RS66208B1 - Pd-1-vezujući molekuli i metode njihove upotrebe - Google Patents

Pd-1-vezujući molekuli i metode njihove upotrebe

Info

Publication number
RS66208B1
RS66208B1 RS20241291A RSP20241291A RS66208B1 RS 66208 B1 RS66208 B1 RS 66208B1 RS 20241291 A RS20241291 A RS 20241291A RS P20241291 A RSP20241291 A RS P20241291A RS 66208 B1 RS66208 B1 RS 66208B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
mab
cancer
seq
domain
binding
Prior art date
Application number
RS20241291A
Other languages
English (en)
Inventor
Kalpana Shah
Douglas H Smith
Motte-Mohs Ross La
Leslie S Johnson
Paul A Moore
Ezio Bonvini
Scott Koenig
Original Assignee
Macrogenics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Macrogenics Inc filed Critical Macrogenics Inc
Publication of RS66208B1 publication Critical patent/RS66208B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/18—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70521—CD28, CD152

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Dermatology (AREA)

Description

Opis
Oblast tehnike
[0001] Opisani su PD-1 vezujući molekuli koji sadrže PD-1-vezujući domen odabranih anti-PD-1 antitela sposobnih da se vežu i za PD-1 cinomolgus majmuna i za PD-1 čoveka: PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15, ali se ovde ne traži njihova zaštita. PD-1 vezujući molekuli koji su humanizovane ili himerne verzije takvih antitela, ili koji sadrže PD-1 vezujuće fragmente takvih anti-PD-1 antitela (naročito imunokongugati, diatela, BiTE, bispecifična antitela, itd.) su otkriveni, ali se ne traži njihova zaštita.Predmetni pronalazak se odnosi na PD-1-vezujući molekule koji su dodatno sposobni da vežu epitop molekula uključenog u regulisanje imunološke kontrolne tačke koja je prisutna na površini imunske ćelije, ali se se ne traži njihova zaštita. Predmetni pronalazak se odnosi na PD-1 vezujuće molekule pronalaska, kako je definisano u zahtevima 1-6, za upotrebu u postupcima za stimulisanje imunološkog odgovora. Konkretno, ovaj pronalazak se odnosi na PD-1 vezujuće molekule pronalaska, kako je definisano u zahtevima 1-6, za upotrebu u metodama kombinovane terapije u kojima se PD-1 vezujući molekul koji sadrži jedan ili više PD-1- vezujućih domena poput onih odabranih anti-PD-1 antitela, administrira u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji su efikasni u stimulisanju imunog odgovora i/ili u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji specifično vezuju antigen raka.
Oblast pronalaska
I. Ćelijski posredovani imuni odgovori
[0002] Imuni sistem čoveka i drugih sisara je odgovoran za obezbeđivanje zaštite od infekcije i bolesti. Takvu zaštitu obezbeđuje i humoralni imuni odgovor i ćelijski posredovan imuni odgovor. Humoralni odgovor rezultira proizvodnjom antitela i drugih biomolekula koji su sposobni da prepoznaju i neutrališu strane ciljeve/mete (antigene). Nasuprot tome, imuni odgovor posredovan ćelijama uključuje aktivaciju makrofaga, prirodnih ćelija ubica (NK) i antigen specifičnih citotoksičnih T-limfocita od strane T-ćelija, i oslobađanje različitih citokina kao odgovor na prepoznavanje antigena (Dong, C. et al. (2003) "Immune Regulation by Novel Costimulatory Molecules," Immunolog. Res. 28(1):39-48).
[0003] Sposobnost T-ćelija da optimalno posreduju u imunološkom odgovoru protiv antigena zahteva dve različite signalne interakcije (Viglietta, V. et al. (2007) "Modulating CoStimulation," Neurotherapeutics 4:666-675; Korman, A.J. et al. (2007) "Checkpoint Blockade in Cancer Immunotherapy," Adv. Immunol.90:297-339). Prvo, antigen koji je postavljen na površini ćelija koje predstavljaju antigen (APC) mora da bude predstavljen antigen specifičnoj prirodnoj CD4+ T-ćeliji. Receptor (TCR) koji usmerava T-ćeliju da pokrene imuni odgovor koji će biti specifičan za predstavljeni antigen. Drugo, niz kostimulatornih i inhibitornih signala, posredovanih interakcijama između APC i različitih površinskih molekula T-ćelija, inicira prvo aktivaciju i proliferaciju T-ćelija i na kraju njihovu inhibiciju. Tako, prvi signal daje specifičnost imunološkom odgovoru, dok drugi signal služi za određivanje prirode, veličine i trajanja odgovora.
[0004] Imuni sistem je strogo kontrolisan kostimulatornim i ko-inhibitornim ligandima i receptorima. Ovi molekuli obezbeđuju drugi signal za aktivaciju T-ćelija i obezbeđuju uravnoteženu mrežu pozitivnih i negativnih signala kako bi se maksimizirao imuni odgovor na infekciju dok istovremeno ograničavaju vlastiti imunitet (Wang, L. et al. (March 7, 2011) "VISTA, A Novel Mouse Ig Superfamily Ligand That Negatively Regulates T-Cell Responses," J. Exp. Med.10,1084/jem.20100619:1-16; Lepenies, B. et al. (2008) "The Role Of Negative Costimulators During Parasitic Infections," Endocrine, Metabolic & Immune Disorders - Drug Targets 8:279-288). Od posebnog značaja je vezivanje između B7.1 (CD80) i B7.2 (CD86) liganda antigen-prezentujuće ćelije i CD28 i CTLA-4 receptora CD4+ T limfocita Sharpe, A.H. et al. (2002) "The B7-CD28 Superfamily," Nature Rev.
Immunol.2:116-126; Dong, C. et al. (2003) "Immune Regulation by Novel Costimulatory Molecules," Immunolog. Res.28(1):39-48; Lindley, P.S. et al. (2009) "The Clinical Utility Of Inhibiting CD28Mediated Costimulation," Immunol. Rev.229:307-321). Vezivanje B7.1 ili B7.2 za CD28 stimuliše aktivaciju T-ćelija; vezivanje B7.1 ili B7.2 za CTLA-4 inhibira takvu aktivaciju ((Dong, C. et al. (2003) "Immune Regulation by Novel Costimulatory Molecules," Immunolog. Res.28(1):39-48; Lindley, P.S. etal. (2009) "The Clinical Utility Of Inhibiting CD28Mediated Costimulation," Immunol. Rev.229:307-321; Greenwald, R.J. et al. (2005) "The B7 Family Revisited," Ann. Rev. Immunol.23:515-548). CD28 je konstitutivno eksprimiran na površini T-ćelija (Gross, J., et al. (1992) "Identification And Distribution Of The Costimulatory Receptor CD28 In The Mouse," J. Immunol.149:380-388), dok se eksprimiranje CTLA -4 brzo povećava nakon aktivacije T-ćelija (Linsley, P. et al. (1996) "Intracellular Trafficking Of CTLA4 And Focal Localization Towards Sites Of TCR Engagement," Immunity 4:535-543). Kako CTLA-4 je receptor višeg afiniteta (Sharpe, A.H. et al. (2002) "The B7-CD28 Superfamily," Nature Rev. Immunol.2:116-126), vezivanje prvo inicira proliferaciju T-ćelija (preko CD28) a zatim je inhibira (preko nascentne ekspresije CTLA-4), čime se prigušuje efekat kada proliferacija više nije potrebna.
[0005] Dalja istraživanja liganda CD28 receptora dovela su do identifikacije i karakterizacije skupa srodnih molekula B7 („B7 Superfamily") (Coyle, A.J. et al. (2001) "The Expanding B7 Superfamily: Increasing Complexity In Costimulatory Signals Regulating T-Cell Function," Nature Immunol.
2(3):203-209; Sharpe, A.H. et al. (2002) "The B7-CD28 Superfamily," Nature Rev. Immunol.2:116-126; Greenwald, R.J. et al. (2005) "The B7 Family Revisited," Ann. Rev. Immunol.23:515-548; Collins, M. et al. (2005) "The B7 Family Of Immune-Regulatory Ligands," Genome Biol.6:223.1-223.7; Loke, P. et al. (2004) "Emerging Mechanisms Of Immune Regulation: The Extended B 7 Family And Regulatory T-Cells." Arthritis Res. Ther.6:208-214; Korman, A.J. et al. (2007) "Checkpoint Blockade in Cancer Immunotherapy," Adv. Immunol.90:297-339; Flies, D.B. et al. (2007) "The New B7s: Playing a Pivotal Role in Tumor Immunity," J. Immunother.30(3):251-260; Agarwal, A. et al. (2008) "The Role Of Positive Costimulatory Molecules In Transplantation And Tolerance," Curr. Opin. Organ Transplant. 13:366-372; Lenschow, D.J. et al. (1996) "CD28/B7 System of T-Cell Costimulation," Ann. Rev.
Immunol.14:233-258; Wang, S. et al. (2004) "Co-Signaling Molecules Of The B7-CD28 Family In Positive And Negative Regulation Of T Lymphocyte Responses," Microbes Infect.6:759-766).
Trenutno postoji nekoliko poznatih članova porodice: B7.1 (CD80), B7.2 (CD86), ligand induktabilnog kostimulatora (ICOS-L), ligand programirane smrti-1 (PD-L1; B7-H1), ligand programirane smrti-2 (PD-L2; B7-DC), B7-H3, B7-H4 and B7-H6 (Collins, M. et al. (2005) "The B7 Family Of Immune-Regulatory Ligands," Genome Biol.6:223.1-223.7; Flajnik, M.F. et al. (2012) "Evolution Of The B7 Family: Co-Evolution Of B7H6 And Nkp30, Identification Of A New B7 Family Member, B7H7, And Of B7's Historical Relationship With The MHC," Immunogenetics epub doi.org/10,1007/s00251-012-0616-2).
II. Programirana smrt-1 („PD-1“)
[0006] Programirana smrt-1 („PD-1“, takođe poznat kao „CD279“) je membranski protein, od približno 31 kD tip I, i uzorak proširene CD28/CTLA-4 porodice T-ćelija regulatora koji u velikoj meri negativno reguliše imuni odgovori (Ishida, Y. et al. (1992) "Induced Expression Of PD-1, A Novel Member Of The Immunoglobulin Gene Superfamily, Upon Programmed Cell Death," EMBO J.
11:3887-3895; objave SAD patentnih prijava br.2007/0202100; 2008/0311117; 2009/00110667; SAD Patenti Br.6,808,710; 7,101,550; 7,488,802; 7,635,757; 7,722,868; PCTpbjava br. WO 01/14557).
[0007] PD-1 se eksprimira na aktiviranim T-ćelijama, B-ćelijama i monocitima (Agata, Y. et al. (1996) "Expression Of The PD-1 Antigen On The Surface Of Stimulated Mouse T And B Lymphocytes," Int. Immunol.8(5):765-772; Yamazaki, T. et al. (2002) "Expression Of Programmed Death 1 Ligands By Murine T-Cells And APC," J. Immunol.169:5538-5545) i pri niskim nivoima u prirodnim T-ćelijama ubicama (NK) (Nishimura, H. et al. (2000) "Facilitation Of Beta Selection And Modification Of Positive Selection In The Thymus Of PD-1-Deficient Mice," J. Exp. Med.191:891-898; Martin-Orozco, N. et al. (2007) "Inhibitory Costimulation And AntiTumor Immunity," Semin. Cancer Biol.17(4):288-298).
[0008] Ekstracelularni region PD-1 sastoji se od jednog domena imunoglobulina (Ig)V sa 23% identičnosti sa ekvivalentnim domenom u CTLA-4 (Martin-Orozco, N. et al. (2007) "Inhibitory Costimulation And Anti-Tumor Immunity," Semin. Cancer Biol.17(4):288-298).Nakon ekstracelularnog IgV domena slede transmembranski region i intracelularni rep. Intracelularni rep sadrži dva mesta fosforilacije koja se nalaze u inhibitornom motivu zasnovanom na imunoreceptoru na tirozinu i u motivu prekidača zasnovanom na imunoreceptoru na tirozinu, što sugeriše da PD-1 negativno reguliše TCR signale (Ishida, Y. et al. (1992) "Induced Expression Of PD-1, A Novel Member Of The Immunoglobulin Gene Superfamily, Upon Programmed Cell Death," EMBO J.11:3887-3895; Blank, C. et al. (2006) "Contribution Of The PD-L1/PD-1 Pathway To T-Cell Exhaustion: An Update On Implications For Chronic Infections And Tumor Evasion Cancer," Immunol. Immunother.
56(5):739-745).
[0009] PD-1 posreduje u svojoj inhibiciji imunog sistema vezivanjem za B7-H1 i B7-DC ((Flies, D.B. et al. (2007) "The New B7s: Playing a Pivotal Role in Tumor Immunity," J. Immunother.30(3):251-260; United States Patents Nos.6,803,192; 7,794,710; Obajva SAD prijave patenta br.
2005/0059051; 2009/0055944; 2009/0274666; 2009/0313687; PCT objave br.. WO 01/39722; WO 02/086083).
[0010] B7-H1 i B7-DC su široko eksprimirani na površinama ljudskog i mišjeg tkiva, kao što su srce, placenta, mišići, fetalna jetra, slezina, limfni čvorovi i timus, kao i mišja jetra, pluća, bubrezi, ćelije ostrvaca pankreasa i tankog creva (Martin-Orozco, N. et al. (2007) "Inhibitory Costimulation And Anti-Tumor Immunity," Semin. Cancer Biol.17(4):288-298). Kod ljudi, ekspresija proteina B7-H1 pronađena je u endotelnim ćelijama ;oveka (Chen, Y. et al. (2005) "Expression of B7-H1 in Inflammatory Renal Tubular Epithelial Cells," Nephron. Exp. Nephrol.102:e81-e92; de Haij, S. et al. (2005) "Renal Tubular Epithelial Cells Modulate T-Cell Responses Via ICOS L And B7-H1" Kidney Int.
68:2091-2102; Mazanet, M.M. et al. (2002) "B7-H1 Is Expressed By Human Endothelial Cells And Suppresses T-Cell Cytokine Synthesis," J. Immunol.169:3581-3588), myocardium (Brown, J.A. et al. (2003) "Blockade Of Programmed Death-1 Ligands On Dendritic Cells Enhances T-Cell Activation And Cytokine Production," J. Immunol.170:1257-1266), syncyciotrophoblasts (Petroff, M.G. et al. (2002) "B7 Family Molecules: Novel Immunomodulators At The Maternal-Fetal Interface," Placenta 23:S95-S101). Molekuli se takođe eksprimiraju rezidentnim makrofagima nekih tkiva, makrofagima koji su aktivirani interferonom (IFN)-γ ili faktorom nekroze tumora alfa (TNF)-α ((Latchman, Y. et al. (2001) "PD-L2 Is A Second Ligand For PD-1 And Inhibits T-Cell Activation," Nat. Immunol 2:261-268), and in tumors (Dong, H. (2003) "B7-H1 Pathway And Its Role In The Evasion Of Tumor Immunity," J. Mol. Med.81:281-287).
[0011] Utvrđeno je da interakcija između B7-H1 i PD-1 obezbeđuje ključni negativni kostimulatorni signal za T i B ćelije (Martin-Orozco, N. et al. (2007) "Inhibitory Costimulation And Anti-Tumor Immunity," Semin. Cancer Biol.17(4):288-298) and functions as a cell death inducer (Ishida, Y. et al. (1992) "Induced Expression Of PD-1, A Novel Member Of The Immunoglobulin Gene Superfamily, Upon Programmed Cell Death," EMBO J.11:3887-3895; Subudhi, S.K. etal. (2005) "The Balance Of Immune Responses: Costimulation Verse Coinhibition," J. Molec. Med.83:193-202). Tačnije, nađeno je da interakcija između niskih koncentracija PD-1 receptora i B7-H1 liganda dovodi do prenosa inhibitornog signala koji snažno inhibira proliferaciju antigen-specifičnih CD8<+>T- ćelija; pri višim koncentracijama interakcije sa PD-1 ne inhibiraju proliferaciju T-ćelija, ali značajno smanjuju proizvodnju multiplih citokina(Sharpe, A.H. et al. (2002) "The B7-CD28 Superfamily," Nature Rev. Immunol.2:116-126). Utvrđeno je da su proliferacija T-ćelija i proizvodnja citokina u mirovanju i prethodno aktiviranim CD4 i CD8 T-ćelijama, pa čak i nativnim T-ćelijama iz krvi pupčane vrpce, inhibirani rastvornim fuzionim proteinima B7-H1-Fc (Freeman, G.J. et al. (2000) "Engagement Of The PD-1 Immunoinhibitory Receptor By A Novel B7 Family Member Leads To Negative Regulation Of Lymphocyte Activation," J. Exp. Med.192:1-9; Latchman, Y. etal. (2001) "PD-L2 Is A Second Ligand For PD-1 And Inhibits T-Cell Activation," Nature Immunol.2:261-268; Carter, L. et al. (2002) "PD-1:PD-L Inhibitory Pathway Affects Both CD4(+) and CD8(+) T-cells And Is Overcome By IL-2," Eur. J. Immunol.
32(3):634-643; Sharpe, A.H. et al. (2002) "The B7-CD28 Superfamily," Nature Rev. Immunol.2:116-126).
[0012] Uloga B7-H1 i PD-1 u inhibiciji aktivacije i proliferacije T-ćelija sugeriše da ovi biomolekuli mogu poslužiti kao terapeutske mete za lečenje upale i raka. Stoga je predložena upotreba anti-PD-1 antitela za lečenje infekcija i tumora i za povećanje adaptivnog imunog odgovora (videti Publikaciju patentnih prijava SAD br.2010/0040614; 2010/0028330; 2004/0241745; 2008/0311117;
2009/0217401;SAD patentni br..7,521,051; 7,563,869; 7,595,048; PCT objave br. WO 2004/056875; WO 2008/083174). Antitela sposobna da se specifično vežu za PD-1 su prijavili Agata, T. et al. (1996) "Expression Of The PD-1 Antigen On The Surface Of Stimulated Mouse T And B Lymphocytes," Int. Immunol.8(5):765-772; and Berger, R. et al. (2008) "Phase I Safety And Pharmacokinetic Study Of CT-011, A Humanized Antibody Interacting With PD-1, In Patients With Advanced Hematologic Malignancies," Clin. Cancer Res.14(10):3044-3051 (see, also, US Patent Nos.
8,008,449 and 8,552,154; SAD objave patenata br..2007/0166281; 2012/0114648; 2012/0114649; 2013/0017199; 2013/0230514 i 2014/0044738; o PCT objave patenata br. WO 2003/099196; WO 2004/004771; WO 2004/056875; WO 2004/072286; WO 2006/121168; WO 2007/005874; WO 2008/083174; WO 2009/014708; WO 2009/073533; WO 2012/135408, WO 2012/145549; i WO 2013/014668).
[0013] Međutim, uprkos svim takvim prethodnim napredovanjima, ostaje potreba za poboljšanim kompozicijama sposobnim da snažnije usmere imuni sistem tela da napadne ćelije raka ili ćelije inficirane patogenom, posebno u nižim terapeutskim koncentracijama. Iako adaptivni imuni sistem može da bude snažan odbrambeni mehanizam protiv raka i bolesti, on je često ometan imunosupresivnim mehanizmima u mikrookruženju tumora, kao što je ekspresija PD-1. Dalje, koinhibitorni molekuli eksprimirani tumorskim ćelijama, imunim ćelijama i stromalnim ćelijama u tumorskom miljeu mogu dominantno da oslabe odgovore T-ćelija na ćelije raka. Dakle, ostaje potreba za snažnim molekulima koji vezuju PD-1. Konkretno, postoji potreba za moćnim molekulima koji se vezuju za PD-1 koji imaju poželjan kinetički profil vezivanja i koji antagonizuju osu PD-1/PD-L1 blokiranjem interakcije PD-1/PD-L1, što bi moglo da obezbedi poboljšanu terapeutsku vrednost pacijentima koji boluju od raka ili drugih bolesti i stanja.
WO 2014194302 se odnosi na kompozicije i postupke koji se odnose na anti-PD-1 antitela ili su izvedene iz istih.
WO 2014179664 se odnosi na izolovani polipeptid teškog lanca imunoglobulina i izolovani polipeptid lakog lanca imunoglobulina koji se vezuju za protein programirane smrti-1 (PD-1).
Kratak opis pronalaska
[0014] Ovaj pronalazak je usmeren na monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za humani PD-1, a koje sadrži varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu: navedeni varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 147, a navedeni varijabilni domen lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 153 za upotrebu u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji su efikasni u stimulaciji imunog odgovora, pri čemu navedeni jedan ili više dodatnih molekula su antitela, u stimulaciji imunog odgovora posredovanog T-ćelijama subjekta kome je to potrebno.
[0015] Ovaj pronalazak je takođe usmeren na jedan ili više molekula koji su efikasni u stimulisanju imunog odgovora, pri čemu su pomenuti jedan ili više molekula antitela, za upotrebu u kombinaciji sa monospecifičnim monoklonskim antitelom koji se vezuje za humani PD-1 koji sadrži varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu: pomenuti varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 147, a navedeni varijabilni domen lakog lanca sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 153, u stimulisanju imunog odgovora posredovanog T-ćelijama subjekta kome je to potrebno.
[0016] Ovaj pronalazak je dalje usmeren na kombinaciju monospecifičnog monoklonalnog antitela koji se vezuje za humani PD-1 koje sadrži varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu: pomenuti varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinu sekvenca SEQ ID NO:147, a navedeni varijabilni domen lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:153 i jedan ili više dodatnih molekula koji su efikasni u stimulaciji imunog odgovora, pri čemu navedeni jedan ili više dodatnih molekula su antitela , za upotrebu u stimulaciji imunog odgovora posredovanog T-ćelijama subjekta kome je to potrebno.
[0017] Ovaj pronalazak je usmeren na monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za humani PD-1 koje sadrži varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu: navedeni varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID-a NO: 147, a navedeni varijabilni domen lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 153 za upotrebu u kombinaciji sa drugim agensom protiv raka, i/ili jednim ili više dodatnih molekula koji specifično vezuju antigen raka, u lečenju od raka.
[0018] Ovaj pronalazak je takođe usmeren na sredstvo protiv raka, i/ili jedan ili više molekula koji specifično vezuju antigen raka, za upotrebu u kombinaciji sa monospecifičnim monoklonskim antitelom koji se vezuje za humani PD-1 koje sadrži varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu: pomenuti varijabilni domen teškog lanca sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 147, a navedeni varijabilni domen lakog lanca sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 153, u lečenje kancera.
[0019] Ovaj pronalazak je dalje usmeren na kombinaciju monospecifičnog monoklonskog antitela koji se vezuje za humani PD-1 koje se sastoji od varijabilnog domena teškog lanca i varijabilnog domena lakog lanca, pri čemu: pomenuti varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinu sekvenca SEQ ID NO: 147, a pomenuti varijabilni domen lakog lanca sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 153, i sredstvo protiv raka i/ili jedan ili više dodatnih molekula koji specifično vezuju antigen raka, za upotrebu u lečenje kancera. Pronalazak je definisan patentnim zahtevima i svi drugi aspekti, konfiguracije, primeri ili realizacije koje su ovde izložene ne spadaju u obim patentnih zahteva su dati samo informativno.
[0020] Sve reference u opisu na metode lečenja (ili dijagnoze) odnose se na jedinjenja, farmaceutske kompozicije i lekove ovog pronalaska za upotrebu u postupku lečenja ljudskog (ili životinjskog) tela terapijom (ili za dijagnozu). ).
[0021] PD-1 vezujući molekuli koji sadrže PD-1-vezujući domen odabranih anti-PD-1 antitela sposobnih da se vežu i za PD-1 cinomolgus majmuna i za humani PD-1: PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15 su otkriveni, ali se ovde ne traži zaštita. PD-1 vezujući molekuli koji su humanizovane ili himerne verzije takvih antitela, ili koji sadrže PD-1 vezujuće fragmente takvih anti-PD-1 antitela (naročito imunokongugati, dijatela, BiTE, bispecifična antitela, itd.) su otkriveni, ali se ne traži njihova zaštita. PD-1-vezujući molekuli koji su dodatno sposobni da vežu epitop molekula uključenog u regulisanje imunološke kontrolne tačke koja je prisutna na površini imune ćelije su otkriveni, ali se ovde ne traži njhova zaštita. Ovaj pronalazak se odnosi na PD-1 vezujuće molekule pronalaska, kako je definisano u zahtevima 1-6, za upotrebu u postupcima za stimulisanje imunološkog odgovora. Konkretno, ovaj pronalazak se odnosi na PD-1 vezujuće molekule pronalaska, kako je definisano u zahtevima 1-6, za upotrebu u metodama kombinovane terapije u kojima se PD-1 vezujući molekul koji sadrži jedan ili više PD-1- vezujući domen(i) tako odabranih anti-PD-1 antitela se primenjuje u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji su efikasni u stimulisanju imunog odgovora i/ili u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji specifično vezuju antigen raka.
[0022] Detaljno, pronalazak obezbeđuje anti-humani PD-1-vezujući molekul, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, koji obuhvata tri CDR domena teškog lanca, CDRH1, CDRH2 i CDRH3 i tri CDR domena lakog lanca, CDRH1, CDRH2 i CDRH3, pri čemu:
(1) CDRH1 domen, CDRH2 domen i CDRH3 domen su CDR teškog lanca hPD-1 mAb 7(1,2), i respektivno imaju sekvence aminokiselina: SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:140, i SEQ ID NO:141; i
(2) CDRH1 domen, CDRH2 domen i CDRH3 domen su CDR lakog lanca hPD-1 mAb 7(1,2), i, respektivno, imaju sekvence aminokiselina: SEQ ID NO:157, SEQ ID NO:145, i SEQ ID NO:146;
[0023] Anti-humani PD-1-vezujući molekul, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, je humanizovano antitelo.
[0024] Anti-humani PD-1-vezujući molekul kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrži varijabilni domen teškog lanca koji ima sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 147.
[0025] Anti-humani PD-1-vezujući molekul, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrži varijabilni domen lakog lanca koji ima sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 153.
[0026] Pronalazak se dalje odnosi na realizacije takvih anti-humanih PD-1-vezujućih molekula, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, pri čemu molekul sadrži Fc region, i gde Fc region je varijanta Fc regiona koji sadrži jednu ili više aminokiselinskih modifikacija koje smanjuju afinitet varijante Fc regiona za FcγR i/ili poboljšavaju poluživot u serumu, a tačnije, pri čemu modifikacije obuhvataju najmanje jednu aminokiselinsku supstituciju izabranu od grupa koju čine:
(1) L234A; L235A;
(2) L234A i L235A;
(3) M252Y; M252Y i S254T;
(4) M252Y i T256E;
(5) M252Y, S254T i T256E; ili
(6) K288D i H435K;
pri čemu je numeracija ona indeksa EU kao u Kabatu.
[0027] Pronalazak se dalje odnosi na izvođenja u kojima se bilo koji od gore opisanih PD-1-vezujućih molekula, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, koristi za stimulisanje imunološkog odgovora koji posreduje T-ćelijama. Pronalazak se dodatno odnosi na izvođenja u kojima je bilo koji od gore opisanih PD-1-vezujućih molekula za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja povezanih sa potisnutim imunološkim sistemom, posebno raka (karcinoma) ili infekcije.
[0028] Pronalazak se posebno odnosi na takvu upotrebu u lečenju ili dijagnozi ili prognozi raka, pri čemu je karcinom okarakterisan prisustvom ćelija raka izabranim iz grupe koju čine ćelije: tumora nadbubrežne žlezde, ćelije raka povezane sa AIDS-om, alveolarnog sarkoma mekog dela, astrocitnog tumora, raka mokraćne bešike, raka kostiju, karcinoma mozga i kičmene moždine, metastatskog tumora na mozgu, raka dojke, tumora karotidnog tela, raka grlića materice, hondrosarkoma, hordoma, hromofobnog karcinoma bubrežnih ćelija, svetloćelijskog karcinoma, karcinoma debelog creva, kolorektalnog karcinoma, kožnog benignog fibroznog histiocitoma, dezmoplastičnog tumora malih okruglih ćelija, ependimoma, Juingovog tumora, ekstraskeletnog miksoidnog hondrosarkoma, osteogenesis imperfecta (OI, bolest krhkih kostiju), fibrozna displazija kostiju, rak žučne kese ili žučnih kanala, rak želuca, gestacijske trofoblastne bolesti, tumor zametnih ćelija, rak aglave i vrata, hepatocelularnog karcinoma, tumora Langerhansovih ostrvaca, Kaposijevog sarkoma, raka bubrega, leukemije, lipoma/benignog lipomatoznog tumora, liposarkoma/malignog lipomatoznog tumora, raka jetre, limfoma, raka pluća, meduloblastoma, melanoma, meningioma, multiple endokrine neoplazije, multiplog mijeloma, mijelodisplastičnog neuroblastoma, neuroendokrinog tumora, raka jajnika, raka pankreasa, papilarnog karcinoma štitne žlezde, tumora paratiroidne žlezde, pedijatrijskog raka, tumora perifernog nervnog omotača, feohromocitom, tumor hipofize, raka prostate, melanoma posteriorne uvee, retkog hematološkog poremećaja, metastatskog raka bubrega, rabdoidnog tumora, rabdomisarkoma, sarkom, raka kože, sarkoma mekog tkiva, raka skvamoznih ćelija, raka stomaka, sinovijalnog sarkoma, raka testisa, raka timusa, timoma , metastatskiog raka štitne žlezde i rak materice.
[0029] Pronalazak se posebno odnosi na takvu upotrebu u lečenju ili dijagnozi ili prognozi raka/karcinoma, pri čemu rak je kolorektalni karcinom, hepatocelularni karcinom, gliom,rak bubrega, rak dojke, multipli mijelom, rak bešike, neuroblastom; sarkom, ne-Hodgkin-ov limfom, rak ne-malih ćelija pluća, rak jajnika, rak pankreasa, rak rektuma, akutna mijeloična leukemija (AML), hronična mijeloična leukemija (CML), akutna B limfoblastna leukemija (B-ALL), leukemija (CLL), leukemija vlasastih ćelija (HCL), blastična plazmacitoidna neoplazma dendritičnih ćelija (BPDCN), ne-Hodgkinovi limfomi (NHL), uključujući leukemiju pločastih ćelija (MCL) i mali limfocitni limfom (SLL), Hodgkin-ov limfom, sistemska mastocitoza ili Burkitt-ov limfom.
[0030] Bilo koji od gore opisanih PD-1-vezujućih molekula može biti detektabilno obeležen i korišćen u detekciji PD-1.
Kratak opis slika
[0031]
Slika 1 daje šematski prikaz reprezentativnog kovalentno vezanog dijatela koje ima dva mesta za vezivanje epitopa sastavljena od dva polipeptidna lanca, od kojih svaki ima Heterodimer-Promovišući domen sa upredenom E-zavojnicom ili K- zavojnicom. Cisteinski ostatak može da bude prisutan u linkeru i/ili u domenu koji promoviše heterodimer kao što je prikazano na Slici 3B. VL i VH domeni koji prepoznaju isti epitop su prikazani koristeći isti obrazac senčenja ili popunjavanja.
Slika 2 daje šematksi prizak reprezentativnog kovalentno vezanog molekula dijatela koji ima dva epitop-vezujuća mesta sastavljena od dva polipeptidna lanca, od kojih svaki ima CH2 i CH3 domen, tako da povezani lanci formiraju ceo ili deo Fc regiona. VL i VH domeni koji prepoznaju isti epitop su prikazani koristeći isti obrazac senčenja ili popunjavanja.
Slike 3A-3C daju šeme koje prikazuju reprezentativna tetravalentna dijatela koja imaju četiri mesta za vezivanje epitopa sastavljena od dva para polipeptidnih lanaca (tj. ukupno četiri polipeptidna lanca). Jedan polipeptid iz svakog para poseduje CH2 i CH3 domen, tako da povezani lanci formiraju ceo ili deo Fc regiona. VL i VH domeni koji prepoznaju isti epitop su prikazani koristeći isti obrazac senčenja ili popunjavanja. Dva para polipeptidnih lanaca mogu biti ista. Kada VL i VH domeni prepoznaju različite epitope (kao što je prikazano na slikama 3A-3C), rezultujući molekul poseduje četiri mesta za vezivanje epitopa i bispecifičan je i bivalentan u odnosu na svaki vezani epitop. Kada VL i VH domeni prepoznaju isti epitop (npr. isti CDR domena VL i isti CDR domena VH se koriste na oba lanca), rezultujući molekul poseduje četiri mesta za vezivanje epitopa i monospecifičan je i četvorovalentan u odnosu na jedan epitopa. Alternativno, dva para polipeptida mogu biti različita. Kada VL i VH domeni svakog para polipeptida prepoznaju različite epitope (kao što je prikazano na slikama 3A-3C), rezultujući molekul poseduje četiri mesta za vezivanje epitopa i tetraspecifičan je i monovalentan u odnosu na svaki vezani epitop. Slika 3A prikazuje Fc dijatelo koje sadrži peptidni Heterodimer-Promovišući domen koji sadrži cisteinski ostatak. Slika 3B prikazuje dijatelo koje sadrži Fc region, koje sadrži heterodimer-promovićuće domene sa upredenom E-zavojnicom ili K- zavojnicom koji se sastoje od cisteinskog ostatka i linkera (sa opcionim ostatkom cisteina). Slika 3C, prikazuje dijatelo koje sadrži Fc region, koje sadrži CH1 i CL domene antitela.
Slike 4A i 4B daju šematski prikaz reprezentativnog kovalentno vezanog molekula dijatela koji ima dva epitop- mesta vezivanja sastavljena od tri polipeptidna lanca. Dva polipeptidna lanca poseduju CH2 i CH3 domen, tako da povezani lanci formiraju ceo ili deo Fc regiona. Polipeptidni lanci koji sadrže VL i VH domen dalje obuhvataju domen koji promoviše heterodimer. VL i VH domeni koji prepoznaju isti epitop su prikazani koristeći isti obrazac senčenja ili popunjavanja.
Slika 5 daje šematski prikaz reprezentativnog kovalentno vezanog molekula dijatela koji ima četiri mesta za vezivanje epitopa sastavljena od pet polipeptidnih lanaca. Dva polipeptidna lanca poseduju CH2 i CH3 domen, tako da povezani lanci formiraju Fc region koji obuhvata ceo ili deo Fc regiona. Polipeptidni lanci koji sadrže povezane VL i VH domene dalje obuhvataju domen koji promoviše heterodimer. VL i VH domeni koji prepoznaju isti epitop su prikazani koristeći isti obrazac senčenja ili popunjavanja.
Slike 6A-6F daju šematski prikaz reprezentativnih trivalentnih vezujućih molekula koji sadrže Fc region koji imaju tri mesta za vezivanje epitopa. Slike 6A i 6B, respektivno, šematskilustruju i domene trovalentnih vezujućih molekula koji se sastoje od dva vezujuća domena tipa dijatela i domena za vezivanje tipa Fab koji imaju različite orijentacije domena u kojima su domeni tipa dijatela N-terminalni ili C-terminalni za region Fc. Molekuli na slikama 6A i 6B se sastoje od četiri lanca. Slike 6C i 6D, respektivno, šematski ilustruju domene trovalentnih vezujućih molekula koji se sastoje od dva vezujuća domena tipa dijatela na N-terminalnom delu za Fc region, i Fab tipa vezujući domen u koji su laki i teški lanac uvučeni preko polipeptida. spacer, ili domen vezivanja tipa scFv. Trovalentni vezujući molekuli na slikama 6E i 6F, respektivno, šematski ilustruju domene trovalentnih vezujućih molekula koji se sastoje od dva vezujuća domena tipa dijatela sa C-terminusa za Fc region, i povezani domen vezivanja tipa Fab, ili domen vezivanja tipa scFv u kojima su vezujući domeni tipa dijatela.
Trovalentni vezujući molekuli na slikama 6C-6F se sastoje od tri lanca. VL i VH domeni koji prepoznaju isti epitop su prikazani koristeći isti obrazac senčenja ili popunjavanja.
Slike 7A-7D pokazuju da se anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15 vezuju za humani PD-1. Krive vezivanja za vezivanje za shPD-1-His su prikazane na slici 7A (PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 4 i PD-1 mAb 9), Slika 7B (PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6 i PD-1 mAb 7), i slika 7C (PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD- 1 mAb 13, PD-1 mAb 14 i PD-1 mAb 15). Krive vezivanja za shPD-1-humani Fc prikazane su na slici 7D (PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 i PD-1 mAb 15).
Slike 8A-8C pokazuju da se anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15 vezuju za PD-1 cinomolgus majmuna. Krive vezivanja za vezivanje za scinoPD-1-hFc prikazane su na slici 8A (PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7), Slika 8B (PD-1 mAb 9) i Slika 8C (PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 i PD-1 mAb 15).
Slike 9A-9D pokazuju sposobnost anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15 da blokiraju vezivanje humanog PD-L1 za humani PD-1. Krive inhibicije su prikazane na slici 9A (PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 15 i PD-1 mAb A), Slika 9B (PD-1 mAb 4), Slika 9C (PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7 i PD-1 mAb A), i Slika 9D (PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 10 , PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, PD-1 mAb 15 i PD-1 mAb A).
Slike 10A-10B pokazuju specifičnost tkiva anti-humanog PD-1 antitela PD-1 mAb 7. Slika 10A prikazuje histološke mrlje normalnog debelog creva (paneli i i vii), jetre (paneli ii i viii), pluća (paneli iii i ix), pankreasa (pankreasa iv i x), bubrega (paneli v i xi) i srca (paneli vi i xii) tkiva. Slika 10A, Paneli i-vi pokazuju rezultate tkiva inkubiranih sa obeleženim PD-1 mAb 7 (0,313 µg/mL). Slika 10A, Paneli vii-kii pokazuju rezultate tkiva inkubiranih sa obeleženim kontrolnim mAb izotipom (0,314 µg/mL). Slika 10B prikazuje histološke mrlje kože (paneli i i iv), krajnika (paneli ii i v) i NSO ćelije koje eksprimiraju PD-1 (paneli iii i vi). Slika 10B, Paneli i-iii pokazuju rezultate tkiva inkubiranih sa obeleženim PD-1 mAb 7 (0,313 µg/mL).
Slika 11 prikazuje profile vezivanja humanizovanih anti-humanih PD-1 antitela hPD-1 mAb 2, hPD-1 mAb 7(1,1), hPD-1 mAb 7(1,2), hPD-1 mAb 9(1,1) i referentna anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B koja imaju IgG1 (AA) ili IgG4 (P) za vezivanje za ćelijsku površinu PD-1.
Slike 12A-12B pokazuju sposobnost humanizovanih anti-PD antitela hPD-1 mAb 2, hPD-1 mAb 7(1,1), hPD-1 mAb 7(1,2), hPD-1 mAb 9(1,1) i referentnih antitela -PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B, koja imaju IgG1 (AA) ili IgG4 (P) da blokiraju vezivanje rastvornog humanog PD-L1 (Slika 12A) i rastvornog humanog PD-L2 (Slika 12B ) na ćelijsku površinu humanog PD-1.
Slika 13 prikazuje sposobnost humanizovanih anti-PD antitela hPD-1 mAb 2, hPD-1 mAb 7(1,1), hPD-1 mAb 7(1,2), hPD-1 mAb 9(1,1) i referentnog anti-PD -1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B, koja imaju IgG1 (AA) ili IgG4 (P) da antagonizuju osu PD-1/PD-L1 blokiranjem interakcije PD-1/PD-L1 i sprečavanjem nishodne regulacije odgovora T-ćelija u Jurkat-luc-NFAT / CHO-PD-L1 luciferaza reporter testu.
Slika 14 pokazuje da su PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 u stanju da stimulišu proizvodnju citokina na nivoe koji su uporedivi ili viši od referentnih anti-PD-1 antitela (PD- 1 mAb A i PD-1 mAb B) i da je tretman sa PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 u kombinaciji sa LAG-3 mAb 1 obezbedio najveće poboljšanje oslobađanje citokina. Profili sekrecije IFNγ iz PBMC-a stimulisanih stafilokoknim enterotoksinom B (SEB) lečenim anti-PD-1 i anti-LAG-3 antitelima sami ili u kombinaciji.
Slike 15A-15B pokazuju sposobnost humanizovanih anti-PD antitela hPD-1 mAb 2, hPD-1 mAb 7(1,2), hPD-1 mAb 9(1,1) i referentnih anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B, koji imaju IgG1 (AA) ili IgG4 (P) za stimulaciju proizvodnje citokina. IFNγ (Slika 15A) i TNFa (Slika 15B), profili sekrecije iz SEB-stimulisanih PBMC-a tretiranih anti-PD-1 antitelima.
Slike 16A-16B pokazuju da su - konstrukti DART A, DART D, DART E, DART F, DART G i DART H, PD-1 c LAG bispecifičnih dijatela u stanju da stimulišu proizvodnju citokina na nivoe koji su uporedivi ili viši od onog uočenog nakon administracije kombinacije anti-PD-1 mAb anti-LAG-3 mAb (PD-1 mAb A LAG-3 mAb A), i da su PD-1 x LAG-3 konstrukti DART A , DART D, DART E, DART F i DART G bispecifičnih dijatela obezbedili su najveće poboljšanje oslobađanja citokina. Ucrtani su profili sekrecije IFNγ PBMC-a stimulisanih niskom koncentracijom SEB (0,2 ng/mL tretiranih sa PD-1 x LAG-3 bispecifičnim dijatelima, ili anti-PD-1 i anti-LAG-3 antitelima sami ili u kombinaciji). Rezultati korišćenjem PBMC od dva reprezentativna donatora prikazani su na slici 16A i slici 16B.
Slike 17A-17B pokazuju da konstrukti DART A, DART B i DART C PD-1 x LAG-3 bispecifičnih dijatela mogu da stimulišu proizvodnju citokina do nivoa viših od onog uočenog nakon administracije kombinacije anti-PD-1 mAb anti-LAG-3 mAb (PD-1 mAb A LAG-3 mAb A). Prikazani su profili sekrecije IFNγ PBMC od dva reprezentativna donatora, stimulisani visokom koncentracijom SEB (85 ng/mL) tretiranih sa PD-1 x LAG-3 bispecifičnim dijatelima, ili samo saanti-PD-1 i anti-LAG-3 antitelima i u kombinaciji. Rezultati korišćenjem PBMC od dva reprezentativna donatora prikazani su na slici 17A i slici 17B.
Slike 18A-18B pokazuju da konstrukti DART A, DART B i DART C PD-1 x LAG-3 bispecifičnih dijatela mogu da stimulišu proizvodnju citokina do nivoa viših od onog uočenog nakon administracije kombinacije anti-PD-1 mAb anti-LAG-3 mAb (PD-1 mAb A LAG-3 mAb A). Prikazani su profili sekrecije IFNγ PBMC od dva reprezentativna donatora, stimulisani srednjom koncentracijom SEB (0,5 ng/mL) tretiranih sa PD-1 x LAG-3 bispecifičnim dijatelima, ili samo sa anti-PD-1 i anti-LAG-3 antitelima i u kombinaciji. Rezultati korišćenjem PBMC od dva reprezentativna donatora prikazani su na slici 18A i slici 18B.
Slika 19 pokazuje da konstrukti DART D i DART H PD-1 x LAG-3 bispecifičnog dijatela mogu da stimulišu proizvodnju citokina na nivoe koji su uporedivi ili viši od onih primećenih nakon administracije kombinacije anti-PD-1 mAb anti-LAG-3 mAb (PD-1 mAb A LAG-3 mAb A), i da je DART D obezbedio najveće poboljšanje oslobađanja citokina. Prikazan je profili sekrecije IL-2 PBMC od reprezentativnog donora stimulisanog visokom koncentracijom SEB (85 ng/mL) lečenih PD-1 x LAG-3 bispecifičnim dijatelima, ili samo sa anti-PD-1 i anti-LAG-3 antitelima i u kombinaciji.
Slika 20 pokazuje da konstrukti DART B i DART I PD-1 x LAG-3 bispecifičnih dijatela mogu da stimulišu proizvodnju citokina do nivoa viših od onog uočenog nakon administracije kombinacije anti-PD-1 mAb anti- LAG-3 mAb (PD-1 mAb A LAG-3 mAb A, hPD-1 mAb 7(1,2) hLAG-3 mAb 1(1,4), hPD-1 mAb 7(1,2) hLAG-3 mAb 6( 1,1)). Prikazani su profili sekrecije IFNγ PBMC od reprezentativnog donatora, stimulisani srednjom koncentracijom SEB (0,5 ng/mL) tretiranih sa PD-1 x LAG-3 bispecifičnim dijatelima, ili samo sa anti-PD-1 i anti-LAG-3 antitelima i u kombinaciji.
Slike 21A-21D pokazuju da je PD-1 x LAG-3 bispecifično dijatelo DART I u stanju da stimuliše proizvodnju citokina do nivoa viših od onog uočenog pri administraciji kombinacije anti-PD-1 mAb anti- LAG-3 mAb (PD-1 mAb A LAG-3 mAb A). Prikazani su profili sekrecije IFNγ (Slike 21A i 21C) i IL-2 (Slike 21B i 21D) CD4 memorijskih ćelija od dva reprezentativna donatora, stimulisani toksoidom tetanusa (5 µg/mL) tretiranim PD-1 × LAG-3 bispecifičnim dijatelom DART-I, anti-PD-1 i anti-LAG-3 antitela u kombinaciji, ili kontrola izotipa su ucrtani. Rezultati 7. dana korišćenjem CD4 memorijskih T ćelija od dva reprezentativna donora prikazani su na slikama 21A-B i slikama 21C-D.
Slika 22 pokazuje da je farmakokinetika PD-1 × LAG-3 bispecifičnog molekula, DART I, uporediva sa farmakokinetikom anti-PD-1 antitela, PD-1 mAb A IgG4 (P) kod cinomolgus majmuna. Linije pokazuju srednju serumsku koncentraciju DART I (čvrsto) i PD-1 mAb A (isprekidano). Pojedinačne vrednosti za mužjake (popunjene) i ženke (otvorene) majmuna su ucrtane za DART I (trouglovi) i PD-1 mAb A (krugovi).
Slike 23A-23C prikazuju koncentracije antitela u serumu i procenat vezanog PD-1 na površini CD4+ ili CD8+ T ćelija tokom vremena kod životinja nakon tretmana različitim anti-PD-1 antitelima. Procenat vezanog PD 1 na površini CD4+ ili CD8+ T ćelija nakon tretmana anti-PD 1 mAb je ucrtan na desnoj iosi; simboli predstavljaju % vezanog PD 1 na T ćelijama za svaku pojedinačnu životinju, a isprekidane linije predstavljaju srednje vrednosti. Koncentracije mAb u serumu su ucrtane na levoj i-osi; simboli predstavljaju nivoe seruma za svaku pojedinačnu životinju, a pune linije predstavljaju nelinearno uklapanje podataka. Svaki panel predstavlja podatke za životinje (n = 1/pol/grupa) kojima je administrirano 10 mg/kg hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) (Slika 23A), PD-1 mAb A IgG4 (P) (Slika 23B) ili PD-1 mAb B IgG4 (P) (Slika 23B) IV infuzijom prvog dana.
Detaljan opis pronalaska
[0032] PD-1-vezujući molekuli koji sadrže PD-1-vezujući domen odabranih anti-PD-1 antitela sposobnih da se vežu i za PD-1 cinomolgus majmuna i za ljudski PD-1: PD-1 mAb 1, PD -1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15 su otkriveni, ali se ovde ne traže. Pronalazak se odnosi na PD-1-vezujuće molekule koji su humanizovana antitela, pri čemu monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za humani PD-1 sadrži varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 147 i varijabilni domen lakog lanca koja sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 153 za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6. Ovaj pronalazak je usmeren na takve PD-1-vezujuće molekule za upotrebu u postupcima stimulisanja imunog odgovora. Posebno, ovaj pronalazak je usmeren na takve PD-1-vezujuće molekule za upotrebu u metodama kombinovane terapije u kojima se PD-1-vezujući molekul koji sadrži jedan ili više PD-1-vezujućih domena(a) tako odabranih anti -PD-1 antitela, kao što su definisana i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, daju se u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji su efikasni u stimulisanju imunog odgovora i/ili u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji specifično vezuju antigen raka.
I. Antitela i njihovi vezujući domeni
[0033] Antitela su molekuli imunoglobulina koji su sposobni da se specifično vežu za cilj, kao što je ugljeni hidrat, polinukleotid, lipid, polipeptid, itd., preko najmanje jednog mesta za prepoznavanje antigena, lociranog u varijabilnom domenu molekula imunoglobulina. Kako se ovde koristi, termini "antitelo" i "antitela" odnose se na monoklonska antitela, multispecifična antitela, ljudska antitela, humanizovana antitela, sintetička antitela, himerna antitela, poliklonska antitela, kamelizovana antitela, jednolančane Fvs (scFv), jednolančane antitela, Fab fragmente, F(ab') fragmente, disulfidno povezane bispecifične Fvs (sdFv), intratela i fragmente koji se vezuju za epitop bilo kog od gore navedenih. Posebno, antitela obuhvataju molekule imunoglobulina i imunološki aktivne fragmente molekula imunoglobulina, tj. molekule koji sadrže mesto za vezivanje antigena. Molekuli imunoglobulina mogu biti bilo kog tipa (npr. IgG, IgE, IgM, IgD, IgA i IgY), klase (npr. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1i IgA2) ili podklase. Pored njihove poznate upotrebe u dijagnostici, antitela su se pokazala korisnim kao terapeutski agensi. Antitela su sposobna da se imunospecifično vezuju za polipeptid ili protein ili neproteinski molekul zbog prisustva na takvom molekulu određenog domena ili dela ili konformacije („epitop“). Molekul koji sadrži epitop može imati imunogenu aktivnost, tako da izaziva odgovor proizvodnje antitela kod životinje; takvi molekuli se nazivaju "antigeni"). Poslednjih nekoliko decenija došlo je do oživljavanja interesovanja za terapeutski potencijal antitela, a antitela su postala jedna od vodećih klasa lekova dobijenih iz biotehnologije (drugs (Chan, C.E. et al. (2009) "The Use Of Antibodies In The Treatment Of Infectious Diseases," Singapore Med. J.50(7):663-666). Preko 200 lekova na bazi antitela je odobreno za upotrebu ili su u razvoju.
[0034] Termin "monoklonsko antitelo" se odnosi na homogenu populaciju antitela u kojoj se monoklonsko antitelo sastoji od aminokiselina (prirodnih i oni koji se me pojavljuju u prirodi) koje su uključene u selektivno vezivanje antigena. Monoklonska antitela su veoma specifična, usmerena su protiv jednog epitopa (ili antigenskog mesta). Termin "monoklonsko antitelo" obuhvata ne samo intaktna monoklonska antitela i monoklonska antitela pune dužine, već i njihove fragmente (kao što su Fab, Fab', F(ab')2 Fv), jednolančane (scFv), njihove mutante, fuzione proteine koji sadrži deo antitela, humanizovana monoklonska antitela, himerna monoklonska antitela i bilo koju drugu modifikovanu konfiguraciju molekula imunoglobulina koja sadrži mesto za prepoznavanje antigena potrebne specifičnosti i sposobnosti da se vezuje za antigen. Nije predviđeno da bude ograničen u pogledu izvora antitela ili načina na koji je ono napravljeno (npr. hibridomom, selekcijom faga, rekombinantnom ekspresijom, transgenim životinjama, itd.). Termin uključuje cele imunoglobuline, kao i fragmente itd. opisane gore pod definicijom "antitela". Postupci pravljenja monoklonskih antitela su poznati u tehnici. Jedna metoda koja se može primeniti je metoda koju su opisali Kohler, G. et al. (1975) "Continuous Cultures Of Fused Cells Secreting Antibody Of Predefined Specificity," Nature 256:495-497 ", ili njihova modifikacija. Tipično, monoklonska antitela se razvijaju kod miševa, pacova ili zečeva. Antitela se proizvode imunizacijom životinje imunogenom količinom ćelija, ćelijskih ekstrakata ili proteinskih preparata koji sadrže željeni epitop. Imunogen može biti, ali nije ograničen na, primarne ćelije, kultivisane ćelijske linije, ćelije raka, proteini, peptidi, nukleinske kiseline ili tkivo. Ćelije koje se koriste za imunizaciju mogu se kultivisati tokom određenog vremenskog perioda (npr. najmanje 24 sata) pre njihove upotrebe kao imunogena. Ćelije se mogu koristiti kao imunogeni same ili u kombinaciji sa nedenaturirajućim adjuvansom, kao što je Ribi (videti, npr., Jennings, V.M. (1995) "Review of Selected Adjuvants Used in Antibody Production," ILAR J.37(3): 119-125). Generalno, ćelije treba da budu netaknute i poželjno održive kada se koriste kao imunogeni. Intaktne ćelije mogu omogućiti da imunizovana životinja bolje detektuje antigene od rupturiranih (puknutih) ćelija.
Upotreba denaturišućih ili oštrih adjuvansa, na primer, Frojdovog pomoćnog sredstva, može da izazove rupturu ćelije i stoga se ne preporučuje. Imunogen se može primenjivati više puta u periodičnim intervalima kao što su dve nedelje ili nedeljno, ili se može primeniti na takav način da se održi održivost kod životinje (npr., u rekombinantu tkiva). Alternativno, postojeća monoklonska antitela i bilo koja druga ekvivalentna antitela koja su imunospecifična za željeni patogeni epitop mogu biti sekvencionirana i proizvedena rekombinantno na bilo koji način poznat u tehnici. Antitelo se može sekvencirati i polinukleotidna sekvenca se zatim klonira u vektor za ekspresiju ili propagaciju. Sekvenca koja kodira antitelo od interesa može se održavati u vektoru u ćeliji domaćinu i ćelija domaćina se zatim može proširiti i zamrznuti za buduću upotrebu. Polinukleotidna sekvenca takvih antitela može da se koristi za genetsku manipulaciju za generisanje monospecifičnih molekula pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, kao i optimizovano afinitetom, himerno antitelo, humanizovano antitelo, i/ili kaninizovano antitelo, za poboljšanje afiniteta ili drugih karakteristika antitela. Opšti princip humanizacije antitela uključuje zadržavanje osnovne sekvence dela antitela koji se vezuje za antigen, dok se ostatak antitela koji nije ljudski zamenjuje sekvencama humanih antitela.
[0035] Prirodna antitela (kao što su IgG antitela) se sastoje od dva laka lanca u kompleksu sa dva teška lanca. Svaki laki lanac sadrži varijabilni domen (VL) i konstantni domen (CL). Svaki teški lanac sadrži varijabilni domen (VH), tri konstantna domena (CH1, CH2 i CH3) i pregibni domen koji se nalazi između CH1 i CH2 domena. Osnovna strukturna jedinica prirodno prisutnih imunoglobulina (npr. IgG) je stoga tetramer koji ima dva laka lanca i dva teška lanca, obično izražen kao glikoprotein od oko 150,000 Da. Amino-terminalni ("N-terminalni") deo svakog lanca uključuje varijabilni domen od oko 100 do 110 ili više aminokiselina koje su prvenstveno odgovorne za prepoznavanje antigena.
Karboksi-terminalni ("C-terminalni") deo svakog lanca definiše konstantni region, sa lakim lancima koji imaju jedan konstantni domen i teškim lancima koji obično imaju tri konstantna domena i pregibni domen. Dakle, struktura lakih lanaca IgG molekula je n-VL-CL-c, a struktura teških lanaca IgG je n-VH-CH1-H-CH2-CH3-c (gde je H zglobni domen, i n i c predstavljaju, respektivno, N-terminus i C-terminalni kraj polipeptida). Varijabilni domeni IgG molekula sastoje se od regiona koji određuju komplementarnost (CDR), koji sadrže ostatke u kontaktu sa epitopom, i ne-CDR segmenata, koji se nazivaju okvirni segmenti (FR), koji generalno održavaju strukturu i određuju pozicioniranje CDR petlji tako da se omogući takav kontakt (iako određeni ostaci okvira mogu takođe kontaktirati antigen). Dakle, VL i VH domeni imaju strukturu n-FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-c. Polipeptidi koji su (ili mogu poslužiti kao) prvi, drugi i treći CDR lakog lanca antitela su ovde respektivno označeni kao CDRL1 domen, CDRL2 domen, i CDRL3 domen. Slično, polipeptidi koji su (ili mogu poslužiti kao) prvi, drugi i treći CDR teškog lanca antitela su ovde respektivno označeni kao CDRH1 domen, CDRH2 domen, i CDRH3 domen. Dakle, termini CDRL1 domen , CDRL2 domen, CDRL3 domen, CDRH1 domen, CDRH2 domen, i CDRH3 domen su usmereni na polipeptide koji kada su inkorporirani u protein uzrokuju da se taj protein može vezati za određeni epitop bez obzira na to da li je takav protein antitelo koje ima lake i teške lance ili dijatelo ili jednolančani vezujući molekul (npr. scFv, BiTe, itd.), ili je drugi tip proteina. Shodno tome, kako se ovde koristi, izraz "epitop-vezujući fragment" označava fragment antitela sposobnog da se imunospecifično veže za epitop, a izraz "mesto vezivanja epitopa" se odnosi na onaj deo molekula koji sadrži fragment koji se vezuje za epitop. koji je odgovoran za vezivanje epitopa. Mesto vezivanja epitopa može sadržati 1, 2, 3, 4, 5 ili svih 6 CDR domena takvog antitela i, iako je sposobno da se imunospecifično veže za takav epitop, može pokazati imunospecifičnost, afinitet ili selektivnost prema takvom epitopu koji se razlikuje od takvog antitela. Međutim, poželjno je da fragment koji se vezuje za epitop sadrži svih 6 CDR domena takvog antitela. Fragment antitela koji se vezuje za epitop može biti jedan polipeptidni lanac (npr., scFv), ili može da sadrži dva ili više polipeptidnih lanaca, od kojih svaki ima amino-terminus i karboksi kraj (npr. dijatelo, Fab fragment, F(ab')2 fragment, itd.).+
[0036] Fragmenti jednolančanog varijabilnog domena su napravljeni povezivanjem varijabilnog domena lakog i/ili teškog lanca korišćenjem peptida kratkog vezivanja. Bird et al. (1988) ("Single-Chain Antigen-Binding Proteins," Science 242:423-426) opisuje primer povezivanja peptida koji premošćuju približno 3,5 nm između karboksi kraja jednog varijabilnog domena i amino kraja drugog varijabilnog domena. Dizajnirani su i korišćeni linkeri drugih sekvenci . Bird et al. (1988) ("Single-Chain Antigen-Binding Proteins," Science 242:423-426) . Linkeri se zauzvrat mogu modifikovati za dodatne funkcije, kao što je vezivanje lekova ili pričvršćivanje na čvrste nosače. Jednolančane varijante se mogu proizvesti bilo rekombinantno ili sintetički. Za sintetičku proizvodnju scFv, može se koristiti automatizovani sintetizator. Za rekombinantnu proizvodnju scFv, pogodan plazmid koji sadrži polinukleotid koji kodira scFv može se uvesti u odgovarajuću ćeliju domaćina, bilo eukariotsku, kao što su ćelije kvasca, biljaka, insekata ili sisara, ili prokariotske, kao što je E. coli. Polinukleotidi koji kodiraju scFv od interesa mogu se napraviti rutinskim manipulacijama kao što je ligacija polinukleotida. Dobijeni scFv se može izolovati korišćenjem standardnih tehnika prečišćavanja proteina poznatih u tehnici.
[0037] Termin "humanizovano" antitelo se odnosi na himerni molekul, generalno pripremljen korišćenjem rekombinantnih tehnika, koji ima mesto vezivanja antigena imunoglobulina iz neljudske vrste i preostalu imunoglobulinsku strukturu molekula koja je zasnovana na strukturi i/ili sekvenca humanog imunoglobulina. Anti-humana PD-1 antitela uključuju humanizovane, himerične ili kaninizovane varijante antitela PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15. Polinukleotidna sekvenca varijabilnih domena takvih antitela može da se koristi za genetsku manipulaciju da bi se generisali takvi derivati i da bi se poboljšao afinitet ili druge karakteristike takvih antitela. Opšti princip humanizacije antitela uključuje zadržavanje osnovne sekvence dela antitela koji se vezuje za antigen, dok se ostatak antitela koji nije ljudski zamenjuje sekvencama humanih antitela. Postoje četiri opšta koraka za humanizaciju monoklonskog antitela. To su: (1) određivanje nukleotidne i predviđene aminokiselinske sekvence početnih lakih i teških varijabilnih domena (2) dizajniranje humanizovanog antitela ili kaninizovanog antitela, tj. odlučivanje koji region okvira antitela da se koristi tokom procesa humanizacije ili kaninizacije ( 3) stvarne metodologije/tehnike humanizacije ili kaninizacije i (4) transfekcija i ekspresija humanizovanog antitela. Videti, na primer, patente SAD br.4,816,567; 5,807,715; 5,866,692; i 6,331,415.
[0038] Antigen-vezujuće mesto (mesto za vezivanje antigena) može da sadrži ili kompletan varijabilni domen fuzionisan sa konstantnim domenom ili samo hipervarijabilne regione (CDR takvog varijabilnog domena kalemljene na odgovarajuće okvirne regione. Mesta za vezivanje antigena mogu biti divljeg tipa ili modifikovana jednom ili više amino kiselinskih supstitucija. Ovo eliminiše konstantni region kao imunogen kod pojedinaca kod ljudi, ali ostaje mogućnost imunog odgovora na strani varijabilni domen (LoBuglio, A.F. et al. (1989) "Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody In Man: Kinetics And Immune Response," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86:4220-4224). Drugi pristup se fokusira ne samo na obezbeđivanje konstantnih regiona izvedenih od ljudi, već i na modifikovanje varijabilnih domena kako bi ih preoblikovali što je moguće bliže ljudskom obliku. Poznato je da varijabilni domeni i teških i lakih lanaca sadrže tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR) koji variraju u zavisnosti od antigena o kojima je reč i određuju sposobnost vezivanja, uz četiri okvira regiona (FR) koji su relativno konzervirani u datom vrste i koje navodno obezbeđuju osnovnu strukturu za CDR-ove. Kada se ne-humana antitela pripremaju u odnosu na određeni antigen, varijabilni domeni se mogu "preoblikovati" ili "humanizovati" presađivanjem CDR-ova izvedenih iz nehumanih antitela na FR prisutne u humanom antitelu koje treba modifikovati. O primeni ovog pristupa na različita antitela obajvili su Sato, K. et al. (1993) Cancer Res 53:851-856. Riechmann, L. et al. (1988) "Reshaping Human Antibodies for Therapy," Nature 332:323-327; Verhoeyen, M. et al. (1988) "Reshaping Human Antibodies: Grafting An Antilysozyme Activity," Science 239:1534-1536; Kettleborough, C. A. et al. (1991) "Humanization Of A Mouse Monoclonal Antibody By CDR-Grafting: The Importance Of Framework Residues On Loop Conformation," Protein Engineering 4:773-3783; Maeda, H. et al. (1991) "Construction Of Reshaped Human Antibodies With HIV-Neutralizing Activity," Human Antibodies Hybridoma 2:124-134; Gorman, S. D. et al. (1991) "Reshaping A Therapeutic CD4 Antibody," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:4181-4185; Tempest, P.R. et al. (1991) "Reshaping A Human Monoclonal Antibody To Inhibit Human Respiratory Syncytial Virus Infection in vivo," Bio/Technology 9:266-271; Co, M. S. et al. (1991) "Humanized Antibodies For Antiviral Therapy," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:2869-2873; Carter, P. etal. (1992) "Humanization Of An Antipl85her2 Antibody For Human Cancer Therapy," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 89:4285-4289; and Co, M.S. et al. (1992) "Chimeric And Humanized Antibodies With Specificity For The CD33 Antigen," J. Immunol.148:1149-1154. Humanizovana antitela mogu da sačuvaju sve CDR sekvence (na primer, humanizovano mišje antitelo koje sadrži svih šest CDR-ova mišjih antitela). Alternativno, humanizovana antitela mogu imati jedan ili više CDR (jedan, dva, tri, četiri, pet ili šest) koji se razlikuju po sekvenci u odnosu na originalno antitelo.
[0039] Opisani su brojni "humanizovani" molekuli antitela koji sadrže mesto vezivanja antigena izvedeno iz ne-humanog imunoglobulina, uključujući himerna antitela koja imaju varijabilni domen glodara ili modifikovanih glodara i njihove povezane hipervarijabilne regione (CDR) spojene sa konstantnim domenima čoveka (videti, na primer, Winter et al. (1991) "Man-made Antibodies," Nature 349:293-299; Lobuglio et al. (1989) "Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody In Man: Kinetics And Immune Response," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86:4220-4224 (1989), Shaw et al. (1987) "Characterization Of A Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody (17-1A) To A Colon Cancer Tumor Associated Antigen," J. Immunol.138:4534-4538, i Brown et al. (1987) "Tumor-Specific Genetically Engineered Murine/Human Chimeric Monoclonal Antibody," Cancer Res.47:3577-3583). Druge reference opisuju CDR-ove glodara kalemljene u noseći okvirni region (FR) čoveka pre fuzije sa odgovarajućim konstantnim domena humanog antitela (videti, na primer, Riechmann, L. et al. (1988) "Reshaping Human Antibodies for Therapy," Nature 332:323-327; Verhoeyen, M. et al. (1988) "Reshaping Human Antibodies: Grafting An Antilysozyme Activity," Science 239:1534-1536; i Jones et al. (1986) "Replacing The Complementarity-Determining Regions In A Human Antibody With Those From A Mouse," Nature 321:522-525). Druga referenca opisuje CDR-ove glodara podržane rekombinantno furniranim okvirnim regionima glodara. Videti, na primer, Evropsku patentnu publikaciju br.519,596. Ovi "humanizovani" molekuli su dizajnirani da svedu na minimum neželjeni imunološki odgovor na molekule anti-humanih antitela glodara, što ograničava trajanje i efikasnost terapijskih primena tih delova kod humanih primaoca. Drugi postupci humanizacije antitela koji se takođe mogu koristiti su otkrili Daugherty et al. (1991) "Polymerase Chain Reaction Facilitates The Cloning, CDR-Grafting, And Rapid Expression Of A Murine Monoclonal Antibody Directed Against The CD18 Component Of Leukocyte Integrins," Nucl. Acids Res.19:2471-2476 and in U.S. Patents Nos. 6,180,377; 6,054,297; 5,997,867; and 5,866,692.
II. Fcγ Receptori (FcγRs)
[0040] CH2 i CH3 domeni dva teška lanca međusobno deluju da bi formirali Fc region, koji je domen koji prepoznaju ćelijski Fc receptori, uključujući, ali ne ograničavajući se na Fc gama receptore (FcγRs). Kako se ovde koristi, termin "Fc region" se koristi za definisanje C-terminalnog regiona teškog lanca IgG. Aminokiselinska sekvenca CH2-CH3 domena primera humanog IgG1 je (SEQ ID NO:1):
kao što je numerisano EU indeksom kako je navedeno u Kabatu, pri čemu je x lizin (K) ili je nije prisutan.
[0041] Aminokiselinska sekvenca CH2-CH3 domena primera humanog IgG2 je (SEQ ID NO:2):
kao što je numerisano EU indeksom kako je navedeno u Kabatu, pri čemu je x lizin (K) ili je nije prisutan.
[0042] Aminokiselinska sekvenca CH2-CH3 domena primera humanog IgG3 je (SEQ ID NO:3):
kao što je numerisano EU indeksom kako je navedeno u Kabatu, pri čemu je x lizin (K) ili je nije prisutan.
[0043] Aminokiselinska sekvenca CH2-CH3 domena primera humanog IgG4 je (SEQ ID NO:4):
kao što je numerisano EU indeksom kako je navedeno u Kabatu, pri čemu je x lizin (K) ili je nije prisutan
[0044] U ovoj specifikaciji, numerisanje ostataka u konstantnom regionu teškog lanca IgG je kao onaj od EU indeksa kao u Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, NH1, MD (1991) ("Kabat"), izričito. Termin "EU indeks kao u Kabatu" odnosi se na numerisanje humanog IgG1 EU antitela. Aminokiseline iz varijabilnih domena zrelih teških i lakih lanaca imunoglobulina su označene položajem aminokiseline u lancu. Kabat je opisao brojne aminokiselinske sekvence za antitela, identifikovao konsenzus sekvencu aminokiselina za svaku podgrupu i dodelio broj ostatka svakoj aminokiselini, a CDR-ovi su identifikovani kako je definisao Kabat (podrazumeva se da je CDRH1 kako je definisao Chothia, C. & Lesk, A. M. ((1987) "Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins,". J. Mol. Biol.196:901-917) počinje pet ostataka ranije). Kabatova numerička šema se može proširiti na antitela koja nisu uključena u njegov kompendijum tako što se dotično antitelo poravna sa jednom od konsenzus sekvenci u Kabatu pozivajući se na konzervirane aminokiseline. Ova metoda za dodeljivanje brojeva ostataka postala je standardna u ovoj oblasti i lako identifikuje aminokiseline na ekvivalentnim pozicijama u različitim antitelima, uključujući himerne ili humanizovane varijante. Na primer, amino kiselina na poziciji 50 lakog lanca humanog antitela zauzima ekvivalentnu poziciju kao amino kiselina na poziciji 50 lakog lanca antitela miša.
[0045] Polimorfizmi su uočeni na brojnim različitim pozicijama unutar konstantnih regiona antitela (npr. CH1 pozicije, uključujući ali ne ograničavajući se na pozicije 192, 193 i 214; Fc pozicije, uključujući ali ne ograničavajući se na pozicije 270, 272, 312 , 315, 356 i 358 numerisane prema EU indeksu kako je navedeno u Kabatu), i stoga mogu postojati male razlike između predstavljene sekvence i sekvenci u prethodnom stanju tehnike. Polimorfni oblici humanih imunoglobulina su dobro okarakterisani. Trenutno su poznati alotipovi od 18 Gm: G1m (1, 2, 3, 17) or G1m (a, x, f, z), G2m (23) or G2m (n), G3m (5, 6, 10, 11, 13, 14, 15, 16, 21, 24, 26, 27, 28) or G3m (b1, c3, b3, b0, b3, b4, s, t, g1, c5, u, v, g5) (Lefranc, et al., "The Human IgG Subclasses: Molecular Analysis Of Structure, Function And Regulation." Pergamon, Oxford, pp.43-78 (1990); Lefranc, G. et al., 1979, Hum. Genet.: 50, 199-211). Posebno se smatra da antitela ovog pronalaska, kako su definisana i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, mogu da inkorporiraju bilo koji alotip, izoalotip ili haplotip bilo kog imunoglobulinskog gena, i nisu ograničena na alotip, izoalotip ili haplotip sekvenci datih ovde.
Štaviše, u nekim ekspresionim sistemima, C-terminalni aminokiselinski ostatak (gore označen masnim slovima) CH3 domena može biti uklonjen post-translaciono. Shodno tome, C-terminalni ostatak CH3 domena je opcioni aminokiselinski ostatak u PD-1-vezujućim molekulima pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6. Specifično obuhvaćeni ovim pronalaskom su PD-1-vezujući molekuli kojima nedostaje C-terminalni ostatak CH3 domena. Takođe su posebno obuhvaćeni ovim pronalaskom takvi konstrukti koji sadrže C-terminalni lizinski ostatak CH3 domena.
[0046] Aktivirajući i inhibitorni signali se prenose kroz ligaciju Fc regiona na ćelijski Fc gama receptor (FcyR). Sposobnost takve ligacije da rezultira dijametralno suprotnim funkcijama je rezultat strukturnih razlika između različitih FcyR. Dva različita domena unutar citoplazmatskih signalnih domena receptora koji se nazivaju motivi aktivacije zasnovani na imunoreceptoru tirozina (ITAM) i inhibitorni motivi zasnovani na imunoreceptoru tirozina (ITIMS) objašnjavaju različite odgovore. Regrutovanje različitih citoplazmatskih enzima u ove strukture diktira ishod ćelijskih odgovora posredovanih FcyR. FcyR kompleksi koji sadrže ITAM uključuju FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIIA, dok kompleksi koji sadrže ITIM uključuju samo FcyRIIB. Čovečiji neutrofili eksprimiraju gen FcyRIIA. Grupisanje FcyRIIA preko imunih kompleksa ili specifičnog umrežavanja antitela služi za agregaciju ITAM-ova zajedno sa kinazama povezanim sa receptorom koje olakšavaju fosforilaciju ITAM-a. ITAM fosforilacija služi kao mesto za spajanje Syk kinaze, čija aktivacija dovodi do aktivacije nizvodnih supstrata (npr. PI3K). Ćelijska aktivacija dovodi do oslobađanja proinflamatornih medijatora. Gen FcyRIIB je eksprimiran na B limfocitima; njegov ekstracelularni domen je 96% identičan FcyRIIA i vezuje IgG komplekse na nerazlučiv način. Prisustvo ITIM-a u citoplazmatskom domenu FcyRIIB definiše ovu inhibitornu podklasu FcyR. Nedavno je ustanovljena molekularna osnova ove inhibicije. Kada se koligira zajedno sa aktivirajućim FcyR, ITIM u FcyRIIB postaje fosforilisan i privlači SH2 domen inozitol polifosfat 5'-fosfataze (SHIP), koji hidrolizuje fosfoinozitol glasnike koji se oslobađaju kao posledica medijasa F ITAMR koji sadrži kirosinu. aktivacije, posledično sprečavajući priliv intracelularnog Ca++. Tako umrežavanje FcyRIIB prigušuje aktivacioni odgovor na FcyR ligaciju i inhibira ćelijski odgovor. Aktivacija B-ćelija, proliferacija B-ćelija i lučenje antitela se na tak način prekida.
[0047] Sposobnost antitela da veže epitop antigena zavisi od prisustva i aminokiselinske sekvence VL i VH domena antitela. Interakcija lakog lanca antitela i teškog lanca antitela i, posebno, interakcija njegovih VL i VH domena formira jedno od dva epitop-vezujuća mesta prirodnog antitela. Prirodna antitela su sposobna da se vežu samo za jednu vrstu epitopa (tj., monospecifična su), iako mogu da vežu više kopija te vrste (tj. pokazuju bivalentnost ili multivalentnost).
[0048] Vezujući domeni antitela vezuju se za epitope na "imunospecifičan" način. Kako se ovde koristi, za antitelo, dijatelo ili drugi molekul koji se vezuje za epitop kaže se da "imunospecifično" vezuje region drugog molekula (tj. epitop) ako reaguje ili se povezuje češće, brže, sa dužim trajanjem i/ili sa veći afinitet sa tim epitopom u odnosu na alternativne epitope. Na primer, antitelo koje se imunospecifično vezuje za virusni epitop je antitelo koje vezuje ovaj virusni epitop sa većim afinitetom, avidnošću, lakše i/ili sa dužim trajanjem nego što se imunospecifično vezuje za druge virusne epitope ili nevirusne epitope. Takođe se razume čitanjem ove definicije da, na primer, antitelo (ili deo ili epitop) koje se imunospecifično vezuje za prvu metu može, ali ne mora specifično ili preferencijalno da se veže za drugu metu. Kao takvo, "imunospecifično vezivanje" ne zahteva nužno (iako može uključivati) ekskluzivno vezivanje. Uopšteno, ali ne nužno, referenca na vezivanje znači "specifično" vezivanje. Kaže se da su dva molekula sposobna da se vezuju jedan za drugi na "fiziospecifičan" način, ako takvo vezivanje pokazuje specifičnost sa kojom se receptori vezuju za svoje odgovarajuće ligande.
[0049] Funkcionalnost antitela se može poboljšati stvaranjem multispecifičnih molekula zasnovanih na antitelu koji mogu istovremeno da vežu dva odvojena i različita antigena (ili različite epitope istog antigena) i/ili stvaranjem molekula zasnovanog na antitelu koji ima veću valentnost (tj. više od dva mesta vezivanja) za isti epitop i/ili antigen.
[0050] Da bi se obezbedili molekuli koji imaju veću sposobnost od prirodnih antitela, razvijen je širok spektar formata rekombinantnih bispecifičnih antitela (videti, npr., PCT publikacije br. WO 2008/003116, WO 2009/132876, WO 2008/003103, WO 2007/146968, WO 2009/018386, WO 2012/009544, WO 2013/070565), većina njih koristi peptide za povezivanje ili za spajanje daljeg fragmenta koji se vezuje za epitop (npr., scFv, VL, VH, itd.) sa, ili unutar jezgra antitela (IgA, IgD, IgE, IgG ili IgM), ili za spajanje višestrukih fragmenata koji se vezuju za epitop (npr. dva Fab fragmenta ili scFvs). Alternativni formati koriste linker peptide za spajanje fragmenta koji se vezuje za epitop (npr., scFv, VL, VH, itd.) sa domenom dimerizacije kao što je CH2-CH3 domen ili alternativni polipeptidi (WO 2005/070966, WO 2006/107786A WO 2006/107617A, WO 2007/046893). Tipično, takvi pristupi uključuju pogodbe i kompromise. Na primer, PCT publikacije br. WO 2013/174873, WO 2011/133886 i WO 2010/136172 otkrivaju da upotreba linkera može da izazove probleme u terapijskim postavkama i poučava trispecifično antitelo u kojem su CL i CH1 domeni zamenjeni. odgovarajuće prirodne pozicije i VL i VH domeni su diversifikovani (WO 2008/027236; WO 2010/108127) kako bi im se omogućilo da se vežu za više od jednog antigena. Dakle, molekuli otkriveni u ovim dokumentima trguju specifičnošću vezivanja za sposobnost vezivanja dodatnih vrsta antigena. PCT publikacije br. WO 2013/163427 i WO 2013/119903 otkrivaju modifikovanje CH2 domena da sadrži adukt fuzionog proteina koji sadrži vezujući domen. U dokumentu se navodi da CH2 domen verovatno igra samo minimalnu ulogu u posredovanju efektorske funkcije. PCT publikacije br. WO
2010/028797, WO2010028796 i WO 2010/028795 otkrivaju rekombinantna antitela čiji su Fc regioni zamenjeni dodatnim VL i VH domenima, tako da formiraju trovalentne vezujuće molekule. PCT publikacije br.2003/025018 i WO2003012069 otkrivaju rekombinantna dijatela čiji pojedinačni lanci sadrže scFv domene. PCT publikacije br. WO 2013/006544 otkrivaju multivalentne Fab molekule koji se sintetišu kao jedan polipeptidni lanac i zatim podvrgavaju proteolizi da bi se dobile heterodimerne strukture. Dakle, molekuli otkriveni u ovim dokumentima menjaju svu ili deo sposobnosti posredovanja efektorske funkcije za sposobnost vezivanja dodatnih vrsta antigena. PCT publikacije br. WO 2014/022540, WO 2013/003652, WO 2012/162583, WO 2012/156430, WO 2011/086091, WO 2008/024188, WO 2007/024715, WO 2007/075270, WO 1998/002463, WO 1992/022583 i WO 1991/003493 otkrivaju dodavanje dodatnih vezujućih domena ili funkcionalnih grupa antitelu ili delu antitela (npr. dodavanje dijatela lakom lancu antitela, ili dodavanje dodatnih VL i VH domena lakim i teškim lancima antitela, ili dodavanje heterolognog fuzionog proteina ili lačnano povezivanje više Fab domena jedan sa drugim). Tako, molekuli otkriveni u ovim dokumentima razmenjuju nativnu strukturu antitela za sposobnost vezivanja dodatnih vrsta antigena.
[0051] U tehnici je dodatno uočena sposobnost da se proizvedu dijatela koja se razlikuju od takvih prirodnih antitela po tome što su sposobna da vežu dve ili više različitih vrsta epitopa (tj. pokazuju bispecifičnost ili višestruku specifičnost pored bivalentnosti ili multivalentnosti) (videti, npr. Holliger et al. (1993) "'Diabodies': Small Bivalent And Bispecific Antibody Fragments," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 90:6444-6448; US 2004/0058400 (Hollinger et al.); US 2004/0220388 / WO 02/02781 (Mertens et al.); Alt et al. (1999) FEBS Lett.454(1-2):90-94; Lu, D. et al. (2005) "A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity," J. Biol. Chem.280(20):19665-19672; WO 02/02781 (Mertens et al.); Olafsen, T. et al. (2004) "Covalent Disulfide-Linked Anti-CEA Diabody Allows Site-Specific Conjugation And Radiolabeling For Tumor Targeting Applications," Protein Eng. Des. Sel.17(1):21-27; Wu, A. et al. (2001) "Multimerization Of A Chimeric Anti-CD20 Single Chain Fv-Fv Fusion Protein Is Mediated Through Variable Domain Exchange," Protein Engineering 14(2):1025-1033; Asano et al. (2004) "A Diabody For Cancer Immunotherapy And Its Functional Enhancement By Fusion Of Human Fc Domain," Abstract 3P-683, J. Biochem.
76(8):992; Takemura, S. et al. (2000) "Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System," Protein Eng.13(8):583-588; Baeuerle, P.A. et al. (2009) "Bispecific T-Cell Engaging Antibodies For Cancer Therapy," Cancer Res.69(12):4941-4944).
[0052] Dizajn dijatela je zasnovan na derivatu antitela poznatom kao domen jednolančanog varijabilnog fragmenta (scFv). Takvi molekuli se prave povezivanjem varijabilnih domena lakog i/ili teškog lanca korišćenjem peptida za kratko povezivanj. Bird et al. (1988) ("Single-Chain Antigen-Binding Proteins," Science 242:423-426) opisuju primer povezivanja peptida koji premošćuju približno 3,5 nm između karboksi kraja jednog varijabilnog domena i amino kraja drugog varijabilnog domena. Dizajnirani su i korišćeni linkeri drugih sekvenci (Bird et al. (1988) "Single-Chain Antigen-Binding Proteins," Science 242:423-426). Linkeri se zauzvrat mogu modifikovati za dodatne funkcije, kao što je vezivanje lekova ili pričvršćivanje na čvrste nosače. Jednolančane varijante se mogu proizvesti bilo rekombinantno ili sintetički. Za sintetičku proizvodnju scFv, može se koristiti automatizovani sintietizator. Za rekombinantnu proizvodnju scFv, pogodan plazmid koji sadrži polinukleotid koji kodira scFv može se uvesti u odgovarajuću ćeliju domaćina, bilo eukariotsku, kao što su ćelije kvasca, biljaka, insekata ili sisara, ili prokariotske, kao što je E. coli. Polinukleotidi koji kodiraju scFv od interesa mogu se napraviti rutinskim manipulacijama kao što je ligacija polinukleotida. Dobijeni scFv se može izolovati korišćenjem standardnih tehnika prečišćavanja proteina poznatih u tehnici.
[0053] Obezbeđivanje nemonospecifičnih dijatela pruža značajnu prednost u odnosu na antitela, uključujući, ali ne ograničavajući se na, sposobnost ko-ligiranja i ko-lokalizacije ćelija koje eksprimiraju različite epitope. Bispecifična dijatela stoga imaju širok spektar primene uključujući terapiju i imunodijagnozu. Bispecifičnost omogućava veliku fleksibilnost u dizajnu i inženjeringu dijatela u različitim primenama, obezbeđujući povećanu avidnost multimernih antigena, unakrsno povezivanje različitih antigena i usmereno ciljanje na specifične tipove ćelija oslanjajući se na prisustvo oba ciljna antigena. Zbog svoje povećane valence, niske stope disocijacije i brzog uklanjanja iz cirkulacije (za dijatela male veličine, na ili ispod ~50 kDa), molekuli dijatela poznati u tehnici su takođe pokazali posebnu upotrebu u oblasti snimanja tumora (Fitzgerald et al. (1997) "Improved Tumour Targeting By Disulphide Stabilized Diabodies Expressed In Pichia pastoris, " Protein Eng.10:1221).
[0054] Bispecifičnost dijatela je dovela do njihove upotrebe za ko-ligiranje različitih ćelija, na primer, umrežavanje citotoksičnih T-ćelija sa tumorskim ćelijama (Staerz et al. (1985) "Hybrid Antibodies Can Target Sites For Attack By T Cells, " Nature 314:628-631, and Holliger et al. (1996) "Specific Killing Of Lymphoma Cells By Cytotoxic T-Cells Mediated By A Bispecific Diabody, " Protein Eng.9:299-305; Marvin et al. (2005) "Recombinant Approaches To IgG-Like Bispecific Antibodies," Acta Pharmacol. Sin.26:649-658). Alternativno, ili dodatno, bispecifična dijatela se mogu koristiti za koligiranje receptora na površini različitih ćelija ili na jednoj ćeliji. Ko-ligacija različitih ćelija i/ili receptora je korisna za modulaciju efektorskih funkcija i/ili signalizaciju imunih ćelija. Multispecifični molekuli (npr. bispecifična dijatela) koji sadrže mesta vezivanja epitopa mogu biti usmereni na površinsku determinantu bilo koje imunološke ćelije kao što su B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), BTLA (CD272), CD3, CD8, CD16, CD27, CD32, CD40, CD40L, CD47, CD64, CD70 (CD27L), CD80 (B7-1), CD86 (B7-2), CD94 (KLRD1), CD137 (4-1BB), CD137L (4-1BBL), CD226, CTLA-4 (CD152), Galectin-9, GITR, GITRL, HHA2, ICOS (CD278), ICOSL (CD275), Receptor za aktiviranje ubice (KIR), LAG-3 (CD223), LIGHT (TNFSF14, CD258), MHC klasa I ili II, NKG2a, NKG2d, OX40 (CD134), OX40L (CD134L), PD1H, PD-1 (CD279), PD-L1 (B7-H1, CD274), PD-L2 (B7-CD, CD273), PVR (NECL5, CD155), SIRPa, TCR, TIGIT, TIM-3 (HAVCR2), i/ili VISTA (PD-1H) koje su eksprimirane na T limfocitima, prirodnim ćelijama ubicama (NK), ćelijama koje predstavljaju antigen ili drugim mononuklearnim ćelijama. Konkretno, mesta za vezivanje epitopa usmerena na receptor ćelijske površine koji je uključen u regulisanje imunološke kontrolne tačke (ili njenog liganda) su korisna u stvaranju bispecifičnih ili multispecifičnih vezujućih molekula koji antagonizuju ili blokiraju inhibicionu signalizaciju molekula imunološke kontrolne tačke i na taj način stimulišu, regulišu ili pojačavaju imune odgovore kod subjekta. Molekuli uključeni u regulaciju imunoloških kontrolnih tačaka uključuju, ali nisu ograničeni na B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD40L, CD47, CD70, CD80, CD86, CD94, CD137, CD137L, CD226, CTLA-4, galektin-9, GITR, GITRL, HHLA2, ICOS, ICOSL, KIR, LAG-3, LIGHT, MHC klasa I ili II, NKG2a, NKG2d, OX40, OX40L, PD1H, PD-1, PD-L1, PD-L2, PVR, SIRPa, TCR, TIGIT, TIM-3 ai/ili VISTA.
[0055] Međutim, gore navedene prednosti imaju svoju cenu. Formiranje takvih nemonospecifičnih dijatela zahteva uspešno sklapanje dva ili više različitih i različitih polipeptida (tj., takvo formiranje zahteva da se dijatela formiraju heterodimerizacijom različitih vrsta polipeptidnog lanca). Ova činjenica je u suprotnosti sa monospecifičnim dijatelima, koja nastaju homodimerizacijom identičnih polipeptidnih lanaca. Zato što se moraju obezbediti najmanje dva različita polipeptida (tj. dve polipeptidne vrste) da bi se formiralo nemonospecifično dijatelo, i zato što homodimerizacija takvih polipeptida dovodi do neaktivnih molekula (Takemura, S. et al. (2000) "Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System," Protein Eng.13(8):583-588), proizvodnja takvih polipeptida mora biti ostvarena na takav način da se spreči kovalentna veza između polipeptida iste vrste (tj. kako bi se sprečila homodimerizacija) (Takemura, S. et al. (2000) "Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System," Protein Eng.13(8):583-588). U tehnici je stoga poznata nekovalentna asocijacija takvih polipeptida (videti npr., Olafsen et al. (2004) "Covalent Disulfide-Linked Anti-CEA Diabody Allows Site-Specific Conjugation And Radiolabeling For Tumor Targeting Applications, " Prot. Engr. Des. Sel.17:21-27; Asano et al. (2004) "A Diabody For Cancer Immunotherapy And Its Functional Enhancement By Fusion Of Human Fc Domain," Abstract 3P-683, J. Biochem.76(8):992; Takemura, S. et al. (2000) "Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System," Protein Eng.13(8):583-588; Lu, D. et al. (2005) "A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity," J. Biol. Chem.280(20):19665-19672).
[0056] Međutim, struka je prepoznala da su bispecifična dijatela sastavljena od nekovalentno povezanih polipeptida nestabilna i da se lako disociraju u nefunkcionalne monomere (videti, npr. Lu, D. et al. (2005) "A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity," J. Biol. Chem.280(20):19665-19672).
[0057] Suočeni sa ovim izazovom, struka je uspela da razvije stabilna, kovalentno vezana heterodimerna nemonospecifična dijatela, nazvana DART® (Dual Affiniti ReTargeting Reagents) dijatela; videti, npr., Patentne publikacije Sjedinjenih Država br.2013-0295121; 2010-0174053 i 2009-0060910; evropske patentne publikacije br. EP 2714079; EP 2601216; EP 2376109; EP 2158221 i PCT publikacije br. WO 2012/162068; WO 2012/018687; WO 2010/080538; i Sloan, D.D. et al. (2015) "Targeting HIV Reservoir in Infected CD4 T Cells by Dual-Affinity Re-targeting Molecules (DARTs) that Bind HIV Envelope and Recruit Cytotoxic T Cells," PLoS Pathog.11(11):e1005233. doi:
10,1371/journal.ppat.1005233; Al Hussaini, M. et al. (2015) "Targeting CD123 In AML Using A T-Cell Directed Dual-Affinity Re-Targeting (DART®) Platform," Blood pii: blood-2014-05-575704; Chichili, G.R. et al. (2015) "A CD3xCD123 Bispecific DART For Redirecting Host T Cells To Myelogenous Leukemia: Preclinical Activity And Safety In Nonhuman Primates," Sci. Transl. Med.
7(289):289ra82; Moore, P.A. et al. (2011) "Application Of Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T-Cell Killing Of B-Cell Lymphoma," Blood 117(17):4542-4551; Veri, M.C. et al. (2010) "Therapeutic Control Of B Cell Activation Via Recruitment Of Fcgamma Receptor IIb (CD32B) Inhibitory Function With A Novel Bispecific Antibody Scaffold," Arthritis Rheum.62(7):1933-1943; Johnson, S. et al. (2010) "Effector Cell Recruitment With Novel Fv-BasedDual-Affinity Re-Targeting Protein Leads To Potent Tumor Cytolysis And in vivo B-Cell Depletion," J. Mol. Biol.
399(3):436-449). Takva dijatela obuhvataju dva ili više kovalentno složenih polipeptida i uključuju inženjering jednog ili više cisteinskih ostataka u svaku od upotrebljenih polipeptidnih vrsta koje dozvoljavaju formiranje disulfidnih veza i na taj način kovalentno vezuju dva polipeptidna lanca. Na primer, pokazalo se da dodavanje cisteinskog ostatka na C-terminus takvih konstrukata omogućava disulfidno vezivanje između polipeptidnih lanaca, stabilizujući rezultujući heterodimer bez uticaja na karakteristike vezivanja dvovalentnog molekula.
[0058] Svaki od dva polipeptida najjednostavnijeg bispecifičnog DART® dijatela obuhvata tri domena. Prvi polipeptid sadrži (u pravcu od N-terminusa do C-terminusa ): (i) Prvi domen koji sadrži vezujući region varijabilnog domena lakog lanca prvog imunoglobulina (VL1), (ii) drugi domen koji sadrži vezujući region varijabilnog domena teškog lanca drugog imunoglobulina (VH2) i (iii) treći domen koji sadrži cisteinski ostatak (ili domen koji sadrži cistein) i domen koji promoviše heterodimer koji služi za promociju heterodimerizacije sa drugi polipeptid dijatela i da kovalentno vežu prvi i drugi polipeptid dijatela jedan za drugi. Drugi polipeptid sadrži (u pravcu od N-terminusa do C-terminusa ): (i) prvi domen koji sadrži vezujući region varijabilnog domena lakog lanca drugog imunoglobulina (VL2), (ii) drugi domen koji sadrži vezujući region varijabilnog domena teškog lanca prvog imunoglobulina (VH1) i (iii) treći domen koji sadrži cisteinski ostatak (ili domen koji sadrži cistein) i komplementarni domen koji promoviše heterodimer koji se kombinuje sa heterodimerom- Promovisanje domena prvog polipeptidnog lanca u cilju promovisanja heterodimerizacije sa prvim polipeptidnim lancem. Cisteinski ostatak (ili domen koji sadrži cistein) trećeg domena drugog polipeptidnog lanca služi za promovisanje kovalentnog vezivanja drugog polipeptidnog lanca za prvi polipeptidni lanac dijatela. Takvi molekuli su stabilni, moćni i imaju sposobnost da istovremeno vežu dva ili više antigena. Svaki treći domen prvog i drugog polipeptida sadrži cisteinski ostatak, koji služi za vezivanje polipeptida zajedno preko disulfidne veze. Slika 1 daje šemu takvog dijatela, koje koristi domene koji promovišu heterodimer E/K zavojnice i linker koji sadrži cistein za kovalentno vezivanje. Kao što je prikazano na slici 2 i slikama 3A-3C, jedan ili oba polipeptida mogu dodatno posedovati sekvencu CH2-CH3 domena, tako da kompleksiranje između dva polipeptida dijatela formira Fc region koji je sposoban da se veže za Fc receptor ćelija (kao što su B limfociti, dendritske ćelije, prirodne ćelije ubice, makrofagi, neutrofili, eozinofili, bazofili i mastociti). Kao što je detaljnije navedeno u nastavku, CH2 i/ili CH3 domeni takvih polipeptidnih lanaca ne moraju biti identični u sekvenci, i poželjno je da su modifikovani da podstiču kompleksiranje između dva polipeptidna lanca.
[0059] Mnoge varijacije takvih molekula su opisane (videti, npr., Patentne publikacije Sjedinjenih Država br.2015/0175697; 2014/0255407; 2014/0099318; 2013/0295121; 2010/0174053 i 2009/0060910; publkacije evropskih patenta br. EP 2714079; EP 2601216; EP 2376109; EP 2158221 i PCT publikacije br. WO 2012/162068; WO 2012/018687; WO 2010/080538). Ova DART® dijatela koja sadrže Fc region mogu da sadrže dva para polipeptidnih lanaca. Prvi polipeptidni lanac sadrži (u pravcu od N-terminusa do C-terminusa ): (i) prvi domen koji sadrži vezujući region varijabilnog domena lakog lanca prvog imunoglobulina (VL1), (ii) drugi domen koji sadrži vezujući region varijabilnog domena teškog lanca drugog imunoglobulina (VH2), (iii) Treći domen koji sadrži cisteinski ostatak (ili domen koji sadrži cistein) i služi za promovisanje heterodimerizacije sa drugim polipeptidom dijatela i da kovalentno vežu prvi i drugi polipeptid dijatela jedan za drugi, i (iv) CH2-CH3 domen. Drugi polipeptid sadrži (u pravcu od N-terminusa do C-terminusa ): (i) prvi domen koji sadrži vezujući region varijabilnog domena lakog lanca drugog imunoglobulina (VL2), (ii) drugi domen koji sadrži vezujući region varijabilnog domena teškog lanca prvog imunoglobulina (VH1), i (iii) ) Treći domen koji sadrži cisteinski ostatak (ili domen koji sadrži cistein) i domen koji promoviše heterodimer koji promoviše heterodimerizaciju sa prvim polipeptidni lanac. Ovde se dva prva polipeptida kombinuju jedan sa drugim da bi formirali Fc region. Slike 3A-3C daju šeme tri varijacije takvih dijatela koje koriste različite domene koji promovišu heterodimer (heterodimer-promovišuće domene).
[0060] Druga DART® dijatela koja sadrže Fc-region mogu da sadrže tri polipeptidna lanca. Prvi polipeptid takvih DART® dijatela sadrži tri domena: (i) Domen koji sadrži VL1, (ii) Domen koji sadrži VH2 i (iii) Domen koji sadrži CH2-CH3 sekvencu. Drugi polipeptid takvih DART® dijatela sadrži: (i) Domen koji sadrži VL2, (ii) Domen koji sadrži VH1 i (iii) Domen koji promoviše heterodimerizaciju i kovalentno vezivanje sa prvim polipeptidnim lancem dijatela. Treći polipeptid takvih DART® dijatela sadrži CH2-CH3 sekvencu. Dakle, prvi i drugi polipeptidni lanci takvih DART® dijatela se udružuju kako bi formirali mesto vezivanja VL1/VH1 koje je sposobno da se veže za epitop, kao i mesto vezivanja VL2/VH2 koje je sposobno da se veže za drugi epitop. Takvi složeniji DART® molekuli takođe poseduju domene koji sadrže cistein koji funkcionišu tako da formiraju kovalentno vezan kompleks. Dakle, prvi i drugi polipeptidi su vezani jedan za drugi preko disulfidne veze koja uključuje cisteinske ostatke u njihovim odgovarajućim Trećim domenima. Značajno je da se prvi i treći polipeptidni lanci kompleksiraju jedan sa drugim da bi formirali Fc region koji je stabilizovan preko disulfidne veze. Slike 4A-4B daju šeme takvih dijatela koja sadrže tri polipeptidna lanca.
[0061] Druga DART® dijatela koja sadrže Fc-region mogu da sadrže pet polipeptidnih lanaca koji mogu sadržati regione vezivanja iz varijabilnih domena lakog i teškog lanca do tri različita imunoglobulina (koji se nazivaju VL1/VH1, VL2/VH2 i VL3/VH3). Na primer, prvi polipeptidni lanac takvih dijatela može da sadrži: (i) domen koji sadrži VH1, (ii) domen koji sadrži CH1, i (iii) domen koji sadrži CH2-CH3 sekvencu. Drugi i peti polipeptidni lanci takvih dijatela mogu da sadrže: (i) domen koji sadrži VL1 i (ii) domen koji sadrži CL. Treći polipeptidni lanac takvih dijatela može da sadrži: (i) domen koji sadrži VH1, (ii) domen koji sadrži CH1, (iii) domen koji sadrži CH2-CH3 sekvencu, (iv) domen koji sadrži VL2, ( v) domen koji sadrži VH3 i (vi) domen koji promoviše heterodimer, gde domeni koji promovišu heterodimer promovišu dimerizaciju trećeg lanca sa četvrtim lancem. Četvrti polipeptid takvih dijatela može da sadrži: (i) domen koji sadrži VL3, (ii) domen koji sadrži VH2 i (iii) domen koji promoviše heterodimerizaciju i kovalentno vezivanje sa trećim polipeptidnim lancem dijatela. Ovde se prvi i treći polipeptidi međusobno kombinuju da bi formirali Fc region. Takvi složeniji DART® molekuli takođe poseduju domene koji sadrže cistein koji funkcionišu tako da formiraju kovalentno vezan kompleks, tako da je svaki polipeptidni lanac vezan za najmanje jedan adodatni polipeptidni lanac preko disulfidne veze koja uključuje cisteinske ostatke. Poželjno, takvi domeni su poređani u pravcu od N-terminusa do C-terminusa . Slika 5 daje šeme takvih dijatela koja sadrže pet polipeptidnih lanaca.
[0062] Alternativni konstrukti su poznati u tehnici za primene u kojima je poželjan tetravalentni molekul, ali Fc nije potreban uključujući, ali ne ograničavajući se na, tetravalentna tandem antitela, koja se takođe nazivaju „TandAbs“ (videti, npr. e.g. patentne publikacije Sjedinjenih Američkih Država br.2005-0079170, 2007-0031436, 2010-0099853, 2011-0206672013-0189263; Evropske Patentne publikacije br. EP 1078004, EP 2371866, EP 2361936 i EP 1293514; PCT publikacije br. WO 1999/057150, WO 2003/025018, i WO 2013/013700) koji su formirani homo-dimerizacijom dva identična lanca od kojih svaki poseduje VH1, VL2, VH2 i VL2 domen.
[0063] Nedavno su opisane trovalentne strukture koje uključuju dva vezujuća domena tipa dijatela i jedan domen koji nije tipa dijatela i Fc region (videti, npr., PCT prijavu br: PCT/US 15/33076, pod naslovom „ Tri-Specific Binding Molecules and Methods of Use Thereof “, podnetu 29. maja 2015; i PCT/US15/33081, pod nazivom „ Tri-Specific Binding Molecules That Specifically Bind to Multiple Cancer Antigens and Methods of Use Thereof “, podnetu 29. maja 2015). Takvi trovalentni molekuli se mogu koristiti za generisanje monospecifičnih, bispecifičnih ili trispecifičnih molekula. Slike 6A-6F daju šeme takvih trovalentnih molekula koji sadrže 3 ili 4 polipeptidna lanca.
IV. Anti-humani PD-1-vezujući molekuli
[0064] PD-1 -vezujući molekuli uključuju antitela, dijatela, BiTE, itd. i sposobni su da se vezuju za kontinuirani ili diskontinualni (npr. konformacioni) deo (epitop) humanog PD-1 (CD279). Molekuli koji se vezuju za PD-1 poželjno takođe pokazuju sposobnost da se vezuju za PD-1 molekule jedne ili više vrsta koje ne potiču od čoveka, posebno vrsta primata (i posebno vrste primata, kao što je cinomolgus majmun). Reprezentativni humani PD-1 polipeptid (NCBI sekvenca NP_005009.2; uključujući signalnu sekvencu od 20 aminokiselinskih ostataka (prikazano podvučeno) i zreli (konačni) protein od 268 aminokiselinskih ostataka) ima aminokiselinsku sekvencu (SEQ ID NO:68):
[0065] Anti-humani PD-1-vezujući molekuli mogu se okarakterisati bilo kojim (jednim ili više) od sledećih kriterijuma:
(1) specifično vezuje humani PD-1 kao endogeno eksprimiran na površini stimulisane humane T-ćelije;
(2) specifično vezuje humani PD-1 sa konstantom ravnoteže vezivanja (KD) od 40 nM ili manje;
(3) specifično vezuje humani PD-1 sa konstantom ravnoteže vezivanja (KD) od 5 nM ili manje;
(4) specifično vezuje humani PD-1 sa stopom uključivanja (ka) od 1,5 × 104 M-1min-1 ili više;
(5) specifično vezuje humani PD-1 sa stopom uključivanja (ka) od 90,0 × 104 M-1min-1 ili više;
(6) specifično vezuje humani PD-1 sa stopom isključenja (kd) od 7 µ 10-4 min-1 ili manje;
(7) specifično vezuje humani PD-1 sa stopom isključenja (kd) od 2 × 10-4 min-1 ili manje;
(8) specifično vezuje PD-1 neljudskog primata (npr. PD-1 majmuna cinomolgus);
(9) inhibira (tj. blokira ili ometa) vezivanje/inhibitornu aktivnost) PD-1 liganda (PD-L1/PD-L2) za PD-1; (10) stimuliše imuni odgovor; i/ili
(11) sinergiše sa anti-humanim LAG-3 antitelom da stimuliše antigen specifičan T-ćelijski odgovor.
[0066] Kako se ovde koristi izraz "antigen specifičan T-ćelijski odgovor" odnosi se na odgovore T-ćelije koji su rezultat stimulacije T-ćelije sa antigenom za koji je T-ćelija specifična. Neograničavajući primeri odgovora T-ćelije na antigen specifičnu stimulaciju uključuju proliferaciju i proizvodnju citokina (npr., proizvodnja TNF-α, IFN-γ). Sposobnost molekula da stimuliše antigen specifičan T-ćelijski odgovor može da se odredi, na primer, korišćenjem ovde opisanog PBMC testa ("SEB") - stimulisanog antigenom Staphilococcus aureus enterotoksin tipa B.
[0067] Anti-humani PD-1-vezujući molekuli koji su otkriveni ali za koje se ovde ne traži zaštita poseduju VH i/ili VL domene mišjih anti-humanih PD-1 monoklonskih antitela ""PD-1 mAb 1," "PD-1 mAb 2," "PD-1 mAb 3,‴'PD-1 mAb 4," "PD-1 mAb 5," "PD-1 mAb 6," "PD-1 mAb 7," "PD-1 mAb 8," "PD-1 mAb 9," "PD-1 mAb 10," "PD-1 mAb 11," "PD-1 mAb 12," "PD-1 mAb 13," "PD-1 mAb 14," ili "PD-1 mAb 15,", i poželjnije da poseduju 1, 2 ili sva 3 CDRHs VH domena i/ili 1, 2 ili sva 3 CDRLs VL domena takvih anti-humanih PD-1 monoklonskih antitela. Takvi poželjni anti-humani PD-1-vezujući molekuli uključuju bispecifična (ili multispecifična) antitela, himerna ili humanizovana antitela, BiTes, dijatela, itd, i takve vezujuće molekule koji imaju varijante Fc regiona.
[0068] Pronalazak se odnosi na PD-1-vezujuće molekule, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, koji sadrže PD-1 vezujući domen koji poseduje:
(1) tri CDRHs VH domena PD-1 mAb 7 i tri CDRLs VL domena hPD-1 mAb 7 VL2;
(2) VH domen hPD-1 mAb 7 VH1;
(3) VL domen hPD-1 mAb 7 VL2; i
(4) VH i VL domene hPD-1 mAb 7(1,2).
A. Anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 1
1. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 1
[0069] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 1 (SEQ ID NO:69) je prikazana u daljem tekstu (CDRH ostaci su prikazani kao podvučeni).
[0070] Primer polinukleotida koji kodira VH Domain PD-1 mAb 1 je SEQ ID NO:70 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0071] Aminokiselinska sekvenca VL Domena PD-1 mAb 1 (SEQ ID NO:74) je data u daljem tekstu (CDRLostaci su podvučeni):
[0072] Primer polinukleotida koji kodira VL Domain PD-1 mAb 1 je SEQ ID NO:75 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
2. Humanizacija anti-humanog PD-1 antitela
PD-1 mAb 1 da formira "hPD-1 mAb 1"
[0073] Gore opisano mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 1 je humanizovano i dalje deimunizovano kada su identifikovani antigeni epitopi da bi se pokazala sposobnost humanizacije anti-humanog PD-1 antitela tako da se smanji njegova antigenost po davanju humanom primaocu. Humanizacija je dala jedan humanizovani VH domen, ovde označen kao "hPD-1 mAb 1 VH1," i jedan humanizovani VL domen koji je ovde označen kao "hPD-1 mAb 1 VL1." Shodno tome, antitelo koje sadrži humanizovane VL domene uparene sa humanizovanim VH domenom se naziva "hPD-1 mAb 1."
[0074] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 1 VH1 (SEQ ID NO:79) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci):
[0075] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 1 VH1 je SEQ ID NO:80 (70 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0076] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 1 VL1 (SEQ ID NO:81) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci):
[0077] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 1 VL1 je SEQ ID NO:82 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
B. Anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 2
1. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 2
[0078] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 2 (SEQ ID NO:83) je data u daljem tekstu (p odvučeni su CDRHostaci).
[0079] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 2 je SEQ ID NO: (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0080] Aminokiselinska sekvenca VL doemna PD-1 mAb 2 (SEQ ID NO:88) je data u daljem tekstu (CDRLostaci su podvučeni):
[0081] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 2 je SEQ ID NO:8970 (podvučeni su
2. Humanizacija Anti-Humanog PD-1 antitela
PD-1 mAb 2 da formira "hPD-1 mAb 2"
[0082] Gore opisano mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 2 je humanizovano i dalje deimunizovano kada su identifikovani antigeni epitopi da bi se demonstrirala sposobnost humanizacije anti-humanog PD-1 antitela tako da se smanji njegova antigenost nakon administracije humanom primaocu. Humanizacija je dala jedan humanizovani VH domen, ovde označen kao "hPD-1 mAb 2 VH1," i jedan humanizovani VL domen koji je ovde označen kao "hPD-1 mAb 1 VL1." Shodno tome, svako antitelo koje sadrži humanizovane VL domene uparene sa humanizovanim VH domenom se naziva "hPD-1 mAb 2."
[0083] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 2 VH1 (SEQ ID NO:93 je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci):
[0084] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 2 VH1 je SEQ ID NO:94 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0085] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 2 VL1 (SEQ ID NO:95 ) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci):
[0086] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 2 VL1 je SEQ ID NO:96 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
C. Mišje Anti-Humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 3
[0087] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 3 (SEQ ID NO:97) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci).
[0088] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 3 je SEQ ID NO: 82 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0089] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 3 (SEQ ID NO:102) ) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRLostaci):
[0090] Primer polinukleotida koji kodira the VL domen PD-1 mAb 3 je SEQ ID NO:10382 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke):
D. Mišje Anti-Humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 4
[0091] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 4 (SEQ ID NO:107) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci).
[0092] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 4 je SEQ ID NO:108 ((podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0093] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 4 (SEQ ID NO:112) ) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRLostaci):
[0094] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 4 je SEQ ID NO:11382 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke):
E. Mišje Anti-Humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 5
[0095] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 5 (SEQ ID NO:117) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci).
[0096] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 5 je SEQ ID NO:118 ((podvučeni su n ukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0097] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 5 (SEQ ID NO:122) je data u daljem tekstu
(podvučeni su (CDRLostaci):
[0098] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 5 je SEQ ID NO:123 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke):
F. Mišje Anti-Humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 6
[0099] Aminokiselinska sekvenca VH Domena PD-1 mAb 6 (SEQ ID NO:127) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci).
[0100] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 6 je SEQ ID NO:12882 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0101] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 6 (SEQ ID NO:132) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRLostaci):
[0102] Primer polinukleotida koji kodira VL Domain od PD-1 mAb 6 je SEQ ID NO: 82 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke):
G. Anti-Humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 7
1. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 7
[0103] Aminokiselinska sekvenca VH Domena PD-1 mAb 7 (SEQ ID NO:137) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci).
[0104] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 7 je SEQ ID NO:138 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0105] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 7 (SEQ ID NO:142) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRLostaci):
[0106] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 7 je SEQ ID NO: 143 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke):
2. Humanizacija Anti-Humanog PD-1 antitela PD-1 mAb 7 da formira "hPD-1 mAb 7"
[0107] Gore opisano mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 7 je humanizovano i dalje deimunizovano kada su identifikovani antigeni epitopi da bi se demonstrirala sposobnost humanizacije anti-humanog PD-1 antitela tako da se smanji njegova antigenost po davanju humanom primaocu. Humanizacija je dala dva humanizovana VH domena, ovde označena kao " hPD-1 mAb 7 VH1," i "hPD-1 mAb 7 VH2," ", i tri humanizovana VL domena koja su ovde označena "hPD-1 mAb 7 VL1," "hPD-1 mAb 7 VL2," i "hPD-1 mAb 7 VL3." Bilo koji od humanizovanih VL domena može biti uparen sa bilo kojim od humanizovanih VH domena. Shodno tome, svako antitelo koje sadrži jedan od humanizovanih VL domena uparenih sa humanizovanim VH domenom se generalno naziva "hPD-1 mAb 7," a određene kombinacije humanizovanih VH/VL domena se pozivaju na specifične VH/VL domene. Domeni, na primer humanizovano antitelo koje sadrži hPD-1 mAb 7 VH1 i hPD-1 mAb 1 VL2 se posebno naziva as "hPD-1 mAb 7(1,2)."
[0108] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 7 VH1 (SEQ ID NO:147) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci):
[0109] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 7 VH1 je SEQ ID NO:148 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0110] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 7 VH2 (SEQ ID NO:149 je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci):
[0111] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 7 VH2 je SEQ ID NO:150143 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0112] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 7 VL1 (SEQ ID NO:151) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci):
[0113] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 7 VL1 je SEQ ID NO:152 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostaci):
[0114] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 7 VL2 (SEQ ID NO:153) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostsaci):
[0115] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 7 VL2 je SEQ ID NO:154 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0116] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 7 VL3 (SEQ ID NO:155) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci):
[0117] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 7 VL3 je SEQ ID NO:156 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0118] CDRL1 domena VL i hPD-1 mAb 7 VL2 i hPD-1 mAb 7 VL3 sadrži supstituciju aminokiselina asparagina i serina i ima aminokiselinsku sekvencu RASESVDNYGMSFMN ((SEQ ID NO:157), podvučenje supstituisani serin). Predviđeno je da se slična supstitucija može inkorporirati u bilo koji od prethodno opisanih PD-1 mAb 7 CDRL1 domena.
[0119] Pored toga, CDRL2 domena hPD-1 mAb 7 VL3 sadrži supstituciju aminokiselina glutamina i arginina i ima amino kiselinsku sekvencu: AASNRGS ((SEQ ID NO:158), podvučen je supstituisani arginin ). Predviđeno je da se slična supstitucija može inkorporirati u bilo koji od prethodno opisanih PD-1 mAb 7 CDRL2 domena.
H. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 8
[0120] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 8 (SEQ ID NO:159) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci).
[0121] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 8 je SEQ ID NO:160 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0122] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 8 (SEQ ID NO:164) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRLostaci):
[0123] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 8 je SEQ ID NO:165 ((podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke):
I. Anti-Humano PD-1 Antitelo PD-1 mAb 9
1. Mišje Anti-Humano PD-1 Antitelo PD-1 mAb 9
[0124] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 9 (SEQ ID NO:169) je data u daljem tekstu
(podvučeni su CDRHostaci)
[0125] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 9 je SEQ ID NO: (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0126] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 9 (SEQ ID NO:174) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRLostaci):
[0127] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 9 je SEQ ID NO:175 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke):
2. Humanizacija Anti-Humanog PD-1 antitela PD-1 mAb 9 da formira "hPD-1 mAb 9"
[0128] Gore opisano mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 9 je humanizovano i dalje deimunizovano kada su identifikovani antigeni epitopi da bi se demonstrirala sposobnost humanizacije anti-humanog PD-1 antitela tako da se smanji njegova antigenost nakon administracije humanom primaocu. Humanizacija je dala dva humanizovana VH domena, ovde označena kao "hPD-1 mAb 9 VH1," i "hPD-1 mAb 9 VH2," i dva humanizovana VL domena koja su ovde označena kao "hPD-1 mAb 9 VL1," i "hPD-1 mAb 9 VL2." Bilo koji od humanizovanih VL domena može biti uparen sa humanizovanim VH domenima. Shodno tome, svako antitelo koje sadrži jedan od humanizovanih VL domena uparenih sa humanizovanim VH domenom se generalno naziva "hPD-1 mAb 9," a određene kombinacije humanizovanih VH/VL domena se pozivaju na specifične VH/VL domene. Domeni, na primer humanizovano antitelo koje sadrži hPD-1 mAb 9 VH1 i hPD-1 mAb 9 VL2 se posebno naziva "hPD-1 mAb 9(1,2)."
[0129] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 9 VH1 (SEQ ID NO:179 je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci):
[0130] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 9 VH1 je SEQ ID NO:180 ((podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0131] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 9 VH2 (SEQ ID NO:181) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci):
[0132] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 9 VH2 je SEQ ID NO:182 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0133] CDRH1 VH domena hPD-1 mAb 9 VH2 sadrži supstituciju aminokiselina serina glicinom i ima aminokiselinsku sekvencu: SYLVG ((SEQ ID NO:183), podvučen je supstituisani glicin). Smatra se da se slična supstitucija može inkorporirati u bilo koji od prethodno opisanih PD-1 mAb 9 CDRH1 domena opisanih iznad.
[0134] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 9 VL1 (SEQ ID NO:184) je data u daljem
tekstu (podvučeni su CDRHostaci):
[0135] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 9 VL1 je SEQ ID NO: (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0136] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 9 VL2 (SEQ ID NO:186) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci):
[0137] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 9 VL2 je SEQ ID NO:187 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0138] CDRL1 VL domena hPD-1 mAb 9 VL2 sadrži supstituciju aminokiselina serina asparaginom i ima aminokiselinsku sekvencu: RASENIYNYLA (SEQ ID NO:188), gde je podvučen supstituisani asparagin). Predviđeno je da se slična supstitucija može inkorporirati u bilo koji od prethodno opisanih PD-1 mAb 9 CDRL1 domena.
[0139] CDRL2 VL domena hPD-1 mAb 9 VL2 sadrži supstituciju aminokiselina asparagin aspartatom i ima amino kiselinsku sekvencu: DAKTLAA ((SEQ ID NO:189), supstituisani aspartat je prikazan kao podvučen). Predviđeno je da se slična supstitucija može inkorporirati u bilo koji od prethodno opisanih PD-1 mAb 7 CDRL2 domena.
J. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 10
[0140] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 10 (SEQ ID NO:190) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci).
[0141] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 10 je SEQ ID NO:191 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0142] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 10 (SEQ ID NO:195) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRLostaci):
[0143] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 10 je SEQ ID NO: (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke):
K. Mišje Anti-Humano PD-1 AntiteloPD-1 mAb 11
[0144] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 11 (SEQ ID NO:200) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci).
[0145] Primer polinukleotida koji kodira VH Domen PD-1 mAb 11 je SEQ ID NO:201 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0146] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 11 (SEQ ID NO:205) je data u daljem tekstu
(podvučeni su CDRLostaci):
[0147] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 11 je SEQ ID NO:206 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke):
L. Mišje Anti-Humano PD-1 Antitelo PD-1 mAb 12
[0148] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 12 (SEQ ID NO:210) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci).
[0149] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 12 je SEQ ID NO:211 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0150] Aminokiselinska sekvenca VL Domena PD-1 mAb 4 (SEQ ID NO:215) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRLostaci):
[0151] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 12 je SEQ ID NO:216 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke):
M. Mišje Anti-Humano PD-1 Antitelo PD-1 mAb 13
[0152] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 13 (SEQ ID NO:220) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci).
[0153] Primer polinukleotida koji kodira VH Domain od PD-1 mAb 13 je SEQ ID NO:221 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0154] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 13 (SEQ ID NO:225) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRLostaci):
[0155] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 13 je SEQ ID NO:226 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke):
N. Mišje Anti-Humano PD-1 Antitelo PD-1 mAb 14
[0156] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 14 (SEQ ID NO:230) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci).
[0157] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 14 je SEQ ID NO:231 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0158] Aminokiselinska sekvenca VL Domena PD-1 mAb 14 (SEQ ID NO:235) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRLostaci):
[0159] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 14 je SEQ ID NO:236 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke):
O. Anti-Humana PD-1 AntiteloPD-1 mAb 15
1. Mišje Anti-Humano PD-1 AntiteloPD-1 mAb 15
[0160] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 15 (SEQ ID NO:240) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci).
[0161] Primer polinukleotida koji kodira VH Domain od PD-1 mAb 15 je SEQ ID NO:241 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0162] Aminokiselinska sekvenca VL Domena PD-1 mAb 15 (SEQ ID NO:245) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRLostaci):
[0163] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 15 je SEQ ID NO:246 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke):
2. Humanizacija Anti-Humanog PD-1 Antitela PD-1 mAb 15 da se dobije "hPD-1 mAb 15"
[0164] Gore opisano mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 15 je humanizovano i dalje deimunizovano kada su identifikovani antigeni epitopi da bi se demonstrirala sposobnost humanizacije anti-humanog PD-1 antitela tako da se smanji njegova antigenost nakon administracije ljudskom primaocu. Humanizacija je dala jedan humanizovani VH domen, ovde označen kao " hPD-1 mAb 2 VH1," i jedan humanizovani VL domen koji je ovde označen kao "hPD-1 mAb 1 VL1." Antitelo koje sadrži humanizovani VL domen uparen sa humanizovanim VH domenom se naziva "hPD-1 mAb 15."
[0165] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 15 VH1 (SEQ ID NO:250) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci):
[0166] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 15 VH1 je SEQ ID NO: (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
[0167] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 15 VL1 (SEQ ID NO:252) je data u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci):
[0168] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 15 VL1 je SEQ ID NO:253241 (podvučeni su nukleotidi koji kodiraju CDRHostatke):
V. Anti-Humana PD-1 Antitela PD-1 mAb 1-15, i njihovi derivati sa genetički proizvedenim Fc Regionom
[0169] U tradicionalnoj imunološkoj funkciji, interakcija kompleksa antitelo-antigen sa ćelijama imunog sistema rezultira širokim spektrom odgovora, u rasponu od efektorskih funkcija kao što je citotoksičnost zavisna od antitela, degranulacija mastocita i fagocitoza do imunomodulatornih signala kao što su regulisanje proliferacije limfocita i sekrecije antitela. Sve ove interakcije pokreću se vezivanjem Fc regiona antitela ili imunih kompleksa za specijalizovane receptore ćelijske površine na hematopoetskim ćelijama. Raznolikost ćelijskih odgovora izazvanih antitelima i imunim kompleksima je rezultat strukturne heterogenosti tri Fc receptora: FcyRI (CD64), FcyRII (CD32) i FcyRIII (CD16). FcyRI (CD64), FcyRIIA (CD32A) i FcyRIII (CD16) su receptori za aktiviranje (tj. koji poboljšavaju imuni sistem); FcyRIIB (CD32B) je receptor koji inhibira (tj. prigušuje imuni sistem). Pored toga, interakcija sa neonatalnim Fc receptorom (FcRn) posreduje u reciklažu IgG molekula sa endozoma na površinu ćelije i oslobađanje u krv. Aminokiselinska sekvenca primera divljeg (SEQ ID NO:1), IgG2 (SEQ ID NO:2), IgG3 (SEQ ID NO:3), i IgG4 (SEQ ID NO:4) je predstavljena u tekstu iznad .
[0170] Modifikacija Fc regiona normalno dovodi do izmenjenog fenotipa, na primer izmenjenog poluživota seruma, izmenjene stabilnosti, izmenjene osetljivosti na ćelijske enzime ili izmenjene efektorske funkcije. Može biti poželjno modifikovati antitelo ili drugi vezujući molekul ovog pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, u pogledu efektorske funkcije, na primer, tako da se poboljša efikasnost takvog molekula u lečenje raka. Smanjenje ili eliminacija efektorske funkcije je poželjno u određenim slučajevima, na primer u slučaju antitela čiji mehanizam delovanja uključuje blokiranje ili antagonizam, ali ne i ubijanje ćelija koje nose ciljni antigen.
Povećana efektorska funkcija je generalno poželjna kada je usmerena na nepoželjne ćelije, kao što su tumorske i strane ćelije, gde su FcyR eksprimirane na niskim nivoima, na primer, tumor-specifične B ćelije sa niskim nivoom FcyRIIB (npr., ne-Hodgkinov limfom, CLL i Burkitov limfom). U navedenim realizacijama, molekuli pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sa dodeljenom ili izmenjenom efektorskom funkcijom, korisni su za lečenje i/ili prevenciju bolesti, poremećaja ili infekcije gde je poželjna povećana efikasnost aktivnosti efektorske funkcije.
[0171] U određenim realizacijama, PD-1-vezujući molekuli ovog pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrže Fc region koji poseduje jednu ili više modifikacija (npr. supstitucije, delecije, ili insercije) na sekvencu aminokiselina divljeg tipa Fc regiona (npr. SEQ ID NO:1), koje smanjuju afinitet i aviditet Fc regiona i, prema tome, molekula pronalaska, za jedan ili više FcyR receptori. U drugim realizacijama, molekuli pronalaska, kako su definisani i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrže Fc region koji poseduje jednu ili više modifikacija aminokiselina divljeg tipa Fc regiona, koje povećavaju afinitet i avidnost Fc regiona i, prema tome, molekula pronalaska, za jedan ili više FcyR receptora. U drugim realizacijama, molekuli sadrže varijantu Fc regiona pri čemu navedena varijanta daje ili posreduje povećanu aktivnost citotoksičnosti posredovane ćelijama (ADCC) zavisnu od antitela i/ili povećano vezivanje za FcyRIIA, u odnosu na molekul koji ne sadrži Fc region ili koji sadrži divlji tip Fc Region. U alternativnim izvođenjima, molekuli sadrže varijantu Fc regiona u kojoj navedena varijanta daje ili posreduje smanjenu ADCC aktivnost (ili drugu efektorsku funkciju) i/ili povećano vezivanje za FcyRIIB, u odnosu na molekul koji ne sadrži Fc region ili koji sadrži Fc divljeg tipa. Region. U nekim realizacijama, pronalazak, kako je definisan i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, obuhvata molekule koji se vezuju za PD-1 koji sadrže varijantu Fc regiona, pri čemu varijanta Fc regiona ne pokazuje detektabilno vezivanje za bilo koji FcyR, u odnosu na uporedivi molekul koji sadrži Fc region divljeg tipa. U drugim realizacijama, pronalazak, kako je definisan i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, obuhvata PD-1-vezujuće molekule koji sadrže varijantu Fc regiona, čija varijanta Fc regiona vezuje samo jedan FcyR, poželjno jedan od FcyRIIA, FcyRIIB , ili FcyRIIIA. Svaki takav povećani afinitet i/ili avidnost se poželjno procenjuje merenjem in vitro stepena detektabilnog vezivanja za FcyR ili FcgR aktivnost u ćelijama koje eksprimiraju niske nivoe FcyR kada vezujuća aktivnost roditeljskog molekula (bez modifikovanog Fc regiona ) ne može se otkriti u ćelijama, ili u ćelijama koje eksprimiraju ciljne antigene ne-FcyR receptora pri gustini od 30,000 do 20,000 molekula/ćeliji, pri gustini od 20,000 do 10,000 molekula/ćeliji, pri gustini od 10,000 do 10,000 mola/ ćelija, pri gustini od 5,000 do 1.000 molekula po ćeliji, pri gustini od 1.000 do 200 molekula po ćeliji ili pri gustini od 200 molekula po ćeliji ili manje (ali najmanje 10, 50, 100 ili 150 molekula po ćeliji).
[0172] PD-1-vezujući molekuli ovog pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, mogu sadržati varijantni Fc region koji ima izmenjene afinitete za aktivirajući i/ili inhibitorni Fcg receptor. U jednom aspektu, PD-1-vezujući molekul sadrži varijantu Fc regiona koji ima povećan afinitet za FcyRIIB i smanjen afinitet za FcyRIIIA i/ili FcyRIIA, u odnosu na uporedivi molekul sa Fc regionom divljeg tipa. U drugom aspektu, PD-1-vezujući molekul ovog pronalaska, kako je definisan i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrži varijantu Fc regiona, koja ima smanjen afinitet za FcyRIIB i povećan afinitet za FcyRIIIA i/ili FcyRIIA, u odnosu na uporedivi molekul sa Fc regionom divljeg tipa. U još jednoj realizaciji, PD-1-vezujući molekuli ovog pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrže varijantu Fc regiona koji ima smanjen afinitet za FcyRIIB i smanjen afinitet za FcyRIIIA i/ili FcyRIIA, u odnosu na uporedivi molekul sa Fc regionom divljeg tipa. U još jednom izvođenju, PD-1-vezujući molekuli ovog pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrže varijantu Fc regiona, koja ima nepromenjen afinitet za FcyRIIB i smanjen (ili povećan) afinitet za FcyRIIIA i/ili FcyRIIA, u odnosu na uporedivi molekul sa Fc regionom divljeg tipa.
[0173] U određenim realizacijama, PD-1-vezujući molekuli ovog pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrže varijantu Fc regiona koji ima izmenjen afinitet za FcyRIIIA i/ili FcyRIIA tako da imunoglobulin ima pojačanu efektornu funkciju. Neograničavajući primeri funkcija efektorskih ćelija uključuju citotoksičnost posredovanu od antitela, fagocitozu zavisnu od antitela, fagocitozu, opsonizaciju, opsonofagocitozu, ćelijsko vezivanje, resetovanje, vezivanje C1q i citotoksičnost posredovanu ćelijama koja je zavisna od komplementa.
[0174] U poželjnoj varijanti, promena afiniteta ili efektorske funkcije je najmanje 2 puta, poželjno najmanje 4 puta, najmanje 5 puta, najmanje 6 puta, najmanje 7 puta, najmanje 8 puta, najmanje 9 puta, najmanje 10 puta, najmanje 50 puta, ili najmanje 100 puta, u odnosu na uporedivi molekul koji sadrži Fc region divljeg tipa. U drugim realizacijama pronalaska, varijanta Fc Region imunospecifično vezuje jedan ili više FcR sa najmanje 65%, poželjno najmanje 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 225% ili 250% veći afinitet u odnosu na molekul koji sadrži Fc region divljeg tipa. Takva merenja mogu biti in vivo ili in vitro testovi, a u poželjnoj realizaciji su in vitro testovi kao što su ELISA ili testovi površinske plazmonske rezonance.
[0175] U različitim realizacijama, PD-1-vezujući molekuli ovog pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrže varijantu Fc regiona u kojoj navedena varijanta agonizuje najmanje jednu aktivnost FcyR receptora ili antagonizuje najmanje jednu aktivnost FcyR receptora. U poželjnom izvođenju, molekuli sadrže varijantu koja antagonizuje jednu ili više aktivnosti FcyRIIB, na primer, signalizaciju posredovanu receptorom B-ćelija, aktivaciju B-ćelija, proliferaciju B-ćelija, proizvodnju antitela, intracelularni influks kalcijuma u B ćelije , progresija ćelijskog ciklusa, FcyRIIB-posredovana inhibicija FcεRI signalizacije, fosforilacija FcyRIIB, regrutovanje SHIP, fosforilacija SHIP-a i povezanost sa She, ili aktivnost jednog ili više nishodnih molekula (npr. MAP kinaze, JNK, p38 ili Akt) Put transdukcije signala FcyRIIB. U drugom aspektu, PD-1-vezujući molekuli ovog pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrže varijantu koja agonizuje jednu ili više aktivnosti FcεRI, na primer, aktivaciju mastocita, kalcijuma mobilizacija, degranulacija, proizvodnja citokina ili oslobađanje serotonina.
[0176] U određenim realizacijama, molekuli sadrže Fc region koji sadrži regione od dva ili više IgG izotipova (npr. IgG1, IgG2, IgG3 i IgG4). Kako se ovde koristi, za Fc region se kaže da je određenog IgG izotipa ako je njegova aminokiselinska sekvenca najhomolognija tom izotipu u odnosu na druge IgG izotipove. Različiti izotipovi IgG pokazuju različita fizička i funkcionalna svojstva uključujući poluživot u serumu, fiksaciju komplementa, afinitete vezivanja FcyR i aktivnosti efektorske funkcije (npr. ADCC, CDC, itd.) zbog razlika u aminokiselinskim sekvencama njihovog zgloba i/ili Fc regioni, na primer kako je opisano u Flesch and Neppert (1999) J. Clin. Lab. Anal.14:141-156; Chappel et al. (1993) J. Biol. Chem.33:25124-25131; Chappel et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:9036-9040;
or Brüggemann et al. (1987) J. Exp. Med 166:1351-1361. Ovaj tip varijante Fc regiona može da se koristi sam, ili u kombinaciji sa modifikacijom aminokiselina, da utiče na Fc-posredovanu efektorsku funkciju i/ili aktivnost vezivanja. U kombinaciji, modifikacija aminokiselina i IgG pregibni/Fc region mogu pokazati sličnu funkcionalnost (npr. povećan afinitet za FcyRIIA) i mogu delovati aditivno ili, poželjnije, sinergistički da modifikuju efektornu funkcionalnost u molekulu pronalaska, u odnosu na molekul pronalaska koji sadrži Fc region divljeg tipa. U drugim realizacijama, modifikacija aminokiselina i IgG Fc region mogu pokazati suprotnu funkcionalnost (npr. povećan i smanjen afinitet za FcyRIIA, respektivno) i mogu delovati na selektivno ublažavanje ili smanjenje specifične funkcionalnosti u molekulu pronalaska, u odnosu na molekul pronalaska koji ne sadrži Fc region ili koji sadrži divlji tip Fc region istog izotipa.
[0177] U poželjnoj specifičnoj realizaciji, PD-1-vezujući molekuli ovog pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrže varijantu Fc regiona, pri čemu pomenuta varijanta Fc regiona sadrži najmanje jedan modifikacija aminokiselina u odnosu na divlji tip Fc regiona, tako da pomenuti molekul ima izmenjen afinitet za FcR, pod uslovom da pomenuta varijanta Fc regiona nema supstituciju na pozicijama koje ostvaruju direktan kontakt sa FcyR na osnovu kristalografske i strukturne analize Fc-FcR interakcija kao što su one koje su otkrili Sondermann et al. (2000) Nature 406:267-73. Primeri položaja unutar Fc regiona koji ostvaruju direktan kontakt sa FcyR su aminokiselinski ostaci 234-239, aminokiselinski ostaci 265-269 (B/C petlja), aminokiselinski ostaci 297-299 (C'/E petlja) i aminokiselinski ostaci 327-332 (F/G petlja). U nekim realizacijama, molekuli pronalaska, kao što su definisani i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrže varijante Fc regiona koji sadrže modifikaciju najmanje jednog ostatka koji ne ostvaruje direktan kontakt sa FcyR na osnovu strukturnih i kristalografskih podataka. analiza, na primer, nije unutar Fc-FcyR mesta vezivanja.
[0178] Varijantni Fc regioni su dobro poznati u tehnici, i bilo koja poznata varijanta Fc regiona može da se koristi u ovom pronalasku da se dodeli ili modifikuje efektorska funkcija koju pokazuje molekul pronalaska koji sadrži Fc region (ili njegov deo) kao funkcionalno ispitan, npr., u testu zavisnom od NK ili testu zavisnom od makrofaga. Na primer, varijante Fc regiona identifikovane kao menjajuća efektorska funkcija su otkrivene u PCT publikacijama br. WO 04/063351; WO 06/088494; WO 07/024249; WO 06/113665; WO 07/021841; WO 07/106707; i WO 2008/140603, i bilo koja pogodna varijanta koja je tamo otkrivena može se koristiti u ovim molekulima.
[0179] U određenim realizacijama, PD-1-vezujući molekuli ovog pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrže varijantu Fc regiona, koja ima jednu ili više modifikacija amino kiselina u jednoj ili više regioni, čije modifikacije menjaju (u odnosu na Fc region divljeg tipa) odnos afiniteta varijante Fc regiona prema aktivirajućem FcyR (kao što je FcyRIIA ili FcyRIIIA) u odnosu na inhibirajući FcyR (kao što je FcyRIIB):
[0180] Naročito poželjni su PD-1-vezujući molekuli ovog pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, koji poseduju varijantu Fc regiona (u odnosu na divlji tip Fc regiona) u kome varijanta Fc Region ima odnos afiniteta veći od 1. Takvi molekuli imaju posebnu upotrebu u obezbeđivanju terapeutskog ili profilaktičkog tretmana bolesti, poremećaja ili infekcije, ili ublažavanja njihovih simptoma, gde je povećana efikasnost funkcije efektorskih ćelija ( npr. ADCC) posredovan FcyR je poželjan, npr. rak ili infektivna bolest. Nasuprot tome, varijanta Fc regiona sa odnosom afiniteta manjim od 1 posreduje u smanjenoj efikasnosti funkcije efektorskih ćelija. Tabela 1 navodi primere pojedinačnih, dvostrukih, trostrukih, četvorostrukih i petorostrukih mutacija prema tome da li je njihov odnos afiniteta veći ili manji od 1.
[0181] U specifičnom izvođenju, u varijantnim Fc regionima, bilo koje modifikacije amino kiselina (npr. supstitucije) na bilo kojoj od pozicija 235, 240, 241, 243, 244, 247, 262, 263, 269, 290, 333 i poželjno jedan ili više od sledećih ostataka: A240, I240, L241, L243, H244, N298, I328 ili V330. U drugom specifičnom izvođenju, u varijantnim Fc regionima, bilo koje modifikacije aminokiselina (npr. supstitucije) na bilo kojoj od pozicija 268, 269, 270, 272, 276, 278, 283, 285, 286, 289, 292, 293, 301,
303, 305, 307, 309, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 416, 419, 430, 434, 435, 437,
438 ili 439 ili jedan ili više od sledećih ostataka: H280, Q280, Y280, G290, S290, T290, Y290, N294, K295, P296, D298, N298, P298, V298, I300 ili L300.
[0182] U poželjnoj varijanti, u varijantama Fc regiona koji vezuju FcyR sa izmenjenim afinitetom, bilo koje modifikacije amino kiselina (npr. supstitucije) na bilo kojoj od pozicija 255, 256, 258, 267, 268,
269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 300, 301, 303,
305, 307, 309, 312, 320, 322, 326, 329, 330, 332, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 339, 340, 359, 360,
373, 376, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 ili 439. Poželjno, varijanta Fc Region ima bilo koji od sledećih ostataka: A256, N268, Q272, D286, Q286, S286, A290, S290, A298, M301, A312, E320,
M320, Q320, R320, E322, A326, D326, E326, N326, S326, K330, T339, A333, A334, E334, H334, L334,
M334, Q334, V334, K335, Q335, A359, A360 ili A430.
[0183] U drugom aspektu, u varijantama Fc regiona koji vezuju FcyR (preko svog Fc regiona) sa smanjenim afinitetom, bilo koje modifikacije aminokiselina (npr. supstitucije) na bilo kojoj od pozicija
252, 254, 265, 268, 269, 270, 278, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 300, 301, 303, 322, 324, 327,
329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 ili 439.
[0184] U drugom aspektu, u varijantama Fc regiona koji vezuju FcyR (preko njegovog Fc regiona) sa pojačanim afinitetom, bilo koje modifikacije amino kiselina (npr. supstitucije) na bilo kojoj od pozicija
280, 283, 285, 286, 290, 294, 295, 298, 300, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 331, 333, 334, 337, 340,
360, 378, 398 ili 430. U drugom aspektu, u varijantama Fc regiona koji vezuju FcyRIIA sa pojačanim afinitetom, bilo koji od sledećih ostataka: A255, A256, A258, A267, A268, N268, A272, Q272, A276, A280, A283, A285, A286, D286, Q286, S286, A290, S290, M301, E320, M320, Q320, R320, E322, A326, D326, E326, S326, K330, A331, Q335, A337 ili A430.
[0185] Poželjne varijante uključuju jednu ili više modifikacija na bilo kojoj od pozicija: 228, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 239, 240, 241, 243, 244, 245, 247, 262, 263, 264, 265, 266, 271, 273, 275, 281, 284, 291, 296, 297, 298, 299, 302, 304, 305, 313, 323, 325, 326, 328, 330 ili332.
[0186] Posebno poželjne varijante uključuju jednu ili više modifikacija izabranih iz grupa A-AI:
[0187] Posebno poželjnije varijante uključuju jednu ili više modifikacija izabranih iz Grupa 1-105:
[0188] U jednom aspektu, PD-1-vezujući molekul pronalaska, kako je definisan i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, će sadržati varijantu Fc regiona koja ima najmanje jednu modifikaciju u Fc regionu. U određenim realizacijama, varijanta Fc Region sadrži najmanje jednu supstituciju izabranu iz grupe koju čine L235V, F243L, R292P, Y300L, V305I, i P396L.
[0189] U specifičnoj realizaciji, varijanta Fc Region obuhvata:
(A) najmanje jednu supstituciju izabrana iz grupe koju čine: F243L, R292P, Y300L, V305I, i P396L; (B) najmanje dve supstitucije izabrane iz grupe koju čine:
(1) F243L i P396L;
(2) F243L i R292P; i
(3) R292P i V305I;
(C) najmanje tru supstitucije izabrane iz grupe koju čine:
(1) F243L, R292P i Y300L;
(2) F243L, R292P i V305I;
(3) F243L, R292P i P396L; i
(4) R292P, V305I i P396L;
(D) najmanje četiri supstitucije izabrane iz grupe koju čine::
(1) F243L, R292P, Y300L i P396L; i
(2) F243L, R292P, V305I i P396L; ili
(E) najmanje pet supstitucija izabranih iz grupe koju čine:
(1) F243L, R292P, Y300L, V305I i P396L; i
(2) L235V, F243L, R292P, Y300L i P396L.
[0190] U drugom specifičnom izvođenju, varijanta Fc Region sadrži supstitucije
(A) F243L, R292P, i Y300L;
(B) L235V, F243L, R292P, Y300L, i P396L; ili
(C) F243L, R292P, Y300L, V305I, i P396L.
[0191] U jednom aspektu, PD-1-vezujući molekul pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrži varijantu Fc regiona koja pokazuje smanjeno (ili suštinski nikakvo) vezivanje za FcyRIA (CD64), FcyRIIA (CD32A), FcyRIIB (CD32B), FcyRIIIA (CD16a) ili FcyRIIIB (CD16b) (u odnosu na vezivanje koje pokazuje divlji tip IgG1 Fc regiona (SEQ ID NO:1)). U jednom aspektu, PD-1-vezujući molekul pronalaska, kako je definisan i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, će sadržati varijantu Fc regiona koji pokazuje smanjeno (ili suštinski nikakvo) vezivanje za FcyR (npr., FcyRIIIA) i smanjena (ili suštinski nikakva) ADCC efektorska funkcija. U određenim realizacijama, varijanta Fc regiona sadrži najmanje jednu supstituciju izabranu iz grupe koju čine L234A, L235A, D265A,N297Q, i N297G. U specifičnom izvođenju, varijanta Fc regiona sadrži supstituciju L234A; L235A; L234A and L235A; D265A; N297Q, ili N297G.
[0192] Poželjna IgG1 sekvenca za CH2 i CH3 domene PD-1-vezujućih molekula pronalaska imaće L234A/L235A supstitucije (SEQ ID NO:5):
gde, x je lizin (K) ili je nije prisutan.
[0193] U različitoj realizaciji, PD-1-vezujući molekul pronalaska, kako je definisan i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrži Fc region koji inherentno pokazuje smanjeno (ili suštinski nikakvo) vezivanje za cyRIIIA ( CD16a) i/ili smanjena efektorska funkcija (u odnosu na vezivanje koje pokazuje divlji tip IgG1 Fc regiona (SEQ ID NO:1)). U specifičnoj realizaciji, PD-1-vezujući molekul ovog pronalaska, kako je definisan i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrži IgG2 Fc Region (SEQ ID NO:2) ili IgG4 Fc Region (SEQ ID:NO:4). Kada se koristi IgG4 Fc region, ovaj pronalazak takođe obuhvata uvođenje stabilizacijske mutacije, kao što je supstitucija IgG4 zglobnog regiona S228P (videti, na primer, SEQ ID NO:13: ESKYGPPCPPCP, (Lu et al., (2008) "The Effect Of A Point Mutation On The Stability Of Igg4 As Monitored By Analytical Ultracentrifugation," J. Pharmaceutical Sciences 97:960-969) da bi se smanjila učestalost razmene lanaca. Druge stabilizacione mutacije poznate u tehnici mogu se uvesti u IgG4 Fc Region (Region (Peters, P et al., (2012) "Engineering an Improved IgG4 Molecule with Reduced Disulfide Bond Heterogeneity and Increased Fab Domain Thermal Stability," J. Biol. Chem., 287:24525-24533; PCT Patentna publikacija br: WO 2008/145142).
[0194] U drugim realizacijama, pronalazak obuhvata upotrebu bilo koje varijante Fc regiona poznate u tehnici, kao što su one otkrivene u Jefferis, B.J. et al. (2002) "Interaction Sites On Human IgG-Fc For FcgammaR: Current Models," Immunol. Lett.82:57-65; Presta, L.G. et al. (2002) "Engineering Therapeutic Antibodies For Improved Function," Biochem. Soc. Trans.30:487-90; Idusogie, E.E. et al. (2001) "Engineered Antibodies With Increased Activity To Recruit Complement," J. Immunol.
166:2571-75; Shields, R.L. et al. (2001) "High Resolution Mapping Of The Binding Site On Human IgG1 For Fc Gamma RI, Fc Gamma RII, Fc Gamma RIII, And FcRn And Design Of IgG1 Variants With Improved Binding To The Fc gamma R," J. Biol. Chem.276:6591-6604; Idusogie, E.E. et al. (2000) "Mapping Of The C1q Binding Site On Rituxan, A Chimeric Antibody With A Human IgG Fc," J.
Immunol.164:4178-84; Reddy, M.P. et al. (2000) "Elimination Of Fc Receptor-Dependent Effector Functions Of A Modified IgG4 Monoclonal Antibody To Human CD4," J. Immunol.164:1925-1933; Xu, D. et al. (2000) "In Vitro Characterization of Five Humanized OKT3 Effector Function Variant Antibodies," Cell. Immunol.200:16-26; Armour, K.L. et al. (1999) "Recombinant human IgG Molecules Lacking Fcgamma Receptor I Binding And Monocyte Triggering Activities," Eur. J. Immunol.
29:2613-24; Jefferis, R. et al. (1996) "Modulation Of Fc(Gamma)R And Human Complement Activation By IgG3-Core Oligosaccharide Interactions," Immunol. Lett.54:101-04; Lund, J. et al.
(1996) "Multiple Interactions Of IgG With Its Core Oligosaccharide Can Modulate Recognition By Complement And Human Fc Gamma Receptor I And Influence The Synthesis Of Its Oligosaccharide Chains," J. Immunol.157:4963-4969; Hutchins et al. (1995) "Improved Biodistribution, Tumor Targeting, And Reduced Immunogenicity In Mice With A Gamma 4 Variant Of Campath-1H," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 92:11980-84; Jefferis, R. et al. (1995) "Recognition Sites On Human IgG For Fc Gamma Receptors: The Role Of Glycosylation," Immunol. Lett.44:111-17; Lund, J. et al. (1995) "Oligosaccharide-Protein Interactions In IgG Can Modulate Recognition By Fc Gamma Receptors," FASEB J.9:115-19; Alegre, M.L. et al. (1994) "A Non-Activating "Humanized" Anti-CD3 Monoclonal Antibody Retains Immunosuppressive Properties In Vivo," Transplantation 57:1537-1543; Lund et al. (1992) "Multiple Binding Sites On The CH2 Domen IgG For Mouse Fc Gamma R11," Mol. Immunol.
29:53-59; Lund et al. (1991) "Human Fc Gamma RI And Fc Gamma RII Interact With Distinct But Overlapping Sites On Human IgG," J. Immunol.147:2657-2662; Duncan, A.R. et al. (1988) "Localization Of The Binding Site For The Human High-Affinity Fc Receptor On IgG," Nature 332:563-564; US PatentNos.5,624,821; 5,885,573; 6,194,551; 7,276,586; and 7,317,091; and PCT Publications WO 00/42072 and PCT WO 99/58572.
[0195] U nekim realizacijama, molekuli pronalaska, kao što su definisani i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, mogu dalje da sadrže jedno ili više mesta glikozilacije, tako da su jedan ili više ugljenih hidrata kovalentno vezani za molekul. Poželjno, molekuli pronalaska sa jednim ili više mesta glikozilacije i/ili jednom ili više modifikacija u Fc regionu daju ili imaju poboljšanu efektornu funkciju posredovanu antitelom, npr. pojačanu ADCC aktivnost, u poređenju sa nemodifikovanim antitelom. U nekim realizacijama, pronalazak dalje obuhvata molekule koji sadrže jednu ili više modifikacija aminokiselina za koje je poznato da direktno ili indirektno stupaju u interakciju sa delovom ugljenih hidrata Fc regiona, uključujući, ali ne ograničavajući se na aminokiseline na pozicijama 241, 243, 244, 245, 245, 249, 256, 258, 260, 262, 264, 265, 296, 299, i 301. Amino kiseline koje direktno ili indirektno stupaju u interakciju sa ugljenohidratnim delom Fc regiona su poznate u tehnici, videti, Jefferis et al., 1995 Immunology Letters, 44: 111-7.
[0196] U drugom aspektu, pronalazak obuhvata molekule koji su modifikovani uvođenjem jednog ili više mesta glikozilacije u jedno ili više mesta molekula, poželjno bez promene funkcionalnosti molekula, npr., aktivnosti vezivanja za ciljni antigen ili FcyR. Mesta glikozilacije se mogu uvesti u varijabilni i/ili konstantni region molekula pronalaska. Kako se ovde koristi, "mesta glikozilacije" uključuju bilo koju specifičnu aminokiselinsku sekvencu u antitelu za koju će se oligosaharid (tj. ugljeni hidrati koji sadrže dva ili više jednostavnih šećera povezanih) specifično i kovalentno vezati. Bočni lanci oligosaharida su tipično povezani sa kičmom antitela preko N- ili O-veza. N-vezana glikozilacija se odnosi na vezivanje oligosaharidnog dela za bočni lanac asparaginskog ostatka. O-vezana glikozilacija se odnosi na vezivanje oligosaharidnog dela za hidroksiamino kiselinu, npr., serin, treonin. Molekuli pronalaska, kao što su definisani i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, mogu da sadrže jedno ili više mesta glikozilacije, uključujući N-vezana i O-vezana mesta glikozilacije. Bilo koje mesto glikozilacije za N-vezanu ili O-vezanu glikozilaciju poznato u tehnici može se koristiti u skladu sa ovim pronalaskom. Primer N-vezanog mesta glikozilacije koje je korisno u skladu sa takvim metodama je aminokiselinska sekvenca: Asn-X-Thr/Ser, pri čemu X može biti bilo koja amino kiselina, a Thr/Ser označava treonin ili serin. Takvo mesto ili mesta se mogu uvesti u molekul pronalaska korišćenjem metoda koje su dobro poznate u tehnici (videti na primer, IN VITRO MUTAGENESIS, RECOMBINANT DNA: A SHORT COURSE, J. D. Watson, et al. W.H. Freeman and Company, New York, 1983, poglavlje 8, pp.106-116.) Primer metoda za uvođenje mesta glikozilacije u molekul pronalaska može da obuhvata: modifikaciju ili mutaciju aminokiselinske sekvence molekula tako da se dobije željeni Asn-X-Thr/Ser dobija se sekvenca.
[0197] Postupci za modifikaciju sadržaja ugljenih hidrata u antitelima (i molekulima koji sadrže domene antitela, npr., Fc region) su dobro poznati u tehnici, videti, npr., U.S. Patent br.6,218,149; EP 0 359096 B1; U.S. publikacija br. US 2002/0028486; WO 03/035835; U.S. publikacija br.
2003/0115614; U.S. Patent br.6,218,149; U.S. Patent br.6,472,511. Postupci modifikacije sadržaja ugljenih hidrata u molekulu pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, uključuju brisanje jednog ili više endogenih ugljenih hidrata delova molekula ili pomeranje mesta glikozilacije Fc regiona antitela, modifikovanjem pozicija susedna 297. Položaj 296 može biti modifikovan tako da pozicija 296, a ne pozicija 297 bude glikozilovana.
[0198] Funkcija efektora se takođe može modifikovati tehnikama kao što je uvođenje jednog ili više cisteinskih ostataka u Fc region, čime se omogućava formiranje međulančane disulfidne veze u ovom regionu, što rezultira stvaranjem homodimernog antitela koje može imati poboljšanu internalizaciju sposobnost i/ili povećano ubijanje ćelija posredovano komplementom i ADCC (Caron, P.C. et al. (1992) "Engineered Humanized Dimeric Forms Of IgG Are More Effective Antibodies," J. Exp. Med. 176:1191-1195; Shopes, B. (1992) "A Genetically Engineered Human IgG Mutant With Enhanced Cytolytic Activity," J. Immunol.148(9):2918-2922. Homodimeric antibodies with enhanced antitumor activity may also be prepared using heterobifunctional cross-linkers as described in Wolff, E.A. et al. (1993) "Monoclonal Antibody Homodimers: Enhanced Antitumor Activity In Nude Mice," Cancer Research 53:2560-2565. Alternativno, može se konstruisati antitelo koje ima dvostruke Fc regione i na taj način može imati poboljšanu lizu komplementa i ADCC sposobnosti (Stevenson, G.T. et al. (1989) "A Chimeric Antibody With Dual Fc Regions (bisFabFc) Prepared By Manipulations At The IgG Hinge," Anti-Cancer Drug Design 3:219-230).
[0199] Poluživot u serumu molekula ovog pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, koji sadrže Fc regione, može se povećati povećanjem afiniteta vezivanja Fc regiona za FcRn. Termin "poluživot" kako se ovde koristi označava farmakokinetičko svojstvo molekula koje je mera srednjeg vremena preživljavanja molekula nakon njihove primene. Poluživot se može izraziti kao vreme potrebno da se eliminiše pedeset procenata (50%) poznate količine molekula iz tela subjekta (npr. Humanog pacijenta ili drugog sisara) ili njegovog specifičnog odeljka, na primer, kao što je mereno u serumu, odnosno poluživotu u cirkulaciji, ili u drugim tkivima. Generalno, povećanje poluživota dovodi do povećanja srednjeg vremena zadržavanja (MRT) u cirkulaciji za administrirani molekul.
[0200] U nekim realizacijama, PD-1-vezujući molekuli ovog pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrže varijantu Fc regiona, gde pomenuta varijanta Fc regiona sadrži najmanje jednu amino kiselinu modifikacija u odnosu na divlji tip Fc regiona, tako da navedeni molekul ima produženo vreme poluraspada (u odnosu na Fc region divljeg tipa).
[0201] U nekim realizacijama, PD-1-vezujući molekuli ovog pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrže varijantu Fc regiona, pri čemu pomenuta varijanta Fc regiona sadrži poluživot koji se produžava supstitucija aminokiselina na jednoj ili više pozicija izabranih iz grupe koju čine 238, 250, 252, 254, 256, 257, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305, 307, 308, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424, 428, 433, 434, 435, i 436.
Brojne specifične mutacije koje mogu da povećaju vreme poluživota molekula koji sadrži Fc region su poznate u tehnici i uključuju, na primer, M252Y, S254T, T256E i njihove kombinacije. Na primer, pogledajte mutacije opisane u US Patenti br.6,277,375, 7,083,784; 7,217,797, 8,088,376; U.S.
Publikacije br.2002/0147311; 2007/0148164; i me]unarodne publikacije br. WO 98/23289; WO 2009/058492; i WO 2010/033279Molekuli koji sadrže Fc region sa produženim poluživotom takođe uključuju one sa supstitucijama na dva ili više ostataka Fc regiona 250, 252, 254, 256, 257, 288, 307, 308, 309, 311, 378, 428, 433, 434, 435 i 436.. Konkretno, dve ili više supstitucija izabranih između: T250Q, M252Y, S254T, T256E, K288D, T307Q, V308P, A378V, M428L, N434A, H435K, i Y436I.
[0202] U specifičnoj realizaciji, varijanta Fc Region sadrži supstitucije:
(A) M252Y, S254T i T256E;
(B) M252Y i S254T;
(C) M252Y i T256E;
(D) T250Q i M428L;
(E) T307Q i N434A;
(F) A378V i N434A;
(G) N434A i Y436I;
(H) V308P i N434A; or
(I) K288D i H435K.
[0203] Varijanta Fc regiona može sa obuhvati:
(A) jednu ili više mutacija koje menjaju funkciju efektora i/ili FcyR; i
(B) jednu ili više mutacija koje produžavaju poluživot u serumu.
VI. Bispecifični anti-humani PD-1-vezujući molekuli
[0204] Otkriveni su, ali ne traženi, bispecifični vezujući molekuli koji su sposobni da se vežu za "prvi epitop" i "drugi epitop", pri čemu je prvi epitop epitop humanog PD-1, a drugi epitop je isti ili različit epitop PD-1, ili je epitop drugog molekula koji je prisutan na površini imune ćelije (kao što je T limfocit) i uključen je u regulisanje imunološke kontrolne tačke. U jednom slučaju, drugi epitop je epitop od B7-H3, B7-H4, BTLA, CD3, CD8, CD16, CD27, CD32, CD40, CD40L, CD47, CD64, CD70, CD80, CD86, CD94, CD137, CD137L, CD226, CTLA-4, Galectin-9, GITR, GITRL, HHLA2, ICOS, ICOSL, KIR, LAG-3, LIGHT, MHC class I ili II, NKG2a, NKG2d, OX40, OX40L, PD1H, PD-1, PD-L1, PD-L2, PVR, SIRPa, TCR, TIGIT, TIM-3 ili VISTA.. U jednom slučaju, drugi epitop nije epitop PD-1. U specifičnom slučaju, drugi epitop je CD137, CTLA-4, LAG-3, OX40, TIGIT, ili TIM-3. U određenim slučajevima, bispecifični molekul sadrži više od dva epitopska vezivna mesta. Takvi bispecifični molekuli mogu da vežu dva ili više različitih epitopa LAG-3 i najmanje jedan epitop molekula koji nije LAG-3.
[0205] Bispecifična antitela mogu biti sposobna da se istovremeno vežu za PD-1 i drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3, MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3, itd.). U nekim slučajevima, bispecifično antitelo sposobno da se istovremeno veže za PD-1 i drugi epitop se proizvodi korišćenjem bilo koje od metoda opisanih u PCT publikacijama br. , WO 1998/002463, WO 2005/070966, WO 2006/107786, WO 2007/024715, WO 2007/075270, WO 2006/107617, WO 2007/046893, WO 2007/146968, WO 2008/003103, WO 2008/003116, WO 2008/027236, WO 2008/024188, WO 2009/132876, WO 2009/018386, WO 2010/028797, WO2010028796, WO 2010/028795, WO 2010/108127, WO 2010/136172, WO 2011/086091, WO 2011/133886, WO 2012/009544, WO 2013/003652, WO 2013/070565, WO 2012/162583, WO 2012/156430, WO 2013/174873, i WO 2014/022540.
A. Bispecifična dijatela bez Fc regiona
[0206] Otkrivena, ali za koja nije tražena zaštita, su bispecifična dijatela koja sadrže, i najpoželjnije su sastavljena od, prvog polipeptidnog lanca i drugog polipeptidnog lanca, čije sekvence dozvoljavaju polipeptidnim lancima da se kovalentno vezuju jedan za drugi da bi formirali kovalentno povezano dijatelo koje je sposoban da se istovremeno veže za prvi epitop i drugi epitop, pri čemu takvi epitopi nisu identični jedan drugom. Takva bispecifična dijatela tako obuhvataju " VL1" / "VH1" domene koji su sposobni da se vežu za prvi epitop i " VL2" / "VH2" domene koji su sposobni da se vežu za drugi epitop. Oznake " VL1" i "VH1" označavaju, respektivno, varijabilni domen lakog lanca i varijabilni domen teškog lanca koji vezuju "prvi" epitop takvog bispecifičnog dijatela. Slično, oznake " VL2" i "VH2" označavaju respektivno, varijabilni domen lakog lanca i varijabilni domen teškog lanca koji vezuju "drugi" epitop takvog bispecifičnog dijatela. Nije važno da li je određeni epitop označen kao prvi u odnosu na drugi epitop; takva notacija je relevantna samo u pogledu prisustva i orijentacije domena polipeptidnih lanaca vezujućih molekula. Jedan od takvih epitopa je epitop PD-1, a drugi od takvih epitopa nije epitop PD-1 (na primer, epitop B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3, MHC class I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3, itdc.).
[0207] VL domen prvog polipeptidnog lanca stupa u interakciju sa VH domenom drugog polipeptidnog lanca da bi formirao prvo funkcionalno mesto vezivanja antigena koje je specifično za prvi antigen (tj. ili PD-1 ili antigen koji sadrži drugi epitop). Slično, VL domen drugog polipeptidnog lanca interaguje sa VH domenom prvog polipeptidnog lanca kako bi formirao drugo funkcionalno mesto vezivanja antigena koje je specifično za drugi antigen (tj. ili antigen koji sadrži drugi epitop ili PD-1). Dakle, izbor VL i VH domena prvog i drugog polipeptidnog lanca je koordinisan, tako da dva polipeptidna lanca dijatela zajedno sadrže VL i VH domene koji su sposobni da se vežu i za epitop PD-1 i za drugi epitop (tj. obuhvataju VLPD-1/VHPD-1i VL2/VH2, pri čemu je PD-1 "prvi" epitop, ili VL1/VH1 i VLPD-1/VHPD, gde je PD-1 "drugi" " epitop).
[0208] Prvi polipeptidni lanac primera takvih bispecifičnih dijatela sadrži, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa , N-terminus, VL1 domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za prvi ili drugi epitop ( tj. VLPD-1ili VLEpitope 2), prvi intervenišući spejser peptid (Linker 1), VH2 domen monoklonskog antitela sposobnog da se veže bilo za drugi epitop (ako takav prvi polipeptidni lanac sadrži VLPD-1) ili za prvi epitop (ako takav prvi polipeptidni lanac sadrži VLEpitope 2), drugi intervenišući spejser peptid (Linker 2) koji opciono sadrži cisteinski ostatak, domen koji promoviše heterodimer i C-terminus (slika 1).
[0209] Drugi polipeptidni lanac ovog primera bispecifičnih dijatela sadrži, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa , N-terminus, VL2 domen monoklonskog antitela sposobnog da se veže ili za PD-1 ili za drugi epitop (tj. ili VLPD-1ili VLEpitope 2, i budući da VL domen nije odabran za uključivanje u prvi polipeptidni lanac dijatela), intervenišući linker peptid (Linker 1), VH1 domen monoklonskog antitela sposobnog da se veže za bilo drugi epitop (ako takav drugi polipeptidni lanac sadrži VLPD-1) ili PD-1 (ako takav drugi polipeptidni lanac sadrži VLEpitope 2), drugi intervenišući spejser peptid (Linker 2) koji opciono sadrži cisteinski ostatak, domen koji promoviše heterodimer i C-terminus (slika 1).
[0210] Najpoželjnije, dužina intervenišućeg linker peptida (npr., linkera 1) koja razdvaja takve VL i VH domene je odabrana da suštinski ili potpuno spreči vezivanje VL i VH domena polipeptidnog lanca jedan za drugi. Tako su VL i VH domeni prvog polipeptidnog lanca suštinski ili potpuno nesposobni da se vežu jedan za drugi. Slično, VL i VH domeni drugog polipeptidnog lanca su suštinski ili potpuno nesposobni da se vežu jedan za drugi. Poželjni intervenirajući spejser peptid (linker 1) ima sekvencu (SEQ ID NO:14): GGGSGGGG.
[0211] Dužina i sastav drugog intervenišućeg veznog peptida (Linker 2) se bira na osnovu izbora domena koji promovišu heterodimer. Tipično, drugi intervenišući linker peptid (Linker 2) će sadržati 3-20 aminokiselinskih ostataka. Konkretno, tamo gde domeni koji promovišu heterodimer ne sadrže cisteinski ostatak, koristi se drugi intervenišući linker peptid (Linker 2) koji sadrži cistein. Drugi međuprostorni peptid koji sadrži cistein (Linker 2) će sadržati 1, 2, 3 ili više cisteina. Poželjni spejser peptid koji sadrži cistein (Linker 2) ima sekvencu SEQ ID NO:15: GGCGGG . Alternativno, linker 2 ne sadrži cistein (npr. GGG, GGGS (SEQ ID NO:29), LGGGSG (SEQ ID NO:261), GGGSGGGSGGG (SEQ ID NO:262), ASTKG (SEQ ID NO:30), LEPKSS (SEQ ID NO:33), APSSS (SEQ ID NO:34), itd.) i domen koji promoviše heterodimer koji sadrži cistein, kao što je opisano u nastavku. Opciono, koriste se i linker 2 koji sadrži cistein i domen koji promoviše heterodimer koji sadrži cistein.
[0212] Domeni koji promovišu heterodimer mogu biti GVEPKSC (SEQ ID NO:16) or VEPKSC (SEQ ID NO:17) ili AEPKSC (SEQ ID NO:18) na jednom polipeptidnom lancu i GFNRGEC (SEQ ID NO:19) ili FNRGEC (SEQ ID NO:20) na drugom polipeptidnom lancu (US2007/0004909).
[0213] Još poželjnije, međutim, domeni koji promovišu heterodimere takvih dijatela su formirani od jednog, dva, tri ili četiri tandemski ponovljena domena spirale suprotnog naboja koji sadrže sekvencu od najmanje šest, najmanje sedam ili najmanje osam amino kiselinski ostataka tako da domen koji promoviše heterodimer poseduje neto naelektrisanje (Apostolovic, B. et al. (2008) "pH-Sensitivity of the E3/K3 Heterodimeric Coiled Coil," Biomacromolecules 9:3173-3180; Arndt, K.M. et al. (2001) "Helix-stabilized Fv (hsFv) Antibody Fragments: Substituting the Constant Domains of a Fab Fragment for a Heterodimeric Coiled-coil Domain," J. Molec. Biol.312:221-228; Arndt, K.M. et al. (2002) "Comparison of In Vivo Selection and Rational Design of Heterodimeric Coiled Coils," Structure 10:1235-1248; Boucher, C. et al. (2010) "Protein Detection By Western Blot Via Coiled-Coil Interactions," Analytical Biochemistry 399:138-140; Cachia, P.J. et al. (2004) "Synthetic Peptide Vaccine Development: Measurement Of Polyclonal Antibody Affinity And Cross-Reactivity Using A New Peptide Capture And Release System For Surface Plasmon Resonance Spectroscopy," J. Mol. Recognit.17:540-557; De Crescenzo, G.D. et al. (2003) "Real-Time Monitoring of the Interactions of Two-Stranded de novo Designed Coiled-Coils: Effect of Chain Length on the Kinetic and Thermodynamic Constants of Binding," Biochemistry 42:1754-1763; Fernandez-Rodriquez, J. et al. (2012) "Induced Heterodimerization And Purification Of Two Target Proteins By A Synthetic Coiled-Coil Tag," Protein Science 21:511-519; Ghosh, T.S. et al. (2009) "End To End And End- To-Middle Interhelical Interactions: New Classes Of Interacting Helix Pairs In Protein Structures," Acta Crystallographica D65:1032-1041; Grigoryan, G. et al. (2008) "Structural Specificity In Coiled-Coil Interactions," Curr. Opin. Struc. Biol.18:477-483; Litowski, J.R. et al. (2002) "Designing Heterodimeric Two-Stranded α-Helical Coiled-Coils: The Effects Of Hydrophobicity And α-Helical Propensity On Protein Folding, Stability, And Specificity," J. Biol. Chem.277:37272-37279; Steinkruger, J.D. et al. (2012) "The d'--d--d' Vertical Triad is Less Discriminating Than the a'--a--a' Vertical Triad in the Antiparallel Coiled-coil Dimer Motif," J. Amer. Chem. Soc.134(5):2626-2633; Straussman, R. et al. (2007) "Kinking the Coiled Coil - Negatively Charged Residues at the Coiled-coil Interface," J. Molec. Biol.366:1232-1242; Tripet, B. et al. (2002) "Kinetic Analysis of the Interactions between Troponin C and the C-terminal Troponin I Regulatory Region and Validation of a New Peptide Delivery/Capture System used for Surface Plasmon Resonance," J. Molec. Biol.323:345-362; Woolfson, D.N. (2005) "The Design Of Coiled-Coil Structures And Assemblies," Adv. Prot. Chem.70:79-112; Zeng, Y. et al.
(2008) "A Ligand-Pseudoreceptor System Based On de novo Designed Peptides For The Generation Of Adenoviral Vectors With Altered Tropism," J. Gene Med.10:355-367).
[0214] Takvi ponovljeni domeni namotaja mogu biti tačna ponavljanja ili mogu imati supstitucije. Na primer, zavojni domen domena koji promoviše heterodimer prvog polipeptidnog lanca može da sadrži sekvencu od osam aminokiselinskih ostataka izabranih da daju negativan naboj takvom domenu koji promoviše heterodimer, i domen zavojnice domena koji promoviše heterodimer od drugi polipeptidni lanac može da sadrži sekvencu od osam aminokiselinskih ostataka odabranih da daju pozitivan naboj takvom domenu koji promoviše heterodimer. Nije bitno koji kalem je obezbeđen za prvi ili drugi polipeptidni lanac, pod uslovom da se kalem suprotnog naelektrisanja koristi za drugi polipeptidni lanac. Pozitivno naelektrisana amino kiselina može biti lizin, arginin, histidin, itd. i/ili negativno naelektrisana amino kiselina može biti glutaminska kiselina, asparaginska kiselina, itd. Pozitivno naelektrisana amino kiselina je poželjno lizin i/ili negativno naelektrisana amino kiselina je poželjno glutaminska kiselina. Moguće je da se koristi samo jedan domen koji promoviše heterodimer (pošto će takav domen inhibirati homodimerizaciju i time promovisati heterodimerizaciju), međutim, poželjno je da i prvi i drugi polipeptidni lanac dijatela sadrže domene koje promovišu heterodimer.
[0215] U poželjnom slučaju, jedan od domena koji promovišu heterodimer će se sastojati od četiri tandem spiralna domena "E-zavojnica (E-coil)" (SEQ ID NO:21: EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK), čiji će ostaci glutamata formirati negativno naelektrisanje na pH 7, dok će drugi od domena koji promovišu heterodimer činiti četiri tandem domena "K- zavojnica (K-coil)" ((SEQ ID NO:22: KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE), čiji će ostaci lizina formirati pozitivno naelektrisanje na pH 7 Prisustvo takvih naelektrisanih domena promoviše vezu između prvog i drugog polipeptida, i na taj način podstiče formiranje heterodimera. Naročito je poželjan domen koji promoviše heterodimer u kojem je jedan od četiri tandema "E-zavojnice" spiralnog domena SEQ ID
NO:21 modifikovan da sadrži cisteinski ostatak: EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEQ ID NO:23). Slično tome, posebno je poželjan domen koji promoviše heterodimer u kome je jedan od četiri tandema "K-zavojnice" spiralnog domena SEQ ID NO:22 modifikovan da sadrži cisteinski ostatak: KVAACKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE (SEQ ID NO:24).
[0216] Kao što je otkriveno u WO 2012/018687, da bi se poboljšala in vivo farmakokinetička svojstva dijatela, dijatelo može biti modifikovano da sadrži polipeptidni deo proteina koji se vezuje za serum na jednom ili više krajeva dijatela. Najpoželjnije, takav polipeptidni deo proteina koji se vezuje za serum će biti instaliran na C-terminusu dijatela. Albumin je najzastupljeniji protein u plazmi i ima poluživot od 19 dana kod ljudi. Albumin poseduje nekoliko mesta za vezivanje malih molekula koja mu omogućavaju da se nekovalentno vezuje za druge proteine i na taj način produžava njihov poluživot u serumu. Albumin-vezujući domen 3 (ABD3) proteina G soja Streptococcus G148 sastoji se od 46 aminokiselinskih ostataka koji formiraju stabilan snop sa tri spirale i ima široku specifičnost vezivanja albumina (Johansson, M.U. et al. (2002) "Structure, Specificity, And Mode Of Interaction For Bacterial Albumin-Binding Modules," J. Biol. Chem.277(10):8114-8120. Dakle, posebno poželjan polipeptidni deo proteina koji vezuje serum za poboljšanje in vivo farmakokinetičkih svojstava diabodi je domen koji vezuje albumin (ABD) iz streptokoknog proteina G, i još poželjnije, albuminvezujući domen 3 (ABD3) proteina G soja Streptococcus dysgalactiae G148 (SEQ ID NO:25):
LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNLIDNAKS AEGVKALIDE ILAALP.
[0217] Kao što je otkriveno u WO 2012/162068, "deimunizovane" varijante SEQ ID NO:25 imaju sposobnost da oslabe ili eliminišu vezivanje MHC klase II. Na osnovu rezultata kombinovanih mutacija, sledeće kombinacije supstitucija se smatraju poželjnim supstitucijama za formiranje takvog deimunizovanog ABD-a: 66D/70S 71A; 66S/70S 71A; 66S/70S 79A; 64A/65A/71A; 64A/65A/71A+66S; 64A/65A/71A+66D; 64A/65A/71A+66E; 64A/65A/79A+66S; 64A/65A/79A+66D; 64A/65A/79A+66E. Varijanta ABDs obuhvata modifikacije L64A, I65A and D79A ili modifikacije N66S, T70S i D79A. Varijanta deimunizovanog ABD sa sekvencom aminokiselina:
LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNLID66NAKS70A71EGVKALIDE ILAALP (SEQ ID NO:26),
ili sekvenca aminokiselina:
LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNA64A65NNAKT VEGVKALIA79E ILAALP (SEQ ID NO:27),
ili sekvenca aminokiselina:
LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNLIS66NAKS70VEGVKALIA79E ILAALP (SEQ ID NO:28),
su posebno poželjni jer takvi deimunizovani ABD pokazuju suštinski vezu divljeg tipa dok obezbeđuju oslabljeno vezivanje MHC klase II. Dakle, prvi polipeptidni lanac takvog dijatela koji ima ABD sadrži peptidni linker, poželjno pozicioniran na C-terminalnom delu na domenu E-zavojnice (ili K-zavojnice) takvog polipeptidnog lanca tako da interveniše između E-zavojnice (ili K -zavojnice) Domen i ABD (koji je poželjno deimunizovani ABD). Poželjna sekvenca za takav peptidni linker je SEQ ID NO:29: GGGS.
B. Bispecifična dijatela koja sadrže Fc regione
[0218] Otkriveno, ali ne i traženo, su bispecifična dijatela koja sadrže Fc region sposoban da se istovremeno veže za PD-1 i drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3, MHC class I ili II, OX40, PD-1, PD-L1, TCR, TIM-3, itd.). Dodavanje IgG CH2-CH3 domena jednom ili oba polipeptidna lanca dijatela, tako da kompleksiranje lanaca dijatela rezultira formiranjem Fc regiona, povećava biološki poluživot i/ili menja valenciju diabodi. Ugrađivanje IgG CH2-CH3 domena na oba polipeptida dijatela omogućiće formiranje dvolančanog bispecifičnog dijatela koje sadrži Fc-region (Slika 2).
[0219] Alternativno, inkorporacija IgG CH2-CH3 domena na samo jedan od polipeptida dijatela omogućiće formiranje složenijeg četvorolančanog bispecifičnog dijatela koje sadrži Fc region (Slike 3A-3C). Slika 3C prikazuje reprezentativno četvorolančano dijatelo koje poseduje domen konstantne svetlosti (CL) i domen konstantne težine CH1, međutim fragmenti takvih domena kao i drugi polipeptidi mogu se alternativno koristiti (videti, na primer, slike 3A i 3B, US patentne publikacije br.
2013-0295121; 2010-0174053 i 2009-0060910; publikacije evropskih patenata br. EP 2714079; EP 2601216; EP 2376109; EP 2158221 i PCT publikacije br. WO 2012/162068; WO 2012/018687; WO 2010/080538). Tako, na primer, umesto CH1 domena, može se koristiti peptid koji ima aminokiselinsku GVEPKSC (SEQ ID NO:16) VEPKSC (SEQ ID NO:17), ili AEPKSC (SEQ ID NO:18), izvedenu iz zglobnog domena ljudskog IgG, i umesto CL domena, može se koristiti C-terminalnih 6 aminokiselina humanog kapa lakog lanca, GFNRGEC (SEQ ID NO:19) ili FNRGEC (SEQ ID NO:20). Reprezentativni peptid koji sadrži četvorolančano dijatelo prikazan je na slici 3A.
Alternativno, ili kao dodatak, može se koristiti peptid koji sadrži tandem kalemove domena suprotnog naelektrisanja, kao što su spiralni domeni "E-zavojnice" (SEQ ID NO:21: EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK or SEQ ID NO:23: EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK); i domeni "K-zavojnice" (SEQ ID NO:22: KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE or SEQ ID NO:24: KVAACKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE). Reprezentativni domen zavojnice koji sadrži četvorolančano dijatelo prikazan je na slici 3B.
[0220] Molekuli dijatela koji sadrže Fc region generalno uključuju dodatne intervenišuće vezne peptide (linkere). Tipično, dodatni linkeri će sadržati 3-20 aminokiselinskih ostataka. Dodatni ili alternativni linkeri koji se mogu koristiti u molekulima dijatela koji sadrže Fc region uključuju:
GGGS (SEQ ID NO:29), LGGGSG (SEQ ID NO:261), GGGSGGGSGGG (SEQ ID NO:262), ASTKG (SEQ ID NO:30), DKTHTCPPCP (SEQ ID NO:31), EPKSCDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:32), LEPKSS (SEQ ID NO:33), APSSS (SEQ ID NO:34), and APSSSPME (SEQ ID NO:35), LEPKSADKTHTCPPC SEQ ID
NO:36), GGC, i GGG. SEQ ID NO:33 se može koristiti umesto GGG ili GGC radi lakšeg kloniranja. Pored toga, aminokiseline GGG ili SEQ ID NO:33 mogu biti odmah praćene SEQ ID NO:31 da bi se formirali alternativni linkeri: GGGDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:263); i LEPKSSDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:37).
Molekul dijatela koji sadrži Fc region može da inkorporira IgG pregibni region pored ili umesto linkera. Primeri zglobnih regiona uključuju: EPKSCDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:32) izIgG1, ERKCCVECPPCP (SEQ ID NO:11) iz IgG2, ESKYGPPCPSCP (SEQ ID NO:12) iz IgG4, i ESKYGPPCPPCP (SEQ ID NO:13) i IgG43 zglobna varijanta koja sadrži stabilizujuću zamenu za smanjenje razmene lanaca.
[0221] Kao što je istaknuto na Slici 3A-3C, dijatela mogu da sadrže četiri različita lanca. Prvi i treći polipeptidni lanci takvog dijatela sadrže tri domena: (i) domen koji sadrži VL1, (ii) domen koji sadrži VH2, (iii) domen koji promoviše heterodimer i (iv) domen koji sadrži CH2-CH3 sekvencu. Drugi i četvrti polipeptidni lanci sadrže: (i) domen koji sadrži VL2, (ii) domen koji sadrži VH1 i (iii) domen koji promoviše heterodimer, gde domeni koji promovišu heterodimer promovišu dimerizaciju prvog/trećeg polipeptidnog lanca sa drugim/četvrtim polipeptidnim lancima. VL i/ili VH domeni trećeg i četvrtog polipeptidnog lanca, i VL i/ili VH domeni prvog i drugog polipeptidnog lanca mogu biti isti ili različiti tako da dozvoljavaju tetravalentno vezivanje koje je ili monospecifično, bispecifično ili tetraspecifično. Oznake "VL3" i "VH3" označavaju, respektivno, varijabilni domen lakog lanca i varijabilni domen teškog lanca koji vezuju "treći" epitop takvog dijatela. Slično, oznake "VL4" i "VH4" označavaju, respektivno, varijabilni domen lakog lanca i varijabilni domen teškog lanca koji vezuju "četvrti" epitop takvog dijatela. Opšta struktura polipeptidnih lanaca reprezentativnih dijatela sa četiri lanca Fc regiona je data u tabeli 2:
[0222] U specifičnom slučaju, dijatela su bispecifična, tetravalentna (tj. poseduju četiri mesta za vezivanje epitopa), dijatela koja sadrže Fc (Slike 3A-3C) koja su sastavljena od četiri ukupna polipeptidna lanca. Bispecifična, tetravalentna dijatela koja sadrže Fc obuhvataju dva mesta za vezivanje epitopa imunospecifična za PD-1 (koja mogu biti sposobna da se vežu za isti epitop PD-1 ili za različite epitope PD-1) i dva epitopa za vezivanje lokacije specifične za drugi epitop (npr. B7-H3, B7H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3, itd.).
[0223] U daljem slučaju, dijatela koja sadrže bispecifična Fc region mogu da sadrže tri polipeptidna lanca. Prvi polipeptid takvog dijatela sadrži tri domena: (i) Domen koji sadrži VL1, (ii) Domen koji sadrži VH2 i (iii) Domen koji sadrži CH2-CH3 sekvencu. Drugi polipeptid takvih dijatela sadrži: (i) Domen koji sadrži VL2, (ii) Domen koji sadrži VH1 i (iii) Domen koji promoviše heterodimerizaciju i kovalentno vezivanje sa prvim polipeptidnim lancem dijatela. Treći polipeptid takvih dijatela obuhvata CH2-CH3 sekvencu. Dakle, prvi i drugi polipeptidni lanci takvih dijatela se udružuju kako bi formirali VL1/VH1 vezujuće mesto koje je sposobno da se veže za prvi epitop, kao i VL2/VH2 vezujuće mesto koje je sposobno da se veže za drugi epitop. Prvi i drugi polipeptidi su vezani jedan za drugi preko disulfidne veze koja uključuje cisteinske ostatke u njihovim odgovarajućim Trećim domenima. Značajno je da se prvi i treći polipeptidni lanci kompleksiraju jedan sa drugim da bi formirali Fc region koji je stabilizovan preko disulfidne veze. Takva dijatela imaju pojačanu potenciju. Slike 4A i 4B ilustruju strukture takvih dijatela. Takva bispecifična dijatela koja sadrže Fc-region mogu imati bilo koju od dve orijentacije (Tabela 3):
[0224] U specifičnom slučaju, dijatela su bispecifična, bivalentna (tj. poseduju dva mesta vezivanja za epitop), dijatela koja sadrže Fc (Slike 4A-4B) koja su sastavljena od tri ukupna polipeptidna lanca. Bispecifična, bivalentna dijatela koja sadrže Fc iz ovog otkrića obuhvataju jedno mesto vezivanja za epitop imunospecifično za PD-1 i jedno mesto za vezivanje epitopa specifično za drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3, itd.).
[0225] U daljem slučaju, dijatela koja sadrže bispecifična Fc region mogu da sadrže ukupno pet polipeptidnih lanaca. U posebnom slučaju, dva od pomenutih pet polipeptidnih lanaca imaju istu sekvencu aminokiselina. Prvi polipeptidni lanac takvih dijatela sadrži: (i) domen koji sadrži VH1, (ii) domen koji sadrži CH1 i (iii) domen koji sadrži CH2-CH3 sekvencu. Prvi polipeptidni lanac može biti teški lanac antitela koji sadrži VH1 i konstantni region teškog lanca. Drugi i peti polipeptidni lanci takvih dijatela sadrže: (i) domen koji sadrži VL1 i (ii) domen koji sadrži CL. Drugi i/ili peti polipeptidni lanci takvih dijatela mogu biti laki lanci antitela koje sadrži VL1 komplementaran VH1 prvog/trećeg polipeptidnog lanca. Prvi, drugi i/ili peti polipeptidni lanci mogu biti izolovani iz prirodnih antitela. Alternativno, mogu se konstruisati rekombinantno. Treći polipeptidni lanac takvih dijatela sadrži: (i) domen koji sadrži VH1, (ii) domen koji sadrži CH1, (iii) domen koji sadrži CH2-CH3 sekvencu, (iv) domen koji sadrži VL2, (v ) domen koji sadrži VH3 i (vi) domen koji promoviše heterodimer, gde domeni koji promovišu heterodimer promovišu dimerizaciju trećeg lanca sa četvrtim lancem. Četvrti polipeptid takvih dijatela sadrži: (i) domen koji sadrži VL3, (ii) domen koji sadrži VH2 i (iii) domen koji promoviše heterodimerizaciju i kovalentno vezivanje sa trećim polipeptidnim lancem dijatela.
[0226] Dakle, prvi i drugi, i treći i peti, polipeptidni lanci takvih dijatela se udružuju da formiraju dva VL1/VH1 vezujuća mesta sposobna da vežu prvi epitop. Treći i četvrti polipeptidni lanci takvih dijatela se udružuju kako bi formirali VL2/VH2 vezujuće mesto koje je sposobno da se veže za drugi epitop, kao i VL3/VH3 vezujuće mesto koje je sposobno da se veže za treći epitop. Prvi i treći polipeptidi su vezani jedan za drugi preko disulfidne veze koja uključuje ostatke cisteina u njihovim odgovarajućim konstantnim regionima. Značajno je da se prvi i treći polipeptidni lanci kompleksiraju jedan sa drugim da bi formirali Fc region. Takva dijatela imaju pojačanu potenciju. Slika 5 ilustruje strukturu takvih dijatela. Podrazumeva se da domeni VL1/VH1, VL2/VH2 i VL3/VH3 mogu biti isti ili različiti tako da dozvoljavaju vezivanje koje je monospecifično, bispecifično ili trispecifično. Međutim, kako je ovde predviđeno, ovi domeni su poželjno odabrani tako da vezuju PD-1 i drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3, itd.).
[0227] VL i VH domeni polipeptidnih lanaca se biraju tako da formiraju VL/VH vezujuća mesta specifična za željeni epitop. Vezujuća mesta VL/VH formirana asocijacijom polipeptidnih lanaca mogu biti ista ili različita tako da omogućavaju tetravalentno vezivanje koje je monospecifično, bispecifično, trispecifično ili tetraspecifično. Konkretno, VL i VH domeni se mogu odabrati tako da bispecifično dijatelo može da sadrži dva mesta vezivanja za prvi epitop i dva mesta vezivanja za drugi epitop, ili tri mesta vezivanja za prvi epitop i jedno mesto vezivanja za drugi epitop, ili dva mesta vezivanja za prvi epitop, jedno mesto vezivanja za drugi epitop i jedno mesto vezivanja za treći epitop (kao što je prikazano na slici 5). Opšta struktura polipeptidnih lanaca reprezentativnih dijatela sa pet lanaca Fc regiona je data u tabeli 4:
[0228] U specifičnom slučaju, dijatela su bispecifična, tetravalentna (tj. poseduju četiri mesta vezivanja za epitop), dijatela koja sadrže Fc koja su sastavljena od pet ukupnih polipeptidnih lanaca koji imaju dva mesta vezivanja za prvi epitop i dva mesta vezivanja za drugi epitop. U jednom slučaju, bispecifična, tetravalentna dijatela koja sadrže Fc sadrže dva epitop-vezujuća mesta imunospecifična za PD-1 (koja mogu biti sposobna da se vežu za isti epitop PD-1 ili za različite epitope PD-1), i dva epitop-vezujuća mesta specifična za drugi epitop (npr., B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3, itd.). U drugom slučaju, bispecifična, tetravalentna dijatela koja sadrže Fc sadrže tri mesta za vezivanje epitopa imunospecifična za PD-1 koja mogu biti sposobna da se vežu za isti epitop PD-1 ili za različite epitope PD-1) i jedno mesta za vezivanje epitopa specifična za drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3, itd.). U drugom slučaju, bispecifična, tetravalentna dijatela koja sadrže Fc sadrže jedno mesto vezivanja za epitop imunospecifično za PD-1 i tri mesta za vezivanje epitopa specifična za drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3, itd.).
C. Bispecifični trovalentni vezujući molekuli koji sadrže Fc regione
[0229] Otkriveni su, ali nije tražena zaštita, za bispecifične, trovalentne vezujuće molekule, koji sadrže Fc region, i koji su sposobni da se istovremeno vežu za prvi epitop, drugi epitop i treći epitop, pri čemu najmanje jedan od takvih epitopa nije identičan drugom.. Takva bispecifična dijatela stoga obuhvataju "VL1" / "VH1" domene koji su sposobni da se vežu za prvi epitop, "VL2" / "VH2" domene koji su sposobni da se vežu za drugi epitop i "VL3" / "VH3" domene koji su sposobni da se vežu za treći epitop. U jednom slučaju, jedan ili dva takva epitopa su epitop PD-1, a drugi (ili drugi) takvih epitopa nije epitop PD-1 (na primer, epitop B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3, MHC klase I ili II, OX40, PD-1, PD-L1, TCR, TIM-3, itd.). Takvi bispecifični trovalentni vezujući molekuli obuhvataju tri mesta za vezivanje epitopa, od kojih su dva vezujuća domena tipa dijatela, koji obezbeđuju vezujuće mesto A i vezujuće mesto B, a jedno od njih je vezujući domen koji nije tipa dijatela, koji obezbeđuje vezujuće mesto C (videti, na primer, slike 6A-6F i PCT prijavu br: PCT/US15/33081; i PCT/US15/33076).
[0230] Tipično, trovalentni vezujući molekuli će sadržati četiri različita polipeptidna lanca (videti slike 6A-6B), međutim, molekuli mogu da sadrže manji ili veći broj polipeptidnih lanaca, na primer spajanjem takvih polipeptidnih lanaca jedan sa drugim (npr. preko peptidne veze) ili deljenjem takvih polipeptidnih lanaca da bi se formirali dodatni polipeptidni lanci, ili povezivanjem manjeg broja ili dodatnih polipeptidnih lanaca preko disulfidnih veza. Slike 6B-6F ilustruju ovaj aspekt šematskim prikazom takvih molekula koji imaju tri polipeptidna lanca. Kao što je prikazano na slikama 6A-6F, trovalentni vezujući molekuli mogu imati alternativne orijentacije u kojima su domeni vezivanja tipa dijatela N-terminalni (slike 6A, 6C i 6D) ili C-terminalni (slike 6B, 6E i 6F) za Fc Region.
[0231] U određenim slučajevima, prvi polipeptidni lanac takvih trovalentnih vezujućih molekula sadrži: (i) domen koji sadrži VL1, (ii) domen koji sadrži VH2, (iii) domen koji promoviše heterodimer, i (iv) domen Domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3. VL1 i VL2 domeni su locirani na N-terminalnom ili C-terminalnom mestu u odnosu na domen koji sadrži CH2-CH3 kao što je prikazano u Tabeli 5 (Slike 6A i 6B). Drugi polipeptidni lanac takvih instanci sadrži: (i) domen koji sadrži VL2, (ii) domen koji sadrži VH1 i (iii) domen koji promoviše heterodimer. Treći polipeptidni lanac takvih primera sadrži: (i) Domen koji sadrži VH3, (ii) Domen koji sadrži CH1 i (iii) Domen koji sadrži CH2-CH3 sekvencu. Treći polipeptidni lanac može biti teški lanac antitela koji sadrži VH3 i konstantni region teškog lanca. Četvrti polipeptid takvih instanci sadrži: (i) Domen koji sadrži VL3 i (ii) Domen koji sadrži CL. Četvrti polipeptidni lanci mogu biti laki lanac antitela koji sadrži VL3 komplementaran VH3 trećeg polipeptidnog lanca. Treći ili četvrti polipeptidni lanci mogu biti izolovani iz prirodnih antitela.
Alternativno, mogu se konstruisati rekombinantno, sintetički ili na druge načine.
[0232] Domen promenljivog lakog lanca prvog i drugog polipeptidnog lanca odvojen je od domena varijabilnog teškog lanca takvih polipeptidnih lanaca intervenišućim spejser linkerom koji ima dužinu koja je prekratka da bi dozvolila njihov VL1/VH2 (ili njihov VL2/ VH1) domene da se povežu kako bi formirali mesto za vezivanje epitopa sposobno da se veže za prvi ili drugi epitop. Poželjni intervenirajući spejser peptid (Linker 1) za ovu svrhu ima sekvencu (sequence ( SEQ ID
NO:14): GGGSGGGG. Drugi domeni trovalentnih vezujućih molekula mogu biti razdvojeni jednim ili više međuprostornih peptida, koji opciono sadrže cisteinski ostatak. Primeri linkera korisnih za generisanje trovalentnih vezujućih molekula su dati ovde i takođe su dati u PCT prijavama br:
PCT/US15/33081; i PCT/US15/33076. Dakle, prvi i drugi polipeptidni lanci takvih trovalentnih vezujućih molekula se udružuju kako bi formirali VL1/VH1 vezujuće mesto sposobno da veže prvi epitop, kao i VL2/VH2 vezujuće mesto koje je sposobno da se veže za drugi epitop. Treći i četvrti polipeptidni lanci takvih trovalentnih vezujućih molekula se udružuju kako bi formirali VL3/VH3 vezujuće mesto koje je sposobno da se veže za treći epitop. Podrazumeva se da domeni VL1/VH1, VL2/VH2 i VL3/VH3 mogu biti isti ili različiti tako da dozvoljavaju vezivanje koje je monospecifično, bispecifično ili trispecifično.
[0233] Kao što je gore opisano, trovalentni vezujući molekuli mogu da sadrže tri polipeptida.
Trovalentni vezujući molekuli koji sadrže tri polipeptidna lanca mogu se dobiti povezivanjem domena četvrtog polipeptidnog N-terminusa sa domenom trećeg polipeptida koji sadrži VH3. Alternativno, koristi se treći polipeptidni lanac trovalentnog vezujućeg molekula koji sadrži sledeća tri domena: (i) domen koji sadrži VL3, (ii) domen koji sadrži VH3 i (iii) domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3, pri čemu su VL3 i VH3 prostorno odvojeni jedan od drugog intervenišućim spejser peptidom koji je dovoljno dugačak (najmanje 9 ili više aminokiselinskih ostataka) tako da omogući povezivanje ovih domena da formira mesto za vezivanje epitopa.
[0234] Razumeće se da domeni VL1/VH1, VL2/VH2 i VL3/VH3 mogu biti isti ili različiti kako bi se omogućilo vezivanje koje je monospecifično, bispecifično ili trispecifično. Međutim, kako je ovde predviđeno, ovi domeni su poželjno odabrani tako da vezuju PD-1 i drugi epitop (ili drugi i treći epitop) (poželjno, takvi epitopi su epitopi B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3, itd.).
[0235] Konkretno, VL i VH domeni mogu biti odabrani tako da trovalentni vezujući molekul sadrži dva mesta vezivanja za prvi epitop i jedno vezivno mesto za drugi epitop, ili jedno mesto vezivanja za prvi epitop i dva mesta vezivanja za drugi epitop, ili jedno mesto vezivanja za prvi epitop, jedno mesto vezivanja za drugi epitop i jedno mesto vezivanja za treći epitop. Opšta struktura polipeptidnih lanaca reprezentativnih trovalentnih vezujućih molekula je data na slikama 6A-6F i u tabeli 5:
[0236] Jedan primer se odnosi na bispecifične trovalentne vezujuće molekule koji sadrže dva epitopvezujuća mesta za PD-1 i jedno mesto vezivanja za epitop za drugi epitop prisutan na molekulu koji nije PD-1 (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3, MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3, itd.). Dva mesta za vezivanje epitopa za PD-1 mogu da vežu isti epitop ili različite epitope. Drugi primer se odnosi na bispecifične trovalentne vezujuće molekule koji sadrže jedno mesto vezivanja za epitop za PD-1 i dva mesta za vezivanje epitopa koja vezuju drugi antigen prisutan na molekulu koji nije PD-1 (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3, MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3, itd.). Dva mesta vezivanja za epitop za drugi antigen mogu da vežu isti epitop ili različite epitope antigena (npr. isti ili različiti epitopi LAG-3). Kao što je gore navedeno, takvi bispecifični trovalentni vezujući molekuli mogu da sadrže tri ili četiri polipeptidna lanca.
VII. Konstantni domeni i Fc regioni
[0237] Ovde su obezbeđeni konstantni domeni antitela korisni u generisanju PD-1-vezujućih molekula (npr. antitela, dijatela, trovalentni vezujući molekuli, itd.).
[0238] Poželjni CL domen je ljudski IgG CL Kapa domen. Aminokiselinska sekvenca primera humanog CL Kappa domena je (SEQ ID NO:8):
[0239] Alternativno, primer CL domena je ljudski IgG CL Lambda domen. Aminokiselinska sekvenca primera humanog CL Kappa domena je (SEQ ID NO:9):
[0240] Kao što je ovde predviđeno, PD-1-vezujući molekuli pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, mogu sadržati Fc region. Fc region takvih molekula pronalaska može biti bilo kog izotipa (npr. IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4). PD-1-vezujući molekuli pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, mogu dalje da sadrže CH1 domen i/ili zglobni region. Kada je prisutan, CH1 domen i/ili pregibni region mogu biti bilo kog izotipa (npr. IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4), i poželjno je istog izotipa kao i željeni Fc region.
[0241] Primer CH1 domena je ljudski IgG1 CH1 domen. Aminokiselinska sekvenca primera humanog I
[0242] Primer CH1 domena je ljudski IgG2 CH1 domen. Aminokiselinska sekvenca primera ljudskog IgG2 CH1 domena je (SEQ ID NO:257):
[0243] Primer CH1 domena je ljudski IgG4 CH1 domen. Aminokiselinska sekvenca primera humanog I
[0244] Jedan primer zglobnog regiona je humani IgG1 zglobni region. Aminokiselinska sekvenca primera zglobnog regiona humanog IgG1 je (SEQ ID NO:32): EPKSCDKTHTCPPCP .
[0245] Još jedan primer zglobnog regiona je humani IgG2 zglobni region. Aminokiselinska sekvenca primera zglobnog regiona humanog IgG2 je (SEQ ID NO:11): ERKCCVECPPCP .
[0246] Naredni jedan primer zglobnog regiona je humani IgG4 zglobni region. Aminokiselinska sekvenca primera zglobnog regiona IgG4 je (SEQ ID NO:12): ESKYGPPCPSCP . Kao što je ovde opisano, pregibni region humanog IgG4 može da sadrži stabilizujuću mutaciju kao što je supstitucija S228P. Aminokiselinska sekvenca primera stabilizovanog IgG4 zglobnog regiona je (SEQ ID
NO:13): ESKYGPPCPPCP .
[0247] Fc region molekula koji sadrže Fc region može biti ili kompletan Fc region (npr. kompletan IgG Fc region) ili samo fragment Fc regiona. Opciono, Fc Region molekula koji sadrže Fc Region iz ovog pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, nema aminokiselinski ostatak lizina na C-terminalnom delu. Konkretno, Fc region molekula koji sadrže Fc region prema ovom pronalasku, kako je definisan i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, može biti projektovana varijanta Fc regiona Fc regioni bispecifičnih molekula koji sadrže Fc region mogu poseduju sposobnost da se vezuju za jedan ili više Fc receptora (npr., FcyR(s)), poželjnije je da takva varijanta Fc regiona ima izmenjeno vezivanje za FcyRIA (CD64), FcyRIIA (CD32A), FcyRIIB (CD32B), FcyRIIIA (CD16a) ili FcyRIIIB (CD16b) (u odnosu na vezivanje koje pokazuje divlji tip Fc regiona) ili će imati značajno smanjenu ili nikakvu sposobnost da se veže za inhibitorni receptor(e). Fc region molekula koji sadrže Fc region ovog pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, može uključivati neke ili sve CH2 domene i/ili neke ili sve CH3 domene kompletan Fc region, ili može da sadrži varijantu CH2 i/ili varijantnu CH3 sekvencu (koja može uključivati, na primer, jednu ili više insercija i/ili jednu ili više delecija u odnosu na CH2 ili CH3 domene kompletnog Fc regiona) . Takvi Fc regioni mogu sadržati ne-Fc polipeptidne delove, ili mogu sadržati delove ne-prirodno kompletnih Fc regiona, ili mogu sadržati neprirodne orijentacije CH2 i/ili CH3 domena (kao što su, na primer, dva CH2 domena ili dva CH3 domena, ili u pravcu N-terminusa ka C-terminusu, CH3 domen povezan sa CH2 domenom, itd.).
[0248] Modifikacije Fc regiona identifikovane kao promene efektorske funkcije su poznate u tehnici, uključujući modifikacije koje povećavaju vezivanje za aktivirajuće receptore (npr., FcyRIIA (CD16A) i smanjuju vezivanje za inhibitorne receptore (npr., FcyRIIB (CD32B)) (videti, npr Stavenhagen, J.B. et al. (2007) "Fc Optimization Of Therapeutic Antibodies Enhances Their Ability To Kill Tumor Cells In Vitro And Controls Tumor Expansion In Vivo Via Low-Affinity Activating Fcgamma Receptors," Cancer Res.57(18):8882-8890). Primeri varijanti humanih IgG1 Fc regiona sa smanjenim vezivanjem za CD32B i/ili povećanim vezivanjem za CD16A sadrže F243L, R292P, Y300L, V305I ili P296L supstitucije. Ove aminokiselinske supstitucije mogu biti prisutne u ljudskom IgG1 Fc regionu u bilo kojoj kombinaciji ili podkombinaciji. U jednom aspektu, varijanta humanog IgG1 Fc regiona sadrži F243L, R292P i Y300L supstituciju. U drugom aspektu, varijanta humanog IgG1 Fc regiona sadrži F243L, R292P, Y300L, V305I i P296L supstitucije.
[0249] Posebno, poželjno je da Fc regioni polipeptidnih lanaca molekula koji sadrže Fc region ovog pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, pokazuju smanjene (ili suštinski nikakve) vezivanje za FcyRIA (CD64), FcyRIIA (CD32A), FcyRIIB (CD32B), FcyRIIIA (CD16a) ili FcyRIIIB (CD16b) (u odnosu na vezivanje koje pokazuje divlji tip IgG1 Fc regiona (SEQ ID
NO:1). Varijante Fc regiona i mutantni oblici koji mogu da posreduju u takvom izmenjenom vezivanju su opisani gore. U specifičnoj varijanti, molekuli koji sadrže Fc region prema ovom pronalasku, kao što su definisani i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrže IgG Fc region. koji pokazuje smanjenu ADCC efektornu funkciju U poželjnoj realizaciji CH2-CH3 domen prvog i/ili trećeg polipeptidnog lanca takvih molekula koji sadrže Fc region uključuje bilo koju 1, 2 ili 3 supstitucija: L234A, L235A, N297Q, i N297G. U drugom aspektu, varijanta ljudskog IgG Fc regiona obuhvata supstituciju N297Q, supstituciju N297G, supstituciju L234A i L235A ili supstituciju D265A, pošto ove mutacije poništavaju vezivanje FcR. Alternativno, koristi se CH2-CH3 domen Fc regiona koji inherentno pokazuje smanjeno (ili u suštini nikakvo) vezivanje za FcyRIIIA (CD16a) i/ili smanjenu efektorsku funkciju (u odnosu na vezivanje koje pokazuje divlji tip IgG1 Fc regiona (SEQ ID NO:1)) . U specifičnom izvođenju, molekuli koji sadrže Fc region ovog pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, sadrže IgG2 Fc region (SEQ ID NO:2) ili IgG4 Fc region (SEQ ID:NO:4). Kada se koristi IgG4 Fc region, ovaj pronalazak takođe obuhvata uvođenje stabilizacijske mutacije, kao što je supstitucija zglobnog regiona S228P opisana gore (videti, npr. SEQ ID NO:13).
Budući da supstitucije N297G, N297Q, L234A, L235A i D265A ukidaju efektorsku funkciju, u okolnostima u kojima je efektorska funkcija poželjna, poželjno ove supstitucije se ne bi koristile.
[0250] Posebno, poželjno je da Fc regioni polipeptidnih lanaca molekula koji sadrže Fc region ovog pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, pokazuju produženo poluvreme eliminacije u serumu (u odnosu na vreme poluraspada koje pokazuje odgovarajući Fc divljeg tipa). Varijantni Fc regioni i mutantni oblici koji pokazuju produženo polu-život u serumu su opisani gore. U poželjnom izvođenju, CH2-CH3 domen prvog i/ili trećeg polipeptidnog lanca takvih molekula koji sadrže Fc region obuhvata bilo koju 1, 2 ili 3 supstitucije: M252Y, S254T i T256E. Pronalazak dalje obuhvata molekule koji sadrže Fc region ovog pronalaska koji sadrže varijante Fc regiona koji obuhvataju:
(A) jedna ili više mutacija koje menjaju funkciju efektora i/ili FcyR; i
(B) jedna ili više mutacija koje produžavaju poluživot u serumu.
[0251] Poželjna IgG1 sekvenca za CH2 i CH3 domene molekula koji sadrže Fc region ovog pronalaska će sadržati L234A/L235A/M252Y/S254T/T256E supstitucije (SEQ ID NO:258):
gde, X je lizin (K) ili nije prisutan.
[0252] Poželjna IgG4 sekvenca za CH2 i CH3 domene molekula koji sadrže Fc region ovog pronalaska će sadržati M252Y/S254T/T256E supstitucije (SEQ ID NO:259):
gde, X je lizin (K) ili nije prisutan.
[0253] Za dijatela i trovalentne vezujuće molekule čiji prvi i treći polipeptidni lanci nisu identični), poželjno je smanjiti ili sprečiti pojavu homodimerizacije između CH2-CH3 domena dva prva polipeptidna lanca ili između CH2-CH3 domena dva treći polipeptidni lanci. CH2 i/ili CH3 domeni takvih polipeptidnih lanaca ne moraju biti identični u sekvenci, i poželjno je da su modifikovani da podstiču kompleksiranje između dva polipeptidna lanca. Na primer, supstitucija aminokiselina (poželjno supstitucija sa amino kiselinom koja sadrži glomaznu bočnu grupu koja formira „ ručicu/čvor“, npr. triptofan) može se uvesti u CH2 ili CH3 domen tako da sterna interferencija spreči interakciju sa slično mutiranim domenu i obavezaće mutirani domen da se upari sa domenom u koji je konstruisana komplementarna ili adaptirajuća mutacija, tj. "otvor" (npr. zamena glicinom). Takvi skupovi mutacija se mogu konstruisati u bilo koji par polipeptida koji sadrže CH2-CH3 domene koji formiraju Fc region. Metode proteinskog inženjeringa za favorizovanje heterodimerizacije u odnosu na homodimerizaciju su dobro poznate u struci, posebno u pogledu inženjeringa molekula sličnih imunoglobulinu, i obuhvaćeni su ovde (videti npr., Ridgway et al. (1996) " 'Knobs-Into-Holes' Engineering Of Antibody CH3 Domains For Heavy Chain Heterodimerization, " Protein Engr.9:617-621, Atwell et al. (1997) "Stable Heterodimers From Remodeling The Domain Interface Of A Homodimer Using A Phage Display Library, " J. Mol. Biol.270: 26-35, and Xie et al. (2005) "A New Format Of Bispecific Antibody: Highly Efficient Heterodimerization, Expression And Tumor Cell Lysis, " J. Immunol. Methods 296:95-101). Poželjno je da je "kvačica/čvor" projektovana u CH2-CH3 domene prvog polipeptidnog lanca, a "otvor" je projektovan u CH2-CH3 domene trećeg polipeptidnog lanca dijatela koji se sastoji od tri polipeptidna lanca. Dakle, „ ručica/čvor “ će pomoći u sprečavanju homodimerizacije prvog polipeptidnog lanca preko njegovih CH2 i/ili CH3 domena. Pošto treći polipeptidni lanac poželjno sadrži supstituciju "otvora", on će se heterodimerizovati sa prvim polipeptidnim lancem, kao i homodimerizovati sa samim sobom. Ova strategija se može koristiti za dijatela i trovalentne vezujuće molekule koji se sastoje od tri, četiri ili pet lanaca kao što je detaljno opisano gore, gde je „ ručica /čvor “ projektovana u CH2-CH3 domene prvog polipeptidnog lanca, a „otvor“ je projektovan u CH2 -CH3 domena trećeg polipeptidnog lanca.
[0254] Poželjno dugme se kreira modifikovanjem IgG Fc regiona da sadrži modifikaciju T366W.
Poželjan otvorse stvara modifikacijom IgG Fc regiona da sadrži modifikacije T366S, L368A i Y407V. Da bi se pomoglo u prečišćavanju homodimera trećeg polipeptidnog lanca koji nosi otvore od konačnog bispecifičnog heterodimernog molekula koji sadrži Fc region, mesto vezivanja proteina domena A CH2 i CH3 trećeg polipeptidnog lanca koji nose otvore je poželjno mutirano supstitucijom amino kiselina na pozicija 435 (H435R). Dakle, homodimer trećeg polipeptidnog lanca koji nosi otvore neće se vezati za protein A, dok će bispecifični heterodimer zadržati svoju sposobnost da se vezuje za protein A preko mesta vezivanja za protein A na prvom polipeptidnom lancu. U alternativnoj varijanti, treći polipeptidni lanac koji nosi otvor može da sadrži supstitucije aminokiselina na pozicijama 434 i 435 (N434A/N435K).
[0255] Poželjna IgG1 aminokiselinska sekvenca za CH2 i CH3 domene prvog polipeptidnog lanca molekula koji sadrži Fc region može imati sekvencu "koja nosi ručicu/čvor" (SEQ ID NO:6):
gde x je lizin (K) ili nije prisutan.
[0256] Poželjna IgG1 aminokiselinska sekvenca za CH2 i CH3 domene drugog polipeptidnog lanca molekula koji sadrži Fc region koji ima dva polipeptidna lanca (ili treći polipeptidni lanac molekula koji sadrži Fc region koji ima tri, četiri ili pet polipeptidnih lanaca) imaće sekvencu koja "nosi otvor" (SEQ ID NO:7):
gde x je lizin (K) ili nije prisutan.
[0257] Kao što će biti napomenuto, CH2-CH3 domeni SEQ ID NO:6, i SEQ ID NO:7 uključuju supstituciju na poziciji 234 sa alaninom i 235 sa alaninom, i na taj način formiraju eksponat Fc regiona smanjen (ili značajno ne) vezivanje za FcyRIA (CD64), FcyRIIA (CD32A), FcyRIIB (CD32B), FcyRIIIA (CD16a) ili FcyRIIIB (CD16b) (u odnosu na vezivanje koje pokazuje divlji tip Fc regiona (SEQ ID NO:1).
CH2 -CH3 domeni, mogu sadržati alternativne i/ili dodatne supstitucije koje modifikuju efektornu funkciju i/ili vezujuću aktivnost Fc regiona. Domeni CH2-CH3, mogu dalje da sadrže jednu ili više supstitucija aminokiselina sa produženim životom. Domeni CH2-CH3 koji nose otvor i koji nose ručicu/čvor mogu dalje da obuhvataju M252Y/S254T/T256E.
[0258] Poželjno je da prvi polipeptidni lanac ima sekvencu CH2-CH3 "koja nosi “nosač" kao što je sekvenca SEQ ID NO:6. Međutim, kao što će se prepoznati, CH2-CH3 domen " koji nosi otvore (npr.
SEQ ID NO:7) mogao bi da se koristi u prvom polipeptidnom lancu, u kom slučaju, CH2-CH3 domen "sa kvačicama" (na primer, SEQ ID NO:6) bi se koristio u drugom polipeptidnom lancu molekula koji sadrži Fc region iz ovog pronalaska koji ima dva polipeptidna lanca (ili u trećem polipeptidnom lancu molekula koji sadrži Fc region koji ima tri, četiri, ili pet polipeptidnih lanaca).
[0259] Molekuli koji sadrže Fc region (npr. antitela i dijatela koja sadrže Fc region) koji imaju CH2 i CH3 domen divljeg tipa, ili koji imaju CH2 i CH3 domene, mogu da sadrže kombinacije supstitucija opisanih gore. Primer sekvence aminokiselina IgG1 CH2-CH3 domena koja obuhvata takve varijacije je (SEQ ID NO:260):
pri čemu:
(a) oba X1i X2su L (divlji tip), ili su oba A (smanjeno vezivanje FcyR);
(b) X3, X4, i X5tim redom su M, S i T (divlji tip), ili su Y, T i E (produćen polu-život),
(c) X6, X7, i X8tim redom su: T, L i Y (divlji tip), ili su W, L and Y (ručica/čvor), ili S, A i V (otvor);
(d) X9i X10tim redom su N i H (divlji tip), ili su N a i R (bez vezivanja proteina A), ili A i K (bez vezivanja proteina A), i
(e) X11je K ili nije prisutan.
[0260] PD-1-vezujući molekuli mogu da sadrže CH2 i/ili CH3 domene koji su dobijeni inžinjeningom da favorizuju heterodimerizaciju u odnosu na homodimerizaciju korišćenjem mutacija poznatih u tehnici, kao što su one otkrivene u PCT publikaciji br WO 2007/110205; WO 2011/143545; WO 2012/058768; WO 2013/06867.
VIII. PD-1 x LAG-3 Bispecifični vezujući molekuli
[0261] Otkriveni su, ali nije tražena zaštita, za PD-1 x LAG-3 bispecifične vezujuće molekule (npr. bispecifična antitela, bispecifična dijatela, itd.) koji sadrže fragment anti-PD-1 antitela koji se vezuje za epitop, i poželjno jedan od nova anti-humana PD-1 antitela koja su ovde data, i fragment koji se vezuje za epitop antitela protiv humanog LAG-3, poželjno jednog od novih anti-humanih LAG-3 antitela koja su ovde data. Poželjni PD-1 x LAG-3 bispecifični vezujući molekuli poseduju fragmente antitela koji se vezuju za epitop koji im omogućavaju da budu u stanju da se koordinirano vežu za dva različita epitopa: epitop PD-1 i epitop LAG-3, tako da umanjuju inhibitorne aktivnosti takvih molekula.
Kako se ovde koristi, takvo slabljenje se odnosi na smanjenje od najmanje 20%, smanjenje od najmanje 50%, smanjenje od najmanje 80% ili smanjenje od najmanje 90% detektabilnog PD-1 i/ili LAG.3 inhibitornu aktivnost, ili potpunu eliminaciju inhibitorne aktivnosti PD-1 i/ili LAG-3 koja se može detektovati. Izbor fragmenata koji se vezuju za epitop (npr. VL i VH domeni) anti-humanog PD-1 antitela i anti-LAG-3 antitela je koordinisan tako da su polipeptidni lanci koji čine takav PD-1 x LAG-3 bispecifični vezujući molekuli se okupljaju da formiraju najmanje jedno funkcionalno mesto vezivanja antigena koje je specifično za prvi antigen (tj. bilo PD-1 ili LAG-3) i najmanje jedno funkcionalno mesto vezivanja antigena koje je specifično za drugi antigen (tj. PD-1 ili LAG-3, u zavisnosti od identiteta prvog antigena).
[0262] U posebnom slučaju, PD-1 x LAG-3 bispecifično vezujući molekul je bispecifično dijatelo, koje poželjno sadrži dva, tri, četiri ili pet polipeptidnih lanaca kao što je ovde opisano. U drugom posebnom slučaju, PD-1 x LAG-3 bispecifično vezujući molekul je bispecifično antitelo, koje poželjno sadrži dva, tri ili četiri polipeptidna lanca kao što je ovde opisano (takođe videti, npr WO 2007/024715; WO2007/110205; WO 2009/080251; WO 2009/080254; WO 2009/089004; WO 2011/069104; WO 2011/117329; WO 2011/131746; WO 2011/133886; WO 2011/143545; WO 2012/023053; WO 2013/060867).
A. Anti-humana LAG-3 antitela
[0263] Otkrivena su, ali za koja se ne traži zaštita, antitela koja su imunospecifična za humani LAG-3 data u nastavku. Dodatna željena antitela mogu biti napravljena izolovanjem hibridoma koji sekretuju antitela izazvani korišćenjem LAG-3 ili njegovog peptidnog fragmenta, ili skriningom biblioteka rekombinantnih antitela za vezivanje za LAG-3 ili njegov peptidni fragment. Human LAG-3 (uključujući signalnu sekvencu od 28 aminokiselinskih ostataka (prikazano podvučeno) i zreli protein od 497 aminokiselinskih ostataka) ima sekvencu aminokiselina (SEQ ID NO:38):
1. LAG-3 mAb A
[0264] Anti-humano LAG-3 antitelo BMS-986016 (25F7; Medarex/BMS), ovde označeno kao "LAG-3 mAb A," i njegove varijante su opisane (videti, npr., WO 2014/008218). Aminokiselinska sekvenca varijabilnog domena teškog lanca LAG-3 mAb A ima aminokiselinsku sekvencu (SEQ ID NO:39) (podvučeni su CDR):
[0265] Aminokiselinska sekvenca varijabilnog domena lakog lanca LAG-3 mAb A ima aminokiselinsku sekvencu (SEQ ID NO:40) (podvučeni su CDR):
[0266] Nedavno su identifikovana dodatna mišja anti-humana LAG-3 antitela koja poseduju jedinstvene karakteristike vezivanja (videti US prijavu patenta br.62/172,277). Poželjni PD-1 x LAG-3 bispecifični vezujući molekuli sadrže fragmente za vezivanje epitopa antitela LAG-3 mAb 1 ili LAG-3 mAb 6 antitela na LAG-3, koja vezuju novi epitop i ne takmiče se sa BMS-986016 za LAG-3 vezivanje. Posebno poželjni su PD-1 x LAG-3 bispecifični vezujući molekuli koji poseduju humanizovane VH i/ili VL domene LAG-3 mAb 1 ili LAG-3 mAb 6.
2. LAG-1 mAb 1
[0267] Aminokiselinska sekvenca VH domena LAG-3 mAb 1 (SEQ ID NO:41) je prikazana ispod (podvučeni su ostaci CDRH).
[0268] Aminokiselinska sekvenca VL domena LAG-3 mAb 1 (SEQ ID NO:45) je prikazana u dalje m
tekstu (podvučeni su ostaci CDRL):
[0269] Dva primera humanizovanih VH domena LAG-3 mAb 1 označena ovde kao " hLAG-3 mAb 1 VH1," i "hLAG-3 mAb 1 VH2," i četiri primera humanizovanih VL domena LAG-3 mAb 1 označena ovde kao "hLAG-3 mAb 1 VL1," "hLAG-3 mAb 1 VL2," "hLAG-3 mAb 1 VL3," i hLAG-3 mAb 1 VL4," su data u dlajem tekstu. Bilo koji od humanizovanih VL domena može biti uparen sa bilo kojim od humanizovanih VH domena da se generiše LAG-3 vezujući domen. Shodno tome, svako antitelo koje sadrži jedan od humanizovanih VL domena uparenih sa humanizovanim VH domenom se generalno naziva "hLAG-3 mAb 1," a određene kombinacije humanizovanih VH/VL domena se pozivaju na specifične VH/VL domene. Domeni, na primer humanizovano antitelo koje sadrži hLAG-3 mAb 1 VH1 i hLAG-3 mAb 1 VL2 se posebno naziva "hLAG-3 mAb 1(1,2)."
[0270] Aminokiselinska sekvenca VH domena hLAG-3 mAb 1 VH1 (SEQ ID NO:49) je prikazana u tekstu niže, (podvučeni su CDRHostaci):
[0271] Aminokiselinska sekvenca VH domena hLAG-3 mAb 1 VH2 (SEQ ID NO:50) data je u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci):
[0272] Aminokiselinska sekvenca VL domena hLAG-3 mAb 1 VL1 (SEQ ID NO:51) data je u daljem tekstu (podvučeni su CDRLostaci):
[0273] Aminokiselinska sekvenca VL domena hLAG-3 mAb 1 VL2 (SEQ ID NO:52 data je u daljem tekstu (podvučeni su CDRLostaci):
[0274] Aminokiselinska sekvenca VL domena hLAG-3 mAb 1 VL3 (SEQ ID NO:53) data je u daljem tekstu (podvučeni su CDRLostaci):
[0275] Aminokiselinska sekvenca VL domena hLAG-3 mAb 1 VL4 (SEQ ID NO:54) data je u daljem tekstu (podvučeni su CDRLostaci):
[0276] CDRL1 VL domena hLAG-3 mAb 1 VL4 sadrži supstituciju aminokiselina od glicina alaninom i ima amino kiselinsku sekvencu: KSSQSLLHSDAKTYLN (SEQ ID NO:55), supstituisani alanin je prikazan kao podvučen). Predviđeno je da se slična supstitucija može inkorporirati u bilo koji od LAG-3 mAb 1 CDRL1 domena koji su prethodno opisani.
3. LAG-3 mAb 6
[0277] Aminokiselinska sekvenca VH domena LAG-3 mAb 6 (SEQ ID NO:56) data je u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci):
[0278] Aminokiselinska sekvenca VL domena LAG-3 mAb 6 (SEQ ID NO:60) data je u daljem tekstu (podvučeni su CDR ostaci):
[0279] Dva primera humanizovanih VH domena LAG-3 mAb 6 označena ovde kao as "hLAG-3 mAb 6 VH1," i "hLAG-3 mAb 6 VH2," i dva primera humanizovanih VL LAG-3 mAb 6 "hLAG-3 mAb 1 VL1," i "hLAG-3 mAb 1 VL2," su dati u taljem tekstu. Bilo koji od humanizovanih VL domena može biti uparen sa bilo kojim od humanizovanih VH domena da se generiše LAG-3 vezujući domen. Shodno tome, svako antitelo koje sadrži jedan od humanizovanih VL domena uparenih sa humanizovanim VH domenom se generički označava kao "hLAG-3 mAb 6," a određene kombinacije humanizovanih VH/VL domena se pozivaju na specifične VH/VL domene. Domeni, na primer humanizovano antitelo koje sadrži hLAG-3 mAb 6 VH1 i hLAG-3 mAb 6 VL2 je posebno označeno kao "hLAG-3 mAb 6(1,2)."
[0280] Aminokiselinska sekvenca VH domena hLAG-3 mAb 6 VH1 (SEQ ID NO:294) data je u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci):
[0281] Aminokiselinska sekvenca VH domena hLAG-3 mAb 6 VH2 (SEQ ID NO:295) data je u daljem tekstu (podvučeni su CDRHostaci):
[0282] Aminokiselinska sekvenca VL domena hLAG-3 mAb 6 VL1 (SEQ ID NO:296) is shown below (CDRLresidues are shown underlined):
[0283] Aminokiselinska sekvenca VL Domen hLAG-3 mAb 6 VL2 (SEQ ID NO:297) data je u daljem tekstu (podvučeni su CDRLostaci):
[0284] CDRL1 VL domena hLAG-3 mAb 6 VL1 i VL2 sadrži supstituciju aminokiselina lizina argininom i ima aminokiselinsku sekvencu: RASQDVSSWA (SEQ ID NO:298), supstituisani arginin je prikazan kao podvučen). Predviđeno je da se slična supstitucija može inkorporirati u bilo koji od prethodno opisanih LAG-3 mAb 6 CDRL1 domena.
B. Primer dijatela sa četiri lanca Fc regiona koji imaju E/K zavojnice
[0285] Otkrivena su, ali nije tražena zaštita, za četiri primera PD-1 x LAG-3 bispecifična, četiri lančana dijatela koja sadrže Fc region koja sadrže heterodimer-promovišuće domene E/K-zavojnice (označeni kao "DART A", "DART B", "DART C" i "DART I"). Struktura ovih dijatela koja sadrže Fc region je detaljno opisana u nastavku.
1. DART A
[0286] DART A je bispecifično, četvorolančano dijatelo koje sadrži Fc region i ima dva mesta vezivanja specifična za PD-1, dva mesta vezivanja specifična za LAG-3, varijantu IgG4 Fc regiona projektovanu za produženi poluživot i domene koji promovišu heterodimer E/K-zavojnice sa cisteinom. Prvi i treći polipeptidni lanci DART A sadrže, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa : N-terminus, VL domen monoklonskog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEQ ID NO:54); intervenišući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEQ ID NO:147); intervenišući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEQ ID NO:15)); domen za promociju heterodimera (E-zavojnica) koji sadrži cistein Domain (EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEQ ID NO:23)); stabilizovani IgG4 pregibni region (SEQ ID NO:13); varijantu IgG4 CH2-CH3 domena koja sadrži supstitucije M252Y/S254T/T256E i nema C-terminalni ostatak (SEQ ID NO:259); i C-terminus.
[0287] Aminokiselinska sekvenca prvog i trećeg polipeptidnog lanca DART A je varijanta od SEQ ID NO:267:
pri čemu su X1, X2, X3i X4nezavisno odabrani, i gde X1je A ili G; X2je Y ili M; X3je T ili S; i X4je E ili T.
[0288] Aminokiselinske sekvence prvog i trećeg polipeptidnog lanca DART A su SEQ ID NO:267, gde X1je A; X2je Y; X3je T; i X4je E.
[0289] Drugi i četvrti polipeptidni lanci DART A sadrže, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa: N-terminus, VL domen monoklonskog antitela sposobnog da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEQ ID NO:153); intervenišući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da veže LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEQ ID NO:49); intervenišući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEQ ID NO:15)); domen za promociju heterodimera (K-zavojnica) koji sadrži cistein (KVAACKE- KVAALKE- KVAALKE-KVAALKE (SEQ ID NO:24); i C-terminus.
[0290] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART A je is (SEQ ID NO:268):
2. DART B
[0291] DART B je identičan sa DART A, osim što prvi i treći polipeptidni lanac DART B obuhvata VL domen hLAG-3 mAb 1 VL3 (SEQ ID NO:53), koji sadrži supstituciju amino kiseline u CDRL1. Dakle, prvi i treći polipeptidni lanci DART B sadrže, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa: N-terminus; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL3) (SEQ ID NO:53); intervenišući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEQ ID NO:147); intervenišući linker peptid Linker 2: GGCGGG (SEQ ID NO:15)); domen za promociju heterodimera (E-zavojnica) koji sadrži cistein (EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEQ ID NO:23)); stabilizovani IgG4 pregibni region (SEQ ID NO:13); varijantu IgG4 CH2-CH3 domena koja sadrži supstitucije M252Y/S254T/T256E i bez C-terminalnog ostatka (SEQ ID NO:259); i C-terminus.
[0292] Aminokiselinska sekvenca prvog i trećeg polipeptidnog lanca DART B je SEQ ID NO:267, gde X1je G; X2je Y; X3je T; i X4je E.
[0293] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART B je SEQ ID NO:268.
3. DART C
[0294] DART C je identičan sa DART B, osim što prvi i treći polipeptidni lanac DART B sadrži divlji tip IgG4 CH2-CH3 domena kome nedostaje C-terminalni ostatak (SEQ ID NO:4). Dakle, prvi i treći polipeptidni lanci DART C sadrže, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa: N-terminus, VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL3) (SEQ ID NO:53); intervenišući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEQ ID NO:147); intervenišući linker peptid (Linker 2: GGCGGG (SEQ ID NO:15)); domen za promociju heterodimera (E-navojnica) koji sadrži cistein (EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEQ ID NO:23)); stabilizovani IgG4 pregibni region (SEQ ID NO:13); IgG4 CH2-CH3 domen kome nedostaje C-terminalni ostatak (SEQ ID NO:4); i C-terminus.
[0295] Aminokiselinska sekvenca prvog i trećeg polipeptidnog lanca DART C je SEQ ID NO:267, gde X1je G; X2je M; X3je S; i X4je T.
[0296] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART C je SEQ ID NO:268.
4. DART I
[0297] DART I je bispecifično, četvorolančano dijatelo koje sadrži Fc region i ima dva vezujuća mesta specifična za PD-1, dva mesta vezivanja specifična za LAG-3, varijantu IgG4 Fc regiona projektovanu za produženi poluživot i domene za promociju heterodimera sa E/K-zavojnicom koji sadrže cisteinom. Prvi i treći polipeptidni lanci DART I sadrže, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa: N-terminus, VL domen monoklonskog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 6 VL1) (SEQ ID NO:296); intervenišući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEQ ID NO:147); intervenišući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEQ ID NO:15)); domen za promociju heterodimera (E-zavojnica) koji sadrži cistein (EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEQ ID NO:23)); stabilizovani IgG4 pregibni region (SEQ ID NO:13); varijanta IgG4 CH2-CH3 domena koja sadrži supstitucije M252Y/S254T/T256E i nema C-terminalni ostatak (SEQ ID NO:259); i C-terminus.
[0298] Aminokiselinska sekvenca prvog i trećeg polipeptidnog lanca DART I je (SEQ ID NO:290):
[0299] Drugi i četvrti polipeptidni lanci DART I sadrže, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa: N-terminus, VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEQ ID NO:153); intervenišući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da veže LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 6 VH1) (SEQ ID NO:294); intervenišući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEQ ID NO:15)); domen za promociju heterodimera (K-zavojnica) koji sadrži cistein (KVAACKE- KVAALKE- KVAALKE-KVAALKE (SEQ ID NO:24); i C-terminus.
[0300] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART I je (SEQ ID NO:291):
C. Primer dijatela sa četiri lanca Fc regiona koja imaju CL/CH1 domene
[0301] Otkrivena su, ali nije tražena zaštita, za dobijena četiri PD-1 x LAG-3 bispecifična,dijatela sa četiri lanca data kao primer, koja sadrže Fc region koja sadrže CL/CH1 domene označene kao designated "DART D," "DART E," "DART J" i "DART I" su generisani. Struktura ovih dijatela koja sadrže Fc region je detaljno opisana u nastavku.
1. DART D
[0302] DART D je bispecifično, četvorolančano dijatelo koje sadrži Fc region i ima dva vezujuća mesta specifična za PD-1, dva mesta vezivanja specifična za LAG-3, CL/CH1 domene i varijantu IgG4 Fc regiona projektovanu za produženi poluživot. Prvi i treći polipeptidni lanci DART D sadrže, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa : N-terminus; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEQ ID NO:153); intervenišući linker peptid Linker
1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonskog antitela sposobnog da se veže LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEQ ID NO:49); intervenišući linker peptid (Linker 2: LGGGSG (SEQ ID NO:261)); IgG4 CH1 domen (SEQ ID NO:254); stabilizovani IgG4 pregibni region (SEQ ID NO: 13); varijanta IgG4 CH2-CH3 domena koja sadrži supstitucije M252Y/S254T/T256E i bez C-terminalnog ostatka (SEQ ID NO:259); i C-terminus.
[0303] Aminokiselinska sekvenca prvog i trećeg polipeptidnog lanca DART D je (SEQ ID NO:269):
[0304] Drugi i četvrti polipeptidni lanci DART D sadrže, u pravcu N-terminusa ka C-terminusu: N-terminus; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za to LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEQ ID NO:54); intervenišući linker peptid peptide (Linker 1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14));
VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da veže PD-1 ((VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEQ ID NO:147); intervenišući linek peptid (Linker 2: LGGGSG (SEQ ID NO:261)); Kappa CL domen (SEQ ID NO:8); i C-terminus.
[0305] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART D je (SEQ ID NO:270):
2. DART E
[0306] DART E je još jedno bispecifično, četvorolančano dijatelo koje sadrži Fc region i ima dva vezujuća mesta specifična za PD-1, dva mesta vezivanja specifična za LAG-3, CL/CH1 domene i varijantu IgG4 Fc regiona projektovanu za produženi poluživot. Položaj PD-1 i LAG-3 mesta vezivanja DART E je obrnut u poređenju sa DART D.
[0307] Prvi i treći polipeptidni lanci DART E sadrže, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa: N-terminus, VL domen monoklonskog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEQ ID NO:54); intervenišući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da veže PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEQ ID NO:147); intervenišući linker peptid (Linker 2: LGGGSG (SEQ ID NO:261)); IgG4 CH1 (SEQ ID NO:254); stabilizovani IgG4 pregibni region (SEQ ID NO: 13); varijanta IgG4 CH2-CH3 domena koja sadrži supstitucije M252Y/S254T/T256E i bez C-terminalnog ostatka (SEQ ID NO: 259); i C-terminus.
[0308] Aminokiselinska sekvenca prvog i trećeg polipeptidnog lanca DART E je (SEQ ID NO:271):
[0309] Drugi i četvrti polipeptidni lanci DART E sadrže, u pravcu N-terminusa ka C-terminusu: N-terminus; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEQ ID NO:153); intervenišući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonskog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEQ ID NO:49); intervenišući linker peptid (Linker 2: LGGGSG (SEQ ID NO:261)); Kapa CL domen (SEQ ID NO:8), i C-terminus.
[0310] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART E je (SEQ ID NO:272):
3. DART J
[0311] DART J je bispecifično, četvorolančano dijatelo koje sadrži Fc region i ima dva vezujuća mesta specifična za PD-1, dva mesta vezivanja specifična za LAG-3, CL/CH1 domene i varijantu IgG4 Fc regiona projektovanu za produženo poluživot. Prvi i treći polipeptidni lanci DART J sadrže, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa : N-terminus; VL domen monoklonskog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 6 VL1) (SEQ ID NO:296); intervenišući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da veže PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEQ ID NO:147); intervenišući linker peptid (Linker 2: LGGGSG (SEQ ID NO:261)); IgG4 CH1 domen (SEQ ID NO:254); stabilizovani IgG4 pregibni region (SEQ ID NO:13); varijanta IgG4 CH2-CH3 domena koja sadrži supstitucije M252Y/S254T/T256E i bez C-terminalnog ostatka (SEQ ID NO:259); i C-terminus.
[0312] Aminokiselinska sekvenca prvog i trećeg polipeptidnog lanca DART J je (SEQ ID NO:292):
[0313] Drugi i četvrti polipeptidni lanci DART J sadrže, u pravcu N-terminusa ka C-terminalnusu: N-terminus; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za to PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEQ ID NO:153); intervenišući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 6 VH1) (SEQ ID NO:294); intervenišući linker peptid (Linker 2: LGGGSG (SEQ ID NO:261)); Kappa CL (SEQ ID NO:8); i C-terminus.
[0314] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART J je (SEQ ID NO:293):
4. DART I
[0315] DART Ije bispecifično, četvorolančano dijatelo koje sadrži Fc region i ima dva vezujuća mesta specifična za PD-1, dva vezujuća mesta specifična za LAG-3, CL/CH1 domene i varijantu IgG1 Fc regiona projektovanu za redukciju FcgR vezivanje. Prvi i treći polipeptidni lanci DART Isadrže, u pravcu od Terminusa do C-terminusa : N-terminus; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za PD-1 (VLPD-1PD-1 mAb A VL) (SEQ ID NO:65); intervenišući linker peptid (Linker
1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonskog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VHLAG-3LAG-3 mAb A VH1) (SEQ ID NO:39); intervenišući linker peptid peptide (Linker
2: LGGGSG (SEQ ID NO:261)); IgG1 CH1 domen (SEQ ID NO:10); IgG1 pregibni region (SEQ ID NO:32); varijanta IgG1 CH2-CH3 domena koja sadrži supstitucije L234A/L235A i nema C-terminalni ostatak (SEQ ID NO:5); i C-terminus.
[0316] Aminokiselinska sekvenca prvog i trećeg polipeptidnog lanca DART Ije (SEQ ID NO:284):
[0317] Drugi i četvrti polipeptidni lanci DART Isadrže, u pravcu od Terminusa do C-terminusa : N-terminus; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VLLAG-3LAG-3 mAb A VL) (SEQ ID NO:40); intervenišući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da veže PD-1 (VHPD-1PD-1 mAb A VH) (SEQ ID NO:64);
intervenišući linker peptid (Linker 2: LGGGSG (SEQ ID NO:261)); Kappa CL domen (SEQ ID NO:8); i C-terminus.
[0318] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART Ije (SEQ ID NO:285):
D. Primeri petolančanog dijatela koje sadrži Fc region
[0319] Otkrivena su, ali nije tražena zaštita, za dva primera PD-1x LAG-3 bispecifična, petolančana dijatela koja sadrže Fc region, a koja se sastoje od CL/CH1 domena i E/K-zavojnice domena koji promovišu heterodimere označene kao "DART F," i "DART G" su generisani. Struktura ovih dijatela koja sadrže Fc region je detaljno opisana u nastavku.
1. DART F
[0320] DART F je bispecifično, petolančano dijatelo koje sadrži Fc region i ima tri vezujuća mesta specifična za PD-1, jedno vezivno mesto specifično za LAG-3, CL/CH1 domene, varijantu IgG1 Fc sa kvačicama/rupama. Region projektovan za smanjeno vezivanje FciR i produženi polu-život, i domene koji promovišu heterodimer E/K-zavojnice. Prvi polipeptidni lanac DART F sadrži, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa: N-terminus; VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da veže PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEQ ID NO:147); IgG1 CH1 domen (SEQ ID NO:10); IgG1 pregibni region (SEQ ID NO:32); IgG1 CH2-CH3 domen sa rupama koji sadrži supstitucije L234A/L235A/M252Y/S254T/T256E/N434A/H435K i koji nema C-terminalni ostatak (SEQ ID NO:260, gde X1je A, X2je A; X3je Y, X4je T, X5je E, X6je S, X7je A, X8je V, X9je A, X10je K, i X11je odsutan); i C-terminus.
[0321] Aminokiselinska sekvenca prvog polipeptidnog lanca DART F je (SEQ ID NO:273):
[0322] Drugi i peti polipeptidni lanac DART F sadrže, u pravcu N-terminusa ka C-terminalnusu: N-terminus; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEQ ID NO:153), Kapa CL domen (SEQ ID NO:8) i C-terminus .
[0323] Aminokiselinska sekvenca drugog i petog polipeptidnog lanca DART F je (SEQ ID NO:274):
[0324] Treći polipeptidni lanac DART F sadrži, u pravcu od N-terminusa do C-terminausa: N-terminus; VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da veže PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEQ ID NO:147); IgG1 CH1 domen (SEQ ID NO:10); IgG1 pregibni region (SEQ ID NO:32); IgG1 CH2-CH3 domen sa čvorom koji obuhvata supstitucije L234A/L235A/M252Y/S254T/T256E i koji nema C-terminalni ostatak (SEQ ID NO:260, gde X1je A, X2je A; X3je Y, X4je T, X5je E, X6je W, X7je L, X8je Y, X9je N, X10je H, i X11je odsutan); intervenišući linker peptid (GGGSGGGSGGG (SEQ ID NO:262)); VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VLLAG-3 hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEQ ID NO:54); intervenišući vezni peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da veže PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEQ ID NO:147);
intervenišući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEQ ID NO:15)); domen Domain (EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEQ ID NO:21)); koji promoviše heterodimer (E-zavojnica); i C-terminus.
[0325] Aminokiselinska sekvenca trećeg polipeptidnog lanca DART F je (SEQ ID NO:275):
[0326] Četvrti polipeptidni lanac DART F sadrži, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa: N-terminus; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za to PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEQ ID NO:153); intervenišući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonskog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEQ ID NO:49); intervenišući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEQ ID NO:15)); domen koji promoviše heterodimer (K-zavojnica) KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE (SEQ ID NO:22)); i C-terminus.
[0327] Aminokiselinska sekvenca četvrtog polipeptidnog lanca DART F je (SEQ ID NO:276):
2. DART G
[0328] DART G je bispecifično, petolančano dijatelo koje sadrži Fc region i ima dva vezujuća mesta specifična za PD-1, dva vezujuća mesta specifična za LAG-3, CL/CH1 domene, varijantu IgG1 Fc sa čvorom/otvorima. Region projektovan za smanjeno vezivanje FcyR i produženi polu-život, i domene koji promovišu heterodimer E/K-zavojnicu. Prvi polipeptidni lanac DART G sadrži, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa: N-terminus; VH domen monoklonskog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEQ ID NO:49); IgG1 CH1 domen (SEQ ID NO:10); IgG1 pregibni region (SEQ ID NO:32); IgG1 CH2-CH3 domen saotvorima koji sadrži supstitucije L234A/L235A/M252Y/S254T/T256E/N434A/H435K i koji nema C-terminalni ostatak (SEQ ID NO:260, gde je X1je A, X2je A; X3je Y, X4je T, X5je E, X6je S, X7je A, X8je V, X9je A, X10je K, i X1je odsutan); i C-terminus.
[0329] Aminokiselinska sekvenca prvog polipeptidnog lanca DART G je (SEQ ID NO:277):
[0330] Drugi i peti polipeptidni lanci DART G sadrže, u pravcu N-terminusa ka C-terminalnusu: N-terminus; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEQ ID NO:54), Kapa CL domen (SEQ ID NO:8), i C-terminus.
[0331] Aminokiselinska sekvenca drugog i petog polipeptidnog lanca DART G je (SEQ ID NO:278):
[0332] Treći polipeptidni lanac DART G sadrži, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa: N-terminus; VH domen monoklonskog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEQ ID NO:49); IgG1 CH1 domen (SEQ ID NO:10); IgG1 pregibni region (SEQ ID NO:32); IgG1 CH2-CH3 domen sa dugmetom koji sadrži supstitucije L234A/L235A/M252Y/S254T/T256E i koji nema C-terminalni ostatak (SEQ ID NO:260, gde X1je A, X2je A; X3je Y, X4je T, X5je E, X6je W, X7je L, X8je Y, X9je N, X10je H, i X11je odsutan); intervenišući linker peptid (GGGSGGGSGGG (SEQ ID NO:262)); VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEQ ID NO:153); intervenišući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da veže PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEQ ID NO:147);
intervenišući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEQ ID NO:15)); domen koji promoviše heterodimer (E-zavojnica) (EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEQ ID NO:21));
[0333] Aminokiselinska sekvenca trećeg polipeptidnog lanca DART G je (SEQ ID NO:279):
[0334] Četvrti polipeptidni lanac DART G sadrži, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa: N-terminus; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEQ ID NO:153); intervenišući vezni peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da veže PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEQ ID NO:147);
intervenišući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEQ ID NO:15)); domen koji promoviše heterodimer (K-zavojnica) (KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE (SEQ ID NO:22); i C-terminus.
[0335] Aminokiselinska sekvenca četvrtog polipeptidnog lanca DART G je (SEQ ID NO:280):
E. Primer trolačanog dijatela koje sadrži Fc regiona sa E/K-zavojnicama
[0336] Otkrivena su, ali nije tražena zaštita, za PD-1 Ks LAG-3 bispecifična, trolančana dijateza koja sadrži Fc region i koja sadrži domene koji promovišu heterodimere sa E/K-zavojnicom. Generisano je kao primer PD-1 x LAG-3 bispecifično, trolančano dijatelo koje sadrži Fc region i domene koji promovišu heterodimere sa E/K-zavojnicom označeno kao "DART H". Struktura dijatela koji sadrže Fc region je detaljno opisana u nastavku.
[0337] DART H je bispecifično, trolančano, dijatelo koje sadrži Fc region, koje ima jedno mesto vezivanja specifično za PD-1, jedno mesto vezivanja specifično za LAG-3, varijantu IgG1 Fc region sa čvorom/otvorima, projektovan za smanjeno vezivanje FcyR i domene koji promovišu heterodimere sa E/K-zavojnicom
[0338] Prvi polipeptidni lanac DART H sadrži, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa: N-terminus; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEQ ID NO:153); intervenišući vezni peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonskog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEQ ID NO:49); intervenišući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEQ ID NO:15)); domen koji promoviše heterodimer (E-zavojnica) ((EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEQ ID NO:21));
intervenišući linker (Spejser-Linker 3: GGGDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:263)); IgG1 CH2-CH3 domen sa čvorom koji sadrži supstitucije L234A/L235A i ima C-terminalni lizinski ostatak ((SEQ ID NO:6); i C-terminus.
[0339] Aminokiselinska sekvenca prvog polipeptidnog lanca DART H je (SEQ ID NO:281):
[0340] Drugi polipeptidni lanac DART H sadrži, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa: N-terminus; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEQ ID NO:54); intervenišući linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEQ ID NO:14)); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEQ ID NO:147); intervenišući linker peptid koji sadrži cistein (Linker 2: GGCGGG (SEQ ID NO:15)); koji promoviše heterodimer (K-zavojnica) (KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE (SEQ ID NO:22)); i C-terminus.
[0341] Aminokiselinska sekvenca drugog polipeptidnog lanca DART H je (SEQ ID NO:282):
[0342] treći polipeptidni lanac STRELICE H sastoji se, u smeru od N-terminusa do C-terminalnusa: N-teminus, pregibnog regiona (DKTHTCPPCP (SEQ ID NO:31); IgG1 CH2-CH3 domena koji nosi otvor koji sadrži supstitucije L234A/L235A i koji ima C-terminalni lizinski ostatak (SEQ ID NO:7); i C-terminusa.
[0343] Aminokiselinska sekvenca trećeg polipeptidnog lanca DART H je (SEQ ID NO:283):
F. Primer bispecifičnog antitela
[0344] Otkriveno je, ali nije zatražena ya[tita, za generisano PD-1 Ks LAG-3 četvorolančano bispecifično antitelo označeno kao "BSAB A", dato kao primer. Struktura ovog bispecifičnog antitela je detaljno opisana u nastavku.
[0345] BSAB A je bispecifično antitelo koje ima jedno mesto vezivanja specifično za PD-1, jedno mesto vezivanja specifično za LAG-3, varijantu IgG1 Fc regiona dizajniranu da smanji vezivanje FcyR i da podstakne kompleksiranje između dva različita polipeptida teškog lanca ( videti, npr., WO 2011/143545).
[0346] Prvi polipeptidni lanac BSAB A sadrži, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa: N-terminus; VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za to PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEQ ID NO:147); IgG1 CH1 domen (SEQ ID NO:10); varijantni IgG1 pregibni region koji sadrži supstitucije D221E/P228E (numerisane prema EU indeksu kao u Kabatu i podvučene u SEQ ID NO:286, u daljem tekstu); varijanta IgG1 CH2-CH3 domena koja sadrži supstitucije L234A/L235A/L368E (podvučene u SEQ ID NO:286, ispod) i bez C-terminalnog ostatka; i C-terminus.
[0347] Aminokiselinska sekvenca prvog polipeptidnog lanca BSAB A je (SEQ ID NO:286):
[0348] Drugi polipeptidni lanac BSAB-a sadrži, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa: N-terminus; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEQ ID NO:153); Kapa CL domen (SEQ ID NO:8), i C-terminus.
[0349] Aminokiselinska sekvenca drugog polipeptidnog lanca BSA je (SEQ ID NO:287):
[0350] Treći polipeptidni lanac BSAB A sadrži, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa: N-terminus; VH domen monoklonskog antitela sposobnog da se veže za to LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEQ ID NO:49); IgG1 CH1 domen (SEQ ID NO:10); varijantni IgG1 pregibni region koji sadrži supstitucije D221R/P228R (podvučeno u SEQ ID NO:288, u daljem tekstu); varijanta IgG1 CH2-CH3 domena koja sadrži supstitucije L234A/L235A/L409R (podvučene u SEQ ID NO:288, u daljem tekstu) i bez C-terminalnog ostatka; i C-terminus.
[0351] Aminokiselinska sekvenca trećeg polipeptidnog lanca BSAB A je (SEQ ID NO:288):
[0352] Četvrti polipeptidni lanac BSAB A sadrži, u pravcu od N-terminusa do C-terminusa: N-terminus; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za to LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEQ ID NO:54); Kapa CL domen (SEQ ID NO:8), i C-terminus.
[0353] Aminokiselinska sekvenca četvrtog polipeptidnog lanca BSAB A je (SEQ ID NO:289):
IX. Referentna Antitela
A. Referentna Anti-Humana PD-1 antitela
[0354] Da bi se procenili i okarakterisali novi anti-humani PD-1-vezujući molekuli koji su ovde otkriveni, korišćena su sledeća referentna antitela: nivolumab (takođe poznat kao 5C4, BMS-936558, ONO-4538, MDX-1106 i na tržištu poznat kao OPDIVO® od strane Bristol-Myers Squibb), humano IgG4 antitelo označeno ovde kao " PD-1 mAb A;" ;" i pembrolizumab (ranije poznat kao lambrolizumab, takođe poznat kao MK-3475, SCH-900475i prodavan kao KEYTRUDA® od strane Merck) humanizovano IgG4 antitelo koje je ovde označeno kao " PD-1 mAb B."."
1. Nivolumab („PD-1 mAb A“)
[0355] Aminokiselinska sekvenca varijabilnog domena teškog lanca PD-1 mAb A ima sekvencu aminokiselna (SEQ ID NO:64) (podvučeni su ostaci CDRH):
[0356] Aminokiselinska sekvenca varijabilnog domena lakog lanca PD-1 mAb A ima sekvencu aminokiselna (SEQ ID NO:65) (podvučeni su ostaci CDRL):
2. Pembrolizumab ("PD-1 mAb B")
[0357] Aminokiselinska sekvenca varijabilnog domena teškog lanca PD-1 mAb ima sekvencu aminokiselna (SEQ ID NO:66) (podvučeni su ostaci CDRH):
[0358] Aminokiselinska sekvenca varijabilnog domena lakog lanca od PD-1 mAb B ima sekvencu aminokiselna (SEQ ID NO:67) (podvučeni su ostaci CDRL):
X. Postupci dobijanja
[0359] Antihumani PD-1 polipeptid i drugi PD-1 agonisti, antagonisti i modulatori mogu se dobiti od polinukleotida i/ili sekvenci anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15 poznatim metodama u stanju tehnike, na primer, sintetički ili rekombinantno. Jedan metod za proizvodnju takvih peptidnih agonista, antagonista i modulatora uključuje hemijsku sintezu polipeptida, nakon čega sledi tretman pod odgovarajućim uslovima oksidacije da bi se dobila nativna konformacija, to jest, tačne disulfidne veze. Ovo se može postići korišćenjem metodologija koje su dobro poznate stručnjacima (videti, npr.., Kelley, R. F. et al. (1990) In: GENETIC ENGINEERING PRINCIPLES AND METHODS, Setlow, J.K. Ed., Plenum Press, N.Y., vol.12, pp 1-19; Stewart, J.M et al. (1984) SOLID PHASE PEPTIDE SYNTHESIS, Pierce Chemical Co., Rockford, IL; videti takođe US patentne br.4,105,603; 3,972,859; 3,842,067; i 3,862,925).
[0360] Polipeptidi se mogu prikladno dobiti primenom sinteze peptida na čvrstoj fazi (Merrifield, B. (1986) "Solid Phase Synthesis," Science 232(4748):341-347; Houghten, R.A. (1985) "General Method For The Rapid Solid-Phase Synthesis Of Large Numbers Of Peptides: Specificity Of Antigen-Antibody Interaction At The Level Of Individual Amino Acids," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 82(15):5131-5135; Ganesan, A. (2006) "Solid Phase Synthesis In The Twenty-First Century," Mini Rev. Med. Chem.
6(1):3-10).
[0361] U još jednoj alternativi, potpuno ljudska (humana) antitela koja imaju jedan ili više CDRs d PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, or PD-1 mAb 15, ili koji su u kompeticiji sa PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15, za vezivanje za humani PD-1 ili njegov rastvoran oblik može se dobiti korišćenjem komercijalno dostupnih miševa koji su genetički modigikovani da eksprimiraju specifične humane imunoglobulinske proteine. Transgene životinje koje su dizajnirane da proizvode poželjnije (npr. potpuno humana antitela) ili snažniji imuni odgovor mogu se takođe koristiti za stvaranje humanizovanih ili humanih antitela. Primeri takve tehnologije su XENOMOUSE<™>(Abgenix, Inc., Fremont, CA) i HUMAB-MOUSE<®>i TC MOUSE<™>(oba od Medarex, Inc., Princeton, NJ).
[0362] Alternativno, antitela se mogu napraviti rekombinantno i eksprimovati korišćenjem bilo kog postupka poznatog u tehnici. Antitela se mogu napraviti rekombinantno tako što se prvo izoluju antitela napravljena od domaćina životinje, pri čemu se dobije sekvenca gena i koristi se sekvenca gena za rekombinantnu ekspresiju antitela u ćelijama domaćina (npr., CHO ćelije). Drugi metod koji se može primeniti je ekspresija sekvence antitela u biljkama (npr. duvan) ili transgenom mleku.
Pogodne metode za ekspresiju antitela rekombinantno u biljkama ili mleku su otkrivene (videti, npr, Peeters et al. (2001) "Production Of Antibodies And Antibody Fragments In Plants," Vaccine 19:2756; Lonberg, N. et al. (1995) "Human Antibodies From Transgenic Mice," Int. Rev. Immunol 13:65-93; and Pollock et al. (1999) "Transgenic Milk As A Method For The Production Of Recombinant Antibodies," J. Immunol Methods 231:147-157). Pogodni postupci za dobijanje derivata antitela, npr. humanizovanih, jednolančanih, itd. su poznati u tehnici. U drugoj alternativi, antitela mogu biti napravljena rekombinantno tehnologijom displeja faga (vidi, npr., U.S. Patent br.5,565,332;
5,580,717; 5,733, 743; 6,265,150; i Winter, G. et al. (1994) "Making Antibodies By Phage Display Technology," Annu. Rev. Immunol.12,433-455).
[0363] Antitela ili protein od interesa mogu biti podvrgnuti sekvenciranju pomoću Edmanove degradacije, što je dobro poznato stručnjacima u ovoj oblasti. Informacije o peptidima dobijene iz masene spektrometrije ili Edmanove degradacije mogu se koristiti za dizajniranje probi ili prajmera koji se koriste za kloniranje proteina od interesa.
[0364] Alternativni metod kloniranja proteina od interesa je „paniranje“ korišćenjem prečišćenog PD-1 ili njegovih delova za ćelije koje eksprimiraju antitelo ili protein od interesa koji poseduju jedan ili više CDR od PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, or PD-1 mAb 15, ili antitelo koje je u kompeticiji sa PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15, za vezivanje humanog PD-1. Procedura "paniranja" se može sprovesti dobijanjem biblioteke cDNK iz tkiva ili ćelija koje eksprimiraju PD-1, prekomernom ekspresijom cDNK u drugom tipu ćelije i skriningom transfektovanih ćelija drugog tipa ćelije za specifično vezivanje za PD-1 u prisustvu ili odsustvu PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15. Detaljni opisi metoda koje se koriste u kloniranju gena sisara koji kodiraju proteine na ćelijskoj površini „paniranjem“ mogu se naći u tehnici (vidi, npr. Aruffo, A. et al. (1987) "Molecular Cloning Of A CD28 cDNA By A High-Efficiency COS Cell Expression System," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 84:8573-8577 and Stephan, J. etal. (1999) "Selective Cloning Of Cell Surface Proteins Involved In Organ Development: Epithelial Glycoprotein Is Involved In Normal Epithelial Differentiation," Endocrinol.140:5841-5854).
[0365] Vektori koji sadrže polinukleotide od interesa mogu se uvesti u ćeliju domaćina bilo kojim od brojnih odgovarajućih sredstava, uključujući elektroporaciju, transfekciju upotrebom kalcijum hlorida, rubidijum hlorida, kalcijum fosfata, DEAE-dekstrana ili drugih supstanci; bombardovanje mikroprojektilom; lipofekcija; i infekcija (npr. gde je vektor infektivni agens kao što je virus vakcinije). Izbor uvođenja vektora ili polinukleotida često zavisi od karakteristika ćelije domaćina.
[0366] Bilo koja ćelija domaćin sposobna za prekomernu ekspresiju heterolognih DNK može se koristiti u svrhu izolovanja gena koji kodiraju antitelo, polipeptid ili protein od interesa.
Neograničavajući primeri pogodnih ćelija domaćina sisara uključuju, ali nisu ograničeni na COS, HeLa i CHO ćelije. Poželjno je da ćelije domaćina eksprimiraju cDNK na nivou od oko 5 puta više, poželjnije 10 puta više, još poželjnije 20 puta veće od nivoa odgovarajućeg endogenog antitela ili proteina od interesa, ako je prisutan, u domaćinu ćelije. Skrining ćelija domaćina za specifično vezivanje za PD-1 vrši se imunotestom ili FACS. Može se identifikovati ćelija koja prekomerno eksprimira antitelo ili protein od interesa.
[0367] Polipeptidi ovog pronalaska, kao što su definisani i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, mogu se dobiti postupcima poznatim u tehnici. Polipeptidi se mogu proizvesti proteolitičkom ili drugom degradacijom antitela, rekombinantnim metodama (tj. pojedinačnim ili fuzionim polipeptidima) kao što je gore opisano ili hemijskom sintezom. Polipeptidi antitela, posebno kraći polipeptidi do oko 50 amino kiselina, pogodno se prave hemijskom sintezom. Metode hemijske sinteze su poznate u tehnici i komercijalno su dostupne. Na primer, anti-humani PD-1 polipeptid može da se proizvede automatskim sintetizatorom polipeptida koji koristi metoda na čvrstoj fazi.
[0368] Otkrivene su varijante, ali nije tražena zaštita za PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15 antitela i njihove polipeptidne fragmente koji se vezuju za PD-1, uključujući funkcionalno ekvivalentna antitela i fuzione polipeptide koji ne utiču značajno na svojstva takvih molekula kao i varijante koje imaju pojačanu ili smanjenu aktivnost. Modifikacija polipeptida je rutinska praksa u tehnici i ne mora ovse da bude detaljno opisana. Primeri modifikovanih polipeptida obuhvataju polipeptide sa konzervativnim supstitucijama aminokiselinskih ostataka, jednu ili više delecija ili dodavanja amino kiselina koje ne menjaju značajno štetno funkcionalnu aktivnost, ili upotrebu hemijskih analoga. Aminokiselinski ostaci koji se mogu konzervativno zameniti jedni drugima uključuju, ali nisu ograničeni na: glicin/alanin; serin/treonin; valin/izoleucin/leucin; asparagin/glutamin; asparaginska kiselina/glutaminska kiselina; lizin/arginin; i fenilalanin/tirozin. Ovi polipeptidi takođe uključuju glikozilovane i ne-glikozilovane polipeptide, kao i polipeptide sa drugim post-translacionim modifikacijama, kao što je, na primer, glikozilacija sa različitim šećerima, acetilacija i fosforilacija. Poželjno, aminokiselinske supstitucije bi bile konzervativne, tj. supstituisana amino kiselina bi imala slična hemijska svojstva kao originalna amino kiselina. Takve konzervativne supstitucije su poznate u tehnici, a primeri su dati gore. Modifikacije aminokiselina mogu da variraju od promene ili modifikacije jedne ili više aminokiselina do potpunog redizajniranja regiona, kao što je varijabilni domen. Promene u varijabilnom domenu mogu da promene afinitet i/ili specifičnost vezivanja. Druge metode modifikacije uključuju korišćenje tehnika kuplovanja poznatih u tehnici, uključujući, ali ne ograničavajući se na, enzimske metode, oksidativnu supstituciju i helaciju. Modifikacije se mogu koristiti, na primer, za pričvršćivanje oznaka za imunotest, kao što je vezivanje radioaktivnih delova za radioimuni test. Modifikovani polipeptidi se prave primenom poznatih procedura u struci i mogu se pregledati korišćenjem standardnih testova poznatih u tehnici.
[0369] Otkriveni su, ali nije tražena zašstita, za fuzione proteine koji sadrže jedan ili više polipeptida ili PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15 antitela. U jednom slučaju, obezbeđen je fuzioni polipeptid koji sadrži laki lanac, teški lanac ili i laki i teški lanac. U drugom slučaju, fuzioni polipeptid sadrži heterologni imunoglobulinski konstantni region. U drugom slučaju, fuzioni polipeptid sadrži promenljivi domen lakog lanca i promenljivi domen teškog lanca antitela proizvedenog iz javno deponovanog hibridoma. Za potrebe ovog otkrića, fuzioni protein antitela sadrži jedan ili više polipeptidnih domena koji se specifično vezuju za PD-1 i drugu amino kiselinsku sekvencu za koju nije vezan u prirodnom molekulu, na primer, heterolognu sekvencu ili homolognu sekvencu iz drugi region.
XI. Upotreba PD-1-vezujućih molekula prema predmetnom pronalasku
A. Terapeutske upotrebe
[0370] Kao što je prethodno diskutovano, PD-1 igra važnu ulogu u negativnoj regulaciji proliferacije, funkcije i homeostaze T-ćelija. Molekuli koji se vezuju za PD-1 prema ovom pronalasku, kao što su definisani i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, imaju sposobnost da inhibiraju funkciju PD-1, i na taj način preokrenu PD-1 posredovanu inhibiciju imunog sistema. PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, i PD-1 mAb 15, njihovi humanizovani derivati i molekuli koji sadrže njihove PD-1 vezujuće fragmente (npr., bispecifična antitela). dijabodije (uključujući, ali ne ograničavajući se na, DART-A, DART-B, DART-C, DART-D, DART-E, DART-F, DART-G, DART-H, DART-I, i DART-J), itd.), ili koji se takmiče za vezivanje sa takvim antitelima, mogu se koristiti za blokiranje inhibicije imunog sistema posredovane PD-1, i na taj način promovisati aktivaciju imunog sistema.
[0371] Bispecifični PD-1-vezujući molekuli koji su otkriveni, ali se ovde ne traži zaštita, a koji se vezuju za PD-1 i drugi molekul uključen u regulisanje imunološke kontrolne tačke prisutne na površini ćelije (npr. LAG-3) povećavaju imuni sistem blokiranjem imunog sistema. inhibicija sistema posredovana PD-1 i takvim molekulima imunih kontrolnih tačaka. Prema tome, takvi PD-1 vezjueći molekuli su korisni za povećanje imunog odgovora (npr. imunskog odgovora posredovanog T-ćelijama) subjekta. Posebno, takvi PD-1-vezujući molekuli mogu se koristiti za lečenje bilo koje bolesti ili stanja povezanog sa nepoželjno potisnutim imunološkim sistemom, uključujući rak i bolesti koje su povezane sa prisustvom patogena (npr. bakterija, gljivica, virus ili infekcija protozoama).
[0372] Karcinomi koji se mogu lečiti takvim PD-1-vezujućim molekulima iz ovog pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, uključuju karcinome koje karakteriše prisustvo ćelije raka izabrane iz grupe koji se sastoji od ćelije: tumora nadbubrežne žlezde, raka povezanog sa AIDS-om, sarkoma mekog alveola, astrocitnog tumora, raka bešike, raka kostiju, raka mozga i kičmene moždine, metastatskog tumora mozga, raka dojke, tumori karotidnog tela, rak grlića materice, hondrosarkoma, hordoma, hromofobnog karcinoma bubrežnih ćelija, karcinoma bistrih ćelija, raka debelog creva, kolorektalnog karcinoma, kožnog benignog fibroznog histiocitoma, dezmoplastičnog tumora malih okruglih ćelija, Juingovog tumora, ekstraskeletnog miksoidnog hondrosarkoma, fibrogeneze osteogenesis imperfecta, fibrozne displazije kosti, raka žučne kese ili žučnih kanala, rak aželuca, gestacijske trofoblastne bolesti, tumora polnih ćelija, karcinoma glave i vrata, hepatocelularniog karcinoma, tumora ćelija ostrvaca, Kapošijevog sarkoma, raka bubrega, leukemije, lipoma/benignog lipomatoznog tumora, liposarkoma/malignog lipomatoznog tumora, raka jetre, limfoma, raka pluća, meduloblastoma, melanoma, meningioma, višestruke endokrine neoplazije, multiplog mijeloma, mijelodisplastičnog sindroma, neuroblastoma, neuroendokrinog tumora, raka jajnika, raka pankreasa, papilarnog karcinoma štitne žlezde, tumora paratiroidne žlezde, pedijatrijskog karcinoma, tumora perifernog nervnog omotača, feokromocitoma, tumora hipofize, raka prostate, melanoma posteriorne uvee, retkog hematološkog poremećaja, metastatskog raka bubrega, rabdoidnog tumora, rabdomisarkoma, sarkoma, raka kože, sarkoma mekog tkiva, raka skvamoznih ćelija, raka želuca , sinovijalnog sarkoma, raka testisa, karcinoma timusa, timoma, metastatskogi karcinoma štitne žlezde i raka materice.
[0373] Posebno, PD-1-vezujući molekuli predmetnog pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, mogu se koristiti u lečenju kolorektalnog karcinoma, hepatocelularnog karcinoma, glioma, raka bubrega, raka dojke, multiplog mijeloma, raka bešike, neuroblastoma; sarkoma, ne-Hodžkinovog limfoma, nesitnoćelijskog raka pluća, raka jajnika, raka pankreasa i raka debelog creva.
[0374] Bolesti povezane sa patogenom koje se mogu lečiti takvim PD-1-vezujućim molekulima uključuju hronične virusne, bakterijske, gljivične i parazitske infekcije. Hronične infekcije koje se mogu lečiti PD-1-vezujućim molekulima uključuju Epstein Barr-ov virus, virus hepatitisa A (HAV); virus hepatitisa B (HBV); virus hepatitisa C (HCV); herpes viruse (npr. HSV-1, HSV-2, HHV-6, CMV), virus humane imunodeficijencije (HIV), virus vezikularnog stomatitisa (VSV), Bacilli, Citrobacter, Cholera, Diphtheria, Enterobacter, Gonococci, Helicobacter pylori, Klebsiella, Legionella,
Meningococci, mycobacteria, Pseudomonas, Pneumonococci, rickettsia bacteria, Salmonella, Serratia, Staphylococci, Streptococci, Tetanus, Aspergillus (fumigatus, niger, etc.), Blastomyces dermatitidis, Candida (albicans, krusei, glabrata, tropicalis, itd.), Cryptococcus neoformans,
Genus Mucorales (mucor, absidia, rizopus), Sporothrix schenkii, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis, Histoplasma capsulatum, Leptospirosis, Borrelia burgdorferi, helminti paraziti (ankilostoma, trakavice, metilji, pljosnati crvi (npr. Schistosomia), Giardia lambia, trichinella, Dientamoeba Fragilis, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, i Leishmania donovani.
[0375] PD-1-vezujući molekuli pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, mogu se kombinovati sa drugim agensima protiv raka, posebno, molekulima koji specifično vezuju antigen raka (npr. antitela, dijatela). Terapije protiv raka koje se mogu kombinovati sa PD-1-vezujućim molekulima pronalaska uključuju molekule koji specifično vezuju još jedan antigen raka uključujući:
19.9 kao što je pronađeno kod raka debelog creva, mucine raka želuca; 4,2; A33 (antigen kolorektalnog karcinoma; Almqvist, Y.2006, Nucl Med Biol. Nov;33(8):991-998); ADAM-9 (US publikacije patenta br.2006/0172350; PCT publikacije. WO 06/084075); AH6 kao što je nađeno kod raka želuca; ALCAM (PCT Publikacija br. WO 03/093443); APO-1 (maligni humani limfocitni antigen) (Trauth et al. (1989) "Monoclonal Antibody Mediated Tumor Regression By Induction Of Apoptosis, " Science 245:301-304); B1 (Egloff, A.M. et al.2006, Cancer Res.66(1):6-9); B7-H3 (Collins, M. et al. (2005) "The B7 Family Of Immune-Regulatory Ligands," Genome Biol.6:223.1-223.7). Chapoval, A. et al. (2001) "B7-H3: A Costimulatory Molecule For T Cell Activation and IFN-γ Production," Nature Immunol.2:269-274; Sun, M. et al. (2002) "Characterization of Mouse and Human B7-H3 Genes," J. Immunol.168:6294-6297); BAGE (Bodey, B.2002 Expert Opin Biol Ther. 2(6):577-84); beta-katenin (Prange W. et al.2003 J Pathol.201(2):250-9); krvna grupa ALe<b>/Le<y>kao što se nalazi u adenokarcinomu debelog creva; antigen Burkitovog limfoma-38.13, C14 kao što je nađeno u adenokarcinomu debelog creva; CA125 (antigen karcinoma jajnika) (Bast, R.C. Jr. et al. 2005 Int J Gynecol Cancer 15 Suppl 3:274-81 ; Yu et al. (1991) "Coexpression Of Different Antigenic Markers On Moieties That Bear CA 125 Determinants, " Cancer Res.51(2):468-475); Karboksipeptidaza M (US Patentna Publikacija br.2006/0166291); CDS (Calin, G.A. et al.2006 Semin Oncol.33(2):167-73; CD19 (Ghetie et al. (1994) "Anti-CD19 Inhibits The Growth Of Human B-Cell Tumor Lines In Vitro And Of Daudi Cells In SCID Mice By Inducing Cell Cycle Arrest, " Blood 83:1329-1336; Troussard, X. et al.1998 Hematol Cell Ther.40(4):139-48); CD20 (Reff et al. (1994) "Depletion Of B Cells In Vivo By A Chimeric Mouse Human Monoclonal Antibody To CD20, " Blood 83:435-445; Thomas, D.A. et al.2006 Hematol Oncol Clin North Am.20(5):1125-36); CD22 (Kreitman, R.J.2006 AAPS J.18;8(3):E532-51); CD23 (Rosati, S. et al.2005 Curr Top Microbiol Immunol.
5;294:91-107); CD25 (Troussard, X. et al.1998 Hematol Cell Ther.40(4):139-48); CD27 (Bataille, R. 2006 Haematologica 91(9):1234-40); CD28 (Bataille, R.2006 Haematologica 91(9):1234-40); CD33 (Sgouros et al. (1993) "Modeling And Dosimetry Of Monoclonal Antibody M195 (Anti-CD33) In Acute Myelogenous Leukemia, " J. Nucl. Med.34:422-430); CD36 (Ge, Y.2005 Lab Hematol.
11(1):31-7); CD40/CD154 (Messmer, D. et al.2005 Ann N Y Acad Sci.1062:51-60); CD45 (Jurcic, J.G.
2005 Curr Oncol Rep.7(5):339-46); CD56 (Bataille, R.2006 Haematologica 91(9):1234-40); CD46 (US Patent No.7,148,038; PCT Publikacija br. WO 03/032814); CD52 (Eketorp, S.S. et al. (2014) "Alemtuzumab (Anti-CD52 Monoclonal Antibody) As Single-Agent Therapy In Patients With Relapsed/Refractory Chronic Lymphocytic Leukaemia (CLL)-A Single Region Experience On Consecutive Patients," Ann Hematol.93(10):1725-1733; Suresh, T. et al. (2014) "New Antibody Approaches To Lymphoma Therapy," J. Hematol. Oncol.7:58; Hoelzer, D. (2013) "Targeted Therapy With Monoclonal Antibodies In Acute Lymphoblastic Leukemia," Curr. Opin. Oncol.25(6):701-706); CD56 (Bataille, R.2006 Haematologica 91(9):1234-40); CD79a/CD79b (Troussard, X. et al.1998 Hematol Cell Ther.40(4):139-48; Chu, P.G. et al.2001 Appl Immunohistochem Mol Morphol.9(2):97-106); CD103 (Troussard, X. et al.1998 Hematol Cell Ther.40(4):139-48); CD317 (Kawai, S. et al. (2008) "Interferon-A Enhances CD317 Expression And The Antitumor Activity Of Anti-CD317 Monoclonal Antibody In Renal Cell Carcinoma Xenograft Models," Cancer Science 99(12):2461-2466; Wang, W. et al. (2009) HM1,24 (CD317) Is A Novel Target Against Lung Cancer For Immunotherapy Using Anti-HM].24 Antibody," Cancer Immunology, Immunotherapy 58(6):967-976; Wang, W. et al. (2009) "Chimeric And Humanized Anti-HM1,24 Antibodies Mediate Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity Against Lung Cancer Cells. Lung Cancer," 63(1):23-31; Sayeed, A. et al. (2013) "Aberrant Regulation Of The BST2 (Tetherin) Promoter Enhances Cell Proliferation And Apoptosis Evasion In High Grade Breast Cancer Cells," PLoS ONE 8(6)e67191, pp.1-10); CDK4 (Lee, Y.M. et al.2006 Cell Cycle 5(18):2110-4); CEA (carcinoembryonic antigen; Foon etal. (1995) "Immune Response To The Carcinoembryonic Antigen In Patients Treated With An Anti-Idiotype Antibody Vaccine, " J. Clin. Invest.96(1):334-42); Mathelin, C.2006 Gynecol Obstet Fertil.34(7-8):638-46; Tellez-Avila, F.I. et al.
2005 Rev Invest Clin.57(6):814-9); CEACAM9/CEACAM6 (Zheng, C. et al. (2011) "A Novel Anti-CEACAMS Monoclonal Antibody, CC4, Suppresses Colorectal Tumor Growth and Enhances NK Cells Mediated Tumor Immunity," PLoS One 6(6):e21146, pp.1-11); CO17-1A (Ragnhammar et al. (1993) "Effect Of Monoclonal Antibody 17-1A And GM-CSF In Patients With Advanced Colorectal Carcinoma - Long-Lasting, Complete Remissions Can Be Induced, " Int. J. Cancer 53:751-758); CO-43 (krvan grupa Le<b>); CO-514 (krvna grupa Le<a>) kao što je nađeno u adenocarkarvinomu; CTA-1; CTLA-4 (Peggs, K.S. et al.2006 Curr Opin Immunol.18(2):206-13); Cytokeratin 8 (PCT Publikacija br. WO 03/024191); D1,1; D156-22; DR5 (Abdulghani, J. et al. (2010) "TRAIL Receptor Signaling And Therapeutics," Expert Opin. Ther. Targets 14(10):1091-1108; Andera, L. (2009) "Signaling Activated By The Death Receptors Of The TNFR Family," Biomed. Pap. Med. Fac. Univ. Palacky Olomouc Czech. Repub.153(3):173-180; Carlo-Stella, C. et al. (2007) "Targeting TRAIL Agonistic Receptors for Cancer Therapy," Clin, Cancer 13(8):2313-2317; Chaudhari, B.R. et al. (2006) "Following the TRAIL to Apoptosis," Immunologic Res.35(3):249-262); Ei series (blood group B) kao što je nađeno u pancreatic cancer; EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor; Adenis, A. et al.2003 Bull Cancer.90 Spec No:S228-32); Efrinski receptori ( i posebno EphA2 (US Patent No.7,569,672; PCT Publikacija br. WO 06/084226); Erb (ErbB1; ErbB3; ErbB4; Zhou, H. et al.2002 Oncogene 21(57):8732-8740; Rimon, E. et al.2004 Int J Oncol.24(5):1325-1338); GAGE (GAGE-1; GAGE-2; Akcakanat, A. et al.2006 Int J Cancer.118(1):123-128); GD2/GD3/GM2 (Livingston, P.O. et al.2005 Cancer Immunol Immunother.
54(10):1018-1025); gangliozid GD2 (GD2; Saleh et al. (1993) "Generation Of A Human Anti-Idiotypic Antibody That Mimics The GD2 Antigen, " J.Immunol., 151, 3390-3398); ganglioside
GD3 (GD3; Shitara et al. (1993) "A Mouse/Human Chimeric Anti-(Ganglioside GD3) Antibody With Enhanced Antitumor Activities, " Cancer Immunol. Immunother.36:373-380); ganglioside
GM2 (GM2; Livingston et al. (1994) "Improved Survival In Stage III Melanoma Patients With GM2 Antibodies: A Randomized Trial Of Adjuvant Vaccination With GM2 Ganglioside, " J. Clin. Oncol. 12:1036-1044); gangliozid GM3 (GM3; Hoon et al. (1993) "Molecular Cloning Of A Human Monoclonal Antibody Reactive To Ganglioside GM3 Antigen On Human Cancers, " Cancer Res.53:5244-5250); GICA 19-9 (Herlyn et al. (1982) "Monoclonal Antibody Detection Of A Circulating Tumor-Associated Antigen. I. Presence Of Antigen In Sera Of Patients With Colorectal, Gastric, And Pancreatic Carcinoma, " J. Clin. Immunol.2:135-140); gp100 (Lotem, M. et al.2006 J Immunother. 29(6):616-27); Gp37 (antigen T ćelija leukemje kod čoveka; Bhattacharya-Chatterjee et al. (1988) "Idiotype Vaccines Against Human T Cell Leukemia. II. Generation And Characterization Of A Monoclonal Idiotype Cascade (Abl, Ab2, and Ab3), " J. Immunol.141:1398-1403); gp75 (antigen melanoma; Vijayasardahl et al. (1990) "The Melanoma Antigen Gp75 Is The Human Homologue Of The Mouse B (Brown) Locus Gene Product, " J. Exp. Med.171(4):1375-1380); gpA33 (Heath, J.K. et al. (1997) "The Human A33 Antigen Is A Transmembrane Glycoprotein And A Novel Member Of The Immunoglobulin Superfamily," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 94(2):469-474; Ritter, G. et al. (1997) "Characterization Of Posttranslational Modifications Of Human A33 Antigen, A Novel Palmitoylated Surface Glycoprotein Of Human Gastrointestinal Epithelium," Biochem. Biophys. Res. Commun. 236(3):682-686; Wong, N.A. et al. (2006) "EpCAM and gpA33 Are Markers Of Barrett's Metaplasia," J.
Clin. Pathol.59(3):260-263); HER2 antigen (HER2/neu, p185<HER2>; Kumar, Pal S et al.2006 Semin Oncol.33(4):386-91); HMFG (antigen globule masti u mleku čoveka; WO 1995015171); humani papilloma virus-E6/human papilloma virus-E7 (DiMaio, D. et al.2006 Adv Virus Res.66:125-59; HMW-MAA (antigen melanoma visoke molekularne težine; Natali et al. (1987) "Immunohistochemical Detection Of Antigen In Human Primary And Metastatic Melanomas By The Monoclonal Antibody 140,240 And Its Possible Prognostic Significance, " Cancer 59:55-63; Mittelman et al. (1990) "Active Specific Immunotherapy In Patients With Melanoma. A Clinical Trial With Mouse Antiidiotypic Monoclonal Antibodies Elicited With Syngeneic Anti-High Molecular-Weight Melanoma Associated Antigen Monoclonal Antibodies," J. Clin. Invest.86:2136-2144); I antigen (diferencijacijski antigen; Feizi (1985) "Demonstration By Monoclonal Antibodies That Carbohydrate Structures Of Glycoproteins And Glycolipids Are Onco-Developmental Antigens," Nature 314:53-57); IL13Rα2 (PCT Publikacija br. WO 2008/146911; Brown, C.E. et al. (2013) "Glioma IL13Rα2 Is Associated With Mesenchymal Signature Gene Expression And Poor Patient Prognosis," PLoS One.
18;8(10):e77769; Barderas, R. et al. (2012) "High Expression Of IL-13 Receptor A2 In Colorectal Cancer Is Associated With Invasion, Liver Metastasis, And Poor Prognosis," Cancer Res.72(11):2780-2790; Kasaian, M.T. et al. (2011) "IL-13 Antibodies Influence IL-13 Clearance In Humans By Modulating Scavenger Activity Of IL-13Rα2," J. Immunol.187(1):561-569; Bozinov, O. et al. (2010) "Decreasing Expression Of The Interleukin-13 Receptor IL-13Ralpha2 In Treated Recurrent Malignant Gliomas," Neurol. Med. Chir. (Tokyo) 50(8):617-621; Fujisawa, T. et al. (2009) "A novel role of interleukin-13 receptor alpha2 in pancreatic cancer invasion and metastasis," Cancer Res.
69(22):8678-8685); Integrin β6 (PCT Publikacija br. WO 03/087340); JAM-3 (PCT Publikacija br. WO 06/084078); KIDS (PCT Publikacija br. WO 05/028498); HID31 (PCT Publikacija br. WO 06/076584); KS 1/4 pan-carcinoma antigen (Perez et al. (1989) "Isolation And Characterization Of A cDNA Encoding The Ks1/4 Epithelial Carcinoma Marker, " J. Immunol.142:3662-3667; Möller et al. (1991) "Bi-specific Monoclonal Antibody-Directed Lysis Of Ovarian Carcinoma Cells By Activated Human T Lymphocytes, " Cancer Immunol. Immunother.33(4):210-216; Ragupathi, G.2005 Cancer TreatRes.123:157-80); L6 and L20 (human lung carcinoma antigens; Hellström et al. (1986) "Monoclonal Mouse Antibodies Raised Against Human Lung Carcinoma, " Cancer Res.46:3917-3923); LEA; LUCA-2 (US Patent Publikacija br.2006/0172349; PCT Publikacija br. WO 06/083852); M1:22:25:8; M18; M39; MAGE (MAGE-1; MAGE-3; (Bodey, B.2002 Expert Opin Biol Ther.2(6):577-84); MART (Kounalakis, N. et al.2005 Curr Oncol Rep.7(5):377-82; mezotelin (Chang K, and Pastan I.1996 "Molecular cloning of mesothelin, a differentiation antigen present on mesothelium, mesotheliomas, and ovarian cancers," Proc Natl Acad Sci USA 93:136-40), MUC-1 (Mathelin, C.2006 Gynecol Obstet Fertil.34(7-8):638-46); MUM-1 (Castelli, C. et al.2000 J Cell Physiol.182(3):323-31); Myl; N-acetilglukozaminiltransferaza (Dennis, J.W.1999 Biochim Biophys Acta.6;1473(1):21-34); neoglikoprotein; NS-10 kao što je nađeno u adenokarcinomima; OFA-1; OFA-2; Oncostatin M (Oncostatin Receptor Beta; US Patent No.7,572,896; PCT Publikacija br. WO 06/084092); p15 (Gil, J. et al.2006 Nat Rev Mol Cell Biol.7(9):667-77); p97 (melanoma-associated antigen; Estin et al. (1989) "Transfected Mouse Melanoma Lines That Express Various Levels Of Human Melanoma-Associated Antigen p97," J. Natl. Cancer Instit.81(6):445-454); PEM (polimorfni epitelni mucin; Hilkens et al. (1992) "Cell Membrane-Associated Mucins And Their Adhesion-Modulating Property, " Trends in Biochem. Sci.17:359-363); P EMA (polimorfni epitelni mucin antigen); PIPA (US Patent No.
7,405,061; PCT Publikacija br. WO 04/043239); PSA (prostata-specifični antigen; Henttu et al. (1989) "cDNA Coding For The Entire Human Prostate Specific Antigen Shows High Homologies To The Human Tissue Kallikrein Genes, " Biochem. Biophys. Res. Comm.10(2):903-910; Israeli et al. (1993) "Molecular Cloning Of A Complementary DNA Encoding A Prostate-Specific Membrane Antigen, " Cancer Res.53:227-230; Cracco, C.M. et al.2005 Minerva Urol Nefrol.57(4):301-11); PSMA (prostate-specific membrane antigen; Ragupathi, G.2005 Cancer Treat Res.123:157180); Prostatična kisela fosfataza (Tailor et al. (1990) "Nucleotide Sequence Of Human Prostatic Acid Phosphatase Determined From A Full-Length cDNA Clone, " Nucl. Acids Res.18(16):4928); R24kao što je nađeno u melanoma; ROR1 (US Patent No.5,843,749); sfingolipiti; SSEA-1; SSEA-3; SSEA-4; sTn (Holmberg, L.A.2001 Expert Opin Biol Ther.1(5):881-91); Peptid dobijen od T-ćelijskog receptora iz kožnog T ćelijskog limfoma (videti Edelson (1998) "Cutaneous T-Cell Lymphoma: A Model For Selective Immunotherapy, " Cancer J Sci Am.4:62-71); T5A7nađen u mijeloidnim ćelijama; TAG-72 (Yokota et al. (1992) "Rapid Tumor Penetration Of A Single-Chain Fv And Comparison With Other Immunoglobulin Forms, " Cancer Res.52:3402-3408); TL5 (blood group A); TNF-receptor (TNF-α receptor, TNF-β receptor; TNF-y receptor (van Horssen, R. et al.2006 Oncologist.11(4):397-408; Gardnerova, M. et al.2000 Curr Drug Targets.1(4):327-64); TRA-1-85 (blood group
H); Transferin Receptor (US Patent No.7,572,895; PCT Publikacija br. WO 05/121179); 5T4 (TPBG, glikoprotein trofoblasta; Boghaert, E.R. et al. (2008) "The Oncofetal Protein, 5T4, Is A Suitable Target For Antibody-Guided Anti-Cancer Chemotherapy With Calicheamicin," Int. J. Oncol.32(1):221-234; Eisen, T. et al. (2014) "Naptumomab Estafenatox: Targeted Immunotherapy with a Novel Immunotoxin," Curr. Oncol. Rep.16:370, pp.1-6); TSTA (tumor-specifični transplantacioni antigen) kao što su virusno izazvani tumorski antigeni uključujući T-antigen DNK tumorske viruse i antigene omotača RNK tumorskih virusa, onkofetalni antigen-alfa-fetoprotein kao što je CEA debelog creva, onkofetalni antigen tumora bešike (Hellström et al. (1985) "Monoclonal Antibodies To Cell Surface Antigens Shared By Chemically Induced Mouse Bladder Carcinomas, " Cancer. Res.45:2210-2188); VEGF (Pietrantonio, F. et al. (2015) "Bevacizumab-Based Neoadjuvant Chemotherapy For Colorectal Cancer Liver Metastases: Pitfalls And Helpful Tricks In A Review For Clinicians," Crit. Rev. Oncol. Hematol.95(3):272-281; Grabowski, J.P. (2015) "Current Management Of Ovarian Cancer," Minerva Med.106(3):151-156; Field, K.M. (2015) "Bevacizumab And Glioblastoma: Scientific Review, Newly Reported Updates, And Ongoing Controversies," Cancer 121(7):997-1007; Suh, D.H. et al. (2015) "Major Clinical Research Advances In Gynecologic Cancer In 2014," J. Gynecol. Oncol.
26(2):156-167; Liu, K.J. et al. (2015) "Bevacizumab In Combination With Anticancer Drugs For Previously Treated Advanced Non-Small Cell Lung Cancer," Tumour Biol.36(3):1323-1327; Di Bartolomeo, M. et al. (2015) "Bevacizumab treatment in the elderly patient with metastatic colorectal cancer," Clin. Interv. Aging 10:127-133); VEGF Receptor (O'Dwyer. P.J.2006 Oncologist. 11(9):992-998); VEP8; VEP9; VIM-D5; i Y hapten, Le<y>kao što je nađeno u ćelijama embrionalnog karcinoma.
[0376] U određenim realizacijama, takvi anti-PD-1-vezujući molekuli pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, koriste se u kombinaciji sa jednim ili više molekula koji specifično vezuju5T4, B7H3, CD19, CD20, CD51, CD123, DR5, EGFR, EpCam, GD2, gpA33, HER2, ROR-1, TAG-72, VEGF-A antitelo i/ili VEGFR2.
[0377] Takvi PD-1-vezujući molekuli pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 4-6, mogu se kombinovati sa imunogenim agensom kao što je vakcina protiv tumora. Takve vakcine mogu da sadrže prečišćene tumorske antigene (uključujući rekombinantne proteine, peptide i molekule ugljenih hidrata), autologne ili alogene tumorske ćelije. Opisano je više strategija vakcinacije protiv tumora (vidi npr. Palena, C., et al., (2006) "Cancer vaccines: preclinical studies and novel strategies," Adv. Cancer Res.95, 115-145; Mellman, I., et al. (2011) "Cancer immunotherapy comes of age," Nature 480, 480-489; Zhang, X. M. et al. (2008) "The anti-tumor immune response induced by a combination of MAGE-3/MAGE-n-derived peptides," Oncol. Rep.20, 245-252; Disis, M. L. et al. (2002) "Generation of T-cell immunity to the HER-2/neu protein after active immunization with HER-2/neu peptide-based vaccines," J. Clin. Oncol.20, 2624-2632; Vermeij, R. et al. (2012) "Potentiation of a p53-SLP vaccine by cyclophosphamide in ovarian cancer: a single-arm phase II study." Int. J. Cancer 131, E670-E680). Takvi PD-1-vezujući molekuli pronalaska mogu se kombinovati sa hemoterapeutskim režimima. U ovim slučajevima može biti moguće smanjiti dozu administriranog hemoterapeutskog reagensa (Mokyr et al. (1998) Cancer Research 58: 5301-5304).
[0378] PD-1-vezujući molekuli pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, mogu se kombinovati sa drugim imunostimulatornim molekulima kao što su antitela koja aktiviraju imuni odgovor domaćina kako bi se obezbedili povećani nivoi aktivacije T-ćelija. Konkretno, dokazano je da anti-PD-1 antitela, anti-PD-L1 antitela i/ili anti-CTLA-4 antitela aktiviraju imuni sistem (videti, npr., del Rio, M-L. et al. (2005) "Antibody-Mediated Signaling Through PD-1 Costimulates T Cells And Enhances CD28-Dependent Proliferation," Eur. J. Immunol 35:3545-3560; Barber, D. L. et al. (2006) "Restoring function in exhausted CD8 T cells during chronic viral infection," Nature 439, 682-687; Iwai, Y. et al. (2002) "Involvement Of PD-L1 On Tumor Cells In The Escape From Host Immune System And Tumor Immunotherapy By PD-L1 Blockade," Proc. Natl Acad. Sci. USA 99, 12293-12297; Leach, D. R., et al., (1996) "Enhancement Of Antitumor Immunity By CTLA-4 Blockade," Science 271, 1734-1736). Dodatni imunostimulatorni molekuli koji se mogu kombinovati sa PD-1-vezujućim molekulima pronalaska uključuju antitela na molekule na površini dendritskih ćelija koja aktiviraju funkciju dendritskih ćelija (DC) i prezentaciju antigena, anti-CD40 antitela koja mogu da zamene aktivnost T- ćelija pomoćnica i aktiviraju antitela na kostimulatorne molekule T-ćelija kao što su PD-L1, CTLA-4, OX-404-1BB i ICOS (videti, na primer, Ito et al. (2000) "Effective Priming Of Cytotoxic T Lymphocyte Precursors By Subcutaneous Administration Of Peptide Antigens In Liposomes Accompanied By Anti-CD40 And Anti-CTLA-4 Antibodies,"Immunobiology 201:527-40; U.S. Pat. No.5,811,097; Weinberg et al. (2000) "Engagement of the OX-40 Receptor In Vivo Enhances Antitumor Immunity," Immunol 164:2160-2169; Melero et al. (1997) "Monoclonal Antibodies Against The 4-IBB T-Cell Activation Molecule Eradicate Established Tumors," Nature Medicine 3: 682-685; Hutloff et al. (1999) "ICOS Is An Inducible T-Cell Co-Stimulator Structurally And Functionally Related To CD28," Nature 397: 263-266; and Moran, A.E. et al. (2013) "The TNFRs OX40, 4-IBB, and CD40 As Targets For Cancer Immunotherapy," Curr Opin Immunol.2013 Apr; 25(2):
10,1016/j.coi.2013,01.004), i/ili stimulativni himerni antigenski receptori (CAR) koji sadrže domen koji se vezuje za antigen usmeren protiv antigena bolesti fuzionisan sa jednim ili više intracelularnih signalnih domena iz različitih kostimulatornih proteinskih receptora (npr. CD28, 4-1BB, ICOS, OX40, itd.) koji su služe za stimulaciju T-ćelija nakon vezivanja antigena (videti, na primer, Tettamanti, S. et al. (2013) "Targeting Of Acute Myeloid Leukaemia By Cytokine-Induced Killer Cells Redirected With A Novel CD123-Specific Chimeric Antigen Receptor," Br. J. Haematol.161:389-401; Gill, S. et al. (2014) "Efficacy Against Human Acute Myeloid Leukemia And Myeloablation Of Normal Hematopoiesis In A Mouse Model Using Chimeric Antigen ReceptorModified T Cells," Blood 123(15): 2343-2354; Mardiros, A. et al. (2013) "T Cells Expressing CD123-Specific Chimeric Antigen Receptors Exhibit Specific Cytolytic Effector Functions And Antitumor Effects Against Human Acute Myeloid Leukemia," Blood 122:3138-3148; Pizzitola, I. et al. (2014) "Chimeric Antigen Receptors Against CD33/CD123 Antigens Efficiently Target Primary Acute Myeloid Leukemia Cells in vivo," Leukemia doi:10,1038/leu.2014,62).
[0379] PD-1-vezujući molekuli pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, mogu se kombinovati sa inhibitornim himernim antigenskim receptorima (iCAR) da bi se preusmerili sa ciljanih imunoterapijskih odgovora. iCAR je domen koji se vezuje za antigen usmeren protiv antigena bolestifuzionisan sa jednim ili više intracelularnih signalnih domena iz različitih inhibitornih proteinskih receptora (npr. CTLA-4, PD-1, itd.) koji služe za ograničavanje odgovora T-ćelija na vezivanje antigena (videti , na primer, Fedorov V.D. (2013) "PD-1-and CTLA-4-Based Inhibitory Chimeric Antigen Receptors (iCARs) Divert Off-Target Immunotherapy Responses," Sci. Tranl. Med.5:215ra172 doi:10,1126/ scitranslmed.3006597.
[0380] Posebno, takvi anti-PD-1-vezujući molekuli pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, koriste se u kombinaciji sa anti-CD137 antitelom, anti-CTLA-4 antitelom, anti-OXS40 antitelom, anti-LAG-3 antitelom, anti-PD-L1 antitelom, anti-TIGIT antitelom i/ili anti TIM-3 antitelom.
B. Dijagnostička i teranostička upotreba
[0381] Određeni PD-1-vezujući molekuli koji su ovde otkriveni ne pokazuju malo ili nikakvu sposobnost da blokiraju vezivanje između PD-1 i PD-1L liganda. Kao takva, antitela PD-1 mAb 2 i PD-1 mAb 4, njihovi humanizovani derivati i molekuli koji sadrže njihove PD-1-vezujuće fragmente (npr., bispecifična dijatela, itd.) ili koji se takmiče za vezivanje sa takvim antitelima mogu se obeležiti (npr. radioaktivnim, enzimskim, fluorescentnim, hemiluminiscentnim, paramagnetnim, dijamagnetnim ili drugim obeleživačima) i koristiti za detekciju PD-1 u uzorcima ili za snimanje PD-1 na ćelijama. Pošto takvi molekuli ne utiču na biološku aktivnost PD-1, oni su posebno korisni u metodama određivanja obima, lokacije i promene ekspresije PD-1 kod subjekata (npr., subjekti koji se leče od raka povezanog sa ekspresijom ili ciljanjem PD-1).
XII. Farmaceutske kompozicije
[0382] Kompozicije uključuju aktvine farmaceutske sastojke korisne u proizvodnji farmaceutskih kompozicija (npr. nečiste ili nesterilne kompozicije) i farmaceutske kompozicije (tj. kompozicije koje su pogodne za davanje subjektu ili pacijentu) koje se mogu koristiti u pripremi jediničnih doznih oblika. Takve kompozicije mogu sadržati profilaktički ili terapeutski efikasnu količinu PD-1-vezujućih molekula iz ovog pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, ili kombinaciju takvih agenasa i farmaceutski prihvatljivog nosača. Poželjno, kompozicije mogu sadržati profilaktički ili terapeutski efikasnu količinu PD-1-vezujućih molekula iz ovog pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0383] Takve farmaceutske kompozicije mogu dodatno uključiti drugo terapeutsko antitelo (npr. tumor-specifično monoklonsko antitelo) koje je specifično za određeni antigen raka, i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0384] Termin "farmaceutski prihvatljiv" označava odobrenje od strane regulatorne agencije savezne ili državne vlade ili naveden u Farmakopeji SAD ili drugoj opšte priznatoj farmakopeji za upotrebu kod životinja, a posebno kod ljudi. Izraz "nosač" se odnosi na razblaživač, pomoćno sredstvo (npr.
Frojndov adjuvans (kompletan i nepotpun), ekscipijens ili vehikulum sa kojim se terapeutik administrira. Takvi farmaceutski nosači mogu biti sterilne tečnosti, kao što su voda i ulja, uključujući one naftnog, životinjskog, biljnog ili sintetičkog porekla, kao što su ulje od kikirikija, sojino ulje, mineralno ulje, susamovo ulje i slično. Voda je poželjan nosač kada se farmaceutska kompozicija administrira intravenski. Slani rastvori i vodeni rastvori dekstroze i glicerola takođe se mogu koristiti kao tečni nosači, posebno za rastvore za injekcije. Pogodni farmaceutski ekscipijenti uključuju skrob, glukozu, laktozu, saharozu, želatin, slad, pirinač, brašno, kredu, silika gel, natrijum stearat, glicerol monostearat, talk, natrijum hlorid, sušeno obrano mleko, glicerol, propilen, glikol, vodu, etanol i slično. Kompozicija, ako se želi, takođe može da sadrži manje količine okvašivače ili emulgatore, ili pH pufer. Ove kompozicije mogu biti u obliku rastvora, suspenzija, emulzija, tableta, pilula, kapsula, prahova, formulacija sa produženim oslobađanjem i slično.
[0385] Generalno, sastojci kompozicija se isporučuju ili odvojeno ili pomešani zajedno u jediničnom doznom obliku, na primer, kao suvi liofilizovani prah ili koncentrat bez vode u hermetički zatvorenoj posudi kao što je ampula ili kesica koja ukazuje na količinu aktivnog agensa. Tamo gde se kompozicija administrira infuzijom, ona se dozirati bocom za infuziju koja sadrži sterilnu vodu ili fiziološki rastvor farmaceutskog kvaliteta. Kada se kompozicija administrira injekcijom, može se obezbediti ampula sterilne vode za injekcije ili fiziološkog rastvora tako da se sastojci mogu mešati preadministracije.
[0386] Kompozicije se mogu formulisati kao neutralni ili solni oblici. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju, ali nisu ograničene na, one formirane sa anjonima kao što su one dobijene iz hlorovodonične, fosforne, sirćetne, oksalne, vinske kiseline, itd., i one formirane sa katjonima kao što su oni dobijeni od natrijuma, kalijuma, amonijuma, kalcijuma, feri hidroksida, izopropilamina, trietilamina, 2-etilamino etanola, ahistidina, prokaina, itd.
[0387] Komplet može da sadrži bilo koji od PD-1-vezujućih molekula ovog pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6. Komplet može dalje da sadrži jedan ili više drugih profilaktičkih i/ili terapeutskih agenasa korisnih za lečenje raka, u jednom ili više kontejnera; i/ili komplet može dalje da sadrži jedno ili više citotoksičnih antitela koja vezuju jedan ili više antigena karcinoma povezanih sa rakom. U određenim realizacijama, drugi profilaktički ili terapeutski agens je hemoterapeutik. U drugim realizacijama, profilaktički ili terapeutski agens je biološki ili hormonski terapeut.
XIII. Metode administracije
[0388] Poznati su različiti sistemi isporuke i mogu se koristiti za primenu ovde otkrivenih kompozicija, npr., inkapsulacija u lipozome, mikročestice, mikrokapsule, rekombinantne ćelije sposobne da eksprimiraju antitelo ili fuzioni protein, endocitoza posredovana receptorom (videti, npr Wu et al. (1987) "Receptor Mediated In Vitro Gene Transformation By A Soluble DNA Carrier System, " J. Biol. Chem.262:4429-4432), konstrukcija nukleinske kiseline kao dela retrovirusnog ili drugog vektora, itd.
[0389] Metode administriranja molekula pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, uključuju, ali nisu ograničene na, parenteralnu administraciju (npr. intradermalno, intramuskularno, intraperitonealno, intravenozno i subkutano), epiduralno i mukozno (npr.
Intranazalno i oralno). U specifičnom izvođenju, PD-1- vezujući molekuli 1 prema ovom pronalasku, kako su definisani i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, administriraju se intramuskularno, intravenozno ili subkutano. Kompozicije se mogu administrirati bilo kojim pogodnim putem, na primer, infuzijom ili bolus injekcijom, apsorpcijom kroz epitelne ili mukokutane obloge (npr. oralnu sluzokožu, rektalne i crevne sluzokože, itd.) i mogu se administrirati zajedno sa drugim biološki aktivnim agensima . Administracija može biti sistemska ili lokalna. Pored toga, plućna administracija se takođe može primeniti, na primer, upotrebom inhalatora ili nebulizatora, i formulacijom sa agensom za aerosolizaciju. Videti, npr., US patenti br.6,019,968; 5,985,320; 5,985,309; 5,934,272; 5,874,064; 5,855,913; 5,290,540; i 4,880,078; i PCT publikacije br. WO 92/19244; WO 97/32572; WO 97/44013; WO 98/31346; i WO 99/66903.
[0390] PD-1 vezujući molekuli prema ovom pronalasku, kao što su definisani i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, mogu biti upakovani u hermetički zatvorenu posudu (kontejner) kao što je ampula ili kesica na kojoj je naznačena količina molekula. Takvi molekuli se mogu isporučiti kao suvi sterilizovani liofilizovani prah ili koncentrat bez vode u hermetički zatvorenoj posudi i mogu se rekonstituisati, na primer, vodom ili fiziološkim rastvorom do odgovarajuće koncentracije za davanje subjektu. Poželjno, PD-1-vezujući molekuli ovog pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, se isporučuju kao suvi sterilni liofilizovani prah u hermetički zatvorenoj posudi.
[0391] Liofilizovani PD-1-vezujući molekuli ovog pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, treba da se čuvaju na temperaturi između 2°C i 8°C u svom originalnoj posudi i molekuli treba da da se administrira u roku od 12 sati, poželjno u roku od 6 sati, u roku od 5 sati, u roku od 3 sata ili u roku od 1 sata nakon rekonstituisanja. U alternativnoj varijanti, takvi molekuli se isporučuju u tečnom obliku u hermetički zatvorenoj posudi koja ukazuje na količinu i koncentraciju molekula, fuzionog proteina ili konjugovanog molekula. Poželjno, takvi PD-1-vezujući molekuli kada se daju u tečnom obliku se isporučuju u hermetički zatvorenoj posudi.
[0392] Količina kompozicije koja će biti efikasna u lečenju, prevenciji ili ublažavanju jednog ili više simptoma povezanih sa poremećajem može se odrediti standardnim kliničkim tehnikama. Precizna doza koja će se koristiti u formulaciji takođe će zavisiti od načina primene i ozbiljnosti stanja, i odluku donosi lekar uzimajući u obzir okolnosti svakog pacijenta. Efikasne doze se mogu ekstrapolirati iz krive doza-odgovor izvedenih iz in vitro test sistema ili na životinjskim modelima.
[0393] Kako se ovde koristi, "efikasna količina" farmaceutske kompozicije je količina dovoljna da utiče na korisne ili željene rezultate uključujući, bez ograničenja, kliničke rezultate kao što su smanjenje simptoma koji su rezultat bolesti, ublažavanje simptoma infekcije (npr. virusno opterećenje, groznica, bol, sepsa, itd.) ili simptom raka (npr. proliferacija ćelija raka, prisustvo tumora, tumorske metastaze, itd.), čime se povećava kvalitet života onih koji pate od bolesti , smanjenje doze drugih lekova potrebnih za lečenje bolesti, poboljšanje efekta drugog leka, kao što je ciljanje i/ili internalizacija, odlaganje progresije bolesti i/ili produženje preživljavanja pojedinaca.
[0394] Efikasna količina se može administrirati u jednoj ili više primena/ordiniranja. Efikasna količina leka, jedinjenja ili farmaceutske kompozicije je količina dovoljna da smanji proliferaciju (ili efekat) prisustva virusa i da smanji i/ili odloži razvoj virusne bolesti, bilo direktno ili indirektno. U nekim slučajevima, efikasna količina leka, jedinjenja ili farmaceutske kompozicije može ili ne mora da se postigne u kombinaciji sa drugim lekom, jedinjenjem ili farmaceutskom kompozicijom. Dakle, "efikasna količina" se može razmatrati u kontekstu administriranja jednog ili više hemoterapeutskih agenasa, a može se smatrati da se jedan agens ordinira u efektivnoj količini ako, u kombinaciji sa jednim ili više drugih agenasa, može da se postigne željeni rezultat. biti ili je postignuto. Dok se individualne potrebe razlikuju, određivanje optimalnih opsega efektivnih količina svake komponente je u okviru znanja u tehnici.
[0395] Za PD-1-vezujuće molekule obuhvaćene pronalaskom, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, doza koja se administrira pacijentu je poželjno određena na osnovu telesne težine (kg) primaoca. Za PD-1-vezujuće molekule obuhvaćene pronalaskom, doza koja se daje pacijentu je tipično najmanje oko 0,01 µg/kg, najmanje oko 0,05 µg/kg, najmanje oko 0,1 µg/kg, najmanje oko 0,2 µg /kg, najmanje oko 0,5 µg/kg, najmanje oko 1 µg/kg, najmanje oko 2 µg/kg, najmanje oko 5 µg/kg, najmanje oko 10 µg/kg, najmanje oko 20 µg/kg , najmanje oko 50 µg/kg, najmanje oko 0,1 mg/kg, najmanje oko 1 mg/kg, najmanje oko 3 mg/kg, najmanje oko 5 mg/kg, najmanje oko 10 mg/kg, na najmanje oko 30 mg/kg, najmanje oko 50 mg/kg, najmanje oko 75 mg/kg, najmanje oko 100 mg/kg, najmanje oko 125 mg/kg, najmanje oko 150 mg/kg ili više od telesne težine subjekta.
[0396] Doziranje i učestalost administracije PD-1-vezujućeg molekula iz ovog pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, mogu biti smanjene ili izmenjene povećanjem apsorpcije i prodiranja molekula u tkivo modifikacijama kao što je, na primer, lipidacija.
[0397] Doziranje PD-1-vezujućeg molekula pronalaska, kao što je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, administrirano pacijentu može se izračunati za upotrebu kao terapija sa jednim agensom. Alternativno, molekul se može upotrebit u kombinaciji sa drugim terapeutskim kompozicijama i doze koje se administriraju pacijentu su niže nego kada se navedeni molekuli koriste kao terapija sa jednim agensom.
[0398] Farmaceutske kompozicije koje su ovde otkrivene mogu se administrirati lokalno u deo kojem je potrebno lečenje; ovo se može postići, na primer, a ne kao obraničenje, lokalnom infuzijom, injekcijom ili pomoću implantata, pri čemu je navedeni implant od poroznog, neporoznog ili želatinoznog materijala, uključujući membrane, kao što su sijastične membrane ili vlakna. Poželjno, kada se daje molekul pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, mora se voditi računa da se koriste materijali koje molekul ne apsorbuje.
[0399] Kompozicije koje su ovde otkrivene mogu biti isporučene u vezikuli, posebno u lipozomu (videti Langer (1990) "New Methods Of Drug Delivery," Science 249:1527-1533); Treat et al., in LIPOSOMES IN THE THERAPY OF INFECTIOUS DISEASE AND CANCER, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp.353- 365 (1989); Lopez-Berestein, ibid., pp.317-327).
[0400] Kompozicije koje su ovde otkrivene mogu biti isporučene u sistemu sa kontrolisanim ili produženim oslobađanjem. Bilo koja tehnika poznata stručnjaku može se koristiti za proizvodnju formulacija sa produženim oslobađanjem koje sadrže jedan ili više PD-1-vezujućih molekula pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1- 6. Videti, npr., US Patent br. 4,526,938; PCT publikaciju WO 91/05548; PCT publikaciju WO 96/20698; Ning et al. (1996) "Intratumoral Radioimmunotheraphy Of A Human Colon Cancer Xenograft Using A Sustained-Release Gel, " Radiotherapy & Oncology 39:179-189, Song et al. (1995) "Antibody Mediated Lung Targeting Of Long-Circulating Emulsions, " PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372-397; Cleek et al. (1997) "Biodegradable Polymeric Carriers For A bFGF Antibody For Cardiovascular Application, " Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater.24:853-854; and Lam et al. (1997) "Microencapsulation Of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody For Local Delivery, " Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater.24:759-760. Pumpa se može koristiti u sistemu sa kontrolisanim otpuštanjem (videti Langer, supra; Sefton, (1987) "Implantable Pumps, " CRC Crit. Rev. Biomed. Eng.14:201-240; Buchwald et al. (1980) "Long-Term, Continuous Intravenous Heparin Administration By An Implantable Infusion Pump In Ambulatory Patients With Recurrent Venous Thrombosis, " Surgery 88:507-516; and Saudek et al. (1989) "A Preliminary Trial Of The Programmable Implantable Medication System For Insulin Delivery, "N. Engl. J. Med.321:574-579). Polimerni materijali se mogu koristiti za postizanje kontrolisanog oslobađanja molekula (videti npr., MEDICAL APPLICATIONS OF CONTROLLED RELEASE, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); CONTROLLED DRUG BIOAVAILABILITY, DRUG PRODUCT DESIGN AND PERFORMANCE, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Levy et al. (1985) "Inhibition Of Calcification Of Bioprosthetic Heart Valves By Local Controlled-Release Diphosphonate, " Science 228:190-192; During et al. (1989) "Controlled Release Of Dopamine From A Polymeric Brain Implant: In Vivo Characterization, " Ann. Neurol.25:351-356; Howard et al. (1989) "Intracerebral Drug Delivery In Rats With Lesion-Induced Memory Deficits, " J. Neurosurg.7(1):105-112); U.S. Patent br.
5,679,377; U.S. Patent br.5,916,597; U.S. Patent br.5,912,015; U.S. Patent br.5,989,463; U.S. Patent br.5,128,326; PCT Publikacija br. WO 99/15154; i PCT Publikacija br. WO 99/20253). Primeri polimera koji se koriste u formulacijama sa produženim oslobađanjem uključuju, ali nisu ograničeni na, poli(2-hidroksi etil metakrilat), poli(metil metakrilat), poli(akrilnu kiselinu), poli(etilen-ko-vinil acetat), poli( metakrilnu kiselinu), poliglikolide (PLG), polianhidride, poli(N-vinil pirolidon), poli(vinil alkohol), poliakrilamid, poli(etilen glikol), polilaktide (PLA), poli(laktid-ko-glikolidi) (PLGA), i poliortoestre. Sistem sa kontrolisanim oslobađanjem se može postaviti u blizinu terapeutskog cilja (npr. pluća), što zahteva samo mali deo sistemske doze (videti, npr., Goodson, in MEDICAL APPLICATIONS OF CONTROLLED RELEASE, supra, vol.2, pp.115-138 (1984)). Polimerne kompozicije korisne kao implantati sa kontrolisanim oslobađanjem mogu se koristiti prema Dunn et al. (videti U.S.5,945,155). Ova posebna metoda se zasniva na terapijskom efektu in situ kontrolisanog oslobađanja bioaktivnog materijala iz polimernog sistema. Implantacija se generalno može desiti bilo gde u telu pacijenta kome je potreban terapijski tretman. Može se koristiti nepolimerni sistem produžene isporuke, pri čemu se nepolimerni implantat u telu subjekta koristi kao sistem za isporuku leka. Nakon implantacije u telo, organski rastvarač implantata će se raspršiti, dispergovati ili ispirati iz kompozicije u okolnu tkivnu tečnost, a nepolimerni materijal će postepeno koagulirati ili precipitirati da bi formirao čvrstu, mikroporoznu matricu (vidi U.S.5,888,533)
[0401] Sistemi sa kontrolisanim oslobađanjem su razmatrani u Langerovom pregledu (1990, "New Methods Of Drug Delivery, " Science 249:1527-1533). Bilo koja tehnika poznata stručnjaku može se koristiti za proizvodnju formulacija sa produženim oslobađanjem koje sadrže jedan ili više terapeutskih agenasa pronalaska koji se tu pominju. Videti, npr., U.S. Patent No.4,526,938;
International Publication Nos. WO 91/05548 and WO 96/20698; Ning et al. (1996) "Intratumoral Radioimmunotheraphy Of A Human Colon Cancer Xenograft Using A Sustained-Release Gel, " Radiotherapy & Oncology 39:179-189, Song et al. (1995) "Antibody Mediated Lung Targeting Of Long-Circulating Emulsions, " PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372-397; Cleek et al. (1997) "Biodegradable Polymeric Carriers For A bFGF Antibody For Cardiovascular Application, " Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater.24:853-854; and Lam et al. (1997) "Microencapsulation Of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody For Local Delivery, " Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater.24:759-760.
[0402] Tretman subjekta terapeutski ili profilaktički efikasnom količinom PD-1-vezujućeg molekula iz ovog pronalaska, kako je definisano i za upotrebu u skladu sa zahtevima 1-6, može uključivati jedan tretman ili, poželjno, može uključiti niz tretmana. Farmaceutske kompozicije koje su ovde otkrivene mogu se administrirati jednom dnevno, dva puta dnevno ili tri puta dnevno. Alternativno, farmaceutske kompozicije se mogu administrirati jednom nedeljno, dva puta nedeljno, jednom u dve nedelje, jednom mesečno, jednom u šest nedelja, jednom u dva meseca, dva puta godišnje ili jednom godišnje. Takođe će se ceniti činjenica da efektivna doza molekula korišćenih za lečenje može da se poveća ili smanji tokom određenog tretmana.
Primeri
[0403] Primeri koji slede ilustruju različite metode za kompozicije u dijagnostičkim metodama ili metodama lečenja/tretiranja.
Primer 1
Karakterizacija anti-humanih PD-1 monoklonskih antitela
[0404] Petnaest mišjih monoklonskih antitela je izolovano kao sposobno da se specifično vežu za PD-1 i čoveka i cinomolgus majmuna, i dobila su oznake „ PD-1 mAb 1," "PD-1 mAb 2," "PD-1 mAb 3," "PD-1 mAb 4," "PD-1 mAb 5," "PD-1 mAb 6," "PD-1 mAb 7," "PD-1 mAb 8," "PD-1 mAb 9," "PD-1 mAb 10 > " "PD-1 mAb 11," "PD-1 mAb 12," "PD-1 mAb 13," "PD-1 mAb 14," i "PD-1 mAb 15." Utvrđeno je da se CDR-ovi ovih antitela razlikuju i prethodno su navedeni. Vezivanje za ekstracelularni domen PD-1 čoveka i cinomologus majmuna je procenjeno na sledeći način makisorb ploče sa 96 ležišta za sa ravnim dnom su obložene rastvornim humanim ili cinomolgus majmunskim PD-1 (ekstracelularni domen humanog PD-1 fuzionisan sa His tagom (shPD-1 His) ili na humani Fc region (shPD-1 hFc), ili ekstracelularni domen PD-1 cinomolgus majmuna fuzionisan sa ljudskim Fc regionom (scyno-PD1 Fc)) svaki pri koncentraciji 0,5 ili 1 µg/mL , ploče su isprane i inkubirane sa jednim od izolovanih anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15. Za ova ispitivanja korišćena su anti-PD-1 antitela u 3, 1,0, 0,3333, 0,1111, 0,0370, 0,0123 ili 0,0041 µg/mL (trostruka serijska razblaženja). Količina vezivanja antitela za imobilizovani PD-1 (ljudski ili cinomolgus majmuna) je procenjena korišćenjem kozjeg anti-mišjeg IgG-HRP sekundarnog antitela. Svi uzorci su analizirani na čitaču ploča (Victor 2 Wallac, Perkin Elmers). Reprezentativne krive vezivanja za rastvorni humani i rastvorni cinomolgus PD-1 prikazane su na slikama 7A-7D i slikama 8A-8C, respektivno.
[0405] Rezultati ovih testova vezivanja (Slike 7A-7D i Slike 8A-8C) pokazuju da se sva anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15 vezuju i za rastvorni humani PD-1 i rastvorni PD-1 cinomolgus majmuna.
[0406] Da bi se dalje karakterisala mišja anti-PD-1 antitela, njihova sposobnost da blokiraju vezivanje rastvornog humanog PD-L1 za rastvorni humani PD-1 procenjena je u dva različita testa. U jednom testu ispitana je sposobnost antitela da blokiraju vezivanje humanog PD-1 za PD-L1 imobilisan na površini. Za ovaj test svako od anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15, ili referentno anti-PD-1 antitelo (PD-1 mAb A) je pomešano sa shPD-1 His fuzionim proteinom, (pri koncentraciji od 2,5 µg /mL) i odvojeno je inkubiran sa rastvornim humanim PD-L1 koji je obeležen biotinom (ekstracelularni domen PD-L1 fuzionisan sa humanim Fc (sPD-L1)) pri koncentraciji od 1 µg/mL imobilisan na ploči obloženoj streptavidinom. Za ove studije su korišćena anti-PD-1 antitela u dozama od 10, 5,0, 2,5, 1,25, 0,625, 0,3125 ili 0,1563 µg/mL (dvostruka serijska razblaženja). Količina shPD-1 His vezivanja za imobilizovani sPD-L1 je procenjena preko His-Tag pomoću anti-His-Tag-HRP sekundarnog antitela. Svi uzorci su analizirani na čitaču ploča (Victor 2 Wallac, Perkin Elmers). Rezultati ovog eksperimenta su prikazani na slikama 9A-9D.
[0407] Rezultati ovih testova inhibicije (Slike 9A-9D) pokazuju da anti-PD-antitela PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, i PD-1 mAb 15, su bila u stanju da blokiraju vezivanje rastvorljivog humanog PD-L1 za rastvorni humani PD-1 u različitim stepenima, dok PD-1 mAb 2 i PD-1 mAb 4 su ispoljili malu aktivnost blokiranja ili nisu ispoljili aktivnost blokiranja u ovom formatu testa.
[0408] U drugom testu ispitivana je sposobnost mišjih anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15 da blokiraju vezivanje PD-1 liganda (tj. humanog PD-L1 ili humanog PD-L2) za PD-1 eksprimiran na površini NSO ćelija. Za ovaj test svako od anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15, ili referentno anti-PD-1 antitelo (PD-1 mAb A ili PD-1 mAb B) je odvojeno pomešano sa biotinilovanim rastvorom humanog PD-L1 (shPD-L1 fuzioni protein) ili biotinilovani rastvorni humani PD-L2-muIgFc fuzioni protein (shPD-L2; Ancell Cat# 573-030), svaki u koncentraciji od 0,1 µg/test, i inkubirani sa NSO ćelijama koje eksprimiraju humane PD-1 (~250,000 ćelija/ležištu) u puferu za blokiranje (FACS 10% humanog serumskog albumina). Za ove studije korišćena su anti-PD-1 antitela pri koncentraciji 4,0, 1.0, 2,5 ×10<-1>, 6.25 × 10<-2>, 1,56 × 10<-2>, 3,90 × 10<-3>, 9.76 × 10<-4>, 2,4 × 10<-4>, 0,6 × 10<-4>µg/testu (četvorostruka serijska razblaženja). Količina shPD-L1 (ili shPD-L2) vezivanja za površinu NSO ćelija je određena korišćenjem PE-konjugovanog Streptavidin sekundarnog antitela pomoću FACS analize. Određene su IC50 vrednosti za inhibiciju vezivanja PD-1/PD-L1 i data je srednja vrednost uzorka (x) za najmanje dva eksperimenta (osim tamo gde je naznačeno) u tabeli 6.
[0409] Rezultati testova inhibicije shPD-L1 (Tabela 6) pokazuju da su anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, i PD-1 mAb 15, bila u stanju da blokiraju vezivanje humanog PD-L1 za humani PD-1 eksprimiran na površini NSO ćelija. Konkretno, PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 10, and PD-1 mAb 15 su blokirala vezivanje shPD-L1 kao i bolje od referentnih PD-1 antitela (PD-1 mAb A, PD-1 mAb B), dok PD-1 mAb 8 u suštini nije blokiralo u ovom formatu testa. I PD-1 mAb 2 i PD-1 mAb 4 su bila u stanju da blokiraju vezivanje PD-1/PD-L1 u ovom formatu testa.
[0410] Slično, anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, and PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, su bila u stanju da blokiraju vezivanje humanog PD-L2 za ljudski PD- 1 eksprimiran na površini NSO ćelija, dok PD-1 mAb 8 u suštini nije blokiralo u ovom formatu testa. Konkretno, , PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, i PD-1 mAb 10 blokirala su vezivanje shPD-L2 jednako dobro ili bolje od referentnih PD-1 antitela (PD-1 mAb A, PD-1 mAb B). PD-1 antitela PD-1 mAb 11 i PD-1 mAb 15 nisu testirana u ovom testu. Rezultati za nekoliko humanizovanih anti-PD-1 antitela uključujući hPD-1 mAb 15 su dati u nastavku.
Primer 2
Humanizacija i dalja karakterizacija
[0411] Varijabilni domeni anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9, i PD-1 mAb 15 su humanizovana, pri čemu su antigeni epitopi identifikovana antitela koja su dalje deimunizovana da bi se generisali krajnji humanizovani varijabilni domeni. Humanizacija PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2 i PD-1 mAb 15 dala je jedan humanizovani VH domen i jedan humanizovani VL domen za svako antitelo označeno ovde kao "hPD-1 mAb 1 VH1," i "hPD-1 mAb 1 VL1;" "hPD-1 mAb 2 VH1," i "hPD-1 mAb 2 VL1;" i "hPD-1 mAb 15 VH1," i "hPD-1 mAb 15 VL1." Humanizacija PD-1 mAb 7 dala je dva humanizovana VH domena, ovde označena kao " hPD-1 mAb 7 VH1," i "hPD-1 mAb 7 VH2", i tri humanizovana VL domena koja su ovde označena kao " hPD-1 mAb 1 VL1," "hPD-1 mAb 7 VL2," i "hPD-1 mAb 7 VL3." Humanizacija PD-1 mAb 9 je dala dva humanizovana VH domena, ovde označena kao "hPD-1 mAb 9 VH1," i "hPD-1 mAb 9 VH2," i dva humanizovana VL domena koja su ovde označena kao "hPD-1 mAb 9 VL1," and "hPD-1 mAb 1 VL2." Kada je stvoreno više humanizovanih varijabilnih domena, humanizovani varijabilni domeni teškog i lakog lanca određenog anti-PD-1 antitela (npr., PD-1 mAb 7) mogu se koristiti u bilo kojoj kombinaciji, a određene kombinacije humanizovanih lanaca se pominju kao referenca na specifične VH/VL domene, na primer humanizovano antitelo koje sadrži hPD-1 mAb 7 VH1 i hPD-1 mAb 7 VL2 je posebno označeno kao "hPD-1 mAb 7(1,2)." Humanizovana antitela pune dužine su generisana ili sa humanim IgG1 konstantnim regionom koji sadrži L234A/L235A supstitucije (IgG1 (AA)) ili humanim IgG4 konstantnim regionom koji sadrži S228P supstituciju (IgG4 (P)).
[0412] Teški lanci humanizovanog antitela IgG1 pune dužine su konstruisani na sledeći način: C-terminus humanizovanog VH domena je fuzionisan sa N-terminusom humanog IgG1 konstantnog regiona koji ima varijantni CH2-CH3 domen (koji sadrži L234A/L235A (AA) supstitucije) i bez C-terminalnog lizinskog ostatka (SEQ ID NO:255):
[0413] U SEQ ID NO:255, aminokiselinski ostaci 1-98 odgovaraju IgG1 CH1 domenu (SEQ ID NO: 10), aminokiselinski ostaci 99-113 odgovaraju IgG1 zglobnom regionu (SEQ ID NO: 32), i aminokiselinski ostaci 114-329 odgovaraju IgG1 CH2-CH3 domenu koji sadrži supstitucije L234A/L235A (podvučene) (SEQ ID NO: 5), ali nemaju C-terminalni lizinski ostatak.
[0414] Aminokiselinska sekvenca teškog lanca primera humanizovanog antitela ((hPD-1 mAb 7(1,2)) koji ima konstantni region teškog lanca IgG1 koji sadrži mutaciju L234A/L235A i nema C-terminalni lizinski ostatak je (SEQ ID NO:265):
[0415] U SEQ ID NO: 265 aminokiselinski ostaci 1-119 odgovaraju VH domenu hPD-1 mAb 7 VH1 (SEQ ID NO: 147), aminokiselinski ostaci 120-217 odgovaraju IgG1 CH1 domenu (SEQ ID NO: 10), ostaci 218-232 odgovaraju IgG1 zglobnom regionu (SEQ ID NO: 32) i ostaci 233-448 odgovaraju IgG1 CH2-CH3 domenu koji sadrži L234A/L235A supstitucije (podvučeno) (SEQ ID NO: 5) , ali bez C-terminalnog lizinskog ostatka.
[0416] Teški lanci humanizovanog antitela IgG4 pune dužine su konstruisani na sledeći način: C-terminus humanizovanog VH domena je fuzionisan sa N-terminusom humanog IgG4 konstantnog regiona koji ima stabilizovani pregibni region (koji sadrži supstituciju S228P) i nema C-terminalni lizinski ostatak (SEQ ID NO:256):
[0417] U SEQ ID NO:256, , aminokiselinski ostaci 1-98 odgovaraju IgG4 CH1 domenu Domain (SEQ ID NO:254), aminokiselinski ostaci 99-110 odgovaraju stabilizovanom IgG4 zglobnom regionu koji sadrži S228P supstitucije (podvučene) (SEQ ID NO: 13) i aminokiselinski ostaci 111-326 odgovaraju IgG4 CH2-CH3 domenu (SEQ ID NO:4) ali nemaju C-terminalni lizinski ostatak.
[0418] Aminokiselinska sekvenca teškog lanca primera humanizovanog antitela ((hPD-1 mAb 7(1,2)) koji ima konstantni region teškog lanca IgG4 koji sadrži stabilizovani pregibni region koji ima mutaciju S228P i nema C-terminalni lizin ostatak je (SEQ ID NO:266):
[0419] U SEQ ID NO:266 , aminokiselinski ostaci 1-119 odgovaraju VH domenu hPD-1 mAb 7 VH1 (SEQ ID NO:147), aminokiselinski ostaci 120-217 odgovaraju IgG4 CH1 domenu (SEQ ID NO:254), aminokiselinski ostaci 218-229 odgovaraju stabilizovanom IgG4 zglobnom regionu koji sadrži S228P supstitucije (podvučene) (SEQ ID NO:13) i aminokiselinski ostaci 230-445 odgovaraju IgG4 CH2-CH3 domenu (SEQ ID NO:4), ali bez C-terminalnog lizinskog ostatka.
[0420] Laki lanci humanizovanog antitela pune dužine su konstruisani na sledeći način: C-terminus humanizovanog VL domena je fuzionisan sa N-terminusom kapa regiona humanog lakog lanca (SEQ ID NO:8). Isti laki lanac je uparen sa teškim lancima IgG1 (AA) i IgG4 (P).
[0421] Aminokiselinska sekvenca lakog lanca primera humanizovanog PD-1 antitela (hPD-1 mAb 7(1,2)) koji ima kapa konstantni region je (SEQ ID NO:264):
[0422] U SEQ ID NO:264, aminokiselinski ostaci 1-111 odgovaraju VL domenu hPD-1 mAb 7 VL2 (SEQ ID NO:153), a aminokiselinski ostaci 112-218 odgovaraju kapa konstanti lakog lanca region (SEQ ID NO: 8).
[0423] Anti-PD-1 antitela koja imaju alternativne konstantne regione, na primer Fc regione koji su dobijeni genetičkim inženjeringom, koji se lako generišu inkorporacijom različitih konstantnih regiona i/ili uvođenjem jedne ili više aminokiselinskih supstitucija, dodataka ili delecija. Na primer, gde je poželjno bispecifično antitelo, CH2-CH3 domeni koji nose dugmad i rupe se koriste da bi se olakšala heterodimerizacija. Himerna anti-PD-1 antitela koja sadrže mišje varijabilne domene i humane konstantne regione se generišu kao što je gore opisano.
[0424] Humanizovana antitela (IgG1 (AA) i/ili IgG4 (P)) su testirana na vezujuće i blokirajuće aktivnosti kao što je gore opisano. Vezivanje humanizovanih antitela za humani PD-1 (shPD-1 His i shPD-1 hFc) i PD-1 cinomolgus majmuna (shPD-L1 hFc) bilo je uporedivo sa onim kod odgovarajućih mišjih antitela. Pored toga, humanizovana antitela su zadržala sposobnost da blokiraju vezivanje humanog PD-L1 za humani PD-1 u ELISA testu.
[0425] Kinetika vezivanja mišjih antitela PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 15, humanizovanih antitela hPD-1 mAb 2, hPD-1 mAb 7(1,2), hPD-1 mAb 9(1,1), hPD-1 mAb 15, i referentnih anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B ispitivana je korišćenjem Biacore analize. Anti-PD-1 antitela su uhvaćena na imobilizovanom proteinu A i inkubirana sa rastvornim humanim PD-1 (shPD-1-His) ili rastvornim ljudskim cinomolgus majmunskim PD-1 Fc fuzijom (scyno PD-1 hFc) odcepljenim da se ukloni Fc deo, a kinetika vezivanja je određena Biacore analizom. U dodatnim studijama anti-PD-1 antitela hPD-1 mAb 7(1,2) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7(1,2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 9(1,1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 9(1,1) IgG4 (P), PD-1 mAb A IgG1 (AA), PD-1 mAb A IgG4 (P), PD-1 mAb B IgG1 (AA), i PD-1 mAb B IgG4 (P), su uhvaćeni na imobilizovanom F(ab)2 kozjem anti-humanom Fc i kinetika vezivanja je određena Biacore analizom kao što je gore opisano. Izračunate ka, kd i KD iz ovih studija prikazani su u tabeli 7
<a>
His tagovan rastvoran humani PD-1 (shPD-1 His)
<b>rastvoran PD-1 cinomolgus majmuna (scyno PD-1 hFc) otcepljen
[0426] Rezultati pokazuju da PD-1 mAb 7 i humanizovano hPD-1 mAb 7(1,2) pokazuju bolju kinetiku vezivanja u odnosu na referentna anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A and PD-1 mAb B. PD-1 mAb 2, i hPD-1 mAb 2 pokazuju kinetiku vezivanja unutar oko dva puta u odnosu na referentna anti-PD-1 antitela, dok PD-1 mAb 9, hPD-1 mAb 9(1,1), PD-1 mAb 15, i hPD-1 mAb 15 pokazuje kinetiku vezivanja unutar oko 2-6 puta u odnosu na referentna anti-PD-1 antitela.
[0427] Ispitivana je specifičnost tkiva anti-humanog PD-1 antitela PD-1 mAb 7. Normalno tkivo je kontaktirano sa PD-1 mAb 7 ili sa izotipnom kontrolom (0,313 µg/mL) i vizuelizovan je stepen bojenja. Za endogeni enzimski blok za smanjenje nespecifičnog bojenja mucina u tkivu debelog creva korišćen je Bloxall. Kao što je prikazano na slici 10A, paneli i-xii, PD-1 mAb 7 i izotipnaa kontrola nisu uspeli da obeleže ćelije normalnog debelog creva, jetre, pluća, pankreasa, bubrega i srčanog tkiva. Pored toga, PD-1 mAb 7 i izotipna kontrola nisu uspeli da obojeju normalnu kožu (Slika 10B, Paneli i-ii). Nasuprot tome, otkriveno je da PD-1 mAb 7 snažno obeležava limfocite prisutne u normalnom tkivu krajnika i PDCD1 transfektovane NSO ćelije koje eksprimiraju PD-1 (slika 10B, paneli iii i v), dok izotipnaa kontrola nije uspela da obeleži nijedno (slika 10B, Paneli iv i vi). Rezultati predstavljeni na slikama 10A-10B pokazuju da je PD-1 mAb 7 bilo sposobno da se specifično vezuje za limfocite i ćelije koje eksprimiraju PD-1.
[0428] Ispitivani su profili zasićenja vezivanja hPD-1 mAb 2 IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7(1,1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7(1,2) IgG1, (AA), hPD-1 mAb 7(1,2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 9(1,1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 9(1,1) IgG4 (P), hPD-1 mAb 15 IgG1 (AA), i referentni anti-PD -1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B. Ukratko, svako od anti-PD-1 antitela, PD-1 mAb 1-15, ili referentnih anti-PD-1 antitela (PD-1 mAb A i PD-1 mAb B) je pomešano sa NSO ćelijama koje eksprimiraju humani PD -1 (~250.000 ćelija/ležištu) u puferu za blokiranje (FACS 10% humanog serumskog albumina). Za ove studije su korišćena anti-PD-1 antitela u koncentraciji od 50, 12,5, 3.13, 2,0 ×10<-1>, 4,9 × 10<-2>, 1,2 × 10<-2>, 3,0 × 10<-3>, 1,9 × 10<-4>, 7,6 × 10<-4>, 4,75 × 10<-5>, ili 1,19 × 10<-5>µg/testu (četvorostruka serijska razblaženja). Količina vezivanja antitela za površinu NSO ćelija je određena korišćenjem kozjeg anti-humanog-APC sekundarnog antitela pomoću FACS analize. Reprezentativne krive zasićenja su prikazane na slici 11. Određene su vrednosti EC50 i EC90, a srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD s) iz četiri odvojena eksperimenta su date u tabeli 8.
[0429] Studije vezivanja do zasićenja pokazuju da humanizovane PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9, i PD-1 mAb 15 imaju povoljan profil za vezivanje za površinu ćelije PD-1. Posebno, humanizovana PD-1 mAb 7 (hPD-1 mAb 7(1,1), and hPD-1 mAb 7(1,2) koja imaju ili IgG1 (AA) ili IgG4 (P) Fc region)) imaju najniže vrednosti EC90 od svih ispitivanih antitela.
[0430] Da bi se dalje karakterisala humanizovana anti-PD-1 antitela hPD-1 mAb 2 IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7(1,1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7(1,2) IgG1, (AA), hPD-1 mAb 7(1,2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 9(1,1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 9(1,1) IgG4 (P), i hPD-1 mAb 15 IgG1 (AA), ispitana je njihova sposobnost da blokiraju vezivanje humanog PD-L1 (shPD-L1) i humanog PD-L2 (shPD-L2) za PD-1 eksprimiran na površini NSO ćelija. Ovi testovi su izvedeni u suštini kao što je gore opisano. Reprezentativne krive za inhibiciju vezivanja sPD-L1 i sPD-L2 za PD-1 izražene na NSO ćelijama prikazane su na slikama 12A i 12B, respektivno. Određene su vrednosti IC50 i IC90, a srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ) iz tri odvojena eksperimenta su date u tabeli 9.
[0431] Studije inhibicije vezivanja liganda pokazuju da su humanizovane verzije PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 sposobne da inhibiraju vezivanje sPD-L1 i sPD -L2 do PD-1 na površini ćelije. Posebno, humanizovana PD-1 mAb 7 (hPD-1 mAb 7(1,1) i hPD-1 mAb 7(1,2)) imaju najniže vrednosti IC90 od svih ispitivanih antitela.
Primer 3
Blokada PD-1/PD-L1 kontrolne tačke humanizovanim anti-humanim PD-1 antitelima
[0432] Sposobnost hPD-1 mAb 2 IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7(1,1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7(1,2) IgG1, (AA), hPD-1 mAb 7(1,2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 9(1,1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 9(1,1) IgG4 (P), hPD-1 mAb 15 IgG1 (AA), i referentnog anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B da antagonizuju osu PD-1/PD-L1 (tj. blokiraju interakciju PD-1/PD-L1 i spreče nishodnu regulacija odgovora T-ćelija) je ispitan u testu Jurkat-luc-NFAT / CHO-PD-L1 luciferaza reporter. Ukratko, ćelije CHO koje eksprimiraju PD-L1 (CHO/PD-L1) su nanete u koncentraciji od 40.000/ležištu u 100 µL medijuma za kulturu (RPMI 10% FBS 100 µg/mL Higromicin B 100 µg/mL G418) i inkubirane preko noći . Sledećeg dana medijum je uklonjen i dodate su MNFAT-luc2/PD-1 Jurkat ćelije (Promega) u koncentraciji od 50.000 ćelija/ležištu u 40 µL u puferu za ispitivanje (RPMI 2% FBS), i anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15, ili referentna anti-PD-1 antitela (PD-1 mAb A i PD-1 mAb B) (0-25 µg/mL; osam 2,5 puta serijskih razblaženja u puferu za ispitivanje) u svako ležišste i inkubirana su 6 sati na 37°C, a zatim inkubirana 5-10 minuta na temperaturi okoline.80 µL BioGlo supstrata (Promega) je zatim dodato u svako ležište i ploča je inkubirana dodatnih 5-10 minuta na sobnoj temperaturi, luminiscencija je izmerena u čitaču ploča Victor Plate Reader. Reprezentativne krive zasićenja su prikazane na slici 13. Određene su vrednosti EC50 i EC90, i srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD s) iz četiri odvojena eksperimenta su date u tabeli 10.
[0433] Studije signalizacije reportera pokazuju da humanizovane verzije PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 mogu da blokiraju osu PD-1/PD-L1 i spreče smanjenje odgovora T-ćelija. Posebno, humanizovana PD-1 mAb 7 (hPD-1 mAb 7(1,1) i hPD-1 mAb 7(1,2) koja imaju ili IgG1 (AA) ili IgG4 (P) Fc region)) imaju najniže vrednosti EC50/EC90.
Primer 4
Funkcionalna aktivnost anti-humanih PD-1 antitela
[0434] Enterotoksin Staphylococcus aureus tipa B (SEB) je mikrobni superantigen sposoban da aktivira veliki deo T-ćelija (5-30%) kod donatora koji reaguju na SEB. SEB se vezuje za MHC II izvan žljeba za vezivanje peptida i stoga je MHC II zavisan, ali neograničen i posredovan TCR-om. SEB-stimulacija T-ćelija dovodi do oligoklonske proliferacije T-ćelija i proizvodnje citokina (iako se može primetiti varijabilnost donora i neki donatori neće reagovati). U roku od 48 sati od SEB-stimulacije PMBC povećavaju regulaciju PD-1 i LAG-3 sa daljim poboljšanjem, videti 5. dan, post-sekundarnu kulturu u ploči sa 96 ležišta sa SEB-stimulacijom. Povećana regulacija proteina kontrolne tačke imunog sistema PD-1 i LAG-3 nakon SEB-stimulacije PBMC ograničava oslobađanje citokina nakon restimulacije. Ispitivana je sposobnost anti-PD-1 antitela samih i u kombinaciji sa anti-LAG-3 antitelima da pojačaju oslobađanje citokina putem inhibicije kontrolnih tačaka.
[0435] Ukratko, PBMC su prečišćeni korišćenjem Ficoll-Paque Plus (GE Healthcare) metode centrifugiranja sa gradijentom gustine prema uputstvima proizvođača iz pune krvi dobijene uz informisani pristanak od zdravih davalaca (Biological Specialti Corporation), a T ćelije su zatim prečišćene korišćenjem Dinabeads ® komplet Ficoll-Paque Plus (GE Healthcare) prema uputstvima proizvođača. Prečišćene PBMC su kultivisane u RPMI-medijumu 10% toplotno inaktivirani FBS 1% penicilin/streptomicin u T-25 bocama za 2-3 dana sami ili sa SEB (Sigma-Aldrich) pri 0,1 ng/mL (primarna stimulacija). Na kraju prve runde SEB-stimulacije, PBMCs su dva puta isprani PBS-om i odmah postavljeni u ploče za kulturu tkiva sa 96 ležišta u koncentraciji od 1-5 × 10<5>ćelija/ležitu samo u medijumu, medijumu sa kontrolom ili anti-PD-1 antitelom, medijum sa SEB na 0,1 ng/mL (sekundarna stimulacija) i bez antitela, ili medijum sa SEB i kontrolnim IgG ili anti-PD-1 antitelom /-anti-LAG-3 mAb, i kultivisana dodatna 2-3 dana. Na kraju druge stimulacije, supernatanti su sakupljeni za merenje sekrecije citokina korišćenjem humanih DuoSet ELISA kompleta za IFNy, TNFα, IL-10, i IL-4 (R&D Systems) prema uputstvima proizvođača.
[0436] Ispitana je sposobnost PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 samih ili u kombinaciji sa jedinstvenim anti-LAG-3 antitelom LAG-3 mAb 1 da povećaju oslobađanje citokina putem inhibicije kontrolnih tačaka. Ove studije su takođe uključivale jedno ili više od sledećih referentnih anti-PD-1 antitela: PD-1 mAb A; PD-1 mAb B; i LAG-3 mAb A, sam ili u kombinaciji. Slika 14 prikazuje profile sekrecije IFNy iz PBMC stimulisanih SEB (0,1 ng/mL) reprezentativnog donatora koji reaguje (D:38941), tretiranih sa: bez antitela; antitelo izotipne kontrole; PD-1 mAb 7 i/ili LAG-3 mAb 7; PD-1 mAb 9 i/ili LAG-3 mAb 1; PD-1 mAb 15 i/ili LAG-3 mAb 1; PD-1 mAb 2 i/ili LAG-3 mAb 1; ili referentna anti-PD-1 antitela PD-1 mAb B i/ili LAG-3 mAb A (antitela su korišćena u količini od 10 µg/mL).
[0437] U dodatnim studijama sposobnost humanizovanih verzija PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 (sadrže humani IgG1 (AA) ili humani IgG4 ( P) Fc region) kao i referentna anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B za poboljšanje oslobađanja citokina putem inhibicije kontrolnih tačaka. Za ove studije antitela su korišćena u količini od 0,625, 2,5 i 10 µg/mL. Slike 15A-15B prikazuju IFNy (Slika 15A) i TNFα (Slika 15B), profile sekrecije od PBMC stimulisanih SEB (0,2 ng/mL) od reprezentativnog donatora koji reaguje (D:57709), lečenih bez antitela ili jednog od sledećih antitela: izotipna kontrola; hPD-1 mAb 2 IgG1 (AA); hPD-1 mAb 7(1,2) IgG1 (AA); hPD-1 mAb 7(1,2) IgG4 (P); hPD-1 mAb 9(1,1) IgG1 (AA); hPD-1 mAb 9(1,1) IgG4 (P); hPD-1 mAb 15 IgG1 (AA); or the reference anti-PD-1 antibodies PD-1 mAb A IgG1 (AA), PD-1 mAb A IgG4 (P), PD-1 mAb B IgG1 (AA), PD-1 mAb B IgG4 (P). Ukupni pg/mg IFNy u uzorcima tretiranim sa SEB+Ab je određen za uzorke tretirane anti-PD-1 antitelima u koncentraciji od 0,625, 2,5 i 10 µg/mL i srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ) od 3 različita davalaca koji reaguju (osim tamo gde je navedeno) dati su u tabeli 11. Odnos IFNy izlučenog u uzorku tretiranom humanizovanim verzijama PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9, i PD-1 mAb 15 (koji sadrži humani IgG1 (AA) ili humani IgG4 (P) Fc region) preko referentnih anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B (tj. humanizovani anti- PD-1/PD-1 mAb A i humanizovano anti-PD-1/PD-1 mAb B) je dat u tabeli 12 i tabeli 13, respektivno
[0438] Rezultati ovih studija pokazuju da su PD-1 antitela PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 dramatično poboljšala IFNγ (Slike 14 i 15A, i tabele 11-13), i proizvodnju TNFα (Slika 15B) iz SEB-stimulisanih PBMC posle restimulacije. Pored toga, kombinacija anti-PD-1 antitela sa anti-LAG-3 antitelima je dovela do daljeg poboljšanja oslobađanja citokina (Slika 14) iz SEB-stimulisanih PBMC posle restimulacije. Konkretno, kombinacija PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 ili PD-1 mAb 15 sa jedinstvenim anti-LAG-3 antitelom LAG-3 mAb 1 obezbedila je najveće poboljšanje.
Primer 5
Studije vezivanja bispecifičnih molekula PD-1 × LAG-3
[0439] Generisan je određen broj PD-1 × LAG-3 bispecifičnih molekula, uključujući dijatela koja sadrže Fc region koja se sastoje od tri, četiri i pet lanaca i bispecifično antitelo. Četiri dijatela koja imaju četiri lanca i sadrže domene za promociju heterodimera E/K-zavojnice su generisana i dodeljena su oznakama "DART A," "DART B," "DART C, i "DART I." Četiri dijatela koja imaju četiri lanca i sadrže CH1 /CL domeni su generisani i dobili su oznake "DART D," "DART E," "DART J," i "DART I." Dva dijatela koja imaju pet lanaca i koja sadrže domene za promovisanje heterodimera E/K-zavojnice i CH1/CL. Domene su generisani i dobili su oznake "DART F," and "DART G ". Jedno dijatelo koje ima tri lanca i koje se sastoji od domena koji promovišu heterodimer E/K-zavojnice i dobilo je oznaku "DART H." Jedno bispecifično antitelo sa četiri lanca je generisano i označeno je kao "BSAB A." Struktura i aminokiselinske sekvence ovih PD-1 × LAG-3 bispecifičnih molekula su date gore i sumirane su u tabeli 14 ispod.
[0440] Dodatni PD-1 × LAG-3 bispecifični molekuli koji sadrže alternativna mesta za vezivanje epitopa PD-1 i/ili LAG-3 mogu se lako generisati ugradnjom različitih VH i VL domena. Slično, molekuli koji vezuju antigen koji nije LAG-3 mogu se generisati ugradnjom VH i VL koji imaju željenu specifičnost.
[0441] Profili zasićenja vezivanja PD-1 × LAG-3 bispecifičnih dijatela konstrukata: DART A, DART B, DART D, DART E, DART F, DART G, DART H, DART I i DART I; anti-PD-1 antitela hPD-1 mAb 7(1,2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 7(1,2) IgG1 (AA), PD-1 mAb A IgG1 (AA) and PD-1 mAb A IgG4 (P); i anti-LAG-3 antitela: hLAG-3 mAb 1(1,4) IgG4 (P), LAG-3 mAb A IgG4 (P), hLAG-3 mAb 1(1,4) IgG1 (AA), i LAG-3 mAb A IgG1 (AA) su ispitani u suštini kao što je gore opisano. Konstrukti PD-1 × LAG-3 bispecifičnog dijatela su testirani na vezivanje i za PD-1 i za LAG-3, dok su anti-PD-1 i anti-LAG-3 antitela testirana samo na vezivanje za njihove odgovarajuće antigene. Za ove studije korišćene su NSO ćelije koje eksprimiraju PD-1 ili LAG-3. Dijatela i antitela su iskorišćena (170,0-0,013 µM ili 85,0-0,0021 µM (četvorostruka serijska razblaženja). Određene su vrednosti EC50 i EC90 i prikazane su u Tabelama 15-16. Srednja vrednost uzorka (SM ) i standardna devijacija (SD σ) su dati tamo gde su izvedena 2 ili više odvojenih eksperimenata
[0442] Studije vezivanja do zasićenja pokazuju da konstrukti bispecifičnog dijatela PD-1 × LAG-3 zadržavaju vezivanje za PD-1 i da imaju profile vezivanja koji su slični profilima vezivanja roditeljskih anti-PD-1 antitela. Slično, konstrukti bispecifičnog dijatela PD-1 × LAG-3 zadržavaju vezivanje za LAG-3 i, sa izuzetkom DART I, imaju profile vezivanja koji su slični profilima vezivanja roditeljskih anti-LAG-3 antitela.
Primer 6
PD-1 × LAG-3 Studije inhibicije bispecifičnih molekula
[0443] Sposobnost PD-1 × LAG-3 bispecifičnih molekula: DART A, DART B, DART D, DART E, DART F, DART G, DART H, DART I, DART Ii BSAB A; i anti-PD-1 antitela: hPD-1 mAb 7(1,2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 7(1,2) IgG1 (AA), PD-1 mAb A IgG1 (AA) i PD-1 mAb A IgG4 (P), da blokira vezivanje humanog PD-L1 (shPD-L1) i humanog PD-L2 (shPD-L2) za PD-1 eksprimiran na površini NSO ćelija, ispitana je u suštini kao što je gore opisano. Dijatela i antitela su korišćena u koncentraciji od 33,75-0,002 µM ili 107,5-0,0001 µM (četvorostruka serijska razblaženja).
[0444] Vrednosti IC50 i IC90 su određene i predstavljene su u tabeli 17. Srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ) su date gde su izvedena 2 ili više odvojenih eksperimenata.
[0445] Studije inhibicije vezivanja liganda pokazuju da konstrukti bispecifičnog dijatela PD-1 × LAG-3 zadržavaju sposobnost da inhibiraju vezivanje sPD-L1 i sPD-L2 za PD-1 na površini ćelije.
[0446] Pored toga, ispitana je sposobnost PD-1 × LAG-3 bispecifičnih molekula: DART A, DART B, DART D, DART E, DART F, DART G, DART H, DART I, DART Ii BSAB A; i anti-LAG-3 antitela: hLAG-3 mAb 1(1,4) IgG4 (P), LAG-3 mAb A IgG4 (P), hLAG-3 mAb 1(1,4) IgG1 (AA), i LAG-3 mAb A IgG1 (AA), da blokira vezivanje humanog LAG-3 za nativni MHC klase II na površini Daudi ćelija. Ukratko, svaki PD-1 × LAG-3 bispecifični molekul i kontrolno anti-LAG-3 antitelo su pomešani sa biotinilovano rastvornim humanim LAG-3-Fc fuzionim proteinom (shLAG-3), (od 0,5 µg/ml) i odvojeno su inkubirani sa MHC II-pozitivnim Daudi ćelijama (2,5 × 10<6>ćelija). Količina LAG-3 vezivanja za površinu Daudi ćelija je određena korišćenjem PE-konjugovanog sekundarnog Streptavidin antitela pomoću FACS analize.
Dijatela i antitela su korišćena u 27,5-0,026 µM (dvostruka serijska razblaženja) ili 107,5-0,0001 µM (četvorostruka serijska razblaženja), ili 35-0,002 µM (četvorostruka serijska razblaženja).
[0447] Vrednosti IC50 i IC90 su određene i predstavljene su u tabeli 18. Srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ) su date gde je izvedeno 2 ili više odvojenih eksperimenata
[0448] Studije inhibicije vezivanja liganda pokazuju da konstrukti bispecifičnog dijatela PD-1 × LAG-3 zadržavaju sposobnost da inhibiraju vezivanje fuzionog proteina shLAG-3-Fc za MHC klasu II na površini ćelije. Sa izuzetkom DART I, PD-1 × LAG-3 bispecifični molekuli imaju slične profile inhibicije kao roditeljska anti-LAG-3 antitela.
Primer 7
Blokada PD-1/PD-L1 kontrolne tačke sa PD-1 × LAG-3 bispecifičnim molekulima
[0449] Sposobnost PD-1 × LAG-3 bispecifičnih molekula: DART A, DART B, DART D, DART E, DART F, DART G, DART H, DART I, DART Ii BSAB A; i anti-PD-1 antitela: hPD-1 mAb 7(1,2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 7(1,2) IgG1 (AA), PD-1 mAb A IgG1 (AA) i PD-1 mAb A IgG4 (P), da antagonizuje osu PD-1/PD-L1 (tj., blokira interakciju PD-1/PD-L1 i sprečava nishodnu regulaciju odgovora T-ćelija) ispitan je u testu Jurkat- luc2-NFAT/CHO-PD-L1 luciferaza reporter (koristeći CHO/PD-L1 ćelije i MNFAT-luc2/PD-1 Jurkat ćelije) u suštini kao što je prethodno opisano. Dijatela i antitela su korišćena u količini od 100-0,0065 µM (četvorostruka serijska razblaženja) ili 100-0,0013 µM (petostruka serijska razblaženja).
[0450] Vrednosti IC50 i IC90 su određene i predstavljene su u tabeli 19. Srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ) su date gde je izvedeno 2 ili više odvojenih eksperimenata.
[0451] Studije signalizacije reportera pokazuju da većina PD-1 × LAG-3 bispecifičnih dijatela konstrukata zadržava sposobnost da inhibira vezivanje sPD-L1 za PD-1 na površini ćelije. Tetravalentni PD-1 × LAG-3 konstrukti bispecifičnog dijatela, DART A, DART B, DART D, DART-E, DART F, DART G i DART I su bili najjači inhibitori u ovom testu. Slični rezultati su dobijeni za nekoliko ovih bispecifičnih konstrukata ispitanih u PD-L2 reporter testu.
Primer 8
Funkcionalna aktivnost PD-1 × LAG-3 bispecifičnih molekula
[0452] Sposobnost PD-1 × LAG-3 bispecifičnih molekula da pojačaju oslobađanje citokina putem inhibicije kontrolne tačke ispitana je u SEB-stimulisanim PBMC nakon restimulacije u suštini kao što je gore opisano, osim gde je drugačije naznačeno.
[0453] U početnim studijama ispitana je sposobnost PD-1 × LAG-3 bispecifičnih molekula: DART A, DART D, DART E, DART F, DART G, DART H; i anti-PD-1 i anti-LAG antitela: PD-1 mAb A IgG4 (P) i LAG-3 mAb A IgG4 (P), sâmi ili u kombinaciji za poboljšanje oslobađanja citokina putem inhibicije kontrolnih tačaka. U ovim testovima PD-1 × LAG-3 bispecifični molekuli i antitela su korišćeni u ukupnoj koncentraciji od 3,125, 12,5 ili 50 nM, a PBMC su stimulisani sa 0,2 ng/mL SEB (prethodne studije su koristile 0,1 ng/mL). Za ove studije, gde se koristi kombinacija antitela, svako antitelo je obezbeđeno u polovini ukupne koncentracije (tj.1,563, 6,25 ili 25 nM). Slike 16A i 16B prikazuju profile sekrecije IFNi iz PBMC stimulisanih SEB od dva reprezentativna donatora koji su odgovorili, D: 35644 i D:
59697, respektivno.
[0454] Kao što je navedeno, ne reaguju svi donatori na SEB pri 0,1 ili 0,2 ng/mL. Da bi se poboljšala SEB stimulacija PBMC od većeg broja donatora, SEB je korišćen u visokoj koncentraciji od 85 ng/mL, ili srednjoj koncentraciji od 0,5 ng/mL u dodatnim ispitivanjima. Pri ovim koncentracijama stimulacija SEB-a je snažnija kod više donatora, iako se i dalje može videti varijabilnost od donatora do donora.
[0455] U jednoj takvoj studiji ispitana je sposobnost PD-1 × LAG-3 bispecifičnih molekula: DART A, DART B; anti-PD-1 antitelo: hPD-1 mAb 7(1,2) IgG4(P); anti-LAG-3 antitelo: LAG-3 mAb 1(1,4) IgG4(P); i kombinacija: PD-1 mAb A IgG4 (P) i LAG-3 mAb A IgG4 (P), da bi se poboljšalo oslobađanje citokina putem inhibicije kontrolne tačke. U ovim testovima PD-1 × LAG-3 bispecifični molekuli i antitela su korišćeni u koncentraciji od 0,019, 0,078, 0,3125, 1,25, 5 ili 20 nM, a PBMC su stimulisani sa 85 ng/mL SEB . Za ovaj test gde se koristi kombinacija antitela svako antitelo je obezbeđeno u naznačenoj koncentraciji i stoga je ukupna koncentracija antitela dvostruko veća od koncentracije koja se koristi za svako antitelo (tj.0,038, 0,156, 0,625, 2,5, 10 ili 40 nM ). Slike 17A i 17B prikazuju profile sekrecije IFNy iz PBMC stimulisanih SEB od dva reprezentativna donatora, D: 55515 i D: 54024, respektivno.
[0456] U drugoj studiji ispitani su PD-1 × LAG-3 bispecifični molekuli: DART A, DART B, DART C; anti-PD-1 antitelo: hPD-1 mAb 7(1,2) IgG4(P); anti-LAG-3 antitelo: LAG-3 mAb 1(1,4) IgG4(P); i kombinacija: PD-1 mAb A IgG4 (P) i LAG-3 mAb A IgG4 (P), da bi se poboljšalo oslobađanje citokina putem inhibicije kontrolne tačke. U ovim testovima korišćeni su PD-1 × LAG-3 bispecifični molekuli i antitela u ukupnoj koncentraciji od 0,048, 0,195, 0,78, 3,125, 12,5 ili 50 nM, a PBMC su stimulisani sa 0,5 ng/ mL SEB. Za ove studije, gde se koristi kombinacija antitela, svako antitelo je obezbeđeno u polovini ukupne koncentracije (tj.0,024, 0,098, 0,39, 1,563, 6,25 ili 25 nM). Slike 18A i 18B prikazuju profile sekrecije IFNy iz PBMC stimulisanih SEB od dva reprezentativna donatora, D: 20990 i D: 54947, respektivno).
[0457] U daljoj studiji, ispitivano je oslobađanje citokina IL-2. Posebno, PD-1 × LAG-3 bispecifični molekuli: DART D, DART H; anti-PD-1 antitela: PD-1 mAb A IgG4 (P), hPD-1 mAb 7(1,2) IgG4(P); anti-LAG-3 antitela: LAG-3 mAb A IgG4 (P) LAG-3 mAb 1(1,4) IgG4(P); i kombinacija: PD-1 mAb A IgG4 (P) i LAG-3 mAb A IgG4 (P), i hPD-1 mAb 7(1,2) IgG4(P) i LAG-3 mAb 1(1,4) IgG4(P),za poboljšanje oslobađanja IL-2 putem inhibicije kontrolnih tačaka. U ovim testovima korišćeni su PD-1 × LAG-3 bispecifični molekuli i antitela u ukupnoj koncentraciji od 3,125, 12,5 ili 50 nM, a PBMC su stimulisani visokom koncentracijom SEB od 85 ng/mL. Za ove studije, gde se koristi kombinacija antitela, svako antitelo je obezbeđeno u polovini ukupne koncentracije (tj.1,563, 6,25 ili 25 nM). Slika 19 prikazuje profil sekrecije IL-2 iz PBMC stimulisanih SEB od reprezentativnog donora (D: 54024).
[0458] U dodatnim studijama ispitani su PD-1 × LAG-3 bispecifični molekuli: DART B i DART I; anti-PD-1 antitela: PD-1 mAb A IgG4 (P),i hPD-1 mAb 7(1,2) IgG4(P); anti-LAG-3 antitela: LAG-3 mAb A IgG4 (P), hLAG-3 mAb 1(1,4) IgG4(P), i hLAG-3 mAb 6(1,1) IgG4 (P); kombinacija: PD-1 mAb A IgG4 (P) i LAG-3 mAb A IgG4 (P), hPD-1 mAb 7(1,2) IgG4(P) i hLAG-3 mAb 1(1,4) IgG4(P), i hPD-1 mAb 7(1,2) IgG4(P) i hLAG-3 mAb 6(1,1) IgG4 (P) za poboljšanje oslobađanja citokina putem inhibicije kontrolnih tačaka. U ovim testovima PD-1 × LAG-3 bispecifični molekuli i antitela su korišćeni u koncentraciji od 0,0061, 0,024, 0,09, 0,39, 1,56, 6,25 ili 25 nM, a PBMC su stimulisani sa 0 ,5 ng/mL SEB. Za ove studije, gde se koristi kombinacija antitela, svako antitelo je obezbeđeno u naznačenoj koncentraciji i stoga je ukupna koncentracija antitela dvostruko veća od koncentracije koja se koristi za svako antitelo (tj.0,0122, 0,048, 0,18, 0,78, 3.12, 12,5 ili 50 nM). Slika 20 prikazuje profile sekrecije IFNy iz PBMC stimulisanih SEB od reprezentativnog donatora D: 56041).
[0459] Ispitana je sposobnost PD-1 × LAG-3 bispecifičnog molekula DART I; kombinacije anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A IgG4 i anti-LAG-3 antitela LAG-3 mAb A IgG4 (P); i antitela negativne kontrole za poboljšanje odgovora T ćelija specifičnih za antigen primenom testa opoziva toksoid tetanusa.
Posebno, odgovor na antigen-specifično pojačano lučenje citokina je meren korišćenjem toksoida tetanusa kao opoziv antigena u sistemu testa ko-kulture. Ukratko, CD4 memorijske T ćelije (0,5 - 1,0 X10<5>ćelija/ležištu) su izolovane korišćenjem kompleta za izolaciju negativne (Miltenyi Biotec, San Diego, CA and Invitrogen, Carlsbad, CA) iz periferne krvi čoveka i kultivisane 5-7 dana sa ozračenim monocitima (0,01 - 0,05X10<5>ćelija/ležištu, 3500 rada) od istog donatora u prisustvu ili odsustvu 5 µg/mL opoziv antigena tetanus toksoida (TTd) i razblaženja (počev od 25 nM) DART I , PD-1 mAb A IgG4 LAG-3 mAb A IgG4(P), ili izotipne kontrole. U paralelnim pločama, proliferacija je merena kroz ugradnju tritiranog timidina i IL-2, a I IFNy je meren korišćenjem ELISA (R&D systems, Minneapolis, MN) dana 5-7. Slike 21A-D prikazuju profile sekrecije IFNγ (Slike 21A, 21C) i IL-2 (Slika 21B, 21D) na dan 7, od dva reprezentativna donora (D50702 i D54267).
[0460] Rezultati ovih studija pokazuju da PD-1 × LAG-3 bispecifični molekuli dramatično povećavaju proizvodnju IFNγ (Slike 16A-16B, 17A-17B, 18A-18B, 20) i IL-2 (Slika 19) iz SEB-stimulisani PBMC nakon restimulacije. Pored toga, bispecifični molekuli PD-1 × LAG-3 dramatično su povećali proizvodnju IFNγ (Slike 21A i 21C) iz CD4 memorijskih T ćelija stimulisanih toksoidom tetanusa. Posebno, tetravalentni PD-1 × LAG-3 bispecifični molekuli dali su veće poboljšanje od kombinacije anti-PD-1 antitela sa anti-LAG-3 antitelima.
Primer 9
Farmakokinetika PD-1 × LAG-3 bispecifičnih molekula
[0461] Farmakokinetika reprezentativnog PD-1 × LAG-3 bispecifičnog molekula, DART I i reprezentativnog anti-PD-1 antitela, PD-1 mAb A, ispitana je kod Cinomolgus majmuna. Ukratko, dva cinomolgus majmuna (jedan mužjak i jedna ženka) su dobili jednu dozu DART I (5 mg/kg) ili PD-1 mAb A (10 mg/kg), a koncentracija molekula u serumu je praćena tokom vremena koristeći sendvič ELISA test. Ukratko, maxsorb ploče za analizu sa 96 ležišta su obložene rastvornim humanim PD-1 (shPD-1), blokirane goveđim serum albuminom, isprane i inkubirane sa kalibracionim standardima, standardima za kontrolu kvaliteta i razblaženim uzorcima seruma. Količina uhvaćenog DART I i PD-1 mAb A procenjena je sekvencijalnim dodavanjem kozjeg anti-humanog sekundarnog IgG Fc-biotina i streptavidin-peroksidaze rena (SA-HRP). HRP aktivnost je otkrivena korišćenjem TMB supstrata. Svi uzorci su analizirani čitačem mikroploča (SpectraMak M2e, Molecular Device, Sunnivale, CA) i OD signali proizvedeni od strane standardnih kalibratora korišćeni su u četvoroparametarskom logističkom modelu korišćenjem softvera SoftMax Pro (Verzija 5.4, Molecular Devices). Koncentracije PD-1 mAb A, ili DART I su određene interpolacijom podataka OD signala uzoraka sa jednačinom koja opisuje standardnu krivu. Donja granica kvantitacije (LLOQ) za ovaj test je procenjena na 9,775 ng/mL.
[0462] Slika 22 prikazuje koncentraciju u serumu tokom vremena, linije predstavljaju srednju vrednost i mužjaka (popunjeni simboli) i ženki (otvoreni simboli) majmuna kojima je dat DART I (puna linija, trouglovi) ili PD-1 mAb A (isprekidana linija , krugovi). Ovi podaci pokazuju da je farmakokinetika PD-1 × LAG-3 bispecifičnog molekula uporediva sa farmakokinetikom anti-PD-1 antitela kod cinomolgus majmuna.
Primer 10
Toksikološka studija PD-1 antitela i PD-1 × LAG-3 bispecifičnih molekula
[0463] Bezbednosni profil reprezentativnog reprezentativnog anti-PD1 antitela, hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P), i reprezentativnog PD1 × LAG3 bispecifičnog molekula, DART I, procenjen je u ne-GLP (Dobra laboratorijska praksa) studija doziranja kod cinomolgus majmuna.
[0464] U ovoj studiji je procenjena potencijalna toksičnost i toksikokinetika anti-PD-1 antitela (hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P)), kada se primenjuje višestrukim intravenskim infuzijama. Pored toga, procenjena je i potencijalna toksičnost i farmakokinetika PD-1 × LAG-3 DART molekula (DART I), kada se daje jednom intravenskom infuzijom. Dizajn studije je predstavljen u tabeli 20.
[0465] U ovoj studiji su procenjeni sledeći parametri i krajnje tačke: klinički znaci, telesna težina, potrošnja hrane, telesna temperatura, parametri kliničke patologije (hematologija, koagulacija i klinička hemija), bioanaliza i toksikokinetički parametri, analiza antitela na lek, protočna citometrija, citokin, grubi nalazi nekropsije, težine organa i histopatološki pregledi.
[0466] Sve životinje su preživele do zakazane eutanazije 18. ili 22. dana ili puštanja iz studije 29. dana. Za hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) nije bilo promena u kliničkim znacima, hrani u vezi sa ispitivanim uzorkom, potrošnju, telesnu težinu, telesnu temperaturu, hematologiju, koagulaciju ili kliničkohemijske parametre, ili grube nalaze obdukcije. Dana 18. i 22., povećanje težine slezine i blagi do umereni limfohistiocitni infiltrat crvene pulpe u zavisnosti od doze bili su evidentni kod životinja koje su primale hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) u dozi od 1 ili 100 mg/kg . U poređenju sa okolnim limfocitima, limfohistiocitne ćelije su imale bledu citoplazmu i nepravilna jezgra. Retke mitozne figure su bile evidentne. Infiltrat je bio mikroskopski korelat za povećanu težinu slezine.
[0467] Profili koncentracije i vremena u serumu za životinje kojima je dato hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) pokazuju profil koji se očekuje za antitelo u ovoj vrsti, sa nekoliko izuzetaka. Nagibi krivih nakon treće doze su opali oštrije nego nakon prve doze za dve životinje u grupi sa dozom od 1 mg/kg i dve životinje u grupi sa dozom od 100 mg/kg, što ukazuje na moguću pojavu antitela protiv leka ( ADA) u kasnijim ciklusima. Analiza je pokazala da je 2/4 životinja razvilo ADA u grupi od 1 mg/kg, a 1/4 životinja razvilo je ADA u grupi od 100 mg/kg.
[0468] U zaključku, primena hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) intravenskom infuzijom jednom nedeljno tokom 3 nedelje (1., 8. i 15. dan) dobro se podnosila kod cinomolgus majmuna na nivoima od 1 i 100 mg/kg. Blagi do umereni limfohistiocitni ćelijski infiltrat crvene pulpe slezine zavisan od doze bio je prisutan pri 1 i 100 mg/kg hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P).
[0469] Za DART I, nije bilo promena u kliničkim znacima, potrošnji hrane, telesnoj težini, telesnoj temperaturi, hematologiji ili parametrima koagulacije u vezi sa ispitivanim uzorkom. Promene u kliničko-hemijskim parametrima koje se odnose na DART I uključivale su nepoželjna, prolazna povećanja aspartat aminotransferaze (AST) i laktat dehidrogenaze (LDH) na dan 2. Prosečna promena AST bila je 3,2x kontrolne životinje tretirane nosačem i 7,8x pre studije nivoa, sa nivoima iznad referentnog opsega kontrole2. Prosečna promena LDH bila je 2,5x kontrolnih životinja tretiranih nosačem i 6,9x nivoa pre studije. Oba parametra su se 8. dana vratila na nivoe približne početnoj liniji. U zaključku, jednokratna primena DART-I intravenskom infuzijom dobro se podnosila kod cinomolgus majmuna na nivou od 5 mg/kg.
Primer 11
Ispitivanje jedne doza PK sa anti-PD-1 antitelima
[0470] PK studija sa jednom dozom sa odabranim toksikološkim krajnjim tačkama sprovedena je na cinomolgus majmunima. U ovoj studiji, hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) je poređen sa dva druga anti-PD1 IgG4 (P), k mAb: PD-1 mAb A IgG4 (P) i PD-1 mAb B IgG4 (P). Svako antitelo je dato u dozi od 10 mg/kg via jednosatnom intravenskom infuzijom za 2 majmuna (1M, 1F) i životinje su praćene 65 dana.
[0471] Nije bilo kliničkih znakova u vezi sa ispitivanim uzorkom, promena telesne težine, potrošnje hrane, citokina ili imunofenotipizacije povezanih sa administracijom hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) ili PD-1 mAb A IgG4 (P). Podaci su bili slični za PD-1 mAb B IgG4 (P) sa izuzetkom da je uočeno povećanje IL-5 nakon administracije PD-1 mAb B IgG4 (P).
[0472] Vezivanje anti-PD-1 antitela za PD-1 na površini T ćelija je određeno protočnom citometrijom korišćenjem kompetitivne metode u kojoj je srednji intenzitet fluorescencije (MFI) fluorescentno obeleženog hPD-1 mAb 7 (1,2 ) IgG4 (P) vezivanje za T ćelije u odsustvu (PBS kontrola) ili prisustvu viška kompetitora (neobeleženog hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P)) tokom celog perioda uzorka krvi sakupljenih iz cinomolgusa majmuni tretirani sa hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P), PD-1 mAb A IgG4 (P) ili PD-1 mAb B IgG4 (P). Kao što je prikazano na slikama 23A-23C, hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) i PD-1 mAb B IgG4 (P) pokazali su produženo vezivanje za PD-1 na površini CD4+ i CD8+ T ćelija (PD -1 vezivanje održavano na ≥ 80% tokom 28 dana ili više) (Slike 23A i 23C, respektivno) u poređenju sa PD-1 mAb A IgG4 (P) (vezivanje PD-1 održavano na ≥ 80% tokom 21 dana ili manje) ( Slika 23B). Za svako od anti-PD-1 antitela, podaci o vezivanju PD-1 T-ćelija su u korelaciji sa njihovim koncentracijama u serumu.
Primer 12
Toksikološke studije ponovljene doze
[0473] Da bi se procenio bezbednost, toksikokinetički i farmakodinamički profil terapeutskih molekula koji su ovde otkriveni, primer molekula (hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P)) je primenjen cinomolgus majmunima i GLP (Good Laboratori). Praksa) sprovedeno je ispitivanje doziranja. U ovoj studiji, četiri grupe životinja (10 po grupi, 5 mužjaka i 5 ženki) su tretirane sa hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) ili kontrolnim uzorkom, jednom nedeljno infuzijom u 3 nivoa doze. Izvršena je procena životinja na bilo kakvu potencijalnu toksičnost tokom 4-nedeljnog perioda doziranja leka, praćenog montoringom tokom dodatnih 10 nedelja bez lekova. Eksperimentalni dizajn ove studije je predstavljen u Tabeli 21. Životinjama su administrirane doze jednom nedeljno putem jednočasovne intravenske infuzije korišćenjem kalibrisane infuzione pumpe dana 1, 8, 15 i 22 ispitivanja. Jedan mužjak i jedna ženka iz svake grupe su bili žrtvovane 25. dana, preostale životinje su žrtvovane 95. dana studije. Procenjeni su afekti administracije hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) na subpopulacije leukocita u cirkulaciji, uključujući zauzetost PD-1 receptora na T -limfocite. Pored toga, određeni su profili antitela protiv lekova (ADA).
[0474] Jednom nedeljno intravenske (IV) infuzije hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) u dozama od 0, 10, 40 i 150 mg/kg kod cinomolgus majmuna su dobro tolerisane i sve životinje su preživele do predviđenog roka za eutanaziju 25. ili 95. dana. Nije bilo promena vezanih za hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) u kliničkim znacima, potrošnji hrane, telesnoj težini, fizičkim, oftalmološkim i neurološkim pregledima, elektrokardiologiji, telesnoj temperaturi, respiratorne brzine, krvnog pritiska i otkucaja srca, koagulacije, kliničke hemije i parametara analize urina, težine organa ili grubih nalaza nekropsije.
[0475] Promene hematoloških parametara povezane sa hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) uključivale su prolazno smanjenje titra limfocita. Titri limfocita su umereno smanjeni u poređenju sa prethodnom studijom (pred-doza 1. dana) 2. dana (23 sata nakon infuzije) kod mužjaka i žena pri ≥ 10 mg/kg, statistički značajno za mužjake pri koncentraciji 10 i 40 mg/kg i ženke pri koncentraciji 40 i 150 mg/kg u poređenju sa kontrolama. Titri limfocita su se vratili blizu nivoa pre studije 8. dana pred- doze, ali su blago smanjeni za neke pojedinačne mužjake i ženke na svim nivoima doze (0,47x do 0,68x pre studije) 9. dana (23 sata nakon infuzije). Titri limfocita su se povećali pre doziranja 15. i 22. dana, ali su se smanjili za neke pojedinačne mužjake i ženke (0,36k do 0,54k pre studije) 16. i 23. dana (23 sata nakon infuzije).
[0476] Prolazni pad u populaciji imunih ćelija koji cirkuliše, uključujući ukupne leukocite, T ćelije, B ćelije i NK ćelije, nezavisan od doze, primećen je 23 sata nakon završetka infuzije kod živornja tretiranih sa hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P)-u poređenju sa kontrolnom grupom. Najveća uočena promena je primećena nakon primene prve doze prvog dana; manje zapažene promene su prolazno primećene nakon sledećih doza 8.15. ili 22. dana. Populacije imunih ćelija su se generalno oporavile na ili blizu početnih vrednosti do 72 sata nakon EOI i tokom faze oporavka. Nisu primećene promene u cirkulišućim monocitima kod životinja tretiranih sa hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) u poređenju sa kontrolnom grupom.
[0477] Maksimalno vezivanje hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) za PD-1+/CD4+ i PD-1+/CD8+ ćelije primećeno je tokom hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 ( P) faza tretmana studije pri svim ispitivanim dozama (10, 40 ili 150 mg/kg). U fazi oporavka, kod životinja koje nisu razvile odgovore na antitela na lek (ADA), serumske koncentracije hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) su ostale iznad 29 µg/mL i maksimalno hPD-1 mAb 7 (1,2 ) vezivanje IgG4 (P) za PD-1+/CD4+ i PD-1+/CD8+ T ćelije je održano tokom čitavog perioda oporavka od 10 nedelja. Kod ovih životinja nije bilo dokaza o modulaciji PD-1 na T ćelijama. Kod životinja koje su se oporavile i koje su razvile ADA odgovore, učestalost MGD012 vezanih PD-1+ T ćelija je opala na osnovne nivoe. Opadanje maksimalnog vezivanja hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) na PD-1+/CD4+ i PD-1+/CD8+ ćelije ADA-pozitivnih životinja generalno se dešavalo kada su očigledne serumske hPD-1 mAb 7 (1,2) koncentracije IgG4 (P) pale su ispod približno 25 µg/mL. Međutim, nije poznato da li se ovaj očigledni odnos praga osetljivosti odnosi na ADA-negativne životinje, pošto prisustvo ADA kod ADA-pozitivnih životinja može doprineti blokiranju vezivanja PD-1 antitela za PD-1.
[0478] Postojale su minimalne razlike u vezi sa polom u farmakokinetičkim odgovorima hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P), koje su bile linearne u procenjenom opsegu doza (10 do 150 mg/kg). Za hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) pri 10, 40 i 150 mg/kg, kombinovana srednja vrednost Cmaxza pol bila iznosila je 240 µg/mL (0,240 mg/mL), 1078 µg/mL (1,08 mg). /mL) i 3938 µg/mL
[0479] 3,94 mg/mL) i AUC iznosio je 47310 h•µg/mL (47.3 h•mg/mL), 205723 h•µg/mL (206 h•mg/mL), and 745681 h•µg/mL (746 h•mg/mL), respektivno. Srednji klirens nekompartmentalnom analizom (NCA) prvog ciklusa hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) pre pojave ADA, iznosio je 0,21 mL/h/kg, što je znatno niže od glomerularne brzine filtracije kod uzorka cinomolgus majmuna, kao što bi se očekivalo za protein velike molekulske težine. Srednja stabilna zapremina distribucije prema NCA prvog ciklusa hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) bila je 68 mL/kg, oko 1,5 puta više od zapremine seruma, ali manje od ekstracelularnog vodenog prostora . Ovo sugeriše da hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) ekstravazira iz vaskularnog odeljka u ekstracelularni prostor tkiva, ali da ovom molekulu nije bio dostupan sav ekstracelularni prostor. Prosečna vrednost srednjeg vremena boravka (MRT) prema NCA prvog ciklusa hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) bila je 335 sati ili približno 14 dana. Pojava ADA smanjila je koncentraciju hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) u ciklusima 2 do 4. Dokazi o smanjenim koncentracijama hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) u serumu nakon ponovljenih doza hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) primećeni su kod 7/10, 4/10 i 3/10 životinja u grupama doza od 10, 40 i 150 mg/kg, respektivno. Prisustvo ADA protiv hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) potvrđeno je kod 4, 2 i 1 od ovih životinja u grupama doza od 10, 40 i 150 mg/kg, respektivno; sve životinje kod kojih ADA nije potvrđena bile su u grupi terminalne nekropsije tokom koje su koncentracije hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) u serumu verovatno ometale sposobnost detekcije ADA. Shodno tome, u kasnijoj TK analizi, kada je najniža koncentracija bila niža od prethodne najniže koncentracije, podaci od ovog trenutka nadalje su cenzurisani. Iz modeliranja podataka sa dva odeljka u svim ciklusima za 3 dozne grupe, isključujući tačke na koje je uticala ADA, srednje vrednosti za primarne TK parametre za model sa 2 odeljka bile su 0,22 mL/h/kg za klirens, 38,5 mL/kg za početni volumen distribucije (V1), i 33,8 mL/kg za V2, što je dalo srednji volumen distribucije u stabilnom stanju (Vss) od 72,3 mL/kg i MRT od 329 sati. Ove vrednosti su bile u skladu sa parametrima dobijenim od NCA prve doze. U odsustvu ADA, simulacije predviđaju da bi se kod nedeljnih doza stabilno stanje postiglo kod majmuna cinomolgus nakon 5. doze i da bi indeks akumulacije iznosio 2,4.
[0480] Dana 25, minimalni multifokalni perivaskularni mononuklearni ćelijski infiltrati povezani sa hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P)-bili su prisutni u površinskom dermisu na mestu IV injekcije kod muškaraca pri ≥ 40 mg/kg i u ženke na ≥ 10 mg/kg i bile su očekivana reakcija na ponovljeno ubrizgavanje stranog proteina (monoklonsko antitelo). Dana 95. nije bilo zabeleženih mikroskopskih promena povezanih sa hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P), što ukazuje na oporavak promene u vezi sa ispitivanim uzorkom prisutne 25. dana.
[0481] Ukratko, rezultati ove studije pokazuju da se primena hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) putem intravenske infuzije jednom nedeljno (1., 8., 15. i 22. dana) klinički dobro podnosila kod cinomolgus majmuni pri nivoima od 10, 40 ili 150 mg/kg. Uočeni efekti bili su ograničeni na prolazno smanjenje cirkulišućih limfocita i minimalne promene na mestu injekcije povezane sa injekcijom stranog proteina. Na osnovu ovih rezultata, smatralo se da je nivo bez uočenih štetnih efekata (NOAEL) 150 mg/kg (kombinovana srednja vrednost Cmaxza pol od 3,94 mg/mL i AUC od 746 h•mg/mL).

Claims (15)

Patentni zahtevi
1. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za humani PD-1 koje sadrži varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu: pomenuti varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 147, i pomenutu varijabilni domen lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 153 za upotrebu u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji su efikasni u stimulaciji imunog odgovora, pri čemu navedeni jedan ili više dodatnih molekula su antitela, u stimulaciji imunog odgovora posredovanog T-ćelijama kod subjekta kome je to potrebno.
2. Jedan ili više molekula koji su efikasni u stimulaciji imunog odgovora, pri čemu su dati jedan ili više molekula antitela, za upotrebu u kombinaciji sa monospecifičnim monoklonskim antitelom koji se vezuje za humani PD-1 koje sadrži varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, gde: pomenuti varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:147, a navedeni varijabilni domen lakog lanca sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO:153, u stimulaciji imunog odgovora posredovanog T-ćelijama kod subjekta kome je to potrebno.
3. Kombinacija monospecifičnog monoklonskog antitela koji se vezuje za humani PD-1 koje sadrži varijabilni domen p teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu: pomenuti varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 147, i pomenuti varijabilni domen lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 153 i jedan ili više dodatnih molekula koji su efikasni u stimulisanju imunog odgovora, pri čemu navedeni jedan ili više dodatnih molekula su antitela, za upotrebu stimulaciji imunog odgovora posredovanog T-ćelijama kod subjekta kome je to potrebno.
4. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za humani PD-1 koje sadrži varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu: navedeni varijabilni domen teškog lanca obuhvatai aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 147, i navedeni varijabilni domen lakog lanca obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 153 za upotrebu u kombinaciji sa drugim agensom protiv raka, i/ili jednim ili više dodatnih molekula koji specifično vezuju antigen raka, u lečenju raka.
5. Agens protiv raka, i/ili jedan ili više molekula koji specifično vezuju antigen raka, za upotrebu u kombinaciji sa monospecifičnim monoklonskim antitelom koji se vezuje za humani PD-1 koje sadrži varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu: pomenuti varijabilni domen teškog lanca obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 147, a navedeni varijabilni domen lakog lanca obuhvata sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 153, u lečenju raka.
6. Kombinacija monospecifičnog monoklonskog antitela koji se vezuje za humani PD-1 koje sadrži varijabilni domen teškog l anca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu: pomenuti varijabilni domen teškog lanca obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 147, i pomenuti varijabilni domen lakog lanca obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 153, i agens protiv raka i/ili jedan ili više dodatnih molekula koji specifično vezuju antigen raka, za upotrebu u lečenju raka.
7. Anti-humano monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za humani PD-1 za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1 ili 4, jedan ili više molekula koji su efikasni u stimulaciji imunog odgovora za upotrebu prema zahtevu 2, agens provi raka i/ili jedan ili više molekula koji specifično vezuju antigen raka za upotrebu prema zahtevu 5, ili kombinacija za upotrebu prema zahtevu 3 ili 6, pri čemu monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za humani PD-1 je himerno antitelo .
8. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za humani PD-1 za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1, 4 ili 7, jedan ili više molekula koji su efikasni u stimulaciji imunog odgovora prema zahtevima 2 ili 7, agens protiv raka i/ili jedan ili više molekula koji specifično vezuju antigen raka za upotrebu prema zahtevu 5 ili 7, ili kombinacija za upotrebu prema bilo kom od zahteva 3, 6 i 7, pri čemu je monospecifično monoklonsko antitelo koje vezuje humani PD-1 sadrži Fc region.
9. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za humani PD-1, jedan ili više molekula koji su efikasni u stimulisanju imunog odgovora, agens protiv raka i/ili jedan ili više molekula koji specifično vezuju antigen raka, ili kombinacija, za upotrebu prema zahtevu 8, naznačeno time, što:
(a) navedeni Fc region je izotipa IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4;
(b) pomenuto monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za humani PD-1 dalje sadrži zglobni domen; i/ili
(c) navedeni Fc region i navedeni zglobni domen su izotipa IgG4, i pri čemu pomenuti zglobni domen sadrži stabilizujuću mutaciju.
10. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za humani PD-1, jedan ili više molekula koji su efikasni u stimulisanju imunog odgovora, agens protiv raka i/ili jedan ili više molekula koji specifično vezuju antigen raka, ili kombinacija, za upotrebu prema bilo kom od zahteva 8 ili 9, naznačeno time, što:
(a) monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za humani PD-1 obuvata SEQ ID NO: 264 i 265; ili
(b) monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za humani PD-1 obuvata SEQ ID NO: 264 i 266.
11. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje zahumani PD-1, jedan ili više molekula koji su efikasni u stimulisanju imunog odgovora, agens protiv raka i/ili jedan ili više molekula koji specifično vezuju antigen raka, ili kombinacija, za upotrebu prema bilo kom od zahteva 8 ili 9, pri čemu navedeni Fc region je varijanta Fc regiona koji sadrži:
(a) jednu ili više modifikacija amino kiselina koje smanjuju afinitet varijante Fc regiona za FcyR; i/ili
(b) jednu ili više modifikacija aminokiselina koje povećavaju poluživot varijante Fc regiona u serumu;
opciono gde:
(i) navedene modifikacije koje smanjuju afinitet varijante Fc regiona za FcyR obuhvataju supstituciju L234A; L235A; ili L234A i L235A, gde je navedena numeracija ona iz indeksa EU kao u Kabatu; i/ili
(ii) navedene modifikacije koje produžavaju poluživot u serumu varijante Fc regiona obuhvataju supstituciju M252Y; M252Y i S254T; M252Y i T256E; M252Y, S254T i T256E; ili K288D i H435K, pri čemu je navedena numeracija ona iz indeksa EU kao u Kabatu.
12. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za humani PD-1 za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1 i 7-11, jedan ili više molekula koji su efikasni u stimulisanju imunog odgovora za upotrebu prema bilo kom od zahteva.2 i 7-11, ili kombinacija za upotrebu prema bilo kom od zahteva 3 i 7-11, pri čemu naveden jedan ili više dodatnih molekula koji su efikasni u stimulisanju imunog odgovora su anti-CD137 antitelo, anti-CTLA- 4 antitelo, anti-OX40 antitelo, anti-LAG-3 antitelo, anti-PD-L1 antitelo, anti-TIGIT antitelo i/ili anti-TIM-3 antitelo.
13. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za humani PD-1 za upotrebu prema bilo kom od zahteva 4 i 7-11, agens protiv raka i/ili jedan ili više molekula koji specifično vezuju antigen raka za upotrebu prema prema bilo kom od zahteva 5 i 7-11, ili kombinacija za upotrebu prema bilo kom od zahteva 6-11, gde pomenuti antigen raka je 5T4, B7H3, CD19, CD20, CD51, CD123, DR5, EGFR, EpCam, GD2, gpA33, HER2, ROR-1, TAG-72, VEGF-A, i/ili VEGFR2.
14. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za humani PD-1 za upotrebu prema bilo kom od zahteva 4, 7-11 i 13, sredstvo protiv raka i/ili jedan ili više molekula koji specifično vezuju antigen raka za 13. upotreba prema bilo kom od zahteva 5, 7-11 i 13, ili kombinacija za upotrebu prema bilo kom od zahteva 6-11 i 13, pri čemu rak karakteriše prisustvo ćelija raka izabrane iz grupe koju čine: tumor nadbubrežne žlezde, rak povezan sa AIDS-om, sarkom mekog alveolarnog dela, astrocitni tumor, rak mokraćne bešike, rak kostiju, rak mozga i rak kičmene moždine, metastatski tumor mozga, rak dojke, tumor karotidnog tela, rak grlića materice, hondrosarkom, hordom, hromofobni karcinom bubrežnih ćelija, svetloćelijski karcinom, rak debelog creva, kolorektalni kancer, kožni benigni fibrozni histiocitom, dezmoplastični tumor malih okruglih ćelija, ependimoma, Juingov tumor, ekstraskeletni miksoidni hondrosarkom, fibrogenesis imperfecta ossium, fibrozna displazija kostiju, rak žučne kese ili žučnih kanala, rak želuca, gestacijske trofoblastne bolesti, tumor germinativnih ćelija, rak glave i vrata, hepatocelularni karcinom, tumor ćelija pankreasa, Kaposijev sarkom, rak bubrega, leukemija, lipoma/benigni lipomatozni tumor, liposarkom/maligni lipomatozni tumor, rak jetre, limfom, rak pluća, meduloblastom, melanom, meningiom, multipla endokrina neoplazija, multipli mijelom, mijelodisplastični sindrom, neuroblastom, neuroendokrini tumori, rak jajnika, rak pankreasa, papilarni karcinom štitne žlezde, tumor paratiroidne žlezde, zloćudne bolesti dečjeg uzrasta, tumor perifernog nervnog omotača, feohromocitom, tumor hipofize, rak prostate, melanom posteriorne uvee, retki hematološki poremećaj, metastatski karcinom bubrega, rabdoidni tumor, rabdomisarkom, sarkom, rak kože, sarkom mekog tkiva, rak skvamoznih ćelija, rak želuca, sinovijalni sarkom, rak testisa, rak timusa, timom, metastatski karcinom štitne žlezde i rak materice.
15. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za humani PD-1 za upotrebu prema bilo kom od zahteva 4, 6-11 i 13, agens protiv raka i/ili jedan ili više molekula koji specifično vezuju antigen raka za upotrebu prema bilo kom od zahteva 5, 7-11 i 13, ili kombinacija za upotrebu prema bilo kom od zahteva 6-11 i 13, gde navedeni rak je kolorektalni karcinom, hepatocelularni karcinom, gliom, rak bubrega, rak dojke,multipli mijelom, rak mokraćne bešike, neuroblastom; sarkom, ne-Hodgkinov limfom, rak ne-malih ćelija pluća, rak jajnika, rak pankreasa, rak rektuma, akutna mijeloidna leukemija (AML), hronična mijelogena leukemija (CML), akutna B limfoblastna leukemija (B-ALL), hronična leukemija (CLL), leukemija vlasastih ćelija (HCL), blastična plazmacitoidna neoplazma dendritiskih ćelija (BPDCN), ne-Hodgkinovi limfomi (NHL), uključujući leukemiju pločastih ćelija (MCL) i mali limfocitni limfom (SLL), Hodgkinov limfom, sistemska mastocitoza ili Burkitov limfom.
RS20241291A 2015-07-30 2016-07-28 Pd-1-vezujući molekuli i metode njihove upotrebe RS66208B1 (sr)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562198867P 2015-07-30 2015-07-30
US201562239559P 2015-10-09 2015-10-09
US201562255140P 2015-11-13 2015-11-13
US201662322974P 2016-04-15 2016-04-15
EP21191711.7A EP3981792B1 (en) 2015-07-30 2016-07-28 Pd-1-binding molecules and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS66208B1 true RS66208B1 (sr) 2024-12-31

Family

ID=57884977

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20211102A RS62374B1 (sr) 2015-07-30 2016-07-28 Molekuli za vezivanje pd-1 i lag-3 i metode njihove upotrebe
RS20211320A RS62568B1 (sr) 2015-07-30 2016-07-28 Pd-1-vezujući molekuli i metodi njihove upotrebe
RS20241291A RS66208B1 (sr) 2015-07-30 2016-07-28 Pd-1-vezujući molekuli i metode njihove upotrebe

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20211102A RS62374B1 (sr) 2015-07-30 2016-07-28 Molekuli za vezivanje pd-1 i lag-3 i metode njihove upotrebe
RS20211320A RS62568B1 (sr) 2015-07-30 2016-07-28 Pd-1-vezujući molekuli i metodi njihove upotrebe

Country Status (39)

Country Link
US (3) US10577422B2 (sr)
EP (4) EP3328419B1 (sr)
JP (5) JP6959907B2 (sr)
KR (3) KR20250020718A (sr)
CN (4) CN114773475B (sr)
AU (5) AU2016298227B9 (sr)
CA (1) CA2993948A1 (sr)
CL (1) CL2018000254A1 (sr)
CO (1) CO2018000867A2 (sr)
CR (3) CR20200423A (sr)
CY (3) CY1124634T1 (sr)
DK (3) DK3456346T3 (sr)
EA (1) EA201890296A1 (sr)
EC (1) ECSP18006831A (sr)
ES (3) ES2898511T3 (sr)
FI (2) FI3981792T3 (sr)
FR (1) FR24C1033I2 (sr)
GE (6) GEP20227419B (sr)
HR (3) HRP20211645T1 (sr)
HU (4) HUE068868T2 (sr)
IL (4) IL297090B2 (sr)
JO (2) JO3736B1 (sr)
LT (4) LT3981792T (sr)
MA (2) MA42542B1 (sr)
MD (3) MD3328419T2 (sr)
MX (3) MX2018001227A (sr)
NL (1) NL301287I2 (sr)
PE (3) PE20231958A1 (sr)
PH (1) PH12018500232A1 (sr)
PL (3) PL3981792T3 (sr)
PT (3) PT3328419T (sr)
RS (3) RS62374B1 (sr)
SG (2) SG10201906059VA (sr)
SI (3) SI3328419T1 (sr)
SM (3) SMT202100527T1 (sr)
TW (5) TWI833183B (sr)
UA (1) UA127372C2 (sr)
WO (1) WO2017019846A1 (sr)
ZA (2) ZA201800500B (sr)

Families Citing this family (352)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
PL1879573T3 (pl) 2005-05-10 2013-05-31 Incyte Holdings Corp Modulatory 2,3-dioksygenazy indoloaminy i sposoby ich zastosowania
PL2315756T3 (pl) 2008-07-08 2015-02-27 Incyte Holdings Corp 1,2,5-oksadiazole jako inhibitory 2,3-dioksygenazy indoloaminy
US12466897B2 (en) 2011-10-10 2025-11-11 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
ES2704744T3 (es) 2012-06-13 2019-03-19 Incyte Holdings Corp Compuestos tricíclicos sustituidos como inhibidores de FGFR
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
CA2898100C (en) 2013-01-14 2023-10-10 Xencor, Inc. Novel heterodimeric proteins
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
EA035095B1 (ru) 2013-04-19 2020-04-27 Инсайт Холдингс Корпорейшн Бициклические гетероциклы в качестве ингибиторов fgfr
JP6775422B2 (ja) 2014-03-28 2020-10-28 ゼンコー・インコーポレイテッドＸｅｎｃｏｒ、 Ｉｎｃ． Ｃｄ３８及びｃｄ３に結合する二重特異性抗体
EP3152235B1 (en) * 2014-05-29 2021-08-25 MacroGenics, Inc. Tri-specific binding molecules and methods of use thereof
TWI693232B (zh) * 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
BR112017011166A2 (pt) 2014-11-26 2018-02-27 Xencor, Inc. anticorpos heterodiméricos que se ligam a cd3 e cd38
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
CN110894240B (zh) 2014-11-26 2022-04-15 森科股份有限公司 结合cd3和肿瘤抗原的异二聚体抗体
WO2016105450A2 (en) 2014-12-22 2016-06-30 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
MX373169B (es) 2015-02-20 2020-04-24 Incyte Holdings Corp Heterociclos bicíclicos como inhibidores de receptores del factor de crecimiento fibroblástico (fgfr).
MA41551A (fr) 2015-02-20 2017-12-26 Incyte Corp Hétérocycles bicycliques utilisés en tant qu'inhibiteurs de fgfr4
EP3283508B1 (en) 2015-04-17 2021-03-17 Alpine Immune Sciences, Inc. Immunomodulatory proteins with tunable affinities
TWI773646B (zh) * 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
TWI870335B (zh) * 2015-06-12 2025-01-21 美商宏觀基因股份有限公司 變異的嵌合4d5抗體及其與抗pd-1抗體聯合用於治療癌症的應用
CN114591433A (zh) 2015-07-13 2022-06-07 西托姆克斯治疗公司 抗pd-1抗体、可活化抗pd-1抗体及其使用方法
WO2017019846A1 (en) * 2015-07-30 2017-02-02 Macrogenics, Inc. Pd-1-binding molecules and methods use thereof
CN114605548A (zh) 2015-09-01 2022-06-10 艾吉纳斯公司 抗-pd-1抗体及其使用方法
EA201890790A1 (ru) 2015-09-29 2018-10-31 Селджин Корпорейшн Связывающие pd-1 белки и способы их применения
AU2016350701B2 (en) 2015-11-02 2021-08-19 Five Prime Therapeutics, Inc. CD80 extracellular domain polypeptides and their use in cancer treatment
EP3370768B9 (en) 2015-11-03 2022-03-16 Janssen Biotech, Inc. Antibodies specifically binding pd-1 and their uses
JP7058219B2 (ja) 2015-12-07 2022-04-21 ゼンコア インコーポレイテッド Ｃｄ３及びｐｓｍａに結合するヘテロ二量体抗体
US10954301B2 (en) 2015-12-14 2021-03-23 Macrogenics, Inc. Bispecific molecules having immunoreactivity with PD-1 and CTLA-4, and methods of use thereof
MD3436461T2 (ro) 2016-03-28 2024-05-31 Incyte Corp Compuși pirolotriazină ca inhibitori TAM
EP4706777A2 (en) 2016-04-15 2026-03-11 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd80 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
IL262365B2 (en) 2016-04-15 2024-11-01 Alpine Immune Sciences Inc Immunomodulatory proteins ICOS ligand variants and uses thereof
SI3468586T1 (sl) 2016-06-14 2025-01-31 Xencor, Inc. Bispecifična protitelesa za zaviralce kontrolnih točk
KR20190022632A (ko) 2016-06-20 2019-03-06 에프-스타 베타 리미티드 Lag-3 결합 구성원
KR102379464B1 (ko) 2016-06-20 2022-03-29 키맵 리미티드 항-pd-l1 항체
WO2018005706A1 (en) 2016-06-28 2018-01-04 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind somatostatin receptor 2
US11834490B2 (en) 2016-07-28 2023-12-05 Alpine Immune Sciences, Inc. CD112 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US11471488B2 (en) 2016-07-28 2022-10-18 Alpine Immune Sciences, Inc. CD155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
BR112019004733A2 (pt) 2016-09-19 2019-05-28 Celgene Corp métodos de tratamento de distúrbios imunes usando proteínas de ligação a pd-1
EP3515943A4 (en) 2016-09-19 2020-05-06 Celgene Corporation METHODS OF TREATING VITILIGO WITH PD-1 BINDING PROTEINS
CN110214147A (zh) 2016-10-14 2019-09-06 Xencor股份有限公司 IL15/IL15Rα异源二聚体FC-融合蛋白
JP7106538B2 (ja) 2016-12-07 2022-07-26 アジェナス インコーポレイテッド 抗体およびその使用方法
WO2018127918A1 (en) 2017-01-05 2018-07-12 Kahr Medical Ltd. A sirp alpha-cd70 fusion protein and methods of use thereof
PT3565828T (pt) 2017-01-05 2022-02-08 Kahr Medical Ltd Proteína de fusão sirp1 alfa-41bbl e seus métodos de utilização
LT3565579T (lt) 2017-01-05 2023-09-11 Kahr Medical Ltd. Pd1-41bbl sulietas baltymas ir jo panaudojimo būdai
US11566060B2 (en) 2017-01-05 2023-01-31 Kahr Medical Ltd. PD1-CD70 fusion protein and methods of use thereof
JP7183163B2 (ja) 2017-01-06 2022-12-05 クレシェンド・バイオロジックス・リミテッド プログラム細胞死（ｐｄ－１）に対するシングルドメイン抗体
WO2018129714A1 (zh) * 2017-01-13 2018-07-19 杭州翰思生物医药有限公司 抗pd-1的单克隆抗体及其应用
CN117586401A (zh) 2017-01-20 2024-02-23 大有华夏生物医药集团有限公司 抗pd-1抗体及其用途
CN108341871A (zh) * 2017-01-24 2018-07-31 三生国健药业（上海）股份有限公司 抗pd-1单克隆抗体及其制备方法和应用
SG11201907561PA (en) * 2017-02-22 2019-09-27 I Mab Anti-lag-3 antibodies and uses thereof
IL268836B2 (en) 2017-02-24 2024-04-01 Macrogenics Inc Bispecific binding molecules that are capable of binding cd137 and tumor antigens, and uses thereof
TW202428301A (zh) 2017-02-28 2024-07-16 法商賽諾菲公司 治療性rna
JP2020511144A (ja) 2017-03-16 2020-04-16 アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド Ｐｄ−ｌ２バリアント免疫調節タンパク質及びその使用
EP3596114A2 (en) 2017-03-16 2020-01-22 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd80 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
KR102775647B1 (ko) 2017-03-31 2025-03-06 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 종양을 치료하는 방법
TWI788340B (zh) 2017-04-07 2023-01-01 美商必治妥美雅史谷比公司 抗icos促效劑抗體及其用途
MX2019012295A (es) 2017-04-14 2020-02-07 Tollnine Inc Polinucleotidos inmunomoduladores, conjugados de anticuerpos de los mismos y metodos para su uso.
JOP20190248A1 (ar) * 2017-04-21 2019-10-20 Amgen Inc بروتينات ربط مولد ضد trem2 واستخداماته
WO2018201014A1 (en) 2017-04-28 2018-11-01 Five Prime Therapeutics, Inc. Methods of treatment with cd80 extracellular domain polypeptides
EP3630292A2 (en) * 2017-05-24 2020-04-08 Sutro Biopharma, Inc. Pd-1/lag3 bi-specific antibodies, compositions thereof, and methods of making and using the same
AR111960A1 (es) 2017-05-26 2019-09-04 Incyte Corp Formas cristalinas de un inhibidor de fgfr y procesos para su preparación
SMT202300418T1 (it) 2017-05-30 2024-01-10 Bristol Myers Squibb Co Trattamento di tumori positivi per lag-3
EP3630179A2 (en) 2017-05-30 2020-04-08 Bristol-Myers Squibb Company Compositions comprising an anti-lag-3 antibody or an anti-lag-3 antibody and an anti-pd-1 or anti-pd-l1 antibody
US20210340250A1 (en) 2017-05-30 2021-11-04 Bristol-Myers Squibb Company Compositions comprising a combination of an anti-lag-3 antibody, a pd-1 pathway inhibitor, and an immunotherapeutic agent
US11566073B2 (en) 2017-06-01 2023-01-31 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor using an anti-PD-1 antibody
CR20190550A (es) 2017-06-05 2020-04-05 Janssen Biotech Inc Anticuerpos que se unen específicamente a pd-1 y métodos de uso
WO2019005635A2 (en) * 2017-06-25 2019-01-03 Systimmune, Inc. ANTI-PD-1 ANTIBODIES AND METHODS OF PREPARATION AND USE
EA202090005A1 (ru) * 2017-07-06 2020-06-18 Мерус Н.В. Антитела, модулирующие биологическую активность, проявляемую клеткой
DK3661954T3 (da) 2017-08-03 2022-04-19 Amgen Inc Interleukin-21-muteiner og fremgangsmåder til behandling
SG11202000198QA (en) 2017-08-04 2020-02-27 Genmab As Binding agents binding to pd-l1 and cd137 and use thereof
EP3672990A1 (en) 2017-08-25 2020-07-01 Five Prime Therapeutics, Inc. B7-h4 antibodies and methods of use thereof
SI3687996T1 (sl) 2017-09-27 2022-04-29 Incyte Corporation Soli pirolotriazinskih derivatov, ki so uporabne kot zaviralci TAM
KR102813968B1 (ko) 2017-10-10 2025-05-29 알파인 이뮨 사이언시즈, 인코포레이티드 Ctla-4 변이체 면역조절 단백질 및 이의 용도
US20200239577A1 (en) 2017-10-15 2020-07-30 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
SMT202600062T1 (it) 2017-10-18 2026-03-09 Alpine Immune Sciences Inc Proteine immunomodulatrici del ligando di icos variante e composizioni e metodi correlati
EP3706778A1 (en) 2017-11-06 2020-09-16 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor
JP2021502100A (ja) 2017-11-08 2021-01-28 ゼンコア インコーポレイテッド 新規抗ｐｄ−１配列を用いた二重特異性および単一特異性抗体
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
WO2019092452A1 (en) 2017-11-13 2019-05-16 Crescendo Biologics Limited Molecules that bind to cd137 and psma
CN109897111B (zh) * 2017-12-08 2021-02-23 杭州翰思生物医药有限公司 抗pd-1/cd47的双特异性抗体及其应用
US11319355B2 (en) 2017-12-19 2022-05-03 Xencor, Inc. Engineered IL-2 Fc fusion proteins
CN109971714B (zh) * 2017-12-28 2023-06-20 上海细胞治疗研究院 自表达pd-1抗体并靶向间皮素的嵌合抗原受体修饰t细胞及其用途
CN109971712B (zh) * 2017-12-28 2023-06-20 上海细胞治疗研究院 特异性靶向cd19抗原且高水平稳定表达pd-1抗体的car-t细胞及用途
SG11202006148UA (en) 2018-01-03 2020-07-29 Alpine Immune Sciences Inc Multi-domain immunomodulatory proteins and methods of use thereof
TW201930344A (zh) 2018-01-12 2019-08-01 美商安進公司 抗ｐｄ-１抗體及治療方法
CA3096287A1 (en) 2018-01-22 2019-07-25 Pascal Biosciences Inc. Cannabinoids and derivatives for promoting immunogenicity of tumor and infected cells
US12398209B2 (en) 2018-01-22 2025-08-26 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating cancers with antagonistic anti-PD-1 antibodies
WO2019148410A1 (en) 2018-02-01 2019-08-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-pd-1 antibodies
WO2019148412A1 (en) * 2018-02-01 2019-08-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-pd-1/lag3 bispecific antibodies
GB201802573D0 (en) * 2018-02-16 2018-04-04 Crescendo Biologics Ltd Therapeutic molecules that bind to LAG3
JP2021514379A (ja) 2018-02-21 2021-06-10 ファイブ プライム セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｂ７−ｈ４抗体製剤
IL276675B2 (en) 2018-02-23 2023-10-01 Eucure Beijing Biopharma Co Ltd Anti-PD-1 antibodies and uses thereof
BR122023024273A2 (pt) 2018-02-27 2024-02-20 Incyte Corporation Compostos imidazopirimidinas e triazolopirimidinas, seus usos, método para inibir uma atividade de um receptor de adenosina e composição farmacêutica dos mesmos
MA52416A (fr) 2018-03-02 2021-04-21 Five Prime Therapeutics Inc Anticorps b7-h4 et leurs procédés d'utilisation
WO2019179422A1 (en) * 2018-03-20 2019-09-26 Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. Novel bispecific pd-1/lag-3 antibody molecules
TWI841554B (zh) 2018-03-21 2024-05-11 丹麥商珍美寶股份有限公司 以鉑為主之劑與抗組織因子抗體－藥物共軛物的組合治療癌症之方法
PE20210665A1 (es) 2018-03-23 2021-03-31 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos contra mica y/o micb y sus usos
CN108546297B (zh) * 2018-03-29 2019-08-02 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 针对pd-1的单克隆抗体及其应用
EP3774911A1 (en) 2018-03-30 2021-02-17 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
EP3773916A4 (en) * 2018-04-04 2021-12-15 TrueBinding, Inc. PROCEDURES AND COMPOSITIONS FOR BLOCKING THE INTERACTION BETWEEN NON-GLYCOSYLATED PD-1 POLYPEPTIDES
WO2019195623A2 (en) 2018-04-04 2019-10-10 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
JP2021520850A (ja) * 2018-04-15 2021-08-26 サルブリス （チョンドゥ） バイオテック カンパニー リミテッド Ｐｄ−１結合抗体及びその使用
SG11202010163QA (en) 2018-04-18 2020-11-27 Xencor Inc Pd-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and pd-1 antigen binding domains and uses thereof
US11505595B2 (en) 2018-04-18 2022-11-22 Xencor, Inc. TIM-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing IL-15/IL-15RA Fc-fusion proteins and TIM-3 antigen binding domains
MX2020011588A (es) * 2018-05-03 2020-12-07 Shanghai Epimab Biotherapeutics Co Ltd Anticuerpos de alta afinidad a pd-1 y lag-3 y proteinas de union bispecificas preparadas a partir de las mismas.
CR20200590A (es) 2018-05-04 2021-04-26 Incyte Corp Formas sólidas de un inhibidor de fgfr y procesos para prepararlas
MA52493A (fr) 2018-05-04 2021-03-10 Incyte Corp Sels d'un inhibiteur de fgfr
WO2019217457A1 (en) 2018-05-07 2019-11-14 Genmab A/S Methods of treating cancer with a combination of an anti-pd-1 antibody and an anti-tissue factor antibody-drug conjugate
WO2019217455A1 (en) 2018-05-07 2019-11-14 Genmab A/S Methods of treating cancer with a combination of an anti-pd-1 antibody and an anti-tissue factor antibody-drug conjugate
WO2019222677A1 (en) 2018-05-18 2019-11-21 Incyte Corporation Fused pyrimidine derivatives as a2a / a2b inhibitors
WO2019227490A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Compositions and methods for imaging
KR20210056288A (ko) 2018-06-01 2021-05-18 타유 후아시아 바이오테크 메디컬 그룹 컴퍼니 리미티드 질환 또는 병태를 치료하기 위한 조성물 및 그의 용도
CN120714024A (zh) 2018-06-20 2025-09-30 因赛特公司 抗pd-1抗体及其用途
MD3813800T2 (ro) 2018-06-29 2025-10-31 Incyte Corp Formulări de inhibitor al AXL/MER
GEP20237548B (en) 2018-07-05 2023-10-10 Incyte Corp Fused pyrazine derivatives as a2a /a2b inhibitors
CN110684113A (zh) * 2018-07-06 2020-01-14 复旦大学 一种抗PD-1抗原和抗c-Met抗原的双特异性抗体及其构建方法
US12134638B2 (en) 2018-07-11 2024-11-05 Kahr Medical Ltd. SIRPalpha-4-1BBL variant fusion protein and methods of use thereof
KR20210044221A (ko) 2018-07-11 2021-04-22 카 메디컬 리미티드 Pd1-4-1bbl 변이체 융합 단백질 및 이의 사용 방법
GB201811403D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd Antibody molecules
GB201811450D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Delta Ltd Mesothelin and CD137 binding molecules
PL3820569T3 (pl) 2018-07-12 2025-07-14 Invox Pharma Limited Cząsteczki przeciwciał, które wiążą PD-L1 oraz CD137
GB201811410D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd OX40 Binding molecules
GB201811408D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd CD137 Binding Molecules
GB201811415D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd Anti-Mesothelin Anti bodies
BR112021000282A2 (pt) 2018-07-12 2021-04-06 F-Star Beta Limited Moléculas de anticorpo que se ligam a cd137 e ox40
GB201811404D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd Anti-CD137 Antibodies
CN112424231B (zh) 2018-07-19 2022-09-13 大有华夏生物医药集团有限公司 抗pd-1抗体及其剂量和用途
MX2021000726A (es) 2018-07-26 2021-03-25 Bristol Myers Squibb Co Terapia combinada de gen de activacion de linfocitos 3(lag-3) para el tratamiento del cancer.
WO2020060781A1 (en) 2018-09-17 2020-03-26 Abcuro, Inc. Anti-klrg1 antibodies
SG11202102851XA (en) 2018-09-27 2021-04-29 Celgene Corp SIRPa BINDING PROTEINS AND METHODS OF USE THEREOF
US11591390B2 (en) 2018-09-27 2023-02-28 Celgene Corporation SIRP-α binding proteins and methods of use thereof
EP3861016A2 (en) 2018-10-03 2021-08-11 Xencor, Inc. Il-12 heterodimeric fc-fusion proteins
US11066404B2 (en) 2018-10-11 2021-07-20 Incyte Corporation Dihydropyrido[2,3-d]pyrimidinone compounds as CDK2 inhibitors
JP2022512750A (ja) 2018-10-19 2022-02-07 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 黒色腫に対する併用療法
JP2022505647A (ja) 2018-10-23 2022-01-14 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 腫瘍の処置方法
TWI844571B (zh) 2018-10-30 2024-06-11 丹麥商珍美寶股份有限公司 使用抗血管內皮生長因子（ｖｅｇｆ）抗體與抗組織因子（ｔｆ）抗體－藥物共軛體之組合以治療癌症之方法
CN119798453A (zh) * 2018-11-13 2025-04-11 Jn生物科学有限责任公司 激活免疫细胞的双特异性抗体
US11274150B2 (en) 2018-11-16 2022-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Anti-human natural killer cell inhibitory receptor group 2A protein (NKG2A) antibodies
WO2020113141A2 (en) 2018-11-30 2020-06-04 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd86 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
JP7584418B2 (ja) 2018-12-04 2024-11-15 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 多重反応同位体分子種反応モニタリングによる、サンプル内検量線を用いた分析方法
EP3666905A1 (en) 2018-12-11 2020-06-17 Sanofi E. coli positive for pks island as marker of positive response to anti-pd1 therapy in colorectal cancer
AU2019409805A1 (en) 2018-12-21 2021-07-22 Ose Immunotherapeutics Bifunctional anti-PD-1/SIRPA molecule
CN113614109A (zh) 2018-12-21 2021-11-05 Ose免疫疗法公司 双功能抗pd-1/il-7分子
CN111349162A (zh) * 2018-12-21 2020-06-30 神州细胞工程有限公司 人源化抗pd-1抗体及其用途
CN111423510B (zh) * 2019-01-10 2024-02-06 迈威(上海)生物科技股份有限公司 重组抗人pd-1抗体及其应用
EP3914355A1 (en) 2019-01-21 2021-12-01 Sanofi Therapeutic rna and anti-pd1 antibodies for advanced stage solid tumor cancers
WO2020151572A1 (en) * 2019-01-23 2020-07-30 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Anti-pd-l1 diabodies and the use thereof
TWI829857B (zh) 2019-01-29 2024-01-21 美商英塞特公司 作為a2a / a2b抑制劑之吡唑并吡啶及三唑并吡啶
JP7604379B2 (ja) * 2019-02-03 2024-12-23 ジエンス ヘンルイ メデイシンカンパニー リミテッド 抗ｐｄ－１抗体、その抗原結合フラグメントおよびそれらの医薬用途
WO2020165374A1 (en) 2019-02-14 2020-08-20 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecule comprising il-15ra
WO2020168197A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 Incyte Corporation Pyrrolo[2,3-d]pyrimidinone compounds as cdk2 inhibitors
US20200316064A1 (en) 2019-02-15 2020-10-08 Incyte Corporation Cyclin-dependent kinase 2 biomarkers and uses thereof
US12589132B2 (en) 2019-02-22 2026-03-31 Five Prime Therapeutics, Inc. CD80 extracellular domain Fc fusion proteins for treating PD-L1 negative tumors
UA128825C2 (uk) 2019-03-01 2024-10-30 Ксенкор, Інк. Гетеродимерні антитіла, що зв'язують enpp3 та cd3
WO2020180959A1 (en) 2019-03-05 2020-09-10 Incyte Corporation Pyrazolyl pyrimidinylamine compounds as cdk2 inhibitors
WO2020185532A1 (en) 2019-03-08 2020-09-17 Incyte Corporation Methods of treating cancer with an fgfr inhibitor
CN113891748A (zh) 2019-03-28 2022-01-04 百时美施贵宝公司 治疗肿瘤的方法
KR20210146348A (ko) 2019-03-28 2021-12-03 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 종양을 치료하는 방법
WO2020205560A1 (en) 2019-03-29 2020-10-08 Incyte Corporation Sulfonylamide compounds as cdk2 inhibitors
WO2020223558A1 (en) 2019-05-01 2020-11-05 Incyte Corporation Tricyclic amine compounds as cdk2 inhibitors
US11440914B2 (en) 2019-05-01 2022-09-13 Incyte Corporation Tricyclic amine compounds as CDK2 inhibitors
AU2020281535A1 (en) 2019-05-24 2022-01-27 Merck Patent Gmbh Combination therapies using CDK inhibitors
JP2022534967A (ja) 2019-05-30 2022-08-04 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 多腫瘍遺伝子シグネチャーおよびその使用
KR20220016155A (ko) 2019-05-30 2022-02-08 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 면역-종양학 (i-o) 요법에 적합한 대상체를 확인하는 방법
EP3977132A1 (en) 2019-05-30 2022-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and combination therapy
CN112225809B (zh) * 2019-06-30 2023-09-05 福州创方医药科技有限公司 一种靶向pd-1的单克隆抗体及其应用
CN117447596A (zh) * 2019-06-30 2024-01-26 福州创方医药科技有限公司 一种靶向pd-1的单克隆抗体及其应用
WO2021006199A1 (ja) 2019-07-05 2021-01-14 小野薬品工業株式会社 Ｐｄ－１／ｃｄ３二重特異性タンパク質による血液がん治療
US12516121B2 (en) 2019-07-09 2026-01-06 Zydus Lifesciences Limited Antibodies to human programmed death receptor PD-1
WO2021007269A1 (en) 2019-07-09 2021-01-14 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
CN112239506B (zh) * 2019-07-16 2023-09-26 复旦大学 一种抗PD-1及c-Met抗原的小分子双特异性抗体Diabody
EP4007602A1 (en) 2019-08-01 2022-06-08 Incyte Corporation A dosing regimen for an ido inhibitor
AU2020324185A1 (en) * 2019-08-02 2022-03-03 CTTQ-Akeso (ShangHai) Biomed. Tech. Co., Ltd. Anti-PD-1 antibody and medical use thereof
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
EP4011918A4 (en) 2019-08-08 2023-08-23 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. DUAL SPECIFIC PROTEIN
TW202115024A (zh) 2019-08-14 2021-04-16 美商英塞特公司 作為cdk2 抑制劑之咪唑基嘧啶基胺化合物
CA3153777A1 (en) 2019-09-22 2021-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Quantitative spatial profiling for lag-3 antagonist therapy
US20220339249A1 (en) 2019-09-25 2022-10-27 Bristol-Myers Squibb Company Composite biomarker for cancer therapy
WO2021063201A1 (zh) * 2019-09-30 2021-04-08 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 抗pd-1抗体及其用途
WO2021067374A1 (en) 2019-10-01 2021-04-08 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
AU2020364007A1 (en) 2019-10-11 2022-04-28 Incyte Corporation Bicyclic amines as CDK2 inhibitors
TWI891666B (zh) 2019-10-14 2025-08-01 美商英塞特公司 作為ｆｇｆｒ抑制劑之雙環雜環
WO2021076728A1 (en) 2019-10-16 2021-04-22 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
KR20220092578A (ko) 2019-11-05 2022-07-01 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 M-단백질 검정 및 이의 용도
WO2021092220A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
WO2021092221A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
BR112022008191A2 (pt) 2019-11-08 2022-07-12 Bristol Myers Squibb Co Terapia com antagonista de lag-3 para melanoma
WO2021097256A1 (en) 2019-11-14 2021-05-20 Cohbar, Inc. Cxcr4 antagonist peptides
WO2021097800A1 (en) * 2019-11-22 2021-05-27 Abl Bio Inc. Anti-pd-l1/anti-b7-h3 multispecific antibodies and uses thereof
EP4069696A1 (en) 2019-12-04 2022-10-12 Incyte Corporation Tricyclic heterocycles as fgfr inhibitors
BR112022010664A2 (pt) 2019-12-04 2022-08-16 Incyte Corp Derivados de um inibidor de fgfr
AU2020406083A1 (en) 2019-12-17 2022-06-16 Boehringer Ingelheim International Gmbh Bifunctional molecules comprising an IL-7 variant
BR112022009631A2 (pt) 2019-12-19 2022-08-09 Bristol Myers Squibb Co Combinações de inibidores de dgk e antagonistas do ponto de checagem
US20230044381A1 (en) * 2019-12-20 2023-02-09 Guangdong Feipeng Pharmaceutical Co., Ltd Anti-human programmed death-1 monoclonal antibody
BR112022012437A2 (pt) * 2019-12-23 2022-09-20 Macrogenics Inc Método de tratamento de um câncer compreendendo a administração de uma molécula biespecífica pd-1 x lag-3 a um indivíduo em necessidade deste e método de tratamento de um câncer em um indivíduo
MX2022008208A (es) 2020-01-03 2022-10-21 Incyte Corp Terapia de combinación que comprende inhibidores de a2a/a2b y proteína de muerte programada 1 /ligando de muerte programada 1 (pd-1/pdl1).
WO2021141977A1 (en) 2020-01-07 2021-07-15 Board Of Regents, The University Of Texas System Improved human methyl thioadenosine/adenosine depleting enzyme variants for cancer therapy
WO2021146424A1 (en) 2020-01-15 2021-07-22 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
EP4097234A1 (en) 2020-01-28 2022-12-07 Université de Strasbourg Antisense oligonucleotide targeting linc00518 for treating melanoma
US20230112470A1 (en) 2020-01-29 2023-04-13 Board Of Regents, The University Of Texas System Use of egfr/her2 tyrosine kinase inhibitors and/or her2/her3 antibodies for the treatment of cancers with nrg1 fusions
KR20220133238A (ko) 2020-01-29 2022-10-04 더 보드 오브 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 Nrg1 융합체가 있는 암의 치료를 위한 포지오티닙의 용도
WO2021152548A1 (en) 2020-01-30 2021-08-05 Benitah Salvador Aznar Combination therapy for treatment of cancer and cancer metastasis
KR20220139915A (ko) 2020-02-06 2022-10-17 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Il-10 및 그의 용도
EP4106813A4 (en) 2020-02-21 2024-03-27 MacroGenics, Inc. CD137 BINDING MOLECULES AND THEIR USES
BR112022017136A2 (pt) 2020-02-28 2022-10-11 Tallac Therapeutics Inc Conjugação mediada por transglutaminase
TWI855236B (zh) * 2020-02-28 2024-09-11 大陸商南京聖和藥業股份有限公司 抗cd47/抗pd-l1抗體及其應用
EP4114401A1 (en) 2020-03-06 2023-01-11 Incyte Corporation Combination therapy comprising axl/mer and pd-1/pd-l1 inhibitors
US20230235073A1 (en) 2020-03-06 2023-07-27 Ona Therapeutics, S.L. Anti-cd36 antibodies and their use to treat cancer
EP4114398A1 (en) 2020-03-06 2023-01-11 Celgene Quanticel Research, Inc. Combination of an lsd-1 inhibitor and nivolumab for use in treating sclc or sqnsclc
CA3179692A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Incyte Corporation Fused tricyclic kras inhibitors
CN113583127A (zh) * 2020-04-30 2021-11-02 迈威(上海)生物科技股份有限公司 一种靶向nkg2a和pd-l1的双特异性抗体及应用
CA3176497A1 (en) 2020-05-07 2021-11-11 Fatima MECHTA-GRIGORIOU Antxr1 as a biomarker of immunosuppressive fibroblast populations and its use for predicting response to immunotherapy
JP7748393B2 (ja) 2020-05-08 2025-10-02 アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド Ａｐｒｉｌおよびｂａｆｆ阻害免疫調節タンパク質、ならびにその使用方法
US11739102B2 (en) 2020-05-13 2023-08-29 Incyte Corporation Fused pyrimidine compounds as KRAS inhibitors
WO2021231976A1 (en) 2020-05-14 2021-11-18 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (psma) and cd3
MX2023000197A (es) 2020-07-07 2023-02-22 BioNTech SE Arn terapeutico para el cancer positivo para vph.
BR112023003087A2 (pt) * 2020-08-19 2023-03-28 Pandion Operations Inc Anticorpos anti-pd-1 multiparatópicos e usos dos mesmos
CA3192204A1 (en) 2020-08-19 2022-02-24 Xencor, Inc. Anti-cd28 and/or anti-b7h3 compositions
BR112023003427A2 (pt) 2020-08-28 2023-03-21 Bristol Myers Squibb Co Terapia com antagonista de lag-3 para carcinoma hepatocelular
US11999752B2 (en) 2020-08-28 2024-06-04 Incyte Corporation Vinyl imidazole compounds as inhibitors of KRAS
AU2021334361A1 (en) 2020-08-31 2023-05-11 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and immunotherapy
WO2022072783A1 (en) 2020-10-02 2022-04-07 Incyte Corporation Bicyclic dione compounds as inhibitors of kras
US20230374064A1 (en) 2020-10-05 2023-11-23 Bristol-Myers Squibb Company Methods for concentrating proteins
WO2022076596A1 (en) 2020-10-06 2022-04-14 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicle-aso constructs targeting stat6
US12555649B2 (en) 2020-10-09 2026-02-17 Worldwide Innovative Network Prediction method and gene signatures for the treatment of cancer
WO2022087402A1 (en) 2020-10-23 2022-04-28 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for lung cancer
IL302346A (en) 2020-10-28 2023-06-01 Ikena Oncology Inc Combination of an ahr inhibitor with a pdx inhibitor or doxorubicine
WO2022108931A2 (en) 2020-11-17 2022-05-27 Seagen Inc. Methods of treating cancer with a combination of tucatinib and an anti-pd-1/anti-pd-l1 antibody
WO2022112198A1 (en) 2020-11-24 2022-06-02 Worldwide Innovative Network Method to select the optimal immune checkpoint therapies
WO2022118197A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Pfizer Inc. Time to resolution of axitinib-related adverse events
WO2022120179A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures and uses thereof
EP4261225A4 (en) * 2020-12-10 2024-11-13 Eutilex Co., Ltd. ANTI-PD-1 ANTIBODY AND ITS USES
KR20230129441A (ko) 2020-12-17 2023-09-08 오제 이뮈노테라프틱스 이기능성 항-pd1/il-7 분자
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
JP2024501029A (ja) 2020-12-28 2024-01-10 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｐｄ１／ｐｄ－ｌ１抗体の皮下投与
SMT202500208T1 (it) 2020-12-28 2025-07-22 Bristol Myers Squibb Co Composizioni anticorpali e metodi per il loro uso
MX2023007850A (es) 2020-12-29 2023-09-11 Incyte Corp Terapia combinada que comprende inhibidores de adora2a/adora2b (a2a/a2b), inhibidores de muerte programada/ligando 1 de muerte programada (pd-1/pd-l1) y anticuerpos de cumulo de diferenciacion 73 (anti-cd73).
WO2022148781A1 (en) 2021-01-05 2022-07-14 Institut Curie Combination of mcoln activators and immune checkpoint inhibitors
EP4274852A4 (en) * 2021-01-11 2025-02-26 Eutilex Co., Ltd. BISPECIFIC EPITOP-BINDING PROTEIN WITH ANTI-4-1BB ANTIBODY AND PD-1 PROTEIN OR FRAGMENTS THEREOF AND USE THEREOF
AU2022212123A1 (en) 2021-01-29 2023-09-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods of treating cancer with kinase inhibitors
CN113336848B (zh) * 2021-02-03 2022-08-19 上海莱馥医疗科技有限公司 一种抗pd-1抗体及其用途
JP2024511319A (ja) 2021-03-09 2024-03-13 ゼンコア インコーポレイテッド Ｃｄ３及びｃｌｄｎ６に結合するヘテロ二量体抗体
JP2024509274A (ja) 2021-03-10 2024-02-29 ゼンコア インコーポレイテッド Ｃｄ３及びｇｐｃ３に結合するヘテロ二量体抗体
TW202304506A (zh) 2021-03-25 2023-02-01 日商安斯泰來製藥公司 涉及抗claudin 18.2抗體的組合治療以治療癌症
US20240181052A1 (en) 2021-03-29 2024-06-06 Juno Therapeutics, Inc. Methods for dosing and treatment with a combination of a checkpoint inhibitor therapy and a car t cell therapy
JP2024514530A (ja) 2021-04-02 2024-04-02 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 切断型ｃｄｃｐ１に対する抗体およびその使用
AU2022253474A1 (en) 2021-04-08 2023-11-16 Board Of Regents, The University Of Texas System Compounds and methods for theranostic targeting of parp activity
AU2022253351A1 (en) 2021-04-09 2023-10-12 Boehringer Ingelheim International Gmbh New scaffold for bifunctional molecules with improved properties
EP4320156A1 (en) 2021-04-09 2024-02-14 Ose Immunotherapeutics Scaffold for bifunctioanl molecules comprising pd-1 or cd28 and sirp binding domains
TW202304459A (zh) 2021-04-12 2023-02-01 美商英塞特公司 包含ｆｇｆｒ抑制劑及ｎｅｃｔｉｎ－４靶向劑之組合療法
US20240285740A1 (en) 2021-05-12 2024-08-29 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions and methods for treating cancer
GB202107994D0 (en) 2021-06-04 2021-07-21 Kymab Ltd Treatment of cancer
EP4352059A1 (en) 2021-06-09 2024-04-17 Incyte Corporation Tricyclic heterocycles as fgfr inhibitors
WO2022261159A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Incyte Corporation Tricyclic heterocycles as fgfr inhibitors
US11981671B2 (en) 2021-06-21 2024-05-14 Incyte Corporation Bicyclic pyrazolyl amines as CDK2 inhibitors
MX2024000357A (es) 2021-07-07 2024-02-12 Incyte Corp Compuestos triciclicos como inhibidores de homologo de oncogen viral de sarcoma de rata kirsten (kras).
US12364756B2 (en) * 2021-07-09 2025-07-22 Macrogenics, Inc. Pharmaceutical compositions of a PD-1 antibody and use of the same
JP2024525758A (ja) 2021-07-13 2024-07-12 ビオンテック・ソシエタス・エウロパエア がんのための併用療法におけるｃｄ４０およびｃｄ１３７に対する多重特異性結合剤
US12600717B2 (en) 2021-07-14 2026-04-14 Incyte Corporation Tricyclic compounds as inhibitors of KRAS
AU2022320051A1 (en) 2021-07-30 2024-01-25 ONA Therapeutics S.L. Anti-cd36 antibodies and their use to treat cancer
US12441742B2 (en) 2021-08-31 2025-10-14 Incyte Corporation Naphthyridine compounds as inhibitors of KRAS
WO2023049697A1 (en) 2021-09-21 2023-03-30 Incyte Corporation Hetero-tricyclic compounds as inhibitors of kras
JP2024536133A (ja) 2021-09-29 2024-10-04 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム 抗ｈｓｐ７０抗体およびその治療的使用
WO2023051926A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 BioNTech SE Treatment involving non-immunogenic rna for antigen vaccination and pd-1 axis binding antagonists
CA3234375A1 (en) 2021-10-01 2023-04-06 Incyte Corporation Pyrazoloquinoline kras inhibitors
WO2023057882A1 (en) 2021-10-05 2023-04-13 Pfizer Inc. Combinations of azalactam compounds with a pd-1 axis binding antagonist for the treatment of cancer
US20250002600A1 (en) 2021-10-06 2025-01-02 Genmab A/S Multispecific binding agents against pd-l1 and cd137 in combination therapy
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
WO2023064857A1 (en) 2021-10-14 2023-04-20 Incyte Corporation Quinoline compounds as inhibitors of kras
EP4419566A4 (en) * 2021-10-21 2025-09-17 Seismic Therapeutic Inc DUAL-TARGETED IMMUNE REGULATORY COMPOSITIONS
KR20240099362A (ko) 2021-10-29 2024-06-28 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 혈액암에 대한 lag-3 길항제 요법
WO2023079428A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Pfizer Inc. Combination therapies using tlr7/8 agonist
WO2023083439A1 (en) 2021-11-09 2023-05-19 BioNTech SE Tlr7 agonist and combinations for cancer treatment
WO2023091746A1 (en) 2021-11-22 2023-05-25 Incyte Corporation Combination therapy comprising an fgfr inhibitor and a kras inhibitor
US11976073B2 (en) 2021-12-10 2024-05-07 Incyte Corporation Bicyclic amines as CDK2 inhibitors
CA3244187A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Incyte Corporation SALTS AND SOLID FORMS OF AN FGFR INHIBITOR AND THEIR METHODS OF PREPARATION
CA3249004A1 (en) 2022-01-26 2023-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Polytherapy for Hepatocellular Carcinoma
WO2023164638A1 (en) 2022-02-25 2023-08-31 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for colorectal carcinoma
WO2023168404A1 (en) 2022-03-04 2023-09-07 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor
CN119156403A (zh) 2022-03-08 2024-12-17 阿伦蒂斯治疗股份公司 抗紧密连接蛋白-1抗体增加t细胞可用性的用途
EP4493575A1 (en) 2022-03-18 2025-01-22 Bristol-Myers Squibb Company Methods of isolating polypeptides
US20260042840A1 (en) 2022-04-07 2026-02-12 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
US20230326022A1 (en) 2022-04-08 2023-10-12 Bristol-Myers Squibb Company Machine Learning Identification, Classification, and Quantification of Tertiary Lymphoid Structures
TW202413412A (zh) 2022-05-12 2024-04-01 丹麥商珍美寶股份有限公司 在組合療法中能夠結合到ｃｄ２７之結合劑
EP4531916A1 (en) 2022-06-02 2025-04-09 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
IL317382A (en) * 2022-06-07 2025-02-01 Incyte Corp Combination therapy of anti-PD-1 active agent, anti-TIM-3 active agent, and anti-LAG-3 active agent for the treatment of cancer
PE20250927A1 (es) 2022-06-08 2025-04-02 Incyte Corp Compuestos triciclicos de triazolo como inhibidores de dgk
WO2024003360A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Institut Curie Biomarkers and uses thereof for the treatment of neuroblastoma
WO2024015731A1 (en) 2022-07-11 2024-01-18 Incyte Corporation Fused tricyclic compounds as inhibitors of kras g12v mutants
US12600723B2 (en) 2022-07-18 2026-04-14 Incyte Corporation Tetracyclic compounds as DGK inhibitors
US12600722B2 (en) 2022-07-18 2026-04-14 Incyte Corporation Tetracyclic compounds as DGK inhibitors
EP4310197A1 (en) 2022-07-21 2024-01-24 Fundación para la Investigación Biomédica del Hospital Universitario Puerta de Hierro Majadahonda Method for identifying lung cancer patients for a combination treatment of immuno- and chemotherapy
KR20250044313A (ko) 2022-07-27 2025-03-31 아스트라제네카 아베 Pd-1/pd-l1 저해제와 인터루킨-12를 발현하는 재조합 바이러스의 조합물
WO2024028386A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Ose Immunotherapeutics Multifunctional molecule directed against cd28
US20240101718A1 (en) * 2022-09-28 2024-03-28 Incyte Corporation Anti-pd-1/lag-3 bispecific antibodies and uses thereof
WO2024069009A1 (en) 2022-09-30 2024-04-04 Alentis Therapeutics Ag Treatment of drug-resistant hepatocellular carcinoma
WO2024092031A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Seismic Therapeutic, Inc. VARIANT IgG FC POLYPEPTIDES AND USES THEREOF
AU2023367648A1 (en) * 2022-10-25 2025-05-01 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Klrb1 binding agents and methods of use thereof
WO2024097328A1 (en) 2022-11-03 2024-05-10 Incyte Corporation Combination therapies comprising an anti-gitr antibody for treating cancers
WO2024107731A2 (en) * 2022-11-14 2024-05-23 Ablexis, Llc Anti-pd-l1 antibodies
EP4619435A1 (en) 2022-11-16 2025-09-24 Boehringer Ingelheim International GmbH Predictive efficacy biomarkers for anti-sirpa antibodies
AR131099A1 (es) 2022-11-18 2025-02-19 Incyte Corp Fluoroalquenos heteroarílicos como inhibidores de dgk
EP4626552A1 (en) 2022-12-01 2025-10-08 MedImmune Limited Combination therapy for treatment of cancer comprising anti-pd-l1 and anti-cd73 antibodies
JP2025541738A (ja) 2022-12-01 2025-12-23 ビオンテック・ソシエタス・エウロパエア 抗ｐｄ１ａｂと化学療法での併用療法におけるｃｄ４０およびｃｄ１３７に対する多重特異性抗体
KR20250120305A (ko) 2022-12-14 2025-08-08 아스텔라스 파마 유럽 비.브이. Cldn18.2 및 cd3에 결합하는 2중 특이성 결합제와 면역 체크포인트 저해제를 수반한 조합 요법
CN120731228A (zh) 2022-12-21 2025-09-30 百时美施贵宝公司 肺癌的组合疗法
CN117482246B (zh) * 2022-12-30 2024-10-15 英百瑞(杭州)生物医药有限公司 抗cd33/cll1双特异性抗体-自然杀伤细胞偶联物及其用途
KR20240112755A (ko) * 2023-01-11 2024-07-19 주식회사 녹십자 혈전성 질환의 예방 또는 치료를 위한 신규한 액상 제형물
WO2024150177A1 (en) 2023-01-11 2024-07-18 Advesya Treatment methods for solid tumors
AR131101A1 (es) 2023-01-12 2025-02-19 Incyte Corp Heteroarilfluoroalquenos como inhibidores de dgk
WO2024160721A1 (en) 2023-01-30 2024-08-08 Kymab Limited Antibodies
JP2026506893A (ja) 2023-02-23 2026-02-27 イムチェック セラピューティクス エスエーエス Ｂｔｎ３ａ活性化抗体と免役チェックポイント阻害剤の併用
WO2024196952A1 (en) 2023-03-20 2024-09-26 Bristol-Myers Squibb Company Tumor subtype assessment for cancer therapy
CN121358499A (zh) 2023-03-30 2026-01-16 Ose免疫疗法 靶向活化的免疫细胞以表达免疫细胞增强分子的基于脂质的纳米粒及其用途
AU2024254671A1 (en) 2023-03-30 2025-10-02 Ose Immunotherapeutics Method of synthesis of targeted lipid nanoparticle and uses thereof
CN121620391A (zh) 2023-04-06 2026-03-06 金麦安博股份有限公司 用于治疗癌症的针对pd-l1和cd137的多特异性结合剂
WO2024220532A1 (en) 2023-04-18 2024-10-24 Incyte Corporation Pyrrolidine kras inhibitors
CN121285385A (zh) 2023-05-12 2026-01-06 金麦安博股份有限公司 能够与ox40结合的抗体、其变体及其用途
WO2024236048A1 (en) 2023-05-16 2024-11-21 Nh Theraguix Combination therapy for treating tumors with radiotherapy
WO2024261239A1 (en) 2023-06-23 2024-12-26 Imcheck Therapeutics Bispecific antibodies targeting btn3a and the pd-1/pd-l1 inhibitory axis
CN121712571A (zh) 2023-08-15 2026-03-20 百时美施贵宝公司 陶瓷羟基磷灰石色谱流通法
WO2025043151A2 (en) 2023-08-24 2025-02-27 Incyte Corporation Bicyclic dgk inhibitors
WO2025056180A1 (en) 2023-09-15 2025-03-20 BioNTech SE Methods of treatment using agents binding to epcam and cd137 in combination with pd-1 axis binding antagonists
WO2025068461A1 (en) 2023-09-29 2025-04-03 Negio Therapeutics Guanfacine derivatives and their use in treating cancer
WO2025068452A1 (en) 2023-09-29 2025-04-03 Negio Therapeutics Guanfacine derivatives and their use in treating cancer
AU2024357850A1 (en) 2023-10-09 2026-04-23 Incyte Corporation Combination therapy using a kras g12d inhibitor and pd-1 inhibitor or pd-l1 inhibitor
US20250163079A1 (en) 2023-11-01 2025-05-22 Incyte Corporation Kras inhibitors
TW202540189A (zh) 2023-11-30 2025-10-16 德商生物新技術公司 在組合療法中能夠結合ｏｘ４０之抗體
TW202523667A (zh) 2023-12-05 2025-06-16 美商英塞特公司 作為ｄｇｋ抑制劑之三環三唑并化合物
US20250186450A1 (en) 2023-12-06 2025-06-12 Incyte Corporation COMBINATION THERAPY COMPRISING DGK INHIBITORS and PD-1/PD-L1 INHIBITORS
WO2026033885A1 (en) 2024-08-08 2026-02-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and agents stabilizing or increasing expression of cldn18.2
WO2025120866A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and agents stabilizing or increasing expression of cldn18.2
WO2025120867A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and anti-vegfr2 antibodies
AR134560A1 (es) 2023-12-08 2026-01-28 Astellas Pharma Inc Terapia de combinación que implica agentes de unión biespecíficos que se unen a cldn18.2 y cd3 y agentes que estabilizan o aumentan la expresión de cldn18.2
US20250195536A1 (en) 2023-12-13 2025-06-19 Incyte Corporation Bicyclooctane kras inhibitors
WO2025132831A1 (en) 2023-12-19 2025-06-26 Universite D'aix-Marseille N-heteroaryl derivatives and uses thereof for treating cancer
WO2025133115A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Ose Immunotherapeutics Lipid-based nanoparticles comprising il-35
WO2025145207A1 (en) 2023-12-29 2025-07-03 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy of kras inhibitor and treg-depleting agent
EP4658320A1 (en) 2024-02-27 2025-12-10 Bristol-Myers Squibb Company Anti-ceacam5 antibody drug conjugates
TW202600608A (zh) 2024-02-27 2026-01-01 美商必治妥美雅史谷比公司 抗ｃｅａｃａｍ５抗體及其用途
WO2025242835A1 (en) 2024-05-22 2025-11-27 Ose Immunotherapeutics Molecules comprising masking linkers and uses thereof for the treatment of cancer
WO2025245489A1 (en) 2024-05-24 2025-11-27 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of tumors in subjects having fgl-1 positive samples
WO2025262250A1 (en) 2024-06-20 2025-12-26 Negio Therapeutics Guanfacine derivatives and their uses
WO2026060143A1 (en) 2024-09-11 2026-03-19 Incyte Corporation Kras inhibitors
WO2026068705A1 (en) 2024-09-26 2026-04-02 Ose Immunotherapeutics Lipid-based nanoparticles comprising non-glycosylated fc domains and uses thereof

Family Cites Families (249)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5985A (en) 1848-12-26 Pianoforte-action
US320A (en) 1837-07-31 John dainty
US3862925A (en) 1973-07-05 1975-01-28 American Home Prod Preparation of somatotropin release inhibiting factor and intermediates therefor
US3842067A (en) 1973-07-27 1974-10-15 American Home Prod Synthesis of(des-asn5)-srif and intermediates
JPS5726506B2 (sr) 1974-03-08 1982-06-04
US4105603A (en) 1977-03-28 1978-08-08 The Salk Institute For Biological Studies Peptides which effect release of hormones
ATE37983T1 (de) 1982-04-22 1988-11-15 Ici Plc Mittel mit verzoegerter freigabe.
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5128326A (en) 1984-12-06 1992-07-07 Biomatrix, Inc. Drug delivery systems based on hyaluronans derivatives thereof and their salts and methods of producing same
US4980286A (en) 1985-07-05 1990-12-25 Whitehead Institute For Biomedical Research In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US4880078A (en) 1987-06-29 1989-11-14 Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha Exhaust muffler
EP0359096B1 (en) 1988-09-15 1997-11-05 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Antibodies having modified carbohydrate content and methods of preparation and use
AU6290090A (en) 1989-08-29 1991-04-08 University Of Southampton Bi-or trispecific (fab)3 or (fab)4 conjugates
WO1991005548A1 (en) 1989-10-10 1991-05-02 Pitman-Moore, Inc. Sustained release composition for macromolecular proteins
WO1991006287A1 (en) 1989-11-06 1991-05-16 Enzytech, Inc. Protein microspheres and methods of using them
FR2656800B1 (fr) 1990-01-08 1992-05-15 Roussy Inst Gustave Nouvelles proteines produits par les lymphocytes humains, sequence d'adn codant pour ces proteines et applications pharmaceutiques et biologiques.
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
FR2664500B1 (fr) 1990-07-13 1994-10-28 Lille Ii Universite Droit Sant Procede de preparation d'une lipoproteine modifiee par incorporation d'une substance active lipophile, lipoproteine modifiee ainsi obtenue et composition pharmaceutique ou cosmetique la contenant.
US5972337A (en) 1990-11-01 1999-10-26 Cancer Research Fund Of Contra Costa 46 kilodalton human milk fat globule (HMFG) antigen, fragments and fusion protein
WO1992019244A2 (en) 1991-05-01 1992-11-12 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine A method for treating infectious respiratory diseases
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
GB9112536D0 (en) 1991-06-11 1991-07-31 Celltech Ltd Chemical compounds
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
GB9115364D0 (en) 1991-07-16 1991-08-28 Wellcome Found Antibody
US5843749A (en) 1991-07-26 1998-12-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ehk and Ror tyrosine kinases
AU669124B2 (en) 1991-09-18 1996-05-30 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing humanized chimera antibody
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
US5912015A (en) 1992-03-12 1999-06-15 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Modulated release from biocompatible polymers
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
GB9225453D0 (en) 1992-12-04 1993-01-27 Medical Res Council Binding proteins
US5934272A (en) 1993-01-29 1999-08-10 Aradigm Corporation Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug
US5885573A (en) 1993-06-01 1999-03-23 Arch Development Corporation Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
US6180377B1 (en) 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
IL108501A (en) 1994-01-31 1998-10-30 Mor Research Applic Ltd Antibodies and pharmaceutical compositions containing them
ES2281899T3 (es) 1994-05-06 2007-10-01 Institut Gustave Roussy Fracciones polipeptidicas solubles de la proteina lag-3; procedimiento de produccion; composicion terapeutica; anticuerpo anti-idiotipo.
EP0805678B1 (en) 1995-01-05 2003-10-29 THE BOARD OF REGENTS acting for and on behalf of THE UNIVERSITY OF MICHIGAN Surface-modified nanoparticles and method of making and using same
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
US5811097A (en) 1995-07-25 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
EP0850051A2 (en) 1995-08-31 1998-07-01 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Composition for sustained release of an agent
US5736152A (en) 1995-10-27 1998-04-07 Atrix Laboratories, Inc. Non-polymeric sustained release delivery system
US5942328A (en) 1996-02-29 1999-08-24 International Business Machines Corporation Low dielectric constant amorphous fluorinated carbon and method of preparation
DK0885002T3 (da) 1996-03-04 2011-08-22 Penn State Res Found Materialer og fremgangsmåder til forøgelse af cellulær internalisering
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US5855913A (en) 1997-01-16 1999-01-05 Massachusetts Instite Of Technology Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery
US5985309A (en) 1996-05-24 1999-11-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
US5922845A (en) 1996-07-11 1999-07-13 Medarex, Inc. Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
US6482925B1 (en) 1996-11-28 2002-11-19 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Mutants of the LAG-3 proteins and nucleotides encoding LAG-3 mutants
DE69732306T2 (de) 1997-01-16 2006-01-12 Massachusetts Institute Of Technology, Cambridge Zubereitung von partikelhaltigen arzneimitteln zur inhalation
US6090381A (en) 1997-02-11 2000-07-18 Immunomedics, Inc. Stimulation of an immune response with antibodies labeled with the . .alpha-galactosyl epitope
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
EP0900841A1 (en) 1997-06-18 1999-03-10 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) LAG-3 splice variants
US5989463A (en) 1997-09-24 1999-11-23 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Methods for fabricating polymer-based controlled release devices
SE512663C2 (sv) 1997-10-23 2000-04-17 Biogram Ab Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
DE19819846B4 (de) 1998-05-05 2016-11-24 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Multivalente Antikörper-Konstrukte
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
CA2336139C (en) 1998-06-24 2008-10-14 Advanced Inhalation Research, Inc. Large porous particles emitted from an inhaler
HU230769B1 (hu) 1999-01-15 2018-03-28 Genentech Inc. Módosított effektor-funkciójú polipeptid-változatok
US7109292B2 (en) 1999-03-08 2006-09-19 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
EP1210424B1 (en) 1999-08-23 2007-02-07 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Novel b7-4 molecules and uses therefor
EP1210428B1 (en) 1999-08-23 2015-03-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Pd-1, a receptor for b7-4, and uses therefor
US6803192B1 (en) 1999-11-30 2004-10-12 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-H1, a novel immunoregulatory molecule
AU784634B2 (en) 1999-11-30 2006-05-18 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-H1, a novel immunoregulatory molecule
HUP0204475A2 (en) 2000-02-11 2003-04-28 Merck Patent Gmbh Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
CA2410551A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw (Vib) Heterodimeric fusion proteins
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
PT1355919E (pt) 2000-12-12 2011-03-02 Medimmune Llc Moléculas com semivida longa, composições que as contêm e suas utilizações
AU2002258941A1 (en) 2001-04-20 2002-11-05 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods of enhancing cell responsiveness
WO2003011911A1 (fr) 2001-07-31 2003-02-13 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Substance specifique pour pd-1
US6833441B2 (en) 2001-08-01 2004-12-21 Abmaxis, Inc. Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers
DE60124912T2 (de) 2001-09-14 2007-06-14 Affimed Therapeutics Ag Multimerische, einzelkettige, Tandem-Fv-Antikörper
US20030138425A1 (en) 2001-09-21 2003-07-24 Mather Jennie Powell Antibodies that bind to cancer-associated antigen cytokeratin 8 and methods of use thereof
WO2003032814A2 (en) 2001-10-16 2003-04-24 Raven Biotechnologies, Inc. Antibodies that bind to cancer-associated antigen cd46 and methods of use thereof
WO2003088808A2 (en) 2002-04-16 2003-10-30 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
HUP0600342A3 (en) 2001-10-25 2011-03-28 Genentech Inc Glycoprotein compositions
WO2003042402A2 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Agents that modulate immune cell activation and methods of use thereof
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20040048312A1 (en) 2002-04-12 2004-03-11 Ronghao Li Antibodies that bind to integrin alpha-v-beta-6 and methods of use thereof
JP2005524399A (ja) 2002-05-03 2005-08-18 レイヴェン バイオテクノロジーズ， インコーポレイテッド Ａｌｃａｍおよびａｌｃａｍ調節因子
IL149820A0 (en) 2002-05-23 2002-11-10 Curetech Ltd Humanized immunomodulatory monoclonal antibodies for the treatment of neoplastic disease or immunodeficiency
ES2350687T3 (es) 2002-07-03 2011-01-26 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Composiciones de inmunopotenciación.
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
WO2004043239A2 (en) 2002-11-13 2004-05-27 Raven Biotechnologies, Inc. Antigen pipa and antibodies that bind thereto
CN1753912B (zh) 2002-12-23 2011-11-02 惠氏公司 抗pd-1抗体及其用途
JP2006524039A (ja) 2003-01-09 2006-10-26 マクロジェニクス，インコーポレーテッド 変異型Ｆｃ領域を含む抗体の同定および作製ならびにその利用法
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7563869B2 (en) 2003-01-23 2009-07-21 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Substance specific to human PD-1
FI1897548T4 (fi) 2003-02-28 2024-09-03 The Johns Hopkins University T-solujen säätely
WO2005019415A2 (en) 2003-07-07 2005-03-03 The Scripps Research Institute Compositions of orthogonal lysyl-trna and aminoacyl-trna synthetase pairs and uses thereof
WO2005019258A2 (en) 2003-08-11 2005-03-03 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
MXPA06003014A (es) 2003-09-18 2006-06-23 Raven Biotechnologies Inc Kid3 y anticuerpos de kid3 que se unen a este.
WO2005047327A2 (en) 2003-11-12 2005-05-26 Biogen Idec Ma Inc. NEONATAL Fc RECEPTOR (FcRn)-BINDING POLYPEPTIDE VARIANTS, DIMERIC Fc BINDING PROTEINS AND METHODS RELATED THERETO
WO2005070966A2 (en) 2004-01-16 2005-08-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fusion polypeptides capable of activating receptors
KR20050082389A (ko) 2004-02-18 2005-08-23 메덱스젠 주식회사 직렬 연쇄체를 갖는 면역접합체를 포함하는 장기이식합병증 치료용 약제학적 조성물
KR101295139B1 (ko) 2004-06-07 2013-08-12 레이븐 바이오테크놀로지스, 인코퍼레이티드 트랜스페린 리셉터 항체
US20070166281A1 (en) 2004-08-21 2007-07-19 Kosak Kenneth M Chloroquine coupled antibodies and other proteins with methods for their synthesis
WO2006021955A2 (en) 2004-08-23 2006-03-02 Mor Research Applications Ltd. Use of bat monoclonal antibody for immunotherapy
JP4938673B2 (ja) 2004-10-15 2012-05-23 ベリサイン・インコーポレイテッド ワンタイムパスワード
EP1810035A4 (en) 2004-11-10 2010-03-17 Macrogenics Inc GENERATION OF FC ANTIBODY REGIONS FOR EFFECTOR FUNCTION
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8802820B2 (en) 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US7687242B2 (en) 2005-01-12 2010-03-30 Raven Biotechnologies, Inc. KID31 and antibodies that bind thereto
EP1846032A4 (en) 2005-01-31 2009-01-28 Raven Biotechnologies Inc LUCA2 AND THEREO BINDING ANTIBODIES
AU2006210589B2 (en) 2005-02-02 2011-12-08 Macrogenics West, Inc. ADAM-9 modulators
WO2006084078A2 (en) 2005-02-02 2006-08-10 Raven Biotechnologies, Inc. Jam-3 and antibodies that bind thereto
EP1846455A4 (en) 2005-02-03 2010-02-17 Raven Biotechnologies Inc ANTIBODY TO THE ONKOSTATIN M RECEPTOR
BRPI0607450A2 (pt) 2005-02-04 2009-09-01 Raven Biotechnologies Inc anticorpos que se ligam a epha2 e métodos para sua utilização
EP1874824A4 (en) 2005-04-06 2009-12-30 Ibc Pharmaceuticals Inc METHODS OF GENERATING STABLE COMPOUND RELATED COMPLEXES OF HOMODIMERS, HOMOTRATEERS OR DIMER SIZES AND USES THEREOF
AU2006232310B9 (en) 2005-04-06 2011-07-21 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Improved stably tethered structures of defined compositions with multiple functions or binding specificities
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US9284375B2 (en) 2005-04-15 2016-03-15 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
EP3479844B1 (en) 2005-04-15 2023-11-22 MacroGenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
RU2494107C2 (ru) 2005-05-09 2013-09-27 Оно Фармасьютикал Ко., Лтд. Моноклональные антитела человека к белку программируемой смерти 1 (pd-1) и способы лечения рака с использованием анти-pd-1-антител самостоятельно или в комбинации с другими иммунотерапевтическими средствами
CN101355965A (zh) 2005-06-08 2009-01-28 达纳－法伯癌症研究院 通过抑制程序性细胞死亡1（pd-1）途经治疗持续性感染和癌症的方法及组合物
JP2006345852A (ja) 2005-06-16 2006-12-28 Virxsys Corp 抗体複合体
CN104356236B (zh) 2005-07-01 2020-07-03 E.R.施贵宝&圣斯有限责任公司 抗程序性死亡配体1(pd-l1)的人单克隆抗体
HUE029465T2 (en) 2005-08-10 2017-02-28 Macrogenics Inc Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
KR20130108481A (ko) 2005-08-19 2013-10-02 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
CA2607056C (en) 2005-10-19 2015-11-24 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for generating bioactive assemblies of increased complexity and uses
CN101374546B (zh) 2005-12-16 2016-03-23 Ibc医药公司 基于免疫球蛋白的多价生物活性装配体
CA2644903A1 (en) 2006-03-10 2007-09-20 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant heavy chains and methods of using same
US8871912B2 (en) 2006-03-24 2014-10-28 Merck Patent Gmbh Engineered heterodimeric protein domains
WO2007146968A2 (en) 2006-06-12 2007-12-21 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Single-chain multivalent binding proteins with effector function
AT503902B1 (de) 2006-07-05 2008-06-15 F Star Biotech Forsch & Entw Verfahren zur manipulation von immunglobulinen
AT503889B1 (de) 2006-07-05 2011-12-15 Star Biotechnologische Forschungs Und Entwicklungsges M B H F Multivalente immunglobuline
WO2008027236A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
WO2008140603A2 (en) 2006-12-08 2008-11-20 Macrogenics, Inc. METHODS FOR THE TREATMENT OF DISEASE USING IMMUNOGLOBULINS HAVING FC REGIONS WITH ALTERED AFFINITIES FOR FCγR ACTIVATING AND FCγR INHIBITING
CN103536915A (zh) 2006-12-27 2014-01-29 埃默里大学 用于治疗传染病和肿瘤的组合物和方法
EP1987839A1 (en) 2007-04-30 2008-11-05 I.N.S.E.R.M. Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease
AU2008255352B2 (en) 2007-05-31 2014-05-22 Genmab A/S Stable IgG4 antibodies
JP2010190572A (ja) 2007-06-01 2010-09-02 Sapporo Medical Univ ＩＬ１３Ｒａ２に対する抗体およびこれを含む診断・治療薬
HRP20131167T1 (hr) 2007-06-18 2014-01-03 Merck Sharp & Dohme B.V. Antitijela za humani receptor programirane smrti pd-1
EP3424951A1 (en) 2007-06-21 2019-01-09 MacroGenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US20090028857A1 (en) 2007-07-23 2009-01-29 Cell Genesys, Inc. Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof
KR20100058509A (ko) 2007-07-31 2010-06-03 메디뮨 엘엘씨 다중특이적 에피토프 결합 단백질 및 이의 용도
US8062852B2 (en) 2007-10-01 2011-11-22 The Children's Hospital And Regional Medical Center Detection and treatment of autoimmune disorders
EA201000910A1 (ru) 2007-11-30 2011-04-29 Бристоль-Мейерз Сквибб Компани Конъюгат "моноклональное антитело против в7н4/лекарственное средство" и способы его применения
US8227577B2 (en) 2007-12-21 2012-07-24 Hoffman-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
ES2563027T3 (es) 2008-01-07 2016-03-10 Amgen Inc. Método para fabricación de moléculas heterodímeras Fc de anticuerpos utilizando efectos de conducción electrostática
PT2242773T (pt) 2008-02-11 2017-09-15 Cure Tech Ltd Anticorpos monoclonais para o tratamento de tumores
EP2113255A1 (en) 2008-05-02 2009-11-04 f-star Biotechnologische Forschungs- und Entwicklungsges.m.b.H. Cytotoxic immunoglobulin
US7565048B1 (en) 2008-05-30 2009-07-21 Ofs Fitel Llc Undersea optical fiber transmission systems
ES2675730T3 (es) 2008-06-04 2018-07-12 Macrogenics, Inc. Anticuerpos con unión alterada a FcRn y métodos de uso de los mismos
US8460886B2 (en) 2008-07-04 2013-06-11 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Use of an efficacy marker for optimizing therapeutic efficacy of an anti-human PD-1 antibody on cancers
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
CN102203132A (zh) 2008-08-25 2011-09-28 安普利穆尼股份有限公司 Pd-1拮抗剂的组合物和使用方法
WO2010028797A1 (en) 2008-09-10 2010-03-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Multivalent antibodies
WO2010028796A1 (en) 2008-09-10 2010-03-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Trispecific hexavalent antibodies
WO2010028795A1 (en) 2008-09-10 2010-03-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Multivalent antibodies
KR101814408B1 (ko) 2008-09-26 2018-01-04 다나-파버 캔서 인스티튜트 인크. 인간 항-ｐｄ-１, ｐｄ-ｌ１, 및 ｐｄ-ｌ2 항체 및 그의 용도
EP2376109B1 (en) 2008-12-19 2019-01-23 MacroGenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
CN102395603A (zh) * 2008-12-26 2012-03-28 国立大学法人东京大学 使用抗lgr7抗体的癌症的诊断和治疗
WO2010089411A2 (en) 2009-02-09 2010-08-12 Universite De La Mediterranee Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof
CN104447995A (zh) 2009-03-20 2015-03-25 霍夫曼-拉罗奇有限公司 双特异性抗-her抗体
TW201100543A (en) 2009-05-27 2011-01-01 Hoffmann La Roche Tri-or tetraspecific antibodies
US8277919B2 (en) 2009-07-23 2012-10-02 VMO Systems, Inc. Reflective coating for an optical disc
WO2011044368A1 (en) 2009-10-07 2011-04-14 Macrogenics, Inc. Fc region-containing polypeptides that exhibit improved effector function due to alterations of the extent of fucosylation, and methods for their use
WO2011066342A2 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Amplimmune, Inc. Simultaneous inhibition of pd-l1/pd-l2
EP2507381A4 (en) 2009-12-04 2016-07-20 Hoffmann La Roche MULTISPECIFIC ANTIBODIES, ANTIBODY ANALOGS, COMPOSITIONS AND METHODS
GB201000467D0 (en) 2010-01-12 2010-02-24 Ucb Pharma Sa Antibodies
PT2361936T (pt) 2010-02-25 2016-07-15 Affimed Gmbh Molécula que se liga a antigénio e utilizações desta
US20110206672A1 (en) 2010-02-25 2011-08-25 Melvyn Little Antigen-Binding Molecule And Uses Thereof
JP5998060B2 (ja) * 2010-03-04 2016-09-28 マクロジェニクス，インコーポレーテッド Ｂ７−ｈ３と反応性のある抗体、その免疫学的に活性なフラグメントおよびその使用
CN102892786B (zh) 2010-03-11 2016-03-16 Ucb医药有限公司 Pd-1抗体
TW201134488A (en) * 2010-03-11 2011-10-16 Ucb Pharma Sa PD-1 antibodies
TWI426920B (zh) 2010-03-26 2014-02-21 Hoffmann La Roche 雙專一性、雙價抗－ｖｅｇｆ／抗－ａｎｇ－２抗體
DK2560993T3 (da) 2010-04-20 2024-10-14 Genmab As Heterodimeric antibody fc-containing proteins and methods for production thereof
US8876892B2 (en) 2010-04-21 2014-11-04 Medtronic, Inc. Prosthetic heart valve delivery system with spacing
CN102946906B (zh) 2010-04-23 2015-07-15 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 生产异源多聚体蛋白质
US9527926B2 (en) 2010-05-14 2016-12-27 Rinat Neuroscience Corp. Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them
JP2013532153A (ja) 2010-06-18 2013-08-15 ザ ブリガム アンド ウィメンズ ホスピタル インコーポレイテッド 慢性免疫病に対する免疫治療のためのｔｉｍ−３およびｐｄ−１に対する二重特異性抗体
US20130115215A1 (en) 2010-07-14 2013-05-09 Hongxing Zhou Domain insertion immunoglobulin
EP2601216B1 (en) 2010-08-02 2018-01-03 MacroGenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
PL2606064T3 (pl) 2010-08-16 2015-07-31 Novimmune Sa Sposoby wytwarzania wieloswoistych i wielowartościowych przeciwciał
PL2635607T3 (pl) 2010-11-05 2020-05-18 Zymeworks Inc. Projekt stabilnego przeciwciała heterodimerowego z mutacjami w domenie FC
ES2676205T3 (es) 2011-03-31 2018-07-17 Merck Sharp & Dohme Corp. Formulaciones estables de anticuerpos para el receptor PD-1 humano de muerte programada y tratamientos relacionados
KR101970025B1 (ko) 2011-04-20 2019-04-17 메디뮨 엘엘씨 Ｂ7-ｈ1 및 ｐｄ-1과 결합하는 항체 및 다른 분자들
ES2703780T3 (es) 2011-05-17 2019-03-12 Trion Res Gmbh Preparación de una vacuna que contiene anticuerpos trifuncionales con propiedades potenciadoras de la inmunogenicidad del antígeno
DK2714733T3 (da) 2011-05-21 2019-05-06 Macrogenics Inc Cd3-bindende molekyler, der er i stand til at binde til human og ikke-human cd3
CA2836873C (en) 2011-05-21 2019-10-22 Macrogenics, Inc. Deimmunized serum-binding domains and their use for extending serum half-life
WO2012162583A1 (en) 2011-05-26 2012-11-29 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Design and construction of novel multivalent antibodies
US20150045540A1 (en) 2011-06-28 2015-02-12 Sea Lane Biotechnologies, Llc Multispecific stacked variable domain binding proteins
MY180616A (en) 2011-06-30 2020-12-03 Genzyme Corp Inhibitors of t-cell activation
US20140155581A1 (en) 2011-07-06 2014-06-05 Medimmune, Llc Methods For Making Multimeric Polypeptides
US9920438B2 (en) 2011-07-07 2018-03-20 Massachusetts Institute Of Technology Methods and apparatus for ultrathin catalyst layer for photoelectrode
JP5938473B2 (ja) 2011-07-22 2016-06-22 アフィメート テラポイティクス アーゲー 多価抗原結合Ｆｖ分子
JP6240600B2 (ja) 2011-07-24 2017-11-29 キュアテク リミテッド ヒト化免疫モノクローナル抗体の変異体
US10344050B2 (en) 2011-10-27 2019-07-09 Genmab A/S Production of heterodimeric proteins
CA2854806A1 (en) 2011-11-07 2013-05-16 Medimmune, Llc Multispecific and multivalent binding proteins and uses thereof
CA2863944A1 (en) 2012-02-10 2013-08-15 Research Corporation Technologies, Inc. Fusion proteins comprising immunoglobulin constant domain-derived scaffolds
WO2013163427A1 (en) 2012-04-25 2013-10-31 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Antibodies to treat hiv-1 infection
CN113967253A (zh) 2012-05-15 2022-01-25 百时美施贵宝公司 通过破坏pd-1/pd-l1信号传输的免疫治疗
EP2855531A1 (en) 2012-05-24 2015-04-08 F. Hoffmann-La Roche AG Multispecific antibodies
AR091649A1 (es) * 2012-07-02 2015-02-18 Bristol Myers Squibb Co Optimizacion de anticuerpos que se fijan al gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
US20150203591A1 (en) 2012-08-02 2015-07-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mutivalent antigen-binding proteins
JP6403166B2 (ja) 2012-08-03 2018-10-10 ダナ−ファーバー キャンサー インスティテュート， インコーポレイテッド 単一抗原抗ｐｄ−ｌ１およびｐｄ−ｌ２二重結合抗体およびその使用方法
DK2900061T3 (da) 2012-09-17 2020-03-02 Galectin Therapeutics Inc Fremgangsmåde til forstærkning af specifikke immunterapier ved cancerbehandling
PL2904011T3 (pl) 2012-10-02 2018-01-31 Bristol Myers Squibb Co Połączenie przeciwciał anty-kir i przeciwciał anty-pd-1 w leczeniu raka
CN104853776B (zh) 2012-10-12 2021-04-09 布里格姆及妇女医院股份有限公司 免疫应答的增强
US9789182B2 (en) 2012-10-23 2017-10-17 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-KIR and anti-CTLA-4 antibodies to treat cancer
CA2889182A1 (en) 2012-10-26 2014-05-01 The University Of Chicago Synergistic combination of immunologic inhibitors for the treatment of cancer
US9487587B2 (en) 2013-03-05 2016-11-08 Macrogenics, Inc. Bispecific molecules that are immunoreactive with immune effector cells of a companion animal that express an activating receptor and cells that express B7-H3 and uses thereof
EA037554B1 (ru) 2013-03-15 2021-04-13 Глаксосмитклайн Интеллекчуал Проперти Дивелопмент Лимитед Анти-lag-3 связывающие белки
JP6742903B2 (ja) * 2013-05-02 2020-08-19 アナプティスバイオ インコーポレイティッド プログラム死−１（ｐｄ−１）に対する抗体
US9676853B2 (en) * 2013-05-31 2017-06-13 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind PD-1
WO2014209804A1 (en) 2013-06-24 2014-12-31 Biomed Valley Discoveries, Inc. Bispecific antibodies
DK177790B1 (en) 2013-08-08 2014-07-07 Liqtech Internat A S A METHOD OF PRODUCING A CERAMIC FILTER MEMBRANE, A METHOD OF IMPROVING A CERAMIC FILTER MEMBRANE AND THE CERAMIC FILTER MEMBRANE OBTAINED BY THE METHOD
AR097306A1 (es) 2013-08-20 2016-03-02 Merck Sharp & Dohme Modulación de la inmunidad tumoral
EP2839842A1 (en) * 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding CD123 and CD3 and uses thereof
EP2840091A1 (en) * 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific diabodies that are capable of binding gpA33 and CD3 and uses thereof
US10077305B2 (en) 2013-09-10 2018-09-18 Medimmune Limited Antibodies against PD-1 and uses thereof
EA034666B1 (ru) * 2013-09-13 2020-03-04 Бейджин Свитзерланд Гмбх Антитело против pd-1 и его применение для лечения рака или вирусной инфекции и фрагмент антитела
SG11201601763SA (en) 2013-09-20 2016-04-28 Bristol Myers Squibb Co Combination of anti-lag-3 antibodies and anti-pd-1 antibodies to treat tumors
US10570204B2 (en) * 2013-09-26 2020-02-25 The Medical College Of Wisconsin, Inc. Methods for treating hematologic cancers
MY184154A (en) * 2013-12-12 2021-03-23 Shanghai hengrui pharmaceutical co ltd Pd-1 antibody, antigen-binding fragment thereof, and medical application thereof
BR112016015140A2 (pt) 2013-12-30 2018-01-23 Epimab Biotherapeutics Inc. imunoglobulina com fabs in-tandem e usos das mesmas
WO2015112534A2 (en) 2014-01-21 2015-07-30 Medimmune, Llc Compositions and methods for modulating and redirecting immune responses
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
SG10201900002QA (en) 2014-01-24 2019-02-27 Dana Farber Cancer Institue Inc Antibody molecules to pd-1 and uses thereof
EP3099716A1 (en) 2014-01-28 2016-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Anti-lag-3 antibodies to treat hematological malignancies
US20150259420A1 (en) 2014-03-14 2015-09-17 Novartis Ag Antibody molecules to lag-3 and uses thereof
US20150307620A1 (en) 2014-04-16 2015-10-29 University Of Connecticut Linked immunotherapeutic agonists that costimulate multiple pathways
JP2017515859A (ja) 2014-05-15 2017-06-15 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 抗ｐｄ−１抗体と他の抗癌剤の組み合わせを使用する肺癌の処置
EP3152235B1 (en) 2014-05-29 2021-08-25 MacroGenics, Inc. Tri-specific binding molecules and methods of use thereof
WO2015195163A1 (en) 2014-06-20 2015-12-23 R-Pharm Overseas, Inc. Pd-l1 antagonist fully human antibody
TWI693232B (zh) 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
EP3160497A4 (en) 2014-06-27 2018-01-17 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Conjugates for immunotherapy
KR102524920B1 (ko) 2014-07-22 2023-04-25 아폴로믹스 인코포레이티드 항-pd-1 항체
CN105330740B (zh) 2014-07-30 2018-08-17 珠海市丽珠单抗生物技术有限公司 抗pd-1抗体及其应用
US10435470B2 (en) 2014-08-05 2019-10-08 Cb Therapeutics, Inc. Anti-PD-L1 antibodies
WO2016020856A2 (en) 2014-08-05 2016-02-11 MabQuest SA Immunological reagents
JO3663B1 (ar) 2014-08-19 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين
GB201419084D0 (en) 2014-10-27 2014-12-10 Agency Science Tech & Res Anti-PD-1 antibodies
EP3218409A2 (en) 2014-11-11 2017-09-20 Sutro Biopharma, Inc. Anti-pd-1 antibodies, compositions comprising anti-pd-1 antibodies and methods of using anti-pd-1 antibodies
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
EP3916017A1 (en) 2014-12-22 2021-12-01 PD-1 Acquisition Group, LLC Anti-pd-1 antibodies
EA201791768A1 (ru) 2015-02-06 2018-07-31 КАДМОН КОРПОРЕЙШН, ЭлЭлСи Иммуномодулирующие агенты
TN2017000440A1 (en) 2015-04-17 2019-04-12 Bristol Myers Squibb Co Compositions comprising a combination of an anti-pd-1 antibody and another antibody
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
TWI870335B (zh) * 2015-06-12 2025-01-21 美商宏觀基因股份有限公司 變異的嵌合4d5抗體及其與抗pd-1抗體聯合用於治療癌症的應用
WO2017019846A1 (en) * 2015-07-30 2017-02-02 Macrogenics, Inc. Pd-1-binding molecules and methods use thereof
CN108136010A (zh) * 2015-10-08 2018-06-08 宏观基因有限公司 用于治疗癌症的联合疗法
EP3370768B9 (en) 2015-11-03 2022-03-16 Janssen Biotech, Inc. Antibodies specifically binding pd-1 and their uses

Also Published As

Publication number Publication date
CR20180062A (es) 2018-05-25
ES2898958T3 (es) 2022-03-09
JP6959907B2 (ja) 2021-11-05
JP7557567B2 (ja) 2024-09-27
IL290571B (en) 2022-11-01
UA127372C2 (uk) 2023-08-02
MX2022014645A (es) 2022-12-15
MD3456346T2 (ro) 2021-11-30
TW202417048A (zh) 2024-05-01
IL287916A (en) 2022-01-01
PT3328419T (pt) 2021-11-26
AU2025202334A1 (en) 2025-04-24
PH12018500232A1 (en) 2018-08-29
JP7245304B2 (ja) 2023-03-23
PT3981792T (pt) 2024-11-08
PE20181151A1 (es) 2018-07-17
AU2022200168B2 (en) 2025-01-02
IL287916B2 (en) 2023-09-01
IL297090B1 (en) 2024-09-01
IL287916B1 (en) 2023-05-01
EP3456346A1 (en) 2019-03-20
US20200231675A1 (en) 2020-07-23
IL257216A (en) 2018-03-29
MX2019001161A (es) 2019-07-04
GEAP202315864A (en) 2023-05-25
CY1124723T1 (el) 2022-07-22
EP3981792B1 (en) 2024-08-21
AU2018214151A1 (en) 2018-08-30
JP2023075241A (ja) 2023-05-30
SMT202100610T1 (it) 2021-11-12
JP2018524394A (ja) 2018-08-30
HUE068868T2 (hu) 2025-02-28
FIC20240028I1 (fi) 2024-08-05
GEAP202214712A (en) 2022-07-25
DK3328419T3 (da) 2021-10-11
TWI886756B (zh) 2025-06-11
LT3981792T (lt) 2024-11-11
IL297090A (en) 2022-12-01
TW202028234A (zh) 2020-08-01
ES2994122T3 (en) 2025-01-17
ES2898511T3 (es) 2022-03-07
HRP20241289T1 (hr) 2024-12-20
IL290571B2 (en) 2023-03-01
PT3456346T (pt) 2021-09-28
HRP20211645T1 (hr) 2022-02-04
DK3456346T3 (da) 2021-08-30
AU2020200054A1 (en) 2020-01-30
CN116333138A (zh) 2023-06-27
KR20180093127A (ko) 2018-08-20
FR24C1033I1 (fr) 2024-08-30
CY1124634T1 (el) 2022-07-22
HUE056201T2 (hu) 2022-02-28
SG10201906059VA (en) 2019-08-27
SG10202010506TA (en) 2020-11-27
MD3981792T2 (ro) 2025-02-28
RS62568B1 (sr) 2021-12-31
HUS2400028I1 (hu) 2024-08-28
MD3328419T2 (ro) 2022-01-31
TW201710292A (zh) 2017-03-16
JOP20200213B1 (ar) 2025-10-01
JP6959897B2 (ja) 2021-11-05
CN114773475A (zh) 2022-07-22
CN114773475B (zh) 2024-01-12
AU2016298227A2 (en) 2018-09-13
WO2017019846A1 (en) 2017-02-02
CO2018000867A2 (es) 2018-04-19
EA201890296A1 (ru) 2018-08-31
LT3328419T (lt) 2021-11-10
GEAP202215554A (en) 2022-06-10
CN107847574B (zh) 2023-05-23
MA42542B1 (fr) 2021-09-30
TWI762879B (zh) 2022-05-01
PL3981792T3 (pl) 2024-12-16
LT3456346T (lt) 2021-09-27
CL2018000254A1 (es) 2018-07-20
KR20250020718A (ko) 2025-02-11
EP3456346B1 (en) 2021-07-07
CR20220194A (es) 2022-06-16
DK3981792T3 (da) 2024-09-02
AU2016298227A8 (en) 2018-03-08
EP4450088A3 (en) 2025-03-26
IL297090B2 (en) 2025-01-01
JP2019055948A (ja) 2019-04-11
HRP20211333T1 (hr) 2021-11-26
EP3981792A1 (en) 2022-04-13
HUE055207T2 (hu) 2021-11-29
SI3981792T1 (sl) 2024-10-30
PL3456346T3 (pl) 2021-12-20
RS62374B1 (sr) 2021-10-29
MA58293B1 (fr) 2024-11-29
US12534531B2 (en) 2026-01-27
EP3328419A4 (en) 2018-12-26
CN108976300B (zh) 2023-04-14
MX2018001227A (es) 2018-03-26
CN108976300A (zh) 2018-12-11
US20190127467A1 (en) 2019-05-02
GEP20227419B (en) 2022-10-10
AU2016298227A1 (en) 2018-02-22
MA42542A (fr) 2021-05-26
NL301287I2 (nl) 2024-08-21
AU2020200054B2 (en) 2022-03-03
CA2993948A1 (en) 2017-02-02
HK1248106A1 (en) 2018-10-12
LTPA2024525I1 (sr) 2024-08-26
EP3328419A1 (en) 2018-06-06
JP2024178244A (ja) 2024-12-24
TWI833183B (zh) 2024-02-21
ZA201800500B (en) 2020-10-28
JO3736B1 (ar) 2021-01-31
ECSP18006831A (es) 2018-04-30
JOP20200213A1 (ar) 2022-10-30
PE20231958A1 (es) 2023-12-06
ES2898511T9 (en) 2025-03-12
GEP20237538B (en) 2023-09-11
US20230357404A1 (en) 2023-11-09
CR20200423A (es) 2021-01-20
WO2017019846A8 (en) 2018-01-25
KR102762075B1 (ko) 2025-02-05
US11623959B2 (en) 2023-04-11
CN107847574A (zh) 2018-03-27
FI3981792T3 (fi) 2024-09-23
NZ739493A (en) 2024-12-20
EP3328419B1 (en) 2021-08-25
AU2022200168A1 (en) 2022-02-10
ZA201807856B (en) 2020-09-30
SMT202400381T1 (it) 2024-11-15
AU2016298227B2 (en) 2019-10-03
PL3328419T3 (pl) 2021-12-27
SMT202100527T1 (it) 2021-11-12
TW202229357A (zh) 2022-08-01
PE20240111A1 (es) 2024-01-22
IL257216B (en) 2022-03-01
SI3456346T1 (sl) 2021-11-30
KR102761886B1 (ko) 2025-02-06
CY2024026I1 (el) 2025-03-28
AU2018214151B2 (en) 2019-10-31
FR24C1033I2 (fr) 2025-05-23
KR20180034588A (ko) 2018-04-04
SI3328419T1 (sl) 2021-11-30
TW202535469A (zh) 2025-09-16
GEP20227438B (en) 2022-11-10
IL290571A (en) 2022-04-01
JP2022002540A (ja) 2022-01-11
AU2016298227B9 (en) 2019-10-31
TWI691509B (zh) 2020-04-21
US10577422B2 (en) 2020-03-03
EP4450088A2 (en) 2024-10-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7557567B2 (ja) Ｐｄ‐１結合分子及びその使用方法
TWI773646B (zh) 結合lag-3的分子和其使用方法
TWI814758B (zh) 雙特異性ｃｄ１６-結合分子及其在疾病治療中的用途
JP7378567B2 (ja) Ｌａｇ‐３結合分子及びその使用方法
HK40070346A (en) Pd-1-binding molecules and methods of use thereof
HK40117494A (en) Pd-1-binding molecules and methods of use thereof
HK40070346B (en) Pd-1-binding molecules and methods of use thereof
HK40006310B (en) Pd-1 and lag-3 binding molecules and methods of use thereof
HK40006310A (en) Pd-1 and lag-3 binding molecules and methods of use thereof
HK1248106B (en) Pd-1-binding molecules and methods of use thereof