excepto quando o referido o contrário, os termos seguintes utilizados na especificação têm os significados que lhes são dados abaixo: "Alcoxiaiquilo" significa uma parte da fórmula Ra-0-Rb-, em que Ra é alquilo e Rb é alquíleno, tal como aqui definido. A título de exemplo, grupos alcoxiaiquilo representativos incluem 2-metoxietilo, 3-metoxipropilo, l-metil-2-metoxietilo, 1-(2-metoxietil)-3-metoxipropilo e 1-(2-metoxietil)-3-metoxipropilo. "Alquilo" significa um radical hidrocarbonetc monovalente saturado linear com um a seis átomos de carbono ou um radical hidrocarboneto monovalente saturado ramificado com três a seis átomos de carbono, por exemplo, metilo, etilo, propilo, 2-propilc, n-butilo, isobutilo, terc-butilo, pentilo e semelhantes. "Alquíleno" significa um radical hidrocarboneto bívalente saturado linear com um a seis átomos de carbono ou um radical hidrocarboneto bivalente saturado ramificado com três a seis átomos de carbono, por exemplo, metileno, etileno, 2,2-dimetiletileno, propíleno, 2-metilpropíleno, butíleno, pentileno e semelhantes. "Arílo" significa um radical hidrocarboneto aromático monocíclico ou bícíclico monovalente que é opcionalmente 5 5 substituído, substituíntes, substítuíntes, seleccicnados independentemente, com um ou maís de preferência um, dois ou três, sendo esses preferencialmente do grupo que consiste em alquilo, hidroxiio, alcoxí, halogenoalquilo, halogenoalcoxi, halogénío, nitro, ciano, amino, monoalquilamino, dialquilamino, metilenodioxi, etilenodioxi e acilo. Um substítuinte de arilo particularmente preferido é halogénío. Mais especificamente o termo arilo inclui, mas não se encontra limitado a, fenílo, clorofenilo, fluorofenilo, difluorofenílo (tal como 2,4- e 2,6-difluorofeniio), metoxifenilo, 1-naftilo, 2-naftil.o e os seus derivados. "Cicloaiquilo" refere-se a um radical hidrocarboneto cíclico monovalente saturado com três a sete carbonos no anel, por exemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclo-hexilo, 4-metil-cíclo-hexilo e semelhantes. Cicloaiquilo pode ser opcionalmente substituído com. um ou mais substituíntes, de preferência um, dois ou três substituíntes. 0 substítuinte de cicloaiquilo é, de preferência, seleccionado do grupo consistindo de alquilo, hidroxiio, alcoxi, halogenoalquilo, halogenoalcoxi, halogénío, arninc, monoalqui lamino, dialquilamino e acilo. Um grupo particularmente preferido de substituíntes de cicloaiquilo incluí alquilo, hidroxiio, alcoxi, halogenoalquilo, halogenoalcoxi e halogénío. Um grupo especialmente preferido de substituíntes de cicloaiquilo inclui alquilo, hidroxiio, alcoxi e halogénío. "Cicloalcruí iam Rc-Rd-, em que iilo" refere-se a uma parte, da fórmula Kc é cicloaiquilo e R'1 é alquileno tal como aoui definido. 6 "Halogénio" e "halogeneto" são aqui usados como intermutáveis e referem-se a fluoro, clor c, bromo, ou iodo. Halogenet os preferidos são fluoro e cloro com íluoro a ser um halogenetc partícularmente preferido. "Halogenoalquilo" significa alquilo substituído com um ou ma is átomos de halcgénio iguais ou diferentes, por exemplo, -CH2Cl, -CF3, -CH2CF3, -CH2CCI3 e semelhantes. "Heteroarilo" significa um radical monocíclico ou bicíclico monovalente com 5 a 12 átomos no anel com pelo menos um anel aromático contendo um, dois ou três heteroátomos no anel seleccíonados de entre N, 0 ou S (de preferência N ou 0) , sendo C os restantes átomos do anel, entendendo-se que o ponto de ligação do radical heteroarilo será num anel aromático. 0 anel heteroarilo é opcionalmente substituído, independentemente, com um ou mais substituintes, de preferência, um ou mais substituíntes, seleccíonados de entre alquilo, halogenoalquilo, hidroxi, alcoxi, halogénio, nitro ou cíano. Mais especificamente o termo heteroarilo inclui, mas não se encontra limitado a, pirídilo, furanilo, tienilo, tiazolilo, isoriazolilo, triazoiilo, imidazolilo, isoxazolílo, pirrolilo, pirazolílo, pirimidínilo, benzofuranilo, tetra-hidrobenzofuranilo, isobenzofuranilo, benzotiazolilo, benzcísotiazolilo, benzotriazolilo, indolilo, isoindolilo, benzoxazolilo, quinolílo, tetra-hidroquinolinilo, isoquinolilo, benzimidazolilo, benzisoxazolilo ou benzotienilo, imídazo[1,2-a]-piridinilo, imidazc[2,1-b]-tiazolilo, e os seus derivados. 7 "Heterociclilo" significa um radical cíclico não aromático saturado ou insaturado com 3 a 8 átomos no anel em que um ou dois átomos do anel são heteroátomos seleccionadcs de entre N, 0, ou S(0)ri (em que n é um ínneiro de 0 a 2) , de preferência, N ou 0, sendo C os átomos remanescentes do anel, em que um ou dois átomos C podem opcionalmente ser substituídos por um grupo carbonilo. 0 anel heterociclilo pode ser opcionalmente substituído, independentemente, com um, dois ou três substituíntes seleccionados de alquilo, halogencalquilo, hidroxíalquilo, halogénío, nitro, cíano, ciancalquilo, hidroxilo, alcoxi, amino, monoalquilamino, dialquilamino, aralquílo, - (X) n-C (0) Rs (em que X é 0 ou NRf, n é 0 ou 1, Re é hidrogénio (quando X é NR1) , alquilo, halogenoalquilo, hidroxi (quando n é 0) , alcoxi, amino, monoalquilamino, dialquilamino, ou fenilo opcionalmente substituído, e Rf é H ou alquilo) , alquíleno-C(O)R9 (em que Rg é alquilo, -0Rn ou NR^R^ e Rh é hidrogénio, alquilo ou halogenoalquilo, e R1 e R3 são, independentemente, hidrogénio ou alquilo), ou -S(0)nRk (em que n é um inteiro de 0 a 2) tal que, quando n é 0, Rk é hidrogénio, alquilo, cicloalquilo cu ciclcalquilalquílo, e quando n é 1 ou 2, Rk é alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, amino, acilamino, monoalquilamino ou dialquilamino. Um grupo particularmente preferido de substituintes de heterociclilo incluí alquilo, halogenoalquilo, hidroxíalquilo, halogénío, hidroxilo, alcoxi, amino, monoalquilamino, dialquilamino, aralquilo e -S (0) nRK. Em particular, o termo heterociclilo incluí, mas não se encontra limitado a, tetra-hídrofuraníio, piridinilo, tetra-hidropiranilo, piperidino, N-metilpiperidín-3-ilo, píperazino, N-metilpírrolidín-3-ilo, 3-pirrolidino, morfolino, tiomorfoiino, tiomorfolino-l-óxído, tiomorfolino-1,1-dióxico, 4-(1,l-dioxo-tetra-hidro-2H-tioDÍranilo), pirrolinilo, imidazoiinilo, N- metanossulíonil-piperidin-4-lio, e os seus derivados, cada um dcs quais pode ser opcicnalmente substituído. "Hidroxialquilo" significa uma parte alquilo, tal como aqui definida, substituída com um ou maís, de preferência, um, dois ou três grupos hidroxí, desde que o mesmo átomo de carbono não seja porcador de maís do que um grupo hidroxilo. Exemplos representativos incluem, mas não se encontram limitados a, hidroximetilo, 2-hidroxietilo, 2-hidroxipropilo, 3-hídroxipropilo, 1-(hidroximetilj-2~metilpropilo, 2-hidroxibutilo, 3-hidroxibutilo, 4-hidroxíbutilo, 2,3-di-hidroxipropilo, 2-hidroxi-l-hidroximetiletilo, 2,3-di-hidroxíbutilo, 3,4-di-hidroxibutilo e 2-(hidroximetil!-3-hídroxipropilo. "Hidroxicícloaiquilo" significa uma parte cicloalquilo, tal como aqui definido, em que um, dois ou três átomos de hidrogénio no radical cicloalquilo foram substituídos por um substituinte hidroxilo. Exemplos representativos incluem, mas não se encontram limitados a, 2-, 3-, ou 4-hidroxiciclo-hexilo, e semelhantes. "Grupo a rejeitar" tem c significado que convencíonalmente lhe está associado em quimíca orgânica de síntese ou seja um átomo ou um grupo capaz de ser removido por um nucleófilo e incluí halogénio (tal como clero, bromo e iodo), alcanossulfoníloxi, arenossuifoniloxi, alquíIcarboniloxi (por exemplo, acetoxí), ariicarboniloxi, mesiloxi, tosiloxi, triflucrometanossulfoniloxi, aríloxi (por exemplo, 2,4- 9 dinitrofenoxí}, metoxi, N,O-dímetí1-hídroxílamino e semelhantes. "Fenilo opcionalmente substituído" significa um anel feniIo que seja opcionalmente substituído, independentemente, com um ou mais substituintes, de preferência, um ou dois substituintes seleccionados de entre o grupo que consiste de alquilo, hidroxiio, alcoxí, halogenoalquilo, halogenoalcoxi, halogénio, nitro, ciano, ainino, metiienodioxi, etilenodioxi e acilo. "Cxoalquilo" significa um grupo alquilo que seja substituído com uma ou mais partes oxigénio de carbonilo (isto é, =0), tal como uma parte com a fórmula Rz-C(=0)- RY-, na qual RY é alquileno e Rz é alquilo. Grupos cxoalquilo representativos incluem 2-propanon-3-ilo, 2-metil-3-butancn-4-ilo e semelhantes. "Exeípiente farmaceuticamente aceitável" significa um excípíente que seja útil na preparação de uma composição farmacêutica que, em termos gerais, seja segura, não tóxica, nem indesejável quer sob o ponto de vista biológico quer sob qualquer outro, e inclui excxpiente que seja aceitável para uso veterinário bem como para uso farmacêutico humano. Um "excipiente farmaceuticamente aceitável", tal como usado na especificação e nas reivindicações, incluí tanto um como mais do que um desses excípíentes.

Sal farmaceuti camen te aceitável" de um composto ignif íca um. sal que seja farmaceuticí imente aceitável e ue p ossua a dese j ada natividade farmacológica do composto base. Taís sais incluem: (1) saís de adição de 10 ácido, formados com ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, ácido bromídríco, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e semelhantes; ou formados com ácidos orgânicos cais como ácido acético, ácido propiónico, ácido hexanóico, ácido ciclopentanopropiónico, ácido glicóiícc, ácido pirúvico, ácido láctico, ácido malónico, ácido succinico, ácido málico, ácido maleico, ácido fumáríco, ácido tartáríco, ácido cítrico, ácido benzóíco, ácido 3 —(4 — hidroxíbenzoíi)-benzóíco, ácido cínâmico, ácido mandélico, ácido metanossulfónico, ácido etanossulfónico, ácido 1,2-etano-dissulfónico, ácido 2-hídroxietanossulfónico, ácido benzenossulfónico, ácido 4-clorobenzenossulfónico, ácido 2-naftalenossulfónico, ácido 4-toluenessulfónico, ácido cânforossulfónico, ácido 4-metílbícíclo[2.2.2]-oct-2-eno-l-carboxilico, ácido gluco-heptónico, ácido 3-feniipropiónico, ácido trimetilacético, ácido terc-butilacético, ácido laurilsulfúrico, ácido glucóníco, ácido glutâmico, ácido hídrox.i naftóico, ácido salícílíco, ãcído esteárico, ácido mucóníco e semelhantes; ou (2) sais formados quando um protão acíclíco presente no composto base é ou substituído por um ião metálico, por exemplo, um ião de metal alcalino, um Ião de metal alcalino-terroso ou um ião alumínio; ou entra em coordenação com uma base orgânica tal como etanolamina, dietanolamína, trietanolamina, trometamina, N-metílglucamína e semelhantes.

Os termos "pró-fárrnaco" e "profármaco" são aqui usados de modo intermutável e referem-se a qualquer composto que liberte ín vivo um fármaco base acrivo, de acordo com a Fórmula I, quando tal pró-fármaco for adminisrrado a um mamífero. Pró-fármacos de um composto da Fórmula 1 11 são preparados modificando um ou mais grupo(s) funcionais presenres nc composto da Fórmula I de um modo tal que a modificação (modificações) possam ser clivadas m vivo para libertar o composto base. Pró-fármacos incluem compostos da Fórmula I nos quais um grupo hidroxilo, amino, sulfidrilo, carboxilo ou carboniio, num composto da Fórmula I, se encontra ligado a qualquer grupo que possa ser clivado in vivo para regenerar, respectivamente, o grupo hidroxilo, amino ou sulfidrilo livre. Exemplos de pró-fármacos incluem, mas não se encontram limitados a, ésteres (por exemplo, derivados de acetato, dialquilaminoacetatos, formiatos, fosfatos, sulfaros e benzoato) e carbamatos (por exemplo, N,N-dimetilaminocarbonilo) de grupos funcionais hidroxilo, grupos éster (por exemplo, ésteres de etilo, ésteres de morfolinoetanol) de grupos funcionais carboxilo, derivados N-acilo (por exemplo N-acetilo) bases de Mannich N-, bases de Schiff e enaminonas de grupos funcionais ami.no, oximas, acetais, cetais e enol ésteres de grupos funcionais cetona e aldeído em compostos da Fórmula I, e semelhantes, ver Bundegaard, "Design of Prodrugs" pág. 1-92, Eisevier, New York-Oxford (1985). "Grupo protector" refere-se a um agrupamento de átomos que quando ligados a um grupo reactivo numa molécula mascaram, reduzem ou previnem essa reactividade. Exemplos de grupos protectores podem encontrar-se em Green e Wuts, Protective Groups in Organíc Chemistry, (Wiley, 2nd ed. 1991) e Harrison e Harríson et ai., Compendíum of Synthetíc Organíc Methods, Vols. 1-8 (John Wiley and Sons, 1971-1996). Grupos protectores de amino, representativos, incluem irormilo, acetilo, tnf luoroacetilo, benzilo, benziloxicarbonílo (CBZ), terc-butoxicarbonilo (Boc), rrímetilsiiílo (TM3), 2- 12 12 (SES), tritiio e grupou aliloxícarbonilo, 9- trimeti isí1il-etanossulfoni tritiio substituídos,

Lio {FM o o / nrtro- NVOC) r e semel hantes. Grupos xilo, represe nta ti Ví 1 H ^ ! incluem ipo h idroxii .o se er 'Ρπυΐ i v_/ αΐ υ ra quer talo como é teres de benz ilo e de ; S de a r qu i J -O, é t ;ere s d« 5 tetra- f1uorenilmetiloxicarbc veratriloxícarbonilo protectores de hid] aqueles em que o g acilado quer alquiladc tritiio bem como éte hidropíranílo, éteres de tríaiquílsíliio e éteres de "Tratar" ou "tratamento" de uma doença incL Lui: (1) preveni r a doença, isto é, levar a que os sintomas clini cos da doença não se desenvolvam num mamífero que possa ser exposto à doença ou se encontre predisposto à doença, mas que ainda não tenha a doença ou apresente sintomas da doença; (2) inibir a doença, isto é, parar ou reduzir o desenvolvimento doença ou dos seus sintomas clínicos; ou (3) aliviar a doença, isto é, causar a regressão da doença ou dos seus sintomas clínicos. "Uma quantidade terapeuticamente eficaz" significa a quantidade de um composto que, quando administrada a um mamífero para o tratamento de uma doença, seja suficiente para assegurar tal tratamento da doença. A "quantidade terapeuticamente eficaz" variará em função do composto, da doença e sua severidade e da idade, peso, etc., do mamífero a tratai 0 termo "traear", "colocar em conoacto" ou "fazer reagir" com referência a uma reacçào química, significa a adição ou mistura de dois ou mais reagentes sob condições apropriadas para produzir o produto indicado e/ou desejado. Deve valorizar-se o facto de aue a 13 reacção que produz o produto indicado e/ou desejado não tem necessariamente de resultar directamente da combinação de deis reagentes que foram inicialmente adicionados, isco é, pode haver um ou mais produtos intermédios que sei am produzidos na mistura que em última análise conduz à formação do produto indicado e/ou desejado.

Os compostos da presente invenção podem existir sob formas nâo solvatadas bem como sob formas solvatadas, incluindo formas hidratadas. Em geral, as formas solvatadas, incluindo as formas hidratadas, são equivalentes a formas não solvatadas e devem ser consideradas como abrangidas no âmbito da presente invenção. Em adição aos compostos descritos acima, os compostos da presente invenção incluem todas as formas tautoméricas. Além disso, a presente invenção, também inclui todos os sais £armaceuticamente aceitáveis desses compostos assim como as formas pró-fármaco dos compostos e todos os estereoisómeros quer seb forma quiral pura quer como uma mistura racémica quer sob outra forma de mistura.

Os compostos da Fórmula I podem além disse formar sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis. Todas estas formas se encontram no âmbito da presente invenção.

Sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da Fórmula I incluem sais derivados de ácidos inorgânicos, tais como clorídrico, nítrico, fosfórico, sulfúrico, bromídrico, iodídrico, fosforoso e semelhantes, bem como os saís derivados de ácidos orgânicos, tais como ácidos alífátícos monocarboxílícos e dicarboxílícos, ácidos alcanóicos fenil substituídos, ácidos hidroxi alcanóícos, ácidos alcanodióicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfónicos 14 alxf áticos e aromáticos, etc. Taís saís incluem, pois, sulfato, pirossulfate, bissulfato, sulfito, bissulfito, nitrato, fosfato, mono-hidrogenofosfato, ai- 14 h( jgenof os £ aro brometo, )de , metafosfato, pirofosfaro, cloreto, :o, acetato, propionato, capriiato, isobutirato, oxalato, malonato, succínato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, mandelato, benzoato, clorobenzoato, metiIbenzoato, dinitrobenzoato, ftalato, benzenossulfonato, toluenossulfonato, fenilacetato, citrato, lactato, maleato, tartarato, metanossulfonato e semelhantes. Também abrangidos são sais de aminoácidos tais como arginato e semelhantes e gluconato, galacturonato (ver, por exemplo, Berge et al., J. of Pharmaceutical Science 66:1-19 (1977).

Os saís de adição de ácido dos compostos base podem ser preparados por contacto da forma base livre com uma quantidade suficiente do ácido desejado para produzir o sal do modo convencional. A forma base livre pode ser regenerada por contacto da forma sal com uma base e isolando a base livre do modo convencional. As formas base livre diferem um pouco das suas respectivas formas de sal em certas propriedades físicas tais como solubilidade em solventes polares, mas quanto aos outros aspectos, para efeitos da presente invenção, os sais são equivalentes às suas respectivas bases livres. é arilo. Um Ar1 fenilo opcionaimente é f e n i 1 o

Numa concretização, Ar" particularmente preferido é substituído. Em certas concretizações, Ar opcionalmente substituído uma ou mais vezes com alquilo, naiogénio, halogenoaiquilo ou aicoxi. Um Ar" roais preferido é fenilo dissubstítuído tal como fenilo 2,4-dissubstituído. Ainda mais preferido, Ar1 é fenilo 2,4-di-halogeno 15 substituído. Ura Ar1 especialmente preferido é 2,4-difiuorofeniio.

Ainda noutra concretização, X1 é 0.

Noutra concretização, R1 é alccxialquilo, alquilo, cícloalquilo, cicloalquilalquilo, hidroxíalquilo ou heterocíciílo. De entre este grupo, um FR particularraente preferido inclui tetra-hidropiranilo opcionalmente substituído, l-metil-2-metoxietilo, ciclopentilo opcionalmente substituído, ciclopropilo cpcionalmcnte substituído, isopropilo, ciclo-hexilo opcionalmente substituído, 1-(2-hidroxietilj-3-hidrcxipropilo, 1-hidroximetil-2-hidroxipropilo, l-hidroximetil-3-hidroxipropilo, 1-metilpropilo, 2-hidroxi-l-metiletilo, 1-(2-metoxietil)-3-metoxipropilo, N-metanossulfonil-piperídinilo, etílo, metilo, 2-hidroxipropilo, neopentilo, 1,l-dimetil-2-hídroxíetilo, 1-(hidroximetil)propilo, 2-metilpropilo, cicloprcpilmetilo, cíclobutilo opcionalmente substituído, 1,2-dímeti1-2-hidroxipropilo e 1-(hidroximetil)-2-hidroxietilo.

Ainda numa outra concretização, um R1 preferido é hidroxíalquilo, com 2-hidroxi-l-metiletilo a ser um R1 particularmente preferido. R1 especialmente preferido incluí 2-hidroxi-l-mecíletíio enantíomerícamente enriquecido, isto é, (R)~ e (S) -2-hidroxi-l-metiletilo.

Numa concretização especifica, Pr é 2-hidroxietiio, 3-hidroxipropílo, 2-hídroxipropilo, 1-í2-hídroxíetíl)-3- hidroxipropilo ou 2-oxopropilo.

Numa outra concretização, R2 é hidroxíalquilo. De entre este grupo, um R2 particularraente preferido é 2- 16 hidroxietilo, 3-hidroxipropilo, 2-hídroxípropíIo e l-(2-hidroxietil}-3-hidroxiprcpílo. Um Pd especxalraente preferido é 2-hidroxipropilo. Numa outra concretização, R" é oxoalquilo.

Para além disso, combinações dos grupos preferidos, aqui descritos, formam outras concretizações preferidas. Por exemplo, numa concretização particularmente preferida R1 é (R) - ou (S)-2-hidroxi-l-metiletilo, é (R)- ou (S> — 2-hxdroxipropilo, ou 2-oxopropilo, X1 é 0 e Ar1 é 2,4“ difluorofeniio.

Numa concretização a presente invenção proporciona um composto da fórmula I em que Ar1 é arilo e X1 é 0. Noutra concretização a presente invenção proporciona um composto da fórmula I em que Ar1 é arilo, X1 é 0 e R1 é alcoxialquilo, alquilo, cicloalquiio, cicloalquiialquilo, hidroxialquilo ou heterociclilo. Ainda noutra concretização a presente invenção proporciona um composto da fórmula I em que Arx é arilo, X1 é 0 e R1 é tetra-hidropiranilo, 1-metil-2-metoxxetilo, ciclopentílo, ciclopropilo, isopropilo, cíclo-hexilo, 1-(2-hidroxietil)-3-hidroxípropilo, 1-hídrox.imetí 1-2-hidroxipropilo, l-hidroximetil-3-hidroxipropilo, 1-metilpropilo, 2-hidroxi-l-metiletilo, 1-(2-metoxietíl)-3-metoxipropilo, N-metanossulfonil-piperidinilo, etilo, metilo, 2-hidroxípropilo, neopentilo, 1,l-dimetil-2-hidroxietilo, 1-(hidroxímetíl)propilo, 2-metílpropilo, ciclopropilmetilc, ciclobutilo, 1,2-dimetil- 2- hidroxípropilo ou 1- (hidroximetil)2-hídroxietilo. Ainda numa outra concretização a presente invenção proporciona um composto da fórmula I em que Ar1 é arilo, X1 é 0, R1 é tetra-hidropiranilo, l-metil-2-metoxietilo, ciclopentílo, ciclopropilo, isopropilo, ciclo-hexilo, 1-(2-hidroxietil)- 3- hídroxipropilo, Í-hidrcximetil-2-hidroxipropilo, 1- 17 hidroximeti1-3-hidroxipropilo, 1-metilpropilo, 2-hídrcxi-i-metiletilo, 1-(2-metoxíetil)-3-metoxipropilo, n-metanossulfonil- píperidinilo, stilo, rrietílo, 2-hídroxípropilo, neopentílo, 1,l-dimetil-2-hídroxietilo, 1-(hidroximetil) propilo, 2-metilpropilo, ciclopropi .lmeti.l o, cíclobutílo, 1,2-dírnetil-2-hidroxipropilo ou i-(hidroximetil)2-hidroxietilo e R" é 2-hidroxietilo, 3-hidroxipropilo, 2-nídroxipropilo, 1-(2-hidroxietilo)-3-hidroxipropilo ou 2-oxopropílo.

Numa concretização a presente invenção proporciona um composto da fórmula I no qual Ar1 é arilo, X1 é 0, R1 é (R) -2-hidrοχι-l-metiletilo ou (S) -2-hidroxi-l-metiletiio e R2 é 2-oxopropilo, (R)-2-hidroxipropilo ou (S)-2- hidroxipropilo.

Numa concretização a presente invenção proporciona um composto da fórmula I no qual Ar1 é arilo, X1 é 0, R1 é hidroxialquilo. Noutra concretização a presente invenção proporciona um composto da fórmula I no qual Ar1 é arilo, X1 é 0, R1 é hidroxialquilo e R2 é hidroxialquilo. Ainda numa outra concretização a presente invenção proporciona um composto da fórmula I no qual Ar1 é arilo, X e 0, R e hidroxialquilo e R2 é 2-hidroxietilo, 3-hidroxipropilc, 2-hidroxipropilo ou 1-(2-hidroxietil)-3-hidroxipropilo.

Noutra concretização a presente invenção proporciona ; arilo, X1 é 0, R1 é -2-hidroxipropilo; R1 (S)-2-hidroxipropilo; e Rz é (?.}-2--1-metiletilo e R* é um composto da fórmula I no qual Ar1 (R)-2-hidroxi-l-metiletilo e R2 é (R) é (R)-2-hídroxi-l-metiletilo e R2 é R1 é (S)-2-hidroxi-l-metiletilo hídroxípropilo; ou R1 é (S)-2-hidroxi (3)-2-hidroxípropíIo. 18

Numa concretização a presente invenção proporciona um composto da fórmula 1 no qual E1 é hidroxialquilo. Noutra concretização a presente invenção proporciona um composto da fórmula I no qual R1 é hidroxialquilo e R“ é hidroxialquilo. Ainda numa outra concretização a presente invenção proporciona um composto da fórmula I no qual R1 é hidroxialquilo e R2 é hidroxialquilo e ArA é arilo.

Numa concretização a presente invenção proporciona um composto da fórmula I na qual Rz é hidroxialquilo.

Em certas concretizações, os compostos da invenção podem ser da fórmula

na qual m é entre 0 e 4; cada R3 é alquilo, halogénio, alcoxí ou halogenoalquílo; e R1 e R2 são como aqui descritos.

Em concretizações específicas, m é 1 e R3 é halogénio.

Ainda noutras concretizações, m é 2 e RJ é halogénio.

Numa concretização a presente invenção proporciona um composto da fórmula II na qual R1 é alcoxialquilo, alquilo, cicloalquíio, cícloalquílalquílo, hidroxialquilo ou heterocicliio. cíclopropilo

Numa concretização a presente invenção proporciona um composto da fórmula II na qual R1 é tetra-hidropiranilo, 1-ir.etí 1-2-metoxietilo, ciclopentiio, 19 isopropilo, ciclo-hexilo, 1-(2-hidroxietiij-3-hí.droxipropiio, 1-hidroximeti 1-2-hidroxí propilo, 1-hídroxímetil-3-hídroxipropilo, 1-metilpropilo, 2-hidroxi-l-metiletiio, 1-(2-metoxietil)-3-meLcxipropilo, N-metancssulfonil-piperidinilo, etilo, metílo, 2-hidroxipropilo, neopentilo, 1,l-dimetil-2-hidroxietilo, 1-(hi droxi metil)-propilo, 2-metilpropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, 1,2-dimetil-2“hidroxipropilo ou 1-(hidroximetil)-2-hidroxietilo. Noutra concretização a presente invenção proporciona um composto da fórmula II na qual R1 é tetra-hidropiranilo, l-metil-2-metoxietilo, ciclopentilo, ciclopropilo, isopropilo, ciclo-hexilo, 1-(2-hidroxietíl)-3-hidroxípropilo, l-hidroximetil-2-hidroxipropilo, 1-hídroxímetil-3-hidroxípropilo, 1-metilpropilo, 2-hidroxí-1-metiletilo, 1-(2-metoxietil)-3-metoxipropilo, N-metanossulfonil-piperidinilo, etilo, metilo, 2-hidroxipropilo, neopentilo, 1,l-dimetil-2-hidroxietilo, 1-(hidroximetil)-propilo, 2-metilpropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, 1,2-dimetil-2-hidroxipropilo ou 1-(hidroximetil)-2-hidroxietilo e Rz é 2-hidroxietilo, 3-hidrcxípropiio, 2-hidroxipropiio, l-(2-hidroxietil)-3-hidroxipropilo ou 2-oxopropilo.

Numa concretização a presente invenção proporciona urn composto da fórmula II na qual R1 é (R}-2-hidroxi-l-metíletilo ou (S)-2-hidroxi-l-metiletilo e R^ é 2-oxopropilo, (R)-2-hídrcxipropiio ou (S}-2-hidroxipropilo.

Numa concretização a presente invenç 3. C proporciona um composto da fórmula II na qual R1 e R2 são hí droxialauilo. Numa concretização a presente invenç 30 proporciona um composto da fórmula II na qual R1 é l) -2-hidroxi-l- metiletiio e R2 é (R)-2-hi droxiprop i1 o; R1 é (R)-2-hídroxi- 20 1-metiletílo e R2 é (S)-2-hidroxipropilo; R1 é (S)-2-hídroxi-1-me tile tilo e Rr é (R) -2-hidroxipropilo; ou Pd é (S) -2-hidroxi-l-metiletilo e R~ é {S)-2-hidroxipropilo.

Noutra concret 1 Z 3. Ç 3 O a presente invenção proporciona um composto da fórmula II na qual R1 θ R são hidr oxialquílo, n é 1 e R3 é halogénio * Noutra concret ização a presente invenção proporciona um composto da fórmula II na qual R1 e R' são hidr oxialquílo, n é 2 e R3 é halogénio .

Compostos representativos, de acordo com a invenção, são apresentados na Tabela I.

TABELA I # Nome 1 6- (2,4-Difliioro-fenoxi ) -8 - (2-hidroxi-etil)-2-(tetra-hidropiran-4-ilamino) -8H-pirido [2,3-d] pirimidin-7-ona 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-8-(3-hidroxi-propil)-2- (tetra- Z hidropiran-4-ilamino) -8#-pirido [2,3-d] pirimidin-7-ona 6-(2,4-Difluoro-fenoxi}-8-(2-hidroxi-propil)-2-(tetra- hidropiran-4-ilarnino) -SH-pirido [2,3-d] pirimidin-7-ona 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-8-[3-hidroxi-l-(2-hidroxi-etil) - 4 propil]-2-((S)-2-metoxí-l-meti1-etilamino)-8H-pírido[2,3- d]pirimidin-7-ona 2-Ciclopentiiamino-6-(2,4-difluoro-fenoxi)-8-((S)-2- hitíroxípropili-8fl-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona 2-Ciclopropílamino-6-(2,4-difluoro-fenoxi5-8-((S)-2-hidroxi- t) propil)-8fí-pirido[2,3-d]pirímidin-7-ona -q 6- (2,4-Difluoro-fencxi)-8-((S)-2-hidroxi-propil)-2- iscpropilamino-8H-pirido[2,3-d]pirímídin-/-cna Q 2-Ciclo~hexilamino-6-(2,4-difluoro-fenoxi)-8-((S)-2-hidroxi- j propil)-8H~pirído[2,3-d]pirimidin-7-ona 21 9 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-2-[3-hidroxi-l-(2-hidroxi-etil)-propilaminoj -8- ( (S) -2-hidroxi-propil) -8#-pirido [2,3- d] pirimidin-7-ona 10 6-(2,4-Dlfluoro-fenoxi)-8-((S)-2-hídroxi-propil)-2-(tetra- hidro-píran-4-ilamino) -8ií-pirido (2, 3-d] pirimidín-7-ona 11 6~(2,4-Difluoro-fenoxi)-2-((IR,2R)-2-hidroxi-l-hidroximetil-propilamino) - 8- ( (S) - 2-hidroxi-propil) -3Ií-piridc [ 2,3-d]pirimidin-7-ona 12 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-2-((S)-3-hidroxi-l-hidroximetil- propilamino) -8- ( (S) -2-hidroxi-propil) -8J7-pirido [2,3-d]pirimidin-7-ona 13 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-2-((R)-3-hidroxi-l-hidroximetii-propilamino) -8- ( (S) -2-hidroxi-propil) -8i7-pirido[2,3-dj pirimidin-7-ona 14 2 —((S)-sec-Butilamino)-6-(2,4-difluoro-fenoxi)-8-((S)—2 — hidroxi-propil) -8fí-pirido [2,3-d] pirimidin-7-ona 15 2-((R)-sec-Butilamino)-6-(2,4-difluoro-fenoxi)-8- ( (S)-2-hidroxí-propil) -8ií-pirido [2,3-d] pirimidin-7-ona 16 6- (2,4-Difluoro-fenoxi)-2-((S)-2-hidroxi-l-metil-etilaminc) -8 —((S)-2-hídroxi-propil)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona h i 6-(2,4-Difiuoro-fenoxi)-2-((R)-2-hidroxi-l-metil-eoilaminoi-8-((3) -2-hidroxi-propil) -817-pirido [2,3-d] pirimidin-7-ona 18 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-8-((S)-2-hidroxi-propil)-2-((S)-2-metoxi-l-metil-etilamino) -8Jí-pirido [2,3-d]pirimidin-7-ona 19 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-8-((S)-2-hidroxi-propil)-2-[3-metoxi-1- (2-metoxi-eti 1) -propilamino] -8ií-pirido [2,3-d] pi r imidin-7-ona Ο Λ /_ ;J 6-(2, 4-Difluoro-fenoxi)-8-((R)-2-hidroxi-propil)-2- (tetra-hidro-piran-4-ilamino) -8íh-pirido (2,3-d] pirimidin-7-ona 21 6- (2,4-Difluoro-fenoxi)-8-((S)-2-hidroxi-propil)-2-(1- netanossulfonil-piperidin-4-ilamino) -8i7-pirido [2,3-d] pir j.midin-7-ona 22 2-Ciclopropílamino-6-(2,4-difluoro-fenoxi)-8-((R)-2-hidroxi- 22 propil) -877-pirido [2,3-d]pirimidín-7-ona 23 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-8-((R)-2-hídroxi-propil}-2-isopropilamino-8Jí-pirido [2,3-d] pírimidin-7-ona 24 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-2-etilamino-8-{(R)-2-hidroxi-propil)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7~ona 25 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-3-((R)-2-hídroxi-propil)-2-metílamino-8H-pírído[2,3-d]pirimidin-7-ona 26 2-((S)-sec-Butilamínc)-6-[2,4-difluoro-fenoxi)-8-( (R)—2 — hidroxi-propil) -8/í-pirido [2,3-d] pírimidin-7-ona 27 28 2-((R)-sec-Butilamino)-6-(2,4-difluoro-fenoxi)-8-((R)-2-hídroxi-propíl) -87í-pirído [2,3-d] pirimidín-7-ona 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-8-((S)-2-hídroxí-propíl)-2-((R)-2-hidroxi-propílamino) -8d-pirido [2,3-d] pírimídín-7-ona 29 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-8-((3)-2-hidroxí-propil)-2- ( (S)-2-hidroxi-propílamino) -8i7-pírido [2,3-d] pirimidin-7-ona 30 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-2-(2,2-dimetil-propilamino)-8-((S)-2-hidroxi-propil)-Sff-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona 31 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-2-(2-hidroxi-l,1-dimetil-etilamino}-8- ( (R) -2-hidroxi-propil) -8d-pirido[2,3-d] pirimidin-7-ona 32 6- (2,4-Difluoro-fenoxi) -2- ( (S}-l-hidrcximetil-propilam.ino) -8-((S)-2-hídroxi-propil)-8d-pirido[2,3-d]pirimidín-7-ona 33 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-2-((R)-1-hidroximetil-propilamino)-8-((S)-2-hidroxi-propil)-8fí-pírido[2,3-d]pírimidin-7-ona 34 6- (2,4-Difluoro-fenoxi)-8-((R)-2-hidroxi-propil)-2-((S)-2-nidroxi-prcpilamino) -8H-pirido [2,3-d] pirimidin-7-ona 35 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-8-((R)-2-hidroxi-propil)—2—{(R)—2— hidroxi-propilamino)-Bd-pirido[2,3-d]pirimidín-7.....ona 3 6 6- (2, 4-Dífluoro-fenoxi) -2- (2-hidrox.i-1,1-dimetil-etílamino) --8-í (S)-2-hidroxi-propil)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona 37 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-2-((R)-1-hidroxi-propilamino)-8- ((R)-2-hidroxi-propil)-8H-pirido[2, 3-d]pirímidin-7-ona 38 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-8-((R)-2-hidroxi-propil)-2- isobutilamino-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona 23 C5ó 1 cn 2-(Ciclopropilmetil-amino)-6-(2,4-ditluoro-fenoxi)-8-((R)-2-hidroxi-propil)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona 40 2-Ciclobutilaminc-6- (2,4-dif luoro-fenoxí )-8-( (R) -2-h.idroxi-prcpil)-8H-pirido[2, 3-d]pirimidin-7-ona 41 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-2-((S)-2-hidroxi-l-metil-etilamino)-8- ( (R) -2-hidroxi-propil) -8ff-piridc· [2,3-d]pirímidin-7-ona 42 6- (2 , 4-Dif luoro-fenoxi) -2- ( (R) -2-hidroxi-l-met 1.1-eti l amino) -8-((R)-2-hidroxi-propil)-8fí-pirido[2,3-d]pi rimidin-7-ona 43 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-2-(2,2-dimetil-propilamino)-8-((R)-2-hidroxi-propil) -8í7-pirido [2,3-d] pirimidin- / -ona 44 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-2-((S)-2-hídroxl-l,2-dimetb 1-propilamino)-8-((R)-2-hidroxi-propil)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona 45 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-2-((S)-2-hidroxi-l-metil-etilamino)-8- (2-oxc-propil) -8i7-pirido [2,3-d] pirimidin-7-ona 4 6 6-(2,4-Dífluoro-fenoxi)-2-((R)-2-hidroxi-l-metil-etilamino)-8-(2-oxc-propil)-8fl-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona 47 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-2-(2-hídroxi-l-hidroximetil-etilamino) -8- ( (S) -2-hidroxi-propil) -Síí-pirido [2,3-d]pirímídin-7-ona 48 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-2-((R)-2-hidroxi-l-metil-etilamino)--8- ( (R) -2-hidroxi-propil) -8/í-pírido [2,3-d] pirimidin-7-ona 49 6-(2,4-Difluoro-fenoxí)-2-((R)-2-hidroxi-l-metil-etilamino) -8- (2-cxopropil) -Síí-pirido [2,3-d] pírimidin-7-ona

Os compostos da presente invenção podem ser preparados por uma variedade de métodos, incluindo métodos divulgados na US-2003-0171584-Al, também detida, que foi prevíamente incorporada por referência, Numa caracteristica da presente invenção, no

Esquema 1, abaixo, é apres ;entado um método para preparar compostos da Fórmula I. Deve entender-se que, embora o esquema indique frequentemente estr uturas exactas, os métodos da presente invenção se api içam largamente a compostos análogos da Fórmula I, dando a atenção devida à protecção e desprotecção de 24 grupos funcionais reactivos por métodos Standard na arte da química orgânica. Por exemplo, para se evitarem reacçoes secundárias indesejáveis, os grupos hidroxiio têm por vezes de ser protegidos (por exemplo, convertidos em éteres ou ésteres) durante reacçoes químicas noutras localizações na molécula. 0 grupo protector de hídroxilo é então removido para dar o grupo hídroxilo livre. De modo similar, os grupos amino e os grupos ácido carboxilico podem ser protegidos (por exemplo, por geração de derivados) para os proteger contra reacçoes secundárias indesejáveis. Grupos protectores típicos e métodos para os ligar e clivar são completamente descritos nas referências acima incorporadas de Greene e Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3r0 edition, John Wiley & Sons, New York, 1999, e Harrison e Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods, Vais. 1-8 (John Wiley and Sons, 1971-1996).

Esquema 1

Tratamento de um c omp > o s t o da Fórmula la cora uma hidroxialquílamina (R2-NH2) proporciona um composto da Fórmula 1b. Esta re d dp td ζ-· conduzida conveni entemente num solvente que seja i nerte sc b as condições d; 3 2Γ 6 di O Ç 8 O r de 25 preferência um hídrocarboneto alífático halogenado, especíalmenre diclorometano, um hídrocarboneto aromático opcíonalmente halogenado ou um éter de cadeia aberta ou 25 -dico ta’ :omc :θ t rã- .drofurano (THF), uma formamida ou um alcanol inferior. Conveníentemente, a reacção é conduzida de cerca de -20°C a cerca de 120°C, tipicamente a cerca de 0°C. Frequentemente, adiciona-se à mistura reaccíonal uma base, tal como trialquilamína, de preferência trietilamina. A redução de um composto da Fórmula Ib proporciona um álcool da Fórmula Ic. Esta redução é tipicamente conduzida com hidreto de alumínio e iítío, de um modo bem conhecido dos peritos na arte (por exemplo, num solvente que seja inerte nas condições da redução, de preferência um éter de cadeia aberta ou cíclico, especialmente tetra-hidrofurano (THF), de cerca de -20°C a cerca de 70°C, de preferência de cerca de 0°C a próximo da temperatura ambiente (RT)). A oxidação de um álcool da Fórmula 1c proporciona um carboxaldeído da Fórmula Id. A oxidação é executada tipicamente com dióxido de manganês, embora se possam utilizado, a solvente que seja inerte nas condições especifica da utilizar numeroso s outrcs métodos (ver, por exemplo, ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY, 4a ed., Março, John Wiley & Sons, New York i (1992)). Dependendo do ag ente oxidante reacçao conduzida convenientemente num oxidação, de preferência um hídrocarboneto alifático halogenado, especo a.)mente diclorometano ou um hídrocarboneto aromático opcionalmente halogenado. Convenientemente, a oxidação é conduzida entre cerca de 0°C e cerca de 60°C. 26 A reacção de um carboxaldeído da Fórmula Id com un éster, Ar1-X1CH2-C02R1 (na qual R3 é um grupo alquilo e Ar1 e X1 são os aqui definidos) na presença de uma base proporciona um composto da Fórmula le. Pode ser utilizada qualquer base relativamente não nucleófila, incluindo carbonatos, tais como carbonato de potássio, carbonato de lítio e carbonato de sódio; bicarbonatos, tais como bicarbonato de potássio, bicarbonato de lítio e bicarbonato de sódio; aminas, tais corno aminas secundárias e terciárias; e aminas ligadas a resinas, Lais como as 1,3,4,6,7,8-hexa-hidro-2H-pirimido [1,2-a] pirimidina . Convenientemente, a reacção é conduzida num solvente que seja relativamente polar, mas inerte nas condições da reacção, de preferência uma amida tal como dímetilformamida, pirrolidinona N-substituída, especialmente l-metil-2-pirrolidinona e a uma temperatura entre cerca de 25°C e cerca de 150°C. A oxidação de Ie com um agente oxidante, por exemplo, um perácido, tal como ácido 3-cloroperbenzóico (isto é, MCPBA) ou Oxone®, proporciona uma sulfona (If) que pode ser convertida numa variedade de compostos alvo. Tipicamente, a oxidação de Ie é conduzida num solvente que seja inerte nas condições da oxidação. Por exemplo, quando se utiliza o MCPBA como agente oxidante, o solvente é de preferência um hídrocarboneto alifático halogenado, especialmente clorofórmio. Quando se utiliza o Oxone® como agente oxidante, o solvente é de preferência metanol, etanol aquoso ou THF aquoso. A temperatura da reacção depende do solvente utilizado. Para um solvente orgânico, a temperatura da reacção é geralmente entre cerca de -20°C e cerca de 50°C, de preferência entre cerca de 0°C e a temperatura ambiente. Quando é utilizada água como solvente, a temperatura da reacção é geralmente entre cerca 27 de 0°C e cerca de 50°C, de preferência entre cerca de 0°C e a temperatura ambiente. Alternativamente, a oxidação pode ser conduzida em condições catalíticas com reagentes à base de peróxido / rénío, ver (Lahti et al., Inorg. Chem., 2000, 39, 2164-2167; Catai. Today, 2000, 55, 317-363, e Coperec et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 1740-1741.

Fazendo reagir o composco If com uma amina (Fd-NFb) são proporcionados os compostos da Fórmula 1. A reacção pode ser conduzida na presença ou ausência de solvente. Convenientemente, a reacção é conduzida a temperaturas entre cerca de 0°C e cerca de 200°C, com maior preferência entre a temperatura ambiente e cerca de 15 00 C. Alternativamente, nalguns casos, em vez de se utilizar a sulfona If, pode fazer-se reagir dírectamente o sulfureto le ou o correspondente sulfóxido com uma amina (R1—NH2) para proporcionar os compostos da Fórmula I.

Alguém, perito na arte, compreenderá que determinadas modificações aos esquemas acima se encontram contempladas e no âmbito da presente invenção. Por exemplo, certos passos envolverão a utilização de grupos protectores de grupos funcionais que não são compatíveis com determinadas condições de reacção.

Alternatívamente, compostos da Fórmula I podem também ser preparados pelo método apresentado no Esquema 2, abaixo. Enquanto as reacções do Esquema 2 são apresentadas em termos de compostos específicos, será perfeitamente evidente para os peritos na arte que o método do Esquema 2 pode ser utilizado com todos os compostos da invenção.

Tal como apresentado no Esquema 2, o tratamento de um acetaí dietilico Ila com uma tíoureía proporciona um 28 composto pírímidina Ilb. Esta reacção é convenientemente conduzida num solvente alcoólico, na presença de uma base, tal como metóxido de sódio. A metilação do grupo tiol, por exemplo, com iodeto de metilo, proporciona, então, o tíoéter lie. 0 tíoéter IIc pode então ser tratado com um a-ariioxiéster Ild, tal como (2,4-dífluorofenoxi)acetato de etilo, para se obter um tíoéter de pirído-pirimidona lie. Esta reacção pode ser conduzida, por exemplo, por aquecimento na presença de carbonato de sódio ou de outra base moderada, em N-metilpírrolídinona ou noutro solvente aprótico polar.

Reacção do tíoéter lie com carbonato de propileno ou com um carbonato semelhante, sob condições de um solvente aprótico polar, para se obter um tíoéter de N-hidroxialquil pírido-pírimídona Ilf. Esta reacção pede ser facilitada por aquecimento na presença de carbonato de potássio. 0 tíoéter TIf é então oxidado para proporcionar a correspondente sulfona de pirido-pirimidona Ilg. Esta oxidação pode ser conduzida, utilizando peróxido de hidrogénio na presença de ácido acético num solvente polar, tal como o diclorometano. A oxidação pode alternativamente ser realizada utilizando Oxone® ou MCPBA nos termos acima descritos para o Esquema 1. 0 tratamento da sulfona Ilg com uma hídroxílamina, em que o grupo hidroxílc se encontre convenientemente protegi,do, conduz a um composto piridopírimidona Ilh, de acordo com a invenção. Esta reacção pode ser conduzida com aquecimento tal como descrito acima com referência ao Esquema 1. 29

Esquema 2 A piridopirimidínona Ilf pode também ser preparada por alquilação da pirídopirimidinona He com um epóxido em vez de um carbonato, tal como apresentado no Esquema 3, abaixo. A reacção do Esquema 3 pode ser conduzida aquecendo o composto lie sob pressão na presença de excesso de óxido de propiieno em N-metílpirrolidinona ou sob outras condições de solvente aprótico polar.

Esquema 3 30

Os compostos da Fórmula I podem ser utilizados como medicamentos, por exemplo, na íorma de preparações farmacêuticas. As preparações farmacêuticas podem ser administradas por via entérica, por exemplo, por via oral sob a forma de comprimidos, comprimidos revestidos, draqeias, cápsulas de gelatina mole e dura, soluções, emulsões ou suspensões, por via nasal, por exemplo, sob a forma de sprays nasais, ou por via rectal, por exemplo, sob a forma de supositórios. Mo entanto, podem também ser administrados por via parenteral, por exemplo, sob a forma de soluções injectáveis.

Outra característíca da presente invenção proporciona uma formulação farmacêutica que compreende um composto da Fórmula I e um veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável para esse fim.

Para a produção de preparações farmacêuticas, os compostos da Fórmula I podem ser processados com veículos orgânicos ou inorgânicos, farmaceuticamente inertes. Lactose, amido de milho ou os seus derivados, talco, ácido esteárico ou os seus sais e semelhantes, podem ser utilizados, por exemplo, como tais veículos para comprimidos, comprimidos revestidos, draqeias e cápsulas de gelatina dura. Veículos adequados para cápsulas de gelatina mole são, por exemplo, óleos vegetais, ceras, gorduras, polióis líquidos e semi-sólidos e semelhantes; no entanto, dependendo da natureza do ingrediente activo, no caso de cápsulas de ge.lat.ina mole não são, habitualmente, necessários quaisquer veículos. Veículos adequados para a produção de soluções e de xaropes são, por exemplo, água, polióis, sacarose, açúcar invertido, glucose e semelhantes. Veículos adequados para supositórios são, por exemplo, 31 óleos naturais ou endurecidos, ceras, gorduras, polióís líquidos ou semilíquidos e semelhantes.

As preparações farmacêuticas podem também conter conservantes, solubilizantes, estsbílizantes, agentes moihantes, emulsionantes, edulcorantes, corantes, máscaras de sabor, saís para fazer variar a pressão osmótica, tampões, agentes máscara ou antíoxídantes. Podem também conter substâncias com valor terapêutico, diferentes dos compostos da Fórmula I.

Os medicamentos que contêm um composto da Fórmula I com um material veículo farmacêutico compatível são, também, um objecto da presente invenção, tal como o é um processo para a produção de tais medicamentos o que compreende colocar um ou mais destes compostos ou sais e, se desejado, uma ou mais outras substâncias com valor terapêutico numa forma de administração galénica juntamente com um veículo farmacêutico compatível.

Tal como mencionado anteríormente, os compostos da Fórmula I podem ser utilizados, de acordo com a invenção, como substâncias terapeutícamente activas, especialmente como agentes anti-inflamatórics ou para a prevenção da rejeição de enxertos no seguimento de uma cirurgia de transplante. A dosagem pode variar entre limites amplos e será, obviamente, ajustada às necessidades individuais, em cada caso particular. Em geral, no caso da administração a adultos uma dose diária conveniente seria de cerca 0,1 mg/kg a cerca de 100 mg/kg, de preferência de cerca de 0,5 mg/kg a cerca de 5 mg/kg. A dose diária pode ser administrada como uma dose única ou em doses frsccionadas e, adicionalmente, o limite superior de dose, anteríormente 32 referido, poderá ser excedido quando se verificar que tal está indicado. Fínaimer te, também é um objecto da invenção a u f 1 f 1 z a ç a o d a compostos da Fórmula I para a produção cie medicamentos, especíalmente para o tratament o ou para a profilaxia de doenças inflamatórias, ímunolcgícas, oncológicas, broncopulmonares, dermatoi ógícas O cardiovasculares , no tratamento cia asma, de doenças do sistema nervoso centrai ou de compli cações da diabetes Q LI na prevenção da rejeição de enxertos no seguimento de uma cirurgia de transplante.

Os compostos da Fórmula I são úteis no, mas não limitados ao, tratamento de qualquer doença ou situação de doença num ser humano ou neutro mamífero, que seja exacerbada ou causada por produção excessiva ou desregulada de TNF ou p38 quinase, por tal mamífero. Em conformidade, é divulgado um método para tratar uma doença mediada por citcquina que compreenda a administração de uma quantidade eficaz, que interfira com cítoquina, de um composto da Fórmula I ou de um seu sal ou tautómero farmaceuticamente aceitável. :ompostos da Fórmula I são úteis no, mas não itamento da inflamação num indivíduo e ao febre. 0= >o, como antipiréticos, no tratamento compostos da invenção seriam ateis no tratamento da artrite, incluindo, mas não limitada a, artrite reumatóide, espondilartropatias, artrite gotosa, osteoartríte, artrite psoriática, espondilartrite anquilosante, lúpus erítematoso sistémico e artrite juvenil, osteoartríte, artrite gotosa e outras patologias de artrite. Taís compostos seriam úteis no tratamento de doenças pulmonares ou de inflamação do 33 pulmão, incluindo síndrome dolorosa respiratória do adulto, sarcoidose pulmonar, asma, silrcose e doença inflamatória pulmonar crónica. Os compostos sao também uteis no tratamento de ínfecções bacterianas e virais, incluindo sepsia, choque séptico, sepsia por gram-negativos, malária, meningite, caquexia secundária a ínfecçâo ou malignidade, caquexia secundária a síndrome da imunodefi ciência adquirida (SIDA), SIDA, ARC (complexo relacionado com SIDA;, pneumonia e herpes vírus. Os compostos são também úteis no tratamento de doenças da absorção do osso, tais como osteoporose, choque endotóxico, síndrome de choque tóxico, lesão de reperfusão, doença auto-imune incluindo reacção enxerto versus hospedeiro e rejeições de alotransplante, doenças cardiovasculares incluindo aterosclerose, trombose, insuficiência cardíaca congestiva e lesão de reperfusão cardíaca, lesão de reperfusão renal, doença hepática e nefrite, e mialgias devidas a ínfecçâo.

Os compostos são também úteis no tratamento da doença de Aizheimer, influenzs, esclerose múltipla, cancro, diabetes, lúpus eritematoso sistémico (LES), patologias relacionadas com a pele tais como psoríase, eczema, queimaduras, dermatite, formação quelóide, e formação de tecido de cicatrização. AdicionaImente, os compostos da invenção são úteis no tratamento de patologias gastrointestinais tais como doença inflamatória do intestino, doença de Crohn, gastrite, síndrome de cólon irritável e colite ulcerosa. Os compostos são também úteis no tratamento de doenças oftálmicas, tais como retinite, retinopatia ° / uveíte, fotofobía ocul ar e lesão aguda do tecido ocul .ar. Os compostos podem tam bém ser utilizados no tratamento Cia angiogénese, incluindo neoplasia; meras l a s e patolog:as of t almológicas tais como r eleição de enxerto da córnea, neovascularizaçâo ocular, neovascularízação da 34 retina incluindo neovascularizaçao a seguir a lesão ou ínfecção, retinopatia diabética, fibroplasia retrolental e glaucoma neovascuiar; doenças ulcerosas tal como úlcera gástrica; situações patológicas, mas não malignas, situações tais como hemangíomas, incluindo hemangiomas infantis, angiofibroma da nasofaringe e necrose vascular do osso; nefropatia diabética e cardiomiopatía; e doenças do sistema reprodutivo feminino tal como endometriose. Os compostos podem ainda ser utilizados para a prevenção da produção de cicloxigenase-2 e têm propriedades analgésicas. Por isso, Compostos da Fórmula I são úteis no tratamento da dor.

Outras utilizações para Compostos da Fórmula I incluem tratamentos de HCV, asma grave, psoríase, doença pulmonar obstrutiva crónica (DPOC) e outras doenças que possam ser tratadas com um composto anti-TNF.

Além disse, sendo úteis para tratamento humano, estes compostos são também úteis para tratamento veterinário de animais de companhia, animais exóticos e animais de produção, incluindo mamíferos, roedores, e semelhantes. Os animais maís preferidos incluem cavalos, cães e gatos.

Os presentes compostos podem também ser utilizados em co-terapêuticas, parcial ou completamente, em vez de outros anti-inflamatórios convencionais, tal como em conjunto com esteróides, inibidores da cícloxigenase-2, AINEs, DMARDs, agentes ímunos supre ssores, inibidores da 5-lípox.igenase, antagonistas da LIB4 e inibidores da hidrólase da LTA4.

Tal como usado aqui, o termo "doença mediada por INF" refere-se a qualquer e a todas as doenças e estados de doença em que INF desempenhe um papel, quer per controlo do 35 próprio TNF, quer por o TNF causar a libertação de uma outra nionoquina, tal como mas não limitada a IL-1, IL-6 ou IL-8. Um estado de doença em que, por exemplo, IL-1 seja um componente major e cuja produção ou acção seja exacerbada ou secretada em resposta a TNF, seria pois considerado uma doença mediada por TNF.

Tal como usado aqui, o termo "doença mediada por p38" refere-se a qualquer e a codas as doenças e estados de doença em que p38 desempenhe um papel, quer por controlo do próprio p38, quer por p33 causar a libertação de um outro factor, tal como, mas não limitado a, IL-1, IL-6 or IL-8. Um estado de doença em que, por exemplo, IL-1 seja um componente major e cuja produção ou acção seja exacerbada ou secretada em resposta a p38, seria pois considerado uma doença mediada por p38.

Como TNF-β tem uma homologia estrutural próxima com TNF-a (também conhecido por caquectina) e uma vez que cada um induz respostas biológicas similares e se liga ao mesmo receptor celular, a síntese de ambos TNF-α e TNF-β é inibida pelos compostos da presente invenção e, assim, são aqui referidos colectívamente como "TNF" excepto se especificamente delineado de outro modo.

EXEMPLOS

Objectos adicionais, vantagens, e aspectos novos desta invenção tornar-se-ão manifestos para os peritos na arte após exame dos seus exemplos ilustrativos, seguintes, que não pretendem ser limitativos. 36

Exemplo 1: Preparação de 6-(2,4-difluoro-fenoxi)-2-((S)-(+)-2-hidroxi-l-metiletilamino5-8-((S)-2-hidroxi-propil)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (composto 16)

Passo A; Preparação de 4- ((S) -2-Hidroxi-propilamino)-2- metilsulfaníl-pirímidína-5-carboxí.lato de etilo A uma solução de 4-cloro-2-metiltiopirimidina-5-carboxilato de etilo (Aldrich, 65 g, 280 mmole) em 500 ml de THF a 0°C adicionou-se trietilamina (140 ml 1000 mmole) & (S)-l-amino-2-propanol (21 g, 280 mmole). Depois de se agitar durante 4 horas, adicionou-se água (200 ml) e as fases foram separadas. A fase aquosa foi extraída com diclorometano. A fase orgânica foi concentrada e o resíduo foi dissolvido em diclorometano, lavado com salmoura e seco sobre sulfato de magnésio. Filtrado e o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida para se obterem 77 g de 4-((S)-2-hidroxi-propilamino)-2-metilsulfanil-pirimidina-5-carboxilato de etilo como um sólido branco.

Passo B: Preparação de 4- ((S)-2~Hidroxi-propilaminoj -2-metilsulfanil-pirimidina-5-metanol

Hidreto de alumínio e lítio (5,7 g, 150 mmcle) foi agitado em THF seco (500 ml) a 5°C e tratado gota a gota com uma solução de 4-((S)-2-hidroxi-propilamino)-2-metilsulfanil-pirimidina-5-carboxiiato de etilo (27 g, 100 mmole) em THF seco (450 ml) . A mistura reaccionai foi agitada durante 15 min e depois adicionou-se água (18 ml) gota a gota com cuidado. A mistura reaccionai foi agitada durante solução de água durante 30 min e depois adícionou-se gota a gota uma aquosa de hidróxido de sódio (15%, 8,5 ml), seguida (25,5 ml) . A suspensão resultante foi agitada 17 horas à temperatura ambiente e depois filtrada. 37 0 resíduo no filtro foi lavado com isopropanol (2x, 100 ml) e o filtrado combinado com os líquidos de lavagem foram evaporados sob pressão reduzida para se obterem 25,8 g de 4-{(S)-2-hidroxi-propilamino)-2-metilsulfanil-pírímidina-5-metanol.

Passo C: Preparação de 4- ((S)-2-tíidroxi-propilamina)-2-metilsulfanil-pirimidina-5-carbaldeído 4-((S)“2-hidroxi-propilamino)-2-metilsulfanil-pírimidina-5-metanol (26 g, 100 minale) e 1 i de diclorometano foram combinados com agitação e tratados com dióxído de manganês (102 g, 1 more). A suspensão resultante foi agitada durante 24 horas e depois filtrada por ceiite. 0 resíduo no filtro foi lavado com diclorometano (100 ml) e o filtrado combinado com os líquidos de lavagem foram evaporados soo pressão reduzida para se obterem 16,5 g de 4-((S)-2-hidroxipropilamino)-2-metiyisulfanil-pirimidina-5-carbaldeído como um sólido branco.

Sulfona

Passo Ά: Preparação de 6-(2,4-Difluorofenoxi)-8- ( (S)-2-hidroxipropil)-2-meti 1 sulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirímídin-7- ona A uma mistura de 4- ( (S)-2-hidroxi-propílamíno)-2- metilsulfaníl-pírimidína-5-carbaideído (16,5 g, 73 imole; e de (2,4-dífluorofenoxí)acetato de metílo (29,1 g, 145 mmole) em dímetilformamida anidra (300 ml) adicionou-se carbonato de potássio (30 g, 218 minore) . A mistura reaccíonal foi aquecida a 60°C e, após 18 horas, a mistura reacoional foi arrefecida e a dímetílíormamída foi retirada por destilação sob vazio. O resíduo em bruto foi suspenso 38 em água (300 ml) e extraído com diclorometsno, lavado com salmoura e seco sobre sulfato de magnésio. FíItrou-se e concentrou-se sob vazio para se obterem 41 g de material em bruto que foi cromatograf ado numa coluna de sílica gel eluindo ccm 1% metancl em diclorometano para se obterem 30 g de 6-(2,4-diflucrofenoxi)-8-((S)-2-hidroxipropil)-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimídín-7-ona (massa M+l = 274) .

Passo B: Preparação de 6-(2,4-Difluorofenoxi)-8-((S)-2-hidroxipropil)-2-metanos sulfonil-8H-pirido[2,3-d]pirimidín-7-ona A uma solução de 6- (2,4-diflucrofenoxi)-8-((S)-2-hídroxipropil)-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (29,7 g, 108 mmole) em diclorometano (500 ml) a 5°C foi adicionado, em porções, ácido m-cloroperbenzóico (55 g, 240 mmole) e agitou-se durante 24 horas. A mistura reaccionai foi lavada com solução aquosa de sulfito de sódio, com solução aquosa de bicarbonato de sódio e seca sobre sulfato de magnésio. Filtrou-se e evaporou-se para se obterem 24 g de 6-(2,4-difluorofenoxi)-8-((S)-2-hidroxipropil)-2-metanossulfoníl-SH-piridc[2,3-d]pirimidin-7-ona (massa M+l = 412) .

Passo C: Preparação de 6-(2, 4-Difluoro-fenoxi)-2- ((S)-2-hidroxí-1 -metil-et.ilamino) -8- ((S) -2-hidroxi -propíl) -8H- pírido[2, 3-d]pirimidin-?-ona A urna solução de 6- (2,4-dif luorof enoxi) -8-((3)-2-hídroxipropíl)-2-metanossulfonil-8H-pírido[2,3d]pirimidin- 7-ona (400 mg, 1 mmole) em THF (5 ml) adicionou-se (S) — 2 — ammo-l-propanol (0,38 ml, 5 mmole) e agítou-se durante a noite à temperatura ambiente. Concentrou-se sob vazio e 39 cromatografou-se em sílica gel eluindo com 2% metanol em diciorometano e converteu-se no sal cloridrato para se obterem. 320 mg 6- (2, 4-dífluoro-fenoxí)-2-{ (S) - ( + )-2- hídroxí-l-meLÍl-etilamino)8-((S)-2-hidroxi-propil}-8H- pírido[2,3—d1pírimidin-7-ona (massa M+l = 407, PF = 175,1 -179,1°C).

Exemplo 2: Preparação de 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-2-(R) 2-hidroxi-l-metiletilamino)-8-((S)-2-hidroxipropil)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (Composto 17). A uma solução de 6-(2,4-difluorofenoxí)-8-( (S)-2-hidroxípropil)-2-metanossulfonil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (400 mg, 1 minole) em THF (5 ml) adicionou-se (R)-2-amino-l-propanoi (0,38 ml, 5 mmole) e agitou-se durante a noite à temperatura ambiente. Concentrou-se sob vazio e cromatografou-se em sílica gel eluindo com 2% metanol em diciorometano e converteu-se no sal cloridrato para se obterem 370 mg 6- (2,4-difluoro-fenoxi)-2-((R)-2-hidroxy-l-metil-etilamino)-8-((S)-2-hidroxi-propil)-8H-pírido[2,3-d]pirimidin-7-ona (massa M+l = 407, PF = 174,9 - 178, 1°C) .

Exemplo 3: Preparação de 6- (2,4-Difluoro-fenoxi)-2-(2-hidroxi-l,l-dimetil-etilamino)-8-((S)-2-hidroxipropil)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (Composto 36) A uma solução de 6- (2,4-difluorofenoxi)-8- ( (S)-2-hidroxipropíl)-2-metanossulfoniL-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (717 mg, 1,74 mmcle) em THF (10 ml) adicionou-se 2-amino-2-metí1-1-propanol (1,55 g, 17,43 mmole) e agitou-se durante a noite à temperatura ambiente, concentrou-se no vácuo e cromatoqrafou-se em sílica gel eluindo com 4% metanol em diciorometano para se obterem, após conversão no cloridrato, 291 mg de 6-(2,4-difluorofenoxi)-2-(2-hídroxi- 291 40 1,1-dimetiietilamino)-8- ( (S)-2-hidrcxi-propil}-8H-pírido-[2,3-d] pirimidin-7-ona como um sólido branco (massa M+l = 421, PF = 187,4 - 189,9°C).

Exemplo 4: Preparação de 6- (2,4-dif Ittoro-fenoxi) -2-((S) -2-hidroxi-l-metil-etilamino)-8-((R)-2-hidroxipropil)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (Composto 41)

Passo A: Preparação de 4-((R)-2-Hidroxi-propilamíno)-2-metilsulfaníl-pirimidína-5-carhoxílato de etilo A uma solução de 4-cloro-2-metiltiopirimidina-5-carboxilato de etilo (Aldrich, 62,6 g, 269 mmole) em 1 1 de THF a 0°C adicionou-se trietilamina (135 ml, 1000 mmole) e (R)-l-amino-2-propanol (30 ç, 400 mmole). Após agitar durante 4 horas, evaporou-se sob pressão reduzida para se obterem 66,6 g de 4-(R)-2-hidroxi-propiiamino}-2-metilsulfaníl-pirimidina-5-carboxilato de etilo como um sólido branco.

Passo B: Preparação de 4- ( (R) -2-IIidroxi-propilamino) -2-metí1su1fani l-pirimidina-5-metanol

Hidreto de alumínio e lítio (.1.4 g, 368 mmole) foi agitado em THF seco (500 ml) a 5eC e tratado gota a gota com uma solução de 4-(R)-2-hidroxi-propilamino)-2-metílsulfaníi-pirimidina-5-carboxílato de etilo (66,6 g, 246 mmole) em THF seco (150 ml) . A mistura reaccíonal foi agitada durante 15 mín e depois adícionou-se água (18 ml), cuidadosamente, gota a gota. A reacção foi mantida sob agitação dur ante 30 min e, então, adi cionou -se gota a gota uma sclu ção aquosa de hidróxido de sódio /1 CS. o c; O f u ml, seguida de acua (2 5,5 ml) . A suspensão resultante foi agitada durante 1/ horas à temperatura ambiente e depois 41 filtrada. 0 resíduo no filtro foi lavado com iscpropanol (2x, 100 ml) e o filtrado combinado com os líquidos de lavagem foram evaporados sob pressão reduzida para se obterem 58,6 g de 4- (R) -2-hidroxi-propilairtíno) -2- metí1 sulfanil-pirimídína-5-metanol.

Passo C: Preparação de 4-((R)-2-Hi.droxi-propilam.inc)-2-metilsulfanil-pirimidina-S-carbaldeído 4-(RJ-2-Hidroxí-propílamino)-2-meti1sulfanil -pirimidina-5-metanol {58,6 g, 256 mmole) e 1 1 de diclorometano foram combinados com agitação e tratados com dióxido de manganês (222 g, 2,560 mole). A suspensão resultante foi agitada durante 24 horas e depois filtrada por celite. O resíduo no filtro foi lavado com diclorometano (100 ml) e o filtrado combinado com os líquidos de lavagem foram evaporados sob pressão reduzida para se obterem 34 g de 4-( (R)-2-hidroxipropilamino)-2-metiisulfanil-pirimidina-5-carbaldeído como um sólido branco.

Sulfona

Passo A: Preparação de 6-(2,4-dífluorofenoxi-8- ((R-2- hidroxipropi 1) -2-metilsulf anil - 8H~pírído (2,3-d) pírímídín-7-· ona A uma mistura de 4-((R)-2-hídroxí-propílamíno)-2-metílsulfaníl-pírimidína-5-carbaideído (17,7 g, 78 mmole) e de (2,4-dífluorofenoxi)acetato de metílo (31,6 g, 156 mmole) em dímetilforruamida anidra (300 ml) adicionou-se carbonato de potássio (30 g, 218 mmole). A mistura reaccionai foi aquecida a 60 °C e depois de 18 noras, a mistura reaccionai foi arrefecida e a DMF retirada por 42 destilação. 0 resíduo foi colocado em suspensão em água (300 ml) e extraído com diclorometano, lavado com salmoura e seco sobre sulfato de magnésio. Filtrou-se e concentrou-se sob vácuo para se obterem 29,5 g de material em bruto que foi cromatografado por coluna de sílica gel eluindo com 1% metanol em ciclorometano para se obterem 17,5 g 6-(2,4- dí fluorofenoxi}- 8-((R)-2-hidroxipropil)-2-met j—L D Li X J_ d i. 1 J__L 8H- pirido[2,3-ri]pirimidin-7-ona (massa M+l = 274).

Passo B: Preparação de 6-(2, 4-Difluorofenoxi)-8- ((R)-2-hídroxipropíl)-2-metanossulfoníl-8H-pirido[2,3-d]pírimídin- 7-ona A uma solução de 6- (2,4-difluorofenoxi)-8-((R)-2-hidroxipropil)-2-metilsulfanil-8H-pírido[2 , 3—d] pirimidin-7-ona (9,38 g, 24,7 mniole) em diclorometano (200 ml) a 5°C adicionou-se, em porções, ácido m-cloroperbenzóico (12,5 g, 54 mmole) e agitou-se durante 24 horas. A mistura reaccional foi lavada com solução aquosa de sulfito de sódio, solução aquosa ce bicarbonato de sódio e seca sobre sulfato de magnésio. Filtrou-se e evaporou-se para se obterem 10,7 g de 6-(2,4-difluorofenoxi)—8—((R)—2— hidroxipropil)-2-metanossulfonil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-cna (massa M+l = 412).

Passo C: Preparação de 6~(2,4-Difluoro-fenoxi)-2-((S)-2-hidroxi-1-metil-etilamino)-8-((R)-2-hidroxi-propil) ~8H-pirido[2,3-dJpirimidin~7~ona R uma solução de hidroxipropil}-2-metanossu 7-ona (615 mg, 1,5 mmole) 2- 6-(2,4-difluorofenoxi)-8-((R)-itoniI-8H-pirido[2,3d]pirimidin em THF (5 mi) adicicnou-se (S)— amino-l-p noite a ropanoi (1,2 ml, j.5 mmole) e agitou-se durante temperatura ambiente. Concentrou-se sob vácuo 43 croir.atografou-se em sílica gel eiuindo com 2¾ metanol em diclorometano e converteu-se no sal clorídrato para se obterem 296 mg de 6-(2,4-diflucro-fenoxi)-2-((S)-2-hídroxí-1-metil-etilamino)8-((R)-2-hidroxi-propil)-8H-pirído[2,3-d] pirimidin-7-ona (massa M+l = 407, PF = 186,0 - 189,1°C).

Exemplo 5: Preparação de 6-(2,4-Difluoro-fenoxi)-2-(R)-2-hidroxi-l-metil-etilamino)-8-((R)-2-hidroxipropil)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (Composto 48) Ά uma solução de 6-(2,4-difiuorofenoxi)-8-((R)-2-hidroxipropil)-2-metanossulfonil-SH-pirido[2,3d]pirimidin-7-ona (400 mg, 1 mmole) em THF (5 ml) adicionou-se (R) —2— amino-l-propanol (0,38 ml, 5 mmole} e agitou-se durante a noite à temperatura ambiente. Concentrou-se sob vácuo e cromatografou-se em sílica gel eiuindo com 2% metanol em diclorometano e converteu-se no sal clorídrato para se obterem 350 mg de 6- (2,4-difluoro-fenoxi)-2-((R)-2-hidroxi-1-metil-etilamino)8-((R)-2-hidroxi-propil)-8H-pirido[2,3-d]pírimidin-7-ona (massa M+l = 407, PF =181,5 - 184,4°C).

Exemplo 6: Preparação de 6-(2,4-Difluorofenoxi)-2-(2-hidroxi-1,1-dimetil-etilamino)-8-((R)-2-hidroxipropil)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (Composto 31)

Uma mistura de 6-(2,4-dífluorofenoxi)-8-((R)-2- hidroxípropíl)-2-metanossulfoníl-8H-pirido[2,3-d1pirímidin-7-ona (886 mg, 2,15 mmole) e de 2-amino-2-metil-l-propanol (5,15 g, 58 mmole) foi aquecida a 60°C sob atmosfera de azoto durante 2 sílica gel eluín obterem, depois 6- (2,4-Difluorof horas. Arrefeceu-se e cromatografou-se em ι-ao com 2% metanol em diclorometano para se de converter no Sal clorídrato, 385 mg de enoxi)-2-(2-hidrcxi-l,1-dimetil-etilamino)- 44 3-{ (R) -2-hidroxi-propil; -8H-pirido f 2,3-c 3 pírimidin-7-ona (massa Mil = 421, PF = 182,0 - 183,9°C).

Exemplo 7: Preparação de 6-(2,4-Difluorofenoxi)-2-( (S)-2-hidroxi-l-metil-etilamino)-8-(2-oxopropil)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (composto 45)

Passo R: Preparação de 6-(2,4-Difluorofenoxi} 2........ metanossulfoní1-8- (2-oxopropil)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona A uma solução de cloreto de oxalilo (1,05 ml, 12 mmole) em diclorometano (100 ml) a -60°C adicionaram-se dimetilsulfóxido (1,7 ml, 24 mmole) e 6-(2,4- difluorofenoxi) -8- (2-hidroxipropil) -2-metanossulfonil-8H-pirido [2,3-d] pirimidin-7-ona (4,12 g, 10 mmole) . Ά esta mistura adicionou-se trietilamina (7 ml, 50 mraole) e agítcu-se durante a noite. Adicionou-se água (100 ml) e extraiu-se com diclorometano, lavou-se com salmoura e secou-se sobre sulfato de magnésio. Filtrou-se e concentrou-se sob vácuo, cromatografou-se em sílica gel eluindo com 2% metanol em diclorometano para se obter 1,0 g 6- (2,4-flucrofenoxi)-2-metanossulfoni1-8-(2-oxopropil)— 8 H — pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (massa M+l - 410).

Passo B: Preparação de 6- (2, 4-D.i fluorofenoxi) -2-( (S) -2-hidroxi-1 -metíl-etilamino) -8- (2-oxopropil}-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (composto 45} A uma suspensão de 6-(2,4-dífluorofenoxi}-2- metanossulfoni1-8-(2-oxopropil)-8H-pirido[2,3-d]pirimidín- 7- ona (412 mg, 1 mmole) em THF adicionou-se (S)-2-amino-l- propanol (0,33 ml, 5 mmole) à temperatura ambiente e agicou—se durante a noite. Concentrou—se sob vácuo e 45 cromatografου-se em sílica gel eluíndo com 2¾ metanol em diclorometano para se obterem, após conversão no sal clorídrato, 330 mg de 6-(2,4-Difluorofenoxi)-2- ((S)-2-hidroxí-l-metil-etílamino)-8-(2-oxopropil)-8H-pirido[2,3-djpirimidín-7-ona (Massa M+l = 405, PF - 207,9 - 214,6°C).

Exemplo 8: Preparação de 6-(2,4-Difluorofenoxi)-2-((R)-2-hidroxi-l-metil-etilamino)-8-(2-oxopropil)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (Composto 49) Ã uma suspensão de 6- (2,4-difluorofenoxi}-2-metanossulfonil-8-(2-oxopropil)-8H-pirido[2,3-d]pírimídin-7-ona (412 mg, 1 mmole) em THF (10 ml) adícíonou-se (R)-(-)-2-amino-l-propanol (0,40 ml, 5 mmole) à temperatura ambiente e agitou-se durante a noite. Concentrou-se sob vácuo e cromatograf ou-se em sílica gel eluíndo com 2% metanol em diclorometano para se obterem, após conversão no sai clorídrato, 330 mg de 6-(2,4-Difluorofenoxi)-2-((R)-2-hidroxi-l-metil-etilamino)-8-(2-oxopropil}-8H-pirido[2,3— d]pirimidin-7-ona (Massa M+l = 405, PF = 207,8 - 216,4°C).

Exemplo 9: Ensaio in vitrc A actívídade inibitória in vitro da p38 MAP quinase pelos compostos da presente invenção foi determinada medindo a transferência do γ-fosfato de y-iJP-ATP peia p-38 quinase para a Proteína Básica da Mieiina (MBPj, usando uma pequena modificação do método descrito em Ahn et ei., J.

Biol. Chem. A forma fo co-expressa et al. , J . purificada 266:4220-4227 (1991). sforilada da p-38 MAP quinase recombinante foi com 3EK-1 e MEKK em E. coli (ver t Khokhlatchev Biol. Chem. 272:11057-11062 (1997)) e depois per cromatografia de afinidade, utilizando uma coluna com Níquel. 46 A p-38 MAP quinase fosforilada foi diluída em tampão de quinase (20 mM ácido 3- (N-morf oiíno) prcpanossulfónico, pH 7,2, 25 mM fosfato tíe β-glícerol, 5 mM ácido etileno glicol-bís(éter beta-aminoetílico)-Ν,Ν,Ν',N'-tetracético, 1 mM orto-vanadato de sódio, 1 mM ditiotreitoi, 40 mM cloreto de magnésio). O composto teste dissolvido em DMSO ou apenas DM30 (controlo) foi adicionado e as amostras foram incubadas durante 10 min a 30°C. A reacção da quinase foi iniciada pela adição de um substrato cocktail contendo MBP e γ—33p—ATP. Depois de se incubar por 20 min adicionais a 30°C, a reacção foi terminada por adição de 0,75% ácido fosfórico. A MBP fosforilada foi então separada do γ-33Ρ-ATP residual, usando uma membrana de fosfocelulose (Millipore, Bedford, MA) , e quantificada, usando um contador de cintilação (Packard, Meriden, CT) .

Utilizando o ensaio acima, mostrc-u-se que os compostos da invenção são inibidores da p-38 MAP quinase. Os compostos da invenção exibiram valores IC50 p38 no intervalo de menos de 0,001 a 0,1 μΜ. Por exemplo, utilizando o ensaio acima, a 6-(2,4-difluorofenoxi)-8-(3-hidroxipropil)-2-(tetra- hidro-piran-4-ilamino)-8H-pirido[2,3—d]pirimidin-7-cna apresentou um IC50 de 0,0008 μΜ.

Exemplo 10: Ensaio in vitro

Este exemplo ilustra um ensaio in vitro com sangue completo humano (HWB) (isto é, produção de IL-Ιβ induzida por LPS em sangue completo humano não diluído via inibição da p-38 MAP quinase) para avaliar os compostos da presente invenção e os resultados comparativos dos análogos alquilo correspondentes. 0 tratamento com LPS (lípopolíssacárído) de sangue completo humano induz a produção de IL-13 (interleucina-ΐβ) a qual pode ser medida por um teste ELISA especifico em relação a 47 IL-Ιβ. 0 sangue completo humano foi pré-incubado, durante 30 mm a 37°C, com as concentrações indicadas de um composto ca presente invenção em 0,51 DMSO (concentração final). As amostras foram estimuladas com 0,5 pg/ml de lipopolissacárido (LPS, da Sigma) (concentração final), durante 18 horas, para induzir a síntese e a secreção de IL-Ιβ que foi medido utilizando um teste ELISA IL-lp.

Soluções de Compostos

Uma solução "stock" 6 rnM em DMSO (da Sigma) foi preparada dissolvendo o composto em DMSO em 449 μΐ de DMSO. Da solução "stock" 6 rriM, fizeram-se seis diluições em série semi-log subsequentes, em DMSO, para se obterem as seguintes concentrações: 1,9 mM, 600, ISO, 60, 19 e 6 μΜ. Tubos rotulados de 1-7. Ά solução "stock" 6 mM no tubo 1, 216 μΐ DMSO foi colocada em cada um dos tubos 2-7. Do tubo 1, 100 μΐ foram transferidos para o tubo 2. O tubo 2 foi centrifugado e 100 μΐ foram transferidos do tubo 2 para o tubo 3. Este processo foi repetido até ao tubo 7.

Utilizando as diluições em série do composto, em DMSO, preparadas acima, efectuou-se uma diluição adicionai 1/20 (10 μΐ para 190 μΐ de meio RPMI 1640, da Gibco-BRL) para se obter uma curva de concentração do composto final de 30, 10, 2,9, 1, 0,3, 0,1, 0,03 uM.

Soluções LPS

Reconstituição de LPS: No frasco de 10 mg dc LPS, adieionaram-se 10 ml IXSoluçâo tamponada de fosfato (isto é, 1XPBS da Gibco-BRL), misturou-se bem e transferiu-se para um tubo de 50 ml. Outros 10 ml foram adicionados ao frasco de LPS, seguido de enxaguamento, e esta enxaguadela 48 foi adicionada ao tubo de 50 mi e bem misturada. Λ solução foi filtrada e esterilizada e dividida em aliquotas nas quantidades desejadas (uma alíquota de 100 μΐ foi suficiente para 4 placas). Isto produziu uma "stock" com 0,5 mg/ml que foi diluída 1/100 para utilização no protocolo. Imediatamente antes da utilização, a "stock" de LPS foi diluída 1/100 (100 μΐ em 10 ml de RPMI)

Processo de Ensaio O Ensaio foi realizado numa placa com fundo em U e 96 alvéolos (da Gostar) . Foram incluídos dois controlos em cada ensaio, com e sem LPS na ausência do composto. Todas as amostras e controlos foram realizados em triplicado.

Foi colhido sangue humano (de dadores que não tivessem recebido medicação pelo menos durante 14 dias, que não tivessem ingerido álcool durante 48 horas) para "vacutainers" siliconados contendo heparina (19 unidades/ml). Adicionou-se uma alíquota de 25 μΐ de 5% DMSO em RPMI 1640 aos alvéolos de controlo (controlos com ou sem LPS). Aliquotas de 25 μΐ de cada concentração do composto, acima preparada, foram adicionadas a alvéolos específicos. Adicionaram-se 200 μι de sangue completo humano a cada alvéolo e incubou-se a 37°C e 5% CCR durante 30 min. Adicionaram-se 25 μΐ de LPS diluído a todos os alvéolos excepto aos alvéolos controlo sem LPS. Adicionaram-se 25 μΐ de RPMI aos alvéolos controlo sem LPS.

As placas foram Incubadas a 37°C e 51 C02 durante 18 horas. Após a incubação, as placas foram centrifugadas a 400xg para "peiletizar" as células e recolher o plasma, tendo o cuidado de não afectar a "pellet". O plasma foi transferido para uma nova placa de polipropíleno com 56 alvéolos. Foi imediatamente realizado um teste ELISA e o plasma 49 remanescente foi armazenado a -20°C, no caso de ser necessário para novo teste.

Protocolo ELISA 0 ELISA IL-1B utilizou dois anticorpos monoclonais anti-IL-Ιβ: ILBI-H6 (1 mg/ml} e ΙΤβ1-Η67 (2,71 mg/ml).

Materiais IL-Ιβ humana recombinante (rhuIL-Ιβ, 2,5 pg/ml) foi obtida da R&D Systems. Solução salina tamponada com fosfato Dulbecco (1XPBS) foi obtida da Gibco-BRL.

Solução salina tamponada com fosfato (13XPBS) modificação de Dulbecco sem cálcio e magnésio, ρΗ 7,2, foi obtida da Gibco-BRL. Garrafas por abrir foram armazenadas à temperatura ambiente. Tampão para Incubação ELISA (EIB): -0,1% BSA/PBS; 1 g de Albumina de soro bovina (BSA); 100 ml de 10XPBS; Adicionar água desionizada até 1 litro e armazenar a 4°C. Tampão de Lavagem ELISA (EVJB) : 0,05%

Tween/PBS; 0,5 ml Tween 20; 100 ml 1QXPBS; Adicionar água desionizada até 1 litro e armazenar a 4 °C. Tampão de

Bloqueio - 3% Leite seco não gordo/PBS: 15 g Leite em pó seco rião gordo (Carnation) ; 50 ml 10XPBS; Adicionar água destilada até 500 ml e armazenar a 4°C. Estreptavidína conjugada com peroxidase (da Pharmingen): Diluir aproximadamente 1:3000 (10 μΐ /30 ml) em tampão EWB. Tampão de Citrato 0,1 M, pH 4,5: 9,6 g de ácido cítrico (PM 192,1, da Sigma); 14,7 g de citrato trissódico (PM 294,1, da

Sigma); Ajustar para pH 4,5 utilizando NaOH e adicionar água destilada até 500 ml. Armazenar a 4°C. Solução de substrato OPD: 1 mg/ml OPD / 0,031 H202 / tampão de citrato; 1 pastilha o-fenilenodiamina (OPD, da Zymed); 12 μΐ de 30% peróxído de hidrogénio; 12 ml de 0,1 M tampão de citrato. 50

Preparaçao de Standards (preparar de novo, imediatamente antes de aplicar na placa)

Uma solução "stock" de rhuIL-lB (2,5 μg/mi) foi utilizada para construir uma curva Standard. As concentrações para a curva são: 12500, 4167, 1389, 463,

154, 51 e 17 pg/rrd. Os tubos foram rotulados de 1-8. A solução "stock" de rhuIL-lp foi diluída 1/500 (3 μΐ de "stock" + 597 ui de EWB) no tubo 1. 400 μΐ de EWB foi introduzido n .os tubos 2- 8. Do tubo 1, foram transferidos 200 μΐ para o tubo 2 e centrifugados. 200 μΐ foram transferidos do tubo 2 para o tubo 3. Repetiu-se este processo até ao tubo / 0 cubo 8 foi utilizado como o controlo no ensaio ELISA.

As amostras de plasma foram diluídas 1:4 em EWB (20 μΐ de plasma + 60 μΐ de EWB).

Preparação de soluções de Anticorpo 0 anticorpo Ι1β1-Η6 foi diluído 1/100 em 1XPBS para dar uma solução de 10 pg/ml. Por placa, diluíram-se 50 μΐ de anticorpo em 5 ml de PBS. 0 anticorpo ILpl-H67 foi diluído 1/100 em EWB para dar uma solução de 2 pg/rrtl. Por placa, diluíram-se 3,69 μΐ de anticorpo em 5 ml de EIB.

Processo

Placas EIA com 96 alvéolos foram revestidas com 50 μΐ por alvéolo de anticorpo IL31-H6 (10 pg/ml), agitadas suavemente para libertar quaisquer bolhas de ar, seladas com selante para placas e incubadas numa câmara húmida durante a noite a 4°C. As placas toram esvaziadas e secas com toalha de papel isenta de algodão. Os pontos de ligação 51 não específicos foram bloqueados com 175 ul por alvéolo de Tampão de Bloqueio durante 1-2 horas à temperatura ambiente. As placas foram lavadas uma vez com EWB (isto é, placa vazia, cheia com 150 μΐ de EWB, esvaziadas e secas com coalha de papel isenta de algodão).

Alíquotas de Standard com 25 μΐ, em triplicado, foram adicionadas aos alvéolos apropriados. (Cada placa tem a sua própria curva Standard). Uma alíquota de 25 μΐ de plasma diluído foi adicionada ao alvéolo apropriado. A todos os alvéolos, adícicnarain-se 25 μΐ de anticorpo mcnoclonal biotinilado ILpl-H67 (2 pg/ml). As placas foram seladas com selante de placas e incubadas durante 2 horas à temperatura ambiente (ou durante a noite a 4°C), sendo sujeitas a uma suave agitação (tíellco Mini-Orbital Shaker, posição 3,5). Após a incubação, as placas foram lavadas 3 x com EWB (tal como descrito acima). Uma alíquota com 50 μΐ de peroxidase-estreptavidina, diluída 1:3000 em EIB, foi adicionada a cada alvéolo. As placas foram seladas com selante de placas, placas incubadas durante 1 hora à temperatura ambiente enquanto eram agitadas, e lavadas 3 x tal como descrito acima. Uma pastilha de CPD foi dissolvida em tampão de citrato, (1 pastilha / 12 ml de tampão de citrato), e adicionaram-se 12 μΐ de h202 a 30% ao OPD/ tampão de citrato}. Introduziram-se em cada alvéolo 50 μΐ de solução de substrato OPD, e as placas foram incubadas às escuras durante 30 rnín à temperatura ambiente para ciesexivo 1 vxmenLo cie cor . As placas foram lidas em dois comprimentos de onda: Filtro da amostra = 450 nm / Filtro ae reterencia i0 nm. Os valores das 5 amostras que contêm esenhar uma curva o Standard foram utilizados para q.

Standard (absorvância vs. concentração) utilizada para determinar concentrações de amostras desconhecidas Método Estatístico

Se a curva de concentração pontos de cada lado des 50%, en como > concentração maís elevada baixa. De outro modo , se 0 número 5, 03 dados eram ajustados ao parâmetros, para estimar um 1C50: - inibição não incluir ão o ÍC50 foi reportado cu < concentração maís da concentração fosse b seguinte modelo de 2 % Média de Inibição = 1 + ( 100 /Cso Cone n

Este modelo assume que a resposta mínima e máxima eram, respectivamente, 0% e 100% e estima 0 IC50 e 0 parâmetro de inclinação. Se a regressão não linear se reduz ou se o número de concentrações testadas foi < 5, utilizou-se uma regressão linear para estimar o IC50, utilizando os 2 pontos que flanqueiam os 50%.

Se uma regressão linear foi utilizada para estimar ο IC50, este foi output nos registos de ensaio, e pode também ser visto na presença (regressão não linear) ou na ausência (regressão linear) do erro padrão do IC50 e do parâmetro de inclinação.

Utilizando o ensaio acima, compostos da invenção foram mostrados como inibindo a produção de IL-Ιβ induzida por LPS em sangue completo humano, não diluído, via inibição da P 38 ΜΆΡ quír 1 a s e, qu e, como referido acima, medeia pr OClUí y à O d Θ I i. j- 1 β. Cornpos tos da invenção ' exibir ram valore de IC< 5 0 pãTc. 3 produ ção de IL-Ιβ induzida por LP S em s angu completo humano, não diluído, no intervalo de <0,001 μΜ a 0,30 μΜ, Por exemplo, a 6-(2,4-dífluorc 3-f enoxi )-8-( / fs \ 1 K; -2 hídroxipropil) '-2-ítetra-hidropíran-i-ílan :iino) - 8H- 53 pirído[2,3-d]pirimidín-/-ona apresentou um IC50 de 0,001 μΜ.

Surpreendentemente, a Inibição da produção de IL-Ιβ induzida por LPS utilizando compostos da invenção em que Pr na fórmula (I) é hidroxialquilo ou alcoxiaiquilo, é substancialmente maior do que os resultados dos compostos correspondentes em que R2 é metilo ou outro alquilo. Esta vantagem inesperada da invenção é ilustrada ma is completamente na Tabela 2, na qual compostos representativos da invenção em que Bf (da fórmula I) é hidroxialquilo são comparados com os correspondentes análogos em que Pb é metilo) . Os compostos na primeira ou coluna mais à esquerda da Tabela 1 são preparados como descrito nos exemplos aqui apresentados, e são também apresentados na Tabela 1. Os compostos na segunda ou coluna do centro ca Tabela 2 foram preparados de acordo com os processos apresentados na W0 02/064594. Os valores na terceira ou coluna mais à direita correspondem ao rácio: (Inibição IC50 da produção IL-Ιβ em que R2 = hidroxialquilo) / (Inibição IC5C da produção IL-Ιβ em que R2 = metilo) .

Como se pode observar pela Tabela 2, os compostos em que Rz é hidroxialquilo proporcionam uma inibição da produção de IL-Ιβ induzida por LPS em sangue completo humano, não diluído, que é da ordem de 2,7 a > 100 vezes, í,e., 2701 a > 100001, maior do que a dos correspondentes análogos metilo (R‘ = metilo) . TABELA 2 = í Pb = alquilo rácio hidroxialquilo { (meti lo) IC50/IC50 54

55

56

A anterior discussão da invenção foi apresentada para fins de ilustração e de descrição. A anterior discussão não pretende limitar a invenção à forma ou formas aqui divulgadas. Embora a descrição da invenção tenha incluído a descrição de uma ou mais concretizações e certas variações e modificações, outras variações e modificações encontram-se no âmbito da invenção, por exemplo como se pode encontrar no âmbito do conhecimento e da perícia dos que pertencem à arte, após compreenderem a presente divulgação.

Lisboa, 9 de Maio de 2007

Claims

1 Reivindicações 1. Um composto da fórmula I

< Ar' (I) em que X1 é A ^ f AC ou S(G)n, em que n é 0, 1 ou 2; Ar1 é d Γ ilo ou heteroarilo; R1 é a i c o x i a 1qu í1 o, alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilc, heterocíclílo, hídroxíalquílo ou hidroxícicloalquilo; e R2 é hídroxíalquílo, oxcalquí1 o ou hidroxícicloalquilo.

2. 0 composto da fórmula I, de acordo com a reivindicação 1, que tem a fórmula II N' r^r "°tA- Rl Á A htR)m (Π) N "N AA H l 2 R2 na qual ru é entre Π ρ 4; cada R3 p alquilo , halogénio, alcoxi halogenoai qui lo; ^ FT e Rd são como definidos na reivindicação 1.

3. 0 composto, de acordo coir: a reivindicação 1, para utilização como substância terapeutacamente actíva.

4. Um processo para a preparação de um composto da fórmula I, de acordo com a reivindicação 1, que compreende a reacção de um composto da fórmula If 2

em que R é tf-Ce alquilo e X1, Ar1 e R2 têm os significados definidos na reivindicação 1, com uma amína da fórmula R^NPR.

5. Um. composto da fórmula I, de acordo com a reivindicação 1, sempre que preparado de acordo com o processo de acordo com a reivindicação 4.

6. A utilização do composto da fórmula I, de acordo com a reivindicação 1, para o fabrico de um medicamento para o controlo ou para a prevenção de uma doença mediada pela p38 quinase.

7. Uma composição que compreenda um excipiente farmaceutícamente aceitável e um composto da fórmula I, de acordo com a reivindicação 1.

8. A utilização do composto da fórmula I, de acordo com a reivindicação 1, para o fabrico de um medicamento para o tratamento de uma doença mediada pela p38 quinase.

9. A utilização da reivindicação 8, em que a referida doença mediada pela p38 quinase é artrite, doença de Crohn, síndrome de cólon irritável, síndrome dolorosa respiratória do adulto, doença pulmonar obstrutiva crónica ou doença de Alzheimer. Lisboa, 9 de Maio de 2007