RS50449B - Supstituisani bisindolilmaleimidi za inhibiciju proliferacije ćelija - Google Patents

Abstract

Jedinjenje opšte formulei farmaceutski prihvatljive soli ovih jedinjenja, naznačeni time, što je R odabrano iz grupe koja se sastoji od:Prijava sadrži još 8 patentnih zahteva.

Description

Opis pronalaska

Predmetni pronalazak se odnosi na određene supstituisane pirole koji deluju kao antiproliferativni agensi. Ova jedinjenja i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu se primeniti u terapiji ili kontroli poremećaja uslovćenih proliferacijom ćelija, naročito kancera. Pronalazak je takođe usmeren na farmaceutske smeše koje sadrže ova jedinjenja, kao i na postupke terapije i/ili prevencije kancera, a naročito na terapiju ili kontrolu soUdnih tumora.

Osnova predmetnog pronalaska

Nekontrolisana proliferacija ćelija je osnovno obeležje kancera. Kancerozne tumorske ćelije obično imaju neki oblik oštećenja gena koji direktno ili indirektno kontrolišu ciklus ćelijskih deoba. Iako su otkriveni mnogi agensi koji poseduju željene antiproliferativne aktivnosti, mnogi od tih agenasa imaju različite nedostatke, između ostalog, slabu rastvorljivost, molekularnu složenost, i td. što ih Čini ili nepodesnima ili nepogodnima za terapeutsku primenu kod pacijenata. Stoga i dalje postoji potreba za jedinjenjirna malih molekula, koja se mogu lako sintetisati, a koja deluju kao efikasni terapeutski agensi kancera i koja su pogodna za primenu kod pacijenata u vidu kontinualne infuzije. Stoga je cilj ovog pronalaska da obezbedi ovakva jedinjenja, kao i farmaceutske smeše koje sadrže ova jedinjenja.

Definicije

U značenju kako je ovde primenjeno, naredni izrazi imaju sledeće opise.

"Alkenil" označava linearni ili razgranati alifatični nezasićeni ugljovodonični lanac sa 1 do 15 atoma ugljenika, poželjno 1 do 10 atoma ugfjenika, a najpogodnije l do 6 atoma ugljenika.

"Alkoksi"označava neku alkil ili alkenil grupu koja je preko kiseonika vezana za ostatak molekula (na pr. RO-, kao što su metoksi, etoksi, i td.).

"Aril" označava aromatični prsten sa 5 do 10 atoma, koji sadrži jedan ili dva

prstena, koji opciono sadrže jedan ili više heteroatoma, koji mogu biti isti ili različiti. U slučaju ovog-f>pisa, aril obuhvata i heteroaril. Poželjni heteroatomi obuhvataju azot, sumpor ili kiseonik, pojedinačno ili u bilo kojoj kombinaciji, na mestu jednog ili više atoma ugljenika. Primeri aril grupa u okviru ove definicije obuhvataju fenil, piridin, imidazoL pirol, triazoL furan, pirimidin.

"Cikloalkil" označava ne-aromatični, delirnično ili potpuno zasićeni cikličnu alifatičnu ugljovodoničnu grupu koja sadrži 3 do 8 atoma ugljenika. Primeri cikloalkil grupa obuhvataju ciklopropil, ciklopentil i cikloheksil.

'Efektivna količina" označava onu količinu najmanje jednog jedinjenja Formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive sobi, koja značajno inhibira proliferaciju i/ili sprečava diferencijaciju humanih tumorskih ćelija, uključujući i humane tumorske ćelijske Unije.

<Ci>Heteroatom" označava neki atom izabran između azota, sumpora i kiseonika. Heteroatomi su nezavisno izabrani i mogu da zamene jedan ili više atoma ugljenika.

"Heteroprsten" označava 3- do 10-točlanu nearomatičnu, delirnično ili potpuno zasićenu ugljovodoničnu grupu, koja sadrži najmanje jedan heteroatom. Ovakvi prstenasti sistemi obuhvataju morfolin, pirolidin, piperidin, piperazin.

"IC50" se odnosi na koncentraciju određenog jedinjenja saglasno pronalasku, koja inhibira 50% specifične merene aktivnosti. IC50se može meriti,inter alia,kao stoje to opisano u Primeru 15,infra.

"Niži alkil" označava linearni ili razgranati zasićeni alifatični ugljovodonik, koji sadrži 1 do 6, poželjno 1 do 4 atoma ugljenika. Niže alkil grupe mogu biti supstituisane kao Što je to opisanoinfra.Uz to, alkil lanac može sadržati jedan ili više heteroatoma umesto atoma ugljenika. Tipične niže alkil grupe obuhvataju metil, etil, propil, izopropiL butil, t-butil, 2-butil, pentil, heksil i slične.

'"Farmaceutski prihvatljiva so" odnosi se na konvencionalne soli nastale dodavanjem kiselina ili dodavanjem baza, a koje zadržavaju biološku efikasnost i svojstva jedinjenja formule I i koje nastaju od pogodnih netoksičnih organskih ili neorganskih kiselina ili organskih ili neorganskih baza. Primeri soli nastalih dodavanjem kiselina obuhvataju one nastale od neorganskih kiselina, kao što su

hlorovodonična kiselina, bromovodoniČna kiselina, jodovodonična kiselina, sumporna kiselina, fosforna kiselina i azotna kiselina, kao i one koje nastale od organskih kiselina, kao šttrsu sirćetna kiselina, tartarna kiselina, salicilna kiselina, metansulfonska kiselina, ćilibarna kiselina, lirnunska kiselina, jabučna kiselina, mlečna kiselina, fumarna kiselina, i slične. Primeri sob nastahh dodavanjem baza obuhvataju one nastale od amonijum-, kalijum-, natrijum- i kvatemernog amonijum hidroksida, kao što je na primer, tetrametilamonijum hidroksid.

"Farmaceutski prihvatljiv", kao što je to farmaceutski prihvatljiv nosač, ekscipijent i td, označava farmakološku prihvatljivost i suštinsku netoksičnost određenog jedinjenja koje se primenjuje kod subjekata.

"Farmaceutski aktivan metabolit" označava metabobčki proizvod jedinjenja formule I, koji je farmaceutski prihvatljiv i efikasan.

"Polietilen glikol" ili "PEG" grupe predstavljaju strukture opšte formule - R<9>(OCH3CH^)aOH, gdenima prosečnu vrednost između 2 i 1500, poželjno između 15 i 150, sa prosečnom molekulskom težinom 500 do 5000 daltona, i naznačen time što je R<9>karboksi ili niži alkil, poželjno metil ili etil.

"Prolek" se odnosi na jedinjenje koje se može konvertovati pod fiziološkim uslovima ih rastvaranjem u farmaceutski aktivno jedinjenje. Prolek može biti neaktivan kada se primeni kod subjekta, ali se konvertujein vivou neko aktivno jedinjenje.

"Supstitusian", kao što je supstituisani alkil, označava da se supstitucija može desiti na jednoj ili više pozicija, i da su, ukoliko nije drugačije naznačeno, supstituenti na svakom supstitucionom mestu nezavisno izabrani između specifičnih opcija.

"Supstituisani amino" označava amino grupu, koja je mono- ili di-supstituisana drugom grupom, poželjno nižom alkil (na pr. metil ili etil).

Detaljan opis pronalaska

Konkretno, pronalazak se odnosi na supstituisane pirole sa formulom:

i farmaceutski prihvatljive soli prethodnih jedinjenja, naznačene time što: R je izabran iz grupe koja se sastoji od -PCbR^2, -CHR3OCOR4, - CHR<3>OC02R<4>, -CHR<3>OCONHR<4>i -COR<4>;

R<1>i R<2>su izabrani iz grupe koja se sastoji od H, Na i NH4, i oni su isti, osim osim ukoliko bilo R<1>ili R<2>ne predstavlja H, u kom slučaju drugi radikal može biti različit ili u supsrotnom, R<1>i R2 mogu zajedno predstavljati Ca;

R<3>je izabran između iz grupe koja se sastoji od H ili metil;

R4 je izabran iz grupe koja se sastoji od

niže alkil grupe, koja može opciono biti supstituisana jednim ili vise supstituenata izabranih između grupe koja se sastoji -CO7R5, -NR6R7, polietilen glikol, -OPO^R'R"", hidroksi, alkoksi i aril,

alkenil, koji može opciono biti susptituisan jednim ili više supstituenata izabranih između -CO2R<5>, -NR<6>R', polietilen glikol, - OP03R<l>R<2>, hidroksi, alkoksi i aril,

cikloalkil, koji može biti opciono supstituisan jednim ili sa više supstituenata izabranih iz grupe koja se sastoji od --CO2R3, -NR°R<7>, polietilen glikol, -0P03R'R<2>, hidroksi, alkoksi i aril,

heteroprsten, koji, kada sadrži N kao heteroatom, može biti opciono

supsutituisan na N atomu sa -COR i

aril koji može biti opciono supstituisan jednim ili sa više supstituenata izabranih iz grupe koja se sastoji od -CO?R°, hidroksi, alkoksi, polietilen glikol. -OPO3RR<2>i nižom alkil grupom, koja sama može biti supstituisana hidroksi, karboksi ili supstituisnaom arnino grupom;

Jedinjenja iz ovog pronalaska pokazuju antiproliferativnu aktivnost, konkretno, ona inhibiraju deobu ćelija u G2/M fazi ćelijskog ciklusa i načelno se označavaju kao-inhibitori "G2/M faze ćelijskog ciklusa". Ova jedinjenja su rastvorljivi prolekovi aktivnog metabolita antikancerskog terapeutskog agensa u okviru U.S. Patenta Br. 5,057,614 (Davies et al.) i stoga su pogodna za primenu putem kontinualne mfuzije.

Predmetni pronalazak je dalje usmeren na farmaceutske smeše koje sadrže farmaceutski efektivnu količinu jednog ili više prethodno opisanih jedinjenja i farmaceutski prihvatljiv nosač ih ekscipijent.

Predmetni pronalazak je dalje usmeren na primenu jednog ili više prethodno opisanih jedinjenja za dobijanje medikamenata u terapiji poremećaja izazvanih proliferačijom ćelija, naročito kancera, na primer, sohdnih tumora i kancera dojke, debelog creva ili pluća.

Predmetni pronalazak je takođe usmeren na postupak tretiranja sohdnih tumora, naročito tumora dojke ili debelog creva, primenom efektivne količine jedinjenja formule 1 i/ili njegovih farmaceutski prihvatljivih soli, pacijentima kojima je potrebna ova terapija.

U poželjnom obliku izvođenja jedinjenja formule I, R predstavlja - CHR<3>OCOR<4.>Najpoželjnije je daje R<J>H i R<4>niži alkil, supstituisan polietilen glikolom.

U narednom poželjnom obliku izvođenja jedinjenja formule I, R je -COR<4.>Poželjnije je da je R<4>izabran iz grupe koja se sastoji od heteroprstena i nižeg alkila, najpoželjnije je daje to niži alkil, supstituisan -NR<6>R' grupom

U narednom poželjnom obliku izvođenja jedinjenja formule I, polietilen glikol ima molekulsku težinu od oko 750 do oko 5000 daltona, a najpoželjnije oko 2000 daltona.

Slede primeri poželjnih jedinjenja formule I: 3-[2-(2-Metoksi-etoksi)-etoksi]-propionska kiselina 3-[4-( l-metil-6-nitro- 1H-indol-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro- lH-pirol-3-iTJ-indol- 1-ilmetil estar;

0424[2,5-diMdro-3-[4-(l-meta-6-mtro-lH-indoi-3-il)-2,5-diokso-2,5 dihidro-pirol-3-il]-indol- l-il]metoksikarbonil]etil]-0'-metilpropilen glikol 2000;

2,3-Dimetoksi-benzojeva kiselina 3-[4-(l-metil-6-nitro- lH-indol-3-il)-2,5-diokso-2,5-diMdro-lH-pkol-3-il]-indol- 1-ilmetil estar;

3-Dietikminometil-benzojeva kiselina 3-[4-(l-metil-6-nitro-lH-indol-3-il)-2,5-diokso-2,5-diMdro-lH-pirol-3-il]-indol- 1-ilmetil hidrohlorid estar;

3-( lH-indol-3-il)-4-( l-metil-6-nitro- lH-indol-3-il)- l-oktadeka-9-enoil-pirol-2,5-dion;

{3-[4-(l-MetU-6-nitro-lH-indol-3-a>2,5-diokso-2,5-dihidro-lH^ indol-l-il}-fosfonska kiselina;

3-(lAcetU-lH-mdol-3-d)-4-(l-metU-6-rutro-lH-mdol-3-U)-pkol-Trifluorosirćetna kiseiina 3-(l-metil-6-nitro-lH-mdol-3-il)-4-[l-(piperidin-4-karb onil)- IH- in dol- 3 - il] -p ir o 1- 2,5 - dion;

3-( 1-Aminoacetil- lH-indol-3-il)-4-( l-metil-6-nitro- lH-rndol-3-il)-pirol-2,5-dion hidrohlorid;

Sirćetna kiselina 3-[4-(l-metil-6-nitro-lH-mdol-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro-lH-pirol-3-il]-indol-1-ilmetil estar;

Pentadioctena kiselina niono-{3-[4-(l-metil-6-nitro-lH-indol-3-il)-2,5-diokso-2,5-đihidro- lH-<p>hol-3-il]-indol-1-ilmetil} estar;

2,3-Dimetoksi-benzojeva kisehna l-{3-[4-( 1-metil-6-nitro-lH-indol-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro-lH-pirol-3-il]-indol-l-Ll}-etil estar; i

3-Dietilaminometil-benzojeva kiselina l-{3-[4-(l-metil-6-nitro-lH-inodl-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro-lH-pkol-3-il]-indol- l-il}-etil estar hidrohlorid.

Jedinjenja koja su ovde opisana i predstavljena formulama mogu iskazati tautomerizam ili strukturni izomerizam. Smatra se da predmetni pronalazak obuhvata svaku tautomernu ih strukturno izomernu formu ovih jedinjenja ili smeše ovih formi i da nije ograničen bilo kojom tautomemom ili strukturno izmernom formom predstavljenom formulom na priloženim crtežima.

Sinteza jedinjenja u skladu sa pronalaskom

Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu se pripremiti postupcima poznatim u stanju tehnike. Pogodni postupci za sintezu ovih jedinjenja predstavljeni su primerima. Načelno se ova jedinjenja mogu dobiti kao stoje to dato u zahtevu 18.

KoiLbetnije, jedinjenja formule I, u kojima R označava -POsR'R<2>i u kojima su R<1>i R<2>kao sto je to prethodno opisano, mogu se dobiti kao što je prikazano na narednoj Shemi'f.

Kao stoje prikazano na Shemi I, 3-(lH-indol-3-il)-4-(l-metil-6-nitro-iH-indol-3-il)-pirol-2,5-dion (1), (dobijen saglasno opisu u USSN 09/268,887, čiji su relevantni deiovi ovde priključeni referencama), tretiran je sa pogodnim protektovanim hlorofosfonatom u prisustvu jake baze, kao što je litijum bis(trimetUsilil)amid, i u odgovarajućem rastvaraču, kao što je THF, kako bi se dobio protektovani derivat fosfonske Iđseline 2, u kojem X predstavlja pogodnu protektivnu grupu poznatu stručnjacima, kao što je n pr. benzil. Uklanjanje protektivne grupe

može se postići bilo kojim standardnim postupkom koji je poznat stručnjaku, kako bi nastala fosfonska kiselina 3. Konkretno, kada X predstavlja benzil grupu, protektivna

grupa se uklanja primenom cikloheksadiena i palađijuma na ugljeniku, kao katalizatora. Jedinjenje 3 može se konvertovati u svoju so 4, kao stoje na pr. mononatrijumska so, primenom standaralnih postupaka, koji su takođe poznati stručnjaku.

Jedinjenja formule I, u kojima R označava -COR4 mogu se dobiti saglasno Shemi II, koja sledi.

Tipično, 3-(lH-mdol-3-il)-4-(l-metd-6-nitro-lH-indol-3-il)-pirol-2,5-dion (jedinjenje 1, dobijeno kao stoje ilustrovano na Shemi I) se deprotonuje u aprotičnom rastvaraču, kao stoje THF, na -60°C, primenom jake baze, kao što je litijum bis(trimetilsilil)amid. Rezultujući anjon se zatim tretira sa poznatim kiselim hloridom ili nekim Mselim hloridom, dobijenim poznatim postupcima. Alternativno, jedinjenje 1 može se kuplovati sa poznatom karboksilnom kiselinom ili nekom karboksilnom kiselinom, dobijenom poznatim postupcima, primenom standaardnog postupka formiranja amidneveze, kao stoje duzo<p>ro<p>ilkarbodiirnid i HOBt. Jedinjenje 5, naznačeno time što R<4>sadrži pogodni protektovani karboksil, hidroksialkil, amino ih monoaj^amino, može se dalje modiOkovati uklanjanjem protektivne grupe primenom poznatih postupaka, a zatim opcionim modiflkovanjem tako nastale karboksil, hidroksi ili amino grupe u željeni amid ih estar, primenom postupaka koji su poznati u stanju tehnike.

Jedinjenja opšte formule I u kojima R označava -CHR OCOR mogu se dobiti saglasno Shemi HI, koja sledi.

Kao što je naznačeno na Shemi III, hidroksi alkil derivat 6 se esteiifikuje primenom poznatih postupaka. Obično, jedinjenje 6 se tretira nekom poznatom karboksilnom kiselinom ili nekom karboksilnom kiselinom dobijenom poznatim postupcima, u rastvaraču kao što je metilen hlorid u prisustvu EDC i dimetilaminopiridina, tokom nekoliko sati na sobnoj temperaturi. Alternativno, hidroksi intermedijer 6 može se tretirati nekim poznatim Mselim hloridom ili nekim lđselim hloridom dobijenim poznatim postupcima. Alternativno, hidroksi intermedijer 6 može se tretirati poznatim kiselim anhidridom ili nekim kiselim anhidridom, dobijenim poznatim postupcima.

U cilju dobijanja jedinjenja 7, u kojem R4 sadrži heteroaromatični prsten, heteroatom, kao stoje N, može se dalje modifikovati reakcijom sa nekim alkil jodidom, kao stoje —CH3I, u rastvaraču kao što je acetonitril.

Alternativno, jedinjenje 7, u kojem R4 sadrži pogodni protektovani karboksil. hidroksialkil, amino ili monoalkilamino, može se dalje modifikovati uklanjanjem protektrvne grupe poznatim postupcima, a zatim opcionim modifikovanjem tako nastale karboksil, hidroksi ili amino grupe do željenog amida ili estra, primenom postupaka koji su poznati u stanju tehnike.

Polazni materijal 6, u kojem R<3>označava H, može se takođe dobiti kao što je to opisano u US pat. appl 09/268,887 (Jedinjenje U), Čiji su relevantni delovi ovde obuhvaćeni referencama.

Polazni materijal 6, u kojem R<3>označava metil, može se dobiti saglasno Shemi IV koja sledi.

Jedinjenje 8 je komercijalno dostupno (na primeTkod Aldrich-a).

Jedinjenja opšte formule I, u kojima R označava -CHR<3>OC(},R<4>i u kojima su R<3>i R<4>kao što je to prethodno opisano, mogu se dobiti saglasno Shemi V, koja sledi.

Obično, hidroksi alkil derivat 6 se tretira sa poznatim hloroformatom ili nekim hhooformatom dobijenim poznatim postupcima, u rastvaraču kao stoje dihlorometan na temperaturama od -78 do 20°, u prisustvu dimetilaminophridina, kako bi nastao željeni karbonat 14.

Jedinjenja opšte formule I, u kojima R označava -CHR30C0NHR4, i u kojima su R<3>i R<4>kao stoje to ranije opisano, mogu se dobiti saglasno Shemi VI, koja sledi.

Obično se hidroksimetil intermedijer 6 deprotonuje primenom jake baze, kao što je litijum bis(trimetnsilil)amid, u rastvaraču kao što je THF na 0°C. Nastali anjon se zatim tretira u istom rastvaraču, bis(p-nitrofenil)karbonatorn, a zatim poznatim aminom ili nekim aminom dobijenim poznatim postupcima.

Kiselo jedinjenje formule I može se konvertovati u neku farmaceutski prihvatljivu so tretiranjem pogodnom bazom, primenom postupaka poznatim u stanju tehnike. Pogodee- soli su one nastale ne samo od neorganskih baza, kao što su na primer, natrijumove, kalijumove ili kalcijumove soli, već takođe i od organskig baza, kao što su etilendiamin, monoetanolamin ih dietanolamin. Konverzija baznog jedinjenja formule I u farmaceutski prihvatljivu so može se sprovesti tretmanom sa pogodnom kiselinom, na poznati način. Pogodne soli su one nastale ne samo od neorganskih kiselina, na primer, hlorovodonici, bromovodonici, fosfati ili sulfati, već takođe i od organskih Iđselina, na primer, acetati, citrati, tumarati, tartarati, maleati, metansulfonati ih p-toluensulfonati.

Smeše/ Formulacii' e

U alternativnom obliku izvođenja, predmetni pronalazak je usmeren na farmaceutske smeše koje sadrže najmanje jedno jedinjenje formule I ili njihove farmaceutske prihvatljive soli.

Ove farmaceutske smeše mogu se primeniti oralno, na primer u formi tableta, film tableta, dražeja, tvTdih ili mekih želatinskih kapsula, rastvora, emulzija ili suspenzija. One se takođe mogu primeniti rektabio, na primer u formi supozitorija. Ipak su jedinjenja formule I pogodna za parenteralnu primenu, na primer u formi mjekcionih rastvora.

Farmaceutske smeše iz predmetnog pronalaska koje sadrže jedinjenja formule I, prolekovi ovih jedinjenja ih njihove soli mogu se proizvesti na način koji je poznat u stanju tehnike, na primer, konvencionalnim mešanjem, inkapusuliranjem, rastvaranjem, granulacijom, emulzifikacijom, zarobljavanjem, pravljenjem dražeja ili postupkom hofilizacije. Ovi farmaceutski preparati mogu se formulisati sa terapeutski mertriim, neorganskim ili organskim nosačima. Kao nosače za tablete, film tablete, dražeje i tvrde želatinske kapsule moguće je primeniti laktozu, kukuruz, škrob hi njihove derivate, talk, stearinsku kiselinu ili njene soli. Pogodni nosači za meke želatinske kapsule obuhvataju biljna ulja, voskove i masnoće. Zavisno od prirode aktivne susptance, nekada neće biti potrebni nosači u slučaju mekih želatmskih kapsula. Pogodni nosači za proizvodnju rastvora i sirupa su voda, alkoholi, polioli, glicerin, biljna ulja, fosfolipidi i površinski aktivne supstance. Pogodni nosači za supozitorije su prirodna ili stvrdnuta ulja, voskovi, masnoće i polu-tečni polioli..

Farmaceutski preparati mogu takođe sadržati prezervative, solibilizatore, stabilizatore, ovlaživače, emulzifikatore, zaslađivače, bije, arome, sori za postizanje različitih osmotskih pritisaka, pufere, agense za oblaganje i antioksidante. Oni takođe mogu sadržati druge terapeutski korisne supstance, kao i dodatne aktivne sastojke trazličite od jedinjenja formule I.

Doziranje

Kao što je ranije pomenuto Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu se primeniti u terapiji ili kontroli poremećaja uslovljenih proliferacijom ćehja, naročito onkoloških oboljenja. Ova jedinjenja i formulacije koje sadrže naznačena jedinjenja su naročito korisni u terapiji ili kontroh sohdnih tumora, kao što su naprimer, tumori dojke i debelog creva.

Terapeutski efektivna količina jedinjenja u skladu sa ovim pronalaskom označava onu količinu jedinjenja koja je sposobna da spreči, umanji ili ublaži simptome bolesti ili produži preživljavanje subjekta koji je pod terapijom Određivanje terapeutski efektivne količine je stvar stručnosti eksperta.

Terapeutski efektivna količina ih doza jedinjenja u skladu sa ovim pronalaskom može varirati unutar širokih granica i može se podešavati saglasno potrebama u svakom konkretnom slučaju. Uopšteno, u slučaju oralne ili parenteralne primene kod odraslog pacijenta težine oko 70 kg, dnevna doza od oko 10 mg do oko 10 000 mg, poželjno od oko 200 mg do oko 1 000 mg bi bila adekvatna, iako je moguće prevazići gornji limit kada je to potrebno. Dnevna doza može se primeniti u obliku pojedinačne doze ili u više podeljenih doza, ih u slučaju parenteralne primene, može biti data u vidu kontinualne infuzije.

Primeri

Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu se sintetisati sagalsno poznatim tehnikama, kao što su na primer, opšte sheme koje su prethodno date. Naredni primeri ilustruju pogodne postupke za sintezu jedinjenja i formulacija iz predmetnog nronalsska

Primer 1:3-[2-(2-Metoksi-etoksi)-etoksi]-propionska kiselina 3-[4-(1-

metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro-1 H-piroI-3-il]-indol-1-

ilmetil estar

Suspenzija l-eth-3-(3-đimethammoproph)karb^ HC1 ('TiDC-HCl"; Aldrich, 77 mg, 0.40 mmol) u suvom THF (12 ml), tretirana je sa DMAP (Aldricli)

(55 mg, 0.45 mmol), tokom 2minuta na 22°C. Ovome je dodat 3-(l-Mdroksimetil-lH-indol-3-h)-4-(l-meta-6-nitro-lH-md (110 mg, 0.26 mmol)

(pripremljen kao što je opisano kasnije). Smeša je mešana tokom 20 minuta, a zatim je dodata 2-(2-metoksi-etoksi)-etoksi]-propionska kiselina (CAS: 209542-49-4) (120 mg, 0.62 mmol). Mešanje je nastavljeno na 22°C tokom 4 sata. Svi rastvarači su upareni a proizvod je prečišćen liromatografijom na silika gelu, čime je nastalo 130 mg 3-[2-(2-metoksi-etoksi)-etoksi]-propionska kiselina 3-[4-(l-metil-6-nitro-lH-mdol-3-d)-2,5-diokso-2,5-dihidro- lH-piro 1-3-il]-indol-1-ilmetil estar. (prinos 80%).

3-(l-MdroksimetU-lH-indol-3-il)-4-(l-metil-6-mtro-lH-m^ dion je dobijen, kao što je opisano u USSN 09/268,887 (Jedinjenej II), čiji su relevantni delovi ovde obuhvaćeni u vidu referenci.

Primer 2: 0-[2-[[2,5-dihidro-3-[4-(1-metil-6-nitro-1 H-indol-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro-pirol-3-il]-indol-1 -il]metoksikarbonil]etil]-0'-metilpolietiien

glikol 2000

Rastvoru 3-( l-hidroksimetil-lH-indol-3-h)-4-(l-metil-6-nitro-lH-indol-3-il)-pirol-2,5-diona (200 mg, 0.5 mmol) (dobijen kao stoje opisano u Primeru 1) u dihlorometanu, dodat je, na -78°C, trietharmn (0.6 mmol), a zatim 0-(2-karboksietil)-O'-metil pohetilen glikol 2000 hlorovodonik (0.6 mmol) (dobijen standardnim postupcima od mono-metil pohetilen glikol 2000 propanonske kisehne). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 sata i rastvarač je uparen. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu, čime je nastalo 1 g 0-[2-[[2,5-dihidro-3-[4-(l-meth-6-nitro-lH-mdol-3-d)-2,5-diokso-2,5-diMdro-phol-3-il]-uidol-l-illmetoksikarbonilletilj-O'-metilpolietilen glikol 2000. (Prinos 80%).

Primer3: Primenom istog postupka kao u Primeru 2, dobijena su sledeća jedinjenja: a) 2,3-Dimetoksi-benzojeva Idselina 3-[4-(l-metil-6-nitro-lH-indol-3-il)-2,5-diokso-b) 3-Diethammometil-benzojeva kiselina 3-[4-(l-metil-6-rritro-lH-iadol-3-il)-2,5-điokso-2,5-dihidro-lH-phol-3-h]-m^ estar hlorovodonik.

Primer 4: 3-(tH-indoi-3-iI)-4-(1 -metil-6-nitro-1 H-indol-3-il)-1 -oktadeka-9-enoil-pirol-2,5-dion

Rastvor 3-(lH-mdol-3-U)-4-(l-metU-6-nitro-lH-mdol-3-U)-pirol-2,5-dioiia (250 mg, 0.65 mmol), dobijen kao što je opisano u USSN 09/268,887, rastvoren je TFH (15 ml) i ohlađen na -60°C. Ovom rastvoru je dodat htijum bis(trimethsilil)amid (0.7 mmol, 0.7 ml, 1.0 M u TFH), a zatim oleil hlorid (Aldrich) (0.300 g, 1.0 mmol) u THF (5 ml). Tako nastala smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata. Sav rastvarao je uparen, a sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu. Nastali proizvod je razdvojen primenom hromatografije na silika gelu, uz korišćenje gradijenta etil acetata i heksana. Na ovaj način nastalo je 310 mg 3-(lH-indol-3-il)~4-(l-metil-6-nitro-lH-indol-3-il)- l-oktadeka-9-enoh-pirol-2,5-diona (prinos 70%).

Primer 5: {3-[4-(1-MetiI-6-nitro-1H-indol-3-iI)-2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-3-SI3-indoM -il}-fosfonska kiselina

a) Rastvor 3-(lH-mdol-3-h)-4-(l-meth-6-nitro-lH-mdol-341)-phol-2,5-diona (210 mg, 0.55 mmol), dobijen je kao stoje opisano u USSN 09/268,887, u THF (150

ml), i ohlađen na -70°C. Ovom rastvoru dodat je htijum bis(trimethsilil)amid (1.5 mmol, 1.5 mi 2.5 ekv, 1.0 M u THF). Ovome je dodat dibenzil hlorofosfat (CAS;

538-37-4) (500 mg, 1.6 mmol) u THF (5 ml). Hlađenje je uklonjeno i temperatura rastvora je podignuta na -40°C, rastvor je sipan u vodu i ekstrahovan etil acetatom/heksanom (1:4). Organski sloj je ispran vodom, osušen i uparen. Ostatak je prečišćen i razdvojen u komponentne proizvode, primenom hromatografije na silika gelu, uz korišćenje gradijenta etil acetata/heksana. Tako je nastalo 150 mg (3-[4-( l-metil-6-nitro- lH-mdol-3-h)-2,5-diokso-2,5-dihidro- lH-pirol-3-il]-indol-l-il}-fosfonske lđseline dibenzil estra. (Prinos 43%).

b) Rastvor (3-[4-(l-metil-6-nitro-lH-mdol-3-h)-2,5-diokso-2,5-dihidro-lH-phol-3-il]-indol-l-il}-fosfonske kiseline dibenzil estra (50 mg, 0.08 mol) (iz prethodne

faze, u smeši THF/etanola (3 ml/6 ml) tretiran je sa 10% Pd/C (75 mg) i 1,4-eikloheksadienom (0.5 ml), a zatim je zagrejan na 35-40°C tokom 2 sata. Reakcija je ohlađena, filtrirana kroz ceht i potpuno uparena. Dobijeni su kristali of

THF/heksana, čime je nastalo 20 mg {3-[4-(l-metil-6-nitro-lH-indol-3-il)-2,5-diokso-2,5-diMdro-lH-pirol-3-il]-indol-l-il}-fosfonska kiselina. (Prinos 55%).

Primer 6; 3-(1-Acetil-1H-indol-3-iI)-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-pirol-2,5-dion

Rastvor 3-(lH-mdol-3-h)-4-(l-meth-6-mtro-lH-m^ (51 mg, 0.13 mmol), dobijen kao stoje opisano u USNN 09/268,887, u THF (20 ml), ohlađen je na -70°C. Ovom rastvoru dodat je htijum bis(trimetilsilil)amid (0.5 mmol, 0.5 ml, 3.8 ekv. 1.0 M u THF), nakon Čega je dodato acetil hlorida u suvišku (0.1 ml). Nastali rastvor je mešan sve dok nije postignuta temperatura od -45°C. Reakcija je uparena i prečišćena hromatografijom na silika gelu, čime je nastalo 33 mg 3-(l-acetil- 1H-indol-3-il)-4-(l-metil-6-nitro- lH-indol-3-il)-pirol-2,5-siona. (Prinos 65%).

Primer 7: Trifluoro-sirćetna kiselina 3-(1-metil-6-nitro-1 H-indol-3-il)-4-[1-(piperidin-4-karbonil)-1H-indol-3-il]-pirol-2,5-dion

1.5 ekvivalenata N-(terc-butoksikarbonil)-piperidin-4-karbokshna kiselina (Bachem, CA) dodato je rastvoru 3-(lH-mdol-3-h)-4-(l-meth-6-nitro-lH-indol-3-il)-phol-2,5-diona (dobijen kao što je opisano u USSN 09/268,887) (Jeahnjenje 1), čiji su relevantni delovi ovde obuhvaćeni referncama) u THF. Dodato je 1.3 ekvivalenata diizopropil karbodiimida i N-hidroksibenztriazola. Ovaj rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 6.5 sata. Zatim je dodata mala količina cezijum karbonata i 0.5 ml DMF. Reakcija je mešana 20 minuta. Reakciona srneša je zatim razblažena dodavanjem CH2G2 i isprana zasićenim NH4CI i vodom. Proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu. (Prinos 92%). Rezultutjući BOC protektovani amin je rastvore u CH2CI2i tretiran trifluorosirćetnom kiselinom na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. RastvaraČ je uparen, a ostatak je prečišćen primenom HPLC, čime je nastao trifhiorosirćetna kiselina 3-(l-metil-6-nitro- lH-indol-3-il)-4-[l-(piperidin-4-karbonil)-lH-indol-3-il]-phol-2,5-dion. (Prinos 54%).

Primer 8: 3-(1 -Aminoacetil-1 H-indol-3-il)-4-{1 -metil-6-nitro-1 H-indol-3-il)-pirol-2,5-dion hidrohlorid

1.05 Ekvivalenata N-(terc-butoksikarbonil)ghcina (Bachem, CA) i 1 ekvivalent 3-(lH-mdol-3-U)-4-(l-meth-6-nitro-lH-rndol-3-il)-phol-2,5-diona (dobijen kao stoje prethodno opisano), rastvoreno je u THF. Dodato je 1.3 ekvivalenata N-

mdroksibenzotnazola i duzopropil-karbodumada i reakciona smesa je mesana tokom 5 sati. Dodata je mala količina cezijum karbonata i DMF. Reakcija je mešana tokom 30 minuta. Reakeiona smeša je razblažena etil acetatom i etrom, isprana vodom i osušena natrijum sulfatom Rezultujući 3-P^-butoksikarbonil-(l-aminoacetil-lH-indol-3-il)]-4-(l-metil-6-nitro-lH-mdol-3-U)-pirol-2,5-dion je prečišćen na Prep TLCploči. (Prinos 53%). BOC-protektovani proizvod je rastvoren u THF, a zatim je 12 N HC1 dodata kap po kap. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod azotom i prečišćena primenom HPLC, čime je nastalo 0.026 g 3-(l-arrhnoaceth-lH-mdol-3-h)-4-(l-m^ pirol-2,5-diona. (Prinos 95%).

Primer 9: 3-[4-(1-Metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro-1 H-pirol-3-il]-indol-1-ilmetil estar sirćetne kiseline

Polu-čvrsti 3-( 1-hidroksimetil- lH-indol-3-il)-4-( l-metil-6-nitro- lH-indol-3-il)-pirol-2,5-dion (120 mg, 0.228 mmol) (dobijen kao stoje opisano u USSN 09/268,887 (Jedinjenje II) u 3 ml sirćetnog ankidrida (Aldrich) mešan je na sobnoj temperaturi tokom 19 sati i na 100°C tokom 2.5 sata. Rezultujući rastvor je ohlađen, razblažen vodom i ekstrahovan EtOAc. EtOAc sloj je ispran vodom, slanim rastvorom i osušen nad magnezijum sulfatom, a zatim je uparen. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom primenom EtOAc/heksana, čime je nastalo 77.1 mg 3-[4-(l-mefil-6-nitro-lH-mdol-3-tf)-2,5-diokso~2,5-dMdro-lH-ph^ estar sirćetne kiseline. (Prinos 53%).

Primer 10: Mono~{3-[4-(1-metil-6-nitro-1 H-indol-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-3-il]-indol-1-ilmetil} estar pentaoctene kiseline Rastvor 3-(1-hidroksimetil- lH-indol-3-il)-4-(l-metil-6-nitro- lH-indol-3-il)-phol-2,5-diona (103 mg, 0.248 mmol), (dobijen kao stoje opisano u Primeru 1), glutaril anhidrida (35.1 mg, 0.308 mmol) (Aldrich) i trietharnina (0.03 ml, 0.924 mmol) u 5 ml EtOAc. ugrejan je na temperaturu refluksa tokom 6 sati. Rastvor je ohlađen, razblažen EtOAc, ispran sa 0.5 N HC1, vodom i slanim rastvorom, osušen nad magnezijum sulfatom i konačno uparen. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom primenom EtOAc/acetona, čime je nastalo 35 mg mono-{3-[4-(l-metil-6-nitro-lH-kdol-3-il)-2,5-diokso-2,5-diM<ko-lH-pk^ estra pentanoctene kiseline. (Prinos 27%).

Primer 11: 1-{3-[4-(1-metil-6-nitro-1 H-indoI-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-3-il]-indoi-1-il}-etil estar 2,3-dimetoksi-benzojeve kiseline

a) Suspenziji NaH (1.92 g 60% disperzije u ulju) u 75 ml DMF, dodat je indol (4.68 g, 40 mmol) (Aldrich). Smeša je mešana tokom 15 minuta na 0°C, a zatim je, kap

po kap, dodat 1-hloroetil metil etar (4 ml). Rezultujuća smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata i sipana preko leda/vode, a zatim je ekstrahovana toluenom. Organski sloj je osušen nad magnezijum sulfatom i uparen. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom, uz korišćenje EtOAc/heksana, čime je nastalo 4 g 1-[1-metoksietiljindola. (Prinos 58%).

b) Rastvoru l-( l-metoksietil)indola (4 g, 23 mmol) (dobijen kao što je opisano u prethodnoj fazi a)) u anhidridnom dietil etru na 0°C, dodavanje oksal hlorid (4.2

ml 48 mmol) tokom 5 minuta. Rezultujuća polu-čvsrta smeša je mešana na 0°C tokom 5 sati, i profiltrirana, Čime je nastalo 1.9 g [l-(l-metoksi-eth)-lH-indol-3-il]-okso-aceth hlorida. (Prinos 31%). Ovaj materijal je korišćen bez dodatnog

prečišćavanja.

c) Polu-čvrstoj smeši [l-(l-metoksi-etil)- lH-indol-3-il]-okso-aceth hlorida (1.9 g, 7.15 mmol) (iz prethodne faze b)) i 1-metiletil estar hidrohloridu [1-metil-6-nitro-lH-indol]-3-etenimidne kiseline (2.3 g, 7.3 mmol) (Jedinjenje 15 na Shemi 2 USSN 09/268, 887), u 75 ml CH2C12na 0°C, dodavanje trietil amin (3.6 ml, 25.8 mmol) tokom 3 minuta. Smeša je mešana na 0°C tokom 4 sata, a zatim je ekstrahovana 0.5 N HC1. Vodeni sloj je ekstrahovan primenom CH^Cl?, a spojeni CH2CI2slojevi su isprani vodom, slanim rastvorom, osušeni nad magnezijum sulfatom i upareni. Ostatak je rastvoren u 70 ml toluena, a nastali rastvor je ohlađena na 0°C. Dodat je kiseli hidrat p-toluensulfonske Iđseline (1.4 g, 7.36 mmol), i smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata. Smeša je isprana zasićenim rastvorom NaHCOj i ekstrahovana sa 2x50 ml EtOAc. Spojeni EtOAc slojevi su osušeni nad magnezijum sulfatom i upareni, čime je nastao 4.1 g (Prinos 100%) 3-[l-( 1-metoksi-etil)- lH-indol-3-il]-4-( l-metil-6-nitro- lH-indol-3-il)-phol-2,5-diona, u obliku crvene, čvrste gumaste supstance, koja je korišćena bez dodatnog

prečišćavanja.

d) Rastvoru 3-[l-( 1-metoksi-etil)- lH-indol-3-il]-4-( l-metil-6-nitro- lH-inđol-3-il)-pirol-2,5-diona (3.75 g) (iz prethodne fazec))u 100 ml THF, dodata je 2N HC1

(75 ml). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 sata i usut u EtOAc i slani rastvor. Slojevi su razdvojeni, a vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Spojeni EtOAc slojevi su osušeni nad magnezijum sulfatom i upareni. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom primenom EtOAc/heksana, Čime je nastao 1.1 g (Prinos 33%) 3-[l-( 1-hidroksi-etil)- lH-indol-3-a]-4-(l-metil-6-nitro-indol-3-il)-p hol- 2,5 -diona.

e) Rastvoru 3-[l-(l-ludroksi-eth)-lH-mdol-3-h^^ 2,5-diona (165.3 mg, 0.678 mmol) (iz prethodne fazed))EDC-HC1 (284.5 mg, 1.484 mmol) i dimethamino pridina (185.5 mg, 1,58 mmol) u 20 ml CH2CI2, dodata je 2,3-dimetoksibenzojeva kiselina (287.4 mg, 0.668 mmol). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 0.5 sata, ispran zasićenim rastvorom NaHCOj, slanim rastvorom, osušen nad magnezijum sulfatom i uparen. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom primenom EtOAc/heksana, čime je nastalo 203 mg l-{3-[4-(l-meth-6-nitro-rH-indol-3-h)-2,5-diokso-2,5-dihidro-lH-phol-3-il]-indoH-h}-etil estar 2,3-dimetoksi benzojeve kiseline. (Prinos 50%). Primer 12: 1 -{3-[4-(1 -metil-6-nitro-1 H-indol-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-3-il]-indol-1-iI}-etil estar hidrohlorid 3-dietilaminometil-benzojeve kiseline l-{3-[4-(l-meth-6-nitro-lH-3-il)-2,5-diokso-2,5-orludro-lH-phol-3-U]-indol-l-il}-etil estar hidrohlorid 3-dietharrunometil benzojeve krseline dobijen je saglasno postupku iz Primera 11, primenom 3-diethaminometil benzojeve kiseline (CAS: 137605-77-7) kao polaznog materijala. (Prinos 50%).

Primer 13: Karbonske kiseline mono-metilpolietilenglikol2000 estar, 3-[4-(1-metii-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-3-il]-indol-1 -ilmetilestar

Mono-metilpohetilen glikol (prosečna molekulska = 2000) (lg, 0.5 mmol), tretiran je suviškom 20% fozgena u rastvoru toluena, na sobnoj temperaturi tokom 24sata,azatim je uparen. Hloroformat u dihlorometanu dodat je suvoj led/aceton ohlađenoj smeši 3-( 1-hidroksimetil- lH-indol-3-h)-4-( 1-metil-6-nitro- lH-indol-3-il)-phol-2,5-diona (208 mg,JL5 mmol) (dobijen kao što je opisano u Primeru 1) i 4-dimethamino piridina (244 mg, 2 mmol) u dihlorometanu. Uklonjeno je vodeno hlađenje i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Reakciona smeša je prečišćena fleš hromatografijom primenom metanola/dihlorometana, nakon čega su proizvodene frakcije kristalizovane iz THF/etil etra, čime je nastalo 0.8 g mono-metilpolietilen glikol 2000 estra, 3-[4-(l-meth-6-mtro-lH-mdol-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro-lH-phol-3-il]-indol- I-hmetilestar, u obliku narandžaste čvrste supstance, t.t. 46-48°C.

(Prinos 65%).

Primer 14: Mono-metilpolietilen glikol 2000-karbaminska kiselina 3-[4-(1-metii-6-nitro-1 H-indol-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro-1 H-pirol-3-il]indol-1 - ilmetil estar

Litijum bis(trimetilsilil)amid (0.25 ml, 0.25 mmol, IM u THF) dodat je kap po kap, rastvoru 3-( l-hidroksimetil-lH-indol-3-il)-4-(l-metil-6-nitro- lH-indol-3-il)-phol-2,5-diona (104 mg, 0.25 mmol) (dobijen kao što je opisano u rjrimeru 1) u THF (5 ml) na 0°C. Nakon 10 minuta dodat je bis(p-nitrofenil)karbonat (84 mg, 0.275 mmol) i rastvor je mešan na 0°C tokom 10 minuta. Dodat je zatim metoksi-PEG 2000-amin (0.6 g, 0.3 mmol) (Sheanvater Polvmers, Inc.), i smeša je ugrejana na oko 40°C, kako bi se čvrsta supstanca rastvorila. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 sata i uparen, kako bi se uklonio rastvarač. Ostatak je podvrgnut hrornatografiji na silika gelu, uz primenu metanola/dihlorometana, nakon čega su frakcije kristalizovane iz THF/etil etra, čime je nastalo 0.425 g mono-metilpolietilen glikol 2000-karbarninska Iđselina, 3-[4-(l-metil-6-nitro-lH-indol-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro-lH-phol-3-h]indol- 1-ilmetil estar, u obliku oranž čvrste supstance, t.t. 49-51°C (Prinos 70%).

Primer 15: Antiproliferativna aktivnost

Antiproliferativna aktivnost jedinjenja iz predmetnog pronalaska biće kasnije demonstrirana. Ovi efekti ukazuju da se jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu primeniti u terapiji kancera, naročito solidnih tumora, kao što je tumor dojke i tumor debelog creva

Test MDAMB- 435 ćelija

Epitelijalna ćelijska linija karcinoma dojke (MDAMB-435) nabavljena je od ATTC (American Typc-€ell Culture Collection) i gajena je u kulturi, u medijumu koji je preporučen od strane ATCC. Za analizu uticaja različitih, jedinjenja formule I na rast ovih ćelija, ćelije su zasađene u koncentraciji od 1500 ćelija/bunariću na ploči za ćeiijske kulture sa 96 bunarića ("test ploče"). Jedan dan nakon što su ćehje zasađene, jedinjenja koja će biti analizira su rastvorena u 100% DMSO (dimetil sulfoksid), kako bi se dobili 10 mM štok rastvori. Svako jedinjenje je razblaženo vodom do koncentracije od 1 mM i dodato u po tri bunarića prvog reda master ploče sa 96 bunarića koji su sadržavah medijum, kako bi se dobila finalna koncentracija od 40 uM. Jedinjenja su zatim serijski razblažena u medijumu na "master ploči". Razblažena jedinjenja su zatim prebačena u test ploče koje sadrže ćehje. U red sa "kontrolnim ćelijama" sipanje DMSO. Finalna koncentracija DMSO u svakom bunariću iznosila je 0.1%. Pet dana nakon dodavanja jedinjenja, ploče su analizirane, kao što će biti kasnije opisano.

MTT (3-(4-5 metil tiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazohjum bromid; tiazolil plavo) dodat je u svaki bunarić u finalnoj koncentraciji od 1 mg/ml. Ploča je zatim inkubhana na 37°C tokom2lA- 3sata. Medijum sa MTT je zatim uklonjen, a u svaki bunarić je dodato 50 p.1 100% etanola, kako bi se rastvorio formazan. Izmerena je apsorbanca korišćenjem automatskog čitača (Biotek čitač ploča). IC50vrednosti određene su primenom jednačine Reed-a i Munsch-a,videtiAm. J. Hvgiene Vol. 27, str. 493-497, 1938.

Rezultati premodnihin vitroeksperimenata predstavljeni su u Tabeli I. Svako od jedinjenja u Tabeh I ima IC50^0.3 uM.

Ova jedinjenja pogodna su za primenu putem kontinualne irifuzije.

Postupak proizvodnje:

1. Pomešati sastojke 1, 2 i 3 u odgovarajućem mikseru, tokom 15 minuta.

2. Granulirati praškasu smešu iz faze sa sa 20% rastvorom Povidon K30 (sastojak 4).

3. Osušiti granulat iz faze 2 na 50°C.

4. Propustiti granulaciju iz faze 3 kroz pogodni mlin.

5. U samleveni granulat iz faze 4 dodati sastojak 5 i mešati 3 minuta.

6. Komprimovati granulaciju iz faze 5 pogodnom presom.

Postupak proizvodnje:

1. Pomešati sastojke 1, 2 i 3 u pogodnom mikseru, tokom 15 minuta.

2. Dodati sastojke 4 i 5 i mešati ih 3 minuta.

3. Napuniti odgovarajuće kapsule.

Primer 18: Injekcioni rastvor/Priprema emulzija

Postupak proizvodnje:

1. Rastvoriti sastojke 1 i 2.

2. Dodati sastojke 3, 4 i 5 u sastojak 6 i mešati ih dok se disperguju, a zatim ih homogenizovati. 3. Dodati rastvor iz faze 1 u smešu iz faze 2 i homogenizovati ih, sve dok disperzija ne postane transparentna.

4. Sterilno profiltrirati kroz 0.2 um filtere i sipati rastvor u vajle.

Primer 19: Injekcioni rastvor/ Priprema emulzije

Postupakproizvodnje

1. Rastvoriti sastojak 1 u sastojku 2. 2. Dodati sastojke 3, 4 i 5 u sastojku 6 i mešati sve dok se ne disperguje, a zatim homogenizovati. 3. Dodati rastvor iz faze 1 u smeši iz faze 2 i homogenizovati sve dok disperzija ne postane providna.

4. Sterilno filtrirati kroz 0.2 um filter i napuniti vajle.

lako je pronalazak ilustrovan na osnovu specefičnih i poželjnih oblika izvođenja, očigledno je svakom ekspertu da je tokom rutinske eksperimentisanja i praktičnog izvođenja moguće izvesti varijacije i modifikacije ovog pronalaska. Stoga, pronalazak nije ograničen prethodnim opisima, već je definisan priloženim zahtevima i njihovim ekvivalentima.

Claims (9)

1. Jedinjenje opšte formule i farmaceutski prihvatljive soli ovih jedinjenja, naznačeni time, što je R odabrano iz grupe koja se sastoji od

2. Jedinjenje odabrano iz grupe koja se sastoji od sledećih jedinjenja: 3-[4-( 1 -metil-6-nitro-1 H-indol-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro-1 H-pirol-3-il]-indol-1 -ilmetil-estar 3-[2-(2-metoksi-etoksi)-etoksi]-propionske kiseline; 0424[2,5-dimdro-344-(l-metil-6-nitro-lH-indol-3-il)-2,5-diokso-2,5-dimdropirol-S-ill-indol-l-iljmetoksikarboniljetill-O'-metilpolietilen-glikol 2000; 3-[4-(l-metil-6-mtro-lH-indol-3-il)^^ 1-ilmetil-estar 2,3-dimetoksi-benzoeve kiseline; hidrohlorid 3-[4-(l-metiI-6-nitro-lH-mdol-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro-lH-pirol-3-il]-indol-l-ilmetil-estra 3-dietilaminometil-benzoeve kiseline.

3. Jedinjenje odabrano iz grupe koja se sastoji od sledećih jedinjenja: 3-( 1 -metil-6-nitro-1 H-indol-3-il)-4-[ 1 -(piperidin-4-karbonil)-1 H-indol-3-ilj-pirol-2,5-dion-trifluorosirćetna kiselina; 3 -(1 -arrhnoacetil-1 H-indol -3 -il)-4-( 1 -metil-6-nitro-1 H-inđol-3 -il)-pirol-2,5 -dion-hidrohlorid; 3-[4-( 1 -metil-6-nitro-1 H-indol-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro-1 H-pirol-3-il]-indol-1-ilmetil-estar sirćetne kiseline; mono- { 3-[4-( 1 -metil-6-nitro-1 H-indol-3 -iI)-2,5-điokso-2,5-đihidro-1 H-pirol-3 - il]-indol-l -ilmetil}-estar pentan-dikiseline; 1 - {3-[4-(l -metil-6-nitro-1 H-indol-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro-1 H-pirol-3-il j-indol-l-il}-etil-estar 2,3-dimetoksi-benzoeve kiseline i hidrohlorid l-{3-[4-(l-metil-6-nitro-lH-mdol-3-il)-2,5-diokso-2,5-dihidro-lH-pirol-3-il]-indol-l-il}-etil-estra 3-dietilaminometil-benzoeve kiseline.

4. Farmaceutska smeša koja kao aktivni sastojak sadrži efektivnu količinu bilo kojeg od jedinjenja iz zahteva 1-3 i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijent.

5. Farmaceutska smeša iz zahteva 4 koja je pogodna za parenteralno davanje.

6. Postupak za dobivanje jedinjenja kao što su definisana u bilo kojem od zahteva 1 -3 za koja su definisana u zahtevima 1-3, koji obuhvata a) kada R u formuli I označava ili uvođenje ove grupe u početno jedinjenje formule tretiranjem jedinjenja agensima koji daju pomenutu grupu, ili b) kada je R u formuli I različit od grupa gore datih pod a), uvođenje ove grupe u početno jedinjenje opšte formule pri čemu R -i označava vodonik ili metil, tretiranjem agensima koji daju pomenutu grupu, ili c) pretvaranje jedinjenja formule I u njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

7. Jedinjenja prema bilo kojem od zahteva 1 -3 kada god su sintetizovana pomoću postupka iz zahteva 6.

8. Primena jedinjenja kao što je definisano u bilo kojem od zahteva 1-3 za proizvodnju lekova za terapiju proliferativnih poremećaja ćelija.

9. Primena jedinjenja kao stoje definisano u bilo kojem od zahteva 1-3 za proizvodnju lekova za terapiju kancera.