PT2084151E - Di-hidropirazolonas substituídas para o tratamento de doenças cardiovasculares e hematológicas - Google Patents

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Mario Jeske
Hanno Wild
Ingo Flamme
Jens-Kerim Ergueden
Peter Kolkhof
Joachim Schuhmacher
Kai Thede
Hartmut Beck
Friederike Stoll
Felix Oehme
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Description

1
DESCRIÇÃO "DI-HIDROPIRAZOLONAS SUBSTITUÍDAS PARA O TRATAMENTO DE DOENÇAS CARDIOVASCULARES E HEMATOLÓGICAS" O presente pedido de patente de invenção diz respeito a novos derivados de di-hidropirazolona substituída, a processos para a sua preparação e à sua utilização para a preparação de medicamentos para o tratamento e/ou para a profilaxia de doenças, em particular de doenças cardiovasculares e hematológicas e de doenças renais, bem como para a promoção da cicatrização de feridas.
Um fornecimento deficiente de oxigénio ao organismo humano ou aos seus componentes que prejudique o funcionamento regular do organismo ou dos seus componentes devido à sua duração e/ou à sua extensão ou que faça com o que seu funcionamento sejam completamente parado é designado por hipóxia. A hipóxia pode ser provocada por uma redução do oxigénio disponível no ar proveniente da respiração (v.g.r durante períodos a altitudes elevadas), por distúrbios na respiração externa (v.g., como resultado de um funcionamento perturbado dos pulmões ou uma obstrução do tracto respiratório), por uma redução do débito cardíaco (v.g., no caso de insuficiência cardíaca, de sobrecarga ventricular direita aguda com embolismo pulmonar) , por uma capacidade de transporte de oxigénio muito reduzida do sangue (v.g., como resultado de anemia ou de intoxicação, v.g., com monóxido de carbono), demarcada localmente por um fluxo sanguíneo reduzido coo resultado de oclusões vasculares (estados de isquemia tipicamente, v.g., do coração, das extremidades inferiores ou do cérebro, 2 macroangiopatia e microangiopatia diabética) , bem como por um aumento das necessidades em termos de oxigénio dos tecidos (v.g., com resultado do aumento do trabalho muscular ou de inflamações locais) [Eder, Gedigk (Hrsg.), Allgemeine Pathologie und pathologische Anatomie, 33a ed., Springer Verlag, Berlin, 1990]. O organismo humano é capaz, até uma extensão limitada, de se adaptar de um modo agudo ou crónico a situações de fornecimento de oxigénio reduzido. Para além de uma resposta imediata, a qual compreende, por exemplo, um aumento do débito cardíaco e do débito respiratório e uma dilatação local dos vasos sanguíneos por mecanismos de controlo vegetativo-nervosos, a hipóxia provoca uma alteração na transcrição de diversos genes. Neste caso, a função dos produtos génicos serve para compensar a deficiência em oxigénio. Assim, a expressão de diversas enzimas de glicólise e do transportador I de glicose é aumentada, tendo como resultado o aumento da produção anaeróbica de ATP e tornando possível a sobrevivência à deficiência em oxigénio [Schmidt, Thews (Hrsg.), Physiologie des Menschen, 27a ed., Springer Verlag, Berlin, 1997; Lõffler, Petrides (Hrsg.), Biochemie und Pathobiochemie, 7a ed., Springer Verlag, Berlin, 2003].
Além disso, a hipóxia provoca uma expressão aumentada do factor de crescimento de células endoteliais vascular, VEGF, sendo, tendo como resultado o estímulo da regeneração de vasos sanguíneos (angiogénese) em tecidos hipóxicos. O fluxo sanguíneo através de tecidos isquémicos é assim melhorado a longo prazo. Como é evidente, tal contra-regulação é bastante inadequada no caso de diversas doenças cardiovasculares e doenças de oclusão vascular [para um 3 resumo ver: Simons und Ware, Therapeutic angiogenesis in cardiovascular disease, Nat. Rev. Drug. Discov. 2 (11), 863-71 (2003)].
Além do mais, em casos de hipóxia sistémica, a expressão da hormona peptidica eritropoietina formada predominantemente nos fibroblastos intersticiais dos rins é aumentada. A formação de células vermelhas sanguíneas na espinal medula é assim estimulada e, por tal motivo, a capacidade de transporte de oxigénio do sangue é aumentada. Este efeito tem vindo a ser e é utilizado por atletas profissionais em treinos a altitude elevada. Uma diminuição na capacidade de transporte de oxigénio do sangue, v.g., como resultado de anemia após hemorragia, provoca normalmente um aumento na produção de eritropoietina nos rins. No caso de determinadas formas de anemia, este mecanismo regulador pode ser perturbado ou o seu valor normal pode ser fixado para um valor inferior. Assim, v.g., em pacientes que sofrem de insuficiência renal, a eritropoietina é, de facto, produzida no parênquima do rim, embora em quantidades significativamente reduzidas no que diz respeito à capacidade de transporte de oxigénio do sangue, provocando a designada anemia renal. A anemia renal em particular, mas também anemias provocadas por tumores e por infecção com VIH, são convencionalmente tratadas por administração por via parentérica de eritropoietina humana recombinante (rhEPO). Não existe presentemente qualquer terapia alternativa com medicamentos oralmente disponíveis para esta terapia dispendiosa [para uma descrição ver: Eckardt, The potential of erythropoietin and related strategies to stimulate erythropoiesis, Curr. Opin.
Investig. Drugs 2(8), 1081-5 (2001); Berns, Should the 4 target hemoglobin for patients with chronic kidney disease treated with erythropoietic replacement therapy be changed?, Semin. Dial. 18 (D , 22-9 (2005)] . Estudos recentes demonstraram que, para além da sua acção de aumento de eritropoiese, a eritropoietina também apresenta uma acção protectora (anti-apoptótica) nos tecidos hipóxicos, em particular do coração e do cérebro, a qual é independente. Além disso, de acordo com estudos recentes, a terapia com eritropoietina reduz a gravidade média de morbidade em pacientes com insuficiência cardiaca [para uma descrição ver: Caiola e Cheng, Use of erythropoietin in heart failure management, Ann. Pharmacother. 38 (12), 2145-9 (2004); Katz, Mechanisms and treatment of anemia in chronic heart failure, Congest. Heart. Fail. 10 (5), 243-7 (2004) ] .
Os genes descritos antes que são induzidos por hipóxia possuem a caracteristica comum do facto do aumento da sua expressão sob hipóxia ser provocado pelo designado factor de transcrição induzivel por hipóxia (HIF) . O HIF é um factor de transcrição heterodimérico que compreende uma subunidade alfa e uma subunidade beta. Encontram-se descritas três isoformas alfa de HIF, das quais a HIF-1 alfa e a HIF-2 alfa são bastante homólogas e são importantes para a expressão génica induzida por hipóxia. Ao passo que a subunidade beta (das quais foram descritas 2 isoformas), também designada ARNT (translocador nuclear receptor de hidrocarbonetos de arilo), é expressa constitutivamente, a expressão da subunidade alfa dependo do teor em oxigénio na célula. Sob normóxia, a proteina HIF alfa é poli-ubiquitinizada e depois degradada proteossomicamente. Sob hipóxia, esta degradação é inibida, 5 de modo que o HIF alfa dimeriza com ARNT e pode activar os seus genes alvo. Neste caso, o dímero de HIF liga-se aos designados elementos responsáveis pela hipóxia (HRE) nas sequências reguladoras dos seus genes alvo. Os HRE são definidos por uma sequência de consenso. Foram detectados HRE funcionais nos elementos reguladores de diversos genes induzidos por hipóxia (para uma descrição ver: Semenza, Hypoxia-inducible factor 1: oxygen homeostasis and disease pathophysiology, Trends Mol. Med. 7 (8), 345-50 (2001); Wenger e Gassmann, Oxygen(es) and the hypoxia-inducible factor-1, Biol. Chem. 378 (7), 609-16 (1997)]. O mecanismo molecular no qual esta regulação de HIF alfa é baseada tem vindo a ser clarificado pelos trabalhos de diversos grupos independentes de investigadores. O mecanismo é conservado de espécie para espécie: o HIF alfa é hidroxilado por uma subclasse de prolil-4-hidroxilases dependentes de oxigénio, designada por PHD ou EGLN, em dois radicais prolilo específicos (P402 e P564 da subunidade HIF-1 alfa humana). As HIF prolil-4-hidroxilases são dioxigenases conversoras de 2-oxoglutarato dependentes de ferro [Epstein et al., C. elegans EGL-9 and mammalian homologs define a family of dioxygenases that regulate HIF by prolyl hydroxylation, Cell 107 (1), 43-54 (2001); Bruick e McKnight, A conserved family of prolyl-4-hydroxylases that modify HIF, Science 294 (5545), 1337-40 (2001); Ivan et al., Biochemical purification and pharmacological inhibition of a mammalian prolyl hydroxylase acting on hypoxia-inducible factor, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 99 (21), 13459-64 (2002)]. As enzimas foram descritas como prolil-hidroxilases pela primeira vez em 2001 [Aravind e Koonin, The DNA-repair protein AlkB, EGL-9, and leprecan 6 define new families of 2-oxoglutarate- and irondependent dioxygenases, Genome Biol. 2 (3), pesquisa 0007.1-0007.8, Epub 2001 Feb 19]. A proteína supressora de tumores pVHL, a qual em conjunto com elongina B e C forma o designado complexo VBC, que adapta a subunidade HIF alfa a uma ubiquitina E3 ligase, liga-se à subunidade HIF alfa prolil-hidroxilada. Uma vez que a prolil-4-hidroxilação da subunidade HIF alfa e a sua subsequente degradação é efectuada como função da concentração intracelular de oxigénio, as HIF prolil-4-hidroxilases também têm sido designadas como sensor de oxigénio celular. Foram identificadas três isoformas destas enzimas: EGLN1/PHD2, EGLN2/PHD1 e EGLN3/PHD3. Duas destas enzimas (EGLN2/PHD1 e EGLN3/PHD3) são induzidas transcricionalmente mesmo sob hipóxia e são, possivelmente, responsáveis pela diminuição dos niveis de HIF alfa observados sob hipóxia crónica [para uma descrição ver: Schofield e Ratcliffe, Oxygen sensing by HIF hydroxylases, Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 5 (5), 343-54 (2004)]. A inibição farmacológica selectiva de HIF prolil-4-hidroxilases provoca o aumento da expressão génica de genes alvo dependentes de HIF, sendo, por tal motivo, benéfica para a terapia de diversas sindromes de doenças. Em particular no caso de doenças do sistema cardiovascular, é esperado uma melhoria no decurso da doença a partir da indução de novos vasos sanguíneos e da alteração da situação metabólica dos órgãos isquémicos de produção aeróbica de ATP para a produção anaeróbica ATP. Uma melhoria na vascularização de feridas crónicas promove o processo de cura, em particular no caso de úlceras crurais e de outras feridas crónicas da pele com cura reduzida. De 7 igual modo, a indução de eritropoietina endógena em determinadas formas de doença, em particular em pacientes com anemia renal, também constitui um objectivo terapêutico desejado.
Os inibidores de HIF prolil-4-hidroxilase descritos na literatura cientifica não satisfazem os requerimentos impostas a um medicamento. Estes são análogos de oxoglutarato competitivos (tais como, v.g., N-oxalil-gi icina), os quais são caracterizados pela sua potência de acção muito fraca, não tendo ainda demonstrado acção em modelos in vivo no sentido da indução de genes alvo de HIF. Ou então são agentes de complexação com ferro (quelantes), tais como desferroxamina, que actuam como inibidores não específicos de dioxigenases que contêm ferro e, embora proporcionem uma indução dos genes alvo, tal como, v.g., de eritropoietina, in vivo, mitigam, evidentemente, a eritropoiese através da complexação do ferro disponível. 0 objecto da presente invenção consiste em proporcionar novos compostos que possam ser utilizados para o tratamento de doenças e, em particular, de doenças cardiovasculares ou hematológicas.
No contexto da presente invenção, são agora descritos compostos que actuam como inibidores específicos de HIF prolil-4-hidroxilases e, com base neste mecanismo de acção específico, proporcionam in vivo, após administração por via parentérica ou oral, a indução dos genes alvo de HIF, tais como, v.g., eritropoietina, e os processos biológicos causados por esta inibição, tais como, v.g., eritropoiese.
Nos documentos EP 165 448 e EP 212 281 encontram-se descritas 2-heteroaril-4-aril-l,2-di-hidropirazolonas que possuem acção bactericida e/ou fungicida. 0 documento EP 183 159 reivindica a utilização de 2-heteroaril-4-aril-l,2-di-hidropirazolonas enquanto inibidores de lipoxigenase para o tratamento de doenças cardiovasculares e
inflamatórias do tracto respiratório. No documento DE 2 651 008 encontram-se descritas 2,4-difenil-l,2-di-hidro-pirazolonas que possuem uma actividade herbicida. A preparação e as propriedades farmacológicas de determinadas 2-piridil-l,2-di-hidropirazolonas encontram-se descritas em Helv. Chim. Acta 49_ (1), 272-280 (1966). Os documentos WO 96/12706, WO 00/51989 e WO 03/074550 reivindicam compostos com uma estrutura parcial di-hidropirazolona para o tratamento de diversas doenças e no documento WO 2006/ /101903 encontram-se descritos bipirazoles substituídos com hidroxi ou alcoxi para o tratamento de doenças neuropsiquiátricas. Nos documentos WO 03/051833 e WO 2004/ /089303 encontram-se ainda descritos derivados de pirazole substituídos com heteroarilo para o tratamento da doe e de diversas doenças do SNC. Entretanto, no documento WO 2006/ /114213 encontram-se descritas 2,4-dipiridil-l,2-di-hidro-pirazolonas como inibidores de HIF prolil-4-hidroxilases. A estrutura do cristal por raio-X do composto 3-metil-1-(piridina-2-il)-4-(l-piridina-2-il-3-metil-lH-pirazol-5-il)-2H-3-pirazolina-5(1H)-ona (outro nome: 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridina-2-il-l',2'-di-hidro-2H,3'H-3,4'-bipirazol-3'-ona) encontra-se descrita em Acta Crystallogr., Section E: Structure Reports Online E57 (11), oll26-oll27 (2001) [Chem. Abstr. 2001: 796190]. A síntese de determinados derivados de 3', 5-dimetil-2-fenil-l'-(1,3-tiazol-2-il)-1'Η, 2H-3r4'-bipirazol-5'-ol encontra-se descrita em Indian J. Heterocyclic Chem. 3 (1), 5-8 (1993) [Chem.
Abstr. 1994: 323362]. A preparação e o tautomerismo de 9 derivados individuais de 4-(pirazol-5-il)-pirazolina-5-ona encontra-se descrita em J. Heterocyclic Chem. 27 (4), 865- 870 (1990) [Chem. Abstr. 1991: 428557]. Não foi ainda descrita uma utilização terapêutica para os compostos referidos em tais publicações. No documento WO 2007/ /008541 encontra-se listado o composto 2-terc-butil-1'-[4-(4-clorofenil)-l,3-tiazol-2-il]-3',5-dimetil-l'Η, 2H-3, 4'-bipirazol-5'-ol como exemplos de teste. A presente invenção proporciona compostos de fórmula estrutural (I)
em que o simbolo R1 representa um grupo heteroarilo de fórmula estrutural N. R'
n4 em que o simbolo * representa o ponto de ligação ao anel di-hidropirazolona e o simbolo R4 representa hidrogénio, flúor, cloro, bromo, ciano, alquilo(Ci-C4), trifluorometilo, hidroximetilo, alcoxi(Ci-C4), trifluorometoxi, hidroxicarbonilo ou alcoxi(Ci-C4)-carbonilo, o simbolo R2 representa um grupo heteroarilo de fórmula estrutural 10
ou em que o símbolo # representa o ponto de ligação ao anel di-hidropirazolona e os símbolos R6, R6A e R6B são iguais ou diferentes e representam, de um modo independente entre si, hidrogénio ou um substituinte seleccionado entre o conjunto constituído por flúor, cloro, bromo, ciano, alquilo(Ci-C6), trifluorometilo, hidroxi, alcoxi (Ci-Cô) , trifluorometoxi, amino, mono-alquil (Ci-C4) -amino, di-alquil (Ci-C4) -amino, hidroxicarbonilo, alcoxi(C1-C4)-carbonilo, heterociclo-alquilo com 4 a 6 membros, fenilo e heteroarilo com 5 ou 6 membros, em que o grupo alquilo (Οι-Οε) pode ser substituído, por sua vez, com hidroxi, alcoxi(C1-C4) ou amino e os grupos heterocicloalquilo com 4 a 6 membros, fenilo e heteroarilo com 5 ou 6 membros, podem ser, por sua vez e em cada caso, substituídos uma ou duas vezes, de um modo igual ou diferente, com flúor, cloro, bromo, ciano, alquilo (C1-C4) , trifluorometilo, hidroxi, alcoxi (C1-C4) , trif luorometoxi, oxo, amino, mono-alquil (C1-C4) -amino, di-alquil- (C1-C4) -amino, hidroxilcarbonilo e/ou alcoxi(C1-C4)-carbonilo e o símbolo R representa hidrogénio, e seus sais, solvatos e solvatos dos sais.
Os compostos de acordo com a invenção são os compostos de fórmula estrutural (I) e os seus sais, solvatos e 11 solvatos dos sais, os compostos abrangidos pela fórmula estrutural (I) das fórmulas estruturais a seguir referidas e seus sais, solvatos e solvatos dos sais e os compostos abrangidos pela fórmula estrutural (I) e a seguir referidos como exemplos de variantes e seus sais, solvatos e solvatos dos sais, em que os compostos abrangidos pela fórmula estrutural (I) e a seguir referidos não sejam já sais, solvatos ou solvatos dos sais.
Os compostos de acordo com a invenção podem existir em formas estereoisoméricas (enantiómeros, diastereómeros), em função da sua estrutura. Assim sendo, a invenção compreende os enantiómeros ou diastereómeros e suas misturas particulares. Os constituintes estereoisomericamente uniformes podem ser isolados a partir de tais misturas de enantiómeros e/ou diastereómeros de um modo conhecido.
No caso dos compostos de acordo com a invenção poderem ocorrer em formas tautoméricas, então a presente invenção compreende todas as formas tautoméricas.
No contexto da presente invenção, como sais preferidos refere-se os sais fisiologicamente aceitáveis dos compostos de acordo com a invenção. Também estão incluidos os sais que não sendo, eles próprios, adequados para utilizações farmacêuticas possam ser utilizados, por exemplo, para o isolamento ou para a purificação dos compostos de acordo com a invenção.
Como sais fisiologicamente aceitáveis dos compostos de acordo com a invenção refere-se sais de adição de ácido de ácidos minerais, de ácidos carboxilicos e de ácidos sulfónicos, v.gr., sais de ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metano-sulfónico, ácido etano-sulfónico, ácido tolueno-sulfónico, 12 ácido benzeno-sulfónico, ácido naftaleno-sulfónico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido propiónico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido málico, ácido cítrico, ácido fumárico, ácido maleico e ácido benzóico.
Como sais fisiologicamente aceitáveis dos compostos de acordo com a invenção refere-se também sais de bases convencionais, tais como, a título exemplificativo e preferencial, sais de metais alcalinos (v.g., sais de sódio e de potássio), sais de metais alcalino-terrosos {v.g., sais de cálcio e de magnésio) e sais de amónio provenientes de amónia ou de aminas orgânicas com 1 a 16 átomos de carbono, tais como, a título exemplificativo e preferencial, etilamina, dietilamina, trietilamina, etildiisopropilamina, monoetanolamina, dietanolamina, trietanolamina, diciclo-hexilamina, dimetilaminoetanol, procaína, dibenzilamina, N-metilmorfolina, arginina, lisina, etilenodiamina e N-metilpiperidina.
No contexto da invenção, o termo solvato designa aquelas formas de compostos de acordo com a invenção que formam um complexo, no estado sólido ou líquido, por coordenação com moléculas de solvente. Os hidratos constituem formas específicas de solvatos, nos quais a coordenação tem lugar com água. No contexto da presente invenção, os hidratos são os solvatos preferidos.
No contexto da presente invenção, os substituintes possuem os significados seguintes, salvo quando especificado de outro modo.
No contexto da invenção, alquilo (Ci~C6) e alquilo(Ci — C4-) representam um radical alquilo de cadeia linear ou ramificada que possui, respectivamente, 1 a 6 ou 1 a 4 átomos de carbono. É preferido um radical alquilo de cadeia 13 linear ou ramificada que possuem 1 a 4 átomos de carbono. A titulo exemplificativo e preferencial, é possivel referir: metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, iso-butilo, sec-butilo, terc-butilo, 1-etilpropilo, n-pentilo e n-hexilo.
No contexto da invenção, alcoxi(Ci~C6) e alcoxi(Ci— C4) representam um radical alcoxi de cadeia linear ou ramificada que possui, respectivamente, 1 a 6 ou 1 a 4 átomos de carbono. É preferido um radical alcoxi de cadeia linear ou ramificada que possui 1 a 4 átomos de carbono. A titulo exemplificativo e preferencial, é possivel referir: metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, terc-butoxi, n-pentoxi e n-hexoxi.
No contexto da invenção, mono-alguil (C1-C4) -amino representa um grupo amino com um substituinte alquilo de cadeia linear ou ramificada que contém 1 a 4 átomos de carbono. A titulo exemplificativo e preferencial, é possível referir: metilamino, etilamino, n-propilamino, isopropilamino, n-butilamino e terc-butilamino.
No contexto da invenção, di-alquil(C1-C4)-amino representa um grupo amino com dois substituintes alquilo de cadeia linear ou ramificada, iguais ou diferentes, em que cada um deles possui 1 a 4 átomos de carbono. A título exemplificativo e preferencial, é possível referir: N,N-dimetilamino, N,N-dietilamino, N-etil-N-metilamino, N-metil-N-n-propilamino, N-isopropil-N-n-propilamino, N,N-diisopropilamino, N-n-butil-N-metilamino e N-terc-butil-N-metilamino.
No contexto da invenção, alcoxi (C1-C4) -carbonilo representa um radical alcoxi de cadeia linear ou ramificada que possui 1 a 4 átomos de carbono que está 14 ligado por meio de um grupo carbonilo. A titulo exemplificativo e preferencial, é possivel referir: metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, n-propoxicarbonilo, isopropoxicarbonilo, n-butoxicarbonilo e terc-butoxi-carbonilo.
No contexto da invenção, heterocicloalquilo com 4 a 6 membros representa um radical heterocíclico que é monociclico ou, facultativamente biciclico, saturado ou contém uma ligação dupla e que possui 4 a 6 átomos no anel, contém um ou dois heteroátomos no anel seleccionado entre o conjunto constituído por N, 0 e/ou S e que está ligado através do átomo de carbono no anel ou, facultativamente, do átomo de azoto do anel. A titulo exemplificativo e preferencial, é possivel referir: azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, pirrolinilo, pirazolidinilo, di-hidropirazolilo, tetra-hidrofuranilo, tiolanilo, 1,3-oxazolidinilo, 1,3-tiazolidinilo, piperidinilo, tetra-hidropiridilo, piperazinilo, tetra-hidropiranilo, di-hidropiranilo, tetra-hidrotiopiranilo, 1,3-dioxanilo, 1,4-dioxanilo, morfolinilo e tiomorfolinilo. De preferência, no contexto da invenção, representa um radical heterocicloalquilo com 4 a 6 membros monociclico que possui 4 a 6 átomos no anel e contém um ou dois heteroátomos no anel seleccionado entre o conjunto constituído por N, 0 e/ou S e que está ligado através do átomo de carbono no anel ou, facultativamente, do átomo de azoto do anel. A titulo exemplificativo e preferencial, é possivel referir: azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, pirazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, tiolanilo, 1,3-oxazolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, tetra-hidropiranilo, tetra-hidrotiopiranilo, 1,3-dioxanil, 1,4- 15 dioxanilo, morfolinilo e tiomorfolinilo. Mais preferencialmente, representa um radical heterocicloalquilo com 4 a 6 membros que possui 4 a 6 átomos no anel e contém um ou dois heteroátomos no anel seleccionado entre o conjunto constituído por N e/ou 0, tal como, por exemplo, pirrolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, piperazinilo, tetra-hidropiranilo e morfolinilo.
No contexto da invenção, heteroarilo com 5 ou 6 membros representa um radical heterocíclico aromático (heteroaromáticos) que possui um total de 5 ou, respectivamente, de 6 átomos no anel, o qual contém até quatro heteroátomos no anel, iguais ou diferentes, seleccionados entre o conjunto constituído por N, 0 e/ou S e que está ligado através de um átomo de carbono do anel ou, facultativamente, através de um átomo de azoto do anel. A título exemplificativo e preferencial, é possível referir: furilo, pirrolilo, tienilo, pirazolilo, isoxazolilo, tiadiazolilo, piridazinilo, os radicais imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, isotiazolilo, triazolilo, oxadiazolilo, tetrazolilo, piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo. São preferidos heteroarilo com 5 ou 6 membros que possuem até três heteroátomos no anel seleccionados entre o conjunto constituído por N, 0 e/ou S, tais como, por exemplo, furilo, tienilo, tiazolilo, oxazolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, pirazolilo, imidazolilo, triazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, piridilo, pirimidinilo, piridazinilo, pirazinilo.
No contexto da invenção, halogéneo compreende flúor, cloro, bromo e iodo. São preferidos flúor, cloro e bromo e mais preferidos flúor e cloro. 16
No caso dos radicais no composto de acordo com a invenção serem substituídos, então os radicais podem ser mono- ou poli-substituídos, salvo quando especificado de outro modo. No contexto da presente invenção, para todos os radicais que ocorram diversas vezes, o seu significado é independente entre si. A substituição com um, dois ou três substituintes iguais ou diferentes é preferida. A substituição com um ou dois substituintes iguais ou diferentes é particularmente preferida.
No contexto da invenção, são preferidos os compostos de fórmula estrutural (I) em que o símbolo R1 representa um grupo heteroarilo de fórmula estrutural
em que
ou
17 o símbolo # representa o ponto de ligação ao anel di-hidropirazolona e os símbolos R6, R6A e R6B são iguais ou diferentes e representam, de um modo independente entre si, hidrogénio ou um substituinte seleccionado entre o conjunto constituído por flúor, cloro, bromo, ciano, alquilo(Οχ-Οε), trifluorometilo, hidroxi, alcoxi (Οχ-Οε) , trifluorometoxi, amino, mono-alquil(C1-C4)-amino, di-alquil(C1-C4)-amino, hidroxicarbonilo, alcoxi(Ci-C4)-carbonilo, heterocicloalquilo com 4 a 6 membros, fenilo e heteroarilo com 5 ou 6 membros, em que o grupo alquilo (Ci-C6) pode ser substituído, por sua vez, com hidroxi, alcoxi(C1-C4) ou amino e os grupos heterocicloalquilo com 4 a 6 membros, fenilo e heteroarilo com 5 ou 6 membros, podem ser, por sua vez e em cada caso, substituídos uma ou duas vezes, de um modo igual ou diferente, com flúor, cloro, bromo, ciano, alquilo(C1-C4) , trifluorometilo, hidroxi, alcoxi (C1-C4) , trif luorometoxi, oxo, amino, mono-alquil (C1-C4) -amino, di-alquil- (C1-C4) -amino, hidroxilcarbonilo e/ou alcoxi(C1-C4) -carbonilo e o símbolo R3 representa hidrogénio, e seus sais, solvatos e solvatos dos sais.
No contexto da invenção, são preferidos os compostos de fórmula estrutural (I) em que o símbolo R1 representa um grupo heteroarilo de fórmula estrutural
18 em que, o símbolo * representa o ponto de ligação ao anel di-hidropirazolona e o símbolo R4 representa hidrogénio, flúor, cloro, bromo, ciano, alquilo(C1-C4) , trifluorometilo, hidroximetilo, alcoxi (Ci-C4) , trifluorometoxi, hidroxicarbonilo ou alcoxi (Ci-C4) -carbonilo, o símbolo R2 representa um grupo heteroarilo de fórmula estrutural
em que o símbolo # representa o ponto de ligação ao anel di-hidropirazolona e o símbolo R6 representa hidrogénio ou um substituinte seleccionado entre o conjunto constituído por flúor, cloro, bromo, ciano, alquilo(Ci-Cô) , trifluorometilo, hidroxi, alcoxi (C1-C6) , trifluorometoxi, amino, mono-alquil(Ci~C4)-amino, di-alquil(C1-C4)-amino, hidroxicarbonilo, alcoxi(Ci-C4)-carbonilo, heterocicloalquilo com 4 a 6 membros, fenilo e heteroarilo com 5 ou 6 membros, em que o grupo alquilo (C1-C6) pode ser substituído, por sua vez, com hidroxi, alcoxi(C1-C4) ou amino e os grupos heterocicloalquilo com 4 a 6 membros, fenilo e heteroarilo com 5 ou 6 membros, podem ser, por sua vez e em cada caso, substituídos uma ou duas vezes, de um modo igual ou diferente, com flúor, cloro, bromo, ciano, alquilo (C1-C4) , trifluorometilo, hidroxi, alcoxi (Ci-C4) , trifluorometoxi, oxo, amino, mono-alquil(C1-C4)-amino, di- 19 alquil-(C1-C4) -amino, hidroxilcarbonilo e/ou alcoxi (C1-C4) - carbonilo e o símbolo R3 representa hidrogénio, e seus sais, solvatos e solvatos dos sais.
Os significados dos radicais apresentados mais minuciosamente nas combinações particulares ou nas combinações preferidas de radicais também podem ser alterados consoante desejado por significados de radicais de outras combinações, independentemente das combinações de radical particulares apresentadas. São ainda mais preferidas combinações de dois ou mais dos intervalos preferidos supramencionados.
Os derivados de 1,2-di-hidropirazol-3-ona de fórmula estrutural (I) de acordo com a invenção também podem estar na forma tautomérica lH-pirazole-5-ol (ver esquema 1 seguinte); as duas formas tautoméricas estão expressamente incluídas na presente invenção.
Esquema 1
¢0 ({·') A invenção também proporciona um processo para a preparação dos compostos de fórmula estrutural (I) de acordo com a invenção, o qual é caracterizado pelo facto de se fazer reagir um composto de fórmula estrutural (II) 20 20
r: possuem as significações definidas antes e o símbolo Z representa metilo ou etilo, num solvente inerte e, facultativamente, na presença de um ácido, com um composto de fórmula estrutural (III) H <J% em que o símbolo R2 possui as significações definidas antes, para se obter compostos de fórmula estrutural (IV)
NH
em que os símbolos Z1, R1, R2 e R3 possuem as significações definidas antes, os quais sofrem ciclização sob estas condições de reacção ou então num passo de reacção subsequente sob a influência de uma base para se obter os compostos de fórmula estrutural (I), sendo os compostos de fórmula estrutural (I) facultativamente convertidos com os correspondentes (i) solventes e/ou (ii) bases ou ácidos nos seus solvatos, sais e/ou solvatos dos sais. 21
Os compostos de fórmula estrutural (I) de acordo com a invenção, em que o símbolo R3 representa hidrogénio, também podem ser preparados por um processo, no qual um composto de fórmula estrutural (V) O,
O em que os símbolos Z1 e R1 possuem as significações definidas antes, é submetido, em primeiro lugar, a uma reacção de condensação com um composto de fórmula estrutural (VI) H,SC O—2a ^ \ / \
em que o símbolo Z2 representa metilo ou etilo, para se obter compostos de fórmula estrutural (VII) CH$ HX-Ni
O em que os símbolos Z1 e R1 possuem as significações definidas antes, os quais se faz então reagir, na presença de um ácido, com um composto de fórmula estrutural (III) para se obter compostos de fórmula estrutural (IV-A) 22
ÍÈV-A) em que os símbolos Z1, R1 e R2 possuem as significações definidas antes, os quais sofrem ciclização sob estas condições de reacção ou então num passo de reacção subsequente sob a influência de uma base para se obter os compostos de fórmula estrutural (I), em que o símbolo R3 representa hidrogénio.
Outros compostos de acordo com a invenção podem facultativamente ser preparados por meio da conversão de grupos funcionais de substituintes individuais, em particular os apresentados para os significados dos símbolos R1 e R2, partindo de compostos de fórmula estrutural (I) obtidos pelos processos anteriores. Tais conversões são efectuadas através de métodos convencionais conhecidos pelos especialistas na matéria, os quais compreendem, por exemplo, reacções de substituição nucleofílica ou electrofílica, oxidação, redução, hidrogenação, reacções de acoplamento catalisadas com metais de transição, alquilação, acilação, aminação, esterificação, clivagem de éster, eterificação, clivagem de éter, formação de carboxamidas, sulfonamidas, carbamatos e ureias, e introdução e remoção de grupos protectores temporários.
Como solventes inertes adequados para os passos de processo (II) + (III) (IV), (IV) (I), (VII) + (III) 23 (IV-A) e (IV-A) ->· (I) refere-se, em particular, éteres, tais como éter dietilico, éter metil-terc-butílico, 1,2-dimetoxietano, tetra-hidrofurano e dioxano, ou álcoois, tais como metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol e terc-butanol. São preferencialmente utilizados metanol, etanol, tetra-hidrofurano ou misturas destes solventes. 0 passo de processo (V) + (VI) -* (VII) é preferencialmente efectuado em dimetilformamida, enquanto solvente, ou também na presença de um excesso do composto (IV) sem mais nenhum solvente. A reacção também pode ser facultativamente efectuada sob irradiação com micro-ondas. De um modo geral, a reacção é efectuada a uma temperatura compreendida entre +20°C e +150°C e de preferência entre +80°C e +120°C [ver também J.P. Bazureau et al., Synthesis 1998, 967; ibid. 2001 (4), 581].
Os passos de processo (II) + (III) -► (IV) e (VII) + (III) -> (IV-A) podem ser, facultativa e vantajosamente, efectuados com a adição de um ácido. Para tal são adequados ácidos inorgânicos ou orgânicos convencionais, tais como, por exemplo, cloreto de hidrogénio, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido metano-sulfónico, ácido p-tolueno-sulfónico ou ácido camfor-10-sulfónico. De preferência, utiliza-se ácido acético ou, em particular, ácido canfor-10-sulfónico ou ácido p-tolueno-sulfónico.
De um modo geral, a reacção (II) + (III) -► (IV) é efectuada a uma temperatura compreendida entre 0°C e +100°C e de preferência entre +10°C e +50°C. De um modo geral, a reacção (VII) + (III) -> (IV-A) é efectuada a uma temperatura compreendida entre +20°C e +120°C e de preferência entre +50°C e +100°C. 24
As sequências de processo (II) + (III) ->· (IV) -> (I) e (VII) + (III) -► (IV-A) ->· (I) podem ser efectuadas num procedimento de reacção em duas etapas ou também numa reacção num único recipiente, sem isolamento da etapa intermediária (IV) ou, respectivamente (IV-A). Para esta última variante, a reacção dos componentes sob irradiação com micro-ondas é particularmente adequada; neste caso, a reacção é geralmente efectuada a uma temperatura compreendida entre +50°C e +200°C e de preferência entre + 100°C e +180°C.
Em alguns casos, também ocorre uma ciclização para o composto (I) mesmo durante a preparação do composto (IV) ou, respectivamente, do composto (IV-A); a ciclização pode então ser facultativamente completada por tratamento in situ da mistura de reacção com uma base.
Enquanto base são adequadas bases inorgânicas ou orgânicas convencionais para tal passo de ciclização em separado (IV) -> (I) ou (IV-A) -> (I) . estas compreendem, em particular, hidróxidos de metais alcalinos, tais como, por exemplo, hidróxido de sódio ou de potássio, carbonatos de metais alcalinos ou de metais alcalino-terrosos, tais como carbonato de sódio, potássio, cálcio ou césio, alcoolatos de metais alcalinos, tais como metanolato de sódio ou potássio, etanolato de sódio ou potássio ou terc-butilato de potássio, ou hidretos de metais alcalinos, tais como hidreto de sódio. De preferência, utiliza-se metanolato ou etanolato de sódio.
De um modo geral, a reacção induzida com base (IV) -► (I) ou (IV-A) -► (I) é efectuada a uma temperatura compreendida entre 0°C e +60°C e de preferência entre 0°C e + 30 °C. 25
Todos os passos de processo podem ser efectuados a pressão normal, elevada ou reduzida (v.g., entre 0,5 bar e 5 bar). De um modo geral, é aplicada uma pressão normal.
Os compostos de fórmula estrutural (II) podem ser preparados por métodos convencionais descritos na literatura para a C-acilação de ésteres de ácidos carboxilicos a partir de compostos de fórmula estrutural (V). Os compostos de fórmulas estruturais (III), (V) e (VI) encontram-se comercialmente disponíveis, são conhecidos a partir da literatura ou podem ser preparados de um modo análogo a processos descritos na literatura. A preparação dos compostos de acordo com a invenção pode ser ilustrada pelo seguinte esquema 2 de reacção:
26 O
Esquema 2 h,c ^pa
0€t
ÇH» H —^ HSC O Et H
-R OEt
OEt [a) : DMF, 16 horas, +100°C; b) : etanol, ácido canfor-slO-sulfónico cat., +78°C; c) : NaOEt, etanol, 1 hora, temperatura ambiente].
Os compostos de acordo com a invenção apresentam um inesperado espectro de acção farmacológica valioso. Assim sendo, são adequados para utilização enquanto medicamentos para o tratamento e/ou para a profilaxia de doenças em seres humanos e em animais.
Os compostos de acordo com a invenção são reconhecidos como inibidores específicos de HIF prolil-4-hidroxilases.
Com base nas suas propriedades farmacológicas, os compostos de acordo com a invenção podem ser utilizados para o tratamento e/ou para a profilaxia de doenças cardiovasculares, em particular, insuficiência cardiaca, doença cardiaca coronária, angina de peito, enfarte do miocárdio, apoplexia, arteriosclerose, hipertensão 27 essencial, pulmonar e maligna e doença oclusiva arterial periférica.
Os compostos de acordo com a invenção são ainda adequados para o tratamento e/ou para a profilaxia de distúrbios na formação de sangue, tais como, v.g., anemias idiopáticas, anemia renal e anemias associadas a doenças tumorais (em particular, anemia induzida por quimioterapia), a uma infecção (em particular, infecção com VIH) ou a uma outra doença inflamatória, tal como, v.g., artrite reumatóide. Além disso, os compostos de acordo com a invenção são adequados para o tratamento de suporte de anemias provocadas por perda de sangue, anemia por deficiência em ferro, anemia por deficiência em vitamina B12 (v.g., provocadas por deficiência em vitamina B12 ou provocadas por deficiência em ácido fólico), anemia hipoplástica ou aplástica ou anemia hemolitica ou para o tratamento de suporte de anemias provocadas por distúrbios de utilização de ferro (anemia sideroacréstica) ou anemias causadas por outros distúrbios endócrinos (v.g., hipotiroidose).
Além do mais, os compostos são adequados para aumentar o hematócrito com o objectivo de se obter sangue para auto-doação de sangue antes de operações.
Além disso, os compostos de acordo com a invenção podem ser utilizados para o tratamento e/ou para a profilaxia de estados de isquemia associados a operações e seus sintomas consequentes após intervenções cirúrgicas, em particular intervenções ao coração utilizando uma máquina coração-pulmão (v.g., operações de bypass, implantes de válvulas cardíacas), intervenções nas artérias carótidas, intervenções na aorta e intervenções com abertura ou 28 penetração instrumental da parte superior do crânio. Além do mais, os compostos são adequados para o tratamento e/ou para a profilaxia gerais no caso de intervenções cirúrgicas com o objectivo de acelerar a cicatrização de feridas e reduzir o tempo de reconvalescença.
Os compostos são ainda adequados para o tratamento e para a profilaxia de sintomas consequentes de estados de isquemia agudos e crónicos do cérebro (v.g., apoplexia, asfixia no nascimento).
Além do mais, os compostos pode ser utilizados para o tratamento e/ou para a profilaxia de cancro e para o tratamento e/ou para a profilaxia de uma perturbação no estado geral de saúde que ocorra durante o tratamento de cancro, em particular após terapia com agentes citostáticos, antibióticos e radiação.
Os compostos são ainda adequados para o tratamento e/ou para a profilaxia de doenças do tipo reumático e de outros formas de doenças referidas como doenças anto-imunes e, em particular, para o tratamento e/ou para a profilaxia de uma perturbação no estado geral de saúde que ocorra durante o tratamento medicamentoso de tais doenças.
Além disso, os compostos de acordo com a invenção podem ser utilizados para o tratamento e/ou para a profilaxia de doenças do olho (v.g., glaucoma), do cérebro (v.g., doença de Parkinson, doença de Alzheimer, demência, sensação crónica de dor), de doenças renais crónicas, de insuficiência renal e de falência renal aguda e para promover a cicatrização de feridas.
Além do mais, os compostos são adequados para o tratamento e/ou para a profilaxia de estados gerais de 29 fraqueza física até caquexia, em particular, os que ocorrem num elevado grau em idades mais avançadas.
Os compostos são ainda adequados para o tratamento e/ou para a profilaxia de disfunção sexual.
Além disso, os compostos são adequados para o tratamento e/ou para a profilaxia de diabetes mellitus e dos seus sintomas consequentes, tais como, v.g., macroangiopatia e microangiopatia diabética, nefropatia e neuropatia diabética.
Além do mais, os compostos de acordo com a invenção são adequados para o tratamento e/ou para a profilaxia de doenças fibróticas, v.g., do coração, dos pulmões e do fígado.
Em particular, os compostos de acordo com a invenção também são adequados para a profilaxia e para o tratamento de retinopatia em bebés prematuros (retinopatia prematurorum).
Além disso, a invenção proporciona a utilização dos compostos de acordo com a invenção para a preparação de um medicamento para o tratamento e/ou para a profilaxia de doenças, em particular das doenças supramencionadas.
Os compostos de acordo com a invenção podem ser utilizados por si sós ou, se necessário, em combinação com outros compostos activos. Além do mais, a presente invenção proporciona medicamentos que compreendem pelo menos um dos compostos de acordo com a invenção e um ou mais compostos activos, em particular para o tratamento e/ou para a profilaxia das doenças supramencionadas. Como compostos activos adequados em combinação que é possível mencionar a título exemplificativo e preferencial, refere-se: inibidores de ACE, antagonistas do receptor de angiotensina 30 II, bloqueadores do receptor beta, antagonistas de cálcio, inibidores de PDE, antagonistas do receptor mineral-corticóide, diuréticos, aspirina, suplementos de ferro, suplementos de vitamina B12 e de ácido fólico, estatinas, derivados de digitalis (digoxina), agentes quimioterapêuticos para tumores e antibióticos.
De acordo com uma variante preferida da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de ACE, tal como, a titulo exemplificativo e preferencial, enalapril, captopril, lisinopril, ramipril, delapril, fosinopril, quinopril, perindopril ou trandopril.
De acordo com uma variante preferida da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um antagonista de angiotensina AII, tal como, a titulo exemplificativo e preferencial, losartano, candesartano, valsartano, telmisartano ou embusartano.
De acordo com uma variante preferida da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um bloqueador do receptor beta, tal como, a titulo exemplificativo e preferencial, propranolol, atenolol, timolol, pindolol, alprenolol, oxprenolol, penbutolol, bupranolol, metipranolol, nadolol, mepindolol, carazalol, sotalol, metoprolol, betaxolol, celiprolol, bisoprolol, carteolol, esmolol, labetalol, carvedilol, adaprolol, landiolol, nebivolol, epanolol ou bucindolol.
De acordo com uma variante preferida da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um antagonista de cálcio, tal como, a titulo 31 exemplificativo e preferencial, nifedipina, amlodipina, verapamilo ou diltiazem.
De acordo com uma variante preferida da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de fosfodiesterase (PDE), tal como, a titulo exemplificativo e preferencial, milrinona, amrinona, oimobendano, cilostazol, sildenafilo, vardenafilo ou tadalafilo.
De acordo com uma variante preferida da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um antagonista do receptor mineral-corticóide, tal como, a titulo exemplificativo e preferencial, espironolactona, eplerenona, canrenona ou canrenoato de potássio.
De acordo com uma variante preferida da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um diurético, tal como, a titulo exemplificativo e preferencial, furosemida, bumetanida, torsemida, bendroflumetiazida, clorotiazida, hidroclorotiazida, hidroflumetiazida, meticlotiazida, politiazida, triclorometiazida, clorotalidona, indapamida, metolazona, quinetazona, acetazolamida, diclorfenamida, metazolamida, glicerina, isossorbido, manitol, amilorida ou triamtereno.
De acordo com uma variante preferida da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de HMG-CoA-reductase da classe das estatinas, tal como, a titulo exemplificativo e preferencial, lovastatina, simvastatina, pravastatina, fluvastatina, atorvastatina, rosuvastatina, cerivastatina ou pitavastatina. 32
De acordo com uma variante preferida da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um agente quimioterapêutico tumoral, a titulo exemplificativo e preferencial, do conjunto constituído por complexos de platina, tais como, v.g., cisplatina e carboplatina, de agentes de alquilação, tais como, v.g., ciclofosfamida e clorambucilo, de antimetabolitos, tais como, v.g., 5-fluorouracilo e metotrexato, dos inibidores de topoisomerase, tais como, v.g., etopósido e camptotecina, dos antibióticos, tais como, v.g., doxorrubicina e daunorrubicina, ou dos inibidores de cinase, tais como, v.g., sorafenib e sunitinib.
De acordo com uma variante preferida da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um antibiótico, a título exemplificativo e preferencial, do conjunto constituído por penicilinas, cefalosporinas ou quinolonas, tais como, v.g., ciprofloxacina e moxifloxacina.
Além disso, a presente invenção proporciona medicamentos que compreendem pelo menos um composto de acordo com a invenção, em conjunto, de um modo convencional, com uma ou mais substâncias auxiliares inertes, não tóxicas e farmaceuticamente adequadas, bem como a sua utilização para os fins supramencionados.
Os compostos de acordo com a invenção podem actuar de um modo sistémico e/ou local. Podem ser administrados de um modo adequado para tal fim, tal como, v.g., por via oral, parentérica, pulmonar, nasal, sublingual, lingual, bucal, rectal, dérmica, transdérmica, conjuntival, óptica ou sob a forma de implantes ou endopróteses. 33
Os compostos de acordo com a invenção podem ser administrados em formas de administração adequadas para estas vias de administração.
As formas de administração que actuam de acordo com a técnica anterior, libertam os compostos de acordo com a invenção de um modo rápido e/ou modificado e compreendem os compostos de acordo com a invenção numa forma cristalina e/ou amorfa e/ou dissolvida, são adequadas para administração por via oral, tais como, v.g., comprimidos (comprimidos não revestidos ou revestidos, por exemplo, com revestimentos que são resistentes ao suco gástrico ou que se dissolvem de um modo prolongado ou que são insolúveis e que controlam a libertação do composto de acordo com a invenção), comprimidos ou peliculas/pastilhas, peliculas/liofilisados ou cápsulas que se desintegram rapidamente na cavidade oral (por exemplo, cápsulas de gelatina dura ou mole) , drageias, grânulos, aglomerados, pós, emulsões, suspensões, aerossóis ou soluções. A administração por via parentérica pode ser efectuada na ausência de um passo de absorção (v.g., intravenosa, intra-arterial, intra-cardiaca, instra-espinal ou intra-lombar) ou com a inclusão de um passo de absorção (v.g., intramuscular, subcutânea, intracutânea, percutânea ou intraperitoneal). Como formas de administração que são adequadas para administração por via parentérica refere-se, por exemplo, formulações para injecção e infusão sob a forma de soluções, suspensões, emulsões, liofilizados ou pós estéreis.
Para as outras vias de administração são adequadas, v.g., formas de medicamentos para inalação (por exemplo, inaladores de pós, nebulizadores), gotas, soluções ou 34 pulverizações nasais, comprimidos, peliculas/pastilhas ou cápsulas para administração por via lingual, sublingual ou bucal, supositórios, preparações para os ouvidos ou olhos, cápsulas vaginais, suspensões aquosas (loções, misturas agitadas), suspensões lipofílicas, unguentos, cremes, sistemas terapêuticos transdérmicos (v.g., adesivos), leites, pastas, espumas, pós de espalhamento, implantes ou endopróteses.
As vias de administração oral e parentérica são preferidas e, em particular, a administração por via oral e intravenosa.
Os compostos de acordo com a invenção podem ser convertidos nas formas de administração referidas. Tal pode ser efectuado de um modo conhecido per se através da mistura com substâncias auxiliares inertes, não tóxicas e farmaceuticamente adequadas. Tais substâncias auxiliares compreendem, por exemplo, substâncias de veiculo (por exemplo, celulose microcristalina, lactose, manitol), solventes (v.g., polietileno-glicóis líquidos), emulsionantes e dispersantes ou agentes humectantes (por exemplo, dodecilsulfato de sódio, oleato de polioxi-sorbitano), aglutinantes (por exemplo, polivinilpirrolidona), polímeros naturais e sintéticos (por exemplo, albumina), estabilizadores (v.g., antioxidantes, tais como, por exemplo, ácido ascórbico), corantes (v.g., pigmentos inorgânicos, tais como, por exemplo, óxidos de ferro) e agentes para disfarçar o sabor e/ou o odor.
De um modo geral, provou ser vantajoso, no caso da administração por via parentérica, administrar quantidades compreendidas entre cerca de 0,001 e 1 mg/kg e de preferência entre cerca de 0,01 e 0.5 mg/kg de peso 35 corporal, para se atingir resultados eficazes. No caso da administração por via oral, a dosagem está compreendida entre cerca de 0,01 e 100 mg/kg, de preferência entre cerca de 0,01 e 20 mg/kg e mais preferencialmente entre 0,1 e 10 mg/kg de peso corporal.
No entanto, poderá ser necessário alterar as quantidades referidas, em particular em função do peso corporal, da via de administração, do comportamento individual face ao composto activo, da natureza da formulação e do momento ou intervalo de tempo no qual tem lugar a administração. Assim, em alguns casos, poderá ser suficiente utilizar uma quantidade inferior à quantidade minima referida, ao passo que, em outros casos, o limite superior terá de ser excedido. No caso de se administrarem quantidades elevadas, poderá ser aconselhável distribui-las em diversas doses individuais ao longo do dia.
Os seguintes exemplos de variantes ilustram a invenção. A invenção não está limitada a estes exemplos.
Os dados em percentagem no testes e exemplos seguintes dizem respeito a percentagens em peso, salvo quando indicado de outro modo; as partes designam partes em peso. As proporções em solvente, proporções de diluição e dados de concentrações de soluções líquido/liquido dizem respeito, em cada caso, ao volume. A. Exemplos
Abreviaturas e acrónimos aq. solução aquosa cat. catalítica D dia (s) DCI ionização química directa (em MS) 36 DMF dimetilformamida DMSO dimetilsulfóxido d. Th. teórico (em rendimento) EI ionização electrrónica (em MS) ESI ionização por electropulverização (em MS) Et etilo GC-MS espectroscopia de massa acoplada a cromatografia gasosa H hora(s) HPLC cromatografia liguida de elevado rendimento, pressão elevada konz. Concentrado LC-MS espectroscopia de massa acoplada a cromatografia liquida Meth. método Min minuto (s) MS espectroscopia de massa NMR espectroscopia de ressonância magnética nuclear tr tempo de retenção (em HPLC) TA temperatura ambiente TFA ácido trifluoroacético THF tetra-hidrofurano Métodos de LC-MS, GC-MS e HPLC Método 1 (LC-MS)
Instrumento: Micromass Platform LCZ com HPLC Agilent Serie 1100; coluna: Thermo Hypersil GOLD 3 p, 20 mm x 4 mm; eluente A: 1 L de água + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 L de acetonitrilo + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0,0 minuto, 100% de A -> 0,2 minuto, 100% de 37 A ^ 2,9 minutos, 30% de A -► 3,1 minutos, 10% de A -> 5,5 minutos, 10% de A; forno: 50°C; caudal: 0,8 mL/minuto; detecção UV: 210 nm. Método 2 (LC-MS)
Tipo de aparelho de MS: Micromass ZQ; tipo de aparelho de HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; coluna: Phenomenex Gemini 3μ 30 mm x 3,0 0 mm; eluente A: 1 L de água + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 L de acetonitrilo + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0,0 minutos, 90% de A 2,5 minutos, 30% de A -» 3,0 minutos, 5% de A -> 4,5 minutos, 5% de A; caudal: 0,0 minuto, 1 mL/minuto -► 2,5 minutos/3,0 minutos/4,5 minutos, 2 mL/minuto; forno: 50°C; detecção UV: 210 nm. Método 3 (LC-MS)
Instrumento: Micromass Quattro LCZ com HPLC Agilent Serie 1100; coluna: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; eluente A: 1 L de água + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 L de acetonitrilo + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0,0 minuto, 90% de A ->· 2,5 minutos, 30% de A -* 3,0 minutos, 5% de A ^ 4,5 minutos, 5% de A; caudal: 0,0 minuto, 1 mL/minuto -* 2,5 minutos/3,0 minutos/4,5 minutos, 2 mL/minuto; forno: 50°C; detecção UV: 208-400 nm. Método 4 (LC-MS)
Tipo de aparelho de MS: Micromass ZQ; tipo de aparelho de HPLC: Waters Alliance 2795; coluna: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury, 20 mm x 4 mm; eluente A: 1 L de água + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 L de 38 acetonitrilo + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0,0 minuto, 90% de A ^ 2,5 minuto, 30% de A -► 3,0 minutos, 5% de A -> 4,5 minutos, 5% de A; caudal: 0,0 minuto, 1 mL/minuto -► 2,5 minutos/3,0 minutos/4,5 minutos, 2 mL/minuto; forno: 50°C; detecção UV: 210 nm. Método 5 (LC-MS)
Tipo de aparelho de MS: Micromass ZQ; tipo de aparelho de HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; coluna: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury, 20 mm x 4 mm; eluente A: 1 L de água + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 L de acetonitrilo + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0,0 minuto, 90% de A -> 2,5 minutos, 30% de A -► 3,0 minutos, 5% de A ->· 4,5 minutos, 5% de A; caudal: 0,0 minuto, 1 mL/minuto -* 2,5 minutos/3,0 minutos/4,5 minutos, 2 mL/minuto; forno: 50°C; detecção UV: 210 nm. Método 6 (LC-MS)
Tipo de aparelho de MS: Waters ZQ; tipo de aparelho de HPLC: Agilent 1100 Series; UV DAD; coluna: Thermo Hypersil GOLD 3μ, 20 mm x 4 mm; eluente A: 1 L de água + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 L de acetonitrilo + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0,0 minuto, 100% de A -* 3,0 minutos, 10% de A -► 4,0 minutos, 10% de A -► 4,1 minutos, 100% de A; caudal: 2,5 mL/minuto; forno: 55°C; detecção UV: 210 nm. Método 7 (LC-MS)
Tipo de aparelho de MS: Micromass ZQ; tipo de aparelho de HPLC: Waters Alliance 2795; coluna: Phenomenex Synergi 2,5 μ, MAX-RP 100A Mercury, 20 mm x 4 mm; eluente A: 1 L de 39 água + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 L de acetonitrilo + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0,0 minuto, 90% de A -» 0,1 minuto, 90% de A -► 3,0 minutos, 5% de A ^ 4,0 minutos, 5% de A -► 4,01 minutos, 90% de A; caudal: 2 mL/minuto; forno: 50°C; detecção UV: 210 nm. Método 8 (LC-MS)
Instrumento: Micromass Quattro Micro MS com HPLC Agilent Serie 1100; coluna: Thermo Hypersil GOLD 3μ, 20 mm x 4 mm; eluente A: 1 L de água + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 L de acetonitrilo + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0,0 minuto, 100% de A -► 3,0 minutos, 10% de A -> 4,0 minutos, 10% de A -> 4,01 minutos, 100% de A (caudal 2,5 mL/minuto) -► 5,00 minutos, 100% de A; forno: 50°C; caudal: 2 mL/minuto; detecção UV: 210 nm. Método 9 (LC-MS)
Instrumento: Micromass Quattro LCZ com HPLC Agilent Serie 1100; coluna: Phenomenex Synergi 2,5μ MAX-RP 100A Mercury, 20 mm x 4 mm; eluente A: 1 L de água + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 L de acetonitrilo + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0,0 minuto, 90% de A -► 0,1 minuto, 90% de A ->· 3,0 minutos, 5% de A -► 4,0 minutos, 5% de A -► 4,1 minutos, 90% de A; caudal: 2 mL/minuto; forno: 50°C; detecção UV: 208-400 nm. Método 10 (LC-MS)
Instrumento: Micromass QuattroPremier com Waters UPLC Acquity; coluna: Thermo Hypersil GOLD 1,9μ, 50 mm x 1 mm; eluente A: 1 L de água + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 L de acetonitrilo +0,5 mL de ácido fórmico a 40 50%; gradiente: 0,0 minuto, 90% de A ->· 0,1 minuto, 90% de A ->· 1,5 minutos, 10% de A -* 2,2 minutos, 10% de A; caudal: 0,33 mL/minuto; forno: 50°C; detecção UV: 210 nm. Método 11 (HPLC)
Instrumento: HP 1100 com detecção DAD; coluna:
Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2,1 mm, 3,5 ym; eluente A: 5 mL de HCIO4 (a 70%)/litro de água, eluente B: acetonitrilo; gradiente: 0 minuto, 2% de B -► 0,5 minuto, 2% de B ^ 4,5 minutos, 90% de B -► 6,5 minutos, 90% de B -► 6,7 minutos, 2% de B -► 7,5 minutos, 2% de B; caudal: 0,75 mL/minuto; temperatura da coluna: 30°C; detecção UV: 210 nm. Método 12 (HPLC)
Coluna: Kromasil 100 C18 5 ym, 250 mm x 20 mm; eluente A: ácido trifluoroacético a 0,2%, eluente B: acetonitrilo; gradiente: 0,0 minuto, 95% de A -» 10 minutos, 5% de A -► 15 minutos, 5% de A -> 15,1 minutos, 95% de A ^ 20 minutos, 95% de A; forno: 30°C; caudal: 25 mL/minuto; detecção UV: 240 nm. Método 13 (LC-MS)
Instrumento: Micromass Quattro LCZ com HPLC Agilent Serie 1100; coluna: Phenomenex Onyx Monolithic C18, 100 mm x 3 mm; eluente A: 1 L de água + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 L de acetonitrilo + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0,0 minuto, 90% de A -► 2 minutos, 65% de A -► 4,5 minutos, 5% de A 6 minutos, 5% de A; caudal: 2 mL/minuto; forno: 40°C; detecção UV: 208-400 nm. 41 Método 14 (GC-MS)
Instrumento: Micromass GCT, GC6890; coluna: Restek RTX-35, 15 m x 200 ym x 0,33 ym; caudal constante com hélio: 0,88 mL/minuto; forno: 70°C; entrada: 250°C; gradiente: 70°C, 30°C/minuto -► 310°C (3 minutos de pausa). Método 15 (HPLC preparativa)
Coluna: Chromatorex C18 5 ym, 250 mm x 20 mm; eluente A: solução aquosa a 0,1% de diisopropiletilamina, eluente B: acetonitrilo; gradiente: 0,0 minuto, 60% de A -► 4 minutos, 60% de A; forno: 30°C; caudal: 25 mL/minuto; detecção UV: 260 nm. Método 16 (LC-MS preparativa)
Instrumento de MS: Waters ZQ 2000; instrumento de HPLC: Agilent 1100, circuito de 2 colunas; auto-amostrador: HTC PAL; coluna: YMC-ODS-AQ, 50 mm x 4,6 mm, 3,0 ym; eluente A: água + ácido fórmico a 0,1%, eluente B: acetonitrilo + ácido fórmico a 0,1%; gradiente: 0,0 minuto, 100% de A ^ 0,2 minuto, 95% de A ^ 1,8 minutos, 25% de A ^ 1,9 minutos, 10% de A -* 2,0 minutos, 5% de A ^ 3,2 minutos, 5% de A -► 3,21 minutos, 100% de A ^ 3,35 minutos, 100% de A; forno: 40°C; caudal: 3,0 mL/minuto; detecção UV: 210 nm. Método 17 (HPLC preparativa)
Coluna: Kromasil 100 C18 5 ym, 250 mm x 20 mm; eluente A: solução aquosa a 0,1% de diisopropiletilamina, eluente B: acetonitrilo; gradiente: 0,0 minuto, 95% de A ->· 10 minutos, 65% de A -> 10,1 minutos, 95% de A ^ 15 minutos, 95% de A; forno: 40°C; caudal: 25 mL/minuto; detecção UV: 210 nm. 42
Compostos de partida e intermediários Exemplo IA 2-Hidrazino-4-metilpiridina CM,
Inicialmente, introduz-se 3,33 g (30,0 mmol) de 2-flúor-4-metilpiridina em 40 mL de 2-etoxietanol, adiciona-se 14,6 mL (15,0 g, 300 mmol) de hidrato de hidrazina à solução e agita-se a mistura à temperatura de ebulição (temperatura de banho de 150°C) durante 16 horas. Depois, concentra-se a solução de reacção numa evaporadora rotativa, adiciona-se o resíduo a 100 mL de água e extrai-se a mistura com acetato de etilo (três vezes com 100 mL de cada vez) . Seca-se as fases orgânicas combinadas sobre sulfato de sódio, filtra-se e concentra-se. Seca-se o resíduo obtido sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 1,90 g (51% teórico). ^-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 7,83 (d, 1H) , 7,22 (s, 1H) , 6,51 (s, 1H) , 6,38 (d, 1H) , 4,04 (s, 2H) , 2,17 (s, 3H) . LC-MS (método 1): tr = 0,80 minuto; MS (ESIpos): m/z = 124 [M+H] +.
Exemplo 2A Éster metilico do ácido 3-(dimetilamino)-2-[5-(trifluoro-metil)-l,3,4-tiadiazol-2-il]-acrílico 43
Çv, U S5 'N~“^ 0
Aquece se 3,05 g (13,5 mmol) de éster etílico do ácido [para 5-(trifluorometil)-1,3,4-tiadiazol-2-il-acético preparação ver o documento DE 42 40 168-A1] em 6,9 mL (40,5 mmol) de dietilacetal de dimetilformamida, de um dia para o outro a 100°C. Depois de se arrefecer, concentra-se a mistura e purifica-se o resíduo por HPLC preparativa (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água). 8,28 (s, 1H), 3,74 (s
Rendimento: 2,8 g (74% teórico) 1H-NMR (400 MHz, DMSO-de) : 5 " { 88 minutos; MS (ESIpos) : m/z 3H) , 3,32 (s, 6H) . LC-MS (método 4): tr = 282 [M+H] +.
Exemplo 3A Éster etilico do á-G^° triazol-l-il)-acrílico 3-(dimetilamino)-2-(1H-1,2,3-
pOSt° A preparação do coiíjr Y o modo análogo ao descri1- ^.igrafe é efectuada de um ep _ ...... Ί ο 2A partindo de 1,00 g 44 (6,45 mmol) de éster etílico do ácido 2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)-acético.
Rendimento: 1,4 g (100% teórico). 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,10 (d, 1H) , 7,78 (d, 1H), 7,65 (s, 1H), 4,03 (q, 2H), 3,06 (s lr., 3H) , 2,10 (s lr., 3H), 1,12 (t, 3H). LC-MS (método 5): tr = 1,40 minutos; MS (ESIpos): m/z = 211 [M+H] + .
Exemplo 4A (6-Hidrazinopiridina-3-il)-metanol
N
Inicialmente, introduz-se 220,0 g (1,5 mol) de (6-cloropiridina-3-il)-metanol [Evans et al., Organic Letters 2001, 19, 3009-3012] em 746 mL (767, 1 g, 15,3 mol) de hidrato de hidrazina e agita-se a mistura a uma temperatura de banho de 150°C durante 5 horas. Concentra-se a mistura de reacção sob uma pressão hipobárica, retoma-se o resíduo em 500 mL de água e adiciona-se 86,0 g (1,5 mol) de hidróxido de potássio. Agita-se a mistura durante 15 minutos, remove-se então a água praticamente na totalidade numa evaporadora rotativa e destila-se azeotropicamente os resíduos de água com tolueno, diversas vezes. Agita-se o resíduo oleoso em etanol, arrefece-se a mistura até aproximadamente 10°C, remove-se por filtração o cloreto de potássio precipitado, concentra-se o filtrado, adiciona-se éter dietílico ao resíduo e agita-se a mistura. Por último, remove-se por filtração o produto, lava-se o resíduo no 45 filtro com éter dietílico e seca-se os cristais sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 149,0 g (68% teórico). LC-MS (método 1): tr = 0,46 minuto; MS (ESIpos): m/z = 140 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 7,91 (d, 1H) , 7,40 (dd, 1H), 7,29 (s, 1H), 6,66 (d, 1H) , 4,94 (s lr., 1H) , 4,34- 4,28 (m, 2H), 4,04 (s lr., 2H).
Exemplo 5A 1-(6-Hidrazinopiridina-3-il)-N-metilmetanamina
Inicialmente, introduz-se 1,0 g (6,4 mmol) de 1—(6— cloropiridina-3-il)-N-metilmetanamina [para preparação ver documento EP 0 556 684-A1] em 1,5 mL (1,6 g, 31,9 mmol) de hidrato de hidrazina e agita-se a mistura à temperatura de ebulição a uma temperatura de banho de 150°C durante 12 horas. Concentra-se a solução de reacção arrefecida e seca-se o resíduo sob uma pressão hipobárica. Obtém-se 1,1 g do composto em epígrafe, o qual é utilizado sem mais purificação. LC-MS (método 1): tr = 0,52 minuto; MS (ESIpos): m/z = 153 [M+H] +. 46
Exemplo 6A Ácido 6-hidrazinonicotínico
O
Inicialmente, introduz-se 5,0 g (31,7 mmol) de ácido 6-cloronicotínico e 30,9 mL (31,8 g, 634,7 mmol) de hidrato de hidrazina em 10 mL de etanol e agita-se a mistura à temperatura de ebulição a uma temperatura de banho de 100°C durante 16 horas. Remove-se por destilação o solvente e o excesso de hidreto de hidrazina numa evaporadora rotativa, retoma-se o residuo com água, adiciona-se então 1,8 g (31,7 mmol) de hidróxido de potássio e agita-se a mistura durante 15 minutos. Remove-se completamente o solvente numa evaporadora rotativa, seca-se o resíduo sob uma pressão hipobárica e obtém-se 7,5 g de produto impuro, o qual se faz reagir tal qual. LC-MS (método 1): tr = 0,48 minuto; MS (ESIpos): m/z = 154 [M+H]+; 7,89 (s 2H) . ^-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,49 (d, 1H) , lr., 1H), 7,84 (dd, 1H), 6,63 (d, 1H) , 5,37 (s lr.
Exemplo 7A 4-Clori-6-hidrazinopirimidina α
H 47 A uma solução de 20,0 g (134,3 mmol) de 4,6-dicloropirimidina em 300 mL de etanol adiciona-se, gota a gota, 11,8 mL (12,1 g, 241,6 mmol) de hidrato de hidrazina, à temperatura ambiente e sob agitação. Caso se observe turbidez durante a introdução de hidrato de hidrazina, adiciona-se mais etanol (cerca de 400 mL) . Depois, agita-se a solução de reacção à temperatura ambiente durante 12 horas. Como processamento subsequente, remove-se por filtração o sólido precipitado, lava-se o resíduo no filtro duas vezes com 150 mL de água de cada vez e duas vezes com 100 mL de éter dietílico e seca-se o produto sob uma pressão hipobárica. Obtém-se mais uma fracção cristalina a partir das águas-mãe concentradas.
Rendimento: 16,8 g (87% teórico). LC-MS (método 1): tr = 1,17 minutos; MS (ESIpos): m/z = 145 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,81 (s, 1H) , 8,17 (s lr., 1 H), 6,75 (s, 1 H), 4,48 (s lr., 2H).
Exemplo 8A 4-Hidrazino-6-piperidina-l-ilpirimidina
H 48
Passo a); 4-Cloro-6-piperidina-l-ilpirimidina 48
Prepara-se uma mistura de 10,0 g (67,1 mmol) de 4,6-dicloropirimidina e 5,7 g (67,1 mmol) de piperidina em 100 mL de água e agita-se durante 16 horas a uma temperatura de banho de 115°C. Depois de se arrefecer até à temperatura ambiente, remove-se por filtração o precipitado, lava-se com água e seca-se sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 6,4 g (47% teórico). LC-MS (método 4): tr = 2,16 minutos; MS (ESIpos): m/z = 198 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,29 (s, 1H) , 6,92 (s, 1H) , 3, 65-3,58 (m, 4H) , 1, 66-1, 62 (m, 2H) , 1, 60-1, 48 (m, 4H) .
Passo b): 4-Hidrazino-6-piperidina-l-ilpirimidina
'N' H Δ uma solução de 6,0 g (30,4 mmol) de 4-cloro-6-piperidina-l-ilpirimidina em 50 mL de etanol adiciona-se, gota a gota, 17,7 mL (18,2 g, 364,2 mmol) de hidrato de 49 hidrazina, à temperatura ambiente e sob agitação. Depois, agita-se a solução de reacção a 80°C durante 16 horas. Para subsequente processamento, concentra-se a mistura sob uma pressão hipobárica, agita-se o residuo em água, remove-se por filtração o sólido precipitado, lava-se o residuo no filtro duas vezes com 150 mL de água, de cada vez, e duas vezes com 100 mL de éter dietilico e seca-se o produto sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 4,0 g (69% teórico). LC-MS (método 1) : tr = 2,0 6 minutos; MS (ESIpos): m/z = 194 [M+H] +; ^-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 7,91 (s, 1H) , 7,54 (s lr., 1H) , 5,89 (s, 1H), 4,11 (s lr., 2H), 3,50-3,47 (m, 4H) , 1,61-1,58 (m, 2H), 1,51-1,46 (m, 4H).
Exemplo 9A 2-Hidrazino-5-(metilsulfonil)-piridina
A 2,0 g (8,5 mmol) de 2,5-bis-(metilsulfonil)-piridina [Woods et al., J. Heterocycl. Chem. 1984, 21, 97-101] em 15 mL de etanol adiciona-se 1,7 mL (1,7 g, 34,0 mmol) de hidrato de hidrazina e agita-se a mistura ao refluxo durante 4 horas. Como processamento subsequente, arrefece-se a solução de reacção até 15°C, remove-se por filtração o sólido precipitado, lava-se o residuo no filtro com etanol e com éter dietilico e seca-se o produto sob uma pressão hipobárica. 50
Rendimento: 1,4 g (89% teórico). LC-MS (método 1): tr = 0,51 min; MS (ESIpos) : m/z = 188 [M+H]+; ^-NMR (400 MHz, DMS0-d6) : δ = 8,56 (s, 1H) , 8,38 (d 1H) , 7,81 (dd, 1H) , 6,79 (d, 3H) . 1H), 4,42 (s, 2H) , 3, 11 (s
Exemplo 10A 5-Bromo-2-hid.razinopirid.ina
A uma solução de 1,8 g (9,5 mmol) de 5-bromo-2-cloropiridina em 25 mL de etanol adiciona-se 9,3 mL (9,5 g, 190,2 mmol) de hidrato de hidrazina, à temperatura ambiente e sob agitação, e agita-se então a mistura a 90°C durante 46 horas. Após concentração da mistura de reacção sob uma pressão hipobárica, agita-se o residuo em água, remove-se por filtração o sólido, lava-se com água e com éter dietilico e seca-se sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 0,8 g (44% teórico). LC-MS (método 8): tr = 0,50 minuto; MS (ESIpos): m/z = 188 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMS0-d6) : δ = 8,02 (d, 1H) , 7,66 (s, 1H) , 7,58 (dd, 1H) , 6,69 (d, 1H) , 4,16 (s, 2H) .
Exemplo 11A 1-(6-Hidrazinopirimidina-4-il)-azetidina-3-ol 51
l y 4„i.l) -azetidina-3-ol Passo a): 1-(6-Cloropirimidina"e
„ , ,. ·, nropirimidina é volátil, de a 90 C (em que a 2,4-diclOJ- r , . . . sob uma forma cristalina no um modo detectavel) e precipita ΰ condensador). Remove-se o solvente sob uma pressão hipobárica e seca-se o resíduo para se obter 10,4 g de produto impuro, o qual se faz reagir sem mais purificação. LC-MS (método 10): R, = 0,36 minuto; MS (ESIpos): m/z = 186 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,29 (s, 1H) , 6,50 (s, 1H) , 4, 63-4,57 (m, 1H) , 4,26 (t, 2H) , 3, 82-3, 75 (m, 2H) .
Passo b): 1-(6-Hidrazinopirimidina-4-il)-azetidina-3-ol 52
Inicialmente, introduz-se 960 mg (5,2 mmol) de 1 — (6 — cloropirimidina-4-il)-azetidina-3-ol e 2,5 mL (51,7 mmol) de hidrato de hidrazina numa mistura de 10 mL de etanol e 10 mL de THF. Efectua-se a reacção a 130°C durante 1 hora num micro-ondas de modo único (CEM Explorer). Concentra-se a mistura até aproximadamente 20%-50% do volume original de liquido e mantém-se em repouso à temperatura ambiente durante 48 horas. Remove-se por decantação o sobrenadante a partir do sólido formado e lava-se o sólido três vezes com 1,5 mL de etanol frio, de cada vez. Seca-se sob uma pressão hipobárica elevada.
Rendimento: 300 mg (32% teórico). LC-MS (método 8) : tr = 0,23 minuto; MS (ESIpos) : m/z = 182 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 7,88 (s, 1H) , 7,63 (s, 1H) , 5,68 (s lr., 1H) , 5,52 (s, 1H) , 4,55 (s lr., 1H) , 4,18-4,06 (m, 4H) , 3, 65-3, 60 (m, 2H) .
Exemplo 12A 5-(2,2-Dimetilpropoxi)-2-hidrazinopiridina 53
Passo a): 2-Cloro-5-(2,2-dimetilpropoxi)-piridina
Prepara-se 5,2 g (40,0 mmol) de 6-cloropiridina-3-ol, 11,9 g (60,0 mmol) de l-iodo-2,2-dimetilpropano, 19,6 g (60,0 mmol) de carbonato de césio e 120 mL de éter dimetílico de dietileno-glicol, divide-se em cinco porções com tamanhos idênticos e faz-se reagir em porções, a 160°C e durante 4 horas, num micro-ondas em modo único (CEM Explorer). Depois, combina-se as misturas de reacção obtidas, remove-se por filtração o sólido, enxagua-se com éter dimetílico de dietileno-glicol e combina-se o filtrado e as soluções de lavagem. Remove-se a maior parte do solvente e adiciona-se 300 mL de água à solução concentrada (aproximadamente 50 mL) . Agita-se a mistura durante 30 minutos, remove-se por filtração o sólido obtido, lava-se uma vez com água e seca-se sob uma pressão hipobárica elevada.
Rendimento: 7,0 g (88% teórico). LC-MS (método 8): tr = 2,47 minutos; MS (ESIpos): m/z = 200 [M+H]+; ^-NMR (400 MHz, CDCl3) : δ = 8,05 (d, 1H) , 7,25-7,15 (m, 2H) , 3,61 (s, 2H) , 1,03 (s, 9H) . 54
Passo b): 5-(2,2-dimetilpropoxi)-2-hidrazinopiridina
Prepara-se 6,2 g (30,8 mmol) de 2-cloro-5-(2,2-dimetilpropoxi)-piridina com 60 mL (1,2 mol) de hidrato de hidrazina, divide-se em quatro porções com tamanhos idênticos e adiciona-se, a cada porção, 10 mL de etanol. Faz-se reagir cada porção num micro-ondas de modo único (CEM Explorer) a 170°C (200 Watt) durante 12 horas, em cada caso. Depois, combina-se as quatro misturas e remove-se o solvente. Retoma-se o resíduo em acetato de etilo e lava-se a mistura uma vez com uma solução saturada de bicarbonato de sódio e com uma solução saturada de cloreto de sódio, em cada caso. Seca-se a mistura sobre sulfato de magnésio e remove-se o solvente sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 6,0 g (76% teórico). LC-MS (método 8): tr = 1,28 minutos; MS (ESIpos): m/z = 196 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, CDC13) : δ = 7,84 (s, 1H) , 7,17 (dd, 1H), 6,68 (d, 1H), 5,54 (s lr., 1H), 3,80 (s lr., 2H), 3,56 (s, 2H), 1,02 (s, 9H).
Exemplo 13A 2-Cloro-5-(metoximetil)-piridina 55
Dissolve-se 2,6 g (23,0 mmol) de terc-butilato de potássio em 50 mL de THF. Adiciona-se 3,0 g (20,9 mmol) de (6-cloropiridina-3-il)-metanol e agita-se a mistura durante 15 minutos à temperatura ambiente. Adiciona-se então 4,4 g (31,3 mmol) de iodometano e agita-se a mistura durante aproximadamente 30 minutos, até subsistir uma reacção ligeiramente exotérmica. Remove-se o solvente, retoma-se o residuo em cloreto de metileno e lava-se a mistura duas vezes com água. Seca-se a mistura sobre sulfato de magnésio, concentra-se e purifica-se o residuo por cromatografia em coluna através de gel de silica (cromatografia Biotage, fase móvel: ciclo-hexano/acetato de etilo a 85:15).
Rendimento: 2,2 g (68% teórico). LC-MS (método 1): tr = 2,62 minutos; MS (ESIpos): m/z = 158 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, CDC13) : δ = 8,34 (d, 1H) , 7,65 (dd, 1H), 7,32 (d, 1H), 4,45 (s, 2H), 3,41 (s, 3 H).
Exemplo 14A 2-Bromo-4,5-dimetilpiridina
Inicialmente, introduz-se 71,3 g (0,8 mol) de 2-(dimetilamino)-etanol em 500 mL de n-hexano e arrefece-se a 56 mistura até 0°C. Adiciona-se lentamente 1,0 litro (1,6 mol) de uma solução de n-butil-litio (1,6 M em n-hexano) e agita-se a mistura durante 15 minutos a 0°C. Adiciona-se então, gota a gota, uma solução de 17,9 g (166,7 mmol) de 3.4- lutidina em 500 mL de n-hexano e agita-se a mistura a 0°C durante 1 hora. Subsequentemente, arrefece-se até -78°C e adiciona-se uma solução de 331,7 g (1,0 mol) de tetra-bromometano em 1,0 litro de THF. Subsequentemente, agita-se a mistura de reacção a -78°C durante 1 hora e depois deixa-se aquecer até à temperatura ambiente. Arrefece-se novamente até 0°C e adiciona-se lentamente, gota a gota, 1,5 litros de água. Separa-se as fases, lava-se a fase orgânica com água, seca-se sobre sulfato de magnésio e concentra-se sob uma pressão hipobárica. Em primeiro lugar, submete-se o residuo a pré-purificação através de aproximadamente 1 kg de gel de silica (fase móvel: ciclo-hexano/acetato de etilo a 9:1 e depois a 7:3). Combina-se as fracções que contêm produto e concentra-se sob uma pressão hipobárica. Purifica-se então novamente o residuo através de gel de silica (fase móvel: ciclo-hexano/acetato de etilo a 9:1). O produto assim obtido contém aproximadamente 10% de 2-bromo- 3.4- dimetilpiridina regioisomérica.
Rendimento: 6,7 g (20% teórico). GC-MS (método 14) : tr = 4,24 minutos; MS (ESIpos) : m/z = 187 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, CDC13) : δ = 8,07 (s, 1H) , 7,25 (s, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,18 (s, 3H).
Exemplo 15A
[(6-Cloropiridina-3-il)-metil]-carbamato de terc-butilo 57
Inicialmente, introduz-se 25,0 g (175,3 mmol) de 5-aminometil-2-cloropiridina em 175 mL de diclorometano. Adiciona-se 175 mL de uma solução de hidróxido de sódio a 10% e acrescenta-se, gota a gota, uma solução de 38,3 g (175,3 mmol) de dicarbonato de di-terc-butilo em 175 mL de diclorometano. Agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 16 horas. Depois dilui-se com 175 mL de diclorometano, separa-se a fase orgânica e extrai-se a fase aquosa com 175 mL de diclorometano. Seca-se as fases orgânicas combinadas sobre sulfato de magnésio e concentra-se sob uma pressão hipobárica. Seca-se o produto sob uma pressão hipobárica elevada.
Rendimento: 42,0 g (99% teórico). LC-MS (método 7): tr = 1,58 minutos; MS (ESIpos): m/z = 243 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, CDC13) : δ = 8,31 (d, 1H) , 7,61 (dd, 1H) , 7,30 (d, 1H) , 4,99 (s lr., 1H) , 4,30 (d, 2H) , 1,46 (s, 9H) .
Exemplo 16A 4-(6-Hidrazinopirimidina-4-il)-morfolina -4-il)-morfolina
Passo a) : 4-(e-CloropirimidinS·
Inicialmente, introduz-se 45,0 g (302,1 mmol) de 4,6 dicloropirimidina em 450 mL de água. Adiciona-se 26,3 g (302,1 mmol) de morfolina e agita-se a mistura a 90°C durante 16 horas. A seguir, arrefece-se até 0°C e remove-se por filtração o precipitado formado. Lava-se o precipitado uma vez com 50 mL de água e seca-se ao ar.
Rendimento: 51,0 g (85% teórico). LC-MS (método 4): tr = 1,09 minuto; MS (ESIpos): m/z = 200 [M+H]+; ^-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,35 (s, 1H) , 6,95 (s, 1H) , 3,62 (s, 8H) .
Passo b): 4-(6-Hidrazinopirimidina-4-il)-morfolina 59
Inicialmente, introduz-se 53,0 g (2,7 mol) de 4-(6-cloropirimidina-4-il)-morfolina em 260 mL de etanol. Adiciona-se 132,9 g (2,7 mol) de hidrato de hidrazina e agita-se a mistura ao refluxo durante 16 horas. A seguir, arrefece-se até à temperatura ambiente e remove-se por destilação aproximadamente metade do solvente. Arrefece-se a mistura até 0°C e remove-se por filtração o sólido formado. Enxagua-se com etanol frio e seca-se o sólido em primeiro lugar ao ar e depois sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 35,0 g (68% teórico). LC-MS (método 1): tr = 0,17 minuto; MS (ESIpos): m/z = 196 [M+H]+; ^-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 7,94 (s, 1H) , 7,70 (s, 1H) , 5,91 (s, 1H), 4,15 (s, 2H) , 3, 66-3, 60 (m, 4H) , 3,45- 3,37 (m, 4H) .
Exemplo 17A 2-Hidrazinopirazina
Adiciona-se, gota a gota, 20,0 g (174,6 mmol) de 2 cloropirazina a 60,0 mL (61,7 g, 1/2 mol) de hidrato de 60 hidrazina. Agita-se a mistura a uma temperatura de banho de 120°C durante 45 minutos. Como processamento subsequente, mantém-se em repouso a mistura de reacção arrefecida durante 12 horas a 2°C, remove-se por filtração os cristais precipitados e lava-se o residuo no filtro duas vezes com éter de petróleo. Submete-se então o residuo a recristalização a partir de tolueno.
Rendimento: 6,5 g (34% teórico). LC-MS (método 1): tr = 0,49 minutos; MS (ESIpos): m/z = 111 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,11 (s, 1H) , 7,94 (s, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,70 (d, 1H), 4,29 (s lr., 2H).
Exemplo 18A 5- (terc-Butoximetil) -2-hidrazinopii'id.ina
Passo a): 5-(terc-Butoximetil)-2-cloropiridina
Inicialmente, introduz-se 7,2 g (50,0 mmol) de (6-cloropiridina-3-il)-metanol em 50 mL de diclorometano. Adiciona-se 25,1 g (115,0 mmol) de dicarbonato de di-terc-butilo e 1,2 g (5,0 mmol) de perclorato de magnésio e agita-se a mistura a 40°C durante 24 horas. Arrefece-se 61 então até à temperatura ambiente, adiciona-se mais 12,5 g (87,1 mmol) de dicarbonato de di-terc-butilo e 600 mg (2,7 mmol) de perclorato de magnésio e agita-se novamente a mistura ao refluxo durante 2,5 horas. Adiciona-se novamente 12,5 g (87,1 mmol) de dicarbonato de di-terc-butilo e agita-se a mistura ao refluxo durante mais 3 horas. A seguir, dilui-se com diclorometano e lava-se uma vez com água e uma vez com uma solução saturada de cloreto de sódio. Seca-se a mistura sobre sulfato de magnésio, concentra-se e purifica-se o residuo por cromatografia em coluna através de gel de silica (fase móvel: ciclo-hexano/ /acetato de etilo a 85:15).
Rendimento: 7,9 g (79% teórico). LC-MS (método 10): tr = 1,12 minutos; MS (ESIpos): m/z = 200 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,36 (d, 1H) , 7,78 (dd, 1H), 6,98 (d, 1H), 4,45 (s, 2H), 1,22 (s, 9H).
Passo b): 5-(terc-Butoximetil)-2-hidrazinopiridina
Prepara-se 7,9 g (39,6 mmol) de 5-(terc-butoximetil)-2-cloropiridina e 19,8 g (395,6 mmol) de hidrato de hidrazina, divide-se em três porções de tamanhos idênticos e adiciona-se 15 mL de etanol a cada porção. Faz-se reagir cada porção num micro-ondas de modo único (CEM Explorer) a 170°C durante 4 horas, em cada caso. A seguir, combina-se as três misturas e remove-se o solvente. Retoma-se o 62 resíduo em acetato de etilo e lava-se a mistura uma vez com uma solução saturada de bicarbonato de sódio. Extrai-se a fase aquosa uma vez com acetato de etilo. Combina-se as duas fases de acetato de etilo e lava-se uma vez com uma solução saturada de cloreto de sódio. Seca-se a mistura sobre sulfato de magnésio e remove-se o solvente. Agita-se o resíduo obtido em éter de petróleo e remove-se por filtração o sólido.
Rendimento: 1,6 g (21% teórico). LC-MS (método 10): tr = 0,77 minuto; MS (ESIpos): m/z = 196 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, CDC13) : δ = 8,08 (s, 1H) , 7,50 (dd, 1H) , 6,68 (d, 1H) , 5,77 (s lr., 1H), 4,32 (s, 2H), 3,80 (s lr., 2H), 1,28 (s, 9H).
Exemplo 19A 6-Hidrazinopiridina-3-carbonitrilo
H
Agita-se 2,0 g (14,4 mmol) de nitrilo do ácido 6-cloronicotínico em 7,0 mL (7,3 g, 144,4 mmol) de hidrato de hidrazina, a uma temperatura de banho de 100°C, durante 15 minutos. Dilui-se a mistura de reacção, arrefecida até à temperatura ambiente, com água e agita-se à temperatura ambiente durante 30 minutos. Separa-se por filtração o precipitado, lava-se o resíduo no filtro com água, seca-se os cristais ao ar de um dia para o outro e deixa-se recristalizar a partir de acetato de etilo.
Rendimento: 1,5 g (80% teórico). 63 LC-MS (método 1): tr = 0,51 minutos; MS (ESIpos): m/z = 135 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) = 8,56 (s, 1H) , 8,35 (s, 1H), 7,73 (d, 1H), 6,75 (m, 1H), 4,42 (s, 1H).
Exemplo 20A 2-Hidrazino-5-metilpiridina
Agita-se 1,0 g (7,8 mmol) de 2-cloro-5-metilpiridina em 5,7 mL (5,9 g, 117,6 mmol) de hidrato de hidrazina, ao refluxo, durante 12 horas. Adiciona-se 10 mL de éter monoetílico de etileno-glicol à mistura de reacção arrefecida e remove-se então completamente o solvente numa evaporadora rotativa. Este passo de processo é repetido duas vezes, adiciona-se então diclorometano ao residuo, remove-se por filtração o precipitado, concentra-se o filtrado sob uma pressão hipobárica e seca-se o resíduo sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 644 mg (67% teórico). LC-MS (método 8) : tr = 0,35 minuto; MS (ESIpos) : m/z = 124 [M+H] +.
Exemplo 21A 4-Ciclopropil-6-hidrazinopirimidina 64
Rendimento: 0,8 g (69% teórico). GC-MS (método 14): tr = 5,72 minutos; MS (ESIpos): m/z = 151 [M+H]+; ^-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,33 (s lr., 1H) , 8,19 (s, 1H), 6,59 (s, 1H), 4,85 (s lr., 2H), 1,90-1,87 (m, 1H), 0,96-0,85 (m, 4H).
Os compostos apresentados no quadro 1 seguinte são preparados de um modo análogo a partir do material de partida indicado de acordo com as instruções seguintes.
Utiliza-se hidrato de hidrazina ou uma solução 1 M de hidrazina em THF. A reacção também pode ser efectuada num micro-ondas de modo único (CEM Explorer ou Emrys Optimizer), tipicamente em etanol ou THF, a 150°C e ao longo de um periodo de cerca de 15 minutos a 4 horas. A purificação é efectuada conforme descrita na preparação do exemplo 9A ou de um modo semelhantes, v.g., por lavagem do sólido precipitado com água e recristalização a partir de acetato de etilo ou por agitação com acetato de etilo ou éter de petróleo. O excesso de hidrato de hidrazina pode ser removido retomando o produto impuro, v.g., em acetato de etilo e lavagem da mistura com uma solução saturada de bicarbonato de sódio. 65
Quadro 1
Exemplo n° Estrutura Eductos; preparação análogo ao [exemplo]; rendimento (% teórico) MS (ESI) [M+H] + ; LC-MS/ GC-MS (método) ^H-NMR (400 MHz) 22A H * Μ fi h,c ' | ;} Wv Jk -«N, X >r H Éster terc-butílico do ácido 6-cloro-nicotínico [19A] 93% m/ z = 210; tr = 2,28 minutos (1) (DMSO-d6) : δ = 8,48 (d, 1H), 8,30 (s, 1H), 7,82 (dd, 1H) , 6,70 (d, 1H), 4,35 (s, 2H), 1,50 (s, 9H). 23A Oix S3* J. «< >A 'Si. v:>' v Γ 1 ,A-S ^NK» N H 5-Bromo-2-cloro-4-picolina [5A] 67% m/z = 202; tr = 0,86 minuto (8) (DMSO-d6) : δ = 7,99 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 6,70 (s, 1H), 5,51 (s lr., 1H), 4,11 (s lr., 2H), 2,22 (s, 3H) . 24A Ç*> *-VY^ χ. <#N, & "Ν' ;N 15A [19A] 37% m/z = 239; tr = 1,00 minuto (8) 25A f3 "JL I\j5 Ml %" -·?/ 2 H 2-Cloro-4-(trifluoro-metil)-piridina [19A] 91% m/z = 178; tr = 0,27 minuto (10) (CDC13) : δ = 8,23 (d, 1H), 7,00 (s, 1H), 6,83 (dd, 1H), 6,30 (s lr., 1H), 3,75 (s lr., 2H) . 66Exemplo
Estrutura
Eductos; preparação análogo ao [exemplo]; rendimento (% teórico) MS (ESI) [M+H] + ; LC-MS/ GC-MS (método) XH-NMR (400 MHz)
26A 14A [19A] 65% m/ z = 138; tr = 0,75 minuto (8) (CDC13) : δ = 7, 86 (s, 1H) , 6,51 (s, 1H) , 5,61 (s lr., 1H), 3,72 (s lr., 2H), 2,20 (s, 3H), 2,12 (s, 3H) .
27A
2,4-dicloro-piridina [19A] 47% m/z = 144; tr = 0,23 minuto (8)
28A 4-cloro-6- etil- pirimidina [US 5 468 751] [19A] m/ z = 139; tr = 4,94 minutos (14)
29A o 13A [19A] 45% m/z = 154; tr = 0,20 minuto (6) (CDCI3) : δ = 8,08 (d, 1H), 7,50 (dd, 1H), 6,70 (d, 1H), 5,98 (s lr., 1H), 4,33 (s, 2H), 3,72 (s lr., 2H), 3,35 (s, 3H) . 67
Exemplo 30A 4-Hidrazino-6-(4-pirrolidina-l-ilpiperidina-l-il)-pirimidina
Agita-se uma mistura de 2,0 g (13,8 mmol) do composto do exemplo 7A e 4,3 g (27,7 mmol) de 4-pirrolidina-l-ilpiperidina em 20 mL de água a 100°C durante 16 horas. Remove-se por filtração o sólido precipitado, lava-se primeiro com etanol e depois com éter dietilico e seca-se sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 3,0 g (82% teórico). LC-MS (método 8): tr = 0,21 minuto; MS (ESIpos): m/z = 263 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 7,92 (s, 1H) , 7,58 (s, 1H) , 5,91 (s, 1H) , 4,17-4,07 (m, 4H) , 2, 95-2,85 (m, 2H) , 2,54 (s, 2H) , 2,52 -2,46 (m, 2H) , 2,24-2,15 (m, 1H), 1,90 1,80 (m, 2H) , 1,71- 1, 61 (m, 4H) , 1,39-1,24 (m, 2H).
Exemplo 31A 4-Hidrazino-6-[4-(2-metoxietil)-piperazina-l-il]-pirimidina 68 Ο 's
Agita se uma mistura de 1 , 0 g (6,9 mmol) do composto do exemplo 7A e 1,1 g (7,6 mmol) de 1-(2-metoxietil)- piperazina em 10 mL de água a 100°C durante 2 horas. Adiciona-se mais 0,9 g (6,2 mmol) de 1-(2-metoxietil)- piperazina e agita-se a mistura de reacção a 100°C durante mais 16 horas. Após concentração sob uma pressão hipobárica, agita-se o residuo em acetonitrilo. Remove-se por filtração o sólido precipitado, lava-se primeiro com etanol e depois com éter dietilico e seca-se sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 0,8 g (42% teórico). LC-MS (método 8): tr = 0,22 minuto; MS (ESIpos): m/z = 253 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 7,93 (s, 1H) , 7,64 (s, 1H) , 5,91 (s, 1H) , 4,14 (s, 2H) , 3,50-3,40 (m, 6H) , 3,24 (s, 3H), 2,47-2,39 (m, 4H).
Exemplo 32A Éster etílico do ácido [4-(trifluorometil)-lH-imidazol-1-il]-acético 69
Inicialmente, introduz-se 2,0 g (14,7 mmol) de 4-(trifluorometil)-lH-imidazol em 5,5 mL (4,7 g, 14,7 mmol) de uma solução de etilado de sódio a 21% e adiciona-se 1,8 mL (2,7 g, 16,2 mmol) de bromoacetato de etilo. Agita-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 16 horas. Como processamento subsequente, remove-se por filtração o sólido precipitado, lava-se o residuo no filtro com etanol e concentra-se o filtrado sob uma pressão hipobárica. Adiciona-se éter diisopropilico ao residuo, filtra-se novamente a mistura, concentra-se novamente a mistura numa evaporadora rotativa e seca-se o residuo sob uma pressão hipobárica. Obtém-se o produto sob a forma de uma mistura a 9:1 de dois regioisómeros e faz-se reagir tal qual.
Rendimento: 3,3 g (95% teórico). LC-MS (método 1): tr = 1,75 minutos + 1,80 minutos; MS (ESIpos): m/z = 223 [M+H]+; ^-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 7,93 (s, 1H) , 7, 82 (s 1H) , 5, 04 (s, 2H), [5,07 (s, 2H) ] 00 \—1 (q# 2H) , [4,12 (q 2H) ] , 1/22 (t, 3H), [1,19 (t, 3H); i.
Exemplo 33A Éster etílico do ácido [4-ciano-lH-imidazol-l-il]-acético
70
Inicialmente, introduz-se 3,3 g (35,3 mmol) de 1H-imidazol-4-carbonitrilo [Matthews et al., J. Org. Chem. 1986, 51, 3228-3231] em 13,2 mL (11,5 g, 35,3 mmol) de uma solução de etilato de sódio a 21% em etanol e adiciona-se 4,3 mL (6,5 g, 38,9 mmol) de bromoacetato de etilo. Agita-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 16 horas. Como processamento subsequente, remove-se por filtração o sólido precipitado, lava-se o residuo no filtro com etanol e concentra-se o filtrado sob uma pressão hipobárica. Adiciona-se éter diisopropilico ao residuo, filtra-se novamente a mistura, concentra-se novamente o filtrado numa evaporadora rotativa e seca-se o residuo sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 3,8 g (60% teórico). LC-MS (método 1): tr = 1,17 minutos; MS (ESIpos): m/z = 180 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,12 (s, 1H) , 7,88 (s, 1H), 5,06 (s, 2H), 4,18 (q, 2H), 1,22 (t, 3H).
Exemplo 34A Éster etilico do ácido (4-metil-lff-imidazol-l-il)-acético
remove-se por
Inicialmente, introduz-se 4,4 g (53,6 mmol) de 4-metil-lH-imidazol em 20,0 mL (17,4 g, 53,6 mmol) de uma solução de etilato de sódio a 21% em etanol e adiciona-se 6,5 mL (9,8 g, 58,9 mmol) de bromoacetato de etilo. Agita-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 16 horas. Como processamento subsequente, 71 filtração o sólido precipitado, lava-se o residuo no filtro com etanol e concentra-se o filtrado sob uma pressão hipobárica. Purifica-se o residuo por cromatografia em coluna através de gel de silica (fase móvel: acetonitrilo/ /água a 9:1). Obtém-se o produto sob a forma de uma mistura a 3:2 de dois regioisómeros, que se faz reagir tal qual.
Rendimento: 1,8 g (20% teórico). LC-MS (método 1): tr = 1,02 minutos; MS (ESIpos): m/z = 169 [M+H]+; H-NMR (400 MHz, DMSO -d6) : δ = 7,48 (s, 1H), [7,52 (s 6, 82 (s, 1H), [6,64 (s, 1H) ] , 4,86 (s, 2H), [4,88 (s 4,22- -4,11 (m, 2H) , 2, 07 (s, 3H) , [2,06 (s, 3H)] 1,25-1,19 (m, 3H).
Exemplo 35A Éster etílico do ácido 2-metil-lH-imidazol-l-il)-acético
Inicialmente, introduz-se 2,0 g (24,4 mmol) de 2-metil-lH-imidazol em 9,1 mL (7,9 g, 24,4 mmol) de uma solução de etilato de sódio a 21% em etanol e adiciona-se 2,9 mL (4,5 g, 26,8 mmol) de bromoacetato de etilo. Agita-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 16 horas. Como processamento subsequente, remove-se por filtração o sólido precipitado, lava-se o resíduo no filtro com etanol e concentra-se o filtrado sob uma pressão hipobárica. Agita-se o resíduo em éter diisopropílico, filtra-se novamente a mistura e concentra-se novamente o filtrado sob uma pressão hipobárica. 72
Rendimento: 2,9 g (70% teórico). LC-MS (método 1): tr = 0,49 minuto; MS (ESIpos): m/z = 169 [M+H] +.
Exemplo 36A Éster etilico do ácido (4-metil-lH-l,2,3-triazol-l-il)-acético
Dissolve-se 2,0 g (14,2 mmol) de ácido (4-metil-lH-1,2,3-triazol-l-il)-acético em 30 mL de etanol e adiciona-se 10 gotas de ácido sulfúrico concentrado. Agita-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 16 horas. Como processamento subsequente, concentra-se a mistura sob uma pressão hipobárica, adiciona-se acetato de etilo ao residuo e lava-se a suspensão com uma solução semi-concentrada de bicarbonato de sódio. Seca-se a fase orgânica sobre sulfato de magnésio, remove-se completamente o solvente numa evaporadora rotativa e seca-se o sólido sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 1,5 g (61 % teórico). LC-MS (método 1): tr = 2,33 minutos; MS (ESIpos): m/z = 170 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 7,82 (s, 1H) , 5,31 (s, 2H), 4,17 (q, 2H), 2,25 (s, 3H), 1,21 (t, 3H).
Os compostos apresentados no quadro 2 são preparados de um modo análogo ao exemplo 3 6A a partir dos eductos referidos. 73
Quadro 2 __ Educto; rendimento (% teórico) MS (ESI) [M+H]+; LC-MS (método) 1H-NMR (400 MHz, DMSO- de) Exemplo n° Est^- „CK, Ácido (4-isopropil-lH-1,2,3-triazol-l-il)-acético 100% m/z = 198; tr = 1,68 minutos (4) δ = 7,84 (s, 1H), 5,32 (s, 2H), 4,18 (q, 2H), 3,02-2,98 (m, 1H) , 1,28-1,19 (m, 9H) . 37A v ° / C:Hi. ____" b. Ácido (3-metilisoxazol-5-il)-acético 80% m/z = 170; tr = 2,70 minutos (D δ = 6,28 (s, 1H), 4,12 (q, 2H), 3,95 (s, 2H), 2,21 (s, 3H), 1,21 (t, 3H) . 38A sj » /
Exemplo 39A Éster etílico do ácido 2-(lH-l,2,3-triazol-l-il)-acético
N
fCHL
Adiciona-se lentamente 129,2 g (5,6 mol) de sódio a 4,0 litros de etanol. Adiciona-se então 400,0 g (5,6 mol) de 1,2,3-lH-triazol e acrescenta-se, gota a gota, 623 mL (938,2 g, 5,6 mol) de bromoacetato de etilo a uma temperatura interna de 20°C a 25°C. Agita—se a mistura a temperatura ambiente durante 48 horas. Remove-se por 74 filtração o sólido precipitado, remove-se o etanol sob uma pressão hipobárica e filtra-se novamente a mistura. Retoma-se o residuo em acetato de etilo, filtra-se a mistura, concentra-se novamente sob uma pressão hipobárica e purifica-se o residuo por destilação numa coluna de 30 cm. Obtém-se o produto a uma temperatura de banho de 140°C, uma temperatura na cabeça de 140°C e uma pressão de 1 mbar. Rendimento: 440,0 g (50% teórico). HPLC (método 11): tr = 1,58 minutos; LC-MS (método 1): tr = 0,71 minuto; MS (ESIpos): m/z = 156 [M+H] +.
Exemplo 40A Éster etilico do ácido lH-imidazol-l-il-acético
Adiciona-se lentamente 118,2 g (5,1 mol) de sódio a 2,5 litros de etanol. Adiciona-se então 350,0 g (5,1 mol) de imidazol e acrescenta-se, gota a gota, 570 mL (858, 6 g, 5,1 mol) de bromoacetato de etilo a uma temperatura interna de 20°C a 25°C. Agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 24 horas. Remove-se por filtração o sólido precipitado, remove-se o etanol sob uma pressão hipobárica e filtra-se novamente a mistura. Purifica-se o residuo por cromatografia em coluna através de gel de silica (fase móvel: acetato de etilo).
Rendimento: 639,0 g (81% teórico). GC-MS (método 14): tr = 4,55 minutos; MS (ESIpos): m/z = 155 [M+H] +. 75
Exemplo 4ΙΑ Éster etílico do ácido (4-ciano-lH-l,2,3-triazol-l-il)-acético
Agita-se 4,1 g (31,9 mmol) de éster etílico do ácido azidoacético e 2,8 g (31,9 mmol) de cloroacrilnitrilo em 32 mL de água a uma temperatura de banho de 80°C durante 16 horas. Depois de se arrefecer até à temperatura ambiente, acidifica-se a solução com ácido clorídrico 1 N e extrai-se com acetato de etilo. Seca-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio, filtra-se e concentra-se sob uma pressão hipobárica. Adiciona-se 50 mL de etanol e 10 gotas de ácido sulfúrico concentrado ao resíduo e agita-se a mistura ao refluxo durante 16 horas. Como processamento subsequente, concentra-se a mistura de reacção sob uma pressão hipobárica, adiciona-se acetato de etilo ao resíduo, lava-se a suspensão com uma solução semi-concentrada de bicarbonato de sódio e seca-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio. Remove-se completamente o solvente numa evaporadora rotativa e seca-se o sólido sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 1,5 g (25% teórico). LC-MS (método 7): tr = 0,96 minuto; MS (ESIpos): m/z = 181 [M+H]+; ^-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 9,06 (s, 1H) , 5,57 (s, 2H), 4,19 (q, 2H), 1,22 (t, 3H). 76
Exemplo 42A Éster etílico do ácido 3-(dimetilamino)-2-(lH-imidazol-1-il)-acrílico
Agita-se 38,0 g (244,9 mmol) do composto do exemplo 39A em 126 mL (108,1 g, 734,7 mmol) de dietilacetal de dimetilformamida a uma temperatura de banho de 90°C e durante 16 horas. Depois de se arrefecer, concentra-se a mistura sob uma pressão hipobárica, agita-se o resíduo com éter diisopropílico, remove-se por filtração o sólido e, por último, lava-se com éter diisopropílico.
Rendimento: 49,0 g (95% teórico). LC-MS (método 4): tr = 2,42 minutos; MS (ESIpos): m/z = 211 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 7^52 (s, 1H) , 7,49 (s, 1H) , 7,05 (s, 1H) , 6,91 (s, 1H) , 4,02 (q, 2H) , 2,63 (s lr., 6H), 1,12 (t, 3H).
Exemplo 43A Éster etílico do ácido 3- (dimetila111*110) ^ -*-'2,4 triazol 1-il)-acrílico
77
Agita-se 1,9 g (9,8 mmol) de éster etílico do ácido [1,2,4]-triazol-l-il-acético [Ainsworth et al., J. Am. Chem. Soc. 1955, 77, 621-623] e 3,6 mL (2,9 g, 19,6 mmol) de dietilacetal de dimetilformamida a uma temperatura de banho de 100°C, durante 12 horas. Como processamento subsequente, concentra-se a solução de reacção arrefecida numa evaporadora rotativa e seca-se o resíduo sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 2,3 g (pureza de 90%, 100% teórico). LC-MS (método 1): tr = 2,32 minutos; MS (ESIpos): m/z = 211 [M+H]+; ^-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,48 (s, 1H) , 8,04 (s, 1H) , 7,61 (s, 1H) , 4,03 (q, 2H), 3,04 (s lr., 3H), 2,25 (s lr., 3H), 1,12 (t, 3H).
Exemplo 44A Éster etílico do ácido 3-(dimetilamino)-2-[4-(trifluoro-metil)-lH-imidazol-l-il]-acrílico
Agita-se 38,0 g (170,8 mmol) do composto do exemplo 32A e 58,5 mL (50,3 g, 341,6 mmol) de dietilacetal de dimetilformamida a uma temperatura de banho de 100°C, durante 16 horas. Como processamento subsequente, concentra-se a solução de reacção arrefecida numa 78 evaporadora rotativa e seCa_se Q resídu0 sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 49,5 g (97% teórico). LC-MS (método 8): tr = 1/68 minutos; MS (ESIpos): m/z = 278 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO~-dg) : δ = 7,81 (s, 1H), 7,27 (s, 1 H) , 7,58 (s, (t, 3H). 1H), 4,03 (q^ 2H) , 2, 68 (s lr., 6H), 1,13
Exemplo 45A Éster etílico do ácido 3-(dimetilamino)-2-[4-ciano-lH- imidazol-1-il]-acrílico
tm
Agita-se 3,8 g (21,4 mmol) do composto do exemplo 33A e 7,4 mL (6,3 g, 42,8 mmol) de dietilacetal de dimetilformamida a uma temperatura de banho de 100°C, durante 16 horas. Como processamento subsequente, concentra-se a solução de reacção arrefecida numa evaporadora rotativa e seca-se o resíduo sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 5,0 g (pureza de 73%, 73% teórico). LC-MS (método 1): tr = 2,69 minutos; MS (ESIpos): m/z = 235 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-de) : δ = 8,13 (s, 1H) , 7,85 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 4,03 (q, 2H), 2,69 (s lr., 6H) , 1,12 (t, 3H) . 79
Exemplo 46A Éster etilico do ácido 3-(dimetilamino)-2-[4-metil-lH-imidazol-l-il]-acrílico
Agita-se 310 mg (1,5 mmol, pureza de 80%) do composto do exemplo 34A e 0,5 mL (434 mg, 3,0 mmol) de dietilacetal de dimetilformamida a uma temperatura de banho de 100°C, durante 16 horas. Como processamento subsequente, concentra-se a solução de reacção arrefecida numa evaporadora rotativa e seca-se o residuo sob uma pressão hipobárica. Obtém-se o produto sob a forma de uma mistura a 3:2 de dois regioisómeros, que se faz reagir tal qual.
Rendimento: 329 mg (99% teórico). LC-MS (método 1): tr = 2,05 minutos; MS (ESIpos): m/z = 224 [M+H]+; ^-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 7,50 (s, 1H) , [7,58 (s, 1H)], 7,32 (d, 1H) , [7,38 (d, 1H) ] , 6,73 (s, 1H) , [6,66 (s, 1H) ] , 4,04-3, 98 (m, 2H) , 2,64 (s lr., 6H) , 2,08 (s, 3H) , [1,97 (s, 3H)], 1,12 (t, 3H).
Os compostos apresentados no quadro 3 são preparados de um modo análogo ao descrito no exemplo 43A a partir do educto de partida e de dietilacetal de dimetilformamida. 80
Quadro 3
Exemplo n° Estrutura Educto; rendimento (% teórico) MS (ESI) [M+H] + ; LC-MS (método) ^H-NMR (400 MHz, DMSO-ds) 47A Γ"" ,-í u r* ÇH, .A. jf SH* -•rt' ^---- O 36A m/z = 225; tr = 2,59 minutos (D δ = 7,78 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 4,02 (q, 2H), 3,05 (s lr., 3H), 2,12 (s lr., 3H), 1,13 (t, 3H) . 48A m.. ^ $ í '&% y i CHsl 37A m/z = 253; tr = 3,00 minutos (D δ = 7,79 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 4,03 (q, 2H), 3,08 (s lr., 3H), 3,00-2, 97 (m, 1H) , 2,09 (s lr., 3H), 1,23 (d, 6H), 1,13 (t, 3H) . 49A yra^ N; j ÇHS j1* CHS tí *·' 35A m/z = 224; tr = 2,03 minutos (D 50A Vi W- Apt χΓ x -. . . f CKÍ 1 ...D. .,0Κ> O 38A 75% m/z = 225; tr =2,91 minutos (D δ = 7,64 (s, 1H), 6,13 (s, 1H), 4,03 (q, 2H), 2,81 (s lr., 6H), 2,21 (s, 3H), 1,12 (t, 3H) . 81
Exemplo 52A
Cloridrato de 2-(6-cloropirimidina-4-il)-4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona
Inicialmente, introduz-se 10,0 g (47,7 mmol) do composto do exemplo 3A e 8,3 g (57,1 mmol) do composto do exemplo 7A em 100 mL de etanol e adiciona-se 1,5 mL (2,2 g, 19,0 mmol) de TFA. Agita-se a mistura ao refluxo durante 12 horas. Adiciona-se então uma solução de cloreto de hidrogénio 4 M em excesso à mistura de reacção arrefecida, extrai-se a mistura por agitação durante aproximadamente 1 hora, remove-se por filtração os cristais precipitados e lava-se o residuo no filtro com dioxano e etanol. Dissolve-se o produto intermediário obtido deste modo em 150 mL de etanol, adiciona-se 50 mL de uma solução metanólica de metilato de sódio a 25% e agita-se a mistura à temperatura 82 ambiente durante 2 horas. Ajusta-se o pH da mistura de reacção até pH 5 com ácido cloridrico 1 N, extrai-se por agitação à temperatura ambiente durante mais 2 horas, remove-se por filtração o sólido, lava-se o resíduo no filtro com etanol e seca-se o produto sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 7,0 g (49% teórico). LC-MS (método 10): tr = 1,20 minutos; MS (ESIpos): m/z = 264 [M+H] + .
Exemplo 53A
Cloridrato de 2-(6-cloropirimidina-4-il)-4-(lH-imidazol-1-il) -1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona
Inicialmente, introduz-se 10,0 g (47,8 mmol) do composto do exemplo 42A e 8,3 g (57,3 mmol) do composto do exemplo 7A em 100 mL de etanol e adiciona-se 1,5 mL (2,2 g, 19,0 mmol) de TFA. Agita-se a mistura ao refluxo durante 12 horas. Remove-se por filtração os cristais precipitados, enxagua-se o resíduo no filtro com etanol e seca-se o produto intermediário de um dia para o outro. Coloca-se então em suspensão em 20 mL de metanol, adiciona-se uma solução de cloreto de hidrogénio 4 M em dioxano e depois agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. Remove-se por filtração o sólido, lava-se o resíduo no filtro com dioxano, acetato de etilo e éter diisopropílico e seca-se o produto sob uma pressão hipobárica. 83
Rendimento: 4,6 g (32% teórico). HPLC (método 11): tr = 2,81 minutos; MS (ESIpos): m/z = 263 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-de) : δ = 9,46 (s, 1H) , 8,96 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,51 (d, 1H), 8,07-8,04 (m, 1 H), 7,85- 7, 82 (m, 1H) .
Exemplo 54A Éster 4-etílico de 2-(6-morfolina-4-ilpirimidina-4-il)-3-oxo-2,3-di-hidro-lH-pirazol
Dissolve-se 1,4 g (10,0 mmol) de carbonato de potássio em 50 mL de água. Adiciona-se 2,0 g (10,0 mmol) do composto do exemplo 16A e depois 2,2 g (10,0 mmol) de éster dietilico do ácido etoximetilenomalónico a esta solução e agita-se então a mistura a 100°C durante 2 horas. Deixa-se arrefecer até à temperatura ambiente, remove-se por filtração o sólido, lava-se duas vezes com água e seca-se sob uma pressão hipobárica elevada.
Rendimento: 2,4 g (75% teórico). LC-MS (método 8): tr = 1,31 minutos; MS (ESIpos): m/z = 320 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,30 (s, 1H) , 7,97 (s, 1H), 7,48 (s, 1H) , 4,00 (q, 2H) , 3,75-3,61 (m, 4H) , 3,55- 3,45 (m, 4H), 1,18 (t, 3H). 84
Exemplos de variantes
Exemplo 1 2-Piridina-2-il-4-(lH-l,2,3-triazol-l-il)-l,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona
Dissolve-se 250 mg (1,19 mmol) do composto do exemplo 3A, 108 mg (0,99 mmol) de 2-hidrazinopiridina e 23 mg (99 pmol) de ácido canfor-10-sulfónico em 5 mL de etanol anidro e aquece-se a mistura ao refluxo de um dia para o outro. Adiciona-se novamente, em cada caso e num total de quatro vezes, 108 mg (0,99 mmol) de 2-hidrazinopiridina e aquece-se ainda a mistura ao refluxo até se converter completamente o composto do exemplo 3A. Depois de se arrefecer, purifica-se a mistura de reacção por HPLC preparativa diversas vezes (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água com adição de 0,1% de ácido clorídrico concentrado) para se obter 6 mg (2% teórico) do composto em epígrafe. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,52 (d, 1H), 8,44 (s, 1H) , 8,37 (s, 1H) , 8,29-8,23 (m, 1H), 8,11-8,06 (m, τ—1 7,90 (s, 1H), 7,43-7,38 (m, 1H). LC-MS (método 2): tr = 1,17 minutos; MS (ESIpos): m/z = 229 [M+H] + . 85
Exemplo 2 2-(4-Metilpiridina-2-il)-4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona
Dissolve-se 250 mg (1,19 mmol) do composto do exemplo 3A, 122 mg (0,99 mmol) do composto do exemplo IA e 23 mg (99 ymol) de ácido canfor-10-sulfónico em 5 mL de etanol anidro e aquece-se a mistura ao refluxo de um dia para o outro. Depois, deixa-se arrefecer a mistura de reacção e submete-se a pré-purificação através de HPLC preparativa (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água) e subsequente cromatografia rápida através de gel de sílica (fase móvel: gradiente de diclorometano/metanol) . Submete-se a nova purificação por HPLC preparativa (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água) para se obter 21 mg (9% teórico) do composto em epígrafe. 1H-NMP ; (400 MHz, DMSO-de) : δ = 8,42 (s, 1H) , 8,38 (d, 1H) , 8,29 (s, 1H), 8, ,09 (s, 1H) , 7, 90 (s, 1H) , 7,27 (d, 1H) , 2,46 (s, 3H) . LC-MS (método 4): : tr = 1 , 05 minutos ; MS (ESIpos): m/ z = 243 [M+H] + .
Exemplo 3 2-(6-Morfolina-4-il-pirimidina-4-il)-4-[5-(trifluorometil)-1,3,4-tiadiazol-2-il]-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona 86
Dissolve-se 2,43 g (8,62 mmol) do composto do exemplo 2A, 1,53 g do composto do exemplo 16A e 182 mg (784 pmol) de ácido canfor-10-sulfónico em 35 mL de metanol anidro e aquece-se a mistura ao refluxo de um dia para o outro. Depois de se arrefecer, concentra-se a mistura, retoma-se o resíduo em 325 mL de metanol, adiciona-se 0,5 mL (8,62 mmol) de uma solução metanólica de metilato de sódio a 25% e aquece-se novamente a mistura ao refluxo de um dia para o outro. Depois de se arrefecer, remove-se por filtração com sucção o precipitado formado, lava-se com éter dietílico, coloca-se em suspensão numa pequena quantidade de água, adiciona-se um excesso de ácido clorídrico 1 M e concentra-se novamente a suspensão. Lava-se o resíduo com água e com éter dietílico e seca-se. Obtém-se 1,34 g (43% teórico) do composto em epígrafe. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,55 (s, 1H) , 8,26 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 3,84-3,70 (m, 8H). LC-MS (método 4): R, = 1,68 minutos; MS (ESIpos): m/z = 400 [M+H] +.
Exemplo 4 2-(6-Piperidina-l-il-pirimidina-4-il)-4-[5-(trifluorometil)-1,3,4-tiadiazol-2-il]-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona 87
Dissolve-se 240 mg (854 ymol) do composto do exemplo 2A, 150 mg (776 pmol) do composto do exemplo 8A e 18 mg (78 ymol) de ácido canfor-10-sulfónico em 3 mL de etanol anidro e aquece-se a mistura ao refluxo de um dia para o outro.
Depois de se arrefecer, adiciona-se 64 mg (931 ymol) de
etilato de sódio e agita-se mais a mistura à temperatura ambiente de um dia para o outro. Remove-se por filtração com sucção o precipitado formado, lava-se com etanol e com éter dietílico e seca-se. Concentra-se o filtrado e purifica-se o residuo por HPLC preparativa (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água). em conjunto, coloca-se em suspensão as duas fracções de produto intermediário obtido deste modo em 5 mL de metanol, adiciona-se 15 mg (278 ymol) de etilato de sódio e aquece-se a mistura ao refluxo de um dia para o outro. Depois de se arrefecer, purifica-se a mistura de reacção por HPLC preparativa (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água) e obtém-se 26 mg (8% teórico) do composto em epígrafe. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,33 (s, 1H) , 7,87 (s, 1H) , 7,76 (s, 1H) , 3, 63-3,58 (m, 4H) , 1,68-1,51 (m, 6H) . LC-MS (método 3): tr = 2,23 minutos; MS (ESIpos): m/z = 398 [M+H] +.
Os compostos apresentados no quadro 4 são preparados de um modo análogo ao descrito no exemplo 4 a partir dos eductos correspondentes.
Quadro 4
Exemplo 7
Cloridrato de 2-(4-metilpiridina-2-il)-4-(1H-1,2,3-triazol-1-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona 89
Dissolve-se 3,7 g (17,6 mmol) do composto do exemplo 3A e 2,6 g (21,1 mmol) do composto do exemplo IA em 100 mL de etanol anidro e adiciona-se 0,7 mL (1,0 g, 8,8 mmol) de TFA. Agita-se a mistura durante 16 horas a uma temperatura de banho de 100°C. Depois, deixa-se arrefecer a mistura até à temperatura ambiente e concentra-se sob uma pressão hipobárica. Dissolve-se o residuo em 35 mL de acetonitrilo e adiciona-se 9 mL (35,2 mmol) de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano, à temperatura ambiente. Separa-se o precipitado e lava-se com 35 mL de acetonitrilo. Lava-se o sólido com éter diisopropílico, depois aguece-se a 40°C em 10 mL de metanol, adiciona-se 10 mL de acetato de etil, filtra-se a mistura e lava-se o produto com 5 mL de uma mistura a 1:1 de metanol e acetato de etilo, bem como com 2 mL de acetato de etilo.
Rendimento: 2,0 g (40% teórico). LC-MS (método 2): tr = 1,05 minutos; MS (ESIpos): m/z = 243 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMS0-d6) : δ = 8,42-8,40 (m, 1H) , 8,37 (d, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,89 (d, 1H) , 7,27 (d, 1H), 2,46 (s, 3H).
Exemplo 8
Cloridrato de éster etilico do ácido 6-[5-oxo-4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-2,5-di-hidro-lH-pirazol-l-il]-nicotinico 90
Agita-se 227 mg (1,1 iranol) do composto do exemplo 3A, 245 mg (1,1 mmol) de éster etílico do ácido 6-hidrazinonicotínico [para preparação ver documento WO 2006/ /114213] e 50 mg (0,2 mmol) de ácido canfor-10-sulfónico em 6 mL de etanol, ao refluxo durante 3 horas. A seguir, adiciona-se mais 490 mg (2,2 mmol) de éster etílico do ácido 6-hidrazinonicotínico e 37 mg (0,2 mmol) de ácido p-tolueno-sulfónico à mistura de reacção arrefecida e agita-se a mistura à temperatura de ebulição durante 1 dia. Como processamento subsequente, concentra-se a mistura de reacção sob uma pressão hipobárica e submete-se o resíduo a cromatografia por HPLC preparativa (método 12). Adiciona-se 4 mL de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano ao sal trifluoroacetato liofilizado obtido a partir da separação por HPLC, concentra-se parcialmente a suspensão, remove-se por filtração o sólido, lava-se o resíduo no filtro com éter dietílico e seca-se o produto sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 139 mg (38% teórico). LC-MS (método 1): tr = 2,88 minutos; MS (ESIpos): m/z = 301 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 9,00 (s, 1H) , 8,60-8,57 (m, 1H) , 8,53-8,46 (m, 2H) , 8,45 (s, 1H) , 7,91 (s, 1H) , 4,38 (q, 2H) , 1,35 (t, 3H) . 91
Exemplo 9
Cloridrato de 2-(6-piperidina-l-ilpirimidina-4-il)-4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona
Inicialmente, introduz-se 400 mg (1,8 mmol) do composto do exemplo 3A, 338 mg (1,8 mmol) do composto do exemplo 8A e 60 mg (0,4 mmol) de ácido p-tolueno-sulfónico numa mistura de 2 mL de THF e 2 mL de etanol e faz-se reagir a mistura num micro-ondas de modo único (Emrys Optimizer), a 140°C durante 1 hora. Concentra-se a mistura de reacção arrefecida sob uma pressão hipobárica e adiciona-se 2 mL de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano, éter dietilico e acetonitrilo ao resíduo. Remove-se por filtração o precipitado separado e submete-se o resíduo no filtro a cromatografia por HPLC preparativa (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água com adição de 0,1% de ácido fórmico na água), adiciona-se 4 mL de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano ao sal formato liofilizado assim obtido, concentra-se parcialmente a suspensão, remove-se por filtração o sólido, lava-se o resíduo no filtro com éter dietilico e seca-se o produto sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 75 mg (12% teórico). LC-MS (método 1): tr = 2,75 minutos; MS (ESIpos): m/z = 313 [M+H]+; 92 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,51 (s, 1H) , 8,38 (s, 1H) , 8,21 (s, 1H) , 7,85 (s, 1H) , 7,38 (s, 1H) , 3,76-3,72 (m, 4H) , 1,74-1, 63 (m, 2H) , 1,59 (s, 9H) .
Exemplo 10 2-[5-(Hidroximetil)-piridina-2-il]-4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona
Dissolve-se 15,1 g (71,9 mmol) do composto do exemplo 3A e 10,0 g (71,9 mmol) do composto do exemplo 4A em 375 mL de etanol e adiciona-se 1,7 g (7,2 mmol) de ácido canfor-10-sulfónico. Aguece-se a mistura ao refluxo durante 16 horas. Depois de se arrefecer até à temperatura ambiente, concentra-se a mistura de reacção e purifica-se o resíduo por cromatografia em coluna através de gel de sílica (fase móvel: diclorometano/metanol a 9:1 e depois a 1:1) .
Concentra-se a fracção de produto sob uma pressão hipobárica, agita-se o resíduo em éter diisopropílico, remove-se por filtração e seca-se sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 1,0 g (5% teórico). LC-MS (método 1); tr = 2,14 minutos; MS (ESIpos): m/z = 259 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-de) : δ = 8,46 (d, 1H) , 8,43 (s, 1H) , 8,34 (s, 1H) , 8,23 (d, 1H) , 8,01 (dd, 1H) , 7,90 (s, 1H), 5,43 (s lr., 1H), 4,58 (s, 2H) . 93
Exemplo 11
Cloridrato de 1-[3-oxo-2-(6-piperidina-l-ilpirimidina-0-il)-2,3-di-hidro-lH-pirazol-4-il]-lH-l,2,3-triazol-4-carbonitrilo
Dissolve-se 400 mg (1,7 mmol) do composto do exemplo 11 e 328 mg (1,7 mmol) do composto do exemplo 8A em 4 mL de etanol e adiciona-se 59 mg (0,3 mmol) de ácido p-tolueno-sulfónico. Faz-se reagir a mistura num micro-ondas de modo único (Emrys Optimizer) a 120°C durante 1 hora. Depois de se arrefecer até à temperatura ambiente, concentra-se a mistura de reacção e purifica-se o resíduo por HPLC preparativa (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água com adição de 0,1% de ácido fórmico na água). Converte-se o sal formato assim obtido no cloridrato por meio da adição de 0,2 mL de uma solução de cloreto de hidrogénio a 4 N em dioxano.
Rendimento: 4 mg (1% teórico). LC-MS (método 8): tr = 1,73 minutos; MS (ESIpos): m/z = 338 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 9,35 (s, 1H) , 8,47 (s, 1H) , 8,47 (s, 1H) , 8,33 (s, 1H) , 7,05 (s, 1H) , 3,75-3,65 (m, 4H) , 1, 67-1, 64 (m, 2H) , 1,57-1,55 (m, 4H) . 94
Exemplo 12 2-[6-(Dimetilamino)-pirimidina-4-il]-4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona
Faz-se reagir 3,7 g (16,5 mmol) do composto do exemplo 3A, 2,4 g do composto do exemplo 7A e 0,6 g (3,3 mmol) de ácido p-tolueno-sulfónico numa mistura de 10 mL de etanol e 5 mL de THF num micro-ondas de modo único (Emrys Optimizer), a 140°C durante 1 hora. Remove-se por filtração o precipitado separado, lava-se o resíduo no filtro com uma mistura de etanol e éter dietílico e seca-se o produto sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 0,8 g (17% teórico). LC-MS (método 10): Ri = 0,47 minuto; MS (ESIpos) : m/z = 273 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,53 (s, 1H) , 8,38 (s, 1H) , 8,20 (s, 1H) , 7,85 (s, 1H) , 7,22 (s, 1H) , 3,21 (s, 6H) .
Exemplo 13
Cloridrato de 2-(5-bromopiridina-2-il)-4-(1H-1,2,3-triazol-1-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona 95
Faz-se reagir uma mistura de 280 mg (1,3 mmol) do composto do exemplo 3A, 250 mg (1,3 mmol) do composto do exemplo 10A e 46 mg (0,3 mmol) de ácido p-tolueno-sulfónico em 5 mL de THF num micro-ondas de modo único (Emrys Optimizer), a 170°C durante 30 minutos. Depois de se adicionar 2 mL de ácido fórmico à solução de reacção, remove-se por filtração o sólido precipitado, agita-se com 3 mL de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano, filtra-se novamente, lava-se com éter dietilico e seca-se sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 181 mg (40% teórico). LC-MS (método 8): tr = 1,50 minutos; MS (ESIpos): m/z = 306 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,66 (s, 1H) , 8,48 (s, 1H) , 8,44 (s, 1H) , 8, 33-8,25 (m, 2H) , 7,90(s, 1H) .
Exemplo 14
Cloridrato de 2-(6-cloropirimidina-4-il)-4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-1,2-di-hidro)-3H-pirazol-3-ona
A uma mistura de 7,3 g (34,6 mmol) do composto do exemplo 3A e 6,0 g (41,5 mmol) do composto do exemplo 7A em 96 70 mL de etanol adiciona-se 1,1 mL (1,6 g, 13,8 mmol) de TFA e agita-se a mistura durante 20 horas a 100°C. Remove-se por filtração o sólido precipitado e concentra-se o filtrado sob uma pressão hipobárica. Coloca-se em suspensão o resíduo em 100 mL de etanol, adiciona-se 30 mL de uma solução de metanolato de sódio a 30% em metanol e agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Depois de se adicionar 42 mL de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano (pH = 5-6) e depois de se agitar durante 30 minutos, remove-se por filtração o sólido, lava-se primeiro com etanol e depois com éter dietílico e seca-se sob uma pressão hipobárica. Efectua-se uma nova purificação por agitação em etanol e acetonitrilo diversas vezes. Adiciona-se então 10 mL de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano e agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 16 horas. Remove-se por filtração o produto, lava-se primeiro com acetonitrilo e depois com éter dietílico e seca-se sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 7,9 g (76% teórico). LC-MS (método 8): tr = 1,20 minutos; MS (ESIpos): m/z = 264 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSD-d6) ; δ = 8,97 (s, 1H) , 8,59 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,89 (s, 1H) .
Os compostos apresentados no quadro 5 são preparados de um modo análogo ao descrito nos exemplos apresentados a partir dos eductos correspondentes. 97
Quadro 5
Exemplo n° Estrutura Educto; preparação análoga ao [Exemplo]; rendimento (% teórico) MS (ESI) [M+H] + ; LC-MS/ HPLC: R, (método) “Ή-NMR (400 MHz, DMSO-de) 15 I r\ 3A, 19A m/z = δ = 9,00 % N ./ X [68] 254; 2,41 (s, 1H) , N«**' Η í H-Vt 11% minutos 8, 62 (s, (método 1H) , 1 co LO co D 8,41 (m, 3H) , 7,91 (s, 1H) . 16 t $ u \ Ji, |' \ 3 A, 24A m/z = δ = 8,43 . 7 x-·'- *&* ϋ « [68] 3% 358; 0,91 (s, 1H) , ^•-vvJ SS! minutos 8,38 (d, (método 1H), 8,34 10) (s, 1H) , 8,22 (d, 1H) , 7, 92 (d, 1H) , 7,89 (s, 1H) , 7,51 (t, 1H) , 4,19 (d, 2H) , 1,39 (s, 9H) . 98
99
Exemplo n° Estrutura Educto; preparação análoga ao [Exemplo]; rendimento (% teórico) MS (ESI) [M+H] + ; LC-MS/ HPLC: R, (método) ^H-NMR (400 MHz, DMSO-de) 19 o v « 'S S n c« i/yyv^ & ! CH. H * H85* s 48A, 8A [69] 12% m/ z = 355; 3,88 minutos (método 11) δ = 8,52 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,42 (s, 1H), 3,75-3,71 (m, 4H), 3,07-3,03 (m, 1H), 1,73-1,52 (m, 6H), 1,28 (d, 6H) . 20 “ νλ<ν>^ fr* *m CH* 48A, 4A [69] 15% m/z= 301; 2,71 minutos (método D δ = 8,45 (s, 1H), 8,32 (s, 1H), 8,21 (d, 1H), 8,16 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 4,58 (s, 2H), 3,09-3,06 (m, 1H), 1,28 (d, 6H) . 100
Exemplo n° Estrutura Educto; preparação análoga ao [Exemplo]; rendimento (% teórico) MS (ESI) [M+H] + ; LC-MS/ HPLC: R, (método) “Ή-NMR (400 MHz, DMSO-de) 21 /¾ f f#ssM \| y A. ^ 1, f ^ 1 N— CH.. H x NCI 48A [69] 11% m/ z = 271; 2,70 minutos (método D δ = 8,52 (d, 1H), 8,33 (s, 1H), 8,26 (d, 1H), 8,15 (s, 1 H), 8,07 (t, 1H), 7,41 (dd, 1H), 3,10-3,07 (m, 1H), 1,28 (d, 6H) . 22 NLC*^/5^ f f*-*| ^ \ U Μμ^' $ HO 3A, 20A [68] 26% m/ z =243; 1,27 minutos (método 8) δ = 8,43 (s, 1H), 8,34 (d, 2H), 8,14 (d, 1H), 7, 92-7,90 (m, 2H), 2,36 (s, 3H) . 23 I p*í II s.HQ 3A, 23A [68] 10% m/ z = 321; 0,93 minuto (método 10) δ = 8,61 (s, 1H), 8,44-8,41 (m, 2H), 8,30 (s, 1H), 7,90 (s, 1H), 2,47 (s, 3H) . 101
Exemplo 26
Cloridrato do éster terc-butilico do ácido 6-[5-oxo-4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-2,5-di-hidro-lH-pirazol-l-il]-piridina-3-carboxílico 102
Inicialmente, introduz-se 3,2 g (15,0 mmol) do composto do exemplo 3A em 100 mL de etanol. Adiciona-se 3,1 g (15,0 mmol) do composto do exemplo 22A e 571 mg (3,0 mmol) mono-hidrato de ácido p-tolueno-sulfónico e agita-se a mistura ao refluxo durante 16 horas. Concentra-se então a mistura e purifica-se o resíduo por HPLC preparativa (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água com adição de 0,1% de TFA) . Combina-se as fracções que contêm produto, remove-se a maior parte do solvente e filtra-se o sólido formado. Seca-se sob uma pressão hipobárica elevada e adiciona-se então uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano. Agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora, remove-se por filtração o sólido e seca-se sob uma pressão hipobárica elevada.
Rendimento: 1,6 g (28% teórico). LC-MS (método 1): tr = 3,32 minutos; MS (ESIpos): m/z = 329 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,94 (s, 1H) , 8,53 (s, 1H), 8,50-8,40 (m, 3H), 7,91 (s, 1H) , 1,58 (s, 9H) .
Exemplo 27
Cloridrato do ácido 6-[5-oxo-4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-2,5-di-hidro-lH-pirazol-l-il]-piridina-3-carboxílico 103
Dissolve-se 50 mg (0,1 mmol) do composto do exemplo 26 em 1 mL de uma mistura a 1:1 de diclorometano e TFA e agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. Concentra-se a solução de reacção sob uma pressão hipobárica, coloca-se em suspensão o resíduo em 2 mL de ácido clorídrico 1 N e depois submete-se a suspensão liofilização.
Rendimento: 42 mg (99% teórico). LC-MS (método 9): tr = 0,82 minuto; MS (ESIpos): m/z = 273 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMS0-d6) : δ = 8,99 (s, 1H) , 8,53 (s, 1H) , 8,51-8,41 (m, 3H), 7,91 (s, 1H) .
Exemplo 28 Ácido 6-[5-oxo-4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-2,5-di-hidro-lH-pirazol-l-il]-piridina-3-carboxílico
Agita-se 491 mg (1,8 mmol, pureza de 80%) do composto do exemplo 3A e 289 mg (1,6 mmol) éster etílico do ácido 6-hidrazinonicotínico [para preparação ver documento WO 2006/114213] em 10 mL de ácido acético, à temperatura ambiente durante 12 horas. A seguir, adiciona-se 120 mg 104 (0,7 mmol) de éster etílico do ácido 6-hidrazinonicotínico à mistura de reacção e agita-se novamente a mistura à temperatura ambiente durante 13 horas. Depois de se manter em repouso à temperatura ambiente durante mais dois dias, concentra-se a solução de reacção sob uma pressão hipobárica, retoma-se o resíduo em acetato de etilo, neutraliza-se a mistura com uma solução saturada de bicarbonato de sódio, seca-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio, filtra-se e concentra-se numa evaporadora rotativa. Dissolve-se o produto intermediário assim obtido em 10 mL de etanol, adiciona-se 0,3 mL (1,8 mmol) de uma solução de metilato de sódio a 30% em metanol e agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 17 horas. Ajusta-se o pH da solução de reacção até pH 5 com ácido clorídrico 1 N e depois agita-se à temperatura ambiente durante mais 2 horas. Concentra-se sob uma pressão hipobárica, adiciona-se acetonitrilo ao resíduo, remove-se por filtração o precipitado separado, lava-se o resíduo no filtro com éter dietílico e seca-se sob uma pressão hipobárica. Adiciona-se 9,4 mL de uma solução etanólica de hidróxido de potássio 0,1 M ao éster assim obtido e agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 16 horas. Ajusta-se o pH da solução de reacção até pH 2 com ácido clorídrico 1 N, remove-se o solvente numa evaporadora rotativa, retoma-se o resíduo em água e extrai-se a mistura com acetato de etilo. Remove-se por filtração os cristais precipitados a partir da fase aquosa, lava-se o resíduo no filtro com éter dietílico e seca-se o produto sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 32 mg (7% teórico). LC-MS (método 1): tr = 2,31 minutos; MS (ESIpos): m/z = 273 [M+H]+; 105 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 13,49 (s lr., 1H) , 9,00 (s, 1H), 8,71-8,33 (m, 4H), 8,41 (s, 1H).
Exemplo 29 Éster etílico do ácido 6-[5-oxo-4-[lH-l,2,3-triazol-l-il) -2,5-di-hidro-lH-pirazol-l-il]-nicotínico
Agita-se 2,7 g (13,1 inmol) do composto do exemplo 3A, 2,0 g (13,1 mmol) do composto do exemplo 6A e 1,1 g (6,5 mmol) de ácido p-tolueno-sulfónico em 50 mL de etanol, ao refluxo, durante 16 horas. Adiciona-se 50 mL de DMF à mistura de reacção arrefecida e agita-se então a mistura a uma temperatura de banho de 130°C durante mais 10 horas. Concentra-se a solução de reacção sob uma pressão hipobárica e adiciona-se 10 mL de etanol e 1 mL de ácido sulfúrico concentrado ao residuo. Subsequentemente, agita-se a mistura a temperatura de ebulição durante 12 horas. Adiciona-se água à mistura de reacção arrefecida, remove-se por filtração o sólido, enxagua-se o residuo no filtro com etanol e seca-se o produto sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 0,14 g (3% teórico). LC-MS (método 9): tr = 2,89 minutos; MS (ESIpos): m/z = 300 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 9,00 (s, 1H) , 8,57-8,54 (m, 1H) , 8,53-8,46 (m, 2H) , 8,45 (s, 1H) , 7,91 (s, 1H) 4,38 (g, 2H) , 1,35 (t, 3H) . 106
Exemplo 30
Cloridrato de 2-[5-(aminometil)-piridina-2-il]-4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona
Agita-se 83 mg (0,2 mmol) do composto do exemplo 16 em 5 mL de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 M em dioxano, à temperatura ambiente, durante 2 horas. A seguir, concentra-se a mistura sob uma pressão hipobárica e submete-se o resíduo a cromatografia por HPLC preparativa (coluna RP18; gradiente: acetonitrilo/água com adição de 0,1% de TFA). Concentra-se as fracções combinadas de produto e adiciona-se 2 mL de ácido clorídrico 1 N ao resíduo. Congela-se a suspensão resultante. Agita-se o liofilisado em etanol, remove-se por filtração o sólido e seca-se os cristais sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 14 mg (14% teórico). LC-MS (método 8): tr = 0,76 minuto; MS (ESIpos): m/z = 258 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,64 (s, 1 H) , 8,53 (s, 3H) , 8,47 (s, 2H) , 8,31 (s, 1H) , 8,18 (s, 1H) , 7,91 (s, 1H), 4,12-4,10 (m, 2H).
Exemplo 31 2-(6-Morfolina-4-ilpirimidina-4-il)-4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona 107
Inicialmente, introduz-se 1,9 g (8,8 mmol) do composto do exemplo 3A e 1,9 g (9,7 mmol) do composto do exemplo 16A em 25 mL de acetato de etilo e adiciona-se 504 mg (4,4 mmol) de TFA, à temperatura ambiente. Agita-se a mistura ao refluxo durante 16 horas, depois arrefece-se até 5°C e, subsequentemente, agita-se durante mais 2 horas. Remove-se por filtração o sólido formado, lava-se com acetato de etilo e seca-se primeiro ao ar e depois sob uma pressão hipobárica elevada. Obtém-se 1,7 g de produto.
Combina-se as águas-mãe com a solução de lavagem e remove-se o solvente. De acordo com a análise por LC-MS, o resíduo (2,4 g) ainda contém o intermediário éster etílico do ácido 3-[2-(6-morfolina-4-ilpirimidina-4-il)-hidrazino]-2-(1H-1,2,3-triazol-l-il)prop-2-enóico (etapa intermediária de ciclização), o qual é utilizado directamente na preparação do exemplo 72 (ver esse exemplo).
Rendimento: 1,7 g (61% teórico). LC-MS (método 9): tr = 0,90 minuto; MS (ESIpos): m/z = 31 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,42 (s, 1H) , 8,38 (s, 1H) , 8,01 (s, 1H) , 7,73 (s, 1H) , 7,70 (s, 1 H) , 3,71-3,65 (m, 4H), 3,57-3,51 (m, 4H) . 108
Exemplo 32
Cloridrato de 2-(6-morfolina-4-ilpirimidina-4-il)-4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona
Lote 1: a 1,7 g (5,4 mmol) do composto do exemplo 31 adiciona-se 7,5 mL de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano. Agita-se a mistura à temperatura ambiente, adiciona-se 5 mL de dioxano e agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 16 horas. Remove-se por filtração o sólido e lava-se com 5 mL de dioxano. Seca-se a mistura sob uma pressão hipobárica elevada durante 16 horas, adiciona-se 10 mL de metanol e agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. Remove-se por filtração o sólido, lava-se com 4 mL de metanol e seca-se sob uma pressão hipobárica elevada. Obtém-se 1,6 g do composto em epigrafe.
Lote 2: obtém-se uma nova quantidade do composto em epigrafe do modo seguinte: dissolve-se o residuo (2,4 g) obtido a partir das águas-mãe durante a sintese do composto do exemplo 31, que contém o intermediário de abertura do anel do passo de ciclização, éster etilico do ácido 3 — [2 — (6-morfolina-4-ilpirimidina-4-il)-hidrazino]-2-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-prop-2-enóico, em 12 mL de etanol e adiciona-se 1,5 mL de uma solução de metilato de sódio a 30% em metanol, à temperatura ambiente e sob agitação. A seguir, 109 agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 45 minutos, depois ajusta-se o pH até 5 com ácido clorídrico 2 N e agita-se à temperatura ambiente durante mais 16 horas. Arrefece-se a mistura até 10°C, remove-se por filtração o sólido e lava-se com 3,5 mL de dioxano. Seca-se a mistura sob uma pressão hipobárica elevada durante 16 horas, adiciona-se então 5 mL de metanol e depois agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. Filtra-se o sólido, lava-se com 2 mL de metanol e seca-se sob uma pressão hipobárica elevada para se obter mais 997 mg do composto em epígrafe deste modo.
Rendimento: em conjunto de 2,6 g (83% teórico). LC-MS (método 6): tr = 0,89 minuto; MS (ESIpos): m/z = 315 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,54 (s, 1H) , 8,39 (s, 1H) , 8,28 (s, 1H) , 7,88 (s, 1H) , 7,42 (s, 1H) , 3,71 (s, 8H) .
Os compostos apresentados no quadro 7 são preparados de um modo análogo ao descrito nos exemplos apresentados a partir dos eductos correspondentes. Em vez de ácido canfor-10-sulfónico também é possível utilizar mono-hidrato do ácido tolueno-4-sulfónico. 110
Exemplo35
Cloridrato de 2-[5-(terc-butoximetil)piridina-2-il]-4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona
x BC! 111
Inicialmente, introduz-se 631 mg (3,0 mmol) do composto do exemplo 3A e 586 mg (3,0 mmol) do composto do exemplo 18A em 10 mL de etanol. Adiciona-se 114 mg (0,6 mmol) de mono-hidrato do ácido p-tolueno-sulfónico e agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 16 horas. Remove-se o solvente e purifica-se o residuo por HPLC preparativa (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água com adição de 0,1% de TFA). Combina-se as fracções de produto, concentra-se e seca-se o residuo sob uma pressão hipobárica elevada. Adiciona-se 10 mL de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano e agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. Filtra-se o sólido, lava-se com éter terc-butil-metilico e seca-se sob uma pressão hipobárica elevada.
Rendimento: 260 mg (25% teórico). LC-MS (método 8): tr = 1,77 minutos; MS (ESIpos): m/z = 315 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMS0-d6) : δ = 8,47-8,42 (m, 2H) (s, 1H) , 8,22 (d, 1H) , 7,99 (dd, 1H) , 7,90 (s, 1H) (s, 2H), 1,25 (s, 9H).
Exemplo 36
Cloridrato de 4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-2-[4-(trifluoro-metil)-piridina-2-il]-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona
Inicialmente, introduz-se 631 mg (3,0 mmol) do composto do exemplo 3A e 531 mg (3,0 mmol) do composto do 112 exemplo 25A em 10 mL de etanol. Adiciona-se 114 mg (0,6 mmol) de mono-hidrato do ácido p-tolueno-sulfónico e agita-se a mistura ao refluxo durante 16 horas. Concentra-se e purifica-se o residuo por HPLC preparativa (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água com adição de 0,1% de TFA) . Combina-se as fracções de produto, remove-se o solvente e seca-se o residuo sob uma pressão hipobárica elevada. Adiciona-se 20 mL de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano e agita-se à temperatura ambiente durante 1 hora. Filtra-se o sólido, lava-se duas vezes com éter terc-butil-metilico e seca-se sob uma pressão hipobárica elevada.
Rendimento: 231 mg (23% teórico). LC-MS (método 8): tr = 1,65 minutos; MS (ESIpos): m/z = 297 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,81 (d, 1H) , 8,70 (s, 1H) , 8,59 (s, 1H) , 8,47 (s, 1H) , 7,92 (s, 1H) , 7,77(d, 1H) .
Exemplo 37 2-[5-(2,2-Dimetilpropoxi)-piridina-2-il]-4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona
Inicialmente, introduz-se 171 mg (0,8 mmol) do composto do exemplo 3A e 455 mg (pureza de 35%, 0,8 mmol) do composto do exemplo 12A em 7 mL de etanol. Adiciona-se 31 mg (0,2 mmol) de mono-hidrato de ácido p-tolueno-sulfónico e agita-se a mistura ao refluxo durante 64 horas. 113 A seguir, concentra-se e purifica-se o resíduo por HPLC preparativa (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água com adição de 0,1% de TFA). Combina-se as fracções de produto, remove-se o solvente e seca-se o resíduo sob uma pressão hipobárica elevada.
Rendimento: 28 mg (11% teórico). LC-MS (método 10): tr = 1,17 minutos; MS (ESIpos) : m/z= 315 [M+H]+; ^-NMR (500 MHz, DMSD-d6) : δ = 8,42 (s, 1H) , 8,29 (s, 1H) , 8,23 (s, 1 H) , 8,18-8,08 (m, 1H) , 7,90 (s, 1H) , 7,69 (dd, 1H), 3,78 (s, 2H), 1,02 (s, 9H).
Exemplo 38
Cloridrato de 2-[5-(2,2-dimetilpropoxi)-piridina-2-il]-4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona
A 22 mg (0,1 mmol) do composto do exemplo 37 adiciona-se 2 mL de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano e agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. Filtra-se o sólido e seca-se sob uma pressão hipobárica elevada.
Rendimento: 17 mg (97% teórico). LC-MS (método 10): tr = 1,17 minutos; MS (ESIpos): m/z = 315 [M+H]+; 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,42 (s, 1H) , 8,29 (s, 1H) , 8,23 (s, 1H) , 8,18-8,08 (m, 1H) , 7,90 (s, 1H) , 7,69 (dd, 1 H), 3,78 (s, 2H), 1,02 (s, 9H). 114
Exemplo 39
Trifluoroacetato de 1-[2-(6-morfolina-4-ilpirimidina-4-il)-3-oxo-2,3-di-hidrO'lH-Pirazol-4-i;L] -1H-1,2,3-triazol-4-carbonitrilo
Inicialmente, introduz-se 250 mg (1,1 mmol) do composto do exemplo 41A, 207 mg (1,1 mmol) do composto do exemplo 16A e 40 mg (0,2 mmol) de mono-hidrato do ácido p-tolueno-sulfónico em 10 mL de THF. Faz-se reagir a mistura num micro-ondas de modo único (CEM Explorer), primeiro a 120°C durante 3,5 horas e depois a 130°C durante 4 horas. Deixa-se arrefecer a mistura até à temperatura ambiente, adiciona-se 5 mL de acetonitrilo e mantém-se a mistura em repouso durante 24 horas. Remove-se por decantação o sobrenadante e lava-se o precipitado uma vez com acetonitrilo. Combina-se a solução de lavagem com o sobrenadante decantado e concentra-se a mistura. Purifica-se o resíduo assim obtido por HPLC preparativa (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água com adição de 0,1% de TFA). Combina-se as fracções que contêm produto e concentra-se. Agita-se o resíduo sólido duas vezes numa mistura de pouco éster terc-butil-metílico e algumas gotas de acetonitrilo. Remove-se por decantação o sobrenadante de 115 cada vez e seca-se, finalmente, o sólido sob uma pressão hipobárica elevada.
Rendimento: 15 mg (3% teórico). LC-MS (método 4): tr = 1,57 minutos; MS (ESIpos): m/z = 340 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,58 (s, 1H) , 8,24 (s, 1H), 7,42 (s, 1H), 3,80-3,63 (m, 8H).
Exemplo 40
Cloridrato de 1-[2-(6-morfolina-4-ilpirimidina-4-il)-3-oxo-2,3-di-hidro-lH-pirazol-4-il]-1H-1,2,3-triazol-4-carbonitrilo .0
A 18 mg (0,04 mmol) do composto do exemplo 39 adiciona-se 3 mL de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano e agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. Filtra-se o sólido, lava-se com éter terc-butil-metílico e seca-se sob uma pressão hipobárica elevada.
Rendimento: 15 mg (97% teórico). LC-MS (método 8): tr = 1,38 minutos; MS (ESIpos): m/z = 340 [M+H]+; ^-NMR (400 MHz, DMS0-d6) : δ= 8,58 (s, 1H] , 8,25 (s, 1H), 7,41 (s, 1H), 3,82-3,57 (m, 8H). 116
Exemplo 41 2-[6-(3-Hidroxi-azetidina-l-il)-pirimidina-4-il]-4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona
H
Inicialmente, introduz-se 348 mg (1,7 mmol) do composto do exemplo 3A e 300 mg (1,7 mmol) do composto do exemplo 11A numa mistura de 6 mL de THF e 6 mL de etanol. Adiciona-se 63 mg (0,3 mmol) de mono-hidrato do ácido p-tolueno-sulfónico e faz-se reagir a mistura num micro-ondas de modo único (CEM Explorer) a 130°C durante 1,5 horas. Deixa-se arrefecer a mistura até à temperatura ambiente, adiciona-se mais 50 mg do composto do exemplo 3A e uma ponta de espátula de mono-hidrato do ácido p-tolueno-sulfónico e aquece-se a mistura a 150°C durante 1 hora. Deixa-se arrefecer até à temperatura ambiente, decanta-se a partir do sólido e lava-se o sólido várias vezes com THF (lote 1 de sólido). Combina-se o sobrenadante decantado e a solução de lavagem, concentra-se a mistura e adiciona-se 5 mL de etanol, 5 mL de THF e uma ponta de espátula de mono-hidrato do ácido p-tolueno-sulfónico ao residuo obtido. Faz-se reagir novamente a mistura num micro-ondas de modo único (CEM Explorer) a 150°C durante 2 horas. Deixa-se arrefecer até à temperatura ambiente e remove-se por filtração o sólido formado (lote 2 de sólido). Concentra-se o filtrado, adiciona-se 3 mL de DMSO ao residuo e purifica- 117 se por HPLC preparativa (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água com adição de 0,1% de TFA). Combina-se as fracções que contêm produto e concentra-se. Dissolve-se o resíduo em etanol, adiciona-se uma pequena quantidade de THF e concentra-se a mistura, com formação de um precipitado. Remove-se por filtração o sólido e lava-se com THF (lote 3 de sólido) . Combina-se os três lotes de sólido e seca-se a mistura sob uma pressão hipobárica elevada.
Rendimento: 108 mg (22% teórico). LC-MS (método 8 ): tr = 1,00 minuto; MS (ESIpos): m/ z = 301 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz , DMSO-de) : δ = 8,47 (s, 1H) , 8,36 (S, 1H) , 8,18 (s, 1H) , 7,84 (s, 1H) , 6,97 (s, 1 H) , 5,92 (d, 1H) , 4, 69-4,49 (m, 1H) , 4,41-4,33 (m, 2H) , 3,95-3,86 (m, 2H) .
Exemplo 42
Cloridrato de 2-[6-(3-hidroxi-azetidina-l-il)-pirimidina-4-il]-4-(lH-l,2,3-triazol-l-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona
A 105 mg (0,4 mmol) do composto do exemplo 41 adiciona-se 3 mL de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano e agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. Filtra-se o sólido, lava-se com éter terc- 118 butil-metílico e seca-se sob uma pressão hipobárica elevada.
Rendimento: 117 mg (99% teórico). LC-MS (método 8): tr = 0,99 minuto; MS (ESIpos): m/z = 301 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,50 (s, 1H) , 8,38 (s, 1H) , 8,22 (s, 1H) , 7,87 (s, 1H) , 6,95 (s, 1H) , 4,68-4,60 (m, 1H) , 4,43-4,35 (m, 2H) , 3, 97-3, 88 (m, 2H) .
Exemplo 43
Cloridrato de 1-{2-[5-(2,2-dimetilpropoxi)-piridina-2-il]-3-oxo-2,3-di-hidro-lH-pirazol-4-il}-1H-1,2,3-triazol-4-carbonitrilo
Inicialmente, introduz-se 150 mg (0,6 mmol) do composto do exemplo 41A em 2,5 mL de etanol. Adiciona-se 166 mg (0,6 mmol, pureza de 75%) do composto do exemplo 12A e 24 mg (0,1 mmol) de mono-hidrato do ácido p-tolueno-sulfónico e agita-se a mistura ao refluxo durante 16 horas. Putrifica-se directamente a solução de reacção por HPLC preparativa (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água com adição de 0,1% de TFA). Combina-se as fracções que contêm produto e concentra-se. Adiciona-se 1 mL de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano ao residuo obtido e agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. Concentra-se a mistura e seca-se o residuo sob uma pressão hipobárica elevada. 119
Rendimento: 3 mg (1% teórico). m/z (s, (s, LC-MS (método 8): tr = 2,42 minutos; MS (ESIpos): = 340 [M+H]+; ^-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 9,39 (s, 1H) , 8,41 1H) , 8,24 (d, 1H) , 8,12 (d, 1H) , 7,70 (dd, 1H) , 3,78 2H), 1,03 (s, 9H).
Exemplo 44
Cloridrato do éster 3-terc-butílico de 6-[4-(4-ciano-lH-1,2,3-triazol-l-il)-5-oxo-2,5-di-hidro-lH-pirazol-l-il)-piridina
Inicialmente, introduz-se 150 mg (0,6 mmol) do composto do exemplo 41A em 2,5 mL de etanol. Adiciona-se 178 mg (0,6 mmol) do composto do exemplo 22A e 24 mg (0,1 mmol) de mono-hidrato do ácido p-tolueno-sulfónico e agita-se a mistura ao refluxo durante 16 horas. Purifica-se directamente a solução de reacção por HPLC preparativa (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água com adição de 0,1% de TFA) . Combina-se as fracções que contêm produto, concentra-se a mistura e seca-se o residuo sob uma pressão hipobárica elevada. Adiciona-se 5 mL de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano ao residuo obtido e agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. Filtra-se o sólido, lava-se com éter terc-butil-metilico e seca-se sob uma pressão hipobárica elevada. 120
Rendimento: 21 mg (8% teórico). LC-MS (método 7): tr = 1,96 minutos; MS (ESIpos): m/z = 354 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 9,39 (s, 1H) , 8,94 (s, 1H) , 8,63 (s, 1H), 8,46 (s, 2H) , 1,58 (s, 9H) .
Exemplo 45 2-[6-(3,5-Dimetilpiperidina-l-il)-pirimidina-4-il]-4-(1H-1,2,3-triaxol-l-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona
Dissolve-se 2,9 g (9,6 mmol) do composto do exemplo 52A em 40 mL DMF e utiliza-se como solução de reserva.
Inicialmente introduz-se 23 mg (0,1 mmol) de 3,5-dimetilpiperidina em 200 pL de DMF e adiciona-se, sucessivamente, 400 pL (0,1 mmol) da solução de reserva do composto do exemplo 52A e 35 mg (0,3 mmol) de carbonato de potássio. Agita-se a mistura de reacção a 100°C durante 16 horas. Como processamento subsequente, filtra-se a suspensão e submete-se o filtrado a cromatografia por LC-MS preparativa (método 16). Concentra-se as fracções que contêm produto e seca-se o residuo.
Rendimento: 3 mg (10% teórico). LC-MS (método 16): tr = 1,90 minutos; MS (ESIpos): m/z = 341 [M+H] + . 121
Os compostos apresentados no quadro 8 são preparados de um modo análogo ao descrito no exemplo 45, a partir de 0,1 mmol do composto do exemplo 52A e 0,1 mmol da amina secundária correspondente.
Quadro 8
Exemplo n° Estrutura Rendimento (% teórico) MS (ESI) [M+H]+; LG-MS: tr (método 16) 46 L. λ* V ✓ /W, 9 Ή 2% m/z = 339; 1,88 minutos 47 CK, ^ X* w f ajsstí % i 1 .t \ v | ' N 1% m/z = 341; 1,91 minutos 48 Λ \ _/ | p*t H 7% m/z = 327; 1,77 minutos 122
Exemplo n° Estrutura Rendimento (% teórico) MS (ESI) [M+H]+; LG-MS: tr (método 16) 49 C\ 'H j J^:<eeec^ 5% m/z = 327; 1,77 minutos 50 £Ht p""...... S ../ ff <S i n 4% m/z = 341; 1,82 minutos 51 *¥?" ^ ) S 1 pi * V ! |\p.w\vv} 1-1 5% m/z = 343; 1,54 minutos 52 S/ \ > i/S 1 !^*f Sr Ί g ^ &S™·* H 5% m/z = 331; 1,58 minutos 53 #s o N: S S rs :1 p-- .·" -V. ...-j·/ ..--1 Í4 \ // V" *~’ H 5% m/z = 311; 1,63 minutos 123
Exemplo n° Estrutura Rendimento (% teórico) MS (ESI) [M+H]+; LG-MS: tr (método 16) 54 * v* As*i f N—NÊ H \ / \ 1 %. ff H 2% m/z = 356; 1,18 minutos 55 ,, Λ ϋπ,. h^4 ‘ Sí ^ ff N-^í$ W 1 > ^ fc-** 7% m/z = 356; 1,18 minutos 56 L ; ":N «Ή J 1. ^s/v·1^ -n \ H H 6% m/z = 343; 1,53 minutos 57 ,..·Α~~.·^ *Ψ \ f ) -2-¾¾ f ««si* & Λ JL i Λ ~H \ ff H 9% m/z = 353; 2,01 minutos 124
Exemplo n° Estrutura Rendimento (% teórico) MS (ESI) [M+H]+; LG-MS: tr (método 16) 58 1 \ ) ^ -, tt fi"""· H 9% m/z = 356; 1,18 minutos 59 V0"^5 >*S í 1 IS n/N I p*i v^-cV^ H 8% m/z = 371; 1,60 minutos 60 í\ f psa hi \ li * 1 * ^ N 2% m/z = 341; 1,81 minutos 61 ! \ V / 1 Vj φχζψι (t. \ 1 > x 'V-H *\ | X ^—>' u · 10% m/z = 371; 1,79 minutos 125
Exemplo n° Estrutura Rendimento (% teórico) MS (ESI) [M+H]+; LG-MS: tr (método 16) 62 .m ' c ti H 3% m/z = 341; 1,88 minutos 63 m >> \ ) """Ν' /-¾^. 9 &:=Sís! m: \ u r \ *L ir" 'v#·" N: Λ,_ί ^jjwWwí H 7% m/z = 327; 1,78 minutos 64 r*\ s ? ·-··/ \ ····, y^ssY í| N—N n. \ É J. \ Sr ί r ^ ír* 3% m/z = 299; 1,51 minutos 65 HA w s n \ ΐ{ N 1; H í \ 1. #^N Ή \ $f ti—' 11% m/z = 341; 1,87 minutos 66 ίΤ°·η jpyju | Λ /Wlí.V i V ' 31 ix /Vaij Vtí' wH) jk^ o | %t=n %. 1 M f \ Ή 1 H “' k—‘ 2% m/z = 327; 1,79 minutos 126
Exemplo 67
Cloridrato de 2-(6-metoxipirimidina-4-il)-4-(1H-1,2,3-triazol-l-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona
Inicialmente, introduz-se 0,3 mL (6,6 mmol) de metanol em 15 mL de dioxano. Adiciona-se lentamente, sob agitação, 1,3 mL (2,7 mmol) de uma solução 2 M de base fosfazeno P2-terc-butilo em THF e agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 15 minutos. Depois, adiciona-se 350 mg (1,3 mmol) do composto do exemplo 52A e faz-se reagir a mistura num micro-ondas de modo único (CEM Explorer) a 150°C durante 2 horas. Adiciona-se então mais 2 mL (49,2 mmol) de metanol e faz-se reagir novamente a mistura num micro-ondas de modo único (CEM Explorer) sob as mesmas condições durante 2 horas. Depois de se arrefecer, concentra-se a mistura de reacção e purifica-se o resíduo por HPLC preparativa (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água com adição de 0,1% de TFA). Combina-se as fracções que contêm produto e concentra-se a mistura numa evaporadora rotativa. Seca-se o resíduo sob uma pressão hipobárica elevada e depois adiciona-se 3 mL de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano. Agita-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos, remove-se por filtração o sólido e seca-se sob uma pressão hipobárica elevada. 127
Rendimento: 60 mg (15% teórico). LC-MS (método 7); tr = 0,82 minuto; MS (ESIpos): m/z = 260 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-de) ; δ = 8,80 (s, 1H) , 8,59 (s, 1H) , 8,43 (s, 1H) , 7,90 (s, 1H) , 7,70 (s, 1H) , 4,00 (s 3H) .
Exemplo 68 (exemplo de comparação)
Cloridrato de 1-[3-oxo-2-(6-piperidina-l-ilpirimidina-4-il)-2,3-di-hidro-lH-pirazol-4-il]-lH-imidazol-4-carbonitrilo
Dissolve-se 200 mg (0,9 mmol) do composto do exemplo 45A e 165 mg (0,9 mmol) do composto do exemplo 8A em 2 mL de etanol e adiciona-se 29 mg (0,2 mmol) de ácido p-tolueno-sulfónico. Agita-se a mistura a 90°C durante 48 horas. Depois de se arrefecer até à temperatura ambiente, concentra-se a mistura de reacção e purifica-se o resíduo por HPLC preparativa (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água com adição de 0,1% de ácido fórmico). Trata-se as fracções de produto concentradas com um excesso de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano e éter dietílico, filtra-se os cristais precipitados, lava-se o resíduo no filtro com éter dietílico e seca-se o produto sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 18 mg (6% teórico). 128 HPLC (método 11): tr = 3,64 minutos; MS (ESIpos): m/z = 337 [M+H]+; 1H-MMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 8,49 (s, 1H) , 8,40 (s, 1H), 8,21 (s, 1H) , 8,18 (s, 1H) , 7,42 (s, 1H) , 3,75-3,65 (m, 4H), 1,73-1,51 (m, 6H) .
Exemplo 69 (exemplo de comparação)
Cloridrato de 2-[5-(hidroximetil)-piridina-2-il]-4-(1H-imidazol-l-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona
Dissolve-se 200 mg (1,0 mmol) do composto do exemplo 42A e 133 mg (1,0 mmol) do composto do exemplo 4A em 2 mL de etanol e adiciona-se 44 mg (0,2 mmol) de ácido canfor-10-sulfónico. Agita-se ao refluxo durante 12 horas.
Concentra-se a mistura de reacção arrefecida sob uma pressão hipobárica. Após purificação por duas HPLC preparativas (coluna RP18; fase móvel: gradiente de acetonitrilo/água com adição de 0,1% de ácido fórmico), adiciona-se à fracção que contém produto 1 mL de uma solução de cloreto de hidrogénio 4 N em dioxano, agita-se durante 1 hora, remove-se completamente o solvente numa evaporadora rotativa e seca-se o residuo sob uma pressão hipobárica.
Rendimento: 86 mg (31% teórico). LC-MS (método 1): tr = 1,77 minutos; MS (ESIpos): m/z = 258 [M+H]+; 129 ^-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 9,50 (s, 1H) , 8,51 (s, 1H) , 8,47 (s, 1H) , 8,29 (d, 1H) , 8,09-8,01 (m, 2H) , 7,87 (s, 1H), 3,58 (s, 2H) . B. Avaliação da eficácia farmacológica
As propriedades farmacológicas dos compostos de acordo com a invenção podem ser demonstradas através dos ensaios seguintes.
Abreviaturas DMEM Meio de Eagle modificado por Dulbecco FCS Soro fetal de bovino TMB 3,3',5,5'-tetrametilbenzidina
Tris tris-(hidroximetil)-aminometano 1. Testes in vitro para a determinação da actividade e da selectividade de inibidores de HIF prolil-4-hidroxilase l.a) Inibição da actividade de HIF prolil-hidroxilase O HIF hidroxilado liga-se especificamente ao complexo proteina von Hippel-Lindau-elongina B-elongina C (complexo VBC) . Esta interacção ocorre apenas caso o HIF esteja hidroxilado num radical prolilo conservado. Tal constitui a base para a determinação bioquímica da actividade de HIF prolil-hidroxilase. O teste é efectuado conforme descrito [Oehme F., Jonghaus W., Narouz-Ott L., Huetter J., Flamme 1., Anal. Biochem. 330 (1), 74-80 (2004)].
Mantém-se a incubar uma placa de microtitulação com 96 cavidades límpida revestida com NeutrAvidin HBC (empresa Pierce) com bloqueador caseína durante 30 minutos. Lava-se então a placa três vezes com 200 pL, de cada vez, de tampão de lavagem (Tris 50 mM, pH 7,5, NaCl 100 mM, bloqueador 130 caseína a 10% (v/v), Tween 20 a 0,05% (v/v)) por cavidade. Adiciona-se o péptido biotina-DLDLEMLAPYIPMDDDFQL (empresa Eurogentec, 4102 Seraing, Bélgica) a uma concentração de 400 nM em 100 yL de tampão de lavagem. Este péptido actua como substrato para a hidroxilação de prolilo e está ligado à placa de microtitulação. Após incubação durante 60 minutos, lava-se a placa três vezes com tampão de lavagem, mantém-se a incubar com biotina 1 mM em bloqueador caseína durante 30 minutos e depois lava-se novamente três vezes com tampão de lavagem.
Para se efectuar a reacção de prolil-hidroxilase, mantém-se a incubar o substrato do péptido ligado à placa com um lisado de células que contém prolil-hidroxilase, durante 1 a 60 minutos. A reacção tem lugar em 100 yL de tampão de reacção (Tris 20 mM, pH 7,5, KC1 5 mM, MgCl2 1,5 mM, 2-oxoglutarato 1 yM-1 mM, FeSCy 10 yM, ascorbato 2 mM) à temperatura ambiente. Além disso, a mistura de reacção contêm diversas concentrações do inibidor de prolil-hidroxilase que se pretende testar.
De preferência, mas não exclusivamente, a substância de teste é utilizada em concentrações compreendidas entre 1 nM e 100 yM. A reacção é interrompida por meio de lavagem, três vezes, da placa com tampão de lavagem.
Para a determinação quantitativa da hidroxilação de prolilo, adiciona-se uma proteína de fusão que contém tioredoxina de E. coli e o complexo de VBC em 80 yL de tampão de ligação (Tris 50 mM, pH 7,5, NaCl 120 mM) . Decorridos 15 minutos, adiciona-se 10 yL de uma solução de anticorpos policlonais anti-tioredozina de coelho. Decorridos mais 30 minutos, adiciona-se 10 yL de uma solução de anti-imunoglobulina de coelho acoplada a 131 peroxidase de rábano em tampão de ligação. Após incubação à temperatura ambiente durante 30 minutos, lava-se a placa três vezes com tampão de lavagem para se remover o complexo de VBC e os anticorpos não ligados. Para se determinar a quantidade de complexo de VBC ligado, mantém-se a placa a incubar com TMB durante 15 minutos. Termina-se a reacção colorida por adição de 100 yL de ácido sulfúrico 1 M. Determina-se a quantidade de complexo VBC ligado por medição da densidade óptica a 450 nm. Esta é proporcional à quantidade de prolina hidroxilada no substrato de péptido.
Em alternativa, é possível utilizar um complexo VBC acoplado a európio (da empresa Perkin Elmer) para a detecção da hidroxilação de prolilo. Neste caso, a quantidade de complexo VBC ligado é determinada por fluorescência relativamente ao tempo. Além disso, também é possível utilizar complexo VBC marcado com [35S]-metionina. Para tal, é possível preparar o complexo VBC radioactivamente marcado por transcição-tradução in vitro em lisado de reticulócitos.
Os exemplos de variantes inibem a actividade de HIF prolil-hidroxilase neste teste com um valor CI5o ^ 30 μΜ. No quadro 1 seguinte, são apresentados valores CI50 representativos para os exemplos de variantes.
Quadro 1
Exemplo n° CI50 [μΜ] 5 1,2 7 0,34 20 0,78 25 1,1 26 0,05 132
Exemplo n° Ciso [μΜ] 32 0,49 36 1, 9 38 0,19 52 0,74 63 0,36 l.b) Teste celular funcional in vitro
Quantifica-se a actividade dos compostos de acordo com a invenção com o auxilio de uma linhagem celular recombinante. As células são provenientes, originalmente, de uma linhagem celular de carcinoma do pulmão humano (A549, ATCC: American Type Culture Collection, Manassas, VA 20108, USA) . A linhagem celular de teste é tranfectada de um modo estável com um vector que contém o gene repórter de Pholinus pyralis Luciferase (doravante designado luciferase) , sob o controlo de um promotor mínimo artificial. O promotor mínimo compreende dois elementos responsáveis por hipóxia a montante de uma caixa TATA [Oehme F., Ellinghaus P., Kolkhof P., Smith T.J.,
Ramakrishnan S., Hutter J., Schramm M., Flamme L, Biochem. Biophys. Res. Commun. 296 (2), 343-9 (2002)]. Sob o efeito de hipóxia (v.g., cultura na presença de 1% de oxigénio durante 24 horas) ou sob a acção de inibidores de dioxigenase não selectivos (v.g., desferroxamina numa concentração de 100 μΜ, cloreto de cobalto numa concentração de 100 μΜ ou éster dietílico de N- oxalilglicina numa concentração de 1 mM), a linhagem celular de teste produz luciferase, a qual pode ser detectada e quantificada com o auxílio de reagentes de bioluminescência adequados (v.g., sistema de ensaio de 133 luciferase Steady-Glo® , Promega Corporation, Madison, WI 53711, USA) e de um luminómetro adequado.
Procedimento de teste: no dia anterior ao teste, coloca-se as células numa quantidade exactamente calculada de meio de cultura (DMEM, 10% de FCS, glutamina 2 mM) em placas de microtitulação com 384 ou 1536 cavidades e mantém-se numa incubadora celular (humidade atmosférica de 96%, 5% v/v de CO2, 37°C). No dia de teste, adiciona-se as substâncias de teste ao meio de cultura em concentrações graduadas. Aos lotes utilizados como controlos negativos não é adicionada substância de teste às células. Como controlo positivo para a determinação da sensibilidade da célula a inibidores, adiciona-se, v.g., desferroxamina numa concentração final de 100 μΜ. Decorridas 6 a 24 horas após a transferência das substâncias de teste para as cavidades das placas de microtitulação, mede-se o sinal de luz resultante no luminómetro. Representa-se graficamente uma relação dose/efeito com o auxilio dos valores de medição, os quais constituem a base para a determinação da concentração activa de metade do máximo (designada por valor CE50) . l.c) Teste celular funcional in vitro da modificação da expressão génica
Para se investigar a modificação da expressão de mARN especifico em linhagens celulares humanas após tratamento com as substâncias de teste, desenvolve-se em cultura as seguintes linhagens celulares em placas com 6 ou 24 cavidades: células de hepatoma humano (HUH, JCRB Cell Bank, Japão), fibroblastos de rim embrional humano (HEK/293, ATCC, Manassas, VA 20108, USA), células de carcinoma 134 cervical humano (HeLa, ATCC, Manassas, VA 20108, USA), células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC, Cambrex, East Rutherford, New Jersey 07073, USA). Decorridas 24 horas após a adição das substâncias de teste, lava-se as células com soluto salino tamponado com fosfato e obtém-se o ARN total a partir destas utilizando um método adequado (v.g., reagente Trizol®, Invitrogen GmbH, 76131 Karlsruhe, Alemanha).
Para uma análise típica experimental, digere-se 1 yg de cada um do ARN total obtido deste modo com DNase I e traduz-se num ADN complementar (cADN), utilizando uma reacção de transcriptase inversa adequada (sistema de transcrição inversa ImProm-II, Promega Corporation, Madison, WI 53711, USA) . Utiliza-se 2,5% do lote de cADN assim obtido, em cada caso, para a reacção em cadeia de polimerase. Investiga-se o nível de expressão de mARN nos genes que se pretende investigar através da reacção de polimerase em cadeia quantitativa em tempo real [TaqMan-PCR; Heid C.A., Stevens J., Livak K.J., Williams P.M., Genome Res. 6 (10), 986-94 (1996)], utilizando um instrumento de detecção de sequências ABI Prism 7700 (da empresa Applied Biosystems, Inc.)· as combinações iniciador sonda aqui utilizadas são geradas através da aplicação informática Primer Express 1.5 (da empresa Applied Biosystems, Inc.). Especificamente, são investigados os mARN de eritropoietina, de carboanidrase IX, de lactato de de-hidrogenase A e do factor de crescimento de células endoteliais vascular.
As substâncias de acordo com a invenção proporcionam um aumento significativo dependente da dose no mARN de genes induzidos por hipóxia em células de origem humana. 135 2. Teste in vivo para a detecção da acgão no sistema cardiovascular 2.a) Teste in vivo da modificação da expressão de genes
Administra-se os compostos de teste dissolvidos em solventes adequados a murganhos ou ratos por via oral através de uma sonda esofágica, por via intraperitoneal ou intravenosa. As dosagens típicas são de 0,1, 0,5, 1, 5, 10, 20, 50, 100 e 300 mg de substância por kg de peso corporal e administração. Os animais de controlo recebem apenas solvente. Decorridas 4, 8 ou 24 horas após a administração da substância de teste, sacrifica-se os animais com uma sobredose de isoflurano e uma subsequente fractura do pescoço e remove-se os órgãos que se pretende investigar. Congela-se parte dos órgãos em azoto líquido. Obtém-se o ARN total a partir das partes dos órgãos conforme descrito no ponto B.l.a) e traduz-se este ARN num cADN. Investiga-se o nível de expressão de mARN dos genes que se pretende investigar através de reacção em cadeia de polimerase quantitativa em tempo real [TaqMan-PCR; Heid C.A., Stevens J., Livak K.J., Williams P.M., Genome Res. 6 (10), 986-94 (1996)], utilizando um instrumento de detecção de sequências ABI Prism 7700 (da empresa Applied Biosystems, Inc.).
As substâncias de acordo com a presente invenção proporcionam um aumento significativo dependente da dose no mARN de eritropoietina no rim, após administração por via oral ou parentérica, em comparação com o controlo com placebo. 136 2.b) Determinação do nivel de eritropoietina no soro
Administra-se a substância de teste num solvente adequado a murganhos ou ratos por via intraperitoneal ou oral, uma ou duas vezes por dia. As dosagens típicas são de 0,1, 0,5, 1, 5, 10, 20, 50, 100 e 300 mg de substância por kg de peso corporal por administração. Os animais de controlo com placebo recebem apenas solvente. Antes da administração e 4 horas após a última administração de substância, recolhe-se 50 yL de sangue dos animais a partir do plexo venoso retro-orbital ou da veia da cauda, sob narcose curta. Torna-se o sangue incoagulável por meio da adição de heparina de lítio. Obtém-se o plasma sanguíneo por centrifugação. Determina-se o teor em eritropoietina no plasma sanguíneo recorrendo a um ensaio eritropoietina-ELISA (imunoensaio Epo de murganho Quantikine®, R&D
Systems, Inc., Minneapolis, USA), de acordo com as instruções do fabricante. Converte-se os valores medidos em pg/mL com o auxílio de medições de referência registadas para eritropoietina de murganho.
As substâncias de acordo com a presente invenção proporcionam um aumento significativo dependente da dose na eritropoietina no plasma, após administração por via oral ou parentérica, em comparação com o valor inicial e com o controlo com placebo. 2.c) Determinação da composição celular do sangue periférico
Administra-se a substância de teste num solvente adequado a murganhos ou ratos por via intraperitoneal ou oral, uma ou duas vezes por dia. As dosagens típicas são de, v.g., 0,1, 0,5, 1, 5, 10, 20, 50, 100 e 300 mg de 137 substância por kg de peso corporal por administração. Os animais de controlo recebem apenas solvente. No final do estudo, recolhe-se sangue dos animais a partir do plexo venoso do canto do olho ou a partir da veia da cauda, sob narcose curta, tornando-se depois incoagulável por adição de citrato de sódio. Determina-se as concentrações de eritrócitos, leucócitos e trombócitos em amostras de sangue, utilizando um aparelho de medição electrónico adequado. Determina-se a concentração de reticulócitos por pesquisa em microscópio de 1000 eritrócitos, em cada caso, com o auxilio de manchas de sangue coloridas com uma solução colorida adequada para este propósito (da empresa ΚΑΒΕ Labortechnik, Numbrecht). Para a determinação do hematócrito, recolhe-se sangue a partir do plexo venoso retro-orbital através de um capilar hematócrito e lê-se o valor do hematócrito manulamente, após centrifugação do capilar numa centrifugadora adequada para este propósito.
As substâncias de acordo com a presente invenção proporcionam um aumento significativo dependente da dose no hematócrito, na contagem de eritrócitos e nos reticulócitos, após administração por via oral ou parentérica, em comparação com o valor inicial e com o controlo com placebo. 3. Determinação da solubilidade
Preparação da solução de partida (solução inicial)
Pesa-se, de um modo exacto, pelo menos 1,5 mg da substância de teste num frasco em V roscado com uma abertura de boca de 10 mm (da empresa Glastechnik Gráfenroda GmbH, art. n° 8004-WM-H/V15y) com uma rolha roscada adequada e septo, adiciona-se DMSO para se obter 138 uma concentração de 50 mg/mL e submete-se a mistura a um vórtice durante 30 minutos.
Preparação das soluções de calibração
Os passos de pipetação necessários são efectuados numa placa de cavidades fundas (DWP) com 96 cavidades de 1,2 mL, utilizando um robot de manuseamento de líquidos. 0 solvente utilizado é uma mistura de acetonitrilo/água a 8:2.
Preparação da solução de partida para as soluções de calibração (solução de reserva): a 10 yL da solução inicial adiciona-se 833 yL da mistura de solventes (concentração = 600 yg/ml) e submete-se a mistura a homogeneização. Para cada substância de teste, prepara-se diluições 1:100 em DWP separados e, por sua vez, submete-se a homogeneização as diluições.
Solução de calibração 5 (600 ng/mL): a 30 yL da solução de reserva adiciona-se 270 yL da mistura de solventes e submete-se a mistura a homogeneização.
Solução de calibração 4 (60 ng/mL): a 30 yL da solução de calibração 5 adiciona-se 270 yL da mistura de solventes e submete-se a mistura a homogeneização.
Solução de calibração 3 (12 ng/mL): a 100 yL da solução de calibração 4 adiciona-se 400 yL da mistura de solventes e submete-se a mistura a homogeneização.
Solução de calibração 2 (1,2 ng/mL): a 30 yL da solução de calibração 3 adiciona-se 270 yL da mistura de solventes e submete-se a mistura a homogeneização.
Solução de calibração 1 (0,6 ng/mL): a 150 yL da solução de calibração 2 adiciona-se 150 yL da mistura de solventes e submete-se a mistura a homogeneização. 139
Preparação das soluções de amostra
Os passos de pipetação necessários são efectuados numa DWP com 96 cavidades de 1,2 mL, utilizando um robot de manuseamento de líquidos. A 10,1 pL da solução de reserva adiciona-se 1000 μΐ de tampão de PBS, pH 6,5. (Tampão de PBS, pH 6,5: pesa-se 61,86 g de cloreto de sódio, 39,54 g de di-hidrogeno-fosfato de sódio e 83,35 g de uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1 N num frasco de medição com 1 litro, enche-se o frasco com água e agita-se a mistura durante cerca de 1 hora. A partir desta solução, adiciona-se 500 mL a um frasco de medição de 5 litros e enche-se o frasco com água. Utilizando uma solução aquosa de hidróxido de sódio, ajusta-se o valor de pH até 6,5).
Execução
Os passos de pipetação necessários são efectuados numa DWP com 96 cavidades de 1,2 mL, utilizando um robot de manuseamento de líquidos. Utilizando uma agitadora com temperatura ajustável, agita-se as soluções de amostras preparadas deste modo a 20°C e 1400 r.p.m. durante 24 horas. A partir destas soluções, remove-se 180 pL, em cada caso, e transfere-se para tubos de centrifugação de polialómero Beckman. Submete-se estas soluções a centrifugação a cerca de 223000 x g durante 1 hora. A partir de cada solução de amostra, remove-se 100 pL de sobrenadante e dilui-se a 1:100 e a 1:1000 com tampão de PBS 6,5.
Análise
Analisa-se as amostras por HPLC/MS-MS. A quantificação é efectuada utilizando uma curva de cinco pontos de 140 calibração do composto de teste. A solubilidade é expressa em mg/mL. Sequência de análise: 1) branco (mistura de solvente); 2) solução de calibração a 0,6 ng/mL; 3) solução de calibração a 1,2 ng/mL; 4) solução de calibração a 12 ng/mL; 5) solução de calibração a 60 ng/mL; 6) solução de calibração a 600 ng/mL; 7) branco (mistura de solvente); 8) solução de amostra a 1:1000; 7) solução de amostra a 1:10.
Método HPLC/MS-MS HPLC: Agilent 1100, bomba quat. (G1311A), auto- amostrador CTC HTS PAL, desgaseificador (G1322A) e termostato da coluna (G1316A); coluna: Oásis HLB 20 mm x 2,1 mm, 25 μ; temperatura: 40°C; eluente A: água + 0,5 mL de ácido fórmico/L; eluente B: acetonitrilo + 0,5 mL de ácido fórmico/L; caudal: 2,5 mL/minuto; tempo de paragem 1.5 minutos; gradiente: 0 minuto, 95% de A, 5% de B; rampa: 0-0,5 minuto, 5% de A, 95% de B; 0,5-0,84 minuto, 5% de A, 95% de B; rampa: 0,84-0,85 minuto, 95% de A, 5% de B; 0,85- 1.5 minutos, 95% de A, 5% de B. MS/MS: WATERS Quattro Micro Tandem MS/MS; Z-Spray API-Interface; divisão inicial de HPLC-MS 1:20; medição em modo ESI. C. Exemplos de variantes para composições farmacêuticas
Os compostos de acordo com a invenção podem ser convertidos nas formulações farmacêuticas do modo seguinte.
Composição 100 mg do composto de acordo com a invenção, 50 mg de lactose (mono-hidrato), 50 mg de amido de milho (nativo), 141 10 mg de polivinilpirrolidona (PVP 25) (da empresa BASF, Ludwigshafen, Alemanha) e 2 mg de estearato de magnésio.
Peso do comprimido: 212 mg. Diâmetro: 8 mm, raio de curvatura: 12 mm.
Preparação
Submete-se a granulação a mistura de composto de acordo com a invenção, lactose e amido com uma solução a 5% (p/p) de PVP em água. Após secagem, mistura-se os grânulos com estearato de magnésio durante 5 minutos. Comprime-se esta mistura num dispositivo convencional para a preparação de comprimidos (ver antes para o formato do comprimido). Utiliza-se uma força de pressão de 15 kN como valor recomendado para a compressão.
Suspensão para administração por via oral
Composição 1000 mg do composto de acordo com a invenção, 1000 mg de etanol (a 96%) , 400 mg de Rhodigel® (goma de xantano da empresa FMC, Pennsylvania, USA) e 99 g de água. 10 mL da suspensão oral correspondem a uma dose individual de 100 mg do composto de acordo com a invenção.
Preparação
Coloca- se o Rhodigel em suspensão em etanol e adiciona-se o composto de acordo com a invenção à suspensão. Adiciona-se água sob agitação. Agita-se a mistura durante aproximadamente 6 horas, até terminar o aumento de volume do Rhodigel. 142
Solução para administração por via oral
Composição 500 mg do composto de acordo com a invenção, 2,5 g de polissorbato e 97 g de polietilenoglicol 400. 20 g de solução oral correspondem a uma dose individual de 100 mg do composto de acordo com a invenção.
Preparação
Coloca-se em suspensão o composto de acordo com a invenção numa mistura de polietileno-glicol e polissorbato, sob agitação. Mantém-se a agitação até se completar a dissolução do composto de acordo com a invenção.
Solução i.v.
Dissolve-se o composto de acordo com a invenção numa concentração inferior à solubilidade de saturação num solvente fisiologicamente aceitável (v.g., solução de soluto salino isotónica, solução de glicose a 5% e/ou solução de PEG 400 a 30%). Submete-se a solução a filtração estéril e transfere-se para recipientes para injecção estéreis e livres de pirogénio. 143
REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO A presente listagem de referências citadas pela requerente é apresentada meramente por razões de conveniência para o leitor. Não faz parte da patente de invenção europeia. Embora se tenha tomado todo o cuidado durante a compilação das referências, não é possível excluir a existência de erros ou omissões, pelos quais o EPO não assume nenhuma responsabilidade.
Patentes de invenção citadas na descrição • EP 165448 A [0013] • EP 212281 A [0013] • EP 183159 A [0013] • DE 2651008 [0013] • WO 9612706 A [0013] • WO 0051989 A [0013] • WO 03074550 A [0013] • WO 2006101903 A [0013] • WO 03051833 A [0013] • WO 2004089303 A [0013] • WO 2006114213 A [0013] [0217] [0236] • WO 2007008541 A [0014] . de 4240168 AI [0113] • EP 0556684 AI [0119] • US 5468751 A [0166]
Literatura citada na descrição, para além das patentes de invenção • EDER, GEDIGK. Allgemeine Pathologie und pathologische Anatomie. Springer Verlag, 1990, vol. 33 [0002] 144 • SCHMIDT, THEWS. Physiologie des Menschen,. Springer Verlag, 1997, vol. 27 [0003] • LÕFFLER, PETRIDES. Biochemie und Pathobiochemie. Springer Verlag, 2003, vol. 7 [0003] • SIMONS UND WARE. Therapeut ic angiogenesis in cardiovascular disease, . Nat. Rev. Drug. Discov., 2003, vol. 2 (11), 863-71 [0004] • ECKARDT. The potential of erythropoietin and related strategies to stimulate erythropoiesis. Curr. Opin. Investig. Drugs, 2001, vol. 2 (8), 1081-5 [0005] • BERNS. Should the target hemoglobin for patients with chronic kidney disease treated with erythropoietic replacement therapy be changed?. Semin. Dial., 2005, vol. 18 (1), 22-9 [0005] • CAIOLA UND CHENG. Use of erythropoietin in heart failure management, . Ann. Pharmacother., 2004, vol. 38 (12), 2145-9 [0005] • KATZ. Mechanisms and treatment of anemia in chronic heart failure,. Congest. Heart. Fail., 2004, vol. 10 (5), 243-7 [0005] • SEMENZA. Hyp oxia-inducible factor 1: oxygen homeostasis and disease pathophysiology. Trends Mol. Med., 2001, vol. 7 (8), 345-50 [0006] • WENGER UND GASSMANN. Oxygen(es) and the hypoxia-inducible factor-1. Biol. Chem., 1997, vol. 378 (7), 609-16 [0006] • EPSTEIN et al. C. elegans EGL-9 and mammalian homologs define a family of dioxygenases that regulate HIF by prolyl hydroxylation. Cell, 2001, vol. 107 (1), 43-54 [0007] • BRUICK; MCKNIGHT. A conserved family of prolyl-4-hydroxylases that modify HIF. Science, 2001, vol. 294 (5545), 1337-40 [0007] 145 • IVAN et al. Biochemical purification and pharmacological inhibition of a mammalian prolyl hydroxylase acting on hypoxia-inducible factor. Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A., 2002, vol. 99 (21), 13459-64 [0007] • SCHOFIELD; RATCLIFFE. Oxygen sensing by HIF hydroxylases. Nat. Rev. Mol. Cell. Biol., 2004, vol. 5 (5), 343-54 [0008] • J. Heterocyclic Chem., 1993, vol. 3 (1), 5-8 [0014] • J. Heterocyclic Chem., 1990, vol. 27 (4), 865-870 [0014] • WOODS et al. J. Heterocycl. Chem., 1984, vol. 21, 97-101 [0130] . MATTHEWS et al. J. Org. Chem., 1986, vol. 51, 3228-3231 [0174] • AINSWORTH et al. J. Am. Chem. Soc., 1955, vol. 77, 621-623 [0191] • Anal. Biochem., 2004, vol. 330 (1), 74-80 [0280] • Biochem. Biophys. Res. Commun., 2002, vol. 296 (2), 343-9 [0287] • HEID C.A.; STEVENS J. ; LIVAK K.J; WILLIAMS P.M. Genome Res, 1996, vol. 6 (10), 986-94 [0292]

Claims (10)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula estrutural (I)
em que o símbolo R1 representa um grupo heteroarilo de fórmula estrutural
fC M em que o símbolo * representa o ponto de ligação ao anel di-hidropirazolona e o símbolo R4 representa hidrogénio, flúor, cloro, bromo, ciano, alquilo(Ci-C4) , trifluorometilo, hidroximetilo, alcoxi(C1-C4) , trifluorometoxi, hidroxicarbonilo ou alcoxi(C1-C4)-carbonilo, o símbolo R2 representa um grupo heteroarilo de fórmula estrutural
ou em que o símbolo # representa o ponto de ligação ao anel di-hidropirazolona e os símbolos R6, R6A e R6B são iguais ou diferentes e representam, de um modo independente entre si, hidrogénio 2 ou um substituinte seleccionado entre o conjunto constituído por flúor, cloro, bromo, ciano, alquilo(Ci-C6) , trifluorometilo, hidroxi, alcoxi (Ci-C6) , trifluorometoxi, amino, mono-alquil (C1-C4) -amino, di-alquil (C1-C4) -amino, hidroxicarbonilo, alcoxi(C1-C4)-carbonilo, heterociclo-alquilo com 4 a 6 membros, fenilo e heteroarilo com 5 ou 6 membros, em que o grupo alquilo (C±-Ce) pode ser substituído, por sua vez, com hidroxi, alcoxi(C1-C4) ou amino e os grupos heterocicloalquilo com 4 a 6 membros, fenilo e heteroarilo com 5 ou 6 membros, podem ser, por sua vez e em cada caso, substituídos uma ou duas vezes, de um modo igual ou diferente, com flúor, cloro, bromo, ciano, alquilo(C1-C4) , trifluorometilo, hidroxi, alcoxi(C1-C4) , trif luorometoxi, oxo, amino, mono-alquil (C1-C4) -amino, di-alquil- (C1-C4) -amino, hidroxilcarbonilo e/ou alcoxi (C1-C4) -carbonilo e o símbolo R3 representa hidrogénio, e seus sais, solvatos e solvatos dos sais.
2. Composto de fórmula estrutural (I) de acordo com a reivindicação 1, em que o símbolo R1 representa um grupo heteroarilo de fórmula estrutural
em que, o símbolo * representa o ponto de ligação ao anel di-hidropirazolona e 3 o símbolo R4 representa hidrogénio, flúor, cloro, bromo, ciano, alquilo(Ci-C4) , trifluorometilo, hidroximetilo, alcoxi(C1-C4), trifluorometoxi, hidroxicarbonilo ou alcoxi(C1-C4)-carbonilo, o símbolo R2 representa um grupo heteroarilo de fórmula estrutural
em que o símbolo # representa o ponto de ligação ao anel di-hidropirazolona e os símbolos R6, R6A e R6B são iguais ou diferentes e representam, de um modo independente entre si, hidrogénio ou um substituinte seleccionado entre o conjunto constituído por flúor, cloro, bromo, ciano, alquilo(Ci-C6), trifluorometilo, hidroxi, alcoxi(Ci-C6), trifluorometoxi, amino, mono-alquil (Ci-C4)-amino, di-alquil (Ci~C4) -amino, hidroxicarbonilo, alcoxi (Ci-C4) -carbonilo, heterocicloalquilo com 4 a 6 membros, fenilo e heteroarilo com 5 ou 6 membros, em que o grupo alquilo (Ci-Cô) pode ser substituído, por sua vez, com hidroxi, alcoxi(Ci-C4) ou amino e os grupos heterocicloalquilo com 4 a 6 membros, fenilo e heteroarilo com 5 ou 6 membros, podem ser, por sua vez e em cada caso, substituídos uma ou duas vezes, de um modo igual ou diferente, com flúor, cloro, bromo, ciano, alquilo(Ci-C4) , trifluorometilo, hidroxi, alcoxi (Ci-C4) , trifluorometoxi, oxo, amino, mono-alquil(Ci-C4)-amino, di- 4 alquil- (C1-C4) -amino, hidroxilcarbonilo e/ou alcoxi (C1-C4) - carbonilo e o símbolo R3 representa hidrogénio, e seus sais, solvatos e solvatos dos sais.
3. Composto de fórmula estrutural (I) de acordo com a reivindicação 1, em que o símbolo R1 representa um grupo heteroarilo de fórmula estrutural N * Γ ,-N n & XiJí! / ou em que, o símbolo * representa o ponto de ligação ao anel di-hidropirazolona e o símbolo R4 representa hidrogénio, flúor, cloro, bromo, ciano, alquilo(C1-C4) , trifluorometilo, hidroximetilo, alcoxi(C1-C4), trifluorometoxi, hidroxicarbonilo ou alcoxi(C1-C4)-carbonilo, o símbolo R2 representa um grupo heteroarilo de fórmula estrutural
em que o símbolo # representa o ponto de ligação ao anel di-hidropirazolona e 5 o símbolo R6 representa hidrogénio ou um substituinte seleccionado entre o conjunto constituído por flúor, cloro, bromo, ciano, alquilo (Ci-Cô) , trifluorometilo, hidroxi, alcoxi (Ci-Cô) i trifluorometoxi, amino, mono-alquil (C1-C4) -amino, di-alquil(C1-C4)-amino, hidroxicarbonilo, alcoxi(Ci-C4)-carbonilo, heterocicloalquilo com 4 a 6 membros, fenilo e heteroarilo com 5 ou 6 membros, em que o grupo alquilo (Οχ-Οε) pode ser substituído, por sua vez, com hidroxi, alcoxi(C1-C4) ou amino e os grupos heterocicloalquilo com 4 a 6 membros, fenilo e heteroarilo com 5 ou 6 membros, podem ser, por sua vez e em cada caso, substituídos uma ou duas vezes, de um modo igual ou diferente, com flúor, cloro, bromo, ciano, alquilo (C1-C4) , trifluorometilo, hidroxi, alcoxi (C1-C4) , trifluorometoxi, oxo, amino, mono-alquil(C1-C4)-amino, di-alquil- (C1-C4) -amino, hidroxilcarbonilo e/ou alcoxi (C1-C4) -carbonilo e o símbolo R3 representa hidrogénio, e seus sais, solvatos e solvatos dos sais. 4. 2-(6-Morfolina-4-ilpirimidina-4-il)-4-(1H-1,2,3- triazol-l-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona de acordo com a reivindicação 1 que satisfaz a fórmula estrutural
6 ou um dos seus sais, seus solvatos ou solvatos dos seus sais. 5. 2-(6-Morfolina-4-ilpirimidina-4-il)-4-(lH-l,2,3- triazol-l-il)-1,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona de acordo com a reivindicação 1 que satisfaz a fórmula estrutural
6. Cloridrato de 2-(6-morfolina-4-ilpirimidina-4-il)-4-(lH-l,2,3-triazol-l-il)-l,2-di-hidro-3H-pirazol-3-ona de acordo com a reivindicação 1 que satisfaz a fórmula estrutural
7. Processo para a preparação de um composto de fórmula estrutural (I) de acordo com uma das reivindicações 1 a 6, em que o simbolo R3 representa hidrogénio, caracterizado pelo facto de um composto de fórmula estrutural (V) (V). 7 (V). 7
ο ο em que ο símbolo R1 possui as significações definidas nas reivindicações 1 a 6 e o símbolo Z1 representa metilo ou etilo, ser submetido a uma reacção de condensação com um composto de fórmula estrutural (VI) H,C Ô--Za Λ / N™"^ (VI), HSC 0—2* em que o símbolo Z2 representa metilo ou etilo, para se obter compostos de fórmula estrutural (VII) CH,
definidas antes, os quais se faz então reagir, na presença de um ácido, com um composto de fórmula estrutural (III) h mti para se obter compostos de fórmula estrutural (IV-A)
<1Υ*Α) em que os símbolos Z1, R1 e R2 possuem as significações definidas antes, os quais sofrem ciclização sob estas condições de reacção ou então num passo de reacção subsequente sob a influência de uma base para se obter os compostos de fórmula estrutural (I), em que o símbolo R3 representa hidrogénio.
8. Composto de acordo com uma das reivindicações 1 a 6 para o tratamento e/ou para a profilaxia de doenças.
9. Utilização de um composto de acordo com uma das reivindicações 1 a 6 para a preparação de um medicamento para o tratamento e/ou para a profilaxia de doenças cardiovasculares, insuficiência cardíaca, anemia, doenças renais crónicas e insuficiência renal.
10. Medicamento que compreende um composto de acordo com uma das reivindicações 1 a 6 em combinação com uma substância auxiliar inerte, não tóxica e farmaceuticamente adequada.
11. Medicamento que compreende um composto de acordo com uma das reivindicações 1 a 6 em combinação com um ou mais compostos activos seleccionados entre o conjunto 9 constituído por inibidores de ACE, antagonistas do receptor de angiotensina II, bloqueadores do receptor beta, antagonistas de cálcio, inibidores de PDE, antagonistas do receptor mineral-corticóide, diuréticos, aspirina, suplementos de ferro, suplementos de vitamina B12 e de ácido fólico, estatinas, derivados de digitalis (digoxina), agentes quimioterapêuticos para tumores e antibióticos.
12. Medicamento de acordo com a reivindicação 10 ou 11 para o tratamento e/ou para a profilaxia de doenças cardiovasculares, insuficiência cardíaca, anemia, doenças renais crónicas e insuficiência renal.
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