RS49984B

RS49984B - Inhibitori azot (ii) oksid sintaze

Info

Publication number: RS49984B
Application number: YUP-746/00A
Authority: RS
Inventors: Paul John Beswick; Savvas Kleanthous; Robert John Young
Original assignee: Glaxo Group Limited,
Priority date: 1998-05-30
Filing date: 1999-05-27
Publication date: 2008-09-29
Also published as: DK1084104T3; GB9811599D0; CN1218940C; ID26790A; DE69909625T2; JP3839256B2; PL344368A1; EE04149B1; AP1382A; EA003026B1; IL139697A; AU757042B2; CA2333322C; EA200001122A1; EP1084104B1; JP2002516901A; ATE245142T1; ES2203147T3; CZ297473B6; PT1084104E

Abstract

Jedinjenje formule (I) njegova so, solvat ili fiziološki funkcionalan derivat, naznačeno time, što se R1 bira između C1-4alkil, C3-4cikloalkil, C1-4hidroksialkil i C1-4haloalkil. Prijava sadrži još 9 patentnih zahteva.

Description

Ovaj pronalazak se odnosi na nova amidino jedinjenja, na postupak za njihovu proizvodnju, na farmaceutske preparate koji ih sadrže i na njihovu upotrebu u terapiji, naročito na njihovu upotrebu kao selektivnih inhibitora indukujuće azot(!l)oksid sintaze.

Azot(ll)oksid je endogeni stimulator rastvomog enzima gvanilat ciklaze i uključen je u brojna biološka delovanja. Višak proizvodnje azot(ll) oksida smatra se da je takođe uključen u brojna stanja, kao što su septički šok i mnoge inflamatorne bolesti. Biohemijska sinteza azot(ll)oksida iz L-arginina katalizovana je enzimom NO sintaze. Opisani su mnogi inhibitori NO sintaze i predloženi za terapeutsku upotrebu.

Od nedavno, na ovom polju tema je dobijanje inhibitora NO sintaze koji ispoljavaju selektivnost prema indukujućoj NO sintazi (iNOS) u odnosu na endotelijalnu NO sintazu (eNOS) i/ili neuronalnu NO sintazu (nNOS).

Tako, u VVO93/13055 se opisuju selektivni inhibitori NO sintaze formule

i njihove soli i farmaceutski prihvatljivi esiri i amidi, u kojoj su:

Ri je aikil grupa ravnog ili račvastog lanca, C2-6a'kenil grupa, C2-saJkinil grupa, C3-6Cikioaikii grupa ili C3-6cikloaikilCi-6alkil grupa;

Q je alkilen, alkenilen ili alkinilen grupa, koja ima 3 do 6 atoma ugljenika, koja opciono može biti supstituisana sa jednom ili više Ci.3alkil grupa;

Grupa formule -(CH2)pA(CH2)s- gde je r 1 ili 2, s 0, 1 ili 2, i A je 3- do 6-člani karbociklični ili heterocikiični prsten, koji opciono može biti supstituisan sa jednim ili više podesnih supstituenata, kao što su Ci-6a!kil, C-i-6alkoksi, hidroksi, halo, nitro, cijano, trifluoroCiealkil, amino, Ci-6alkilamino ili di-Ci-6alkilamino.

Priključena međunarodna prijava WO 98/30537 takođe opisuje neka amidi no jedinjenja koja su selektivni inhibitori indukujuće azot(ll)oksid sintaze.

mi smo pronašli novu klasu jedinjenja koja, pored toga što su inhibitori selektivni na iNOS, pokazuju prednosti, uključujući i onu da imaju relativno dugo poiuvreme, da su oralno biopristupačna kada se ordinirajuin vlvoi da se mogu napraviti iz relativno jeftinih polaznih materijala.

Stoga, u skladu sa ovim pronalaskom, daje se jedinjenje formule (I)

ili njegova so, soivai, ili fiziološki funkcionalan derivat, u kome se R1 bira između Ci-4alkil, C^cikloalkil, C-Mhidroksialkil i C-Mhaloalkil.

Poželjno je da u formuli (I) R<1>predstavlja Ci^alkil, a najpoželjnije, metil.

Jedinjenja formule (I) sadrže dva hiralna centra, tj. ugljenik koji nosi supstituent R<1>i asimetrični centar u grupi aminokiseline. Namera je da formula (I) obuhvata sve optičke izomere biio u suštinski čistom obliku iii pomešane u bilo kojim odnosima. U poželjnom aspektu, grupa aminokiseline je u prirodnoj L konfiguraciji. U siedećem poželjnom aspektu ugijenik koji nosi R<1>grupu je u R konfiguraciji. U najpoželjnijem aspektu, aminokiselina je u prirodnoj L konfiguraciji, a ugljenik koji nosi R<1>grupu je u R konfiguraciji. Kroz ovu prijavu, ukoliko se daje stereohemija ova dva hiralna centra u molekulu, prva konfiguracija se odnosi na cc-ugijenik aminokiseline, a druga se odnosi na ugljenik koji nosi R<1>supstituent, na primer, stereohemija označena sa (R,S) znači da je (R)-siereohernija na a-ugijeniku aminokiseline, a (S)-siereohemija na ugljeniku koji nosi R<1>supstituent.

Dakle, u siedećem aspektu ovog pronalaska daje se jedinjenje koje se bira između: S-[(R)-2-(i -iminoetiiamino)propiij-L-cisiein;

S-[(S)-2-(1-iminoetilamino)propil]-L-cistein;

S-[(R/S)-2-(1-iminoetiiamino)propiij-L-cisiein;

S-[(R)-2-(1-iminoetilamino)propil]-D-cistein;

5-[(5)-2-(i-iminoetiiamino)propilj-D-cisiein;

S-[(S/R)-2-(1-iminoetilamino)propil]-D-cistein;

S-[(R/S;-2-( i-iminoetiiaminotĐuriij-L-cisiein;

S-[(R/S)-2-(1-iminoetilamino,2-ctklopropil)eti!]-L-cistein; i

S-^K/Sj-z-ri-tminoeiiiamin.j-hiaroKsi^ropiij-L-cisiem;

i njihove soli, solvati i fiziološki funkcionalni derivati.

u poželjnom aspeKiu, ovaj pronaiazak daje S-MKj-2-ri-iminoeriiaminojpropiij-L-cistein ili njegovu so, solvat ili fiziološki funkcionalan derivat. U naročito,

poželjnom aspektu, ovaj pronalazak daje S[(R)-2-(1--iminoetilamino)propil]-L-cistein ili njegovu so.

Podrazumeva se da ovaj pronalazak pokriva sve kombinacije naročitih i poželjnih grupa koje su ovde opisane.

Soli i solvati jedinjenja formule (I) podesne za upotrebu u medicini su one u kojima su kontra-jon ili pripojeni rastvarač farmaceutski prihvatljivi. Međutim, soli i solvati koje nemaju farmaceutski prihvatljive kontra-jone ili pripojene rastvarače, su unutar obima ovog pronalaska, na primer, koriste se kao intermedijari prilikom dobijanja drugih jedinjenja formule (I) i njihovih farmaceutski prihvatjivih soli, solvata i fiziološki funkcionalnih derivata.

Pod nazivom "fiziološki funkcionalan derivat" podrazumeva se hemijski derivat jedinjenja formule (I) koji ima istu fiziološku funkciju kao slobodno jedinjenje formule (I), na primer, tako što se unutar tela konvertuje u njega. U skladu sa ovim pronalaskom, primeri fiziološki funkcionalnih derivata su estri, amidi i karbamati; poželjno estri i amidi.

Podesne soli u skladu sa ovim pronalaskom su one koje se stvaraju sa organskim i neorganskim kiselinama ili bazama. Farmaceutski prihvatljvie kisele adicione soli su one koje nastaju iz hlorovodonične, bromovodonične, sumporne, limunske, vinske, fosforne, mlečne, piruvinske, sirćetne, trifluorosirćetne, ćilibarne, oksalne, fumarne, maleinske, oksalosirćetne, metansulfonske, etansulfonske, p-toluensulfonske, benzensulfonske i izetionske kiseline. Farmaceutski prihvatljive bazne soli su amonijumove soli, soli alkalnih metala, kao što su natrijumove i kalijumove soli, soli zemnoalkalnih metala, kao što su kalcijumove i magnezijumove soli, i soli sa organskim bazama, kao što su dicikloheksilamin i N-metil-D-glukamin.

U farmaceutski privatljh/im etsrima i amidima jedinjenja formule (I) kisela grupa može biti konvertovana u Ci.6lalkil, aril, arilCi-6alkil ili estar ili amid amino kiseline. U farmaceutski prihvatljivim amidima i karbamatima jedinjenja formule (I) amino grupa se može konvertovati u Ci-6alkil, aril, arilCi^alkil ili amid ili karbamat amino kiseline.

Kao što je gore pomenuto, jedinjenja formule (I) su inhibitori NO sintaze, što se pokazuje u testovima inhibicije NOS u nastavku.

Dakle, jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli, solvati i fiziološki funkcionalni derivati se koriste u profilaksi i tretmanu kliničkih stanja za koja je indiciran inhibrtor NO sintaze, a naročito inhibitor iNOS. Ta stanja su inflamatorna stanja, stanja šoka, imuni poremećaji i poremećaji gastrointestinalnog motiliteta. Jedinjenja formule (I) i njihove farmacaeutski prhvatljive soli, solvati i fiziološki funkcionalni derivati, mogu takođe da se upotrebljavaju u profilaksi i tretmanu bolesti centralnog nervnog sistema, uključujući migrenu.

Pod stanjima šoka podrazumevaju se ona stanja koja proizilaze iz preteranog stvaranja NO, kao što su septički šok, hemoragični šok, traumatski šok, ili šok koji je izazvan naglim oštećenjem jetre ili terapijom citokinima, kao što je TNF, IL-1 i IL-2, ili terapija sa sredstvima koja indukuju citokine, na primer, sa 5,6-dimetilksantenon sirćetnom kiselinom.

Primeri inflamatornih stanja i imunih poremećaja su ona u zglobovima, naročito artritis (npr. reumatoidni artritis, osteoartritis, protetičko oštećenje zgloba) ili u gastrointestinalnom traktu (npr. ulcerattvni kolitis, Chron-ova bolest i druge zapaljive bolesti utrobe, gastritis i mukozna zapaljenja koja su rezultat infekcije, enteropatija izazvana ne-steroidnim anti-inflamatomim lekovima) ili u plućima (npr. respiratorni bolni sindrom odraslih, astma, cistična fibroza ili hronična opstruktivna plućna bolest), u srcu (npr. miokarditis), u nervnom tkivu (npr. multipla skleroza), u pankreasu (npr. dijabetes melitus i njegove komplikacije), u bubrezima (npr. glomerulonefritis) na koži (npr. dermat'rtis, psorijaza, ekcemi, urtikarija) u oku (npr. glaukom), kao i na transplantiranim organima (npr. odbacivanje) i multi-organskim bolestima (npr. sistemski lupus eritematozus) i od zapaljivih posledica virusnih ili bakterijskih infekcija. Postoje takođe podaci da inhibitori iNOS mogu biti od koristi u profilaksi ili tretmanu bakterijskih infekcija (npr. pneumonija), a naročito za smanjenje mase bakterija kod inficiranih sisana.

Pored toga, postoje podaci o hiperprodukciji NO od strane iNOS kod ateroskleroze i hipotičkih ili ishemičnih ispada koji posle toga slede (sa ili bez izliva), na primer u mozgu ili kod ishemičnih bolesti srca.

Poremećaji gastorintestinalnog motiliteta su ileus, na primer postoperativni ileus, i ileus tokom sepse.

Pod bolestima centralnog nervnog sistema podrazumevaju se one kod kojih dolazi do hiperprodukcije NO, kao što su na primer, migrena, psihoza, anksiozost, šizofrenija, premećaji sna, cerebralna ishemija, trauma CNS, epilepsija, multipla skleroza, AIDS demencija, hronična neurodegenerativna bolest (npr. Lewy-eva telesna demencija, Huntingon-ova bolest, Parkinson-ova bolest ili Alzheimer-ova bolest), akutni i hronični bol, i stanja kod kojih može da bude obuhvaćen ne-adrenergijski ne-holinergijski nerv, kao što je priapizam, gojaznost i proždrljivost.

Primeri akutnog bola su muskuloskeletni bol, postoperativni bol i hirurški bol. Primeri hlroničnog bola su hronični inflamatorni bol (npr. reumatoidni artritis i osteoartritis), neuropatski bol (npr. neuralgija posle herpesa, dijabetska neuropatija povezana sa dijabetesom, trigeminalna neuralgija, bol povezan sa funkcionalnim poremećajima utrobe, npr. sindrom irrtabilne utrobe, bol u grudima koji nije srčanog porekla i bol koji se održava simpatetski) i bol koji je povezan sa rakom i fibromijalgijom.

Pored toga, inhibicija NO sintaze može da ima pogodnost u prevenciji gubitka limfocita koji je povezan sa HIV infekcijom, kod porasta osetljivosti tumora prema zračenju za vreme radioterapije i kod smanjenja rasta tumora, kod napredovanja tumora, angiogenzee i metastaza.

U skladu sa tim, ovaj pronalazak daje postupak za profilaksu ili tretiranje kliničkog stanja kod sisara, kao što su humana buća, za koja je indiciran inhibitor azot(ll)oksidaze, na primer iNOS, koji se sastoji u ordiniranju terapeutski efikasne količine jedinjenja formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, solvata ili fiziološki funkcionalnog derivata. Ovaj pronalazak naročito daje postupak za profilaksu ili tretman inflamatornog i/ili imunog poremećaja, kao što su artritis ili astma. U poželjnom aspektu ovog pronalaska daje se postupak za profilaksu ili tretman kliničkog stanja koje se bira između artritisa, astme, ileusa i migrene. U siedećem aspektu, ovaj pronalazak daje postupak za profilaksu ili tretman bakterijske infekcije.

Alternativno, daje se takođe jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili fiziološki funkcionalan derivat, za upotrebu u medicinskoj terapiji, naročito za upotrebu u profilaksi ili tretmanu kliničkih stanja kod sisara, kao što su humana bića, kod kojih je indiciran inhibitor azot(lll)oksid sintaze, na primer inhibitor iNOS. Naročito, daje se jedinjenje formule (I) ili njegova fiziološki prihvatljiva so, solvat ili fiziološki funkcionalan derivat za profilaksu i tretman inflamatornog i/ili imunog poremećaja, kao što su artritis ili astma. U poželjnom aspektu aje se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prhvatljiva so, solvat ili fiziološki funkcionalan derivat za profilaksu ili tretman artritisa, astme, ileusa i migrene. U siedećem aspektu, daje se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili fiziološki funkcionalan derivat za profilaksu i tretman bakteriološke infekcije.

Količina jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, solvata ili fiziološki funkcionalnog derivata koja je neophodna za postizanje terapeutskog efekta, vartraće, naravno, sa pojedinačnim jedinjenjem, putem ordiniranja i subjektom koji je pod tretmanom, a naročito sa poremećajem ili bolešću koji se tretiraju. Jedinjenja ovog pronalaska se mogu ordinirati oralno ili putem injekcija, sa dozom od oko 0,1 do 1500 mg/kg na dan, poželjno od 0,1 do 500 mg/kg/dan. Obično je doza za odrasla humana bića cd 5 do 35 mg/kg/dan, a poželjno od 5 mg do 2 g/dan. Tablete ili drugi oblici daju se kao pojedinačne jedinice i pogodno je da sadrže količinu jedinjenja ovog pronalaska koja je efikasna u takvoj dozi ili u višestrukoj, na primer, u pojedinačnim dozama koje sadrže 5 mg do 500 mg, obično oko 10 mg do 200 mg.

lako je moguće da se jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili fiziološki funkcionalan derivat ordiniraju sami, poželjno je da se daju kao farmaceutska formulacija.

U skladu sa ovim pronalaskom, daje se još farmaceutska formulacija koja sadrži jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, solvat ili fiziološki funkcionalan derivat, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili dodatak, i opciono jedan ili više drugih terapeutskih sastojaka.

Ovaj pronalazak takođe daje upotrebu jedinjenja formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, solvata ili fiziološki funkcionalnog derivatauproizvodnji medikamenta za profilaksu ili tretman kliničkog stanja za koje je indiciran inhibitor azot{II)oksid sintaze, na primer iNOS, za na primer, inflamatorni i/ili imuni poremećaj, kao što su artritis ili astma. U poželjnom aspektu, daje se jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili fiziološki funkcionalan derivat, za proizvodnju medikamenta za profilaksu ili tretman kliničkog stanja koje se bira između artritisa, astme, ileusa i migrene. U siedećem aspektu, daje se jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili fiziološki fukcionalan derivat, za proizvodnju medikamenta za profilaksu ili tretman bakterijske infekcije.

Naziv "aktivni sastojak" koji se ovde koristi, označava jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, solvat ili fiziološki funkcionalan derivat.

Formulacije su one koje su podesne za oralno, parenteralno (uključujući potkožno, intradermalno, intramuskularno, intravenozno i intraartikularno), inhalaciono (uključujući prahove finih čestica ili magle, koje se mogu generisati pomoću različitih vrsta odmerenih doza aerosola pod pritiskom, nebulizatora ili insuflatora), rektalno i površinsko (uključujući kožno, bukalno, sublingvalno i intraokularno) ordiniranje, mada najpodesniji put može da zavisi od primera stanja i poremećaja kod primaoca. Pogodno je da se formulacije daju u obliku jedinične doze, a mogu se dobiti bilo kojim od postupaka koji su dobro poznati u stanju tehnike u farmaciji. Svi postupci obuhvataju korak dovođenja aktivnog sastojka u vezu sa nosačem, koga čini jedan ili više sastojaka. Obično, formulacije se pripremaju uniformnim i intimnim dovođenjem u vezu aktivnog sastojka sa tečnim nosačima ili fino usitnjenim čvrstim nosačima ili sa oboje, a zatim, ukoliko je potrebno, oblikovanjem ovog proizvoda u željenu formulaciju.

Formulacije ovog pronalaska, podesne za oralno ordiniranje, mogu se pripremiti kao pojedinačne jedinice kao što su kapsule, kasete ili tablete, od kojih svaka sadrži unapred određenu količinu aktivnog sastojka; kao prah ili granule; kao rastvor ili suspenzija u vodenoj sredini ili nevodenoj sredini; ili kao emulzija ulja u vodi ili vode u ulju. Aktivni sastojak se može dati i kao bolus, klizma ili pasta.

Tableta se može dobiti presovanjem ili kalupovanjem, opciono sa jedan ili više dodatnih sastojaka. Presovane tablete se mogu dobiti presovanjem u podesnoj mašini aktivnog sastojka u obliku koji slobodno teče , kao što je prah ili granule, opciono pomešan sa vezivom lubrikantom, inertnim razblaživačem, sredstvom za podmazivanje, za površinsku aktivnost ili za dezintegraciju. Kalupovane tablete se mogu kalupovati u podesnoj mašini smeše sprašenog jedinjenja ovlaženog sa inertnim tečnim razblaživačem. Tablete se opciono mogu obložiti ili prevući, a mogu se formulisati tako da daju usporeno ili kontrolisano oslobađanje aktivnog sastojka iz njih.

Formulacije za perenteralno ordiniranje su vodeni i nevodeni, sterilni rastvori za injekcije, koji mogu da sadrže antioksidante, pufere, bakteriostate i rastvorene supstance koji čine formulaciju izotoničnom sa krvlju primaoca kome su namenjene; i vodene ili nevodene sterilne suspenzije koje mogu da sadrže sredstva za suspendovanje i zgušnjavanje. Ove formulacije se mogu dati u sudovima sa jediničnom dozom ili višestrukom dozom, na primer, u zatopjenim ampulama, ili u fiolama, a mogu se čuvati u stanju osušenom smrzavanjem (liofilizacija) koje zahteva samo dodavanje sterilnog tečnog nosača, na primer, slanog rastvora ili vode za injekcije, neposreno pred upotrebu. Nepripremljeni rastvori i suspenzije za injekcije se mogu pripremati iz sterilnih prahova, granula i

tableta, prethodno opisanih.

Formulacije za reaktalno ordiniranje še mogu dati u obliku supozitorija, sa uobičajenim nosačima, kao što su kakaobuter ili polietilenglikol.

Formulacije za površinsko ordiniranje u ustima, na primer, bukalno ili sublingvalno, kao pastile koje sadrže aktivni sastojak u aromatizovanoj osnovi, kao što je saharoza i akacija ili tragant, i pastile, koje sadrže aktivni sastojak u osnovi, kao što je želatin i glicerin ili saharoza i akacija.

Poželjne formulacije jedininčne doze su one koje sadrže efikasnu dozu aktivnog sastojka, kao stoje ranije pomenuto, ili njen odgovarajuću deo.

Podrazumeva se da pored gore posebno pomenutih sastojaka, formulacije ovog pronalaska mogu da sadrže i druga konvencionalna sredstva iz stanja tehnike, zavisno od vrste formulacije koja je u pitanju, na primer, one koje su podesne za oralno ordiniranje mogu sadržati sredstva za aromatizovanje.

U skladu sa sledećim aspektom ovog pronalaska, daje se postupak za dobijanje jedinjenja formule (I) ili njegove soli, solvata ili fiziološki funkcionalnog derivata, koji se sastoji od:

(i) reakcije jedinjenja formule (II)

ili njegovog optičkog izomera, soli ili zaštićenog derivata, gde je R<1>definisano gore, sa jedinjenjem formule (III)

ili sa njegovom solju, gde je L odlazeća grupa, najpodesnije Ci-6alkil grupa, na primer etoksi, ili alkitio, aralkiltio ili ariltio grupa, npr. benziltio ili 1- ili 2-naftilmetiltio grupa;

nakon čega slede koraci prema bilo kom od njih,

(ii) opciono uKianjanje bilo koje od zaštitinih grupa; (iii) opciono razdvajanje optičkog izomera iz smeše optičkih izomera; (iv) opciona konverzija proizvoda u njegovu odgovarajuću so, solvat ili fiziološki funkcionalan derivat;

Ukoliko je L Cvealkoksi, gornji reakcioni korak (i) se može ostvariti u alkalnom rastvoru, na primer sa pH 8 do 11, podesno pH 10,5, i na niskoj temperaturi, na primer -5° do 20°C, podesno 0 do 5°C. Ukoliko je L alktttio, aralkiltio ili ariltio grupa, reakcija se može obaviti u organskom rstvaraču, npr. tetrahidrofuranu ili C-Malkohofu, kao što je etanol, na umerenoj temperaturi, npr. 10 đo 40°C, podesno na temperaturi okoline.

Jedinjenja formule (III) i njihove soli su komercijalno pristupačna ili se mogu dobiti postupcima organske hernije koji su dobro poznati stručnjaku iz odgovarajućeoblasti tehnike na primer, kao što je opisano u Sheare et al.Tetrahedron Letters,1987,

38,179-182.

Jedinjenja formule (II) i njihove soli i zaštićeni derivati se mogu dobiti iz jedinjenja formule (IV):

Ili njihovog zaštićenog derivata, kuplovanjem sa jedinjenjem formule (V):

Ili njegovim zaštićenim derivatom, gde je R<1>definisano gore, a L<1>je odlazeća grupa, na primer, halo, kao Što je bromo, ili alkil, aril ili aralkil sulfonatni estar, kao što je toluensulfonil.

Zaštićeni derivati jedinjenja formule (IV), npr. N-t-butoksikarbonil cistein-t-butilestar, mogu reagovati sa jedinjenjima formule (V) pod uslovima odgovarajućeg organskog rastvarača (npr. toluen), u reakciji koja je posredovana bazom, kao što je 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, ili sličnom sredstvu koje je poznato onima koji su verzirani u stanje tehnike.

Alternativno, jedinjenja formule (II) i njihove soli i zaštićeni derivati, mogu se dobiti redukcijom (na primer, korišćenjem kompleksa hidrida metala) jedinjenja formule (VI)

Ili njegovog zaštićenog derivata, gde je R<1>definisano gore.

Jedinjenja formule (VI) se mogu dobiti postupcima koji su analogni onima koje su opisali Yanagisawa et al uJ. Med. Chem.1987, 30(11), 1984-91 i Hassner i Dehaen uJ. Org. Chem. 1990,55, 5505-5510. Dakle, reakcija jedinjenja formule (VI) ili njegovog zaštićenog derivata (na primer, u kome je amino grupa zaštićena acil grupom, kao što je t-butoksikarboni, a kisela karboksilna grupa je zaštićena estrom, kao što je terc-butilestar) sa nitrometanom i odgovarajućim aidehidom R<1>CHO, gde jeR<1>definisano gore, u prisustvu piperidina, daje nitro jedinjenje formule (VI), ili njegov zaštićeni derivat.

Jedinjenja formule (II) ili njihovi zaštićeni derivati, mogu se takođe dobiti reakcijom jedinjenja formule (VII)

Ili njihovog zaštićenog derivata, gde je R<1>dfinisano gore, sa aziridinom formule

(VIII)

Ili njegovim zaštićenim derivatom, na primer, amin je zaštićen acil grupom, kao što je t-butoksikarbonil, a kiselina je zaštićena estrom, kao što je Ci^alkil estar. Reakcija jedinjenja sa formulama (VII) i (VIII) se može izvesti u inertnom rastvaraču, kao što je hloroform, u prisustvu Lewis-ove kiseline, kao što je BF3(OEt)2.

Jedinjenja formula (IV), (V), (VII) i (VIII) i njihovi zaštićeni derivati, su komercijalno pristupačna, ili se mogu dobiti u skladu sa postupcima organske hernije koji su dobro poznati stručnjaku iz odgovarajuće oblasti tehnike.

Zaštitne grupe koje se koriste prilikom dobijanja jedinjenja formule (I) mogu se upotrebljavati na konvencionalan način, na primer, koristeći postupke koji su opisani u Theodora W Green" Protective Groups in Organic Chemistrf,izdanje (John Wiley and Sons, 1991), gde su takođe opisani postupci za uklanjanje tih grupa.

U gornjim reakcijama podesno je da se zaštite primarni amini, korišćenjem acil grupa, kao što su t-butoksikarbonil ili benziloksikrbonil grupe, koje se mogu ukloniti pod kiselim uslovima, na primer, tretmanom sa HCI ili HBr kiselinom, i!i hidrogenolizom.

Osoba verzirana u stanje tehnike podrazumeva da upotreba ovih zaštitinih grupa može da obuhvati ortogonalnu zaštitu amino grupa u jedinjenjima formule (II),

kako bi se olakšalo uklanjanje jedne grupe u prisustvu druge,\ čime se omogućava selektivna funkcionalnost pojedine amino funkcije. Na primer, benziloksikarbonil grupa se može selektivno ukloniti hidrogenolizom. Osoba koja je verzirana u stanje tehnike podrazumeva takođe druge ortogonalne strategije zaštite, koje stoje na raspolaganju sa konvencionalnim sredstvima, kao što je opisala Theodora W Green (v. gore).

Enantiomerna jedinjenja ovog pronalaska se mogu dobiti (a) razdvajanjem komponenasta odgovarajuće racemske smeše, na primer, pomoću hiralne hromatografije na koloni, postupcima enzimskog razdvajanja ili pripremanjem i razdvajanjem podesnih dijastereomera, ili (b) direktnom sintezom iz odgovarajućih hiralnih intermedijara po postupcima koji su gore opisani.

Opciona konverzija jedinjenja formule (I) u odgovarajuću so se može podesno ostvariti reakcgom sa odgovarajućom kiselinom ili bazom. Opciona konverzija jedinjenja formule (I) u odgovarajući solvat ili fiziološki funkcionalni derivat se može ostvariti po postupcima koji su poznati onima koji su verzirani u stanje tehnike.

U skladu sa sledećim aspektom, ovaj pronalazak daje nove intermedijare za dobijanje jedinjenja formule (I), na primer, jedinjenja formule (II) definisanih gore, ili njihove optičke izomere, ili soli ili zaštićene derivate; naročito jedinjenja koja se biraju između: (R,R)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tioheksanoat; (R.SH-butil^N-t-butoksikarbonil^.e-diamrno-S-metiM-tioheksanoat; (S,S)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tioheksanoat; (S,R)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tioheksanoat; (R,R/S)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-2,6-diamino-5-etil-4-tioheksanoat; (R,R/S)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-2,6-diamino-5-butoksimetil-4-tioheksanoat; (R,R/S)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-2,6-diamino-5-ciklopropil-4-tioheksanoat; (R,R)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-6N-benziloksikarbonil-2,6-diamino-5-metil-4- tioheksanoat;

(R,S)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-6N-benziloksikarbohil-2,6-diamino-5-metil-4-tioheksanoat;

(S,S)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-6N-benzitoksikarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tioheksanoat;

(S,R)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-6N-benziloksikarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tioheksanoat;

(R,R/S)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-6N-benziloksikarbonil-2,6-diamino-5-etiM-tioheksanoat; i

(R,R/S)-t-butih2N44j^

butoksimetil-4-tioheksanoat.

U naročitom aspektu ovog pronalaska jedinjenje formule (II) se bira između (R,R)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tioheksanoata i (R,R)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-6N-benziloksikarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tioheksanoata.

Neki zaštićeni dervati jedinjenja formule (VI) su takođe korisni kao intermedijari za dobijanje jedinjenja formule (II); naročito (R,R/S)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-2-amino-5-ciklopropil-6-nitro-4-tioheksanoat.

Neki zaštićeni derivati jedinjenja formule (I) su takođe korisni intermedijari za dobijanje jedinjenja formule (I); naročito jedinjenja koja se biraju između: (R,R)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-6N-(lHminoetil)-2t6-diamino-5-metil-4- tioheksanoat;

(R,S)-t-buti^2N-t-butoksikarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4-tioheksanoat;

(S,S)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4-tioheksanoat;

(S.RH-butil^N-t-butoksikarbonil-eN^I-iminoetil^.e-diamino-S-metiM-tioheksanoat;

(R,R/S)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-điamino-5-etil-4-tioheksancct;

(R,R/S)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-butoksimetiM-tioheksanoat; i

(R,R/S)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-ciklopropil-4-tioheksanoat,

i njihove soli i solvati.

U naročitom aspektu ovog pronalaska, zaštićeni derivat formule (I) je (R,R)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4-tioheksanoat.

Za bolje razumevanje ovog pronalaska sledeći Primeri su dati u svrhu ilustracije.

Primeri sinteze

Primer 1

Sinteza ( R. R)- 6N-( 1 - iminoetilV2. 6- diamino- 5- metil- 4- tioheksanoat dihidrohlorida

ili S- l( R)- 2-( 1 - iminoetiltilamino) propin- L- cistein dihidrohlorida

( a^ ( R. RH- butil- 2N- t- butoksikarbonil- 6N- benziloksikarbonil- 2. 6- diamino- 5-

metil- 4- tioheksanoat

U rastvor N-t-butoksikarbonil-cistein-t-butilestra (7,25 g, 26,2 mmol) (Olsen et a I.J. Med. Chem.1985, 50(22), 4332-4336) u suvom toluenu (100 mL) doda se (S)-N-benziloksikarbonil-1-aminopropan-2-oPtozilat (9,51 g, 26,2 mmol) i 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en (3,90 mL, 26,2 mmol), pa se smeša preko noći snažno meša na 60°C, pod azotom. Smeša se raspodeli između po 250 mL etilacetata i 1M vodene HCl. Dodatni organski ekstrakti se kombinuju, pa se operu sa vodenim rastvorom natrijum-bikarbonata, vodom i zasićenim rastvorom soli, osuše i ispare. Prečišćavanje hromatografijom na koloni daje nastavljeno jedinjenje kao bezbojno ulje, koje posle dužeg stanjanja kristališe, dajući belu čvrstu supstancu. LC/Elektrosprej Mas. Spektr., RT 4,93 min, M+H 469 (100%), M+NH4<+>486 (70%).

<1>H NMR (CDCI3) 5H; 1,27 (3H, d, Me), 1,44 i 1,47 (svaki 9H, s, CMe3), 2,92 (3H, m, 3-H), 3,23 i 3,38 (svaki 1H, m, 6-H), 4,39 (1H, m, 2-H), 5,11 (2H, s, CH2Ph), 5,31 i 5,32 (svaki 1H, br, NH), 7,34 (5H, m, Ar-H).

Spektar cirkularnog dihroizma (MeCN): 210 (+0,42) i 233 (-0,11) nm

( b) ( R. R)- t- butil- 2N- t- butoksikarbonil- 2, 6- diamino- 5- metil- 4- tioheksanoat

U rastvor (R,R)-t-butil-2N-t-butoksikarboniI-6N-benziloksikarbonil-2,6^iamino-5-metil-4-tioheksanoata (5 g) u 120 mL etanola, koji je degasiran i pod atmosferom azota, doda se 2,5 g paladijum-hidroksida na uglju (20%, Degussa, tip E101 NE/VV, 1:1 sa vodom), a nakon toga amonijum-formijat (10 g). Ovaj rastvor se zatim 1 h zagreva i refluksuje, posle toga ohladi i filtrira kroz Hyfio, pa dobro ispere vodenim etanolom. Rastvor se ispari, a ostatak propusti niz kratku kolonu sa gjlfcijum-dioksidom, pa eluira sa 90:10:0,5 hloroform:metanol:880 amonijakom, dajući posle isparavanja ulje, koje se direktno koristi u siedećem koraku.

LC/Elektrosprej Mas. Spektr., RT 2,40 min, M+H 335 (100%), 279 (60%).

( c) ( R. RVt- butil- 2N- t- butoksikarbonil- 6N- f1- iminoetil)- 2, 6- diamino- 5- metil- 4-

tioheksanoat hidrohlorid

U jednoj porciji doda se S-(1-naftilmetil)tioacetimidat hidrohlorid (3,10 g, 12,3 mmol) rastvoru (R,R)-t-butil-2N-t-btJtoksikarbonil-6N-2,6-diamino-5-metil-4-tioheksanoata 2,75 g, u 50 mL etanola, pod azotom, pa se ovaj rastvor 14 h meša na sobnoj temperaturi. Rastvarao se ispari, a ostatak raspodeli između po 50 mL etra i vode, a nakon toga slede dva ispiranja sa etrom; Vodeni reekstrakti se kombinuju i ispare, dajući sirovu, belu, amorfnu pastu, koja se direktno koristi u siedećem koraku.

Privremeni maseni spektar M+H 376 (100%), 276 (12%).

<1>H NMR (D20) 8H; 1,28 (3H, d, Me), 1,39 i 1,42 (svaki 9H, s, CMe3), 2,21 (3H, s, CH3), 3,01 (3H, n, 3-H, 5-H), 3,37 (2H, m, 6-H), 4,18 (t, 2-H).

( d) ( R. R)- 6N-( 1- iminoetin- 2. 6- diamino- 5- metil- tioheksanoat dihidrohlorid ili

S- ITR)- 2-( 1 - iminoetilamino) propifl- L- cistein dihidroh lorid

Rastvori se (R,R)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4-tioheksanoat hidrohlorid u 20 mL 4M hlorovodonika u dioksanu, a ubrzo nastala suspenzija se preko noći snažno meša, pod azotom. Doda se 50 mL etra, pa se tečnost dekantuje od lepljive gume. Trituracija etrom konačno daje naslovljeno jedinjenje kao amorfnu, higroskopnu belu čvrstu supstancu.

Elektrosprej maseni spektar M+H 220 (100%).

<1>H NMR (D20) 8H; 1.37 (3H, d. Me), 2,25 (3H, s, CH3). 3,23 (3H, m, 3-H, 5-H), 3,47 (2H, m, 6-H), 4,24 (1H, t, 2-H) (zapaziti izvesno udvajanje signala usled rotamernih oblika).

<13>C NMR (DMSO-ds) 5C; 18,90 (q, Me), 19,30 (q, Me), 30,13 (t, 3-C), 38,83 (d, 5-C), 47,43 (t, 6-C), 52,20 (d, 2-C), 165,0 (s, N=C-N), 170,0 (s, C02H).

Spektar cirkularnog dihroizma: 199 (+1,38) i 223 (-0,77) nm.

Primer 2

Sinteza ( R. SV6N-( 1- iminoetil)- 2, 6- diamino- 5- metil- 4- tioheksanoat dihidrohlorida

ili Sf( S)- 2-( 1- iminoetilamino) propill- L- cistern dihidrohlorida

Procedure i postupci su identični onima koji su korišćeni u Primeru 1, izuzev što je u koraku alkilovanja reagovao zaštićeni L-cistein sa (R)-N-benziloksikarbonil-l-aminopropan-2-ol-tozilatom, umesto (S) enantiomera u tom primeru.

Elektrosprej maseni spektar M+H 220 (1'00%).

<1>H NMR (D20) 5H; 1,40 (3H, d, Me), 2,25 (3H, s, CH3), 3,30 (3H, m, 3-H, 5-H), 3,45 (2H, m, 6-H), 4,25 (1H, t, 2-H) (treba uočiti izvesno udvajanje signala usled rotamernih oblika).

Primer 3

Sinteza ( S. S)- 6N-( 1- iminoetil)- 2. 6- diamino- 5- metil- 4- tioheksanoat dihidrohlorida

ili Sf( S)- 2-( 1- iminoetilamino) propil1- D- cistein dihidrohlorida

Procedure i postupci su identični onima koji su korišćeni u Primeru 1, izuzev što je u koraku alkilovanja reagovao zaštićeni enantiomerski D-cistein sa (R)-N-be nziloks ikarbonil-1 -amin op ro pan-2-o l-tozilatom.

Spektar proizvoda je identičan onome za jedinjenje iz Primera 1, sa izuzetkom: Spektra cirkularnog dihroizma (H20): 199 (-1,05) i 224 (+0,66) nm.

Primer 4

Sinteza ( S. R)- 6N-( 1 - iminoettl)- 2. 6- diamino- 5- metil- 4- tioheksanoat

dihidrohlorida ili Sr( R)- 2- f1- iminoetilamino) propin- D- cistein dihidrohlorida

Procedure i postupci su identični onima koji su korišćeni u Primeru 1, izuzev što je u koraku alkilovanja reagovao zaštićeni enantiometarski D-cistein sa (S)-N-benziloksikarbonil-1-aminopropan-2-o!-tozilatom.

Elektrosprej maseni spektar M+H 220 (100%).

<1>H NMR (D20) 5H; 1,40 (3H, d, Me), 2,25 (3H, s. CH3), 3,30 (3H, m, 3-H, 5-H), 3,45 (2H, m, 6-H), 4,25 (1H, t, 2-H).

Primer 5

Sinteza ( R. R/ S)- 6N-( 1 - iminoetil)- 2. 6- diamino- 5- metii- 4- tioheksanoat

dihidrohlorida ili S[( R/ S)- 2-( 1- iminoetilamino') butil1- L- cistein dihidrohlorida

Procedure i postupci su identični onima koji su korišćeni u Primeru 1, izuzev što je u koraku alkilovanja reagovao zaštićeni L-cistein sa derivatom (R/S)-N-benziloksikarbonil-1-aminopropan-2-ola iz tog primera, dajući proizvod koji je u suštini epimerna smeša naslovljenog jedinjenja.

Elektroprej maseni spektar M+H 234 (f00%).

Primer 6

Sinteza ( R. R/ S)- 6N-( 1- iminoetil)- 2. 6- diamino- 5- metil- 4- tioheksanoat

dihidrohlorida ili SIYR/ S)- 2-( 1 - iminoetilamino. 3- hidroksi) propin- L- cistein

dihidrohlorida

Procedure i postupci su identični onima koji su korišćeni u Primeru 1, izuzev što je u koraku alkilovanja reagovao zaštićeni L-cistein sa derivatom (R/S)-N-benziloksikarbonil-1~aminopropan-2-ola iz tog primera. Dobijeni proizvod je bio u suštini epimerna smeša naslovljenog jedinjenja sa istovremenim gubitkom butiletra u koraku deprotekcije.

Elektrosprej maseni spektar M+H 236 (100%).

Ptrimer 7

Sinteza Sr( R/ S)- 2-) 1- iminoetilamino, 2- ciklopropiDetin- L- cistein dihidrohlorida ili

S- tYR/ SV- 2- n- iminoetilamino. 2- ciklopropiDetin- L- cistein dihidrohlorida

( a) ( R. R/ SH- butil- 2N- t- butoksikaroonil- 2- amino- 5- cikloproDil- 6- nitro- 4-

tioheksanoat

Zaštićeni L-cistein reaguje sa nitrometanom, piperidinom i cikiopropankarboksaldehidom, koristeći uslove koje su opisali Hassner i Dehaen uJ. Org. Chem.1990, 55, 5505-5510, dajući naslovljeno jedinjenje kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (CDCb) 8H; 0,40 i 0,68 (svaki 2H, m, ciklopropil-H), 0,89 (1H, m, ciklopropil-H), 1,46 i 1,48 (svaki 9H, s, CMe3), 2,81, 3,00 i 3,10 (svaki 1H, m, 3-H, 5-H), 4,41 (1H, bm, 2-H), 4,58 (2H, m, 6-H), 5,34 (1H, bs, NH).

( b) ( R. R/ S)- t- butil- 2N- t- butoksikarbonil- 2. 6- diamino- 5- ciklopropil- 4-

tioheksanoat

Nitro grupa intermedijara iz koraka (a) je redukovana upotrebom smeše nikal-hlorid/natrijum-borohidrida u metanolu, u skladu sa postupkom koji su opisali Nagarajan i Ganem uJ. Org. Chem.T990, 51., 4856-4861. Ulje se dobije posle ekstrakcije čvrste paste sa silikagela, a koristi se direktno u siedećem koraku.

( c) Sinteza ( R. R/ S)- t- butil- N- t- butoksikarbonil- 6N-( 1 - iminoetin- 2. 6- diamino- 5-

ciklopropii- 4- tioheksanoata

Proizvod gornjeg koraka redukcije (b) (47 mg, 0,13 mmol) reaguje sa S-(1-naftilmetil)tioacetimtdat hidrohloridom (72 mg), kao što je opisano u koraku (c) Primera 1, dajući sirovu, belu penu.

<1>H NMR (D20) 5H; 0,05 i 0,34 (svaki 2H, m, ciklopropil-H), 0,59 (1H, m, ciklopropil-H), 1,09 i 1,12 (svaki 9H, s, CMe3), 1,92 (3H, s, Me), 2,05 (1H, m, 5-H), 2,70 (2H, m, 3-H), 3,25 (2H, m, 6-H), 3,89 (1H, m, 2-H).

Elektrosprej masci'»nektar M+H 402 (59%).

(d) Sinteza S- rR. S)- 2-( 1- iminoetiiamino. 2- ciklopropiDetili- L- cistein

dihidrohlorida ili Sr( R/ S)- 2-( 1- fminoetilamino, 2- ciklopropil) etin- L- cistein

dihidrohlorida

Deprotekcija (R, R/S)-t-buu>N-t-butoksikarboniI-6N-(1 -iminoetil)-2,6-diamino-5-ciklopropil-4-tioheksanoata se obavlja korišćenjem 4M HCI u dioksanu. Proizvod, smeša epimera na C-5, izoluje se kao higroskopna staklasta čvrsta supstanca, posle C-18 ekstrakcije čvrste faze, uz eluiranje vodom.

<1>H NMR (D2) SH; 0,29 i 0,58 (svaki 2H, m, ciklopropil-H), 0,82 (1H, m, ciklopropil-H), 2,14 (3H, s, Me), 2,34 (1H, m, 5-H), 3,12 (2H, m, 3-H), 3,48 (2H, m. 6-H), 3,98 (1H,m, 2-H).

Elektrosprej maseni spektar M+H 246 (100%).

Biološka aktivnost

1. Inhibiciia izolovanog humanog iNOS

Inhibicija prečišćenog humanog iNOS se može odrediti upotrebom preparata humanog iNOS, kao što je opisano u glavi "Expression of Human Nitric Oxide Svnthaze Isozvmes", od Charles et al., uMethods in Enzymology,1996, Vof. 268, 449-460. Aktivnost se može pratiti koristeći kvantitativne promene absorpcije hemoglobina, kao što su opisali R.G.Knovvles i J.Davvson u "A Microtiterplate Assay of Human NOS Isoforms", uMethods in Molecular Biology,1998, Vol. 100, 237-242, Nitric Oxide Protocols, Urednik MATitheradge, Humana Press, Totovva HJ.

2. Inhibiciia eNOS i iNOS na prstenovima aorte pacova

Inhibicija eNOS i iNOSin situna prstenovima aorte pacova testirana je merenjem porasta tenzije prstena koja je prouzrokovana inhibicijom NO sintaze. Za proučavanja bazičnog tonusa (koji odražava eNOS), preparisani su prstenovi torakalne aorte sa nedirnutim endotelijumom, kao što je ranije opisano (Rees et al.Br. J. Pharmacol.1989, 96, 418-424) i dobijene su krive kumulativne koncentracije za inhibitore u prisustvu koncentracije praga osetlj'rvosti fenilefrina (EDio«10 nM). Za izučavanje indukovanog tonusa glatkih mišića (koji reflektuje iNOS), izloženi su prstenovi sa ogoljenim endotelijumom delovanju LPS (0,1 ug/mL, izS. typho$ a), uprisustvu fenilefrina, sa približno ED90tokom 6 h, kao što je ranije opisano (Rees et al.,Biochem. Biophys. Res. CommunA990i173, 541- 547). Tokom ovog vremena dolazilo je do progresivnog gubitka tonusa usled inhibicije iNOS. Krive kumulativne koncentracije su zatim dobijene za inhibitore. Rezultati su dati u sledećoj tabeli:

3. Inhibiciia nNOS na isečcima korteksa pacova

Efekti jedinjenja na nNOS u isečcima mozga pacova određivani su kao što su opisali Furfine et al. UJ. Biol. Chem.1994, 269, 26677-26683, i Lizasoain et al. UJ. Neunochem.1995, 84, 636-642.

Sinteza NO stimulisana sa KCI (54 nM) merena je konverzijom 14C-arginina u 14C-citrulin tokom 2 h na 37°C, u isečcima cerebralnog korteksa pacova, isečenih u aparatu Mcllvvain (0,2mmx0,2mm), nakon 1 h perioda preinkubacije u odsustvu jednjenja ili visokog sadržaja KCI.

Određeno je da jedinjenje iz Primera 1 ima IC50koje je >800 uM, što ukazuje na približno >300-struku selektivnost prema iNOS u odnosu na nNOS.

4. Postupak određivanja oralne bioupotrebliivosti iedinienia koia su inhibitori

iNOS

Rad na životinjama:

Pacovi (3 životinje po svakoj tački vremena) se doziraju intravenozno (10 mg/kg) i oralno (50 mg/kg) sa test jedinjenjem u vodenom rastvoru. Uzorci krvi se uzimaju u vremenskim intervalima posle ordiniranja, a plazma se priprema centrifugiranjem. Uzorci se čuvaju na -20°C do analize.

Analiza jedinjenja u plazmi:

Plazma (50 uL) se de-proteinizuje, a jedinjenja derivatizuju sa kvaternemim amonijum-reagensom. Zatim se uzorci injektiraju u HPLC sistem, a koncentracija jedinjenja određuje korišćenjem maseno-spektrometrijske detekcije.

Farmakokinetička analiza:

Koncentracije u plazmi, dobijene gornjim postupkom, se unesu u farmakokinetički softverski paket (PKCAL v 1,2s) a podaci se frtuju po metodi ne-odeljaka. Oralna bioupotrebljivost ovih jedinjenja se poredi sa vrednostima površine ispod krive (AUC) koje izračunava softver za oralni profil sa AUC za intravenozni profil. Poluvremena se dobijaju frtovanjem vremenskih taćaka u završnoj fazi intravenoznog profila.

Nađeno je da jedinjenje Primera 1 ima oralnu bioupotrebljivost >90% i poluvreme od2Ah.

Claims

1. Jedinjenje formule (l) njegova so, solvat ili fiziološki funkcionalan derivat, naznačeno time, što se R<1>bira između Ci^alkil, C^cikloalkil, Ci-4hidroksialkil i Ci-thaloalkil.

2. Jedinjenje formule (I), naznačeno time, što se bira između: S-[(R)-2-(1-iminoetilamino)propiO-L-cistein; S-[(S)-2-(1-iminoetilamino)propil]-L-cistein; S-[(R/S)-2-(1 -iminoetilamino)propil]-L-cistein; S-[(R)-2-(1-iminoetilamino)propiO-D-cistein; S-[(S)-2-(1-iminoetilamino)propii]-D-cistein; S-[(R/S)-2-(1-iminoetilamino)propil]-D-cistein; S-[(R/S)-2-(1 -imin oetila mino)b util]-L-cis te in; S-[(R/S)-2-(1 -iminoetilamino,2-ciklo<p>ro<p>il)etiO-L-cistein; i S-[(R/S)-2-(1-iminoetilamin,3-hidroksi)propil]-L-cistein; ili njegova so. solvat i fiziološki funkcionalan derivat.

3. Jedinjenje formule (I), naznačeno time što je to S-[(R)-2~(1-iminoet;larnino)propil]-L-cistein ili njegova so, solvat ili fiziološki funkcionalan derivat.

4. Jedinjenje formule (I), definisano prema bilo kome od Zahteva 1 do 3, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili fiziološki funkcionalan derivat, naznačeno time, što se koristi u medicinskoj terapiji.

<5->Farmaceutska formulacija, naznačena time, što sadrži jedinjenje formule (I) prema bilo kome od Zahteva 1 do 3, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, sotvat ili fiziološki funkcionalan derivat, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili dodatak, i opciono, jedan ili više drugih terapeutskih sastojaka.

6. Upotreba jedinjenja formule (I), definisanog prema bilo kome od Zahteva 1 do 3, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, solvata ili fiziološki funkcionalnog derivata za proizvodnju medikamenta za profilaksu ili tretman kliničkog stanja za koje je indiciran inhibitor azot(ll)oksid sintaze.

7. Upotreba, prema Zahtevu6pri čemu se kliničko stanje bira između artritisa, astme, ileusa i migrene.

<8->Postupak dobijanja jedinjenja formule (I), njegove soli, solvata ili fiziološki funkcionalnog derivata, naznačen time, što se sastoji od: (i) reakcije jedinjenja formule (II) ili njegovog optičkog izomera, soli ili zaštićenog derivata, gde je R<1>definisano gore, sa jedinjenjem formule (III) ili sa njegovom solju, gde je L odlazeća grupa, posle čega slede koraci, bez obzira na smer: (ii) opcionog uklanjanja bilo koje od zaštitnih grupa; (iii) opciono izdvajanje optičkfig izomera iz smeše optičkih izomera; (iv) opciona konverzija proizvoda u njegovu odgovarajuću so, solvat ili fiziološki funkcionalan derivat. g Jedinjenje formule (II), naznačeno time, što ima strukturu ili njegov optički izomer, so ili zaštićeni derivat, gde je R<1>definisano gore.

10. Zaštićeni derivat jedinjenja formule (I) prema Zahtevu 1, naznačen time, što se bira između: (R,R)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4- tioheksanoat; (R,S)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4- tioheksanoat; (S,S)-t-butil-2N-t-buto^ tioheksanoat; (S.RJ-t-butil-aN-t-butoksikarbonil-eN-fl-iminoetilJ-Z.e^iamino-S-metil^- tioheksanoat; (R,R/S)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diarriino-5-etil-4- tioheksanoat; (R, R/S )-t-b util-2 N-t-buto ks ikarbon il-6 N-(1 -imin oetil)-2,6-d ia mino-5-b utoks imetil-4- tioheksanoat; i (R,R/S)-t-butil-2N-t-butoksikarbonil-6N-{1-iminoetil)-2,6-diamino-5-cikloprop tioheksanoat; i njegove soli i solvati.