RS20060584A - Beta-karbolini koji su korisni za lečenje inflamatorne bolesti - Google Patents

Beta-karbolini koji su korisni za lečenje inflamatorne bolesti

Info

Publication number
RS20060584A
RS20060584A RSP-2006/0584A RSP20060584A RS20060584A RS 20060584 A RS20060584 A RS 20060584A RS P20060584 A RSP20060584 A RS P20060584A RS 20060584 A RS20060584 A RS 20060584A
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
group
aliphatic
hydrogen
optionally substituted
halo
Prior art date
Application number
RSP-2006/0584A
Other languages
English (en)
Inventor
Francois Soucy
Michael Hepperle
Julie Fields Liu
Raman Prakash
Jeremy D. Little
Paul E. Fleming
Dominic Reynolds
Geraldine Harriman
Original Assignee
Millennium Pharmaceuticals Inc.,
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=35045213&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS20060584(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Millennium Pharmaceuticals Inc., filed Critical Millennium Pharmaceuticals Inc.,
Publication of RS20060584A publication Critical patent/RS20060584A/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/08—Antibacterial agents for leprosy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)

Abstract

Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja beta-karbolina formule III-A-aa, pri čemu su Q, G, R1, R2, R3 i R6b kako je opisano u specifikaciji. Jedinjenja su korisna za lečenje bolesti kao što su inflamatorne bolesti i kancer.

Description

BETA- KARBOLIM KOJI SU KORISNI ZA LEĆENJE INFLAMATORNE BOLESTI
POLJE PRONALASKA
Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenja beta-karbolina, njihove farmaceutske kompozicije i postupke za korišćenje kompozicija u tretmanu bolesti. Jedinjenja su posebno korisna za lečenje inflamatornih bolesti i kancera.
POREKLO PRONALASKA
Transkriptivni (nuklearni) faktor NF-kB je član familije Rel proteina i obično je heterodimer sastavljen od p50 i p65 podjedinica. NF-kB je konstitutivno prisutan u citozolu i inaktiviran je povezivanjem sa jednim od inhibitora IkB familije. Palombella i saradnici, WO 95/25533, ukazuju da putevi svuda prisutnih protozoma igraju osnovnu ulogu u regulaciji aktivnosti NF-kB, tako što su odgovorni za procese p 105 do p50 i za degradaciju inhibitora proteina IkB-cl Chen i saradnici, Cell 84:853 (1996), ukazuju da se, pre degradacije, hcB-a podvrgavaju selektivnoj fosforilaciji na ostacima serina 32 i 36 pomoću višestrukih podjedinica kompleksa IkB kinaze (IKK). Fosforilacija IkB-ci se vrši pomoću IKK kompleksa koji ima dve katalitičke podgrupe, IKK-1 (IkB kinaza a ili IKK-a) i IKK-2 (IkB kinaza p ili IKK-p). Kada je izvršena fosforilacija, IkB je usmerena ka ubikvitinaciji i degradaciji pomoću 26S protozoma, omogućavajući translokaciju NF-kB u nukleus, gde se vezuje za specifične sekvence DNA unapređujući ciljane gene i stimulišući njihovu transkripciju. Inhibitori IKK mogu da blokiraju fosforilaciju IKB i dalje opadanje njegovih efekata, posebno onih koji su povezani sa faktorima transkripcije NF-kB.
Proteini koje geni produkuju pod regulacionom kontrolom NF-kB uključuju citokine, hemokine, molekule ćelijske adhezije i proteine koji su posrednici u rastu i kontroli ćelije. Značajno je da su mnogi od ovih proinflamatornih proteina takođe sposobni da deluju, bilo na autokrin ili parakrin način, na dalju stimulaciju aktivacije NF-kB. Dodatno, NF-kB igra ulogu u rastu normalnih i malignih ćelija. Osim toga, NF-kB je faktor heterodimeričke transkripcije koji može da aktivira veliki broj gena koji kodiraju, između ostalog, proinflamatorne citokine, kao što su IL-1, IL-2, TNFa ili IL-6. NF-kB je prisutan u citozolu ćelija, gradeći kompleks sa njegovim prirodno nastalim inhibitorom IkB. Stimulacija ćelija, na primer sa citokinima, vodi ka fosforilaciji a zatim proteolitičkoj degradaciji IkB. Ova proteolitička degradacija vodi ka aktiviranju NF-kB, koji nakon toga migrira u nukleus ćelije i aktivira veliki broj proinflamatornih gena.
Rinehart i saradnici, U.S. Pat. No. 4,631,149 (1986), otkrivaju jedinjenja beta-karbolina koja su korisna kao antivirusna, antibakterijska i antitumorna sredstva.
Ritzeler i saradnici, WO 01/68648, otkrivaju jedinjenja beta-karbolina koja imaju inhibitornu aktivnost IkB kinaze za upotrebu u tretmanu inflamatornih oboljenja (na primer, reumatoidni artritis), osteoartritisa, astme, kardiačnog infarkta, Alchajmerove bolesti, kancerogenih oboljenja (mogućnost citotoksičnih terapija) i ateroskleroze.
Bilo bi korisno da sc obezbede novi inhibitori IKK koji poseduju dobre terapeutske osobine, posebno za tretman inflamatornih bolesti i kancera.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
1. Opšti opis jedinjenja iz pronalaska: :
Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja su inhibitori IKK-2, i u skladu sa tim su korisna za tretman inflamatornih bolesti i kancera. Jedinjenja iz ovog pronalaska su predstavljena formulom I:
ili njenom farmaceutski prihvatljivom solju, pri čemu:
Prsten A je je izabran iz grupe koja sadrži:
(a) piridinil ili pirimidinil prsten koji je supstituisan sa (i) -CH2C(0)-G i 0-1 R<6a>grupom ili (ii) 1 -2 R<6a>grupom, i (b) morfolinil, piperidinil, piperazinil, pirolidinil, piranil, tetrahidrofuranil, cikloheksil, ciklopentil ili tiomorfolinil prsten koji je supstituisan sa (i) -C(R<9>)3, -W-G ili -G, (ii) 0-4 R<6b>i (iii) 0-1 okso grupama na ugljeniku u prstenu ili 0-2 okso grupama na sumporu u prstenu; svaka R<6a>grupa je nezavisno izabrana od Ci.6alifatične, halo, Ci.6alkoksi ili amino grupe; svaka R<6b>grupa je nezavisno izabrana od C1.3alifatične ili -N(R<7>)2grupe i dve R<6b>grupe na istom atomu ugljenika ili na susednim atomima ugljenika su opciono uzete zajedno sa ugljenikom (ugljenicima) koji se nalaze između da formiraju 5-6 člani prsten koji u prstenu ima 1-2 heteroatoma izabrana od N, O ili S; W je -Q-, -Q-C(0)-, -C(<R9>)2-C(R<9>)(R12)-, ili -C(R<9>)2-[C(R<9>)(R,<2>)]2- grupa; Q je -C(R<9>)2- ili -C(R<9>)2C(R<9>)2- grupa; G je -OH, -NR<4>R<5>, -N(R<9>)CONR4R<5>, -N(R<9>)S02(C,_3alifatična), -N(R<9>)COCF3, -N(R<9>)CO(C,.6alifatična), -N(R<9>)CO(heterociklil), -N(R<9>)CO(heteroaril), -N(R<9>)CO(aril) grupa, 3-10 člani monociklični ili biciklični heterociklični prsten ili 5-6 člani heteroaril prsten, pri čemu je svaki od heteroaril, aril i heterociklil radikala G opciono supstituisan sa 1-4 R10 grupom; R<1>je vodonik, halo, Ci.3 alifatična, amino, cijano, (Ci.3alkil)i.2 amino, C]_3 alkoksi, -CONH2, -NHCOCF3ili -CH2NH2grupa;
R je vodonik, halo, C 1.4 alifatična, Ci.2alkoksi ili Ci.2haloalkil grupa;
R3 je vodonik, halo, Ci^haloalkil, hidroksi, amino, cijano, ili opciono supstituisana grupa izabrana od Ci-6alifatične, Ci_6alkoksi, (Ci-6alkil)i_2amino, Ci-ćtioalkil, morfolinil, piperazinil, piperidinil ili pirolidinil grupe;
R<4>je vodonik, 3-7 člana heterociklil ili Ci.6alifatična grupa;
R<5>je: a) vodonik; b) opciono supstituisana grupa izabrana od aril, heteroaril, heterociklil, ili karbociklil grupe, ili
c) Ci-6alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa:
halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2, ili aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupom koja je opciono dalje supstituisana sa Ci_6alifatičnom, -CF3, halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom; svaka R grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili opciono supstituisane Cm alifatične grupe, ili su dve R<7>grupe na istom atomu azota uzete zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaka R<7a>grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili opciono supstituisane grupe izabrane od Ci.4 alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili su dve R<7a>grupe na istom atomu azota uzete zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaka R o grupa je nezavisno opciono supstituisana Ci.4alifatična grupa; svaka R<8a>grupa je nezavisno opciono supstituisana grupa izabrana od C 1.4 alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe; svaka R<9>grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili Ci.3alifatične grupe; svaka R<10>grupa je nezavisno izabrana od okso, -Ru,-T-R<11>ili -V-T-R<11>grupe, ili su u dva slučaja R<10>grupe uzete zajedno sa atomom (atomima) za koji su vezani da formiraju opciono supstituisani monociklični ili biciklični 3-8-člani aril, heteroaril, heterociklil, ili karbociklil prsten; svaka R<11>grupa je nezavisno izabrana od -CF3, halo, -OR<7a>, -CN, -SR<8a>, -S(0)2R<8a>, -C(0)R<7a>, -C02R<7a>, -N(R<7a>)2, -C(0)N(R<7a>)2, -N(R<7>)C(0)R<7a>, -N(R<7>)C02<R7a,><->S02N(R<7a>)2, -N(R<7>)S02R<7a>, -N(R<7>)C(0)N(R<7a>)2grupe ili opciono supstituisane grupe izabrane od Ci.6alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe;
Tje ravan ili račvast Ci^alkilen lanac;
V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(O)-, -S(0)2-, -C(0)- ili -C02- grupa; i
R12 je vodonik ili bočni lanac amino kiseline.
U narednom otelotvorenju, jedinjenja iz ovog pronalaska su predstavljena formulom I:
ih njenom tarmaceutski prihvatljivom solju, pri cemu je:
Prsten A izabran iz grupe koja sadrži:
(a) piridinil ili pirimidinil prsten koji je supstituisan sa (i) -CH2C(0)-G i 0-1 R<6a>grupom ili (ii) 1-2 R<6a>grupom, i (b) morfolinil, piperidinil, piperazinil, pirolidinil, piranil, tetrahidrofuranil, cikloheksil, ciklopentil ili tiomorfolinil prsten koji je supstituisan sa (i) -C(R<9>)3, -W-G ili -G, (ii) 0-4 R6b i (iii) 0-1 okso grupama na ugljeniku u prstenu ili 0-2 okso grupama na sumporu u prstenu; svaka R<6a>grupa je nezavisno izabrana od Cj-6alifatične, halo, Ci_6alkoksi ili amino grupe; svaka R6b je nezavisno izabrana od Ci-3alifatične ili -N(R<7>)2grupe, i dve R<6b>grupe na istom ili susednom atomu ugljenika su opciono uzete zajedno sa atomom ugljenika da formiraju 5-6 člani prsten koji ima 1-2 heteroatoma u prstenu izabrana od izabrana od N, O ili S; -N(R9)CO(Ci-6 alifatična), -N(R<9>)CO(heterociklil), -N(R<9>)CO(heteroaril), -N(R<9>)CO(aril) grupa, 3-7 člani heterociklil prsten ili 5-6 člani heteroaril prsten, pri čemu je svaki heteroaril, aril i heterociklil radikal G opciono supstituisan sa 1-3 R<10>grupom; R<1>je vodonik, halo, Ci_3alifatična, amino, cijano, (C1-3alkil)i-2amino, C1.3alkoksi, -CONH2, -NHCOCF3ili -CH2NH2grupa; R<2>je vodonik, halo, Ci-3alifatična, -CF3grupa; R3 je vodonik, halo, Ci_6 alifatična, Cj^haloalkil, Ci-6 alkoksi, hidroksi, amino, cijano ili (Ci-6alkil)i_2 amino grupa; R4 je vodonik, 3-7 članad heterociklil ili Ci-6alifatična grupa; R<5>je vodonik, Ci-6alifatična grupa ili 3-7 člani heterociklični prsten koji ima 1-2 heteroatoma u prstenu izabrana od N, O, ili S, pri čemu je R<5>grupa opciono supstituisana sa halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -S(0)2N(R<7>)2, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2; svaka R<7>grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili CM alifatične grupe ili su dve R7 grupe na istom atomu azota uzete zajedno sa azotom da formiraju 5-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaka R je nezavisno izabrana od Cm alifatične grupe; svaka R9 je nezavisno izabrana od vodonika ili C1.3alifatične grupe; svaka R10 je nezavisno izabrana od okso, -R<11>, -T-R11 ili -V-T-R11 grupe; svaka R11 je nezavisno izabrana od Cm alifatične, halo, -S(0)2N(R<7>)2, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R7, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<7>ili -N(R7)C(0)N(R7)2 grupe;
T je ravan ili račvast Cm alkilen lanac;
V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(O)-, -S(0)2-, -C(O)- ili -C02- grupa; i
R12 je vodonik ili bočni lanac amino kiseline.
2. Jedinjenja i definicije:
Jedinjenja iz ovog pronalaska obuhvataju ona koja su generalno prethodno opisana, a dalje su ilustrovana grupama, podgrupama i vrstama koje su ovde otkrivene. Kako se ovde koriste, naredne definicije će se primenjivati u koliko nije drugačije navedeno. U svrhu ovog pronalaska, hemijski elementi su identifikovani u skladu sa Periodnim sistemom elemenata, CAS verzija, Handbook of Chemistrv and Phvsics, 75-to izdanje. Dodatno, opšti principi organske hernije opisani su u "Organic Chemistrv", Thomas Sorrell, Universitv Science Books, Sausalito: 1999., i "March's Advanced Organic Chemistrv", 5-to izdanje,: Smith, M. B. i March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001.
Kako se ovde koristi, naziv "alifatični" označava Q- C\ 2 hidrokarbonate ravnog lanca, račvastog lanca ili ciklične, koji su potpuno zasićeni ili koji sadrže jednu ili više nezasićenih jedinica ali koje nisu aromatične. Na primer, pogodne alifatične grupe obuhvataju supstituisane ili nesupstituisane linearne, račvaste ili ciklične alkil, alkenil, alkinil groupe i njihove hibride, kao što su (cikloalkil)alkil, (cikloalkenil)alkil ili (cikloalkil)alkenil grupe. Nazivi "alkil", "alkoksi", "hidroksialkil", "alkoksialkil" i "alkoksikarbonil", korišćeni sami ili kao deo većeg radikala, obuhvataju i ravne i račvaste lance koji sadrže jedan do dvanaest atoma ugljenika. Nazivi "alkenil" i "alkinil", korišćeni sami ili kao deo većeg radikala, obuhvataju i ravne i račvaste lance koji sadrže dva do dvanaest atoma ugljenika. Naziv "cikloalkil", korišćen sam ili kao deo većeg radikala, obuhvata ciklične C3-C12hidrokarbonate koji su potpuno zasićeni ili koji sadrže jednu ili više nezasićenih jedinica, ali koje nisu aromatične.
Nazivi "haloalkil", "haloalkenil" i "haloalkoksi", označavaju alkil, alkenil ili alkoksi grupu, u zavisnosti od slučaja, supstituisanu sa jednim ili više atoma halogena. Naziv "halogen" označava F, Cl, Br ili I.
Naziv "heteroatom" označava azot, kiseonik ili sumpor i obuhvata bilo koji oksidni oblik azota i sumpora i kvaternerni oblik bilo kog baznog azota. Takođe, naziv "azot" obuhvata supstitutabilni azot heterocikličnog prstena. Samo kao primer, u zasićenom ili delimično nezasićenom prstenu koji ima 0-3 heteroatoma izabrana od kiseonika, sumpora ili azota, azot može da bude N (kao u 3,4-dihidro-2-pirolil), NH (kao u pirolidinilu) ili NR<+>(kao u N-supstituisanom pirolidinilu).
Nazivi "karbocikl", "karbociklil", "karbociklo", ili "karbocikličan", kako se ovde koristi, označava alifatični sistem prstena koji ima tri do četrnaest članova. Nazivi "karbocikl", "karbociklil", "karbociklo" ili "karbocikličan", bilo da su zasićeni ili delimično nezasićeni, se takođe odnose na prstenove koji su opciono supstituisani. Nazivi "karbocikl", "karbociklil", "karbociklo", ili "karbocikličan", takođe obuhvataju alifatične prstenove koji su spojeni sa jednim ili više aromatičnih ili alifatičnih prstenova, kao što je slučaj u dekahidronaftilu ili tetrahidronaftilu, gde je radikal ili mesto vezivanja na alifatičnom prstenu. Premošteni sistemi prstenova su takođe obuhvaćeni okvirom naziva "karbocikl", "karbociklil", "karbociklo", ili "karbocikličan".
Naziv "aril" korišćen sam ili kao deo većeg radikala, kao u "aralkil", "aralkoksi", ili "ariloksialkil", odnosi se na grupe aromatičnog prstena koji ima pet do četrnaest članova, kao što su fenil, benzil, fenetil, 1-naftil, 2-naftil, 1-antracil i 2-antracil. Naziv "aril" se takođe odnosi na prstenove koji su opciono supstituisani. Naziv "aril" može da ima isto značenje kao "aril prsten". "Aril" takođe obuhvata spojene sisteme policikličnih aromatičnih prstenova u kojima je aromatični prsten spojen sa jednim ili više prstenova. Primeri obuhvataju 1-naftil, 2-naftil, 1- antracil i 2-antracil. U okviru naziva "aril", kako se ovde koristi, takođe je obuhvaćena grupa u kojoj je aromatični prsten spojen sa jednim ili više alifatičnih prstenova, kao što je u indanil, fenantridinil ili tetrahidronaftil prstenovima, gde je radikal ili tačka vezivanja na aromatičnom prstenu.
Kako se ovde koriste, nazivi "heterocikl", "heterociklil" ili "heterocikličan" obuhvata alifatični sistem prstenova koji ima tri do četrnaest članova, preferirano pet do deset, u kojima je jedan ili više ugljenika u prstenu, preferirano jedan do četiri, svaki zamenjen sa heteroatomom kao što su N, O, ili S. Primeri heterocikličnih prstenova obuhvataju 3-lH-benzimidazol-2-on, (l-supstituisani)-2-okso-benzimidazol-3-il, 2-tetrahidrofuranil, 3-tetrahidrofuranil, 2-tetrahidropiranil, 3-tetrahidropiranil, 4-tetrahidropiranil, [l,3]-dioksalanil, [l,3]-ditiolanil, [l,3]-dioksanil, 2-tetrahidrotiofenil, 3-tetrahidrotiofenil, 2-morfolinil, 3-morfolinil, 4-morfolinil, 2-tiomorfolinil, 3-tiomorfolinil, 4-tiomorfolinil, 1-pirolidinil, 2-pirolidinil, 3-pirolidinil, 1-piperazinil, 2-piperazinil, 1-piperidinil, 2-piperidinil, 3-piperidinil, 4-piperidinil, 4- tiazolidinil, diazolinil, N-supstituisani diazolinil, 1- ftalimidinil, benzoksanil, benzopirolidinil, benzopiperidinil, benzoksalanil, benzotiolanil, i benzotianil. Unutar okvira naziva "heterociklil" ili "heterocikličan", kako se ovde koriste, takođe je obuhvaćena i grupa u kojoj je alifatični prsten koji sadrži heteroatom spojen za jedan ili više aromatičnih ili alifatičnih prstenova, kao što su indolinil, hromanil, fenantridinil ili tetrahidrokvinolinil, pri čemu se radikal ili tačka vezivanja nalazi na alifatičnom prstenu koji sadrži heteroatom. Premošteni sistemi prstena su takođe obuhvaćeni okvirom naziva "heterociklil" ili "heterocikličan". Naziv "heterocikl", "heterociklil" ili "heterocikličan" bilo zasićeni ili delimično nezasićeni, takođe se odnis na prstenove koji su opciono supstituisani.
Naziv "heteroaril", korišćen sam ili kao deo većeg radikala, kao u "heteroaralkil" ili "heteroarilalkoksi", odnosi se na grupe heteroaromatičnog prstena koje imaju pet do četrnaest članova. Primeri heteroaril prstenova uključuju 2-furanil, 3-furanil, 3-furazanil, N-imidazolil, 2-imidazolil, 4-imidazolil, 5-imidazolil, 3-izoksazolil, 4-izoksazolil, 5-izoksazolil, 2-oksadiazolil, 5-oksadiazolil, 2-oksazolil, 4-oksazolil, 5-oksazolil, 1-pirolil, 2-pirolil, 3-pirolil, 1-pirazolil, 2-pirazolil, 3-pirazolil, 2-piridil, 3-piridil, 4-piridil, 2-pirimidil, 4-pirimidil, 5-pirimidil, 3-piridazinil, 2-tiazolil, 4-tiazolil, 5-tiazolil, 5-tetrazolil, 2-triazolil, 5-triazolil, 2-tienil, 3-tienil, karbazolil, benzimidazolil, benzotienil, benzofuranil, indolil, kvinolinil, benzotriazolil, benzotiazolil, benzoksazolil, benzimidazolil, izokvinolinil, indazolil, izoindolil, akridinil ili benzoizoksazolil. Unutar okvira naziva "heteroaril", kako se ovde koristi, takođe je obuhvaćena grupa u kojoj je heteroaromatični prsten spojen za jedan ili više aromatičnih ili alifatičnih prstenova u kojima se radikal ili tačka vezivanja nalazi na heteroaromatičnom prstenu. Primeri obuhvataju tetrahidrokvinolinil, tetrahidroizokvinolinil i pirido[3,4-d]pirimidinil. Naziv "heteroaril" se takođe odnosi na prstenove koji su opciono supstituisani. Naziv "heteroaril" može da se koristi umesto, ili zajedno sa nazivom "heteroaril prsten" ili sa nazivom "heteroaromatik".
Aril (uključujući aralkil, aralkoksi, ariloksialkil i tome slično) ili heteroaril (uključujući heteroaralkil i heteroarilalkoksi i tome slično) grupa može da sadrži jedan ili više supstituenata. U koliko nije drugačije navedeno, primeri odgovarajućih supstituenata na nezasićenom atomu ugljenika aril, heteroaril, aralkil ili heteroaralkil grupe generalno obuhvataju halogen, -R°, -OR°, -SR°, 1,2-metilen-dioksi, 1,2-etilendioksi, zaštićenu OH (kao što je aciloksi), fenil (Ph), supstituisanu Ph, -O(Ph), supstituisanu -O(Ph),
-CH2(Ph), supstituisanu -CH2(Ph), -CH2CH2(Ph), supstituisanu -CH2CH2(Ph), -N02, -CN, -N(R°)2, -NR°C(0)R°, -NR°C(0)N(R°)2, -NR°C02R°, -NR°NR°C(0)R°, -NR°NR<o>C(0)N(R<o>)2, -NR°NR°C02R°, -C(0)C(0)R°, -C(O)CH2C(O)R<0>, -C02R°, -C(0)R°, -C(0)N(R°)2, -OC(0)N(R°)2, -S(0)2R°, -S02N(R°)2, -S(0)R°, -NR°S02N(R°)2, -NR°S02R°, -C(=S)N(R°)2, -C(=NH)-N(R°)2, -(CH2)yNHC(0)R°, -(CH2)yNHC(0) CH(V-R°)(R°) grupu; pri čemu je svaka R° grupa nezavisno izabrana od vodonika, supstituisane ili nesupstituisane alifatične grupe, nesupstituisanog heteroaril ili heterocikličnog prstena, fenil (Ph), supstituisane Ph, -O(Ph), supstituisane -O(Ph), -CH2(Ph) ili supstituisane -CH2(Ph) grupe, ili dve R° grupe koje se pojavljuju nezavisno, uzete zajedno sa unutrašnjim atomom(atomima) kojim su povezani, formiraju opciono supstituisani 3-12-člani zasićeni, delimično nezasićeni ili potpuno nezasićeni monociklični monociklični ili biciklični prsten koji ima 0-4 heteroatoma nezavisno izabrana od azota, kiseonika ili sumpora; y je 0-6; i V je vezujuća grupa. U koliko nije drugačije navedeno, primeri supstituenata na alifatičnoj grupi ili fenilnom prstenu R° grupe, generalno obuhvataju amino, alkilamino, dialkilamino, aminokarbonil, halogen, alkil, alkilaminokarbonil, dialkilaminokarbonil, alkilaminokarboniloksi, dialkilaminokarboniloksi, alkoksi, nitro, cijano, karboksi, alkoksikarbonil, alkilkarbonil, hidroksi, haloalkoksi ili haloalkil grupu.
Alifatična grupa ili alifatični heterociklični prsten može da sadrži jedan ili više supstituenata. U koliko nije drugačije navedeno, primeri odgovarajućih supstituenata na zasićenom ugljeniku alifatične grupe ili alifatičnog heterocikličnog prstena generalno obuhvataju supstituente koji su prethodno navedeni za nezasićeni atom ugljenika aril ili heteroaril grupe i sledeće: =0, =S, =NNHR<*>, =NN(R<*>)2, =N-, =NNHC(0)R<*>, =NNHC02(alkil), =NNHS02(alkil) ili =NR<*>grupu, gde je svaka R<*>grupa nezavisno izabrana od vodonika, nesupstituisane alifatične grupe ili supstituisane alifatične grupe. Primeri supstituenata na alifatičnoj grupi obuhvataju amino, alkilamino, dialkilamino, aminokarbonil, halogen, alkil, alkilaminokarbonil, dialkilaminokarbonil, alkilaminokarboniloksi, dialkilaminokarboniloksi, alkoksi, nitro, cijano, karboksi, alkoksikarbonil, alkilkarbonil, hidroksi, haloalkoksi ili haloalkil grupu.
U koliko nije drugačije navedeno, odgovarajući supstituenti na azotu alifatičnog heterocikličnog prstena generalno obuhvataju -R<+>, -N(R )2, -C(0)R<+>, -C02R<+>,
-C(0)C(0)R<+>, -C(0)CH2C(0)R<+>, -S02R<+>, -S02N(R<+>)2, -C(=S)N(R<+>)2, -C(=NH)-N(R<+>)2i -NR<+>S02R<+>grupu; pri čemu je svaka R<+>grupa nezavisno izabrana od vodonika, alifatične grupe, supstituisane alifatične grupe, fenil (Ph), supstituisane Ph, -O(Ph), supstituisane -O(Ph), CH2(Ph), supstituisane CH.2(Ph) grupe, ili nesupstituisani heteroaril ili heterociklični prsten, ili dve R+grupe koje se pojavljuju nezavisno, uzete zajedno sa unutrašnjim atomom(atomima) koji ih povezuju, formiraju opciono supstituisani 3-12-člani zasićeni, delimično nezasićeni ili potpuno nezasićeni monociklični ili biciklični prsten koji ima 0-4 heteroatoma nezavisno izabrana od azota, kiseonika ili sumpora. U koliko nije drugačije navedeno, primeri supstituenata na alifatičnoj grupi ili fenilnom prstenu generalno obuhvataju amino, alkilamino, dialkilamino, aminokarbonil, halogen, alkil, alkilaminokarbonil, dialkilaminokarbonil, alkilaminokarboniloksi, dialkilaminokarboniloksi, alkoksi, nitro, cijano, karboksi, alkoksikarbonil, alkilkarbonil, hidroksi, haloalkoksi ili haloalkil grupu.
Kako je gore detaljno navedeno, u nekim aspektima, dve R° grupe koje se nezavisno pojavljuju (ili R<+>ili bilo koja slično definisana grupa u specifikaciji i ovde datim patentnim zahtevima) su uzete zajedno sa unutrašnjim atomom(atomima) koji ih povezuju da formiraju opciono supstituisani 3-12 člani zasićeni, delimično nezasićeni ili potpuno nezasićeni monociklični ili biciklični prsten koji ima 0-4 heteroatoma nezavisno izabrana od azota, kiseonika ili sumpora.
Primeri prstenova koji su formirani kada se dve nezavisno prisutne R° grupe (ili R<+>ili bilo koja slično definisana grupa u specifikaciji i ovde datim patentnim zahtevima), uzmu zajedno sa unutrašnjim atomom(atomima) koji ih povezuju, bez ograničenja na, su sledeći: a) dve nezavisno prisutne R° grupe (ili R<+>, ili bilo koja slično definisana grupa u specifikaciji i ovde datim patentnim zahtevima) koje su vezane za isti atom i uzete su zajedno sa tim atomom da formiraju prsten, na primer, N(R°)2, gde su obe prisutne R° grupe uzete zajedno sa atomom azota da formiraju piperidin-l-il, piperazin-1-il ili morfolin-4-il grupu; i b) dve nezavisno prisutne R° grupe (ili R<+>ili bilo koja slično definisana grupa u specifikaciji i ovde datim patentnim zahtevima) koje su vezane za
različite atome i uzete zajedno sa oba ta atoma da formiraju prsten, na primer gde je fenil
grupa supstituisana sa dve prisutne
grupe, ove dve prisutne R° grupe su uzete zajedno sa tomom kiseonika za koji su vezane da formiraju spojeni 6-člani prsten koji sadrži kiseonik:
Razumljivo je da može da se formira veliki broj
drugih prstenova (na primer, takođe spiro i premošteni prstenovi) kada su dve nezavisno prisutne R° grupe (ili R<+>, ili bilo koja slično definisana grupa u specifikaciji i ovde datim patentnim zahtevima) uzete zajedno sa svojim unutrašnjim atomom(atomima) koji ih spaja, pa primeri koji su prethodno detaljno opisani ne treba da budu ograničavajući.
U koliko nije drugačije navedeno, naziv "vezujuća grupa" ili "povezivač" označava organski radikal koji povezuje dva dela jedinjenja. Povezivači obično uključuju atom kao što su kiseonik ili sumpor, jedinice kao što su -NH-, -CH2-, -C(O)-, -C(0)NH- ili lanac atoma kao što je alkiliden lanac. Molekularna masa povezivača je obično u rasponu od približno 14 do 200, preferirano u rasponu od 14 do 96 dužine do približno 6 atoma. Primeri povezivača obuhvataju zasićeni ili nezasićeni Ci-6 alkiliden lanac koji je opciono supstituisan i pri čemu su jedan ili dva zasićena ugljenika u lancu opciono zamenjena sa -C(O)-, -C(0)C(0)-, -CONH-, -CONHNH-, -C02-, -OC(O)-, -NHC02-, -O-, -NHCONH-, -OC(0)NH-, -NHNH-, -NHCO-, -S-, -SO-, -S02-, -NH-, -S02NH- ili -NHS02- grupama.
Naziv "alkiliden lanac" ili "alkilen lanac" se odnosi na opciono supstituisan ravan ili račvast lanac ugljenika koji može da bude potpuno zasićen ili može da ima jednu ili više nezasićenih jedinica. Opcioni supstituenti su prethodno opisani za alifatičnu grupu.
Kombinacija supstituenata ili promenljivih jedinica je dozvoljena samo u koliko takva kombinacija dovodi do stabilnog ili hemijski ostvarljivog jedinjenja. Stabilno jedinjenje ili hemijski ostvarljivo jedinjenje je ono u kome hemijska struktura nije znatno izmenjena kada se čuva na temperaturi od 40°C ili nižoj, preferirano 25°C ili nižoj, bez prisustva vlage ili drugih hemijski reaktivnih uslova, najmanje u toku nedelju dana.
U koliko nije drugačije navedeno, ovde opisane strukture treba takođe da obuhvate sve stereohemijske oblike strukture; to jest, R i S konfiguracije za svaki asimetrični centar. Prema tome, pojedinačni stereohemijski izomeri kao i enantiomerne i diastereomerne mešavine ovih jedinjenja su obuhvaćeni okvirom ovog pronalaska. U koliko nije drugačije navedeno, ovde opisane strukture treba takođe da obuhvate jedinjenja koja se razlikuju samo po prisustvu jednog ili više izotopno obogaćenog atoma. Na primer, jedinjenja koja imaju ovde date strukture izuzev što je atom vodonika zamenjen sa deuterijumom ili tricijumom, ili što je atom ugljenika zamenjen sa<I3>C- ili<l4>C-obogaćenim ugljenikom, obuhvaćena su okvirom ovog pronalaska.
3. Opis jedinjenja koja služe kao primeri::
U jednom aspektu jedinjenja formule I, Prsten A je izabran od piridinil ili pirimidinil prstena koji je supstituisan sa 1-2 R<6a>grupama. U ovom aspektu, preferirani Prsten A obuhvata 3-piridinil ili 5-pirimidinil prsten, kako je niže pokazano sa jedinjenjima formule II-A i II-B, tim redom.
Preferirano, R<6a>grupa je izabrana od halo atoma ili Ci_6alifatične grupe, kao što su hlor ili metil grupa. Kada je R<6a>alifatična grupa kao što je metil, pogodan položaj za R<6a>grupu je na položaju 2 piridinil prstena ili na položaju 4-pirimidinil prstena, kako je gore pokazano u II-C. Specifični radikali Prstena A su 2-metil-3-piridinil i 4-metil-5-pirimidinil. Ustanovljeno je da su jedinjenja formule II-C, gde je R<6a>metil grupa, neočekivano potentniji u biološkom ispitivanju za inhibiciju IKK od analognih jedinjenja koja imaju nesupstituisan piridin Prstena A, kao što su ona jedinjenja koja su opisana u prethodno pomenutoj PCT prijavi WO 01/68648, od Ritzeler/ saradnika.
U nekim aspektima, R<1>je vodonik, halo, Ci^alkil, amino ili (Ci_2alkil)i.2amino grupa. Preferirane R<1>grupe su male grupe, kao što su vodonik, metil grupa, amino grupa i fluoro atom.
Preferirane R grupe obuhvataju vodonik i halo atom. Hlor je preferirana R halo grupa.
Preferirane R<3>grupe obuhvataju vodonik, halo (posebno hlor) i alkoksi grupe. Primeri odgovarajućih alkoksi grupa obuhvataju Ci_4alkoksi grupe kao što su metoksi, etoksi, propoksi i ciklopropilmetoksi grupa.
U narednom aspektu, Prsten A je izabran od 5-6 članog alifatičnog prstena koji ima 0-2 heteroatoma u prstenu, izabranih od azota, kiseonika i sumpora. Ova jedinjenja su generalno označena kao jedinjenja formule III. Primeri grupa alifatičnog Prstena A obuhvataju morfolinil, piperidinil, piperazinil, pirolidinil, piranil, tetrahidrofuranil, cikloheksil, ciklopentil i tiomorfolinil prsten. Preferirano, ovi alifatični prstenovi su supstituisani sa (i) -C(R<9>)3ili -W-G, (ii) 0-4 R<6b>i (iii) 0-1 okso grupama na ugljenikovom atomu prstena ili 0-2 okso grupama na sumporu prstena. Još poželjnije, ovakvi alifatični prstenovi su supstituisani sa (i) -W-G, (ii) 0-2 R<6b>, i (iii) 0-1 okso grupama na ugljeniku prstena ili 0-2 okso grupom na sumporu prstena.
Preferirani G je -NR<4>R<5>ili 3-7 člani heterociklil prsten. Preferirani G je -NR<4>R<5>ili 5-6 člani heterociklil prsten, gde je G grupa supstituisana sa 1-4 R<10>grupama. Još poželjnije, G je -NR<4>R<5>grupa ili 5-6 člani heterociklil prsten, gde je G supstituisan sa 1-2 R10 grupom.
Preferirana R<4>grupa je vodonik, 5-6 člani heterociklil prsten ili Ci-6alifatičnaa grupa, još poželjnije vodonik ili Ci-6alifatična grupa. R<4>mopže takođe da bude Ci-6alkoksi grupa.
Preferirana R5 grupa je vodonik, opciono supstituisani 5-6 člani aril, heteroaril, karbociklil ili heterociklil prsten, ili opciono supstituisana Ci-6alifatična grupa, još poželjnije, vodonik ili opciono supstituisana Ci_6alifatična grupa. U drugim preferiranim aspektima, R<5>je vodonik, 5-6 člani heterociklil prsten iliC\.(,alifatična grupa, još poželjnije, vodonik ili C)-6alifatična grupa.
Različita jedinjenja formule III, gde je Prsten A alifatični prsten, pokazana su u Tabeli 2. Zbog praćenja, supstituenti na ovim jedinjenjima sa alifatičnim Prstenom A, izuzev za okso grupe u nekim slučajevima, nisu pokazani.
Kada je Prsten A alifatičan, šestočlani heterociklični prsten, pogodan položaj za -W-G i -C(R<9>)3supstituente na Prstenu A je orto položaj u odnosu na položaj gde je vezan beta-karbolin deo. Na primer, ujedinjenjimaIII-A, HI-B, III-D, IH-H, III-JiIII-M,preferirani položaj za vezivanje -W-G i -C(R<9>)3je za azot u Prstenu A ili za N-l u slučaju jedinjenjaIII-F.Preferirano, W je -Q-, -Q-C(0)-, -C(R<9>)2-C(R<9>)(R<12>)-, ili -C(R<9>)2-[C(R<9>)(R<12>)]2- radikal, gde je R<9>vodonik. Još poželjnije, W je -Q-, -Q-C(0)- ili -C(R<9>)2-C(R<9>)(R<12>)- radikal. R12 je vodonik, Ci.6alifatičan, supstituisani ili nesupstituisani fenil, supstituisani ili nesupstituisani benzil ili bočni lanac amino kiseline, posebno bočni lanac prirodne amino kiseline. Primeri bočnih lanaca specifičnih prirodnih amino kiselina obuhvataju bočne lance alanina, fenilalanina, valina, leucina, izoleucina, serina, tirozina, aspartanske kiseline i glutaminske kiseline.
U jednom aspektu, W je Q-C(0)- grupa. U ovom aspektu, preferirana Q je
-CH2- ili -CH2-CH2- grupa, još poželjnije -CH2- grupa.
U narednom aspektu, Prsten A je supstituisan sa 0-2 R<6b>grupe. Preferirana R<6b>grupa je metil. Kada je Prsten A šestočlani alifatični prsten, jedan aspekt obezbeđuje jedinjenja formuleIIIgde se dve metil grupe na Prstenu A nalaze u para položaju sa položajem gde je vezan beta karbolin deo. Primer ovog aspekta je jedinjenje gde je Prsten A 6,6-dimetil-morfolinil prsten. Preferirano, ova jedinjenja su dalje supstituisana sa -W-G grupom, kako je prethodno opisano.
Kada je Prsten A morfolinil prsten, ustanovljeno je da su preferirana jedinjenja koja imaju "S" stereohemiju na položaju 3 morfolinskog prstena, kako je niže pokazano sa jedinjenjima formule (5)-III-A.
gde jen0-4 i R<1>, R<2>, R<3>, W, G i R<6b>su kako je prethodno defmisano. Analogno tome, očekuje se daje "S" stereohemija takođe preferirana za druga jedinjenja šestočlanog alifatičnog prstena A formule III.
Jedan aspekt jedinjenja formule I se odnosi na jedinjenja formule IH-A ili( S)-III-A gde: R<1>je vodonik, halo, metil ili amino grupa; R2 je vodonik, metil ili halo grupa; R<3>je vodonik, halo, alkoksi ili (Q.6alifatična)2amino grupa; Prsten A je supstituisan sa 0-2 R<6b>grupom; R<6b>je C1-3alifatična grupa; W je -Q-, -Q-C(0)-, -C(R<9>)2-C(R<9>)(R<12>)- ili -C(R<9>)2-[C(R9)(R12)]2-grupa; Q je -C(R<9>)2- ili -C(R<9>)2C(R<9>)2- grupa; G je -NR<4>R<5>, -N(R<9>)CONR<4>R<5>, -N(R<9>)S02(C,.3alifatična), -N(R<9>)COCF3, -N(R9)CO(Ci.6 alifatična), -N(R<9>)CO(heterociklil), -N(R<9>)CO(heteroaril), -N(R<9>)CO(aril), 3-10 člani monociklični ili biciklični heterociklil prsten ili 5-6 člani heteroaril prsten, pri čemu je svaki heteroaril, aril i heterociklil radikal G opciono supstituisan sa 1-4 R<10>grupom; R4 je vodonik ili Ci.6alifatična grupa; R<5>je: a) vodonik; b) opciono supstituisana grupa izabrana od aril, heteroaril, heterociklil, ili karbociklil grupe, ili
c) C[.6alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa:
halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2, ili aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupom koja je opciono dalje supstituisana sa Ci ^alifatičnom, -CF3, halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom; svaki R<7>radikal je nezavisno izabran od vodonika ili opciono supstituisane Cm alifatične grupe, ili su dva R<7>radikala na istom atomu azota uzeta zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisani 3-6 heteroaril ili heterociklil prsten; svaki R<7a>radikal je nezavisno izabran od vodonika ili opciono supstituisane grupe izabrane od C 1.4 alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili su dva R<7a>radikala na istom atomu azota uzeta zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaki R<8>radikal je nezavisno opciono supstituisana Ci.4alifatična grupa; svaki R<8a>radikal je nezavisno opciono supstituisana grupa izabrana od C1.4alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe; R9 je vodonik; svaki R<10>radikal je nezavisno izabran od okso, -R11, -T-R<11>, ili -V-T-R<11>grupe, ili dve prisutne R<10>grupe, uzete zajedno sa atomom(atomima) za koje su vezani, formiraju opciono supstituisani monociklični ili biciklični 3-8 člani aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil prsten; svaki R<11>radikal je nezavisno izabran od -CF3, halo, -OR<7a>, -CN, -SR<8a>, -S(0)2R<8a>, -C(0)R<7a>, -C02R<7a>, -N(R<7a>)2, -C(0)N(R<7a>)2, -N(R<7>)C(0)R<7a>, -N(R<7>)C02R<7a>, -S02N(R<7a>)2, -N(R<7>)S02R<7a>, -N(R<7>)C(0)N(R<7a>)2ili opciono supstituisane grupe izabrane od Ci.6alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe;
T je ravan ili račvast Ci.4alkilen lanac;
V je -O-, -N(R<7>)-,-S-, -S(O)-, -S(0)2-, -C(O)-, ili -C02- grupa i
R je vodonik, Ci-6alifatična, supstituisana ili nesupstituisana fenil, ili supstituisana ili nesupstituisana benzil grupa.
Naredni aspekt jedinjenja formule I se odnosi na jedinjenja formulaIII-Aili(5)-III-Agde: R<1>je vodonik, halo, metil ili amino grupa;
R je vodonik, metil ili halo grupa;
R je vodonik, halo, alkoksi ili (C].6alifatična)2amino grupa;
Prsten A je supstituisan sa 0-2 R<6b>grupom;
R6b je Ci.3alifatična grupa;
W je -Q-, -Q-C(0)-, -C(R<9>)2-C(R<9>)(R<12>)- ili -C(R<9>)2-[C(R<9>)(R<12>)]2- grupa;
Q je -C(R<9>)2- ili -C(R<9>)2C(R<9>)2- grupa;
Gje-NR<4>R<5>, -N(R<9>)C(0)NR4R<5>, -N(R9)S02(C,.3 alifatična), -N(R<9>)C(0)CF3,
-N(R<9>)CO(Ci-6alifatična) i -N(R<9>)CO(heterociklil), -N(R<9>)CO(heteroaril), -N(R<9>)CO(aril) grupa, 5-6 člani heterociklil prsten ili 5-6 člani heteroaril prsten, gde je svaki heteroaril, aril i heterociklil radikal G opciono supstituisan sa 1-3 R<10>grupom; R4 je vodonik ili Cm alifatična grupa; R je vodonik ili Cm alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa halo, -OR , -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -S(0)2N(R<7>)2, -C(0)R<7>, -C02R7, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom; svaki R<7>radikal je nezavisno izabran od vodoniak ili Cm alifatične grupe, ili su dva R radikala na istom atomu azota uzeta zajedno sa azotom da formiraju 5-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaki R o radikal je nezavisno izabran od Cm alifatične grupe; R9 je vodonik; svaki R<10>radikal je nezavisno izabran od okso, R<1>', T-R<11>ili V-T-R<11>grupe; svaki R<11>radikal je nezavisno izabran od Cj.6 alifatične, halo, -S(0)2N(R<7>)2, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<7>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupe;
T je ravan ili račvast Cm alkilen lanac;
V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(O)-, -S(0)2-, -C(O)- ili -C02- grupa; i
R 12je vodonik, Cm alifatična grupa, supstituisani ili nesupstituisani fenil ili supstituisani ili nesupstituisani benzil prsten.
Naredni aspekt se odnosi na jedinjenja formuleIH-Aili (5)-III-A gde:
R<1>je vodonik, metil, fluoro ili amino grupa; R2 je hlor; R je vodonik ili alkoksi grupa; Prsten A je supstituisan sa -W-G i 0-2 R<6b>grupo<m>; R6b je metil grupa; W je -Q-, -Q-C(0)- ili -C(R<9>)2-C(R9)(R12)-grupa; Q je -C(R<9>)2- ili -C(R<9>)2C(R<9>)2grupa; Gje-NR4R<5>, -N(R<9>)C(0)NR<4>R<5>, -N(R<9>)C(0)CF3, -N(R9)CO(C,.6 alifatična) i -N(R<9>)CO(heterociklil), -N(R<9>)CO(heteroaril), 3-10 člani monociklični ili biciklični heterociklični prsten ili 5-6 člani heteroaril prsten, pri čemu je svaki od heteroaril i heterociklil radikala G opciono supstituisan sa 1-4 R<10>grupom; R<4>je vodonik ili Cm alifatična grupa;; R<5>je: a) vodonik; b) opciono supstituisana grupa izabrana od aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili
c) Ci-6alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa:
halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2ili aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupom koja je opciono dalje supstituisana sa Ci.6alifatičnom, -CF3, halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom; svaki R<7>radikal je nezavisno izabran od vodonika ili opciono supstituisane Cmalifatične grupe, ili su dva R7 radikala na istom azotu uzeta zajedno sa azotom da formiraju opciono supsituisan 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaki R<7a>radikal je nezavisno izabran od vodonika ili opciono supstituisane grupe izabrane od Cm alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili su dva R<7a>radikala na istom azotu uzeta zajedno sa azotom da formiraju opciono supsituisan 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaki R<8>radikal je nezavisno opciono supstituisana Cm alifatična grupa; svaki R<8a>radikal je nezavisno opciono supstituisana grupa izabrana od Cm alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe; R<9>je vodonik; svakiR<10>radikal je nezavisno izabran od okso, -R11, -T-R11ili -V-T-R1 'grupe, ili dva prisutna R<10>radikala, uzeta zajedno sa atomom(atomima) za koje su vezani, formiraju opciono supstituisani monociklični ili biciklični 3-8-člani aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil prsten; svaki R<11>radikal je nezavisno izabran od -CF3, halo, -OR<7a>, -CN, -SR<8a>, -S(0)2R<8a,>-C(0)R<7a>, -C02R<7a>, -N(R<7a>)2, -C(0)N(R<7a>)2, -N(R<7>)C(0)R<7a>, -N(R<7>)C02R<7a>, -S02N(R<7a>)2, -N(R<7>)S02R<7a>, -N(R<7>)C(0)N(R<7a>)2grupe ili opciono supstituisane grupe izabrane od Ci-6alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe;
T je ravan ili račvast Cm alkilen lanac;
V je-O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(O)-, -S(0)2-, -C(O)- ili -C02- grupa; i
R12 je vodonik, Ci.6 alifatična, fenil ili benzil grupa.
Još jedan aspekt se odnosi na jedinjenja formule IH-A ili (5)-III-A gde:
R<1>je vodonik, metil, fluoro ili amino grupa; R2 je hlor; R<3>je vodonik ili alkoksi grupa; Prsten A je supstituisan sa-W-G i 0-2 R6b grupom; R<6b>je metil grupa; W je -Q-, -Q-C(0)- ili -C(R<9>)2-C(R9)(R12)-grupa; Q je -C(R<9>)2- ili -C(R<9>)2C(R<9>)2- grupa; G je -NR<4>R<5>, -N(R<9>)C(0)NR4R<5>, -N(R<9>)C(0)CF3, -N(R9)CO(C,.6 alifatična) i -N(R<9>)CO(heterociklil),-N(R<9>)CO(heteroaril) grupa, 5-6 člani heterociklil prsten ili 5-6 člani heteroaril, pri čemu je svaki heteroaril i heterociklil radikal G opciono supstituisan sa 1-3 R10 grupom; R4 je vodonik ili Ci-6alifatična grupa; R<5>je vodonik ili Cm alifatična grupa; svaki R<7>radikal je nezavisno izabran od vodonika ili Cm alifatične grupe, ili su dva R radikala na istom atomu azota uzeti zajedno sa azotom da formiraju 5-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaki R o radikal je nezavisno izabran od Cm alifatične grupe; R9 je vodonik; svaki R<10>radikal je nezavisno izabran od okso, R<11>, T-R11 ili V-T-R<11>grupe; svaki R 11 radikal je nezavisno izabran od Cm alifatične, halo, -S(0)2N(R 7 )2, -OR 7, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<7>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupe;
T je ravan ili račvast Cm alkilen lanac;
V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(O)-, -S(0)2-, -C(O)- ili -C02- grupa; i
R 12 j*e vodonik, Cm alifatična, fenil ili benzil grupa.
Preferirana jedinjenja formule III-A su jedinjenja formule (5)-III-A':
gde su R , R , R , W i G kako je prethodno definisano za (5)-III-A.
Naredni aspekt se odnosi na jedinjenja formule III-A-a:
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu:
Q je -CH2-, -CH(R<9>)-ili -C(R<9>)2- grupa;
G je -NR<4>R<5>ili 3-7 člani heterociklil ili heteroaril prsten koji je opciono supstituisan sa 1-4 R10 grupom;
R<1>je vodonik, halo, C 1.3 alifatična, amino, cijano, (C1.3alkil)i.2 amino, C1.3 alkoksi, (C1.3alifatična)-C(O)-, (Ci.6alifatična)-C02- ili (C1.3alifatična)-C(0)NH- grupa;
R<2>je vodonik, halo, C1-3alifatična, C1.3alkoksi, C1.3haloalkoksi ili C1.3haloalkil grupa;
R je vodonik, halo, Ci_6 alifatična, Ci.6 haloalkil, Ci-6 alkoksi, hidroksi, amino, cijano ili (Ci_6alkil)i-2 amino grupa;
R4 je vodonik ili Ci_6alifatična grupa;
R<5>je:
a) opciono supstituisana grupa izabrana od aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili
b) Ci-6alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa:
halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom, ili aril, heteroaril, heterociklil, ili karbociklil grupom koja je opciono dalje supstituisana sa Ci-6alifatičnom, -CF3, halo, -OR , -CN, -SR , -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R7, -N(R7)C(0)N(R<7>)2grupom; Prsten A je supstituisan sa 0-4 R<6b>grupo<m>; svaki R<6b>radikal je nezavisno izabran od a Cm alifatične grupe; svaki R7 radikal je nezavisno izabran od vodonika ili opciono supstituisane Cm alifatične grupe, ili su dva R<7>radikala na istom azotmu azota uzeta zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaki R<7a>radikal je nezavisno izabran od vodonika ili opciono supstituisane grupe izabrane od C 1.4 alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili su dva R<7a>radikala na istom atomu azota uzeta zajedno sa atomom azota da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaki R radikal je nezavisno opciono supstituisansa Cm alifatična grupa; svaki R<8a>radikal je nezavisno opciono supstituisana grupa izabrana od Cm alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe; svaki R<9>radikal je nezavisno izabran od Cm alifatične grupe; svaki R<10>radikal je nezavisno izabran od okso, -R11, -T-R11 ili -V-T-R11 grupe, ili dva prisutna R<10>radikala uzeta zajedno sa atomom(atomima) za koje su vezani, formiraju opciono supstituisani monocikličan ili bicikličan 3-8-člani aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil prsten; svaki R" radikal je nezavisno izabran od -CF3, halo, -OR<7a>, -CN, -SR<8a>, -S(0)2R<8a>, -C(0)R<7a>, -C02R<7a>, -N(R<7a>)2, -C(0)N(R<7a>)2, -N(R<7>)C(0)R<7a>, -N(R<7>)C02<R7a>, -S02N(R<7a>)2, -N(R<7>)S02R<7a>, -N(R<7>)C(0)N(R<7a>)2grupe, ili opciono supstituisane grupe izabrane od C,.ćalifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe;
T je ravan ili račvast Cmalkilen lanac; i
V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(O)-, -S(0)2-, -C(O)- ili -C02- grupa.
Još jedan aspekt se odnosi na jedinjenja formule III-A-a:
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu:
Q je -CH2-, -CH(R<9>)- ili -C(R<9>)2- grupa; G je -NR<4>R<5>grupa ili 3-7 člani heterociklil ili heteroaril prsten koji je opciono supstituisan sa 1-2 R<10>grupom; R<1>je vodonik, halo, C1.3alifatična, amino, cijano, (C1-3alkil) 1.2 amino, C1.3alkoksi, (C1.3 alifatična)-C(O)-, (Ci.6alifatična)-C02- ili (Ci.3alifatična)-C(0)NH- grupa; R<2>je vodonik, halo, C1.3alifatična, C1.3alkoksi, Ci.3haloalkoksi, ili C1.3haloalkil grupa; R3 je vodonik, halo, C).6 alifatična, Ci.6 haloalkil, Ci-6 alkoksi, hidroksi, amino, cijano ili (C)_6alkil)i.2amino grupa; R<4>je vodonik ili Ci-6alifatična grupa; R<5>je Ci-6alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom; Prsten A je supstituisan sa 0-4 R<6b>grupom; svaki R<6b>radikal je nezavisno izabran od C1.6alifatične grupe; svaki R radikal je nezavisno izabran od vodonika ili C1.4 alifatične grupe, ili su dva R radikala na istom atomu azota uzeta zajedno sa azotom da formiraju 5-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaki R<8>radikal je nezavisno izabran od C1.4 alifatične grupe; svaki R<9>radikal je nezavisno izabran od a C1-3alifatične grupe; svaki R<10>radikal je nezavisno izabran odR11,T-R<11>ili V-T-R11 grupe; svaki R<11>radikal je nezavisno izabran od Ci_6 alifatične, halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<7>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupe;
T je ravan ili račvast Cm alkilen lanac; i
V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(O)-, -S(0)2-, -C(O)- ili -C02- grupa.
Jedan aspekt se odnosi na jedinjenja formule III-A-a gde:
Q je -CH2- ili -CH(R<9>)- grupa;
G je -NR<4>R<5>grupa ili 5-6 člani heterociklil ili heteroaril prsten koji je opciono supstituisan sa 1-4 R<10>grupom;
R<1>je vodonik, halo, C 1.2 alkil, amino ili (Ci.2alkil) 1.2 amino grupa;
R je vodonik, halo, C 1.2 alifatična, Cm alkoksi ih Cm haloalkil grupa;
R3 je vodonik, halo, C).2alifatična, Ci.2alkoksi ili Ci_2haloalkil grupa;
R4 je vodonik ili Cm alifatična grupa;
R<5>je:
a) opciono supstituisana grupa izabrana od aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili
b) Cm alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa:
halo, -OR<7>,-CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R8, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom, ili aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupom koja je dalje opciono supstituisana sa Ci^alifatičnom, -CF3, halo, -OR 7 , -CN, -SR 8, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R7, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom; Prsten A je supstituisan sa 0-2 R<6b>grupom; svakiR6bradikal je nezavisno izabran od Cm alifatične grupe; svaki R<7>radikal je nezavisno izabran od vodonika ili opciono supstituisane Cm alifatične grupe, ili su dva R<7>radikala na istom atomu azota uzeta zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaki R<7a>radikal je nezavisno izabran od vodonika ili opciono supstituisane grupe izabrane od Cm alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili su dva R<7a>radikala na istom atomu azota uzeta zajedno sa atomom azota da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaki R<8>radikal je nezavisno opciono supstituisana Ci.4alifatična grupa; svaki R<8a>radikal je nezavisno opciono supstituisana grupa izabrana od C 1.4 alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe; svaki R<9>radikal je nezavisno izabran od a C 1.3 alifatične grupe; svakiR10radikal je nezavisno izabran od okso, -R<11>, -T-R<11>ili -V-T-R<11>grupe, ili dva prisutna R<10>radikala uzeta zajedno sa atomom(atomima) za koje su vezani, formiraju opciono supstituisani monocikličan ili bicikličan 3-8-člani aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil prsten; svaki R<11>radikal je nezavisno izabran od -CF3, halo, -OR<7a>, -CN, -SR<8a>, -S(0)2R<8a>, -C(0)R<7a>, -C02R<7a>, -N(R<7a>)2, -C(0)N(R<7a>)2, -N(R<7>)C(0)R<7a>, -N(R<7>)C02R<7a>, -S02N(R<7a>)2, -N(R<7>)S02R<7a>, -N(R<7>)C(0)N(R<7a>)2grupe, ili opciono supstituisane grupe izabrane od Ci.6alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe;
T je ravan ili račvast C? alkilen lanac; i
V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(O)-, -S(0)2-, -C(O)- ili -C02- grupa.
Naredni aspekt se odnosi na jedinjenja formule III-A-a gde:
Q je -CH2- ili -CH(R<9>)- grupa; G je -NR<4>R<5>ili 5-6 člani heterociklil ili heteroaril prsten koji je opciono supstituisan sa 1-2 R<10>grupom; R<1>je vodonik, halo, Ci-2 alkil, amino ili (Ci.2alkil) 1-2 amino grupa; R je vodonik, halo, Ci.2 alifatična, Ci_2 alkoksi ili Ci-2 haloalkil grupa; R je vodonik, halo, Ci-2 alifatična, Ci_2 alkoksi ili C 1.2 haloalkil grupa; R4 je vodonik ili Cj.6 alifatična grupa; R5 je C i-6 alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -CO2R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom;
Prsten A je supstituisan sa 0-2 R<6b>grupom;
svaki R<6b>radikal je nezavisno izabran od Ci.3alifatične grupe;
svaki R radikal je nezavisno izabran od vodonika ili C1.4 alifatične grupe, ili su dva R7 radikala na istom atomu azota uzeta zajedno sa azotom da formiraju 5-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten;
R 8 j*e Ci4alifatična grupa;
R9 je nezavisno izabran od C1.3alifatične grupe;
svaki R10 radikal je nezavisno izabran od R<u>, T-R11 ili V-T-R11 grupe;
svaki R II radikal je nezavisno izabran od Ci-6 alifatične, halo, -OR 7 , -CN, -SR 8, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<7>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupe;
T je ravan ili račvast C1.4alkilen lanac; i
V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(O)-, -S(0)2-, -C(O)- ili -C02- grupa.
Naredni aspekt se odnosi na jedinjenja formule III-A-a gde:
Q je -CH2-, ili -CH(R<9>)- grupa;
G je -NR<4>R<5>grupa ili 5-6 člani heterociklil prsten, koji u prstenu ima 1-2 heteroatoma izabrana od kiseonika ili azota, koji je opciono supstituisan sa 1-4 R<10>grupom;
R<1>je vodonik, halo, metil, amino ili (Ci_2alkil)i.2amino grupa;
R<2>je vodonik, halo, Ci_2 alifatična ili Ci.2 haloalkil grupa;
R3 je vodonik, halo ili Ci_2 alifatična grupa;
R<4>je vodonik ili Ci-6alifatična grupa;
R<5>je:
a) opciono supstituisana grupa izabrana od aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili
b) Ci-6alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa:
halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom, ili aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupom koja je opciono dalje supstituisana sa C kalifati čnom, -CF3, halo, -OR , -CN, -SR , -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2<g>rupom; Prsten A je supstituisan sa 0-2 R<6b>grupom; svaki R<6b>radikal je nezavisno izabran od Ci-6alifatične grupe; svaki R radikal je nezavisno izabran od vodonika ili opciono supstituisane Ci.4alifatične grupe, ili su dva R<7>radikala na istom atomu azota uzeta zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaki R<7a>radikal je nezavisno izabran od vodonika ili opciono supstituisane grupe izabrane od Cm alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili su dva R<7a>radikala na istom atomu azota uzeta zajedno sa atomom azota da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaki R<8>radikal je nezavisno opciono supstituisana Cm alifatična grupa; svaki R<8a>radikal je nezavisno opciono supstituisana grupa izabrana od Cm alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe; svaki R<9>radikal je nezavisno izabran od Cm alifatične grupe; svaki R10 radikal je nezavisno izabran od okso, -R<11>, -T-R11 ili -V-T-R<11>grupe, ili dva prisutna R<10>radikala uzeta zajedno sa atomom(atomima) za koje su vezani, formiraju opciono supstituisani monocikličan ili bicikličan 3-8-člani aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil prsten; svaki R<11>radikal je nezavisno izabran od -CF3, halo, -OR<7a>, -CN, -SR<8a>, -S(0)2R<8a>, -C(0)R<7a>, -C02R<7a>, -N(R<7a>)2, -C(0)N(R<7a>)2, -N(R<7>)C(0)R<7a>, -N(R<7>)C02R<7a>, -S02<N>(R<7a>)2, -N(R<7>)S02R<7a>, -N(R<7>)C(0)N(R<7a>)2grupe, ili opciono supstituisane grupe izabrane od Ci.6alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe;
T je ravan ili račvast Cm alkilen lanac; i
V je -0-, -N(R<7>)-, -S-, -S(0)-, -S(0)2-, -C(0)- ili -C02- grupa.
Još jedan aspekt se odnosi na jedinjenja formule III-A-a gde:
Q je -CH2- ili -CH(R<9>)- grupa; G je -NR<4>R<5>grupa ili 5-6 člani heterociklil prsten, koji u prstenu ima 1-2 heteroatoma izabrana od kiseonika ili azota, koji je opciono supstituisan sa 1-2 R<10>grupom; R<1>je vodonik, halo, metil, amino ili (Ci.2alkil) 1.2 amino grupa; R je vodonik, halo, Ci.2 alifatična ili C).2 haloalkil grupa; R je vodonik, halo ili Cm alifatična grupa;; R<4>je vodonik ili Cm alifatična grupa;; R<5>je C1.6 alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom;
Prsten A je supstituisan sa nula ili dve R<6b>grupe;
svaki R<6b>radikal je nezavisno izabran od C1.3alifatične grupe;
svaki R7 radikal je nezavisno izabran od vodonika ili C1.4alifatične grupe, ili su dva R7 radikala na istom atomu azota uzeta zajedno sa azotom da formiraju 5-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten;
svaki R<8>radikal je nezavisno C 1.4 alifatična grupa;
svaki R<9>radikal je nezavisno izabran od Ci.3alifatične grupe;
svaki R<10>radikal je nezavisno izabran od R<11>, T-R11 ili V-T-R<11>grupe;
svaki R<11>radikal je nezavisno izabran od Ci.6 alifatične, halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>,-N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<7>ili -N(R7)C(0)N(R7)2 grupe;
T je ravan ili račvast C1-4alkilen lanac; i
V je -0-, -N(R<7>)-, -S-, -S(0>, -S(0)2-, -C(0)- ili -C02- grupa.
U preferiranim jedinjenjima formule III-A-a, Q je -CH2- grupa; G je izabrana od opciono supstituisane piperidinil, piperazinil, morfolinil, pirolidinil ili -NR<4>R<5>grupe; R<4>je vodonik ili Ci-6alifatična grupa; i R<5>je Ci-6alifatična, 5-6 člana heterociklil ili Ci-6hidroksialkil grupa. U drugim preferiranim jedinjenjima formule III-A-a, Q je -CH2-grupa; G je izabran od opciono supstituisane piperidinil, piperazinil, morfolinil, pirolidinil ili -NR<4>R<5>grupe; R4 je vodonik ili Ci-6alifatična grupa; i R<5>je C 1.6 alifatična, 5-6 člani heterociklil, C 1.6hidroksialkil, aminoalkil, ili mono- ili dialkilaminoalkil grupa. U preferiranim jedinjenjima formule III-A-a, G je nesupstituisan ili supstituisan sal-4 grupe nezavisno izabrane od: Ci.3alkil, -OH, -CH2OH, -COO(CMalkil), -CH(CH3)2OH, =0, F, -CONHCH3,0(Ci.3alkil), -CONH2, -NHC00(CMalkil), CF3, -C0N(Ci.3alkil)2, -C^C-, -SO2CH3, -CH2C00H, -NHS02CH3ili fenil grupe. Još su poželjnija jedinjenja gde je G nesupstituisan ili supstituisan sa 1-2 grupe nezavisno izabrane od grupe koja sadrži: Ci.3alkil, HO-alkil, alkoksikarbonil, mono- ili dialkilaminokarbonil i H02C-alkil grupu. U svakom od prethodnih aspekata za jedinjenja formule III-A-a je preferirana (5) stereohemija na položaju 3 morfolina.
Naredni aspekt se odnosi na jedinjenja formule III-A-aa:
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu:
Q je -CH2- ili -CH(R<9>)- grupa;
G je -NR<4>R<5>grupa ili 3-10 člani monocikličan ili bicikličan heterociklil prsten koji je opciono supstituisan sa 1-4 R10 grupom;
R<1>je vodonik, halo, C 1.2alkil, amino ili (C1-2alkil)i_2 amino grupa;
R<2>je vodonik, halo, Cmalifatična, Cm alkoksi ili Ci.2 haloalkil grupa;
R3 je vodonik, halo, C 1.2 alifatična, Cm alkoksi ili Cm haloalkil grupa;
R4 je vodonik ili opciono supstituisana Cm alifatična grupa;
R<5>je:
a) opciono supstituisana grupa izabrana od aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili
b) Ci_6 alifatične grupa koja je opciono supstituisana sa:
halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom, ili aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupom koja je opciono dalje supstituisana sa CMalifatičnom, -CF3, halo, -OR 7 , -CN, -SR S, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -CO2R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R7, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom; svaki R radikal je nezavisno izabran od vodonika ili Cm alifatične grupe; svaki R7 radikal je nezavisno izabran od vodonika ili opciono supstituisane Cm alifatične grupe, ili su dva R<7>radikala na istom atomu azota uzeta zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisan 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaki R<7a>radikal je nezavisno izabran od vodonika ili opciono supstituisane grupe izabrane od Cmalifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili su dva R<7a>na istom atomu azota uzeta zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaki R<8>radikal je nezavisno opciono supstituisana C 1.4 alifatična grupa; svaki R<8a>radikal je nezavisno opciono supstituisana grupa izabrana od C1.4alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe; R<9>ie nezavisno izabran od C1.3alifatične grupe; svaki R<10>radikal je nezavisno izabran od =0, R1T-R11 ili V-T-R<11>grupe, ili dva prisutna R<10>radikala, uzeta zajedno sa atomom(atomima) za koje su vezani, formiraju formiraju opciono supstituisani monociklični ili biciklični 3-8-člani aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil prsten; svaki R11 radikal je nezavisno izabran od -CF3, halo, -0R<7a>, -CN, -SR<8a>, -S(0)2R<8a>, -C(0)R<7a>, -C02R<7a>, -N(R<7a>)2, -C(0)N(R<7a>)2, -N(R<7>)C(0)R<7a>, -N(R<7>)C02<R7a,><->S02N(R<7a>)2, -N(R<7>)S02R<7a>, -N(R<7>)C(0)N(R<7a>)2grupe, ili opciono supstituisane grupe izabrane od Ci.6alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe;
T je ravan ili račvast Cm alkilen lanac; i
V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(0)-, -S(0)2-, -C(0)- ili -C02- grupa.
Još jedan aspekt se odnosi na jedinjenja formule III-A-aa:
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu: Q je -CH2- ili -CH(R<9>)- grupa; G je -NR<4>R<5>grupa ili 3-7 člani heterociklil prsten koji je opciono supstituisan sa 1-4 R<i0>grupom; R<1>je vodonik, halo, Ci.2alkil, amino ili (C1.2alkil)i-2amino grupa; R je vodonik, halo, Ci.2 alifatična, Ci_2 alkoksi ili C1-2 haloalkil grupa; R je vodonik, halo, C1-2alifatična, C].2alkoksi ili C1.2haloalkil grupa; R4 je vodonik ili C 1.6 alifatična grupa;; R<5>je Ci-6 alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom; svaki R<6b>radikal je nezavisno izabran od vodonika ili Ci.6 alifatične grupe; svaki R7 radikal je nezavisno izabran od vodonika ili Ci.4alifatične grupe, ili su dva R radikala na istom atomu azota uzeta zajedno sa azotom da formiraju 5-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; R 8 j*e Cm alifatična grupa; R<9>je C1.3alifatična grupa; svaki R<10>radikal je nezavisno izabran od =0, R1T-R11 ili V-T-R<11>grupe; svaki R11 radikal je nezavisno izabran od C1.6 alifatične, -CF3, halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<7>ili -N(R7)C(0)N(R7)2 grupe;
T je ravan ili račvast C1.4alkilen lanac; i
V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(0)-, -S(0)2-, -C(0)- ili -C02- grupa.
Još jedan aspekt se odnosi na jedinjenja formule IH-A-aa:
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so pri čemu,
Q je -CH2- ili -CH(R<9>)- grupa;
G je -NR<4>R<5>grupa ili 3-7 člani heterociklil prsten koji je opciono supstituisan sa 1-"> r>10
2 R grupom; R<1>je vodonik, halo, Ci.2alkil, amino ili (Ci.2alkil) 1.2 amino grupa; R<2>je vodonik, halo, Ci.2 alifatična, Ci.2 alkoksi ili Ci-2 haloalkil grupa; R3 je vodonik, halo, C 1.2alifatična, C 1.2 alkoksi ili Ci.2 haloalkil grupa; R4 je vodonik ili Ci.6 alifatična grupa;; R<5>je Ci_6 alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02<R8>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom; svaki R<6b>radikal je nezavisno izabran od vodonika ili Cj.6alifatične grupe; svaki R<7>radikal je nezavisno izabran od vodonika ili C1-4alifatične grupe, ili su dva R<7>na istom atomu azota uzeta zajedno sa azotom da formiraju 5-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; R8 je Ci.4 alifatična grupa; R<9>je nezavisno izabrana od Ci.3alifatične grupe; svakiR10radikal je nezavisno izabran od R<11>, T-R11 ili V-T-R<11>grupe; svaki R radikal je nezavisno izabran od Ci.6 alifatične, halo, -OR , -CN, -SR , -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<7>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupe;
T je ravan ili račvast Ci.4alkilen lanac; i
V je -O-, -N(R<7>)-,-S-, -S(O)-, -S(0)2-, -C(O)- ili -C02- grupa.
Još jedan aspekt se odnosi na jedinjenja formule III-A-aa gde: Qje-CH2- grupa;
G je -NR<4>R<5>grupa ili 5-6 člani heterociklil prsten koji je opciono supstituisan sa 1-4 R<10>grupom;
R<1>je vodonik, halo ili metil grupa;
R je vodonik, halo, C14 alifatična, Cm alkoksi ili Ci_2 haloalkil grupa;
R je vodonik;
R4 je vodonik ili Cm alifatična grupa;;
R<5>je:
a) opciono supstituisana grupa izabrana od aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili
b) Ci-6alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa:
halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom, ili aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupa koja je opciono dalje supstituisana sa Ci_6alifatičnom, -CF3, halo, -OR 7 , -CN, -SR 8, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R7, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom; svaki R<6b>radikal je nezavisno izabran od vodonika ili Ci.6alifatične grupe; svaki R radikal je nezavisno izabran od vodonika ili opciono supstituisane Ci.4alifatične grupe, ili su dva R na istom atomu azota uzeta zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaki R<7a>radikal je nezavisno izabran od vodonika ili opciono supstituisane grupe izabrane od C1.4alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili su dva R<7a>na istom atomu azota uzeta zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaki R radikal je nezavisno opciono supstituisana Ci.4 alifatična grupa; svaki R8a radikal je nezavisno opciono supstituisana grupa izabrana od C 1.4 alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe; svaki R<10>radikal je nezavisno izabran od =0, R11, T-R<u>ili V-T-R11 grupe, ili dva prisutna R<10>radikala uzeta zajedno sa atomom(atomima) za koje su vezani formiraju opciono supstituisani monociklični ili biciklični 3-8-člani aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil prsten; svaki R11 radikal je nezavisno izabran od -CF3, halo, -0R<7a>, -CN, -SR<8a>, -S(0)2R<8a>, -C(0)R<7a>, -C02R<7a>, -N(R<7a>)2, -C(0)N(R<7a>)2, -N(R<7>)C(0)R<7a>, -N(R<7>)C02<R7a,><->S02N(R<7a>)2, -N(R<7>)S02R<7a>, -N(R<7>)C(0)N(R<7a>)2grupe, ili opciono supstituisane grupe izabrane od C\.6alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe;
T je ravan ili račvast Ci^alkilen lanac; i
V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(0)-, -S(0)2-, -C(0)- ili -C02- grupa.
Naredni aspekt se odnosi na jedinjenja formule HI-A-aa gde: Qje-CH2- grupa; Gje -NR<4>R<5>grupa ili 5-6 člani heterociklil prsten koji je opciono supstituisan sa 1-2 R<10>grupom; R<1>je vodonik, halo ili metil grupa; R<2>je vodonik, halo, Cm alifatična, Ci-2 alkoksi ili Cm haloalkil grupa; R je vodonik; R4 je vodonik ili Ci.6 alifatična grupa; R c je Ci-6 alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa halo, -OR 7 , -CN, -SR 8, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom;
svaki R<6b>radikal je nezavisno izabran od vodonika ili Ci.6alifatične grupe;
svaki R<7>radikal je nezavisno izabran od vodonika ili C].4alifatične grupe, ili su dva R<7>na istom atomu azota uzeta zajedno sa azotom da formiraju 5-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten;
R8 je Ci_4 alifatična grupa;
svakiR10radikal je nezavisno izabran od R<11>, T-R<11>ili V-T-R<11>grupe
svaki R<11>radikal je nezavisno izabran od Ci.6 alifatične, halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R7, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<7>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupe;
T je ravan ili račvast Cm alkilen lanac; i
V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(O)-, -S(0)2-, -C(O)- ili -C02- grupa.
Preferirana jedinjenja III-A-aa su jedinjenja gde:
Qje-CH2-grupa;
Gje izabran od opciono supstituisane piperidinil, piperazinil, morfolinil, pirolidinil, ili -NR<4>R<5>grupe;
R<1>je vodonik, halo ili metil grupa;
R<2>je halo;
R je vodonik;
R4 je vodonik ili Ci.6 alifatična grupa;
R3 je Ci_6 alkoksi, Cm alifatična ili Cm hidroksialkil grupa;
svaki R<6b>radikal je nezavisno izabran od vodonika ili C1.3alifatične grupe. Preferirano, svaki R<6b>radikal je vodonik ili metil grupa.
U preferiranim jedinjenjima formule III-A-aa, Gje 3-7-člani heterociklični prsten koji sadrži azot i koji je opciono supstituisan sa 1-4 R<10>grupe. U narednim preferiranim aspektima, Gje 3-7-člani heterociklični prsten koji sadrži azot i koji je opciono supstituisan sal-2 R<10>grupe. U narednim preferiranim aspektima, 3-7-člani heterociklični prsten koji sadrži azot je 3-7-člani N-vezani heterociklil koji sadrži azot i koji je opciono supstituisan sa 1-4 R<10>grupe. U još daljim preferiranim aspektima, 3-7-člani heterociklični prsten koji sadrži azot je 3-7-člani N-vezani heterociklični prsten koji je opciono supstituisan sal-2 R10grupe.
U preferiranim jedinjenjima formuleIII-A-aa,Gje nesupstituisan ili supstituisan sa 1-4 grupe nezavisno izabrane od: Ci^alkil, -OH, -CH2OH, -COO(Ci_4alkil), -CH(CH3)2OH, =0, F, -CONHCH3, 0(Ci.3alkil), -CONH2, -NHCOO(CMalkil), -CF3, -CON(C,.3alkil)2, -C=CH, -S02CH3, -CH2COOH, -NHS02CH3ili fenil grupe. U narednim preferiranim aspektima, Gje nesupstituisan ili supstituisan sa 1-2 grupe nezavisno izabrane iz grupe koja sadrži: C1.3alkil, HO-alkil, alkoksikarbonil, mono- ili dialkilaminokarbonil, i H02C-alkil grupu.
U svakom od prethodnih aspekata za jedinjenja formuleIII-A-aapreferirana je (S) stereohemija na položaju 3 morfolinskog Prstena A.
Primeri specifičnih jedinjenja formule I su pokazani u niže datim Tabelama 3 i 4. Za jedinjenja u Tabeli 3 i Tabeli 4 (i jedinjenja koja su generalno opisana i navedena na drugom mestu u specifikaciji) metil grupa je predstavljena sa -CH3, -Me ili sa jednostrukom linijom (kako je dato u primerima za jedinjenja 64-207) bez specifične naznake atoma vodonika.
Niže data Tabela 4 pokazuje specifične primere jedinjenja III-A-aa.
Na osnovu svojih osobina da inhibiraju IkB kinazu i drugih farmakoloških osobina, preferirana su jedinjenja ćiji su primeri obeleženi brojevima 1-30, 39-62 i 64-206. Još su poželjnija jedinjenja čiji su primeri označeni brojevima 1, 2, 7, 10, 11, 13, 16, 17,19-27, 39-62,64-77, 79-180,182-191, 193-201 i 204-207.
4 Upotreba, formulacije i primena
Farmaceutski prihvatljive kompozicije
Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da se primene na ljudima ili drugim sisarima različitim putevima, uključujući oralne dozne oblike i injekcije (intravenozne, intramuskularne, intraperitonealne, subkutane i slično). Koristeći pogodne farmaceutske ekscipijente (ili nosače), stručnjak sa iskustvom u tehnici može jednostavno da formuliše brojne druge dozne oblike koji sadrže jedinjenja iz pronalaska, kako je niže definisano.
Primeri farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata (ili nosača) i postupci proizvodnje različitih kompozicija mogu da se nađu u A. Gennaro (ed.), Remington: The Science and Practice of Pharmacv, 20<th>Edition, Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD (2000.), koji je ovde u celini inkorporiran u referencama. Farmaceutski prihvatljivi ekscipijenti (ili nosači) uključuju sredstva za korekciju ukusa, farmaceutske boje ili pigmente, rastvarače, ko-rastvarače, puferne sisteme, površinski aktivne materije, konzervanse, sredstva za zaslađivanje, sredstva za podešavanje viskoziteta, punioce, lubrikanse, glidante, dezintegratore, vezivna sredstva i smole.
Mogu da se koriste uobičajena sredstva za korekciju ukusa, kao ona koja su opisana u Remington's Pharmaceutical Sciences, 18<th>Ed., Mack Publishing Co., strane 1288-1300 (1990.), koji je ovde u celini inkorporiran u referencama. Farmaceutske kompozicije iz pronalaska generalno sadrže od 0 do 2% sredstava za korigovanje ukusa.
Uobičajena sredstva za bojenje i/ili pigmenti mogu takođe da se koriste, kao što su ona opisana u Handbook of Pharmaceutical Excipients, American Pharmaceutical Association & the Pharmaceutical Societv of Great Britain, strane 81-90 (1986.), koja je ovde u celini inkorporiran u referencama. Farmaceutske kompozicije iz pronalaska generalno sadrže od približno 0 do 2% sredstava za bojenje i/ili pigmenata.
Farmaceutske kompozicije pronalaska generalno sadrže od približno 0.1 do 99.9% rastvarača. Preferirani rastvarač je voda. U preferirane ko-rastvarače spadaju etanol, glicerin, propilen glikol, polietilen glikol i slično. Farmaceutske kompozicije iz pronalaska mogu da uključe od približno 0 do 50% ko-rastvarača.
Preferirani puferni sistemi obuhvataju acetatne, boratne, karbonatne, fosforatne, sukcinatne, maleatne, tartaratne, citratne, acetatne, benzoatne, laktatne, gliceratne, glukonatne, glutaratne i glutaminske kiseline i njihove natrijumove, kalijumove i amonijum soli. Posebno preferirani puferi su fosforatna, tartaratna, citratna i acetatna kiselina i njihove soli. Farmaceutske kompozicije iz pronalaska generalno sadrže od približno 0 do 5% pufera.
Preferirane površinski aktivne materije uključuju estre masne kiseline polioksietilen sorbitana, monoalkil etre polioksietilena, monoestre saharoza i estre i etre lanolina, soli alkil sulfata i natrijumove, kalijumove i amonijum soli masnih kiselina Farmaceutske kompozicije iz pronalaska generalno sadrže 0 do 2% površinski aktivnih materija.
Preferirani konzervansi uključuju fenol, alkil estre parahidroksibenzoatne kiseline, o-fenilfenol benzoatnu kiselinu i njene soli, boratnu kiselinu i njene soli, sorbatnu kiselinu i njene soli, hlorobutanol, benzil alkohol, timerosal, fenilmerkuri acetat i nitrat, nitromersol, benzalkonijum hlorid, cetilpiridin hlorid, metil paraben i propil paraben. Posebno preferirani konzervansi su soli benzoatne kiseline, cetilpiridin hlorid, metil paraben i propil paraben. Farmaceutske kompozicije iz pronalaska generalno sadrže od približno 0 do 2% konzervansa.
Preferirani zaslađivači uključuju saharozu, glukozu, saharin, sorbitol, manitol i aspartam. Posebno preferirani zaslađivači su saharoza i saharin. Farmaceutske kompozicije iz pronalaska generalno sadrže od približno 0 do 5% zaslađivača.
Preferirana sredstva za korekciju viskoziteta obuhvataju metilcelulozu, natrijum karboksimetilcelulozu, hidroksipropil-metilcelulozu, hidroksipropilcelulozu, natrijum alginat, karbomer, povidon, akaciju, guar gumu, ksantan gumu i tragakantu. Posebno preferirana sredstva za korekciju viskoziteta su metilceluloza, karbomer, ksantan guma, guar guma, povidon, natrijum karboksimetilceluloza i magnezij um aluminij um silikat. Farmaceutske kompozicije iz pronalaska generalno sadrže 0 do 5% sredstava za korigovanje viskoziteta.
U preferirana sredstva za punjenje spadaju laktoza, manitol, sorbitol, tribazni kalcijum fosfat, dibazni kalcijum fosfat, kompresibilni šećer, škrob, kalcijum sulfat, dekstro i mikrokristalna celuloza. Farmaceutske kompozicije iz pronalaska generalno sadrže od približno 0 do 75% sredstava za punjenje.
Preferirani lubrikansi/glidansi obuhvataju matnezijum stearat, stearatnu kiselinu u talk. Farmaceutske kompozicije iz pronalaska generalno sadrže od približno 0 do 7%, preferirano približno 1 do 5% lubrikansa/glidansa.
Preferirani dezintegratori obuhvataju škrob, natrijum škrob glikolat, krospovidon i kroskarmelozu natrijum i mikrokristalnu celulozu. Farmaceutske kompozicije iz pronalaska generalno sadrže od približno 0 do 20%, preferirano približno 4 do 15% dezintegratora.
U preferirana vezivna sredstva spadaju akacija, tragakanta, hidroksipropilceluloza, preželatinizirani škrob, želatin, povidon, hidroksipropilceluloza, hidroksipropilmetilceluloza, metilceluloza, rastvori šećera kao što su saharoza i sorbitol, i etilceluloza. Farmaceutske kompozicije iz pronalaska generalno sadrže od približno 0 do 12%, preferirano približno 1 do 10% vezivnih sredstava.
Dodatna sredstva koja su poznata stručnjaku sa iskustvom u praksi mogu da se kombinuju sa jedinjenjima iz pronalaska da nagrade pojedinačni dozni oblik. Alternativno, dodatna sredstva mogu razdvojeno da se primene na sisaru kao deo višestrukog doznog oblika.
Za izradu farmaceutskih kompozicija koje sadrže inventivne kompozicije, inertni, farmaceutski prihvatljivi ekscipijenti ili nosači mogu da budu ili u čvrstom ili u tečnom obliku. Preparati u čvrstom obliku obuhvataju praškove, tablete, disperzibilne granule, kapsule, kahete i supozitorije. Generalno, praškovi i tablete mogu da sadrže od približno 5 do 95 težinskih procenata aktivnih sastojaka. Pogodni čvrsti nosači su poznati u tehnici, na primer, magnezijum karbonat, magnezijum stearat, talk, šećer i laktoza. Tablete, praškovi, kahete i kapsule mogu da se koriste kao čvrsti dozni oblici koji su pogodni za oralnu primenu. Primeri farmaceutski prihvatljivh nosača i postupaka proizvodnje za različite kompozicije mogu da se nađu u Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Co. (1990.).
Tečni oblici preparata uključuju rastvore, suspenzije i emulzije. Uobičajeni tečni oblici preparata uključuju vodu i rastvore voda-propilen glikol za parenteralne injekcije ili dodavanje zaslađivača i sredstava za zamućenje u oralne rastvore, suspenzije i emulzije. Tečni oblik preparata može takođe da uključi rastvore za intranazalnu primenu.
Aerosol preparati pogodni za inhalaciju uključuju rastvore i čvrste čestice u obliku praška koji mogu da se kombinuju sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, kao što je inertni gas pod pritiskom (na primer, azot).
Takođe su obuhvaćeni čvrsti oblici preparata koji, za kratko vreme pre upotrebe, mogu da se konvertuju u tečni oblik preparata ili na oralnu ili za parenteralnu primenu. Ovakvi tečni oblici uključuju rastvore, suspenzije i emulzije.
Jedinjenja iz pronalaska mogu takođe da se primene transdermalno. Transdermalne kompozicije mogu da budu u obliku kremova, losiona, aerosola i emulzija i mogu da budu uključeni u transdermalni flaster matriksa ili tipa rezervoara, kako je za ovu svrhu uobičajeno u tehnici.
Preferirani način primene jedinjenja iz ovog pronalaska je oralni. Preferirano, farmaceutski preparat je u jediničnom doznom obliku. U tom obliku, preparat je razdeljen u jedinične doze odgovarajućih veličina koje sadrže odgovarajuće količine aktivne komponente, na primer, efektivnu količinu da se postigne željeni cilj.
Količina aktivnog sastojka (jedinjenja) u jediničnoj dozi preparata može da varira ili da bude podešena od približno 0.01 do 4,000 mg, preferirano od približno 0.01 do 1,000 mg, još poželjnije od približno 0.01 do 500 mg, a čak još poželjnije od približno 0.01 do 250 mg, u skladu sa određenom primenom. Karakterističan predloženi režim dnevne doze za oralnu primenu je obično u rasponu od približno 0.02 do 2,000 mg/dan, u jednoj ili četiri podeljene doze. Radi pogodnosti, ukupna dnevna doza može da se podeli i primeni u porcijama u toku dana, kako se zahteva. Tipično, farmaceutske kompozicije iz pronalaska se primenjuju od približno 1 do 5 puta dnevno, ili alternativno, kao kontinuirana infuzija. Ovakva primena može da se koristi za hroničnu ili akutnu terapiju. Količina aktivnog sastojka koji može da se kombinuje sa ekscipijentom ili nosećim materijalima da se dobije jedinični dozni oblik će da varira u zavisnosti od osobe koja se tretira i posebnog načina primene. Tipičan preparat obično sadrži od približno 5 do 95% aktivnog jedinjenja (w/w). Preferirano, ovakvi preparati sadrže od približno 20 do 80 mt % aktivnog jedinjenja.
Farmaceutski prihvatljivi ekscipijenti ili nosači uključeni u konjukciji sa jedinjenjima iz pronalaska, koriste se u koncentraciji koja je dovoljna da se obezbedi veličina čestice u odnosu na dozu. Farmaceutski prihvatljivi ekscipijenti ili nosači mogu ukupno da čine od 0.1 do 99.9% težine farmaceutske kompozicije pronalaska, preferirano od približno 20 do 80%o težine.
U koliko je podesno, nakon poboljšanja stanja pacijenta može da se primeni doza održavanja jedinjenja, kompozicije ili kombinacija jedinjenja i kompozicije iz pronalaska. Kasnije, doza ili učestalost primene, ili oba, mogu da se redukuju u koliko ostanu simptomi na nivou na kome je poboljšano stanje. Kada su simptomi ublaženi do željene vrednosti, tretman može da se prekine. Međutim, pacijenti mogu da zahtevaju isprekidani tretman u dužem vremenskom periodu nakon bilo kakvog ponovnog pojavljivanja simptoma bolesti.
Specifičnost doze i režimi tretmana za bilo kog određenog pacijenta mogu da variraju i zavisiće od različitih faktora, uključujući delovanje specifičnog uključenog jedinjenja, godina, telesne težine, opšteg zdravstvenog stanja, pola i načina ishrane pacijenta, vremena primene, brzine izlučivanja, specifične kombinacije leka, ozbiljnosti i pravca simptoma koji se tretiraju, odnosa pacijenta prema stanju koje se tretira i procene lekara koji leči. Određivanje odgovarajućeg režima doziranja za određenu situaciju je u granicama sposobnosti stručnjaka. Količina i učestalost primene jedinjenja iz pronalaska ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli može da bude regulisana u skladu sa procenom odgovarajućeg lekara, na bazi faktora koji su prethodno navedeni. Iskusni lekar će shvatiti da može da bude potrebna niža ili viša doze od onih koje su prethodno navedene.
Razumljivo je da inventivna jedinjenja obezbeđuju efikasan tretman različitih bolesti, simptoma i oboljenja, posebno onih čija je priroda infalamatorna ili povezana sa imunim sistemom, uključujući prihvatljivo vreme odgovora od početka primene i prihvatljivo trajanja nakon primene. Dok hrana, način ishrane, prethodna stanja, alkohol i druga sistemska stanja mogu da produže odlaganje delovanja leka nakon primene, razumljivo je da će optimalna doza imati za rezultat delotvoran tretman lekom unutar i u toku prihvatljivog vremenskog perioda.
Naziv "efektivna količina", kako se ovde koristi, treba da označi količinu jedinjenja, kompozicije, medikamenta ili drugog aktivnog sastojka ovog pronalaska koji dovodi do željenog terapeutskog efekta, na primer, inhibicije IKK-2 i/ili dovodi do lečenja ili umanjenja ozbiljnosti inflamatorne bolesti ili oboljenja i/ili lečenja ili umanjivanja ozbiljnosti kancera.
Inventivna jedinjenja mogu da egzistiraju u nerastvornim kao i solvatnim oblicima, uključujući hidratne oblike. Generalno, u svrhu ovog pronalaska, solvatni oblici sa farmaceutski prihvatljivim rastvaračima kao što su voda, etanol i slično, ekvivalenti su sa nerastvornim oblicima.
Inventivna jedinjenja mogu da formiraju farmaceutski prihavljive soli sa organskim i neorganskim kiselinama. Primeri pogodnih kiselina za formiranje soli su hidrohloridna, sulfatna, fosfatna, acetatna, citratna, malonska, salicilatna, malitna, fumaratna, sukcinatna, askorbitna, maleatna, metansulfonska i druge mineralne ili karboksilne kiseline koje su dobro poznate stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Soli se izrađuju kontaktom oblika slobodne baze sa dovoljnom količinom željene kiseline da se produkuje so na uobičajeni način. Oblici slobodne baze mogu da se regenerišu tretiranjem soli sa odgovarajućim razblaženim vodenim rastvorom baze, kao stoje razblaženi vodeni rastvor natrijum hidroksida, kalijum karbonata, amonijaka ili natrijum bikarbonata. Oblici slobodne baze mogu donekle da se razlikuju od svojih odgovarajućih oblika soli u izvesnim fizičkim osobinama, kao što je rastvorljivost u polarnim rastvaračima, ali su u svrhu ovog pronalaska soli inače ekvivalentne sa svojim odgovarajućim oblicima slobodne baze.
Prema svojim farmakološkim osobinama, jedinjenja u skladu sa pronalaskom su pogodna za profilaktički tretman i terapiju bolesti, oboljenja i simptoma koja uključuju povećanu aktivnost IkB kinaze. Ovo obuhvata, na primer, upalu zglobova (na primer, reumatoidni artritis (RA), reumatoidni spondilitis, giht, traumatični artritis, artritis izazvan rubeolom, psorijatični artritis, osteoartritis i druga artristična stanja), akutni sinovitis, tuberkulozu, aterosklerozu, degeneraciju mišića, kaheksiju, Reiterov sindrom, endotoksemiju, sepsu, septički šok, endotoksični šok, gram negativne sepse, artritis izazvan gihtom, sindrom toksičnog šoka, inflamatorne bolesti pluća (na primer, astmu, akutni respiratorni distres sindrom, hronično opstruktivno oboljenje pluća, silikoze, pulmonarne sarkoidoze i slično), bolesti resorpcije kostiju, reperfusna oštećenja, karcinoze, leukemiju, sarkome, tumore limfnih žlezda, karcinome kože, limfome, apoptoze, reakciju domaćina na grafit, bolesti domaćina izazvane graftom (GVHD), odbacivanje alografta i lepru.
Osim toga, inventivna jedinjenja mogu da se koriste u tretmanu bolesti simptoma i oboljenja povezanih sa imuno sistemom, na primer, infekcija, kao što su virusne infekcije (na primer, HIV, citomegaloviirus (CMV) influenca, adenovirus, herpes grupa virusa i slično), parazitne infekcije (na primer, malarija, kao što je cerebralna malarija) i infekcije kvascima i glivicama (na primer, gljivični meningitis). Dodatno, inventivna jedinjenja mogu da budu korisna za lečenje groznica i mialgija izazvanih infekcijom, sindroma stečene imune deficijencije (AIDS), kompleksa povezanih sa AIDS (ARC), kaheksije kao posledice infekcije ili maligniteta, kaheksije kao posledice AIDS-a ili kancera, formiranja keloida i ožiljaka, groznica, dijabetesa i imflamatornog oboljenja creva (IBD) (na primer, Kronova bolest i ulcerativni kolitis). Jedinjenja iz pronalaska su takođe korisna u tretmanu bolesti ili oštećenja na mozgu u kojima je implicirano povećano pojavljivanje TNF-a, kao što je multiple skleroza (MS) ishemično oštećenje mozga (na primer, cerebralni infartk (šlog) i povreda glave. Jedinjenja iz pronalaska su takođe korisna u tretmanu psorijaze, Alchajmerove bolesti, karcinomatoznih oboljenja (potencirani citotoksičnim terapijama), kardijačnog infarkta, hronične opstruktivne bolesti pluća (COPD) i akutnog respiratornog odloženog stresa (ARDS).
U jednom aspektu jedinjenja iz ovog pronalaska su korisna za lečenje kancera, posebno za lečenje kancera gde je aktivnost IKK abnormalno velika. Tipovi kancera koji mogu da se tretiraju obuhvataju limfome, kao što je difuzija velike B-ćelije, primerne mediastinalne B-ćelije i oivičene ćelije; multiple mielome; osteolitičku metastazu kostiju; kancer ćelija ovojnica glave i vrata; kancer prostate; kancer pankreasa i "non-small" kancer ćelija pluća. U jednom aspektu, jedinjenja su korisna za ABC limfomu. Za tretman kancera, jedinjenja mogu da se koriste kao pojedinačno sredstvo ili u kombinaciji sa drugim sredstvima za koje se zna da su korisna u tretmanu kancera. Primeri ovakvih drugih sredstava obuhvataju bortezomib; kapecitibin; gemcitabin; irinotecan; fudarabin; 5-fluorouricil ili 5-fluorouricil/ leukovorin; taksane, uključujući, na primer, paklitaksel i docetaksel; jedinjenja platine, uključujući, na primer, cisplatin, karboplatin i oksaliplatin; antracikline, uključujući, na primer, doksorubicin i doksorubicin i pegilirani lipozomalni doksorubicin; mitoksantron; deksametazon; vinkristin; etopozid; prednizon; talidomid; Herceptin; temozolomid; i alkilirajuća sredstva kao što su melfalan, hlorambucil i ciklofosfamid.
Jedinjenja formule (I) su posebno korisna za lečenje inflamatornih i bolesti, oboljenja i simptoma povezanih sa imuno sistemom, još preciznije, onih inflamatornih oboljenja kao što su RA, astma, IBD, psorijaza, COPD i MS. Razumljivo je da su data jedinjenja korisna za tretman bolesti ili simptoma koje su povezane sa aktivnošću NF-kB, TNF-a i drugih enzima u delovima u kojima je poznato da IKK modelira aktivnost.
Jedinjenja iz ovog pronalaska su takođe korisna za lečenje bolesti, simptoma i oboljenja povezanih sa kostima u kojima postoji gubitak ili umanjenje koštane mase - ili kao rezultat smanjenog formiranja nove koštane mase ili povećanja resorpcije kostiju ili njihovom kombinacijom. Specifični primeri uključuju osteoporozu, peridontalnu bolest, osteomielitis, reumatoidni artritis, aseptični gubitak hrskavice zgloba ili osteolitičke lezije (obično povezane sa kancerom). Poznato je daje reumatoidni artritis, koji karakteriše inflamacija zglobova, takođe povezan sa destrukcijom hrskavice i kostiju. Osim toga, objavljeno je da inhibitor IKK obezbeđuje inhibiciju gubitka hrskavice i kostiju kod modela pacova u slučaju artritisa indukovanog kolagenom. Videti Mclntvre i saradnici,Arthritis & Rheumatism(2003.), 48(9), 2652-2659.
Osteoporoza je širok pojam koji se odnosi na brojne različite bolesti u kojima dolazi do smanjenja koštane mase. Ovo uključuje primarnu osteoporozu (na primer, post-menopauznu, senilnu osteoporozu i juvenilnu osteoporozu) i sekundarne osteoporoze. Primeri sekundarni osteoporoza su one osteoporoze koje su povezane sa hroničnim bolestima (na primer, hronična bolest bubrega, hepatična insuficijencija, gastrointestinalna malapsorpcija, hronična imobilizacija i hronične inflamatorne bolesti, uključujući reumatoidni artritis, osteoartritis, peridontalnu bolest i aseptični prostetični gubitak zgloba), bolestima povezanim sa endokrinom disfunkcijom (na primer, dijabetes, hipertiroidizam, hiperparatiroidizam, hipogonadizam i hipopituitarizam), simptomi povezani sa lekovima i određenim supstancama (na primer, kortikosteroid, heparin, antikonvulzanti, alkohol i imunosupresanti) i hematološka oboljenja (na primer, metastatične bolesti, mieloma, leukemija, gaučerova bolest i anemija). Objavljeno je daje inhibicija ili direktno IkB ili indirektno dela puteva NF-kB korisna za tretman osteoporoza i osteoartritisa. Videti, na primer, PCT prijave WO 2003104219, WO 2003103658, WO 2003029242, WO 2003065972 i WO 9965495. U skladu sa tim, ovaj pronalazak takođe obezbeđuje postupak za lečenje ili prevenciju gubitka kostiju kod pacijenata kojima je to potrebno, uključujući primenu na pacijentu jedinjenja iz ovog pronalaska. Takođe je obezbeđen postupak za generisanje formiranja kostiju kod pacijenata, uključujući primenu jedinjenja iz ovog pronalaska.
Naredni aspekt iz pronalaska obezbeđuje postupak za inhibiciju aktivacije pojavljivanja NF-kB zavisnog gena povezane sa inhibicijom katalitičkog delovanja IKK i/ili fosforilacije IkB, uključujući primenu na pacijentu kome je to potrebno određene količine jedinjenja iz pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili solvata, ili njegove farmaceutske kompozicije, koja je efikasna u inhibiciji katalitičkog delovanja IKK i/ili fosforilacije IkB, i na taj način inhibiraju aktiviranje pojavljivanja NF-kB zavisnog gena.
U jednom aspektu pronalaska, obezbeđen je postupak za lečenje inflamatornih ili imuno-zavisnih fizioloških oboljenja, simptoma ili bolesti kod pacijenata kojima je potreban takav tretman, uključujući primenu na tom pacijentu određene količine najmanje jednog jedinjenja iz pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili solvata ili njihove farmaceutske kompozicije, koja je efikasna za lečenje inflamatornih ili imuno-povezanih fizioloških oboljenja, simptoma ili bolesti. Preferirano, inflamatorna bolest, oboljenje ili simptom je reumatoidni artritis, astma, psorijaza, psorijatični artritis, hronično opstruktivna bolest pluća (COPD) inflamatorno oboljenje creva ili multiple skleroza.
U još jednom aspektu pronalaska, dat je postupak za lečenje cističnih fibroza kod pacijenata kojima je potreban takav tretman, uključujući primenu na pacijentu određene količine najmanje jednog jedinjenja iz pronalaska ili njegove farmaceutski prihvaljive soli ili solvata ili njihove farmaceutske kompozicije.
Pronalazak uključuje jedinjenje koje ima formulu (I), postupak za izradu inventivnog jedinjenja, postupak za izradu farmaceutske kompozicije od najmanje jednog inventivnog jedinjenja i najmanje jednog farmaceutski prihvatljivog nosača ili ekscipijenta i postupak za korišćenje jednog ili više inventivnih jedinjenja za lečenje različitih oboljenja, simptoma i bolesti, posebno onih koja su po prirodi inflamatorna ili povezana sa imuno sistemom. Inventivna jedinjenja i njihova farmaceutski prihvatljiva so i neutralne kompozicije mogu da se formulišu zajedno sa farmaceutski prihvatljivim eskcipijentom ili nosačem, a nastala kompozicija može da se in vivo primeni na sisarima, kao što su primati, na primer, šimpanzama i ljudima (na primer, muškom i ženskom polu) i životinjama (na primer, psima, mačkama, govedima, konjima i slično) za lečenje različitih oboljenja, simptoma i bolesti. Osim toga, inventivna jedinjenja mogu da se koriste za izradu medikamenta koji je koristan za lečenje različitih oboljenja, simptoma i bolesti.
Dok jedno ili više inventivnih jedinjenja može da se koristi u monoterapijskoj primeni za lečenje oboljenja, bolesti ili simptoma, takođe mogu da se koriste u kombinovanoj terapiji, u kojoj se upotrebljeno inventivno jedinjenje ili kompozicija (terapeutsko sredstvo) kombinuje sa jednim ili više drugih terapeutskih sredstava za lečenje istih i/ili drugih tipova oboljenja, simptoma i bolesti. Kombinovana terapija obuhvata primenu terapeutskih sredstava istovremeno ili jedno za drugim. Alternativno, terapeutska sredstva mogu da sekombinuju u jednu ili više kompozicija koje se primenjuju na pacijentu.
U jednom aspektu, jedinjenja iz ovog pronalaska se koriste u kombinaciji sa drugim terapeutskim sredstvima, kao što su drugi IKK, druga sredstva korisna u lečenju stanja povezanih sa NF-kB i TNF-a i sredstva koja su korisna za lečenje drugih oboljenja, simptoma i bolesti. Posebno, srestva koja indukuju apoptoze, kao što su sredstva koja izazivaju poremećaje ćelijskog ciklusa ili funkciju mitohondrija su korisna u kombinaciji sa inhibitorima IKK ovog pronalaska. Primeri sredstava za kombinaciju sa inhibitorima IKK obuhvataju antiproliferativna sredstva (na primer, metotreksat) i sredstva otkrivena u U.S. Patentnoj prijavi objavljenoj pod brojem. US2003/0022898, strana 14, paragraf [0173-0174], koja je u celini ovde inkorporirana. U nekim aspektima, jedinjenje iz pronalaska se primenjuje u konjukciji sa terapeutskim sredstvom izabranim iz grupe koja sadrži citotoksična sredstva, radioterapijom i imunoterapijom. Neograničavajući primeri citotoksičnih sredstava pogodnih za upotrebu u kombinaciji sa inhibitorima IKK iz pronalaska obuhvataju kapecitibin; gemcitabin; irinotekan; fludarabin; 5-fluorouracil ili 5-fluorouracil/ leukovorin; taksane, uključujući, na primer, paklitaksel i docetaksel; sredstva sa platinom, uključujući, na primer, cisplatin, karboplatin i oksaliplatin; antracikline, uključujući, na primer, doksorubicin i pegilatni lipozomalni doksorubicin; mitoksantron, deksametazon; vinkristin; etopozid; prednizon; talidomid; herceptin; temozolomid; i alkilirajuća sredstva, kao što su melfalan, hlorambucil i ciklofosfamid. Jasno je da druge kombinacije mogu da se prihvate sve dok dok su unutar okvira ovog pronalaska.
Naredni aspekt pronalaska se odnosi na inhibiciju IKK, aktivnost na biološkom uzorku ili pacijentu, pri čemu ovaj postupak uključuju primenu na pacijentu, ili kontakt navedenog biološkog uzorka sa jedinjenjem formule I ili kompozicijom koja uključuje navedeno jedinjenje. Naziv "bioološki uzorak", kako se ovde koristi, generalno obuhvata materijalein vivo, in vitroiex vivo,i takođe obuhvata, bez ograničenja, ćelijske kulture ili njihove ekstrakte; materijal biopsije dobijen od sisara ili njihovih ekstrakata; i krv, pljuvačku, urin, feces, semenu tečnost, suze ili druge telesne tečnosti ili njihove ekstrakte. Još jedan aspekt ovoga pronalaska je da obezbedi kit koji uključuje razdvojene kontejnere sa pojedinačnim pakovanjem, pri čemu se inventivna farmaceutska jedinjenja, kompozicije i/ili njihove soli koriste u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačima za lečenje oboljenja, simptoma i bolesti u kojima IkB kinaza igra ulogu.
5. Opšti postupci sinteze:
Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da se izrade postupcima koji su poznati stručnjacima sa iskustvom u tehnici za analogna jedinjenja, kako je ilustrovano niže datim opštim šemama, i pozivajući se na preparativne primere koji su pokazani u daljem tekstu.
Prethodna Šema I pokazuje opšti put za dobijanje jedinjenja formule I. Prsten A karbociklične kiselinelamože da bude spojen sa željenim amino beta-karbolinom2ada se dobije I. Mnogi međuproizvodi la koji su korisni za izradu jedinjenja iz ovog pronalaska, jednostavno se dobijaju od poznatih početnih materijala i hemijskim postupcima, posebno u pogledu sintetičkih primera koji su ovde detaljno dati. Šeme II-IV opisuju načine za izradu različitih p-karbolin međuproizvoda 2a.
Faze: (a) (i) HCOC02H (ii) HC1 (b) Pd/C (c) NCS (d) NaN02(e) NaOMe (f) Pt/ H2
Gore data Šema II pokazuje način izrade beta-karbolin radikala gde je R<1>vodonik, R<2>je hlor a R<3>je alkoksi grupa. Iako šema daje primer za R<3>kao metoksi grupe, stručnjaku sa iskustvom u tehnici će biti razumljivo da beta-karbolini koji imaju druge R<3>alkoksi grupe mogu da se dobiju zamenom NaOMe u fazi (e) sa natrij umom ili alkoksidima metala.
Faze: (a) NaHMDS, Mel (b) H2, Ranej nikl, PtO (c) i. TFA ii. CHOC02H iii. HC1 (d) Pd/C, ksileni, 160 °C (e) i. NCS, IN HC1 ii. NaN02, TFA iii. H2, Pt
Prethodno data Šema III pokazuje način za izradu beta-karbolin međuproizvoda gde je R alkil grupa kao što je metil grupa, R je halo halo element kao što je hlor i R je vodonik. Stručnjak sa iskustvom u tehnici će razumeti kako prethodna šema može da se modifikuje tako da se dobije R<1>alkil grupa različita od metil grupe ili R<2>halo grupa koja nije hlor.
Faze: (a) i. LDA, THF, -78°C, ii. SnBu3Cl (b) 5% Pd(PPh3)2Cl2, 10% Cul, DMF, refluks u toku noći (c) 3eq NHMDS, THF, sobna temperatura u toku noći (d) i. TFA/NaN03, ii.
zasićeni NaHC03, iii. 5% Pt(S), NH402CH
Prethodno data Sema IV pokazuje način izrade beta-karbolin međuproizvoda gde je R<1>fluor, R2 je hlor i R3 je vodonik. Treba da se razume daje moguće lako modifikovati ovu šemu, čime se omogućava izrada drugih međuproizvoda. Na primer, R<2>grupa može da se uvede zamenom 4-hloro-2-jodoanilina u fazi (b) sa drugim 2-jodoanilinom koji na položaju 4 ima supstituent koji se razlikuje od hlora.
Prethodno data Šema IVA pokazuje drugi način izrade beta-karbolin međuproizvoda gde je R<1>vodonik, R<2>je hlor i R<3>je vodonik. Treba da se razume da će jednostavna modifikacija ove šeme omogućiti izradu drugih međuproizvoda.
Posebno koristan međuproizvod za izradu jedinjenja formuleIII-A-aa jemeđuproizvod 3a:
gde je R<13>halo, OH, OR<15>ili karboksilna kisela zaštitna grupa; R14 je amino zaštitna grupa, vodonik ili -W-G grupa kako je prethodno definisano; i R15 je organski radikal. Amino zaštitne grupe su dobro poznate u tehnici. Primeri pogodnih amino zaštitnih grupa obuhvataju alkoksikarbonil grupe, kao što je t-butoksikarbonil (t-BOC) i benzil grupe, kao što su benzil i para-metoksibenzil grupe. Karboksilna kisela grupa na položaju 3 morfolinskog prstena može da bude zaštićena kao bilo koja stabilna estarska grupa, kao što su prosti alkil ili arili estri, kao što su metil, etil, benzil ili pentafluorofenil estar. U jednom aspektu, R<14>je -W-G grupa, a R<13>je -OH, halo ili karboksilna kisela zaštitna grupa. Različite zaštitne grupe su detaljno opisane u Protecting Groups in Organic Svnthesis, Theodora W. Greene and Peter G. M. Wuts, 3<rd>edition, 1999, izdavač John Wiley i Sons.
Preferirani enantiomer međuproizvoda 3a je (S)-3a:
gde suR13i R<14>kako je prethodno opisano.
Međuproizvod 3a ili (5j-3a, kao karboksilna kiselina ili neki njen aktivirani oblik (kao što je kiseli hlorid), može da bude spojen sa odgovarajućim amino-beta-karbolinom, kako je navedeno u prethodno datoj Šemi I. Kada je R<14>amino zaštitna grupa, reakcija spajanja amida obezbeđuje dalje korisne međuproizvode, kako je niže pokazano u obliku jedinjenja formule IV:
gde je R<14>amino zaštitna grupa a R<1>, R<2>iR<3>su kako je prethodno opisano. Stručnjak sa iskustvom u tehnici će razumeti da izvesna jedinjenja formule III-A-aa (gde je svaki R6b metil grupa) mogu da se izrade od jedinjenja formule IV uklanjanjem R<14>zaštitne grupe a zatim vezivanjem -W-G dela koristeći poznate postupke. Alternativno, jedinjenja formule III-A-aa mogu da se izrade najpre stvaranjem međuproizvoda 3a, gde je R<14>-W-G grupasiR je karboksilna kiselina ili njen derivat. Reakcija spajanja amida sa odgovarajućim amino-beta-karbolinom obezbeđuje zatim direktno jedinjenja formule III-A-aa.
Faze: (a) K2C03, Kl, 3-Bromo-2-metil-propen, MeCN (b) I2, NaHC03, MeCN (c) Bu3SnH, AIBN, toluen, 110°C (d) H2, 20% Pd(OH)2/C, 10% AcOH/MeOH
Predhodno data Šema V pokazuje način dobijanja međuproizvoda formule 3a, uključujući nezaštićeni i-19. Selektivna zaštita ili oslobađanje amino i karboksilnih kiselih grupa u i-19 da se dobiju različiti 3a međuproizvodi biće u okviru znanja stručnjaka sa iskustvom u tehnici.
Naredni koristan međuproizvod za izradu jedinjenja formule III-A-aa je jedinjenje formule V, preferirano (S)-V:
gde je R<13>halo ili neka druga odlazeća grupa, OH, OR<15>ili karboksilna kisela zaštitna grupa, R15 je neki organski radikal kao što su Ci.6alifatična, aril ili benzil grupa, Prsten A ima 0-2 ili 0-4 R<6b>grupa, a R<1>, R<2>, R<3>i R<6b>su kako je prethodno definisano.
Naredni koristan međuproizvod za izradu jedinjenja iz ovog pronalaska je VI, preferirano( S)~VI:
gde je jedan od R<13>i R<13a>OH ili odlazeća grupa, kao što je halo grupa, a drugi je OR15ili karboksilna kisela zaštitna grupa, R<15>je organski radikal, kao što je Cj.6alifatična, aril ili benzil grupa, Prsten A ima 0-2, a R<6b>je kako je prethodno definisano.
Primeri sinteza
U postupcima izrade su korišćene sledeće skraćenice: RT ili rt je sobna temperatura; h, hr ili hrs je sat ili sati; min je minut; TFA je trifluoroacetatna kiselina; DMSO je dimetilsulfoksid; NCS je N-hlorosukcinimid; EDCI je l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorid; EtOAc je etil acetat; DIEA je diizopropiletilamin; DCM je dihlorometan; DDQ je dihloro dicijano benzokvinon; mCPBA je meta-hloroperbenzoatna kiselina; MeOH je metanol; EtOH je etanol; MeCN je acetonitril; TLC je hromatografija na tankom sloju; AIBN je azobisizobutironitril; NH4OAC je amonijum acetat; NaOAc je natrijum acetat; Et20 je dietil etar; AcOH je acetatna kiselina; i DMF je dimetilformamid. TBTU je N,N,N',N'-tetrametil-o-(benzotriazol-1 -il)uronijum tetrafluoroborat.
MEĐUPROIZVOD 1: 7- fluoro- 2, 3, 4, 9- tetrahidro- IH- p- karbolin~ l- karboksilna kiselina
U 10 g (46.6 mmol) komercijalno raspoloživog 6-fluorotriptamin hidrohlorida se doda 50 ml IM acetatnog pufera (pH 4.4) da se dobije suspenzija koja se meša na sobnoj temperaturi (RT). Nakon toga se u izmešanu suspenziju odjedanput doda suspenzija monohidratne glioksilne kiseline (1.1 eq, 51.28 mmol, 4.72 g) u etil acetatu. Suspenzija se meša u toku noći (16 sati) na sobnoj temperaturi i nastali čvrsti precipitat se sakupi filtriranjem i ispere i sa H20 i etil acetatom. Uzorak se zatim suši pod vakuumom da se dobije svetio žuta, čvrsta supstanca u kvantitativnom prinosu.
'H-NMR (300 MHz, acetatna kiselina-d4): 5 3.04 (m, 2H), 3.56 (m, 1H), 3.83 (m, IH), 6.80 (m, IH), 7.13 (dd, IH), 7.34 (dd, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.17 min. MS (M+H<+>): 235.0.
MEĐUPROIZVOD 2: 7- fluoro- 2, 3, 4, 9- tetrahidro- lH- f3- karbolin
U boci sa okruglim dnom zapremine 500 ml se suspenduje 7-fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-lH-p-karbolin-1 -karboksilna kiselina (5 g, 21.36 mmol) u 130 ml 3N rastvoru HC1 i uz mešanje refluksuje u toku noći (16 sati). Nakon hlađenja, stvoreni svetio smeđi čvrsti precipitat se izdvoji filtriranjem i ispere sa H20. So dobijena prethodnim filtriranjem se nakon toga rastvori u vrućem metanolu (200 ml) i tretira sa 3M rastvorom K2C03(5-10 ml) tako daje pH je približno 9. U ovu mešavinu se doda 100 ml H20 i ostavi da se meša na sobnoj temperaturi. Metanol se upari na rotacionom evaporatoru da se dobije bela vodena suspenzija željene slobodne baze koja se zatim izdvoji filtriranjem (3.2 g, prinos 79%). 'H-NMR (300 MHz, metanol-d4): 5 2.73 (t, 2H), 3.11 (t, 2H), 3.94 (s, 2H), 6.73 (m, IH), 6.94 (m, IH), 7.30 (dd, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.25 min. MS (M+H<+>): 191.1.
MEĐUPROIZVOD 3: 7- fluoro- 9H- ji- karbolin
U boci sa okruglim dnom zapremine 250 ml koja je opremljena sa kondenzatorom sa otvorom u atmosferu suspenduje se 7-fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-lH-P-karbolin (3.5 g, 18.42 mmol) u ksilenu (60 ml) i zagreva. U ovu vruću reaktivnu mešavinu se doda Pd/C (10 mt%, 0.2 eq, 700 mg) i mešavina refluksuje u ksilenu u toku noći (12-14 sati). Nakon toga se rastvor filtrira kroz celite ploču i sakupljeni filtrat se zatim upari na rotacionom evaporaturu da se dobije željeni produkt u obliku smeđe/žutomrke, čvrste supstance (3.0 g, prinos 88%). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 7.10 (m, IH), 7.37 (dd, IH), 8.10 (d, IH), 8.28 (dd, IH), 8.35 (dd, IH), 8.89 (s, IH), 11.74 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.88 min. MS (M+H<+>): 187.1.
MEĐUPROIZVOD 4: 6- hloro- 7- fluoro- 9H- p- karbolin
7-fluoro-9H-P-karbolin (2.15 g, 11.58 mmol) se suspenduje u 100 ml IN rastvora HC1. U ovu mešavinu se doda NCS (1.85 g, 13.89 mmol, 1.2 eq) i dobijena mešavina se meša u toku noći na sobnoj temperaturi. Nakon toga se reaktivna mešavina filtrira da se dobije svetio žuta, čvrsta supstanca (2.1 g, prinos 83%).
'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 7.86 (d, 1H), 8.64 (d, IH), 8.79 (d, IH), 8.91 (d, 1H), 9.33 (s, IH), 13.05 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 2.19 min. MS (M+H<+>): 221.1.
MEĐUPROIZVOD 5: 6- hloro- 7- fluoro- 8- nitro- 9H- if- karbolin
6-hloro-7-fluoro-9H-P-karbolin (2.1 g, 9.54 mmol) se prenese u bocu sa okruglim dnom (250 ml) i doda se NaNC>3 (1.136 g, 13.36 mmol, 1.4 eq). Nakon toga se u bocu doda TFA (48 ml) i dobijena mešavina se refluksuje u toku noći. Zatim se TFA ukloni na rotacionom evaporaturu. Dobijena žitka masa se suspenduje u vodi (50 ml) i potpuno sonicira. Dobijena suspenzija se zatim filtrira da se dobije žuta, čvrsta supstanca (2.0 g, prinos 80%). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 8.21 (d, IH), 8.46 (d, IH), 9.04 (m, 2H), 12.55 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 2.24 min. MS (M+H<+>): 266.2.
MEĐUPROIZVOD 6: 6- Moro- 7- metoksi- 8- nitro- 9H- if- karbolin
U izmešanu suspenziju NaH (684 mg, 17.1 mmol) u DMF (10 ml) se u atmosferi argona doda metanol (0.462 ml, 11.4 mmol). Dobijeni rastvor se ostavi 20 minuta da se meša na sobnoj temperaturi. U izmešani rastvor se doda 6-hloro-7-fluoro-8-nitro-9H-P-karbolin (500 mg, 1.9 mmol) i dobijena mešavina se ostavi da se meša na sobnoj temperaturi. Nakon dodavanja H2O, izdvoji se smeđi čvrsti precipitat koji se filtrira da se dobije željeni 6-hloro-7-metoksi-8-nitro-9H-(3-karbolin (510 mg, prinos 97%). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 4.02 (s, 3H), 8.52 (d, IH), 8.60 (d, IH), 9.05 (s, IH), 9.12 (s, IH), 12.78 (b, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 2.28min. MS (M+H<+>): 278.
MEĐUPROIZVOD 7: 6- hloro- 7- metoksi- 9H- p- karbolin- 8- ilamin
6-hloro-7-metoksi-8-nitro-9H-(3-karbolin (510 mg, 1.84 mmol) se suspenduje u 50 ml metanola i doda se 100 mg Pd/C (10%). Boca je opremljena sa balonom vodonika i reaktivna mešavina se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Nakon filtriranja kroz celite ploču i evaporacije metanola, dobij a se tamno smeđa čvrsta supstanca. Ovaj ostatak se suspenduje u metanolu (15 ml) i uz intenzivno mešanje doda u rastvor zasićenog NaHCOa(100 ml). Svetio smeđa čvrsta supstanca koja se izdvoji u obliku precipitata se odvoji filtriranjem i temeljno suši pod vakuumom da se dobije željeni produkt (512 mg, kvantitativni prinos). 'H-NMR (300 MHz, metanol-d4); 53.90 (s, 3H), 7.63 (s, IH), 8.11 (d, IH), 8.27 (d, IH), 8.84 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.12 min.
MS (M+H<+>): 248.
MEĐUPROIZVOD 8: 6- hloro- 9H- p- karbolin- 8- ilamin
Ciljano jedinjenje je izrađeno u skladu sa procedurama koje su navedene zaMeđuproizvod 1doMeđuproizvod 7gde je početni materijal zaMeđuproizvod 1nesupstituisani triptamin. Alternativna sinteza za 6-hloro-9H-(3-karbolin-8-ilamin je opisana na strani 34, primera 15, PCT prijave broj WO 01/68648 Al, koja je ovde inkorporirana u celini.
POSTUPAKA: PROCEDURA SPAJANJA ZA 6, 7, 8- SUPSTITUISANE- fi- KARBOLINE
6,7,8-supstituisani-9H-p-karbolin (1 mmol), EDCI (1.6 mmol) i odgovarajuća karboksilna kiselina (1.2 mmol) se prenesu u bocu sa okruglim dnom i suspenduju u piridinu (5 ml). Dobijena mešavina se zagreva na 60°C u toku noći. Nakon toga se piridin ukloni rotacionom evaporacijom i doda se 5% rastvor Na2C03. Nastali čvrsti precipitat se izdvoji filtriranjem. Prečišćavanjem hromatografijom dobija se željeni produkt.
POSTUPAK B: PROCEDURA SPAJANJA ZA 6, 8- SUPSTITUISANE- B- KARBOLINE
6,8-supstituisani-9H-P-karbolin (1.0 mmol), EDCI (1.6 mmol) i karboksilna kiselina (1.2 mmol) koje treba da se spoje se prenesu u bocu sa okruglim dnom i suspenduju u piridinu (5 ml). Nastala mešavina se meša u toku noći. Nakon toga se piridin ukloni rotacionom evaporacijom i doda se 5% rastvor Na2C03. Nastali čvrsti precipitat se izdvoji filtriranjem. Prečišćavanjem hromatografijom dobija se željeni produkt.
PRIMER 1: N-( 6- hloro- 7- metoksi- 9H-[3- karbolin- 8- in- 2- metil- nikotinamid
6-hloro-7-metoksi-9H-P-karbolin-8-ilamin (100 mg, 0.4 mmol), EDCI (125 mg, 0.64 mmol) i 2-metil nikotinska kiselina (66 mg, 0.48 mmol) se prenesu u bocu sa okruglim dnom i suspenduju u piridinu (2 ml). Nastala mešavina se zagreva na 80°C u toku noći. Nakon toga se piridin ukloni rotacionom evaporacijom i doda se 5% rastvor Na2CC>3. Nastali čvrsti precipitat se izdvoji filtriranjem. Prečišćavanjem hromatografijom se dobija željeni produkt u prinosu od 50-70%. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 2.71 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 7.45 (dd, IH), 8.15 (d, IH), 8.21 (d, IH), 8.38 (d, IH), 8.45 (s, IH), 8.61 (d, IH), 8.92 (s, IH), 10.33 (s, IH), 11.57 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.77 min. MS (M+H<+>): 367.1.
PRIMER 2: 4- metil- pirimidin- 5- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 7- metoksi- 9H- beta-karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu sa Postupkom A od 6-hloro-7-metoksi-9H-beta-karbolin-8-ilamina i 4-metil-5-pirimidin karboksilne kiseline, u prinosu od 80%. 1 H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 2.75 (s, 3H), 3.92 (s, 3H), 8.19 (d, IH), 8.41 (d, IH), 8.50 (s, IH), 8.96 (s, IH), 9.20 (s, IH), 9.25 (s, IH), 10.63 (s, IH), 11.67 (s,lH). Vreme retencije (LC, postupak sa formijatnom kiselinom kao standardom): 0.95 min. MS (M+H<+>): 368.
MEĐUPROIZVOD 9: 6- hloro- 7- etoksi- 8- nitro- 9H- fi- karbolin
Natrijum etoksid (232 mg, 3.4 mmol) se doda u rastvor 6-hloro-7-fluoro-8-nitro-9H-p-karbolina (200 mg, 0.76 mmol) u DMSO (4 ml) i reaktivna mešavina se ostavi da se meša u toku noći. Reaktivna mešavina se razblaži sa vodom i pH rastvora se podesi do približno 4 dodavanjem IN rastvora HCL. Vodeni rastvor se ekstrahuje (3x) sa EtOAc. Kombinovani EtOAc slojevi se suše i upare. Sirovi produkt se prečisti gasnom hromatografijom da se dobije željeni produkt u prinosu od 40-60%. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 1.44 (t, 3H), 4.24 (q, 2H), 8.21 (d, IH), 8.46 (d, IH), 8.91 (s, IH), 9.02 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 2.37min. MS(M+H+): 291.9.
MEĐUPROIZVOD 10: 6- hloro- 7- etoksi- 9H- B- karbolin- 8- ilamin
6-hloro-7-etoksi-8-nitro-9H-P-karbolin (160 mg, 0.55 mmol) se suspenduje u 4 ml metanola i doda se 25 mg Pd/C (10%). Na bocu se stavi balon vodonika i reaktivna mešavina se meša u toku noći na sobnoj temperaturi. Nakon filtriranja kroz celite ploču i evaporacije metanola, dobija se tamno smeđa, čvrsta supstanca i odredi kao željeni 6-hloro-7-ciklopropilmetoksi-9H-p-karbolin-8-ilamin (80 mg, 55%). 'H-NMR (300 MHz, Metanol-d4/CDCl3): 5 1.26 (t, 3H), 3.91 (q, 2H), 7.34 (s, IH), 7.71 (d, IH), 8.02 (s, IH), 8.56 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa formijatnom kiselinom kao standardom): 1.16 min. MS (M+H+): 262.0.
PRIMER 3: N-(6-hlo ro- 7- etoksi- 9H- p- karbolin-8-il)-2-metil-nikotinamid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu saPostupkom Aod 6-hloro-7-etoksi-9H-p-karbolin-8-ilamina i 2-metilnikotinske kiseline, u prinosu od 40%. 'H-NMR (300 MHz, MeOH-d4): 8 1.39 (t, 3H), 2.76 (s, 3H), 4.14 (q, 2H), 7.43 (dd, IH), 8.05 (d, IH), 8.26 (m, 3H), 8.55 (d, IH), 8.79 (s, IH).
Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.98 min. MS (M+H+): 381.3.
MEĐUPROIZVOD 11: 6- hloro- 7-( N, N)- dimetilamino- 8- nitro- 9H- B- karbolin
N,N-dimetilamin hidrohlorid (278 mg, 3.4 mmol) se doda u izmešani rastvor 6-hloro-7-fluoro-8-nitro-9H-p-karbolina (300 mg, 1.13 mmol) u DMSO (8 ml) u atmosferi argona. Nakon toga se doda DIEA (0.83 ml, 4.65 mmol) i reaktivna mešavina se u toku noći zagreva na 60°C. Nakon što se reaktivna mešavina ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu, doda se voda i formira se tamno narandžasti čvrsti precipitat. Čvrsti deo se filtrira, ispere sa vodom i suši da se dobije željeni produkt (230 mg, prinos 70%).
'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 4.06 (s, 6H), 7.23 (d, IH), 7.53 (d, IH), 7.66 (s, IH), 8.05 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 2.41 min. MS (M+H<+>): 290.9.
MEĐUPROIZVOD 12: 6- hloro- 7-( N, N)- dimetilamino- 9H- p- karbolin- 8- ilamin
6-hloro-7-(N,N)-dimetilamino-8-nitro-9H-(3-karbolin (828 mg, 2.86 mmol) se suspenduje u 30 ml metanola i doda se 166 mg Pd/C (10%). Boca se zatvori sa balonom vodonika i reaktivna mešavina se meša u toku noći na sobnoj temperaturi. Nakon filtriranja kroz celite ploču i evaporacije metanola, dobija se tamno smeđa čvrsta supstanca koja se odredi kao željeni 6-hloro-7-(N,N)-dimetilamino-9H-(3-karbolin-8-ilamin (500 mg, prinos 67%). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 2.80 (s, 6H), 5.42 (s, 2H), 7.45 (s, IH), 7.95 (d, IH), 8.23 (d, IH), 8.86 (d, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 2.32 min. MS (M+H<+>): 261.1.
PRIMER 4: N-( 6- hloro- 7- 7-( N, N)- dimetilamino- 9H- B- karbolin- 8- il)- 2- metil- nikotinamid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu saPostupkom Aod 6-hloro-7-(N,N)-dimetilamino-9H-P-karbolin-8-ilamina i 2-metilnikotinatne kiseline, u prinosu od 40-60%.<*>H-NMR (300 MHz, metanol-d4/CDCl3): 8 2.82 (s, 3H), 2.94 (s, 6H), 7.33 (m, IH), 8.02 (m, 3H), 8.34 (d, IH), 8.61 (d, IH), 8.95 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 2.29 min. MS (M+H<+>): 380.3.
MEĐUPROIZVOD 13: 6- hloro- 7-( 4- metil- piperazin- l- il)- 8- mtro- 9H-/]- karbolin
U rastvor DMSO (4 ml) 200 mg (0.755 mmol) 6-hloro-7-fluoro-8-nitro-9H-p-karbolina se doda 1-metilpiperazin (226 mg, 2.26 mmol) i pomoću šprica se doda DIEA (400 mg, 3.09 mmol). Reakcija se ostavi da se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Nakon dodavanja vode, stvara se narandžasti čvrsti precipitat. Čvrsti deo se filtrira, ispere i suši da se dobije 236 mg (prinos 91%) željenog 6-hloro-7-(4-metil-piperazin-l-il)-8-nitro-9H-p-karbolina. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 2.24 (s, 3H), 2.48 (m, 4H), 3.13 (m, 4H), 8.13 (d, IH), 8.40 (d, IH), 8.73 (s, IH), 8.94 (s, IH), 12.05 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.72min. MS (M+H<+>): 346.
MEĐUPROIZVOD 14: 6- hloro- 7-( 4- metil- piperazin- l- il)- 8- amino- 9H- R- karbolin
236 mg 6-hloro-7-(4-metil-piperazin-l-il)-8-nitro-9H-(3-karbolina se suspenduje u lOOml metanola i u atmosferi argona se doda 10% Pd/C (48 mg). Boca se napuni sa vodonikom (3x) i reaktivna mešavina se u atmosferi vodonika meša u toku noći na sobnoj temperaturi. Reaktivna mešavina se filtrira i Pd/C se ukloni pomoću celite ploče. Reaktivna mešavina se upari da se ukloni rastvarač i prečisti gasnom hromatografijom da se dobije 119 mg (prinos 55%) željenog 6-hloro-7-(4-metilpiperazin-l-il)-8-amino-9H-p-karbolina. 'H-NMR (300 MHz, metanol-d4): 5 2.39 (s, 3H), 2.46 (m, 2H), 2.87 (m, 4H), 3.83 (m, 2H), 7.50 (s, IH), 7.97 (d, IH), 8.24 (d, IH), 8.78 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak: amonijum acetat polar): 1.32min. MS (M+H<+>):316.
PRIMER 5: 2- hloro- N- r6- hloro- 7-( 4- metil- t) iperazin- l- in- 9H-(3- karbolin- 8- ill-
nikotinamid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu saPostupkom Aod 6-hloro-7-(4-metilpiperazin-l-il)-8-amino-9H-(3-karbolina i 2-hloro-nikotinatne kiseline, u prinosu od 25%.
'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 2.21 (s, 3H), 2.33 (m, 2H), 2.54(m, 2H), 3.24 (m, 4H), 7.73 (dd, IH), 8.12 (d, IH), 8.35 (d, IH), 8.37 (s, IH), 8.48 (dd, IH), 8.61 (dd, IH), 8.91 (s, IH), 10.40 (s, IH), 11.33 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.46min. MS (M+H<+>): 455.
MEĐUPROIZVOD 15: rezolucija rac- terpentinske kiseline
Terpentinska kiselina se rastvori u 10:1 mešavini EtOAc-MeOH [10 g terpentinska kiselina (17.7 g soli) u 550 ml] i zagreva na 50-55°C, a zatim se doda (S)-(-)-a-metil-benzilamin. Reaktivna mešavina se meša 2 minuta i zatim ostavi 15 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon toga se reaktivna mešavina zaseje sa obogaćenom solju (izrađena u manjoj razmeri korišćenjem 3 ciklusa rekristalizacije), sonicira 10-15 sekundi i ostavi u toku noći na sobnoj temperaturi. Čvrsti deo se izdvoji filtriranjem, ispere sa EtOAc i suši pod vakuumom. Rekristalizacija se vrši u istoj mešavini rastvarača ponovnim rastvaranjem soli (24 mg/ml). Ova mešavina se nakon toga zagreva kratak vremenski period do blagog refluksa (nekoliko kristala zaostaje u suspenziji). Mešavina se ostavi na sobnoj temperaturi u toku noći. Čvrsti deo se podvrgne procesu kako je prethodno opisano.
Enantiomerni višak se odredi u sirovom obliku pomoću NMR protona odgovarajućeg amida dobijenog od TBTU spajanja.
Regeneracija ( R)-(+)- terpentinske kiseline:so se rastvori u vodi (320 mg/ml), zagreje na 65°C i doda se 1.2 ekvivalenta vodenog 6M rastvora HC1. Reaktivna mešavina se nakon toga ostavi u toku noći na 4°C. Čvrsti deo se izdvoji filtriranjem, ispere sa malim porcijama hladne vode i suši pod visokim vakuumom (prinos 25-30%). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 1.30 (s, 3H), 1.52 (s, 3H), 2.74 (dd, IH), 2.85 (dd, IH), 3.25 (t, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 0.33 min. MS(M+H<+>): 159.0.
PRIMER 6: 2, 2- dimetil- 5- okso- tetrahidro- furan- 3- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H-( j-karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu saPostupkom Bod 6-hloro-9H-p-karbolin-8-ilamina i (R)-terpentinske kiseline( Međuproizvod 15),u prinosu od 80-90%).
'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 1.44 (s, 3H), 1.59 (s, 3H), 2.91 (dd, IH), 3.08 (dd, IH), 3.38 (dd, IH), 7.85 (m, IH), 8.17 (d, IH), 8.25 (d, IH), 8.39 (d, IH), 9.05 (s, IH), 10.26 (s, IH), 11.72 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.22 min. MS (M+H<+>): 358.3.
PRIMER7: l, 2, 2- trimetil- 5- okso- pirolidin- 3- karboksilnakiselina ( 6- hloro- 9H-[ 3-
karbolin- 8- iD- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu saPostupkom Bod 6-hloro-9H-P-karbolin-8-ilamina i l,2,2-trimetil-5-okso-pirolidin-3-karboksilne kiseline, u prinosu od 68%.1 H-NMR (DMSO-d6, 300MHz) 8 1.23 (s, 3H), 1.45 (s, 3H), 2.59 (dd, lH),2.66(s, 3H), 2.70 (dd, IH), 3.17 (t, IH), 7.91 (m, IH), 8.18 (d, IH), 8.24 (d, IH), 8.40 (d, IH), 9.07 (s, IH), 10.16 (s, IH), 11.32 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.17 min. MS (M+H<+>): 371.3.
MEĐUPROIZVOD 16: N- benzil- serin benzil estar
U mešavinu L-serin-benzil estar-HCl (2.3 g), benzaldehida (1.05 eq.) i natrijum acetata (1 eq.) u metanolu se doda natrijum cijanoborohidrid (1.0 eq.). Dobijena mešavina se 15 sati meša na sobnoj temperaturi, nakon toga se podeli između etra i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata. Izdvojena organska faza se ekstrahuje sa IM rastvorom HC1 (3X). Kombinovani organski ekstrakti se isperu sa etrom, zaalkališu sa vodenim 4.5M rastvorom K2CO3i ekstrahuju sa etrom. Kombinovani organski ekstrakti se isperu sa slanim rastvorom, suše preko natrijum sulfata i koncentruju do sušenja da se dobije 2.32 g željenog jedinjenja (čvrsta voštana supstanca, prinos 81%).
'H-NMR (300MHz, CDCI3): 8 3.48 (dd, IH), 3.64 (dd, IH), 3.74 (d, IH), 3.80 (dd, IH), 3.88 (d, IH), 5.18 (s, 2H), 7.25-7.39 (m, 10H). MS (M+H<+>): 286.
MEĐUPROIZVOD 17: benzil estar 4- benzil- 6- jodometil- 6- metil- morfolin- 3- karboksilne
kiseline
U rastvor N-benzil-serin benzil estra( Međuproizvod 16, 6.35g) u 90 ml MeCN se na sobnoj temperaturi dodaju 3-bromo-2-metil-propen (5.6 ml), Kl (740 mg) i K2CO3(7.7 g). Reaktivna mešavina se meša 72 sati na sobnoj temperaturi. Doda se 1 ml 3-bromo-2-metil-propena i reaktivna mešavina se meša narednih 15 sati. Proverom na TLC (1:1; EtOAc-heksan) dobija se da preostane samo mala količina početnog materijala. U dobijenu mešavinu se doda 11.2 g joda. Nakon 4 sati mešanja, TLC (10% EtOAc/heksan) pokazuje potpunu konverziju. Reaktivna mešavina se podeli u etru (300 ml) i 0.5 M rastvoru Na2S2C>3 (100 ml). Izdvojena organska faza se po redu ispere sa vodom, zasićenim rastvorom NaHC03i slanim rastvorom, suši preko MgS04i koncentruje do sušenja. Ostatak se prečisti na silika gelu (5% EtOAc/heksan) da se dobije 6.65 g (žućkasto ulje, prinos 64%, približno 4:1 mešavina) jedinjenje benzil estra 4-benzil-6-jodometil-6-metil-morfolin-3-karboksilne kiseline. Glavna komponenta: 'H-NMR (300MHz, CDCI3): 5 1.22 (s, 3H), 2.50 (d, IH), 3.16-3.36 (m, 3H), 3.75-3.95 (m, 4H), 4.06 (dd, IH), 5.16 (d, IH), 5.21 (d, IH), 7.28-7.36 (m, 10H).
MS (M+H<+>): 466.
MEĐUPROIZVOD 18: benzil estar 4- benzil- 6, 6- dimetil- morfolin- 3- karboksilne kiseline
U rastvor benzil estra 4-benzil-6-jodometil-6-metil-morfolin-3-karboksilne kiseline( Međuproizvod 17,1.23 g) i tributiltin hidrida (1.8 ml, 2.5 eq.) u 11 ml toluena se pod blagim refluksom u toku 1.5 sati dodaje rastvor AIBN u toluenu (25 mg/lml). Mešavina se ostavi da se ohladi i koncentruje do sušenja. Ostatak se podeli u 15% IM rastvoru HC1 u acetonitrilu i heksanu. Izdvojena faza heksana se dva puta ekstrahuje sa rastvorom acetonitrila. Kombinovani rastvori acetonitrila se dva puta isperu sa heksanom i koncentruju. Ostatak se podeli u etru i IM rastvoru K2CO3. Izdvojena etarska faza se po redu ispere sa 0.4M rastvorom Na2S203i slanim rastvorom, suši preko MgS04i koncentruje. Ostatak se prečisti na silika gelu (7.5% EtOAc/heksan) da se dobije 760 mg (ulje, prinos 85%>) jedinjenja benzil estra 4-benzil-6,6-dimetil-morfolin-3-karboksilne kiseline. 'H-NMR (300MHz, CDC13): 5 1.21 (s, 3H), 1.24 (s, 3H), 2.12 (d, IH), 2.84 (d, IH), 3.29 (t, IH), 3.58 (d, IH), 3.95-4.05 (m, 2H), 5.15 (d, IH), 5.21 (d, IH), 7.28-7.36 (m, 10H). MS (M+H<+>):340.
MEĐUPROIZVOD 19: 6, 6- dimetil- morfolin- 3'- karboksilna kiselina
U rastvor benzil estra 4-benzil-6,6-dimetil-morfolin-3-karboksilne kiseline( Međuproizvod 18,1.25 g) u 40 ml 10% AcOH/MeOH (u atmosferi azota) se doda 250 mg 20%o Pd(OH)2na ugljeniku. Reaktivna mešavina se prečisti sa vodonikom (balon) i meša 72 sati na sobnoj temperaturi. U dobijenu sivu mešavinu se doda 4 ml vode da se pomogne rastvaranje. Katalizator se ukloni filtriranjem, a filtrat se koncentruje do sušenja. Ostatak se ko-evaporira sa etanolom (2x), a nakon toga triturira sa EtOAc. Dobijena bela čvrsta supstanca se izdvoji filtriranjem i suši pod visokim vakuumom da se dobije 559 mg 6,6-dimetil-morfolin-3-karboksilne kiseline (prinos 95%). 'H-NMR (300MHz, D20): 8 1.35 (s, 3H), 1.38(s,3H),3.11 (d, IH), 3.32 (d, IH), 3.81-3.87 (m, IH), 4.05 (bt, IH), 4.17 (bd, IH). MS (M+H<+>): 160.
MEĐUPROIZVOD 20: 4, 6, 6- trimetil- morfolin- 3- karboksilna kiselina
U suspenziju 6,6-dimetil-morfolin-3-karboksilne kiseline( Međuproizvod 19,540 mg) u 17 ml etanola (pod azotom) se dodaju 100 mg 10% Pd na ugljeniku i 830 ul (~3 eq.) 37%o vodenog rastvora formaldehida. Mešavina se prečisti sa vodonikom (balon) i meša 5 sati na sobnoj temperaturi. U dobijenu sivu mešavinu se dodaju 4 ml vode i 4 ml metanola da pomognu rastvaranju. Katalizator se ukloni filtriranjem, a filtrat se koncentruje do sušenja. Ostatak se triturira sa EtOAc. Dobijena bela, čvrsta supstanca se izdvoji filtriranjem i suši pod visokim vakuumom da se dobije 574 mg 4,6,6-trimetil-morfolin-3-karboksilne kiseline (prinos 97%).
'H-NMR (300MHz, D20): 5 1.35 (s, 3H), 1.43(s, 3H), 2.94(s, 3H), 3.08 (d, IH), 3.41 (d, IH), 3.68 (dd, IH), 3.96 (t, IH), 4.14 (dd, IH).
MS (M+H+): 174.
PRIMER 8: 4. 6. 6- trimetil- morfolin- 3- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- p- karbolin- 8- ilV
amid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu saPostupkom B od6-hloro-9H-p-karbolin-8-ilamina i 4,6,6-trimetil-morfolin-3-karboksilne kiseline, u prinosu od 61%>.
'H-NMR (DMSO-d6, 300MHz) 5 1.15 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.98 (d, IH), 2.26 (s, 3H), 2.72 (d, IH), 2.80 (dd, IH), 3.79(m, 2H), 7.91 (s, IH), 8.03-8.08 (m, 2H), 8.22 (d, IH), 8.97 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.33 minuta. MS (M+H<+>): 373.2.
PRIMER 9: 2, 2- dimetil- 5- okso- tetrahidro- furan- 3- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 7-
metoksi- 9H- P- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu saPostupkom Aod 6-hloro-7-metoksi-9H-P-karbolin-8-ilamina i (R)-terpentinske kiseline, u prinosu od 60-80%. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 1.48 (s, 3H), 1.61 (s, 3H), 3.03 (m, 2H), 3.51 (m, IH), 3.86 (s, 3H), 8.16 (m, IH), 8.37 (m, IH), 8.43 (s, IH), 8.94 (s, IH), 10.10 (s, IH), 11.33 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.94 minuta. MS (M+H<+>): 388.
MEĐUPROIZVOD 21: 6- hloro- 7- ciklopropilmetoksi- 8- nitro- 9H- B- karbolin
Ciklopropilmetil alkohol (0.921 ml, 11.4 mmol) se u atmosferi argona doda u izmešanu suspenziju NaH (455 mg, 11.4 mmol) u DMF (20 ml). Dobijeni rastvor se meša 20 minuta na sobnoj temperaturi. U izmešani rastvor se doda 6-hloro-7-fluoro-8-nitro-9H-P-karbolin (500 mg, 1.9 mmol) i dobijena mešavina se meša na sobnoj temperaturi. Nakon dodavanja H2O, stvara se smeđi čvrsti precipitat koji se filtrira da se dobije željeni 6-hloro-7-ciklopropilmetoksi-8-nitro-9H-p-karbolin (510 mg, 85%). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 0.35 (m, 2H), 0.59 (m, 2H), 1.32 (m, IH), 4.04 (d, 2H), 8.21 (d, IH), 8.46 (d, IH), 8.90 (s, IH), 9.02 (s, IH), 12.32 (b, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 2.63minuta. MS (M+H<+>): 318.
MEĐUPROIZVOD 22: 6- hloro- 7- ciklopropilmetoksi- 9H- B- karbolin- 8- ilamin
6-hloro-7-ciklopropilmetoksi-8-nitro-9H-P-karbolin (510 mg, 1.61 mmol) se suspenduje u 12 ml metanola i doda se 100 mg Pd/C (10%)). Na bocu se stavi balon vodonika i reaktivna mešavina se meša u toku noći na sobnoj temperaturi. Nakon filtriranja kroz celite ploču i evaporacije metanola, dobija se tamno smeđa, čvrsta supstanca. Ovaj ostatak se suspenduje u metanolu (10 ml) i uz intenzivno mešanje doda u rastvor zasićenog NaHC03(100 ml). Stvoreni svetio smeđi, čvrsti precipitat se izdvoji filtriranjem i potpuno osuši pod vakuumom da se dobije željeni 6-hloro-7-ciklopropilmetoksi-9H-p-karbolin-8-ilamin (371 mg, prinos 80%). 1 H-NMR (300 MHz, metanol-d4): 5 0.36 (m, 2H), 0.61 (m, 2H), 1.37 (m, IH), 3.88 (d, 2H), 7.58 (s, IH), 7.96(d, IH), 8.23 (d, IH), 8.76 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 2.28minuta. MS (M+H<+>): 288.
PRIMER 10: N-( 6- hloro- 7- ciklopropilmetoksi- 9H- P- karbolin- 8- il)- 2- metil- nikotinamid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu saPostupkom Aod 6-hloro-7-ciklopropilmetoksi-9H-P-karbolin-8-ilamina i 2-metilnikotinatne kiseline, u prinosu od 40-60%. 'H-NMR (300 MHz, MeOH-d4): 8 0.29 (m, 2H), 0.55 (m, 2H), 1.29 (m, IH), 2.78 (s, 3H), 3.95 (m, 2H), 7.46 (dd, IH), 8.08 (m, IH), 8.30 (m, 3H), 8.59 (m, IH), 8.81 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 2.18 minuta. MS (M+H<+>): 405.
MEĐUPROIZVOD 23: 6- hloro- 7-( N, N)- dimetilaminoetotei- 8- nitro- 9H- B- karbolin
N,N-dimetilaminoetil alkohol (6.0 eq) se u atmosferi argona doda u izmešanu suspenziju NaH (6.0 eq) u DMF. Dobijeni rastvor se meša 20 minuta na sobnoj temperaturi. U izmešani rastvor se doda 6-hloro-7-fluoro-8-nitro-9H-P-karbolin (1.0 eq) i dobijena mešavina se ostavi da se meša na sobnoj temperaturi. Nakon dodavanja H2O, stvara se smeđi, čvrsti precipitat koji se izdvoji filtriranjem da se dobije željeni 6-hloro-7-
(N,N)-dimetilaminoetoksi-8-nitro-9H-P-karbolin (kvantitativni prinos). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 2.23 (s, 6H), 2.74 (t, 2H), 4.28 (t, 2H), 8.21(d, IH), 8.46 (d, IH), 8.90 (s, IH), 9.02 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.26 minuta
MS (M+H<+>): 335.
MEĐUPROIZVOD 24: 6- hloro- 7-( N, N)- dimetilaminoetoksi- 9H- B- karbolin- 8- ilamin
6-hloro-7-(N,N)-dimetilaminoetoksi-8-nitro-9H-P-karbolin (500 mg, 1.5 mmol) se suspenduje u 12 ml metanola i doda se 100 mg Pd/C (10%). Na bocu se stavi balon vodonika i reaktivna mešavina se meša u toku noći na sobnoj temperaturi. Nakon filtriranja kroz celite ploču i evaporacije metanola, dobija se tamno smeđa, čvrsta supstanca. Ostatak se suspenduje u metanolu (10 ml) i uz intenzivno mešanje doda u rastvor zasićenog NaHC03(100 ml). Nastali čvrsti precipitat se izdvoji filtriranjem i potpuno osuši pod vakuumom da se dobije željeni 6-hloro-7-(N,N)-dimetilaminoetoksi-9H-p-karbolin-8-ilamin (380 mgs, 83%). 'H-NMR (300 MHz, metanol-d4): 8 2.43 (s, 6H), 2.84 (t, 2H), 4.11 (t, 2H), 7.47 (s, IH), 7.88 (d, IH), 8.20 (d, IH), 8.72 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.34 minuta. MS (M+H<+>): 305.
PRIMER 11: N- C6- hloro- 7-( 2- dimetilamino- etoksi)- 9H- B- karbolin- 8- ill- 2- metil-
nikotinamid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladusa. Postupkom Aod 6-hloro-7-(N,N)-dimetilaminoetoksi-9H-p-karbolin-8-ilamina i 2-metilnikotinatne kiseline, u prinosu od 40-60%. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-dć): 8 1.92 (s, 6H), 2.49 (m, 2H), 2.68 (s, 3H), 4.25 (m, 2H), 7.50 (dd, IH), 8.16 (m, 2H), 8.38 (d, IH), 8.42 (s, IH), 8.66 (m, IH), 9.00 (s, IH), 11.27 (s, IH), 11.78 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.52 minuta. MS (M+H<+>): 424.
PRIMER 12: 2- amino- ciklopentankarboksilna kiselina ( 6- hloro- 7- metoksi- 9H- P- karbolin-8- il)- amid
6-hloro-7-metoksi-9H-P-karbolin-8-ilamin i 2-terc-butoksikarbonilamino-ciklopentankarboksilna kiselina reaguju koristećiPostupak A.U ovaj produkt se doda
~5ml 4N rastvora HCl/dioksan i nastala mešavina se ostavi da se meša na sobnoj temperaturi. Reakcija se prati pomoću LC-MS dok ne bude potpuno završena. Evaporacijom se uklone svi rastvarači čime se dobija sirova HCL so. Željeni produkt se nakon toga prečisti pomoću preparativne HPLC. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 1.68 (m, IH), 1.84 (m, 2H), 2.06 (m, 2H), 2.20 (m, IH), 3.46 (m, IH), 3.67 (m, IH), 3.89 (s, 3H), 8.24 (d, 2H), 8.61 (d, IH), 8.72 (s, IH), 8.78 (d, IH), 9.19 (s, IH), 10.58 (s, IH), 13.20 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.54 minuta. MS (M+H<+>): 359.
MEĐUPROIZVOD 25: l-( 2- dimetilamino- etil)- 5- okso- pirolidin- 3- karboksilna kiselina
Mešavina komercijalno raspoložive itakonske kiseline i N,N-dimetiletilendiamina se zagreva do 160 °C, približno 20-25 minuta. Mešavina se ohladi
na 100 °C i nakon toga razblaži sa MeOH da se spreči očvršćavanje. Nakon kristalizacije, iz MeOH/EtOAc se dobija produkt u prinosu od 56%. 'H-NMR (300MHz, D20): 5 2.63 (dd, IH), 2.80 (dd, IH), 2.95 (s, 6H), 3.15-3.25 (m, IH), 3.32-3.44 (m, IH), 3.44-3.76 (m, 4H), 3.82-3.94 (m, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao
standardom): 0.13 minuta. MS (M+H<+>): 201.0.
PRIMER 13: l-( 2- dimetilamino- etil)- 5- okso- pirolidin- 3- karboksilna kiselina ( 6- hloro-9H- B- karbolin- 8- in- amid
Izrađuje se u skladu saPostupkom B od6-hloro-9H-p-karbolin-8-ilamina i 1-(2-dimetilamino-etil)-5-okso-pirolidin-3-karboksilne kiseline, u prinosu od 70 - 80%» u obliku di-HCl soli. 'H-NMR (300MHz, D20): 5 2.97 (dd, IH), 3.03 (s, 6H), 3.08 (dd, IH), 3.51 (t, 2H), 3.76-3.89 (m, 3H), 3.95 (dd, IH), 4.01 (dd, IH), 7.75 (d, IH), 8.24 (d, IH), 8.45 (dd, IH), 8.52 (dd, IH), 9.10 (bs, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 0.99 minuta. MS (M+H<+>): 400.
PRIMER 14: l-( 2- dimetilamino- etil)- 5- okso- pirolidin- 3- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 7-
metoksi- 9H- p- karbolin- 8 - il)- amid
Izrađuje se u skladu saPostupkom Aod 6-hloro-7-metoksi-9H-P-karbolin-8-ilamina i l-(2-dimetilamino-etil)-5-okso-pirolidin-3-karboksilne kiseline, nakon prečišćavanja korišćenjem semi-preparativne Ciralcel OD kolone sa 85/7.5/7.5 heksan/EtOH/MeOH kao eluanta, u prinosu od 60%. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 2.44 (s, 6H), 2.75 (t, 2H), 2.88 (d, 2H), 3.56 (t, 2H), 3.66 (m, IH), 3.85 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 8.03 (d, IH), 8.21 (s, IH), 8.28 (d,lH), 8.79 (s,lH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.42 minuta. MS (M+H<+>): 430.
MEĐUPROIZVOD 26: 6- hloro- 7- fluoro- 9H- B- karbolin- 8- ilamin
Žitka masa 6-hloro-7-fluoro-8-nitro-9H-B-karbolina (500 mg, 1.88 mmol) u MeOH (25 ml) se degasira sa argonom. Doda se paladijum na ugljeniku (20%> m/m na C, 50 mg) i reaktivna posuda se ispere sa vodonikom. Žitka masa se meša 6 sati pod balonom vodonika, nakon toga filtrira kroz celite ploču i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije 6-hloro-7-fluoro-9H-B-karbolin-8-ilamin (400 mg) u obliku smeđe, čvrste supstance. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 11.48 (br s, 1); 8.99 - 8.98 (m, 1); 8.37 - 8.35 (m, 1); 8.11 - 8.09 (m, 1); 7.74 - 7.72 (m, 1); 5.65 (br s, 2). HCOOH standardni uslovi. DAD Rf = 1.00 minuta. MS (M+H<+>): 236.
PRIMER 15: N-( 6- hloro- 7- fluoro- 9H- B- karbolin- 8- in- 2- metil- nikotinamid
Rastvor 6-hloro-7-fluoro-9H-P-karbolin-8-ilamina (100 mg, 0.424 mmol) u piridinu (2.5 ml) se meša na sobnoj temperaturi. Dodaju se 2-metil nikotinska kiselina (70 mg, 0.509 mmol), a zatim EDCI (130 mg, 0.678 mmol). Suspenzija se meša ceo dan na 100 °C. Piridin se ukloni pod pritiskom, a dobijeno tamno ulje se triturira sa zasićenim vodenim rastvorom NaHC03. Nastali precipitat se filtrira i ispere sa MeOH. Materijal se tretira sa 2M rastvorom HC1 u Et20 da se dobije siva, čvrsta supstanca di-HCl soli N-(6-hloro-7-fluoro-9H-P-karbolin-8-il)-2-metil-nikotinamida (110 mg). 1 H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 13.15 (s, 1); 11.03 (s, 1); 9.33 (s, 1); 8.99 - 8.97 (m, 1); 8.92 - 8.89 (m, 1); 8.79 - 8.73 (m, 2); 8.50 (m, 1); 7.70 (m, 1); 2.80 (s, 3). HCOOH standardni uslovi. DAD Rf = 0.91 minuta. MS (M+H<+>): 355.
MEĐUPROIZVOD 27: 6- hloro- 7- metilsulfanil- 8- nitro- 9H- B- karbolin
Reagens boca zapremine 250 ml sa okruglim dnom i magnetnom mešalicom se napuni sa 6-hloro-7-fluoro-8-nitro-P-karbolinom{ Međuproizvod 5, 3.959g, 14.9 mmol) i 100 ml anhidrovanog DMF. Nastala oranž mešavina se ohladi na 0 °C (ledeno hladno kupatilo) i u nju se polako dodaje natrijum tiometoksid (1.809 g, 25.8 mmol) u obliku praha. Reaktivna mešavina se meša 1 sat na 0 °C, zagreje na sobnu temperaturu i polako dodaje u izmešanu mešavinu 4:1 H2O / zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (500 ml). Čvrsti precipitat se izdvoji sukcionom filtracijom i suši na vazduhu da se dobije 4.017 g 6-hloro-7-metilsulfanil-8-nitro-9H-P-karbolina u obliku oranž praha. Sirovi materijal se direktno koristi u narednim fazama. 'H-NMR (300 MHz, Metanol-d4): 8 8.91 (IH, d) 8.63 (IH, s) 8.42 (IH, d) 8.17 (IH, dd) 2.54 (3H, s). LCMS (postupak sa formijatnom kiselinom kao standardom) vreme retencije= 1.43 minuta. MS (M+H<+>): 294.
MEĐUPROIZVOD 28: 6- hloro- 7- metilsulfanil- 9H- B- karbolin- 8- ilamin
Reagens boca zapremine 500 ml sa okruglim dnom i magnetnom mešalicom se napuni sa 6-hloro-7-metilsulfanil-8-nitro-9H-P-karbolinom (4.011 g, 13.6 mmol) i 200 ml anahidrovanog etanola. U dobijenu mešavinu se dodaju vodeni rastvor amonijum hlorida (75 ml 0.33 M rastvor, 24.7 mmol), vodeni rastvor hidrohloridne kiseline (10 ml 1 M rastvora, 10 mmol) i gvožđe u prahu (7.734 g, 138 mmol). Dobijena mešavina se zagreva na 60 °C (uljano kupatilo) i intenzivno meša 3.5 sati. Reakcija se ohladi na sobnu temperaturu, razblaži sa EtOAc (75 ml) i doda se aktivni ugalj (približno 2.5 g). Nastala mešavina se meša na sobnoj temperaturi dodatnih 1.5 sati, filtrira kroz celite ploču i dobijeni filtrat koncentruje (rotaciona evaporacija, nakon toga vakuum pumpa) da se dobije 5.153 g čvrste supstance žućkasto-oranž boje. Čvrsta supstanca se ponovo rastvori u MeOH (50-100 ml) i polako, uz mešanje, dodaje u zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (500 ml). Mešavina se meša 45 minuta na sobnoj temperaturi i nastali čvrsti precipitat se izdvoji sukcionom filtracijom i sušenjem na vazduhu da se dobije 3.476 g 6-hloro-7-metilsulfanil-9H-p-karbolin-8-ilamina u obliku žuto smeđe, čvrste supstance koja se bez daljeg prečišćavanja koristi u narednim fazama.
'H-NMR (300 MHz, Metanol-d4): 8 8.87 (IH, s) 8.35-8.24 (IH, m) 8.16-8.06 (IH, m) 7.67 (IH, s) 2.32 (3H, s). LCMS (postupak sa amonijum acetatom kao standardom) vreme retencije= 2.12 minuta. MS (M+H<+>): 264.
PRIMER 16: N-( 6- hloro- 7- metilsulfanil- 9H- P- karbolin- 8- in- 2- metil- nikotinamid
Reagens boca zapremine 250 ml sa okruglim dnom i magnetnom mešalicom se napuni sa 6-hloro-7-metilsulfanil-9H-P-karbolin-8-ilaminom( Međuproizvod 28, 2.336g, 8.86 mmol) i 2-metilnikotinatnom kiselinom (3.219 g, 23.4 mmol) u 80 ml anhidrovanog piridina. U dobijenu reaktivnu mešavinu se na sobnoj temperaturi doda čvrsti l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorid (7.080 g, 36.9 mmol) i reaktivna mešavina se zagreva 2 dana na 100 °C (uljano kupatilo). Dobijena mešavina se ohladi na sobnu temperaturu i koncentruje (rotaciona evaporacija) da se dobije smeđi ostatak. Ostatak se ponovo rastvori u MeOH (50 ml), polako dodaje u izmešanu mešavinu 5:1 H20 / zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (600 mlL) i meša približno 18 sati na sobnoj temperaturi. Nastali čvrsti precipitat se izdvoji sukcionom filtracijom, ispere sa E12O (2 x 150 ml) i suši na vazduhu da se dobije 3.036 g sirovog N-(6-hloro-7-metilsulfanil-9H-P-karbolin-8-il)-2-metil-nikotinamida u obliku smeđe, čvrste supstance. Sirovi materijal se prečisti pomoću HPLC (prinos = -40-60%). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 11.72 (IH, s) 10.50 (IH, s) 8.97 (IH, s) 8.62 (IH, dd) 8.57 (IH, s) 8.41 (IH, d) 8.33-8.27 (IH, m) 8.21 (IH, d) 2.73 (3H, s) 2.41 (3H, s). LCMS (postupak sa amonijum acetatom kao standardom) vreme retencije= 1.89 minuta. MS (M+H<+>): 383.
MEĐUPROIZVOD 29: 6- hloro- 7- etilsulfanil- 8- nitro- 9H- R- karbolin
Reagens boca zapremine 25 ml sa okruglim dnom i magnetnom mešalicom se napuni sa 6-hloro-7-fluoro-8-nitro-9H-P-karbolinom (102 mg, 0.38 mmol) u 5 ml anhidrovanog DMF. U dobijenu oranž mešavinu se na sobnoj temperaturi polako dodaje natrijum tioetoksid (80% čistoće, 69.7 mg, 0.66 mmol) u obliku praha. Reaktivna mešavina se meša 45 minuta na sobnoj temperaturi, a nakon toga se u kapima dodaje u 5:1 mešavinu H2O / zasićeni natrijum bikarbonat (-30 ml). Dobijeni čvrsti precipita se izdvoji sukcionom filtracijom, ispere sa 1:1 mešavinom heksan / dietil etar (2 x 20 ml) i suši na vazduhu da se dobije 95.0 mg 6-hloro-7-etilsulfanil-8-nitro-9H-P-karbolina u obliku oranž čvrste supstance (79%). 'H-NMR (300 MHz, CD3OD, ppm) 5 8.91 (IH, s) 8.63 (IH, s) 8.42 (IH, d) 8.18 (IH, d) 3.04 (2H, q) 1.20 (3H, t). Vreme retencije (LC, postupak sa formijatnom kiselinom kao standardom): 1.71 minuta. MS (M+H<+>): 308.
MEĐUPROIZVOD 30: 6- hloro- 7- etilsulfanil- 9H- B- karbolin- 8- ilamin
Reagens boca zapremine 50 ml sa okruglim dnom i magnetnom mešalicom se napuni sa 6-hloro-7-etilsulfanil-8-nitro-9H-P-karbolinom (85.0 mg, 0.28 mmol) u 10 ml anhidrovanog etanola. U dobijenu oranž mešavinu se na sobnoj temperaturi dodaju 0.33 M vodeni rastvor amonijum hlorida (2.0 ml, 0.66 mmol) i gvožđe u prahu (680 mg, 12.2 mmol). Reaktivna mešavina se zagreje na 60 °C i intenzivno meša 20 sati. Nakon toga se mešavina ohladi na sobnu temperaturu, razblaži sa etil acetatom (15 ml) i doda se aktivni ugalj (-180 mg). Nastala mešavina se filtrira kroz celite ploču i filtrat se koncentruje da se dobije 77.8 mg 6-hloro-7-etilsulfanil-9H-(3-karbolin-8-ilamina u obliku žute, čvrste supstance (> 99%). 1 H-NMR (300 MHz, CD3OD, ppm) 5 8.94 (IH, s) 8.33-8.29 (IH, m) 8.21-8.18 (IH, m) 7.73 (IH, s) 2.85 (2H, q) 1.21 (3H, t). LCMS (postupak sa amonijum acetatom kao standardom) vreme retencije= 2.13 minuta. (M<+>= 278; M" = 276).
PRIMER 17:N-( 6- hloro- 7- etilsulfanil- 9H- B- karbolin- 8- il)- 2- metil- nikotinamid
Reagens boca zapremine 25 ml sa okruglim dnom i magnetnom mešalicom se napuni sa 6-hloro-7-etilsulfanil-9H-P-karbolin-8-ilaminom (37.2 mg, 0.13 mmol) i 2-metilnikotinatne kiseline (36.2 mg, 0.26 mmol) u 3 ml anhidrovanog piridina. U dobijenu svetio oranž mešavinu se na sobnoj temperaturi doda čvrsti l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorid (73.2 mg, 0.38 mmol) i dobijena reaktivna mešavina se zagreva 5 dana na 80 °C. Nakon toga se reaktivna mešavina ohladi na sobnu temperaturu i koncentruje da se dobije smeđi viskozni sirup. Sirup se rastvori u minimalnoj količini MeOH (-2 ml), polako doda u 5:1 mešavinu H20 / zasićeni natrijum bikarbonat (-20 ml) i meša 2.5 sati na sobnoj temperaturi. Nastalii čvrsti precipitat se sakupi sukcionom filtracijom, ispere sa 1:1 mešavinom heksan / dietil etar (2 x 20 ml) i suši na vazduhu da se dobije 21.0 mg N-(6-hloro-7-etilsulfanil-9H-p-karbolin-8-il)-2-metil-nikotinamida u obliku žuto smeđe, čvrste supstance (-38%>). LCMS (postupak sa amonijum acetatom kao standardom) vreme retencije = 2.33 minuta. (M<+>= 397; M" = 395). 'H-NMR (300 MHz, CD3OD, ppm) 8 8.89 (IH, s) 8.63-8.58 (IH, m) 8.44-8.38 (2H, m) 8.36 (IH, d) 8.15 (IH, d) 7.52-7.44 (IH, m) 2.98 (2H, q) 2.84 (3H, s) 1.20 (3H, t).
MEĐUPROIZVOD 31: [ 2-( 6- hloro- 8- nitro- 9H- B- karbolin- 7- ilsulfanil)- etil]- dimetil- amin
Reagens boca zapremine 25 ml sa okruglim dnom i magnetnom mešalicom se napuni sa 6-hloro-7-fluoro-8-nitro-9H-P-karbolinom (98 mg, 0.37 mmol) u 2 ml anhidrovanog DMF. Druga reagens boca zapremine 10 ml sa okruglim dnom i magnetnom mešalicom se napuni sa 2-dimetilamino-etanetiol hidrohloridom (100 mg, 0.70 mmol) u 2 ml anhidrovanog DMF. U dobijenu suspenziju se doda n-butillitijum (0.43 ml 1.6 M rastvora u heksanu, 0.69 mmol) pomoću šprica i mešavina se meša 5 min na sobnoj temperaturi. Nakon toga se pomoću šprica rastvor tioanjona doda u 6-hloro-7-fiuoro-8-nitro-9H-p-karbolin i dobijeni crveni rastvor se meša 30 min na sobnoj temperaturi. Reaktivna mešavina se polako doda u 5:1 mešavinu H20/zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (30 ml) i ostavi na sobnoj temperaturi nekoliko sati. Nastali čvrsti precipita se izdvoji sukcionom filtracijom i suši na vazduhu da se dobije 109 mg [2-(6-hloro-8-nitro-9H-P-karbolin-7-ilsulfanil)-etil]-dimetil-amina u obliku oranž čvrste supstance (83%). LCMS (postupak sa amonijum acetatom kao standardom) vreme retencije= 1.35 minuta. (M+ = 351; M" = 349). 'H-NMR (300 MHz, CD3OD, ppm) 8 8.92 (IH, d, J = 1.0 Hz) 8.66 (IH, s) 8.43 (IH, d) 8.19 (IH, dd) 3.18-3.13 (2H, m) 2.57-2.52 (2H, m) 2.21 (6H, s).
MEĐUPROIZVOD 32: 6- hloro- 7-( 2- dimetilamino- etilsulfanil)- 9H- R- karbolin- 8- ilamin
Reagens boca zapremine 50 ml sa okruglim dnom i magnetnom mešalicom se napuni sa [2-(6-hloro-8-nitro-9H-P-karbolin-7-ilsulfanil)-etil]-dimetil-aminom (106 mg, 0.30 mmol) u 8 ml anhidrovanog etanola. U dobijenu oranž mešavinu se na sobnoj temperaturi dodaju 0.33 M vodeni rastvor amonijum hlorida (1.95 ml, 0.64 mmol) i gvožđe u prahu (540 mg, 9.67 mmol). Reaktivna mešavina se zagreje na 60 °C i intenzivno meša 20 sati. Nakon toga se mešavina ohaldi na sobnu temperaturu, razblaži sa etil acetatom (20 ml) i doda se aktivni ugalj (približno 150 mg). Dobijena mešavina se filtrira kroz celite ploču, a dobijeni filtrat se koncentruje da se dobije 103 mg 6-hloro-7-(2-dimetilamino-etilsulfanil)-9H-P-karbolin-8-ilamina u obliku žute, čvrste supstance. Sirovi produkt se koristi direktno u fazi spajanja.
LCMS (postupak sa amonijum acetatom kao standardom) vreme retencije= 1.34 minuta.
(M+ = 321; M" = 319). 1 H-NMR (300 MHz, CD3OD, ppm) 8 8.87 (IH, s) 8.30 (IH, d) 8.06 (IH, d) 7.75 (IH, s) 3.23-3.13 (4H, m) 2.84 (6H, s).
PRIMER 18: N- r6- hloro- 7-( 2- dimetilamino- etilsulfanil)- 9H- p- karbolin- 8- in- 2- metil-
nikotinamid
Reagens boca zapremine 25 ml sa okruglim dnom i magnetnom mešalicom se napuni sa 6-hloro-7-(2-dimetilamino-etilsulfanil)-9H-p-karbolin-8-ilaminom (45.2 mg, 0.14 mmol) i 2-metilnikotinskom kiselinom (39.0 mg, 0.28 mmol) u 4.5 ml anhidrovanog piridina. U dobijenu svetlo-oranž mešavinu se na sobnoj temperaturi doda čvrsti l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorid (95.0 mg, 0.49 mmol). Dobijena reaktivna mešavina se zagreva 3 dana na 80 °C. Nakon toga se reakcija ohladi na sobnu temperaturu i koncentruje da se dobije smeđi, viskozni sirup. Sirup se rastvori u minimalnoj količini MeOH (-2 ml), polako doda u 5:1 mešavinu H20 / zasićeni rastvor natrijum bikarbonata (-25 ml) i ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 30 ml). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (1 x 30 ml), suše preko Na2S04, filtriraju i koncentruju da se dobije smeđi ostatak (79.6 mg). Ostatak se ponovo rastvori u MeOH (-5 ml) i filtrira kroz pamučni zatvarač. U dobijeni filtrat se doda HC1 u 1,4-dioksanu (1.0 ml, 4.0 mmol), dobijeni rastvor meša 3 sata na sobnoj temperaturi i uz mešanje u kapima doda u dietil etar (30 ml). Nastali precipitat se izdvoji sukcionom filtracijom, ispere sa etrom i suši na vazduhu da se dobije 36.3 mg N-[6-hloro-7-(2-dimetilamino-etilsulfanil)-9H-P-karbolin-8-il]-2-metil-nikotinamid tris-hidrohlorida u obliku žutog praha. 'H-NMR (300 MHz, CD3OD, ppm) 8 8.95 (IH, s) 8.62 (IH, dd) 8.43 (IH, s) 8.38-8.34 (2H, m) 8.16 (IH, d) 7.50 (IH, dd) 3.09 (2H, t) 2.85 (3H, s) 2.30 (2H, t) 1.99 (6H, s). LCMS (postupak sa amonijum acetatom kao standardom) vreme retencije^1.56 minuta.
(M+ = 440;M" = 438).
MEĐUPROIZVOD 33: 4- terc- butil estar morfolin- 3( S), 4- dikarboksilne kiseline
Suspenzija morfolin-3(S)-karboksilne kiseline (2.00 g, 15.3 mmol) u DMF (75 ml) se meša na sobnoj temperaturi. Nakon toga se dodaju trietilamin (7.47 ml,
53.6 mmol) i di-terc-butil dikarbonat (BOC20, 4.02 g, 18.4 mmol). Suspenzija se meša jedan sat na sobnoj temperaturi, za koje vreme reakcija formira bistar žuti rastvor. Rastvor se koncentruje do smanjene zapremine (-25 ml) i razblaži sa vodom (15 ml) i IN rastvorom HC1 (15 ml). Mešavina se sipa u levak za odvajanje, dalje razblaži sa vodom (100 ml) i slanim rastvorom (100 ml) i ekstrahuje sa Et20 (3 x 100 ml). Organski sloj se ispere sa slanim rastvorom, suši, filtrira i koncentruje da se dobije bela, čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca koja sadrži višak BOC20 se rastvori u Et20 (500 ml) i ekstrahuje sa IN rastvorom NaOH (3 x 100 ml). Vodeni sloj se zakiseli sa 6N rastvorom HC1 do približno pH 2, zatim brzo ekstrahuje sa Et20 (3 x 100 ml). Et20 sloj se suši, filtrira i koncentruje da se dobije bela, čvrsta supstanca (3.07 g). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 12.95 (br s, 1); 4.34 - 4.30 (m, 1); 4.18 - 4.10 (m, 1); 3.83 - 3.74 (m, 1); 3.59 - 3.51 (m, 2); 3.39 -
3.32 (m, 1); 3.21 - 2.95 (m, 1); 1.41 - 1.36 (m, 9). NH4OAc standardni uslovi. ELSD Rf
-1.08 minuta. M-H = 230.
PRIMER 19: 4- metil- morfolin- 3( S)- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- B- karbolin- 8- il)-amid
Žitka masa morfolin-3(S)-karboksilne kiseline (3.00 g, 22.9 mmol) u EtOH (115 ml) se meša na sobnoj temperaturi. Doda se vodeni rastvor CH2O (3.42 ml,
45.8 mmol, 37% m/m u H20), a zatim Pd(OH)2(600 mg, 20%> m/m na ugljeniku). Reagens boca se napuni sa vodonikom (1 atm) i siva žitka masa se pod balonom vodonika meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Reagens boca se prečisti sa azotom, a crna žitka masa se razblaži sa MeOH, filtrira kroz filter papir i koncentruje do redukovane zapremine. Bledo sivi rastvor se filtrira kroz 0.45 pm membranski filter da se ukloni Pd(OH)2i koncentruje da se dobije bistro bezbojno ulje. Ulje se podvrgne visokom vakuumu u toku 24 sata nakon čega se izdvoji bela, čvrsta pena. Pena se rastvori u piridinu (200 ml) i doda se 6-hloro-9H-B-karbolin-8-ilamin (3.74 g, 17.2 mmol) a zatim EDCI (5.87 g,
30.6 mmol). Bistar bledo oranž rastvor se meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Rastvor se razblaži sa H20 (300 ml) i prenese u levak za odvajanje koji sadrži EtOAc (300 ml). Mešavina se mućka i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc (3 x
150 ml) a kombinovani organski slojevi se isperu sa H20 i slanim rastvorom. Organski sloj se suši, filtrira i koncentruje da se dobije smeđe ulje koje se podvrgne visokom vakuumu. Dobijena smeđa pena se triturira sa MeOH, a nastali precipitat se filtrira i ispere sa MeOH. Dobijena bledo žuta čvrsta supstanca se prečisti pomoću HPLC na koloni da se dobije bela, čvrsta supstanca (3.23 g). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 11.36 (s, 1); 10.02 (s, 1); 9.04 (s, 1); 8.38 (d, 1); 8.22-8.21 (m, 1); 8.15 (d, 1); 7.91 - 7.90 (m, 1); 4.00 (dd, 1); 3.85 - 3.81 (m, 1); 3.69 - 3.58 (m, 2); 2.99 - 2.95 (dd, 1); 2.89 - 2.85 (m, 1); 2.32 (s, 3); 2.32 - 2.24 (m, 1). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 1.89 minuta. M+H = 345. preparativna HPLC na koloni 10% v/v EtOH/Heksan. Čiralcel OD kolona. Rf = 11.5 - 14 minuta. Enantiočistoća produkta > 99%> ee.
POSTUPAK C: PROCEDURA ZA 4- MORFOLINSUPSTITUISANE ANALOGE
Kako je navedeno zaMeđuproizvod 34, Međuproizvod 35i Primer 20:MEĐUPROIZVOD 34: terc- butil estar 3( S)-( 6- hloro- 9H- p- karbolin- 8- ilkarbamoil)-morfolin- 4- karboksilne kiseline
Rastvor 4-terc-butil estra morfolin-3(S),4-dikarboksilne kiseline (2.83 g,
12.7 mmol) u piridinu (106 ml) se meša na sobnoj temperaturi. Doda se 6-hloro-9H-p-karbolin-8-ilamin (2.30 g, 10.6 mmol), a zatim EDCI (4.06 g, 21.2 mmol). Bistar oranž do smeđi rastvor se meša 14 sati na sobnoj temperaturi. Rastvor se razblaži sa H2O
(120 ml) i sipa u levak za odvajanje koji sadrži EtOAc (200 ml), H2O (100 ml) i slani rastvor (100 ml). Mešavina se mućka i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc (2 x 50 ml) a kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom. Organski sloj se suši, filtrira i koncentruje do smanjene zapremine, a nakon toga se u kapima dodaje u izmešani rastvor 1:1 Et20/heksan (500 ml). Nastali precipitat se filtrira i ispere sa 1:1 Et20/heksan. Filtrat se koncentruje do smanjene zapremine i izdvoji se druga serija precipitata. Čvrsti produkt se podvrgne visokom vakuumu u trajanju od 2 sata da se dobije terc-butil estar 3(S)-(6-hloro-9H-P-karbolin-8-ilkarbamoil)-morfolin-4-karboksilne kiseline u obliku bledo žute do bledo smeđe, čvrste supstance (4.36 g). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 11.30 (s, 1); 10.13 (s, l);9.06(s, 1); 8.40-8.38 (m, 1); 8.19 - 8.16 (m, 2); 7.98 (s, 1); 4.67 - 4.47 (m, 2); 3.96 - 3.60 (m, 2); 3.64 - 3.39 (m, 3); 1.42 (s, 9). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 2.31 minuta. M+H = 431.
MEĐUPROIZVOD 35: terc- butil estar 2( R)-[ 3( S)-( 6- hloro- 9H- R- karbolin- 8-
ilkarbamoil)- morfolin- 4- ilmetil]- pirolidin- l- karboksilne kiseline
Rastvor terc-butil estra 3(S)-(6-hloro-9H-P-karbolin-8-ilkarbamoil)-morfolin-4-karboksilne kiseline (1.00 g, 2.32 mmol) u CH2CI2(6 ml) se meša na sobnoj temperaturi. Doda se trifluoroacetatna kiselina (6 ml) i rastvor se meša na sobnoj temperaturi 45 minuta, a nakon toga koncentruje do ostatka. Ostatak se još jedanput koncentruje iz CH2C12da se dobije žuto smeđa, čvrsta supstanca koja se u atmosferi argona rastvori u THF (13 ml). Ponekad je potrebno blago zagrevanje da bi se osiguralo potpuno rastvaranje. Doda se rastvor N-(terc-butoksikarbonil)-D-prolinala (693 mg,
3.48 mmol) u THF (2 ml) a zatim natrijum triacetoksiborohidrid (738 mg, 3.48 mmol).
Rastvor se meša na sobnoj temperaturi 30 minuta, a zatim neutrališe dodavanjem
IN vodenog rastvora NaOH (30 ml). Mešavina se sipa u levak za odvajanje koji sadrži EtOAc (100 ml), H20 (100 ml) i slani rastvor (100 ml). Mešavina se mućka i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc (2 x 50 ml) a kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom. Organski sloj se suši, filtrira i koncentruje da se dobije svetio smeđa, čvrsta supstanca. Hromatografijom na koloni (2%-4% MeOH/CH2Cl2) se dobija terc-butil estar 2(R)-[3(S)-(6-Hloro-9H-B-karbolin-8-ilkarbamoil)-morfolin-4-ilmetil]-pirolidin-l-karboksilne kiseline u obliku bele, čvrste supstance (915 mg). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 11.30 (s, 1); 9.88 (s, 1); 9.04 (s, 1); 8.39 - 8.37 (m, 1); 8.20 - 8.15 (m, 2); 7.95 (s, 1); 3.99 - 3.82 (m, 3); 3.69 - 3.63 (m, 2); 3.44 - 3.32 (m, 1); 3.27-3.11 (m, 3); 2.92-2.80 (m, 1); 2.44 - 2.32 (m, 1); 1.99- 1.67 (m, 5); 1.33 (s, 9). HCOOH standardni uslovi. DAD Rf = 1.39 minuta. M+H = 514. Čiral HPLC.
Enantiočistoća uzorka se proverava. Uzorci su > 97% ee. Ciralpak AD kolona. 15% v/v EtOH/Heksan koji sadrži 0.1% Et2NH.
PRIMER 20: 4- piridin- 2fR)- ilmetil- morfolin- 3( S)- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- B-karbolin- 8- il)- amid, HC1 so
U rastvor terc-butil estra 2(R)-[3(S)-(6-hloro-9H-B-karbolin-8-ilkarbamoil)-morfolin-4-ilmetil]-pirolidin-l-karboksilne kiseline (850 mg, 1.65 mmol) u MeOH
(16 ml) se doda koncentrovani vodeni rastvor HC1 (13 ml). Rastvor se meša na sobnoj temperaturi 30-45 minuta, za koje vreme se formira fini žuti precipitat. Reaktivna mešavina se koncentruje da se dobije 4-piridin-2(R)-ilmetil-morfolin-3(S)-karboksilna kiselina (6-hloro-9H-B-karbolin-8-il)-amid, HC1 so) u obliku bledo žute, čvrste supstance (755 mg). 1 H-NMR (300 MHz, DMSO-d6):. 5 13.30 (s, 1); 11.56 (br s, 1); 9.63 (br s, 1); 9.46 (s, 1); 8.87 - 8.85 (m, 1); 8.66 - 8.57 (m, 2); 8.25 (s, 1); 4.38 - 4.26 (m, 1); 4.24 - 4.08 (m, 1); 4.04 - 3.86 (m, 2); 3.86 - 3.68 (m, 2); 3.57 - 3.39 (m, 1); 3.39 - 3.02 (m, 4); 2.99-2.76 (m, 1); 2.10 - 1.84 (m, 3); 1.75 - 1.56 (m, 1). HCOOH standardni uslovi. DAD Rf = 0.81 minuta. M+H = 414.
MEĐUPROIZVOD 36: cis- 2-( terc- butoksikarbonilamino)- ciklopentankarboksilna
kiselina ( 6- hloro- 9H- karbolin- 8- il) amid
Rastvor cis-2-(terc-butoksikarbonilamino)-ciklopentan karboksilne kiseline (550 mg, 2.4 mmol) u piridinu (10 ml) se meša na sobnoj temperaturi. Doda se 6-hloro-9H-p-karbolin-8-ilamin (436 mg, 2.0 mmol), a zatim EDCI (615 mg, 3.2 mmol) i nastali oranž rastvor se meša na sobnoj temperaturi 1.5 sati. Rastvor se razblaži sa H2O (20 ml) i sipa u levak za odvajanje koji sadrži H20 (50 ml) i EtOAc (100 ml). Mešavina se mućka i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc (100 ml). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom, suše preko MgS04, filtriraju i koncentruju do oranž uljanih čestica koje se zatim trituriraju sa 5% MeOH u Et20 (20 ml) i sakupe filtriranjem da se dobije cis-2-(terc-butoksikarbonilamino)-ciklopentankarboksilna kiselina (6-hloro-9H-karbolin-8-il) amid u obliku svetio žute, čvrste supstance (740 mg). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 11.17 (s, 1); 9.89 (s, 1); 9.04 (s, 1); 8.36 (d, 1); 8.18 - 8.08 (m, 2); 7.95 (s, 1); 6.92 (d, 1); 4.32-4.22 (m, 1); 3.16-3.09 (m, 1); 2.13-2.01 (m, 1); 1.96-1.75 (m, 3); 1.74 - 1.59 (m, 1); 1.58 - 1.42 (m, 1); 1.07 (s, 9). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 2.52 minuta. M+H = 429.
PRIMER 21: cis- 2- amino- ciklopentan karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- p- karbolin- 8- ilV
amid
Rastvor 2-(terc-butoksikarbonilamino)-ciklopentan karboksilna kiselina (6-hloro-9H-P-karbolin-8-il) amida (736 mg, 1.72 mmol) u trifluoroacetatnoj kiselini (5 ml) se meša 20 minuta na sobnoj temperaturi, a nakon se toga koncentruje do oranž ulja. Ulje se rastvori u MeOH (5 ml) i neutrališe sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (25 ml). Nastala mešavina se dalje razblaži sa H20 (25 ml) i EtOAc (100 ml). Vodeni sloj se ukloni i ekstrahuje sa EtOAc (100 ml). Organski slojevi se kombinuju, isperu sa slanim rastvorom, suše preko MgS04, filtriraju i koncentruju do žute, čvrste supstance (507 mg). Ova čvrsta supstanca se rastvori u MeOH (5 ml) i doda se rastvor HC1 u dioksanu (4 M, 1.5 ml). Svetio žuti rastvor se meša 30 minuta, a nakon toga koncentruje da se dobije cis-2-amino-ciklopentankarboksilna kiselina (6-hloro-9H-P-karbolin-8-il)-amid u obliku žutog praha (600 mg). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 9.29 (s, 1); 8.75 (d, 1); 8.53 (d, 1); 8.37 (s, 1); 8.02 (s, 1); 4.05 - 3.95 (m, 1); 3.42 - 3.34 (m, 1); 2.46 - 1.80 (m, 6). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 1.65 minuta. M+H = 329.
PRIMER 22: 4-( 2- amino- etiO- morfolin- 3- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- B- karbolin- 8-iO- amid, HC1 so
Naslovljeno jedinjenje sedobija Postupkom C,koristeći racematnu morfolin-3-karboksilnu kiselinu reduktivno alkalisanu sa 2-aminoacetaldehidom. 'H-NMR (300 MHz, MeOH-d4): 5 9.37 (s, 1); 8.76 (d, 1); 8.55 (d, 1); 8.44 (d, 1); 8.06 (d, 1); 4.68 - 4.55 (m, 2); 4.17-3.99 (m, 3); 3.84 - 3.73 (m, 2); 3.57 - 3.39 (m, 4). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 1.69 minuta. M+H = 374.
PRIMER 23: 4- f2( SVamino- propilVmorfolin- 3( S')- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- B-karbolin- 8- ilVamid, HC1 so ( prvi eluirani diastereomer)
Naslovljeno jedinjenje se dobijaPostupkom C koristećiracematnu morfolin-3-karboksilnu kiselinu reduktivno alkalisanu sa odgovarajućim alanin aldehidom. Diastereomeri se razdvoje hromatografijom na koloni, pre faze deprotekcije. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 9.32 (s, 1); 8.76 (d); 8.55 (d, 1); 8.41 (s, 1); 8.08 (s, 1); 4.38 (d, 1); 4.32-4.21 (m, 1); 4.16 - 4.09 (m, 1); 4.04 - 3.95 (m, 2); 3.79 - 3.57 (m, 2); 3.47 - 3.40 (m, 1); 3.22 - 3.05 (m, 2); 1.44 (d, 3). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 1.38 minuta. M+H = 388.
PRIMER 24: 4-( 2( SVamino- propil)- morfolin- 3( R)- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- B-karbolin- 8- ilVamid, HC1 so ( drugi eluirani diastereomer)
Naslovljeno jedinjenje se dobijaPostupkom C koristećiracematnu morfolin-3-karboksilnu kiselinu reduktivno alkalisanu sa odgovarajućim alanin aldehidom. Diastereomeri se razdvoje hromatografijom na koloni, pre faze deprotekcije.1 H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 9.34 (s, 1); 8.77 (d, 1); 8.55 (d, 1); 8.42 (s, 1); 8.06 (s, 1); 4.42 (d, 1); 4.30-4.12 (m, 1); 4.07 - 3.92 (m, 3); 3.89 - 3.74 (m, 1); 3.65 - 3.49 (m, 1); 3.25 - 2.90 (m, 3); 1.36 (d, 3). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 1.57 minuta. M+H = 388.
PRIMER 25: 2- amino- cikloheksan karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- B- karbolin- 8- il)- amid
Rastvor cis-2-(terc-butoksikarbonilamino)-cikloheksan karboksilne kiseline (255 mg, 1.05 mmol) u piridinu (10 ml) se meša na sobnoj temperaturi. Doda se 6-hloro-9H-B-karbolin-8-ilamin (218 mg, 1.00 mmol), a zatim EDCI (315 mg, 1.64 mmol) i blago zamućen bledo oranž rastvor se meša 16 sati na sobnoj temperaturi. Rastvor se razblaži sa H20 (20 ml) i sipa u levak za odvajanje koji sadrži H20 (50 ml) i EtOAc (50 ml). Mešavina se mućka i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc (50 ml) i kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom. Organski sloj se suši, filtrira i koncentruje do dobijanja žutog ulja koje se podvrgne visokom vakuumu u toku 4 sata. Nastalo žuto-smeđe staklo se prevede u žitku masu u CH2C12(10 ml) na sobnoj temperaturi. Doda se trifluoroacetatna kiselina (5 ml) i žitka masa se odmah rastvori da se formira bistar oranž rastvor. Rastvor se 45 minuta meša na sobnoj temperaturi, a nakon toga koncentruje do smeđeg ostatka. Ostatak se azeotropira iz toluena (3x10 ml) da se dobije žuta, čvrsta supstanca. Razblaženi vodeni rastvor Na2C03se izrađuje dodavanjem male zapremine 10% vodenog rastvora Na2C03u H20 (50 ml) sve dok vodeni rastvor ne dostigne pH 10. Žuta čvrsta supstanca se rastvori u minimalnoj količini MeOH i uz mešanje u kapima doda u vodeni rastvor. Formiorani precipitat se filtrira, ispere sa H20 i podvrgne visokom vakuumu da se dobije 2-amino-cikloheksankarboksilna kiselina (6-hloro-9H-P-karbolin-8-il)-amid u obliku bledo žute, čvrste supstance (147 mg). 1 H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 9.00 (s, 1); 8.37 - 8.34 (m, 1); 8.16 - 8.13 (m, 2); 7.83 (m, 1); 5.66-5.00 (br s, 2); 3.42-3.40 (m, 1); 2.70-2.62 (m, 1); 2.02- 1.90 (m, 1); 1.70-1.54 (m, 5); 1.42 - 1.29 (m, 2). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 1.46 minuta. M+H = 343.
PRIMER 26: 4-( 2( R)- amino- propin- morfolin- 3( S)- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H-( 3-
karbolin- 8- il)- amid, HC1 so
Naslovljeno jedinjenje sedobija Postupkom C,koristeći racematnu morfolin-3-karboksilnu kiselinu reduktivno alkalisanu sa odgovarajućim alanin aldehidom. Diastereomeri se razdvoje hromatografijom na koloni, pre faze deprotekcije. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 9.35 (s, 1); 8.77 (m, 1); 8.55 (m, 1); 8.43 (s, 1); 8.01 (s, 1); 4.45 (d, 1); 4.26 (m, 1); 4.09-3.91 (m, 3); 3.79 (m, 1); 3.63 (m, 1); 3.28-2.99 (m, 3); 1.37 (d, 3). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf= 1.39 minuta. M+H = 388.
PRIMER 27: 4-( 2( R)- amino- 3- fenil- propil)- morfolin- 3( S)- karboksilna kiselina ( 6- hloro-9H- B- karbolin- 8- il)- amid. HC1 so
Naslovljeno jedinjenje se dobijaPostupkom C,koristeći racematnu morfolin-3-karboksilnu kiselinu reduktivno alkalisanu sa odgovarajućim alanin aldehidom. Diastereomeri se razdvoje hromatografijom na koloni, pre faze deprotekcije.. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 9.34 (s, 1); 8.77 (d, 1); 8.55 (d, 1); 8.42 (s, 1); 8.04 (s, 1); 7.44 - 7.23 (m, 5); 4.39 (d, 1); 4.65 - 4.07 (m, 1); 4.40 - 3.82 (m, 4); 3.50 - 3.25 (m, 1); 3.30 - 3.14 (m, 1); 3.11 - 2.88 (m, 3); 2.85 - 2.69 (m, 1). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf= 1.90 minuta. M+H = 464.
POSTUPAKD: USLOVIHROMATOGRAFIJE
LCMS
Tip kolone: Phenomenex Luna Cl8(2) kolone, 5 um, dimenzije 50 x 4.6 mm
Vreme protoka: 5.00 minuta protok
NH4 OAc uslovi:
rastvarač A:
10mMNH4OAc
99% H20
1% MeCN
rastvarač B:
10 mM NH4OAc
5% H20
95% MeCN
Standardni gradijent:
Početni uslovi - 95% A, 5% B
3.5 minuta gradijent od 5%-100% B
3.5-4.3 minuta zadržavanja na 100%) B
4.3-5 minuta početni uslovi
Polar gradijent:
Početni uslovi - 70% A, 30% B
3.5 minuta gradijent od 70%-100% B
3.5 - 4.3 minuta zadržavanja na 100% B
4.3 - 5 minuta početni uslovi
Nepolarni gradijent:
Početni uslovi - 100% A
3.5 minuta gradijent od 0%-50% B
3.5 - 4.3 minuta zadržavanja na 100% B 4.3 - 5 minuta početni uslovi
HCOOH uslovi:
rastvarač C:
0.1% HCOOH
99% H20
l%MeCN
rastvarač D:
0.1% HCOOH
5% H20
95% MeCN
Standardni gradijent:
Početni uslovi - 95% C, 5% D
3.5 minuta gradijent od 5%-100% D 3.5-4.3 minuta zadržavanja na 100% D 4.3-5 minuta početni uslovi
Polarni gradijent:
Početni uslovi- 70% C, 30% D
3.5 minuta gradijent od 70%-100% D 3.5-4.3 minuta zadržavanja na 100% D 4.3-5 minuta početni uslovi
nepolarni gradijent:
Početni uslovi- 100%> C
3.5 minuta gradijent od 0%>-50% D
3.5 - 4.3 minuta zadržavanja na 100% D 4.3-5 minuta početni uslovi
MEĐUPROIZVOD 37: 6- hloro- 2, 3, 4, 9- tetrahidro- lH- B- karbolin, HCl so
5- hlorotriptamin hidrohlorid (5 g, 20 mmol, 1 ekviv.) se rastvori u 40 ml 3 M NaOAc pufera (pH = 4.8) i 40 ml vode. Glioksalna kiselina (1.84 g, 20 mmol, 1 ekviv.) se doda u jednoj porciji i rastvor se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Nastala lepljiva žitka masa se filtrira i svetio zelena čvrsta supstanca se suspenduje u 100 ml 6N rastvoru HCl i 1 sat zagreva na 125 °C pod refluksnim kondenzatorom uz intermitentno dodavanje konc. HCl (2 ml svakih 15 minuta). Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, filtriranjem se izdvaja 4.38 g (90%) 6-hloro-2,3,4,9-tetrahidro-lH-p-karbolin, HCl so u obliku plavo-sive, čvrste supstance. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 11.33 (br, 2H), 9.62 (br, 2H), 7.53 (d, 1), 7.39 (d, 1), 7.09 (dd, 1), 4.33 (br, 2H), 2.92 (t, 2). Uslovi standarda formijatne kiseline. DAD RT = 1.56 minuta. M+H = 207.
MEĐUPROIZVOD 38: ( 6- hloro- l, 3, 4, 9- tetrahidro- p- karbolin- 2- il)- fenil- metanon
6- hloro-2,3,4,9-tetrahidro-lH-p-karbolin, HCl so (10.2 g, 42 mmol, 1 ekviv.) se suspenduje u 100 ml bezvodnog piridina pod N2i ohladi na 0 °C u ledeno hladnom kupatilu. U hladan rastvor se u kapima doda benzoil hlorid (7.3 ml, 63 mmol, 1.5 ekviv.), nakon čega se reakcija ukloni iz vodenog kupatila i meša u toku noći na sobnoj temperaturi. Reakcija se neutrališe dodavanjem vode, sve dok se ne stvori čvrsta supstanca. Ove čvrste čestice se izdvoje filtriranjem, isperu sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata, re-suspenduju u vodi, soniciraju i ponovo filtriraju da se dobije 1.27 g (94%>) (6-hloro-l,3,4,9-tetrahidro-p-karbolin-2-il)-fenil-metanona u obliku oranž kristalne čvrste supstance. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 10.65 - 10.59 (br, IH), 7.0 - 7.5 (m, 9H), 4.60 - 4.83 (br, 2H), 3.62 - 3.99 (br, 2H), 2.75 (br., 2H). Uslovi standarda formijatne kiseline. DAD RT = 2.68 minuta. M+H = 311.
MEĐUPROIZVOD 39: 2- benzoil- 6- hloro- l, 2, 3, 9- tetrahidro- B- karbolin- 4- on
(6-hloro-l,3,4,9-tetrahidro-P-karbolin-2-il)-fenil-metanon (1.76 g, 5.66 mmol, 1 ekviv.) i DDQ (2.31 g, 10.2 mmol, 1.8 ekviv.) se izmešaju u čvrstom obliku i ohlade na
-78 °C. 15 ml rastvora 9:1 THF/H2O se ohladi na -78 °C i dobijena žitka masa se doda u ohlađenu čvrstu mešavinu, nakon toga se doda još 15 ml THF (takođe ohlađen na -78 °C). Tamno plavi rastvor se meša 2 sata na -78 °C, a nakon toga postepeno zagreva do sobne temperature i meša dodatna dva sata. Reakcija se neutrališe dodavanjem 1 N
rastvora NaOH, i ekstrahuje sa 3 x 150 ml EtOAc. Kombinovani organski slojevi se isperu sa 2 x 100 ml 1 N rastvora HCl, 1 x 100 ml slanog rastvora, suše preko MgS04, filtriraju i koncentruju da se dobije 1.38 g (75%) 2-benzoil-6-hloro-1,2,3,9-tetrahidro-P-karbolin-4-ona u obliku uljanih oranž čvrstih čestica. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 12.11 - 12.48 (br, IH), 7.29 - 7.88 (m, 8H), 4.93 - 5.18 (br, 2H), 4.60 - 4.46 (br, 2H). Egzaktna masa: 324.07. Uslovi standarda formijatne kiseline. DAD RT = 2.15 minuta. M+H = 325.
MEĐUPROIZVOD 40: 4- amino- 6- hloro fi- karbolin
Sirovi 2-benzoil-6-hloro-l,2,3,9-tetrahidro-P-karbolin-4-on (4 g ) se rastvori u 30 ml anhidrovanog hidrazina i meša 6 sati na temperaturi refluksa (130 °C uljano
kupatilo) u atmosferi N2, nakon toga se reaktivan mešavina ohladi na sobnu temperaturu i ostavi u toku noći. Nastali žuti čvrsti precipitat se ukloni filtriranjem i ispere sa vodom, 2 x 5 ml, da se dobije 785 mg (30%>) 4-amino-6-hloro p-karbolina u obliku beličaste čvrste supstance. U kombinovane filtrate se dodaje nova količina vode sve dok ne dođe do nove precipitacije. Ovaj precipitat se takođe ukloni filtriranjem da se dobije 1.056 g (39%) 4-amino-6-hloro P-karbolina u obliku žute, čvrste supstance, (ukupan prinos 69%).<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 11.48 (s, IH), 8.44 (s, IH), 8.13 (s, IH), 7.77 (s, IH), 7.42 - 7.52 (m, 2H), 5.86 (s, 2H). Uslovi standarda formijatne kiseline. DAD RT = 1.68 minuta. M+H = 218.
MEĐUPROIZVOD 41: N-( 6- hloro- 9H- B- karbolin- 4- il)- 2, 2, 2- trilfuoro- acetamid
4-amino-6-hloro p-karbolina (1.05 g, 4.82 mmol, 1 ekviv.) se rastvori u 4 ml anhidrovanog piridina i 20 ml THF i ohladi na 0 °C u atmosferi N2. U ohlađeni rastvor se u kapima dodaje trifluoroacetatni anhidrid (3.4 ml, 24 mmol, 5 ekviv.). Nakon završenog dodavanja, reakcija se ukloni iz ledenog kupatila i meša na sobnoj temperaturi u toku
-1.5 sati. Reakcija se neutrališe pažljivim dodavanjem vode (10 ml) i ekstrahuje sa 2 x
150 ml EtOAc, ispere sa 2 x 100 ml zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata, 1 x 100 ml slanog rastvora, suši preko MgS04, filtrira i koncentruje to oranž čvrste supstance. Ove čvrste čestice se tituriraju u 10 -15 ml Et20 i izdvoje filtriranjem da se dobije 1.23 g (81%) N-(6-hloro-9H-p-karbolin-4-il)-2,2,2-trifluoro-acetamid u obliku žute, čvrste supstance. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 12.11 (s, IH), 11.89 (s, IH), 8.92 (s, IH),
8.33 (s, IH), 7.82 (s, IH), 7.60-7.70 (m, 2H). Uslovi standarda formijatne kiseline.. DAD RT = 2.12 minuta. M+H = 314.
MEĐUPROIZVOD 42: N-( 6- hloro- 8- nitro- 9H- B- karbolin- 4- il)- 2, 2, 2- trifluoro- acetamid
N-(6-hloro-9H-p-karbolin-4-il)-2,2,2-trifluoro-acetamid (125 mg, 0.4 mmol, 1 ekviv.) se rastvori u 2 ml TFA i odjedanput se doda NaN02(541 mg, 7.84 mmol, 2 ekviv.). Rastvor se meša 4 sata na sobnoj temperaturi. Isparljive komponente se uklone rotacionom evaporacijom, a dovijene uljane oranž čvrste čestice se suspenduju u vodi, neutrališu sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i filtriraju da se dobije 132 mg (92%)N-(6-hloro-8-nitro-9H-B-karbolin-4-il)-2,2,2-trifluoro-acetamida.<*>H-NMR(300 MHz, DMSO-d6): 8 12.87 (s, IH), 12.03 (s, IH), 9.11 (s, IH), 8.56 (s, IH), 8.53 (s, IH), 8.26 (s, IH). Uslovi standarda formijatne kiseline. DAD RT = 2.27 minuta. M+H = 359.
MEĐUPROIZVOD 43: N-( 8- amino- 6- hloro- 9H- R- karbolin- 4- il)- 2, 2, 2- trifluoro- acetamid
Sirovi N-(6-hloro-8-nitro-9H-<p->karbolin-4-il)-2,2,2-trifluoro-acetamid (130 mg, 0.36 mmol) se rastvori u 7 ml MeOH i reaktivna posuda se pod vakuumom ispere 3 X sa N2. Brzo se doda platina (20 mg, 20% mt. na aktivnom ugljeniku) i reaktivna posuda se ponovo pod vakuumom ispere 3 X sa N2, a nakon toga još 3 dodatna ciklusa ispiranja pod vakuumom sa H2. Reakcija se ostavi da se meša u toku noći pod pritiskom H2od 1 atm. Nakon završene reakcije, reaktivna posuda se ispere sa H2i filtrira preko celite ploče. Celite ploča se više puta ispere sa metanolom, sve dok filtrati ne postanu bistri. Kombinovani filtrati se koncentruju da se dobije N-(8-amino-6-hloro-9H-P-karbolin-4-il)-2,2,2-trifluoro-acetamid u obliku žute, čvrste supstance (112 mg, 95%>). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 11.83 (s, IH), 8.98 (s, IH), 8.30 (s, IH), 7.10 (s, IH), 6.82 (s, IH), 5.87 (br, 2H). Uslovi standarda formijatne kiseline. DAD RT = 1.95 minuta. M+H = 329.
MEĐUPROIZVOD 44: N-[ 6- hloro- 4-( 2, 2, 2- trifluoro- acetilamino)- 9H- R- karbolin- 8- il]- 2-
metil- nikotinamid
N-(8-amino-6-hloro-9H-P-karbolin-4-il)-2,2,24rifluoro-acetamid (90 mg, 0.274 mmol, 1 ekviv.) i 2-metilnikotinatne kiseline (45 mg, 0.329 mmol, 1.2 ekviv.) se rastvore u 1.5 ml anhidrovanog piridina u atmosferi N2. EDCI (84 mg, 0.438 mmol, 1.6 ekviv.) se doda odjedanput i reaktivna mešavina se meša 2 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija se neutrališe sa vodom a nastala tamna čvrsta supstanca se izdvoji filtriranjem. Ove čvrste čestice se tituriraju u rastvoru 3:1 metanol - DMSO da se dobije N-[6-hloro-4-(2,2,2-trifluoro-acetilamino)-9H-p-karbolin-8-il]-2-metil-nikotinamid u obliku svetio žutih, čvrstih čestica (41 mg, 3%). 1 H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 11.94 (br, IH), 11.78 (s, IH), 10.61 (s, 1), 9.00 (s, 1), 8.64 (d, 1), 8.38 (s, IH), 8.13 (d, 1), 8.01 (s, IH), 7.73 (s, IH), 7.45 (m, IH), 2.68 (s, 3H). Uslovi standarda formijatne kiseline. DAD RT = 1.98 minuta. M+H = 448.
MEĐUPROIZVOD 45: N-[ 6- hloro- 4-( 2, 2, 2- trifluoro- acetilamino)- 9H- B- karbolin- 8- il]-nikotinamid
N-(8-amino-6-hloro-9H-p-karbolin-4-il)-2,2,2-trifluoro-acetamid (90 mg, 0.274 mmol, 1 ekviv.) i 2-metilnikotinatna kiselina (40 mg, 0.329 mmol, 1.2 ekviv.) se rastvore u 1.5 ml anhidrovanog piridina u atmosferi N2. EDCI (84 mg, 0.438 mmol, 1.6 ekviv.) se doda odjedanput i reaktivna mešavina se 2 sata meša na sobnoj temperaturi. Reakcija se neutrališe i tretira po protokolu koji je prethodno dat da se dobije 38 mg (32%)N-[6-hloro-4-(2,2,2-trifluoro-acetilamino)-9H-p-karbolin-8-il]-nikotinamida.<*>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 11.89 (br, IH), 10.73 (s, 1), 9.28 (s, 1), 8.97 (s, 1), 8.84 (d, 1), 8.43 (d, 1), 8.37 (s, 1), 7.85 (s, 1), 7.76 (s, 1), 7.67 (m, 1). Uslovi standarda formijatne kiseline. DAD RT = 1.94 minuta. M+H = 434.
PRIMER 28: N-( 4- amino- 6- hloro- 9H- P- karbolin- 8- il)- 2- metil- nikotinamid
N-t6-hloro-4-(2,2,2-trifluoro-acetilamino)-9H-P-karbolin-8-il]-nikotinamid (41 mg, 0.092 mmol, 1 ekviv.) se suspenduje u 5 ml MeOH i u to se doda 2 ml vodenog rastvora K2C03(127 mg, 0.92 mmol, 10 ekviv.). Dobijeni bistar rastvor se zagreva 16 sati na 60 °C, a nakon toga se ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu. Doda se nova količina vode čime se stvaraju fine čvrste čestice koje se izdvoje filtriranjem, jedanput isperu sa 10 ml 5% MeOH u Et20 i suše pod visokim vakuumom da se dobije 18 mg N-(4-amino-6-hloro-9H-P-karbolin-8-il)-2-metil-nikotinamida u obliku praškaste žute, čvrste supstance (prinos 56%). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 11.18 (s, IH), 10.41 (s, IH), 8.62 (d, J = 3.6, IH),), 8.32 (s, IH), 8.20 (s, IH), 8.11 (d, J = 7.5, IH), 7.91 (s, IH), 7.79 (s, IH), 7.43 (m, IH), 5.91 (br, 2H), 2.66 (s, 3H). Uslovi standarda formijatne kiseline. DAD RT = 1.63 minuta. M+H = 352.
PRIMER 29: N-( 4- amino- 6- hloro- 9H- B- karbolin- 8- ilVnikotinamid
N-[6-hloro-4-(2,2,2-trifluoro-acetilamino)-9H-B-karbolin-8-il]-nikotinamid (38 mg, 0.088 mmol, 1 ekviv.) se suspenduje u 5 ml MeOH i u to se doda 2 ml vodenog rastvora K2CO3 (121 mg, 0.92 mmol, 10 ekviv.). Dobijeni bistar rastvor se zagreva 11 sati na 60 °C. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, precipitirane fine čvrste čestice se izdvoje filtriranjem i isperu sa 10 ml vode da se dobije 2.78 mg (10%>) N-(4-amino-6-hloro-9H-B-karbolin-8-il)-nikotinamida. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 11.32 (s, IH), 10.56 (s, IH), 9.26 (s, IH), 8.82 (d, 1), 8.42 (d, 1), 8.36 (s, IH), 8.18 (s, IH), 7.79 (s, IH), 7.70 (s, IH), 7.64 (m, IH), 5.91 (br, 2H). Uslovi standarda formijatne kiseline. DAD RT = 1.55 minuta. M+H = 338.
MEĐUPROIZVOD 46: terc- butil estar 3- cijanometil- indol- I- karboksilne kiseline
Rastvor 3-indolacetonitrila (10 g, 64 mmol) u DMF (160 ml) se meša na sobnoj temperaturi. U to se dodaju K2CO3(13.3 g, 96 mmol) i di-terc-butil dikarbonat (15.35 g, 70 mmol) i reaktivna mešavina se 12 sati meša na sobnoj temperaturi. U reaktivnu mešavinu se doda H20 (100 ml) i nastali precipitat se izdvoji filtriranjem. Čvrste čestice se rastvore u toplom metanolu (20 ml) i rastvor se ostavi da se polako ohladi, pri čemu se stvaraju svetio oranž, čvrste čestice koje se izdvajaju filtriranjem da se dobije terc-butil estar 3-cijanometil-indol-l-karboksilne kiseline (9.2 g). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 8.08 (d, 1); 7.70 - 7.66 (m, 2); 7.42 - 7.29 (m, 2); 4.12 (s, 2); 1.63 (3, 9). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 3.31 minuta. M+H = 257.
MEĐUPROIZVOD 47: terc- butil estar 3-( cijano- metil- metil)- indol- l- karboksilne kiseline
Izmešani rastvor terc-butil estra 3-cijanometil-indol-l-karboksilne kiseline (2.15 g, 8.39 mmol) u THF (40 ml) se ohladi na -78 °C u atmosferi argona. U to se doda natrijum bis(trimetilsilil)amid (1 M u THF, 10 ml, 10 mmol) i hladan rastvor se meša 30 minuta. U to se doda jodometan (627 uL, 10 mmol) i reaktivna mešavina se meša 1.5 sati, pri čemu se postepeno zagreva na 0 °C. Nakon toga se doda H2O (100 ml) i rastvor se dovede na sobnu temperaturu i razblaži sa EtOAc (250 ml). Vodeni sloj se ukloni i ekstrahuje sa EtOAc (250 ml). Kombinovani organski slojevi se isperu sa vodenim rastvorom HCl (IN, 3 x 50 ml), zatim sa slanim rastvorom, nakon toga suše preko MgS04, filtriraju i koncentruju do konzistencije oranž ulja. Prečišćavanjem hromatografijom na koloni (heksanretil acetat) dobija se terc-butil estar 3-(cijano-metil-metil)-indol-l-karboksilne kiseline (1.8 g). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 6 8.09 (d, 1); 7.73 (d, 1); 7.69 (s, 1); 7.74-7.29 (m, 2); 4.56 (q, 1); 1.66 (d, J = 7.2,3); 1.63 (s, 9).
MEĐUPROIZVOD 48: terc- butil estar 3-( 2- amino- l- metil- metil)- indol- l- karboksilne
kiseline
Rastvor terc-butil estra 3-(cijano-metil-metil)-indol-l-karboksilne kiseline (850 mg, 3.14 mol) u metanolu (15 ml) se meša na sobnoj temperaturi. U to se doda katalizator Raney-nikl (50% g /mt suspenzija u H2O, 1 ml) i reaktivna posuda se zatvori i pod vakuumom ispere 3 puta sa argonom, a nakon toga isto tako sa vodonikom. Mešavina se meša 22 sata pod pritiskom vodonika od 1 atm., ispere argonom pod vakuumom i filtrira kroz celite ploču. Filtrat se koncentruje do konzistencije ulja i pomoću LCMS je ustanovljeno daje sastavljeno uglavnom od željenog jedinjenja terc-butil estra 3-(2-amino-l-metil-metil)-indol-l-karboksilne kiseline. NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf= 1.78 minuta. M+H= 275.
MEĐUPROIZVOD 49: 4- metil- 2, 3, 4, 9- tetrahidro- lH- R- karbolin- l- karboksilna kiselina
Sirovi terc-butil estar 3-(2-amino-l-metil-metil)-indol-l-karboksilne kiseline (670 mg, approx. 2.44 mmol) se rastvori u trifiuoroacetatnoj kiselini (2 ml) i meša 30 minuta na sobnoj temperaturi, a nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom do konzistencije čvrstog ulja. Dobij eno ulje se na sobnoj temperaturi rastvori u 3 M NaOAc:AcOH rastvoru pufera (pH = 4.8, 12 ml) i H20 (6 ml). U to se doda glioksalna kiselina (225 mg, 2.44 mmol) i reaktivna mešavina se 4 sata meša na sobnoj temperaturi, a nakon toga koncentruje do sušenja. Pomoću LCMS je ustanovljeno da su dobijene čvrste čestice uglavnom sastavljene od željenog jedinjenja 4-metil-2,3,4,9-tetrahidro-lH-P-karbolin-l-karboksilne kiseline i dalje se koriste bez prečišćavanja. NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 1.24 minuta. M+H =231.
MEĐUPROIZVOD 50: 4- metil- 2, 3, 4, 9- tetrahidro- lH- B- karbolin
Sirova 4-metil-2,3,4,9-tetrahidro-lH-(3-karbolin-l-karboksilna kiselina (aproksimativno 2.44 mmol) se suspenduje u H2O (5 ml) i HCl (12 N, 5 ml) i suspenzija se 1 sat zagreva na 120 °C, nakon toga ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu. Tamno oranž-braon čvrste čestice se uklone filtriranjem, a nakon toga rastvore u metanolu (5 ml). U to se doda zasićeni rastvor natrijum bikarbonata (20 ml) čime se dobija lepljivo žuta žitka masa. Reaktivna mešavina se filtrira da se dobiju žute, čvrste čestice koje su uglavnom sastavljene od 4-metil-2,3,4,9-tetrahidro-lH-p-karbolina (386 mg), kako je određeno pomoću LCMS. NH4OAC standardni uslovi. DAD Rf= 1.23 minuta. M+H = 187.
MEĐUPROIZVOD 51: 4- Metil- 9H- P- karbolin
4-metil-2,3,4,9-tetrahidro-lH-P-karbolin (214 mg, 1.17 mmol) se suspenduje u ksilenu (10 ml). U to se doda katalizator Pd (10% mt. na ugljeniku, 21 mg) i reaktivna mešavina se meša 24 sata na 160 °C, nakon toga ohladi na sobnu temperaturu i filtrira kroz celite ploču. Filtrat se koncentruje do sušenja da se dobije 4-metil-9H-P-karbolin (210 mg). 1 H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 11.73 (br s, 1); 8.78 (br s, 1); 8.19 (d, 1); 8.13 (s, 1); 7.62 (br s, 1); 7.53 (t, 1); 7.25 (t, 1); 2.78 (s, 3). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 2.24 minuta. M+H = 183.
MEĐUPROIZVOD 52: 6- Hloro- 4- metil- 9H- p- karbolin
4-metil-9H-p-karbolin (97 mg, 0.532 mmol) se rastvori u HCl (IN, 4 ml) i meša na sobnoj temperaturi. U to se doda NCS (85 mg, 0.637 mmol) i reaktivna mešavina se meša 5 sati. U to se doda zasićeni rastvor natrijum bikarbonata (20 ml) i reaktivna mešavina se dva puta ekstrahuje sa EtOAc (100 ml). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom, suše preko MgS04, filtriraju i koncentruju da se dobije 6-hloro-4-metil-9H-P-karbolin (108 mg) u obliku ulja. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 8.67 (s, 1); 8.19 (s, 1); 8.11 (s, 1); 7.57 - 7.54 (m, 2); 2.82 (s, 3). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf= 2.48 minuta. M+H = 217.
MEĐUPROIZVOD 53: 6- hloro- 4- metil- 8- nitro- 9H- R- karbolin
Rastvor 6-hloro-4-metil-9H-(3-karbolina (100 mg, 0.462 mmol) u trifluoroacetatnoj kiselini (10 ml) se meša na sobnoj temperaturi. U to se doda NaNC>3 (106 mg, 1.25 mmol) i reaktivna mešavina se meša 30 minuta, a nakon toga koncentruje da se dobije oranž ostatak. Ostatak se rastvori u MeOH (5 ml) i neutrališe dodavanjem zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (20 ml) što dovodi do formiranja žutih čestica koje se izdvoje filtriranjem, isperu sa H2O (10 ml) i Et20 (2x10 ml) da se dobije 6-hloro-4-metil-8-nitro-9H-p-karbolin (82 mg). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 8.90 (s, 1); 8.65 (s, 1); 8.55 (s, 1); 8.29 (s, 1); 2.89 (s, 3). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 3.00 minuta. M+H = 262.
MEĐUPROIZVOD 54: 6- hloro- 4- metil- 9H- B- karbolin- 8- ilamin
Rastvor 6-hloro-4-metil-8-nitro-9H-P-karbolina (80 mg, 0.31 mmol) u MeOH (10 ml) se meša na sobnoj temperaturi. U to se doda katalizator platina (10% mt. na ugljeniku, 24 mg), reaktivna posuda se zatvori i pod vakuumom ispere 3 puta sa argonom a nakon toga na isti način sa vodonikom. Reaktivna mešavina se meša 1.5 sati pod pritiskom vodonika od 1 atm, nakon toga se pod vakuumom ispere sa argonom, razblaži sa DCM (10 ml) i filtrira kroz 0.2 uM membranski filter. Filtrat se koncentruje da se dobije 6-hloro-4-metil-9H-P-karbolin-8-ilamin (67 mg) u obliku svetio smeđeg ulja. 'H-NMR(300 MHz, DMSO-d6): 8 9.04 (s, 1); 8.29 (s, 1); 7.74 (d, 1); 7.10 (d, 1); 2.98 (s, 3). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 1.89 minuta. M+H = 231.
PRIMER 30: N-( 6- hloro- 4- metil- 9H- P- karbolin- 8- il)- nikotinamid
Rastvor 6-hloro-4-metil-9H-P-karbolin-8-ilamina (43 mg, 0.19 mmol) u piridinu (4 ml) se meša na sobnoj temperaturi u atmosferi argona. U to se doda nikotinoil hlorid hidrohlorid (40 mg, 0.22 mmol) i reaktivna mešavina se meša 12 sati. Rastvor se razblaži sa H2O (5 ml) i sipa u levak za odvajanje koji sadrži H2O (5 ml) i EtOAc (25 ml). Reaktivna mešavina se mućka i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc (2 x 25 ml). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (15 ml), nakon toga sa slanim rastvorom, zatim suše preko MgS04, filtriraju i koncentruju da se dobije N-(6-hloro-4-metil-9H-P-karbolin-8-il)-nikotinamid (5.2 mg) u obliku viskoznog oranž ulja. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 11.67 (s, 1);
10.70 (s, 1); 9.27 (s, 1); 8.83 (s, 2); 8.45 (s, 1); 8.20 - 8.12 (m, 2); 7.83 (s, 1); 7.66 (s, 1); 2.80 (s, 3). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 1.92 minuta. M+H = 337.
MEĐUPROIZVOD 55: 4- terc- butil estar l, l- diokso- lX6- tiomorfolin- 3, 4- dikarboksilne
kiseline
4-terc-butil estar tiomorfolin-3,4-dikarboksilne kiseline (120 mg, 0.485 mmol) se rastvori u Et20 (8 ml). U rastvor se doda mCPBA (172 mg, 0.994 mmol), a nakon toga druga količina mCPBA (84 mg, 0.485 mmol). Formirani precipitat se filtrira, ispere sa Et20 i suši da se dobije beli čvrsti 4-terc-butil estar l,l-diokso-R<6->tiomorfolin-3,4-dikarboksilne kiseline (74 mg).
PRIMER 31: 1 J- Diokso- ll6- tiomorfolin- 3- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- B- karbolin-8- il)- amid
Žitka masa 6-hloro-7-lfuoro-9H-B-karbolin-8-ilamina (43 mg, 0.198 mmol), 4-terc-butil estra l,l-diokso-lX<6->tiomorfolin-3,4-dikarboksilne kiseline (72 mg,
0.257 mmol) i EDCI (76 mg, 0.396 mmol) u piridinu (2 ml) se zagreje na 70 °C. Nakon 1 sat, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom, a dobij eno tamno ulje se rastvori u MeOH (1 ml). Rastvor MeOH se u kapima doda u izmešani vodeni rastvor NaHC03i formira se žuti precipitat. Čvrsti deo se odvoji filtriranjem, suši i rastvori u 2 M rastvoru HCl u
Et20. Nakon mešanja u toku noći, nastala žuta čvrsta supstanca se filtrira i suši da se dobiju žute čvrste čestice di-HCl soli l,l-diokso-lX<6->tiomorfolin-3-karboksilne kiseline (6-hloro-9H-p-karbolin-8-il)-amida (78 mg). 'H-NMR (300 MHz, MeOH-d4): 8 9.26 (s, 1); 8.74 (d, 1); 8.54 (d, 1); 8.37 (d, 1); 7.94 (d, 1); 5.01 (dd, 1); 4.15 - 3.75 (m, 4); 3.64-3.58 (m, 2). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 1.57 minuta. M+H = 379.
MEĐUPROIZVOD 56: 4- terc- butil estar 6, 6- dimetil- morfolin- 3, 4- dikarboksilne kiseline
U suspenziju 6,6-dimetil-morfolin-3-karboksilne kiseline (5.56 g, 34.9 mmol) u dioksanu (58 mL) se doda vodeni rastvor kalijum karbonata (IM, 58 mL). U dobijeni bistar bezbojni rastvor se doda di-terc-butil dikarbonat (9.14 g, 41.9 mmol). Rastvor se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna mešavina se razblaži sa vodom (200 mL) i proveri se da je pH rastvora aproksimativno 7. Reaktivna mešavina se sipa u levak za odvajanje i ekstrahuje sa Et20 (2 x 100 mL) da se ukloni višak di-terc-butil dikarbonata. Vodeni slčoj se zakiseli dodavanjem 7N vodenog rastvora HCl uz mešanje, sve dok se ne postigne pH 3. Mešavina se brzo ekstrahuje sa Et20 (2 x 200 mL) i organski slojevi se komobinuju, suše preko magnezijum sulfata, filtriraju i koncentruju da se dobije bistro bezbojno ulje. Ulje se rastvori u Et20 (50 mL), triturira sa heksanom (150 mL) i koncentruje da se dobije bela čvrsta supstanca. Čvrsti produkt se postavi nekoliko sati na pumpu visokog vakuuma, nakon čega se dobija 8.85 g 4-terc-butil estra 6,6-dimetil-morfolin-3,4-dikarboksilne kiseline (prinos 97%). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 12.95 (s, 1); 4.35 ("dd", 1); 3.98-3.83 (m, 2); 3.48 ("dd", 1); 2.81 ("dd", 1); 1.39 ("dd", 9); 1.15 (s, 3); 1.08 ("dd", 3). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 0.98 minuta. M-H = 258.
MEĐUPROIZVOD 57: terc- butil estar ( S)- 5-( 6- Hloro- 9H- B- karbolin- 8- ilkarbamoil)- 2, 2-
dimetil- morfolin- 4- karboksilne kiseline
Željeno jedinjenje se izrađuju u skladu saPostupkom Cod 6-hloro-9H-p-karbolin-8-ilamina i 4-terc-butil estra 6,6-dimetil-morfolin-3,4-dikarboksilne kiselina, u prinosu od 87%.
'H-NMR (DMSO-d6, 300MHz) 5 11.33 (s, 1); 10.14 (s, 1); 9.05 (s, 1); 8.38 (d, 1); 8.21 (d, 1); 8.16 (d, 1); 7.94 (s, 1); 4.70-4.56 (m, 1); 4.25-4.14 (m, 1); 4.07 (dd, 1); 3.64-3.56 (m, 1); 3.30 -3.14 (m, 1); 1.41 ("dd", 9); 1.21 (s, 3); 1.15 (s, 3). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 1.84 minuta. M+H = 459. Čiral HPLC: > 95% ee. Čiralpak AD kolona. 15% v/v EtOH/heksan koji sadrži 0.1 % Et2NH.
MEĐUPROIZVOD 58: [( S)- 4-(( S)- 2- Amino- propil)- 6, 6- dimetil- morfolin- 3- karboksilna
kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- il)- amid trifluoroacetatna so
Željeno jedinjenje se izrađuje po istoj proceduri kao Međuproizvod 35, počevši od terc-butil estra (S)-5-(6-Hloro-9H-beta-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetilmorfolin-4-karboksilne kiseline i koristeći Boc-alaninal u fazi reduktivne alkilacije, u prinosu od 60%. 'H-NMR (300 MHz, D20): 5 1.16 (d, 3H), 1.25 (s, 3H), 1.28 (s, 3H), 2.41 (d, IH), 2.59 (dd, IH), 2.89 (dd, IH), 2.95 (d, IH), 3.35-3.50 (m, 2H), 3.95-4.15 (m, 2H), 7.59 (d, IH), 7.97 (d, IH), 8.11 (d, IH), 8.30 (d, IH), 8.40 (d, IH), 8.94 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.57 minuta. MS (M+H<+>): 416.2.
POSTUPAK E: Procedura spajanja uz korišćenje [(S)-4-((S)-2-amino-propil)-6,6-dimetilmorfolin-3-karboksilna kiselina (6-hloro-9H-beta-karbolin-8-il)-amid trifluoroacetatne soli [(S)-4-((S)-2-amino-propil)-6,6-dimetil-morfolin-3-karboksilna kiselina (6-hloro-9H-beta-karbolin-8-il)-amid trifluoroacetatne soli (1.0 mmol), TBTU (1.2 mmol), kiseline koja se spaja (1.25 mmol) i Et3N (4-6 mmol, baznog pH) koji se stave u acetonitril (10 ml). Dobijena mešavina se meša 4-15 sati na sobnoj temperaturi. Nakon toga se reaktivna mešavina podeli između EtOAc i 10% vodenog rastvora Na2C03. Izdvojena vodena faza se dalje ekstrahuje sa EtOAc. Kombinovani ekstrakti se po redu isperu sa 10% vodenim rastvorom Na2C03 i slanim rastvorom, suše preko Na2S04i potpuno koncentruju. Ostatak se prečisti na silika gelu (2-7%>MeOH/CH.2Cl2) da se dobije odgovarajući produkt.
PRIMER 39: 6, 6- dimetil- 4-[ 2-( 2, 2, 2- trilfuoro- acetilamino)- propil]- morfolin- 3-
karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9//- B- karbolin- 8- il)- amid: 4-(2-Amino-propil)-6,6-dimetil-morfolin-3-karboksilna kiselina (6-hloro-9/f-P-karbolin-8-il)-amid (3 CF3COOH so) (1.5g) se suspenduje u dihlorometanu (80 mL) zajedno sa 5 ekvivalenata trietilamina. Doda se trifluoroacetatni anhidrid (56 uL, 2 ekvivalenta) i mešavina se meša 1 sat na sobnoj temperaturi. Rastvarač se ukloni
rotacionom evaporacijom. Produkt se prečisti gasnom hromatografijom na silika gelu (5% metanol / dihlorometan, produkt Rf0.3) da se dobije lg. 'H-NMR (300 MHz, u odnosu na CDC13pik 7.3 ppm) 5 10 (s, IH), 9.7 (d, IH), 8.7 (s, IH), 8.6 (s, IH), 8.2 (d, IH), 7.6 (s, 2H), 6.6 (s, IH), 4.3 (m, IH), 3.9 (m, IH), 3.8 (t, IH), 3.2 (m, IH), 2.7-2.9 (m, 2H), 2.5 (m, IH), 2.2 (d, 1 H), 1.4 (d, 3H), 1.3 (s, 3H), 1.2 (s, 3H). LCMS (postupak sa amonijum acetatom kao standardom) vreme retencije = 1.84 minuta. (M<+>= 512; M" = 510).
PRIMER 40: 4-(( S)- 2- acetilamino- propil)- 6. 6- dimetil- morfolin- 3-( S)- karboksilna
kiselina ( 6- hloro- 9H- b- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu sa prethodnim primerom od 4-(2-amino-propil)-6,6-dimetil-morfolin-3-karboksilna kiselina (6-hloro-9//-B-karbolin-8-il)-amida (3 CF3COOH so) i acetat anhidrida. 'H-NMR (300 MHz, metil-d3alkohol-d): 8 1.15 (d, 3H), 1.23 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 2.24 (d, IH), 2.38 (m, IH), 2.68 (m, IH), 2.92 (d, IH), 3.24 (m, IH), 3.98 (m, 2H), 4.22 (m, H), 7.78 (d, IH), 7.98 (m, 2H),
8.27 (d, IH), 8.84 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.54 minuta. MS (M+H<+>): 458.
PRIMER 41:4-(( S)- 2- metansulfonilamino- propil)- 6, 6- dimetil- morfolin- 3-( S)- karboksilna
kiselina ( 6- hloro- 9H- b- karbolin- 8- il)- amid
Žv eljeno jedinjenje se izrađuju u skladu sa Postupkom E.<1>H-NMR (300 MHz, metil-daalkohol-d): 5 1.28 (s, 3H), 1.29 (d, 3H), 1.43 (s, 3H), 2.28 (d, IH), 2.57 (m, IH), 2.66 (m, IH), 2.98 (s, 3H), 3.03 (d, IH), 3.34 (m, IH), 3.66 (m, IH), 4.05 (m, 2H), 7.67 (d, IH), 8.10 (m, 2H), 8.32 (d, IH), 8.89 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.54 minuta.
MS (M+H<+>): 494.
PRIMER 42: 4-{ 2-[(- 4, 6- dimetil- pirimidin- 5- karbonil)- amino1- propil}- 6, 6- dimetilmorfolin- 3- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje korišćenjem [4-(2-amino-propil)-6,6-dimetilmorfolin-3-ilmetil]-(6-hloro-9//-beta-karbolin-8-il)-amina i 4,6-dimetil pirimidin-5-karboksilne kiseline po Postupku E, uz prinos od 51%. 'H-NMR (300MHz, DMSO): 8 11.27 (IH, s), 10.02 (IH, s), 9.0 (IH, s), 8.86 (IH, s), 8.5 (IH, d), 8.3 (IH, d), 8.22 (2H, m), 7.88 (IH, s), 4.1 (IH, m), 3.9 (2H, m), 2.99 (2H, m), 2.36 (6H, s), 2.1 (2H, m), 1.3 (3H, s), 1.24 (6H, m). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.50 minuta. MS (M+H+): 551
PRIMER 43: ( SV6, 6- dimetil- 4- f( S)- 2- r( 2- metil- piridin- 3karbonil) aminolpropil)-morfolin- 3 - karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- il)- amid.
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu sa Postupkom E od (S)-4-((S)-2-amino-propil)-6,6-dimetil-morfolin-3-karboksilna kiselina (6-hloro-9H-beta-karbolin-8-il)-amida trifluoroacetatne soli i 2-metil-nikotinatne kiseline, u prinosu od 75%. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 1.21 (s,3H), 1.22 (d,3H), 1.36 (s,3H), 2.10 (d,lH), 2.42 (m,lH), 2.60 (m,lH), 2.99 (d,lH), 3.20 (m,lH), 3.92 (m,2H), 4.22 (m,lH), 7.22 (dd,lH), 7.65 (d,lH), 7.90 (s,lH), 8.16 (d,lH), 8.23 (s,lH), 8.31 (d,lH),8.38 (d,lH), 8.45 (d,lH), 9.02 (s,lH),10.04 (s,lH), 11.26 (s,lH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 2.16 minuta. MS (M+H<+>): 535.5.
PRIMER 44: 6, 6- dimetil- 4-{ 2- f( tetrahidro
karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- b- karbolin- 8- ilVamid: 4-(2-Amino-propil)-6,6-dimetil-morfolin-3 -karboksilna kiselina (6-hloro-9H-B-karbolin-8-il)-amid (3 CF3COOH so) (300 mg) se suspenduje u metilen hloridu (12 mL) zajedno sa 3 ekvivalenta trietilamina. Doda se morfolin-4-karbonil hlorid (70 mg, 1.3 ekvivalenta) i mešavina se meša u toku noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač se ukloni rotacionom evaporacijom. Produkt se razdvoji preparativnom TLC na ploči cilika gela (10/90 metanol/etil acetat kao eluant, produkt Rf 0.4). Prinos: 83 mg. 'H-NMR (300 MHz, u odnosu na CD3OD pik na 3.3 ppm) 5 8.8 (s, IH), 8.27 (d, IH), 7.9-7.99 (m, 3H), 3.95-4.15 (m, 2H), 3.85-3.95 (m, 2H), 3.5-3.6 (m, 5H), 3.3-3.45 (m, 2H), 3.15-3.3 (m, 2H), 2.85-2.95 (d, IH), 2.6-2.72 m, IH), 2.3-2.43 (m, IH), 2.2-2.28 (d, IH), 2.0 (s, 2H), 1.35-1.45 (d, 3H), 1.05-1.25 (m, 6H). LCMS (postupak sa amonijum acetatom kao standardom) vreme retencije= 2.39 minuta. (M+ = 529; M- = 527).
PRIMER45: 4-(( S)- 2- r( l- acetil- pirolidin- 2-( S)- karbonilVaminol- propill- 6, 6- dimetilmorfolin- 3-( Sykarboksilna kiselina ( 6- hIoro- 9H- b- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu sa Postupkom E. 'H-NMR (300 MHz, metil-d3alkohol-d): 5 1.21 (d, 3H), 1.28 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.95 (m, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.17 (m, IH), 2.28 (d, IH), 2.51 (m, IH), 2.74 (m, IH), 3.05 (d, IH), 3.30 (m, IH), 3.55 (m, IH), 3.61 (m, IH), 4.05 (m, 2H), 4.18 (m, IH), 4.34 (m IH), 7.78 (d, IH), 8.10 (m, 2H), 8.33 (d, IH), 8.90 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 2.07 minuta. MS (M+H<+>): 555.
PRIMER 46: 6, 6- dimetil- 4-(- 2-[ Y5- metil- izoksazol- 3- karbonil)- amino]- propil}- morfolin-3- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje od [4-(2-amino-propil)-6,6-dimetil-morfolin-3-ilmetil]-(6-hloro-9//-beta-karbolin-8-il)-amina i 5-metilizoksazol karbonil hloridapo Postupku E, uz prinos od 61%. 'H-NMR (300MHz, DMSO): 5 11.2 (IH, s), 9.98 (IH, s), 9.0 (IH, s), 8.7 (IH, d), 8.6 (IH, d), 8.2 (2H, m), 7.9 (IH, s). 6.47 (IH, s), 3.87 (2H, m), 3.17 (2H,m), 2.9 (IH, d), 2.7 (IH, m), 2.3 (4H), 2.1 (IH, d), 1.29 (3H, s), 1.15 (6H, m). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.81 minuta. MS (M+H+): 526
PRIMER 47: 6, 6- dimetil- 4- f2-( 3- metil- ureido)- propil1- morfolin- 3- karboksilna kiselina ( 6-
hloro- 9/ f- p- karbolin- 8- in- amid: 4-(2-Amino-propil)-6,6-dimetil-morfolin-3-karboksilna kiselina (6-hloro-9#-B-karbolin-8-il)-amid (3 HCl so) (300mg) se suspenduje u dihlorometanu (10 mL) a nakon toga se istovremeno dodaju trietil amin (4 ekvivalenta) i metil izocijanat (2 ekvivalenta). Nakon jedan sat stajanja na sobnoj temperaturi, rastvarač se ukloni rotacionom evaporacijom. Produkt se prečisti gasnom hromatografijom na silika gelu (5% metanol / dihlorometan, produkt Rf = 0.3) da se dobije 200 mg. 1 H-NMR (300 MHz, u odnosu na CDC13pik na 7.3 ppm) 5 12.3 (s, IH), 10.2 (s, IH), 8.9 (s, IH), 8.6 (s, IH), 8.4 (d, IH), 7.9 (d, IH), 7.8 (s, IH), 5.4 (s, IH), 5.2 (d, IH), 4.2 (s, IH), 3.8 (m, 2H), 3.2 (m, IH), 2.6-3 (m, 7H), 2.3 (d, IH), 2.2 (t, IH), 1.4 (s, 3H), 1.2 (s, 3H), 1.1 (d, 3H) LCMS (postupak sa amonijum acetatom kao standardom) vreme retencije = 1.62 minuta. (M<+>= 473;M" = 471).
PRIMER 49: metil estar {( SV2- r( S)- 5-( 6- Hloro- 9H- beta- karbolin- 8- ilkarbamoil)- 2, 2-
dimetil- morfolin- 4- il]- 1 - metil- etil} - karbamatne kiseline.
U rastvor hidrohloridne soli (S)-4-((S)-2-amino-propil)-6,6-dimetiI-morfolin-3 karboksilna kiselina (6-hloro-9H-beta-karbolin-8-il)-amida (3.45g, 6.59 mmol) u 68 ml bezvodnog piridina se u toku 1.5 sati, u tri porcije doda 3M rastvor DCM metil hloroformata (9.2 ml, 27.6 mmol, 4.2 eq). Nakon 2 sata, doda se 10 ml vode i mešavina koncentruje do sušenja. Ostatak se podeli između 150 ml EtOAc i 100 ml 0.5M vodenog rastvora K2CO3. Razdvojena vodena faza se ekstrahuje sa 50 ml EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti se po redu isperu sa vodom (2X50 ml) i slanim rastvorom (50 ml), suše preko Na2S04i koncentruju do sušenja. Ostatak se prečisti na silika gelu (5% MeOH/CH2Cl2) da se dobije 2.48 g(gusto ulje, prinos 77%) željenog produkta 'H-NMR (300 MHz, CDCI3): 5 1.15 (d, 3H), 1.28 (s, 3H), 1.42 (s, 3H), 2.33 (dd, IH), 2.42 (d, IH), 2.78 (dd, IH), 2.86 (d, IH), 3.32 (dd, IH), 3.86 (s, 3H), 3.92 (t, IH), 4.01 (dd, IH), 4.18 (m, IH), 4.78 (d, IH), 7.95 (d, IH), 7.97 (s, IH), 8.29 (s, IH), 8.50 (d, IH), 8.98 (s, IH), 9.88 (s, IH), 10.94 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.70 minuta. MS (M+H<+>): 474.1
PRIMER 50: 4-{ 2-[( 2, 4- dimetil- piridin- 3- karbonil>amino]- propil}^^
3- karboksiIna kiselina ( 6- hloro- 9//- beta- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje od [4-(2-amino-propil)-6,6-dimetil-morfolin-3-ilmetil]-(6-hloro-9/f-beta-karbolin-8-il)-amina i 2,4-dimetil nikotinatne kiseline po Postupku E, u prinosu od 50%. 'H-NMR (300MHz, DMSO): 6 11.27 (IH, s), 10 (IH, s), 8.9 (IH, s), 8.37 (2H, d), 8.24 (3H, m), 7.8 (IH, s), 7.04 (IH, d), 3.91 (2H, m), 3.1 (2H, m), 2.36 (4H, m), 2.1 (3H, m), 2.05 (IH, d), 1.3 (3H, s), 1.2 (6H, m). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.53 minuta.
MS (M+H+): 550
PRIMER 51: 6, 6- dimetil- 4-( 2-[( pirazin- 2- karbonil)- amino]- propil}- morfolin- 3-
karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje od [4-(2-Amino-propil)-6,6-dimetil-morfolin-3-ilmetil]-(6-hloro-9//-beta-karbolin-8-il)-amina i 2-pirazin karboksilne kiseline po Postupku E, u prinosu od 62%. 'H-NMR (300MHz, DMSO): 8 12.9 (IH, s), 10.89 (IH, s), 9.42 (IH, s), 9.0 (IH, s), 8.8 (IH, d), 8.6 (IH, d), 8.4 (IH, s), 8.2 (IH, m), 4.5 (IH, m), 4.1 (2H, m), 3.1 (IH, m), 2.1 (4H, m), 1.23 (9H, m). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.69 minuta. MS (M+): 522.2
PRIMER 52: piridin- 3, 4- dikarboksilna kiselina 4-({ 2- r5-( 6- hloro- 9H- B- karbolin- 8-
ilkarbamoil)- 2, 2- dimetil- morfolin- 4- il} - 1 - metil- etil} - amid} 3 - metilamid
U rastvor [4-(2-amino-propil)-6,6-dimetil-morfolin-3-ilmetil]-(6-hloro-9H-beta-karbolin-8-il)-amina (100 mg, 0.132 mmol) u 0.6 ml bezvodnog acetonitrila se dodaju 3, 4-piridindikarboksilatni anhidrid (21mg, 0.15 mmol) i trietilamin (102 ml, 0.8 mmol). Reaktivna mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 sat. Nakon toga se rastvarač ukloni pod sniženim pritiskom, a ostatak se prenese u piridin (0.6 ml). U nastalu mešavinu se doda 2M rastvor metilamina u THF (0.2 ml, 0.4 mmol) i EDCI (40 mg, 0.21 mmol). Reaktivna mešavina se meša 4 sata, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom a ostatak podeli između EtOAc i IM vodenog rastvora K2CO3. Odvojena vodena faza se dva puta ekstrahuje sa EtOAc. Kombinovane organske faze se po redu isperu sa vodom i slanim rastvorom, suše preko MgS04 i potpuno koncentruju. Ostatak se prečisti na silika gelu (10% MeOH-CH2Cl2) da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela, čvrsta supstanca u prinosu od 36%. 'H-NMR (300MHz, DMSO): 8 9.24 (IH, s), 8.17 (lH,s), 7.81 (2H, m), 7.5 ( 3H, m), 7.3 (IH, s), 7.0 (IH, s) 6.5 (IH, d), 3.08 (2H, d), 3.35 (IH, m), 2.4 (3H, m), 1.86 (4H, m), 0.5 (3H, s), 0.37 (6H, m). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.46 minuta. MS (M+H+): 579
PRIMER 53: 6. 6- dimetil- 4-{( 4- metil- pirimidin- 5- karbonil)- amino)- propil}- morfolin- 3-
karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu sa Postupkom E od [4-(2-Amino-propil)-6,6-dimetil-morfolin-3-ilmetil]-(6-hloro-9H-beta-karbolin-8-il)-amina i 4-metil-pirimidin-5-karboksilne kiseline, u prinosu od 55%. 'H-NMR (300MHz, DMSO): 8 11.26 (IH, s), 10.04 (IH, s) 9.04 (2H, m), 8.66 (IH, d) 8.3 (2H, m) 8.22-8.17 (2H, m), 7.9 (IH, s), 4.2 (IH, m), 3.93 (2H, m), 3.2 (IH, m), 2.98 (2H, m), 2.6 (3H, m), 2.1 (2H, m), 1.36 (3H, s), 1.23 (6H, m). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.55 minuta. MS (M+H+): 537
PRIMER 54: ( S)- 6, 6- dimetil- 4-(( S)- 2- r( 4- metil- piridin- 3- karbonilVaminol- propil|-
morfolin- 3- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- il)- amid.
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu sa Postupkom E od trifluoroacetatne
soli (S)-4-((S)-2-amino-propil)-6,6-dimetil-morfolin-3-karboksilna kiselina (6-hloro-9H-beta-karbolin-8-il)-amida i 4-metil-nikotinatne kiseline, u prinosu od 79%. 1 H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 1.21 (s,3H), 1.22 (d,3H), 1.36 (s,3H), 2.10 (d,lH), 2.40 (m,lH), 2.62 (m,lH), 2.99 (d,lH), 3.22 (m,lH), 3.94 (m,2H), 4.23 (m,lH), 7.26 (d,lH), 7.90 (s,lH), 8.16 (d,lH), 8.23 (s,lH), 8.34-8.46 (m,3H), 9.02 (s,lH),10.04 (s,lH), 11.27 (s,lH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 2.22minuta. MS (M+H<+>): 535.5.
PRIMER 47: 4-[ 2-( 2- amino- 2- metil- propionil) 1- 6, 6- dimetil- morfolin- 3- karboksilna
kiselina ( 6- hloro- 9H- p- karbolin- 8- il)- amid
Rastvor terc-butil estra (2-[5-(6-Hloro-9H-B-karbolin-8-ilkarbamoil) 2,2-dimetil-morfolin-4-il]-l-metil-etil}-karbamatne kiseline (70.2 mg, 0.14 mmol) u TFA
(2 mL) se meša na sobnoj temperaturi. Nakon 15 minuta, reakcija se koncentruje i sirovi produkt se azeotropira sa CH2CI2(2x5 mL). Mešavina sirovog međuproizvoda, TBTU
(54.0 mg, 0.17 mmol), trietilamina (0.2 mL, 1.43 mmol) i 2-terc-butoksikarbonilamino-2-metil-propionatne kiseline (45.0 mg, 0.22 mmol) u MeCN (1 mL) se meša 18 sati na sobnoj temperaturi. Rastvor se razblaži sa H2O (20 mL) i sipa u levak za odvajanje koji sadrži EtOAc (50 mL) i slani rastvor (50 mL). Mešavina se mućka i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc (2 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi se suše, filtriraju i koncentruju. Sirovi produkt se prečisti gasnom hromatografijom da se dobije žuta, čvrsta supstanca (51.0 mg, 62%) za koju se pomoću NMR i LCMS utvrdi daje 4-[2-(2-amino-2-metil-propionil] -6,6-dimetil-morfolin-3 -karboksilna kiselina (6-hloro-9H-B-karbolin-8-il)-amid.
'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 12.94 (br s, 1); 11.36 (br s, 1); 10.16 (s, 1); 9.06 (s, 1); 8.39 (d, 1); 8.22 (d, 1); 8.19 (d, 1); 7.95 (s, 1); 4.77 - 4.52 (m, 1); 4.28 - 4.13 (m, 1); 4.13 - 4.00 (m, 1); 3.68 - 3.52 (m, 1); 3.22 - 3.12 (m, 1); 1.44 (s, 3); 1.41 - 1.38 (m, 6); 1.28 - 1.24 (m, 2); 1.22 (s, 3); 1.25 (s, 3); 1.11 - 1.07 (m, 1). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 1.31 minuta. M+H = 501.
PRIMER 55: 6, 6 dimetil- 4-( 1, 2, 3, 4- tetrahidroizokvinolin- 3- ilmetil)- morfolin- 3-
karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- il) amid
Željeno jedinjenje se izrađuje po proceduri koja je opisana u Postupku C koristeći 6,6-dimetil morfolin-3-karboksilnu kiselinu i (s)-tetrahidroizokvinolin aldehid.
'H-NMR (300MHz, D20): 6 9.1 (IH, s), 8.68 (IH, d), 8.52 (IH, d), 8.41 (IH, d), 7.68 (IH, d), 7.27 (IH, d), 7.06 (IH, m), 6.97 (IH, d), 6.84 (IH, m), 4.31 (2H, m), 4.09 (2H, m), 3.68 (IH, m), 3.56 (IH, t), 3.2 (2H, m), 3.06 (2H, m), 2.7 (2H, m) 1,48 (3H, s), 1.32 (3H, s) Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 2.43 minuta. MS (M+H+): 505
MEĐUPROIZVOD 59: 6, 6- dimetil- morfolin- 3- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- R-karbolin- 8- il)- amid, HCl so
U bistar smeđi rastvor terc-butil estra 5-(6-hloro-9H-B-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetil-morfolin-4-karboksilne kiseline (10.4 g, 22.7 mmol) u metanolu (41 mL) se doda HCl u dioksanu (4M, 91 mL). Reakcija se meša 30 minuta na sobnoj temperaturi, za koje vreme počinje da se stvara bledo smeđi precipitat. Mešavina se sipa u 250-mL intenzivno mešanog Et20. Dobijena žitka masa se meša 15 minuta na sobnoj temperaturi, a nakon toga filtrira da se dobije bledo oranž čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se u toku noći postavi u pumpu visokog vakuuma nakon čega se dobija 9.71 g 6,6-dimetiI-morfolin-3-karboksilna kiselina (6-hloro-9H-B-karbolin-8-il)-amid (prinos 99%). 'H-NMR (DMSO-d6, 300MHz) 5 13.47 (s, 1); 11.77 (s, 1); 9.42 (s, 1); 8.86 (d, 1); 8.66 (d, 1); 8.58 (d, 1); 8.25 (d, 1); 4.41 - 4.37 (m, 2); 4.05 (dd, 1); 3.32 - 3.28 (m, 1); 3.04 - 3.00 (m, 1); 1.34 (s, 3); 1.30 (s, 3). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 1.48 minuta. M+H = 359.
PRIMER 56: 4-( 2- amino- butil)- 6, 6- dimetil- morfolin- 3- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H-B- karbolin- 8- in- amid( takođe MEĐUPROIZVOD 60)
Izrađuje se poPostupku C,koristeći terc-butil estar 5-(6-hloro-9H-B-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetil-morfolin-4-karboksilne kiseline i odgovarajući aldehid, terc-butil estar (l-formil-propil)-karbamatne kiseline.
'H-NMR (DMSO-d6, 300MHz) 6 9.06 (s, 1); 8.37 (d, 1); 8.19 (d, 1); 8.15 (d, 1); 7.85 (d, 1); 6.75 (br s, 2); 3.96 - 3.85 (m, 2); 3.17 - 3.13 (m, 1); 2.89 (d, 1); 2.78 - 2.74 (m, 1); 2.67- 2.59 (m, 1); 2.26-2.20 (m, l);2.14(d, 1); 1.58- 1.50 (m, 1); 1.32 (s, 3); 1.32-1.23 (m, 1); 1.18 (s, 3); 0.87 (t, 3). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 1.27 minuta. M+H = 430.
PRIMER 57: 6, 6- dimetil- 4-{ 2-[( 2- metil- piridin- 3- karbonil)- amino]- butil}- morfolin- 3-
karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- p- karbolin- 8- il)- amid, HCl so
U rastvor 4-(2-amino-butil)-6,6-dimetil-morfolin-3-karboksilna kiselina (6-hloro-9H-p-karbolin-8-il)-amida (100 mg, 0.233 mmol) u piridinu (4 mL) se dodaju 2-metil-nikotinatna kiselina (38.4 mg, 0.280 mmol) i EDCI (71.5 mg, 0.373 mmol). Rastvor se meša u toku noći na sobnoj temperaturi, a nakon toga razblaži sa vodom (5 mL). Mešavina se sipa u levak za odvajanje i dalje razblaži sa vodom (20 mL). Mešavina se ekstrahuje sa EtOAc (2 x 20 mL), a nakon toga se kombinovani organski slojevi isperu sa slanim rastvorom. Organski sloj se suši preko magnezijum sulfata, filtrira i koncentruje da se dobije žuto smeđe ulje koje se prečisti hromatografijom na koloni. Dobijena čvrsta žuta supstanca se rastvori u metanol (2 mL) i doda se HCl u Et20 (2M, 2 mL). Mešavina se meša 5 minuta, a nakon toga koncentruje da se dobije 103 mg 6,6-dimetil-4-{2-[(2-metil-piridin-3-karbonil)-amino]-butil}-morfolin-3-karboksilna kiselina (6-hloro-9H-p-karbolin-8-il)-amida (prinos 71%). 'H-NMR (DMSO-d6, 300MHz) 8 13.31 (br s, 1); 11.41 (brs, 1); 11.14 (brs, 1); 9.44 (s, 1); 8.85 (d, 1); 8.73 - 8.64 (m, 3); 8.52 (s, 1); 8.32 (s, 1); 7.72 (s, 1); 4.64 - 3.55 (m, 6); 3.24 - 3.06 (m, 1); 2.95 - 2.81 (m, 1); 2.71 (s, 3); 1.89- 1.74 (m, 1); 1.55 - 1.41 (m, 1); 1.32 (s, 3); 1.23 (s, 3); 0.93 (t, 3). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf= 1.66 minuta. M+H = 549.
MEĐUPROIZVOD 61: 4-( 2- Amino- 3- metil- butil)- 6, 6- dimetil- morfolin- 3- karboksilna
kiselina ( 6- hloro- 9H- R- karbolin- 8- il)- amid
Dobija se poPostupku C koristećiterc-butil estar 5-(6-hloro-9H-B-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetil-morfolin-4-karboksilne kiseline i odgovarajući aldehid, terc-butil estar (1 -formil-2-metil-propil)-karbamatne kiseline. 1 H-NMR (DMSO-d6, 300MHz) 8 9.05 (s, 1); 8.37 (d, 1); 8.21 (d, 1); 8.16 (dd, 1); 7.90 (d, 1); 6.71 (br s, 2); 3.93 - 3.86 (m, 2); 3.18-3.14 (m, 1); 2.91 (d, 1); 2.70 - 2.65 (m, 2); 2.21 (dd, 1); 2.15 (d, 1); 1.74-1.66 (m, 1); 1.31 (s, 3); 1.19 (s, 3); 0.85 (d, 3); 0.80 (d, 3). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 1.27 minuta. M+H = 444.
PRIMER 58: 6, 6- dimetil- 4-| 3- metil- 2- f( 2- metil- piridin- 3- karbonil)- aminol- butiU-
morfolin- 3- karboksilna kiselina ( 6- hloro-9H-|3-karbolin-8-il)-amid
U rastvor 4-(2-amino-3-metil-butil)-6,6-dimetil-morfolin-3-karboksilna kiselina (6-hloro-9H-p-karbolin-8-il)-amida (1.47 g, 3.31 mmol) u piridinu (35 mL) se doda 2-metil-nikotinatna kiselina (544 mg, 3.97 mmol) i EDCI (1.02 g, 5.30 mmol). Rastvor se meša 6.5 sati na sobnoj temperaturi, a nakon toga razblaži sa vodom (100 mL). Mešavian se sipa u levak za odvajanje i dalje razblaži sa vodom (50 mL) i EtOAc (150 mL). Slojevi se mućkaju i razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc (3 x 50 mL), a nakon toga se kombinovani organski slojevi isperu sa slanim rastvorom. Organski sloj se suši preko magnezijum sulfata, filtrira i koncentruje da se dobije polu-čvrsti oranž ostatak koji se prečisti hromatografijom na koloni. Nastali žuti čvrsti ostatak se u toku noći ostavi na pumpi sa visokim vakuumom nakon čega se dobija 1.43 g 6,6-dimetil-4-{3-metil-2-[(2-metil-piridin-3 -karbonil)-amino] -butil} -morfolin-3 -karboksilna kiselina (6-hloro-9H-B-karbolin-8-il)-amida (77% prinos). 'H-NMR (DMSO-d6, 300MHz) 5 11.32 (s, 1); 10.08 (s, 1); 9.02 (s, 1); 8.46 (dd, 1); 8.38 (d, 1); 8.21 - 8.14 (m, 3); 7.97 (d, 1); 7.64 (dd, 1); 7.23 (dd, 1); 4.23-4.14 (m, 1); 3.99-3.87 (m, 2); 3.22 -3.19 (m, 1): 3.02 (d, 1); 2.85
(dd, 1); 2.52 (s, 3); 2.30 (dd, 1); 2.11 (d, 1); 2.05 - 1.95 (m, 1); 1.32 (s, 3); 1.21 . NH(s, 3); 0.93 (d, 3); 0.86 (d, 3)4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 1.67 minuta. M+H = 563.
PRIMER 59: 6. 6- Dimetil- 4-( 3- metil- 2-( S)- r( tetrahidro- furan- 3- karbonilVamino1- butiU-
morfolin- 3-( S)- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- b- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu sa Postupkom E od Međuproizvoda 61 i odgovarajuće kiseline.1 H-NMR (300 MHz, metil-d3alkohol-d): 5 0.87 (m, 6H), 1.25 (d, 3H), 1.37 (d, 3H), 1.81 (m, IH), 2.10-2.47 (m, 4H), 2.93 (m, 2H), 3.10 (m, IH), 3.26 (m, IH), 3.80 (m, IH), 3.86-4.07 (m, 6H), 7.86 (d, IH), 8.10 (m, 2H), 8.32 (d, IH), 8.89 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.73 minuta. MS (M+H<+>): 542.
MEĐUPROIZVOD 62: terc- butil estar {( S)- 2-[( S)- 5-( 6- Hloro- 4- metil- 9H- jB- karbolin- 8-
ilkarbamoil)- 2, 2- dimetil- morfolin- 4- il]- I- metil- etil}- karbamatne kiseline
Rastvor (S)-4-((S)-2-terc-butoksikarbonilamino-propil)-6,6-dimetil-morfolin-3-karboksilne kiseline (3.316 g, 10.5 mmol) (izrađen reduktivnom alkilacijom (S)-6,6-dimetil-morfolin-3-karboksilne kiseline saN-(terc-butoksikarbonil)-L-alanalom) u anhidrovanom piridinu (75 mL), meša se na sobnoj temperaturi. Doda se 6-hloro-4-metil-9H-B-karbolin-8-ilamin (1.869 g, 8.09 mmol), a nakon toga EDCI (2.894 g, 15.1 mmol). Reakcija se meša 14-18 sati na sobnoj temperaturi u atmosferi argona. Reakcija se delimično koncentruje, razblaži sa H2O (20 mL) i prenese u levak za odvajanje. Mešavina se razblaži sa slanim rastvorom (50 mL) i ekstrahuje sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom, suše, filtriraju i koncentruju da se dobije taman ostatak. Hromatografijom na koloni (0-8% MeOH / CH2CI2) se dobija terc-butil estar {(S)-2-[(S)-5-(6-Hloro-4-metil-9H-B-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetilmorfolin-4-il]-l-metil-etil}-karbamatne kiseline u obliku svetio smeđe, žute, čvrste supstance (2.688 g). 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 6 11.25 (s, 1) 9.94 (s, 1) 8.88 (s, 1) 8.18 (s, 1) 8.02 (s, 1) 7.92 (s, 1) 6.73 (d, 1) 3.95 - 3.85 (m, 2) 3.66 (br s, 1) 3.16 - 3.08 (m, 1) 2.88 (d, 1) 2.76 (s, 3) 2.51 - 2.40 (m, 1) 2.23 (dd, 1) 1.99 (d, 1) 1.34 (br s, 12) 1.17 (s, 3) 1.08 (d, 3). NH4OAc standardni uslovi. ELSD Rf = 2.07 minuta. M+H = 530.
PRIMER 60: ( S)- 6, 6- dimetil- 44( SV24( 2- metil- piridin- 3- karbonin- arninol- propiU-
morfolin- 3- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 4- metil- 9H- p- karbolin- 8- il)- amid
Rastvor terc-butil estra {(S)-2-[(S)-5-(6-Hloro-4-metil-9H-B-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetil-morfolin-4-il]-l-metil-etil}-karbamatne kiseline (2.688 g, 5.08 mmol) u EtOH (60 mL) se meša na sobnoj temperaturi. Doda se koncentrovana HCl (10 mL) i reakcija meša 14 sati na sobnoj temperaturi u atmosferi argona. Reakcija se koncentruje da se dobije žuta, čvrsta supstanca (2.84 g). Čvrsta supstanca se rastvori u anhidrovanom piridinu (40 mL) i meša na sobnoj temperaturi u atmosferi argona. Dodaju se trietilamin (2.20 mL, 15.7 mmol) i EDCI (1.39 g, 7.28 mmol). Reaktivna mešavina se 10 minuta meša na sobnoj temperaturi i doda se 2-metil-nikotinatna kiselina (0.868 g, 6.33 mmol). Reakcija se meša 14-18 sati na sobnoj temperaturi i razblaži sa H20 (40 mL). Mešavina se sipa u levak za odvajanje koji sadrži H20 (40 mL), slani rastvor (40 mL) i EtOAc (40 mL). Mešavina se mućka i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc (2 x 40 mL) i kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom. Organski sloj se suši, filtrira i koncentruje. Dobijeni ostatak se rastvori u EtOAc (10-20 mL) i u kapima dodaje u izmešani rastvor 4:1 heksan / Et20 (300 mL). Nastali precipitat se izdvoji filtriranjem i suši na vazduhu da se dobije (S)-6,6-dimetil-4-{(S)-2-[(2-metil-piridin-3-karbonil)-amino]-propil} -morfolin-3-karboksilna kiselina (6-hloro-4-metil-9H-P-karbolin-8-il)-amid u obliku žuto smeđe, čvrste supstance (3.151 g).
'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 11.28 (s, 1) 9.98 (s, 1)8.81 (s, 1) 8.45 - 8.39 (m, 1) 8.26 (d, 1) 8.13 (s, 1) 7.97 (s, 1) 7.89 (s, 1) 7.64 - 7.56 (m, 1) 7.24 - 7.12 (m, 1) 4.25 - 4.10 (m, 1)3.91-3.82 (m, 2) 3.20-3.10 (m, 1)2.94 (d, 1)2.71 (s, 3) 2.61 -2.49 (m, 1) 2.37 (s, 3) 2.06 - 2.02 (m, 2) 1.30 (s, 3) 1.16 (d, 3) 1.15 (s, 3). NH4OAc standardni uslovi. ELSD Rf = 1.57 minuta. M+H = 549.
MEĐUPROIZVOD 63: 3, 5- dilfuoro- 4- tributilstananil- piridin
n-Butil litijum (1.0 eq, 76 mmol, 47.6 mL, 1.6 M u heksanu) se doda preko levka za ukapavanje u rastvor diizopropilamina (1.05 eq, 80 mmol, 11.2 mL) u THF (300 mL) na -78 °C u atmosferi azota (N2). Rastvor se meša 30 min na -78 °C, a nakon toga se pomoću šprica u kapima doda 3,5-difluoropiridin (1.05 eq, 80 mmol, 9.2 g) u THF (20 mL). Uočeno je da se formira bež precipitat. Reakcija se meša 90 minuta na -78 °C, a nakon toga se pomoću šprica u kapima doda tributiltin hlorid (1.0 eq, 76 mmol, 20.7 mL)
i nastali rastvor ostavi 2 sata da se zagreje na sobnu temperaturu. Doda se voda (5 mL) a nakon toga se približno 250 mL THF ukloni rotacionom evaporacijom. Dobijeni materijal se razblaži sa dietil etrom (350 mL) i ispere po redu sa vodom (2x200 mL), zasićenim rastvorom natrijum hlorida (1x150 mL), suši preko magnezijum sulfata, filtrira ikoncentruje pod vakuumomda se dobije 3,5-difluoro-4-tributilstananil-piridin kao bezbojno ulje (27.5 g, 88%). Ovaj materijal se koristi sirov bez naknadnog prečišćavanja. Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 3.35 minuta. MS (M+H<+>): 406.
MEĐUPROIZVOD 64: 4- hloro- 2-( 3, 5- difluoro- piridin- 4- il)- fenilamin
Način spajanja: rastvor sirovog međuproizvoda 63 (1.1 eq, 70 mmol, 27.5 g) i 2-jodo-4-hloro-fenilamina (1.0 eq, 64 mmol, 16.2 g) u dimetil formamidu (256 ml) se degasira 14 minuta saN2. Dodaju se dihlorobis(trifenilfosfin)paladijum (II) (0.05 eq, 3.2 mmol, 2.2 g) i bakar (I) jodid (0.1 eq, 6.4 mmol, 1.2 g) i suspenzija zagreva 15 sati pod refluksom u atmosferi N2. Mešavina se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira kroz tanku celite® ploču, a dimetil formamid se ukloni rotacionim evaporatorom. Sirovi materijal se rastvori u acetonitrilu (300 mL) ispere sa heksanom (2x 200 mL), a zatim koncentrujepod vakuumom.Nakon toga se materijal rastvori u etil acetatu (400 mL) i po redu ispere sa vodom (2x200 mL), zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (1x200 mL), zasićenim rastvorom natrijum hlorida (200 mL), suši preko magnezijum sulfata, filtrira i koncentrujepod vakuumom.Nastala čvrsta supstanca se triturira sa dietil etrom (50 mL) da se ukloni tamna boja, nakon toga rastvori u minimalnoj zapremini etanola, filtrira da se uklone nerastvorljive nečistoće i koncentruje pod vakuumom da se dobije 4-hloro-2-(3,5-difluoro-piridin-4-il)-fenilamin u obliku žuto smeđe, čvrste supstance (12.3 g, -80%,) koja se u narednoj fazi koristi bez naknadnog prečišćavanja.<l>H-NMR (300 MHz, dmso-d6): 5 5.28 (s, 2H), 6.77 (d, IH), 7.08 (d, IH), 7.19 (dd, IH) i 8.58 (s, 2H). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.70 minuta. MS (M+H<+>): nije uočeno.
MEĐUPROIZVOD 65: 6- hloro- 4- fluoro- 9H- p- karbolin
Natrijum bis(trimetilsilil)amid (3.0 eq, 130 mmol, 130 mL, LOM u THF) se pomoću levka za ukapavanje na sobnoj temperaturi u atmosferi N2doda u rastvor sirovog
Međuproizvoda 64 (1.0 eq, 43 mmol, 10.4 g) u THF. Nakon 15 sati mešanja, višak baze se neutrališe pažljivim dodavanjem zasićenog rastvora amonijum hlorida (100 mL) i
najveći deo THF se ukloni na rotacionom evaporaturu. Dobijena žitka masa se ekstrahuje sa etil acetatom (400 mL then 2x200 mL), nakon toga se kombinovani organski slojevi po redu isperu sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (300 mL), zasićenim rastvorom natrijum hlorida (300 mL), suše preko natrijum sulfata i filtriraju. Doda se silika gel i žitka masa koncentruje na rotacionom evaporatoru. Materijal se prečisti koristeći Biotage Flash 75 sistem za prečišćavanje (kratka kolona) uz eluiranje sa 96:4 dihlorometan/metanol da se dobije 6-hloro-4-fluoro-9H-B-karbolin u obliku beličaste čvrste supstance (7.8 g, 82%). 'H-NMR (300 MHz, dmso-d6): 8 7.71-7.61 (m, 3H), 8.11 (d, IH) i 12.16 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.70 minuta. MS (M+H<+>): 221.
MEĐUPROIZVOD 66: 6- hloro- 4- lfuoro- 9H-/ 3- karbolin- 8- ilamin
Natrijum nitrat (1.5 eq, 53 mmol, 4.5 g) se u porcijama doda u rastvor Međuproizvoda 65 (1.0 eq, 35 mmol, 7.8 g) u trifluoroacetatnoj kiselini (200 mL) i dobijena mešavina se zagreva 3 sata na 70 °C. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, trifluoroacetatna kiselina se ukloni na rotacionom evaporatoru da se dobije sirova čvrsta supstanca koja se suspenduje u maloj zapremini metanola i u kapima doda u intenzivno izmešanu mešavinu zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (500 mL). Dobijena žitka masa se meša 15 minuta, a nakon toga se čvrsti precipitat izdvoji sukcionom filtracijom, ispere sa vodom (300 mL) i zatimsuši pod vakuumomda se dobije 6-hloro-4-fluoro-8-nitro-9H-p-karbolin (približno 9.5 g) koji se koristi u narednoj fazi bez naknadnog prečišćavanja. Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.79 minuta. MS (M+H<+>): 266
Platina sulfat (~0.1 eq, 1 g) se doda u suspenziju 6-hloro-4-fluoro-8-nitro-9H-P-karbolina (1.0 eq, 35 mmol, 9.3 g) i amonijum formata (3.0 eq, 105 mmol, 6.6 g) u etanolu (175 mL) i dobijena mešavina se zagreva 4 sata na 75 °C. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, mešavina se filtrira kroz tanku Celite® ploču koja je isprana sa obilnim količinama metanola, a nakon toga se filtrat koncentruje pod vakuumom da se dobije bež čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se suspenduje u minimalnoj zapremini metanola i u kapima doda u intenzivno izmešanu mešavinu zasićenog rastvora natrijum bikarbonata i zasićenog rastvora natrijum hlorida. Nakon 15 minuta mešanja, čvrsti precipitat se izdvoji sukcionom filtracijom, ispere sa vodom (200 mL) isuši pod vakuumomda se dobije da se dobije 6-hloro-4-fluoro-9HB-karbolin-8-ilamin (5,8 g 70% 2 faze) u obliku bež praha. 'H-NMR (300 MHz, dmso-d6): 5 5.76 (s, 2H), 6.81 (d, IH), 7.29 (d, IH), 8.24 (d, IH), 8.82 (d, IH), i 11.71 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.59 minuta. MS (M+H<+>): 236.
PRIMER 61: 4-( 2- acetilamino- propil)- 6, 6- dimetil- morfolin- 3- karboksilna kiselina( 6 -
hloro- 4- lfuoro- 9H- b- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje od Međuproizvoda 66 i acetat anhidrida. 'H-NMR(300 MHz, dmso-d6): 8 11.70 (s, IH), 10.17 (s, IH), 8.92 (s, IH), 8.34 (d, IH), 7.95 (s, 2H), 7.81 (d, IH), 4.05-3.95 (m, IH), 3.92-3.83 (m, 2H), 3.18-3.12 (m, IH), 2.87 (d, IH), 2.55-2.47 (m, IH), 2.40-2.31 (m, IH), 2.03 (d, IH), 1.78 (s, 3H), 1.32 (s, 3H), 1.63 (s, 3H) i 1.08 (d, 3H). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.73 minuta. MS (M+H<+>): 474.
PRIMER 62: 6, 6- dimetil- 4- { 2-[( 2- metil- piridin- 3- karbonil)- amino]- propil}- morfolin- 3-
karboksilna kiselina ( 6- hloro- 4- fluoro- 9H- B- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu sa Postupkom E od Međuproizvoda 66 i metilnikotinatne kiseline. 'H-NMR (300 MHz, dmso-d6): 8 11.63 (s, IH), 8 10.10 (s, IH), 8 8.90 (s, IH), 8 8.44 (d, IH), 5 8.34 (s, IH), 8 8.29 (d, IH), 7.94 (s, 2H), 7.65 (d, IH), 7.21 (dd, IH), 4.25-4.15 (m, IH), 3.97-3.88 (m, 2H), 3.24-3.15 (m, IH), 2.99 (d, IH), 2.59 (t, IH), 2.49 (s, 3H), 2.40 (dd, IH), 2.09 (d, IH), 1.35 (s, 3H), 1.21 (d, 3H) i 1.20 (s, 3H). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.67 minuta. MS (M+H+): 553.
Primer 63: f( S)- 5-( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- ilkarbamoil)- 2, 2- dimetil- morfolin- 4- il]-acetatna kiselina
U suspenziju (S)-6,6-dimetil-morfolin-3-karboksilna kiselina (6-hloro-9H-beta-karbolin-8-il)-amida (2.6 g, 6.0 mmola) u 60 ml metanola se dodaju 1.7 ml trietilamina (2.0 eq.), natrijum cijanoborohidrid (575 mg, 9.1 mmola) i glioksilatna kiselina (780 mg, 8.5 mmol). Reaktivna mešavina se meša 1.5 sati na sobnoj temperaturi. Doda se voda (5 ml) i mešavina se koncentruje do lepljive žute, žitke mase. Nakon toga se doda nova količina vode (30 ml) i nastala žitka masa se meša na sobnoj temperaturi 10 minuta i filtrira. Izdvojena žuta čvrsta supstanca se ispere sa vodom i suši pod visokim vakuumom da se dobije 1.80 g (71%) željenog produkta. 1 H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 1.17 (s,3H), 1.30 (s,3H), 2.81 (d,lH), 3.34 (d,lH), 3.46 (d,lH), 3.56 (dd,lH), 3.84-3.90 (m,2H), 7.92 (s,lH), 8.15 (d,lH), 8.21 (s,lH), 8.36 (d,lH), 9.01 (s,lH), 10.28 (s,lH),l 1.40 (s,lH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.26 minuta. MS (M+H<+>): 417.1.
POSTUPAK F:procedura spajanja za reverzne amide odf ( S )- 5 -( 6 - hloro - 9H - beta -
karbolin - 8 - ilkarbamoil )- 2 , 2 - dimetil - morfolin - 4 - il ]- acetatne kiseline
[(S)-5-(6-hloro-9H-beta-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetil-morfolin-4-il]-acetatna kiselina (1.0 mmol), EDCI (1.6 mmol) i amin (1.2 mmol) koji treba da se spoje se prenesu u bocu sa okruglim dnom i suspenduju u piridinu (5 ml). Dobijena mešavina se meša u toku noći. Nakon toga se piridin ukloni pod sniženim pritiskom, a ostatak se podeli između EtOAc i 5% vodenog rastvora Na2C03. Izdvojena vodena faza se dalje ekstrahuje sa EtOAc. Kombinovani ekstrakti se po redu isperu sa vodom i slanim rastvorom, suše preko Na2S04i potpuno koncentruju. Ostatak se prečisti na silika gelu da se dobije željeni produkt.
PRIMER 64: ( S)- 6, 6- dimetil- 4-( 2- okso- 2- piridin- l- il- etil)- morfolin- 3- karboksilna
kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu sa Postupkom F od [(S)-5-(6-Hloro-9H-beta-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetil-morfolin-4-il]-acetatne kiseline i pirolidina, uz prinos od 82%. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 1.21 (s,3H), 1.29 (s,3H), 1.75-1.92 (m,4H), 2.46 (d,lH), 2.77 (d,lH), 3.35-3.68 (m,7H), 3.94 (m,2H), 8.08 (s,lH), 8.19 (d,lH), 8.23 (s,lH), 8.41 (d,lH), 9.05 (s,lH), 10.71 (s,lH),l 1.51 (s,lH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.75 minuta. MS (M+H<+>): 470.3.
PRIMER 65: fS)- 6, 6- dimetil- 4-( 2- okso- 2- piperidin- l- il- etil) morfolin- 3- karboksilna
kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- il')- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu sa Postupkom F od [(S)-5-(6-Hloro-9H-beta-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetil-morfolin-4-il]-acetatne kiseline i piperidina, uz prinos od 90%. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 1.17 (s,3H), 1.29 (s,3H), 1.35-1.60 (m,6H), 2.25 (d,lH), 2.71 (d,lH), 3.15 (d,lH), 3.26 (dd,lH), 3.37 (dd,lH), 3.45-3.65 (m, 2H), 3.65 (d, IH), 3.70 (m, IH), 3.89 (m, 2H) 7.95 (d,lH), 8.15 (d,lH), 8.20 (d,lH), 8.37 (d,lH), 9.01 (s,lH), 10.43 (s,lH),l 1.32 (s,lH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.86 minuta. MS (M+H<+>): 484.3.
PRIMER 66: ( S)- 6, 6- dimetil- 4-( 2- morfolin- 4- il- 2- okso- etil)- morfolin- 3- karboksilna
kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- iD- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu sa Postupkom F od [(S)-5-(6-Hloro-9H-beta-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetil-morfolin-4-il]-acetatne kiseline i morfolina, uz
prinos od 86%. 'H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 1.17 (s,3H), 1.30 (s,3H), 2.19 (d,lH), 2.71 (d,lH), 3.03 (d,lH), 3.16 (d,lH), 3.22 (dd,lH), 3.45-3.72 (m,7H), 3.80-3.98 (m, 3H), 7.94 (d,lH), 8.15 (d,lH), 8.21 (d,lH), 8.37 (d,lH), 9.03 (s,lH), 10.35 (s,lH),11.28 (s,lH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.56 minuta. MS (M+H<+>): 486.3.
PRIMER 67: ( S)- 4-( r( 2- hidroksi- etil)- metil- karbamoill- metil)- 6, 6- dimetil- morfolin- 3-
karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu sa Postupkom F od [(S)-5-(6-Hloro-9H-beta-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetiI-morfolin-4-iI]-acetatne kiseline i 2-metilamino-etanola, uz prinos od 55%. 'HNMR (300 MHz, DMSO-d6); 81.21 (s, 3H), 1.30 (s, 3H), 2.39 (m,lH), 2.75 (bd,lH), 2.96 (s,1.5H), 3.17 (s,1.5H), 3.50-3.65 (m,2.5H), 3.70-3.85 (m,1.5H), 3.93 (m, 2H), 4.69 (m, 0.5H), 4.94(m, 0.5H), 8.05 (d,lH), 8.18-8.25 (m, 2H), 8.42 (d,lH), 9.06 (s,lH), 10.68 (s,lH),11.38 (s,lH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.47 minuta. MS (M+H<+>): 474.
PRIMER 68: ( S)- 6, 6- dimetil- 4-( piridin- 3- ilkarbamoilmetil)- morfolin- 3- karboksilna
kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu sa Postupkom F od [(S)-5-(6-Hloro-9H-beta-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetil-morfolin-4-il]-acetatne kiseline i 3-aminopiridina. Produk se izdvaja u obliku hidrohloridne soli uz prinos od 55%. 'HNMR (300 MHz, D20): 5 1.34 (s, 3H), 1.54 (s, 3H), 2.60 (d,lH), 3.4 (d, IH), 3.50 (d, IH), 3.70 (t, IH), 3.81 (d, IH) 4.23 (d, 2H), 7.69 (d, IH), 7.98 (d, IH), 8.01 (d, IH), 8.17(d, IH), 8.42 (d, IH), 8.48-8.55 (m, 3H), 9.09 (s,lH), 9.30 (d, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.56 minuta. MS (M+H<+>): 493.2.
PRIMER 69: ( S)- 6, 6- dimetil- 4-{|( piridin- 4- ilmetil)- karbamoill- metill- morfolin- 3-
karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu sa Postupkom F od [(S)-5-(6-Hloro-9H-beta-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetil-morfolin-4-il]-acetatne kiseline i 4-(aminometil)piridina. Produk se izdvaja u obliku hidrohloridne soli uz prinos od 53%.
'HNMR(300 MHz, D20): 8 1.34 (s, 3H), 1.49 (s, 3H), 2.64 (d, IH), 3.03 (d, IH), 3.48 (d, IH), 3.72 (t, IH), 3.74 (d, IH), 4.15-4.25 (m, 2H), 7.66 (d, IH), 7.88 (s, IH), 7.91 (s, IH), 8.21(d, IH), 8.44 (d,lH), 8.53 (d, IH), 8.56 (s, IH), 8.58 (s, IH), 9.08 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.47 minuta. MS (M+H<+>): 507.3.
PRIMER 70: 4- r2-( 4- hidroksimetil- piperidin- l- in- 2- okso- etin- 6, 6- dimetil- morfolin- 3-
karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- il)- amid
[5-(6-Hloro-9H-beta-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetil-morfolin-4-il]-acetatna kiselina (200 mg, 0.48 mmol) i piperidin-4-il-metanol (111 mg, 0.96 mmol) se rastvore u piridinu (4 mL). Dobijeni žuti rastvor se meša 10 minuta na sobnoj temperaturi, a nakon toga se odjedanput doda EDC (184 mg, 0.96 mmol). Reaktivna mešavina se ostavi da se meša u toku noći (16 sati). Doda se voda (4 mL) i mešavina se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se podeli između etil acetata (50 mL) i 1 M vodenog rastvora kalijum karbonata. Vodeni sloj se ponovo ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 50 mL) i kombinovani ekstrakti se isperu sa vodom i slanim rastvorom, suše preko natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju. Sirovii ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu (metilen hlorid i metanol gradijent) da se dobije čist 4-[2-(4-hidroksimetil-piperidin-1 -il)-2-okso-etil]-6,6-dimetil-morfolin-3-karboksilna kiselina
(6-hloro-9H-beta-karbolin-8-il)-amid u obliku žute pene (152 mg, 62%). Bis-HCl so se izrađuje dodavanjem 2 ekvivalenta conc. HCl u etanolni rastvor slobodne baze. Koncentrisanjem, a zatim trituracijom iz etra, dobija se so u obliku slobodno protočnog žutog praha. 1 H-NMR (slobodna baza, 300 MHz, CDC13) 8: 11.03 (d, 1 H), 10.51 (d, 1
H), 8.97 - 8.80 (m, 1 H), 8.47 - 8.27 (m, 2 H), 7.94 - 7.76 (m, 2 H), 4.84 (d, 1 H), 4.16 - 3.77 (m, 3 H), 3.68 - 3.26 (m, 5 H), 3.08 (ddd, 1 H), 2.89 - 2.64 (m, 2 H), 2.50 - 2.37(m, 2H), 1.98- 1.70 (m, 3 H), 1.38 (s, 3 H), 1.25 (s, 3 H), 1.19-0.97 (m, 1). MS (NH4OAc standardni uslovi, ES+) e/z = 514 (M+H)<+>DAD Rf=1.51 min
PRIMER 71: 4- r2-( 4- hidroksi- piperdin- l- il)- 2- okso- etill- 6, 6- dimetil- morfolin- 3-
karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se sintetiše od [5-(6-hloro-9//-beta-karbolin-8-ilkarbamoil)-2, 2-dimetil-morfolin-4-il]-acetatne kiseline i 4-hidroksipiperazina, po Postupku F u
prinosu od 31%. 1 H-NMR (300MHz, D20): 5 8.85 (lH,s), 8.19 (2H, s), 7.82 (IH, s), 7.44 (IH, s), 4.15 (2H, m), 3.9-3.75 (4H, m), 3.6 (2H, m), 3.56 (2H, m), 3.12 (IH, m), 2.9 (3H, m), 2.8 (IH, m), 1.7 (2H, m) 1.34 (3H, s), 1.19 (3H, s). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.5 min
MS (M+H+): 501
PRIMER 72: 4- dietilkarbamoilmetil- 6, 6- dimetil- morfolin- 3- karboksilna kiselina ( 6- hloro-9H- beta- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje od [5-(6-hloro-9//-beta-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetil-morfolin-4-il]-acetatne kiseline i dietilamina, po Postupku F u prinosu od 60%. 'H-NMR (300MHz, D20): 5 8.87 (IH, s), 8.26 (2H, m), 7.8 (IH, s), 7.52 (IH, s), 4.1 (3H, m), 3.8 (2H, m), 3.22 (2H, m), 3.0 (IH, d), 2.7 (IH, d), 1.3 ( 3H, s), 1.19 (3H, s), 0.09 (6H, m). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom) : 1.96 minuta. MS (M+H+): 472
PRIMER 73: 6, 6- dimetil- 4- r- 2-( 4- metil- piperazin- 1 - il)- 2- okso- etil1- morfolin- 3-
karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje od [5-(6-Hloro-9//-beta-karbolin-8-ilkarbamoil)-2, 2-dimetil-morfolin-4-il]-acetatne kiseline i 1-metil piperazina, po Postupku F uz prinos od 12%.
'H-NMR (DMSO) 5 11.28 (IH, s), 10.35 (IH, s), 9.01 (lH,s), 8.37 (IH, s), 8.21-8.15 (2H, m), 7.9 (IH, s), 3.89 (2H, m), 3.7 (5H, m), 3.1 (2H, m), 2.85 (2H, m), 2.49 (3H, s), 2.4 (3H, m), 1.2 (3H, s), 1.16 (3H, s). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.34 minuta. MS (M+H+): 500
PRIMER 74: 4-[ 2-( 2. 6- dimetil- morfolin- 4- in- 2- okso- etill- 6, 6- dimetil- morfolin- 3-
karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- B- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje od [5-(6-Hloro-9//-beta-karbolin-8-ilkarbamoil)-2, 2-dimetil-morfolin-4-il]-acetatne kiseline i 2,6-dimetil morfolina, po Postupku F. Prečišćavanjem hromatografijom se dobija željeni produkt u prinosu od 70-80%.<*>H-NMR(300 MHz, CDC13): 8 9.31 (s, IH), 8.75 (d, IH), 8.55 (d, IH), 8.37 (d, IH), 8.14 (m, IH), 4.73 (m, 2H), 4.96 (m, IH), 4.37 (m, 2H), 3.69 (m, 2H), 3.57 (m, 4H), 2.82 (t, IH), 2.47 (t, IH), 1.50 (d, 3H), 1.42 (d, 3H), 1.18 (m, 6H). Vreme retencije (LC, postupak sa formijatnom kiselinom kao standardom): 1.14 min (Diode Array). MS (M+H+):514, (M-H+):512
PRIMER 75: metil estar l-| 2- r5-( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- ilkarbamoil')- 2, 2- dimetilmorfolin- 4- ill - acetil} - piperidin- 4- karboksilne kiseline
[5-(6-hloro-9H-beta-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetil-morfolin-4-il]-acetatna kiselina (200 mg, 0.48 mmol) i metil izonipekotat (137 mg, 130 uL, 0.96 mmol) se rastvore u piridinu (4 mL) i 10 minuta mešaju na sobnoj temperaturi. Doda se EDC i reaktivna mešavina uz mešanje ostavi na sobnoj temperaturi u toku noći (16 sati). Doda se nova količina metil izonipekotata (137 uL, 0.96 mmol) i mešavina se meša naredna 24 sata. Doda se voda (4 mL) i mešavina se koncentruje. Sirovi ostatak se podeli između etil acetata (75 mL) i 1 M vodenog rastvora kalijum karbonata (50 mL). Vodena faza se ponovo ekstrahuje sa dodatnom količinom etil acetata (75 + 50 mL). Kombinovani ekstrakti se isperu sa vodom i slanim rastvorom, suše preko natrijum sulfata, filtriraju, koncentruju i prečiste hromatografijom na silika gelu (metilen hlorid/metanol gradijent) da se dobije slobodna baza u obliku žute pene (150 mg, 57%>). Bis-HCl so se izrađuje
dodavanjem 2 ekvivalenta conc. HCl u etanolni rastvor slobodne baze. Koncentrovanjem, a nakon toga trituriranjem iz etra, dobija se so u obliku protočnog žutog praha. 1 H-NMR (slobodna baza, 300 MHz, CDC13) 8 11.04 (d, 1 H), 10.48 (d, 1 H), 8.95 (s, 1 H), 8.48 - 8.31 (m, 2 H), 7.96 - 7.79 (m, 2 H), 4.48 (dd, 1 H), 4.13 - 3.92 (m, 2 H), 3.88-2.97 (m, 9 H), 2.84 - 2.35 (m, 3 H), 2.09 - 1.90 (m, 2 H), 1.85 - 1.52 (m, 2 H), 1.38 (s, 3 H), 1.23 (s, 3 H). MS (NH4OAc standardni uslovi, ES+) e/z = 542 (M+H)<+.>DAD Rf = 1.72 minuta.
PRIMER 76: (■ S^- 4- r2-( 3, 3- dimetil- morfolin- 4- il)- 2- okso- etin- 6, 6- dimetil- morfolin- 3-
karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9//- beta- karbolin- 8- il)- amid- 6fc- hidrohloridna so
2,2-Dimetilmorfolin (3.0 g, 26.1 mmol) (izrađen u skladu sa postupkom koji su dali Cottle, D.L., i saradnici,J. Org. Chem. 1946, 11, 286-291)se rastvori u dihlorometanu (60 mL). Doda se trietilamin (3.6 mL, 2.66 g, 26.1 mmol) i reakcija se ohladi na -10°C. U kapima se doda bromoacetil hlorid (2.2 mL, 4.08 g, 26.1 mmol) i rastvor se polako zagreje na sobnu temperaturu. Reakcija se koncentruje do sušenja pod vakuumom, ponovo rastvori u etil acetatu i propusti kroz ploču silika gela. Eluant se koncentruje do žutog ulja koje su čuva do sledeće faze (3.45 g, 56%). Vreme retencije (LC, postupak: standard amonijum acetata): 1.20 minuta. MS (M+H<+>): 237. Međuproizvod 59 (60 mg, 0.14 mmol) se suspenduje u dihlorometanu (3 mL). Doda se IM rastvor kalijum karbonata (0.5 mL). Organski sloj se izdvoji, suši preko MgS04i koncentruje do sušenja. Slobodna baza se rastvori u DMF (1 mL) i meša na sobnoj temperaturi. 2-Bromo-l-(3,3-dimetil-morfolin-4-il)-etanon (30 mg, 0.13 mmol) se rastvori u DMF (1 mL) i doda u kapima. Reakcija se meša for 3 sati na sobnoj temperaturii pod vakuumomkoncentruje do sušenja. Gasnom hromatografijom na koloni (93:7 dihlorometammetanol) se dobija žuto ulje koje se rastvori u 4N rastvoru HCl/dioksan (2 mL).Koncentracijom pod vakuumomse dobija naslovljeno jedinjenje u obliku žute, čvrste supstance (22 mg, 29%). 'HNMR (300 MHz, MeOH-d4): 8 1.35 (s, 3H), 1.41 (s, 3H), 1.43 (s, 6H), 2.98 (m, IH), 3.45 (m, 4H), 3.56 (m, IH), 3.76 (m, 3H), 4.30 (m, 4H), 8.04 (s, IH), 8.39 (s, IH), 8.52 (d, IH), 8.73 (d, IH), 9.24 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 1.16 minuta. MS (M+H<+>): 514
PRIMER 77: 4- f(/ ra», y- 4- hidroksi- cikloheks^
karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- il)- amid
[5-(6-Hloro-9H-beta-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetil-morfolin-4-il]-acetatna kiselina (200 mg, 0.48 mmol), fra«s-4-aminocikloheksanol hidrohlorid (145 mg, 0.96 mmol) i diizopropiletilamin (124 mg, 167 uL, 0.96 mmol) se rastvore u piridinu (4 mL) i mešajulO minuta na sobnoj temperaturi. Doda se EDC (184 mg) i reakcija se meša u toku noći na sobnoj temperaturi (16 sati). Doda se voda (2 mL) i dobijena mešavina se koncentruje pod sniženim pritiskom. Nastali ostatak se razblaži sa 50 ml IM vodenog rastvora kalijum karbonata i ekstrahuje sa etil acetatom (75 + 2 x 50 mL). Kombinovani ekstrakti se isperu sa vodom i slanim rastvorom, suše preko natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju. Sirovi ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu (metanol / metilen hlorid gradijent) da se dobije čist 4-[(^ran5-4-hidroksi-cikloheksilkarbamoil)-metil]-6,6-dimetil-morfolin-3-karboksilna kiselina (6-hloro-9H-beta-karbolin-8-il)-amid (148 mg, 59%) u obliku žute pene. Bis-HCl so se izrađuje dodavanjem 2 ekvivalenta conc. HCl u etanolni rastvor slobodne baze. Koncentrovanjem, a nakon toga trituriranjem iz etra, dobija se so u obliku protočnog žutog praha. 'H-NMR (slobodna baza, 300 MHz, CDCI3) 5 11.71 (br s, 1 H), 10.21 (s, 1 H), 9.06 (s, 1 H), 8.45 - 8.27 (m, 2 H), 8.08 - 7.84 (m, 2 H), 6.36 (brs, 1 H), 4.13-3.81 (m, 3 H), 3.72 - 3.56 (m, IH), 3.51 - 3.37 (m, 2 H), 3.03 (d, 1 H), 2.79 - 2.26 (m, 5 H), 2.16 - 1.94 (m, 4 H), 1.54 - 1.30 (m, 5 H), 1.22 (s, 3 H). MS (NH4OAc standardni uslovi, ES+) e/z = 514 (M+H)<+>. DAD Rf = 1.39 minuta.
PRIMER 78: (^- 4-[ 2-(( 2^. 5/ ?)- 2, 5- dimetil- piridin- l- in- 2- okso- etill- 6, 6- dimetil- morfolin-3- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9//- beta- karbolin- 8- il)- amid- 6w- hidrohlorid so
(2R,5R)-2,5-Dimetil-pirolidin hidrohlorid (270 mg, 2.0 mmol) (izrađuje se po proceduri koju su dali Masamune, S., i saradnici,J. Org. Chem.1989,54,1756) se rastvori u dihlorometan (3 mL) i ohladi na 0°C. Doda se trietilamin (405 mg, 0.56 mL, 4.0 mmol). Hloroacetil hlorid (226 mg, 0.16 mL, 2.0 mmol) se rastvori u dihlorometan (1 mL) i doda u kapima. Mešavina se zagreje na sobnu temperaturu i meša narednih 30 minuta. Reakcija se razblaži sa dihlorometanom (5 mL), ekstrahuje sa IN rastvorom HCl i slanim rastvorom, a nakon toga suši preko MgSO^. Organski sloj se koncentruje do smeđeg ulja. Mt: 242 mg (82%>). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom
kao standardom): 1.24 minuta. MS (M+H<+>): 176.5. Materijal se čuva do sledeće faze bez naknadnog prečišćavanja.
Međuproizvod 59 (495 mg, 1.15 mmol) se rastvori u mešavini acetonitrila (8 mL) i vode (2 mL). Doda se kalijum karbonat (477 mg, 3.45 mmol) i reakcija se zagreje na 40 °C. 2-Hloro-l-((2R,5R)-2,5-dimetil-piridin-l-il)-etanon (242 mg, 1.38 mmol)
(izrađen kako je prethodno opisano) se rastvori u acetonitril (1 mL) i doda u kapima. Reakcija se zagreje na 80°C i meša u toku noći. Reakcija se ohladi na 40 °C. Natrijum jodid (207 mg, 1.38 mmol) se rastvori u acetonu (1 mL) i odjedanput doda. Reakcija se meša u toku noći na 40 °C. Reakcija se koncentrujepod vakuumomi razblaži sa etil acetatom (40 mL). Organski sloj se dva puta ekstrahuje sa vodom, slanim rastvorom a zatim suši preko MgS04. Organski sloj se filtrira ikoncentruje pod vakuumomdo oranž pene. Gasnom hromatografijom na koloni (95:5 dihlorometan.metanol) se dobija žuta čvrsta supstanca koji se rastvori u 4N rastvoru HCl/dioksan (1 mL) i koncentruje do sušenja. Trituracijom sa etrom se dobija naslovljeno jedinjenje u obliku žute, čvrste supstance (18 mg, 3%). 'H-NMR (300 MHz, MeOH-d4): 5 1.23 (dd, 6H), 1.38 (s, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.65 (m, 2H), 2.23 (m, 2H), 3.18 (m, IH), 3.50 (m, IH), 3.66 (m, IH), 4.18 (m, 2H), 4.35 (m, 4H), 8.15 (s, IH), 8.42 (s, IH), 8.55 (d, IH), 8.78 (d, IH), 9.29 (s, IH). Vreme retencije (LC, postupak sa amonijum acetatom kao standardom): 2.02 minuta. MS (M+H<+>): 498.
PRIMER 79: 4-( 2- f4-( 1 - hidroksi- 1 - metil- etilVpiperidin- 1 - ill- 2- okso- etil|- 6, 6- dimetilmorfolin- 3- karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- B- karbolin- 8- il)- amid.
Rastvor metil estra l-{2-[5-(6-hloro-9H-p-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetilmorfolin-4-il]-acetil}-piperidin-4-karboksilne kiseline (62 mg, 0.11 mmol) u mešavini anhidrovanog etra i toluena (1 ml: lml) se meša na 0° C u atmosferi N2. U ovaj rastvor se pažljivo dodaje rastvor metilmagnezijum bromida (3.0 M u etru, 306uL, 0.917mmol). Reaktivna mešavina se meša na sobnoj temperaturi u toku noći, a nakon toga neutrališe dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata. Dobijena mešavina se dalje razblaži sa vodom (10 ml) i etil acetatom (30 ml). Vodeni sloj se ukloni i ekstrahuje sa etil acetatom (30x2 ml). Organski slojevi se kombinuju, isperu sa slanim rastvorom, suše preko magnezijum sulfata, filtriraju i koncentruju da se dobije žuta čvrsta supstanca (85 mg). Ostatak se prečisti sa HPLC, da se dobije čist produkt (13 mg, 20%). 1 H-NMR
(300 MHz, HCDCI3): 8 10.94 (d, 1 H), 10.47 (d, 1 H), 8.94 (s, 1 H), 8.41 (d, 1 H), 8.32 (d, 1 H), 7.89 - 7.81 (m, 2H), 4.91 (d, 1 H), 4.04 - 3.91 (m, 2 H); 3.64 - 3.57 (m, 1 H), 3.43 (s, 1 H), 3.37-3.31 (m, 1 H), 3.15-2.90 (m, 1 H), 2.77-2.58 (m, 2 H), 2.47-2.41 (m, 1 H), 2.00 - 1.86 (m, 2 H), 1.53 - 1.03 (m, 17 H). NH4OAc standardni uslovi. DAD Rf = 1.85 minuta. M+H = 542.
PRIMER 80: 4- f2-( 3, 3- dimetil- 4- okso- piperidin- 1 - ilV2- okso- etill- 6, 6- dimetil- morfolin- 3-
karboksilna kiselina ( 6- hloro- 9H- beta- karbolin- 8- il)- amid
Terc-butil estar 4-okso-piperidin-l-karboksilne kiseline (5 g, 25 mmol) se rastvori u tetrahidrofuranu (100 mL) i dobijeni rastvor se ohladi na 0 °C. U ohlađeni rastvor se odjedanput doda natrijum hidrid (60% u mineralnom ulju, 2.10 g, 53 mmol) i dobijena zamućena mešavina se meša 10 minuta. Nakon toga se doda metil jodid i mešavina se ostavi nekoliko sati da se zagreje na sobnu temperaturu. Mešanje se nastavi u toku noći (12 sati). Svetio oranž mešavina se koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se podeli između etra i vode. Vodena faza se ponovo ekstrahuje sa dodatnom količinom etra. Kombinovani ekstrakti se isperu sa vodom i slanim rastvorom, suše preko natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju do bledo žute čvrste supstance. Čvrsta supstanca se triturira sa 4%> etil acetata u heksanu (50 mL) da se dobije terc-butil estar 3,3-dimetil-4-okso-piperidin-l-karboksilne kiseline u obliku čvrste supstance krem boje (1.8 g, 32%>).
'H-NMR (CDCI3, 300 MHz) 5 3.73 (t, 2 H), 3.43 (br s, 2 H), 2.49 (t, 2 H), 1.49 (s, 9 H), 1.13 (s,6H).
Ovako izrađen terc-butil estar 3,3-dimetil-4-okso-piperidin-l-karboksilne kiseline (450 mg, 1.97 mmol) se rastvori u metilen hloridu (10 mL). Doda se trifluoroacetatna kiselina (305 uL) i dobijeni rastvor meša 2 sata na sobnoj temperaturi. Doda se nova količina trifluoroacetatne kiseline (300 uL) i reakcija meša 3 dana na sobnoj temperaturi. Bledo žuti rastvor se koncentruje do konzistencije uljanog ostatka koji se triturira sa etrom. Čvrsta supstanca se izdvoji filtriranjem i suši pod vakuumom. Izdvoji se 3,3-dimetil-piperidin-4-on i koristi u obliku svoje soli trifluoroacetatne kiseline (381 mg, 80%). 'H-NMR (rf6-DMSO, 300 MHz) 8 3.44 - 3.33 (m, 4 H), 2.63 - 2.57 (m, 2 H), 1.11 (s,6H).
[5-(6-Hloro-9H-beta-karbolin-8-ilkarbamoil)-2,2-dimetil-morfolin-4-il]-acetatna kiselina (100 mg, 0.24 mmol), do 3,3-dimetil-piperidin-4-on trifluoroacetatne
kiseline (116 mg, 0.48 mmol) i diizopropiletilamin (62 mg, 85 uL) se rastvore u piridinu (3 mL) i mešaju 10 minuta. Doda se EDC (92 mg, 0.48 mmol) i mešavina se meša 4 dana na sobnoj temperaturi. Doda se voda (3 mL) i neutralisana reakcija se koncentruje. Ostatak se podeli između etil acetata (50 mL) i 1 M vodenog rastvora natrijum karbonata (50 mL). Vodena faza se ekstrahuje sa dodatnom količinom etil acetata (50 mL) i ekstrakti se kombinuju. Nakon toga se ekstrakti isperu sa vodom i slanim rastvorom, suše preko natrijum sulfata, filtriraju, suše i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu (hloroform, etil acetat, metanol gradijent) da se dobije 4-[2-(3,3-dimetil-4-okso-piperidin-l-il)-2-okso-etil]-6,6-dimetilmorfolin-3-karboksilna kiselina (6-hloroa-9H-beta-karbolin-8-il)-amid u obliku žute pene (91 mg, 73%). Bis-HCl so se izrađuje dodavanjem 2 ekvivalenta conc. HCl u etanolni rastvor slobodne baze. Koncentrovanjem, a nakon toga trituriranjem u etru, dobija se so u obliku protočnog žutog praha. 'H-NMR (CDC13, 300 MHz) 8 10.67 (s, 1 H), 10.37 (d, 1 H), 8.93 (s, 1 H), 8.41 (d, 1 H), 8.15 (dd, 1 H), 7.82 (d, 1 H), 7.71 (d, 1 H), 4.07 - 3.92 (m, 3 H), 3.83 - 3.89 (m, 6 H), 2.79 - 2.68 (m, 1 H), 2.62 - 2.40 (m, 3 H), 1.41 - 1.36 (m, 3 H), 1.27 - 1.22 (m, 3 H), 1.18 - 1.13 (m, 3 H), 1.07 - 0.99 (m, 3 H). MS (NH4OAc standardni uslovi, ES+) e/z = 526 (M+H)<+>. DAD Rf = 1.79 minuta.
PRIMER 81: 6, 6- dimetil- 4-( 2- okso- 2- piridin- l- il- etil)- morfolin- 3- karboksilna kiselina ( 6-
hloro- 4- metil- 9H- B- karbolin- 8- il)- amid
Željeno jedinjenje se izrađuje u skladu sa Postupcima C, E i F od 6-hloro-4-metil-9H-P-karbolin-8-ilamina (Međuproizvod 54) i pirolidina. 'H-NMR (300 MHz, MeOD-d4)8 9.17(s, 1) 8.39 (s, 1)8.26 (d, 1) 8.17 (d, 1)4.74-4.52 (m, 3) 4.47-4.30 (m, 1) 3.80 - 3.52 (m, 3) 3.48 - 3.34 (m, 4) 3.01 (s, 3) 1.76 - 1.55 (m, 4) 1.50 (s, 3) 1.43 (s, 3). NH4OAc standardni uslovi ELSD Rf = 2.01 minuta. M+H = 498.
Jasno je da jedinjenja koja su prethodno data kao primeri i specificirana u Tabelama 3 i 4 mogu da se izrade u skladu sa postupcima koji su prethodno opisani.
Eksperimentalne vrednosti za određene primere su niže date u Tabeli 5.
Biološko ispitivanje
Jedinjenja iz ovog pronalaska su efikasni inhibitori IkB kinaze (IKK), i stoga su korisna za lečenje stanja koja su izazvana ili otežana delovanjem ove kinaze. Inhibitorno delovanje jedinjenja formule I na IkB kinazuin vitroiin vivomože da se odredi različitim procedurama koje su poznate u tehnici. Potentni afiniteti za IkB kinazu koju pokazuju jedinjenja iz pronalaska mogu da se mere kao IC50vrednost (u nM), što predstavlja koncentraciju (u nM) jedinjenja koja je potrebna da bi se obezbedilo 50% inhibicije IkB kinaze.
U daljem tekstu su dati primeri ispitivanja koja mogu da budu korisna za procenu i izbor jedinjenja koja moduliraju IKK.
Ispitivanje kojim se meri inhibicija enzima IkB kinaza
In vitroispitivanje za detekciju i merenje inhibitorne aktivnosti na kompleks IkB kinaze ispitivanih farmakoloških sredstava može da uključi polipeptid koji obuhvata i Ser i Ser IkB (SvvissProt pristup broj P25963, Swiss Institute of Bioinformatics, Geneva, Switzerland) i sredstvo za detekciju fosforilisanog produkta, na primer, specifičnog antitela koje se vezuje samo za fosforilisani oblik polipeptida, koje je ili monoklonalno ili poliklonalno (na primer, komercijalno raspoloživa anti-fosfo-serin32IkB antitela). U primeru detekcije fosforilisanog produkta sa anti-fosfoserin IkB antitelom, kada se jednomformira antitelo-fosfo-polipeptid kompleks, on može da se detektuje različitim analitičkim postupcima (na primer, radioaktivnošću, luminescencijom, fluorescencijom ili optičkom apsorpcijom). Za korišćenje DELFIA (Dissociation Enhancement Lanthanide Fluorescence Immunoassav) postupka (vremenski-određena fluorometrija, Perkin Elmer Life and Analvtical Sciences Inc., Boston, MA), kompleks može da se imobilizuje ili na ploču vezujućeg biotina (na primer, ploča prevučena neutravidinom) i detektuje sa sekundarnim antitelom koje je u konjugaciji sa europijumom, ili na ploči vezujućeg antitela (na primer, ploča prevučena proteinom-A) i detektuje sa proteinom vezujućeg biotina koji je u njnjugaciji sa europijumom (na primer, streptavidin-europijum). Nivo aktivnosti može da bude u korelaciji sa standardnom krivom za koju se koriste sintetički fosfopeptidi koji odgovaraju supstratu polipeptida. U daljem tekstu su mnogo detaljnije opisani načini za pripremu materijala za izvođenje ovih analiza.
Izdvajanje kompleksa IkB kinaze
Kompleks IkB-(x kinaze se izrađuje prvo razblaživanjem 10 ml HeLa S3 ekstrakta ćelija SI00 frakcije (Lee i saradnici (1997.) Cell 88:213-222) sa 40 ml 50 mM HEPES pH 7.5. Nakon toga se doda 40% rastvor amonijum sulfata i inkubira 30 minuta na ledu. Nastale precipitirane pelete se ponovo rastvore u 5 ml SEC pufera (50 mM HEPES pH 7.5, 1 mM DTT, 0.5 mM EDTA, 10 mM 2-glicerofosfata), izbistre centrifugiranjem 15 minuta na 20,000 x g i filtriranjem kroz filter promera 0.22 (im. Uzorak se prenese u FPLC kolonu za filtriranje sa 320 ml SUPEROSE-6 gela (Amersham Biosciences AB, Uppsala, Sweden) koja je uravnotežena sa SEC puferom uz brzinu protoka od 2 ml/min na 4 °C. Frakcije koje obuhvataju marker molekulske težine 670-kDa se izmešaju za aktivaciju. Mešavina koja sadrži kinazu se nakon toga aktivira inkubacijom sa 100 nM MEKK1A (Lee i saradnici (1997.) Cell 88:213-222), 250 uM MgATP, 10 mM MgC12, 5 mM DTT, 10 mM 2-glicerofosfatom, 2.5 pM microcistin-LR, na 37 °C u trajanju od 45 minuta. Aktivirani enzim se čuva na -80 °C do dalje upotrebe.
Merenje aktivnosti fosfo- transferaze IkB kinaze
U svakom otvoru ploče sa 96 otvora jedinjenja različitih koncentracija u 5 pL 20% DMSO se prethodno inkubiraju 30 minuta na 25 °C sa 40 pL aktiviranog enzima razblaženog u odnosu 1:25 sa puferom za ispitivanje (50 mM Hepes pH 7.5, 5 mM DTT, 10 mM MgCb, 10 mM 2-glicerofosfat, 2 uM Microcistin-LR, 0.1 % Albumin seruma govečeta). 5 pL supstrata peptida (biotin-(CH2)6-DRHDSGLD(fosfoS)MKD-CONH2) na 200 uM + 500 pM ATP se doda u svaki otvor i inkubira 1 sat, a nakon toga se neutrališe sa 50 pL 50 mM Hepes pH 7.5, 0.1% BSA, 100 mM EDTA. 5 pL neutralisane reakcije kinaze se prenese u Protein A ploču (Pierce Biotechnologv, Inc., Rockford, IL, USA) koja sadrži 90 pL anti-fosfo IkB S32/S36 antitelo (Cell Signaling Technologies Beverlv, MA, USA) u koncentraciji od 2 pg/ml. Uzorci se inkubiraju 2 sata uz mućkanje. Nakon 3 ispiranja sa PBS + 0.05% Tween20, 90 pL streptavidina vezanog za helat europijuma (Perkin Elmer Life and Analvtical Sciences, Boston, MA, USA) u koncentraciji od 0.1 pg/ml se doda u svaki otvor i inkubira 1 sat uz mućkanje. Nakon 3 ispiranja sa PBS + 0.05% Tween20, u svaki otvor se doda po 100 pL DELFIA obogaćenog rastvora (Perkin Elmer Life and Analvtical Sciences, Boston, MA, USA). Signal europijuma se čita uz ekstincitaciju od 330 nM i emisiju od 615 nM na Wallac Victor čitaču ploča (Perkin Elmer Life and Analvtical Sciences, Boston, MA). Kako je prethodno ispitivanje pokazalo da postoji linearan odnos koncentracije enzima u odnosu na vreme za ispitivana razblaženja enzima, vrednosti signala europijuma se koriste za određivanje inhibitornog delovanja ispitivanog farmakološkog sredstva.
Jedinjenja iz pronalaska su aktivni inhibitori IKK kompleksa. Biće jasno da jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da pokažu različite stupnjeve aktivnosti inhibitora IkB kinaze. Nakon procedura ispitivanja kao što su ovde opisana ispitivanja in vitro i ispitivanja na bazi ćelija, prosečne IC50vrednosti inhibicije IkB kinaze za inventivna jedinjenja su generalno ispod približno 10 mikromola, preferirano ispod približno 1.0 mikromola, a najpoželjnije ispod približno 100 nanomola. Inventivna jedinjenja su takođe selektivna u inhibiranju IKK-2 za razliku od IKK-1.
Celularna ispitivanja
Multiple mieloma ( MM) ćelijske linije i izolovanje MM ćelija koje potiču od pacijenata
RPMI 8226 i U266 humane MM ćelije su dobijene od American Type Culture Collection (Manassas, VA). Sve MM ćelijske linije su uzgajane u RPMI-1640 koji sadrži 10%) seruma fetusa govečeta (FBS, Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO), 2 mM L-glutamina, 100 U/mL penicilina (Pen) i 100 pg/mL streptomicina (Strep) (GIBCO marka produkata ćelijske kulture nabavljene od Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA). MM ćelije dobijene od pacijenata se aspiracijom prečiste od koštane srži (BM) pacijenta pomoću ROSETTESEP (kit za obogaćivanje B ćelije) separacionog sistema (StemCell Technologies, Vancouver, Canada). Čistoća MM ćelija se potvrđuje protočnom citometrijom pomoću PE-konjugovanog anti-CD138 antitela (BD Biosciences, Bedford,
MA).
Kulture stroma ćelija koštane srži
Uzorci koštane srži (BM) su dobijeni od pacijenata sa MM. Za utvrđivanje dugotrajnih BM kultura koriste se mononuklearne ćelije (MNCs) koje su razdvojene pomoću Ficoll-Hipaque sedimentacije na bazi gustine, kako je prethodno opisano (Uchivama/ saradnici, Blood1993, 82:3712-3720). Ćelije se sakupe u Hankovom puferovanom slanom rastvoru (HBSS) koji sadrži 0.25% tripsina i 0.02%) EDTA, isperu i izdvoje centrifugiranjem.
Proliferacija ćelije merenjem brzine sinteza DNA
Proliferacija se meri na prethodno opisani način (Hideshima i saradnici, Blood 96:2943 (2000)). MM ćelije (3 x 104 ćelija/otvor) se inkubiraju u pločama za kulture sa 96-otvora (Corning Life Sciences, Corning, NY) u toku 48 sati na 37°C u prisustvu medijuma ili nekog IKK inhibitora iz ovog pronalaska. DNA sinteza se meri pomoću [3H]-timidina ([3H]-TdR, New England Nuclear division of Perkin Elmer Life and Analvtical Sciences, Boston, MA) inkorporiranjem u ćelije koje se dele. Ćelije se mere sa [ H]TdR (0.5 pCi/otvor) u toku poslednjih 8 sati od 48 sati razvijanja kulture. Svi eksperimenti se izvode u triplikatu.
Ispitivanje životne sposobnosti MTT ćelije
Inhibitorni efekat jedinjenja iz pronalaska na rast MM se određuje merenjem redukcije žutog tetrazolijum MTT (3-(4, 5-dimetiltiazolil-2)-2, 5-difeniltetrazolijum bromid) pomoću metabolički aktivnih ćelija (J. Immunol. Metods 174: 311-320, 1994). Ćelije iz 48 sati starih kultura se mere sa 10 pL 5 mg/mL MTT za svaki otvor poslednja 4 sata za kulture koje se razvijaju 48 h, a zatim pomoću 100 pL izopropanola koji sadrži 0.04N rastvor HCl. Apsorpcija se meri na 570 nm pomoću spektrofotometra (Molecular Devices Corp., Sunnvvale CA).
NF- kB aktivacija ispitivanjem elektroforetičke pokretljivosti
Analize elektroforetičke pokretljivosti (EMSA) se izvode na način koji je prethodno opisan (Hideshimai saradnici, Oncogene2001, 20:4519). Ukratko, MM ćelije se prethodno inkubiraju sa IKK inhibitorom iz ovog pronalaska (10 pM u toku 90 minuta), a nakon toga stimulišu 10 Do 20 minuta sa TNF-a (5 ng/mL). Nakon toga se ćelije peletiraju, resuspenduju u 400 pL hipotoničnog lizirajućeg pufera (20 mM HEPES, pH 7.9, 10 mM KC1, 1 mM EDTA, 0.2% Triton X-100, 1 mM Na3V04, 5 mM NaF, 1 mM PMSF,
5 pg/mL leupeptin, 5 pg/mL aprotinin) i čuvaju 20 minuta na ledu. Nakon centrifugiranja (5 minuta na 14000g) na 4°C, nuklearna peleta se na ledu 20 minuta ekstrahuje sa 100 pL hipertoničnog lizirajućeg pufera (20 mM HEPES, pH 7.9, 400 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM Na3V04, 5 mM NaF, 1 mM PMSF, 5 pg/mL leupeptin, 5 pg/mL aprotinin). Nakon centrifugiranja (5 min na 14000g) na 4°C, supernatant se izdvoji kao nuklearni ekstrakt. Dvostruko lančana NF-kB usaglašena oligonukleotidna proba (5'-GGGGACTTTCCC-3', Santa Cruz Biotechnologv Inc., Santa Cruz CA) se na kraju obeleži sa [(<32>P]ATP (50 pCi na 222 TBq/mM; New England Nuclear division of Perkin Elmer Life and Analvtical Sciences, Boston, MA). Reakcije vezivanja koje sadrže 1 ng oligonukleotida i 5 pg nuklearnog proteina se izvode na sobnoj temperaturi u toku 20 minuta u ukupnoj zapremini od 10 pL vezujućeg pufera (10 mM Tris-HCl, pH 7.5, 50 mM NaCl, 1 mM MgCl2, 0.5 mM EDTA, 0.5 mM DTT, 4% glicerol (v/v), i 0.5 pg poli (dl-dC) (Amersham Biosciences AB, Uppsala, Sweden). Za analizu superpomeranja, 1 pg anti-p65 NF-kB Ab se doda 5 minuta pre mešanja reakcije, odmah nakon dodavanja radioobeležen probe. Uzorci se nanesu na 4% poliakrilamidni gel, prenesu na Whatman papir (Whatman International, Maidstone, U.K.) i vizualizuju autoradiografijom.
Ispitivanje ćelijske proliferacije difuzne velike B- ćelije limfoma ( DLBCL)
DLBCL ćelijske linije kao ABC (LY3 i Lyl0) i kao GCB (Ly7 i Lyl9)
(Alizadeh i saradnici (2000.) Nature 403:503-511; Daviš i saradnici (2001.) J. Exp. Med. 194:1861-1874) se održavaju u medijumu za rast (GM, Iscove's DMEM+10%FBS) propuštanjem ćelija dva puta nedeljno. Ćelije se izgladnjuju u toku noći u Iscove-ovom DMEM medijumu + 0.5% FBS u toku noći pre ispitivanja proliferacije. Na dan ispitivanja, ćelije se izbroje i viabilnost se proveri bojenje sa Trypan plavim. Za Ly3 i Lyl0 ćelije, 5000 ćelija se stavi u GM po otvoru u ploču sa 96-otvora. Ly7 i Lyl9 ćelija se stave u količini od 10,000 ćelija po otvoru. IKK inhibitori se prvo rastvore u DMSO, a nakon toga razblaže u GM da se postigne finalna koncentracija od 80 pM - 0.01 pM. Svaka koncentracija se stavlja u triplikatu. Viabilnost ćelije se određuje pomoću WST-1 standarda za ispitivanje viabilnosti ćelija (Roche Applied Science, Indianapolis, IN).
Ispitivanje oslobađanja citokina monocita humane periferne krvi ( PBMC)
Humani PBMC se prečisti od normalno uzete celokupne krvi metodom Ficoll gradijenta. Nakon ispiranja sa PBS, PBMC se re-suspenduje u AIM-V medijumu. Serijski razblaženi IKK inhibitori iz ovog pronalaska u 100% DMSO se dodaju po 1 pl na dno ploče sa 96-otvora i mešaju sa 180 pl 4.5 X 10<5>PBMC u AIM-V medijumu po otvoru. Nakon preinkubacije PBMC sa inhibitorom na 37°C u toku 40 minuta, ćelije se stimulišu sa 20 pl ili LPS (100 ng/ml) ili sa anti-CD3 (0.25 pg/ml) i anti-CD28 (0.25pg/ml)
(Pharmingen division of BD Biosciences, Bedford, MA) na 37°C u toku 5 sati. Supernatanti se sakupe i ispituju na IL-lp ili TNF-a oslobađanje pomoću standarda komercijalno raspoloživih ELISA kitova.
Ispitivanje oslobađanja humanih hondrocita matriksa metaloproteaze ( MMPs)
Ćelijska linija humanog hondrocita SW1353 (ATCC, Manassas, VA) se zaseje na podlozi koja sadrži 10% serum fetusa govečeta (Hvclone, Logan, UT), 2 mM L-glutamin (GIBCO marka ćelijske kulture, produkt raspoloživ od Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA) i \% Pen/Strep (GIBCO). Ćelije se zaseju u Poly-D-lizin ploču sa 96 otvora (BD BIOCOAT, Black/Clear bottom, BD Biosciences, Bedford, MA). Serijski razblaženi IKK inhibitori se u količini od 1 pl dodaju u svaki otvor ploče sa 96-otvora i izmešaju sa 180 pl 4.5 X 10<5>hondrocita po otvoru. Nakon prethodne inkubacije ćelija sa jedinjenjima u toku 1 sat na 37°C, ćelije se stimulišu sa 20 pl IL-ip (10 ng/mL, R&D Systems Inc.) na 37°C u toku 24 sati. Nakon toga se supernatanti sakupe i ispituju na produkciju matriks metaloproteinaze pomoću komercijalno raspoloživih ELISA kitova
Ispitivanje humanog fibroblasta kao sinoviocita ( HFLS)
HFLS izdvojeni iz RA sinovijalnih tkiva dobijenih operacijom zamene zgloba su obezbeđeni od Cell Applications Inc. (San Diego, CA). IKK inhibitori iz pronalaska se ispituju na sposobnost da blokiraju TNF- ili IL-ip-indukovano oslobađanje IL-6 ili IL-8 iz ovih ćelija, upotrebom komercijalno raspoloživih ELISA kitova. Uslovi uzgajanja ćelija i postupci ispitivanja su opisali Aupperle i saradnici,Journal ofImmunology,163:427-433 (1999.).
Ispitivanje izdvojene mast ćelije iz krvi humanog vlakna
Krv humanog vlakna je dobijena od Cambrex (Walkersville, MD). Mast ćelije su diferencirane i odgajane na način sličan onome koji su opisali Hsieh i saradnici,J. Exp. Med.,193:123-133 (2001.). IKK inhibitori iz pronalaska se ispituju na sposobnost da blokiraju IgE- ili LPS-indukovano oslobađanje TNFa upotrebom komercijalno raspoloživih ELISA kitova
Ispitivanje diferencijacije i funkcije osteoklasta
Prekursorsi humanih osteoklasta su dobijeni kao kriozaštićeni oblici od firme Cambrex (Walkersville, MD). Ćelije su diferencirane u kulturi po instrukcijama proizvođača. IKK inhibitori iz pronalaska se ispituju na sposobnost da blokiraju diferencijaciju, resorpciju kostiju i degradaciju kolagena, kako je prethodno opisano (videti Khapli, S. M.,Journal of Immunol,171:142-151 (2003.); Karsdal, M. A.,JBiol Chem,278:44975-44987 (2003.); i Takami, M.,Journal of Immunol,169:1516-1523 (2002.)).
Modeli pacova za reumatoidni artritis
Nađeno je da određena jedinjenja iz ovog pronalaska deluju kod jednog ili više modela reumatoidnog artritisa kod pacova. Ovakvi testovi su poznati u literaturi i obuhvataju standardni LPS model pacova kako su opisali Conway i saradnici, u "Inhibition of Tumor Necrosis Factor-a (TNF-a) Produktion and Arthritis in the Rat by GW3333, a Dual Inhibitor of TNF—Converting Enzyme i Matrix Metalloproteinases",J. Pharmacol. Exp. Ther.298(3), 900-908 (2001.); model dodatnog indukovanog artritisa kod pacova, kako je opisano u Pharmacological Metods in the Control of Inflammation (1989) p 363-380 "Rat Adjuvant Arthritis: A Model of Chronic Inflammation" Barry M. Weichman autor poglavlja knjige {Alan R. Liss Ine Publisher}; i model artritisa indukovanog kolagenom kod pacova, kako je opisano u Pharmacological Metods in the Control of Inflammation (1989.) strane 395-413 "Type II Collagen Induced Arthritis in the Rat" DE Trentham i RA Dynesuis-Trentham autora poglavlja knjige {Alan R. Liss Ine Publisher}. Videti takođe, "Animal Models of Arthritis: Relevance to Human Disease"
(1999.) autora A. Bendele, J. McComb, T. Gould, T. McAbee, G. Sennello, E. Chlipala i M. Guy. Toxicologic Pathology Vol 27 (1) 134-142.
Na osnovu rezultata jednog ili više modela pacova, kao što su oni prethodno opisani, nađeno je da su jedinjenja formule II-C neočekivano superiorna u poređenju sa drugim jedinjenjima gde je Prsten A piridin prsten. Takođe na modelima pacova, nađeno je da su jedinjenja formule III-A-a, posebno jedinjenja formule III-A-aa, neočekivano superiorna u poređenju sa drugim jedinjenjima gde je Prsten A morfolin prsten.
Mada smo opisali veliki broj aspekata ovog pronalaska, razumljivo je da naši bazni primeri mogu da se izmene kako bi se obezbedili drugi aspekti koji koriste jedinjenja i postupke iz ovog pronalaska. Zbog toga će biti razumljivo daje okvir ovog pronalaska definisan priloženim patentnim zahtevima pre nego specifičnim aspektima koji su predstavljeni u obliku primera.

Claims (27)

1. Jedinjenje formule III-A-aa: ,( ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, Q je -CH2- ili -CH(R<9>)- grupa; Gje -NR<4>R<5>grupa ili 3-10 člani monociklični ili biciklični heterociklični prsten koji je opciono supstituisan sa 1-4 R<10>grupa; R<1>je vodonik, halo, C].2alkil, amino ili (Ci.2alkil)i_2amino grupa; R<2>je vodonik, halo, Cmalifatična, C1-2 alkoksi ili Ci_2 haloalkil grupa; R3 je vodonik, halo, C].2 alifatična, Ci_2 alkoksi ili Ci_2haloalkil grupa; R4 je vodonik ili opciono supstituisana Ci-6 alifatična grupa; R<5>je: a) opciono supstituisana grupa izabrana od aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili b) Ci-6alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa: halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom, ili aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupom koja je opciono dalje supstituisan sa C].6alifatičnom, -CF3, halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2<g>rupom; svaka R6b je nezavisno izabrana od vodonika ili C1.6alifatične grupe; svaka R<7>je nezavisno izabrana od vodonika ili opciono supstituisane Cm alifatične grupe, ili su dve R<7>grupe na istom atomu azota uzete zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaka R<7a>grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili opciono supstituisane grupe izabrane od C1-4alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil, ili su dve R<7a>grupe na istom atomu azota uzete zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaka R Q grupa je nezavisno opciono supstituisana Ci.4alifatična grupa; svaka R<8a>grupa je nezavisno opciono supstituisana grupa izabrana od Ci-4alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe; R9 je C1-3 alifatična grupa; svaka R<10>grupa je nezavisno izabrana od =0, R<11>, T-R11 ili V-T-R<11>grupe, ili dve prisutne R<10>grupe, uzete zajedno sa atomom(atomima) za koje su vezane, formiraju opciono supstituisani monociklični ili biciklični 3-8-člani aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil prsten; svaka R11 grupa je nezavisno izabrana od -CF3, halo, -0R<7a>, -CN, -SR<8a>, -S(0)2R<8a>, -C(0)R<7a>, -C02R<7a>, -N(R<7a>)2, -C(0)N(R<7a>)2, -N(R<7>)C(0)R<7a>, -N(R<7>)C02R<7a>, -S02N(R<7a>)2, -N(R<7>)S02R<7a>, -N(R<7>)C(0)N(R<7a>)2ili opciono supstituisane grupe izabrane od Ci-6alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe; T je ravan ili račvast C1.4alkilen lanac; i V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(0)-, -S(0)2-, -C(0)-, ili -C02- grupa.
2. Jedinjenje formule III-A-aa: ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, Q je -CH2- ili -CH(R<9>)- grupa; Gje -NR<4>R<5>grupa ili 3-7 člani heterociklil prsten koji je opciono supstituisan sa 1-4 R<10>grupom; R<1>je vodonik, halo, C1-2 alkil, amino ili (C1.2alkil) 1.2 amino grupa; R<2>je vodonik, halo, Ci_2 alifatična, Ci-2 alkoksi ili C1-2haloalkil grupa; R3 je vodonik, halo, Ci.2alifatična, Ci.2 alkoksi ili Ci-2haloalkil grupa; R4 je vodonik ili Cj.6alifatična grupa;; R<5>je C 1.6 alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom; svaka R grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili Ci-6alifatične grupe; svaka R<7>grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili C)? alifatične grupe, ili su dve R grupe na istom atomu azota uzete zajedno sa azotom da formiraju 5-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; R<8>je Cm alifatična grupa; R<9>je C1.3alifatična grupa; svaka R<10>grupa je nezavisno izabrana od =0, R11, T-R11 ili V-T-R11 grupe; svaka R11 grupa je nezavisno izabrana od C 1.6 alifatične, -CF3, halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -CO2R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<7>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupe; T je ravan ili račvast Cm alkilen lanac; i V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(0)-, -S(0)2-, -C(0)- ili -C02- grupa.
3. Jedinjenje formule III-A-aa: ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, Q je -CH2- ili -CH(R<9>)- grupa; Gje -NR<4>R<5>grupa ili 3-7 člani heterociklil prsten koji je opciono supstituisan sa 1-2 R10 grupe; R<1>je vodonik, halo, C 1.2 alkil, amino ili (C1.2alkil) 1.2 amino grupa; R<2>je vodonik, halo, Ci.2 alifatična, Ci.2 alkoksi ili C1-2 haloalkil grupa; R<3>je vodonik, halo, Ci.2alifatična, Ci.2alkoksi ili Ci.2haloalkil grupa; R4 je vodonik ili Cj.6 alifatična grupa; R c je Ci_6 alifatična grupa koja je opciono supstituisan sa halo, -OR 7 , -CN, -SR JI, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom; svaka R<6b>grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili C1.6alifatične grupe; svaka R<7>grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili CMalifatične grupe, ili su dve R<7>grupe na istom atomu azota uzete zajedno sa azotom da formiraju 5-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaka R grupa j e nezavisno C1.4 alifatična grupa; R9 je C1.3alifatična grupa; svaka R<10>grupa je nezavisno izabrana od R<11>, T-R11 ili V-T-R<11>grupe; svaka R<11>grupa je nezavisno izabrana od C\.(, alifatične, halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<7>ili -N(R7)C(0)N(R7)2 grupe; Tje ravan ili račvast Ci.4alkilen lanac; i V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(O)-, -S(0)2-, -C(O)- ili -C02- grupa.
4. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, 2, ili 3, naznačeno time što je sa G predstavljen heterociklil prsten heterociklil prsten koji sadrži azot.
5. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, 2, ili 3, naznačeno time što je sa G predstavljen heterociklil prsten heterociklil prsten koji sadrži azot i vezanje preko N.
6. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 naznačeno time što: Qje-CH2- grupa; Gje -NR<4>R<5>grupa ili 3-10 člani monocikličan ili bicikličan heterociklil prsten koji je opciono supstituisan sa 1-4 R10grupe; R<1>je vodonik, halo, Ci-2alkil, amino ili (Ci.2alkil)i_2amino grupa; R je vodonik, halo, Cm alifatična, Ci_2 alkoksi ili Cj.2 haloalkil grupa; R3 je vodonik, halo, Ci-2 alifatična, Ci.2 alkoksi ili Ci_2 haloalkil grupa; R4 je vodonik ili Cj.6 alifatična grupa; R<5>je: a) opciono supstituisana grupa izabrana od aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili b) Ci.6alifatične grupa koja je opciono supstituisana sa: halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom, ili aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupa koja je opciono dalje supstituisana saCi-ćalifatičnom, -CF3, halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom; svaka R<6b>grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili C1.3alifatične grupe; svaka R<7>grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili opciono supstituisane Cm alifatične grupe, ili su dve R grupe na istom atomu azota uzeta zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaka R<7a>grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili opciono supstituisane grupe izabrane od C 1.4 alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili su dve R<7a>grupe na istom atomu azota uzeta zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaka R<8>grupa je nezavisno opciono supstituisana Cm alifatična grupa; svaka R<8a>grupa je nezavisno opciono supstituisana grupa izabrana od C1.4alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe; svaka R<10>grupa je nezavisno izabrana od =0, R11, T-R1' ili V-T-R<11>grupe, ili dve prisutne R10 grupe, uzete zajedno sa atomom(atomima) za koje su vezane, formiraju opciono supstituisani monociklični ili biciklični 3-8-člani aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil prsten; svaka R<11>grupa je nezavisno izabrana od -CF3, halo, -OR<7a>, -CN, -SR<8a>, -S(0)2R<8a>, -C(0)R<7a>, -C02R<7a>, -N(R<7a>)2, -C(0)N(R<7a>)2, -N(R<7>)C(0)R<7a>, -N(R<7>)C02<R7a,><->S02N(R<7a>)2, -N(R<7>)S02R<7a>, -N(R<7>)C(0)N(R<7a>)2grupe ili opciono supstituisana grupa izabrana od Ci.6alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe; T je ravan ili račvast Ci-4alkilen lanac; i V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(0)-, -S(0)2-, -C(0)- ili -C02- grupa.
7. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 3 naznačeno time što: Qje-CH2- grupa; Gje -NR<4>R<5>grupa ili 5-6 člani heterociklil prsten koji je opciono supstituisan sa 1-2 R10 grupe; R<1>je vodonik, halo, Ci.2 alkil, amino ili (Ci-2alkil)i_2 amino grupa; R je vodonik, halo, Ci.2 alifatična, Ci.2 alkoksi ili C1-2 haloalkil grupa; R3 je vodonik, halo, C 1.2 alifatična, C1-2 alkoksi ili Q.2 haloalkil grupa; R<4>je vodonik ili Ci.6 alifatična grupa; R5 je Ci_6 alifatične grupa koja je opciono supstituisana sa halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom; svaka R<6b>grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili Ci_3alifatične grupe; svaka R grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili Cm alifatične grupe, ili su dve R<7>grupe na istom atomu azota uzete zajedno sa azotom da formiraju 5-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; R<8>je Cm alifatična grupa; svakaR10grupa je nezavisno izabrana od R<11>, T-R11 ili V-T-R<11>grupe; svaka R i. grupa je nezavisno izabrana od Cj-6 alifatične, halo, -OR 7 , -CN, -SR 8, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<7>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupe; T je ravan ili račvast Ci_4alkilen lanac; i V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(O)-, -S(0)2-, -C(O)- ili -C02- grupa.
8. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 6, naznačeno time što: Qje-CH2- grupa; Gje -NR<4>R<5>grupa ili 5-6 člani heterociklil prsten koji je opciono supstituisan sa 1-4 R10 grupe: R<1>je vodonik, halo ili metil, amino ili (Ci_2alkil)i_2amino grupa; R<2>je vodonik, halo, Ci ^alifatična ili Ci.2 haloalkil grupa; R<3>je vodonik, halo ili C].2alkoksi grupa; R4 je vodonik ili Ci.6alifatična grupa; R<5>je: a) opciono supstituisana grupa izabrana od aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili b) Ci.6alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa: halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R7, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom; ili aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupa koja je opciono dalje supstituisana sa Ci-ćalifatičnom, -CF3, halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom; R6b je vodonik ili metil grupa; svaka R 7 grupa j•e nezavisno izabrana od vodonika ili opciono supstituisane Cm alifatične grupe, ili su dve R<7>grupe na istom atomu azota uzete zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaka R<7a>grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili opciono supstituisane grupe izabrane od Cm alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili su dve R<7a>grupe na istom atomu azota uzete zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaka R8 grupa je nezavisno opciono supstituisana C 1.4 alifatična grupa; svaka R<8a>grupa je nezavisno opciono supstituisana grupa izabrana od C 1.4 alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe; svaka R10 grupa je nezavisno izabrana od =0, R11, T-R11 ili V-T-R11 grupe, ili dve prisutne R<10>grupe, uzete zajedno sa atomom(atomima) za koje su vezane, formiraju opciono supstituisani monociklični ili biciklični 3-8-člani aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil prsten; svaka R11 grupa je nezavisno izabrana od -CF3, halo, -0R<7a>, -CN, -SR<8a>, -S(0)2R<8a>, -C(0)R<7a>, -C02R<7a>, -N(R<7a>)2, -C(0)N(R<7a>)2, -N(R<7>)C(0)R<7a>, -N(R<7>)C02R<7a>, -S02N(R<7a>)2, -N(R<7>)S02R<7a>, -N(R<7>)C(0)N(R<7a>)2grupe ili opciono supstituisane grupe izabrane od Ci.ćalifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe; T je ravan ili račvast Ci.4alkilen lanac; i V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(0)-, -S(0)2-, -C(0)-, ili -C02- grupa.
9. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 7, naznačeno time što: Qje-CH2- grupa; Gje -NR<4>R<5>grupa ili 5-6 člani heterociklil prsten, koja ima 1-2 heteroatoma u prstenu izabrana od kiseonika ili azota, a koji je opciono supstituisan sa 1-2 R10grupe; R<1>je vodonik, halo ili metil, amino ili (Ci.2alkil)].2amino grupa; R<2>je vodonik, halo, Ci_2 alifatična ili Ci.2 haloalkil grupa; R<3>je vodonik, halo ili C].2alifatična grupa; R4 je vodonik ili Ci.6 alifatična grupa; R je Ci_6 alifatične grupa koja je opciono supstituisana sa halo, -OR , -CN, -SR , -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom; R<6b>je vodonik ili metil grupa; svaka R<7>grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili Cm alifatične grupe, ili su dve R<7>grupe na istom atomu azota uzete zajedno sa azotom da formiraju 5-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; R o je Ci_4 alifatična grupa; svaka R<10>grupa je nezavisno izabrana od R1T-R11 ili V-T-R11grupe; svaka R<11>grupa je nezavisno izabrana od Ci_6 alifatične, halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<7>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupe; T je ravan ili račvast Ci^alkilen lanac; i V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(O)-, -S(0)2-, -C(O)- ili -C02- grupa.
10. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 8, naznačeno time što je jedinjenje( S)-III-A-aa.
11. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 9, naznačeno time što je jedinjenje (5)-III-A-aa.
12. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 10, naznačeno time što: Gje -NR<4>R<5>grupa ili 5-6 člani monocikličan ili bicikličan heterociklil prsten koji je opciono supstituisan sa 1-4 R<10>grupe; R<1>je vodonik, halo ili metil grupa; R<2>je vodonik, halo, C14 alifatična, Ci-2 alkoksi ili Ci_2haloalkil grupa; R3 je vodonik; R<4>je vodonik ili Ci-6alifatična grupa; R<5>je: a) opciono supstituisana grupa izabrana od aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili b) Ci-6alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa: halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>, -S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R<7>, -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom ili aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupa koja je opciono dalje supstituisana sa Ci-6alifatičnom, -CF3, halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R8,-S02N(R<7>)2, -NR<7>S02R7,-N(R<7>)C(0)N(R<7>)2<g>rupom; R6b je vodonik ili metil grupa; svaka R<7>grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili opciono supstituisane Cm alifatične grupe, ili su dve R<7>grupe na istom atomu azota uzete zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaka R<7a>grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili opciono supstituisane grupa izabrane od Ci.4 alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe, ili su dve R<7a>grupe na istom atomu azota uzete zajedno sa azotom da formiraju opciono supstituisani 3-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; svaka R o grupa je nezavisno opciono supstituisana Cm alifatična grupa; svaka R<8a>grupa je nezavisno opciono supstituisana grupa izabrana od Cm alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe; svakaR10grupa je nezavisno izabrana od =0, R<11>, T-R11 ili V-T-R<11>grupe, ili dve prisutne R<10>grupe, uzete zajedno sa atomom(atomima) za koje su vezane, formiraju opciono supstituisani monociklični ili biciklični 3-8-člani aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil prsten; svaka R<11>grupa je nezavisno izabrana od -CF3, halo, -0R<7a>, -CN, -SR<8a>, -S(0)2R<8a>, -C(0)R<7a>, -C02R<7a>, -N(R<7a>)2, -C(0)N(R<7a>)2, -N(R<7>)C(0)R<7a>, -N(R<7>)C02<R7a,><-S>02N(R<7a>)2, -N(R<7>)S02R<7a>, -N(R<7>)C(0)N(R<7a>)2grupe ili opciono supstituisane grupe izabrane od Ci-6alifatične, aril, heteroaril, heterociklil ili karbociklil grupe; T je ravan ili račvast Ci^alkilen lanac; i V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(0)-, -S(0)2-, -C(0)- ili -C02- grupa.
13. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 11, naznačeno time što: Gje -NR<4>R<5>grupa ili 5-6 člani heterociklil prsten koji je opciono supstituisan sa 1-2 R10 grupe; R<1>je vodonik, halo ili metil grupa; R<2>je vodonik, halo, Ci-2alifatična, Ci-2alkoksi ili C1.2haloalkil grupa; R je vodonik; R<4>je vodonik ili Ci-6 alifatična grupa; R<5>je Ci-6 alifatična grupa koja je opciono supstituisana sa halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<8>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupom; R6b je vodonik ili metil grupa; svaka R<7>grupa je nezavisno izabrana od vodonika ili C1-4alifatične grupe, ili su dve R<7>grupe na istom atomu azota uzete zajedno sa azotom da formiraju 5-6 člani heteroaril ili heterociklil prsten; R8 je C1.4 alifatična grupa; svakaR10grupa je nezavisno izabrana od R<11>, T-R11 ili V-T-R<11>grupe; svaka R<11>grupa je nezavisno izabrana od Cj-6 alifatične, halo, -OR<7>, -CN, -SR<8>, -S(0)2R<8>, -C(0)R<7>, -C02R<7>, -N(R<7>)2, -C(0)N(R<7>)2, -N(R<7>)C(0)R<7>, -N(R<7>)C02R<7>ili -N(R<7>)C(0)N(R<7>)2grupe; T je ravan ili račvast C].4alkilen lanac; i V je -O-, -N(R<7>)-, -S-, -S(O)-, -S(0)2-, -C(O)- ili -C02- grupa.
14. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 13, naznačeno time što je G izabran od opciono supstituisane piperidinil, piperazinil, morfolinil, pirolidinil ili -NR<4>R<5>grupe; R4 je vodonik ili Ci-6alifatična grupa; i R<5>je Ci-6alifatična grupa, 5-6 člani heterociklil prsten ili C i-6 hidroksialkil grupa.
15. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 14, naznačeno time što je opciono supstituisana piperidinil, piperazinil, morfolinil ili pirolidinil grupa opciono supstituisana N-piperidinil, N-piperazinil, N-morfolinil ili N-pirolidinil grupa.
16. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 14, naznačeno time što: Gje nesupstituisan ili supstituisan sa 1-2 grupe nezavisno izabrane iz grupe koja sadrži: C 1.3 alkil, HO-alkil, alkoksikarbonil, mono- ili dialkilaminokarbonil i H02C-alkil grupu; i R6b je metil grupa.
17. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, izabrana od: 0^0VNH" 0^_T H80 81???kJ??N I??N-??'?0?O I ?082 83 /s.
O-^NH H /~—i <VNH o k^o o k^o84 85I T O^NH X o k^o86 87
19. Farmaceutska kompozicija koja uključuje jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevima 1, 2 ili 3 i farmaceutski prihvatljiv nosač.
20. Postupak za lečenje inflamatorne bolesti ili bolesti povezane sa imunitetom kod pacijenata, uključujući primenu na navedenom pacijentu terapeutski efektivne količine jedinjenja u skladu sa patentnim zahtevom 1,2 ili 3.
21. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 20, naznačen time što je bolesti reumatoidni artritis, astma, psorijaza, psorijatični artritis, hronična opstruktivna bolest pluća, inflamatorno oboljenje creva ili multiple skleroza.
22. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 19, naznačen time što je bolest reumatoidni artritis, multiple skleroza, astma ili hronična opstruktivna bolest pluća.
23. Postupak lečenja kancera kod pacijenata naznačen time što uključuje primenu na određenom pacijentu terapeutski efektivne količine jedinjenja u skladu sa patentnim zahtevom 1,2 ili 3.
24. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 23, naznačen time što je kancer limfoma, multiple mijeloma, osteolitička metastaza kostiju, kancer glave ili vrata, kancer pluća, kancer prostate ili kancer pankreasa.
25. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 22, naznačen time što je kancer limfoma.
26. Postupak inhibicije IKK kod pacijenata, naznačen time što uključuje primenu na određenom pacijentu jedinjenja u skladu sa patentnim zahtevom 1, 2 ili 3.
27. Postupak inhibicije IKK u biološkom uzorku, naznačen time što uključuju kontakt navedenog uzorka sa jedinjenjem u skladu sa patentnim zahtevom 1, 2 ili 3.
RSP-2006/0584A 2004-04-09 2005-04-08 Beta-karbolini koji su korisni za lečenje inflamatorne bolesti RS20060584A (sr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US56089204P 2004-04-09 2004-04-09
PCT/US2005/013812 WO2005111037A1 (en) 2004-04-09 2005-04-08 Beta-carbolines useful for treating inflammatory disease

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS20060584A true RS20060584A (sr) 2008-08-07

Family

ID=35045213

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RSP-2006/0584A RS20060584A (sr) 2004-04-09 2005-04-08 Beta-karbolini koji su korisni za lečenje inflamatorne bolesti

Country Status (23)

Country Link
US (1) US7951801B2 (sr)
EP (2) EP1735311B1 (sr)
JP (1) JP2007532582A (sr)
KR (1) KR20070014166A (sr)
CN (1) CN1976931A (sr)
AT (1) ATE462702T1 (sr)
AU (1) AU2005243188A1 (sr)
BR (1) BRPI0509660A (sr)
CA (1) CA2561859A1 (sr)
CR (1) CR8696A (sr)
DE (1) DE602005020263D1 (sr)
EA (1) EA010546B1 (sr)
EC (1) ECSP066986A (sr)
IL (1) IL178435A0 (sr)
MA (1) MA28567B1 (sr)
MX (1) MXPA06011545A (sr)
NO (1) NO20064894L (sr)
RS (1) RS20060584A (sr)
TN (1) TNSN06321A1 (sr)
TW (1) TW200539880A (sr)
UA (1) UA88638C2 (sr)
WO (1) WO2005111037A1 (sr)
ZA (1) ZA200608956B (sr)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW200630337A (en) * 2004-10-14 2006-09-01 Euro Celtique Sa Piperidinyl compounds and the use thereof
WO2007110449A1 (en) * 2006-03-29 2007-10-04 Euro-Celtique S.A. Benzenesulfonamide compounds and their use
WO2007118854A1 (en) * 2006-04-13 2007-10-25 Euro-Celtique S.A. Benzenesulfonamide compounds and the use thereof
US8791264B2 (en) * 2006-04-13 2014-07-29 Purdue Pharma L.P. Benzenesulfonamide compounds and their use as blockers of calcium channels
AR063275A1 (es) * 2006-10-12 2009-01-14 Epix Delaware Inc Compuestos de carboxamida, una composicion farmaceutica que los comprende y su uso en la preparacion de un medicamento para el tratamiento de enfermedades mediadas por la activacion de ccr2.
WO2008124118A1 (en) 2007-04-09 2008-10-16 Purdue Pharma L.P. Benzenesulfonyl compounds and the use therof
WO2009040659A2 (en) * 2007-09-28 2009-04-02 Purdue Pharma L.P. Benzenesulfonamide compounds and the use thereof
US20090137579A1 (en) * 2007-10-23 2009-05-28 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Mesylate salt of an IKK inhibitor
US20090131422A1 (en) * 2007-10-23 2009-05-21 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Salts of an IKK inhibitor
BRPI0820701A2 (pt) 2007-12-11 2015-06-16 Cytopathfinder Inc Composto de carboxamida e seu uso como agonistas do receptor de quimiocina
ES2693247T3 (es) 2010-07-06 2018-12-10 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Derivado de tetrahidrocarbolina
WO2012127885A1 (ja) 2011-03-18 2012-09-27 小野薬品工業株式会社 テトラヒドロカルボリン誘導体
CN102416014B (zh) * 2011-09-13 2012-11-21 河南中医学院 一种生物碱类成分组合物在制备抗甲型h1n1流感病毒药物中的应用
WO2017067670A1 (en) 2015-10-23 2017-04-27 Pharmathen S.A. A novel process for the preparation of tryptamines and derivatives thereof
AU2017225912B2 (en) 2016-03-03 2022-02-17 Bill Elliot Cham Glycoalkaloid combinations and various uses thereof
US11117893B2 (en) * 2018-09-24 2021-09-14 Union University Methods for preparation of substituted pyridines and related novel compounds
WO2022223022A1 (zh) * 2021-04-23 2022-10-27 四川海思科制药有限公司 一种并环杂环衍生物及其在医药上的应用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2242402T3 (es) 1998-08-12 2005-11-01 Pfizer Products Inc. Inhibidores de tace.
DE19951360A1 (de) 1999-10-26 2001-05-03 Aventis Pharma Gmbh Substituierte Indole
HK1054039B (zh) * 2000-03-15 2010-04-16 萨诺费－阿文蒂斯德国有限公司 取代的β-咔啉
EP1268477B1 (en) * 2000-03-15 2010-04-21 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Substituted beta-carbolines with ikb-kinase inhibiting activity
ATE363473T1 (de) 2001-09-19 2007-06-15 Pharmacia Corp Substituierte pyrazoloverbindungen zur behandlung von entzündungen
US9248124B2 (en) 2001-11-07 2016-02-02 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Use of inhibitors of IκB kinase for the treatment of cancer
BRPI0409263A (pt) 2003-04-09 2006-03-28 Millennium Pharm Inc composto; composição farmacêutica; método para tratar uma doença mediada por ikk e método para inibir ikk em um paciente que dele necessita

Also Published As

Publication number Publication date
TW200539880A (en) 2005-12-16
CN1976931A (zh) 2007-06-06
AU2005243188A1 (en) 2005-11-24
EA200601884A1 (ru) 2007-04-27
ECSP066986A (es) 2006-12-29
IL178435A0 (en) 2007-02-11
WO2005111037A1 (en) 2005-11-24
CR8696A (es) 2007-08-28
EP1735311B1 (en) 2010-03-31
US20050239781A1 (en) 2005-10-27
MXPA06011545A (es) 2007-03-26
JP2007532582A (ja) 2007-11-15
BRPI0509660A (pt) 2007-10-09
EA010546B1 (ru) 2008-10-30
CA2561859A1 (en) 2005-11-24
US7951801B2 (en) 2011-05-31
MA28567B1 (fr) 2007-05-02
EP2206713A1 (en) 2010-07-14
ZA200608956B (en) 2008-06-25
DE602005020263D1 (de) 2010-05-12
KR20070014166A (ko) 2007-01-31
UA88638C2 (ru) 2009-11-10
EP1735311A1 (en) 2006-12-27
ATE462702T1 (de) 2010-04-15
NO20064894L (no) 2007-01-03
TNSN06321A1 (en) 2008-02-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20100093713A1 (en) Beta-carbolines useful for treating inflammatory disease
ES2366239T3 (es) Piridin[3,4-b]pirazinonas.
EP3231798B1 (en) Thiazole intermediates useful in the preparation of raf kinase inhibitors
RS20060584A (sr) Beta-karbolini koji su korisni za lečenje inflamatorne bolesti
KR20250028378A (ko) 5원 및 6원 융합 질소 함유 화합물, 이의 중간체, 제조 방법 및 용도
CA2608672A1 (en) Pyridine [3,4-b] pyrazinones as pde-5 inhibitors
WO2007097981A2 (en) Alpha carbolines and uses thereof
WO2009067233A1 (en) Beta carbolines and uses thereof
JP2023537586A (ja) Ｃｄｋ９阻害剤およびその使用
CN117425654A (zh) 2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷化合物
HK1133875B (en) Pyridine[3,4-b]pyrazinones