RS62374B1 - Molekuli za vezivanje pd-1 i lag-3 i metode njihove upotrebe - Google Patents

Molekuli za vezivanje pd-1 i lag-3 i metode njihove upotrebe

Info

Publication number
RS62374B1
RS62374B1 RS20211102A RSP20211102A RS62374B1 RS 62374 B1 RS62374 B1 RS 62374B1 RS 20211102 A RS20211102 A RS 20211102A RS P20211102 A RSP20211102 A RS P20211102A RS 62374 B1 RS62374 B1 RS 62374B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
seq
mab
domain
binding
amino acid
Prior art date
Application number
RS20211102A
Other languages
English (en)
Inventor
Kalpana Shah
Douglas H Smith
Motte-Mohs Ross La
Leslie S Johnson
Paul A Moore
Ezio Bonvini
Scott Koenig
Original Assignee
Macrogenics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Macrogenics Inc filed Critical Macrogenics Inc
Publication of RS62374B1 publication Critical patent/RS62374B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/18—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70521—CD28, CD152

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Dermatology (AREA)

Description

Opis
Upuć ivanje na srodne prijave
[0001] Ova prijava temelji pravo na patentnoj prijavi US 62/198,867 (podneta 30. jula 2015; u toku ispitivanja), US 62/239,559 (podneta 9. oktobra 2015; u toku ispitivanja), 62/255,140 (podneta 13. novembra, 2015; u toku ispitivanja) i 62/322.974 (podneta 15. aprila 2016; u toku ispitivanja).
Reference liste sekvence
[0002] Ova prijava uključuje jednu ili više lista sekvenci u skladu sa 37 C.F.R. 1.821 i dalje, koji su obelodanjeni na računarima čitljivim medijima (naziv datoteke: 1301_0122PCT_Sekuence_Listing_ST25.tkt, kreiran 1. jula 2016. i veličine 282.789 bajtova).
Polje pronalaska
[0003] Ovaj pronalazak je usmeren na molekule za vezivanje PD-1 koji sadrže domen za vezivanje PD-1 odabranih od anti-PD-1 antitela sposobnih da se vezuju i za PD-1 majmuna cinomolgus i za ljudski PD-1: PD- 1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15. Pronalazak se posebno odnosi na molekule za vezivanje PD-1 koji su humanizovane ili himerne verzije takvih antitela, ili koje sadrže PD-1 vezujuć e fragmente takvih anti-PD-1 antitela (naročito imunokongugate, dijatela, BiTE, bispecifična antitela itd.). Pronalazak se posebno odnosi na molekule koji vezuju PD-1 i koji su dodatno sposobni da vezuju epitop molekula uključenog u regulaciju imunološke kontrolne tačke koja je prisutna na površini imunološke ć elije. Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupke upotrebe takvih molekula koji vezuju PD-1 za detekciju PD-1 ili za stimulisanje imunolo škog odgovora. Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupke kombinovane terapije u kojima se PD-1-vezujuć i molekul koji sadrži jedan ili više PD-1-vezujuć ih domena (ova) izabranih anti-PD-1 antitela koji se primenjuje u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji su efikasni u stimulisanju imunološkog odgovora i/ili u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji specifično vezuju antigen raka.
Stanje tehnike
IĆ elijski posredovani imunološki odgovori
[0004] Imuni sistem ljudi i drugih sisara odgovoran je za pružanje zaštite od infekcija i bolesti. Takva zaštita obezbeđena je humoralnim imunološkim odgovorom i imunološkim odgovorom posredovanim ć elijom. Humoralni odgovor rezultira proizvodnjom antitela i drugih biomolekula koji su sposobni da prepoznaju i neutrališu strane mete (antigene). Nasuprot tome, ć elijski posredovani imunolo ški odgovor uključuje aktivaciju makrofaga, ć elija prirodnih ubica (NK) i antigen specifi čnih citotoksičnih T-limfocita pomoć u T- ć elija i oslobađanje različitih citokina kao odgovor na prepoznavanje antigena (Dong , C. i sar. (2003) "Imunološka regulacija pomoć u novih kostimulatornih molekula", Imunolog. Res. 28 (1): 39-48).
[0005] Sposobnost T-ć elija da optimalno posreduju u imunološkom odgovoru na antigen zahteva dve različite signalne interakcije (Viglietta, V. et al. (2007) "Modulating CoStimulation", Neurotherapeutics 4: 666-675; Korman, AJ et al. (2007) "Blokada kontrolnih tačaka u imunoterapiji protiv raka", Adv. Immunol.
90: 297-339). Prvo, antigen koji je raspoređen na površini ć elija prisutnih antigena (APC) mora biti predstavljen nezreloj CD4-T-ć eliji specifičnoj za antigen. Takva prezentacija daje signal preko receptora T-ć elija (TCR) koji usmerava T ć eliju da inicira imunološki odgovor koji ć e biti specifičan za predstavljeni antigen. Drugo, niz kostimulacionih i inhibitornih signala, posredovanih kroz interakcije izme đu APC-a i različitih površinskih molekula T-ć elija, prvo pokre ć e aktivaciju i proliferaciju T- ć elija i na kraju njihovu inhibiciju. Dakle, prvi signal daje specifičnost imunološkom odgovoru, dok drugi signal služi za određivanje prirode, veličine i trajanja odgovora.
[0006] Imuni sistem je strogo kontrolisan kostimulatornim i ko-inhibitornim ligandima i receptorima. Ove molekule pružaju drugi signal za aktivaciju T-ć elija i pružaju uravnoteženu mrežu pozitivnih i negativnih signala za maksimiziranje imunoloških odgovora na infekciju uz ograničavanje imuniteta na sebe (Vang, L. i sar. (7. marta 2011) "VISTA , Novi mišji superligand miša koji negativno reguliše reakcije T-ć elija, "J. Ekp.
Med. 10.1084/jem.20100619: 1-16; Lepenies, B. et al. (2008)" Uloga negativnih kostimulatora tokom parazita Infekcije, „Endokrini, metabolički i imunološki poremeć aji - lekovi 8: 279-288). Od posebnog značaja je vezivanje između liganda B7.1 (CD80) i B7.2 (CD86) ć elije koja predstavlja antigen i receptora CD28 i CTLA-4 CD4+ T limfocita (Sharpe, AH et al. (2002) "Superporodica B7-CD28", Nature Rev. Immunol.
2: 116-126; Dong, C. et al. (2003) "Regulacija imuniteta pomoć u novih kostimulatornih molekula", Imunolog. Res. 28 (1): 39-48; Lindlei, P.S. et al. (2009) "Klinička korisnost inhibicije CD28-posredovane kostimulacije", Immunol. Rev. 229: 307-321). Vezivanje B7.1 ili B7.2 za CD28 stimuliše aktivaciju T-ć elija; vezivanje B7.1 ili B7.2 za CTLA-4 inhibira takvu aktivaciju (Dong, C. et al. (2003) "Regulacija imuniteta pomoć u novih kostimulatornih molekula", Imunolog. Res. 28 (1): 39-48; Lindlei , PS i sar. (2009) "Klinička korisnost inhibiranja CD28 posredovane kostimulacije", Immunol. Rev. 229: 307-321; Greenvald, RJ i sar. (2005) "Ponovljena poseta porodice B7", Ann. Rev. Immunol. 23: 515-548). CD28 je konstitutivno izražen na površini T-ć elija (Gross, J., et al. (1992) "Identification and Distribution of Costimulatori Receptor CD28 In The Mouse", J. Immunol. 149: 380-388), dok je CTLA -4 ekspresija se brzo reguliše nakon aktivacije T-ć elija (Linslei, P. et al. (1996) "Intracelularni promet CTLA4 i fokalne lokalizacije ka mestima anga žovanja TCR-a", Immuniti 4: 535-543). Pošto je CTLA-4 receptor višeg afiniteta (Sharpe, AH et al. (2002) "Superporodica B7-CD28," Nature Rev. Immunol. 2: 116-126), vezivanje prvo pokreć e proliferaciju T- ć elija (preko CD28) a zatim ga inhibira (putem novonastale ekspresije CTLA-4), čime se umanjuje efekat kada proliferacija više nije potrebna.
[0007] Daljnja istraživanja liganda receptora CD28 dovela su do identifikacije i karakterizacije skupa srodnih molekula B7 ("superporodica B7") (Coile, AJ et al. (2001) "Proširena B7 superporodica: poveć anje složenosti u kostimulativnim signalima koji regulišu funkciju T-ć elija, "Nature Immunol. 2 (3): 203-209; Sharpe, AH et al. (2002)" Superfamilija B7-CD28, Nature Rev. Immunol. 2: 116-126 ; Greenvald, RJ et al. (2005) "The B7 Famili Revisited", Ann. Rev. Immunol. 23: 515-548; Collins, M. et al. (2005) "The B7 Famili of Immune-Regulatori Ligands," Genome Biol. 6: 223.1-223.7; Loke, P. et al. (2004) "Pojavljujuć i mehanizmi imunološke regulacije: proširena porodica B7 i regulatorne T-ć elije." Arthritis Res. Ther. 6: 208-214; Korman, AJ et al. (2007) "Blokada kontrolnih tačaka u imunoterapiji protiv raka", Adv. Immunol. 90: 297-339; Flies, DB et al. (2007) "Novi B7: Igraju ključnu ulogu u imunosti na tumore", J. Immunother 30 (3): 251-260; Agarval, A. i dr. (2008) "T. Uloga pozitivnih kosimulatornih molekula u transplantaciji i toleranciji, „Curr. Opin. Transplantacija organa. 13: 366-372; Lenschov, D.J. et al. (1996) "CD28/B7 sistem kostimulacije T-ć elija", Ann. Rev. Immunol. 14: 233-258; Vang, S. i sar. (2004) "Kosignalni molekuli porodice B7-CD28 u pozitivnoj i negativnoj regulaciji odgovora limfocita T", Mikrobi zara ženi. 6: 759-766). Trenutno postoji nekoliko poznatih članova porodice: B7.1 (CD80), B7.2 (CD86), inducibilni ko-stimulatorni ligand (ICOS-L), programirani ligand smrt-1 (PD-L1; B7-H1 ), programirani ligand smrti-2 (PD-L2; B7-DC), B7-H3, B7-H4 i B7-H6 (Collins, M. i sar. (2005) "Porodica imuno-regulatornih liganda B7, "Genom Biol. 6: 223.1-223.7; Flajnik, MF et al. (2012)" Evolucija porodice B7: ko-evolucija B7H6 i Nkp30, identifikacija novog člana porodice B7, B7H7 i istorijske veze B7 sa MHC, „Immunogenetics epub doi.org/10.1007/s00251-012-0616-2).
II. Programirana smrt-1 ("PD-1")
[0008] Programirana smrt-1 ("PD-1", takođe poznata i kao "CD279") je otprilike 31 kD membranski proteinski član tipa I iz proširene porodice regulatora T-ć elija CD28/CTLA-4 koji široko negativno reguliše imunološki sistemski odgovori (Ishida, I. et al. (1992) "Indukovana ekspresija PD-1, novi član superporodice gena imunoglobulina, nakon programirane ć elijske smrti", EMBO J. 11: 3887-3895; Publikacija br.
2007/0202100; 2008/0311117; 2009/00110667; patenti US br. 6,808,710; 7,101,550; 7,488,802; 7,635,757; 7,722,868; PCT publikacija br. WO 01/14557).
[0009] PD-1 se eksprimira na aktiviranim T-ć elijama, B- ć elijama i monocitima (Agata, I. et al. (1996) "Ekspresija PD-1 antigena na površini stimuliranih limfocita T i B miša, "Int. Immunol. 8 (5): 765-772; Iamazaki, T. et al. (2002)" Ekspresija programiranih smrti 1 Liganda od majmuna T-ćelije i APC, "J. Immunol. 169: 5538-5545) i na niskim nivoima u T-ć elijama prirodnih ubica (NK) (Nishimura, H. et al. (2000) "Olakšavanje selekcije beta i modifikacija pozitivne selekcije u timusu mi ševa sa nedostatkom PD-1", J. Ekp. Med. 191: 891-898; Martin-Orozco, N. i dr. (2007) "Inhibitori Costimulation And Antitumor Immuniti", Semin. Cancer Biol. 17 (4): 288-298).
[0010] Izvanć elijski region PD-1 sastoji se od jednog imunoglobulinskog (Ig) V domena sa 23 % identiteta ekvivalentnog domena u CTLA-4 (Martin-Orozco, N. i dr. (2007) "Inhibitori kostimulacije i anti-tumorski imunitet, "Semin. Biocr. Cancer Biol. 17 (4): 288-298). Izvanć elijski IgV domen prati transmembranski region i unutarć elijski rep. Unutar ć elijski rep sadrži dva mesta fosforilacije koja se nalaze u inhibitornom motivu imunoreceptora na bazi tirozina na bazi imunoreceptora na bazi tirozina, što sugeriše da PD-1 negativno reguliše TCR signale (Ishida, I. et al. (1992) "Indukovana ekspresija PD-1, novi član superporodice gena imunoglobulina, nakon programirane ć elijske smrti, "EMBO J. 11: 3887-3895; Blank, C.
et al. (2006)" Doprinos PD-L1/PD- 1 Put do iscrpljivanja T-ć elija: ažuriranje o implikacijama za hronične infekcije i rak izbegavanja tumora, "Immunol. Immunother.56 (5): 739-745).
[0011] PD-1 posreduje u inhibiciji imunološkog sistema vezivanjem za B7-H1 i B7-DC (Flies, DB et al. (2007) "Novi B7: Igraju ključnu ulogu u imunosti na tumore", J. Immunother 30 (3): 251-260; patenti US br.
6,803,192; 7,794,710; objave br. 2005/0059051; 2009/0055944; 2009/0274666; 2009/0313687; WO 02/086083).
[0012] B7-H1 i B7-DC su široko izraženi na površinama ljudskih i mišjih tkiva, poput srca, placente, mišić a, fetalne jetre, slezine, limfnih čvorova i timusa, kao i mišje jetre, pluć a, bubrega, ostrvske ć elije pankreasa i tankog creva (Martin-Orozco, N. i sar. (2007) "Inhibitors Costimulation And Antitumor Immunity", Semin. Cancer Biol. 17 (4): 288-298). Kod ljudi, ekspresija proteina B7-H1 pronađena je u humanim endotelnim ć elijama (Chen, I. et al. (2005) "Ekspresija B7 H1 u inflamatornim bubre žnim tubularnim epitelnim ć elijama", Nephron. Ekp. Nephrol. 102: e81-e92 ; de Haij, S. et al. (2005) "Bubre žne tubularne epitelne ć elije moduliraju odgovore T- ć elija putem ICOS-L i B7-H1" Int. 68: 2091-2102; Mazanet, MM et al. (2002) " B7-H1 se eksprimira u ljudskim endotelnim ć elijama i potiskuje sintezu citokina T- ć elija, "J. Immunol. 169: 3581-3588), miokard (Brovn, JA i sar. (2003)" Blokada programiranih ligamenata smrti-1 na dendritici Ć elije poboljšavaju aktivaciju T- ć elija i proizvodnju citokina, "J. Immunol. 170: 1257-1266), sinciciiotrofoblasti (Petroff, MG i sar. (2002)" Molekuli porodice B7: novi imunomodulatori na interfejsu majke i ploda, "Placenta 23 : S95-S101). Molekule takođe eksprimiraju rezidentni makrofagi nekih tkiva, makrofagi koji su aktivirani interferonom (IFN) -i ili faktorom tumorske nekroze (TNF) -a (Latchman, I. et al. (2001) "PD-L2 Is Drugi ligand za PD-1 i inhibira aktivaciju T-ć elija, "Nat. Immunol 2: 261-268), i kod tumora (Dong, H. (2003)" B7-H1 put i njegova uloga u izbegavanju tumorskog imuniteta , "J. Mol. Med. 81: 281-287).
[0013] Utvrđeno je da interakcija između B7-H1 i PD-1 pruža ključni negativni kostimulatorni signal T i B-ć elijama (Martin-Orozco, N. i sar. (2007) "Inhibitorna kostimulacija i antitumorski imunitet , "Semin. Biol. Cancer. 17 (4): 288-298) i funkcioniše kao induktor ć elijske smrti (Ishida, I. et al. (1992)" Indukovana ekspresija PD-1, novog člana superporodice gena imunoglobulina , After Programmed Cell Death, "EMBO J.
11: 3887-3895; Subudhi, SK et al. (2005)" Balance of Immune Responses: Costimulation Verse Coinhibition, "J. Molec. Med. 83: 193-202). Preciznije, utvrđeno je da interakcija između niskih koncentracija receptora PD-1 i liganda B7-H1 dovodi do prenosa inhibitornog signala koji snažno inhibira proliferaciju CD8+ T-ć elija specifičnih za antigen; pri već im koncentracijama interakcije sa PD-1 ne inhibiraju proliferaciju T- ć elija, ali značajno smanjuju proizvodnju više citokina (Sharpe, AH et al. (2002) "The B7-CD28 Superfamili," Nature Rev. Immunol. 2: 116 -126). Utvrđeno je da su proliferacija T-ć elija i proizvodnja citokina i u mirovanju i u prethodno aktiviranim CD4 i CD8 T-ć elijama, pa čak i u naivnim T- ć elijama iz krvi iz pupčane vrpce, inhibirane rastvorljivim fuzionisanim proteinima B7-H1-Fc (Freeman, GJ et al. (2000) "Anga žovanje imuno-inhibitornog receptora PD-1 od strane člana porodice B7 dovodi do negativne regulacije aktivacije limfocita", J. Ekp. Med. 192: 1-9; Latchman, I. etal. 2001) "PD-L2 je drugi ligand za PD-1 i inhibira aktivaciju T-ć elija," Nature Immunol. 2: 261-268; Carter, L. et al. (2002) "PD-1: PD-L inhibitor Put uti če i na CD4 (+) i na CD8 (+) T-ć elije i savladava ih IL-2, "Eur. J. Immunol. 32 (3): 634-643; Sharpe, AH etal. (2002)" The B7 -CD28 Superfamili, "Nature Rev. Immunol.2: 116-126).
[0014] Uloga B7-H1 i PD-1 u inhibiranju aktivacije i proliferacije T-ć elija sugeri še da bi ovi biomolekuli mogli poslužiti kao terapijske mete za lečenje upale i raka. Tako je predložena upotreba antitela na PD-1 za lečenje infekcija i tumora i poveć anje modulacije adaptivnog imunolo škog odgovora (vidi, US br.
2010/0040614; 2010/0028330; 2004/0241745; 2008 /0311117; 2009/0217401; US br. 7,521,051; 7,563,869; 7,595,048; objave PCT-a WO 2004/056875; VO 2008/083174). Agata, T. i sar. Su prijavili antitela sposobna za specifično vezivanje za PD-1. (1996) "Ekspresija PD-1 antigena na površini stimuliranih limfocita T i B miša", Int. Immunol. 8 (5): 765-772; i Berger, R. etal. (2008) "I faza bezbednosti i farmakokinetička studija CT-011, humanizovanog antitela u interakciji sa PD-1, kod pacijenata sa uznapredovalim hematolo škim malignitetima", Clin. Cancer Res. 14 (10): 3044-3051 (vidi, takođe, US br. 8,008,449 i 8,552,154; US br.
2007/0166281; 2012/0114648; 2012/0114649; 2013/0017199; 2013/0230514 i 2014/0044738 i PCT US br. WO 2003/099196; WO 2004/004771; WO 2004/056875; WO 2004/072286; WO 2006/121168; WO 2007/005874; WO 2008/083174; WO 2009/014708; WO 2009/ 073533; WO 2012/135408, WO 2012/145549; i WO 2013/014668).
[0015] Međutim, uprkos svim takvim napredovanjima, ostaje potreba za poboljšanim sastavima sposobnim za snažnije usmeravanje imunološkog sistema tela da napada ć elije raka ili ć elije inficirane patogenima, posebno pri nižim terapijskim koncentracijama. Jer iako adaptivni imunolo ški sistem može biti moć an odbrambeni mehanizam protiv raka i bolesti, često ga ometaju imunološki supresivni mehanizmi u mikrookruženju tumora, poput ekspresije PD-1. Štaviše, ko-inhibitorni molekuli koje eksprimiraju tumorskeć elije, imunske ć elije i stromalne ć elije u tumorskom miljeu mogu dominantno oslabiti odgovore T-ć elija protiv ć elija raka. Dakle, ostaje potreba za mo ć nim molekulima koji se vezuju za PD-1. Konkretno, postoji potreba za snažnim molekulima koji se vezuju za PD-1 sa poželjnim kinetičkim profilom vezivanja i koji antagoniziraju osovinu PD-1/PD-L1 blokiranjem interakcije PD-1/PD-L1, što bi moglo pružiti poboljšanu terapijsku učinkovitost pacijentima koji boluju od raka ili drugih bolesti i stanja. Ovaj pronalazak je usmereno na ove i druge ciljeve.
[0016] WO 2014194302 se odnosi na kompozicije i postupke koji se odnose na ili potiču od antitela na PD-1.
[0017] WO 2014179664 se odnosi na izolovani polipeptid teškog lanca imunoglobulina i izolovani imunoglobulin polipeptid lakog lanca koji se vezuje za programiranu smrt proteina-1 (PD-1).
Suština pronalaska
[0018] Ovaj pronalazak je usmeren na multispecifični anti-humani PD-1-vezujuć i molekul koji sadrži domen promenljivog teškog lanca i domen promenljivog lakog lanca, pri čemu navedeni domen promenljivog teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR: 147, i navedeni domen promenljivog lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR: 153. Pronalazak je takođe usmeren na kompoziciju koja sadrži multispecifični molekul vezan za humani PD-1 prema pronalasku i farmaceutski prihvatljiv nosač. Pronalazak je takođe usmeren na multispecifični antihumani PD-1 vezujuć i molekul, ili kompoziciju iz pronalaska za upotrebu u (A) metodu stimulacije imunološkog odgovora posredovanog T-ć elijama subjekta kome je to potrebno ili (B) lečenje bolesti ili stanja povezanih sa oslabljenim imunološkim sistemom. Pronalazak je takođe usmeren na upotrebu multispecifičnog antihumanog molekula koji vezuje PD-1 prema pronalasku u in vitro detekciji PD-1, pri čemu je navedeni molekul ili navedeno antitelo detektabilno obeleženo. Ostvarenja pronalaska su opisana u nekim donjim slučajevima. Ovaj pronalazak je usmeren na molekule za vezivanje PD-1 koji sadrže domen za vezivanje PD-1 odabranih anti-PD-1 antitela sposobnih da se vezuju i za PD-1 majmuna cinomolgusa i za humani PD-1: PD-1 mAb 1 , PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD -1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15. Pronalazak se posebno odnosi na molekule za vezivanje PD-1 koji su humanizovani ili himerični verzije takvih antitela, ili koje sadrže fragmente vezivanja PD-1 takvih anti-PD-1 antitela (naročito imunokongugate, dijatela, BiTE, bispecifična antitela itd.). Pronalazak se posebno odnosi na molekule koji se vezuju za PD-1 i koji su dodatno sposobni da vezuju epitop molekula uključenog u regulaciju imunološke kontrolne tačke koja je prisutna na površini imunske ć elije. Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupke upotrebe takvih molekula koji vezuju PD-1 za detekciju PD-1 ili za stimulisanje imunološkog odgovora. Ovaj pronalazak se takođe odnosi na metode kombinovane terapije u kojima se PD-1-vezujuć i molekul koji sadrži jedan ili više PD-1-vezuju ć ih domena (ova) izabranih antitela na PD-1 primenjuje u kombinaciji sa jednim ili vi še dodatnih molekula koji su efikasni u stimulisanju imunološkog odgovora i/ili u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji specifično vezuju antigen raka.
[0019] Detaljno, pronalazak obezbeđuje molekul koji se vezuje za humani PD-1 koji sadrži tri CDR domena teškog lanca, CDRH1, CDRH2 i CDRH3 i tri domena lakog lanca CDR, CDRL1, CDRL2 i CDRL3, pri čemu:
(A)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 1, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 71, SEK ID BR: 72 i SEK ID BR: 73; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3, su CDR lakog lanca PD-1 mAb 1 i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 76, SEK ID BR: 77 i SEK ID BR: 78;
ili
(B)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 2, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 85, SEK ID BR: 86 i SEK ID BR: 87; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 2 i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 90, SEK ID BR: 91 i SEK ID BR: 92;
ili
(C)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su teški lanci CDR-a PD-1 mAb 3, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 99, SEK ID BR: 100 i SEK ID BR: 101; i
(2) domena domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3, su CDR lakog lanca PD-1 mAb 3 i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 104, SEK ID BR: 105 i SEK ID NO : 106;
ili
(D)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 4, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 109, SEK ID BR: 110 i SEK ID BR: 111; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 4 i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 114, SEK ID BR: 115 i SEK ID BR: 116;
ili
(E)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 5, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 119, SEK ID BR: 120 i SEK ID BR: 121; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 5 i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 124, SEK ID BR: 125 i SEK ID BR: 126;
ili
(F)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 6, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 129, SEK ID BR: 130 i SEK ID BR: 131; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 6, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 134, SEK ID BR: 135 i SEK ID BR: 136;
ili
(G)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 7 i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 139, SEK ID BR: 140 i SEK ID BR: 141; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 7 i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 144, SEK ID BR: 145 i SEK ID BR: 146;
ili
(H)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 8 i imaju sekvence aminokiselina: SEK ID BR: 161, SEK ID BR: 162 i SEK ID BR: 163; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 su CDR lakog lanca PD-1 mAb 8, i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 166, SEK ID BR: 167 i SEK ID BR: 168;
ili
(I)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 9 i imaju sekvence aminokiselina: SEK ID BR: 171, SEK ID BR: 172 i SEK ID BR: 173; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 9 i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 176, SEK ID BR: 177 i SEK ID BR: 178;
ili
(J)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su teški lanci CDR-a PD-1 mAb 10 i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 192, SEK ID BR: 193 i SEK ID BR: 194; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 su CDR lakog lanca PD-1 mAb 10 i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 197, SEK ID BR: 198 i SEK ID BR: 199;
ili
(K)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 11, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 202, SEK ID BR: 203 i SEK ID BR: 204; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 11 i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 207, SEK ID BR: 208 i SEK ID BR: 209;
ili
(L)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 12, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 212, SEK ID BR: 213 i SEK ID BR: 214; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 12, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 217, SEK ID BR: 218 i SEK ID BR: 219
ili
(M)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 13, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 222, SEK ID BR: 223 i SEK ID BR: 224; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 13, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 227, SEK ID BR: 228 i SEK ID BR: 229;
ili
(N)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 14, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 232, SEK ID BR: 233 i SEK ID BR: 234; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 su CDR lakog lanca PD-1 mAb 14, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 237, SEK ID BR: 238 i SEK ID BR: 239;
ili
(O)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 15, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 242, SEK ID BR: 243 i SEK ID BR: 244; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 15, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 247, SEK ID BR: 248 i SEK ID BR: 249;
ili
(P)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su teški lanci CDR-ova hPD-1 mAb 7 (1.2) i imaju sekvence aminokiselina: SEK ID BR: 139, SEK ID BR: 140 i SEK ID BR: 141; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca hPD-1 mAb 7 (1.2) i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 157, SEK ID BR: 145, i SEK ID BR: 146;
ili
(Q)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca hPD-1 mAb 7 (1.3) i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 139, SEK ID BR: 140 i SEK ID BR: 141; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca hPD-1 mAb 7 (1.3) i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 157, SEK ID BR: 158, i SEK ID BR: 145;
ili
(R)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca hPD-1 mAb 9 (2.2) i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 183, SEK ID BR: 172 i SEK ID BR: 173; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca hPD-1 mAb 9 (2.2) i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 188, SEK ID BR: 189, i SEK ID BR: 178.
[0020] Pronalazak se dalje odnosi na slučajeve svih takvih molekula koji vezuju humane PD-1, pri čemu je molekul antitelo, posebno pri čemu je molekul himerno antitelo ili humanizovano antitelo.
[0021] Pronalazak se dalje odnosi na slučajeve takvih molekula koji se vezuju za humani PD-1, pri čemu promenljivi domen teškog lanca ima aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR: 79, SEK ID BR: 93, SEK ID BR: 147, SEK ID BR: 149, SEK ID BR: 179, SEK ID BR: 181, ili SEK ID BR: 250.
[0022] Pronalazak se dalje odnosi na slučajeve takvih molekula koji se vezuju za humani PD-1, gde promenljiva domena lakog lanca ima aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR: 81, SEK ID BR: 95, SEK ID BR: 151, SEK ID BR: 153, SEK ID BR: 155, SEK ID BR: 184, SEK ID BR: 186, ili SEK ID BR: 251.
[0023] Pronalazak se dalje odnosi na slučaj gde je molekul koji vezuje anti-humani PD-1 bispecifični vezujuć i molekul, sposoban da se istovremeno veže za humani PD-1 i za drugi epitop, a posebno se tiče primera gde je drugi epitop je epitop molekula uključenog u regulaciju imunološke kontrolne tačke prisutne na površini imunološke ć elije (posebno gde je drugi epitop epitop B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD40L, CD47, CD70, CD80, CD86, CD94, CD137, CD137L, CD226, CTLA-4, Galectin-9, GITR, GITRL, HHLA2, ICOS, ICOSL, KIR, LAG-3, SVETLO, MHC klase I ili II, NKG2a, NKG2d, OKS40, OKS40L, PD1H, PD-1, PD-L1, PD-L2, PVR, SIRPa, TCR, TIGIT, TIM-3 ili VISTA, a naročito gde je druga epitop je epitop CD137, CTLA-4, LAG-3, OKS40, TIGIT ili TIM-3).
[0024] Pronalazak se dalje odnosi na slučajeve u kojima je molekul koji se vezuje za humani PD-1 bispecifičan molekul koji sadrži mesto vezivanja za epitop LAG-3, posebno gde mesto za vezivanje epitopa LAG-3 sadrži:
(A)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 promenljivog teškog lanca LAG-3 mAb 1, koji ima aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 42, SEK ID BR: 43, i SEK ID BR: 44, respektivno; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 promenljivog lakog lanca LAG-3 mAb 1, koji ima aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 46, SEK ID BR: 47, i SEK ID BR: 48, respektivno;
ili
(B)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 promenljivog teškog lanca hLAG-3 mAb 1 VH1, koji ima aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 42, SEK ID BR: 43 i SEK ID BR: 44, respektivno; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 promenljivog lakog lanca hLAG-3 mAb 1 VL4, koji ima aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 55, SEK ID BR: 47 i SEK ID BR: 48, respektivno;
ili
(C)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 promenljivog teškog lanca LAG-3 mAb 6, koji ima aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 57, SEK ID BR: 58 i SEK ID BR: 59, respektivno; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 promenljivog lakog lanca LAG-3 mAb 6, koji ima aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 61, SEK ID BR: 62, i SEK ID BR: 63, respektivno;
ili
(D)
(1) domeni CDRH1, CDRH2 i CDRH3 promenljivog teškog lanca hLAG-3 mAb 6 VH1, koji ima aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 57, SEK ID BR: 58 i SEK ID BR: 59, respektivno; i
(2) domeni CDRL1, CDRL2 i CDRL3 promenljivog lakog lanca LAG-3 mAb 6, koji ima aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 298, SEK ID BR: 62 i SEK ID BR: 63, respektivno.
[0025] Pronalazak se dalje odnosi na slučaj takvih molekula koji vežu humane PD-1, pri čemu je molekul dijatelo, a posebno pri čemu je dijatelo kovalentno vezan kompleks koji sadrži dva, tri, ili četiri ili pet polipeptidnih lanaca. Pronalazak se dalje odnosi na primer takvih molekula koji se vezuju za humane PD-1, pri čemu je molekul trovalentni vezujuć i molekul, a posebno pri čemu je molekul trovalentnog vezivanja kovalentno vezan kompleks koji sadrži tri, četiri, pet ili više od pet lanaca polipeptida. Pronalazak se dodatno odnosi na slučaj takvih molekula koji se vezuju za humane PD-1 u kojima molekul sadrži Fc region. Pronalazak se dodatno odnosi na slučaj takvih molekula koji se vezuju za humane PD-1 u kojima molekul sadrži domen koji veže albumin, a posebno deimunizovan domen koji veže albumin.
[0026] Pronalazak se dalje odnosi na slučajeve svih takvih molekula koji vežu humane PD-1, pri čemu molekul sadrži Fc region, i pri čemu je Fc region varijanta Fc regiona koji sadrži jednu ili više aminokisele modifikacije koje smanjuju afinitet varijantnog Fc regiona za FcgR i/ili poveć avaju polu život u serumu, a naročito, pri čemu modifikacije sadrže najmanje jednu supstituciju aminokiselina izabranu iz grupe koju čine:
(1) L234A; L235A;
(2) L234A i L235A;
(3) M252I; M252I i S254T;
(4) M252I i T256E;
(5) M252I, S254T i T256E; ili
(6) K288D i H435K;
pri čemu je numerisanje indeksa EU kao u Kabatu.
[0027] Pronalazak se dalje odnosi na slučajeve u kojima se bilo koji od napred opisanih molekula koji vežu PD-1 koristi za stimulaciju imunološkog odgovora posredovanog T-ć elijama. Pronalazak se dodatno odnosi na slučajeve u kojima se bilo koji od napred opisanih molekula koji vežu PD-1 koristi u lečenju bolesti ili stanja povezanih sa potisnutim imunološkim sistemom, posebno rakom ili infekcijom.
[0028] Pronalazak se posebno odnosi na takvu upotrebu u lečenju ili dijagnostici ili prognozi raka, pri čemu se rak karakteriše prisustvom ć elije raka koja je izabrana iz grupe koju čine ć elije: tumor nadbubrežne žlezde, povezan sa AIDS-om rak, alveolarni sarkom mekog dela, astrocitni tumor, rak be šike, rak kostiju, rak mozga i kičmene moždine, metastatski tumor mozga, rak dojke, tumori karotidnog tela, rak grlić a materice, hondrosarkom, hordoma, hromofobni karcinom bubre žnih ć elija, karcinom čistih ć elija, rak debelog creva, kolorektalni karcinom, kožni benigni fibrozni histiocitom, desmoplastični tumor malih okruglih ć elija, ependimom, Evingov tumor, ekstraskeletni miksoidni hondrosarkom, fibrogeneza displazija kostiju, rak žučne kese ili žučnih puteva, rak želuca, gestacijska trofoblastna bolest, tumor zametnih ć elija, rak glave i vrata, hepatocelularni karcinom, Kaposijev sarkom, rak bubrega, leukemija, lipom/benigni lipomatozni tumor, liposarkom/maligni lipomatozni tumor, rak jetre, limfom, rak pluć a, meduloblastom, melanom, meningiom, višestruka endokrina neoplazija, multipli mijelom, mijelodisplastični sindrom, neuroblastom, neuroendokrini tumori, rak jajnika, rak pankreasa, papilarni karcinom štitne žlezde, paratiroidni tumor, pedijatrijski karcinom, tumor perifernih nervnih ovojnica, feohromocitom, tumor hipofize, prostata rak, strašni uvealni melanom, retki hematološki poremeć aj, bubrežni metastatski rak, rabdoidni tumor, rabdomisarkom, sarkom, rak kože, sarkom mekih tkiva, karcinom pločastihć elija, rak želuca, sinovijalni sarkom, rak testisa, karcinom timusa, timom, metastatski rak štitne žlezde i rak materice.
[0029] Pronalazak se posebno odnosi na takvu upotrebu u lečenju ili dijagnosticiranju ili prognozi raka, pri čemu je rak kolorektalni karcinom, hepatocelularni karcinom, gliom, rak bubrega, rak dojke, multipla mijelom, rak bešike, neuroblastom; sarkom, ne-Hodgkinov limfom, nedrobnoć elijski karcinom plu ć a, rak jajnika, pankreatički karcinom, rektalni karcinom, akutna mijeloična leukemija (AML), hronična mijeloična leukemija (CML), akutna B limfofinijska leukemija (B-ALL), hronična limfocitna leukemija (CLL), leukemija dlakavih ć elija (HCL), blastična neoplazma dendritičkih ć elija plazmacitoidnih ć elija (BPDCN), ne-Hodgkinovi limfomi (NHL), uključujuć i leukemiju mantel ć elija (MCL) i mali limfocitni limfom (SLL), Hodgkinova bolest limfom, sistemska mastocitoza ili Burkittov limfom.
[0030] Pronalazak se dalje odnosi na slučajeve u kojima je bilo koji od napred opisanih molekula koji vežu PD-1 detektabilno obeležen i korišć en u detekciji PD-1.
Kratak opis slika
[0031] Slika 1 prikazuje šemu reprezentativnog kovalentno povezanog dijatela koje ima dva epitopvezujuć a mesta sastavljena od dva polipeptidna lanca, od kojih svaki ima E-zavojnicu ili K-zavojnicu heterodimera koji promoviše domen. Ostatak cisteina može biti prisutan u linkeru i/ili u domenu koji promoviše heterodimer, kao što je prikazano na slici 3B. VL i VH domeni koji prepoznaju isti epitop prikazani su koristeć i isti obrazac senčenja ili popunjavanja.
[0032] Slika 2 prikazuje šemu reprezentativnog kovalentno vezanog molekula dijatela sa dva epitopvezujuć a mesta sastavljena od dva polipeptidna lanca, od kojih svaki ima domen CH2 i CH3, tako da povezani lanci formiraju ceo ili deo Fc regiona. VL i VH domeni koji prepoznaju isti epitop prikazani su koristeć i isti obrazac senčenja ili popunjavanja.
[0033] Slike 3A-3C pružaju šeme koje prikazuju reprezentativna tetravalentna dijatela koja imaju četiri epitop-vezujuć a mesta sastavljena od dva para polipeptidnih lanaca (tj. ukupno četiri polipeptidna lanca). Jedan polipeptid svakog para poseduje domen CH2 i CH3, tako da povezani lanci formiraju celu ili deo Fc regije. VL i VH domeni koji prepoznaju isti epitop prikazani su koristeć i isti obrazac sen čenja ili popunjavanja. Dva para polipeptidnih lanaca mogu biti isti. U takvim slu čajevima u kojima VL i VH domeni prepoznaju različite epitope (kao što je prikazano na slikama 3A-3C), dobijeni molekul poseduje četiri mesta za vezivanje epitopa i bispecifičan je i dvovalentan u odnosu na svaki vezani epitop. U takvim slučajevima gde VL i VH domeni prepoznaju isti epitop (npr. isti CDR-ovi VL domena i isti CDR-i VH domena se koriste na oba lanca), rezultujuć i molekul poseduje četiri mesta za vezivanje epitopa i monospecifičan je i četvorovalentan u odnosu na do jednog epitopa. Alternativno, dva para polipeptida mogu biti različita. U takvim slučajevima u kojima VL i VH domeni svakog para polipeptida prepoznaju različite epitope (kao što je prikazano na slikama 3A-3C), rezultujuć i molekul poseduje četiri mesta za vezivanje epitopa i tetraspecifičan je i monovalentan u odnosu na svaki vezani epitop. Slika 3A prikazuje Fc dijatelo koje sadrži peptidni domen koji promoviše heterodimer, koji sadrži ostatak cisteina. Slika 3B prikazuje dijatelo koje sadrži Fc regiju, koje sadrži E-zavojnice i K-zavojnice domena koji promovi še heterodimere, a koji sadrži ostatak cisteina i vezivo (sa opcionim ostatkom cisteina). Na slici 3C, prikazan je Fc-region koji sadrži dijatelo, koje sadrži CH1 i CL domene antitela.
[0034] Slike 4A i 4B pružaju šeme reprezentativnog kovalentno vezanog molekula dijatela koji ima dva mesta za vezivanje epitopa sastavljena od tri polipeptidna lanca. Dva polipeptidna lanca poseduju domenu CH2 i CH3, tako da povezani lanci čine celu ili deo Fc regiona. Polipeptidni lanci koji obuhvataju VL i VH domen dalje sadrže domen koji promoviše heterodimer. VL i VH domeni koji prepoznaju isti epitop prikazani su koristeć i isti obrazac senčenja ili popunjavanja.
[0035] Slika 5 prikazuje šeme reprezentativnog kovalentno vezanog molekula dijatela sa četiri epitopvezana mesta sastavljena od pet polipeptidnih lanaca. Dva polipeptidna lanca poseduju domenu CH2 i CH3, tako da povezani lanci formiraju Fc regiju koja obuhvata celu ili deo Fc regije. Polipeptidni lanci koji sadrže povezane VL i VH domene dalje sadrže domen koji promoviše heterodimer. VL i VH domeni koji prepoznaju isti epitop prikazani su koristeć i isti obrazac senčenja ili popunjavanja.
[0036] Slike 6A-6F daju šeme reprezentativnih trovalentnih vezujuć ih molekula koji sadrže region Fc koji imaju tri mesta za vezivanje epitopa. Slike 6A i 6B, redom, ilustruju šematski domene trovalentnih vezujuć ih molekula koji se sastoje od dva domena vezivanja tipa dijatela i veznog domena tipa Fab koji ima različite orijentacije domena u kojima su domeni vezanja tipa antitela N-terminalni ili C- terminal do Fc regije. Molekuli na slikama 6A i 6B sadrže četiri lanca. Slike 6C i 6D, redom, ilustruju šematski domene trovalentnih vezujuć ih molekula koji se sastoje od dva domena veznog tipa dijatebola N-terminala za Fc region, i veznog domena tipa Fab u kome su laki lanac i teški lanac obojeni polipeptidnim razmakom ili vezni domen tipa scFv. Molekuli trovalentnog vezivanja na slikama 6E i 6F, redom, ilustruju šematski domene trovalentnih vezujuć ih molekula koji sadrže dva domena vezivanja tipa dijatela tipa C-terminal za Fc region, i povezani vezni domen tipa Fab, ili vezni domen tipa scFv u kojima su domeni vezivanja tipa dijatela. Molekuli trovalentnog vezivanja na slikama 6C-6F sadrže tri lanca. VL i VH domeni koji prepoznaju isti epitop prikazani su koristeć i isti obrazac senčenja ili popunjavanja.
[0037] Slike 7A-7D pokazuju da se anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15 vezuju za humani PD-1. Krive vezivanja za shPD-1-His prikazane su na slici 7A (PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 4 i PD-1 mAb 9), na slici 7B (PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6 i PD-1 mAb 7) i slici 7C (PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, i PD-1 mAb 15). Krive vezivanja za shPD-1 humani Fc prikazane su na slici 7D (PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 i PD-1 mAb 15).
[0038] Slike 8A-8C pokazuju da se anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15 vezuju za cinomolgus majmuna PD-1. Krive vezivanja za vezivanje za scinoPD-1-hFc prikazane su na slici 8A (PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7), slici 8B (PD-1 mAb 9) i slici 8C (PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 i PD-1 mAb 15).
[0039] Slike 9A-9D pokazuju sposobnost anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15 da blokiraju vezivanje humanog PD-L1 za humani PD-1. Krive inhibicije su prikazane na slici 9A (PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 15 i PD-1 mAb A), slici 9B (PD-1 mAb 4) i slici 9C (PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7 i PD-1 mAb A) i Slika 9D (PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 10 , PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb
1
14, PD-1 mAb 15 i PD-1 mAb A).
[0040] Slike 10A-10B pokazuju specifičnost tkiva anti-humanog antitela na PD-1 PD-1 mAb 7. Slika 10A prikazuje histološke boje normalnog debelog creva (paneli i i vii), jetre (paneli ii i viii), pluć a (paneli iii i ix), tkivo pankreasa (paneli iv i x), bubreg (paneli v i xi) i srce (paneli vi i xii). Slika 10A, paneli i-vi prikazuju rezultate tkiva inkubiranog sa obeleženim PD-1 mAb 7 (0,313 mg/mL). Slika 10A, paneli vii-xii prikazuju rezultate tkiva inkubiranog sa obeleženim izotipom kontrolnog mAb (0,314 mg/mL). Slika 10B prikazuje histološke mrlje kože (paneli i iv), krajnika (paneli ii i v) i NSO ć elije koje eksprimiraju PD-1 (paneli iii i vi). Slika 10B, paneli i-iii prikazuju rezultate tkiva inkubiranog sa obeleženim PD-1 mAb 7 (0,313 mg/mL).
[0041] Slika 11 prikazuje profile vezivanja humanizovanih anti-humanih antitela na PD-1 hPD-1 mAb 2, hPD-1 mAb 7 (1.1), hPD-1 mAb 7 (1.2), hPD-1 mAb 9 (1.1) i referentna anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B koja imaju IgG1 (AA) ili IgG4 (P) za vezivanje za ć elijsku površinu PD-1.
[0042] Slike 12A-12B pokazuju sposobnost humanizovanih anti-PD antitela hPD-1 mAb 2, hPD-1 mAb 7 (1.1), hPD-1 mAb 7 (1.2), hPD-1 mAb 9 (1.1) i referentna anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B, koja imaju IgG1 (AA) ili IgG4 (P) da blokiraju vezivanje rastvorljivog ljudskog PD-L1 (slika 12A) i rastvorljivog ljudskog PD-L2 (slika 12B) nać elijskoj površini ljudskog PD-1.
[0043] Slika 13 prikazuje sposobnost humanizovanih anti-PD antitela hPD-1 mAb 2, hPD-1 mAb 7 (1.1), hPD-1 mAb 7 (1.2), hPD-1 mAb 9 (1.1) i referentnu anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B, koja imaju IgG1 (AA) ili IgG4 (P) da antagoniziraju osovinu PD-1/PD-L1 blokiranjem interakcije PD-1/PD-L1 i sprečavanje smanjenja T-ć elijskih odgovora u Jurkat-luc-NFAT / CHO-PD-L1 reporter testu luciferaze.
[0044] Slika 14 pokazuje da su PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 sposobni da stimulišu proizvodnju citokina do nivoa uporedivih ili vi ših od navedenih anti-PD-1 antitela. (PD-1 mAb A i PD-1 mAb B) i taj tretman sa PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 u kombinaciji sa LAG-3 mAb 1 obezbedio je najveć e pove ć anje oslobađanja citokina. Profili sekrecije IFNg iz stafilokoknih enterotoksina B (SEB) -stimuliranih PBMC-ova tretiranih sa anti-PD-1 i anti-LAG-3 antitelima sami i u kombinaciji.
[0045] Slike 15A-15B pokazuju sposobnost humanizovanih anti-PD antitela hPD-1 mAb 2, hPD-1 mAb 7 (1.2), hPD-1 mAb 9 (1.1) i referentna anti-PD-1 antitela PD -1 mAb A i PD-1 mAb B, sa IgG1 (AA) ili IgG4 (P) za stimulisanje proizvodnje citokina. IFNg (Slika 15A) i TNFa (Slika 15B), profili sekrecije iz SEB-stimuliranih PBMC-a tretiranih sa anti-PD-1 antitelima.
[0046] Slike 16A-16B pokazuju da PD-1 x LAG-3 bispecifična konstrukcija dijatela DART A, DART D, DART E, DART F, DART G i DART H, mogu da stimulišu proizvodnju citokina do nivoa uporedivih ili viših od koje su uočene nakon primene kombinacije anti-PD-1 mAb i anti-LAG-3 mAb (PD-1 mAb A LAG-3 mAb A), i da je PD-1 x LAG-3 bispecifična konstrukcija dijatela DART A, DART D, DART E, DART F i DART G obezbedila najveć e pove ć anje oslobađanja citokina. Profili sekrecije IFNg PBMC-a stimulisani niskom koncentracijom SEB-a (0,2 ng/mL tretirani sa PD-1 x LAG-3 bispecifičnim antitelima, ili samo na antitela na PD-1 i anti-LAG-3 i u kombinaciji. Rezultati dobijeni pomoć u PBMC-a dva reprezentativna donatora prikazani su na Slici 16A i Slici 16B.
[0047] Slike 17A-17B pokazuju da su PD-1 x LAG-3 bispecifični konstrukti dijatela DART A, DART B i DART C sposobni da stimulišu proizvodnju citokina na nivoe koji su viši nakon primene kombinacije anti- PD-1 mAb<+>i anti-LAG-3 mAb (PD-1 mAb A<+>LAG-3 mAb A). Profili sekrecije IFNg PBMC-a od dva reprezentativna davaoca, stimulisani visokom koncentracijom SEB (85 ng/mL) tretiranih sa PD-1 x LAG-3 bispecifi čnim antitelima, ili samo protiv antitela na PD-1 i anti-LAG-3 i u kombinaciji su iscrtani. Rezultati dobijeni pomo ć u PBMC -a dva reprezentativna donatora prikazani su na Slici 17A i Slici 17B.
[0048] Slike 18A-18B pokazuju da su PD-1 x LAG-3 bispecifični konstrukti dijatela DART A, DART B i DART C sposobni da stimulišu proizvodnju citokina na nivoe koji su viši nakon primene kombinacije anti- PD-1 mAb i anti-LAG-3 mAb (PD-1 mAb A LAG-3 mAb A). Profili sekrecije IFNg PBMC od dva reprezentativna davaoca, stimulisani srednjom koncentracijom SEB (0,5 ng/mL) tretirani sa PD-1 x LAG-3 bispecifi čnim antitelima, ili samo protiv antitela na PD-1 i anti-LAG-3 i u kombinaciji su iscrtani. Rezultati dobijeni pomo ć u PBMC-a dva reprezentativna donatora prikazani su na Slici 18A i Slici 18B.
[0049] Slika 19 pokazuje da PD-1 x LAG-3 bispecifična konstrukcija dijatela DART D i DART H mogu da stimulišu proizvodnju citokina do nivoa uporedivog ili višeg od onog koji je primeć en primenom kombinacije anti-PD-1 mAb<+>anti-LAG-3 mAb (PD-1 mAb A<+>LAG-3 mAb A), i da je DART D obezbedio najveć e pove ć anje oslobađanja citokina. Profili sekrecije IL-2 PBMC-a od reprezentativnog donora stimulisani visokom koncentracijom SEB (85 ng/mL) tretiranom sa PD-1 x LAG-3 bispecifičnim antitelima, ili samo protiv antitela na PD-1 i anti-LAG-3 a u kombinaciji su iscrtani.
[0050] Slika 20 pokazuje da PD-1 x LAG-3 bispecifična konstrukcija dijatela DART B i DART I mogu da stimulišu proizvodnju citokina na nivoe već e od onih koji su prime ć eni primenom kombinacije anti-PD-1 mAb<+>anti-LAG-3 mAb (PD-1 mAb A<+>LAG-3 mAb A, hPD-1 mAb 7 (1.2) hLAG-3 mAb 1 (1.4), hPD-1 mAb 7 (1.2)<+>hLAG-3 mAb 6 (1.1)). Profili sekrecije IFNg PBMC od reprezentativnog donora, stimulisani srednjom koncentracijom SEB (0,5 ng/mL) tretiranom sa PD-1 x LAG-3 bispecifičnim dijatelima, ili samo protiv antitela na PD-1 i anti-LAG-3 i u kombinaciji su iscrtani.
[0051] Slike 21A-21D pokazuju da je PD-1 x LAG-3 bispecifično dijatelo DART I sposobno da stimuliše proizvodnju citokina na nivoe ve ć e od onog koji je prime ć en primenom kombinacije anti-PD-1 mAb<+>anti-LAG-3 mAb (PD-1 mAb A LAG-3 mAb A). IFNg (slike 21A i 21C) i IL-2 (slike 21B i 21D) profili sekrecije CD4 memorijskih ć elija od dva reprezentativna davaoca, stimulisani tetanusnim toksoidom (5 mg/mL) tretirani sa PD-1 x LAG-3 bispecifičnim dijabetolom ucrtavaju se DART-I, anti-PD-1 i anti-LAG-3 antitela u kombinaciji sa kontrolom izotipa. Rezultati dobijeni 7. dana kori šć enjem CD4 memorijskih T ć elija od dva reprezentativna davaoca prikazani su na slikama 21A-B i slikama 21C-D.
[0052] Slika 22 pokazuje da je farmakokinetika PD-1 x LAG-3 bispecifičnog molekula, DART I uporediva sa onima anti-PD-1 antitela, PD-1 mAb A IgG4 (P) u majmunu cinomolgus. Linije pokazuju srednju serumsku koncentraciju DART I (čvrsta) i PD-1 mAb A (isprekidana). Pojedinačne vrednosti za muško (ispunjeno) i žensko (otvoreno) majmuni su iscrtani za DART I (trouglovi) i PD-1 mAb A (krugovi).
[0053] Slike 23A-23C pokazuju koncentracije antitela u serumu i procenat vezanog PD-1 na povr šini CD4+ ili CD8+ Tć elija tokom vremena kod životinja nakon tretmana sa različitim anti-PD-1 antitelima. Procenat vezanog PD 1 na površini CD4+ ili CD8+ T ć elija nakon tretmana sa mAb anti-PD 1 naveden je na desnoj yosi; simboli predstavljaju % vezanog PD 1 na T ć elijama za svaku pojedinačnu životinju, a isprekidane linije predstavljaju srednje vrednosti. Koncentracije serumskog mAb iscrtane su na levoj y-osi; simboli predstavljaju nivoe seruma za svaku pojedinu životinju, a pune linije predstavljaju nelinearno uklapanje podataka. Svaki panel prikazuje podatke za životinje (n = 1/pol/grupu) kojima je davano 10 mg/kg hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) (slika 23A), PD-1 mAb A IgG4 (P) (slika 23B) ili PD-1 mAb B IgG4 (P) (slika 23B) IV infuzijom prvog dana.
Detaljan opis pronalaska
[0054] Ovaj pronalazak je usmeren na molekule koji se vezuju za PD-1 i koji sadrže PD-1-vezujuć i domen selektovanih antitela na PD-1 sposobnih za vezivanje i za PD-1 majmuna cinomolgus i za humani PD-1: PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD- 1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15. Pronalazak se posebno odnosi na vezivanje PD-1 molekula koji je humanizovan ili himerna verzija takvih antitela, ili koji sadrže fragmente koji vezuju PD-1 takvih anti-PD-1 antitela (naročito imunokongugate, dijatela (uključujuć i, ali bez ograničenja na DART-A, DART-B, DART-C , DART-D, DART-E, DART-F, DART-G, DART-H, DART-I i DART-J), BiTE, bispecifična antitela itd.). Pronalazak se posebno odnosi na molekule koji se vezuju za PD-1 i koji su dodatno sposobni da vezuju epitop molekula uključenog u regulaciju imunološke kontrolne tačke koja je prisutna na površini imunske ć elije. Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupke upotrebe takvih molekula koji vezuju PD-1 za detekciju PD-1 ili za stimulisanje imunolo škog odgovora. Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupke kombinovane terapije u kojima se PD-1-vezujuć i molekul koji sadrži jedan ili više PD-1-vezujuć ih domena (ova) izabranih anti-PD-1 antitela primenjuje u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji su efikasni u stimulisanju imunološkog odgovora i/ili u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji specifično vezuju antigen raka.
I. Antitela i njihovi vezujući domeni
[0055] Antitela prema ovom pronalasku su molekuli imunoglobulina sposobni za specifično vezivanje za metu, kao što su ugljeni hidrati, polinukleotidi, lipidi, polipeptidi itd., Kroz najmanje jedno mesto za prepoznavanje antigena, koje se nalazi u promenljivom domenu imunoglobulina molekula. Kako se ovde koristi, izrazi "antitelo" i "antitela" odnose se na monoklonska antitela, multispecifična antitela, ljudska antitela, humanizovana antitela, sintetička antitela, himerna antitela, poliklonska antitela, kamelizovana antitela, jednolančani Fvs (scFv), jednolančani antitela, Fab fragmenti, F (ab ') fragmenti, disulfidom povezani bispecifični Fvs (sdFv), intratela i fragmenti koji vezuju epitope bilo čega od gore navedenog. Konkretno, antitela uključuju molekule imunoglobulina i imunološki aktivne fragmente molekula imunoglobulina, tj. Molekule koji sadrže mesto za vezivanje antigena. Molekuli imunoglobulina mogu biti bilo koje vrste (npr. IgG, IgE, IgM, IgD, IgA i IgI), klase (npr. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 i IgA2) ili podklase. Pored njihove poznate upotrebe u dijagnostici, antitela su se pokazala korisnim i kao terapijska sredstva. Antitela su sposobna da se imuno-specifično vezuju za polipeptid ili protein ili ne-proteinski molekul zbog prisustva na tom molekulu određenog domena ili dela ili konformacije ("epitopa"). Molekul koji sadrži epitop može imati imunogeno delovanje, tako da izaziva odgovor na stvaranje antitela kod životinje; takvi molekuli se nazivaju "antigeni"). U poslednjih nekoliko decenija do šlo je do oživljavanja interesovanja za terapijski potencijal antitela, a antitela su postala jedna od vodeć ih klasa lekova dobijenih biotehnologijom (Chan, CE etal. (2009) "Upotreba antitela u lečenju infektivnih bolesti" Diseases, "Singapore Med. J. 50 (7): 663-666). Preko 200 lekova zasnovanih na antitelima odobreno je za upotrebu ili su u razvoju.
[0056] Izraz "monoklonsko antitelo" odnosi se na populaciju homogenih antitela gde se monoklonsko antitelo sastoji od aminokiselina (prisutnih u prirodi i onih koje se ne pojavljuju u prirodi) koje su uključene u selektivno vezivanje antigena. Monoklonska antitela su visoko specifi čna, usmerena su protiv jednog epitopa (ili antigenog mesta). Izraz "monoklonsko antitelo" ne obuhvata samo netaknuta monoklonska antitela i monoklonska antitela pune dužine, već i njihove fragmente (poput Fab, Fab ', F (ab') 2 Fv), jednolančane (scFv), njihove mutante, fuzioni proteini koji sadrže deo antitela, humanizovana monoklonska antitela, himerna monoklonska antitela i bilo koju drugu modifikovanu konfiguraciju molekula imunoglobulina koja sadrži mesto za prepoznavanje antigena potrebne specifičnosti i sposobnosti vezivanja za antigen. Ne namerava se ograničiti u pogledu izvora antitela ili načina na koji je ono napravljeno (npr. Hibridomom, selekcijom faga, rekombinantnom ekspresijom, transgenim životinjama itd.). Izraz uključuje cele imunoglobuline, kao i fragmente itd. Opisane napred pod definicijom "antitela". postupci stvaranja monoklonskih antitela poznati su u tehnici. Jedan metod koji se mo že koristiti je metod Kohler, G. et al. (1975) "Kontinuirane kulture fuzionisanih ć elija koje luče antitela unapred definisane specifičnosti", Nature 256: 495-497 ili njegove modifikacije. Obično se monoklonska antitela razvijaju kod miševa, pacova ili zečeva. Antitela se proizvode imunizacijom životinje imunogenom količinom ć elija, ć elijskim ekstraktima ili proteinskim preparatima koji sadrže željeni epitop. Imunogen može biti, ali nije ograničen na, primarne ć elije, kultivisane ć elijske linije, ć elije raka, proteini, peptidi, nukleinske kiseline ili tkivo. Ć elije koje se koriste za imunizaciju mogu se uzgajati u određenom vremenskom periodu (na primer, najmanje 24 sata) pre nego što se upotrebe kao imunogen. Ć elije se mogu same koristiti kao imunogeni ili u kombinaciji sa nedenaturirajuć im adjuvansom, kao što je Ribi (vidi, npr., Jennings, VM (1995) "Pregled odabranih adjuvansa koji se koriste u proizvodnji antitela", ILAR J. 37 (3):119-125). Generalno, ć elije treba da budu netaknute i poželjno održive kada se koriste kao imunogeni. Netaknute ć elije mogu dozvoliti da imunizovana životinja bolje detektuje antigene nego ć elije. Upotreba denaturišuć ih ili oštrih pomo ć nih sredstava, na primer, Frojdovog adjuvansa, može da napukne ć elije i stoga se ne preporučuje. Imunogen se može primenjivati više puta u periodičnim intervalima, na primer, dvonedeljno ili nedeljno, ili se može primenjivati na takav način da se održi vitalnost kod životinje (npr. u tkivnom rekombinantnom). Alternativno, postojeć a monoklonska antitela i bilo koja druga ekvivalentna antitela koja su imunospecifična za željeni patogeni epitop mogu se sekvencirati i proizvesti rekombinantno na bilo koji način poznat u tehnici. U jednom slučaju, takvo antitelo je sekvencirano i polinukleotidna sekvenca je zatim klonirana u vektor za ekspresiju ili razmnožavanje. Sekvenca koja kodira antitelo od interesa može se održavati u vektoru u ć eliji doma ć inu, a ć elija doma ć in se zatim može proširiti i zamrznuti za buduć u upotrebu. Polinukleotidna sekvenca takvih antitela mo že se koristiti za genetsku manipulaciju za generisanje monospecifičnih ili multispecifičnih (npr. Bispecifičnih, trispecifičnih i tetraspecifičnih) molekula iz ovog otkrić a, kao i optimizovanog afiniteta, himernog antitela, humanizovanog antitela i/ili kaninizirano antitelo, za pobolj šanje afiniteta, ili druge karakteristike antitela. Opšti princip humanizacije antitela uključuje zadržavanje osnovne sekvence dela antitela koji se vezuje za antigen, uz zamenu nehumanog ostatka antitela sa sekvencama humanih antitela.
[0057] Prirodna antitela (kao što su IgG antitela) sastavljena su od dva laka lanca kompleksirana sa dva teška lanca. Svaki laki lanac sadrži promenljivi domen (VL) i konstantan domen (CL). Svaki te ški lanac sadrži promenljivi domen (VH), tri konstantna domena (CH1, CH2 i CH3) i domen šarki koji se nalazi između domena CH1 i CH2. Osnovna strukturna jedinica imunoglobulina u prirodi (npr., IgG) je prema tome tetramer koji ima dva laka lanca i dva teška lanca, obično izražena kao glikoprotein od oko 150.000 Da. Amino-terminalni ("N-terminalni") deo svakog lanca uključuje promenljivi domen od oko 100 do 110 ili više aminokiselina prvenstveno odgovornih za prepoznavanje antigena. Karboksi-terminalni ("C-terminalni") deo svakog lanca definiše konstantan region, pri čemu laki lanci imaju jedan konstantan domen, a teški lanci obično tri konstantna domena i domen šarki. Dakle, struktura lakih lanaca molekula IgG je n-VL-CL-c, a struktura teških lanaca IgG n-VH-CH1-H-CH2-CH3-c (gde je H domeni šarki, i n i c predstavljaju, respektivno, N-kraj i C-kraj polipeptida). Promenljivi domeni IgG molekula sastoje se od regiona za određivanje komplementarnosti (CDR), koji sadrže ostatke u kontaktu sa epitopom, i ne-CDR segmenata, koji se nazivaju okvirni segmenti (FR), koji generalno održavaju strukturu i određuju pozicioniranje CDR petlji tako da dozvoli takvo kontaktiranje (mada određeni ostaci okvira takođe mogu doć i u kontakt sa antigenom). Dakle, VL i VH domeni imaju strukturu n-FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-c. Polipeptidi koji su (ili mogu služiti kao) prvi, drugi i treć i CDR lakog lanca antitela ovde su označeni respektivno kao domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3. Slično, polipeptidi koji su (ili mogu služiti kao) prvi, drugi i treć i CDR teškog lanca antitela ovde su označeni kao domen CDRn1, domen CDRH2 i domena CDRH3. Prema tome, termini domen CDRL1, domen CDRL2, domen CDRL3, domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 usmereni su na polipeptide koji, kada se ugrade u protein, uzrokuju da se taj protein veže za određeni epitop, bez obzira na to da li se takav protein je antitelo koje ima lake i te ške lance ili dijatelo ili molekul vezivanja sa jednim lancem (npr. scFv, BiTe, itd.), ili je druga vrsta proteina.
1
Shodno tome, kako se ovde koristi, izraz "fragment koji se veže za epitop" označava fragment antitela sposobnog za imunospecifično vezivanje za epitope, a izraz "epitop-vezujuć e mesto" odnosi se na onaj deo molekula koji sadrži epitop-vezujuć i fragment koji je odgovoran za vezivanje epitopa. Mesto za vezivanje epitopa može sadržati 1, 2, 3, 4, 5 ili svih 6 domena CDR takvog antitela.
[0058] Pronalazak posebno obuhvata fragmente promenljivih domena sa jednim lancem ("scFv") anti-PD-1 antitela iz ovog pronalaska i molekule za više vezanih molekula koje ih sadrže. Fragmenti promenljivog domena sa jednim lancem nastaju povezivanjem lakog i/ili teškog lanca promenljivog domena korišć enjem kratkog peptida za povezivanje. Bird i dr. (1988) ("Jednolančani proteini koji vezuju antigen", Science 242: 423-426) opisuje primer povezivanja peptida koji premošć uju približno 3,5 nm između karboksi završetka jednog promenljivog domena i amino završetka drugog promenljivog domena. Dizajnirani su i korišć eni linkeri drugih sekvenci (Bird et al. (1988) "Single-Chain Antigen-Binding Proteins", Science 242: 423-426). Linkeri se zauzvrat mogu modifikovati za dodatne funkcije, kao što je vezivanje lekova ili vezivanje za čvrste nosače. Varijante sa jednim lancem mogu se proizvesti rekombinantno ili sinteti čki. Za sintetičku proizvodnju scFv, može se koristiti automatizovani sintisajzer. Za rekombinantnu proizvodnju scFv, pogodan je plazmid koji sadrži polinukleotid koji kodira scFv i može se uvesti u odgovarajuć u ć eliju domać ina, bilo eukariotsku, poput ć elija kvasca, biljaka, insekata ili sisara, ili prokariotsku, poput E. coli. Polinukleotidi koji kodiraju scFv od značaja mogu se napraviti rutinskim manipulacijama kao što je vezivanje polinukleotida. Dobijeni scFv se može izolovati primenom standardnih tehnika prečišć avanja proteina poznatih u tehnici.
[0059] Pronalazak takođe posebno obuhvata humanizovane varijante anti-PD-1 antitela iz pronalaska i multispecifične vezuju ć e molekule koji ih sadrže. Izraz "humanizovano" antitelo se odnosi na himerni molekul, generalno pripremljen primenom rekombinantnih tehnika, koji ima mesto vezivanja antigena imunoglobulina iz nehumane vrste i preostalu imunoglobulinsku strukturu molekula zasnovanu na strukturi i /ili sekvenca humanog imunoglobulina. Anti-humana antitela PD-1 prema ovom pronalasku uklju čuju humanizovane, himerne ili kaninizirane varijante antitela PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5 , PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD -1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15. Polinukleotidna sekvenca varijabilnih domena takvih antitela može se koristiti za genetsku manipulaciju za generisanje takvih derivata i pobolj šanje afiniteta, ili drugih karakteristika takvih antitela. Opšti princip humanizacije antitela uključuje zadržavanje osnovne sekvence dela antitela koji se vezuje za antigen, uz zamenu nehumanog ostatka antitela sa sekvencama humanih antitela. Postoje četiri opšta koraka za humanizaciju monoklonalnog antitela. To su: (1) određivanje nukleotidne i predviđene aminokiselinske sekvence početnih lakih i teških promenljivih domena antitela (2) dizajniranje humanizovanog antitela ili kanizovanog antitela, tj. odlu čivanje koji okvirni okvir antitela ć e se koristiti tokom procesa humanizacije ili kanonizacije (3) stvarne metodologije/tehnike humanizacije ili kaniziranja i (4) transfekcija i ekspresija humanizovanog antitela. Videti, na primer, US br. 4,816,567; 5,807,715; 5,866,692; i 6,331,415.
[0060] Mesto koje se vezuje za antigen može sadržati ili kompletan promenljivi domen spojen sa konstantnim domenom ili samo regione za određivanje komplementarnosti (CDR) takvog promenljivog domena kalemljenog na odgovarajuć e okvirne regione. Mesta za vezivanje antigena mogu biti divljeg tipa ili modifikovana jednom ili više supstitucija aminokiselina. Ovo eliminiše konstantnu regiju kao imunogen kod ljudskih pojedinaca, ali ostaje moguć nost imunološkog odgovora na strani promenljivi domen (LoBuglio, AF et al. (1989) "Miš/humano himerno monoklonsko antitelo kod čoveka: kinetika i imunološki odgovor, "Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 86: 4220-4224). Drugi pristup se ne fokusira samo na obezbeđivanje konstantnih regiona izvedenih od čoveka, već i na promenu promenljivih domena tako da ih preoblikuju što je moguć e bliže ljudskom obliku. Poznato je da promenljivi domeni i teških i lakih lanaca sadrže tri regiona za određivanje komplementarnosti (CDR) koji variraju u odgovoru na dotične antigene i određuju sposobnost vezivanja, okruženi sa četiri okvirna regiona (FR) koji su relativno očuvani u date vrste i koje navodno pružaju skele za CDR -ove. Kada se ne-humana antitela pripreme u odnosu na odre đeni antigen, promenljivi domeni mogu biti "preoblikovani" ili "humanizovani" kalemljenjem CDR-a izvedenih iz nehumanog antitela na FR prisutne u ljudskom antitelu koje treba modifikovati. Primenu ovog pristupa na različita antitela prijavili su Sato, K. i sar. (1993) Cancer Res 53: 851-856. Riechmann, L. i sar. (1988) "Preoblikovanje ljudskih antitela za terapiju", Nature 332: 323-327; Verhoeien, M. et al. (1988) "Preoblikovanje ljudskih antitela: kalemljenje antilizomske aktivnosti", Nauka 239: 1534-1536; Kettleborough, C. A. et al. (1991) "Humanizacija mišjeg monoklonalnog antitela CDR-kalemljenjem: važnost okvirnih ostataka na konformaciji petlje", Protein Engineering 4: 773-3783; Maeda, H. i sar. (1991) "Konstrukcija preoblikovanih ljudskih antitela sa HIV-neutralisanjem", Hibridoma ljudskih antitela 2: 124-134; Gorman, S. D. et al. (1991) "ReshapingA terapeutsko CD4 antitelo", Proc. Natl. Akad. Sci. (U.S.A.) 88: 4181-4185; Tempest, P. R. i sar. (1991) "Preoblikovanje humanog monoklonalnog antitela za inhibiranje infekcije sincicijalnog virusa humanih respiratornih organa in vivo", Bio/Technology 9: 266-271; Co, M. S. i sar. (1991) "Humanizovana antitela za antivirusnu terapiju", Proc. Natl. Akad. Sci. (SAD) 88: 2869-2873; Carter, P. etal. (1992) "Humanizacija antitela protiv p185her2 za terapiju humanog raka", Proc. Natl. Akad. Sci. (U.S.A.) 89: 4285-4289; i Co, M.S. et al. (1992) "Himerna i humanizovana antitela sa specifičnošć u za CD33 antigen", J. Immunol. 148: 1149-1154. U nekim slučajevima, humanizovana antitela čuvaju sve CDR sekvence (na primer, humanizovano mišje antitelo koje sadrži svih šest CDR iz mišjih antitela). U drugim slučajevima, humanizovana antitela imaju jedan ili vi še CDR -ova (jedan, dva, tri, četiri, pet ili šest) koji se razlikuju u sekvenci u odnosu na originalno antitelo.
[0061] Opisani su brojni "humanizovani" molekuli antitela koji sadrže mesto za vezivanje antigena izvedeno iz imunoglobulina koji nije humani, uključujuć i himerna antitela koja imaju promenljivi domen glodara ili modifikovane glodare i njihove povezane regione za određivanje komplementarnosti (CDR) spojene sa ljudima Constant Domains (vidi, na primer, Vinter et al. (1991) "Man-made Antitodies", Nature 349: 293-299; Lobuglio et al. (1989) "Mouse/Human Chimeric Moncleonal Antibodi In Man: Kinetics And Immune Response, "Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 86: 4220-4224 (1989), Shav et al. (1987)" Characterization of a Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antitelo (17-1A) to A Colon Cancer Tumor-Associated Antigen, "J. Immunol. 138: 4534-4538, and Brovn et al. (1987)" Tumor-Specific Genetsko Engineered Murine/Human Chimeric Monoclonal Antitelo, "Cancer Res. 47: 3577-3583). Druge reference opisuju CDR -ove za glodare kalemljen u okvir ljudskog potpornog okvira (FR) pre fuzije sa odgovarajuć im humanim antitelom Constant Domain (vidi, na primer, Riechmann, L. et al. (1988) "Reshaping Human Antitodies for Therapi", Nature 332: 323-327 ; Verhoeien, M. etal. (1988) "Preoblikovanje ljudskih antitela: kalemljenje antilizomske aktivnosti", Science 239: 1534-1536; i Jones et al. (1986) "Zamena regiona koji određuju komplementarnost u ljudskom antitelu sa onima iz Miš, "Priroda 321: 522-525). Druga referenca opisuje CDR glodara podržane rekombinantno furniranim okvirnim regionima glodara. Videti, na primer, Evropsku patentnu publikaciju br. 519,596. Ovi "humanizovani" molekuli su dizajnirani da minimiziraju ne željeni imunološki odgovor na molekule antitela antitela glodara, što ograničava trajanje i efikasnost terapeutske primene ovih delova na ljudima. Druge metode humanizacije antitela koje se tako đe mogu koristiti otkrivaju Daugherti et al. (1991) "Lančana reakcija polimeraze olakšava kloniranje, kalemljenje CDR-a i brzu ekspresiju mišjeg monoklonalnog antitela usmerenog protiv komponente CD18 leukocitnih integrina", Nucl. Acids Res. 19: 2471-2476 i u US br. 6,180,377; 6,054,297; 5,997,867; i 5,866,692.
II. Fcg receptori (FcgRs).
[0062] CH2 i CH3 domeni dva teška lanca međusobno deluju i formiraju Fc region, koji je domen koji prepoznaje ć elijske Fc receptore, uključuju ć i, ali bez ograničenja, Fc gama receptore (FcgRs). Kako se ovde koristi, izraz "Fc region" se koristi za definisanje C-terminalnog regiona teškog lanca IgG. Aminokiselinska sekvenca domena CH2-CH3 primernog humanog IgG1 je (SEK ID BR: 1):
kako je označeno indeksom EU kako je navedeno u Kabatu, pri čemu je X lizin (K) ili ga nema.
1
[0063] Aminokiselinska sekvenca domena CH2-CH3 primernog humanog IgG2 je (SEK ID BR: 2):
kako je označeno indeksom EU kako je navedeno u Kabatu, pri čemu je X lizin (K) ili ga nema.
[0064] Aminokiselinska sekvenca domena CH2-CH3 primernog humanog IgG3 je (SEK ID BR: 3):
kako je označeno indeksom EU kako je navedeno u Kabatu, pri čemu je X lizin (K) ili ga nema.
1
[0065] Aminokiselinska sekvenca domena CH2-CH3 primernog humanog IgG4 je (SEK ID BR: 4):
kako je označeno indeksom EU kako je navedeno u Kabatu, pri čemu je X lizin (K) ili ga nema.
[0066] U ovoj specifikaciji, numerisanje ostataka u konstantnoj oblasti te škog IgG lanca je ono za indeks EU kao u Kabat et al., Sekvence proteina od imunolo škog značaja, 5. izd. Služba za javno zdravlje, NH1, MD (1991) (dalje u tekstu: Kabat), izričito. Izraz "EU indeks kao u Kabatu" odnosi se na numerisanje humanog IgG1 EU antitela. Aminokiseline iz promenljivih domena zrelih te ških i lakih lanaca imunoglobulina označene su položajem aminokiseline u lancu. Kabat je opisao brojne aminokiselinske sekvence za antitela, identifikovao aminokiselinsku konsenzusnu sekvencu za svaku podgrupu i dodelio broj ostataka svakoj aminokiselini, a CDR su identifikovani kako ih defini še Kabat (razumeć e se da je CDRH1 definisan od Chothia, C. & Lesk, AM ((1987) "Kanonske strukture za hipervarijabilne regione imunoglobulina,". J. Mol. Biol. 196: 901-917) počinje pet ostataka ranije). Kabatova šema numerisanja se može proširiti na antitela koja nisu uključena u njegov sažetak usklađivanjem predmetnog antitela sa jednom od konsenzusnih sekvenci u Kabatu pozivanjem na očuvane aminokiseline. Ova metoda za dodeljivanje brojeva ostataka postala je standardna na terenu i lako identifikuje aminokiseline na ekvivalentnim pozicijama u različitim antitelima, uključujuć i himerne ili humanizovane varijante. Na primer, aminokiselina na položaju 50 lakog lanca humanog antitela zauzima ekvivalentan položaj aminokiselini na položaju 50 lakog lanca mišjeg antitela.
[0067] Polimorfizmi su primeć eni na brojnim različitim položajima unutar konstantnih regiona antitela (npr. položaji CH1, uključujuć i, ali bez ograničenja na položaje 192, 193 i 214; položaje Fc, uključuju ć i, ali bez ograničenja na položaje 270, 272, 312 , 315, 356 i 358 numerisani indeksom EU kako je navedeno u Kabatu), pa stoga mogu postojati male razlike između predstavljenih sekvenci i sekvenci u prethodnom stanju tehnike. Polimorfni oblici humanih imunoglobulina su dobro okarakterisani. Trenutno je poznato 18 Gm alotipova: G1m (1, 2, 3, 17) ili G1m (a, x, f, z), G2m (23) ili G2m (n), G3m (5, 6, 10, 11 , 13, 14, 15, 16, 21, 24, 26, 27, 28) ili G3m (b1, c3, b3, b0, b3, b4, s, t, g1, c5, u, v, g5) (Lefranc , et al., "Podklase humanog IgG: molekularna analiza strukture, funkcije i regulacije." Pergamon, Oxford, str. 43-78 (1990); Lefranc, G. et al., 1979, Hum. Genet .: 50 , 199-211). Posebno se razmatra da antitela prema ovom pronalasku mogu uključivati bilo koji alotip, izoalotip ili haplotip bilo kog gena imunoglobulina, i nisu ograničena na alotip, izoalotip ili haplotip ovde navedenih sekvenci. Štaviše, u nekim ekspresionim sistemima, C-terminalni aminokiselinski ostatak (podebljano iznad) CH3 domena mo že biti posttranslaciono uklonjen. Shodno tome, C-terminalni ostatak CH3 domena je izborni aminokiselinski ostatak u molekulima koji vezuju PD-1 iz ovog pronalaska. Ovim pronalaskom su posebno obuhvać eni molekuli koji se vezuju za PD-1 i kojima nedostaje C-terminalni ostatak domena CH3. Takođe su predmetnim pronalaskom posebno obuhvać eni takvi konstrukti koji sadrže C-terminalni lizinski ostatak CH3 domena.
[0068] Aktivacioni i inhibitorni signali se transduciraju ligacijom Fc regiona u ć elijski Fc gama receptor (FcγR). Sposobnost takvog vezivanja da rezultira dijametralno suprotnim funkcijama rezultat je strukturnih razlika između različitih FcγR. Dva različita domena unutar citoplazmatskih signalnih domena receptora koji se nazivaju imunoreceptorski motivi aktivacije zasnovani na tirozinu (ITAM) i inhibitorni motivi na bazi imunoreceptora tirozina (ITIMS) uzimaju u obzir razli čite odgovore. Regrutovanje različitih
1
citoplazmatskih enzima u ove strukture diktira ishod ć elijskih odgovora posredovanih FcγR. FcγR kompleksi koji sadrže ITAM uključuju FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIIA, dok kompleksi koji sadrže ITIM uključuju samo FcγRIIB. Humani neutrofili eksprimiraju gen FcγRIIA. Grupisanje FcγRIIA putem imunoloških kompleksa ili umrežavanja specifičnih antitela služi za agregiranje ITAM-a zajedno sa receptorskim kinazama koje olakšavaju fosforilaciju ITAM-a. Fosforilacija ITAM -a služi kao baza za aktivaciju Syk kinaze od kojih dolazi do aktivacije nizvodnih podloga (npr. PI3K). Ć elijska aktivacija dovodi do osloba đanja proinflamatornih medijatora. Gen FcγRIIB je eksprimiran na B limfocitima; njegov vanć elijski domen je 96 % identičan sa FcγRIIA i veže komplekse IgG na nerazlučiv način. Prisustvo ITIM -a u citoplazmatskom domenu FcγRIIB definiše ovu inhibitornu podklasu FcγR. Nedavno je uspostavljena molekularna osnova ove inhibicije. Kada se koliguje zajedno sa aktiviraju ć im FcγR, ITIM u FcγRIIB postaje fosforilisan i privlači SH2 domen inozitol polifosfatne 5'-fosfataze (SHIP), koji hidrolizuje glasnike fosfoinozitola koji se oslobađaju kao posledica FcγR posredovane tirozin kinaze koja sadrži ITAM aktivaciju, čime se sprečava priliv unutarć elijskog Ca +. Tako umrežavanje FcγRIIB prigušuje aktiviraju ć i odgovor na ligaciju FcγR i inhibira ć elijski odgovor. Aktivacija B- ć elija, proliferacija B- ć elija i sekrecija antitela se time prekida.
III. Bispecifična antitela, multispecifična dijatela i DART® dijatela
[0069] Sposobnost antitela da veže epitop antigena zavisi od prisustva i aminokiselinske sekvence VL i VH domena antitela. Interakcija lakog lanca antitela i te škog lanca antitela i, posebno, interakcija njegovih VL i VH domena čine jedno od dva epitop-vezujuć a mesta prirodnog antitela. Prirodna antitela su sposobna da se vezuju samo za jednu vrstu epitopa (tj. monospecifična su), mada mogu da se vezuju za više kopija te vrste (tj. pokazuju dvovalentnost ili viševalentnost).
[0070] Vezivni domeni ovog pronalaska vezuju se za epitope na "imunospecifičan" način. Kako se ovde koristi, za antitelo, dijatelo ili drugi molekul koji se veže za epitop se kaže da "imunospecifično" vezuje region drugog molekula (tj. epitopa) ako reaguje ili asocira češć e, brže, sa dužim trajanjem i/ili sa ve ć im afinitetom sa tim epitopom u odnosu na alternativne epitope. Na primer, antitelo koje se imunospecifi čno vezuje za virusni epitop je antitelo koje se veže za ovaj virusni epitop sa već im afinitetom, jačinom, lakše i/ili sa dužim trajanjem nego što se imunospecifično vezuje za druge virusne epitope ili nevirusne epitope. Takođe se može razumeti čitanjem ove definicije da se, na primer, antitelo (ili deo ili epitop) koje se imunospecifično vezuje za prvu metu može ili ne mora specifično ili preferencijalno da se veže za drugu metu. Kao takvo, "imunospecifično vezivanje" ne zahteva nužno (iako može uključivati) isključivo vezivanje. Uopšteno, ali ne nužno, pozivanje na vezivanje znači "specifično" vezivanje. Za dva molekula se kaže da su sposobni da se međusobno vezuju na "fiziospecifičan" način, ako takvo vezivanje pokazuje specifičnost sa kojom se receptori vezuju za njihove odgovarajuć e ligande.
[0071] Funkcionalnost antitela može se poboljšati generisanjem multispecifičnih molekula zasnovanih na antitelima koji mogu istovremeno vezati dva odvojena i različita antigena (ili različite epitope istog antigena) i/ili generisanjem molekula zasnovanog na antitelima već e valencije (tj. vi še od dva mesta vezivanja) za isti epitop i/ili antigen.
[0072] Da bi se obezbedili molekuli koji imaju već u sposobnost od prirodnih antitela, razvijen je veliki broj oblika rekombinantnih bispecifičnih antitela (videti, na primer, PCT publikaciju br. WO 2008/003116, WO 2009/132876, WO 2008/003103, WO 2007/146968, WO 2009/018386, WO 2012/009544, WO 2013/070565), od kojih već ina koristi linkerske peptide ili za fuziju daljeg fragmenta koji se veže za epitop (npr. ScFv, VL, VH itd.) Sa , ili unutar jezgra antitela (IgA, IgD, IgE, IgG ili IgM), ili za fuziju vi še fragmenata koji vezuju epitop (npr. dva Fab fragmenta ili scFvs). Alternativni formati koriste linkerske peptide za fuziju epitop-vezujuć eg fragmenta (npr. ScFv, VL, VH, itd.) Sa domenom dimerizacije kao što je domen CH2-CH3 ili alternativni polipeptidi (WO 2005/070966, WO 2006/107786A WO 2006/107617A, WO 2007/046893). Obično takvi pristupi uključuju kompromise. Na primer, objave PCT-a pod brojevima WO 2013/174873, WO 2011/133886 i WO 2010/136172 otkrivaju da upotreba povezivača može izazvati probleme u terapeutskim okruženjima i uči trispecifično antitelo u kome se CL i CH1 domene prebacuju sa njihovih odgovarajuć i prirodni položaji i VL i VH domeni su raznoliki (WO 2008/027236; WO 2010/108127) kako bi im se omoguć ilo da se vežu za više od jednog antigena. Prema tome, molekuli otkriveni u ovim dokumentima imaju specifičnost vezivanja za sposobnost vezivanja dodatnih vrsta antigena. PCT publikacije br. WO 2013/163427 i WO 2013/119903 otkrivaju modifikovanje CH2 domene tako da sadrži produkt fuzionog proteina koji sadrži vezujuć i domen. U dokumentu se prime ć uje da domen CH2 verovatno igra samo minimalnu ulogu u posredovanju efektorske funkcije. PCT objave br. WO 2010/028797, WO2010028796 i WO 2010/028795 otkrivaju rekombinantna antitela čije su Fc regije zamenjene dodatnim VL i VH domenima, tako da formiraju molekule trovalentnog vezivanja. PCT objave br. WO 2003/025018 i WO2003012069 otkrivaju rekombinantna dijatela čiji pojedinačni lanci sadrže scFv domene. PCT objave br. WO 2013/006544 otkrivaju multivalentne Fab molekule koji se sintetišu kao jedan polipeptidni lanac i zatim podvrgavaju proteolizi da bi se dobile heterodimerne strukture. Prema tome,
1
molekuli otkriveni u ovim dokumentima imaju sve ili neke od sposobnosti posredovanja efektorske funkcije za sposobnost vezivanja dodatnih vrsta antigena. PCT publikacije br. WO 2014/022540, WO 2013/003652, WO 2012/162583, WO 2012/156430, WO 2011/086091, WO 2008/024188, WO 2007/024715, WO 2007/075270, WO 1998/002463, WO 1992/022583 i WO 1991/003493 otkrivaju dodavanje dodatnih vezivnih domena ili funkcionalnih grupa na antitelo ili deo antitela (npr. dodavanje dijatela u laki lanac antitela ili dodavanje dodatnih VL i VH domena lakim i te škim antitelima ili dodavanjem heterolognog fuzionisanog proteina ili međusobnim povezivanjem više Fab domena. Prema tome, molekuli otkriveni u ovim dokumentima imaju strukturu nativnih antitela sa sposobno šću vezivanja dodatnih vrsta antigena.
[0073] Struka je dodatno primetila sposobnost stvaranja dijatela koja se razlikuju od takvih prirodnih antitela po tome što su sposobna da vezuju dve ili više različitih vrsta epitopa (tj. ispoljavaju bispecifičnost ili multispecifičnost pored bivalencije ili viševalentnosti) (vidi, npr. Holliger et al. (1993) "'Dijatela': Mali bivalentni fragmenti antitela i specifičnih antitela," Proc. Natl. Acad. Sci. (SAD) 90: 6444-6448; US 2004/0058400 (Hollinger et al.); US 2004/0220388/WO 02/02781 (Mertens et al.); Alt et al. (1999) FEBS Lett.454 (1-2): 90-94; Lu, D. et al. (2005) "Potpuno humani rekombinant. Bispecifična antitela nalik IgG na receptor epidermalnog faktora rasta i receptor faktora rasta sli čan insulinu za pojačanu antitumorsku aktivnost, "J. Biol. Chem. 280 (20): 19665-19672; WO 02/02781 (Mertens et al.); Olafsen, T. i sar. (2004) "Kovalentno disulfidno povezano anti-CEA dijatelo omoguć ava konjugaciju i radio-obele žavanje specifične za lokaciju za aplikacije ciljanja tumora", Protein Eng. Des. Sel. 17 (1): 21-27; Wu, A. i sar. (2001) "Multimerizacija himernog anti-CD20 jednolančanog fuzionisanog proteina Fv-Fv posreduje putem razmene promenljivih domena", Proteinsko inženjerstvo 14 (2): 1025-1033; Asano i dr. (2004) "Dijatelo za imunoterapiju raka i njegovo funkcionalno poboljšanje fuzijom humanog Fc domena", Sažetak 3P-683, J. Biochem. 76 (8): 992; Takemura, S. i sar. (2000) "Konstrukcija dijatela (malo rekombinantno bispecifi čno antitelo) pomoć u sistema ponovnog sklapanja", Protein Eng. 13 (8): 583-588; Baeuerle, P.A. et al. (2009) "Bispecific T-Cell Engaging Antitodies For Cancer Therapi", Cancer Res. 69 (12): 4941-4944).
[0074] Dizajn dijatela se zasniva na derivatu antitela poznatom kao jednolan čani fragment promenljivog domena (scFv). Takvi molekuli nastaju povezivanjem lakih i/ili teških lanaca promenljivih domena korišć enjem kratkog peptida za povezivanje. Bird i dr. (1988) ("Jednolančani proteini koji vezuju antigen", Science 242: 423-426) opisuje primer povezivanja peptida koji premo šć uju približno 3,5 nm između karboksi završetka jednog promenljivog domena i amino završetka drugog promenljivog domena. Dizajnirani su i korišć eni linkeri drugih sekvenci (Bird et al. (1988) "Single-Chain Antigen-Binding Proteins", Science 242: 423-426). Linkeri se zauzvrat mogu modifikovati za dodatne funkcije, kao što je vezivanje lekova ili vezivanje za čvrste nosače. Varijante sa jednim lancem mogu se proizvesti rekombinantno ili sintetički. Za sintetičku proizvodnju scFv, može se koristiti automatizovani sintisajzer. Za rekombinantnu proizvodnju scFv, odgovarajuć i plazmid koji sadrži polinukleotid koji kodira scFv može se uvesti u odgovarajuć u ć eliju doma ć ina, bilo eukariotsku, poput ć elija kvasca, biljaka, insekata ili sisara, ili prokariotsku, poput E. coli. Polinukleotidi koji kodiraju scFv od značaja mogu se napraviti rutinskim manipulacijama kao što je vezivanje polinukleotida. Dobijeni scFv se može izolovati primenom standardnih tehnika prečišć avanja proteina poznatih u tehnici.
[0075] Obezbeđivanje nemonospecifičnih dijatela pruža značajnu prednost u odnosu na antitela, uključujuć i, ali bez ograničenja, sposobnost koligacije i kolokalizacije ć elija koje eksprimiraju različite epitope. Bispecifična dijatela stoga imaju široku primenu, uključujuć i terapiju i imunodijagnozu. Bispecifičnost omoguć ava veliku fleksibilnost u dizajnu i inženjeringu dijatela u različitim aplikacijama, pružajuć i pove ć anu avidnost prema multimernim antigenima, ukr štaju ć i različite antigene i usmeravaju ć i ciljanje na određene tipove ć elija oslanjaju ć i se na prisustvo oba ciljana antigena. Zbog pove ć ane valencije, niske stope disocijacije i brzog uklanjanja iz cirkulacije (za dijatela male veli čine, na ili ispod ∼ 50 kDa), molekuli dijateleski poznati u tehnici takođe su pokazali posebnu upotrebu u oblasti snimanja tumora (Fitzgerald et al. (1997) "Poboljšano ciljanje tumora pomoć u disulfidno stabilizovanih dijatela izraženih u Pichia pastoris", Protein Eng. 10: 1221).
[0076] Bispecifičnost dijatela dovela je do njihove upotrebe za koaligovanje različitih ć elija, na primer, umrežavanje citotoksičnih T-ć elija sa tumorskim ć elijama (Staerz et al. (1985) "Hibridna antitela mogu ciljati na mesta za napad T-ćelija, "Nature 314: 628-631, i Holliger et al. (1996)" Specifično ubijanje limfomskih ć elija citotoksičnim T- ć elijama posredovanim bispecifičnim dijatejlom, "Protein Eng. 9: 299-305; Marvin et al. . (2005) "Rekombinantni pristupi IgG-sličnim bispecifičnim antitelima", Acta Pharmacol. Sin. 26: 649-658). Alternativno, ili dodatno, bispecifična dijatela se mogu koristiti za koaligovanje receptora na površini različitih ć elija ili na jednoj ć eliji. Koligacija različitih ć elija i/ili receptora je korisna za modulaciju efektorskih funkcija i/ili signalizaciju imunih ć elija. Multispecifi čni molekuli (npr. bispecifična dijatela) koja sadrže epitop vezujuć a mesta mogu biti usmereni na površinsku determinantu bilo koje imunološke ć elije kao što su B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), BTLA (CD272), CD3, CD8, CD16 , CD27, CD32, CD40, CD40L, CD47, CD64, CD70 (CD27L), CD80 (B7-1), CD86 (B7-2), CD94 (KLRD1), CD137 (4-1BB), CD137L (4-1BBL) , CD226, CTLA-4 (CD152), Galectin-9, GITR, GITRL, HHLA2, ICOS (CD278), ICOSL
1
(CD275), Receptor za aktivaciju ubice (KIR), LAG-3 (CD223), SVETLO (TNFSF14, CD258) , MHC klase I ili II, NKG2a, NKG2d, OKS40 (CD134), OKS40L (CD134L), PD1H, PD-1 (CD279), PD-L1 (B7-H1, CD274), PD-L2 (B7-CD, CD273 ), PVR (NECL5, CD155), SIRPa, TCR, TIGIT, TIM-3 (HAVCR2) i/ili VISTA (PD-1H), koji su izraženi na T limfocitima, prirodnim ć elijama ubicama (NK), ć elijama koje predstavljaju antigen ili drugu mononuklearnu ć eliju. Konkretno, mesta za vezivanje epitopa usmerena na receptor na ć elijskoj povr šini koji je uključen u regulaciju imunološke kontrolne tačke (ili njenog liganda) korisna su u stvaranju bispecifičnih ili multispecifičnih vezujuć ih molekula koji antagoniziraju ili blokiraju inhibitornu signalizaciju molekula imune kontrolne tačke i na taj način stimulišu ili pojačavaju imunološke odgovore subjekta. Molekuli uključeni u regulisanje imunoloških kontrolnih punktova uključuju, ali nisu ograničeni na, B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD40L, CD47, CD70, CD80, CD86, CD94, CD137, CD137L, CD226, CTLA-4, Galectin-9 , GITR, GITRL, HHLA2, ICOS, ICOSL, KIR, LAG-3, LIGHT, MHC klase I ili II, NKG2a, NKG2d, OKS40, OKS40L, PD1H, PD-1, PD-L1, PD-L2, PVR, SIRPa , TCR, TIGIT, TIM-3 i/ili VISTA.
[0077] Međutim, napred navedene prednosti dolaze sa značajnim posledicama. Formiranje takvih nemonospecifičnih dijatela zahteva uspešno sklapanje dva ili više različitih i različitih polipeptida (tj. za takvo formiranje je potrebno da se dijatela formiraju heterodimerizacijom razli čitih vrsta polipeptidnog lanca). Ova činjenica je za razliku od monospecifičnih dijatela, koja nastaju homodimerizacijom identičnih polipeptidnih lanaca. Zato što moraju da se obezbede najmanje dva različita polipeptida (tj. dve vrste polipeptida) da bi se formiralo nemonospecifično dijatelo i zato što homodimerizacija takvih polipeptida dovodi do neaktivnih molekula (Takemura, S. et al. (2000) "Construction of Diabody (malo rekombinantno bispecifično antitelo) pomoć u sistema za ponovno savijanje, „Protein Eng. 13 (8): 583-588), proizvodnja takvih polipeptida mora se postić i na takav način da se spreči kovalentna veza između polipeptida iste vrste (tj. kako bi se sprečila homodimerizacija) (Takemura, S. i sar. (2000) "Konstrukcija dijatejskog tela (malo rekombinantno bispecifično antitelo) korišć enjem sistema za presavijanje", Protein Eng. 13 (8): 583-588 ). Ova tehnika je stoga naučila nekovalentnu asocijaciju takvih polipeptida (vidi, npr., Olafsen et al. (2004) "Anti-CEA dijavalentno povezano kovalentnim disulfidom omoguć ava konjugaciju i radio-obeležavanje specifične za lokaciju za aplikacije ciljanja tumora", Prot. Engr Des. Sel. 17: 21-27; Asano et al. (2004) "Dijatelo za imunoterapiju raka i njeno funkcionalno pobolj šanje fuzijom ljudskog FC domena", Sažetak 3P-683, J. Biochem. 76 (8): 992; Takemura, S. i dr. (2000) "Konstrukcija dijatela (malo rekombinantno bispecifično antitelo) korišć enjem sistema za presavijanje", Protein Eng. 13 (8): 583-588; Lu, D. et al. (2005) "Potpuno humano rekombinantno IgG-slično bispecifično antitelo na receptor epidermalnog faktora rasta i receptor faktora rasta sličan insulinu za pojačanu antitumorsku aktivnost", J. Biol. Chem.280 (20): 19665-19672).
[0078] Međutim, struka je prepoznala da su bispecifična dijatela sastavljena od nekovalentno povezanih polipeptida nestabilna i da se lako disociraju na nefunkcionalne monomere (videti, na primer, Lu, D. i sar. (2005) "Potpuno ljudski kombinovano bispecifično antitelo nalik IgG na receptor epidermalnog faktora rasta i receptor nalik insulinu na faktor rasta za pojačanu antitumorsku aktivnost, "J. Biol. Chem. 280 (20): 19665-19672).
[0079] Suočena sa ovim izazovom, tehnika je uspela da razvije stabilna, kovalentno vezana heterodimerna nemonospecifična antitela, nazvana DART® (reagensi za ponovno ciljanje sa dvostrukim afinitetom) dijatela; videti, na primer, US br. 2013-0295121; 2010-0174053 i 2009-0060910; evropski patenti br. EP 2714079; EP 2601216; EP 2376109; EP 2158221 i PCT objave br. WO 2012/162068; WO 2012/018687; WO 2010/080538; i Sloan, D.D. et al. (2015) "Ciljanje rezervoara HIV-a u zaraženim CD4 T ć elijama pomo ć u molekula ponovnog ciljanja dvostrukog afiniteta (DART) koji vezuju omota č HIV-a i regrutuju citotoksične T ć elije", PLoS Pathog. 11 (11): e1005233. doi: 10.1371/journal.ppat.1005233; Al Hussaini, M. i sar. (2015) "Ciljanje CD123 u AML-u korišć enjem T-CellDirected platforme za ponovno ciljanje sa dvostrukim afinitetom (DART®)", Blood pii: blood-2014-05-575704; Chichili, G.R. et al. (2015) "CD3xCD123 bispecifični DART za preusmeravanje T ć elija doma ć ina na mielogenu leukemiju: pretklini čka aktivnost i bezbednost kod nehumanih primata," Sci. Transl. Med. 7 (289): 289ra82; Moore, P.A. et al. (2011) "Primena molekula preusmeravanja dvostrukog afiniteta za postizanje optimalnog preusmerenog ubijanja T-ć elija limfoma B- ć elija", Krv 117 (17): 4542-4551; Very, M.C. et al. (2010) "Terapijska kontrola aktivacije B ć elija putem regrutovanja inhibitorne funkcije receptora fcgamam IIb (CD32B) sa novom skalom za bispecifična antitela", Arthritis Rheum. 62 (7): 1933-1943; Johnson, S. i sar. (2010) "Efektorsko ć elijsko oplemenjivanje sa novim proteinima na dvostrukom afinitetu na bazi Fv koji ponovo ciljaju protein dovodi do snažne citolize tumora i iscrpljivanja B-ć elija in vivo", J. Mol. Biol. 399 (3): 436-449). Takva dijatela sadrže dva ili više kovalentno kompleksnih polipeptida i uključuju inženjering jednog ili više cisteinskih ostataka u svaku od upotrebljenih vrsta polipeptida koji dozvoljavaju formiranje disulfidnih veza i na taj način kovalentno vezuju dva polipeptidna lanca. Na primer, pokazano je da dodavanje cisteinskog ostatka na C-kraj takvih konstrukata omoguć ava disulfidnu vezu između polipeptidnih lanaca, stabilizujuć i rezultuju ć i heterodimer bez ometanja karakteristika vezivanja dvovalentnog molekula.
[0080] Svaki od dva polipeptida najjednostavnijeg bispecifičnog DART® dijatela sadrži tri domena. Prvi
2
polipeptid sadrži (u smeru od N-kraja do C-terminala): (i) prvi domen koji sadrži vezujuć i region promenljivog domena lakog lanca prvog imunoglobulina (VL1), (ii) drugi domen koji sadr ži region vezivanja promenljivog domena teškog lanca drugog imunoglobulina (VH2) i (iii) treć i domen koji sadrži ostatak cisteina (ili domen koji sadrži cistein) i domen koji promoviše heterodimer koji služi za promociju heterodimerizacije sa drugim polipeptidom dijatela i za kovalentnu vezu prvog i drugog polipeptida dijatela jedan za drugi. Drugi polipeptid sadrži (u smeru od N-kraja do C-terminala): (i) prvi domen koji sadrži vezujuć i region promenljivog domena lakog lanca drugog imunoglobulina (VL2), (ii) drugi domen koji sadrži vezujuć i region promenljivog domena teškog lanca prvog imunoglobulina (VH1) i (iii) treći domen koji sadrži ostatak cisteina (ili domen koji sadrži cistein) i komplementarni domen koji promoviše heterodimer koji se kombinuje sa heterodimerom. Promovisanje domena prvog polipeptidnog lanca je u cilju promovisanja heterodimerizacije sa prvim polipeptidnim lancem. Cisteinski ostatak (ili domen koji sadrži cistein) treć eg domena drugog polipeptidnog lanca služi za promovisanje kovalentne veze drugog polipeptidnog lanca za prvi polipeptidni lanac dijatela. Takvi molekuli su stabilni, sna žni i imaju sposobnost da istovremeno vezuju dva ili više antigena. U jednom slučaju, treć i domeni prvog i drugog polipeptida sadrže svaki ostatak cisteina, koji služi za vezivanje polipeptida zajedno disulfidnom vezom.
Slika 1 daje šemu takvog dijatela, koje koristi domene koji promovišu E-zavojnicu/K-zavojnicu heterodimera i linker koji sadrži cistein za kovalentno vezivanje. Kao što je prikazano na slikama 2 i slikama 3A-3C, jedan ili oba polipeptida mogu dodatno posedovati sekvencu domena CH2-CH3, tako da kompleksiranje između dva polipeptida dijatebona formira Fc region koji je sposoban da se ve že za Fc receptor ć elija (kao što su B limfociti, dendritične ć elije, ć elije prirodne ubice, makrofagi, neutrofili, eozinofili, bazofili i mastociti). Kao što je detaljnije prikazano u nastavku, domeni CH2 i/ili CH3 takvih polipeptidnih lanaca ne moraju biti identični u nizu, i poželjno su modifikovani tako da podstiču kompleksiranje između dva polipeptidna lanca.
[0081] Opisane su mnoge varijacije takvih molekula (videti, na primer, US br. 2015/0175697; 2014/0255407; 2014/0099318; 2013/0295121; 2010/0174053 i 2009/0060910; EP 2714079; EP 2601216; EP 2376109; EP 2158221 i PCT objave br. WO 2012/162068; WO 2012/018687; WO 2010/080538). Ova DART® dijatela koja sadrže Fc region mogu da sadrže dva para polipeptidnih lanaca. Prvi polipeptidni lanac sadr ži (u smeru od N-kraja do C-terminala): (i) prvi domen koji sadrži vezujuć i region promenljivog domena lakog lanca prvog imunoglobulina (VL1), (ii) drugi domen koji sadrži vezujuć u regiju promenljivog domena teškog lanca drugog imunoglobulina (VH2), (iii) treći domen koji sadrži ostatak cisteina (ili domen koji sadrži cistein) i služi za promovisanje heterodimerizacije sa drugim polipeptidom dijatela i da kovalentno vežu prvi i drugi polipeptid dijatela jedan za drugi, i (iv) domen CH2-CH3. Drugi polipeptid sadr ži (u smeru od N-kraja do C-terminala): (i) prvi domen koji sadrži vezujuć i region promenljivog domena lakog lanca drugog imunoglobulina (VL2), (ii) drugi domen koji sadrži oblast vezivanja promenljivog domena teškog lanca prvog imunoglobulina (VH1) i (iii)) treci domen koji sadrži ostatak cisteina (ili domen koji sadrži cistein) i domen koji promoviše heterodimer koji promoviše heterodimerizaciju sa prvim polipeptidnim lanacem. Ovde se dva prva polipeptida međusobno kompleksuju i formiraju Fc region. Slike 3A-3C pružaju šeme tri varijacije takvih dijatela koje koriste različite domene koji promovišu heterodimer.
[0082] Druga DART® dijatela koja sadrže Fc-region mogu sadržati tri polipeptidna lanca. Prvi polipeptid takvih DART® dijatela sadrži tri domena: (i) domen koji sadrži VL1, (ii) domen koji sadrži VH2 i (iii) domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3. Drugi polipeptid takvih DART® dijatela sadrži: (i) domen koji sadrži VL2, (ii) domen koji sadrži VH1 i (iii) domen koji promoviše heterodimerizaciju i kovalentno vezivanje sa prvim polipeptidnim lancem dijatela. Treć i polipeptid takvih DART® dijatela sadr ži sekvencu CH2-CH3. Dakle, prvi i drugi polipeptidni lanac takvih DART® dijatela udružuju se zajedno da formiraju mesto vezivanja VL1/VH1 koje je sposobno da se veže za epitop, kao i mesto vezivanja VL2/VH2 koje je sposobno da se veže za drugi epitop. Takvi složeniji DART® molekuli takođe poseduju domene koji sadrže cistein i koji funkcionišu da formiraju kovalentno vezan kompleks. Tako su prvi i drugi polipeptidi međusobno vezani disulfidnom vezom koja uključuje ostatke cisteina u njihovim odgovarajuć im tre ć im domenima. Zna čajno je da se prvi i treć i polipeptidni lanac međusobno kompleksuju kako bi formirali Fc regiju koja je stabilizovana disulfidnom vezom. Slike 4A-4B daju šeme takvih dijatela koja sadrže tri polipeptidna lanca.
[0083] Još druga DART® dijatela koja sadrže Fc-region mogu sadržati pet polipeptidnih lanaca koji mogu sadržati vezujuć e regione iz promenljivih domena lakog i teškog lanca do tri različita imunoglobulina (koji se nazivaju VL1/VH1, VL2/VH2 i VL3/VH3). Na primer, prvi polipeptidni lanac takvih dijatela mo že da sadrži: (i) domen koji sadrži VH1, (ii) domen koji sadrži CH1 i (iii) domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3. Drugi i peti polipeptidni lanac takvih dijatela može sadržati: (i) domen koji sadrži VL1 i (ii) domen koji sadrži CL. Treć i polipeptidni lanac takvih dijatela može da sadrži: (i) domen koji sadrži VH1, (ii) domen koji sadrži CHI, (iii) domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3, (iv) domen koji sadrži VL2, ( v) domen koji sadrži VH3 i (vi) domen koji promoviše heterodimer, pri čemu domeni koji promovišu heterodimer promovišu dimerizaciju treć eg lanca sa četvrtim lancem. Četvrti polipeptid takvih dijatela može da sadrži: (i) domen koji sadrži VL3, (ii) domen koji sadrži VH2 i (iii) domen koji promoviše heterodimerizaciju i kovalentno vezivanje sa treć im polipeptidnim lancem dijatela. Ovde se prvi i tre ć i polipeptidi me đusobno kompleksuju i formiraju Fc region. Takvi složeniji DART® molekuli takođe poseduju domene koji sadrže cistein i koji funkcionišu tako da formiraju kovalentno vezan kompleks, tako da je svaki polipeptidni lanac vezan za najmanje jedan aditivnim polipeptidnim lancem preko disulfidne veze koja uklju čuje ostatke cisteina. Poželjno je da su takvi domeni poređani u smeru od N-terminala do C-terminala. Slika 5 prikazuje šeme takvih dijatela koja sadrže pet polipeptidnih lanaca.
[0084] Alternativni konstrukti su poznati u tehnici za aplikacije gde je po željan četvorovalentni molekul, ali nije potreban Fc uključujuć i, ali bez ograničenja na, četvorovalentna vezana antitela, koja se takođe nazivaju "TandAbs" (vidi, npr. US Br. 2005-0079170, 2007-0031436, 2010-0099853, 2011-020667 2013-0189263; evropske patente br. EP 1078004, EP 2371866, EP 2361936 i EP 1293514; objave PCT-a WO 1999/057150, WO 2003/ 025018 i WO 2013/013700) koji su nastali homodimerizacijom dva identična lanca od kojih svaki poseduje VH1, VL2, VH2 i VL2 domen.
[0085] Nedavno su opisane trovalentne strukture koje uključuju dva domena vezanja tipa dijatela i jedan domen tipa dijatela i Fc region (videti, na primer, PCT prijavu br: PCT/US 15/33076, pod nazivom "Trispecifična" Vezujuć i molekuli i načini njihove upotrebe ", podnet 29. maja 2015; i PCT/US15/33081, pod naslovom" Tri-specifična vezivna molekula koje se specifično vezuju za više antigena raka i njihove upotrebe ", podnet 29. maja 2015). Takvi trovalentni molekuli mogu se koristiti za stvaranje monospecifičnih, bispecifičnih ili trispecifičnih molekula. Slike 6A-6F daju šeme takvih trovalentnih molekula koji sadrže 3 ili 4 polipeptidna lanca.
IV. Molekule vezivanja za humane PD-1 predmetnog pronalaska
[0086] Poželjni molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku uključuju antitela, dijatela, BiTE, itd. i sposobni su da se vezuju za kontinuirani ili diskontinuirani (npr. konformacioni) deo (epitop) humanog PD-1 (CD279) ). Molekuli koji vezuju PD-1 iz ovog pronalaska ć e poželjno takođe pokazivati sposobnost vezivanja za molekule PD-1 jedne ili više vrsta koji nisu humani, posebno vrste primata (a naročito vrste primata, poput majmuna cinomolgus). Reprezentativni humani PD-1 polipeptid (NCBI sekvenca NP_005009.2; uključujuć i signalnu sekvencu ostatka od 20 aminokiselina (prikazano podvučeno) i zreli protein 268 aminokiselina) ima aminokiselinsku sekvencu (SEK ID BR: 68):
[0087] U određenim slučajevima, molekuli koji se vezuju za humani PD-1 iz ovog pronalaska ispunjavaju bilo koji (jedan ili više) sledeć ih kriterijuma:
(1) specifično vezuje humani PD-1 kao endogeno izražen na površini stimulisane humane T-ć elije; (2) specifično vezuje humani PD-1 sa ravnotežnom konstantom vezivanja (KD) od 40 nM ili manje;
(3) specifično vezuje humani PD-1 sa ravnotežnom konstantom vezivanja (KD) od 5 nM ili manje;
(4) specifično vezuje humani PD-1 sa stopom uključivanja (ka) od 1,5 x 10<4>M-1min<-1>ili više;
(5) specifično vezuje humani PD-1 sa stopom uključivanja (ka) od 90,0 k 10<4>M-1min<-1>ili više;
(6) specifično vezuje humani PD-1 sa stopom isključenja (ka) od 7 k 10<-4>min-1 ili manjom;
(7) specifično vezuje humani PD-1 sa brzinom isključivanja (ka) 2 k 10<-4>min-1 ili manjom;
(8) specifično vezuje primate PD-1 koji nisu humani (npr. PD-1 majmuna cinomolgus);
(9) inhibira (tj. blokira ili ometa) vezivanje/inhibitornu aktivnost) PD-1 liganda (PD-L1/PD-L2) za PD-1; (10) stimuliše imunološki odgovor; i/ili
(11) sinergiše sa anti-humanim LAG-3 antitelom da stimuliše antigen specifičan za T-ć elijski odgovor.
[0088] Kako se ovde koristi, izraz "antigen specifičan odgovor T-ć elija" odnosi se na odgovore T-ć elija koji su rezultat stimulacije T-ć elije antigenom za koji je T- ć elija specifi čna. Neograničavaju ć i primeri odgovora T-ć elija na stimulaciju specifičnu za antigen uključuju proliferaciju i proizvodnju citokina (npr. proizvodnja TNF-a, IFN-g). Sposobnost molekula da stimuliše antigen specifičan T-ć elijski odgovor može se odrediti, na primer, korišć enjem ovde opisanog PBMC testa stimulisanog Staphilococcus aureus enterotoksinom tipa B ("SEB").
[0089] Poželjni molekuli koji vezuju anti-humani PD-1 prema ovom pronalasku poseduju VH i/ili VL domene mišjih anti-humanih monoklonskih antitela PD-1 "PD-1 mAb 1", "PD-1 mAb 2" , "" PD-1 mAb 3, "" PD-1 mAb 4, "" PD-1 mAb 5, "" PD-1 mAb 6, "" PD-1 mAb 7, "" PD-1 mAb 8, " "PD-1 mAb 9", "PD-1 mAb 10", "PD-1 mAb 11", "PD-1 mAb 12", "PD-1 mAb 13", "PD-1 mAb 14," ili " PD-1 mAb 15, "i još poželjnije poseduju 1, 2 ili sva 3 CDRH-a VH domena i/ili 1, 2 ili sva 3 CDRL-a VL domena takvih anti-humanih monoklonskih antitela PD-1. Takvi poželjni molekuli koji vežu humane PD-1 uključuju bispecifična (ili multispecifična) antitela, himerna ili humanizovana antitela, BiTes, dijatela itd, i takve vezujuć e molekule koji imaju varijantne Fc regione.
[0090]
(A)
Pronalazak se posebno odnosi na molekule koji se vezuju za PD-1 i koji sadrže domen za vezivanje PD-1 koji poseduju:
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1mAb 1;
(2) tri CDRLVL domena PD-1 mAb 1;
(3) tri CDRHVH domena PD-1 mAb 1 i tri CDRLVL domena PD-1 mAb 1;
(4) VH domen hPD-1 mAb 1 VH1;
(5) VL domen hPD-1 mAb 1 VL1;
(6) VH i VL domene hPD-1 mAb 1;
(B)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1 mAb 3;
(2) tri CDRLVL domena PD-1 mAb 3;
(3) tri CDRHVH domena PD-1 mAb 3 i tri CDRLVL domena PD-1 mAb 3;
(C)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1 mAb 2;
(2) tri CDRLVL domena PD-1 mAb 2;
(3) tri CDRHVH domena PD-1 mAb 2 i tri CDRLVL domena PD-1 mAb 2; (4) VH domen hPD-1 mAb 2 VH1; (5) VL domen hPD-1 mAb 2 VL1;
(6) VH i VL domene hPD-1 mAb 2;
(D)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1 mAb 4;
(2) tri CDRLVL domena PD-1 mAb 4;
(3) tri CDRHVH domena PD-1 mAb 4 i tri CDRLVL domena PD-1 mAb 4;
(E)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1 mAb 5;
(2) tri CDRLVL domena PD-1 mAb 5;
(3) tri CDRHVH domena PD-1 mAb 5 i tri CDRLVL domena PD-1 mAb 5;
(F)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1 mAb 6;
(2) tri CDRLVL domena PD-1 mAb 6;
(3) tri CDRHVH domena PD-1 mAb 6 i tri CDRLVL domena PD-1 mAb 6;
2
(G)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1 mAb 7;
(2) tri CDRLVL domena PD-1 mAb 7, ili hPD-1 mAb 7 VL2, ili hPD-1 mAb 7 VL3;
(3) tri CDRHVH domena PD-1 mAb 7 i tri CDRLVL domena PD-1 mAb 7, ili hPD-1 mAb 7 VL2, hPD-1 mAb 7 VL3;
(4) VH domen hPD-1 mAb 7 VH1, ili hPD-1 mAb 7 VH2;
(5) VL domen hPD-1 mAb 7 VL1, ili hPD-1 mAb 7 VL2, ili hPD-1 mAb 7 VL 3;
(6) VH i VL domene hPD-1 mAb 7 (1.1), ili hPD-1 mAb 7 (1.2), ili hPD-1 mAb 7 (1.3), ili hPD-1 mAb 7 (2.1), ili hPD-1 mAb 7 (2.2), ili hPD-1 mAb 7 (2.3);
(H)
(1) tri CDRHSVH domena PD-1 mAb 8;
(2) tri CDRLSVL domena PD-1 mAb 8;
(3) tri CDRHSVH domena PD-1 mAb 8 i tri CDRLSVL domena PD-1 mAb 8;
(I)
(1) tri CDRHSVH domena PD-1 mAb 9, ili hPD-1 mAb 9 VH2;
(2) tri CDRLSVL domena PD-1 mAb 9, ili hPD-1 mAb 9 VL2;
(3) tri CDRHSVH domena PD-1 mAb 9, ili hPD-1 mAb 9 VH2 i tri CDRLSVL domena PD-1 mAb 9, ili hPD-1 mAb 9 VL2;
(4) VH domen hPD-1 mAb 9 VH1, ili hPD-1 mAb 9 VH2;
(5) VL domen hPD-1 mAb 9 VL1, ili hPD-1 mAb 9 VL2;
(6) VH i VL domene hPD-1 mAb 9 (1.1), ili hPD-1 mAb 9 (1.2), ili hPD-1 mAb 9 (2.1), ili hPD-1 mAb 9 (2.2); (J)
(1) tri CDRHSVH domena PD-1 mAb 10;
(2) tri CDRLSVL domena PD-1 mAb 10;
(3) tri CDRHSVH domena PD-1 mAb 10 i tri CDRLSVL domena PD-1 mAb 10;
(K)
(1) tri CDRHSVH domena PD-1 mAb 11;
(2) tri CDRLSVL domena PD-1 mAb 11;
(3) tri CDRHSVH domena PD-1 mAb 11 i tri CDRLSVL domena PD-1 mAb 11;
(L)
(1) tri CDRHSVH domena PD-1 mAb 12;
(2) tri CDRLSVL domena PD-1 mAb 12;
(3) tri CDRHSVH domena PD-1 mAb 12 i tri CDRLSVL domena PD-1 mAb 12;
(M)
(1) tri CDRHSVH domena PD-1 mAb 13;
(2) tri CDRLSVL domena PD-1 mAb 13;
(3) tri CDRHSVH domena PD-1 mAb 13 i tri CDRLSVL domena PD-1 mAb 13;
(N)
(1) tri CDRHSVH domena PD-1 mAb 14;
(2) tri CDRLSVL domena PD-1 mAb 14;
(3) tri CDRHSVH domena PD-1 mAb 14 i tri CDRLSVL domena PD-1 mAb 14;
(O)
(1) tri CDRHSVH domena PD-1 mAb 15;
(2) tri CDRLSVL domena PD-1 mAb 15;
(3) tri CDRHSVH domena PD-1 mAb 15 i tri CDRLSVL domena PD-1 mAb 15; (4) VH domen hPD-1 mAb 15 VH1;
(5) VL domen hPD-1 mAb 15 VL1;
(6) VH i VL domene hPD-1 mAb 15;
ili koji se vezuje ili se takmiči za vezivanje sa istim epitopom kao PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD -1 mAb 15.
A. Anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 1
1. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 1
[0091] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 1 (SEK ID BR: 69) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni).
[0092] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 1 je SEK ID BR: 70 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
2
[0093] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 1 (SEK ID BR: 74) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
[0094] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 1 je SEK ID BR: 75 (nukleotidi koji kodiraju CDRL ostatke prikazani su podvučeni):
2. Humanizacija antitela PD-1 antitela PD-1 mAb 1 u formu "hPD-1 mAb 1"
[0095] Napred opisano mišje anti-humano antitelo PD-1 PD-1 mAb 1 je humanizovano i dalje deimunizovano kada su identifikovani antigeni epitopi kako bi se pokazala sposobnost humanizacije antihumanog antitela PD-1 kako bi se smanjilo njegova antigenost nakon primene na humanog primaoca. Humanizacijom je dobijen jedan humanizovani VH domen, ovde ozna čen kao "hPD-1 mAb 1 VH1", i jedan humanizovani VL domen ovde označen kao "hPD-1 mAb 1 VL1". Shodno tome, antitelo koje sadrži humanizovane VL domene uparene sa humanizovanim VH domenom naziva se "hPD-1 mAb 1."
[0096] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 1 VH1 (SEK ID BR: 79) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0097] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 1 VH1 je SEK ID BR: 80 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
2
[0098] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 1 VL1 (SEK ID BR: 81) prikazana je ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0099] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 1 VL1 je SEK ID BR: 82 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
B. Anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 2
1. Mišije anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 2
[0100] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 2 (SEK ID BR: 83) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni).
CDRH1 PD-1 mAb 2 (SEK ID BR: 85): SFGMH
CDRH2 PD-1 mAb 2 (SEK ID BR: 86): YISSGSMSISYADTVKG
CDRH3 PD-1 mAb 2 (SEK ID BR: 87): LSDYFDY
[0101] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 2 je SEK ID BR: 84 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRH prikazani su podvučeni):
2
[0102] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 2 (SEK ID BR: 88) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 PD-1 mAb 2 (SEK ID BR: 90): RSSQSLVHSTGNTYLH
CDRL2 PD-1 mAb 2 (SEK ID BR: 91): RVSNRFS
CDRL3 PD-1 mAb 2 (SEK ID BR: 92): SQTTHVPWT
[0103] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 2 je SEK ID BR: 89 (nukleotidi koji kodiraju CDRL ostatke prikazani su podvučeni):
2. Humanizacija anti-humanog PD-1 antitela PD-1 mAb 2 u formu "hPD-1 mAb 2"
[0104] Napred opisano mišje anti-humano antitelo PD-1 PD-1 mAb 2 je humanizovano i dalje deimunizovano kada su identifikovani antigeni epitopi kako bi se pokazala sposobnost humanizacije antihumanog antitela na PD-1 kako bi se smanjilo njegova antigenost nakon primene na humanog primaoca. Humanizacijom je dobijen jedan humanizovani VH domen, ovde ozna čen kao "hPD-1 mAb 2 VH1", i jedan humanizovani VL domen ovde označen kao "hPD-1 mAb 1 VL1". Shodno tome, svako antitelo koje sadrži humanizovane VL domene uparene sa humanizovanim VH domenom naziva se "hPD-1 mAb 2."
[0105] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 2 VH1 (SEK ID BR: 93 je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni)):
[0106] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 2 VH1 je SEK ID BR: 94 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
2
[0107] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 2 VL1 (SEK ID BR: 95 je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni)):
[0108] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 2 VL1 je SEK ID BR: 96 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
C. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 3
[0109] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 3 (SEK ID BR: 97) je prikazana ispod (ostaci CDRHprikazani su podvučeni).
CDRH1 PD-1 mAb 3 (SEK ID BR: 99): DYVMH
CDRH2 PD-1 mAb 3 (SEK ID BR: 100): TIDPETGGTAYNQKFKG
CDRH3 of PD-1 mAb 3 (SEK ID BR:101): EKITTIVEGTYWYFDV
[0110] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 3 je SEK ID BR: 98 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRH prikazani su podvučeni):
2
[0111] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 3 (SEK ID BR: 102) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 PD-1 mAb 3 (SEK ID BR: 104): RSSQNIVHSNGDTYLE
CDRL2 PD-1 mAb 3 (SEK ID BR: 105): KVSNRFS
CDRL3 PD-1 mAb 3 (SEK ID BR: 106): FQGSHLPYT
[0112] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 3 je SEK ID BR: 103 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
D. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 4
[0113] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 4 (SEK ID BR: 107) je prikazana ispod (ostaci CDRHprikazani su podvučeni).
CDRH1 of PD-1 mAb 4 (SEQ ID NO:109): SFGMH
CDRH2 of PD-1 mAb 4 (SEQ ID NO:110): YISSGSMSISYADTVKG
CDRH3 of PD-1 mAb 4 (SEQ ID NO:111): LTDYFDY
[0114] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 4 je SEK ID BR: 108 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0115] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 4 (SEK ID BR: 112) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 PD-1 mAb 4 (SEK ID BR: 114): RSSQSLVHSTGNTYFH
CDRL2 PD-1 mAb 4 (SEK ID BR: 115): RVSNRFS
CDRL3 PD-1 mAb 4 (SEK ID BR: 116): SQTTHVPWT
[0116] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 4 je SEK ID BR: 113 (nukleotidi koji kodiraju ostatake CDRLprikazani su podvučeni):
E. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 5
[0117] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 5 (SEK ID BR: 117) je prikazana ispod (ostaci CDRHprikazani su podvučeni).
CDRH1 PD-1 mAb 5 (SEK ID BR: 119): AYWMN
CDRH2 PD-1 mAb 5 (SEK ID BR: 120): VIHPSDSETWLNQKFKD
CDRH3 PD-1 mAb 5 (SEK ID BR: 121): EHYGSSPFAY
[0118] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 5 je SEK ID BR: 118 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
1
[0119] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 5 (SEK ID BR: 122) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 PD-1 mAb 5 (SEK ID BR: 124): RANESVDNYGMSFMN
CDRL2 PD-1 mAb 5 (SEK ID BR: 125): AASNQGS
CDRL3 PD-1 mAb 5 (SEK ID BR: 126): QQSKEVPYT
[0120] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 5 je SEK ID BR: 123 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
F. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 6
[0121] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 6 (SEK ID BR: 127) je prikazana ispod (ostaci CDRHprikazani su podvučeni).
CDRH1 PD-1 mAb 6 (SEK ID BR: 129): SYGMS
CDRH2 PD-1 mAb 6 (SEK ID BR: 130): TISGGGSDTYYPDSVKG
CDRH3 PD-1 mAb 6 (SEK ID BR: 131): QKATTWFAY
[0122] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 6 je SEK ID BR: 128 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
2
[0123] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 6 (SEK ID BR: 132) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 PD-1 mAb 6 (SEK ID BR: 134): RASESVDNYGISFMN
CDRL2 PD-1 mAb 6 (SEK ID BR: 135): PASNQGS
CDRL3 PD-1 mAb 6 (SEK ID BR: 136): QQSKEVPWT
[0124] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 6 je SEK ID BR: 133 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
G. Anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 7
1. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 7
[0125] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 7 (SEK ID BR: 137) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni).
CDRH1 PD-1 mAb 7 (SEK ID BR: 139): SYWMN
CDRH2 PD-1 mAb 7 (SEK ID BR: 140): VIHPSDSETWLDQKFKD
CDRH3 PD-1 mAb 7 (SEK ID BR: 141): EHYGTSPFAY
[0126] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 7 je SEK ID BR: 138 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0127] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 7 (SEK ID BR: 142) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 PD-1 mAb 7 (SEK ID BR: 144): RANESVDNYGMSFMN
CDRL2 PD-1 mAb 7 (SEK ID BR: 145): AASNQGS
CDRL3 PD-1 mAb 7 (SEK ID BR: 146): QQSKEVPYT
[0128] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 7 je SEK ID BR: 143 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
2. Humanizacija anti-humanog PD-1 antitela PD-1 mAb 7 u formu "hPD-1 mAb 7"
[0129] Napred opisano mišje anti-humano antitelo PD-1 PD-1 mAb 7 je humanizovano i dalje deimunizovano kada su identifikovani antigeni epitopi kako bi se pokazala sposobnost humanizacije antihumanog antitela na PD-1 kako bi se smanjila njegova antigenost nakon primene na humanog primaoca. Humanizacijom su dobijena dva humanizovana VH domena, ovde označena kao "hPD-1 mAb 7 VH1" i "hPD-1 mAb 7 VH2", i tri humanizovana VL domena ovde označena kao "hPD-1 mAb 7 VL1," "hPD- 1 mAb 7 VL2, "i" hPD-1 mAb 7 VL3." Bilo koji od humanizovanih VL domena može biti uparen sa bilo kojim od humanizovanih VH domena. Shodno tome, svako antitelo koje sadrži jedan od humanizovanih VL domena uparenih sa humanizovanim VH domenom u opštem se naziva "hPD-1 mAb 7", a određene kombinacije humanizovanih VH/VL domena se pozivaju na specifične VH/VL domene, na primer humanizovano antitelo koje sadrži hPD-1 mAb 7 VH1 i hPD-1 mAb 1 VL2, posebno se nazivaju "hPD-1 mAb 7 (1.2)."
[0130] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 7 VH1 (SEK ID BR: 147) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
4
[0131] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 7 VH1 je SEK ID BR: 148 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0132] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 7 VH2 (SEK ID BR: 149) je prikazana ispod (CDRHostaci su prikazani podvučeni):
[0133] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 7 VH2 je SEK ID BR: 150 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0134] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 7 VL1 (SEK ID BR: 151) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0135] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 7 VL1 je SEK ID BR: 152 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0136] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 7 VL2 (SEK ID BR: 153) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0137] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 7 VL2 je SEK ID BR: 154 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0138] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 7 VL3 (SEK ID BR: 155) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0139] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 7 VL3 je SEK ID BR: 156 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRH prikazani su podvučeni):
[0140] CDRL1 VL domena i hPD-1 mAb 7 VL2 i hPD-1 mAb 7 VL3 sadrži supstituciju aminokiselina asparagin-serin i ima aminokiselinsku sekvencu: RASESVDNYGMSFMN ((SEK ID BR: 157), supstituisani serin prikazan je podvučeno). Predviđeno je da se slična supstitucija može ugraditi u bilo koji od napred opisanih domena PD-1 mAb 7 CDRL1.
[0141] Pored toga, CDRL2 VL domena hPD-1 mAb 7 VL3 sadrži supstituciju aminokiseline glutamin u arginin i ima aminokiselinsku sekvencu: AASNRGS ((SEK ID BR: 158), supstituisani arginin je prikazan podvučeno). Predviđeno je da se slična supstitucija može ugraditi u bilo koji od napred opisanih domena PD-1 mAb 7 CDRL2.
H. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 8
[0142] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 8 (SEK ID BR: 159) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni).
CDRH1 PD-1 mAb 8 (SEK ID BR: 161): DYYMN
CDRH2 PD-1 mAb 8 (SEK ID BR: 162): DINPKNGDTHYNQKFKG
CDRH3 PD-1 mAb 8 (SEK ID BR: 163): DFDY
[0143] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 8 je SEK ID BR: 160 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0144] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 8 (SEK ID BR: 164) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 PD-1 mAb 8 (SEK ID BR: 166): RSSQTLVYSNGNTYLN
CDRL2 PD-1 mAb 8 (SEK ID BR: 167): KVSNRFS
CDRL3 PD-1 mAb 8 (SEK ID BR: 168): SQSTHVPFT
[0145] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 8 je SEK ID BR: 165 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
I. Anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 9
1. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 9
[0146] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 9 (SEK ID BR: 169) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni).
CDRH1 PD-1 mAb 9 (SEK ID BR: 171): SYLVS
CDRH2 PD-1 mAb 9 (SEK ID BR: 172): TISGGGGNTYYSDSVKG
CDRH3 PD-1 mAb 9 (SEK ID BR: 173): YGFDGAWFAY
[0147] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 9 je SEK ID BR: 170 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0148] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 9 (SEK ID BR: 174) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 PD-1 mAb 9 (SEK ID BR: 176): RASENIYSYLA
CDRL2 PD-1 mAb 9 (SEK ID BR: 177): NAKTLAA
CDRL3 PD-1 mAb 9 (SEK ID BR: 178): QHHYAVPWT
[0149] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 9 je SEK ID BR: 175 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
2. Humanizacija anti-humanog PD-1 antitela PD-1 mAb 9 u formu "hPD-1 mAb 9"
[0150] Napred opisano mišje anti-humano antitelo na PD-1 PD-1 mAb 9 je humanizovano i dalje deimunizovano kada su identifikovani antigeni epitopi kako bi se pokazala sposobnost humanizacije antihumanog antitela na PD-1 kako bi se smanjila njegova antigenost nakon primene na humanog primaoca. Humanizacijom su dobijena dva humanizovana VH domena, ovde ozna čena kao "hPD-1 mAb 9 VH1" i "hPD-1 mAb 9 VH2", i dva humanizovana VL domena ovde označena kao "hPD-1 mAb 9 VL1" i "hPD -1 mAb 9 VL2." Bilo koji od humanizovanih VL domena može biti uparen sa humanizovanim VH domenima. Shodno tome, svako antitelo koje sadrži jedan od humanizovanih VL domena uparenih sa humanizovanim VH domenom se u opštem se naziva "hPD-1 mAb 9", a posebne kombinacije humanizovanih VH/VL domena se pozivaju na specifične VH/VL domene, na primer humanizovano antitelo koje sadrži hPD-1 mAb 9 VH1 i hPD-1 mAb 9 VL2, posebno se nazivaju "hPD-1 mAb 9 (1.2)."
[0151] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 9 VH1 (SEK ID BR: 179) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0152] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 9 VH1 je SEK ID BR: 180 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0153] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 9 VH2 (SEK ID BR: 181) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0154] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 9 VH2 je SEK ID BR: 182 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0155] CDRH1 VH domena hPD-1 mAb 9 VH2 sadrži supstituciju aminokiselina serin-glicin i ima aminokiselinsku sekvencu: SYLVG ((SEK ID BR: 183), supstituisani glicin je prikazan podvučen). Predviđeno je da se slična supstitucija može ugraditi u bilo koju od napred opisanih domena PD-1 mAb 9 CDRH1.
[0156] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 9 VL1 (SEK ID BR: 184) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0157] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 9 VL1 je SEK ID BR: 185 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0158] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 9 VL2 (SEK ID BR: 186) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
4
[0159] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 9 VL2 je SEK ID BR: 187 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0160] CDRL1 VL domena hPD-1 mAb 9 VL2 sadrži supstituciju aminokiselina serin-asparagin i ima aminokiselinsku sekvencu: RASENIYNYLA ((SEK ID BR: 188), supstituisani asparagin je prikazan podvučeno). Predviđeno je da se slična supstitucija može ugraditi u bilo koji od napred opisanih domena PD-1 mAb 9 CDRL1.
[0161] CDRL2 VL domena hPD-1 mAb 9 VL2 sadrži supstituciju aminokiseline asparagin-aspartat i ima aminokiselinsku sekvencu: DAKTLAA ((SEK ID BR: 189), supstituisani asparagin je prikazan podvučeno). Predviđeno je da se slična supstitucija može ugraditi u bilo koji od napred opisanih domena PD-1 mAb 7 CDRL2.
J. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 10
[0162] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 10 (SEK ID BR: 190) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni).
CDRH1 PD-1 mAb 10 (SEK ID BR: 192): NYLMS
CDRH2 PD-1 mAb 10 (SEK ID BR: 193): SISGGGSNIYYPDSVKG
CDRH3 PD-1 mAb 10 (SEK ID BR: 194): QELAFDY
[0163] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 10 je SEK ID BR: 191 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0164] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 10 (SEK ID BR: 195) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 PD-1 mAb 10 (SEK ID BR: 197): RTSQDISNFLN
CDRL2 PD-1 mAb 10 (SEK ID BR: 198): YTSRLHS
CDRL3 PD-1 mAb 10 (SEK ID BR: 199): QQGSTLPWT
[0165] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 10 je SEK ID BR: 196 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke su prikazani podvučeno):
K. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 11
[0166] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 11 (SEK ID BR: 200) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni).
CDRH1 PD-1 mAb 11 (SEK ID BR: 202): GYWMH
CDRH2 PD-1 mAb 11 (SEK ID BR: 203): AIYPGNSDTHYNQKFKG
CDRH3 PD-1 mAb 11 (SEK ID BR: 204): GTYSYFDV
[0167] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 11 je SEK ID BR: 201 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0168] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 11 (SEK ID BR: 205) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 PD-1 mAb 11 (SEK ID BR: 207): RASQSIGTSIH
CDRL2 PD-1 mAb 11 (SEK ID BR: 208): YASESIS
CDRL3 PD-1 mAb 11 (SEK ID BR: 209): QQSNSWLT
[0169] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 11 je SEK ID BR: 206 (nukleotidi koji kodiraju CDRL ostatke prikazani su podvučeni):
L. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 12
[0170] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 12 (SEK ID BR: 210) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni).
CDRH1 PD-1 mAb 12 (SEK ID BR: 212): DYEMH
CDRH2 PD-1 mAb 12 (SEK ID BR: 213): TIDPETGGTAYNQKFKG
CDRH3 PD-1 mAb 12 (SEK ID BR: 214): ERITTVVEGAYWYFDV
[0171] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 12 je SEK ID BR: 211 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
4
[0172] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 4 (SEK ID BR: 215) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 PD-1 mAb 12 (SEK ID BR: 217): RSSQNIVHSNGNTYLE
CDRL2 PD-1 mAb 12 (SEK ID BR: 218): KVSTRFS
CDRL3 PD-1 mAb 12 (SEK ID BR: 219): FQGSHVPYT
[0173] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 12 je SEK ID BR: 216 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
M. Mišje anti-humano PD-1 Antitelo PD-1 mAb 13
[0174] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 13 (SEK ID BR: 220) prikazana je ispod (ostaci CDRHprikazani su podvučeni).
CDRH1 PD-1 mAb 13 (SEK ID BR: 222): SHTMS
CDRH2 PD-1 mAb 13 (SEK ID BR: 223): TISGGGSNIYYPDSVKG
CDRH3 PD-1 mAb 13 (SEK ID BR: 224): QAYYGNYWYFDV
[0175] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 13 je SEK ID BR: 221 (nukleotidi kodiranje ostataka CDRHprikazano je podvučeno):
[0176] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 13 (SEK ID BR: 225) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 PD-1 mAb 13 (SEK ID BR: 227): LASQTIGTWLA
CDRL2 PD-1 mAb 13 (SEK ID BR: 228): AATSLAD
CDRL3 PD-1 mAb 13 (SEK ID BR: 229): QQLDSIPWT
[0177] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 13 je SEK ID BR: 226 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
N. Mišje anti-humano PD-1 Antitelo PD-1 mAb 14
[0178] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 14 (SEK ID BR: 230) je prikazana ispod (ostaci CDRHprikazani su podvučeni).
CDRH1 PD-1 mAb 14 (SEK ID BR: 232): SYWIT
CDRH2 PD-1 mAb 14 (SEK ID BR: 233): NIYPGTDGTTYNEKFKS
CDRH3 PD-1 mAb 14 (SEK ID BR: 234): GLHWYFDV
[0179] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 14 je SEK ID BR: 231 (nukleotidi kodiranje ostataka CDRHprikazano je podvučeno):
4
[0180] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 14 (SEK ID BR: 235) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 PD-1 mAb 14 (SEK ID BR: 237): KASQSVGTNVA
CDRL2 PD-1 mAb 14 (SEK ID BR: 238): SASSRFS
CDRL3 PD-1 mAb 14 (SEK ID BR: 239): QQYNSYPYT
[0181] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 14 je SEK ID BR: 236 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
O. Anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 15
1. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 15
[0182] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 15 (SEK ID BR: 240) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni).
CDRH1 PD-1 mAb 15 (SEK ID BR: 242): SYLIS
CDRH2 PD-1 mAb 15 (SEK ID BR: 243): AISGGGADTYYADSVKG
CDRH3 PD-1 mAb 15 (SEK ID BR: 244): RGTYAMDY
[0183] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 15 je SEK ID BR: 241 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
4
[0184] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 15 (SEK ID BR: 245) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 PD-1 mAb 15 (SEK ID BR: 247): LASQTIGTWLA
CDRL2 PD-1 mAb 15 (SEK ID BR: 248): AATSLAD
CDRL3 PD-1 mAb 15 (SEK ID BR: 249): QQLYSIPWT
[0185] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 15 je SEK ID BR: 246 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
2. Humanizacija anti-humanog PD-1 antitela PD-1 mAb 15 u formu "hPD-1 mAb 15"
[0186] Napred opisano mišje anti-humano antitelo PD-1 PD-1 mAb 15 je humanizovano i dalje deimunizovano kada su identifikovani antigeni epitopi kako bi se pokazala sposobnost humanizacije antihumanog antitela na PD-1 kako bi se smanjila njegova antigenost nakon primene na humanog primaoca. Humanizacijom je dobijen jedan humanizovani VH domen, ovde ozna čen kao "hPD-1 mAb 2 VH1" i jedan humanizovani VL domen ovde označen kao "hPD-1 mAb 1 VL1". Antitelo koje sadrži humanizovani VL domen uparen sa humanizovanim VH domenom naziva se "hPD-1 mAb 15."
[0187] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 15 VH1 (SEK ID BR: 250) je prikazana ispod (ostaci CDRH su prikazani podvučeni):
[0188] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 15 VH1 je SEK ID BR: 251 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
4
[0189] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 15 VL1 (SEK ID BR: 252) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0190] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 15 VL1 je SEK ID BR: 253 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
V. Anti-humana PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15, i njihovi derivati koji imaju projektovanu Fc regiju
[0191] U tradicionalnoj imunološkoj funkciji, interakcija kompleksa antitelo-antigen sa ć elijama imunološkog sistema rezultira širokim spektrom odgovora, u rasponu od efektorskih funkcija kao što su citotoksičnost zavisna od antitela, degranulacija mastocita i fagocitoza do imunomodulatornih signala, kao što je reguliše proliferaciju limfocita i lučenje antitela. Sve ove interakcije započinju vezivanjem Fc regiona antitela ili imunih kompleksa za specijalizovane ć elijske povr šinske receptore na hematopoetskim ć elijama. Raznolikost ć elijskih odgovora izazvanih antitelima i imunskim kompleksima rezultat je strukturne heterogenosti tri Fc receptora: FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) i FcγRIII (CD16). FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32A) i FcγRIII (CD16) aktiviraju (tj. jačaju imunološki sistem) receptore; FcγRIIB (CD32B) je inhibitor (tj. prigušivač imunog sistema) receptor. Osim toga, interakcija sa neonatalnim Fc receptorom (FcRn) posreduje u recikliranju molekula IgG sa endosoma na ć elijsku povr šinu i oslobađanje u krv. Aminokiselinska sekvenca primera IgG1 divljeg tipa (SEK ID BR: 1), IgG2 (SEK ID BR: 2), IgG3 (SEK ID BR: 3) i IgG4 (SEK ID BR: 4) su predstavljene napred.
[0192] Modifikacija Fc regiona obično dovodi do izmenjenog fenotipa, na primer promenjenog polu života seruma, promenjene stabilnosti, promenjene osetljivosti na ć elijske enzime ili izmenjene efektorske funkcije. Može biti poželjno modifikovati antitelo ili drugi vezujuć i molekul ovog pronalaska u odnosu na efektorsku funkciju, na primer, tako da se poveć a efikasnost takvog molekula u lečenju raka. Smanjenje ili uklanjanje efektorske funkcije je poželjno u određenim slučajevima, na primer u slučaju antitela čiji mehanizam delovanja uključuje blokiranje ili antagonizam, ali ne i ubijanje ć elija koje nose ciljni antigen. Poveć ana efektorska funkcija je generalno poželjna kada se usmeri na neželjene ć elije, poput tumora i stranih ć elija, gde su Fc γR izražene na niskim nivoima, na primer, tumorske specifične B ć elije sa niskim nivoom FcγRIIB (npr. Ne-Hodgkinov limfom, CLL i Burkitov limfom). U navedenim slučajevima, molekuli iz ovog pronalaska sa dodeljenom ili izmenjenom aktivnošć u efektorske funkcije korisni su za lečenje i/ili prevenciju bolesti, poremeć aja ili infekcije gde je poželjna pove ć ana efikasnost aktivnosti efektorske funkcije.
[0193] U određenim slučajevima, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku sadrže Fc region koji poseduje jednu ili više modifikacija (npr. supstitucije, delecije ili insercije) u sekvencu aminokiselina divljeg tip Fc regiona (npr. SEK ID BR: 1), koji smanjuju afinitet i avidnost Fc regiona i, prema tome, molekul iz pronalaska, za jedan ili više receptora FcγR. U drugim slučajevima, molekuli iz ovog pronalaska obuhvataju Fc region koji poseduje jednu ili više modifikacija aminokiselina Fc regiona divljeg tipa, koje poveć avaju afinitet i avidnost Fc regiona i, prema tome, molekul iz pronalaska, za jedan ili vi še Fc γR receptora. U drugim slučajevima, molekuli sadrže varijantu Fc regiona gde navedena varijanta daje ili posreduje poveć anu aktivnost citotoksičnosti zavisnu od antitela (ADCC) i/ili pove ć ano vezivanje za FcγRIIA, u odnosu na molekul koji ne sadrži Fc region ili koji sadrži divlji tip Fc Region. U alternativnim slučajevima, molekuli sadrže varijantu Fc regiona u kojoj navedena varijanta daje ili posreduje smanjenu aktivnost ADCC (ili drugu efektorsku funkciju) i/ili poveć ano vezivanje za Fc γRIIB, u odnosu na molekul koji ne sadrži Fc region ili koji sadrži Fc region divljeg tipa. U nekim slučajevima, pronalazak obuhvata
4
molekule koji se vezuju za PD-1 i koji sadrže varijantu Fc regiona, čija varijanta Fc regija ne pokazuje detektibilno vezivanje za bilo koji FcγR, u odnosu na uporedni molekul koji sadrži Fc region divljeg tipa. U drugim slučajevima, pronalazak obuhvata molekule za vezivanje PD-1 koji sadrže varijantu Fc regiona, čija varijanta Fc regija vezuje samo jedan FcγR, poželjno jedan od FcγRIIA, FcγRIIB ili FcγRIIIA. Svaki takav poveć an afinitet i/ili avidnost poželjno se procenjuje merenjem in vitro stepena detektibilnog vezivanja za aktivnost povezanu sa FcγR u ć elijama koje izražavaju niske nivoe Fc γR pri vezivanju aktivnosti matičnog molekula (bez modifikovane Fc regije) ne mogu se otkriti u ć elijama ili u ć elijama koje eksprimiraju ciljne antigene koji nisu FcγR receptori pri gustini od 30.000 do 20.000 molekula/ć eliji, pri gustini od 20.000 do 10.000 molekula/ć eliji, pri gustini od 10.000 do 5.000 molekula/ ć elija, pri gustini od 5.000 do 1.000 molekula/ć eliji, pri gustini od 1.000 do 200 molekula/ ć eliji ili pri gustini od 200 molekula/ć eliji ili manje (ali najmanje 10, 50, 100 ili 150 molekula/ ć eliji).
[0194] PD-1-vezujuć i molekuli ovog pronalaska može sadržati varijantu Fc regiona sa izmenjenim afinitetima za aktiviranje i/ili inhibiciju receptora Fc γ. U jednom slučaju, molekul koji se veže za PD-1 sadrži varijantu Fc regiona koja ima poveć an afinitet za Fc γRIIB i smanjen afinitet za FcγRIIIA i/ili FcγRIIA, u poređenju sa uporedivim molekulom sa Fc regionom divljeg tipa. U drugom slučaju, molekul koji vezuje PD-1 prema ovom pronalasku sadrži varijantu Fc regiona, koja je smanjila afinitet za FcγRIIB i poveć ala afinitet za FcγRIIIA i/ili FcγRIIA, u poređenju sa uporedivim molekulom sa Fc regionom divljeg tipa. U još jednom slučaju, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku sadrže varijantu Fc regiona koja je smanjila afinitet za FcγRIIB i smanjila afinitet za FcγRIIIA i/ili FcγRIIA, u poređenju sa uporedivim molekulom sa Fc regionom divljeg tipa. U još jednom slučaju, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku sadrže varijantu Fc regiona, koja ima nepromenjen afinitet za Fc γRIIB i smanjen (ili poveć an) afinitet za FcγRIIIA i/ili FcγRIIA, u odnosu na uporedni molekul Fc regije divljeg tipa.
[0195] U određenim slučajevima, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku sadrže varijantu Fc regiona koja ima izmenjeni afinitet za FcγRIIIA i/ili FcγRIIA tako da imunoglobulin ima pojačanu efektorsku funkciju. Neograničavajuć i primeri efektivnih ć elijskih funkcija uključuju citotoksičnost zavisnu od ć elija zavisnu od antitela, fagocitozu zavisnu od antitela, fagocitozu, opsonizaciju, opsonofagocitozu, vezivanje ć elija, rozetiranje, vezivanje C1q i ć elijsku posredovanu citotoksičnost zavisnu od komplementa.
[0196] U poželjnom slučaju, promena afiniteta ili efektorske funkcije je najmanje 2 puta, po željno najmanje 4 puta, najmanje 5 puta, najmanje 6 puta, najmanje 7 puta, najmanje 8 puta, najmanje 9 puta, najmanje 10 puta, najmanje 50 puta ili najmanje 100 puta, u odnosu na uporedni molekul koji sadr ži Fc region divljeg tipa. U drugim slučajevima pronalaska, varijanta Fc regiona imunospecifično vezuje jedan ili više FcR sa najmanje 65 %, poželjno najmanje 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 100 %, 125 %, 150 %, 175 %, 200 %, 225 % ili 250 % već i afinitet u odnosu na molekul koji sadrži Fc region divljeg tipa. Takva merenja mogu biti in vivo ili in vitro testovi, a u poželjnom slučaju su in vitro testovi kao što su ELISA ili površinski plazmonski rezonantni testovi.
[0197] U različitim slučajevima, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku sadrže varijantu Fc regiona u kojoj navedena varijanta agonizuje najmanje jednu aktivnost receptora Fc γR, ili antagonizuje najmanje jednu aktivnost receptora FcγR. U poželjnom slučaju, molekuli sadrže varijantu koja antagonizuje jednu ili više aktivnosti FcγRIIB, na primer, signalizacija posredovana receptorima B ć elija, aktivacija B ć elija, proliferacija B ć elija, proizvodnja antitela, unutar ć elijski priliv kalcijuma B ć elija, napredovanje ć elijskog ciklusa, Fc γRIIB-posredovana inhibicija signalizacije FcγRI, fosforilacija FcγRIIB, regrutovanje SHIP-a, fosforilacija SHIP-a i povezanost sa Shc, ili aktivnost jednog ili vi še nizvodnih molekula (npr. MAP kinaza, JNK, p38 ili Akt) FcγRIIB put transdukcije signala. U drugom slučaju, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku sadrže varijantu koja agonizuje jednu ili više aktivnosti FcγRI, na primer, aktivaciju mastocita, mobilizaciju kalcijuma, degranulaciju, proizvodnju citokina ili otpu štanje serotonina.
[0198] U nekim slučajevima, molekuli obuhvataju Fc region koji obuhvata regione iz dva ili vi še IgG izotipa (npr. IgG1, IgG2, IgG3 i IgG4). Kako se ovde koristi, za Fc region se kaže da je određenog IgG izotipa ako je njegova aminokiselinska sekvenca najhomolognija tom izotipu u odnosu na druge izotipe IgG. Različiti izotipi IgG pokazuju različita fizička i funkcionalna svojstva, uključujuć i poluživot u serumu, fiksaciju komplementa, afinitete vezivanja za FcγR i aktivnosti efektorske funkcije (npr. ADCC, CDC, itd.) Zbog razlika u aminokiselinskim sekvencama njihovih šarki i/ili Fc regije, na primer kako je opisano u Flesch and Neppert (1999) J. Clin. Lab. Anal. 14: 141-156; Chappel et al. (1993) J. Biol. Chem. 33: 25124-25131; Chappel et al. (1991) Proc. Natl. Akad. Sci. (U.S.A.) 88: 9036-9040; ili Bruggemann et al. (1987) J. Ekp. Med 166: 1351-1361. Ova vrsta varijantnog Fc regiona može se koristiti sama, ili u kombinaciji sa modifikacijom aminokiseline, da utiče na Fc posredovanu efektorsku funkciju i/ili aktivnost vezivanja. U kombinaciji, modifikacija aminokiselina i IgG šarka/Fc regija mogu pokazati sličnu funkcionalnost (npr. poveć an afinitet za Fc γRIIA) i mogu delovati aditivno ili, još poželjnije, sinergistički da izmene efektorsku funkcionalnost u molekulu iz ovog pronalaska, u odnosu na molekul iz pronalaska koji sadrži Fc region divljeg tipa. U drugim slučajevima, modifikacija aminokiselina i IgG Fc region mogu pokazati suprotnu
4
funkcionalnost (npr. poveć an i smanjen afinitet za Fc γRIIA, respektivno) i mogu delovati tako da selektivno ublaže ili smanje specifičnu funkcionalnost u molekulu iz ovog pronalaska, u odnosu na molekul pronalaska koji ne obuhvata Fc regiju ili sadrži Fc regiju divljeg tipa istog izotipa.
[0199] U poželjnom specifičnom slučaju, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku sadrže varijantu Fc regiona, gde navedena varijanta Fc regija sadr ži najmanje jednu modifikaciju aminokiselina u odnosu na Fc region divljeg tipa, tako da navedeni molekul ima izmenjeni afinitet prema FcR, pod uslovom da navedena varijanta Fc regiona nema supstituciju na polo žajima koji ostvaruju direktan kontakt sa FcγR na osnovu kristalografske i strukturne analize interakcija Fc-Fcγ, poput onih koje su otkrili Sondermann i sar. (2000) Nature 406: 267-73. Primeri položaja unutar Fc regiona koji imaju direktan kontakt sa Fc γR su aminokiselinski ostaci 234-239, aminokiselinski ostaci 265-269 (B/C petlja), aminokiselinski ostaci 297-299 (C '/E petlja) i aminokiselinski ostaci 327-332 (F/G petlja). U nekim slučajevima, molekuli iz pronalaska sadrže varijantu Fc regiona koji obuhva modifikaciju najmanje jednog ostatka koji ne ostvaruje direktan kontakt sa FcγR na osnovu strukturne i kristalografske analize, na primer, nije unutar mesta vezivanja Fc-FcγR.
[0200] Varijante Fc regiona su dobro poznate u tehnici, a bilo koja poznata varijanta Fc regiona mo že se koristiti u ovom pronalasku za davanje ili modifikovanje efektorske funkcije koju ispoljava molekul iz pronalaska koji sadrži Fc region (ili njegov deo) kao funkcionalno ispitani, npr. u testu zavisnom od NK ili makrofaga. Na primer, varijante Fc regiona identifikovane kao promenljiva efektorska funkcija opisane su u PCT objavama br. WO 04/063351; WO 06/088494; WO 07/024249; WO 06/113665; WO 07/021841; WO 07/106707; i WO 2008/140603, i bilo koja pogodna varijanta koja je ovde otkrivena može se koristiti u predmetnim molekulima.
[0201] U određenim slučajevima, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku sadrže varijantu Fc regiona, koja ima jednu ili više aminokiselinskih modifikacija u jednom ili više regiona, koje se modifikacije menjaju (u odnosu na divlji tip Fc regiona) Odnos afiniteta varijantnog Fc regiona prema aktivirajuć em Fc γR (kao što je FcγRIIA ili FcγRIIIA) u odnosu na inhibitorni FcγR (kao što je FcγRIIB):
[0202] Posebno su poželjni molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku i koji imaju varijantu Fc regiona (u odnosu na Fc region divljeg tipa) u kojoj varijanta Fc regiona ima odnos afiniteta već i od 1. Takvi molekuli imaju naročitu upotrebu u obezbeđivanju terapeutskog ili profilaktičkog lečenja bolesti, poremeć aja ili infekcije ili ublažavanja simptoma, gde je poželjna pove ć ana efikasnost efektorske ć elijske funkcije (npr. ADCC) posredovana FcγR, npr. ili zarazne bolesti. Nasuprot tome, varijanta Fc regiona sa odnosom afiniteta manjim od 1 posreduje u smanjenju efikasnosti funkcije efektorske ć elije. Tabela 1 prikazuje primere pojedinačnih, dvostrukih, trostrukih, četvorostrukih i petostrukih mutacija prema tome da li je njihov odnos afiniteta već i ili manji od 1.
� (nastavak)
[0203] U određenom slučaju, u varijantama Fc regiona, sve modifikacije aminokiselina (npr., supstitucije) na bilo kojoj od pozicija 235, 240, 241, 243, 244, 247, 262, 263, 269, 298, 328 ili 330 i poželjno jedan ili više sledeć ih ostataka: A240, 1240, L241, L243, H244, N298, 1328 ili V330. U drugačijem specifičnom slučaju, u varijanti Fc regiona, bilo koje modifikacije aminokiselina (npr., supstitucije) na bilo kojoj od pozicija 268, 269, 270, 272, 276, 278, 283, 285, 286, 289, 292, 293, 301, 303, 305, 307, 309, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 ili 439 i poželjno jedan ili više od sledeć ih ostataka: H280, K280, I280, G290, S290, T290, I290, N294, K295, P296, D298, N298, P298, V298, I300 ili L300.
[0204] U poželjnom slučaju, u varijanti Fc regiona koje vezuju FcγR sa promenjenim afinitetom, bilo koje modifikacije aminokiselina (npr., supstitucije) na bilo kojoj od pozicija 255, 256, 258, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 300, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 320, 322, 326, 329, 330, 332, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 339, 340, 359, 360, 373, 376, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 ili 439. Poželjno je da varijanta Fc regiona ima bilo koji od sledeć ih ostataka: A256, N268, K272, D286, K286, S286, A290, S290, A298, M301, A312, E320, M320, K320, R320, E322, A326, D326, E326, N326, S326 , K330, T339, A333, A334, E334, H334, L334, M334, K334, V334, K335, K335, A359, A360 ili A430.
[0205] U drugom slučaju, u varijanti Fc regiona koje vezuju FcγR (preko njegove Fc regije) sa smanjenim afinitetom, sve modifikacije aminokiselina (npr., supstitucije) na bilo kojoj od pozicija 252, 254, 265, 268, 269, 270, 278, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 300, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 ili 439.
[0206] U drugom slučaju, u varijanti Fc regiona koje vezuju FcγR (preko njegove Fc regije) sa pojačanim afinitetom, sve modifikacije aminokiselina (npr. supstitucije) na bilo kojoj od pozicija 280, 283, 285, 286, 290, 294, 295, 298, 300, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 331, 333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 ili 430. U drugom slučaju, u varijanti Fc regiona koji vezuje FcγRIIA sa pojačanim afinitetom, bilo koji od sledeć ih ostataka: A255, A256, A258, A267, A268, N268, A272, K272, A276, A280, A283, A285, A286, D286, K286, S286, A290, S290, M301, E320 , M320, K320, R320, E322, A326, D326, E326, S326, K330, A331, K335, A337 ili A430.
[0207] Poželjne varijante uključuju jednu ili više modifikacija na bilo kojoj poziciji: 228, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 239, 240, 241, 243, 244, 245, 247, 262, 263, 264, 265 , 266, 271, 273, 275, 281, 284, 291, 296, 297, 298, 299, 302, 304, 305, 313, 323, 325, 326, 328, 330 ili 332.
[0208] Posebno poželjne varijante uključuju jednu ili više modifikacija izabranih iz grupa A-AI:
2
(nastavak)
4
[0209] Još posebno poželjne varijante uključuju jednu ili više modifikacija izabranih iz Grupa 1-105:
[0210] U jednom slučaju, PD-1-vezujuć i molekul iz ovog pronalaska ć e sadržati varijantu Fc regiona koja ima najmanje jednu modifikaciju u Fc regionu. U određenim slučajevima, varijanta Fc regiona sadrži najmanje jednu supstituciju izabranu iz grupe koju čine L235V, F243L, R292P, I300L, V305I i P396L.
[0211] U određenom slučaju, varijanta Fc regiona obuhvata:
(A) najmanje jednu supstituciju izabranu iz grupe koju čine F243L, R292P, I300L, V305I i P396L;
(B) najmanje dve supstitucije izabrane iz grupe koju čine:
(1) F243L i P396L;
(2) F243L i R292P; i (3) R292P i V305I;
(C) najmanje tri supstitucije izabrane iz grupe koju čine:
(1) F243L, R292P i I300L;
(2) F243L, R292P i V305I;
(3) F243L, R292P i P396L; i
(4) R292P, V305I i P396L;
(D) najmanje četiri supstitucije izabrane iz grupe koju čine:
(1) F243L, R292P, I300L i P396L; i
(2) F243L, R292P, V305I i P396L; ili
(E) najmanje pet supstitucija izabranih iz grupe koju čine:
(1) F243L, R292P, I300L, V305I i P396L; i
(2) L235V, F243L, R292P, I300L i P396L.
[0212] U drugom specifičnom slučaju, varijanta Fc regiona sadrži supstitucije:
(A) F243L, R292P i I300L;
(B) L235V, F243L, R292P, I300L i P396L; ili
(C) F243L, R292P, I300L, V305I i P396L.
[0213] U jednom slučaju, PD-1-vezujuć i molekul iz ovog pronalaska sadrži varijantu Fc regiona koja pokazuje smanjeno (ili u suštini nema) vezivanje za FcγRIA (CD64), FcγRIIA (CD32A), FcγRIIB (CD32B), FcγRIIIA (CD16a ) ili FcγRIIIB (CD16b) (u odnosu na vezivanje koje pokazuje Fc regija divljeg tipa IgG1 (SEK ID BR: 1)). U jednom slučaju, PD-1- vezujuć i molekul iz ovog pronalaska ć e sadržati varijantu Fc regiona koja pokazuje smanjeno (ili u suštini nikakvo) vezivanje za FcγR (npr. FcγRIIIA) i smanjenu (ili u suštini nema) efektorsku funkciju ADCC. U određenim slučajevima, varijanta Fc regiona sadrži najmanje jednu supstituciju izabranu iz grupe koju čine L234A, L235A, D265A, N297K i N297G. U određenom slučaju, varijanta Fc regiona obuhvata supstituciju L234A; L235A; L234A i L235A; D265A; N297K ili N297G.
[0214] Poželjna sekvenca IgG1 za CH2 i CH3 domene PD-1-vezujuć ih molekula iz ovog pronalaska ć e imati supstitucije L234A/L235A (SEK ID BR: 5):
pri čemu je X lizin (K) ili je odsutan.
[0215] U drugom slučaju, PD-1-vezujuć i molekul iz ovog pronalaska sadrži Fc region koji inherentno pokazuje smanjeno (ili u suštini nikakvo) vezivanje za FcγRIIIA (CD16a) i/ili smanjenu efektorsku funkciju (u odnosu na vezivanje koje pokazuje IgG1 Fc region divljeg tipa (SEK ID BR: 1)). U određenom slučaju, PD-1-vezujuć i molekul ovog pronalaska sadrži IgG2 Fc region (SEK ID BR: 2) ili IgG4 Fc region (SEK ID BR: 4). Kada se koristi IgG4 Fc region, predmetni pronalazak takođe obuhvata uvođenje stabilizirajuć e mutacije, kao što je supstitucija zglobnog regiona IgG4 S228P (vidi, npr. SEK ID BR: 13: ESKIGPPCPPCP, (Lu et al., (2008) "The Effect of a PointMutation on the Stability of Igg4 Asmonitored bi Analitical Ultracentrifugation", J. Pharmaceutical Sciences 97: 960-969) kako bi se smanjila učestalost razmene niti. Druge stabiliziraju ć e mutacije poznate u tehnici mogu se uvesti u IgG4 Fc region (Peters, P et al., (2012) "Inženjering poboljšane molekule IgG4 sa smanjenom heterogenošć u disulfidnih veza i pove ć anom termičkom stabilnošć u domena Fab", J. Biol. Chem ., 287: 24525-24533; PCT patentna objava br: WO 2008/145142).
[0216] U drugim slučajevima, pronalazak obuhvata upotrebu bilo koje varijante Fc regiona poznate u tehnici, poput onih otkrivenih u Jefferis, B.J. et al. (2002) "Mesto interakcije na humanom IgG-Fc za FcgammaR: trenutni modeli", Immunol. Lett. 82: 57-65; Presta, L.G. et al. (2002) "Inženjerska terapijska antitela za poboljšanu funkciju", Biohemija. Soc. Trans. 30: 487-90; Idusogie, E.E. et al. (2001) "Inženjerska antitela sa poveć anom aktivnoš ć u za regrutovanje komplementa", J. Immunol. 166: 2571-75; Shields, R.L. et al. (2001) "Mapiranje veznog mesta visoke rezolucije mesta vezivanja na humanom IgG1 za Fc gama RI, Fc gama RII, Fc gama RIII i FcRn i dizajn varijanti IgG1 sa poboljšanim vezivanjem za Fc gama R", J. Biol. Chem. 276: 6591-6604; Idusogie, E.E. et al. (2000) "Mapiranje mesta vezivanja Clq na Rituksanu, himernom antitelu sa humanim IgG Fc", J. Immunol. 164: 4178-84; Reddi, M.P. et al. (2000) "Uklanjanje efektorskih funkcija zavisnih od receptora zavisnih modifikovanih IgG4 monoklonskih antitela na humani CD4", J. Immunol. 164: 1925-1933; Ksu, D. i sar. (2000) "In vitro karakterizacija pet humanizovanih antitela sa funkcijom efektora OKT3", ć elija. Immunol. 200: 16-26; Armor, K.L. et al. (1999) "Rekombinantni humani IgG molekuli kojima nedostaju aktivnosti vezivanja receptora I Fcgamma i aktivnosti aktiviranja monocita", Eur. J. Immunol. 29: 2613-24; Jefferis, R. i sar. (1996) "Modulacija aktivacije Fc (gama) R i humanog komplementa interakcijama oligosaharida IgG3-jezgra", Immunol. Lett.
54: 101-04; Lund, J. i sar. (1996) "Više interakcija IgG sa jezgrom oligosaharida može modulirati prepoznavanje komplementom i ljudskim Fc gama receptorom I i uticati na sintezu njegovih oligosaharidnih lanaca", J. Immunol. 157: 4963-4969; Hutchins i sar. (1995) "Poboljšana biodistribucija, ciljanje tumora i smanjena imunogenost kod miševa sa varijantom gama 4 Campath-1H", Proc. Natl. Akad. Sci. (SAD) 92: 11980-84; Jefferis, R. i sar. (1995) "Prepoznavanje lokacija na ljudskom IgG za Fc gama receptore: Uloga glikozilacije", Immunol. Lett. 44: 111-17; Lund, J. i sar. (1995) "Oligosaharidnoproteinske interakcije u IgG mogu modulirati prepoznavanje pomoć u Fc gama receptora", FASEB J. 9: 115-19; Alegre, M.L. et al. (1994) "Neaktivativno" humanizovano "anti-CD3 monoklonsko antitelo zadržava imunosupresivna svojstva in vivo," Transplantation 57: 1537-1543; Lund i dr. (1992) "Multiple Binding Sites On CH2 Domain of IgG For Fouse Gamma R11," Mol. Immunol. 29: 53-59; Lund i dr. (1991) "Human Fc Gamma RI i Fc Gamma RII interaguju sa različitim, ali preklapajuć im mestima na ljudskom IgG", J. Immunol. 147: 2657-2662; Duncan, A.R. et al. (1988) "Lokalizacija vezivnog mesta za humani Fc receptor visokog afiniteta na IgG," Nature 332: 563-564; US br. 5,624,821; 5,885,573; 6,194,551; 7,276,586; i 7,317,091; i PCT publikacije WO 00/42072 i PCT WO 99/58572.
[0217] U nekim slučajevima, molekuli iz ovog pronalaska dalje sadrže jedno ili više mesta glikozilacije, tako da je jedan ili više ugljeno hidratnih delova kovalentno vezano za molekul. Poželjno, molekuli iz ovog pronalaska sa jednim ili više mesta glikozilacije i/ili jednom ili više modifikacija u Fc regionu daju ili imaju pojačanu efektorsku funkciju posredovanu antitelom, na primer, pojačanu aktivnost ADCC, u poređenju sa nemodifikovanim antitelom. U nekim slučajevima, pronalazak dalje obuhvata molekule koji sadrže jednu ili više modifikacija aminokiselina za koje je direktno ili indirektno poznato da stupaju u interakciju sa ugljeno hidratnim delom Fc regiona, uključujuć i, ali bez ograničenja, aminokiseline na položajima 241, 243, 244, 245 , 245, 249, 256, 258, 260, 262, 264, 265, 296, 299 i 301. Aminokiseline koje direktno ili indirektno stupaju u interakciju sa ugljeno hidratnim delom Fc regiona poznate su u tehnici, videti, na primer, Jefferis et al., 1995 Immunology Letters, 44: 111-7.
[0218] U drugom slučaju, pronalazak obuhvata molekule koji su modifikovani uvođenjem jednog ili više mesta glikozilacije u jedno ili više mesta molekula, poželjno bez promene funkcionalnosti molekula, na primer, aktivnosti vezivanja za ciljni antigen ili FcγR. Mesta glikozilacije mogu se uvesti u varijabilnu i/ili konstantnu oblast molekula iz ovog pronalaska. Kako se ovde koristi, "mesta glikozilacije" uključuju bilo koju specifičnu sekvencu aminokiselina u antitelu za koju ć e se oligosaharid (tj. ugljeni hidrati koji sadr že dva ili više jednostavnih šeć era povezanih zajedno) specifično i kovalentno vezati. Bočni lanci oligosaharida su tipično povezani sa okosnicom antitela preko N- ili O-veza. N-vezana glikozilacija se odnosi na vezivanje oligosaharidnog dela na bočni lanac ostatka asparagina. O-vezana glikozilacija odnosi se na vezivanje oligosaharidnog dela na hidroksiamino kiselinu, na primer, serin, treonin. Molekuli iz ovog pronalaska mogu sadržati jedno ili više mesta glikozilacije, uključujuć i N-vezana i O-vezana mesta glikozilacije. Bilo koje mesto glikozilacije za N-vezano ili O-vezano glikozilovanje poznato u tehnici mo že se koristiti u skladu sa predmetnim pronalaskom. Primerno mesto glikozilacije vezano za N koje je korisno u skladu sa postupcima iz ovog pronalaska je aminokiselinska sekvenca: Asn-Ks-Thr/Ser, pri čemu X može biti bilo koja aminokiselina, a Thr/Ser označava treonin ili serin. Takva lokacija ili mesto mogu se uvesti u molekul iz pronalaska pomoć u metoda dobro poznatih u tehnici na koje se ovaj pronalazak odnosi (vidi, na primer, IN VITRO MUTAGENEZA, REKOMBINANTNA DNK: KRATAK KURS, JD Vatson, et al. VH Freeman i Compani, New York, 1983, poglavlje 8, str. 106-116.). Primerna metoda za uvođenje mesta glikozilacije u molekul iz ovog pronalaska može da sadrži: modifikovanje ili mutiranje aminokiselinske sekvence molekula tako da željeni Asn - daje X-Thr/Ser sekvencu.
[0219] U nekim slučajevima, pronalazak obuhvata metode modifikovanja sadržaja ugljenih hidrata u molekulu iz ovog pronalaska dodavanjem ili brisanjem mesta glikozilacije. Postupci za modifikovanje sadržaja ugljenih hidrata u antitelima (i molekulima koji sadrže domene antitela, npr. Fc region) dobro su poznati u tehnici i obuhvać eni su pronalaskom, videti, na primer, US br. 6,218,149; EP 0 359 096 B1; US Publication No. US 2002/0028486; WO 03/035835; US br. 2003/0115614; US No. 6,218,149; US Patent No.
6,472,511. U drugim slučajevima, pronalazak obuhvata postupke modifikovanja sadržaja ugljenih hidrata u molekulu iz pronalaska brisanjem jednog ili više endogenih ugljeno hidratnih delova molekula. U konkretnom slučaju, pronalazak obuhvata pomeranje mesta glikozilacije Fc regiona antitela, menjanjem položaja pored 297. U određenom slučaju, pronalazak obuhvata modifikovanje položaja 296 tako da je položaj 296, a ne položaj 297 glikoziliran.
[0220] Efektorska funkcija se takođe može modifikovati tehnikama kao što je uvođenje jednog ili više ostataka cisteina u Fc region, čime se omoguć ava stvaranje međulančanih disulfidnih veza u ovom regionu, što rezultira stvaranjem homodimernog antitela koje je moglo pobolj šati internalizaciju sposobnosti i/ili pove ć ano ubijanje ć elija posredovano komplementom i ADCC (Caron, PC et al. (1992) "Inženjerirani humanizovani dimerni oblici IgG su efikasnija antitela", J. Ekp. Med. 176: 1191-1195; Shopes, B . (1992) "Genetski modifikovani humani IgG mutant sa poveć anom citolitičkom aktivnoš ć u", J. Immunol. 148 (9): 2918-2922. Homodimerna antitela sa pojačanom antitumorskom aktivnošć u mogu se takođe pripremiti korišć enjem heterobifunkcionalnih umreživača kao što je opisano u Wolff, EA i dr. (1993) "Homodimeri monoklonskih antitela: poboljšana antitumorska aktivnost kod golih miševa", Istraživanje raka 53: 2560-2565. Alternativno, može se konstruisati antitelo koje ima dvostruke Fc regione i na taj na čin može poboljšati kompletna analiza emenata i sposobnosti ADCC -a (Stevenson, G.T. et al. (1989) "Himerno antitelo sa dvostrukim Fc regijama (bisFabFc) pripremljeno od strane manipulacija na IgG šarki", "Anti-Cancer Drug Design 3: 219-230).
[0221] Poluživot u serumu molekula iz ovog pronalaska koji sadrži Fc regione može se poveć ati pove ć anjem afiniteta vezivanja Fc regiona za FcRn. Izraz "poluživot" kako se ovde koristi označava farmakokinetičko svojstvo molekula koje je mera srednjeg vremena preživljavanja molekula nakon njihove primene. Poluživot se može izraziti kao vreme potrebno za uklanjanje pedeset procenata (50 %) poznate količine molekula iz tela subjekta (na primer, pacijenta ili drugog sisara) ili njegovog posebnog dela, na primer, mereno u serumu, tj. poluvreme cirkulacije ili u drugim tkivima. Generalno, poveć anje poluvremena eliminacije dovodi do poveć anja srednjeg vremena boravka (MRT) u cirkulaciji za primenjeni molekul.
[0222] U nekim slučajevima, PD-1-vezujući molekuli iz ovog otkrića sadrže varijantu Fc Regiona, pri čemu navedena varijanta Fc Regiona sadrži najmanje jednu aminokiselinsku modifikaciju u odnosu na Fc Region divljeg tipa, tako da pomenuti molekul ima duži poluživot (u odnosu na divlji tip Fc Regiona).
[0223] U nekim slučajevima, PD-1-vezujući molekuli iz ovog otkrića sadrže varijantu Fc Regiona, pri čemu navedena varijanta Fc Regiona sadrži aminokiselinsku supstituciju, koja produžava poluživot, na jednoj ili više pozicija izabranih iz grupe koju čine 238, 250, 252, 254, 256, 257, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305, 307, 308, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424, 428, 433, 434, 435 i 436. Brojne specifične mutacije koje mogu da povećaju vreme poluživota molekula koji sadrži Fc Region su poznate u tehnici i uključuju, na primer, M252Y, S254T, T256E i njihove kombinacije. Na primer, pogledajte mutacije opisane u U.S. Patent Br. 6,277,375, 7,083,784; 7,217,797, 8,088,376; U.S. Publikacija Br.
2002/0147311; 2007/0148164; i Međunarodnim Publikacijama Br. WO 98/23289; WO 2009/058492; i WO 2010/033279. Molekuli koji sadrže Fc Region sa povećanim poluživotom takođe uključuju molekule sa supstitucijama na dva ili više ostataka Fc Regiona 250, 252, 254, 256, 257, 288, 307, 308, 309, 311, 378, 428, 433, 434, 435 i 436. Konkretno, dve ili više supstitucija izabranih između: T250Q, M252Y, S254T, T256E, K288D, T307Q, V308P, A378V, M428L, N434A, H435K, i Y436I
[0224] U određenom slučaju, varijanta Fc Regiona sadrži supstitucije:
(A) M252Y, S254T i T256E;
(B) M252Y i S254T;
(C) M252Y i T256E;
(D) T250Q i M428L;
(E) T307Q i N434A;
(F) A378V i N434A;
(G) N434A i I436I;
(H) V308P i N434A; ili
(I) K288D i H435K.
[0225] Ovo otkriće dalje obuhvata varijante Fc Regiona koje sadrže:
(A) jednu ili više mutacija koje menjaju efektorsku funkciju i/ili FcγR; i
(B) jednu ili više mutacija koje produžavaju poluživot u serumu.
VI. Bispecifični Anti-Humani PD-1-Vezujući Molekuli
[0226] Jedan primer ovog otkrića se odnosi na bispecifične molekule koji su sposobni da se vežu za „prvi epitop“ i „drugi epitop“, pri čemu prvi epitop je epitop humanog PD-1 a drugi epitop je epitop isti ili različit od PD-1, ili je epitop drugog molekula koji je prisutan na povr šini imune ćelije (kao što je T limfocit) i uključen je u regulaciju imunološke kontrolne tačke. U jednom slučaju, drugi epitop je epitop B7-H3, B7-H4, BTLA, CD3, CD8, CD16, CD27, CD32, CD40, CD40L, CD47, CD64, CD70, CD80, CD86, CD94, CD137, CD137L, CD226, CTLA-4, Galectin-9, GITR, GITRL, HHLA2, ICOS, ICOSL, KIR, LAG-3, LIGHT, MHC klase I ili II, NKG2a, NKG2d, OX40, OX40L, PD1H, PD-1, PD-L1, PD-L2, PVR, SIRPa, TCR, TIGIT, TIM-3 ili VISTA. U jednom slučaju, drugi epitop nije epitop PD-1. U određenom slučaju, drugi epitop je CD137, CTLA-4, LAG-3, OX40, TIGIT ili TIM-3. U određenim slučajevima, bispecifični molekul sadrži više od dva mesta za vezivanje epitopa. Takvi bispecifični molekuli mogu da vežu dva ili više različitih epitopa LAG-3 i najmanje jedan epitop molekula koji nije LAG-3.
[0227] Ovo otkriće obuhvata bispecifična antitela sposobna da se istovremeno vežu za PD-1 i za drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3, MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.). U nekim slučajevima, bispecifično antitelo koje je sposobno da se istovremeno veže za PD-1 i za drugi epitop, se proizvodi korišćenjem bilo koje metode opisane u PCT Publikacijama Br. WO 1998/002463, WO 2005/070966, WO 2006/107786 WO 2007/024715, WO 2007/075270, WO 2006/107617, WO 2007/046893, WO 2007/146968, WO 2008/003103, WO 2008/003116, WO 2008/027236, WO 2008/024188, WO 2009/132876, WO 2009/018386, WO 2010/028797, WO2010028796, WO 2010/028795, WO 2010/108127, WO 2010/136172, WO 2011/086091, WO 2011/133886, WO 2012/009544, WO 2013/003652, WO 2013/070565, WO 2012/162583, WO 2012/156430, WO 2013/174873 i WO 2014/022540.
A. Bispecifična Dijatela Bez Fc Regiona
[0228] Jedan primer ovog otkrića odnosi se na bispecifična tela koja sadrže, a najpoželjnije se sastoje od prvog polipeptidnog lanca i drugog polipeptidnog lanca, čije sekvence omogućavaju da se polipeptidni lanci kovalentno vežu jedan za drugi da bi formirali kovalentno vezano dijatelo koje je sposobno da se istovremeno veže za prvi i za drugi epitop, koji epitopi nisu međusobno identični. Takva bispecifična dijatela prema tome sadrže "VL1"/"VH1" domene koji su sposobni da se vežu za prvi epitop i "VL2"/"VH2" domene koji su sposobni da se vežu za drugi epitop. Oznake "VL1" i "VH1" označavaju, respektivno, varijabilni domen lakog lanca i varijabilni domen te škog lanca koji vezuju "prvi" epitop takvog bispecifičnog dijatela. Slično tome, oznaka "VL2" i "VH2" označavaju, respektivno, varijabilni domen lakog lanca i varijabilni domen teškog lanca koji vezuju "drugi" epitop takvog bispecifičnog dijatela. Nebitno je da li je određeni epitop označen kao prvi u odnosu na drugi epitop; takva notacija je relevantna samo u pogledu prisustva i orijentacije domena polipeptidnih lanaca vezuju ćih molekula iz ovog otkrića. U jednom slučaju, jedan od takvih epitopa je epitop PD-1, a drugi takav epitop nije epitop PD-1 (na primer, epitop B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3, MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.).
[0229] VL Domen prvog polipeptidnog lanca komunicira sa VH Domenom drugog polipeptidnog lanca da bi formirao prvo funkcionalno mesto vezivanja antigena koje je specifično za prvi antigen (tj. PD-1 ili antigen koji sadrži drugi epitop). Slično tome, VL Domen drugog polipeptidnog lanca komunicira sa VH Domenom prvog polipeptidnog lanca kako bi formirao drugo funkcionalno mesto vezivanja antigena koje je specifično za drugi antigen (tj. ili antigen koji sadrži drugi epitop ili PD-1). Prema tome, koordinira se odabir VL i VH Domena prvog i drugog polipeptidnog lanca, tako da dva polipeptidna lanca dijatela kolektivno sadrže VL i VH Domene koji mogu da se vežu i za epitop PD-1 i za drugi epitop (oni sadrže VL PD-1/VH PD-1 i VL2/VH2, pri čemu PD-1 je "prvi" epitop, ili VL1/VH1 i VL PD-1/VH PD-1, pri čemu PD-1 je „drugi“ epitop).
[0230] Prvi polipeptidni lanac primera takvih bispecifičnih antitela sadrži, u smeru od N-kraja ka C-kraju, N-kraj, VL1 Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za prvi ili za drugi epitop (tj. ili VLPD-1ili VLEpitop 2), prvi intervenirajući spejser peptid (Linker 1), VH2 Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže ili za drugi epitop (ako takav prvi polipeptidni lanac sadrži VLPD-1) ili za prvi epitop (ako takav prvi polipeptidni lanac sadrži VLEpitop 2), drugi intervenirajući spejser peptid (Linker 2) koji opciono sadrži cisteinski ostatak, Domen za Promovisanje Heterodimera i C-kraj (Slika 1).
[0231] Drugi polipeptidni lanac iz ovog primera bispecifičnih antitela sadrži, u smeru od N-kraja ka C-kraju, N-kraj, VL2 Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže ili za PD-1 ili za drugi epitop (tj. ili VLPD-1ili VLEpitop 2i pošto VL Domen nije izabran za uključivanje u prvi polipeptidni lanac dijatela), intervenirajući linker peptid (Linker 1), VH1 Domen monoklonskog antitela koji može da se veže ili za drugi epitop (ako takav drugi polipeptidni lanac sadrži VLPD-1) ili za PD-1 (ako takav drugi polipeptidni lanac sadrži VLEpitop 2), drugi intervenirajući spejser peptid (Linker 2) koji opciono sadrži cisteinski ostatak, Domen za Promovisanje Heterodimera i C-kraj (Slika 1).
[0232] Najpoželjnije je da je dužina intervenirajućeg linker peptida (npr. Linker 1) koji razdvaja takve VL i VH Domene izabrana tako da u suštini ili potpuno spreči VL i VH Domene polipeptidnog lanca da se vežu jedni za druge. Stoga VL i VH Domeni prvog polipeptidnog lanca su štinski ili potpuno nisu sposobni da se međusobno vežu. Isto tako, domeni VL i VH drugog polipeptidnog lanca suštinski ili potpuno nisu sposobni da se međusobno vežu. Poželjni intervenirajući spejser peptid (Linker 1) ima sekvencu (SEK ID BR: 14): GGGSGGGG.
[0233] Dužina i sastav drugog intervenirajućeg linker peptida (Linker 2) se bira na osnovu izabranih domena za promovisanje heterodimera. Tipično, drugi intervenirajući linker peptid (Linker 2) će sadržati 3-20 aminokiselinskih ostataka. Konkretno, kada domeni koji promovi šu heterodimer ne sadrže ostatak cisteina, koristi se drugi intervenirajući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2). Drugi intervenirajući spejser peptid koji sadrži cistein (Linker 2) će sadržati 1, 2, 3 ili više cisteina. Poželjni spejser peptid koji sadrži cistein (Linker 2) ima sekvencu SEK ID BR:15: GGCGGG. Alternativno, Linker 2 ne sadrži cistein (npr. GGG, GGGS (SEK ID BR:29), LGGGSG (SEK ID BR: 261), GGGSGGGSGGG (SEK ID BR:262), ASTKG (SEK ID BR:30), Koriste se LEPKSS (SEK ID BR:33), APSSS (SEK ID BR: 34), itd.) i Domen za Promovisanje Heterodimera koji sadrži cistein, kao što je opisano u nastavku. Opciono se koriste oba, i Linker 2 koji sadrži cistein i Domen za Promovisanje Heterodimera koji sadrži cistein.
[0234] Domeni za Promovisanje Heterodimera mogu biti GVEPKSC (SEK ID BR:16) ili VEPKSC (SEK ID BR:17) ili AEPKSC (SEK ID BR:18) na jednom polipeptidnom lancu i GFNRGEC (SEK ID BR:19) ili FNRGEC (SEK ID BR:20) na drugom polipeptidnom lancu (US2007/ 0004909).
[0235] Poželjnije je, međutim, da se Domeni za Promovisanje Heterodimera takvih dijatela formiraju od jednog, dva, tri ili četiri tandemski ponovljenih domena zavojnice suprotnog naelektrisanja koji sadr že sekvencu od najmanje šest, najmanje sedam ili najmanje osam aminokiselinskih ostataka, tako da Domen za Promovisanje Heterodimera ima neto naelektrisanje (Apostolovic, B. et al. (2008) "pH-Sensitivity of the E3/K3 Heterodimeric Coiled Coil," Biomacromolecules 9:3173-3180; Arndt, K.M. et al. (2001) "Helixstabilized Fv (hsFv) Antibody Fragments: Substituting the Constant Domains of a Fab Fragment for a
1
Heterodimeric Coiled-coil Domain," J. Molec. Biol. 312:221-228; Arndt, K.M. et al. (2002) "Comparison of In Vivo Selection and Rational Design of Heterodimeric Coiled Coils," Structure 10:1235-1248; Boucher, C. et al. (2010) "Protein Detection By Western Blot Via Coiled-Coil Interactions," Analytical Biochemistry 399:138-140; Cachia, P.J. et al. (2004) "Synthetic Peptide Vaccine Development: Measurement Of Polyclonal Antibody Affinity And Cross-Reactivity Using A New Peptide Capture And Release System For Surface Plasmon Resonance Spectroscopy," J. Mol. Recognit. 17:540-557; De Crescenzo, G.D. et al. (2003) "Real-Time Monitoring of the Interactions of Two-Stranded de novo Designed Coiled-Coils: Effect of Chain Length on the Kinetic and Thermodynamic Constants of Binding," Biochemistry 42:1754-1763; Fernandez-Rodriquez, J. et al. (2012) "Induced Heterodimerization And Purification Of Two Target Proteins By A Synthetic Coiled-Coil Tag," Protein Science 21:511-519; Ghosh, T.S. et al. (2009) "End-To-End And End-To-Middle Interhelical Interactions: New Classes Of Interacting Helix Pairs In Protein Structures," Acta Crystallographica D65:1032-1041; Grigoryan, G. et al. (2008) "Structural Specificity In Coiled-Coil Interactions," Curr. Opin. Struc. Biol. 18:477-483; Litowski, J.R. et al. (2002) "Designing Heterodimeric Two-Stranded α-Helical Coiled-Coils: The Effects Of Hydrophobicity And α-Helical Propensity On Protein Folding, Stability, And Specificity," J. Biol. Chem. 277:37272-37279; Steinkruger, J.D. et al. (2012) "The d’--d--d’ Vertical Triad is Less Discriminating Than the a’--a--a’ Vertical Triad in the Antiparallel Coiled-coil Dimer Motif," J. Amer. Chem. Soc. 134(5):2626-2633; Straussman, R. et al. (2007) "Kinking the Coiled Coil -Negatively Charged Residues at the Coiled-coil Interface," J. Molec. Biol. 366:1232-1242; Tripet, B. et al. (2002) "Kinetic Analysis of the Interactions between Troponin C and the C-terminal Troponin I Regulatory Region and Validation of a New Peptide Delivery/Capture System used for Surface Plasmon Resonance," J. Molec. Biol. 323:345-362; Woolfson, D.N. (2005) "The Design Of Coiled-Coil Structures And Assemblies," Adv. Prot. Chem. 70:79-112; Zeng, Y. et al. (2008) "A Ligand-Pseudoreceptor System Based On de novo Designed Peptides For The Generation Of Adenoviral Vectors With Altered Tropism," J. Gene Med. 10:355-367).
[0236] Takvi domeni sa ponovljenim zavojnicama mogu biti ekzaktno ponavljani ili mogu imati supstitucije. Na primer, domen zavojnice Domena za Promovisanje Heterodimera prvog polipeptidnog lanca može da sadrži sekvencu od osam aminokiselinskih ostataka odabranih da daju negativno naelelktrisanje takvom Domenu za Promovisanje Heterodimera a domen zavojnice Domena za Promovisanje Heterodimera drugog polipeptidnog lanca može da sadrži sekvencu od osam aminokiselinskih ostataka odabranih da daju pozitivno naelektrisanje takvom Domenu za Promovisanje Heterodimera. Nije bitno koja zavojnica je obezbeđena za prvi ili drugi polipeptidni lanac, pod uslovom da se za drugi polipeptidni lanac koristi zavojnica suprotnog naelektrisanja. Pozitivno naelektrisana aminokiselina mo že biti lizin, arginin, histidin itd. i/ili negativno naelektrisana aminokiselina mo že biti glutaminska kiselina, asparaginska kiselina itd. Pozitivno naelektrisana aminokiselina je po željno lizin i/ili negativno naelektrisana aminokiselina je po moguć nosti glutaminska kiselina. Mogu ć e je da se koristi samo jedan Domen za Promovisanje Heterodimera (pošto ć e takav domen inhibirati homodimerizaciju i na taj na čin promovisati heterodimerizaciju), međutim, poželjno je da i prvi i drugi polipeptidni lanci dijatela iz ovog otkrić a sadrže Domene za Promovisanje Heterodimera.
[0237] U poželjnom slučaju, jedan od Domena za Promovisanje Heterodimera će sadržati četiri tandemska spiralna domena "E-zavojnice" (SEK ID BR: 21: EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK), čiji glutamatni ostaci će formirati negativno naelektrisanje pri pH 7, dok će se drugi od Domena za Promovisanje Heterodimera sastojati od četiri tandemska domena „K-zavojnice“ (SEK ID BR:22: KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE), čiji lizinski ostaci će formirati pozitivno naelektrisanje pri pH 7. Prisustvo takvih naelektrisanih domena promoviše asocijaciju između prvog i drugog polipeptida i na taj način podstiče stvaranje heterodimera. Posebno je poželjan Domen za Promovisanje Heterodimera u kojem je jedan od četiri tandemska spiralna domena "E-zavojnica" iz SEK ID BR:21 modifikovan tako da sadrži cisteinski ostatak:
EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEK ID BR: 23). Isto tako, naročit je poželjan Domen za Promovisanje Heterodimera u kojem je jedan od četiri tandemska spiralna domena „K-zavojnica“ SEK ID BR:22 modifikovan tako da sadrži cisteinski ostatak: KVAACKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE (SEQ ID NO : 24).
[0238] Kao što je otkriveno u WO 2012/018687, da bi se poboljšala in vivo farmakokinetička svojstva dijatela, dijatelo se može modifikovati tako da sadrži polipeptidni deo proteina koji veže serum na jednom ili više krajeva dijatela. Najpoželjnije, takav polipeptidni deo proteina koji se veže za serum će biti instaliran na C-kraju dijatela. Albumin je najzastupljeniji protein u plazmi i ima polu život od 19 dana kod ljudi. Albumin poseduje nekoliko mesta vezivanja za male molekule koji mu omogućavaju da se nekovalentno veže za druge proteine i time produžava njihov poluživot u serumu. Albumin-vezujući Domen 3 (ABD3) proteina G Streptococcus soja G148 se sastoji od 46 aminokiselinskih ostataka koji formiraju stabilan snop od tri zavojnice i ima široku specifičnost za vezivanje albumina (Johansson, M.U. et al. (2002) "Structure, Specificity, And Mode Of Interaction For Bacterial Albumin-Binding Modules," J. Biol. Chem. 277(10):8114-8120. Prema tome, posebno poželjni polipeptidni deo proteina koji veže serum za
2
poboljšanje in vivo farmakokinetičkih svojstava dijatela je Albumin-Vezujući Domen (ABD) iz streptokoknog proteina G, a još poželjnije, Albumin-Vezujući Domen 3 (ABD3) proteina G iz Streptococcus disgalactiae soja G148 (SEK ID BR:25): LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNLIDNAKS AEGVKALIDE ILAALP.
[0239] Kao što je otkriveno u WO 2012/162068, „deimunizovane“ varijante SEK ID BR:25 imaju sposobnost da slabe ili eliminišu vezivanje MHC klase II. Na osnovu rezultata kombinacija mutacija, sledeće kombinacije supstitucija se smatraju poželjnim supstitucijama za formiranje takvog deimunizovanog ABD: 66D/70S 71A; 66S/70S 71A; 66S/70S 79A; 64A/65A/71A; 64A/65A/71A 66S; 64A/65A/71A 66D; 64A/65A/71A 66E; 64A/65A/79A 66S; 64A/65A/ 79A 66D; 64A/65A/79A 66E. Varijanta ABD-a sa modifikacijama L64A, I65A i D79A ili modifikacijama N66S, T70S i D79A. Varijante deimunizovanog ABD koje imaju aminokiselinsku sekvencu:
LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNLID66NAKS70A71EGVKALIDE ILAALP (SEK ID BR:26),
ili aminokiselinsku sekvencu:
LAEAKVLANR ELDKIGVSDI IKNA64A65NNAKT VEGVKALIA79E ILAALP (SEK ID BR: 27),
ili aminokiselinska sekvenca:
LAEAKVLANR ELDKIGVSDI IKNLIS66NAKS70VEGVKALIA79E ILAALP (SEK ID BR:28) su posebno poželjne pošto takvi deimunizovani ABD pokazuju uglavnom vezivanje divljeg tipa, istovremeno obezbe đujući slabije vezivanje MHC klase II. Prema tome, prvi polipeptidni lanac takvog dijatela koje ima ABD sadr ži peptidni linker koji je poželjno pozicioniran C-terminalno na Domen E-zavojnice (ili K-zavojnice) takvog polipeptidnog lanca tako da interveniše između Domena E- zavojnice (ili K-zavojnice) i ABD (koje je poželjno deimunizovano ABD). Poželjna sekvenca za takav peptidni linker je SEK ID BR:29: GGGS.
B. Bispecifična Dijatela koja Sadrže Fc Regione
[0240] Jedan primer ovog otkrića se odnosi na bispecifična dijatela koja sadrže Fc Region koji se istovremeno može vezati za PD-1 i za drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3, MHC klase I ili II, OX40, PD-1, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.). Dodavanje IgG CH2-CH3 Domena u jedan ili oba polipeptidna lanca dijatela, tako da kompleksiranje lanca dija tela rezultira u formiranju Fc Regiona, povećava biološki poluživot i/ili menja valentnost dijatela. Inkorporiranjem IgG CH2-CH3 Domena na oba polipeptida dijatela će omogućiti formiranje dvolančanog bispecifičnog dijatela koje sadrži Fc-region (Slika 2).
[0241] Alternativno, inkorporiranje domena IgG CH2-CH3 na samo jedan od polipeptida dijatela omogu ćiće da se formira kompleksnije četvorolančano bispecifično dijatelo koje sadrži Fc-Region (Slike 3A-3C). Slika 3C prikazuje reprezentativno četvorolančano dijatelo koje poseduje Konstantni Laki Domen (CL) i Konstantni teški domen CH1, međutim fragmenti takvih domena, kao i drugi polipeptidi, se alternativno mogu koristiti (videti, na primer, Slike 3A i 3B, U. S. Publikacije Br. 2013-0295121; 2010-0174053 i 2009-0060910; Evropske Patentne Publikacije Br. EP 2714079; EP 2601216; EP 2376109; EP 2158221 i PCT Publikacije Br. WO 2012/162068; WO 2012/018687; WO 2010/080538). Tako, na primer, umesto domena CH1 se može koristiti peptid koji ima aminokiselinsku sekvencu GVEPKSC (SEK ID BR: 16) VEPKSC (SEK ID BR: 17) ili AEPKSC (SEK ID BR: 18), dobijenu iz zglobnog domena humanog IgG, a umesto CL domena, mogu se koristiti C-terminalne 6 aminokiseline humanog Kapa lakog lanca, GFNRGEC ( SEK ID BR: 19) ili FNRGEC (SEK ID BR: 20). Reprezentativni peptid koji sadrži četvorolančano dijatelo prikazan je na Slici 3A. Alternativno, ili dodatno, može se koristiti peptid koji sadrži domene tandemskih zavojnica suprotnog naelektrisanja kao što su spiralni domeni „E-zavojnice“ (SEK ID BR: 21: EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK ili SEK ID BR:23: EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK); i domeni „K-zavojnice“ (SEK ID BR:22: KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE ili SEK ID BR:24: KVAACKE-KVAAL-KE-KVAALKE-KVAALKE). Reprezentativni domen zavojnice koji sadrži četvorolančano dijatelo je prikazan na Slici 3B.
[0242] Molekuli dijatela iz ovog otkrića, koji sadrže Fc Region generalno uključuju dodatne intervenirajuće linker peptide (Linkere). Tipično, dodatni Linkeri će sadržati 3-20 aminokiselinskih ostataka. Dodatni ili alternativni linkeri koji se mogu koristiti u molekulima dijatela koji sadrže Fc Region uključuju: GGGS (SEK ID BR:29), LGGGSG (SEK ID BR:261), GGGSGGGSGGG (SEK ID BR:262), ASTKG (SEK ID BR:30), DKTH-TCPPCP (SEK ID BR:31), EPKSCDKTHTCPPCP (SEK ID BR:32), LEPKSS (SEK ID BR:33), APSSS (SEK ID BR:34) i APSSSPME (SEK ID BR:35), LEPKSADKTHTCPPC SEK ID BR:36), GGC i GGG. SEK ID BR:33 se može koristiti umesto GGG ili GGC radi lakšeg kloniranja. Pored toga, nakon aminokiseline GGG ili SEK ID BR: 33 može odmah da prati SEK ID BR:31 da se formiraju alternativni linkeri: GGGDKTHTCPPCP (SEK ID BR: 263); i LEPKSSDKTH-TCPPCP (SEK ID BR:37). Molekul dijatela iz ovog otkrića koji sadrži Fc region može da sadrži zglobni region IgG pored ili umesto linkera. Primeri zglobnih regiona uključuju: EPKSCDKTHTCPPCP (SEK ID BR:32) iz IgG1, ERKCCVECPPCP (SEK ID BR:11) iz IgG2, ESKYGPPCPSCP (SEK ID BR:12) iz IgG4 i ESKYGPPCPPCP (SEK ID BR:13) IgG4 zglobnu varijantu koja sadrži stabilizujuću zamenu za smanjenje izmena lanaca.
[0243] Kao što je dato na Slici 3A-3C, dijatela iz ovog otkrića mogu sadržati četiri različita lanca. Prvi i treći polipeptidni lanac takvog dijatela sadrže tri domena: (i) Domen koji sadrži VL1, (ii) domen koji sadrži VH2, (iii) Domen za Promovisanje Heterodimera i (iv) Domen koji sadrži CH2-CH3 sekvencu. Drugi i četvrti polipeptidni lanac sadrže: (i) Domen koji sadrži VL2, (ii) Domen koji sadrži VH1 i (iii) Domen za Promovisanje Heterodimera, gde Domeni za Promovisanje Heterodimera promovi šu dimerizaciju prvog/trećeg polipeptidnog lanca sa drugim/četvrtim polipeptidnim lancima. VL i/ili VH Domeni trećeg i četvrtog polipeptidnog lanca i VL i/ili VH Domeni prvog i drugog polipeptidnog lanca mogu biti isti ili različiti tako da omogućavaju četvorovalentno vezivanje koje je monospecifično, bispecifično ili tetraspecifično. Oznake "VL3" i "VH3" označavaju, respektivno, varijabilni domen lakog lanca i varijabilni domen teškog lanca koji vezuju "treći" epitop takvog dijatela. Slično tome, oznaka „VL4“ i „VH4“ označavaju, respektivno, varijabilni domen lakog lanca i varijabilni domen te škog lanca koji vezuju „četvrti“ epitop takvog dijatela. Opšta struktura polipeptidnih lanaca reprezentativnih četvorolančanih dijatela iz otkrića, koja sadrže Fc Region data je u Tabeli 2:
[0244] U konkretnom slučaju, dijatela iz ovog otkrića su bispecifična, četvorovalentna (tj. poseduju četiri mesta za vezivanje epitopa), dijatela koja sadrže Fc (Slike 3A-3C) i sastoje se od četiri ukupna polipeptidna lanca. Bispecifična, četverovalentna, dijatela koja sadrže Fc sadrže dva mesta za vezivanje epitopa, imunospecifična za PD-1 (koja mogu da se vežu za isti epitop od PD-1 ili za različite epitope od PD-1), i dva mesta za vezivanje epitopa specifična za drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.).
[0245] U sledećem primeru, dijatela koja sadrže bispecifični Fc Region mogu sadržati tri polipeptidna lanca. Prvi polipeptid takvog dijatela sadrži tri domena: (i) Domen koji sadrži VL1, (ii) Domen koji sadrži VH2 i (iii) Domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3. Drugi polipeptid takvih dijatela sadrži: (i) Domen koji sadrži VL2, (ii) Domen koji sadrži VH1 i (iii) Domen koji Promoviše Heterodimerizaciju i kovalentnu vezu sa prvim polipeptidnim lancem dijatela. Treći polipeptid takvih dijatela sadrži sekvencu CH2-CH3. Prema tome, prvi i drugi polipeptidni lanci takvih dijatela se udru žuju da bi formirali mesto vezivanja VL1/VH1 koje je sposobno da se veže za prvi epitop, kao i mesto vezivanja VL2/VH2 koje je sposobno da se veže za drugi epitop. Prvi i drugi polipeptid se povezuju jedan sa drugim disulfidnom vezom koja uklju čuje cisteinske ostatke u njihovim odgovarajućim Trećim Domenima. Naime prvi i treći polipeptidni lanac se međusobno kompleksiraju da bi formirali Fc Region koji je stabilizovan disulfidnom vezom. Takva antitela imaju pojačanu potentnost. Slike 4A i 4B ilustruju strukturu takvih dijatela. Takva bispecifična dijatela koja sadrže Fc-region mogu imati bilo koju od dve orijentacije (Tabela 3):
[0246] U konkretnom slučaju, dijatela iz ovog otkrića su bispecifična, bivalentna (tj. poseduju dva mesta
4
za vezivanje epitopa), dijatela koja sadrže Fc (Slike 4A-4B) koja se sastoje od tri ukupna polipeptidna lanca. Bispecifična, bivalentna antitela iz otkrića koja sadrže Fc sadrže jedno mesto vezivanja epitopa imunospecifično za PD-1 i jedno mesto vezivanja epitopa specifično za drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40 , CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.).
[0247] U sledećem slučaju, antitela koja sadrže bispecifični Fc Region mogu sadržati ukupno pet polipeptidnih lanaca. U određenom slučaju, dva od pomenutih pet polipeptidnih lanaca imaju istu aminokiselinsku sekvencu. Prvi polipeptidni lanac takvih antitela sadr ži: (i) Domen koji sadrži VH1, (ii) Domen koji sadrži CHI i (iii) Domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3. Prvi polipeptidni lanac može biti teški lanac antitela koji sadrži VH1 i konstantni region teškog lanca. Drugi i peti polipeptidni lanac takvih antitela sadrže: (i) Domen koji sadrži VL1 i (ii) Domen koji sadrži CL. Drugi i/ili peti polipeptidni lanac takvih antitela mogu biti laki lanci antitela koji sadrže VL1 komplementaran sa VH1 prvog/trećeg polipeptidnog lanca. Prvi, drugi i/ili peti polipeptidni lanac mogu biti izolovani od antitela koja se prirodno javljaju. Alternativno, oni mogu biti konstruisani rekombinantno. Tre ći polipeptidni lanac takvih tela ima: (i) Domen koji sadrži VH1, (ii) Domen koji sadrži CHI, (iii) Domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3, (iv) Domen koji sadrži VL2, (v) Domen koji sadrži VH3 i (vi) Domen za Promovisanje Heterodimera, gde Domeni za Promovisanje Heterodimera promovišu dimerizaciju trećeg lanca sa četvrtim lancem. Četvrti polipeptid takvih dijatela sadrži: (i) Domen koji sadrži VL3, (ii) Domen koji sadrži VH2 i (iii) Domen koji promoviše heterodimerizaciju i kovalentnu vezu sa trećim polipeptidnim lancem dijatela.
[0248] Dakle, prvi i drugi, i treći i peti, polipeptidni lanci takvih dijatela se udru žuju da formiraju dva mesta vezivanja VL1/VH1 sposobna za vezivanje prvog epitopa. Treći i četvrti polipeptidni lanac takvih antitela se udružuju da formiraju mesto vezivanja VL2/VH2 koje može da se veže za drugi epitop, kao i mesto vezivanja VL3/VH3 koje može da se veže za treći epitop. Prvi i treći polipeptidi su povezani jedan sa drugim disulfidnom vezom koja uključuje ostatke cisteina u njihovim respektivnim konstantnim regionima. Značajno je da se prvi i treći polipeptidni lanac međusobno kompleksiraju da formiraju Fc Region. Takva antitela imaju pojačanu potentnost. Slika 5 ilustruje strukturu takvih dijatela. Podrazumeva se da domeni VL1/VH1, VL2/VH2 i VL3/VH3 mogu biti isti ili različiti tako da omogućavaju vezivanje koje je monospecifično, bispecifično ili trispecifično. Međutim, kako je ovde dato, poželjno je da ovi domeni budu izabrani tako da vezuju PD-1 i drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.).
[0249] VL i VH Domeni polipeptidnih lanaca su odabrani tako da formiraju mesta vezivanja VL/ VH specifična za željeni epitop. Mesta vezivanja za VL/VH formirana udruživanjem polipeptidnih lanaca mogu biti ista ili različita tako da omogućavaju četvorovalentno vezivanje koje je monospecifično, bispecifično, trispecifično ili tetraspecifično. Naročito, domeni VL i VH mogu biti izabrani tako da bispecifično dijatelo može sadržati dva mesta vezivanja za prvi epitop i dva mesta vezivanja za drugi epitop, ili tri mesta vezivanja za prvi epitop i jedno mesto vezivanja za drugi epitop, ili dva mesta vezivanja za prvi epitop, jedno mesto vezivanja za drugi epitop i jedno mesto vezivanja za tre ći epitop (kao što je prikazano na Slici 5). Opšta struktura polipeptidnih lanaca reprezentativnih petolan čanih dijatela koja sadrže Fc Region je data u Tabeli 4:
[0250] U određenom slučaju, dijatela iz ovog otkrić a su bispecifična, četvorovalentna (tj. poseduju četiri mesta za vezivanje epitopa), dijatela koja sadrže Fc i koja se sastoje od pet ukupnih polipeptidnih lanaca koji imaju dva mesta vezivanja za prvi epitop i dva mesta vezivanja za drugi epitop. U jednom slu čaju, bispecifična, četvorovalentna, dijatela iz ovog otkrić a, koja sadrže Fc, sadrže dva mesta za vezivanje epitopa, imunospecifična za PD-1 (koja mogu da se vežu za isti epitop PD-1 ili za različite epitope PD-1) i dva mesta vezivanja epitopa specifična za drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.). U drugom slučaju, bispecifična, četverovalentna, dijatela iz ovog otkrić a koja sadrže Fc, sadrže tri mesta vezivanja epitopa, imunospecifična za PD-1, koja mogu da se vežu za isti epitop PD-1 ili za različite epitope PD-1) i jedno mesto vezivanja epitopa specifično za drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.). U drugom slučaju, bispecifična, četvorovalentna, dijatela iz ovog otkrić a koja sadrže Fc, sadrže jedno mesto vezivanja epitopa imunospecifično za PD-1 i tri mesta vezivanja epitopa specifična za drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.).
C. Bispecifični Trovalentni Vezujući Molekuli Koji Sadrže Fc Regione
[0251] Sledeći primer ovog otkrića se odnosi na bispecifične, trovalentne vezujuće molekule, koji sadrže Fc Region, i koji mogu da se istovremeno vežu za prvi epitop, drugi epitop i treći epitop, pri čemu najmanje jedan od takvih epitopa nije identičan drugom. Takva bispecifična dijatela tako sadrže domene "VL1"/"VH1" koji mogu da se vežu za prvi epitop, "VL2"/ "VH2" domene koji mogu da se vežu za drugi epitop i "VL3"/"VH3" domene koji mogu da se vežu za treći epitop. U jednom slučaju, jedan ili dva od takvih epitopa je epitop PD-1, a drugi (ili drugi) takav epitop nije epitop PD-1 (na primer, epitop B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3, MHC klase I ili II, OX40, PD-1, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.). Takvi bispecifični trovalentni vezujući molekuli sadrže tri mesta vezivanja epitopa, od kojih su dva domena vezivanja tipa dijatela, koji obezbeđuju Vezujuće mesto A i Vezujuće mesto B, a jedan od njih je Vezujući domen tipa različitog od dijatela, koji obezbeđuje vezujuće mesto C (vidi, npr., Slike 6A-6F, i PCT Prijavu Br: PCT/US15/33081; i PCT/US15/33076).
[0252] Tipično, trovalentni vezujući molekuli iz ovog otkrića će se sastojati od četiri različita polipeptidna lanca (videti Slike 6A-6B), međutim, molekuli mogu sadržati manji ili veći broj polipeptidnih lanaca, na primer spajanjem takvih polipeptidnih lanaca jednog sa drugim (npr. preko peptidne veze) ili deljenjem takvih polipeptidnih lanaca da bi se formirali dodatni polipeptidni lanci, ili povezivanjem manjeg broja ili dodatnih polipeptidnih lanaca preko disulfidnih veza. Slike 6B-6F ilustruju ovaj aspekt otkrića šematskim prikazom takvih molekula koji imaju tri polipeptidna lanca. Kao što je dato na Slikama 6A-6F, trovalentni vezujući molekuli iz ovog otkrića mogu imati alternativne orijentacije u kojima su domeni vezanja tipa dijatela N-terminalni (Slike 6A, 6C i 6D) ili C-terminalni (Slike 6B, 6E i 6F) za Fc Region.
[0253] U određenim slučajevima, prvi polipeptidni lanac takvih trovalentnih vezujućih molekula iz ovog otkrića sadrži: (i) Domen koji sadrži VL1, (ii) Domen koji sadrži VH2, (iii) Domen koji Promoviše Heterodimer i (iv) Domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3. Domeni VL1 i VL2 se nalaze na N-kraju ili C-kraju u odnosu na Domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3, kako je prikazano u Tabeli 5 (Slike 6A i 6B). Drugi polipeptidni lanac u takvom slučaju sadrži: (i) Domen koji sadrži VL2, (ii) Domen koji sadrži VH1 i (iii) Domen za Promovisanje Heterodimera. Treći polipeptidni lanac u takvom slučaju sadrži: (i) Domen koji sadrži VH3, (ii) Domen koji sadrži CHI i (iii) Domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3. Treći polipeptidni lanac može biti teški lanac antitela koji sadrži VH3 i konstantni region teškog lanca. Četvrti polipeptid u takvom slučaju sadrži: (i) Domen koji sadrži VL3 i (ii) Domen koji sadrži CL. Četvrti polipeptidni lanac može biti laki lanac antitela koji sadrži VL3 komplementaran sa VH3 trećeg polipeptidnog lanca. Treći ili četvrti polipeptidni lanci mogu biti izolovani od antitela koja se prirodno javljaju. Alternativno, oni mogu biti konstruisani rekombinantno, sintetički ili na drugi način.
[0254] Varijabilni Domeni Lakog Lanca prvog i drugog polipeptidnog lanca su odvojeni od varijabilnih domena teškog lanca takvih polipeptidnih lanaca pomoću intervenirajućeg spejser linkera koji je prekratak, da bi mogao da omogući da se njihovi VL1/VH2 (ili njihovi VL2/VH1) domeni udruže i formiraju mesto vezivanja epitopa koje može da se veže ili za prvi ili za drugi epitop. Poželjni intervenirajući spejser peptid (Linker 1) za ovu svrhu ima sekvencu (SEK ID BR: 14): GGGSGGGG. Ostali domeni trovalentnih vezujućih molekula mogu biti odvojeni pomoću jednog ili više intervenirajućih peptidnih spejsera, koji opciono sadrže cisteinski ostatak. Ovde su dati primeri linkera korisnih za generisanje trovalentnih vezujućih molekula a takođe su dati u PCT Prijavama Br.: PCT/US15/33081; i PCT/US15/33076. Prema tome, prvi i drugi polipeptidni lanci takvih trovalentnih vezujućih molekula se udružuju da formiraju mesto vezivanja VL1/VH1 sposobno da se veže za prvi epitop, kao i mesto vezivanja VL2/VH2 koje je sposobno da se veže za drugi epitop. Treći i četvrti polipeptidni lanac takvih trovalentnih vezujućih molekula se udružuju da formiraju mesto vezivanja VL3/VH3 koje može da se veže za treći epitop. Podrazumeva se da domeni VL1/VH1, VL2/VH2 i VL3/VH3 mogu biti isti ili različiti tako da omogućavaju vezivanje koje je monospecifično, bispecifično ili trispecifično.
[0255] Kao što je gore opisano, trovalentni vezujući molekuli prema ovom otkriću mogu sadržati tri polipeptida. Trovalentni vezujući molekuli koji sadrže tri polipeptidna lanca mogu biti dobijeni povezivanjem domena N-kraja četvrtog polipeptida sa Domenom koji sadrži VH3, trećeg polipeptida. Alternativno, koristi se treći polipeptidni lanac trovalentnog vezujućeg molekula iz otkrića koji sadrži sledeća tri domena: (i) Domen koji sadrži VL3, (ii) Domen koji sadrži VH3 i (iii) Domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3, pri čemu su VL3 i VH3 međusobno razdvojeni intervenirajućim peptidnim spejserom koji je dovoljno dugačak (najmanje 9 ili više aminokiselinskih ostataka) tako da omogućava povezivanje ovih domena da se formira mesto za vezivanje epitopa.
[0256] Podrazumeva se da VL1/VH1, VL2/VH2 i VL3/VH3 Domeni mogu biti isti ili različiti tako da omoguće monospecifično, bispecifično ili trispecifično vezivanje. Međutim, kako je ovde dato, ovi domeni su poželjno izabrani tako da vezuju PD-1 i drugi epitop (ili drugi i treći epitop) (poželjno, takvi epitopi su epitopi B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.).
[0257] Konkretno, VL i VH Domeni mogu biti izabrani tako da trovalentni vezuju ći molekul sadrži dva mesta vezivanja za prvi epitop i jedno mesto vezivanja za drugi epitop ili jedno mesto vezivanja za prvi epitop i dva mesta vezivanja za drugi epitop ili jedno mesto vezivanja za prvi epitop, jedno mesto vezivanja za drugi epitop i jedno mesto vezivanja za treći epitop. Opšta struktura polipeptidnih lanaca reprezentativnih trovalentnih vezuju ć ih molekula iz otkrića je data na Slikama 6A-6F i u Tabeli 5:
[0258] Jedan primer ovog otkrić a se odnosi na bispecifične trovalentne vezujuće molekule koji sadrže dva mesta vezivanja epitopa za PD-1 i jedno mesto vezivanja epitopa za drugi epitop prisutan na molekulu koji nije PD-1 (npr. B7-H3, B7- H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3, MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.). Dva mesta za vezivanje epitopa za PD-1 mogu da vežu isti epitop ili različite epitope. Sledeć i primer ovog otkri ć a se odnosi na bispecifične trovalentne vezujuće molekule koji sadrže jedno mesto vezivanja epitopa za PD-1 i dva mesta vezivanja epitopa koja vezuju drugi antigen prisutan na molekulu različit od PD-1 (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3, MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.). Dva mesta vezivanja epitopa za drugi antigen mogu da vežu isti epitop ili različite epitope antigena (npr. isti ili epitopi različiti od LAG-3). Kao što je gore navedeno, takvi bispecifični trovalentni vezujući molekuli mogu sadržati tri ili četiri polipeptidna lanca.
VII. Konstantni Domeni i Fc Regioni
[0259] Ovde su dati Konstantni Domeni antitela korisni u generisanju PD-1 vezujućih molekula iz otkrića (npr. antitela, dijatela, trovalentni vezujući molekuli, itd.).
[0260] Poželjan CL domen je humani IgG CL Kapa domen. Aminokiselinska sekvenca primernog humanog CL Kapa domena je (SEK ID BR: 8):
[0261] Alternativno, primer CL domena je humani IgG CL Lambda Domen. Aminokiselinska sekvenca primernog humanog CL Kapa domena je (SEK ID BR: 9):
[0262] Kao što je ovde dato, PD-1 vezujući molekuli prema pronalasku mogu sadržati Fc Region. Fc Region takvih molekula iz otkrića može biti bilo kog izotipa (npr. IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4). PD-1-vezujući molekuli iz ovog otkrića mogu dalje sadržati CH1 Domen i/ili zglobni region. Kada je prisutan, CH1 domen i/ili zglobni region mogu biti bilo kog izotipa (npr. IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4), i poželjno su istog izotipa kao željeni Fc Region.
[0263] Primer CH1 Domena je humani IgG1 CH1 Domen. Aminokiselinska sekvenca primernog humanog IgG1 CH1 Domena je (SEK ID BR:10):
[0264] Primer CH1 Domena je humani IgG2 CH1 Domen. Aminokiselinska sekvenca primernog humanog IgG2 CH1 Domena je (SEK ID BR:257):
[0265] Primer CH1 Domena je humani IgG4 CH1 Domen. Aminokiselinska sekvenca primernog humanog IgG4 CH1 Domena je (SEK ID BR:254):
[0266] Jedan primer zglobnog regiona je humani IgG1 zglobni region. Aminokiselinska sekvenca primernog humanog zglobnog regiona IgG1 je (SEK ID BR:32): EPKSCDKTHTCPPCP.
[0267] Još jedan primer zglobnog regiona je humani zglobni region IgG2. Aminokiselinska sekvenca primernog humanog zglobnog regiona IgG2 je (SEK ID BR:11): ERKCCVECPPCP.
[0268] Još jedan primer zglobnog regiona je humani zglobni region IgG4. Aminokiselinska sekvenca primernog humanog regiona šarki IgG4 je (SEK ID BR: 12): ESKIGPPCPSCP. Kao što je ovde opisano, zglobni region IgG4 može sadržati stabilizujuću mutaciju kao što je supstitucija S228P. Aminokiselinska sekvenca primerno stabilizovanog regiona šarki IgG4 je (SEK ID BR:13): ESKYGPPCPPCP.
[0269] Fc Region molekula koji sadrže Fc Region (npr. antitela, dijatela i trovalentni molekuli) iz ovog otkrića može biti ili kompletan Fc Region (npr. kompletni IgG Fc Region) ili samo fragment Fc Regiona. Po potrebi, u Fc Regionu molekula koji sadrže Fc Region u ovom otkriću nedostaje C-terminalna lizinska aminokiselinska rezidua. Konkretno, Fc Region molekula koji sadrže Fc Region, prema ovom otkriću, može biti inženjerisana varijanta Fc Regiona. Iako Fc Region bispecifičnih molekula iz ovog otkrića koji sadrže Fc Region može imati sposobnost vezivanja za jedan ili više Fc receptora (npr. FcγR(i)), poželjnije je da takva varijanta Fc Regiona ima promenjeno vezivanje za FcγRIA (CD64), FcγRIIA (CD32A), FcγRIIB (CD32B), FcγRIIIA (CD16a) ili FcγRIIIB (CD16b) (u odnosu na vezivanje koje pokazuje divlji tip Fc Regiona) ili će imati znatno smanjenu ili nikakvu sposobnost vezivanja za inhibitorni(e) receptor(e)). Tako, Fc Region molekula koji sadrže Fc Region, prema ovom otkriću, može obuhvatati neki ili sve CH2 Domene i/ili neke ili sve CH3 Domene kompletnog Fc Regiona, ili može sadržati varijantu CH2 i/ili varijantu CH3 sekvence (koja može da uključuje, na primer, jedno ili više insercija i/ili jednu ili više delecija u odnosu na CH2 ili CH3 domene kompletnog Fc Regiona). Takvi Fc Regioni mogu sadržati polipeptidne delove koji nisu Fc, ili mogu sadržati delove kompletnih Fc Regiona koji se prirodno ne javljaju, ili mogu sadržati orijentacije CH2 i/ili CH3 domena koji se prirodno ne javljaju (kao što su, na primer, dva CH2 domena ili dva CH3 domena, ili u smeru od N-kraja ka C-kraju, CH3 Domen povezan sa CH2 Domenom itd.).
[0270] Modifikacije Fc regiona identifikovane kao promene efektorske funkcije su poznate u tehnici, uključujuć i modifikacije koje pojačavaju vezivanje za aktiviraju ć e receptore (npr. FcγRIIA (CD16A) i smanjuju vezivanje za inhibitorne receptore (npr. FcγRIIB (CD32B) (videti, npr., Stavenhagen, J.B. et al. (2007) "Fc Optimization Of Therapeutic Antibodies Enhances Their Ability
To Kill Tumor Cells In Vitro And Controls Tumor Expansion In Vivo Via Low-Affinity Activating Fcgamma Receptors," Cancer Res. 57(18):8882-8890). Primerne varijante humanih IgG1 Fc regija sa smanjenim vezivanjem za CD32B i/ili poveć ano vezivanje za CD16A sadrže supstitucije F243L, R292P, Y300L, V305I ili P296L. Ove aminokiselinske supstitucije mogu biti prisutne u humanom IgG1 Fc Regionu u bilo kojoj kombinaciji ili podkombinaciji. U jednom slučaju, varijanta humanog IgG1 Fc regiona sadrži F243L, supstitucija R292P i Y300L. U drugom slučaju, varijanta humanog IgG1 Fc Regiona sadrži supstitucije F243L, R292P, Y300L, V305I i P296L.
[0271] Naročito je poželjno da Fc Regioni polipeptidnih lanaca molekula koji sadrže Fc Region iz ovog otkrića pokazuju smanjeno (ili suštinski nikakvo) vezivanje za FcγRIA (CD64), FcγRIIA (CD32A), FcγRIIB (CD32B), FcγRIIIA (CD16a) ili FcγRIIIB (CD16b) (u odnosu na vezivanje koje pokazuje divlji tip IgG1 Fc Regiona (SEK ID BR:1). Gore su opisani varijantni Fc Regioni i mutirani oblici sposobni da posreduju u takvom izmenjenom vezivanju. U konkretnom slučaju, molekuli koji sadrže Fc Region, u ovom otkriću, sadrže IgG Fc Region koji pokazuje smanjenu ADCC efektorsku funkciju. U poželjnom slučaju, Domen CH2-CH3 prvog i/ili trećeg polipeptidnog lanca takvih molekula koji sadrže Fc Region uključuju 1, 2 ili 3 od supstitucija: L234A, L235A, N297Q i N297G. U drugom slučaju, varijanta humanog IgG Fc Regiona sadrži supstituciju N297Q, supstituciju N297G, supstitucije L234A i L235A ili supstituciju D265A, po što ove mutacije aboliraju vezivanje FcR. Alternativno, koristi se CH2-CH3 Domen Fc Regiona koji inherentno pokazuje smanjeno (ili u suštini nikakvo) vezivanje za FcγRIIIA (CD16a) i/ili smanjenu efektorsku funkciju (u odnosu na vezivanje koje pokazuje divlji tip IgG1 Fc Regiona (SEK ID BR:1)). U konkretnom slu čaju, molekuli koji sadrže Fc Region, prema ovom otkriću, sadrže IgG2 Fc Region (SEK ID BR:2) ili IgG4 Fc Region (SEK ID: NO:4). Kada se koristi IgG4 Fc Region, trenutno otkriće takođe uključuje uvođenje stabilizujuće mutacije, kao što je gore opisana supstitucija zglobnog regiona S228P (videti, na primer, SEK ID BR:13). Pošto supstitucije N297G, N297Q, L234A, L235A i D265A ukidaju efektorsku funkciju, u okolnostima u kojima je efektorska funkcija poželjna, ove supstitucije poželjno ne bi bile upotrebljene.
[0272] Naročito je poželjno da Fc regioni polipeptidnih lanaca molekula koji sadrže Fc Region iz ovog otkrića pokazuju produžen serumski poluživot (u odnosu na poluživot koji pokazuje odgovarajući divlji tip Fc). Varijantni Fc Regioni i mutantni oblici koji pokazuju produ ženi poluživot u serumu su gore opisani. U poželjnom slučaju, Domen CH2-CH3 prvog i/ili trećeg polipeptidnog lanca takvih molekula koji sadrže Fc Region uključuju 1, 2 ili 3 supstitucije: M252Y, S254T i T256E. Otkriće dalje obuhvata molekule koji sadrže Fc Region, a koji obuhvataju varijantne Fc Regione, koji sadrže:
(A) jednu ili više mutacija koje menjaju efektorsku funkciju i/ili FcγR; i
(B) jednu ili više mutacija koje produžavaju poluživot u serumu.
[0273] Poželjna sekvenca IgG1 za Domene CH2 i CH3 molekula koji sadrže Fc Region iz ovog otkrića će obuhvatati supstitucije L234A/L235A/M252Y/S254T/T256E (SEK ID BR:258):
gde X je lizin (K) ili je odsutan.
[0274] Poželjna sekvenca IgG4 za Domene CH2 i CH3 molekula koji sadrže Fc Region iz ovog otkrića će sadržati M252Y/S254T/T256E supstitucije (SEK ID BR:259):
gde X je lizin (K) ili je odsutan.
[0275] Za dijatela i trovalentne vezujuće molekule (čiji prvi i treći polipeptidni lanci nisu identični), poželjno je smanjiti ili sprečiti pojavu homodimerizacije između CH2-CH3 Domena dva prva polipeptidna lanca ili između CH2-CH3 Domena dva treća polipeptidna lanca. CH2 i/ili CH3 Domeni takvih polipeptidnih lanaca ne moraju da budu identični u sekvenci, i povoljno su modifikovani da podstiču kompleksiranje između ova dva polipeptidna lanca. Na primer, aminokiselinska supstitucija (po željno supstitucija aminokiselinom koja čini glomaznu bočnu grupu koja formira „ispupčenje“, npr. triptofan) može se uvesti u Domen CH2 ili CH3 tako da ć e sterične smetnje sprečiti interakciju sa slično mutiranim domen i primoraće mutirani domen da se upari sa domenom u koji je inženjerisana komplementarna ili prilagodljiva mutacija, tj. „udubljenje“ (npr. supstitucija sa glicinom). Takvi setovi mutacija se mogu inženjerisati u bilo koji par polipeptida koji sadrži CH2-CH3 Domene koji čine Fc region. Postupci inženjerisanja proteina koji favorizuju heterodimerizaciju u odnosu na homodimerizaciju su dobro poznati u tehnici, posebno u pogledu inženjerisanja molekula sličnih imunoglobulinu, i ovde su obuhvać eni (vidie.g., Ridgway et al. (1996) "’Knobs-Into-Holes’ Engineering Of Antibody CH3 Domains For Heavy Chain Heterodimerization, " Protein Engr. 9:617-621, Atwell et al. (1997) "Stable Heterodimers From Remodeling The Domain Interface Of A Homodimer Using A Phage Display Library, " J. Mol. Biol. 270: 26-35, i Xie et al. (2005) "A New Format Of Bispecific Antibody: Highly Efficient Heterodimerization, Expression And Tumor Cell Lysis, " J. Immunol. Methods 296:95-101). Poželjno je da je „ispupčenje“ inženjerisano u CH2-CH3 Domene prvog polipeptidnog lanca, a „udubljenje“ je inženjerisano u CH2-CH3 Domene trećeg polipeptidnog lanca antitela koje sadrži tri polipeptitna lanca. Tako će „ispupčenje“ pomoći u sprečavanju homodimerizovanja prvog polipeptidnog lanca preko njegovih CH2 i/ili CH3 domena. Kako tre ći polipeptidni lanac poželjno sadrži supstituciju „udubljenje“ on će heterodimerizovati sa prvim polipeptidnim lancem kao i što će homodimerizovati sam sa sobom. Ova strategija se može primeniti za dijatela i trovalentne vezujuće molekule koji sadrže tri, četiri ili pet lanaca kako je gore opisano, gde je „ispupčenje“ inženjerisano u CH2-CH3 Domene prvog polipeptidnog lanca, a „udubljenje“ je inženjerisano u CH2 -CH3 Domene trećeg polipeptidnog lanca.
[0276] Poželjno ispupčenje je inženjerisano modifikovanjem IgG Fc Regiona da sadrži modifikaciju T366W. Poželjno udubljenje nastaje modifikovanjem IgG Fc Regiona koji sadrži modifikaciju T366S, L368A i Y407V. Da bi se pomoglo u prečišćavanju homodimera trećeg polipeptidnog lanca koji nosi udubljenje od poslednjeg bispecifičnog heterodimernog molekula koji sadrži Fc Region, mesto vezivanja proteina A na CH2 i CH3 Domenima koji nose udubljenje, trećeg polipeptidnog lanca se poželjno mutira aminokiselinskom supstitucijom na poziciji 435 (H435R). Prema tome, homodimer trećeg polipeptidnog lanca koji ima udubljenje se neće vezati za protein A, dok će bispecifični heterodimer zadržati sposobnost da veže protein A preko mesta vezanja proteina A na prvom polipeptidnom lancu. U alternativnom slu čaju, treći polipeptidni lanac koji ima udubljenje može da sadrži aminokiselinske supstitucije na položajima 434 i 435 (N434A/N435K).
[0277] Poželjna sekvenca amino kiselina IgG1 za CH2 i CH3 Domene prvog polipeptidnog lanca molekula koji sadrži Fc Region iz ovog otkrića će imati sekvencu „koja nosi ispupčenje“ (SEK ID BR: 6):
u kojoj, X je lizin (K) ili je odsutan.
[0278] Poželjna aminokiselinska sekvenca IgG1 za CH2 i CH3 Domene drugog polipeptidnog lanca molekula prema ovom pronalasku, koji sadrži Fc Region, koji ima dva polipeptidna lanca (ili treći polipeptidni lanac molekula koji sadrži Fc Region, koji ima tri, četiri ili pet polipeptidnih lanaca) imaće sekvencu „koja nosi udubljenje“ (SEK ID BR:7):
u kojoj X je lizin (K) ili je odsutan.
[0279] Kao što će se primetiti, CH2-CH3 Domeni SEK ID BR:6 i SEK ID BR:7 uključuju supstituciju na poziciji 234 sa alaninom i 235 sa alaninom, i tako formiraju Fc Region pokazuje smanjeno (ili u su štini nikavo) vezivanje za FcγRIA (CD64), FcγRIIA (CD32A), FcγRIIB (CD32B), FcγRIIIA (CD16a) ili FcγRIIIB (CD16b) (u odnosu na vezivanje koje pokazuje Fc Region divljeg tipa ( SEK ID BR:1). Otkriće takođe obuhvata takve CH2-CH3 Domene, koji sadrže alternativne i/ili dodatne supstitucije koje modifikuju efektorsku funkciju i/ili aktivnost vezanja FγR u Fc Regionu. Otkriće takođe obuhvata takve CH2-CH3 Domene, koji dalje sadrže jednu ili više aminokiselinskih supstitucija koje produžavaju poluživot. Naročito, otkriće obuhvata takve CH2-CH3 Domene koji nose udubljenja i koji nose ispupčenja koji dalje sadrže M252Y/S254T/T256E.
[0280] Poželjno je da prvi polipeptidni lanac ima sekvencu CH2-CH3 koja nosi ispupčenje, poput one iz SEK ID BR:6. Međutim, kao što će biti prepoznato, u prvom polipeptidnom lancu se može koristiti „CH2-CH3“ domen koji „nosi udubljenje“ (npr. SEK ID BR:7), u kom slučaju, „CH2-CH3“ Domen koji „nosi
1
ispupčenje“ (npr. SEK ID BR:6) bi se koristio u drugom polipeptidnom lancu molekula koji sadrži Fc Region, prema ovom otkriću, koji ima dva polipeptidna lanca (ili u trećem polipeptidnom lancu molekula koji sadrži Fc Region, koji ima tri, četiri ili pet polipeptidnih lanaca).
[0281] Kao što je gore opisano, otkriće obuhvata molekule koji sadrže Fc Region (npr. antitela i dijatela koja sadrže Fc Region) koji imaju CH2 i CH3 Domene divljeg tipa ili koji imaju CH2 i CH3 Domene koji sadrže kombinacije gore opisanih supstitucija. Primer aminokiselinske sekvence IgG1 CH2-CH3 Domena koji obuhvata takve varijacije je (SEK ID BR:260):
u kojoj:
(a) X1i X2su oba L (divlji tip), ili su oba A (smanjeno vezivanje FcγR);
(b) X3, X4, odnosno X5su M, S i T (divlji tip), ili su Y, T i E (produžen poluživot),
(c) X6, X7, odnosno X8su: T, L i I (divlji tip), ili su W, L i Y (ispupčenje), ili S, A i V (udubljenje);
(d) X9odnosno X10su N i H (divlji tip), ili su N i R (bez vezivanja za protein A), ili A i K (bez vezivanja za protein A); i
(e) X11je K ili je odsutan.
[0282] U drugim slučajevima, otkriće obuhvata PD-1 vezujuće molekule koji sadrže CH2 i/ili CH3 Domene koji su inženjerisani da favorizuju heterodimerizaciju u odnosu na homodimerizaciju kori šćenjem mutacija poznatih u tehnici, kao što su one otkrivene u PCT publikacijama br. WO 2007/110205; WO 2011/143545; WO 2012/058768; WO 2013/06867.
VIII. Molekuli za PD-1 x LAG-3 Bispecifično Vezivanje
[0283] Ovo otkriće se posebno odnosi na molekule za PD-1 x LAG-3bispecifično vezivanje (npr. bispecifična antitela, bispecifična dijatela, itd.) koji sadrže fragment koji vezuje epitop anti-PD-1 antitela, i poželjno jednog od novih anti-humanih PD-1 antitela koja su ovde data, i fragment koji vezuje epitop anti-humanog LAG-3 antitela, poželjno jednog od novih anti-humanih LAG-3 antitela koja su ovde data. Po željni PD-1 x LAG-3 bispecifično vezujući molekuli iz ovog otkrića poseduju fragmente antitela koji vezuju epitope koji im omogućavaju da se koordinirano vežu za dva različita epitopa: epitop PD-1 i epitop LAG-3 , kako bi se smanjile inhibitorne aktivnosti takvih molekula. Kako se ovde koristi, takvo slabljenje se odnosi na smanjenje od najmanje 20%, smanjenje od najmanje 50%, smanjenje od najmanje 80% ili smanjenje od najmanje 90% detektabilne PD-1 i/ili LAG- 3 inhibitorne aktivnosti, ili potpunu eliminaciju detektabilne inhibitorne aktivnosti PD-1 i/ili LAG-3. Izbor fragmenata koji vežu epitop (npr. VL i VH Domeni) antihumanog PD-1 antitela i anti-LAG-3 antitela je koordiniran tako da se polipeptidni lanci koji čine takve PD-1 x LAG-3 bispecifične molekule sklapaju tako da formiraju najmanje jedno funkcionalno mesto vezivanja antigena koje je specifično za prvi antigen (tj. PD-1 ili LAG-3) i najmanje jedno funkcionalno mesto vezivanja antigena, specifično za drugi antigen (tj. bilo PD-1 ili LAG-3, u zavisnosti od identiteta prvog antigena).
[0284] U određenom slučaju, PD-1 x LAG-3 bispecifično vezujući molekul iz ovog otkrića je bispecifično dijatelo, koje poželjno sadrži dva, tri, četiri ili pet polipeptidnih lanaca kako je ovde opisano. U jo š jednom određenom slučaju, PD-1 x LAG-3 bispecifično vezujući molekul prema ovom otkriću je bispecifično antitelo, koje poželjno sadrži dva, tri ili četiri polipeptidna lanca kako je ovde opisano (takođe videti, npr. WO 2007/024715; WO2007/110205; WO 2009/080251; WO 2009/080254; WO 2009/089004; WO 2011/069104; WO 2011/117329; WO 2011/131746; WO 2011/133886; WO 2011/143545; WO 2012/023053; WO 2013/060867).
A. Anti-humana LAG-3 Antitela
[0285] U nastavku su dati primeri antitela koja su imunospecifična za humani LAG-3. Dodatna poželjna antitela se mogu dobiti izdvajanjem hibridoma koji sekretuju antitela izazvani kori šćenjem LAG-3 ili njegovog peptidnog fragmenta, ili skriningom biblioteka rekombinantnih antitela za vezivanje za LAG-3 ili njegovog peptidnog fragmenta. Humani LAG-3 (uključujući signalnu sekvencu od 28 aminokiselinskih
2
ostataka (prikazana podvučeno) i zreli protein od 497 aminokiselinskih ostataka) ima aminokiselinsku sekvencu (SEK ID BR: 38):
1. LAG-3 mAb A
[0286] Anti-humano LAG-3 antitelo BMS-986016 (25F7; Medarex/BMS), ovde označeno kao "LAG-3 mAb A", i njegove varijante su opisane (vidi, npr., WO 2014/008218). Aminokiselinska sekvenca Varijabilnog Domena Teškog Lanca LAG-3 mAb A ima aminokiselinsku sekvencu (SEK ID BR:39) (CDR-i su prikazani podvučeno):
[0287] Aminokiselinska sekvenca Varijabilnog Domena Lakog Lanca LAG-3 mAb A ima aminokiselinsku sekvencu (SEK ID BR:40) (CDR-i su prikazani podvučeno):
[0288] Nedavno su identifikovana dodatna mišja antihumana LAG-3 antitela koja imaju jedinstvene karakteristike vezivanja (videti, prijavu patenta Sjedinjenih Dr žava Br. 62/172,277). Poželjni PD-1 x LAG-3 bispecifično vezujući molekuli iz ovog pronalaska sadrže fragmente koji vezuju epitop anti-humanog LAG-3 antitela LAG-3 mAb 1 ili LAG-3 mAb 6, antitela, koja vezuju novi epitop i ne takmiče se sa BMS-986016 za vezivanje LAG-3. Naročito su poželjni PD-1 x LAG-3 bispecifično vezujući molekuli iz ovog otkrića koji poseduju humanizovane VH i/ili VL Domene LAG-3 mAb 1 ili LAG-3 mAb 6.
2. LAG-1 mAb 1
[0289] Aminokiselinska sekvenca VH Domena LAG-3 mAb 1 (SEK ID BR:41) je prikazana ispod (CDRHostaci su prikazani podvučeno).
CDRH1 od LAG-3 mAb 1 (SEK ID BR:42): RNIGMN
CDRH2 od LAG-3 mAb 1 (SEK ID BR:43): WINTYTGESTYADDFEG
CDRH3 od LAG-3 mAb 1 (SEK ID BR:44): ESLYDYYSMDY
[0290] Aminokiselinska sekvenca VL Domena LAG-3 mAb 1 (SEK ID BR:45) je prikazana ispod (CDRLostaci su podvučeni):
CDRL1 od LAG-3 mAb 1 (SEK ID BR:46): KSSQSLLHSDGKTYLN
CDRL2 od LAG-3 mAb 1 (SEK ID BR: 47): LVSELDS
CDRL3 od LAG-3 mAb 1 (SEK ID BR:48): WQGTHFPYT
[0291] Dva primerna humanizovana VH Domena LAG-3 mAb 1 ovde označena kao "hLAG-3 mAb 1 VH1," i "hLAG-3 mA 1 VH2," i četiri primerna humanizovana VL Domena LAG-3 mAb 1 "hLAG-3 mAb 1 VL1," "hLAG-3 mAb 1 VL2, "" hLAG-3 mAb 1 VL3, "i" hLAG-3 mAb 1 VL4," su navedeni u nastavku. Bilo koji od humanizovanih VL Domena može biti uparen sa bilo kojim od humanizovanih VH Domena da bi se generisao LAG-3 vezujući domen. Prema tome, bilo koje antitelo koje sadrži jedan od humanizovanih VL Domena uparenih sa humanizovanim VH Domenom generički se označava kao "hLAG-3 mAb 1," a na određene kombinacije humanizovanih VH/VL Domena se označava pozivanjem na specifične VH/VL Domene, na primer, humanizovano antitelo koje sadrži hLAG-3 mAb 1 VH1 i hLAG-3 mAb 1 VL2 se konkretno označava kao "hLAG-3" mAb 1 (1.2)."
[0292] Aminokiselinska sekvenca VH Domena hLAG-3 mAb 1 VH1 (SEK ID BR:49) je prikazana dole (CDRHostaci su prikazani podvučeno):
[0293] Aminokiselinska sekvenca VH Domena hLAG-3 mAb 1 VH2 (SEK ID BR:50) je prikazana dole (CDRHostaci su prikazani podvučeno):
[0294] Aminokiselinska sekvenca VL Domena hLAG-3 mAb 1 VL1 (SEK ID BR:51) je prikazana dole (CDRLostaci su prikazani podvučeno):
[0295] Aminokiselinska sekvenca VL Domena hLAG-3 mAb 1 VL2 (SEK ID BR:52) je prikazana dole (CDRLostaci su prikazani podvučeno):
[0296] Aminokiselinska sekvenca VL Domena hLAG-3 mAb 1 VL3 (SEK ID BR:53) je prikazana dole (CDRLostaci su prikazani podvučeno):
[0297] Aminokiselinska sekvenca VL Domena hLAG -3 mAb 1 VL4 (SEK ID BR:54) je prikazana dole (CDRLostaci su prikazani podvučeno):
4
[0298] CDRL1 iz VL Domena hLAG-3 mAb 1 VL4 sadrži glicin u alanin aminokiselinsku supstituciju i ima aminokiselinsku sekvencu: KSSQSLLHSDAKTYLN (SEK ID BR:55), supstituisani alanin je prikazan podvučeno). Smatra se da slična supstitucija može biti ugrađena u bilo koji od gore opisanih LAG-3 mAb 1 CDR L1 Domena.
3. LAG-3 mAb 6
[0299] Aminokiselinska sekvenca VH Domena LAG-3 mAb 6 (SEK ID BR:56) je prikazana dole (CDRHostaci su prikazani podvučeno):
CDRH1 od LAG-3 mAb 6 (SEK ID BR:57): DYNMD
CDRH2 od LAG-3 mAb 6 (SEK ID BR:58): DINPDNGVTIYNQKFEG
CDRH3 od LAG-3 mAb 6 (SEK ID BR:59): EADYFYFDY
[0300] Aminokiselinska sekvenca VLDomena LAG-3 mAb 6 (SEK ID BR: 60) je prikazana dole (CDR ostaci su prikazani podvučeno):
CDRL1 od LAG-3 mAb 6 (SEK ID BR:61):KASQDVSSWA
CDRL2 od LAG-3 mAb 6 (SEK ID BR:62):SASYRYT
CDRL3 od LAG-3 mAb 6 (SEK ID BR:63):HYSTPWT
[0301] Dva primerna humanizovana VH Domena LAG- 3 mAb 6 ovde su označeni kao „hLAG-3 mAb 6 VH1,“ i „hLAG-3 mAb 6 VH2“, i dva primerna humanizovana VL Domena LAG-3 mAb 6 „hLAG-3 mAb 1 VL1,“ i „hLAG-3 mAb 1 VL2," su data u nastavku. Bilo koji od humanizovanih VL Domena može biti uparen sa bilo kojim od humanizovanih VH Domena da bi se generisao LAG-3 vezujući domen. Shodno tome, bilo koje antitelo koje sadrži jedan od humanizovanih VL Domena uparenih sa humanizovanim VH Domenom označava se generički kao "hLAG-3 mAb 6," a određene kombinacije humanizovanih VH/VL Domena se označavaju pozivanjem na specifične VH/VL Domene, na primer, humanizovano antitelo koje sadrži hLAG-3 mAb 6 VH1 i hLAG-3 mAb 6 VL2 konkretno se označava kao "hLAG-3" mAb 6 (1.2)."
[0302] Aminokiselinska sekvenca VH Domena hLAG-3 mAb 6 VH1 (SEK ID BR: 294) je prikazana dole (CDRHostaci su prikazani podvučeno):
[0303] Aminokiselinska sekvenca VH Domena hLAG-3 mAb 6 VH2 (SEK ID BR:295) je prikazano dole (CDRHostaci su prikazani podvučeno):
[0304] Aminokiselinska sekvenca VL Domena hLAG-3 mAb 6 VL1 (SEK ID BR:296) je prikazano dole (CDRLostaci su prikazani podvučeno):
[0305] Aminokiselinska sekvenca VL Domena hLAG-3 mAb 6 VL2 (SEK ID BR:297) je prikazana dole (CDRLostaci su prikazani podvučeno):
[0306] CDRL1 VL Domena hLAG-3 mAb 6 VL1 i VL2 sadrži supstituciju lizina u arginin aminokiseline i ima aminokiselinsku sekvencu: RASQDVSSWA (SEK ID BR: 298), supstituisani arginin je podvučen ). Smatra se da slična supstitucija može biti ugrađena u bilo koji od gore opisanih LAG-3 mAb 6 CDR L1 domena.
B. Primeri Dijatela sa Četvorolančanim Fc Regionom Koja Imaju E/K-Zavojnice
[0307] Generisana su četiri primerna PD-1 x LAG-3 bispecifična, dijatela sa četvorolančanim Fc-Regionom koja sadrže Domene E/K-zavojnice za Promovisanje Heterodimera (označena sa "DART A", "DART B", "DART C" i "DART I"). Struktura ovih antitela koja sadrže Fc Region je detaljno opisana u nastavku. Ovi primeri PD-1 x LAG-3 antitela su namenjeni za ilustraciju, ali ni na koji način ne ograničavaju, obim otkrića.
1. DART A
[0308] DART A je bispecifično, četvorolančno, telo koje sadrži Fc Region i koje ima dva mesta vezivanja specifična za PD-1, dva mesta vezivanja specifična za LAG-3, varijantu IgG4 Fc Regiona inženjerisanu za produženje poluživota i Domene E/K-zavojnica za Promovisanje Heterodimera, koji sadr že cistein. Prvi i treći polipeptidni lanci DART A sadrže, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj, VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEK ID BR: 54); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); intervenirajući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15)); Domen za Promovisanje Heterodimera (E-zavojnica) (EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEK ID BR: 23)); stabilizovani zglobni region IgG4 (SEK ID BR: 13); varijantu IgG4 Domena CH2-CH3 koji sadrži supstitucije M252Y/S254T/T256E i nema C-terminalni ostatak (SEK ID BR:259); i C-kraj.
[0309] Aminokiselinska sekvenca prvog i trećeg polipeptidnog lanca DART A je varijanta SEK ID BR: 267:
u kojoj X1, X2, X3i X4su nezavisno izabrani, i gde X1je A ili G; X2je Y ili M; X3je T ili S; i X4je E ili T.
[0310] Aminokiselinske sekvence prvog i trećeg polipeptidnog lanca DART A su SEK ID BR: 267, u kojoj X1je A; X2je Y; X3je T; i X4je E.
[0311] Drugi i četvrti polipeptidni lanci DART A sadrže, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj, VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR:153); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR:14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEK ID BR: 49); intervenirajući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15)); Domen za Promovisanje Heterodimera (K-zavojnica) koji sadrži cistein (KVAACKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE (SEK ID BR: 24) i C-kraj.
[0312] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART A je (SEK ID BR: 268):
2. DART B
[0313] DART B je identičan sa DART A, s tim što prvi i treći polipeptidni lanci DART B sadrže VL Domen hLAG-3 mAb 1 VL3 (SEK ID BR: 53), koji sadrži aminokiselinsku supstituciju u CDRL1. Dakle, prvi i treći polipeptidni lanci DART B sadrže, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj; VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL3) (SEK ID BR:53); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR:14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR:147); intervenirajući linker peptid (Linker 2: GGCGGG (SEK ID BR:15)); Domen za Promovisanje Heterodimera (E-zavojnica) koji sadrži cistein (EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEK ID BR:23)); stabilizovani zglobni region IgG4 (SEK ID BR:13); varijantu IgG4 CH2-CH3 Domena koja sadrži supstitucije M252Y/S254T/T256E i nema C-terminalni ostatak (SEK ID BR:259); i C-kraj.
[0314] Aminokiselinska sekvenca prvog i trećeg polipeptidnog lanca DART B je SEK ID BR:267, u kojoj X1je G; X2je Y; X3je T; i X4je E.
[0315] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART B je SEK ID BR: 268.
3. DART C
[0316] DART C je identičan sa DART B, osim što prvi i treći polipeptidni lanci DART B sadrže domen divljeg tipa IgG4 CH2-CH3 kojem nedostaje C-terminalni ostatak (SEK ID BR:4). Dakle, prvi i treći polipeptidni lanci DART C sadrže, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj, VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG- 3 mAb 1 VL3) (SEK ID BR:53); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR:14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); intervenirajući linker peptid (Linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15)); Domen za Promovisanje Heterodimera (E-zavojnica) koji sadrži cistein (EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK - EVAALEK (SEK ID BR:23)); stabilizovani zglobni region IgG4 (SEK ID BR:13); Domen IgG4 CH2-CH3 kojem nedostaje C-terminalni ostatak (SEK ID BR:4); i C-kraj.
[0317] Aminokiselinska sekvenca prvog i trećeg polipeptidnog lanca DART C je SEK ID BR: 267, u kojoj X1je G; X2je M; X3je S; i X4je T.
[0318] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART C je SEK ID BR:268.
4. DART I
[0319] DART I je bispecifično, četvorolančno, telo koje sadrži Fc Region koji ima dva mesta vezivanja specifična za PD-1, dva mesta vezivanja specifična za LAG-3, varijantu IgG4 Fc Regiona inženjerisanu za produženi poluživot, i Domen E/K-zavojnice za Promovisanje Heterodimera koji sadr ži cistein. Prvi i treći polipeptidni lanci DART I sadrže, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj, VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 6 VL1) (SEK ID BR:296); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR:14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR:147); intervenirajući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEK ID BR:15)); Domen za Promovisanje Heterodimera (E-zavojnica) koji sadrži cistein (EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEK ID BR:23)); stabilizovani zglobni region IgG4 (SEK ID BR:13); varijanta domena IgG4 CH2-CH3 koja sadrži supstitucije M252Y/S254T/T256E i kojima nedostaje C-terminalni ostatak (SEK ID BR:259); i C-kraj.
[0320] Aminokiselinska sekvenca prvog i trećeg polipeptidnog lanca DART I je (SEK ID BR:290):
[0321] Drugi i četvrti polipeptidni lanac DART I sadrže, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj, VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da veže LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 6 VH1) (SEK ID BR: 294); intervenirajući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15)); Domen za Promovisanje Heterodimera (K-zavojnicu) koja sadrži cistein (KVAACKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE (SEK ID BR: 24) i C-kraj.
[0322] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART I je (SEK ID BR:
291):
C. Primeri Četvorolančanih Dijatela koja Sadrže Fc Region i koja Imaju CL/CH1 Domene
[0323] Generisana su četiri primerna PD-1 X LAG-3 bispecifična, četvorolančana dijatela koja sadrže Fc Regione i CL/CH1 domene, označena sa „DART D“, „DART E“, „DART J“ i „DART 1“. Struktura ovih antitela koja sadrže Fc Regione je detaljno opisana u nastavku. Ova primerna PD-1 x LAG-3 antitela treba da ilustruju, ali ni na koji način ne treba da ograniče, obim ovog otkrića.
1. DART D
[0324] DART D je bispecifično, četvorolančano, dijatelo koje sadrži Fc Region koje ima dva mesta vezivanja specifična za PD-1, dva mesta vezivanja specifična za LAG-3, CL/CH1 Domene i varijantu IgG4 Fc Regiona inženjerisanu za produženi poluživot. Prvi i treći polipeptidni lanci DART D sadrže, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj; VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR:153); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEK ID BR: 49); intervenirajući linker peptid (Linker 2: LGGGSG (SEK ID BR:261)); Domen IgG4 CH1 (SEK ID BR:254); stabilizovani zglobni region IgG4 (SEK ID BR:13); varijantu Domena IgG4 CH2-CH3 koja sadrži supstitucije M252Y/S254T/T256E i nema C-terminalni ostatak (SEK ID BR:259); i C-kraj.
[0325] Aminokiselinska sekvenca prvog i trećeg polipeptidnog lanca DART D je (SEK ID BR: 269):
[0326] Drugi i četvrti polipeptidni lanac DART D sadrže, u smeru od N-kraja ka C-kraju : N-kraj; VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEK ID BR: 54); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da veže PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); intervenirajući linker peptid (Linker 2: LGGGSG (SEK ID BR: 261)); Domen Kapa CL (SEK ID BR: 8); i C-kraj.
[0327] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART D je (SEK ID BR: 270):
2. DART E
[0328] DART E je još jedno bispecifično, četvorolančano, dijatelo koje sadrži Fc-Region dva mesta vezivanja specifična za PD-1, dva mesta vezivanja specifična za Domene LAG-3, CL/CH1 i varijantu Regiona IgG4 Fc inženjerisanu za produženje poluživota. Položaj mesta vezivanja PD-1 i LAG-3 u DART E je obrnut u poređenju sa DART D.
[0329] Prvi i treći polipeptidni lanci DART E sadrže, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj, VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEK ID BR: 54); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da veže PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); intervenirajući linker peptid (Linker 2: LGGGSG (SEK ID BR: 261)); Domen IgG4 CH1 (SEK ID BR: 254); stabilizovani zglobni region IgG4 (SEK ID BR: 13); varijantu IgG4 CH2-CH3 Domena koja sadrži supstitucije M252Y/S254T/T256E i nema C-terminalni ostatak (SEK ID BR: 259); i C-kraj.
[0330] Aminokiselinska sekvenca prvog i trećeg polipeptidnog lanca DART E je (SEK ID BR:271):
[0331] Drugi i četvrti polipeptidni lanci DART E sadrže, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj; VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VLPD-1 hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VHLAG-3 hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEK ID BR: 49); intervenirajući linker peptid (Linker 2: LGGGSG (SEK ID BR: 261)); Domen Kapa CL (SEK ID BR: 8) i C-kraj.
[0332] Aminokiselinska sekvenca dru o i četvrto oli e tidno lanca DART E e SEK ID BR: 272):
3. DART J
[0333] DART J je bispecifično, četvorolančano, dijatelo koje sadrži dva mesta vezivanja specifična za PD-1, dve mesta vezivanja specifična za LAG-3, CL/CH1 Domene, i varijantu IgG4 Fc Regiona inženjerisanu za produženi poluživot. Prvi i treći polipeptidni lanci DART J sadrže, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj; VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 6 VL1) (SEK ID BR: 296); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); intervenirajući linker peptid (Linker 2: LGGGSG (SEK ID BR: 261)); IgG4 CH1 Domen (SEK ID BR: 254); stabilizovani zglobni region IgG4 (SEK ID BR: 13); varijantu IgG4 CH2-CH3 Domena koja sadrži supstitucije M252Y/S254T/T256E kojoj nedostaje C-terminalni ostatak (SEK ID BR: 259); i C-kraj.
[0334] Aminokiselinska sekvenca prvog i trećeg polipeptidnog lanca DART J je (SEK ID BR: 292):
[0335] Drugi i četvrti polipeptidni lanci DART J sadrže, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj; VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 6 VH1) (SEK ID BR: 294); intervenirajući linker peptid (Linker 2: LGGGSG (SEK ID BR: 261)); domen Kapa CL (SEK ID BR: 8); i C-kraj.
[0336] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART J je (SEK ID BR: 293):
4. DART 1
[0337] DART 1 je bispecifično, četvorolančano, dijatelo koje sadrži dva mesta vezivanja specifična za PD-1, dva mesta vezivanja specifična za LAG-3, CL/CH1 domene, i varijantu IgG1 Fc Regiona inženjerisanu za smanjeno vezivanje za FcyR. Prvi i treći polipeptidni lanci DART 1 sadrže, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj; VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VLPD-1PD-1 mAb A VL) (SEK ID BR: 65); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VHLAG-3LAG-3 mAb A VH1) (SEK ID BR: 39); intervenirajući linker peptid (Linker 2: LGGGSG (SEK ID BR: 261)); IgG1 CH1 Domen (SEK ID BR: 10); zglobni region IgG1 (SEK ID BR: 32); varijantu domena IgG1 CH2-CH3 koja sadrži supstitucije L234A/L235A i kojoj nedostaje C-terminalni ostatak (SEK ID BR: 5); i C-kraj.
[0338] Aminokiselinska sekvenca prvog i trećeg polipeptidnog lanca DART 1 je (SEK ID BR: 284):
[0339] Drugi i četvrti polipeptidni lanci DART 1 sadrže, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj; VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VLLAG-3LAG-3 mAb A VL) (SEK ID BR: 40); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VLPD-1PD-1 mAb A VH) (SEK ID BR: 64); intervenirajući linker peptid (Linker 2: LGGGSG (SEK ID BR: 261)); Domen Kapa CL (SEK ID BR: 8); i C-kraj.
[0340] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART 1 je (SEK ID BR: 285):
1
D. Primerna Dijatela Koja sadrže Fc Region sa pet lanaca
[0341] Generisana su dva primerna petolančana PD-1 X LAG-3 bispecifična, dijatela koja sadrže Fc Region, CL/CH1 Domene i Domene E/K-zavojnice za Promovisanje Heterodimera označena sa "DART F," i "DART G". Struktura ovih dijatela koja sadrže Fc region je detaljno opisana u nastavku. Ova primerna PD-1 x LAG-3 dijatela imaju za cilj da ilustruju, ali ni na koji način ne ograničavaju, obim otkrić a.
1. DART F
[0342] DART F je bispecifično, petolančano, dijatelo koje sadrži Fc region ima tri mesta vezivanja specifična za PD-1, jedno mesto vezivanja specifično za LAG-3, CL/CH1, varijantu IgG1 Fc regiona sa ispupčenjem/udubljenjem koja je inženjerisana za smanjenje vezivanja FcγR i produženi poluživot, i Domene E/K-zavojnice za Promovisanje Heterodimera. Prvi polipeptidni lanac DART F sadr ži, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj; VH domen monoklonskog antitela sposoban za vezivanje za PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID NO: 147); IgG1 CH1 Domen (SEK ID NO: 10); zglobni region IgG1 (SEK ID NO: 32); IgG1 CH2-CH3 Domen sa udubljenjem koji sadrži supstitucije L234A/L235A/M252I/S254T/T256E/N434A/H435K i nema C-terminalni ostatak.
[0343] (SEK ID BR: 260, gde X1je A, X2je A; X3je Y, X4je T, X5je E, X6je S, X7je A, X8je V, X9je A, X10je K i X11je odsutan); i C-kraj.
[0344] Aminokiselinska sekvenca prvog polipeptidnog lanca DART F je (SEK ID BR: 273):
[0345] Drugi i peti polipeptidni lanac DART F sadrže, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N- kraj; VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153), Kapa CL domen (SEK ID BR: 8) i C-kraj.
[0346] Aminokiselinska sekvenca drugog i petog polipeptidnog lanca DART F je (SEK ID BR: 274):
[0347] Treći polipeptidni lanac DART F sadrži, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); Domen IgG1 CH1 (SEK ID BR: 10); zglobni region IgG1 (SEK ID BR: 32); Domen IgG1 CH2-CH3 koji nosi ispupčenje, koji sadrži supstitucije L234A/L235A/M252Y/S254T/T256E i kojem nedostaje C-terminalni ostatak (SEK ID BR: 260, gde X1je A, X2je A; X3je Y, X4je T, X5je E, X6je W, X7je L, X8je Y, X9je N, X10je H i X11je odsutan); intervenirajući linker peptid (GGGSGGGSGGG (SEK ID BR:262)); VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEK ID BR:54); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da veže PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR:147); intervenirajući linker peptid koji sadrži cistein
[0348] (Linker 2: GGCGGG (SEK ID BR:15)); Domen za Promovisanje Heterodimera (E-zavojnica) (EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEK ID BR:21)); i C-kraj.
[0349] Aminokiselinska sekvenca trećeg polipeptidnog lanca DART F je (SEK ID BR: 275):
2
[0350] Četvrti polipeptidni lanac DART F sadrži, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N- kraj; VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEK ID BR: 49); intervenirajući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15)); domen za Promovisanje Heterodimera (K-zavojnica) (KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE- KVAALKE (SEK ID BR: 22)); i C-kraj.
[0351] Aminokiselinska sekvenca četvrtog polipeptidnog lanca DART F je (SEK ID BR: 276):
2. DART G
[0352] DART G je bispecifično petolančano dijatelo koje sadrži Fc Region i ima dva mesta vezivanja specifična za PD-1, dva mesta vezivanja specifična za LAG-3, CL/CH1 Domene, varijantu IgG1 Fc Regiona sa ispupčenjem/udubljenjem inženjerisanu za smanjeno vezivanje FcγR i produženi poluživot i Domene E/K-zavojnica za Promovisanje Heterodimera. Prvi polipeptidni lanac DART G sadr ži, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj; VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEK ID BR: 49); Domen IgG1 CH1 (SEK ID BR: 10); zglobni region IgG1 (SEK ID BR: 32); Domen IgG1 CH2-CH3 koji ima udubljenje i sadrži supstitucije 234A/L235A/M252Y/S254T/T256E/N434A/H435K ali nema C-terminalni ostatak (SEK ID BR: 260, gde X1je A, X2je A; X3je Y, X4je T, X5je E, X6je S, X7je A, X8je V, X9je A, X10je K i X11je odsutan); i C-kraj.
[0353] Aminokiselinska sekvenca prvog polipeptidnog lanca DART G je (SEK ID BR: 277):
[0354] Drugi i peti polipeptidni lanac DART G sadrže, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N- kraj; VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEK ID BR: 54), Kapa CL domen (SEK ID BR: 8) i C-kraj.
[0355] Aminokiselinska sekvenca drugog i petog polipeptidnog lanca DART G je (SEK ID BR: 278):
[0356] Treći polipeptidni lanac DART G sadrži, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj; VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEK ID BR: 49); Domen IgG1 CH1 (SEK ID BR: 10); zglobni region IgG1 (SEK ID BR: 32); IgG1 CH2-CH3 Domen koji nosi ispupčenje, sadrži supstitucije L234A/L235A/M252Y/S254T/T256E i nedostaje mu C-terminalni ostatak (SEK ID BR: 260, gde X1je A, X2je A; X3je I, X4je T, X5je E, X6je V, X7je L, X8je I, X9je N, X10je H i X11je odsutan); intervenirajući linker peptid (GGGSGGGSGGG (SEK ID BR: 262)); VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da veže PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); intervenirajući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15)); Domen za Promovisanje Heterodimera (E-zavojnica) (EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEK ID BR: 21)); i C-kraj.
[0357] Aminokiselinska sekvenca trećeg polipeptidnog lanca DART G je (SEK ID BR: 279):
[0358] Četvrti polipeptidni lanac DART G sadrži, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj; VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); intervenirajući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15)); Domen za Promovisanje Heterodimera (K-zavojnica) (KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE (SEK ID BR: 22) i C-kraj.
[0359] Aminokiselinska sekvenca četvrtog polipeptidnog lanca DART G je (SEK ID BR: 280):
4
E. Primerno Trolančano Dijatelo Koje Sadrži Fc Region i E/K-zavojnice
[0360] Predmetno otkriće dodatno obezbeđuje trolančana PD-1 X LAG-3 bispecifična dijatela koja sadrže Fc-region, Domene E/K-zavojnica za Promovisanje Heterodimera. Generisano je primerno trolan čano PD-1 X LAG-3 bispecifično, dijatelo koje sadrži Fc Region, Domene E/K-zavojnica za Promovisanje Heterodimera označeno kao "DART H". Struktura ovih dijatela koja sadrže Fc Region je detaljno opisana u nastavku. Ovo primerno PD-1 x LAG-3 dijatelo ima za cilj da ilustruje, ali ni na koji način ne ograničava, obim otkrića.
[0361] DART H je bispecifično, trolančano, dijatelo koje sadrži Fc Region i ima jedno mesto vezivanja specifično za PD-1, jedno mesto vezivanja specifično za LAG-3, varijantu IgG1 Fc Regiona koji nosi ispupčenje/udubljenje inženjerisano za smanjeno FcγR vezivanje, i Domene E/K-zavojnica za Promovisanje Heterodimera.
[0362] Prvi polipeptidni lanac DART H sadrži, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj; VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEK ID BR: 49); intervenirajući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15)); Domen za Promovisanje Heterodimera (E-zavojnica) (EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK- EVAALEK (SEK ID BR: 21)); intervenirajući linker (Spejser-Linker 3: GGGDKTHTCPPCP (SEK ID BR: 263)); Domen IgG1 CH2-CH3 koji nosi ispupčenje i sadrži supstitucije L234A/L235A i ima C-terminalni lizinski ostatak (SEK ID BR: 6); i C-kraj.
[0363] Aminokiselinska sekvenca prvog polipeptidnog lanca DART H je (SEK ID BR: 281):
[0364] Drugi polipeptidni lanac DART H sadrži, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N- kraj; VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEK ID BR: 54); intervenirajući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14)); VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); intervenirajući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15)); Domen za Promovisanje Heterodimera (K-zavojnica) (KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE (SEK ID BR: 22)); i C-kraj.
[0365] Aminokiselinska sekvenca drugog polipeptidnog lanca DART H je (SEK ID BR:282):
[0366] Treći polipeptidni lanac DART H sadrži, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj; zglobni region (DKTHTCPPCP (SEK ID BR: 31); IgG1 CH2-CH3 Domen sa udubljenjem, koji sadrži supstitucije L234A/L235A i koji ima C-terminalni ostatak lizina (SEK ID BR: 7); i C-kraj.
[0367] Aminokiselinska sekvenca trećeg polipeptidnog lanca DART H je (SEK ID BR:283):
F. Primer Bispecifičnog Antitela
[0368] Generisano je primerno četvorolančano PD-1 X LAG-3 bispecifično dijatelo označeno kao "BSAB A". Struktura ovog bispecifičnog antitela je detaljno opisana u nastavku. Ovo primerno PD-1 x LAG-3 bispecifično antitelo ima za cilj da ilustruje, ali ni na koji način ne ograničava, obim otkrića.
[0369] BSAB A je bispecifično antitelo koje ima jedno mesto vezivanja specifično za PD-1, jedno mesto vezivanja specifično za LAG-3, varijantu IgG1 Fc Regiona inženjerisanu da smanji vezivanje FcγR i da podstakne kompleksiranje između dva različita polipeptida teškog lanca (videti, na primer, WO 2011/143545).
[0370] Prvi lanac polipeptida BSAB A sadrži, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj; VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); IgG1 CH1 Domen (SEK ID BR: 10); varijantu zglobnog regiona IgG1 koja sadrži supstitucije D221E/P228E (numerisane EU indeksom kao u Kabatu i podvučene u SEK ID BR: 286, dole); varijantu IgG1 CH2-CH3 Domena koji sadrži supstitucije L234A/L235A/L368E (podvučene u SEK ID BR: 286, dole) i nema C-terminalni ostatak; i C-kraj.
[0371] Aminokiselinska sekvenca prvog polipeptidnog lanca BSAB A je (SEK ID BR: 286):
[0372] Drugi polipeptidni lanac BSAB sadrži, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj; VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153); Kapa CL domen (SEK ID BR: 8) i C-kraj.
[0373] Aminokiselinska sekvenca drugog polipeptidnog lanca BSAB je (SEK ID BR: 287):
[0374] Treći polipeptidni lanac BSAB A sadrži, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N-kraj ; VH Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEK ID BR: 49); Domen IgG1 CH1 (SEK ID BR: 10); varijantuu zglobnog regiona IgG1 koji sadrži supstitucije D221R/P228R (podvučene u SEK ID BR: 288, dole); varijantu Domena IgG1 CH2-CH3 koji sadrži supstitucije L234A/L235A/L409R (podvučene u SEK ID BR: 288, dole) i nema C-terminalni ostatak; i C-kraj.
[0375] Aminokiselinska sekvenca trećeg polipeptidnog lanca BSAB A je (SEK ID BR: 288):
[0376] Četvrti polipeptidni lanac BSAB A sadrži, u smeru od N-kraja ka C-kraju: N- kraj; VL Domen monoklonskog antitela sposoban da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEK ID BR: 54); Kapa CL domen (SEK ID BR: 8) i C-kraj.
[0377] Aminokiselinska sekvenca četvrtog polipeptidnog lanca BSAB A je (SEK ID BR: 289):
IX. Referentna Antitela
A. Referentna Anti-Humana PD-1 Antitela
[0378] Da bi se procenili i okarakterisali novi anti-humani PD-1-vezujući molekuli iz ovog otkrića, primenjena su sledeća referentna antitela: nivolumab (takođe poznato kao 5C4 , BMS-936558, ONO-4538, MDX-1106, ili kao OPDIVO® koje je prodavao Bristol-Myers Squibb), humano IgG4 antitelo ovde označeno kao "PD-1 mAb A;" i pembrolizumab (ranije poznat kao lambrolizumab, takođe poznat kao MK-3475, SCH-900475, a Merck ga je prodavao kao KEYTRUDA®), humanizovano IgG4 antitelo koje je ovde označeno kao "PD-1 mAb B."
1. Nivolumab („PD-1 mAb A“)
[0379] Aminokiselinska sekvenca Varijabilnog Domena Teškog Lanca od PD-1 mAb A ima aminokiselinsku sekvencu (SEK ID BR: 64) (CDRHostaci su prikazani podvučeno):
[0380] Aminokiselinska sekvenca Varijabilnog Domena Lakog Lanca PD-1 mAb A ima aminokiselinsku sekvencu (SEK ID BR: 65) (CDRLostaci su prikazani podvučeno):
2. Pembrolizumab ("PD-1 mAb B")
[0381] Aminokiselinska sekvenca Varijabilnog Domena Teškog Lanca PD-1 mAb B ima aminokiselinsku sekvencu (SEK ID BR: 66) (CDRHostaci su prikazani podvučeno):
[0382] Aminokiselinska sekvenca Varijabilnog Domena Lakog Lanca PD-1 mAb B ima aminokiselinsku sekvencu (SEK ID BR: 67) (CDRLostaci su prikazani podvučeno) :
X. Metode Proizvodnje
[0383] Anti-humani PD-1 polipeptid i drugi PD-1 agonisti, antagonisti i modulatori mogu biti proizvedeni od polinukleotida i/ili sekvenci anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15 pomoću metoda poznatih u struci, na primer, sintetički ili rekombinantno. Jedan postupak za proizvodnju takvih peptidnih agonista, antagonista i modulatora uključuje hemijsku sintezu polipeptida, nakon čega sledi tretman u oksidacionim uslovima pogodnim za dobijanje nativne konformacije, odnosno tačnog povezivanja disulfidnim vezama. To se može postići korišćenjem metodologija koje su dobro poznate stručnjacima (vidi, npr., Kelley, R.F. et al. (1990) U: GENETIC ENGINEERING PRINCIPLES AND
METHODS, Setlow, J.K. Ed., Plenum Press, N.Y., vol. 12, pp 1-19; Stewart, J.M et al. (1984) SOLID PHASE PEPTIDE SYNTHESIS, Pierce Chemical Co., Rockford, IL; vidi takođe United States Patents Nos. 4,105,603; 3,972,859; 3,842,067; i 3,862,925).
[0384] Polipeptidi iz ovog otkrića se mogu pogodno pripremiti sintezom peptida u čvrstoj fazi (Merrifield, B. (1986) "Solid Phase Synthesis", Science 232(4748):341-347; Houghten, R.A. (1985) "General Method For The Rapid Solid-Phase Synthesis Of Large Numbers Of Peptides: Specificity Of Antigen-Antibody Interaction At The Level Of Individual Amino Acids," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 82(15):5131-5135; Ganesan, A. (2006) "Solid-Phase Synthesis In The Twenty-First Century," Mini Rev. Med. Chem. 6(1):3-10).
[0385] U još jednoj alternativi, potpuno humana antitela koja imaju jedan ili vi še CDR-a od PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD -1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15, ili koji se takmiče sa PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15, za vezivanje za humani PD-1 ili njiihov rastvorljivi oblik se može dobiti upotrebom komercijalno dostupnih miševa koji su inženjerisani da eksprimiraju specifične proteine humanog imunoglobulina. Transgene životinje koje su namenjene da proizvode poželjniji (npr. potpuno humana antitela) ili snažniji imuni odgovor se takođe mogu koristiti za generisanje humanizovanih ili humanih antitela. Primeri takve tehnologije su XENOMOUSE<TM>(Abgenix, Inc., Fremont, CA) i HUMAB-MOUSE® and TC MOUSETM (oba iz Medarex, Inc., Princeton, NJ).
[0386] Alternativno, antitela mogu biti dobijena rekombinantno i eksprimirana bilo kojim postupkom poznatim u tehnici. Antitela se mogu dobiti rekombinantno tako što će prvo biti izolovana antitela dobijena od životinja domaćina, biti dobijena genska sekvenca a zatim biti upotrebljena genska sekvenca za ekspresiju antitela rekombinantno u ćelijama domaćina (npr. CHO ćelije). Drugi metod koji se može primeniti je da se sekvence antitela eksprimiraju u biljkama (npr. duvan) ili transgenom mleku. Otkriveni su pogodni postupci za ekspresiju antitela rekombinantno u biljkama ili mleku (videti, na primer, Peeters et al. (2001) "Production Of Antibodies And Antibody Fragments In Plants," Vaccine 19:2756; Lonberg, N. et al. (1995) "Human Antibodies From Transgenic Mice," Int. Rev. Immunol 13:65-93; i Pollock et al. (1999) "Transgenic Milk As A Method For The Production Of Recombinant Antibodies," J. Immunol Methods 231:147-157). Pogodne metode za dobijanje derivata antitela, npr. humanizovanih, jednolan čanih itd. su poznate u tehnici. U drugoj alternativi, antitela se mogu dobiti rekombinantno tehnologijom prikazivanja faga (videti, na primer, U.S. Patente Br. 5,565,332; 5,580,717; 5,733,743; 6,265,150; i Winter, G. et al. (1994) "Making Antibodies By Phage Display Technology," Annu. Rev. Immunol.12.433-455).
[0387] Antitela ili proteini od interesa mogu biti podvrgnuti sekvenciranju Edmanovom degradacijom, što je dobro poznato stručnjacima. Informacije o peptidu generisane masenom spektrometrijom ili Edmanovom degradacijom se mogu koristiti za dizajn proba ili prajmera koji se koriste za kloniranje proteina od interesa.
[0388] Alternativni postupak kloniranja proteina od interesa je ispiranjem (eng. panning) korišćenjem prečišćenog PD-1 ili njegovih delova za ćelije koje eksprimiraju antitelo ili protein od interesa koji poseduju jedan ili više CDR-a PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15, ili antitela koja se takmiče sa PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10 , PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15, za vezivanje za humani PD-1. Postupak ispiranja (eng.
panning) se može sprovesti dobijanjem biblioteke cDNA iz tkiva ili ć elija koje eksprimiraju PD-1, prekomernim eksprimiranjem cDNA u drugom tipu ć elija i skriningom transfektovanih ć elija drugog ć elijskog tipa za specifično vezivanje za PD-1 u prisustvu ili odsustvu PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15. Detaljni opisi metoda koje se koriste za kloniranje gena sisara koji kodiraju proteine na površini ć elije ispiranjem (eng. panning) se mogu na ć i u tehnici (vidi, na primer, Aruffo, A. et al. (1987) "Molecular Cloning Of A CD28 cDNA By A High-Efficiency COS Cell Expression System," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 84:8573-8577 i Stephan, J. et al. (1999) "Selective Cloning Of Cell Surface Proteins Involved In Organ Development: Epithelial Glycoprotein Is Involved In Normal Epithelial Differentiation," Endocrinol. 140:5841-5854).
[0389] Vektori koji sadrže polinukleotide od interesa se mogu uvesti u ćeliju domaćina na bilo koji od brojnih odgovarajućih načina, uključujući elektroporaciju, transfekciju primenom kalcijum-hlorida, rubidijum-hlorida, kalcijum-fosfata, DEAE-dekstrana ili drugih supstanci; bombardovanje mikroprojektima; lipofekciju; i infekciju (na primer, kada je vektor infektivni agens kao što je virus vakcinije). Izbor uvođenja vektora ili polinukleotida često zavisi od karakteristika ćelije domaćina.
[0390] Bilo koja ćelija domaćin koja je sposobna da prekomerno eksprimira heterologne DNK se može koristiti u svrhu izolovanja gena koji kodiraju antitelo, polipeptid ili protein od interesa. Neograni čavajući primeri pogodnih ćelija domaćina sisara uključuju, ali nisu ograničeni na, COS, HeLa i CHO ćelije. Poželjno, ćelije domaćini eksprimiraju cDNK na oko 5 puta višem nivou, još poželjnije 10 puta višem, još poželjnije 20 puta višem od nivoa odgovarajućeg endogenog antitela ili proteina od interesa, ako su prisutni, u ćeliji domaćinu. Skrining ćelija domaćina za specifično vezivanje za PD-1 se vrši imunoanalizom ili FACS. ćelija koja prekomerno eksprimira antitelo ili protein od interesa može biti identifikovana.
[0391] Otkriće uključuje polipeptide koji sadrže aminokiselinsku sekvencu antitela iz ovog otkrića. Polipeptidi iz ovog otkrića se mogu dobiti postupcima poznatim u struci. Polipeptidi se mogu proizvesti proteolitičkom ili drugom razgradnjom antitela, rekombinantnim metodama (tj. pojedina čni ili fuzioni polipeptidi) kao što je gore opisano ili hemijskom sintezom. Polipeptidi antitela, naro čito kraći polipeptidi do oko 50 aminokiselina, prikladno se dobijaju hemijskom sintezom. Postupci hemijske sinteze su poznati u struci i dostupni su na tržištu. Na primer, antihumani PD-1 polipeptid se može proizvesti automatizovanim sintetizatorom polipeptida metodom čvrste faze.
[0392] Otkriće uključuje varijante PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15 antitela i njihove polipeptidne fragmente koji se vezuju za PD-1, uključujući funkcionalno ekvivalentna antitela i fuzione polipeptide koji ne uti ču značajno na svojstva takvih molekula, kao i varijante koje imaju pojačanu ili smanjenu aktivnost. Modifikacija polipeptida je rutinska praksa u struci i ovde je nije potrebno detaljno opisivati. Primeri modifikovanih polipeptida uklju čuju polipeptide sa konzervativnim supstitucijama aminokiselinskih ostataka, jednom ili vi še delecija ili adicija aminokiselina koje ne pogoršavaju značajno funkcionalnu aktivnost ili upotrebu hemijskih analoga. Ostaci aminokiselina koji se mogu konzervativno supstituisati, uključuju, ali nisu ograničeni na: glicin/alanin; serin/reonin; valin/izoleucin/leucin; asparagin/glutamin; asparaginsku kiselinu/glutaminsku kiselinu; lizin/arginin; i fenilalanin/tirozin. Ovi polipeptidi takođe uključuju glikozilirane i ne-glikozilirane polipeptide, kao i polipeptide sa drugim post-translacionim modifikacijama, kao što su, na primer, glikozilacija sa različitim šećerima, acetilacija i fosforilacija. Poželjno je da supstitucije aminokiselina budu konzervativne, tj. Da supstituisane aminokiseline imaju slična hemijska svojstva kao originalna aminokiselina. Takve konzervativne supstitucije su poznate u tehnici, a primeri su dati gore. Modifikacije aminokiselina se mogu kretati od promene ili modifikacije jedne ili vi še aminokiselina do potpunog redizajna regiona, kao što je Varijabilni Domen. Promene u Varijabilnom Domenu mogu promeniti afinitet i/ili specifičnost vezivanja. Ostale metode modifikacije uključuju upotrebu tehnika spajanja poznatih u tehnici, uključujući, ali ne ograničavajući se na, enzimska sredstva, oksidativnu supstituciju i helaciju. Modifikacije se mogu koristiti, na primer, za vezivanje oznaka za imunoesej, kao što je vezivanje radioaktivnih delova za radioimunoesej. Modifikovani polipeptidi su napravljeni primenom ustaljenih postupaka u struci i mogu biti skriningovani pomoću standardnih testova poznatih u struci.
[0393] Otkriće obuhvata fuzione proteine koji sadrže jedan ili više polipeptida ili PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15 antitela iz ovog otkrića. U jednom slučaju, obezbeđen je fuzioni polipeptid koji sadrži laki lanac, teški lanac ili i laki i teški lanac. U drugom slučaju, fuzioni polipeptid sadrži heterologni konstantni region imunoglobulina. U drugom slučaju, fuzijski polipeptid sadrži Varijabilni Domen Lakog Lanca i Varijabilni Domen Te škog Lanca antitela proizvedenog iz javno deponovanih hibridoma. Za potrebe ovog otkrića, fuzioni protein antitela sadrži jedan ili više polipeptidnih domena koji se specifično vezuju za PD-1 i drugu aminokiselinsku sekvencu za koju nije vezan u nativnom molekulu, na primer, heterologna sekvenca ili homologna sekvenca iz drugog regiona.
XI. Upotrebe PD-1-Vezujućih Molekula iz Predstavljenog Otkrića
[0394] Ovo otkriće obuhvata kompozicije, uključujući farmaceutske kompozicije, koje sadrže PD-1-vezujuće molekule iz ovog otkrića (npr. anti-PD-1 antitela, anti-PD-1 bispecifična antitela, itd.), polipeptidi izvedeni iz takvih molekula, polinukleotidi koji sadrže sekvence koje kodiraju takve molekule ili polipeptide i druga sredstva kao što je ovde opisano.
A. Terapijske upotrebe
[0395] Kao što je gore razmatrano, PD-1 igra važnu ulogu u negativnoj regulaciji T-ćelijske proliferacije, funkcije i homeostaze. Određeni molekuli koji se vezuju za PD-1 iz ovog otkrića imaju sposobnost da inhibiraju funkciju PD-1 i tako preokrenu inhibiciju imunolo škog sistema posredovanog sa PD-1. Kao takvi, PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 i PD-1 mAb 15, njihovi humanizovani derivati i molekuli koji sadrže njihove PD-1-vezujuće fragmente (npr. bispecifična antitela, bispecifična dijatela (uključujući, ali ne ograničavajući se na, DART-A, DART-B, DART-C, DART-D, DART-E, DART-F, DART-G, DART-H, DART-I i DART-J), itd.) ili koja se takmiče za vezivanje sa takvim antitelima, mogu se koristiti za blokiranje inhibicije imunološkog sistema posredovane sa PD-1, i time promovišu aktivaciju imunološkog sistema.
[0396] Takvi bispecifični PD-1-vezujući molekuli iz ovog otkrića koji se vezuju za PD-1 i drugi molekul uključen u regulisanje imunološke kontrolne tačke prisutan na površini ćelije (npr. LAG-3) ojačavaju imunološki sistem blokiranjem inhibicije imunološkog sistema posredovane sa PD-1 i takvim molekulima imunološke kontrolne tačke. Dakle, takvi PD-1-vezujući molekuli iz ovog otkrića su korisni za pojačavanje imunog odgovora subjekta (npr. imunološkog odgovora posredovanog T-ćelijama). Naročito, takvi PD-1-vezujući molekuli iz ovog otkrića se mogu koristiti za lečenje bilo koje bolesti ili stanja povezanih sa nepoželjno oslabljenim imunološkim sistemom, uključujući rak i bolesti povezane sa prisustvom patogena (npr. bakterijske, gljivične, virusne ili protozojske infekcije).
[0397] Karcinomi koji se mogu lečiti takvim PD-1-vezujućim molekulima iz ovog otkrića uključuju karcinome koji se karakterišu prisustvom ćelije karcinoma odabrane iz grupe koju čine ćelije: tumora nadbubrežne žlezde,-a raka povezanog sa AIDS, alveolarnog sarkoma mekih tkiva, astrocitnog tumora, raka bešike, raka kostiju, raka mozga i kičmene moždine, metastatskog tumora mozga, raka dojke, tumora karotidnog tela, raka grlića materice, hondro-sarkoma, hordoma, karcinoma hromofobnih bubrežnih ćelija, karcinoma bistrih ćelija, raka debelog creva, kolorektalnog karcinoma, benignog fibroznog histiocitoma kože, desmoplastičnog tumora malih okruglih ć elija, ependimoma, Juingovog tumora, ekstraskeletnog miksoidnog hondrosarkoma, nesavršene osteogeneze, fibrozne displazije kosti, raka žučne kese ili žučnog kanala, raka želuca, gestacijske trofoblastne bolesti, tumora zametnih ć elija, raka glave i vrata, hepatocelularnog karcinoma, tumora otočnih ć elija, Kapošijevog sarkoma, raka bubrega, leukemije, lipom/benignog lipomatoznog tumora, liposarkoma/malignog lipomatoznog tumora, raka jetre, limfoma, raka pluć a, meduloblastoma, melanoma, meningioma, multiple endokrine neoplazije, multiplog mijeloma, mijelodisplastični sindrom, neuroblastoma, neuroendokrinog tumora, raka jajnika, raka pankreasa, papilarnog karcinoma štitaste žlezde, paratiroidnog tumora, pedijatrijskog raka, tumora ovojnice perifernog nerva, feohromocitoma, pituitarnog tumora, raka prostate, uvealnog melanoma, retkog hematološkog poremeć aja, metastatskog raka bubrega, rabdoidnog tumora, rabdomisarkoma, sarkoma, raka kože, sarkoma mekog tkiva, raka skvamoznih ć elija, raka želuca, sinovijalnog sarkoma, raka testisa, karcinoma timusa, timoma, metastatskog karcinoma štitaste žlezde i raka materice.
[0398] Takvi PD-1-vezujući molekuli iz ovog otkrića se naročito mogu koristiti u lečenju karcinoma debelog creva, hepatocelularnog karcinoma, glioma, raka bubrega, karcinoma dojke, multiplog mijeloma, karcinoma bešike, neuroblastoma; sarkoma, ne-Hočkinovog limfoma, karcinoma pluća ne-malih ćelija, raka jajnika, raka pankreasa i rektuma.
[0399] Bolesti povezane sa patogenom koje se mogu lečiti takvim PD-1-vezujućim molekulima iz ovog otkrića uključuju hronične virusne, bakterijske, gljivične i parazitske infekcije. Hronične infekcije koje mogu lečiti PD-1-vezujući molekuli iz ovog otkrića uključuju Epstein Barr virus, virus Hepatitisa A (HAV); Virus Hepatitisa B (HBV); Virus Hepatitisa C (HCV); viruse herpesa (npr. HSV-1, HSV-2, HHV-6, CMV), virus humane imunodeficijencije (HIV), Virus Vezikularnog Stomatitisa (VSV), Bacili, Citrobacter, Cholera, Diphtheria, Enterobacter, Gonococci, Helicobacter pylori, Klebsiella, Legionella, Meningococci, mycobacteria, Pseudomonas, Pneumonococci, rickettsia bacteria, Salmonella, Serratia, Staphylococci, Streptococci, Tetanus, Aspergillus (fumigatus, niger, etc.), Blastomyces dermatitidis, Candida (albicans, krusei, glabrata, tropicalis, etc.), Cryptococcus neoformans, Genus Mucorales (mucor, absidia, rhizopus), Sporothrix schenkii, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis, Histoplasma capsulatum, Leptospirosis, Borrelia burgdorferi, helminth parasite (ankilozija, trakasti crvi, metilji, ravne gliste (npr. Schistosomia), Giardia lambia, trichinella, Dientamoeba Fragilis, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, i Leishmania donovani.
[0400] Takvi PD-1-vezujuć i molekuli iz otkri ć a se mogu kombinovati sa drugim agensima protiv raka, posebno molekulima koji se specifično vezuju za antigen karcinoma (npr. antitela, dijatela). Terapije protiv raka koje se mogu kombinovati sa molekulima koji se vezuju za PD-1, iz otkrić a uključuju molekule koji se specifično vezuju za još jedan antigen karcinoma, uključuju ć i: 19.9 kao što je nađeno u raku debelog creva, mucine raka želuca; 4.2; A33 (antigen kolorektalnog karcinoma; Almqvist, Y. 2006, NuclMed Biol. Nov; 33(8):991-998); ADAM-9 (U.S. Patentna Publikacija Br. 2006/0172350; PCT Publikacija Br. WO 06/084075); AH6 kao što je nađeno kod karcinoma želuca; ALCAM (PCT Publikacija Br. WO 03/093443); APO-1 (maligni humani limfocitni antigen) (Trauth et al. (1989) "Monoclonal Antibody-Mediated Tumor Regression By Induction Of Apoptosis," Science 245:301-304); B1 (Egloff, A.M. et al. 2006, Cancer Res. 66(1):6-9); B7-H3 (Collins, M. et al. (2005) "The B7 Family Of Immune-Regulatory Ligands," Genome Biol. 6:223.1-223.7). Chapoval, A. et al. (2001) "B7-H3: A Costimulatory Molecule For T Cell Activation and IFN-γ Production," Nature Immunol. 2:269-274; Sun, M. et al. (2002) "Characterization of Mouse and Human B7-H3 Genes," J. Immunol. 168:6294-6297); BAGE (Bodey, B. 2002 Expert Opin Biol Ther.
2(6):577-84); beta-catenin (Prange W. et al. 2003 J Pathol. 201(2):250-9); blood group ALe<b>/Le<y>nađena u kolonskom adenokarcinomu; Burkitt’s lymphoma antigen-38.13, C14 nađen u kolonskom adenokarcinomu; CA125 (antigen karcinoma jajnih ćelija) (Bast, R.C. Jr. et al. 2005 Int J Gynecol Cancer 15 Suppl 3:274-81 ; Yu et al. (1991) "Coexpression Of Different Antigenic Markers On Moieties That Bear CA 125 Determinants," Cancer Res. 51(2):468-475); Carboxypeptidase M (United States Patent Publication No.
2006/0166291); CD5 (Calin, G.A. et al. 2006 Semin Oncol. 33(2):167-73; CD19 (Ghetie et al. (1994) "Anti-CD19 Inhibits The Growth Of Human B-Cell Tumor Lines In Vitro And Of Daudi Cells In SCID Mice By InducingCell Cycle Arrest," Blood 83:1329-1336; Troussard, X. et al. 1998 Hematol Cell Ther. 40(4): 139-48); CD20 (Reff et al. (1994) "Depletion Of B Cells In Vivo By A Chimeric Mouse Human Monoclonal Antibody To CD20," Blood 83:435-445; Thomas, D.A. et al. 2006 Hematol Oncol Clin North Am. 20(5):1125-36); CD22 (Kreitman, R.J. 2006 AAPS J. 18;8(3):E532-51); CD23 (Rosati, S. et al. 2005 Curr Top Microbiol Immunol. 5;294:91-107); CD25 (Troussard, X. et al. 1998 Hematol Cell Ther. 40(4):139-48); CD27 (Bataille, R. 2006 Haematologica 91(9):1234-40); CD28 (Bataille, R. 2006 Haematologica 91(9):1234-40); CD33 (Sgouros et al. (1993) "Modeling And Dosimetry Of Monoclonal Antibody M195 (Anti-CD33) In Acute Myelogenous Leukemia, " J. Nucl. Med. 34:422-430); CD36 (Ge, Y. 2005 Lab Hematol. 11(1):31-7); CD40/CD154 (Messmer, D. et al. 2005 Ann NY Acad Sci. 1062:51-60); CD45 (Jurcic, J.G. 2005 Curr Oncol Rep. 7(5):339-46); CD56 (Bataille, R. 2006 Haematologica 91(9):1234-40); CD46 (United States Patent No.
7,148,038; PCT Publication No. WO 03/032814); CD52 (Eketorp, S.S. et al. (2014) "Alemtuzumab (Anti-CD52 Monoclonal Antibody) As Single-Agent Therapy In Patients With Relapsed/Refractory Chronic Lymphocytic Leukaemia (CLL)-A Single Region Experience On Consecutive Patients," Ann Hematol.
93(10):1725-1733; Suresh, T. et al. (2014) "New Antibody Approaches To Lymphoma Therapy," J. Hematol. Oncol. 7:58; Hoelzer, D. (2013) "Targeted Therapy With Monoclonal Antibodies In Acute Lymphoblastic Leukemia," Curr. Opin. Oncol. 25(6):701-706); CD56 (Bataille, R. 2006 Haematologica 91(9):1234-40);
CD79a/CD79b (Troussard, X. et al. 1998 Hematol Cell Ther. 40(4):139-48; Chu, P.G. et al. 2001 Appl Immunohistochem Mol Morphol. 9(2):97-106); CD103 (Troussard, X. et al. 1998 Hematol Cell Ther.
40(4):139-48); CD317 (Kawai, S. et al. (2008) "Interferon-A Enhances CD317 Expression And The Antitumor Activity Of Anti-CD317 Monoclonal Antibody In Renal Cell Carcinoma Xenograft Models," Cancer Science 99(12):2461-2466; Wang, W. et al. (2009) HM1.24 (CD317) Is A Novel Target Against Lung Cancer For Immunotherapy Using Anti-HM1.24 Antibody," Cancer Immunology, Immunotherapy 58(6):967-976; Wang, W. et al. (2009) "Chimeric And Humanized Anti-HM1.24 Antibodies Mediate Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity Against Lung Cancer Cells. Lung Cancer," 63(1):23-31; Sayeed, A. et al. (2013) "Aberrant Regulation Of The BST2 (Tetherin) Promoter Enhances Cell Proliferation And Apoptosis Evasion In High Grade Breast Cancer Cells," PLoS ONE 8(6)e67191, pp. 1-10); CDK4 (Lee, Y.M. et al. 2006 Cell Cycle 5(18):2110-4); CEA (carcinoembryonic antigen; Foon et al. (1995) "Immune Response To The Carcinoembryonic Antigen In Patients Treated With An Anti-Idiotype Antibody Vaccine," J. Clin. Invest. (1):334-42); Mathelin, C. 2006 Gynecol Obstet Fertil. 34(7-8):638-46; Tellez-Avila, F.I. et al. 2005 Rev Invest Clin. 57(6):814-9); CEACAM9 /CEACAM6 (Zheng, C. et al. (2011) "A Novel Anti-CEACAM5 Monoclonal Antibody, CC4, Suppresses Colorectal Tumor Growth and Enhances NK Cells-Mediated Tumor Immunity," PLoS One 6(6):e21146, pp. 1-11); CO17-1A (Ragnhammar et al. (1993) "Effect Of Monoclonal Antibody 17-1A And GM-CSF In Patients With Advanced Colorectal Carcinoma - Long-Lasting, Complete Remissions Can Be Induced, " Int. J. Cancer 53:751-758); CO-43 (krvna grupa Le b ); CO-514 (krvna grupa Le a ) kako je nađen u adenokarcinomu; CTA-1; CTLA-4 (Peggs, K.S. et al. 2006 Curr Opin Immunol. 18(2):206-13);
Cytokeratin 8 (PCT Publication No. WO 03/024191); D1.1; D 1 56-22; DR5 (Abdulghani, J. et al. (2010) "TRAIL Receptor Signaling And Therapeutics," Expert Opin. Ther. Targets 14(10): 1091-1108; Andera, L.
1
(2009) "Signaling Activated By The Death Receptors Of The TNFR Family," Biomed. Pap. Med. Fac. Univ. Palacky Olomouc Czech. Repub. 153(3): 173-180; Carlo-Stella, C. et al. (2007) "Targeting TRAIL Agonistic Receptors for Cancer Therapy," Clin, Cancer 13(8):2313-2317; Chaudhari, B.R. et al. (2006) "Following the TRAIL to Apoptosis," Immunologic Res. 35(3):249-262); E 1 series (blood group B) kao što je nađeno u kanceru pankreasa; EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor; Adenis, A. et al. 2003 Bull Cancer. 90 Spec No:S228-32); Ephrin receptori (a posebno EphA2 (United States Patent No. 7,569,672; PCT Publication No. WO 06/084226); Erb (ErbB1; ErbB3; ErbB4; Zhou, H. et al. 2002 Oncogene 21(57):8732-8740; Rimon, E. et al. 2004 Int J Oncol. 24(5): 1325-1338); GAGE (GAGE-1; GAGE-2; Akcakanat, A. et al. 2006 Int J Cancer.
118(1): 123-128); GD2/GD3/GM2 (Livingston, P.O. et al. 2005 Cancer Immunol Immunother. 54(10):1018-1025); gangliozid GD2 (GD2; Saleh et al. (1993) "Generation Of A Human Anti-Idiotypic Antibody That Mimics The GD2 Antigen, " J.Immunol., 151, 3390-3398); gangliozid GD3 (GD3; Shitara et al. (1993) "A Mouse/Human Chimeric Anti-(Ganglioside GD3) Antibody With Enhanced Antitumor Activities," Cancer Immunol. Immunother. 36:373-380); gangliozid GM2 (GM2; Livingston et al. (1994) "Improved Survival In Stage III Melanoma Patients With GM2 Antibodies: A Randomized Trial Of Adjuvant Vaccination With GM2 Ganglioside," J. Clin. Oncol. 12:1036-1044); gangliozid GM3 (GM3; Hoon et al. (1993) "Molecular Cloning Of A Human Monoclonal Antibody Reactive To Ganglioside GM3 Antigen On Human Cancers," Cancer Res.
53:5244-5250); GICA 19-9 (Herlyn et al. (1982) "Monoclonal Antibody Detection Of A Circulating Tumor-Associated Antigen. I. Presence Of Antigen In Sera Of Patients With Colorectal, Gastric, And Pancreatic Carcinoma, " J. Clin. Immunol. 2:135-140); gp100 (Lotem, M. et al. 2006 J Immunother. 29(6):616-27);
Gp37 (human leukemia T cell antigen; Bhattacharya-Chatterjee et al. (1988) "Idiotype Vaccines Against Human T Cell Leukemia. II. Generation And Characterization Of A Monoclonal Idiotype Cascade (Abl, Ab2, and Ab3), " J. Immunol. 141:1398-1403); gp75 (melanoma antigen; Vijayasardahl et al. (1990) "The Melanoma Antigen Gp75 Is The Human Homologue Of The Mouse B (Brown) Locus Gene Product, " J. Exp. Med. 171(4): 1375-1380); gpA33 (Heath, J.K. et al. (1997) "The Human A33 Antigen Is A Transmembrane Glycoprotein And A Novel Member Of The Immunoglobulin Superfamily," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 94(2):469-474; Ritter, G. et al. (1997) "Characterization Of Posttranslational Modifications Of Human A33 Antigen, A Novel Palmitoylated Surface Glycoprotein Of Human Gastrointestinal Epithelium," Biochem. Biophys. Res. Commun. 236(3):682-686; Wong, N.A. et al. (2006) "EpCAM and gpA33 Are Markers Of Barrett’s Metaplasia," J. Clin. Pathol. 59(3):260-263); HER2 antigen (HER2/neu, p185 HER2 ; Kumar, Pal S et al. 2006 Semin Oncol. 33(4):386-91); HMFG (human milk fat globule antigen; WO1995015171); human papillomavirus-E6/human papillomavirus-E7 (DiMaio, D. et al. 2006 Adv Virus Res. 66:125-59; HMW-MAA (high molecular weight antigen melanoma; Natali et al. (1987) "Immunohistochemical Detection Of Antigen In Human Primary And Metastatic Melanomas By The Monoclonal Antibody 140.240 And Its Possible Prognostic Significance, " Cancer 59:55-63; Mittelman et al. (1990) "Active Specific Immunotherapy In Patients With Melanoma. A Clinical Trial With Mouse Antiidiotypic Monoclonal Antibodies Elicited With Syngeneic Anti-High-Molecular-Weight-Melanoma-Associated Antigen Monoclonal Antibodies," J. Clin. Invest. 86:2136-2144); I antigen (differentiation antigen; Feizi (1985) "Demonstration By Monoclonal Antibodies That Carbohydrate Structures Of Glycoproteins And Glycolipids Are Onco-Developmental Antigens," Nature 314:53-57); IL13Ra2 (PCT Publication No. WO 2008/146911; Brown, C.E. et al. (2013) "Glioma IL13Rα2 Is Associated With Mesenchymal Signature Gene Expression And Poor Patient Prognosis," PLoS One. 18;8(10):e77769; Barderas, R. et al. (2012) "High Expression Of IL-13 Receptor A2 In Colorectal Cancer Is Associated With Invasion, Liver Metastasis, And Poor Prognosis," Cancer Res. 72(11):2780-2790; Kasaian, M.T. et al. (2011) "IL-13 Antibodies Influence IL-13 Clearance In Humans By Modulating Scavenger Activity Of IL-13Rα2," J. Immunol. 187(1):561-569; Bozinov, O. et al. (2010) "Decreasing Expression Of The Interleukin-13 Receptor IL-13Ralpha2 In Treated Recurrent Malignant Gliomas," Neurol. Med. Chir. (Tokyo) 50(8):617-621; Fujisawa, T. et al. (2009) "A novel role of interleukin-13 receptor alpha2 in pancreatic cancer invasion and metastasis," Cancer Res. 69(22):8678-8685); Integrin β6 (PCT Publication No. WO 03/087340); JAM-3 (PCT Publication No. WO 06/084078); KID3 (PCT Publication No. WO 05/028498);
KID31 (PCT Publication No. WO 06/076584); KS 1/4 pan-carcinoma antigen (Perez et al. (1989) "Isolation And Characterization Of A cDNA Encoding The Ks1/4 Epithelial Carcinoma Marker," J. Immunol. 142:3662-3667; Möller et al. (1991) "Bi-specific-Monoclonal-Antibody-Directed Lysis Of Ovarian Carcinoma Cells By Activated Human T Lymphocytes," Cancer Immunol. Immunother. 33(4):210-216; Ragupathi, G. 2005 Cancer Treat Res. 123:157-80); L6 i L20 (antigeni humanog karcinoma pluća; Hellstrom et al. (1986) "Monoclonal Mouse Antibodies Raised Against Human Lung Carcinoma," Cancer Res. 46:3917-3923); LEA; LUCA-2 (United States Patent Publication No. 2006/0172349; PCT Publication No. WO 06/083852);
M1:22:25:8; M18; M39; MAGE (MAGE-1; MAGE-3; (Bodey, B. 2002 Expert Opin Biol Ther. 2(6):577-84);
MART (Kounalakis, N. et al. 2005 Curr Oncol Rep. 7(5):377-82; mesothelin (Chang K, and Pastan I. 1996 "Molecular cloning of mesothelin, a differentiation antigen present on mesothelium, mesotheliomas, and ovarian cancers," Proc Natl Acad Sci USA 93:136-40), MUC-1 (Mathelin, C. 2006 Gynecol Obstet Fertil.
34(7-8):638-46); MUM-1 (Castelli, C. et al. 2000 J Cell Physiol. 182(3):323-31); Myl; N-
2
acetilglukozaminiltransferaza (Dennis, J.W. 1999 Biochim Biophys Acta. 6;1473(1):21-34); neoglycoprotein; NS-10 kao što je nađeno u adenokarcinomima; OFA-1; OFA-2; Oncostatin M (Oncostatin Receptor Beta; United States Patent No. 7,572,896; PCT Publication No. WO 06/084092); p15 (Gil, J. et al.
2006 Nat Rev Mol Cell Biol. 7(9):667-77); p97 (melanoma-associated antigen; Estin et al. (1989) "Transfected Mouse Melanoma Lines That Express Various Levels Of Human Melanoma-Associated Antigen p97," J. Natl. Cancer Instit. 81(6):445-454); PEM (polymorphic epithelial mucin; Hilkens et al. (1992) "Cell Membrane-Associated Mucins And Their Adhesion-Modulating Property," Trends in Biochem. Sci. 17:359-363); PEMA (polymorphic epithelial mucin antigen); PIPA (United States Patent No. 7,405,061; PCT Publication No. WO 04/043239); PSA (prostate-specific antigen; Henttu et al. (1989) "cDNA Coding For The Entire Human Prostate Specific Antigen Shows High Homologies To The Human Tissue Kallikrein Genes," Biochem. Biophys. Res. Comm. 10(2):903-910; Israeli et al. (1993) "Molecular Cloning Of A Complementary DNA Encoding A Prostate-Specific Membrane Antigen, " Cancer Res. 53:227-230; Cracco, C.M. et al. 2005 Minerva Urol Nefrol. 57(4):301-11); PSMA (prostate-specific membrane antigen; Ragupathi, G.2005 Cancer Treat Res. 123:157-180); prostatic acid phosphate (Tailor et al. (1990) "Nucleotide Sequence Of Human Prostatic Acid Phosphatase Determined From A Full-Length cDNA Clone," Nucl. Acids Res. 18(16):4928); R24kao što je nađeno u melanomu; ROR1 (United States Patent No. 5,843,749); sfingolipidi; SSEA-1; SSEA-3; SSEA-4; sTn (Holmberg, L.A. 2001 Expert Opin Biol Ther. 1(5):881-91); TCR-izveden peptid iz kutanih T-ćelijskih limfoma (vidi Edelson (1998) "Cutaneous T-Cell Lymphoma: A Model For Selective Immunotherapy, " Cancer J Sci Am. 4:62-71); T5A7nađen u mijeloidnim ćelijama; TAG-72 (Yokota et al. (1992) "Rapid Tumor Penetration Of A Single-Chain Fv And Comparison With Other Immunoglobulin Forms, " Cancer Res.
52:3402-3408); TL5 (blood group A); TNF-receptor (TNF-α receptor, TNF-β receptor; TNF-γ receptor (van Horssen, R. et al. 2006 Oncologist. 11(4):397-408; Gardnerova, M. et al. 2000 Curr Drug Targets. 1(4):327-64); TRA-1-85 (blood group H); Transferin Receptor (United States Patent No. 7,572,895; PCT Publication No. WO 05/121179); 5T4 (TPBG, trophoblast glycoprotein; Boghaert, E.R. et al. (2008) "The Oncofetal Protein, 5T4, Is A Suitable Target For Antibody-Guided Anti-Cancer Chemotherapy With Calicheamicin," Int. J. Oncol. 32(1):221-234; Eisen, T. et al. (2014) "Naptumomab Estafenatox: Targeted Immunotherapy with a Novel Immunotoxin," Curr. Oncol. Rep. 16:370, pp. 1-6); TSTA (tumor-specifičan transplantacioni antigen) kao što su virusno indukovani tumorski antigeni, uključujuć i T-antigen DNK tumorskih virusa i antigen tumorskog virusa omotača RNK, onkofetalni antigen-alfa-fetoprotein kao što je CEA debelog creva, onkofetalni antigen tumora bešike (Hellstrom et al. (1985) "Monoclonal Antibodies To Cell Surface Antigens Shared By Chemically Induced Mouse Bladder Carcinomas," Cancer. Res. 45:2210-2188); VEGF (Pietrantonio, F. et al. (2015) "Bevacizumab-Based Neoadjuvant Chemotherapy For Colorectal Cancer Liver Metastases: Pitfalls And Helpful Tricks In A Review For Clinicians," Crit. Rev. Oncol. Hematol. 95(3):272-281; Grabowski, J.P. (2015) "Current Management Of Ovarian Cancer," Minerva Med. 106(3):151-156; Field, K.M. (2015) "Bevacizumab And Glioblastoma: Scientific Review, Newly Reported Updates, And Ongoing Controversies," Cancer 121(7):997-1007; Suh, D.H. et al. (2015) "Major Clinical Research Advances In Gynecologic Cancer In 2014," J. Gynecol. Oncol. 26(2):156-167; Liu, K.J. et al. (2015) "Bevacizumab In Combination With Anticancer Drugs For Previously Treated Advanced Non-Small Cell Lung Cancer," Tumour Biol. 36(3): 1323-1327; Di Bartolomeo, M. et al. (2015) "Bevacizumab treatment in the elderly patient with metastatic colorectal cancer," Clin. Interv. Aging 10:127-133); VEGF Receptor (O’Dwyer. P.J. 2006 Oncologist. 11(9):992-998); VEP8; VEP9; VIM-D5; i Y hapten, Le<y>kako je nađeno u karcinomu embrionalnih ćelija.
[0401] U određenim slučajevima, takvi PD-1-vezujući molekuli iz otkrića se koriste u kombinaciji sa jednim ili više molekula koji se specifično vezuju za 5T4, B7H3, CD19, CD20, CD51, CD123, DR5, EGFR, EpCam, GD2 , gpA33, HER2, ROR-1, TAG-72, VEGF-A antitelo i/ili VEGFR2.
[0402] Takvi PD-1-vezujući molekuli iz ovog otkrića se mogu kombinovati sa imunogenim sredstvom kao što je vakcina protiv tumora. Takve vakcine mogu sadržati prečišćene tumorske antigene (uključujući rekombinantne proteine, peptide i molekule ugljenih hidrata), autologne ili alogene tumorske ćelije. Opisane su brojne strategije vakcine protiv tumora (vidi, npr, Palena, C., et al., (2006) "Cancer vaccines: preclinical studies and novel strategies," Adv. Cancer Res. 95, 115-145; Mellman, I., et al. (2011) "Cancer immunotherapy comes of age," Nature 480, 480-489; Zhang, X. M. et al. (2008) "The anti-tumor immune response induced by a combination of MAGE-3/MAGE-n-derived peptides," Oncol. Rep. 20, 245-252; Disis, M. L. et al. (2002) "Generation of T-cell immunity to the HER-2/neu protein after active immunization with HER-2/neu peptide-based vaccines," J. Clin. Oncol. 20, 2624-2632; Vermeij, R. et al. (2012) "Potentiation of a p53-SLP vaccine by cyclophosphamide in ovarian cancer: a single-arm phase II study." Int. J. Cancer 131, E670-E680). Takvi PD-1-vezujući molekuli iz otkrića se mogu kombinovati sa hemoterapeutskim režimima. U ovim slučajevima može biti moguće smanjiti dozu primenjenog hemoterapijskog reagensa Mokyr et al. (1998) Cancer Research 58: 5301-5304).
[0403] Takvi PD-1-vezujući molekuli iz ovog otkrića se mogu kombinovati sa drugim imunostimulatornim molekulima kao što su antitela koja aktiviraju imunološku reakciju domaćina da bi se obezbedili povećani nivoi aktivacije T-ćelija. Konkretno, anti-PD-1 antitela, anti-PD-L1 antitela i/ili anti-CTLA-4 antitela su pokazala da deluju na imuni sistem (vidi, npr. del Rio, M-L. et al. (2005) "Antibody-Mediated Signaling Through PD-1 Costimulates T Cells And Enhances CD28-Dependent Proliferation," Eur. J. Immunol 35:3545-3560; Barber, D. L. et al. (2006) "Restoring function in exhausted CD8 T cells during chronic viral infection," Nature 439, 682-687; Iwai, Y. et al. (2002) "Involvement Of PD-L1 On Tumor Cells In The Escape From Host Immune System And Tumor Immunotherapy By PD-L1 Blockade," Proc. Natl Acad. Sci. USA 99, 12293-12297; Leach, D. R., et al., (1996) "Enhancement Of Antitumor Immunity By CTLA-4 Blockade," Science 271, 1734-1736). Dodatni imunostimulatorni molekuli koji se mogu kombinovati sa PD-1-vezujućim molekulima iz otkrića, uključuju antitela na molekule na površini dendritičnih ćelija koja aktiviraju funkciju dendritičnih ćelija (DC) i prezentaciju antigena, anti-CD40 antitela koja mogu da zamene aktivnost pomoćnih T-ćelija i aktiviranje antitela na kostimulatorne molekule T-ćelija kao što su PD-L1, CTLA-4, OX-40 4-1BB i ICOS (videti, na primer, Ito et al. (2000) "Effective Priming Of Cytotoxic T Lymphocyte Precursors By Subcutaneous Administration Of Peptide Antigens In Liposomes Accompanied By Anti-CD40 And Anti-CTLA-4 Antibodies,"Immunobiology 201:527-40; U.S. Pat. No. 5,811,097; Weinberg et al. (2000) "Engagement of the OX-40 Receptor In Vivo Enhances Antitumor Immunity," Immunol 164:2160-2169; Melero et al. (1997) "Monoclonal Antibodies Against The 4-1BB T-Cell Activation Molecule Eradicate Established Tumors," Nature Medicine 3: 682-685; Hutloff et al. (1999) "ICOS Is An Inducible T-Cell Co-Stimulator Structurally And Functionally Related To CD28," Nature 397: 263-266; i Moran, A.E. et al. (2013) "The TNFRs OX40, 4-14BB, and CD40 As Targets For Cancer Immunotherapy," Curr Opin Immunol. 2013 Apr; 25(2):10.1016/j.coi.2013.01.004), i/ili stimulatorne Himerne Antigen Receptore (CAR) koji sadrže domen za vezivanje antigena usmeren protiv antigena bolesti fuzionisan u jedan ili vi še unutarćelijskih signalnih domena različitih kostimulatornih proteinskih receptora (npr. CD28, 4-1BB, ICOS, OX40, itd.) koji slu že za stimulisanje T-ć elija nakon vezivanja antigena (vidi, na primer, Tettamanti, S. et al. (2013) "Targeting Of Acute Myeloid Leukaemia By Cytokine-Induced Killer Cells Redirected With A Novel CD123-Specific Chimeric Antigen Receptor," Br. J. Haematol. 161:389-401; Gill, S. et al. (2014) "Efficacy Against Human Acute Myeloid Leukemia And Myeloablation Of Normal Hematopoiesis In A Mouse Model Using Chimeric Antigen Receptor-Modified T Cells," Blood 123(15): 2343-2354; Mardiros, A. et al. (2013) "T Cells Expressing CD123-Specific Chimeric Antigen Receptors Exhibit Specific Cytolytic Effector Functions And Antitumor Effects Against Human Acute Myeloid Leukemia," Blood 122:3138-3148; Pizzitola, I. et al. (2014) "Chimeric Antigen Receptors Against CD33/CD123 Antigens Efficiently Target Primary Acute Myeloid Leukemia Cells in vivo," Leukemia doi: 10.1038/leu.2014.62).
[0404] Takvi PD-1-vezujuć i molekuli iz ovog otkri ć a se mogu kombinovati sa inhibitornim Himernim Antigen Receptorima (iCAR) da se preusmere ciljni imunoterapijski odgovori. iCARs domen koji vezuje antigen usmeren protiv antigena bolesti fuzionisanog u jedan ili vi še intracelularnih signalnih domena iz različitih receptora inhibitornih proteina (npr. CTLA-4, PD-1, itd.) koji slu že da suzbiju odgovor T-ć elija nakon vezivanja antigena (vidi, npr, Fedorov V.D. (2013) "PD-1-and CTLA-4 BasedInhibitory Chimeric Antigen Receptors (iCARs) Divert Off-Target Immunotherapy Responses," Sci. Tranl. Med. 5:215ra172 doi:10.1126/ scitranslmed. 3006597.
[0405] Naročito, takvi molekuli koji se vezuju za PD-1 iz otkrić a se koriste u kombinaciji sa antitelom protiv CD137, antitelom protiv CTLA-4, antitelom protiv OX40, antitelom protiv LAG-3, antitelom protiv PD-Ll, antitelom protiv TIGIT, antitelom protiv TIM-3 i/ili vakcinom protiv raka.
B. Dijagnostička i Teranostička korist
[0406] Određeni PD-1-vezujući molekuli iz ovog otkrića pokazuju malu ili nikakvu mogućnost da blokiraju vezivanje između PD-1 i PD-1L liganda. Kao takva, antitela PD-1 mAb 2 i PD-1 mAb 4, njihovi humanizovani derivati i molekuli koji sadrže njihove fragmente koji se vezuju za PD-1 (npr. bispecifična antitela, itd.) ili ona koja se takmiče za vezivanje sa takvim antitelima mogu biti detektabilno obele žena (npr. sa radioaktivnim, enzimskim, fluorescentnim, hemiluminescentnim, paramagnetnim, dijamagnetnim, ili drugim grupama za obeležavanje) i koriste se u detekciji PD-1 u uzorcima ili imidžingu PD-1 na ćelijama. S obzirom da takvi molekuli ne utiču na biološku aktivnost PD-1, oni su posebno korisni u metodama određivanja obima, lokacije i promene u ekspresiji PD-1 kod ispitanika (npr. kod ispitanika koji se le če od karcinoma povezanih sa ekspresijom ili ciljanjem na PD-1).
XII. Farmaceutske Kompozicije
[0407] Kompozicije iz ovog otkrića uključuju kompozicije lekova u rinfuzi, korisne u proizvodnji farmaceutskih kompozicija (npr. nečiste ili nesterilne smeše) i farmaceutske kompozicije (tj. kompozicije koje su pogodne za primenu kod subjekta ili pacijenta) koje se mogu koristiti u pripremi jedini čnih
4
dozonih oblika. Takve smeše sadrže profilaktički ili terapeutski efikasnu količinu PD-1-vezujućih molekula iz ovog otkrića ili kombinaciju takvih sredstava i farmaceutski prihvatljivog nosača. Poželjno je da kompozicije iz otkrića sadrže profilaktički ili terapeutski efikasnu količinu PD-1-vezujućih molekula iz ovog otkrića i farmaceutski prihvatljiv nosač. Otkriće naročito obuhvata takve farmaceutske kompozicije u kojima je molekul koji vezuje PD-1: PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD -1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15; humanizovani PD-1 mAb 1; PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD- 1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD- 1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15; PD-1-vezujući fragment bilo kog takvog antitela; ili u kome je PD-1-vezujući molekul bispecifično PD-1 dijatelo (npr. PD-1 x LAG-3 bispecifično dijatelo). Posebno su obuhvaćeni molekuli koji sadrže 3 CDRLi 3 CDRHod PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD -1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15 antitelo; humanizovano PD-1
mAb 1; PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD- 1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15.
[0408] Otkriće takođe uključuje takve farmaceutske kompozicije koje dodatno uključuju drugo terapeutsko antitelo (npr. monoklonsko antitelo specifično za tumor) koje je specifično za određeni antigen raka i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0409] U određenom slučaju, izraz „farmaceutski prihvatljiv“ znači odobren od strane regulatorne agencije Savezne vlade ili vlade države ili naveden u američkoj farmakopeji ili drugoj opšte priznatoj farmakopeji za upotrebu na životinjama, a naročito na ljudima. Izraz "nosač" se odnosi na diluent, adjuvans (npr. Freundov adjuvans (kompletan i nekompletan), ekscipijent, ili nosa č kojim se terapeutik daje. Takvi farmaceutski nosači mogu biti sterilne tečnosti, poput vode i ulja, uključujući ona naftnog, životinjskog, biljnog ili sintetičkog porekla, kao što je ulje kikirikija, sojino ulje, mineralno ulje, sezamovo ulje i slično. Voda je poželjan nosač kada se farmaceutska kompozicija administrira intravenozno. Slani rastvori i vodeni rastvori dekstroze i glicerola se takođe mogu koristiti kao tečni nosači, posebno za injekcione rastvore. Pogodni farmaceutski ekscipijenti, uključuju skrob, glukozu, laktozu, saharozu, želatin, slad, pirinač, brašno, kredu, silikagel, natrijum stearat, glicerol monostearat, talk, natrijum hlorid, sušeno obrano mleko, glicerol, propilen, glikol, vodu, etanol i slično. Kompozicija, po želji, takođe može sadržati manje količine sredstava za vlaženje ili emulgovanje ili pufere. Ove kompozicije mogu biti u obliku rastvora, suspenzija, emulzija, tableta, pilula, kapsula, prahova, formulacija sa produ ženim oslobađanjem i slično.
[0410] Generalno, sastojci kompozicija iz ovog otkrića se isporučuju ili odvojeno ili pomešani zajedno u obliku jedinične doze, na primer, u obliku suvog liofilizovanog praha ili koncentrata bez vode u hermeti čki zatvorenom kontejneru, poput ampule ili kesice, koja ukazuje na količinu aktivnog agensa. Kada se kompozicija administrira infuzijom, može se izdati u bočici za infuziju koja sadrži sterilnu vodu farmaceutske čistoće ili fiziološki rastvor. Kada se kompozicija administrira injekcijom, može se obezbediti ampula sterilne vode za injekcije ili fiziološkog rastvora, tako da se sastojci mogu pomešati pre administracije.
[0411] Kompozicije iz otkrića se mogu formulisati kao neutralni ili oblici soli. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju, ali nisu ograničene na one formirane sa anjonima kao što su oni dobijeni iz hlorovodonične, fosforne, sirć etne, oksalne, vinske kiseline itd., i oni nastali sa katjonima kao što su oni izvedeni iz natrijuma, kalijuma, amonijuma, kalcijuma, hidroksida gvožđa, izopropilamina, trietilamina, 2-etilamino etanola, histidina, prokaina, itd.
[0412] Otkrivanje takođe obezbeđuje farmaceutsko pakovanje ili komplet koji sadrži jedan ili više kontejnera ispunjenih molekulom koji vezuje PD-1 iz ovog otkrić a (i jo š poželjnije, PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15; humanizovani PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12 , PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15 antitelo; PD-1-vezujuć i fragment bilo kog takvog antitela; ili u kome je PD-1-vezujuć i molekul bispecifično PD-1 dijatelo (npr. PD-1 x LAG-3 bispecifično telo). Posebno su obuhvać eni takvi molekuli koji sadrže 3 CDRLs i 3 CDRHs od PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15, samo ili sa farmaceutski prihvatljivim nosačem. Pored toga, jedno ili više drugih profilaktičkih ili terapijskih sredstava korisnih za lečenje bolesti takođe može biti uključeno u farmaceutsko pakovanje ili komplet. Otkrić e takođe obezbeđuje farmaceutsko pakovanje ili komplet koji sadrži jedan ili više kontejnera napunjenih jednim ili više sastojaka farmaceutskih kompozicija iz ovog otkrić a. Uz takve kontejnere mo že se dodati i obaveštenje u obliku koji propisuje vladina agencija koja reguli še proizvodnju, upotrebu ili prodaju farmaceutskih ili bioloških proizvoda, koje odražava odobrenje agencije za proizvodnju, upotrebu ili prodaju za ljudsku administraciju.
[0413] Ovo otkriće pruža komplete koji se mogu koristiti u gore navedenim metodama. Komplet mo že sadržati bilo koji od PD-1-vezujućih molekula iz ovog otkrića. Komplet može dalje da sadrži jedno ili više drugih profilaktičkih i/ili terapijskih sredstava korisnih za lečenje karcinoma, u jednom ili više kontejnera; i/ili komplet može dalje da sadrži jedno ili više citotoksičnih antitela koja vezuju jedan ili više kancerskih antigena povezanih sa rakom. U određenim slučajevima, drugo profilaktičko ili terapijsko sredstvo je hemoterapeutik. U drugim slučajevima, profilaktičko ili terapijsko sredstvo je biološki ili hormonski terapeutik.
XIII. Metode Administracije
[0414] Kompozicije iz ovog otkrića mogu biti obezbeđene za lečenje, profilaksu i ublažavanje jednog ili više simptoma povezanih sa bolešću, poremećajem ili infekcijom administriranjem subjektu efikasne količine fuzionog proteina ili konjugovanog molekula iz otkrića, ili farmaceutske kompozicije koja sadrži fuzioni protein ili konjugovani molekul iz otkrića. U poželjnom aspektu, takve kompozicije su u suštini prečišćene (tj. u suštini su bez supstanci koje ograničavaju njihovo dejstvo ili proizvode neželjene sporedne efekte). U određenom slučaju, subjekat je životinja, poželjno sisar kao što je ne-primat (npr. goveče, konj, mačka, pas, glodar itd.) ili primat (npr. majmun kao što je cynomolgus majmun, čovek itd.). U poželjnom slučaju, subjekat je čovek.
[0415] Poznati su različiti sistemi za isporuku i mogu se koristiti za administriranje kompozicija iz otkri ća, npr. inkapsulacija u lipozome, mikročestice, mikrokapsule, rekombinantne ćelije sposobne da eksprimiraju antitelo ili fuzioni protein, endocitoza posredovana receptorima (vidi npr. Wu et al. (1987) "Receptor-Mediated In Vitro Gene Transformation By A Soluble DNA Carrier System, " J. Biol. Chem. 262:4429-4432), konstrukcija nukleinske kiseline kao dela retroviralnog ili drugog vektora, itd.
[0416] Metode administriranja molekula iz otkrića uključuju, ali nisu ograničene na, parenteralnu administraciju (npr. intradermalno, intramuskularno, intraperitonealno, intravenozno i potko žno), epiduralno i mukozno (npr. intranazalnim i oralnim putem). U konkretnom slučaju, molekuli koji se vezuju za PD-1 iz otkrića se administriraju intramuskularno, intravenozno ili subkutano. Kompozicije se mogu administrirati na bilo koji pogodan način, na primer, infuzijom ili bolus injekcijom, apsorpcijom kroz epitelne ili mukokutane slojeve (npr. oralnu sluznicu, rektalnu i crevnu sluznicu, itd.) i mogu biti administrirane zajedno sa drugim biološki aktivnim agensima. Administracija može biti sistemska ili lokalna. Pored toga, plućna administracija se takođe može primeniti, npr. upotrebom inhalatora ili nebulizatora i formulacija sa aerosolizujućim agensom. Vidi, npr., Američke Patente Br. 6,019,968; 5,985, 320; 5,985,309; 5,934,272; 5,874,064; 5,855,913; 5,290,540; i 4.880.078; i PCT publikacije Br. WO 92/19244; WO 97/32572; WO 97/44013; WO 98/31346; i WO 99/66903.
[0417] Otkriće takođe obezbeđuje da su PD-1-vezujući molekuli iz ovog otkrića upakovani u hermetički zatvorenu posudu kao što je ampula ili vrećica koja ukazuje na količinu molekula. U jednom slučaju, takvi molekuli se isporučuju u obliku suvog sterilisanog liofilizovanog praha ili koncentrata bez vode u hermetički zatvorenoj posudi i mogu se rekonstituisati, na primer, vodom ili fiziolo škim rastvorom do odgovarajuće koncentracije za administraciju subjektu. Poželjno je da se PD-1-vezujući molekuli iz ovog otkrića isporučuju u obliku suvog sterilnog liofilizovanog praha u hermetički zatvorenom kontejneru.
[0418] Liofilizovani PD-1-vezujući molekuli iz ovog otkrića treba da se čuvaju na temperaturi između 2 °C i 8 °C u svom originalnom kontejneru, a molekuli treba da se daju u roku od 12 sati, po mogu ćnosti u roku od 6 sati, u roku od 5 sati, u roku od 3 sata ili u roku od 1 sat nakon rekonstitucije. U alternativnom slučaju, takvi molekuli se isporučuju u tečnom obliku u hermetički zatvorenom kontejneru koji ukazuje na količinu i koncentraciju molekula, fuzionog proteina ili konjugovanog molekula. Poželjno je da se takvi PD-1-vezujući molekuli, u tečnom obliku, isporučuju u hermetički zatvorenom kontejneru.
[0419] Količina kompozicije iz otkrića koja će biti efikasna u lečenju, prevenciji ili ublažavanju jednog ili više simptoma povezanih sa poremećajem može se odrediti standardnim kliničkim tehnikama. Precizna doza koja će se koristiti u formulaciji takođe će zavisiti od načina administracije i ozbiljnosti stanja, i o tome treba odlučiti u skladu sa procenom lekara i okolnostima svakog pacijenta. Efikasne doze se mogu ekstrapolirati iz krivih doza-reakcija izvedenih iz sistema ispitivanja in vitro ili sistema životinjskih modela.
[0420] Kako se ovde koristi, "efikasna količina" farmaceutskog sastava, u jednom slučaju, je količina dovoljna da utiče na korisne ili željene rezultate, uključujući, bez ograničenja, kliničke rezultate kao što su smanjenje simptoma koji proističu iz bolesti, ublažavanje simptoma infekcije (npr. virusno opterećenje, groznica, bol, sepsa, itd.) ili simptoma karcinoma (npr. proliferacija, ćelije karcinoma, prisustvo tumora, metastaze tumora, itd.), čime se popravlja kvalitet života onih koji pate od bolesti, smanjujući dozu drugih lekova potrebnih za lečenje bolesti, pojačavanje efekta drugog leka, na primer ciljanjem i/ili internalizacijom, odlaganje napredovanja bolesti i/ili produžavanje preživljavanja pojedinaca.
[0421] Efikasna količina može biti administrirana u jednoj ili više administracija. Za potrebe ovog otkrića, efikasna količina leka, jedinjenja ili farmaceutske smeše je količina dovoljna da smanji proliferaciju (ili efekat) prisustva virusa i da smanji i/ili odloži razvoj virusne bolesti, bilo direktno ili posredno. U nekim slučajevima, efikasna količina leka, jedinjenja ili farmaceutske kompozicije može ili ne mora biti postignuta u konjunkciji sa drugim lekom, jedinjenjem ili farmaceutskom kompozicijom. Prema tome, „efikasna količina“ se može razmatrati u kontekstu primene jednog ili više hemoterapeutskih sredstava, i može se smatrati da se pojedinačno sredstvo administrira u efikasnoj količini ako se, zajedno sa jednim ili više drugih sredstava, može postići ili se postiže željeni rezultat. Iako se individualne potrebe razlikuju, određivanje optimalnih opsega efikasnih količina svake komponente je u okviru veštine u struci.
[0422] Za PD-1-vezujuće molekule obuhvaćene otkrićem, doza koja se administrira pacijentu se poželjno odredjuje na osnovu telesne težine (kg) subjekta primaoca. Za PD-1-vezujuće molekule obuhvaćene otkrićem, doza koja se administrira pacijentu je obično najmanje oko 0.01 mg/kg, najmanje oko 0.05 mg/kg, najmanje oko 0.1 mg/kg, najmanje oko 0.2 mg/kg, najmanje oko 0.5 mg/kg, najmanje oko 1 mg/kg, najmanje oko 2 mg/kg, najmanje oko 5 mg/kg, najmanje oko 10 mg/kg, najmanje oko 20 mg/kg , najmanje oko 50 mg/kg, najmanje oko 0.1 mg/kg, najmanje oko 1 mg/kg, najmanje oko 3 mg/kg, najmanje oko 5 mg/kg, najmanje oko 10 mg/kg, najmanje oko 30 mg/kg, najmanje oko 50 mg/kg, najmanje oko 75 mg/kg, najmanje oko 100 mg/kg, najmanje oko 125 mg/kg, najmanje oko 150 mg/kg ili više, telesne težine.
[0423] Doziranje i učestalost administracije PD-1-vezujućeg molekula iz ovog otkrića se mogu smanjiti ili izmeniti pojačavanjem pruzimanja i penetracije molekula u tkivo modifikacijama kao što je, na primer, lipidacija.
[0424] Doziranje PD-1-vezujućeg molekula iz otkrića koji se administrira pacijentu se može izračunati za upotrebu kao terapija pojedinačnim agensom. Alternativno, molekul se može koristiti u kombinaciji sa drugim terapijskim kompozicijama, a doza koja se pacijentu administrira je ni ža nego kada se pomenuti molekuli koriste kao terapija pojedinačnim agensom.
[0425] Farmaceutske kompozicije iz otkrića se mogu administrirati lokalno u područje kome je potrebno lečenje; to se može postići, na primer, ne ograničavajući se na, lokalnom infuzijom, injekcijom ili pomoću implantata, pri čemu je navedeni implantat od poroznog, neporoznog ili želatinoznog materijala, uključujući membrane, kao što su sialastične membrane ili vlakna. Poželjno, kada se administrira molekul iz otkrića, mora se voditi računa da se koriste materijali koje molekul ne apsorbuje.
[0426] Kompozicije iz otkrića se mogu isporučiti u vezikuli, naročito lipozomu (vidi Langer (1990) "New Methods Of Drug Delivery," Science 249:1527-1533); Treat et al., u “LIPOSOMES IN THE THERAPY OF INFECTIOUS DISEASE AND CANCER”, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353- 365 (1989); Lopez-Berestein, ibid., str.317-327).
[0427] Kompozicije iz otkrića se mogu isporučivati u sistemu sa kontrolisanim ili odloženim oslobađanjem. Bilo koja tehnika poznata stručnjaku u ovoj oblasti se može koristiti za proizvodnju formulacija sa odloženim oslobađanjem koje sadrže jedan ili više PD-1-vezujućih molekula iz ovog otkrića. Vidi, npr., Američki patent Br. 4,526,938; PCT Publikaciju WO 91/05548; PCT Publikaciju WO96/20698; Ning et al. (1996) "Intratumoral Radioimmunotheraphy Of A Human Colon Cancer Xenograft Using A Sustained-Release Gel," Radiotherapy&Oncology 39:179-189, Song et al. (1995) "Antibody Mediated Lung Targeting Of Long-Circulating Emulsions," PDA Journal of Pharmaceutical Science&Technology 50:372-397; Cleek et al. (1997) "Biodegradable Polymeric Carriers For A bFGF Antibody For Cardiovascular Application, "Pro. Int’1. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854; i Lam et al. (1997) "Microencapsulation Of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody For Local Delivery," Proc. Int’1. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-760. U jednom slučaju, pumpa može biti korišćena u sistemu sa kontrolisanim oslobađanjem (Vidi Langer, supra; Sefton, (1987) "Implantable Pumps," CRC Crit. Rev. Biomed. Eng. 14:201-240; Buchwald et al. (1980) "Long-Term, Continuous Intravenous Heparin Administration By An Implantable Infusion Pump In Ambulatory Patients With Recurrent Venous Thrombosis," Surgery 88:507-516; i Saudek et al. (1989) "A Preliminary Trial Of The Programmable Implantable Medication System For Insulin Delivery," N. Engl. J. Med. 321:574-579). U drugom slučaju, za postizanje kontrolisanog oslobađanja molekula se mogu koristiti polimerni materijali (vidi npr. MEDICAL APPLICATIONS OF CONTROLLED RELEASE, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); CONTROLLED DRUG BIOAVAILABILITY, DRUG PRODUCT DESIGN AND PERFORMANCE, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Levy et al. (1985) "Inhibition Of Calcification Of Bioprosthetic Heart Valves By Local Controlled-Release Diphosphonate, " Science 228:190-192; During et al. (1989) "Controlled Release Of Dopamine From A Polymeric Brain Implant: In Vivo Characterization," Ann. Neurol. 25:351-356; Howard et al. (1989) "Intracerebral Drug Delivery In Rats With Lesion-Induced Memory Deficits, " J. Neurosurg.7(1): 105-112); U.S. Patent No.5,679,377; U.S. Patent No.
5,916,597; U.S. Patent No. 5,912,015; U.S. Patent No. 5,989,463; U.S. Patent No. 5,128,326; PCT Publication No. WO 99/15154; i PCT Publikaciju Br. WO 99/20253). Primeri polimera koji se koriste u formulacijama sa odloženim oslobađanjem uključuju, ali nisu ograničeni na, poli (2-hidroksi etil metakrilat), poli (metilmetakrilat), poli (akrilnu kiselinu), poli (etilen-ko-vinil acetat), poli (metakrilnu kiselinu), poliglikolide (PLG), polianhidride, poli (N-vinil pirolidon), poli (vinil alkohol), poliakrilamid, poli (etilen glikol), polilaktide (PLA), poli (laktid-ko-glikolide) (PLGA) i poliortoestre. Sistem sa kontrolisanim oslobađanjem se može postaviti u blizini terapijske mete (npr. pluć a), zahtevaju ć i tako samo deli ć sistemske doze (vidi, npr., Goodson, in MEDICAL APPLICATIONS OF CONTROLLED RELEASE, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984)). Polimerne kompozicije korisne kao implantati sa kontrolisanim oslobađanjem se mogu koristiti prema Dunn et al. (Vidi US 5,945,155). Ova posebna metoda se zasniva na terapeutskom efektu kontrolisanog oslobađanja bioaktivnog materijala in situ iz polimernog sistema. Implantacija se generalno može dogoditi bilo gde u telu pacijenta kome je potreban terapijski tretman. Mo že se koristiti nepolimerni sistem za kontinuiranu administraciju, pri čemu se ne-polimerni implantat u telu subjekta koristi kao sistem za isporuku leka. Nakon implantacije u telo, organski rastvarač implantata će se rasuti, dispergovati ili isprati iz kompozicije u okolnu tkivnu tečnost, a ne-polimerni materijal će se postepeno koagulisati ili taložiti da bi se formirao čvrsti, mikroporozni matriks (Vidi U.S. 5,888,533).
[0428] Sistemi sa kontrolisanim oslobađanjem su razmatrani u pregledu Langer-a (1990, "New Methods Of Drug Delivery, " Science 249:1527-1533). Bilo koja tehnika poznata stručnjaku u ovoj oblasti se može koristiti za proizvodnju formulacija sa produženim oslobađanjem koje sadrže jedno ili više terapeutskih sredstava iz ovog otkrića. Vidi, npr., U.S. Br. 4,526,938; Međunarodne Publikacije Br. WO91/05548 i WO 96/20698; Ning et al. (1996) "Intratumoral Radioimmuno-theraphy Of A Human Colon Cancer Xenograft Using A Sustained-Release Gel," Radiotherapy&Oncology 39:179-189, Song et al. (1995) "Antibody Mediated Lung Targeting Of Long-Circulating Emulsions, " PDA Journal of Pharmaceutical Science&Technology 50:372-397; Cleek et al. (1997) "Biodegradable Polymeric Carriers For A bFGF Antibody For Cardiovascular Application," Pro. Int’1. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854; i Lam et al. (1997) "Microencapsulation Of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody For Local Delivery," Proc. Int’1. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-760.
[0429] Kada je kompozicija iz otkrića nukleinska kiselina koja kodira PD-1-vezujući molekul iz ovog otkrića, nukleinska kiselina se može primeniti in vivo da pospeši ekspresiju svog kodiranog PD-1-vezujućeg molekula njegovim konstruisanjem kao dela odgovarajućeg ekspresionog vektora nukleinske kiseline i njegovim administriranjem tako da postane intracelularan, npr. upotrebom retrovirusnog vektora (vidi US patent Br. 4,980,286) ili direktnom injekcijom, ili upotrebom bombardovanja mikro česticama (npr. genskim pištoljem; Biolistic, Dupont), ili prevlačenjem lipidima ili receptorima ćelijske površine ili transfekcionim agensima, ili njegovim administriranjem u vezi sa peptidom sli čnim homeoboksu za koji je poznato da ulazi u jezgro (Vidi npr. Joliot et al. (1991) "Antennapedia Homeobox Peptide Regulates Neural Morphogenesis," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:1864-1868), itd. Alternativno, nukleinska kiselina mo že biti uvedena intracelularno i ugrađena u DNK ćelije domaćina za ekspresiju homolognom rekombinacijom.
[0430] Lečenje subjekta terapeutski ili profilaktički efikasnom količinom PD-1-vezujućeg molekula iz ovog otkrića može obuhvatati pojedinačni tretman ili, poželjno, može obuhvatiti seriju tretmana. U poželjnom primeru, subjekt se tretira sa takvim dijatelom jednom nedeljno tokom oko 1 do 10 nedelja, po željno između 2 do 8 nedelja, još poželjnije između oko 3 do 7 nedelja, a još poželjnije oko 4, 5 ili 6 nedelja. Farmaceutske kompozicije iz ovog otkrića se mogu administrirati jednom dnevno, dva puta dnevno ili tri puta dnevno. Alternativno, farmaceutske kompozicije se mogu administrirati jednom nedeljno, dva puta nedeljno, jednom u dve nedelje, jednom mesečno, jednom u šest nedelja, jednom u dva meseca, dva puta godišnje ili jednom godišnje. Takođe će se uvideti da efikasna doza molekula korišćenih za lečenje može da se poveća ili smanji tokom određenog tretmana.
Primeri
[0431] Sledeći primeri ilustruju različite metode za kompozicije u dijagnostičkim ili tretmanskim metodama otkrića. Primeri su namenjeni da ilustruju, ali da ni na koji način ne ograničavaju obim otkrića.
Primer 1
Karakterizacija Anti-Humanih PD-1 Monoklonskih Antitela
[0432] Izolovano je petnaest mišjih monoklonskih antitela koja se mogu specifično vezati i za humani i za cynomolgus majmuna PD-1 i dobila su oznake "PD-1 mAb 1," "PD-1 mAb 2," "PD-1 mAb 3," "PD-1 mAb 4," "PD-1 mAb 5," "PD-1 mAb 6," "PD-1 mAb 7," "PD-1 mAb 8," "PD-1 mAb 9," "PD-1 mAb 10," "PD-1 mAb 11," "PD-1 mAb 12," "PD-1 mAb 13," "PD-1 mAb 14," i "PD-1 mAb 15." Utvrđeno je da se CDR-i ovih antitela razlikuju i dati su gore. Vezivanje za ekstracelularni domen humanog i cinomologus majmuna PD-1 je procenjeno na sledeći način, maxisorb ploče sa 96 bunarčića sa ravnim dnom su prevučene rastvorljivim humanim ili cynomolgus majmuna PD-1 (ekstracelularni domen humanog PD-1 fuzionisan za His tag (shPD-1 His) ili za humani Fc Region (shPD-1 hFc), ili za ekstracelularni domen cynomolgus majmuna PD-1 fuzionisan sa humanim Fc Regionom (scyno-PD1 Fc)) svaki sa 0.5 ili 1 mg/ml, ploče su isprane i inkubirane sa jednim od izolovanih anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15. Za ove studije, anti-PD-1 antitela su kori šćena sa 3, 1.0, 0.3333, 0.1111, 0.0370, 0.0123 ili 0.0041 mg/ml (trostruka serijska razblaženja). Količina antitela vezanog za imobilizovani PD-1 (humani ili cynomolgus majmuna) je procenjena kori šćenjem kozjeg anti-mišjeg IgG-HRP sekundarnog antitela. Svi uzorci su analizirani na čitaču ploča (Victor 2 Vallac, Perkin Elmers). Reprezentativne krive vezivanja za rastvorljivi humani i rastvorljivi cynomolgus PD-1 su prikazane na Slikama 7A-7D, i Slikama 8A-8C respektivno.
[0433] Rezultati ovih testova vezivanja (Slike 7A-7D i Slike 8A-8C) pokazuju da se sva anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15 vezuju i za rastvorljivi humani i za rastvorljivi PD-1 cynomolgus majmuna.
[0434] Da bi se dalje okarakterisala mišja anti-PD-1 antitela, njihova sposobnost blokiranja vezivanja rastvorljivog humanog PD-L1 za rastvorljivi humani PD-1 je procenjena u dva različita testa. U jednom testu je ispitivana sposobnost antitela da blokiraju vezivanje humanog PD-1 za PD-L1 imobilisan na površini. Za ovaj test, svako od antitela na PD-1 PD-1 mAb 1-15 ili referentno anti-PD-1 antitelo (PD-1 mAb A) je pomešano sa shPD-1 His fuzionim proteinom, (na 2.5 µg/mL) i odvojeno je inkubirano sa, biotinom obeleženim, rastvorljivim humanim PD-L1 (ekstracelularni domen PD-L1 kondenzovan sa humanim Fc (sPD-L1)) u količini od 1 µg/ml imobilisanim na pločici prevučenoj streptavidinom. Za ove studije su korišćena anti-PD-1 antitela sa 10, 5.0, 2.5, 1.25, 0.625, 0.3125 ili 0.1563 mg/ml (dvostruka serijska razblaženja). Količina vezivanja shPD-1 His za imobilizovani sPD-L1 je procenjena preko His-Taga koristeći sekundarno antitelo anti-His-Tag-HRP. Svi uzorci su analizirani na čitaču ploča (Victor 2 Wallac, Perkin Elmer). Rezultati ovog eksperimenta su prikazani na Slikama 9A-9D.
[0435] Rezultati ovih testova inhibicije (Slike 9A-9D) pokazuju da su anti-PD-antitela PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 i PD-1 mAb 15, uspela da blokiraju vezivanje rastvornog humanog PD-L1 za rastvorni humani PD-1 u različitom stepenu, dok su PD-1 mAb 2 i PD-1 mAb 4 pokazala malu ili nikavu aktivnost blokiranja u ovom formatu testa.
[0436] U drugom testu sposobnost mišjih anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15 da blokiraju vezivanje PD-1 liganda (tj. humanog PD-L1 ili humanog PD-L2) za PD-1 eksprimiran na povr šini NSO ćelija. Za ovaj test, svako od anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15, ili referentno anti-PD-1 antitelo (PD-1 mAb A ili PD-1 mAb B) je pomešano odvojeno sa biotinilovanim solubilnim humanim PD-L1 (shPD-L1 fuzionim proteinom) ili biotinilovanim solubilnim humanim PD-L2-muIgFc fuzionim proteinom (shPD-L2; Ancell Cat# 573-030), svaki po 0.1 µg/test, i inkubirano sa NSO ćelijama koje eksprimiraju humani PD-1 (∼ 250 000 ćelija/bunarčiću) u puferu za blokiranje (FACS 10% albumin humanog seruma). Za ove studije su korišćena anti-PD-1 antitela pri 4.0, 1.0, 2.5 x 10<-1>, 6.25 x 10<-2>, 1.56 x 10<-2>, 3.90 x 10<-3>, 9.76 x 10<-4>, 2.4 x 10<- 4>, 0.6 x 10<-4>µg/testu (četvorostruka serijska razblaženja). Količina vezivanja shPD-L1 (ili shPD-L2) za površinu NSO ćelija je određena upotrebom PE-konjugovanog sekundarnog antitela Streptavidin pomo ću FACS analize. Utvrđene su vrednosti IC50 za inhibiciju vezivanja PD-1/PD-L1 i data je srednja vrednost uzorka (□) od najmanje dva eksperimenta (osim tamo gde je naznačeno) u Tabeli 6.
[0437] Rezultati testova inhibicije shPD-L1 (Tabela 6) pokazuju da su antitela na PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb. 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 i PD-1 mAb 15 bila u stanju da blokiraju vezivanje humanog PD-L1 za humani PD-1 eksprimiran na površini NSO ćelija. Konkretno, PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 10 i PD-1 mAb 15 su blokirala vezivanje shPD-L1 podjednako dobro ili bolje nego referentna PD-1 antitela (PD-1 mAb A, PD-1 mAb B), dok je PD-1 mAb 8 suštinski bilo ne-blokirajuće u ovom formatu testa. I PD-1 mAb 2 i PD-1 mAb 4 su mogla da blokiraju vezivanje PD-1/PD-L1 u ovom formatu testa.
[0438] Slično tome, anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2 i PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD -1 mAb 7, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, su mogla da blokiraju vezivanje humanog PD-L2 za humani PD-1 eksprimiran na površini NSO ćelija, dok je PD-1 mAb 8 suštinski bilo ne-blokirajuće u ovom formatu testa. Konkretno, PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7 i PD-1 mAb 10 su blokirala vezivanje shPD-L2 isto, ili bolje od referentnog PD-1 antitela (PD-1 mAb A, PD-1 mAb B). PD-1 antitela PD-1 mAb 11 i PD-1 mAb 15 nisu testirana u ovom testu. Rezultati za nekoliko humanizovanih anti-PD-1 antitela, uključujući hPD-1 mAb 15 su dati u nastavku.
Primer 2
Humanizacija i Dalja Karakterizacija
[0439] Varijabilni domeni anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 su humanizovani, kada su identifikovani antigenski epitopi, antitela su dalje deimunizovana da bi se stvorili konačni humanizovani Varijabilni Domeni. Humanizacija PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2 i PD-1 mAb 15 je dala po jedan humanizovani VH Domen i jedan humanizovani VL Domen za svako antitelo koje je ovde označeno kao "hPD-1 mAb 1 VH1," i "hPD-1 mAb 1 VL1;" "hPD-1 mAb 2 VH1," i "hPD-1 mAb 2 VL1;" i "hPD-1 mAb 15 VH1," i "hPD-1 mAb 15 VL1." Humanizacija PD-1 mAb 7 je dala dva humanizovana VH Domena, označena ovde kao "hPD-1 mAb 7 VH1," i "hPD-1 mAb 7 VH2," i tri humanizovana VL Domena, označena ovde kao "hPD-1 mAb 1 VL1," "hPD-1 mAb 7 VL2," i "hPD-1 mAb 7 VL3." Humanizacija PD-1 mAb 9 je dala dva humanizovana VH Domena, označena ovde kao "hPD-1 mAb 9 VH1," i "hPD-1 mAb 9 VH2," dva humanizovana VL Domena, označena ovde kao "hPD-1 mAb 9 VL1," i "hPD-1 mAb 1 VL2." Tamo gde je generisano više humanizovanih Varijabilnih Domena, humanizovani Varijabilni Domeni te škog i lakog lanca određenog anti-PD-1 antitela (npr. PD-1 mAb 7) se mogu koristiti u bilo kojoj kombinaciji, a određene kombinacije humanizovanih lanaca se označavaju pozivanjem na određene VH/VL Domene, na primer, humanizovano antitelo koje sadrži hPD-1 mAb 7 VH1 i hPD-1 mAb 7 VL2 posebno se označava sa "hPD-1 mAb 7 (1.2)." Humanizovana antitela pune dužine su generisana ili sa humanim IgG1 konstantnim regionom koji sadrži L234A/L235A supstitucije (IgG1 (AA)) ili sa humanim IgG4 konstantnim regionom koji sadrži S228P supstituciju (IgG4 (P)).
[0440] Teški lanci pune dužine humanizovanih IgG1 antitela konstruisani su kako sledi: C-kraj humanizovanog VH Domena je fuzionisan sa N-krajem humanog IgG1 Konstantnog Regiona koji ima varijantu CH2-CH3 Domena (koji sadrži L234A/L235A (AA)) supstitucije ali nema C-terminalni lizinski ostatak (SEK ID BR: 255):
[0441] U SEK ID BR:255, aminokiselinski ostaci 1-98 odgovaraju IgG1 CH1 Domenu (SEK ID BR:10), aminokiselinski ostaci 99-113 odgovaraju IgG1 zglobnom regionu (SEK ID BR:32) a aminokiselinski ostaci 114-329 odgovaraju IgG1 CH2-CH3 Domenu koji sadrži supstitucije L234A/L235A (podvučeno) (SEK ID BR:5), ali nema C-terminalni lizinski ostatak.
[0442] Aminokiselinska sekvenca teškog lanca primernog humanizovanog antitela ((hPD-1 mAb 7 (1.2)) koja ima konstantni region IgG1 teškog lanca koji sadrži L234A/L235A mutaciju ali nema C-terminalni lizinski ostatak je (SEK ID BR:265):
1
[0443] U SEK ID BR:265, aminokiselinski ostaci 1-119 odgovaraju VH Domenu hPD-1 mAb 7 VH1 (SEK ID BR:147), aminokiselinski ostaci 120-217 odgovaraju IgG1 CH1 domenu (SEK ID BR:10), ostaci 218-232 odgovaraju zglobnom regionu IgG1 (SEK ID BR:32), a ostaci 233-448 odgovaraju IgG1 CH2-CH3 Domenu koji sadrži L234A/L235A supstitucije (podvučeno) (SEK ID BR:5) ali nema C-terminalni lizinski ostatak.
[0444] Teški lanci pune dužine humanizovanih antitela IgG4 su konstruisani na sledeći način: C-kraj humanizovanog VH Domena je fuzionisan sa N-krajem humanog IgG4 konstantnog regiona koji ima stabilizovan zglobni region (koji sadrži S228P supstituciju) ali nema C-terminalni lizinski ostatak ( SEK ID BR:256):
[0445] U SEK ID BR:256, aminokiselinski ostaci 1-98 odgovaraju IgG4 CH1 Domenu (SEK ID BR:254), aminokiselinski ostaci 99-110 odgovaraju stabilizovanom IgG4 zglobnom regionu koji sadrži supstitucije S228P (podvučeno) (SEK ID BR:13), a aminokiselinski ostaci 111-326 odgovaraju IgG4 CH2-CH3 Domenu (SEK ID BR:4), ali nedostaje C-terminalni lizinski ostatak.
[0446] Aminokiselinska sekvenca teškog lanca primernog humanizovanog antitela ((hPD-1 mAb 7 (1.2)) koja ima IgG4 konstantni region teškog lanca koji sadrži stabilizovani zglobni region sa S228P mutacijom, i nema C-terminalni lizinski ostatak, je (SEK ID BR:266):
[0447] U SEK ID BR: 266, aminokiselinski ostaci 1-119 odgovaraju VH Domenu hPD-1 mAb 7 VH1 (SEK ID BR: 147), aminokiselinski ostaci 120 -217 odgovaraju IgG4 CH1 domenu (SEK ID BR:254), aminokiselinski ostaci 218-229 odgovaraju stabilizovanom zglobnom regionu IgG4 koji sadrži S228P supstitucije (podvučeno) (SEK ID BR:13), a aminokiselinski ostaci 230-445 odgovaraju IgG4 CH2-CH3 Domenu (SEK ID BR:4), ali nedostaje C-terminalni lizinski ostatak.
[0448] Laki lanci pune dužine humanizovanih antitela su konstruisani na sledeći način: C-kraj humanizovanog VL Domena je fuzionisan sa N-krajem Kapa regiona humanog lakog lanca ( SEK ID BR:8). Isti laki lanac je uparen sa teškim lancima IgG1 (AA) i IgG4 (P).
[0449] Aminokiselinska sekvenca lakog lanca primernog humanizovanog PD-1 antitela (hPD-1 mAb 7 (1.2))
1 1
koje ima Kapa konstantni region je (SEK ID BR:264):
[0450] U SEK ID BR:264, aminokiselinski ostaci 1-111 odgovaraju VL Domenu iz hPD-1 mAb 7 VL2 (SEK ID BR:153), a aminokiselinski ostaci 112-218 odgovaraju Kapa konstantnom regionu lakog lanca ( SEK ID BR:8).
[0451] Anti-PD-1 antitela koja imaju alternativne Konstantne Regione, na primer in ženjerisane Fc Regione, lako se generišu uključivanjem različitih Konstantnih Regiona i/ili uvođenjem jedne ili više aminokiselinskih supstitucija, adicija ili delecija. Na primer, kada je po željno bispecifično antitelo, koriste se CH2-CH3 domeni koji nose ispupčenja i udubljenja da bi se olakšala heterodimerizacija. Himerna anti-PD-1 antitela koja sadrže mišje Varijabilne Domene i humane Konstantne Regione se generi šu kako je gore opisano.
[0452] Humanizovana antitela (IgG1 (AA) i/ili IgG4 (P)) su testirana za aktivnost vezivanja i blokiranja kako je gore opisano. Vezivanje humanizovanih antitela za humani PD-1 (shPD-1 His, i shPD-1 hFc) i PD-1 cynomolgus majmuna (shPD-L1 hFc) je bio uporediv sa onim od odgovarajućeg mišjeg antitela. Osim toga, humanizovana antitela su zadržala sposobnost da blokiraju vezivanje humanog PD-L1 za humani PD-1 u ELISA testu.
[0453] Kinetika vezivanja mišjih antitela PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 15, humanizovanih antitela hPD-1 mAb 2, hPD-1 mAb 7 (1.2), hPD-1 mAb 9 (1.1), hPD-1 mAb 15 i referentnih anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B je ispitivana pomoću Biacore analize. Anti-PD-1 antitela su zarobljena na imobilizovanom Proteinu A i inkubirana sa His-tagovanim solubilnim humanim PD-1 (shPD-1-His) ili solubilnim humanim PD-1 Fc fuzionim (scyno PD-1 hFc) cynomolgus majmuna, cepana za uklanjanje Fc dela, a kinetika vezivanja je određena Biacore analizom. U dodatnim studijama anti-PD-1 antitela hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG1 (AA), hPD- 1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 9 (1.1) IgG1 (AA), hPD -1 mAb 9 (1.1) IgG4 (P), PD-1 mAb A IgG1 (AA), PD-1 mAb A IgG4 (P), PD-1 mAb B IgG1 (AA) i PD-1 mAb B IgG4 (P) su uhvaćena na imobilizovanom F(ab)2 kozjem anti-humanom Fc, a kinetika vezivanja je odre đena Biacore analizom kako je gore opisano. Izračunati ka, kd i KD iz ovih studija predstavljeni su u Tabeli 7.
1 2
[0454] Rezultati pokazuju da PD-1 mAb 7 i humanizovani hPD-1 mAb 7 (1.2) pokazuju bolju kinetiku vezivanja u odnosu na referentna antitela na anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B. PD-1 mAb 2, i hPD-1 mAb 2 pokazuju približno dva puta bolju kinetiku vezivanja od referentnih anti-PD-1 antitela, dok PD-1 mAb 9, hPD-1 mAb 9 (1.1), PD-1 mAb 15 i hPD-1 mAb 15 pokazuju oko 2-6 puta bolju kinetiku vezivanja od referentnih anti-PD-1 antitela.
[0455] Ispitana je tkivna specifičnost anti-humanog PD-1 antitela PD-1 mAb 7. Normalno tkivo je kontaktirano sa PD-1 mAb 7 ili sa kontrolom izotipa (0.313 µg/ml) i vizuelizovan je stepen obojenja. Bioksal je korišćen za blokiranje endogenih enzima za smanjenje nespecifičnog bojenja na mucin u tkivu debelog creva. Kao što je prikazano na Slici 10A, Paneli i-xii, PD-1 mAb 7 i kontrola izotipa nisu uspeli da obeleže ćelije normalnog kolona, jetre, pluća, pankreasa, bubrega i srčanog tkiva. Pored toga, PD-1 mAb 7 i kontrola izotipa nisu uspeli da oboje normalnu kožu (Slika 10B, Paneli i-ii). Nasuprot tome, utvrđeno je da PD-1 mAb 7 snažno obeležava limfocite prisutne u normalnom tkivu krajnika i PDCD1 transfektovane NSO ćelije koje eksprimiraju PD-1 ( Slika 10B, Paneli iii i v), dok kontrola izotipa nije uspela da obeleži ni jedno (Slika 10B, Paneli iv i vi). Rezultati predstavljeni na Slikama 10A-10B, prema tome, pokazuju da je PD-1 mAb 7 moglo da se specifično veže za limfocite i ćelije koje eksprimiraju PD-1.
[0456] Ispitivani su profili zasićenja vezivanja hPD-1 mAb 2 IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7 (1.1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG1, (AA), hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 9 (1.1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 9 (1.1) IgG4 (P), hPD-1 mAb 15 IgG1 (AA) i referentnih anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B. Ukratko, svako od anti-PD-1 antitela, PD-1 mAb 1-15, ili referentnih anti-PD-1 antitela (PD-1 mAb A i PD-1 mAb B) su pomešana sa NSO ćelijama koje eksprimiraju humani PD-1 (∼ 250 000 ćelija/bunarčiću) u blokirajućem puferu (FACS 10% humanog serumskog albumina). Za ove studije su korišćena anti-PD-1 antitela sa 50, 12.5, 3.13, 2.0 x 10<-1>, 4.9 x 10<-2>, 1.2 x 10<-2>, 3.0 x 10<-3>, 1.9 x 10<-4>, 7.6 x 10<-4>, 4.75 x 10<-5>ili 1.19 x 10<-5>mg/test (četvorostruka serijska razblaženja). Količina antitela vezanog za površinu NSO ćelija je određena
1
FACS analizom pomoću kozjih anti-humanih-APC sekundarnih antitela. Reprezentativne krive zasi ćenja su prikazane na Slici 11. Određene su vrednosti EC50 i EC90, a srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SDσ) iz četiri odvojena eksperimenta su date u Tabeli 8.
[0457] Studije zasić enja vezivanja pokazuju da humanizovane verzije PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 imaju povoljan profil vezivanja za PD-1 na površini ć elije. Naročito, humanizovani PD-1 mAb 7 (hPD-1 mAb 7 (1.1) i hPD-1 mAb 7 (1.2) koji imaju ili IgG1 (AA) ili IgG4 (P) Fc Region) imaju najniže vrednosti EC90 od svih ispitivanih antitela.
[0458] Da bi se dalje okarakterisala humanizovana anti-PD-1 antitela hPD-1 mAb 2 IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7 (1.1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG1, (AA), hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 9 (1,1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 9 (1,1) IgG4 (P) i hPD-1 mAb 15 IgG1 (AA), ispitivana je njihova sposobnost blokiranja vezivanja humanog PD-L1 (shPD-L1) i humanog PD-L2 (shPD-L2) za PD-1 eksprimiran na površini NSO ćelija. Ovi testovi su izvedeni u osnovi kako je gore opisano. Reprezentativne krive za inhibiciju vezivanja sPD-L1 i sPD-L2 za PD-1 eksprimiran na NSO ćelijama su prikazane na Slikama 12A, i 12B respektivno. Određene su vrednosti IC50 i IC90, a srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ) iz tri odvojena eksperimenta su dati u Tabeli 9.
1 4
[0459] Studije inhibicije vezivanja liganda pokazuju da su humanizovane verzije PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 u stanju da inhibiraju vezivanje sPD-L1 i sPD-L2 za PD-1 na površini ćelije. Naročito, humanizovana PD-1 mAb 7 (hPD-1 mAb 7 (1.1) i hPD-1 mAb 7 (1.2)) imaju najniže vrednosti IC90 od svih ispitivanih antitela.
Primer 3
Blokada Kontrolne Tačke PD-1/PD-L1 Humanizovanim Anti-humanim PD-1 Antitelima
[0460] Sposobnost hPD-1 mAb 2 IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7 (1.1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG1, (AA), hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 9 (1.1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 9 (1.1) IgG4 (P), hPD-1 mAb 15 IgG1 (AA) i referentnih anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B da antagonizuju PD-1/PD-L1 osu (tj. blokiraju interakciju PD-1/PD-L1 i spreče nishodnu regulaciju odgovora T-ćelija) je ispitivana u Jurkat-luc-NFAT/CHO-PD-L1 luciferaza reporterskom testu. Ukratko, CHO ćelije koje eksprimiraju PD-L1 (CHO/PD-L1) su postavljene sa 40.000 ćelija/bunarčiću u 100 µL medijuma za kulturu (RPMI 10% FBS 100 µg/mL Higromicin B 100 µg/mL G418) i inkubirane preko noći. Sledećeg dana medijum je uklonjen i MNFAT-luc2/PD-1 Jurkat ćelije (Promega) sa 50.000 ćelija/bunarčiću u 40 µl test pufera (RPMI 2% FBS) i anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15, ili referentna anti-PD-1 antitela (PD-1 mAb A i PD-1 mAb B) (0-25 µg/mL; osam 2,5 puta serijskih razblaženja u puferu za ispitivanje) je dodato u svaki bunarčić i inkubirano 6 sati na 37 °C, a zatim je 5-10 minuta inkubirano na sobnoj temperaturi. Zatim je u svaki bunar čić dodato 80 ml BioGlo supstrata (Promega) i ploča je inkubirana dodatnih 5-10 minuta na sobnoj temperaturi, a luminiscencija je merena u čitaču ploča Victor. Reprezentativne krive zasićenja su prikazane na Slici 13. Određene su vrednosti EC50 i EC90, a srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ) iz četiri odvojena eksperimenta su date u Tabeli 10.
[0461] Studije signalizacije reportera pokazuju da humanizovane verzije PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 mogu blokirati PD-1 / PD-L1 osu i sprečiti nishodnu regulaciju T-ćelija. Naročito, humanizovani PD-1 mAb 7 (hPD-1 mAb 7 (1. 1), i hPD-1 mAb 7 (1.2) koji imaju ili IgG1 (AA) ili IgG4 (P) Fc Region) imaju najniže vrednosti EC50/EC90.
Primer 4
Funkcionalna Aktivnost Anti-Humanih PD-1 Antitela
[0462] Staphilococcus aureus enterotoksin tip B (SEB) je mikrobni superantigen sposoban da aktivira veliki procenat T-ćelija (5-30%) kod davalaca koji reaguju na SEB. SEB se vezuje za MHC II izvan udubljenja za vezivanje peptida i tako je zavisan od MHC II, ali nije ograničen i posredovan od TCR. SEB-stimulacija T-ćelija rezultira proliferacijom oligoklonalnih T-ćelija i proizvodnjom citokina (mada se može uočiti varijabilnost donora i neki donori neće odgovoriti). U roku od 48 sati od SEB stimulacije, PMBC ushodno regulišu PD-1 i LAG-3 sa daljim poboljšanjem, vidi na dan 5, postsekundarna kultura u ploči sa 96 bunarčića sa SEB stimulacijom. Ushodna regulacija proteina imunolo ške kontrolne tačke PD-1 i LAG-3
1
nakon SEB stimulacije PBMC ograničava oslobađanje citokina nakon restimulacije. Ispitana je sposobnost anti-PD-1 antitela, samih i u kombinaciji sa anti-LAG-3 antitelima da se poja ča oslobađanje citokina inhibicijom kontrolne tačke.
[0463] Ukratko, PBMC su prečišćene metodom centrifugiranja u gradijentu gustine Ficoll-Paque Plus (GE Healthcare) prema uputstvima proizvođača iz pune krvi dobijene uz informisani pristanak zdravih davalaca (Biological Specialty Corporation) i T ćelije su zatim prečišćene upotrebom Dynabeads® Untouched Human T Cells kompleta (Life Technologies) prema uputstvima proizvođača. Prečišćene PBMC su kultivisane u RPMI medijumu 10% termički inaktiviranog FBS 1% Penicilin/Streptomicin u T-25 bocama tokom 2-3 dana same ili sa SEB (Sigma-Aldrich) pri 0.1 ng/ml (primarna stimulacija). Na kraju prvog kruga SEB-stimulacije, PBMC su dva puta isprane sa PBS i odmah postavljene u ploče za kulturu tkiva sa 96 bunarčića u koncentraciji od 1-5 x 10<5>ćelija/bunarčiću u samom medijumu, medijumu sa kontrolnim ili anti-PD-1 antitelom, medijumu sa SEB pri 0.1 ng/mL (sekundarna stimulacija) i bez antitela, ili u medijumu sa SEB i kontrolnim IgG ili anti-PD-1 antitelom /- anti-LAG-3 mAb, i gajene dodatna 2-3 dana. Na kraju druge stimulacije, sakupljeni su supernatanti za merenje sekrecije citokina koriste ći humane DuoSet ELISA setove za IFNγ, TNFα, IL-10 i IL-4 (R&D Systems) prema uputstvima proizvođača.
[0464] Ispitana je sposobnost PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 samih, ili u kombinaciji sa pojedinačnim anti-LAG-3 antitelom LAG-3 mAb 1 da se pojača oslobađanje citokina kroz inhibiciju kontrolne tačke. Ove studije su takođe uključivale jedno ili više sledećih referentnih anti-PD-1 antitela: PD-1 mAb A; PD-1 mAb B; i LAG-3 mAb A, pojedinačno ili u kombinaciji. Slika 14 prikazuje profile IFNγ sekrecije iz SEB-stimulisanih (0.1 ng/mL) PBMC-a od reprezentativnih donora koji reaguju (D: 38941), tretiranih sa: bez antitela; antitela za kontrolu izotipa; PD-1 mAb 7 i/ili LAG-3 mAb 7; PD-1 mAb 9 i/ili LAG-3 mAb 1; PD-1 mAb 15 i/ili LAG-3 mAb 1; PD-1 mAb 2 i/ili LAG-3 mAb 1; ili referentnim anti-PD-1 antitelima PD-1 mAb B i/ili LAG-3 mAb A (antitela su korišćena pri 10 µg/mL).
[0465] U dodatnim studijama je ispitana sposobnost humanizovanih verzija PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 (koja sadrže humani IgG1 (AA) ili humani IgG4 (P) Fc Region) kao i referentnih anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B da pojačaju oslobađanje citokina putem inhibicije kontrolne tačke. Za ove studije antitela su korišćena pri 0.625, 2.5 i 10 µg/mL. Slike 15A-15B prikazuju IFNγ (Slika 15A) i TNFα (Slika 15B), profile sekrecije SEB-stimulisanih (0.2 ng/ml) PBMC od reprezentativnih donora koji reaguju (D: 57709), tretiranih bez antitela ili nekim od sledećih antitela: kontrola izotipa; hPD-1 mAb 2 IgG1 (AA); hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG1 (AA); hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P); hPD-1 mAb 9 (1.1) IgG1 (AA); hPD-1 mAb 9 (1.1) IgG4 (P); hPD-1 mAb 15 IgG1 (AA); ili referentnim anti-PD-1 antitelima PD-1 mAb A IgG1 (AA), PD-1 mAb A IgG4 (P), PD-1 mAb B IgG1 (AA), PD-1 mAb B IgG4 (P). Ukupno pg/mg IFNγ u uzorcima tretiranim sa SEB Ab su određeni za uzorke tretirane sa anti-PD-1 antitelima pri 0.625, 2.5 i 10 µg/mL i srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ) od 3 različita donora koji reaguju (osim gde je navedeno) su dati u Tabeli 11. Odnos IFNγ izlučenog u uzorku tretiranom humanizovanim verzijama PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 (koji sadrži humani IgG1 (AA) ili humani IgG4 (P) Fc Region) preko referentnih anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B (tj. humanizovano anti-PD-1/PD-1 mAb A i humanizovano anti-PD-1/PD-1 mAb B) su predstavljeni u Tabeli 12, odnosno Tabeli 13, respektivno.
1
1
[0466] Rezultati ovih studija pokazuju da su PD-1 antitela PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 dramatično poboljšali produkciju IFNγ (Slike 14 i 15A i Tabele 11-13) i TNFα (Slika 15B) od SEB-stimulisanih PBMC-a nakon restimulacije. Pored toga, kombinacija anti-PD-1 antitela sa anti-LAG-3 antitelima je rezultirala daljim pojačavanjem oslobađanja citokina (Slika 14) iz SEB-stimulisanih PBMC nakon restimulacije. Naročito, kombinacija PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 ili PD-1 mAb 15 sa pojedinačnim anti-LAG-3 antitelom LAG-3 mAb 1 je obezbedila najveće poboljšanje.
Primer 5
Studije Vezivanja PD-1 x LAG-3 Bispecifičnih Molekula
[0467] Generisan je niz PD-1 x LAG-3 bispecifičnih molekula, uključujući i antitela koja sadrže Fc Region, koja sadrže tri, četiri i pet lanaca i bispecifično antitelo. Generisana su četiri dijatela koja imaju četiri lanca i koja sadrže Domene za Promovisanje Heterodimera E/K-zavojnice i označena su sa "DART A", "DART B", "DART C" i "DART I." Generisana su četiri antitela koja imaju četiri lanca i sadrže CH1/CL Domene i označena su sa "DART D", "DART E", "DART J", i "DART 1." Generisana su dva petolančana dijatela koja sadrže Domene E/K-zavojnica za Promovisanje Heterodimera i CH1/CL Domene i označena su sa „DART F“ i „DART G.“ Generisano je jedno dijatelo sa tri lanca i sadrži Domen E/K-zavojnice za Promovisanje Heterodimera i označeno je sa "DART H." Generisano je jedno bispecifično antitelo sa četiri lanca i označeno je sa "BSAB A." Struktura i aminokiselinske sekvence ovih PD-1 x LAG-3 bispecifičnih molekula su date gore i sumirane u Tabeli 14 u nastavku.
1
[0468] Dodatni PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli koji sadrže alternativna mesta za vezivanje epitopa PD-1 i/ili LAG-3 se mogu lako generisati uključivanjem različitih VH i VL Domena. Slično tome, molekuli koji vezuju antigen različit od LAG-3 se mogu generisati uključivanjem VH i VL koji imaju željenu specifičnost.
[0469] Profili zasićenja vezivanja PD-1 x LAG-3 bispecifičnih konstrukta dijatela: DART A, DART B, DART D, DART E, DART F, DART G, DART H, DART I, i DART 1; anti-PD-1 antitela: hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P), hPD-1
1
mAb 7 (1.2) IgG1 (AA), PD-1 mAb A IgG1 (AA) i PD-1 mAb A IgG4 (P); i anti-LAG-3 antitela: hLAG-3 mAb 1 (1.4) IgG4 (P), LAG-3 mAb A IgG4 (P), hLAG-3 mAb 1 (1.4) IgG1 (AA) i LAG-3 mAb A IgG1 (AA) su ispitivani u osnovi kao što je gore opisano. PD-1 x LAG-3 bispecifični konstrukti dijatela su testirani za PD-1 i LAG-3 vezivanje, dok su anti-PD-1 i anti-LAG-3 antitela testirana samo za vezivanje za njihove odgovaraju će antigene. Za ove studije su korišćene NSO ćelije koje eksprimiraju PD-1 ili LAG-3. Korišćena su dijatela i antitela (170.0-0.013 mM ili 85.0-0.0021 mM (četvorostruka serijska razblaženja). Određene su vrednosti EC50 i EC90 i predstavljene u Tabelama 15-16. Srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ) su date kada su izvedena 2 ili više odvojenih eksperimenata
11
[0470] Studije zasićenja vezivanja pokazuju da PD-1 x LAG-3 bispecifični konstrukti dijatela zadržavaju vezivanje za PD-1 i imaju profile vezivanja koji su slični profilima vezivanja roditeljskih antitela za PD-1. Slično tome, PD-1 x LAG-3 bispecifični konstrukti dijatela zadržavaju vezivanje za LAG-3 i, sa izuzetkom DART 1, imaju profile vezivanja koji su slični profilima vezivanja roditeljskih antitela za LAG-3.
Primer 6
Studije Inhibicije Bispecifičnih Molekula PD-1 x LAG-3
[0471] Sposobnost PD-1 x LAG-3 bispecifičnih molekula: DART A, DART B, DART D, DART E, DART F, DART G, DART H , DART I, DART 1 i BSAB A; i anti-PD-1 antitela: hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG1 (AA), PD-1 mAb A IgG1 (AA) i PD-1 mAb A IgG4 (P), da blokiraju vezivanje humanog PD-L1 (shPD-L1) i humanog PD-L2 (shPD-L2) za PD-1 eksprimiran na površini NSO ćelija, ispitivan je u osnovi kao što je gore opisano. Dijatela i antitela su korišćena pri 33.75-0.002 µM ili 107.5-0.0001 µM (četvorostruka serijska razblaženja).
[0472] Vrednosti IC50 i IC90 su utvrđene i predstavljene su u Tabeli 17. Srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ) su date kada su izvedena 2 ili više odvojenih eksperimenata.
[0473] Studije inhibicije vezanja liganda pokazuju da PD-1 x LAG-3 konstrukti bispecifi čnog dijatela zadržavaju sposobnost inhibicije vezivanja sPD-L1 i sPD-L2 za PD-1 na površini ćelije.
[0474] Pored toga, ispitana je sposobnost PD-1 x LAG-3 bispecifičnih molekula: DART A, DART B, DART D, DART E, DART F, DART G, DART H, DART I, DART 1 i BSAB A; i anti-LAG-3 antitela: hLAG-3 mAb 1(1.4) IgG4 (P), LAG-3 mAb A IgG4 (P), hLAG-3 mAb 1(1.4) IgG1 (AA), i LAG-3 mAb A IgG1 (AA) da blokiraju vezivanje humanog LAG-3 za nativni MHC klase II na površini Daudi ćelija. Ukratko, svaki bispecifični molekul PD-1 x LAG-3 i kontrolno anti-LAG-3 antitelo su pomešani su sa biotiniziranim-solubilnim humanim LAG-3-Fc fuzionim proteinom (shLAG-3), (pri 0.5 µg/ml) i odvojeno su inkubirani sa MHC II pozitivnim Daudijevim ćelijama (2.5 x 10<6>ćelija). LAG-3 vezivanje za površinu Daudijevih ćelija je određeno pomoću PE-konjugovanog Streptavidin sekundarnog antitela FACS analizom. Dijela i antitela su kori šćena pri 27.5-0.026 µM (dvostruka serijska razblaženja) ili 107.5-0.0001 µM (četvorostruka serijska razblaženja) ili 35-0.002 µM (četvorostruka serijska razblaženja).
[0475] Vrednosti IC50 i IC90 su određene i predstavljene su u Tabeli 18. Srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ) su date kada je izvedeno 2 ili više odvojenih eksperimenata.
[0476] Studije inhibicije vezivanja liganda pokazuju da PD-1 x LAG-3 konstrukti bispecifi čnog dijatela zadržavaju sposobnost da inhibiraju vezivanje shLAG-3-Fc fuzionog proteina za MHC klase II na ćelijskoj površini. Sa izuzetkom DART 1, PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli imaju slične profile inhibicije kao roditeljska anti-LAG-3 antitela.
Primer 7
Blokada PD-1/PD-L1 Kontrolne Tačke pomoću PD-1 x LAG-3 Bispecifičnih Molekula
[0477] Sposobnost PD-1 x LAG-3 bispecifičnih molekula: DART A, DART B, DART D, DART E, DART F, DART G, DART H, DART I, DART 1 i BSAB A; i anti-PD-1 antitela: hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG1 (AA), PD-1 mAb A IgG1 (AA) i PD-1 mAb A IgG4 (P), da antagonizuju PD-1/PD-L1 osu (tj. blokiraju interakciju PD-1/PD-L1 i spreče nishodnu regulaciju odgovora T-ćelija) je ispitivana u testu reporter Jurkat-luc2-NFAT/CHO-PD-L1 luciferaze (koristeći CHO/PD-L1 ćelije i MNFAT-luc2/PD-1 Jurkat ćelije) u osnovi kako je gore opisano. Dijatela i antitela su korišćena pri 100-0.0065 µM (četvorostruka serijska razblaženja) ili 100-0.0013 µM (petostruka serijska razblaženja).
[0478] Vrednosti IC50 i IC90 su utvrđene i predstavljene su u Tabeli 19. Srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ) su date kada je izvedeno 2 ili više odvojenih eksperimenata.
[0479] Studije signalizacije reportera pokazuju da većina konstrukta PD-1 x LAG-3 bispecifičnog dijatela zadržava sposobnost da inhibira vezivanje sPD-L1 za PD-1 na površini ćelije. Četvorovalentni PD-1 x LAG-3 bispecifični konstrukti dijatela, DART A, DART B, DART D, DART-E, DART F, DART G i DART I su bili najjači inhibitori u ovom testu. Slični rezultati su dobijeni za nekoliko od ovih bispecifičnih konstrukata ispitivanih u PD-L2 reporter testu.
Primer 8
Funkcionalna Aktivnost Bispecifičnih Molekula PD-1 x LAG-3
[0480] Sposobnost bispecifičnih molekula PD-1 x LAG-3 da pojačaju oslobađanje citokina kroz inhibiciju kontrolne tačke je ispitivana u SEB-stimulisanim PBMC nakon restimulacije, u osnovi kao što je gore opisano, osim kada je napomenuto.
[0481] U početnim studijama sposobnost bispecifičnih molekula PD-1 x LAG-3: DART A, DART D, DART E, DART F, DART G, DART H; i anti-PD-1 i anti-LAG antitela: ispitano je PD-1 mAb A IgG4 (P) i LAG-3 mAb A IgG4 (P), pojedinačno ili u kombinaciji za pojačavanje oslobađanja citokina kroz inhibiciju kontrolne tačke. U ovim testovima su korišćeni bispecifični molekuli i antitela PD-1 x LAG-3 u ukupnoj koncentraciji od 3.125, 12.5 ili 50 nM, i PBMC su stimulisani sa 0.2 ng/ml SEB (prethodne studije su koristile 0.1 ng/ml). Za ove studije, kada se koristi kombinacija antitela, svako antitelo se daje u polovini ukupne koncentracije (tj. 1.563, 6.25 ili 25 nM). Slike 16A i 16B pokazuju profile sekrecije IFNγ iz SEB-stimulisanih PBMC-a od dva reprezentativna davaoca koji reaguju, D: 35644 i D: 59697, respektivno.
[0482] Kao što je napomenuto, ne reaguju svi donori na SEB pri 0.1 ili 0.2 ng/ml. Da bi se poja čala SEB stimulacija PBMC od šireg broja donora, SEB je korišćen u visokoj koncentraciji od 85 ng/ml, ili srednjoj koncentraciji od 0.5 ng/ml u dodatnim studijama. U ovim koncentracijama stimulacija SEB-a je sna žnija kod više donora, mada se i dalje može uočiti varijabilnost od donora do donora.
[0483] U jednoj takvoj studiji je ispitana sposobnost bispecifičnih molekula PD-1 x LAG-3: DART A, DART B; anti-PD-1 antitela: hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P); anti-LAG-3 antitela: LAG-3 mAb 1 (1.4) IgG4 (P); i kombinacije: PD-1 mAb A IgG4 (P) i LAG-3 mAb A IgG4 (P) da pojačaju oslobađanje citokina kroz inhibiciju kontrolne tačke. U ovim ispitivanjima su korišćeni bispecifični molekuli i antitela PD-1 x LAG-3 u koncentraciji od 0.019, 0.078, 0.3125, 1.25, 5 ili 20 nM, a PBMC su stimulisani sa 85 ng/ml SEB. Za ovaj test, kada se koristi kombinacija antitela, svako antitelo je dato u nazna čenoj koncentraciji i prema tome je ukupna koncentracija antitela dvostruko veća od koncentracije koja se koristi za svako antitelo (tj.
0.038, 0.156, 0.625, 2.5, 10 ili 40 nM). Slike 17A i 17B pokazuju profile sekrecije IFNi iz SEB-stimulisanih
11
PBMC-a od dva reprezentativna donora, D: 55515 i D: 54024, respektivno.
[0484] U drugoj studiji bis-specifični molekuli PD-1 x LAG-3: DART A, DART B, DART C; anti-PD-1 antitela: hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P); anti-LAG-3 antitela: LAG-3 mAb 1 (1.4) IgG4 (P); i ispitana je kombinacija: PD-1 mAb A IgG4 (P) i LAG-3 mAb A IgG4 (P), da bi se pojačalo oslobađanje citokina putem inhibicije kontrolne tačke. U ovim testovima su korišćeni bispecifični molekuli i antitela PD-1 x LAG-3 u ukupnoj koncentraciji od 0.048, 0.195, 0.78, 3.125, 12.5 ili 50 nM, a PBMC su stimulisani sa 0.5 ng/ml SEB. Za ove studije, kada se koristi kombinacija antitela, svako antitelo se daje u polovini ukupne koncentracije (tj.
0.024, 0.098, 0.39, 1.563, 6.25 ili 25 nM). Slike 18A i 18B pokazuju profile sekrecije IFNγ iz SEB-stimulisanih PBMC-a od dva reprezentativna donora, D: 20990 i D: 54947, respektivno).
[0485] U daljoj studiji ispitivano je oslobađanje citokina IL-2. Naročito, PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli: DART D, DART H; anti-PD-1 antitela: PD-1 mAb A IgG4 (P), hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P); anti-LAG-3 antitela: LAG-3 mAb A IgG4 (P) i LAG-3 mAb 1 (1.4) IgG4 (P); i kombinacija: PD-1 mAb A IgG4 (P) i LAG-3 mAb A IgG4 (P), i hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) i LAG-3 mAb 1 (1,4) IgG4 (P), da bi se pojačalo oslobađanje IL-2 kroz inhibiciju kontrolne tačke. U ovim ispitivanjima su korišćeni bispecifični molekuli i antitela PD-1 x LAG-3 u ukupnoj koncentraciji od 3.125, 12.5 ili 50 nM, a PBMC su stimulisani visokom koncentracijom SEB od 85 ng/ml. Za ove studije, kada se koristi kombinacija antitela, svako antitelo se daje u polovini ukupne koncentracije (tj. 1.563, 6.25 ili 25 nM). Slika 19 prikazuje profil sekrecije IL-2 iz SEB-stimulisanih PBMC od reprezentativnog donora (D: 54024).
[0486] U dodatnim studijama su ispitani PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli: DART B i DART I; anti-PD-1 antitela: PD-1 mAb A IgG4 (P) i hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P); anti-LAG-3 antitela: LAG-3 mAb A IgG4 (P), hLAG-3 mAb 1 (1.4) IgG4 (P) i hLAG-3 mAb 6 (1.1) IgG4 (P); i kombinacije: PD-1 mAb A IgG4 (P) i LAG-3 mAb A IgG4 (P), hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) i hLAG-3 mAb 1 (1.4) IgG4 (P) , i hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) i hLAG-3 mAb 6 (1.1) IgG4 (P) za pojačavanje oslobađanja citokina kroz inhibiciju kontrolne tačke. U ovim testovima su korišćeni bispecifični molekuli i antitela PD-1 x LAG-3 u koncentraciji od 0.0061, 0.024, 0.09, 0.39, 1.56, 6.25 ili 25 nM, a PBMC su stimulisani sa 0.5 ng/ml SEB. Za ove studije, kada se koristi kombinacija antitela, svako antitelo se daje u naznačenoj koncentraciji, pa je ukupna koncentracija antitela dvostruko veća od koncentracije koja se koristi za svako antitelo (tj. 0.0122, 0.048, 0.18, 0.78, 3.12, 12.5 ili 50 nM). Slika 20 prikazuje profile sekrecije IFNγ iz SEB- stimulisanih PBMC-a od reprezentativnog davaoca D: 56041).
[0487] Sposobnost PD-1 x LAG-3 bispecifičnog molekula DART I; kombinacije anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A IgG4 i anti-LAG-3 antitela LAG-3 mAb A IgG4 (P); i negativnog kontrolnog antitela za poja čavanje antigenspecifičnih odgovora T ćelija je ispitana pomoć u testa opoziva Toksoida Tetanusa. Konkretno, meren je odgovor pojačane sekrecije citokina specifičan za antigen, koristeći toksoid tetanusa kao antigena opoziva u sistemu ispitivanja kokulture. Ukratko, CD4 memorijske T ćelije (0.5 – 1.0 x 10<5>ćelija/bunarčiću) su izolovane pomoću izolacionih kompleta za negativnu selekciju (Miltenyi Biotec, San Diego, CA i Invitrogen, Carlsbad, CA) iz periferne krvi čoveka i kultivisane 5-7 dana sa ozračenim monocitima (0.01 – 0.05x10<5>ćelija/bunarčiću, 3500 rada) od istog davaoca u prisustvu ili odsustvu 5 µg/mL antigena opoziva toksoida tetanusa (TTd) i razblaženja (počev od 25nM) DART I, PD-1 mAb IgG4 LAG-3 mAb A IgG4 (P), ili kontrole izotipa. U paralelnim pločama je merena proliferacija ugradnjom tritiranog timidina i IL-2, a IFN γ je meren pomoću ELISA (R&D systems, Minneapolis, MN) na dane 5-7. Na Slikama 21A-D su prikazani profili sekrecije IFNγ (Slika 21A, 21C) i IL-2 (Slika 21B, 21D) na dan 7, od dva reprezentativna donora (D50702 i D54267).
[0488] Rezultati ovih studija pokazuju da su PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli dramatično pojačali produkciju IFNγ (Slike 16A-16B, 17A-17B, 18A-18B, 20) i IL-2 (Slika 19) iz SEB-stimulisanih PBMC-a nakon restimulacije. Pored toga, PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli dramatično su pojačali produkciju IFNγ (Slike 21A i 21C) iz CD4 memorijskih T ćelija stimulisanih toksoidom tetanusa. Konkretno, četvorovalentni PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli su obezbedili veće poboljšanje nego kombinacija anti-PD-1 antitela sa anti-LAG-3 antitelima.
Primer 9
Farmakokinetika Bispecifičnih Molekula PD-1 x LAG-3
[0489] Ispitana je farmakokinetika reprezentativnog PD-1 x LAG-3 bispecifičnog molekula, DART I i reprezentativnog anti-PD-1 antitela, PD-1 mAb A kod Cynomolgus majmuna. Ukratko, dva cynomolgus majmuna (jedan mužjak i jedna ženka) su infuzirani sa jednom dozom DART I (5 mg/kg) ili PD-1 mAb A (10 mg/kg), a serumska koncentracija molekula je praćena tokom vremena pomoću sendvič ELISA testa. Ukratko, maxisorb ploče za analizu sa 96 bunarčića su prevučene solubilnim humanim PD-1 (shPD-1), blokirane albuminom goveđeg seruma, isprane i inkubirane sa kalibracionim standardima, standardima za kontrolu kvaliteta i uzorcima razblaženog seruma. Količina uhvaćenog DART I i PD-1 mAb A je procenjena sekvencijalnim dodavanjem sekundarnog kozjeg anti-humanog IgG Fc-biotina i streptavidin-peroksidaze rena (SA-HRP). Aktivnost HRP-a je detektovana pomoću TMB supstrata. Svi uzorci su analizirani čitačem mikroploča (SpectraMax M2e, Molecular Device, Sunnyvale, CA) a OD signali proizvedeni pomo ću standardnih kalibratora su korišćeni u četvoparametarskom logističkom modelu pomoću softvera SoftMax Pro (Verzija 5.4, Molecular Devices). Koncentracije PD-1 mAb A ili DART I su određene iz interpolacije podataka OD signala uzoraka sa jednačinom koja opisuje standardnu krivu. Donja granica kvantifikacije (LLOK) za ovaj test procenjena je na 9.775 ng/ml.
[0490] Slika 22 prikazuje koncentraciju u serumu tokom vremena, linije predstavljaju srednju vrednost i muških (puni simboli) i ženskih (otvoreni simboli) majmuna infuziranih sa DART I (puna linija, trouglovi) ili PD-1 mAb A (isprekidana linija, krugovi). Ovi podaci pokazuju da je farmakokinetika bispecifi čnog PD-1 x LAG-3 molekula uporediva sa onom kod anti-PD-1 antitela kod cynomolgus majmuna.
Primer 10
Toksikološka Studija PD-1 Antitela i PD-1 x LAG-3 Bispecifičnih Molekula
[0491] Sigurnosni profil reprezentativnog anti-PDl antitela, hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) i reprezentativnog PD1 x LAG3 bispecifičnog molekula, DART I, procenjen je u ne-GLP (koja nije u skladu sa Dobrom Laboratorijskom Praksom) studiji doziranja na cynomolgus majmunima.
[0492] U ovoj studiji je procenjena potencijalna toksičnost i toksikokinetika anti-PD-1 antitela (hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P)), kada je administriran u višestrukim intravenskim infuzijama. Pored toga, takođe je procenjena potencijalna toksičnost i farmakokinetika PD-1 x LAG-3 DART molekula (DART I), kada se administrira jednom intravenskom infuzijom. Dizajn studije je predstavljen u Tabeli 20.
[0493] U ovoj studiji su procenjeni sledeći parametri i krajnje tačke: klinički znaci, telesne težine, potrošnja hrane, telesna temperatura, parametri kliničke patologije (hematologija, koagulacija i klinička hemija), bioanaliza i toksikokinetički parametri, analiza anti-lek antitela, protočna citometrija, citokin, ukupan nalaz obdukcije, težine organa i histopatološki pregledi.
[0494] Sve životinje su preživele do predviđene eutanazije na Dan 18 ili 22 ili puštanja iz studije na Dan 29. Za hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) nije bilo sa ispitnim artiklom povezanih promena kliničkih znakova, konzumacije hrane, telesne težine, telesne temperature, hematoloških, koagulacionih ili kliničkih hemijskih parametara ili ukupnog nalaza obdukcije. Na Dane 18 i 22, povećanje težine slezine i limfohistiocitni infiltrat crvene pulpe, zavisan od doze su bili evidentni kod životinja koje su primale hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) u dozi od 1 ili 100 mg/kg. U poređenju sa okolnim limfocitima, limfohistiocitne ćelije su imale bledu citoplazmu i nepravilna jezgra. Očigledne su bile retke mitotičke figure. Infiltrat je bio mikroskopski korelat za povećanu težinu slezine.
[0495] Profili serumske koncentracije - vreme za životinje kojima je dato hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P)
11
pokazuju profil koji se očekuje za antitelo kod ovih vrsta, sa nekoliko izuzetaka. Nagibi krivih nakon treće doze su opali oštrije nego posle prve doze za dve životinje u doznoj grupi 1 mg/kg i dve životinje u doznoj grupi 100 mg/kg, što ukazuje na moguću pojavu anti-lek antitela (ADA) u kasnijim ciklusima. Analiza je pokazala da su 2/4 životinja razvile ADA u grupi 1 mg/kg, a 1/4 životinja je razvilo ADA u grupi 100 mg/kg.
[0496] U zaključku, administracija hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) intravenskom infuzijom jednom nedeljno tokom 3 nedelje (Dani 1, 8 i 15) se dobro podnosi kod cynomolgus majmuna na nivoima od 1 i 100 mg/kg. Dozno-zavisni blagi do umereni limfohistiocitni ćelijski infiltrat crvene pulpe slezine je bio prisutan pri 1 i 100 mg/kg hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P).
[0497] Za DART I, nije bilo sa ispitnim artiklom povezanih promena kliničkih znakova, konzumacije hrane, telesne težine, telesne temperature, hematologije ili parametara koagulacije. Promene u parametrima kliničke hemije povezane sa DART I su uključivale neželjeno, prolazno povišenje aspartat aminotransferaze (AST) i laktat dehidrogenaze (LDH) na Dan 2. Prosečna promena AST je bila 3.2x nivo kontrolnih životinja tretiranih nosačem i 7.8x nivo pre studija, sa nivoima iznad kontrolnog referentnog opsega 2. Prosečna promena LDH bila je 2.5x nivo kontrolnih životinja tretiranih nosačem i 6.9x nivo pre studija. Oba parametra su se vratila na približno početni nivo na Dan 8. U zaključku, pojedinačna administracija DART-I intravenskom infuzijom se dobro podnosi kod cynomolgus majmuna na nivou od 5 mg/kg.
Primer 11
PK Studija Pojedinačne Doze anti-PD-1 Antitela
[0498] PK studija pojedinačne doze sa izabranim toksikološkim krajnjim tačkama sprovedena je na cynomolgus majmunima. U ovoj studiji, hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) je upoređen sa dva druga anti-PD1 IgG4 (P), κ mAbs: PD-1 mAb A IgG4 (P) i PD-1 mAb B IgG4 (P). Svako antitelo je administrirano sa 10 mg/kg jednosatnom intravenskom infuzijom na 2 majmuna (1M, IF) i životinje su praćene tokom 65 dana.
[0499] Nije bilo sa ispitnim artiklom povezanih kliničkih znakova, promene telesne težine, konzumacije hrane, citokina, ili imunofenotipizacije povezane sa administracijom hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) ili PD-1 mAb A IgG4 (P). Podaci su bili slični za PD-1 mAb B IgG4 (P), s tim što su zabeležena povišenja u IL-5 nakon administracije PD-1 mAb B IgG4 (P).
[0500] Anti-PD-1 antitelo koje se vezuje za PD-1 na površini T ćelija je određeno protočnom citometrijom primenom metode kompeticije u kojoj je srednji intenzitet fluorescencije (MFI) fluorescentno obele ženih hPD-1 mAb 7 (1.2 ) IgG4 (P) koja se vezuju za T ćelije u odsustvu (PBS kontrola) ili u prisustvu viška kompetitora (neobeleženi hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P)) za celokupan tok uzoraka krvi prikupljenih od cynomolgus majmuna tretiranih sa hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P), PD-1 mAb A IgG4 (P) ili PD-1 mAb B IgG4 (P). Kao što je prikazano na Slikama 23A-23C, hPD-1 mAb 7 (1. 2) IgG4 (P) i PD-1 mAb B IgG4 (P) su pokazali produženo vezivanje za PD-1 na površini CD4 i CD8 T ćelija (vezivanje PD-1 se održavalo na ≥ 80% tokom 28 dana ili više) (Slike 23A i 23C, respektivno) u poređenju sa PD-1 mAb A IgG4 (P) (vezivanje PD-1 se održavalo na ≥ 80% tokom 21 dan ili manje) (Slika 23B). Za svako od antitela na PD-1, podaci o vezivanju PD-1 za T-ćelije su bili u korelaciji sa njihovim koncentracijama u serumu.
Primer 12
Toksikološke Studije Ponovljene Doze
[0501] Da bi se procenio bezbednosni, toksikokinetički i farmakodinamički profil terapijskih molekula iz ovog otkrića, primerni molekul (hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P)) je administriran cynomolgus majmunima i izvršena je GLP (Good Laboratory Practice) studija doziranja. U ovoj studiji, četiri grupe životinja (10 po grupi, 5 mužjaka i 5 ženki) su tretirane sa hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) ili kontrolnim artiklom, jednom nedeljno infuzijom sa 3 nivoa doze. Životinje su procenjene na bilo kakvu potencijalnu toksičnost tokom 4-nedeljnog perioda doziranja leka, praćene tokom dodatnog 10-nedeljnog perioda bez leka. Eksperimentalni dizajn ove studije je predstavljen u Tabeli 21. Životinje su dozirane jednom nedeljno jednosatnom intravenskom infuzijom pomoću kalibrisane infuzione pumpe na Dane studija 1, 8, 15 i 22. Jedan mužjak i jedna ženka iz svake grupe su žrtvovani na Dan 25, a preostale životinje su žrtvovane na Dan 95 studije. Ispitan je uticaj adminitracije hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) na subpopulacije leukocita u cirkulaciji, uključujući zauzetost PD-1 receptora na T-limfocitima. Pored toga, utvrđeni su profili Anti-lek antitelo (ADA).
11
[0502] Jednom nedeljno intravenozne (IV) infuzije hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) pri 0, 10, 40 i 150 mg/kg kod cynomolgus majmuna su dobro tolerisane i sve životinje su preživele do predviđene eutanazije na Dan 25 ili 95. Nije bilo promena u kliničkim znacima, potrošnji hrane, telesnoj težini, fizičkim, oftalmološkim i neurološkim pregledima, elektrokardiologiji, telesnim temperaturama, frekvencijama disanja, krvi pritisak i srčani ritam, koagulabilnost, klinička hemija i parametri analize urina, težine organa ili ukupnog nalaza obdukcije, povezanih sa hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P).
[0503] Sa hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) povezane promene hematoloških parametara uključuju prolazno smanjenje titra limfocita. Titri limfocita su umereno smanjeni u poređenju sa prethodnom studijom (Dan 1 predoze) na Dan 2 (23 sata nakon infuzije) kod mužjaka i ženki pri ≥ 10 mg/kg, što je statistički značajno za mužjake kod 10 i 40 mg/kg i ženke kod 40 i 150 mg/kg u poređenju sa kontrolama. Titri limfocita su se vratili blizu nivoa pre studije na Dan 8 predoze, ali su blago smanjeni kod pojedinih mu žjaka i ženki pri svim nivoima doze (0.47x do 0.68x pre studije) na Dan 9 (23 sata nakon infuzije). Titri limfocita su se povećavali pre doziranja na Dane 15 i 22, ali su se smanjivali za pojedine mužjake i ženke (0.36x do 0.54x pre studije) na Dane 16 i 23 (23 sata posle infuzije).
[0504] Dozno-nezavisan, privremeni pad populacija imunih ćelija u cirkulaciji, uključujući ukupne leukocite, T ćelije, B ćelije i NK ćelije je uočen 23 sata nakon završetka infuzije kod životinja tretiranih sa hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) u poređenju sa kontrolnom grupom. Najveća veličina promene je uočena nakon admininstracije prve doze na Dan 1; manje privremene promene su uo čene nakon sledećih doza na Dane 8, 15 ili 22. Populacije imunih ćelija su generalno oporavljene do ili blizu polaznih vrednosti 72 sata posle EOI (End of Infusion) i tokom faze oporavka. Nisu primećene promene u cirkulišućim monocitima kod životinja tretiranih sa hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) u poređenju sa kontrolnom grupom.
[0505] Maksimalno vezivanje hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) za ćelije PD-1+/CD4+ i PD-1+/CD8+ ćelije je primećeno tokom faze tretmana sa hPD-1 mAb 7 (1. 2) IgG4 (P), pri svim ispitivanim dozama (10, 40 ili 150 mg/kg). Prilikom oporavka, kod životinja koje nisu razvile anti-lek antitelo (ADA) odgovore, koncentracije hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) u serumu su ostale iznad 29 µg/ml i maksimalno vezivanje hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P ) za PD-1+/CD4 i PD-1+/CD8 T ćelije je održano tokom celog 10-tonedeljnog perioda oporavka. Kod ovih životinja nije bilo dokaza o PD-1 modulaciji na T ćelijama. Kod životinja koje su se oporavile i koje su razvile ADA odgovore, frekvencija PD-1+T ćelija vezanih za MGD012 je opala na polazni nivo. Pad od maksimalnog hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) vezivanja za PD-1+/CD4+ i PD-1+/CD8+ ćelije kod ADA pozitivnih životinja se uglavnom dogodio kada su prividne serumske hPD-1 mAb 7 (1.2 ) koncentracije IgG4 (P) pale ispod približno 25 µg/ml. Međutim, nije poznato da li se ovaj očigledni odnos praga odnosi na ADA negativne životinje, pošto prisustvo ADA kod ADA pozitivnih životinja može doprineti blokiranju vezivanja PD-1 antitela za PD-1.
[0506] Postojale su minimalne razlike povezane sa polom u farmakokinetičkim odgovorima hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P), koji su bili linearni u rasponu doza koje su procenjivane (10 do 150 mg/kg). Za hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) u dozi od 10, 40 i 150 mg/kg, srednja vrednost za oba pola Cmaxje bila 240 µg/ml (0.240 mg/ml), 1078 µg/ml (1.08 mg/ml) i 3938 µg/ml (3.94 µg/ml), a AUC je iznosila 47310 h•µg/mL (47.3 h•mg/ml), 205723 h•µg/ml (206 h•mg/ml) i 745681 h•µg/ml (746 h•mg/ml), respektivno. Srednji klirens nekompartmentalnom analizom (NCA) prvog ciklusa hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) pre pojave ADA je bio 0.21 mL/h/kg, znatno niži od brzine glomerularne filtracije cynomolgus majmuna, kao što bi se očekivalo za protein velike molekulske težine. Srednja zapremina u stanju ravnoteže prema NCA prvog ciklusa hPD-1
11
mAb 7 (1.2) IgG4 (P) je iznosila 68 mL/kg, približno 1.5 x zapremina seruma, ali manje od ekstracelularnog vodenog prostora. To sugeriše da se hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) ekstravira iz vaskularnog odeljka u ekstracelularni prostor tkiva, ali da ovom molekulu nije bio dostupan čitav ekstracelularni prostor. Prosečna vrednost srednjeg vremena zadržavanja leka u organizmu (MRT) prema NCA prvog ciklusa hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) je iznosila 335 sati ili približno 14 dana. Pojava ADA je smanjila koncentracije hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) u Ciklusima 2 do 4. Dokazi o smanjenju koncentracija hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) u serumu nakon ponovljenih doza hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) su primećene kod 7/10, 4/10 i 3/10 životinja u doznim grupama od 10, 40 i 150 mg/kg, respektivno. Prisustvo ADA protiv hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) je potvrđeno kod 4, 2 i 1 od ovih životinja u doznim grupama od 10, 40 i 150 mg/kg, respektivno; sve životinje kod kojih ADA nije potvrđena su bile u terminalnoj grupi za obdukciju tokom koje su koncentracije hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) u serumu verovatno ometale mogućnost otkrivanja ADA. Prema tome, u kasnijoj TK analizi, kada je najniža koncentracija bila niža od prethodne najniže koncentracije, podaci od ovog trenutka na dalje su bili cenzurisani. Iz dvokompartmentalnog modelovanja podataka (iz dva odeljka) u svim ciklusima za grupe od 3 doze, isključujući tačke na koje je uticao ADA, srednje vrednosti za primarne parametre TK za model sa 2 odeljka su bile 0.22 ml/h/kg za klirens, 38.5 ml/kg za početnu zapreminu distribucije (Vi) i 33.8 ml/kg za V2, što je dalo srednju vrednost volumena distribucije u ravnotežnom stanju (Vss) od 72.3 ml/kg i MRT od 329 sati. Ove vrednosti su bile u skladu sa parametrima dobijenim iz NCA prve doze. U odsustvu ADA, simulacije predviđaju da bi se kod nedeljnih doza stabilno stanje kod cynomolgus majmuna postiglo nakon 5. doze, a indeks akumulacije bi bio 2.4.
[0507] Na Dan 25, sa hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P)-povezani minimalni multifokalni perivaskularni mononuklearni ćelijski infiltrati su bili prisutni u površinskom dermisu na IV mestu ubrizgavanja kod mužjaka pri ≥ 40 mg/kg, a kod ženki pri ≥ 10 mg/kg, i bili su očekivana reakcija na ponovljeno ubrizgavanje stranog proteina (monoklonsko antitelo). Na Dan 95 nisu zabeležene mikroskopske promene povezane sa hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P), što ukazuje na oporavak promene povezane sa ispitivanim artiklom koja je bila pisutna na Dan 25.
[0508] Ukratko, rezultati ove studije pokazuju da se primena hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) putem intravenske infuzije jednom nedeljno (Dani 1, 8, 15 i 22) klinički dobro podnosi kod cynomolgus majmuna na nivoima od 10, 40 ili 150 mg/kg. Uočeni efekti su bili ograničeni na prolazno smanjenje cirkulišućih limfocita i minimalne promene na mestu injekcije povezane sa injekcijom stranog proteina. Na osnovu ovih rezultata, smatrano je da nivo bez-zabeleženih neželjenih efekata (NOAEL) iznosi 150 mg/kg (srednja vrednost C max od 3.94 mg/ml i AUC od 746 h•mg/ml).
11
11
12
12
12
12
12
12
12
1
11
12
1
14
1
1
�
1
1
14
14
14
14
14
14
14
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
2
21
22
2
24
2
2
2
2
2
21
21
21
21
21
21
21
22
22
22
22
22
22
22
2
21
22
2
24
�
2
�
2
�
��
��
��
24
��
24
��
2
21
22
2
��
�
�
2
2
�
2
21
22
�
24
�
2
�
2
2
2
21
22
2
24
�
2
2
�
�
2
21
22
�
24
2
�
2
2
2

Claims (18)

Patentni zahtevi
1. Multispecifični anti-humani PD-1-vezujući molekul koji sadrži Varijabilni Domen Teškog Lanca i Varijabilni Domen Lakog Lanca, pri čemu: navedeni Varijabilni Domen Teškog Lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR:147 i navedeni Varijabilni Domen Lakog Lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR:153.
2. Multispecifični anti-humani PD-1-vezujući molekul prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je navedeni molekul molekul koji se bispecifično vezuje, koji može istovremeno da se veže za humani PD-1 i za drugi epitop.
3. Multispecifični anti-humani PD-1-vezujući molekul prema patentnom zahtevu 2pri čemu je navedeni drugi epitop epitop molekula koji učestvuje u regulisanju imunološke kontrolne tačke prisutan na površini imune ćelije, pri čemu pomenuti drugi epitop je epitop od B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD40L, CD47, CD70, CD80, CD86, CD94, CD137, CD137L, CD226, CTLA-4, Galectin-9, GITR, GITRL, HHLA2, ICOS, ICOSL, KIR, LAG-3, LIGHT, MHC klase I ili II, NKG2a, NKG2d, OX40, OX40L, PD1H, PD-1, PD-L1, PD-L2, PVR, SIRPa, TCR, TIGIT, TIM-3 ili VISTA.
4. Multispecifični anti-humani PD-1-vezujući molekul prema patentnom zahtevu 3, pri čemu navedeni drugi epitop je epitop LAG-3.
5. Multispecifični anti-humani PD-1-vezujući molekul prema patentnom zahtevu 4, pri čemu navedeno mesto vezivanja LAG-3 epitopa sadrži:
(A)
(1) CDRH1 Domen, CDRH2 Domen i CDRH3 Domen Varijabilnog Teškog Lanca od LAG-3 mAb1,i respektivno sadrži aminokiselinske sekvence: SEK ID BR:42, SEK ID BR:43 i SEK ID BR: 44; i
(2) CDRL1 Domen, CDRL2 Domen i CDRL3 Domen Varijabilnog Lakog Lanca od LAG-3 mAb1, i respektivno sadrži aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 46, SEK ID BR: 47 i SEK ID BR:
48;
ili
(B)
(1) CDRH1 Domen, CDRH2 Domen i CDRH3 Domen Varijabilnog Teškog Lanca od hLAG-3 mAb 1 VH1, i respektivno sadrži aminokiselinske sekvence: SEK ID BR:42, SEK ID BR: 43 i SEK ID BR: 44; i
(2) CDRL1 Domen, CDRL2 Domen i CDRL3 Domen Varijabilnog Lakog Lanca od LAG-3 mAb 1 VL4, i respektivno sadrži aminokiselinske sekvence: SEK ID BR:55, SEK ID BR:47 i SEK ID BR: 48;
ili
(C)
(1) CDRH1 Domen, CDRH2 Domen i CDRH3 Domen Varijabilnog Teškog Lanca od LAG-3 mAb 6, i respektivno sadrži aminokiselinske sekvence: SEK ID BR:57, SEK ID BR:58 i SEK ID BR:59; i
(2) CDRL1 Domen, CDRL2 Domen i CDRL3 Domen Varijabilnog Lakog Lanca od LAG-3 mAb 6, i respektivno sadrži aminokiselinske sekvence: SEK ID BR:61, SEK ID BR:62 i SEK ID BR:63; ili
(D)
(1) CDRH1 Domen, CDRH2 Domen i CDRH3 Domen Varijabilnog Teškog Lanca odhLAG-3 mAb 6 VH1, i respektivno sadrži aminokiselinske sekvence: SEK ID BR:57, SEK ID BR:58 i SEK ID BR:59; i
2
(2) CDRL1 Domen, CDRL2 Domen i CDRL3 Domen Varijabilnog Lakog Lanca od LAG-3 mAb 6 i respektivno sadrže aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 298, SEK ID BR:62 i SEK ID BR:63.
6. Multispecifični anti-humani PD-1-vezujući molekul prema patentnom zahtevu 5, pri čemu navedeno mesto vezivanja epitopa LAG-3 sadrži:
(1) CDRH1 Domen, CDRH2 Domen i CDRH3 Domen Varijabilnog Teškog Lanca od hLAG-3 mAb 6 VH1, i respektivno sadrži aminokiselinske sekvence: SEK ID BR:57, SEK ID BR: 58 i SEK ID BR: 59; i
(2) CDRL1 Domen, CDRL2 Domen, i CDRL3 Domen Varijabilnog Lakog Lanca od hLAG-3 mAb 6 VL1/VL2 i respektivno sadrži aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 298, SEK ID BR: 62 i SEK ID BR: 63.
7. Multispecifični anti-humani PD-1-vezujući molekul prema patentnom zahtevu 6, pri čemu navedeno mesto vezivanja epitopa LAG-3 sadrži:
(1) Varijabilni Teški Lanac od hLAG-3 mAb 6 VH1 (SEK ID BR: 294) i
(2) Varijabilni Laki Lanac od hLAG-3 mAb 6 VL1 (SEK ID BR: 296).
8. Multispecifični anti-humani PD-1-vezujući molekul prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 7, pri čemu je navedeni molekul:
(A) dijatelo, pri čemu je navedeno dijatelo kovalentno vezan kompleks koji sadrži dva, tri, četiri ili pet polipeptidnih lanaca; ili
(B) trovalentni vezujući molekul I navedeni trovalentni vezujući molekul je kovalentno vezani kompleks koji sadrži tri, četiri ili pet polipeptidnih lanaca ili
(C) bispecifično antitelo.
9. Multispecifični anti-humani PD-1-vezujući molekul prema patentnom zahtevu 8, pri čemu navedeni molekul je dijatelo i sadrži Albumin-Vezujući Domen (ABD).
10. Multispecifični anti-humani PD-1-vezujući molekul prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 9, pri čemu navedeni molekul sadrži Fc Region, i pri čemu:
(a) navedeni Fc Region je IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4 izotip;
(b) navedeni molekul dodatno sadrži zglobni domen;
(c) navedeni Fc Region je IgG4 Fc Domen i navedeno antitelo dodatno sadr ži IgG4 Zglobni Domen koji sadrži stabilizujuću mutaciju; ili
(d) navedeni Fc Region sadrži jednu ili više aminokiselinskih modifikacija koje smanjuju afinitet varijante Fc Regiona za FcyR; i/ili
(e) navedeni Fc Region sadrži jednu ili više aminokiselinskih modifikacija koje produžavaju poluživot u serumu ove varijante Fc Regiona.
11. Multispecifični anti-humani PD-1-vezujući molekul prema patentnom zahtevu 10, pri čemu:
(A) navedene jedna ili više modifikacija koje smanjuju afinitet ove varijante Fc Regiona prema FcyR, i navedene modifikacije sadrže supstituciju L234A; L235A; ili L234A i L235A, pri čemu je navedena numeracija EU indeksa kao i prema Kabat-u; i
(B) navedene jedna ili više modifikacija koje produžavaju poluživot ove varijante Fc Regiona u serumu, i navedene modifikacije koje produžavaju poluživot ove varijante Fc Regiona u serumu uključuju supstituciju M252Y; M252Y i S254T; M252Y i T256E; M252Y, S254T i T256E; ili K288D i H435K, pri čemu je navedena numeracija EU indeksa kao i prema Kabat-u.
12. Multispecifični anti-humani PD-1-vezujući molekul prema bilo kojem od patentnih zahteva 8, 10 ili 11, pri čemu navedeni molekul je dijatelo koje sadrži:
(a) SEK ID BR:267, gde X1je Ala; X2je Tyr; X3je Thr; X4je Glu i SEK ID BR:268; ili
(b) SEK ID BR:267, gde X1je Gly; X2je Tyr; X3je Thr; X4je Glu i SEK ID BR:268; ili
(c) SEK ID BR:267, gde X1je Gly; X2je Met; X3je Ser; X4je Thr, i SEK ID BR:268; ili
(d) SEK ID BR:269 i 270; ili
(e) SEK ID BR:271 i 272; ili
(f) SEK ID BR:273, 274, 275 i 276; ili
(g) SEK ID BR:277, 278, 279 i 280; ili
(h) SEK ID BR:281, 282 i 283; ili
(i) SEK ID BR:290 i 291; ili
(j) SEK ID BR:292 i 293.
13. Multispecifični anti-humani PD-1-vezujući molekul prema patentnom zahtevu 12, pri čemu navedeni molekul je dijatelo koje sadrži SEK ID BR:290 i 291.
14. Kompozicija koja sadrži:
(A) multispecifični anti-humani PD-1-vezujući molekul prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 13; i
(B) farmaceutski prihvatljiv nosač.
15. Multispecifični anti-humani PD-1-vezujući molekul prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 13, ili kompozicija prema patentnom zahtevu 14, za upotrebu u:
(A) postupku stimulisanja imunološkog odgovora posredovanog T-ćelijama kod subjekta kome je to potrebno; ili
(B) lečenje bolesti ili stanja povezanih sa potisnutim imunološkim sistemom.
16. Multispecifični anti-humani PD-1-vezujući molekul ili kompozicija prema patentnom zahtevu 15, za upotrebu prema patentnom zahtevu 15, pri čemu je bolest ili stanje karcinom ili infekcija, opciono što je navedeni karcinom izabran iz grupe koju čine: tumor nadbubrežne žlezde, kancer povezan sa AIDS-om, alveolarni sarkom mekih tkiva, astrocitni tumor, rak bešike, rak kostiju, rak mozga i kičmene moždine, metastatski tumor mozga, rak dojke, tumori karotidnog tela, rak grlića materice, hondrosarkom, kordom, karcinom bubrežnih ć elija hromofoba, karcinom bistrih ć elija, rak debelog creva, kolorektalni karcinom, benigni fibrozni histiocitom kože, desmoplastični tumor malih okruglih ć elija, ependimom, Juingov tumor, ekstraskeletni miksoidni hondrosarkom, nesavršena osteogeneza, fibrozna displazija kosti, rak žučne kese ili žučnog kanala, rak želuca, gestacijska trofoblastna bolest, tumor zametnih ć elija, rak glave i vrata, hepatocelularni karcinom, tumor otočnih ć elija, Kapošijev sarkom, rak bubrega, leukemija, lipom/benigni lipomatozni tumor, liposarkom/maligni lipomatozni tumor, rak jetre, limfom, rak pluć a, meduloblastom, melanom, meningiom, multipla endokrina neoplazija, multipli mijelom, mijelodisplasti čni sindrom, neuroblastom , neuroendokrini tumori, rak jajnika, rak pankreasa, papilarni karcinom štitaste žlezde, paratiroidni tumor, pedijatrijski rak, tumor ovojnice perifernog nerva, feohromocitom, pituitarni tumor, rak prostate, uvealni melanom, retki hematološki poremeć aj, metastatski rak bubrega, rabdoidni tumor, rabdomisarkom, sarkom, rak kože, sarkom mekog tkiva, rak skvamoznih ć elija, rak želuca, sinovijalni sarkom, rak testisa, karcinom timusa, timom, metastatski karcinom štitaste žlezde i rak materice, opciono pri čemu navedeni karcinom je kolorektalni karcinom, hepatocelularni karcinom, gliom, rak bubrega, rak dojke, multipli mijelom, rak bešike, neuroblastom, sarkom, ne-Hočkinov limfom, nedrobnoć elijski karcinom pluć a, rak jajnika, rak pankreasa, rak rektuma, akutna mijeloidna leukemija (AML), hroni čna mijeloidna leukemija (HML), akutna B limfoblastna leukemija (B-ALL), hroni čna limfocitna leukemija (CLL), leukemija vlasastih ć elija (HCL), Blastna neoplazma plazmacitoidnih dendritskih ćelija (BPDCN), ne-Hočkinovi limfomi (NHL), uključujuć i leukemiju mantelnih ć elija (MCL) i limfom malih limfocita (SLL),
2 2
Hočkinov limfom, sistemsku mastocitozu ili Burkitt-ov limfom.
17. Multispecifični anti-humani PD-1-vezujući molekul prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 13, pri čemu je navedeni molekul namenjen za upotrebu u in vitro metodu detekcije PD-1, i pri čemu je navedeni molekul ili navedeno antitelo detektabilno obeleženo.
18. Upotreba multispecifičnog anti-humanog PD-1 vezujućeg molekula prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 13 u in vitro detekciji PD-1, pri čemu su navedeni molekul ili navedeno antitelo detektabilno obeleženi.
2
RS20211102A 2015-07-30 2016-07-28 Molekuli za vezivanje pd-1 i lag-3 i metode njihove upotrebe RS62374B1 (sr)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562198867P 2015-07-30 2015-07-30
US201562239559P 2015-10-09 2015-10-09
US201562255140P 2015-11-13 2015-11-13
US201662322974P 2016-04-15 2016-04-15
EP18199685.1A EP3456346B1 (en) 2015-07-30 2016-07-28 Pd-1 and lag-3 binding molecules and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS62374B1 true RS62374B1 (sr) 2021-10-29

Family

ID=57884977

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20241291A RS66208B1 (sr) 2015-07-30 2016-07-28 Pd-1-vezujući molekuli i metode njihove upotrebe
RS20211102A RS62374B1 (sr) 2015-07-30 2016-07-28 Molekuli za vezivanje pd-1 i lag-3 i metode njihove upotrebe
RS20211320A RS62568B1 (sr) 2015-07-30 2016-07-28 Pd-1-vezujući molekuli i metodi njihove upotrebe

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20241291A RS66208B1 (sr) 2015-07-30 2016-07-28 Pd-1-vezujući molekuli i metode njihove upotrebe

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20211320A RS62568B1 (sr) 2015-07-30 2016-07-28 Pd-1-vezujući molekuli i metodi njihove upotrebe

Country Status (39)

Country Link
US (3) US10577422B2 (sr)
EP (4) EP3981792B1 (sr)
JP (5) JP6959907B2 (sr)
KR (3) KR20250020718A (sr)
CN (4) CN108976300B (sr)
AU (5) AU2016298227B9 (sr)
CA (1) CA2993948A1 (sr)
CL (1) CL2018000254A1 (sr)
CO (1) CO2018000867A2 (sr)
CR (3) CR20200423A (sr)
CY (3) CY1124634T1 (sr)
DK (3) DK3981792T3 (sr)
EA (1) EA201890296A1 (sr)
EC (1) ECSP18006831A (sr)
ES (3) ES2994122T3 (sr)
FI (2) FI3981792T3 (sr)
FR (1) FR24C1033I2 (sr)
GE (6) GEAP202215554A (sr)
HR (3) HRP20211645T1 (sr)
HU (4) HUE068868T2 (sr)
IL (4) IL290571B2 (sr)
JO (2) JO3736B1 (sr)
LT (4) LT3456346T (sr)
MA (2) MA42542B1 (sr)
MD (3) MD3328419T2 (sr)
MX (3) MX2018001227A (sr)
NL (1) NL301287I2 (sr)
PE (3) PE20240111A1 (sr)
PH (1) PH12018500232A1 (sr)
PL (3) PL3456346T3 (sr)
PT (3) PT3456346T (sr)
RS (3) RS66208B1 (sr)
SG (2) SG10201906059VA (sr)
SI (3) SI3328419T1 (sr)
SM (3) SMT202400381T1 (sr)
TW (5) TWI833183B (sr)
UA (1) UA127372C2 (sr)
WO (1) WO2017019846A1 (sr)
ZA (2) ZA201800500B (sr)

Families Citing this family (352)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
PL1879573T3 (pl) 2005-05-10 2013-05-31 Incyte Holdings Corp Modulatory 2,3-dioksygenazy indoloaminy i sposoby ich zastosowania
JP5465720B2 (ja) 2008-07-08 2014-04-09 インサイト・コーポレイション インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼの阻害剤としての１，２，５−オキサジアゾール
US12466897B2 (en) 2011-10-10 2025-11-11 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
RS58514B1 (sr) 2012-06-13 2019-04-30 Incyte Holdings Corp Supstituisana triciklična jedinjenja kao inhibitori fgfr
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
KR102211837B1 (ko) 2013-01-14 2021-02-03 젠코어 인코포레이티드 신규한 이형이량체 단백질
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
PH12015502383B1 (en) 2013-04-19 2023-02-03 Incyte Holdings Corp Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
EP3699195A3 (en) 2014-03-28 2020-11-04 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind to cd38 and cd3
EA035419B9 (ru) * 2014-05-29 2020-08-07 Мэкроудженикс, Инк. Триспецифичные связывающие молекулы и способы их применения
TWI693232B (zh) * 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
EP3223907A2 (en) 2014-11-26 2017-10-04 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cd38
PE20171324A1 (es) 2014-11-26 2017-09-11 Xencor Inc Anticuerpos heterodimericos que se unen a cd3 y a antigenos tumorales
WO2016105450A2 (en) 2014-12-22 2016-06-30 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
MA41551A (fr) 2015-02-20 2017-12-26 Incyte Corp Hétérocycles bicycliques utilisés en tant qu'inhibiteurs de fgfr4
TWI712601B (zh) 2015-02-20 2020-12-11 美商英塞特公司 作為fgfr抑制劑之雙環雜環
CN121159719A (zh) 2015-04-17 2025-12-19 高山免疫科学股份有限公司 具有可调的亲和力的免疫调节蛋白
TWI773646B (zh) * 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
TWI870335B (zh) * 2015-06-12 2025-01-21 美商宏觀基因股份有限公司 變異的嵌合4d5抗體及其與抗pd-1抗體聯合用於治療癌症的應用
MX383464B (es) 2015-07-13 2025-03-14 Cytomx Therapeutics Inc Anticuerpos anti-pd-1, anticuerpos anti-pd-1 activables, y métodos de uso de los mismos.
HUE068868T2 (hu) 2015-07-30 2025-02-28 Macrogenics Inc PD-1-hez kötõdõ molekulák és alkalmazásukra szolgáló eljárások
AU2016317915B2 (en) 2015-09-01 2021-02-18 Agenus Inc. Anti-PD-1 antibodies and methods of use thereof
BR112018006237A2 (pt) 2015-09-29 2018-10-09 Celgene Corp proteínas de ligação a pd-1 e métodos de uso das mesmas
US10273281B2 (en) 2015-11-02 2019-04-30 Five Prime Therapeutics, Inc. CD80 extracellular domain polypeptides and their use in cancer treatment
PE20181326A1 (es) 2015-11-03 2018-08-20 Janssen Biotech Inc Anticuerpos que se unen especificamente a pd-1 y sus usos
CA3007030A1 (en) 2015-12-07 2017-06-15 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and psma
IL260021B (en) 2015-12-14 2022-09-01 Macrogenics Inc Bispecific molecules that are immunoreactive for pd1 and ctla4 and methods for using them
KR102483020B1 (ko) 2016-03-28 2023-01-04 인사이트 코포레이션 Tam 저해제로서의 피롤로트리아진 화합물
WO2017181152A2 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd80 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
MX2018012472A (es) 2016-04-15 2019-08-12 Alpine Immune Sciences Inc Proteinas inmunomoduladoras variantes de ligando icos y sus usos.
JP7010854B2 (ja) 2016-06-14 2022-01-26 ゼンコア インコーポレイテッド 二重特異性チェックポイント阻害剤抗体
SG11201811184UA (en) 2016-06-20 2019-01-30 F Star Beta Ltd Lag -3 binding members
RU2769282C2 (ru) 2016-06-20 2022-03-30 Кимаб Лимитед Анти-PD-L1 и IL-2 цитокины
CN109715663B (zh) 2016-06-28 2022-11-25 Xencor股份有限公司 结合生长抑素受体2的异源二聚抗体
WO2018022945A1 (en) 2016-07-28 2018-02-01 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd112 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US11471488B2 (en) 2016-07-28 2022-10-18 Alpine Immune Sciences, Inc. CD155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
MX2019002867A (es) 2016-09-19 2019-11-12 Celgene Corp Metodos de tratamiento de trastornos inmunologicos usando proteinas de union a pd-1.
JP2019534859A (ja) 2016-09-19 2019-12-05 セルジーン コーポレイション Ｐｄ−１結合タンパク質を使用して白斑を治療する方法
MY203000A (en) 2016-10-14 2024-06-01 Xencor Inc Il15/il15r� heterodimeric fc-fusion proteins
CN110300599B (zh) 2016-12-07 2024-07-02 艾吉纳斯公司 抗体和其使用方法
US11299530B2 (en) 2017-01-05 2022-04-12 Kahr Medical Ltd. SIRP alpha-CD70 fusion protein and methods of use thereof
US11566060B2 (en) 2017-01-05 2023-01-31 Kahr Medical Ltd. PD1-CD70 fusion protein and methods of use thereof
RU2769769C2 (ru) 2017-01-05 2022-04-05 Кахр Медикал Лтд. СЛИТЫЙ БЕЛОК SIRPα-4-1BBL И СПОСОБЫ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ
CN110536693B (zh) 2017-01-05 2023-12-22 卡尔医学有限公司 Pd1-41bbl融合蛋白及使用其的方法
EP3565841A1 (en) 2017-01-06 2019-11-13 Crescendo Biologics Limited Single domain antibodies to programmed cell death (pd-1)
EP3569616B1 (en) * 2017-01-13 2021-09-29 Taizhou Hanzhong Biopharmaceutics, Inc. Monoclonal antibody against pd-1 and applications thereof
JP7275030B2 (ja) 2017-01-20 2023-05-17 タユー ファシャ バイオテック メディカル グループ カンパニー， リミテッド 抗ｐｄ－１抗体およびその使用
CN108341871A (zh) * 2017-01-24 2018-07-31 三生国健药业（上海）股份有限公司 抗pd-1单克隆抗体及其制备方法和应用
US10577421B2 (en) * 2017-02-22 2020-03-03 I-Mab Anti-LAG-3 antibodies and uses thereof
AU2018224094B2 (en) 2017-02-24 2025-04-17 Macrogenics, Inc. Bispecific binding molecules that are capable of binding CD137 and tumor antigens, and uses thereof
TW202428301A (zh) 2017-02-28 2024-07-16 法商賽諾菲公司 治療性rna
SG11201907769XA (en) 2017-03-16 2019-09-27 Alpine Immune Sciences Inc Cd80 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
KR20190141146A (ko) 2017-03-16 2019-12-23 알파인 이뮨 사이언시즈, 인코포레이티드 Pd-l2 변이체 면역조절 단백질 및 그의 용도
EP3601355A1 (en) 2017-03-31 2020-02-05 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
TWI788340B (zh) 2017-04-07 2023-01-01 美商必治妥美雅史谷比公司 抗icos促效劑抗體及其用途
MX2019012295A (es) 2017-04-14 2020-02-07 Tollnine Inc Polinucleotidos inmunomoduladores, conjugados de anticuerpos de los mismos y metodos para su uso.
JOP20190248A1 (ar) 2017-04-21 2019-10-20 Amgen Inc بروتينات ربط مولد ضد trem2 واستخداماته
KR20190139216A (ko) 2017-04-28 2019-12-17 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. Cd80 세포외 도메인 폴리펩티드를 이용한 치료 방법
WO2018217944A1 (en) * 2017-05-24 2018-11-29 Sutro Biopharma, Inc. Pd-1/lag3 bi-specific antibodies, compositions thereof, and methods of making and using the same
AR111960A1 (es) 2017-05-26 2019-09-04 Incyte Corp Formas cristalinas de un inhibidor de fgfr y procesos para su preparación
ES2965352T3 (es) 2017-05-30 2024-04-12 Bristol Myers Squibb Co Tratamiento de tumores positivos a gen 3 de activación de linfocitos (LAG-3)
JP2020522495A (ja) 2017-05-30 2020-07-30 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 抗ｌａｇ−３抗体、ｐｄ−１経路阻害剤および免疫療法剤の組み合わせを含む組成物
CN110678200B (zh) 2017-05-30 2024-05-17 百时美施贵宝公司 包含抗lag-3抗体或抗lag-3抗体和抗pd-1或抗pd-l1抗体的组合物
KR20240149982A (ko) 2017-06-01 2024-10-15 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항-pd-1 항체를 사용하여 종양을 치료하는 방법
CR20190550A (es) 2017-06-05 2020-04-05 Janssen Biotech Inc Anticuerpos que se unen específicamente a pd-1 y métodos de uso
WO2019005635A2 (en) * 2017-06-25 2019-01-03 Systimmune, Inc. ANTI-PD-1 ANTIBODIES AND METHODS OF PREPARATION AND USE
CN118027197A (zh) * 2017-07-06 2024-05-14 美勒斯公司 调节由细胞表达的生物活性的抗体
EP4029877B1 (en) 2017-08-03 2024-01-17 Amgen Inc. Interleukin-21 muteins and methods of treatment
SG11202000198QA (en) 2017-08-04 2020-02-27 Genmab As Binding agents binding to pd-l1 and cd137 and use thereof
US11306144B2 (en) 2017-08-25 2022-04-19 Five Prime Therapeutics, Inc. B7-H4 antibodies and methods of use thereof
MA50655B1 (fr) 2017-09-27 2021-11-30 Incyte Corp Sels de dérivés de pyrrolotriazine utiles en tant qu'inhibiteurs de tam
JP7749319B2 (ja) 2017-10-10 2025-10-06 アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド Ｃｔｌａ－４変異型免疫調節タンパク質およびそれらの使用
CN111247169A (zh) 2017-10-15 2020-06-05 百时美施贵宝公司 治疗肿瘤的方法
BR112020007542A2 (pt) 2017-10-18 2020-12-01 Alpine Immune Sciences, Inc. proteínas imunomoduladoras ligantes de icos variantes e composições e métodos relacionados
WO2019090330A1 (en) 2017-11-06 2019-05-09 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
JP2021502100A (ja) * 2017-11-08 2021-01-28 ゼンコア インコーポレイテッド 新規抗ｐｄ−１配列を用いた二重特異性および単一特異性抗体
EP3710478A1 (en) 2017-11-13 2020-09-23 Crescendo Biologics Limited Molecules that bind to cd137 and psma
CN109897111B (zh) * 2017-12-08 2021-02-23 杭州翰思生物医药有限公司 抗pd-1/cd47的双特异性抗体及其应用
IL275426B2 (en) 2017-12-19 2025-03-01 Xencor Inc Engineered il-2 fc fusion proteins
CN109971714B (zh) * 2017-12-28 2023-06-20 上海细胞治疗研究院 自表达pd-1抗体并靶向间皮素的嵌合抗原受体修饰t细胞及其用途
CN109971712B (zh) * 2017-12-28 2023-06-20 上海细胞治疗研究院 特异性靶向cd19抗原且高水平稳定表达pd-1抗体的car-t细胞及用途
AU2019205273B2 (en) * 2018-01-03 2024-04-04 Alpine Immune Sciences, Inc. Multi-domain immunomodulatory proteins and methods of use thereof
TW201930344A (zh) 2018-01-12 2019-08-01 美商安進公司 抗ｐｄ-１抗體及治療方法
CA3096287A1 (en) 2018-01-22 2019-07-25 Pascal Biosciences Inc. Cannabinoids and derivatives for promoting immunogenicity of tumor and infected cells
US12398209B2 (en) 2018-01-22 2025-08-26 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating cancers with antagonistic anti-PD-1 antibodies
WO2019148410A1 (en) 2018-02-01 2019-08-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-pd-1 antibodies
WO2019148412A1 (en) * 2018-02-01 2019-08-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-pd-1/lag3 bispecific antibodies
GB201802573D0 (en) * 2018-02-16 2018-04-04 Crescendo Biologics Ltd Therapeutic molecules that bind to LAG3
BR112020016986A2 (pt) 2018-02-21 2021-03-02 Five Prime Therapeutics, Inc. formulações de anticorpo contra b7-h4
EP3755716A4 (en) * 2018-02-23 2021-08-04 Eucure (Beijing) Biopharma Co., Ltd ANTI-PD-1 ANTIBODIES AND USES THEREOF
TWI877770B (zh) 2018-02-27 2025-03-21 美商英塞特公司 作為a2a / a2b抑制劑之咪唑并嘧啶及三唑并嘧啶
KR20200144094A (ko) 2018-03-02 2020-12-28 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. B7-h4 항체 및 이의 사용 방법
US20210115138A1 (en) * 2018-03-20 2021-04-22 WuXi Biologics Ireland Limited Novel bispecific pd-1/lag-3 antibody molecules
TWI841554B (zh) 2018-03-21 2024-05-11 丹麥商珍美寶股份有限公司 以鉑為主之劑與抗組織因子抗體－藥物共軛物的組合治療癌症之方法
EP3768715A1 (en) 2018-03-23 2021-01-27 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against mica and/or micb and uses thereof
CN108546297B (zh) * 2018-03-29 2019-08-02 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 针对pd-1的单克隆抗体及其应用
KR20200139724A (ko) 2018-03-30 2020-12-14 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 종양을 치료하는 방법
CN112584901A (zh) * 2018-04-04 2021-03-30 真和制药有限公司 用于阻断非糖基化的pd-1多肽之间的相互作用的方法和组合物
CA3096052A1 (en) 2018-04-04 2019-10-10 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
AU2019254215A1 (en) * 2018-04-15 2020-10-22 Salubris (Chengdu) Biotech Co., Ltd Antibodies binding PD-1 and uses thereof
EP3781598A1 (en) 2018-04-18 2021-02-24 Xencor, Inc. Tim-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and tim-3 antigen binding domains
SG11202010163QA (en) 2018-04-18 2020-11-27 Xencor Inc Pd-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and pd-1 antigen binding domains and uses thereof
EP3788079A4 (en) * 2018-05-03 2022-12-21 Shanghai Epimab Biotherapeutics Co., Ltd. ANTIBODIES WITH HIGH AFFINITY TO PD-1 AND LAG-3 AND BI-SPECIFIC BINDING PROTEINS PRODUCTION THEREOF
AU2019262579B2 (en) 2018-05-04 2024-09-12 Incyte Corporation Salts of an FGFR inhibitor
HRP20241288T1 (hr) 2018-05-04 2024-12-06 Incyte Corporation Čvrsti oblici fgfr inhibitora i postupci za njihovu proizvodnju
TW202506732A (zh) 2018-05-07 2025-02-16 丹麥商珍美寶股份有限公司 使用抗ｐｄ－１抗體與抗組織因子抗體－藥物共軛體之組合以治療癌症之方法
UA129352C2 (uk) 2018-05-07 2025-03-26 Генмаб А/С Способи лікування раку за допомогою комбінації антитіла до pd-1 і кон'югата антитіла до тканинного фактора та лікарського засобу
EP3810610A1 (en) 2018-05-18 2021-04-28 Incyte Corporation Fused pyrimidine derivatives as a2a / a2b inhibitors
WO2019227490A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Compositions and methods for imaging
EP3818085A4 (en) 2018-06-01 2022-03-09 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. COMPOSITIONS AND THEIR USES FOR THE TREATMENT OF DISEASES OR DISORDERS
US12448448B2 (en) * 2018-06-20 2025-10-21 Incyte Corporation Anti-PD-1 antibodies and uses thereof
AR117600A1 (es) 2018-06-29 2021-08-18 Incyte Corp Formulaciones de un inhibidor de axl / mer
WO2020010197A1 (en) 2018-07-05 2020-01-09 Incyte Corporation Fused pyrazine derivatives as a2a / a2b inhibitors
CN110684113A (zh) * 2018-07-06 2020-01-14 复旦大学 一种抗PD-1抗原和抗c-Met抗原的双特异性抗体及其构建方法
EP3820887A4 (en) 2018-07-11 2022-04-20 KAHR Medical Ltd. Pd1-4-1bbl variant fusion protein and methods of use thereof
KR102945860B1 (ko) 2018-07-11 2026-03-31 카 메디컬 리미티드 SIRPalpha-4-1BBL 변이체 융합 단백질 및 이의 사용 방법
GB201811450D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Delta Ltd Mesothelin and CD137 binding molecules
PT3820569T (pt) 2018-07-12 2025-01-14 Invox Pharma Ltd Moléculas de anticorpo que se ligam a pd-l1 e cd137
GB201811410D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd OX40 Binding molecules
GB201811415D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd Anti-Mesothelin Anti bodies
GB201811404D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd Anti-CD137 Antibodies
GB201811403D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd Antibody molecules
GB201811408D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd CD137 Binding Molecules
ES3044118T3 (en) 2018-07-12 2025-11-26 Invox Pharma Ltd Antibody molecules that bind cd137 and ox40
US12258407B2 (en) 2018-07-19 2025-03-25 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Anti-PD-1 antibodies, dosages and uses thereof
CN112739371A (zh) 2018-07-26 2021-04-30 百时美施贵宝公司 用于治疗癌症的lag-3组合疗法
BR112021004553A2 (pt) 2018-09-17 2021-06-08 Abcuro, Inc. anticorpos anti-klrg1
BR112021005585A2 (pt) 2018-09-27 2021-06-29 Celgene Corporation proteínas de ligação a sirpa e métodos de uso das mesmas
US11591390B2 (en) 2018-09-27 2023-02-28 Celgene Corporation SIRP-α binding proteins and methods of use thereof
AU2019355971B2 (en) 2018-10-03 2025-05-08 Xencor, Inc. IL-12 heterodimeric Fc-fusion proteins
US11066404B2 (en) 2018-10-11 2021-07-20 Incyte Corporation Dihydropyrido[2,3-d]pyrimidinone compounds as CDK2 inhibitors
LT4445958T (lt) 2018-10-19 2025-12-10 Bristol-Myers Squibb Company Kompleksinė terapija, skirta melanomai gydyti
WO2020086724A1 (en) 2018-10-23 2020-04-30 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
TWI844571B (zh) 2018-10-30 2024-06-11 丹麥商珍美寶股份有限公司 使用抗血管內皮生長因子（ｖｅｇｆ）抗體與抗組織因子（ｔｆ）抗體－藥物共軛體之組合以治療癌症之方法
JP7575100B2 (ja) 2018-11-13 2024-10-29 ジェイエヌ バイオサイエンシーズ エルエルシー 免疫細胞活性化のための二重特異性抗体
CN113316590B (zh) 2018-11-16 2025-02-28 百时美施贵宝公司 抗nkg2a抗体及其用途
CA3120868A1 (en) 2018-11-30 2020-06-04 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd86 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
KR102835299B1 (ko) 2018-12-04 2025-07-18 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 다중 동위원소체 반응 모니터링에 의한 샘플내 보정 곡선을 사용한 분석 방법
EP3666905A1 (en) 2018-12-11 2020-06-17 Sanofi E. coli positive for pks island as marker of positive response to anti-pd1 therapy in colorectal cancer
MX2021007274A (es) 2018-12-21 2021-07-15 Ose Immunotherapeutics Molecula bifuncional anti-pd-1/sirpa.
KR20210108978A (ko) 2018-12-21 2021-09-03 오제 이뮈노테라프틱스 이작용성 항-pd-1/il-7 분자
CN111349162A (zh) * 2018-12-21 2020-06-30 神州细胞工程有限公司 人源化抗pd-1抗体及其用途
CN111423510B (zh) * 2019-01-10 2024-02-06 迈威(上海)生物科技股份有限公司 重组抗人pd-1抗体及其应用
AU2020210614A1 (en) 2019-01-21 2021-08-26 Sanofi Therapeutic RNA and anti-PD1 antibodies for advanced stage solid tumor cancers
CN113795511B (zh) 2019-01-23 2024-07-23 大有华夏生物医药集团有限公司 抗pd-l1双抗体及其用途
TWI829857B (zh) 2019-01-29 2024-01-21 美商英塞特公司 作為a2a / a2b抑制劑之吡唑并吡啶及三唑并吡啶
EP3922647A4 (en) 2019-02-03 2023-05-24 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. ANTI-PD-1 ANTIBODIES, ANTIGEN-BINDING FRAGMENT THEREOF AND PHARMACEUTICAL USE THEREOF
WO2020165374A1 (en) 2019-02-14 2020-08-20 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecule comprising il-15ra
PH12021551976A1 (en) 2019-02-15 2022-07-04 Incyte Corp Cyclin-dependent kinase 2 biomarkers and uses thereof
US11384083B2 (en) 2019-02-15 2022-07-12 Incyte Corporation Substituted spiro[cyclopropane-1,5′-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin]-6′(7′h)-ones as CDK2 inhibitors
US12589132B2 (en) 2019-02-22 2026-03-31 Five Prime Therapeutics, Inc. CD80 extracellular domain Fc fusion proteins for treating PD-L1 negative tumors
CA3132185A1 (en) 2019-03-01 2020-09-10 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind enpp3 and cd3
TW202100520A (zh) 2019-03-05 2021-01-01 美商英塞特公司 作為cdk2 抑制劑之吡唑基嘧啶基胺化合物
US11628162B2 (en) 2019-03-08 2023-04-18 Incyte Corporation Methods of treating cancer with an FGFR inhibitor
KR20210146348A (ko) 2019-03-28 2021-12-03 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 종양을 치료하는 방법
WO2020198676A1 (en) 2019-03-28 2020-10-01 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
WO2020205560A1 (en) 2019-03-29 2020-10-08 Incyte Corporation Sulfonylamide compounds as cdk2 inhibitors
WO2020223469A1 (en) 2019-05-01 2020-11-05 Incyte Corporation N-(1-(methylsulfonyl)piperidin-4-yl)-4,5-di hydro-1h-imidazo[4,5-h]quinazolin-8-amine derivatives and related compounds as cyclin-dependent kinase 2 (cdk2) inhibitors for treating cancer
US11447494B2 (en) 2019-05-01 2022-09-20 Incyte Corporation Tricyclic amine compounds as CDK2 inhibitors
WO2020239558A1 (en) 2019-05-24 2020-12-03 Pfizer Inc. Combination therapies using cdk inhibitors
WO2020243570A1 (en) 2019-05-30 2020-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and combination therapy
KR20220016155A (ko) 2019-05-30 2022-02-08 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 면역-종양학 (i-o) 요법에 적합한 대상체를 확인하는 방법
US20220363760A1 (en) 2019-05-30 2022-11-17 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signature for suitability to immuno-oncology therapy
CN112225809B (zh) * 2019-06-30 2023-09-05 福州创方医药科技有限公司 一种靶向pd-1的单克隆抗体及其应用
CN117447596A (zh) * 2019-06-30 2024-01-26 福州创方医药科技有限公司 一种靶向pd-1的单克隆抗体及其应用
JP6881658B2 (ja) 2019-07-05 2021-06-02 小野薬品工業株式会社 Ｐｄ−１／ｃｄ３二重特異性タンパク質による血液がん治療
US11591329B2 (en) 2019-07-09 2023-02-28 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as FGFR inhibitors
JP2022547650A (ja) * 2019-07-09 2022-11-15 カディラ・ヘルスケア・リミテッド ヒトプログラム細胞死受容体ｐｄ－１に対する抗体
CN112239506B (zh) * 2019-07-16 2023-09-26 复旦大学 一种抗PD-1及c-Met抗原的小分子双特异性抗体Diabody
KR20220044527A (ko) 2019-08-01 2022-04-08 인사이트 코포레이션 Ido 억제제의 투여 요법
BR112022002028A2 (pt) * 2019-08-02 2022-04-12 Cttq Akeso Shanghai Biomed Tech Co Ltd Anticorpo anti-pd-1 e uso farmacêutico do mesmo
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
US20220332825A1 (en) 2019-08-08 2022-10-20 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Bispecific protein
CA3150681A1 (en) 2019-08-14 2021-02-18 Incyte Corporation Imidazolyl pyrimidinylamine compounds as cdk2 inhibitors
WO2021055994A1 (en) 2019-09-22 2021-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Quantitative spatial profiling for lag-3 antagonist therapy
KR20220066950A (ko) 2019-09-25 2022-05-24 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 암 요법을 위한 복합 바이오마커
WO2021063201A1 (zh) * 2019-09-30 2021-04-08 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 抗pd-1抗体及其用途
WO2021067374A1 (en) 2019-10-01 2021-04-08 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
US11851426B2 (en) 2019-10-11 2023-12-26 Incyte Corporation Bicyclic amines as CDK2 inhibitors
CA3157361A1 (en) 2019-10-14 2021-04-22 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
WO2021076728A1 (en) 2019-10-16 2021-04-22 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
US20220390455A1 (en) 2019-11-05 2022-12-08 Bristol-Myers Squibb Company M-protein assays and uses thereof
WO2021092221A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
WO2021092220A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
US20220411499A1 (en) 2019-11-08 2022-12-29 Bristol-Myers Squibb Company LAG-3 Antagonist Therapy for Melanoma
WO2021097256A1 (en) 2019-11-14 2021-05-20 Cohbar, Inc. Cxcr4 antagonist peptides
WO2021097800A1 (en) * 2019-11-22 2021-05-27 Abl Bio Inc. Anti-pd-l1/anti-b7-h3 multispecific antibodies and uses thereof
CA3163875A1 (en) 2019-12-04 2021-06-10 Incyte Corporation Tricyclic heterocycles as fgfr inhibitors
JP7832891B2 (ja) 2019-12-04 2026-03-18 インサイト・コーポレイション Ｆｇｆｒ阻害剤の誘導体
WO2021122866A1 (en) 2019-12-17 2021-06-24 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecules comprising an il-7 variant
IL294085A (en) 2019-12-19 2022-08-01 Bristol Myers Squibb Co Combinations of dgk inhibitors and checkpoint antagonists
EP4079763A4 (en) * 2019-12-20 2023-10-11 Guangdong Feipeng Pharmaceutical Co., Ltd MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST HUMAN PROGRAMMED DEATH-1 (PD-1)
CN114901306A (zh) * 2019-12-23 2022-08-12 宏观基因有限公司 用于治疗癌症的疗法
US20210205311A1 (en) * 2020-01-03 2021-07-08 Incyte Corporation Combination Therapy Comprising A2A/A2B and PD-1/PD-L1 Inhibitors
IL294557A (en) 2020-01-07 2022-09-01 Univ Texas Improved human methylthioadenosine/adenosine depleting enzyme variants for cancer therapy
US12012409B2 (en) 2020-01-15 2024-06-18 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as FGFR inhibitors
WO2021152005A1 (en) 2020-01-28 2021-08-05 Universite De Strasbourg Antisense oligonucleotide targeting linc00518 for treating melanoma
CN115362270A (zh) 2020-01-29 2022-11-18 得克萨斯州大学系统董事会 Egfr/her2酪氨酸激酶抑制剂和/或her2/her3抗体在具有nrg1融合的癌症的治疗中的用途
JP7777533B2 (ja) 2020-01-29 2025-11-28 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム Ｎｒｇ１融合体を有するがんの治療のためのポジオチニブの使用
CA3168923A1 (en) 2020-01-30 2021-08-05 ONA Therapeutics S.L. Combination therapy for treatment of cancer and cancer metastasis
JP2023514152A (ja) 2020-02-06 2023-04-05 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｉｌ－１０およびその使用
IL295434A (en) 2020-02-21 2022-10-01 Macrogenics Inc cd137 binding molecules and their uses
US20230090014A1 (en) * 2020-02-28 2023-03-23 Nanjing Sanhome Pharmaceutical Co., Ltd. Anti-cd47/anti-pd-l1 antibody and applications thereof
CA3169523A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 Jaume Pons Transglutaminase-mediated conjugation
AU2021232158A1 (en) 2020-03-06 2022-09-29 Ona Therapeutics, S.L. Anti-CD36 antibodies and their use to treat cancer
WO2021178779A1 (en) * 2020-03-06 2021-09-10 Incyte Corporation Combination therapy comprising axl/mer and pd-1/pd-l1 inhibitors
EP4114398A1 (en) 2020-03-06 2023-01-11 Celgene Quanticel Research, Inc. Combination of an lsd-1 inhibitor and nivolumab for use in treating sclc or sqnsclc
AU2021254794A1 (en) 2020-04-16 2022-12-15 Incyte Corporation Fused tricyclic KRAS inhibitors
CN113583127A (zh) * 2020-04-30 2021-11-02 迈威(上海)生物科技股份有限公司 一种靶向nkg2a和pd-l1的双特异性抗体及应用
CN115943312A (zh) 2020-05-07 2023-04-07 法国居里学院 免疫抑制性成纤维细胞群体的生物标志物antxr1及其在预测对免疫疗法的反应中的用途
EP4146684A2 (en) 2020-05-08 2023-03-15 Alpine Immune Sciences, Inc. April and baff inhibitory immunomodulatory proteins with and without a t cell inhibitory protein and methods of use thereof
US11739102B2 (en) 2020-05-13 2023-08-29 Incyte Corporation Fused pyrimidine compounds as KRAS inhibitors
WO2021231976A1 (en) 2020-05-14 2021-11-18 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (psma) and cd3
KR20230035576A (ko) 2020-07-07 2023-03-14 비온테크 에스이 Hpv 양성 암 치료용 rna
CA3192204A1 (en) 2020-08-19 2022-02-24 Xencor, Inc. Anti-cd28 and/or anti-b7h3 compositions
CA3188732A1 (en) * 2020-08-19 2022-02-24 Nathan HIGGINSON-SCOTT Multi-paratopic anti-pd-1 antibodies and uses thereof
US11999752B2 (en) 2020-08-28 2024-06-04 Incyte Corporation Vinyl imidazole compounds as inhibitors of KRAS
IL300813A (en) 2020-08-28 2023-04-01 Bristol Myers Squibb Co LAG-3 antagonist therapy for hepatocellular carcinoma
AU2021334361A1 (en) 2020-08-31 2023-05-11 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and immunotherapy
US11767320B2 (en) 2020-10-02 2023-09-26 Incyte Corporation Bicyclic dione compounds as inhibitors of KRAS
CN116406369A (zh) 2020-10-05 2023-07-07 百时美施贵宝公司 用于浓缩蛋白质的方法
US20230364127A1 (en) 2020-10-06 2023-11-16 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicle-aso constructs targeting stat6
CA3193688A1 (en) 2020-10-09 2022-04-14 Vladimir Lazar Novel prediction method and gene signatures for the treatment of cancer
KR20230093282A (ko) 2020-10-23 2023-06-27 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 폐암에 대한 lag-3 길항제 요법
MX2023004847A (es) 2020-10-28 2023-07-11 Ikena Oncology Inc Combinación de un inhibidor del receptor de hidrocarburos de arilo (ahr) con un inhibidor de pdx o doxorrubicina.
AU2021383611A1 (en) 2020-11-17 2023-06-29 Peter Maccallum Cancer Institute Methods of treating cancer with a combination of tucatinib and an anti-pd-1/anti-pd-l1 antibody
WO2022112198A1 (en) 2020-11-24 2022-06-02 Worldwide Innovative Network Method to select the optimal immune checkpoint therapies
US20220168293A1 (en) 2020-12-02 2022-06-02 Pfizer Inc. Time to resolution of axitinib-related adverse events
WO2022120179A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures and uses thereof
KR20220082775A (ko) * 2020-12-10 2022-06-17 주식회사 유틸렉스 항-pd-1 항체 및 이의 용도
US20240067727A1 (en) 2020-12-17 2024-02-29 Ose Immunotherapeutics Bifunctional anti-pd1/il-7 molecules
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
US20220233693A1 (en) 2020-12-28 2022-07-28 Bristol-Myers Squibb Company Antibody Compositions and Methods of Use Thereof
JP2024501029A (ja) 2020-12-28 2024-01-10 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｐｄ１／ｐｄ－ｌ１抗体の皮下投与
TW202241441A (zh) 2020-12-29 2022-11-01 美商英塞特公司 包含ａ２ａ／ａ２ｂ抑制劑、ｐｄ－１／ｐｄ－ｌ１抑制劑及抗ｃｄ７３抗體之組合療法
WO2022148781A1 (en) 2021-01-05 2022-07-14 Institut Curie Combination of mcoln activators and immune checkpoint inhibitors
KR102618718B1 (ko) * 2021-01-11 2023-12-29 주식회사 유틸렉스 항-4-1bb 항체 및 pd-1 단백질 또는 이의 단편을 포함하는 이중특이적 에피토프 결합 단백질 및 이의 용도
US20240384350A1 (en) 2021-01-29 2024-11-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods of treating cancer with kinase inhibitors
CN113336848B (zh) * 2021-02-03 2022-08-19 上海莱馥医疗科技有限公司 一种抗pd-1抗体及其用途
US11739144B2 (en) 2021-03-09 2023-08-29 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and CLDN6
EP4305065A1 (en) 2021-03-10 2024-01-17 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and gpc3
TW202304506A (zh) 2021-03-25 2023-02-01 日商安斯泰來製藥公司 涉及抗claudin 18.2抗體的組合治療以治療癌症
CN117858719A (zh) 2021-03-29 2024-04-09 朱诺治疗学股份有限公司 使用检查点抑制剂疗法和car t细胞疗法的组合进行给药和治疗的方法
EP4314068A1 (en) 2021-04-02 2024-02-07 The Regents Of The University Of California Antibodies against cleaved cdcp1 and uses thereof
EP4319755A4 (en) 2021-04-08 2025-03-26 Board of Regents, The University of Texas System Compounds and methods for theranostic targeting of parp activity
MX2023011964A (es) 2021-04-09 2024-01-08 Ose Immunotherapeutics Nuevo andamio para moléculas bifuncionales con propiedades mejoradas.
EP4320156A1 (en) 2021-04-09 2024-02-14 Ose Immunotherapeutics Scaffold for bifunctioanl molecules comprising pd-1 or cd28 and sirp binding domains
WO2022221170A1 (en) 2021-04-12 2022-10-20 Incyte Corporation Combination therapy comprising an fgfr inhibitor and a nectin-4 targeting agent
EP4337694A1 (en) 2021-05-12 2024-03-20 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Lag3 and gal3 inhibitory agents, xbp1, cs1, and cd138 peptides, and methods of use thereof
GB202107994D0 (en) 2021-06-04 2021-07-21 Kymab Ltd Treatment of cancer
CA3220155A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Incyte Corporation Tricyclic heterocycles as fgfr inhibitors
US11939331B2 (en) 2021-06-09 2024-03-26 Incyte Corporation Tricyclic heterocycles as FGFR inhibitors
US11981671B2 (en) 2021-06-21 2024-05-14 Incyte Corporation Bicyclic pyrazolyl amines as CDK2 inhibitors
MX2024000357A (es) 2021-07-07 2024-02-12 Incyte Corp Compuestos triciclicos como inhibidores de homologo de oncogen viral de sarcoma de rata kirsten (kras).
CA3224640A1 (en) * 2021-07-09 2023-01-12 Krishnan SAMPATHKUMAR Pharmaceutical compositions of a pd-1 antibody and use of the same
CA3225254A1 (en) 2021-07-13 2023-01-19 BioNTech SE Multispecific binding agents against cd40 and cd137 in combination therapy for cancer
WO2023287896A1 (en) 2021-07-14 2023-01-19 Incyte Corporation Tricyclic compounds as inhibitors of kras
KR20240042476A (ko) 2021-07-30 2024-04-02 오엔에이 테라퓨틱스 에스.엘. 항-cd36 항체 및 암을 치료하기 위한 이의 용도
US12441742B2 (en) 2021-08-31 2025-10-14 Incyte Corporation Naphthyridine compounds as inhibitors of KRAS
WO2023049697A1 (en) 2021-09-21 2023-03-30 Incyte Corporation Hetero-tricyclic compounds as inhibitors of kras
WO2023056361A1 (en) 2021-09-29 2023-04-06 Board Of Regents, The University Of Texas System Anti-hsp70 antibodies and therapeutic uses thereof
WO2023051926A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 BioNTech SE Treatment involving non-immunogenic rna for antigen vaccination and pd-1 axis binding antagonists
CA3234375A1 (en) 2021-10-01 2023-04-06 Incyte Corporation Pyrazoloquinoline kras inhibitors
TW202327595A (zh) 2021-10-05 2023-07-16 美商輝瑞大藥廠 用於治療癌症之氮雜內醯胺化合物的組合
EP4413040A1 (en) 2021-10-06 2024-08-14 Genmab A/S Multispecific binding agents against pd-l1 and cd137 in combination
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
CA3235146A1 (en) 2021-10-14 2023-04-20 Incyte Corporation Quinoline compounds as inhibitors of kras
WO2023070100A1 (en) * 2021-10-21 2023-04-27 Seismic Therapeutic, Inc. Dual targeted immune regulating compositions
CA3224890A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for hematological cancer
WO2023079428A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Pfizer Inc. Combination therapies using tlr7/8 agonist
WO2023083439A1 (en) 2021-11-09 2023-05-19 BioNTech SE Tlr7 agonist and combinations for cancer treatment
MX2024006113A (es) 2021-11-22 2024-07-29 Incyte Corp Terapia de combinación que comprende un inhibidor del receptor del factor de crecimiento de fibroblastos (fgfr) y un inhibidor del sarcoma de rata de kirsten (kras).
US11976073B2 (en) 2021-12-10 2024-05-07 Incyte Corporation Bicyclic amines as CDK2 inhibitors
EP4452982A1 (en) 2021-12-22 2024-10-30 Incyte Corporation Salts and solid forms of an fgfr inhibitor and processes of preparing thereof
KR20240135661A (ko) 2022-01-26 2024-09-11 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 간세포성 암종에 대한 조합 요법
WO2023164638A1 (en) 2022-02-25 2023-08-31 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for colorectal carcinoma
WO2023168404A1 (en) 2022-03-04 2023-09-07 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor
JP2025508076A (ja) 2022-03-08 2025-03-21 アレンティス・セラピューティクス・アクチェンゲゼルシャフト Ｔ細胞の利用能を向上させるための抗クローディン－１抗体の使用
WO2023178329A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Bristol-Myers Squibb Company Methods of isolating polypeptides
WO2023196987A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
JP7851417B2 (ja) 2022-04-08 2026-04-24 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 三次リンパ組織様構造の機械学習識別、分類、及び定量化
EP4522657A1 (en) 2022-05-12 2025-03-19 Genmab A/S Binding agents capable of binding to cd27 in combination therapy
KR20250022071A (ko) 2022-06-02 2025-02-14 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항체 조성물 및 이의 이용 방법
KR20250035054A (ko) * 2022-06-07 2025-03-11 인사이트 코포레이션 암을 치료하기 위한 항-pd-1 활성제, 항-tim-3 활성제, 및 항-lag-3 활성제의 조합 요법
AU2023284958A1 (en) 2022-06-08 2025-01-02 Incyte Corporation Tricyclic triazolo compounds as dgk inhibitors
WO2024003360A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Institut Curie Biomarkers and uses thereof for the treatment of neuroblastoma
US20240101557A1 (en) 2022-07-11 2024-03-28 Incyte Corporation Fused tricyclic compounds as inhibitors of kras g12v mutants
US12600723B2 (en) 2022-07-18 2026-04-14 Incyte Corporation Tetracyclic compounds as DGK inhibitors
US12600722B2 (en) 2022-07-18 2026-04-14 Incyte Corporation Tetracyclic compounds as DGK inhibitors
EP4310197A1 (en) 2022-07-21 2024-01-24 Fundación para la Investigación Biomédica del Hospital Universitario Puerta de Hierro Majadahonda Method for identifying lung cancer patients for a combination treatment of immuno- and chemotherapy
CN119923267A (zh) 2022-07-27 2025-05-02 阿斯利康(瑞典)有限公司 表达白介素-12的重组病毒与pd-1/pd-l1抑制剂的组合
JP2025525886A (ja) 2022-08-02 2025-08-07 オーエスイー・イミュノセラピューティクス Ｃｄ２８に対する多機能性分子
US20240101718A1 (en) * 2022-09-28 2024-03-28 Incyte Corporation Anti-pd-1/lag-3 bispecific antibodies and uses thereof
US20260015416A1 (en) 2022-09-30 2026-01-15 Alentis Therapeutics Ag Treatment of drug-resistant hepatocellular carcinoma
JP2026502764A (ja) * 2022-10-25 2026-01-27 ザ ブリガム アンド ウィメンズ ホスピタル インコーポレイテッド Ｋｌｒｂ１結合剤及びその使用方法
KR20250122541A (ko) 2022-10-25 2025-08-13 사이즈믹 테라퓨틱, 인코포레이티드. 변이체 IgG FC 폴리펩티드 및 그 용도
TW202421194A (zh) * 2022-11-03 2024-06-01 美商英塞特公司 包含抗ｇｉｔｒ抗體之用於治療癌症的組合療法
WO2024107731A2 (en) * 2022-11-14 2024-05-23 Ablexis, Llc Anti-pd-l1 antibodies
EP4619435A1 (en) 2022-11-16 2025-09-24 Boehringer Ingelheim International GmbH Predictive efficacy biomarkers for anti-sirpa antibodies
US20240217989A1 (en) 2022-11-18 2024-07-04 Incyte Corporation Heteroaryl Fluoroalkenes As DGK Inhibitors
CN120302979A (zh) 2022-12-01 2025-07-11 生物技术公司 针对CD40和CD137的多特异性抗体与抗PD1 Ab和化学治疗的组合治疗
EP4626552A1 (en) 2022-12-01 2025-10-08 MedImmune Limited Combination therapy for treatment of cancer comprising anti-pd-l1 and anti-cd73 antibodies
JP2026501506A (ja) 2022-12-14 2026-01-16 アステラス・ファーマ・ヨーロッパ・ベスローデン・フェンノートシャップ Ｃｌｄｎ１８．２及びｃｄ３に結合する二重特異性結合剤並びに免疫チェックポイント阻害剤を含む併用療法
EP4638503A1 (en) 2022-12-21 2025-10-29 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for lung cancer
CN117482246B (zh) * 2022-12-30 2024-10-15 英百瑞(杭州)生物医药有限公司 抗cd33/cll1双特异性抗体-自然杀伤细胞偶联物及其用途
WO2024150177A1 (en) 2023-01-11 2024-07-18 Advesya Treatment methods for solid tumors
WO2024151093A1 (ko) * 2023-01-11 2024-07-18 주식회사 녹십자 혈전성 질환의 예방 또는 치료를 위한 신규한 액상 제형물
TW202428575A (zh) 2023-01-12 2024-07-16 美商英塞特公司 作為ｄｇｋ抑制劑之雜芳基氟代烯烴
CN120813375A (zh) 2023-01-30 2025-10-17 凯玛布有限公司 抗体
IL322506A (en) 2023-02-23 2025-10-01 Imcheck Therapeutics Combinations of BTN3A activating antibody and immune checkpoint inhibitors
WO2024196952A1 (en) 2023-03-20 2024-09-26 Bristol-Myers Squibb Company Tumor subtype assessment for cancer therapy
WO2024200820A1 (en) 2023-03-30 2024-10-03 Ose Immunotherapeutics Method of synthesis of targeted lipid nanoparticle and uses thereof
EP4687991A1 (en) 2023-03-30 2026-02-11 Ose Immunotherapeutics Lipid-based nanoparticle targeted at activated immune cells for the expression of immune cell enhancing molecule and use thereof
CN121620391A (zh) 2023-04-06 2026-03-06 金麦安博股份有限公司 用于治疗癌症的针对pd-l1和cd137的多特异性结合剂
US20240390340A1 (en) 2023-04-18 2024-11-28 Incyte Corporation Pyrrolidine kras inhibitors
TW202509071A (zh) 2023-05-12 2025-03-01 丹麥商珍美寶股份有限公司 能夠與ｏｘ４０結合之抗體、其變異體及其用途
WO2024236048A1 (en) 2023-05-16 2024-11-21 Nh Theraguix Combination therapy for treating tumors with radiotherapy
EP4731681A1 (en) 2023-06-23 2026-04-29 Imcheck Therapeutics Bispecific antibodies targeting btn3a and the pd-1/pd-l1 inhibitory axis
WO2025038763A1 (en) 2023-08-15 2025-02-20 Bristol-Myers Squibb Company Ceramic hydroxyapatite chromatography flow through method
WO2025043151A2 (en) 2023-08-24 2025-02-27 Incyte Corporation Bicyclic dgk inhibitors
WO2025056180A1 (en) 2023-09-15 2025-03-20 BioNTech SE Methods of treatment using agents binding to epcam and cd137 in combination with pd-1 axis binding antagonists
WO2025068461A1 (en) 2023-09-29 2025-04-03 Negio Therapeutics Guanfacine derivatives and their use in treating cancer
WO2025068452A1 (en) 2023-09-29 2025-04-03 Negio Therapeutics Guanfacine derivatives and their use in treating cancer
US20250114346A1 (en) 2023-10-09 2025-04-10 Incyte Corporation Combination therapy using a kras g12d inhibitor and pd-1 inhibitor or pd-l1 inhibitor
WO2025096738A1 (en) 2023-11-01 2025-05-08 Incyte Corporation Kras inhibitors
TW202540189A (zh) 2023-11-30 2025-10-16 德商生物新技術公司 在組合療法中能夠結合ｏｘ４０之抗體
TW202523667A (zh) 2023-12-05 2025-06-16 美商英塞特公司 作為ｄｇｋ抑制劑之三環三唑并化合物
TW202523304A (zh) 2023-12-06 2025-06-16 美商英塞特公司 包含ｄｇｋ抑制劑及ｐｄ—１／ｐｄ—ｌ１抑制劑之組合療法
WO2026033885A1 (en) 2024-08-08 2026-02-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and agents stabilizing or increasing expression of cldn18.2
TW202541837A (zh) 2023-12-08 2025-11-01 日商安斯泰來製藥公司 含有結合至cldn18.2和cd3之雙特異性結合劑和穩定或增加cldn18.2表現之藥劑之組合療法
WO2025120867A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and anti-vegfr2 antibodies
WO2025120866A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and agents stabilizing or increasing expression of cldn18.2
US20250195536A1 (en) 2023-12-13 2025-06-19 Incyte Corporation Bicyclooctane kras inhibitors
WO2025132831A1 (en) 2023-12-19 2025-06-26 Universite D'aix-Marseille N-heteroaryl derivatives and uses thereof for treating cancer
WO2025133115A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Ose Immunotherapeutics Lipid-based nanoparticles comprising il-35
WO2025145207A1 (en) 2023-12-29 2025-07-03 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy of kras inhibitor and treg-depleting agent
US12521446B2 (en) 2024-02-27 2026-01-13 Bristol-Myers Squibb Company Anti-CEACAM5 antibody drug conjugates
WO2025184208A1 (en) 2024-02-27 2025-09-04 Bristol-Myers Squibb Company Anti-ceacam5 antibodies and uses thereof
WO2025242835A1 (en) 2024-05-22 2025-11-27 Ose Immunotherapeutics Molecules comprising masking linkers and uses thereof for the treatment of cancer
WO2025245489A1 (en) 2024-05-24 2025-11-27 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of tumors in subjects having fgl-1 positive samples
WO2025262250A1 (en) 2024-06-20 2025-12-26 Negio Therapeutics Guanfacine derivatives and their uses
US20260069605A1 (en) 2024-09-11 2026-03-12 Incyte Corporation Kras inhibitors
WO2026068705A1 (en) 2024-09-26 2026-04-02 Ose Immunotherapeutics Lipid-based nanoparticles comprising non-glycosylated fc domains and uses thereof

Family Cites Families (249)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5985A (en) 1848-12-26 Pianoforte-action
US320A (en) 1837-07-31 John dainty
US3862925A (en) 1973-07-05 1975-01-28 American Home Prod Preparation of somatotropin release inhibiting factor and intermediates therefor
US3842067A (en) 1973-07-27 1974-10-15 American Home Prod Synthesis of(des-asn5)-srif and intermediates
JPS5726506B2 (sr) 1974-03-08 1982-06-04
US4105603A (en) 1977-03-28 1978-08-08 The Salk Institute For Biological Studies Peptides which effect release of hormones
EP0092918B1 (en) 1982-04-22 1988-10-19 Imperial Chemical Industries Plc Continuous release formulations
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5128326A (en) 1984-12-06 1992-07-07 Biomatrix, Inc. Drug delivery systems based on hyaluronans derivatives thereof and their salts and methods of producing same
US4980286A (en) 1985-07-05 1990-12-25 Whitehead Institute For Biomedical Research In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
US4880078A (en) 1987-06-29 1989-11-14 Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha Exhaust muffler
DE68928427T2 (de) 1988-09-15 1998-06-04 Univ Columbia Antikörper mit modifiziertem Kohlenhydratgehalt und Verfahren zur Herstellung und Verwendung
WO1991003493A1 (en) 1989-08-29 1991-03-21 The University Of Southampton Bi-or trispecific (fab)3 or (fab)4 conjugates
AU6430190A (en) 1989-10-10 1991-05-16 Pitman-Moore, Inc. Sustained release composition for macromolecular proteins
CA2071867A1 (en) 1989-11-06 1991-05-07 Edith Mathiowitz Method for producing protein microspheres
FR2656800B1 (fr) 1990-01-08 1992-05-15 Roussy Inst Gustave Nouvelles proteines produits par les lymphocytes humains, sequence d'adn codant pour ces proteines et applications pharmaceutiques et biologiques.
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
FR2664500B1 (fr) 1990-07-13 1994-10-28 Lille Ii Universite Droit Sant Procede de preparation d'une lipoproteine modifiee par incorporation d'une substance active lipophile, lipoproteine modifiee ainsi obtenue et composition pharmaceutique ou cosmetique la contenant.
US5972337A (en) 1990-11-01 1999-10-26 Cancer Research Fund Of Contra Costa 46 kilodalton human milk fat globule (HMFG) antigen, fragments and fusion protein
CA2109528A1 (en) 1991-05-01 1992-11-02 Gregory A. Prince A method for treating infectious respiratory diseases
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
GB9112536D0 (en) 1991-06-11 1991-07-31 Celltech Ltd Chemical compounds
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
GB9115364D0 (en) 1991-07-16 1991-08-28 Wellcome Found Antibody
US5843749A (en) 1991-07-26 1998-12-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ehk and Ror tyrosine kinases
AU669124B2 (en) 1991-09-18 1996-05-30 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing humanized chimera antibody
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5912015A (en) 1992-03-12 1999-06-15 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Modulated release from biocompatible polymers
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
GB9225453D0 (en) 1992-12-04 1993-01-27 Medical Res Council Binding proteins
US5934272A (en) 1993-01-29 1999-08-10 Aradigm Corporation Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug
US5885573A (en) 1993-06-01 1999-03-23 Arch Development Corporation Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
US6180377B1 (en) 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
IL108501A (en) 1994-01-31 1998-10-30 Mor Research Applic Ltd Antibodies and pharmaceutical compositions containing them
CA2189657C (fr) 1994-05-06 2002-03-12 Florence Faure Fractions polypeptidiques solubles de la proteine lag-3; procede de production; composition therapeutique; anticorps anti-idiotype
ATE252894T1 (de) 1995-01-05 2003-11-15 Univ Michigan Oberflächen-modifizierte nanopartikel und verfahren für ihre herstellung und verwendung
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
US5811097A (en) 1995-07-25 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
WO1997007788A2 (en) 1995-08-31 1997-03-06 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Composition for sustained release of an agent
US5736152A (en) 1995-10-27 1998-04-07 Atrix Laboratories, Inc. Non-polymeric sustained release delivery system
US5942328A (en) 1996-02-29 1999-08-24 International Business Machines Corporation Low dielectric constant amorphous fluorinated carbon and method of preparation
ATE508733T1 (de) 1996-03-04 2011-05-15 Penn State Res Found Materialien und verfahren zur steigerung der zellulären internalisierung
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US5855913A (en) 1997-01-16 1999-01-05 Massachusetts Instite Of Technology Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery
US5985309A (en) 1996-05-24 1999-11-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
US5922845A (en) 1996-07-11 1999-07-13 Medarex, Inc. Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
IL130123A (en) 1996-11-28 2007-07-24 Roussy Inst Gustave LAG-3 protein mutants, their expression, use and method of production
CA2277801C (en) 1997-01-16 2002-10-15 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
WO1998034957A1 (en) 1997-02-11 1998-08-13 Immunomedics, Inc. STIMULATION OF AN IMMUNE RESPONSE WITH ANTIBODIES LABELED WITH THE α-GALACTOSYL EPITOPE
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
EP0900841A1 (en) 1997-06-18 1999-03-10 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) LAG-3 splice variants
US5989463A (en) 1997-09-24 1999-11-23 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Methods for fabricating polymer-based controlled release devices
SE512663C2 (sv) 1997-10-23 2000-04-17 Biogram Ab Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
DE19819846B4 (de) 1998-05-05 2016-11-24 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Multivalente Antikörper-Konstrukte
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
WO1999066903A2 (en) 1998-06-24 1999-12-29 Advanced Inhalation Research, Inc. Large porous particles emitted from an inhaler
US20030009013A1 (en) 1998-12-30 2003-01-09 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
PL209392B1 (pl) 1999-01-15 2011-08-31 Genentech Inc Przeciwciało, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciała oraz zastosowanie przeciwciała
JP5004390B2 (ja) 1999-08-23 2012-08-22 デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド 新規ｂ７−４分子およびその用途
PL354286A1 (en) 1999-08-23 2003-12-29 Dana-Farber Cancer Institutedana-Farber Cancer Institute Pd-1, a receptor for b7-4, and uses therefor
DK1234031T3 (en) 1999-11-30 2017-07-03 Mayo Foundation B7-H1, AN UNKNOWN IMMUNE REGULATORY MOLECULE
US6803192B1 (en) 1999-11-30 2004-10-12 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-H1, a novel immunoregulatory molecule
HUP0204475A2 (en) 2000-02-11 2003-04-28 Merck Patent Gmbh Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
CA2410551A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw (Vib) Heterodimeric fusion proteins
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7083784B2 (en) 2000-12-12 2006-08-01 Medimmune, Inc. Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
US7794710B2 (en) 2001-04-20 2010-09-14 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods of enhancing T cell responsiveness
US20040241745A1 (en) 2001-07-31 2004-12-02 Tasuku Honjo Substance specific to pd-1
US6833441B2 (en) 2001-08-01 2004-12-21 Abmaxis, Inc. Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers
EP1293514B1 (en) 2001-09-14 2006-11-29 Affimed Therapeutics AG Multimeric single chain tandem Fv-antibodies
US20030138425A1 (en) 2001-09-21 2003-07-24 Mather Jennie Powell Antibodies that bind to cancer-associated antigen cytokeratin 8 and methods of use thereof
US7148038B2 (en) 2001-10-16 2006-12-12 Raven Biotechnologies, Inc. Antibodies that bind to cancer-associated antigen CD46 and methods of use thereof
CA2463879C (en) 2001-10-25 2012-12-04 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
CA2466279A1 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Agents that modulate immune cell activation and methods of use thereof
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
CA2481922A1 (en) 2002-04-12 2003-10-23 Raven Biotechnologies, Inc. Antibodies that bind to integrin alpha-v-beta-6 and methods of use thereof
JP2005536190A (ja) 2002-04-16 2005-12-02 ジェネンテック・インコーポレーテッド 腫瘍の診断と治療のための組成物と方法
US20040048319A1 (en) 2002-05-03 2004-03-11 Mather Jennie P. ALCAM and ALCAM modulators
IL149820A0 (en) 2002-05-23 2002-11-10 Curetech Ltd Humanized immunomodulatory monoclonal antibodies for the treatment of neoplastic disease or immunodeficiency
AU2003281200A1 (en) 2002-07-03 2004-01-23 Tasuku Honjo Immunopotentiating compositions
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US7405061B2 (en) 2002-11-13 2008-07-29 Raven Biotechnologies, Inc. Antigen PIPA and antibodies that bind thereto
CN101899114A (zh) 2002-12-23 2010-12-01 惠氏公司 抗pd-1抗体及其用途
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
CA2512729C (en) 2003-01-09 2014-09-16 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant fc regions and methods of using same
US7563869B2 (en) 2003-01-23 2009-07-21 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Substance specific to human PD-1
PL1897548T5 (pl) 2003-02-28 2025-03-17 The Johns Hopkins University Regulacja komórek T
EP1649004A4 (en) 2003-07-07 2008-04-09 Scripps Research Inst COMPOSITIONS WITH PAIRS OF ORTHOGONAL LYSYL-TRNA AND AMINOACYL-TRNA-SYNTHETASE AND USES THEREOF
WO2005019258A2 (en) 2003-08-11 2005-03-03 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
CN101048425B (zh) 2003-09-18 2012-12-26 雷文生物技术公司 Kid3及与其结合的kid3抗体
WO2005047327A2 (en) 2003-11-12 2005-05-26 Biogen Idec Ma Inc. NEONATAL Fc RECEPTOR (FcRn)-BINDING POLYPEPTIDE VARIANTS, DIMERIC Fc BINDING PROTEINS AND METHODS RELATED THERETO
DK1709081T3 (da) 2004-01-16 2011-06-06 Regeneron Pharma Fusionspolypeptider, der kan aktivere receptorer
KR20050082389A (ko) 2004-02-18 2005-08-23 메덱스젠 주식회사 직렬 연쇄체를 갖는 면역접합체를 포함하는 장기이식합병증 치료용 약제학적 조성물
JP4824025B2 (ja) 2004-06-07 2011-11-24 マクロジェニックス ウエスト，インコーポレイテッド トランスフェリンレセプター抗体
US20070166281A1 (en) 2004-08-21 2007-07-19 Kosak Kenneth M Chloroquine coupled antibodies and other proteins with methods for their synthesis
US20090123413A1 (en) 2004-08-23 2009-05-14 Britta Hardy Use of bat monoclonal antibody for immunotherapy
CA2583741C (en) 2004-10-15 2014-10-14 Verisign, Inc. An algorithm to create and validate a one time password
AU2005335714B2 (en) 2004-11-10 2012-07-26 Macrogenics, Inc. Engineering Fc antibody regions to confer effector function
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8802820B2 (en) 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US7687242B2 (en) 2005-01-12 2010-03-30 Raven Biotechnologies, Inc. KID31 and antibodies that bind thereto
US7847070B2 (en) 2005-01-31 2010-12-07 Raven Biotechnologies, Inc. LUCA2 and antibodies that bind thereto
WO2006084075A2 (en) 2005-02-02 2006-08-10 Raven Biotechnologies, Inc. Adam-9 modulators
US20060171952A1 (en) 2005-02-02 2006-08-03 Mather Jennie P JAM-3 and antibodies that bind thereto
US7572896B2 (en) 2005-02-03 2009-08-11 Raven Biotechnologies, Inc. Antibodies to oncostatin M receptor
CN101155830B (zh) 2005-02-04 2014-06-18 雷文生物技术公司 结合epha2的抗体及其使用方法
AU2006232310B9 (en) 2005-04-06 2011-07-21 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Improved stably tethered structures of defined compositions with multiple functions or binding specificities
CA2604032C (en) 2005-04-06 2017-08-22 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Methods for generating stably linked complexes composed of homodimers, homotetramers or dimers of dimers and uses
US9284375B2 (en) 2005-04-15 2016-03-15 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
ES2971647T3 (es) 2005-04-15 2024-06-06 Macrogenics Inc Diacuerpos covalentes y usos de los mismos
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
DK2439273T3 (da) 2005-05-09 2019-06-03 Ono Pharmaceutical Co Humane monoklonale antistoffer til programmeret død-1(pd-1) og fremgangsmåder til behandling af cancer ved anvendelse af anti-pd-1- antistoffer alene eller i kombination med andre immunterapeutika
CA2611861C (en) 2005-06-08 2017-11-28 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Methods and compositions for the treatment of persistent infections
JP2006345852A (ja) 2005-06-16 2006-12-28 Virxsys Corp 抗体複合体
PT1907424E (pt) 2005-07-01 2015-10-09 Squibb & Sons Llc Anticorpos monoclonais humanos para o ligando 1 de morte programada (pd-l1)
PL2573114T3 (pl) 2005-08-10 2016-10-31 Identyfikacja i inżynieria przeciwciał z wariantami regionów FC oraz sposoby ich stosowania
NZ612578A (en) 2005-08-19 2014-11-28 Abbvie Inc Dual variable domain immunoglobin and uses thereof
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
CA2607056C (en) 2005-10-19 2015-11-24 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for generating bioactive assemblies of increased complexity and uses
SG153825A1 (en) 2005-12-16 2009-07-29 Ibc Pharmaceuticals Inc Multivalent immunoglobulin-based bioactive assemblies
EP1999470A4 (en) 2006-03-10 2009-08-19 Macrogenics Inc IDENTIFICATION AND GENETIC MODIFICATION OF ANTIBODIES WITH HEAVY CHAINS OF VARIANTS AND METHODS OF USE THEREOF
PT1999154E (pt) 2006-03-24 2013-01-24 Merck Patent Gmbh Domínios proteicos heterodiméricos modificados
NZ573646A (en) 2006-06-12 2012-04-27 Wyeth Llc Single-chain multivalent binding proteins with effector function
AT503902B1 (de) 2006-07-05 2008-06-15 F Star Biotech Forsch & Entw Verfahren zur manipulation von immunglobulinen
AT503889B1 (de) 2006-07-05 2011-12-15 Star Biotechnologische Forschungs Und Entwicklungsges M B H F Multivalente immunglobuline
WO2008027236A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
US8652466B2 (en) 2006-12-08 2014-02-18 Macrogenics, Inc. Methods for the treatment of disease using immunoglobulins having Fc regions with altered affinities for FcγRactivating and FcγRinhibiting
KR101523391B1 (ko) 2006-12-27 2015-05-27 에모리 유니버시티 감염 및 종양 치료를 위한 조성물 및 방법
EP1987839A1 (en) 2007-04-30 2008-11-05 I.N.S.E.R.M. Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease
JP6071165B2 (ja) 2007-05-31 2017-02-01 ゲンマブ エー／エス 安定なＩｇＧ４抗体
JP2010190572A (ja) 2007-06-01 2010-09-02 Sapporo Medical Univ ＩＬ１３Ｒａ２に対する抗体およびこれを含む診断・治療薬
BR122017025062B8 (pt) * 2007-06-18 2021-07-27 Merck Sharp & Dohme anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo para o receptor de morte programada humano pd-1, polinucleotídeo e composição compreendendo o referido anticorpo ou fragmento
EP2158221B1 (en) 2007-06-21 2018-08-29 MacroGenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
WO2009014708A2 (en) 2007-07-23 2009-01-29 Cell Genesys, Inc. Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof
KR20100058509A (ko) 2007-07-31 2010-06-03 메디뮨 엘엘씨 다중특이적 에피토프 결합 단백질 및 이의 용도
US8062852B2 (en) 2007-10-01 2011-11-22 The Children's Hospital And Regional Medical Center Detection and treatment of autoimmune disorders
CL2008003526A1 (es) 2007-11-30 2010-01-11 Medarex Inc Conjugado de anticuerpo-molécula asociada que comprende un anticuerpo monoclonal humano anti b7-h4/08e/b7x/b7s1/bl-cam/b3/leu-14/lyb-8 humana; composición que lo comprende; método in vitro de inhibición de célula tumoral que expresa b7-h4/08e/b7x/b7s1/bl-cam/b3/leu-14/lyb-8; y uso para tratar cancer.
US8227577B2 (en) 2007-12-21 2012-07-24 Hoffman-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
JP6157046B2 (ja) 2008-01-07 2017-07-05 アムジェン インコーポレイテッド 静電的ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃｓｔｅｅｒｉｎｇ）効果を用いた抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための方法
CN101970499B (zh) 2008-02-11 2014-12-31 治疗科技公司 用于肿瘤治疗的单克隆抗体
EP2113255A1 (en) 2008-05-02 2009-11-04 f-star Biotechnologische Forschungs- und Entwicklungsges.m.b.H. Cytotoxic immunoglobulin
US7565048B1 (en) 2008-05-30 2009-07-21 Ofs Fitel Llc Undersea optical fiber transmission systems
US20110081347A1 (en) 2008-06-04 2011-04-07 Macrogenics, Inc. Antibodies with Altered Binding to FcRn and Methods of Using Same
WO2010001617A1 (en) 2008-07-04 2010-01-07 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Use of an efficacy marker for optimizing therapeutic efficacy of an anti-human pd-1 antibody on cancers
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
AU2009288730B2 (en) 2008-08-25 2013-06-20 Amplimmune, Inc. Compositions of PD-1 antagonists and methods of use
WO2010028796A1 (en) 2008-09-10 2010-03-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Trispecific hexavalent antibodies
WO2010028797A1 (en) 2008-09-10 2010-03-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Multivalent antibodies
WO2010028795A1 (en) 2008-09-10 2010-03-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Multivalent antibodies
US8552154B2 (en) 2008-09-26 2013-10-08 Emory University Anti-PD-L1 antibodies and uses therefor
DK2786762T3 (da) * 2008-12-19 2019-05-06 Macrogenics Inc Kovalente diabodies og anvendelser deraf
RU2011131071A (ru) * 2008-12-26 2013-02-10 Дзе Юниверсити Оф Токио Диагностика и лечение рака с помощью антитела против lgr7
JP5844159B2 (ja) 2009-02-09 2016-01-13 ユニヴェルシテ デクス−マルセイユＵｎｉｖｅｒｓｉｔｅ Ｄ’Ａｉｘ−Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ Ｐｄ−１抗体およびｐｄ−ｌ１抗体ならびにその使用
MY152068A (en) 2009-03-20 2014-08-15 Genentech Inc Bispecific anti-her antibodies
PE20120540A1 (es) 2009-05-27 2012-05-09 Hoffmann La Roche Anticuerpos triespecificos o tetraespecificos
US8277919B2 (en) 2009-07-23 2012-10-02 VMO Systems, Inc. Reflective coating for an optical disc
JP5898082B2 (ja) 2009-10-07 2016-04-06 マクロジェニクス，インコーポレーテッド フコシル化程度の変更により改良されたエフェクター機能を示すＦｃ領域含有ポリペプチドおよびその使用法
WO2011066342A2 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Amplimmune, Inc. Simultaneous inhibition of pd-l1/pd-l2
CN102770456B (zh) 2009-12-04 2018-04-06 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 多特异性抗体、抗体类似物、组合物和方法
GB201000467D0 (en) 2010-01-12 2010-02-24 Ucb Pharma Sa Antibodies
US20110206672A1 (en) 2010-02-25 2011-08-25 Melvyn Little Antigen-Binding Molecule And Uses Thereof
EP2361936B1 (en) 2010-02-25 2016-04-20 Affimed GmbH Antigen-binding molecule and uses thereof
EP2542256B1 (en) * 2010-03-04 2019-05-22 MacroGenics, Inc. Antibodies reactive with b7-h3, immunologically active fragments thereof and uses thereof
EP2545078A1 (en) 2010-03-11 2013-01-16 UCB Pharma, S.A. Pd-1 antibody
TW201134488A (en) * 2010-03-11 2011-10-16 Ucb Pharma Sa PD-1 antibodies
AR080794A1 (es) 2010-03-26 2012-05-09 Hoffmann La Roche Anticuerpos bivalentes biespecificos anti- vegf/ anti-ang-2
HRP20241208T1 (hr) 2010-04-20 2024-11-22 Genmab A/S Heterodimerni proteini koji sadrže fc fragment protutijela i postupci za njihovu proizvodnju
US8876892B2 (en) 2010-04-21 2014-11-04 Medtronic, Inc. Prosthetic heart valve delivery system with spacing
KR101860963B1 (ko) 2010-04-23 2018-05-24 제넨테크, 인크. 이종다량체 단백질의 생산
US9527926B2 (en) 2010-05-14 2016-12-27 Rinat Neuroscience Corp. Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them
WO2011159877A2 (en) 2010-06-18 2011-12-22 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Bi-specific antibodies against tim-3 and pd-1 for immunotherapy in chronic immune conditions
EP2596114A4 (en) 2010-07-14 2014-01-08 Amgen Inc IMMUNOGLOBULIN WITH DOMAIN INSERTION
AU2011286024B2 (en) 2010-08-02 2014-08-07 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
CN103261220B (zh) 2010-08-16 2016-06-15 诺夫免疫股份有限公司 用于生成多特异性和多价抗体的方法
ES2758994T3 (es) 2010-11-05 2020-05-07 Zymeworks Inc Diseño anticuerpo heterodimérico estable con mutaciones en el dominio Fc
US9803210B2 (en) 2011-02-11 2017-10-31 Research Corporation Technologies, Inc. Fusion proteins comprising immunoglobulin constant domain-derived scaffolds
PT2691112T (pt) * 2011-03-31 2018-07-10 Merck Sharp & Dohme Formulações estáveis de anticorpos para o recetor pd-1 humano de morte programada e tratamentos relacionados
JP6072771B2 (ja) 2011-04-20 2017-02-01 メディミューン，エルエルシー Ｂ７−ｈ１およびｐｄ−１に結合する抗体およびその他の分子
ES2703780T3 (es) 2011-05-17 2019-03-12 Trion Res Gmbh Preparación de una vacuna que contiene anticuerpos trifuncionales con propiedades potenciadoras de la inmunogenicidad del antígeno
KR102060389B1 (ko) 2011-05-21 2019-12-31 마크로제닉스, 인크. 사람 및 비-사람 cd3에 결합할 수 있는 cd3-결합 분자
BR112013029892A2 (pt) 2011-05-21 2016-12-20 Macrogenics Inc polipeptídeo, molécula de ligação a antígeno, diacorpo e uso de uma porção polipeptídica de uma proteína de ligação a soro desimunizada
WO2012162583A1 (en) 2011-05-26 2012-11-29 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Design and construction of novel multivalent antibodies
WO2013003647A2 (en) 2011-06-28 2013-01-03 Sea Lane Biotechnologies, Llc Multispecific stacked variable domain binding proteins
CN103796681B (zh) 2011-06-30 2018-07-20 建新公司 T细胞活化的抑制剂
US20140155581A1 (en) 2011-07-06 2014-06-05 Medimmune, Llc Methods For Making Multimeric Polypeptides
US9920438B2 (en) 2011-07-07 2018-03-20 Massachusetts Institute Of Technology Methods and apparatus for ultrathin catalyst layer for photoelectrode
WO2013013700A1 (en) 2011-07-22 2013-01-31 Affimed Therapeutics Ag Multivalent antigen-binding fv molecule
CA2840018C (en) 2011-07-24 2019-07-16 Curetech Ltd. Variants of humanized immunomodulatory monoclonal antibodies
SG11201401422VA (en) 2011-10-27 2014-09-26 Genmab As Production of heterodimeric proteins
US9580509B2 (en) 2011-11-07 2017-02-28 Medimmune, Llc Multispecific and multivalent binding proteins and uses thereof
WO2013163427A1 (en) 2012-04-25 2013-10-31 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Antibodies to treat hiv-1 infection
HK1203971A1 (en) 2012-05-15 2015-11-06 Bristol-Myers Squibb Company Cancer immunotherapy by disrupting pd-1/pd-l1 signaling
MX2014014162A (es) 2012-05-24 2015-02-04 Hoffmann La Roche Anticuerpos multiespecificos.
UY34887A (es) * 2012-07-02 2013-12-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
US20150203591A1 (en) 2012-08-02 2015-07-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mutivalent antigen-binding proteins
CN111499755A (zh) 2012-08-03 2020-08-07 丹娜法伯癌症研究院 抗-pd-l1和pd-l2双结合抗体单一试剂及其使用方法
AU2013315019B2 (en) 2012-09-17 2017-06-01 Galectin Therapeutics, Inc. Method for enhancing specific immunotherapies in cancer treatment
PL2904011T3 (pl) 2012-10-02 2018-01-31 Bristol Myers Squibb Co Połączenie przeciwciał anty-kir i przeciwciał anty-pd-1 w leczeniu raka
HK1213788A1 (zh) 2012-10-12 2016-07-15 布里格姆及妇女医院股份有限公司 免疫應答的增强
EP2912063A1 (en) 2012-10-23 2015-09-02 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-kir and anti-ctla-4 antibodies to treat cancer
CA2889182A1 (en) 2012-10-26 2014-05-01 The University Of Chicago Synergistic combination of immunologic inhibitors for the treatment of cancer
US9487587B2 (en) 2013-03-05 2016-11-08 Macrogenics, Inc. Bispecific molecules that are immunoreactive with immune effector cells of a companion animal that express an activating receptor and cells that express B7-H3 and uses thereof
US10344088B2 (en) 2013-03-15 2019-07-09 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Antigen binding proteins
SMT202100065T1 (it) * 2013-05-02 2021-03-15 Anaptysbio Inc Anticorpi diretti contro la proteina della morte programmata (pd-1)
WO2014194302A2 (en) * 2013-05-31 2014-12-04 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind pd-1
US20160145355A1 (en) 2013-06-24 2016-05-26 Biomed Valley Discoveries, Inc. Bispecific antibodies
DK177790B1 (en) 2013-08-08 2014-07-07 Liqtech Internat A S A METHOD OF PRODUCING A CERAMIC FILTER MEMBRANE, A METHOD OF IMPROVING A CERAMIC FILTER MEMBRANE AND THE CERAMIC FILTER MEMBRANE OBTAINED BY THE METHOD
AR097306A1 (es) 2013-08-20 2016-03-02 Merck Sharp & Dohme Modulación de la inmunidad tumoral
EP2840091A1 (en) * 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific diabodies that are capable of binding gpA33 and CD3 and uses thereof
EP2839842A1 (en) * 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding CD123 and CD3 and uses thereof
US10077305B2 (en) 2013-09-10 2018-09-18 Medimmune Limited Antibodies against PD-1 and uses thereof
CN112552401B (zh) * 2013-09-13 2023-08-25 广州百济神州生物制药有限公司 抗pd1抗体及其作为治疗剂与诊断剂的用途
JP6595458B2 (ja) 2013-09-20 2019-10-23 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー 腫瘍を処置するための抗ｌａｇ−３抗体と抗ｐｄ−１抗体との組合せ
WO2015048312A1 (en) * 2013-09-26 2015-04-02 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
SG10201804945WA (en) * 2013-12-12 2018-07-30 Shanghai hengrui pharmaceutical co ltd Pd-1 antibody, antigen-binding fragment thereof, and medical application thereof
US10519251B2 (en) 2013-12-30 2019-12-31 Epimab Biotherapeutics, Inc. Fabs-in-tandem immunoglobulin and uses thereof
CA2936244A1 (en) 2014-01-21 2015-07-30 Medimmune, Llc Compositions and methods for modulating and redirecting immune responses
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
PE20170255A1 (es) 2014-01-24 2017-03-22 Dana Farber Cancer Inst Inc Moleculas de anticuerpo que se unen a pd-1 y usos de las mismas
HUE057817T2 (hu) 2014-01-28 2022-06-28 Bristol Myers Squibb Co Anti-LAG-3 antitestek haematológiai malignitások kezelésére
KR102442436B1 (ko) 2014-03-14 2022-09-15 노파르티스 아게 Lag-3에 대한 항체 분자 및 그의 용도
US20150307620A1 (en) 2014-04-16 2015-10-29 University Of Connecticut Linked immunotherapeutic agonists that costimulate multiple pathways
WO2015176033A1 (en) 2014-05-15 2015-11-19 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of lung cancer using a combination of an anti-pd-1 antibody and another anti-cancer agent
EA035419B9 (ru) 2014-05-29 2020-08-07 Мэкроудженикс, Инк. Триспецифичные связывающие молекулы и способы их применения
WO2015195163A1 (en) 2014-06-20 2015-12-23 R-Pharm Overseas, Inc. Pd-l1 antagonist fully human antibody
TWI693232B (zh) 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
EP3160497A4 (en) 2014-06-27 2018-01-17 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Conjugates for immunotherapy
BR112017001385B1 (pt) 2014-07-22 2023-12-05 Cb Therapeutics, Inc. Anticorpo isolado ou fragmento do mesmo que liga a pd-1, uso deste, composição, polinucleotídeo isolado e vetor de expressão
CN105330740B (zh) 2014-07-30 2018-08-17 珠海市丽珠单抗生物技术有限公司 抗pd-1抗体及其应用
KR102476226B1 (ko) 2014-08-05 2022-12-12 아폴로믹스 인코포레이티드 항-pd-l1 항체
KR102357893B1 (ko) 2014-08-05 2022-02-04 맵퀘스트 에스아 Pd-1 에 결합하는 면역학적 시약
JO3663B1 (ar) 2014-08-19 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين
GB201419084D0 (en) 2014-10-27 2014-12-10 Agency Science Tech & Res Anti-PD-1 antibodies
EP3218409A2 (en) 2014-11-11 2017-09-20 Sutro Biopharma, Inc. Anti-pd-1 antibodies, compositions comprising anti-pd-1 antibodies and methods of using anti-pd-1 antibodies
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
DK3237446T3 (en) 2014-12-22 2021-07-26 Pd 1 Acquisition Group Llc Anti-PD-1-antistoffer
EA201791768A1 (ru) 2015-02-06 2018-07-31 КАДМОН КОРПОРЕЙШН, ЭлЭлСи Иммуномодулирующие агенты
KR20250004095A (ko) 2015-04-17 2025-01-07 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항-pd-1 항체 및 또 다른 항체의 조합물을 포함하는 조성물
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
TWI870335B (zh) * 2015-06-12 2025-01-21 美商宏觀基因股份有限公司 變異的嵌合4d5抗體及其與抗pd-1抗體聯合用於治療癌症的應用
HUE068868T2 (hu) 2015-07-30 2025-02-28 Macrogenics Inc PD-1-hez kötõdõ molekulák és alkalmazásukra szolgáló eljárások
BR112018006817A2 (pt) 2015-10-08 2018-10-23 Macrogenics Inc método de tratamento do câncer
PE20181326A1 (es) 2015-11-03 2018-08-20 Janssen Biotech Inc Anticuerpos que se unen especificamente a pd-1 y sus usos

Also Published As

Publication number Publication date
MX2019001161A (es) 2019-07-04
CN114773475A (zh) 2022-07-22
PL3328419T3 (pl) 2021-12-27
MA58293B1 (fr) 2024-11-29
CA2993948A1 (en) 2017-02-02
HK1248106A1 (en) 2018-10-12
SMT202100527T1 (it) 2021-11-12
TW202229357A (zh) 2022-08-01
JP2018524394A (ja) 2018-08-30
CR20220194A (es) 2022-06-16
TW202028234A (zh) 2020-08-01
KR20250020718A (ko) 2025-02-11
EP3328419A4 (en) 2018-12-26
IL257216A (en) 2018-03-29
IL297090B1 (en) 2024-09-01
CN114773475B (zh) 2024-01-12
PT3981792T (pt) 2024-11-08
CN108976300B (zh) 2023-04-14
PT3456346T (pt) 2021-09-28
JP2023075241A (ja) 2023-05-30
JP7557567B2 (ja) 2024-09-27
AU2016298227B9 (en) 2019-10-31
GEAP202315864A (en) 2023-05-25
HRP20211333T1 (hr) 2021-11-26
CO2018000867A2 (es) 2018-04-19
JP6959907B2 (ja) 2021-11-05
JOP20200213B1 (ar) 2025-10-01
TWI762879B (zh) 2022-05-01
EP3456346A1 (en) 2019-03-20
SMT202100610T1 (it) 2021-11-12
ES2994122T3 (en) 2025-01-17
MD3981792T2 (ro) 2025-02-28
US10577422B2 (en) 2020-03-03
US20200231675A1 (en) 2020-07-23
SG10201906059VA (en) 2019-08-27
AU2018214151A1 (en) 2018-08-30
CL2018000254A1 (es) 2018-07-20
ES2898511T3 (es) 2022-03-07
HRP20241289T1 (hr) 2024-12-20
IL290571B2 (en) 2023-03-01
FIC20240028I1 (fi) 2024-08-05
GEAP202214712A (en) 2022-07-25
CY1124723T1 (el) 2022-07-22
DK3328419T3 (da) 2021-10-11
AU2020200054B2 (en) 2022-03-03
AU2025202334A1 (en) 2025-04-24
DK3456346T3 (da) 2021-08-30
EP4450088A3 (en) 2025-03-26
FR24C1033I2 (fr) 2025-05-23
MD3456346T2 (ro) 2021-11-30
TW202417048A (zh) 2024-05-01
ZA201800500B (en) 2020-10-28
CR20200423A (es) 2021-01-20
WO2017019846A1 (en) 2017-02-02
EP3456346B1 (en) 2021-07-07
SI3328419T1 (sl) 2021-11-30
CN108976300A (zh) 2018-12-11
ES2898958T3 (es) 2022-03-09
IL287916B1 (en) 2023-05-01
JP2022002540A (ja) 2022-01-11
MD3328419T2 (ro) 2022-01-31
JP2024178244A (ja) 2024-12-24
AU2016298227A2 (en) 2018-09-13
WO2017019846A8 (en) 2018-01-25
JO3736B1 (ar) 2021-01-31
FR24C1033I1 (fr) 2024-08-30
PE20181151A1 (es) 2018-07-17
TW202535469A (zh) 2025-09-16
US20190127467A1 (en) 2019-05-02
CY1124634T1 (el) 2022-07-22
TW201710292A (zh) 2017-03-16
AU2016298227A8 (en) 2018-03-08
PH12018500232A1 (en) 2018-08-29
ECSP18006831A (es) 2018-04-30
CY2024026I1 (el) 2025-03-28
AU2022200168A1 (en) 2022-02-10
HRP20211645T1 (hr) 2022-02-04
AU2016298227A1 (en) 2018-02-22
TWI691509B (zh) 2020-04-21
RS62568B1 (sr) 2021-12-31
NZ739493A (en) 2024-12-20
TWI886756B (zh) 2025-06-11
HUE056201T2 (hu) 2022-02-28
SI3456346T1 (sl) 2021-11-30
AU2016298227B2 (en) 2019-10-03
AU2022200168B2 (en) 2025-01-02
IL297090A (en) 2022-12-01
EA201890296A1 (ru) 2018-08-31
FI3981792T3 (fi) 2024-09-23
IL290571B (en) 2022-11-01
HUS2400028I1 (hu) 2024-08-28
JP7245304B2 (ja) 2023-03-23
JP6959897B2 (ja) 2021-11-05
PE20240111A1 (es) 2024-01-22
PT3328419T (pt) 2021-11-26
KR102762075B1 (ko) 2025-02-05
JP2019055948A (ja) 2019-04-11
KR102761886B1 (ko) 2025-02-06
IL287916B2 (en) 2023-09-01
ES2898511T9 (en) 2025-03-12
ZA201807856B (en) 2020-09-30
US20230357404A1 (en) 2023-11-09
LT3456346T (lt) 2021-09-27
GEP20227438B (en) 2022-11-10
IL290571A (en) 2022-04-01
AU2020200054A1 (en) 2020-01-30
GEP20237538B (en) 2023-09-11
US12534531B2 (en) 2026-01-27
LTPA2024525I1 (sr) 2024-08-26
SI3981792T1 (sl) 2024-10-30
IL287916A (en) 2022-01-01
AU2018214151B2 (en) 2019-10-31
GEP20227419B (en) 2022-10-10
GEAP202215554A (en) 2022-06-10
PL3456346T3 (pl) 2021-12-20
SG10202010506TA (en) 2020-11-27
NL301287I2 (nl) 2024-08-21
PE20231958A1 (es) 2023-12-06
TWI833183B (zh) 2024-02-21
MA42542A (fr) 2021-05-26
PL3981792T3 (pl) 2024-12-16
JOP20200213A1 (ar) 2022-10-30
EP3328419A1 (en) 2018-06-06
UA127372C2 (uk) 2023-08-02
MA42542B1 (fr) 2021-09-30
LT3981792T (lt) 2024-11-11
CN116333138A (zh) 2023-06-27
EP3328419B1 (en) 2021-08-25
SMT202400381T1 (it) 2024-11-15
CR20180062A (es) 2018-05-25
MX2018001227A (es) 2018-03-26
HUE055207T2 (hu) 2021-11-29
RS66208B1 (sr) 2024-12-31
IL257216B (en) 2022-03-01
KR20180034588A (ko) 2018-04-04
EP4450088A2 (en) 2024-10-23
EP3981792A1 (en) 2022-04-13
IL297090B2 (en) 2025-01-01
DK3981792T3 (da) 2024-09-02
CN107847574B (zh) 2023-05-23
KR20180093127A (ko) 2018-08-20
CN107847574A (zh) 2018-03-27
MX2022014645A (es) 2022-12-15
HUE068868T2 (hu) 2025-02-28
EP3981792B1 (en) 2024-08-21
LT3328419T (lt) 2021-11-10
US11623959B2 (en) 2023-04-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7557567B2 (ja) Ｐｄ‐１結合分子及びその使用方法
TWI773646B (zh) 結合lag-3的分子和其使用方法
TWI814758B (zh) 雙特異性ｃｄ１６-結合分子及其在疾病治療中的用途
JP7192042B2 (ja) Ｌａｇ‐３結合分子及びその使用方法
HK40070346A (en) Pd-1-binding molecules and methods of use thereof
HK40117494A (en) Pd-1-binding molecules and methods of use thereof
HK40070346B (en) Pd-1-binding molecules and methods of use thereof
HK40006310B (en) Pd-1 and lag-3 binding molecules and methods of use thereof
HK40006310A (en) Pd-1 and lag-3 binding molecules and methods of use thereof
HK1248106B (en) Pd-1-binding molecules and methods of use thereof