RS61994B1 - Agonist glukokortikoidnog receptora i njegovi imunokonjugati - Google Patents

Agonist glukokortikoidnog receptora i njegovi imunokonjugati

Info

Publication number
RS61994B1
RS61994B1 RS20210761A RSP20210761A RS61994B1 RS 61994 B1 RS61994 B1 RS 61994B1 RS 20210761 A RS20210761 A RS 20210761A RS P20210761 A RSP20210761 A RS P20210761A RS 61994 B1 RS61994 B1 RS 61994B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
antibody
tnfα
formula
mmol
drug
Prior art date
Application number
RS20210761A
Other languages
English (en)
Inventor
Adrian D Hobson
Michael J Mcpherson
Wendy Waegell
Christian Goess
Axel Hernandez Jr
Lu Wang
Christopher C Marvin
Ling C Santora
Original Assignee
Abbvie Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Abbvie Inc filed Critical Abbvie Inc
Publication of RS61994B1 publication Critical patent/RS61994B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/191—Tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin [LT], i.e. TNF-beta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6845—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a cytokine, e.g. growth factors, VEGF, TNF, a lymphokine or an interferon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/249—Interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Description

Opis
ODGOVARAJUĆE PRIJAVE
[0001] Ova prijava zahteva prioritet US privremene prijave broj 62/593,776, podnete 1. decembra 2017. i US privremene prijave broj 62/595,054, podnete 5. decembra 2017.
POPIS SEKVENCI
[0002] Aktuelna prijava sadrži Popis sekvenci koji je podnet elektronski u ASCII formatu i koji je ovime uključen kao referenca u svojoj celini. Pomenuta ASCII kopija, kreirana 28. novembra 2018, nazvana je A103017_1490WO_SL.txt i ima veličinu od 14,758 bajtova.
OBLAST TEHNIKE
[0003] Faktor nekroze tumora (engl. Tumor Necrosis Factor α, skr. TNFα) igra centralnu ulogu u patofiziologiji nekoliko humanih poremećaja, a anti-TNFa sredstva imaju klinički validiranu terapijsku primenljivost u lečenju autoimunih i zapaljenskih poremećaja, kao što su reumatoidni artritis, psorijaza i zapaljenska bolest creva. Uprkos njihovom uspehu u klinici, anti-TNFa biologici su još uvek ograničeni u pogledu maksimalne efikasnosti koju mogu ostvariti kod pacijenata, što zahteva identifikaciju i razvoj potentnijih i efektivnijih terapeutika. Pacijenti lečeni anti-TNFa biologicima takođe mogu razviti imunogenu reakciju na terapeutik, što ograničava njihovu efektivnost. Zbog toga bi anti-TNFa terapije sa manjom imunogenosti i većom efikasnosti bile korisne za dalju kontrolu bolesti.
[0004] Sintetički agonisti glukokortikoidnog receptora su potentna klasa malih molekula koji se koriste u lečenju zapaljenskih poremećaja, ali je njihova primenljivost u hroničnom lečenju bolesti ograničena zbog ozbiljnih neželjenih reakcija. Postoji potreba za razvojem terapeutika sa povećanom efikasnosti i dužim trajanjem dejstva u poređenju sa anti-TNF antitelima i sa minimalnim neželjenim reakcijama.
[0005] Iz Patel, Dermatologic Therapy, tom 17, 2004, 427-431 je poznato da se anti-TNFa antitelo adalimumab koristi u lečenju reumatoidnog artritisa i psorijaze.
SUŠTINA PRONALASKA
[0006] Predmetnim pronalaskom su realizovani imunokonjugati agonista glukokortikoidnog receptora korisni za lečenje autoimunih bolesti 11.
[0007] Pronalazak za koji se traži zaštita je definisan patentnim zahtevima. Bilo koji predmet koji se ne nalazi u okviru patentnih zahteva predviđen je samo za informativne svrhe. Bilo kakve reference na metode lečenja u opisu se odnose na konjugate prema predmetnom pronalasku za primenu u metodu lečenja ljudskog ili životinjskog tela terapijom.
[0008] Prema jednom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovan konjugat antitelo lek koji sadrži: (a) anti-TNFa antitelo koje sadrži teški lanac naveden kao SEQ ID NO: 3 i laki lanac naveden kao SEQ ID NO: 4; i (b) agonist glukokortikoidnog receptora koji sadrži radikal predstavljen formulom:
i pri čemu je antitelo konjugovano sa agonistom glukokortikoidnog receptora preko linkera predstavljenog formulom:
[0009] Prema jednom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovan konjugat antitelo lek u skladu sa formulom:
pri čemu je A antitelo i n je ceo broj od 1-10.
[0010] Prema jednom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovan konjugat antitelo lek koji sadrži:
(a) anti-TNFa antitelo koje sadrži teški lanac naveden kao SEQ ID NO: 3 i laki lanac naveden kao SEQ ID NO: 4; i (b) agonist glukokortikoidnog receptora koji sadrži radikal predstavljen formulom:
i pri čemu je antitelo konjugovano sa agonistom glukokortikoidnog receptora preko linkera predstavljenog formulom:
[0011] Prema jednom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovan konjugat antitelo lek u skladu sa formulom:
pri čemu je A antitelo i n je ceo broj od 1-10.
[0012] Prema jednom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovan konjugat antitelo lek prema bilo kom prethodnom aspektu, pri čemu je opterećenje lekom 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ili 10. Prema jednom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovan konjugat antitelo lek prema bilo kom prethodnom aspektu, pri čemu je opterećenje lekom jednako 4, na primer, n je u prethodnoj formuli konjugata antitelo lek jednako 4. Prema jednom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovan konjugat antitelo lek prema bilo kom prethodnom aspektu, pri čemu je opterećenje lekom jednako 2, na primer, n je u prethodnoj formuli konjugata antitelo lek formula jednako 2.
[0013] Prema jednom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovan metod za dobijanje konjugata antitelo lek prema bilo kom prethodnom aspektu, koji sadrži korak konjugacije antitela sa agonistom glukokortikoidnog receptora. Prema jednom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovan metod prema prethodnom aspektu, koji dalje sadrži korak uvođenja PO4radikala na agonist glukokortikoidnog receptora pre konjugacije antitela sa agonistom glukokortikoidnog receptora. Prema jednom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovan metod prema bilo kom prethodnom aspektu, pri čemu konjugacija sadrži delimičnu redukciju antitela i alkilaciju delimično redukovanog antitela sa jedinjenjem u skladu sa formulom:
[0014] Prema jednom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovana farmaceutska kompozicija koja sadrži konjugat antitelo lek prema bilo kom prethodnom aspektu i farmaceutski prihvatljivi nosač. Prema jednom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovana farmaceutska kompozicija prema bilo kom od prethodnih aspekata, koja ima odnos lek prema antitelu (DAR) od 1-10.
[0015] Prema jednom poželjnom primeru izvođenja, predmetnim pronalaskom je realizovan konjugat antitelo lek u skladu sa formulom:
pri čemu je A adalimumab i n je 4.
[0016] Prema jednom poželjnom primeru izvođenja, predmetnim pronalaskom je realizovan konjugat antitelo lek u skladu sa formulom:
pri čemu je A anti-TNFa antitelo koje sadrži teški lanac naveden kao SEQ ID NO: 3 i laki lanac naveden kao SEQ ID NO: 4, i n je 4.
[0017] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, predmetnim pronalaskom je realizovan konjugat antitelo lek u skladu sa formulom:
[0018] pri čemu je A adalimumab i n je 2. U sledećem poželjnom primeru izvođenja, predmetnim pronalaskom je realizovan konjugat antitelo lek u skladu sa formulom:
pri čemu je A anti-TNFa antitelo koje sadrži teški lanac naveden kao SEQ ID NO: 3 i laki lanac naveden kao SEQ ID NO: 4, i n je 2.
[0019] Prema jednom poželjnom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovana farmaceutska kompozicija prema bilo kom prethodnom aspektu, koja ima odnos lek prema antitelu (DAR) od 2.0.
[0020] Prema jednom poželjnom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovana farmaceutska kompozicija prema bilo kom prethodnom aspektu, koja ima odnos lek prema antitelu (DAR) od 4.0.
[0021] Prema jednom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovan konjugat antitelo lek prema bilo kom prethodnom aspektu ili farmaceutska kompozicija prema bilo kom prethodnom aspektu za primenu u lečenju stanja izabranog između reumatoidnog artritisa, ankilozirajućeg spondilitisa, psorijatičnog artritisa, plak psorijaze, ulcerativnog kolitisa, adultne Kronove bolesti, pedijatrijske Kronove bolesti, uveitisa, hidradenitis suppurativa i juvenilnog idiopatskog artritisa.
[0022] Prema jednom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovana primena konjugata antitelo lek prema bilo kom prethodnom aspektu ili farmaceutske kompozicije prema bilo kom prethodnom aspektu za pripremu leka za lečenje stanja izabranog između reumatoidnog artritisa, ankilozirajućeg spondilitisa, psorijatičnog artritisa, plak psorijaze, ulcerativnog kolitisa, adultne Kronove bolesti, pedijatrijske Kronove bolesti, uveitisa, hidradenitis suppurativa i juvenilnog idiopatskog artritisa.
[0023] Prema jednom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovan kit koji sadrži: (a) kontejner koji sadrži konjugat antitelo lek prema bilo kom prethodnom aspektu ili farmaceutsku kompoziciju prema bilo kom prethodnom aspektu; i (b) etiketu ili umetak pakovanja koji se nalazi na jednom ili više kontejnera ili im je pridružen, pri čemu etiketa ili umetak pakovanja ukazuje da se konjugat antitelo lek ili farmaceutska kompozicija koristi za lečenje stanja izabranog između reumatoidnog artritisa, ankilozirajućeg spondilitisa, psorijatičnog artritisa, plak psorijaze, ulcerativnog kolitisa, adultne Kronove bolesti, pedijatrijske Kronove bolesti, uveitisa, hidradenitis suppurativa i juvenilnog idiopatskog artritisa.
[0024] Prema jednom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovan metod isporuke agonista glukokortikoidnog receptora ćeliji koja izražava TNFα, koji sadrži korak dovođenja u kontakt ćelije sa konjugatom antitelo lek prema bilo kom prethodnom aspektu. Prema jednom aspektu, predmetnim pronalaskom je realizovan metod određivanja anti-zapaljenske aktivnosti konjugata antitelo lek koji sadrži: (a) dovođenje u kontakt ćelije koja izražava TNFα sa konjugatom antitelo lek prema bilo kom prethodnom aspektu; i (b) određivanje oslobađanja prozapaljenskih citokina iz ćelije u poređenju sa kontrolnom ćelijom.
KRATKI OPIS SLIKA NACRTA
[0025]
Fig. 1 predstavlja hromatografsku rezoluciju modulatora BrAc-Gly-Gluglukokortikoidnog receptora (GRM)-PO4, kao što je izvedeno i opisano u Primeru 7. Kao što je prikazano, ADC je heterogena ADC smeša koja sadrži ADC-ove sa dva molekula linkera vezana za lek i ADC-ove sa četiri molekula linkera vezana za lek.
Fig. 2 prikazuje dalje dekonvoluisane MS podatke za adalimumab koji je konjugovan sa BrAc-Gly-Glu-glukokortikosteroidom-PO4. Kao što je prikazano, ostvarena je konjugacija.
Fig. 3 prikazuje grafikon koji pokazuje efikasnost visoke i niske doze ADC1 u poređenju sa anti-TNFa mAb (visoka doza) ili nosačem u mišjem modelu artritisa za artritis indukovan kolagenom (engl. collagen-induced arthritis, skr. CIA), kao što je izvedeno i opisano u Primeru 7. Kao što je prikazano, pojedinačna doza anti-TNFa glukokortikosteroidnog ADC1 je ispoljila produženo trajanje dejstva ublažavanjem oticanja šape za ~28 dana u poređenju sa anti-TNFa mAb ili samim nosačem.
Fig. 4 je grafikon koncentracije (ug/ml) za ADC sa zatvorenim i otvorenim prstenom kod makaki majmuna tokom vremena, kao što je izvedeno i opisano u Primeru 7. Kao što je prikazano, oblik sa zatvorenim prstenom je podložan reverznoj Majklovoj reakciji i sledstvenom gubitku linkera-leka in vivo.
DETALJNI OPIS
[0026] Ovde su realizovani imunokonjugati agonista glukokortikoidnog receptora, agonisti glukokortikoidnog receptora i metodi za njihovo dobijanje i primenu.
[0027] Pronalazak za koji se traži zaštita je definisan patentnim zahtevima. Bilo koji predmet koji se ne nalazi u okviru patentnih zahteva predviđen je samo za informativne svrhe.
[0028] Ovde je realizovan konjugat antitelo lek u skladu sa formulom:
pri čemu je A adalumimab i n je 4. Kao što je pokazano u Primeru 7 u nastavku, ovaj ADC (tj. ADC4 u nastavku) ispoljava in vitro aktivnost, stabilnost u plazmi i minimalnu agregaciju.
[0029] Takođe su realizovani metodi za dobijanje i metodi primene ADC4.
I. Definicije
[0030] Da bi se olakšalo razumevanje predmetnog pronalaska u nastavku je definisano više izraza i fraza.
[0031] Izraz "anti-TNFa protein" se odnosi na proteine koji su sposobni za (i) vezivanje za TNFα i (ii) inhibiciju vezivanja rastvorljivog TNFα za TNF receptore na površini ćelije (p55 i/ili p75) i/ili ćelije koje izražavaju lizirajući površinski TNFα ili TNFα receptor in vitro u prisustvu komplementa. Prema nekim aspektima, anti-TNF antitelo se može vezati za TNF alfa na površini ćelije i postati internalizovano. Na primer, US 2014/0294813 opisuje anti-TNF antitela koja ispoljavaju ćelijsku internalizaciju posle vezivanja za humani TNF na površini ćelije. Anti-TNFa proteini obuhvataju, na primer, anti-TNFa antitela (npr. adalimumab, infliksimab, i golimumab). Anti-TNFa antitela se aktivno internalizuju posle vezivanja za transmembranski TNF na DC-ovima koji potiču od monocita i brzo ulaze u lizozome, gde se degradiraju (Deora et.al. MABS, 2017, tom 9, br.4, 680-694).
[0032] Izraz "antitelo", kada se ovde koristi, treba da se odnosi na imunoglobulinske molekule koji se sastoje od četiri polipeptidna lanca, dva teška (H) lanca i dva laka (L) lanca koji su međusobno povezani pomoću disulfidnih veza. Svaki teški lanac se sastoji od varijabilnog regiona teškog lanca (ovde skraćeno kao HCVR ili VH) i konstantnog regiona teškog lanca. Konstantni region teškog lanca se sastoji od tri domena, CH1, CH2 i CH3. Svaki laki lanac se sastoji od varijabilnog regiona lakog lanca (ovde skraćeno kao LCVR ili VL) i konstantnog regiona lakog lanca. Konstantni region lakog lanca se sastoji od jednog domena, CL. VH i VL regioni dalje mogu biti podeljeni na regione hipervarijabilnosti, koji se nazivaju regioni koji određuju komplementarnost (engl. complementarity determining regions, skr. CDR), koji su prošarani regionima koji su konzerviraniji i koji se nazivaju okvirnim regionima (engl. framework regions, skr. FR). Svaki VH i VL se sastoji od tri CDR-a i četiri FR-a, koji su raspoređeni od amino-terminusa do karboksi-terminusa po sledećem redosledu: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
[0033] Izraz "anti-TNFa antitelo" ili " antitelo koje se vezuje za TNFα" se odnosi na antitelo koje je sposobno za vezivanje za TNFα, npr. sa dovoljnim afinitetom, tako da je antitelo korisno kao terapijsko sredstvo za ciljanje na TNFα. Stepen vezivanja anti-TNFa antitela za nesrodni, ne-TNFa protein može biti manji od oko 10% vezivanja antitela za TNFα, što se meri, npr. pomoću radioimunotesta (RIA). Prema izvesnom
1
aspektu, antitelo koje se vezuje za TNFα ima konstantu disocijacije (Kd) od ≤1 mM, ≤100 nM, ≤10 nM, ≤1 nM, ili ≤0.1 nM.
[0034] Izraz "imunokonjugat," "konjugat", "konjugat antitelo-lek" ili "ADC", kada se ovde koristi, odnosi se na jedinjenje ili njegov derivat koji je konjugovan sa proteinom, kao sredstvo koje se vezuje za ćeliju (npr. anti-TNFa antitelo). Takvi imunokonjugati mogu biti definisani generičkom formulom: (SM-L-Q)n-A, pri čemu su SM = radikal koji potiče od malog molekula agonista glukokortikoidnog receptora, npr. glukokortikosteroida, L = linker, Q = heterobifunkcionalna grupa ili je odsutna, i A = protein (npr. antitelo), i n = 1-10. Imunokonjugati takođe mogu biti definisani pomoću generičke formule po obrnutom redosledu: A-(Q-L-SM)n.
[0035] U predmetnom otkrivanju, izraz "linker" se odnosi na hemijski radikal koji je sposoban za vezivanje za anti-TNFa protein (npr. antitelo) za glukokortikosteroid. Linkeri mogu biti podložni odvajanju ("odvojivi linker"), čime olakšavaju oslobađanje glukokortikosteroida. Na primer, takvi odvojivi linkeri mogu biti podložni odvajanju indukovanom peptidazom, pod uslovima pod kojima glukokortikosteroid i/ili antitelo ostaju aktivni.
[0036] Naročito ovde opisana odvojiva linkerska komponenta sadrži peptid koji sadrži dva ili tri aminokiselinska ostatka (dipeptid ili tripeptid), a specifično dipeptide i tripeptide izabrane iz grupe koja se sastoji od alanina-alanina (Ala-Ala), glicinaglutaminske kiseline (Gly-Glu), glutaminske kiseline-alanina-alanina (Glu-Ala-Ala) i glicina-lizina (Gly-Lys). Peptid omogućava odvajanje linkera pomoću proteaze, čime se olakšava oslobađanje glukokortikosteroida posle izlaganja intracelularnim proteazama, kao što su lizozomski enzimi (Doronina et al. (2003) Nat. Biotechnol. 21:778-784).
[0037] U predmetnom otkrivanju, izraz "glukokortikosteroid" se odnosi na prirodni ili sintetički steroidni hormon koji sadejstvuje sa glukokortikoidnim receptorima, a specifični glukokortikosteroidi su ovde detaljno opisani. "Radikal glukokortikosteroida" se dobija uklanjanjem jednog ili više atoma vodonika iz roditeljskog glukokortikosteroida. Uklanjanje jednog ili više atoma vodonika olakšava vezivanje roditeljskog glukokortikosteroida za linker. U predmetnom otkrivanju, atom vodonika se uklanja iz bilo koje podesne -NH2grupe roditeljskog glukokortikosteroida. Naročito je "radikal glukokortikosteroida" monovalentni radikal koji se dobija uklanjanjem jednog atoma vodonika iz roditeljskog
glukokortikosteroida.
[0038] U predmetnom otkrivanju, izraz "heterobifunkcionalna grupa" se odnosi na hemijsku grupu koja povezuje linker i anti-TNFa protein (npr. antitelo).
Heterobifunkcionalne grupe su karakteristične po tome što imaju različite reaktivne grupe na oba kraja hemijske grupe.
[0039] Izraz "odnos leka prema antitelu" ili "DAR" se odnosi na broj SM-ova (npr. radikala dobijenog od malog molekula agonista glukokortikoidnog receptora, npr. glukokortikosteroida) vezanih za A (npr. antitelo). Shodno tome, u imunokonjugatu koji ima generičku formulu (SM-L-Q)n-A, DAR je definisan pomoću opterećenja lekom po konjugatu antitelo lek, na primer, pomoću "n".
[0040] Kada se pominje jedinjenje koje ima Formulu (SM-L-Q)n-A koje predstavlja pojedinačni imunokonjugat, onda se izraz "jedinjenje DAR" odnosi na broj SM-ova vezanih za pojedinačno A (npr. opterećenje lekom ili n kao ceo broj od 1 do 10).
[0041] Kada se pominje jedinjenje koje ima Formulu (SM-L-Q)n-A i koje predstavlja populaciju imunokonjugata, onda se izraz "populacija DAR" odnosi na prosečni broj SM-ova vezanih za A-ove (npr. opterećenje lekom ili n kao ceo broj ili frakciju od 1 do 10 ± 0.5, ± 0.4, ± 0.3, ± 0.2, ± 0.1).
[0042] Izraz "subjekt" se odnosi na ljude, nehumane primate i slično koji treba da budu primalac specifičnog tretmana. Tipično se izrazi "subjekt" i "pacijent" ovde koriste jedan umesto drugog u vezi sa humanim subjektom.
[0043] Izraz "farmaceutska formulacija" se odnosi na preparat koji je u takvom obliku da dozvoljava da biološka aktivnost aktivnog sastojka bude efektivna i koji ne sadrži dodatne komponente koje su neprihvatljivo toksične za subjekta kome bi formulacija trebalo da se daje. Formulacija može biti sterilna.
[0044] "Efektivna količina" imunokonjugata koji je ovde opisan je količina koja je dovoljna za ostvarivanje specifično navedene svrhe. "Efektivna količina" može biti određena u vezi navedene svrhe.
[0045] Izraz "terapijski efektivna količina" se odnosi na količinu imunokonjugata koja je efektivna za "lečenje" bolesti ili poremećaja kod subjekta ili sisara. "Profilaktički efektivna količina" se odnosi na količinu koja je efektivna za ostvarivanje željenog profilaktičnog rezultata.
[0046] Izrazi kao što su "lečiti" ili "lečenje" ili "leči" ili "ublažavanje" ili "ublažava" se odnose na terapijske mere koje leče, usporavaju, umanjuju jedan ili više simptoma i/ili usporavaju ili zaustavljaju progresiju dijagnostikovanog patološkog stanja ili poremećaja ("terapijsko lečenje"). Shodno tome, oni kojima je potrebno terapijsko lečenje obuhvataju one kojima je već dijagnostikovan ili se sumnja da imaju taj poremećaj. Profilaktične ili preventivne mere se odnose na mere za sprečavanje razvoja ciljanog patološkog stanja ili poremećaja ("profilaktičko lečenje"). Shodno tome, oni kojima je potrebno lečenje obuhvataju one koji su skloni tome da imaju poremećaj i one kod kojih taj poremećaj treba da bude sprečen.
II. Proteini za vezivanje za agoniste glukokortikoidnog receptora
[0047] Predmetnim pronalaskom su realizovani imunokonjugati koji sadrže agoniste glukokortikoidnog receptora vezane za proteine, na primer, za antitela. Prema nekim aspektima, antitelo je humano, humanizovano, himerično ili mišje. Prema nekim aspektima, protein, npr. antitelo, se može vezivati za cilj na površini ćelije i može postati internalizovan.
[0048] Predmetnim pronalaskom su takođe realizovani imunokonjugati koji sadrže agoniste glukokortikoidnog receptora vezane za anti-TNFa proteine. Prema izvesnim aspektima, anti-TNFa proteini su antitela. Prema izvesnim aspektima, anti-TNFa proteini su antitela koja se vezuju za TNFα (npr. rastvorljivi TNFα i/ili TNFα vezan za membranu). Prema izvesnim aspektima, anti-TNFa proteini su rastvorljivi proteini TNF receptora, npr. rastvorljivi proteini TNF receptora fuzionisani sa konstantnim teškog lanca. Prema nekim aspektima, anti-TNFa protein, npr. anti-TNFa antitelo, vezuje se za TNFα na površini ćelije i postaje internalizovan. Na primer, US objavljena prijava patenta br.2014/0294813 opisuje anti-TNFa proteine koji ispoljavaju ćelijsku internalizaciju posle vezivanja za humani TNFα na površini ćelije.
[0049] Prema izvesnim aspektima, antitela se vezuju za humani i/ili mišji TNFα.
[0050] Aminokiselinska sekvenca cele dužine za humani TNFα koji je vezan za membranu je:
[0051] MSTESMIRDVELAEEALPKKTGGPQGSRRCLFLSLFSFLIVAGATTLFCLLHFGVIGP QRE EFPRDLSLISPLAQAVRSSSRTPSDKPVAHVVANPQAEGQLQWLNRRANALLANG VELRDNQLVVP SEGLYLIYSQVLFKGQGCPSTHVLLTHTISRIAVSYQTKVNLLSAIKSPCQRETPEGA EAKPWYEPIY LGGVFQLE-
1
KGDRLSAEINRPDYLDFAESGQVYFGIIAL (SEQ ID NO:1). Rastvorljivi humani TNFα sadrži aminokiseline 77-233 iz SEQ ID NO:1. Aminokiselinska sekvenca cele dužine za mišji TNFα koji je vezan za membranu je:
MSTESMIRDVELAEEALPQKMGGFQNSRRCLCLSLFSFLLVAGATTLFCLLNFGVIG PQRDEKFPNG LPLISSMAQTLTLRSSSQNSSDKPVAHVVANHQVEEQLEWLSQRANALLANGMDL KDNQLVVPAD GLYLVYSQVLFKGQGCPDYVLLTHTVSRFAISYQEKVNLLSAVKSPCPKDTPEGAE LKPWYEPIYL GGVFQLE -KGDQLSAEVNLPKYLDFAESGQVYFGVIAL (SEQ ID NO:2). Rastvorljivi mišji TNFα sadrži aminokiseline 80-235 iz SEQ ID NO:2.
[0052] Prema nekim aspektima, anti-TNFa antitelo se vezuje za humani TNFα.
[0053] Prema nekim aspektima, anti-TNFa antitelo se vezuje za mišji TNFα.
[0054] Prema izvesnim aspektima, anti-TNFa antitelo ima jedan ili više sledećih efekata: neutralizuje citotoksičnost humanog TNFα u in vitro L929 testu sa IC50 od 1X10<-7>M ili manjim; blokira interakciju TNFα sa p55 i p75 receptorima na površini ćelije; i/ili lizira ćelije koje na površini izražavaju TNF in vitro u prisustvu komplementa.
[0055] Prema izvesnim aspektima, anti-TNFa antitelo se ne vezuje za TNF-beta.
[0056] Anti-TNFa antitela obuhvataju, na primer, adalimumab, koji je rekombinantno humano antitelo. Aminokiselinske sekvence koje odgovaraju CDR i varijabilnim regionima adalimumaba su opisane u US patentu br.6,258,562 u vezi antitela D2E7, tj. SEQ ID No: 1 do 8.
[0057] Međunarodni nezaštićeni naziv (INN) adalimumab se nalazi na WHO INN mestu popisa: Godina 2000, List 44 (WHO Drug Information (2000) tom 14(3)).
[0058] Prema izvesnim aspektima, anti-TNFa antitelo sadrži sekvence adalimumaba, npr. regione koji određuju komplementarnost (CDR-ove), varijabilni teški domen (VH), i/ili varijabilni laki domen (VL). Niz ilustrativnih sekvenci je dat u Tabeli 1.
Tabela 1: Ilustrativne sekvence regiona antitela adalimumab
[0059] Prema izvesnim aspektima, anti-TNFa antitelo sadrži CDR-ove sa SEQ ID NO: 3 i 4. Prema nekim aspektima, CDR-ovi sadrže SEQ ID NO: 7 ili 8, 9, 10 ili 11, 12, 13, i 14. Prema izvesnim aspektima, anti-TNFa antitelo sadrži teški lanac sa SEQ ID NO:3 i/ili laki lanac sa SEQ ID NO:4.
[0060] Predmetni pronalazak dalje obuhvata varijante i ekvivalente koji su u suštini homologi sa ovde navedenim anti-TNFa antitelima. Oni mogu sadržati, na primer, konzervativne supstitucione mutacije, tj. supstituciju jedne ili više aminokiselina sa sličnim aminokiselinama. Na primer, konzervativna supstitucija se odnosi na supstituciju jedne aminokiseline drugom u okviru iste opšte klase, kao što je, na primer, jedne kisele aminokiseline drugom kiselom aminokiselinom, jedne bazne
1
aminokiseline drugom baznom aminokiselinom ili jedne neutralne aminokiseline drugom neutralnom aminokiselinom. Šta se podrazumeva pod konzervativnom supstitucijom aminokiselina je dobro poznato u odgovarajućoj oblasti.
[0061] Ovde opisana izolovana anti-TNFa antitela se mogu proizvoditi bilo kojim podesnim metodom poznatom u odgovarajućoj oblasti. Takve metode se nalaze u okviru od metoda direktne sinteze proteina do konstruisanja DNK sekvence koja kodira izolovane polipeptidne sekvence i izražavanja tih sekvenci u podesno transformisanom domaćinu. Prema nekim aspektima, DNK sekvenca se konstruiše korišćenjem rekombinantne tehnologije putem izolacije ili sinteze DNK sekvence koja kodira protein divljeg tipa od interesa. Opciono, sekvenca se može mutagenizovati pomoću mesno-specifične mutageneze da bi se dobili njeni funkcionalni analozi. Vidi, npr. Zoeller et al., Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 81:5662-5066 (1984) i US. pat. br.4,588,585.
[0062] Prema nekim aspektima, DNK sekvenca koja kodira antitelo od interesa bi bila konstruisana hemijskom sintezom uz korišćenje oligonukleotidnog sintetizatora. Takvi oligonukleotidi mogu biti konstruisani na osnovu aminokiselinske sekvence željenog polipeptida i izborom onih kodona koji su favorizovani u ćeliji domaćinu u kojoj će rekombinantni polipeptid od interesa biti proizveden. Standardni metodi mogu biti primenjeni za sintezu izolovane polinukleotidne sekvence koja kodira izolovani polipeptid od interesa.
[0063] Prema izvesnim aspektima, rekombinantni ekspresioni vektori se koriste za amplifikaciju i izražavanje DNK koja kodira anti-TNFa antitela. Može se upotrebiti široki spektar kombinacija ekspresionog domaćina/vektora. Korisni ekspresioni vektori za eukariotske domaćine, obuhvataju, na primer, vektore koji sadrže ekspresione kontrolne sekvence iz SV40, goveđeg papiloma virusa, adenovirusa i citomegalovirusa. Korisni ekspresioni vektori za bakterijske domaćine obuhvataju poznate bakterijske plazmide, kao što su plazmidi Escherichia coli, uključujući pCR 1, pBR322, pMB9 i njihove derivate, širi spektar domaćina plazmida, kao što su M13 i fagi sa vlaknastom jednolančanom DNK.
[0064] Podesne ćelije domaćini za izražavanje anti-TNFa antitela) obuhvataju prokariotske, kvaščeve, insektne ili više eukariotske ćelije pod kontrolom podesnih promotera. Prokariote obuhvataju gram negativne ili gram pozitivne organizme, na primer, E. coli ili bacile. Više eukariotske ćelije obuhvataju uspostavljene ćelijske linije sisarskog porekla. Takođe bi mogli da budu upotrebljeni translacioni sistemi
1
bez ćelija. Podesne vektore za kloniranje i ekspresiju za korišćenje sa bakterijskim, gljivičnim, kvaščevim i sisarskim ćelijskim domaćinima su opisali Pouwels et al.
(Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, N.Y., 1985). Dodatne informacije u vezi metoda proizvodnje proteina, uključujući proizvodnju antitela, mogu se naći, npr. u US objavljenoj prijavi patenta br.2008/0187954, US patentima br.6,413,746 i 6,660,501 i objavljenoj međunarodnoj prijavi patenta br. WO 04009823.
III. Imunokonjugati koji sadrže agoniste glukokortikoidnog receptora
[0065] Takođe su realizovani imunokonjugati koji sadrže agoniste glukokortikoidnog receptora. Prema nekim aspektima, imunokonjugat se vezuje za Fc gama receptor. Prema nekim aspektima, imunokonjugat je aktivan u GRE transmembranskom TNFα reporter testu (kada se ovde koristi "GRE transmembranski TNFα reporter test" se odnosi na test koji je upotrebljen dole u Primeru 7 u nastavku). Prema nekim aspektima, imunokonjugat ispoljava smanjenu imunogenost (smanjenu imunu reakciju protiv leka (engl. anti-drug immune response, skr. ADA)) u poređenju sa samim proteinom u imunokonjugatu (npr. antitelom).
[0066] Prema jednom aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu I-a:
(SM-L-Q)n-A I-a,
pri čemu:
A je antitelo protiv faktora nekroze tumora (TNF) α, anti-TNFa monoklonsko antitelo, ili adalimumab;
L je linker;
Q je heterobifunkcionalna grupa; ili
Q je odsutno;
n je 1-10; i
SM je monovalentni radikal glukokortikosteroida koji ima bilo koju od:
(1) Formule II-a:
1
(2) Formule II-b:
(3) Formule II-c:
ili
(4) Formule II-d:
[0067] Prema sledećem aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu I-a, pri čemu je SM monovalentni radikal glukokortikosteroida koji ima bilo koju od Formula II-a, II-b, II-c, ili II-d, pri čemu je L odvojivi linker koji sadrži dipeptid ili tripeptid, Q je heterobifunkcionalna grupa ili je Q odsutno i n je 1-10. Naročito, L sadrži dipeptid ili tripeptid koji je izabran iz grupe koja se sastoji od alanina-alanina (Ala-Ala), glicina-
1
glutaminske kiseline (Gly-Glu), glutaminske kiseline-alanina-alanina (Glu-Ala-Ala), i glicina-lizina (Gly-Lys).
[0068] Prema sledećem aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu I-a, pri čemu je SM monovalentni radikal glukokortikosteroida koji ima bilo koju od Formula II-a, II-b, II-c, i II-d, pri čemu je Q heterobifunkcionalna grupa koja je predstavljena sa:
pri čemu je m jednako 0 ili 1.
[0069] Prema sledećem aspektu, m je 0, i Q je predstavljeno sa:
[0070] Prema sledećem aspektu, m je 1, i Q je predstavljeno sa:
[0071] Prema sledećem aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu I-a, pri čemu je SM monovalentni radikal glukokortikosteroida koji ima bilo koju od Formula II-a, II-b, II-c, i II-d, pri čemu je - L-Q- bilo koja od hemijskih struktura iz Tabele 2:
1
[0072] Prema sledećem aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu I-a, npr. jedinjenje koje ima Formulu I-a, pri čemu je SM monovalentni radikal glukokortikosteroida koji ima bilo koju od Formula II-a, II-b, II-c, i II-d, pri čemu je n jednako 2-8. Prema sledećem aspektu, n je 1-5. Prema sledećem aspektu, n je 2-5. Prema sledećem aspektu, n je 1. Prema sledećem aspektu, n je 2. Prema sledećem aspektu, n je 3. Prema sledećem aspektu, n je 4. Prema sledećem aspektu, n je 5. Prema sledećem aspektu, n je 6. Prema sledećem aspektu, n je 7. Prema sledećem aspektu, n je 8.
[0073] Prema sledećem aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu I-a, npr. jedinjenje koje ima Formulu I-a, pri čemu je SM monovalentni radikal glukokortikosteroida koji ima bilo koju od Formula II-a, II-b, II-c, i II-d, pri čemu je A antitelo.
[0074] Prema sledećem aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu I-a, npr. jedinjenje koje ima Formulu I-a, pri čemu je SM monovalentni radikal glukokortikosteroida koji ima bilo koju od Formula II-a, II-b, II-c, i II-d, pri čemu je antitelo mišje, himerično, humanizovano, ili humano.
[0075] Prema sledećem aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu I-a, npr. jedinjenje koje ima Formulu I-a, pri čemu je SM monovalentni radikal glukokortikosteroida koji ima bilo koju od Formula II-a, II-b, II-c, i II-d, pri čemu A
2
kompetitivno inhibira vezivanje antitela izabranog iz grupe koja se sastoji od adalimumaba, infliksimaba, certolizumab pegola, i golimumaba za TNFα.
[0076] Prema sledećem aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu I-a, npr. jedinjenje koje ima Formulu I-a, pri čemu je SM monovalentni radikal glukokortikosteroida koji ima bilo koju od Formula II-a, II-b, II-c, i II-d, pri čemu se A vezuje za isti TNFα epitop kao antitelo izabrano iz grupe koja se sastoji od adalimumaba, infliksimaba, certolizumab pegola, afelimomaba, nerelimomaba, ozoralizumaba, plakulumaba, i golimumaba.
[0077] Prema sledećem aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu I-a, npr. jedinjenje koje ima Formulu I-a, pri čemu je SM monovalentni radikal glukokortikosteroida koji ima bilo koju od Formula II-a, II-b, II-c, i II-d, pri čemu A ima CDR1, CDR2, i CDR3 sekvence varijabilnog teškog lanca sa SEQ ID NO:7 ili 8, SEQ ID NO:9, i SEQ ID NO: 10 ili 11, respektivno, i CDR1, CDR2, i CDR3 sekvence varijabilnog lakog lanca sa SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, i SEQ ID NO:14, respektivno.
[0078] Prema sledećem aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu I-a, npr. jedinjenje koje ima Formulu I-a, pri čemu je SM monovalentni radikal glukokortikosteroida koji ima bilo koju od Formula II-a, II-b, II-c, i II-d, pri čemu je A anti-TNFa antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca koji je naveden kao SEQ ID NO: 5 i varijabilni region lakog lanca koji je naveden kao SEQ ID NO: 6.
[0079] Prema sledećem aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu I-a, npr. jedinjenje koje ima Formulu I-a, pri čemu je SM monovalentni radikal glukokortikosteroida koji ima bilo koju od Formula II-a, II-b, II-c, i II-d, pri čemu je A anti-TNFa antitelo koje sadrži teški lanac naveden kao SEQ ID NO: 3 i laki lanac naveden kao SEQ ID NO: 4.
[0080] Prema sledećem aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu I-a, npr. jedinjenje koje ima Formulu I-a, pri čemu je SM monovalentni radikal glukokortikosteroida koji ima bilo koju od Formula II-a, II-b, II-c, i II-d, pri čemu A blokira interakciju TNFα sa p55 i p75 receptorima na površini ćelije.
[0081] Prema sledećem aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu I-a, npr. jedinjenje koje ima Formulu I-a, pri čemu je SM monovalentni radikal glukokortikosteroida koji ima bilo koju od Formula II-a, II-b, II-c, i II-d, pri čemu A lizira ćelije koje izražavaju na površini TNF in vitro u prisustvu komplementa.
[0082] Prema sledećem aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu I-a, npr. jedinjenje koje ima Formulu I-a, pri čemu je SM monovalentni radikal
glukokortikosteroida koji ima bilo koju od Formula II-a, II-b, II-c, i II-d, pri čemu je A etanercept.
[0083] Prema sledećem aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu I-a, npr. jedinjenje koje ima Formulu I-a, pri čemu je SM monovalentni radikal
glukokortikosteroida koji ima bilo koju od Formula II-a, II-b, II-c, i II-d, pri čemu je A adalimumab.
[0084] Prema sledećem aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu I-a, koje je bilo koja od hemijskih struktura iz Tabele 3:
�
�
�
pri čemu je n jednako 1-5 i A je adalimumab.
[0085] Prema sledećem aspektu, ovde je opisan konjugat antitelo lek u skladu sa formulom:
pri čemu je A adalumimab i n je 4. Kao što je pokazano u Primeru 7 u nastavku, ovaj ADC (tj. ADC4 u nastavku) ispoljava in vitro aktivnost, stabilnost u plazmi i minimalnu agregaciju.
IV. Metodi za dobijanje imunokonjugata i sintetičkih međuproizvoda
[0086] Opšta sinteza različitih imunokonjugata prema pronalasku sadrži reakciju NH2-funkcionalizovanog malog molekula (SM) bilo koje od Formula III-a, III-b, III-c, ili III-d u nastavku sa linkerskim delom i funkcionalizaciju rezultujućeg jedinjenja da bi se dobio bromoacetamidno-funkcionalizovani međuproizvod. Bromoacetamidnofunkcionalizovani međuproizvod onda reaguje sa HS-A, pri čemu je HS-A antitelo, na primer adilumimab, koje ima ograničen broj redukovanih međulančanih disulfidnih veza.
(1) Formula III-a:
2
(2) Formula III-b:
(3) Formula III-c:
ili
(4) Formula III-d:
2
[0087] Prema sledećem aspektu, ovde je opisan metod za dobijanje jedinjenja koje ima Formulu IV-a:
pri čemu:
A je adalimumab;
L je linker;
n je 1-10; i
SM je radikal glukokortikosteroida koji ima bilo koju od Formula III-a- IIId;
pri čemu metod sadrži:
a) konjugaciju jedinjenja koje ima Formulu V:
sa anti-tumorskim faktorom nekroze (TNF) α proteinom ili proteinom; i
b) izolaciju jedinjenja koje ima Formulu IV-a.
[0088] Prema nekim aspektima, opisani metod dalje sadrži prečišćavanje jedinjenja Formule IV-a. Prema izvesnim aspektima, koristi se anjonsko izmenjivačka hromatografija (AEC) koja (zbog naelektrisanih radikala na peptidnom delu linkera prema nekim aspektima i/ili fosfatnoj grupi na SM prema nekim aspektima) može obezbediti efikasno razdvajanje različitih DAR vrsta.
[0089] Prema nekim aspektima, opisani metod zahteva manje koraka za sintezu od metoda koje su bazirane na standardnoj hemiji linkera baziranih na maleimidu. Naročito, metode koje su bazirane na standardnoj hemiji linkera baziranih na maleimidu mogu zahtevati sledstveni korak hidrolize za otvaranje sukcinimidnog
2
prstena koji se izvodi posle prečišćavanja odgovarajućih DAR vrsta. Prema izvesnim aspektima, kao takav, opisani metod znatno skraćuje protokol konjugacije u odnosu na standardnu hemiju linkera baziranih na maleimidu.
[0090] Prema sledećem aspektu, ovde je opisan metod za dobijanje jedinjenja koje ima Formulu VI-a:
pri čemu:
A je adalimumab; i
n je 1-10,
taj metod sadrži:
a) konjugaciju jedinjenja Formule VII-a:
sa delimično redukovanim adalimumabom; i
b) izolaciju, npr. pomoću hromatografije, jedinjenja koje ima Formulu VI-a.
[0091] Prema sledećem aspektu, ovde je opisan metod za dobijanje jedinjenja koje ima Formulu IV-a ili Formulu VI-a, pri čemu n je 1-7. Prema sledećem aspektu, n je 1-5. Prema sledećem aspektu, n je 2-4. Prema sledećem aspektu, n je 1. Prema sledećem aspektu, n je 2. Prema sledećem aspektu, n je 3. Prema sledećem aspektu, n je 4. Prema sledećem aspektu, n je 5. Prema sledećem aspektu, n je 6. Prema sledećem aspektu, n je 7. Prema sledećem aspektu, n je 8.
[0092] Prema sledećem aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu IV-a ili VI-a, pri čemu:
A je adalimumab; i
n je 1-10.
[0093] Prema sledećem aspektu, ovde je opisano jedinjenje koje ima Formulu IV-a ili VI-a, pri čemu n je 1-7. Prema sledećem aspektu, n je 1-5. Prema sledećem aspektu, n je 2-4. Prema sledećem aspektu, n je 1. Prema sledećem aspektu, n je 2. Prema sledećem aspektu, n je 3. Prema sledećem aspektu, n je 4. Prema sledećem aspektu, n je 5. Prema sledećem aspektu, n je 6. Prema sledećem aspektu, n je 7. Prema sledećem aspektu, n je 8.
[0094] Ovde su takođe realizovani sintetički međuproizvodi koji su korisni za pripremu imunokonjugata.
[0095] Prema jednom aspektu, ovde opisani sintetički međuproizvod je jedinjenje koje ima bilo koju od Formula V ili VII-a.
VI. Metodi primene i farmaceutske kompozicije
[0096] Ovde su realizovani konjugati koji imaju Formulu I-a (npr. koji imaju formule koje su prikazane u Tabeli 3) koji se mogu koristiti in vitro ili in vivo. Shodno tome, takođe su realizovane kompozicije, npr. farmaceutske kompozicije za izvesne in vivo primene, koje sadrže konjugat ili agonist glukokortikoidnog receptora koji ima željeni stepen čistoće u fiziološki prihvatljivom nosaču, ekscipijensu ili stabilizatoru (Remington’s Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA). Prihvatljivi nosači, ekscipijensi, ili stabilizatori su netoksični za primaoce u upotrebljenim dozama i koncentracijama.
[0097] Kompozicije (npr. farmaceutske kompozicije) koje treba da se koriste za primenu in vivo mogu biti sterilne, što se može ostvariti filtriranjem, npr. kroz membrane za sterilizaciju filtriranjem. Kompozicije (npr. farmaceutske kompozicije) koje treba da se koriste za primenu in vivo mogu sadržati konzervans.
1
[0098] Konjugati antitelo lek i/ili farmaceutske kompozicije koje sadrže konjugate antitelo lek koji su ovde opisani mogu biti korisni za liziranje ćelije koja izražava TNFα na površini (in vitro ili in vivo) i/ili za lečenje bolesti ili poremećaja karakterisanih povećanjem TNFα (npr. povećanjem TNFα u sinovijalnom fluidu). Prema nekim aspektima, konjugati antitelo lek i/ili kompozicije su korisni za inhibiciju oslobađanja citokina (in vitro ili in vivo) i/ili za lečenje autoimunih ili zapaljenskih bolesti. Prema nekim aspektima, konjugati antitelo lek i/ili kompozicije se koriste za lečenje Kronove bolesti (npr. umereno do ozbiljno aktivne Kronove bolesti koja zahvata ileum i/ili silazni kolon i/ili za održanje kliničke remisije umerene do ozbiljno aktivne Kronove bolesti koja zahvata ileum i/ili silazni kolon do 3 meseca). Prema nekim aspektima, konjugati antitelo lek i/ili kompozicije se koriste za lečenje ulcerativnog kolitisa (npr. za indukciju remisije kod pacijenata sa aktivnim, umerenim do ozbiljnim ulcerativnim kolitisom). Prema nekim aspektima, konjugati antitelo lek i/ili kompozicije se koriste za lečenje reumatoidnog artritisa (RA). Prema nekim aspektima, konjugati antitelo lek i/ili kompozicije se koriste za lečenje juvenilnog idiopatskog artritisa (JA). Prema nekim aspektima, konjugati antitelo lek i/ili kompozicije se koriste za lečenje psorijatičnog artritisa (PsA). Prema nekim aspektima, konjugati antitelo lek i/ili kompozicije se koriste za lečenje spondiloartropatije, kao što su ankilozirajući spondilitis (AS) ili aksijalni spondiloartritis (axSpA). Prema nekim aspektima, konjugati antitelo lek i/ili kompozicije se koriste za lečenje adultne Kronove bolesti (CD). Prema nekim aspektima, konjugati antitelo lek i/ili kompozicije se koriste za lečenje pedijatrijske Kronove bolesti. Prema nekim aspektima, konjugati antitelo lek i/ili kompozicije se koriste za lečenje ulcerativnog kolitisa (UC). Prema nekim aspektima, konjugati antitelo lek i/ili kompozicije se koriste za lečenje plak psorijaze (Ps). Prema nekim aspektima, konjugati antitelo lek i/ili kompozicije se koriste za lečenje hidradenitis suppurativa (HS). Prema nekim aspektima, konjugati antitelo lek i/ili kompozicije se koriste za lečenje uveitisa. Prema nekim aspektima, konjugati antitelo lek i/ili kompozicije se koriste za lečenje Behčetove bolesti. Prema nekim aspektima, konjugati antitelo lek i/ili kompozicije se koriste za lečenje psorijaze, uključujući plak psorijazu. Neki aspekti sadrže korišćenje konjugata leka i/ili farmaceutskih kompozicija za pripremu leka za lečenje ovde opisanih bolesti ili poremećaja.
[0099] Neki aspekti sadrže metode za isporuku agonista glukokortikoidnog receptora ćeliji koja izražava TNFα. Takvi metodi mogu sadržati korak dovođenja u kontakt
2
ćelije koja izražava TNFα sa ovde opisanim konjugatom antitelo lek. Neki aspekti sadrže in vitro metod za isporuku agonista glukokortikoidnog receptora ćeliji koja izražava TNFα.
[0100] Takođe su realizovani metodi za određivanje anti-zapaljenske aktivnosti konjugata antitelo lek. Takvi metodi mogu sadržati korak dovođenja u kontakt ćelije koja izražava TNFα sa ovde opisanim konjugatom antitelo lek. Neki aspekti sadrže dovođenje u kontakt ćelije koja izražava TNFα sa ovde opisanim konjugatom antitelo lek i određivanje smanjenog oslobađanja pro-zapaljenskih citokina iz ćelije u poređenju sa kontrolnom ćelijom. Neki aspekti sadrže in vitro metod određivanja anti-zapaljenske aktivnosti konjugata antitelo lek.
[0101] Neki aspekti sadrže metode trijaže (npr. in vitro metode) koje sadrže dovođenje u kontakt, direktno ili indirektno, ćelija (npr. ćelija koje izražavaju TNFα) sa konjugatom antitelo lek i određivanje da li konjugat antitelo lek moduliše aktivnost ili funkciju ćelija, što se odražava, na primer, promenama u morfologiji ili vijabilnosti ćelija, ekspresiji markera, diferencijaciji ili de-diferencijaciji, ćelijskoj respiraciji, mitohondrijalnoj aktivnosti, integritetu membrane, sazrevanju, proliferaciji, vijabilnosti, apoptozi ili ćelijskoj smrti. Jedan primer direktne interakcije je fizička interakcija, dok indirektna interakcija sadrži, na primer, dejstvo kompozicije na intermedijerni molekul koji dalje deluje na referentni entitet (npr. ćeliju ili ćelijsku kulturu).
VII. Artikli za proizvodnju
[0102] Pronalazak takođe obuhvata farmaceutska pakovanja i kitove koji sadrže jedan ili više kontejnera, pri čemu kontejner može sadržati jednu ili više doza ovde opisanog konjugata antitelo lek ili kompozicije. Prema izvesnim aspektima, pakovanje ili kit sadrže jediničnu dozu, što znači prethodno određenu količinu kompozicije ili konjugata antitelo lek, sa ili bez jednog ili više dodatnih sredstava.
[0103] Kit može sadržati jedan ili više kontejnera i etiketu ili umetak za pakovanje u, na ili pridružen kontejneru, odn. kontejnerima, koji ukazuju da se priložena kompozicija koristi za lečenje izabranog stanja bolesti. Podesni kontejneri obuhvataju, na primer, boce, bočice, špriceve, itd. Kontejneri mogu biti napravljeni od različitih materijala, kao što su staklo ili plastika. Kontejner, odn. kontejneri mogu sadržati sterilni pristupni port, na primer, kontejner može biti kesa za intravenski rastvor ili bočica koja ima čep koji se može probiti pomoću igle za hipodermalnu injekciju.
[0104] Prema nekim aspektima kit može sadržati sredstva pomoću kojih se pacijentu daje antitelo i bilo koje opcione komponente, npr. jednu ili više igala ili špriceva (prethodno napunjenih ili praznih), kapalicu za oči, pipetu, ili neko drugo takvo slično sredstvo, iz koga se formulacija može ubrizgati ili uvesti u subjekta ili primeniti na bolesnu oblast tela. Kitovi prema pronalasku će takođe obično sadržati sredstva za smeštaj bočica ili slično, i drugih komponenata u ograničenom prostoru radi komercijalne prodaje, kao što su, npr. plastični kontejneri napravljeni duvanjem, u koje se stavljaju i u njima drže željene bočice i druga sredstva.
Primeri
[0105] Podrazumeva se da su ovde opisani primeri i primeri izvođenja samo za ilustrativne svrhe i da će različite modifikacije ili promene u svetlu toga biti sugerisane stručnjacima iz odgovarajuće oblasti i da će one biti uključene u suštinu i okvir ovog pronalaska.
[0106] Polazni materijali su komercijalno raspoloživi, mogu se dobiti ovde opisanim procedurama, procedurama iz literature ili procedurama koje bi bile dobro poznate stručnjaku iz oblasti organske hemije. Nazivi reagenasa/reaktanata koji su dati su onakvi kao što je navedeno na komercijalnoj boci ili kao što je generisano prema IUPAC konvencijama, CambridgeSoft® ChemDraw Ultra 12.0, CambridgeSoft® Chemistry E-Notebook 11, ili AutoNom 2000. Podrazumeva se da su ovde opisani primeri i primeri izvođenja samo za ilustrativne svrhe i da će različite modifikacije ili promene u svetlu toga biti sugerisane stručnjacima iz odgovarajuće oblasti i da će biti uključene u suštinu i okvir ovog pronalaska.
Analitičke metode za sintezu i karakterizaciju jedinjenja
[0107] Analitički podaci su uključeni u okviru procedura u nastavku, u ilustracijama opštih procedura, ili u tabelama primera. Osim ako nije drugačije navedeno, svi<1>H i<13>C NMR podaci su bili sakupljeni na Varian Mercury Plus 400 MHz ili Bruker AVIII 300 MHz instrumentu; hemijski pomaci su navedeni u delovima na milion, odn. promilima (ppm). HPLC analitički podaci su navedeni detaljno u okviru
4
eksperimenata ili se vrši poziv na tabelu LC/MS i HPLC uslova, uz korišćenje metoda navedenog u Tabeli 4.
Tabela 4
[0108] Skraćenice upotrebljene u primerima koji slede su:
Primer 1 (Referentni primer): Sinteza (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-aminobenzil)fenil)-2,6bdifluoro-7-hidroksi-8b-(2-hidroksiacetil)-6a,8a-dimetil-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodekahidro-4H-nafto[2’,1’:4,5]mdeno[1,2-d][1,3]dioksol-4-ona
Korak 1: Sinteza 4-(bromometil)benzaldehida
[0109]
[0110] Diizobutilaluminijum hidrid (153 mL, 153 mmol, 1 M u toluenu) bio je dodavan ukapavanjem na 0 °C rastvoru 4-(bromometil)benzonitrila (20 g, 102 mmol) u toluenu (400 mL) preko 1 sat. Dve dodatne bočice su bile pripremljene kao što je gore opisano. Sve tri reakcione smeše su bile sjedinjene. Smeši je bio dodat 10% vodeni HCl (1.5 L). Smeša je bila ekstrahovana sa DCM (3 X 500 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, pa je isfiltriran i onda je koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Ostatak je bio prečišćen pomoću kolonske hromatografije na silika gelu (eluiranjem sa PE:EtOAc = 10:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50 g, prinos 82%) kao bela čvrsta materija.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 10.02 (s, 1H), 7.91 - 7.82 (m, 2H), 7.56 (d, J=7.9 Hz, 2H), 4.55 - 4.45 (m, 2H).
Korak 2: Sinteza 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)anilina
[0111]
[0112] Rastvoru 3-bromoanilina (40 g, 233 mmol) u 1,4-dioksanu (480 mL) bio je dodat 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-tetrametil-2,2’-bi(1,3,2-dioksaborolan) (94 g, 372 mmol), kalijum acetat (45.6 g, 465 mmol), 2-dicikloheksilfosfino-2’,4’,6’-tri-i-propil-1,1’-bifenil (8.07 g, 13.95 mmol), i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (8.52 g, 9.30 mmol). Rezultujuća smeša je bila zagrevana na 80°C tokom 4 sata pod azotom. Jedna dodatna bočica je bila pripremljena kao što je gore opisano. Dve reakcione smeše su bile sjedinjene, pa su koncentrisane, a ostatak je bio prečišćen pomoću kolonske hromatografije na silika gelu (eluiranjem sa PE:EtOAc = 10:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (60 g, prinos 55.4%) kao svetlo žuta čvrsta materija.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.80 (d, J=7.5 Hz, 1H), 3.82 - 3.38 (m, 2H), 1.34 (s, 12H).
Korak 3: Sinteza terc-butil (3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil) karbamata
[0113]
[0114] 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)anilme (Primer 1, Korak 2) (30 g, 137 mmol) i di-terc-butil dikarbonat (38.9 g, 178 mmol) bili su mešani u toluenu (600 mL) na 100 °C tokom 24 sati. Još jedna bočica je bila pripremljena kao što je gore opisano. Dve reakcione smeše su bile sjedinjene i onda je smeša bila uparena, pa je rastvorena u EtOAc (1.5 L), te je isprana sa 0.1 N HCl (3 X 2 L) i slanim rastvorom (3 L), a zatim je osušena preko Na2SO4, pa je isfiltrirana i onda je koncentrovana pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50 g, prinos 57%) kao crvena čvrsta materija.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) d7.63 (br m, 2H), 7.48 (d, J=7.1 Hz, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 1H), 1.52 (s, 9H), 1.34 (s, 12H).
Korak 4: Sinteza terc-butil (3-(4-formilbenzil)fenil)karbamata
[0115]
[0116] Smeša 4-(bromometil)benzaldehida (Primer 1, Korak 1) (24.94 g, 125 mmol), 1,1’-bis(difenilfosfino) ferocendihloro paladijum(II) DCM kompleksa (13.75 g, 18.80 mmol), terc-butil (3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil) karbamata (iz Primera 1, Korak 3) (20 g, 62.7 mmol) i kalijum karbonata (43.3 g, 313 mmol) u tetrahidrofuranu (400 mL) je bila zagrevana na 80 °C tokom 12 sati. Još jedna bočica je bila pripremljena kao što je gore opisano. Dve reakcione smeše su bile sjedinjene i razređene vodom (500 mL). Vodena smeša je bila ekstrahovana sa EtOAc (3 X 500 mL). Organski slojevi su bili sjedinjeni i zatim su osušeni preko Na2SO4, pa su isfiltrirani i onda su koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Ostatak je bio prečišćen pomoću kolonske hromatografije na silika gelu (eluiranjem sa PE:EtOAc = 10:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (15 g, prinos 38.4%) kao bela čvrsta materija.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) d9.95 (s, 1H), 7.78 (d, J=7.9 Hz, 2H), 7.33 (d, J=7.9 Hz, 2H), 7.27 - 7.13 (m, 3H), 6.82 (d, J=7.1 Hz, 1H), 6.47 (br. s., 1H), 4.00 (s, 2H), 1.48 (s, 9H).
Korak 5: Sinteza (6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-6,9-difluoro-11,16,17-trihidroksi-17-(2-hidroksiacetil)-10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodekahidro-3H-ciklopenta[a]fenantren-3 -ona
[0117]
[0118] (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroksi-8b-(2-hidroksiacetil)-6a,8a,10,10-tetrametil-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12bdodekahidro-4H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-4-on (20 g, 44.2 mmol) je bio suspendovan u 40% vodenom HBF4(440 mL) i smeša je bila mešana na 25 °C tokom 48 sati. Pošto se reakcija završila, bilo je dodato 2 L vode, pa je čvrsta materija bila isfiltrirana. Ova čvrsta materija je bila isprana vodom (1 L), a zatim sa MeOH (200 mL) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (11 g, prinos 60.3%) kao bela čvrsta materija.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) d7.25 (d, J=10.1 Hz, 1H), 6.28 (d, J=10.1 Hz, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.73 - 5.50 (m, 1H), 5.39 (br. s., 1H), 4.85 - 4.60 (m, 2H), 4.50 (d, J=19.4 Hz, 1H), 4.20 - 4.04 (m, 2H), 2.46 - 2.06 (m, 6H), 1.87 - 1.75 (m, 1H), 1.56 - 1.30 (m, 6H), 0.83 (s, 3H).
Korak 6: Sinteza (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-aminobenzil)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroksi-8b-(2-hidroksiacetil)-6a,8a-dimetil-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodekahidro-4H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-4-ona.
[0119]
[0120] Suspenzija (6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-6,9-difluoro-11,16,17-trihidroksi-17-(2-hidroksiacetil)-10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodekahidro-3H-ciklopenta[a]fenantren-3-ona (Primer 1, Korak 5) (4.4 g, 10.67 mmol) i MgSO4(6.42 g, 53.3 mmol) u MeCN (100 mL) je bila mešana na 20°C tokom 1 sata. Rastvor terc-butil (3-(4-formilbenzil)fenil)karbamata (Primer 1, Korak 4) (3.65 g, 11.74 mmol) u MeCN (100 mL) je bio dodat u jednoj šarži.
Trifluorometansulfonska kiselina (9.01 mL, 53.3 mmol) je bila dodata ukapavanjem uz održavanje unutrašnje temperature ispod 25°C korišćenjem ledenog kupatila. Posle dodavanja, smeša je bila mešana na 20 °C tokom 2 sata. Tri dodatne bočice su bile pripremljene kao što je gore opisano. Sve četiri reakcione smeše su bile sjedinjene i koncentrovane, a ostatak je bio prečišćen pomoću Prep HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.5 g, prinos 14.2%) kao žuta čvrsta materija. LCMS (Metod a, Tabela 4) Rt= 2.65 min; MS m/z = 606.2 (M+H)<+>;<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) d7.44 - 7.17 (m, 5H), 6.89 (t, J=7.7 Hz, 1H), 6.44 - 6.25 (m, 4H), 6.13 (br. s., 1H), 5.79 - 5.52 (m, 2H), 5.44 (s, 1H), 5.17 - 4.89 (m, 3H), 4.51 (d, J=19.4 Hz, 1H), 4.25 - 4.05 (m, 2H), 3.73 (s, 2H), 3.17 (br. s., 1H), 2.75 - 2.55 (m, 1H), 2.36 -1.97 (m, 3H), 1.76 - 1.64 (m, 3H), 1.59 - 1.39 (m, 4H), 0.94 - 0.78 (m, 3H). Prep HPLC metod: Instrument: Gilson 281 semi-preparativni HPLC sistem; mobilna faza: A: mravlja kiselina/H2O=0.01% v/v; B: MeCN; kolona: Luna C18150*25 5 mikrona; protok: 25 mL/min; talasna dužina praćenja: 220 i 254nm.
Primer 2: Sinteza (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-aminobenzil)fenil)-7-hidroksi-8b-(2-hidroksiacetil)-6a,8a-dimetil-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodekahidro-4H-nafto[2’,1’:4,5]mdeno[1,2-d][1,3]dioksol-4-ona.
[0121]
[0122] Primer 2 je bio sintetizovan po sličnoj proceduri kao Primer 1 korišćenjem (8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17-trihidroksi-17-(2-hidroksiacetil)-10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodekahidro-3H-ciklopenta[a]fenantren-3-ona.
4
<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) d7.36 (d, J=7.9 Hz, 2H), 7.31 (d, J=10.1 Hz, 1H), 7.20 (d, J=7.9 Hz, 2H), 6.89 (t, J=7.9 Hz, 1H), 6.39 - 6.28 (m, 3H), 6.16 (dd, J=1.5, 9.9 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.39 (s, 1H), 5.08 (t, J=5.7 Hz, 1H), 4.98 - 4.87 (m, 3H), 4.78 (d, J=3.1 Hz, 1H), 4.49 (dd, J=6.2, 19.4 Hz, 1H), 4.29 (br. s., 1H), 4.17 (dd, J=5.5, 19.6 Hz, 1H), 3.74 (s, 2H), 2.61 - 2.53 (m, 1H), 2.36 - 2.26 (m, 1H), 2.11 (d, J=11.0 Hz, 1H), 2.07 (s, 1H), 2.02 (d, J=12.8 Hz, 1H), 1.83 - 1.54 (m, 5H), 1.39 (s, 3H), 1.16 -0.96 (m, 2H), 0.85 (s, 3H). LCMS (Metod a, Tabela 4) Rt= 2.365 min; m/z = 570.2 (M+H)<+>.
Primer 3 (Referentni primer): Sinteza (6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-aminobenzil)fenil)-6b-fluoro-7-hidroksi-8b-(2-hidroksiacetil)-6a,8a-dimetil-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12bdodekahidro-4H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-4-ona.
[0123]
[0124] Primer 3 je bio sintetizovan po sličnoj proceduri kao Primer 1 korišćenjem (8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-9-fluoro-11,16,17-trihidroksi-17-(2-hidroksiacetil)-10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodekahidro-3H-ciklopenta[a]fenantren-3-ona.
[0125]<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) d7.37 - 7.26 (m, 3H), 7.21 (d, J=7.9 Hz, 2H), 6.89 (t, J=7.7 Hz, 1H), 6.43 - 6.30 (m, 3H), 6.23 (d, J=10.1 Hz, 1H), 6.04 (s, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.44 (s, 2H), 5.09 (t, J=5.7 Hz, 1H), 4.93 (br. s., 3H), 4.50 (dd, J=6.2, 19.4 Hz, 1H), 4.28 - 4.09 (m, 2H), 3.74 (s, 2H), 2.73 - 2.54 (m, 2H), 2.35 (d, J=13.2 Hz, 1H), 2.25 - 2.12 (m, 1H), 2.05 (d, J=15.0 Hz, 1H), 1.92 - 1.77 (m, 1H), 1.74 - 1.58 (m, 3H), 1.50 (s, 3H), 1.45 - 1.30 (m, 1H), 0.87 (s, 3H). LCMS (Metod a, Tabela 4) Rt= 2.68 min; m/z = 588.1 (M+H)<+>
Primer 4: Sinteza (S)-4-(2-(2-bromoacetamido)acetamido)-5-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-hidroksi-6a,8a-dimetil-4-okso-8b-(2-(fosfonooksi)acetil)-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodekahidro-1H-nafto[2’,1’:4,5]mdeno[1,2-d][1,3]dioksol-10-il)benzil)fenil)amino)-5-oksopentanske kiseline
Korak 1: Sinteza (S)-2-(2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)acetamido)-5-(terc-butoksi)-5-oksopentanske kiseline.
[0126]
[0127] Smeša 2-hlorotritil hloridne smole (30 g, 92 mmol), trietilamina (46.4 g, 458 mmol) i (S)-2-((((9Hfluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-5-(terc-butoksi)-5-oksopentanske kiseline (25.5 g, 60 mmol) u suvom DCM (200 mL) bila je barbotirana sa N2na 20°C tokom 8 sati. Smeša je bila isfiltrirana, pa je smola bila isprana sa DCM (2 X 200 mL), MeOH (2 X 200 mL), i DMF (2 X 200 mL). Smoli je bio dodat rastvor piperidin:DMF (1:4, 400 mL) i smeša je onda bila barbotirana sa N2tokom 8 minuta, a zatim je isfiltrirana. Ova operacija je bila ponovljena pet puta da bi se ostvarilo kompletno odstranjivanje Fmoc zaštitne grupe. Smola je bila isprana sa DMF (5 X 500 mL) da bi se dobila (S)-2-amino-5-(terc.butoksi)-5-oksopentanska kiselina vezana za smolu. Smeša 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)sirćetne kiseline (13.38 g, 45.0 mmol), N,N-diizopropiletilamina (7.86 mL, 45 mmol), hidroksibenzotriazola (6.89 g, 45 mmol), 2-(6-hloro-1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilizouronijumheksafluorofosfata (V) (18.62 g, 45.0 mmol) u DMF (200 mL) je bila mešana na 20°C tokom 30 min. Smeši je bila dodata (S)-2-amino-5-(tercbutoksi)-5-oksopentanska kiselina vezana za smolu, a rezultujuća smeša bila je barbotirana sa N2na 25°C tokom 1.5 sata. Smeša je bila isfiltrirana, pa je smola bila isprana sa DMF (4 X 500 mL), i DCM (2 X 500 mL). Smeši je bio dodat 1% TFA / DCM (5 X 500 mL) i onda je barbotirana sa N2tokom 5 minuta. Smeša je bila isfiltrirana, pa je filtrat bio dodat zasićenom rastvoru NaHCO3(200 mL) direktno. Sjedinjena smeša je bila izdvojena i organska faza je onda bila isprana zasićenim vodenim rastvorom limunske kiseline (4 X 400 mL) i slanim rastvorom (2 X 300 mL). Finalni organski rastvor je bio osušen preko Na2SO4(20 g), pa je isfiltriran, a onda je koncentrovan pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (10 g, prinos 20%) kao svetlo žuta čvrsta materija.
[0128]<1>H NMR: (CDCl3, 400 MHz) δ = 7.75 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.59 (br d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.41 - 7.36 (m, 2H), 7.30 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 5.82 (br s, 1H), 4.57 (br d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.38 (br d, J = 7.5 Hz, 2H), 4.27 - 4.15 (m, 1H), 4.06 - 3.83 (m, 2H), 2.50 - 2.29 (m, 2H), 2.26 - 2.13 (m, 1H), 2.06 - 2.02 (m, 1H), 1.43 (s, 9H).
Korak 2: Sinteza terc-butil (S)-4-(2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)acetamido)-5-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-hidroksi-8b-(2-hidroksiacetil)-6a,8adimetil-4-okso-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodekahidro-1H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-10-il)benzil)fenil)amino)-5-oksopentanoata
[0129]
[0130] Rastvoru (S)-2-(2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)acetamido)-5-(terc-butoksi)-5-oksopentanske kiseline (Primer 4, korak 1) (424 mg, 0.878 mmol) u DMF (3.5 mL) bili su dodati (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-aminobenzil)fenil)-7-hidroksi-8b-(2-hidroksiacetil)-6a,8a-dimetil-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodekahidro-4H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-4-on (Primer 2) (500 mg, 0.878 mmol) i trietilamin (0.3 mL, 2.63 mmol)
4
na 25°C. Rastvor je bio ohlađen na 0 °C, a onda mu je bio dodat 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksid (1.12 g, 1.755 mmol). Reakciona smeša je bila mešana 12 sati na 25 °C. LCMS je pokazala da se reakcija završila. Četrnaest dodatnih bočica je bilo pripremljeno kao što je gore opisano. Svih petnaest reakcionih smeša je bilo sjedinjeno. Smeša je bila prečišćena pomoću reverznofazne kolone da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5 g, prinos 38.4%) kao žuta čvrsta materija. Metod sa reverzno-faznom kolonom: Instrument: Shimadzu LC-8A preparativna HPLC; kolona: Phenomenex Luna C18200*40 mm*10 mm; mobilna faza: A za H2O (0.05% TFA) i B za MeCN; gradijent: B od 30% do 100% u 30 min; protok: 60 mL/min; talasna dužina: 220 & 254 nm.
[0131] LCMS (Metod a, Tabela 4) Rt= 1.34 min; m/z 1016.6 (M+H-18)<+>.
Korak 3: Sinteza terc-butil (S)-4-(2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-acetamido)-5-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((di-tercbutoksifosforil)oksi)acetil)-7-hidroksi-6a,8a-dimetil-4-okso-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodekahidro-1H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-10-il)benzil)fenil)amino)-5-oksopentanoata.
[0132]
[0133] Rastvoru terc-butil (S)-4-(2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-acetamido)-5-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-hidroksi-8b-(2-hidroksiacetil)-6a,8a-dimetil-4-okso-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12bdodekahidro-1H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-10-il)benzil)fenil)amino)-5-oksopentanoata (Primer 4, korak 2) (400 mg, 0.387 mmol) u DMF (2.5 mL) bio je dodat 1H-tetrazol (271 mg 3.87 mmol) i di-terc-butil dietilfosforamidit (1.16 g, 4.64 mmol). Reakcija je bila mešana na st tokom 2.5 sati, a onda je ohlađena na 0 °C. Bio je dodat vodonik peroksid (241 mg, 2.127 mmol), pa je ostavljeno da se rezultujuća smeša zagreje do st i mešana je 1 sat, posle kog vremena je LCMS pokazala da je reakcija bila završena. Jedanaest dodatnih bočica je bilo pripremljeno kao što je gore opisano. Svih dvanaest reakcionih smeša su bile sjedinjene. Smeša je bila prečišćena pomoću reverzno-fazne kolone da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.4 g, prinos 64.2%) kao žuta čvrsta materija. Metod sa reverzno-faznom kolonom: instrument: Shimadzu LC-8A preparativna HPLC; kolona: Phenomenex Luna C18 200*40mm*10 mm; mobilna faza: A za H2O i B za MeCN; gradijent: B od 50% do 100% u 30min; protok: 60 mL/min; talasna dužina: 220 & 254 nm. LCMS (Metod a, Tabela 4) Rt= 1.41 min; m/z 1226.7 (M+H)<+>.
Korak 4: Sinteza terc-butil (S)-4-(2-aminoacetamido)-5-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((di-terc-butoksifosforil)oksi)-acetil)-7-hidroksi-6a,8a-dimetil-4-okso-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12bdodekahidro-1H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-10-il)benzil)fenil)amino)-5-oksopentanoata.
[0134]
[0135] Rastvoru terc-butil (S)-4-(2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-acetamido)-5-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((di-tercbutoksifosforil)oksi)acetil)-7-hidroksi-6a,8a-dimetil-4-okso-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b, 11a,12,12a,12b-dodekahidro-1H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-10-il)benzil)fenil)amino)-5-oksopentanoata (Primer 4, Korak 3) (1.1 g, 0.897 mmol) u MeCN (6 mL) bio je dodat piperidin (0.75 mL, 7.58 mmol) na 25°C. Reakcija je bila mešana na st tokom 20 minuta, posle kog vremena je LCMS pokazala da se reakcija završila. Tri dodatne bočice su bile pripremljene kao što je gore opisano. Sve četiri reakcione smeše su bile sjedinjene. Smeša je bila koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je bio tretiran sa PE (10 mL) uz mešanje 2 sata. Rezultujuća čvrsta
4
materija je bila isfiltrirana, a onda je osušena pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.8 g, prinos 90%) kao žuta čvrsta materija.
[0136] LCMS (Metod a, Tabela 4) Rt= 1.16 min; m/z 1004.6 (M+H)<+>.
Korak 5: Sinteza terc-butil (S)-4-(2-(2-bromoacetamido)acetamido)-5-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((di-tercbutoksifosforil)oksi)acetil)-7-hidroksi-6a,8a-dimetil-4-okso-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodekahidro-1H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-10-il)benzil)fenil)amino)-5-oksopentanoata.
[0137]
[0138] Rastvoru 2-bromosirćetne kiseline (97 mg, 0.697 mmol) u DMF (2.5 mL) bio je dodat EEDQ (172 mg, 0.697 mmol) na st. Smeša je bila mešana na st tokom 1 sata. Bio je dodat terc-butil (S)-4-(2-aminoacetamido)-5-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS, 8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((di-terc-butoksifosforil)oksi)acetil)-7-hidroksi-6a,8a-dimetil-4-okso-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodekahidro-1H-nafto[2’,I’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-10-il)benzil)fenil)amino)-5-oksopentanoat (Primer 4, Korak 4) (350 mg, 0.349 mmol), a rezultujući rastvor je bio mešan 2.5 sata, posle kog vremena je LCMS pokazala da se reakcija završila. Sedam dodatnih bočica je bilo pripremljeno kao što je gore opisano. Svih osam reakcionih smeša su bile sjedinjene. Reakcija je bila razređena sa DCM (100 mL), pa je isprana sa vodenim HBr (1 M, 2 X 80 mL), vodenim NaHCO3(60 mL), i slanim rastvorom (60 mL). Organski sloj je bio osušen preko Na2SO4, pa je isfiltriran i onda je koncentrovan pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2 g, prinos 63.7%) kao žuto ulje.
[0139] LCMS (Metod a, Tabela 4) Rt= 1.30 min; m/z 1124.2, 1125.9 (M+H)<+>.
4
Korak 6: Sinteza (S)-4-(2-(2-bromoacetamido)acetamido)-5-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-hidroksi-6a,8a-dimetil-4-okso-8b-(2-(fosfonooksi)acetil)-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodekahidro-1H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-10-il)benzil)fenil)amino)-5-oksopentanske kiseline
[0140]
[0141] Rastvoru terc-butil (S)-4-(2-(2-bromoacetamido)acetamido)-5-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((di-tercbutoksifosforil)oksi)acetil)-7-hidroksi-6a,8a-dimetil-4-okso-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodekahidro-1H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-10-il)benzil)fenil)amino)-5-oksopentanoata (Primer 4, Korak 5) (2 g, 1.778 mmol) u DCM (16 mL) je bio dodat TFA (8 mL, 104 mmol) i rezultujuća smeša je bila mešana na st tokom 40 minuta, posle kog vremena je LCMS pokazala da se reakcija završila. Rastvarač je bio odstranjen pod smanjenim pritiskom. Rezultujući ostatak je bio prečišćen pomoću Prep HPLC. Mobilna faza je bila direktno liofilizovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (640 mg, prinos 35.3%) kao žuta čvrsta materija. Prep HPLC metod: instrument: Shimadzu LC-8A preparativna HPLC; kolona: Phenomenex Luna C18200*40 mm*10 μm; mobilna faza: A za H2O (0.09% TFA) i B za MeCN; gradijent: B od 30% do 40% u 20 min; protok: 60mL/min; talasna dužina: 220 & 254 nm.
[0142]<1>H NMR: (DMSO-d6, 400 MHz) δ = 9.88 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.24 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.46 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.36 (br d, J =7.9 Hz, 2H), 7.30 (br d, J = 9.7 Hz, 1H), 7.23 - 7.17 (m, 3H), 6.90 (br d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.16 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.47 (s, 1H), 4.96 - 4.85 (m, 3H), 4.58 (br dd, J = 7.9, 18.7 Hz, 1H), 4.38 (br d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.29 (br s, 1H), 3.93 (s, 2H), 3.89 (s, 2H), 3.80 (br s, 2H), 2.30 - 2.22 (m, 2H), 2.16 - 1.91 (m, 4H), 1.85 - 1.62 (m, 6H), 1.39 (s, 3H),
4
1.00 (br s, 2H), 0.87 (s, 3H). LCMS (Metod a, Tabela 4) Rt= 2.86 min; m/z 956.0, 958.0 (M+H)<+>.
Primer 5 (Referentni primer): Sinteza 2-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R, 11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-6-amino-2-(2-(2-bromoacetamido)acetamido)-heksanamido)benzil)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroksi-6a,8a-dimetil-4-okso-1,2,4,6a,6b,7,8,8a,11a,12,12a,12b-dodekahidro-8bH-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][l,3]dioksol-8b-il)-2-oksoetil dihidrogen fosfata.
Korak 1: Sinteza terc-butil ((S)-5-(2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-acetamido)-6-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroksi-8b-(2-hidroksiacetil)-6a,8a-dimetil-4-okso-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b, 11a,12,12a,12b-dodekahidro-1H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-10-il)benzil)fenil)amino)-6-oksoheksil)karbamata.
[0143]
[0144] Rastvoru N<2>-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)glicil)-N6-(tercbutoksikarbonil)-L-lizina (5.58 g, 8.26 mmol) u DMF (60 mL) na 0 °C bili su dodati 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksid (10.51 g, 16.51 mmol) i trietilamin (3.45 mL, 24.77 mmol). Rezultujuća smeša je bila mešana na st tokom 1 sata. Bio je dodat (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-aminobenzil)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroksi-8b-(2-hidroksiacetil)-6a,8a-dimetil-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodekahidro-4H-nafto[2’,1’:4,5]mdeno[1,2-d][1,3]dioksol-4-on (Primer 1, Korak 6) (5 g, 8.26 mmol). Rezultujuća smeša je bila mešana 5 sati na st, posle kog vremena je LCMS pokazala da se reakcija završila. Šest dodatnih bočica je bilo pripremljeno kao što je gore opisano. Svih sedam reakcionih smeša je bilo sjedinjeno. Reakcija je bila prečišćena pomoću reverzno-
4
fazne kolone da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (24 g, prinos 24.62%) kao bela čvrsta materija. Metod sa reverzno-faznom kolonom: instrument: Shimadzu LC-8A prep HPLC; kolona: Phenomenex Luna C18200*40 mm*10 mm; mobilna faza: A za H2O (0.05% TFA) i B za MeCN; gradijent: B od 30% do 100% u 30 min; protok: 60 mL/min; talasna dužina: 220 & 254 nm.
[0145] LCMS (Metod a, Tabela 4) Rt= 1.29 min; m/z 1095.6 (M+H-18)<+>.
Korak 2: Sinteza terc-butil ((S)-5-(2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-acetamido)-6-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((diterc-butoksifosforil)oksi)acetil)-2,6b-difluoro-7-hidroksi-6a,8a-dimetil-4-okso-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodekahidro-1H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-10-il)benzil)fenil)amino)-6-oksoheksil)karbamata.
[0146]
[0147] Rastvoru terc-butil ((S)-5-(2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-acetamido)-6-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroksi-8b-(2-hidroksiacetil)-6a,8a-dimetil-4-okso-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b, 11a,12,12a,12b-dodekahidro-1H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-10-il)benzil)fenil)amino)-6-oksoheksil)karbamata (Primer 5, Korak 1) (3 g, 2.69 mmol) u DMF (30 mL) bili su dodati 1H-tetrazol (1.888 g, 26.9 mmol) i di-terc-butil dietilfosforamidit (8.06 g, 32.3 mmol) i reakcija je bila mešana na st tokom 3.5 sata. Reakciji je bio dodat vodonik peroksid (224 mg, 1.97 mmol), pa je mešana 0.5 sata, posle kog vremena je LCMS pokazala da se reakcija završila. Šest dodatnih bočica je bilo pripremljeno kao što je gore opisano. Svih sedam reakcionih smeša je bilo sjedinjeno. Reakcija je bila prečišćena pomoću reverzno-fazne kolone da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (10 g, čistoća: 78%, prinos 37.1%) kao bela čvrsta materija. Metod sa reverzno-faznom kolonom: instrument: Shimadzu LC-8A prep
4
HPLC; kolona: Phenomenex Luna C18200*40mm*10 mm; mobilna faza: A za H2O i B za MeCN; gradijent: B od 50% do 100% u 30 min; protok: 60 mL/min; talasna dužina: 220 & 254 nm.
[0148] LCMS (Metod a, Tabela 4) Rt= 1.42 min; m/z 1305.7 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza terc-butil ((S)-5-(2-aminoacetamido)-6-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((di-tercbutoksifosforil)oksi)acetil)-2,6b-difluoro-7-hidroksi-6a,8a-dimetil-4-okso-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodekahidro-1H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-10-il)benzil)fenil)amino)-6-oksoheksil)karbamata.
[0149]
[0150] Rastvoru terc-butil ((S)-5-(2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-acetamido)-6-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((diterc-butoksifosforil)oksi)acetil)-2,6b-difluoro-7-hidroksi-6a,8a-dimetil-4-okso-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodekahidro-1H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-10-il)benzil)fenil)amino)-6-oksoheksil)karbamata (Primer 5, Korak 2) (2.5 g, 1.969 mmol) u MeCN (10 mL) bio je dodat piperidin (2 mL, 1.969 mmol) i reakcija je mešana na st tokom 1 sata, posle kog vremena je LCMS pokazala da se reakcija završila. Tri dodatne bočice su bile pripremljene kao što je gore opisano. Sve četiri reakcione smeše su bile sjedinjene. Reakcija je bila koncentrovana da bi se dobio sirovi proizvod, koji je bio mešan u PE (30 mL) tokom 2 sata. Rezultujuća čvrsta materija je bila isfiltrirana, a onda je osušena pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (7 g, čistoća: 83%, prinos 70.4%) kao žuta čvrsta materija.
[0151] LCMS (Metod a, Tabela 4) Rt= 1.17 min; m/z 1083.5 (M+H)<+>.
Korak 4: Sinteza terc-butil ((S)-5-(2-(2-bromoacetamido)acetamido)-6-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((di-tercbutoksifosforil)oksi)acetil)-2,6b-difluoro-7-hidroksi-6a,8a-dimetil-4-okso-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodekahidro-1H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-10-il)benzil)fenil)amino)-6-oksoheksil)karbamata.
[0152]
[0153] Rastvoru 2-bromosirćetne kiseline (0.929 g, 6.68 mmol) u DMF (35 mL) bio je dodat 2-etoksi-1-etoksikarbonil-1,2-dihidrohinolin (1.653 g, 6.68 mmol) i rezultujuća smeša je mešana na st tokom 1 sata. Bio je dodat proizvod iz Primera 5, Korak 3 (3.5 g, 3.34 mmol) i rezultujuća smeša je bila mešana na st tokom 2 sata. LCMS je pokazala da se reakcija završila. Reakcija je bila razređena sa DCM (100 mL), pa je isprana sa vodenom HBr (1 M, 2 X 80 mL), vodenim NaHCO3(60 mL) i slanim rastvorom (60 mL). Organski sloj je bio osušen preko Na2SO4, pa je isfiltriran i onda je koncentrovan pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2 g, prinos 51.2%) kao žuto ulje.
[0154] LCMS (Metod a, Tabela 4) Rt= 1.32 min; m/z 1205.5 (M+H)<+>.
Korak 5: Sinteza 2-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-6-amino-2-(2-(2-bromoacetamido)acetamido)heksanamido)benzil)fenil)-2,6bdifluoro-7-hidroksi-6a,8a-dimetil-4-okso-1,2,4,6a,6b,7,8,8a,11a,12,12a,12bdodekahidro-8bH-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-8b-il)-2-oksoetil dihidrogen fosfata.
[0155]
1
[0156] Rastvoru terc-butil ((S)-5-(2-amiaoacetamido)-6-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS, 8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((di-terc-butoksifosforil)oksi)acetil)-2,6b-difluoro-7-hidroksi-6a,8a-dimetil-4-okso-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodekahidro-1H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-10-il)benzil)fenil)amino)-6-oksoheksil)karbamata (Primer 5, Korak 3) (2 g, 1.661 mmol) u DCM (10 mL) bio je dodat TFA (5 mL, 64.9 mmol) i reakcija je bila mešana na st tokom 40 min, posle kog vremena je LCMS pokazala da se reakcija završila. Rastvarač je bio odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi proizvod je bio prečišćen pomoću Prep HPLC. Mobilna faza je bila liofilizovana direktno da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (550 mg, čistoća: 96.9%, prinos 32.3%) kao beličasta čvrsta materija. Prep-HPLC metod: instrument: Shimadzu LC-8A prep HPLC; kolona: Phenomenex Luna C18200*40 mm*10 mm; mobilna faza: A za H2O (0.09% TFA) i B za MeCN; gradijent: B od 30% do 40% u 20 min; protok: 60 mL/min; talasna dužina: 220 & 254 nm.
[0157]<1>H NMR: (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm 0.90 (s, 3 H) 1.19 - 1.41 (m, 2 H) 1.43 - 1.62 (m, 7 H) 1.64 - 1.77 (m, 3 H) 1.84 (br d, J=14.55 Hz, 1 H) 1.95 - 2.07 (m, 1H) 2.18 - 2.36 (m, 3 H) 2.65 - 2.78 (m, 3 H) 3.71 - 3.86 (m, 3 H) 3.89 (s, 2 H) 3.93 (s, 2 H) 4.20 (br d, J=9.48 Hz, 1 H) 4.33 - 4.41 (m, 1H) 4.59 (br dd, J=18.41, 8.05 Hz, 1 H) 4.81 (br dd, J=18.52, 8.60 Hz, 1 H) 4.94 (d, J=4.63 Hz, 1 H) 5.50 (s, 1 H) 5.54 - 5.76 (m, 1 H) 6.13 (s, 1 H) 6.29 (dd, J=10.14, 1.32 Hz, 1 H) 6.95 (d, J=7.72 Hz, 1 H) 7.15 - 7.28 (m, 4 H) 7.30 - 7.41 (m, 3 H) 7.51 (br d, J=7.94 Hz, 1 H) 7.72 (br s, 3 H) 8.21 (br d, J=7.72 Hz, 1H) 8.54 (t, J=5.62 Hz, 1H) 9.93 (br d, J=2.65 Hz, 1H) LCMS (Metod a, Tabela 4) Rt= 2.31 min.
Primer 6 (Referentni primer): Sinteza (S)-2-((2-(2-bromoacetamido)etil)amino)-N-((S)-1-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-hidroksi-8b-(2-hidroksiacetil)-6a,8a-dimetil-4-okso-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12bdodekahidro-1H-nafto[2’,1’:4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioksol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oksopropan-2-il)propanamida.
2
[0158] Proizvod iz primera 6 može biti sintetizovan kuplovanjem N-(2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)etil)-N-(terc-butoksikarbonil)-L-alanil-L-alanina (proizvod koraka S1 i S2 u nastavku) u amino proizvod iz Primera 2, što je praćeno koracima S4-S6: (1) Fmoc deprotekcije, (2) kuplovanja sa 2-bromosirćetnom kiselinom, i (3) Boc deprotekcije. Fmoc = fluorenilmetiloksikarbonil; Boc = terc.butoksikarbonil.
Opšti protokol cisteinske konjugacije
[0159] Rastvor od približno 5-20 mg/mL željenog antitela je bio pripremljen u PBS puferu, pH 6 - 7.4. Redukciono sredstvo po izboru, kao što je TCEP, bilo je razređeno ili rastvoreno u rastvaračima kao što su H2O, DMSO, DMA ili DMF da bi se dobio rastvor sa opsegom koncentracija između 1 i 25 mM. Antitela (anti-hTNF hIgG1 (D2E7) ili anti-mTNF mIgG2a (8C11; McRae BL et al. J Crohns Colitis 10 (1): 69-76 (2016)) su bila onda delimično redukovana dodavanjem oko 2-3.5 ekvivalenta redukcionog sredstva, kratko su mešana, pa su inkubirana preko noći na 0 - 4 °C. Onda je bio dodat Tris pufer, pH 8-8.5 (20-50 mM), što je bilo praćeno linkeromlekom u DMSO ili DMA (manje od 15% ukupno) i smeša je bila inkubirana tokom 2-3 sata na st. Višak linkera-leka i organski rastvarač su zatim bili odstranjeni prečišćavanjem. Prečišćeni ADC uzorci su onda bili analizirani pomoću SEC, HIC i redukovane masene spektrometrije.
ADC analitičke procedure
[0160] ADC-ovi su bili profilisani bilo pomoću anjonsko izmenjivačke hromatografije (AEC) ili hidrofobne interaktivne hromatografije (HIC) da bi se odredio stepen konjugacije i čistoća ADC.
[0161] AEC. Približno 20 μg ADC je bilo stavljeno na Ultimate 3000 Dual LC sistem (Thermo Scientific) opremljen sa 4 X 250 mm Propac™ WAX-10 kolonom (Tosoh Bioscience, kat.054999). Kolona je bila uravnotežena sa 100% pufera A i eluirana je uz korišćenje linearnog gradijenta od 100% pufera A do 100% pufera B preko 18 min sa 1.0 mL/min, gde je pufer A bio 20 mM MES, pH 6.7 i pufer B je bio 20 mM MES, 500 natrijum hlorida, pH 6.7.
[0162] HIC. Približno 20 mg ADC je bilo stavljeno na Ultimate 3000 Dual LC sistem (Thermo Scientific) opremljen sa 4.6 X 35 mm butil-NPR kolonom (Tosoh Bioscience, kat.14947). Kolona je bila uravnotežena u 100% pufera A i eluirana je uz korišćenje linearnog gradijenta od 100% pufera A do 100% pufera B preko 12 min sa 0.8 mL/min, gde je pufer A bio 25 mM natrijum fosfata, 1.5 M amonijum sulfata, pH 7.0 i pufer B je bio 25 mM natrijum fosfata, 25% izopropanola, pH 7.0.
[0163] SEC. Raspodele veličina ADC-ova su bile profilisane ekskluzionom SEC uz korišćenje Ultimate 3000 Dual LC sistema (Thermo Scientific) opremljenog sa 7.8 X 300 mm TSK-gel 3000SWXLkolonom (Tosoh Bioscience, kat.08541). Približno 20 μg ADC je bilo stavljeno na kolonu i eluirano je preko 17 min uz korišćenje izokratskog gradijenta od 100 mM natrijum sulfata, 100 mM natrijum fosfata, pH 6.8 sa protokom 1.0 mL/min.
[0164] MS. Redukovani uzorci (10 μL) su bili ubrizgani u Agilent 6550 QTof LC/MS sistem kroz temperaturski kontrolisani (5 C) CTC autosampler. Eluiranje uzorka je bilo izvedeno na Waters C-4, 3.5 μm, 300 Å, 2.1 x 50 mm i.d. HPLC koloni. Mobilne faze su bile: A: 0.1% mravlje kiseline u vodi, i B: 0.1% mravlje kiseline u MeCN; protok je bio 0.45 mL/min, i prostor kolone je bio održavan na 40°C.
[0165] HPLC gradijent je bio kao što je navedeno u Tabeli 5:
4
Vreme (min) %A %B
2.2 10 90
2.4 95 5
3.5 95 5
Primer 7: Preparat adalimumaba konjugovan sa glukokortikosteroidom da bi se dobio konjugat antitelo lek
Adalimumab BrAc-Gly-Glu-Steroid-PO4ADC koji je imao populaciju DAR 4.0 bio je pripremljen pomoću hemijskog procesa u dva koraka: disulfidne redukcije adalimumaba praćene alkilacijom (konjugacijom) sa bromoacetamido glicinglutaminskom kiselinom steroidom iz Primera 4.
[0166]
[0167] 100 mg adalimumaba u koncentraciji od 20 mg/mL bilo je redukovano difenilfosfinosirćetnom kiselinom (2.9 - 3.0 ekv) na 0°C preko noći. Delimično redukovani adalimumab je onda bio konjugovan sa Primerom 4 (10 ekv) u DMSO tokom 3 sata na st. Konjugacionoj smeši je bio prvo promenjen pufer u 20 mM Tris Pufera, 50 mM NaCl, pH 7.8 uz korišćenje više NAP 25 desalinizujućih kolona. Desalinizovani ADC rastvor je bio prečišćen pomoću AEC da bi se dobile DAR4 komponente ADC. AEC hromatografski metod: instrument: Akta pure; kolona: 2X Hitrap Q HP 5 mL; mobilna faza: A za 20 mM Tris Pufera, pH 7.8; B za 20 mM Tris Pufera, 1 M NaCl, pH 7.8; gradijent: B od 0% do 25% u 60 min; protok: 5 mL/min; talasna dužina: 280 & 214 nm.
[0168] Sa pozivom na Fig.1, koji prikazuje hromatografsku rezoluciju rezultujućeg ADC preparata, ADC je heterogena smeša koja sadrži antitela koja imaju dva vezana molekula lek linker ("DAR2" pik), četiri vezana molekula lek linker ("DAR4" pik), u zavisnosti od broja redukovanih međulančanih disulfidnih veza. AEC uslovi korišćeni na Fig.1 su bili kao što sledi: kolona je bila Propac™ WAX-10, 4 X 250 mm (Thermo Fisher Scientific, kat.054999) i temperatura kolona je bila 37 C. Talasna dužina je bila 280 nm, vreme trajanja analize je bilo 18 minuta, ubrizgana količina je bila 20 μg, i protok je bio 1.0 mL/minut. Mobilna faza A: 20 mM MES, pH 6.7, mobilna faza B: 20 mM MES, 500 mM NaCl, pH 6.7. Profil gradijenta (Tabela 6):
Tabela 6
Fig. 2 prikazuje dekonvoluirani maseni spektar prečišćenog ADC. Ovaj ADC ima 4 molekula lek linker konjugovana za svako antitelo. Pik na levoj strani ima molekulsku težinu od 24284.74 Da, koja je rezultat toga da je jedan lek linker vezan za samo jedan laki lanac. Pik na desnoj strani ima molekulsku težinu od 51513.96 Da, koja je rezultat toga da je jedan lek linker vezan za samo jedan teški lanac. ADC-ovi u Tabeli 7 i 8 su bili pripremljeni u skladu sa gore opisanom procedurom. Oni ADC-ovi u Tabelama 7 i 8 koji nisu pokriveni zahtevom 1 su predviđeni samo kao referenca.
Tabela 7: Konjugati anti-mišje TNFa antitelo lek. X se odnosi na anti-mišje TNFa antitelo 8C11
Tabela 8: Konjugati anti-humano TNFa antitelo lek. X se odnosi na anti-humano TNFa antitelo adalimumab
Generacija humanih i mišjih transmembranskih TNF-alfa GRE reporter ćelijskih linija
[0169] Da bi se kreirala roditeljska ćelijska linija, K562 ćelije su bile zasejane na šolju sa 6 bunarčića (Costar: 3516) sa 2 mL kompletnog medijuma za kultivaciju (RPMI,10%FBS, 1% L-glutamin, 1% Na Piruvata i 1% MEM NEAA) sa 500,000 ćelija po bunarčiću tokom 24 sati na 37°, 5% CO2. Sledećeg dana, 1.5 mg pGL4.36[Luc2P/MMTV/Hygro] (Promega: E316), 1.5 ug pG14.75 [hRLuc/CMV] (Promega: E639A), i 3 uL PLUS reagensa (Invitrogen: 10964-021) su bili razređeni u 244 mL Opti-MEM (Gibco: 31985-070) i onda su inkubirani na st 15 minuta. pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro] vektor sadrži MMTV LTR (Murine Mammary Tumor Virus Long Terminal Repeat) koji pokreće transkripciju reporter gena luciferaze luc2P kao reakciju na aktivaciju nekoliko nuklearnih receptora, kao što su glukokortikoidni receptor i androgeni receptor. pGL4.75 [hRluc/CMV] vektor kodira reporter gen luciferaze hRluc (Renilla reniformis) i dizajniran je za visoku ekspresiju i redukovanu anomalnu transkripciju.
[0170] Posle inkubacije, razređeni DNK rastvor je bio prethodno inkubiran sa 1:1 Lipofektamin LTX rastvorom (Invitogen: 94756) (13.2 mL 256.8 mL Opti-MEM), a onda je inkubiran na sobnoj temperaturi 25 minuta da bi se formirali DNK-Lipofektamin LTX kompleksi. Posle inkubacije, 500 mL DNK-Lipofektamin kompleksa je bilo dodato direktno u bunarčić koji je sadržao ćelije. K562 ćelije su bile transfektovane 24 h na 37 °C, 5% CO2. Posle inkubacije, ćelije su bile isprane sa 3 mL PBS i selekcionisane su sa kompletnim medijumom za kultivaciju koji je sadržao 125 mg/mL higromicina B (Invitrogen: 10687-010) tokom dve nedelje. Bile su proizvedene "K562 pGL4.36[Luc2P/MMTV/Hygro]_pGL4.75[hRLuc/CMV]" ćelije.
[0171] Da bi se kreirala mišja transmembranska TNF-alfa GRE reporter ćelijska linija, roditeljske ćelije, K562 pGL4.36[Luc2P/MMTV/Hygro]_pGL4.75[hRLuc/CMV], su bile zasejane na šolju sa 6 bunarčića (Costar: 3516) sa 2 mL kompletnog medijuma za kultivaciju (RPMI, 10%FBS, 1% L-glutamin, 1% Na piruvat i 1% MEM NEAA) sa 500,000 ćelija po bunarčiću tokom 24 h na 37°, 5% CO2. Sledećeg dana, 3 mg mFL_TNFa DNK (Origene: MC208048), koja kodira netagovani mišji TNF, i 3 mL PLUS reagensa (Invitogen: 10964-021) su bili razređeni u 244 mL Opti-MEM (Gibco: 31985-070) i onda su inkubirani na st tokom 15 minuta. Posle inkubacije, razređeni DNK rastvor je bio prethodno inkubiran sa 1:1 Lipofektamin LTX rastvorom (Invitogen: 94756) (13.2 mL 256.8 mL Opti-MEM), a zatim je inkubiran na st 25 minuta da bi se formirali DNK-Lipofektamin LTX kompleksi. Posle inkubacije, 500 mL DNK-Lipofektamin kompleksa je bilo dodato direktno u bunarčić koji je sadržao ćelije. Roditeljske K562 pGL4.36[Luc2P/MMTV/Hygro]_pGL4.75[hRLuc/CMV] ćelije bile su transfektovane 24 h na 37°C, 5% CO2. Posle inkubacije, ćelije su bile isprane sa 3 mL PBS i selekcionisane su sa kompletnim medijumom za kultivaciju koji je sadržao 125 mg /mL higromicina B (Invitrogen: 10687-010) i 250 mg /mL G418 (Gibco: 10131-027) tokom dve nedelje. Bile su proizvedene "K562 mišje FL-TNFa GRE (pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro])" ćelije.
[0172] Da bi se kreirala humana transmembranska TNF-alfa GRE reporter ćelijska linija, roditeljske ćelije, K562 pGL4.36[Luc2P/MMTV/Hygro]_pGL4.75[hRLuc/CMV], su bile transfektovane sa plazmidom hTNF delta 1-12 C-Myc pcDNA3.1(-) plazmidnim konstruktom. Ovaj plazmid je pcDNK 3.1 (Thermofisher kat# V79020) koja kodira tace rezistentni transmembranski TNF (tj. SEQ ID NO:1 kojoj nedostaju aminokiseline 77-88). (Vidi Perez C et al. Cell 63 (2): 251-8 (1990) koji razmatra tace rezistentni transmembranski TNF). Ove ćelijske linije su onda bile korišćene u TNF-alfa reporter testovima koji su opisani u narednim primerima.
Aktivnost anti-TNF-alfa imunokonjugata u GRE transmembranskim TNF-alfa reporter testovima
[0173] K562 roditeljske GRE (pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro]) ćelije i K562 mFL-TNF-a ili hTNF delta 1-12 GRE (pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro]) ćelije su bile zasejane na tretirane bele ploče za kultivaciju tkiva sa 96 bunarčića (Costar: 3917) sa 50,000 ćelija po bunarčiću u 50 μL medijuma za testiranje (RPMI, 1% CSFBS, 1% L-glutamin, 1% Na piruvat i 1% MEAA). Ćelije su bile tretirane sa 25 μL 3X serijski razređenih konjugata mišjeg ili humanog anti-TNF-a antitela leka u medijumu za testiranje, steroidnom jedinjenju, ili samom medijumu i onda su inkubirane 48 sati na 37 °C, 5% CO2. Posle 48 sati inkubacije, ćelije su bile tretirane sa 75 μL Dual-Glo Luciferase sistemom za testiranje (Promega-E2920) 10 min, pa su analizirane u pogledu luminescencije uz korišćenje Microbeta (PerkinElmer). Podaci su bili analizirani korišćenjem četvoro-parametarskog fitovanja krive da bi se generisale EC50vrednosti. % maksimalne aktivacije je bio normalizovan na 100 nM deksametazona. Rezultati korišćenja mišje TNF-alfa ćelijske linije su prikazani dole u Tabeli 9, a rezultati korišćenja humane TNF-alfa ćelijske linije su prikazani dole u Tabeli 10. U Tabeli 9 dole, antitelo u ADC je anti-mišje TNFa antitelo 8C11. U Tabeli 10 dole, antitelo u ADC je anti-humano TNFa antitelo adalimumab. Procenat (%) monomera je bio određen pomoću SEC kao što je prethodno opisano (vidi ADC analitičke procedure).
Tabela 9: In vitro aktivnost konjugata anti-mišje TNFa antitelo lek u mišjem transmembranskom TNFa GRE reporter testu
Tabela 10: In vitro aktivnost konjugata anti-humano TNFa antitelo lek u humanom transmembranskom TNFa GRE reporter testu
Aktivnost anti-hTNF alfa imunokonjugata u lipopolisaharidima stimulisanom humanom PBMC testu oslobađanja citokina
[0174] Primarne humane mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC-ovi) su bile nabavljene od Biological Specialty Corporation (kat# 214-00-10), pa su isprane u 50 mL PBS, ponovo su suspendovane u FBS sa 5% DMSO, pa su alikvotirane i kriočuvane u tečnom azotu sve do upotrebe. PBMC su bile otopljene, pa su ponovo suspendovane u RPMI medijumu kome je bilo dodato 2% FBS, i 1% penicilinstreptomicina, i onda su zasejane u ploču za testiranje ćelija (Costar #3799). Onda su ćelije bile inkubirane sa različitim koncentracijama anti-TNF ADC na 37 °C i 5% CO2tokom 4 sata. Ćelije su onda bile stimulisane sa 100 ng/mL LPS preko noći. Sledećeg dana, ploča je bila centrifugirana pet minuta na 1000 rpm, i 100 mL medijuma supernatanta je bilo preneto direktno u dodatnu ploču sa 96 bunarčića i analizirano je u vezi koncentracija IL-6 (MSD, #K151AKB) i IL-1 beta(MSD, #K151AGB). Podaci o reakciji na dozu su bili fitovani sa sigmoidnom krivom uz korišćenje nelinearne regresije, a IC50vrednosti su bile izračunate uz pomoć GraphPad 5.0 (GraphPad Software, Inc.). Rezultati koji su prikazani u Tabeli 11 pokazuju da anti-TNF ADC ima potentnu aktivnost u inhibiranju oslobađanja prozapaljenskih citokina IL-6 i II-1beta iz aktiviranih primarnih imunih ćelija.
Tabela 11. In vitro aktivnost anti-TNF steroidnih ADC u testu stimulisanog PBMC oslobađanja citokina
Aktivnost anti- mTNF-alfa imunokonjugata u kontaktu sa modelom hipersenzitivnosti
[0175] Anti-TNFa steroidni ADC je bio ispitivan u modelu akutne kontaktne hipersenzitivnosti, pobuđivanju akutnog zapaljenja kože korišćenjem reakcije hipersenzibilnosti odloženog tipa (engl. delayed-type hypersensitivity, skr. DTH) (aktivirane T-ćelijama) primenom senzibilizujućeg sredstva (fluorescein izotiocijanat (FTTC)). Efikasnost anti-TNFa steroidnih ADC-ova je bila merena pomoću sposobnosti da smanje oticanje uha. Steroidni biomarkeri kortikosteron i prokolagenski tip 1 N-terminalni propeptid (P1NP) su bili uključeni kao očitavanja za određivanje pretpostavljenog uticaja tretmana sa anti-TNFa steroidnim ADC na hipotalamusno-hipofizno-nadbubrežnu (HPA) osovinu i resorpciju kostiju, respektivno.
Oticanje uha
[0176] Na 0. dan miševi su bili stavljeni u opštu anesteziju i abdomeni su im bili obrijani. Korišćenjem mikropipetora, miševi su bili senzibilizovani epikutanom aplikacijom 400 μL FITC rastvora (1.5% rastvora u 1:1 acetonu:DBP) na abdomen. Šest dana kasnije miševi su bili dozirani nosačem ili terapijskim sredstvom 1 sat pre izazova uha sa FITC. Za izazov uha, miševi su bili stavljeni u opštu anesteziju i onda su bili izazvani sa 20 μL FITC nanetog na desno uho. Dvadeset četiri sata posle izazova miševi su bili stavljeni u opštu anesteziju i šestarom je izmerena debljina njihovog uha. Bila je izračunata razlika između izazvanog i neizazvanog uha.
1
Sedamdeset dva sata posle izazova uha, miševima je ubrizgan ACTH sa 1 mpk IP, i terminalno su krvarili 30 min posle ACTH. Plazma je bila sakupljena i analizirani su nivoi P1NP, kortikosterona, slobodnog steroida i velikih molekula.
Kvantifikacija oslobođenog slobodnog steroida i endogenog kortikosterona
[0177] Bila je pripremljena kalibraciona kriva steroida u mišjoj plazmi sa finalnim koncentracijama od 0.03 nM do 0.1 μM sa 8 različitih nivoa koncentracije. Bila je pripremljena kalibraciona kriva kortikosterona u opsegu od 0.3 nM do 1 μM finalnih koncentracija kortikosterona u 70 mg/mL rastvora goveđeg serumskog albumina u PBS puferu. Rastvor 160 μL MeCN sa 0.1% mravlje kiseline je bio dodat u 40 μL uzoraka plazme iz studije ili kalibracionim standardima. Supernatanti su bili razređeni destilovanom vodom, pa je 30 μL uzorka finalnog rastvora bilo ubrizgano za LC/MS analizu.
[0178] Kvantifikacija oslobođenog slobodnog steroida i kortikosterona je bila izvršena na AB Sciex 5500 tripl kvadrupl masenom spektrometru povezanom sa Shimadzu AC20 HPLC sistemom međusobno povezanim sa izvorom elektrosprej jonizacije koji je radio u pozitivnom modu. Waters XBridge BEH C18, 2.1x30mm, 3.5 μm kolona je bila upotrebljena za hromatografsku separaciju. Mobilna faza A je bila 0.1% mravlje kiseline u Milli Q HPLC vodi, a mobilna faza B je bila 0.1% mravlje kiseline u MeCN. Linearni gradijent od 2% mobilne faze B do 98% mobilne faze B je bio primenjen od 0.6 do 1.2 min. Ukupno vreme trajanja analize je bilo 2.6 min sa protokom od 0.8 mL/min. Maseni spektrometar je radio u pozitivnom MRM modu sa izvorom temperature od 700 C.
Kvantifikacija P1NP u plazmi
[0179] Kvantifikacija P1NP u plazmi je bila izvedena na LCMS platformi na bazi digestije proteina tripsina. Uzorci plazme su bili delimično istaloženi, pa su potpuno redukovani dodavanjem smeše MeCN/0.1M amonijum bikarbonata/DTT.
Supernatant je bio sakupljen i onda je alkilovan dodavanjem jodosirćetne kiseline. Alkilovani proteini su bili digestirani tripsinom, pa su rezultujući triptinski peptidi bili analizirani pomoću LCMS. Kalibraciona kriva je bila generisana korišćenjem sintetičkog triptinskog peptida sipanog u konjski serum (neremeteća surogatna
2
matrica). Stabilnim izotopom obeleženi okružujući peptid (3-6 aminokiselina koje se pružaju sa obe strane krajeva triptinskog peptida) je bio upotrebljen kao interni standard koji je dodat u smešu MeCN/DTT istaloženog proteina da bi se normalizovala i efikasnost digestije i LCMS ubrizgavanje.
[0180] Columnex Chromenta BB-C18, 2.1x150 mm, 5 μm kolona je bila korišćena za hromatografsku separaciju. Mobilna faza A je bila 0.1% mravlje kiseline u Milli Q HPLC vodi, a mobilna faza B je bila 0.1% mravlje kiseline u MeCN. Linearni gradijent od 2% mobilne faze B do 65% mobilne faze B je bio primenjen od 0.6 do 3 min.
Ukupno vreme trajanja analize je bilo 8 min sa protokom od 0.45 mL/min. AB Sciex 4000Q trap maseni spektrometar je bio korišćen u pozitivnom MRM modu da bi se kvantifikovali P1NP peptidi, sa izvorom temperature od 700 C.
Rezultati
[0181] Rezultati su prikazani u Tabeli 12 u nastavku:
Tabela 12: Upoređivanje anti-mTNF alfa steroidne ADC aktivnosti na oticanje uha i steroidnih biomarkera u CHS modelu zapaljenja
Aktivnost anti- mTNF-alfa imunokonjugata u artritisu indukovanom kolagenom
[0182] Sposobnost anti-mTNFa steroidnog ADC (ADC1) da utiče na bolest je bila ispitana u modelu artritisa za artritis indukovan kolagenom (CIA).
[0183] U ovim eksperimentima, mužjaci DBA/1J miševa su dobijeni od Jackson Labs (Bar Harbor, ME). Miševi su bili korišćeni u uzrastu od 6 do 8 nedelja. Sve životinje su bile držane na konstantnoj temperaturi i vlažnosti pod ciklusom od 12 sati svetlost/tama i hranjeni su hranom za glodare (Lab Diet 5010 PharmaServ, Framingham, MA) i vodom ad libitum. AbbVie je akreditovana od strane AAALAC (Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care) i sve procedure su bile odobrene od strane Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) i nadzirane su od strane nadležnog veterinara. Bili su praćeni telesna težina i stanje, a životinje su bile eutanazirane ukoliko se pojavio gubitak težine >20%.
[0184] Mužjaci DBA/J miševa su bili imunizovani intradermalno (i.d.) na korenu repa sa 100 mL emulzije koja je sadržala 100 μg tipa II goveđeg kolagena (MD Biosciences) rastvorenog u 0.1 N sirćetne kiseline i 200 μg toplotom inaktiviranog Mycobacterium tuberculosis H37Ra (Kompletni Frojndov Adjuvans, Difco, Laurence, KS). Dvadesetprvog dana posle imunizacije sa kolagenom, miševima je bilo dato pojačanje IP sa 1 mg Zimosana A (Sigma, St. Louis, MO) u PBS. Posle pojačanja, miševi su bili proveravani 3 do 5 nedeljno u vezi postojanja artritisa. Zadnje šape su bile ispitivane u vezi postojanja oticanja korišćenjem Dyer opružnih šestara (Dyer 310-115)
[0185] Miševi su bili uključeni između 24. i 28. dana sa prvim kliničkim znacima bolesti i bili su raspodeljeni u grupe sa ekvivalentnom ozbiljnosti artritisa. Rano terapijsko lečenje je počelo u vreme uključivanja.
[0186] Životinje su bile dozirane jednom intraperitonealno (i.p.) sa anti-mTNF mAb (visoka doza) ili anti-mTNF steroidnim ADC (visoka i niska doza - mpk) u 0.9% slanog rastvora. Krv za izlaganje antitelu je bila sakupljena preko useka na repu 24 i 72 sata posle doze. Šape su bile uzete u terminalnom vremenskom trenutku za histopatologiju. Krv je bila sakupljena u terminalnom vremenskom trenutku kardijalnom punkturom radi određivanja kompletne krvne slike (Sysmex XT-2000iV). Statistička značajnost je bila određena pomoću ANOVE.
[0187] Rezultati su prikazani na Fig.3 i pokazuju da pojedinačna doza anti-TNFa steroidnog ADC može ispoljiti produženo trajanje dejstva ublažavanjem oticanja šape za ∼28 dana u poređenju sa anti-TNFa mAb ili samim nosačem.
Stabilnost ADC u plazmi
[0188] Mada je hidroliza bila upotrebljena za povećanje in vivo stabilnosti linkera na bazi maleimida, ona generalno zahteva izlaganje baznom pH, što može dovesti do modifikacija u antitelu (npr. deamidacije), povećane heterogenosti, smanjenog prinosa i sličnog. (Shen et al., Nature Biotechnology 30:184-189 (2012) (hidrolizacijom maleimida se izbegava prevremeno oslobađanje leka i sistemsko izlaganje leku); Strop et al., Chemistry & Biology 20(2):161-167 (2013) (slična
4
studija); Tumey et al., Bioconjugate Chem 25(10):1871-1880 (2014) (korišćenje susednog PEG lanca za omogućavanje hidrolize prstena pod baznim uslovima); Lyon et al., Nature Biotechnology 32:1059-1062 (2014) (procesi za olakšanje kreiranja hidrolizovanog sukcinimida); Christie et al., J Control Release 220(PtB):660-70 (28 Dec 2015) (korišćenje N-aril maleimida za olakšanje hidrolize sukcinimidnog prstena pod baznim uslovima); Dovgan et al., Scientific Reports 6:1 (2016)(korišćenje 2-(maleimidometil)-1,3-dioksana za olakšanje hidrolize prstena pod blago baznim uslovima tokom produženog vremenskog perioda); i J Pharm Sci 2013: 102 (6) 1712-1723 (asparaginska deamidacija zavisna od tipa pufera, pH i temperature). Nasuprot tome, tipični uslovi za konjugaciju uz korišćenje bromo acetamida su gotovi u toku nekoliko sati, u poređenju sa više dana za maleimide (konjugacija i sledstvena hidroliza prstena na baznom pH). Dodatno tome, 2-merkaptoacetamid koji se formira u toku reakcije cisteina sa bromo acetamidom nije podložan reverznoj Majklovoj reakciji i obezbeđuje stabilno vezivanje linkera za antitelo kao što je pokazano dole u Tabeli 13 za ADC4.
Tabela 13
ADC stabilnost u rastvoru
[0189] Da bi se odredila dugoročna stabilnost, biologik je podvrgnut ubrzanom testu stresa. Protokol za ovaj test je 100 mg/mL biologika u 15 mM histidina na 40 °C tokom 21 dana. Kada je ADC4 bio podvrgnut ovom testu procenat povećanja agregata je bio <5% u poređenju sa ADC203 iz US objavljene prijave patenta br.2018/012600, objavljene 10. maja 2018, koja predviđa povećanje agregacije od 18% (Tabela 14). Ovo pokazuje poboljšana svojstva koja na ADC4 prenosi Gly-Glu linker sa fosfatnim prolekom opterećenja. ADC203 iz US2018/0126000 je:
gde n=4 i A se odnosi na anti-humano TNFa antitelo adalimumab.
Tabela 14
[0190] Dodatna korist od fosfatnog proleka je što on omogućava korišćenje anjonsko izmenjivačke hromatografije za DAR prečišćavanje. Ovo rezultuje poboljšanom rezolucijom pika u poređenju sa hidrofobnom interaktivnom hromatografijom koja rezultuje većim prinosima DAR prečišćenog ADC.
[0191] U formulaciji pufera hidrolizovani sukcinimidni prsten ADC203 je u ravnoteži sa zatvorenim oblikom prstena. Zatvoreni oblik prstena je podložan reverznoj Majklovoj reakciji i sledstvenom gubitku linkera-leka in vivo kod makaki majmuna (Fig. 4).
[0192] Pod normalnim uslovima za čuvanje tečnosti sukcinimidno vezivanje u otvorenoj konformaciji će ponovo formirati zatvorenu konformaciju veću od 5% na 5 °C i veću od 15% na 25 °C posle 6 meseci (Tabela 15).
Tabela 15
[0193] Treba shvatiti da sekcija sa detaljnim opisom, a ne sekcije sa suštinom pronalaska i apstraktom, treba da bude korišćena za interpretaciju patentnih zahteva. Sekcije sa suštinom pronalaska i apstraktom daju jedan ili više, ali ne sve ilustrativne primere izvođenja predmetnog pronalaska kao što su ih osmislili pronalazač, odn. pronalazači i zato nisu namenjene za ograničavanje predmetnog pronalaska i priloženih patentnih zahteva ni na koji način.
[0194] Predmetni pronalazak je gore opisan uz pomoć funkcionalnih sastavnih elemenata koji ilustruju implementaciju specifikovanih funkcija i njihove odnose. Granice ovih funkcionalnih sastavnih elemenata su ovde proizvoljno definisane iz razloga pogodnosti opisa. Alternativne granice mogu biti definisane sve dok se specifikovane funkcije i njihovi odnosi mogu adekvatno izvesti.
1
�
4

Claims (6)

  1. Patentni zahtevi 1. Konjugat antitelo lek koji sadrži: (a) anti-TNFa antitelo koje sadrži teški lanac naveden kao SEQ ID NO: 3 i laki lanac naveden kao SEQ ID NO: 4; i (b) agonist glukokortikoidnog receptora koji sadrži radikal predstavljen formulom:
    pri čemu je antitelo konjugovano sa agonistom glukokortikoidnog receptora preko linkera predstavljenog formulom:
  2. 2. Konjugat antitelo lek prema zahtevu 1, u skladu sa formulom:
    pri čemu je A antitelo i n je ceo broj od 1-10.
  3. 3. Konjugat antitelo lek prema zahtevu 2, pri čemu je n jednako 4.
  4. 4. Konjugat antitelo lek prema zahtevu 2, pri čemu je n jednako 2.
  5. 5. Konjugat antitelo lek prema zahtevu 1 u skladu sa formulom:
    pri čemu je A adalimumab i n je 4.
  6. 6. Konjugat antitelo lek prema zahtevu 1 u skladu sa formulom:
    pri čemu je A adalimumab i n je 2.
RS20210761A 2017-12-01 2018-11-29 Agonist glukokortikoidnog receptora i njegovi imunokonjugati RS61994B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762593776P 2017-12-01 2017-12-01
US201762595054P 2017-12-05 2017-12-05
EP18833113.6A EP3658192B1 (en) 2017-12-01 2018-11-29 Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof
PCT/IB2018/059482 WO2019106609A1 (en) 2017-12-01 2018-11-29 Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS61994B1 true RS61994B1 (sr) 2021-07-30

Family

ID=65010803

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20210761A RS61994B1 (sr) 2017-12-01 2018-11-29 Agonist glukokortikoidnog receptora i njegovi imunokonjugati

Country Status (35)

Country Link
US (2) US10772970B2 (sr)
EP (2) EP3884962A1 (sr)
JP (2) JP6813712B2 (sr)
KR (1) KR20200095477A (sr)
CN (1) CN111417410B (sr)
AU (1) AU2018374634A1 (sr)
BR (1) BR112020010694A2 (sr)
CA (1) CA3082356A1 (sr)
CL (2) CL2020001452A1 (sr)
CO (1) CO2020006446A2 (sr)
CR (1) CR20200239A (sr)
CY (1) CY1124230T1 (sr)
DK (1) DK3658192T3 (sr)
DO (1) DOP2020000116A (sr)
EC (1) ECSP20029001A (sr)
ES (1) ES2877659T3 (sr)
HR (1) HRP20210917T1 (sr)
HU (1) HUE054428T2 (sr)
IL (1) IL274651B (sr)
LT (1) LT3658192T (sr)
MA (1) MA49796A (sr)
MX (1) MX2020005583A (sr)
PE (1) PE20201286A1 (sr)
PH (1) PH12020550779A1 (sr)
PL (1) PL3658192T3 (sr)
PT (1) PT3658192T (sr)
RS (1) RS61994B1 (sr)
RU (1) RU2020117698A (sr)
SG (1) SG11202004867WA (sr)
SI (1) SI3658192T1 (sr)
TW (1) TWI803542B (sr)
UA (1) UA126595C2 (sr)
UY (1) UY37991A (sr)
WO (1) WO2019106609A1 (sr)
ZA (1) ZA202003325B (sr)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20190074310A (ko) 2016-11-08 2019-06-27 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 스테로이드 및 이의 단백질-접합체
CA3082356A1 (en) * 2017-12-01 2019-06-06 Abbvie Inc. Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof
US20230310634A1 (en) * 2020-04-22 2023-10-05 Immunext, Inc. Anti-human vista antibodies and use thereof
CA3203533A1 (en) * 2021-01-07 2022-07-14 Jay ROTHSTEIN Novel steroid payloads, steroid linkers, adcs containing and use thereof
JP2024506012A (ja) * 2021-02-04 2024-02-08 上海森▲輝▼医▲葯▼有限公司 グルココルチコイド受容体アゴニストの薬物複合体及びその医薬的応用
AR125079A1 (es) * 2021-03-23 2023-06-07 Lilly Co Eli Agonistas de receptores de glucocorticoides sustituidos con carboxi
AR125084A1 (es) 2021-03-23 2023-06-07 Lilly Co Eli Agonistas del receptor de glucocorticoides novedosos
TWI899455B (zh) * 2021-03-23 2025-10-01 美商美國禮來大藥廠 糖皮質素受體激動劑
CN117043172A (zh) * 2021-03-23 2023-11-10 伊莱利利公司 糖皮质激素受体激动剂
CN117580849A (zh) * 2021-06-24 2024-02-20 江苏先声药业有限公司 甾体类化合物、其药物组合物及其应用
CN120463762A (zh) * 2021-08-26 2025-08-12 映恩生物科技(上海)有限公司 一种甾体化合物及其缀合物
US20250179114A1 (en) * 2021-09-14 2025-06-05 Duality Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Anti-Inflammatory Compound and Use Thereof
EP4470569A1 (en) * 2022-01-29 2024-12-04 Shanghai Shengdi Pharmaceutical Co., Ltd Drug conjugate of glucocorticoid
CN120239705A (zh) 2022-07-21 2025-07-01 萤火虫生物股份有限公司 糖皮质激素受体激动剂和其缀合物
AU2023347987A1 (en) * 2022-09-22 2025-04-10 Eli Lilly And Company Glucocorticoid receptor agonists
CN118236514B (zh) * 2022-12-24 2025-10-31 津药生物科技（天津）有限公司 抗体-糖皮质激素偶联物及其用途
TW202430226A (zh) * 2022-12-28 2024-08-01 大陸商上海盛迪醫藥有限公司 抗cd40抗體藥物偶聯物、其製備方法及其醫藥用途
JP2026501523A (ja) * 2023-01-10 2026-01-16 シチュアン ケルン－バイオテック バイオファーマシューティカル カンパニー リミテッド グルココルチコイド受容体アゴニスト及びそのコンジュゲート
JP2026502619A (ja) * 2023-01-18 2026-01-23 シャンハイ ミクウルク ファーマシューティカル シーオー．エルティーディー 腎疾患の標的療法のためのペプチド薬物コンジュゲート
CN121568722A (zh) 2023-07-28 2026-02-24 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种含有糖皮质激素的抗体药物偶联物的药物组合物

Family Cites Families (134)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3126375A (en) 1964-03-24 Chioacyl
GB933868A (en) 1958-12-08 1963-08-14 American Cyanamid Co Process for fluorinating steroids
IT1057859B (it) 1972-04-28 1982-03-30 Sigma Tao Ind Farmaceutiche Sp Perivato del triamoinolone
US4588585A (en) 1982-10-19 1986-05-13 Cetus Corporation Human recombinant cysteine depleted interferon-β muteins
US5681718A (en) 1986-03-14 1997-10-28 Celltech Limited Methods for enhanced production of tissue plasminogen activator in cell culture using alkanoic acids or salts thereof
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
DE3889853D1 (de) 1987-11-05 1994-07-07 Hybritech Inc Polysaccharidmodifizierte Immunglobuline mit reduziertem immunogenem Potential oder verbesserter Pharmakokinetik.
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5010176A (en) 1988-11-10 1991-04-23 Eli Lilly And Company Antibody-drug conjugates
GB9109645D0 (en) 1991-05-03 1991-06-26 Celltech Ltd Recombinant antibodies
US6284471B1 (en) 1991-03-18 2001-09-04 New York University Medical Center Anti-TNFa antibodies and assays employing anti-TNFa antibodies
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
CN1062869C (zh) 1993-04-02 2001-03-07 比克·古尔顿·劳姆贝尔格化学公司 新型脱氢皮质醇衍生物
WO1994025478A1 (en) 1993-04-29 1994-11-10 Instytut Farmaceutyczny 16α,17α-ACETAL GLUCOCORTICOSTEROIDAL DERIVATIVES
WO1995024416A1 (de) 1994-03-09 1995-09-14 Byk Gulden Lomberg Chemische Fabrik Gmbh Neue silylverbindungen und ihre verwendung
JP2749778B2 (ja) 1994-09-05 1998-05-13 日清食品株式会社 トリアムシノロン誘導体
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
US5792758A (en) 1995-12-08 1998-08-11 G. D. Searle & Co. Steroid nitrite ester derivatives useful as anti-inflammatory drugs
DE122004000004I1 (de) 1996-02-09 2004-08-12 Abott Biotechnology Ltd Humane Antikörper welche an Humanen TNFalpha binden.
US5824669A (en) 1996-03-22 1998-10-20 Nitromed, Inc. Nitrosated and nitrosylated compounds and compositions and their use for treating respiratory disorders
DE19635498A1 (de) 1996-09-03 1998-03-26 Byk Gulden Lomberg Chem Fab Verfahren zur Epimerenanreicherung
WO2000049993A2 (en) 1999-02-24 2000-08-31 Nitromed, Inc. Nitrosated and nitrosylated steroids for the treatment of cardiovascular diseases and disorders
US8383081B2 (en) 1999-05-10 2013-02-26 Immunomedics, Inc. Anti-CD74 immunoconjugates and methods of use
GB0013810D0 (en) 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
DE10055820C1 (de) 2000-11-10 2002-07-25 Byk Gulden Lomberg Chem Fab Verfahren zur Herstellung eines Glucocorticoids
EA006231B1 (ru) 2000-11-10 2005-10-27 Алтана Фарма Аг Способ получения 16,17-[(циклогексилметилен)бис(окси)]-11,21-дигидроксипрегна-1,4-диен-3,20-диона или его 21-изобутирата транскетализацией
CA2385745C (en) 2001-06-08 2015-02-17 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
US7595378B2 (en) 2001-06-13 2009-09-29 Genmab A/S Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor (EGFR)
US20060073141A1 (en) 2001-06-28 2006-04-06 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
IL166244A0 (en) 2001-07-12 2006-01-15 Jefferson Foote Super humanized antibodies
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
EP2305312B1 (en) 2001-10-10 2015-03-04 ratiopharm GmbH Remodelling and glycoconjugation of follicle-stimulating hormone (FSH)
MXPA04004417A (es) 2001-11-12 2004-08-11 Merck Patent Gmbh Anticuerpo anti-tnf alfa modificado.
GB0216648D0 (en) 2002-07-18 2002-08-28 Lonza Biologics Plc Method of expressing recombinant protein in CHO cells
US20040157810A1 (en) 2002-08-23 2004-08-12 Teicher Martin H. Corticosteroid conjugates and uses thereof
MY150740A (en) 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
US8232304B2 (en) 2002-10-24 2012-07-31 G & R Pharmaceuticals, Llc Antifungal formulations
AR042461A1 (es) 2002-12-13 2005-06-22 Neurogen Corp Analogos 2-sustituidos de quinazolin-4-il - amina. composiciones farmaceuticas
JP2006516636A (ja) 2003-01-30 2006-07-06 メディミューン，インコーポレーテッド 抗インテグリンαｖβ３抗体製剤及びその用途
MY143936A (en) 2003-03-27 2011-07-29 Nycomed Gmbh Process for preparing crystalline ciclesonide with defined particle size
WO2005044759A2 (en) 2003-08-14 2005-05-19 Sun Pharmaceutical Industries Limited Acetalization process for preparation of steroid compounds
PL1670482T5 (pl) 2003-09-16 2022-10-03 Covis Pharma Gmbh Zastosowanie cyklezonidu w leczeniu chorób układu oddechowego
WO2005028495A1 (en) 2003-09-24 2005-03-31 Glaxo Group Limited Anti-inflammatory glucocorticoids
CA2542834C (en) 2003-10-21 2012-04-24 Igf Oncology, Llc Conjugates or co-administration of igf-1 receptor ligands with anti-cancer chemotherapeutic agents
WO2005047284A1 (en) 2003-11-13 2005-05-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Hydroxyalkyl substituted pyrido-7-pyrimidin-7-ones
ATE360630T1 (de) 2003-12-19 2007-05-15 Bristol Myers Squibb Co Azabicyclische heterocyclen als modulatoren des cannabinoidrezeptors
WO2005063777A1 (en) 2003-12-23 2005-07-14 Corus Pharma Benzylphosphate and substituted benzylphosphate prodrugs for the treatment of pulmonary inflammation
CA2552641A1 (en) 2003-12-31 2005-07-21 Cydex, Inc. Inhalant formulation containing sulfoalkyl ether cyclodextrin and corticosteroid prepared from a unit dose suspension
GB0402797D0 (en) 2004-02-09 2004-03-10 Novartis Ag Organic compounds
JP4942643B2 (ja) 2004-03-02 2012-05-30 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 部分的に付加された抗体およびそれらの結合体化方法
WO2005075514A2 (en) 2004-03-10 2005-08-18 Lonza Ltd. Method for producing antibodies
CN103172731A (zh) 2004-07-15 2013-06-26 赞科股份有限公司 优化的Fc变体
EP1685161A1 (en) 2004-08-30 2006-08-02 Lonza Biologics plc Affinity- plus ion exchange-chromatography for purifying antibodies
HUE058817T2 (hu) 2004-09-03 2022-09-28 Genentech Inc Humanizált anti-béta7 antagonisták és alkalmazásaik
US20080027034A1 (en) 2004-09-10 2008-01-31 Shah Tushar P Ciclesonide and Syk Inhibitor Combination and Method of Use Thereof
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
WO2006065533A2 (en) 2004-11-29 2006-06-22 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibodies and immunoconjugates
WO2006097458A1 (en) 2005-03-15 2006-09-21 Nycomed Gmbh Novel combination
WO2006110593A2 (en) 2005-04-07 2006-10-19 Macrogenics, Inc. Biological targets for the diagnosis, treatment and prevention of cancer
EP1712220A1 (en) 2005-04-15 2006-10-18 PARI GmbH Spezialisten für effektive Inhalation Pharmaceutical aerosol composition
WO2006135479A2 (en) 2005-05-10 2006-12-21 Angiotech International Ag Anti-scarring agents, therapeutic compositions, and use thereof
AU2006259604A1 (en) 2005-06-14 2006-12-28 Gilead Sciences, Inc. Substituted phenylphosphates as mutual prodrugs of steroids and beta -agonists for the treatment of pulmonary inflammation and bronchoconstriction
BRPI0612529A2 (pt) 2005-06-20 2010-11-23 Psma Dev Company Llc conjugados de anticorpo-medicamento de psma
WO2007054974A2 (en) 2005-09-28 2007-05-18 Arch Pharmalab Limited A green chemistry process for the preparation of pregnadiene esters
JP2009533347A (ja) 2006-04-07 2009-09-17 ネクター セラピューティックス エイエル，コーポレイション 抗ＴＮＦα抗体の複合体
WO2008015696A2 (en) 2006-05-23 2008-02-07 Cadila Healthcare Limited Process for preparing ciclesonide
CL2007001536A1 (es) 2006-05-30 2008-01-25 Genentech Inc Anticuerpos anti-cd22; polinucleotidos que los codifica; vector y celula huesped que los comprende; metodo de fabricacion; metodo de deteccion del anticuerpo en una muestra biologica; inmunoconjugado que comprende al anticuerpo; composicion que lo comprende y su uso para tratar trastornos proliferativos de celulas b.
WO2009003199A1 (en) 2007-06-28 2008-12-31 Cydex Pharmaceuticals, Inc. Nasal and ophthalmic delivery of aqueous corticosteroid solutions
CA2663737A1 (en) 2006-09-19 2008-03-27 Cipla Limited Processes for the preparation of ciclesonide and its crystal form
WO2008052350A1 (en) 2006-11-03 2008-05-08 Qlt Inc. Photodynamic therapy for the treatment of hidradenitis suppurativa
NO331891B1 (no) 2007-03-20 2012-04-30 Clavis Pharma Asa Kjemiske forbindelser, et farmasoytisk preparat inneholdende slike forbindelser, samt anvendelse derav for behandling av kreft, inflammasjon og KOLS
UA100120C2 (en) 2007-04-03 2012-11-26 Анадис Фармасьютикалз, Инк. 5,6-dihydro-1h-pyridin-2-one compounds
CN101878221B (zh) 2007-11-30 2014-04-02 辉瑞有限公司 糖皮质激素受体激动剂
TW200944540A (en) 2007-12-21 2009-11-01 Schering Corp C20-C21 substituted glucocorticoid receptor agonists
EP2235035A2 (en) 2007-12-21 2010-10-06 Schering Corporation C-21 thioethers as glucocorticoid receptor agonists
WO2009095478A1 (en) 2008-01-31 2009-08-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies against human cd39 and use thereof for inhibiting t regulatory cells activity
US20110294766A1 (en) 2008-02-27 2011-12-01 Astrazeneca Ab 16 Alpha, 17 Alpha-Acetal Glucocorticosteroidal Derivatives and their Use
EP2262823B1 (en) 2008-03-13 2013-01-23 Farmabios S.p.A. Process for the preparation of pregnane derivatives
US20090318396A1 (en) 2008-06-10 2009-12-24 Gilead Sciences, Inc. Corticosteroid linked beta-agonist compounds for use in therapy
KR20110028450A (ko) 2008-06-16 2011-03-18 이뮤노젠 아이엔씨 새로운 상승 효과
US8362050B2 (en) 2008-06-24 2013-01-29 Irm Llc Compounds and methods for modulating G protein-coupled receptors
WO2010054158A2 (en) 2008-11-07 2010-05-14 Auspex Pharmaceuticals, Inc. Steroid modulators of glucocorticoid receptor
JP2012510821A (ja) 2008-12-04 2012-05-17 アボット・ラボラトリーズ 二重可変ドメイン免疫グロブリンおよびその使用
SG172254A1 (en) 2008-12-19 2011-07-28 Macrogenics Inc Covalent diabodies and uses thereof
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
EP2407476B1 (en) 2009-03-09 2014-05-07 Mikasa Seiyaku Co,. Ltd. Steroid compound
WO2010126953A1 (en) 2009-04-29 2010-11-04 Gilead Sciences, Inc. Corticosteroid linked beta-agonist compounds for use in therapy
WO2010132743A1 (en) 2009-05-15 2010-11-18 Gilead Sciences, Inc. Corticosteroid beta-agonist compounds for use in therapy
SG175738A1 (en) 2009-05-29 2011-12-29 Pfizer Ltd Novel glucocorticoid receptor agonists
GB0917044D0 (en) 2009-09-29 2009-11-18 Cytoguide As Agents, uses and methods
MX2012006406A (es) 2009-12-04 2012-07-25 Genentech Inc Anticuerpos multiespecificos, analogos de anticuerpo, composiciones y metodos.
CA2782398C (en) 2009-12-09 2017-09-26 Immunomedics, Inc. Delivery system for cytotoxic drugs by bispecific antibody pretargeting
WO2011081937A1 (en) 2009-12-15 2011-07-07 Gilead Sciences, Inc. Corticosteroid-beta-agonist-muscarinic antagonist compounds for use in therapy
CN102167741B (zh) 2010-02-25 2014-05-14 上海百迈博制药有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体、其制备方法及用途
CN102958537B (zh) 2010-04-07 2015-09-16 Abbvie公司 TNF-α结合蛋白
US9637557B2 (en) 2010-04-23 2017-05-02 Genentech, Inc. Production of heteromultimeric proteins
CA2799202C (en) 2010-05-18 2016-07-05 Cerulean Pharma Inc. Compositions and methods for treatment of autoimmune and other diseases
HUE039740T2 (hu) 2010-06-03 2019-01-28 Abbvie Biotechnology Ltd Alkalmazások és készítmények hidradenitis suppurativa (HS) kezelésére
JP2013539353A (ja) 2010-06-24 2013-10-24 アボット・ラボラトリーズ 二重可変ドメイン免疫グロブリンおよびその使用
EP2618818A4 (en) 2010-09-22 2014-10-29 Map Pharmaceuticals Inc CORTICOSTEROID PARTICLES AND METHOD FOR PRODUCING THE SAME
AR084210A1 (es) 2010-12-08 2013-05-02 Abbott Lab PROTEINAS DE UNION AL TNF-a
WO2012082947A1 (en) 2010-12-16 2012-06-21 Irm Llc Compounds and compositions as tgr5 agonists
WO2012089247A1 (en) 2010-12-29 2012-07-05 Nokia Siemens Networks Oy A method and apparatus for transmitting an identity
CN106039306A (zh) 2011-03-30 2016-10-26 埃博灵克斯股份有限公司 使用针对TNFα的单结构域抗体治疗免疫病症的方法
HK1200464A1 (en) 2011-10-24 2015-08-07 Abbvie Inc. Immunobinders directed against tnf
MX2014004980A (es) 2011-10-24 2014-09-11 Abbvie Inc Inmunoaglutinantes biespecificos dirigidos contra tnf e il-17.
US20130115269A1 (en) 2011-11-04 2013-05-09 Henry John Smith Anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-a) antibody used as a targeting agent to treat arthritis and other diseases
US20140359902A1 (en) 2011-12-16 2014-12-04 Synthon Biopharmaceuticals B.V. EXPRESSION OF SECRETORY IgA ANTIBODIES IN DUCKWEED
US9109005B2 (en) 2012-02-23 2015-08-18 Boehringer Ingelheim International Gmbh Method for manufacturing of ciclesonide
EP2641900A1 (en) 2012-03-20 2013-09-25 Almirall, S.A. Novel polymorphic Crystal forms of 5-(2-{[6-(2,2-difluoro-2-phenylethoxy) hexyl]amino}-1-(R)-hydroxyethyl)-8-hydroxyquinolin-2(1h)-one, heminapadisylate as agonist of the ß2 adrenergic receptor.
EP2647627A1 (en) 2012-04-02 2013-10-09 Almirall, S.A. Salts of 5-[(1r)-2-({2-[4-(2,2-difluoro-2-phenylethoxy)phenyl] ethyl}amino)-1-hydroxyethyl]-8-hydroxyquinolin-2(1h)-one.
CN103421075B (zh) 2012-05-16 2017-07-28 上海特化医药科技有限公司 孕烷衍生物16,17‑缩醛(酮)的制备方法
US20150158943A1 (en) 2012-06-01 2015-06-11 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods related to adalimumab
US10066019B2 (en) 2012-10-12 2018-09-04 Agency For Science, Technology And Research Optimised heavy chain and light chain signal peptides for the production of recombinant antibody therapeutics
CA2891280C (en) 2012-11-24 2018-03-20 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to cell binding molecules
ES2819573T3 (es) 2012-12-13 2021-04-16 Immunomedics Inc Método para producir inmunoconjugados de anticuerpo-SN-38 con un enlazador CL2A
EP2934544B1 (en) 2012-12-21 2018-11-07 Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH Pharmaceutical formulation comprising ciclesonide
JP2016516041A (ja) 2013-03-15 2016-06-02 アッヴィ・インコーポレイテッド 改善されたｔｎｆ結合タンパク質
EP3049443A4 (en) 2013-09-27 2017-04-05 Immunomedics, Inc. Anti-trop-2 antibody-drug conjugates and uses thereof
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
CN106414465B (zh) 2014-02-28 2021-11-16 杭州多禧生物科技有限公司 带电荷链接体及其在共轭反应上的应用
WO2015153401A1 (en) * 2014-04-04 2015-10-08 Merck Sharp & Dohme Corp Phosphate based linkers for intracellular delivery of drug conjugates
CA2948013A1 (en) 2014-06-30 2016-01-07 Immunomedics, Inc. Antibodies reactive with an epitope located in the n-terminal region of muc5ac comprising cysteine-rich subdomain 2 (cys2)
EP3193829B1 (en) 2014-09-19 2021-12-08 Oxular Limited Ophthalmic drug compositions
EP3250211B1 (en) 2015-01-30 2021-12-22 Coral Drugs Pvt. Ltd. Novel process for preparation of glucocorticoid steroids
JP2016190798A (ja) 2015-03-31 2016-11-10 三笠製薬株式会社 アレルギー性鼻炎治療用局所点鼻薬
WO2015151078A2 (en) 2015-06-15 2015-10-08 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd Hydrophilic linkers for conjugation
WO2015151079A2 (en) 2015-06-20 2015-10-08 Hangzhou Dac Biotech Co, Ltd Auristatin analogues and their conjugates with cell-binding molecules
CN108289964B (zh) 2015-08-10 2022-08-12 杭州多禧生物科技有限公司 新型连接体及其用于药物和生物分子的特异性偶联
JP2017066075A (ja) 2015-09-30 2017-04-06 三笠製薬株式会社 リウマチ治療薬
SG10202001787QA (en) 2016-06-02 2020-04-29 Abbvie Inc Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof
JP6767796B2 (ja) 2016-07-08 2020-10-14 株式会社日立情報通信エンジニアリング 通話管理システム及びその音声認識制御方法
KR20190074310A (ko) 2016-11-08 2019-06-27 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 스테로이드 및 이의 단백질-접합체
CA3082356A1 (en) * 2017-12-01 2019-06-06 Abbvie Inc. Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof

Also Published As

Publication number Publication date
SG11202004867WA (en) 2020-06-29
EP3658192A1 (en) 2020-06-03
RU2020117698A (ru) 2022-01-04
HUE054428T2 (hu) 2021-09-28
JP2021501124A (ja) 2021-01-14
CA3082356A1 (en) 2019-06-06
PT3658192T (pt) 2021-06-25
US20210015938A1 (en) 2021-01-21
CO2020006446A2 (es) 2020-06-09
DOP2020000116A (es) 2020-08-31
CR20200239A (es) 2020-09-21
CY1124230T1 (el) 2022-05-27
EP3658192B1 (en) 2021-04-28
PL3658192T3 (pl) 2021-10-18
MX2020005583A (es) 2020-11-25
ECSP20029001A (es) 2020-06-30
UA126595C2 (uk) 2022-11-02
CL2020001452A1 (es) 2020-09-11
PH12020550779A1 (en) 2021-04-19
SI3658192T1 (sl) 2021-08-31
JP6813712B2 (ja) 2021-01-13
PE20201286A1 (es) 2020-11-24
MA49796A (fr) 2020-06-03
LT3658192T (lt) 2021-07-12
TWI803542B (zh) 2023-06-01
EP3884962A1 (en) 2021-09-29
IL274651A (en) 2020-06-30
CL2021001075A1 (es) 2021-10-15
WO2019106609A1 (en) 2019-06-06
AU2018374634A1 (en) 2020-05-28
UY37991A (es) 2019-06-28
US10772970B2 (en) 2020-09-15
BR112020010694A2 (pt) 2020-11-10
HRP20210917T1 (hr) 2021-09-03
KR20200095477A (ko) 2020-08-10
US20190167804A1 (en) 2019-06-06
CN111417410A (zh) 2020-07-14
DK3658192T3 (da) 2021-06-21
RU2020117698A3 (sr) 2022-01-04
IL274651B (en) 2021-04-29
TW201924723A (zh) 2019-07-01
JP2021054845A (ja) 2021-04-08
ZA202003325B (en) 2021-07-28
ES2877659T3 (es) 2021-11-17
CN111417410B (zh) 2023-06-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3658192B1 (en) Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof
JP7330101B2 (ja) ステロイド及びそのタンパク質コンジュゲート
AU2018270784B2 (en) Cyclodextrin protein drug conjugates
KR20200095493A (ko) 항-cd40 항체 약물 공액체
AU2018269568B2 (en) Bis-octahydrophenanthrene carboxamides and protein conjugates thereof
TW202015739A (zh) 剪接調節抗體-藥物結合物及其使用方法
KR20220156533A (ko) IL-7Rα 결합 화합물
RS62040B1 (sr) Agonist receptora glukokortikoida i njegovi imunokonjugati
WO2023040793A1 (zh) 一种抗炎症的化合物及其用途
HK40031135A (en) Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof
HK40031135B (en) Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof