RS49739B - Kompleks platine, njegovo dobijanje i terapeutska primena - Google Patents

Abstract

Kompleks platine sa oksidacionim brojem II formule (I): gde X predstavlja atom halogena, i A predstavlja grupu –NH2-R gde R je triciklična ugljovodonična grupa koj asadrži 10 do 14 atoma ugljenika, koja može da bude po izboru supstituisana na tricikličnom prstenu sa jednom ili dve alkil grupe koje sadrže 1 do 4 atoma ugljenika. Prijava sadrži jo 7 zahteva.

Description

Oblast tehnike

Ovaj pronalazak se odnosi na novi kompleks platine sa oksidacionim brojem II koji se koristi u medicinskoj praksi za lečenje onkoloških oboljenja. Pronalazak dalje opisuje primenu kompleksa kao lekova i farmaceutskih preparata koji sadrže kompleks platine kao aktivnu supstancu.

Stanje tehnike

Kompleksi platine koji su efikasni kao citostatički agensi uvedeni su u medicinsku praksu pred kraj sedemadesetih godina ovog veka. Prvi farmaceutski proizvod ovoga tipa je cisplatina [cis-diamin-dihlorplatina(ll) kompleks]. Tokom daljeg razvoja sintetisano je i testirano desetine kompleksa platine; između ostalih, karboplatina (cis-diamin-[1,1-ciklobutandikarboksilato] platina(ll) kompleks je dostigao najveći značaj u onkologiji.

Dalje, opisani su asimetrični kompleksi platine u kojima je jedan amino ligand zamenjen alkilamino grupom (USP 4,329,299). Publikacija J.Med.C/7em.(1995),38 (16), 3014-24 opisujeinteraliatetrakordinatne trans-platina (II) komplekse sa halogenima i amino grupama a od razlikuju se jedinjenja predmetne prijave po tome što su to jedinjenja cis-platine(ll). PublikacijaInorg. Chem.,(1993), 32(12), 2717-23 opisuje komplekse cis-dihlorplatine(ll) koji nose adamantanamino grupu i drugi amin koji se razlikuju od jedinjenja predmetnog pronalaska u tome što ovi kompleksi nemaju NH3ligand. Patentni dokument EP-A-0 503 830 opisuje trans-platina (IV) komplekse koji su dobijeni iz odgovarajućih trans-platina (II) kompleksa. Patentni dokument EP-B-0 273 315 opisuje cis-platina (II) komplekse sa zasićenim N-heterocikličnim ligandom i jednim NH3

ligandom. Nijedan od ovih kompleska nije obuhvaćen jedinjenjem predmetne patentne prijave koji ima cis-geometriju.

Za sada se još uvek istražuju kompleksi platine koji mogu da pokažu veću anti-

tumorsku efikasnost sa manje sporednih efekata u poređenju sa poznatim kompleksima platine.

U predmetnom pronalasku nađeni su izvesni novi kompleksi platine koji poseduju veću antitumorsku efikasnost u odnosu na komplekse platine iz prethodnog stanja tehnike i manje sporedne efekte u odnosu na napred pomenute poznate komplekse. Ovi novi kompleksi predstavljaju osnovno načelo predmetnog pronalaska.

Kratak opis pronalaska

Prvi aspekt predmetnog pronalaska je kompleks platine sa oksidacionim brojem II opšte formule (I):

gde

X predstavlja atom halogena, i

A predstavlja grupu -NH2R, gde je R, triciklična ugljovodonična grupa koja sadrži od 10 do 14 atoma ugljenika, koja može da bude po izboru supstituisana na tricikličnom prstenu jednom ili dve alkil grupe koje sadrže od 1 do 4 atoma ugljenika.

Drugi aspekt predmetnog pronalaska je inkluzioni kompleks kompleksa platine sa oksidacionim brojem II opšte formule (I):

gde

X predstavlja atom halogena, i

A predstavlja grupu -NH2R, gde R je triciklična ugljovodonična grupa koja sadrži od 10 do 14 atoma ugljenika, koja može da bude po izboru supstituisana na tricikličnom prstenu jednom ili dve alkil grupe od kojih svaka sadrži od 1 do 4 atoma ugljenika, sa p-ili y-ciklodekstrinom koji može po izboru da bude supstituisan sa hidroksialkil grupom koja sadrži od 1 do 6 atoma ugljenika.

Posebno podesan kompleks predmetnog pronalaska je kompleks platine opšte formule (I) gde A predstavlja adamantilamino grupu i X ima napred definisano značenje. Dalje, sledeći podesan kompleks platine predmetnog pronalaska je kompleks opšte formule (I) gde A predstavlja 3,5-dimetiladamantilamino grupu i X ima napred definisano značenje.

Dalji aspekt predmetnog pronalaska je postupak za dobijanje kompleksa platine opšte formule (I) koji je okarakterisan time što se rastvor aminotrihalogenplatinatne(ll) soli alkalnog metala u polarnom organskom rastvaraču ili u vodi podvrgava reakciji sa primamim aminom formule NH2-R, gde R je triciklična ugljovodonična grupa koja sadrži od 10 do 14 atoma ugljenika koja može po izboru da bude supstituisana na tricikličnom prstenu sa jednom ili dve alkil grupe koje sadrže od jedan do četiri atoma ugljenika, na temperaturi od 0 do 100°C.

Pronalazak takođe obezbeđuje postupak za dobijanje inkluzionog kompleksa kompleksa platine formule (I) sa (3- iliY-ciklodekstrinom koji može po izboru da bude supstituisan sa hidroksialkil grupama koje sadrže od 1 do 6 atoma ugljenika, gde je pomenuti postupak okarakterisan time što se rastvor kompleksa platine formule (I) u organskom rastvaraču meša sa vodenim rastvorom (3-ili vciklodekstrina koji je po izboru supstituisan hidroksialkil grupama koje sadrže od 1 do 6 atoma ugljenika, i u sledećem stupnju, rastvarači se upare iz dobijenog rastvora.

Naredni aspekt pronalska je kompleks platine formule (I) napred ili njegov inkluzioni kompleks sa (3-ili vciklodekstrinom za primenu kao lek.

Sledeći aspekt pronalaska obezbeđuje farmaceutski preparat za lečenje onkoloških obolenja, koji je okarakterisan time što sadrži,kao svoju aktivnu supstancu, bar jedan kompleks platine gornje formule (I) ili njegov inkluzioni kompleks sa (3- ili vciklodekstrinom, i bar jedan farmaceutski eksipijens.

Čak sta više, kompleksi platine formule (I) mogu dalje da budu korišćni kao polazne supstance za proizvodnju analogno supstituisanih kompleksa platine sa oksidacionim brojem IV koji su primenljivi za peroralnu aplikaciju.

Kompleksi platine predmetnog pronalaska su nova hemijska jedinjenja koja do sada nisu bila posebno opisana u nekom dokumentu iz stanja tehnike, niti su bile opisane njihove osobine kao ni postupak za njihovo dobijanje. Primena ovih jedinjenja kao aktivnih supstanci u terapiji onkoloških obolenja je takođe nova i invetivna pošto iz stanja tehnike nije na jasan način moguće predvideti pošto prisustvo primarnog tricikličnog aminskog liganda u kompleksima dvovalentne platine može da dovede do značajnog povećanja anti-tumorske aktivnosti novih jedinjenja predmetnog pronalaska.

U delu koji sledi, pronalazak će biti detaljnije opisan primerima konkretne realizacije. Treba naglasiti da su ovi primeri su dati ilustrativno i ni na koji način ne ograničavaju obim pronalaska koji je definisan patentnim zahtevima.

Detaljan opis pronalaska

Primer 1

Sinteza cis-( 1- adamantilamin)- amin- dihlorplatina( ll) kompleksa

(koji je u daljem tekstu označen kao "LA-9")

Rastvor 19,55 g (54,6 mmola) kalijum amin-trihlorplatinata (1-) u 84 ml vode se profiltrira i smesa 84 ml vode i 45,4 g (273,4 mmola) kalijum jodida se doda u filtrat. U smesu se doda 8,27 g (54,6 mmola) 1-adamantilamina u atmsoferi azota Dobijena smesa se meša bez prisustva vazduha i svetla na sobnoj temperaturi 22 sata. Dobijeni talog se profiltrira pod azotom i ispere se sa vodom koja ne sadrži rastvorene gasove. Posle sušenja u vakumskoj sušnici, dobija se intermedijer koji sadrži 3.09% hlora i 33,03% joda. Ovaj intermedijer se suspenduje u 170 ml vode i u suspenziju se doda 17,75 g (104,5 mmola) srebro nitrata (90% teorijske količine bazirano na sadržaju haligenida u intermedijeru). Posle mešanja od 70 sati na sobnoj temperaturi bez prisustva svetla i vazduha, nerastvomi deo se profiltrira i ispere se sa malom količinom vode. Koncentrovana hlorvodonična kiselina (19 ml, 205 mmola) se lagano doda u filtrat i smesa se meša bez prisustva vazduha i svetla na sobnoj temperaturi tokom 20 sati.

Čvrsti sirovi proizvod se profiltrira i ispere se redom sa: 0,1 M hlorvodonicnom kiselinom, zatim etanolom i na kraju etrom. Posle sušenja u vakumskoj sušnici, dobija se 16,46 g sirovog proizvoda (68% bazirano na polaznom kalijum amintrihlorplatinatu (1-).

Sirovi proizvod (16,36 g, 37,7 mmola) se rastvori u 200 ml dimetilformamida, dobijeni rastvor se profiltrira i uz hlađenje u filtrat se doda 600 ml 0,1 M hlorvodonične kiseline. Dobijen čvrsti talog se profiltrira, ispere se uzastopno 0,1M rastvorom hlorvodonične kiseline, zatim etanolom i etrom i osuši se u vakumskoj sušnici. Prinos je 14,70 g željenog proizvoda (89,8% teorijskog, bazirano na polaznom sirovom proizvodu).

Identitet dobijenog proizvoda je potvrđen pomoću IR i 1H NMR spektralnih analiza. Kristalna i molekulska struktura dobijenih kompleksa platine je testirana na dobijenom monokristalu pomoću rendgenske difrakcione strukturne analize, tako da su potvrđeni rezultati spektralnih metoda analize. Čistoća dobijenog proizvodaje potvrđena pomoću tečne hromatografije visoke performanse.

Primer 2

Sinteza cis-( l- amino- 3, S- dimetiladamantan )- amin- dihlorplatina( ll) kompleksa

(koji je u daljem tekstu označen kao "LA-13")

1-amino-3,5-dimetiladamantan (8,06 ml, 42 mmola) se doda u sveže profiltriran rastvor 13,95 g (39 mmola) kalijum amin-trihlorplatinata (II) uz mešanje na sobnoj temperaturi i u atmsoferi azota. Dobijena smesa se meša 15 sati na 50°C zaštićena od svetlosti i vazduha. Posle hlađenja do sobne temperature, dobijen čvrsti talog se profiltrira pod oblakom azota i ispere se sa n-heptanom. Kolac se osuši produvavanjem vazduha kroz levak i osušen sirovi proizvod se rastvori u 120 ml dimetilformamida. Filtrat se izmesa sa 360 ml 0,1 M rastvora hlorvodonične kiseline. Dobijeni talog se profiltrira i ispere se sa 0,1 M ratsvorom hlorvodonične kiseline i etrom. Posle sušenja u vakumskoj sušnici

dobija se 6,25 g željenog proizvoda (34,6% teorijskog prinosa, bazirano na polaznom kalijum amintrihlorplatinatu (1-)).

Identitet dobijenog proizvodaje potvrđen pomoću IR spektralne analize dok je čistoća određena tečnom hromatografijom visoke performanse.

Primer 3

Sinteza inkluzionog kompleksa jedinjenja LA- 9 sa hidroksipropil- p- ciklodekstrinom

(označeno kao "inkluzioni oblik leka LA-9")

Jedinjenje LA-9 se rastvori u dimetilformamidu radi dobijanja rastvora sa konačnom koncentracijom od 25g/l. Hidroksipropil-p-ciklodekstrin se doda u rastvor u količini koja je potrebna za dobijanje molarnog odnosa LA-9/ciklodekstrin =1:3. Puferisana vodena faza 10mMHepes- apH 7,3 se doda u rastvor LA-9 i ciklodekstrina uz mešanje i na sobnoj temperaturi do konačnog zapreminskog odnosa dimetilformamida i vodene faze od 1:10. Nerastvoren ciklodekstrin se rastvara brzo čak posle prvog dodavanja vodene faze. Dimetilformamid i voda se liofililizacijom uklone iz rastvora inkluzionog kompleksa

Citostatička aktivnost jedinjenja predmetnog pronalaska je testiranain vitrona linijama tumroskih ćelija. MMT test je odabran za testiranje efikasnosti odgovarajućih jedinjenja. Test je baziran na reakciji tetrazolijum soli sa respiratornim mitohondrijama živih ćelija. Dobijeni nerastvoren formazan j rastvoren i njegova količina se određuje na čitaču mikroploča. Ova metoda se koristi kao standardna metoda za ocenu citostatičkog efekta na farmaceutski aktivna jedinjenja (Tim Rosmann,Rapid colorimetric assay for cellular

growth and survival, Application to proliferation and cytotoxicity assayas, Journal of

Immunalogical Methods,65 (1983), 55-63). Konstanta inhibicije (IC 50) predstvalja takvu koncentraciju supstance koja izaziva 50% smanjenje rasta kulture ćelija. Ova konstanta je određena iz grafika zavisnosti MTT vrednosti (mikrohondrijalna aktivnost ćelija) od koncentracije testirane supstance.Graph Pad Prismprogram je korišćen za određivanje konstante iz izmerenih vrednosti, tako da je Boltzman-ov sigmoid određen za konstrukciju krive iz pojedinačnih eksperimetalnih tačaka. Odabrane ćelijske linije su standardne linije koje se koriste za rutinsko ispitivanje citostatičkog efekta farmakološki aktivnih jedinjenja.

Primer 4

Anti- tumorska aktivnost na linijama mišijih tumorskih ćelija

U ovom primeru testirane su linije P 815( mastocytoma) i L 1210 ( lymphocyte leucaemia Une).Efekat LA-9 je upoređen sa onim za karboplatinu pomoću MTT testa.

Nađene vrednosti IC 50 su 1,1 uM za P-815 liniju i 1,5iiM za L-1210 liniju. Na suprot, karboplatina (u slobodnom obliku i u obliku kompleksa sa ciklodekstrinom) ima IC 50 vrednost od 105 |-iM,tj. koja je približno 100 puta manje aktivna od LA-9.

Primer 5

Anti- tumorska aktivnost na humanim tumorskim ćelijama

Uporedni eksperimenti su izvedeni nalimfoblastic leucaemia UneCEMt MTT je test je korišćen za procenu citotoksičkog efekta. Konstanta inhibicije IC 50 je određena za jedinjenja LA-9 (IC 50 = 0,36 uM), cisplatinu (IC 50 = 1,9 uM), karboplatinu (IC 50 = 30,4 uM) i oksaliplatinu (IC 50=4,8 uM).

Grafičko prikazivanje inhibicionih krivih datoje na slici 1. Tačke na krivama su označene, kao što sledi: za LA-9= nagore orijentisan trougao, za karboplatinu = nadole orijentisan trougao, za cisplatinu = kvadrat, za oksaliplatinu = krug. Vitalnost ćelija je određivana pomoću standardnog MTT spektrofotomerijskog testa baziranog na redukciji 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromida pomoću vitalnih ćelija uz građenje formazana.

Okularni melanom VUP (Masarvk Oncological Institute, Brno) je pokazao deset puta veću osetljivost prema LA-9 (IC 50 = 9 u.M)u poređenju sa karboplatinom (IC 50 = 95 u<M>)<.>

Primer 6

In vivoanti- tumorska aktivnost

Anti-tumorska aktivnost jedinjenja LA-9 i cis-platine je poređena na životinjama sa čvrstim adenokarcinomom sisara MC 2111 posle intravenske aplikacije jedne doze petogi dana posle inokulacije tumorskih ćelija. Ovaj način aplikacije karakterističan za komplekse platine moguć je pripremom rastvornog oblika za aplikaciju.

Ženke miša DBA/1 telesne mase 22,9 - 25,8 g su korišćene u ovom eksperimentu. Tumori su razvijani potkožnom inokulacijom 0,2 ml tumorskog homogenata koji je sa izotoničnim rastvorom glukoze razblažen u zapreminskom odnosu 1:1. Testirana jedinjenja su primenjena u obliku izotoničnog vodenog rastvora koji je pripremljen neposredno pre aplikacije, rastvaranjem odgovarajućeg liofilizovanog proizvoda u vodi za injekcije i dalje razblaživanjem izotoničnim rastvorom natrijum hloridaad hocpo potrebi, u zapreminama od 0,1 do 0,4 ml na 20g telesne mase životinje, kao što se vidi iz sledeće tabele:

Jedinjenje LA=9 je povećalo srednje vreme preživljavnja pri dozi od 12 mg/kg na 410% u poređenju sa kontrolnom grupom, tako da disribucija pojedinačnih vremena preživljavanja se statistički znatno razlikuje pri nivou važnosti a = 0,05 kada se računa pomoću neparametarskog testa prema Hajek-u (Fabian V.,Zakladni statističke metody[Basic methods of statistics], NCSAV Prague 1963). Polovina ukupnog broja životinja je prezivela u permanetnoj potpunoj remisiji i eliminisana je posle završetka eksperimenta bez makroskospkih manifestacija tumora. Pozitivan uticaj na preživljavanje, mada statistički neznačajan, može da bude smatran kao dovoljan dokaz anti-tumorske aktivnosti i niske toksičnost testiranih jedinjenja. Niska toksičnost LA-9 može takođe da bude pokazana pomoću procene koeficijenta povećanja telesne mase. Primena LA-9 je praćena sa gubitkom telesne mase manjim od 10%. Optimalna doza za LA-9 iznosi 13-16 mg/kg za životinje koje su korišćene u testovima. Vrednost maksimalne tolerisane doze /MDT) može da bude procenjena na oko 25 mg/kg.

Claims (8)

1. Kompleks platine sa oksidacionim brojem II formule (I): gde X predstavlja atom halogena, i A predstavlja grupu -NH2R, gde R je triciklična ugljovodonična grupa koja sadrži 10 do 14 atoma ugljenika, koja može da bude po izboru supstituisana na tricikličnom prstenu sa jednom ili dve alkil grupe koje sadrže od 1 do 4 atoma ugljenika.

2. Inkluzioni kompleks kompleksa platine sa oksidacionim brojem II formule (I): gde X predstavlja atom halogena, i A predstavlja grupu -NH2R, gde R je triciklična ugljovodonična grupa koja sadrži 10 do 14 atoma ugljenika, koja može da bude po izboru supstituisana na tricikličnom prstenu jednom ili dve alkil grupe koje sadrže od 1 do 4 atoma ugljenika, sa p - ili y-ciklodekstrinom koji može po izboru da bude supstituisan sa hidroksialkil grupom koja sadrži od 1 do 6 atoma ugljenika.

3. Kompleks platine prema zahtevu 1, opšte formule (I), naznačen time, što A predstavlja adamantilamino grupu i X ima značenje koje je definisano u zahtevu 1.

4. Kompleks platine prema zahtevu 1 opšte formule (I), naznačen time, što je A, 3,5-dimetiladamantilamino grupa i X ima značenje koje je definisano u zahtevu 1.

5. Postupak za dobijanje kompleksa platine opšte formule (I) prema zahtevu 1, naznačen time, što se rastvor aminotrihalogenplatinatne(ll) soli alkalnog metala u polarnom organskom rastvaraču ili u vodi, podvrgava reakciji sa primamim aminom formule NH2-R, gde je R, triciklična ugljovodonična grupa koja sadrži od 10 do 14 atoma ugljenika koja može po potrebi da bude supstituisana na tricikličnom prstenu jednom ili dve alkil grupe koje sadrže od jedan do četiri atoma ugljenika, na temperaturi od 0° do 100°C.

6. Postupak za dobijanje inkluzionog kompleksa platine formule (I) sa p- ili y - ciklodekstrinom koji može po izboru da bude supstituisan sa hidroksialkil grupom koja sadrži od 1 do 6 atoma ugljenika prema zahtevu 2, naznačen time, što se rastvor kompleksa platine formule (I) u organskom rastvaraču meša sa vodenim rastvorom p- ili y-cikiodekstrina koji je po izboru supstituisan sa hidroksialkil grupama koje sadrže od 1 do 6 atoma ugljenika, posle čega se rastvarači upare iz dobijenog rastvora.

7. Kompleks platine opšte formule (I) ili njegov inkluzioni kompleks sa p- ili y-ciklodekstrinom prema zahtevu 1 ili 2, za primenu kao lek.

8. Farmaceutski preparat za lečenje onkoloških oboljenja, naznačen time, što sadrži, bar jedan kompleks, platine opšte formule (I) ili njegov inkluzioni kompleks sa p-ili y-ciklodekstrinom prema zahtevu 1 ili 2 kao aktivnu supstancu, i bar jedan farmaceutski eksipijens.