RS50891B

RS50891B - Postupak za pripremanje rastvora albumina

Info

Publication number: RS50891B
Application number: YUP-2005/0624A
Authority: RS
Inventors: Werner Gehringer; Katharina Pock; Jürgen Römisch; Tor-Einar Svae; Christoph Kannicht
Original assignee: Octapharma Ag.
Priority date: 2003-02-13
Filing date: 2004-02-13
Publication date: 2010-08-31
Also published as: UA80469C2; NO20053677L; EP1592439A1; NO20053677D0; BRPI0407458A; DE502004003834D1; ES2285427T3; RU2005128507A; CN1798573A; PT1592439E; MXPA05008276A; AU2004212324B2; AU2004212324A1; CA2514163A1; ATE362376T1; PL376644A1; DK1592439T3; WO2004071524A1; IL169828A0; RU2305556C2

Abstract

Postupak pripremanja albumina, naznačen time, što se sastoji od kombinacije sledećih koraka:(a) podvrgavanje prvog vodenog rastvora albumina tretmanu za virus-dezaktiviranje putem SD postupka njegovim kontaktiranjem sa SD reagensima na temperaturi ispod 45°C;(b) uklanjanje, bar suštinski, SD reagensa putem ekstrakcije ulja praćene hromatografijom hidrofobične interakcije, pri čemu je hidrofobična matrica, posebno matrica za koju hidrofobične grupe mogu opciono biti vezane, upotrebljene za navedenu hromatografiju, pod uslovom da su navedene grupe alifatične grupe sa više od 24 atoma ugljenika, da se dobije drugi rastvor albumina za koji se(c) dodaju opciono jedan ili više stabilizatora odabranih iz grupe šećera, amino kiselina i šećernih alkohola, pod uslovom da se ne upošljavaju kao navedeni stabilizator indol stabilizator i C6-C10 masna kiselina, nakon čega(d) se navedeni drugi rastvor albumina kome je stabilizator opciono dodat podvrgne konačnom pakovanju i sterilnom filtriranju i opciono puni u konačne kontejnere.Prijava sadrži još 17 zavisnih patentnih zahteva.

Description

Pronalazak se odnosi na terapeutski upotrebljiv virus-dezaktivirani albumin, i na postupak njegove proizvodnje.

STANJE TEHNIKE

Albumin je plazma protein sa najvišom proporcijom u krvnoj plazmi. Albumin može vezivati mnoge endogene i egzogene supstance za svoj molekul. Ovaj kapacitet vezivanja je takođe osnova za jednu od njegovih mnogih funkcija: transport supstanci vezanih za albumin.

Zbog svog kapaciteta vezivanja, albumin je takođe važan depo za širok spektar različitih jedinjenja, kao što su masne kiseline sa dugačkim lancem, bilirubin, triptofan, tiroksin ili metalni joni. Date farmaceutski aktivne supstance, kao što su varfarin (warfarin), digitoksin ili naproksen, se takođe vezuju za albumin i transportuju.

Ipak, s ovim u vezi, kritično je znati daje samo slobodna frakcija svake pojedinačne farmaceutski aktivne supstance, odnosno, one koja nije vezana za albumin, upravo ona koja pokazuje farmakološko dejstvo. Redukcija dela vezanog za albumin povećava slobodnu frakciju i tako farmakološku aktivnost.

Svi komercijalno dostupni albumin preparati se pripremaju sredstvima modifikovanog Cohn-ovog deljenja na frakcije, postupka koji se uobičajeno sastoji od nekoliko koraka deljenja na frakcije. Pasterizacija (10 sati na 60°C) koncentrata albumina se upošljava kako korak virus-dezaktiviranja opada. Da bi se izbeglo denaturizovanje albumina tokom ovog koraka, upošljavaju se stabilizatori. Prema Evropskoj farmakopeji, natrijum kaprilat (natrijum oktanoat) ili N-acetiltriptofan ili kombinacija oba se upotrebljavaju kao stabilizator.

Da se dobiju virus-dezaktivirani faktor VIII preparati ili drugi plazma proteini, upošljava se takozvani SD postupak, kao što je to opisano, na primer u EP-A-0 131 740. Ova prikazani opis je ovde uključen putem reference.

Iz svojih sopstvenih proučavanja, Prijavilac zna da je kapacitet vezivanja komercijalno dostupnog albumina značajno smanjen upoređeno sa prirodnim albuminom. Ovo se objašnjava činjenicom da su upotrebljeni stabilizatori u pasterizaciji vezani albuminom i tako zauzimaju važne položaje transporta, pri čemu je kapacitet vezivanja smanjen. Ovo znači da su pacijenti koji dobijaju takve albumin preparate izloženi značajno povećanoj koncentraciji slobodne aktivne supstance, odnosno, one koje nije vezana za albumin, kada se farmaceutski aktivne supstance daju, što prirodno znači povećani rizik od prekomernih farmakoliških efekata i sporednih efekata za pacijenta.

OPIS PRONALASKA

Predmet je sadašnjeg pronalaska da obezbedi albumin preparat koji nema ovu smetnju.

Slika 1 prikazuje ponašanje absorbcije ultraljubičastog albumina iz različitih izvora kao funkciju vremena elutovanja tokom hromatografske separacije.

Slika 2 ilustruje ponašanje vezivanja albumina iz različitih izvora u prisustvu različitih koncentracija varfarina.

Ovaj predmet je postignut terapeutski upotrebljivim virus-dezaktiviran albuminom koji ima povećani kapacitet vezivanja za supstance upoređeno sa albuminom virus-dezaktiviran pasterizacijom. Određenije, albumin prema pronalasku ima kapacitet vezivanja koji je povećan bar za 10% preko onog albumina virus-dezaktiviran putem pasterizacije, tipično kapacitet vezivanja koji je povećan od 20 do 500%, posebno onaj gde je povećan od 100 do 500%. U pojedinačnim slučajevima, moguće su čak i veće vrednosti, u zavisnosti od supstance koja se ima vezivati.

Supstance su posebno one koje se vezuju i/ili transportuju prirodnim albuminom, posebno uključujući aktivne supstance sa niskom-molekularnom težinom. Određenije, supstance sa niskom-molekulamom težinom su organske i neorganske supstance, nukleinske kiseline, polipeptidi, koji tipično imaju molekularnu težinu od < 10 000 Da.

Za gore pomenute terapeutske upotrebe, albumin prema pronalasku može biti u obliku tečnog rastvora ili u čvrstom stanju, posebno u liofilisanom obliku.

Albumin prema pronalasku može takođe biti dobijen postupkom koji se karakteriše kombinacijom sledećih koraka: (a) podvrgavanje prvog vodenog rastvora albumina tretmanu za virus-dezaktiviranje putem SD postupka njegovim kontaktiranjem sa SD reagensima na temperaturi ispod 45°C; (b) uklanjanje, bar suštinski, SD reagensa putem ekstrakcije ulja praćene hromatografijom hidrofobične interakcije, pri čemu je hidrofobična matrica, posebno matrica za koju hidrofobične grupe mogu opciono biti vezane, upotrebljene za navedenu hromatografiju, pod uslovom da su navedene grupe alifatične grupe sa više od 25 atoma ugljenika, da se dobije drugi rastvor albumina za koji se (c) dodaju opciono jedan ili više stabilizatora odabranih iz grupe šećera, amino kiselina i šećernih alkohola, pod uslovom da se ne upošljavaju kao navedeni stabilizator indol stabilizator i C6-C10masna kiselina, nakon čega (d) se navedeni drugi rastvor albumina kome je stabilizator opciono dodat podvrgne konačnom pakovanju i sterilnom filtriranju i opciono puni u konačne kontejnere.

Pojam "indol stabilizator" će obuhvatati sve stabilizatore koji imaju skelet indola, kao što je N-acetiltriptofan.

SD (= rastvarač/deterdžent) postupak dezaktiviranja virusa je poznat iz EP-A-0 131 740. Ovaj opis takođe pominje albumin, među ostalim proteinima.

Tačno je, iz EP-A-0 366 946, poznato je da SD reagensi mogu biti uklonjeni sa biljnim uljima, na primer, soja-ulje, prećeno hromatografijom hidrofobične interakcije. Tako, u delu u kome se preklapa sa postupkom prema EP-A-0 366 946, postupak prema zahtevu 8 treba da se razume kao analogni postupak za pripremanje albumina prema pronalasku u jednom aspektu. Ipak, za hromatografiju, gornji patent pretpostavljeno predlaže matricu, na primer, silika matricu, za koju su vezani hidrofobični bočni lanci, odnosno, račvasti ili ne-račvasti C6-C24alki! lanci.

Iznenađujuće, pronađeno je da upotreba hidrofobične matrice umesto matrice koja nosi C18 alkil lance, na primer, kao hidrofobični bočni lanci rezultira u većem kapacitetu vezivanjaza adsorbciju deterdženata. U skladu sa tim, nema potrebe da budu vezane dalje hidrofobične grupe za matricu koja je uposlena prema pronalasku. Prema tome, pronalazak se takođe odnosi na postupak u kojem se takva matrica upotrebljava.

Dezaktiviranje virusa se korisno obavlja na temperaturi u rasponu od 25 do 40°C.

U pretpostavljenoj realizaciji postupka prema pronalasku, dezaktiviranje virusa se obavlja tokom vremenskog perioda koji je u rasponu od 4 do 6 sati.

Glicin je vrlo pogodan kao stabilizator.

Ricinusovo ulje je vrlo pogodno za uljanu ekstrakciju.

Pronađeno je da je od posebne prednosti za efekat prečišćavanja ukoliko se polistiren-divinilbenzen polimer ili metakrilat-bazirani polimer upotrebljava kao navedena hidrofobična matrica.

Hidrofobične matrice uposlene prema pronalasku mogu nositi račvaste ili u normalnom nizu alifatične grupe sa više od 24 atoma ugljenika.

U zavisnosti od početno materijala koji se upošljava, može biti neophodan korak pražnjenja takozvane aktivnosti prekalikrein aktivatora (PKA). Za PKA se zna da izaziva opadanje krvnog pritiska nakon davanja preparata koji sadrže PKA otpuštanjem vazo-aktivne supstance bradikinin sa kininogena sa velikom molekularnom težinom (HMWK).

PKA se obično dezaktivira tokom pasterizacije proteinskih preparata. Pošto je tretman zagrevanjem, kojim se PKA bar delimično dezaktivira kako se to zna na osnovu prethodnog iskustva, nepovoljno za albumin pripremljen prema pronalasku uslede gore navedenih razloga, PKA se može ukloniti specijalnim merama, ukoliko je to neophodno. Ovo uključuje inkubaciju sa aktivnim biljnim ugljem prećenu filtriranjem, pretpostavljeno sa dubokim filterima, ili direktno filtriranje kroz filtere koji sadrže aktivni biljni ugalj.

Dalje, jon-izmenjivači, kao što su katjon i anjon izmenjivači, su veoma pogodni za uklanjanje PKA. Ovo se može izvesti dovođenjem u kontakt rastvora koji sadrži albumin sa matricom u kolonama, ili putem postupaka šarži dobro poznatih stručnjaku iz ove oblasti. Alternativno, dekstran sulfat ili heparin matrice mogu se uposliti za smanjenje PKA.

U dobijenom rastvoru koji sadrži albumin, PKA je smanjena, i u optimalnom slučaju se više ne može opaziti. Prema sadašnjem stanju nauke, PKA je identična sa aktiviranim (koagulacija) faktorom XII (FXIIa), koji je generisan iz svoje pro-enzimske forme (FXII). Ovo nastaje na površinama putem auto-katalize ili putem enzimskog dejstva, na primer, kalikreina. U skladu sa tim, smanjenje FXII (pro-enzima), pošto je prekursor PKA, je takođe preporučljivo, ali se ne zahteva obavezno. Ipak, da se spreči obnovljeno generisanje PKA iz pro-enzimskog oblika, kasnije se može ukloniti jon-izmenjivačkom hromatografijom. Smanjenje FXII može se opciono obaviti da bi se omogućilo dugotrajno skladištenje albumina u tečnom stanju. Ovo je takođe važno nakon odmrzavanja rastvora albumina koji je mogao biti skladišten u zamrznutom obliku. U skladu sa tim, rastvor albumina može biti duboko zamrznut nakon što se napuni u krajnje kontejnere, ali može takođe biti ohlađen u tečnom ili zamrznuto-osušeno stanju i uskladišten na temperaturi do 40°C.

Tako, da se uklone PKA ili PKA-prekursor supstance, bilo koja aktivnost prekalikrein aktivatora (PKA) koja je može biti prisutna pre li nakon koraka (a), (b) ili (c) može biti uklonjena na po sebi poznati način, posebno gde se albumin rastvor A) dovodi u kontakt sa aktivnim biljnim ugljem, praćeno uklanjanjem aktivnog prirodnog uglja iz rastvora albumina; ili

B) podvrgava jon-izmenjivačkoj hromatografiji.

Korak (A) se izvodi pri koncentraciji albumina od 1 do 20 mas.%, posebno od 5 do10 mas.%.

Korak (B) se izvodi, posebno, pri koncentraciji albumina od 5 do 10 mas.%.

U daljoj realizaciji postupka prema pronalasku, jon-izmenjivač je anjon-izmenjivač, i rastvor albumina se tretira puferom sa natrijumacetatom u rasponu od 100 do 150 mmol/L, dok je pH vrednost u rasponu od 5,0 do 6,0, posebno u rasponu od <5,5.

U daljoj realizaciji postupka prema pronalasku, jon-izmenjivač je katjon-izmenjivač, i rastvor albumina se tretira puferom sa natrijumacetatom u rasponu od 20 do 30 mmol/L, dok je pH vrednost u rasponu od 4,8 do 6,0, posebno u rasponu od 4,8 do 5,2.

Pronalazak se dalje odnosi na rastvor albumina koji se može dobiti postupkom prema pronalasku. Ovaj postupak se može primeniti za rastvore albumina dobijene iz različitih izvora, na primer, iz krvne plazme ili seruma, iz frakcija koje sadrže albumin deljenja na frakcije plazme, iz albumina koji je dobijen i površinskog sloja kulture nakon rekombinantnog pripremanja, ili iz transgenski pripremljenog albumina, ili iz medijuma koji sadrži albumin, kao stoje mleko.

Pretpostavljena realizacija pronalaska je dalje opisana putem sledećeg Primera.

Primer

1000 g vodenm rastvoru albumina dobijenog Cohn-ovim postupkom (nakon dia-filtriranja/ultrafiltriranja) koji ima sadržaj proteina od oko 23% se dodaju Triton X-100 i tri-n-butilfosfat (TNBP) do koncentracije od 1% svaki. Potom se rastvor albumina mesa na 30°C 4 sata.

Da se uklone SD reagensi, prvo se dodaje ricinusovo ulje sa mešanjem do koncentracije od 5% dok se rastvor ne dovede do temperature u rasponu od 20 do 25°C. Potom se smeša meša 30 minuta. Nakon mešanja, smeši se dopusti da odstoji 60 minuta da se formira teška vodena i laka faza. Teška faza se odvaja i flitrira kroz filter koji ima membrane veličine pore od

< 1 pm i < 0,45 um. Laka faza (uljana faza) sadrži TNBP i odbacuje se.

Da se odvoji od Triton X-100, filtrirani rastvor se propušta kroz čvrstu fazu ekstrakcije kolone. Polistiren-divinilbenzen polimer (Amberschrome CG 161) bez hidrofobičnih bočnih lanaca se upotrebljava kao hidrofobična matrica. Ubrizgavanje vode se upotrebljava za pročišćavanje kolone, postupak koji se prati merenjem absorbcije ultraljubičastog na 280 nm. Nakon upotrebe, kolona se regeneriše.

Sledeće se može dodati kao stabilizator: glicin, glutamat, arginin, maltoza, sorbit ili smeša ovih supstanci.

Dobijeni rastvor se dovodi do pH 7,0 i sadržaj proteina se podešava na 200 g/L, a sadržaj natrijuma na 80 mmol/L Na<+.>Onda se rastvor podvrgne sterilnom filtriranju kroz filter membrane koji ima veličinu pore od < 0,2 pm. Sterilno-filtrirani rastvor se puni u sterilne i bez pirogena PVC kesice pod aseptičkim uslovima, i kesice se označavaju.

Označene kesice se duboko zamrznu na temperaturi od < -60°C tako da temperatura u kesicama dostigne < -30°C. Na ovoj temperaturi (< -30°C), kesice se skladište.

Smanjenje prekalikreina

Kada treba da se PKA smanji, sledeće varijante postupka se mogu upotrebiti: a) Rastvor albumina koji ima koncentraciju proteina od 1 do 25 mas.%, posebno od 5 do 10 mas.%, se meša jedan sat sa 3-10 mas.%, posebno sa 5 mas.%, aktivnog biljnog uglja na pH = 5. Potome se aktivni prirodni ugalj uklanja filtriranjem.

b) Rastvor albumina koji ima koncentraciju proteina od 5 do 10 mas.% se podvrgava jon-izmenjivačkoj hromatografiji (DEAE

Sepharose, Q Sepharose) na pH 5-6, posebno <5,5, u sistemu tretiranom puferom sa 100-150 mM natrijumacetata. Usled velike jonske snage, dobija se u filtratu rastvor albumina bez PKA.

c) Rastvor albumina koji ima koncentraciju proteina od 5 do 10 mas.% se podvrgne jon-izmenjivačkoj hromatografiji (SP

Tovopearl, CM Sepharose) na ph 5-6, pretpostavljeno 4,8-5,2, u sistemu tretiranom puferom sa 20-30 mmol/L natrijumacetata. Dobija se kao filtrat rastvor albumina bez PKA.

Konačnaformulacija

Dobijem' rastvori se dovode do pH = 7,0 svaki, i sadržaj proteina se podešava na 200 g/L, a sadržaj natrijuma na 80 mmol/L Na<+.>Onda se rastvor podvrgne sterilnom filtriranju kroz filter membrane koja ima veličinu pore od < 0,2^im.

Sterilno-filtrirani rastvor se puni u sterilne i bez pirogena PVC kesice pod aseptičkim uslovima, i kesice se označavaju.

Merenie vezivanja supstanci za različite albumin preparate

Direktni postupak za utvrđivanje osobina vezivanja supstanci za albumin je hromatografija isključivanjem veličine (SEC) prema Hummel-u i Dreyer-u (Biochim Biophvs Acta 1962; 63: 530-532).

Tako, SEC kolona se uravnoteži sa rastvorom pufera koji sadrži ligand za vezivanje (n.pr., fenilbutazon ili varfarin). Absorbcija ultraljubičastog regiona se kontinuirano prati. Protein se nanosi na kolonu i elutuje u puferu za uravnoteženje. Vezani ligand postaje elutovan zajedno sa albuminom, dok ne-vezani ligand, koji je manji u većini slučajeva, postaje elutovan na odgovarajući način kasnije. Absorbcija vezanog liganda se uglavnom meša sa absorbcijom albumina i mogućim pridruženim supstancama, kao što su stabilizatori. Kasniji elutujući "negativni" ili takozvana "prazna" najviša vrednost se izaziva smanjenjem liganda u potonjem puferu, koji zauzima veću površinsku oblast, usled čega dolazi do više vezivanja za prethodno elutovani albumin. Koizumi et al., (Biomed Chromatogr 1998; 12: 203-210) iskoristio je ovaj postupak u blago modifikovanom obliku da ispita kapacitete vezivanja supstanci za albumin ili njihove afinitete, na primer, dodavanjem povećanih količina liganda konstantnim koncentracijama albumina u odvojenim pokušajima, pri čemu se kapacitet vezivanja može utvrditi u obliku odnosa albumin-prema-supstanci.

Za ova ispitivanja upotrebljava se Biosep-SEC-ova 4000 kolona, 300 x 4,6 mm mikrona (Phenomenenx) na Shimadzu HPLC instalaciji. Brzina protoka pufera je 0,35 mUmin, kolona se uravnotežuje sa 50 mM pufera kalijumfosfata, pH 7,4. Koncentracija proteina je 50 uM, a zapremina ubrizgavanja je 80 pL Fenilbutazon se prati na 263 nm, a varfarin na 308 nm. Regioni linearne absorbcije se prethodno utvrđuju.

Upotrebljavaju se albumin kako je opisan u ovoj prijavi (1) kao i dva komercijalno dostupna (stabilizovana) albumin preparata (2, 3). Oni su 20% rastvori albumina.

Slika 1 pokazuje superpoziciju četiri različita hromatograma, kolonu koja je uravnoteženja u 50 ?M fenilbutazona (u fosfatnom puferu). Pri vremenu zadržavanja od 11 minuta, albumin prvo postaje elutovan, najviša vrednost naznačava zbir absorbcije proteina i to od vezane supstance. Na 14,5 minuta, najviša vrednost N-acetiltriptofana (stabilizator) se uobičajeno pronalazi u slučaju komercijalnog albumina. Nakon 18,5 minuta, pojavljuje se "prazna" najviša vrednost u obliku "negativnog" predstavljanja absorbcije u odnosu na nivo uravnoteženog pufera uključujući supstancu. Što je viša (u negativnom smislu) ova najviša vrednost ili veća oblast koja obuhvata najvišu vrednost, više supstance se prethodno vezalo za elutovani albumin.

Slika 2 pokazuje absorbcije ultraljubičastog tri koncentracije fenilbutazona vezanog za albumin (nakon oduzimanje najviše vrednosti pufera). Tako se, dva komercijalno dostupna albumina (koji sadrže kaprilat i N-acetiltriptofan) i albumin pripremljen prema postupku opisanom u sadašnjoj prijavi podvrgavaju hromatografiji, i upoređuju se kvaliteti vezivanja. Za uporedive molarne koncentracije fenilbutazona za albumin, u slučaju novog albumina jasno je pronađeno da su naviše vrednosti značajno više u pogledu visine i oblasti. Ovo se na sličan način zadržava za drugi primer, naime varfarin, kao što je prikazano na Slici 3.

Ovi rezultati daju konačan rezultat da je komercijalni albumin inferioran prema albuminu koji je ovde opisan u pogledu osobine vezivanja.

Upoređenie kapaciteta vezivanja RP- 18 kolona upoređeno sa

polistiren- divinilbenzen polimerima ( Amberchrome 161M)

Testirani sistem: zapremina kolone: 44 ml_

Brzina protoka: 4 mL/min

Kolona se napuni sa 1% Triton X-100 rastvorom. Sadržaj Triton X u eluatu se meri nakon svake zapremine kolone sredstvima HPLC reversne-faze. Ukoliko Triton može da se detektuje u eluatu, kapacitet gela se iscrpljuje.

Rezultat:

RP-18 gel vezuje 140 mg Triton X-100/mL gela, a Amberchrome gel vezuje 160 mg Triton X-100/mL gela.

Claims

1. Postupak pripremanja albumina,naznačen time,što se sastoji od kombinacije sledećih koraka: (a) podvrgavanje prvog vodenog rastvora albumina tretmanu za virus-dezaktiviranje putem SD postupka njegovim kontaktiranjem sa SD reagensima na temperaturi ispod 45°C; (b) uklanjanje, bar suštinski, SD reagensa putem ekstrakcije ulja praćene hromatografijom hidrofobične interakcije, pri čemu je hidrofobična matrica, posebno matrica za koju hidrofobične grupe mogu opciono biti vezane, upotrebljene za navedenu hromatografiju, pod uslovom da su navedene grupe alifatične grupe sa više od 24 atoma ugljenika, da se dobije drugi rastvor albumina za koji se (c) dodaju opciono jedan ili više stabilizatora odabranih iz grupe šećera, amino kiselina i šećernih alkohola, pod uslovom da se ne upošljavaju kao navedeni stabilizator indol stabilizator i C6-C10masna kiselina, nakon čega (d) se navedeni drugi rastvor albumina kome je stabilizator opciono dodat podvrgne konačnom pakovanju i sterilnom filtriranju i opciono puni u konačne kontejnere.

2. Postupak prema zahtevu 1,naznačen time,što se navedeno dezaktiviranje virusa ostvaruje na temperaturi u rasponu od 25 do 40°C.

3. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 i/ili 2,naznačen time,što navedeno dezaktiviranje virusa ostvaruje tokom perioda vremena u rasponu od 4 do 6 sati.

4. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 3,naznačen time,što se kao navedeni stabilizator upošljava glicin, glutamat, arginin ili lizin ili njihova kombinacija.

5. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 3,naznačen time,što se kao navedeni stabilizator upošljava maltoza i/ili sorbit.

6. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 5,naznačen time,što se za ekstrakciju ulja upošljava ricinusovo ulje.

7. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 6,naznačen time,što kao navedena hidrofobična matrica upotrebljava polistiren-divinilbenzen polimer ili metakrilat-bazirani polimer.

8. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 7,naznačen time,što se račvaste ili u normalnom nizu alifatične grupe sa više od 24 atoma ugljenika vezuju za matricu.

9. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 8,naznačen time,što je rastvor albumina duboko zamrznut nakon što je napunjen u konačne kontejnere.

10. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 9,naznačen time,što se bilo koja aktivnost prekalikrein aktivatora (PKA) koja može biti prisutna pre ili posle koraka (a), (b) ili (c) uklanja na po sebi poznati način.

11. Postupak prema zahtevu 10,naznačen time,što se navedeni rastvor albumina a) dovodi u kontakt sa aktivnim biljnim ugljem, praćeno uklanjanjem aktivnog prirodnog uglja iz rastvora albumina; ili b) podvrgava jon-izmenjivačkoj hromatografiji; da se ukloni navedena aktivnost prekalikrein aktivatora koja može biti prisutna.

12. Postupak prema zahtevu 11,naznačen time,što se korak a) obavlja pri koncentraciji albumina od 1 do 25 mas.%.

13. Postupak prema zahtevu 12,naznačen time,što je navedena koncentracija albumina od 5 do 10 mas.%.

14. Postupak prema zahtevu 11,naznačen time,što se korak b) obavlja pri koncentraciji albumina od 5 do 10 mas.%.

15. Postupak prema bilo kom od zahteva 11 ili 14,naznačen time,što je navedeni jon-izmenjivač anjon izmenjivač, i rastvor albumina se tretira puferom sa natrijumacetatom u rasponu od 100 do 150 mmol/L, i pH je u rasponu od 5,0 do 6,0.

16. Postupak prema zahtevu 15,naznačen time,što je pH < 5,5.

17. Postupak prema bilo kom od zahteva 11 ili 14,naznačen time,što je navedeni jon-izmenjivač katjon izmenjivač, i rastvor albumina se tretira puferom sa natrijumacetatom u rasponu od 20 do 30 mmol/L, i pH vrednost je u rasponu od 4,8 do 6,0.

18. Postupak prema zahtevu 17,naznačen time,što je pH u rasponu od 4,8 do 5,2.