RS20050462A - Supstituisani pirolo-pirazolo derivati kao inhibitori kinaze - Google Patents

Abstract

Otkrivena su jedinjenja predstavljena formulom (Ia) ili (Ib) gde su R i R1 kao što je definisano u opisu, i njihove farmaceutski prihvatljive soli; pomenuta jedinjenja su korisna u lečenju poremećaja proliferacije ciklusa ćelije, na primer, kancera, koji je povezan sa izmenjenim ćelijskim ciklusom zavisnim od aktivnosti kinaze.

Description

SUPSTITUISANI PIROLO-PIRAZOL DERIVATI KAO INHIBITORI

KINAZE

OBLAST TEHNIKE

Oblast pronalaska

Ovaj pronalazak se odnosi na pirolo-pirazolo derivate, na postupke za njihovo dobijanje, na farmaceutske preparate koji ih sadrže, i na njihovu upotrebu kao terapeutskih agenasa, naročito u lečenje kancera i poremećaja proliferacije ćelija.

Stanje tehnike

Više citotoksičnih lekova kao što su, na primer, fluorouracil (5-FU),

doksorubicin i kamptotecini, oštećuju DNA ili utiču na celularne metaboličke puteve i stoga izazivaju, u mnogim slučajevima, indirektno blokiranje ćelijskog ciklusa. Prema tome, stvaranjem ireverzibilnog oštećenja kako normalnih tako i ćelija tumora, ovi agensi izazivaju značajnu toksičnost i neželjene efekte.

U vezi sa tim, poželjna su jedinjenja koja imaju sposobnost da deluju kao

visoko specifični anti-tumorni agensi tako što selektivno dovode do aresta ćelija temora i apoptoze, a imaju komparativnu efikasnost ali smanjenu toksičnost nego lekovi koji su sada dostupni.

Dobro je poznato daje progresija kroz ćelijski ciklus regulisana serijom

kontrolnih tačaka, koje se inače označavaju kao restrikcione tačke, a koje su regulisane porodicom enzima poznatim kao kinaze koje zavise od ciklina (Cdk).

Zauzvrat, sami Cdk su regulisani na više nivoa, na primer, vezivanjem za ci kline.

Koordinisana aktivacija i inaktivacija raznih Cdk/ciklin kompleksa je

neophodna za normalnu progresiju kroz ćelijski ciklus. Obe kritičke tranzicije Gl-S i G2-M su kontrolisane aktivacijom različitih Cdk/ciklin aktivnosti. Smatra se da u Gl, kako Cdk4/ciklin D tako i Cdk2/ciklin E posreduju početak S -faze. Progresija kroz S

- fazu zahteva aktivnost Cdk2/ciklin A dok se aktivacija Cdc2/ciklin A (Cdkl) i Cdc2/ciklin B zahteva za početak mitoze. Za opštu referencu za cikline i kinaze koje

zavise od ciklina vidi, na primer, Kevin R. Webster et al, u Exp. Opin. Invest. Drugs, 1998, Vol 7(6), 865-887. Kontrolne tačke su defektne u ćelijama tumora usled, delimično, deregulacije aktivnosti cdk. Na primer, izmenjena ekspresija ciklina E i cdk je primećena u ćelijama tumora, a pokazano je daje izbacivanje cdk inhibitora p27 KIP gena kod miševa uzrok češće pojave kancera.

Povećani dokazni materijal podržava ideju da su cdk enzimi koji ograničavaju brzinu progresije u ćelijskom ciklusu i, kao takvi, predstavljaju molekularnu metu za terapeutsku intervenciju. Posebno, direktna inhibicija aktivnosti cdk/ciklin kinaze treba da bude od pomoći u restrikciji neregularne proliferacije ćelija tumora.

OPIS PRONALASKA

Jedan predmet pronalaska je da obezbedi jedinjenja koja su korisna u lečenju poremećaja proliferacije ćelija koji su izazvani i/ili povezani sa izmenjenim ciklusom ćelije koji zavisi od aktivnosti kinaze.Sledeći predmet je da se obezbede jedinjenja koja imaju aktivnost inhibicije cdk/ciklin kinaze.

Pronalazači su sada otkrili da neka jedinjenja pirazola imaju osobinu aktivnosti inhibicije cdk/ciklin kinaze i sa su stoga korisna u terapiji kao antitumorni agensi i nemaju, što se tiče toksičnosti i nuspojava, gore pomenute nepogodnosti koje su povezane sa antitumornim lekovima koji se danas dostupni.

Specifičnije, derivati pirazola ovog pronalaska su korisni u lečenju različitih kancera, uključujući, ali ne ograničavajući se na njih, karcinome kao što su bešike, prsa, debelog creva, bubrega, jetre, pluća, uključujući kancer malih ćelija pluća, jednjaka, žučnog mehura, jajnika, pankreasa, grlića materice, tiroide, prostate i kože, uključujući karcinome skvamoznih ćelija, hematopoetski tumori limfoidnog porekla uključujući leukemiju, akutnu limfocitičnu leukemiju, akutnu limfoblastičnu leukemiju, limfomu B-ćelija, limfomu T-ćelija, Hodgkin-ovu limfomu, ne Hodgkin-ovu, limfomu kosmatih ćelija i Burkett-ovu limfomu; hematopoetski tumori mijeolidnog porekla, uključujući akutnu i hroničnu mielogenu leukemiju, mielodisplastični sindrom i promielocitičnu leukemiju; tumore mezenhimalnog porekla, uključujući fibrosarkom i rabdomiosarkom; tumore centralnog i periferalnog nervnog sistema, uključujući astrocitom neoblastom, gliom i švanom, i druge tumore, uključujući melanom, seminom, teratokarcinom, i osteosarkom, kseroderm pigmentozum, keratoksantom, tiroidni folikularni kancer i Kaprosi sarkom.

Zbog ključne uloge cdk u regulaciji celularne proliferacije, ovi derivati pirazola su takođe korisni u lečenju različitih poremećaja proliferacije ćelija kao što su, na primer, benigna hiperplazija prostate, familialna adenomatoza polipoza, neurofibromatoza, psorijaza, proliferacija vaskularnih glatkih ćelija povezana sa aterosklerozom, pulmonarna fibroza, artritis, glomerulonefritis i post-hirurška stenoza i restenoza.

Jedinjenja pronalaska mogu biti korisna u lečenju Alzheimer-ove bolesti, kao stoje sugerisano činjenicom daje cdk uključun u fosforilaciju tau proteina (J. Biochem. 117, 741-749, 1995).

Jedinjenja ovog pronalaska, kao modulatori apoptoze, mogu takođe biti korisna u lečenju kancera, viralnih infekcija, prevenciji razvoja AIDS-a kod osoba zaraženih HlV-om, autoimunih oboljenja i neurodegerativnih poremećaja.

Jedinjenja ovog pronalaska mogu biti korisna u inhibiiciji angiogeneze tumora i metastaza, kao i u lečenju odbacivanja transpalantiranih organa i oboljenja domaćin versus graft..

Jedinjenja ovog pronalaska mogu takođe da deluju kao inhibitori drugih protein kinaza, na primer, protein kinaze C u različitim izoformama, Met, PAK-4, PAK-5, ZC-1, STLK-2. DDR-2, Aurora 1, Aurora -2, Bub-1, PLK, Chkl, Chk2, HER2, rafl, MEKI, MAPK, EGF-R, PDGF-R, FGF-R, IGF-R, PI3K, "weel" kinaze, Src, Abl, Akt, MAPK, ILK, MK-2, IKK-2, Cdc7, Nek, i stoga efektivni u lečenju oboljenja koja su povezana sa drugim protein kinazama..

Jedinjenja pronalaska su takođe korisna u lečenju i prevenciji alopecija koje su indukovane radioterapijom ili hemoterapijom.

Prema tome, ovaj pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje poremećaja proliferacije ćelija koji su izazvani i/ili povezani sa izmenjenom aktivnosti kinaze koja zavisi od ciklusa ćelije, administracijom sisarima kojima je takvo lečenje potrebno efektivne količine derivata pirazola koji su predstavljeni formulama (Ia) i (lb).

gde

R je grupa -COR<a>, -CONHR<a>ili CONR<a>R<b>gde su R<a>i R<b>, svaki nezavisno, vodonik ili po izboru supstituisana grupa koja je izabrana od pravog ili razgranatog Cj-C6alkila, C3-C6cikloalkila, arila, arilalkila, heterociklila ili heterocikloalkila ili; zajedno sa atomom azota za koji su vezani, R<a>i R<b>mogu da grade po izboru supstituisani 5 ili 6 člani heterocikl koji po izboru sadrži jedan dodatni hetero atom ili heteroatomsku grupu izabranu id N, NH, 0 ili S;

Rije izabran iz grupe koja se sastoji od:

a) pravog ili razgranatog C3-C4alkila; b) cikloalila, cikloalkil-alkila ili alkil-ciklalkila gde cikloalikil grupa sadrži bilo koju C3-C6cikloalikl grupu i gde alkil grupa sadrži bilo

koju pravu ili razgranam C1-C4alkil grupu.

c) 3-metiltienil-2-iI; 2-tienil; fenil; 2,6-difluorofenil; 4-(aminosulfonil)fenil; 4-(dimetilaminometil)fenil; 4-(4-metilpiperazinil)metil-fenil;

d) grupe formule (Ha) ili (Ilb):

gde, u formuli (Ha), krug predstavlja 5 do 7 člani heterociklični prsten gde X, direktno

vezan za ostatak molekula, predstavlja atom ugljenika ili azota; Y je atom ugljenika, azota, kiseonika ili sumpora ili je NH grupa, uz uslov da najmanje jedan od X i Y nije atom ugljenika; Rc je nezavisno jedan od drugog i u bilo kom od slobodnih položaja heterocikličnog prstena formule (Ha), atom halogena ili hidroksi grupa ili je po izboru supstituisana grupa izabrana od pravog ili razgranatog Ci-Cćalkila, C3-C6cikloalkila, arila, arilalkila, heterociklila, heterocikloalkila, amino, aminokarbonila, karboksi, okso (=0), alkoskikarbonila, alkilkarbonila ili arilkarbonila; i nje 0 ili ceo broj od 1 do 4;

e) grupe formule (IIc) ili (Ud):

gde R<d>, R|<d>i Rc predstavljaju isti ili različiti i nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili pravi ili razgranati C-i-C-6 alkil koji je po izboru supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih od hidroksi (-OH), aminokarbonil (-CONH2) ili metilaminokarbonil (-CONHCH3): uz uslov da u formuli (Ia), kad je R) grupa formule (IIc) ijedan od R<d>i R'd je atom vodonika dok je drugi od R<d>i R'<d>etil ili n-butil, onda R nije -COR<a>gde je Ra 3-bromofenil, benzil, 4-terc-butilfenil, 4-terc-butilfenilmetil, 4-fluorofenilmetil, ciklopropil ili 2-naftilmetil;

ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.

U prioritetnom pristupu postupka opisanog u prethodnom tekstu, poremećaj proliferacije ćelija je izabran iz grupe koja se sastoji od kancera, Alzheimer-ove bolesti, viralne infekcije, autoimunih oboljenja i neurodegenerativnih poremećaja.

Specifični tipovi kancera koji se mogu lečiti uključuju karcinom, karcinom skvamoznih ćelija, hematopoetski tumori mijeloidnog ili limfoidnog porekla, tumore mezenhimalnog porekla, tumore centralnog i perifernog nervnog sistema, melanom, seminom, teratokarcinom, osteosarkom, kseroderma pigmentozum, keratoksantom, tiroidni folikularni kancer, i Kaposi sarkom.

U drugom prioritetnom pristupu postupka gore opisanog, poremećaj proliferacije ćelija je izabran iz grupe koja se sastoji od benigne hiperplazije prostate, familialne adenomatoze polipoze, neuro-fibromatoze, psorijaze, proliferacije vaskularnih glatkih ćelija povezane sa aterosklerozom, pulmonarne fibroze, artritisa, glomerulonefritisa i post-hirurške stenoze i restenoze. Osim toga, metode pronalaska obezbeđuju inhibiciju angiogeneze tumora i metastaza kao i lečenje odbacivanja transpalantiranih organa i oboljenja domaćin versus graft. Metode pronalaska mogu takođe da obezbede inhibiciju ciklusa ćelija i/ili inhibiciju koja zavisi od cdk/ciklina.

Osim gore izloženog, predmet ovog pronalaska obezbeđuje lečenje i

prevenciju alopecija koje su indukovane radioterapijom ilihemoterapijom.

Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje derivate pirazola formula (Ia) i (lb)

gde

R je grupa -COR<a>, -CONHR<3>ili CONR<a>R<b>gde su R<a>i R<b>, svaki nezavisno, vodonik ili po izboru supstituisana grupa koja je izabrana od pravog ili razgranatog Ci-Cćalkila, C3-C6cikloalkila, arila, arilalkila, heterociklila ili heterocikloalkila ili; zajedno sa atomom azota za koji su vezani, R<a>i R<b>mogu da grade po izboru supstituisani 5 ili 6 člani heterocikl koji po izboru sadrži jedan dodatni hetero atom ili heteroatomsku grupu izabranu id N, NH, O ili S;

Rije izabran iz grupe koja se sastoji od:

a) pravog ili razgranatog C3-C4alkila; b) cikloalila, cikloalkil-alkila ili alkil-ciklalkila gde cikloalikil grupa sadrži bilo koju C3-C6cikloalikl grupu i gde alkil grupa sadrži bilo koju pravu ili

razgranati! C1-C4alkil grupu.

c) 3-metiltienil-2-il; 2-tienil; fenil; 2,6-difluorofenil; 4-(aminosulfonil)fenil; 4-(dimetilaminometil)fenil; 4-(4-metilpiperazinil)metil-fenil;

d) grupe formule (Ha) ili (Ilb):

gde, u formuli (Ha), krug predstavlja 5 do 7 člani heterociklični prsten gde X, direktno

vezan za ostatak molekula, predstavlja atom ugljenika ili azota; Y je atom ugljenika, azota, kiseonika ili sumpora ili je to NH grupa, uz uslov da bar jedan od X i Y nije atom ugljenika; R° je, nezavisno jedan od drugog i u bilo kom od slobodnih položaja heterocikličnog prstena formule (Ha), atom halogena ili hidroksi grupa ili je po izboru supstituisana grupa izabrana od pravog ili razgranatog Ci-C6alkila, C3-C6cikloalkila,

arila, arilalkila, heterociklila, heterocikloalkila, amino, aminokarbonila, karboksi, okso (=0), alkoskikarbonila, alkilkarbonila ili arilkarbonila; i nje 0 ili ceo broj od 1 do 4;

e) grupa formule (IIc) ili (Ud):

gde R , R' i Rc predstavljaju isti ili različiti i nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili pravi ili razgranati Ci-C-6 alkil koji je po izboru supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih od hidroksi (-0H), aminokarbonil (-CONH2) ili metilaminokarbonil (-CONHCH3): uz uslov da u formuli (Ia), kad jeR\grupa formule (IIc) ijedan od R<d>i R'd je atom vodonika dok je drugi od R<d>i R,<d>etil ili n-butil, onda R nije -COR<a>gde je R<a>3-bromofenil, benzil, 4-terc-butilfenil, 4-terc-butilfenilmetil, 4-fluorofenilmetil, ciklopropil ili 2-naftilmetil;

ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.

Ovaj pronalazak takođe obuhvata postupke za sintezu derivata pirazola predstavljenih formulama (Ia) i (lb) koja, osim ako to nije drugačije naznačeno, mogu biti pogodno grupisani i defmisani kao jedinjenja formule (I). Farmaceutski preparati koji sadrže derivate pirazola formule (I) su takođe uključeni u ovaj pronalazak.

Detaljni opis koji sledi omogućiće potpunije shvatanje i razumevanje pronalaska i mnogih njegovih pratećih prednosti.

DETALJNI OPIS PONALASKA

Više heterocikličnih jedinjenja je poznato u tehnici kao inihibitori protein kinaze. Kao primer, 2-karboksamido-pirazoli i 2-ureido-pirazol i njihovi derivati, su otkriveni kao inhibitori protein kinaze u međunarodnim patentnim prijavama W0 01/12189, WO 01/12188, WO 02/48114 i WO 02/70515, svi na ime ovih prijavilaca.

Kondenzovana diciklična jedinjenja koja sadrže pirazol grupe i imaju aktivnost inhibicije kinaze su takođe otkrivena u WO 00/69846 i WO 02/12242 kao i u WO 03/028720 (PCT/EPO02/10534 koji zahteva prvenstvo u odnosu na SAD patentnu prijavu br. 09/962162 od 26 septembra 2001) i prijava koja je u toku PCT/EP04862 (koji zahteva prvenstvo u odnosu na SAD patentnu prijavu 60/381092 od 17 maja 2002), koji su svi na ime prijavilaca.

Jedinjenja koja su predmet ovog pronalask spadaju u okvir opšte formule ranije pomenutog WO 02/12242, koji je ovde uključen kao referenca, ali nisu tamo specifično naznačena.

Osim ako nije drugačije naznačeno, kad se poziva na jedinjenja formule (I) per se, kao i na bilo koje njihove farmaceutske preparate ili na bilo koje terapeutsko lečenje koje ih sadrži, ovaj pronalazak uključuje sve hidrate, solvate, komplekse, metabolite i prolekove jedinjenja pronalaska. Prolekovi su bilo koja kovalentno vezana jedinjenja koja oslobađaju aktivni roditeljski lek prema formuli (I) in vivo.

Metabolit jedinjenja formule (I) je bilo koje jedinjenje u koje se ovo isto jedinjenje formule (I) pretvara, in vivo, na primer, posle administracije sisaru kome je to potrebno.

Tipično, ali ne predstavljajući primer koji ograničava, posle administracije jedinjenja formule (I); taj isti derivat može biti pretvoren u razna jedinjenja, na primer, u više rastvorljive derivate kao što su hidroksilirani derivati, koji će biti lako izlučeni. Dakle, u zavisnosti od metaboličkog puta koji nastaje, bilo koji od ovih hidroksiliranih derivata može biti smatran kao metabolit jedinjenja formule (I).

Ukoliko je ujedinjenju ovog pronalaska prisutan hiralni centar ili drugi oblik izomernog centra, svi oblici takvog izomera ili takvih izomera, uključujući enantiomere i diastereoizomere, spadaju u okvir ovog pronalaska. Jedinjenja koja sadrže hiralni centar mogu biti korišćena kao racemska smeša, enantiomeriski obogaćena smeša, ili racemska smeša može biti razdvojena korišćcnjem dobro poznatih tehnika, i pojedinačni enantiomer može biti sam korišćen. U slučajevima gde jedinjenja imaju nezasićenu ugljenik-ugljenik dvostruku vezu, i cis (Z) i trans (E) izomeri spadaju u okvir ovog pronalaska. U slučajevima u kojima jedinjenja mogu da postoje u tautomernim oblicima, kao što su keto-enol tautomeri, svaki tautomerni oblik se smatra uključenim u ovaj pronalazak, bilo da postoji u ravnoteži ili predominantno u jednom obliku.

U ovom opisu, sem ako nije drugačije naznačeno, izrazom pravi ili razgranati C|-Cćalkil, dakle obuhvatajući C1-C4alkil, pođrazumevamo bilo koju od grupa kao što su, na primer, metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, terc-butil, sec-butil, n-pentil, n-heksil i slične.

Izrazom C3-C6cikloalkil označavamo, osim ako nije drugačije naznačeno, cikloalifatični prsten kao stoje ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil i cikloheksil.

Izraz aril obuhvata karbociklične ili heterociklične ugljovodonike sa od 1 do 2 prstenaste grupe, bilo da su kondenzovane ili vezane jedna za drugu prostom vezom, gde je bar jedan od prstenova aromatični; ako je prisutan, bilo koji aromatični heterociklični ugljovodonik koga smo takođe označili kao heteroarilnu grupu, sadrži 5 do 6 člani prsten sa od 1 do 3 heteroatoma ili heteroatomskih grupa izabranih između N, NH, O ili S.

Primeri aril grupa prema ovom pronalasku su, na primer, fenil, difenil, a- ili (3-naftil, dihidronaftil, tienil, benzotienil, furil, benzofuranil, pirolil, imidazolil, pirazolil, tiazolil, izotiazolil, oksazolil, izoksazolil, piridil, pirazinil, pirimidinil, piridazinil, indolil, izoindolil, purinil, hinolil, izohinolil, dihidrohinolinil, hinoksalinil, indanil, indenil, triazolil i slične.

Osim ako nije drugačije naznačeno, izraz heterocikl ili heterociklil obuhvata 5 do 6 člane zasićene, delimično nezasićene ili potpuno nezasićne heterocikle sa od 1 do 3 hetero atoma ili heteroatomskih izabranih između N, NH, O ili S.

Osim potpuno nezasićenih heterocikla, koje smo ranije označili kao aromatične heterocikle i koji su obuhvaćeni izrazom aril, primeri zasićenih ili delimično nezasićenih heterocikla prema ovom pronalasku su, na primer, piran, pirolidin, pirolin, imidazolin, imidazolidin, pirazolidin, pirazolin, tiazolin, tiazolidin, dihidrofuran, tetrahidrofuran, 1,3-dioksolan, piperidin, piperazin, morfolin i slični.

Kad se pozivamo na jedinjenja pronalaska gde jeR\grupisan pod (b), samR\može da predstavlja datu cikloalkil grupu, na primer, ciklopropil; datu cikloalkil-alkil grupu, na primer, ciklopropilmetil; ili čak datu alkil-cikloalkil grupru, na primer rnetilciklopropil; svi oni imaju sledeće formule:

Kad se pozivamo na jedinjenja pronalaska gde je R]grupa formule (Ha), 5 do 7 člani heterociklični prstenje direktno vezan za ostatak molekula preko X atoma, kako sledi:

Primeri ovih 5- do 7 članih heterocikla obuhvataju bilo koji 5 do 6 člani heterociklični prsten koji je već pomenut i, dodatno 7-člani heterocikl kao što je , na primer, azepin, diazepin, oksazepin i slični.

Svaki Rc, ako je prisutan, nalazi se na bilo kome od slobodnih položaja heterocikličnog prstena formule (Ha) zamenom atoma vodonika.

Kad se pozivamo na jedinjenja pronalaska gde je Rigrupa formule (IIc) ili (Ud), mogu time biti identifikovani ureido i karbamatski derivati, koji imaju sledeće pod-formule:

Prema ovom pronalaski i ako nije drugačije naznačeno, bilo koja od ranije pomenutih R<a>, R<b>i R<c>grupa može biti po izboru supstituisana, na bilo kom od njihovih slobodnih položaja, sa jednom ili više grupa, na primer, 1 do 6 grupa, nezavisno izabranih od: halogen, nitro, okso grupa (- 0), cijano, alkil, polifluorinisani alkil, polifluorinisani alkoksi, alkenil, alkinil, hidroksialkil, aril, arilalkil, heterociklil, cikloalkil, hidroksi, alkoksi, ariloksi, heterocikliloksi, metilendioksi, alkilkarboniloksi, arilkarboniloksi, cikloalkeniloksi, alkilidenaminooksi, karboksi, alkoksikarbonil, ariloksikarbonil, cikloalkiloksikarbonil, amino, ureido, alkilamino, dialkilamino, arilamino, diarilamino, formilamino, alkilkarbonilalmino, arilkarbonilamino, heterociklilkarbonilamino, alkoksikarbonilamino, alkoksiimino, alkilsulfonilamino, arilsulfonilamino, formil, alkilkarbonil, arilkarbonil, cikloalkilkarbonil, heterociklilkarbonil, aminokarbonil, alkilaminokarbonil, dialkilaminokarbonil, alkilsulfonil, arilsulfonil, aminosulfonil, alkilaminosulfonil, dialkilamisnosulfonil, ariltio i alkiltio.

U vezi sa ovim, izrazom atom halogena označavamo atom fluora, hlora, broma ili joda.

Pod izrazom alkenil ili alkinil mi mislimo na bilo koju od ranije pomenutih pravih ili razgranatih C2-C6alkil grupa koje dalje nose dvostruku ili trostruku vezu. Neoganičavajući primeri alkenil ili alkinil grupa pronalaska su, na primer, vinil, alil, 1- propenil, izopropenil, 1-butenil, 2-butenil, 3-butenil, 2-pentenil, 1-heksenil, etinil, 2- propinil, 4-pentinil, i slične.

Izrazom polifluorinisani alkil ili alkoksi označavamo bilo koji od gore pomenutih C\- C(, alkil ili alkoksi grupa koje su supstituisane sa više od jednog atoma fluora, kao što su, na primer, trifluorometil, trifluoroetil, 1,1,1,3,3,3-heksafluoropropil, trifluorometoksi i slične.

Izrazom alkoksi, ariloksi, heterocikliloksi i njihovim derivatima mi označavamo bilo koji od gore pomenutih alkil, aril ili heterocikličnih grupa koje su vezane za ostatak molekula preko atopma kiseonika (-0-).

Iz svea gore navedenog, prosečnom stručnajku je jasno da bilo koja grupa čije je ime složeno ime kao što je, na primer, cikloalkilalkil, arilalkil, heterocikloalkil, alkoksi, alkiltio, ariloksi, arilalkoksi, alkilkarboniloksi, arilalkil, heterociklilalkil i slično, treba da bude smatrana kao konvencionalno konstruisana od delova iz kojih je izvedena. Kao primer, grupa kao stoje heterocikloalkoksi je alkoksi grupa, na primer, alkoksi u kome je alkil skupina dalje supstituisana sa heterocikličnom grupom,- i gde su alkil i heterociklil kao stoje gore definisano.

Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja formule (I) obuhvataju kisele adicione soli sa organskim ili neorganskim kiselinama, na primer, azotnom, hlorovodoničnom, bromovodoničnom, sumpornpm, prehlornom, fosfornom, sirćetnom, trufluorosirćetnom, propionskom, glikolnom, mlečnom, oksalnom, malonskom, hidroksi maleinskom, maleinskom, vinskom, limunskom, benzoevom, cimetnom, bademovom, metansulfonskom, izetionskom i salicilnom kiselinom. Prioritetno, kisele adicione soli jedinjenja pronalaska su izabrane između hlorovodične i mezilatne soli

Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja formule (I) takođe obuhvataju soli organskih i neorganskih baza, na primer, alkalnih ili zemnoalkalnih metala, naročito natrijum, kalijum, kalcijum ili magnezijum hidroksida, karbonate ili bikarbonate, aciklične ili ciklične amine, prioritetno metilamin, etilamin, dietilamin, trietilamin, piperidin i slično.

Prva klasa prioritetnih jedinjenja formula (Ia) ili (lb) je predstavljena derivatima u kojima je R grupa -COOR<3>, Ra je kao što je gore definisano i R<1>je terc-butil.

Druga klasa prioritetnih jedinjenja čije su formule (Ia) i (lb) je predstavljena derivatima u kojima je R grupa -CONHR<3>, Ra je kao što je gore definisano i Rije terc-butil.

Sledeća klasa prioritetnih jedinjenja čije su formule (Ia) i (lb) je predstavljena derivatima u kojima je R grupa -CONR<a>R<b>, R<a>i Rb su kao što je gore definisano i Rije terc-butil.

Sledeća klasa prioritetnih jedinjenja čije su formule (Ia) i (lb) je predstavljena derivatima u kojima je R kao stoje gore definisano i RI je grupa formule (Ha) izabrana od:

gde R<c>ima ranije opisano značenje.

Sledeća klasa prioritetnih jedinjenja čije su formule (Ia) i (lb) je predstavljena derivatima u kojima je R kao što je gore definisano i Rije grupa formule (Ha) izabrana od:

gde n i R<c>imaju ranije opisano značenje.

Naročito preferentna, unutar gore opisanih klasa, su jedinjenja formule (Ia) gde je R grupa -COR<a>, sa R<a>kao 4-fluorofenilom ili ciklobutilom, a R<1>je kao što je definisano u opštoj formuli.

Takođe su naročito prioritetna jedinjenja formule (Ia) gde je R kao što je definisano u opštoj formuli, a RI je grupa izabrana od terc-butil, l-metil-piperidil-4-il, 1- metil-piperazinil-4-il, 2-(R,S)-tetrahidrofuranil-2-il, 2-(R)-tetrahidrofuranil-2-il i.i 2- (S) -tetrahidrofuranil-2-il.

Za opštu referencu za bilo koje specifično jedinjenje formule (I) pronalaska, po izboru u obliku farmaceutski prihvatljive soli, vidi eksperimetnalni deo.

Kao stoje ranije naznačno, dalji predmet ovog pronalaska je predstavljen postupkom za dobijanje jedinjenja formule (I).

Prema tome, jedinjenja formule (I) i farmaceutski prihvatljive soli mogu biti dobijena postupkom koji sadrži:

a) reagovanje jedinjenja formule (lila) ili (Illb)

sa akrilonitrilom tako da se dobije odgovarajući derivat formule (IVa) ili (IVb) b) zaštita amino grupe jedinjenja formule (IVa) ili (IVb) tako da se dobije odgovarajući derivat formule (Va) ili (Vb)

gde je Q pogodna zaštitna grupa amina;

c). reagovanje jedinjenja čija je formula (Va) ili (Vb) sa pogodnim agensom za alkilovanje tako da se dobije odgovarajući estarski derivat formule (Via) ili

(VIb)

gde Alk predstvlj a pogodnu C1-C4alkil grupu; đ) reagovanje jedinjenja formula (Via) ili (VIb) sa natrijum hidridom (NaH)) tako da se dobije odgovarajući derivat formule (Vila) ili (Vllb) e) reagovanje jedinjenja formula (Vila) ili (Vllb) sa hidrazin hidratom tako da se dobije odgovarajući derivat formule (Vllla) ili (VHIb)

f) reagovanje jedinjenja formula (Vllla) ili (VHIb) sa hloroformatom tako da se dobije odgovarajući derivat formule (IXa) ili (IXb), svaki od njih u bilo

kom od dva regioizomerna oblika

i reagovanjem jedinjenja formula (IXa) i (IXb) prema bilo kome od alternativnih koraka (g.l), (g.2) ili (g.3)

g.l) sa jedinjenjem formule (X)

R<a>CO-Z (X)

gde je R<a>kao što je gore definisano i Z je atom halogena, tako da se dobije jedinjenje formule (XIa) ili (XIb)

gde je R grupa -CORa;

g.2) sa jedinjenjem formule (XII)

R<a>NCO (XII)

gde je R<a>kao što je gore definisano tako da se dobije jedinjenje formule (XIa) ili (XIb) gde je R grupa -CONHR<3>; ili

g.3) sa pogodnim aminom formule (XIII) u prisustvu trifosgena ili pogodnog hloroformata

HNR<a>R<b>(XIII)

gde su R<a>i R<h>kao što je gore definisano, tako da se dobije jedinjenje formule (XIa) ili (XIb) gde je R grupa -CONR<a>R<b>;

h) skidanje zaštite amino grupe jedinjenja formule (XIa) ili XIb) dobijenog prema bilo kome od koraka od (g.l) do (g.3), tako da se dobije odgovarajući derivat

formule (XIVa) ili (XIVb)

gde R ima ranije opisano značenje; i reagovanje jedinjenja formule (XIVa) ili (XIVb) prema bilo kome od alternativnih koraka (i.l), (i.2), (i.3) ili (i.4).

i.l) sa derivatom acil halida formule (XV)

gde je Rikao stoje izloženo u formuli (Ia) ili (lb) pod grupama (a), (b), (c), (Ha) sa X kao atomom ugljenika i (Ilb), i Z je atom halogena, tako da se dobije jedinjenje formule (XVIa) ili (XVIb) gde su R i Rikao stoje ranije definisano; i.2) sa 5 do 7 članim heterocikličnim jedinjenjem formule (XVII) ili pogodnim aminom formule (XVIII), u prisustvu trifosgena

gde X je NH i Y, R<c>, n, R<d>i R'<d>imaju ranije navedeno značenje, tako da se dobiju odgovarajuća jedinjenja formule (XVIa) ili (XVIb) gde je R kao što je gore definisano a R]je ili grupa formule (Ha) sa X kao atomom azota i R, Y, R<c>i n su kao stoje gore definisano, ili formula (IIc) gde su R<d>i R'<d>kao što je ranije definisano;

1.3) sa karboksilnom kiselinom formule (XIX) u prisustvu pogodnog agensa za kondenzovanje

Ri-COOH (XIX)

tako da se dobije jedinjenje formula (XVIa) ili (XVIb) gde je Rikao što je izloženo u formuli (Ia) ili (lb) pod grupama (a), (b), (c), ili je to grupa formule (Ha) sa X kao atomom ugljenika ili formule (Ilb), i R, Y, R<c>i n su kao što je gore definisano;

1.4) sa jedinjenjem formule (XX)

RrCOZ (XX)

gde Ri je grupa formule (Ud) a Z je atom hlora ili broma, tako da se dobije jedinjenje formule (XVIa) ili (XVIb) gde je R kao stoje gore definisano a Rije grupa formule (Ud); i

j) reagovanje jedinjenja formula (XVIa) ili (XVIb) dobijenim prema bilo kom od koraka od (i.l) do (i.4) u baznim uslovima, tako da se dobije odgovarajući derivat formule (Ia) ili (lb) gde su R i Ri kao stoje ranije definisano; i, po izboru,

k) njihovo pretvaranje u druga jedinjenja formule (Ia) ili (lb), i/ili u njihove farmaceutski prihvatljive soli.

Gore opisani proces ja analogni proces koji može biti izveden prema postupcima koji su dobro poznati u tehnici.

Iz svega gore navedenog, prosečnom stručnjaku je jasno da ako je jedinjenje formula (Ia) i (lb), dobijeno prema gore opisanom procesu, dobijeno kao smeša izomera, njihovo razdvajanje u pojedinačne izomere formule (Ia) ili (lb), izvedeno konvencionalnim tehnikama, spada u okvir pronalaska.

Na sličan način, konverzija odgovarajućih soli u njihova slobodna jedinjenja (Ia) ili (lb), izvedena dobro poznatim postupcima, spada u okvir pronalaska.

Prema stupnju (a) procesa, jedinjenje formule (lila) ili (Illb) je reagovalo sa akrilonitrilom u prisustvu pogodne baze, na primer natrij um hidroksida. Reakija se prioritetno izvodi u vodi na temperaturi u oblasti od oko-10°C do sobne tmperature.

Prema stupnju (b) procesa, amino grupaa jedinjenja formule (IVa) ili (IVb) je zaštićena konvencionalnim postupcima, na primer sa terc-butioksikarbonil anhidridom (B0C2O) i u prisustvu pogodnog rastvarača kao što je acetonitril ili dihlorometan, tako da se dobije odgovarajući derivat vormule (Va) ili (Vb) gde zaštitna grupa amina Q predstavlja terc-butoksikarbonil (boe)

Prema stupnju (c) procesa, karboksi grupa jedinjenja formule (Va) ili (Vb) je pretvorena u odgovarajući derivat alkil estra, na primer dejstvom u prisustvu pogodnog alkil halida, na primer metil jodida.

Reakcija je izvedena u prisustvu pogodnog rastvarača kao što je dimetilformamid i u baznim uslovima, na primer, korišćenjem natrijum ili kalijum bikarbonata.

Prema stupnju (d) procesa, jedinjenje formule (Via) ili (VIb) je pretvoreno u odgovarajući ciklični derivat formule (Vila) ili (Vllb) reakcijom sa natrijum hidridom. Reakcija je izvedena u prisustvu pogodnog rastvarača kao što je dioksan ili tetrahidrofuran na temperaturi refluksovanja.

Prema stupnju (e) procesa, jedinjenje formule (Vila) ili (Vllb) je reagovalo sa hidrazin hidratom, prioritetno sa viškom hidrazin monohidrata, na primer do 10 ekvivalenata, u prisustvu pogodnog rastvarača kao što su halogenizovani ugljovodonici, niži alkoholi ili njihove smeše. Reakcija je prioritetno izvedena u prisustvu etanola, didatkom hidrazina rastvoru jedinjenja formule (Vila) ili (Vllb) i uz mešanje tokom pogodnog vremena, na primer oko 48 sati, na temperaturi u oblasti od oko 20°C do oko 70°C. Prioritetno, ova reakcija je izvedena takođe u prisustvu glacijalne sirćetne kiseline.

Prema stupnju (f) procesa, jedinjenje formule (Vllla) ili (VHIb) je reagovalo sa etil hloroformatom tako da se dobije odgovarajući derivat formule (IXa) ili (IXb). Reakcija je izvedena u dobro poznatim operativnim uslovima, u prisustvu pogodne baze, na primer diizopropiletilamina, i pogodnog rastvarača kao što je tetrahidrofuran.

Jasno, etoksikarbonil grupa može biti vezana za bilo koji od atoma azota pirazola oba jedinjenja (Vllla) ili (VHIb) tako da se dobiju sledećo regioizomeri formule (LXa) ili (IXb).

U vezi sa tim, svaki par regioizomera formule (IXa) ili (IXb) može biti izdvojen na pogodan način dobro poznatim postupcima, na primer, u hromatogtafskim uslovima, i svaki tako izolovan regioizomer da se dalje tretira. Kao alternativa, smeša regioizomera može da se tretira kao takva u daljim koracima postupka, bez bilo kakvog razdvajanja.

U stvari, kako se etoksikarbonil grupa koja dovodi do dva različita regioizomera na kraju uklanja iz procesa, prosečnom stručnjaku je jasno da oba ova puta mogu biti izvedena da bi se dobila jedinjenja formule (Ia) ili (lb) ovog pronalaska.

Prioritetno, međutim, proces se izvodi prvo razdvajanjem i izolovanjem regioizomera formule (IXa) ili (IXb) iz njihove smeše, kao što je prikazano u radnim primerima, i zatim njihovim reagovanjem do željenih jedinjenja.

Prema koraku (g. 1) procesa, jedinjenje formule (IXa) ili (IXb) je reagovalo sa pogodnim derivatom formule (X) gde Z predstavla atom halogena, prioritetno hlora ili broma.

Tipično, jedinjenje formule (IXa) ili (IXb) je rastvoreno u pogodnom rastvaraču kao stoje dihlorometan, dimetilformamid, tetrahidrofuran, dioksan ili slično, i dodana je pogodna baza kao što je trietilamin, diizopropietilamin, natrijum karbonat i slično. Tada je smeši dodano jedinjenje formule (X) i smeša mešana tokom vremena od oko 2 do oko 15 sati, na temperaturi u oblasi od oko 20°C do oko 80°C.

Po izboru može biti dodan pogodni katalizator kao što je dimetilamino-piridin.

Prema koraku (g.2) procesa, jedinjenje formule (IXa) ili (IXb) je reagovalo sa izocijanatnim derivatom formule (XII), delujući suštinski isto kao što je navedeno u koraku (g.l) procesa, sem što baza možda neće biti potrebna.

Prema koraku (g.3) procesa, jedinjenje dormule (IXa) ili (IXb) je reagovalo sa aminom formule (XIII) u prisustvu trifozgena ili pogodnog hloroformata, na primer 4-nitrofenil hloroformata, tako da se dobije odgovarajući ureido derivat.Reakcija je izvedena u tetrahidrofuranu (THF) ili u pogodnom halogenovanom uglovodoniku, prioritetno dihlorometanu (DCM), i u prisustvu pogodnog amina kao što je diizopropiletilamin ili trietilamin na temperaturi od oko -70°C do sobne temperature.

Prema stupnju (h) procesa, zaštita amino grupe u formuli (IXa) ili (IXb) je uklonjena pod dobro poznatim uslovima, na primer u kiselim uslovima u prisustvu trifluorosirćetne ili hlorovodične kiseline.

Jedinjenje formule (XIa) ili (XIb) je zatim suspendovano u pogodnom rastvaraču kao što je dihlorometan ili dioksan, i tretirano sa koncentrovanim rastvorom izabrane kiseline. Alternativno, komercijalno dostupni rastvori gasovitog hlorovodonika rastvoreni u dioksanu (4 M HC1) mogu biti povoljno upotrebljeni. Smeša se tada meša tokom vremena od oko 2 sata do oko 15 sati na temperaturi u oblasti od oko 20°C do oko 40°C.

Prema bilo kom od koraka (i.l), (i.2), (i.3) ili (i.4) procesa, jedinjenje formule (XIVa) ili (XIVb) je dalje reagovalo sa pogodnim derivatom tako da se dobije odgovarajući karboksamido, ureido ili karbamat derivat formule (XVIa) ili (XVIb). Korak (i.l) je izveden sa acil halidom, prioritetno hloridom, formule (XV) u pogodnom rastvaraču kao stoje dihlorometan i u baznim uslovima, na primer u prisustvu pogodnog amina kao stoje diizopropiletilamin.

Reakcija dozvoljava da se dobiju karboksamido derivati formule (XVIa) ili (XVIb) gde je Rjkao što je definisano u formuli (I) pod grupama od (a) do (c), (Ha) saX kao atomom ugljenika i (Ilb); iz navedenog, prosečnom stručnjaku je jasno daje atom grupe RI koji je direktno vezan za karbonil grupu (XVIa) ili (XVIb), atom ugljenika.

Korak (i.2) je izveden sa heterocikličnim derivatom formule (XVII) ili aminom formule (XVIII) u prisustvu trifozgena, u suštini kao što je opisano u koraku (g.3) procesa.

U vezi sa tim, korak (i.2) dozvoljava da se dobiju ureido derivati formule (XVIa) ili (XVIb) gde je Rigrupa formule (Ha) sa X kao atomom azota ili formule (IIc) i gde su Y, R<c>, n, R<d>i R,<d>kao što je ranije definisano.

Na sličan način, kondenzacija koraka (i.3) je izvedena sa derivatom karboksilne kiseline formule (XIX), u prisustvu pogodnog agensa za kondenzovanje kao stoje, na primer, diicikloheksilkarbodiimid (DCC), l-etil-3-(3'-dimetilaminopropiljkarbodiimid) (EDC) ili O-benzotriazolil tetrametilizouronijum tetrafluoroborat (TBTU), i delujući prema dobro poznatim postupcima za dobijanje karboksiamido derivata.

Prema koraku (i.4) procesa, jedinjenje formule (XVIa) ili (XVIb) je reagovalo sa pogodnim derivatom formule (XX) gde je R]grupa formule (Ud) i R<L>kao što je dato u formuli (Ia) ili (lb), tako da se dobije odgovarajući karbamatni derivat formule (XVIa) ili (XVIb).

U vezi sa tim, jedinjenje formule (XIVa) ili (XIVb) je rastvoreno u pogodnom rastvaraču kao što je dihlorometan, dimetilformamid, tetrahidrofuran, dioksan ili slično, i u to je dodana pogodna baza kao što je trietilamin, diizopropietilamin, natrijum karbonat ili slično. Tada je dodano jedinjenje opšte formule (XX) i smeša mešana tokom vremena od oko 2 sata do oko 15 sari, na temperturi u oblasti od oko 20°C do oko 80°C. Prema prioritetnom pristupu, po izboru može bit korišćen pogodni katalizator kao što je dimetilamino piridin.

Prema koraku (j) procesa, jedinjenje formule (XBIa) ili (XVIb) koje je dobijeno u bilo kome od koraka (i.l) do (i.4) je reagovalo sa pogodnom bazom, na primer trietilaminom. i u prisustvu pogodnog rastvarača kao što je metanol ili etanol tako da se dobije željeno jedinjenje formule (Ia) ili (lb).

Najzad, što se liče stupnja (k) procesa, ova poslednja jedinjenja (Ia) ili (lb) mogu po izbboru da budu pretvorena u farmaceutski prihvatljive soli kao što je ranije navedeno i delujući prema konvencionalnim postupcima ili, alternativno, mogu biti pretvorena u adiciona jedinjenja formule (Ia) ili (lb).

Samo kao primer koji ne ograničava, jedinjenja formule (Ia) ili (lb) koja nose karboksiestar funkciju mogu biti pretvorena u razne derivate prema u tehnici dobro poznatim postupcima za pretvaranje karboksiestarske grupe u karboksamide, N-supstituisane karboksamide, N,N-disupstituisane karboksamide, karboksline kiseline, i slično.

Operativni uslovi su oni koji su dobro poznati u tehnici i mogu se sadržati, na primer, u konverziji karboksiestarske grupe u karboksamidnu grupu, reakciji sa amonijakom ili amonijum hidroksidom u prisustvu pogodnog rastvarača kao što je niži alkohol, dimetilformamid ili njihova smeša; prioritetno reakcija je izvedena sa amonijum hidroksidom u metanol/dimetilformamid smeši, na temperaturi u oblasti od oko 50°C do oko 100°C.

Analogni operativni uslovi se primenjuju na dobijanje N-supstituisanih ili N,N-disupstituisanih karboksamida gde je korišćen pogodni primarni ili sekundarni amin umesto amonijaka ili amonijum hidroksida.

Slično, karboksiestarska grupa može biti pretvorena u derivate karboksilne kiseline uslovima bazne ili kisele hidolize, dobro poznatim u tehnici.

Kao dodatni primer, jedinjenja formula (Ia) ili (lb) koja nose amino funkciju mogu lako biti petvorena u odgovarajuće karboksiamido ili ureido derivate.

Iz svega gore navedenog prosečnom stručnjaku je jasno da prema stupnju (k) procesa, bilo koje jedinjenje formule (Ia) ili (lb) koje nosi funkcionalnu grupu koja se dalje može derivatizovati u drugu funkcionalnu grupu, delujući prema postupcima koji su dobro poznati u tehnici i prema tome dovodi do drugih jedinjenja formule (Ia) ili (lb), smatra se da spada u okvir ovog pronalaska.

Prema bilo kojoj varijanti procesa dobijanja jedinjenja (I), početni materijali i svi drugi reaktanti su poznati ili se lako mogu dobiti poznatim postupcima.

Kao primer, dok su početni materijali formula (lila) i (Illb) komercijalno dostupni, jedinjenja formule (X), (XII), (XIII), (XV), (XVII), (XVIII), (XIX) i (XX) su poznata ili mogu llako biti dobijena poznatim postupcima.

Intermedijarna jedinjenja formule (Vila) i (Vllb) procesa

gde Q predstavlja zaštitnu grupu amina, na primer terc-butoksikarbonil (boe), su nova i, prema tome, predstavljaju delji predmet pronalaska..

Kao što je lako razumljivo, ako su jedinjenja formule (I) pripremljena procesom koji je opisan u ranijem tekstu dobijena kao smeša izomera, njihovo

razdvajanje u pojedinačne izomere formule (I), konvencionalnim tehnikama, je unutar okvira ovog pronalaska. Konvencione tehnike za razdvajanje racemata obuhvataju, na primer, odvojenu kristalizaciju derivata diastereoizomerne soli ili preparativnu hiralnu

HPLC.

Osim toga, jasno je iz gore navedenog da data jedinjenja formule (Ia) ili (lb) mogu biti dobijena bilo počevši od smeše regioizomera formule (IXa) ili (IXb) ili, alternativno, od svakog od ovih izomera pojedinačno.

Kod pripreme jedinjenja formule (I) prema bilo kojoj gore pomenutoj varijanti procesa, opcione funkcionalne grupe početnog materijala ili njihovih intermedijara, a koje mogu da dovedu do neželjenih sporednih reakcija, treba da budu ispravno zaštićene konvencionalnim tehnikama.. Slično, konverzija ovih poslednji u slobodna nezaštićena jedinjenja može biti izvedena na poznati način.

Osim toga, jedinjenja formule (I) pronalaska mogu takođe biti pripremljena tehnikama kombinatorne hernije koje su opšte poznate u tehnici, serijskim izvođenjem gore pomenutih reakcija između više intermedijara i delujući pod uslovima sinteze u čvrstom stanju (SPS).

Kao primer, jedinjenja formule (XIa) ili (XIb) koja su dobijena prema bilo kome od koraka (g.l), (g.2) ili (g.3) mogu da budu naneta na pogodnu polimernu smolu. Posebno, etoksikarbonilna grupa u formuli (XIa) ili (XIb) može biti uklonjena u baznim uslovima, na primer u prisustvu trietiamina ili diizopropilamina, i stvoreno jedinjenje vezano za gore pomenutu smolu, preko samog azota pirazola.

Intermedijar na nosaču tako dobijen može da reaguje prema stupnju (h) ili bilo kome od koraka (i.l), (i.2), (i.3) ili (i.4) procesa, tako da se dobije odgovarajuće jedinjenje formule (Ia) ili (lb) pronalaska koje je još uvek na polimernoj smoli. Dalje cepanje smole, na primer u baznim ili kiselim uslovima poznatim postupcima, dozvoljava da se dobiju željena jedinjenja formule (Ia) ili (lb).

Jasno je da se serijskim izvođenjem gore pomenutih reakcija, kao što je praćenjem gore izloženog kombinatornog pristupa, može dobiti i sakupiti više jedinjenja formule (Ia) ili (lb).

Prema tome, dalji predmet ovog pronalaska je biblioteka dva ili više jedinjenja formule (Ia)

gde

R je grupa -COR<a>, -CONHR<3>ili CONR<a>R<b>gde su R<a>i R<b>, svaki nezavisno, vodonik ili po izboru supstituisana grupa koja je izabrana od pravog ili razgranatog Ci-Cćalkila, CrCć cikloalkila, arila, arilalkila, heterocikla ili heterocikloalkila ili; zajedno sa atomo azota za kosi su vezani, Ra i Rb mogu da grade po izboru supstituisani 5 ili 6 člani heterocikl koji po izboru sadrži jedan dodatni hetero atom ili heteroatomsku grupu izabranu od N, NH, 0 ili S;

Rije izabran iz grupe koja se sastoji od:

a) pravog ili razgranatog C3-C4alkila; b) cikloalila, cikloalkil-alkila ili alkil-ciklalkila gde cikloalikil grupa sadrži bilo koju C3-C6cikloalikl grupu i gde alkil grupa sadrži bilo koju pravu ili

razgranatu C1-C4alkil grupu.

c) 3-metiltienil-2-il; 2-tienil; fenil; 2,6-difluorofenil; 4-(aminosulfonil)fenil; 4-(dimetilaminometil)fenil; 4-(4-metilpiperazinil)metil-fenil;

d) grupe formule (Ha) ili (Ilb):

gde, u formuli (Ila), krug predstavlja 5 do 7 člani heterociklični prsten gde X, direktno

vezan za ostatak molekula, predstavlja aton ugljenika ili azota; Y je atom ugljenika, azota, kiseonika ili sumpora ili je to NH grupa, uz uslov da najmanje jedan od X i Y nije atom ugljenika; Rc je nezavisno jedan od drugog i u bilo kom od slobodnih položaja heterocikličnog prstena formule (Ila), atom halogena ili hidroksi grupa ili je po izboru supstituisana grupa izabrana od pravog ili razgranatog Ci-C-6 alkila, C3-C6cikloalkila, arila, arilalkila, heterociklila, heterocikloalkila, amino, aminokarbonila, karboksi, okso (=0), alkoksikarbonila, alkilkarbonila ili arilkarbonila; i nje 0 ili ceo broj od 1 do 4;

e) grupa formule (IIc) ili (Ud):

gde R<d>, R'<d>i R'predstavljaju isti ili različiti i nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili pravi ili razgrnati Ci-C6 alkil koji je po izboru supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih od hidroksi (-0H), aminokarbonil (-CONH2) ili metilaminokarbonil (-CONHCH3): uz uslov da u formuli (Ia), kad je Rigrupa formule (IIc) i jedan od R<d>i R'<d>je atom vodonika dok je drugi od R<d>i R'<d>etil ili n-butil, onda R nije -COR<a>gde je R<a>3-bromofenil, benzil, 4-terc-butilfenil, 4-tercbutilfenilmetiI, 4-fluorofenilmetil, ciklopropil ili 2-naftilmetil;

ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.

Slično, dalji predmet ovog pronalaska je biblioteka dva ili više jedinjenja formule (lb)

gde

R je grupa -COR<a>, -CONHR<3>ili CONR<a>R<b>gde su R<a>i R<b>, svaki nezavisno, vodonik ili po izboru supstituisana grupa koja je izabrana od pravog ili razgranatog Ci-Cćalkila, C3-C6cikloalkila, arila, arilalkila, heterocikla ili heterocikloalkila ili; zajedno sa atomo azota za kosi su vezani, R<a>i R<b>mogu da grade po izboru supstituisani 5 ili 6 člani heterocikl koji po izboru sadrži jedan dodatni hetero atom ili heteroatomsku grupu izabranuld N, NH, O ili S;

Rije izabran iz grupe koja se sastoji od:

a) pravog ili razgranatog C3-C4alkila; b) cikloalkila, cikloalkil-alkila ili alkil-ciklalkila gde cikloalikil grupa sadrži bilo koju C3-C6cikloalikl grupu i gde alkil grupa sadrži bilo koju pravu ili

razgranatu C1-C4alkil grupu.

c) 3-mctiltienil-2-il; 2-tienil; fenil; 2,6-difluorofenil; 4-(aminosulfonil)fenil; 4-(dimetilaminometil)fenil; 4-(4-metilpiperazinil)metil-feml;

d) grupe formule (Ila) ili (Ilb):

gde, u formuli (Ila), krug predstavlja 5. do 7 člani heterociklični prsten gde X, direktno vezan za ostatak molekula, predstavlja aton ugljenika ili azota; Y je atom ugljenika, azota, kiseonika ili sumpora ili je to NH grupa, uz uslov da najmanje jedan od X i Y nije atom ugljenika; Rc je nezavisno jedan od drugog i u bilo kom od slobodnih položaja heterocikličnog prstena formule (Ila), atom halogena ili hidroksi grupa ili je po izboru supstituisana grupa izabrana od pravog ili razgranatog Ci-C-6 alkila, C3-C6cikloalkila, arila, arilalkila, heterociklila, heterocikloalkila, amino, aminokarbonila, karboksi, okso (=0), alkoksikarbonila, alkilkarbonila ili arilkarbonila; i nje 0 ili ceo broj od 1 do 4;

e) grupa formule (IIc) ili (Ud):

gde R<d>, R'<đ>i R'predstavljaju isti ili različiti i nezavisno jedan od drugog, atom

vodonika ili pravi ili razgrnati C|-C6 alkil koji je po izboru supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih od hidroksi (-0H), aminokarbonil (-CONH2) ili metilaminokarbonil (-CONHCH3):

ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.

Za dalju opštu referencu za gore opisane biblioteke jedinjenja formule (I) vidi eksperimentalni deo.

Iz svega gore navedenog, prosečnom stručnjaku je jasno da kad je biblioteka derivata pirolo-pitazol jedinjenja pripremljena, koja se sastoji od, na primer, nekoliko stotina ili čak nekoliko hiljada jedinjenje formule (Ia) ili (lb), ta bibliioteka može biti vrlo pogodno korišćena za skrining datih kinaza, kao što je ranije izneto.

Vidi, za opštu referencu za biblioteke jedinjenja i njihovo korišćenje za skrining bioloških aktivnosti, J. Med. Chem. 1999, 42, 2373-2382; i Biol. Med. Chem Lett. 10(2000), 223-226.

FARMAKOLOGIJA

Jedinjenja formule (I) su aktivna kao inhibitori proteim kinaze i prema tome, korisna, na primer, da ograniče neregularnu proliferaciju ćelija tumora.

U terapiji, mogu se koristiti u lečenju različitih vrsta tumora, kao što su oni ranije pomenuti, kao i u lečenju drugih poremećaja proliferacije ćelija kao što je psorijaza, proliferacija vaskularni glatkih ćelija povezana sa aterosklerozom i post-operaciona stenoza i restenoza i u lečenju Alzheimer-ove bolesti.

Inhibiciona aktivnost predpostavljenih Cdk/ciklin inhibitora i potencija izabranih jedinjenja je određena postupcima analize koja je zasnovana na korišćenju SPA tehnologije (Amersham Pharmacia Biotech).

Analiza se sastoji od transfera radioaktivnosti obeleženih fosfatnih skupina kinazom u biotinilisanom supstratu.. Dobijenom 33P- obeleženom biotinilisanom proizvodu je dozvoljeno da se veže za streptavidinom obložene SPA perle ( biotin kapacitet 130 pmola/mg) i emitovano svetio je mereno scintilacionim brojačem.

Analiza inhibicije Cdk/ Ciklin A aktivnosti

Reakcija kinaze: 4 uM domaćeg biotinilisanog histona Hl (Sigma # H-5505) supstrata, 10 uM ATP (0.1 microCi P33y-ATP), 4.2 ng Cdk2/Ciklm A kompleksa, inhibitor u krajnjoj zapremini od 30 ul pufera (TRIS HC1 10 mM pH 7.5, MgCl210 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml BSA) su dodani na dno svake od 96 U ćelija. Posle 10 min inkubacije na sobnoj temperaturi (r.t), reakcija je zaustavljena sa 100 jal PBS + 32 mM EDTA + 0.1% Triton X-100 + 500 uM ATP, koji sadrži 1 mg SPA perli. Tada je zapremina od 110 ul prebačena na Optiplate.

Posle 20 min inkubacije supstrata, dodano je 100 ul 5M CsCl da bi se omogućila statistička raspodela perli na vrh ćelije i ostavljeno da stoji 4 sata pre merenja radioaktivnosti u Top-Count instrumentu.

Određivanje IC50: inhibitori su testirani na različitim koncentracijama u opsegu od 0.0015 do 10 uM. Eksperimentalni podaci su analizirani kompjuterskim programom GraphPad Prizm koristeći četiri parametra logističke jedačine:

y = dno + (vrh-dno)/(l + 10<A>((logIC50-x)<*>nagib)

gde je x logaritam koncentracije inhibitora, y je odgovor; y počinje na dnu i ide do vrha sigmoidnim oblikom.

Izračunavanje Ki:

Eksperimentalni postupak:Reakcije su izvedene u puferu (10 mM Tris, pH 7.5, 10 mM MgCl2, 0.2 mg/ml BSA, 7.5 mM DTT) koji sadrži 3.7 nM enzima, histon i ATP (konstantni odnos hladnog/obeleženog ATP 1/3000). Reakcija je zaustavljena sa EDTA i supstrat uhvaćen (vezan) na fosfomembrani (Multiscreen 96 ćelijeske mikro ploče od Millipore). Posle ekstenzivnog pranja, ploče su čitane na top brojaču.

Merena je kontrola (vreme 0 ) za svaku koncentraciju ATP i histona

Plan eksperimenta:Brzine reakcija su merene na ćetiri različite koncentracije ATP, supstrata (histon) i inhibitora. Koncentraciona matrica sa 80 tačaka je projektovana oko vrednosti ATP i Km supstrata, i vrednosti IC50 inhibitora (0.3, 1,3, 9 puta Km ili IC50 vrednosti). Preliminarni eksperiment opsega vremena u otsustvu inhibitora i na različitim koncentracijama ATP i supstrata dozvoljava izbor vremena singularne krajnje tačke (10 min) u linearnoj oblasti reakcije za eksperiment određivanja Ki.

Određivanje kinetičkih parametara:Kinetički parametri su određeni simultanom nelinearnom regresijom najmanjih kvadrata korišćenjem jednačine [1]

(kompetitivni inhibitor u odnosu na ATP, slučajni mehanizam) korišćenjem celokupnih podataka (80 tačaka)

gde je A = [ATP], B = [supstrat], I = [inhibitor], Vm = maksimalna brzina, Ka, Kb, Ki disocijacione konstante ATP, supstrata i inhibitora, respektivno, a i |3 je faktor kooperativnosti vezivanja između supstrata i inhibitora odnosno uzmeđu supstrata i inhibitora.

Osim ovoga izabrana jedinjenja su karakterisana na panelu ser/treo kinaze striktno u odnosu na ćelijski ciklus (Cdk2/Ciklin E, Cdkl/Ciklin BI, Cdk5/p25, Cdk4/Ciklin Dl) i takođe na specifičnost na MAPK, PKA, EGFR, IGF1-R, Aurora-2 i Akt.

Analiza inhibicije Cdk2/ Ciklin E aktivnosti

Reakcija kinaze: 10 uM domaćeg biotinilisanog histona Hl (Sigma # H-5505) supstrata, 30 uM ATP (0.3 microCi P<33>y-ATP), 4 ng Cdk/Ciklin E kompleksa, inhibitor u krajnjoj zapremini od 30 jal pufera (TRIS HC1 10 mM pH 7.5, MgCl2 10 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml BSA) su dodani na dno svake od 96 U ćelija. Posle 60 min inkubacije na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena sa 100 ul PBS + 32 mM EDTA + 0.1% Triton X-100 + 500 uM ATP, koji sadrži 1 mg SPA perli. Tada je zapremina od 110 ul prebačena na Optiplate.

Posle 20 min inkubacije supstrata, dodano je 100 jal 5M CsCl da bi se omogućila statistička raspodela perli na vrh ploče i ostavljeno da stoji 4 sata pre merenja radioaktivnosti u Top-Count instrumentu.

Određivanje IC50: vidi gore

Analiza inhibicije Cdk2/ Ciklin BI aktivnosti

Reakcija kinaze: 4 uM domaćeg biotinilisanog histona Hl (Sigma # H-5505) supstrata, 20 uM ATP (0.2 microCi P<33>y-ATP), 3 ng Cdk/Ciklin B kompleksa, inhibitor u krajnjoj zapremini od 30 ul pufera (TRIS HC1 10 mM pH 7.5, MgCl2 10 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml BSA) su dodani na dno svake od 96 U ćelija. Posle 20 min inkubacije na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena sa 100 ul PBS + 32 mM EDTA + 0.1% Triton X-100 + 500 uM ATP, koji sadrži 1 mg SPA perli. Tada je zapremina od 110 jal prebačena na Optiplate.

Posle 20 min inkubacije supstrata, dodano je 100 ul 5M CsCl da bi se omogućila statistička raspodela perli na vrh ćelije i ostavljeno da stoji 4 sata prc merenja radioaktivnosti u Top-Count instrumentu.

Određivanje IC50: vidi gore

Analiza inhibicije Cdk5/ p25 aktivnosti

Analiza inhibicije aktivnosti Cdk5(p25 je izvedena prema sledećem protokolu

Reakcija kinaze: 10 uM domaćeg biotinilisanog histona Hl (Sigma # H-5505) supstrata, 30 uM ATP (0.2 microCi P<33>y-ATP), 15 ng Cdk5/p25 kompleksa, inhibitor u krajnjoj zapremini od 30 ul pufera (TRIS HC1 10 mM pH 7.5, MgCl210 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml BSA) su dodani na dno svake od 96 U ćelija. Posle 30 min inkubacije na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena sa 100 ul PBS + 32 mM EDTA + 0.1% Triton X-100 + 500 uM ATP, koji sadrži 1 mg SPA perli. Tada je zapremina od 110 jal prebačena na Optiplate.

Posle 20 min inkubacije supstrata, dodano je 100 ul 5M CsCl da bi se omogućila statistička raspodela perli na vrh ploče i ostavljeno da stoji 4 sata pre merenja radioaktivnosti u Top-Count instrumentu.

Određivanje IC50: vidi gore

Analiza inhibicije Cdk4/ CiklinDlaktivnosti

Reakcija kinaze 0.4 uM mišjeg GST-Rb (769-921) (# sc-4112 od Santa Kruz) supstrata, 10 uM ATP (0.5 uCi P<33>y-ATP), 100 ng bakulovirusom ekspresovanog GST- Cdk4/Ciklin Dl supstrata, pogodna koncentracija inhibitora u krajnjoj zapremini od 50 ul pufera (TRIS HC1 10 mM pH 7.5, MgCl210 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml BSA) su dodani na dno svake od 96 U ćelija. Posle 40 min inkubacije na 37°C, reakcija je zaustavljena sa 20 ul EDTA 120 mM.

Vezivanje (hvatanje) supstrata: 60 ulje prebačeno sa svake ćelije na MultiSkreen ploču, da bi se omogućilo da se supstrat veže za fosfocelulzoni filter. Ploče su tada isprane 3 puta sa 150 ul/ćeliji PBS slobodnog od Ca<++>/Mg<++>i fiiltrirane MultiScreen sistemom za filtriranje.

Detekcija: filtri su ostavljeni da se osuše na 37°C, tada je dodan scinilant 100 ul/ćeliji i P obeleženi Rb fragment detektovan merenjem radioaktvinosti na Top.Count instrumentu.

Određivanje IC50: vidi gore

Analiza inhibicije MAPK aktivnosti

Reakcija kinaze: 10 uM domaćeg biotinilisanog MPB (Sigma # M-1891) supstrata, 15 uM ATP (0.15 microCi P<33>y-ATP), 30 ng GST-MAPK (Upstate Biotechnologv # 14-173), inhibitor u krajnjoj zapremini od 30 ul pufera (TRIS HC1 10 mM pH 7.5, MgCl210 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml BSA) su dodani na dno svake od 96 U ćelija. Posle 30 min inkubacije na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena sa 100 ul PBS + 32 mM EDTA + 0.1% Triton X-100 + 500 uM ATP, koji sadrži 1 mg SPA perli. Tada je zapremina od 110 ul prebačena na Optiplate.

Posle 20 min inkubacije supstrata, dodano je 100 ul 5M CsCl da bi se omogućila statistička raspodela perli na vrh ćelije i ostavljeno da stoji 4 sata pre merenja radioaktivnosti u Top-Count instrumentu.

Određivanje IC50: vidi gore

Analizainhibicije PKA aktivnosti

Reakcija kinaze: 10 uM domaćeg biotinilisanog histona Hl (Sigma # H-5505) supstrata, 10 uM ATP (0.2 microCi P<33>y-ATP), 0.45 U PKA (Sigma # 2645), inhibitor u krajnjoj zapremini od 30 ul pufera (TRIS HC1 10 mM pH 7.5, MgCl210 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml BSA) su dodani na dno svake od 96 U ćelija. Posle 30 min inkubacije na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena sa 100 ul PBS + 32 mM EDTA + 0.1% Triton X-100 + 500 uM ATP, koji sadrži 1 mg SPA perli. Tada je zapremina od 110 ul prebačena na Optiplate.

Posle 20 min inkubacije supstrata, dodano je 100 ul 5M CsCl da bi se omogućila statistička raspodela perli na vrh ćelije i ostavljeno da stoji 4 sata pre merenja radioaktivnosti u Top-Count instrumentu.

Određivanje IC50: vidi gore

Analiza inhibicije EGFR aktivnosti

Reakcija kinaze: 10 uM domaćeg biotinilisanog MPB (Sigma # M-1891) supstrata, 2 uM ATP (0.04 microCi P<33>y-ATP), 36 ng ćelijama insekata ekspresovanog GST-EFGR, inhibitor u krajnjoj zapremini od 30 ul pufera (TRIS HC1 10 mM pH 7.5, MgCl210 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml BSA) su dodani na dno svake od 96 U ćelija. Posle 30 min inkubacije na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena sa 100 ul PBS + 32 mM EDTA + 0.1% Triton X-100 + 500 uM ATP, koji sadrži 1 mg SPA perli. Tada je zapremina od 110 ul prebačena na Optiplate.

Posle 20 min inkubacije supstrata, dodano je 100 ul 5M CsCl da bi se omogućila statistička raspodela perli na vrh ćelije i ostavljeno da stoji 4 sata pre merenja radioaktivnosti u Top-Count instrumentu.

Određivanje IC50: vidi gore

Analiza inhibicije IGF1- R aktivnosti

Analiza inhibicije aktivnosti IGF1-R je izvedena prema sledećem protokolu

Reakcija kinaze: 10 uM biotinilisanog MPB (Sigma cat # M-1891) supstrata, 0-20 uM inhibitora, 6 uM ATP, 1 microCi<33>P-ATP, i 22.5 ng GST-IGF1-R (pre-inkubiranog tokom 30 min. na sobnoj temperaturi sa 60 uM hladnog ATP) ii krajnjoj zapremini od 30 ul pufera (50 mM HEPES pH 7.9, 3 mM MnCl2, lmM DTT, 3 uM NaVOs) su dodani u svaku ćeliju 96 U ćelijske ploče. Posle 35 min inkubacije na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena dodatkom 100 jal PBS pufera koji sadrži 32 mM EDTA, 500 uM hladnog ATP, 0.1% tritona XI00 i 10 mg/ml streptavidinom obložene SPA perle. Posle 20 min inkubacije, 110 ul suspenzije je izvučeno i prebačeno na 96 ćelijske OPTIPLATE, koji sadrže 100 ul 5M CsCl. Posle 4 sata, ploče su čitane 2 minuta u Packard TOP-Count čitaču radioaktivnosti.

Analiza inhibicije Aurora 2 aktivnosti

Reakcija kinaze: 8 uM biotinilisanog peptida ( 4 ponavljanja LRRWSLG), 10 uM ATP (0.5 microCi P<33>y-ATP), 15 ng Aurora 2, inhibitor u konačnoj zapremini od 30 ul pufera (50 mM HEPES pH 7.0, MgCl210 mM,, lmM DTT, 0.2 mg/ml BSA, 3 uM ortovanadata) su dodani u svaku ćeliju 96 U ćelijske ploče. Posle 30 min inkubacije na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena i biotinilisani peptid je uhvaćen (vezan ) dodatkom 100 Ml suspenzije perli.

Statistička raspodela: 100 uL CsC12 5 M je dodano u svaku ćeliju i ostavljeno da stoji 4 sata pre nego što je radioaktivnost merena na Top-Count instrumentu.

Određivanje IC50: vidi gore

Analiza inhibicije Cdc7/ dbf4 aktivnosti

Analiza inhibicije aktivnosti Cdc7/dbf4 je izvedena prema sledećem protokolu

Biotin-MCM2 supstrat je trans-fosforilinisan sa Cdc7/Dfb4 kompleksom u prisustvu ATP trasiranog sa y<JJ->ATP. Fosforilinisan Biotin-MCM2 susptrat je tada uhvaćen (vezan) sa Strepravidin-pokrivenim SPA perlama i stepen fosforiliacije određen |3 brojanjem.

Analiza inhibicije aktivnosti Cdc7/dbf4 je izvedena u 96 ćelijskoj ploči prema sledećem protokolu.

U svaku ćeliju ploče je dodano:

10 ul supstrata (biotinilisani MCM2, 6 um konačna koncentracija)

10 ul enzima (Cdc7/dfb4, 12.5 nM krajnja koncentracija)

10 ul test jedinjenja (12 sve većih koncentracija u opsegu od nM do pm da bi se dobila kriva odgovora na dozu) 10 ul smeše hladnog ATP (10 um krajnja koncentracija) i radioaktivni ATP (1/2500 molarni odnos sa hladnim ATP) je tada korišćen da se otpočne reakcija koja je izvedena na 37°C.

Supstrat, enzim i ATP su razblaženi u 50 mM HEPES pH 7.9 koji sadrži 15 mM MgCl2, 2mM DTT, 3 uM NaV03, 2 mM glicerofosfata i 0.2 mg/ml BSA. Rastvarač za test jedinjenja je takođe sadržao 10% DMSO.

Posle inkubacije od 20 minuta, reakcija je zaustavljena dodatkom u svaku ćeliju 100 ul PBS pH 7.4 koji sadrži 50 mM EDTA, 1 mM hladnog ATP, 0.1% Tritona XI00 i 10 mg/ml streptavidinom obložene SPA perle.

Posle 15 min inkubacije na sobnoj temperaturi da bi se omogućio nastanak intereakcije biotinilisani MCM2 - streptavidin SPA perle, perle su stavljene u 96 ćelijsku filter ploču (Unifilter<R>GF/B™) korišćenjem Packard Cell Harvester (Filtermate), isprane destilovanom vodom i tada čitane korišćenjem Top Count (Packard) instrumenta.

Od otkucaja je oduzeta vrednost za šlepu probu i zatim eksperimentalni podaci (svaka tačka u triplikatu) analizirani za određivanje IC50 korišćenjem ne-linearne regresione analize (Sigma površina).

Na osnovu gore iznetih analiza inhibicije, pokazalo se da jedinjenja formule (I) pronalaska poseduju značajnu aktivnost inhibicije cdk. Vidi, kao primer, sledeće eksperimentalne podatke (IC50) dva reprezentativna jedinjenja pronalaska formule (Ia) i (lb) koja su testirana prema Cdk2/Ciklin A: Jedinjenje 1: N-[5-(2,2-dimetilpropanoil)-6,6-dimetil-1,4,5,6-tetrahidropirolo[3,4-c]-pirazol-3-il]-4-fluorobenzamid (IC500.030 uM);

Jedinjenje 2: N-[5-(2,2-dimetilpropanoil)-l ,4,5,6-tetrahidropirolo[3,4-c]-pirazol-6-spirociklopropan-3-il]-4-fluorobenzamid (ICso 0.025 uM);

Iznenađujuće, pomenuta inhibitorska aktivnost se pokazala značajno superiorna u odnosu na vrlo blisko jedinjenje ranije tehnike WO 02/12242, koje smo ovde označili kao Referentno jedinjenje (vidi jedinjenje 1143, dno strane 76; i primer 19, jedinjenje koje vezuje strane 242-3 u WO 02/12242), korišćeno za komparativne svrhe i testirano prema Cdk2/Ciklin A, kao što je ranije izneto.

Referentno jedinjenje: N-[5-acetil-6,6-dimetil-4,6-dihidropirolo[3,4-c]pirazol-3-il]-(3-bromo)benzamid (IC501.7 uM);

Tako, nova jedinjenja pronalaska su neočekivano pokazala inhibitorsku aktivnost cdk koja je značajno viša od strukturno najbližih jedinjenja poznatih u tehnici opisanih u WO 02/12242 i stoga su naročirto pogodna , u terapiji, protiv proliferativnih poremećaja kojisu povezani sa izmenjenim ciklusom ćelije koji zavisi od aktivnosti kinaze.

Jedinjenja ovog pronalaska mogu biti administrirana bilo kao pojedinačni agensi ili, alternativno u kombinaciji sa poznatim anti-kancernim tretmanima kao što su radijaciona terapija ili režim hemoterapije u kombinaciji sa citostatičnim ili citotoksičnim agensima, agensima tipa antibiotika, agensima za alkilaciju, antimetabolitskim agensima, hormonskim agensima, imunološkim agensima, agensima intrferon-tipa, inhibitorima ciklooksigenaze, (na primer, inhibitorima COX-2), inhibitorima matriksmetaloproteaze, inhibitorima telomeraze, inhibitorima tirozin kinaze, agensima receptora faktora koji spre;avaju rast, anti-HER agensima, anti-EGFR agensima, agensima anti-angiogeneze ( na primer, inhibitorima angiogeneze), inhibitorima farnezil transferaze, inhibitorima ras-raf signal transdukcionog puta, inhibitorima ćelijskog ciklusa, drugim cdk inhibitorima, agensima vezivanja tubulina, inhibitorima topoizomeraze I, inhibitorima topoizomeraze II, i sličnim.

Ako je formulisana kao fiksna doza, takav kombinacioni proizvod koristi jedinjenja ovog pronalaska u doznom opsegu opisanom u daljem tekstu i drugi farmaceutski aktivni agens u dozvoljenom doznom opsegu.

Jedinjenja formule (I) se mogu koristiti uzastopno sa drugim poznatim antikancernim agensima kad je kombinaciona formulacija nepovoljna.

Jedinjenja formule (I) ovog pronalaska, pogodna za administraciju sisarima, na primer ljudima, možr biti administrirana uobičajenim putem i dozni nivo zavisi od starosti, težine, stanja pacijenta i načina administracie.

Na primer, pogodna doza usvojena za oralnu administraciju jedinjenja formule (I) može da varira od oko 10 do oko 500 mg po dozi, od 1 do 5 puta dnevno. Jedinjenja pronalaska mogu biti administrirana u raznim doznim oblicima, na primer, oralno, u obliku tableta, kapsula, tableta obloženih šećerom ili filmom, kao tečni rastvori ili suspenzije; rektalno u obliku supozitorija; parenteralno, na primer, intramuskularno, ili kao intravenozna i/ili intratekalna i/ili intraspinalna injekcija ili infuzija.

Ovaj pronalazak takođe obuhvata farmaceutske preparate koji sadrže jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihavtljivu so zajedno sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijentom, koji može biti nosač ili razblaživač.

Farmaceutski preparati koji sadrže jedinjenja pronalaska su obično pripremljeia konvencionalnim postupcima i administrirana su u pogodnom farmaceutskom obliku. Na primer, čvrsti oralni oblici mogu da sadrže, zajedno sa aktivnim jedinjenjem, razblaživače, na primer, laktozu, dekstrozu, saharozu, celulozu, kukuruzni škrob ili krompirni škrob; lubrikante, na primer, siliku, talk, magnezijum ili kalcijum stearat, i/ili polietilen glikole; vezujuće agense, na primer, škrob, gumu arabik, želatin metilcelulozu, karboksimetilcelulozu ili polivinil pirolidon; dezintegracione agense, na primer, škrob, alginskukiselinu, alginate ili natrijum škrob glikonat; smešama koje ispuštaju mehuriće; bojama; zaslađivačima; ovlaživačima kao stoje lecitin, polisorbati, laurilsulsfati; i, u opštem slučaju, ne-toksične i farmakološki neaktivne supstance koje se koriste u farmaceutskim preparatima. Ovi farmaceutski preparati mogu biti prouzvedeni na poznati način, na primer, postupkom mešanja, granuliranja, tabletiranja, oblaganja šećerom, ili oblaganja filmom.

Tečne disperzije za oralni administraciju mogu da budu, na primer, sirupi, emulzije i suspenzije. Kao primer, sirupi mogu da sadrže, kao nosač, saharozu ili saharozu sa glicerinom i/ili manitol i sorbitol.

Suspenzije i emulzije mogu da sadrže, kao primer nosača, prirodnu gumu, agar, natrijum alginat, pektin, metilcelulozu, karboksimetilcelulozu, ili polivinil alkohol. Suspenzije ili rastvori za intramuskularne injekcije mogu sadržati, zajedno sa aktivnim jedinjenjem, farmaceutski pruhvatljiv nosač, na primer, sterilnu vodu, maslinovo ulje, etil oleat, glikole, na primer, propilen glikol i, ako se želi, pogodnu količinu lidokain hidrohlorida.

Rastvori za intravenozne injekcije ili infuzije mogu da sadrže, kao nosač, sterilnu vodu ili prioritetno mogu biti u obliku sterilnih, vodenih, izotoničnih fizioloških rastvora ili mogu da sadrže propilen glikol kao nosač.

Supozitorije mogu da sadrže, zajedno sa aktivnom komponentom, farmaceutski prihvtljiv nosač, na primer, kakao buter, polietilen glikol, polioksietilen sorbitan estre masnih kiselina ili lecitin.

Radi bolje ilustracije ovog pronalaska, ni na koji način ga ne ograničavajući, dati su sledeći primeri.

Opšti postupci

Pre razmatranja sintetičkih priremanja specifičnih jedinjenja formule (I)

pronalaska, na primer kao što je dato u sledećim primerima, treba obratiti pažnju na činjenicu da su neka jedinjenja ovde navedena i indicirana prema njihovim hemijskim nazivima, dok su druga, većina, konvencionalno i nedvosmisleno indicirana sistemom kodiranja, zajedno sa njihovim 'H-NMR podacima (vidi tablice koje slede III, IV i V) podacima HPLC/MS ( vidi tablicu VI).

Svaki kod, posebno, identifikuje jedno specifično jedinjenje formule (Ia) ili

(lb) i sastoji se od tri jedinice A-M-B.

A predstavlja bilo koji supstituent R [vidi formulu (Ia) ili (lb)] i pripojenje za ostatak molekula preko -NH2 grupe; svaka specifična A grupa je predstavljena i uzastopno numerisana u sledećoj tablici 1.

Slično, B predstavlja bilo koji supstituentR\[vidi formulu (Ia) ili (lb)] i

pripojenje za ostatak molekula preko karbonil (CO) grupe; svaka specifična B grupa je predstavljena i uzastopno numerisana u sledećoj tablici II.

M se odnosi na centralno jezgro divalentne skupine koja je supstituisana

grupama A i B; posebno, M može da varira od Ml ili M2 kao u formulama dole, pri čemu svaka identifikuje cetralno jezgro molekula koje ima formulu (Ia) odnosno (lb).

Radi lakše reference, sve A i B grupe tablica I i II su identifikovane pravim hemijskim formulama koje takođe ukazuju tačku vezivanja za ostatak molekula M.

Prema tome, kao primer, jedinjenje A06-M1-B01 tablice III predstavlja

jedinjenje formule (Ia) koje ima centralno Ml jezgro, koje jesupstituisano sa grupom A06 i grupom BOI, u položajima koji se indiciram strelicama; slično, jedinjenje A04-M2-B08 u tablici V predstavlja jedinjenje formule (lb) koje ima centralno jezgro M2, a supstituisano je grupo A04 i grupom B08, u položajima indiciranim strelicama:

Primer 1

N-(2-cijanoetiI)-2-metilaIanin

50 g (0.48 mol) 2-metilalanina je dodano u hlađeni rastvor (voda/led) NaOH (19.6 g) u vodi (100 ml). Kad se rastvor izbistrio, u kapima je dodano 34 ml (0.50 mola) acetonitrila uz hlađenje. Smeša je ostavljena preko noći. Posle 18 sati, dodano je 28 ml sirćetne kiseline uz hlađenje (voda/led); pao je beli talog; 200 ml 95% etanolaje ukapano u bocu, mešanje je nastavljeno još 1 sat, zatim je smeša ostavljena da stoji u frižideru 2 - 3 sata. Posle filtriranja, čvrsta supstanva je sakupljena i sušena u peći na 80°C. Filtrati su ispareni i stavljeni u etanol (60 ml). Pri hlađenju dobijena je dalja količina proizvoda, koja je filtrirana i sušena. Iz prvog filtriranja dobijeno je 72 g jedinjenja iz naslova. Ukupni prinos: 95%.

ESI MS: m/z 157 (MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8 7.47 (s, IH), 2.70 (t, 2H), 2.48 (t, 2H), 1.18 (s, 6H).

Radeći na analogni način dobijeno je sledeće jedinjenje:

l-[(2-Cijanoetil)amino]cikIopropankarboksilna kiselina

EI MS: m/z 154 (M), 136 (M-H20), 114 (M.CH2CN), 68 (100% ciklopr=C=0);

'II NMR (400 MHz, DMSO-d6): 6 7.47 (s, IH), 2.86 (t, 2H, J = 6.6 Hz), 2.48 (t, 2H, J = 6.6 Hz), 1.09 (dd, 2H, J = 6.9 Hz, J = 4.1 Hz), 0.86 (dd, 2H, J = 6.9 Hz, J = 4.1 Hz).

Primer2

N-(ferc-butoksikarboniI)-N-(2-cijanoetil)-2-metilaIanin

44.5 g (0.285 mola) N-(2-cijanoetil)-2-metilalanina i 51.7 g tetrametilamonijum hidroksid pentahidrata je rastvoreno u acetonitrilu (2 1) na 40°C i kad je dobijen bistri rastvor, dodano je 112 g B0C2O. Smeša je ostavljena 24 sata na 40°C. Sutradan, dodano je daljih 20 g B0C2O dok je temperatura održavana na 40°C. Svakih 8-12 sati dodavano je po 20 g B0C2O, do ukupno 192 g. Posle 4 dana rastvarao je isparen, ostatak stavljen u vodu (1000 ml) i ispran dva puta etil etrom (500 ml). Vodene frakcije su dovedene na pH 3-4 limunskom kiselinom i ekstrahovane etil acetatom, isprane vodom (200 ml) i koncentrovane. Dobijeno je 52 g jedinjenja iz naslova (prinos: 72%).

ESI MS: m/z 274 (M+NH4);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 3.52 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 2.68 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 1.18-1.38 (m, 15H).

Radeći na analogni način dobijeno je sledeće jedinjenje: l-[(^c-Butoksikarbonil)(2--cijanoetil)amino]ciklopropankarboksilna kiselina

EI MS: m/z: 272 (M+NH4), 225 (MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 12.55 (bs, IH), 3.33 (m, 2H), 2.71 (m, 2H), 0.97-1.63 (m, 13H).

Primer 3

Metil N-(fcrc-butoksikarbonil)-N-(2-cijanoetil)-2-metilalaninat

62 g (0.23 mola) N-(^e/"c-butoksikarbonil)-N-(2-cijanoetil)-2-mctilalanina je rastvoreno u 350 ml DMF i dodano 50 g KTICO3. Posle nekoliko minuta, u kapima je dodato 30 ml metil jodida (MeJ) i smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 sati. Tada je dodano daljih 15 ml MeJ. Smeša je ostavljena na sobnoj tmperaturi preko noći. Posle razblaženja sa 1.5 1 vode, rastvor je ekstrahovan sa etil acetatom (3 puta). Organske faze su isprane malom količinom vode, sušene iznad natrijum sulfata, isparene i sušene mehaničkom pumpom. Tako je dobijeno 60.5 g (97%) metilN-( terc-butoksikarbonil)-N-(2-cijanoetiI)-2-metilalaninata.

ESIMS: m/z 288 (M+NH4);

'H NMR (400 MHz, DMSO-dć): 8 3.55 (m, 5H), 2.70 (t, 2H, J = 6.7 Hz), 1.40 (s, 6H), 1.36 (s, 9H).

Radeći na analogni način dobijeno je sledeće jedinjenje:Metil l-[(et/,c-butoksikarbonil)(2-cijanoetil)amino]ciklopropankarboksilat

ESI MS: m/z 286 (M+NH4);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 3.61 (s, 3H), 3.42 (t, 2H, J = 6.7 Hz), 2.71 (m, 2H), 1.07-1.62 (m, 13H).

Primer 4

terc- Buti\4-cijano -3-hidroksi-2,2-dimetiI-2,5-dihidro-lH-piroI-l-karboksilat45 g metil N-(/'erc-butoksikarbonil)-N-(2-cijanoetil)-2-metilalaninata je rastvoreno u dioksanu (240 ml) u atmosferi azota i dodano 7.9 g natrijum hidrida. Smeša je refluksovana tokom 6 sati (120°C unutrašnja temperatura), i zatim ostavljena da stoji preko noći na sobnoj temperaturi (TLC: C^CVEtOH 90/10). Rastvarač je isparen, dodana voda (1000 ml) i smeša dovedena na pH 3 - 4 limunskom kiselinom. Vodeni slojevi su ekstrahovani 4 puta etil acetatom, ekstrakti isprani ograničenom količinom vode i ispareni. Tada je ostatak stavljen u heksan, isparen i kristalisan iz heksana. Dobijeno je 33.1 g ferobutil 4-cijano -3-hidroksi-2,2-dimetil-2,5-dihidro-lH-pirol-l-karboksilata (prinos 85%).

ESI MS: m/z 237 (M-H-):

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 4.06-4.10 (s, 2H, konformeri), 1.48 (s, 6H), 1.47 (s, 9H).

Radeći na analogni način dobijeno je sledeće jedinjenje:

terc- Butil 6-cijano-7-okso-4-azaspiro [2,4]heptan-4-karboksilat

ESIMS: m/z 235 (M-H-);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): S 4.63 (t, IH, J = 9.8 Hz), 4.24 (t, IH, J = 10.2 Hz), 3.74 (t, IH, J= 10.2 Hz), 1.67-2.16 (m, 2H), 1.34-1.41 (s, 9H), 0.93-1.20 (m, 2H).

Primer 5

terc- Buti\3-amino-6,6-dimetil -2,6-dihidropiroIo[3,4-c]pirazol-5(4H)-karboksilat

32 gterc- butil4-cijano -3-hidroksi-2,2-dimetil-2,5-dihidro-lH-pirol-l-karboksilata (0.134 mola) je dodano u 430 ml apsolutnog etanola. U ovaj rastvor, dodano je 9 ml (0.18 mola) hidrazin hidrata, pa zatim 12 ml glacijalne AcOH (1.5 ekv.). Smeša je mešana na 60°C tokom 48 ati, etanol uklonjen, ostatak stavljen u 400 ml rastvora natrijum bikarbonata, i ekstrahovan više puta etil acetatom do ukupne ekstrakcije željenog proizvoda. Organske faze su sušene i isparene. Posle prečišćavanja brzom hromatografijom (eluent: CHC^/EtOH 97/3) i mrvljenja sa smešom heksana i etil acetata 9/1, dobijeno je 25 g jedinjenja iz naslova. Ukupan prinos 30.5 g (88%).

ESI MS: m/z 253 (M+H-);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 4.06-4.10 (2s, 2H, kongormeri), 1.48 (2s, 6H, konformeri), 1.47 (2s, 9H, konformeri).

Radeći na analogni način dobijeno je sledeće jedinjenje:

terc- Butil3-amino-2,6-dihidropirolo[3,4-c]pirazol-6-spirocikIopropan-5(4H)-karboksiIat

ESI MS: m/z 251 (MH+);

]H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8 11.12 (bs, IH), 5.13 (bs, 2H), 4.16-4.33 (m, 2H), 1.57-1.91 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 0.65-0.83 (m, 2H).

Primer 6

terc- Butil2-etil 3-amino-6,6-dimetilpirolo [3,4-c] pirazoI-2,5(4H,6H)-dikarboksilat iterc-butil1-etil 3-amino-6,6-dimetil-4,6 dihidropirolo[3,4-c]pirazol-l,5-dikarboksilat 15 gterc- butil3-amino-6,6-dimetil -2,6-dihidropirolo[3,4-c]pirazol-5(4H)-karboksilata (59.4 mmola) je rastvoreno u anhidrovanom THF (150 ml) i tretirano, na 0°C u atmosferi Ar, prvo sa N,N-diizopropiletilaminom (50 ml) i zatim sa ClC02Et (4.65 ml, 1 ekv.), u kapima. Posle 90 minuta, rastvor je razblažen sa EtAc (1 1), ispran vodom, pa zatim zasićenim rastvorom soli, sušen iznad natrijum sulfata i isparen. Sirovi proizvod je prečišćen brzom hromatografijom (heksan/EtOAc 2/8 da bi se dobilo 7.3 gterc- butil 2etil 3-amino-6,6-dimetilpirolo[3,4-c]pirazol-2,5(411,611)-dikarboksilata kao glavne komponente u prinosu od 38%, zajedno sa 5.7 g iterc- butil1-etil 3-amino-6,6-dimetil-4,6 dihidropirolo[3,4-c]pirazol-l,5-dikarboksilata u prinosu od 30%.

5- terc- Butil2-etil 3-amino-6,6-dimetilpiroIo [3,4-c] pirazoI-2,5(4H,6H)-dikarboksilat

ESIMS: m/z 325 (MH);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8 4.35 (q, 2H), 4.10 (2s, 211, konformeri), 1.50-1.51 (m, 6H), 1.41-1.43 (2s, 9H, konformeri), 1.29 (t, 3H).

5~tor-Butil1-etil 3-amino-6,6-dimetil-4,6 dihidropirolo[3,4-c]pirazol-l,5-đikarboksilat

ESI MS: m/z 325 (MH);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8 4.28 (q, 2H, J = 7.1 Hz), 4.09-4.14 (2s, H, konformeri), 1.66-1.67 (m, 6H), 1.41-1.44 (2s, 9H, konformeri), 1.27 (t, 3H, J = 7.1 Hz).

Radeći na analogni način dobijena su sledeća jedinjenja:

5- terc- Butil2-etil 3-amino-pirolo[3,4-c]pirazol-6-spirociklopropan-2,5(4H,6H)-dikarboksilat

ESI MS: m/z 323 (MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8 4.30 (q, 2H, J = 7.1 Hz), 4..27 (bs, 2H), 1.65-2.01 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.27 (t, 3H, J - 7.1 Hz), 0.82-0.96 (m, 2H).

5-ferc-Butil 1- etil 3-amino-4,6-dihidropirolo[3,4-c]pirazol-6-

spirociklopropan-l,5-dikarboksilat

ESIMS: m/z 323 (MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8 4.26 (bs, 2H), 4.21 (q, 2H, J = 7.0 Hz), 1.36-1.97 (m, 13H), 1.23 (t, 3H, J = 7.0 Hz).

Primer 7

5- terc- Butil 1-etil 3-[(4-lfuorobenzoiI)amino]-6,6-dimetiI-4,6-

dihidropirolo[3,4-c]pirazol-l,5-dikarboksilat

5-terc-Butil 1- etil 3-amino-6,6-dimetil-4,6 dihidropirolo[3,4-c]pirazol-l,5-dikarboksilat (2.0 g, 6.16 mmol) je rastvoren u THF (40 ml), tretiran prvo sa N,N-diizopropiletilaminom (5.4 ml, 30.80 mmola) i zatim, na 0°C, u kapima, sa 4-fluorobenzil hloridom (800 ul, 6.77 mmola) rastvorenim u THF (8 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 sati, koncentrovan i rastvorena u DCM, isprana sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organske faze su sušene iznad natrijum sulfata, isparene i prečišćene brzom hromatografijom (eluent: heksan/EtOAc 80/20) da bi se dobilo 2.5 g jedinjenja iz naslova u prinosu od 90%.

ESIMS: m/z 447 (MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8 11.47 (s, IH), 8.04-8,17 (m, 2H), 7.25-7.37 (m, 2H), 4.44-4.47 (2s, 2H, konformeri), 4.43 (q, 2H, J = 7.1 Hz)), 1.73-1.75 (2s, 6H, konformeri), 1.43-1.46 (2s, 9H, konformeri), 1.33 (t, 3H, J = 7.1 Hz).

Radeći na analogni način dobijena su sledeća jedinjenja:

5-terc-Butil 2-etil 3-[(4-fluorobenzoil)amino]-6,6-dimetilpirolo[3,4-c]pirazoI-2,5(4H,6H)-dikarboksilat

ESIMS: m/z 447 (MH+);

<X>UNMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 10.78 (s, IH), 7.85-7.99 (m, 2H), 7.40-7.47 (m, 2H), 4.51-4.49 (2s, 2H, konformeri), 4.43 (q, 2H, J = 7.1 Hz), 1.59-1.60 (2s, 6H), 1.43-1.46 (2s, 9H, konformeri), 1.34 (t, 3H, J = 7.1 Hz).

5-terc-Butil 2-etil 3-[(4-fluorobenzoil)amino]-pirolo[3,4-c]pirazol-6-spirocikIopropan-2,5(4H,6H)-dikarboksilat

ESI MS: m/z 445 (MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8 10.81 (s, IH), 7.95-8.06 (m, 2H), 7.39-7.49 (m, 2H), 4.67 (bs, 2H), 4.41 (q, 2H,J = 7.1 Hz), 1.80-2.10 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 1.32 (t, 3H, J = 7.1 Hz), 0.93-1.06 (m, 2H).

Primer 8

5-terc-Butil 1- etil 3-({[(3-fluorofenil)amino]karboniI}amino)-6,6-dimetil-4,6-dihidropiroIo[3,4-c]pirazol-l,5-dikarboksilat

5-terc-Butil1- etil 3-amino-6,6-dimetil-4,6-dihidropirolo[3,4-c]pirazol-l,5-dikarboksilat (3.0 g, 9.24 mmola) je rastvoren u anhidrovanom THF (50 ml), tretiran na sobnoj temperaturi sa 3-fluorofenil-izocijanatom (1.4 g, 10.21 mmola), 1.1 ekv.) i mešan preko noći. Sledećeg dana reakciona smeša je isparena, stavljena u DCM i isprana zasićenim vodenim rastvorom soli. Organske faze su sušene iznad natrijum sulfata i isparene do suva. Prečišćavanje brzom hromatografijom (C^C^/MeOH 90/10) dalo je 3.05 g (prinos 71%) jedinjenja iz naslova.

ESI MS: m/z 462 (MH+);

'H NMR (400 MI Iz, DMSO-d6): 5 9.74 (s, IH), 9.05 (s, IH), 7.44 (m, IH), 7.33 (m, IH), 7.16 (m, IH), 6.84 (m, IH), 4.43 (m, 4H), 1.76 (2s, 6H), 1.48 (2s, 9H, konformeri), 1.36 (t, 3H, J = 7.1 Hz).

Primer 9

5-terc-Butil 1-etil 3-[(piperidin-l-karbonil)-amino]-6,6-dimetil-4,6-dihdiropirolo[3,4-c]pirazol-l,5-dikarboksilat

Rastvoru trifosgena (550 mg, 1.85 mmola, 0.4 ekv.) u tetrahidrofuranu (50 ml) dodan je, na -40°C, rastvor5-terobutil1-etil 3-amino-6,6-dimetil-4,6-dihidropirolo[3,4-c]pirazol-l,5-dikarboksilata(1.5 g, 4.62 mmola) u tetrahidrofuranu

(50 ml) i N,N-diizoptopiletilamin (1.8 ml, 2.2 ekv.). Posle 3 sata, dodan je rastvor piperidina (690 ul, 1.5 ekv.) i N,N-diizopropiletilamin (1.2 ml, 1.5 ekv.) u tetrahidrofuranu (25 ml). Ostavljeno je da reakcija dostigne sobnu temperaturu tokom 2 h (TLC: EtOAc/heksan 90/10). Posle isparavanja rastvarača čvrsti ostatak je rastvoren u DCM i rastvor ispran zasićenim rastvorom soli, organska faza sušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana. Čvrsta supstanca je prečišćena brzom hromatografijom (eluent: EtOAc/heksan 50/50). Čvrsta supstanca je tretirana diisopropiletrom i filtrirana da bi se dobilo 1.45 g jedinjenja iz naslova u prinosu od 72%.

ESI MS: m/z 436 (MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 9.36 (s, IH), 4.46 (m, 4H), 3.40 (m, 4H), 1.76 (2s, 6H), 1.54 (m, 6H), 1.44 (2s, 9H, konformeri), 1.36 (t, 3H, J = 7.1 Hz).

Primer 10

Etil 3-[(4-fluorobenzoil)amino]-6,6-dimetil-5,6-dihidropirolo[3,4-c]pirazol-l(4H)-karboksilat hidrohlorid

5-terc-Butil 1- etil 3-[(4-fluorobenzoil)amino]-6,6-dimetil-4,6-dihidropirolo[3,4-c]pirazol-l,5-dikarboksilat (2.5 g, 5.59 mmola) je rastvoren u dioksanu (50 ml) i tretiran sa HC1 4M u dioksanu (28 ml, 20 ekv.). Posle 2 sata na 40°C (TLC: CH2Cl2/MeOH 90/10) reakciona smeša je koncentrovana i ostatak tretiran sa dietil etrom, i filtriran da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.09 g) kao čvrste supstanca u prinosu od 98%.

ESI MS: m/z 347 (MH+);

'HNMR (400 MHz, DMSO-d6):5 11.28 (s, IH), 8.06-8.11 (m, 2H), 7.28-7.34 (m, 2H), 4.40 (q, 2H, J = 7.1 Hz)), 3.92 (s, 2H), 1.42(s, 6H), 1.33 (t, 3H, J = 7.1 Hz).

Radeći na analogni način dobijena su sledeća jedinjenja: Etil 3-[(4-fluorobenzoil)amino]-6,6-dimetil-5,6-dihidropirolo[3,4-c]pirazol-2(4H)-karboksi!at hidrohlorid

ESIMS: m/z 347 (MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 10.92 (s, IH), 9.89(s, IH), 8.02 (m, 2H), 7.49 (m, 2H), 4.61 (s, 2H), 4.51 (q, 2H, J - 7.1 Hz)), 1.69(s, 6H), 1.39 (t, 3H, J - 7.1 Hz).

Etil 3-[4-fluorobenzoiI)amino]-5,6-dihidropiroIo[3,4-c]pirazol-6-spirociklopropan-2(4H)-karboksilat hidrohlorid

ESIMS: m/z 345 (MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8 10.87 (bs, IH), 10.00 (bs, 2H), 7.93-8.04 (m, 2H), 7.39-7.53 (m, 2H), 4.69 (s, 2H), 4.41 (q, 2H, J = 7.1 Hz)), 1.68(dd, 2H, J = 6.1 Hz)), 1.41 (dd, 2H,J = 8.6 Hz, J = 6.1 Hz), 1.33 (t, 3H, J = 7.1 Hz).

Primer11

Etil 5-(2,2-dimetiIpropanoil)-3-[(4-fluorobenzoiI)amino]-6,6-dimetil-5,6-dihidropiroIo[3,4-c]pirazol-l(4H)-karboksilat

Etil 3-[(4-fluorobenzoil)amino]-6,6-dimetil-5,6-dihidropirolo[3,4-c]pirazol-l(4H)-karboksilat hidrohlorid (2.0 g, 5.77 mmola) u dihlormetanu (70 ml) je tretitan, na 0°C, sa N,N-diizopropiletilaminom (1.6 ml, 9.2 mola, 1.6 ekv.) i sa pivaloil hloridom (780 ul, 6.3 mmola 1.1 ekv.). Postepeno, reakcija je dovedena do sobne temperature i mešana preko noći (TLC: C^C^/EtOAc 90/10). Rastvor je ispran sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organske faze su sušene iznad natrijum sulfata, isparene i prečišćene brzom hromatografijom (eluent: heksan/EtOAc 80/20) da bi se dobilo 2.03 g jedinjenja iz naslova u prinosu od 82%.

ESIMS: m/z 447 (MH+);

'HNMR (400 MHz, DMSO-d6):8 11.51 (s, IH), 8.05-8.14 (m, 2H), 7.23-7.37 (m, 2H), 4.90 (s, 2H), 4.42 (q, 2H, J = 7.1 Hz)), 1.89 (s, 6H), 1.33 (t, 3H, J = 7.1 Hz), 1.22 (s, 9H).

Radeći na analogni način dobijeno je sledeće jedinjenje:

Etil 5-(2,2-dimetilpropanoil)-3-[(4-fluorobenzoil)amino]-5,6-dihidropirolo[3,4-c]pirazol-6-spirociklopropan-2(4H)-karboksilat ESI MS: m/z429(MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8 10.81 (bs, IH), 7.96-8.04 (m, 2H),7.38-7.48 (m, 2H), 5.10 (bs, 2H), 4.42 (q, 2H, J = 7.1 Hz), 2.33 (dd, 2H, J = 6.8 Hz, J = 4.2 Hz), 1.32 (t, 3H, J = 7.1 Hz), 1.22 (s, 9H), 0.90 (dd, 2H, J = 6.8 Hz, J = 4.2 Hz)..

Primer 12

N- [5-(2,2-dimetilpropanoil)-6,6-dimctil-l,4,5,6-tetrahidropirolo[3,4-c]pirazoI-3-iI]-4-fluorobenzamid

Etil 5-(2,2-dimetilpropanoil)-3-[(4-fluorobenzoil)amino]-6,6-dimetil-5,6-dihidropirolo[3,4-c]pirazol-l(4H)-karboksilat (2.0 g, 4.64 mmola) je rastvoren u metanolu (60 ml), tretiran sa TEA (6.45 ml, 46.4 mmola, 10 ekv.) i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. (TLC: CEbCVMeOH 95/5). Posle isparavanja, čvrsta supstanca je tretirana sa smešom dietil etar/heksan i filtrirana da bi se dobilo 1.43 g jedinjenja iz naslova u prinosu od 86%.

ESI MS: rn/z 359 (MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8 12.41 (bs, IH), 10.91 (bs, IH), 7.98-8.11 (m, 2H), 7.20-7..44 (m, 2H), 4.66-4.92 (bs, 2H), 1.64 (s, 6H), 1.21 (s, 9H).

Radeći na analogni način dobijena su sledeća jedinjenja:

N- [5-(2,2-dimetilpropanoil)-2,4,5,6-tetrahidropirolo[3,4-c]pirazol-6-spirociloptopan-3-il]-4-fluorobenzamid

ESI MS: m/z357 (MH+);

'HNMR(400MHz,DMSO-d6):8 11.59-12.47 (bs, IH), 10. 94 (bs, IH), 8.02-8.11 (m, 2H), 7.27-7.37 (m, 2H), 4.99 (s, 2H), 2.25 (dd, 2H, J = 6.5 Hz, J = 4.4 Hz), 1.20 (s, 9H), 0.79 (dd, 2H, J = 6.5 Hz, J = 4.4 Hz).

N- {6,6-dimetil-5-[(2R)-tetrahidrofuran-2-iIkarboniI]-l,4,5,6-tetrahidropirolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-lfuorobenzamid

ESI MS: m/z 373 (MH+);

'HNMR (400 MHz, DMSO-d6): 8 12.49 (bs, IH), 10.96 (bs, IH), 8.09 (m, 2H), 7.34 (m, 2H), 4.86 (m, 2H), 4.56 (t, IH), 3.83 (m, 2H), 2.02 (m, 2H), 1.86 (m, 2H), 1.68 (s, 6H).

aD+27.7 (c = 0.50, MeOH).

N- {6,6-dimetil-5-[(2S)-tetrahidrofuran-2-ilkarbonil]-l ,4,5,6-tetrahidropiro!o[3,4-c]pirazoI-3-il}-4-lfuorobenzamid

ESI MS: m/z 373 (MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8 12.49 (bs, IH), 10.96 (bs, IH), 8.09 (m, 2H), 7.34 (m, 2H), 4.86 (m, 2H), 4.56 (t, IH), 3.83 (m, 2H), 2.02 (m, 2H), 1.86 (m, 2H), 1.68 (s, 6H).

aD -25.9 (c = 0.76, MeOH).

Primer 13

Metil estar 4-(l-metil-piperidin-4-iIoksi)-benzoeve kiseline

Rastvoru l-metil-piperidin-4-ol (6.8 g, 59 mmola), PPh3(trifenilfosfin, 15.5 g, 59 mmola) i metil estra 4-hidroksi benzoeve kiseline (6 g, 39 mmola) u THF (150 ml) na 0°C, dodan je polako dietil azodikarboksilat (9.5 ml, 59 mmola) u THF. Ostavljeno je da se reakciona smeša zagreje do sobne temperature tokom perioda od 24 sata. Tada je isparena i ostatak ponovo rastvoren u 5% vodenom rastvoru limunske kiseline (700 ml). Rastvor je ispran etil acetatom (3 x 250 ml), alkalizovan sa koncentrovanim NH4OH (pH približno 8) i zatim ekstrahovan dihlorometanom (3 x 250 ml). Kombinovani dihlorometanski ekstrakti su isprani zasićenim rastvorom soli, osušeni i ispareni da bi se dobilo ulje koje je prečišćeno brzom hromatografijom na silika gelu koristeći dihlormetan-MeOH (90:10) kao eluent, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuto ulje (7.4 g,75%).

ESI MS: m/z250(MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8 ppm 1.7 (m, 2H), 2.0 (m, 2H), 2.2 (m, 5H), 2.7 (m, 2H), 3.8 (s, 3H), 4.5 (m, IH), 7.1 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.9 (d, J = 9.0 Hz, 2H).

Primer 14

4-(l-Metil-piperidin-4-iIoksi)-benzoeva kiselina, hidrohlorid

Metil estar 4-(l-metil-piperidin-4-iloksi)-benzoeve kiseline (7.3 g, 29 mmola) je rastvoren u 6N vodenom rastvoru HC1 (220 ml). Posle zagrevanja na 85 °C tokom 6 sati, rastvarač j uklonjen u vakumu. Ostatak je prikupljen sa vodom i dva puta otparen i tada prikupljen sa acetonom još dva puta. Čvrsta supstanca tako dobijena je izmrvljena u acetonu da bi se dobila hidrohloridna so kao beli prah (6.4 g, prinos 80%).

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8 ppm 2.0 (m, 4H), 2.8 (m, 3H), 3.3 (m, 4H), 4.7 (m, IH), 7.1 (m, 2H), 7.9 (m, 2H), 9.9 (d, J = 20.4 Hz, IH), 12.6 (s, IH).

Primer 15

Etil estar 4-(4-hidroksi-piperidin-l-il)-benzoeve kiseline

Smeša etil estra 4-fluoro-benzoeve kiseline (1.68 g, 10 mmola), piperidin-4-ol (1.12 g, 11 mmola) i anhidrovanog kalijum karbonata (1.38 g, 10 mmola) u DMSO (10 ml) je zagrevana na 120°C tokom 6 sati. Posle hlađenja, smeša je sipana u smešu vode i leda (500 ml) i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je ispran vodom i zasićenim rastvorom soli, sušen i otparen. Ostatak je prečišćen brzom hromatografijom na silika gelu koristeći kao eluent heksan/EtOAc (70/30) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (1.6 g, 64%).

ESIMS: m/z250 (MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 ppm 1.3 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.4 (m, 2H), 1.8 (m, 2H), 3.0 (m, 2H), 3.7 (m, 2H), 4.2 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.7 (d, J = 4.3 Hz, IH), 6.9 (m, 2H), 7.7 (m, 2H).

Primer 16

Etilestar 4-(4-fluoro-piperidin-4-il)-benzoeve kiseline

Rastvoru etil estra 4-(4-hidroksi-piperidin-l-il)benzoeve kiseline (1.25 g, 5 mmola) u suvom dihlorometanu (30 ml) na sobnoj temperaturi u inertnoj atmosferi, polako je dodan DAST (0.97 g, 6 mmola) u dihlorometanu (5 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata i zatim zakaljena vodenim rastvorom NaHCC>3. Organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli, sušen i otparen. Ostatak je prečišćen brzom hromatografijom na silika gelu koristeći kao eluent heksan/EtOAc (70/30) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (0.7 g, 56%).

ESIMS: m/z 252 (MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 ppm 1.3 (t,J = 7.1 Hz, 3H), 1.8 (m, 2H), 2.0 (m, 2H), 3.3 (m, 2H), 3.6 (m, 2H), 4.2 (s, 2H), 4.8 (s, IH), 7.0 (s, 211), 7.8 (s, 2H).

Primer 17

4-(4-FIuoro-piperidin-l-iI)-benzoeva kiselina

Smeša etil estra 4-(4-hidroksi-piperidin-l-il)benzoeve kiseline (0.7 g, 2.7

mmola) u etanolu (50 ml) i rastvor 2N natrijum hidroksida (20 ml) je mešana na sonoj temperaturi tokom 24 sata. Etanol je tada otparen, rastvor razblažen sa vodom (20 ml) i neutralisan sa 2N HC1. Kiselina se izdvojila kao bela čvrsta supstanca koja je isprana vodom i sušena u vakumu (0.52 g, 82%).

ESI MS:m/z 224 (MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 ppm 1.8 (m, 2H), 2.0 (m, 2H), 3.3 (m, 2H), 3.5 (m, 2H), 5.0 (s, IH), 7.0 (s, 2H), 7.8 (s, 2H), 12.2 (s, IH).

Radeći kao što je opisano u bilo kome od prethodnih primera, to jest korišćenjem pogodnih početnih materijala i bilo koji pogodni reaktant prema procesu koji je prethodno opisan, pripremljena su takođe dodatna jedinjenja formule (Ia) i (lb), kao što je opisano u sledećoj tablici III. Za objašnjenje sistema kodiranja koji identifikuje svako specifično jedinjenje formule (Ia) i (lb) vidi "opšti postupak" na početku eksperomentalnog dela.

Primer18

N- [6,6-dimetil-5-[(l-metilpiperidin-4-ilkarbonil]-2,4,5,6-tetrahidropirolo[3,4-c]pirazol-3-iI]-4-lfuorobenzamid

Etil 3-[4-fluorobenzoil)amino]-6,6-dimetil-5,6-dihidropirolo[3,4-c]pirazol-l(4H)-karboksilat hidrohlorid (0.5 g, 1.3 mmola) u dihlorometanu (25 ml) je tretitan sa N,N-diizopropiletilaminom (1.13 ml, 6.5 mola, 5 ekv.) i TBTU (0.542 g, 1,69 mmola 1.3 ekv.) na sobnoj temperatui tokom 1 sata, a zatim je dodan hidrohlorid 1-metil-piperidin-4karboksilne kiseline (0.29 g, 1.61 mmol, 1.2 ekv.). Reakcija je mešana preko noći (TLC: CH2Cl2/MeOH 90/10). Rastvor je ispran sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom soli, organske faze su sušene iznad natrijum sulfata i koncentrovane. Ostatak je rastvoren u metanolu (16 ml), tretiran sa TEA (2 ml, 14.3 mmola, 11 ekv.) i mešan preko noći na sobnoj temperaturi (TLC: CH2Cl2/MeOH/NH4OH 90/10/1). Posle isparavanja, čvrsti ostatak je prečišćen brzom hromatografijom (eluent: CH2Cl2/MeOH/NH4OH 90/10/2). Čvrsta supstanca je tretirana sa iizopropil etrom i filtrirana da bi se dobilo 0.36 g jedinjenja iz naslova u prinosu od 69%.

ESI MS: m/z 400 (MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8 12.48 (bs, IH), 10.97 (bs, IH), 8.09 (m, 2H), 7.35 (m, 2H), 4.75 (bs, 2H), 2.87 (m, 2H), 2.40 (m, IH), 2.24 (s, 3H), 2.05 (m, 2H), 1.67 (m, 10H).

Radeći na analogni način dobijeno je sledeće jedinjenje:

N- [5-[(l-metilpiperidin-4-ilkarbonil]-2,4,5,6-tetrahidropiroIo[3,4-c]pirazol-6-spirociklopropan-3-il]-4-lfuorobenzamid

ESI MS: m/z 398 (MH+);

'HNMR (400 MHz, DMSO-d6):S 12.20 (bs, IH), 11.00 (s, IH), 8.10 (m, 2H), 7.36 (m, 2H), 4.91 (s, 2H), 2.84 (m, 2H), 2.40 (m, IH), 2.23 (m, 5H), 2.0 (m, 2H), 1.65 (m, 4H), 0.89 (m, 2H).

Radeći na analogni način i korišćenjem pogodnih početnih materijala i bilo koji pogodni reaktant, kao u procesu koji je prethodno opisan, pripremljena su takođe dodatna jedinjenja formula (Ia) i (lb), kao što je opisano u sledećoj tablici IV

Primer 19

N- [6,6-dimetil-5-[(4-metilpiperazin-l-iIkarbonil]-2,4,5,6-tetrahidropirolo [3,4-c] pirazol-3-il] -4-fluorobenzamid

Rastvoru trifozgena (195 mg, 0.65 mmola, 0.56 ekv.) u DCM (15 ml) dodan je rastvor etil 3-[4-fluorobenzoil)amino]-6,6-dimetil-5,6-dihidropirolo[3,4-c]pirazol-2(4H)-karboksilat hidrohlorid (442 mg, 1.15 mmola) u DCM (30 ml) pa zatim N,N-diizopropiletilaminom (760 ul, 4.31 mmol, 3.75 ekv.) Posle 3 sata, dodan je rastvor N-metilpiperazina (195 ul, 1.72 mmola, 1.5 ekv.) i diizopropietilamina (300 ul, 1.72 mmola, 1.5 ekv.) u DCM (8 ml). Reakcija je mešana preko noći na sobnoj temperaturi (TLC: CH2Cl2/MeOH 90/10). Rastvor je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, organska faza je sušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana. Ostatak je rastvoren u metanolu (16 ml), tretiran sa TEA (1.6 ml, 11.5 mmola, 10 ekv.) i mešan preko noći na sobnoj temperaturi (TLC: CH2Cl2/MeOH 90/10). Posle isparavanja, čvrsti ostatak je prečišćen brzom hromatografijom (eluent: CH2Cl2/MeOH 90/10). Čvrsta supsranca je tretirana sa diizopropil etrom i filtrirana da bi se dobilo 0.294 g jedinjenja iz naslova u prinosu od 64%.

ESIMS: m/z 401 (MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 12.39 (bs, IH), 10.39 (s, IH), 8.04 (m, 2H, Ar), 7.31 (m, 2H), 4.53 (bs, 2H), 3.04 (m, 4H), 2.40 (m, 4H), 2.22 (bs, 3H), 1.60 (bs, 6H).

Radeći na analogni način dobijena su sledeća jedinjenja:

N- [5-[(4-metilpiperidin-4-ilkarboniI]-2,4,5,6-tetrahidropirolo[3,4-c]pirazol-6-spirociklopropan-3-il]-4-fluorobenzamid

ESIMS: m/z 399 (MH+);

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 6 12.19 (bs, IH), 10.95 (s, IH), 8.09 (m, 2H), 7.35 (m, 2H), 4.70 (bs, 2H), 3.18 (m, 4H), 2.34 (m, 7H), 1.92 (m, 2H), 0.97 (m, 2H).

Primer 20

4-Hloro-N- [6,6-dimetil-5-(4-pirolidin-l-ilmetil-piperidin-l-karbonil)-l,4,5,6-tetrahidropirolo[3,4-c]pirazol-3-il]benzamid, hdirohlorid

Smeša N-[5-(4-aminometil-piperidin-1 -karbonil)-6,6-dimetil-2,4,5,6-tetrahidro-pirolo[3,4-c]pirazol-3-il]-4-hloro-benzamida (310 mg, 0.7 mmola), 1,4 dibromometana (92 ul, 0.7 mmola) i NaHC03(600 mg, 7 mmola) u apsolutnom etanolu (15 ml) je zagrevana na 150 °C tokom 15 minuta u mikrotalasnoj peći. Posle hlađenja, rastvarao je isparen. Ostatak je prikupljen sa smešom dihlorometan/MeOH (90:10) i vodom, dobijena suspenzija filtrirana i organski sloj isparen do suva. Ostatak je prečišćen brzom hromatografijom sa smešom dihlorometan/MeOH /30% NH4OH aq (95/5/0.5). Proizvod je dobijen u prinosu od 20% (71 mg).

Jedinjenje je rastvoreno u metanolu (2 ml) i dodan je rastvor 4N HC1 u dioksanu (40 ul, 0.16 mmola) i zatim rastvor otparen. Dobijena čvrsta supstanca je mrvljena u etru da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao beli prah.

ESI MS: m/z 485 (MH+);

<1>II NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 ppm 1.24 (m, 2H), 1.63 (s, 6H), 1.92 (m, 7H), 2.67 (t, J = 11.83 Hz, 2H), 3,01 (m, 2H), 3.09 (t, J = 6.46 Hz, 2H), 3.47 (m, 4H), 4..56 (s, 2H), 7.59 (d, J = 8.54 Hz, 2H), 8.01 (d, J = 8.66 Hz, 2H), 9.49 (s, IH), 11.02 (s, IH), 12.40 (s, IH).

Radeći na analogni način i korišćenjem pogodnih početnih materijala i bilo koji pogodni reaktant, kao u procesu koji je prethodno opisan, pripremljena su takođe dodatna jedinjenja formula (Ia) i (lb), kao što je opisano u sledećoj tablici V

Primer 21

Više jedinjenja pronalaska formule (Ia) i (lb), koja su dobijena kao što je ranije opisano, takođe su karakterisana tehnikama HPLC/MS, dakle, retencionim vremenom (r.t.) i masom [M+H]<+.>

Operativni uslovi su opisani u takstu koji sledi:

HPLC/MS Postupak 1

HPLC oprema se sastojala od Waters 2790 HPLC sistema opremljenim sa 996 Waters PDA detektorom i Micromass mod. ZQ single quadrupol masenim spektrometrom, opremljenim elektrosprej (ESI) jonskim izvorom. Kontrola instrumenta, prikupljanje podataka i obrada podataka su izvedeni softverom Millenium 4.0 i MassLynx 3.5

HLPC je izvođen na 25°C pri brzini toka od 1 ml/min koristeći RP18 Waters X Terra (4.6 x 50 mm, 3.5 pm) kolonu. Mobilna faza A je bio amonijumacetat 5 mM pufer (pH 5.5 sa smešom sirćetna kiselina/acetonitril 95:5), mobilna faza B je bila voda /acetonitril (5:95); gradijent je bio od 10 do 90% B za 8 minuta i tada držan 90%o B 2 minuta. Injekciona zapremina je bila 10ul.

Maseni spektrometar je radio u modalitetu pozitivnog i negativnog jona, voltaža kapilare je stavljena na 2.5 KV, temperatura izvora je bila 120°C; napon cevi je bio 10 V, puni sken, maseni opseg je stavljen od 100 do 800 amu.

HPLC/MS Postupak 2

HPLC oprema se sastojala od Waters 2790 HPLC sistema opremljenimsa 996 Waters PDA detektorom i Micromass mod. ZQ single quadrupol masenim spektrometrom, opremljenim elektrosprej (ESI) jonskim izvorom. Kontrola instrumenta, prikupljanje podataka i obrada podataka su izvedeni softverom Millenium 4.0 i MassLynx 3.5

HPLC je izvođena na 25°C pri brzini toka od 1 ml/min koristeći RP18 Waters X Terra (4.6 x 50 mm, 3.5pm)kolonu. Mobilna faza A je bio amonijum acetat 5 mM pufer (pH 5.5 sa smešom sirćetna kiselina/acetonitril 95:5), mobilna faza B je bila voda /acetonitril (5:95); gradijent je bio od 10 do 90% B za 4 minuta i zatim držan 90%o B 1 minut. Injekciona zapremina je bila 10 pl.

Maseni spektrometar je radio u modalitetu pozitivnog i negativnog j ona, voltaža kapilare je stavljena na 2.5 KV, temperatura izvora je bila 120°C; napon cevi je bio 10 V; puni sken, maseni opseg je stavljen od 100 do 800 amu.

HPLC/MS Postupak 3

Maseni spektri su određeni na masenom sprektrometru Finnigan LCQ "ion trap" koristeći elektrosprej (ESI) jonizacionu tehniku sa detekcijom pozitivnih i negativnih jona. Maseni spektrometar je bio direktno povezan za SSP4000 HPLC sistem (Thermo Separation), opremljen sa LePal autosemplerom (CTC Analitics) i UV 6000LP PDA detektorom (Thermo Separation). Kontrola instrumenta, prikupljanje i obrada podataka su izvedeni korišćenjem softvera Xcalibar 1.2. HPLC analiza je izvedena na sobnoj temperaturi pri brzini toka od 1 ml/min koristeći RP18 Waters X Terra (4.6 x 50 mm, 3.5 pm) kolonu. Mobilna faza A je bio amonijum acetat 5 mM pufer (pH 5.5 sa smešom sirćetn kiselin/acetonitril 90/10, mobilna faza B je bila voda /acetonitril (10:90); gradijent je bio od 10 do 100% B za 7 minuta i zatim držan 100% B 2 minuta pre reekvilibracije. Ukupno Lc vreme je 12 minuta. Injekciona zapremina je bila 10 ul. Detekcija je izvedena između 215 i 400 nm.

Joni su generisani pod sledećim uslovima: voltaža ESI sprejera 4.0 kV, temperatura grejane kapilare 255°C, azot sa pritiskom od 5.0 Bara. Korišćen je modalitet detekcije ukupunog skrina (od 50 do 1000 amu) sa MS/MS analizom za najintenzivniji jon ( normalizovana koliziona energija: 35%)

UV detekcija : 215-400 nm.

HPLC/ MS Postupak4

HPLC sistem koji je korišćen (Albance 2790, sa termostatiranim autosemplerom i ventilom LabPro, UV detektorom 2487 i "satin "interfejsom, ZQ maseni spektrometar sa ESI inerfejsom) je proizvod Waters Inc., Milford, Massachusets. Hemililuminscentni azotni detektor (CLND) mod. 8060 je proizvod ANTEK Instruments Inc., Houston, Texas. Tečnost je mešana uz pomoć Miniprep 75 je proizvod Tečan Group Ltd., Maennedorf, Svvitzerland.

Hromatografski uslovi su bili sledeći: Brzina toka je stavljena na 1 ml/min.

Korišćene su dve mobilne faze (mobilna faza A: 0.1 mravlja kiselina, mobilna faza B: 0.1%o mravlje kiseline u metanolu) za izvođenje u 10 min linearnom gradijentu od 5% B do 95% B, koji je zadržan 2 min, i praćen re-ekvilibracijom na 5% B sledeća 3 min. Vreme izvođenja je bilo 15 min. Injekciona zapremina 10 ul, temperatura

autosemplera 25°C, talasna dužina detekcije 220 nm.

Kao što je prikazano u sledećoj tablici VI, neka druga jedinjenja formule (Ia) i (lb) su pripremljena, svako identifikovano ranije pomeenutim A-M-B sistemom kodiranja, i zatim karakterisano preko HPLC/MS, prema eksperimentalnim uslovima koji su ranije izneti.

Claims (33)

1).Postupak za lečenje poremećaja proliferacije ćelija koji su izazvani i/ili povezani sa izmenjenim ćelijskim ciklusom zavisnim od aktivnosti kinaze, administracijom sisarima kojima je takvo lečenje, potrebne efektivne količine derivata pirazola koji su predstavljeni formulama (Ia) i (lb). gde: R je grupa -COR<a>, -C0NHR<3>ili CONR<a>R<b>gde su Ra i R<b>, svaki nezavisno, vodonik ili po izboru supstituisana grupa koja je izabrana od pravog ili razgranatog Ci-Cćalkila, C3-C6cikloalkila, arila, arilalkila, heterociklila ili heterocikloalkila ili; zajedno sa atomom azota za koji su vezani, Ra i R<b>mogu da grade po izboru supstituisani 5 ili 6 člani heterocikl koji po izboru sadrži jedan dodatni hetero atom ili heteroatomsku grupu izabranu od N, NH, 0 ili S; Rije izabran iz grupe koja se sastoji od: a) pravog ili razgranatog C3-C4alkila; b) cikloalkila, cikloalkil-alkila ili alkil-ciklalkila gde cikloalikil grupa sadrži bilo koju C3-C6cikloalikl grupu i gde alkil grupa sadrži bilo koju pravu ili razgranatu C1-C4alkil grupu. c) 3-metiltienil-2-il; 2-tienil; fenil; 2,6-difluorofenil; 4-(aminosulfonil)fenil; 4-(dimetilaminometil)fenil; 4-(4-metilpiperazinil)metil-fenil; d) grupe formule (Ila) ili (Ilb): gde, u formuli (Ila), krug predstavlja 5 do 7 člani heterociklični prsten gde X, direktno vezan za ostatak molekula, predstavlja atom ugljenika ili azota; Y je atom ugljenika, azota, kiseonika ili sumpora ili je NH grupa, uz uslov da najmanje jedan od X i Y nije atom ugljenika; Rc je", nezavisno jedan od drugog i u bilo kom od slobodnih položaja heterocikličnog prstena formule (Ila), atom halogena ili hidroksi grupa ili je po izboru supstituisana grupa izabrana od pravog ili razgranatog CpCć alkila, C3-C6cikloalkila, arila, arilalkila, heterociklila, heterocikloalkila, amino, aminokarbonila, karboksi, okso (=0), alkoskikarbonila, alkilkarbonila ili arilkarbonila; i nje 0 ili ceo broj od 1 do 4; e) grupe formule (IIc) ili (Ud): gde R<d>, R'<d>i R<c>predstavljaju isti ili različiti i nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili pravi ili razgranati Ci-Cć alkil koji je po izboru supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih od hidroksi (-0H), aminokarbonil (-CONH2) ili metilaminokarbonil (-CONHCH3): uz uslov da u formuli (Ia), kad je Ri grupa formule (IIc) i jedan odR<d>i R'<d>je atom vodonika dok je drugi od R<d>i R'd etil ili n-butil, onda R nije -COR<a>gde je R<a>3-bromofenil, benzil, 4-ten>butilfenil, 4-terc-butilfenilmetil, 4-fluorofenilmetil, ciklopropil ili 2-naftilmetil; ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.

2) . Postupak prema zahtevu 1 gde je poremećaj proliferacie ćelija izabran iz grupe koja se sastoji od kancera, Alzheimer-ove bolesti, viralnih infekcija, autoimunih oboljenja i neurodegenerativnih poremećaja.

3) . Postupak prema zahtevu 2, gde je kancer izabran iz grupekoja se sastoji od karcinoma, karcinoma skvamoznih ćelija; hematopoetski tumori limfoidnog porekla; tumora mezenhimalnog porekla, tumora centralnog i perifernog nervnog sistema, melanoma, seminoma, teratokarcinoma, osteosarkoma, kseroderm pigmentozum, keratoksantoma, tiroidnog folikularnog kancera i Kaprosi sarkoma.

4) . Postupak prema zahtevu 1 gde je poremećaj proliferacije ćelija izabran iz grupe koja se sastoji od benigne hiperplazije prostate, familialne adenomatoze polipoze, neuro-fibromatoze, psoriaze, proliferacije vaskularnih glatkih ćelija povezane sa aterosklerozom, pulmonarne fibroze, artririsa, glomerulonefritisa i post-operacione stenoze i restenoze.

5) . Postupak prema zahtevu 1 koji obezbeđuje angiogenezu tumora i inhibiciju metastaza.

6) . Postupak prema zahtevu 1 koji obezbeđuje lečenje odbacivanja transplanta organa i domaćin versus grafit.

7) . Postupak prema zahtevu 1 koji obezbeđuje lečenje ili prevenciju alopecija koje su indukovane radioterapijom ili hemoterapijom.

8) . Postupak prema zahtevu 1 koji dalje sadrži izlaganje sisara kojima je to potrebno režimu radioterapije ili hemoterapije u kombinaciji sa najmanje jednim citostatičkim ih citotoksičnim agensom.

9) . Postupak prema zahtevu 1 gde je sisar kome je to potrebno, čovek.

10) . Postupak za inhibiciju aktivnosti kinaze zavisne od ciklina , naznačen time, što sadrži kontakt pomenute kinaze sa efektivnom količinom jedinjenja kako je definisano u zahtevu 1.

11) . Jedinjenje predstavljeno formulom (Ia) ili (lb) gde: R je grupa -COR\ -CONHR<a>ili CONR<a>R<b>gde su R<a>i R<b>, svaki nezavisno, vodonik ili po izboru supstituisana grupa koja je izabrana od pravog ili razgranatog Ci-Cgalkila, C3-C6cikloalkila, arila, arilalkila, heterociklila ili heterocikloalkila ili; zajedno sa atomom azota za koji su vezani, R<a>i R<b>mogu da grade po izboru supstituisani 5 ili 6 člani heterocikl koji po izboru sadrži jedan dodatni hetero atom ili heteroatomsku grupu izabranu od N, NH, 0 ili S; Rije izabran iz grupe koja se sastoji od: a) pravog ili razgranatog C3-C4alkila; b) cikloalkila, cikloalkil-alkila ili alkil-ciklalkila gde cikloalikil grupa sadrži bilo koju C3-C6cikloalikl grupu i gde alkil grupa sadrži bilo koju pravu ili razgranatu C1-C4alkil grupu. c) 3-metiltienil-2-il; 2-tienil; fenil; 2,6-difluorofenil; 4-(aminosulofnil)fenil; 4-(dimetilaminometil)fenil; 4-(4-metilpiperazinil)metil-fenil; d) grupe formule (Ila) ili (Ilb): gde, u formuli (Ila), krug predstavlja 5 do 7 člani heterociklični prsten gde X, direktno vezan za ostatak molekula, predstavlja atom ugljenika ili azota; Y je atom ugljenika, azota, kiseonika ili sumpora ili je NH grupa, uz uslov da najmanje jedan od X i Y nije atom ugljenika; Rc je nezavisno jedan od drugog i u bilo kom od slobodnih položaja heterocikličnog prstena formule (Ila), atom halogena ili hidroksi grupa ili je po izboru supstituisana grupa izabrana od pravog ili razgranatog C1-C6alkila, C3-C6cikloalkila, arila, arilalkila, heterociklila, heterocikloalkila, amino, aminokarbonila, karboksi, okso (=0), alkoskikarbonila, alkilkarbonila ili arilkarbonila; i nje 0 ili ceo broj od 1 do 4; e) grupe formule (IIc) ili (Ud): gde R<d>, R'<d>i R<c>predstavljaju isti ili različiti i nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili pravi ili razgranati C\- C(, alkil koji je po izboru supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih od hidroksi (-0H), aminokarbonil (-CONH2) ili metilaminokarbonil (-CONHCH3): uz uslov da u formuli (Ia), kad je Rigrupa formule (IIc) ijedan od R<d>i R'd je atom vodonika dok je drugi od R<d>i R,<d>etil ili n-butil, onda R nije -COR<a>gde je R<a>3-bromofenil, benzil, 4-terc-butilfenil, 4-terc-butilfenilmetil, 4-fiuorofenilmetil, ciklopropil ili 2-naftilmetil; ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.

12) . Jedinjenje formule (Ia) ili (lb) prema zahtevu 11 , naznačeno time, što je R grupa -COR<a>, R<a>kao što je definisano u zahtevu 11 i Rije terc-butil.

13) . Jedinjenje formule (Ia) ili (lb) prema zahtevu 11 , naznačeno time, što je R grupa -CONHR<3>, R<a>kao što je definisano u zahtevu 11 i Rije terc-butil.

14) . Jedinjenje formule (Ia) ili (lb) prema zahtevu 11 , naznačeno time, što je R grupa -CONR<a>R<b>, R<a>i R<b>u kao što je definisano u zahtevu 11 i Rije terc-butil

15) . Jedinjenje formule (Ia) ili (lb) prema zahtevu 11 , naznačeno time, što je R grupa kao što je definisano u zahtevu 11 i Rije grupa formule (Ila) izabrane od : gde su n i R<c>kao što je definisano u zahtevu 11.

16). Jedinjenje formule (Ia) ili (lb) prema zahtevu 11 , naznačeno time, što je R grupa kao što je definisano u zahtevu Ili Rije grupa formule (Ila) izabrane od : gde je R° kao što je definisano u zahtevu 11.

17) . Jedinjenje formule (Ia) prema zahtevu 11 , naznačeno time, što je R grupa - COR<a>pri čemu je Ra 4-fluorofenil ili ciklobutil, i R| je kao što je definisano u zahtevu 11.

18) . Jedinjenje formule (Ia) prema zahtevu 11, naznačeno time, što je R kao što je definisano u zahtevu 11 i Rije grupa izabrana od terc-butil, 1 -metil-piperidin-4-il, 1-metil-piperazinil-4-il, 2-(R,S)-tetrahidrofuranil-2-il, 2-(R)-tetrahidrofuranil-2-ili ili 2-(S)-tetrahidrofuranil-2-il:

19) . Jedinjenje formule (Ia) ili (lb), prema zahtevu 11, naznačeno time, stoje bilo koji od R<a>, R<b>i Rc je grupa, kao što je deinisano u zahtevu 11, po izboru supstituisana, najednom ili više njihovih slobodnih položaja, sa grupama nezavisno izabranih od: halogen, nitro, okso grupe (=0), cijano, alkil, polifluorinisani alkil, polifluorinisani alkoksi, alkenil, alkinil, hidroksialkil, aril, arilalkil, heterociklil, cikloalkil, hidroksi, alkoksi, ariloksi, heterocikliloksi, metilendioksi, alkilkarboniloksi, arilkarboniloksi, cikloalkeniloksi, alkilidenaminooksi, karboksi, alkoksikarbonil, ariloksikarbonil, cikloalkiloksikarbonil, amino, ureido, alkilamino, dialkilamino, arilamino, diarilamino, formilamino, alkilkarbonilamino, arilkarbonilamino, heterociklilkarbonilamino, alkoksikarbonilamino, alkoksiimino, alkilsulfonilamino, arilsulfonilamino, formil, alkilkarbonil, arilkarbonil, cikloalkilkarbonil, heterociklilkarbonil, aminokarbonil, alkilaminokarbonil, dialkilaminokarbonil, alkilsulfonil, arilsulfonil, aminosulfonil, alkilaminosulfonil, dialkilamisnosulfonil, ariltio i alkiltio.

20) . Jedinjenje formule (Ia) ili (lb), po izboru u obliku farmaceutski prihvatljive soli, izabrano iz grupe koja se sastoji od: N-{6,6-dimetil-5-[(l-metilpiperidin-4-il)karbonil]-2,4,5,6-tetrahidropirolo[3,4-c]pirazol-3-il}ciklobutankarboksamid; N-[5-(2,2-dimetilpropanoil)-6,6-dimetil-1,4,5,6-tetrahidropirolo[3,4-clpirazol-3-il]-4-fluorobenzamid; N-[5-(2,2-dimetilpropanoil)-2,4,5,6-tetrahidropirolo[3,4-c]pirazol-6-spirociklopropan-3-il]-4-fluorobenzamid N-{6,6-dimetil-5-[(2R)-tetrahidrofuran-2-ilkarbonil]-l,4,5,6-tetrahidropirolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-fluorobenzamid; N-{6,6-dimetil-5-[(2S)-tetrahidrofuran-2-ilkarbonil]-1,4,5,6-tetrahidropirolo [3,4-c]pirazol-3 -il} -4-fluorobenzamid; N-{6,6-dimetil-5-[(l-metilpiperidin-4-il)karbonil]-2,4,5,6-tetrahidropirolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-fliorobenzamid; N-[5-(l-metilpiperidin-4-il)karbonil]-2,4,5,6-tetrahidropirolo[3,4-c]pirazol-6-spirociklopropan-3-il]-4-fluorobenzamid N-{6,6-dimetil-5-[(4-metilpiperazin-l-il)karbonil]-2,4,5,6-tetrahidropirolo [3,4-c]pirazol-3 -il} -4-fluorobenzamid; N-[5-(4-metilpiperazin-l-il)karbonil]-2,4,5,6-tetrahidropirolo[3,4-c]pirazol-6-spirociklopropan-3-il]-4-fluorobenzamid 4-hloro- N-{6,6-dimetil-5-(4-pirolidin-l-ilmetil-piperidin-l-karbonil]-l,4,5,6-tetrahidro-pirolo[3,4-c]pirazol-3-il}-benzamid;

21) . Bilo koje jedinjenj formule (Ia) ih (lb), po izboru u obliku farmaceutski prihvatljive soli, kao stoje specifično identifikovano u tablicama III, IV, V i VI eksperimentalnog dela.

22) . Jedinjenje A13-M1-B03 formule (Ia), naznačeno time, što je R grupa -COR<a>pri čemu je R<a>ciklobutil a Rije grupa formule (Ila) koja odgovara l-metil-piperidil-4-ilu, bilo kao takvo ili u obliku hlorovodonične ili mezilatne soli.

23) . Postupak za dobijanje jedinjenja formule (Ia) ili (lb) kao što je definisano u zahtevu 11, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli,, naznačen time, što obuhvata: . a) reagovanje jedinjenje formule (lila) ili (Illb) sa acetonitrilom da se dobije odgovarajući derivat formule (IVa) ili (IVb) b) zaštita amino grupe jedinjenja formule (IVa) ili (IVb) tako da se dobije odgovarajući derivat formule (Va) ili (Vb) gde je Q pogodna zaštitna grupa amina; c). reagovanje jedinjenja čija je formula (Va) ili (Vb) sa pogodnim agensom za alkilovanje tako da se dobije odgovarajući estarski derivat formule (Via) ili (VIb) gde Alk predstvlja pogodnu C1-C4alkil grupu; d) reagovanje jedinjenja formula (Via) ili (VIb) sa natrijum hidridom (NaH)) tako da se dobije odgovarajući derivat formule (Vila) ili (Vllb) e) reagovanje jedinjenja formula (Vila) ili (Vllb) sa hidrazin hidratom tako da se dobije jedinjenje formule (Vllla) ili (Vlllb) f) reagovanje jedinjenja formula (Vllla) ili (Vlllb) sa hloroformatom tako da se dobije derivat formule (IXa) ili (IXb), svaki od njih u bilo kom od dva regioizomerna oblika i reagovanjem jedinjenja formula (IXa) i (IXb) prema bilo kome od alternativnih koraka (g.l), (g.2) ili (g.3) g.l) sa jedinjenjem formule (X) R<a>CO-Z (X) gde je Ra kao što je definisano u zahtevu 11 i Z je atom halogena, tako da se dobije jedinjenje formule (IXa) ili (IXb) gde je R grupa -CORa; g.2) sa jedinjenjem formule (XII) R<a>NCO (XII) gde je R<a>kao što je definisano u zahtevu 11 tako da se dobije jedinjenje formule (XIa) ili (XIb) gde je R grupa -CONHR<3>; ili g.3) sa pogodnim aminom formule (XIII) u prisustvu trifosgena ili pogodnog hloroformata HNR<a>R<b>(XIII) gde su R<a>i R<b>kao što je definisano u zahtevu 11, tako da se dobije jedinjenje formule (XIa) ili (XIb) gde je R grupa -CONR<a>R<b>; h) skidanje zaštite amino grupe jedinjenja formule (XIa) ili XIb) dobijenog prema bilo kome od koraka od (g.l) do (g.3), tako da se dobije odgovarajući derivat formule (XIVa) ili (XIVb) gde R ima ranije opisano značenje; i reagovanje jedinjenja formule (XIVa) ili (XIVb) prema bilo kome od alternativnih koraka (i.l), (i.2), (i.3) ili (i.4). i.l) sa derivatom acil halida formule (XV) Ri-COZ (XV) gde je Rikao stoje izloženo u zahtevu 11 pod grupama (a), (b), (c), (Ila) sa X kao atomom ugljenika i (Ilb), i Z je atom halogena, tako da se dobije jedinjenje formule (XVIa) ili (XVIb) gde su R i Rikao što je ranije definisano; i.2) sa 5 do 7 članim heterocikličnim jedinjenjem formule (XVII) ili pogodnim aminom formule (XVIII), u prisustvu trifosgena gde X je NH a Y, R<c>, n, R<d>i R'<d>su kao što je definisano u zahtevu 11, tako da se dobiju odgovarajuća jedinjenja formule (XVIa) ili (XVIb) gde je R kao što je gore definisano aR\je ili grupa formule (Ila) sa X kao atomom azota i R, Y, R<c>i n su kao što je gore definisano, ili formula (IIc) gde su R<d>i R'd kao što je ranije definisano; 1.3) sa karboksilnom kiselinom formule (XIX) u prisustvu pogodnog agensa za kondenzovanje Ri-COOH (XIX) tako da se dobije jedinjenje formula (XVIa) ili (XVIb) gde jeR\kao što je izloženo u formuli (Ia) ili (lb) pod grupama (a), (b), (c), ili je to grupa formule (Ila) sa X kao atomom ugljenika ili formule (Ilb), i R, Y, R° i n su kao što je gore definisano; 1.4) sa jedinjenjem formule (XX) R,-COZ (XX) gde R\je grupa formule (Ud) a Z je atom hlora ili broma, tako da se dobije jedinjenje formule (XVIa) ili (XVIb) gde je R kao što je gore definisano a Rije grupa formule (Ud); i j) reagovanje jedinjenja formula (XVIa) ili (XVIb) dobijenim prema bilo kom od koraka od (i.l) do (i.4) u baznim uslovima, tako da se dobije odgovarajući derivat formule (Ia) ili (lb) gde su R i Rikao stoje ranije definisano; i, po izboru, f) njihovo pretvaranje u druga jedinjenja formule (Ia) ili (lb), i/ili u njihove farmaceutski prihvatljive soli.

24) . Postupak prema zahtevu 23, naznačen time, što je u stupnju (b), Q je terc-butioksikarbonil (boe).

25) . Postupak prema zahtevu 23 , naznačen time, što je u stupnju (c) Alk je metil.

26) . Jedinjenje formule (Vila) ili (Vllb) naznačeno time, što je Q predstavlja pogodnu zaštitnu grupu azota kao što je terc-butiksikarbonil (boe).

27) Biblioteka dva ili više jedinjenja formule (Ia) gde R je grupa -COR<a>, -CONHR<3>ili CONR<a>R<b>gde su R<a>i R<b>, svaki nezavisno, vodonik ili po izboru supstituisana grupa koja je izabrana od pravog ili razgranatog Ci-C6alkila, C3-C6cikloalkila, arila, arilalkila, heterociklila ili heterocikloalkila ili; zajedno sa atomom azota za koji su vezani, R<a>i R<b>mogu da grade po izboru supstituisani 5 ili 6 člani heterocikl koji po izboru sadrži jedan dodatni hetero atom ili heteroatomsku grupu izabranu od N, NH, 0 ili S; Ri je izabran iz grupe koja se sastoji od: a) pravog ili razgranatog C3-C4alkila; b) cikloalkila, cikloalkil-alkila ili alkil-ciklalkila gde cikloalikil grupa sadrži bilo koju C3-C6cikloalikl grupu i gde alkil grupa sadrži bilo koju pravu ili razgranam C1-C4alkil grupu. c) 3-metiltienil-2-il; 2-tienil; fenil; 2,6-difluorofenil; 4-(aminosulfonil)fenil 4-(dimetilaminometil)fenil; 4-(4-metilpiperazinil)metil-fenil; d) grupe formule (Ila) ili (Ilb): gde, u formuli (Ila), krug predstavlja 5 do 7 člani heterociklični prsten gde X, direktno vezan za ostatak molekula, predstavlja atom ugljenika ili azota; Y je atom ugljenika, azota, kiseonika ili sumpora ili je to NH grupa, uz uslov da najmanje jedan od X i Y nije atom ugljenika; R<c>je nezavisno jedan od drugog i u bilo kom od slobodnih položaja heterocikličnog prstena formule (Ila), atom halogena ili hidroksi grupa ili je po izboru supstituisana grupa izabrana od pravog ili razgranatog Ci- C(, alkila, C3-C6cikloalkila, arila, arilalkila, heterociklila, heterocikloalkila, amino, aminokarbonila, karboksi, okso (=0), alkoksikarbonila, alkilkarbonila ili arilkarbonila; i nje 0 ili ceo broj od 1 do 4; e) grupa formule (IIc) ili (Ud): gde R<d>, R,<đ>i R'predstavljaju isti ili različiti i nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili pravi ili razgrnati C\- C(, alkil koji je po izboru supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih od hidroksi (-OH), aminokarbonil (-CONH2) ili metilaminokarbonil (-CONHCH3): uz uslov da u formuli (Ia), kad jeR\grupa formule (IIc) i jedan od R<d>i R'<d>je atom vodonika dok je drugi od R<d>i R'<d>etil ili n-butil, onda R nije -COR<a>gde je R<a>3-bromofenil, benzil, 4-terc-butilfenil, 4-terc-butilfenilmetil, 4-fluorofenilmetil, ciklopropil ili 2-naftilmetil; ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.

28). Biblioteka dva ili više jedinjenja formule (lb) gde R je grupa -COR<a>, -CONHR<3>ili CONR<a>R<b>gde su R<a>i R<b>, svaki nezavisno, vodonik ili po izboru supstituisana grupa koja je izabrana od pravog ili razgranatog Ci-Cćalkila, C3-C6cikloalkila, arila, arilalkila, heterociklila ili heterocikloalkila ili; zajedno sa atomom azota za koji su vezani, R<a>i R<b>mogu da grade po izboru supstituisani 5 ili 6 člani heterocikl koji po izboru sadrži jedan dodatni hetero atom ili heteroatomsku grupu izabranu od N, NH, 0 ili S; Rije izabran iz grupe koja se sastoji od: a) pravog ili razgranatog C3-C4alkila; b) cikloalkila, cikloalkil-alkila ili alkil-ciklalkila gde cikloalikil grupa sadrži bilo koju C3-C6cikloalikl grupu i gde alkil grupa sadrži bilo koju pravu ili razgranatu C1-C4alkil grupu. c) 3-metiltienil-2-il; 2-tienil; fenil; 2,6-difluorofenil; 4-(aminosulfonil)fenil 4-(dimetilaminometil)fenil; 4-(4-metilpiperazinil)metil-fenil; d) grupe formule (Ila) ili (Ilb): gde, u formuli (Ila), krug predstavlja 5 do 7 člani heterociklični prsten gde X, direktno vezan za ostatak molekula, predstavlja atom ugljenika ili azota; Y je atom ugljenika, azota, kiseonika ili sumpora ili je to NH grupa, uz uslov da najmanje jedan od X i Y nije atom ugljenika; R<c>je nezavisno jedan od drugog i u bilo kom od slobodnih položaja heterocikličnog prstena formule (Ila), atom halogena ili hidroksi grupa ili je po izboru supstituisana grupa izabrana od pravog ili razgranatog Cj-Cćalkila, C3-C6cikloalkila, arila, arilalkila, heterociklila, heterocikloalkila, amino, aminokarbonila, karboksi, okso (=0), alkoskikarbonila, alkilkarbonila ili arilkarbonila; i nje 0 ili ceo broj od 1 do 4; e) grupa formule (IIc) ili (Ud): gde R<d>, R'<d>i R'predstavljaju isti ili različiti i nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili pravi ili razgrnati Ci-Cć alkil koji je po izboru supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih od hidroksi (-0H), aminokarbonil (-CONH2) ili metilaminokarbonil (-CONHCH3): ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.

29) . Farmaceutski preparat, naznačen time, što sadrži terapeutski efektivnu količinu jedinjenja formule (Ia) ili (lb), kao što je definisano u zahtevu 11, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijent, nosač i/ili razblaživač.

30) . Farmaceutski preparat prema zahtevu 29, nazanačen time, što sadrži još i jedan ili više hemoterapeutskih agenasa.

31) . Proizvod ili pribor, naznačen time, što sadrži jedinjenje formule (Ia) ili (lb) kao što je definisano u zahtevu 11 ili njihov farmaceutski preparat kao što je definisano u zahtevu 29, ijedan ili više hemoterapeutskih agenasa, kao kombinovani preparat za istovremenu, odvojenu ili uzastopnu upotrebu u terapiji protiv kancera.

32) . Jedinjenje formule (Ia) ili (lb), kao što je definisano u zahtevu 11, za primenu kao lek.

33) . Primena jedinjenja Formule (Ia) ili (lb), kao što je definisano u zahtevu 11, za proizvodnju leka sa antitumornom aktivnošću.