PT679656E

PT679656E - Melhoramentos em complexos de platina

Info

Publication number: PT679656E
Application number: PT95302629T
Authority: PT
Inventors: Christopher Francis Ja Barnard; Gerald Edward Bossard
Original assignee: Johnson Matthey Plc
Priority date: 1994-04-26
Filing date: 1995-04-20
Publication date: 2001-12-28
Also published as: DE69522490D1; GB9408218D0; AU692521B2; CA2147567A1; JPH0840892A; US5519155A; ES2162897T3; EP0679656B1; DK0679656T3; GR3036538T3; ATE205216T1; EP0679656A1; DE69522490T2; AU1766195A; CA2147567C

Description

DESCRIÇÃO "MELHORAMENTOS EM COMPLEXOS DE PLATINA" A presente invenção relaciona-se com melhoramentos em complexos de platina e mais especialmente relaciona-se com complexos de platina que têm actividade contra células cancerosas. A actividade de muitos complexos de platina(II) e de platina (IV) contra células cancerosas está descrita na literatura de patentes e académica. Apesar de esta actividade ter sido publicada há mais de vinte anos, ainda só há dois desses complexos aprovados como fármacos, e mantém-se a necessidade de novos complexos com actividade significativa e/ou um espectro de actividade mais amplo, ou de oferta de quimioterapias alternativas. O nosso Pedido de Patente europeia N2 0328274 descreve certos complexos carboxilato de Pt(IV). Estes complexos estão indicados para utilização como substâncias antitumorais de administração oral.

Proporciona-se agora novos complexos dicarboxilato de Pt(IV) de fórmula geral I,

OtHR3

R 1ΜΠ.2 ‘X 02cr4 1

I

em que X é um átomo de halogéneo, especialmente cloro, um pseudo-halogéneo, por exemplo um grupo acetato ou hidroxilo, R1 e R2 são hidrogénio, alquilo ou ciclo-alquilo em Cl até C6 com cadeia linear ou ramificada, arilo ou r1-NH2 é um doador de azoto heterocíclico, por exemplo piridina, e R^ e R2 podem ser iguais ou diferentes um do outro, R2 e R4 são hidrogénio, alquilo ou ciclo-alquilo em Ci até C5 com cadeia linear ou ramificada ou arilo, por exemplo fenilo, e R2 e R^ podem ser iguais ou diferentes um do outro, e r5 é hidrogénio, metilo ou etilo. e tendo a estrutura cis, trans, cis.

Numa forma de realização, a invenção proporciona complexos sintéticos de fórmula geral I. A invenção proporciona adicionalmente um processo para a preparação de complexos de fórmula I, compreendendo a reacção de um complexo de fórmula II, O2CR3

II em que R^ até R^ são como definidos acima, e é um halogéneo ou pseudo-halogéneo, com um reagente incorporando o grupo -OR^ em que R^ é como definido acima, 11a presença de ume base.

Os complexos de fórmula II são conhecidos e podem ser preparados tal como descrito no EP-A-0328274. 2 Γ Ο processo pode ser realizado num solvente tal como água ou solventes orgânicos polares tais como acetonitrilo, dimetilformamida ou dimetilacetamida, ou suas misturas e a uma temperatura na gama desde cerca da temperatura ambiente até cerca de 70°C, dependendo da solubilidade dos reagentes. Se necessário, pode utilizar-se uma atmosfera inerte.

Os complexos de fórmula I possuem actividade em ensaios correntes in vitro e em certos ensaios in vivo que indicam a sua adequação para o tratamento do cancro.

Os complexos da invenção podem ser utilizados, de acordo com a invenção, como um componente activo de uma composição farmacêutica compreendendo um complexo de fórmula I, em mistura com um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável. A invenção também inclui a utilização de complexos de fórmula I, para a preparação de um medicamento para o tratamento do cancro.

Os complexos activos podem ser administrados na forma de composições farmacêuticas formuladas de acordo com princípios bem conhecidos e incorporando o complexo, preferencialmente na forma de dosagem unitária, em combinação com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável. Essas composições podem estar na forma de soluções ou suspensões para injecção, ou ser ima cápsula, comprimido, drageia, ou outra composição sólida ou como uma solução ou suspensão para administração oral, ou formuladas em pessários ou supositórios, ou uma forma de libertação controlada de qualquer das formulações acima referidas. Os diluentes, veículos, excipientes e outros componentes adequados são conhecidos. Também pode ser desejável formular uma composição para administração tópica tal como uma pomada ou um creme, ou para administração como um penso transdérmico.

As composições farmacêuticas de acordo com a invenção podem conter dosagens determinadas de acordo com métodos 3 t Γ farmacológicos conhecidos, adequadamente para proporcionar compostos activos na gama de dosagem em seres humanos desde 0,1 até 100 mg/kg de peso corporal por dia, numa dose unitária única ou em diversas doses unitárias mais pequenas. As gamas de dosagem preferidas são de 1 até 30 mg/kg de peso corporal por dia.

Os complexos da invenção podem ser administrados sós ou em combinação com outro agente quimioterapêutico, tal como cisplatina, como um tratamento único ou como regime de tratamento ou como parte de terapêutica combinada com outros fármacos para superar ou diminuir efeitos secundários ou para aumentar a biodisponibilidade, ou em combinação com outras terapêuticas tais como tratamento com radição. A invenção será agora descrita apenas a título exemplificativo. EXEMPLO 1 c,t,C-[PtCl(OMe)(O2CC3H7)2NH3(C-C6H11NH2)]

Caracterização:

IV RMN % Pt-OCH3 δ 2,92

Difracção por raios X (cristal único)

Análise Elementar C H N Cl Teórica 32,63 6,03 5,08 6,44 Encontrada 32,69 5,82 4,88 6,64 Síntese:

Preparou-se uma solução de metóxido de sódio em metanol (0,1 M) . A esta solução (36 mL, 3,6 mmol) adicionou-se c,t,c-[PtCl2(O2CC3H7)2NH3(C-C6H11NH2)1 (2 9- 3,6 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 dias. O precipitado de cloreto de sódio foi removido por filtração e o filtrado foi evaporado até à secura a pressão reduzida. O resíduo foi 4 retomado em etanol absoluto, filtrado e reevaporado mais duas vezes. 0 óleo residual cristalizou quando em repouso. 0 sólido foi recolhido por filtração, lavado com um pouco de etanol, depois com éter dietílico e seco ao ar. 0 produto foi finalmente seco sob vácuo.

Rendimento: 0,5 g (25%) 0 complexo também foi preparado por reacção do material de partida complexo de platina com CS2CO3 em metanol, isto ilustra o princípio de que a escolha da base não é crítica para a formulação do produto uma vez que o nucleófilo que entra é normalmente fornecido pelo solvente. No caso de solventes fracamente coordenantes tais como dimetilacetamida a base (e.g. 0H“) pode então actuar também como o nucleófilo na formação do produto. EXEMPLO 2 C, t, c-[Pt (OH) 2 (OAC) 2NH3 (C-C6H11NH2) ]

Caracterização:

IV

HPLC

Análise Elementar C H N Teórica 25,91 5,22 6, 05 Encontrada 25,78 5,20 5, 98 Síntese: A uma solução c,t,c-[PtCl2(OAC2)2NH3(C-C6H11NH2)] (1,31 g, 2,62 mmol) em dimetilacetamida (10 mL) adicionou-se hidróxido de sódio aquoso (1,0 M, 5,38 mL, 5,38 mmol). Algum do complexo de partida precipitou da solução ao misturar-se. A mistura foi agitada e aquecida a 60°C durante Lrês horas. A mistura foi deixada arrefecer e diluída com água (ca. de 50 mL) . 0 precipitado amarelo pálido foi recolhido por filtração e lavado com água. 0 produto foi seco sob vácuo.

Rendimento: 0,42 g (35%) 5

EXEMPLO 3 c,t,c-[PtCl(OH)(O2CC5H11)2(Í-C3H7NH2)21

Caracterização:

IV

HPLC

Análise Elementar C H N Cl Teórica 36,27 6,94 4,70 5,96 Encontrada 36,47 7,18 4,73 5,59 Síntese:

Agitou-se o complexo c,t,c-[PtCl2(O2CC5H11)2(Í-C3H7NH2)2\ (0,5 g, 0,81 mmol) numa mistura 50:50% em volume de acetonitrilo e água (ca. de 100 mL) para dar uma solução amarela pálida, adicionou-se solução de hidróxido de potássio (1,0 M, 0,84 mL, 0,84 mmol). Após agitação durante 30 minutos à temperatura ambiente a solução foi filtrada e o produto sólido lavado com água. O produto foi seco sob vácuo.

Rendimento: 0,27 g (57%) EXEMPLO 4 C,t,C-[PtCl(OH)(OAc)2(Í-C3H7NH2)2l

Caracterização: TV

HPLC

Análise Elementar C H N Cl Teórica 24,82 5,21 5,79 7,34 Encontrada 25,11 4,88 5,65 7,46 Síntese:

Agitou-se o complexo c, L, c- [PtCl2 (OAc) 2 (Í-C3II7NH2) 2 ] (0,5 g, 1,0 mmol) numa mistura 50:50% em volume de acetonitrilo e água (ca. de 20 mL) . Adicionou-se solução de hidróxido de potássio (1,0 M, 1,3 mL, 1,3 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente. Após agitação durante 3 horas a solução 6 Γ u, t foi evaporada a pressão reduzida até o produto começar a precipitar. A solução foi então deixada em repouso durante ca. de 1 hora para permitir que o produto recristalizasse. A mistura foi filtrada e o produto lavado com um pouco de água e seco sob vácuo.

Rendimento: 0,19 g (39%) EXEMPLO 5 c, t, c-[PtCl (OH) 2 (OAc) 2 (Í-C3H7NH2) 2]

Carac teri zação:

Análise Elementar C H N Teórica 25,81 5,63 6, 02 Encontrada 25,72 5,63 6, 04 Síntese: A uma solução de pentahidrato de hidróxido de tetrametilamónio (0,476 g, 2,63 mmol) em acetonitrilo (4 mL) adicionou-se c, t,c-[PtCl2(OAc)2(Í-C3H7NH2)2] (0,66 g, 1,21 mmol). A mistura foi agitada durante 20 minutos. Os materiais de partida dissolveram-se para dar uma solução cor de laranja da qual precipitou vim sólido amarelo pálido. O sólido foi recolhido por filtração e lavado com acetonitrilo (60 mL) e depois com éter dietílico. O produto foi seco sob vácuo.

Rendimento: 0,54 g (89%)

Este produto também foi preparado por tratamento de uma solução de c, t, c- [PtCl2(OAc)2(i-C3H7NH2)2] em metanol/água com um excesso de resina de permuta iónica AG 1-X8 na forma de hidróxido. Após agitação da mistura de um dia para o outro a resina foi removida por filtração. O filtrado foi evaporado até à secura a pressão reduzida e o resíduo tratado com metanol/éter dietílico. O produto solidificou e foi recolhido por filtração e seco sob vácuo. 7

EXEMPLO 6 c, t,c-[PtCl(OH) (OAc)2NH3 (c-C6HnNH2> 1

Caracterização:

IV

HPLC

Análise Elementar C H N Cl Teórica 24,92 4,81 5,82 7,37 Exemplo 6 H2O 24,02 5,05 5,61 7,11 Encontrada 24,13 5,00 5,52 7,35 Síntese:

Dissolveu-se complexo c, t, c-[PtCl2 (OAc) 2NH3 (c-C6HnNH2) ] (1,0 g, 2 mmol) numa mistura 75:25% em volume de acetonitrilo e água (ca. de 150 mL) . Adicionou-se solução de hidróxido de potássio (1 M, 3 mL, 3 mmol) e a solução foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. A solução foi evaporada a pressão reduzida até o produto começar a precipitar. A solução foi então deixada em repouso durante 15 minutos para completar a cristalização. 0 produto foi recolhido por filtração e lavado com água. 0 produto foi seco sob vácuo.

Rendimento: 0,32 g (33%) EXEMPLO 7 c,t,c-[Pt(OH)(OMe)(OAc)2(Í-C3H7NH2)21

Caracterização: IV RMN 1H Pt-0CH3 δ Análise Elementar C H N Teórica 27,56 5,89 5,84 Encontrada 28,16 6,00 5,76 Síntese:

Suspendeu-se o complexo c,t,c-[PtCl2(OAc)2(Í-C3H7NH2)2l (0,5 g, 1 mmol) em metanol seco e adicionou-se gota a gota 8 t t metóxido de sódio em metanol (solução a 25%, 0,43 g, 2 mmol) . Todos os sólidos se dissolveram e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas sob azoto. 0 solvente foi removido por evaporação a pressão reduzida e o resíduo foi retomado em diclorometano. A mistura foi filtrada para remover cloreto de sódio e a adição de éter dietílico ao filtrado deu um sólido amarelo. Este sólido foi recristalizado de metanol/acetato de etilo. (No decurso da reacção de síntese com humidade atmosférica conduz à conversão do complexo di-metoxo no produto mono-metoxo-mono-hidroxo).

Rendimento: 0,28 g (60%) O ensaio biológico in vitro foi realizado utilizando linhas celulares derivadas de carcinomas do ovário humanos e mantidas no Institute of Câncer Research, Sutton, Inglaterra (ver C. A. Hills e colaboradores, Br. J. Câncer 59, 527-534 (1989)). Células em monocamadas foram tripsinizadas e cultivadas em placas de microtitulação com 96 poços a uma densidade de 1 x 10^ células/poço em 200 μΒ de meio de cultura. As células foram incubadas de um dia para o outro e os compostos de teste foram adicionados aos poços em triplicado a várias concentrações durante um total de 48 a 96 horas. Para análise de toxicidade após exposição ao fármaco, as células foram fixadas com ácido tricloroacético e coradas para determinação do teor de proteína celular por incubação durante 30 minutos com 0,4% (p/v) de sulfo-rodamina B (SRB) dissolvida em ácido acético a 1%. 0 corante não ligado foi removido por lavagens com ácido acético a 1%, e o corante ligado foi extraído com tampão Tris 10 mM. A quantidade de corante na solução foi quantificada por absorvância a 564 nm. A Tabela 1 apresenta os resultados da IC50 em μΜ. 9

f U

TABELA

w *rl Φ >

VH c o ft ω

•H T3

O

!<C β cn o T3 (ti

-P I—l β to Q) P g 10

Os compostos da invenção foram então testados in vivo em murganhos com tumores Adj/PC6. 0 ensaio com Adj/PC6 foi realizado tal como descrito por P. M. Goddard et al. apresentado no Sixth NCI-EORTC Symposium on New Drugs in Câncer Therapy 1989, que é um desenvolvimento do método de base descrito por T. A. Connors et al . , Chem. Biol. Interact. 5, 415 (1972). Os animais foram sacrificados quanto moribundos. Os compostos foram administrados parentericamente (ip) ou oralmente (po), ou no caso do composto do Exemplo 2, iv a doses de 2,5, 5, 10 e 20 mg/kg (4 animais por grupo de dosagem).

No ensaio, determinou-se os valores de LD50 e ED90 em mg/kg de peso corporal pelo modo convencional. O índice terapêutico (IT) foi calculado como a razão entre LD50 e ED90, e os resultados estão apresentados a seguir. TABELA 2

Composto i.p. _P-Q-_ i. V. LD50 ED90 IT LD50 ED90 IT LD50 ED90 IT Exemplo 1 17,5 2,6 6,7 Exemplo 2 17,5 4,2 4,2 670 42 16 14 <2,5 >5,6

Os resultados dos ensaios in vitro e in vivo indicam que os complexos da invenção possuem actividade útil contra células cancerosas. O índice terapêutico superior para o produto do Exemplo 2 quando administrado por via oral em comparação com a administração parentérica indica potencial para administração oral.

Lisboa, 11 de Setembro de 2001

O AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL

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Claims

REIVINDICAÇÕES Corrplexos de Pt (IV) de fórmula geral I,

em que X é um átomo de halogéneo, ou um pseudo-halogéneo, R1 e R2 são hidrogénio, alquilo ou ciclo-alquilo em Ci até Cç com cadeia linear ou ramificada, arilo ou R^NH2 é um doador de azoto heterocíclico, e R^- e R2 podem ser iguais ou diferentes um do outro, R3 e R4 são hidrogénio, alquilo ou ciclo-alquilo em Ci até C5 com cadeia linear ou ramificada ou arilo, e R3 e R4 podem ser iguais ou diferentes um do outro, e r5 é hidrogénio, metilo ou etilo, e tendo a estrutura cis, trans, cis. Complexos de acordo com a reivinvidação 1, em que X é cloro ou acetato ou hidroxilo e um de R3· e R2 é hidrogénio. Complexos de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que R3 e R4 são metilo. Complexo de acordo com a reivindicação 1 que é c, t, c-[PtCl(OMe)(O2CC3H7)2NH3(C-C6H11NH2)] Complexo de acordo com a reivindicação 1 que é c, t,c-[Pt(OH)2(OAc)2NH3(C-C6H11NH2)] Complexo de acordo com a reivindicação 1 que é c,t,c-[PtCl(OH)(O2CC5H11)2(Í-C3H7NH2)2] Complexo de acordo com a reivindicação 1 que é c,t,c-[PtCl(OH)(OAc)2(Í-C3H7NH2)2l Complexo de acordo com a reivindicação 1 que é c,t,c-[PtCl(OH)(OAc)2NH3(C-C6H11NH2)] Complexo de acordo com a reivindicação 1 que é c, fc,c-[Pt(OH)(OMe)(OAc)2(Í-C3H7NH2)2l Processo para a preparação de um complexo de acordo com a reivindicação 1, compreendendo a reacção de um complexo de fórmula II,

em que R^· até são como definidos na reivindicação 1, e χΐ é um halogéneo ou pseudo-halogéneo, com um reagente incorporando o grupo -OR^ em que R5 é como definido na reivindicação 1, na presença de uma base. Composição farmacêutica para tratamento de células cancerosas, compreendendo como componente activo um complexo de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 9, 2 em mistura com um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável. Lisboa, 11 de Setembro de 2001 O AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL

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