JPS6034556B2 - 抗生物質ｃ−１５００３ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規抗生物質Ｃ−１５００３その製造法および
該抗生物質からの誘導体の製造法に関する。 本発明者らは多種類の土壌などの試料を採取して、それ
らから分離される微生物について、その生産する抗生物
質を検索し、ある種の微生物が新規な抗生物質を生産す
ること、該微生物はノカルディア属に属すること、該微
生物を適宜な栄養塔地で培養することにより該抗生物質
を培養物中に蓄積させ得ることを知り、また得られた該
抗生物質から譲導体を得ることを知り、さらに研究した
＊結果、本発明を完成した。すなわち本発明は、‘１１
一般式（１） 〔式中、Ｒは 又は を表わ す。 〕で表わされる抗生物質Ｃ−１５００３ および■ノカ
ルディア属に属する抗生物質Ｃ−１５００３生産菌を借
地に培養し、培養物中に抗生物質Ｃ−１５００３を生成
蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする抗生物質
Ｃ−１５００３の製造法である。本発明においては「抗
生物質Ｃ−１５００３Ｊとは、上記一般式（１）におい
て示される三つの化合物の総称、二つ又は三つの混合物
、又はそれぞれの単一化合物をいうものとする。また、
一般式（１）におし、てＲ−ＣＯ−ＣＨく旨葺き化合物
を「抗生物質Ｃ−１５００犯−３」あるいは単にｃ−１
５００蛇−３」と、Ｒが−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２ＣＨ３
の化合物を「抗生物質Ｃ−１５００が−３」あるいは単
に｛Ｃ−１５００犯−３′」と、Ｒが−ＣＯ−ＣＨ２−
ＣＨくＳ韓室の化合物を「抗生物質Ｃ−１５００館−４
」あるいは単に「Ｃ−１５００犯−４」と、Ｒが日の化
合物〔一般式（０）〕を〔抗生物質Ｃ−１５００が−Ｃ
Ｊあるいは単に「Ｃ−１５００が−Ｃ」と、それぞれ称
するものとする。本発明の抗生物質Ｃ−１５００３を生
産する菌としては、たとえば本発明者らが抗生物質生産
菌の探索中に土壌などから分離した放線菌ＮｎＣ−１５
００３株などが挙げられる。 ＮｏＣ−１５００３株の菌学的諸性質をシヤーリングお
よびゴツトリープの方法〔インターナショナル．ジヤー
ナル・オブ・システマテイツク・バクテリオ ロ ジー
｛ｌｎｔｅｍａｔｉｏＭＩ ＪｏｍＭ１ ｏｆＳ＄ｔ
ｍａｔｉｃ母ｃｔｅｒｉｏｌｏ鋤）、第１６巻、３１３
頁〜３４０頁、１９６６王〕に準じて検討し、２がｏ、
２１日間にわたって観察した結果は下記の通りである。 １ 形態的特徴基生菌糸は寒天培地上および液体培地中
ともによく伸長し、分枝する。 その直径の多くは０．８〜１．２ムｍであり、時には樺
菌状または分枝した短い菌糸状に分断することがある。
種々の分類用培地上でよく生育し、気菌体は基生菌糸上
に発育するが、束状体（５０〜２００ムｍ×２００×１
０００仏ｍ）を形成し、それらの上に発育することが多
い。気菌糸の形状の多くは屈曲状または直線状を示し、
まれにゆるい螺旋状を示すものも見られる。成熟した培
養を検鏡すると胞子が連鎖状になっていると考えられる
ものは少なく、それらの培養表面から採取した菌懸濁液
について検鏡した所、長楕円形（０．８〜１．２山ｍ×
４．８〜６．８山ｍ）および楕円形（０．８〜１．２×
１．０〜２．０ｒｍ）の分節胞子様のものが多く観察さ
れ、電子顕微鏡による観察ではその表面は平滑であった
。２ 菌体組成 本菌株をＩＳＰ舷．１の改変塔地中で２８℃、８．６６
〜９０時間振顔培養して、菌体を集め、洗糠した。 上記菌体をビー．べッカ−らの方法（アプライド、マイ
ロバイオロジ−（ＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｊｏｌｏ
ｇｙ）、１２萱、４２１頁、１９６山王〕およびェム・
ビー・レェヒバリェーの方法〔ジャーナル・オプ・ラボ
ラトリー・アンド・クリニカル・メデイシン（Ｊｏｍ雌
ｌ ｏｆいｂｏｔｏひ、ａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅ
ｄｉｃｉｎｅ）７１巻、９８４頁、１９路年〕に従って
菌体細胞中のジアミノピメリン酸および糖組成を検した
結果、前者はメソ体であること、後者はガラクトースお
よびアラビノースに相当するスポットの存在が認められ
た。３ 分類用塔地上の諸一性質本菌株は各種培地上で
、いずれも比較的よく発育し、その基生菌糸は培養初期
無色ないし淡黄色で、その淡黄褐色または叢褐色を示す
。 また種々の分類用培地中に黄色ないし黄褐色の可溶性色
素を生成する。気菌糸は粉状で、一般には中程度に発育
し、白色ないし黄色または淡黄褐色を示す。本菌株の各
種分類用培地上における諸性状は第１表に示した通りで
ある。第１表 Ｎｏ．Ｃ−１５００３朱の分類用培地上
の諸性質

【ィ｝ 庶糖・硝酸塩寒天培地 生育（Ｇ）：豊富，黄色（３ｉａ）※ないし淡黄褐色４
３１ｃ）、東状体形成気菌糸（ＡＭ）：貧弱、白色可溶
性色素（ＳＰ）：なしまたは徴黄褐色‘ｏ’グリセロー
ル・硝酸塩寒天培地 Ｇ：中程度、淡黄色（次ａ）※東状体形成ＡＭ：中程度
、白色 ＳＰ：なし し一 ブドウ糖・アスパラギン寒天塔地 Ｇ：中程度、淡明黄色（３ｐａ）※なしい明黄色（本ａ
）※ＡＭ：貧弱、白色 ＳＰ：明黄色（沙ａ）※ ０ グリセロール・アスパラギン寒天培地Ｇ：中程度、
淡黄色（沈ａ）※束状体形成ＡＭ：貧弱、白色 Ｐ：なし ■ でん粉寒天培地 Ｇ：中程度、淡黄色（松ａ）※ないし淡黄褐色（衣ａ）
※東状体形成ＡＭ：豊富、淡黄色（次ａ）※ Ｓｐ：なし Ｎ 栄養寒天培地 Ｇ：中程度、淡黄色（沙ａ）※ないし黄色（ＺＰ）※
東状体形成ＡＭ：貧弱、白色ＳＰ：なし 【ト’リンゴ酸カルシウム寒天培地 Ｇ：中程度。 淡黄色（沙ａ）※ないし淡黄褐色（畿ａ）※ 東状体形
成ＡＮ：中程度、白色ないし淡黄色（沙ａ）※ＳＰ：な
し併 酵母エキス・麦芽エキス寒天渚地Ｇ：中程度、淡
黄褐色（３ｉｃ）※ないし明褐色（３ｉａ）※東状体形
成ＡＭ：中程度、白色ないし淡黄色（次ａ）※ＳＰ：な
し肌 オートミル寒天塔地Ｇ：中程度、淡黄色（Ｘａ）
※ないし黄色（２３）※ 東状体形成ＡＭ：貧弱、白色
ないし淡黄色ＳＰ：なし（ヌ） べプトン・酵母エキス
・鉄寒天培地Ｇ：中程度、黄色（Ｚ３）※ＡＭ：なし ＳＰ：黄色（なめ）※ （ル） チロジン寒天培地 Ｇ：中程度、淡黄色（Ｘａ）※なしい黄色（珠ａ）※束
状体形成ＡＭ：中程度、白色ないし淡黄色（次ａ）※Ｓ
Ｐ：黄褐色（３ｉｅ）※ ※：カラー・ハーモニー・マニュアル、第４版、（コン
テエイナ−・コーポレーション・オブ．アメリカ、１９
班年発行）による色名記号４ 生理学性質 本菌株の生理学性質は第２表に示した通りである。 すなわち生育温度範囲は１〆○ないし３８℃、また寒天
培地（ＩＳＰＭ．２）上で気菌糸をよく着生する温度範
囲は２０午○ないし３５ｑ０である。第２表 Ｍ．Ｃ−
１５００３朱の生理的性状生育温度範囲：１２０〜３８
ｑ０気菌糸着生温度２０ｏｏ〜３５ｑ０ゼラチン液化：
陽性 でん粉加水分解：陽性 硝酸塩還元館：陽性 ミルク・ベプトン化：陽性 ミルク・凝固：陰性 カゼイン分解能：陽性 メラニン様色素形成（ベプトン・酵母エキス鉄寒天培地
）：陰性、（チロジン寒天培地）：腸性チロジン分解館
：陽・性 キサンチン分解熊：陰性 ヒポキサンチン分解能：陰性 リゾチーム耐性：陽一性 食塩耐性：２％ ５ 各種炭素源の利用性 プリーダムおよびゴットリーブの方法〔ジャーナル・オ
ブ・バクテリオ。 ジー（Ｊｏｕｍａｌｏｆ母ｃｔｅｒｉｏｌｏ期）５琵琶
、１０７頁、１９４８年〕に記載されている培地および
それに酵母エキス（バクト）を０．１％添加した基礎培
地を用いて、各種炭素源の利用性を検し、それらの結果
を第３表に示した。第３表 Ｎｏ．Ｃ−１５００３朱の
炭素源利用性炭素源 生育※
Ｄ−キシロース 十日 Ｄーアラビノース ＋＋ Ｄーグルコース 日日○ーガラク
トース ＋＋Ｄ−フラクトース
州什 Ｌーラムノース ＋＋ Ｄーマンノース 川什シユークロー
ス 什日ラクトースマルトース
士＋トレハロース
十日 ラフイノース ±士 メリピオース ＋＋ ｉ−イノシトール Ｄーソルビトール Ｄ−マンニトール しＭグリセロー
ル −±可溶性澱粉
＋十対 照 −− ※：酵母エキス０．１％添加基礎培地 注；川：豊富な発育 汁：比較的良好な発育 十：発育を認める ±：僅かに発育する −：発育しない ６ その他の諸性質 前述２）に示した方法で菌体を集め、これらとジェー・
マーマーらの方法〔ジャーナル・オブ・モレキユラー・
バイオロジー（ＪｏｕｍａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢ
ｉｏｌｏ期）、２０８頁、１９６１年〕に準じてＤＮＡ
を調製し、ＤＮＡのＧ−Ｃ含量を検すると約７１モル％
であった。 本菌株の栄養菌糸をグラム染色すると陽・性であつた。 以上述べた船．Ｃ−１５００株の諸性質をェス・ェー・
ワックスマン著、ジ・アクチノミセテス（ｍｅＡｃｔｉ
ｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）、第２巻、ザ・ウィリアムス・ア
ンド・ウィルキンス・カンパニー発行、１９６１年、ア
ール・ィー．ブッフアナン・アンド・ェヌ・イー・ギボ
ンス編、パージース・マニュアル・オブ・デターミネー
テイブ・バクテリオロジ− （ ＢｅｒｇｅｙＳ Ｍａ
ｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｎｎｉ岬ｔｉＶｅ母ｃｔｅｒ
ｉｏｌｏ鋤）、第８版、１９７４王およびその他の文献
に従って検索した。本菌株はノカルディア（Ｎｏｃａｒ
ｄｉａ）属のグループｍに属すると考えられるが、既知
菌株の中には上記諸性質を有する種は見出されず、新菌
種と同定された。本菌株Ｎｏ．Ｃ−１５００３群ま、工
業技術院微生物工業技術研究所にＦＥＲＭ−ＰＮｏ．３
９９２として、財団法人発酵研究所にＩＦＯ−１３７２
６として、それぞれ寄託されている。 タ 以上に述べた様に船．Ｃ−１５００３％まノカルデ
ィア属の新種であるが、微生物の一般的性質として自然
的にまたは変異剤によって変異を起し得る。 たとえばＸ線、ガンマ一線、紫外線等の放射線の照射単
胞子分離、種々の薬剤を含有する培地上で０の培養、そ
の他の手段で変異させて得られる多くの変異株、あるい
は自然的に得られる突然変異株等であっても、上記した
菌学的性状または下記に示した様な菌学的性状との比較
において実質的に別種とするに足らず、しかもＣ−】５
００犯−３，タＰ，３および（または）Ｐ−４を生産す
る性質を有するものはすべて本発明の方法に利用し得る
。たとえばＮｏ．Ｃ−１５００３朱を種々の変異処理す
ることにより、可溶性色素をほとんど生成しないもの、
基生菌糸が無色のもの、黄緑色のもの、赤褐０色ないし
燈赤色を示すもの、菌糸が樟菌状または分枝した短い菌
糸に分断し易いものおよび気菌糸が多く白色または気菌
糸をほとんど着‘性しない変異株が得られている。抗生
物質Ｃ−１５００３主産菌の培養に用いられる培地は該
菌株が利用し得る栄養源を含むものなら、液状でも固状
でもよいが、大量を処理するときには液体塔地を用いる
のがより適当である。 培地にはＭ．Ｃ−１５００３珠が同化し得る炭素源、消
化し得る窒素源、無機物質、徴量栄養素等が適宜配合さ
れる。炭素源としては、たとえばブドウ糖、乳糖、ショ
糖、麦芽糖、デキストリン、でん粉、グリセリン、マン
ニトール、ソルビトール等油脂類（例、大豆油、ラード
油、チキン油等）その他が窒素源としては、たとえば肉
エキス、酵母エキス、乾燥酵母、大豆粉、コーン・スチ
ーブ・リカー、ベプトン、棉実粉、溌糖蜜、尿素、アン
モニウム塩類（例、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウ
ム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウム等）その他が
用いられる。さらにナトリウム、カリウム、ウルシウム
、マグネシウムなどを含む塩類、鉄、マンガン、亜鉛、
コバルト、ニッケルなどの金属塩類、リン酸、ホゥ酸な
どの塩類や酢酸、ブロピオンなどの有機酸の塩類が適宜
用いらる。その他、アミノ酸（例、グルタミン酸、アス
パラギィン酸、アラニン、グリシン、リジン、メチニン
、プロリン等）、ベプチド、トリベプチド等）、ビタミ
ン類（例、Ｂ，、＆、ニコチン酸、Ｂ，２、ＶＣ、Ｅ等
）、核酸類（例、プリン、ピリジンおよびその誘導体等
）等を含有させてもよい。もちろん培地のｐＨを調節す
る目的で無機または有機の酸、アルカリ類、緩衝剤等を
加え、あるし、は消泡の目的で油脂類、表面活性剤等の
適量を添加してもよい。培養の手段は静置培養でも、振
麹培養あるいは通気損梓培養法等の手段を用いてもよい
。 大量の処理には、いわゆる深部通気蝿梓培養によるのが
望ましいことはいうまでもない。培養の条件は培地の状
態、組成、菌株の種類、培養の手段等によって一定しな
いのは当然であるが、それらは通常２０００〜３５ｏ０
の温度で初発ｐＨを中性附近に選択するのがよい。とり
わけ、培養中期の温度は２３℃〜３０℃、また初発ｐＨ
‘ま６．５〜７．５の条件が望ましい。培養期間も前記
の諸条件により一定しないが、所望の抗生物質濃度が最
大となるまで培養するのがよい。これに要する時間は液
体培地を用いる振遼培養または通気樫梓培養の場合は通
常２〜６日間程度である。これら抗生物質の力価測定は
テトラヒメナ・ピリホルミスＷ株（Ｔｅｔｒａｐｈのｍ
ｏｎａ、ｐのｉｆｏ肌ｌｅＷ）を試験微生物として検定
培地〔トリプトーズ・ベプトン（ディフコ社製）２０夕
、酵母エキス（ディフコ社製）１夕、ブドウ糖２夕、蒸
留水ｌ０ｏ０泌およ１モル燐酸緩衝液ｐＨ７．０１０奴
‘〕を用い、２８ｑｏ、４岬時間ないし４報時間培養し
、その生育を濁度で測定する液体希釈検定法および後に
示す薄層クロマトグラフィー法（以下、ＴＬＣと略す）
により測定した。 このようにして培養された培養物中に新規抗生物質Ｃ−
１５００＊−３、Ｐ−３′および（または）Ｐ−４が生
産蓄積され、これらは炉液および菌体抽出液のいずれに
も含有される。 またこれらの物質はＴＬＣ法により検索された。 すなわち、培養物を炉過または遠心分離で菌体と炉液と
に分け、炉液はそのま）炉液と同量の酢酸エチルで抽出
する。菌体には炉液と同量の７０％アセトン水を加えて
２０午０で１時間損拝し炉過する。炉液中のァセトンを
留去し得られた水、炉液を酢酸エチルで抽出する。そぜ
ぞれの抽出液の１０Ｍ音濃縮した液をシリカゲルガラス
プレート（西独メルク社、キーゼルゲン６価捌０．２５
柵２０×２０）を担体とした薄層クロマトグラフィー（
ＴＬＣ）に付し（溶媒：クロロホルム・メタノール＝９
：１）、紫外線２５３７人を照射して検出される吸収像
の強さから測定される。培養物中に産生されたＣ−１５
００兜−３、Ｐ−３および（または）Ｆ−４を取するに
は本物質群が中性脂溶性であるため、か）る微生物代謝
物を採取するために通常用いられる分離精製の方法が適
宜利用される。 たとえば不純物との溶解度の差を利用する手段、活性炭
、マクロポーラス非イオン系樹脂、シリカゲル、アルミ
ナ等各種の吸着剤の吸着親和力の差を利用する手段、イ
オン交換樹脂による不純物の除去手段のいずれもがそれ
ぞれ単独で、また組合せて、あるいは反覆して利用され
る。前記のようにＣ−１５００犯−３、Ｐ−３′および
Ｐ−４は培養炉液と菌体の双方に含まれているので、こ
れら吸着剤を用いる場合培養了戸液では直接あるいは溶
媒抽出後、菌体では溶媒抽出後吸着剤に吸着させ分離精
製する。溶媒で抽出する場合には、

【１１菌体を分離し
ない全培養物から溶媒抽出するか、あるいは｛２１炉過
または遠心分離などで分離した菌体および培養炉液のそ
れぞれから溶媒抽出する等いずれの方法でも使用しうる
。炉液と菌体とを個別に抽出する場合には、以下の方法
で実施するのが有利である。炉液からの抽出に適当な溶
媒としては水と混じらない有機溶媒、たとえば酢酸エチ
ル、酢酸アミルなどの脂肪酸ェステル、ブタノールなど
のアルコール類、クロロホルムなどのハロゲン化炭化水
素、メチルィソブチルケトンなどのケトン類が用いられ
る。 抽出は中性附近で行なわれ、好ましくはｐＨ７に調整さ
れた培養炉液から酢酸エチルを用いて行なわれる。抽出
液を水洗後減圧下に濃縮し、石油エーテル、ｎ−へキサ
ンのような非頓挫溶媒を加えて有効成分を含む粗物質１
を採取する。この中にはＴＬＣ上で抗生物質Ｃ−１５０
０３以外の多数のスポットが認められるため、段階的に
つぎの精製工程が利用される。すなわち、通常用いられ
る精製法として種々の吸着クロマトグラフイ−が有効で
あり、吸着剤としては、一般に使用される担体、たとえ
ばシリカゲル、アルミナ、マクロポーラス非イオン系吸
着樹脂等が使用できるが、粗物質１よりの精製にはシリ
カゲルが最も有効に利用され、非極・性溶媒、たとえば
石油ェーナル・ｎ−へキサンから展開をはじめ、酢酸エ
チル、アセトン、エタノール、メタノールのような極性
溶媒を添加することにより抗生物質Ｃ−１５００３の熔
出を行う。その１例を示すとシリカゲル（西独メルク
０．０５〜０．２側）を担体とし、ｎ−へキサン、酢酸
エチルの混合比を順次増加しながらカラムクロマトグラ
フイーを行い、溶出液をＴＬＣでしらべてＣ−１５００
３を含有するフラクションを集め、減圧濃縮して石油エ
ーテルまたはｎ−へキサンを加え粗物質０を得る。この
中にはまだ、他の不純物を含むため、つぎの精製を行う
。たとえば溶媒系をかえた第２のシリカゲルカラムによ
り精製する。この場合の展開溶媒には、ジクロルメタン
、クロロホルムのような含ハロゲン炭化水素類から展開
をはじめ、エタノール、メタノールのようなアルコール
類、アセトン、メチルエチルケトンのようなケトン類等
極性溶媒を添加することにより抗生物質Ｃ−１５００３
を分離採取する。第１、第２のシリカゲルカラムの溶媒
の組み合わせは、前後を逆にしても可能であって、その
他通常用いられる有機機溶媒が適宜組み合わされる。粗
物質０の精製手段として、マクロポーラス吸着性樹脂を
用いるとき、抗生物質Ｃ−１５００３を溶出するには、
低級アルコール類、あるいは低級ケトン類、ェステル類
と水との混合物を使用する。 低級アルコール類としては、たとえばメタノール、エタ
ノール、プロパノール、ブタノールなど、低級ケトン類
としては、たとえばアセトン、メチルエチルケトン、ェ
ステル類としては、酢酸エチルなどが利用できる。その
一例を示すと６０％メタノール水に粗物質０をとかし、
ダイヤイオンＨＰ−１０（三菱化成）カラムに通過させ
て吸着せしめ、７０％メタノール水で洗浄後９０％メタ
ノール水で溶出すると目的物抗生物質Ｃ−１５００３が
溶出される。いずれの方法でも、得られた抗生物質Ｃ−
１５００３の画分を減圧濃縮し、乾燥物に対して５〜８
倍量の酢酸エチルを加え放置すると抗生物質Ｃ−１５０
０３の結晶が析出する。 この結晶中にはＣ−１５００斑−３、Ｐ−３およびＰ−
４が含有され、つぎにこれらはさらに上記の吸着剤を利
用して分離される。すなわち、シリカゲルまたはマクロ
ポーラス非イオン性吸着樹脂を用いて、それぞれ前述の
溶媒により分離溶出することが可能であり、たとえばシ
リカゲルを用いるときは、ｎ−へキサン、酢酸エチル系
またはクロロホルム・メタノ−ル系の溶媒で展開し、Ｃ
−１５００が−４、Ｐ−３、Ｐ−３の順序で溶出される
ので、それぞれＴＬＣにより検出後、Ｃ−１５００が−
４、Ｐ−３′、Ｐ−３区分を減圧濃縮し、酢酸エチルを
加えてそれぞれの結晶を得ることが出来る。またマクロ
ポーラス非イオン系吸着樹脂を用いるときは、アルコー
ル類、ケトン類、ヱステル類と水との混合比を変える額
斜溶出法、たとえば５％食塩を含む６０％メタノール水
と９５％メタノール水とを用いた煩斜溶出法を用いると
、Ｃ−１５００が−３、Ｐ−３、Ｐ−４の順序で溶出さ
れ、各区分をそれぞれＴＬＣにより検出後減圧濃縮し、
酢酸エチルより結晶として単離採取される。これらの結
晶は酢酸エチルを結晶溶媒として含有するため、７０ｏ
ｏ減圧下に五酸化リン上で８時間乾燥後測定される物理
化学的性状はつぎの通りである（第４表）。第４表 上述のように分子式、後述の抗微生物活性および抗腫煽
情性などから既知抗生物質群と比較したが、本抗生物質
Ｃ−１５００３のようなグループは認められなかった。 しかし植物成分その他天然有機化合物群で、同様な紫外
部吸収を示す物質を検索したところ、メイタナシングル
ープがあげられ、特に分子式から窒素２個を含有するメ
ィタナシン（ｍａｙねｃｉｎｅ）グループであることが
推定される。メィタナシンは植物成分として得られ、そ
の構造は第１図に示され、ジャーナル・オブ・アメリカ
ン・ケミカル・ソサイテイー（ＪｏｕｍａｌｏｆＡｍｅ
ｒｉｃａｎ ＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅツ）、ｇ７巻
、５２９７頁（１９７５）に報告されている。またメイ
タナシンのマススベクトルのデータはつぎに示される。 Ｍ十一｛ａ】 メイタナシン ５４５ ｛ａ）＝ＫＯ十日ＮＣ０， Ｍ＋−（ａ＋ｂ）、４８５−ＣＨ３ メイタナシン ４８５ ４７
０メイタナシン ４８５一ＣＩ４５０ Ｃ−１５００班−３，Ｐ−３，Ｐ−４でも同様にｍ／ｅ
４８ふ４７０４５０が認められることから基本骨格はメ
ィタナシンと同じであるが、３位のアシ−ル基の異なる
ものであることが容易に推定され、抗生物質Ｃ−１５０
０３は新規化合物であることが分かる。 Ｃ−１５００３Ｆ−３、Ｐ−３、Ｐ−４をそれぞれアル
カリ分解に付し、生成するカルボン酸をガスクロマトグ
ラフイ一でしらべるとＣ−１５００蛇−３からはィソ酪
酸、Ｃ−１５００が−３′からはノルマ酪酸、Ｃ−１５
００犯−４からはィソ青草酸が得られた。 以上のデータからＣ−１５００班−３、Ｐ−３、Ｐ−４
の推定構造は第１図に示される。 第１図 生物活性 Ａ 抗微生物活性 トリプティカーゼ・ソィ寒天培地（ＢＢＬ製）を検定培
地として、以下に示す微生物に対する発育阻止能をペー
パー・ディスク法で検した。 すなわち、下記微生物含菌平板培也上でＣ−１５００斑
−３、Ｐ−３′およびＰ−４の３００山夕／叫の溶液の
０．０２叫をペーパー・ディスク（東洋製作所、薄型、
直径８豚）に含ませたものにより生育阻止能を検した。
その結果、下記微生物に対しては活性を示さなかった。
エシエリヒア・コリ・プロテウス・プルガリス、プロテ
ウス・ミラピリス，シユウドモナス・アエルギノサ、ス
タフイロコツクス・アウレウス、パチルス。 ズブチリス、バチルス・セレウス、クレブジエラ・ニユ
ウモニエ、セラチア・マルセスセンス、ミコバクテリウ
ム・アビウム一方、検定培地〔燐酸二ナトリウム３．５
夕、燐酸ーカリウム０．５夕、酵母エキス（ディフコ）
５夕、グルコース１０夕、寒天１５夕、蒸留水ｌｏｏ０
の上、ｐＨ７．０）の寒天平板を用い、タラロマイセス
・アベラ ネ ウ ス（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓａｖｅ
ｌｌａｎｅ雌）を試験菌としてその生育能を検するとＣ
−１５００班−３およびＰ−３′‘ま、３０ムタ／似、
Ｃ−１５００班−４は１．５０山夕／地で生育阻止力を
示した。 また、テトラヒメナ・ピリホルミス （Ｔｅｔｒａｐｈｙｍｅｎａｐｙｒｉｆｏｒｍｊｓ）Ｗ
株を試験微生物とし、検定塔地〔トリプトース・ベプト
ン（ティフコ）２０夕、酵母エキス１夕、グルコース２
夕、蒸留水１０００肌、１モル燐酸緩衝液ｐＨ７．０、
１０の‘〕を用い、２が０、４独特間ないし４８時間培
養して、液体稀釈検定法により該抗生物質の該微生物発
育阻止能を検した。 その結果、Ｃ−１５００が−３およびＰ−３′は１０ム
タ／の【またＣ−１５００が−４は０．５０ムタ／の‘
で該微生物の発育を阻止することを認めた。Ｂ 抗腫場
活性 腰湯細砲Ｐ斑８（１×１ぴ 細胞／匹、マウス、腹腔移
植）に対するＣ−１５００＊−３、Ｐ−３′およびＰ−
４の治療効果（９日間連続腹腔内投与）を調べた。 その結果、これらの物質によるマウスの延命率は対称に
比し、０．００６２の９／ｋ９／日没与で２００％を示
す抗腫場作用が認められた。Ｃ毒性 マウスを供試験物とした急性毒性試験で、Ｃ−１５００
が−３、Ｐ−３およびＰ−４を腹腔注射した場合、該抗
生物質はすべてＬＤ，ｏｏ値が０．６２５０Ｍ夕／ｋ９
、またＬＤｏ値は０．３１３雌／ｋ９であつた。 上記したように本抗生物質Ｃ−１５００３は糸状菌およ
び原虫に対し、強い発育阻止能を有するので、防徴剤ま
たは抗原虫剤としても有用なものである。 また、抗生物質Ｃ−１５００３は、櫨傷をもつ０甫乳動
物（例、マウスなど）に対し延命効果を示すので、抗腫
凝剤としても有用であると期待される。本抗生物質Ｃ−
１５００３を防徴剤および抗原虫剤して使用するには、
たとえば土壌、活性汚泥または動物体液などの細菌生態
を検する際に有利に使用し得る。 すなわち、土壌から有用な細菌類を分離する場合、また
は溌水処理に用いられている活性汚泥法の運転、解析に
原虫または轍以外の細菌類の作用を検する場合、試料中
に生存する徴または原虫を発育させず、細菌生態を選択
的に発育させることが出来る。具体的には被検試料を液
体または固体培地に添加し、その培地１の‘当りに本抗
生物質１０ないし１００仏夕／肌‘の１％メタノール含
有水容液を０．１の【添加し、培養する。以上Ｃ−１５
００班−３、Ｐ−３、Ｐ−４は新規化合物であり、これ
らはいずれも同一骨格をもっており、さらに有用な医薬
用化合物の中間原料としても利用される。 すなわち脱アシール化反応により、３位が水酸基である
Ｃ−１００が−０〔メィタンシノール（ｍａれａｎｓｉ
ｎｏｌ）〕を得ることが出来る。この場合アシル基の位
置がカルボニール位のベータ−位にあるため、通常用い
られる還元的水簾反応が有利に利用される。すなわち低
温時（例、一２０〜０℃）に錯金属水素化合物〔例、リ
チウムアルミニウムハイドライド（ＬｉＡＩＨ４〕を用
い、他の官能基、例えばカルボニール基、ェポオキシ基
、炭素−炭素間二重結合等に影響を与えず、３位のＣ−
ェステル結合を加水分解することによりメィタンシール
を得ることが出来る。ここに得られたメィタンシノール
の物理化学的性状Ｋｕｐｃｈａｎらの記載とよく一致す
る〔ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイ
テイ−９７巻、５２９４〜５２９５頁（１９７３王）参
照。〕。実施例 １イーストエキストラクトーマルトエ
キストラクト斜面寒天塔地に培養したノカルディアＮｏ
．Ｃ−１５００３（ｍ０１３７２０ＦＥＲＭ−Ｐ 地．
３９９２を、２００の‘客三角フラスコ内の、グルコー
ス２％、可溶性デンプン３％、生大豆粉１％、コーンス
テイープリカ−１％、ポリベプトン０．５％、ＮａＣＩ
Ｏ．３％、ＣａＣ０３０．５％、ｐＨ７．０を含む４０
叫の種培地に接種し、４錨時間回転振盤機上で培養し、
種培養液を得た。 得られた種培養液の０．軌（を２００の【客三角フラス
コ内の、デキストリン５％、コーンステープリカー３％
、ポリベプトン０．１％、ＣａＣ０３０．５％、ＰＨ７
．０を含む４帆【の主塔地に移植し、２８ｏｏ、９０時
間、回転振麹機上で培養した。 この培養液はテトラヒメナ・ピリホルミスＷを検定菌と
し、抗生物質Ｃ−１５００班−３を標準品として液体希
釈法で検定すると２５ｒ夕／奴の生産力価を示した。実
施例 ２実施例１で得た種培養液の１０の‘を種培地５
００心を含む２そ客坂口フラスコに移植し、２８００、
４錨時間往復振濠機上で培養した。 この培養液５００の【を種塔地３０そを含む５０そ客ス
テンレス・スチールタンクに移植し、２８００、通気３
０そ／分、櫨梓２８０回転／分（１／幻Ｔ）、内圧ｌｋ
９夕／洲の条件で４８時間培養して種培養液を得た。得
られた種培養液を移植率１０％で実施例１に示したもの
と同様の主培地１００そを含む２００〆容ステンレス・
スチールタンクに移植し、２８００、通気１００夕／分
、蝿梓２００回転／分（１′２ＤＴ）、内圧ｌｋ９夕／
均の条件で９０時間培養した。得られた培養液は実施例
１と同様の検定法で２５ムタ／地の生産力価を示した。
実施例 ３実施例２で得られた培養液９５のこハイフロ
スーパーセル（米国、ジョンズマンヴイル・プロダクト
社）２ｋ９を加えよくかきまぜる。 混合物を加圧式炉過機で炉過し炉液８５クおよび湿菌体
３２ｋ９を得る。炉液８５夕に酢酸エチル３０そを加え
縄梓抽出し、この操作を２回くり返す。酢酸エチル層を
合せて水３０そ宛で２回水洗し無水硫酸ナトリウム５０
０夕を加えて乾燥後２００地まで減圧濃縮し石油エーテ
ルを加え、析出する沈澱を炉取する（５３夕）。得られ
た粗物質１に酢酸エチル１００叫を加えかきまぜ、不溶
物を炉去し、炉液にシリカゲル（西独 メルク社 ０．
０５〜０．２側）１０夕を加えてかきまぜた後、酢酸エ
チルを減圧下に留去しあらかじめ用意したシリカゲルカ
ラム（４００の‘）の上端におきｎーヘキサン５００の
と、ｎーヘキサン・酢酸エチル（３：１）５００私、ｎ
−へキサン・酢酸エチル（１：１）５００の‘、ｎ−へ
キサン・酢酸エチル（１：３）５００の‘、酢酸エチル
５００の‘、酢酸エチル・メタノール（５０：１）１夕
を流し溶出液を１００Ｍ宛分画する。各フランクション
の１の‘宛を濃縮乾固し、０．１の‘の酢酸エチルを加
え、シリカゲルガラスプレート（西独 メルク社 キー
ゼルゲン６価２弦０．２５側 ２０×２０）の下端から
２．５肌の位置にスポットし、展開溶媒、酢酸エチル・
メタノール（１９：１）で約１７ｃの展開する。展開後
紫外線（２５３７Ａ）下で吸収像をしらべ、Ｒｆｏ．６
〜０．６部付近に吸収のあるフアラクション■２３〜２
８までを集め約２０の‘まで減圧濃縮する。濃縮液に石
油エーテル１５０地を加え粗物質０１５夕を得る。実施
例 ４ 実施例３で得た菌体３２ｋｇに７０％アセトソ水５０そ
を加え３時間燈洋抽出後、加圧式炉過機で炉遇する。 再度７０％アセトン水５０そで抽出をくり返し、同様病
過して得られた炉液を合せ、減圧濃縮によりァセトンを
轡去する。得られた水性液と、ダイヤイオンＨＰ−１０
（三菱化成）５そのカラムに流し２０その水と５０％メ
タノール水で洗縦後１５その９０％メタノール水で港出
する。溶出液ご３夕まで減圧濃縮し、水３そ、酢酸エチ
ル３夕を加えふりまぜ、この操作を２回くり返す。酢酸
エチル層を合せ水洗後無水硫酸ナトリウムを加え乾燥後
、２００Ｍまで減圧濃縮し、石油エーテルを加えて析出
する沈澱を炉取する（２８夕）。得られた粗物質は実施
例３と同様の方法でシリカゲルカラムにより精製し、粗
物質０８．０夕を得る。実施例 ５ 実施例 ３で得た粗物質ロ１．５夕を酢酸エチル１０の
‘に溶解し、シリカゲル（西独、メルク社０．０５〜０
．２帆）４夕を加えよくかきまぜたのち、酢酸エチルを
減圧で留去する。 あらかじめ用意したシリカゲルカラム３００の‘の上端
におき、クロロホルム５００のとで洗糠後、クロロホル
ム・メタノール（５０：１）５００の‘、クロロホルム
・メタール（２０：１）５００の【、クロロホルム・メ
タノール（１０：１）５００の‘で溶出する。溶出液は
２５私宛分画し、各フラクションの０．５叫を減圧濃縮
して、０．０５の上の酢酸エチルを加え、これをサンプ
ルとして、シリカゲルの薄層クロマトグラフィーに付す
（展開溶媒 クロロホルム・メタノール９：１）。Ｒｆ
ｏ．５０〜０．６０に２５３７Ａで吸収像を示すフラク
ション柚．３９４０を減圧濃縮乾固して酢酸エチル２泌
を加え放置すると抗生物質Ｃ−１５００３の結晶１５０
柵が得られる。上記で得られた抗生物質Ｃ−１５００孫
吉晶１５０の９をメタノール１５の上にとかし、これに
食塩３００の９、水１５のとを加えて溶解する。 ダイヤイオンＨＰ−１０（三菱化成）２００柵を直径１
．８肌のカラムにつめ５％食塩を含む５０％メタノール
水６００の‘を流して調整する。先に用意したサンプル
溶液を流した後５％食塩を含む６０％メタノール水３０
０の‘を流し、５％食塩を含む６０％メタノール水１．
５夕と９５％メタノール水１．５夕との間で懐斜溶出を
行う。溶出後液は１５の‘宛分画し各フランクションを
シリカゲルの薄層ク。マトグラフィーに付して検出する
。フラクシヨン１４５〜１５３でＣ−１５００３Ｐ−３
、フラクシヨン１６７〜１８０００でＣ−１５００３Ｐ
−３とＰ一４、フラクション１８５〜１９ぴＣでＣ−１
５〜〜が−４が港出される。各々を集めて濃縮し水５０
叫、酢酸エチル１００の‘を加え溶解し分液ロートに入
れ、ふりまぜたのち水層を分離し、水５０叫宛で２回水
洗後、酢酸エチル層を苧硝で乾燥、濃縮して放置すると
それぞれの結晶が析出する。結晶を炉取、乾燥する。Ｃ
−１５００が‐３ ７０ｍ９ Ｃ−１５００３Ｐ・３、Ｐ−４ １８のタＣ−１５００
が−４ １５ｍ９ Ｃ−１５００＊−３ Ｐ−４混合結晶１＆９を
酢酸エチル０．３の‘に溶解し、シリカゲルガラスプレ
ート（西独 メルク社、キーゼルゲル６岬２弦０．２５
肋 ２０×２０）３板の下端より２．５弧の位置に直線
状に塗布し酢酸エチル・メタノール（１９：１）で展開
する。 約１８伽展開後、Ｒｆｏ．６８（Ｐ−４）、Ｒｆｏ．６
５（Ｐ−３）の吸収像をそれぞれかきとり、少量の水を
含む酢酸エチルで２回別々に抽出し、得られた抽出酢酸
エチルを水洗後無水硫酸ナトリウムで乾燥減圧濃縮して
放電する。Ｒｆ値が０．６８からＣ−１５００斑−４
１０の９、Ｒｆ値０．６８からＣ−１５００斑−４ １
０のｐ、Ｒｆ値０．６５力）らＣ−１５５００犯−３
３の９の結晶が得られる。実施例 ６実施例２で示した
坂口フラスコ培養液の１そを種借地１００そを含む２０
０そステンレス・スチールタンクに接種し２８ｑｏ、通
気１００そ／分、縄梓２００回転／分で４雛時間培養し
、種培養液を得た。 得られた種培養液を、移植率１０％で実施例１に示した
主培地１０００〆を含む２０００そ客ステンレス・スチ
ールタンクに移植し、２８ｑｏ、通気１０００夕／分、
蝿梓１２０回転／分（１／釦Ｔ）、内圧ｌｋ９夕／地の
の条件で９鼠時間培養した。得られた培養液は、実施例
１の検定法で２０り夕／泌の生産力価を示した。得られ
た培養液９００そに９００そのアセトンを加え１時間燈
梓後、ハィフロスーパーセル（米国、ジョンズ・マンヴ
ィル社製）２０ｋ９を加えてかきまぜ加圧式炉過機で炉
過する。得られた炉液１７００のこ水５００そを加え、
酢酸エチル１０００そでポド・ヴイニャツク（米国Ｐｏ
地ｉｅｌｎｉａｋＩＮＣ）を使って抽出する。 得られた酢酸エチル層を水洗し、無水硫酸ナトリウムを
加えて乾燥後、減圧濃縮する。濃縮液に石油ェー７ルを
加え析出する沈澱を炉取し乾燥すると粗物質１ ６８夕
が得られ、以下実施例３、４、５と同様の方法で精製す
るとＣ−１５００斑−３ ９．５タ Ｃ−１５００＊−
３３００の９、Ｃ−１５００＊−４ ２．５夕がそれぞ
れ得られた。実施例 ７ 実施例５で得られた抗生物質Ｃ−１５００球吉晶１５脚
をテトラヒドロフラン１机に溶解し、一５℃に冷却する
。 リチウム アルミニウムハイドランド１２倣を加え２時
間放置する。反応液に１％比Ｓ０４水０．５の‘を加え
た後酢酸エチル２の‘を加え抽出する。酢酸エチル層を
水洗し無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥後減圧濃縮し、
実施例５で示したと同様にシリカゲルカラムを用いるプ
レパラーティブＴＬＣ（溶媒；酢酸エチル：メタノール
＝１９：１）を行い０．２５〜０．３付近の吸収像をか
きとり、少量の水を含む酢酸エチルで抽出、水洗、無水
硫酸ナトリウムで乾燥減圧濃縮すると結晶が析出する。
結晶を炉取乾燥するとＣ−１５００駅−Ｃが１０雌得ら
れる。融点１７４ｑｏ元素分析 Ｃ５９．６５、日６．
５８、Ｎ５．０２、ＣＩ６．５１、Ｃ２８日３７ＣＩＮ
２０８計算値Ｃ５９．５２、日６．６０、Ｎ４．９６、
ＣＩ６．２７ＩＲ１７１５Ｉ６７０・１５８０（肌‐１
）ＵＶ（ｎｍ） ２３２（３２７５０）、２４４（ｓｈ
３０８５０）２５２（３１６５０） ２８１（５７５０
） ２８８（５７００）本品の性状はメィタンシノール
と一致する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒは ▲数式、化学式、表等があります▼ 又は ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わ す。 〕で表わされる抗生物質Ｃ−１５００３。 ２ ノカルデイア属に属する抗生物質Ｃ−１５００３生
   産菌を倍地に培養し、培養物中に抗生物質Ｃ−１５００
   ３を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする
   抗生物質Ｃ−１５００３の製造法。