RS56233B1

RS56233B1 - Nova jedinjenja

Info

Publication number: RS56233B1
Application number: RS20170841A
Authority: RS
Inventors: Diane Mary Coe; Stephen Allan Smith
Original assignee: Glaxosmithkline Llc
Priority date: 2012-11-20
Filing date: 2013-11-18
Publication date: 2017-11-30
Also published as: IL238800A0; BR112015011400A2; IL238800B; PL2922549T3; DOP2015000121A; AU2013348218A1; CN104780922B; ME02867B; PT2922549T; PH12015501100B1; WO2014081645A1; EP2922549B1; JP6228223B2; AU2013348218B2; DK2922549T3; HK1208826A1; CL2015001342A1; MX2015006375A; KR20150085055A; US9907847B2

Description

Opis

Polje tehnike pronalaska

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenja, procese za njihovu izradu, kompozicije koje ih sadrže, na njihovu upotrebu u tretmanu različitih poremećaja, posebno alergijskih bolesti i drugih inflamatornih stanja, na primer, alergijskog rinitisa i astme, infektivnih bolesti i kancera, i kao imunopotencijatora vakcine.

Poreklo pronalaska

[0002] Kičmenjaci su konstantno izloženi pretnji infekcije mikroorganizama i razvili su mehanizme imune zaštite da se eliminišu infektivni patogeni. Kod sisara, ovaj imuni sistem obuhvata dve grane; urođeni imunitet i stečeni imunitet. Prva linija odbrane domaćina je urođeni imuni sistem koji se održava makrofagima i dendritnim ćelijama. Stečeni imunitet uključuje eliminaciju patogena u kasnijoj fazi infekcija i takođe omogućava generisanje imunološkog pamćenja. Stečeni imunitet je visoko specifičan zbog obimnog registra limfocita sa antigen-specifičnim receptorima koji su podvrgnuti pregrupisavanju gena.

[0003] Ključno za generisanje efikasnog urođenog imunog odgovora kod sisara su mehanizmi koji dovode do indukcije interferona i drugih citokina koji utiču na ćelije da indukuju brojne efekte. Kod ljudi, tip I interferoni su familija povezanih proteina enkodiranih genima na hromozomu 9 i koji enkodiraju najmanje 13 izooblika interferona alfa (IFNα) i jedan izooblik interferona beta (IFNβ). Interferon je prvi opisan kao supstanca koja može da zaštiti ćelije od virusne infekcije (Isaacs & Lindemann, J. Virus Interference. Proc. R. Soc. Lon. Ser. B. Biol. Sci. 1957: 147, 258-267). Rekombinantni IFNα je prvo odobreno biološko terapeutsko sredstvo i postao je važna terapija u virusnim infekcijama i kod kancera. Pored direktnog antivirusnog delovanja na ćelije, za interferone se zna da su potentni modulatori imunog odgovora delujući na ćelije imunog sistema. (Gonzalez-Navajas J.M. i saradnici, Nature Reviews Immunology, 2012; 2,125-35).

[0004] Tolu-slični receptori (TLRi) su familija deset receptora za prepoznavanje molekulskih obrazaca opisanih kod ljudi (Gay, N.J. i saradnici, Annu. Rev. Biochem., 2007: 46, 141-165). TLRi se predominantno pojavljuju u urođenim imunim ćelijama gde je njihova uloga da prate znake infekcije u okruženju i akviranjem mobilišu mehanizme odbrane u cilju eliminacije invazije patogna. Rani urođeni imuni odgovori aktivirani od strane TLRa ograničavaju širenje infekcije, dok pro-inflamatorni citokini i hemokini koje oni indukuju dovode do sakupljanja i aktivacije ćelija sa antigenom, B ćelija i T ćelija. TLRi mogu da moduliraju prirodu adaptivnog imunog odgovora da se dobije odgovarajuća zaštita aktivacijom dendritnih ćelija i oslobađanjem citokina (Akira S. i saradnici, Nat. Immunol., 2001: 2, 675-680). Profil odgovora dobijen od različitih TLR agonista zavisi od tipa aktiviranih ćelija.

[0005] TLR7 pripada podgrupi TLRa (TLRi 3, 7, 8, i 9), lokalizovanih u endosomalnom delu ćelija koji je specijalizovan za detekciju ne-pripadajućih nukleinskih kiselina. TLR7 ima ključnu ulogu u anti-virusnoj odbrani prepoznavanjem ssRNA (Diebold S.S. i saradnici, Science, 2004: 303, 1529-1531; i Lund J. M. i saradnici, PNAS, 2004: 101, 5598-5603). TLR7 ima ograničeni profil ekspresije kod ljudi i predominantno se pojavljuje preko B ćelija i plazmacitoidnih dendritnih ćelija (pDC), i u manjoj meri preko monocita. Plazmacitoidne DCe su jedinstvena populacija dendritnih ćelija izdvojenih iz limfoida (0.2-0.8% mononuklearnih ćelija periferne krvi (PBMCe)) koje su primarne ćelije za produkciju tip I interferona lučenjem visokih vrednosti interferona alfa (IFNα) i interferona beta (IFNβ) kao odgovor na virusne infekcije (Liu Y-J, Annu. Rev. Immunol., 2005: 23, 275-306).

[0006] Primena jedinjenja malih molekula koja mogu da stimulišu urođeni imuni odgovor, uključujući aktivaciju tip I interferona i drugih citokina preko Tolu-sličnih receptora, može da postane važna strategija u tretmanu ili prevenciji bolesti kod ljudi. Opisani su agonisti TLR7 male molekule koji mogu da indukuju interferon alfa kod životinja i kod ljudi (Takeda K. i saradnici, Annu. Rev. Immunol., 2003: 21, 33576). TLR7 agonisti uključuju jedinjenja imidazohinolina kao što su imikvimod i rezikvimod, analoge oksoadenina i takođe analoge nukleozida kao što su loksoribin i 7-tia-8-oksogvanozin za koje se već dugo zna da indukuju interferon alfa (Czarniecki. M., J. Med, Chem., 2008: 51, 6621-6626; Hedayat M. i saradnici, Medicinal Research Reviews, 2012: 32, 294-325). Ovaj tip imunomodulatorne strategije ima potencijal da identifikuje jedinjenja koja mogu da budu korisna u tretmanu alergijskih bolesti (Moisan J. i saradnici, Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol., 2006: 290, L987-995), virusnih infekcija (Horcroft N.J. i saradnici, J. Antimikrob. Chemther, 2012: 67, 789-801), kancera (Krieg A., Curr. Oncol. Rep., 2004: 6(2), 88-95), drugih inflamatornih stanja kao što su bolest nadražajnih creva (Rakoff-Nahoum S., Cell., 2004, 23, 118(2): 229-41), i kao imunopotencijatori vakcina (Persing i saradnici Trends Microbiol.2002: 10(10 Suppl), S32-7).

[0007] Još preciznije, alergijske bolesti su povezane sa Th2-stečeni imunim odgovorom na alergene. Th2 odgovori su povezani sa rastom nivoa IgE, koji, svojim delovanjem na mast ćelije, povećava hipersenzitivnost na alergene, rezultirajući simptomima koji se vide, na primer, kod astme i alergijskog rinitisa. Kod zdravih osoba, imuni odgovor na alergene je mnogo više uravnotežen zajedničkim delovanjem Th2/Th1 i regulisanim odgovorom T ćelija. Pokazano je da TLR7 ligandi redukuju Th2 citokine i pojačavaju oslobađanje Th1 citokina in vitro i poboljšavaju Th2-tip inflamatornih odgovora na modelima alergijskih pluća in vivo (Duechs M.J., Pulmonary Pharmacology & Therapeutics, 2011: 24, 203-214; Fili L. i saradnici, J. All. Clin. Immunol., 2006: 118, 511-517; Tao i saradnici, Chin. Med. J., 2006: 119, 640-648; Van L.P. Eur. J. Immunol., 2011: 41, 1992-1999). Prema tome, TLR7 ligandi imaju potencijal da uravnoteže imuni odgovor koji se javlja kod alergičnih pojedinaca i da dovedu do modifikacije bolesti. Savremene kliničke studije sa TLR7 agonistima su pokazale ponovljenu intranazalnu stimulaciju TLR7 da produkuje održivu redukciju u odgovorima na alergene kod pacijenata i sa alergijskim rinitisom i sa alergijskom astmom (Greiff L.

Respiratory Research, 2012: 13, 53; Leaker B.R. i saradnici, Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2012: 185, A4184).

[0008] WO2005/097800 opisuje heterobiciklična jedinjenja koja inhibiraju aktivnost enzima tirozin kinaze i njihovu upotrebu u tretmanu i/ili prevenciji različitih bolesti i stanja kao što je kancer.

[0009] WO97/49706 opisuje 7-amino-pirolo[3,2-d]pirimidine efikasne kao inhibitori tirozin protein kinaze i njihovu upotrebu kod toplokrvnih životinja u tretmanu bolesti kostiju i drugih bolesti koje su prvenstveno izazvane inhibicijom tirozin protein kinaze.

[0010] US2009/233948 opisuje jedinjenja kao što su jedinjenja pirolo[2,3]pirimidina koja su inhibitori nukleozid fosforilaza i nukleozidaza.

[0011] U istraživanju novih malih molekula inducera humanog interferona IFNα razvijena je strategija ispitivanja koja karakteriše male molekule (nezavisno od mehanizma) koja se zasniva na stimulaciji primarnih humanih donor ćelija ili cele krvi sa jedinjenjima i koja je ovde otkrivena.

Kratak sadržaj pronalaska

[0012] U prvom aspektu, predmet ovog pronalaska su jedinjenja formule (I) i njihove soli:

gde:

R1 je n-C4-6alkil ili C1-2alkoksiC1-2alkil-grupa;

R2 je vodonik ili metil grupa;

svaki R3je hidroksi grupa, halo ili n-C1-3alkil grupa;

m je ceo broj koji ima vrednost od 2 do 4;

n je ceo broj koji ima vrednost od 0 do 3;

p je ceo broj koji ima vrednost od 0 do 2.

[0013] Pokazano je da su neka jedinjenja iz pronalaska induceri humanog interferona i da mogu da poseduju poželjan profil mogućnosti razvoja u poređenju sa poznatim inducerima humanog interferona. Pored toga, neka jedinjenja iz pronalaska mogu da pokažu selektivnost za IFNα u odnosu na TNFα. Jedinjenja koja indukuju humani interferon mogu da budu korisna u tretmanu različitih poremećaja, na primer, u tretmanu alergijskih bolesti i drugih inflamatornih stanja, na primer, alergijskog rinitisa i astme, u tretmanu infektivnih bolesti i kancera. U skladu sa tim, dalji predmet pronalaska su farmaceutske kompozicije koje uključuju jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. Ovaj pronalazak se dalje odnosi na postupke tretmana poremećaja povezanih sa tim, koristeći jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutsku kompoziciju koja uključuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0014] Jedinjenja iz pronalaska mogu takođe da se koriste kao imunopotencijatori vakcina. U vezi sa tim, ovaj pronalazak se dalje odnosi na kompoziciju vakcine koja uključuje jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i antigen ili kompoziciju antigena.

[0015] Neka jedinjenja iz pronalaska su potentni imunomodulatori i u skladu sa tim sa njima treba pažljivo rukovati.

Detaljan opis pronalaska

[0016] U prvom aspektu, predmet ovog pronalaska su jedinjenja formule (I) i njihove soli:

gde:

R1 je n-C4-6alkil ili C1-2alkoksiC1-2alkil- grupa;

R2je vodonik ili metil grupa;

svaki R3je hidroksi grupa, halo ili n-C1-3alkil grupa;

m je ceo broj koji ima vrednost od 2 do 4;

n je ceo broj koji ima vrednost od 0 do 3;

p je ceo broj koji ima vrednost od 0 do 2.

[0017] U narednom aspektu, R1 je n-butil.

[0018] U narednom aspektu, R1je etoksimetil.

[0019] U narednom aspektu, R1 je 2-metoksietil.

[0020] U narednom aspektu, R2 je vodonik.

[0021] U narednom aspektu, R2je metil.

[0022] U narednom aspektu, m je ceo broj koji ima vrednost od 2, 3 ili 4.

[0023] U narednom aspektu, n je ceo broj koji ima vrednost od 1 ili 2.

[0024] U narednom aspektu, p je 0.

[0025] U narednom aspektu, R3je hidroksi ili halo.

[0026] U narednom aspektu, p je 1 i R3 je hidroksi ili fluor.

[0027] U narednom aspektu, p je 2 i R3je fluor.

[0028] Primeri jedinjenja formule (I) su dati u narednoj grupi i predstavljaju naredni aspekt pronalaska:

2-Butil-7-(6-(piperidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-Butil-7-(5-(piperidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-Butil-7-(4-(piperidin-1-il)butil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-(Etoksimetil)-7-(6-(piperidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-(2-Metoksetil)-7-(6-(piperidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-Butil-6-metil-7-(6-(piperidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-Butil-6-metil-7-(5-(piperidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-Butil-6-metil-7-(4-(piperidin-1-il)butil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-Butil-7-(5-(pirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-Butil-7-(6-(pirolidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-pentil-7-(6-(piperidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

7-(5-(Azepan-1-il)pentil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

7-(4-(Azepan-1-il)butil)-2-butil-6-metil-5Hpirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-Butil-6-metil-7-(6-(pirolidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

7-(6-(Azetidin-1-il)heksil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-Butil-6-metil-7-(5-(pirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

7-(5-(Azetidin-1-il)pentil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

7-(5-(Azetidin-1-il)pentil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-Butil-6-metil-7-(4-(pirolidin-1-il)butil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-Butil-7-(5-(4,4-difluorpiperidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-Butil-7-(5-(4-fluorpiperidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

7-(5-(4-Fluoropiperidin-1-il)pentil)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 1-(5-(4-Amino-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pentil)piperidin-4-ol;

(R)-2-Butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; (S)-2-Butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

(R)-7-(5-(3-fluoropirolidin-1-il)pentil)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; (S)-7-(5-(3-fluoropirolidin-1-il)pentil)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; (S)-1-(5-(4-Amino-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pentil)pirolidin-3-ol; i

1-(5-(4-Amino-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pentil)azetidin-3-ol;

7-(6-(Azepan-1-il)heksil)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-Butil-7-(6-(4-fluorpiperidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

(R)-2-Butil-7-(6-(3-fluorpirolidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

(S)-2-Butil-7-(6-(3-fluorpirolidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

(S)-2-Butil-7-(5-(2-metilpirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

(R)-2-Butil-7-(5-(2-metilpirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-Butil-7-(5-(3-metilazetidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-Butil-7-(5-(3-fluorazetidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-Butil-6-metil-7-(6-(pirolidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-Butil-7-(5-(4-fluorpiperidin-1-il)pentil)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

(S)-2-Butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pentil)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; (R)-2-Butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pentil)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-7-(5-(3-fluorazetidin-1-il)pentil)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin;

2-(2-Metoksetil)-7-(5-(pirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin, i njihove soli.

[0029] Kako se ovde koristi, naziv "alkil" se odnosi na zasićeni, ravan lanac ugljovodonika koji ima navedeni broj atoma članova. Na primer, n-C4-6 se odnosi na alkil zasićeni, ravan lanac ugljovodonika koji ima od 4 do 6 atoma ugljenika. Ukoliko nije drugačije navedeno, alkil grupe su nesupstituisane. Naziv "alkil" uključuje, ali se ne ograničava samo na, n-butil.

[0030] Kako se ovde koristi, naziv "alkoksi" se odnosi na zasićeni, ravan lanac ugljovodonika koji ima navedeni broj atoma članova vezanih jednostrukom vezom za atom kiseonika. Na primer, C1-2alkoksi se odnosi na alkoksi grupu koja ima 1 ili 2 atoma ugljenika, koji mogu da se označe kao metoksi ili etoksi, tim redom.

[0031] Kako se ovde koristi, naziv "halo." se odnosi na fluor, hlor, brom i jod.

[0032] Treba da se razume da sve što se ovde odnosi na jedinjenja iz pronalaska označava jedinjenje formule (I) kao slobodnu bazu, ili kao so, na primer farmaceutski prihvatljivu so.

[0033] U jednom aspektu pronalaska, jedinjenje formule (I) je u obliku slobodne baze.

[0034] Soli jedinjenja formule (I) uključuju farmaceutski prihvatljive soli i soli koje ne moraju da budu farmaceutski prihvatljive, ali mogu da budu korisne za izradu jedinjenja formule (I) i njihovih farmaceutski prihvatljivih soli. U jednom aspektu pronalaska, jedinjenje formule (I) je u obliku farmaceutski prihvatljive soli. Soli mogu da se dobiju sa nekim neorganskim ili organskim kiselinama.

[0035] Primeri soli su farmaceutski prihvatljive soli. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju soli dobijene dodatkom kiseline. Za pregled odgovarajućih soli videti Berge i saradnici, J. Pharm. Sci., 66:1-19 (1977).

[0036] Primeri farmaceutski prihvatljivih soli jedinjenje formule (I) nastalih dodatkom kiseline uključuju dodavanje neorganskih kiselina kao što su, na primer, hlorovodonična kiselina, ortofosforna kiselina, azotna kiselina, fosforna kiselina ili sumporna kiselina, ili organske kiseline kao što su, na primer, metansulfonska kiselina, etansulfonska kiselina, ptoluensulfonska kiselina, sirćetna kiselina, propionska kiselina, mlečna kiselina, limunska kiselina, fumarna kiselina, jabučna kiselina, sukcinatna kiselina, salicilna kiselina, maleinska kiselina, glicerofosforna kiselina, vinska, benzoeva, glutaminska, aspartanska, benzensulfonska, naftalensulfonska kao što je 2-naftalensulfonska, heksanoatna kiselina ili acetilsalicilna kiselina.

[0037] U svom okviru, pronalazak uključuje sve moguće stehiometrijske i ne-stehiometrijske oblike soli jedinjenja formule (I). Na primer, dimaleatnu ili hemi-sukcinatnu so jedinjenja formule (I).

[0038] Soli mogu da se formiraju tehnikama koje su dobro poznate u tehnici, na primer precipitacijom iz rastvora a nakon toga filtracijom ili evaporacijom rastvarača.

[0039] Uobičajeno, farmaceutski prihvatljiva so nastala dodatkom kiseline može da se formira reakcijom jedinjenja formule (I) sa odgovarajućom kiselinom (kao što su bromovodonična, hlorovodonična, sumporna, maleatna, p-toluensulfonska, metansulfonska, naftalensulfonska ili sukcinatna kiselina), opciono u pogodnom rastvaraču kao što je neki organski rastvarač, da se dobije so koja se običano izoluje, na primer, kristalizacijom i filtracijom.

[0040] Jasno je da mnoga organska jedinjenja mogu da formiraju komplekse sa rastvaračima u kojima reaguju ili iz kojih precipitiraju ili kristališu. Ovi kompleksi su poznati "solvati". Na primer, kompleks sa vodom je poznat kao "hidrat". Rastvarači sa visokom tačkom topljenja i/ili rastvarači sa izraženim osobinama da formiraju vodonične veze, kao što su voda, etanol, izo-propil alkohol i N-metil pirolidinon, mogu da se koriste za formiranje solvata. Postupci za identifikaciju solvata uključuju, ali se ne ogrančavaju samo na, NMR i mikroanalize. Solvati jedinjenja formule (I) su obuhvaćeni okvirom ovog pronalaska. Kako se ovde koristi, naziv solvat obuhvata solvate i jedinjenja u obliku slobodne baze kao i bilo koje njihove soli.

[0041] Neka od jedinjenja iz pronalaska mogu da sadrže asimetrične atome i/ili višestruke veze i stoga mogu da egzistiraju u jednom ili više stereoizomernih oblika. Ovaj pronalazak obuhvata sve stereoizomere jedinjenja iz pronalaska, uključujući optičke izomere ili kao pojedinačne stereoizomere ili kao njihove smeše, uključujući racematne modifikacije. Bilo koji stereoizomer može da sadrži manje od 10% težinskih, na primer manje od 5% težinskih, ili manje od 0.5% težinskih delova, bilo kog drugog stereoizomera. Na primer, bilo koji optički izomer može da sadrži manje od 10% težinskih, na primer manje od 5% težinskih ili manje od 0.5% težinskih delova, svog antipoda.

[0042] Neka od jedinjenja iz pronalaska mogu da egzistiraju u tautomernim oblicima. Jasno je da ovaj pronalazak obuhvata sve tautomere jedinjenja iz pronalaska, ili kao pojedinačne tautomere ili kao njihove smeše.

[0043] Jedinjenja iz pronalaska mogu da budu u kristalnom ili amorfnom obliku. Osim toga, neki od kristalih oblika jedinjenja iz pronalaska mogu da egzistiraju kao polimorfi, pri čemu su svi obuhvaćeni okvirom ovog pronalaska. Od posebnog interesa je termodinamički najstabilniji polimorfni oblik ili oblici jedinjenja iz ovog pronalaska.

[0044] Polimorfni oblici jedinjenja iz pronalaska mogu da se karakterišu i diferenciraju pomoću brojnih uobičajenih analitičkih tehnika, uključujući, ali se ne ogrančavajući samo na, difrakciju X-zraka praškastog uzorka (XRPD), infracrvenu spektroskopiju (IR), Raman spektroskopiju, diferencijalnu skenirajuću kalorimatriju (DSC), termogravimetrijske analize (TGA) i nuklearnu magnetnu rezonancu čvrstog stanja (ssNMR).

[0045] Ovaj pronalazak takođe uključuje sve pogodne izotopne varijante jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Izotopna varijacija jedinjenja formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, se definiše kao ona u kojoj je najmanje jedan atom zamenjen sa atomom koji ima isti atomski broj ali se atomska masa razlikuje od atomske mase koja se obično nalazi u prirodi. Primeri izotopa koji mogu da se inkorporiraju u jedinjenja iz pronalaska uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fluora i hlora, kao što su<2>H,<3>H,<13>C,<14>C,<15>N,<17>O,<18>O,<18>F i<36>Cl, tim redom. Neke izotopne varijante jedinjenja formule (I) ili njihove soli ili solvata, na primer, one u kojima je inkorporiran radioaktivni izotop kao što su<3>H ili<14>C su korisne u studijama distribucije leka i/ili substrata tkiva. Tricijum, to jest,<3>H i ugljenik-14, to jest,<14>C izotopi su posebno preferirani zbog svoje lake izrade i detektabilnosti. Osim toga. supstitucija sa izotopima kao što je deuterijum, to jest,<2>H, može da dovede do izvesnih terapeutskih prednosti nastalih zbog veće metaboličke stabilnosti, na primer, povećanog polu života in vivo ili do smanjenja potrebnih doza i na taj način mogu da budu preferirana u nekim situacijama. Izotopne varijante jedinjenja formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, mogu generalno da se izrade uobičajenim procedurama kao što je dato u ilustrativnim postupcima i izradama opisanim u niže datim primerima korišćenjem odgovarajućih izotopnih varijanti pogodnih reagenasa.

[0046] Iz prethodno datog je jasno da su okvirom pronalaska uključeni solvati, hidrati, izomerni i polimorfni oblici jedinjenja formule (I) i njihovih soli i solvata.

Izrada jedinjenja

[0047]

[0048] U skladu sa tim, ovde je obezbeđen proces za izradu jedinjenja formule (I), pri čemu proces uključuje deprotekciju jedinjenja formule (II):

gde su R1, R2, R3, m, n i p kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I) a PG je zaštitna grupa, kao što su benziloksimetil (BOM), 2-(trimetilsilil)etoksimetil (SEM) ili ptoluensulfonil a nakon toga se, ukoliko je potrebno, izrađuje so ovako formiranog jedinjenja

[0049] Na primer, jedinjenje formule (II), gde je PG ekvivalent sa BOM, se rastvori u odgovarajućem rastvaraču, na primer, metanolu ili etanolu i propusti preko pogodnog katalizatora, na primer 10% paladijuma na ugljeniku u prisustvu vodonika, na odgovarajućoj temperaturi, na primer 20 - 60 °C u aparatu kao što je Thales H-cube™. Produkt (I) se izdvoji uklanjanjem rastvarača i, po potrebi, prečišćavanjem.

[0050] Na primer, jedinjenje formule (II), gde je PG SEM, se rastvori u pogodnom rastvaraču, na primer tetrahidrofuranu, i reaguje sa tetrabutilamonijum fluoridom i etilendiaminom, na odgovarajućoj temperaturi, na primer 70 °C. Produkt (I) se izdvoji uklanjanjem rastvarača i, po potrebi, prečišćavanjem.

[0051] Jedinjenje formule (II) može da se izradi reakcijom jedinjenja formule (III):

gde su R1, R2, R3, m, n i p kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I), sa vodonikom, u prisustvu katalizatora.

[0052] Na primer, jedinjenje formule (III) se rastvori u pogodnom rastvaraču, na primer, metil alkoholu ili etil alkoholu i propusti preko pogodnog katalizatora, na primer 10% paladijum na ugljeniku, u prisustvu vodonika, na odgovarajućoj temperaturi, na primer 20 - 60 °C, u pogodnom aparatu za protočnu hidrogenaciju kao što je Thales H-Cube™. Produkt (II) se izdvoji uklanjanjem rastvarača i, po potrebi, prečišćavanjem.

[0053] Kada je zaštitna grupa benziloksimetil (BOM) grupa, reakcija redukcije sa alkinom može da dovede do istovremenog uklanjanja zaštitne grupe i da se direktno dobije jedinjenje formule (I).

[0054] Jedinjenje formule (III) može da se izradi reakcijom jedinjenja formule (IV):

gde su R1 i R2 kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I) a Y je odlazeća grupa na primer halogen kao što su jod ili brom ili alkil sulfonat kao što je trifluormetan sulfonat, sa jedinjenjem formule (V):

gde su R3, m, n i p definisani za jedinjenje formule (I).

[0055] Na primer, jedinjenje formule (IV) i jedinjenje formule (V) se rastvore u pogoddnom rastvaraču, na primer N,N-dimetilformamidu, u prisustvu bakar(I) jodida, pogodnog katalizatora, na primer bis(trifenilfosfin)paladijum(II) dihlorida i pogodne baze, na primer trietilamina, i zagrevaju na odgovarajućoj temperaturi, na primer 20 - 55 °C u toku odgovarajućeg vremenskog perioda, na primer 0.5 - 17 sati. Produkt (III) se izdvoji nakon procesa sa vodom i prečišćavanja.

[0056] Jedinjenje formule (V) može da se izradi reakcijom jedinjenja formule (VI):

gde je m kako je definisano za jedinjenje formule (I) a X je odlazeća grupa kao što je halogen, na primer hlor, brom ili jod, ili alkil sulfonat, na primer p-toluensulfonat, sa jedinjenjem formule (VII):

gde su R3, n i p kako je definisano za jedinjenje formule (I).

[0057] Na primer, jedinjenje formule (VI), jedinjenje formule (VII) i odgovarajuća baza, na primer natrijum hidrogen karbonat, se rastvore u odgovarajućem rastvaraču, na primer N,N-dimetilformamidu, i zagreju na odgovarajućoj temperaturi, na primer 80 - 100 °C u toku odgovarajućeg vremenskog perioda, na primer 16 - 18 sati. Produkt (V) se izdvoji nakon procesa sa vodom i prečišćavanja, na primer izdvajanjem odgovarajuće kristalne soli, na primer oksalatne soli.

[0058] Jedinjenja formule (VI) i formule (VII) su ili komercijalno raspoloživa ili mogu da se izrade postupcima opisanim u literaturi.

[0059] Alternativno, jedinjenje formule (III) može da se izradi reakcijom jedinjenje formule (VIIIA) ili formule (VIIIB):

gde su R1, R2i m kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I) a X je odlazeća grupa kako je definisano za jedinjenja formule (VI), sa jedinjenjem formule (VII).

[0060] Na primer, jedinjenje formule (VIIIA), jedinjenje formule (VII) i odgovarajuća baza, na primer trietilamin, se rastvore u odgovarajućem rastvaraču, na primer acetonitrilu i zagreju na odgovarajućoj temperaturi, na primer 60 - 80 °C u toku odgovarajućeg vremenskog perioda, na primer 16 - 26 sati. Produkt (III) se izdvoji nakon procesa sa vodom i prečišćavanja.

[0061] Na primer, odgovarajuće redukciono sredstvo, na primer natrijum triacetoksiborohidrid, se doda u smešu jedinjenja formule (VIIIB), jedinjenja formule (VII) i sredstva za sušenje, na primer 4Å molekularna sita, u odgovarajućem rastvaraču, na primer dihlormetanu, i mešaju na odgovarajućoj temperaturi, na primer 20 °C, u toku odgovarajućeg vremenskog perioda, na primer 1 - 2 sata. Produkt (III) se izdvoji nakon procesa sa vodom i prečišćavanja.

[0062] Jedinjenja formule (VIIIA) mogu da se izrade reakcijom jedinjenja formule (IV) sa jedinjenjima formule (VI). Na primer, jedinjenje formule (IV) i jedinjenje formule (VI) se rastvore u odgovarajućem rastvaraču, na primer N,N-dimetilformamidu, u prisustvu bakar(I) jodida, odgovarajućeg katalizatora, na primer bis(trifenilfosfin)paladijum(II) dihlorida i odgovarajuće baze, na primer trietilamina i zagreju na odgovarajućoj temperaturi, na primer 20 °C, u toku odgovarajućeg vremenskog perioda, na primer 18 - 20 sati. Produkt (VIIIA) se izdvoji nakon procesa sa vodom i prečišćavanja.

[0063] Jedinjenja formule (VIIIB) mogu da se izrade reakcijom jedinjenja formule (IX):

gde su R1, R2 i m kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I), sa oksidujućim sredstvom, na primer tetrapropilamonijum perutenatom, u prisustvu 4-metilmorfolin N-oksida.

[0064] Na primer, jedinjenje formule (IX), odgovarajući oksidant, na primer tetrapropilamonijum perutenat, u prisustvu 4-metilmorfolin N-oksida, u odgovarajućem rastvaraču, na primer smeši dihlormetana i acetonitrila, se meša na odgovarajućoj temperaturi, na primer 20 °C, u toku odgovarajućeg vremenskog perioda, na primer 2 sata. Reaktivna smeša se filtrira i produkt (VIIIB) se izdvoji uklanjanjem rastvarača i, po potrebi, prečišćavanjem. Jedinjenja formule (IX) mogu da se izrade reakcijom jedinjenja formule (IV) sa odgovarajućim alkin-1-olima. Na primer jedinjenje formule (IV) i alkin-1-ol se rastvore u odgovarajućem rastvaraču, na primer N,N-dimetilformamidu, u prisustvu bakar(I) jodida, odgovarajućeg katalizatora, na primer bis(trifenilfosfin)paladijum(II) dihlorida i odgovarajuće baze, na primer trietilamina, i zagreju na odgovarajućoj temperaturi, na primer 20 °C u toku odgovarajućeg vremenskog perioda, na primer 18 - 20 sati. Produkt (IX) se izdvoji nakon procesa sa vodom i prečišćavanja.

[0065] Alternativno, jedinjenja formule (II) mogu da se izrade reakcijom jedinjenja formule (X):

gde su R1, R2i m kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I).

[0066] Na primer, odgovarajuće redukciono sredstvo, na primer natrijum triacetoksiborohidrid, se doda u smešu jedinjenja formule (X), jedinjenja formule (VII) i sredstva za sušenje, na primer 4Å molekularnih sita, u odgovarajućem rastvaraču, na primer dihlormetana i mešaju na odgovarajućoj temperaturi, na primer 20 °C, u toku odgovarajućeg vremenskog perioda, na primer 1 - 2 sata. Produkt (II) se izdvoji nakon procesa sa vodom i prečišćavanja.

[0067] Jedinjenja formule (X) mogu da se izrade reakcijom jedinjenja formule (XI):

gde su R1, R2i m kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I).

[0068] Na primer, jedinjenje formule (XI), odgovarajući oksidant, na primer tetrapropilamonijum perutenat, u prisustvu 4-metilmorfolin N-oksida, u odgovarajućem rastvaraču, na primer smeši dihlormetana i acetonitrila, se meša na odgovarajućoj temperaturi, na primer 20 °C, u toku odgovarajućeg vremenskog perioda, na primer 2 sati. Produkt (X) se izdvoji uklanjanjem rastvarača i po potrebi prečišćavanjem.

[0069] Jedinjenja formule (XI) mogu da se izrade reakcijom jedinjenja formule (IX) sa vodonikom, u prisustvu katalizatora. Na primer, jedinjenje formule (IX) se rastvori u pogodnom rastvaraču, na primer etanolu, i propusti preko pogodnog katalizatora, na primer 10% paladijum na ugljeniku u prisustvu vodonika, na odgovarajućoj temperaturi, na primer 20 - 60 °C, u aparatu kao što je Thales H-cube™. Produkt (XI) se izdvoji uklanjanjem rastvarača i po potrebi prečišćavanjem.

[0070] Jedinjenja formule (IV) mogu da se izrade reakcijom jedinjenja formule (XII):

gde su R1i R2kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I) a Y je definisan za jedinjenje formule (IV) sa rastvorom amonijaka.

[0071] Na primer vodeni rastvor amonijaka (0.88) se doda u rastvor jedinjenja formule (XII) u odgovarajućem rastvaraču, na primer izo-propil alkoholu. Dobijena smeša se nakon toga zagreva u grejaču sa mikrotalasima na odgovarajućoj temperaturi, na primer 120 - 150 °C u toku odgovarajućeg vremenskog perioda, na primer 1 - 2 sata. Produkt (IV) se izdvoji nakon procesa sa vodom i prečišćavanja.

[0072] Jedinjenja formule (XII) mogu da se izrade reakcijom jedinjenja formule (XIII):

gde su R1i R2kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I), sa jedinjenjem formule (XIV):

pri čemu je jedinjenje formule (XIV) pogodan prekursor za zaštitnu grupu PG, na primer benzil hlormetil etar ili (2-(hlormetoks)etil)trimetilsilan.

[0073] Na primer, jedinjenje formule (XIII) u odgovarajućem rastvaraču, na primer N,N-dimetilformamidu ili tetrahidrofuranu, se tretira sa odgovarajućom bazom, na primer suspenzijom natrijum hidrid u ulju. Doda se jedinjenje formule (XIV), na primer benzil hlormetil etar ili (2-(hlormetoks)etil)trimetilsilan i reaktivna smeša se meša na odgovarajućoj temperaturi, na primer 20 °C u toku odgovarajućeg vremenskog perioda, na primer 1 - 4 sata. Produkt (XII) se izdvoji nakon procesa sa vodom i prečišćavanja.

[0074] Jedinjenja formule (XIII) mogu da se izrade reakcijom jedinjenja formule (XV):

gde su R1i R2kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I), sa sredstvom za halogenizaciju, na primer N-jodsukcinimidom.

[0075] Na primer jedinjenje formule (XV) se rastvori u pogodnom rastvaraču, na primer tetrahidrofuranu i reaguje sa N-jodsukcinimidom na odgovarajućoj temperaturi, na primer 20 °C, u toku odgovarajućeg vremenskog perioda, na primer 1 - 2 sata. Produkt (XIII) se izdvoji nakon procesa sa vodom i prečišćavanja.

[0076] Jedinjenja formule (XV) mogu da se izrade reakcijom jedinjenja formule (XVI):

gde su R1i R2kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I), sa reagensom za hlorinaciju, na primer fosfor oksihloridom.

[0077] Na primer, jedinjenje formule (XVI) se suspenduje u fosfor oksihloridu i zagreva na odgovarajućoj temperaturi, na primer 120 °C, u toku odgovarajućeg vremenskog perioda, na primer 3 - 4 sata. Višak fosfor oksihlorida može da se ukloni in vacuo a nakon toga se ostatak sipa na led i pH smeše podesi na 7 - 9. Produkt se nakon toga ekstrahuje u odgovarajućem organskom rastvaraču, na primer etil acetatu. Produkt (XV) se izdvoji uklanjanjem rastvarača i po potrebi prečišćavanjem.

[0078] Jedinjenja formule (XVI) mogu da se izrade reakcijom jedinjenja formule (XVII):

gde su R1 i R2 kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I), sa odgovarajućom bazom, na primer natrijum hidroksidom.

[0079] Na primer, rastvor jedinjenja formule (XVII) u odgovarajućem rastvaraču, na primer etil alkohoul, se tretira sa vodenim rastvorom natrijum hidroksida i reaktivna smeša meša na odgovarajućoj temperaturi, na primer 80 - 100 °C, u toku odgovarajućeg vremenskog perioda, na primer 4 - 18 sati. Produkt (III) se izdvoji nakon procesa sa vodom i prečišćavanja.

[0080] Jedinjenja formule (XVII) mogu da se izrade reakcijom jedinjenja formule (XVIII):

sa jedinjenjima formule (XIX):

gde su R1i R2kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I).

[0081] Na primer, suspenzija jedinjenja formule (XVIII) u jedinjenju formule (XIX) se tretira sa rastvorom vodonik hlorida u odgovarajućem rastvaraču, na primer rastvorom vodonik hlorida u 1,4-dioksanu i zagreva na odgovarajućoj temperaturi, 50 - 70 °C, u toku odgovarajućeg vremenskog perioda, na primer 16 - 18 sati. Produkt (XVIII) se izdvoji nakon filtriranja i dodavanja odgovarajućeg rastvarača, na primer terc-butil metil etra.

[0082] Alternativno, jedinjenje formule (XVI) može da se izradi reakcijom jedinjenja formule (XVIII) sa jedinjenjima formule (XX):

gde je R1kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I).

[0083] Na primer, smeša jedinjenja formule (XVIII) i jedinjenja formule (XX) se zagreva u odgovarajućem rastvaraču, na primer o-ksilenu, na odgovarajućoj temperaturi, na primer temperturi refluksa, u toku odgovarajućeg vremenskog perioda, na primer 3 dana. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, produkt (XVI) se izdvoji filtriranjem.

[0084] Jedinjenja formula (VI), (VII), (XIV), (XVIII), (XIX) i (XX) su ili poznata u literaturi ili su komercijalno raspoloživa, na primer od firme Sigma Aldrich, UK, ili mogu da se izrade analogno sa poznatim procedurama, na primer procedurama otkrivenim u standardnim referentnim tekstovima za metodologiju sinteza, kao što su J. March, Advanced Organic Chemistry, 6th Edition (2007), WileyBlackwell, ili Comprehensive Organic Synthesis (Trost B.M. i Fleming I., (Eds), Pergamon Press, 1991), koji su ovde inkorporirani kao reference jer se odnose na takve procedure.

[0085] Primeri drugih zaštitnih grupa koje mogu da se koriste u ovde opisanim postupcima sinteze i načini njihovog uklanjanja mogu da se nađu u T. W. Greene ’Protective Groups in Organic Synthesis’, 4th Edition, J. Wiley i Sons, 2006, inkorporirani ovde kao reference jer se odnose na takve procedure.

[0086] Za bilo koju reakciju ili proces koji su ovde opisani, mogu da se koriste uobičajeni postupci zagrevanja i hlađenja, na primer, uljana kupatila sa regulisanom temperaturom ili ploče sa regulisanom temperaturom, ledeneo/slana kupatila i kupatila sa suvim ledom/aceton, tim redom. Mogu da se koriste uobičajeni postupci za izdvajanje, na primer, ekstrakcija iz ili u vodenim ili nevodenim rastvaračima. Mogu da se koriste uobičajeni postupci sušenja organskih rastvarača, rastvora ili ekstrakta kao što je mućkanje sa anhidrovanim magnezijum sulfatom ili anhidrovanim natrijum sulfatom ili propuštanje kroz hidrofobrni frit.

[0087] Ukoliko je potrebno, mogu da se koriste uobičajeni postupci prečišćavanja, na primer kristalizacija i hromatografija, na primer hromatografija na silika gelu ili reverzno fazna hromatografija. Kristalizacija može da se izvrši korišćenjem uobičajenih rastvarača kao što su etil acetat, metanol, etanol ili butanol ili njihove vodene smeše. Razumljivo je da vremena i temperature specifičnih reakcija mogu obično da se odrede tehnikama praćenja reakcije, na primer, hromatografijom na tankom sloju i LC-MS.

[0088] Kada je potrebno, pojedinačni izomerni oblici jedinjenja iz pronalaska mogu da se izrade kao pojedinačni izomeri korišćenjem uobičajene procedure kao što su frakciona kristalizacija dijastereoizomernih derivata ili asimetrična visoko efikasna tečna hromatografija (asimetrična HPLC).

[0089] Apsolutna stereohemija jedinjenja može da se odredi korišćenjem uobičajenih postupaka, kao što je kristalografija X zracima.

Načini upotrebe

[0090] Primeri bolesnih stanja u kojima jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu da imaju korisne efekte uključuju alergijske bolesti i druga inflamatorna stanja, na primer, alergijski rinitis i astmu, infektivne bolesti i kancer.

[0091] Kao modulatori imunog odgovora, jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu takođe da budu korisni u tretmanu imuno posredovanih poremećaja, uključujući ali bez ograničenja na, inflamatorne ili alergijske bolesti kao što su astma, alergijski rinitis i rinokonjuktivitis, alergiju na hranu, bolesti hipersenzitivnih pluća, eozinofilni pneumonitis, poremećaj odloženog tipa hipersenzitivnosti, aterosklerozu, pankreatitis, gastritis, kolitis, osteoartritis, psorijazu, sarkoidozu, plućne fibroze, sindrom respiratornog odloženog stresa, bronhiolitis, hroničnu obstruktivnu bolest pluća, sinuzitis, cistične fibroze, aktinične keratoze, displaziju kože, hroničnu urtikariju, ekceme i sve tipove dermatitisa.

[0092] Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu takođe da budu korisni u tretmanu i/ili prevenciji reakcija na respiratorne infekcije, uključujući ali bez ograničenja na, pogoršanje virusne infekcije disajnih puteva i tonzilitis. Jedinjenja mogu takođe da budu korisna u tretmanu i/ili prevenciji autoimunih bolesti, uključujući ali bez ograničenja na, reumatoidni artritis, psorijatični artritis, sistemski eritematozni lupus, Sjöegrens-ovu bolest, ankilozni spondilitis, sklerodermu, dermatomiozitis, dijabetes, odbacivanje grafta, uključujući bolest domaćin protiv grafta, inflamatornu bolest creva, uključujući ali bez ograničenja na, Kronovu bolesti i ulcerativni kolitis.

[0093] Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu takođe da budu korisni u tretmanu infektivnih bolesti uključujući ali bez ograničenja na, bolesti izazvane virusom hepatitisa (na primer hepatitis B virusom, hepatitis C virusom), humanim imunodeficijentnim virusom, papiloma virusom, herpes virusima, respiratornim virusima (na primer influenca virusima, respiratornim sincitijalnim virusom, rinovirusom, metapneumavirusom, parainfluenca virusom, SARS) i virusom Zapadnog Nila. Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu takođe da budu korisni u tretmanu mikrobnih infekcija izazvanih, na primer, bakterijama, gljivicama ili protozoama. Ovo uključuje, ali bez ograničenja na, tuberkulozu, bakterijsku pneumoniju, aspergiloze, histoplazmoze, kandidoze, pneumocistoze, lepru, hlamidiju, kriptokokne bolesti, kriptosporidoze, toksoplazmoze, lajšmaniju, malariju i tripanosomiaze.

[0094] Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu takođe da budu korisni u tretmanu različitih kancera, posebno u tretmanu kancera za koje se zna da odgovaraju na imunoterapiju i uključuju, ali se ne ogrančavaju samo na, karcinom bubrežnih ćelija, kancer pluća, kancer dojke, kancer kolorektuma, kancer mokraćne bešike, melanomu, leukemiju, limfome i kancere jajnika.

[0095] Stručnjak sa iskustvom u tehnici će da razume da ovde date reference za tretman ili terapiju mogu, u zavisnosti od stanja, da se prošire na profilaksu kao i na tretman utvrđenih stanja.

[0096] Stoga je kao naredni aspekt pronalaska obezbeđeno jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u terapiji.

[0097] Jasno je da se, kada su jedinjenja formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so korisni u terapiji, koriste kao aktivno terapeutsko sredstvo.

[0098] Ovde je takođe obezbeđeno jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u tretmanu alergijskih bolesti i drugih inflamatornih stanja, unfektivnih bolesti i kancera.

[0099] Ovde je takođe obezbeđeno jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u tretmanu alergijskog rinitisa.

[0100] Ovde je takođe obezbeđeno jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u tretmanu astme.

[0101] Ovde je takođe obezbeđena upotreba jedinjenja formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji medikamenta za tretman alergijskih bolesti i drugih inflamatornih stanja, infektivnih bolesti i kancera.

[0102] Ovde je takođe obezbeđena upotreba jedinjenja formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji medikamenta za tretman alergijskog rinitisa.

[0103] Ovde je takođe obezbeđena upotreba jedinjenja formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji medikamenta za tretman astme.

[0104] Ovde je dalje obezbeđen postupak za tretman alergijskih bolesti i drugih inflamatornih stanja, infektivnih bolesti i kancera, pri čemu postupak uključuje primenu na ljudima kojima je to potrebno, terapeutski efektivne količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0105] Ovde je dalje obezbeđen postupak za tretman alergijskog rinitisa, pri čemu postupak uključuje primenu na ljudima kojima je to potrebno, terapeutski efektivne količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0106] Ovde je dalje obezbeđen postupak za tretman astme, pri čemu postupak uključuje primenu na ljudima kojima je to potrebno, terapeutski efektivne količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0107] Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli se takođe potencijalno koriste kao imunopotencijatori vakcine.

[0108] Kao naredni aspekt pronalaska, ovde je takođe obezbeđena kompoziciona vakcina koja uključuje jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i antigen ili kompozicioni antigen za upotrebu u terapiji.

[0109] Kao naredni aspekt pronalaska, ovde je takođe obezbeđena upotreba jedinjenja formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i antigena ili kompozicionog antigena u proizvodnji medikamenta za upotrebu u terapiji.

[0110] Takođe je obezbeđen postupak za lečenje ili prevenciju bolesti koji uključuje primenu na ljudima koji su bolesni ili kod kojih postoji mogućnost oboljevanja, kompozicione vakcine koja uključuje jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i antigen ili kompozicioni antigen.

Kompozicije

[0111] Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli se normalno, ali nije neophodno, pre primene na pacijentu formulišu u farmaceutske kompozicije. U skladu sa tim, u narednom aspektu pronalaska je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja uključuje jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata.

[0112] Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu da se formulišu za primenu na bilo koji uobičajeni način. Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu, na primer, da se formulišu za oralnu, topičnu, inhalacionu, intranazalnu, bukalnu, parenteralnu (na primer, intravensku, subkutanu, intradermalnu ili intramuskularnu) ili rektalnu primenu. U jednom aspektu, jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli se formulišu za oralnu primenu. U narednom aspektu, jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli se formulišu za topičnu primenu, na primer, intranazalnu ili inhalacionu primenu.

[0113] Tablete i kapsule za oralnu primenu mogu da sadrže uobičajene ekscipijente kao što su vezivna sredstva, na primer, sirup, akacija, želatin, sorbitol, tragakanta, mucilaga skroba, celuloza ili polivinil pirolidon; punioce, na primer, laktoza, mikrockristalna celuloza, šećer, kukuruzni skrob, kalcijum fosfat ili sorbitol; lubrikanse, na primer, magnezijum stearat, stearinsku kiselinu, talk, polietilen glikol ili silicijum dioksid; dezintegratore, na primer, krompirov skrob, kroskarmeloza natrijum ili natrijum skrob glikolat; ili vlažeća sredstva kao što je natrijum lauril sulfat. Tablete mogu da budu obložene u skladu sa postupcima dobro poznatim u tehnici.

[0114] Tečni oralni preparati mogu da budu u obliku, na primer, vodenih ili uljanih suspenzija, rastvora, emulzija, sirupa ili eliksira, ili mogu da budu u obliku suvog produkta za rekonstituciju sa vodom ili drugim pogodnim vehikuklumom pre upotrebe. Ovi tečni preparati mogu da sadrže uobičajene aditive kao što su sredstva za suspendovanje, na primer, sorbitol sirup, metil celuloza, glukoza/šećer sirup, želatin, hidroksimetil celuloza, karboksiimetil celuloza, aluminijum stearat gel ili hidrogenizovane jestive masti; emulgujuća sredstva, na primer, lecitin, sorbitan mono-oleat ili akacija; nevodeni vehikulumi (koji mogu da uključe jestiva ulja), na primer, bademovo ulje, frakcionisano kokosovo ulje, uljane estre, propilen glikol ili etil alkohol; ili konzervanse, na primer, metil ili propil p-hidroksibenzoate ili sorbinska kiselina. Preparati mogu po potrebi takođe da sadrže puferne soli, korigense ukusa, sredstva za bojenje i/ili zaslađivanje (na primer manitol).

[0115] Kompozicije za intranazalnu primenu uključuju vodene kompozicije koje se primenjuju u nos u obliku kapi ili preko pumpe pod pritiskom. Odgovarajuće kompozicije za ovu namenu sadrže vodu kao razblaživač ili nosač. Kompozicije za primenu na plućima ili nosu mogu da sadrže jedan ili više ekscipijenata, na primer, jedno ili više sredstava za suspendovanje, jedan ili više konzervansa, jedan ili više surfaktanata, jedno ili više sredstava za podešavanje toničnosti, jedan ili više ko-rastvarača i mogu da uključe komponente za kontrolu pH kompozicije, na primer, sistem pufera. Osim toga, kompozicije mogu da sadrže druge komponente kao što su antioksidansi, na primer natrijum metabisulfit i sredstva za maskiranje ukusa. Kompozicije mogu takođe da se primene na nos ili druge regione respiratornog trakta nebulizacijom.

[0116] Intranazalne kompozicije mogu da omoguće jedinjenju(ima) formule (I) ili (a) njegovoj farmaceutski prihvatljivoj soli(ima) da se oslobode u svim delovima nosne šupljine (ciljano tkivo) i dalje, mogu da omoguće jedinjenju(ima) formule (I) ili njegovoj farmaceutski prihvatljivoj soli(ima) da ostanu duži vremenski period u kontaktu sa ciljanim tkivom.

Odgovarajući režim doziranja za intranazalne kompozicije bi bio da pacijent polako inhalira kroz nos sve dok se nosna šupljina ne pročisti. U toku inhalacije, kompozicija se primenjuje u jednu nozdrvu dok se druga fizički pritisne. Ova procedura se ponavlja sa drugom nozdrvom. Uobičajeno, primenjuje se jedan ili dva spreja po nozdrvi po prethodno navedenoj proceduri, jedanput, dva puta ili tri puta svakog dana, idealno je jedanput dnevno. Od posebnog interesa su intranazalne kompozicije pogodne za primenu jedanput dnevno.

[0117] Ukoliko su prisutne, sredstva za suspendovanje su obično prisutna u količini od 0.1 do 5% (m/m), kao što je od 1.5% do 2.4% (m/m), na bazi ukupne težine kompozicije. Primeri farmaceutski prihvatljivih sredstava za suspendovanje uključuju, ali se ne ogrančavaju samo na, Avicel® (mikrokristalna celuloza i karboksimetilceluloza natrijum), karboksimetilceluloza natrijum, vigam, tragakanta, bentonit, metilceluloza, ksantan guma, karbopol i polietilen glikoli.

[0118] Kompozicije za primenu u pluća ili nos mogu da sadrže jedan ili više ekscipijenata koji mogu da budu zaštićeni od mikrobiološke ili gljivične kontaminacije i rasta uključivanjem jednog ili više konzervansa. Primeri farmaceutski prihvatljivih anti-mikrobnih sredstava ili konzervansa uključuju, ali se ne ogrančavaju samo na, kvaternarna amonijum jedinjenja (na primer benzalkonijum hlorid, benzetonijum hlorid, cetrimid, cetilpiridinijum hlorid, lauralkonijum hlorid i miristil pikolinijum hlorid), sredstva na bazi žive (na primer fenilmerkuri nitrat, fenilmerkuri acetat i timerozal), alkoholna sredstva (na primer hlorbutanol, feniletil alkohol i benzil alkohol), antibakterijske estre (na primer, estri parahidroksibenzoeve kiseline), helatna sredstva kao što je dinatrijum edetat (EDTA) i druga antimikrobna sredstva kao što su hlorheksidin, hlorkrezol, sorbinska kiselina i njene soli (kao što je kalijum sorbat) i polimiksin. Primeri farmaceutski prihvatljivih anti-fungalnih sredstava ili konzervansa uključuju, ali se ne ogrančavaju samo na, natrijum benzoat, sorbinsku kiselinu, natrijum propionat, metilparaben, etilparaben, propilparaben i butilparaben. Konzervans(i), ukoliko su prisutni, mogu da se nalaze u količini od 0.001 do 1% (m/m), kao što je od 0.015% do 0.5% (m/m), na bazi ukupne težine kompozicije.

[0119] Kompozicije (na primer kada je najmanje jedno jedinjenje u suspenziji) mogu da uključe jedan ili više surfaktanata čija je uloga da omoguće rastvaranje čestica medikamenta u vodenoj fazi kompozicije. Na primer, količina korišćenog surfaktanta je količina koja ne dovodi do stvaranja pene u toku mešanja. Primeri farmaceutski prihvatljivih surfaktantata uključuju estre i etre masnih alkohola kao što su polioksietilen (20), sorbitan monooleat (Polysorbat 80), makrogolni etri i poloksameri. Surfaktant može da bude prisutan u količini između približno 0.01 do 10% (m/m), kao što je od 0.01 do 0.75% (m/m), na primer, približno 0.5% (m/m), na bazi ukupne težine kompozicije.

[0120] Jedno ili više sredstava za podešavanje toničnosti može da se uključi da se postigne toničnost sa telesnim tečnostima, na primer, tečnostima nosne šupljine, što dovodi do smanjenja nivoa nadraženosti. Primeri farmaceutski prihvatljivih sredstava za podešavanje toničnosti uključuju, ali se ne ogrančavaju samo na, natrijum hlorid, dekstrozu, ksilitol, kalcijum hlorid, glukozu, glicerin i sorbitol. Ukoliko je prisutno, sredstvo za podešavanje toničnosti može da se nalazi u količini od 0.1 do 10% (m/m), kao što je od 4.5 do 5.5% (m/m), na primer približno 5.0% (m/m), na bazi ukupne težine kompozicije.

[0121] Kompozicije iz pronalaska mogu da budu puferovane dodavanjem odgovarajućih sredstava za puferovanje, kao što su natrijum citrat, limunska kiselina, trometamol, fosfati kao što su dinatrijum fosfat (na primer dodekahidrat, heptahidrat, dihidrat i anhidrovani oblici), ili natrijum fosfat i njihove smeše.

[0122] Sredstvo za puferovanje, ukoliko je prisutno, može da se nalazi u količini od 0.1 do 5% (m/m), na primer 1 do 3% (m/m), na bazi ukupne težine kompozicije.

[0123] Primeri sredstava za korigovanje ukusa uključuju sakralozu, saharozu, saharin ili njegovu so, fruktozu, dekstrozu, glicerol, kukuruzni sirup, aspartam, acesulfamat-K, ksilitol, sorbitol, eritritol, amonijum glicirhizinat, taumatin, neotam, manitol, mentol, ulje eukaliptusa, kamfor, prirodna sredstva za korigovanje ukusa, veštačka sredstva za korigovanje ukusa, i njihove kombinacije.

[0124] Jedan ili više ko-rastvarača može da se uključi da pomogne rastvorljivost lekovitog jedinjenja i/ili drugih ekscipijenata. U primere farmaceutski prihvatljivih ko-rastvarača spadaju, ali se ne ogrančavaju samo na, propilen glikol, dipropilen glikol, etilen glikol, glicerol, etanol, polietilen glikoli (na primer PEG300 ili PEG400) i metanol. U jednom otelotvorenju, ko-rastvarač je propilen glikol.

[0125] Ukoliko je prisutan, ko-rastvarač može da se nalazi u količini od 0.05 do 30% (m/m), kao što je od 1 do 25% (m/m), na primer od 1 do 10% (m/m) na bazi ukupne težine kompozicije.

[0126] Kompozicije za inhalacionu primenu uključuju vodene, organske i vodeno/organske smeše, suvi prašak ili kristalne kompozicije koje se primenjuju u respiratorni trakt pomoću pumpe pod pritiskom ili inhalerom, na primer, inhalerom sa rezervoarom suvog praška, inhalerom sa jednom dozom suvog praška, inhalerom sa prethodno odmerenih više doza suvog praška, nazalnim inhalerom ili aerosol inhalerom pod pritiskom, nebulizerima ili insuflatorima. Odgovarajuće kompozicije sadrže vodu kao razblaživač ili nosač za ovu svrhu i mogu da budu sa uobičajenim ekscipijentima kao što su sredstva za puferovanje, sredstva za modifikaciju toničnosti i slično. Vodene kompozicije mogu takođe da se primene u nos i druge regione respiratornog trakta preko nebulizera. Ovakve kompozicije mogu da budu vodeni rastvori ili suspenzije ili aerosoli oslobođeni iz pakovanja pod pritiskom, kao što je inhaler sa odmerenom dozom, uz upotrebu pogodnog tečnog propelanta.

[0127] Kompozicije za primenu topično u nos (na primer, za tretman rinitisa) ili u pluća, uključuju aerosol kompozicije pod pritiskom i vodene kompozicije koje se preko pumpice pod pritiskom oslobađaju u nosnoj šupljini. Kompozicije koje nisu pod pritiskom a pogodne su za topičnu primenu u nosnu šupljinu su od posebnog interesa. Za ovakvu upotrebu, odgovarajuće kompozicije sadrže vodu kao razblaživač ili nosač. Vodene kompozicije za primenu u pluća ili nos mogu da budu sa uobičajenim ekscipijentima kao što su sredstva za puferovanje, sredstva za modifikaciju toničnosti i slično. Vodene kompozicije mogu takođe da se primene u nos nebulizacijom.

[0128] Za oslobađanje tečne kompozicije u nosne šupljine obično se koristi dispenzer tečnosti. Tečna kompozicija može da bude vodena ili nevodena, ali je obično vodena.

Jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, može da se formuliše kao suspenzija ili rastvor. Ovakav dispenzer tečnosti može da ima mlaznicu za disperziju ili otvor za disperziju kroz koji se odmerena doza tečne kompozicije disperguje nakon što korisnik primeni silu na pumpni mehanizam dispenzera tečnosti. Ovakvi dispenzeri tečnosti su generalno sa rezervoarom više odmerenih doza tečne kompozicije, doze se disperguju nakon višestrukog aktiviranja pumpe. Alternativno, dispenzer tečnosti za oslobađanje tečne kompozicije u nosnu šupljinu može da bude dizajniran tako da je doza ograničena, na primer, dispenzer za jednokratnu upotrebu koji uključuje jednu dozu. Mlaznice ili otvori za disperziju mogu da budu oblikovani za ubacivanje u nozdrve korisnika za sprej dispergovanje tečne kompozicije u nosnu šupljinu. Dispenzer tečnosti prethodno pomenutog tipa je opisan i ilustrovan u Internacionalnoj patentnoj publikaciji broj WO2005/044354 (Glaxo Group Limited). Dispenzer ima kućište u kome se nalazi uređaj za oslobađanje tečnosti sa kompresionom pumpom montiranom na kontejneru u kome se nalazi tečna kompozicija. Kućište ima najmanje jednu polugu sa strane kojom se manipuliše prstom i koja može da se pritisne kako bi se pumpa u kontejneru pripremila da komprimuje i ispumpa odmerenu dozu kompozicije iz pumpe kroz nazalnu mlaznicu kućišta. U jednom otelotvorenju, opšti tip dispenzera tečnosti je ilustrovan na Slikama 30-40 u WO 2005/044354.

[0129] Vodene kompozicije koje sadrže jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so mogu takođe da se oslobode pomoću pumpe kako je otkriveno u Internacionalnoj patentnoj prijavi broj WO2007/138084 (Glaxo Group Limited), na primer kako je otkriveno u tu datim slikama 22-46, ili kako je otkriveno u patentnoj prijavi Velike Britanije broj GB0723418.0 (Glaxo Group Limited), na primer kako je otkriveno u tu datim slikama 7-32. Pumpa može da se aktivira pomoću aktivtora kako je otkriveno na Slikama 1-6 u GB0723418.0.

[0130] Kompozicije suvog praška za topično oslobađanje inhalacijom u plućima mogu, na primer, da se nalaze u kapsulama i kartridžima od, na primer, želatina, ili blisterima, na primer, laminiranoj aluminijumskoj foliji, za upotrebu u inhaleru ili insuflatoru. Kompozicije praškaste mešavine generalno sadrže smešu praška za inhalaciju jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i odgovarajuće praškaste baze (nosač/razblaživač/ekscipijent supstanca) kao što su mono-, di-, ili polisaharidi (na primer laktoza ili skrob). Kompozicije suvog praška mogu takođe da uključe, pored leka i nosača, dodatni ekscpijent (na primer tercijerno sredstvo) kao što su estri šećera, na primer, celobioza oktaacetat, kalcijum stearat ili magnezijum stearat.

[0131] U jednom otelotvorenju, kompozicija pogodna za inhalacionu primenu može da bude inkorporirana u zatvorenim kontejnerima sa višestrukim dozama pakovanog medikamenta koji se nalaze unutar odgovarajućeg uređaja za inhalaciju. Kontejneri mogu da budu razgradivi, da mogu da se poderu ili na drugi način otvore jedan po jedan i doze kompozicije suvog praška se primene na pisku inhalacionog uređaja, kako je poznato u tehnici. Pakovanje medikamenta može da bude u brojnim različitim oblicima, na primer, oblik diska ili oblik izdužene trake. Reprezentativni uređaji za inhalaciju su DISKHALER™ i DISKUS™ uređaji, proizvođača GlaxoSmithKline.

[0132] Kompozicija suvog praška za inhalaciju može takođe da se obezbedi kao rezervoar za masu u inhalacionom uređaju, pri čemu uređaj ima mehanizam za odmeravanje doze kompozicije iz rezervoara u inhalacioni kanal iz koga odmerenu dozu pacijent može da inhalira preko piska na uređaju. Primeri uređaja ovog tipa na tržištu su TURBUHALER™ (AstraZeneca), TWISTHALER™ (Schering) i CLICKHALER™(Innovata.)

[0133] Naredni postupak oslobađanja kompozicije suvog praška za inhalaciju je da se odmerena doza kompozicije nalazi u kapsulama (jedna doza po kapsuli) koja se zatim stavi u inhalacioni uređaj, obično po potrebi pacijenta. Uređajem kapsula može da se prelomi, podere ili na drugi način otvori tako da doza može da dospe u pluća pacijenta kada je inhalira preko piska na uređaju. Kao primeri ovakvih uređaja na tržištu mogu da se navedu ROTAHALER™ (GlaxoSmithKline) i HANDIHALER™ (Boehringer Ingelheim.)

[0134] Aerosol kompozicije pod pritiskom pogodne za inhalaciju mogu da budu ili suspenzije ili rastvori i mogu da sadrže jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i odgovarajući propelant kao što su fluorugljenik ili hlorfluorugljenik koji sadrži vodonik ili njihove smeše, posebno hidrofluoroalkani, posebno 1,1,1,2-tetrafluoretan, 1,1,1,2,3,3,3-heptafluor-n-propan ili njihove smeše. Aerosol kompozicija može opciono da sadrži dodatne ekscipijente kompozicije dobro poznate u tehnici kao što su surfaktanti, na primer, oleinska kiselina, lecitin ili oligolaktatna kiselina ili njeni derivati, na primer kako je opisano u WO 94/21229 i WO 98/34596 (Minnesota Mining i Manufacturing Company) i ko-rastvarače, na primer, etanol. Kompozicije pod pritiskom se generalno nalaze u kanistru (na primer aluminijumskom kanistru) zatvorenom sa ventilom (na primer ventil za odmeravanje) i opremljenim aktivatorom na kome se nalazi pisak.

[0135] Masti, kreme i geli mogu, na primer, da se formulišu sa vodenom ili uljanom bazom uz dodatak odgovarajućeg učvršćivača i/ili gelirajućeg sredstva i/ili rastvarača. Prema tome, ovakve baze mogu da uključe, na primer, vodu i/ili ulje kao što je tečni parafin ili biljno ulje kao što su kikirikijevo ulje ili ricinusovo ulje, ili rastvarač kao što je polietilen glikol.

Učvršćivači i sredstva za geliranje koji mogu da se koriste u skladu sa prirodom baze uključuju vazelin, aluminijum stearat, cetostearil alkohol, polietilen glikole, lanolin, pčelinji vosak, karboksipolimetilen i derivate celuloze, i/ili glicerol monostearat i/ili ne-jonske emulgatore

[0136] Losioni mogu da se formulišu sa vodenom ili uljanom bazom i generalno takođe sadrže jedan ili više emulgatora, stabilizatora, sredstava za disperziju, sredstava za suspendovanje i učvršćivača.

[0137] Praškovi za spoljašnju primenu mogu da se izrade pomoću bilo koje praškaste baze, na primer, talka, laktoze ili skroba. Kapi mogu da se formulišu sa vodenom ili nevodenom bazom i takođe uključuju jedno ili više sredstava za disperziju, solubilizatora, sredstava za suspenziju ili konzervansa.

[0138] Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu, na primer, da se formulišu za transdermalno oslobađanje kompozicijom u obliku flastera ili drugih uređaja (na primer, uređaj sa gasom pod pritiskom) koji oslobađaju aktivnu komponentu u kožu.

[0139] Za bukalnu primenu, kompozicije mogu da budu u obliku tableta ili lozengi formulisanih na uobičajeni način.

[0140] Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu takođe da se formulišu kao supozitorije, na primer koje sadrže uobičajene podloge za supozitorije kao što su kakao buter ili drugi gliceridi.

[0141] Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu takođe da se formulišu za parenteralnu primenu bolus injekcijom ili kontinuiranom infuzijom i mogu da budu u jediničnom doznom obliku, na primer, u ampulama, bočicama, infuzijama male zapremine ili prethodno napunjenim špricevima, ili u višedoznim kontejnerima uz dodatak konzervansa. Kompozicije mogu da budu u obliku rastvora, suspenzija ili emulzija u vodenim ili nevodenim vehikulumima i mogu da sadrže pomoćna sredstva za formulaciju, kao što su antioksidansi, puferi, antimikrobna sredstva i/ili sredstva za podešavanje toničnosti.

Alternativno, aktivni sastojak može da bude u obliku praška za konstituciju sa odgovarajućim vehikulumom pre upotrebe, na primer, sa sterilnom, apirogenom vodom. Suvi čvrsti oblici mogu da se izrade punjenjem sterilnog praška u pojedinačne sterilne kontejnere pod aseptičnim uslovima ili punjenjem sterilnog rastvora u svaki kontejner pod aseptičnim uslovima i sušenjem zamrzavanjem.

[0142] Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu takođe da se formulišu u vakcinama kao imunopotencijatori kako bi modulirali njihovu aktivnost. Ovakve komozicije mogu da sadrže antitelo(a) ili fragment(e) antitela ili antigeničnu komponentu uključujući, ali bez ograničenja na, DNK, žive ili mrtve bakterije i/ili viruse ili čestice slične virusu, zajedno sa jednom ili više komponenti koje imaju aktivnost imunopotencijatora, uključujući ali bez ograničenja na, soli aluminijuma, uljane i vodene emulzije, proteine toplotnog šoka, preparate i derivate lipida A, glikolipide, druge TLR agoniste kao što su CpG DNK ili slična sredstva, citokine kao što su GM-CSF ili IL-12 ili slična sredstva.

[0143] U narednom aspektu pronalaska, dat je imunopotencijator vakcine koji uključuje jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0144] Dalje je data kompoziciona vakcina koja uključuje jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i antigen ili kompozicioni antigen.

[0145] Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu da se koriste sama ili u kombinaciji sa drugim terapeutski aktivnim sredstvima. U narednom aspektu, pronalazak daje kombinaciju koja uključuje jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, zajedno sa najmanje još jednim terapeutski aktivnim sredstvom.

[0146] Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli i drugo terapeutski aktivno sredstvo(a) mogu da se primene zajedno ili odvojeno i, kada se primenjuju odvojeno, primena može da bude istovremena ili jedna za drugom, bilo kojim redosledom. Količine jedinjenja formule (I) ili (a) njegove farmaceutski prihvatljive soli i drugog terapeutski aktivnog sredstva i relativno vreme primene će da bude izabrano tako da se postigne željeni kombinovani terapeutski efekat. Primena kombinacije jedinjenje formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli sa drugim sredstvima u tretmanu može da se izvrši istovremeno u jednoj farmaceutskoj kompoziciji koja uključuje oba jedinjenja ili u odvojenim farmaceutskim kompozicijama od kojih svaka sadrži jedno od jedinjenja. Alternativno, kombinacija može da se primeni odvojeno na sekvencijalan način pri čemu se jedno sredstvo za tretman primenjuje prvo a drugo nakon prvog, ili vice versa. Ovakva sekvencijalna primena može da bude u kratkom vremenskom periodu ili u dužem vremenskom razmaku.

[0147] Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu da se koriste u kombinaciji sa jednim ili više sredstava korisnih u prevenciji ili lečenju virusnih infekcija. Primeri takvih sredstava uključuju, bez ograničenja: inhibitore polimeraze kao što su oni otkriveni u WO 2004/037818-A1, kao i oni otkriveni u WO 2004/037818 i WO 2006/045613; JTK-003, JTK-019, NM-283, HCV-796, R-803, R1728, R1626, kao i oni otkriveni u WO 2006/018725, WO 2004/074270, WO 2003/095441, US2005/0176701, WO 2006/020082, WO 2005/080388, WO 2004/064925, WO 2004/065367, WO 2003/007945, WO 02/04425, WO 2005/014543, WO 2003/000254, EP 1065213, WO 01/47883, WO 2002/057287, WO 2002/057245 i slična sredsta; inhibitore replikacije kao što su aciklovir, famciklovir, ganciklovir, cidofovir, lamivudin i slična sredstva; inhibitore proteaze kao što su inhibitori HIV proteaze, sakvinavir, ritonavir, indinavir, nelfinavir, amprenavir, fosamprenavir, brekanavir, atazanavir, tipranavir, palinavir, lasinavir, i inhibitori HCV proteaze BILN2061, VX-950, SCH503034; i slična sredstva; inhibitore nukleozid i nukleotid reverzne transkriptaze kao što su zidovudin, didanozin, lamivudin, zalcitabin, abakavir, stavidin, adefovir, adefovir dipivoksil, fozivudin, todoksil, emtricitabin, alovudin, amdoksovir, elvucitabin, i slična sredstva; inhibitore ne-nukleozidne reverzne transkriptaze (uključujući sredstvo koje ima anti-oksidativno dejstvo kao što su imunokal, oltipraz, itd.), kao što su nevirapin, delavirdin, efavirenz, lovirid, imunokal, oltipraz, kapravirin, TMC-278, TMC-125, etravirin, i slična sredstva; entri inhibitore kao što su enfuvirtid (T-20), T-1249, PRO-542, PRO-140, TNX-355, BMS-806, 5-Helix i slična sredstva; inhibitore integraze kao što su L-870,180 i slična sredstva; inhibitore pupljenja kao što su PA-344 i PA-457, i slična sredstva; inhibitore hemokin receptora kao što su vikrivirok (Sch-C), Sch-D, TAK779, maravirok (UK-427,857), TAK449, kao i oni otkriveni u WO 02/74769, WO 2004/054974, WO 2004/055012,WO 2004/055010, WO 2004/055016, WO 2004/055011, i WO 2004/054581, i slična sredstva; inhibitore neuraminidaze kao što su CS-8958, zanamivir, oseltamivir, peramivir i slična sredstva; blokere jonskog kanala kao što su amantadin ili rimantadin i slična sredstva; i interferirajuće RNK i nesmislene oligonukleotide kao što je ISIS-14803 i slična sredstva; antivirusna sredstva neodređenog mehanizma delovanja, na primer ona otkrivena u WO 2005/105761, WO 2003/085375, WO 2006/122011, ribavirin, i slična sredstva.

Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu takođe da se koriste u kombinaciji sa jednim ili više drugih sredstava koja mogu da budu korisna u prevenciji ili tretmanu virusnih infekcija, na primer, imunih terapija (na primer interferon ili drugi citokini/hemokini, modulatori citokin/hemokin receptora, agonisti ili antagonisti citokina i slična sredstva); i terapeutske vakcine, antifibrotična sredstva, anti-inflamatorna sredstva kao što su kortikosteroidi ili NSAIDs (ne-steroidna anti-inflamatorna sredstva) i slična sredstva.

[0148] Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu da se koriste u kombinaciji sa jednim ili više drugih sredstava koja mogu da budu korisna u prevenciji ili tretmanu alergijskih bolesti, inflamatornih bolesti, autoimunih bolesti, na primer; antigen imunoterapije, anti-histamina, steroida, NSAIDa, bronhodilatatora (na primer beta 2 agonista, adrenergičnih agonista, antiholinergičnih sredstava, teofilina), metotreksata, modulatora leukotriena i sličnih sredstava; u terapiji monoklenalnim antitelom kao što su anti-IgE, anti-TNF, anti-IL-5, anti-IL-6, anti-IL-12, anti-IL-1 i slična sredstva; terapije receptora, na primer entanrcept i slična sredstva; ne-specifična imunoterapija antigenom (na primer interferon ili drugi citokini/hemokini, modulatori citokin/hemokin receptora, agonisti ili antagonisti citokina, TLR agonisti i slična sredstva).

[0149] Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu da se koriste u kombinaciji sa jednim ili više drugih sredstava koja mogu da budu korisna u prevenciji ili tretmanu kancera, na primer hemoterapeuticima kao što su sredstva za alkilaciju, inhibitori topoizomeraze, antimetaboliti, antimitotična sredstva, inhibitori kinaze i slična sredstva; terapija monoklonalnim antitelom kao što su trastuzumab, gemtuzumab i druga slična sredstva; i hormonska terapija kao što su tamoksifen, goserelin i slična sredstva.

[0150] Farmaceutske kompozicije u skladu sa pronalaskom mogu takođe da se koriste same ili u kombinaciji sa najmanje još jednim drugim terapeutskim sredstvom u drugim terapeutskim oblastima, na primer, gastrointestinalnim bolestima. Kompozicije u skladu sa pronalaskom mogu takođe da se koriste u kombinaciji sa terapijom zamene gena.

[0151] Pronalazak u narednom aspektu uključuje kombinaciju koja sadrži jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, zajedno sa najmanje još jednim drugim terapeutski aktivnim sredstvom.

[0152] Gore navedene kombinacije mogu uobičajeno da budu za upotrebu u obliku farmaceutske kompozicije, a takva farmaceutska kompozicija sadrži kombinaciju kako je prethodno definisano zajedno sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim razblaživačem ili nosačem, što predstavlja naredni aspekt pronalaska.

[0153] Terapeutski efektivna količina jedinjenje formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli zavisi od brojnih faktora. Na primer, vrsta, starost i težina primaoca, određeno stanje koje zahteva tretman i njegova ozbiljnost, priroda kompozicije i način primene su sve faktori koji treba da se razmotre. Terapeutski efektivnu količinu u krajnjoj liniji određuje ordinirajući lekar. Nezavisno od toga, efektivna količina jedinjenja iz ovog pronalaska za tretman ljudi koji su generalno skloni oboljevanju treba da bude u rasponu od 0.0001 do 100 mg/kg telesne težine pacijenta po danu. Mnogo češće, efektivna količina treba da bude u rasponu od 0.001 do 10 mg/kg telesne težine pacijenta po danu. Prema tome, za odraslu osobu težine 70 kg primer stvarne količine po danu bi bio obično od 7 do 700 mg. Za intranazalnu i inhalacionu primenu, uobičajene doze za odraslu osobu od 70 kg bi bile u rasponu od 0.1 mikrograma do 1mg po danu, na primer 1ug, 10µg ili 100µg. Ova količina može da se da u pojedinačnoj dozi dnevno ili u nekoliko (kao što su dve, tri, četiri, pet ili više) subdoza dnevno, tako da je ukupna dnevna doza ista. Efektivna količina farmaceutski prihvatljive količine soli jedinjenja formule (I) može da se odredi kao odnos efektivne količne jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli per se. Slične doze su odgovarajuće za tretman drugih stanja koja su ovde navedena.

[0154] Jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu takođe da se primene bilo kojom odgovarajućom učestalošću, na primer, 1-7 puta nedeljno. Precizan dozni režim naravno zavisni od faktora kao što su terapeutska indikacija, starost i stanje pacijenta i određenog načina primene koji je izabran. U jednom aspektu pronalaska, jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, mogu da se primene jedanput nedeljno u periodu od 4 do 8 nedelja, na primer 4, 5, 6, 7 ili 8 nedelja.

[0155] Farmaceutske kompozicije mogu da budu u jediničnim doznim oblicima koje sadrže prethodno odmerenu količinu aktivnog sastojka po jediničnoj dozi. Ovakva jedinica može da sadrži, kao ne-ograničavajući primer, 0.5 mg do 1 g jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u zavisnosti od stanja koje se tretira, načina primene i starosti, težine i stanja pacijenta. Preferirane jednodozne kompozicije su one koje sadrže dnevnu dozu ili sub-dozu, kako je prethodno navedeno ili njihov odgovarajući deo aktivnog sastojka. Ove farmaceutske kompozicije mogu da se izrade bilo kojim postupkom dobro poznatim u farmaceutskoj tehnici.

[0156] Ovde je takođe dat proces za izradu ovakve farmaceutske kompozicije koji uključuje mešanje jedinjenja formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata.

[0157] Jedinjenja Formule (I) i njihove soli mogu da se izrade metodologijom koja je opisana u daljem tekstu, što čini naredni aspekt ovog pronalaska.

[0158] Aspekti pronalaska su ilustrovani narednim primerima, ali se ne ograničavaju njima.

Analitička metodologija

<1>H NMR

[0159]<1>H NMR spektar se beleži ili u CDCl3 ili DMSO-d6 ili na Bruker DPX 400 ili Bruker AvanceDRX, Varian Unity 400 spektrometru ili JEOL Delta, svi rade na 400 MHz. Korišćeni unutrašnji standard je ili tetrametilsilan ili rezidualni protonski rastvarač na 7.25 ppm za CDCl3 ili 2.50 ppm za DMSO-d6.

LCMS

Sistem A

Kolona: 50mm x 2.1mm ID, 1.7µm Acquity UPLC BEH C18

Brzina protoka: 1mL/min.

Temp: 40°C

opseg UV detekcije UV: 210 do 350nm

Maseni spektar: beležen na masenom spektrometru korišćenjem alternativnog sken pozitivnog i negativnog načina elektrosprej jonizacije

Rastvarači: A: 0.1% v/v mravlja kiselina u vodi

B: 0.1% v/v mravlja kiselina u acetonitrilu

Sistem B

[0161]

Kolona: 50mm x 2.1mm ID, 1.7mm Acquity UPLC BEH C18

Brzina protoka: 1mL/min.

Temp: 40°C

opseg UV detekcije: 210 do 350nm

Rastvarači: A: 10mM amonijum bikarbonata u vodi podešeno na pH10 sa rastvorom amonijaka

B: acetonitril

Masena usmerena autopreparativna HPLC (MDAP)

[0162] Masena usmerena autopreparativna HPLC se izvodi pod niže datim uslovima. UV detekcija je prosečan signal na talasnim dužinama od 210nm do 350nm a maseni spektar je beležen na masenom spektrometru uz korišćenje alternativnog skena pozitivnog i negativnog oblika elektrosprej jonizacije.

Postupak A

[0163] Postupak A je sproveden na Sunfire C18 koloni (obično 150mm x 30mm i.d.5µm promer pakovanja) na sobnoj temperaturi. Korišćeni rastvarači su:

A = 0.1% v/v rastvor mravlje kiseline u vodi

B = 0.1% v/v rastvor mravlje kiseline u acetonitrilu.

Postupak B

[0164] Postupak B je sproveden na XBridge C18koloni (obično 100mm x 30mm i.d.5µm promer pakovanja) na sobnoj temperaturi. Korišćeni rastvarači su:

A = 10 mM vodeni rastvor aminijum bikarbonata podešen na pH 10 sa rastvorom amonijaka.

B = acetonitril.

Postupak C

[0165] Postupak C je sproveden na Sunfire C18 koloni (obično 150mm x 30mm i.d.5µm promer pakovanja) na sobnoj temperaturi. Korišćeni rastvarači su:

A = 0.1% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u vodi

B = 0.1% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu.

Skraćenice

[0166] Naredna lista daje definicije nekih skraćenica kako je ovde korišćeno. Jasno je da lista nije neiscrpna, ali značenja skraćenica koje nisu ovde navedene biće lako razumljive stručnjaku sa iskustvom u tehnici.

DCM Dihlormetan

DMF N,N-Dimetilformamid

DMSO Dimetilsulfoksid

THF Tetrahidrofuran

EtOAc Etil acetat

MeOH Metanol

EtOH Etanol

MeCN Acetonitril

HCl Hlorovodonična kiselina

HPLC Visoko efikasna tečna hromatografija

MDAP Masena usmerena autopreparativna HPLC

SPE Ekstrakcija čvrste faze

MeOH Metanol

TBME terc-Butil metil etar

TFA Trifluorsirćetna kiselina

DIPEA N,N-Diizopropiletilamin

Reakcija međuproizvoda

Međuproizvod 1: Etil 3-pentanimidamido-1H-pirol-2-karboksilat hidrohlorid

[0167] Rastvor vodonik hlorida u dioksanu (12 mL, 4M, 48 mmol) se u kapima doda u rastvor etil 3-amino-1H-pirol-2-karboksilat hidrohlorida (2.04 g, 10.7 mmol) (J. Org. Chem.

1999, 64(22), 8411) u valeronitrilu (30 mL). Dobijena smeša se zagreva 18 sati na 50 °C. Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu a čvrst materijal se sakupi filtriranjem i ispere sa TBME. Naslovljeno jedinjenje se dobija kao beličasta čvrsta supstanca (2.19 g).

Naredna porcija TBME se doda u filtrat i smeša se ponovo filtrira, precipitat se ispere sa TBME i suši da se dobije dodatna porcija naslovljenog jedinjenja (0.275 g).

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.22 (br. s., 1 H) 10.88 (s, 1 H) 9.39 (br. s, 1 H) 8.25 (br. s, 1 H) 7.09 (t, J=2.9Hz, 1 H) 6.19 (t, J=2.5 Hz, 1 H) 4.23 (q, J=7.0 Hz, 2 H) 2.52 - 2.60 (m, 2 H) 1.63 - 1.77 (m, 2 H) 1.34 - 1.47 (m, 2 H) 1.27 (t, J=7.2 Hz, 3 H) 0.94 (t, J=7.4 Hz, 3 H)

Međuproizvod 2: 2-Butil-3H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-on

[0168] Rastvor natrijum hidroksida (1.44 g, 35.9 mmol) u vodi (7 mL) se doda u rastvor etil 3-pentanimidamido-1H-pirol-2-karboksilat hidrohlorida (2.46 g, 8.99 mmol) u etanolu (30 mL). Dobijena smeša se zagreva pod refluksom ukupno 4 sata. Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu i pH podesi na pH 6.5 sa vodenim rastvorom limunske kiseline. Dobijena smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 50 mL). Kombinovane organske faze se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, suše (Na2SO4), filtriraju i upare da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bledo smeđa čvrsta supstanca (1.69 g).

LCMS (Sistem B): tRET= 0.66 min; MH<+>192.

Međuproizvod 3: 2-Butil-4-hlor-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin

[0169] Fosfor oksihlorid (20 mL, 21.46 mmol) se doda u 2-butil-3H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-on (1.69g). Dobijena smeša se zagreva na 100 °C. Nakon 4 sata, reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu a nakon toga sipa na led. Vodena faza se tretira sa vodenim rastvorom natrijum hidroksida (5M) sve do pH 7. Dobijena smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 150 ml). Kombinovana organska faza se ispere sa slanim rastvorom, suši (Na2SO4), filtrira i upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.69 g).

LCMS (Sistem B): tRET= 0.90 min; MH<+>210, 212.

Međuproizvod 4: 2-Butil-4-hlor-7-jod-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin

[0170] N-Jodsukcinimid (2.09 g, 9.29 mmol) se u porcijama doda u izmešani rastvor 2-butil-4-hlor-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina (1.69 g, 8.06 mmol) u THF (35 mL). Dobijena smeša se meša 1 sat na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se razblaži sa TBME (50 mL), nakon toga ispere sa vodenim rastvorom natrijum tiosulfata (50 mL), a zatim sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 mL). Organska faza se suši (Na2SO4), filtrira i upari. Uzorak se rastvori u dihlormetanu i prečisti hromatografijom na silika gelu koristeći kao gradijent 0-100% dihlormetan-cikloheksan u toku 30 minuta, nakon toga gradijent 0-100% TBME-cikloheksan a zatim 0-20% metanol u toku 15 minuta. Odgovarajuće frakcije se identifikuju pomoću LC-MS a nakon toga kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao žuta čvrsta supstanca (2.2 g).

LCMS (Sistem B): tRET = 1.14 min; MH<+>336, 338.

Međuproizvod 5: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-4-hlor-7-jod-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin

[0171] Natrijum hidrid (0.338 g, 60% u ulju, 14.08 mmol) se u porcijama doda u izmešani rastvor 4-hlor-7-jod-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina (2.19 g, 6.53 mmol) u DMF (30 mL) ohlađen u ledenom kupatilu. Nakon 30 minuta se doda benzil hlormetil etar (1.13 mL, 1.278 g, 8.16 mmol) i reakcija meša na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se neutrališe sa vodom i dobijena smeša podeli između etil acetata (150 mL) i vode (150 mL). Organska faza se ispere sa vodom, zatim sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, suši (Na2SO4), filtrira i upari. Uzorak se rastvori u dihlormetanu i prečisti hromatografijom na silika gelu (100 g) koristeći kao gradijent 0-100% etil acetat-cikloheksan u toku 30 minuta.

Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao žuto ulje (2.82 g).

LCMS (Sistem B): tRET = 1.49 min; MH<+>456, 458.

Međuproizvod 6: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-jod-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0172] 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-4-hlor-7-jod-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin (1 g, 2.2 mmol) se suspenduje u 2-propanolu (5 mL) i 35% (0.88) rastvoru amonijaka (4 mL). Reakcija se meša 90 minuta na 120 °C u Biotage Initiator pod mikrotalasima. U reakciju se doda još 1 mL 35% (0.88) rastvora amonijaka. Reakcija se meša 90 minuta na 120 °C u Biotage Initiator pod mikrotalasima. Reakcija se upari pod vakuumom da se dobije bledo žuto ulje. Ulje se rastvori u minimalnoj zapremini 20% rastvora metanola u dihlormetanu i prečisti hromatografijom na silika gelu koristeći kao gradijent 0-100% etil acetat u cikloheksanu u toku 80 minuta.

Frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno ulje (768 mg).

LCMS (Sistem B): tRET= 1.19 min; MH<+>437.

Međuproizvod 7: 2-(Etoksimetil)-3H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-on

[0173] Izmešana smeša 3-amino-2-etoksikarbonilpirol hidrohlorida (2.23 g, 11.70 mmol) i 2-etoksiacetimidamida (2.086 g, 15.21 mmol) u o-ksilenu (20 mL) se zagreva 23 h pod refluksom. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom da se ukloni najveći deo o-ksilena i dobije uzorak koji sadrži naslovljeno jedinjenje (3.8g).

LCMS (Sistem B): tRET= 0.52 min; MH<+>194.

Međuproizvod 8: 4-Hlor-2-(etoksimetil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin

[0174] Fosfor oksihlorid (21.81 mL, 234 mmol) se doda u sirovi uzorak 2-(etoksimetil)-3H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona (2.26 g). Dobijena smeša se zagreva 3 sata na 100 °C. Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu, a nakon toga pažljivo sipa na led. Smeša se tretira sa vodenim rastvorom natrijum hidroksida (5M) sve dok se ne postigne pH 7. Dobijena smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 200 mL). Kombinovani organski ekstrakti se isperu sa slanim rastvorom, suše koristeći hidrofobni frit i koncentruju pod vakuumom da se dobije 920 mg narandžastog ulja. Sirovi produkt se prečisti hromatografijom na koloni (100g Si kolona) koristeći kao gradijent 0-100% EtOAc/cikloheksan u toku 60 minuta. Frakcije koje sadrže željeni produkt se kombinuju i koncentruju pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao žuta čvrsta supstanca (501mg).

LCMS (Sistem B): tRET = 0.67 min; MH<+>212, 214

Međuproizvod 9: 4-Hlor-2-(etoksimetil)-7-jod-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin

[0175] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 4 od 4-hlor-2-(etoksimetil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina.

LCMS (Sistem B): tRET = 0.85 min; MH<+>338, 340.

Međuproizvod 10: 5-((Benziloksi)metil)-4-hlor-2-(etoksimetil)-7-jod-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin

[0176] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 5 od 4-hlor-2-(etoksimetil)-7-jod-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.27 min; MH<+>458, 460.

Međuproizvod 11: 5-((Benziloksi)metil)-2-(etoksimetil)-7-jod-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0177] 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-4-hlor-7-jod-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin (1.2 g, 2.55 mmol) se suspenduje u izopropanolu (4 mL) i doda se 0.88 amonijaka (4.24 mL, 77 mmol). Reakcija se meša i zagreva 2h na 120 °C u Biotage Initiator pod mikrotalasima. Doda se nova porcija 0.88 amonijaka (4.24 mL, 77 mmol) i reakcija se meša 2h na 120 °C u Biotage Initiator pod mikrotalasima. U reakciju se doda nova porcija 0.88 amonijaka (4.24 mL, 77 mmol) i reakcija meša 2 sata na 120 °C u Biotage Initiator pod mikrotalasima.

Reakcija se upari pod vakuumom a sirovi produkt se u toku 60 minuta prečisti hromatografijom na koloni (100 g Si kolona) koristeći kao gradijent 0-50% EtOAc/cikloheksan. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i koncentruju pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (634 mg).

LCMS (Sistem B): tRET = 1.24 min; MH<+>451.

Međuproizvod 12: Etil 3-(3-metokspropanimidamido)-1H-pirol-2-karboksilat hidrohlorid

[0178] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 1 od etil 3-amino-1H-pirol-2-karboksilat hidrohlorida i 3-metokspropan nitrila.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.23 (br. s, 1 H) 10.99 (br. s, 1 H) 9.48 (br. s, 1 H) 8.35 (br. s, 1 H) 7.05 - 7.13 (m, 1 H) 6.15 - 6.20 (m, 1 H) 4.23 (q, J=7.0 Hz, 2 H) 3.73 (t, J=6.3 Hz, 2 H) 3.32 (s, 3 H) 2.84 (t, J=6.27 Hz, 2 H) 1.27 (t, J=7.2 Hz, 3 H).

Međuproizvod 13: 2-(2-Metoksetil)-3H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-on

[0179] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 2 od etil 3-(3-metokspropanimidamido)-1H-pirol-2-karboksilat hidrohlorida.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.48 min; MH<+>194.

Međuproizvod 14: 4-Hlor-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin

[0180] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 3 od 2-(2-metoksietil)-3H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4(5)-ona.

LCMS (Sistem B): tRET = 0.62 min; MH<+>212, 214.

Međuproizvod 15: 4-Hlor-7-jod-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin

[0181] N-jodsukcinimid (892 mg, 3.97 mmol) se u porcijama doda u izmešani rastvor 4-hlor-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina (730 mg, 3.45 mmol) u tetrahidrofuranu (THF) (30 mL). Dobijena smeša se meša 1 sat na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se razblaži sa TBME (50 mL), nakon toga ispere sa vodenim rastvorom natrijum tiosulfata (50 mL), a zatim sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 mL). Organska faza se suši i filtrira pomoću hidrofobnog frita i upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.17 g).

LCMS (Sistem B): tRET = 0.81 min; MH<+>338, 340.

Međuproizvod 16: 5-((Benziloksi)metil)-4-hlor-7-jod-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin

[0182] U izmešanu suspenziju natrijum hidrida 60% mt. u mineralnom ulju (0.180 g, 4.51 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (8 mL) se na 0 °C, u kapima, u toku 5 minuta dodaje rastvor 4-hlor-7-jod-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina (1.17 g, 3.47 mmol) u tetrahidrofuranu (8 mL). Dobijena smeša se meša 15 minuta na 0°C a nakon toga se u kapima, u toku 5 min dodaje rastvor benzilhlormetil etra (0.504 mL, 3.64 mmol) u tetrahidrofuranu (5 mL). Reakcija se meša dva sata. Reakcija se podeli između etil acetata (200 mL) i vode (200 mL). Organski sloj se izdvoji i ispere sa slanim rastvorom (200 mL), suši, filtrira i koncentruje pod vakuumom da se dobije sirovo jedinjenje (1.57 g). Uzorak se rastvori u dihlormetanu i u toku 60 minuta prečisti hromatografijom na silika gelu (70 g) koristeći kao gradijent 0-50% etil acetat-cikloheksan. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao čvrsta supstanca (985 mg).

LCMS (Sistem B): tRET= 1.23 min; MH<+>458, 460

Međuproizvod 17: 5-((Benziloksi)metil)-7-jod-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0183] U čvrsti 5-((benziloksi)metil)-4-hlor-7-jod-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin (555 mg, 1.213 mmol) se dodaju izopropanol (3 mL) i amonijak 880 (0.75 mL, 13.56 mmol). Reaktivna posuda se zatvori i zagreva 1 h u Biotage Initiator koristeći inicijalnu apsorpciju podešenu veoma visoko na 150 °C. U reakciju se doda još amonijaka 880 (0.75 mL, 13.56 mmol) i reaktivna posuda se zatvori i zagreva 1 h u Biotage Initiator koristeći inicijalnu apsorpciju podešenu veoma visoko na 150 °C. Reakcija se koncentruje pod vakuumom a smeša podeli između etil acetata (50 mL) i vode (50 mL) i izdvoji. Vodeni sloj se ponovo ekstrahuje sa etil acetatom (25 mL) i kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (25 mL), suše pomoću hidrofobnog frita i koncentruju pod vakuumom da se dobije braon guma. Uzorak se rastvori u dihlormetanu i prečisti u toku 40 minuta hromatografijom na silika gelu (Si) (50g) pomoću 0-100% etil acetat-dihlormetan gradijenta. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao žuta guma (349 mg).

(Sistem B): tRET = 0.99 min; MH<+>439.

Međuproizvod 18: Etil 5-metil-3-pentanimidamido-1H-pirol-2-karboksilat hidrohlorid

[0184] Vodonik hlorid u dioksanu (4M, 308 mL, 1.2 mol) se u kapima doda u etil 3-amino-5-metil-1H-pirol-2-karboksilat (38.3 g, 228 mmol) (J. Med. Chem. 2008, 51, 68) u valeronitrilu (383 mL). Dobijena smeša se zagreva u toku noći na 50 °C. Doda se nova količina kiseline (160 mL, 0.64 mol) i smeša zagreva na 55 °C u toku noći. Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira i filtrat upari. Ostatak se prevede u žitku masu u TBME (1200 ml) u toku 30 minuta a čvrst supstanca se filtrira i ispere sa TMBE i suši. Naslovljeno jedinjenje se dobija kao braon čvrsta supstanca (58.9 g).

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm uključuje 11.90 (br. s, 1 H) 11.09 (s, 1 H) 9.52 (br. s, 1 H) 8.14 (br. s, 1 H) 5.82 (br. s, 1 H) 4.12 (q, J=7.1 Hz, 2 H) 3.48 (br. s., 1 H) 2.14 (s, 3 H) 1.51 - 1.70 (m, 2 H) 1.05 - 1.40 (m, 6 H) 0.84 (t, J=7.1 Hz, 3 H).

Međuproizvod 19: 2-Butil-6-metil-3H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-on

[0185] Vodeni rastvor natrijum hidroksida (6M, 138 mL) se u kapima doda u rastvor etil 5-metil-3-pentanimidamido-1H-pirol-2-karboksilata (58.9 g, 0.2 mol) u etanolu (550 mL) ohlađenom u ledenom kupatilu. Reaktivna smeša se zagreva pod refluksom 2.5 sata a nakon toga ohladi na sobnu temperaturu. Doda se voda (700 mL) i pH podesi na pH 6.5 pomoću vodenog rastvora limunske kiseline (2M). Dobijena smeša se meša 45 minuta, nakon toga filtrira i čvrst materijal ispere sa vodom. Materijal se suši u vakuumskoj pećnici na 50 °C da se dobije naslovljeno jedinjenje.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm uključuje 11.60 (s, 1 H) 11.53 (s, 1 H) 5.91 (s, 1 H) 2.33 - 2.50 (m, 2 H) 2.19 (s, 3 H) 1.45 - 1.60 (m, 2 H) 1.10 - 1.26 (m, 2 H) 0.70 - 0.84 (m, 3 H)

Međuproizvod 20: 2-Butil-4-hlor-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin

[0186] Fosfor oksihlorid (42.8 mL, 70.4 g, 0.459 mol) se u kapima, u atmosferi azota, doda u rastvor 2-butil-6-metil-3H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona (37.5 g, 0.183 mol) u acetonitrilu (750 mL). Reaktivna smeša se zagreva pod refluksom u toku noći. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu u kapima se doda nova porcija fosfor oksihlorida (42.8 mL, 70.4 g, 0.459 mol) i zagrevanje nastavi još 3.5 sata. Reakcija se ponovo ohladi na sobnu temperaturu, u kapima se doda nova porcija fosfor oksihlorida (42.8 mL, 70.4 g, 0.459 mol) i zagrevanje nastavi još 3 sata. Reaktivna smeša se ostavi da stoji na sobnoj temperaturi u toku noći, nakon toga zagreva pod refluksom 3.5 sata. Reaktivna smeša se ohladi, a nakon toga koncentruje. Ostatak se ohladi u ledenom kupatilu i pažljivo se doda ledeno hladna voda (650 mL). pH se podesi na 8 pomoću vodenog rastvora kalijum hidroksida i nakon toga smeša meša 45 minuta. Smeša se podeli između dihlormetana (1000mL) i vode (1000 mL). Vodeni sloj i čvrsti material se ponovo ekstrahuju sa dihlormetanom (2 x 500 mL). Kombinovani organski slojevi se suše (Na2SO4) i filtriraju kroz ploču neutralnog aluminijuma. Filtrat se koncentruje do žutog ulja i dodaju se zrnca kristala i heksan. Čvrsti materijal se filtrira, ispere sa heksanom i suši da se dobije naslovljeno jedinjenje kao beličasta čvrsta supstanca (15.5 g).

LCMS (Sistem A): tRET= 0.81min; MH<+>224 / 226.

Međuproizvod 21: 2-Butil-4-hlor-7-jod-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin

[0187] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 4 od 2-butil-4-hlor-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.20 min; MH<+>350, 352.

Međuproizvod 22: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-4-hlor-7-jod-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin

[0188] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 5 od 2-butil-4-hlor-7-jod-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.54 min; MH<+>470, 472.

Međuproizvod 23: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-jod-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0189] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 6 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-4-hlor-7-jod-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.24 min; MH<+>451.

Međuproizvod 24: 2-Butil-4-hlor-7-jod-5-((2-(trimetilsilil)etoks)metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin

[0190] U izmešanu suspenziju natrijum hidrida 60% mt. u mineralnom ulju (0.248 g, 6.20 mmol) u anhidrovanom THF (20 mL) se u kapima, u toku 5 min, na 0 °C, dodaje rastvor 2-butil-4-hlor-7-jod-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina (1.3 g, 3.87 mmol) u THF (20 mL). Dobijena smeša se meša 15 minuta na 0 °C a nakon toga se u kapima u toku 5 min dodaje rastvor (2-(hlormetoks)etil)trimetilsilana (0.720 mL, 4.07 mmol) u THF (10 mL). Reakcija se meša dva sata, a nakon toga neutrališe sa vodom. Reakcija se podeli između etil acetata (100 mL) i vode (100 mL). Organski sloj se izdvoji i ispere sa slanim rastvorom (100 mL), suši, filtrira i koncentruje pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.86 g) kao crveno ulje. LCMS (Sistem B): tRET= 1.65 min; MH<+>466.

Međuproizvod 25: 2-Butil-7-jod-5-((2-trimetilsilil)etoks)metil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0191] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 17 od 2-butil-4-hlor-7-jod-5-((2-(trimetilsilil)etoks)metil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.38 min; MH<+>447.

Međuproizvod 26: 1-(Heks-5-in-1-il)piperidin

[0192] Rastvor 6-hlorheks-1-ina (5 mL, 41.3 mmol), piperidina (4.08 mL, 41.3 mmol) i natrijum hidrogen karbonata (4.16 g, 49.5 mmol) u DMF (50 mL) se refluksuje 16 h. Reakcija se koncentruje pod vakuumom i ostatak podeli između etra (150 mL) i vode (150 mL).

Organski sloj se izdvoji i vodeni sloj ponovo ekstrahuje sa dietil etrom (50 mL). kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (150 mL), suše (MgSO4), filtriraju i koncentruju pod vakuumom da se dobije sirovi uzorak naslovljenog jedinjenja (3.74 g). U sirovi produkt se doda oksalna kiselina (2.161 g, 24 mmol). Dobijena čvrsta supstanca rekristališe iz etanola, sakupi filtriranjem i suši pod vakuumom da se dobije 1-(heks-5-in-1-il)piperidin so oksalne kiseline (4.66 g). Čvrsta supstanca se podeli između dietil etra (150 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (150 mL). Organski sloj se izdvoji i suši (MgSO4), filtrira i koncentruje pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao žuto ulje (1.93 g).

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.31 - 2.52 (m, 6 H) 2.18 - 2.26 (m, 2 H) 1.92 - 1.96 (m, 1 H) 1.40 - 1.72 (m, 10 H).

Međuproizvod 27: 1-(Pent-4-in-1-il)piperidin

[0193] Smeša piperidina (11.6 mL, 117 mmol), 5-hlor-1-pentina (13.8 mL, 129 mmol) i natrijum hidrogen karbonata (11.84 g, 141 mmol) u DMF (100 mL) se zagreva u atmosferi argona 18 sati na 80 °C. Reaktivna smeša se razblaži sa ledeno hladnom vodom, nakon toga ekstrahuje sa etil acetatom. Faze se razdvoje i organska faza ispere sa vodom (100 mL), zasićenim slanim rastvorom (25 mL), suši preko natrijum sulfata i upari pod vakuumom da se dobije sirovi produkt kao narandžasta tečnost. Sirovi produkt se prečist hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa 10% metanolom u DCM. Naslovljeno jedinjenje se dobija kao crvena tečnost (5.05 g).

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.30 - 2.50 (m, 6 H) 2.15 - 2.30 (m, 2 H) 1.90 - 1.99 (m, 1 H), 1.65 - 1.78 (m, 2 H),1.50 - 1.63 (m, 4 H) 1.33 - 1.48 (m, 2 H).

Međuproizvod 28: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(6-(piperidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0194] U degasirani rastvor 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-jod-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (217 mg,0.497 mmol) u anhidrovanom N,N-dimetilformamidu (3.5 mL) u atmosferi azota se na sobnoj temperaturi dodaju bakar(I) jodid (19 mg, 0.1 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II)dihlorid (38.4 mg, 0.055 mmol) i na kraju trietilamin (0.124 mL, 0.895 mmol). Smeša se meša 10 minuta na sobnoj temperaturi u atmosferi azota i nakon toga se doda rastvor 1-(heks-5-in-1-il)piperidina (132 mg, 0.796 mmol) u anhidrovanom degasiranom N,N-dimetilformamidu (0.5 mL). Reaktivna smeša se meša 40 minuta na 55 °C. Reakcija se upari pod vakuumom da se dobije tamno crveno ulje. Ulje se podeli između vode i dihlormetana. Organski sloj se izdvoji i vodeni sloj ponovo ekstrahuje sa dihlormetanom. Kombinovani organski ekstrakti se propuste kroz hidrofobni frit i upare pod vakuumom da se dobije tamno crveno ulje. Ulje se rastvori u smeši MeOH:DMSO (1:1) (5 x 1 mL) prečišćenoj sa MDAP (Postupak B). Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao žuto ulje (161 mg).

LCMS (Sistem B): tRET = 1.26 min; MH<+>474.

Međuproizvod 29: 2-Butil-7-(6-(piperidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5-((2-(trimetilsilil)etoks)metil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0195] U degasirani izmešani rastvor 2-butil-7-jod-5-((2-(trimetilsilil)etoks)metil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin4-amina (400 mg, 0.896 mmol), bakar (I) jodida (34 mg, 0.179 mmol) i bis(trifenilfosfin)paladijum(II)dihlorida (63 mg, 0.090 mmol) u anhidrovanom N,N-dimetilformamidu (6 mL) se u kapima u toku 5 minuta doda rastvor 1-(heks-5-in-1il)piperidina (193 mg, 1.165 mmol) i trietilamina (0.186 mL, 1.344 mmol) u anhidrovanom N,N-dimetilformamidu (3 mL). Reakcija se meša 20 sati na sobnoj temperaturi u atmosferi azota. Reakcija se koncentruje pod vakuumom i ostatak podeli između etil acetata (50 mL) i vode (50 mL). Organska faza se izdvoji i vodena faza ponovo ekstrahuje sa etil acetatom (50 mL). Kombinovane organske faze se isperu sa slanim rastvorom (50 mL), suše (MgSO4), filtriraju i koncentruju pod vakuumom da se dobije narandžasta guma. Uzorak se rastvori u dihlormetanu i prečisti u toku 40 minuta na silika gel (Si) kertridžu (50g) koristeći kao gradijent 0-10% metanol-dihlormetan. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao žuta pena (87 mg).

LCMS (Sistem A): tRET= 0.71 min; MH<+>484.

Međuproizvod 30: 2-Butil-7-(6-(piperidin-1-il)heksil)-5-((2-(trimetilsilil)etoks)metil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0196] Rastvor 2-butil-7-(6-(piperidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5-((2-(trimetilsilil)etoks)metil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (87 mg, 0.180 mmol) u etanolu (8 mL) i sirćetnoj kiselini (1 mL) se hidrogenizuje pomoću H-cube (podešavanje: 60 °C, napunjen sa H2, 1mL/min brzina protoka) i 10% Pd/C CatCart 30 kao katalizatorom. Reakcija se koncentruje pod vakuumom i ostatak podeli između DCM (20 mL) i 2N vodenog rastvora natrijum hidroksida (20 mL). Organski sloj se izdvoji i suši pomoću hidrofobnog frita a zatim koncentruje pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (50 mg).

LCMS (Sistem A): tRET = 0.86 min; MH<+>488.

Međuproizvod 31: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(piperidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0197] U degasirani rastvor 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-jod-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (175 mg,0.401 mmol) u anhidrovanom N,N-dimetilformamidu (3mL) se u atmosferi azota, na sobnoj temperaturi, dodaju bakar(I) jodid (15 mg, 0.079 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II)dihlorid (31 mg, 0.044 mmol) i na kraju trietilamin (0.1 mL, 0.722 mmol). Smeša se meša 10 minuta na sobnoj temperaturi u atmosferi azota i nakon toga se doda rastvor 1-(pent-4-in-1-il)piperidina (97 mg, 0.642 mmol) u anhidrovanom degasiranom N,N-dimetilformamidu (0.5mL). Reaktivna smeša se meša 40 minuta na 55 °C.

Reakcija se upari pod vakuumom da se dobije tamno žuto ulje. Ulje se podeli između vode i dihlormetana. Organski sloj se izdvoji i vodeni sloj ponovo ekstrahuje sa dihlormetanom. Kombinovani organski ekstrakti se propuste kroz hidrofobni frit i upare pod vakuumom da se dobije tamno žuto ulje. Ulje se rastvori u smeši MeOH:DMSO (1:1) (4 x 1mL) i prečisti sa MDAP (Postupak B). Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bledo žuta čvrsta supstanca (73mg).

LCMS (Sistem B): tRET= 1.26 min; MH<+>460.

Međuproizvod 32: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(4-(piperidin-1-il)but-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0198] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 26 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-jod-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i 1-(but-3-in-1-il)piperidina (Eur J. Med. Chem. 2009, 44(10), 4098).

LCMS (Sistem B): tRET = 1.11 min; MH<+>446.

Međuproizvod 33: 5-((Benziloksi)metil)-2-(etoksimetil)-7-(6-(piperidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin4-amin

[0199] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 26 od 5-((benziloksi)metil)-4-hlor-7-jod-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina i 1-(heks-5-in-1-il)piperidina.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.16 min; MH<+>476.

Međuproizvod 34: 5-((Benziloksi)metil)-2-(2-metoksietil)-7-(6-(piperidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0200] U degasirani rastvor 5-((benziloksi)metil)-7-jod-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (264 mg, 0.602 mmol) u anhidrovanom N,N-dimetilformamidu (7 mL) se u atmosferi azota, na sobnoj temperaturi, dodaju bakar (I) jodid (22.94 mg, 0.120 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II)dihlorid (42.3 mg, 0.060 mmol) i na kraju trietilamin (0.125 mL, 0.904 mmol). Smeša se meša 10 minuta na sobnoj temperaturi u atmosferi azota i nakon toga se doda rastvor 1-(heks-5-in-1-il)piperidina (129 mg, 0.783 mmol) u anhidrovanom degasiranom N,N-dimetilformamidu (1 mL). Reaktivna smeša se meša 16 sati na sobnoj temperaturi. Doda se 1-(Heks-5-in-1-il)piperidin (129 mg, 0.783 mmol) i smeša se meša 1 sat na sobnoj temperaturi. Reakcija se upari pod vakuumom da se dobije braon ulje. Ulje se podeli između vode (25 mL) i dihlormetana (25 mL). Organski sloj se izdvoji i vodeni sloj ponovo ekstrahuje sa dihlormetanom (20 mL). Kombinovani organski ekstrakti se propuste kroz hidrofobni frit i upare pod vakuumom da se dobije narandžasto ulje. Uzorak se rastvori u dihlormetanu i u toku 60 minuta prečisti hromatografijom na silika gelu (50 g) koristeći kao gradijent 0-100% etil acetat u cikloheksanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao ulje (102 mg).

LCMS (Sistem B): tRET = 1.08 min; MH<+>476.

Međuproizvod 35: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-7-(6-(piperidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0201] U degasirani rastvor 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-jod-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (215 mg, 0.477 mmol) u anhidrovanom N,N-dimetilformamidu (4 mL) se u atmosferi azota, na sobnoj temperaturi, dodaju bakar (I) jodid (19 mg, 0.100 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II)dihlorid (36.9 mg, 0.053 mmol) i na kraju trietilamin (0.119 mL, 0.859 mmol). Smeša se meša 10 minuta na sobnoj temperaturi u atmosferi azota i nakon toga se doda rastvor 1-(heks-5-in-1-il)piperidina (126 mg, 0.764 mmol) u anhidrovanom degasiranom N,N-dimetilformamidu (2 mL). Reaktivna smeša se meša 1.5 sat na 55 °C.

Dodaju se bakar (I) jodid (19 mg, 0.100 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II)dihlorid (36.9 mg, 0.053 mmol) i 1-(heks-5-in-1-il)piperidin (126 mg, 0.764 mmol) i reaktivna smeša se ostavi 1 sat da se meša na 55 °C. Reakcija se upari pod vakuumom da se dobije tamno crveno ulje. Ulje se podeli između vode i dihlormetana. Organski sloj se izdvoji i vodeni sloj ponovo ekstrahuje sa dihlormetanom. Kombinovani organski ekstrakti se propuste kroz hidrofobni frit i upare pod vakuumom da se dobije tamno crveno ulje. Sirovi produkt se prečisti sa MDAP (Postupak B). Frakcije koji sadrži produkt se koncentruju da se dobije naslovljeno jedinjenje kao žuto ulje (134 mg).

LCMS (Sistem B): tRET = 1.33 min; MH<+>488.

Međuproizvod 36: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-7-(4-(piperidin-1-il)but-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0202] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 28 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-jod-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i 1-(but-3-in-1-il)piperidina.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.29 min; MH<+>460.

Međuproizvod 37: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0203] U degasiranu suspenziju 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-jod-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (2.768 g, 6.34 mmol), bakar (I) jodida (0.242 g, 1.269 mmol) i bis(trifenilfosfin)paladijum(II)dihlorida (0.445 g, 0.634 mmol) u anhidrovanom N,N-dimetilformamidu (40 mL) se u kapima, u toku 2 minuta, dodaje rastvor 5-hlorpent-1-ina (0.781 g, 7.61 mmol) i trietilamina (1.231 mL, 8.88 mmol) u anhidrovanom N,N-dimetilformamidu (20 mL). Reakcija se meša 17 sati na sobnoj temperaturi. Reakcija se koncentruje pod vakuumom i dobijeno braon ulje podeli između vode (500 mL) i etil acetata (500 mL). Organska faza se izdvoji i vodeni sloj ponovo ekstrahuje sa etil acetatom (250 mL). Kombinovane organske faze se isperu sa slanim rastvorom (400 mL), suše (MgSO4), filtriraju i koncentruju pod vakuumom. Uzorak se rastvori u dihlormetanu i u toku 60 minuta prečisti hromatografijom na silika gelu (Si) (2 x 100g) koristeći kao gradijent 0-100% etil acetatcikloheksan. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije crveno ulje. Uzorak se rastvori u dihlormetanu i u toku 80 minuta prečisti hromatografijom na silika gelu koristeći 0-100% etil acetat-cikloheksan gradijent. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao žuta čvrsta supstanca. (1.13 g) LCMS (Sistem B): tRET= 1.29 min; MH<+>411, 413.

Međuproizvod 38: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(pirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0204] U izmešani rastvor 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (150 mg, 0.365 mmol) i trietilamina (0.061 mL, 0.438 mmol) u anhidrovanom acetonitrilu (3 mL) se na sobnoj temperaturi doda pirolidin (0.033 mL, 0.402 mmol) u jednom punjenju. Reakcija se meša 1.5 sat na sobnoj temperaturi, nakon toga 2.5 sata na 60 °C. Zagrevanje se nastavi još 16 h na 80 °C. Dodaju se nove količine pirolidina (0.033 mL, 0.402 mmol) i trietilamina (0.061 mL, 0.438 mmol) i zagrevanje nastavi još 10 sati na 80 °C. Reakcija se koncentruje pod vakuumom i ostatak podeli između dihlormetana (10 mL) i vode (10 mL). Organska faza se izdvoji i suši (hidrofobni frit) a zatim koncentruje pod vakuumom. Uzorak se rastvori u dihlormetanu i prečisti hromatografijom na aminopropil (NH2) silika gelu u toku 20 minuta koristeći kao gradijent 0-100% etil acetat - dihlormetan. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao beličasta čvrsta supstanca (95 mg).

LCMS (Sistem B): tRET= 1.23 min; MH<+>446

Međuproizvod 39: 6-(4-Amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)heks-5-in-1-ol

[0205] U čvrsti 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-jod-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin (1.2 g, 2.75 mmol) u N,N-dimetilformamidu (20 mL) se dodaju bis(trifenilfosfin)paladijum(II)dihlorid (0.193 g, 0.275 mmol) i bakar(I) jodid (0.105 g, 0.550 mmol). Rastvor se meša i degasira 5 minuta sa azotom, nakon toga reaktivna smeša ostavi u atmosferi azota. Rastvor heks-5-in-1-ola (0.405 g, 4.13 mmol) i trietilamina (0.575 mL, 4.13 mmol) u N,N-dimetilformamidu (5 mL) se u kapima doda u toku 5 minuta. Reaktivna smeša se meša 24 h na sobnoj temperaturi. U kapima se u toku 5 minuta dodaju nove količine heks-5-in-1-ola (0.1 g, 1.02 mmol) i trietilamina (0.15 mL, 1.08 mmol) u N,N-dimetilformamidu (3 mL) i reaktivna smeša meša na sobnoj temperaturi još 5 sati. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom na 60 °C i ostatak podeli između etil acetata (100 mL) i vode (100 mL). Organski sloj se izdvoji i vodeni sloj ponovo ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 50 mL).

Kombinovane organske faze se isperu sa slanim rastvorom, suše (hidrofobni frit) i koncentruju pod vakuumom da se dobije viskozno braon ulje (2.00 g). Uzorak se rastvori u dihlormetanu i prečisti hromatografijom na aminopropil silika gelu (110 g) koristeći kao gradijent 0-100% etil acetat-cikloheksan, a zatim kao gradijent 0-20% metanol-etil acetat u toku 40 minuta. Odgovarajuće frakcije se kombinuju, upare pod vakuumom, nakon toga azeotropiraju sa dietil etrom i suše da se dobije lepljiva beličasta čvrsta supstanca (699 mg). Uzorak se prenese u dihlormetan i u toku 40 minuta ponovo prečisti hromatografijom na silika gelu (Si) (50g) koristeći gradijent 0-100% etil acetat-dihlormetan. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (505 mg). LCMS (Sistem B): tRET = 1.04 min; MH<+>407.

Međuproizvod 40: 6-(4-Amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)heks-5-inal

[0206] Smeša 6-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)heks-5-in-1-ola (505 mg,1.242 mmol), N-metilmorfolin N-oksida (218 mg, 1.863 mmol), praškastih 4Å molekularnih sita i tetrapropilamonijum perutenata (21.83 mg, 0.062 mmol) se ostave u atmosferi azota i dodaju se anhidrovani dihlormetan (18 mL) i anhidrovani acetonitril (2 mL). Reaktivna smeša se meša 2 sata na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom na 60 °C. Ostatak se rastvori u dihlormetanu, filtrira kroz ploču silika gela i koncentruje pod vakuumom da se dobije crna guma (678 mg). Uzorak se rastvori u dihlormetanu i prečisti hromatografijom na silika gel kertridžu (50g) koristeći 0-10% metanol-dihlormetan gradijent u toku 40 minuta. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije žuta guma gubitkom crne boje (399 mg). Uzorak se rastvori u dihlormetanu i ponovo prečisti na silika gelu (50g) koristeći 0-10% metanol-dihlormetan gradijent u toku 40 minuta. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao žuta guma (227 mg).

LCMS (Sistem B): tRET= 1.11 min; MH<+>405.

Međuproizvod 41: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(6-(pirolidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0207] Suspenzija 6-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)heks-5-inala (117 mg,0.289 mmol) i 4Å molekularnih sita u anhidrovanom dihlormetanu (7 mL) se ostavi u atmosferi azota i doda se pirolidin (0.048 mL, 0.578 mmol). Reaktivna smeša se meša 1 minut na sobnoj temperaturi, a nakon toga se doda natrijum triacetoksiborohidrid (61.3 mg, 0.289 mmol) i reakcija meša još 1 sat. Dodaju se nove količine pirolidina (0.025 mL, 0.301 mmol) i natrijum triacetoksiborohidrida (80 mg, 0.377 mmol) i reaktivna smeša meša još 30 minuta. Reaktivna smeša se filtrira kroz celite ploču i pogača ispere sa DCM. Rastvarač se ukloni pod vakuumom i ostatak ponovo rastvori u DCM (20 mL). Organski sloj se ispere sa zasićenim rastvorom natrijum hidrogen karbonata (20 mL), slojevi izdvoje i vodeni sloj ponovo ekstrahuje sa DCM (20 mL). Kombinovane organske faze se suše preko hidrofobnog frita i koncentruju pod vakuumom da se dobije žuta guma. Uzorak se rastvori u dihlormetanu i prečisti na aminopropil silika gelu (10g) koristeći kao gradijent 0-100% etil acetat-cikloheksan a nakon toga 0-20% metanol u toku 40 minuta. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (55 mg).

LCMS (Sistem B): tRET= 1.17 min; MH<+>460

Međuproizvod 42: 2-pentil-3H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-on

[0208] Suspenzija etil 3-amino-1H-pirol-2-karboksilata, hidrohlorida (3 g, 15.74 mmol), heksanitrila (30 g, 309 mmol) i 4M rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (20 mL, 80 mmol) se meša 20 sati na 50 °C. Reaktivna smeša se ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu, a nakon hlađenja se formira precipitat. U reakciju se doda još 4M rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (10 mL) i reaktivna smeša zagreva još 4 sata na 50 °C. Reaktivna smeša se ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu, nakon toga razblaži sa TBME (300 mL) i dobijena suspenzija filtrira. Čvrsta pogača se ispere sa TBME (150 mL) i dietil etrom (150 mL) i suši pod vakuumom da se dobije bež čvrsta supstanca (4.4 g). Čvrsta supstanca se rastvori u etanolu (45 mL) i tretira sa rastvorom natrijum hidroksida (2.52 g, 62.9 mmol) u vodi (10 mL) a nakon toga se smeša zagreva 4 sata na 80 °C. Reaktivni rastvarač se ukloni pod vakuumom. Ostatak se suspenduje u vodi (200 mL) i pH podesi na 4 sa čvrstom limunskom kiselinom i ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 200 mL). Kombinovani organski ekstrakti se suše (MgSO4), filtriraju i koncentruju pod vakuumom da se dobije lepljiva bež čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se triturira sa dietil etrom i dobijena suspenzija filtrira i suši pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao beličasta čvrsta supstanca (1.884 g).

LCMS (Sistem B): tRET= 0.72 min; MH<+>206.

Međuproizvod 43: 4-Hlor-2-pentil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin

[0209] Izmešana suspenzija 2-pentil-3H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona (1.88 g, 9.16 mmol) u fosfor(V) oksihloridu (20 mL, 215 mmol) se zagreva 3 sata na 100 °C. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i azeotropira sa toluenom. Dobijena guma se rastvori u DCM (100 mL), ispere sa vodom (100 mL) i suši (hidrofobni frit) a nakon toga koncentruje pod vakuumom da se dobije braon čvrsta supstanca. Uzorak se rastvori u dihlormetanu i prečisti hromatografijom na silika gel kertridžu (50 g) koristeći 0-25% MeOH:TBME gradijent u toku 40 minuta. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije braon čvrsta supstanca koja se triturira sa dietil etrom (ca.100 mL), dobijena suspenzija se filtrira i čvrsta supstanca suši pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bledo smeđa čvrsta supstanca (1.04 g).

LCMS (Sistem B): tRET = 0.99 min; MH<+>224, 226.

Međuproizvod 44: 4-Hlor-7-jod-2-pentil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin

[0210] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 15 od 4-hlor-2-pentil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.21 min; MH<+>350, 352.

Međuproizvod 45: 5-((Benziloksi)metil)-4-hlor-7-jod-2-pentil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin

[0211] U izmešanu žitku masu natrijum hidrida 60% mt. u mineralnom ulju (0.167 g, 4.17 mmol) u anhidrovanom THF (15 mL) se u kapima u toku 10 minuta na 0 °C, u atmosferi azota, doda rastvor 4-hlor-7-jod-2-pentil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina (1.268 g, 3.63 mmol) u anhidrovanom THF (10 mL). Reakcija se meša još 30 minuta na 0 °C a nakon toga se u kapima u toku 10 minuta dodaje rastvor ((hlormetoks)metil)benzena (0.653 g, 4.17 mmol) u anhidrovanom THF (10 mL). Reakcija se nakon toga ostavi da se zagreje na sobnu temperaturu i meša još 60 minuta. U reakciju se doda još natrijum hidrida 60% mt. u mineralnom ulju (30 mg, 0.75 mmol) i mešanje na sobnoj temperaturi se nastavi još 16 sati. Reakcija se podeli između vode (120 mL) i etil acetata (120 mL). Organska faza se izdvoji i vodeni sloj ponovo ekstrahuje sa etil acetatom (50 mL). Kombinovani organski ekstrakti se isperu sa slanim rastvorom (100 mL), suše (MgSO4), filtriraju i koncentruju pod vakuumom da se dobije narandžasto ulje. Uzorak se rastvori u dihlormetanu i prečisti hromatografijom na silika gel kertridžu (100 g) koristeći 0-50% etil acetat-cikloheksan gradijent u toku 60 minuta. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao žuto ulje (1.478 g).

LCMS (Sistem B): tRET= 1.51 min; MH<+>470, 472.

Međuproizvod 46: 5-((Benziloksi)metil)-7-jod-2-pentil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0212] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 17 od 5-((benziloksi)metil)-4-hlor-7-jod-2-pentil-5H-pirolo[3,2-d] pirimidina.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.26 min; MH<+>451.

Međuproizvod 47: 5-((Benziloksi)metil)-2-pentil-7-(6-(piperidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0213] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 29 od 5-((benziloksi)metil)-7-jod-2-pentil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i 1-(heks-5-in-1-il)piperidina.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.30 min; MH<+>488.

Međuproizvod 48: 7-(5-(Azepan-1-il)pent-1-in-1-il)-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0214] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 38 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i azepana.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.27 min; MH<+>474.

Međuproizvod 49: 4-(4-Amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)but-3-in-1-ol

[0215] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 39 od 5-((benziloksi)metil)-2-(etoksimetil)-7-jod-5H-pirolo[3,2-d] pirimidin-4-amina i but-3-in-1-ola.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.07 min; MH<+>393.

Međuproizvod 50: 4-(4-Amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)butan-1-ol

[0216] Filtrirani rastvor 4-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)but-3-in-1-ola (853 mg, 2.173 mmol) u etanolu (80 mL) se hidrogenizuje pomoću H-cube (podešavanje: 20 °C, napunjen sa H2, 1 mL/min brzina protoka) i 10% Pd/C CatCart 30 kao katalizatorom. Rastvor se ponovo hidrogenizuje pomoću H-cube (podešavanje: 20 °C, napunjen sa H2, 1 mL/min brzina protoka) i novim 10% Pd/C CatCart 30 kao katalizatorom. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i ostatak se rastvori u dihlormetanu i prečisti hromatografijom na silika gel kertridžu (100 g) koristeći 0-25% metanol-dihlormetan gradijent u toku 60 minuta. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao beličasta čvrsta supstanca (543 mg). LCMS (Sistem B): tRET = 0.83 min; MH<+>397.

Međuproizvod 51: 4-(4-Amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)butanal

[0217] U izmešanu suspenziju 4-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)butan-1-ola (230 mg, 0.580 mmol), 4-metilmorfolin N-oksida (82 mg, 0.696 mmol) i praškastih 4Å molekularnih sita u smeši anhidrovanog dihlormetana (10 mL) i anhidrovanog acetonitrila (1 mL) se na sobnoj temperaturi doda tetrapropilamonijum perutenat (22 mg, 0.063 mmol) i reakcija meša 2 h na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom (vodeno kupatilo 20 °C). Dobijeni ostatak se prevede u žitku masu sa DCM (10 mL) i filtrira kroz celite ploču. Dobijeni rastvor se koncentruje pod vakuumom i ponovo rastvori u dihlormetanu i prečisti hromatografijom na silika gel kertridžu (20 g) koristeći 0-10% metanol-dihlormetan gradijent u toku 40 minuta. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao žuta guma (114 mg).

LCMS (Sistem B): tRET = 1.13 min; MH<+>395.

Međuproizvod 52: 7-(4-(Azepan-1-il)butil)-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0218] Suspenzija 4-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)butanala (68 mg, 0.172 mmol) i 4Å molekularnih sita u anhidrovanom dihlormetanu (5 mL) se ostavi u atmosferi azota i doda se azepan (0.039 mL, 0.345 mmol). Reaktivna smeša se meša 1 minut na sobnoj temperaturi a nakon toga se doda natrijum triacetoksiborohidrid (73.1 mg, 0.345 mmol) i reakcija meša još 1 sat. Reaktivna smeša se filtrira kroz celite ploču i pogača ispere sa DCM a nakon toga sa metanolom. Rastvarač se ukloni pod vakuumom i ostatak ponovo rastvori u DCM (50 mL). Organski sloj se ispere sa zasićenim rastvorom natrijum hidrogen karbonata (50 mL), slojevi razdvoje i vodeni sloj ponovo ekstrahuje sa DCM (25 mL), a nakon toga sa smešom 3:1 CHCl3:IPA (40 mL). Kombinovani organski slojevi se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod vakuumom da se dobije beličasta guma (180 mg). Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na aminopropil kertridžu (11 g) koristeći 0-25% metanol-dihlormetan gradijent u toku 30 minuta. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (42 mg).

LCMS (Sistem B): tRET= 1.36 min; MH<+>478.

Međuproizvod 53: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(6-hlorheks-1-in-1-il)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0219] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 28 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-jod-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i 6-hlorheks-1-ina.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.33 min; MH<+>439, 441.

Međuproizvod 54: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-7-(6-(pirolidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0220] U izmešani rastvor 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(6-hlorheks-1-in-1-il)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (160 mg, 0.364 mmol) i trietilamina (0.152 mL, 1.093 mmol) u acetonitrilu (4 mL) se doda pirolidin (0.090 mL, 1.093 mmol). Reakcija se meša 18 sati na 80 °C. U reaktivnu smešu se dodaju nove količine pirolidina (0.045 mL, 0.547 mmol) i trietilamina (0.075 mL, 0.539 mmol) i smeša meša na 80 °C još 2 sata. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom na 60 °C i ostatak podeli između DCM (25 mL) i vode (25 mL). Organski sloj se izdvoji i vodeni sloj ponovo ekstrahuje sa DCM (2 x 25 mL). Kombinovane organske faze se suše preko hidrofobnog frita i koncentruju pod vakuumom da se dobije narandžasto braon čvrsta supstanca (184 mg). Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na aminopropil kertridžu (NH2) (10g) koristeći 0-50% etil acetatdihlormetan gradijent u toku 40 minuta. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bledo žuta guma (157 mg).

LCMS (Sistem B): tRET = 1.18 min; MH<+>474.

Međuproizvod 55: 6-(4-Amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)heks-5-in-1-ol

[0221] U čvrsti 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-jod-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin (500 mg, 1.110mmol) u N,N-dimetilformamidu (8 mL) se dodaju bis(trifenilfosfin)paladijum(II)dihlorid (78 mg, 0.111 mmol) i bakar(I) jodid (42.3 mg, 0.222 mmol). Rastvor se meša i degasira 5 minuta sa azotom a nakon toga se reaktivna smeša prenese u atmosferu azota. U kapima se u toku 5 minuta dodaje rastvor heks-5-in-1-ola (163 mg, 1.665 mmol) i trietilamina (0.232 mL, 1.665 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2 mL). Reaktivna smeša se meša 6 sati na 50 °C. U reaktivna smeša se dodaju nove količine bis(trifenilfosfin)paladijum(II)dihlorida (40 mg, 0.0569 mmol) i bakar(I) jodida (20 mg, 0.105 mmol) i 5 minuta degasira sa azotom a nakon toga ostavi u atmosferi azota. U kapima se u toku 5 minuta doda rastvor heks-5-in-1-ola (80 mg, 0.817 mmol) i trietilamina (0.100 mL, 0.711 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2 mL). Reaktivna smeša se meša još 2.5 sata na 50 °C, nakon toga ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu i meša 20 sati (pogodnije je) i na kraju zagreva 2 sata na 50 °C. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom na 60 °C i ostatak podeli između etil acetata (100 mL) i vode (100 mL). Organski sloj se izdvoji i vodeni sloj ponovo ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 50 mL) i smešom 3:1 CHCl3: IPA (40 mL).

Kombinovani organski slojevi se suše preko hidrofobnog frita i koncentruju pod vakuumom da se dobije viskozno braon ulje (1.06 g). Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na aminopropil kertridžu (NH2) (70g) koristeći 0-100% etil acetat dihlormetan gradijent u toku 60 minuta. Odgovarajuće frakcije se kombinuju, upare pod vakuumom i azeotropiraju sa dietil etrom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao beličasta čvrsta supstanca (195 mg).

LCMS (Sistem B): tRET = 1.07 min; MH<+>421.

Međuproizvod 56: 6-(4-Amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)heks-5-inal

[0222] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 40 od 6-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)heks-5-in-1-ol.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.16 min; MH<+>419.

Međuproizvod 57: 7-(6-(Azetidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0223] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 41 od 6-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)heks-5-inala i azetidina.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.17 min; MH<+>460.

Međuproizvod 58: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0224] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 28 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-jod-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i 6-hlorpent-1-ina.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.29 min; MH<+>425, 427.

Međuproizvod 59: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-7-(5-(pirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0225] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 54 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i pirolidina.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.17 min; MH<+>460.

Međuproizvod 60: 5-(4-Amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-in-1-ol

[0226] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 39 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-jod-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i pent-4-in-1-ola.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.05 min; MH<+>393.

Međuproizvod 61: 5-(4-Amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-inal

[0227] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 40 od 5-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-in-1-ola.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.08 min; MH<+>391.

Međuproizvod 62: 7-(5-(Azetidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0228] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 41 od 5-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-inala i azetidina.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.17 min; MH<+>432.

Međuproizvod 63: 5-(4-Amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H)-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-in-1-ol

[0229] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 55 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-jod-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i pent-4-in-1-ola.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.03 min; MH<+>407.

Međuproizvod 64: 5-(4-Amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-inal

[0230] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 40 od 5-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-in-1-ola.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.09 min; MH<+>405.

Međuproizvod 65: 7-(5-Azetidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0231] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 41 od 5-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-inala i azetidina.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.14 min; MH<+>446.

Međuproizvod 66: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-7-(4-(pirolidin-1-il)butil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0232] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 52 od 4-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)butanala i pirolidina.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.19 min; MH<+>450.

Međuproizvod 67: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(4,4-difluorpiperidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0233]U izmešanu suspenziju 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (150 mg, 0.365 mmol) i 4,4-difluorpiperidin hidrohlorida (86 mg, 0.548 mmol) u anhidrovanom acetonitrilu (3 mL) se na sobnoj temperaturi doda trietilamin (0.153 mL, 1.095 mmol) u jednom punjenju. Reakcija se zatvori i zagreva 30 minuta u Biotage Initiator pod mikrotalasima (normalno podešavanje apsorpcije) na 150 °C. Reakcija se ponovo zatvori i zagreva 60 minuta u Biotage Initiator pod mikrotalasima (normalno podešavanje apsorpcije) na 170 °C. U reakciju se doda još 4,4-difluorpiperidin hidrohlorida (86 mg, 0.548 mmol) i trietilamina (0.153 mL, 1.095 mmol) i reakcija se ponovo zatvori i zagreva 60 minuta u Biotage Initiator pod mikrotalasima (normalno podešavanje apsorpcije) na 150 °C. Reakcija se koncentruje pod vakuumom i podeli između DCM (10 mL) i vode (10 mL). Organski sloj se izdvoji i suši (hidrofobni frit) i koncentruje pod vakuumom a nakon toga rastvori u DCM i prečisti hromatografijom na aminopropil funkcionalizovanom silika gelu (11 g) koristeći 0-100 % etil acetat:DCM gradijent u toku 20 minuta.

[0234] Materijal je eluiran sa prvim rastvaračem i stoga nije sakupljen. Preostali deo se koncentruje pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (77 mg).

LCMS (Sistem A): tRET= 0.62 min; MH<+>496.

Međuproizvod 68: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(4-fluorpiperidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0235] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 54 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i 4-fluorpiperidin hidrohlorida.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.24 min; MH<+>478.

Međuproizvod 69: 5-((Benziloksi)metil)-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0236] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 37 od 5-((benziloksi)metil)-7-jod-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d] pirimidin-4-amina i 5-hlorpent-1-ina.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.11 min; MH<+>413, 415.

Međuproizvod 70: 5-((Benziloksi)metil)-7-(5-(4-fluorpiperidin-1-il)pent-1-in-1-il)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0237] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 54 od 5-((benziloksi)metil)-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i 4-fluorpiperidin hidrohlorida.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.07 min; MH<+>480.

Međuproizvod 71: 1-(5-(4-Amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-in-1-il)piperidin-4-ol

[0238] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 54 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i piperidin-4-ola.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.04 min; MH<+>476.

Međuproizvod 72: (R)-5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0239] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 54 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i (R)-(-)-3-fluorpirolidin hidrohlorida. LCMS (Sistem B): tRET = 1.18 min; MH<+>464

Međuproizvod 73: (S)-5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0240] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 54 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i (S)-(-)-3-fluorpirolidin hidrohlorida. LCMS (Sistem B): tRET = 1.18 min; MH<+>464.

Međuproizvod 74: (R)-5-((Benziloksi)metil)-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0241] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 54 od 5-((benziloksi)metil)-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i (R)-(-)-3-fluorpirolidin hidrohlorida. LCMS (Sistem B): tRET= 1.02 min; MH<+>466.

Međuproizvod 75: (S)-5-((Benziloksi)metil)-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0242] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 54 od 5-((benziloksi)metil)-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i (S)-(-)-3-fluorpirolidin hidrohlorida. LCMS (Sistem B): tRET= 1.02 min; MH<+>466.

Međuproizvod 76: (S)-1-(5-(4-Amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-in-1-il)pirolidin-3-ol

[0243] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 41 od 5-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-inala i (S)-3-pirolidinola.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.04 min; MH<+>462.

Međuproizvod 77: 1-(5)(4-Amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-in-1-il)azetidin-3-ol

[0244] Smeša 5-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-inala (150 mg, 0.384 mmol), 3-hidroksiazetidin hidrohlorida (84 mg, 0.768 mmol) i trietilamina (0.107 mL, 0.768 mmol) u anhidrovanom dihlormetanu (DCM) (2.5 mL) se meša 1 sat na sobnoj temperaturi u atmosferi azota. U reaktivnu smešu se dodaju molekularna sita. Doda se natrijum triacetoksiborohidrid (163 mg, 0.768 mmol) i reakcija ostavi da se meša 1 sat na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se filtrira i doda se voda. Faze se razdvoje, vodena faza neutrališe sa 2M vodenim rastvorom NaOH i ekstrahuje sa EtOAc. Organski slojevi se kombinuju i koncentruju pod vakuumom. Ostatak se rastvori u smeši 1:1 MeOH:DMSO (1 mL) i prečisti sa MDAP (Postupak A). Frakcije koje sadrže produkt se koncentruju da se dobije naslovljeno jedinjenje kao narandžasto ulje (68 mg).

LCMS (Sistem B): tRET= 0.99 min; MH<+>448.

Međuproizvod 78: 5-((Benziloksi)metil-2-butil-7-(6-hlorheks-1-in il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0245] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 37 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-jod-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i 6-hlorheks-1-ina. Produkt se prečisti u dve faze, prvo hromatografijom na silika gelu koristeći 0-50% etil acetat-dihlormetan gradijent u toku 60 minuta a nakon toga prečišćavanjem na aminopropil (NH2) kertridžu (110g) koristeći 0-100% etil acetat-cikloheksan gradijent u toku 40 minuta.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.29 min; MH<+>425, 427.

Međuproizvod 79: 5-((Benziloksi)metil)-7-(6-hlorheks-1-in-1-il)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0246] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 37 od 5-((benziloksi)metil)-7-jod-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d] pirimidin-4-amina i 6-hlorheks-1-ina.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.14 min; MH<+>427, 429.

Međuproizvod 80: 7-(6-(Azepan-1-il)heks-1-in-1-il)-5-((benziloksi)metil)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0247] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 54 od 5-((benziloksi)metil)-7-(6-hlorheks-1-in-1-il)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i azepana ali sa 72 sata zagrevanja na 80 °C i prečišćavanjem na silika gelu koristeći 0-25% metanol-DCM gradijent u toku 40 minuta.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.10 min; MH<+>490.

Međuproizvod 81: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(6-(4-fluorpiperidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin.

[0248] U suspenziju 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(6-hlorheks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (435 mg, 1.024 mmol) i 4-fluorpiperidin hidrohlorida (367 mg, 2.63 mmol) u acetonitrilu (7 mL) se na sobnoj temperaturi doda trietilamin (0.856 mL, 6.14 mmol). Reaktivna smeša se meša 88 h na 60 °C u atmosferi azota. Reaktivna smeša se upari pod vakuumom da se dobije braon čvrsta supstanca koja se podeli između etil acetata (50 mL) i vode (50 mL). Organski sloj se izdvoji, ispere sa slanim rastvorom (50 mL), suši pomoću hidrofobnog frita i koncentruje pod vakuumom da se dobije braon ulje. Ovaj sirovi produkt se po redu prečisti hromatografijom na aminopropil (NH2) kertridžu koristeći prvo 0-50% etil acetat-cikloheksan gradijent, nakon toga 0-100% terc-butil metil etar (TBME)-cikloheksan gradijent i na kraju 0-10% metanol-dihlormetan gradijent. Finalnim prečišćavanjem sa MDAP (Postupak B) dobija se naslovljeno jedinjenje kao beličasta čvrsta supstanca (50 mg).

LCMS (Sistem B): tRET = 1.24 min; MH<+>492.

Međuproizvod 82: (R)-5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(6-(3-fluorpirolidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0249] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 54 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(6-hlorheks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i (R)(-)3-fluorpirolidin hidrohlorida ali sa 88 sati zagrevanja na 60 °C i prečišćavanjem na aminopropil (NH2) kertridžu koristeći 0-50% etil acetat-cikloheksan gradijent.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.20 min; MH<+>478.

Međuproizvod 83: (S)-5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(6-(3-fluorpirolidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0250] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 82 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(6-hlorheks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i (S)(+)3-fluorpirolidin hidrohlorida. LCMS (Sistem B): tRET = 1.20 min; MH<+>478.

Međuproizvod 84: (S)-5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(2-metilpirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin.

[0251] U izmešani rastvor 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (200 mg, 0.487 mmol) u acetonitrilu (4 mL) se dodaju trietilamin (0.204 mL, 1.460 mmol) i (S)-2-metilpirolidin (0.149 mL, 1.460 mmol). Dobijena smeša se zagreva 72 h na 60 °C kada se doda još (S)-2-metilpirolidina (0.05 mL, 0.49 mmol) i trietilamina (0.068 mL, 0.49 mmol) i reakcija zagreva 5 h na 80 °C. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i ostatak podeli između DCM (20 mL) i vode (20 mL). Organski sloj se izdvoji i suši (hidrofobni frit) a zatim koncentruje pod vakuumom da se dobije crveno ulje. Ovaj materijal se rastvori u dihlormetanu i prečisti na aminopropil funkcionalizovanom silika gel kertridžu (11 g) koristeći 0-50% etil acetat-cikloheksan gradijent u toku 40 minuta. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno ulje koje očvrsne (142 mg).

LCMS (Sistem B): tRET = 1.15 min; MH<+>460.

Međuproizvod 85: (R)-5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(2-metilpirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin.

[0252] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 84 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i (R)-2-metilpirolidina.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.12 min; MH<+>460.

Međuproizvod 86: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(3-metilazetidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0253] U izmešanu suspenziju 5-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-inala (90 mg, 0.230 mmol) i 4Å molekularnih sita u anhidrovanom DCM (4 mL) u atmosferi azota se doda rastvor 3-metilazetidin hidrohlorida (28 mg, 0.260 mmol) i trietilamina (0.04 mL, 0.287 mmol) u anhidrovanom DCM (1 mL). Reaktivna smeša se meša 1 min na sobnoj temperaturi nakon čega se doda natrijum triacetoksiborohidrid (98 mg, 0.461 mmol) i mešanje nastavi 4 h na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se razblaži sa DCM (15 mL) i filtrira kroz celite ploču. Filtrat se ispere sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (20 mL), suši (hidrofobni frit) i koncentruje pod vakuumom da se dobije braon ulje. Ovaj materijal se rastvori u dihlormetanu i prečisti na aminopropil funkcionalizovanom silika gel kertridžu (11 g) koristeći 0-100% etil acetat-cikloheksan gradijent u toku 30 minuta. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno ulje (33 mg).

LCMS (Sistem B): tRET= 1.19 min; MH<+>446.

Međuproizvod 87: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(3-fluorazetidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0254] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 86 od 5-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-inala i 3-fluorazetidin hidrohlorida.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.12 min; MH<+>450.

Međuproizvod 88: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-7-(6-(pirolidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin.

[0255] U izmešani rastvor 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(6-hlorheks-1-in-1-il)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (160 mg, 0.364 mmol) i trietilamina (0.152 mL, 1.093 mmol) u acetonitrilu (4 mL) se doda pirolidin (0.090 mL, 1.093 mmol). Reakcija se meša 18 h na 80 °C kada se doda još pirolidina (0.045 mL, 0.547 mmol) i trietilamina (0.075 mL, 0.539 mmol) i smeša meša još 2 h na 80 °C. Reaktivna smeša se nakon toga koncentruje pod vakuumom na 60 °C i ostatak podeli između DCM (25 mL) i vode (25 mL). Organski sloj se izdvoji i vodeni sloj ponovo ekstrahuje sa DCM (2 x 25 mL). Kombinovane organske faze se suše preko hidrofobnog frita i koncentruju pod vakuumom da se dobije narandžasto-braon čvrsta supstanca. Ovaj materijal se prenese u dihlormetan i prečisti na aminopropil (NH2) kertridžu (10g) koristeći 0-50% etil acetat-DCM gradijent u toku 40 minuta. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bledo žuta guma (157 mg).

LCMS (Sistem B): tRET= 1.18 min; MH<+>474.

Međuproizvod 89: 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(4-fluorpiperidin-1-il)pent-1-in-1-il)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0256] U izmešani rastvor 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (140 mg, 0.329 mmol) u acetonitrilu (3 mL) se dodaju trietilamin (0.276 mL, 1.977 mmol) i 4-fluorpiperidin hidrohlorid (138 mg, 0.988 mmol). Dobijena smeša se zagreva 18 h na 60 °C kada se doda još 4-fluorpiperidin hidrohlorida (50 mg, 0.36 mmol) i trietilamina (0.1 mL, 0.72 mmol) i zagrevanje na 60 °C nastavi još 20 h. Doda se još trietilamina (0.1 mL, 0.72 mmol) i smeša zagreva još 4 h na 80 °C. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i ostatak podeli između DCM (20 mL) i vode (20 mL). Organski sloj se izdvoji i suši (hidrofobni frit) a zatim koncentruje pod vakuumom da se dobije crveno ulje. Ovaj materijal se rastvori u dihlormetanu i prečisti na aminopropil funkcionalizovanom silika gel kertridžu (11 g) koristeći 0-100% etil acetat-cikloheksan gradijent u toku 30 minuta. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojna guma (85 mg).

LCMS (Sistem B): tRET= 1.24 min; MH<+>492.

Međuproizvod 90: (S)-5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0257] U izmešani rastvor 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (334 mg, 0.786 mmol) u DMF (6 mL) se dodaju trietilamin (0.657 mL, 4.72 mmol) i (S)-3-fluorpirolidin hidrohlorid (296 mg, 2.358 mmol). Dobijena smeša se zagreva 52 h na 60 °C i nakon toga koncentruje pod vakuumom. Ostatak se podeli između DCM (40 mL) i vode (40 mL) i organski sloj se izdvoji. Vodeni sloj se ponovo ekstrahuje sa DCM (50mL) i organski ekstrakti se kombinuju, suše (hidrofobni frit) i koncentruju pod vakuumom da se dobije žuto ulje (534mg). Ovaj sirovi produkt se rastvori u dihlormetanu i nanese na aminopropil (NH2) kertridž (50g) i eluira sa 0-100% etil acetatcikloheksan gradientom u toku 60min. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno ulje (265.7 mg).

LCMS (Sistem B): tRET = 1.19 min; MH<+>478.

Međuproizvod 91: (R)-5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0258] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 89 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i (R)-3-fluorpirolidin hidrohlorida.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.20 min; MH<+>478.

Međuproizvod 92: 5-((Benziloksil)metil)-2-butil-7-(5-(3-fluorazetidin-1-il)pent-1-in-1-il)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0259] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 86 od 5-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-inala i 3-fluorazetidin hidrohlorida.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.16 min; MH<+>464.

Međuproizvod 93: 5-((Benziloksi)metil)-2-(2-metoksietil)-7-(5-(pirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0260] Izrađuje se slično kao Međuproizvod 89 od 5-((benziloksi)metil)-7-(5-hlorpent-1-in-1-il)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina i pirolidina.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.01 min; MH<+>448.

Izrada Primera

Primer 1: 2-Butil-7-(6-(piperidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin format

[0261]

Postupak A

[0262] Rastvor 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(6-(piperidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (157 mg, 0.331 mmol) u etanolu (15 ml) se propusti kroz H-cube (podešavanje: 20 °C, napunjen sa vodonikom, 1 mL/min brzina protoka i 10% paladijum na ugljeniku CatCart30 kao katalizator). Novi 10% paladijum na ugljeniku CatCart30 kertridž se ubaci u H-cube i rastvor se ponovo propusti kroz H-cube (podešavanje: 40 °C, napunjen sa vodonikom, 1mL/min brzina protoka). Postupak se ponovi još dva puta koristeći novi kertridž uz identično podešavanje svaki put. Rastvor se upari pod vakuumom da se dobije bela čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se rastvori u DMSO (7 x 1ml) i prečisti sa MDAP (Postupak A). Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno ulje (66 mg).

LCMS (Sistem A): tRET = 0.50 min; MH<+>358.

Postupak B

[0263] Smeša 2-butil-7-(6-(piperidin-1-il)heksil)-5-((2-(trimetilsilil)etoks)metil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (50 mg, 0.103 mmol), etilendiamina (11 µl, 0.163 mmol) i 1 M rastvor tetrabutilamonijum fluorida u tetrahidrofuranu (310 µl, 0.310 mmol) se zagreva 3.5 sata na 70 °C. Reakcija se koncentruje pod vakuumom a ostatak se rastvori u 1:1 smeši MeOH:DMSO (1 mL) i prečisti sa MDAP (Postupak A). Rastvarač se suši u struji azota u Radleys blowdown aparaturi da se dobije naslovljeno jedinjenje (23 mg).

LCMS (Sistem B): tRET = 1.03 min; MH<+>358.

Primer 2: 2-Butil-7-(5-(piperidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0264]

[0265] 5-((Benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(piperidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin (70 mg, 0.152 mmol) u etanolu (20 ml) se filtrira i propusti kroz H-cube (podešavanje: 20 °C, napunjen sa vodonikom, 1 mL/min brzina protoka i 10% paladijum na ugljeniku CatCart30 kao katalizator). Novi 10% paladijum na ugljeniku CatCart30 kertridž se ubaci u H-cube i rastvor se ponovo propusti kroz H-cube (podešavanje: 45 °C, napunjen sa vodonikom,1mL/min brzina protoka). Postupak se ponovi koristeći novi CatCart svaki put, nakon toga se rastvor upari pod vakuumom da se dobije bela čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se rastvori u smeši MeOH:DMSO (1:1) (1 ml) i prečisti sa MDAP (Postupak A). Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno ulje (4.8 mg).

LCMS (Sistem B): tRET= 0.94 min; MH<+>344.

Primer 3: 2-Butil-7-(4-(piperidin-1-il)butil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0266]

[0267] Rastvor 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(4-(piperidin-1-il)but-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (95 mg, 0.213 mmol) u etanolu (20 mL) se propusti kroz H-cube (podešavanje: 20 °C, napunjen sa vodonikom, 1 mL/min brzina protoka i 10% paladijum na ugljeniku CatCart30 kao katalizator). Novi 10% paladijum na ugljeniku CatCart30 kertridž se ubaci u H-cube i rastvor se ponovo propusti kroz H-cube (podešavanje: 45 °C, napunjen sa vodonikom, 1 mL/min brzina protoka). Postupak se ponovi još dva puta koristeći novi CatCart svaki put. Rastvor se upari pod vakuumom da se dobije bela čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se rastvori u smeši MeOH:DMSO (1:1) (1 mL) i prečisti sa MDAP (Postupak B). Odgovarajuća frakcija se upari pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (6.43 mg).

LCMS (Sistem B): tRET = 0.90 min; MH<+>330.

Primer 4: 2-(Etoksimetil)-7-(6-(piperidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0268]

[0269] Rastvor 5-((benziloksi)metil)-2-(etoksimetil)-7-(6-(piperidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (0.296 mL, 0.296 mmol) u metanolu (15 mL) se propusti kroz H-cube (podešavanje: 45 °C, napunjen sa vodonikom, 1 mL/min brzina protoka i 10% paladijum na ugljeniku CatCart30 kao katalizator). Rastvor se ponovo propusti kroz H-cube (isto podešavanje), nakon toga koncentruje pod vakuumom. Ostatak se rastvori u 50:50 smeši DMSO/MeOH (2 mL) i prečisti sa MDAP (Postupak B). Frakcije koje sadrže produkt se koncentruju da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (41 mg).

LCMS (Sistem B): tRET = 0.87 min; MH<+>360.

Primer 5: 2-(2-Metoksetil)-7-(6-(piperidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin hidrohlorid

[0270]

[0271] Rastvor 5-((benziloksi)metil)-2-(2-metoksietil)-7-(6-(piperidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (95.5 mg, 0.201 mmol) u metanolu (15 mL) se hidrogenizuje pomoću H-Cube (podešavanje: 60 °C, napunjen sa H2, 1 mL/min brzina protoka) i 10% Pd/C CatCart 30 kao katalizatorom. Metanol se ukloni pod vakuumom da se dobije bela čvrsta supstanca. Uzorak se rastvori u 1:1 smeši MeOH:DMSO (1 mL) i prečisti sa MDAP (Postupak A). Rastvarač se suši u struji azota u Radleys blowdown aparaturi da se dobije formatna so (31 mg). Doda se 4M rastvor HCl u dioksanu i produkt se suši u struji azota u Radleys blowdown aparaturi da se dobije naslovljeno jedinjenje (34 mg).

LCMS (Sistem B): tRET= 0.84 min; MH<+>360.

Primer 6: 2-Butil-6-metil-7-(6-(piperidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0272]

[0273] Rastvor 5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-7-(6-(piperidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (0.275 mL, 0.275 mmol) u metanolu (15 mL) se propusti kroz H-cube (podešavanje: 40 °C, napunjen sa vodonikom, 1 mL/min brzina protoka i 10% paladijum na ugljeniku CatCart30 kao katalizator). Rastvor se ponovo propusti kroz H-cube (isto podešavanje), nakon toga upari pod vakuumom da se dobije bledo braon ulje (35 mg). Jedinjenje se rastvori u 1mL smeše 50:50 DMSO/MeOH i sirovi produkt se prečisti sa MDAP (Postupak B). Frakcije koji sadrži produkt se koncentruju da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (22 mg).

LCMS (Sistem B): tRET= 1.08 min; MH<+>372.

Primer 7: 2-Butil-6-metil-7-(5-(piperidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0274]

[0275] Izrađuje se slično kao u Primeru 3 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-7-(5-(piperidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.02 min; MH<+>358.

Primer 8: 2-Butil-6-metil-7-(4-(piperidin-1-il)butil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0276]

[0277] Izrađuje se slično kao u Primeru 4 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-7-(4-(piperidin-1-il)but-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET = 0.98 min; MH<+>344.

Primer 9: 2-Butil-7-(5-(pirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin format

[0278]

[0279] Rastvor 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(pirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (90 mg, 0.202 mmol) u etanolu (10 mL) se hidrogenizuje pomoću H-cube (podešavanje: 60 °C, napunjen sa H2, 1mL/min brzina protoka) i 10% Pd/C CatCart 30 kao katalizatorom. Reaktivna smeša se ponovo propusti kroz H-cube koristeći identične uslove. Reakcija se koncentruje pod vakuumom. Ostatak se rastvori u 1:1 smeši MeOH:DMSO (1 mL) i prečisti sa MDAP (Postupak A). Rastvarač se suši u struji azota u Radleys blowdown aparaturi da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela guma (16mg).

LCMS (Sistem A): tRET = 0.44 min; MH<+>330.

Primer 10: 2-Butil-7-(6-(pirolidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0280]

[0281] Rastvor 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(6-(pirolidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (55 mg, 0.120 mmol) u etanolu (4.5 mL) i sirćetnoj kiselini (0.5 mL) se hidrogenizuje pomoću H-cube (podešavanje: 60 °C, napunjen sa H2, 1mL/min brzina protoka) i 10% Pd/C CatCart 30 kao katalizatorom. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom na 60 °C da se dobije bezbojno ulje (45 mg). Uzorci se rastvore u 1:1 smeši DMF:DMSO (1 mL) i prečiste sa MDAP (Postupak B). Veći deo rastvarača se upari pod vakuumom na 60 °C i ostatak ukloni u Radleys blowdown aparaturi na 50 °C da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (20 mg).

LCMS (Sistem B): tRET= 0.93 min; MH<+>342.

Primer 11: 2-pentil-7-(6-(piperidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0282]

[0283] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 5-((benziloksi)metil)-2-pentil-7-(6-(piperidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.17 min; MH<+>372.

Primer 12: 7-(5-(Azepan-1-il)pentil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0284]

[0285] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 7-(5-(azepan-1-il)pent-1-in-1-il)-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET = 0.89 min; MH<+>358.

Primer 13: 7-(4-(Azepan-1-il)butil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0286]

[0287] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 7-(4-(azepan-1-il)butil)-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.93 min; MH<+>358.

Primer 14: 2-Butil-6-metil-7-(6-(pirolidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0288]

[0289] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-7-(6-(pirolidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET = 0.94 min; MH<+>358.

Primer 15: 7-(6-(Azetidin-1-il)heksil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0290]

[0291] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 7-(6-(azetidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.96 min; MH<+>342.

Primer 16: 2-Butil-6-metil-7-(5-(pirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0292]

[0293] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-7-(5-(pirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.89 min; MH<+>344.

Primer 17: 7-(5-(Azetidin-1-il)pentil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0294]

[0295] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 7-(5-(azetidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.89 min; MH<+>316.

Primer 18: 7-(5-(Azetidin-1-il)pentil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0296]

[0297] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 7-(5-(azetidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.82 min; MH<+>330.

Primer 19: 2-Butil-6-metil-7-(4-(pirolidin-1-il)butil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0298]

[0299] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-7-(4-(pirolidin-1-il)butil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.00 min; MH<+>330.

Primer 20: 2-Butil-7-(5-(4,4-difluorpiperidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0300]

[0301] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(4,4-difluorpiperidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET = 1.06 min; MH<+>380.

Primer 21: 2-Butil-7-(5-(4-fluorpiperidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0302]

[0303] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(4-fluorpiperidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.00 min; MH<+>362.

Primer 22: 7-(5-(4-Fluoropiperidin-1-il)pentil)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0304]

[0305] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 5-((benziloksi)metil)-7-(5-(4-fluorpiperidin-1-il)pent-1-in-1-il)-2-(2 metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.81 min; MH<+>364.

Primer 23: 1-(5-(4-Amino-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pentil)piperidin-4-ol

[0306]

[0307] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 1-(5-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-in-1-il)piperidin-4-ola.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.75 min; MH<+>360.

Primer 24: (R)-2-Butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0308]

[0309] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od (R)-5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.93 min; MH<+>348.

Primer 25: (S)-2-Butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0311] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od (S)-5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.93 min; MH<+>348.

Primer 26: (R)-7-(5-(3-fluoropirolidin-1-il)pentil)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin format

[0312]

[0313] Rastvor sirovog (R)-5-((benziloksi)metil)-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (278 mg, 0.597 mmol) u etanolu (25 mL) i sirćetnoj kiselini (2.5 mL) se hidrogenizuje pomoću H-cube (podešavanje: 60 °C, napunjen sa H2, 1mL/min brzina protoka) i 10% Pd/C CatCart 30 kao katalizatorom. Materijal se ponovo propusti 3 puta kroz H-cube. Sirovi materijal se rastvori u smeši DMSO / MeOH (3mL) i uzorak (1 mL) prečisti sa MDAP (Postupak A). Frakcije koje sadrže željeni produkt se kombinuju i koncentruju pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bistro ulje (31.3 mg).

LCMS (Sistem B): tRET= 0.75 min; MH<+>350.

Primer 27: (S)-7-(5-(3-fluoropirolidin-1-il)pentil)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin format

[0314]

[0315] Izrađuje se slično kao u Primeru 26 od (S)-5-((benziloksi)metil)-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.73 min; MH<+>350.

Primer 28: (S)-1-(5-(4-Amino-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pentil)pirolidin-3-ol

[0316]

[0317] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od (S)-1-(5-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-in-1-il)pirolidin-3-ola.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.77 min; MH<+>348.

Primer 29: 1-(5-(4-Amino-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pentil)azetidin-3-ol format

[0318]

[0319] Izrađuje se slično kao u Primeru 27 od 1-(5-(4-amino-5-((benziloksi)metil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pent-4-in-1-il)azetidin-3-ola.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.73 min; MH<+>332.

Primer 30: 7-(6-(Azepan-1-il)heksil)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0320]

[0321] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 7-(6-(azepan-1-il)heks-1-in-1-il)-5-((benziloksi)metil)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET = 0.82 min; MH<+>374.

Primer 31: 2-Butil-7-(6-(4-fluorpiperidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0322]

[0323] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(6-(4-fluorpiperidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET= 1.00 min; MH<+>376.

Primer 32: (R)-2-Butil-7-(6-(3-fluorpirolidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0324]

[0325] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od (R)-5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(6-(3-fluorpirolidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina ali koristeći 5% Pd/C CatCart 30 kertridž i uz dva prolaza kroz H-cube.

LCMS (Sistem B): tRET = 0.96 min; MH<+>362.

Primer 33: (S)-2-Butil-7-(6-(3-fluorpirolidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0327] Izrađuje se slično kao u Primeru 32 od (S)-5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(6-(3-fluorpirolidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.95 min; MH<+>362.

Primer 34: (S)-2-Butil-7-(5-(2-metilpirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0328]

[0329] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od (S)-5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(2-metilpirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.86 min; MH<+>344.

Primer 35: (R)-2-Butil-7-(5-(2-metilpirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0330]

[0331] Izrađuje se slično kao u Primeru 34 od (R)-5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(2-metilpirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina ali uz dva prolaza kroz H-cube pomoću istog 10% Pd/C CatCart 30 kertridža.

LCMS (Sistem B): tRET = 0.85 min; MH<+>344.

Primer 36: 2-Butil-7-(5-(3-metilazetidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0332]

[0333] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(3-metilazetidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET = 0.90 min; MH<+>330.

Primer 37: 2-Butil-7-(5-(3-fluorazetidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0334]

[0335] Izrađuje se slično kao u Primeru 35 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(3-fluorazetidin-1-il)pent-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.89 min; MH<+>334.

Primer 38: 2-Butil-6-metil-7-(6-(pirolidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0336]

[0337] Izrađuje se slično kao u Primeru 35 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-6-metil-7-(6-(pirolidin-1-il)heks-1-in-1-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET = 0.94 min; MH<+>358.

Primer 39: 2-Butil-7-(5-(4-fluorpiperidin-1-il)pentil)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0338]

[0339] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(4-fluorpiperidin-1-il)pent-1-in-1-il)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina ali se u ovom slučaju produkt dobijen od MDAP rastvori u DCM (10mL) i ispere sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (10mL). Organska faza se izdvoji i vodeni sloj ponovo ekstrahuje sa smešom 1:1 etil acetat:hlorform (3 x 10 mL). Kombinovani organski ekstrakti se suše (hidrofobni frit) i koncentruju pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (19mg).

LCMS (Sistem B): tRET = 1.01 min; MH<+>376.

Primer 40: (S)-2-Butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pentil)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0340]

[0341] (S)-5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin (265.7 mg, 0.556 mmol) se rastvori u metanolu (30 mL) i sirćetnoj kiselini (3 mL) i hidrogenizuje pomoću H-cube (podešavanje: 60 °C, napunjen sa vodonikom, 1mL/min brzina protoka) i 10% Pd/C CatCart 30 kao katalizatorom. Smeša se propusti kroz H-cube drugi put a nakon toga se metanol upari i sirovi materijal prečisti sa MDAP (Postupak B). Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bistro ulje (116 mg).

LCMS (Sistem B): tRET= 0.92 min; MH<+>362.

Primer 41: (R)-2-Butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pentil)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0342]

[0343] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od (R)-5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pent-1-in-1-il)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET = 0.96 min; MH<+>362.

Primer 42: 2-Butil-7-(5-(3-fluorazetidin-1-il)pentil)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0344]

[0345] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 5-((benziloksi)metil)-2-butil-7-(5-(3-fluorazetidin-1-il)pent-1-in-1-il)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET = 0.91 min; MH<+>348.

Primer 43: 2-(2-Metoksetil)-7-(5-(pirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

[0346]

[0347] Izrađuje se slično kao u Primeru 10 od 5-((benziloksi)metil)-2-(2-metoksietil)-7-(5-(pirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amina.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.70 min; MH<+>332.

Biološka procena

[0348] Jedinjenja iz pronalaska su testirana na in vitro biološku aktivnost u skladu sa sledećim analizama.

Analiza indukcije Interferona-α i TNF-α pomoću sveže ljudske ukupne krvi (Fresh Human Whole Blood WB)

Izrada jedinjenja

[0349] Jedinjenja se izrade u 100x traženoj koncentraciji u DMSO u mikrotitarnim pločama sa ravnim dnom u zapremini od 1.5µL. Kolone 1-10 sadrže 1 u 4 serijsko razblaženje test jedinjenja. U svaku ploču je uključeno serijsko razblaženje TLR7/8 agonista rezikvimoda kao standard, a Kolona 11 sadrži 1.5µl 200µM rezikvimoda (što daje 2µM finalnu koncentraciju, koristi se da definiše aproksimativni maksimalni odgovor na rezikvimod). Svako jedinjenje se ispituje u duplikatu za svaki donor.

Inkubacija i analiza za Interferon-α i TNF-α

[0350] Uzorci krvi od troje ljudi kao donora se sakupi u natrijum heparinu (10U/ml).150µl ukupne krvi se nanese u kolone 1 do 11 ploča za analizu u kojima se nalazi 1.5 µl test jedinjenja ili standarda u DMSO. Ploče se stave u inkubator u toku noći (37°C, 95% vazduh, 5% CO2). Nakon inkubacije u toku noći, ploče se izvade iz inkubatora i mešaju na orbitalnom šejkeru približno 1 minut. U svaki otvor se doda po 100 µl 0.9% rastvora natrijum hlorida i ploče se ponovo mešaju na orbitalnom šejkeru. Nakon toga se ploče centrifugiraju (2500opm, 10 minuta), nakon čega se uzorci plazme uzmu pomoću Biomek FX i ispituju i na IFN-α i TNF-α koristeći MSD (Mesoscale Discovery) platformu za elektrohemiluminiscentno ispitivanje. Analiza IFN-α se vrši slično kako je prethodno opisano. Analiza TNF-α se izvodi po uputstvima iz kita (Cat No K111BHB).

[0351] Oslobođeni citokin se izražava kao procenat od 2µM rezikvimod kontrole (kolona 11). Ovaj procenat se stavi u odnos sa koncentracijom i odredi se pEC50za odgovor utvrđen nelinearnom fitovanom krivom najmanjih kvadrata. Za IFN-α odgovore, generalno je izabran logistički model sa 4 parametra. Za TNF-α odgovore dobijen je jasan maksimum odgovora (to jest, uočen je jasno definisan plato u odgovoru) nakon što je korišćen generalni model sa 4 parametra. Ukoliko gornja asimptota krive nije jasno definisana tada se fitovana kriva generalno konstruiše za maksimalni odgovor od 100% (to jest za odgovor od 2µM rezikvimoda) ili na odgovor najveće ispitivane koncentracije ukoliko je on veći od odgovora na rezikvimod. Neke krive su u obliku zvona za jedan ili oba citokina a vrednosti citokina na padajućem delu odgovora u obliku zvona (to jest koncentracija iznad onih koje daju maksimalni odgovor) su generalno isključene iz podataka za krivu, obično sa izuzetkom koncentracije neposredno iznad pika odgovora. Fitovana kriva se na taj način koncentruje na uzlaznom delu ove krive odgovora.

Rezultati

[0352]Primeri 1 do 43 imaju prosečnu pEC50 za IFN-α od ≥5.3.

[0353]Primeri 1 do 43 imaju prosečnu pEC50za TNF-α od ≤ 5.3.

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I), ili njegova so:

gde: R1 je n-C4-6alkil ili C1-2alkoksiC1-2alkil-grupa; R2je vodonik ili metil grupa; svaki R3 je hidroksi grupa, halo ili n-C1-3alkil grupa; m je ceo broj koji ima vrednost od 2 do 4; n je ceo broj koji ima vrednost od 0 do 3; p je ceo broj koji ima vrednost od 0 do 2.
2. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, ili njegova so, naznačeno time što je R1nbutil.
3. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, ili njegova so, naznačeno time što je R1 etoksimetil.
4. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, ili njegova so, naznačeno time što je R12-metoksietil.
5. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-4, ili njegova so, naznačeno time što je R2vodonik.
6. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-4, ili njegova so, naznačeno time što je R2 metil.
7. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-6, ili njegova so, naznačeno time što je n ceo broj koji ima vrednost od 1 ili 2.
8. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-7, ili njegova so, naznačeno time što je p 0.
9. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-7, ili njegova so, naznačeno time što je R3hidroksi grupa ili halo.
10. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-7, ili njegova so, naznačeno time što je p 1 a R3je hidroksi grupa ili fluor.
11. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-7, ili njegova so, naznačeno time što je p 2 a R3je fluor.
12. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, ili njegova so, naznačeno time što je izabrano iz grupe koja sadrži: 2-Butil-7-(6-(piperidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-7-(5-(piperidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-7-(4-(piperidin-1-il)butil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-(Etoksimetil)-7-(6-(piperidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-(2-Metoksetil)-7-(6-(piperidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-6-metil-7-(6-(piperidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-6-metil-7-(5-(piperidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-6-metil-7-(4-(piperidin-1-il)butil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-7-(5-(pirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-7-(6-(pirolidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-pentil-7-(6-(piperidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 7-(5-(Azepan-1-il)pentil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 7-(4-(Azepan-1-il)butil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-6-metil-7-(6-(pirolidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 7-(6-(Azetidin-1-il)heksil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-6-metil-7-(5-(pirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 7-(5-(Azetidin-1-il)pentil)-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 7-(5-(Azetidin-1-il)pentil)-2-butil-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-6-metil-7-(4-(pirolidin-1-il)butil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-7-(5-(4,4-difluorpiperidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-7-(5-(4-fluorpiperidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 7-(5-(4-Fluoropiperidin-1-il)pentil)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 1-(5-(4-Amino-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pentil)piperidin-4-ol; (R)-2-Butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; (S)-2-Butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; (R)-7-(5-(3-fluoropirolidin-1-il)pentil)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; (S)-7-(5-(3-fluoropirolidin-1-il)pentil)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; (S)-1-(5-(4-Amino-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pentil)pirolidin-3-ol; 1-(5-(4-Amino-2-butil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pentil)azetidin-3-ol; 7-(6-(Azepan-1-il)heksil)-2-(2-metoksietil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-7-(6-(4-fluorpiperidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; (R)-2-Butil-7-(6-(3-fluorpirolidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; (S)-2-Butil-7-(6-(3-fluorpirolidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; (S)-2-Butil-7-(5-(2-metilpirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; (R)-2-Butil-7-(5-(2-metilpirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-7-(5-(3-metilazetidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-7-(5-(3-fluorazetidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-6-metil-7-(6-(pirolidin-1-il)heksil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-7-(5-(4-fluorpiperidin-1-il)pentil)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; (S)-2-Butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pentil)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; (R)-2-Butil-7-(5-(3-fluorpirolidin-1-il)pentil)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; 2-Butil-7-(5-(3-fluorazetidin-1-il)pentil)-6-metil-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin; i 2-(2-Metoksetil)-7-(5-(pirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin.
13. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to 2-butil-7-(5-(pirolidin-1-il)pentil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin

ili njegova so.
14. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-13, naznačeno time što je u obliku farmaceutski prihvatljive soli.
15. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-13, naznačeno time što je u obliku slobodne baze.
16. Farmaceutska kompozicija, naznačena time što uključuje jedinjenje kako je definisano u bilo kom od patentnih zahteva 1-13, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača.
17. Kompoziciona vakcina, naznačena time što uključuje jedinjenje kako je definisano u bilo kom od patentnih zahteva 1-13, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i antigen ili kompozicioni antigen.
18. Jedinjenje, kako je definisano u bilo kom od patentnih zahteva 1-13, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je za upotrebu u terapiji.
19. Jedinjenje, kako je definisano u bilo kom od patentnih zahteva 1-13, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je za upotrebu u tretmanu alergijskih bolesti i drugih inflamatornih stanja, infektivnih bolesti i kancera.
20. Jedinjenje, kako je definisano u bilo kom od patentnih zahteva 1-13, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je za upotrebu u tretmanu alergijskog rinitisa.
21. Jedinjenje, kako je definisano u bilo kom od patentnih zahteva 1-13, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je za upotrebu u tretmanu astme.
22. Upotreba jedinjenja kako je definisano u bilo kom od patentnih zahteva 1-13 ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, naznačena time što je za proizvodnju medikamenta za tretman alergijskih bolesti i drugih inflamatornih stanja, infektivnih bolesti i kancera.