RS50841B - Derivati pirolidina kao inhibitori ciklične aspecifične fosfodiesteraze - Google Patents

Derivati pirolidina kao inhibitori ciklične aspecifične fosfodiesteraze

Info

Publication number
RS50841B
RS50841B YUP-480/02A YUP48002A RS50841B RS 50841 B RS50841 B RS 50841B YU P48002 A YUP48002 A YU P48002A RS 50841 B RS50841 B RS 50841B
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
hydroxyethyl
methoxyphenyl
methylpyrrolidinyl
methyl
methoxy
Prior art date
Application number
YUP-480/02A
Other languages
English (en)
Inventor
Timothy J. Martins
Kerry W. Fowler
Joshua Odingo
Edward A. Kesicki
Amy Oliver
Laurence E. Burgess
John J. Gaudino
Zachary S. Jones
Bradley J. Newhouse
Stephen Schlachter
Original Assignee
Icos Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Icos Corporation filed Critical Icos Corporation
Publication of YU48002A publication Critical patent/YU48002A/sh
Publication of RS50841B publication Critical patent/RS50841B/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon radicals, substituted by hetero atoms, attached to ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/10—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/06—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)

Abstract

Jedinjenje formule:gde jeR1 odabran od C1-6 alkil C6-16 biciklični ili policiklični ugljovodonik, aril, cikloalkil, 4-, 5-, ili 6-člani zasićen heterocikl, heteroaril, C1-4alkilenaril, C1-4alkilenOaril, C1-4alkilenheteroaril, C1-4alkilenHet, C2-4alkilenarilOaril, C2-4alkilenski premošteni alkil, C1-4alkilencikloalkil, supstituisan ili nesupstituisan propargil, supstituisan ili nesupstituisan allil, ili halocikloalkil;R2 odabran od metil, ili halo-supstituisan metil, e.g., CHF2;R3 odabran od C(=O)OR7, C(=O)R7, NHC(=O)OR7, C1-3alkilenC(=O)OR8, C1-3alkilenC(=O)R8, C(=NH)NR8R9, C(=O)-C(=O)C(=O)OR8, C1-4alkilenOR8, aril, C1-3alkilenaril, C1-3alkilenheteroaril, SO2heteroaril, Het, ili heteroaril;R4 odabran od vodonik, C1-6 alkil, haloalkil, ili cikloalkil;R5 odabran od C1-6 alkil, alkinil, haloalkil, hidroksialkil, cikloalkil, ili aril;R6 odabran od vodonik, C1-6alkil, i C(=O)R7;R odabran od C1-6 alkil ili cikloalkil, svaki po izboru supstituisan sa jednim ili više: OC(=O)R8, C(=O)OR8, OR8, NR8R9, ili SR8;R8 i R9 , isti ili različiti, odabrani su od vodonika, C1-6 alkil, cikloalkil, aril, heteroaril, C(=O)Oalkil, C(=O)-Oaril, C(=O)alkil, alkilSO2, C(=O)-C1-3alkilenaril, C(=O)OC1-4alkilenaril, C1-4alkilenaril, ili Het, ili R8 i R9 zajedno formiraju 4-člani do 7-člani prsten;R10 odabran od vodonik, alkil, haloalkil, ili cikloalkil;R 11 odabran od alkil, cikloalkil, trifluorometil, aril, aralkil, i NR8R9; injihove soli i solvati.Prijava sadrži još 77 patentnih zahteva.

Description

Referenca odnosne prijave
Ova prijava je izdvojena prijava postojeće U.S. patentne prijave br. 09/471,846.
podnete 23.12.1999. godine.
Oblast pronalaska
Predmetni pronalazak se odnosi na niz jedinjenja koja su snažni i selektivni inhibitori fosfodiesteraze specifične za ciklični adenozin 3'.5'-monofosfat (cAMP specifične PDE). Konkretno, predmetni pronalazak se odnosi na niz novih jedinjenja pirolidina koja su korisna za inhibiranje funkcije cAMP specifične PDE. a posebno PDE4, kao i na postupke dobijanja istih, na farmaceutske preparate koji ih sadrže, kao i na njihovu upotrebu u vidu terapeutskih sredstava, na primer u lečenju inflamatornih oboljenja i drugih bolesti povezanih sa povišenim nivoima citokina i proinflamatornih medijatora.
Pozadina pronalaska
Hronična upala je multifaktorna komplikacija oboljenja okarakterisana aktivacijom brojnih vrsta inflamatornih ćelija, posebno ćelija limfoidne loze (uključujući T-limfocite). i mijeloidne loze (uključujući granulocite, makrofage i monocite). Proinflamatorni medijatori, uključujući citokine. kao što su faktor nekroze tumora (TNF) i interleukin-1 (IL-1). stvaraju se u ovim aktiviranim ćelijama. Shodno tome. sredstvo koje suzbija aktivaciju ovih ćelija ili njihovo stvaranje proinflamatornih citokina. bilo bi korisno u terapeutskom lečenju inflamatornih oboljenja kao i drugih oboljenja povezanih sa povišenim nivoima citokina.
Ciklični adenozin rrionofosfat (cAMP) je drugi glasnik koji posreduje u biološkom odgovoru ćelija na širok opseg vanćelijskih stimulusa. Kada se odgovarajući agonist veže za specifične receptore na površini ćelije, aktivira se adenilat-ciklaza koja prevodi adenozin-trifosfat (ATP) u cAMP. U teoriji se smatra da su dejstva cAMP u okviru ćelije, izazvana dejstvom agonista. mahom povezana sa delovanjem cAMP-zavisnih protein kinaza. Unutarćelijska dejstva cAMP se završavaju bilo transportom nukleotida izvan ćelije, bilo enzimskim razlaganjem dejstvom ciklične nukleotid fosfodiesteraze (PDE) koja hidrolizuje 3"-fosfodiestarsku vezu kako bi se dobio 5'-adenozin monofosfat (5-AMP). 5'-AMP je neaktivan metabolit. Strukture cAMP i 5'-AMP su prikazane ispod.
Povišeni nivoi cAMP u humanim ćelijama mijeloidne i limfoidne loze povezani su sa suzbijanjem aktivacije ćelije. Dakle, unutarćelijska enzimska familija PDE reguliše nivo cAMP u ćelijama. PDE4 je dominantni PDE izotip u ovim ćelijama i u velikoj meri doprinosi razlaganju cAMP. Prema tome, inhibicija funkcije PDE bi sprečila prevođenje cAMP u neaktivni metabolit 5-AMP i, shodno tome, održala povišene koncentracije cAMP i time suzbila aktivaciju ćelije (pogledati Beavo et al., »Cvclic Nucleotide Phosphodiesterases: Strucrure. Regulation and Drug Action«. Wiley & Sons, Chichester, pp. 3-14, (1990); Torphv et al.,Drug News and Perspectives, 6,pp. 203-214 (1993); Giembvcz et al..Clin. Exp. Allergy, 22,pp. 337-344 (1992)).
Posebno, pokazano je da inhibitori PDE4, kao što je rolipram, inhibiraju stvaranje TNFa i delimično inhibiraju oslobađanje IL-ip od strane monocita (pogledati Semmler et al..Int. J. Immunopharmacol., 15,pp. 409-413, (1993); Molnar - Kimber et al.,Mediators of Inflammation, 1,pp. 411-417, (1992)). Takođe je pokazano da inhibitori PDE4 inhibiraju stvaranje superoksidnih radikala iz humanih polimorfonuklearnih leukocita (pogledati Verghese et al.,J. Mol. Cell. Cardiol, 21 ( Suppl. 2), S61(1989); Nielson et al.,J. Allergy ImmunoL, 86,pp. 801-808, (1990)); zatim da inhibiraju oslobađanje vazoaktivnih amina i prostanoida iz humanih bazofila (pogledati Peachell et al..J. ImmunoL, 148.pp. 2503-2510.
(1992)); te da inhibiraju nagli porast broja eozinofila u respiratornom stablu (pogledati Dent
et al.,J. Pharmacol, 103,pp. 1339-1346, (1991)); kao i da inhibiraju aktivaciju humanih T limfocita (pogledati Robicsek et al..Biochem. Pharmacol, 42,pp. 869-877, (1991)).
Aktivacija inflamatornih ćelija i prekomerna i nekontrolisana proizvodnja citokina (npr. TNFa i IL-ip) su povezane sa alergijskim autoimunim i inflamatomim oboljenjima i poremećajima kao što su reumatoidni artritis, osteoartritis, giht, spondilitis, oftalmopatija povezana sa disfunkcijama štitaste žlezde, Bečetova bolest, sepsa, septički šok, endotoksički šok, gram-negativna sepsa, gram-pozitivna sepsa, sindrom toksičkog šoka, astma, hronični bronhitis, sindrom respiratornog distresa odraslih, hronična zapaljenska oboljenja pluća, kao što je hronična opstruktivna bolest pluća, silikoza, plućna sarkoidoza, reperfuziona povreda miokarda, mozga, i ekstremiteta, fibroza. cistična fibroza, formiranje keloida, formiranje ožiljaka, ateroskleroza, odbacivanje presadka, kao što su reakcija presadak protiv domaćina i odbacivanje alografta, hronični glomerulonefritis," lupus, inflamatorna oboljenja creva, kao što su Kronova bolest i ulcerozni kolitis, proliferativna limfocitna oboljenja, kao što je leukemija, i inflamatome dermatoze kao što su atopični dermatitis, psorijaza i urtikarija.
Ostala stanja okarakterisana povišenim nivoima citokina uključuju povrede mozga usled umerenih trauma (pogledati Dhillon et al.,J. Neurotrauma, 12,pp. 1035-1043 (1995); Suttorp et al.,J. Clin. Invest., 91,pp. 1421-1428 (1993)), kardiomiopatije, kao Što su zastojna srčana slabost (pogledati Bristovv et al.,Circulation, 97,pp. 1340-1341 (1998)), kaheksija, kaheksija usled infekcije ili malignih oboljenja, kaheksija usled AIDS-a. ARC (kompleks povezan sa AIDS-om), mialgije praćene groznicom usled infekcije, cerebralna malarija, osteoporoza i bolesti praćene poremećajem resorpcije koštane mase, formiranje keloida, formiranje ožiljnog tkiva i pireksija.
Konkretno, otkriveno je da TNFa igra ulogu povezanu sa humanim sindromom stečene imunodeficijencije (AIDS). AIDS nastaje usled infekcije T-limfocita virusom humane imunodeficijencije (HIV). Iako HIV takođe inficira i održava se u ćelijama mijeloidne loza. pokazano je da TNF pospešuje umnožavanje HIV u inficiranim T limfocitima i monocitima (pogledati Poli et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87,pp. 782-785, (1990)).
Veći broj osobina TNFa, kao što su stimulacija kolageneze, stimulacija angiogenezein vivo,stimulacija resorpcije koštane mase, kao i sposobnost povećanja adherentnosti ćelija tumora prema endotelu, u skladu su sa ulogom TNF u razvoju metastatičkog širenja kancera kod domaćina. TNFa je nedavno povezan sa podsticanjem rasta i metastazama ćelija tumora (pogledati Orosz et al.,J. Exp. Med, 177,pp. 1391-1398, (1993)).
PDE4 je široko rasprostranjen u tkivima. Postoje bar Četiri gena za PDE4 od kojih višestruke transkripcije bilo kog od njih mogu dati nekoliko različitih proteina koji imaju identično katalitičko mesto. Identičnost aminokiselina između četiri moguća katalitička mesta je veća od 85%. Njihova zajednička osetljivost na inhibitore i njihova kinetička sličnost odslikavaju funkcionalni aspekt ovog stepena identičnosti aminokiselina. U teoriji se smatra da je uloga ovih alternativno eksprimiranih PDE4 proteina omogućuje mehanizam putem koga ćelija može diferencijalno lokalizovati ove enzime intracelularno i/ili regulisati katalitičku efikasnost putem post-translacione modifikacije. Bilo koji tip ćelije koji eksprimira PDE4 enzim tipično eksprimira više od jednog od četiri moguća gena za kodiranje ovih proteina.
Istraživači su pokazali značajan interes za upotrebu inhibitora PDE4 kao antiinflamatornih sredstava. Preliminarni dokazi pokazuju da inhibicija PDE4 pokazuje povoljne efekte na mnoštvo inflamatornih ćelija kao što su monociti, makrofagi, Th-1 ćelije i granulociti. Sinteza i/ili oslobađanje mnogih proinflamatornih medijatora kao što su citokini. lipidni medijatori, superoksid i biogeni amini kao što je histamin, oslabljeni su u ovim ćelijama, dejstvom inhibitora PDE4. Inhibitori PDE4 takođe utiču na druge ćelijske funkcije uključujući proliferaciju T ćelija, transmigraciju granulocita kao odgovor na hemotoksične supstance, i integritet spojeva endotelnih ćelija unutar krvnih sudova.
Opisani su struktura, sinteza i ispitivanja različitih inhibitora PDE4. Metil-ksantini, kao Što su kofein i teofilin, bili su prvi otkriveni inhibitori PDE, ali ova jedinjenja nisu selektivna u odnosu na PDE koje inhibiraju. Preparat Rolipram, kao antidepresiv, bio je jedan od prvih otkrivenih specifičnih inhibitora PDE4. Rolipram, koji ima sledeću strukturnu formulu, pokazuje IC50(koncentracija koja obezbeđuje 50% inhibiciju) od oko 200 nM (nanomolama) u odnosu na inhibirajući rekombinantni humani PDE4.
Istraživači su nastavili da tragaju za inhibitorima PDE4 koji su selektivniji, imaju nižu ICjo vrednost od Roliprama i koji ne pokazuju neželjene efekte na centralni nervni sistem, kao što su gađenje, povraćanje i sedacija, povezane sa upotrebom Roliprama. Jedna klasa jedinjenja je opisana u U.S. palentu br. 5.665.754 na ime Feldman et al.. Ovde opisana jedinjenja su supstituisani pirolidini koji imaju strukturu sličnu Rolipramu. Konkretno, jedno jedinjenje koje ima strukturnu formulu (I) ima IC50vrednost u odnosu na humanu rekombinantnu PDE4 od oko 2 nM. Iako je uočeno poboljšanje u smislu većeg željenog efekta u odnosu na manje ispoljavanje neželjenog efekta povraćanja, ova jedinjenja ne pokazuju smanjenje u neželjenim efektima na centralni nervni sistem.
Dodatno, nekoliko kompanija u današnje vreme preduzima klinička ispitivanja drugih inhibitora PDE4. Ipak, problemi koji se odnose na efikasnost i neželjene efekte kao što su povraćanje i poremećaji funkcija centralnog nervnog sistema ostaju nerešeni.
Shodno ovome, jedinjenja koja selektivno inhibiraju PDE4 i koja umanjuju ili eliminišu negativne prateće efekte na centralni nervni sistem povezane sa prethodnim inhibitorima PDE4, bili bi korisni u lečenju alergijskih i inflamatornih oboljenja, kao i drugih bolesti povezanih sa prekomernom ili nekontrolisanom proizvodnjom citokina kao što je TNF. Dodamo, selektivni inhibitori PDE4 bili bi korisni u lečenju oboljenja koja su povezana sa povišenim nivoima cAMP ili koja su u vezi sa funkcijom PDE4 u konkretnom ciljnom tkivu.
Suština pronalaska
Predmetni pronalazak je usmeren na snažne i selektivne inhibitore PDE4 korisne u lečenju oboljenja i stanja u kojima se inhibicija aktivnosti PDE4 smatra poželjnom. Inhibitori PDE4 prema predmetnom pronalasku neočekivano smanjuju ili eliminišu negativne prateće efekte na centralni nervni sistem, povezane sa primenom ranijih inhibitora PDE4.
Konkretno, predmetni pronalazak je usmeren na pirolidinska jedinjenja koja imaju strukturnu formulu (II):
naznačena time što
R<1>je izabran iz grupe koju čine vodonik, niži alkil, premošćeni alkil (npr. norbomil). aril, cikloalkil (npr. indanil), 4-, 5- ili 6-člani zasićeni heterociklik (npr. 3-tetrahidrofuril), heteroaril, Cm alkilenaril, Cm alkilenOaril. Cm alkilenheteroaril, Cm alkilenHet. C2.4alkilenarilOaril, Cm alkilen premošćeni alkil, Cm alkilencikloalkil (npr. ciklopentil-metil), supstituisani ili nesupstituisani prop-argil (npr. -Cr^CsC-CćFU ). supstituisani ili nesupstituisani alil (npr. -Cr^CI^CH-CsHs) i halocikloalkil (npr. fluorociklopentil);
R2 je izabran iz grupe koju čine vodonik, metil i halo-supstituisana metil grupa. npr. CHF2;
R<3>je izabran iz grupe koju čine C(=0)OR<7>, C(=0)R<7>, NHC(=0)OR<7.>C,.3alkilenC(=0)OR<8>, C,.3alkilenC(=0)R<8>, C(=NH)NR<8>R<9>, C(=0)NR<8>R<9>, C(=0)-C(=0)NR8R9, C(=0)C(=0)OR<8>. d^alkilenOR<8>, aril, C|.3alkilenaril, Ci.3alkilenheteroaril, S02heteroaril. Het i heteroaril;
R<A>je izabran iz grupe koju čine vodonik, niži alkil, haloalkil, cikloalkil i aril;
R<s>je izabran iz grupe koju Čine vodonik, niži alkil, alkinil, haloalkil, hidroksialkil. cikloalkil i aril;
R6 je izabran iz grupe koju čine vodonik, niži alkil i C(=0)R';
R<7>je izabran iz grupe koju Čine niži alkil, razgranat ili nerazgranat. C].4alkilenaril, cikloalkil, Het, CMalkilencikloalkil, heteroaril i aril, svaki od njih opciono supstituisan sa jednim ili vise OC(=0)R<8>, C(=0)OR<8>,OR<8>,NR<8>R<9>ili SR<8>;
R i R su isti ili različiti i izabrani iz grupe koju sačinjavaju vodonik, niži alkil. cikloalkil, aril, heteroaril, C(=0)Oalkil, C(=0)Oaril, C(=0)alkil, alkiIS02, haloalkilSO?, C(=0)C].3alkilenaril, C(=0)OC]^alkilenaril. CMalkilenaril i Het. ili R<*>i R<9>zajedno čine četvoročlani, petočlani, šestočlani ili sedmočlani prsten;
R<10>je izabran iz grupe koju čine vodonik, alkil, haloalkil, cikloalkil. aril. C(=0)alkil. C(=0)cikloalkiL C(=0)aril, C(=0)Oalkil, C(=0)Ocikloalkil. CH2OH;CH2Oalkil, CHO. CN. N02iS02R<n>;
R<u>je izabran iz grupe koju Čine alkil, cikloalkil, trifluorometil, aril. aralkil i NR<8>R<9>;i njihove soli i solvate (npr. hidrate).
U još jednom rešenju, predmetni pronalazak je usmeren na pirolidinska jedinjenja koja imaju strukturnu formulu (IIa):
naznačena time što
R<1>je izabran iz grupe koju čine vodonik, niži alkil, premošćeni alkil, aril, cikloalkil, 4-, 5- ili 6-člani zasićeni heterociklik, heteroaril. Cm alkilenaril, Cm alkilenOaril, Cm alkilenheteroaril, Cm alkilenHet, C2.4 alkilenarilOaril, Cmalkilen premošćeni alkil, Cm alkilencikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani propargil, supstituisani ili nesupstituisani alil i halocikloalkil;
R<2>je izabran iz grupe koju čine vodonik, metil i halo-supstituisana metil grupa;
R<3>je izabran iz grupe koju Čine vodonik, CMalkilenaril i C(=0)Ci.3alkilenOC|.3
alkilenaril;
R<4>je izabran iz grupe koju čine vodonik, niži alkil, haloalkil, cikloalkil i aril;
R<5>je izabran iz grupe koju čine vodonik, niži alkil, alkinil, haloalkil, hidroksialkil,
cikloalkil i aril;
R6 je izabran iz grupe koju čine vodonik, niži alkil i C(=0)R<7>;
R<7>je izabran iz grupe koju čine niži alkil, razgranat ili nerazgranat, CMalkilenaril, cikloalkil, Het, Ci^alkilencikloalkil, heteroaril i aril, svaki od njih opciono supstituisan sa jednim ili više OC(=0)R<8>, C(=0)OR<8>, OR<s>,NR<8>R<9>ili SR<8>;
R<8>i R<9>su isti ili različiti i izabrani iz grupe koju sačinjavaju vodonik, niži alkil, cikloalkil, aril, heteroaril, C(=0)Oalkil, C(=0)Oaril, C(=0)alkil, alkilS02, haloalkilS02. C(=0)Ci.3alkilenaril, C(=0)OCi^alkilenaril, CMalkilenaril i Het, ili R<s>i R<Q>zajedno čine četvoročlani, petočlani, šestočlani ili sedmočlani prsten: R10 je izabran iz grupe koju čine vodonik. alkil, haloalkil, cikloalkil, aril, C(=0)alkil. C(=0)cikloalkil, C(=0)aril, C(=0)Oalkil, C(=0)OcikIoalkil, CH2OH, CH2OalkiK CHO, CN, N02i SO2R11;.
Rn je izabran iz grupe koju čine alkil, cikloalkil, trifluorometil. aril, aralkil i NR<8>R<9>; i
njihove soli i solvate (npr. hidrate).
Predmetni pronalazak je takođe usmeren na farmaceutske preparate koji sadrže jedno ili više jedinjenja strukturne formule (II), zatim na upotrebu jedinjenja i preparata koji sadrže ova jedinjenja u lečenju oboljenja ili poremećaja, kao i na postupke za dobijanje jedinjenja i intermedijera povezanih sa sintezom jedinjenja strukturne formule (II).
Predmetni pronalazak je takođe usmeren na postupke (a) tretiranja sisata koji pati od oboljenja kod kojeg inhibicija PDE4 obezbeduje poboljšanje, (b) modulisanja nivoa cAMP kod sisara, (c) smanjivanja nivoa TNFa kod sisara. (d) suzbijanja aktivacije inflamatornih ćelija kod sisara i (e) inhibicije funkcije PDE4 kod sisara putem primene na sisaru terapeutskl efikasne količine jedinjenja strukturne formule (II) ili preparata koji sadrži jedinjenje strukturne formule (II).
Detaljan opis poželjnih rešenja predmetnog pronalaska
Predmetni pronalazak je usmeren na jedinjenja koja imaju strukturnu formulu (II):
naznačena time što
R<]>je izabran iz grupe koju čine vodonik. niži alkil. premošćeni alkil (npr. norbornil). aril. cikloalkil (npr. indanil). 4-, 5- ili 6-Člani zasićeni heterociklik (npr. 3-teirahidrofuril). heteroaril, Cm alkilenaril, Cm alkilenOaril, Cm alkilenheteroaril. Cm alkilenHet. C2-4alkilenarilOaril, Cm alkilen premošćeni alkil, Cm alkilencikloalkil (npr. ciklopentil-meiil). supstituisani ili nesupstituisani prop-argil (npr. -CHjCsC-CeH* ), supstituisani ili nesupstituisani alil (npr. -CH2CH=CH-C6H5) i halocikloalkil (npr. fluorociklopentil): R2 je izabran iz grupe koju čine vodonik, metil i halo-supstituisana metil grupa. npr. CHF2;
R<3>je izabran iz grupe koju čine C(=0)OR<7>, C(=0)R<7>, NHC(=0)OR<7>, C1.3alkilenC(=0)OR<8>, Ci.3alkilenC(=0)R<8>, C(=NH)NR<8>R<9>, C(=0)NR<8>R<9>, C(=0)-C(=0)NRsRy, C(=0)C(=0)OR<8>, Ci^alkilenOR<8>, aril, C,-3a]kiIenariL C].3alkilenheteroaril, SC^heteroaril, Het i heteroaril;
R4 je izabran iz grupe koju čine vodonik, niži alkil, haloalkil, cikloalkil i aril;
R'"1 je izabran iz grupe koju čine vodonik, niži alkil, alkinil, haloalkil, hidroksialkil. cikloalkil i aril: R6 je izabran iz grupe koju čine vodonik, niži alkil i C(=0)R<7>;
R<7>je izabran iz grupe koju čine niži alkil, razgranat ili nerazgranat. CMalkilenaril, cikloalkil, Het, CMalkilencikloalkil, heteroaril i aril, svaki od njih opciono supstituisan sa jednim ili više OC(=0)R<8>, C(=0)OR<8>, OR<8>, NR<8>R<9>ili SR<8>;
R<8>i R<9>su isti ili različiti i izabrani iz grupe koju sačinjavaju vodonik, niži alkil. cikloalkil, aril, heteroaril, C(=0)Oalkil, C(=0)Oaril:C(=0)alkil, alkilSCb. haloalkilS02. C(=0)Ci-3alkilenaril, C(=0)OCMalkilenaril, CMalkilenaril i Het, ili R<s>i R<9>zajedno čine četvoročlani, petočlani, šestočlani ili sedmočlani prsten;
R<10>je izabran iz grupe koju Čine vodonik, alkil, haloalkil, cikloalkil, aril, C(=0)alkil, C(=0)cikloalkil, C(=0)aril, C(=0)Oalkil, C(=0)Ocikloalkil, CH2OH, CH2Oalkil, CHO, CN, N02iS02R<11>;
Rn je izabran iz grupe koju čine alkil, cikloalkil, trifluorometil, aril. aralkil i NR<S>R<9>: i njihove soli i solvate (npr. hidrate).
U još jednom rešenju, predmetni pronalazak je usmeren na pirolidinska jedinjenja koja imaju strukturnu formulu (Ha):
naznačena time što
R<1>je izabran iz grupe koju čine vodonik. niži alkil, premošćeni alkil, aril, cikloalkil, 4-, 5- ili 6-člani zasićeni heterociklik, heteroaril. Cm alkilenaril, Cm alkilenOaril, Cm alkilenheteroaril, CmalkilenHel, C2.4alkilenarilOaril, Cm alkilen premošćeni alkil. Cm alkilencikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani propargil, supstituisani ili nesupstituisani ali! i halocikloalkil;
R2 je izabran iz grupe koju čine vodonik, metil i halo-supstituisana metil grupa;
R<3>je izabran iz grupe koju čine vodonik. CMalkilenaril i C(=0)Ci-3alkilenOCi.3alkilenaril;
R4 je izabran iz grupe koju čine vodonik, niži alkil, haloalkil, cikloalkil i aril;
R? je izabran iz grupe koju čine vodonik. niži alkil, alkinil, haloalkil, hidroksialkil, cikloalkil i aril: R je izabran iz grupe koju čine vodonik, niži alkil i C(=0)R ;
R<7>je izabran iz grupe koju čine niži alkil, razgranat ili nerazgranat. CMalkilenaril, cikloalkil, Het, CMalkilencikloalkil. heteroaril i aril, svaki od njih opciono supstituisan sa jednim ili više OC(=0)R<8>, C(=0)OR<8>, OR<8>,NR<8>R<9>ili SR<8>: R<8>i R<9>su isti ili različiti i izabrani iz grupe koju sačinjavaju vodonik, niži alkil, cikloalkil, aril, heteroaril, C(=0)Oalkil, C(=0)Oaril, C(=0)alkil, alkilS02, haloalkilS02, C(=0)C|.3alkilenaril, C(=0)OCMalkilenaril, CMalkilenaril i Het, ili R<8>i R<9>zajedno čine četvoročlani, petočlani. šestočlani ili sedmočlani prsten;
R<10>je izabran iz grupe koju čine vodonik, alkil, haloalkil, cikloalkil, aril, C(=0)alkil. C(=0)cikloalkil, C(=0)aril, C(=0)Oalkil, C(=0)Ocikloalkil, CH2OH. CH2Oalkil. CHO. CN, N02iS02R";
R11 je izabran iz grupe koju čine alkil, cikloalkil, trifluorometil, aril, aralkil i NR<8>R<9>; i njihove soli i solvate (npr. hidrate).
Na način na koji se ovde upotrebljava, termin »alkil«, sam ili u kombinaciji, definisan je tako da obuhvata zasićenu ugljovodoničnu grupu pravog ili razgranatog lanca koja sadrži od jednog do 16 ugljenikovih atoma, bilo supstituisanu ili nesupstituisanu. Termin »niži alkil« ovde predstavlja alkil-grupu koja ima jedan do 6 ugljenikovih atoma( Ci- C(,).Primeri nižih alkil-grupa uključuju, bez ograničenja, metil, etil, n-propil, izopropil, izobutil.l-butil, izopentil, n-butil, neopentil, n-heksil i slične. Termin »alkinil« se odnosi na nezasićene alkil-grupe koje sadrže trogubu vezu između atoma ugljenika.
Termin »premošćeni alkil« je ovde definisan kao C6-Ci6biciklična ili policiklična ugljovodonična grupa, npr. norboril, adamantil. biciklo[2.2.2]oktil, biciklo[2.2.1]heptil. biciklo[3.2.1]oktil, biciklo[4.1.0]heptil, biciklo[3.1.0]heksil, i dekahidronaftil, supstituisan ili nesupstituisan.
Termin "cikloalkil" je ovde tako definisan da uključuje monociklične ili kondenzovane policiklične C3-C10alifatične ugljovodonične grupe. Primeri cikloalkil grupa uključuju, bez ograničenja, ciklopropil, ciklobutil. cikloheksil, dekahidronaftalen. i ciklopentil. Na način na koji se ovde upotrebljava, "cikloalkil" takodje obuhvata ciklične Cv C?alifatične ugljovodonične grupe slepljene sa aril-prstenom. Na primer, na način kako je to ovde definisano. indaml i tetrahidronaftalenil su cikloalkil grupe.
Alkil, premošćena alkil ili cikloalkil grupa opciono može biti supstituisana jednim ili više, tipično jednim do tri, supstituenta. kao što su npr. niži alkil, cikloalkil, haloalkil, npr. CF3-, halo, hidroksi, alkoksi, aril, heteroaril i Het.
Termin »alkilen« se odnosi na alkil grupe koje imaju supstituent. Na primer, termin »C!-3alkilencikloalkil« se odnosi na alkil-grupu koja sadrži od jednog do tri atoma ugljenika. supstituisanu cikloalkil grupom. Primer »C|.3alkilenarila« je benzil.
Termin »haloalkil« je ovde definisan kao alkil-grupa supstituisana sa jednim ili više halo-supstituenata, bilo fluoro, hloro, bromo, jodo ili njihovom kombinacijom. Slično tome, »halocikloalkil« i »haloaril« su definisani kao cikloalkil ili aril grupa koja ima jedan ili više halo-supstituenata.
Termin »aril« sam ili u kombinaciji, je ovde definisan kao monociklična ili policiklična aromatična grupa, poželjno kao monociklična ili biciklična aromatična grupa, npr. fenil ili naftil, koja može biti nesupstituisana ili supstituisana, npr. sa jednim ili više. a poželjno sa jednim do tri, supstituenata izabranih iz grupe koju sačinjavaju halo, alkil. fenil, supstituisani fenil, hidroksi, hidroksialkil, alkoksi, ariloksi, alkoksialkil, haloalkil. nitro. amino, alkilamino, acilamino, alkiltio. alkilsulfinil i alkilsulfonil. Primeri aril grupa obuhvataju fenil. naftil, bifenil, tetrahidronaftil, indanil, 2-hlorofenil. 3-hlorofenil, 4-hlorofenil, 4-fluorofenil. 2-metilfenil, 4-metoksifenil, 4-trifluorometilfenil, 4-nitrofenil i slične.
Termin »heteroaril« je ovde definisan kao monociklični ili biciklični prstenski sistem koji sadrži jedan ili dva aromatična prstena i bar jedan atom azota, kiseonika ili sumpora u aromatičnom prstenu, i koji može biti nesupstituisan ili supstituisan, npr. sa jednim ili više. a posebno sa jednim do tri, supstituenata, kao što su halo, alkil, hidroksi, hidroksialkil, alkoksi, alkoksialkil, haloalkil, aril, haloaril, nitro, amino, alkilamino, acilamino, alkiltio, alkilsulfinil, i alkilsulfonil. Primeri heteroaril grupa obuhvataju tienil, furil, piridil, oksazolil, 1.2,4-oksadiazol-3-il, hinolil, izohinolil, indolil, triazolil, izotiazolil, izoksazolil, imidazolil. benzotiazolil, pirazinil, pirimidinil, tiazolil, i tiadiazolil.
Termini »heterociklik« i »Het« su definisani kao četvoročlani, petočlani ili šestočlani nearomatični prsten koji ima jedan ili više, tipično jedan do tri, heteroatoma, prisutnih u prstenu, izabranih iz grupe koju sačinjavaju kiseonik. azot i sumpor, i opciono supstituisan sa alkil, halo, aril, alkoksi. Ci^alkilenHet, Ci.jalkilenamino, Ci.3alkilenalkilamino. ili haloaril grupom. Primeri ovih grupa, bez ograničenja, obuhvataju tetrahidrofuran, tetrahidropiran, piperidin, piperazin, sulfolan, morfolin, 1,3-dioksolan, tetrahidropiran. dioksan, trimetilenoksid, i slične.
Termin »halogen« ili »halo« je ovde definisan na takav način da obuhvata fluor, hlor, brom i jod.
Termini »alkoksi« i »ariloksi« su definisani kao -OR, pri čemu R je alkil ili aril, respektivno.
Termin »alkoksialkil« je definisan kao alkoksi grupa pridodata alkil grupi.
Termin »propargil« je definisan kao R-C=C-CH2-, pri čemu R je vodonik. niži alkil, haloalkil, cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani aril, ili supstituisani ili nesupstituisani heteroaril.
Termin »alil« je definisan kao R-CH=CHCH2-, pri čemu R je vodonik. niži alkil. haloalkil, cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani aril, ili supstituisani ili nesupstituisani heteroaril.
Termin »hidroksi« je definisan kao -OH.
Termin »hidroksialkil« je definisan kao hidroksi-grupa pridodata alkil-grupi.
Termin »amino« je definisan kao -NH2.
Termin »alkilamino« je definisan kao -NR2, pri čemu je bar jedno R alkil. a drugo R je alkil ili vodonik.
Termin »acilamino« je definisan kao RC(=0)NH, pri čemu R je alkil ili aril.
Termin »nitro« je definisan kao -NO?.
Termin »alkiltio« je definisan kao -SR, pri čemu je R alkil.
Termin »alkilsulfinil« je definisan kao R-S(0)2, pri čemu je R alkil.
Termin »alkilsulfonil« je definisan kao R-S(03), pri čemu je R alkil.
U poželjnim rešenjima, R3 je metil, R7 je metil ili benzil, R2 je metil ili difluorometil, R<4>je izabran iz grupe koju sačinjavaju vodonik, metil, trifluorometil, ciklopropil, benzil i fenil, a R je izabran iz grupe koju sačinjavaju vodonik, acetil i benzoil. Poželjno, R<1>je izabran iz grupe koju sačinjavaju:
Poželjno, RJ je izabran iz grupe koju sačinjavaju
pri čemu Ac je CH3C(=0) i tBu je C(CH3)3.
U većini poželjnih rešenja, R<1>je izabran iz grupe koju sačinjavaju ciklopentil. benzil.letrahidrofuril. indanil. norbornil, fenetil, fenilbutil. metilenciklopropi!. metilentetrahidrofuril. etilentienil. Ci^alkilenciklopentil, metilenindanil, C].4alkilenfenil. fenilpropargil, fenilalil. 3-(4-hlorofeniI)-(l,2.4-oksadiazol-5-il)metil, C|.4alkilenfenoksi. Ci^alkilenbifenil, Ci^alkilen-cikloheksih piraniL metilen premošćeni alkil,letrahidronaftil, dekahidronaftih i Cm alkil pri čemu je R<1>opciono supstituisan sa jednim ili više fenil, hidroksi, metoksi. metil, etil. trifluorometil. fluoro, fenoksi, t-butil, metoksi. ciklopropil i halofenil; R<2>je izabran iz grupe koju sačinjavaju metil i difluorometil; R3 je izabran iz grupe koju sačinjavaju CO2CH3. C(=0)CH2OH, C(=0)CH(CH3)OH, C(=0)C(CH3)2OH5C(=0)C(=0)NH2rC(=0)C(=0)OH, C(=0)CH2NH2sC(=0)CH(OH)CH2OH, C(=0)CH(OH)CH2CH2CH3,
R<4>je vodonik; R"^ je metil; R<6>je vodonik: a R<8>i R<9>su nezavisno jedan od drugog izabrani iz grupe koju sačinjavaju vodonik i niži alkil, ili čine petočlani ili šestočlani prsten.
Predmetni pronalazak obuhvata sve moguće stereoizomere i geometrijske izomere jedinjenja strukturne formule (II) i obuhvata ne samo racemske smeše već takođe i optički aktivne izomere. Ukoliko se želi da jedinjenje strukturne formule (II) bude pojedinačni enantiomer, može se dobiti bilo izdvajanjem iz konačnog proizvoda ili putem stereospecifične sinteze iz bilo izomerno čistog polaznog materijala ili korišćenjem pomoćnog hiralnog reagensa, videti, na primer. Z. Ma et al.,Tetrahedron: asymmetry, 8( 6),pp. 883-888 (1997). Izdvajanje konačnog proizvoda, intermedijera ili polaznog materijala se može postići bilo kojim pogodnim postupkom poznatim u struci. Dodatno, u slučajevima kada postoje tautomeri jedinjenja strukturne formule (II), predmetni pronalazak obuhvata sve tautomerne oblike jedinjenja. Kao što je ovde pokazano, specifični stereoizomeri ispoljavaju izuzetnu sposobnost inhibicije PDE4 bez manifestacije negativnih nuspojava na centralni nervni sistem koje se tipično javljaju prilikom upotrebe ranijih inhibitora PDE4.
Konkretno, generalno je prihvaćeno da biološki sistemi mogu ispoljavati veoma osetljive aktivnosti u odnosu na apsolutnu stereohemijsku prirodu jedinjenja. (Pogledati E. J. Ariens,Medicinal Research Reviews,6:451-466 (1986): E. J. Ariens,Medicina! Research Reviews,7:367-387 (1987); K. W. Fowler, Handbook of Stereoisomers: Therapeutic Drugs, CRC Press, edited by Donald P. Smith, pp. 35-63 (1989); i S. C. Stinson,Chemical and Engineering News,75:38-70 (1997).)
Na primer, Rolipram je stereospecifični inbibitor PDE4 koji sadrži jedan hiralni centar. Rolipramov (-)-enantiomer ima jače farmakološko dejstvo od (+)-enantiomera. što se može povezati sa njegovim potencijalnim antidepresivnim dejstvom (pogledati Schultz et al..Naunyn- Sckmiedeberg' s Arch. Pharmacol..333:23-30 (1986)). Dodatno, pokazuje se daje metabolizam Roliprama stereospecifičan, pošto (+)-enantiomer pokazuje veću brzinu preuzimanja u odnosu na (-)-enantiomer (pogledati Krause et al.,Xenobiotica.18:561-571
(1988)). Konačno, nedavna ispitivanja su ukazala na to da (-)-enantiomer Roliprama (R-Rolipram) ispoljava desetostruko jače emetičko dejstvo u odnosu na (+)-enantiomer Roliprama (S-Rolipram) (pogledati A. Robichaud et al.,Neuropharmacology,38:289-297
(1999)). Ovo opažanje nije lako usaglasiti sa uočenim razlikama u prijemčivosti laboratorijskih životinja na izomere Roliprama i njegovoj sposobnosti da inhibira PDE4 enzim, Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu imati tri ili više hiralnih centara. Kao što je dole prikazano, jedinjenja specifične stereohemijske orijentacije ispoljavaju sličnu PDE4 inhibitomu aktivnost i farmakološku aktivnost, ali različitu toksičnost prema centralnom nervnom sistemu i emetički potencijal.
Shodno tome, poželjna jedinjenja predmetnog pronalaska imaju strukturnu formulu
(III):
Jedinjenja strukturne formule (III) su snažni i selektivni inhibitori PDE4 i ne ispoljavaju negativne efekte na centralni nervni sistem niti emetički potencijal karakterističan za stereoizomere jedinjenja strukturne formule (III).
Jedinjenja strukturne formule (II) koja sadrže kisele ostatke mogu obrazovati farmaceutski prihvatljive soli sa odgovarajućim katjonima. Odgovarajući farmaceutski prihvatljivi katjoni uključuju katjone alkalnih metala (npr. natrijuma ili kalijuma) i zemnoalkalnih metala (npr. kalcijuma ili magnezijuma). Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja strukturne formule (II) koja sadrže bazni centar, predstavljaju soli koje se obrazuju sa farmaceutski prihvatljivim kiselinama. Primeri ovih soli uključuju hidrohloride. hidrobromide, sulfate ili bisulfate, fosfate ili hidrogenfosfate. acetate, benzoate, sukcinate, fumarate, maleate, laktate. citrate, tartarate, glukonate, metansulfonate. benzensulfonate i p-toluensulfonate. U duhu prethodno navedenog, svako pozivanje na jedinjenja predmetnog pronalaska koje se ovde pojavljuje obuhvata jedinjenja strukturne formule (II). kao i njihove farmaceutski prihvatljive soli i solvate.
Jedinjenja predmetnog pronalaska se mogu terapeutski primenjivati u vidu čistih hemikalija ali je poželjnije primenjivati jedinjenja strukturne formule (II) u vidu farmaceutskih preparata ili formulacija. Shodno tome, predmetni pronalazak dalje obezbeduje farmaceutske formulacije koje sadrže jedinjenja strukturne formule (II) zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosilaca i opciono sa drugim terapeutskim i/ili profilaktičkim sastojcima. Nosioci su »prihvatljivi« u lom smislu da su kompatibilni sa ostalim sastojcima formulacije i da nisu štetni po korisnika.
Posebno, selektivni inhibitor PDE4 prema predmetnom pronalasku je koristan sam ili
u kombinaciji sa drugim antiinflamatornim terapeutskim sredstvom, na primer terapeutskim sredstvom koje je usmereno na TNFa kao što su ENBREL<®>ili REM1CADE<8>. koji su
pogodni u lečenju reumatoidnog artritisa. Takođe, terapeutska korisnost antagonizma IL-1 je pokazana u animalnim modelima u slučajevima reumatoidnog artritisa. Na taj način, pretpostavlja se da bi antagonizam IL-1 u kombinaciji sa inhibicijom PDE4 koja slabi TNFa bio efikasan.
Inhibitori PDE4 predmetnog pronalaska su korisni u lečenju mnoštva alergijskih. autoimunih i inflamatornih oboljenja.
Termin »lečenje« uključuje prevenciju, smanjivanje, zaustavljanje ili povraćaj napredovanja stanja ili simptoma koji se leče. Kao takav, termin »lečenje« obuhvata kako medicinsko lečenje, tako i profilaktičku primenu prema potrebi.
Konkretno, upala (inflamacija) je lokalizovan odbrambeni odgovor izazvan povredom ili uništenjem tkiva, koji služi da uništi, razloži ili obloži (tj. izoluje) kako agens izazivač povrede, tako i povređeno tkivo. Termin »inflamatorno oboljenje« na način na koji se ovde koristi označava bilo koje oboljenje kod koga prekomemi ili nekontrolisani inflamatorni odgovor dovodi do prekomernih inflamatornih simptoma, oštećenja tkiva domaćina ili gubitka funkcije tkiva. Dodatno, termin »autoimuno oboljenje« na način na koji se ovde upotrebljava označava bilo koju grupu poremećaja kod kojih je povreda tkiva povezana sa humoralnim ili ćelijski posredovanim odgovorom na konstituente sopstvenog tela. Termin »alergijsko oboljenje« na način na koji se ovde upotrebljava označava bilo koje simptome, oštećenja tkiva ili gubitak funkcije tkiva koji su posledica alergije. Termin »artritično oboljenje« na način na koji se ovde upotrebljava označava bilo koju od velikih grupa oboljenja koja su okarakterisana inflamatornim lezijama zglobova sa različitim etiologijama. Termin »dermatitis« na način na koji se ovde upotrebljava označava bilo koju od velikih grupa oboljenja kože koja su okarakterisana upalom kože, a mogu imati različite etiologije. Termin »odbacivanje presadka« na način na koji se ovde upotrebljava označava bilo koju imunu reakciju usmerenu protiv presađenog tkiva (uključujući organ i ćeliju (npr. koštanu srž)) okarakterisanu gubitkom funkcije presađenog i okolnih tkiva, bolom, otocima, leukocitozom i trombocitopenijom.
Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje postupak modulacije nivoa cAMP kod sisara, kao i postupak lečenja oboljenja okarakterisanih povišenim nivoima citokina.
Termin »cilokin« na način na koji se ovde upotrebljava označava bilo koji izlučeni polipeptid koji utiče na funkciju drugih ćelija i koji moduliše interakciju između ćelija u imunom ili inflamatornom odgovoru. Citokini uključuju, bez ograničenja, monokine, limfokine i hemokine bez obzira na to koje ih ćelije proizvode. Na primer, monokini se generalno proizvode i luče od strane monocita, mada mnoge druge ćelije, kao što su prirodne ćelije ubice. fibroblasti, bazofili, neutrofili. endotelne ćelije, astrociti u moždanom tkivu, ćelije strome koštane srži, epidermalni keratinociti i B-limfociti takođe stvaraju monokine. Limfokini se generalno stvaraju u limfocitima. Primeri citokina uključuju, bez ograničenja. interleukin-1 (IL-1), interleukin-6 (IL-6), faktor nekroze tumora a (TNFa) i faktor nekroze tumora |3 (TNFP).
Predmetni pronalazak dodatno obezbeđuje postupke za smanjivanje nivoa TNF kod sisara, koji obuhvataju primenu efikasne količine jedinjenja strukturne formule (II) na sisaru. Termin »smanjivanje nivoa TNF« na način na koji se ovde upotrebljava označava bilo: a) smanjivanje prekomemihin vivoTNF nivoa kod sisara na normalne nivoe ili ispod normalnih nivoa putem inhibicijein vivooslobađanja TNF od strane svih ćelija,
uključujući, bez ograničenja, monocite i makrofage; ili
b) izazivanje smanjivanja na nivou translacije ili transkripcije, prekomemihin vivonivoa TNF kod sisara do normalnih nivoa ili ispod njih; ili c) izazivanje smanjivanja direktne sinteze TNF kao posttranslacionog događaja, putem inhibicije.
Štaviše. jedinjenja predmetnog pronalaska su korisna u suzbijanju aktivacije inflamatornih ćelija. Termin »aktivacija inflamatornih ćelija« na način na koji se ovde koristi označava indukciju putem stimulusa (uključujući, bez ograničenja, citokine, antigene ili auto-antitela) proliferativnog ćelijskog odgovora, proizvodnju solubilnih medijatora (uključujući, bez ograničenja, citokine, kiseonične radikale, enzime, prostanoide, ili vazoaktivne amine) ili ekspresiju na površini ćelije novih ili povećanog broja medijatora (uključujući, bez ograničenja, velike histokompatibilne antigene ili molekule ćelijske adhezije) na inflamatornim ćelijama (uključujući, bez ograničenja, monocite, makrofage, T-limfocite, B-limfocite, granulocite, polimorfonuklearne leukocite, mastocite. bazofile, eozinofile, dendritične ćelije, i ćelije endotelijuma). Stručnjaci će uočiti da aktivacija jednog ili kombinacije više ovakvih fenotipova u ovim ćelija, može doprineti započinjanju, izvršavanju ili pogoršavanju stanja inflamacije.
Jedinjenja predmetnog pronalaska su takođe korisna u omogućavanju relaksacije glatke muskulature vazdušnih puteva, bronhodilatacije, i prevencije bronhokonstrikcije.
Jedinjenja predmetnog pronalaska su dakle korisna u tretiranju bolesti kao što su artritične bolesti (kao što je reumatoidni artritis), osteoartritis, giht, spondilitis, oftalmopatija povezana sa tiroidnom žlezdom, Bečetova bolesi, sepsa, septički šok, endotoksički šok, gram-negativna sepsa, gram-pozitivna sepsa, sindrom toksičkog šoka. astma, hronični bronhitis, alergijski rinitis, alergijski konjunktivitis, prolećni konjunktivitis, eozinofilni granulom. adultni (akutni) sindrom respiratornog distresa (ARDS), hronično plućno zapaljensko oboljenje (kao što je hronično opstruktivno plućno oboljenje), silikoza, plućna sarkoidoza, reperfuziono oštećenje miokarda, mozga ili ekstremiteta, povreda mozga ili kičmene moždine usled manje traume, fibroza, uključujući cističnu fibrozu, formiranje keloida, formiranje ožiljnog tkiva, ateroskleroza, autoimune bolesti, kao što su sistemskilupus erythematosus(SLE) i oboljenja odbacivanja presadka (npr. reakcija presadak protiv domaćina (GvH) i odbacivanje aloerafta), hronični glomerulonefritis, zapaljenske bolesti creva, kao što su Kronova bolest i ulcerozni kolitis, proliferativna limfocitna oboljenja, kao što su leukemije (npr. hronična limfocitna leukemija, CLL) (pogledati Mentz et al.,Blood 88,pp. 2172-2182
(1996)). i inflamatorne dermatoze kao što su atopički dermatitis, psorijaza ili koprivnjača.
Jedinjenja predmetnog pronalaska su takođe korisna u lečenju gojaznosti, sama ili u kombinaciji sa inhibitorom PDE3, kao i u lečenju i prevenciji nefropatije kod dijabetesa tipa 2 (pogledati Mora et al.,New England Journal of Medicine, 342,p. 441 (2000)). Inhibitori PDE3 su poznati u struci.
Ostali primeri ovakvih bolesti ili srodnih stanja uključuju kardiomiopatije, kao što su zastojna srčana slabost, pireksija, kaheksija, kaheksija usled infekcije ili malignih oboljenja, kaheksija usled AIDS-a, ARC (kompleks povezan sa AIDS-om), cerebralna malarija, osteoporoza i poremećaji resorpcije koštane mase, kao i groznica i mialgije usled infekcije. Dodatno, jedinjenja predmetnog pronalaska su korisna u lečenju erektilne disfunkcije, posebno vaskulogene impotencije (pogledati U.S. patent br. 6,127.363. na ime Dohenv. Jr. et al.), diabetes insipidus i poremećaja u centralnom nervnom sistemu, kao Što su depresija i multi-infarktna demencija.
Jedinjenja predmetnog pronalaska su takođe korisna i van terapeutskih primena. Na premer, jedinjenja predmetnog pronalaska se mogu koristiti za očuvavanje transplantiranog organa (pogledati Pinsky et al.,J. Clin. lmesi., 92,pp. 2994-3002 (1993)).
Selektivni inhibitori PDE4 se takođe mogu koristiti u lečenju erektilne disfunkcije, posebno vaskulogene impotencije (pogledati U.S. patent br. 6,127,363, na ime Doherty, Jr. et al.), diabetes insipidus (pogledatiKidney Int., 37.p. 362, (1990):Kidnev lm., 35,p. 494,
(1989)) i poremećaja u centralnom nervnom sistemu, kao što su muhi-infarktna demencija (pogledati Nicholson,Psychopharmacology, 101,p. 147 (1990)), depresija (pogledati Eckman et al.,Curr. Ther. Res., 43,p. 291 (1988)), anksioznost i stresne reakcije (pogledatiNeuropkarmaology, 38,p. 1831 (1991)), cerebralna ishemija (pogledatiEur. J. Pharmacol, 272.p. 107 (1995)), tardivna diskinezija (pogledatiJ. Clin. Pharmacol. 16.p. 304 (1976)), Parkinsonova bolest (pogledatiNeurolog}', 25.p. 722 (1975):Clin. Exp. Pharmacol. Physiol, 26,p. 421 (1999)), i premenstrualni sindrom. U pogledu depresije, PDE4-selektivni inhibitori pokazuju efikasnost u velikom broj animalnih modela depresije, kao što je »očaj manifestovan specifičnim ponašanjem životinje« ili Porsolt test (pogledatiEur. J. Pharmacol, 47.p. 379 (1978);Eur. J. Pharmacol, 57,p. 431 (1979);Aniidepressants: neurochemical, behavioral and clinical perspectives,Enna, Malick, and Richelson eds., Raven Press, p. 121 (1981)), kao i »test vešanja o rep« (pogledatiPsychopharmacology, 85,p. 367 (1985)). Nedavna otkrića pokazuju da dugotrajniin vivotretmani uz upotrebu različitih antidepresiva povećavaju ekspresiju PDE4 izazvanu moždanom aktivnošću (pogledatiJ. Neuroscience, 19,p. 610 (1999)). Stoga, selektivni inhibitor PDE4 može biti korišćen sam ili u sprezi sa drugim terapeutskim agensima, u koje spadaju četiri velike klase antidepresiva: elektrokonvulzivne procedure, inhibitori monoaminooksidaze i selektivni inhibitori ponovnog preuzimanja serotonina ili norepinefrina. selektivni inhibitori PDE4 se takođe mogu koristiti u primenama kod kojih se moduJiše bronhodilatatorna aktivnost putem direktnog dejstva na ćelije bronhijalnih glatkih mišića, radi Icčenja astme.
Selektivni inhibitori PDE4 predmetnog pronalaska se takođe mogu koristili u lečenju neplodnosti, kako kod žena tako i kod muškaraca. Inhibitori PDE4 predmetnog pronalaska povećavaju koncentracije cAMP unutar ćelija granuloze, čime pojačavaju indukciju gonadotropina kod ovulacije i sazrevanja oocita (pogledati Tsafriri et al.,Dev. Biol, 178,pp. 393-402 (1996)). Štaviše, inhibitori PDE4 predmetnog pronalaska se mogu koristiti u lečenju kod neplodnih parova, kod kojih postoje abnormalni parametri sperme, pojačavajući motilitet spermatozoida, bez uticaja na akrozomalnu reakciju (pogledati Fosch et al.,Hum. Reprod., 13,pp. 1248-1254(1998)).
Jedinjenja i farmaceutski preparati pogodni za upotrebu u okviru predmetnog pronalaska uključuju one kod kojih se aktivni sastojak daje sisani u efikasnoj količini, kako bi se postigao željeni efekat. Preciznije, »terapeutski efikasna količina« označava količinu efikasnu u prevenciji razvoja, ili ublažavanju postojećih simptoma kod subjekta koji se tretira. Određivanje efikasnih količina je u okviru sposobnosti stručnih lica, posebno u svetlu detaljnih opisa koji su ovde prezentirani.
Termin »sisar« na način na koji se ovde koristi, obuhvata mužjake i ženke, uključujući ljude, domaće životinje (npr. mačke i pse), stoku (npr. goveda, konje i svinje) i divlje životinje (npr. primate, velike mačke, zoološke uzorke). »Terapeutski efikasna doza« se odnosi na onu količinu jedinjenja koja rezultuje u postizanju željenog efekta. Toksičnost i teraputska efikasnost ovakvih jedinjenja se može odrediti standardnim farmaceutskim procedurama u kulturama ćelija ili na eksperimantalnim životinjama, npr. za određivanje LD50(doze sa letalnim dejstvom na 50% populacije) i ED50(doze koja je terapeutski efikasna kod 50% populacije). Odnos doza između toksičnih i terapeutskih efekata je terapeutski indeks, koji se izražava kao odnos LD50i ED50. Poželjna su jedinjenja koja pokazuju visoke vrednosti terapeutskih indeksa. Ovako dobijeni podaci mogu se koristiti u određivanju opsega doza za upotrebu na ljudima. Poželjno je da se doze ovakvih jedinjenja nalaze u opsegu cirkulacionih koncentracija koje uključuju ED50sa malomlokičnošću ili bez nje. Doza može varirali okviru ovog opsega u zavisnosti od primenjene dozne forme i puta davanja koji se koristi.
TaČna formulacija, put davanja i doza, mogu biti određeni od strane pojedinačnog lekara u zavisnosti od stanja u kome se pacijent nalazi. Doza i interval davanja mogu se podesiti individualno, kako bi se postigli nivoi aktivnih ostataka u plazmi koji su dovoljni da se održe terapeutski efekti.
Stručnjacima će biti jasno da se izrazi »tretman« i »lečenje« odnose kako na profilaksu, tako i na tretiranje utvrđenih bolesti ili simptoma. Takođe se podrazumeva da količina jedinjenja predmetnog pronalaska potrebna u tretmanu, varira u zavisnosti od prirode stanja koje se tretira, kao i starosne dobi i stanja pacijenta, i konačno se određuje od strane nadležnog lekara i veterinara. Generalno, međutim, doze koje se koriste za u-etman odraslih ljudi, tipično se nalaze u opsegu od 0,001 mg/kg do oko 100 mg/kg na dan. Željena doza se na pogodan način može davati kao jedna doza ili kao vie doza u odgovarajućim intervalima, na primer ka dve, tri, četiri ili više subdoza na dan. U praksi, lekar određuje stvarni dozni režim koji je najpogodniji za individualnog pacijenta, pri čemu doziranje varira sa starosnom dobi. težinom, i osetljivošću konkretnog pacijenta. Navedene doze predstavljaju primere prosečnog slučaja, međutim, može biti individualnih situacija u kojima su više ili niže doze poželjne, i takve su takođe obuhvaćene obimom zaštite predmetnog pronalaska.
Formulacije predmetnog pronalaska se mogu davati na standardan način, za tretman indikovanih oboljenja, na primer oralno, parenteralno, transmukozno (npr. subiingvalno ili bukalno), topično, transdermalno, rekialno, putem inhalacije (npr. nazalno ili putem duboke plućne inhalacije). Parenteralna primena uključuje, bez ograničenja, intravenozno, intraarterijalno, intraperitonealno. subkutano, intramuskularno, intratekalno i intraartikularno. Parenteralna primena se takođe može postići upotrebom tehnike sa visokim pritiskom, kao što je POVVDERJECT™
Za bukalnu primenu, preparat može biti u obliku tableta ili bombona, formulisanih na konvencionalni način. Na primer. tablete i kapsule za oralnu primenu mogu sadržati uobičajene ekscipijense. kao što su agensi za povezivanje (npr. sirup, akacija, želatin, sorbitol, tragakant, škrobna sluz ili sluz od polivinil-pirolidona), punioce (npr. laktozu, šećer, mikrokristalnu celulozu, kukuruzni škrob, kalcijum-fosfat ili sorbitol), lubrikante (npr. magnezijum-stearat, stearinsku kiselinu, talk, polietilen glikol. silicijum-dioksid). solubilizatore (npr. krompirni škrob ili natrijum škrobni glikolat) ili ovlaživače (npr. natrijum lauril sulfat). Tablete mogu biti obložene u skladu sa postupcima koji su dobro poznati u struci.
Alternativno, jedinjenja predmetnog pronalaska se mogu inkorporirati u oralne tečne preparate kao što su vodene ili uljane suspenzije, rastvori, emulzije, sirupi ili eliksiri. Štaviše, formulacije koje sadrže ova jedinjenja mogu predstavljati suvi proizvod koji se pre upotrebe meša sa vodom ili nekim drugim pogodnim vehikulumom. Takvi tečni preparati mogu sadržati uobičajene aditive kao Što su suspendujući agensi, poput sorbitolnog sirupa, metil celuloze, glukoza/šećer sirupa, želatina, hidroksietil celuloze, hidroksipropilmetil celuloze, karboksimetil celuloze, alurninijum-slearatonog gela i hidrogenizovanih jestivih masti: emulzifikatori kao što su lecilin, sorbitan monooleat ili akacija: nevodeni vehikulumi (koji mogu obuhvatati jestiva ulja) poput bademovog ulja, frakcionisanog kokosovog ulja, uljastih estara, propilen glikola i etil-alkohola; i konzervansi, poput metil ili propil p-hidroksibenzoata i sorbinske kiseline.
Ovakvi preparati takođe mogu biti pripremeljeni u obliku supozitorija, na primer tako da sadrže uobičajene baze za supozitorije, kao što su kakao buter ili drugi gliceridi. Preparati2a inhalaciju tipično mogu biti pripremljeni u obliku rastvora, suspenzija ili emulzija koje se mogu davati kao suvi prašak ili u vidu aerosola, uz upotrebu uobičajenog potisnog gasa, kao što se dihlorodifluorometan ili trihlorofluorometan. Tipične topične i transdermalne formulacije sadrže uobičajene vodene ili nevodene vehikulume, a u njih spadaju kapi za oči, kreme, masti, losioni i paste, ili su u formi medicinskog flastera, umetka ili membrane.
? U nastavku, preparati predmetnog pronalaska se mogu formulisali za parenteralnu primenu putem injekcije ili kontinualne infuzije. Formulacije za injekcije mogu biti u obliku
suspenzija, rastvora ili emulzija u uljanim ili vodenim vehikulumima i mogu sadržati dodatne agense, kao što su suspendujući, stabilizujući i/ili dispergujući agensi. Alternativno, aktivni sastojak može biti u obliku praška koji se meša sa pogodnim vehikulumom (npr. sterilisanom vodom slobodnom od pirogena) pre upotrebe.
Preparat u skladu sa predmetnim pronalaskom takođe može biti formulisan depo preparata. Ovakve formulacije dugog dejstva se mogu primenjivati implantacijom (npr. subkutano ili intramuskularno) ili putem intramuskulame injekcije. U skladu s time, jedinjenja predmetnog pronalaska mogu ući u formulacije zajedno sa pogodnim polimemim ili hidrofobnim materijalima (npr. emulzije u prihvatljivom ulju), jonoizmenjivačkim smolama ili kao delimično rastvorljivi derivati (npr. delimično rastvorljiva so).
Za primenu u veterini, jedinjenje formule (II) ili njegove netoksične soli primenjuju se u obliku prihvatljive formulacije u skladu sa uobičajeno veterinarskom praksom. Veterinar može bez problema odrediti režim doziranja i način primene koji je najpogodniji za određenu životinju.
Stoga, predmetni pronalazak u dodatnom aspektu obezbeđuje farmaceutski preparat koji obuhvata jedinjenje formule (II) zajedno sa farmaceutski prihvatljivim razblaživačem ili nosiocem. Predmetnim pronalaskom je dodatno obezbeđen postupak pripremanja farmaceutskog preparata koji obuhvata jedinjenje formule (II), a koji postupak uključuje mešanje jedinjenja formule (II) sa farmaceutski prihvatljivim razblaživačem ili nosiocem.
Specifični, nelimilirajući primeri jedinjenja strukturne formule (II) dati su u nastavku, a njihova sinteza je izvedena u skladu sa postupcima kojie su takođe navedene u nastavku.
Generalno, jedinjenja strukturne formule (II) mogu se pripremiti prema sledećim šemama sinteze. U svakoj od šema koje su u nastavku opisane podrazumeva se, u struci, da se zaštitne grupe mogu koristiti tamo gde je to potrebno u skladu sa opštim principima sintetičke hernije. Ove zaštitne grupe se uklanjaju u završnim koracima sinteze u baznim, kiselim ili hidrogenolitičkim uslovima koji su sasvim očigledni za stručnjake. Primenom odgovarajuće manipulacije i zaštite bilo koje od hemijskih funkcionalnih grupa, sinteza jedinjenja strukturne formule (II) koja nije ovde specifično navedena, može se izvesti postupcima koji su analogni šemama koje su u nastavku prikazane.
Ukoliko nije drugačije naglašeno, svi polazni materijali su nabavljeni od komercijalnih nabavljača i korišćeni bez dodatnog prečišćavanja. Sve reakcije i hromatografske frakcije analizirane su tankoslojnom hromatografijom na 250-mm silikagelnim pločicama, vizuelizovane pomoću UV (ultravioletne) svetlosti i bojenja jodom 12. Proizvodi i intermedijeri prečišćavani su hromatografijom lakih frakcija, ili postupkom HPLC reverzne faze.
Jedinjenja opšte strukturne formule (II) mogu se pripremiti, na primer. najpre reakcijom disupstituisanog benzaldehida (1) sa 2-butanonom, nakon čega sledi reakciona šema prikazana niže. Stručnjacima su takođe poznati i drugi sintetički putevi. Na primer. pogledati U.S. patent br. 5,665,754, na ime Feldman et al., koji je uvde uključen prema referenci, za mnoge pojedinačne reakcije i sintetičke postupke opisanu u ovde prikazanim Interni edijerima i Primerima.
Gore navedena reakciona šema daje jedinjenje (5).. strukturne formule (II). naznačenolime što su R<1>i R<2>određeni polaznim benzaldehidom, R<J>je C(=0)OCH3, R<4>je vodonik. R<5>je metil. R<6>je vodonik i R' je metil, a R<10>je vodonik. Odgovarajući izbor polaznih materijala, ili izvođenje reakcija konverzije na jedinjenju (5), daje jedinjenja opšte strukturne formule (II) koja imaju druge supstituente R<1>do R<7>iR10.
U nastavku je ilustrovana sinteza različitih intermedijera i jedinjenja strukturne formule (II). Primeri koji slede dati su kao ilustracija i ne treba ih shvatati kao ograničenje.
U ovde navedenim strukturama, u slučaju veze koja nema supstituent, supstituent je metil, na primer:
Tamo gde nije naveden supstituent, na mestu gde bi trebalo da bude vezan za atom ugljenika ili azota, podrazumeva se da ugljenikov atom sadrži odgovarajući broj atoma vodonika.
Takođe se koriste skraćenice koje su dobro poznate osobama sa prosečnim poznavanjem struke, na primer »Me« za metil, »OMs« za mezilat, »Ph« za fenil, »CH2CI2« za metilen-hlorid, »NaOH« a natrijum-hidroksid, »EtOAc« za etil-acetat, »NH4OH« za amonijum-hidroksid, »MeOH« za metanol, »LiOH« za litijum-hidroksid, »CsCCb« za cezijum-karbonat, ,»H?« za vodonik u gasovitom stanju, »TFA« za trifluorosirćetnu kiselinu, »OAc« za acetat, »Ac« za acetil, »t-Bu« za tercijerni butil, »sat.« za zasićeni, »h« za čas, »g« za gram, »mmol« za milimol, »eq« za ekvivalent, »M« za molarni, »N« za normalni.
Intermedijer 1
3-Ciklopropilmetoksi-4-metoksibenzaldehid
Rastvor 3-hidroksi-4-metoksibenza]dehida (400 g, 2,63 mol) i bromometilciklopropana (426 g, 3,2 mol) u 1 1 dimetilformamida (DMF) je mešan sa kalijum-karbonatom (K2CO3) (483 g, 3,5 mol) pri temperaturi od 55 °C, tokom 3.5 časova. Zatim je dodat 1 1 vode, smeša je ohlađena na ledu, a Intermedijer 1 je isfiltriran u vidu bele čvrste supstance (535 g, 99%). m/z 207 (MH<+>).
Intermedijer 2
3-(Indan-2-iloksi)-4-metoksibenzaldehid
Mtisunobu postupak
U rastvor 3-hidroksi-4-metoksibenzaldeliida (15.2 g, 100 mmol, 1 eq), 2-indanoIa (12,1 g, 90 mmol 0,9 eq) i trifenilfosfina (26,2 g, 100 mmol, 1 eq) u suvom THF (300 ml) ukapavan je diizopropilazodikarboksilat (DIAC) (19,6 ml. 100 mmol, 1 eq). Reakciona smeša je mešana na temperaturi deflegmacije tokom 16 časova, zatim ohlađena i razblažena dietil etrom (500 ml). Ratvor je zatim ispran vodom (2 x 150 ml), 1 M NaOH (4 x 125 ml) i zasićenim rastvorom natrijum-hlorida (NaCI) (2 x 100 ml), potom je isušen natrijum-sulfatom (Na2SC»4) i koncentrovan do sirupa koji je očvrsnuo tokom stajanja. Ova čvrsta supstanca je suspendovana u Et20 (350 ml) i mešana tokom noći kako bi se dobile male čestice. Čvrsta supstanca je prikupljena filtriranjem u vakuumu i rekristalizovana iz smeše etanola i vode (21,4 g). Laki filtrat je koncentrovan i prečišćen putem hromatografije za rektifikaciju lakih frakcija (silika gel, Biotage KP-Sil 7,5 x 36 cm kolona, eluacija sa 25% EtOAc u heptanu) kako bi se dobilo dodatnih 5 g Intermedijera 2.
'H NMR (300 MHz, CDC13) 5: 9,86 (s, IH), 7,49-7.44 (m. 2H), 7.25-7,16 (m, 4H), 6,97 (d. J = 8,7 Hz, IH), 5,29-5,22 (m, IH), 3,89 (s, IH), 3,45 (dd, J = 16,7, 6,6 Hz, 2H), 3,24 (dd, J = 16,7, 3,6 Hz, 2H).<13C>NMR (75 MHz, CDCI3) 8: 190,9, 155,5, 147,9, 140,4, 130,0, 126.9, 126,8,124,7, 112,1,111,0,78.9, 56,1,39,7.
Intermedijer 3
3-(terc-Butoksi)-4-metoksibenzaIdehid
U promešani rastvor izovanilina (30,4 g, 200 mmol) u CH2CI2(200 ml) na sobnoj temperaturi u atmosferi azota, dodat je (2-aza-l-(/erc-butoksi)-3-metilbut-l-enil) (metiletil) amin (sirov, 40 ml, oko 200 mmol) kao sredstvo za alkilaciju. Nakon svaka 2 sata, dodavanje još po jedan molarni ekvivalent sredstva za alkilaciju, sve dok nije ukupno dodato 5 ekvivalenata. Reakciona smeša je mešana tokom narednih ] 6 časova. Primenom TLC u smeši EtOAc i heksana u odnosu 3:7. određeno je daje reakcija 80% dovršena. Smeša je razblažena pomoću CH2CI2(500 ml) i isprana sa 3 M NaOH (4 x 300 ml), kako bi se odstranio izovanilin koji nije reagovao. Organski sloj je isušen pomoću magnezijum-sulfata (MgS04), isfiltriran i koncentrovan u vakuumu, kako bi se dobio sirovi proizvod u vidu braon ulja, koje je podvrgnuto hromatografiji za rektifikaciju lakih frakcija primenom smeše heksana i EtOAc u odnosu 3:1, i isušeno u vakuumu, kako bi se dobio čisti Intermedijer 3 (22,6 g, 54%).
'H-NMR (CDCI3,400 MHz) 0: 9,84 (s, IH), 7,60 (d, IH), 7,55 (s, IH), 7,00 (d, IH), 3,86 (s, 3H), 1,39 (s, 9H).
Intermedijer 4
Etil estar (2E)-3-(3-ferc-butoksi-4-metoksifeniI)-2-metil-akrilne kiseline
Horner- Emmons postupak
U promešani rastvor trietil 2-fosfonopropionata (25,6 ml, 119,4 mmol) u THF (120 ml) na 0<n>C, u atmosferi azota. dodat je kap po kap iz šprica litijum heksametildisililamid (1 M u THF, 114 ml, 114 mmol). Nakon 30 minuta, kroz kanilu je dodat rastvor Intermedijera 3 (22.6 g, 108 mmol) u THF (40 ml). Nakon 2 časa na temperaturi od 0 °C, rastvor TLC u smeši heksana i EtOAc u odnosu 4:1 je pokazao završetak reakcije. Reakciona smeša je delimično koncentrovana pomoću rotacionog evaporatora i podeljena između EtOAc (500 ml) i vode (500 ml). Organski sloj je ispran zasićenim rastvorom NaCl (500 ml), isušen (MgSO*). isfiltriran i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je podvrgnut hromatogarfiji za rektifikaciju lakih frakcija korišćenjem smeše heksana i EtOAc u odnosu 9:1 kako bi se nakon koncentovanja u vakuumu dobio Intermedijer 4 (34,1 g, 98%).
'H-NMR (CDC13, 400 MHz) 8: 7,60 (s, IH), 7,16 (d, IH), 7,12 (s, IH), 6,91 (d, IH), 3,83 (s. 3H), 2,13 (s, 3H), 1,37 (s,9H).
Intermedijer 5
(2E)-3-(3-ferc-Butoksi-4-metoksifeniI)-2-metiI-akrilna kiselina
Postupak hidrolize litijum hidroksidom
U promešani rastvor Interrnedijera 4 (34,1 g, 116 mmol) u dioksanu (116 ml) na sobnoj temperaturi u atmosferi azota, dodat je rastvor LiOH monohidrata (5,87 g, 140 mmol) u vodi (116 ml). Reakciona smeša je zagrevana na 80 °C tokom 2 Časa nakon čega je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Reakciona smeša je zatim podeljena između EtOAc (400 ml) i IM fosforne kiseline (H3PO4) (400 ml). Organski sloj je izolovan, ispran vodom (400 ml) i zasićenim rastvorom NaCl (400 ml), osušen (MgSO-j). filtriran i koncentrovan u vakuumu da bi se dobio Intermedijer 5 u vidu bele čvrste supstance (28,2 g. 92%).
'H-NMR (CDCI3, 400 MHz) 5: 7,66 (s, IH), 7,20 (d, IH), 7,18 (s, IH), 6,92 (d, IH), 3,83 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), L38(s, 9H).
Intermedijer 6
(E)-4-(3-Benziloksi-4-metoksifenil)-3-metilbut-3-en-2-on
Postupak aldolne kondenzacije katalizovane kiselinom
Rastvor komercijalno dostupnog 3-benziloksi-4-metoksibenžaldehida (34 g. 0,14 mol, I eq) i 2-butanona (50 ml. 0,56 mol. 4 eq) u suvom THF (50 ml) je ohlađen do temperature od
-4 °C. Gasoviti hlorovodonik je propuštan kroz dobro mešani rastvor u toku nekoliko minuta, nakon čega je reakciona smeša začepljena i pohranjena na temperaturi od - A °C u toku 16 časova. Reakciona smeša je nasuta u dobro mešani, ledeno hladni rastvor zasićenog natrijum-"bikarbbnata (NaHCOa) (oko 2 1). Ukoliko je potrebno, pH vrednost se podešava do veće od 7 zasićenim rastvorom NaHC03a reakciona smeša se ekstrahuje sa EtOAc (3 x 300 ml). Sloj sa
EtOAc je ispran sa NaHC03(2 x 200 ml), vodom (2 x 200 ml) i zasićenim rastvorom NaCl (2 x 200 ml), osušen sa Na2S04i koncentrovan do sirupa.
Sirova smeša je prečišćena primenom hromatografije za rektifikaciju lakih frakcija (silika gel, 7,5 x 36 cm Biotage KP-Sil kolona, eluirano sa 25% EtOAc u heptanu) da bi se dobio Intermedijer 6 (29,1 g, 70%).
'H NMR (300 MHz. CDC13) 8: 7,46-7,27 (m, 6H), 7,06-6,91 (m, 3H), 3,93 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 1,92 (d. J= 1,1 Hz,3H).
Intermedijer 7
(E)-4-[3-(Indan-2-iloksi)-4-metoksifeniI]-3-metil-but-3-en-2-on
Dobijen iz Intermedijera 2 kiselinom katalizovanom aldolnom kondenzacijom,
procedurom opisanom kod Intermedijera 6.
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 323,4 (m+1).
Intermedijer 8
(E)-4-(3-Bromo-4-metoksifenil)-3-metil-but-3-en-2-on
Dobijen iz 3-bromo-4-metoksibenzaldehida kiselinom katalizovanom aldolnom
kondenzacijom, procedurom opisanom kod Intermedijera 6.
'H NMR (300 MHz, CDCI3) 8: 7,66 (d, J = 2,0 Hz, IH), 7,36-7,41 (m, 2H), 6,94 (d, J = 8,6 Hz, IH), 3,94 (s, 3H), 2,45 (s, 3H), 2,06 (d, J = 1,1 Hz, 3H).
Intermedijer 9
(E)-4-(3-Ciklopentiloksi-4-metoksifeni])-3-metiI-but-3-en-2-on
Dobijen iz Intermedijera 1 kiselinom katalizovanom aldolnom kondenzacijom,
procedurom opisanom kod Intermedijera 6.
<*>H NMR (300 MHz, CDC13) 8: -7,45 (br s, IH), 7,05-6,99 (m, 2H), 6,90 (d, J = 8,26 Hz, IH), 4,81-4,75, m, IH), 3,89 (s, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,89 (d, J = 1,1 Hz, 3H) , 1,98-1,79 (m. 6H). 1,66-1,60 (m, 2H).
Intermedijer 10
Etil (2E)-3-(3-Ciklo<p>entiloksi-4-metoksifeniI)-2-mctilprop-enoat
Dobijen iz komercijalno dostupnog 3-ciklopentil-oksi-4-metoksibenzaldehida pomoću Homer-Emmons-ove procedure, opisane kod Intermedijera 4. Prinos braon tečnosti (68.4 g) 100%.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 7,64 (s, IH), 7,01-6,96 (c, 2H), 6,87 (m, IH), 4,77 (m, IH), 4,26 (q, 2H), 3,87 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 1,81-1,96 (c, 6H), 1,59-1,63 (c, 2H), 1,34 (t, 3H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 305,3 (m+1). ■
Intermedijer 11
(2E)-3-(3-Ciklopentiloksi-4-metoksifeniI)-2-metilprop-2-pelargonska kiselina
Intermedijer 10 (68,4 g; 225 mmol) hidrolizovan je upotrebom LiOH hidrolizacione procedure navedene kod Intermedijera 5, čime je dobijen Intermedijer 11 u formi narandžaste čvrste supstance (55 g, 88%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 5: 7,76 (s, IH). 7,06-7,00 (c, 2H), 6,89 (m, IH), 4,78 (m, IH), 3,88 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 1,97-1,83 (c, 6H), 1,64-1,61 (c, 2H).
LRMS (Elektrosprej, negativan): Da/e 275,3 (m-1).
Intermedijer 12
(2E)-3-(3-CiklopentiIoksi-4-metoksifenil)-2-metilprop-2-enoil hlorid
Postupak sa kiselim kloridom
U hlađenom (0 °C), mešanom, anhidrovanom CH2CI2(400 ml) razmućen je Intermedijer 11 (55 g, 199 mmol) i u to je dodat rastvor oksalil-hlorida u CH2Cl2(109 ml. 2.0 M, 218 mmol, 1,1 eq), pomoću šprica u kalcijum-hloridom osušenoj atmosferi tokom 10 minuta. Primećeno je intenzivno stvaranje mehurića. Dobijeni tamni rastvor je mešan na temperaturi od 0 °C tokom 15 minuta, a onda je dodala katalitička količina DMF pomoću šprica (0,3 ml). Dobijeni rastvor je mešan na 0 °C u toku 0,5 časova dok se nije stišaio razvoj mehurića, a onda je ostavljen da se zagreje na sobnoj temperaturi i mešan je tokom noći (17 časova). Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (500 ml) i uz oprez mu je dodata voda radi hlađenja (250 ml). Nakon snažnog mešanja u toku jednog časa. slojevi su razdvojeni i organski sloj je ispran vodom (400 ml) i slanim rastvorom (400 ml), a zatim osušen (MgS04), filtriran i koncentrovan u vakuumu, čime je dobijen Intermedijer 12 u vidu čvrsie braon supstance (57,5 g, 98%).
<J>H NMR (400 MHz, CDC13) 5: 7,98 (s, IH), 7,11-7,02 (c, 2H), 6,92 (m, IH), 4,79 (m, IH), 3,90 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2.01-1.82 (c, 6H), 1,68-1,62 (c, 2H).
Intermedijer 13
Etil (2E)-3-(3-Indan-2-iloksi-4-metoksifenil)-2-metilprop-2-enoat
Dobijen iz Intermedijera 2 putem Horner-Emmons postupka navedenog kod Intermedijera 4.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 7,64 (d, IH), 7,28-7,17 (m, 4H), 7,06 (dd, IH), 7,03 (d, IH). 6,90 (d, IH), 5,20 (c, IH), 4,28 (q, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,39 (dd, 2H), 3,26 (dd, 2H), 2,16 (d, 3H), 1,36 (t,3H).
Intermedijer 14
(2E)-3-(3-Indan-2-iloksi-4-metoksifenil)-2-mctilprop-2-pelargonska kiselina
Dobijen iz Intermedijera 13 upotrebom LiOH hidrolizacione procedure navedene kod Intermedijera 5.
'H NMR (D6DMSO, 400 MHz) 8: 7,56 (s, IH), 7,25-7,11 (m, 5H), 7,06 (d, IH), 6,99 (d, IH), 5,22 (c, IH), 3,71 (s, 3H), 3,34 (dd, 2H), 3,03 (d, 2H), 2,06 (s, 3H).
Intermedijer 15
(2E)-3-(3-Indan-2-iloksi-4-metoksifenil)-2-metilprop-2-enoil hlorid
Dobijen iz Intermedijera 14 putem postupka sa hloridom kiseline navedene kod Intermedijera 12.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 8,01 (s, IH), 7,29-6,93 (m, 7H), 5,23 (c, IH), 3,89 (s, 3H), 3,42 (dd, 2H), 3,28 (dd, 2H), 2,26 (s, 3H).
Intermedijer 16
3-[(2E)-3-(3-Ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-2-mctilprop-2-enoiIJ(4R)-4-fenil-l,3-oksazolidin-2-on
Postupak acilacije oksazolidinona
U hlađeni (-78 °C), gore pomenuti mehanički mešani rastvor R-fenil oksazolidinona (10,0 g, 61,3 mmol) u suvom tetrahidrofuranu (400 ml), dodat je rastvor n-butil-litijuma u heksanima (27 ml, 2,5 M, 1.1 eq) pomoću šprica u atmosferi azota. Dobijeni rastvor je mešan na -78 °C u toku 0.8 Časova, a zatim je putem kanile dodat rastvor Intermedijera 12 (19,9 g. 67,4 mmol, 1,1 eq) u THF (100 ml). Nakon mešanja na -78 °C u toku 15 minuta, reakciona smeša je ostavljena da se polako zagreje do 0 °C u toku 40 minuta tokom kojih je reakciona smeša postala gusta mulju slična supstanca. Nakon mešanja na 0°Cu toku 2,5 časova, reakciona smeša je ohlađena pomoću zasićenog tečnog amonijum-hlorida (NH4CI) (300 ml), a zatim je najveći deo THF uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je zatim ekstrahovan hloroformom (3 x.700 ml) i kombinovani organski slojevi su isprani vodom (300 ml) i sonim rastvorom (300 ml), nakon čega su osušeni (MgS04), filtrirani i koncentrovani u vakuumu, čime je dobijeno oko 33 g svetio narandžaste čvrste supstance., Materijal je suspendovan u 10% EtOAc u heksanu (1,2 1) i snažno mešan u toku noći. Dobijene fine praškaste Čvrste supstance su sakupljene pomoću Bihnerovog levka sa sukcijom, a zatim osušene u vakuumu, čime je dobijen Intermedijer 16 u vidu tamnog praška (21.8 g, 88%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 5: 7,41-7,37 (c, 5H), 7,06 (s, IH), 7,01-6,97 (c, 2H), 6,86 (m.
IH), 5,54 (t, IH), 4,77-4,73 (c, 2H), 4,29 (t, IH), 3,87 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 1,97-1,82 (c, 6H), 1,62-1,56 (c, 2H).
Intermedijer 17
3-[(2E)-3-(3-Indan-2-iloksi-4-metoksifeniI)-2-metilprop-2-enoil](4R)-4-fenil-l,3-oksazolidin-2-on
Dobijen iz Intermedijera 15 postupkom acilacije oksazolidinona navedenim kod Intermedijera 16.
"H NMR (400 MHz, CDC13) 5: 7,43-7,33 (m, 5H), 7,25-7,16 (m, 4H), 7,07-7.03 (m. 2H). 6,89 (d, IH), 5,54 (dd, IH), 5,19 (c, IH), 4,74 (t, IH), 4,28 (dd, IH), 3,84 (s, 3H), 3,38 (dd, 2H). 3,24 (ddd, 2H), 2,19 (d, 3H).
Intermedijer 18
Etil (2E)-3-[4-metoksi-3-(fenilmetoksi)fenil)-2-metiIprop-2-enoat
Dobijen iz 3-benziloksi-4-metoksibenzaldehida putem Horner-Emmons postupka navedenog kod Intermedijera 4.
'H NMR (400 MHz: CDC13) 8: 7,56 (s, IH), 7,44 (t, 2H), 7,36 (t, 2H), 7,30 (t, IH), 7,01 (dd.
IH), 6,95 (d, IH), 6,90 (d, IH), 5,18 (s, 2H), 4,24 (q, 2H), 3,92 (s, 3H), 1,98 (d, 3H), 1,33 (t, 3H).
Intermedijer 19
(2E)-3-[4-metoksi-3-(fenilmetoksi)fenil]-2-metiIprop-2-pelargonska kiselina
Dobijen iz Intermedijera 18 upotrebom LiOH hidrolizacione procedure navedene kod Intermedijera 5 i korišćen bez karakterizacije.
Intermedijer 20
(2E)-3-[4-metoksi-3-(fenilmetoksi)feniIJ-2-metiIprop-2-enoil hlorid
Dobijen iz Intermedijera 19 putem postupka sa hloridom kiseline navedene kod Intermedijera 12.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 7,91 (s, IH), 7,47-7,29 (m, 5H), 7,10 (dd, IH), 7,00 (d, IH), 6,95 (d, IH), 5,20 (s, 2H), 3,95 (s, 3H), 2,04 (s, 3H).
Intermedijer 21
3-{(2E)-3-[4-metoksi-3-(fenilmetoksi)fenil]-2-metilprop-2-enoiI}(4R)-4-fenil-l,3-
oksazolidin-2-on
Dobijen iz Intermedijera 19 postupkom acilacije oksazolidinona navedenim kod Intermedijera 16.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 7,44-7,29 (m, 1 IH), 7,03-6,89 (m, 3H), 5,52 (dd, IH), 5,17 (s. 2H), 4,73 (dt, IH), 4.27 (dd, IH), 3,91 (s, 3H), 2,00 (s, 3H).
Intermedijer 22
(2E)-3-[3-(3-/erc-Butoksi-4-metoksifenil)-2-metil-akriloil]-4-R-feniloksazoIidin-2-on
Dobijen iz Intermedijera 5 (25,7 g, 97.2 mmol) postupkom acilacije oksazolidinona navedenim kod Intermedijera 16. Dobijen je Intermedijer 22 u vidu zagasito bele čvrste supstance (39,8 g, kvantitativni prinos).
'H-NMR (CDCI3, 400 MHz) 8: 7,42-7,33 (m, 5H), 7,16 (d, IH), 7,02 (s, IH), 6,87 (d, IH). 5,55 (dd, IH), 4,73 (dd, IH), 4,26 (dd, IH), 3,81 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 1,38 (s, 9H).
Intermedijer 23
trans-(±)-l-[l-BenziI-4-(3-benzilokšsi-4-metoksifeniI)-3-metiIpiroIidin-3-il]etanon
Ciklizacija azometin ilida
Rastvor Intermedijera 6 (15 g 50,6 mol, 1 eq) i N-(metoksimetil)-N-(trimetisililmetil)benzilamina (11,9 g, 50,6 mmol, 1 eq) u CH2C12(85 ml) na temperaturi od 0 °C, tretiran je kap po kap rstvorom TFA (1 M u CH2CI2, 5 ml, 5,1 mmol, 0,1 eq). nakon mešanja na 0 °C u toku 30 minuta, reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 16 časova. Rastvor je tretiran dodatnom količinom N-(metoksimetil)-N-(trimetisililmetil)benzilamina (6 g, 25,3 mmol, 0,5 eq), mešan u toku jednog časa na sobnoj temperaturi i tretiran po treći put sa N-(metoksimetil)-N-(trimetisililmetil)benzilaminom (6 g, 25.3 mmol, 0,5 eq). Reakciona smeša je koncentrovana, a ostatak je rastvoren u EtOAc (500 ml). Rastvor je ispran sa 1 N HC1 (2 x 60 ml, sa dodatih 10 ml zasićenog rastvora NaCl). vodom (250 ml), 1 M NaOH (250 ml), vodom (250 ml), zasićenim rastvorom NaCl (2 x 100 ml), osušen sa Na2S04i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen primenom hromatografije za rektifikaciju lakih frakcija (silika gel, 7,5 x 36 cm Biotage KP-Sil kolona, eluirano sa 5-10% dietil etrom u dihlorometanu), da bi se dobio Intermedijer 23 (17.4 g. 80%) u vidu svetlo-žutog sirupa.
'H NMR (300 MHz, CDC13) S: 7,44-7,22 (m, 10H). 6,81-6,72 (m, 3H), 5,14 (s, 2H), 3,86 (s. 3H), 3,72-3,67 (m, 2H), 3,58 (d, J = 13,0 Hz, IH), 3,08 (d, J = 9,7 Hz, IH), 2,99 (dd. J = 8.9, 7,8 Hz, IH), 2,74 (dd, J = 9,1 7,4 Hz, IH), 2,33 (d, J = 9,7 Hz, IH), 2,15 (s, 3H), 0,68 (s, 3H).,<5>C NMR (75 MHz, CDC13) 8: 211,3, 148,4, 147,4, 139,2, 137,2, 132,7. 128,51, 128,50. 128,3, 127,8, 127,4, 127,0, 121,6, 115,5, 111,2, 71,0, 63,8, 60,0, 59,5, 57,9, 56,0, 47,7, 25,6, 20,6.
Intermedijer 24
trans-(±)-l-{l-BenziI-4-[3-(indan-2-iloksi)-4-metoksifenH]-3-metilpirolidin-3-il}etanon
Dobijen iz Intermedijera 7 postupkom ciklizacije azometina opisanim kod Intermedijera 23.
'H NMR (300 MHz, CDC13) 6: 7,38-7,16 (m, 9H), 6,88 (br s, IH), 6,78 (br s, 2H), 5,18-5,13 (m, IH), 3,82-3,73 (m, 2H), 3,79 (s, 3H). 3,60 (d. J = 13,0 Hz, IH), 3,41-3,17 (m, 4H), 3,14 (d, J = 9,7 Hz, IH), 3,05 (t, J = 8,3 Hz, IH), 2,84 (t, J = 8,3 Hz, IH), 2,44 (d, J = 9,7 Hz, IH), 2,24 (s, 3H), 0,86 (s, 3H).
Intermedijer 25
Etil estar (±)-l-Benzil-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpiroIidin-3-karboksilne
kiseline
Dobijen iz Intermedijera 10 reakcijom ciklizacije azometin ilida opisanim kod Intermedijera 23. Dobijeno je ulje boje ćilibara (16,7 g, prinos 61%).
'H NMR (300 MHz, CDC13) 5: 7,39-7,23 (m, 5H. aromatični), 6,91 (s, IH, aromatični), 6,78 (m, 2R aromatični), 4,75 (m, IH), 4,18 (q, 2H, OEt), 3,86 (m, IH), 3,81 (s, 3H, OCH3):3,75 (d, IH, J = 13,2 Hz), 3,62 (d, IH, J = 13,2 Hz) 3,20 (d, IH, J = 9,5 Hz) 3.01 (m, IH). 2,91 (m, IH), 2,51 (d, IH, J = 9,5 Hz), 1.93-1.58 (m, 8H, ciklopentil), 1,28 (t, 3H, OEt), 0,9 (s, 3H, CH3).
Intermedijer 26
trans-(±)-l-[l-Benzil-4-(3-cikJopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidin-3-iI]etanon
Dobijen prema ostupku izloženom prema U.S. patentu br. 5,665,754.
Intermedijer 27
(±)-[l-BenziI-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidin-3-il]metanol
Magnetski mešanom rastvoru Intermedijera 25 (9,32 g, 21,3 mmol) u suvom toluenu (10 ml) na 0 °C, dodat je diizobutil-aluminijum hidrid (64 ml, 1,0 M u CH2C12. 63,9 mmol ). Smeša je mešana u toku 30 minuta na 0 °C, zatim na sobnoj temperaturi u toku jednog časa. i konačno ohlađena pomoću MeOH (20 ml). Dodato je 100 ml 1,0 N rastvora hlorovodonične kiseline (HCI), i smeša je mešana dodatnih 30 minuta. Faze su razdvojene i tečna faza je ekstrahovana pomoću CH2C12(2 x 20 ml). Organske faze su isprane zasićenim rastvorom NH4CI, osušene iznad anhidrovanog Na2S04, a zatim koncentrovane, čime je dobijen svetložuti uljasti proizvod (8,28 g, prinos 98%).
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8: 7.31-7,14 (m, 5H, aromatični), 6,78-6,71 (m, 3H, aromatični). 4,76-4,73 (br. m, IH), 3,79 (s, 3H, OCH3), 3,71-3,55 (m, 3H), 3,47-3,10 (m, 3H), 2,92 (d, IH, J = 9,2 Hz), 2,62 (m, IH), 3,35-2,33 (m, 2H). 1,89-1,58 (m, 8H, ciklopentil), 0,52 (s, 3H, CH3).
Intermedijer 28
(±)-]-BenziI-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-nietilpirolidin-3-karboksaldehid
U atmosferi azota je na temperaturi od 78 °C ohlađen rastvor oksalil hlorida (4,87 ml, 9,73 mmol) u suvom CH2CI2(20 ml), a zatim je uz mešanje tretiran rastvorom dimetil sulfoksida (DMSO, 1,38 ml, 19,5 mmol) u CH2CI2(5 ml). Opaženo je razvijanje gasa. Kada je dodavanje završeno, a rastvor je mešan tokom 5 minuta, nakon čega je dodat rastvor Intermedijera 27 (3,5 g, 8,85 mmol) u CH2CI2(10 ml), tokom 10 minuta. Smeša je mešana tokom 30 minuta, tretirana sa trimetilaminom (Et3N) (6,7 ml, 44,3 mmol). nakon čega je ostavljena da se zagreje na sobnoj temperaturi. U smešu je dodata voda. a dobijene faze su razdvojene. Vodena faza je ekstraihovana sa CH2CI2(2 x 50 ml). Kombinovane organske faze su isprane slanim rastvorom, osušen (Na2SC>4) i koncentrovan kako bi se dobio uljasti proizvod (3,2 g, 92%).
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8: 9,63 (s, IH, CEO), 7,34-7,21 (m, 5H, aromatični), 6,78-6,68 (m, 3H, aromatični), 4,73 (br. m, IH), 3,80 (s, 3H, OCH3). 3,78-3,61 (m, 3H), 3,18-3,11 (m. 2H), 2,86-2,81 (m, IH), 2,58-2,52 (m, IH), 2,43-2,34 (m, 2H), 1,87-1.59 (m, 8H, ciklopentil), 0,74 (s, 3H, CH3).
Intermedijer 29
(±)-l-[l-Benzil-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpiroIidin-3-il]-l-hidroksipropan-2-one
U rastvor etil vinil etra (0.95 ml, 9,91 mmol) u suvom THF (4 ml) na -78 °C dodat je 1,7 M t-bulillitijum u pentanu (5.25 ml, 8,93 mmol), a dobijeni rastvor je zagrejan do 0 °C. Boja rastvora se menjala od žute do bezbojne. Dobijeni vinil anjon je zatim ohlađen do
-78 °C, i rastvor Intermedijera 28 (1,95 g, 4.96 mmol) u THF (10 ml) dodat je kap po kap. Dobijena smeša je mešana u toku 45 minuta, ohlađena zasićenim rastvorom NH4CI (15 ml) i
ekstrahovana pomoću EtjO (3 x 30 ml). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad Na2S04i koncentrovani. Sirovi proizvod je rastvoren u Et20 i tretiran koncenirovanom sumpornom kiselinom (H2SO4) u levku za odvajanje, uz snažno mućkanje. Rastvor Et20 ispran je vodom (30 ml), zatim zasićenim rastvorom NaHC03(30 ml), osušen iznad Na2S04i koncentrovan. Ostatak je prečišćen primenom hromatografije za rektifikaciju lakih frakcija (silika gel, 20% EtOAc-heksani), da bi se dobio Intermedijer 29 (1,36 g, prinos 62%) u vidu narandžastog ulja.
<*>H NMR (300 MHz, CDC13) 5: 7,34-7,27 (m, 5H, aromatični), 6,77-6,68 (m, 3H, aromatični), 4,75-4,72 (br. m, IH), 4,13-4,08 (m, IH), 3,81 (s, 3H, OCH3), 3,79-3,57 (m, 3H), 3,26 (m, IH), 2,99 (d, IH, J = 9,2 Hz), 2,69-2,64 (m, IH), 2,39 (d, IH, J = 9,2 Hz) 2,25 (s, 3H. OCH3), 1,94-1,59 (m, 8H, ciklopentil), 0.69 (s, 3H, CH3).
Primer 1
Metil estar (±)-4-(3-CiklopentiIoksi-4-metoksifenil)-3-(l-hidroksi-l-metiletil)-3-metiIpirolidin-l-karboksilne kiseline
U 3,0 M rastvor metilmagnezijum-bromida (0,6 ml, 1,8 mmol) u Et20 na 0 °C je ukapavanjem kroz špric sa pumpom dodat rastvor Intermedijera 36 (0,65 g. 1,73 mmol) u suvom THF (5 ml). Nastala smeša je mešana na temperaturi od 0 °C tokom 30 minuta, a zatim na sobnoj temperaturi tokom jednog časa. Reakciona smeša je zatim ohlađena zasićenim rastvorom NH4CI (15 ml) i ekstrahovana sa Et20 (2 x 10 ml). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni preko Na:S04i koncentrovani. Ostatak je prečišćen primenom hromatografije za rektifikaciju lakih frakcija (silika gel, 20% EtOAc - heksani, a zatim 50% EtOAc - heksani), kako bi se dobilo jedinjenje Primera 1 u vidu narandžastog ulja (0,37 g, 55%).
'H NMR (300 MHz, CDC13) 5: 6,83-6,77 (m, 3H, aromatični), 4,75-4,74 (br. m, IH), 3,83 (s, 3H, OCH3), 3,96-3,50 (m, 4H), 3,73 (s, 3H, OCH3), 3,37-3,25 (m, IH), 1,96-1,59 (m, 8H, ciklopentil), 1,22 (s, 3H, CH3), 1,07 (s, 6H, CH3).
Intermedijer 30
2-[l-Benzil-4-(S)-(3-ciklopropilmetoksi-4-metolcsifeniI)-3-(S)-metiIpirolidin-3-il] propan-2-oI
U THF (7,5 ml) je rastvoren Intermedijer 33 (0,992 g, 2,52 mmol), a rastvor je ohlađen do temperature od 0 °C. Dodat je metilmagnezijum-jodid (3,0 M u etru, 2,52 ml. 7,6 mmol), a reakciona smeša je mešana na temperaturi od 0 °C tokom 1.5 časova. Dodat je zasićeni rastvor NH4CI, pa je reakciona smeša zatim kocentrovana u vakuumu. Ostatak je razblažen sa EtOAc, a organski sloj je tri puta ispran zasićenim rastvorom NaHC03, zasićenim rastvorom NaCl, a zatim osušen preko Na2S04i koncentrovan u vakuumu da bi se dobio Intermedijer 30 (0,96 g, 93%).
<l>H NMR (CDC13, 400 MHz) 8: 7,33-7,24 (m, 5H), 6,83-6,77 (m, 3H), 3,86-3,74 (m, 7H). 3,68-3,59 (dd, 2H), 3,32 (dd, IH), 3,24 (d, IH), 2,48 (dd, IH), 2,16 (d, IH), 1,35-1,28 (m, IH), 1,21-1,18 (m, 5H), 0,66-0,60 (m, 2H), 0,56 (s, 3H), 0,38-0,33 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 410,5 (m+1).
Intermedijer 31
2-[4-(S)-(3-Ciklopropilmetoksi-4-metoksifeniI)-3-(S)-metilpiroIidin-3-il] propan-2-ol
U metanolu (10 ml) je rastvoren Intermedijer 30 (0.96 g, 2.3 mmol), a rastvor je tretiran sa Pearlman-ovim katalizatorom (20% Pd(OH)2na ugljeniku, 200 mg) i amonijum formijatom (1,0 g, 15,5 mmol). Rastvor je zagrevan na temperaturi deflegmacije tokom 6 časova. Katalizator je uklonjen filtracijom, a rastvor je kocentrovan u vakuumu. Ostatak je rastvoren u EtOAc i tri puta ispran vodom, zasićenim rastvorom NaCl, osušen preko Na2S04i koncentrovan u vakuumu da bi se dobio Intermedijer 31 (384 mg, 52%).
'H NMR (CDC13, 400 MHz) 6: 6,83-6,79 (m, 3H), 3,86-3,80 (m, 5H), 3,75-3,66 (m, 2H), 3,57-3,51 (m, 2H), 3,22-3,17 (m, IH), 2,78-2,67 (m, IH), 1,34-1,21 (m, 7H), 0,69 (s, 3H), 0,66-0,60 (m, 2H), 0,37-0,33 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 320,3 (m+1).
Intermedijer 32
2-Bcnziloksi-l-[4-(S)-(3-ciklopropiImetoksi-4-metoksifenil)-3-(l-bidroksi-l-metiIetil)-3-(S)-metilpirolidin-l -il] etanon
U CH2C12(1 ml) je rastvoren Intermedijer 31 (75 mg, 0,23 mmol), a rastvor je tretiran sa N.N-diizopropiletilaminom (DIEA) (61 u.1, 0,35 mmol), a zatim ohlađen do temperature od 0°C. Dodat je benziloksiacetil-hlorid (55,6 pJ, 0,23 mmol), pa je rastvor mešan na temperaturi od 0 °C tokom 3 časa. Reakciona smeša je razblažena sa CH2CI2i tri puta isprana sa 1 N HC1. jednom sa vodom, tri puta sa 6% NaHCOs, a zatim osušena preko Na2S04i koncentrovana u vakuumu. Sirovi proizvod (103 mg) je podvrgnut hromatografiji sa smešom EtOAc i haksana u odnosu 1:1 da bi se dobio Intermedijer 32 (21 mg, 19%).
'H NMR (CDC13, 400 MHz) 5: 7,41-7,27 (m, 5H), 6,85-6,76 (m, 3H), 4,66-4,63 (m, 2H), 4,13-4,07 (m, 2H), 3,94-3,59 (m, 7H), 3,53-3,47 (m, IH), 3,28-3,22 (m, IH), 1,34-1,24 (m, 2H), 1,24-1,19 (m, 2H), 1,14-1,11 (m, 2H), 1,07-0,98 (m, 6H), 0,66-0,59 (m, 2H), 0,36-0,31 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 468,3 (m+1).
Primer 2
l-[4-(S)-(3-Ciklopropilmetoksi-4-metoksifenil)-3-(l-hidroksi-l-metiletil)-3-(S)-metilpirolidin-l-il]-2-hidroksietanon
U etanolu (95%, 2 ml) je rastvoren Intermedijer 32 (21 mg, 45 umol) i tretiran sa Pearlman-ovim katalizatorom (20% Pd(OH)2na ugljeniku, 20 mg). Rastvor je izložen jednoj atmosferi H2tokom 20 časova. Katalizator je uklonjen fihracijom, a rastvor je kocentrovan u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje Primera 2(15 mg, 88%).
'H NMR (CDC13, 400 MHz) 8: 6,87-6,80 (m, 3H), 4,20-4,09 (m, 2H), 3,89-3,62 (m, 9H), 3,58-3,51 (m, IH), 3,13-2,87 (m, 2H), 1,35-1,01 (m, 10H), 0,67-0,61 (m, 2H), 0,39-0,33 (2H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 378,4 (m+1).
Intermedijer 33
I-fl-Benzil-4-(S)-(3-ciklopropilmetoksi-4-metoksifeniI)-3-(S)-metilpiroIidin-3-il]etanon
Oksalil-hlorid (2,0 M u CH2C12, 1.35 ml, 2,7 mmol) je dodat u CH2C12(4ml). a rastvor je ohlađen do temperature od -60 °C. Nakon toga je polako dodavan rastvor DMSO (0.36 ml. 5,0 mmol) u CH2C12(1.5 ml). Ovaj rastvor je mešan tokom 5 minuta, a onda je u njega dodat Intermedijer 66 (1,06 g, 2,7 mmol) rastvoren u CH2C12(7,5 ml). Reakciona smeša je mešana tokom 30 minuta .na temperaturi od -60 °C, a zatim je reakcija prekinuta dodavanjem Et3N (1,9 ml). Smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature, razblažena je vodom, a slojevi su razdvojeni nakom energičnog mešanja tokom nekoliko minuta. Organski sloj je tri puta ispran sa 1 N HC1, tri puta sa 6% NaHC03, a zatim osušena preko Na2S04i koncentrovana u vakuumu. Dobijen je Intermedijer 33, koji je dalje korišćen bez prečišćavanja (0,992 g, 93%).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 392,4 (m+1).
Intermedijer 34
Metil estar trans-(±)-[3-Acetil-4-(3-benziloksi-4-metoksifeniI)-3-metil] pirolidin-1-karboksilne kiseline
Rastvor Intermedijera 23 (17,4 g. 40,5 mmol, 1 eq) u acetonitrilu (150 ml) je tretiran sa metil estrom hlormravlje kiseline (15,6 ml, 202,5 mmol, 5 eq), a zatim mešan na temperaturi deflegmacije tokom 1 časa. Reakciona smeša je koncentrovana, a ostatak je prečišćen hromatograftjom za rektifikaciju Jakih frakcija (silika gel, 7.5 x 36 cm Biotage KP-Sil kolona, eluirano sa 50-60% EtOAc u haplanu) da bi se dobio Intermedijer 34 u vidu bezbojnog sirupa (13,7 g, 85%).
'H NMR (300 MHz, CDC13) 6: 7,42-7,27 (m, 5H), 6,82 (d, J = 8,8 Hz, IH), 6,69 (br d, .1 = 8,3 Hz, IH), 6,63 (d, J = 1.8 Hz, IH), 5,15 (s, 2H), 3,88 (s. 3H), 3,84 (dd, .1 = 16,3. 11,0 Hz. IH). 3.73 (br s, 3H), 3,247-3,12 (2 d, J = 1-1,31/11.0 Hz, IH), 2,09/2,01 (2 s. 3H), 0.84 (s, 3H).
<I3>C NMR (75 MHz, CDC13) 8: 210,0/209,8, 155,2, 149,0, 147,5, 137,0, 130,5/130,0, 128.5, 127,8, 127,2/127,1, 121,2/121,0, 114,9/114,8, 111,5, 70,9, 58,1/57,2, 55,9, 54,4/54,0, 52,5, 50,2/50,0,48,4/48,0,26,3, 17,5.
Intermedijer 35
Metil estar trans-(±)-3-Acetil-4-[3-(indan-2-iloksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidin-l-karboksilne kiseline
Dobijen iz Intermedijera 24 postupkom sa metil estrom hlormravlje kiseline, opisanim kod Intermedijera 34.
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8: 7,24-7,16 (m, 4H), 6,82 (d, .1 = 8,8 Hz. IH). 6,75-6.72 (m, 2H), 5,18-5,10 (m, IH), 3,91 (t, J = 11,2 Hz, IH), 3,80 (s, 3H), 3,77-3,65 (m, 3H), 3,74 (s. 3H), 3,42-3,16 (m, 5H), 2,17 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,04 (s, 3H).
<13>C NMR (75 MHz, CDCI3) 8: 210,1/209,9, 155,3, 149,4, 146,9/146,8, 140.5/140,4, 130,5/130,0, 126,7, 124,7, 121,3/121,1, 116,1/115,8, 111,9, 79,2, 58,2/57,4, 55,9, 54.7/54.2. 52,6, 50,2/50,0, 48,5/48,1, 39,7, 26,6/26,5, 17,8.
Intermedijer 36
Metil estar trans-(±)-3-Acetil-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidin-l-karboksilne kiseline
Dobijen prema postupku opisanom u U.S. patentu br. 5.665,754. Racemski oblik Intermedijera 46.
Intermedijer 37
Metil estar trans-(±)-[3-Acetil-4-(3-hidroksi-4-metoksifenil)-3-metiI]piroIiđin-l-karboksilnc kiseline
Rastvor Intermedijera 34 (8,7 g, 21,9 mmol) u etanolu (50 ml) je mućkan tokom 16 časova u atmosferi Hj(50 psi) u prisustvu paladijuma na ugljeniku kao katalizatora (0,5 g, 10% Pd/C). Katalizator je zatim odstranjen filtracijom kroz jastuče dijatomejske zemlje, a nakon toga i filtracijom kroz 0,22 pm membranski filter. Filtrat je koncentrovan u vakuumu da bi se dobio Intermedijer 37 u vidu bistrog sirupa (6,5 g, 97%).
'H NMR (300 MHz, CDC13) 5: 6,79 (d, J = S,3 Hz, IH), 6,74 (d, J = 1.8 Hz, IH), 6,63 (br d, J = 8,3 Hz, IH), 6,04 (br s, IH), 3,96-3,85 (m, IH). 3,87 (s, 3H), 3,75/3,73 (2 s, 3H), 3,74-3,59 (m, 3H), 3,36/3,26 (2 d, .1 = 11,2/11,0 Hz, IH), 2,17/2,15 (2 s, 3H), 1,01 (s, 3H).
<I3>C NMR (75 MHz, CDC13) 5: 210,0/209,8, 155,3, 145,9/145,8, 145,5, 131,2/130,8, 119,9, 114:5, 110,6, 58,1/57,2, 55,8, 54,4/53,9, 52,5, 50,3/50,1, 48,4/48,0,26,3,17,6.
Intermedijer 38
Metil estar trans-3-AcetiI-4-[ekso-3-(bicikIo[2,2,l]hept-2-iI-oksi)-4-metoksifeniIJ-3-metilpirolidin-l-karboksilne kiseline
Dobijen Mitsunobu postupkom opisanim kod Intermedijera 2 iz Intermedijera 37 i endo-norbomeola (prinos 36%).
'H NMR (300 MHz, CDC13) S: 6,80 (d, J = 8,2 Hz, IH), 6,66 (d, J = 9,0 Hz, IH), 6,62 (s, IH), 4,15-4,08 (m, IH), 3,95-3,86 (m, IH), 3,83 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,73-3,60 (m, 3H), 3,37/3,28 (2 d, J = 11,2/10,8 Hz, IH), 2,47 (br s, IH), 2,32 (br s, IH), 2,17/2,15 (2 s, 3H), 1,76-1,66 (m, 2H), 1,63-1,45 (m, 3H), 1,28-1,08 (m, 3H), 1,02/1,01 (2 s, 3H).
<13>C NMR (75 MHz, CDCI3)0: 210,5/210,3, 155,7, 149,6, 147,4, 130,8/130,76, 130.3, 120,9/120,7/120,5, 115,6/115,4/115,3/115,2, 112,2, 81,5, 58,6/57,8, 56,4, 54,9/54,6, 52,9, 50,6/50,5,49,1/49.0/48,7, 41,5,40,4, 35,8/35,7, 28,8, 26,9/26,8, 24,7/24,6, 18,2.
Intermedijer 39
Metil estar trans-|3-Acetil-4-f4-metoksi-3-(l-metil-3-fenilpropoksi)fenil]-3-metilpirolidin
-1-karboksilne kiseline
Dobijen Mitsonobu postupkom opisanim kod Intermedijera 2 iz Intermedijera 37 i 4-fenil-2-butanola.
'H NMR (300 MHz, CDCI3) 6: 7,29-7,35 (m, 5H), 6,82 (d, J = 8,3 Hz), 6,72-6,63 (m, 2H), 4,33-4,25 (m, IH), 3,94-3,59 (m, 4H), 3,84 (s, 3H), 3,74 (br s, 3H), 3,36/3,27 (2 dd, J = 11,2, 3,0/10,9, 3,9 Hz, IH), 2,88-2,69 (m, 2H), 2,18-2,06 (m, 4H), 1,95-1,82 (m, IH), 1,33/1,31 (2 d, J = 2,3/2,3 Hz, 3H), 1,01/0,99 (2 s, 3H).
<13>C NMR (75 MHz, CDC13) 6: 209,9, 155,4, 149,8, 147,1, 141,9, 130,4/129,9, 128,5, 128.4, 125,8, 121,2, 116,9, 111,9, 74,8, 58,1/57,3, 55,9, 54,6/54,3, 52,6, 50,2/50,1, 48,6/48,2, 38,1, 31,8,26,6,19,9,17,7.
Intermedijer 40
Metil estar trans-3-Acetil-4-(4-metoksi-3-fenetiloksifeniI)-3-metilpiroIidin -1-karboksiine kiseline
Dobijen Mitsonobu postupkom opisanim kod Intermedijera 2 iz Intermedijera 37 i 2-feniletanola.
<*>H NMR (300 MHzsCDC13) 5: 7,36-7,23 (m, 5H), 6,82 (d, J = 8,2 Hz, IH), 6,70 (d, J = 8,4 Hz, IH), 6,66 (s, IH), 4,18 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 3,92-3,81 (m, IH), 3,86 (s, 3H), 3,76-3,61 (m, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,40/3,27 (2 d, J = 11,2/10,9 Hz, IH), 3,15 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 2,16/2,12 (2 s,3H), 1,00 (s, 3H).
Intermedijer 41
Metil estar trans-3-Acetil-4-[4-metoksi-3-(tetrahidrofuran-3-iloksi)feniI]-3-metilpirolidin
-l-karboksilne kiseline
? Dobijen Mitsonobu postupkom opisanim kod Intermedijera 2 iz Intermedijera 37 i 3-hidroksitetrahidrofurana.
'H NMR (300 MHz, CDC13) 6: 6,85-6,63 (m, 3H). 4,92-4,88 (m, IH), 4,07-3.62 (m, 8H), 3,84 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,39/3,29 (2 d, J = 11,2/10,2 Hz, IH), 2,19-2,14 (m, 5H), 1,02 (br s, 3H).<13>C NMR (75 MHz, CDC13) 8: 210,0/209,9. 155,4, 149,5, 146,5, 130,0, 121.6/121.5, 116,5/116,4/116,3, 112,0, 111,0, 78,9, 73,0, 67,2, 58,1/57,3, 55,9, 54,7/54,3, 52,6, 50,1/50,0, 48,4/48,0,33,0,26,6,17,8.
Intermedijer 42
(4R)-3-{[(3S,4S)-4-(3-Ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metiI-l-benzilpiroIidin-3-H)karbonil}-4-feniJ-l,3-oksazoIidin-2-on
U ohlađenu (-4 °C), mešanu smešu acil oksazolidinona (9,30 g, 22.8 mmol) i N-(metoksimetil)-N-(trimetilsililmetil)benzilamina (11.7 ml. 45,6 mmol, 2 eq) u CHCh (65 ml), dodat je rastvor TFA u CHCI3(4,6 ml, 1,0 M, 4,6 mmol, 0,2 eq) pomoću šprica, u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na temperaturi od 0 °C tokom 4 časa, a zatim na temperaturi od 15 °C tokom noći (vodeno kupatilo). Dobijeni zamućeni rastvor je onda ponovo ohlađen do temperature od -4 °C, tretiran dodatnom količinom N-(metoksimetil)-N-(trimetilsililmetiI) benzilamina (5,9 ml, 22,8 mmol, 1 eq) dodatom pomoću šprica, i nastavljen da se meša tokom još 5 časova, tokom kojih je reakciona smeša postala homogena. TLC (5% EtoO u CH2G2) je pokazao da je reakcija završena. Kompletna količina CHCI3je uklonjena pri smanjenom pritisku, a ostatak je razblažen sa EtOAc (250 ml) i redom ispran sa 1 N vodenim rastvorom HC1 (2 x 50 ml), 1 N vodenim rastvorom NaOH (50 ml) i slanim rastvorom (50 ml). Organski sloj je potom osušen (MgS04). filtriran i koncentrovan u vakuumu, da bi se dobila narandžasta supstanca u polu-čvrstom stanju (13.9 g). Prečišćavanjem hromatografijom za rektifikaciju lakih frakcija na silika-gelu (2% etar u CH2CI2) je dobijen glavni diastereoizomer u vidu bele pene (8,25 g, 65%).
Dijastereoizomema selektivnost je bila oko 10:1 (HPLC).
'H NMR (400 MHz, CDCI3) 5: 7,42-7,21 (c, 10H), 6,95 (s, IH), 6,81 (s, 2H), 5,55 (dd, IH), 4,74 (t, IH), 4,68 (m, IH), 4,10 (dd, IH), 3,93 (1, IH), 3,70 (d, IH), 3,68 (s, 3H), 3,56 (d, IH). 3,42 (d, IH), 2,72 (m, 2H), 2,64 (d, IH), 2,48 (m, IH), 1,85-1,78 (c, 2H), 1,75-1,61 (c, 4H), 1,57-1,53 (c, 2H), 0.96 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 555,2 (m+1).
Intermedijer 43
(3S,4S)-l-Ben2il-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidin-3-karbosiIna kiselina
U rastvor Intermedijera 42 (3,0 g, 5,4 mmol) u smeši vode i THF u odnosu 3:1 (30 ml) dodata je suspenzija Iitijum peroksida (0,5 g, 10,8 mmol) u smeši vode i THF u odnosu 1:1 (6 ml) na temperaturi od 0 °C u atmosferi azota. Suspenzija je trenutno solubilizirala. Nakon jednog časa mešanja na temperaturi od 0 °C radi hlađenja viška peroksida dodat je vodeni rastvor natrijum-sulfita (NaoSCb) (1,5 N, 12 ml), a THF je uklonjen pod smanjenim pritiskom. Bazni ostatak je ekstrahovan sa tri zapremine CHiCb od po 30 ml. Vodena faza je zakišeljena do pH vrednosti od 1 sa vodenim 1 N rastvorom HC1. i ekstrahovana sa tri zapremine EtiO od po 30 ml. Ekstrakti u etru su osušeni (Na^SC^), koncentrovani pod smanjenim pritiskom i nadalje korišćeni bez dodatnog prečišćavanja.
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8: 10,73 (br. s, IH, COOH), 7,69 (br. s, 2H, aromatični), 7,3S-7.36 (m, 3H. aromatični), 6,78 (s, IH, aromatični), 6,69 (m, 2H, aromatični), 4,71 (br. s. IH). 4,51-4,48 (m, 2H), 4,24-4,11 (br. s. 2H), 4,08-3,88 (br. s, IH), 3,76 (s, 3H, OCH3), 3,54 (br. s, IH), 3,1 (br. s, IH), 1,83-1,52 (m, 8H, ciklopentil), 1,05 (br. s, 3H, CH3).
Intermedijer 44
Metoksi metilamid(3S,4S)-l-Benzil-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidin
-3-karbosilne kiseline
Intermedijer 44 je dobijen iz Intermedijera 43 (2,lg, 4,98 mmol), 1,1'-karbonildiimidazola (0,89 g, 5,47 mmol) i N,0-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (0,73 g, 7,47 mmol). Dobijeni Intermedijer 44 (0,9 g, 40%) je bio u vidu belog kristalnog praha.
'H NMR (300 MHz, CDC13) 5: 7,4-7,3 (m, 5H, aromatični), 7,06 (d, IH, J = 1,7 Hz, aromatični), 6,89 (dd, IH, J = 8,3 Hz, aromatični), 6,73 (d, IH, J = 8,3 Hz, aromatični), 4,77-4,75 (m, IH), 4,16-4,06 (m, IH), 3,81 (s, 3H, OCH3), 3,81-3,71 (m, 2H), 3,60 (s, 3H, OCH3), 3,21 (s, 3H, NCH3), 2,96 (d, IH, J = 9,6 Hz,), 2,91 (m, IH), 2,78 (d, IH. J = 9,6 Hz,), 2.77 (m, IH), 2,04 (s, 3H, CH3), 1,92-1,59 (m, 8H, ciklopentil), 0,94 (s, 3H, CH3).
Intermedijer 45
l-[(3S,4S)-l-Benzil-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidin-3-il]etanon
Rastvor Intermedijera 44 (0,17 g, 0,43 mmol) u THF (8 ml) je ohlađen do temperature od -78 °C i tretiran sa metillitijumom (1,5 M u THF, 0.315 ml, 0,47 mmol) u atmosferi azota. Rastvor je mešan tokom 40 minuta na temperaturi od -78 °C, a zatim ohlađen sa hladnim zasićenim rastvorom NH4CI (8 ml). Dodata je smeša heksana i CH2CI2u odnosu 3:1 (8 ml) uz energično mešanje. Nakon daljeg razblaživanja sa još jednom količinom smeše heksana i CH2CI2u odnosu 3:1 (10 ml), dodat je slani rastvor (10 ml), a dva sloja su razdvojena. Vodeni sloj je ispran sa CH2Cl2(8 ml), a kombinovani organski ekstrakti su isprani slanim rastvorom, osušeni (Na2S04). filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom da bi se dobio proizvod uvidu ulja (154 mg, 89%).
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8: 7,39-7,24 (m, 5H, aromatični). 6,82-6,70 (m, 3H, aromatični), 4,74 (br. s, IH), 3,81 (s, 3H, OCH3), 3,78-3,58 (m, 3H), 3,14 (d, IH, J = 9,7 Hz), 3,05 (m,
IH), 2,84 (m, IH), 2,40 (d, IH, J = 9,7 Hz, ), 2,23 (s, 3H, CH3), 1.92-1,59 (m, 8H, ciklopentil), 0,83 (s, 3H, CH3).
Intermedijer 46
Metil estar (3S,4S)-3-Acetil-4-(3-ciklopentiIoksi-4-metoksifenil)-3-metilpiroIidin-l - karboksilne kiseline
U mešani rastvor Intermedijera 45 (0,154 g, 0,38 mmol) u anhidrovanom acetonitrilu (10 ml) dodat je metil estar hlormravlje kiseline (0,146 ml. 1,89 mmol). Rastvor je zagrevan do temperature od 80 °C i redestilovan tokom 3 časa. Rastvor je nakon toga ohlađen do sobne temperature i koncentrovan pod samnjenim pritiskom. Prečišćavanjem pomoću HPLC reverzne faze je dobijen Intermedijer 46 u vidu ulja (93 mg. 65%). Specifična rotacija: [a]25923=+2,5 (c=l,0,EtOH). 'H NMR (300 MHz, CDC13) 8: 6,8 (d, IH, J = 8.0 Hz, aromatični). 6,66 (d, IH, J = 8,0 Hz, aromatični), 6,66 (s, IH, aromatični), 4,73 (s. IH), 3,95-3,64 (m, 4H), 3,83 (s, 3H, OCH3). 3.74 (s, 3H, OCH3), 3,37 i 3,27 (s, 3H, CH3), 2.17 i 2,14 (s, 3H, CH3), 1,92-1,59 (m, 8H, ciklopentil), 1,03 i 1,02 (s, 3H, CH).
Intermedijer 47
(3S,4S)-4-(3-Ciklopentilol<si-4-metoksifeniI)-3-metiI-l-benzilpiroIidin-3-karbaIdehid
Opšti postupak redukcije/ oksidacije oksazolidinona
U ohlađeni (-78 °C), mešani rastvor Intermedijera 42 (15,09 g, 27,2 mmol) u toluenu (250 ml) je dodat rastvor litijum aluminijum hidrida u tetrahidrofuranu (16,3 ml. 1,0 M.16,3 mmol, 0,6 eq) putem šprica u atmosferi azota.
Primećeno je izrazito jako stvaranje mehurića. Nastali rastvor je podvrgnut mešanju na temperaturi od -78 °C tokom 2 časa, nakon čega je kupatilo za hlađenje uklonjeno. Reakcija je prekinuta dodavanjem dodavanjem redom vode (0,62 ml), 15% vodenog rastvora NaOH (0,62 ml) i ponovo vode (1,9 ml). Nastala smeša je ostavljena da se zagereje do sobne temperature, mešana je tokom 30 minuta, a zatim razblažena sa EtjO (500 ml) i osušena (MgSCu). Filtracijom i koncentracijom u vakuumu dobijen je alkohol (i nešto aldehida) u vidu polu-čvrste supstance (14,8 g). Ovaj materijal je odmah iskorišćen bez daljeg prečišćavanja.
U ohlađeni (-78 °C), mešani rastvor oksalil-hlorida u CH2C12(10.9 ml, 2,0 M, 21.8 mmol, 0,8 eq) dodato je još CH2C12(75 ml) i DMSO (3,1 ml, 43,5 mmol. 1,6 eq) kroz špric, u atmosferi azota. Nakon mešanja na temperaturi od -78 °C tokom 20 minuta, rastvor sirovog alkohola u CH2C12(75 ml) je dodat kroz kanim. Dobijeni žuti rastvor je mešan na temperaturi od -78 °C tokom 20 minuta, a zatim je dodat Et3N pomoću šprica. Reakciona smeša je mešana na temperaturi od -78 °C tokom 20 minuta, zatim zagrejana do sobne temperature i dodatno mešana tokom jednog časa. Reakcija je prekinuta dodavanjem slanog rastvora (150 ml), a zatim je reakciona smeša ekstrahovana sa CH2CI2(2 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni (MgS04), filtrirani i koncentrovani u vakuumu da bi se dobio sirovi aldehid. Prečišćavanjem pomoću hromatografije za rektifikaciju lakih frakcija na silika gelu (25% EtOAc u heksanima) dobijen je aldehid u vidu bistrog, bezbojnog ulja (9.8 g, 92%).
'H NMR (400 MHz, CDCI3) S: 9,64 (s, IH), 7,37-7,26 (c, 5H), 6,78-6,76 (c, 2H), 6,70 (m, IH), 4,74 (m, IH), 3,82 (s, 3H), 3,70 (m, IH), 3,64-3,62 (c, 2H), 3,18-3,13 (c, 2H), 2,84 (t, IH), 2,41 (d, IH), 1,94-1,83 (c, 6H), 1,63-1,59 (c, 2H), 0,74 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 394,3 (m+1).
Intermedijer 48
(4R)-3-{[(3S,4S)-4-(3-Indan-2-iloksi-4-metoksifenil)-3-metil-l-benziIpiroIidin-3-il]karboniI}-4-fenil-l,3-oksazolidin-2-on
Dobijen iz Intermedijera 17 postupkom cikloadicije azometina opisanom kod Intermedijera 23.
<*>H NMR (400 MHz, CDCI3) 5: 7,45-7,12 (m, 15H), 6,95 (d, IH), 6,78 (d, IH), 5,54 (dd, IH), 5,17 (c, IH), 4,69 (t, IH), 4,22 (dd, IH), 4,11 (t, IH), 3,84-3,60 (m, 5H), 3,51 (d, IH), 3,37 (dt, 2H), 3,21 (dd, 2H), 2,90 (d, IH), 2,85 (dd, IH), 2,76 (dd, IH), 1,12 (s, 3H).
Intermedijer 49
(3S,4S)-4-(3-Indan-2-iloksi-4-metoksifeniI)-3-nietiI-l-benziIpirolidin-3-karbaldehid
Dobijen iz Intermedijera 48 postupkom redukcije/oksidacije opisanom kod Intermedijera 47.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 6: 9,65 (s, IH), 7,36-7,17 (m, 9H), 6,84 (d, IH), 6,79 (d, IH), 6,76"(dd, IH), 5,16 (c, IH), 3,79 (s, 3H), 3,76 (d, IH), 3,68-3,63 (c, IH), 3,40-3,31 (m, 2H), 3,24-3,13 (m, 2H), 2,85 (dd, IH), 2,43 (d, IH), 0,77 (s, 3H).
Intermedijer 50 (lR)-l-l(3S,4S)-4-(3-Indan-2-iIok5i-4-metoksifeniI)-3-metil-l-benzilpiroIidin-3-il]etan-l-ol Željeni, polamiji dijastereomer. Dobijen postupkom Grinjarove adicije opisanim kod Intermedijera 56, iz Intermedijera 49. 'H NMR (400 MHz, CDC13) 5: 7,39-7,17 (m, 9H), 6,84-6,77 (m, 3H), 5,17 (c. IH), 3,80 (s. 3H), 3,72-3,57 (m, 4H), 3,38-3,19 (m, 5H), 3,11 (d, IH), 2,57 (t, IH), 2,12 (d, IH), 1,15 (d, 3H), 0,51 (s, 3H).
Intermedijer 51
(lR)-l-((3S,4S)-4-(3-Indan-2-iloksi-4-meto^
Dobijen postupkom debenzilacije opisanim kod Intermedijera 31, iz Intermedijera 50.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 6: 7,26-7,16 (m, 4H), 6,81 (s, 3H), 5,19 (c, IH), 3,80 (s, 3H), 3,74-3,68 (m, 2H), 3,44-3,17 (m: 8H),2,66 (d, IH), 2,51 (brs, IH), 1,18 (d, 3H), 0,63 (s. 3H).
Intermedijer 52
(4R)-3-({(3S,4S)-4-[4-Metoksi-3-(fenilmetoksi)-feniI]-3-mctiI-l-benzilpirolidin-3^il}karboniI)-4-fenil-l,3-oksazolidin-2-on (Veliki dijastereomer)
Dobijen postupkom cikloadicije opisanim kod Intermedijera 23. iz Intermedijera 21.
'H NMR(400 MHz, CDC13) 5: 7,49-7,23 (m, 15H), 7,09 (d, IH), 6,94 (dd, IH), 6,80 (d, IH). 5,49 (dd, IH), 5,17 (s, 2H), 4,66 (t, IH), 4,19 (dd, IH), 4,09 (t, IH), 3,87 (s, 3H), 3.68 (q. 2H), 3,51 (d, IH), 2,85-2,79 (m, 2H), 2.69 (dd, IH), 0,99 (s, 3H).
Intermedijer 53
(3S,4S)-4-(4-Metoksi-3-(fenilmetoksi)-feniI)-3-metil-l-benzilpirolidin-3-karbaldehid
Dobijen postupkom redukcije/oksidacije opisanim kod Intermedijera 47, iz Intermedijera 52.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 9,56 (s, IH), 7,43-7,22 (m, 10H), 6,79 (d, IH), 6,77 (d, IH), 6,71 (dd, IH), 5,14 (dd, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,71 (d, IH), 3,62 (d, IH), 3,57 (d, IH), 3,13-3,08 (m, 2H), 2,73. (dd, IH), 2,30 (d, IH), 0,58 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): m/z416,3 (m+1).
Intermedijer 54
3-[l-Benzil-4-S-(3-terc-butoksi-4-metoksifem oksazoIidin-2-on
U mešani rastvor Intermedijera 22 (39,8 g, 97 mmol) u CHCl3 (292 ml) na 0 °C, u atmosferi azota, dodat je N-(metoksimelil)-N-(trimetilsililmetiI)benzilamin (49,5 ml. 194 mmol), a zatim i TFA kiselina (1 M u CHCI3. 9,7 ml, 9,7 mmol). Sluzava smeša je puštena da se zagreje do sobne temperature preko noći. TLC u smeši EtOAc i heksana u odnosu 2:3 je pokazao delimičnu konverziju početnog materijala u nešto viši Rfproizvod. Dobijeni rastvor je tretiran sa dodatnom količinom N-(metoksimetil)-N-(trimetilsililmetil)benzilamina (25 ml, 97 mmol) kako bi se eliminisao zaostali početni materijal. Nakon 3 časa na sobnoj temperaturi, na osnovu TLC, reakcija je naizgled završena. Rastvor je koncentrovan u rotacionom isparivaču, a zatim ponovo rastvoren u EtOAc (500 ml). Organski sloj je ispran pomoću 2N HC1 (2 x 500 ml), IN NaOH (2 x 500 ml) i zasićenim rastvorom NaCl (1 x 500 ml). Zatim je organski sloj isušen (MgS04), isfiltriran i koncentrovan u vakuumu, kako bi se dobio Intermedijer 54, u vidu smeše dijastereomera u približnom odnosu 12:1. Hromatografijom na koloni 110 mm x 203 mm sa smešom EtOAc i heksana u odnosu 1:3 dobijen je, nakon koncentrovanja sakupljenih frakcija u vakuumu, Intermedijer 54 (40 g, 76 %) u vidu žute pene.
'H-NMR (CDCI3, 400 MHz) 5: 7,42-7,20 (m, 10H), 7,11 (s, IH), 7,05 (d, IH), 6,76 (d, IH). 5,53 (dd, IH), 4,65 (dd, IH), 4,20 (dd, IH), 4,08 (dd, IH), 3,77 (s, 3H), 3,65 (dd, 2H), 3,51 (d, IH), 2,82 (dd, IH), 2,81 (d, IH), 2,71 (dd, IH), 1,34 (s, 9H), 1,06 (s, 3H).
Intermedijer 55
(3R)-4-[3-(terc-Butoksi)-4-metoksifeniI]-3-metil-l-benzilpiroIidin-3-karbaldehid
U mešani rastvor Intermedijera 54 (21,5 g, 39,7 mmol) u toluenu (400 ml) na -78 °C, u atmosferi azota, dodavan je, kap po kap, litijum aluminijum hidrid (1 M u THF, 24 ml, 24 mmol), pomoću šprica, tokom 10 minuta. Nakon 15 minuta, TLC u smeši CH2CI2i Et20. u odnosu 4:1, pokazala je potpunu iskorišćenost polaznog materijala i pojavu materijala nižeg Rr. Rastvor metanola (4 ml) u toluenu (40 ml), dodavan je pažljivo, pomoću šprica, na temperaturi od -78 °C, uz razvijanje gasa. Kada je razvijanje gasa završeno, reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature, a zatim je tretirana vodom (1 ml). 3 N NaOH (2 ml) i ponovo vodom (1 ml), prema navedenom redosledu. Nakon 10 minuta, reakciona smeša je razblažena pomoću Et20 (300 ml) i mešana tokom 15 minuta. Dodat je magnezijum-sulfat (MgSCu), a smeša je filtrirana kroz GF/F filter papir, sa Et20. Sirovi proizvod je koncentrovan u vakuumu i pokazano je, putem 'H-NMR, da je u pitanju smeša željenog aldehida i redukovanog alkohola, u približnom odnosu 4:1. Sirovi proizvod je potom rastvoren u CH2C12(40 ml). Odvojeno, mešan je oksalil-hlorid (2 M u CH2C12. 11,2 ml. 22,4 mmol) na -60 °C, u atmosferi azota, i tretiran sa DMSO (3,1 ml. 44 mmol) u CH2CI2(15 ml), unošenjem, kap po kap, putem šprica. Nakon 5 minuta, smeša aldehida i alkohola je dodata rastvoru oksalil-hlorida i DMSO, putem kanile. Reakciona smeša je mešana na temperaturi od
-60 °C, tokom 45 minuta, a zatim tretirana sa Et3N (13,8 ml, 100 mmol), nakon čega je ostavljena da se zagreje do sobne temperature. Rastvor je zatim razblažen do 200 ml pomoću CH2CI2, a zatim ispran vodom (1 x 200 ml), 2 N HC1 (2 x 200 ml), zasićenim rastvorom NaHCOs(2 x 200 ml) i zasićenim rastvorom NaCl (1 x 200 ml). Organski slojevi su osušeni (MgSO-O, isfiltrirani i koncentrovani u vakuumu, čime je dobijeno žuto ulje koje je rastvoreno u smeši heksana i EtOAc u odnosu 3:1. Nakon rastvaranja, odvojeni fenil oksazolidinon se istaložio i uklonjen je filtracijom. Filtral je hromatografisan na koloni dimenzija 70 mm x 203
mm, pomoću smeše heksana i EtOAc u odnosu 3:1, čime je dobijeno (nakon koncentrovanja u vakuumu proizvoda koji sadrži frakcije) čist Intermedijer 55 u vidu žutog ulja (13,7 g, 90%).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 6: 9,62 (9, IH), 7,37-7.22 (m, 5H), 6,92 (s, IH). 6,84 (d, IH), 6,79 (d, IH), 3,79 (s, 3H), 3,71 (dd, 2H), 3,62 (dd, IH), 3,17 (dd, IH), 2,80 (dd, IH), 2,38 (d, IH), 1,35 (s, 9H), 0,73 (s, 3H).
Intermedijer 56
(lR)-l-K3S,4S)-4-(3-Ciklo<p>entiloksi-4-metoksifenil)-3-metiI-l-benzilpirolidin-3-il]etan-l-ol
Postupak Grinjarove adicije
U ohlađeni (0 °C), mešani rastvor Intermedijera 47 (0,96 mg, 2,45 mmol) u suvom EtiO (10 ml), dodat je, u atmosferi azota, pomoću šprica, rastvor metilmagnezijum jodida (ili drugog Grinjarovog reagensa), u etru (2,45 ml od 3,0 M, 7,35 mmol, 3 eq). Nakon mešanja na 0 °C tokom 15 minuta, reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana je tokom 2 časa. Reakcija je zatim pažljivo zaustavljena zasićenim vodenim rastvorm NH4CI (40 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 ml). Komibnovani organski slojevi su isprani slanom vodom, osušeni (NaiSOiO, isfiltrirani i koncentrovani u vakuumu, čime jedobijeno 990 mg ulja narandžaste boje. Prečišćavanje putem hromatografije za rektifikaciju lakih frakcija na silika-gelu (CH2CI2do 5% metanola u CH2C12) dalo je manje polaran dijasteromer (419 mg, 42 %) i više polaran dijastereomer (375 mg, 37 %), u vidu bezbojnih, viskoznih ulja.
Manje polarni dijastereomer: (lS)-l-[(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metil-l-benzilpiroIidin-3-iI]etan-l-ol
'H NMR (400 MHz, CDCI3) 8: 7,34-7,28 (c, 5H), 6,79-6,73 (c, 3H), 4,74 (m, IH), 3,82 (s, 3H), 3,74 (q, IH), 3,65 (q, 2H), 3,53 (t, IH), 3.40 (t, IH), 2,99 (d, IH), 2,50 (t, IH), 2,35 (d, IH), 1,94-1,81 (c, 6H), 1,63-1,59 (c, 2H), 1,10 (d, 3H), 0,52 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 4103 (m+1).
Više polarni dijastereomer: (1 R)-l -[(3S, 4S)-4-(3-Ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metil-1 -benzilpirolidin-3-il]etan-1 -ol
'H NMR (400 MHz, CDC13) 6: 7,33-7,31 (c, 5H), 6.79-6,72 (c, 3H), 4,74 (m, IH), 3,82 (s, 3H), 3,69-3,56 (c, 4H), 3,29 (t, IH), 3,10 (d, IH), 2,56 (t, IH), 2,09 (d, IH), 2,04 (s, 3H), 1,92-1,81 (c, 6H), 1,62-1,59 (c, 2H), 1,13 (d, 3H), 0,47 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 410,3 (m+1).
Intermedijer 57
(lS)-l-{(3S,4S)-4-(4-Metoksi-3-(fenilmetoksi)feniI]-3-metil-l-benzilpiroIidin-3-il}etan-l-ol
Manje polarni dijastereomer, dobijen iz Intermedijera 53, Grinjarovim postupkom, opisanim kod Intermedijera 56.
'H NMR (400 MHz, CDCI3) 6: 7,44-7,22 (m, 10H), 6,80 (d, IH), 6,75 (dd, IH), 6,67 (d, IH), 5,17 (s, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,66 (q, IH), 3,60 (d. 2H), 3,43 (t, IH), 2,92 (d, IH), 2,38 (t, IH), 2,22 (d, IH), 0,98 (d, 3H), 0,32 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): m/z 432,5 (m+1).
Intermedijer 58
(lR)-l-{(3S,4S)-4-[4-Metoksi-3-(fenilmetoksi)feniI]-3-metil-l-benziIpirolidin-3-iI}etan-l-ol
Više polami, željeni dijastereomer. Dobijen iz Intermedijera 53, Grinjarovim postupkom, opisanim kod Intermedijera 56.
'H NMR (400 MHz, CDCls) 8: 7,43-7,21 (m, 10H), 6,79 (d, IH), 6,75-6,70 (m, 2H), 5,16 (dd, 2H), 3,87 (s, 3H), 3,64-3,49 (m, 4H), 3,23 (t, IH), 3,06 (d, IH), 2,46 (t, IH), 1,99 (d, IH), 1,07 (d,3H), 0,28 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): m/z 432,5 (m+1).
Intermedijer 59
l-R-[l-Benzil-4-S-(3-terc-butoksi-4-metoksifenil)-3-S-metiIpiroIidin-3-il]etanoI
U mešani rastvor trimetil aluminijuma (2 M u toluenu, 59,4 ml, 119 mmol) na 0 °C, u atmosferi azota, dodat je metilmagnezijum jodid (3 M u Et20, 36 ml, 108 mmol). Nakon 30 minuta, na temperaturi od 0 °C, organometalni rastvor je dodat putem kanile u rastvor Intermedijera 55 (13,7 g, 36 mmol) u CH2CI2(360 ml) na - 78 °C, u atmosferi azota. Nakon završetka dodavanja, reakciona smeša je mešana na -78 °C, tokom 6 časova. Reakciona smeša je zatim zagrejana do 0 °C i pažljivo nasuta u ledeni 1 M rastvor kalijum natrijum tartarata (1500 ml), uz brzo mešanje, a zatim razblažena sa EtOAc (1500 ml). Nakon mešanja u trajanju od 15 minuta, slojevi su razdvojeni i organski sloj ispran sa 1 M kalijum natrijum tartaratom (1 x 1000 ml) i zasićenim rastvorom NaCl (1 x 1000 ml). Organske supstance su osušene (MgSO^, isfiltrirane i koncentovane u vakuumu, čime je dobijena smeša dijastereomera u odnosu 2,5:1 plus približno 10% zaostalog polaznog aldehida, prema gruboj 'H-NMR. Sirovi proizvod je hromatorafisan na koloni dimenzija 110 mm x 203 mm sa smešom EtOAc, heksana i MeOH u odnosu 3:7:0,4, kako bi se, nakon sakupljanja i koncentrovan)a u vakuumu frakcija koje sadrže željeni dijastereomer nižeg Rr, dobio Intermedijer 59 (8,1 g, 57%) u vidu narandžastog ulja.
'H-NMR (CDCI3, 400 MHz) 8: 7,34-7,23 (m, 5H), 6.86 (m, 3H), 6,79 (d, IH), 3,79 (s, 3H), 3,65 (dd, IH), 3,62 (s, 2H), 3,58 (dd, IH), 3,29 (dd, IH), 3,10 (d, IH), 2,53 (dd, IH), 2,07 (d, IH), 1,35 (s, 9H), 1,12 (d, 3H), 0,45 (s, 3H).
Intermedijer 60
Etil estar 3-(3-cikIopropilmetoksi-4-metoksifeniI)-2-metil-E-akriIne kiseline
Balon sa okruglim dnom je napunjen sa THF (850 ml) i trietil 2-fosfonopropionatom (97,2 g, 0,408 mol) i dobijena smeša je ohlađena do temperature od 0 °C. Litijum heksametildisliazid (1,0 M u THF, 489 ml, 0,489 mol) je zatim dodat, kap po kap. Smeša je nakon toga mešana tokom 30 minuta, na 0 °C, nakon čega je dodat rastvor Intermedijera 1 (70 g, 0.34 mol) u THF (100 ml). Nakon dodavanja kap po kap, reakciona smeša je držana na temperaturi od 22 °C, tokom 62 časa. Reakcija je zatim zaustavljena zasićenim rastvorom NaCl, a potom razblažena sa EtOAc. Nakon razdvajanja, organski sloj je ispran zasićenim rastvorom NaCl, osušen iznad Na2S04i koncentrovan u vakuumu. Zeleno ulje je prečišćeno hromatografijom kroz podlogu od Si02(650 g) uz upotrebu eluenta u vidu smeše EtOAc i heksana u odnosu 1:10, (40,8 g).
'H NMR (400 MHz, CDCI3) 8: 7,67-7,61 (m, IH), 7,07-7,02 (m, IH), 6,98-6,95 (m, IH), 6,92-6,89 (m, IH), 4,32-4,25 (m, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,90-3,85 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 1,38-1,32 (m, 4H), 0,70-0,63 (m, 2H), 0,41-0,37 (m, 2H).
Intermedijer 61
3-(3-Ciklopropilmetoksi-4-metoksi-fenil)-2-metil-E-akrilna kiselina
Intermedijer 60 (26,9 g, 93 mmol) rastvoren je u 1,4-dioksanu (95 ml) i tretiran rastvorom LiOH monohidrata (4}6 g, 111 mmol) u vodi (95 ml). Dobijeni rastvor je zagrevan na 80 °C, tokom tri sata, a zatim meSan tokom noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je nasuta u vodu (350 ml) i ekstrahovana dva puta sa EtjO (ukupno 500 ml). Vodeni sloj je razblažen sa EtOAc (350 ml) i pH vrednost je podešena pomoću koncentrovane H3PO4(24 ml). Slojevi su razdvojeni, a EtOAc sloj je ispran vodom i zasićenim rastvorom NaCl, osušen iznad MGSO4i koncentrovan u vakuumu (20,4 g).
'H NMR (400 MHz, CDCI3) 8: 7,77 (s, IH), 7,11-7,07 (dd, IH), 7,02-6,98 (d, IH), 6,93-6.90 (d, IH), 3,93 (s, 3H), 3,86 (d, 2H), 2,18 (s, 3H), 1,39-1,31 (m, IH). 0,69-0,63 (m, 2H), 0.39-0,35 (m, 2H).
■ Intermedijer 62 3-(3-Ciklopropilmetoksi-4-metoksifeniI)-2-metil-E-akriloil hlorid
Intermedijer 61 (55,8 g. 0,213 mol) rastvoren je u CH2Cb (300 ml) i ohlađen do temperature od 0 °C, sa priključenom cevčicom za sušenje. Potom je dodat oksalil hlorid (2.0 M u CH2CI2, 117 ml, 0.234 mol), nakon čega je dodat DMF (1,0 ml); -Reakciona smeša je držana na 22 °C tokom više časova. Smeša je razblažena sa CH2CI2, i isprana vodom, zasićenim rastvorom NaCl. osušen iznad Na2SCui na kraju koncentrovana u vakuumu. Dobijeno je 65.1 g žute, čvrste supstance.
'H NMR (400 MHz, CDCJ3) 6: 7,97 (s, IH), 7,16-7,11 (dd, IH), 7.03-7,00 (d. IH). 6,95-6,91 (dd. IH), 3,93 (s, 3H), 3,87 (d, 2H), 2,23 (s, 3H), 1,39-1,31 (m, IH), 0,69-0,64 (m. 2H), 0.40-0,37 (m, 2H).
Intermedijer 63
3-[3-(3-Ciklopropilmetoksi-4-metoksifeniI)-2-m 2-on
U THF (1 1) je rastvoren 4-(R)-feniloksazolidin-2on (33,0 g, 0,202 mol) i ohlađen do temperature od -78 °C. Zatim je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 79,5 ml. 0,198 mol) i dobijena reakciona smeša je mešana tokom 20 minuta. Rastvor Intermedijera 62 (65,1 g, 0,213 mol) u THF (200 ml) dodavan je kap po kap, tokom 15 minuta. Reakciona smeša je mešana tokom jednog časa, na temperaturi od -78 °C, a zatim polako zagrejana do 0 °C. Rekciona smeša je postala gusta, uz prisustvo čvrstih primesa bež boje. Smeša je neutralizovana na 0 °C pomoću zasićenog rastvora NH4CI (600 ml) i vode (300 ml). Rastvor je zatim brzo zagrejan do 22 °C i usut u CHCI3(2400 ml). Nakon mućkanja i razdvajanja, organski sloj je ispran vodom (1 litar), zasićenim rastvorom NaCl (1 litar), osušen iznad Na2S04i koncentrovan u vakuumu, čime je dobijena čvrsta supstanca. bledo narandžaste boje (94,4 g).
'H NMR (400 MHz, CDCI3) 8: 7,41-7,32 (m, 5H), 7,07-6,98 (m, 2H), 6,95-6,93 (d, IH), 6.90-6.86 (d, IH), 5,55-5,51 (dd, IH), 4,77-4,71 (dd, IH), 4,30-4,26 (dd, IH), 3,91 (s, 3H), 3,85 (d, 2H), 2,17 (s. 3H), 1,38-1,29 (m, IH), 0,66-0,62 (m, 2H), 0,39-0,34 (m, 2H).
Intermedijer 64
3- [l-BenziM-(S)-(3-cikJopropilmetok^i-4-metoksifeniI)-3-(S)-metiIpiroIidin-3-karbonil]-4- (R)-feniloksazoIidin-2on
Intermedijer 63 (94,4 g, 0,21 mol) rastvoren je u CHCI3(640 ml), a zatim ohlađen do 0 °C. dodat je benzil metoksi-metil-trimetil-silanil-metilamin (95 g, 0,40 mol) i reakciona smeša je tretirana kap po kap, rastvorom TFA (3,08 ml) u CHCI3(40 ml). Reakciona smeša je mešana tokom noći uz zagrevanje do 22 °C. Dodatna količina benzil metoksi-metil-trim etil-silanil-metilamina (71,2 g, 0,3 mol) je dodata, a zatim je smeša mešana tokom sledećih 68 časova. Reakcija je zaustavljena zasićenim rastvorom NH4CI (600 ml) i izvršena je separacija. Organski sloj je ispran dva puta sa 1 N HC1 (500 ml), jedanput sa vodom, jedanput sa 1 N NaOH (500 ml), zatim opet jedanput sa vodom, zatim sa 6% rastvorom NaHC03, zatim sa zasićenim rastvorom NaCl, nakon čega je osušen iznad Na2S04i konačno koncentrovan u vakuumu. Sirovi materijal je hromatografisan na Si02(1,2 kg) u dva dela, upotrebom smeše heksana i EtOAc u odnosu 2:1 kao eluenta (62,3 g).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 7,44-7,20 (m, 10H), 7,07 (d, IH), 6,94-6,91 (dd, IH), 6,78-6,76 (d, IH), 5,56-5,50 (dd, IH), 4,69-4,63 (dd, IH), 4,21-4,16, (dd, IH), 3,83-3,80 (m, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,74-3,70 (d, IH), 3,64-3,59 (d;IH), 3,50-3,46 (d, IH), 2,90-2,86 (d, IH), 2,83-2,71 (m, 2H), 1,36-1,29 (m, IH), 0,64-0,60 (m, 2H), 0,38-0,32 (m, 2H).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 9,64 (s, IH), 7,39-7,23 (m, 5H), 6,81-6,71 (m, 3H), 3,83 (s, 3H), 3,83-3,81 (m, 2H), 3,80-3,75 (d, IH), 3,67-3,61 (m, 2H), 3,19-3,11 (m, 2H), 2,86-2,81 (m, IH), 2,43-2,40 (m, IH), 1,38-1,29 (m, IH), 0,76 (s, 3H), 0,68-0,62 (m, 2H), 0,30-0,37 (m, 2H).
Intermedijer 66
l-[l-BenziI-4-(S)-(3-ciWopropilmetoksi-4-metoksifeniI)-3-(S)-metilpirolidin-3-il]etanoI
Trimetil-aluminijum (2,0 M u toluenu, 2,1 ml, 4,2 mmol) je ohlađen do temperature od 0 °C, a zatim je, kap po kap, dodat je metil-magnezijum jodid (3,0 M u etil etru, 1,3 ml, 3,95 mmol). Ova suspenzija, sive boje. mešana je na temperaturi od 0 °C, tokom 30 minuta, a zatim je kroz kanilu dodata u rastvor Intermedijera 65 (0,5 g, 1,3 mmol), rastvorenog u CH2CI2(6.6 ml) koji je ohlađen do -78 °C. Reakciona smeša je mešana na temperaturi od -78 °C tokom 6 časova. Smeša je zatim nasuta direktno u levak za odvajanje koji je sadržavao natrijum kalijum tartarat (1 M, 150 ml). Ostatak je ispran u levak pomoću EtOAc. Smeša je razblažena sa EtOAc i izvršena je separacija. Organski sloj je po drugi put ispran pomoću natrijum kalijum tartarata, te zasićenog rastvora NaCl, nakon čega je osušen iznad MgSO«i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod predstavlja smešu dva dijastereomerna alkohola, u odnosu l.T, plus male količine aldehida. Ovi materijali se mogu razdvojiti ltromatografijom na Si02pomoću smeše EtoAc i heksana u odnosu 1:1.
Željeni polarniji karbinol:
'H NMR (400 MHz, CDCI3) 8: 7,36-7,30 (m, 3H), 7,28-7,24 (m, 2H), 6.81-6,74 (m, 3H), 3,85 (s, 3H), 3,84-3,79 (m, 2H), 3,71-3,56 (m, 4H), 3,33-3,25 (dd, IH), 3,12-3,09 (d, IH), 2,59-2,53 (dd, IH), 2,16-2,08 (d, IH), 1,38-1,25 (m, IH), 1,16 (d, 3H), 0,69-0,61 (m, 2H), 0,49 (s, 3H), 0,39-0,35 (m, 2H).
Intermedijer 67
(lR)-l-{(3S,4S)-4-[3-(Ciklopropilmetokii)-4-metoksifenil]-3-metiIpirolidin-3-iI}etan-l-ol
Dobijen od Intermedijera 66, postupkom debenzilacije, opisanim kod Intermedijera 31.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 6,88-6,71 (m, 3H), 3,92-3,56 (c, 1 IH), 3,14-3,05 (m, IH), 1,37-1,25 (m, IH), 1,20 (d, 2H), 0,72 (s, 3H), 0,63 (d, 2H), 0,37 (d, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 306,2 (m+1).
Intermedijer 68
(lR)-l-((3S,4S)-4-(3-Ciklopentiloksi-4-metoksifeniI)-3-metiIpirolidin-3-il]etan-l-oI
Dobijen iz 1-(R) karbinol izomera (polarnijeg dijastereomera) Intermedijera 56, postupkom debenzilacije, opisanim kod Intermedijera 31.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 6,81 (d, IH), 6,75-6,73 (m, 2H), 4,80 (c, IH), 3,82 (s, 3H), 3,79-3,68 (m, 5H), 3,61 (t, IH), 3,10 (d, IH), 1,96-1,80 (m, 6H), 1,63-1,57 (m, 2H), 1,21 (d, 3H), 0,72 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 320,4 (m+1).
Intermedijer 69
(lS)-l-[(3S,4S)-4-(3-CiklopentiIoksi-4-metoksifenil)-3-metilpiroIidin-3-il]etan-l-oI
Dobijen iz 1 -(S) izomera (manje polarnog intermedijera) Intermedijera 56, postupkom debenzilacije, opisanim kod Intermedijera 31.
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 320,4 (m+1).
Intermedijer 70
5-f4-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-metilpirolidin-3-il]-2-metoksifenol
Dobijen iz Intermedijera 58, postupkom debenzilacije, opisanim kod Intermedijera 31 (10% Pd na ugljeniku, korišćen umesto paladijum acetata).
}H NMR (400 MHz, CDC13) 5: 6,72 (d, IH), 6,67 (d, IH), 6,59 (dd, IH), 3,80 (s, 3H), 3,60 (qd, IH), 3,29-3,17 (m, 6H), 3,10 (t, IH), 2,55 (d, IH), 1,06 (d, 3H), 0,56 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): m/z 252,1 (m+1).
Intermedijer 71
1-R- [l-Benzil-4-S-(3-terc-butoksi-*l;metoksifenil)-3-S-mefilpirolidin-3-il]-etanoI
U mešani rastvor trimetil aluminijuma (2 M u toluenu, 59,4 ml. 119 mmol) na 0 °C, u atmosferi azota, dodat je metil-magnezijum jodid (3 M u Et^O, 36 ml, 108 mmol). Nakon 30 minuta na temperaturi od 0 °C, organometalni rastvor je dodat pomoću kanile u rastvor Intermedijera 55 (13,7 g, 36 mmol) u CH2CI2(360 ml) na -78 °C, u atmosferi azota. Nakon završenog dodavanja, reakciona smeša je mešana tokom 6 časova na temperaturi od -78 °C. Reakciona smeša je zatim zagrejana do temperature od 0 °C i pažljivo nasuta, uz brzo mešanje, u ledom hlađeni 1 M rastvor kalijum natrijum tartarata (1500 ml), a zatim razblažena sa EtOAc (1500 ml). Nakon mešanja tokom 15 minula, slojevi su razdvojeni, a zatim su organski slojevi isprani sa 1 M rastvorom kalijum natrijum tartarata (1 x 1000 ml) i zasićenim rastvorom NaCl (1 x 1000 ml). Organski slojevi su osušeni (upotrebom MgS04), isfiltrirani i koncentrovani u vakuumu, čime je dobijena smeša dijastereomera u odnosu 2,5:1, plus približno 10% zaostalog polaznog aldehida, na osnovu grube 'H-NMR. Sirovi proizvod je hromatografisan na koloni dimenzija 110 mm x 203 mm, sa smešom EtOAc, heksana i MeOH u odnosu 3:7:0.4, respektivno. Nakon sakupljanja i koncentrovanja u vakuumu frakcija koje sadrže željeni dijastereomer niže Rf, dobijen je Intermedijer 71 (8,1 g, 57%) u vidu narandžastog ulja.
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8: 7,34-7,23 (m, sH), 6,86 (m, 3H), 6,79 (d, IH), 3,79 (s, 3H), 3,65 (dd, IH), 3,62 (s, 2H), 3,58 (dd, IH), 3,29 (dd, IH), 3,10 (d, IH), 2,53 (dd, IH), 2,07 (d, IH), 1,35 (s, 9H), 1,12 (d, 3H), 0,45 (s, 3H).
Intermedijer 72 .
5-[(4R)-4-((lS)-l-Hidroksietil)-4-raetiM^
U mešani rastvor Intermedijera 71 (2,3 g, 5,8 mmol) u CH2CI2(18 ml), na temperaturi od 0 °C, ispod cevi za sušenje, dodata je trifluorosirćetna kiselina (2,7 ml, 35 mmol). Zatim je uklonjeno kupatilo za hlađenje i reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature, posle čega je mešana tokom 3.5 časova. Reakciona smeša je koncentrovana pomoću rotacionog isparivača u cilju uklanjanja viška trifluorosirćetne kiseline, nakon čega je ponovo rastvorena u CH2CI2(50 ml), a zatim isprana sa 10 % N^CCb (2 x 50 ml) i zasićenim rastvorom NaCl (1 x 50 ml). Organski slojevi su osušeni pomoću MgS04. isfiltrirani i koncentrovani u vakuumu, čime je dobijen Intermedijer 72 u vidu bele pene (1,9 g, 96%)
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 6: 7,36-7,20 (m, 5H), 6,82 (s, IH), 6,77 (d, IH), 6,66 (d, IH), 5,57 (s, IH), 3,83 (s, 3H), 3,70-3,56 (m, 4H), 3,30 (dd, IH), 3,13 (d, IH), 2,55 (dd, IH), 2,04 (d, IH), 1,12 (d, 3H), 0,45 (s, 3H).
Intermedijer 73
(lR)-l-{(3R)-4-[3-(tec-Butoksi)-4-metoksifenilJ-3metilpirolidin-3-iI]etan-l-ol
Dobijen iz Intermedijera 71 (1 g, 2,53 mmol), postupkom debenzilacije. opisanim kod Intermedijera 31, čime je dobijeno 775 mg Intermedijera 73.
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 5: 6,92-6,79 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,51-3,42 (m, 4H), 3,29 (dd, IH), 2,77 (d, IH), 1,35 (s, 9H), 1,17 (d, 3H), 0,62 (s, 3H).
Intermedijer 74
R'=H
Metil-3-((lR)-l-hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-hidroksi-4-metoksifenil)-3-metiIpirolidi karboksilat
Postupak acilacije posredovan Hunig- ovom bazom
U hlađeni (0 °C). mešani rastvor Intermedijera 70 (670 mg. 2.67 mmol) i Hunig-ove baze (1,4 ml, 8,0 mmol) u suvom CH2CI2(10 ml), 1,4-dioksanu (5 ml) i MeOH (1 ml), dodat je, u atmosferi azota, metil hloroformat (0,41 ml, 5,3 mmol), putem šprica. Dobijeni rastvor je mešan na temperaturi od 0 °C, tokom jednog časa, nakon čega je razblažen sa CH2CI2(90 ml), ispran sukcesivno sa 1 N vodenim rastvorom HC1 (2 x 20 ml) i slanom vodom (20 ml), a potom osušen (pomoću Na2S04), isfiltriran i koncentrovan u vakuumu. Ostatak (737 mg) rastvoren je u THF (3 ml) i vodi (2 ml), zatim tretiran rastvorom LiOH (112 mg, 2,67 mmol u 2 ml vode), na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja u trajanju od 4 časa, reakciona smeša je razblažena pomoću EtOAc (100 ml) i isprana sukcesivno sa 1 N vodenim rastvorom HC1 (2 x 50 ml), zasićenim vodenim rastvorom NaHCOs(30 ml) i slanom vodom (30 ml), a zatim osušena pomoću Na2S04, isfiltrirana i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prečišćen pomoću radijalne hromatografije (4 mm ploča sa 3% MeOH u CH2CI2), čime je dobijen Intermedijer 74 u vidu blede pene (250 mg, 30%).
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 8: 6,84 (d, IH), 6,78 (d, IH), 6,72 (dd, IH), 5,57 (d, IH), 3,90-3,54 (m, IH), 3,30 (d, 0.5H), 3,20 (d, 0,5H), 1.35 (br d, IH), 1,14 (t, 3H), 0.75 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, negativan): m/z 308,6 (m-1).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): m/z 310,5 (m+1)
Intermedijer 75
Dobijen iz Intermedijera 57, putem postupka debenzilacije, opisanog kod Intermedijera 31, i postupka acilacije posredovanog Hunig-ovom bazom, opisanog kod Intermedijera 74.
LRMS (Elektrosprej, negativan): m/z 308,6 (m-1).
LRMS (Elektrosprej. pozitivan): m/z 310,5 (m+1)
Intermedijer 76
(2R)-2-Hidroksikapronska kiselina
U ohlađeni (0 °C), mešani rastvor D-norleucina (500 mg, 3,81 mmol) u 10 ml 1 N vodenog rastvora sumporne kiseline, dodat je rastvor natrijum-nitrit (421 mg, 6,10 mmol) u 3 ml vode, kap po kap, tokom 20 minuta. Reakciona smeša je ostavljena da se polako zagreje do sobne temperature, u toku vremenskog intervala od 16 Časova. Smeša je aztim ekstrahovana sa EtOAc (2 x 25 ml), osušena pomoću Na2S04i koncentrovana. čime je dobijeno 200 mg (40%) bele, voskaste, čvrste supstance.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 6: 4,28 (dd, IH), 1.92-1,81 (m, IH), 1,76-1,64 (m, IH), 1,51-1,29 (m, 4H), 0,92 (t, 3H).
LRMS (Elektrosprej, negativan): Da/e 131,1 (m-1)
Intermedijer 77
(lR)-l-(HIorokarbonil)pentil acetat
Postupak acilacije/ hidrolize/ formiranja klorida kiseline
U ohlađeni (0 °C) rastvor Intermedijera 76 (200 mg. 1,51 mmol) i Hunig-ove baze (657 ml, 3,78 mmol) u CH2CI2(6 ml) dodat je, pomoću šprica, acetil-hlorid (215 ul 3,03 mmol). Dobijena smeša je ostavljena da se polako ugreje do sobne temperature, tokom perioda od 16 časova. Reakciona smeša je zatim isprana sa 1 N rastvorom HC1 (2 x 20 ml), osušena pomoću Na2S04 i koncentrovana do narandžasto-braon ulja, za koje je pomoću NMR utvrđeno da predstavlja bis-acilovani materijal. U ovaj materijal je dodato 5 ml smeše THF i vode u odnosu 4:1, a smeša je mešana tokom 16 časova na sobnoj temperaturi, potom ekstrahovana sa EtOAc, osušena pomoću NajSO^i koncentrovana do količine od 186 mg (71%) narandžastog ulja. NMR i masena spektrometrija su potvrdili acetoksi kiselinu. U ovaj materijal u 5 ml CH2CI2, dodat je oksalil-hlorid (1.07 ml, 2,14 mmol, 2M rastvor u CH2C12) i kap DMF. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 časa, a zatim koncentrovana pri sniženom pritisku u cilju dobijanja Intermedijara 77.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 5: 5,17 (dd, IH), 2,18 (s, 3H), 2,04-1,86 (m, 2H), 1,50-1,30 (m, 4H), 0,93 (t,3H).
Intermedijer 78
(HlorokarboniI)(4-fluorofeniI)metiI acetat
Dobijen iz 2-(4-fluorofenil)-2-hidroksisirćetne kiseline, postupkom acilacije/ hidrolize/formiranja hlorida kiseline, opisanim kod Intermedijera 77.
'H NMR (400 MHz, CDCI3) 6: 7,48 (q, 2H), 7,14 (t, 2H), 6,06 (s, IH), 2.21 (s, 3H).
Intermedijer 79
(Hlorokarbonil)ciklopropil acetat
Dobijen iz 1-hidroksiciklopropankarboksilne kiseline, postupkom acilacije/ hidrolize/formiranja hlorida kiseline, opisanim kod Intermedijera 77.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 5: 2,13 (s, 3H), 1,89-1,84 (m, 2H), 1,46-1,42 (m, 2H).
Intermedijer 80
(lS)-l-(Hlorokarbonil)-2-meti!butil acetat
Dobijen iz (2S)-2-hidroksi-3-metilvalerijanske kiseline, postupkom acilacije/ hidrolize/formiranja hlorida kiseline, opisanim kod Intermedijera 77.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 6: 5,01 (d, IH), 2,24-2,17 (m, IH), 2,17 (s, 3H), 1,57-1,47 (m, IH), 1,39-1,28 (m, IH), 1,03 (d, 3H), 0,94 (t, 3H).
Intermedijer 81
(lS)-l-(Hlorokarbonil)-3-metiIbutil acetat
Dobijen iz (2S)-2-hidroksi-4-metilvalerijanske kiseline, postupkom acilacije/ liidrolize/formiranja hlorida kiseline, opisanim kod Intermedijera 77.
■ 'H NMR (400 MHz, CDCI3) 8: 5,12 (d, IH), 2,16 (s, 3H), 1,88-1,75 (m, 3H), 0,97 (dd, 6H).
Intermedijer 82
(lR)-l-(HlorokarboniI)-2-feniletil aceta t
Dobijen iz (2R)-2-hidroksi-3-fenilvalerijanske kiseline, postupkom -acilacije/ hidrolize/formiranja hlorida kiseline, opisanim kod Intermedijera 77.
'H NMR (400 MHz:CDC13) 5: 7,38-7.21 (m, 5H), 5,33 (dd, IH), 3,33 (dd, IH). 3,18 (dd.
IH), 2,11 (s, 3H).
Intermedijer 83
(lS)-l-(HlorokarboniI)-2-feniIetil acetat
Dobijen iz (2S)-2-hidroksi-3-fenilvalerijanske kiseline, postupkom acilacije/ hidrolize/formiranja hlorida kiseline, opisanim kod Intermedijera 77.
'H NMR (400 MHz, CDCI3) 5: 7,38-7,21 (m, 5H), 5,33 (dd, IH), 3,33 (dd, IH), 3,18 (dd, IH), 2,11 (s, 3H).'
Intermedijer 84
(4-HIorofeniI)(hidroksiimino)metilamin
Rastvor 4-hlorobenzonitrila (10 g, 0,073 mol), hidroksilamin hidrohlorida i NaOH (3,5 g. 0,087 mol) u etanolu (300 ml) i vodi (80 ml), refluktovan je tokom 10 časova, a zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijena čvrsta supstanca zagasito-bele boje, preuzeta u voda/4:1 EtOAc:CH2Ch. Organski slojevi su izdvojeni, isprani jedanput vodom, osušeni pomoću Na2S04i koncentrovani do 10.4 g bele, čvrste supstance (84%).
'H NMR(DMSO-d6,400 MHz) 5: 9,71 (s, IH), 7,66 (d, 2H), 7,41 (d, 2H), 5,85 (br s, 2H).
Intermedijer 85
[3-(4-Hlorofenil)-l,2,4-oksadiazol-5-il]metil acetat
U ohlađeni (0 °C) rastvor Intermedijera 84 (4,5 g, 0,026 mol) u suvom piridinu (20 ml), dodat je, kap po kap, acetoksiacetil hlorid (6 ml, 0,056 mol) tokom jednog časa. Nakon što je dodavanje završeno, smeša je zagrevana na 90 °C, tokom tri časa, a zatim je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Piridin je uklonjen pod sniženim pritiskom, i dobijeni mrki, uljasti materijal je preuzet pomoću CH2CI2i filtriran kroz GF/F filter papir. Filtrat je ispran sonim rastvorom (2 x 100 ml), osušen pomoću NajSCui koncentrovan. Biotage prečišćavanje (40M kertridž, 20% EtOAc/heksan) dalo je 1,93 g Intermedijera 85 u vidu bele, čvrste supstance (29%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 6: 8,01 (d, 2H), 7,46 (d, 2H), 5,35 (s, 2H), 2,21 (s, 3H).
Intermedijer 86
[3-(4-Hlorofenil)-l,2,4-oksadiazoI-5-il]metan-lol
U rastvor Intermedijera 85 (1 g, 3.96 mmol) u MeOH (50 ml), dodat je vodeni rastvor K2CO3(0,56 M, 7 ml, 3,96 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temeraturi tokom dva časa. Rastvarači su zatim uklonjeni na sniženom pritisku, a ostatak je preuzet u EtOAc (75 ml), ispran vodom (2 x 75 ml), osušen pomoću Na2S04i koncentrovan do 820 mg (98%) Intermedijera 86, u vidu bele, čvrste supstance.
<J>H NMR (400 MHz, CDCI3) 6: 8,02 (d, 2H), 7,47 (d, 2H), 4,97 (s, 2H), 2,52 (br s, IH).
Intermedijer 87
[3-(4-HlorofeniI)-l,2,4-oksadiazol-5-il]metiI metilsulfonat
Dobijen postupkom metilsulfonilacije, opisanim kod Intermedijera 90.
'HNMR (400 MHz, CDC13) 8: 8,02 (d. 2H), 7,47 (d, 2H), 5,49 (s, 2H), 3,24 (s. 3H).
Intermedijer 88
3-[4-(Trilfuorom etil)fen il]prop-2-in-l -ol
Postupak vezivanja katalizovan paladijumom
Rastvor 4-jodobenzotrifluorida (5 g. 0,018 mol), propargil alkohola (1.07 ml. 0.018 mol), bakar(I) jodida (17,5 mg, 0,092 mmol) i bis-trifenilfosfinpaladijum(II) hlorida (129 mg, 0,184 mmol) u 50 ml dietilamina, mešan je na sobnoj temperaturi tokom više Časova. Dietilamin je zatim uklonjen pri sniženom pritisku, a ostatak je preuzet u CH2CI2(150 ml). Dobijeni materijal je ispran sa 1 N HC1 (3 x 150 ml), osušen pomoću NajSO*i konačno koncentrovan do 3,1 g Intermedijera 88 u vidu narandžasto-braon ulja (84%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 7,55 (q, 4H), 4,52 (d, 2H), 1,74 (br s, IH).
Intermedijer 89
3-(4-Fluorofenil)prop-2-in-l-oI
Dobijen postupkom opisanim kod Intermedijera 88.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 7,42 (q, 2H), 7,01 (t, 2H), 1,70 (t, IH).
Intermedijer 90
3-Fenilprop-2-inilmetilsulfonat
Postupak metilsulfonilacije
U rastvor 3-fenil-2-propin-l-ola (100 g, 0,757 mol) i Et3N (158 ml, 1,13 mol) u 3 litra suvog CH2CI2, ohlađenog do temperature od 5 °C, dodat je metansulfonil hlorid (59 ml, 0,757 mol) putem levka za dodavanje, uz održavanje unutrašnje temperature na oko 5 °C (dodavanje je završeno nakon približno 45 minuta). Posle jednog časa na temperaturi od 5 °C, TLC je pokazala da je najveći deo polaznog materijala utrošen. Zatim je dodat 1 ml metansulfonil hlorida i reakciona smeša je mešana tokom narednih 30 minuta na temperturi od 5 °C. TLC je pokazala potpuni utrošak polaznog materijala. Smeša je zatim isprana pomoću 1 N rastvora HC1 (3 x 250 ml), osušena pomoću NajSC^i koncentrovana, čime je dobijeno 113 g Intermedijera 90 u vidu žute tečnosti (71%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 7,48-7,45 (m, 2H), 7,39-7,34 (m, 3H), 5,09 (s, 2H), 3,16 (s. 3H).
Intermedijer 91
3-(4-FluorofeniI)prop-2-inil metilsulfonat
Dobijen iz Intermedijera 89, postupkom metilsulfonilacije opisanim kod Intermedijera 90.
'H NMR (400 MHz, CDCI3) 8: 7,47-7,44 (q, 2H), 7,04 (t, 2H), 5,07 (s, 2H), 3,15 (s, 3H).
Intermedijer 92
3-[4-(Trilfuorometil)feniI]prop-2-inil metilsulfonat
Dobijen iz Intermedijera 88. postupkom metilsulfonacije, opisanim kod Intermedijera 90.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 6: 7,62-7,56 (m, 4H). 5,09 (s, 2H), 3,16 (s, 3H).
Primer 3
Priprema četiri stereoizomera redukcijom Intermedijera 36. Natrijum borohidrid (2.0 mmol, 0,075 g) doda se Intermedijeru 36 (1.3 mmol, 0,50 g) rastvorenom u 10 ml etanola. Nakon završetka reakcije, posle jednog sata. reakciona smeša se osuši u vakuumu. Dobijeno ulje se ekstrahuje tri puta iz vode pomoću EtOAc, a zatim se pomešani ekstrakti isperu sonim rastvorom i osuše iznad MgS04. Smeša dva racemata se dobija u formi ulja.
'H NMR 6 : 6,80 (d, IH); 6,67 (d, 2H); 4,72 (bd, IH); 3,86-3,95 (bm, IH); 3,83 (s, 3H); 3.64-3,78 (bm, IH); 3,74 (s, 3H); 3,33 (dd, IH): 2,16 (d, 3H); 1,79-1,92 (bm, 4H): 1,59-1,63 (bm. 2H); 1,01 (sd, 3H).
Smeša racemata se rastvori u smeši koja sadrži 50% acetonitrila i 50% vode, u koncentraciji od 50 mg/ml i prečisti se u porcijama na C-18 koloni (250 x 10 mm) upotrebom voda/acetonitril/0,5% TFA gradijenta. Odgovarajuće frakcije se sakupe, pomešaju i osuše do forme ulja.
'H NMR za manji racemat 6 : 6,75-6,82 (bm, 3H); 4,75 (bd, IH); 3,83 (s, 3H); 3.64-3,81 (bm.
IH); 3,74 (s, 3H); 3,54-3,61 (bm, 2H); 3,28 (dd, IH); 1,81-1,94 (bm, 5H); 1,58-1,65 (bm, 4H); 1,15 (dd, 3H); 0,75 (s, 3H).
'H NMR za veći racemat 8 : 6,76-6,83 (bm, 3H); 4.74 (bd, IH); 3,77-3,89 (bm, IH); 3,83 (s, 3H); 3,73 (s, 3H); 3,65 (kvin, IH); 3,25-3,32 (bm, 3H); 1,77-1,96 (bm, 7H); 1,58-1,61 (bm, 2H); 1,13 (d, 3H); 0,92 (s, 3H).
Hiralna separacija alkohola
Dve kolone su potrebne za razdvajanje četiri diastereomera putem HPLC. Prva kolona, bazirana na dekstrozi, (8 x 30 cm) korišćena je za odvajanje R,R,S izomera od ostalih. Deset mililitara (7,1 mg/ml rastvora) sirove smeše u puferu kolone uvede se i zatim eluira brzinom od 1 ml/min izokratskim heksanima (85%) i izopropanolom (15%), uz sakupljanje odgovarajućih frakcija. Preostali diastereomeri su prečišćeni na posebnoj koloni baziranoj na dekstrozi (10 x 50 cm). Ponovo, 10 ml (7,1 mg/ml rastvora) je uvedeno i zatim eluirano brzinom od 1 ml/min sa izokratskim heksanima (95%) i izopropanolom (5%). Odgovarajuće frakcije su sakupljene, pomešane, i osušene do forme ulja.
Primer 4
R<1>=2-indanil; R<3>=C02CH3
Metil estar trans-(±)-3-(l-hidroksictiI)-4-[3-(indan-2-ilolisi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidin-l-karboksilne kiseline (2 karbino) dijastereomera)
Rastvor Intermedijera 35 (racemski) (300 mg, 0,71 mmol, 1 eq) u etanolu (10 ml) tretiranje sa natrijum borohidridom (54 mg, 1,42 mmol, 2 eq). Smeša je mešana 10 minuta na sobnoj temperaturi, tretirana sa IN HC1 (50 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 25 ml). Pomešani organski ekstrakti su isprani sa 1 N HC1 (25 ml), vodom, zasićenim rastvorom NaHC03(25 ml), vodom (25 ml) i sonim rastvorom (25 ml), osušeni iznad NajSCui koncentrovani u vakuumu. Deo sirovog ostatka je prečišćen putem HPLC (Vydac 20 x 250 mm Cl8 "Protein and peptide" kolona. 8 min, gradijent 50-75% acetonitrila u vodi pri Čemu svaki rastvarač sadrži 0,05% TFA. brzina protoka od 20 ml/min) čime su dobijeni razdvojeni diastereomeri u odnosu 2:1 u formi bezbojnih sirupa (75 i 37 mg respektivno, po redu eluacije iz kolone).
Izomer 1: 'H NMR (300 MHz, CDC13) 5: 7,24-7,15 (m, 4H), 6,83 (br s, 3H), 5,21-5,12 (m, IH), 3,91-3,59 (m, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,40-3,18 (m, 7H), 1,14 (d, .1 = 6,3 Hz, 3H), 0,94 (s, 3H).'
Izomer 2:<*>H NMR (300 MHz, CDC13) 6: 7,23-7,15 (m, 4H), 6,85-6,82 (m, 3H), 5,22-5,10 (m, IH), 3,89-3,67 (m, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,64-3,52 (m, 2H), 3,40-3,15 (m, 5H), 1,20-1,13 (m, 3H), 0,78 (s, 3H).
Jedinjenja iz Primera 5 i 6 su pripremljena na isti način kao i u Primeru 4:
Primer 5
R,=2-norbornil; R<3>=C02CH3
Metil estar trans 4-[3-ekso-(biciklo[2.2.1]hept-2iloksi)-4-metoksifeniI]-3-(l-hidroksietil)-3-metilpirolidin-l-karboksilne kiseline (2 karbinol dijastereomera)
Intermedijer 38 je redukovan i razdvojen na gore naveden način, čime su dobijena dva izomera: Izomer 1: 'H NMR (300 MHz, CDCI3) 5: 6,82-6,72 (m, 3H), 4,15 (br s, IH), 3,88-3,59 (m, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,32-3.24 (m, 3H), 2,50-2,47 (m, IH), 2,34-2,28 (m, IH), 1,77-1,50 (m, 5H), 1,21-1,12 (m, 6H), 0,92 (s, 3H).
Izomer 2: 'H NMR (300 MHz, CDC13) 5: 6,82-6,72 (m, 3H), 4,19-4.15 (m, IH), 3,85-3,54 (m, 5H), 3,83 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,30/3,23 (2 d, J = 10,4/10,4 Hz, IH), 2,49-2,46 (m, IH), 2,32 (br s, IH), 1,76-1,70 (m, 2H), 1,65-1,44 (m, 3H), 1,21-1,14 (m, 6H), 0,75 (s, 3H).
Primer 6
R'=PhCH:tCH2CH(CH3); R<3>=C02CH3
Metil estar trans-3-(l-Hidroksietil)-4-[4-metoksi-3-(l-metil-3-fenilpropoksi)fenil]-3-metilpirolidin-l-karboksilne kiseline (2 karbinol dijastereomera)
Intermedijer 39 je redukovan i razdvojen na gore naveden način, čime su dobijena dva izomera: Izomer 1: 'H NMR (300 MHz, CDC13) o: 7,30-7,25 (m, 3H), 7,22-7,15 (m, 3H), 6,85-6,69 (m, 3H), 4,34-4,27 (m, IH), 3,87-3,54 (m, 3H), 3,84 (s, 3H), 3,73/3,72 (2s, 3H), 3,31-3.20 (m, 3H), 2,83-2,75 (m, 2H), 2,18/2,08 (m, IH), 1,95-1,84 (m, IH), 1,34/1,31 (2s, 3H), 1,12 (d, J = 6,3 Hz,3H), 0,89 (br s, 3H).
,<2>C NMR (75 MHz, CDC13) 8: 156,0, 150,3, 147,8, 142,2, 131,3/131,1, 128,9, 128,8, 126.2, 121,7, 117,1, 112,5, 77,6, 75,3/75,1, 74,1/74,0, 56,3, 56,2/55,8, 52,9, 52,0/51,5/51,2, 49,9/49,1, 38,5/38,4, 32,2,20,3, 19,0/18,9, 14,6/14,5.
Izomer 2: 'H NMR (300 MHz, .CDCl3) 8: 7,29-7,24 (m, 2H), 7,20-7,14 (m, 3H), 6,84-6,69 (m, 3H), 4,35-4,24 (m, IH), 3,85/3,84 (2s, 3H), 3,83-3,45 (m, 5H), 3,75 (s, 3H), 3,31-3,23 (m, IH), 2,88-2,76 (m, 2H), 2,21-2,07 (m, IH), 1,95-1,83 (m, IH), 1,34/1,32 (2s, 3H), 1,15-1,11 (m, 3H), 0,73 (brs,3H).
<l3>C NMR (75 MHz, CDCI3) 8: 156,1, 149,9, 147,4, 142,3, 129,5/129,4, 128,9, 128,7, 126,2, 122,1/121,8, 117,9/117,7/117,4, 112,0, 77,6, 75,3/75,0/74,9, 69,4/69,3, 56,3, 53,2, 53,1, 49,5/49,3/49,1/48,6, 46,5/46,0, 38,5/38,4/38,3, 32,1, 20,3,20,0, 17,7.
Sledeća jedinjenja su pripremljena iz pirolidinskog Intermedijera 68, bez hiralnog centra.
Primer 7
R^CsH?; R<3>=COCH2OCH2Ph
1- [3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-cikIopentil-oksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidin]-2- (fenilmetoksi)etan-l-on
Postupak N- Acilacije
U mešani rastvor Intermedijera 68 (42,6 mg, 0,13 mmol) u 1,4-dioksanu (0,4 ml) dodati su, sukcesivno, vodeni rastvor K2C03(0,8 ml od 0,65 M, 4 eq) i rastvor hlorida kiseline (R3-CI) (21 p.1, 0,13 mmol) u 1,4-dioksanu (0,4 ml) na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ostavljen da se meša na sobnoj temperaturi u toku 4 sata. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (30 ml), a zatim sukcesivno ispirana vodom (20 ml) i sonim rastvorom (20 ml), osušena pomoću MgS04, filtrirana i koncentrovana u vakuumu, čime je dobijeno jedinjenje iz Primera 7 u formi žućkasto-braon pene (46,5 mg, 99%).
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,40-7,31 (m, 5H), 6,80-6,72 (m, 3H), 4,73 (c, IH), 4,67 (s, 2H), 4,14 (s, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,79-3,45 (m, 5H), 3,22 (d, IH), 1,92-1,80 (c, 6H), 1,61-1,55 (c, 2H), 1,14 (dd, 3H), 0,73 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 468,4 (m+l).
Primer 8
R'=C5H9; R<3>=COCH2OH
1- [3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ri^ 2- hidroksietan- 1-on
Na jedinjenju iz Primera 7 (35 mg, 75 u,mol) sproveden je postupak debenzilacije opisan kod Intermedijera 31, čime je dobijeno jedinjenje iz Primera 8 (24 mg, 84%).
'H NMR (CD3OD, 400 MHz, smeša konformera) 8: 6,91-6,82 (m, 3H), 4,83 (c, IH), 4,22 (c, IH), 3,87-3,22 (m, 11H), 1,93-1,73 (m, 6H), 1,69-1,59 (m, 2H), 1,11 (dd, 3H), 0,75 (br s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 378.4 (m+1).
Primer 9
R^CsHg; R<3>=COCH2CH2N(H)C02CH2Ph
N-{3-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpiroiidinil]-3-oksopropil}(fenilmetoksi)karboksamid
Pripremljen od Intermedijera 68 putem postupka acilacije opisanog u Primeru 7. TJmesto hlorida kiseline, korišćen je p-nitrofenilestar N-Cbz-beta-alanina.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,38-7,28 (m, 5H), 6,92-6,83 (m, 3H). 5,06 (c, 2H), 4,86 (s, 2H), 4,84 (c, IH), 3,81-3,27 (m, 10H), 2,59 (c, 2H), 1,98-1.69 (c, 6H), 1,64-1,57 (c, 2H), 1,09 (d, 3H), 0,73 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 525,3 (m+1).
Primer 10
R^CjHg; R<3>=COCH2CH2NH2
l-f3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifeniI)-3-metilpirolidinilJ-3-amino-propan-l -on
Pripremljen od jedinjenja iz Primera 9 putem postupka debenzilacije opisanog kod Intermedijera 31.
<]>H NMR (CD3OD, 400 MHz , smeša konformera) 8: 6,91-6,79 (m, 3H), 4,81 (c, IH), 3,92-3,29 (m, 11H), 3,01 (br s, 2H), 2,61-2,58 (m, 2H), 1,95-1,73 (m, 6H), 1,68-1,58 (m, 2H), 1,10 (dd,3H),0,76(d,3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 391,4 (m+1).
Primer 11
R'=C5H9; R<3>=COCH2CH2COjCH2Ph
Fenilmetil4-[3-((lR)-l-hidroksietH)(3S,4S)-4-(3-cikIopentiloksi-4-metoksifeni metiipirolidinil]-4-oksobutanoat
Pripremljen od Intermedijera 68 putem postupka acilacije opisanog u Primeru 7.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,41-7,31 (m, 5H), 6,84-6,75 (m, 3H), 5,14 (d, 2H), 4,74, (c, IH), 3,94-3,44 (m, 8H), 3,27 (d, IH), 2,80-2,73 (m, 2H), 2,67-2,58 (m, 2H), 1,96-1,81 (m, 6H), 1,68-1,56 (m, 2H), 1,15 (dd. 3H), 0,75 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 510,3 (m+1).
Primer 12
R^CjH*; R<3>=COCH2CH2C02H
4-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentto 4-oksobuterna kiselina
Pripremljen od jedinjenja iz Primera 11 putem postupka debenzilacije opisanog kod Intermedijera 31.
<*>H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 6,80-6,72 (m, 3H), 4.74 (c, IH). 3,98-3,54 (m, 10H), 3,40 (d, IH), 3,24 (d, IH), 2,69 (c, 2H), 1,95-1,74 (m, 6H), 1.69-1,51 (m, 2H). 1,14 (dd, 3H), 0,74 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 420,3 (m+1).
Primer 13
R,=C5H9; R<3>=COCH2N(H)C02CH2Ph
N-{2-[3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-mctilpiroIidinil]-2oksoetil}(TeniImetoksi)karboksamid
Pripremljen od Intermedijera 68 putem postupka acilacije opisanog u Primeru 7. Umesto hlorida kiseline, korišćen je p-nitrofenilestar N-Cbz-glicina.
'H NMR (400 MHz, CDCl3l smeša konformera) 8: 7,40-7,25 (m, 5H), 6,92-6,81 (m, 3H), 5,11 (s, 2H), 4,87 (s, 2H), 4,82 (C, IH), 4,11-3,28 (m, 9H), 1,95- 1,70 (m, 6H), 1,65-1,55 (m, 2H), 1,10 (br s, 3H), 0,76 (br s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 511,6 (m+1).
Primer 14
R^CsH,; R<3>=COCH2NH2
. l-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentil^ 2- aminoetan-l -on
Pripremljen od jedinjenja iz Primera 13 putem postupka debenzilacije opisanog kod Intermedijera 31.
'H NMR (CD3OD, 400 MHz, smeša konformera) 6: 6,91-6,82 (m, 3H), 4,80 (c, IH), 3,91-3,28 (m, 1 IH), 1,90-1,75 (m, 6H), 1,66-1,57 (m, 2H), 1,09 (dd, 3H), 0,74 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 377,2 (m+1).
Primer 15
R<5>=C5H9; R<3>=CO-4-Metil-piperazin
3- ((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiioksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil)-4-metilpiperazinil keton
Intermedijer 68 (30,2 mg, 94 mmol) rastvoren je u 1,2-dihloroetanu (400 u.1) i ohlađen do 0 °C, a zatim je dodat karbonil diimidazol (16 mg, 94 umol). Reakciona smeša je mešana na 0 °C u toku 1,5 sati, nakon čega je dodat 1 -metilpiperazin (21 u.1, 180 umol). Rastvor je zagrevan na 80 °C u toku 60 Časova. Nakon hlađenja, reakciona smeša je razblažena sa CH2C12i isprana tri puta sa 6% rastvorom NaHCOs, osušena iznad Na2SC*4 i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na Si02sa EtOAc (15,5 mg).
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 6: 6,83-6,78 (m, 3H), 4,76 (c, IH), 4,06-3,77 (m, 18H), 3,61 (q, IH), 3,39 (br s, IH), 1,93-1,78 (m, 6H), 1,63-1,57 (m, 2H), 1,15 (br s, 3H), 0,81 (brs, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 446,4 (m+1).
Primer 16
R<1>=C5H9; R<3>=CO-N-morfolin
3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentUoksi-4-metoksifeniI)-3-metn morfolin-4-il keton
Pripremljen od Intermedijera 68 upotrebom morfolina i karbonildiimidazola kao vezivnog reagensa, korišćenjem postupka opisanog u Primeru 15.
'H NMR (400 MHz, CDClj, smeša konformera) 8: 6,84-6,77 (m, 3H), 4,76 (c, IH), 3,88-3,52 (m, 12H), 3,41 (dd, IH), 3,38 (dd, IH), 3,28 (dd, IH), 3,25 (dd, IH), 3,10 (d, IH), 1,95-1,81 (m, 6H), 1,62-1,54 (m, 2H), 1,15 (d, 3H), 0,75 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 433,3 (m+1).
Primer 17
R^CsHs; R<3>=COCH20-MentoI; (lS)-karbinol izomer
1- [3-((lS)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-ciklo<p>entiIoksi-4-metoksifeniI)-3-metHpirolidinil]-2- [(2S,lR,5R)-5-metil-2-(metiletil)cikloheksiloksi]-etan-l-on
Pripremljen od S-karbinol izomera Intermedijera 69, korišćenjem postupka acilacije posredovane Hunig-ovom bazom, opisanog kod Intermedijera 69.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 6,82-6,75 (m, 3H), 4,74 (c, IH), 4,19 (dd, IH), 4,04 (dd, IH), 3,92-3,76 (m, 5H), 3,47-3,19 (m, 5H), 2,26 (c, IH), 2,13 (c, IH), 3,94-1,80 (m, 6H), 1,65-1,53 (m, 4H), 1,51-1,19 (m, 4H), 1,14 (d, 3H), 0,95-0,84 (m, 9H), 0,79 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 516,3 (m+1).
Primer 18
R^CsHs; R<3>=CO-4-(2-meriltiazol)
3- ((lR)-l-Hidrolisietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpiroIidiniI-2-metil-(l,3-tiazol-4-iI) keton
Pripremljen od Intermedijera 68, korišćenjem postupka vezivanja sa EDC1, opisanog kod Primera 27 iz2-metil-l,3-tiazol-4-karboksilne kiseline.
'H NMR (CD3OD, 400 MHz, smeša konformera) 5: 7,98 (dd, IH), 6,92-6,82 (m, 3H). 4,84 (c, IH), 4,27 (t, 0,5H), 4,16 (t, 0.5H), 4,08 (t, 0,5H), 3,96 (d, 0,5H), 3,85-3,47 (m, 7H), 2,72 (dd, 3H), 1,88-1,72 (m, sH), 1,58-1,56 (m, 2H), 1,14 (dd, 1,5H), 1,08 (dd, 1,5H), 0,82 (d, 1,5H), 0,73 (d, 1.5H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 445.4 (m+1).
Primer 19
R^CsHj; R<3>=S02-3-piridil
3-{[3-((lR)4-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpiro]idinil]
sulfoni!}-piridin
U mešani rastvor Intermedijera 68 (32 mg, 0,1 mmol) u dioksanu (0,3 ml), sukcesivno su dodati vodeni rastvor K2CO3(0,6 ml od 0,65 M, 4 eq) i rastvor R<J->sulfonil hlorida (26 mg, 0,12 mmol) u dioksanu (0,3 ml), na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ostavljen da se meša na sobnoj temperaturi tokom dva časa. Reakciona smeša je razblažena sa heksanima i EtOAc u odnosu 1:1 (30 ml) i isprana sukcesivno sa vodom (20 ml) i sonim rastvorom (20 ml), a zatim osušena pomoću MgS04, isfiltrirana i koncentrovana u vakuumu u cilju dobijanja jedinjenja iz Primera 19, u vidu bledo narandzaste pene (36 mg, 78%).
'H NMR (400 MHz, CDCI3) 6: 9,11 (d, IH, J = 2,2 Hz), 8,83 (dd, IH, J = 1,6; 4,8 Hz). 8.17 (ddd. IH, J = 1,5; 2,4; 8,1 Hz), 7,50 (ddd, IH, J = 0,8; 4,9; 8,0 Hz), 6,74 (d, IH, J - 8,5 Hz). 6,68 (d, IH, J = 2,1 Hz), 6,62 (dd, IH, J = 2,1; 8,3 Hz), 4,70 (c, IH), 3,80 (s, 3H), 3,66-3,62 (m, 2H), 3,51-3,43 (m, 3H), 3,24 (d, IH, J = 13,3 Hz), 1,91-1,62 (m, 6H), 1,60-1.55 (m. 2H), 1,08 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,62 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 461,2 (m+1).
Primer 20
R^-indanil; R<3>=COCH2OCH2Ph
1- [3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-inda 2- (feniljmetoksi)-etan-l-on
Pripremljen od Intermedijera 51 (50 mg, 0,14 mmol), korišćenjem postupka acilacije posredovane Hunig-ovom bazom, opisanog kod Intermedijera 74, upotrebom benziloksiacetil hlorida (22,5 u.1, 0,14 mmol), čime je dobijeno jedinjenje Primera 20 u vidu bistrog ulja (48 mg, 68%)
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 6: 7,41-7,16 (m, 9H), 6,84-6,79 (m, 3H). 5,17 (c, IH), 4,66 (d, 2H), 4,19-4,11 (m, 2H). 3,96 (dd, 0.5H), 3,83-3,54 (m, 7H), 3.47 (d. 0.5H), 3,38-3,29 (m, 2H), 3,24-3,17 (m, 3H), 1,57 (br t, IH), 1,15 (dd, 3H), 0,75 (s. 3H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 516,8 (m+1).
Primer 21
R'=2-indanil; R<3>=COCH2OH
1- [3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-indan-2-iloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil]-2- hidroksietan-l -on
Pripremljen od jedinjenja iz Primera 20 putem postupka debenzilacije opisanog kod Intermedijera 31.
'H NMR (CD3OD, 400 MHz, smeša konformera) 8: 7,24-7,18 (m, 2H), 7,14-7.12 (m. 2H), 6,92-6,86 (m, 3H), 5,20 (c, IH), 4,27-4,14 (m, 2H), 3,90-3,50 (m, 6H), 3,41 (d, IH), 3,34-3,24 (m, 4H), 3,13-3,08 (m, 2H), 1,12 (dd, 3H), 0,77 (br s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 426,5 (m+1).
Primer 22
R'=2-indanil; R<3>=COC02CH3
Metil 2-[3-((lR)-l-hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-indan-2-iloksi-4-metoksifenil)-3-metilpiroIidiniIJ-2-oksoacetat
Pripremljen od Intermedijera 51 i metil oksalil hlorida, korišćenjem postupka acilacije posredovane Hunig-ovom bazom, opisanog kod Intermedijera 74.
] HNMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 6: 6,82-6,75 (m, 3H), 4,74 (c, IH), 4,01 (d. IH), 3,98-3,56 (m, 10H), 3,50 (dd, IH), 1,93-1,84 (m, 6H), 1,64-1,56 (m, 2H), 1,45 (dd, IH), 1,16 (dd, 3H), 0,79 (s, 1.5H), 0,75 (s, 1.5H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 406,2 (m+1).
Primer 23
R<1>=2-indanil;R<3>=COC(CH3)2N(H)C02CHiPh
N-{2-[3-((lR)-l-Hidroksietii)(3S,4S)-4-(3-indan-2-iloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil]-l,l-dimetil-2-oksoetil}(fenilmetoksi)karboksamid
Postupak vezivanja sa PyBrOP ??
U mešani rastvor bromo-tris-pirolidino-fosfonijum heksafluorofosfata (PvBrOP, 70 mg, 0,15 mmol), N-karbobenziloksi-2-metilalanina (35,5 mg, 0,15 mmol) i Hunig-ove baze (78 u.1, 0,45 mmol) u suvom dimetilformamidu (1 ml), dodat je Intermedijer 51 (50 mg, 0,14 mmol) na sobnoj temperaturi, u atmosferi azota. Dobijeni rastvor je ostavljen da se meša na sobnoj temeperaturi tokom 16 časova, nakon čega je zagrevan na 70 °C. tokom 5 časova. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature, nakon čega je koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prečišćen putem radijalne hromatografije (1 mm pločica sa 3% MeOH u CH2CI2) čime je dobijeno jedinjenje Primera 23 u vidu bele pene (20 mg, 24%).
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 6: 7,43-7,15 (m, 9H), 6,82-6,62 (m, 3H), 5,64 (br s, 0,5H), 5,51 (br s, 0,5H), 5,15-5,08 (m, 3H), 3,97-3,15 (m, 13H), 1,58 (br s, 6H), l,13(brd,3H), 0,68 (br s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 604,9 (m+18).
Primer 24
R,=2-indanil; R<3>=COC(CH3)2NH2
1- |3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-indan-2-iloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil3-2- amino-2-metilpropan-l -on
Pripremljen od jedinjenja iz Primera 23 putem postupka debenzilacije opisanog kod Intermedijera 31.
<!>H NMR (CD3OD, 400 MHz. smeša konformera) 8: 7,21-7,16 (m. 2H), 7,15-7,12 (m, 2H), 6,94-6,87 (m, 3H), 5,22 (c, IH), 4,05 (d, IH), 3,88 (c, IH), 3,77-3,69 (m, 4H);3,60-3.52 (c. 2H), 3,40-3,29 (c, 2H), 3,22 (q, IH), 3,13-3,09 (c, 2H), 1,37 (d, 6H), 1,13 (br s, 3H), 0.80 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 453,5 (m+1).
Primer 25
R<I>=2-indanil; R<3->=C02CH3
Metil 3-((lR)-l-hidroksietH)(3S,4S)-4-(3-indan-2-iIoksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil karboksilat
Pripremljen od Intermedijera 51, korišćenjem postupka acilacije posredovane Hunig-ovom bazom, opisanog kod Intermedijera 74, upotrebom metil hloroformata.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,24-7,16 (m, 4H), 6,86-6,82 (m. 3H), 5,18 (c, IH), 3,85-3,56 (m, 8H), 3,38-3,30 (m, 3H), 3,25-3,19 (m, 3H), 1,51 (d, 0,5H), 1,47 (d, 0,5H), 1,16 (t, 3H), 0,77 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 426,5 (m+1), 443,3 (m+18).
Primer 26
R<1>=2-indanil;R<3>=COCH2C(CH3)2C02H
4-f3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-inđan-2iloksi-4-metoksifcnil)-3-metilpirolidiniIj-2,2-dimetil-4-oksobuterna kiselina
Staklena cev debelog zida, na koju je stavljen čep sa navojem, napunjena je Intermedijerom 51 (20 mg, 0,05 mmol) i anhidridom 2,2-dimetilćilibarne kiseline (25.8 mg, 0,05 mmol). Cev je zatvorena i zagrevana na 150 °C tokom 30 minuta. Reakciona smeša je puštena da se ohladi do sobne temperature, čime je dobijeno jedinjenje Primera 26 (koje sadrži oko 15-20% drugog regioizomera) u vidu čvrste supstance braon boje (22 mg. 82%).
'H NMR (CD3OD, 400 MHz, smeša konformera) 8: 7,22-7,20 (m, 2H), 7,15-7,12 (m, 2H), 6,96-6,85 (m, 3H), 5,23 (c, IH), 3,92-3,49 (m, 7H), 3,37-3,28 (m, 4H), 3,13-3,09 (m, 2H), 2,73-2,55 (m, 2H), 1,30 (br s, 6H), 1,12 (t, 3H), 0,76 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, negativan): Da/e 494,5 (m-1).
Primer 27
R^-indamT, R<3>=CO-4-(2-metiltiazol)
3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-indan-2-iIoksi-4-metoksifeniI)-3-metU^
metiHl,3-tiazol-4-il) keton
Postupak vezivanja sa EDC1
U mešani rastvor l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (42,3 mg, 0,214 mmol) u suvom CH2CI2(1 ml) dodata je 2-metil-l,3-tiazol-4-karboksilna kiselina (30,7 mg, 0,214 mmol) na sobnoj temperaturi, u atmosferi azota. Dobijena svetlo-crvena smeša je ostavljena da se meša tokom jednog časa, a zatim je dodata jedna količina Intermedijera 51 (75 mg, 0,204 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom noći reakciona smeša je koncentrovana na sniženom pritisku, a ostatak je prečišćen primenom radijalne hromatografije (1 mm pločica sa 3% MeOH u CH7CI2), čime je dobijeno jedinjenje Primera 27 u vidu bistrog filma (21 mg, 20%).
'H NMR (400 MHz. CDC13; smeša konformera) 8: 7,91 (s, 0,5H), 7,88 (s. 0.5H), 7.25-7.20 (m. 2H), 7,18-7.16 (m, 2H), 6,90-6,82 (m, 3H), 5,19 (c, IH), 4,33 (dd, 0,5H), 4,23 (t, 0,5H), 4,15 (d, 0,5H), 4,10 (dd, 0,5H), 3,99 (t, 0,5H), 3,85 (d, 0,5H), 3,81 (s, 3H), 3,77-3,58 (m, 3H), 3,38-3,31 (m, 2H), 3,24-3,20 (m, 2H), 2,74 (s, 1,5H), 2,71 (s, 1,5H), 1,93 (s, 0,5H), 1,61 (d, 0,5H), 1,22 (d, 1,5H), 1,18 (d, 1,5H), 0,86 (s, 1,5H), 0,75 (s, 1,5H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 493,6 (m+1).
Primer 28
R'=2-indanil; R<3>=CO-3-tetrahidrofuranil
3-((lR)-l-Hidroksietil)(4S,3R)-4-(3-indan-2-iloksi-4-metoksifenil)-3-metiIciklopenttl
oksolan-3-il keton (smeša 2 dijastereomerana mestu vezivanjatetrahidrofuraniia)
Pripremljen od Intermedijera 51, korišćenjem postupka acilacije posredovane Hunig-ovom bazom, opisanog kod Intermedijera 74, upotrebom tetrahidrofuran-3-karbonil hlorida.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 8: 7,40-7,20 (m, 2H), 7,19-7,16 (m, 2H), 6,86-6,83 (m, 3H), 5,18 (c, IH), 4,15-4,04 (m, IH), 3,98-3,15 (m, 13H), 2,31-2,09 (m, 2H), 1,75 (br s, IH), 1,26 (t, 1,5H), 1,17 (t, 1,5H), 0,80 (d, 1,5H), 0,78 (s, 1,5H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 466.3 (m+1).
Primer 29
R'=2-indanil; R<3>=COCH2N(H)C02CH2Ph
N-{2-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-indan-2-iloksi-4-metoksifeiiil)-3-metilpirolidinil)-2~oksoetil} (fenilmetoksi) karboksamid
Pripremljen od Intermedijera 51, korišćenjem postupka vezivanja sa PvBrOP, opisanog u Primeru 23, upotrebom N-benziloksi-karbonil glicina.
'H NMR (CD3OD, 400 MHz, smeša konformera) 8: 7,35-7,20 (m, 9H), 6,91-6,88 (m, 3H), 5,22 (br s, IH), 5,10 (s, 2H), 4,07-3,09 (m, 15H), 1,13 (t, 3H), 0,78 (s, 3H).
Primer 30
R^-indairil; R<3>=COCH2NH2
l-|3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4SH-(3-indan-2iloksi-4-metol^ifenil)-3-metilpirolidinil)-2-aminoetan-l-on
Pripremljen od jedinjenja iz Primera 29 putem postupka debenzilacije opisanog kod Intermedijera 31.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 8: 7,22-7,19 (m, 2H), 7,18-7,15 (m, 2H), 6,84 (d, IH), 6,81 (d, 2H), 5,17 (c, IH), 3,96 (dd, 0,5H), 3,81-3,43 (m. 9H), 3,37-3,30 (m. 1,5H), 3,23-3,13 (m:2H), 2,99 (br s, 2H), 1,15 (t, 3H), 0,75 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 425,5 (m+1).
Primer 31
R'=2-indanil; R<3>=2-piridil
(lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-Indan-2-iloksi-4-metoksifeniI)3-metil-l-(2-piridil)pirolidin-3-iI]ctan-l-ol
Postupak vezivanja sa aril bromidom
U mešanu smešu Intermedijera 51 (115 mg, 0,31 mmol) i K2CO3(173 mg. 1,2 mmol) u suvom DMF (2 ml), dodat je, putem Šprica, 2-bromopiridin (0.12 ml, 1,2 mmol), na sobnoj temperaturi, u atmosferi azota. Dobijena smeša je zagrevana na 90 °C, tokom 22 časa, nakon čega je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Reakciona smeša je razblažena vodom
(60 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 30 ml). Pomešani organski ekstrati su isprani sonim rastvorom, osušeni pomoću l^SO^, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom za rektifikaciju lakih frakcija, upotrebom silika-gela i 100% EtOAc, čime je dobijeno jedinjenje Primera 31 (73,4 mg, 53%).
<*>H NMR (400 MHz, CDC13) 5: 8,18 (ddd, IH), 7,45 (ddd, IH), 7,26-7.21 (m, 2H), 7.19-7.16 (m, 2H), 6,92-6,88 (m, 2H), 6,83 (d, IH), 6,54 (ddd, IH). 6,40 (d, IH), 5,17 (c, IH), 3,86-3,78 (m, 5H), 3,70 (d, IH), 3,67 (d, IH), 3,38-3,30 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 445,4 (m+1).
Primer 32
R'>2-indanil; R<3>=3-piridil
(lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-Indan-2-iloksi-4-metoksifeniI)3-metil-l-(3-piridil)pirolidin-3-il]etan-l-ol
Postupak vezivanja katalizovan paladijumom
U rastvor Intermedijera 51 (79,3 mg. 0,22 mmol) i natrijum t-butoksida (29 mg, 0,31 mmol) u suvom toluenu (3 ml), sekvencijalno su dodati, uz mešanje, 3-bromopiridin (22,9 ml, 0,24 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (3,9 mg, kat.), i (R)-(+)-l.l"-bi-2-nafiol (5,4 mg, kat.), na sobnoj temperaturi, u atmosferi azota. Dobijena smeša je zagrevana na temperaturi od 80 °C, tokom tri časa, a zatim ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Reakciona smeša je zatim razblažena sa EtOAc (40 ml), isprana sonim rastvorom, osušena pomoću Na2S04, filtrirana i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prečišćen korišćenjem hromatografije za razdvajanje lakih frakcija na silika-gelu (40% EtOAc na heksanima) kako bi se dobilo jedinjenje Primera 32 (72,1 mg, 75%).
<]>H NMR (400 MHz, CDC13) 5: 7,98 (d, IH), 7,91 (d, IH), 7,24-7,15 (m, 4H), 7,11 (dd, IH), 6,90-6,82 (m, 4H),' 5,15 (c, IH), 3,81-3,72 (m, 4H), 3,70-3,62 (m, 4H), 3,35-3,11 (m, 5H), 1,24 (d, 3H), 0,84 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 445,3 (m+1).
Primer 33
R'=2-indanil; R<3>=2-pirimidil
(lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-lndan-2-iloksi-4-metoksifenil)3^ iI]etan-l-ol
Pripremljen od Intermedijera 51, putem postupka vezivanja sa aril bromidom, opisanog u Primeru 31.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 8,34 (dd, 2H), 7,24-7,18 (m, 2H), 7,16 (dd, 2H), 6,94-6.84 (m, 2H), 6,82 (c, lH)5i6,48 (t, IH), 5,16 (c, IH), 4,12-3,75 (m, 7H), 3,64 (br d. IH), 3,52 (d, IH), 3,36 (d, IH), 3,32 (d, IH), 3,24 (t, IH), 3,20 (t, IH), 1,23 (d, 3H), 0,83 (s. 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 446,4 (m+1).
Primer 34
R,=C5H9; R<3>=2-piridil
(lR)-l-I(3S,4S)-4-(3-Ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metiI-]-(2-piridil)pirolidin-3-il]etanl-ol
Pripremljen od Intermedijera 68. putem postupka vezivanja sa aril bromidom, opisanog u Primeru 31.
<J>H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 8,18 (ddd, IH), 7,46 (ddd, IH), 6,89-6,82 (m, 3H), 6,54 (ddd. IH), 6,40 (d, IH), 4,75 (c, IH), 3,92-3,65 (m, 8H), 3,36 (d, IH), 1,94-1,80 (m, 6H), 1,66-1,55 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 397,4 (m+1).
Primer 35
R^CsHj,; R<3>=3-piridiI
(lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-Ciklopentiloksi-4-metoksifeniI)-3-metil-l-(3-piridil)pi il]etanl-ol
Pripremljen od Intermedijera 68, postupkom vezivanja katalizovanog paladijumom. opisanim u Primeru 32.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 8,00 (d, IH), 7,93 (d, IH), 7,12 (dd, IH), 6,86-6,78 (m, 4H), 4,73 (c, IH), 3,85-3,59 (m, 8H), 3,12 (d, IH), 1,90-1,79 (m, 6H), 1,60-1,54 (m, 2H), 1,22 (d, 3H), 0,82 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 397,2 (m+1).
Primer 36
R'^-PhOKh; R<3>=C02CH3
Metil 3-((lR)-l-hidroksietiI)(3S,4S)-4-l4-metoksi-3-(4-fenoksifenoksi)fenil]-3-metilpirolidin-karboksilat
Postupak eterifikacije kriptanda
U suspenziju natrijum hidrida (16 mg 60% disperzije u mineralnom ulju, 0,40 mmol) u suvom anizolu (2 ml), uz mešanje je dodat Intermedijer 74 (100 mg, 0,32 mmol), deo po deo, u toku 5 minuta, uz razvoj H2, na sobnoj temperaturi, u atmosferi azota. Nakon mešanja u toku 30 minuta, dodati su tris[2-(2-metoksietoksi)etil]amin (10 ml, 0,03 mmol), bakar (I) hlorid (10 mg, 0,10 mmol) i 4-bromo-bifenil etar. i dobijena smeša je zagrevana pod deflegmatorom u toku 20 časova. Zatim je uklonjen anizol putem vakuumske destilacije. Ostatak je rastvoren u EtOAc (25 ml) i profiltriran kroz GF/F filter papir. Filtrat je ispran sa 1 N aq. HC1 (20 ml), osušen pomoću Na2S04, profiltriran i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen upotrebom radijalne hromatografije (2 mm silika pločica, heksani:EtOAc u odnosu 1:1) i dobijeno je jedinjenje Primera 36 u vidu ulja žućkasto-braon boje (40 mg, 26%).
'H NMR (400 MHz, CDC13; smeša konformera) 5: 7,30 (dd, 2H), 7,09-6,86 (m, 10H). 3,88-3,49 (m, 11H), 3.28 (d, 0.5H), 3,19 (d, 0,5H), 1,93 (br s, 0,5H), 1,83 (br s, 0,5H), 1,12 (dd. 3H), 0,71 (brs, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 478,2 (m+1).
Primer 37
R^-PhO) *Ph; R<3>=C02CH3: Drugi karbinolni dijastereomer
Metil 3-((lS)-l-hidroksietiI)(3S,4S)-4-[4-metoksi-3-(4-fenoksifenoksi)fenil]-3-
metilpirolidin-karboksiiat
Pripremljen od (lS)-karbinol izomera Intermedijera 75, postupkom eterifikacije kriptanda, opisanim u Primeru 36.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 5: 7.32 (t, 2H), 7,07 (dt, IH), 7,03-6.74 (m. 9H), 3,91-3,55 (m:9H), 3,35-3,17 (m, 3H), 2,16 (d, 0,5H). 1,38 (br s, 0:5H), 1,12 (d, 3H), 0,85 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 478,2 (m+1).
Primer 38
R,=(4-Ph)-Ph; R<3>=C02CH3
Metil 3-((lR)-l-hidrol«ietil)(3S,4S)-4-[4-metoksi-3-(4-fenilfenoksi)feniI]-3-metilpirolidin-karboksilat
Pripremljen od Intermedijera 74, postupkom eterifikacije kriptanda, opisanim u Primeru 36.
'H NMR (400 MHz, CDC13; smeša konformera) 6: 7,55 (d, 2H), 7,51 (d, 2H), 7,42 (l, 2H), 7,31 (t, IH), 7,05 (dt, IH), 6,98-6,92 (m, 4H), 3,87-3,54 (m, I IH), 3,29 (d50,5H), 3,19 (d, 0,5H), 1,64 (br s, 055H), 1,57 (br s, 0,5H), 1,14 (dd, 3H), 0,74 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 462,2 (m+1).
Primer 39
R<!>=(4-Ph)-Ph; R<3>=C02CH3: Drugi karbinolni dijastereomer
Metil 3-((lS)-l-hidroksietil)(3S,4S)-4-f4-metoksi-3-(4-fenilfenoksi)fenil]-3-metilpirolidin karboksilat
Pripremljen od (lS)-karbinol izomera Intermedijera 75. postupkom eterifikacije kriptanda, opisanim u Primeru 36.
<*>H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 5: 7,56 (d, 2H), 7,52 (dt, 2H), 7,42 (t:2H), 7,32 (t, IH), 7,10-6,94 (m, 5H), 3,93-3,58 (m, 9H), 3,38-3,18 (m, 3H), 1,13 (d, 3H), 0,88 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 462,2 (m+1).
Primer 40
R'=Ph; R<3>=C02CH3
Metil 3-((lR)-l-hidroksietiI)(3S,4S)-4-(4-metoksi-3-fenoksifenil)-3-metilpirolidinkarboksilat
Pripremljen od Intermedijera 74, postupkom eterifikacije kriptanda, opisanim u Primeru 36.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,32-7,26 (m, 3H), 7,02 (t, 2H), 6,94-6,88 (m, 3H), 3,85-3,49 (m, 1 IH), 3,27 (d, 0,5H), 3,18 (d, 0,5H), 1,12 (t, 3H), 0,71 (s, 3H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 386,3 (m+1).
Primer 41
R,=Ph; R<3>=C02CH3: Drugi karbinolni dijastereomer
Metil 3-((lS)-l-hidroksietil)(3S,4S)-4-(4-metoksi-3-fenoksifenil)-3-metilpirolidinkarboksilat
Pripremljen od (lS)-karbinol izomera Intermedijera 75. postupkom eterifikacije kriptanda. opisanim u Primeru 36.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,29 (t, 2H), 7,08-6,85 (m, 6H), 3,87-3,52 (m, 9H), 3,34-3,16 (m, 3H), 1,11 (d, 3H), 0,85 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 386,3 (m+1).
Primer 42
R^-fluorofenil; R<3>=C02CH3
Metil 3-((lR)-l-hidrol«ietiI)(3S,4S)-4-[3-(4-fluorofenoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidin-karboksilat
Pripremljen od Intermedijera 74, postupkom eterifikacije kriptanda, opisanim u Primeru 36.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 5: 7,05-6,84 (m, 7H), 3,89-3,45 (m, 11H), 3.28 (d, 0,5H), 3,18 (d, 0,5H), 1,13 (t, 3H), 0,71 (br s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 404,4 (m+1).
Primer 43
R^CH.CsHs; R<3>=C02CH3
Metil 3-((lR)-l-hidroksietiI) (3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifeniI]-3-metilpirolidin-karboksilat
Postupak eterifikacije sa K2CO3
U smešu Intermedijera 74 (50 mg, 0,16 mmol) i sprašenog K2C03(24,6 mg. 0.18 mmol) u suvom DMF (1 ml) uz mešanje se doda bromometilciklopropan (16,5 u.1,0,17 mmol) putem šprica na sobnoj temperaturi, u aunosferi azota. Dobijena smeša se zagreva na 65 °C u toku 24 časa a zatim se ostavi da se ohladi do sobne temperature. Reakciona smeša se zatim razblaži vodom (5 ml) i ekstrahuje sa Et20 (3 x 20 ml). Pomešani organski slojevi se osuše pomoću MgSO^, profiltriraju i koncentruju u vakuumu. Ostatak se prečišćava primenom radijalne hromatografije (1 mm silika pločice sa 30% EtOAc u heksanima) i dobija se jedinjenje Primera 43 u formi bistrog ulja (30 mg, 51%).
'H NMR (400 MHz, CDC13; smeša konformera) 6: 6,84-6,75 (m, 3H), 3,94-3,54 (m, 13H), 3.29 (d, 0,5H), 3,21 (d, 0,5H), 1,72 (br s, 0,5H), 1,65 (br s, 0,5H), 1,30 (c, IH), 1,13 (t, 3H), 0,73 (s, 3H);0.61 (c, 2H), 0,34 (c, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 364,3 (m+1).
Primer 44
R<1>=CH2C3H5; R<3>=C02CH3Dijastereomer
Metil 3-((lS)-l-hidroksietiI) (SS^SM-fS-fdklopropilmetoksiM-metoksifenilJ-S-m etilpirolidin-ka rboksilat
Pripremljen od (lS)-karbinol izomera Intermedijera 75, postupkom eterifikacije sa K2C03, opisanim u Primeru 43, upotrebom bromometilciklopropana.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 6,84-6,75 (m, 3H), 3,89-3,58 (m, 11H), 3,33-3,20 (m, 3H), 1,52 (br s, IH), 1,31 (c, IH), 1,11 (d, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,62 (m, 2H), 0,33 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 364,3 (m+1).
Primer 45
R'=2-tiazoI; R<3>=C02CH3
Metil 3-((lR)-l-hidroksietiI)(3S,4S)-4-(4-metoksi-3-(l,3-tiazol-2-iloksi)feniI)-3-metilpirolidin-karboksilat
Pripremljen od Intermedijera 74, postupkom eterifikacije sa K2C03, opisanim u Primeru 43, upotrebom 2-bromotiazola.
<]>H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konfonnera) 5: 7,24-7,12 (m, 3H), 6,96 (d, IH), 6,75 (d, IH), 3,89-3,52 (m, 11H), 3,29 (d, 0,5H), 3,20 (d, 0,5H), 1,74 (br s, )H), 1,14 (t, 3H), 0,74 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 393,2 (m+1).
Primer 46
R<1>=2-tiazoI;R<3>=C02CH3»Dijastereomer
Metil 3-((lS)-l-hidroksietiI)(3S,4S)-4-(4-metoksi-3-(l,3-tiazoI-2-iloksi)fenil)-3-metilpirolidin-karboksilat
Pripremljen od (lS)-karbinol izomera Intermedijera 75, postupkom eterifikacije sa K2C03, opisanim u Primeru 43.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) S: 7,17 (d, IH), 7,16 (d, IH), 7,11 (dd, IH), 6,97 (d, IH), 6,75 (d, IH), 3,86-3,59 (m, 9H), 3,42-3,19 (m, 3H), 1.52 (br s, IH), 1,14 (d, 3H), 0,87 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 393,2 (m+1).
Primer 47
R1=2-(N-Metil)benzimidazol; R3=C02CH3
Metil 3-((lR)-l-hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-benzimidazoI-2-iIoksi-4-metoksifeniI)-3-
metilpirolidin-karboksilat
Pripremljen od Intermedijera 74, postupkom eterifikacije sa K2CO3, opisanim u Primeru 43, sa 2-hloro-N-metilbenzimidazolom.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 8: 7,50 (d, IH), 7,29-7,10 (m, 5H), 6,95 (d, IH), 3,80-3,66 (m. 13H), 3,57 (t, IH), 3,29 (d, 0.5H), 3,20 (d, 0,5H), 2,04 (br s, IH), 1,13 (t. 3H), 0,77 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 440,2 (m+1).
Primer 48
R<!>=2-(N-Metil)benzimidazoI; R<3>=C02CH3: Dijastereomer
Metil 3-((lS)-l-hidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-benzimidazol-2-iIoksi-4-metoksifenil)-3-
metilpirolidin-karboksilat
Pripremljen od (lS)-karbinol izomera Intermedijera 75, postupkom eterifikacije sa K2COs, opisanim u Primeru 43, upotrebom 2-hloro-l -metil- lH-benzimidazola.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 6: 7,50 (d, IH), 7,50 (d, IH), 7,30-7,09 (m, 5H), 6,96 (d, IH), 3,87-3,63 (m, 12H), 3,40-3,21 (m, 3H), 1,15 (d, 3H), 0,91 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 440,2 (m+1).
Primer 49
R<I«>CH2CH2CH2Ph; R<3=>C02CH3
Metil 3-((lR)-l-hidroksietiI)(3S,4S)-4-(4-metoksi-3-(3-fenilpropoksi)feniI]-3-
metilpirolidin-karboksilat?
Pripremljen od Intermedijera 74, postupkom eterifikacije sa K2CO3, opisanim u Primeru 43, upotrebom 3-fenil-propil hlorida.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 6: 7,35-7,17 (m, 5H), 6,85-6,77 (m, 3H), 4,02 (dt, 2H), 3,90-3,52 (m, 11H), 3,30 (d, 0,5H)53,21 (d, 0.5H), 2,82 (t, 2H), 2,14 (p, 2H), 1,54 (br s, 0,5H), 1,49 (br s, 0,5H), 1,13 (t, 3H), 0,72 (s, 3H).
Primer 50
R<]>=CH2CH2CH2Ph; R<3>=C02CH3, Drugi karbinolni dijastereomer
Metil 3-((lS)-l-hidroksietiI)(3S,4S)-4-[4-metoksi-3-(3-fenilpropoksi)fenil)-3-
metilpirolidin-karboksilat
Pripremljen od (1 S)-karbinol izomera Intermedijera 75, postupkom eterifikacije sa K2C03, opisanim u Primeru 43, upotrebom (lS)-karbinol izomera Intermedijera 75.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 5: 7,33-7,19 trn, 5H), 6,84-6.78 (m, 2H), 6,72 (br s, IH), 4,01 (t, 2H), 3,90-3,56 (m, 9H), 3,34-3,23 (m, 3H), 2,82 (t, 2H), 2,15 (p, 2H). 1,11 (d, 3H), 0.89 (s, 3H).
Primer 51
R<1>=CH2CH2CH2CH2Ph;R<3>=C02CH3
Metil 3-((lR)-l-hidroksietil)(3S,4S)-4-|4-metoksi-3-(4-feniIbutoksi)fenil]-3-
metilpirolidin-karboksilat
Pripremljen od Intermedijera 74, postupkom eterifikacije sa K2CO3, opisanim u Primeru 43, upotrebom l-hloro-4-fenilbutana.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 6: 7,32-7,15 (m, 5H), 6,84-6,74 (m, 3H):4,00 (t, 2H), 3,89-3,51 (m, 11H), 3,30 (d, 0,5H), 3,22 (d, 0.5H), 2,69 (t, 2H), 1,90-1,79 (m, 4H), 1,41 (dd, IH), 1,13 (t, 3H), 0,73 (s, 3H).
Primer 52
R^CH^HiCHjCHjPh; R<3>=C02CH3, Drugi karbinolni dijastereomer Metil 3>((lS)-l-hidroksietil)(3S,4S)-4-[4-metoksi-3-(4-fenilbutoksi)fenil]-3-m etilpirolidin-ka rboksilat
Pripremljen od Intermedijera 74, postupkom eterifikacije sa K2C03. opisanim u Primeru 43, upotrebom l-hloro-5-fenilpentana.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 5: 7,32-7,16 (m, 5H), 6,83-6,70 (m, 3H), 3,99 (t, 2H), 3,90-3,58 (m, 9H), 3,34-3,21 (m, 3H)r 2,69 (t, 2H), 1,90-1,77 (m, 4H), 1,45 (br s, IH), 1,12 (d, 3ft), 0,90 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 442,4 (m+1).
Primer 53
R^CHaCHiPh; R<3>=C02CH3
Metil 3-((lR)-l-hidroksietil)(3S,4S)-4-[4-metoltsi-3-(2-feniletoksi)feniIJ-3-metilpirolidinkarboksilat
Pripremljen od Intermedijera 74, postupkom eterifikacije sa K2C03, opisanim u Primeru 43, upotrebom 2-fenetil-bromida.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 6: 7,39-7,23 (m, 5H), 6,84-6,78 (m, 311), 4,20 (t, 2H), 3,87-3,52 (m, 1 IH), 3,30 (d, 0,5H), 3,21 (d, 0,5H), 3,15 (t, 2H), 1,13 (t. 3H), 0,73 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 414,3 (m+1).
Primer 54
R<1>=CH2CHJPh; R<3>=C02CH3, Drugi karbinolni dijastereomer
Metil 3-((lS)-l-hidroksietil)(3S,4S)-4-[4-metoksi-3-(2-feniletoksi)feniI)-3-metilpiroIidin-karboksilat
Pripremljen od (lS)-karbinol izomera Intermedijera 75, postupkom eterifikacije sa K2CO3, opisanim u Primeru 43.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 5: 7,34-7,24 (m, 5H), 6,83 (d, IH). 6,79 (dd, IH), 6,73 (br s, IH), 4,18 (t, 2H), 3,89-3,56 (m, 9H), 3,31-3,20 (m, 3H), 3,15 (t, 2H), 1,11 (d, 3H), 0,89 (s, 3H).
Primer 55
R,=C5H9;R<3>=CH3-2-piridil
(lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-Ciklopentiloksi-4-metoksifeniI)-3-metil-l-(2-piridilmetil)pirolidin-3-
il]etan-l-ol
Posiupak reduktivrte aminacije
U rastvor Intermedijera 68 (32 mg, 0,1 mmol) i piridin 2-karboksaldehida (10 ml, 0,1 umol) u suvom 1,2-dihloroetanu (0,3 ml) uz mešanje je dodat natrijum triacetoksiborohidrid (30 mg, 0,14 mmol), u atmosferi azota, na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja u toku tri časa. reakcija je zaustavljena zasićenim vodenim rastvorom NaHCC»3 (0,1 ml) i mešana u toku 5 minuta. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (20 ml), isprana zasićenim vodenim rastvorom NaHCOs(20 ml) i sonim rastvorom (20 ml), a zatim osušena pomoću MgSO«, profiltrirana i koncentrovana u vakuumu. Dobijeno je jedinjenje Primera 55 u vidu žutog ulja (40,4 mg, 98%).
'H NMR (400 MHz, CDCI3) 8: 8,54 (ddd, IH), 7,68 (dt, IH), 7,43 (d, IH), 7,18 (ddd, IH), 6,79-6,73 (m, 3H), 4,75 (c, IH), 3,89-3,77 (m, 5H), 3,69 (q, IH), 3,59 (t, IH), 3,33 (t, IH), 3,16 (d, IH), 2,70 (t, IH), 2,21 (d, IH), 1,92-1,80 (m, 6H), 1,64-1,57 (m, 2H), 1,14 (d, 3H), 0,50, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 411,4 (m+1).
Primer 56
R^CsH«,; R<3>=CH2-3-piridil
(lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-Ciklopentiloksi-4-metok5ifenil)-3-metil-l-(3-piridilmetiI)piroIia^ iI]etan-l-ol
Pripremljen od Intermedijera 68, postupkom reduktivne aminacije, opisanim u Primeru 55, upotrebom piridin-3-karboksaldehida.
<J>H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 8,54 (d, IH), 8,51 (dd, IH), 7,68 (d, IH), 7,26 (dd, IH), 6.78-6,71 (m, 3H), 4,74 (C, IH), 3,86-3,78 (m, 4H), 3,68 (q. IH), 3,64 (d, IH), 3,53 (t, IH), 3,22 (t, IH), 3,05 (d, IH), 2,62 (t, IH), 2,14 (d, IH), 1,92-1,78 (m, 6H), 1,64-1,56 (m, 2H), 1,12 (d. 3H), 0,50 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 411,4 (m+1).
Primer 57
R^CsH,;R<3>=CH2-4-piridil
(lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-Ciklopentiloksi-4-metoksifeniI)-3-metil-l-(4-piridilmetil)pirolidin-^ il]etan-l-ol
Pripremljen od Intermedijera 68, postupkom reduktivne aminacije, opisanim u Primeru 55, upotrebom piridin-4-karboksaldehida.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 8,54 (d, 2H), 7,27 (d, 2H). 6,79-6,72 (m, 3H), 4,74 (c, IH), 3,86-3,74 (m, 4H), 3,70 (q, IH), 3,64 (d, IH), 3,55 (t, IH), 3,23 (t, IH), 3,06 (d. IH). 2,64 (t, IH), 2,15 (d, IH), 1,92-1,80 (m, 6H), 1,65-1,58 (m, 2H), 1,14 (d, 3H), 0,52 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 411,4 (m+1).
Primer 58
R^CsHs; R<3>=CH2CH2C02CH2Ph
Fenilmetil 3-(3-((lR)-l-hidroksietil)(3S,4S)-4(3-cikIopentiloksi-4-metoksifeniI)-3-metil piroIidinil]propanoat
U rastvor benzil akrilata (19,4 mg, 0,12 mmol) u suvom DMF (0,1 ml) uz mešanje je dodat Intermedijer 68 (12,8 mg, 0,04 mmol) i sprašeni K2CO3(26,5 mg. 0,18 mmol), u atmosferi azota. Dobijena smeša je ostavljena da se meša na temperaturi od 80 °C tokom 16 časova, a zatim ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Reakciona smeša je razblažena sa CH2CI2(20 ml), isprana vodom, potom zasićenim vodenim rastvorom NaHC03, a potom sonim rastvorom. Nakon ovoga je osušena pomoću Na2S04, profiltrirana i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prečišćen primenom hromatografije za rektifikaciju lakih frakcija na silika-gelu, sa smešom EtOAc i heksana u odnosu 2:1. Dobijeno je jedinjenje Primera 58 (11,7 mg, 60%).
'H NMR (400 MHz, CDCI3) 6: 7,37-7,31 (m, 5H), 6,81-6,72 (m, 3H), 5,14 (q, 2H), 4,76 (c, IH), 3,87-3,81 (m, 4H), 3,65 (q, IH), 3,54 (t, IH), 3,31 (t, IH), 3,15 (d, IH), 2,82 (dt, 2H), 2,62-2,54 (m, 3H), 2,08 (d, IH), 1,91-1,81 (m, 6H), 1,66-1,56 (m, 2H), 1,15 (d, 3H), 0,48 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 482,3 (m+1).
Primer 59
R^CsHg; R<3>=CH2CH2C02H
3-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-cikJopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil] propionska kiselina
Pripremljen od jedinjenja iz Primera 58 putem postupka debenzilacije opisanog kod Intermedijera 31.
'H NMR (400 MHz, CDCI3) 5: 6,82-6,71 (m, 3H), 4,80 (c, IH), 4,06-3,15 (m, 1 IH), 2,73 (br s, 2H), 1,91-1,74 (m, 6H), 1,63-1,53 (m, 2H), 1,14 (d, 3H), 0,68 (s, 3H).
Intermedijer 60
R^CsHj; R<3>=CH2C02CH2Ph
Fenilmetil 2-[3-((lR)-l-hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metolcsifeniI)-3-metilpirolidiniljacetat
Dobijen iz Intermedijera 68, putem postupka povezivanja posredovanog Hunig-ovom bazom, opisanog kod Intermedijera 74, korišćenjem benzil bromoacetata.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 7,41-7,32 (m, 5H), 6,82-6,73 (m, 3H), 5,18 (q, 2H), 4,77 (c, IH), 3,82 (s, 3H), 3,68 (q, IH), 3,59 (t, IH), 3,52 (d, IH), 3,36-3,30 (m, 2H), 3,24 (d, IH), 2,88 (t, IH). 2,31 (d, IH), 1,93-1,80 (m, 6H), 1,65-1,56 (m, 2H), 1,16 (d, 3H), 0,53 (s, 3H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 468,3 (m+1).
Primer 61
R'^CsH,; R<3>=CH2C02H
2-[3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifeniI)-3-metilpirolidiniljsirćetna kiselina
Pripremljen od jedinjenja iz Primera 60 putem postupka debenzilacije opisanog kod Intermedijera 31.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 6,77-6,68 (m, 3H), 5,56 (br s, IH), 4,77 (c, IH), 3,99-3,85 (m, 4H), 3,82-3,59 (m, 7H), 2,88 (br s, IH), 1,91-1,75 (m, 6H), 1,59-1,51 (m, 2H), 11,1 (d, 3H), 0,67 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, negativan): Da/e 376,2 (m-1).
Primer 62
R^CsH«,; R<3>=COCH(OAc)Ph
2-[(3R)-3-((lR)-l-Hidroksietil)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpiroIidinilJ-2-okso-l-feniletil acetat
Pripremljen od Intermedijera 68 (104 mg, 0,33 mmol) i hlorida O-acetil bademove kiseline (75 ul, 0,33 mmol) putem postupka acilacije opisanog u Primeru 7. Dobijeno je jedinjenje Primera 62 (149 mg, 100%).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8: 7,60-7,37 (m, 5H), 6,82-6,70 (m, 3H), 6,08 (m, IH), 4,76 (m.
IH), 4,05-3,32 (m, 7H), 3,81 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 1,95-1,53 (br m, 5H), 1,13 i 0,51 (dubleti, 3H, konformeri), 0,79 i 0,41 (singleti, 3H, konformeri).
Primer 63
R<]>=C5H9;R<3>=COCH(OH)Ph.
l-[(3R)-3-((lR)-l-HiđroksietiI)^-(3-cikIopentiloksi-4-metoksifeniI)-3-m
hidroksi-2-feniletan-l -on
Dobijen od jedinjenja iz Primera 62 putem postupka hidrolize pomoću LiOH, opisanog kod Intermedijera 5, čime je dobijeno naznačeno jedinjenje Primera 63 u vidu bele pene (99 mg, 66%).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 5: 7,41-7,26 (m, 5H), 6,80-6,41 (m, 3H), 5,16-5,07 (m, IH). 4,75-4,54 (multipleti, IH, konformeri i dijastereomeri), 4,06-2,80 (m, 7H)}3,81 i 3,79 i 3.78 (singleti, 3H, konformeri i dijastereomeri), 1,95-1,55 (br m, 5H), 1,15 i 1,02 (dubleti, 3H, konformeri), 0,77 i 0,75 i 0,46 i 0,38 (singleti, 3H, konformeri i dijastereomeri).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 454,5 (m+1).
Primer 64
R^CsHg; R<3>=COCH2OCH2Ph
1- [3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-ciklopenffl^ 2- (fenilmetoksi)etan-l-on
Pripremljen od Intermedijera 68 (176 mg, 0,574 mmol) putem postupka sa Hunig-ovom bazom opisanog kod Intermedijera 74, korišćenjem benziloksiacetil hlorida (31 u.1, 0,22 mmol, 2eq.), čimcje dobijeno bistro, bezbojno ulje (79 mg, 29°/o).
'H NMR (400 MHz, CDC13>smeša konformera) 5: 7,38-7,28 (m, 5H), 6,77-6,73 (m, 3H), 4,73-4,71 (m, IH), 4,65-4,64 (m, 2H), 4,14-3,19 (c, 12H), 2,07-1,56 (m, 8H), 1,16-1.09 (dd, 3H), 0,72 (s, 3H).
Primer 65
R^CgHs; R<3>=COCH2OH
1- (3-((lR)-l-HidroksietiJ)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifeniI)-3-metilpiroIidinii]-2- hidroksietan-l -on
Pripremljen od jedinjenja iz Primera 64 putem postupka debenzilacije opisanog kod Intermedijera 31. Dobija se bela, čvrsta supstanca (47 mg, 73%).
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 6,82-6,76 (m, 3H), 4,75-4,73 (m, IH), 4,15-3,04 (c, 12H), 1,92-1,61 (m, 9H), 1,27-1,24 (dd, 3H), 0.76 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 378,2 (m+1).
Primer 66
R'^CsHs; R<3>=(S)-COCH(OAc)CH3
2-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metok^ifeni0 metilpiroIidinil](lS)-l-metil-2-oksoetil acetat
Pripremljen od Intermedijera 68 (106 mg, 0,330 mmol) putem postupka acilacije opisanog u Primeru 7, uz upotrebu (S)-(-)-2-acetoksipropionil hlorida (84 u.1, 0,66 mmol, 2 eq.). Dobijeno je bistro, bezbojno ulje koje nije dodatno prečišćavano.
Primer 67
R<J>=C5H9; R<3>=(S)-COCH(OH)CH3
l-[3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-meti!pirolidinil](2S)-2-hidroksipropan-l-on
Sirovom proizvodu iz Primera 66 je skinuta zaštita putem postupka sa LiOH koji je opisan kod Intermedijera 5, da bi se dobio proizvod Primera 67 u vidu bele čvrste supstance (22 mg. 17% za dva koraka).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 6,82-6.76 (m, 3H). 4,75-4,73 (m, IH), 4,38-4,35 (m, IH), 3,88-3,55 (c, 9H), 3,39-3,25 (dd, IH), 1,92-1,58 (m, 9H), 1,41-1,36 (dd, 3H), 1,18-1,14 (dd, 3H), 0,77-0,76 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 392,3 (m+1).
Primer 68
R<I>=CSH9; R<3>=CO(CH2CH2)OAc
{[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifeniI)-3-metilpiroIidinil]karbonil}-ciklopropil acetat
Intermedijer 68 (97,6 mg, 0,306 mmol) je acilovan postupkom acilacije koji je opisan kod Primera 7, korišćenjem 2-acetoksi-2-ciklopropanetanoil hlorida (99 mg, 0,61 mmol, 2 eq), da bi se dobilo bistro, bezbojno ulje (77 mg. 56%).
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 5: 6,78-6,71 (m, 3H), 4,72-4,71 (m, IH), 3,80-3,36 (c, 10H), 2,08 (s, 3H), 1,90-1,50 (m, 11H), 1,16-1,11 (d, 3H), 0,96 (br s, IH), 1,18-1,14 (dd, 3H), 0,70 (s, 3H).
Primer 69
R^CjHj; R<3>=CO(CH2CH2)OH 3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiIoksi-4-metoksifeniI)-3-metilpirolidini) hidroksiciklopropil keton
Jedinjenje iz Primera 68 (77 mg) je hidrolizovano putem LiOH postupka koji je opisan kod Intermedijera 5, da bi dobio proizvod Primera 69 u vidu bele čvrste supstance (34 mg, 44% za dva koraka).
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 5: 6,80-6,75 (m, 3H), 4,74-3,33 (c, 10H), 2,30 (br s, IH), 1,93-1,56 (m, 8H), 1,37-0,89 (m, 8H), 0,74-0,72 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 404,4 (m+1).
Primer 70
R'=C5H9; R<3>=COCH(OAc)(CH3) CH3
2-[3-((lR)-l-Hidrok5ietil)(3S,4S)-4-(3-cikIopentiloksi-4-metoksifeniI)-3-metilpirolidinil]-l,l-dimetil-2-oksoetil acetat
Intermedijer 68 (124 mg, 0,389 mmol) je acilovan postupkom acilacije koji je opisan kod Primera 7, korišćenjem (+)-2-acetoksi-2-metilpropionil hlorida (11 ul, 0,78 mmol, 2 eq). Dobijeno ulje nije dalje prečišćavano.
Primer 71
R<J>=C5H9; R<3>= COCH(OH)(CH3) CH3
1- [3-((lR)-l-Hidrok5ietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil]-2- hidroksi-2-metilpropan-l-on
Jedinjenje iz Primera 70 je konvertovano putem LiOH postupka koji je opisan kod Intermedijera 5, da bi dobio proizvod Primera 71 u vidu bele čvrste supstance (47 mg, 30%).
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 6,79-6,75 (m, 3H), 4,75 (br s, IH), 4,49 (brs, IH), 3,91-3,48 (c, 10H), 1,90-1,46 (ra, 14H), 1,18-1,14 (dd, 3H), 0,77-0,74 (d, 3H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 406,3 (m+1).
Primer 72
R^CsEU; R3=COCO>2CH3
Metil 2-[3-((lR)-l-hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-cikIopentiloIui-4-metoksifenil)-3-metiI piroIiđiniI]-2-oksoacetat
Intermedijer 68 (57,5 mg, 0,180 mmol) je konvertovan putem DIEA postupka koji je opisan kod Intermedijera 32, korišćenjem meti) oksalil hlorida da bi se dobio proizvod Primera 72 u vidu bistrog, bezbojnog ulja (26,8 mg, 36%).
<!>H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 6,81-6,77 (m, 3H), 4,75-4,74 (m, IH), 4,12-3,45 (c, 13H), 1,91-1,52 (m, 8H), 1,18-1,13 (dd, 3H). 0,78-0,75 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 406,4 (m+1).
Primer 73
R^CsHg; R<3>=COC02H
2-I3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil]-2-okso-sirćetna kiselina
Jedinjenje iz Primera 72 (46,8 mg, 0,116 mmol) je konvertovano putem LiOH postupka koji je opisan kod Intermedijera 5, da bi se dobio proizvod Primera 73 u vidu bistrog, bezbojnog filma (34 mg, 76%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 5: 6,82-6,76 (m, 3H), 4,75-4,73 (m, IH), 4,43-3,49 (c, 10H). 1,92-1,58 (m, 8H), 1,19-1,16 (dd, 3H), 0,78-0,76 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, negativan): Da/e 390,2 (m-1).
Primer 74
R,=C5H9; R<3>=COCONH2
2-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifeniI)-3-metiIpiroIidinil]-2-okso-acetamid
Jedinjenje iz Primera 72 (7,1 mg, 0,014 mmol) je rastvoreno u THF (0,5 ml), nakon čega je dodat NH4OH (0,5 ml), pa je reakcioni sud zapečaćen i mešan tokom 2 časa na sobnoj temperaturi. TLC (smeša EtOAc i heksana u odnosu 1:1) je pokazao daje cclokupni početni materijal izreagovao. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (20 ml), a organski slojevi su isprani slanom vodom (2x15 ml). Organski sloj je osušen preko Na2S04i koncentrovan u vakuumu, da bi se dobilo bistro bezbojno ulje (6,6 mg, 117%).
'H NMR (400 MHz, CDCI3) 6: 7,36 (br s, IH), 6,82-6,79 (m, 3H), 5,53 (br s, IH), 4,76-4,75 (m, IH), 4,44-3,47 (c, 10H), 1,92-1,58 (m, 8H), 1,18-1,17 (d, 3H), 0,78-0,74 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, negativan): Da/e 389,1 (m-1).
Primer 75
R'=PhC=CCH2; R<3>=COCONH2
2-{(3S,4S)-3-((R)-l-Hidroltsietil)-4-[4-meto^ metilpirolidin-l-iI}-2-okso-acetamid
Dobijen acilacijom Intermedijera 73 sa meti) oksalil hloridom putem DIEA postupka koji je opisan kod Intermedijera 32; uklanjanjem t-butil grupe postupkom koji je opisan kod Intermedijera 72; O-alkilacijom sa Intermedijerom 90 postupkom eterifikacije sa K2CO3koji je opisan kod Primera 43; i postupkom amidacije koji je opisan kod Primera 74.
<]>H NMR podaci 5: 7,28-7,42 (m, 5H); 7,08 (sd, IH); 6,83-6,87 (m, 2H); 5,45 (bs, IH); 5.0 (s, 2H); 4,42-4,48 (2d, 0,5H); 4,26 (t, 0,5H); 3,72-4,01 (m, 3,5H); 3,89 (s, 3H); 3,50-3,70 (m, IH); 3,44 (d, 0,5H); 0,96-0,99 (dd, 3H); 0,71 (d, 3H).
Primer 76
R^-CFsPhCsCCH,;R<3>=COCONH2
2-((3S,4S)-3-((R)-l-HidroksietiI)-4-{4-metoksi-3-[3-(4-trifluoromctil-feniI)prop-2-iniloksi]-fenil}-3-metilpirolidin-l-il)-2-okso-acetamid
Dobijen kao Što je opisano u Primeru 75. korišćenjem Intermedijera 92 kao reagensa za O-alkilaciju.
'H NMR podaci 6: 7,50-7,61 (m, 4H); 7,04 (s, IH); 6,85-6,91 (m, 2H); 5,69 (bs, IH); 5,00 (s, 2H); 4,42-4,49 (2d:0,5H); 4,26 (t, 0:5H); 3,69-4.07 (m, 5H); 3,90 (s, 3H): 3,45-3,58 (m, IH): 1,04-1,07 (dd,3H);0,73 (d, 3H).
Primer 77
R<1>=4-FPhOCH2CH2CH2; R<3>=COCONH2
2-[(3S,4S)-4-{3-[3-(4-Fluorofenoksi)propoksi]-4-metoksifenU}-3-((R)-l-hidrok^ metilpirolidin-l-iI]-2-okso-acetamid
Dobijen kao što je opisano u Primeru 75, korišćenjem l-(3-hloropropoksi)-4-fiuorobenzena kao reagensa za alkilaciju.
'H NMR podaci 8: 6,93-6,99 (m, 2H); 6,82-6,88 (m, 5); 5,44 (s, IH); 4,40 (dd, 0,5H); 4,14-4,22 (m, 5H); 3,83 (s, 3H); 3,69-4,04 (m, 5H); 3,56 (d, 0.5H); 2,28 (kvint, 2H); 1,16 (dd, 3H);
0,75 (d, 3H).
Primer 78
R^CHjCsHs; R<3>=COCONH2
2-[(3S,4S)-4-(3-Ciklopropilmetoksi-4-metoksifenil)-3-((R)-l-hidroksietil)-3-merilpirolidin-l-il]-2-okso-acetamid
Dobijen kao što je opisano u Primeru 75, korišćenjem ciklopropilmetil bromida kao reagensa za alkilaciju.
'H NMR podaci 8: 6,80-6,81 (m, 3H); 5,50 (bs, IH); 4,40 (2d, 0.5H); 4,23 (t, 0,5H); 3,68-4,05 (m, 7H); 3,84 (s, 3H); 1,40 (t, IH); 1,17 (sd, 3H); 0,76 (d, 3H); 0,61-0,67 (m, 2H); 0,33-0,38 (m,2H).
Primer 79
R'=2-indanil; R<3>=COCONH2
2-{(3S,4S)-3-((R)-l-Hidrol«ietil)-4-[3-(indan-2-jloksi)-4-metoksifenil]-3-metilpiTO
i]}-2-okso-acetamiđ
Dobijen kao Što je opisano u Primeru 75, korišćenjem 2-bromoindana kao reagensa za alkilaciju.
'H NMR podaci 8: 7,16-7,24 (m, 4H); 6,84-6,87 (m, 3H); 5,51 (s, IH); 5,17-5,20 (m, IH); 4,42-4,5 (2d, 0,5H); 4,24 (t, 0,5H); 3.60-4,06 (m, 6H); 3,81 (s, 3H); 3,20-3,40 (m, 4H); 1,20 (sd, 3H); 0,78 (d, 3H).
Primer 80
R<I>=C5H9; R<3>=COCONHCH3
2-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil]-N-metil-2-oksoacetamid
Jedinjenje iz Primera 72 (17,3 mg, 0,0427 mmol) je rastvoreno u THF (0,8 ml). Dodat je metilamin (40% u vodi, 0,5 ml), pa je reakcioni sud zapečaćen i mešan tokom 1 časa na sobnoj temperaturi. TLC (smeša EtOAc i heksana u odnosu 3:1) je pokazao da je celokupni početni materijal izreagovao. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (20 ml), a organski slojevi su isprani slanom vodom (2 x 15 ml). Organski sloj je osušen preko Na2S04i koncentrovan u vakuumu, da bi se dobilo bistro bezbojno ulje (16,9 mg. 97%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 7,59 (br s, IH), 6,80-6,79 (m, 3H), 4,75-4,73 (m, IH), 4,47-3,46 (c, 10H), 2,89-2,87 (dd, 3H), 1,91-1,57 (m, 8H), 1,18-1,16 (dd, 3H). 0,76-0,73 (d, 3H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 405,1 (m+1).
Primer 81
R^CjHg;R<3>=COCO-piperidin
1- [3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil]-2- piperidiletan -1,2-dion
Jedinjenje iz Primera 72 (25,4 mg, 0,0626 mmol) je rastvoreno u THF (0,8 ml). Dodat je piperidin (213 ul, 2,15 mmol, 34 eq), pa je reakcioni sud zapečaćen i zagrevan na temperaturi od 53 °C tokom 12 časova. TLC (100% EtOAc) je pokazao da je nastala mala količina proizvoda. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (20 ml), a organski slojevi su isprani sa 2 N HC1 (2x15 ml), 1 N NaOH (15 ml) i slanom vodom (2x15 ml). Organski sloj je osušen preko Na2S04i koncentrovan u vakuumu, da bi se dobilo bistro bezbojno ulje (1,2 mg, 4%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 6,82-6,76 (m, 3H), 4,75 (m, IH), 4,01-3,27 (c, 14H), 1,89-1,59 (m, 14H), 1,18-1,13 (dd, 3H), 0,78-0,74 (d, 3H).
Primer 82
R^CsHj; R<3>=COCONHCsH9
2-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciWopentiloksi-4-metoksifenil)-^ N-ciklopentil-2-oksoacetamid
Jedinjenje iz Primera 72 (20,9 mg, 0,0515 mmol) je rastvoreno u THF (0,8 ml). Dodat je ciklopentilamin (211 u.1, 2,13 mmol, 41 eq), pa je reakcioni sud mešan tokom 42 časa na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (20 ml), a organski slojevi su isprani sa 2 N HC1 (2x15 ml), 1 N NaOH (15 ml) i slanom vodom (2x15 ml). Organski sloj je osušen preko Na2S04i koncentrovan u vakuumu. Dobijeno ulje je prečišćeno hromatografijom na silika gelu (100% EtOAc), čime je dobijeno bistro bezbojno ulje (14,0 mg, 59%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 5: 7,57-7,53 (br s, IH), 6,80-6,78 (m, 3H), 4,76-4,73 (br s, 111), 4,48-3,44 (c, 9H), 2,04-1,48 (m, 18H):1,18-1,16 (đ, 3H), 0,77-0,73 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, negativan): Da/e 457,2 (m-1).
Primer 83
R^CsHj; R<3>= COCONHCHjPh
2-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3^ 2-okso-N-benzilacetamid
Jedinjenje Primera 83 je dobijeno putem postupka koji je opisan kod Primera 82. korišćenjem benzilamina, da bi dobilo bistro, bezbojno ulje (9,4 mg, 47%).
<l>H NMR (400 MHz, CDC13) 6: 7,96-7,92 (br s, IH), 7.36-7,25 (m, 3H), 4,75 (br s, IH), 4,49-4,47 (d, 2H), 4,28-3,46 (c, 9H), 1,93-1,61 (m, 8H). 1,19-1,16 (dd, 3H), 0,78-0,74 (d, 3H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 481,4 (m+1).
Primer 84
R<1>=C5H9;R<3>=(R)-COCH(C4H9)NHC02CH2Ph
N-{(lR)-2-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil]-l-butil-2-oksoetiI}(fenilmetoksi)karboksamid
Intermedijer 68 (39,5 mg, 0,129 mmol) je konvertovan putem DIEA postupka koji je opisan kod Intermedijera 32, da bi se dobilo bistro, bezbojno ulje (59,0 mg, 80%).
'H NMR (400 MHz, CDCh, smeša konformera) 8: 7,36-7,26 (m, 5H), 6,82-6,71 (m, 3H), 5,71-5,68 (dd, IH), 5,12-5,06 (m, 2H), 4,73 (m, IH), 4,49-4,47 (m, IH), 4,12-2,58 (c, 8H), 2,03-1,25 (m; I6H), 1,16-1,14 (dd, 3H), 0,92-0,84 (m, 3H), 0,73-0,72 (d, 3H).
Primer 85
R'=C5H9; R<3>=(R):COCH(NH2)C4H9
(2R)-l-[3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiIoksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil]-2-aminoheksan-l-on
Jedinjenje iz Primera 84 (59 mg, 0,10 mmol) je konvertovano putem postupka debenzilacije koji je opisan kod Intermedijera 31, da bi se dobilo jedinjenje Primera 85 u vidu belog praha (43 mg, 95%).
'H NMR (CD3OD, 400 MHz. smeša konformera) 8: 6,90-6,83 (m, 3H), 3,85-3,30 (c, 10H), 2,00-1,37 (m, 14H), 1,14-1,11 (dd, 3H), 1,10-0,92 (dt, 3H), 0,77 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 433,5 (m+1).
Primer 86
? R^CsH.,; R<3>=(R)-COCH(i-Pr)NHC02CH2Ph
N-{(lR)-2-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil)-l-(metiletil)-2-oksoetil}(fenilmetoksi)-karboksamid
Intermedijer 68 (43,7 mg. 0,143 mmol) je acilovan postupkom Hunigove baze koji je opisan kod Intermedijera 74, korišćenjem Z-D-Val-OSu (54,6 mg, 0,15 mmol. 1,1 eq), da bi se dobilo bistro, bezbojno ulje (38,9 mg, 49%).
"H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 6: 7,36-7,33 (m, 5H), 6,80-6,71 (m, 3H), 5,62-5,59 (d, IH), 5,10-5,06 (m, 2H), 5,84-5,72 (m, IH), 4,12-2,68 (c, 10H), 2,03-1,52 (m, 9H), 1,18-1,14 (dd, 3H), 1,04-0,92 (m, 7H), 0,73-0,70 (d, 3H).
Primer 87
R^CgHs; R<3>=(R)-COCH(i-Pr)NH2
(2R)-l-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifeniI)-3-metilpirolidiniI]-2-amino-3-metilbutan-l-on
Jedinjenje iz Primera 86 (38,9 mg, 0,070 mmol) je konvertovano postupkom debenzilacije koji je opisan kod Intermedijera 31, da bi se dobila prozirna čvrsta supstanca (26 mg, 88%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 6: 6,42-6,33 (m, 3H), 4,36 (m, IH), 3,62-2,80 (c, 10H), 2,81-2,68 (m, IH), 1,42-1,08 (m, 9H), 0,78-0,65 (m, 9H), 0,24 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 419,5 (m+1).
Primer 88
R<I>=C5H9; R<3>=(S)-COCH(OAc)C6H„
2-(3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciM^^ metilpirolidinil](lS)-l-cikloheksiI-2-oksoetil acetat
Intermedijer 68 (41,2 mg, 0,129 mmol) je acilovan postupkom Hunigove baze koji je opisan kod Intermedijera 74, korišćenjem hlorida (S)-(+)-acetoksiheksahidrobademove kiseline (625 ul, 0,4121 M u CH2CI2, 2 eq) da bi se dobilo jedinjenje Primera 88 u vidu bistrog bezbojnog ulja (40,5 mg, 63%).
<!>H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 5: 6,78-6,77 (m, 3H), 4,84-4,72 (m, 2H), 4,12-3,11 (m, 9H), 2,10 (d, 3H), 2,02-1,68 (m, 15H), 1,38-0,99 (m, 10H), 0,81-0,74 (d, 3H).
Primer 89
R<1>bCsH»;R<3>=(S)-COCH(OH)C6Hn
l-[3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidiniI]-(2S)-2-cikIoheksil-2-hidroksietan-l-on
Jedinjenje iz Primera 88 (40,5 mg, 0,0807 mmol) je konvertovano postupkom LiOH hidrolize koji je opisan kod Intermedijera 5. da bi se dobilo jedinjenje Primera 89 u vidu bistrog, bezbojnog ulja (26,9 mg, 72%).
] H NMR (400 MHz, CDCh, smeša konformera) 5: 6,80-6,78 (m, 3H), 4,73 (m, IH), 4,14-4,06 (m, IH), 3,83-2,99 (c, 9H), 1,91-1,36 (m, 17H), 1,35-1,11 (m, 7H), 0,79-0,78 (d, 3H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 460,3 (m+1).
Primer 90
R<1=>C5H9; R3=(R)-COCH(OAc)C6H„
l-|3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-c^ metilpiroIidiniI](2R)-2-cikJoheksil-2-acetoksietan-l-on
Intermedijer 68 (43,1 mg, 0,135 mmol) je konvertovan postupkom Hunigove baze koji je opisan kod Intermedijera 74, korišćenjem hlorida (R)-(-)-acetoksiheksahidrobademove kiseline (368 ul, 0,734 M u CH2CI2, 2 eq) da bi se dobilo bistro, bezbojno ulje (59,9 mg. 88%).
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 5: 6,84-6.64(m, 3H), 4,78-4,76 (m, 2H). 4,12-2,65 (c, 9H), 2,11 (d, 3H), 2,10-1,51 (m, 15H), 1,38-0,98 (m, 10H), 0,73-0,65 (d, 3H).
Primer 91
R'^CsIb; R3=(R)-COeH(OH)C6H„
(2R)-l-[3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil]-2-cikloheksil-2-hidroksietan-l-on
Jedinjenje iz Primera 90 (59,9 mg, 0,119 mmol) je konvertovano postupkom LiOH hidrolize koji je opisan kod Intermedijera 5, da bi se dobio bistri, bezbojni film (46,6 mg, 84%).
'H NMR (400 MHz , CDCI3, smeša konformera) 8: 6,85-6,74 (m, 3H), 4.79-4.72 (m, IH), 4,13-4,07 (m, IH), 3,87-3,01 (c, 9H), 1,96-1,34 (m, 17H), 1,34-1,08 (m, 7H), 0,78-0,77 (d. 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 460,4 (m+1).
Primer 92
R1=C5H9;R3=(S)-COCH(Ci|H9)NHC02CH2Ph
N-{2-[3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpiroIidinil]-(lS)-l-butil-2-oksoetiI}(fenilmetoksi)karboksamid
Intermedijer 68 (40,6 0,125 mmol) je konvertovan postupkom Hunigove baze koji je opisan kod Intermedijera 74, korišćenjem Z-L-Ble-ONp (53 mg, 0,15 mmol, 1,1 eq) da bi se dobilo jedinjenje Primera 92 u vidu bistrog, bezbojnog ulja (50,4 mg, 71%).
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 6: 7.36-7,25 (m, 5H), 6,80-6,75 (m, 3H). 5,74-5,72 (dd, IH), 5,10-5,06 (m, 2H), 4,74-4,53 (m, IH), 4,13 (m, IH), 4,13-3,35 (c, 8H), 1,95-1,24 (m, 16H), 1,14-1,13 (d, 3H), 0,93-0,87 (m, 3H), 0,74 (s, 3H).
Primer 93
Rl=C£b; R<3>=(S)-COCH(C4H9)NH2
l-(3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifen metilpirolidini]](2S)-2-aminoheksan-l-on
Jedinjenje iz Primera 92 (50,4 mg, 0,0889 mmol) je podvrgnuto postupku debenzilacije koji je opisan kod Intermedijera 31, da bi se dobilo jedinjenje Primera 93 u vidu bele čvrste supstance (31,7 mg, 82%).
<J>H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 5: 5,89-6,74 (m, 3H), 4,83-4,75 (m, IH), 4,40-3,32 (c, 10H), 1,99-1,68 (m, 14H), 1,14-1,12 (m, 3H), 1,04-0,95 (d, 3H), 0,91-0,88 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 433,5 (m+1).
Primer 94
R<1>=C5H9;R<3>=(R)-COCH(OAc)(CH2)3CH3
(lR)-2-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifeniI)-3-metiIpirolidiml]-l -butil-2-oksoetil acetat
Dobijen iz Intermedijera 68 korišćenjem postupka vezivanja sa Hunigov-om bazom koji je opisan kod Intermedijera 74, korišćenjem (lR)-l-(hlorokarbonil)pentil acetata.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 5: 6,81 (m, 2H), 6,79-6,69 (m, 3H), 5,10-5,02 (m. IH), 4,79- 4,73 (m, IH), 4,14-3,18 (c, 9H), 2,14 (d, 3H), 1,94-1,76 (m, 8H), 1.53-1,34 (m, 4H), 1,20 (dd, 2H), 0,96-0,86 (m, 3H), 0,74 (d, 3H).
Primer 95
R^CsH<g>;R<3>=(R)-COCH(OH)(CH2)3CH3
(2R)-l-[3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-cikIopentiIoksi-4-metoksifeniI)-3-metilpirolidinil]-2-hidroksietan-l-on
Jedinjenje iz Primera 94 (5 mg, 0,11 mmol) je hidrolizovano postupkom LiOH hidrolize, da bi se dobilo jedinjenje Primera 95 u vidu bistrog filma (2,5 mg, 55%).
'H NMR (Metanol-dL,, 400 MHz) 6: 6,91-6,80 (m, 3H), 4,34-4,28 (m, IH), 4,04-3,35 (c, 9H), 1.90-1,77 (m, 8H), 1,74-1,62 (m, 2H), 1,55-1,23 (m, 4H), 1,12 (d, 3H), 0,97-0,87 (m, 3H), 0,74 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 434,2 (m+1).
Primer 96
R^CjH,; R3=(S)-COCH(NHCBZ)CH2Ph
N-{2-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiIoksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil]-(lS)-2-okso-l-benziletiI}(fenilmetoksi)karboksamid
Dobijen iz Intermedijera 68 korišćenjem postupka acilacije Hunigove baze koji je opisan kod Intermedijera 74, korišćenjem N-CBZ-(S)-fenilalanina.
<!>H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,41-7,26 (m, 10H), 6,78-6,42 (m, 3H), 5,78-5,74 (m, IH), 5,14-5,05 (m, 2H), 4,76-4,70 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,75-2,66 (c, 10H); 1,94-1,80 (m, 6H), 1,65-1,57 (m, 2H), 1,08-0,99 (dd, 3H), 0,64 i 0,33 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 601,2 (m+1).
Primer 97
R^CsHs; R<3>=(S)-COCH(NH2)CH2Ph
l-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-cikIopentiloksi-4-metoksifeniI)-3-metilpiroIiđinil](2S)-2-amino-3-fenilpropan-l-on
Dobijen iz jedinjenja iz Primera 96 postupkom debenzilacije koji je opisan kod Intermedijera 31.
'H NMR (Metanol-d4, 400 MHz, smeša konformera) 8: 7,47-7,31 (m, 5H), 6,88-6,47 (m, 3H), 4,78-4,76 (m, IH), 4,48-4,44 (m, IH), 3,80-3,06 (c, 13H), 1,88-1,80 (m, 6H), 1,67-1,64 (m, 2H), 1,02 (d, 3H), 0,75 i 0,34 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 467,5 (m+1).
Primer 98
R<1>=C5H9; R<3>=(R)-COCH(NHCBZ)CH2Ph
N-{(lR)-2-{3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-cikIopentiloksi-4-metoksifeni metiIpirolidiniI]-2-okso-l-benziletiI}(fenilmetoksj)karboksamid
Dobijen iz Intermedijera 68 korišćenjem postupka acilacije Hunigove baze koji je opisan kod Intermedijera 74, korišćenjem p-nitrofenilestra N-CBZ-(R)-fenilalanina.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,41-7,19 (m, 10H), 6,77-6,46 (m, 3H), 5,70 (d, IH), 5,14-5,04 (m, 2H), 4,76-4,69 (m, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,93-2,99 (c, 6H), 2,53 (d, IH), 1,93-1,81 (m, 6H), 1,62-1,56 (m, 2H), 1,06 (dd, 3H), 0,67 i 0,28 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 602,3 (m+1).
Primer 99
R'=C5H9; R<3>=(R)-COCH(NH2)CH2Ph
(2R)-l-f3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-cildopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpiroIidiniI]-2-amino-3-fenilpropan-l-on
Dobijen iz jedinjenja iz Primera 98 postupkom debenzilacije koji je opisan kod Intermedijera 31.
'H NMR (Metanol-dU, 400 MHz, smeša konformera) 8: 7,42-7,26 (m, 5H), 6,88-6,65 (m, 3H), 4,80-4,78 (m, IH), 4,42-4,39 (m, IH), 3,89-2,42 (c, 13H), 1,89-1,79 (m, 6H), 1,64-1,62 (m, 2H), 0,99 (dd, 3H), 0,69 i 0,21 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 467.0 (m+1).
Primer 100
R^CHjCjHs; R<3>=COCH(OAc)C4H9
2-{(3S,4S)-3-((lR)-l-Hidroksietil)-4-[3-(cikJopropilmetoksi)-4-metoksifenir meti!piroIidinil}-2-okso-l-propiletil acetat
Intermedijer 67 (46 mg, 0,15 mmol) je konvertovan postupkom Hunigove baze koji je opisan kod Intermedijera 74, korišćenjem (+)-2-acetoksipropionil hlorida (29 mg, 0,165 mmol), da bi se dobilo jedinjenje Primera 100 (36 mg, 54%). 1 H-NMR (400 MHz, CDC13) 5: 6,86-6,69 (m, 3H), 5,30-5,02 (m, IH), 4,17-4,00 (m. IH). 3,82 (s, 3H), 3,82-3,18 (m, 5H), 3,08 i 2,97 (singleti, 2H, konformeri). 2,13 i 2,11 (singleti, 3H, konformeri), 1,95-1,23 (m, 5H), 1,20-1,14 (m, 2H), 1,00-0,92 (m, 3H), 0,76 i 0,72 (dubleti, 3H, konformeri), 0,62 (m, 2H), 0,36 (m, 2H).
Primer 101
R^CHiCsHs; R<3>=COCH(OH)C4H9
l-{(3S,4S)-3-((lR)-l-HidroksietiI)-4-(3-(ciklopropiImetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil}-2-hidroksipentan-l-on
Jedinjenje iz Primera 100 je podvrgnuto postupku LiOH hidrolize koji je opisan kod Intermedijera 5, da bi se dobilo jedinjenje iz Primera 101 u vidu bistrog filma (30 mg, 90%).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8: 6,85-6,73 (m, 3H), 4,23 (m, IH), 4,07-2,98 (m, 6H), 3,83 (s, 3H), 1,71-1,23 (m, 5H), 1,16 (m, 3H), 0,96 (m, 3H), 0,77 (s, 3H), 0,62 (m, 2H), 0,37 (m, 2H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 406,5 (m+1).
Primer 102
R'^CHsCaHs; R3=(S)-COC(CH3)OCH2Ph
l-{(3S,4S)-3-((lR)-l-HidroksietiI)-4-[3-(ciW^^ metilpirolidinil}(2S)-(fenilmetoksi)propan-l-on
Intermedijer 67 (46 mg, 0,15 mmol) je konvertovan postupkom Hunigove baze koji je opisan kod Intermedijera 74, korišćenjem (2S)-2-(fenilmetoksi)propanoil hlorida (59 mg, 0,3 mmol), da bi se dobilo jedinjenje Primera 102 (54 mg, 77%). 1 H-NMR (400 MHz, CDC13) 5: 7,40-7,25 (m, 5H), 6,82-6,77 (m, 2H), 6.72 (s, IH), 4,63 (dd. IH), 4,49 (dd, IH), 4,22 (m, IH). 3,98-3,38 (m. 8H), 3,82 (s, 3H), 3,07 i 2.96 (singleti, IH, konformeri), 143 (m, 3H), 1,31 (m, IH), 1,17 i 1,10 (dubleti, 3H, konformeri), 0,72 i 0,70 (singleti, 3H, konformeri), 0.62 (m, 2H), 0.37 (m, 2H).
Primer 103
R^CHjCsHs; R<3>=(S)-COC(CH3)OH
l-{(3S,4S)-3-((lR)-l-HidroksietiI)-4-|3-(cikiopropiImetoksi)-4-metolvsifeniI]-3-metiIpirolidiniI}(2S)-2-(hidroksi)propan-l-on
Dobijen iz jedinjenja iz Primera 102 (54 mg, 0,12 mmol) postupkom debenzilacije koji je opisan kod Intermedijera 31, da bi se dobilo jedinjenje Primera 103 u vidu bistrog ulja
(45 mg, 100%).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 6: 6,84-6,73 (m, 3H), 4,44 (m, IH), 4,06-3,16 (m, 8H), 3,82 (s, 3H), 2,99 (d, IH), 1,38 (m, 3H, konformeri), 1,30 (m, IH), 1,18 (m, 3H, konformeri), 0.78 i 0,76 (singleti, 3H. konformeri), 0,62 (m, 2H), 0,36 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 378,7 (m+1).
Primer 104
R^CHjCsHs; R<3>=(R)-COCH(t-Bu)NHC02t-Bu
N-((lR)-2-{(3S,4S)-3-((lR)-l-Hidroksietil)-4-[3-(ciklopropiImetoksi)-4-metoksifenil]-3-metiIpirolidinil}-l-(terc-butiI)-2-oksoetil)(terc-butoksi)karboksamid
Intermedijer 67 (46 mg, 0,15 mmol) je konvertovan postupkom vezivanja sa EDCI koji je opisan kod Primera 27, korišćenjem Boc-D-t-butilglicina (35 mg, 0.15 mmol), da bi se dobilo jedinjenje Primera 104 u vidu bele pene (62 mg, 80%).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 5: 6,85-6,79 (m, 2H), 6,72-6,64 (m, IH), 4,36-4,00 (m, 3H, konformeri), 3,83 (s, 3H), 3,79 (d, 2H), 3,67-3,12 (m, 4H, konformeri). ],44 i 1,41 (singleti, 9H, konformeri), 1,32 (m, IH), 1,22-1,16 (m, 3H), 1,06 i 1,01 (singleti, 9H, konformeri), 3.02 (m, 3H), 0,73 i 0,63 (singleti, 3H, konformeri), 0,61 (m, 2H), 0,36 (m, 2H).
Primer 105
R,=CH2C3H5; R3=(R)-COCH(t-Bu)NH2
(2R)-l-{(3S,4S)-3-((lR)-l-Hidroksieti^ metilpirolidiniI}-2-amino-3,3-dimetilbutan-l-on
U mešani rastvor jedinjenja iz Primera 104 (62 mg, 0,12 mmol) u CH2C12(1,5 ml), na sobnoj temperaturi u zatvorenom reakcionom sudu, dodata je trifluorosirćetna kiselina (77 ul, 1 mmol). Nakon mešanja tokom noći, reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod, za koji se ispostavilo da je zagađen trifluoroacetatnim estarom. Sirovi proizvod je rastvoren u smeši THF i vode u odnosu 3:2 (1.5 ml) na sobnoj temperaturi, mešan je u zatvorenom reakcionom sudu i tretiran je sa LiOH monohidratom (42 mg. 1 mmol). Nakon jednog časa, smeša je podeljena između EtOAc (15 ml) i vode (15 ml). Organski slojevi su odvojeni, osušeni (MgS04), filtrirani i koncentrovani u vakuumu, da bi se dobilo jedinjenje Primera 105 u vidu bele pene (35 mg, 70%).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 5: 6,85-6,82 (m, 2H), 6,73-6,73 (m, IH), 4.01-3,30 (m, 9H), 3,83 (s, 3H), 1,18 i 1,12 (dubleti, 3H, konformeri), 1,06 i 1,02 (singleti, 9H, konformeri), 0,78 i 0,68 (singleti, 3H, konformeri), 0,63 (m, 2H), 0.37 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 419,4 (m+1).
Primer 106
R'=H;R<3>=(R)-COCH(CH20CH2Ph)NHC02t-Bu
N-{2-l(3S,4S)-3-((lR)-l-Hidroksietil)-4-(3-hidroksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil](lR)-2-okso-l-[(fenilmetoksi)metil]etil}(terc-butoksi)karboksamid
U mešani rastvor N-Boc-O-benzil-D-serina (2,95 g, 10 mmol) u THF (50 ml), na temperaturi od -78 °C u atmosferi azota, dodat je N-metil morfolin (3,3 ml, 30 mmol), a onda i izobutil estar hlormravlje kiseline (1,3 ml, 10 mmol). Nakon mešanja tokom 30 minuta, putem kanile je dodat rastvor/suspenzija Intermedijera 70 (2,51 g, 10 mmol) u THF (50 ml). Reakciona smeša je mešana tokom 2 časa na temperaturi od -78 °C, a zatim zagrevana do temperature od 0°C tokom 2 Časa. Reakciona smeša je onda delimično koncentrovana korišćenjem rotacionog evaporatora do zapremine od približno 25 ml. i podeljena između EtOAc (250 ml) i 2 N HC1 (250 ml). Organski slojevi su isprani sa 2 N HC1 (2 x 250 ml), zasićenim rastvorom NaHC03(3 x 250 ml) i zasićenim rastvorom NaCl (1 x 250 ml). Organski slojevi su osušeni (MgS04), filtrirani i koncentrovani u vakuumu, da bi se dobilo jedinjenje Primera 106 u vidu žutog ulja (4,2 g, 79%).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8: 7,36-7,21 (m, 5H), 6,81-6,63 (m, 3H), 5,81 (br s, IH), 5,47 (m, IH), 4,73 (m, IH), 4,51 (m, 2H), 4,00-3,40 (m, 83,83H), 3,84 i 3,82 (singleti, 3H, konformeri), 1,43 i 1,41 (singleti, 9H, konformeri), 1,13 i 1,06 (dubleti, 3H, konformeri). 0,95 (m, IH), 0,73 i 0,045 (singleti, 3H, konformeri).
Primer 107
R<1>=CH2C3H5;R<3>=(R)-COCH(CH20CH2Ph)NHC02t-Bu
N-(2-{(3S,4S)-3-((lR)-l-Hidroksietil)-4-|3-(ciklopropiImetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil}(lS)-2-okso-l-[(fenilmetoksi)metil]etiI)-(terc-butoksi)karboksamid
U mešani rastvor jedinjenja iz Primera 106 (4,2 g, 7,9 mmol) u DMF (24 ml), na sobnoj temperaturi u atmosferi azota, dodat je K2CO3u prahu (5,45 g, 39,5 mmol), a zatim i bromometilciklopropan (1,53 ml, 15,8 mmol). Suspenzija je zagrejana do temperature od 65 °C tokom 4 časa. a zatim tretirana sa dodatnom količinom bromometilciklopropana (1,53 ml, 15,8 mmol). Reakciona smeša je dodatno mešana tokom 16 časova na temperaturi od 65 °C, a zatim ohlađena do sobne temperature i podeljena između EtOAc (500 ml) i vode (500 ml). Organski slojevi su isprani vodom (3 x 500 ml) i zasićenim rastvorom NaCl (1 x 500 ml), osušeni (MgSO^). filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Sirovi proizvod je podeljen u dva dela i hromatografisan na Biotage 40M koloni smešom EtOAc i heksana u odnosu 1:1 da bi se, nakon izdvajanja frakcionisanog proizvoda i koncentrovanja u vakuumu, dobilo jedinjenje Primera 107 (2,11 g, 46%). Dugolančani Rr dialkilovani proizvod je identifikovan kao glavna nečistoća.
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8: 7,36-7,22 (m, 5H). 6,81-6,71 (m, 3H), 5,42 (m, IH), 4,73 (m.
IH), 4,51 (m, 2H), 4,04-3,44 (m, 10H), 3,83 i 3,81 (singleti, 3H, konformeri), 1,42 i 1,43 (singleti, 9H, konformeri), 1,32 (m, IH), 1,16 i 1,06 (dubleti, 3H, konformeri), 0.76 i 0,45 (singleti, 3H, konformeri), 0,62 (m, 2H), 0,37 (m, 2H).
Primer 108
RI=CH2C3H5; R3=(R)-COCH(CH2OH)NHC02t-Bu
N-(2-{(3S,4S)-3-((lR)-l-Hidroksietil)-4-{3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metiIpirolidinil}(lR)-l-(hidroksimetiI)-2-oksoetiI)-(terc-butoksi)karboksamid
Jedinjenje iz Primera 107 (2,1 g, 3,6 mmol) je podvrgnuto postupku debenzilacije koji je opisan kod Intermedijera 31, da bi se dobilo jedinjenje Primera 108 u vidu bele pene (1,75 g, 100%).
'H-NMR (CDC13/CD30D, 400 MHz) 8: 6,83-6,71 (m, 3H), 5,70 (br d, IH), 4.55 (m, IH), 4,09-3,38 (ni, 10H), 3,83 (s, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,33 (m, IH), 1,18 (m, 3H), 0,73 (d, 3H), 0,62 (m, 2H), 0,37 (rn, 2H).
Primer 109
R^CH^aHsjR^CRJ-COCHCCH^HJNH! l-{(3S,4S)-((lR)-l-HidroksietiI)-4-[3-(ciklopropiImetoksi)-4-metoksife
metilpiroIidmiI}(2R)-2-amino-3-hidroksi<p>ro<p>an-l-on hidrohlorid
U mešani rastvor jedinjenja iz Primera 108 (1.75 g, 3,6 mmol) u dioksanu (16 ml), na sobnoj temperaturi, u cevi za sušenje, dodata je 4 N HC1 u dioksanu (16 ml). Bistri rastvor je mešan tokom 4 časa, a zatim koncentrovan u vakuumu, da bi se dobilo jedinjenje Primera 109 u vidu mrke pene (1,5 g, 97%).
'H-NMR (400 MHz. CDC13) 8: 6,85-6,76 (m, 3H), 4.36 (m, IH), 4,13-3,31 (m, 10H), 3,84 (s. 3H), 1,29 (m, IH), 1,17 i 1,12 (dubleti. 3H. konformeri), 1,77 i 1,75 (singleti, 3H, konformeri), 0,62 (m, 2H), 0,36 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 393,4 (m+1).
Primer 110
R^CHzCsHs; R<3>=(S)-COCH(OAc)QH„
2-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil}(lS)-l-cikloheksil-2-oksoetil acetat
Intermedijer 67 (91 mg, 0,6 mmol) je konvertovan postupkom Hunigove baze koji je opisan kod Intermedijera 74, korišćenjem hlorida (S)-(+)-acetoksiheksahidrobademove kiseline (100 ul, 4,98 M u CH2G2, 1,7 eq), da bi se dobilo jedinjenje Primera 110 u vidu bistrog, bezbojnog ulja (89 mg, 61 %).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 488,6 (m+1).
Primer 111
R,=CH2C3Hs; R3=(S)-COCH(OH)C6H„
l-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4M3KciklopropiImetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidiniI}(2S)-2-cikloheksiI-2-hidroksietan-l-on
Jedinjenje iz Primera 110 (89 mg, 0,18 mmol) je podvrgnuto postupku LiOH hidrolize koji je opisan kod Intermedijera 5, da bi se dobilo jedinjenje Primera 111 u vidu prozirnog;
bezbojnog filma (44 mg, 54%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 5: 6,80-6,78 (m, 3H), 3,88-3,52 (c, 10H), 3,34-3,26 (dd. IH), 2,98 (d, IH), 2,12 (br s, IH), 1,77-1,10 (c, 16H), 0.75-0,73 (d, 3H), 0,62-0,59 (m, 2H), 0.34-0,31 (m,2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 446,6 (m+1).
- Primer 112
R^CHjCaHs; R3=(R)-COCH(OAc)C6H„
(lR)-2-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropiImetoksi)-4-metoksifenilJ-3-metilpiroIidiniI}-l-cikloheksil-2-oksoetil acetat
Intermedijer 67 (76 mg, 0,25 mmol) je konvertovan postupkom Hunigove baze koji je opisan kod Intermedijera 74, korišćenjem hlorida (R)-(-)-acetoksiheksahidrobademove kiseline (100 ul, 4,16 M u CH2C12, 1.7 eq), da bi se dobilo jedinjenje Primera 112 u vidu bistrog, bezbojnog ulja (75 mg, 62%).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 488,7 (m+1).
Primer 113
R^CHjCjHs; R<3>=(R)-COCH(OH)C6H„
(2R)-l-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4SM^ metiIpirolidinil}-2-cikloheksil-2-bidroksietan-l-on
Jedinjenje iz Primera 112 (75 mg, 0,15 mmol) je podvrgnuto postupku LiOH hidrolize koji je opisan kod Intermedijera 5. da bi se dobilo jedinjenje Primera 113 u vidu prozirnog, bezbojnog filma (35 mg, 51%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 6,81-6,73 (m, 3H), 3,85-3,59 (c, 11H), 2,99-2,98 (d. IH), 2,03-1,15 (c, 17H), 0,73 (s, 3H). 0,64-0,60 (m, 2H), 0,35-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 446,5 (m+1).
Primer 114
R,=CH2C3H5;R<3>=(R)-COCH(C,H9)NHCOjCH2Ph
N-((lR)-2-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-^ metilpirolidinil}-l-butil-2-ok5oetiI)(fenilmetoksi)-karboksamid
Intermedijer 67 (41 mg, 0,13 mmol) je dobijen postupkom sa Hunig-ovom bazom koji je opisan kod Intermedijera 74, korišćenjem Z-D-Nle-ONp (57 mg, 0,15 mmol, 1,1 eq), da bi se dobilo jedinjenje Primera 114 u vidu bistrog, bezbojnog ulja (29,9 mg, 40%).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 553,6 (m+1).
Primer 115
R^CHjCsHs; R<3>=(R)-COCH(C4H9)NH2
(2R)-l-{3-((lR)-l-HidroksietiIK3S,4S)-4-[3-(cikJopropilmetoksi)-4-metoksifeniI]-3-metiIpirolidinil}-2-aminoheksan-l-on
Jedinjenje iz Primera 114 (29,9 mg, 0,054 mmol) je podvrgnuto postupku debenzilacije koji je opisan kod Intermedijera 31, da bi se dobilo jedinjenje Primera 115 u vidu belog praha (18,8 mg, 83%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 5: 6,83-6,62 (m, 3H), 4,17-4,08 (m, 2H), 3,85-3,61 (c, 9H), 3,32-3,29 (t, IH), 3,13-3,11 (d, IH), 2,04-1,78 (m, 3H), 1,52-1,21 (c, 10H), 0,92-0,88 (t, 3H), 0,62-0,58 (m, 5H), 0,34-0,30 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 419,4 (m+1).
Primer 116
R^OTCjHsjR^fRJ-COCHO-PrJNHCdCHjPh
N-((lR)-2-{3-((lR)-l-Hidroksietty metilpirolidinil}-l-(metiletil)-2-oksoetiI)(fenilmetoksi)karboksamid
Intermedijer 67 (41 mg, 0,13 mmol) je konvertovan postupkom Hunigove baze koji je opisan kod Intermedijera 74, korišćenjem Z-D-Val-OSu (52,2 mg, 0,15 mmol, 1,1 eq), da bi se dobilo jedinjenje Primera 116 u vidu bistrog, bezbojnog ulja (64,8 mg, 89%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 7,35-7,32 (m, 5H), 6,81-6,69 (m, 3H), 5.65-5,61 (1, 3H). 5.28-5.01 (m. 2H), 4,34-2,78 (m, 10H), 2,08-1,98 (m, IH), 1.31-0,91 (c, 8H), 0.71-0,68 (d, 3H). 0,64-0,59 (m, 2H), 0,38-0,31 (m, 2H).
Primer 117
R^CHjCjHs; R<3>=(R)-COCH(i-Pr)NH2
(2R)-l-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-l3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifeniI]-3-metiIpirolidiniI}-2-amino-3-metilbutan-l-on
Jedinjenje. iz Primera 116 (64.8 mg, 0,120 mmol) je podvrgnuto postupku debenzilacije koji je opisan kod Intermedijera 31, da bi se dobilo jedinjenje Primera 117 u vidu prozirne Čvrste supstance (38,9 mg, 80%).
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 6: 6,77-6,59 (m, 3H), 4,41 (s, IH), 4,23-4.12 (m, 2H), 3,85-3,60 (c, 9H), 3,24 (s, IH), 3,15-3,13 (d, IH), 2,40 (br s, IH), 1,29-1,14 (m, 1 IH), 0,62-0,58 (m, 5H), 0,33-0,29 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 405,5 (m+1).
Primer 118
R<]>=H; R<3>=COCH2SAc
l-[3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-hidroksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidiniI]-2-acetiltioetan-l-on
Intermedijer 70 (173 mg, 0,694 mmol) je rastvoren u dioksanu (2 ml), pa je ukapavanjem dodat 1 M K2CO3(1 ml). Dodat je hlorid acetoksimerkaptosirćetne kiseline (100 ul, 13,9 M u dioksanu. 2 eq), pa je smeša energično mešana tokom jednog časa. Rastvor je razblažen sa EtOAc (30 ml), a organski slojevi su isprani sa 1 M K2CO3(20 ml), a zatim sa slanim rastvorom (20 ml). Organski sloj je osušen iznad Na2S04i koncentrovan u vakuumu. Dobijeno ulje je hromatografisano na koloni silika gela (smeša EtOAc i heksana u odnosu 1:1), da bi se dobilo bistro, bezbojno ulje (34 mg, 13%).
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 6: 6,85-6,82 (m, 3H), 3,92-2,98 (c, 12H), 2,39 (s, 3H), 1,15-1,11 (t, 3H), 0,75-0,73 (d, 3H).
Primer 119
R<1>=CH2C3H5; R<3>=COCH2SAc
l-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(cikJopropito^ metilpiroIidiniI}-2-acetiltioetan-l-on
U reakcioni sud koji sadrži anhidrovani K2COj(52 mg. 0,37 mmol. 4.0 eq). u atmosferi azota, dodat je rastvor jedinjenja iz Primera 118 (34 mg, 0,093 mmol. 1 eq) u anhidrovanom DMF (1 ml). U smešu je kroz špric dodat ciklopropilmetil bromid (40 ul, 0,37 mmol, 4,0 eq). Reakciona smeša je mešana na temperaturi od 65 °C tokom noći. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim razblažena vodom (50 ml). Vodeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 30 ml), kombinovani organski slojevi su isprani slanim rstvorom (50 ml), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Dobijeno ulje je prečišćeno korišćenjem preparativne TLC (100% EtOAc), čime sj dobijeno bistro, bezbojno ulje (13,9 mg, 36%).
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 5: 7.10-6,75 (m, 3H), 3,91-3,32 (c, 11H). 2,64-2,61 (m, 2H), 2,38-2,30 (d, 3H), 1,82-1,50 (br s, 2H), 1,38-1,04 (m, 2H), 0,75 (s, 3H), 0,58-0,55 (m, 2H), 0,27-0,23 (m, 2H).
Primer 120
R^CH.CaHs; R<3>=COCH2SH
l-{3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-mctoksifenil]-3-metilpirolidinil}-2-sulfaniletan-l-on
Jedinjenje iz Primera 119 (13,9 mg, 0,0329 mmol) je podvrgnuto postupku hidrolize LiOH koji je opisan kod Intermedijera 5, da bi se dobilo bistro, bezbojno ulje (7.2 mg, 58%).
'H NMR (CD3OH, 400 MHz, smeša konformera) 5: 6,86-6,75 (m, 3H), 3,83-3,11 (c, 13H), 2,60-2,56 (d, 2H), 1,39-0,85 (m, 4H), 0,76-0,74 (m, 3H), 0,58-0,56 (m, 2H), 0,35-0,24 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 380,5 (m+1).
Primer 121
R^CHiCjHs;R<3>=COCH2NHC02CH2Ph
N-(2-{3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metok^
metilpirolidinil}-2-oksoetil)(fenilmetoksi)karboksamid
Intermedijer 67 je acilovan postupkom Hunigove baze koji je opisan kod Intermedijera 74. korišćenjem p-nitrofenil estra N-CBZ-glicina, da bi se dobilo jedinjenje Primera 121.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 6: 7,42-7,28 (m, 5H), 6,83-6,75 (m, 3H), 5,87-5,80 (m, IH), 5,13 (s, 2H), 4,08-3,15 (c, 13H), 1,39-1,24 (m, IH), 1,14 (t, 3H), 0,73 (d, 3H), 0,66-0,59 (m, 2H), 0,39-0,31 (m, 2H).
Primer 122
R<1>=CH2C3H5; R<3>=COCH2NH2
l-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-(ciklopropiImetoksi)-4-metoksifeniIJ-3-metilpirolidinil}-2-aminoetan-l-on
Jedinjenje iz Primera 121 je podvrgnuto postupku debenzilacije koji je opisan kod Intermedijera 31, da bi se dobilo jedinjenje Primera 122.
'H NMR (Metanol-d4, 404 MHz, smeša konformera) 6: 6,94-6,84 (m, 3H), 4,01-3,27 (c, 13H), 1,29-1,18 (m, 3H), 0,79-0,73 (m, 3H), 0,62-0,55 (m, 2H), 0,35-0,29 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 363,2 (m+1).
Primer 123
R^CHjCaHs; R<3>=COCH2NHS02CH3
l-{3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-[3-(cM^ metilpiroIidinil}-2-[(metilsulfonil)amino]etan-l-on
Jedinjenje iz Primera 122 je acilovano prema postupku vezivanja pomoću Hunig-ove baze. koji je opisan kod Intermedijera 74, korišćenjem metansulfonil-hlorida, da bi se dobilo jedinjenje Primera 123.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 6: 6,86-6,75 (m, 3H), 5,48-5,42 (m, IH), 4,00-3,57 (c, 1 IH), 3,46 i 3,15 (d i d, IH), 3,00 (s, 3H), 1,67 (dd, IH). 1,36-1,24 (m, IH), 1,16 (t, 3H), 0,76 (d, 3H), 0,66-0,60 (m, 2H), 0,39-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 441,3 (m+1).
Primer 124
R<1>=CH2C3H5; R<3>=COCH2NHS02CF3
-l-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3Š,4S)-4-[3-(ciklopropiImetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil}-2-{[(trifluorometil)suIfonil]amino}etan-l-on
Jedinjenje iz Primera 122 je sulfonovano prema postupku vezivanja pomoću Hunig-ove baze, koji je opisan kod Intermedijera 74, korišćenjem trifluorometansulfonil-hlorida, da bi se dobilo jedinjenje Primera 124.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 6: 6,85-6,77 (m, 3H), 4,11-3,10 (c, 13H), 1,15 (t, 3H), 0,76 (d, 3H), 0,66-0,60 (m, 2H), 0.40-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 495,3 (m+1).
Primer 125
R'^CH.CjHs; R<3>=COCH2NMe2
l-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-f3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpiroIidinil}-2-(dimetilanrino)etan-l-on
Reakcija vezivanja pomoću EDCI u čvrstoj fazi
Reakcioni sud u obliku bočice sa lopaticom za mešanje je ispunjen sa EDC smolom (164 mg, 0,082 mmol, 0,5 M), NMP (2 ml) i N,N-dimetilglicinom (20 mg. 0,143 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom jednog časa. nakon toga je dodat Intermedijer 67, pa je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 29 časova, a potom filtrirana. Smola je isprana sa nekoliko zapremina NMP. Svi ispirci i fillrat su pomešani i izloženi smanjenom pritisku, kako bi se uklonio sav rastvarac. Prečišćavanjem ostatka hromatografijom na Biotage koloni (kertridž 12S, 5% MeOH / CH2CI2/ 0,1% NH4OH) dobijeno je 8 mg (prinos 25%) bistrog filma.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 6: 6,87-6,72 (m, 3H), 4,07-2,97 (c, 13H), 2,35 (d, 6H), 1,35-1,25 (m, IH), 1,17 (t, 3H), 0,74 i 0,54 (s i s, 3H), 0,65-0,60 (m, 2H), 0,37-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 391,5 (m+1).
Primer 126
R^CH^.CsHs^^SJ-COCHCMeJNHCOiCHzPh
N-(2-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifen metilpiroIidiniI}(lS)-l-metil-2-oksoetiI)(feniImetoksi)karboksamid
Intermedijer 67 je acilovan pomoću reakcije vezivanja sa EDCI u čvrstoj fazi koja je opisana kod Primera 125, korišćenjem Z-Ala-ONp. da bi se dobilo jedinjenje Primera 126.
'H NMR (400 MHz. CDC13, smeša konformera) 5: 7,38-7,26 (m, 5H), 6,84-6,74 (m, 3H), 5,86 (dd, IH), 5,14-5,08 (m, 2H), 4.56 (kvintet, IH), 3,87-3,32 (c, 11H), 1,43-1,34 (dd, 3H), 1,33-1,24 (m, IH), 1,13 (d, 3H), 0,74 (s, 3H), 0,66-0,59 (m, 2H), 0,37-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 511.7 (m+1).
Primer 127
R^CHjCaHj; R<3>=(S)-COCH(CH3)NH2
l-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S54S)-4-(3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifeniIJ-3-mehlpirolidiniI}(2S)-2-aminopropan-l-on
Jedinjenje iz Primera 126 je podvrgnuto postupku koji je opisan kod Intermedijera 3 ], da bi se dobilo jedinjenje Primera 127.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 6: 8,44-8,16 (br s, 2H), 6,82-6,56 (m, 3H), 4,53-3,02 (c, 12H), 1,43-1,34 (dd, 3H), 1,33-1,24 (m, IH), 1,13 (d, 3H), 0,74 (s, 3H), 0,66-0,59 (m, 2H), 0,37-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 377,3 (m+1).
Primer 128
R^CHjCaHsjRHRJ-COCHtCHaJNHCOzCHjPh
N-((lR)-2-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-|3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksife metilpiroIidinil}-l-metil-2-oksoetil)(fenilmetoksi)karboksamid
Dobijeno iz Intermedijera 67 postupkom acilovanja koji je opisan kod Primera 7. korišćenjem Z-D-Ala-OSu. •H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 6: 7,40-7,28 (m, 5H), 6,85-6,74 (m, 3H), 5.80 (t:IH), 5,10 (d, 2H), 4,57-4,47 (m, IH), 3,99-3,12 (c. 1 IH), 1,40-1,24 (m, 4H), 1,14 fd, 3H), 0,73 (s, 3H), 0,66-0,59 (m, 2H), 0,38-0,31 (m. 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 511,6 (m+1).
Primer 129
R^CHjCjHs; R<3>=(R)-COCH(CH3)NH2
(2R)-l-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil}-2-aminopropan-l-on
Dobijeno iz jedinjenja iz Primera 128 postupkom debenzilacije koji je opisan kod Intermedijera 31.
'H NMR (400 MHz. CDC13, smeša konformera) 6: 8,60-8,27 (br m, 3H), 6,87-6,58 (m, 3H), 4,75-3,10 (c, 12H), 1,74-1,59 (m, 3H), 1,33-1,05 (m, 4H), 0,66-0,55 (m, 5H), 0,35-0,27 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 377,2 (m+1).
Primer 130
R<1>=CH2C3H5;R<3>=(S)-COCH(i-Pr)NHC02CH2Ph
N-(2-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(cikIopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-mctilpirolidinil}(lS)-l-(metiIetil)-2-oksoetiI)(fenilmetoksi)karboksamid
Dobijeno iz Intermedijera 67 postupkom acilovanja koji je opisan kod Primera 7. korišćenjem Z-Val-ONp.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 5: 7,42-7,27 (m, 5H), 6,84-6.75 (m, 3H). 5,63 (dd IH), 5,15-5,02 (m, 2H), 4.40-4,07 (dm, IH). 3,87-3,33 (c, 12H), 2.08-1.95 (m, IH), 1,34-1,25 (m, IH), 1,14 (t, 3H), 1,04-0,90 (m, 6H), 0,73 (s, 3H), 0,66-0,59 (m, 2H), 0,38-0,31 (m,2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 539,5 (m+1).
Primer 131
R,=CH2C3H5; R<3>=(S)-COCH(i-Pr)NH2
l-{3-((m)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-[3-(cM^ metilpiroIiđinil}(2S)-2-amino-3-metilbutan-l-on
Dobijeno iz jedinjenja iz Primera 130 postupkom debenzilacije koji je opisan kod Intermedijera 31.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 6: 8,37 (br s, 3H), 6,82-6,63 (m, 3H), 4,24-3,53 (c, 11H), 3,19 (d, IH), 2,45-2,32 (m, 2H), 1,34-1,04 (m, 10H), 0,64 (s, 3H), 0,63-0.56 (m, 2H), 0,36-0,29 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 405,4 (m+1).
Primer 132
R<I>=CH2C3H5;R<3>=(S)-COCH(CH2CH(CH3)CH3)NHC02CH2Ph
N-(2-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metolisifeniI]-3-metilpirolidinil}(lS)-l-(2-nietilpropil)-2-oksoetiI)(fenilmetoksi)karboksamid
Dobijeno iz Intermedijera 67 postupkom acilovanja Hunigove baze koji je opisan kod Intermedijera 74, korišćenjem Z-Leu-ONp.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 5: 7,43-7,26 (m, 5H), 6,84-6,75 (m, 3H), 5,61 (dd IH), 5,16-5,04 (m, 2H), 4,63-4,55 (m, IH), 3,90-3,34 (c, 12H), 1,80-1,68 (m, IH), 1,64-1,40 (m, 2H), 1,36-1,24 (m, IH), 1,14 (d, 3H), 1,05-0,92 (m, 6H), 0,74 (d, 3H), 0,65-0,59 (m, 2H), 0,37-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 553.7 (m+1).
Primer 133
R<1>=CH2C3Hs;R<3>=(S)-GOCH(CH2CH(CH3)CH3)NH2
l-{3-((lR)-l-Hidr'ok5ietil)(3S,4S)-4-[3-(cikIopropilmetoksi)-4-metoksifeni metilpirolidinil}(2S)-2-amino-4-metilpentan-l-on
Dobijeno iz jedinjenja iz Primera 132 postupkom debenzilacije koji je opisan kod Intermedijera 31.
<*>H NMR (Metanol-d4, 400 MHz, smeša konformera) 8: 6,96-6,86 (m, 3H), 4,33-4,28 (m, IH), 4,03-3,28 (c, 11H), 1,87-1,65 (m, 3H), 1,29-1,18 (m, IH), 1,14-0,96 (m, 9H), 0,76 (d, 3H). 0,61-0,55 (m, 2H), 0,36-0,29 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 419,5 (m+1).
Primer 134
R^CHjCjHs; R<3>=(R)-COCH(CH2CH(CH3)CH3)NHC02CH2Ph N-((lR)-2-{3-((lR)-l-Hidroksietn)(3S,4S)^ metiIpirolidinil}-l-(2-metilpropil)-2-oksoetil)(fenilmetoksi)karboksamid
Dobijeno iz Intermedijera 67 postupkom acilovanja Hunigove baze koji je opisan kod Intermedijera 74, korišćenjem Z-D-Leu-ONp.
<J>H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 5: 7,40-7,28 (m, 5H), 6,85-6,70 (m, 3H), 5,57 (dd IH), 5,14-5,04 (m, 2H), 4,58-4,49 (m, IH), 4,11-3,19 (c, 11H), 1,78-1,66 (m, IH), 1,60-1,22 (m, 3H), 1,15 (dd, 3H), 1,03-0,85 (m, 6H) 0,72 (d, 3H), 0,65-0,57 (m, 2H), 0,38-0,30 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 553,7 (m+1).
Primer 135
R<1>=CH2C3H5;R<3>=(R)-COCH(CH2CH(CH3)CH3)NH2
(2R)-]-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenilJ-3-nietilpirolidiniI}-2-amino-4-metilpentan-l-on
Dobijeno iz jedinjenja iz Primera 134 postupkom debenzilacije koji je opisan kod Intermedijera 31.
'H NMR (Metanol-d,, 400 MHz, smeša konformera) 5: 6,97-6,91 (m, 2H), 6,88-6,83 (m, IH). 4,29-3,25 (c, 11H), 1,85-1,59 (m, 3H), 1,30-1,19 (m, IH), 1,10 (dd, 3H), 1,06-0,93 (m, 6H), 0,77 (dd, 3H), 0,62-0,55 (m, 2H), 0,36-0,29 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 419,5 (m+1).
Primer 136
R^CHjCaHs; R<3>=COCH(C4H9)NHC02CH2Ph
N-(2-{3-((lR)-l-Hidrok5ietiI)(3S,4S)-443-(ciklopropilmetoksi)-4-metokiiifen metilpirolidiniI}(lS)-l-butil-2-oksoetil)(fenilmetoksi)karboksamid
Dobijeno iz Intermedijera 67 postupkom acilovanja koji je opisan kod Primera 7, korišćenjem Z-NLeu-ONp.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 5: 7,40-7,25 (m, 5H), 6,85-6,75 (m, 3H), 5.69 (dd IH), 5,14-5,05 (m, 2H), 4,56-4,50 (m, IH), 3,87-3,34 (c, 1 IH), 1,80-1,54 (m, 2H), 1,43-1,24 (m, 5H), 1,14 (m, 3H), 0,96-0,85 (m, 3H) 0,74 (s, 3H), 0,65-0,61 (m, 2H), 0,37-0.32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 553,8 (m+1).
Primer 137
R,=CH2C3HS; R<3=>COCH(C4H9)NH2
l-{3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil}-3-metilpirolidiniI}(2S)-2-aminoheksan-l-on
Dobijeno iz jedinjenja iz Primera 136 postupkom debenzilacije koji je opisan kod Intermedijera 31.<J>H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 6: 6,93-6,85 (m, 3H), 4,33-4.25 (m, IH), 4.02- 3,47 (c, 1 IH), 1,96-1,79 (m, 2H), 1,51-1,35 (m, 4H), 1,30-1,19 (m, IH), 1,11 (dd, 3H), 1.03- 0,93 (m, 3H) 0,77 (d, 3H), 0,62-0,56 (m, 2H), 0,35-0,30 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 419,5 (m+1).
Primer 138
R,=CH2C3H5;R<3>=(R)-COCH(C6H„)NH2C02CH2Ph
N-((lR)-2-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)^ metilpirolidinil}-(lR)-cikloheksil-2-oksoetil)(fenilmetoksi)karboksamid
EDCI/ HOBTpostupak vezivanja
Reakcioni sud u obliku bočice sa lopaticom za mešanje je ispunjen sa N-karboksibenzil-D-cikloheksilglicinom (23,8 mg, 0,819 mmol), suvim Ch2C12 (359 ul), EDCI (15,7 mg, 0,819 mmol) i hidroksibenzotriazolorn (12,5 mg, 0,819 mmol). Ova smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom jednog časa, nakon čega je odjednom dodat Intermedijer 67 (25 mg, 0,819 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 48 časova reakciona smeša je razblažena sa CH2CI2(5 ml), isprana sa 1 N HC1 (2 x 20 ml), zasićenim rastvorom NaHCC»3 (1 x 20 ml), osušena (Na2S04) i koncentrovana, da bi se dobilo 27 mg (prinos 57%) bele pene.
<!>H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 6: 7,39-7,29 (m, 5H), 6,86-6.78 (m, 2H), 6,75-6,68 (m, IH), 5,54 (dd, IH), 4,37-3,25 (c, 12H), 1,81-1,56 (m. 5H), 1,36-0,95 (m, 10H), 0,71 (d, 3H), 0,66-0,59 (m, 2H), 0,39-0,31 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 580,2 (m+1).
Primer 139
R'^CHbCsHs;<R>3=(S)-COCH(C6H„)NH2
(2R)-l-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpiroliđinil}-2-amino-2-cikIoheksiletan-l-on
Dobijeno iz jedinjenja iz Primera 138 postupkom debenzilacije koji je opisan kod Intermedijera 31.
'H NMR (Metanol-d4, 400 MHz, smeša konformera) 6: 6,95-6,78 (m, 3H), 4,10-3,20 (c, 12H), 1,96-1,62 (m, 5H), 1,39-1,02 (m, 10H), 0,75 (d, 3H), 0,62-0,51 (m, 2H), 0,35-0,23 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 445,5 (m+1).
Primer 140
R<1>=CH2C3H5;R<3>=(S)-COCH(t-Bu)NHC02CH2Ph
N-((lR)-2-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetol«i)-4-metoksifenil]-^ metilpiroIidiniI}-(lS)-cikloheksil-2-oksoetil)(fenilmetoksi)karboksamid
Dobijeno iz Intermedijera 67 EDCI/HOBT postupkom vezivanja koji je opisan kod Primera 138, korišćenjem N-karboksibenzil-L-t-butilglicina. •H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,39-7,29 (m, 5H), 6,84-6,76 (m, 3H), 5,59-5,53 (m, IH).; 5,14-5,02 (m, 2H), 4,34 (dd, IH), 3,87-3,33 (c, 10H), 1,34-1,24 (m, IH), 1,14 (dd, 3H), 0,74 (d, 3H), 0,66-0,59 (m, 2H), 0,39-0,31 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 554,2 (m+1).
Primer 141
l-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(cildopropilmetoksi)-4-metoksifeniIJ-3-nietilpiroIidiniI}(2S)-2-amino-3,3-dimetiIbutan-l-on
Dobijeno iz jedinjenja iz Primera 140 postupkom debenzilacije koji je opisan kod Intermedijera 31.
'H NMR (Metanol-d4, 400 MHz, smeša konformera) 6: 6,98-6,86 (m, 3H), 4,16-3,33 (c, I2H), 1,29-1,20 (m, IH), 1,15-0,97 (m, 12H), 0,75 (d, 3H), 0,62-0,56 (m, 2H), 0,36-0,30 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 419,5 (m+1).
Primer 142
l-{(3R)-3-((lR)-l-HidroksietiI)-4-[3-(terc-butoksi)-4-metoksifeni!]-3-metilpi (fenilmetoksi)etan-l -on
Intermedijer 73 (775 mg; 2,53 mmol) je reagovao sa benziloksiacetil-hloridom (497 ul, 3,16 mmol) postupkom Hunigove baze koji je opisan kod Intermedijera 74, da bi se dobilo jedinjenje Primera 134 u vidu braon pene (978 mg, 85%).
1 H-NMR (400 MHz, CDC13) 5: 7,41-7,30 (m, 5H), 6,90 (m, 2H), 6,81 (d, IH), 4,64 (dd, 2H), 4,15 (dd, 2H), 3,95 (dd, IH), 3,80 (s, 3H), 3,62 (dd, IH), 3,57 (m, 2H), 3,44 (d, IH), 3,21 (d, IH), 1,33 (s, 9H), 1,16 i 1,11 (dva dubleta, 3H, konformeri), 0,73 (d, 3H. konformeri).
Primer 143
R'=H; R<3>=COCH2OCH2Ph
l-[(3R)-3-((lR)-l-HidroksietiI)-4-(3-hidroksi-4-metoksifenil)-3-metilpiroli (fenilmetoksi)etan-l -on
U rastvor jedinjenja iz Primera 142 (750 mg, 1,65 mmol) u CH2CI2(6,6 ml), na temperaturi od 0 °C, ispod cevi za sušenje, dodata jc, uz mešanje, trifluorosirćetna kiselina (763 u.1, 9,9 mmol). Hlađenje reakcione smeše je obustavljeno i ona je ostavljena da se zagreje do sobne temperature, nakon čega je mešana tokom 3,5 časova. Reakciona smeša je koncentrovana rotacionim isparivačem u cilju uklanjanja viška trifluorosirćetne kiseline, a zatim je razblažena sa CH2CI2(30 ml) i isprana sa 10% rastvorom Na2COs(2 x 30 ml). Organski slojevi su osušeni pomoću MgS04, profiltrirani i koncentrovani u vakuumu, čime je dobijeno jedinjenje Primera 143. Hromatografija za rektifikaciju lakih frakcija u EtOAc dala je, nakon sakupljanja i koncentrovanja u vakuumu frakcija koje sadrže proizvod, jedinjenje Primera 143 u vidu bele pene (650 mg, 98%).
1 H-NMR (400 MHz, CDC13) 8: 7,42 (m, 5H), 6,83-6,70 (m, 3H), 4,64 (s, 2H), 4,16 (s, 2H), 3,93 (dd, IH), 3,95 (3, 3H), 3,78 (d, IH), 3,74 (dd, 2H), 3,67-3,52 (m, 4H), 3,44 (d, IH), 3,20 (d, IH), 1,16 i 1,10 (dubleti, 3H, konfomeri), 0,73 (s, 3H).
Primer 144
R^CH^CHsKCHjCHh); R3=COCH2OCH2Ph
2-Benziloksi-l-(3-((lR)-l-hidroksietiI)-(3S,4S)-4-|4-metoksi-3-(l-metilciklopropilmetoksi)fenil]-3metilpirolidin-l-il)etanon
Mitsunobu postupak u čvrstoj fazi
U rastvor jedinjenja iz Primera 143 (40 mg, 0,1 mmol) u THF (1,5 ml), na sobnoj temperaturi, u zapušenom, koničnom reakcionom sudu, uz mešanje je dodat PS-trifenil-fosfm (1,65 mmol/g, 182 mg, 0,3 mmol). Nakon što je suspenzija ostavljena da se polako meša tokom 5 rninuta, kako bi se omogućilo formiranje gela, dodat je 1-metilciklopropanMetanol (29 u.1, 0,3 mmol) i reakciona smeša je ohlađena do 0 °C. Zatim je suspenzija tretirana sa DIAC (59 ul, 0,3 mmol) i reakciona smeša je zagrejana do temperature od 65 °C. Nakon laganog mešanja tokom noći, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i profiltrirana kroz polistirenski filter sa THF (30 ml). Filtrat je koncentrovan u vakuumu i hromatografisan putem hromatografije za rektifikaciju lakih frakcija na koloni 15 mm x 152 mm sa smešom EtOAc, heksana i metanola u odnosu 1:1:0.1, nakon čega su frakcije koje sadrže proizvod sakupljene i koncentrovane u vakuumu, čime je dobijeno jedinjenje Primera 144 u vidu žutog ulja (40 mg, 86%).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8: 7,42-7,25 (m, 5H), 6,83- 6,77 (m, 3H), 4,63 (s, 2H), 4,15 (dd, 2H), 3,96-3,20 (m, 6H, konformeri), 3,81 (s, 3H), 1,74 (m, IH), 1,24 (s, 3H), 1,17 i 1,10 (dubleti, 3H, konformeri), 0,72 (d, 3H, konformeri), 0,53 (m, 2H), 0,41 (m, 2H).
Primer 145
R<1>=CH2C(CH3)(CH2CH2); R<3>=COCH2OH
l-((3R)-3-((lR)-l-Hidroksietil)-4-{4-roe^^
metilpirolidiniI)-2-hidroksietan-l-on
Sirovi proizvod iz Primera 144 (40 mg, 0,086 mmol) podvrgnut je postupku debenzilacije, opisanim kod Intermedijera 31, čime je dobijeno jedinjenje Primera 145 u vidu bistrog ulja (32,5 mg, 100%).
'H-NMR (CDCI3/CD3OD, 400 MHz) 8: 6,87-6,79 (m, 3H), 3,97-3,18 (m, 7H, konformeri). 3,83 (s, 3H), 1,23 (s, 3H), 1,14 i 1,11 (dubleti, 3H, konformeri), 0,77 (s, 3H), 0,56 (m, 2H);0,42 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 378,2 (m+1).
Primer 146
R<1>=CH2CH2C3H5; R<3>=COCH2OCH2Ph
2- Benzilol«i-l-[(3S,4S)-4-(3-(2-cM^ 3- metilpiroIidin-l-il]etanon
Jedinjenje iz Primera 143 je podvrgnuto postupku iz Primera 144, korišćenjem 2-ciklopropiletanola (26 mg, 0,3 mmol), čime je dobijeno jedinjenje Primera 146 (41 mg, 88%).
'H-NMR (400 MHz, CDCI3) 8: 7,41-7,25 (m, 5H), 6,82-6,74 (m, 3H), 4,63 (s, 2H), 4,15 (dd, 2H), 4,04 (dd, 2H), 3,98-3,20 (m, 5H, konformeri), 3,81 (s, 3H), 1,82 i 1,79 (m, IH,
konformeri), 1,72 (dd, 2H), 1,40-1,20 (m, IH), 1,18 i 1,12 (d, 3H, konformeri), 0,82 (m, IH), 0,74 (s, 3H), 0,46 (m, 2H), 0,12 (m, 2H).
Primer 147
R^CHiOfcCsH^;R<3>=COCH2OH
l-{(3R)-3-((lR)-l-Hidrotaietil)-4-[3-(2-ciklopropiletoksi)-4-metoksifenil]-3-
metilpirolidinil}-2-hidroksietan-l-on
Jedinjenje iz Primera 146 podvrgnuto je postupku debenzilacije, opisanim kod Intermedijera 31, čime je dobijeno jedinjenje Primera 147 u vidu bistrog ulja (27,4 mg, 82%). 1 H-NMR (CDCI3/CD3OD, 400 MHz) 8: 6,91-6,80 (m, 3H), 4,19 (m, 2H), 4,10 (m, 2H), 3,97-3,15 (m, 5H, konformeri), 3,82 (s, 3H), 1,73 (dd, 2H), 1,25 (m, IH), 1,14 i 1,12 (dubleti, 3H, konformeri), 0,85 (m, IH), 0,78 (s, 3H), 0,46 (m. 2H), 0,14 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 378,5 (m+1).
Primer 148
R<l>=CH2CH2C5H9; R<3>=COCH2OH
l-{(3R)-3-((lR)-l-iffdroksietil)-4-[3-(2-ciklo<p>entiletoksi)-4-metoksifenilJ-3-metiIpirolidinil}-2-hidroksietan-l-on
Dobijeno postupkom iz Primera 144, korišćenjem jedinjenja iz Primera 143 i 2-ciklopentiletanola (34 mg, 0,3 mmol), čime je dobijeno jedinjenje Primera 148 (41 mg, 100%).
1 H-NMR (400 MHz, CDC13) 8: 7,41-7,25 (m, 5H), 6,82-6,74 (m, 3H), 4,63 (s, 2H), 4,15 (dd, 2H), 3,99 (dd, 2H), 3,98-3,20 (m, 5H, konformeri), 3,81 (s, 3H), 2,00-1,20 (m, 1IH), 1,18 i 1,12 (d, 3H, konformeri), 0,74 (s, 3H).
Primer 149
l-[(3S,4S)-4-[3-(2-ciklopentiletoksi)-4-metoksifenil]-3-((lR)-l-hidroksietiI)-3-metilpiroIidin-l-il]-2-hidroksietanon
Jedinjenje iz Primera 148 podvrgnuto je postupku debenzilacije, opisanim kod Intermedijera 31, čime je dobijen proizvod u vidu bistrog ulja (34,7 mg, 86%).
'H-NMR (CDCI3/CD3OD, 400 MHz) 8: 6,87-6,80 (m, 3H), 4,18 (m, 2H), 4,03 (m, 2H), 3.99-3,11 (m, 5H, konformeri), 3,84 (s, 3H), 2,01-1,15 (m, 1 IH), 1,14 i 1,11 (dubleti, 3H, konformeri), 0,77 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 406,4 (m+1).
Primer 150
2-Benziloksi-l-[4-(S)-[3-(bici^ hidroksietil)-3-metilpirolidin-l-il]etanon
Dobijeno od jedinjenja iz Primera 143 putem Mitsunobu reakcije, opisane u Primeru 144, korišćenjem biciklo[4.1.0]hept-7-il-Metanola, čime je dobijena je 80:20 smeša cis i trans izomera (prinos 34%).
'H NMR (CDC13, 400 MHz) 6: 7,42-7,23 (m, 5H), 6,85-6,72 (m, 3H), 5,06-4,89 (m, IH), 4,67 (s, 2H), 4,15 (s, 2H), 4,07-3,56 (m, 9H), 2,09-1,56 (m, 8H), 1,36-0,87 (m, 8H), 0,73 (m, 3H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 508,6 (m+1).
Primer 151
l-(4-(S)-[3-(BiciWo[4.1.0]hep^ metilpirolidin-l-il]-2-hidroksictanon
Jedinjenje iz Primera 150 (15 mg, 30 mmol), rastvoreno je u 95% etanolu (1 ml) i rastvor je tretiran sa Pearlman-ovim katalizatorom (20% Pd(OH)2na ugljeniku, 15 mg). Reakciona smeša je hidrogenolizovana na pritisku od jedne atmosfere (ili na 50 psi) vodonika, u toku 16 časova. Reakciona smeša je zatim profiltrirana u cilju uklanjanja katalizatora, nakon čega je rastvarač uklonjen mlazom azota. Proizvod je prečišćen hromatografijom na silika-gelu, ako je potrebno upotrebom smeše EtOAc:heksani:metanol u odnosu 1:1:0,2. Prinos 76%.
'H NMR (CDCI3, 400 MHz) 8: 6,73-6,66 (m, 3H), 4,04-3,99 (m,2H), 3,94-3,87 (m, 4H), 3,83-3,20 (m, 7H), 3,15-2,73 (m, IH), 1,78-1,47 (m, 5H), 1,14-0,69 (10H), 0,63-0,60 (3H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 418,3 (m+1).
Primer 152
2-Benziloksi-l-[4-(S)-[3<biciklo[3.1.0]heks-6-ilmetok5i)-4-metoks hidroksietil)-3-metilpiroIidin-l-iI]etanon
Dobijeno od jedinjenja iz Primera 143 putem Mitsunobu reakcije, opisane u Primeru 144, korišćenjem biciklo[3.1.0]heks-6-il-Metanola. Proizvod je bio nerazdvojiva smeša izomera na alkoholnom bočnom lancu (prinos 32%).
<*>H NMR (CDCh, 400 MHz) 8: 7,45-7,29 (m, 5H), 6,84-6,72 (m, 3H). 5.02-4,94 (m.lH), 4,66 (s, 2H), 4,16 (s, 2H), 4,08-3,44 (m, 8H), 1,96-1,51 (m, 4H), 1,26 (d, 6H), 1,18-1,08 (dd. 5H), 0,72 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 494,4 (m+1).
Primer 153
l-[4-(S)-[3-(Biciklo[3.1.0]beks-6-ilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-(S)-(l-(R)-hidroksietiI)-3-metilpirolidin-l-il]-2-hidroksietanon
Dobijeno od jedinjenja iz Primera 152, postupkom debenzilacije opisanim kod Primera 151. Prinos 90%.
'H NMR (CD3OD, 400 MHz) 8: 6,87-6,79 (m, 3H), 4,97-4,90 (m, IH), 4,19-4,14 (m, 2H), 3,99-3,36 (m, 7H), 3,30-2,89 (m, IH), 1,92-1,52 (m, 4H), 1,28 (d, 6H), 1,16-1,06 (m, 6H), 0,77 (m,3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 404,3 (m+1).
Primer 154
2-BenziIoksi-l-[4-(S)-[3-(4-terc-butto hidrokšsietiI)-3-metiIpiroIidin-l-il]etanon
Dobijeno putem Mitsunobu reakcije opisane u Primeru 144, korišćenjem jedinjenja iz Primera 143 i 4-terc-butil-cikloheksanola. Prinos 17%.
<J>H NMR (CDC13, 400 MHz) 8: 7,43-7,28 (m, 5H), 6,85-6,73 (m, 3H), 6,37 (brd s, IH), 5,02-4,93 (m, 2H), 4,67 (s, 2H), 4,13 (m, 2H), 3,89-3,43 (m, 7H), 2,19-1,36 (m, 8H), 1,26 (d. 9H), 1,18-1,08 (dd, IH), 0,92-0,81 (m, 6H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 538,8 (m+1).
Primer 155
l.[4_(S)-[3-(4-terc-ButilciWoheksilota metilpirolidin-l-il]-2-hidroksietanon
Dobijeno od jedinjenja iz Primera 154, postupkom debenzilacije opisanim kod Primera 151. Prinos 89%.
'H NMR (CD3OD, 400 MHz) 8: 6,82-6,74 (m, 3H), 4,91-4,85 (m, 3H), 3,82-3,78 (m, 4H), 3,76-3,30 (m, 4H), 2,14-1,34 (m, 2H), 1,22-1,18 (m, 10H), 1,08-0,99 (m, 3H), 0,86-0,78 (m, 9H), 0,79-0,75 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 448,8 (m+1).
Primer 156
2-Benziloksi-l-{3-(S)-(l-(R)-hto fenil]-3-metilpiroIidm-l-il}etanon
Dobijeno putem Mitsunobu reakcije od jedinjenja iz Primera 143. korišćenjem 4-metilcikloheksanola (smeše izomera). Prinos 10%.
'H NMR (CDC13, 400 MHz) S: 7,42-7,28 (m, 5H), 6,83-6,74 (m, 3H), 4,67 (s, 2H), 4,40-4,36 (m, IH), 4,15-4,12 (m, 2H), 3,97-3,44 (m, 8H), 1,98-1,91 (m, 2H), 1.60-0,85 (m, 15H), 0,74-0,71 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 496.7 (m+1).
Primer 157
2- Hidroksi-l-{3-(S)-(l-(R)-hidro^ 3- metilpirolidin-l -iljetanon
Dobijeno od jedinjenja iz Primera 156, postupkom debenzilacije opisanim kod Primera 151 (kvantitativni prinos).
'H NMR (CD3OD, 400 MHz) 6: 6,87-6,79 (m, 3H), 4,18-4,11 (m, 2H), 3,98-3,70 (m, IH). 3,69-3,36 (m, 10H), 3,09-2,89 (m, IH), 1,99-1,92 (m, IH), 1,61-1,43 (m, 6H), 1,28-1.25 (m. 2H), 1,14-1,10( m,3H), 0,97-0,86 (m, 3H), 0,78-0,76 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 406,6 (m+1).
Primer 158
2-Benziloksi-l-[4-(S)-[3-(dekahi^ hidroksietil)-3-metiIpiroIidin-l-il]etanon
Dobijeno putem Mitsunobu reakcije od jedinjenja iz Primera 143, korišćenjem dekahidronatfalen-2-ola (smeše izomera). Prinos 10%.
'H NMR (CDC13, 400 MHz) 6: 7,42-7,29 (m, 5H), 6,85-6,74 (m, 3H), 5,03-4,95 (m, IH), 4,68 (s, 2H), 3,98-3,45 (m, 7H), 1,90-1,10 (m, 22 H). 0,75-0,72 (m, 3H)
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 536,7 (m+1).
Primer 159
l-f4-(S)-[3-(Dekahidronaftalen-2-iloksi)-4-metoksifeniIJ-3-(S)-(l-(R)-hidroksietil)-3-metilpiroIidin-l-iI]-2-hiđroksietanon
Dobijeno od jedinjenja iz Primera 158, postupkom debenzilacije opisanim kod Primera 151 (kvantitativni prinos).
'H NMR (CDCI3, 400 MHz) 8: 6,85-6,79 (m, 3H), 5,02-4,94 (m, IH), 4,23-4,12 (m, 2H), 4,03-3,48 (m, 10H), 3,08-2,89 (m, IH), 1,89-1,80 (m, 2H), 1,78-1,13 (m, 17H), 0,77-0,75 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 446,1 (m+1).
Primer 160
2- BenziloksM-[4-(S)-[3-(bici^^ 3- metilpirolidin-l-il]etanon
Dobijeno putem Mitsunobu reakcije od jedinjenja iz Primera 143, korišćenjem bicikloheksil-4-ola (smeše izomera). Prinos 12%.
'H NMR (CDC13;400 MHz) 8: 7,42-7,29 (m, 5H), 6,84-6,74 (m, 3H), 5,03-4,95 (m, IH), 4,68 (s, 2H), 4,17-4,11 (m, 2H), 3,98-3,45 (m, 7H), 1,90-1,10 (m, 26H), 0,75-0,72 (m, 3H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 564,8 (m+1).
Primer 161
l-f4-(S)-[3-(Biciklohek5il-4-iloksi)-4-metoksifenil]-3-(S)-(l-(R)-hidroksietil)-3-metilpiroIidin-l-il]-2-hidroksietanon
Dobijeno od jedinjenja iz Primera 160, postupkom debenzilacije opisanim kod Primera 151 (kvantitativni prinos).
'H NMR (CDC13, 400 MHz) 8: 6,85-6,79 (m, 3H), 5,02-4,93 (m, IH), 4,20-4,15 (m, 2H), 4,07-3,47 (m, 8H), 3,07-2,88 (m, IH), 2,17-1,94 (m, 2H), 1,82-0,82 (m, 23H), 0,77-0,74 (brd s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 474,6 (m+1).
Primer 162
2-Benziloksi-l-{3<S)-(l-(R)-hi^ cikIoheksiloksi)feniI]-3-metilpirolidin-l-iI}etanon
Dobijeno putem Mitsundbu reakcije od jedinjenja iz Primera 143, korišćenjem 4-trifluorometilcikloheksanola (smeše izomera). Prinos 40%.
<*>H NMR (CDC13, 400 MHz) 6: 7,46-7,24 (m, 5H), 6,88-6,77 (m, 3H), 4,72-4,61 (brd s. 2H), 5,03-4,89 (brd m, IH), 4,19-3,18 (m, 10H), 2,26-0,80 (m, 14H), 0,75-0,68 (brd, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 550,7 (m+1).
Primer 163
2-Hidrotai-l-{3-(S)-(l-(R)-hidroksietiI)-4-(S)-[4-metoksi-3-(4-trifluorometil-cikJoheksiloksi)fenil]-3-metilpiroIidin-l-il}etanon
Dobijeno od jedinjenja iz Primera 162, postupkom debenzilacije opisanim kod Primera 151 (kvantitativni prinos).
'H NMR (CDCI3, 400 MHz) 8: 6,85-6,83 (m, 3H), 5,03-4,90 (m, IH), 4,26-4,15 (m, 2H), 4,13-3,95 (m, 2H);3,89-3,37 (m, 7H), 3,10-2,90 (m, IH), 2,26-2,18 (m, 2H), 2,08-2,01 (m. 3H), 1,55-0,86 (m, 7H), 0,75 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 460,3 (m+1).
Primer 164
2-Benziloksi-H3-(S)-(l-(R)-hid^^
fenil]-3-metilpirolidin-l-il}etanon
Dobijeno putem Mitsunobu reakcije od jedinjenja iz Primera 143, korišćenjem 3-metoksi-3-metilbutanola. Prinos 78%.
'H NMR (CDCI3, 400 MHz) 8: 7,42-7,29 (m, 5H), 6,85-6,72 (m, 3H), 4,67 (s, 2H), 4,17-4,13 (m, 3H), 3,97-3,45 (m, 9H), 3,23 (d, 4H), 2,07-2,01 (m, 2H), 1,23 (s, 6H), 1,16-1,09 (dd. 4H), 0,72 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 500,6 (m+1).
Primer 165
2-Hidroksi-l-{3-(S)-(l-(R)-hidroksietil)-4-(S)-|4-metoksi-3-(3-metoksi-3-metilbutoksi)feniI]-3-metilpiroIidin-l-il}etanon
Dobijeno od jedinjenja iz Primera 164, postupkom debenzilacije opisanim kod Primera 151. Prinos 97%.
'H NMR (CDC13: 400 MHz) 8: 6,83-6,72 (m, 3H), 4,19-4,11 (m, 4H), 4,01-3,79 (m, IH), 3,83 (s, 3H), 3,72-3,46 (m, 7H), 3,22 (s, 3H), 2,05-1,99 (m, 2H), 1,22 (brd s, 7H), 1,16-1,11 (m, 3H), 0,73 (brd s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 410,2 (m+1).
Primer 166
2-Benwloksi-l-{3-(S)-(l-(R)-hM^^ metoksi)fenil]-3-metilpirolidin-l-il}etanon
Dobijeno putem Mitsunobu reakcije od jedinjenja iz Primera 143, korišćenjem (1-fenilciklopentil)metanola. Prinos 25%.
'H NMR (CDC13)400 MHz) 8: 7,46-7,13 (m, 10H), 6,78-6,37 (m, 3H), 5,01-4,93 (m, IH), 4,66 (s, 2H), 4,15-4,10 (m, 2H), 3,92-3,41 (m, 7H), 2,24-2,15 (m, IH), 2,04-1,97 (m, 2H), 1,84-1,70 (m,4H), 1,26 (d, 6H), 1,13-1,05 (dd, 3H), 0,87-0,85 (m, IH), 0,65 (2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 558.5 (m+1).
Primer 167
2-Hidroksi-l-{3-(S)-(l-(R)-hidroksietiI)-4-(S)-[4-metoksi-3-(l-fenilcikIopentilmetoksi) fenil)-3-metilpirolidin-l-il}etanon
Dobijeno od jedinjenja iz Primera 166, postupkom debenzilacije opisanim kod Primera 151. Prinos 26%.
'H NMR (CDG3, 400 MHz) 8: 7,46-7,43 (m:2H), 7,34-7,27 (m, 2H), 7,23-7,18 (m, IH), 6,81-6,71 (m, 3H), 6,53-6,48 (m, 2H), 4,15-4,09 (m, 2H), 3,93-3,88 (m, 2H), 3,78-3,46 (m, 7H), 2,25-0,68 (m, 17H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 468,7 (m+1).
Primer 168
2-Benzilotei-l-{3r(S)-(l-(R)-hidroksietiI)-4-(S)-[4-metoksi-3-(l-fe^ fenil]-3-metilpirolidin-l-il}etanon
Dobijeno putem Mitsunobu reakcije od jedinjenja iz Primera 143, korišćenjem (1-fenilciklopropil)metanola. Prinos 90%.
'H NMR (CDC13, 400 MHz) 8: 7,46-7,16 (m, 10H), 6,79-6.72 (m, 2H), 6,64-6.59 (m, IH), 4,66 (s, 2H), 4,14-4,12 (m, 2H), 4,10-4,02 (m, 2H), 3,91-3,42 (m, 9H), 1,28-1,25 (m, IH). 1,14-1,06 (m, 3H), 1,04-0,95 (m, 4H), 0,66 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 530,7 (m+1).
Primer 169
2-Hidroksi-l-{3-(S)-(l-(R)-hidroksietiJ)-4-(S)-[4-metoksi-3-(l-fenilciklopropilmetoksi)fenil]-3-metilpirolidin-l-il}etanon
Dobijeno od jedinjenja iz Primera 168, postupkom debenzilacije opisanim kod Primera 151. Prinos 44%.
'H NMR (CDCl3s400 MHz) 8: 7,47-7,21 (m, 5H), 6,84-6,60 (m, 3H), 4,15-4,04 (m,"4H), 3,99-3,46 (m, 8H), 3,05-2,99 (m, IH), 2,11-2,04 (m, IH), 1,74-1,59 (m, 2H), 1,29-0,96 (m, 4H), 0,88-0,68 ( m, AH).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 440,1 (m+1).
Primer 170
R<1>=CH2C(CH2CH3) (CH3OCH2); R<3>=COCH2OCH2Ph
2-Benzilok5i-l-[(3S,4S)-4-3-(3-etilote hid roksietil)- 3 -m etilpiroli din-1 -il] eta n o n
Dobijeno od jedinjenja iz Primera 143, postupkom opisanim kod Primera 144, upotrebom 3-etil-3-oksetanMetanola (34 ml, 0,3 mmol). Dobijeno je jedinjenje Primera 170 (44 mg, 88%). 1 H-NMR (400 MHz, CDC13) 5: 7,41-7,25 (m, 5H), 6,84-6,80 (m, 3H), 4,64 (s, 2H), 4,58 (dd, 2H), 4,49 (d, 2H). 4,17-4,11 (m, 3H), 3,99 (dd, 2H), 3,98-3,20 (m, 5H, konformeri), 3,80 (s, 3H), 1,91 (dd, 2H), 1,80 (d, IH), 1,24 (dd, IH), 1,17 i 1,13 (dubleti, 3H, konformeri). 0,94 (t, 3H), 0,73 (s, 3H).
Primer 171
R<1>=CH2C(CH2CH3) (CH2OCH2); R<3>=COCH2OH
l-((3R)-3-((lR)-l-HidroksietiI)-4-{3-[(3-etilol<setan-3-il)metoksi]-4-metoksifenil}-3-metilpirolidinil)-2-hidrokisetan-l-on
Jedinjenje iz Primera 170 je deprotektovano, putem debenzilacije opisane kod Intermedijera 31 čime je dobijeno jedinjenje Primera 171 u vidu bistrog ulja (28.6 mg, 80%).
'H-NMR (CDC13/CD30D, 400 MHz) 8: 6,91-6,83 (m, 3H), 4,64 (d, IH), 4,19 (m, 2H), 4,12 (m, IH), 4,00-3,14 (m, 12H), 3,83 (s, 3H), 1,15 (m, 3H), 0,96 (m, 3H), 0,78 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 408,5 (nr+1).
Primer 172
R^t-Bu; R<3>=COCH2OAc
(2-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(tercbutoksi)-4-metoksifenil]-3-^ 2-oksoetil acetat
Dobijeno od Intermedijera 73. postupkom vezivanja pomoću Hunig-ove baze. opisanim kod Intermedijera 74, uz upotrebu acetoksiacetil hlorida.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 5: 6,94-6,81 (rn, 3H), 4.72-4,58 (m. 2H), 3,80 (m, 3H), 3,97-3,17 (m, 6H), 2,19 (s, 3H), 1.33 (d, 9H), 1,15 (t, 3H), 0,76 (d. 3H).
Primer 173
R'=H; R<3>=COCH2OAc
2-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-hidroksi-4-metoksifenil)-3-metilpiroIidinill-2-oksoetil acetat
Jedinjenje iz Primera 172 je deprotektovano, putem TFA postupka opisanog ii Primeru 143, čime je dobijeno jedinjenje Primera 173 u vidu pene žućkasto-braon boje (173 mg, 80%).
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 5: 6,86-6,70 (m, 3H), 5,64 (br s, IH), 4,72-4,62 (m, 2H), 3,88 (m, 3H), 3,95-3,18 (c, 6H), 2,20 (d, 3H), 1,15 (t, 3H), 0,77 (d, 3H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 352,2 (m+1).
Primer 174
R<1>=4-Ph-Ph-CH2CH1;R<3>=C(=0)CH2OCH2Ph
2-Benziloksi-l-[(3S,4S)-4-[3-(2-bifenil-4-Hetoksi)-4-metoksifenil]-3-((R)-^ metilpirolidin-l-il]etanon
Jedinjenje iz Primera 143 (60 mg, 0,15 mmol) podvrgnuto je Mitsunobu postupku opisanom u Primeru 144, uz upotrebu 4-hidroksi-etilbifenila (90 mg. 0,45 mmol) i dobijeni proizvod je korišćen bez daljeg prečišćavanja ili karakterizacije (73 mg. 84%).
Primer 175
R,=4-Ph-Ph-CH2CH2; R<3>=C(=0)CH2OH
l-[(3S,4S)-4-(3K2-Bifenil-4-iletoksi)-4-metoksifenil]-3-((R)-l-hidroksietil)-3-metilpirolidin-l-il]-2-hidro ksietanon
Jedinjenje iz Primera 174 je podvrgnuto postupku debenzilacije, opisanom kod Intermedijera 31, čime je dobijeno jedinjenje Primera 175.
'H NMR (300 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,58 (br t, 7,4 Hz, 3H), 7,47-7,27 (m, 6H), 6,86-6,77 (m, 3H), 4,24 (dt, J = 3,0; 7,4 Hz, 2H), 4,11 (br t, J = 4,1 Hz, 2H), 4,01-3,47 (m, 5,5H, konformeri), 3,87 (s, 3H), 3,20 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 3,03 (d, J = 9,8 Hz, 0,5H, konformeri), 1,36/1,32 (2d, J = 3,6/3,7 Hz, IH), 1,16/1,13 (2D, J =6,5/6,4Hz, 3H), 0,74 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): m/e 490 (m+H)<+.>
Primer 176
R^CHjCsCPh; R<3>=COCH2OAc
2-{3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-[4-metoksi-3-(3-fenilprop-2-iniloksi)fen metilpirolidinil}-2-oksoetil acetat
Balon sa okruglim dnom, opremljen štapićem za mešanje i kondenzatorom, napunjen je jedinjenjem iz Primera 173 (270 mg, 0,769 mmol). acetonom (5 ml), CS2CO3(376 mg, 1.15 mmol) i Intermedijerom 90 (242 mg, 1,15 mmol), u atmosferi azota. Smeša je refluktovana u toku 4 časa, a zatim ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Aceton je uklonjen pod sniženim pritiskom, a ostatak je preuzet pomoću smeše EtOAc i vode. Dobijena smeša je ekstrahovana pomoću EtOAc (2 x 100 ml), osušena pomoću NaiSO«i koncentrovana. Biotage prečišćavanje (40 M kertridž, EtOAc:heksan:MeOH u odnosu 1:1:0,1) je dalo 146 mg jedinjenja Primera 176 u vidu bele pene (41%).
'H NMR (400 MHz. CDC13, smeša konformera) 8: 7,41-7,26 (m, 5H), 7,05 (dd, IH), 6,85 (d. 2H), 5,05-4,95 (m, 2H), 4,70-4,58 (m, 2H), 3,88 (d, 3H), 3,95-3,13 (c, 6H), 2,19 (s, 3H). 0.97-0,92 (dd, 3H), 0,71 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 466,4 (m+1).
P rimer 177
R^CHjOCM-FPh; R<3>=COCH2OAc
2- (3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-{3-I3-(4-nuorofenil)prop-2-iniloksi]-4-metoksifenil}-3- metiIpirolidinil)-2-oksoetil acetat
Pripremljen od jedinjenja iz Primera 173, postupkom iz Primera 176, upotrebom Intermedijera 91 kao alkilujućeg agensa.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,40-7,36 (m, 2H), 7,04-6,97 (m, 3H), 6,86-6,85 (m, 2H), 4,98-4,97 (m, 2H), 4,71-4,59 (m, 2H), 3,88 (d, 3H), 3,96-3,16 (c, 6H), 2,20-2,18 (m. 3H), 1,01 (t, 3H), 0,72 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 484,8 (m+1).
Primer 178
R,=CH(C3H5)C3H5; R<3>=COCH2OAc
2-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(diciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpiroIidinil}-2-oksoetil acetat
Pripremljen od jedinjenja iz Primera 173, Mitsunobu postupkom iz Primera 144, upotrebom diciklopropilkarbinola.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,26-6,78 (m, 3H), 4,74-4,60 (m, 2H), 3,96-3,46 (m, 9H), 3,21-3,10 (m, 2H), 2,20 (s, 3H), 1,26 (d, IH), 1,19-1,11 (m, 4H), 0,75 (d, 3H). 0,55-0,41 (m, 4H), 0,33-0,24 (m, 4H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 446,5 (m+1).
Primer 179
R^-^-hlorofenil) (l,2,4-oksadiazol-5-iI)metil; R<3>=COCH2OAc
2-[3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-{(3-(4-hlorofeniI)(l,2,4-oksadiazol-5-il)Jmetoksi}-4-metoksi-fenil)-3-metilpiroliđiniI]-2-oksoetil acetat
Pripremljen od jedinjenja iz Primera 173, postupkom sa CsC03, opisanim u Primeru 176, upotrebom Intermedijera 87.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 8,02 (d, 2H), 7,46 (d, 2H), 6,95-6,85 (m, 3H), 5,40 (d, 2H), 4,70-4,58 (m, 2H), 3,94 (d, 3H). 3,95-3,12 (c, 6H), 2,19 (s, 3H), 1,04-1,00 (dd, 3H), 0,64 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 544,4 (m+1).
Primer 180
R'=CHjC=CPh; R<3>=COCH2OH
l-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[4-metoksi-3-(3-fenilprop-2-iniloksi)fenil]-3-metUpirolidinil}-2-hidroksietan-l-on
Dobijen od jedinjenja iz Primera 176. putem postupka hidrolize pomoću LiOH. opisanog kod Intermedijera 5.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,40-7,26 (m, 5H), 7,07-7.06 (m. IH), 6.85-6,84 (m, 2H), 5,05-4,94 (m, 2H), 3,89 (s, 3H). 4,13-2,99 (c, 8H), 0,98-0.92 (dd. 3H). 0,71 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 424,6 (m+1).
Primer 181
R<1>=CH2C=C-4-FPh; R<3>=COCH2OH
l-(3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-{3-f3-(4-lfuorofenil)prop-2-iniloksi]-4-metoksileniI}-3-metilpirolidiniI)-2-hidroksietan-l-on
Dobijen od jedinjenja iz Primera 177, putem postupka hidrolize pomoću LiOH, opisanog kod Intermedijera 5.
<J>H NMR (400 MHz, CDCl3ssmeša konformera) 8: 7,39-7,36 (m, 2H), 7,03-6,98 (m, 3H), 6,85 (s, 2H), 5,02-4,93 (m, 2H), 3,89 (s, 3H), 4,15-3,01 (c, 8H), 1,04-0,99 (dd, 3H), 0,72 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 442,7 (m+1).
Primer 182
R^CaHsCHCjHs; R<3>=COCH2OH
l-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S^^ metilpiroIidiniI}-2-hidroksietan-l-on
Dobijen od jedinjenja iz Primera 178, putem postupka hidrolize pomoću LiOH opisanog kod Intermedijera 5.
<J>H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 8: 6,90-6,78 (m, 3H), 4,17-3.44 (c, 11H), 3,15-3,03 (m, 2H), 1,32-1,20 (m, IH), 1,19-1,09 (m, 4H), 0,75 (d, 3H). 0,54-0,39 (m, 4H), 0,34-0,23 (m, 4H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 404,5 (m+1).
Primer 183
R^-^-hlorofenil) (1,2,4-oksadiazol-5-il)metil; R<3>=COCH2OH
l-[3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-{[3-(4-l)lorofenil)(l,2,4-oksadiazol-5-il)]metoksi}-4- metoksifeniI)-3-metiIpiroIidinil]-2-hidroksietan-l-on
Dobijen od jedinjenja iz Primera 179, putem postupka hidrolize pomoću LiOH opisanog kod Intermedijera 5.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 8,03 (d, 2H). 7,47 (d, 2H), 6.95-6.86 (m, 3H), 5,40 (s, 2H), 3,88 (s, 3H), 4.12-2,98 (c, 8H), 1,05-0,99 (dd, 3H), 0,64 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 502,4 (m+1).
Primer 184
R^CHiCHzt-Bu; R<3>=COCH2OCH2Ph
l-{3-((lR)-^Hidrol«ietil)(3S,4S)-4-f3-(3,3-đir^etilbutoksj)-4-metoksife^iI)-3-mctiIpiroliđinil}-2-(fenilmetoksi)etan-l-on
Pripremljen od jedinjenja iz Primera 143. Mitsunobu postupkom iz Primera 144. upotrebom 3,3-dimetil-1 -butanola.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 5: 7,41-7,31 (m, 5Hj, 6.80-6,75 (m. 3H). 4,70-4,63 (m, 2H), 4,15-3,21 (c, 13H), 1,80-1.73 (m. 2H), 1,17-1.10 (m, 2H). 0,98 (s. 9H). 0,74 (d. 3Hj.
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 484,6 (m+1).
Primer 185
R'=CH2CH2t-Bu; R<3>=COCH2OH
l-{3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-[3-(3,3-dimetiIbutoksi)-4-metoksifeniI]-3-mcfilpirolidinil}-2-hidroksieran-l-on
Pripremljen od jedinjenja iz Primera 184, postupkom debenzilacije opisanim kod Intermedijera 31.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 6,88-6,71 (m, 3H), 4,38-2,99 (c, 13H). 1.82-1.73 (m, 2H), 1.19-1,08 (m, 3H), 0,97 (s, 9H), 0,80-0,69 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 394,4 (m+1).
Primer 186
R^CHsCaHs; R<3>=COCH2OCH2Ph
l-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(ciWopropiImetoksi)-4-metoksifeni metilpiroIidiniI}-2-(fenilmetoksi)etan-l-on
Pripremljen od Intermedijera 67, putem postupka vezivanja pomoću Hunig-ove baze, opisanog kod Intermedijera 74, upotrebom benziloksi-acetil hlorida.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,40-7,29 (m, 5H), 6,82-6,74 (m, 3H), 4,66 (s, 2H). 4,15-3,20 (c, 11H), 1,71-1,57 (br s, IH). 1,35-1,23 (m, IH), 1,16-1,07 (dd, 3H), 0,71 (s, 3H), 0,62 (d, 2H), 0,34 (d, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 454,6 (m+1).
Primer 187
R<1>=CH2C3Hs;R3=COCH2OH
l-{3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-f3-(ciklopropilmetoksi)-4-mctoksifenilj-3-metilpirolidinil}-2-hidroksietan-l-on
Pripremljen od jedinjenja iz Primera 186, postupkom debenzilacije opisanim kod Intermedijera 31.
'H NMR (Metanol-d4,400 MHz) 8: 6,95-6,84 (m, 3H), 4,31-4,22 (m, 2H), 3,91-3,23 (c, 1 IH). 1.30-1,19 (m, IH), 0,74 (s, 3H), 0,62-0,56 (m, 2H), 0,35-0,28 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 364,2 (m+1).
Primer 188
R'=CH2C3H5; R<3>=COCH2NHC02CH2Ph
N-(2-{3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-|3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifeni metilpirolidinil}-2-oksoctil)(fenilmetoksi)karboksamid
Pripremljen od Intermedijera 67, putem postupka acilacije opisanog u Primeru 7. uz upotrebu Z-Gly-ONp.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 6: 7,45-7,30 (m, 5H), 6,85-6,76 (m, 3H), 5,81 (br s, IH), 5,13 (s, 2H), 4,10-3,43 (c, 12H), 3,17 (d, IH), 1,68 (br s, IH), 1,36-1,26 (m, IH), 1,14 (t, 3H), 0,73 (d, 3H), 0,66-0,60 (m, 2H), 0,38-0,31 (m, 2H).
Primer 189
R<J>=CH2C3H5; R<3>=COCH2NH2
1- {3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenilJ-3-metilpirolidinil}-2-aminoetan-l-on
Pripremljen od jedinjenja iz Primera 188, postupkom debenzilacije opisanim kod Intermedijera 31.
'H NMR (Metanol-d«, 400 MHz, smeša konformera) 8: 6,96-6.81 (m. 3H), 4,00-3.27 (c, 13H), 1,29-1,18 (m, IH), 1,13-1,07 (m, 3H). 0,75 (m, 3H), 0,62-0,54 (m, 2H). 0,35-0.28 (m. 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 363,2 (m+1).
Primer 190
R^CH^Hs; R<3>=COC(CH3)2OCOCH3
2- {3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropiImetoksi)-4-metoksifenil]-3-metiipirolidinil}-l,l-dimetil-2-oksoetil acetat
Pripremljen od Intermedijera 67, putem postupka vezivanja pomoću Hunig-ove baze. opisanog kod Intermedijera 74, upotrebom 2-acetoksiizobutiril hlorida.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 6,87-6,70 (m, 3H), 3,93-3,32 (c, 11H), 2.08 (d, 3H), 1,81-1,65 (br m. IH), 1,65-1,53 (m, 6H), 1.35-1.23 (m, IH), 1,19-1,11 (t. 3H). 0,68 (d, 3H), 0,65-0.57 (m, 2H), 0.37-0.30 (m. 2H).
Primer 191
R<I>=CH2C3H5; R<3>=COC(CH3)2OH
1- {3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-[3-(ciW^ metilpirolidinil}-2-hidroksi-2-metilpropan-l-on
Dobijen od jedinjenja iz Primera 190. pmem postupka hidrolize pomoću LiOH opisanog kod Intermedijera 5.
'H NMR (400 MHzsCDC13, smeša konformera) 8: 6,84-6,75 (m, 3H), 4,43 (br s. IH). 4.01-3,41 (c, UH), 1,52-1,41 (m, 6H), 1,32-1,17 (m, IH), 1,16-1,08 (t, 3H), 0,73 (d. 3H), 0,63-0,57 (m, 2H), 0,37-0,29 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 392,5 (m+1).
Primer 192
R^CHjCaHs;R<3>=(S)-COCH(CH3)OAc
2- {3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S}4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifcnilJ-3-metiJpirolidinil}(l S)-l-metil-2-oksoetil acetat
Pripremljen od Intermedijera 67, putem postupka vezivanja pomoću Hunig-ove baze,. opisanog kod Intermedijera 74, upotrebom (S)-2-acetoksipropionil hlorida.
'H NMR (400 MHz. CDC13, smeša konformera) 8: 6.83-6,76 (m, 3H), 5,25-5.17 (m, IH). 4,08-3,35 (c, 12H), 2,15-2,09 (m, 3H), 1.50-1.44 (m, 3M), 1,35-1,23 (m. IH). 1,15 (d, 3H), 0,79-0,71 (m, 3H), 0,65-0,60 (m, 2H), 0,37-0,30 (m, 2H).
Primer 193
R<J>=CH2C3H5; R<3>=(S)-COCH(CH3)OH
l-{3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropiImetoksi)-4-metoksifeniI]-3-metilpirolidiniI}(2S)-2-hidroksipropan-l-on
Dobijen od jedinjenja iz Primera 192. putem postupka hidrolize sa LiOH opisanog kod Intermedijera 5.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 6,84-6,73 (m, 3H):4,39-4,28 (m. IH). 3,88-3,48 {c, 10H), 3,29 (dd, IH), 1,40-1.20 (m. 4H), 1,12 (t. 3H), 0,73 (d, 3H), 0,64-0.55 (m, 2H). 0,37-0,29 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 378,7 (m+1).
Primer 194
R,=CH2C3H5; R<3>=COCH(Ph)OAc
2-{3-((lR)-l-Hidrok^ietil)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpiroIidinil}-2-okso-l-feniletiI acetat
Pripremljen od Intermedijera 67, putem postupka vezivanja pomoću Hunig-ove baze, opisanog kod Intermedijera 74, upotrebom hlorida O-acetil-bademove kiseline.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera i dijastereomera) 8: 7,57-7,35 (m, 5H), 6,84-6,51 (m, 3H), 6,11-6,04 (m, IH), 4,08-3,05 (c, UH), 2,21-2,14 (m, 3H), 1,36-1,20 (m, IH), 1.14- 1,06 (dd, 3H), 0,78 i 0,48 (s i d, 3H), 0,67-0,57 (m, 2H), 0,37-0,28 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 482,6 (m+1).
Primer 195
R^CHjOjHj; R<3>=COCH(Ph)OH
1- {3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metiipirolidinil}-2hidroksi-2-feniletan-l-on
Dobijen od jedinjenja iz Primera 194, putem postupka hidrolize sa LiOH opisanog kod Intermedijera 5.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera i dijastereomera) 8: 7,40-7.28 (m, 5H), 6.81-6,42 (m, 3H). 5,13-4,61 (m, IH), 4,07-3.29 (c, 10H), 3,21-2,79 (m, IH), 1,36-1,20 (m, IH). 1.15- 0,97 (dd, 3H), 0,73 i 0,47 (d i s, 3H), 0,65-0,56 (m, 2H), 0,37-0,28 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 440,2 (m+1).
Primer 196
R^O^Hs; R<3>=COCH(4-FPh)OAc
2- {3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-|3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifcnil]-3-metilpiroHdinU}-l(4-fluorofeniI)-2-oksoetil acetat
Pripremljen od Intermedijera 67, putem postupka vezivanja pomoću Hunig-ove baze. opisanog kod Intermedijera 74, upotrebom (hlorokarbonil)(4-fluorofenil)metil acetata.
'H NMR (400 MHz:CDCI3, smeša konformera i dijastereomera) 8: 7,60-7,46 (m, 2H), 7.15-7,03 (m, 2H), 6,85-6,54 (m, 3H), 6,09-5,99 (m, IH), 4,07-2,87 (c, 11H), 2,19-2,12 (m, 3H), 1,33-1,20 (m, IH), 1,15-1,03 (dd, 3H), 0,78 i 0,52 (d i d, 3H), 0,65-0,57 (m, 2H), 0,38-0,27 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 501,0 (m+1).
Primer 197
R^CHjCsHs; R<3>=COCH(4-FPh)OH
l-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifeniI]-3-metilpiroIidinil}-2(4-fluorofenil)-2-hidroksietan-l-on
Dobijen od jedinjenja iz Primera 196, putem postupka hidrolize sa LiOH opisanog kod Intermedijera 5.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera i dijastereomera) 8: 7,60-7,25 (m, 2H), 7,12-7,00 (m, 2H), 6,84-6,48 (m, 3H), 5,11-4,59 (m, IH), 4,04-2,79 (c, 11H), 1,35-1,23 (m. IH). 1,15-1,00 (dd, 3H), 0,75 i 0,48 (d i s, 3H), 0,66-0.60 (m, 2H), 0,37-0,30 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 458.2 (m+1).
Primer 198
R^CHjCjHs; R<3>=COC(CH2CH2)OAc
({3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-{3-(cikIopropiImetoksi)-4-metoksifeniI]-3-metilpiroIidiniI}karbonil)ciklopropil acetat
Pripremljen od Intermedijera 67, putem postupka vezivanja pomoću Hunig-ove baze. opisanog kod Intermedijera 74, upotrebom (hlorokarbonil)ciklopropil acetata.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 6,85-6,72 (m, 3H), 4,06-3,31 (c, 1 IH), 2.10 (s, 3H), 1.74-1,62 (m, IH), 1.59-1.47 (m, IH), 1,35-1,19 (m, 2H), 1,14 (d, 3H), 1,02-0,93 (m, IH), 0.71 (s. 3H), 0,65-0,59 (m, 2H), 0,37-0,30 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 432,5 (m+1).
Primer 199
R<l>=CH2C3Hs; R<3>=COC(CH2CH2)OH
3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil hidroksiciklopropil keton
Dobijen od jedinjenja iz Primera 198. putem postupka hidrolize sa LiOH opisanog kod Intermedijera 5.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 6,88-6,78 (m, 3H);4,42-3,30 (c, 11H), 1,42-1,22 (m, 3H), 1,16 (d, 3H), 1,11-0,88 (m, 3H), 0,74 (d, 3H), 0,66-0,59 (m, 2H), 0,39-0,31 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 390,5 (m+1).
Primer 200
R'=CH2C3H5; R<3>=(S)-COCH(OAc)CH(CH3)CH2CH3
2-{3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-|3-(ciklopropiImetoksi)-4-metoksifeniIJ-3-metilpirolidiniI}(lS)-l-(metilpropil)-2-oksoetiI acetat
Pripremljen od Intermedijera 67, putem postupka vezivanja pomoću Hunig-ove baze, opisanog kod Intermedijera 74, upotrebom (lS)-l-(hlorokarbonil)-2-metilbutil acetata.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera i dijastereomera) 8: 6,85-6,72 (m, 3H), 4,84 (dd, IH), 3,89-3,31 (c, 11H), 2,12 (d, 3H), 2,09-1,95 (m. IH), 1,75-1,62 (m, IH), 1,35-1.19 (m, 2H), 1,15 (t, 3H), 1,00-0,86 (m, 6H), 0,75 (d, 3H), 0,65-0,56 (m, 2H), 0,37-0,30 (m, 2H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 462,5 (m+1).
Primer 201
R,=CH2C3H5;R<3>=(S)-COCH(OH)CH(CH3)CH2CH3
l-{3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-I3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifeniI]-3-metilpirolidinil}(2S)2-hidroksi-3-metilpentan-l-on
Dobijen od jedinjenja iz Primera 200, putem postupka hidrolize sa LiOH opisanog kod Intermedijera 5.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera i dijastereomera) 8: 6,85-6,76 (m, 3H). 4.18-4,11 (m, IH), 3,94-3,26 (c, 1 IH), 1,75-1,66 (m, IH). 1,54-1,19 (m, 4H), 1,15 (dd, 3H), 1,07 (m, 3H), 0,94-0,85 (m, 3H), 0,76 (d. 3H), 0,66-0.60 (m, 2H), 0,38-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 420,5 (m+1).
Primer 202
R<1>=CH2C3H5;R<3>=(S)-COCH(OAc)CH2CH(CH3)2
2-{3-((lR)-l-HidroetietiI)(3S,4S)-4-[3^ metilpiroHdiniI}(lS)l-(2-metilpropil)-2-oksoetil acetat
Pripremljen od Intermedijera 67, putem postupka vezivanja pomoću Hunig-ove baze, opisanog kod Intermedijera 74, upotrebom (lS)-l-(hlorokarbonil)-3-melilbutil acetata.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 8: 6,84-6,74 (m, 3H), 5,19-5,10 (m, IH). 4,15-2,95 (c, I IH), 2,13 (d, 3H), 1,95-1,72 (m, 2H), 1,58-1,39 (m, 2H), 1,34-1,23 (m, IH), 1,18-1,12 (m, 3H), 1,00-0,88 (m, 6H), 0,75 (d. 3H), 0,68-0,57 (m, 2H), 0,37-0,30 (m, 2H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 462,5 (m+1).
Primer 203
R^CHjCsHs; R<3>=(S)-COCH(OH)CH2CH(CH3)2
1- {3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifeniI]-3-metilpiroIidinil}(2S)2-hidroksi-4-metilpentan-l-on
Dobijen od jedinjenja iz Primera 202, putem postupka hidrolize sa LiOH opisanog kod Intermedijera 5.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 6,86-6,77 (m, 3H), 4,32-4,25 (m, IH), 3,88-2,97 (c, 1 IH), 2,05-1,93 (m, IH), 1,73-1,21 (m, 5H), 1,14 {dd, 3H), 1,02-0,93 (m. 6H). 0,76 (d, 3H), 0,66-0,60 (m, 2H), 0,38-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 420,3 (m+1).
Primer 204
R'=CH2C3H5; R3=(S)-COCH(OAc)CH2Ph
2- {3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metiIpiroIidiniI}(lS)2-okso-l-benziletiI acetat
Pripremljen od Intermedijera 67, putem postupka vezivanja pomoću Hunig-ove baze, opisanog kod Intermedijera 74, upotrebom (!S)-l-(hIorokarbonil)-2-feniletil acetata.
<l>H NMR (400 MHz, CDC13>smeša konformera) 6: 7,40-7,26 (m, 5H), 6,82-6,70 i 6,52-6,47 (m i m, 3H), 5,30-5,18 (m, IH), 3,90-2,79 (c, 13H),2,11 (d, 3H), 1,35-1,25 (m, IH), 1.05 (dd. 3H), 0,66 i 0,33 (s i s, 3H), 0,68-0,60 (m, 2H), 0,39-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 497,0 (m+1).
Primer 205
R'=CH2C3HS; R<3>=(S)-COCH(OH)CH2Ph
l-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpiroIidinil}(2S)- 2-hidroksi-3-fenilpropan-l-on
Dobijen od jedinjenja iz Primera 204 (20 mg, 0,040 mmol), putem postupka hidrolize sa LiOH opisanog kod Intermedijera 5, čime se dobija 14,5 mg (79%) jedinjenja Primera 205 u vidu bezbojnog filma.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 6: 7,40-7,26 (m, 5H), 6,82-6,75 i 6.56-6.53 (m i m, 3H), 4,51-4,43 (m, IH), 3,90-2.70 (c, 13H), 1,35-1,25 (m, IH), 1,09 (dd, 3H), 0,69 i 0,52 (s i s, 3H). 0,68-0,60 (m, 2H), 0,39-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 454,3 (m+1).
Primer 206
R^CHjC^Hs; R<3>=(R)-COCH(OAC)CH2Ph
(lR)-2-{3-((]R)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenilJ-3-merilpirolidinil}-2-okso-l-benzilctil acetat
Pripremljen od Intermedijera 67, putem postupka vezivanja pomoću Hunig-ove baze, opisanog kod Intermedijera 74, upotrebom (lR)-l-(hlorokarbonil)-2-feniletil acetata.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,37-7.22 (m, 5H). 6,82-6,72, 6,64. 6.45 (m, d, i dd, 3H), 5,27 i 5,18 (dd, t, IH), 3.99-2,56 (c, 13H), 2,12 (s, 3H), 1,34-1,24 (m. IH), 1,13-1,02 (dd, 3H), 0,68 i 0,34 (s i s, 3H), 0,65-0.58 (m, 2H), 0,37-0,30 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 496,6 (m+1).
Primer 207
R^CHsCaHs; R<3>=(R)-COCH(OH)CH2Ph
((2R)-l-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4^^ metilpiro!idiniI}-2-hidrotai-3-fenilpropan-l-on
Dobijen ođ jedinjenja iz Primera 206, putem postupka sa litijum peroksidom opisanog kod Intermedijera 43.
'H NMR (400 MHz, CĐC13, smeša konformera) 8: 7,35-7,18 (m, 5H), 6,84-6,67 (m, 3H), 4,48-4,40 (m, IH)", 4,04-2,70 (c, 13H), 1,34-1,24 (m, IH), 1,08 (dd, 3H), 0,71 i 0,49 (s i s, 3H), 0,65-0,58 (m, 2H), 0,38-0,31 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 454,5 (m+1).
Primer 208
R'=t-Bu; R<3>=(S)-COCH(OAc)CH3
2-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(tecbutoksi)-4-metoksiftnil]-3-metilpirolidinil}(lS)-l-metil-2-oksoetil acetat
Pripremljen od Intermedijera 73, putem postupka vezivanja pomoću Hunig-ove baze, opisanog kod Intermedijera 74, upotrebom (S)-2-acetoksipropionil hlorida.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 6: 6,95-6,81 (m, 3H), 5,24-5,11 (m, IH), 3.80 (m, 3H), 4,08-3,38 (m, 6H), 2,15-2,12 (d, 3H), 1,49-1,46 (dd, 3H), 1,33 (d, 9H), 1.14 (d, 3H). 0,76 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 422,4 (m+1).
Primer 209
R'=H; R<3>=(S)-COCH(OAc)CH3
2-[3-((lR)-l-HidroksietiL)(3S,4S)-4-(3-hidroksi-4-metoksifeniI)-3-meH^ metiI-2-oksoetil acetat
Dobijen od jedinjenja iz Primera 208, putem postupka TFA deprotektovanja opisanog u Primeru 143.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 6: 6,88-6,70 (m, 3H), 5.73-5,69 (br d, IH). 5,25-5,19 (m, IH), 3,88 (d, 3H), 4,06-3,38 (m, 6H), 2,12 (d, 3H), 1,49-1,46 (d, 3H), 1,16-1,14 (dd, 3H), 0,75 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 366,3 (m+1).
Primer 210
R^OrfcCsCPh; R<3>=(S)-COCH(OAc)CH3
2-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[4-metoksi-3-(3-fenilprop-2-iniloksi)fenil]-3-merilpirolidiniI}(lS)-l-metil-2-oksoetil acetat
Dobijen od jedinjenja iz Primera 209, putem postupka sa CS2CO3opisanog u Primeru 176, upotrebom Intermedijera 90.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 5: . 7,39-7,26 (m, 5H), 7.05 (d, IH). 6.85 (s. 2H), 5,23-5,17 (m, IH), 5,05-4,95 (m, 2H), 3,86 (s, 3H), 4,07-3,36 (d, 6H), 2,15-2,12 (d, 3H), 1,47-1,40 (t, 3H), 1,36-1,33 (m, IH), 0,99-0,95 (m, 3H), 0,75-0,71 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e (m+1).
Primer 211
R^CHlCsCPh; R<3>=(S)-COCH(OH)CH3
1- {3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[4-metoksi^ metilpirolidinil}(2S)-2-hidroksipropan-l-on
Dobijen od jedinjenja iz Primera 210, putem postupka deprotektovanja sa O-acetatom opisanog u Primeru 95.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 5: 7.41-7.26 (m, 5H), 7.07 (d, IH), 6,86 (s, 2H), 5,05-4,94 (m, IH), 4,36-4,30 (m, IH), 3,89 (s, 3H), 3,91-3,48 (c, 5H), 3,28 (dd, IH). 1,37-1,32 (m, 3H), 0,99-0,92 (dd, 3H), 0,73-0,70 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 438.2 (m+1).
Primer 212
Rl=CH2C=C- 4- FPh; R<3>=(S)-COCH(OAc)CH3
2- (3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-{3-[3-(4-fluorofeniI)prop-2-iniloksiJ-4-metoksifeniI}-3- mctilpiroIidinil)-2-oksoetil acetat
Dobijen od jedinjenja iz Primera 209, putem postupka sa Cs^COsopisanog u Primeru 176. upotrebom Intermedijera 91.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,40-7.36 (m, 2H). 7,03-6.96 (m. 3H). 5,22-5,20 (q, IH), 4,98-4,96 (m, 2H), 4.07-3,53 (c, 6H), 3,88-3,86 (m, 3H), 2,14-2,11 (d. 3H), 1,47-1,42 (t, 3H), 1,06-1,01 (m, 3H), 0,75-0,72 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 498,5 (m+1).
Primer 213
R^OHUOCM-FPh; R<3>=(S)-COCH(OH)CH3
l-(3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-{3-[3-(4-lluorofenil)prop-2-iniloksiJ-4-metoksifenil}-3-metilpirolidinil)(2S)-2-hidroksipropan-l-on
Dobijen od jedinjenja iz Primera 212, putem postupka deprotektovanja sa O-acetatom opisanog u Primeru 95.
<!>H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,40-7,26 (m, 2H), 7,04-6,98 (m, 3H). 6.86 (s, 2H), 5,03-4,97 (m, 2H), 4,40-4,30 (m, IH), 3,89 (s, 3H), 3,94-3,52 (c. 5H), 3,29 (dđ\IH), 1,39-1,28 (d, 3H), 1,04-1,00 (m, 3H), 0,74-0,72 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 456,5(m+l).
Primer 214
R^CHjCsCM-CFjPh; R<3>=(S)-COCH(OAc)CH3
2-[3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(4-metoksi-3-{3-[4-(trifluorometil)fenil]prop-2-iniloksi}fenil)-3-metilpirolidiniI](lS)-l-metil-2-oksoetil acetat
Dobijen od jedinjenja iz Primera 209, putem postupka sa CS2CO3opisanog u Primeru 176, upotrebom Intermedijera 92.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 8: 7,57-7.45 (m, 4H), 7.01 (d, IH), 6,88-6,83 (m, 2H), 5,22-5,17 (m, IH), 5,00 (s, 2H), 4,07-3,35 (c, 6H), 3,88 (d, 3H), 2,13-2,11 (d, 3H). 1,47-1,42 (dd, 3H), 1,12 (d, 3H), 0,75-0,71 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 548,8 (ra+1).
Primer 215
R<1>=CH2CsC-4-CF3Ph; R<3>=(S)-COCH(OH)CH3
l-[3-((lR)-l-HidroIvsietiI)(3S,4S)-4-(4-metoksi-3-{3[4-(trifluorometil)fcnil]prop-2-iniloksi}fenil)-3-metilpirolidinil](2S)-2-hidroksipropan-l-on
Dobijen od jedinjenja iz Primera 214, putem postupka deprotektovanja sa O-acetatom opisanog u Primeru 95.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,56 (d, 2H), 7,50 (d, 2H), 7,03 (s, IH), 6.87 (s, 2H), 5,01 (s, 2H), 4,36-4,33 (m, IH), 3,89 (s, 3H), 3,91-3,49 (c, 5H), 3,30 (dd, IH), 1,37-1,35 (dd, 3H), 1.04-1,01 (t, 3H), 0,74-0,71 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 505.9 (m+1).
Primer 216
R'=*3-(4-hlorofenil) (l,2,4-oksadiazoI-5-iI)metiI; R3=(S)-COCH(OAc)CH3
2-[3-((lR)-l-Hidrol<sietil)(3S,4S)-4-(3-{[3-(4-hIorofenil)(l,2,4-ol«adiazoI-5-iI)]metoksi}-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil] (lS)-l-metil-2-oksoetil acetat
Dobijen od jedinjenja iz Primera 209, putem postupka sa CS2CO3opisanog u Primeru 176, upotrebom Intermedijera 87.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 5: 8,01 (d, 2H), 7,46 (d, IH), 6,96-6,85 (m, 3H), 5,45-5,36 (m, 2H), 5,21-5,14 (m, IH), 4,02-3,36 (c, 6H), 3,84 (m, 3H,), 2,11 (d, 3H), 1,47-1,42 (m, 3H), 1,04-1,02 (d, 3H), 0,67-0,65 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 558.2 (m+1).
Primer 217
R,=3-(4-hlorofenil)(l,2,4-oksadiazol-5-il)metil;R<3>=(S)-COCH(OH)CH3
l-(3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-{f3-(4-hlorofenil)(l,2,4-oksadiazo)-5-il)]metoksi}-4-metoksifeniI)-3-metilpirolidinil](2S)-2-hidroksipropan-l-on
Dobijen od jedinjenja iz Primera 216, putem postupka deprotektovanja sa O-acetatom opisanog u Primeru 95.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 5: 8,06-8,00 (m, 2H), 7,49-7.45 (m. 2H), 6,97-6,86 (m, 3H), 5,41 (m, 2H), 4,35-4,32 (m, IH). 3,88 (s, 3H), 3.86-3.19 (c, 6H), 1.38-1.32 (m, 3H), 1,05-1,00 (dd, 3H), 0,66-0,63 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 516,4 (m+1).
Primer 218
R'=2-indanil;R<3>=COCH(OAc)4-FPh
2-{3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-indan-2-iloksi-4-metok5ifeniI)-3-metilpiroIidini l-(4-fluorofeniI)-2-oksoetil acetat
Intermedijer 51 (72,8 mg, 0.198 mmol) je acilovan putem postupka sa K2CO3opisanim u Primeru 7, sa hloridom 2-acetoksifluorobademove kiseline (120 mg, 0.297 mmol, 1,5 eq.)- Dobijeno je bistro, bezbojno ulje (84,2 mg, 75%).
'H NMR (400 MHz. CDCI3, smeša konformera) 5: 7,53-7,47 (m, 2H), 7.26-7,03 (m, 6H), 6,87-6,59 (m, 3H), 6.09-6,04 (m, IH), 5,28-5,01 (m, IH), 4,14-3,03 (c, 13H). 2.16 (s, 311). 1,27-1,06 (m, 3H), 0,82-0,80 (d, 1,5H), 0,55-0,52 (d, 1,5H).
Primer 219
R'=2-indanil; R<3>=COCH(OH) 4-FPh
1- [3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-indan-2-iloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinilj-2- (4-fluorofenil)-2-hidroksietan-l-on
Jedinjenje iz Primera 218 (19 mg, 0,034 mmol, 1 eq.) podvrgnuto je postupku hidrolize pomoću LiOH, opisanom kod Intermedijera 5, čime je dobijena bela praškasta supstanca (6.1 mg. 35%).
'H NMR (400 MHz,CĐCh,smeša konformera) 5: 6.97-6,80 (c, 7H), 4,19 (m, 2H). 4.13 (i. 2H), 3,82 (s, 3H). 3,72 (s, 3H), 3,83-3,48 (c, 4H), 3,25 (dd, IH), 2,27 (kvintet, 2H), 1,70 (s. IH), 1,56 (br d, IH), 1,13 (t, 3H), 0,73 (s. 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 520,4 (m+1).
Primer 220
R'=2-inđaiiil; R<3>=COCH(OAc)CH3
2-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-indan-2-iloksi-4-metoksfeniI)-3-metilpirolidinil]-l-metil-2-oksoetiI acetat
Intermedijer 51 (27 mg, 0,074 mmol) je acilovan putem postupka sa K2CO3opisanim u Primeru 7, uz upotrebu (+)-2-acetoksipropionil hlorida (12,1 u.1, 0,110 mmol, 1,5 cq.). Dobijeno je bistro bezbojno ulje (16,7 mg. 47%).
<]>H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 8: 7.27-7,17 (m, 4H), 6,85-6.83 (m, 3H). 5,30-5,17 (m, 2H), 4,13-3,19 (c, 9H), 2,14 (s, 3H), 1,72 (br s, IH), 1.51-1.47 (m, 4H). 1,19-1,17 (d,3H), 0,82-0,78 (d, 3H).
Primer 221
R'=2-inđanil; R<3>=COCH(OH)CH3
1- [3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-indan-2-iloksi-4-metoksifeniI)-3-m 2- hidroksipropan-l-on
Jedinjenje iz Primera 220 (16,7 mg, 0,0347 mmol, 1 eq.) podvrgnuto je postupku hidrolize pomoću LiOH, opisanom kod Intermedijera 5, čime je dobijena bela, čvrsta supstanca (4,7 mg, 31%).
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,27-7,17 (m, 4H), 6,85-6,84 (m, 3H), 5,19-5,15 (m, IH), 4,39-4,35 (m, IH), 3,90-3,18 (c, 14H), 1,57-1,37 (m, 3H), 1,28-1,15 (m, 3H), 0,80-0,78 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 440,4 (m+1).
Primer 222
R'=2-indanil; R<3>=COC(CH3)(OAc)CH3
2-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-indan-2-iloksi-4-metoksifenil)-3-metilpiioIidinilj-l,l-dimetil-2-oksoetil acetat
Intermedijer 51 (40 mg, 0,11 mmol) je acilovan putem postupka sa K2CO3opisanim u Primeru 7, upotrebom 2-acetoksi-2-metilpropionil hlorida (31 ul, 0,22 mmol, 2 eq.). Dobijeno je bistro, bezbojno ulje (22 mg, 40%).
'H NMR (400 MHz, CDC13;smeša konformera) 8: 7,26-7,16 (m, 4H). 6,85-6,77 (m, 3H), 4.17 (m, IH), 3,95-3,19 (c, 14H), 2,10 (s, 3H), 1,65-1,57 (m, 6H), 1,20-1.17 (m, 3H). 0.73 (s. 3H).
Primer 223
R'=2-indanjI; R<3>=COC(CH3) (OH) CH3
1- f3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-(3-indan-2-iloksi-4-metoksifenil)-3-metilpiroIid 2- hidroksi-2-metilpropan-l-on
Jedinjenje iz Primera 222 (22 mg, 0,044 mmol) podvrgnuto je postupku hidrolize ? pomoću LiOH, opisanom kod Intermedijera 5, čime je dobijen proizvod u vidu bele, čvrste supstance (4,3 mg, 22%).
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 8: 7,26-7,17 (m, 4H). 6,83 (rn, 3H). 5,18-5,17 (m, IH), 4,45-4,44 (m, IH), 3,89-3,19 (c, 14H), 1,53-1,48 (m, 6H). 1.19-1,17 (m, 3H). 0,79-0,78 (d. 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 454.4 (m+1).
Primer 224
R'=t-Bu; R<3>=C02CH3
Metil (3R)-3-((lR)-l-hidroksietiI)-4-[3-(tercbutoksi)-4-metoksifenil]-3-mctilpiroIidin-karboksilat
Intermedijer 73 (6,5 ul 0,084 mmol) je acilovan putem postupka sa. Hunig-ovom bazom, opisanog kod Intermedijera 74, sa metil hloroformatom čime je dobijeno jedinjenje Primera 224 u vidu žutog ulja (19 mg. 94%).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8: 6,96 (d, IH), 6,84 (s, IH), 6,83 (d, IH), 3,80 (s, 3H), 3,77-3,58 (m, 4H), 3,06 (d, IH), 1,36 (s, 9H), 1,16 (d, 3H), 0,76 (s, 3H).
Primer 225
2-Hidroksi-l-((3S,4S)-3-((R)-l-hidroksietiI)-4-{4-metoksi-3-[2-(tetrahidrofuran-2-iI) etoksi]fenil}-3-mctiIpiroIidin-l-iI)etanon
Dobijeno od jedinjenja iz Primera 143, putem Mitsunobu postupka opisanog u Primeru 144, korišćenjem 2-tetrahidrofuran-2-iletanola, nakon čega je izvedena debenzilacija postupkom opisanim kod Intermedijera 31.
'H NMR podaci 8: 6,75-6,87 (m, 3H); 4,16-4.20 (m, 2H) 4,15 (s, 3H); 3,49-4,13 (m. 1 IH); 3,05 (d, IH); 1,97-2,10 (m, 2H) 1.88-1,96 (t,2H); 1,56-1,63 (m, 2H); 1,3-1.17 (t, 3H); 0,75 (s, 3H).
Primer 226
2-Hidroksi-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hidroksietil)-4-[4-metoksi-3-(tetrahidrofuran-3-ilmetoksi)fenil)-3-mctilpirolidin-l-il}etanon
Dobijeno od jedinjenja iz Primera 143, putem Mitsunobu postupka opisanog u Primeru 144, korišćenjem tetrahidrofuran-3-ilMetanola, nakon čega je izvedena debenzilacija postupkom opisanim kod Intermedijera 31.
'H NMR podaci 8: 6,79-6,82 (m. 3H); 4,13-4,16 (m, 2H); 3,48-3,98 (m, 11H); 3,84 (s, 3H); 3,05 (d, IH); 2,80 (bt; IH); 2,07-2,15 (M, 2H); 1,72-1,79 (m, IH); 1,116 (t, 3H); 0,76 (s, 3H).
Primer 227
R'=(S)-CH(CH2OCH2CH2); R<3>=C02CH3
Metil (3R)-3-((lR)-l-hidroksietil)-^ metilpirolidinkarboksilat
Dobijeno od Intermedijera 74 (146 mg, 0,47 mmol), putem Mitsunobu postupka u čvrstoj fazi opisanog u Primeru 144. korišćenjem (S)-(+)-3-hidroksitetrahidrofurana (38 ul. 0,47 mmol). Dobijeno je jedinjenje Primera 227 u vidu bistrog ulja (95 mg, 53%).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8: 6,82 (m, 2H), 6,78 (m, IH), 4,95 (m, IH). 4,03-3,20 (m. 10H), 3,82 (s, 3H), 3,66 (s, 3H), 2,17 (m, 2H), 1,17 (t, 3H), 0.73 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 379,8 (m+1).
Primer 228
R<1>=(R)-CH(CH2OCH2CH2); R<3>=C02CH3
Metil (3R)-3-((lR)-l-hidroksietiI)-4-f3-((3R)oksoIan-3-iloksi)-4-metoksifeniI]-3-metilpirolidinkarboksilat
Dobijeno od Intermedijera 74, putem Mitsunobu postupka u čvrstoj fazi opisanog u Primeru 144, korišćenjem (R)-(-)-3-hidroksitetrahidrofurana (46 u.1. 0,57 mmol). Dobijeno je jedinjenje Primera 228 u vidu bistrog ulja (27 mg, 37%).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) 8: 6,82 (m: 2H), 6,78 (m, IH), 4,95 (m, IH), 4,03-3,20 (m, 10H), 3,82 (s, 3H). 3,66 (s, 3H), 2.17 (m, 2H), 1.17 (t, 3H), 0,73 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 380,3 (m+1).
Primer 229
R^CHjCHjO^-FPh; R<3>=C02CH3
Metil 3-((lR)-l-hidroksictil)(3S,4S)-4-{3-[2-(4-fiuorofenoksi)etoksi]-4-metok5ifenil}-3-metilpirolidinkarboksilat
Dobijeno postupkom eterifikacije sa K2CO3opisanim u Primeru 43, korišćenjem Intermedijera 74 (21.5 mg, 0,0685 mmol, 1 eq.) i 4-fluorofenoksietil bromida (60 mg. 0,27 mmol, 4,0 eq.). Dobijeno je bistro, bezbojno ulje (15,2 mg, 49,7%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 6,99-6.S3 (c, 7H), 4,35 (t, 2H), 4.29 (t, 2H), 3,83 (s, 3H). 3.72 (s. 3H), 3,83-3.48 (c, 4H), 3,25 (dd, IH), 1.64 (s, IH). 1,42 (br d, IH), 1,13 (l. 3H). 0.73 (s: 3H).
Primer 230
R,=CH2CH2CH20-4-FPh; R<3>=C02CH3
Metil 3-((lR)-l-hidroksietil)(3S>4S)-4-{3-[3-(4-fluorofenoksi)propoksi]-4-metoksifeniI}-3-mctiIpiroIidinkarboksilat
Dobijeno od Intermedijera 74 (25,2 mg, 0.0815 mmol, 1 eq.) postupkom eterifikacije sa K.2CO3 opisanim u Primeru 43, korišćenjem l-(3-hloropropoksi)-4-fluorobenzena (62 mg, 0,33 mmol, 4,0 eq.). Dobijeno je jedinjenje Primera 230 u vidu bistrog, bezbojnog ulja (19,0 mg. 50,5%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 6: 6,97-6,80 (c. 7H), 4,19 (m, 2H), 4,13 (1, 2H), 3,82 (s. 3H), 3.72 (s, 3H), 3.83-3,48 (c, 4H), 3,25 (dd, IH), 2.27 (kvintet, 2H), 1,70 (s, IH), 1,56 (br d, IH), 1,13 (t,3H), 0,73 (s, 3H).
Primer 231
R^CHjOCH; R<3>=C02CH3
Metil 3-((lR)-l-hidrokssietil)(3S,4S)-4-(4-metoksi-3-prop-2-iniloksifeniI)-3-metilpirolidinkarboksilat
Dobijeno od Intermedijera 74, postupkom eterifikacije sa K2CO3opisanim u Primeru 43, korišćenjem propargil bromida.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 6,97 (s. IH), 6.87-6,82 (m, 2H), 4,76 (s. 2H), 3,86 (s. 3H). 3.73 (s, 3H), 3,90-3,55 (m, 5H), 3,27 (dd, IH), 2,48 (s, IH), 1,49-1,46 (m, IH), 1,14 (t, 3H), 0,75 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 348,1 (m+1).
Primer 232
R^CHjOCCHs; R<3>=C02CH3
Metil 3-((lR)-l-hidroksietil) (3S,4S)-4-(3-but-2-iniloksi-4-metoksifcnil)-3-metiIpirolidin-karboksilat
Dobijeno od Intermedijera 74, postupkom eterifikacije sa K2CO3opisanim u Primeru 43, korišćenjem 1 -bromo-2-butina.
<l>H NMR (400 MHz, CDCI3) 8: 6,96 (s. IH), 6,85-6,82 (m, 2H), 4,72-4,71 (m, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,90-3,55 (m, 5H), 3,27 (dd, IH), 2,48 (s, IH), 1,81 (s, 3H), 1,52-1,48 (m, IH), 1,14 (t,3H), 0,77 (s,3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 362,2 (m+1).
Primer 233
R^CHjCsCPh; R<3>=C02CH3
Metil 3-((lR)-l-hidroksietil) (3S, 4S)-4-[4-metoksi-3-(3-fenilprop-2-iniloksi)fenil)-3-metilpirolidinkarboksilat
Dobijeno od Intermedijera 74, putem Mitsunobu postupka opisanog u Primeru 144, korišćenjem 3-fenil-2-propin-l -ola.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 6: 7,41-7,38 (m, 2H), 7,32-7,27 (m, 3H), 7,07 (d, IH), 6,84 (s, 2H), 5,00-4,94 (m, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,80-3,69 (m, 3H). 3,57-3,50 (m, 2H), 3,23 (dd, IH), 1,35-1,32 (m, IH), 0,98-0,94 (dd, 3H), 0,70 (d, 3H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 424,2 (m+1).
Primer 234
R1=CH2C=C-4-FPh; R<3>=C02CH3
Metil 3-((lR)-l-hidroksietil)(3S,4S)-4-{3-[3-(4-fluorofenil)prop-2-inilolcsi]-4-metoksifenil}-3-metilpirolidin-karboksilat
Dobijeno od Intermedijera 74, putem Mitsunobu postupka u čvrstoj fazi opisanog u Primeru 144, korišćenjem Intermedijera 89.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 8: 7,40-7,36 (m, 2H), 7,04-6.97 (m, 3H). 6,85 (s, 2H), 4,97 (s, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,86-3,65 (m, 3H), 3,58-3,48 (m, 2H), 3,24 (dd, IH), 1,013 (t, 3H), 1,14 (t, 3H), 0,71 (d. 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 442,5 (m+1).
Primer 235
R^CHjCsCPh; R<3>=COCH2SAc
l-{3-((lR)-l-HidroksietiI)(3S,4S)-4-[4-metoksi-3-(3-fenilprop-2-iniloksi)fen metilpiroitdinil}-2-acetiItioetan-l-on
Dobijen od jedinjenja iz Primera 118 (30 mg, 0,082 mmol, 1,0 eq.), putem postupka sa CS2CO3opisanog u Primeru 176, upotrebom fenilpropargil metilsulfonata (17,4 mg, 0,082 mmol, 1,0 eq.). Dobijeno je bistro, bezbojno ulje (13,2 mg, 33%).
'H NMR (400 MHz, CDCI3, smeša konformera) 6: 7,45-6,86 (m, 8H), 4,13-3,49 (c, 12H), 2,31 (s, 3H), 1,60 (s. IH), 1,28-1,24 (dd, IH), 1,15-1,08 (dd, 3H), 0,73 (s, 3H).
Primer 236
R'=CHiCsCPh;R<3>=COCH2SH
l-{3-((lR)-l-Hidroksietil) (SS^SH-^-metoksi-S-fS-fcnilprop^-iniloksiJfenilJ-S-metilpirolidinil}- 2-sulfaniIetan-l -on
Dobijen od jedinjenja iz Primera 235 (13,2 mg, 0,0274 mmol). putem postupka hidrolize pomoću LiOH opisanog kod Intermedijera 5. čime je dobijen proizvod u vidu bistrog, bezbojnog ulja (10.5 mg, 87%).
'H NMR (CD3OH, 400 MHz, smeša konformera) 5: 7,41-7,20 (m, 5H), 6,91-6.75 (m. 3H). 4.01-3,29 (c, 12H), 3,21 (s, IH), 1,88 (s, IH), 1,38-1,21 (m, IH), 1,07-1.03 (m, 3H). 0.73-0.72 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 440.4 (m+1).
Intermedijer 93
Terc-butil estar (2-[(3S,4S)-3-((R)-l-Hidroksietil)-4-(3-hidroksi-4-metoksifeniI)-3-
metilpirolidin-l-iI]-2-oksoetiI) karbaminske kiseline
U posudu koja sadrži rastvor Intermedijera 70 (67,2 mg, 0,27 mmol) u dioksanu (2 ml), dodat je 1,0 M vodeni rastvor K2CO3(1,0 ml, 1,0 mmol). U ovu smešu je, putem šprica, dodat rastvor N-Boc-glicin p-nitrofenil estra (236 mg, 0,79 mmol) u dioksanu (100 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc, zatim isprana vodenim rastvorom NaHC03(3 x 50 ml) i sonim rastvorom (50 ml), osušena iznad NaiSO^ profiltrirana i koncentrovana u vakuumu, čime je dobijen žuti prašak (43 mg, prinos 83%).
<l>H NMR (CDCI3, 300 MHz, smeša konformera) 5: 6.88-6,77 (m, 2H, aromatični). 6,75-6.65 (m, IH, aromatični), 5,56 (br. s. IH, NH), 4,07-3,83 (m, 311). 3,89 (s. 3H. OMe). 3.S2-3.68 (m. 2H), 3,67-3,52 (m. 2H), 3,46 (d. IH. J = 11,5 Hz), 3,19 (d. IH. J -11.5 Hz). 1,46 (s. 9H). 1,16-1,05 (m, 3H), 0,74 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 353,151 (m+1).
Primer 237
2-Amino-l-((3S,4S)-3-((R)-l-hidroks^^ 2-iniloksi]fenil}-3-meriIpirolidin-l-iI)etanon
Dobijen od Intermedijera 93, putem postupka sa CS2CO3opisanog u Primeru 176, na osnovu postupka opisanog u Primeru 109, da bi se dobio proizvod u vidu ulja boje ćilibara (12.7 mg, prinos 4.1%).
'H NMR (CDC13, 300 MHz, smeša konformera) 6: 7,55-7,4 (m, 4H, aromatični), 7,93 (s, IH, aromatični), 6,85-6,7 (m, 2H, aromatični), 4,96 (s, 2H), 4,38 (br. s, 2H), 4,0-3,4 (m, 7H). 3.83 (d, 3H, OMe), 3,2 (dd, IH), 1,0-0,88 (m, 3H), 0,65 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 491,20 (m+1).
Primer 238
R^t-Bu; R<3>=COC02CH3
Metil 2-{3-((lR)-l-hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(terc-butoksi)-4-metoksifenilJ-3-metiIpirolidinil}-2-oksoacetat
Dobijeno od Intermedijera 73. postupkom vezivanja pomoću Hunig-ove baze, opisanim kod Intermedijera 74, uz upotrebu metil oksalil hlorida.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 5: 6,93-6,81 (m, 3H). 4,01-3.44 (c. 1211), 1,32 (s, 9H), 1,16-1,12 (dd, 3H), 0,77-0,74 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 394,0 (m+1).
Primer 239
R'=H; R<3>=COC02CH3
Metil 2-[3-((lR)-l-hidroksietiI) (3S,4S)-4-(3-hidroksi-4-metok5ifeniI)-3-metilpiroIidinil]-2-oksoacetat
Dobijen od jedinjenja iz Primera 238, putem postupka TFA deprotektovanja opisanog u Primeru 143.
'H NMR (400 MHz, CDC13, smeša konformera) 6: 6,85-6,70 (m, 3H), 5,60-5,56 (br m, IH), 4,00-3,46 (c, 12H), 1,17-1,13 (dd, 3H), 0,79-0,76 (d i d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 338.1 (m+1).
Primer 240
R'=CH2OCPh; R<3>=COC02CH3
Metil 2-{3-((lR)-l-hidroksietil)(3S,4S)-4-|4-metoksi-3-(3-feniIprop-2-iniIoksi)fenil]-3-mctilpirolidinil}-2-oksoacetat
Dobijeno od jedinjenja iz Primera 239, putem Mitsunobu postupka opisanog u Primeru 144, korišćenjem 3-fenil-2-propin-l-ola.
'H NMR (400 MHz. CDCI3, smeša konformera) 5: 7,41-7,26 (m, 5H), 7,07 (s, IH). 6,86-6,85 (m, 2H), 5,05-4,95 (m. 2H), 4,06-3,43 (c, 12H), 0,98-0,91 (dd, 3H), 0,74-0,71 (d, 3H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 452,7 (m+1).
Intermedijer 94
l-Benzil-4-(3-ciklopropilmetoksi-4-metoksifeniI)-3-metiI-3-vinilpiroIidin
Balon sa okruglim dnom, opremljen sa Štapićem za mešanjem i gumenom pregradom, napunjen je suvim dietil etrom (10 ml) i metiltrifenilfosfonijum bromidom (1,88 g, 5.27 mmol) u atmosferi azota. Butil-litijum (2,32 ml, 5,80 mmol, 2,5 M u heksanima) je zatim dodat putem šprica, čime je dobijena narandžasto-žuta suspenzija koja je mešana na sobnoj temperaturi tokom tri časa. Zatim je dodat rastvor Intermedijera 65 u EtjO (2.0 g, 5.27 mmol u 10 ml elra) što je dovelo do trenutnog gubitka boje. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom dva časa, reakcija je zaustavljena zasićenim rastvorom NH4CI. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 50 ml), osušena pomoću Na2S04i koncentrovana. Hromatografija na koloni (Biotage system, 40 M kertridž, 25% EtOAc/heksan) dala je 850 mg (43%) ulja narandžaste boje.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 7,42-7,23 (m, 5H), 6,80-6,63 (m, 3H), 6,05 (dd, IH), 4,95 (dd, IH), 4,87 (dd, IH), 4,87 (dd, IH), 3.86-3.79 (m. 5H), 3,71 (dd, 2H), 3,22 (1. IH). 3.04-2,96 (m, 2H), 2,81 (d, IH), 2,52 (d, IH), 1,37-1,26 (m, IH), 0,77 (s, 3H), 0,66-0,60 (m, 2H), 0.37-0,32 (m, 2H).
Intermedijer 95
Metil estar 4-(3-Ciklopropilmetoksi-4-mctoksifeniI)-3-metil-3-vinilpirolidin-l -
karboksilnekiseline
Rastvor Intermedijera 94 (480 mg. 1.27 mmol) u 10 ml acetonitrila, tretiran je metil hloroformatom (491 ul, 6,36 mmol) i smeša je refluktovana tokom šest časova. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen hromatografijom (Biotage system, 40s kertridž, 10% EtOAc/heksan do 20% EtOAc/heksan) čime je dobijeno 237 mg žutog ulja (54%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 6: 6,81 (d, IH), 6,72-6,67 (m. 2H), 5,87 (dd, IH), 5,09 (d, IH). 4,95 (dd, IH), 3,85 (s, 3H), 3,84-3,68 (m, 7H), 3,52-3,32 (m, 2H), 3.14 (t, IH), 1.35-1.25 (m. IH), 0,85 (s, 3H), 0,66-0,60 (m, 2H), 0,37-0,32 (m, 2H).
Primer 241
R^CHjCsHj;R<3>=C02CH3; R,=H; R5=CH2OH; R6=H
Metil estar 4-(3-Ciklopropilmetoksi-4-mctoksifenil)-3-(l,2-dihidrolcsictil)-3-metilpirolidin-1-karboksilne kiseline
Reakćioni sud opremljen mešalicom sa lopaticama, napunjen je Intermedijerom 95 (46 mg. 0.133 mmol), acetonom (250 ul), vodom (500 ul) i N-metil morfolin N-oksidom (17.1 mg, 0,146 mmol). U ovu smešu je dodat osmijum tetroksid u t-butanolu (50 u.1, 0,004 mmol, težinski 2,5% rastvor). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temepraturi tokom 24 časa. Reakciona smeša je zatim razblažena sa 10% vodenim rastvorom natrijum tiosulfata (5 ml) i profiltrirana kroz GF/F filter papir. Filtrat je ekstrahovan sa EtOAc (2x10 ml), osušen pomoću Na2S04i koncentrovan. Biotage prečišćavanje (12S kertridž, 1:1:0.1 EtOAc/heksan/MeOH)jedalo 18 mg jedinjenja Primera 241 (36%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8: 6,81 (d, IH), 3,86 (s, 3H), 3,85-3,36 (c, 15H), 3,23 (dd. IH), 1,35-1,27 (m, IH), 0,75 (s, 3H), 0,66-0,59 (m, 2H), 0,38-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 380,2 (m+1).
Pr imer 242
R'^CHzCjHs; R<3>=(S)-COCH(CH2OC(CH3)(CH3)0)
[4-(S)-(3-Ciklopropihnetok^i-4-metoksifeniI)-3-(S)-(l-(R)-hidroksietil)-3-metilpirolidin-l-il]-(2,2-dimctil-[l,3]diokso]an-4-(S)-iI)metanon
Intermedijer 67 je acilovan putem postupka sa Hunig-ovom bazom, opisanog kod Intermedijera 74, upotrebom 2,2-dimetil-[1.3]dioksolan-4-(S)-karbonil hlorida. Dobijeno je jedinjenje Primera 242 (22%).
'H NMR (CDC13, 400 MHz) 5: 6,83-6,78, (m, 4H), 4,71-4,65 (m, IH), 4,37-4,32 (m, IH), 4,23-4,15 (m, IH), 3,95-3,44 (m, 10H), 1,72-1,15 (m, 10H), 0,76 (s, 3H), 0,67-0,62 (m, 2H), 0,38-0,33 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 434,4 (m+1).
Primer 243
R^CHjCsHs; R<3>=(S)-COCH(OH)CH2OH
l-|4-(S)-(3-Ciklopropilmetoksi-4-metoksifeniI)-3(S)-(l-(R)-hidroksietiI)-3 l-il]-2(S)-3-dihidroksipropan-l-on
Jedinjenje Primera 242 (9 mg, 20 umol) je rastvoreno u rastvoru sirćetne kiseline i vode (3:1, 0,9 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temepraturi tokom 72 časa. Rastvor je neutralizovan dodavanjem u rastvor NaHCCH. Dobijeni rastvor je koncentrovan do suva. a zatim je čvrsta supstanca pet puta ekstrahovana sa CH2CI2. Pomešane organske supstance su osušene iznad Na2S04i koncentrovane u vakuumu (5.1 mg, 62%).
'H NMR (CDC13, 400 MHz) 5: 6,84-6,76 (m, 3H), 4,40-4,37 (m, IH), 3,89-3.32 (m, 1 IH). 2,33-1,95 (m, IH), 1,34-1,12 (m, 7H), 0,89-0.81 (m, IH), 0,78-0,73 (m, 3H), 0,66-0,61 (m, 2H), 0,37-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 394.0 (m+1).
Primer 244
R'=2-indanil; R<3>=(R)-COCH(OH)CH2OH
(R)-2,3-Dihidrolcsi-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hidroksietiI)4-[3-(indan-2-ilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metiIpiroIidin-l-il}propan-l-on
Dobijen od Intermedijera 96, postupkom opisanim u Primeru 75 i deprotektovan na način opisan u Primeru 243.
<]>H NMR (CDCI3, 300 MHz, smeša konformera) 8: 7,26-7,16 (m, 4H, aromatični), 6.83-6.82 (br. s, 3H, aromatični), 5,19-5,15 (m, IH), 4,45-4.32 (m. IH), 4,10-3,50 (m, 8H), 3,80 (d, 3H, OMe), 3,45-3,12 (m. 5H), 1,27-1,25 (m, IH), 1,20-1,15 (m, 3H), 0,79-0,77 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 470,58 (m+1).
Primer 245
R'=4-F-Ph-OCH2CH2CH2; R<3>=(R)-COCH(OH)CH2OH)
(S)-l-K3S,4S)-4-{3-[3-(4-Fluorofenoksi)propoksi]-4-metoksifeniI}-3-((R)-l-hidroksictil)-3-metilpirolidin-l-iI]-2,3-dihidroksipropan-l-on
Dobijen postupkom opisanim u Primeru 243.
'H NMR (CDCI3, 300 MHz, smeša konformera) 8: 6,99-6,92 (m, 2H, aromatični), 6,87-6,79 (m, 5H. aromatični), 4,39 (s, IH), 4,22-4,12 (m, 4H), 4,0 (d, IH), 3,89-3.56 (m, 7H), 3,S3 (s, 3H. OMe), 3,4-3,3 (dd, IH), 2,32-2,24 (m, 2H) 1,17-1,12 (m, 3H), 0,7 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 492.25 (m+I).
Intermedijer 96
l-((R)-2,2-DimetiI-l,3-dioksolan-4-iI)-l-[(3S,4S)-3((R)-l-hidroksietil)-4-(3-hidroksi-4-metoksifeniI)-3-metilpiroIidin-l -il] mctanon
.Balon sa okruglim dnom. opremljen štapićem za mešanje i gumenom pregradom, napunjen je 5-[4-(l-hidroksietil)-4-metilpirolidin-3-il]-2-metoksifenolom (2,4 g, 9.55 mmol). suvim CH2CI2(50 ml) i DIEA (3.49 ml, 20,1 mmol) u atmosferi azota. Smeša je ohlađena na
0 °C i, kap po kap, putem šprica, dodat je (S)-2,2-dimetil-[l,3]diokso]an-4-karbonil hlorid (3,14 g, 19,1 mmol) u 15 ml CH2Cli. Reakciona smeša je ostavljena da se polako zagreje do sobne temperature u toku vremenskog perioda od 16 časova. Smeša je zatim razblažena sa 50 ml CH2CI2, isprana sa IN HC1 (2 x 50 ml), zasićenim vodenim rastvorom NaHCC>3 (1 x 50 ml), osušena iznad Na2S04i koncentrovana do 3,9 g pene žućkasto-braon boje. Materijal je preuzet u 100 ml CH3OH i ohlađen do 0 °C. Tri ekvivalenta vodenog IN rastvora LiOH je zatim dodato (29 ml, 29,0 mmol), smeša je mešana na 0 °C u toku 2 sata, a zatim zagrevana do sobne temperature u toku još 2 sata. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom sa temperaturom vodenog kupatila od 30 °C u cilju uklanjanja CH3OH. Preostali vodeni rastvor je neutralizovan zasićenim rastvorom NH4CI do pH 7, a zatim ekstrahovan pomoću EtOAc (2 x 100 ml). Ekstrakti su osušeni iznad Na2S04i koncentrovani do 2,74 g pene žućkasto-braon boje (76%).
'H NMR (CDC13. 400 MHz, smeša konformera) 5: 6,90-6,70 (m, 3H), 5,66 (br, s, IH), 4,68 (t, IH), 4,34 (t, IH), 4,23-4,09 (m, 6H), 3,89 (s, 3H), 3,94-3.42 (m, 5H), 1,49-1,37 (m, 6H), 1,17 (d, 3H), 0,76 (s,3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 378,3 (m+1).
Primer 246
R'=F3C-Ph-CHCCH2; R<3>=CO-2,2-dimetil-l,3-dioksolan-4-iI
l-((R)-2,2-Dimetil-l,3-dioksolan-4-il)-l-((3S,4S)-3((R)-l-hidroksictiI)-4-{4-metoksi-3-I3-(4-trifIuorometilfeniI)prop-2-iniiolvsilfenil}-3-mctilpirolidin-l-il) metanon
U sud koji sadrži anhidrovani CS2CO3(67 mg, 0,206 mmol, 1,1 eq), u atmosferi azota. dodat je rastvor Intermedijera 96 (71 mg, 0.187 mmol, 1,0 eq) u anhidrovanom acetonu (I ml). Intermedijer 92 (52,1 mg, 0,187 mmol, 1,0 eq) dodat je u rastvor putem šprica. Reakciona smeša je zatim zagrevana i mešana na temperaturi od 65 °C u toku 4 sata. Reakciona smeša je, zatim, ohlađena do sobne temperature i razblažena vodom (50 ml). Vodeni rastvor je ekstrahovan pomoću EtOAc (3 x 30 ml) i pomešani organski sastojci su isprani sonim rastvorom (50 ml), a zatim osušeni iznad Na2S04, profiltrirani i koncentrovani u vakuumu, čime je dobijen beli penasti proizvod (104 mg).
<l>H NMR (CDCI3, 300 MHz, smeša konformera) 5: 7,5-7,35 (m, 4H, aromatični), 6,96 (d, IH. aromatični), 6,85-6,75 (m, 2H, aromatični), 4,92 (d, 2H, CH2), 4,65-4,50 (m, IH), 4,35-4,20 (m, IH), 4,15-4,00 (m, IH), 3,85-3,40 (m, 5H), 3,8 (d, 3H, OMe), 3,35-3,30 (dd, IH), 1,45-1,25 (2d, 6H, Me), 1,0-0,9 (m, 3H), 0,63 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 562,25 (m+1).
Primer 247
R<1>=F3C-Ph-C=CCH2;R<3>=CO-CH(OH)CH2OH
(R)-2,3-Dihidroksi-l-((3S,4S)-3-((R)-l-hidroksietil)4-{4-metoksi-3-|3-(4-trifluorometilfeniI)prop-2-iniloksi]feniI}-3-metilpirolidin-l-il)propan-l-on
U reakcioni sud koji sadrži jedinjenje iz Primera 246 (104 mg, 0,185 mmol) dodati su sirćetna kiselina (3,0 ml) i voda (1,0 ml). Sud je, zatim, hermetički zatvoren, zagrejan do 50 °C i mešan u toku 2 časa. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu i prečišćena postupkom HPLC reverzne faze na Cl8 koloni (Luna 10u., C18, 250 mm x 10 mm). Gradijentno eluiranje od 50-100% acetonitril-voda (0.05% TFA) dalo je proizvod u vidu ulja ćilibarne boje (27,8 mg, 28,5% prinos).
'H NMR (CDCI3, 300 MHz, smeša konformera) 8: 7,6-7,45 (m, 4H, aromatični), 7.69 (d. 111. aromatični), 6,9-6,82 (m, 2H, aromatični), 5,0 (m, 2H), 4,4-4,32 (m, IH), 4.1-3,2 (m. 7H). 3,89 (d, 3H, OMe), 1,05 (s, 3H), 0,72 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 522,15 (m+1).
Primer 248
R<1>=3-tieniI-CH2CH2;R<3>=COCH2OCH2Ph
2-Benziloksi-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hidroksietil)-4-[4-metoksi-3-(2-tiofen-3^ metilpirolidin-l-il} etanon
Dobijen alkilacijom jedinjenja iz Primera 143 postupkom sa K2CO3opisanim u Primeru 7, upotrebom 2-(3-tienil)etil bromida.
'H NMR podaci 6: 7,27-7,38 (m, 6H); 7,05-7,07 (m, IH); 7,12-7,13 (m, IH); 6,74-6,84 (m, 3H); 6,05 (s, 2H); 4.15-4,22 (m, 4H); 3.44-3,93 (m, 6.5H); 3,86 (s, 3H); 3,14-3,24 (m, 2.5H): l,13(dd,3H); 0,72 (s, 3H).
Primer 249
R,=Ph(ciklo-C3H4)CH2; R<3>=COCH2OH
2-Hidroksi-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hidroksietil)-4-[4-metolisi-3-((R)-2-fenilciklopropil-
metoksi)fenil]-3-metilpirolidin-l-il} etanon
Dobijen alkilacijom jedinjenja iz Primera 143 Mitsunobu postupkom opisanim u Primeru 144, upotrebom 2-fenil-ciklopropanola, te uklanjanjem benzil grupe debenzilacionim postupkom opisanim kod Intermedijera 31.
'H NMR podaci 5: 7,17-7,30 (m, 5H); 6,72-6,85 (m, 3H); 4,00-4,14 (m, 2H); 3,49-3,98 (m, 8.5H); 3,86 (s, 3H); 3,05 (d, 0,5H); 2,86-2,93 (m, IH); 2,51-2,60 (m, IH); 2,27-2,34 (m. IH); 1,02-1,05 (dd, 3H);0,74 (sd, 3H).
Primer 250
R^CsHsCHiCHjCHi; R<3>=COCH2OH
l-[(3S,4S)-4-[3-(3-Cikl6penfilpropoksi)-4-metok^ifenilJO-((R)-l-hidroksi metilpiroIidin-l-iI]-2-hidroksietanon
Dobijen od jedinjenja iz Primera 143 Mitsunobu postupkom opisanim u Primeru 144, upotrebom 3-ciklopentilpropan-l-ola, te uklanjanjem benzil grupe debenzilacionim postupkom opisanim kod Intermedijera 31.
'H NMR podaci 8: 6,75-6,83 (m, 3H); 4,12-4,15 (m, 2H); 3,96-4,01 (m, 2..5H); 3,86 (s, 3H); 3,79-3,86 (m, IH); 3,59-3,70 (m, 4H); 3,06 (d, 0,5H); 1,75-1,88 (m, 5H); 1,44-1,61 (m, 6H); 1,16(1, 5H); 0,77 (sd, 3H).
Primer 251
R<I>=PhCH2CH:CH2; R<3>=COCH2OH
2-Hidroksi-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hidroksietil)-4-(4-metoksi-3-(3-feniIpropoksi)fenil]-3-metilpirolidin-l-il} etanon
Dobijen od jedinjenja iz Primera 143 postupkom sa K2CO3opisanim u Primeru 7, upotrebom 3-fenilpropil hlorida, te uklanjanjem benzil grupe debenzilacionim postupkom opisanim kod Intermedijera 31.
'H NMR podaci 8: 7,16-7,31 (m, 5H); 6,74-6,85 (m, 3H); 4,13-4,15 (m, 2H); 3,94-4,04 (m, 2H); 3,86 (s, 3H); 3,76-3,83 (m, IH); 3,47-3,70 (m, 4H); 3,04-3,07 (m, 3H): 2.80-2.85 (t. 2H); 2,10-2,20 (kvim, 2H); 1,14 (t, 3H); 0.74 (s, 3H).
Primer 252
R^l-hidroksindan-2-il; R<3>=COCH2OH
2-Hidroksi-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hidroksietiO-4-[3-(l-hidrolcsindan-2-iloksi fenil]-3-metilpirolidin-l-il} etanon
Dobijen od jedinjenja iz Primera 143 postupkom sa K2CO3opisanim u Primeru 7, upotrebom inden oksida, te uklanjanjem benzil grupe debenzilacionim postupkom opisanim kod Intermedijera 31.
'H NMR podaci 5: 7,48-7,51 (m, IH); 7,24-7,32 (m, 3H); 6,85-6,96 (m, 3H); 5,11-5,14 (m, IH); 4,84-4,89 (m, IH); 3,98-4.15 (m, 3H); 3.84-3,86 (m, IH); 3,83 (s, 3H); 3,50-3,78 (m. 4,5H); 3,16-3,32 (m, 2H); 3,06 (d, 0,5H); 1,15-1,20 (m, 3H); 0.77 (s, 3H).
Primer 253
R'=4-CH30PhCH2CH2; R<3>=COCH2OH
2-Hidroksi-l-((3S,4S)-3-((R)-l-hidroksietiI)-4-{4-metoksi-3-[2-(4-metoksifenil)etoksi] fenil}-3-metiIpiroIidin-l-H) etanon
Dobijen od jedinjenja iz Primera 143 postupkom sa K2CO3opisanim u Primeru 7. upotrebom l-(2-hloroetil)-4-metoksibenzena, te uklanjanjem benzil grupe debenzilacionim postupkom opisanim kod Intermedijera 31.
'H NMR podaci 8: 7,20-7,23 (d, 2H); 6,74-6,88 (m, 5H); 4,30-4,18 (m, 4H): 3,72-3,91 (m, 2H): 3,86 (s, 3H); 3,80 (s, 3H); 3,48-3,64 (m, 4H); 3,02-3,11 (m, 2H); 1,12-1,17 (m, 3H); 0,74 (s, 3H).
Primer 254
R^CHs^iklo-CjH^CH,; R3=COCHjOH
2-Hidroksi-l-{(3S,4S)-3~((R)-l-hidroksietiIM^
metoksi)fenil]-3-nieti)piroIidin-l-il) etanon
Dobijen od jedinjenja iz Primera 143 postupkom sa K2CO3opisanim u Primeru 7, upotrebom l-(2-hloroetil)-4-metoksibenzena, te uklanjanjem benzil grupe debenzilacionim postupkom opisanim kod Intermedijera 31.
'H NMR podaci 8: 6,77-6,84 (m, 3H); 4,15-4,18 (m, 2H): 3,78-3,99 (m, 4H); 3,86 (s. 3H): 3,49-3,71 (m, 3,5H); 3,08 (d, 0.5H); 1,14-1,19 (m, 3H); 1,07 (sd, 3H); 0,92-1,03 (m. IH): 0,76-0,77 (m, 4H); 0,50-0,52 (m, IH): 0,37-0,41 (m, IH).
Primer 255
l-(R)-[l-(2-BenziloksietiI)-4-(S)-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifeniI)-3-(S)-metilpirolidin-3-il] etanol
Intermedijer 68 (86,4 mg, 0,27 mmol) rastvoren je u 1,2-dihloroetanu (1 ml) i rastvor je tretiran sa benziloksiacetaldehidom (38 ul, 0,27 mmol), nakon čega je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (81 mg, 0,38 mmol). Reakciona smeša je mešana u toku 18 časova na sobnoj temperaturi. Dodato je još natrijum triacetoksiborohidrida (40 mg, 0.19 mmol) i mešanje je nastavljeno u toku 8 časova. Reakciona smeša je razblažena sa 1.0 M NaOH (0.5 ml) i snažno mešana u toku 15 minuta. Slojevi su razdvojeni i vodena faza je isprana sa CH2CI2, a organski slojevi su pomešani. Nakon ispiranja sa 6% rastvorom NaHCOs, organski sastojci su osušeni pomoću Na?S04a zatim koncentrovani u vakuumu. Sirovi materijal (129 mg) je hromatografisan na silika-gelu pomoću smeše CHCl3:95% etanol:conc. NH4OH u odnosu 170:15:1, čime je dobijeno jedinjenje Primera 255 (27 mg. 22%).
'H NMR (CDC13> 400 MHz) 6: 7,36-7.26 (m, 5H)56,81-6,73 (m, 3H), 4,79-4,73 (m, IH). 4,54 (s, IH), 3,82 (s, 3H), 3,71-3,54 (m, 4H), 3,40-3.35 (m, IH), 3,24-3,21 (m, IH), 2,80-2,67 (m. 2H), 2,63-2,56 (m, IH), 2.16-2,09 (m, IH), 1,95-1,88 (m, 8H), 1,65-1,57 (m, 2H), 1,22-1,10 (m, 3H), 0,49 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): 454,5 Da/e (m+1).
Primer 256
l-(R).[4-(S)-(3-CiklopentiloksM^ il]ctanol
Jedinjenje iz Primera 255 (25 mg, 55 mmol) podvrgnuto je postupku debenzilacije opisanom kod Intermedijera 31, čime je dobijeno jedinjenje Primera 256 (7,4 mg, 28%) u vidu TFA soli nakon prečišćavanja pomoću HPLC.
'H NMR (CDCI3, 400 MHz) 5: 6,84-6,65 (m. 3H), 5,40-4,90 (brd, 2H), 4,74 (brd s, IH), 4,26-3,21 (m, 11H), 1,97-1,73 (m, 6H), 1,66-1,56 (m, 3H), 1,33- 0,77 (m, 4H), 0,69 (s, 3H). LRMS (Elektrosprej, pozitivan): 364,4 Da/e (m+1).-
Primer 257
2-Benziloksi-l-[4-(S)-(3-ciklopropilmetoksi-4metoksifeniI)-3-(S)-hidroksimetiI-3-metilpirolidin-l-il] etanon
[4-(S)-(3-Ciklopropilmetoksi-4-metoksifenil)-3-(S)-metilpirolidin-3-il]metanol (100 mg, 0,34 mmol) rastvoren je u CH2CI2(1,7 ml) i rastvor je ohlađen do 0 °C. Dodata je DIEA (144 ul, 0,82 mmol). a zatim i benziloksiacetil hlorid (114 ul, 0,72 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se polako zagreje do sobne temperature i mešana je u toku 18 časova. Dodata je voda (0,25 ml) i reakciona smeša je mešana dodatnih 1,5 časova. Zatim je dodat CH2C12i smeša je isprana jednom vodom, dva puta sa 1N HC1, još jednom vodom, i dva puta sa 6% rastvorom NaHCOj. Smeša je osušena iznad Na2SC>4 i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je rastvoren u 1 ml THF i ohlađen do temperature od 0 °C. Dodat je rastvor LiOH u vodi (1,36 M, 1 ml, 1,36 mmol) i vršena je hidroliza na 0 °C u toku 4 časa. Reakcija je zaustavljena zasićenim rastvorom NH4CI i THF je uklonjen konccntrovanjem u vakuumu. Ostatak je ponovo suspendovan u CH2CI2i ispran dva puta sa6%rastvorom NaHCOs, osušen iznad Na2S04i koncentrovan u vakuumu.
'H NMR (CDCI3, 400 MHz) 6: 7,40-7,28 (m, 5H), 6,83-6,79 (m, IH), 6,73-6,66 (m, 2H), 4.66 (s, 2H), 4,16-4.13 (m, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,83-3,78 (m, 3H), 3,63-3,26 (brd m, 4H), 3,06-3,00 (m, IH), 2,50-2,45 (brd m, IH), 1,34-1,12 (m, IH), 1,03-0,99 (m, 2H), 0,73 (s, 3H), 0,66-0,61 (m, 2H), 0,36-0,32 (m, 2H)
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 440,3 (m+1).
Intermedijer 97
(4-(S)-(3-Ciklopropilmetoksi-4-metoksifenil)-3-(S) metiIpiroIidin-3-il] metanol
Intermedijer 65 (0,99 g, 2,6 mmol) rastvoren je u etanolu (95%, 10 ml) i rastvor je tretiran Pearlman-ovim katalizatorom (20% Pđ(OH)2na ugljeniku, 250 mg). Smeša je hidrogenizovana na 1 atmosferi gasa H: u toku 16 časova. Dodata je nova količina katalizatora (250 mg) i reakcija je nastavljena dodatnih 24 časa. Katalizator je uklonjen filtracijom i reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu (0,68 g, 89%).
'H NMR (CDCI3, 400 MHz) 8: 6,84-6,73 (m. 3H), 3,87-3,83 (m, 4H), 3,59-3,47 (m. 3H), 3.30-3,20 (m. 3H), 2,85 (d, J = 10,6, IH), 2.35-2,12 (brd m, IH), 1,35-1,27 (m, IH). 0.64-0.60 (m, 4H), 0,37-0,31 (m, 2H), 0,36-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 377,3 (m+1).
Primer 258
l-(2-Benziloksiacetil)-4-(S)-(3-ciklopropilmetoksi-4-metoksifcniI)-3-(S)-metiIpirolidin-3-karbaldehid
Oksalil hlorid (2,0 M u CH2C12, 0,175 ml, 0,35 mmol) dodat je u CH2C12 (0.52 ml). Dobijeni rastvor je ohlađen do -60 °C. Rastvor DMSO (47 ml, 0,66 mmol) u CH2C12(0,18 ml) je zatim dodat kap po kap. Rastvor je mešan u toku 5 minuta i jedinjenje iz Primera 257 (rastvoreno u 1,0 ml CH2CI2) je dodato u S\vem-ovu oksidacionu smešu. Nakon šio je reakciona smeša mešana u toku 10 minuta na -60 °C, dodat je Et3N (0,25 ml) i zatim je reakciona smeša zagrejana do sobne temperature. Nakon 30 minuta, dodala je voda i rastvor je snažno mešan u toku 15 minuta. Slojevi su razdvojeni i vodena faza je isprana jednom sa CH2C12. PomeŠani organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom NaCl. osušeni iznad Na2SCXt i koncentrovani u vakuumu. Sirovi materijal je hromatografisan na Si02upotrebom smeše EtOAcrheksani u odnosu 2:1, (76 mg, 50%).
'H NMR (CDCI3, 400 MHz) 8: 9,62-9,57 (m, IH), 7,41-7,30 (m, 5H), 6,84-6,78 (m, IH). 6,68-6,56 (m, 2H), 4,68-4,63 (m, 2H), 4,20-4,10 (m, 2H), 4,05-3,32 (m, 5H), 3,87 (s, 3H). 1.57-1,55 (m, 2H), 1,33-1,24 (m, IH), 0,92-0,88 (m, 3H), 0,67-0,60 (m, 2H), 0,37-0,31 (m. 2H).
Primer 259
l-((R)-2,2-DimetiI-l,3-dioksolan-4-il)-l-l(3S,4S)-3-((R)-l-hidroksietiI)-4-(3-hidroksi-4-metoksifenil)3-metilpirolidin-l-il] metanon
U rastvor Intermedijera 70 (73,5 mg, 0,293 mmol, 1.0 eq) u CH:CI;> (3 ml), uz mešanje, na sobnoj temperturi, u atmosferi azota, dodat je Et3N (65,2 mg, 0,645 mmol). a zatim i 2,2-dimetil-l,3-dioksolan-(4R)-karbonil hlorid (53,2 mg, 0,322 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći. Zatim je reakciona smeša nasuta u 50 ml EtOAc, isprana sonim rastvorom, osušena pomoću Na2S04, te koncentrovana u vakuumu, čime je dobijen penasti proizvod (94 mg, prinos 85%). Sirovi proizvod je hidrolizovan pomoću LiOH, postupkom opisanim kod Intermedijera 5, čime je dobijeno jedinjenje Primera 259.
'H NMR (CDCI3, 300 MHz) 8: 6,97-6,58 (m, 3H, aromatični), 4,68 (t, IH, J = 6.4 Hz). 4.44-4,34 (m, IH), 4,24-3,95 (m, IH), 3,94-3,50 (m, 5H), 3,87 (d, 3H, OMe), 3,42 (d, IH..1 = 12,4Hz), 3,35 (d, IH, J = 12,4Hz), 1,4 (m, 6H), 1.15 (m, 3H), 0,75 (m, 3H).
Primer 260
l-((R)-2,2-Dimetil-l,3-dio^ fenilprop-2-iniloksi)fenil]-3-metilpirolidin-l-iI} metanon
Dobijen od jedinjenja iz Primera 259 (126 mg, 0,332 mmol. 1,0 eq) i Intermedijera 90 (69,8 mg, 0,332 mmol, 1,0 eq) metodom opisanim u Primeru 176. Dobijen je beli, penasti proizvod (160 mg).
'H NMR (CDC13, 300 MHz, smeša konformera) 6: 7,42-7,25 (m, 5H, aromatični), 7,08 (d.
IH, aromatični), 6,86 (d, 2H, aromatični), 5,0 (d, 2H, CH2), 4,72-4,60 (m, IH), 4,45-4,32 (m, IH), 4,22-4,10 (m, IH), 3,95-3,70 (m, 3H), 3.89 (s, 3H, OMe), 3,70-3,45 (m, 2H), 3,44-3.29 (m, IH), 1,5-1,38 (2d, 6H, Me), 1,02-0,75-0,65 (m, 3H), 0.63 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 494,55 (m+1).
Primer 261
(R)-2,3-Dihidroksi-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hidroksietiI)4-f4-metoksi-3-(3-fenilprop-2-iniloksi)fenil]-3-metilpiroIidin-l-il}propan-l-on
U reakcioni sud koji sadrži jedinjenje iz Primera 260 (160 mg, 0,323 mmol) dodati su sirćetna kiselina (3,0 ml) i voda (1,0 ml). Sud je, zatim, hermetički zatvoren, zagrejan do 50 °C i mešan u toku 2 časa. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu i prečišćena postupkom HPLC reverzne faze na Cl8 koloni (Luna lOu, Cl8, 250 mm x 10 mm). Gradijentno eluiranje od 50-100% acetonitril-voda (0,05% TFA) dalo je jedinjenje Primera 261 u vidu bele penaste čvrste supstance (52,2 mg. 35,6% prinos).
<]>H NMR ( CDC13, 300 MHz, smeSa konformera) 8: 7,5-7,21 (m, 5H, aromatični), 7,05 (m, IH, aromatični), 6,9-6,75 (m, 2H. aromatični), 5.0 (d, 2H), 4,31 (s, IH), 4,01-3,2 (m, 9H). 3.88 (s, 3H, OMe), 1,01-0,9 (m, 3H), 0,7 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 454,20 (m+1).
Primer 262
l-((S)-2,2-Dimetil-l,3-dioksolan-4-il)-l-[(3S,4S)-3((R)-l-hidroksietil)-4-(3-hidroksi-4-metoksifenil)-3-metiIpirolidin-l-iI] metanon
U rastvor Intermedijera 70 (73,5 mg, 0,293 mmol, 1,0 eq) u CH2CI:(3 ml), uz mešanje, na sobnoj temperturi, u atmosferi azota, dodat je Et3N (65,2 mg, 0,645 mmol), a zatim i 2,2-dimetil-l,3-dioksolan-(4S)-karbonil hlorid (53,2 mg, 0,322 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći. Zatim je reakciona smeša nasuta u 50 ml EtOAc, isprana sonim rastvorom, osušena pomoću Na2S04, te koncentrovana u vakuumu, čime je dobijen penasti proizvod (94 mg, prinos 85%). Sirovi proizvod je hidrolizovan pomoću LiOH, postupkom opisanim kod Intermedijera 5, čime je dobijeno jedinjenje Primera 262.
'H NMR (CDCI3, 300 MHz) 8: 6,93-6,65 (m. 3H, aromatični), 5.68 (s, IH). 4.67 (m, IH). 4,34 (m, IH), 4,21 (m, IH), 3,94-3,40 (m, 5H), 3,89 (s, 3H. OMe), 3,4 (m, 6H), 1,16 (m. 3H), 0,76 (m, 3H).
Primer 263
l-((S)-2,2-Dimetil-l,3-diaksolan-4-iI)-l-{(3S,4S)-3((R)-l-hidrol<sietil)-4-[4-metoksi-3-(3-fcnilprop-2-iniloksi)feniIJ-3-metilpirolidin-l-iI} metanon
Dobijen od jedinjenja iz Primera 262 (126 mg, 0,332 mmol, 1,0 eq) i Intermedijera 90 (69,8 mg, 0,332 mmol, 1,0 eq) metodom opisanim u Primeru 176. Dobijen je beli, penasii proizvod (160 mg).
'H NMR (CDCI3, 300 MHz, smeša konformera) 8: 7,52-7,15 (m, 5H, aromatični), 7,08 (d, IH, aromatični), 6,86 (d, 2H, aromatični), 5,98 (m, 2H. CH2), 4,64 (m, IH), 4,35-4,32 (m, IH), 4,22-4,10 (m, IH), 3,97-3,36 (m, 5H), 3,89 (s, 3H, OMe), 1,5-1,38 (2d, 6H. Me), 1.02-0,75 (m. 3H), 0,74 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 494,55 (m+1).
Primer 264
(S)-2,3-Dihidroksi-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hidroksietil)4-[4-metoksi-3-(3-fenilprop-2-iniloksi)fenil]-3-metilpirolidin-l-il} propan-l-on
U reakcioni sud koji sadrži jedinjenje iz Primera 263 (160 mg, 0.323 mmol) dodati su sirćetna kiselina (3,0 ml) i voda (1.0 ml). Sud je, zatim, hermetički zatvoren, zagrejan do 50 °C i mešan u toku 2 časa. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu i prečišćena postupkom HPLC reverzne faze na Cl 8 koloni (Luna lOu, Cl 8, 250 mm x 10 mm). Gradijentno eluiranje od 50-100% acetonitril-voda (0,05% TFA) dalo je proizvod u vidu bele penaste čvrste supstance (52,2 mg, 35,6% prinos).
'H NMR (CDCI3, 300 MHz, smeša konformera) 8: 7,44-7,18 (m, 5H, aromatični), 7,08 (s.
IH, aromatični), 6,86 (s, 2H, aromatični), 4,6 (s, 2H, CH2), 4,4-4,3 (m, IH), 4,01-4,62 (m, 7H), 3,89 (s, 3H, OMe), 3,59-3,46 (m, IH), 3,32-3,29 (m, IH), 2,4 (m, IH), 0,95 (m, 3H), 0,72 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): Da/e 454,20 (m+1).
fa]D= 14,6° (c = 1,00 EtOH).
Primer 265
R,=t-Bu; R3=(S)-COCH(OAc)CH2Ph
Dobijen od Intermedijera 73 acilacijom pomoću (S)-l-hlorokarbonil-2-feniletil estra sirćetne kiseline, prema postupku opisanom u F. Babudri et al.,Tetrahedron, 8.2431-2440
(1999).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): m/z 498 (m+1).
Primer 266
R,=H; R3=(S)-COCH(OAC)CH2Ph
Dobijen od jedinjenja iz Primera 265, TFA metodom opisanim u Primeru 143, čime je dobijeno jedinjenje Primera 266.
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): m/z 442 (m+1).
Primer 267
(S)-l-benziI-2-{(3S,4S)-3-((R)-l-hidroksi-etil)-4-[4-metoksi-3-(3-ienilprop-2-iniloksi)fenil]-3-meti]piroIidin-l-il}-2-okso-etil estar sirćctne kiseline Ri=PhCHCCH2;R3=(S)-COCH(OAc)CH2Ph
Jedinjenje iz Primera 266 (88 mg, 0,2 mmol) i Intermedijer 90 (50 mg, 0,24 mmol) podvrgnuti su postupku sa Cs2C03opisanom u Primeru 176, i sirovi ostatak (110 mg) je korišćen bez daljeg prečišćavanja.
Primer 268
(S)-2-Hidroksi-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hidroksietiI)-4I4-metoksi-3-(3-fenilprop-2-iniloksi)feniI]-3-metilpirolidin-l-il}-3-fcnilpropan-l-on
R,=PhOCCH2; R3=(S)-COCH(OH)CH2Ph
Jedinjenje iz Primera 267 (110 mg sirovo, 0,2 mmol teorijski) podvrgnuto je O-Acetatnom postupku deprotektovanja i prečišćeno pomoću HPLC (20 mm x 50 mm YMC CombiPrep Cl8 kolona, 20 ml/min, 10-95% acetonitril/voda u toku 7 minuta) čime je dobijeno jedinjenje Primera 268 (38 mg, 75%).
'H NMR (300 MHz. CDC13, smeša konformera) 8: 7,50-7,16 (m, 10H), 7,10-6,52 (m, 3H). 5,05-4,92 (m, 2H), 4,52-4,36 (m, IH), 3,88 (s, 3H), 3,87-2,72 (m, 9H)r1,48/1,29 (2d, J = 4,3/4,6 Hz, IH), 0,93/0,88 (2d, J = 6,4 Hz, 3H), 0.66/0,51 (2s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitivan): m/e 514 (m+H)<+>.
Testirana je sposobnost jedinjenja strukturne formule (II) da inhibiraju PDE4. Sposobnost jedinjenja da inhibira aktivnost PDE4 je povezana sa njegovom IC50vrednošću. tj. sa koncentracijom inhibitora koja je potrebna da se vrednost enzimske aktivnosti umanji za 50%. IC50vrednosti jedinjenja strukturne formule (II) su određene korišćenjem rekombinantnog humanog PDE4.
In vitroaktivnost fosfodiesteraze, inhibitorne vrednosti IC50i dobijene računske vrednosti K, jedinjenja predstavljenih u primerima određene su merenjem inhibicije hidrolize cAMP u funkciji koncentracije testiranih jedinjenja, u opsegu od 0 do 1 mM. Vrednosti Kjjedinjenja koja su testirana u prethodno pomenutom eseju se nalaze u opsegu od oko 0,0003 uMdooko 100 uM.
Jedinjenja predmetnog pronalaska prema rekombinantnom humanom PDE4 tipično pokazuju vrednost IC50manju od oko 50 u.M, poželjno manju od oko 25 uM, a poželjnije manju od oko 15 uM. Jedinjenja predmetnog pronalaska prema rekombinantnom humanom PDE4 tipično pokazuju vrednost IC50manju od oko 1 uM, a često manju od oko 0,05 u.M. Da bi se postigla puna prednost predmetnog pronalaska u odnosu na druga slična rešenja, PDE4 inhibitor predmetnog pronalaska pokazuje IC50od oko 700 pM (pikomoli) do oko 15 uM.
IC50vrednosti za pomenuta jedinjenja određena su iz krivih koncentracija-odgovor pri čemu su se tipično koristile koncentracije u opsegu od 0,1 pM do 500 uM. Testovi prema drugim PDE enzimima korišćenjem standardne metodologije kao što je opisano u Loughnev et al.,J. Biol. Chem., 271,pp. 796-806 (1996), takođe pokazuju da su jedinjenja predmetnog pronalaska visokoselektivna za cAMP specifični PDE4 enzim.
Posebno, jedinjenje predmetnog pronalaska tj. Uzorak 66 poseduje IC50 vrednost prema humanom rekombinantnom PDE4B od 0,015 jiM, IC50vrednost prema PDE1A od 80 uM, prema PDE1B od 100 uM, prema PDE1C od 12 uM, prema PDE2 od 450 uM, prema PDE3A od 40 uM, prema PDE5 od 270 uM, i prema PDE7 od 36 uM. Ovim se ilustruje selektivnost jedinjenja predmetnog pronalaska za inhibiciju PDE4.
Sposobnost jedinjenja strukturne formule (II) da smanje sekreciju TNFa u humanim limfocitima periferne krvi je takođe testirana. Sposobnost da se smanji sekrecija TNFa je povezana sa EC50vrednostima (tj. sa efektivnom koncentracijom jedinjenja sposobnom da inhibira 50% ukupnog TNFa).
In situinhibicija otpuštanja TNFa prouzrokovana izlaganjem izolovanih humanih limfocita periferne krvi endotoksinom je pokazala da su EC50vrednosti jedinjenja predstavljenih u primerima određene kao funkcije koncentracije testiranog jedinjenja u opsegu od 0 pM do 100 uM. Vrednosti ECso jedinjenja testiranih u ranijim probama nalazile su se u opsegu od oko 0,0002 uM do oko 20 uM.
Jedinjenja predmetnog pronalaska tipično pokazuju vrednosti EC50manje od oko 50 uM, poželjnije od oko 25 uM, a još poželjnije manje od 15 uM. Jedinjena predmetnog pronalaska tipično pokazuju EC50vrednost prema PBL/TNFct manje od oko 1 uM, a često manje od oko 0.05 uM. Da bi se u potpunosti iskoristile prednosti predmetnog pronalaska, inhibitor PDE4 predmetnog pronalaska ima vrednost EC50od oko 1000 pM (pikomolarna) do oko 20 uM.
Pripremanje rekombinantnih humanih PDE kao i određivanje IC50i EC50vrednosti se omogućava postupcima koji su dobro poznati u struci. Postupci za primer su opisani u nastavku.
EKSPRESIJA HUMANIH PDE
Ekspresija u ćelijamaSpodoptera Fugiperda ( Sf 9 )zaraženim Baculovirusom
Plazmidi za prenos baculovirusa su formirani upotrebom bilo pBlueBacIll (Invitrogen) ili pFastBac (BRL-Gibco). Struktura svih ovih plazmida je potvrđena sekvenciranjem kroz vektorske spojeve i punim sekvenciranjem svih regiona generisanih PCR-om. Plazmid pBB-PDElA3/6 sadrži kompletni otvoreni ram za čitanje PDE1A3 u pBlueBacIll (Loughnev etal., J. Biol. Chem., 271.pp. 796-806 (1996)). Plazmid HcamlllaBB sadrži kompletni otvoreni ram za čitanje PDE1C3 u pBlueBacIll (Loughnev et al., (1996)). Plazmid pBB-PDE3A sadrži kompletni otvoreni ram za čitanje PDE3A (Meacci et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89,pp. 3721-3725 (1992)) u pBlueBacIll.
Zalihe rekombinantnog virusa su proizvedene upotrebom bilo MaxBac sistema (Invitrogen) ili FastBac sistema (Gibco-BRL) prema protokolima proizvođača. U oba slučaja ekspresija rekombinantnog humanog PDE u dobijenim virusima je bila bez virusnog poliedarskog promotera. Kada se koristi MaxBac<®>sistem, virus je prečišćen od plaka dva puta, da bi se predupredila kontaminacija preparata divljim tipom (occ+) virusa. Ekspresija proteina je dobijena po sledećem. SF9 ćelije su odgajane na temperaturi od 27 °C na podlozi »Grace's Insect culture« (Gibco-BRL) uz dodatak 10% telećeg fetalnog seruma, 0.33% TC kvasca, 0,33% hidrolizata laktalbumina, 4,2 mM NaHCC»3, 10 ug/ml gentamicina, 100 U/ml penicilina i 100 ug/ml streptomicina. Eksponencijalno rastuće ćelije su inficirane približno sa 2 do 3 virusne čestice po ćeliji i inkubirane tokom 48 časova. Ćelije su prikupljene centrifugiranjem, isprane Grace-ovim medijumom bez dodataka i brzo zaleđene radi čuvanja.
Ekspresija uSaccharomvces Cerevisiae( Kvasac)
Dobijanje humanih PDE1B. PDE2, PDE4A, PDE4B, PDE4C, PDE4D, PDE5 i PDE7 rekombinantnom tehnikom je izvedeno na način sličan onom opisanom u Primeru 7 U.S. patentne prijave br. 5,702,936, ovde uključene po referenci, s tim što je korišćen vektor za transformaciju kvasca izveden iz osnovnog ADH2 plazmida opisanog u Priče et al.,Methods hi Enzymology, 185,pp. 308-318 (1990) u koji su inkorporirane promotorske i terminatorske sekvence plazmida ADH2, pri čemu je domaćinSaccharomyces Cerevisiaebio proteaza-deficijentni soj BJ2-54 priložen 31. avgusta 1998. od strane American Tvpe Culture Collection, Manassas, Virginia, pod pristupnim brojem ATCC 74465. Tiansformisane ćelije domaćina su uzgajane na podlozi 2X S-leu, pri pH vrednosti od 6,2 sa mikroelementima i vitaminima. Nakon 24 Časa, YEP podloga koja sadrži glicerol je dodata do konačne koncentracije od 2X YET/3% glicerola. Nakon približno 24 časa ćelije su prikupljene, isprane i pohranjene na -70°C.
PREČIŠĆAVANJE KALMODULINA
Kalmodulin koji je korišćen za aktivaciju PDE1 enzima je prečišćen iz telećih testisa . na način koji je opisan u Dedman et al.,Methods in Enzymology, 102,pp. 1-8 (1983), korišćenjem postupka Pharmacia Phenvl Sepharose<®>.
MOBILIZACIJA KALMODULINA NA AGAROZI
Kalmodulin je imobilisan na BioRad Affigel<®>15 prema specifikaciji proizvođača.
PREPARATI HUMANE FOSFODIESTERAZE
Određivanja aktivnosti fosfodiesteraze
Aktivnost fosfodiesteraze pomenutih preparata je određena na sledeći način. PDE probe koje koriste tehniku razdvajanja pomoću aktivnog uglja su izvedene na način koji je opisan u Loughnev et al., (1996). U ovoj probi PDE aktivnost prevodi [32P]cAMP ili [32P]cGMP u odgovarajući [32P]5'-AMP ili [32P]5'-GMP u odnosu na prisutnu PDE aktivnost. Nakon toga su [32P]5'-AMP i [32P]5'-GMP kvantitativno prevedeni u slobodni [32P]fosfat. a uklonjeni su i obeleženi adenozin ili guanozin dejstvom 5'-nukleotidaze iz zmijskog otrova. Na taj načinje količina oslobođenog [32P]fosfata proporcionalna enzimskoj aktivnosti. Proba je izvedena na temperaturi od 30 °C u 100 ul reakcione smeše koja sadrži (krajnje koncentracije) 40 mM Tris HC1 (pH 8,0), 1 uM ZnS04, 5 uM MgCl2, i 0,1 mg/ml telećeg serumskog albumina (Bovine Serum Albumin - BSA). Alternativno, u toku proba za procenu PDE1 - specifične aktivnosti, u inkubacione smeše je dalje inkorporiran 0,1 mM CaCl2, i 10 ug/ml kalmodulina. PDE enzim je prisutan u količinama koje učestvuju u manje od 30% ukupne hidrolize supstrata (uslovi linearne probe). Proba je započeta dodavanjem supstrata (1 mM [32P]cAMP ili [32P]cGMP) nakon čega je smeša inkubirana tokom 12 minuta. Sedamdeset i pet (75) mikrograma otrovaCroialus Atrox-& ]' edodato, pa je inkubacija nastavljena tokom 3 minuta (15 minuta ukupno). Reakcija je zaustavljena dodatkom 200 ul aktiviranog uglja (25 mg/ml suspenzije u 0,1M NaH2P04. pH=4). Nakon centrifugiranja (750 X g u toku 3 minuta) da bi se istaložio aktivni ugalj, uzet je uzorak supernatanta radi određivanja radioaktivnosti u scintilacionom brojaču pa je izračunata aktivnost PDE.
Inhibitorne analize su sprovedene slično postupcima opisanim u Loughnev et al.,J. Biol. Chem., 271.pp. 796-806 (1996) s tim što su korišćeni i cAMP i cGMP a koncentracija supstrata je održavana na niskim vrednostima od 32 nM, što je daleko ispod Km testiranih
PDE.
Prečišćavanje PDE1A3 iz SF 9 ćelija
Ćelijske granulice (5 g) pomešane su sa 10 ml pufera za lizu (50 mM MOPS pH 7,5,2 mM ditiotreitol (DTT). 2 mM benzamidin-hidrohlorid, 5 uM ZnS04, 0,1 mM CaCl2, 20
mg/ml inhibitor kalpaina I i II, i po 5 ug/ml leupeptina, pepstatina i aprotinina) na sobnoj temperaturi. Ćelije su lizirane pasiranjem kroz French<®>ćelijsku presu (SLM-Aminco<®>, Spectronic Instruments, Inc., Rochester, NY). Dobijeni lizat je centrifugiran u Beckmann ultracentrifugi korišćenjem rotora tipa T-180 na 45,000 obrtaja u minuti u toku jednog časa. Dobijen je supernatant i filtrovan je kroz 0,2 uM filtar. Ovaj filtrat je primenjen na 2.6 x 90
cm kolonu Sephacryl<®>S-300 ekvilibrisanog Puferom A za kolonu (pufer za lizu sadrži 100
mM NaCl i 2 mM MgCh). Brzina protoka kroz kolonu je podešena na 1 ml/min i frakcije od po 7 ml su prikupljane. Aktivne frakcije su sakupljene i obogaćene sa 0,16 mg kalmodulina. U toku noći je primenjivan enzim pri brzini protoka od 0,2 ml/min na koloni ACC-1 imunoafmitetne agaroze, kao što je opisano u Hansen et al.,Methods in lmmunology. 159,pp. 453-557 (1988). Kolona je isprana sa 5 zapremina Pufera B za kolonu (Pufer A za kolonu bez NaCl), a nakon toga sa 5 zapremina Pufera C za kolonu (Pufer A za kolonu koji sadrži 250 mM NaCl). Kolona je eluirana sa Puferom D za kolonu (50 mM MOPS pH 7,5,1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1 mM DTT, 1 mM benzamidin-hidrohlorid, 100 mM NaCl, 20 ug/ml inhibitora kalpaina I i II i po 5 u.g/ml leupeptina, pepstatina i aprotinina) korišćenjem jedne zapremine kolone pri brzini protoka od 0,1 ml/min, zaustavljanjem toka tokom jednog časa a onda nastavljanjem eluiranja pri istoj brzini protoka. Prikupljene su frakcije od po 0,5 ml. Sakupljene su frakcije koje pokazuju aktivnost i najpre dijalizirane upotrebom pufera za dijalizu koji sadrži 25 mM MOPS ph 7,5, 100 mM NaCl, 10 uM ZnS04, 1 mM CaCl2. 1 mM DTT i 1 mM benzamidin-hidrohlorid. Dijaliza koja je usledila korišćenjem pufera za dijalizu koji sadrži 50% glicerola izvedena je pre brzog smrzavanja uzorka suvim ledom i pohranjivanja na -70 °C. Dobijeni preparati su pokazali čistoću od 10% do 15% prema SDS-PAGE. Ovi preparati su imali specifičnu aktivnost od oko 5 do oko 20 uM cAMP hidrolizovanog u minuti po miligramu proteina.
Prečišćavanje PDE 1Biz S . cerevisiae
Ćelije kvasca (50 g) su raskravljene mešanjem sa 100 ml staklenih perli (0,5 mM isprano kiselinom) i sa 200 ml Pufera A. Pufer A se sastoji od 50 mM MOPS pH 7,5, 1 mM DTT, 2 mM benzamidin-hidrohlorida, 0,01 mM ZnS04, 5 mM MgCb, 20 p,g/ml inhibitora kalpaina I i II i po 5 ug/ml leupeptina, pepstatina i aprotinina. Smeša je ohlađena do temperature od 4 °C, prebačena u Bead-Beater<®>, a ćelije su lizirane brzim mešanjem tokom 6 ciklusa od po 30 sekundi. Homogenat je centrifugiran u toku 15 minuta u Beckmann J2-21M centrifugi korišćenjem rotora JA-10 pri brzini rotacije od 9000 obrtaja u minutu i na temperaturi od 4 °C. Dobijen je supernatant koji je centrifugiran u Beckmann XL-80 ultracentrifugi korišćenjem TI-45 rotora pri brzini rotacije od 36000 obrtaja u minutu, u toku 45 minuta, na temperaturi od 4 °C. Dobijen je supernatant, a PDE1B je istaložen dodavanjem čvrstog amonijum-sulfata (0,33 g/ml supernatanta) uz mešanje u ledenom kupatilu uz
održavanje vrednosti pH između 7,0 i 7,5. Ova smeša je, zatim, centrifugirana u toku 22 minuta u Beckmann J2 centrifugi korišćenjem rotora JA-10 pri brzini rotacije od 9000 obrtaja u minutu (12000 X g). Supernatant je odbačen i ostatak je rastvoren u 100 ml Pufera B (50 mM MOPS pH 7,5, 1 mM DTT, 1 mM benzamidin-hidrohlorid, 0,01 mM ZnS04, 2 mM MgCb, 2 mM CaCh, i po 5 u.g/ml leupeptina, pepstatina i aprotinina). Provodnost i pH vrednost su korigovani do 15 do 20 mS i do 7,5, respektivno. Ovaj rastvor je stavljen na 20 ml kolonu kalmodulin-Agaroze koja je ekvilibrisana sa 10 zapremina kolone Pufera B pri brzini protoka od 1 ml/min. Protok je ponovno primenjen na koloni najmanje 5 puta. Kolona je ponovo isprana sa 5 zapremina Pufera B, 5 zapremina Pufera B koji sadrži 250 mM NaCl i 2 zapremine Pufera B bez NaCl. Eluiranje je izvedeno upotrebom jedne zapremine Pufera C (50 mM MOPS pH 7,5, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1 mM DTT, 1 mM benzamidin-hidrohlorid) pri brzini protoka od 0,33 ml/min, zatim zaustavljanjem protoka u toku jednog Časa pre nastavka eluiranja. Frakcije od oko 4 ml su prikupljene i testirane na PDE aktivnost. Aktivne frakcije su sakupljene i koncentrovane do zapremine od 5 ml korišćenjem Amicon sistema za ultrafiltraciju. Koncentrat je stavljen na Sephacrvl<®>S-300 kolonu (1,6 x 150 cm) od 320 ml koja je ekvilibrisana sa najmanje dve zapremine Pufera D (25 mM MOPS pH 7,5, 1 mM DTT, 1 mM benzamidin-hidrohlorid, 0,01 mM ZnS04. 2 mM CaCl2, i 100 mM NaCl). Kolona je razvijana pri brzini protoka od 1 ml/min (11 cm/h) i prikupljene su frakcije od 5 ml. Najaktivnije frakcije su prikupljene i dijalizovane tokom noći upotrebom Pufera D koji sadrži 50% glicerola. Prečišćeni enzim je zaleđen korišćenjem suvog leda i pohranjen na -70 °C. Dobijeni preparati su pokazali Čistoću veću od 90% prema SDS-PAGE. Ovi preparati su pokazali specifičnu aktivnost od oko 10 do oko 30 umol cGMP hidrolizovanog po minuli po miligramu proteina.
Prečišćavanje PDE1C3 iz Sf 9 ćelija
Ćelijske granulice (5 g) su raskravljene na ledu sa 20 ml pufera za lizu (50 mM MOPS pH 7,4, 1 mM ditiotreitol (DTT), 2 mM benzamidin-hidrohlorid, 10 uM ZnS04, 0,1 mM CaCb, i po 5 ug/ml leupeptina, pepstatina i aprotinina). Ćelije su lizirane pasiranjem kroz French<®>ćelijsku presu (SLM-Aminco<®>, Spectronic Instruments) uz održavanje temperaiure ispod 10 °C. Dobijeni ćelijski homogenat je centrifugiran u Beckmann ultracentrifugi sa rotorom tipa TI-45 na 36,000 obrtaja u minuti u toku 45 minuta na temperaturi od 4 °C.
Supernatant je odbačen a dobijeni ostatak je resuspendovan u 40 ml pufera za solubilizaciju (pufer za lizu koji sadrži IM NaCl, 0,1M MgCl:, 1 mM CaCl2, 20 p.g/ml kalmodulina, i 1% sulfobetain SB-12 (Z3-12)) korišćenjem ultrazvuka dobijenog pomoću VibraCell tjunera sa mikrovrhom u toku 3 x 30 sekundi. Ovo je izvedeno u smeši za hlađenje sastavljenoj od soli i izmrvljenog leda. Nakon primene ultrazvuka, smeša je lagano mešana u toku 30 minuta na temperaturi od 4 °C da bi se dovršila solubilizacija proteina vezanih za membranu. Ova smeša je centrifugirana u Beckmann ultracentrifugi sa rotorom tipa TI-45 na 36,000 obrtaja u minuti u toku 45 minuta. Supernatant je razblažen sa puferom za lizu koji sadrži 10 u.g/ml inhibitora kalpaina I i II. Istaloženi protein je centrifugiran u toku 20 minuta pri brzini rotacije od 9000 obrtaja u minuti u Beckmann centrifugi sa rotorom tipa JA-10. Dobijeni supernatant je zatim podvrgnut Mimetic Blue<®>AP Agarose hromatografiji.
Da bi funkcionisala kolona za Mimetic Blue<®>AP Agarose hromatografiju, smola je inicijalno zaštićena primenom 10 zapremina korita sa 1% polivinil-pirolidonom (npr. molekulske težine 40,000) da bi se blokirala nespecifična vezivna mesta. Labavo vezani PVP-40 je uklonjen ispiranjem sa 10 zapremina korita 2M NaCl i 10 mM natrijum-citratom pH 3.4. Neposredno pre dodavanja solubiliziranog PCE1C3 uzorka, kolona je ekvilibrisana sa 5 zapremina korita pufera za kolonu A (50 mM MOPS pH 7,4, 1 mM ditiotreitol (DTT). 2 mM benzamidin-hidrohlorid, 10 uM ZnS04, 5 mM MgCl2, 0,1 mM CaCl2).
Solubiliziran uzorak se postavlja u kolonu sa protokom od 2 ml/min uz reciklovanje tako da se ukupni uzorak postavlja 4 do 5 puta u toku 12 časova. Nakon završenog punjenja, kolona se ispira sa 10 zapremina kolone puferom A za kolonu, a zatim sa 5 zapremina pufera B za kolonu (pufer A za kolonu sadrži 20 mM 5'-AMP), zatim sa 5 zapremina pufera C za kolonu (50 mM MOPS pH 7,4, 1 mM ditiotreitol (DTT), 2 mM benzamidin-hidrohlorid, 10 uM ZnS04, 0,1 mM CaCl2). Enzim je eluiran u toku tri sukcesivne šarže. Prva šarža se sastojala od enzima dobijenog ispiranjem sa 5 zapremina korita, pri čemu je ispiranje vršeno puferom C za kolonu koji sadrži 1 mM cAMP. Druga šarža se sastojala od enzima dobijenog ispiranjem sa 10 zapremina korita, pri čemu je ispiranje vršeno puferom C za kolonu koji sadrži IM NaCl. Poslednja šarža se sastojala od enzima dobijenog ispiranjem sa 5 zapremina korita, pri čemu je ispiranje vršeno puferom C za kolonu koji sadrži IM NaCl i 20 mM cAMP.
Aktivne šarže enzima su prikupljene a ciklični nukleotid uklonjen primenom uobičajene gel-filtracione hromatografije ili"hromatografije na hidroksiapatitnim smolama. Nakon uklanjanja cikličnih nukleotida, šarže enzima su dijalizovane primenom pufera za dijalizu koji sadrži 25 mM MOPS pH 7,4, 1 mM ditiotreitol (DTT), 1 mM benzamidin-hidrohlorid, 10 uM ZnS04, 1 mM CaCl2, 500 mM NaCl, nakon Čega su dijalizovane primenom pufera za dijalizu koji sadrži 50% glicerola. Enzim je brzo zaleđen korišćenjem suvog leda i pohranjen na -70°C.
Dobijeni preparati su pokazali čistoću veću od 90% prema SDS-PAGE. Ovi preparati su pokazali specifičnu aktivnost od oko 0,1 do oko 1,0 umol cAMP hidrolizovanog po minuti po miligramu proteina.
Prečišćavanje PDE2 izS . cerevisiae
Zaleđene granulice ćelija kvasca soja YI34 (10 g, pohranjeno na -10 °C) su raskravljene na ledu sa 25 ml pufera za lizu (50 mM MOPS pH 7,2, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 0,1 mM ditiotreitol (DTT), 0,1 mM 4-(2-amino-etil)benzensulfonil fluorid (AEBSF), 2 mM benzamidina, i po 1 u.g/m.1 leupeptina, pepstatina, aprotinina i inhibitora kalpaina I i II). Ćelije su lizirane trostrukim pasiranjem kroz French<®>ćelijsku presu (SLM-Aminco<®.>Spectronic Instruments). Lizat je centrifugiran u Beckmann ultracentrifugi sa rotorom tipa TI-45 na 36,000 obrtaja u minuti u toku 60 minuta na temperaturi od 4 °C. Supernatant je odvojen od taloga i propušten kroz 15 ml Epoxy-cGMP Sepharos<®>smole dva puta na temperaturi od 4 °C pri protoku od 0.5 ml/min. Kolona je, nakon toga, isprana sa 45 ml pufera 1 za ispiranje (50 mM MOPS pH 7,2, 0,1 mM EDTA, 0,1 mM ditiotreitol (DTT)). Nakon ovog ispiranja, kolona je isprana sa 45 ml pufera 2 za ispiranje (pufer 1 za ispiranje koji sadrži 0.5M NaCl). Nakon ovog ispiranja solju, kolona je isprana sa 15 ml pufera 3 za ispiranje (pufer 1 za ispiranje koji sadrži 0.25M NaCl). Kolona je preneta na sobnu temperaturu i ostavljena da se zagreje. Približno 25 ml pufera za eluiranje (pufer 3 za ispiranje koji sadrži 10 mM cGMP, uz održavanje sobne temperature) je postavljeno u kolonu, a istekli rastvor je prikupljan u frakcijama od po 2 ml. Mali, tačno određeni deo svake od frakcija je dvadesetostruko razblažen u PBS koji sadrži 5 mM MgCl2 da bi se omogućila hidroliza kompetitivnog Uganda i da bi se pospešila detekcija PDE2 aktivnosti. Aktivne frakcije su propuštene kroz kolonu za gel-filtraciju Pharmacia PD-10<®>radi izmene u pufer 3 za ispiranje. Ova šarža za izmenu je 50% (v/v) razblažena sa sterilnim 80% glicerolom i pohranjena na -20 °C. Nastali preparati su imali Čistoću veću od 85% što je procenjeno primenom SDS-PAGE, nakon čega je protein obojen sa Coomassie R-250. Ovi preparati su imali specifičnu aktivnost od oko 150 do oko 250 umol cGMP hidrolizovanog po minuti po miligramu proteina.
Pobijanje PDE3A iz Sf 9 ćelija
Ćelije (2 X 1010) su suspendovane u puferu za lizu koji sadrži 50 mM MOPS pH 7.5, 2 mM ditiotreitol (DTT), 2 mM benzamidin-hidrohlorid, 5 uM ZnS04, 0,1 mM CaCl2, 20Ug/ml kalpain inhibitora I i II, i po 5 p.g/ml leupeptina, pepstatina i aprotinina. Smeša je izložena dejstvu ultrazvuka dva puta u toku 30 sekundi a ćelije su lizirane u French<®>ćelijskoj presi (SLM-Aminco<®>. Spectronic Instruments) na temperaturi od 4 °C. Lizat je centrifugiran na 100,000 X g u toku 45 minuta. Ostatak je jednom ispran puferom za liziranje i suspendovan u 46 ml pufera za liziranje sa Dounce homogenizatorom. Tačno određene količine su pohranjene na -70 °C. Ovi preparati su imali specifičnu aktivnost od oko 1 do oko 2 nmol cAMP hidrolizovanog po minuti po miligramu proteina.
POSTUPCI POBIJANJA HUMANIH PDE4A. 4B, 4C. 4D
Pobijanje PPE4A izS . cerevisiae
Ćelije kvasca (50 g, soja Y126 koje nose HPUN1.46) su raskravljene na sobnoj temperaturi mešanjem sa 50 ml pufera za lizu (50 mM MOPS pH 7,5, 10 uM ZnS04, 2 mM MgCl2, 14,2 mM 2-merkaptoetanola, po 5 pg/ml leupeptina, pepstatina, aprotinina, po 20 ug/ml inhibitora kalpaina I i II, i 2 mM benzamidin-hidrohlorida). Ćelije su lizirane u French<®>ćelijskoj presi (SLM-Aminco<®>, Spectronic Instruments) na temperaturi od 10 °C. Ekstrakt je centrifugiran u Beckmann ultracentrifugi sa rotorom tipa JA-10 na 9,000 obrtaja u minuti u toku 22 minuta na temperaturi od 4 °C. Supernatant je uklonjen i centrifugiran u Beckmann ultracentrifugi sa rotorom tipa TI-45 na 36.000 obrtaja u minutu u toku 45 minuta na temperaturi od 4 °C. PDE4A je istaložen iz supernatanta velike brzine dodavanjem čvrstog amonijum-sulfata (0,26 g/ml supernatanta) uz mešanje u ledenom kupatilu uz održavanje vrednosti pH između 7,0 i 7,5. Istaloženi proteini koji sadrže PDE4A su prikupljeni centrifugiranjem u toku 22 minuta u Beckmann centrifugi korišćenjem rotora JA-10 pri brzini rotacije od 9000 obrtaja u minutu. Precipitat je resuspendovan u 50 ml pufera G (50 mM MOPS pH 7,5, 10 uM ZnS04, 5 mM MgCl2, 100 mM NaCl, 14,2 mM 2-merkaptoetanola. po 5 u.g/ml leupeptina, pepstatina, aprotinina, po 20 ug/ml inhibitora kalpaina I i II, i 2 mM benzamidin-hidrohlorida) i propušten kroz 0,45 pm filter.
Resuspendovani uzorak (50 ml do 100 ml) je postavljen na 5 x 100 cm kolonu Pharmacia Sephacrvl<®>S-300 ekvilibrisanu puferom G. Frakcije sa najvećom enzimskom aktivnošću su eluirane pri brzini toka od 2 ml/min i prikupljene za kasnije frakcionisanje.
PDE4A koji je izolovan gel-filtracionom hromatografijom postavljen je na 1.6 x 20 cm kolonu Sigma Cibacron Glue Agarose tip 300 (10 ml) ekvilibrisanu puferom A (50 mM MOPS pH 7,5, 10 uM ZnSO<4>, 5 mM MgCl2, 14,2 mM 2-merkaptoetanol, 100 mM benzamidin-hidrohlorid). Kolona je ispirana redom sa 50 ml do 100 ml pufera A, 20 ml do 30 ml pufera A koji sadrži 20 mM 5-AMP, 50 ml do 100 ml pufera A koji sadrži 1.5M NaCl i 10 ml do 20 ml pufera C (50 mM Tris HC1 pH 8, 10 uM ZnS04, 14,2 mM 2-merkaptoetanol i 2 mM benzamidin-hidrohlorid). Enzim je eluiran sa 20 ml do 30 ml pufera C koji sadrži 20 mM cAMP.
Frakcije sa najvećom PDE aktivnošću su prikupljene i istaložene sa amonijum-sulfatom (0,33 g/ml enzimske šarže) da bi se uklonio višak cikličnog nukleotida. Istaloženi proteini su resuspendovani u puferu X (25 mM MOPS pH 7,5, 5 uM ZnS04, 50 mM NaCl. 1 mM DTT i 1 mM benzamidin-hidrohlorid), i desalinizovani gel-filtracijom na Pharmacia PD-10<®>koloni prema proizvođačkoj specifikaciji. Enzim je brzo zaleđen u kupatilu sa suvim ledom i etanolom, i pohranjen na -70 °C. Nastali preparati su imali čistoću veću od 80% što je procenjeno primenom SDS-PAGE. Ovi preparati su imali aktivnost od oko 10 do oko 40 umol cAMP hidrolizovanog po minutu po miligramu proteina.
Pobijanje PDE4B izS . cerevisiae
Ćelije kvasca (150 g soja YI23 koje nose HPUN2.32) su raskravljene mešanjem sa 100 ml staklenih perli (0,5 mM isprano kiselinom) i sa 150 ml Pufera za lizu (50 mM MOPS pH 7,2, 2 mM EDTA, 2 mM EGTA, 1 mM DTT, 2 mM benzamidin-hidrohlorid, po 5 ug/ml leupeptina, pepstatina, aprotinina i inhibitora kalpaina I i II) na sobnoj temperaturi. Smeša je ohlađena do temperature od 4 °C, prebačena u Bead-Beater (Rt, a ćelije su lizirane brzim mešanjem tokom 6 ciklusa od po 30 sekundi. Homogenat je centrifugiran u toku 22 minuta u Beckmann J2-21M centrifugi korišćenjem rotora JA-10 pri brzini rotacije od 9000 obrtaja u minutu i na temperaturi od 4 °C. Dobijen je supernatant koji je centrifugiran u Beckmann XL-80 ultracentrifugi korišćenjem TI-45 rotora pri brzini rotacije od 36000 obrtaja u minutu, u toku 45 minuta, na temperaturi od 4 °C. Dobijen je supernatant, a PDE4B je istaložen dodavanjem čvrstog amonijum-sulfata (0,26 g/ml supernatanta) uz mešanje u ledenom kupatilu uz održavanje vrednosti pH između 7,0 i 7,5. Ova smeša je, zatim, centrifugirana u toku 22 minuta u Beckmann J2 centrifugi korišćenjem rotora JA-10 pri brzini rotacije od 9000 obrtaja u minutu (12000 X g). Supernatant je odbačen i ostatak je rastvoren u 200 ml Pufera A (50 mM MOPS pH 7,5, 1 mM DTT, 1 mM benzamidin-hidrohlorid, 5 mM MgCl2, i po 5 u.g/m.1 leupeptina, pepstatina i aprotinina). Provodnost i pH vrednost su korigovani do 15 do 20 mS i do 7,5, respektivno.
Resuspendovani uzorak je stavljen na 1,6 x 200 cm kolonu (25 ml) Sigma Cibacron Blue Agarose tip 300 ekvilibrisanu puferom A. Uzorak je propušten kroz kolonu 4 do 6 puta tokom 12 časova. Kolona je isprana redom sa 125 ml do 250 ml pufera A, sa 125 ml do 250 ml pufera A koji sadrži 1,5M NaCl, i sa 25 ml do 50 ml pufera A. Enzim je eluiran sa 50 ml do 75 ml pufera E (50 mM Tris HC1 pH 8, 2 mM EDTA, 2 mM EGTA, 1 mM DTT, 2 mM benzamidin-hidrohlorid i 20 mM cAMP) i sa 50 ml do 75 ml pufera E koji sadrži IM NaCl. Sakupljene su frakcije sa najvećom PDE aktivnošću i istaložene su sa amonijum-sulfatom (0,4 g/ml enzimske šarže) da bi se uklonio višak cikličnih nukleotida. 1 staloženi proteini su resuspendovani u puferu X (25 mM MOPS pH 7,5, 5 uM ZnS04, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, i 1 mM benzamidin-hidrohlorid) i desalinizovani putem gel-filtracije na koloni Pharmacia PD-10<®>po specifikaciji proizvođača. Enzimska Šarža je dijalizovana tokom noći primenom pufera X koji sadrži 50% glicerola. Ovaj enzim je brzo zaleđen u kupatilu sa suvim ledom i etanolom i pohranjen na -70 °C.
Nastali preparati su pokazali čistoću veću od 90% primenom SDS-PAGE. Ovi preparati su imali specifičnu aktivnost od oko 10 do oko 50f.imol cAMP hidrolizivanog po minuti po miligramu proteina.
Pobijanje PDE4C iz S.cerevisiae
Ćelije kvasca (150 g soja YI30 koje nose HDUN3.48) su raskravljene mešanjem sa 100 ml staklenih perli (0,5 mM isprano kiselinom) i sa 150 ml Pufera za lizu (50 mM MOPS pH 7,2, 2 mM EDTA, 2 mM EGTA, 1 mM DTT, 2 mM benzamidin-hidrohlorid, po 5 ug/ml leupeptina, pepstatina, aprotinina i inhibitora kalpaina I i II) na sobnoj temperaturi. Smeša je
ohlađena do temperature od 4 °C, prebačena u Bead-Beater<®>, a ćelije su lizirane brzim mešanjem tokom 6 ciklusa od po 30 sekundi. Homogenat je centrifugiran u toku 22 minuta u Beckmann J2-21M centrifugi korišćenjem rotora JA-10 pri brzini rotacije od 9000 obrtaja u minutu i na temperaturi od 4 °C. Dobijen je supernatant koji je centrifugiran u Beckmann XL-80 ultracentrifugi korišćenjem TI-45 rotora pri brzini rotacije od 36000 obrtaja u minutu, u toku 45 minuta, na temperaturi od 4 °C.
Dobijen je supernatant, a PDE4C je istaložen dodavanjem čvrstog amonijum-sulfata (0,26 g/ml supernatanta) uz mešanje u ledenom kupatilu uz održavanje vrednosti pH između 7,0 i 7,5. Ova smeša je, 30 minuta kasnije, centrifugirana u toku 22 minuta u Beckmann J2 centrifugi korišćenjem rotora JA-10 pri brzini rotacije od 9000 obrtaja u minutu (12000 X g). Supernatant je odbačen i ostatak je rastvoren u 200 ml Pufera A (50 mM MOPS pH 7,5, 1 mM DTT, 2 mM benzamidin-hidrohlorid, 5 mM MgCk, i po 5 p.g/ml leupeptina, pepstatina i aprotinina). Provodnost i pH vrednost su korigovani do 15 do 20 mS i do 7.5, respektivno.
Resuspendovani uzorak je stavljen na 1,6 x 20 cm kolonu (25 ml) Sigma Cibacron Blue Agarose tip 300 ekvilibrisanu puferom A. Uzorak je propušten kroz kolonu 4 do 6 puta tokom 12 časova. Kolona je isprana redom sa 125 ml do 250 ml pufera A. sa 125 ml do 250 ml pufera A koji sadrži 1,5M NaCl, i sa 25 ml do 50 ml pufera A. Enzim je eluiran sa 50 ml do 75 ml pufera E (50 mM Tris HC1 pH 8, 2 mM EDTA, 2 mM EGTA, 1 mM DTT. 2 mM benzamidin-hidrohlorid i 20 mM cAMP) i sa 50 ml do 75 ml pufera E koji sadrži IM NaCl. Sakupljene su frakcije sa najvećom PDE4C aktivnošću i istaložene su sa amonijum-sulfatom (0,4 g/ml enzimske šarže) da bi se uklonio višak cikličnih nukleotida. lstaloženi proteini su resuspendovani u puferu X (25 mM MOPS pH 7,5, 5 uM ZnSO«, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, i I mM benzamidin-hidrohlorid) i desalinizovani putem gel-filtracije na koloni Pharmacia PD-10<®>po specifikaciji proizvođača. Enzimska šarža je dijalizovana tokom noći primenom pufera X koji sadrži 50% glicerola. Ovaj enzim je brzo zaleđen u kupatilu sa suvim ledom i etanolom i pohranjen na -70 °C.
Nastali preparati su pokazali čistoću veću od 80% primenom SDS-PAGE. Ovi preparati su imali specifičnu aktivnost od oko 10 do oko 20 umol cAMP hidrolizivanog po minuti po miligramu proteina.
Pobijanje PDE4Diz S . cerevisiae
Ćelije kvasca (100 g soja YI29 koje nose HPUN4.11) su raskravljene mešanjem sa 150 ml staklenih perli (0,5 mM isprano kiselinom) i sa 150 ml Pufera za lizu (50 mM MOPS pH 7,2, 10 pJvl ZnS04, 2 mM MgCh, 14,2 mM 2-merkaptoetanol, 2 mM benzamidin-hidrohlorid, po 5 u.g/ml pepstatina, leupeptina, aprotinina i inhibitora kalpaina I i II) na sobnoj temperaturi. Smeša je ohlađena do temperature od 4 °C, prebačena u Bead-Beater<®>, a ćelije su lizirane brzim mešanjem tokom 6 ciklusa od po 30 sekundi. Homogenat je centrifugiran u toku 22 minuta u Beckmann J2-21M centrifugi korišćenjem rotora JA-10 pri brzini rotacije od 9000 obrtaja u minutu i na temperaturi od 4 °C. Pobijen je supernatant koji je centrifugiran u Beckmann XL-80 ultracentrifugi korišćenjem TI-45 rotora pri brzini rotacije od 36000 obrtaja u minutu, u toku 45 minuta, na temperaturi od 4 °C. Pobijen je supernatant, a PPE4P je istaložen dodavanjem čvrstog amonijum-sulfata (0,33 g/ml supernatanta) uz mešanje u ledenom kupatilu uz održavanje vrednosti pH između 7,0 i 7,5. Ova smeša je, 30 minuta kasnije, centrifugirana u toku 22 minuta u Beckmann J2 centrifugi korišćenjem rotora JA-10 pri brzini rotacije od 9000 obrtaja u minulu (12000 X g). Supernatant je odbačen i ostatak je rastvoren u 100 ml Pufera A (50 mM MOPS pH 7,5, 10 uM ZnS04, 5 mM MgCl2, 14,2 mM 2-merkaptoetanol, 100 mM benzamidin-hidrohlorid, po 5 u.g/ml pepstatina, leupeptina. aprotinina i inhibitora kalpaina I i II). Provodnosl i pH vrednost su korigovani do 15 do 20 mS i do 7,5, respektivno.
Resuspendovani uzorak je stavljen na 1,6 x 20 cm kolonu (10 ml) Sigma Cibacron Blue Agarose tip 300 ekvilibrisanu puferom A, pri brzini protoka od 0,67 ml/min. Kolona je isprana redom sa 50 ml do 100 ml pufera A, sa 20 ml do 30 ml pufera A koji sadrži 20 mM 5'-AMP, sa 50 ml do 100 ml pufera A koji sadrži 1,5M NaCl, i sa 10 ml do 20 ml pufera C (50 mM Tris HC1 pH 8. 10 uM ZnS04, 14,2 mM 2-merkaptoetanol, 2 mM benzamidin-hidrohlorid). Enzim je eluiran sa 20 ml do 30 ml pufera C koji sadrži 20 mM cAMP.
Sakupljene su frakcije sa najvećom PDE4D aktivnošću i istaložene su sa amonijum-sulfatom (0,4 g/ml enzimske šarže) da bi se uklonio višak cikličnih nukleotida. Istaloženi proteini su resuspendovani u puferu X (25 mM MOPS pH 7,5, 5 uM ZnS04, 50 mM NaCl, 1 mM PTT, i 1 mM benzamidin-hidrohlorid) i desalinizovani putem gel-filtracije na koloni Pharmacia PD-10<®>po specifikaciji proizvođača. Enzimska šarža je dijalizovana tokom noći primenom pufera X koji sadrži 50% glicerola. Ovaj enzim je brzo zaleđen u kupatilu sa suvim ledom i etanolom i pohranjen na -70 °C.
Nastali preparati su pokazali čistoću veću od 80% primenom SDS-PAGE. Ovi preparati su imali specifičnu aktivnost od oko 20 do oko 50 umol cAMP hidrolizivanog po minuti po miligramu proteina.
Pobijanje PDE5 izS . cerevisiae
Ćelijske granulice (29 g) su raskravljene na ledu sa jednakom zapreminom pufera za lizu (25 mM Tris HC1 pH 8, 10 uJvi ZnS04, 5 mM MgCL, 0,25 mM PTT, 1 mM benzamidin-hidrohlorid). Ćelije su lizirane u Micro-Fluidizer<®>(Microfluidics Corp.) korišćenjem azota na 20,000 psi. Lizat je centrifugiran i filtriran kroz 0,45 pm filtere za jednokratnu upotrebu. Filtrat je postavljen u kolonu Q Sepharose<®>Fast-Flow (Pharmacia) od 150 ml. Kolona je isprana sa 1,5 zapremina pufera A (20 mM Bis-Tris-propan pH 6,8, 1 mM MgCh, 0,25 mM PTT, 10 uM ZnS04) i eluirana sa korakom gradijenta od 125 mM NaCl u puferu A, a zatim sa linearnim gradijentom od 125 do 1000 mM NaCl u puferu A. Aktivne frakcije iz linearnog gradijenta su postavljene u kolonu hidroksiapatita od 180 ml u puferu B (20 mM Bis-Tris-propan pH 6,8, 1 mM MgCl2, 0,25 mM PTT, 10 uM ZnS04i 250 mM KC1). Nakon postavljanja, kolona je isprana sa dve zapremine pufera B i eluirana sa linearnim gradijentom od 0 do 125 mM kalijum-fosfata u puferu B. Prikupljene su aktivne frakcije, istaložene sa 60% amonijum-sulfatom i resuspendovane u puferu C (20 mM Bis-Tris-propan pH 6.8, 125 mM NaCl, 0,5 mM PTT, 10 uM ZnS04). Šarža je postavljena u kolonu Sephacrvl<®>S-300 HR od 140 ml i eluirana sa puferom C. Aktivne frakcije su razblažene sa 50% glicerolom i pohranjene na -20 °C.
Nastali preparati su pokazali čistoću od oko 85% primenom SDS-PAGE. Ovi preparati su imali specifičnu aktivnost od oko 3 umol cGMP hidrolizivanog po minuti po miligramu proteina.
Pobijanje PDE7 izS . cerevisiae
Ćelijske granulice (126 g) su raskravljene i resuspendovane na sobnoj temperaturi tokom oko 30 minuta u jednakoj zapremini pufera za lizu (50 mM Tris HC1 pH 8, 1 mM
EDTA, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, 2 mM benzamidin-hidrohlorid, i po 5 ug/ml pepstatina, leupeptina i aprotinina). Ćelije su lizirane na temperaturi od 0 °C do 4 °C uz pomoć staklenih perli u Bead Beater<®->u u 6 ciklusa od po 30 sekundi. Lizat je centrifugiran i filtriran kroz 0,45 um filtere za jednokratnu upotrebu. Filtrovani ekstrakt (178 ml) je raspodeljen u porcije od po 4 mililitra, brzo zaleđen suvim ledom i pohranjen u zamrzivaču na -70 °C. Ovi preparati su bili stabilni u toku nekoliko ciklusa zaleđivanja i raskravljivanja, i imali su specifičnu aktivnost od oko 50 do 100 pmol cAMP hidrolizivanog po minuti po miligramu proteina.
Otpuštanje TNFa stimulisano lipopolisaharidom iz humanih limfocita periferne krvi
Da bi se procenila sposobnost jedinjenja da umanje sekreciju TNFa iz humanih limfocita periferne krvi (Peripheral Blood Lvmphocvtes - PBL) sprovedeni su sledeći testovi. Prethodne studije su pokazale da inkubacija humanih PBL sa sredstvima koja povećavaju nivo cAMP, kao što su prostaglandin E21, forskolin, 8-bromo-cAMP, ili dibutril-cAMP, sprečava sekreciju TNFa od strane ćelija kada su stimulisane lipopolisaharidom (LPS; endotoksin). Shodno tome, izvedeni su preliminarni eksperimenti da bi se pokazalo da selektivni PDE4 inhibitori, kao što je rolipram, inhibiraju sekreciju TNFa iz humanih limfocita stimulisanu LPS-om na dozno zavisan način. Stoga, sekrecija TNFa iz humanih PBL je korišćena kao standard za sposobnost jedinjenja da poveća koncentraciju intracelularnog cAMP i/ili da inhibira PDE4 aktivnost unutar ćelije.
Heparinizirana krv (približno 30 ml) dobijena od ljudi dobrovoljaca je pomešana sa Dulbecco-vim modifikovanim, fosfatom puferovanim. sonim rastvorom u odnosu 1:1. Ova smeša je mešana u odnosu 1:1 sa Histopaque<®>i centrifugirana pri brzini rotacije od 1500 obrtaja u minuti na sobnoj temperaturi bez kočenja u obrtnom dobošu centrifuge Beckmann model TJ-6. Eritrociti su centrifugirani do dna kivete, a serum je ostao na površini. Sloj koji sadrži limfocite i koji se nalazi između seruma i Histopaque<®>sloja, uklonjen je aspiracijom u čistu kivetu. Ćelije su prebrojane i njihov broj je podešen do 3x10<6>ćelija u mililitru, a porcije od po 100 ul su prebačene u bazenčiće u okviru ploče od 96 bazenčića. Ispitivana jedinjenja i RPMI podloge (Gibco/BRL Life Sciences) dodate su u svaki od bazenčića 15 min pre dodavanja bakterijskog LPS (25 mg/ml). Smeša je inkubirana tokom 20 časova na temperaturi od 37 °C u komori sa vlagom. Nakon toga, ćelije su razdvojene centrifugiranjem pri brzini rotacije od 800 obrtaja u minuti, tokom 5 minuta, na sobnoj temperaturi. Porcije od po 180 ul supernatanta su prebačene na novu ploču radi određivanja koncentracije TNFa. Protein TNFa iz tečnosti ćelijskog supernatanta je meren upotrebom komercijalno dostupnog za enzim povezanog imunoapsorpcionog testa (ELISA) (Cvtoscreen® Irnmunoassav kit iz Biosource International).
Ćelijski baziran test obezbeđuje sledeće rezultate za različita jedinjenja pirolidina predmetnog pronalaska. EC50vrednosti (tj. efektivna koncentracija jedinjenja sposobna za inhibiciju 50% ukupnog TNFa) pokazuju sposobnost jedinjenja predmetnog pronalaska da inhibiraju otpuštanje TNFa stimulisano LPS-om iz humanih PBL.
Tabela koja sledi ilustruje sposobnost jedinjenja formule (II) da inhibiraju PDE4 aktivnost i otpuštanje TNFain vitro.U tabeli koja sledi, IC50vrednosti su određene za humani rekombinantni PDE4.
Podaci koji su gore predstavljeni da su jedinjenja predmetnog pronalaska snažni inhibitori PDE4, tj. jedinjenja predmetnog pronalaska imaju IC50vrednosti prema humanom rekombinantnom PDE4 od oko 700 pM do oko 15 uM. Poželjna jedinjenja imaju IC50vrednosti od oko 100 nM ili manje a posebno poželjna jedinjenja imaju IC50vrednosti od oko 50 nM ili manje.
Slično, poželjna jedinjenja imaju PBL/TNFa EC50vrednosti od oko 500 nM ili manje a poželjno od oko 200 nM ili manje. Još poželjnija jedinjenja imaju PBL/TNFa EC50vrednosti od oko 100 nM ili manje.
Da bi se u potpunosti iskoristile prednosti predmetnog pronalaska, jedinjenja predmetnog pronalaska imaju IC50vrednosti prema humanom rekombinantnom PDE4 od oko 100 nM ili manje i PBL/TNFa EC50vrednosti od oko 500 nM ili manje. Još poželjnije, jedinjenja predmetnog pronalaska imaju IC50vrednosti od oko 50 nM ili manje, a PBL/TNFa EC50vrednosti od oko 100 nM ili manje.
Životinjski modeli
Probe za inhibiciju nivoa serumskog TNFa kod sisara
( miš/ TNFa ED5 0( mg/ kg))
Da bi se procenila sposobnost jedinjenja da smanje nivoe serumskog TNFa kod sisara. korišćen je sledeći protokol. Stručnjaci mogu primetiti da su prethodne studije pokazale da je inkubacija humanih monocita, aktiviranih sa LPS sredstvima koja mogu povećati nivo cAMP, kao Što su PGE2, forskolin i dbcAMP, inhibirala sekreciju TNFa. Inhibitori PDE4, kao što je rolipram, koji takođe povećava nivo cAMP, inhibiraju takođe serumski TNFa. Pronađeno je da je rolipram inhibirao sekreciju TNFa iz mišjih makrofaga aktiviranih sa LPS. Shodno tome,in vivoefikasnost jedinjenja koje smanjuje aktivnost PDE4 je pokazana doziranjem jedinjenja i merenjem smanjenja nivoa serumskog TNFa kod miša u koga je injektovan LPS. Ženka C3H miša telesne mase 20 g do 25 g je izgladnjivana tokom noći i intraperitonealno joj je dato jedinjenje koje se testira sa odgovarajućim vehikulumom 60 minuta pre nego što joj je ubrizgan LPS. Nakon toga, intraperitonealno je u miša ubrizgano 5 mg LPS. Devedeset minuta nakon ubrizgavanja LPS, izazvano je iskrvarenje miša iz srca. Krv je ostavljena da se zgruša preko noći na temperaturi od 4 °C. Uzorci su centrifugirani tokom 10 minuta u mikrocentrifugi a serum je uklonjen i pohranjen na temperaturi od -20 °C do analize. Nivoi serumskog TNFa su redom mereni upotrebom komercijalno dostupnog ELISA kita (Genzvme) prema protokolu koji je priložen uz kit. Postotak inhibicije nivoa serumskog TNFa izazvane jedinjenjem predmetnog pronalaska je određeno u odnosu na nivoe serumskog TNFa kod kontrolnog miša koji je primio samo vehikulum.
Kombinovana proba otpuštanja TNFa stimulisanog endotoksinom kod miša
i lokomotorne aktivnosti ( ED50 ( mg/ kg))
Svrha ove studije bila je da odredi efikasnost PDE4 inhibitorain vivona LPS mišjem modelu, kao i da odredi neželjene efekte na nivou centralnog nervnog sistema koji se manifestuju smanjenjem spontane pokretljivosti.
Eksperimentalne životinje su bile ženke Balb/c miša i imale su prosečnu masu od oko 20 g. PDE4 inhibitori, formulisani u 30% Cremophor<®>EL, su primenjeni intraperitonealnim
injekcijama (i.p.) u dozama od 0,1, 1,0, 10,0 i 100 mg/kg. Zapremine individualne doze (oko 100 pl) su podešene na osnovu merenja telesnih težina. Nakon jednog sata, u repnu venu svake životinje injektovano je 5 mg/kg LPS u konačnoj zapremini od 200ulNakon 90 minuta od ubrizgavanja LPS, životinje su puštene da iskrvare i prikupljeni su uzorci seruma pre pohranjivanja na temperaturi od -70 °C, do proba.
Radi određivanja efikasnosti, uzorci seruma su dvostruko razblaženi, a nivoi TNFa su određeni korišćenjem Cvtoscreen<®>Immunoassav Kit (Biosource International). Podaci su usrednjeni između trostrukih uzoraka subjekata za svako od testiranih jedinjenja.
Pokretanje X-Y ravni ili propinjanje na zadnje noge je mereno brojanjem prelazaka »svetlosnog zraka« u jedinici vremena. Smanjenje u broju događaja aktivnosti je direktno proporcionalno pokretljivosti ili imobilizaciji životinja. Kvantitativno bodovanje je u dobroj korelaciji sa subjektivnim merenjima koja su gore opisana.
Sledeća tabela sumira rezultate, miš/TNFa ED50mg/kg, dobijene na gore opisan način.
Takođe je utvrđeno da jedinjenja formule (II) pokazuju manje neželjenih efekata na centralni nervni sistem u poređenju sa rolipramom i sa jedinjenjima opisanim u U.S. patentnoj prijavi broj 5,665,754 na ime Feldman et al.. Takođe je pronađeno da je aktivnost centralnog nervnog sistema u vezi sa apsolutnom stereohemijom jedinjenja predmetnog pronalaska.
Poznato je da stereoizomeri leka mogu imati izrazito različite biološke aktivnosti, npr. jačinu, selektivnost, apsorpciju, distribuciju, metabolizam, ekskreciju i profile neželjenih efekata. U predmetnom pronalasku, enantiomeri i diastereoizomeri, predstavljeni jedinjenjima
(A) - (D) u tabeli koja sledi, testirani su na efekte prema PDE aktivnostiin virro,otpuštanje TNFa iz humanih limfocita periferne krvi stimulisanih sa LPS. pokretljivost miša i
povraćanje lasica.
Kao što je prikazano u tabeli koja sledi, jedinjenja (C) i (A) (tj. Uzorci 66 i 69. respektivno) pokazuju sličnu inhibiciju PDE4 i otpuštanja TNFa koje je stimulisano sa LPS, ali imaju izrazito različite bihejvioralne profile. Jedinjenja (C) i (A) koja pokazuju manju CNS aktivnost su izvedena iz predominantnog proizvoda [3+2]azometin ilid ciklizacije do hiralnog a,P-nezasićenog amida. Stoga, apsolutna stereohemija PDE4 inhibitora predmetnog pronalaska značajno doprinosi bihejvioralnom profilu jedinjenja.
Gore predstavljeni podaci pokazuju da su jedinjenja formule (II) snažni i selektivni inhibitori PDE4. Kao važnu dodatnu prednost, jedinjenja formule (II) takođe smanjuju ili eliminišu neželjene efekte na centralni nervni sistem, koji su udruženi sa ranijim PDE4 inhibitorima. Jedinjenja formule (II) su nadalje testirana na emetogena svojstva na životinjskim modelima, da bi se dalje ilustrovala njihova efikasnost. Postupali i rezultati emetogenih testova su predstavljeni u nastavku.
Model<p>vanje povraćanja kod lasice nakon oralne
i intravenske primene PDE4 selektivnih inhibitora
Ova studija je sprovedena da bi se istražila emetogena svojstva PDE4 inhibitorain vivo.Lasica je još ranije ustanovljena kao vredna alatka za procenti povraćanja nakon izlaganja ispitivanim jedinjenjima. Ranija istraživanja su ukazala da emetski odgovor lasice na mnoge PDE4 inhibitore verno odslikava reakciju ljudi prema istim jedinjenjima. Odatle, nedostatak i/ili smanjenje emetskog potencijala testiranih jedinjenja kod lasica pokazuje visok stepen korelacije sa željenim izostankom emetskog efekta kod ljudi. Povraćanje je složeni fiziološki odgovor na štetne agense, koji može biti pokrenut sa periferije ili centralno. Odatle, PDE4 selektivna sredstva su ispitivana nakon intravenske i oralne primene.
Eksperimentalne životinje su odrasle, kastrirane jedinke lasice muškog pola sa kontrolisanim poreklom (vrstaMustela putorius furo, rasa Sable),čiji je opseg telesnih težina od oko 1 do oko 1,5 kg. Ispitivanja su sprovođena u kvadriplikatu na životinjama koje ranije nisu imale kontakta sa PDE4 inhibitorima. PDE4 inhibitori su bili formulisani u vidu 3 0% polioksil-35 ricinusovog ulja (Cremophor<®>EL, proizvođač BASF Corporation, Parsippanv, NJ) u fosfatnom puferovanom sonom rastvoru (PBS), koji je primenjivan i.v. injekcijama kroz kateter hirurški postavljen u desnu spoljašnju jugularnu venu, sa dozom primene od 0.66 ml/kg telesne težine. PDE4 inhibitori za oralnu primenu su formulisani u vidu 30% Cremophor<®>EL u PBS, koji je primenjen kroz kanilu veličine 16 postavljenu u želudac intubiranih životinja. Životinje su primile PDE4 inhibitore u količini od 1.33 ml/kg telesne težine.
Sve životinje su izgladnjivane tokom 8 do 12 Časova pre primene PDE4 inhibitora. Nakon primene PDE4 inhibitora, emetski i bihejvioralni odgovori su kvantifikovani tokom 3 časa nakon primene leka. Ukupan broj emetskih odgovora i epizoda povraćanja su kvantifikovani tokom pomenutog perioda posmatranja. Dodatno, beleženi su period latencije za prvu emetsku epizodu, trajanje emetskih epizoda i krupne bibejvioralne promene uključujući ataksiju, profuznu i viskoznu salivaciju, grebanje usta kandžama, hiperventilacija, hodanje unazad, zaravnjeni položaj tela, hiperaktivnost, lizanje usana, i opšti izgled.
U svrhe poređenja, emetogeni efekat Uzoraka 66 i 69 su ispitivani intravenski u dozama od 1,0, 2,5, 5,0 i 10 mg/kg i oralno u dozama od 2,5, 10, 17 i 25 mg/kg. Rezultati su sumirani u tabeli koja sledi:
Generalno, i jedinjenje (C) i jedinjenje (A) bilo da su primenjeni oralno ili intravenski, prouzrokovali su jasno dozno zavisno emetsko ponašanje. Jedinjenje (A) je izazivalo znatno jači emetski efekat od jedinjenja (C). Ovo je posebno bilo jasno pri poređenju odgovora pri oralnoj primeni. Na primer, pri dozi od 25 mg/kg telesne težine, jedinjenje (A) je proizvodilo brojnije lažne pozive na povraćanje kao i epizode povraćanja u poređenju sa istim oralnim dozama jedinjenja (C). Dodatno, broj lažnih nagona na povraćanje kao i stvarnih povraćanja po epizodi je bio veći za jedinjenje (A) nego u slučaju jedinjenja (C) u ovoj doznoj grupi. Sličan trend je primećen pri oralnim dozama od 17 i 11 mg/kg telesne težine, pri čemu je jedinjenje (A) izaživalo jači odgovor od jedinjenja (C). Pri manjim dozama, nisu primećene razlike u pomenutim efektima za ove molekule. U ovim slučajevima, primećeno je manje lizanja usana i grebanja usta kandžama pri primeni oba jedinjenja, i nije bilo emetskih odgovora.
Rezultati dobijeni pri oralnoj primeni se jasno razlikuju od rezultata pri intravenskoj primeni. Pri intravenskoj dozi od 5 mg/kg telesne težine jedinjenja (A) jedna od eksperimentalnih životinja je umrla skoro trenutno nakon primene doze (unutar 5 minuta), dok je druga životinja bila jasno rastresena, ali se povratila nakon 3 časa. Ovaj distres se može pripisati ili akutnoj toksičnosti, ili preteranom farmakološkom odgovoru na centralno izazvano povraćanje. Takođe je primećeno da su distres i otežano disanje kod ove dozne grupe životinja teško razlučivi od ekstremnog lažonog nagona za povraćanje. Efekti nisu bili ni izbliza tako snažni pri intravenskoj primeni jedinjenja (C) kao Što je prikazano u gornjoj tabeli. Iako sve životinje pokazuju emetsko ponašanje pri dozi od 10 mg/kg telesne težine jedinjenja (C), niti jedna od njih nije pokazala distres koji je udružen sa primenom doze od 5 mg/kg jedinjenja (A). Uz izuzetak pri primeni doze od 5 mg/kg telesne težine jedinjenja (A), sve testirane životinje su se povratile nakon tretmana i izgledale su normalno.
Rezultati sumirani u gore navedenim tabelama pokazuju da su jedinjenja predmetnog pronalaska upotrebljiva za selektivnu inhibiciju PDE4 aktivnosti kod sisara, bez ispoljavanja neželjenih efekata na centralni nervni sistem i emetskih efekata koji su povezani sa ranijim inhibitorima PDE4.
Očigledno, mnoge modifikacije i varijacije predmetnog pronalaska, kao Što je ovde ranije navedeno, mogu biti učinjene, bez odstupanja od duha i obima zaštite predmetnog pronalaska i odatle samo takva ograničenja treba da budu postavljena kakva su naznačena u patentnim zahtevima.

Claims (78)

1. Jedinjenje formule: gde je R<1>odabran od Ci.6alkil C$-i6biciklični ili policiklični ugljovodonik, aril, cikloalkil, 4-, 5-, ili 6-člani zasićen heterocikl, heteroaril, CMalkilenaril, CMalkilenOaril,C\. 4alkilenheteroaril, CMalkilenHet, C2-4alkilenarilOaril, C2^alkilenski premošteni alkil, Ci.4alkilencikloalkil, supstituisan ili nesupstituisan propargil, supstituisan ili nesupstituisanallil, ili halocikloalkil; R<2>odabran od metil, ili halo-supstituisan metil, e.g., CHF2; R<3>odabran od C(=0)OR<7>,C(=0)R<7>, NHC(=0)OR<7>, C,.3alkilenC(=0)OR<8>, Ci.3alkilenC(=0)R<8>, C(=NH)NR<8>R<9>, C(=0)-C(=0)C(=0)OR<8>, CMalkilenOR<8>, aril, C|.3alkilenaril, Ci.3alkilenheteroaril, S02heteroaril, Het, ili heteroaril; R<*>odabran od vodonik, C1-6 alkil, haloalkil, ili cikloalkil; R<5>odabran od Cr-6alkil, alkinil, haloalkil, hidroksialkil, cikloalkil, ili aril; R<6>odabran od vodonik, Ci^alkil, i C(=0)R<7>; R<7>odabran od C1-6alkil ili cikloalkil, svaki po izboru supstituisan sa jednim ili više:OC(=0)R<8>, C(=0)OR<8>, OR<8>, NR<8>R<9>, ili SR<8>;R i R, isti ili različiti, odabrani su od vodonika, C14alkil, cikloalkil, aril, heteroaril, C(=0)Oalkil, C(=0)-Oaril, C(=0)alkil, alkilSCh, C(=0)-C,.3alkilenaril, C(=0)OCMalkilenaril, CMalkilenaril, ili Het, ili R<8>i R<9>zajedno formiraju 4-člani do 7-člani prsten; R<10>odabran od vodonik, alkil, haloalkil, ili cikloalkil; R<11>odabran od alkil, cikloalkil, trifluorometil, aril, aralkil, iNR<8>R<9>;i njihove soli isolvati.;2. Jedinjenje prema zahtevu1 strukture: ;3. Jedinjenje prema zahtevu, naznačeno time, što je R<1>odabran od: CH3-C=CCH2-H-C=CCH2- H-CH3-(CH3)3C-(CH3)3C(CH2)2 4.Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time, što je R<3>odabran od 5. Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time, što je R<4>odabran od: vodonika, metila, trifiuorometila ili ciklopropila.6.Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time, štoR<5>je Ci-6 alkil. 7. Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time, štoje R<6>odabran od vodonika, acetila, ili benzoila.8.Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time, što R<7>je Ci-6alkil.9.Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time, što su R i R , nezavisno, vodonik, C|_6alkil, C(=0)Ci.3alkilenaril, C(=0)Oaril), aril, heteroaril, Het, ili cikloalkil, ili zajedno formiraju 5-člani ili 6-člani prsten. 10.Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time, što R<1>je odabran od: ciklopentil, tetrahidrofuril, indanil, norbornil, fenetil, fenilbutil, metilenciklopropil, metUenterrahidrofuril, etilenthienil, CMalkilenciklopentil, metilenindanil, CMalkilenfenil, fenilpropargil, fenilallil; 3-(4-chlorofenil)(l,2,4-oksadiazol-5-il)metil, CMalkilenfenoksi, Ci^alkilenbifenil, Ci^alkilencikloheksil, piranil, metilenski premošteni alkil, tetrahidronaftil, dekahidronaftil, i C|.6alkil, po izboru supstituisan jednim ili više: fenila, hidroksi, metoksi, metil, etil, trifluorometil, fluoro, fenoksi, t-butil, metoksi, ciklopropil, i halofenil; R odabran iz grupe koju čine: metil i difluorometil; R odabran iz grupe koju čine: C02CH3, C(=0)CH2OH, C(=0)CH(CH3)OH, C(=0)C(CH3)20H, C(=0)C(=0)NH2, C(=0)C(=0)OH, C(=0)CH2NH2, C(=0)CH-(OH)CH2OH, C (=0)CH(OH)CH2CH2CH3, R<4>je vodonik; R<5>je metil; R<6>je vodonik; R<7>je metil; R<8>i R<9>, nezavisno, su odabrani od vodonika ili C? alkila, ili formiraju 5-čIani ili 6-člani prsten, i R10 je vodonik.;11. Jedinjenje prema zahtevu 1 odabrano od: metil estra 4-(3-Ciklopenuloksi-4-metoksifenil)-3-(l-mdorksi-l-metileti metilpirolidin-l-karboksilne kiseline;1- [4-(SH3-Ciklopropilmetoksi-4-metoksifenil)-3-(l-bi<lroksi-l-metiletiO metilpirolidin-1 -il]-2-hidroksietanon metil estra trans-{±)-3-(l-Hidroksietil)-4-[3-(indan-2-iloksi)-4-metoksife^ metilpirolidin-1- karboksilne kiseline metil estra trans 4-[3-Egzo-(Biciklo[2.2.1]hept-2-iloksi)-4-metoksifenil]-3- (1-hidroksietil)-3-metilpirolidin-l- karboksilne kiseline metil estra rrans-3-(l-Hidroksietil)-4-[4-metoksi-3-(l-m metilpirolidin-l-karboksilne kiseline;1 -[3-((l R)-l -Hickoksiehl)(3S,4S)-4-(3-dklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpk^ 2- (fenilmetoksi)etan-1 -on l-[3- ( (lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4- (3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil]-2-hidroksietan-1 -on N-{3-[3-((lRH-Hidorksietil)(3S,4SH-P^ metilpirolidinil]-3-oksopropil} (fenilmetoksi) karboksamid l-[3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-(3-ciklopenitloksi-4-metoksifeml)-3-me^ 3 -amino-propan-1 -on Fenilmetil 4-[3-((l R)-l -hidorksietil) (3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil>3-metilpirolidinil]-4-oksobutanoat 4-[3-((l R)-l -HidroksietiIX3S,4S)-4-(3-ciklopentil-. oksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinitj-4-okso-buterne kiseline N- {2-[3-((l R)-l -Hidroksietil)(3S,4SH-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3^ metilpirolidinil]-2-oksoetil} (fenilmetoksi)karboksamid;1- [3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4- (3-ciklopentilol<si-4-metolcsifemT)-3-metilpirolidinil]-2-aminoetan-1 -on 3-<(lRVl-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-dklopentiloksi-4-m^ metilpiperazinil keton 3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksipheW morpholin-4-il keton;1- [3-((lS)-l-Hidorksietil)(3S,4S)-4-(3-dklopentiloksi-4-metoksifenil)-3;2- [(2S,lR,5R)-5-metil-2-(metiletil)dkloheksiloksi]-etan-l-on;3- ((l R)-l -Hidorksiem)(3S,4S)-4-(3-dklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpiro 2-metil-(l,3-tiazol-4-il) keton;3- {[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifeni metilpirolidinil]sulfonil}piridin;1 -[3-((lR)-l -Hidroksietil)(3S,4S)-4- (3-indan-2-iloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil]-2-(fenilmetoksi)etan-1 -on;1- [3-((lR)-l-Hi<koksietilX3S,4S)-4-(3-mdan-2-iloksi-4-metoksifemlV;2- hidroksietan-l -on Metil 2-[3-((l R)-l -hidroksietil) (3S,4S)-4-(3-indan-2-iloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil]-2-oksoacetat N-{2-[3-((lR)-l-Hidroksieti^ metilpirobdinii]-l,l-dimetU^^;1- [3-((lR)-l-HidVoksietilX3S,4S)-4-(3-mdan-2-iloksi-4-mdoksifeni;2- amino-2-metilpropan-1 -on Metil 3-<(lR)-l -hidroksietilX3S,4S)-4-(3-indan-2-iloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinkarboksilat;4- [3-(lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-indan-2-iloksi-4-metoksifem 2,2-dimetil-4-oksobutanikfe kiseline.;3- ((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-(3-indan-2-ilolcsi-4-metoksifenil)-3-meti 2-metil(l,3-tiazol-4-il) keton 3-((lR)-l-Hidroksietil)(4S,3R)-4-(3-irK^ oksolan-3-il keton N-{2-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(35,4S)-4- (3-indan-2-iloksi-4-raetoksifenil)-3-metilpiroli&nil]-2-oksoetil)(fenilm;1- [3-((lR)-l-Hidroksietil) (3S,4S)-4- (3-indan-2-iloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil]-2-arninoetan-l -on (1R)-1- [(3S,4S)-4- (3-mdan-2-ilofai-4-metoksifenil)-3-metil-l -(2-pmdil)piroli<lin-3-il]etan-l-ol (1R) -1- [(3S,4S)-4- (3-Indan-2-iloksi-4-metoksiferiil)0-mehl-H3-piri il]etan-l-ol (1R) -1- [(3S,4S)-4- (3-Indan-2-iloksi-4-metoksifenil)-3-menl-I-pirim^ il]etan-l-ol (lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-Ciklopenitloksi-4-metoksifenil)-3-ra^ il]etan-l-ol (lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-Ciklopennloksi-4-metoksifOTil)-3-m etan-l-ol Metil 3-((lR -1-hidroksietil) (3S, 4S)-4 [4-metoksi-3-(4-fenoksifenoksi)fenil]-3-metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((lS)-l-hidn)ksietil) (3S,4S)-4-[4-metoksi-3-(4-fenoksifenol<si)fenil]-3-metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((lR)-l-hidroksietilX3S,4SH- [4-metoksi-3-(4-fenilfenoksi)fenil]-3-metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((lS)-l-hidroksietilX3S,4S)-4- [4-metoksi-3-(4-fenilfenoksi)fenil]-3-metilpirolidinkarboksilat. Metil 3-((lR)-l-hidroksietilX3S,4S)-4-(4-metoksi-3-fenoksifenil)-3-metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((l S)-l-hidroksietilX3S,4S)-4-(4-metoksi-3-fenoksil^il)-3-metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((lR)-l-mdrolcsietilX3S,4S)-4-[3-(4-fluorofenoksi)-4-me^ metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((l R)-l -radroksietilX3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4^ pirolidinkarboksilat Metil 3- ((1S) -1-hidroksietil) (3S,4S) -4- [3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((lR)-l-hidroksietilX3S,4S)-4- (4-metoksi-3- (l,3-tiazol-2-iloksi)fenil)-3-rnetilpirolidinkarboksilat Metil 3-((lS)-l-hidroksietil) (3S,4S)-4-(4-metoksi-3- (l,3-tiazol-2-iloksi)fenil)-3-metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((l R)-l -hidroksietilX3S,4SHK3-benziimdazol-2-iloksi-4-m^ metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((l S)-l-Wdol<sietil)(3S,4S)-4-(3-benzimidazol-^ metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((lR)-l-mdroksietiI)(3S^^ metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((lS) -l-hidroksietil)(3S,4S)-4-[4-metoksi-3- (3-fenilpropoksi) fenil] -3-metilpirolidinkarboksilat Metil 3- ((lR)-l-hidroksietil)(3S, 4S)-4-[4-metoksi-3-(4-fenilbutoksi)fenil]-3-metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((lS)-l-Wdroksietil)(3S,4S)^[4-m^ metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((lR)-l-WdorksietilK3S,4S)-4-[4-metoksiO-(2-feniletoksi)fenil]-3-metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((l S)-l-hidroksietil)(3S,4S)-4-[4-metoksi-3- (2-phehiletoksi)fenil]-3-metilpirolidinkarboksilat (1R) -1- [(3S.4S) -4- (3-Ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metil-l-(2-piridilmetil)pirolidin-3-il]etan-l-ol (1R)-1-[(3S,4S) -4- (3-Ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metil-l -(3-piridilmetil)pirolidin-3-il]etan-l-ol (lR)-l-[(3S,4SHK3-Ciklopentiloksi-4-metoksifenil>3-metil-l-(4-pM il]etan-l-ol Fenilmetil 3-[3-((lR)-l-hidrolcsietil) (3S,4S)-4-(3-ciklopehtiloksi-4-metoksifenil) -3-metil pirolidinil]propanoat 3-[3-((lR)-l-HiaVoksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidiniljpropanske kiS€Une Fenilmetil 2-[3-((lR)-l-hidroksiertlX3S,4S)-4-(3-ciklopenitloksi-4-metoksifeiu metilpirolidinil]acetat 2-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopmtiIoksi-4-metoksifem metilpirolidinil]sirćetne kiseline 2-[(3R)OK(lR)-l-HidroksieitlH-(3-ciklopenitloksi-4-metoksifenil)-3-m okso-l-feniletil acetat;1- [(3R)-3-((l RJ-1 -Hidrolcsietil)-4-(3-ciklopenti^ hidroksi-2-feniIetan-1 -on;1- [3- ((lR)-l-Hio^ksieitl)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil]-2-(fenilmetoksi)etan-1 -on l-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4SH-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidirul]-2-hidroksietan-l -on;2- [3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-dklopentiloksi-4-metofa^ metilpirolidinil]( 1S)-1 -metil-2-oksoetil acetat;1 -[3-((lR)-l -HiđroksietilX3S,4S)-4-(3-cM^ metilpirolidinil](2S)-2-hidroksipropan-1 -on {[3-((lR)-l-HiaroksietilX3S,4S)-4-(3^ metilpirolidinilj1tarbonil}ciklopropil acetat;3- ((lR^l-Hidroksietil)(3S,4S>4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifem bidroksiciklopropil keton 2-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-cM^ l,l-dimetil-2-oksoetil acetat;1- [3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-dklopennTolcsi-4-metoksi^;2- hidroksi-2-metilpropan-1 -on MetU 2-[3-(( 1R)-1 -W<hoksietilX3S,4S)^-(3-ciklopentiloksi-4-metoks^ metilpirolidinil]-2-oksoacetat 2-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-dIdopentiloksi-4-metoksifem 2-okso-sirćetne kiseline;2- [3-((lR)-l-Hidroksieh^X3S,4S)-4-(3-ciklopen^ 2-oksoacetamid 2-{(3S,4S)-3-((R)-l-Hi<koksieitl)-4-[4-metolcsi-3-(3-fenilpro metilpirolidin-1 -il} -2 -okso-acetamid 2-((3S,4S)-3-((R)-l-Hid^ksietil)-4-{4-metoksi-3-[3-(4-trifl^ iniloksi]-fenil} -3 -metilpiorlidin-1 -il)-2-okso-acetamid;2- [(3S,4S)-4- {3-[3-(4-Fl\K»rofenoksi)propoksi]-4-metoksifeml}-3-((^^ -hidroksietil)-3-metilpirolidin-1 -il] -2-okso-acetamid;2- [(3S,4S)-4- (3-Ciklopropilmetoksi-4-metoksifenil)3-((R)-l-hidroksietil)-3-metilpirolidin-1 -il]-2-okso-acetamid 2-{(3S,4S)-3-((R)-l-Hi<iorksietil)-4-[3-(indan-2-iloksi)-4-metoltsi il}-2-okso-acetamid 2-[3-((lR)-l-HidroksiedlX3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifeml)-3-metilpirolidinil]^N-metil-2-oksoacetamid;1- [3K(lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-(3-cM^ 2-piperidiletane-l ,2-dion 2-[3-((lR)-l-Hidrolcsietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopenuloksi-4-metoksiferul^3-metilp N-ciklopentil-2-oksoacetamid 2-[3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S>4-(3-ciklor^dloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil^ 2-okso-N-benzilacetamid N-{(lR)-2-[3-((lRH-Hidroksietil)^ metilpiroli(Unil]-l-butil-2-oksoetil}^^ (2R)-l-[3-((lR)-l-Hidroksieitl)(3S,4S^ metilpirolidinil] -2-aminoheksan-1 -on N-{(lR)-2-[3-((lR)-l-HydxoksietiO^^ metilpirolidinil]-1 -(metiletil)-2-oksoetil}(fenilmetoksi)-karboksamid (2R)-l-[3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-met^^ metilpirolidinil] -2-amino-3 -metilbutan-1 -on 2-[3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4^3-cMopentiloksi-4-metoksifemT)-3-metilpirolidinil]( 1 S)-l -cikloheksil-2-oksoetil acetat l-[3-((lR>l-HidorI<sietilX3S,4S)-4-{3-dklorjentiloksi-4-metoksif^ metilpirolidinil](2S)-2-dkloheksil-2-hidroksietan-1 -on l-[3-((lR)-l-HiotaksietilX3S,4SM-(3^iH^^ (2R)-2-dkloheksil-2-acetoksietan-1 -on (2R)-l-[3-((lR)-l-Hi<lioksietil)^mdilpirolidiml]-2-ciUoheksil-2-hidroksietan-1 -on;N-{2-[3- ((lR)-l-Hidroksietil) (3S, 4S) -4- (3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil) -3-metilpirolidinil]-(l S)-1 -butil-2-oksoetil} (fenilmetoksi)karboksamid 1 -[3-((lR>l -Hidroksietil) (3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil](2S)-2-aminoheksan-1 -on (lR)-2-[3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-(3-d^ metilpirolidinil]-l-butil-2-oksoetil acetat (2R)-l-[3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S>4-(3-dklopentiloksi-4-metoksifOT^ mdilpirolidinil]-2-hidroksiheksan-l-on N-(2-[3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-^ metilpirolidinil]-(l S)-2-okso-1 -benziletil} (fenilmetoksi)karboksamid 1 -[3-(( 1R)-1 -HidroksietilX3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil) -3-metilpirolidinil] (2S)-2-amino-3-feniIpropan-1 -on N-{(lR)-2-[3-((lR)-l-Hidn)ksietil)(3S,4S)-4-(3-dklopenitloksi-4-mdoksif^^ metilpirolidiniI]-2-okso-1 -benziletil} (fenilmetoksi) karboksamid (2R>l-[3-((l R)-l -Hidroteietil)(3S,4S)-4-(3-dto^ metilpirolidinil} -2-amino-3-femlpropan-1 -on 2-{(3S,4S)-3-((lR)-l-Hi<lorksieti^ mehTpirolidinil} -2-okso-1 -propiletil acetat 1-{(3S, 4S)-3-((lR)-l-Hi(iroksienl)-4-[3-(cikloporpilmetoksi)-4-m metilpirolidinil }-2-hidroksipentan-l-on;1 - {(3S,4S)-3-((lR)-1 -Hidroksietil)-4-[3-(dklopromlmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil} (2S)-2-(fenilmetoksi)propan-1 -on'l-{(3S,4S)-3-((lR)-l-Hidroksietil)-4-[3-(ciUopropilmeotksi)-4-metoksif^ metilpirolidinil}(2S)-2-(hidroksi)propan-1 -on N-((lR)-2-{(3S,4S)-3-((lR)-l-Hidroksi^ metilpiorlidinil} -1 -(tert-butil)-2-oksoetil)(teTt-butoksi)karboksamid (2RH-{(3S,4S)-3-((lR)-l-Hi<lorksietilW metilpiroIidinil}-2-amino-3,3-dimetilbutan-l-on N-{2-[(3S,4S)-3-((lR)-l-HidroksietilHK3-mdroksi-4-metoKsif^ metilpirolidinil]( 1 R)-2-okso-1 -[(fenilmetoksi)metil]etil} (tert-butoksi)karboksamid N-(2-{(3S,4S)-3-((lR)-l-Hidroksietil)-^metilpirolidinil}(lS)-2-okso-l-[(feiulmdoksi)mN-(2-{(3S,4S)-3-{(lR)-l-Hidorksietil)-4-[3-(dklopropilmdoksi)-4-metoksifen^ metilpirolidinil} (lR)-l-(bidroksimetil) -2-oksoetil) (tert-butoksi)karboksamid 1- {(3S,4SH(lR)-l-Hidroksieitl>4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpiorlidinil} (2R)-2-amino-3-hidroksipropan-1 -on hidrohlorid 2- {3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(d^ metilpirolidinil} (1 S)-l -cikloheksil-2-oksoetil acetat l-{3-((lRH-Hidroksieitl)(3S,4S)-4-[3-(d^ metilpiorlidinil} (2S>2-cikloheksil-2-hidroksietan-1 -on (lR)-2-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(dkloporpilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil} -1 -cikloheksil-2-oksoetil acetat (2RH-{3-((lR)-l-Hidroksietil) (3S^ mdilpirolidinil}-2-cikloheksil-2-hiđroksietan-l-on N-((lR)-2-{3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4- [3-(ciklci>ropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil} -1 -butil-2-oksoetil) (fenilmetoksi)karboksamid (2R)-l-{3-((lR)-l-Hidroksietil) (3S,4S)-4-[3-(dkloporpilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil} -2-aminoheksan-1 -on N-((lR)-2-{3-((lR)-l-HidroksieitlX3S,4S)-4- [3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil} -1 -(metiletil)-2-oksoetil)(fenilmetoksi)karboksarnid (2R)-l-{3-((lR) -1-Hidroksietil) (3S, 4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi) -4-metoksifenil] -3-metilpirolidinil} -2-amino-3-metilbutan-1 -on 1-[3-((lR)-l-Hidroksietil) (3S,^ acetiltioetan-1 -on l-{3-((lR) -1-Hidroksietil) (3S,4S)-4-[3- (ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil} -2-acetiltioetan-1 -on;1 - {3-(( 1R)-1 -HidroksieulX3S,4S)-4- [3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil}-2-sulfaniletan-l-on N-(2-{3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksiH-metoksi^ metilpirolidinil}-2-oksoetiI) (fenilmetoksi) karboksamid l-{3-((lR)-l-Hi<ux>lcsietilX3S,4S)-^ metilpirolidinil}-2-aminoetan-1 -on l-{3-((lR)-l-HidioksietilX3S,4SH-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksif^ metilpirolidinil}-2-[(metilsulkonil)amino]etan-l-on l-(3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi) -4-metoksifenil -3-metilpirolidinil} -2- {[(trifluorometil)sulfonil]amino} etan-1 -on l-{3-((lRVl-HidrolaietilX3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksi^ metilpirolidinil}-2-(dimetilamino)etan-l-on N-(2-{3-((lR^l-HidorIcsienIX3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifOT^ metilpirolidinil} (1S)-1 -metil-2-oksoetilXfenilmetoksi)karboksamid l-{3-((lR)-l-HidrolcsietilX3S,4SM-[3-(^ metilpirolidinil} (2S)-2-aminopropan-1 -on N-((lR)-2-{3-( (lR)-l-Hidroksietil) (3S, 4S) -4- [3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil}-l metil-2-oksoetil) (fenilmetoksi)karboksamid (2R)-l-{3-((lR)-l-HidroksieitlX3S,4S)^ metilpirolidinil} -2-aminopropan-1 -on N-(2-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S metilpirolidinil} (1S)-1 -(meitletil)-2-oksoetil)(fenilmetoksi)karboksamid l-{3-((lR)-l-HidrolcsietilX3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifeml^ -3-metilpirolidinil} (2S)-2-amino-3-metilbutan-1-on N-(2-{3-((lR)-l-HidroksienlX3S,4S^ metilpirolidinil}(lS)-l-(2-metilpropil)-2-oksoetil)(fenilmetoksi)karboksamid l-{3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksi meulpirlidinil}(2S)-2-amino-4-metilpentan-l-on N-((lR)-2-{3-((lR)-l-HioYota metilpirolidinil}-1 -(2-metilpropil)-2-oksoetil)(fenilmetoksi) karboksamid (2R)-l-{3-((lR)-l-Hidrolfflietil)(3S,4S)-4-(3-(cildoporpilmetoksi)-4^ -3-metilpiro lidinil} -2-amino-4-metilpentan-1 -on N-(2-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-[3-(dklopropilmetoksi)-4-metoksife^^ metilpirolidinil}(lS)-l-butil-2-oksoetil)(fenilmetoksi)karboksamid 1 - {3-((l R)- l-Hio^ksietilX3S,4S)-4-[3-(dklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil}(2S)-2-aminoheksan-1 -on N-((lR)-2-{3-((lR)-l-Hi<lroksid^ metilpiorlidinil}-(lR)-dkloheksil-2-oksoetil)(fenilmetoksi)karboksamid (2RH-{3-((lRH-Hidroksietil)(3S,4S)^ metilpirolidinil} -2-amino-2-dkloheksiletan-1 -on N-((lR)-2-{3-((lR)-l-Hi<irok5ietil)(3S^ metilpiorlidinil}-(lS><ikloheksil-2-oksoetil)(fenilmetoksi)karboksamid 1 - {3-((l R)-l-Hidorl^ietil)(3S,4S)-4-[3-(dklopropilmetoksi)-4-metoka metilpirolidinil} (2S)-2-amino-3,3-dimeitIbutan-1 -on;1- {(3R)-3-((lR)-l-Hidroksietil)-4-[3-(t^ (fenilmetoksi)etan-1 -on;1 -[(3R)-3-((l R)-l -Hidteksieitl)-4-(3-Wdroksi-4-metoksifenil)-3-metilmro (fenilmetoksi)-etan-1 -on;2- Benziloksi-l-(3-((lR)-l-hidroksietil)-(3S,4S)-4-[4-metoksi-3-(l-metilcjklopropilmetoksi)fenil]-3-metilpirolidin-l-il)etanon H(3R)-3-((l R)-1 -Hidroksietil)-4- {4-mdoksi-3-[(metildklopropil)metoksi]fenil}-3-metilpirolidinil)-2-hidroksietan-1 -on 2-Berailoksi-l-[(3S,4S)-4-[3-(2-ciklopropiletoksi)-4-metoksifem ((1R)-1 - hidroksietil)-3-metilpiroIidin-1 -il]etanon l-{(3R)-3-((lR)-l-Hidroksietil)-4-[3-(2-c^^ metilpirolidinil} -2-hidroksietan-1 -on;1- {(3R)-3-((lR)-l-Hidroksietil)-4-[3- (2-ciklopentiletok8i)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil} -2-hidroksietan-1 -on;1- [(3S,4S)-4-[3-(2-ciklopentildoksi)-4-md^ metilpirolidin-1 -il]-2-hidroksietanon;2- Benziloksi-l-[4-(S)-[3-(biciklo[4.1.0]hept-7-il-metoksi)-4-metoksifenil]-3-(S)-( 1 -(R)-hiđroksietil)-3-metilpirolidin-1 -iljetanon;1 .[4- (S)-[3-(Biciklo[4.1.0]hept-7-ilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-(SH 1 -(R)-hidroksietil)-3-metilpirolidin-1 -il]-2-hidroksi etanon 2-Berizilolcsi-l-[4-(S)-[3-(bidklo[3.L0]heks-6-ilmeto - (1-(R) - hidroksietil)-3-metilpirolidin-l -iljetanon;1- [4-(S)-[3-(Biciklo[3X0]heks-6-il^ metilpirolidin-1 -il]-2-hidroksietanon;2- Beiiziloksi-l-[4-(S)-[3-(4-tert-bimlcikloheksiloksi)-4-metoksif^ hidroksietil)-3-metilpirolidin-1 -iljetanon;1- [4-(S) - [3-(4-tert-Butildkloheksiloksi)-4-metoksifenil] -3-(S)-(l-(R) -hidroksietil) -3-metilpirolidin-1 -il]-2-hidroksietanon;2- Benziloksi-l-{3-(S) - (l-(R)-hidroksietil)-4-(S)-[4-metoksi-3-(4-menTcikloheksiloksi)fenil]-3-menTpirolidin-l-il)etanon;2- Hid^ksi-l-{3-(SHl-(R)-hidrol«ietil)-4-(S)-[4-metoksi-3-(4-meti 3-metilpirolidin- l-il}etanon 2-Benziloksi-l-[4-(S)-[3-(decahidronaftalen-2-i]oksi)-4-metoksife^ hidroksietil)-3-metilpirolidin-1 -iljetanon;1- [4-(SM3-(Decafoa>onatel^ metilpirolidin-1 -il]-2-hidroksietanon;2- BenzUoksi-l-[4-(S)-[3-(b^^ hidroksietil)-3-metilpirolidin-l -iljetanon;1- [4^S)-[3-<Bicikloheksil-4-iloksi)-4-metoksiferul]-3-(S)-(l-(R)-W metilpirolidin-1 -il]-2-hidroksietanon 2-Benziloksi-l-{3-(S)-(l-(R)-hi(lroksietil)-4-(S)-[4-mdoksi-3-(4-trifluorometildkloheksiloksi)feml]-3-metilpirolidin-1 -il} etanon 2-Hidroksi-l-{3-(S)-(l-(R)-hidorksietil)-4-(S)-[4-metoksi-3-(4-trifluorometilcikloheksiloksi)fenil]-3-metilpirolidm-l-il}etanon 2-Beii2iloksi-l-{3-(S)-(l-(R>hidroksietil)-4-(S)-[4-mdoksi-3-(3-mdoksi-3^metilbutoksi)fenil]-3-metilpirolidin-1 -il} etanon 2-Hidroksi-l-{3-(S)-(l-(R)-Wd^ksietil)-4-(S)-[4-metoksi-3-(3-metoksi-3-metiIbutoksi)fenil]-3-metilpirolidin-l-il}etanon 2-BeiizilolGsi-l-{3-(SMl-(R>hid^ fenildklopenitlmetoksi)fenil]-3-metilpirolidin-1 -il} etanon 2-Hidroksi-l-(3-(S)-(l-(R>hidroksietil)-4-(S)-[4-metoksi-3-(l- femlciklopentilmetote^ 2-Benziloksi-l -(3-(SHl-(R>hidroksietil)-4-(S)-[4-metoksi-3-(l - fenildkloporpilmetoksi)fenil]-3-meitlpirolidin- 2-Hidroksi-l - {3-(SHl-(R)-bidroksietil)-4-(S)-[4-metoksi-3-(l - fenilciklopropilmetoksi)fenil]-3-metilpirolidin-l 2-Benziloksi-l-[(3S,4SH-3<3-etiloksetan-3-iImetoIcsi)-4-m hidroksietil) -3-metilpirolidin-l-il]etanon;1- ((3R) -3- ((1R) -l-Hidroksietil)-4-{3-[(3-etiloksetan-3-tt^^ metiIpirolidinil)-2-hidroksietan-1 -on;(2- {3-((lR) -1-Hidroksietil) (3S,4S)-4- [3- (tert-butoksi) -4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil}-2-oksoetil acetat;2- [3-((lRH-HidroksieitlX3S,4S)-4-(3-hidro oksoetil acetat;2- Benziloksi-l-[(3S,4S)4-[3-(2-bifenil-4-iletoksi)-4-metoksifeml]-3^ 3-metilpirolidin-1 -il]etanon;1- [(3S,4SHK3-(2-Bifenil^iletoksi)-4-metoIcsifenil]-3-((R)-l-hto metilpirolidin-1 -il]-2-hidroksietanon;2- {3-((lR)-l-HidorksietilX3S,4S)-4-[4-metoksi-3-(3-fenilprop-2-imlote^^ metilpirolidinil} -2-oksoetil acetat;2- (3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-{3-[3-^;3- metilpirolidinil)-2-oksoetil acetat 2-{3-((lR)-l-Hid^ksietilX3S,4S)-4-[3-(didklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil}-2-oksoetil acetat;2- [3-((lR>l-Hidroksietil) (3S,4S)-4-(3-{[3-(4-chlorofenil) (l,2,4-oksadiazol-5-il)]metoksi}-4-mdoksifeml)-3-metilpirolidinil]-2-oksoetil acetat l-{3-((lR)-l-HidorksieuTX3S,4S)-4-[4-metoksi-3-(3-fenilprop-2-miloksi^ menlpirolidinil}-2-hidroksietan-1 -on l-(3-((lR)-l-HidorksietilX3S,4S)-4-{3-[3-(4-fluoorfenil)prop-2-im 3 -metilpirolidiml)-2-hidroksietan-1 -on l-{3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-[3-(didklopropilmetoksi)-4-metoksifeml]-3 metilpirolidinil} -2-hidroksietan-1 -on l-[3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-(3-{[3-(4-chlorofenil)(l,2,4-oksadiazol-5-iI)]metoksi}-4-metoksifeniI)-3-meitlpirolidinil]-2-hidroksietan-i-on l-{3-((lR)-l-Hidroksietil) (3S,4S)-4- [3- (3,3-dimetilbutoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil} -2-(fenilmetoksi)etan-1 -on l-{3-((lR)-l-Hidrolcsieti^ metilpirolidinil}-2-hidroksietan-l-on l-{3-((lR)-l-HidroksieitlX3S,4S>4-[3-(dkto^^ metilpirolidinil}-2-(fenilmetoksi)etan-l-on l-{3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-[3-(dklopropilmetoksi)-4-metoksife^ metilpirolidinil} -2-hidroksietan-1 -on N-(2-{3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifena metilpirolichnil}-2-oksoeitlXfenilmetoksi)karboksamid;1- {3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S^^ metilpirolidinil} -2-aminoetan-1 -on;2- {3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-[3-^ metilpirolidinil} -1,1 -dimetil-2-oksoetil acetat;1- {3-((lR)-l-Hidrol<sieul)(3S,4S)-4-^ metilpirolidinil} -2-hidroksi-2-metilpropan-1 -on;2- {3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-[3-(dklopropiImdoksi)^metoksifenil]-3-metilpirolidinil} (1S)-1 -metil-2-oksoetil acetat;1- {3-((lR>l-HidroksieitlX3S,4S)-4-[3-(dkto metilpirolidinil} (2S)-2-hidroksipropan-1 -on;2- {3-((lR)-l-Hidroksietil) (3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi) -4-metoksifenil] -3-metilpirolidinil} -2-okso-1 -feniletil acetat;1- (3-((lR)-l-Hidorksieta)(3S,4S)-4-[3-(dklopropilmetoksi)-4-mdoksi^^ -3-metilpiroUdiml)-2-mdorksi-2-feniletan-1 -on;2- {3- ((1R)-1-Hidroksietil) (3S, 4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil}-l-(4-fluorofenil) -2-oksoetil acetat;1- {3-((lR)-l-Hidroksietil) (3S,4S)-4-metilpirohdinil}-2-(4-fluorofenil) -2-hidroksietan-1-on ({3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-[3- (ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil}fcarbonil)ciklopropil acetat;3- ((lR)-l-Hidroteietil)(3S,4S)-4-[3-(cikto^ metilpirolidinil hidroksiciklopropil keton;2- {3-((lR)-l-Hidroksidil)(3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil}(lS)-l-(meulpropil)-2-oksoetil acetat l-{3-((lR)-l-HidorksieulX3S,4S)^-[3-(ciklopropiImdoksi)-4-metoksifem metilpirolidinil} (2S)-2-hidroksi-3-metilpentan-1 -on 2-{3-((lR)-l-Hidorksietil)(3S,4SM^ metilpirolidinil}( 1 S)-l -(2-metilpropil)-2-oksoetil acetat;1- {3-<(lR)-l-HićrolcsietilX3S^ metilpirolidinil}(2S)-2-hidroksi-4-metilpentan-l-on;2- {3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil^ metilpirolidinil}(l 8)-2-okso-l-benziletil acetat;1- {3-<(lR)-l-Hidroksietil) (3S, 4S)-4-[3- (ciklopropilmetoksi)-4-metolcsifeml]-3-metilpiroli(Mnil}(2S)-2-hidroksi-3-fenilpropan-l-on (lR)-2-{3-((lR)-l-HidroksieitlX3S,4S)-4-[3-(dklopropilmetoksi)-4-metoksif^^^ metilpirolidinil}-2-okso-l -benziletil acetat ((2RH-{3-((lRH-Hiootksietil)(3S,4S)^p metilpirolidinil} -2-hidroksi-3-fenilpropan-1 -on;2- {3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4SH-[3-(tert-butoksi)-4-metoksifeml]-3-metU^ (1 S)-l -metil-2-oksoetil acetat 2-[3-((lR)-l-HidorksietilX3S,4S)-4-(3-hidroksi-4-metoksifenil)-3-meti^ meuT-2-oksoetil acetat 2-{3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4SM-[^ metilpirolidinil} (1S)-1 -metil-2-oksoetil acetat;1- {3-((lR)-l-HidorteMrilX3S,4S^^ metilpirolidinil} -(2S)-2-hidroksipropan-1 -on;2- (3-((lR)-l-Hidroksietil) (3S,4S)-4-{3-[3-(4-fluorofenil) prop-2-iniloksi] -4-metoksifenil} -3-metilpirolidinil)-2-oksoetil acetat;1 -(3-((l R)-1 -HidroksietilX3S,4S)-4- {3-[3-(4-fluorofeiiil)prop-2-imloksi]-4-meotksifenil}-3- metilpirolidinilX2S)-2-hidroksipropan-1 -on 2-[3-((lR)-l-HiaorksietilX3S,4S)-4-(4-metoksi-3-{3-[4-(trifluorometi0 iniloksi}fenil)-3-metilpirolidinil](lS)-l-metil-2-oksoetil acetat;1 -[3-<(l R)-1 -HidroksietilX3S,4S)-4-(4-metoksi-3- {3-[4-(trifluorometil)fenil]prop-2-imloksi}feml)-3-mehTpirolidinil](2S)-2-hidroksipropan-l-on 2-[3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-(3-{[3-(4-cWorofeml)(l^ il)]metoksi} -4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil]( 1S)-1 -metil-2-oksoetil acetat 1- [3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-(3-{[3-(4-chlorofenil) (l,2,4-oksadiazol-5-il)]metoksi}-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil](2S)-2-hidroksipropan-on 2- [3-((lR)-l-HidroksietilX3S,4S)-4-(3^ 1 -(4-fluorofenil)-2-oksoetil acetat;1- [3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4SH-(3-indan-2-iloksi-^;2- (4-fluorofenil) -2-hidroksiehhan-l-on 2-[3K(lR)-l-Hio^lcsietil)(3S,4S)-4-(3-indan-2-iloksi-4-m^ l-metil-2-oksoetil acetat;1- [3-((lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-(3-md^;2- hidroksipropan-1 -on;2-[3-(( 1R)-1-Hidorksieul)(3 S,4S)-4-(3-indan-2-iloksi-4-metoksifem 1,1 -dimetil-2-oksoetil acetat;1- [3-((lR)-l-Hi(lroksietU)(3S,4SM^3-in^^;2- hidroksi-2-metilpropan-1 -on Metil (3R)-3-((lR)-l-Wd^faieitl)-4-[3-(tert-butoksiH-meto metilpirolidinkarboksilat 2-Hidroksi-l-((3S,4S>3-((R)-l-hidro^ il)etoksi]fenil}-3-metilpirolidin-l-il)etanon;2- Hidroksi-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-Mdroksi^^ ilmetoksi)fenil]-3-metilpirolidin-l-il}etanon Metil(3R)-3-((lR)-l-hidroksietilM-[3^ metilpirolidinkarboksilat Metil (3R>3-((lR)-l-Wa*oksietil)-4-[3-((^^ metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((lR)-l-mdroksietil)(3S,4SM-{3-[2-^ metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((lR)-l -hidroksietil)(3S,4SH- {3-[3-(4-fluorofenoksi)propoksi]-4-metoksiferul}-3-metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((lR)-l-hidroksietil)(3S,4S)-4- (4-metoksi-3-prop-2-iniloksifenil)-3-metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((lR>l-Wd^ksietil)(3S,4S)-4-(3-but-2-imloksi-4-in€to^ metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((lR)-l-hidroksietilX3S,4S)-4-[4-m metilpirolidinkarboksilat Metil 3-((lR)-l-hidroksietilX3S,4S)^{3-[3^ mctoksifenil}-3-metilpirolidinkarboksilat
1- (3-((lR)-l-Hidroksietil) (3S,4S)-4-[4-metoksi-3-(3-fem^i>r^^ metilpirolidinil}-2-acetiltioetan-l -on.
1- {3-<(lR)-l-Hidroksieul)(3S,4S)-4-[^^ metilpirolidinil}-2-sulfanil€tan-l-on tert-buul estra {2-[(3S,4S)-3- ((R) -l-Hidroksietil)-4-(3-hidroksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidm-l-il]-2-oksoetil)|earoaminske' kiseline
2- Amino-1 -((3S,4S)-3-((R)-1 -hidroksietil)-4- {4-metoksi-3-[3-(4-trifluorometilfenil)-prop-2-iniloksi]fenil}-3-metilpirolidin-l-il)etanon Metil 2-{3-(lR)-l-hidroksietil) (3S,4S)-4-[3-(tert-butoksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil} -2-oksoacetat Metil 2-[3-((lRH-hidroksietilX3S,4S)^ oksoacetat Metil 2-{3-((lR)-l-todrolcsie^ metilpirolidinil}-2-oksoacetal metil estra 4- (3-Ciklopropilmetoksi-4-metoksifenil) -3-(l,2-dihidroksietil)-3-metilpirolidin-1 -karboksilne kiseline [4-(S)-<3-Cildopropilmetolcsi-4-metoksifeml)-3-(S)-( 1 -(R)-hidroksietil)-3-metilpirolidin-1-il]-(2,2-dimetil- [l,3]dioksolan-4-(S) -il)metanon
1- [4- (S>(3-Ciklopropilmetoksi-4-rnetoksifenil)-3-(S)-(l-(R)-hidroksietil)-3-metilpirolidin-1 -il]-2-(S)-3-dihidroksipropan-1 -on (R)-2,3-DiWdorksi-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-Wdroksieal)-4- [3- (indan-2-ilmetoksi) -4-metoksifenil] -3-metilpirolidin-1 -iljpropan-1 -on (R)-l-[(3S,4S)-4-(3- [3- (4-Fluorofenoksi)propoksi] -4-metoksifenil}-3-((R)-l-Wdroksietil)-3-menlpirolidin-l-il]-2,3-dimdorksipropan-l-on
1- ((R)-2,2-Dimeitl-l,3-(hoksolan-4-il)-l-((3S,4S)-3-((R)-l-md^ [3-(4-trifluoromenlfeml)prop-2-iniloksi]fenil} -3-metilpirolidin-1 -il)metanon (R)-2,3-Diludroksi-l-((3Sf4S)-3-^ trifluorometilfenil) -prop-2-iniloksi]fenil} -3-metilpirolidin-1 -il)-propan-1 -on 2-Benaloksi-l-{(3S,4S>3-((R)-l-hidro^ 3- metilpirolidin-1 -il} etanon 2-Hidroksi-l-{(3S,4S)-3-((R)-1-hidroksietil) -4- [4-metoksi-3-((R)-2-fenilcildopropilmetoksi)feml]-3-metilpirolidin-l-il}etanon
1- [(3S,4S)-4-[3- (3-Ciklopentilpropoksi) -4-metoksifenil]-3-((R)-l-hidroksietil)-3-metilpirolidin-1 -il]-2-hidroksietanon
2- Hidroksi-l-{(3S,4S)-3-((R) -1-hidroksietil) -4- [4-metoksi-3-(3-fenilpropoksi)feniI]-3-metilpirolidin-1 -il} etanon 2-Hidroksi-l - {(3S,4S)-3-((R)-l-hidroksietil)-4-[3-(l -hidroksiindan-2-iloksi)-4-metoksifenil]-3-metilpirolidin-1 -il}etanon 2-Hidroksi-1 -((3S,4S)-3- ((R)-l-hidorksietil)-4-{4-metoksi-3-[2- (4-metoksifenil)etoksi]fenil} -3-metilpirolidin-1 -il)etanon 2-Hio^ksi-l-((3S,4S)-3-((R)-l-hidorksietil)-4-[4-metoksi-3-((R)-2-metildklopropilmetoksi)fenil]-3-metilpirolidin-l-il}etanon
1 -(R)_[ i -(2-Beiiziloksietil)-4-(S)-(3^ il]-etanol
1 ^R)-[4-(SH3-Ciklo<p>entiloksi-4-metoksifenil)-1 -(2-hidorksietil)-3-(S)-metilpirolidin-3-iljetanol 2-Benziloksi-l-[4-(S)-(3-ciklopropilmetoksi-4-metoksifeml)-3-(S)-hidroksimeti metilpirolidin-1 -il]etanon l-(2-Beiiziloksiaeetil)-4-(SM3-cikto^ fcarbaldehid ? . l-((R)-2,2-Dimeitl-l,3-dioksolan^ metoksifenil)-3-metilpiiolidin-l-il]metanon
1 -((R>2,2-Dimetil-1,3-dioksoIan-4-il)-1- {(3S,4S)-4-((R)-l -hidroksietil>4- [4-metoksi-3-(3-fenilprop-2-iniloksi)fenil]-3-metilpirolidin[l[il}metanon (R) -2,3-Dihidroksi-1- {(3S,4S)-3-((R>l -hidroksietil)-4-[4-metoksi-3-(3-fenilprop-2-iniloksi)fenil]-3-metilpirolidin-l-il}propan-l-on 1-((S)-2,2-Dimetil-1,3-dioM metoksifenil)-3-metilpirolidon-1 -il]metanon H(S)-2,2-Dimeitl-l,3-dioksolan-4-il)-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-m^ (3-fenilprop-2-iniloksi)fenil]-3-metilpirolidin-l-il}metanon (S)-2,3-Dihidroksi-1 - {(3S,4S)-3-((R) -1 -hidroksietil)-4-[4-metoksi-3-<3-fenilprop-2-iniloksi)feiul]-3-metilpirolidin-1 -il} propan-1 -on (S)-l-beiizil-2-{(3S,4S)-3-((RH-hidro^ iniloksi)feniI]-3-metilpirolidin-l-il}-2-oksoetil estra sirćetne kiseline (S)-2-Hidorksi-l-{(3S,4S^3-((R)-l-hidroksietil)-4-[4-metolcsi-3-(3-femlp^ iniloksi)fenil]-3-metilpirolidin-l-il}-3-feniIpropan-l-on Metil 3-((lR)-l-m<lroksielil)(3S,4S)-4-(3-Wdroksi-4-metoksifem metilpirolidinkarboksilat ili tert-butil estra {2-[(3S,4S)-3- ((R)-l-Hidroksietil)-4-(3-hidroksi-^^ metilpirolidin-1 -il]-2-oksoetil)karbaminske kiseline.
12. Jedinjenje prema zahtevu 1, odabrano od: 1- [3-((lR)-l-mdroksietil)(3S,4S)-4-(3-d^ 2- (fenilmetoksi)etan-1 -on, fenilmetil 4- [3-((lR)-l-hidroksietil) (3S, 4S) -4- (3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil]-4-oksobutanoat, N-{3-[3-((lR)-l-Mdroksietil)(3S,4S)-4-(3-ciklopentiloksi-4-m^ metilpirolidinil]-3-oksopropil}(fenilmetoksi)karboksamid, N- {2-[3-(( 1 R)-l -hidroksietilX3S,4S)-4-(3-dklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-meuTpirolidiml]-2-oksoetil}(ferulmetoksi)karboksamid, l-[3-((lR)-l-hi(Iroksietil)^ hidroksietan-1 -on, (lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-mdan-2-iloksi-4-m^ il]etan-l-ol, (1R) -1- [(3S,4S)-4- (3-indan-2-iloksi-4-metoksifem^ il]etan-l-ol, metil 3-((lR)-l-hidorlcsi-etil)(3S,4S)-4-(3-dklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinkarboksilat, metil 3-((l R)-l -hidroksietil)(3R,4R)-4-(3-dklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-meuTpirolidinkarboksilat, metil 3-((lR)-l-hidroksietil) (3S,4S)-4-[4-metoksi-3-(3-fenilpropoksi)fenil]-3-metilpirolidinkarboksilat, 3- (( 1R)-1 -hidroksietil) (3 S,4S)-4-(3-dklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidinil morpholin-4-il keton, l-{(3S,4S)-3- ((1R)-1-Hidroksietil) -4- [3- (ciklopropilmetoksi>4-metoksifenil]-3-metilpirolidinil} -2-hidroksipentan-1 -on, 1 - {(3S,4S)-((1 R)-l -Hidroksietil)-4-[3-(ciklopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-metiipirolidinil} (2R)-2-amino-3-hidroksipropan-1 -on hidrochloride, l-{3-((lR)-l-Hidroksidil)(3S,4S)-4-{3^ metilpirolidinil} -2-hidroksi-2-femIetan-1 -on, (S)-2,3-Dihidrolcsi-l-{(3S,4S)-3-((R)-^^ iniloksi)fenil]-3-metilpirolidin-l-il}propan-l-on, ili (S)-2-Hidroksi-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hidroksietil)-4-[4-metoksi^ iniloksi)fenil]-3-metilpirolidin-1 -il}-3-fenilpropan-l-on.
13. Jedmjenje prema zahtevu 1, odabrano od:
14. Jedinjenje prema zahtevu 1, odabrano od:
15. Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time, što ima vrednost IC50prema humanom rekombinantnom PDE4 od oko 700 pM do oko 15 uM.
16. Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time, što ima vrednost PBL/TNFa EC50od oko 1 nM do oko 20uM.
17. Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time, što ima vrednost IC50prema humanom rekombinantnom PDE4 od oko 700 pM do oko 15 uM, i vrednost PBL/TNFa ECjo od oko 1 nM do oko 20 uM.
18. Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time, što ima vrednost IC50prema humanom rekombinantnom PDE4 od oko 100 x IO'<9>M ili manje.
19. Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time, što ima vrednost IC50prema, humanom rekombinantnom PDE4 od oko 50 x IO"<9>M ili manje.
20. Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time, što ima vrednost PBL/TNFa EC50od oko 500 x IO"<9>M ili manje.
21.Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time, Sto ima vrednost PBL/TNFa EC50od oko 100 x IO'<9>M ili manje.
22.Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time, Sto ima vrednost IC50prema humanom rekombinantnom PDE4 od oko 100 x IO"9 ili manje i vrednost PBL/TNFa EC50od oko 500 x 10<9>M ili manje.
23.Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time, što ima vrednost IC50prema humanom rekombinantnom PDE4 od oko 50 x 10"<9>ili manje i vrednost PBL/TNFa EC50od oko 100 x IO"<9>M ili manje.
24.Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time, što je R<3>odabran od vodonika, C(. 4alkilenaril, ili C(=0)Ci.3alkilenOCi.3-dkilenaril.
25. Jedinjenje prema zahtevu 24 odabrano od: (±)-[ 1 -Benzil^(3-ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metilpirolidin-3-il]metanol 2-[l-Benzil-4-(S)-(3-cildoporpilmeto^ 2-ol 2- [4-(SK3-Ciklopropilmetoksi-4-meto^ 2- Benziloksi-l -[4-(S)-(3-ciklopropilmetoksi-4-metoksifenil)-3-( 1 -hidroksi-1 -metiletil)-3-(S)-metilpirolidin-l-il]etanon (1R)-1 - [(3S,4S)-4-(3-lndan-2-iloksi-4-metoksifenil)-3-metil-l -benzilpirolidin-3-il]etan-l-ol (lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-mdan-2-iloksi-4-metoksifenil)-3-meuTpiro^ (lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-Ciklopentiloksi-4-metoksifenil)-3-meuI-l-benzilpu^ ol (lS)-l-[(3S,4S)-4-(3-Cildopentiloksi-4-metoksifenil)-3-metil-l-benzilpiro l-ol (lS)-l-{(3S,4S)-4-(4-Metoksi-3- (fenilmetoksi)fenil]-3-metil-l-benzilpirolimn-3-il}etan-l-ol (lR)-l-{(3S,4S)-4-[4-Metoksi-3-(fenil^^ l-ol 1 -R-[ 1 -Benzil-4-S-(3-tert-butoksi-4-metoksifenil)-3-S-meulpirolidin-3 3- [l-Benzil-4-(S)-(3-cikloporpilmeto^ 4- (R)-feniloksazolidin-2-on 1 -[ 1 -Ben2al-4-(S)-(3-cildopropilmetoksi-4-^ (1 R)-l - {(3S,4S)-4-[3-(Cildopropilmetoksi)-4-metoksifenil]-3-m (lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-Ciklopenitloksi-^^ (1 S)-l-[(3S,4SM-(3-Ciklopenufo^ 5-[4-{(lR)-l-Hidroksietil)(3S,4S)-4-metilpiro^^ (lR)-l-{(3R)-4- [3-(tert-Butoksi)-4-metoksifenil]-3-^^ 5-[(4R)-4-((l S)-l -Hidroksietil)-4-metil-l -benzil-pirolidin-3-iI]-2-metoksifenol [4-(S)-(3-Ciklor^pilmetoksi-4-metoksif^
26. Farmaceutska kompozicija, naznačena time, što sadrži jedinjenje prema jednom od prethodnih zahteva, farmcaeutski prihvatljiv nosač i, po izboru, drugi antiinflamatorni terapeutski agens.
27. Kompozicija prema zahtevu 26, naznačena time, što je drugi antiinflamatorni terapeutski agens sposoban da deluje na TNFa.
28. Jedinjenje prema jednom od prethodnih zahteva 1 do 25 ili kompozicija prema jednom od zahteva 26 do 27, za upotrebu u terapiji.
29. Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 28, naznačeno time, što terapija obuhvata tretiranje obolelog sisara gde inhibicija cAMP- specifičnog PDE je obezbeđuje terapeutsko poboljšanje (benefit).
30. Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 28, naznačeno time, što terapija obuhvata modulaciju nivoa cAMP kod sisara.
31. Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 29, naznačeno time, što je stanje, alergijsko oboljenje, autoimuna bolest, inflamatoma bolest, artritična bolest, ili dermatitis.
32. Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 29 naznačeno time, što je stanje artritis, osteoartritis, giht, ili spondilitis.
33. Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 29, naznačeno time, što je stanje oftalmopatija povezana sa disfunkcijama štitaste žlezde, Behcet-ova bolest, sepa, septički šok, endotoksički šok, gram -negativna sepsa, gram -pozitivna sepsa, sindrom toksičnog šoka, alergijski konjunktivitis, proećni (vernal) konjunktivitis, ili eozinofilni granulom.
34. Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 29, naznačeno time, što je stanje: astma, hronični bronhitis, alergijski rinitis, respiratorni distres sindrom kod odraslih, hronična pulmonama infiamatorna bolest, hronična opstruktivna bolest pluća, silikoza, ili pulmonarna sarkoidoza.
35. Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 29, naznačeno time, što je stanje:reperfuziona povreda miokarda, mozga ili ekstramiteta kao što je povreda mozga ili kičmene moždine usled traume.
36. Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 29, naznačeno time, što je stanje: fibroza, fomiranje keloida, ili formiranje tkiva ožiljka.
37. Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 29, naznačeno time, što je stanje:sistemski eritematozni lupus, poremećaj odbacivanja transplantata, reakcija graft vs.domaćin, ili odbacivanje alografta.
38. Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 29, naznačeno time, što je stanje:hronični glomerulonfritis, nefropija kod dijabetesa tipa 2, infiamatorna bolest creva,Crohn'ova bolest, ili ulcerativni kolitis.
39. Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 29, naznačeno time, što je stanje:proliferativna limfoctna bolest ili leukemija.
40. Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 29, naznačeno time, što je stanje:infiamatorna dermatoza, atopični dermatitis, psorijaza, ili urtikarija.
41. Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 29, naznačeno time, što je stanje:kardiomiopatija, kongestivna srčana insuficijencija, ateroskleroza, pireksija, kaheksija,kaheksija usled infekcije ili maligniteta, kaheksija usled sindroma stečene imunodeficijencije, ARC, cerebralna malarija, osteoporoza, bolest resorpcije kostiju,groznica i mijalgije zbog infekcije, erektilne disfunkcije, dijabetes insipidusa, poremećaj centralnog nervnog sistema, depresija, multi-infarktna demencija, anksioznost ili stresne reakcije, cerebralna ishemija, tardivna diskinezija, Parkinson'ova bolest, ili premenstrualni sindrom.
42. Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 29, naznačeno time, što je stanje:depresija ili multi-infarktna demencija.
43. Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 42, naznačeno time, što terapija dalje obuhvata tretman drugom antidepresivnom terapijom.
44. Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 43, naznačeno time, Što je druga antidepresivna terapija odabrana iz grupe koju čine elektrokonvulzivne procedure, inhbitor monoaminoksidaze, selektivni inhibitor resorpcije serotonina, i selektivni inhibitorresorpcije norepinefrina.
45.Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 29, naznačeno time, što je stanje, gojaznost.
46.Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 45, naznačeno time, što terapija dalje obuhvata administraciju inhibitora PDE3.
47.Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 29, naznačeno time, što se kod sisara ispoljavaju minimalni štetni efekti na centralni nervni sistem.
48.Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 29, naznačeno time, što se kod sisara ne ispoljavaju nepožljcni efekti na central nervni sistem.
49.Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 29, naznačeno time, što se kod sisara ispoljavaju minimalni emetički odgovori.
50.Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 29, naznačeno time, što se kod sisara ne ispoljavaju emetički odgovori.
51.Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 28, naznačeno time, što terapija obuhvata smanjenje nivoa TNF kod sisara.
52.Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 28, naznačeno time, što terapija obuhvata supresiju aktivacije inflamatornih ćelija kod sisara.
53.Jedinjenje ili kompozicija prema zahtevu 28, naznačeno time, što terapija obuhvata inhibiciju funkcije PDE4 kod sisara.
54.Upotreba jedinjenja prema jednom od zahteve 1 do 25 ili kompozicije prema jednom od zahteva 26 do 27 za proizvodnju leka za lečenje sisara obolelih od stanja gde inhibicija cAMP- specifičnog PDE je obezbeđuje terapeutsko poboljšanje.
55.Upotreba jedinjenja prema jednom od zahteva 1 do 25 ili kompozicije prema jednom od zahteva 26 do 27 za proizvodnju leka za modulaciju nivoa cAMP kod sisara.
56. Upotreba prema zahtevu 54, naznačena time, što je stanje: alergijska bolest, autoimuna bolest, antiinflamatorna bolest, artritična bolest, ili dermititis.
57. Upotreba prema zahtevu 54 naznačena time, što je stanje: reumatoidni artritis, osteoartritis, giht, ili spondilitis.
58.Upotreba prema zahtevu 54, naznačena time, što je stanje: oftalmopatija povezana sa disfunkcijama tiroidee, Behcet -ova bolest, sepsa, septički šok, endotoksični šok, gram negativna sepsa, gram pozitivna sepa, sindrom toksičnog šoka, alergijski konjunktivitis, sezonski konjunktivitis, ili eozinofilni granulom.
59.Upotreba prema zahtevu 54, naznačena time, što je stanje: astma, hronični bronhitis, alergijski rinitis, respiratorni distres sindrom kod odraslih, hronična infiamatorna bolest pluća, hroničnu opstruktivnu bolest pluća, silikoza ili plućima sarkoidoza.
60.Upotreba prema zahtevu 54, naznačena time, što je stanje: reperfuziona povreda miokarda, mozga ili ekstramiteta kao što je povreda mozga ili kičmene moždine usled traume.
61.Upotreba prema zahtevu 54, naznačena time, što je stanje: fibroza, fomiranje keloida, ili formiranje tkiva ožiljka.
62.Upotreba prema zahtevu 54, naznačena time, što je stanje: sistemski eritematozni lupus, poremećaj odbacivanja transplantata, reakcija graft vs. domaćin, ili odbacivanje alografta.
63.Upotreba prema zahtevu 54, naznačena time, što je stanje: hronični glomerulonfritis, nefropija kod dijabetesa tipa 2, infiamatorna bolest creva, Crohn'ova bolest, ili ulcerativni kolitis
64.Upotreba prema zahtevu 54, naznačena time, što je stanje: proliferativna limfoctna bolest ili leukemija.
65.Upotreba prema zahtevu 54, naznačena time, što je stanje: infiamatorna dermatoza, atopični dermatitis, psorijaza, ili urtikarija.
66.Upotreba prema zahtevu 54, naznačena time, što je stanje: kardiomiopatija, kongestivna srčana insuficijencija, ateroskleroza, pireksija, kaheksija, kaheksija usled infekcije ili maligniteta, kaheksija usled sindroma stečene imunodeficijencije, ARC, cerebralna malarija, osteoporoza, bolest resorpcije kostiju, groznica i mijalgije zbog infekcije, erektilne disfunkcije, dijabetes insipidusa, poremećaj centralnog nervnog sistema, depresija, multi-infarktna demencija, anksioznost ili stresne reakcije, cerebralna ishemija, tardivna diskinezija, Parkinson'ova bolest, ili premenstrualni sindrom.
67.Upotreba prema zahtevu 54, naznačena time, što je stanje: depresija ili multi-infarktna demencija.
68.Upotreba prema zahtevu 67, naznačena time, što terapija dalje obuhvata tretman drugom antidepresivnom terapijom.
69.Upotreba prema zahtevu 68, naznačeno time, što je druga antidepresivna terapija odabrana iz grupe koju čine elektrokonvulzivne procedure, inhbitor monoaminoksidaze, selektivni inhibitor resorpcije serotonina, i selektivni inhibitor resorpcije norepinefrina.
70.Upotreba prema zahtevu 54, naznačena time, što je stanje, gojaznost.
71.Upotreba prema zahtevu 70, naznačena time, što terapija dalje obuhvata administraciju inhibitora PDE3.
72. Upotreba prema zahtevu 54, naznačena time, što se kod sisara ispoljavaju minimalni štetni efekti na centralni nervni sistem.
73. Upotreba prema zahtevu 54, naznačena time, što što se kod sisara ne ispoljavaju nepožljeni efekti na central nervni sistem.
74. Upotreba prema zahtevu 54, naznačena time, što što se kod sisara ispoljavaju minimalni emetički odgovori.
75. Metod prema zahtevu 54, naznačena time, što što se kod sisara ne ispoljavaju emetički odgovori..
76. Upotreba jedinjenja prema jednom od zahteva 1 do 25 ili kompozicije prema jednom od zahteva 26 do 27 za proizvodnju leka za smanjenje nivoa TNF kod sisara.
77. upotreba jedinjenja prema jednom od zahteva 1 do 25 ili kompozicije prema jednom od zahteva 26 do 27 za proizvodnju leka za supresiju aktivacije inflamatornih ćelija kod sisara.
78. Upotreba jedinjenja prema jednom od zahteva 1 do 25 ili kompozicija prema jednom od zahteva 26 do 27 za proizvodnju leka za inhibiciju funkcije PDE4 kod sisara.
YUP-480/02A 1999-12-23 2000-11-28 Derivati pirolidina kao inhibitori ciklične aspecifične fosfodiesteraze RS50841B (sr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/471,846 US6258833B1 (en) 1999-12-23 1999-12-23 Cyclic AMP-specific phosphodiesterase inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
YU48002A YU48002A (sh) 2005-11-28
RS50841B true RS50841B (sr) 2010-08-31

Family

ID=23873210

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
YUP-480/02A RS50841B (sr) 1999-12-23 2000-11-28 Derivati pirolidina kao inhibitori ciklične aspecifične fosfodiesteraze

Country Status (29)

Country Link
US (6) US6258833B1 (sr)
EP (1) EP1242400B1 (sr)
JP (1) JP4294903B2 (sr)
KR (1) KR20020063600A (sr)
CN (1) CN1434813A (sr)
AT (1) ATE325108T1 (sr)
AU (1) AU778543B2 (sr)
BG (1) BG65892B1 (sr)
BR (1) BRPI0016693B1 (sr)
CA (1) CA2395193C (sr)
CZ (1) CZ20022188A3 (sr)
DE (1) DE60027769D1 (sr)
EA (1) EA005686B1 (sr)
EE (1) EE05087B1 (sr)
GE (1) GEP20043384B (sr)
HK (1) HK1051359A1 (sr)
HR (1) HRP20020541B1 (sr)
HU (1) HUP0301113A3 (sr)
IL (1) IL150313A0 (sr)
IS (1) IS6436A (sr)
MX (1) MXPA02006212A (sr)
NO (1) NO20023008L (sr)
PL (1) PL202227B1 (sr)
RS (1) RS50841B (sr)
SK (1) SK287964B6 (sr)
TR (1) TR200400702T4 (sr)
UA (1) UA73964C2 (sr)
WO (1) WO2001047905A1 (sr)
ZA (1) ZA200205551B (sr)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6455571B1 (en) * 1998-04-23 2002-09-24 Abbott Laboratories Inhibitors of neuraminidases
US6258833B1 (en) * 1999-12-23 2001-07-10 Icos Corporation Cyclic AMP-specific phosphodiesterase inhibitors
US20010049368A1 (en) * 2000-02-29 2001-12-06 Reines Scott A. Method for treating or preventing depression
CA2414839C (en) * 2000-07-03 2010-02-16 Speedel Pharma Ag Preparation of (r)-2-alkyl-3-phenylpropionic acids
US6953774B2 (en) * 2000-08-11 2005-10-11 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Methods of inducing ovulation
WO2002047540A2 (en) * 2000-12-15 2002-06-20 The General Hospital Corporation Methods for inhibiting fibrosis
US20040014099A1 (en) * 2001-03-19 2004-01-22 Decode Genetics Ehf. Susceptibility gene for human stroke; methods of treatment
US20030073711A1 (en) * 2001-08-23 2003-04-17 Whitehead Clark M. Methods for treatment of scleroderma
US6479493B1 (en) 2001-08-23 2002-11-12 Cell Pathways, Inc. Methods for treatment of type I diabetes
IL161317A0 (en) * 2001-10-16 2004-09-27 Memory Pharm Corp 4-(4-alkoxy-3-hydroxyphenyl)-2-pyrrolidone derivatives as pde-4 inhibitors for the treatment of neurological syndromes
US7507707B2 (en) * 2001-12-14 2009-03-24 Laboratoires Serono Sa Methods of inducing ovulation using a non-polypeptide camp level modulator
MY140561A (en) 2002-02-20 2009-12-31 Nycomed Gmbh Dosage form containing pde 4 inhibitor as active ingredient
DE10228132A1 (de) * 2002-06-24 2004-01-22 Arzneimittelwerk Dresden Gmbh Amide cyclischer Aminosäuren als PDE 4 Inhibitoren
ES2335498T3 (es) 2003-03-10 2010-03-29 Nycomed Gmbh Nuevo proceso para la preparacion de reflumilast.
SG169900A1 (en) * 2003-04-16 2011-04-29 Memory Pharm Corp 4 - (3,4 - disubstituted phenyl) - pyrrolidin-2-one compounds as phosphodiesterase 4 inhibitors
EP1631568A1 (en) * 2003-04-18 2006-03-08 Memory Pharmaceuticals Corporation Pyrazole derivatives as phosphodiesterase 4 inhibitors
JP2007521276A (ja) * 2003-06-25 2007-08-02 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション Ｎｋ−２およびｎｋ−３として用いるための４−カルボキサミドキノリン誘導体
AU2004277932B2 (en) * 2003-09-30 2009-07-16 Merck & Co., Inc. Phenyl pyrrolidine ether tachykinin receptor antagonists
US20050201989A1 (en) * 2004-02-19 2005-09-15 St. Camillus Medical, Inc. Compositions and methods for ex vivo preservation of blood vessels for vascular grafts using inhibitors of tumor necrosis factor-alpha
ATE413398T1 (de) * 2004-04-08 2008-11-15 Wyeth Corp Thioamidderivate als progesteronrezeptormodulatoren
EP1799673A1 (en) * 2004-10-15 2007-06-27 Memory Pharmaceuticals Corporation Pyrazole derivatives as phosphodiesterase 4 inhibitors
EP1802615A1 (en) * 2004-10-20 2007-07-04 Memory Pharmaceuticals Corporation Phosphodiesterase 4 inhibitors
US8663694B2 (en) * 2005-03-16 2014-03-04 Takeda Gmbh Taste masked dosage form containing roflumilast
EP2275095A3 (en) 2005-08-26 2011-08-17 Braincells, Inc. Neurogenesis by muscarinic receptor modulation
EP2258358A3 (en) 2005-08-26 2011-09-07 Braincells, Inc. Neurogenesis with acetylcholinesterase inhibitor
EP1940389A2 (en) 2005-10-21 2008-07-09 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis by pde inhibition
AU2006308889A1 (en) 2005-10-31 2007-05-10 Braincells, Inc. GABA receptor mediated modulation of neurogenesis
JP2009514969A (ja) 2005-11-09 2009-04-09 コンビナトアールエックス インコーポレーティッド 医学的状態を治療するための方法、組成物、およびキット
US20070244143A1 (en) * 2006-03-08 2007-10-18 Braincells, Inc Modulation of neurogenesis by nootropic agents
US20100216734A1 (en) * 2006-03-08 2010-08-26 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis by nootropic agents
US20100009983A1 (en) * 2006-05-09 2010-01-14 Braincells, Inc. 5 ht receptor mediated neurogenesis
JP2009536667A (ja) * 2006-05-09 2009-10-15 ブレインセルス，インコーポレイティド ５ｈｔ受容体介在性の神経新生
EP2382975A3 (en) 2006-05-09 2012-02-29 Braincells, Inc. Neurogenesis by modulating angiotensin
AU2007292848A1 (en) 2006-09-08 2008-03-13 Braincells, Inc. Combinations containing a 4-acylaminopyridine derivative
US20100184806A1 (en) 2006-09-19 2010-07-22 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis by ppar agents
AU2007299920A1 (en) * 2006-09-19 2008-03-27 Braincells, Inc. PPAR Mediated Modulation of Neurogenesis
AR063275A1 (es) * 2006-10-12 2009-01-14 Epix Delaware Inc Compuestos de carboxamida, una composicion farmaceutica que los comprende y su uso en la preparacion de un medicamento para el tratamiento de enfermedades mediadas por la activacion de ccr2.
ME01579B (me) 2007-08-07 2014-09-20 Takeda Pharmaceuticals Co Derivati pirolidin-2-ona kao modulatori androgenskih receptora
BRPI0820701A2 (pt) 2007-12-11 2015-06-16 Cytopathfinder Inc Composto de carboxamida e seu uso como agonistas do receptor de quimiocina
WO2010099217A1 (en) 2009-02-25 2010-09-02 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis using d-cycloserine combinations
CN102603623A (zh) * 2011-12-26 2012-07-25 北京赛林泰医药技术有限公司 制备高纯度罗氟司特的方法
WO2013106547A1 (en) 2012-01-10 2013-07-18 President And Fellows Of Harvard College Beta-cell replication promoting compounds and methods of their use
JO3264B1 (ar) * 2013-03-13 2018-09-16 Lilly Co Eli مركبات ازيتيدينيل أوكسي فينيل بيروليدين
WO2015112568A1 (en) * 2014-01-24 2015-07-30 Celgene Corporation Methods for the treatment of obesity using apremilast
PL3150578T3 (pl) * 2014-05-29 2021-07-19 Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation Nowy związek pirolidynowy i zastosowanie jako agonisty receptora melanokortyny
WO2016033776A1 (en) * 2014-09-04 2016-03-10 Eli Lilly And Company Crystalline (2s) -3- [ (3s, 4s) -3- [ (1r) -1-hydroxyethyl] -4- (4-methoxy-3- { [1- (5-methylpyridin-2-yl) azetidin-3-yl] oxy} phenyl) -3-methylpyrrolidin-1-yl] -3-oxopropane-1, 2-diol
TW201625591A (zh) * 2014-09-12 2016-07-16 美國禮來大藥廠 吖丁啶基氧苯基吡咯啶化合物
WO2017072796A1 (en) 2015-10-30 2017-05-04 Council Of Scientific & Industrial Research 2-pyridone based compounds useful as potential phosphodiesterase3a (pde3a)inhibitors and a process for the preparation thereof
JP6392297B2 (ja) * 2015-11-27 2018-09-19 田辺三菱製薬株式会社 医薬組成物
WO2019065954A1 (ja) 2017-09-29 2019-04-04 田辺三菱製薬株式会社 光学活性ピロリジン化合物及びその製造方法
US20220056014A1 (en) * 2018-12-18 2022-02-24 Wuhan Humanwell Innovative Drug Research and Development Center Limited Company Phenylpyrrolidine compound and use thereof
CN112409333B (zh) * 2019-08-23 2024-06-14 武汉人福创新药物研发中心有限公司 苯基吡咯烷类化合物
TWI877358B (zh) * 2020-04-29 2025-03-21 大陸商廣東東陽光藥業股份有限公司 取代的吡咯烷類化合物及其在藥物中的應用

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5821622B2 (ja) * 1973-02-28 1983-05-02 ウェルファイド株式会社 ピロリジンメタノ−ル ノ セイゾウホウ
JPS50108258A (sr) * 1974-02-08 1975-08-26
US5665754A (en) 1993-09-20 1997-09-09 Glaxo Wellcome Inc. Substituted pyrrolidines
CA2143143A1 (en) * 1994-03-08 1995-09-09 Toshihiko Tanaka 3-phenylpyrrolidine derivatives
JPH07300455A (ja) * 1994-03-08 1995-11-14 Mitsubishi Chem Corp ３−フェニルピロリジン誘導体
US5998428A (en) 1995-05-31 1999-12-07 Smithkline Beecham Corporation Compounds and methods for treating PDE IV-related diseases
US5856103A (en) * 1994-10-07 1999-01-05 Board Of Regents The University Of Texas Method for selectively ranking sequences for antisense targeting
DE19601938A1 (de) * 1996-01-12 1997-07-17 Schering Ag Neue Phosphodiesteraseinhibitoren
AU738037B2 (en) * 1997-04-04 2001-09-06 Pfizer Products Inc. Nicotinamide derivatives
US6258833B1 (en) * 1999-12-23 2001-07-10 Icos Corporation Cyclic AMP-specific phosphodiesterase inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
EE200200351A (et) 2003-10-15
NO20023008D0 (no) 2002-06-21
NO20023008L (no) 2002-08-20
JP4294903B2 (ja) 2009-07-15
HUP0301113A2 (hu) 2003-08-28
SK9172002A3 (en) 2002-11-06
US7176229B2 (en) 2007-02-13
PL355988A1 (en) 2004-05-31
CN1434813A (zh) 2003-08-06
BRPI0016693B1 (pt) 2015-09-01
EA005686B1 (ru) 2005-04-28
KR20020063600A (ko) 2002-08-03
EP1242400A1 (en) 2002-09-25
MXPA02006212A (es) 2004-02-26
ZA200205551B (en) 2003-07-11
US20060074123A1 (en) 2006-04-06
EE05087B1 (et) 2008-10-15
US6258833B1 (en) 2001-07-10
IL150313A0 (en) 2002-12-01
UA73964C2 (uk) 2005-10-17
CA2395193A1 (en) 2001-07-05
HRP20020541B1 (en) 2008-06-30
SK287964B6 (sk) 2012-07-03
DE60027769D1 (de) 2006-06-08
US6423710B1 (en) 2002-07-23
AU2426201A (en) 2001-07-09
TR200400702T4 (tr) 2004-06-21
CA2395193C (en) 2008-06-17
US6458787B1 (en) 2002-10-01
BR0016693A (pt) 2003-03-11
BG106860A (bg) 2003-03-31
WO2001047905A1 (en) 2001-07-05
HRP20020541A2 (en) 2004-08-31
IS6436A (is) 2002-06-19
US20040152754A1 (en) 2004-08-05
HUP0301113A3 (en) 2011-07-28
JP2003519135A (ja) 2003-06-17
BG65892B1 (bg) 2010-04-30
PL202227B1 (pl) 2009-06-30
CZ20022188A3 (cs) 2003-03-12
YU48002A (sh) 2005-11-28
US6716871B2 (en) 2004-04-06
ATE325108T1 (de) 2006-06-15
US6998416B2 (en) 2006-02-14
EP1242400B1 (en) 2006-05-03
US20040023945A1 (en) 2004-02-05
GEP20043384B (en) 2004-05-10
AU778543B2 (en) 2004-12-09
EA200200590A1 (ru) 2002-12-26
HK1051359A1 (zh) 2003-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6423710B1 (en) Cyclic AMP-specific phosphodiesterase inhibitors
AU778795B2 (en) Pyrrolidines which inhibit cAMP-specific PDE
AU778717B2 (en) Hydrazone and oxime derivatives of pyrrolidine as AMP-specific phosphodiesterase inhibitors
US6455562B1 (en) Cyclic AMP-specific phosphodiesterase inhibitors
US6680336B2 (en) Cyclic AMP-specific phosphodiesterase inhibitors