RS56207B1 - Modulatori enzima koji modifikuju metil, njihove kompozicije i upotreba - Google Patents

Modulatori enzima koji modifikuju metil, njihove kompozicije i upotreba

Info

Publication number
RS56207B1
RS56207B1 RS20170680A RSP20170680A RS56207B1 RS 56207 B1 RS56207 B1 RS 56207B1 RS 20170680 A RS20170680 A RS 20170680A RS P20170680 A RSP20170680 A RS P20170680A RS 56207 B1 RS56207 B1 RS 56207B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
methyl
compound
mmol
compounds
piperidin
Prior art date
Application number
RS20170680A
Other languages
English (en)
Inventor
Brian K Albrecht
James Edmund Audia
Andrew S Cook
Les A Dakin
Martin Duplessis
Victor S Gehling
Jean-Christophe Harmange
Christopher G Nasveschuk
Rishi G Vaswani
Original Assignee
Constellation Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=50239937&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS56207(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from PCT/US2013/025639 external-priority patent/WO2013120104A2/en
Application filed by Constellation Pharmaceuticals Inc filed Critical Constellation Pharmaceuticals Inc
Publication of RS56207B1 publication Critical patent/RS56207B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

Opis
[0001] Ova prijava ima prioritet međunarodne prijave br. PCT/US2013/025639, podnete 11. februara, 2013. Međunarodna prijava br. PCT/US2013/025639 ima prioritet SAD privremene prijave serijski br. 61/597,695, podnete 10. februara, 2012, i 61/667,821, podnete 03. jula, 2012.
OSNOVA PRONALASKA
[0002] Eukariotski hromatin je sastavljen od makromolekulskih kompleksa nazvanih nukleozomi. Nukleozom ima 147 baznih parova DNK omotanih oko proteinskog oktamera sa dve podjedinice svakog od histonskih proteina H2A, H2B, H3, i H4. Histonski proteini su podvrgnuti post-translacionim modifikacijama koje zauzvrat utiču na strukturu i gensku ekspresiju hromatina. Jedan tip post-translacione modifikacije koji se nalazi kod histona je metilacija ostataka lizina i arginina. Metilacija histona ima kritičnu ulogu u regulaciji genske ekspresije kod eukariota. Metilacija utiče na strukturu hromatina i povezana je i sa aktivacijom i sa suzbijanjem transkripcije (Zhang and Reinberg, Genes Dev. 15:2343-2360, 2001). Enzimi koji katalizuju vezivanje i uklanjanje metil grupa sa histona uključeni su u utišavanje gena, embrionalno razviće, proliferaciju ćelija, i druge procese. WO 2011/140324 A1 opisuje indole koji su korisni za lečenje kancera. WO 2012/118812 A2 odnosi se na 6,5 – fuzionisana biciklična heteroaril jedinjenja kao i na farmaceutske kompozicije koje sadrže ova jedinjenja i postupke za lečenje kancera primenom ovih jedinjenja i farmaceutskih kompozicija na subjekte kojima je to potrebno. US 2012/264734 A1 odnosi se na aril- ili heteroaril-supstituisana benzenova jedinjenja kao i na farmaceutske kompozicije koje sadrže ova jedinjenja i postupke za lečenje kancera primenom ovih jedinjenja i farmaceutskih kompozicija na subjekte kojima je to potrebno.
[0003] Predmetni opis obuhvata prepoznavanje da su enzimi koji modifikuju metil atraktivno ciljno mesto za modulaciju, uzimajući u obzir njihovu ulogu u regulaciji različitih bioloških procesa. Sada je pronađeno da su jedinjenja ovog pronalaska, i njihove farmaceutski prihvatljive kompozicije, efikasni kao sredstva koja stimulišu aktivnost enzima koji modifikuju metil histona, uključujući histonske metilaze i histonske demetilaze. Takva jedinjenja imaju opštu formulu II:
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je svaka promenljiva kao što je ovde definisana.
[0004] Jedinjenja predmetnog pronalaska, i njihove farmaceutski prihvatljive kompozicije, su korisne za lečenje različitih bolesti, poremećaja ili stanja, povezanih sa enzimom koji modifikuje metil. Takve bolesti, poremećaji, ili stanja uključuju one opisane ovde.
[0005] Jedinjenja obezbeđena predmetnim pronalaskom su takođe korisna za proučavanje enzima koji modifikuju metil u biološkim i patološkim fenomenima; proučavanju intracelularnih puteva prenosa signala posredovanih enzimima koji modifikuju metil i komparativnoj evaluaciji novih modulatora enzima koji modifikuju metil.
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0006] Slika 1. Primeri jedinjenja Formule II.
DETALJAN OPIS ODREĐENIH PRIMERA IZVOĐENJA
1. Opšti opis jedinjenja pronalaska
[0007] U određenim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje Formule II:
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde:
A je CH ili N;
R<1a>je izabran od -C1-C2 alkila i -O-(C1-C2 alkila), gde je R<1a>izborno supstituisan sa jednim ili više fluoro;
R<4a>je izabran od 1-halo(C1-C3)alkil-piperidin-4-ila, C3-C6cikloalkila izborno supstituisanog sa jednim ili više fluoro, i tetrahidropiranila; i
R<13>je izabran od vodonika, halo, fenil, piridinila i -O-(C1-C4 alkila).
2. Jedinjenja i definicije
[0008] Definicije specifičnih funkcionalnih grupa i hemijskih termina detaljnije su opisani u nastavku. Za svrhe predmetnog pronalaska, hemijski elementi su identifikovani u skladu sa Periodnim sistemom elemenata, CAS verzija, Handbook of Chemistry and Physics, 75th Ed., unutrašnja korica, i specifične funkcionalne grupe su opšte definisane kao što je ovde opisano. Dodatno, opšti principi organske hemije, kao i specifični funkcionalni delovi i reaktivnosti, opisani su u Organic Chemistry, Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito, 1999; Smith and March March’s Advanced Organic Chemistry, 5th Edition, John Wiley & Sons, Inc., New York, 2001; Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, Inc., New York, 1989; Carruthers, Some Modern Methods of Organic Synthesis, 3rd Edition, Cambridge University Press, Cambridge, 1987; celokupan sadržaj svake od njih je ovde uključen na osnovu reference.
[0009] Ukoliko nije drugačije naznačeno, namera je da ovde prikazane strukture takođe uključuju sve izomerne (npr., enantiomerne, dijastereomerne, i geometrijske (ili konformacione)) oblike strukture; na primer, R i S konfiguracije za svaki asimetrični centar, Z i E izomere dvogube veze, i Z i E konformacione izomere. Stoga, pojedinačni sterohemijski izomeri kao i enantiomerne, dijasteromerne, i geometrijske (ili konformacione) smeše predmetnih jedinjenja su unutar obima pronalaska. Ukoliko nije drugačije naznačeno, svi tautomerni oblici jedinjenja pronalaska su unutar obima pronalaska. Dodatno, ukoliko nije drugačije nazančeno, namera je da ovde prikazane strukture takođe uključuju jedinjenja koja se razlikuju samo u prisustvu jednog ili više izotopski obogaćenih atoma. Na primer, jedinjenja koja imaju predmetne strukture uključujući zamenu vodonika sa deuterijumom ili tricijumom, ili zamenu ugljenika sa<13>C- ili<14>C-obogaćenim ugljenikom su unutar obima predmetnog pronalaska. Takva jedinjenja su korisna, na primer, kao analitički alati, kao probe u biloškim testovima, ili kao terapeutska sredstva u skladu sa predmetnim pronalaskom.
[0010] Tamo gde je određeni enantiomer poželjan, on može, u nekim primerima izvođenja biti obezbeđen značajno bez odgovarajućeg enantiomera, i takođe može biti označen kao "optički obogaćen." "Optički obogaćen," kao što je ovde korišćen, označava da je jedinjenje napravljeno od značajno veće proporcije jednog enantiomera. U određenim primerima izvođenja jedinjenje je napravljeno od najmanje oko 90 težinskih % poželjnog enantiomera. U drugim primerima izvođenja jedinjenje je napravljeno od najmanje oko 95%, 98% ili 99 težinskih % poželjnog enantiomera. Poželjni enantiomeri mogu biti izolovani iz racemskih smeša pomoću bilo kog postupka poznatog stručnjacima iz date oblasti tehnike, uključujući hiralnu tečnu hromatografiju pod visokim pritiskom (HPLC) i formiranje i kristalizaciju hiralnih soli ili su pripremljeni pomoću asimetričnih sinteza. Videti, na primer, Jacques et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, New York, 1981); Wilen, et al., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, E.L. Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); Wilen, S.H. Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972).
[0011] Talasasta veza ) na hiralnom centru u hemijskoj strukturi je korišćena za označavanje jedinjenja prema pronalasku koja su optički čista, ali čija optička rotacija nije određena. Prava veza na hiralnom centru ukazuje na racemsku smešu iako, kao što je naznačeno u prethodnom tekstu, pronalazak takođe obuhvata sve moguće izomerne oblike racemata.
[0012] Termini "halo" i "halogen" kao što su ovde korišćeni označavaju atom izabran od fluora (fluoro, -F), hlora (hloro, -Cl), broma (bromo, -Br), i joda (jodo, -I).
[0013] Termin "alkilen" označava bivalentnu alkil grupu. "Alkilen lanac" je polimetilen grupa, tj.,-(CH2)n-, gde je n pozitivan ceo broj, poželjno od 1 do 6, od 1 do 4, od 1 do 3, od 1 do 2, ili od 2 do 3. Supstituisani alkilen lanac je polimetlen grupa u kojoj su jedan ili više metilen vodonikovih atoma zamenjeni supstituentom. Pogodni supstituenti obuhvataju one opisane u daljem tekstu za supstituisanu alifatičnu grupu.
[0014] Termin "alkil," kao što je ovde korišćen, označava monovalentni zasićeni, sa pravim ili granatim lancem ugljovodonični radikal poreklom od alifatičnog dela koji sadrži između jednog i šest atoma ugljenika uklanjanjem jednog vodonikovog atoma. U nekim primerima izvođenja, alkil sadrži 1-5 atoma ugljenika. U drugom primeru izvođenja, alkil sadrži 1-4 atoma ugljenika. U drugim primerima izvođenja, alkil sadrži 1-3 atoma ugljenika. U sledećem primeru izvođenja, alkil sadrži 1-2 ugljenika. Primeri alkil radikala obuhvataju, ali bez ograničenja na, metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izo-butil, sek-butil, sek-pentil, izopentil, terc-butil, n-pentil, neopentil, n-heksil, sek-heksil, i slično.
[0015] Kao što su ovde opisana, jedinjenja prema pronalasku mogu da sadrže "izborno supstituisane" delove. Uopšteno, termin "supstituisan", bilo da njemu prethodi termin "izborno" ili ne, označava da su jedan ili više vodonika označenog dela zamenjeni sa pogodnim supstituentom. Osim ukoliko nije drugačije naznačeno, "izborno supstituisana" grupa može imati pogodan supstituent na svakom položaju grupe koji se može supstituisati, i kada više od jednog položaja u bilo kojoj datoj strukturi može biti supstituisano sa više od jednog supstituenta izabranog iz naznačene grupe, supstituent može biti isti ili različit na svakom položaju. Kombinacije supstituenata predviđene u ovom pronalasku su poželjno one koje rezultiraju u formiranju stabilnih ili hemijski izvodljivih jedinjenja. Termin "stabilan", kao što je ovde korišćen, označava jedinjenja koja nisu značajno promenjena kada su podvrgnuta uslovima koji omogućavaju njihovu proizvodnju, detekciju i u određenim primerima izvođenja, njihovu izolaciju, prečišćavanje i upotrebu za jednu ili više namena koje su ovde navedene.
[0016] Pogodni monovalentni supstituenti na atomu ugljenika koji se može supstituisati grupe "koja se izborno može supstituisati" su nezavisno halogen; -(CH2)0-4R°; -(CH2)0-4OR°; -O-(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4CH(OR°)2; -(CH2)0-4SR°; -(CH2)0-4Ph, koji može biti supstituisan sa R°; -(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph koji može biti supstituisan sa R°; -CH=CHPh, koji može biti supstituisan sa R°; -NO2; -CN;-N3; -(CH2)0-4N(R°)2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)R’; -N(R°)C(S)R°; -(CH2)0-4N(R°)C(O)NR°2; -N(R °)C(S)NR°2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)OR°; -N(R°)N(R°)C(O)R°; -N(R°)N(R°)C(O)NR°2; -N(R°) N(R°)C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)R°; -C(S)R°; -(CH2)0-
4C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)SR°; -(CH2)0-4C(O)OSiR°3; -(CH2)0-4OC(O)R°; -OC(O)(CH2)0-
4SR-; -SC(S)SR°; -(CH2)0-4SC(O)R°; -(CH2)0-4C(O)NR°2; -C(S)NR°2; -C(S)SR°; -SC(S)SR°; -(CH2)0-4OC(O)NR°2; -C(O)N(OR°) R°; -C(O)C(O)R°; -C(O)CH2C(O)R°; -C(NOR°)R°; -(CH2)0-4SSR°; -(CH2)0-4S(O)2R°; -(CH2)0-4S(O)2OR°; -(CH2)0-4OS(O)2R°; -S(O)2NR°2; -(CH2)0-4S(O)R°; -N(R°)S(O)2NR°2; -N(R°)S(O)2R°; -N(OR°)R°; -C(NH)NR°2; -P(O)2R°; -P(O)R°2; -OP(O)R°2; -OP(O)(OR°)2; -SiR°3; -(C1-4 linearni ili granati alkilen)O-N(R°)2; ili -(C1-4 linearni ili granati alkilen)C(O)O-N(R°)2, gde svaki R° može biti supstituisan kao što je definisano u daljem tekstu i nezavisno je vodonik, C1-6alifatik, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, ili 5-6-člani zasićeni, delimično nezasićeni, ili aril prsten koji ima 0-4 heteroatoma nezavisnoizabranih od azota, kiseonika, ili sumpora, ili, uprkos definiciji u prethodnom tekstu, dva nezavisna R°, uzeti zajedno sa njihovim intermedijernim atomom(atomima), formiraju 3-12-člani zasićeni, delimično nezasićeni, ili aril mono- ili biciklični prsten koji ima 0-4 heteroatoma nezavisno izabrana od azota, kiseonika ili sumpora, koji mogu biti supstituisani kao što je definisano u daljem tekstu.
[0017] Pogodni supstituenti na azotu koji se može supstituisati, grupe "koja se izborno može supstituisati" obuhvataju -R<†>, -NR<†>2, -C(O)R<†>, -C(O)OR<†>, -C(O)C(O)R<†>, -C(O)CH2C(O)R<†>, -S(O)2R<†>, -S(O)2N R<†>2, -C(S)NR<†>2, -C(NH)NR<†>2, ili -N(R<†>)S(O)2R<†>; gde je svaki R<†>nezavisno vodonik, C1-6 alifatik koji može biti supstituisan kao što je definisano u daljem tekstu, nesupstituisan -OPh, ili nesupstituisan 5-6-člani zasićeni, delimično nezasićeni, ili aril prsten koji ima 0-4 heteroatoma nezavisno izabranih od azota, kiseonika ili sumpora, ili, uprkos definiciji u prethodnom tekstu, dva nezavisna slučaja R†, uzeta zajedno sa njihovim intermedijernim atomom(atomima) formiraju nesupstituisani 3-12-člani zasićeni, delimično nezasićeni ili aril mono- ili biciklični prsten koji ima 0-4 heteroatoma nezavisno izabranih od azota, kiseonika ili sumpora.
[0018] Pogodni supstituenti na alifatičnoj grupi od R† su nezavisno halogen, -R<•>, -(haloR<•>), -OH, -OR<•>, -O(haloR<•>), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR<•>, -NH2, -NHR<•>,-NR<•>2, ili -NO2gde je svaki R<•>nesupstituisan ili gde mu prethodi "halo" je supstituisan samo sa jednim ili više halogena, i nezavisno je C1-4alifatik, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, ili 5-6-člani zasićeni, delimično nezasićeni, ili aril prsten koji ima 0-4 heteroatoma nezavisno izabrana od azota, kiseonika ili sumpora.
[0019] Kao što je ovde korišćen, termin "inhibitor" je definisan kao jedinjenje koje se vezuje za i/ili inhibira ciljni enzim koji koristi S-adenozilmetionin (SAM) sa merljivim afinitetom. U određenim primerima izvođenja, inhibitor ima IC50 i/ili konstantnu vezivanja od manje oko 50 µM, manje od oko 1 µM, manje od oko 500 nM, manje od oko 100 nM, ili manje od oko 10 nM.
[0020] Termini "merljivi afinitet" i "merljivo inhibiraju," kao što su ovde korišćeni, označavaju merljivu promenu u aktivnosti od najmanje jednog enzima koji koristi SAM između uzorka koji sadrži obezbeđeno jedinjenje, ili njegove kompozicije, i najmanje jedan SAM zavisni enzim, i ekvivalentog uzorka koji sadrži najmanje jedan SAM zavisni enzim, u odsustvu navedenog jedinjenja ili njegove kompozicije.
3. Opis primera jedinjenja
[0021] U nekim primerima izvođenja formule II, R<1a>je izabran od -OCH3, -CH3, -OCHF2, i -CH2CH3.
[0022] U nekim primerima izvođenja formule II, R<4a>je izabran od 4,4-difluorocikloheksila, ciklopropila, tetrahidrodopiran-4-ila, 1-(2-fluoroetil)-piperidin-4-ila, 1-(2,2-difluoroetil)-piperidin-4-ila, 1-(2,2,2-trifluoroetil)-piperidin-4-ila.
[0023] U nekim primerima izvođenja formule II, R<13>je izabran od vodonika, hloro, fluoro, -OCH(CH3)2, fenila i piridin-2-ila.
[0024] Primeri jedinjenja formule II su navedeni na Slici 1. U nekim slučajevima dva (ili više) jedinjenja sa Slike 1 koja imaju jednu (ili više) talasastih veza imaće tačno istu strukturu. Kako talasasta veza predstavlja hiralni centar neodređene optičke rotacije, takva jedinjenja će biti shvaćena kao odvojeni i posebni optički izomeri jedan drugog. Slika 1 je označena da naznačeni one grupe od dva ili više jedinjenja koja imaju istu prikazanu strukturu, ili su različite stereohemije.
4. Upotrebe, formulacija i primena
Farmaceutski prihvatljive kompozicije
[0025] Prema sledećem primeru izvođenja, pronalazak daje kompoziciju koja sadrži jedinjenje ovog pronalaska ili njegov farmaceutski prihvatljiv derivat i farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans ili vehikulum. Količina jedinjenja u kompozicijama ovog pronalaska je takva da je efikasna za merljivo moduliranje enzima za modifikaciju histon metila, ili njegovog mutanta, u biološkom uzorku ili u pacijentu. U određenim primerima izvođenja, količina jedinjenja u kompozicijama ovog pronalaska je takva da je efikasna za merljivo moduliranje enzima za modifikaciju histon metila, ili njegovog mutanta, u biološkom uzorku ili u pacijentu.
[0026] U određenim primerima izvođenja, kompozicija ovog pronalaska je formulisana za primenu na pacijenta kod koga postoji potreba za takvom kompozicijom. U nekim primerima izvođenja, kompozicija ovog pronalaska je formulisana za oralnu primenu na pacijenta.
[0027] Termin "pacijent," kao što je ovde korišćen, označava životinju, poželjno sisara, i najpoželjnije čoveka.
[0028] Termin "farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans ili vehikulum" označava netoksični nosač, adjuvans ili vehikulum koji ne uništava farmakološku aktivnost jedinjenja sa kojim je formulisan. Farmaceutski prihvatljivi nosači, adjuvansi ili vehikulumi koji mogu biti korišćeni u kompozicijama ovog pronalaska obuhvataju, ali bez ograničenja na, jonske izmenjivače, aluminu, aluminijum stearat, lecitin, proteine seruma, kao što su humani serum albumin, puferske supstance kao što su fosfati, glicin, sorbinska kiselina, kalijum sorbat, delimične gliceridne smeše zasićenih biljnih masnih kiselina, vodu, soli ili elektrolite, kao što je protamin sulfat, dinatrijum hidrogen fosfat, kalijum hidrogen fosfat, natrijum hlorid, soli cinka, koloidni silicijum dioksid, magnezijum trisilikat, polivinil pirolidon, supstance na bazi celuloze, polietilen glikol, natrijum karboksimetilcelulozu, poliakrilate, voskove, polietilenpolioksipropilen blok polimere, polietilen glikol i lanolin.
[0029] "Farmaceutski prihvatljiv derivat" označava bilo koju netoksičnu so, estar, so estra ili drugi derivat jedinjenja ovog pronalaska koji, posle primene na primaoca, je sposoban da obezbedi, bilo direktno ili indirektno, jedinjenje prema ovom pronalasku ili inhibitorno aktivni metabolit ili njegov ostatak.
[0030] Kompozicije prema predmetnom pronalasku mogu biti primenjene oralno, parenteralno, pomoću spreja za inhalaciju, topikalno, rektalno, nazalno, bukalno, vaginalno ili preko implantiranog rezervoara. Termin "parenteralni" kao što je ovde korišćen obuhvata subkutanu, intravensku, intramuskularnu, intra-artikularnu, intra-sinovijalnu, intrasternalnu, intratekalnu, intrahepatičku, intralezionu i intrakranijalnu injekciju ili tehnike infuzije. Poželjno, kompozicije su primenjene oralno, intraperitonealno ili intravenski. Sterilni injektabilni oblici kompozicija ovog pronalaska mogu biti vodena ili uljana suspenzija. Ove suspenzije mogu biti formulisane prema tehnikama poznatim u stanju tehnike upotrebom pogodnih dispergujućih ili sredstava za vlaženje i suspendujućih sredstava. Sterilni injektabilni preparat takođe može biti sterilni injektabilni rastvor ili suspenzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer kao rastvor u 1,3-butandiolu. Među prihvatljivim vehikulumima i rastvaračima koji mogu biti korišćeni su voda, Ringerov rastvor i izotoničan rastvor natrijum hlorida. Pored toga, sterilna, masna ulja su konvencionalno korišćena kao rastvarač ili suspendujući medijum.
[0031] Za ovu svrhu, bilo koje blago masno ulje može biti korišćeno uključujući sintetičke mono- ili di-gliceride. Masne kiseline, kao što je oleinska kiselina i njeni gliceridni derivati su korisni u pripremi injektabilnih preparata, kao što su prirodna farmaceutski prihvatljiva ulja, kao što je maslinovo uilje ili ricinusovo ulje, naročito u njihovim polioksietilovanim verzijama. Ovi uljani rastvori ili suspenzije mogu takođe da sadrže dugolančani alkoholni razblaživač ili disperzant, kao što je karboksimetil celuloza ili slična dispergujuća sredstva koja su uobičajeno korišćena u formulaciji farmaceutski prihvatljivih oblika doze uključujući emulzije i suspenzije. Drugi uobičajeno korišćeni surfaktanti, kao što su Tweens, Spans i druga emulgujuća sredstva ili pojačivači biodostupnusoti koji se uobičajeno koriste u proizvodnji farmaceutski prihvatljivih čvrstih, tečnih ili drugih oblika doze takođe mogu biti korišćeni za svrhe formulacije.
[0032] Farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska mogu biti oralno primenjene u bilo kom oralno prihvatljivom obliku doze uključujući, ali bez ograničenja na, kapsule, tablete, vodene suspenzije ili rastvore. U slučaju tableta za oralnu upotrebu, nosači uobičajeno korišćeni obuhvataju laktozu i kukruzni skrob. Tipično se dodaju lubrikanti, kao što je magnezijum stearat. Za oralnu primenu u obliku kapsule, korisni razblaživači obuhvataju laktozu i osušeni kukuruzni skrob. Kada su vodene suspenzije potrebne za oralnu primenu, aktivni sastojak je kombinovan sa emulgujućih i suspendujućim sredstvima. Ako je poželjno, takođe mogu biti dodati određeni zaslađivači, arome ili boje.
[0033] Alternativno, farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska mogu biti primenjene u obliku supozitorija za rektalnu primenu. One mogu biti pripremljene mešanjem sredstva sa pogodnim neiritirajućim ekscipijensom u supstanci koja je čvrsta na sobnoj temperaturi, a tečna na rektalnoj temperaturi i prema tome će se topiti u rektumu tako da oslobađa lek. Takvi materijali obuhvataju kakao puter, pčelinji vosak i polietilen glikole.
[0034] Farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska takođe mogu biti primenjene topikalno, naročito kada cilj tretmana obuhvata površine ili organe koji su lako dostupni topikalnom primenom, uključujući bolesti oka, kože ili donjeg dela intestinalnog trakta. Pogodne topikalne formulacije su lako pripremljene za svaku od ovih površina ili organa.
[0035] Topikalna primena na donji deo intestinalnog trakta može biti postignuta u formulaciji rektalne supozitorije (videti u prethodnom tekstu) ili u pogodnoj formulaciji klistira. Topikalni-transdermalni flasteri takođe mogu biti korišćeni.
[0036] Za topikalne primene, obezbeđene farmaceutski prihvatljive kompozicije mogu biti formulisane u pogodnoj masti koja sadrži aktivnu komponentu suspendovanu ili rastvorenu u jednom ili više nosača. Nosači za topikalnu primenu jedinjenja prema ovom pronalasku obuhvataju, ali bez ograničenja na, mineralno ulje, tečni vazelin, beli vazelin, propilen glikol, polioksietilen, jedinjenje polioksipropilen, emulgujući vosak i vodu. Alternativno, obezbeđene farmaceutski prihvatljive kompozicije mogu biti formulisane u pogodnom losionu ili kremi koja sadrži aktivne komponente suspendovane ili rastvorene u jedno ili više farmaceutski prihvatljivih nosača. Pogodni nosači obuhvataju, ali bez ograničenja na, mineralno ulje, sorbitan monostearat, polisorbat 60, cetil estar vosak, cetearil alkohol, 2-oktildodekanol, benzil alkohol i vodu.
[0037] Za oftalmičku primenu, obezbeđene farmaceutski prihvatljive kompozicije mogu biti formulisane kao mikronizovane suspenzije u izotoničnom, pH podešenom sterilnom fiziološkom rastvoru, ili, poželjno, kao rastvori u izotoničnom, pH podešenom sterilnom fiziološkom rastvoru, bilo sa ili bez konzervansa kao što je benzilalkonijum hlorid.
Alternativno, za oftalmičke upotrebe, farmaceutski prihvatljive kompozicije mogu biti formulisane u masti kao što je vazelin.
[0038] Farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska takođe mogu biti primenjene pomoću nazalnog aerosola ili inhalacije. Takve kompozicije su pripremljene prema tehnikama koje su dobro poznate u stanju tehnike farmaceutskih formulacija i mogu biti pripremljene kao rastvori u fiziloškom rastvoru, upotrebom benzil alkohola ili drugih pogodnih konzervanasa, sredstava za stimulisanje apsorpcije za pojačanje biodostupnosti, fluorokarbona i/ili drugih konvencionalnih solubilizujućih ili dispergujućih sredstava.
[0039] Najpoželjnije, farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska su formulisane za oralnu primenu. Takve formulacije mogu biti primenjivane sa ili bez hrane. U nekim primerima izvođenja, farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska su primenjene bez hrane. U drugim primerima izvođenja, farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska su primenjene sa hranom.
[0040] Količina jedinjenja prema predmetnom pronalasku koja se može kombinovati sa materijalima nosačima za proizvodnju kompozicije u obliku jedne doze variraće u zavisnosti od tretiranog domaćina i određenog načina primene. Poželjno, obezbeđene kompozicije bi trebalo da su formulisane tako da doza od između 0.01 - 100 mg/kg telesne težine/dan inhibitora može primenjivati na pacijenta koji prima ove kompozicije.
[0041] Takođe treba razumeti da će specifična doza i režim lečenja za svakog određenog pacijenta zavisiti od različitih faktora, uključujući aktivnost specifičnog jedinjenja koje je korišćeno, starost, telesnu težinu, opšte zdravstveno stanje, pol, ishranu, vreme primene, stopu izlučivanja, kombinaciju lekova i procenu nadležnog lekara i težinu određene bolesti koja se leči. Količina jedinjenja prema predmetnom pronalasku u kompoziciji će takođe zavisiti od određenog jedinjenja u kompoziciji.
Upotrebe jedinjenja i farmaceutski prihvatljive kompozicije
[0042] Jedinjenja i kompozicije koji su ovde opisani su generalno korisni za modulaciju aktivnosti jednog ili više enzima uključenih u epigenetičku regulaciju.
[0043] Epigenetika je studija naslednih promena u ekspresiji gena uzrokovana mehanizmima osim promena u osnovnoj DNK sekvenci. Molekularni mehanizmi koji imaju ulogu u epigenetičkoj regulaciji obuhvataju metilaciju DNK i modifikacije hromatina/histona. Metilacija histona, naročito, je kritična u mnogim epigenetičkim fenomenima.
[0044] Hromatin, organizovani sklop jedarne DNK i histonskih proteina, je osnova za veći broj vitalnih jedarnih procesa uključujući regulaciju transkripcije, replikacije, popravke oštećenja DNK i napredovanje kroz ćelijski ciklus. Određeni broj faktora, kao što su enzimi koji modifikuju hromatin, identifikovani su da imaju važnu ulogu u održavanju dinamičke ravnoteže hromatina (Margueron, et al. (2005) Curr. Opin. Genet. Dev. 15:163-176).
[0045] Histoni su glavne proteinske komponente hromatina. Oni deluju kao kalemi oko koji se namotava DNK i oni imaju ulogu u regulaciji gena. Ukupno postoji šest klasa histona (H1, H2A, H2B, H3, H4 i H5) organizovanih u dve superklase: histoni jezgra (H2A, H2B, H3 i H4) i linker histoni (H1 i H5). Osnovna jedinica hromatina je nukleozom, koja se sastoji od oko 147 baznih parova DNK omotanih oko histonskog oktamera, koja se sastoji od dve kopije svaka od histona jezgra H2A, H2B, H3 i H4 (Luger, et al. (1997) Nature 389:251-260).
[0046] Histoni, naročito ostaci amino terminusa histona H3 i H4 i amino i karboksil terminusi histona H2A, H2B i H1, su podložni različitim post-translacionim modifikacijama uključujući acetilaciju, metilaciju, fosforilaciju, ribozilaciju, sumoilaciju, ubikvitinaciju, citrulinaciju, deiminaciju i biotinilaciju. Jezgro histona H2A i H3 takođe može biti modifikovano. Modifikacije histona su povezane sa različitim biološkim procesima kao što je regulacija gena, popravka DNK i kondenzacija hromozoma.
[0047] Predmetno otkriće daje jedinjenja i kompozicije za modulaciju aktivnosti enzima koji modifikuju metil histona. Enzimi koji modifikuju metil histona su ključni regulatori ćelijskih i razvojnih procesa. Enzimi koji modifikuju metil histona mogu biti okarakterisani kao transferaze metil histona ili histon demetilaze. Enzimi histon demetilaze imaju module koji posreduju u vezivanju za metilovane ostatke. Na primer, višestruke demetilaze sadrže Tudor domen (npr., JMJD2C/GASC1) ili PHD domen (npr., JARID1C/SMCX, PHF8).
[0048] Okarakterisane su lizinske specifičnosti mnogih histon metiltransferaza. Na primer SET7/9, SMYD3 i MLL1-5 su specifični za H3K4. SUV39H1, DIM-5 i G9a su specifični za H3K9. SET8 je specifičan za H4K20.
[0049] DOL1 je primer histon metilaze koja ne sadrži SET domen. DOLT1 metiluje H3 na lizinu 79.
[0050] Kao što je pokazano da histon metilaze regulišu transkripcionu aktivnost, hromatinska struktura i utišavanje gena, takođe su otkrivene demetilaze koje utiču na ekspresiju gena. LSD1 je bila prva histon lizin demetilaza koja je okarakterisana. Ovaj enzim ispoljava homologiju sa FAD-zavisnim amin oksidazama i deluje kao transkripcioni korepresor neuronskih gena (Shi et al., Cell 119:941-953, 2004). Otkrivene su dodatne demetilaze koje definišu posebne familije demetilaza, uključujući JHDM1 (ili KDM2), JHDM2 (ili KDM3), JMJD2 (ili KDM4), JARID (ili KDM5), JMJD3 (ili KDM6) i JMJD6 familije (Lan et al., Curr. Opin. Cell Biol.20(3):316-325, 2008).
[0051] Demetilaze deluju na specifične lizinske ostatke unutar supstratnih sekvenci i prave razliku između stepena metilacije prisutnog na datom ostatku. Na primer, LSD1 uklanja mono- ili dimetil- grupe iz H3K4. Članovi JARID1A-D familije uklanjaju trimetil grupe iz H3K4. UTX i JMJD3 demetiluju H3K27, suzbijaju efekte aktivnosti EZH2 metilaze. Okarakterisane su specifičnosti supstrata drugih demetilaza (videti Shi, Nat. Rev. 8:829-833, 2007).
[0052] Jedna klasa histon metilaza je okarakterisana prisustvom SET domena, koja je nazvana po proteinima koji dele domen, Su(var)3-9, pojačivač zeste [E(Z)], i tritoraks. SET domen obuhvata oko 130 aminokiselina. Familije metilaze koje sadrže SET domen obuhvataju SUV39H1, SET1, SET2, EZH2, RIZ1, SMYD3, SUV4-20H1, SET7/9, i PR-SET7/SET8 familije (prikaz u Dillon et al., Genome Biol. 6:227, 2005). Članovi familije tipično obuhvataju slične motive sekvenci u blizini i unutar SET domena. Humani genom kodira preko 50 metilaza proteina histona koje sadrže SET domen, od kojih bilo koja može biti korišćena u analizi koja je ovde opisana.
[0053] EZH2 je primer humane metilaze koja sadrži SET-domen. EZH2 se vezuje sa EED (embrionalni razvoj ektoderma) i SUZ12 (supresor zeste 12 homologa) tako da se formira kompleks poznat kao PRC2 (Polycomb Group Repressive Complex 2) koji ima sposobnost da tri-metiluje histon H3 na lizinu 27 (Cao and Zhang, Mol. Cell 15:57-67, 2004). PRC2 kompleksi takođe mogu da obuhvataju RBAP46 i RBAP48 podjedinice.
[0054] Onkogene aktivnosti EZH2 su pokazane u određenom broju studija. U eksperimentima ćelijske linije, prekomerna ekspresija EZH2 indukuje ćelijsku invaziju, rast u mekom agaru i pokretljivost dok „knockdown“ EZH2 inhibira ćelijsku proliferaciju i ćelijsku invaziju (Kleer et al., 2003, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 100:11606-11611; Varambally et al., (2002), "The polycomb group protein EZH2 is involved in progression of prostate cancer," Nature 419, 624-629). Pokazano je da EZH2 suzbija ekspresiju nekliko tumorskih supresora, uključujući E-kadherin, DAB2IP i RUNX3 pored ostalih. U modelima ksenografta, „knockdown“ EZH2 inhibira rast tumora i metastazu. Nedavno, pokazano je da nishodna regulacija EZH2 u mišjim modelima blokira metastazu kancera prostate (Min et al., "An oncogene-tumor suppressor cascade drives metastatic prostate cancer by coordinately activating Ras and nuclear factorkappaB," Nat Med. 2010 Mar; 16(3):286-94). Prekomerna ekspresija EZH2 je povezana sa agresivnošću određenih kancera kao što je kancer dojke (Kleer et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 100:11606-11611, 2003). Nedavne studije takođe sugerišu da onkogeni fuzioni gen TMPRSS2-ERG specifičan za kancer prostate indukuje represivne epigenetičke programe preko direktne aktivacije EZH2 (Yu et al., "An Integrated Network of Androgen Receptor, Polycomb, and TMPRSS2-ERG Gene Fusions in Prostate Cancer Progression," Cancer Cell.
2010 May 18;17(5):443-454).
[0055] U nekim primerima izvođenja, jedinjenja prema predmetnom pronalasku moduliraju aktivnost jednog ili više enzima uključenih u epigenetičku regulaciju. U nekim primerima izvođenja, jedinjenja prema predmetnom pronalasku moduliraju aktivnost enzima koji modifikuje metil histona, ili njegovog mutanta. U nekim primerima izvođenja, jedinjenja prema predmetnom pronalasku moduliraju aktivnost EZH2. U nekim primerima izvođenja, jedinjenja prema predmetnom pronalasku nishodno regulišu ili suprimiraju aktivnost EZH2. U nekim primerima izvođenja, jedinjenja prema predmetnom pronalasku su antagonisti aktivnosti EZH2.
[0056] U nekim primerima izvođenja, jedinjenja i kompozicije predmetnog pronalaska su korisni u lečenju bolesti i/ili poremećaja povezanih sa enzimom za modifikaciju metila histona. Prema tome, u nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak daje postupak za modulaciju bolesti i/ili poremećaja povezanog sa enzimom za modifikaciju metila histona. U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak daje postupak za lečenje subjekta koji pati od bolesti i/ili poremećaja povezanog sa enzimom za modifikaciju metila histona koji sadrži korak primene jedinjenja ili kompozicije formule II.
[0057] U nekim primerima izvođenja, jedinjenja i kompozicije prema predmetnom pronalasku su korisni u lečenju bolesti i/ili poremećaja povezanih sa prekomernom ekspresijom EZH2. U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak daje postupak za lečenje subjekta koji pati od bolesti i/ili poremećaja povezanog sa prekomernom ekspresijom EZH2 koji sadrži korak primene jedinjenja ili kompozicije formule II. U nekim primerima izvođenja, gore navedeni postupak dodatno sadrži preliminarni korak određivanja da li subjekat prekomerno eksprimira EZH2.
[0058] U nekim primerima izvođenja, jedinjenja i kompozicije prema predmetnom pronalasku su korisni u lečenju bolesti i/ili poremećaja povezanih sa ćelijskom proliferacijom. U nekim primerima izvođenja, jedinjenja i kompozicije prema predmetnom pronalasku su korisni u lečenju bolesti i/ili poremećaja povezanih sa pogrešnom regulacijom ćelijskog ciklusa ili popravke DNK. U nekim primerima izvođenja, jedinjenja i kompozicije prema predmetnom pronalasku su korisni u lečenju kancera. Primeri tipova kancera obuhvataju kancer dojke, kancer prostate, kancer debelog creva, karcinom renalnih ćelija, kancer glioblastoma multiforme, kancer bešike, melanom, bronhijalni kancer, limfom i kancer jetre.
[0059] Studija delecija EZH2, „missense“ i „frameshift“ mutacija sugerišu da EZH2 funkcioniše kao supresor tumora kod poremećaja krvi kao što su mijelodisplastični sindromi (MDS) i mijeloidni maligniteti (Ernst et al., Nat Genet. 2010 Aug; 42(8):722-6; Nikoloski et al., Nat Genet.2010 Aug; 42(8):665-7). Prema tome, u nekim primerima izvođenja, jedinjenja i kompozicije prema predmetnom pronalasku su korisni u lečenju bolesti i/ili poremećaja povezanih sa prisustvom mutantnog oblika EZH2. U nekim primerima izvođenja, jedinjenja i kompozicije prema predmetnom pronalasku su korisni u lečenju bolesti i/ili poremećaja povezanih sa prisustvom Y641N EZH2. U nekom primeru izvođenja, bolest ili poremećaj povezan sa prisustvom mutantnog oblika EZH2 je humani B ćelijski limfom. U nekim primerima izvođenja, bolest i/ili poremećaj povezan sa prisustvom Y641N EZH2 je folikularni limfom ili difuzni limfom krupnih B-ćelija. U nekim primerima izvođenja, jedinjenja ili kompozicije prema predmetnom pronalasku su korisni u lečenju poremećaja krvi, kao što su mijelodisplastični sindromi, leukemija, anemija i citopenija. Sneeringer et al., "Coordinated activities of wild-type plus mutant EZH2 drive tumor-associated hypertrimetilation of lysine 27 on histone H3 (H3K27) in human B-cell lymphomas," Proceedings of the National Academy of Sciences, PNAS Early Edition published ahead of print on November 15, 2010.
[0060] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak daje postupak za redukciju aktivnosti EZH2 kod subjekta koji sadrži korak primene jedinjenja ili kompozicije formule II. U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak daje postupak za smanjenje aktivnosti EZH2 divljeg tipa kod subjekta koji sadrži korak primene jedinjenja ili kompozicije formule II. U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak daje postupak za smanjenje aktivnosti mutantnog oblika EZH2 kod subjekta koji sadrži korak primene jedinjenja ili kompozicije formule II. U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak daje postupak za smanjenje aktivnosti mutantnog oblika EZH2 kod subjekta koji sadrži korak primene jedinjenja ili kompozicije formule II, pri čemu, mutantni oblik EZH2 je Y641N EZH2. U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak daje postupak za lečenje subjekta koji pati od bolesti i/ili poremećaja povezanog sa EZH2 koji sadrži korak primene jedinjenja ili kompozicije formule II. U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak daje postupak za lečenje subjekta koji pati od bolesti i/ili poremećaja povezanog sa divljim tipom EZH2 koji sadrži korak primene jedinjenja ili kompozicije formule II. U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak daje postupak za lečenje subjekta koji pati od bolesti i/ili poremećaja povezanog sa mutantnim oblikom EZH2 koji sadrži korak primene jedinjenja ili kompozicije formule II. U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak daje postupak za lečenje subjekta koji pati od bolesti i/ili poremećaja povezanog sa mutantnim oblikom EZH2 koji sadrži korak primene jedinjenja ili kompozicije formule II, pri čemu, mutantni oblik EZH2 je Y641N EZH2. U nekim primerima izvođenja, gore navedeni postupak dodatno sadrži peliminarni korak određivanja da li subjekat eksprimira mutantni oblik EZH2, kao što je Y641N EZH2. U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak daje postupak za smanjenje aktivnosti mutantnog oblika EZH2, kao što je Y641N EZH2, kod subjekta kod koga postoji potreba za tim, koji sadrži korak primene jedinjenja ili kompozicije formule II. U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak daje postupak za lečenje subjekta koji pati od bolesti i/ili poremećaja povezanog sa mutantnim oblikom EZH2 koji sadrži korak primene jedinjenja ili kompozicije formule II. U nekim primerima izvođenja, gore navedeni postupak dodatno sadrži preliminarni korak određivanja da li subjekat eksprimira mutantni oblik EZH2, kao što je Y641N EZH2. U nekim primerima izvođenja, to određivanje je napravljeno određivanjem da li subjekat ima povećane nivoe histon H3 Lys-27-specifične trimetilacije (H3K27me3), u poređenju sa subjektom za koji je poznato da eksprimira mutantni oblik EZH2.
EKVIVALENTI
[0061] Reprezentativni primeri koji slede su određeni tako da pomognu u ilustraciji pronalaska, i nije bila namera, niti bi ih trebalo tumačiti tako da ograničavaju obim pronalaska. Zaista, različite modifikacije pronalaska i mnogi njihovi dodatni primeri izvođenja, pored onih prikazanih i opisanih ovde, biće jasni stručnjaku iz date oblasti tehnike iz celog konteksta ovog dokumenta, uključujući primere koji slede i pozivanje na naučnu i patentnu literaturu koja je ovde citirana.
[0062] Biće jasno da za pripreme jedinjenja koje su ovde opisane, kada je reverzno-fazna HPLC korišćena za prečišćavanje jedinjenja, jedinjenje može da postoji kao kisela adiciona so. U nekim primerima izvođenja, jedinjenje može da postoji kao so mravlje kiseline ili mono-, di-, ili tri-trifluorosirćetne kiseline.
[0063] Dalje će biuti jasno da predmetni pronalazak razmatra pojedinačna jedinjenja koja su ovde opisana. Tamo gde su pojedinačna ilustrovana jedinjenja izolovana i/ili okarakterisana kao so, na primer, kao so trifluorosirćetne kiseline, predmetni pronalazak razmatra slobodnu bazu soli, kao i druge farmaceutski prihvatljive soli slobodne baze.
[0064] Sledeći primeri sadrže značajne dodatne informacije, ilsutraciju i vodič koji može biti prilagođen za izvođenje ovog pronalaska u njegovim različitim primerima izvođenja i njegovim ekvivalentima.
[0065] Postupci za pripremu jedinjenja koja su ilustrovana u daljem tekstu, kao i dodatnih jedinjenja/intermedijera u sintetičkim šemama mogu se naći u međunarodnoj prijavi br. PCT/US2013/025639, čiji sadržaj je ove obuhvaćen referencom.
PRIMERI
[0066] Kao što su prikazana u Primerima u daljem tekstu, u određenim ilustrativnim primerima izvođenja, jedinjenja su pripremljena prema sledećim opštim postupcima. Biće jasno da, iako sintetički postupci i Šeme prikazuju sintezu određenih jedinjenja prema predmetnom pronalasku, sledeći postupci i drugi postupci poznati stručnjaku iz date oblasti tehnike mogu biti primenjeni na sva jedinjenja i podklase i vrste svakog od ovih jedinjenja, kao što su ovde opisani.
[0067] Osim ukoliko je drugačije naznačeno, svi rastvarači, hemikalije i reagensi su dobijeni komercijalno i korišćeni bez prečišćavanja.<1>H NMR spektri su dobijeni u CDCl3, d6-DMSO, CD3OD, ili d6-aceton na 25°C na 300 MHz na OXFORD (Varian) sa hemijskim pomeranjem (δ, ppm) prikazani u odnosu na TMS kao interni standard. HPLC-MS hromatogrami i spektri su dobijeni sa Shimadzu LC-MS-2020 sistemom. Hiralna analiza i prečišćavanje su dobijeni sa Yilite P270.
[0068] Primer 1. Sinteza jedinjenja 327 i 346 i srodnih jedinjenja i intermedijera.
Jedinjenja iz naslova iz ovog Primera i druga srodna jedinjenja su pripremljena prema sledećoj opštoj šemi. Pored toga, tamo gde je naznačeno, modifikacije ove šeme su opisane za sintezu dodatnih srodnih jedinjenja prema pronalasku i njihovih intermedijera.
Korak 1: (S,E)-terc-butil 4-(((terc-butilsulfinil)imino)metil)piperidin-1-karboksilat:
[0069]
(S)-2-metilpropan-2-sulfinamid
U posudu sa okruglim dnom koja sadrži magnetnu mešalicu dodat je (S)-2-metilpropan-2-sulfinamid (20.46 g, 169 mmol), terc-butil 4-formilpiperidin-1-karboksilat (30 g, 141 mmol), DCM (300 mL) i Ti(OEt)4 (59.0 ml, 281 mmol). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 3 časa pre gašenja fiziološkim rastvorom (80 mL). Rastvor je mešan 30 minuta pre filtriranja. Filter kolač je ispran sa DCM i filtrat je postavljen u levak za odvajanje i ispran vodom. Organski sloj je sušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan in vacuo. Sirovi ostatak je očvrsnuo do jedinjenja iz naslova (29 g, 92 mmol, 65.1 % prinos) m/z 217.
[0070] Intermedijer prikazan u sledećoj tabeli je pripremljen prema opštem postupku navedenom u Koraku 1 upotrebom odgovarajućih početnih materijala i modifikacija.
Korak 2: terc-butil 4-((S)-1-((R ili S)-1,1-dimetiletilsulfinamido)etil)piperidin-1-karboksilat:
[0071]
U posudu sa okruglim dnom koja sadrži magnetnu mešalicu dodat je (S,E)-terc-butil 4-((tercbutilsulfinilimino)metil)piperidin-1-karboksilat (36.4 g, 115 mmol), DCM (400 mL) i rastvor je hlađen do 0°C u ledenom kupatilu uz mešanje. U ovaj rastvor je dodat MeMgBr (77 ml, 230 mmol) (3M u dietil etru) i reakcija je mešana 4 časa uz zagrevanje do sobne temperature. Reakcija je pažljivo ugašena preko dodavanja zasićenog vodenog rastvora NH4Cl. Čvrsta supstanca je razložena dodavanjem 1N HCl. Slojevi su odvojeni i vodena faza je ekstrahovana sa DCM. Kombinovana organska faza je sušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana in vacuo da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (29 g, >9:1 dr) koje je korišćeno bez dodatnog prečišćavanja u sledećem koraku.
[0072] Intermedijer prikazan u sledećoj tabeli je pripremljen prema opštem postupku navedenom u Koraku 2 upotrebom odgovarajućih početnih materijala i modifikacija.
Korak 3: (R ili S)- terc-butil 4-(1-aminoetil)piperidin-1-karboksilat:
[0073]
U 1 L posudu sa okruglim dnom koja sadrži magnetnu mešalicu dodat je sirovi terc-butil 4-((S)-1-((S)-1,1-dimetiletilsulfinamido)etil)piperidin-1-karboksilat (29 g) apsorbovan u MeOH (200 mL) pre dodavanja 4 N rastvora HCl u 1,4-dioksanu (24.06 ml, 96 mmol). Dobijeni rastvor je zatim mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 časa na sobnoj temperaturi. Metanol je zatim uklonjen in vacuo da bi se dobilo viskozno ulje koje je tretirano zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(~ 500 mL) i ekstrahovano sa etil acetatom (2 x 500 mL). Ova organska faza je kombinovana, sušena sa MgSO4, filtrirana i rastvarač je zatim uklonjen in vacuo dajući jedinjenje iz naslova (22 g) koje je korišćeno bez dodatnog prečišćavanja.
[0074] Intermedijer prikazan u sledećoj tabeli je pripremljen prema opštem postupku navedenom u Koraku 3 upotrebom odgovarajućih početnih materijala.
Korak 4: Metil 2-(2-bromofenil)-3-oksobutanoat:
[0075]
U posudu sa okruglim dnom postavljena je magnetna mešalica i sipan je metil 2-(2-bromofenil)acetat (25 g, 109 mmol) i THF (50 mL). Ovaj rastvor je hlađen do -78°C pre ukapavanja 1M rastvora LiHMDS u THF (218 ml, 218 mmol). Reakcija je mešana u trajanju od 30 min na -78°C pre dodavanja 1-(1H-imidazol-1-il)etanona (14.42 g, 131 mmol) rastvorneog u smeši THF:DMF (112 mL THF, 24 mL DMF). Rastvor je mešan 1 čas pre gašenja zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl (-250 mL) i razblaživanja sa EtOAc. Slojevi su odvojeni i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (~2 x 250 mL). Kombinovani organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu upotrebom eluenta etil acetata/heksana (10:1) da bi se dobio metil 2-(2-bromofenil)-3-oksobutanoat (32.5 g, 102 mmol, 93 % prinos).
[0076] Intermedijeri prikazani u sledećoj tabeli su pripremljeni prema opštem postupku navedenom u Koraku 4 upotrebom odgovarajućih početnih materijala.
Korak 5: (R ili S, E i Z)-terc-butil 4-(1-(3-(2-bromofenil)-4-metoksi-4-oksobut-2-en-2-ilamino)etil)piperidin-1-karboksilat:
[0077]
U posudu sa okruglim dnom dodat je (R ili S)-terc-butil 4-(1-aminoetil)piperidin-1-karboksilat (9.35 g, 40.9 mmol), EtOH (75 mL) i metil 2-(2-bromofenil)-3-oksobutanoat (7.40 g, 27.3 mmol) (iz Koraka 4). U ovaj rastvor je dodat AcOH (1.563 ml, 27.3 mmol) i reakcija je zagrevana preko noći na 85°C pre hlađenja do sobne temperature i koncentrovanja. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (330g, 100% heksani do 25% EA u heksanima) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (6.45 g, 13.40 mmol, 49.1 % prinos).
[0078] Intermedijeri prikazani u sledećoj tabeli su pripremljeni prema opštem postupku navedenom u Koraku 5 upotrebom odgovarajućih početnih materijala.
Korak 6: (R ili S)-metil 1-(1-(1-(terc-butoksikarbonil)piperidin-4-il)etil)-2-metil-1H-indol-3-karboksilat:
[0079]
U posudu od 250 mL sa okruglim dnom postavljena je magnetna mešalica, sipan je (R ili S,Z)-terc-butil 4-(1-(3-(2-bromofenil)-4-metoksi-4-oksobut-2-en-2-ilamino)etil)piperidin-1-karboksilat (3.33 g, 6.92 mmol), RuPhos Pre-katalizator II (Metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2’,6’-di-i-propoksi-1,1’-bifenil)(2-amino-1,1’-bifenil-2-il) paladijum(II)) (0.463 g, 0.553 mmol), dicikloheksil(2’,6’-diizopropoksibifenil-2-il)fosfin (0.387 g, 0.830 mmol), anhidrovani 1,4-dioksan (27.7 ml, 6.92 mmol) i natrijum metoksid (0.561 g, 10.38 mmol). Reakciona smeša je prečišćena i nazad filtrirana sa azotom i zagrevana do 100°C uz mešanje preko noći pre nego što je omogućeno hlađenje do sobne temperature. Reakcija je razblažena sa etil acetatom (~100 ml) i smeša je filtrirana kroz sloj od dijatomejske zemlje. Filtrat je pre-apsorbovan na silika gel (~30g) i prečišćen hromatografijom na silika gelu (120 g) upotrebom etil acetata/heksana (1:1) kao eluent da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.01 g, 4.77 mmol, 68.9 % prinos).
[0080] Intermedijeri prikazani u sledećoj tabeli su pripremljeni prema opštem postupku navedenom u Koraku 6 upotrebom odgovarajućih početnih materijala.
Korak 7: (R ili S)-2-metil-1-(1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)-1H-indol-3-karboksilna kiselina:
[0081]
U posudu sa okruglim dnom stavljena je magnetna mešalica, sipan je (R ili S)-metil 2-metil-1-(1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)-1H-indol-3-karboksilat (11.60 g, 38.5 mmol), etanol (96 ml, 38.5 mmol) i 6 N vodeni rastvor NaOH (64.1 ml, 385 mmol). Posuda je povezana sa refluksnim kondenzatorom i zagrevana do refluksa u trajanju od 6 časova pre omogućavanja da se hladi do sobne temperature. Isparljive materije su uklonjene in vacuo i dobijena smeša je sipana u 10% HCl (~300 mL). Formiran je talog koji je sakupljen preko vakuumske filtracije upotrebom Buchner levka. Filter kolač je ispran dodatnom porcijom vode (-200 mL), sakupljen i sušen pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (10.87 g, 35.9 mmol, 93 % prinos) kao prljavo bela čvrsta supstanca.
[0082] Intermedijeri prikazani u sledećoj tabeli su pripremljeni prema opštem postupku navedenom u Koraku 7 upotrebom odgovarajućih početnih materijala.
Korak 8: (R ili S)-terc-butil 4-(1-(3-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metilkarbamoil)-2-metil-1H-indol-1-il)etil)piperidin-1-karboksilat (Jedinjenje 327).
[0083]
U posudu od 250 mL sa okruglim dnom postavljena je megnetna mešalica, sipana je (R ili S)-1-(1-(1-(terc-butoksikarbonil)piperidin-4-il)etil)-2-metil-1H-indol-3-karboksilna kiselina (1.950 g, 5.05 mmol), 3-(aminometil)-4-metoksi-6-metilpiridin-2(1H)-on hidrohlorid (2.065 g, 10.09 mmol), DMF (25.2 ml, 5.05 mmol), Hunig-ova baza (3.52 ml, 20.18 mmol). Reakciona smeša je hlađena do 0°C i dodat je COMU (2.16 g, 5.05 mmol). Reakcija je ostavljena da se meša preko noći do sobne temperature. Reakciona smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Spojeni organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, sušen sa MgSO4, filtriran i konc. in vacuo da bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu (120 g) upotrebom MeOH/etil acetata (1:5) kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.86 g, 3.29 mmol, 65.3 % prinos). LCMS 537 (M+1)<+ 1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 11.83 - 11.71 (m, 1 H), 7.80 (br. s., 1 H), 7.73 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.62 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.06 (td, J = 7.1, 14.4 Hz, 2 H), 6.21 (s, 1 H), 4.32 (br. s., 2 H), 4.16 (br. s., 1 H), 4.02 (br. s., 1 H), 3.85 (s, 3 H), 3.75 (br. s., 1 H), 2.70 (br. s., 1 H), 2.58 (s, 3 H), 2.37 (br. s., 1 H), 2.21 (s, 3 H), 1.90 (d, J = 12.9 Hz, 1 H), 1.53 (d, J = 6.9 Hz, 3 H), 1.35 (s, 10 H), 1.21 (br. s., 1 H), 0.89 (d, J = 8.7 Hz, 1 H), 0.67 (d, J = 11.8 Hz, 1 H).
[0084] Jedinjenja prikazana u sledećoj tabeli su pripremljena prema opštem postupku navedenom u Koraku 8 upotrebom odgovarajućih početnih materijala. Strukture jedinjenja su prikazane na Slici 1.
Korak 9: (R ili S)-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1-(1-(piperidin-4-il)etil)-1H-indol-3-karboksamid hidrohlorid (Jedinjenje 326).
[0085]
U posudu od 250 mL sa okruglim dnom postavljena je magnetna mešalica, sipan je (R ili S)-terc-butil 4-(1-(3-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metilkarbamoil)-2-metil-1H-indol-1-il)etil)piperidin-1-karboksilat (jedinjenje 327) (1.850 g, 3.45 mmol), MeOH (13.79 ml, 3.45 mmol) i HCl (2.59 ml, 10.34 mmol) (4 N u dioksanu). Reakcija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi u trajanju od 6 časova preko nego što je konc. in vacuo da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.65 g, 3.14 mmol, 91 % prinos). LCMS 437 (M+1)<+>.
[0086] Jedinjenje prikazano u sledećoj tabeli je pripremljeno prema opštem postupku navedenom u Koraku 9 upotrebom odgovarajućih početnih materijala. Struktura ovog jedinjenja je prikazana na Slici 1.
Korak 10: (R ili S)-izopropil 4-(1-(3-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metilkarbamoil)-2-metil-1H-indol-1-il)etil)piperidin-1-karboksilat (jedinjenje 346).
[0087]
U posudu od 250 mL sa okruglim dnom postavljena je magnetna mešalica, sipan je (R ili S)-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1-(1-(piperidin-4-il)etil)-1H-indol-3-karboksamid hidrohlorid (0.467 g, 0.987 mmol), DMF (2.468 ml, 0.987 mmol), THF (2.468 ml, 0.987 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0.638 g, 4.94 mmol). Reakcija je hlađena do 0°C i pomoću šprica je ukapavan karbonohloridat (0.160 ml, 1.086 mmol). Reakcija je ostavljena da se meša u trajanju od 2 časa do sobne temperature i zatim je tretirana sa 5 N LiOH u trajanju od 1 časa da bi se uklonio sav acilovani piridon. Ovaj materijal je ekstrahovan sa etil acetatom, ispran fiziološkim rastvorom, sušen sa MgSO4i filtriran i konc. in vacuo. Dobijeni materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (50 g) upotrebom etil acetata/MeOH (5:1) kao eluent da bi se dobilo čisto jedinjenje iz naslova kao svetlo žuta čvrsta supstanca (0.300 g, 0.545 mmol, 55.2 % prinos). LCMS 523 (M+1)<+>;<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.59 (br. s., 1 H), 7.74 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.69 (t, J = 4.9 Hz, 1 H), 7.62 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.13 - 7.01 (m, 2 H), 6.15 (s, 1 H), 4.78 - 4.67 (m, 1 H), 4.32 (d, J = 4.9 Hz, 2 H), 4.23 - 4.12 (m, 1 H), 4.12 - 4.02 (m, 1 H), 3.84 (s, 3 H), 3.82 - 3.74 (m, 1 H), 2.79 - 2.66 (m, 1 H), 2.58 (s, 3 H), 2.46 - 2.34 (m, 2 H), 2.20 (s, 3 H), 1.96 - 1.88 (m, 1 H), 1.58 - 1.46 (m, 4 H), 1.15 (d, J = 6.0 Hz, 6 H), 0.95 - 0.89 (m, 1 H), 0.74 - 0.65 (m, 1 H).
[0088] Jedinjenja prikazana u seldećoj tabeli su pripremljena prema opštem postupku navedenom u Koraku 10 upotrebom odgovarajućih početnih materijala. Strukture jedinjenja su prikazane na Slici 1.
Referentni primer 2. Sinteza (R ili S)-1-(1-(1-izopropilpiperidin-4-il)etil)-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1H-indol-3-karboksamida (Jedinjenje 358)
[0089]
U vijalicu od 25 mL postavljena je magnetna mešalica, sipan je (R ili S)-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1-(1-(piperidin-4-il)etil)-1H-indol-3-karboksamid hidrohlorid, THF (2.114 ml, 0.211 mmol), propan-2-on (0.061 g, 1.057 mmol) i natijum triacetoksiborohidrid (0.224 g, 1.057 mmol). Reakcija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi u trajanju od 12 časova. Reakcija je inverzno ugašena na zasićeni vodeni rastvor NaHCO3, ekstrahovana sa etil acetatom i konc. in vacuo. Dobijeni materijal je tretiran sa 10 mL 7 N amonijakom u MeOH i koncentrovan je in vacuo da bi se dobio materijal koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu (10g upotrebom DCM/MeOH/NH4OH (90:1:0.1) kao eluenta da bi se dobilo 33 mg, (0.065 mmol, 31.0 % prinos) jedinjenja iz naslova kao bela čvrsta supstanca). LCMS 479 (M+1)<+>;<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.59 (s., 1H), 7.64 - 7.82 (m, 2H), 7.59 (d, 1H), 6.95 - 7.17 (m, 2H), 6.15 (s, 1H), 4.32 (d, 2H), 4.04 - 4.24 (m, 1H), 3.84 (h, 3H), 2.77 - 2.93 (h, 2H), 2.68 (h, 1H), 2.60 (h, 3H), 2.20 (h, 3H), 2.08 - 2.15 (h, 1H), 1.92 (h, 1H), 1.83 (hp. h., 1H), 1.54 (h, 3H), 1.27 - 1.43 (h, 2H), 0.91 (h, 6H), 0.71-0.67 (h, 2H).
[0090] Jedinjenja prikazana u sledećoj tabeli su pripremljena prema opštem postupku navedenom u ovom Primeru upotrebom odgovarajućih početnih materijala. Strukture jedinjenja su prikazane na Slici 1.
Pimer 3. Sinteza (R ili S)-1-(1-(1-(2-fluoroetil)piperidin-4-il)etil)-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1H-indol-3-karboksamida (Jedinjenje 356):
[0091]
U vijalicu od 25 mL postavljena je magnetna mešalica, sipan je (R ili S)-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1-(1-(piperidin-4-il)etil)-1H-indol-3-karboksamid hidrohlorid (0.062 g, 0.131 mmol), K2CO3 (0.072 g, 0.524 mmol), MeCN (0.655 ml, 0.131 mmol), DMF (0.262 ml, 0.131 mmol) i 1-bromo-2-fluoroetan (0.020 ml, 0.262 mmol). Reakcija je zatvorena poklopcem i zagrevana do 82°C uz mešanje u trajanju od 4 časa. Reakcija je ostavljena da se hladi do sobne temperature, filtrirana i filtrat je preapsorbovan na silika gel (12 g). Materijal je prečišćen hromatografijom na SiO2 (25 g) upotrebom DCM/MeOH/Et3N (85:15:0.5) kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao prljavo bela čvrsta supstanca (30 mg, 0.059 mmol, 45.1 % prinos). LCMS 483 (M+1)<+>;<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.59 (s, 1H), 7.75-7.68 (m, 2H), 7.60 (d, 1 H) 7.09-7.03 (m, 2H), 6.15 (s, 1H) 4.53-4.51 (m, 1H), 4.42-4.39 (m, 1H), 4.32 (d, 2H), 4.24-4.2 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 2.98 (br. d., 1 H), 2.70-2.49 (m, 4H), 2.60 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.01 (dt, 1H), 1.92-1.90 (m, 1H), 1.75-1.71 (m, 1H), 1.54 (d, 3H), 1.38-1.36 (m, 1H), 1.02-0.98 (m, 1H), 0.7-0.66 (br. d., 1H).
[0092] Jedinjenja prikazana u sledećoj tabeli su pripremljena prema opštem postupku navedenom u ovom Primeru upotrebom odgovarajućih početnih materijala. Strukture jedinjenja su prikazane na Slici 1.
Referentni primer 4. Sinteza (R ili S)-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1-(1-(1-(pirimidin-2-il)piperidin-4-il)etil)-1H-indol-3-karboksamida (Jedinjenja 361).
[0093]
U vijalicu koja se može više puta hermetički zatvoriti dodat je 2-hloropirimidin (185 mg, 1.611 mmol), (R ili S)-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1-(1-(piperidin-4-il)etil)-1H-indol-3-karboksamid hidrohlorid (508 mg, 1.074 mmol) i EtOH (8 mL). U ovaj rastvor je dodat Et3N (449 µl, 3.22 mmol). Vijalica je hermetički zatvorena i zagrevana do 100°C preko noći. Rastvor je ostavljen da se hladi do sobne temperature i koncentrovan in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (heksani: (3:2 DCM:IPA)) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca (357 mg, 0.694 mmol, 64.6 % prinos). LCMS 515 (M+1)<+>;<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.60 (s, 1 H), 8.30 (d, J = 4.7 Hz, 2 H), 7.76 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.73 - 7.64 (m, 2 H), 7.14 - 7.01 (m, 2 H), 6.55 (t, J = 4.7 Hz, 1 H), 6.15 (s, 1 H), 4.84 - 4.75 (m, 1 H), 4.57 - 4.47 (m, 1 H), 4.33 (d, J = 4.2 Hz, 2 H), 4.22 - 4.11 (m, 1 H), 3.84 (s, 3 H), 2.92 - 2.81 (m, 1 H), 2.63 - 2.52 (m, 4 H), 2.20 (s, 3 H), 2.05 - 1.94 (m, 1 H), 1.61 - 1.49 (m, 4 H), 1.34 - 1.21 (m, 1 H), 1.04 - 0.91 (m, 1 H), 0.83 - 0.75 (m, 1 H).
[0094] Jedinjenje prikazano u sledećoj tabeli je pripremljeno prema opštem postupku navedenom u ovom Primeru upotrebom odgovarajućih početnih materijala. Struktura jedinjenja je prikazana na Slici 1.
Referentni primer 5. Sinteza (R ili S)-1-(1-(1-(2-hidroksietil)piperidin-4-il)etil)-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1H-indol-3-karboksamida (Jedinjenje 347).
[0095]
U epruvetu koja se hermetički zatvara koja sadrži magnetnu mešalicu dodat je (R ili S)-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1-(1-(piperidin-4-il)etil)-1H-indol-3-karboksamid (0.1 g, 0.229 mmol) i dodat je DCM (3 mL) i reakcija je hlađena do 0°C. U ohlađenu reakcionu smešu dodat je oksiran koji je kondenzovan u reakcionoj vijalici (~1 mL). Reakcija je ostavljena da se meša do sobne temperature tokom 4 časa i zatim je koncentrovana in vacuo da bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu (12 g) upotrebom etil acetata/MeOH (4:1) kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (50 mg). LCMS 481 (M+1)<+>;<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ) δ 11.58 (s, 1 H), 7.77 - 7.65 (m, 2 H), 7.59 (d, J= 7.8 Hz, 1 H), 7.11 - 6.99 (m, 2 H), 6.14 (s, 1 H), 4.54 - 4.44 (m, 1 H), 4.31 (d, J = 5.1 Hz, 3 H), 4.13 (dd, J = 7.1, 10.3 Hz, 1 H), 3.83 (s, 3 H), 3.42 (q, J = 6.0 Hz, 2 H), 2.93 (br. s., 1 H), 2.71 - 2.56 (m, 4 H), 2.31 (br. s., 2 H), 2.19 (s, 3 H), 2.03 - 1.83 (m, 2 H), 1.64 (br. s., 1 H), 1.53 (d, J = 6.9 Hz, 3 H), 1.32 (d, J = 11.1 Hz, 1 H), 1.02 (d, J = 10.3 Hz, 1 H), 0.65 (d, J = 11.8 Hz, 1 H).
[0096] Jedinjenja prikazana u sledećoj tabeli su pripremljena prema opštem postupku navedenom u ovom Primeru upotrebom odgovarajućih početnih materijala. Strukture jedinjenja su prikazane na Slici 1.
Primer 6. Sinteza (R ili S)-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-6-fenil-1-(1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)-1H-indol-3-karboksamid (Jedinjenje 374).
[0097]
U reakcionu epruvetu od 25 mL postavljena je magnetna mešalica, sipana je fenil borna kiselina (72.6 mg, 0.596 mmol), K3PO4(103 mg, 0.447 mmol), X-Phos pre-katalizator (Hloro(2-dicikloheksilfosfino-2’,4’,6’-triizopropil-1,1’-bifenil)[2-(2-aminoetil)fenil)] paladijum (II)) (4.92 mg, 5.96 µmol) i vijalica je hermetički zatvorena. Vijalica je ispražnjena/ponovo napunjena azotom (33) pre dodavanja metil 6-hloro-2-metil-1-(1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)-1H-indol-3-karboksilata (jedinjenje 314) (100 mg, 0.298 mmol) kao rastvor u 1,4-dioksanu (1 mL). Vijalica je zatim zagrevana do 100°C preko noći uz mešanje. Vijalica je zatim ostavljena da se hladi do sobne temperature i reakcija je koncentrovana in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen preko hromatografije na SiO2(10g) upotrebom eluenta od etil acetata/heksana (4:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (106 mg, 0.281 mmol, 94 % prinos). LCMS 514 (M+1)<+>;<1>H NMR<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 11.59 (s, 1 H), 7.98 - 7.84 (m, 2 H), 7.75 - 7.67 (m, 3 H), 7.47 (t, J = 7.8 Hz, 2 H), 7.39 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 7.35 - 7.27 (m, 1 H), 6.15 (s, 1 H), 4.35 (d, J = 4.9 Hz, 2 H), 4.25 - 4.12 (m, 1 H), 3.93 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 3.86 - 3.77 (m, 3 H), 3.67 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 3.39 - 3.32 (m, 1 H), 3.10 - 3.00 (m, 1 H), 2.62 (s, 3 H), 2.21 (s, 3 H), 1.85 (d, J = 10.0 Hz, 1 H), 1.63 - 1.49 (m, 4 H), 1.45 - 1.33 (m, 1 H), 1.20 - 0.99 (m, 1 H), 0.66 (d, J = 12.0 Hz, 1 H).
Referentni primer 7. Sinteza (R ili S)-2-(4-(1-(3-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metilkarbamoil)-2-metil-1H-indol-1-il)etil)piperidin-1-il)sirćetne kiseline (jedinjenje 364).
[0098]
U posudu sa okruglim dnom postavljena je magnetna mešalica i dodat je (R ili S)-etil-2-(4-(1-(3-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metilkarbamoil)-2-metil-1H-indol-1-il)etil)piperidin-1-il)acetat (jedinjenje 363) (69 mg, 0.132 mmol), THF (1.5 mL), MeOH (1.5 mL) i voda (0.75 mL). U ovaj rastvor dodat je litijum hidroksid monohidrat (5.54 mg, 0.132 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 časa. Organske materije su uklonjene pod sniženim pritiskom i dobijeni vodeni rastvor je prečišćen preko reverzno-fazne HPLC (voda/MeCN) 0→95% da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (66 mg, 0.108 mmol, 82 % prinos). LCMS 514 (M+1)<+ 1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 11.67 (s, 1 H), 9.65 (s, 1 H), 7.84 - 7.68 (m, 2 H), 7.63 (d, J = 7.4 Hz, 1 H), 7.14 - 7.03 (m, 2 H), 6.18 (s, 1 H), 4.33 (d, J = 3.6 Hz, 2 H), 4.27 - 4.15 (m, 1 H), 4.04 (br. s., 2 H), 3.85 (s, 3 H), 3.57 (s, 1 H), 3.35 - 3.23 (m, 1 H), 3.14 - 2.99 (m, 1 H), 2.86 - 2.74 (m, 1 H), 2.62 (s, 3 H), 2.21 (s, 3 H), 2.18 - 2.08 (m, 1 H), 1.75 (s, 1 H), 1.60 - 1.49 (m, 4 H), 1.46 - 1.33 (m, 1 H), 0.92-0.81 (m, 1 H).
[0099] Primer 8. Sinteza (R ili S)-metil 2-metil-6-(piridin-3-il)-1-(1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)-1H-indol-3-karboksilata. Ovaj intermedijer je korišćen kao alternativni početni materijal u Koraku 7 navedenom u Primeru 1 za sintezu drugih jedinjenja pronalaska.
(R ili S)-metil 2-metil-1-(1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-indol-3-karboksilat
[0100]
U posudu sa okruglim dnom dodat je Pd(OAc)2(10.03 mg, 0.045 mmol), kalijum acetat (219 mg, 2.233 mmol), 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-oktametil-2,2’-bi(1,3,2-dioksaborolan) (567 mg, 2.233 mmol) i 2-dicikloheksilfosfino-2’,4’,6’-triizopropilbifenil (XPhos) (85 mg, 0.179 mmol) i vijalica je hermetički zatvorena. U ovu vijalicu je dodat (R ili S)-metil 6-hloro-2-metil-1-(1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)-1H-indol-3-karboksilat (Korak 6) (500 mg, 1.489 mmol) rastvoren u dioksanu (3.4 mL) i reakcija je ispražnjena/ponovo napunjena sa N2 (33) pre zagrevanja do 100°C preko noći. Reakcija je zatim ostavljena da se hladi do sobne temperature i razblažena sa EtOAc. Reakcija je filtrirana kroz dijatomejsku zemlju i filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova koje je korišćeno u kasnijim reakcijama bez dodatnog prečišćavanja. LCMS 428 (M+1)<+>.
(R ili S)-metil 2-metil-6-(piridin-3-il)-1-(1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)-1H-indol-3-karboksilat:
[0101]
U vijalicu koja se može više puta hermetički zatvarati dodat je K2CO3 (206 mg, 1.488 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (60.8 mg, 0.074 mmol) i vijalica je hermetički zatvorena. Ova vijalica je ispražnjena/ponovo napunjena sa N2 (33) pre dodavanja (R ili S)-metil 2-metil-1-(1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-indol-3-karboksilata (318 mg, 0.744 mmol) rastvorenog u 1,4-dioksanu (4 mL), 3-bromopiridina (71.7 µl, 0.744 mmol) i vode (400 µL). Reakcija je ispražnjena/ponovo napunjena sa N2 (33) pre zagrevanja do 100°C. Rastvor je hlađen do sobne temperature i razblažen sa EtOAc. Rastvor je filtriran i koncentrovan in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (10 g, EtOAc/heks. (1:1)) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (101 mg, 0.267 mmol, 35.9 % prinos). LCMS 379 (M+1)<+>.
[0102] Primer 9. Drugi alkil karboksilat intermedijeri. Sledeći alkil karboksilat intermedijeri su sintetisani na analogan način onome koji je naveden u Koraku 2 iz Primera 1, upotrebom odgovarajućeg početnog materijala i reaktanta.
[0103] Primer 10. Druga jedinjenja prema pronalasku proizvedena od intermedijera karboksilne kiseline. Sledeća jedinjenja su sintetisana na analogan način onome navedenom u Koraku 4 iz Primera 1, upotrebom odgovarajućeg početnog materijala. Strukture ovih jedinjenja su navedene na Slici 1.
[0104] Referentni primer 11. Sinteza Metil 1-(1-(1,4-dioksan-2-il)etil)-2-metil-1H-indol-3-karboksilata.
Jedinjenje iz naslova je korišćeno kao alternativni alkil karboksilat početni materijal u Koraku 3 iz Primera 1.
Korak 1: 1-(1,4-dioksan-2-il)etanon:
[0105]
U rastvor benzoil peroksida (20 g, 141 mmol) u 200 mL 1,4-dioksana na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota dodat je biacetil (24.3 g, 282 mmol). Posle dodavanja, smeša je zagrevana do refluksa i mešana 24 časa. Reakciona smeša je hlađena do 0°C. pH je podešena do oko 9 progresivnim dodavanjem 2N natrijum hidroksida ispod 0°C, ekstrahovana sa 2-metoksi-2-metilpropanom (10 mL x 3), i koncentrovana da bi se dobio 1-(1,4-dioksan-2-il)etanon (13 g, 36%) kao žuto ulje koje je korišćeno direktno u sledećem koraku bez prečišćavanja.
Korak 2: 1-(1,4-dioksan-2-il)etanamin:
[0106]
U rastvor 1-(1,4-dioksan-2-il)etanona (12 g, 92.2 mmol) u 1,2-dihloroetanu (100 mL) dodat je (4-metoksifenil)metanamin (25 g, 184.4 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je ostavljena da se meša 3 časa, i zatim je dodat natrijum triacetoksiborohidrid (39 g, 184.4 mmol). Dobijena smeša je ostavljena da se meša u trajanju od 48 časova na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode, ekstrahovana sa dihlorometanom (100 mL x 3). Kombinovana organska faza je sušena pomoću anhidrovanog natrijum sulfata, i zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan i prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluirati: dihlorometan/metanol 100:1→50:1→20:1) da bi se dobio 1-(1,4-dioksan-2-il)-N-(4-metoksibenzil)etanamin (16.4 g, 71%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (M H<+>) m/z: izrač.
251.15, zabeleženo 251.9. U rastvor 1-(1,4-dioksan-2-il)-N-(4-metoksibenzil)etanamina (5 g, 19.9 mmol) u anhidrovanom metanolu (100 mL) dodat je paladijum 10% na uglju (240 mg, 2 mmol), zatim je izvršeno prečišćavanje vodonikom (30 psi), smeša je ostavljena da se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je filtrirana, i filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.5 g, 96%) kao braon čvrsta supstanca.
[0107] Intermedijeri amina prikazani u sledećoj tabeli su pripremljeni prema opštem postupku navedenom u prethodnom tekstu upotrebom odgovarajućih početnih materijala i modifikacija.
Korak 3: (E)-metil 3-((1-(1,4-dioksan-2-il)etil)imino)-2-(2-bromofenil)butanoat:
[0108]
U rastvor 1-(1,4-dioksan-2-il)etanamina (2.5 g, 19 mmol) u metanolu (100 mL) dodat je metil 2-(2-bromofenil)-3-oksobutanoat (5.4 g, 20 mmol) i sirćetna kiselina (1.8 g, 30 mmol). Dobijeni reakcioni sistem je zagrevan do refluksa i ostavljen da se meša preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (eluiran: dihlorometan/metanol 50:1→20:1→5:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1 g, 14%) kao braon čvrsta supstanca. LCMS (M H<+>) m/z: izrač.383.07, zabeleženo 384.9.
[0109] Imino-bromo intermedijeri prikazani u sledećoj tabeli su pripremljeni prema opštem postupku navedenom u prethodnom tekstu upotrebom odgovarajućih početnih materijala (npr., jedan od amina navedenih u tabeli u Koraku 2 ovog primera) i modifikacija.
Korak 4: Metil 1-(1-(1,4-dioksan-2-il)etil)-2-metil-1H-indol-3-karboksilat:
[0110]
U rastvor (E)-metil 3-((1-(1,4-dioksan-2-il)etil)imino)-2-(2-bromofenil)butanoata (400 mg, 1.1 mmol) u dioksanu (3 mL) dodat je hloro[2-(dicikloheksilfosfino)-3,6-dimetoksi-2’,4’,6’-triizopropilbifenil][2-(2-aminoetil)fenil]Pd(II) (160 mg, 0.2 mmol), 2-dicikloheksifosfino-2’,6’-diizopropoksibifenil (93 mg, 0.2 mmol) i natrijum terc-butoksid (192 mg, 2 mmol). Dobijena reakciona smeša je zagrevana do 120°C uz mešanje u trajanju od 30 min u mikrotalasnoj. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode i ekstrahovana je sa etil acetatom (25 mL x 3). Kombinovana organska faza je sušena pomoću anhidrovanog natrijum sulfata, i zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan i prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje: petroletar/ estar sirćetne ksieline 10:1→5:1→2:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (282 mg, 89%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (M H<+>) m/z: izrač. 303.15, zabeleženo 303.9.
[0111] Jedinjenje prikazano u sledećoj tabeli je pripremljeno prema opštem postupku navedenom u prethodnom tekstu upotrebom odgovarajućih početnih materijala (npr., jedan od imino-bromo intermedijera prikazanih u tabeli u koraku 3 ovog primera) i modifikacija.
[0112] Ovi alkil karboksilati su takođe korišćeni kao šočetni materijal u Koraku 3 iz Primera 1 u sintezi određenih jedinjenja prema pronalasku.
[0113] Primer 12. Hiralno odvajanje jedinjenja 219 za dobijanje jedinjenja 223 i 224. N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-1-(1-metoksipropan-2-il)-2-metil-1H-indol-3-karboksamid (200 mg) (jedinjenje 219) je podvrgnut hiralnoj hromatografiji preko superkritične tečne hromatografije (SFC) (A:C2H5OH, B:NH3·H2O. A:B=55:45 AD kolona) da bi se dobili posebni enantiomeri 223 (pik 1) i 224 (pik 2) (po 60 mg) LCMS 398 (M+1)<+ 1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.69 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.53 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.12 (m, 2H), 6.26 (s,1H), 4.80 (m,1H), 4.52 (s,2H), 3.99 (m, 4H), 3.75 (m, 1H), 3.20 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 1.59 (d, J=7.2 Hz, 3H). Optička rotacija svakog enantiomera nije određena.
[0114] Jedinjenja prikazana u sledećoj tabeli su pripremljena prema opštem postupku hiralne hromatografije navedenom u prethodnom tekstu. Optička rotacija odvojenih enantiomera nije određena, ali je naznačen elucioni pik ("pik 1" ili "pik 2"). Strukture svakog jedinjenja su prikazane na Slici 1.
[0115] Primer 1. Sinteza terc-butil 1-(2,3-dihidro-1H-inden-1-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksilata. Jedinjenje iz naslova kao početni materijal u Koraku 3 iz Primera 36 u sintezi određenih jedinjenja prema pronalasku.
Terc-butil 2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksilat:
[0116]
[0117] U posudu od 500 mL sa okruglim dnom koja sadrži N-acetil-N-(3-bromopiridin-2-il)acetamid (14.815 g, 57.6 mmol), dodat je bakar (I) jodid (1.098 g, 5.76 mmol), L-prolin (1.327 g, 11.53 mmol), cezijum karbonat (28.2 g, 86 mmol), zatim t-butil acetoacetat (11.47 ml, 69.2 mmol) i dioksan (100 mL). Reakcija je prečišćena pod vakuumom sa N23X, zatim je postavljen septum i ulaz za N2 i izvršeno je zagrevanje preko noći na 70°C. Neorganske čvrste supstance su uklonjene filtracijom preko celita i kolač je ispran sa 100 mL EtOAc. Ovaj rastvor je koncentrovan i ostatak je podeljen između 250 mL fiziološkog rastvora i 250 mL EtOAc. Vodeni sloj je dalje ekstrahovan sa EtOAc (2x250 mL) i kombinovani organski sloj je sušen preko Na2SO4, filtriran, koncentrovan i prečišćen pomoću CC upotrebom 1:1 EtOAc:heksan kao eluentom da bi se dobilo (2.7g, 20.2%) terc-butil 2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksilata. LRMS (M H<+>) m/z: izrač.233.28; zabeleženo 233.1.
Terc-butil 1-(2,3-dihidro-1H-inden-1-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksilat:
[0118]
Rastvor etil terc-butil 2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksilata (100 mg, 0.74 mmol), 2,3-dihidro-1H-inden-1-ola (176 mg, 0.74 mmol), PPh3(195 mg, 1.49 mmol) je mešan u suvom THF (10 mL) na 0°C pod atmosferom azota. U ovu smešu ukapavanjem je dodavan DIAD (150 mg , 1.48 mmol) tokom perioda od 5 min, i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 16 časova. Smeša je isprana fiziološkim rastvorom, sušena i koncentrovana da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu (petroletar/etil acetat = 5:1) da bi se dobio terc-butil-1-(2,3-dihidro-1H-inden-1-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksilat (150 mg, 60%).
[0119] Jedinjenje prikazano u sledećoj tabeli je pripremljeno prema opštem postupku navedenom u prethodnom tekstu upotrebom odgovarajućih početnih materijala i modifikacija.
[0120] Svaki od gore navedenih alkil karboksilata korišćen je kao početni materijal u koraku 3 iz Primera 1 u sintezi određenih jedinjenja prema pronalasku.
Primer 13. Sinteza izolovanih N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-1-((2R ili 2S, 3R ili 3S)-3-metoksibutan-2-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid diastereomera (jedinjenja 261, 266, 267 i 302).
Korak 1: Terc-butil 2-metil-1-(3-oksobutan-2-il)-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksilat:
[0121]
U rastvor terc-butil 2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksilata (5.0 g, 21.53 mmol) u CH3CN (50 mL) dodat je Cs2CO3 (21.0 g, 64.58mmol), kalijum jodid (3.57 g, 21.53 mmol). Smeša je mešana na 27°C u trajanju od 30 minuta. Zatim je dodat 3-hlorobutan-2-on (2.75 g, 25.83 mmol) i smeša je mešana na 70°C u trajanju od 12 časova. Smeša je filtrirana i i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen na koloni (eluiranje: petroletar: etil acetat =50:1) da bi se dobio terc-butil 2-metil-1-(3-oksobutan-2-il)-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksilat kao žuto-zeleno ulje (3.23 g, prinos 50 %) LCMS (M H<+>) m/z: izrač.303.37; zabeleženo 302.9.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.32-8.30 (m, 1H), 8.25-8.23 (m, 1H), 7.17-7.14 (m, 1H), 5.50-5.44 (m, 1H), 2.71(s, 3H), 1.96 (s, 3H), 1.65-1.67 (d,3H), 1.64 (s, 9H).
Korak 2: Terc-butil 1-(3-hidroksibutan-2-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksilat:
[0122]
U rastvor terc-butil 2-metil-1-(3-oksobutan-2-il)-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksilata (3.1 g, 10.25 mmol) u metanolu (30 mL) dodat je natrijum borohidrid (0.30 g, 8.2 mmol) na 0°C. Posle 30 minuta, dodata je druga serija natrijum borohidrida (0.30 g, 8.2 mmol) na 0°C. Pošto je reakcija završena oko 2 časa kasnije, ukapavanjem je dodata voda (30 ml) veoma pažljivo da bi se reakcija ugasila. Smeša je ekstrahovana sa CH2Cl2. Ekstrakcija je sušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 1-(3-hidroksibutan-2-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksilat kao žuta čvrsta supstanca.
(3.0 g, prinos 96 %) LCMS (M H<+>) m/z: izrač. 305.38; zabeleženo 304.9.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): ä 8.31-8.29 (m, 1H), 8.13-8.12 (m, 1H), 7.11-7.07 (m, 1H), 4.46-4.43 (m, 1H), 4.12 (m, 1H), 2.73 (s, 3H), 1.58 (s, 9H), 1.51-1.49 (d, 3H), 0.92-0.91 (d, 3H).
Korak 3: Terc-butil-1-(3-metoksibutan-2-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksilat:
[0123]
U suvi THF (20 mL) dodat je NaH (60 % u mineralnom ulju, 2.37 g, 59.14 mmol). Zatim je smeša mešana na 27°C u trajanju od 20 minuta, zatim je dodat terc-butil 1-(3-hidroksibutan-2-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksilat (3.0 g, 9.86 mmol). Smeša je mešana na 27°C u trajanju od 1 časa, zatim je dodat CH3I (13.99 g, 98.6 mmol). Smeša je mešana 12 časova na 27°C i zatim hlađena do 0°C. Dodat je zasićeni NH4Cl i ekstrahovan sa CH2Cl2. Ekstrakcija je sušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana da bi se dobio tercbutil-1-(3-metoksibutan-2-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksilat kao žuto ulje. (3.2 g, prinos 100 %) LCMS (M H<+>) m/z: izrač.319.41; zabeleženo 318.9.
Korak 4: 1-(3-metoksibutan-2-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksilna kiselina:
[0124]
U prethodno ohlađeni rastvor terc-butil 1-(3-metoksibutan-2-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksilata (3.0 g, 9.42 mmol) u CH2Cl2 (20 mL) ukapavanjem je dodata trifluorosirćetna kiselina (20 mL). Rastvor je mešan na 27°C u trajanju od 1.5 časa. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom na 27°C. Ostatak je korišćen za sledeći korak bez prečišćavanja. LCMS (M H<+>) m/z: izrač.263.30; zabeleženo 262.9.
Korak 5: N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-1-(3-metoksibutan-2-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid:
[0125]
U rastvor 1-(3-metoksibutan-2-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksilne kiseline (2.4 g, 9.15 mmol) u DMF (30 mL) dodat je TEA (4.2 g, 41.50 mmol), 3-(aminometil)-4-metoksi-6-metilpiridin-2(1H)-on hidrohlorid (2.1g, 12.81 mmol). Posle mešanja od 10 minuta na 27°C, smeša je hlađena i dodat je HATU (5.56 g, 14.64 mmol). Smeša je mešana na 27°C u trajanju od 72 časa i ostalo je 30 % početnog materijala. Zatim je smeša zagrevana na 80°C u trajanju od 5 časova. Rastvor je razblažen fiziološkim rastvorom (100 mL) i ekstrahovan sa CH2Cl2 (100 mL*3). Ekstrakcije su kombinovane i sušene preko Na2SO4. Rastvarač je isparavan pod vakuumom i ostata je prečišćen pomoću „flash“ kolone (Eluent: dihlorometan: metanol =95:5) da bi se dobio N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-1-(3-metoksibutan-2-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid. (3.6g, prinos 95 %)
Korak 6: Odvajanje N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-1-(3-metoksibutan-2-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamida: izomeri (jedinjenja 261, 266, 267 i 302):
[0126]
Smeša izomera iz Koraka 5, N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-1-(3-metoksibutan-2-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid je prečišćen pomoću prep-HPLC (uslovi: kolona: SHIMADZU LC-8A, 250*50mm *10 µm; pokretna faza A: voda sa 0.2 % mravljom kiselinom; pokretna faza B: MeCN; temperatura kolone: 30°C; Gradijent: B u A 10~50 %) da bi se dobio glavni izomerski par (jedinjenje 261 i jedinjenje 266 kombinovano) (1.0 g, čistoća 98.8%) i manji izomerski par (jedinjenje 267 i jedinjenje 302 kombinovani) (180 mg, čistoća 63%). Dobijeni izomerski parovi su pojedinačno odvojeni pomoću SFC (uslovi: kolona: Chiralpak AD 250*30 mm *5 µm; pokretna faza A: superkritični CO2; pokretna faza B: IPA+NH3•H2O; Gradijent : B/A: 75:25) da bi se dobila sledeća pojedinačna jedinjenja:
[0127] Jedinjenje 261, N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-1-((2R ili 2S, 3R ili 3S)-3-metoksibutan-2-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (glavni izomerski par; pik 1):<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.173-8.157 (m, 1H), 8.140-8.116 (m, 1H), 7.582-7.555 (m, 1H), 6.968-6.936 (m, 1H), 5.927 (s, 1H), 4.707-4.609 (m, 2H), 4.348 (s, 1H), 3.892 (s, 3H), 2.869 (s, 3H), 2.788 (s, 3H), 2.173 (s, 3H), 1.644-1.627 (d, 3H), 1.263-1.249 (d, 3H).
[0128] Jedinjenje 266, N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-1-((2R ili 2S, 3R ili 3S)-3-metoksibutan-2-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (glavni izomerski par; pik 2):<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.179-8.163 (m, 1H), 8.143-8.120 (m, 1H), 7.558-7.531 (m, 1H), 6.986-6.954 (m, 1H), 5.931 (s, 1H), 4.702-4.605 (m, 2H), 3.897 (s, 3H), 2.892 (s, 3H), 2.789 (s, 3H), 2.189 (s, 3H), 1.647-1.629 (d, 3H), 1.267-1.252 (d, 3H).
[0129] Jedinjenje 267, N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-1-((2R ili 2S, 3R ili 3S)-3-metoksibutan-2-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (manji izomerski par; pik 1):<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.174-8.162 (d, 1H), 8.111-8.094 (d, 1H), 7.551-7.526 (m, 1H), 6.993-6.961 (m, 1H), 5.935 (s, 1H), 4.683-4.579 (m, 2H), 3.887 (s, 3H), 3.442 (s, 3H), 2.753 (s, 3H), 2.194 (s, 3H), 1.695-1.678 (d, 3H), 0.781-0.768 (d, 3H).
[0130] Jedinjenje 302, N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-1-((2R ili 2S, 3R ili 3S)-3-metoksibutan-2-il)-2-metil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (Manji izomerski par; pik 2):<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.177-8.166 (d, 1H), 8.122-8.104 (d, 1H), 7.587-7.562 (m, 1H), 6.984-6.952 (m, 1H), 5.933 (s, 1H), 4.698-4.591 (m, 2H), 4.426 (s, 2H), 3.983 (s, 3H), 3.448 (s, 3H), 2.764 (s, 3H), 2.180 (s, 3H), 1.701-1.684 (d, 3H), 0.786-0.772 (d, 3H).
Primer 14. Sinteza (6)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1-(1-feniletil)-1H-pirolo[2,3-c]piridin-3-karboksamida
Korak 1: 1-(3-metoksifenil)etanol:
[0131]
U mešani rastvor 3-Amino-4-pikolina (7g, 64.8 mmol) u anhidrovanom THF (200 mL), ukapavanjem je dodavan sec-BuLi (150 mL, 1.3M u cikloheksanu, 194 mmol) tokom 20 minuta na -78°C. Rastvor je zagrevan do sobne temperature i mešan 3 časa. Etil acetat (2.3 g, 25.9 mmol) je dodavan ukapavanjem u reakciju na -78°C i smeša je mešana na istoj temperaturi 2 časa. Metanol (50 mL) je dodavan ukapavanjem u reakciju tokom 10 minuta. Smeša je zagrevana do sobne temperature i mešana 1 čas. Dodat je polu-zasićeni NH4Cl (250 mL). Smeša je ekstrahovana sa EA. Kombinovani organski slojevi su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni i koncentrovani da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu (petroletar/ etil acetat = 10:1) da bi se dobio 2-metil-1H-pirolo[2,3-c]piridin (2.5 g, 73.5%).
Korak 2: 2,2,2-trihloro-1-(2-metil-1H-pirolo[2,3-c]piridin-3-il)etanon:
[0132]
U mešani rastvor 2-metil-1H-pirolo[2,3-c]piridina (2.5 g, 18.9 mmol) i aluminijum hlorida (5 g, 37.8 mmol) u DCM (100 mL), trihloroacetilhlorid (4.1 g, 22.7 mmol) je dodavan ukapavanjem u reakciju tokom 0.5 časa na sobnoj temperaturi. Posle mešanja od 2 časa, reakcija je hlađena do 0°C i ugašena vodom (100 mL). Dobijeni talog je izolovan filtracijom da bi se dobio 2,2,2-trihloro-1-(2-metil-1H-pirolo[2,3-c]piridin-3-il)etanon koji je korišćen za sledeći korak bez dodatnog prečišćavanja. Pretpostavljeni 100% prinos. (5.24 g).
Korak 3: Metil 2-metil-1H-pirolo[2,3-c]piridin-3-karboksilat:
[0133]
Smeša 2,2,2-trihloro-1-(2-metil-1H-pirolo[2,3-c]piridin-3-il)etanona (5.24 g, 18.9 mmol) i KOH (1.2 g, 20.9 mmol) u MeOH (100 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 16 časova. Reakciona smeša je koncentrovana da bi se uklonio MeOH, ostatak je podeljen između EA i vode. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, sušen i koncentrovan da bi se dobio metil 2-metil-1H-pirolo[2,3-c]piridin-3-karboksilat (3 g, 83%).
Korak 4: Metil metil 2-metil-1-(1-feniletil)-1H-pirolo[2,3-c]piridin-3-karboksilat:
[0134]
Smeša metil 2-metil-1H-pirolo[2,3-c]piridin-3-karboksilata (550 mg, 2.89 mmol) i natrijum hidrida (200 mg, 4.34 mmol) u N,N-dimetilformamidu (3.0 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 0.5 časa, i zatim je dodat (1-bromoetil)benzen (589 mg, 3.18 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 3 časa. Reakcona smeša je sipana u zasićeni NH4Cl i ekstrahovana sa etil acetatom. Organski slojevi su spojeni i koncentrovani da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom (petroletar/ etil acetat = 5:1) da bi se dobio metil 2-metil-1-(1-feniletil)-1H-pirolo[2,3-c]piridin-3-karboksilat (800 mg, 94%).
Korak 5: 2-metil-1-(1-feniletil)-1H-pirolo[2,3-c]piridin-3-karboksilna kiselina:
[0135]
[0136] U smešu metil 2-metil-1-(1-feniletil)-1H-pirolo[2,3-c]piridin-3-karboksilata (800 mg, 2.72 mmol) i KOH (1.5 g, 27.2 mmol) u (15 mL) i vodi (5 mL) je refluksovan 2 časa. pH smeše je podešena do 2 pomoću 10% HCl i ekstrahovana sa EA. Kombinovani organski slojevi su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni i koncentrovani da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. 100% prinos. (760 mg).
Korak 6: (±)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1-(1-feniletil)-1H-pirolo[2,3-c]piridin-3-karboksamid (jedinjenje 203):
U smešu 2-metil-1-(1-feniletil)-1H-pirolo[2,3-c]piridin-3-karboksilne kiseline (280 mg, 1.0 mmol) dodat je HATU (456 mg, 1.2 mmol), TEA (1 g, 10 mmol) i 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (182 mg, 1.2 mmol) u anhidrovanom dihlorometanu (30 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 časova. U reakcionu smešu je dodata voda (10 mL), ekstrahovana je sa dihlorometanom (30 mL x 2). Organski slojevi su spojeni i koncentrovani da bi se dobio ostatak. Ostatak je rekristalizovan iz MeCN da bi se dobilo jedinjenje N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1-(1-feniletil)-1H-pirolo[2,3-c]piridin-3-karboksamid kao prljavo bela čvrsta supstanca (80 mg, 21.6%). LRMS (M+H<+>) m/z: izrač.414.21; zabeleženo 414.<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 8.84 (s, 1H), 8.16 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.44-7.37 (m, 5H), 6.09 (s, 1H), 6.01-5.99 (m, 1H), 4.49 (s, 2H), 2.73 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.06 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
[0138] Jedinjenja prikazana u sledećoj tabeli su pripremljena prema opštem postupku navedenom u ovom primeru upotrebom odgovarajućih početnih materijala i modifikacija. Strukture su prikazane na slici 1.
Primer 15. Opšti postupci za sintezu drugih jedinjenja prema pronalasku
Opšti postupak A: alkilacija indola
U ohlađeni (0°C) rastvor NH indol estra (1 ekvivalent) u N,N-dimetilformamidu (zapremina za pripremu koncentracije 0.4M) dodat je natrijum hidrid (60% tež./tež., 1.1 ekvivalenata u odnosu na indol). Rezultirajuća smeša je mešana u trajanju od 15 minuta. Zatim je dodat RX (2 ekvivalenta) i reakcija je ostavljena da se zagreva do sobne temperature. Reakcija je održavana na temperaturi sredine u trajanju od 12 časova. Reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor amonijum hlorida (100 mL) uz mešanje. Smeša je eksrahovana sa etil acetatom (200 mL x 2) i kombinovana organska faza je isprana fiziološkim rastvorom, sušena preko magnezijum sulfata, filtrirana i koncentrovana da bi se dobio sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, petroletar/etil acetat = 20:1) da bi se dobio željeni alkilovani indol estarski proizvod.
Opšti postupak B: Saponifikacija alkilovanog indol estra
[0140]
U rastvor alkilovanog indol estra (1 ekvivalent) u tetrahidrofuranu:metanolu:vodi (2.5:5:1, zapremina za pripremu koncentracije 0.05M) dodat je litijum hidroksid (4 ekvivalenta). Dobijena reakciona smeša je mešana na 60°C u trajanju od 48 časova. Smeša je koncentrovana in vacuo. Zatim je ostatak razblažen vodom (40 mL) i lagano zakišeljen sa 1N hlorovodonikom do pH = 4-5. Smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (100 mL x 3). Kombinovani organski slojevi su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani da bi se dobila sirova indol kiselina, koja je korišćena u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja.
Opšti postupak C: Formiranje amidne veze
U rastvor indol kiseline (1 ekvivalent) u dihlorometanu (zapremna za pripremu koncentracije 0.05M) dodati su 1-hidroksibenzotriazol (1.5 ekvivalenata), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorid (1.5 ekviv.) i trietilamin (3 ekviv.). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 30 minuta. Zatim je dodat piridon amin (1.2 ekviv.) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 časova. U smešu je dodata voda (50 mL). Smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom (100 mL x 2). Organski sloj je koncentrovan in vacuo da bi se dobio sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, dihlorometan/ metanol = 20:1) da bi se dobilo ciljno jedinjenje.
Opšti postupak D: hiralna hromatografija
[0142] Odvajanje hiralnih jedinjenja je postignuto preko normalno-fazne HPLC ili SFC (superkritična telna hromatografija na ugljen dioksidu). Odvojena jedinjenja su tipično bila >95% ee. Apsolutna konfiguracija hiralnih centara nije određena.
Opšti postupak L: Sulfonilacija
[0143]
U rastvor hiralnog amina (1 ekviv.) u dihlorometanu (zapremina za pripremu koncentracije 0.1M) dodat je trietilamin (4 ekviv.) na 18°C pod N2. Reakcija je hlađena do 0°C i dodat je metansulfonil hlorid (1.5 ekviv.). Reakcija je mešana na 0°C u trajanju od 1 časa. Zatim je smeša koncentrovana in vacuo i dodati su metanol i kalijum karbonat i reakcija je mešana još 1 čas. Smeša je filtrirana i sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne-HPLC.
[0144] Tabela u daljem tekstu navodi jedinjenja prema pronalasku i koji od gote navedenih opštih postupaka je korišćen u njihovoj sintezi. Strukture ovih jedinjenja su prikazane na Slici 1.
Primer 16. Merenje IC50 za inhibitore upotrebom EZH2.
[0145] EZH2 analiza: analize su izvedene mešanjem rPRC2 zajedno sa biotinilovanim oligonukleozomnim supstratima u prisustvu radio-obeleženog kofaktora enzima, S-adenozil-L-metionina (<3>H SAM) (Perkin Elmer) i praćenjem enzimatski posredovanog transfera tricijumovanih metil grupa od<3>H SAM do histonskih lizinskih ostataka. Količina rezultirajućeg tricijumovanog metil histon proizvoda je merena prvo hvatanjem biotinilovanih oligonukleozoma u FlashPlates (Perkin Elmer) obložene streptavidinom (SAV), nakon čega je usledio korak ispiranja da bi se uklonio neodreagovali<3>H SAM, i zatim brojanjem na TopCount NXT scintilacionom brojaču za 384-komornu ploču (Perkin Elmer). Krajnji uslovi analize za EZH2 bili su kao što sledi: 50 mM Tris pufer pH 8.5, 1 mM DTT, 69 µM Brij-35 deterdžent, 5.0 mM MgCl2, 0.1 mg/mL BSA, 0.2 µM 3HSAM, 0.2 µM biotinilovani oligonukleozomi, 3.6 µM H3K27me3 peptid i 2 nM EZH2.
[0146] Merenja IC50jedinjenja su dobijena na sledeći način: Jedinjenja su prvo rastvorena u 100% DMSO kao 10 mM stok rastvori. Krive odgovora na dozu od deset tačaka Krive odgovora na dozu od deset tačaka generisane su sipanjem različitih količina 10 mM rastvora jedinjenja u 10 komorica od 384-komorne ploče (Echo; Labcyte), čist DMSO je zatim korišćen za ponovno punjenje komorica da bi se osiguralo da sve komorice imaju istu količinu DMSO.12.5 µL zapremina HMT enzima, H3K27me3 peptida i oligonukleozomskog supstrata u puferu za analizu je dodata u svaku komoricu test ploče upotrebom Multidrop Combi (ThermoFisher). Jedinjenja su prethodno inkubirana sa enzimom u trajanju od 20 min, nakon čega je sledio početak reakcije metiltransferaze dodavanjem 12.5 µL<3>H SAM u test pufer (krajnja zapremina = 25 µL). Krajnje koncentracije jedinjenja kretale su se u opsegu od gornje prethodno definisane koncentracije od 80 µM do 0.16 µM u deset 2-strukih koraka razblaživanja. Reakcije su izvođene 60 minuta i ugašene sa 20 µL po komorici od 1.96 mM SAH, 50 mM Tris pH 8.5, 200 mM EDTA. Zaustavljene reakcije su prebačene u SAV obložene Flashplates (Perkin Elmer), inkubirane u trajanju od 120 min, isprane ispiračen za ploče, i zatim očitavane na TopCount NXT (1.0 min/komorici) da bi se izmerila količina metil histonskog proizvoda formiranog u toku reakcije. Količina metil histonskog proizvoda je upoređivana sa količinom proizvoda formiranog u kontrolnim komoricama sa 0% i 100% inhibicije omogućavajući izračunavanje % inhibicije u prisustvu pojedinačnih jedinjenja u različitim koncentracijama. Vrednosti IC50 su izračunavane upotrebom aproksimirajućeg softverskog paketa 4 parametarskog fitovanja ne-linearne krive (XLFIT, deo paketa baze podataka, ActivityBase (IDBS)) gde su četiri parametra bila IC50, Hill-ov nagib, pretranziciona polazna vrednost (0% INH), i post-tranziciona polazna vrednost (100% INH); pri čemu su poslednja dva parametra fiksirana na nula i 100%, respektivno, kako je unapred određeno.
[0147] Analiza za Y641N EZH2 je izvedena kao u prethodnom tekstu upotrebom rekonstituisanih H3K27Me2 oligonukleozoma kao supstrata.
[0148] Tabela 2 prikazuje aktivnost izabranih jedinjenja ovog pronalaska u analizi inhibicije aktivnosti EZH2 i Y641N EZH2. IC50 vrednosti su prikazane kao što sledi: "A" označava IC50 vrednost od manje od 100 nM; "B" označava IC50 vrednost od 100 nM do 1 µM; "C" označava IC50vrednost od više od 1 µM i manje od 10 µM za svaki enzim; "D" označava IC50vrednost od više od 10 µM za svaki enzim; i "*(X µM)" označava da inhibicija nije zabeležena na najvišoj koncentraciji (tj., X µM) testiranog jedinjenja.
Tabela 2. IC50 vrednosti za jedinjenja formule I protiv EZH2 i Y641N EZH2 mutantnih enzima.
Primer 17. Merenja EC50 za inhibitore u analizama HeLa ćelija
[0149] H3K27me3 MSD Hela analiza. Tripsinizovane HeLa ćelije su brojane i razblažene u 10% DMEM (Life Technologies, Cat. # 10569) do 5000 ćelija/75 µL. Sedamdeset i pet µL ćelija je postavljeno u svaku komoricu 96-komorne ploče sa ravnim dnom i inkubirano na 37°C u trajanju od 4 časa. Dvadeset i pet µL test jedinjenja (u različitim koncentracijama) je dodato u ćelije i inkubacija je nastavljena na 37°C u trajanju od 96 časova. Medijum je zatim uklonjen i ćelije su isprane jednom ledeno hladnim PBS. Četrdeset µL ledenog hladnog MSD pufera AT (10 mM HEPES, pH 7.9, 5 mM MgCl2, 0.25M saharoza, Benzonaza (1:10000), 1% Triton X-100 dopunjen svežim 1x koktelom inhibitora proteaze i 1mM 4-(2Aminoetil)benzensulfonil fluorid hidrohlorid (AEBSF)) je dodat u svaku komoricu i ploče su postavljene na led u trajanju od 30 minuta. Deset µL od 5M NaCl je zatim dodato u svaku komoricu i inkubacija na ledu je nastavljena još 15 minuta. Materijal u svakoj komorici je suspendovan pipetiranjem gore i dole i zatim prebacivanjem u novu 96-komornu ploču. Ispražnjene komorice su isprane sa 150 µL ledeno hladnog 20mM Tris pH 7.5, 1mM EDTA, 1mM EGTA, dopunjene svežim 1x koktelom inhibitora proteaze i 1mM AEBSF ("pufer bez soli i bez deterdženta“) i prebačene u odgovarajuće komorice u novoj ploči. Tri stotine µL pufera bez soli i bez deterdženta je zatim dodato u svaku komoricu lizata i ploče su zamrznute na -80°C.
[0150] Istog dana, odgovarajući broj 96-komorne ploče sa vezanim MSD standardom su obložene sa 30 µL/komorici ukupnih H3 imobilizovanih antitela (Millipore, Cat # MAB3422) na 1 µg/mL koncentraciji u PBS. Rastvor antitela je ravnomerno raspoređen prvo pažljivim tapkanjem na strane ploča i zatim mućkanjem ploča nekoliko minuta na 1000 rpm. Ploče obložene antitelom su čuvane na 4°C preko noći.
[0151] Sledećeg dana lizati su otopljeni do sobne temperature. MSD ploče obložene antitelom su isprane 3X sa TBS-T (Tris-puferisani fiziološki rastvor (Fisher Scientific, Cat #BP2471-1) 0.2% Tween-20). Jedna stotina pedest µL 5% blokatora A u TBS-T je dodato u svaku komoricu. Komorice su pokrivene i mućkane na šejkeru na sobnoj temperaturi jedan čas. Korak blokatora A Korak je ponovljen drugi put. Posle uklanjanja blokatora, 25 µL ćelijskog lizata je prebačeno u svaku komorcu obloženu antitelom. Ploče su mućkane u trajanju od 2 časa na sobnoj temperaturi, lizat je uklonjen i ploče su ponovo isprane blokatorom A u TBS-T. Dvadeset i pet µL odgovarajuće sveže pripremljene mešavine antitela (uključujući primarna i sekundarna antitela) je dodato u svaku komoricu i ploče su mućkane 1 čas na sobnoj temperaturi. Mešavina antitela koja je korišćena je bila ona (ili obe) od onih naznačenih u tabeli u daljem tekstu:
Oba H3 antitela su dobijena iz Cell Signalling (Cat #s 4499 i 9733). Kozje anti-zečje antitelo je dobijeno iz Meso-Scale Discovery (Cat #R32AB-1).
[0152] Mešavina antitela je zatim uklonjena i komorice su isprane blokatorom A. Jedna stotina pedest µL sveže pripremljenog 1X MSD pufera za očitavanje (Meso-Scale Discovery; Cat #R927C-2) je zatim dodata u svaku komoricu i ploče su očitavane na MSD Sector 2400 uređaju za očitavanje ploča.
[0153] Rezultati su analizirani upotrebom Assay Assistant (Constellation Pharmaceuticals Inhouse product) i Activity Base (IDBS Ltd, Surrey, UK) obrasca. Datoteke sa podacima su importovane za Assay Assistant i specificirani su uslovi analize. Stvorena je jedistvena identifikacija analize ID i datoteke sa podacima su eksportovane u Activity Base. Obrazac analize je stvoren na Activity Base za merenje inhibicije H3K27me3 mark zavisne od doze i ćelijske vijabilnosti, respektivno. Očitavanje DMSO komorica je korišćeno za normalizaciju rezultata. Dobijene krive su fitovane upotrebom Activity base softvera Model 205 (IDBS Ltd, Surrey, UK). Rezultati su provereni za kvalitet, potvrđeni i integrisani u excel formatu upotrebom SARview (IDBS Ltd, Surrey, UK).
[0154] H3K27me3 Alpha Hela analiza (AlphaLISA). Deset različitih doza svakog test jedinjenja (u seriji od 3-strukih razblaženja) su postavljeni na ploču u dva ponavljanja u 384-komorne ploče tretirane kulturom tkiva (Catalog # 781080; Greiner Bio One; Monroe, North Carolina). Hela ćelije gajene u kulturi su tripsinizovane i brojane upotrebom Countess® ćelijskoj brojača (Catalog # C10281; Life Technologies, Grand Island, NY). Ćelije su razblažene do 67,000 ćelija po mL u 10 DMEM (Catalog # 10569-010 Life Technologies, Grand Island, NY) i 15 µL (1,000 ćelija) je postavljeno u ploču u svaku komoricu upotrebom Biotek MicroFlo™ Select Dispenser (BioTek Instruments, Inc. Vermont, USA),) 384-komorne ploče. Ploče su inkubirane na 37°C /5% CO2 u trajanju od 72 časa. Jedna od dve kopije ploča je obrađena za HeLa analizu i druga za vijabilnost.
[0155] U ploču obrađenu za AlphaLISA dodato je 5 µL po komorici Cell-Histone Lysis pufera (1X) (Catalog # AL009F1 Perkin Elmer; Waltham, MA) i ploča je inkubirana na sobnoj temperaturi u trajanju od 30 minuta na šejkeru za ploču sa niskom brzinom (Model# 4625-Q Thermo Scientific; Waltham, MA). Zatim, dodato je 10 µL po komorici pufera za ekstrakciju histona (catalog # AL009F2; Perkin Elmer; Waltham, MA) i ploča je dalje inkubirana na sobnoj temperaturi u trajanju od 20 min na šejkeru za ploču niske brzine. U svaku komoricu je zatim dodato 10 µL po komorici 5X mešavine anti-K27me3 akceptorskih kuglica plus biotinilovano anti-Histonsko H3 (C-ter) antitelo (razblaženo do krajnje koncentracije od 3nM) (Catalog #AL118 Perkin Elmer; Waltham, MA). Razblaženje akceptorskih kuglica i zatim anti-Histonski H3 bio je sa 1X Histone Detection puferom (Catalog # AL009F3 Perkin Elmer; Waltham, MA) koji je proizveden razblažen od 10X obezbeđenog stok rastvora. Ploča je hermetički zatvorena aluminijumskim hermetičkim poklopcem za ploču i inkubirana na 23°C u trajanju od 60 min. Zatim smo dodali 10µL 5X rastvora streptavidinskih donorskih kuglica (Catalog #6760002 Perkin Elmer; Waltham, MA) (20 µg/mL krajnja koncentracija u 1X Histone Detection puferu), ploča je hermetički zatvorena sa aluminijumskim poklopcem za ploču i inkubirana na 23°C u trajanju od 30 min. Ploče su zatim očitavane upotrebom EnVision- Alpha Reader (model # 2104 Perkin Elmer; Waltham, MA).
[0156] Ćelijska vijabilnost je analizirana dodavanjem 15 µL Cell Titer Glo ((Catalog #G7571 Promega Madison, WI) u svaku komoricu sa ćelijama sa medijumom. Ploče su inkubirane na sobnoj temperaturi u trajanju od 15 - 20 minuta na šejkeru za ploču na niskoj brzini. Ploče su zatim očitavane upotrebom EnVision- Alpha Reader (model # 2104 Perkin Elmer; Waltham, MA).
[0157] Rezultati iz obe analize su analizirani upotrebom Assay Assistant (Constellation Pharmaceuticals In-house product) i Activity Base (IDBS Ltd, Surrey, UK) obrasca. Datoteka sa podacima je importovana u Assay Assistant i specificirani su uslovi analize. Stvorena je jedinstvena identifikacija analize i datoteka sa podacima je eksportovana u Activity Base. Obrazac analize je stvoren na Activity Base da bi se merila inhibicija H3K27me3 mark zavisna od doze i ćelijska vijabilnost, respektivno. Očitavanje DMSO komorica je korišćeno za normalizaciju podataka. Dobijene krive su fitovane upotrebom Activity base softvera Model 205 (IDBS Ltd, Surrey, UK). Rezultati su provereni za kvalitet, potvrđeni i integrisani u excel formatu upotrebom SARview (IDBS Ltd, Surrey, UK).
[0158] Tabela 3 prikazuje aktivnost izabranih jedinjenja ovog pronalaska u dve različite HeLa ćelijske analize opisane u prethodnom tekstu. Vrednosti EC50 su prikazane kao što sledi: "A" označava vrednost EC50 od manje od 400 nM; "B" označava vrednost EC50 od 400 nM do 2 µM; "C" označava vrednost EC50veću od 2 µM i manju od 10 µM za svaki enzim; "D" označava vrednost EC50 veću od 10 µM za svaki enzim; i "*(X µM)" označava da inhibicija nije zabeležena na najvišoj koncentraciji (tj., X µM) testiranog jedinjenja.
Tabela 3. Vrednosti EC50 za izabrana jedinjenja prema pronalasku u Hela ćelijama koje eksprimiraju H3k27 Mutant EZH2.
Primer 18. Analiza inhibicije rasta tumora
[0159] Anti-tumorska efikasnost jedinjenja 362 i 365 u modelu ksenografta humanog limfoma Karpas422 u ženkama CB-17 SCID miševa bila je kao što sledi.
Životinje
[0160]
Vrsta: Mus musculus
Soj: CB-17 SCID miševi
Starost: 6-8 nedelje
Pol: ženski
Telesna težina: 18-22 g
Broj životinja: 50 miševa plus rezervni
Nabavljač životinja: Shanghai SLAC Laboratory Animal Co., LTD.
Ćelijska kultura
[0161] Karpas422 tumorske ćelije su održavane in vitro kao suspenziona kultura u RPMI1640 medijumu dopunjenom sa 10% toplotom inaktiviranog fetusnog telećeg saeruma na 37°C u atmosferi od 5% CO2 na vazduhu. Tumorske ćelije su rutinski subkultivisane dva puta nedeljno. Ćelije koje rastu u eksponencijalnoj fazi rasta su sakupljene i brojane za inokulaciju tumora.
Inokulacija tumora
[0162] Svaki miš je inokulisan subkutano na desnom boku sa Karpas422 tumorskim ćelijama (5 x 10<6>) u 0.2 ml PBS sa Matrigel (1:1) za razvoj tumora. Dan 23 posle inokulacije tumora je bio kao dan 0 posle početka tretmana kada je srednja vrednost veličine tumora dostigla približno 300 mm<3>. Svaka grupa se sastojala od 10 miševa sa tumrom.
Merenja tumora
[0163] Veličina tumora je merena tri puta nedeljno u dve dimenzije upotrebom kalipera, i zapremina je izražena u mm<3>upotrebom formule: V = 0.536 a x b<2>gde su a i b su dugi i kratki prečnik tumora, respektivno. Veličina tumora je zatim korišćena za izračunavanja T/C vrednosti. T/C vrednost (u procentima) je indikacija antitumorske efikasnosti; T i C su srednje zapremine tretiranih i kontrolnih grupa, respektivno, datog dana. TGI je izračunavan za svaku grupu upotrebom fromule: TGI (%) = [1-(Ti-T0)/ (Vi-V0)] 3100; Ti je srednja vrednost zapremine tumora grupe za tretman datog dana, T0 je srednja zapremina tumora grupe za tretman na dan početka tretmana, Vi je srednja vrednost zapremine tumora kontrolne grupe koja prima nosač istog dana sa Ti, i V0 je srednja vrednost zapremine tumora na dan početka tretmana.
Eksperimentalna krajnja tačka i sakupljanje uzoraka
[0164] 1). Plazma, tumor i mišić u EPZ-6438 grupi su sakupljeni na dan 16 posle početka tretmana 6 časova posle doziranja. Plazma, tumor i mišić u grupama koje su primale nosač, CPI-524369, CPI-524416 i CPI-591780 sakupljeni su na dan 25 posle početka tretmana 1 čas posle doziranja. 2). Sva krv je uzeta iz svake životinje sa EDTA-K2 kao antikoagulant. Plazma je podeljena na dva dela. Prvi deo je bio za PK analizu; drugi deo je zamrznut za rezervu. 3). Tumor je podeljen u tri dela. Prvi deo je brzo zamrznut za PK; drugi deo je brzo zamrznut za PD analizu; treći deo je zamrznut za rezervu. 4). Mišić je podeljen u dva dela. Prvi deo je brzo zamrznut za PK; drugi deo je zamrznut za rezervu.
Analiza inhibicije rasta tumora
[0165]
Tabela 4. Izračunavanje inhibicije rasta tumora za jedinjenja 362 i 365 u modelu ksenografta karpass422 izračunato na bazi merenja zapremine tumora na dan 25 ili dan 16 posle početka tretmana
[0166] Dodatni poželjni primeri izvođenja prema pronalasku su opisani ovde u daljem tekstu:
1. Jedinjenje koje ima strukturnu formulu (II):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde:
A je CH ili N;
R<1a>je izabran od -C1-C2 alkila i -O-(C1-C2 alkila), gde je R<1a>izborno supstituisan sa jednim ili više fluoro;
R<4a>je izabran od 1-halo(C1-C3)alkil-piperidin-4-ila, C3-C6cikloalkila izborno supstituisanog sa jednim ili više fluoro i tetrahidropiranil; i
R<13>je izabran od vodonika, halo, fenila, piridinila i -O-(C1-C4 alkila).
2. Jedinjenje prema primeru izvođenja 1, gde je R<1a>izabran od -OCH3, -CH3, -OCHF2, i -CH2CH3.
3. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvođenja 1 ili 2, gde je R<4a>izabran od 4,4-difluorocikloheksila, ciklopropila, tetrahidrodopiran-4-ila, 1-(t-butoksikarbonil)-piperidin-4-ila, 1-(izobutoksikarbonil)-piperidin-4-ila, 1-(izopropoksikarbonil)-piperidin-4-ila, 1-(2-fluoroetil)-piperidin-4-ila, 1-(2,2-difluoroetil)-piperidin-4-ila, 1-(2,2,2-trifluoroetil)-piperidin-4-ila, 1-(2-hidroksiizobutil)-piperidin-4-ila, 1-(hidroksiizopropilkarbonil)-piperidin-4-ila, 1-(etoksikarbonilmetil)-piperidin-4-ila, 1-(izopropilkarbonil)-piperidin-4-ila, 1-metilpiperidin-4-ila, 1-(metilsulfonil)-piperidin-4-ila, 1-(etilsulfonil)-piperidin-4-ila, 1-(izopropilsulfonil)-piperidin-4-ila, 1-(fenil)-piperidin-4-ila, 1-(oksetan-3-il)piperidin-4-ila, 1-(piridin-2-il)-piperidin-4-ila i 1-(pirimidin-2-il)-piperidin-4-ila.
4. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvođenja 1 do 3, gde je R<13>izabran od vodonika, hloro, fluoro, -OCH(CH3)2, fenila i piridin-2-ila.
5. Jedinjenje prema primeru izvođenja 1, gde, jedinjenje je N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1-(1-(1-(2,2,2-trifluoroetil)piperidin-4-il)etil)-1H-indol-3-karboksamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
6. Jedinjenje prema primeru izvođenja 5, gde, jedinjenje je R-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1-(1-(1-(2,2,2-trifluoroetil)piperidin-4-il)etil)-1H-indol-3-karboksamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
7. Jedinjenje prema primeru izvođenja 1, gde jedinjenje je 1-(1-(1-(2,2-difluoroetil)piperidin-4-il)etil)-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1H-indol-3-karboksamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
8. Jedinjenje prema primeru izvođenja 7, gde, jedinjenje je R-1-(1-(1-(2,2-difluoroetil)piperidin-4-il)etil)-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1H-indol-3-karboksamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
9. Jedinjenje prema primeru izvođenja 1, gde, jedinjenje je 1-(1-(1-etilpiperidin-4-il)etil)-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1H-indol-3-karboksamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
10. Jedinjenje prema primeru izvođenja 9, gde, jedinjenje je R-1-(1-(1-etilpiperidin-4-il)etil)-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1H-indol-3-karboksamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
11. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od primera izvođenja 1 do 10, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so; i farmaceutski prihvatljiv nosač.
12. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvođenja 1 do 10, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju bolesti ili poremećaja povezanog sa ćelijskom proliferacijom.
13. Jedinjenje za upotrebu prema primeru izvođenja 12, gde, bolest je kancer.
14. Jedinjenje za upotrebu prema primeru izvođenja 13, gde je kancer izabran od kancera dojke, kancera prostate, kancera debelog creva, karcinoma renalnih ćelija, kancera glioblastoma multiforme, kancera bešike, melanoma, bronhijalnog kancera, limfoma i kancera jetre.

Claims (12)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje koje ima strukturnu formulu (II):
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde: A je CH ili N; R<1a>je izabran od -C1-C2alkila i -O-(C1-C2alkila), gde je R<1a>izborno supstituisan sa jednim ili više fluoro; R<4a>je izabran od 1-halo(C1-C3)alkil-piperidin-4-ila, C3-C6 cikloalkila izborno supstituisanog sa jednim ili više fluoro i tetrahidropiranila; i R<13>je izabran od vodonika, halo, fenila, piridinila i -O-(C1-C4 alkila).
  2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što R<1a>je izabran od -OCH3, -CH3, -OCHF2, i -CH2CH3.
  3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili 2, naznačeno time što je R<4a>izabran od 4,4-difluorocikloheksila, ciklopropila, tetrahidropiran-4-il, 1-(2-fluoroetil)-piperidin-4-ila, 1-(2,2-difluoroetil)-piperidin-4-ila, 1-(2,2,2-trifluoroetil)-piperidin-4-ila.
  4. 4. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, naznačeno time što R<13>je izabran od vodonika, hloro, fluoro, -OCH(CH3)2, fenila i piridin-2-ila.
  5. 5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno tim što, jedinjenje je N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1-(1-(1-(2,2,2-trifluoroetil)piperidin-4-il)etil)-1H-indol-3-karboksamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  6. 6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 5, naznačeno time što, jedinjenje je R-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1-(1-(1-(2,2,2-trifluoroetil)piperidin-4-il)etil)-1H-indol-3-karboksamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  7. 7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što, jedinjenje je 1-(1-(1-(2,2-difluoroetil)piperidin-4-il)etil)-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1H-indol-3-karboksamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  8. 8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 7, naznačeno time što, jedinjenje je R-1-(1-(1-(2,2-difluoroetil)piperidin-4-il)etil)-N-((4-metoksi-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-1H-indol-3-karboksamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  9. 9. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač.
  10. 10. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju bolesti ili poremećaja povezanog sa ćelijskom proliferacijom.
  11. 11. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 10, naznačeno time što, bolest je kancer.
  12. 12. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 11, naznačeno time što je kancer izabran od kancera dojke, kancera prostate, kancera debelog creva, karcinoma renalnih ćelija, kancera glioblastoma multiforme, kancera bešike, melanoma, bronhijalnog kancera, limfoma i kancera jetre.
RS20170680A 2013-02-11 2014-02-11 Modulatori enzima koji modifikuju metil, njihove kompozicije i upotreba RS56207B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/US2013/025639 WO2013120104A2 (en) 2012-02-10 2013-02-11 Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
EP14708987.4A EP2953941B1 (en) 2013-02-11 2014-02-11 Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
PCT/US2014/015706 WO2014124418A1 (en) 2013-02-11 2014-02-11 Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS56207B1 true RS56207B1 (sr) 2017-11-30

Family

ID=50239937

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20170680A RS56207B1 (sr) 2013-02-11 2014-02-11 Modulatori enzima koji modifikuju metil, njihove kompozicije i upotreba

Country Status (16)

Country Link
EP (1) EP2953941B1 (sr)
KR (1) KR102219441B1 (sr)
CN (1) CN105102446B (sr)
CL (1) CL2015002239A1 (sr)
CR (1) CR20150457A (sr)
IL (1) IL239985B (sr)
MA (1) MA38341B1 (sr)
ME (1) ME02730B (sr)
PE (1) PE20160044A1 (sr)
PH (1) PH12015501720A1 (sr)
PL (1) PL2953941T3 (sr)
RS (1) RS56207B1 (sr)
SG (1) SG11201506077XA (sr)
SI (1) SI2953941T1 (sr)
TW (1) TWI629273B (sr)
WO (1) WO2014124418A1 (sr)

Families Citing this family (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011160206A1 (en) 2010-06-23 2011-12-29 Morin Ryan D Biomarkers for non-hodgkin lymphomas and uses thereof
US9051269B2 (en) 2011-11-18 2015-06-09 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
JP5989805B2 (ja) 2012-02-10 2016-09-07 コンステレーション・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＣｏｎｓｔｅｌｌａｔｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． メチル基変更酵素の調節物質、組成物及びその使用
CA2887243C (en) 2012-10-15 2024-04-09 Epizyme, Inc. Methods of treating cancer
US9969716B2 (en) 2013-08-15 2018-05-15 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Indole derivatives as modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
UY36462A (es) 2014-12-23 2016-07-29 Novartis Ag Compuestos de triazolopirimidina y usos de los mismos
WO2016130396A1 (en) * 2015-02-13 2016-08-18 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
US20180214519A1 (en) 2015-07-24 2018-08-02 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies for modulation of histone methyl modifying enzymes
WO2017023671A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Ezh2 inhibitors and modulation of regulatory t-cell function
KR20180042356A (ko) 2015-08-24 2018-04-25 에피자임, 인코포레이티드 암 치료 방법
TW201718598A (zh) 2015-08-27 2017-06-01 美國禮來大藥廠 Ｅｚｈ２抑制劑
US10577350B2 (en) 2015-08-28 2020-03-03 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Crystalline forms of (R)-N-((4-methoxy-6-methyl-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-2-methyl-1-(1-(1-(2,2,2-trifluoroethyl)piperidin-4-yl)ethyl)-1H-indole-3-carboxamide
MX394355B (es) 2015-10-06 2025-03-24 Epizyme Inc Método de tratamiento de meduloblastoma con un inhibidor de ezh2.
EP3371601A1 (en) 2015-11-05 2018-09-12 Epizyme Inc Flow cytometry for monitoring histone h3 methylation status
WO2017132518A1 (en) 2016-01-29 2017-08-03 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
CN105669647B (zh) * 2016-02-22 2018-05-04 上海皓元生物医药科技有限公司 一种组蛋白甲基化酶ezh2抑制剂中间体的合成方法
EP3471830A4 (en) 2016-06-17 2020-02-26 Epizyme Inc EZH2 INHIBITORS TO TREAT CANCER
WO2017221092A1 (en) 2016-06-20 2017-12-28 Novartis Ag Triazolopyridine compounds and uses thereof
EP3472166A1 (en) 2016-06-20 2019-04-24 Novartis AG Imidazopyrimidine compounds useful for the treatment of cancer
ES2975263T3 (es) 2016-06-20 2024-07-04 Novartis Ag Formas cristalinas de un compuesto triazolopirimidínico
CN109843870A (zh) * 2016-10-19 2019-06-04 星座制药公司 Ezh2抑制剂的合成
EP3548032A2 (en) 2016-12-02 2019-10-09 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
TW201831181A (zh) 2017-01-19 2018-09-01 日商第一三共股份有限公司 用以用於治療ｈｔｌｖ－１相關脊髓病之醫藥組成物
US10266542B2 (en) 2017-03-15 2019-04-23 Mirati Therapeutics, Inc. EZH2 inhibitors
US11642346B2 (en) 2017-03-31 2023-05-09 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
US20230201212A1 (en) 2017-06-13 2023-06-29 Epizyme, Inc. Inhibitors of ezh2 and methods of use thereof
US20210161883A1 (en) 2017-07-10 2021-06-03 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Ezh2 inhibitor-induced gene expression
WO2019094552A1 (en) * 2017-11-09 2019-05-16 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
BR112020008325A2 (pt) 2017-11-14 2020-10-20 Pfizer Inc. terapias de combinação com o inibidor de ezh2
CN109879790B (zh) * 2017-12-06 2022-09-20 华东师范大学 以吲哚或吲哚类似物为母核结构的酰胺类小分子有机化合物、用途及其制备方法
CN111757734A (zh) 2017-12-28 2020-10-09 星座制药公司 通过组合疗法的ezh2抑制剂的药代动力学增强
MX2020007974A (es) 2018-01-31 2020-09-07 Mirati Therapeutics Inc Inhibidores de complejo represivo polycomb 2 (prc2).
CN110229151B (zh) * 2018-03-06 2021-09-10 上海海和药物研究开发股份有限公司 吲嗪类化合物、其制备方法及用途
CN110229157B (zh) * 2018-03-06 2022-06-21 上海海和药物研究开发股份有限公司 嘧啶并五元芳香杂环类化合物、其制备方法及用途
JP7453916B2 (ja) 2018-03-14 2024-03-21 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッド Ｏ－糖タンパク質－２－アセトアミド－２－デオキシ－３－ｄ－グリコピラノシダーゼ阻害剤
HRP20240793T1 (hr) 2018-04-18 2024-09-13 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Modulatori enzima koji modificiraju metil, njihovi pripravci i upotreba
EP3797108B1 (en) 2018-05-21 2022-07-20 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
EP3823671B1 (en) 2018-07-09 2024-02-07 Fondation Asile Des Aveugles Inhibition of prc2 subunits to treat eye disorders
US12180205B2 (en) 2018-09-19 2024-12-31 Biogen Ma Inc. O-glycoprotein-2-acetamido-2-deoxy-3-d-glucopyranosidase inhibitors
ES2968733T3 (es) 2018-12-05 2024-05-13 Biogen Ma Inc Derivados morfolinilo, piperazinilo, oxazepanilo y diazepanilo útiles como inhibidores de o-glicoproteína-2-acetamido-2-desoxi-3-d-glucopiranosidasa
WO2020139339A1 (en) 2018-12-27 2020-07-02 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Ezh2 and androgen receptor signaling inhibitors as tools for targeting prostate cancer
JP7504898B2 (ja) 2019-02-04 2024-06-24 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッド 二環式エーテルｏ－糖タンパク質－２－アセトアミド－２－デオキシ－３－ｄ－グルコピラノシダーゼ阻害剤
JP7663503B2 (ja) 2019-03-08 2025-04-16 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッド アゼチジニルｏ－糖タンパク質－２－アセトアミド－２－デオキシ－３－ｄ－グルコピラノシダーゼ阻害剤
US12421228B2 (en) 2019-04-22 2025-09-23 Mirati Therapeutics, Inc. Naphthyridine derivatives as PRC2 inhibitors
EP3980422A1 (en) 2019-06-05 2022-04-13 Mirati Therapeutics, Inc. Imidazo[1,2-c]pyrimidine derivatives as prc2 inhibitors for treating cancer
LT4003532T (lt) 2019-07-24 2024-11-11 Constellation Pharmaceuticals, Inc. 7-chlor-2- (4-(3-metoksiazetidin-1-il)cikloheksil)-2,4-dimetil-n-((6-metil-4-(metiltio)-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)benzo[d][1,3]dioksol-5-karboksamido kristalinės formos
MX2022000933A (es) 2019-07-24 2022-05-06 Constellation Pharmaceuticals Inc Inhibición de ezh2 en tratamientos combinados para el tratamiento del cáncer.
AR120324A1 (es) 2019-10-29 2022-02-09 Biogen Ma Inc Inhibidores de o-glucoproteína-2-acetamido-2-deoxi-3-d-glucopiranosidasa espirocíclica
WO2022031701A1 (en) 2020-08-03 2022-02-10 Biogen Ma Inc. Crystaline forms of an o-glycoprotein-2-acetamido-2-deoxy-3-d-glucopyranosidase inhibitor
CN112679505B (zh) * 2020-12-25 2022-04-22 杭州澳赛诺生物科技有限公司 一种4-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶的合成方法
WO2022150962A1 (en) 2021-01-12 2022-07-21 Westlake Pharmaceutical (Hangzhou) Co., Ltd. Protease inhibitors, preparation, and uses thereof
IL308348A (en) 2021-05-20 2024-01-01 Sironax Ltd RIP1 modulators including cyclic ureas aztidine, their preparation and uses
US20250049802A1 (en) 2021-12-14 2025-02-13 Pfizer Inc. Combination therapies and uses for treating cancer
WO2023115203A1 (en) * 2021-12-20 2023-06-29 Fairhaven Pharmaceuticals Inc. Oxer1 antagonists and uses thereof
EP4514391A1 (en) 2022-04-27 2025-03-05 Daiichi Sankyo Company, Limited Combination of antibody-drug conjugate with ezh1 and/or ezh2 inhibitor

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA023788B1 (ru) * 2010-05-07 2016-07-29 ГЛЭКСОСМИТКЛАЙН ЭлЭлСи Производные индола и фармацевтические композиции на их основе
WO2012118812A2 (en) * 2011-02-28 2012-09-07 Epizyme, Inc. Substituted 6,5-fused bicyclic heteroaryl compounds
JO3363B1 (ar) * 2011-04-13 2019-03-13 Epizyme Inc مركبات بنزين مستبدلة بأريل أو أريل غير متجانس
JP5989805B2 (ja) * 2012-02-10 2016-09-07 コンステレーション・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＣｏｎｓｔｅｌｌａｔｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． メチル基変更酵素の調節物質、組成物及びその使用

Also Published As

Publication number Publication date
IL239985B (en) 2018-11-29
ME02730B (me) 2017-10-20
PE20160044A1 (es) 2016-02-11
SI2953941T1 (sl) 2017-08-31
MA38341B1 (fr) 2018-11-30
PL2953941T3 (pl) 2017-11-30
HK1218648A1 (en) 2017-03-03
CN105102446A (zh) 2015-11-25
PH12015501720B1 (en) 2015-11-09
PH12015501720A1 (en) 2015-11-09
CL2015002239A1 (es) 2016-02-05
WO2014124418A1 (en) 2014-08-14
TW201443038A (zh) 2014-11-16
EP2953941A1 (en) 2015-12-16
CN105102446B (zh) 2018-01-23
CR20150457A (es) 2015-10-20
KR20150119201A (ko) 2015-10-23
TWI629273B (zh) 2018-07-11
IL239985A0 (en) 2015-09-24
SG11201506077XA (en) 2015-08-28
MA38341A1 (fr) 2018-01-31
EP2953941B1 (en) 2017-04-05
KR102219441B1 (ko) 2021-02-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RS56207B1 (sr) Modulatori enzima koji modifikuju metil, njihove kompozicije i upotreba
JP5989923B2 (ja) メチル基変更酵素の調節物質、組成物及びその使用
US9969716B2 (en) Indole derivatives as modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
US9745305B2 (en) Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
TW202413362A (zh) 新型prmt5抑制劑及其應用
WO2013078320A1 (en) Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
KR102947064B1 (ko) 약학적 화합물
HK1218648B (en) Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof