RS62075B1 - Poboljšani postupak za acilaciju majtanzinola - Google Patents

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Predmetni pronalazak predstavlja poboljšani postupak za pripremu intermedijera u sintezi majtanzinoida i njihovih konjugata sa antitelima.

OSNOVA PRONALASKA

[0002] Majtanzinoidi su visoko citotoksična jedinjenja, uključujući majtanzinol i C-3 estre majtanzinola (SAD pat. br.4,151,042), kao što je prikazano ispod:

[0003] Prirodni i sintetski C-3 estri majtanzinola mogu da se svrstaju u dve grupe: (a) majtanzin (2) i njegovi analozi (npr., DM1 i DM4), koji su C-3 estri sa N-metil-L-alaninom ili sa derivatima N-metil-L-alanina (SAD pat. br. 4,137,230; 4,260,608; 5,208,020; i Chem. Pharm. Bull. 12:3441 (1984)); (b) ansamitocini, koji su C-3 estri sa jednostavnim karboksilnim kiselinama (SAD pat. br. 4,248,870; 4,265,814; 4,308,268; 4,308,269; 4,309,428; 4,317,821; 4,322,348; i 4,331,598).

[0004] Majtanzin (2), njegovi analozi i sve vrste ansamitocina su C3 estri majtanzinola koji mogu da se pripreme esterifikacijom majtanzinola (1). SAD patenti br. 7,301,019 i 7,598,375 opisuju postupke acilacije majtanzinola (1), sa N-karboksianhidridom aminokiseline (NCA, 5), u prisustvu baze da bi se obrazovao aminokiselinski estar majtanzinola (May-AA, 6) kao što je prikazano ispod:

[0005] Aminokiselinski estri majtanzinola su dragoceni intermedijeri koji mogu da budu kuplovani sa karboksilnim kiselinama za dobijanje majtanzinoida. Na primer, reakcija majtanzinola sa (4S)-3,4-dimetil-2, 5-oksazolidindionom (5a) daje N2'-deacetil-majtanzin (6a), koji zauzvrat može da bude kuplovan sa 3-(metilditio)propionskom kiselinom (7), upotrebom N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilkarbodiimid hidrohlorida (EDAC) da bi se obrazovao DM1-SMe (8) kao što je prikazano ispod:

[0006] Značajan nedostatak reakcije acilacije u kojoj se formiraju aminokiselinski estri majtanzinola je taj što se takođe formira sporedni proizvod koji sadrži dodatni fragment N-metil-alanila u C3 bočnom lancu, označen kao „ekstra-NMA“ (9). Kada se N2'-deacetilmajtanzin aciluje, ekstra NMA (9) se takođe aciluje tako da obrazuje ekstra NMA-DM1-SMe (9a). Strukture ekstra-NMA (9) i ekstra-NMA-DM1-SMe (9a) su prikazane ispod:

[0007] DM1 (3) može da se pripremi iz DM1-SMe (8) redukcijom, koja takođe pretvara sav ekstra-NMA-DM1-SMe (9a) u ekstra-NMA-DM1 (10) kao što je prikazano ispod:

[0008] Ekstra-NMA-DM1 (10) je teško ukloniti iz DM1 (3) jer oba jedinjenja imaju sličnu polarnost i daju pikove koji se preklapaju u zapisu HPLC prečišćenog DM1 (3). DM1 (3) i DM4 (4) se koriste za pripremu konjugata sa antitelima, od kojih je nekoliko trenutno podvrgnuto kliničkim ispitivanjima.

[0009] Prema tome, postoji potreba za poboljšanjem prinosa i pouzdanosti postupaka za pripremu takvih majtanzinoida i za smanjenjem sporednih proizvoda koji se obrazuju tokom reakcija koje se koriste u njihovoj pripremi.

KRATAK OPIS PRONALASKA

[0010] Sada je pronađeno da dodavanje sredstva za sušenje u reakciju između majtanzinola i N-karboksianhidrida aminokiseline suštinski povećava prinos aminokiselinskog estra majtanzinola, kao što je prikazano u primerima 1-4. Takođe je nađeno da dodavanje koraka pred-gašenja reakcije primenom nukleofila nakon reakcije majtanzinola i N-karboksianhidrida aminokiseline, suštinski redukuje formiranje neželjenih sporednih proizvoda, kao što je ekstra-NMA, kao što je pokazano u primerima 6-8. Na osnovu ovih otkrića, u ovom tekstu opisani su poboljšani postupci za pripremu aminokiselinskog estra majtanzinola.

[0011] Pronalazak je usmeren na postupak za pripremu aminokiselinskog estra majtanzinola predstavljenog Formulom (Ia):

gde je R1metil; i R2je metil.

[0012] Postupak obuhvata:

a) reakciju majtanzinola sa N-karboksianhidridom u reakcionoj smeši koja dodatno sadrži bazu i sredstvo za sušenje. N-karboksianhidrid je predstavljen sledećom formulom:

.

Sve varijable u Formuli (IIa) su kao što je definisano u Formuli (Ia).

Postupak dodatno obuhvata:

b) reakciju neizreagovanog N-karboksianhidrida iz koraka a) sa nukleofilnim reagensom, pri čemu je nukelofilni reagens voda.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0013]

Slike 1-2 su šematski prikaz acilacije N2'-deacetil-majtanzina karboksilnom kiselinom i sredstvom za kondenzovanje.

Slike 3-4 su šematski prikaz acilacije N2'-deacetil-majtanzina aktiviranom karboksilnom kiselinom.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0014] Predmetni pronalazak je usmeren na postupke za pripremu aminokiselinskog estra predstavljenog Formulom (Ia) iz majtanzinola i N-karboksianhidrida predstavljenog Formulom (IIa). Aminokiselinski estar može dodatno da se esterifikuje za pripremu majtanzinoida kao što su DM1 i DM4 i zatim dalje preradi u konjugate antitela i majtanzinoida. Aminokiselinski estar je predstavljen formulom (Ia) i N-karboksianhidrid je predstavljen Formulom (IIa).

[0015] I R1i R2su metili.

[0016] Predmetni pronalazak obuhvata reakciju majtanzinola sa N-karboksianhidridom predstavljenim Formulom (IIa) u reakcionoj smeši koja dodatno sadrži bazu i sredstvo za sušenje.

[0017] U poželjnom primeru izvođenja, reakciona smeša dodatno sadrži Luisovu kiselinu. Poželjne Luisove kiseline sadrže katjon metala.

[0018] U još jednom poželjnom primeru izvođenja, majtanzinol i N-karboksianhidrid prvo reaguju, a zatim se reakciona smeša dovodi u kontakt sa vodenim rastvorom koji sadrži bikarbonat ili karbonat, ili se reakciona smeša dovodi u kontakt sa apsorberom metala. Mogu da se koriste apsorberi metala poznati u stanju tehnike (videti, na primer, poglavlje 9 u "The Power of Functional Resin in Organic Synthesis" autora Aubrey Mendoca, Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, 2008). Primeri apsorbera metala uključuju, ali nisu ograničeni na polimerne i apsorbere metala na bazi silicijum dioksida (npr., QuadraPure™ i QuadraSil™ proizvođača Sigma-Aldrich, SiliaMetS® proizvođača SiliCycle, Smopex® proizvođača Johnson Matthey i apsorbere metala Biotage), apsorbere na bazi ugljenika (npr., QuadraPure™ C proizvođača Sigma-Aldrich).

[0019] U još jednom poželjnom primeru izvođenja, majtanzinol i N-karboksianhidrid prvo reaguju, a zatim se katjon metala iz Luisove kiseline uklanja iz reakcione smeše. Na primer, katjon metala iz Luisove kiseline uklanja se iz reakcione smeše dovođenjem u kontakt reakcione smeše sa vodenim rastvorom koji sadrži bikarbonat ili karbonat ili dovođenjem u kontakt reakcione smeše sa apsorberom metala.

[0020] Postupak prema pronalasku obuhvata: reakciju majtanzinola sa N-karboksianhidridom predstavljenim formulom (IIa) u reakcionoj smeši koja dodatno sadrži bazu i sredstvo za sušenje; b) reakciju neizreagovanog N-karboksianhidrida iz koraka a) sa nukleofilnim reagensom, pri čemu je nukleofilni reagens voda.

[0021] U jednom poželjnom primeru izvođenja, reakciona smeša iz koraka a) dodatno sadrži Luisovu kiselinu. Poželjne Luisove kiseline sadrže katjon metala.

[0022] U još jednom poželjnom primeru izvođenja, reakciona smeša posle koraka b) dovodi se u kontakt sa vodenim rastvorom koji sadrži bikarbonat ili karbonat ili sa apsorberom metala.

[0023] U još jednom poželjnom primeru izvođenja, katjon metala iz Luisove kiseline uklanja se iz reakcione smeše posle izvođenja koraka b), tj., posle reakcije nukleofila sa neizreagovanim N-karboksianhidridom. Na primer, katjon metala iz Luisove kiseline uklanja se iz reakcione smeše dovođenjem u kontakt reakcione smeše sa vodenim rastvorom koji sadrži bikarbonat ili karbonat ili dovođenjem u kontakt reakcione smeše sa apsorberom metala.

[0024] Termin „baza“ se odnosi na supstancu koja može da primi vodonične jone (protone) ili da otpusti par valentnih elektrona. Baze date kao primer su ne-nukleofilne i nereaktivne prema N-karboksianhidridu predstavljenom formulom (II). Primeri pogodnih baza uključuju trialkilamin (npr., diizopropiletilamin, trietilamin, i 1,8-diazabicikloundec-7-en), alkoksid metala (npr., natrijum terc-butoksid i kalijum terc-butoksid), alkil metal (npr., terc-butillitijum, metil litijum, n-butil litijum, terc-butil litijum, litijum di-izopropilamid, pentil natrijum i 2-fenil izopropil-kalijum), aril metal (npr., fenil litijum), hidrid metala (npr., natrijum hidrid), amid metala (npr., natrijum amid, kalijum amid, litijum diizopropilamid i litijum tetrametilpiperidid), i amid na bazi silikona (npr., natrijum bis(trimetilsilil)amid i kalijum bis(trimetilsilil)amid). Poželjno, baza je trialkilamin. Poželjnije, baza je diizopropiletilamin.

[0025] Termin „sredstvo za sušenje“ odnosi se na sredstvo koje može da ukloni vodu iz rastvora. Primeri pogodnog sredstva za sušenje uključuju, ali nisu ograničeni na molekulska sita, natrijum sulfat, kalcijum sulfat, kalcijum hlorid i magnezijum sulfat. Fizički oblici sredstava za sušenje uključuju, ali nisu ograničeni na, granulirane perle ili prahove. Poželjno, sredstvo za sušenje je molekulsko sito. Alternativno, sredstvo za sušenje je natrijum sulfat.

[0026] Termin „Luisova kiselina“ odnosi se na kiselu supstancu koja može da koristi elektronski par iz drugog molekula za kompletiranje stabilne grupe jednog od svojih atoma. Tipične Luisove kiseline za upotrebu u opisanim postupcima uključuju cink triflat, cink hlorid, magnezijum bromid, magnezijum triflat, bakar triflat, bakar (II) bromid, bakar (II) hlorid i magnezijum hlorid. Poželjno, Luisova kiselina je cink triflat.

[0027] Termin „nukleofilni reagens“ se odnosi na reaktant koji reaguje sa elektropozitivnim centrima u N-karboksianhidridu predstavljenom Formulom (IIa) da bi razložio N-karboksianhidrid. Primeri nukleofilnih reagenasa uključuju vodu, alkohol (metanol, etanol, n-propanol, izopropanol ili terc-butanol) i primarni ili sekundarni amin (npr. metilamin, etilamin, dimetilamin, dietilamin, itd.). Nukleofilni reagens postupka prema pronalasku je voda.

[0028] Primeri reakcionih uslova za pripremu aminokiselinskih estara majtanzinola predstavljenih formulom (Ia) dati su ispod u tekstu. Specifični uslovi su dati u odeljku sa primerima.

[0029] Iako mogu da se koriste ekvimolarne količine majtanzinola u odnosu na N-karboksianhidrid, češće se N-karboksianhidrid koristi u višku. Primeri molarnih odnosa majtanzinola prema N-karboksianhidridu nalaze se u opsegu od 1:1 do 1:10, češće 1:2 do 1:7 ili 1:1 do 1:4. U poželjnom primeru izvođenja, molarni odnos majtanzinola prema N-karboksianhidridu je oko 1:5.

[0030] Luisova kiselina se izborno koristi u prikazanim postupcia.Kada je prisutna, tipično se koristi u višku u odnosu na majtanzinol, na primer, do 20 puta u višku. Češće, molarni odnos majtanzinola i Luisove kiseline nalazi se u opsegu od 1:5 do 1:8, poželjnije oko 1:7. Manje količine Luisove kiseline takođe mogu da se koriste.

[0031] Dovoljne količine sredstava za sušenje se koriste za uklanjanje rastvorene vode iz reakcionog rastvarača. Količina sredstva za sušenje nije kritična, pod uslovom da reakcioni rastvor postaje suštinski anhidrovan. Sredstvo za sušenje može da se koristi direktno u reakcionom sudu ili da bude sadržano u posudi pomoću polupropusne barijere, kao što je posuda od sinterovanog stakla.

[0032] Vreme potrebno za reakciju stručnjak u datoj oblasti može lako da prati upotrebom tehnika koje uključuju, ali nisu ograničene na tečnu hromatografiju na visokom pritisku i tankoslojnu hromatografiju. Tipična reakcija je završena nakon mešanja 24 časa, ali može da se izvodi sporije ili brže u zavisnosti od različitih faktora, kao što su reakciona temperatura i koncentracije reaktanata.

[0033] Reakcija može da se odvija između -20 °C i 80 °C, poželjno između -10 °C i 60 °C, poželjnije između -10 °C do 40 °C, i najpoželjnije između 0 °C i 35 °C.

[0034] Pogodne rastvarače može lako da odredi stručnjak u odgovarajućoj oblasti, i oni uključuju, ali nisu ograničeni na, polarne aprotične rastvarače kao što su anhidrovani dimetil formamid, dimetil sulfoksid (DMSO) ili dimetilacetamid (DMA), heksani, etri (kao što je tetrahidrofuran, dietil etar, dimetoksietan, dioksan), dihlorometan, ili njihove smeše.

[0035] Ukoliko je Luisova baza prisutna u reakcionoj smeši, reakciona smeša posle reakcije majtanzinola i N-karboksianhidrida poželjno se dovodi u kontakt sa vodenim rastvorom koji sadrži bikarbonat ili karbonat ili sa apsorberom metala. Poželjno, reakciona smeša reaguje sa nukleofilnim reagensom da bi se razložio višak N-karboksianhidrida pre dovođenja u kontakt reakcione smeše sa vodenim rastvorom koji sadrži bikarbonat ili karbonat ili sa apsorberom metala.

[0036] Ukoliko je Luisova kiselina koja sadrži katjon metala prisutna u reakcionoj smeši, katjon metala se poželjno uklanja iz reakcione smeše kao deo obrade reakcione smeše. Uklanjanje katjona metala može da se ostvari dovođenjem u kontakt reakcione smeše sa vodenim rastvorom koji sadrži bikarbonat ili karbonat ili sa apsorberom metala. Poželjno, N-karboksianhidrid reaguje sa nukleofilnim reagensom pre uklanjanja katjona metala.

[0037] Količinu nukleofila u koraku b) može lako da odredi stručnjak u datoj oblasti. Poželjno, koristi se dovoljna količina nukleofila da razgradi neizreagovani N-karboksianhidrid. To je tipično ekvimolarna količina nukleofila, međutim, može da se koristi i količina nukleofila koja je u višku. Tipična reakcija je završena nakon mešanja tokom 1 časa, ali može da se odvija sporije ili brže u zavisnosti od različitih faktora, kao što je temperatura.

[0038] Takođe, u okviru obima pronalaska je postupak acilacije aminokiselinskog estra majtanzinola. Postupak obuhvata reakciju aminokiselinskog estra majtanzinola predstavljenog formulom (Ia) koji je pripremljen kao što je gore opisano, sa karboksilnom kiselinom, koja ima formulu „R3COOH“, u prisustvu sredstva za kondenzovanje ili sa aktiviranom karboksilnom kiselinom koja ima formulu „R3COX“, da bi se formiralo jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:

[0039] U formuli (IIIa), R1i R2su kao što je definisano u formulama (Ia), i (IIa); R3je alkil grupa ili supstituisana alkil grupa; i X u R3COX je odlazeća grupa. Poželjno, X je halid, alkoksi grupa, ariloksi grupa, imidazol, -S-fenil, u kojoj je fenil opciono supstituisan sa nitro ili hloridom, ili -OCOR, u kojoj je R linearna C1-C10 alkil grupa, razgranata C1-C10 alkil grupa, ciklična C3-C10 alkil grupa, ili C1-C10 alkenil grupa. U jednom primeru izvođenja, u gore opisanoj formuli „R3COX“, -COX je reaktivni estar; na primer opciono supstituisani N-sukcinimidni estar. Primeri reaktivnog estra uključuju, ali nisu ograničeni na, N-sukcinimidil, N-sulfosukcinimidil, N-ftalimidil, N-sulfoftalimidil, 2-nitrofenil, 4-nitrofenil, 2,4-dinitrofenil, 3-sulfonil-4-nitrofenil i 3-karboksi-4-nitrofenil estre.

[0040] Poželjno, R3je -Y-S-SR4, Y je C1-C10 alkilen, i R4je C1-C10 alkil, aril, ili heteroaril. U drugoj alternativnoj varijanti, Y je -CH2CH2- ili -CH2CH2C(CH3)2- i R4je metil.

[0041] U još jednom primeru izvođenja, R3je -L-E; L je

ili -(CH2CH2O)mCH2CH2NHC(=O)CH2CH2- ili

E je

ili

1

X' je halid; n je 1, 2, 3, 4, 5 ili 6; m je 0 ili ceo broj od 1 do 20; i q je 0 ili 1. Alternativno, L je -(CH2)n-; i n je kao što je gore definisano ili n je 5. U drugoj alternativnoj varijanti, L je

i n i m su kao što je gore definisano; ili, alternativno, n je 4 i m je 3.

[0042] U još jednoj alternativnoj varijanti, R3je odabrano od sledećih formula:

[0043] Termin „sredstvo za kondenzovanje“ je reagens koji reaguje sa hidroksilnom grupom karboksilne kiseline i pretvara je u odlazeću grupu, koja može da bude potisnuta amino ili hidroksilnom grupom. Primeri pogodnih sredstava za kondenzovanje uključuju karbodiimid (N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilkarbodiimid hidrohlorid), uronijum, aktivni estar, fosfonijum, 2-alkil-1-alkilkarbonil-1,2-dihidrokvinolin (2-izobutoksi-1-izobutoksikarbonil-1,2-dihidrokvinolin), 2-alkoksi-1-alkoksikarbonil-1,2-dihidrokvinolin (2-etoksi-1-etoksikarbonil-1,2-dihidrokvinolin), ili alkilhloroformat (izobutilhloroformat). Poželjno, sredstvo za kondenzovanje je karbodiimid. Poželjnije, N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilkarbodiimid hidrohlorid.

[0044] Termin „odlazeća grupa“ odnosi se na grupu naelektrisanog ili nenaelektrisanog fragmenta koji lako može da se potisne nukleofilom, kao što je amin. Takve odlazeće grupe su dobro poznate u stanju tehnike i uključuju, ali nisu ograničene na halide, estre, alkoksi, hidroksil, alkoksi, tozilate, triflate, mezilate, nitrile, azid, imidazol, karbamat, disulfide, tioestre, tioetre (tj., opciono supstituisani -S-fenil) i jedinjenja diazonijuma. Poželjno odlazeća grupa je halid, alkoksi grupa, ariloksi grupa, imidazol, -S-fenil opciono supstituisan sa -NO2ili hloro, ili -OCOR, u kome je R linearna C1-C10 alkil grupa, razgranata C1-C10 alkil grupa, ciklična C3-C10 alkil grupa, ili C1-C10 alkenil grupa. U još jednom poželjnom primeru izvođenja, odlazeća grupa je fragment u reaktivnom estru (npr., -COX) koji može da bude potisnut. Reaktivni estar uključuje, ali nije ograničen na N-sukcinimidil, N-sulfosukcinimidil, N-ftalimidil, N-sulfoftalimidil, 2-nitrofenil, 4-nitrofenil, 2,4-dinitrofenil, 3-sulfonil-4-nitrofenil i 3-karboksi-4-nitrofenil estar.

[0045] Pronalazak takođe uključuje postupak za upotrebu C3 estra majtanzinola za pripremu njegovog derivata. Postupak obuhvata reakciju C3 estra majtanzinola predstavljenog formulom (IIIa) koji je gore pripremljen sa redukcionim sredstvom, kojom se obrazuje jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:

[0046] U formuli (IVa), R1i R2su kao što je definisano u formulama (Ia), i (IIa); i Y je kao što je definisano u formuli (IIIa).

[0047] Termin „redukciono sredstvo“ je element ili jedinjenje u redukciono-oksidacionoj reakciji koje pretvara disulfidnu vezu u hidrosulfidnu grupu. Primeri pogodnih redukcionih sredstava uključuju ditiotreitol (DTT), (tris(2-karboksietil)fosfin) (TCEP) i NaBH4.

[0048] Jedinjenje formule (IIIa), kada R3predstavlja -L-E, ili jedinjenje formule (IVa), mogu da reaguju sa antitelom ili modifikovanim antitelom da obrazuju konjugat antitelomajtanzinoid. Videti na primer, SAD patente br. 7,521,541, 5,208,020, i 7,811,872. Alternativno, jedinjenje formule (IVa) može da reaguje sa bifunkcionalnim sredstvom za unakrsno vezivanje čime se obrazuje linkersko jedinjenje koje nosi reaktivnu grupu, koja može da reaguje sa antitelom i obrazuje konjugat antitelo-majtanzinoid. Videti, na primer, US 6,441,163, US 2011/0003969A1 i US 2008/0145374.

[0049] „Alkil“, kako se ovde koristi, odnosi se na linearni, razgranati ili ciklični alkil.

[0050] „Linearni ili razgranati alkil“, kako se ovde koristi, odnosi se na zasićeni monovalentni ugljovodonični radikal linearnog ili razgranatog lanca koji sadrži od jednog do dvadeset atoma ugljenika. Primeri za alkil uključuju, ali nisu ograničeni na, metil, etil, 1-propil, 2-propil, 1-butil, 2-metil-1-propil, - CH2CH(CH3)2, 2-butil, 2-metil-2-propil, 1-pentil, 2-pentil, 3-pentil, 2-metil-2-butil, 3-metil-2-butil, 3-metil-1-butil, 2-metil-1-butil, -CH2CH2CH(CH3)2,1-heksil, 2-heksil, 3-heksil, 2-metil-2-pentil, 3-metil-2-pentil, 4-metil-2-pentil, 3-metil-3-pentil, 2-metil-3-pentil, 2,3-dimetil-2-butil, 3,3-dimetil-2-butil, 1-heptil, 1-oktil, i slično. Poželjno, alkil ima jedan do deset atoma ugljenika. Poželjnije, alkil ima jedan do četiri atoma ugljenika.

[0051] „Alkilen“, kako se ovde koristi, odnosi se na linearni, razgranati ili ciklični alkilen.

[0052] „Linearni ili razgranati alkilen“, kako se ovde koristi, odnosi se na zasićeni divalentni ugljovodonični radikal linearnog ili razgranatog lanca koji sadrži jedan do dvadeset atoma ugljenika. Primeri za alkil uključuju, ali nisu ograničeni na, metilen, etilen, 1-propilen, 2-propilen, 1-butilen, 2-metil-1-propilen, -CH2CH(CH3)2-, 2-butilen, 2-metil-2-propilen, 1-pentilen, 2-pentilen, 3-pentilen, 2-metil-2-butilen, 3-metil-2-butilen, 3-metil-1-butilen, 2-metil-1-butilen, -CH2CH2CH(CH3)2-, 1-heksil, 2-heksilen, 3-heksilen, 2-metil-2-pentilen, 3-metil-2-pentilen, 4-metil-2-pentilen, 3-metil-3-pentilen, 2-metil-3-pentilen, 2,3-dimetil-2-butilen, 3,3-dimetil-2-butilen, 1-heptilen, 1-oktilen, i slično. Poželjno, alkilen ima jedan do deset atoma ugljenika. Poželjnije, alkilen ima jedan do četiri atoma ugljenika.

[0053] „Linearni ili razgranati alkenil“ se odnosi na monovalentni ugljovodonični radikal linearnog ili razgranatog lanca koji sadrži dva do dvadeset atoma ugljenika sa najmanje jednim mestom nezasićenosti, tj., dvostrukom vezom ugljenik-ugljenik, pri čemu

1

alkenil radikal uključuje radikale koji imaju „cis“ i „trans“ orjentaciju, ili alternativno, „E“ i „Z“ orjentaciju. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, etilenil ili vinil (-CH=CH2), alil (-CH2CH=CH2), i slično. Poželjno, alkenil ima dva do deset atoma ugljenika. Poželjnije, alkenil ima dva do četiri atoma ugljenika.

[0054] „Ciklični alkil“ se odnosi na monovalentni zasićeni karbociklični prstenasti radikal. Poželjno, ciklični alkil je tro- do desetočlani monociklični prstenasti radikal. Poželjnije, ciklični alkil je cikloheksil.

[0055] „Aril“ označava monovalentni aromatični ugljovodonični radikal koji sadrži 6-18 atoma ugljenika dobijen uklanjanjem jednog atoma vodonika sa jednog atoma ugljenika matičnog sistema aromatičnog prstena. Aril uključuje biciklične radikale koji sadrže aromatični prsten fuzionisan sa zasićenim, delimično nezasićenim prstenom, ili aromatični karbociklični ili heterociklični prsten. Tipične aril grupe uključuju, ali nisu ograničene na, radikale izvedene iz benzena (fenil), supstituisanih benzena (npr., para-nitrofenil, ortonitrofenil, i dinitrofenil), naftalena, antracena, indenila, indanila, 1,2-dihidronaftalena, 1,2,3,4-tetrahidronaftila, i slično. Poželjno, aril je opciono supstituisani fenil (npr., fenil, fenol ili zaštićeni fenol).

[0056] „Heteroaril“ se odnosi na monovalentni aromatični radikal koji sadrži 5- ili 6-člane prstenove, i uključuje sisteme fuzionisanih prstenova (od kojih je bar jedan aromatičan) od 5-18 atoma, koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabrana od azota, kiseonika i sumpora. Primeri heteroaril grupa su piridinil (npr., 2-hidroksipiridinil), imidazolil, imidazopiridinil, pirimidinil (npr., 4-hidroksipirimidinil), pirazolil, triazolil, pirazinil, tetrazolil, furil, tienil, izoksazolil, tiazolil, oksazolil, izotiazolil, pirolil, kvinolinil, izokvinolinil, indolil, benzimidazolil, benzofuranyl, cinolinil, indazolil, indolizinil, ftalazinil, piridazinil, triazinil, izoindolil, pteridinil, purinil, oksadiazolil, triazolil, tiadiazolil, furazanil, benzofurazanil, benzotiofenil, benzotiazolil, benzoksazolil, kvinazolinil, kvinoksalinil, naftiridinil i furopiridinil.

[0057] Pogodni supstituenti za alkil grupu su oni koji ne interferiraju u značajnoj meri sa opisanim reakcijama. Supstituenti koji interferiraju sa opisanim reakcijama mogu da budu zaštićeni postupcima koji su dobro poznati stručnjaku u datoj oblasti, na primer, videti T.W. Greene i P. G. M. Wuts "Protective Groups in Organic Synthesis" John Wiley & Sons, Inc., New York 1999. Primeri supstituenata uključuju aril (npr., fenil, fenol i zaštićeni fenol), heteroaril (npr., indolil i imidazolil) halogen, guanidinijum [-NH(C=NH)NH2], -OR<100>, NR<101>R<102>, -NO2,-NR<101>COR<102>, -SR<100>, sulfoksid predstavljen sa -SOR<101>, sulfon predstavljen sa -SO2R<101>, sulfat -SO3R<100>, sulfonat -OSO3R<100>, sulfonamid predstavljen sa -SO2NR<101>R<102>, cijano, azido, -COR<101>, -OCOR<101>, -OCONR<101>R<102>; R<101>i R<102>je svaki nezavisno odabran od H, linearnog, razgranatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika.

[0058] Termin „halid“ se odnosi na -F, -Cl, -Br ili -I.

[0059] Termin „aminokiselina“ se odnosi na prirodne aminokiseline ili neprirodnu aminokiselinu predstavljenu sa NH2-C(R<aa>R<aa>)-C(=O)OH, gde su R<aa>i R<aa'>svaki nezavisno H, opciono supstituisani linearni, razgranati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil koji ima 1 do 10 atoma ugljenika, aril, heteroaril ili heterociklil. Termin „aminokiselina“ takođe se odnosi na odgovarajuću reziduu kada je jedan atom vodonika uklonjen sa amino i/ili karboksi kraja aminokiseline, kao što je -NH-C(R<aa'>R<aa>)-C(=O)O-.

PRIMERI

[0060] Primeri 3 do 9 i nisu primeri izvođenja prema pronalasku.

Materijali i metode

[0061] Procesni parametri dati u nastavku mogu da budu usvojeni i prilagođeni od strane stručnih osoba kako bi odgovarali njihovim specifičnim potrebama.

[0062] Sve reakcije su sprovedene u atmosferi argona uz mešanje magnetom. Tetrahidrofuran i dimetil formamid su nabavljeni kao anhidrovani rastvarači od proizvođača Aldrich. Majtanzinol je proizveden kao što je opisano (Widdison et al., J. Med. Chem., 49:4392-4408 (2006)). N-karboksianhidrid N-metil-alanina, (4S)-3,4-dimetil-2, 5-oksazolidindion je pripremljen kao što je opisano (Akssira, M. et al., J. Marocain de Chimie Heterocyclique, 1:44-47 (2002)). Spektri nuklearne magnetne rezonance (NMR) (<1>H 400MHz,<13>C 100 MHz) dobijeni su pomoću NMR Bruker serije ADVANCE™. Podaci HPLC/MS su dobijeni upotrebom masenog spektrometra za hvatanje jona Bruker ESQUIRE™ 3000 u liniji sa HPLC Agilent serije 1100. Za analizu DM1 korišćen je metod 1 HPLC. Za sve druge analize korišćen je metod 2 HPLC.

[0063] Analitički metod 1 HPLC:

Vodeni HPLC sistem sa UV detektorom ili ekvivalentni

Kolona: YMC-Pack ODS-AQ 250x4,6 mm; 5µm (Deo br. = AQ12S05-2546WT) Protok: 1 mL/min (gradijent)

Mobilna faza: A = 1 ml 85% H3PO4u 1 litru vode; B = acetonitril/tetrahidrofuran 30:70 (zapr./zapr.) (Napomena: 0,1% TFA je korišćena umesto H3PO4 u mobilnoj fazi A u analizi LC/MS

1

Tabela gradijenta:

[0064]

Vreme ciklusa: 60 minuta Vreme oporavka kolone: 10 minuta

UV detekcija: 252 nm

Zapremina injektovanja = 5µL od oko 1 mg/ml DM1 u acetonitrilu Temperatura kolone = 15°C (osim ako nije drugačije naznačeno) Temperatura uzorka = 2-8°C

[0065] Analitički metod 2 HPLC/MS:

Kolona : 150 x 4,6 mm C8, veličina čestica 5 mikrona, Zorbax P/N 993967-906 Rastvarači : A dejonizovana voda 0,1% TFA

Rastvarač B: acetonitril

Protok 1,0 mL/min Temperatura: sobna

Zapremina injektovanja: 15 µL

Gradijent

[0066]

Vreme %B

0 25

25 50

26 95

30 95

31 25

37 25

[0067] Podaci su prikazani za 0-25 min beleženja HPLC.

[0068] Priprema uzoraka za analitički metod 2 HPLC:

1

Alikvoti (20 µL) date smeše su dodati u acetonitril (1,5 mL) u bočicu automatskog uzorkivača. Bočica je zatvorena i mućkana, a zatim stavljena u automatski uzorkivač na 15 °C. Injekciona zapremina (15 µL) analizirana je za svaki ciklus HPLC.

Primer 1. Priprema DM1-SMe sa dodatim molekulskim sitima 4A kao sredstvom za sušenje

[0069] Majtanzinol (50,1 mg, 0,0888 mmol), (4S)-3,4-dimetil-2, 5-oksazolidindion (30,2 mg, 0,233 mmol, 2,6 ekv), cink triflat (133 mg, 0,366 mol) i molekulska sita 4A (0,50 g) prethodno osušena na 250°C pod vakuumom, a zatim ohlađena do sobne temperature, dodata su u bocu od 10 ml. Sadržaj je sipan u anhidrovani dimetil formamid (0,75 mL) kome je dodat diizopropiletil amin (62 µL, 0,357 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 24 časa. Uzorak sirove smeše je analiziran pomoću HPLC, proizvod N<2'>-deacetil-majtanzin činio je 80% ukupne površine HPLC. Reakciona smeša je razblažena sa 1:1 zasićenim rastvorom NaHCO3:zasićenim rastvorom NaCl (1,2 mL) i etil acetatom (3 mL), mešana, a zatim filtrirana kroz celit, nakon toga je oprana kalijum fosfatnim puferom (1 mL, 400 mM, pH 7,5). Organski sloj je osušen anhidrovanim magnezijum sulfatom, filtriran, a zatim podvrgnut uparavanju da bi se dobila žuta čvrsta supstanca. Čvrstom ostatku je dodata 3-metilditiopropanoinska kiselina (25 mg, 0,16 mmol), N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilkarbodiimid hidrohlorid (30 mg, 0,16 mmol) i dihlorometan (3 mL). Posle mešanja tokom 2 časa, smeša je razblažena etilacetatom (8 mL), oprana sa 1,0 M, pH 6,5 kalijum fosfatnog pufera (2 mL) i vodeni rastvor je ekstrahovan etil acetatom (2 x 8 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni nad anhidrovanim magnezijum sulfatom, koncentrovani i prečišćeni hromatografijom na silika gelu upotrebom smeše dihlorometan:metanol u odnosu 95:5, da bi se dobio 51 mg (70%) DM1-SMe.

Primer 2. Desetostruko povećanje pripreme prema primeru 1

[0070] Reakcija iz primera 1 izvedena je sa 10 puta većim količinama dajući 490 mg (68%) DM1-SMe.

Primer 3. Priprema DM1-SMe bez dodatog sredstva za sušenje

[0071] Majtanzinol (1,0 g, 1,77 mmol) je rastvoren u anhidrovanom dimetil formamidu (15 mL) u boci od 25 mL koja je ohlađena u kupatilu sa mešavinom vode i leda. Posle 2 minuta, dodat je diizopropiletil amin (DIPEA, 0,92g 7,07 mmol) i cink triflat (3,8g, 10,6 mmol) uz mešanje magnetnom mešalicom, zatim je brzo dodat (4S)-3,4-dimetil-2, 5-oksazolidindion (0,913 g, 7,07 mmol) i smeša je mešana 24 časa. Uzorak sirove smeše je analiziran pomoću HPLC, proizvod N<2'>-deacetil-majtanzin predstavljao je 65% od ukupne

1

površine HPLC. Reakciona smeša je razblažena 1:1 zasićenim rastvorom NaHCO3: zasićenim rastvorom NaCl (25 mL) i etil acetatom (40 mL), promešana, a zatim filtrirana kroz celit, i oprana zasićenim NaCl. Organski sloj je osušen anhidrovanim natrijum sulfatom, filtriran, a zatim evaporisan. Ostatak je sipan u dihlorometan (30 mL) kome je brzo dodata 3-metilditiopropanska kiselina (1,1 g, 7,0 mmol) i N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilkarbodiimid hidrohlorid (1,34 g, 7,0 mmol) i reakcija je mešana pod argonom na sobnoj temperaturi 2 časa. Smeša je razblažena etil acetatom (30 mL), oprana sa 1,0 M kalijum fosfatnim puferom (30 mL), pH 6,5, i vodeni rastvor je ekstrahovan etil acetatom (2 x 40 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni nad anhidrovanim natrijum sulfatom, koncentrovani i prečišćeni hromatografijom na silika gelu upotrebom smeše dihlorometan:metanol u odnosu 95:5, da bi se dobilo 698 mg (50%) DM1-SMe.

Primer 4. Ponavljanje primera 3

[0072] Reakcija iz primera 3 je ponovljena sa istim količinama dajući 735 mg (53%) DM1-SMe.

Primer 5. Štok-rastvor sirovog N2'-deacetil-majtanzina

[0073] Majtanzinol (0,5 g, 0,89 mmol) je rastvoren u anhidrovanom dimetil formamidu (7 mL) u boci od 25 mL koja je ohlađena u kupatilu sa mešavinom vode i leda . Posle 2 minuta, dodat je diizopropil etil amin (0,5 g, 3,5 mmol) i cink triflat (1,9g, 5,3 mmol) uz mešanje magnetnom mešalicom, a zatim je brzo dodat (4S)-3,4-dimetil-2, 5-oksazolidindion (4,52 g, 3,5 mmol) i smeša je mešana 24 časa. Alikvoti (svaki po 0,5 mL) ovog štok-rastvora su korišćeni u sledećim eksperimentima, tako da je svaki alikvot napravljen od približno 0,13 mmol majtanzinola.

Primer 6. Ekstrakcija N<2'>-deacetil-majtanzina praćena kuplovanjem sa propionskom kiselinom (kontrola)

[0074]

1

[0075] Štok-rastvor N<2'>-deacetil-majtanzina (0,50 mL) dodat je u bočicu od 6 mL koja sadrži etil acetat (1,5 mL) i 1:1 zasićeni rastvor NaCl:NaHCO3(0,75 mL), bočica je brzo zatvorena i promešana. Organski sloj je zadržan i osušen nad anhidrovanim Na2SO4(120 mg). Organski sloj (1,0 mL) je uzet i dodata je propionska kiselina (20,0 µL, 0,27 mmol). Rastvor je zatim prenet u bočicu koja sadrži N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilkarbodiimid hidrohlorid (40 mg, 0,209 mmol). Reakcija je ostavljena da se odvija 2,5 časa, posle čega je analizirana pomoću HPLC.

[0076] Sledeći sporedni proizvod je takođe proizveden iz May-NMA2, sporednog proizvoda u prethodnoj reakciji, kao što je prikazano ispod:

[0077] Odnos procenata površina HPLC za 17:16 bio je 3,0:71,7, MS za 16 (M+ H+) 706 (M Na<+>) 728; MS za 17 (M+ Na<+>) 813.

Primer 7. Eksperiment iz primera 6 je ponovljen.

[0078] Odnos procenata površina HPLC za 17:16 bio je 3,0:70,9.

1

Primer 8. Ekstrakcija N<2'>-deacetil-majtanzina praćena pred-gašenjem metanolom, a zatim kuplovanjem sa propionskom kiselinom (pred-gašenje za uništavanje viška 5a)

[0079] Štok-rastvor N<2'>-deacetil-majtanzin (0,50 mL) dodat je u bočicu od 6 mL u koju je dodat metanol (75 µL, 1,8 mmol) i bočica je zatvorena i sadržaj je mešan na magnetnoj mešalici 1 čas. Zatim je dodat etil acetat (1,5 mL) i 1:1 zasićeni rastvor NaCl:NaHCO3(0,75 mL) i bočica je zatvorena i promešana. Organski sloj je zadržan i osušen nad anhidrovanim Na2SO4(120 mg). Organski sloj (1,0 mL) je uzet i dodata je propionska kiselina (20,0 µL, 0,27 mmol). Rastvor je zatim prenet u bočicu koja sadrži N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilkarbodiimid hidrohlorid (40 mg, 0,209 mmol). Reakcija je ostavljena da se odvija 2,5 časa, posle čega je analizirana pomoću HPLC. Pik HPLC za 17 bio je jedva detektabilan, integracija nije bila moguća. Ova reakcija je ponovljena i ponovo je 17 bio je jedva detektabilan, integracija nije bila moguća. Prema tome, postupak pred-gašenja dovodi do proizvodnje manje količine neželjenih jedinjenja 15 i 17.

Primer 9. Sinteza ekstra-NMA-DM1-SMe (9a)

[0080]

[0081] Majtanzinol (1,2 mg, 2,1 mmol) je odmeren u bocu od 50 mL i rastvoren u smeši dimetilformamida (12 mL) i tetrahidrofurana (6 mL). Boca je ohlađena u kupatilu sa smešom voda/led. Posle 5 minuta, redom su dodati diizopropil etil amin (1,5 mL, 8,5 mmol), cink trifluorometansufonat (4,5 g, 12,6 mmol), i 2,5-oksazolidindion, 3,4-dimetil

2

(4S) (1,1 g, 8,5 mmol). Posle mešanja tokom 17 časova reakcija je ekstrahovana smešom 1:1 zasićenog vodenog rastvora NaCl: zasićenog vodenog rastvora NaHCO3(14 mL) i etil acetatom (100 mL). Organski sloj je zadržan i osušen nad anhidrovanim Na2SO4,Sredstvo za sušenje je uklonjeno i približno 2/3 rastvarača su uklonjene upotrebom rotacionog uparivača pod vakuumom. Zatim je dodat N-metil-N-[(2-metilditio)-1-oksopropil]-L-alanin (1,0 g, 4,2 mmol), praćen dodavanjem N-(3-dimetilaminopropil)-N-etilkarbodiimid hidrohlorida (0,889 g, 4,6 mmol). Metilen hlorid (10 mL) je dodat da bi se smeša rastvorila. Posle 4 časa reakcija je ekstrahovana metilen hloridom (70 mL) i smešom u odnosu 1:4 zasićenog vodenog rastvora NaCl: zasićenog vodenog rastvora NaHCO3(20 mL). Organski sloj je zadržan i osušen nad anhidrovanim Na2SO4. Rastvarač je uklonjen upotrebom rotacionog uparivača pod vakuumom. Nastalo gusto ulje je rastvoreno u acetonitrilu (3 mL) i približno 1⁄2 materijala je prečišćena pomoću HPLC na koloni Waters Symmetry Shield C8 (19 x 150 mm mikrona, veličina čestica 5 mikrona). Kolona je eluirana sa dejonizovanom vodom koja sadrži 0,2% mravlje kiseline sa gradijentom acetonitrila (30% - 60% acetonitrila tokom 18 minuta). Kolona je isprana sa 95% acetonitrila tokom 5 minuta, a zatim ponovo ekvilibrisana sa 30% acetonitrila tokom 6 minuta između analiza. Zapremine injektovanja bile su u opsegu između 100 - 800 uL. Neizreagovani majtanzinol eluiran je na 8,5 minuta, nepoželjni izomer ekstra-NMA-DM1-SMe eluiran je na 13,8 minuta, i poželjni izomer ekstra-NMA-DM1-SMe eluiran je na 15,1 minut. Frakcije željenog proizvoda iz nekoliko ciklusa su kombinovane i rastvarač je uklonjen upotrebom rotacionog uparivača pod vakuumom. Ostatak je sipan u minimalnu zapreminu etil acetata i minorne nečistoće su uklonjene pomoću HPLC na koloni Kromasil Cyano (250 mm x 21 mm, veličina čestica 10 mikrona). Kolona je pokrenuta sa izokratskom mobilnom fazom od 67:9:24 heksani:2-propanol:etil acetat pri 21 mL/min. Željeni proizvod je eluiran na 22,6 minuta, dok je nečistoća eluirana na 12,6 min. Frakcije proizvoda iz nekoliko ciklusa su kombinovane i rastvarač je uklonjen upotrebom rotacionog uparivača pod vakuumom da bi se dobilo 95 mg proizvoda (10% prinosa). 1H NMR (400MHz ,CDCl3-d) δ = 7,26 , 6,81 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 6,67 (d, J = 11,1 Hz, 1 H), 6,56 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 6,42 (dd, J = 11,4, 15,2 Hz, 1 H), 6,30 (s, 1 H), 5,67 (dd, J = 9,1, 15,2 Hz, 1 H), 5,52 - 5,40 (m, 1 H), 5,27 (d, J = 7,1 Hz, 1 H), 4,85 - 4,69 (m, 1 H), 4,26 (t, J = 10,9 Hz, 1 H), 3,96 (s, 3 H), 3,7 (bs, 1), 3,57 (d, J = 12,6 Hz, 1 H), 3,48 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 3,34 (s, 3 H), 3,23 (s, 3 H), 3,10 (d, J = 12,6 Hz, 1 H), 3,03 - 2,90 (m, 3 H), 2,87 (s, 3 H), 2,82 - 2,64 (m, 5 H), 2,63 - 2,50 (m, 1 H), 2,45 - 2,30 (m, 3 H), 2,15 (d, J = 14,1 Hz, 1 H), 1,62 (s, 3 H), 1,57 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 1,45 (d, J = 6,3 Hz, 1 H), 1,29 (d, J = 7,1 Hz, 3 H), 1,26 (d, J = 6,3 Hz, 4 H), 1,18 (d, J = 6,3 Hz, 3 H), 0,79 (s, 3 H) 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 170,86, 170,50, 170,35, 168,69, 156,19, 152,35, 142,2, 140,90, 139,29, 133,27, 128,05, 125,1, 122,07, 119,15, 113,31, 88,72, 80,96, 78,51, 74,23, 66,19, 60,66, 60,13, 56,81, 56,71, 54,97, 47,90, 46,72, 38,99, 36,41, 35,68, 33,19, 32,54, 30,90, 30,02, 23,01, 15,62, 14,75, 14,59, 13,54, 12,35, HRMS izrač. za C40H57ClN4O11S2(M Na<+>) m/z = 891,3052; nađeno 891,3049.

Primer 10. Sinteza ekstra-NMA-DM1 (10)

[0082]

[0083] N<2'>-Deacetil-N<2'>-(3-metilditio-1-oksopropil-N-metil-L-alanil)-majtanzin (95 mg, 0,109 mmol) je rastvoren u smeši 2:1 dimetoksietana: 100 mM kalijum fosfatnog pufera pH 7,5 kome je dodat ditiotreitol (110 mg, mmol). Posle 2 časa rastvor je ekstrahovan smešom etil acetat: metilen hlorid = 2: 1 (5 mL) i zasićenim vodenim rastvorom NaCl (1 mL). Organski sloj je zadržan i osušen nad anhidrovanim Na2SO4. Sredstvo za sušenje je uklonjeno vakuum filtracijom i rastvarač je uklonjen upotrebom rotacionog uparivača pod vakuumom. Ostatak je sipan u minimalnu zapreminu smeše 1:1 etil acetat:metilen hlorid i prečišćen pomoću HPLC na koloni Kromasil Cyano (250 mm x 21 mm, veličina čestica 10 mikrona). Kolona je pokrenuta sa izokratskom mobilnom fazom od 64:19:17 heksani:2-propanol:etil acetat pri 21 mL/min. Željeni proizvod je eluiran na 16 minuta. Frakcije proizvoda iz nekoliko ciklusa su kombinovane i rastvarač je uklonjen upotrebom rotacionog uparivača pod vakuumom da bi se dobilo 62 mg proizvoda (69% prinosa).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6,81 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 6,58 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,43 (dd, J = 15,3 Hz, 11,1 Hz, 1H), 6,26 (s, 1H), 5,67 (dd, J = 15,3 Hz, 9,0 Hz, 1H), 5,47 (q, J = 6,6 Hz, 1H), 5,28-5,22 (m, J = 6,7 Hz, 1H), 4,81 (dd, J = 12,0 Hz, 2,9 Hz, 1H), 4,26 (t, J = 10,5 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,59 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 3,49 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 3,41 (bs, 1H), 3,36 (s, 3H), 3,24 (s, 3H), 3,11 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 2,98 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 2,85 (s, 3H), 2,84 - 2,80 (m, 1H), 2,79 (s, 3H), 2,76 (s, 1H), 2,68 - 2,61 (m, 2H), 2,58 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 2,17 (dd, J = 14,3 Hz, J = 2,8 Hz, 1H), 1,71 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 1,64 (s, 3H), 1,62-1,59 (m, 1H), 1,49-1,40 (m, , 1H), 1,31 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,29 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,27-1,23 (m, 1H), 1,20 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,81 (s, 3H). 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 170,37, 170,30, 170,25, 168,53, 156,07, 152,16, 142,31, 140,74, 139,16, 133,12, 127,09, 125,32, 121,92, 119,92, 113,15, 88,57, 80,83, 78,37, 74,08, 67,01, 59,97, 58,66, 56,56, 53,54, 49,17, 46,58, 38,86, 37,33, 36,25, 35,53, 32,39, 30,81, 29,80, 21,02, 19,87, 15,47, 14,80, 13,4, 12,22, HRMS izrač. za C39H55ClN4O11S (M Na<+>) m/z = 845,3174; nađeno 845,3166.

2

Claims (15)

1. Patentni zahtevi 1. Postupak za pripremu jedinjenja predstavljenog sledećom formulom:

   naznačen time što je R1metil; i R2je metil, pri čemu postupak obuhvata: a) reakciju majtanzinola sa N-karboksianhidridom u reakcionoj smeši koja dodatno sadrži bazu i sredstvo za sušenje, gde je N-karboksianhidrid predstavljen sledećom formulom:

   čime se obrazuje jedinjenje formule (Ia); i b) reakciju neizreagovanog N-karboksianhidrida iz reakcione smeše u koraku a) sa nukleofilnim reagensom, pri čemu je nukleofilni reagens voda.
2. 2. Postupak prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što reakciona smeša u koraku a) dodatno sadrži Luisovu kiselinu.
3. 3. Postupak prema patentnom zahtevu 2, naznačen time što je Luisova kiselina odabrana iz grupe koja se sastoji od cink triflata, cink hlorida, magnezijum bromida, magnezijum triflata, bakar triflata, bakar (II) bromida, bakar (II) hlorida i magnezijum hlorida.
4. 4. Postupak prema patentnom zahtevu 3, naznačen time što je Luisova kiselina cink triflat.
5. 5. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, naznačen time što postupak dalje obuhvata dovođenje u kontakt reakcione smeše posle koraka b) sa vodenim rastvorom koji sadrži bikarbonat ili karbonat ili dovođenje u kontakt reakcione smeše sa apsorberom metala.
6. 6. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1- 5, koji dodatno obuhvata korak reakcije jedinjenja formule (Ia) sa karboksilnom kiselinom koja ima formulu R3COOH u prisustvu sredstva za kondenzovanje ili sa aktiviranom karboksilnom kiselinom koja ima formulu R3COX, da bi se obrazovalo jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:

   naznačen time, što je R3alkil grupa ili supstituisana alkil grupa, i X je odlazeća grupa.
7. 7. Postupak prema patentnom zahtevu 6, naznačen time što: i) X je halid, alkoksi grupa, ariloksi grupa, imidazol, -S-fenil opciono supstituisan sa nitro ili hloridom, ili -OCOR, u kojoj je R linearna C1-C10 alkil grupa, razgranata C1-C10 alkil grupa, ciklična C3-C10 alkil grupa, ili C1-C10 alkenil grupa; ii) -COX je reaktivni estar; iii) R3je -Y-S-SR4, gde Y predstavlja C1-C10 alkilen i R4je C1-C10 alkil, aril, ili heteroaril; iv) R3je -Y-S-SR4, gde Y predstavlja -CH2CH2- ili -CH2CH2C(CH3)2- i R4je -CH3; v) R3je -L-E; L je

   ili -(CH2CH2O)mCH2CH2NHC(=O)CH2CH2- ili

   E je

   X' je halid; n je 2, 3, 4, 5 ili 6; m je 0 ili ceo broj od 1 do 20; i q je 0 ili 1, poželjno L je -(CH2)n- ili

   ili vi) R3je predstavljen jednim od sledećeg:
8. 8. Postupak prema patentnom zahtevu 7, naznačen time što R3predstavlja -Y-S-SR4, gde Y predstavlja -CH2CH2- ili -CH2CH2C(CH3)2-; R4je -CH3; i -COX je reaktivni estar izabran iz grupe koja se sastoji od N-sukcinimidila, N-sulfosukcinimidila, N-ftalimidila, N-sulfoftalimidila, 2-nitrofenila, 4-nitrofenila, 2,4-dinitrofenila, 3-sulfonil-4-nitrofenila i 3-karboksi-4-nitrofenil estra. 2
9. 9. Postupak prema patentnom zahtevu 7 ili patentnom zahtevu 8, naznačen time što kada R3predstavlja -Y-S-SR4, postupak dodatno obuhvata reakciju jedinjenja formule (IIIa) sa redukcionim sredstvom, da bi se obrazovalo jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:
10. 10. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 6, 7 i 9, naznačen time što: i) sredstvo za kondenzovanje je karbodiimid, uronijum, aktivni estar, fosfonijum, 2-alkil-1-alkilkarbonil-1,2-dihidrokvinolin, 2-alkoksi-1-alkoksikarbonil-1,2-dihidrokvinolin, ili alkilhloroformat; ili ii) sredstvo za kondenzovanje je karbodiimid; ili N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilkarbodiimid hidrohlorid.
11. 11. Postupak prema patentnom zahtevu 10, naznačen time što je sredstvo za kondenzovanje N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilkarbodiimid hidrohlorid.
12. 12. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1-11, naznačen time što je baza i) trialkilamin, alkoksid metala, alkil metal, aril metal, hidrid metala, amid metala, ili amid na bazi silikona; ii) trialkilamin; ili iii) diizopropiletilamin.
13. 13. Postupak prema patentnom zahtevu 12, naznačen time što je baza diizopropiletilamin.
14. 14. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1-13, naznačen time što je sredstvo za sušenje i) molekulsko sito, natrijum sulfat, kalcijum sulfat, kalcijum hlorid, ili magnezijum sulfat; ili ii) molekulsko sito; i/ili je u obliku granularnih perli ili prahova.
15. 15. Postupak prema patentnom zahtevu 14, naznačen time, što je sredstvo za sušenje natrijum sulfat. 2