RS64011B1 - Postupci pripreme 18f-obeleženih psma-usmerenih agenasa za pet snimanje i dijagnostički postupci sa njima - Google Patents

Description

Opis

POZADINA PRONALASKA

UNAKRSNO POVEZIVANJE SA SRODNIM PRIJAVAMA

[0001] Ova prijava zahteva pravo prvenstva datuma podnošenja S.A.D. privremene prijave serijski br.61/798,108 koja je podneta 15. marta 2013. godine.

OBLAST PRONALASKA

[0002] Predmetni pronalazak se odnosi na postupke za pravljenje malih molekula koji imaju visok afinitet i specifičnost za membranski antigen specifičan za prostatu (PSMA), i na upotrebu takvih molekula u dijagnostičke svrhe.

SAŽETAK SRODNE STRUKE

[0003] Membranski antigen specifičan za prostatu (PSMA) se jedinstveno prekomerno eksprimira na površini ćelija kancera prostate, kao i u neovaskulaturi različitih čvrstih tumora. Kao rezultat toga, PSMA je privukao pažnju kao klinički biomarker za detekciju i upravljanje kancerom prostate. Generalno, ovi pristupi koriste antitelo specifično usmereno na PSMA za direktno snimanje ili terapijske agense. Na primer, ProstaScint (Cytogen, Philadelphia, PA), koji je FDA odobrila za detekciju i snimanje kancera prostate, koristi antitelo za isporuku helatnog radioizotopa (Indijum-111). Međutim, sada je prepoznato da je tehnologija ProstaScint ograničena na detekciju mrtvih ćelija i prema tome je njena klinička relevantnost upitna.

[0004] Uspeh dijagnoze kancera i terapije upotrebom antitela ograničen je izazovima kao što su imunogenost i slaba vaskularna permeabilnost. Pored toga, velika antitela vezana za ciljeve na površini ćelije predstavljaju barijeru za naknadno vezivanje dopunskih antitela na susednim mestima na površini ćelije, što rezultuje smanjenim obeležavanjem površine ćelije.

[0005] Pored toga što služi kao cilj na površini ćelije za antitela koja isporučuju dijagnostičke ili terapijske agense, u velikoj meri zanemareno i jedinstveno svojstvo PSMA je njegova enzimska aktivnost. To jest, PSMA je sposoban da prepozna i obradi molekule male kao što su dipeptidi. Uprkos postojanju ovog svojstva, ono je u velikoj meri neistraženo u smislu razvoja novih dijagnostičkih i terapijskih strategija. Postoji nekoliko nedavnih primera u literaturi koji su opisali rezultate u detektovanju ćelija kancera prostate upotrebom obeleženih inhibitora PSMA malog molekula.

[0006] Određeni fosforamidatni PSMA inhibitori opisani su u S.A.D. patentima br. RE42,275 i 8,293,725. I jedan<18>F-obeleženi PMSA inhibitor objavljen je u Lapi, S.E., et al., J. Nucl. Med. 2009, 50(12), 2042. Drugi PSMA inhibitori, uključujući radionuklidom-helirane analoge, objavljeni su u WO 2012/174136, WO 2012/064914, i WO 2013/173583. WO 2013/173630 se odnosi na postupke koji omogućavaju da se veoma polarni radiofarmaceutici brzo konvertuju u rastvore spremne za injekciju.

SAŽETAK PRONALASKA

[0007] Ovde su obezbeđeni postupci pripreme dijagnostičkih jedinjenja i postupci za detektovanje PSMA prezentujućih ćelija, kao što su ćelije kancera prostate, koji počivaju na potentnosti i specifičnom afinitetu inhibitora malog molekula. Dijagnostički agensi se mogu upotrebljavati za praćenje i stratifikaciju pacijenata radi lečenja odgovarajućim terapijskim agensima.

[0008] U prvom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje postupak pripreme formule (I)

ili njene farmaceutski prihvatljive soli, postupak sadrži dovođenje u kontakt jedinjenja formule (III):

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli sa izvorom fluorida ili radiofluorida, pri čemu

L je linker koji sadrži funkcionalnu grupu formule -NH-CH2CH2-(OCH2CH2-)y-C(O)-ili grupu formule

pri čemu

y je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12;

m je 1, 2, 3, ili 4;

svako n je nezavisno 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12;

R<1>je fenil ili piridil; pri čemu je fenil ili piridil supstituisan sa [F]- ili [<18>F]-fluoro grupom i opciono supstituisan sa drugom grupom koja je odabrana od halogena, cijano, i nitro;

svako R<2>je nezavisno vodonik ili C1-C6alkil;

R<3>je fenil ili piridil; pri čemu je fenil ili piridil supstituisan sa odlazećom grupom i opciono supstituisan sa drugom grupom koja je odabrana od halogena, cijano, i nitro; i svako R je nezavisno vodonik ili zaštitna grupa koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od alkila, alkenila, haloalkila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, onitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, p-nitrobenzila, p-metoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksibenzila, i piperonila, poželjno koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od metila, etila, propila, izopropila, terc-butila, alila, trifluorometila, trifluoroetila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, o-nitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, pbromobenzila, p-nitrobenzila, p-metoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksi-benzila, i piperonila;

pod uslovom da kada je L grupa formule

m·(n+2) je veće od ili jednako 3 i manje od ili jednako 21.

[0009] U drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje postupak pripreme formule (I)

ili njene farmaceutski prihvatljive soli, postupak sadrži dovođenje u kontakt jedinjenja formule (II),

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli sa jedinjenjem formule (IV),

pri čemu

L je linker koji sadrži funkcionalnu grupu formule -NH-CH2CH2-(OCH2CH2-)y-C(O)-ili grupu formule

pri čemu

y je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12;

m je 1, 2, 3, ili 4;

svako n je nezavisno 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12;

R<1>je fenil ili piridil; pri čemu je fenil ili piridil supstituisan sa [F]- ili [<18>F]-fluoro grupom i opciono supstituisan sa drugom grupom koja je odabrana od halogena, cijano, i nitro;

svako R<2>je nezavisno vodonik ili C1-C6alkil;

R<5>je R<1>; i

svako R je nezavisno vodonik ili zaštitna grupa koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od alkila, alkenila, haloalkila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, onitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, p-nitrobenzila, p-metoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksibenzila, i piperonila, poželjno koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od metila, etila, propila, izopropila, terc-butila, alila, trifluorometila, trifluoroetila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, o-nitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, pbromobenzila, p-nitrobenzila, p-metoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksi-benzila, i piperonila;

pod uslovom da kada je L grupa formule

m·(n+2) je veće od ili jednako 3 i manje od ili jednako 21.

[0010] U trećem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje postupak za detektovanje i/ili identifikovanje ćelija koje prezentuju PSMA koji sadrži dovođenje u kontakt ćelije za koju se sumnja da prezentuje PSMA sa jedinjenjem formule (I)

ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, pri čemu

L je linker koji sadrži funkcionalnu grupu formule -NH-CH2CH2-(OCH2CH2-)y-C(O)-ili grupu formule

pri čemu

y je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12;

m je 1, 2, 3, ili 4;

svako n je nezavisno 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12;

R<1>je fenil ili piridil; pri čemu je fenil ili piridil supstituisan sa [F]- ili [<18>F]-fluoro grupom i opciono supstituisan sa drugom grupom koja je odabrana od halogena, cijano, i nitro;

svako R<2>je nezavisno vodonik ili C1-C6alkil; i

svako R je nezavisno vodonik ili zaštitna grupa koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od alkila, alkenila, haloalkila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, onitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, p-nitrobenzila, p-metoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksibenzila, i piperonila, poželjno koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od metila, etila, propila, izopropila, terc-butila, alila, trifluorometila, trifluoroetila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, o-nitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, pbromobenzila, p-nitrobenzila, p-metoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksi-benzila, i piperonila;

pod uslovom da kada je L grupa formule

m·(n+2) je veće od ili jednako 3 i manje od ili jednako 21.

[0011] Poželjni primeri izvođenja postupaka prvog, drugog i trećeg aspekta pronalaska izneti su u patentnim zahtevima 4 do 15.

[0012] Prethodno navedeno samo sumira određene aspekte predmetnog pronalaska i nije namenjeno da bude ograničavajuće. Opširniji i potpuniji opis različitih aspekata i primera izvođenja predmetnog pronalaska obezbeđen je u nastavku.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0013]

Slika 1 pokazuje<31>P NMR spektre pH 6 rastvora CTT1054 u vremenskim intervalima na po sat od 0-8 h.

Slika 2 pokazuje<31>P NMR spektre pH 6 rastvora CTT1297 u vremenskim intervalima na po sat od 0-8 h.

Slika 3 pokazuje<31>P NMR spektre pH 5 rastvora CTT1297 u vremenskim intervalima na po sat od 0-8 h.

Slika 4 pokazuje<31>P NMR spektre pH 4 rastvora CTT1297 u vremenskim intervalima na po sat od 0-8 h.

Slika 5 pokazuje<31>P NMR spektre pH 3 rastvora CTT1297 u vremenskim intervalima na po sat od 0-8 h.

Slika 6 pokazuje<31>P NMR spektre pH 2 rastvora CTT1297 u vremenskim intervalima na po sat od 0-8 h.

Slika 7 pokazuje<31>P NMR spektre pH 4,5 rastvora CTT1000 u vremenskim intervalima na po sat od 0-8 h.

Slika 8 pokazuje rendgensku kristalnu strukturu CTT1055 kokristalizovanu u vanćelijskom domenu PSMA. Nema prisustva indukovanog aren-vezujućeg mesta. Crveno označava područja visoke gustine kiseonika, plavo označava područja visoke gustine azota i zeleno označava područja visoke gustine vodonika.

Slika 9 pokazuje rendgensku kristalnu strukturu CTT1057 kokristalizovanu u vanćelijskom domenu PSMA. Aren-vezujuće mesto indukuje fluorobenzamid grupa CTT1057. Crveno označava područja visoke gustine kiseonika, plavo označava područja visoke gustine azota i zeleno označava područja visoke gustine vodonika. Slika 10 pokazuje biodistribuciju A) CTT1057, i B) CTT1059 u mišjem modelu sa CWR22RV1 ćelijskim ksenograftima tumora.

Slika 11 pokazuje sken PET snimanja CWR22RV1 ksenografta tumora 2 sata posle injekcije sa CTT1056. Strelica označava lokaciju tumora. Crveno označava područja visokog preuzimanja radioaktivno obeleženih agenasa, zeleno označava srednje preuzimanje, i plavo označava područja niskog preuzimanja.

Slika 12 pokazuje sken PET snimanja CWR22RV1 ksenografta tumora 5 sati posle injekcije sa CTT1057. Strelica označava lokaciju tumora. Crveno označava područja visokog preuzimanja radioaktivno obeleženih agenasa, zeleno označava srednje preuzimanje, i plavo označava područja niskog preuzimanja.

Slika 13 pokazuje kristalne strukture A) CTT1056; B) CTT1057; i C) CTT1059 sa PSMA. Aren-vezujući region sadrži Arg511 i Trp541 ostatke koji su obeleženi kao "Arg511" i "Trp541" respektivno.

Slika 14 pokazuje 3D MicroPET/CT snimke 2 h nakon injekcije mužjaka golih miševa koji nose CWR22Rv1 i PC3 ksenografte tumora, respektivno A) [<18>F]CTT1056; B)

[<18>F]CTT1057; i C) [<18>F]CTT1059. Strelice označavaju gde je tumor postavljen.

Slika 15 pokazuje ex vivo biodistribuciju [<18>F]CTT1057.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

1

[0014] Ovde su objavljena jedinjenja koja su u obliku formule (I),

ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu su R<1>, R<2>, R i L kao što je prethodno definisano.

[0015] Na primer, kada je m 2 i svako n je 4, linker je dužine dvanaest atoma. Ukoliko je m 1, a n 10, dužina linkera je takođe 12. Dužina linkera se izračunava upotrebom formule m·(n+2).

U određenim primerima izvođenja jedinjenja formule (I), jedinjenje je formule (Ia):

[0016]

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su m, n, R<1>, R<2>, i R kao što je definisano za formulu (I).

[0017] U nekim primerima izvođenja, m je 1, 2 ili 3. Poželjno, m je 1 ili 2.

[0018] U nekim primerima izvođenja, svako n je nezavisno 1, 2, 3, 4, 5, 6 ili 7. U drugim primerima izvođenja, svako n je nezavisno 3, 4, 5 ili 6. U nekim primerima izvođenja, svako n je 5.

[0019] U nekim primerima izvođenja, m je 1 ili 2, i svako n je 5.

[0020] U nekim primerima izvođenja, m je 2, 3 ili 4, i mogu se izabrati dve, tri ili četiri različite opcije za n, pod uslovom da je linearna dužina rezultujućeg linkera veća od ili jednaka 4, i manja od ili jednaka 20. Na primer, kada je m 2, n je 3 i 5, proizvodeći linker strukture:

[0021] "Zaštitna grupa" kao što se ovde upotrebljava je grupa koja je introdukovana u funkcionalnu grupu (npr. fosforna kiselina ili karboksilna kiselina) koja omogućava hemoselektivnost u sledećoj hemijskoj transformaciji. Generalno, takve grupe, specifično zaštitne grupe karboksilne i fosforne kiseline, opisane su u Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Edition.

[0022] U nekim primerima izvođenja, "zaštitna grupa" je alkil, alkenil, ili haloalkil. Ovo uključuje, ali nije ograničeno na, metil, etil, propil, izopropil, terc-butil, alil, trifluorometil ili trifluoroetil.

[0023] U nekim primerima izvođenja, "zaštitna grupa" je benzil, trifenilmetil (tritil), difenilmetil, o-nitrobenzil, 2,4,6-trimetilbenzil, p-bromobenzil, p-nitrobenzil, p-metoksibenzil (PMB), 2,6-dimetoksibenzil, 4-(metilsulfinil)benzil, 4-sulfobenzil, 4-azidometoksibenzil, ili piperonil.

U određenim primerima izvođenja jedinjenja formule (I), jedinjenje je formule (Ib):

[0024]

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0025] U nekim primerima izvođenja jedinjenja formule (Ia), m je 1, i svako R i R<2>je vodonik. U drugim primerima izvođenja, m je 2, i svako R i R<2>je vodonik.

U određenim primerima izvođenja jedinjenja formula (I), (I\a) i (Ib), R<1>je odabrano od jedne od sledećih grupa (1a)-(1kk):

[0026]

pri čemu je R<6>-F ili -<18>F; i R<7>je vodonik, halogen, cijano, ili nitro.

pri čemu je R<6>-F ili -<18>F; i R<7>je vodonik, halogen, cijano, ili nitro.

pri čemu je R<6>-F ili -<18>F; i R<7>je vodonik, halogen, cijano, ili nitro.

pri čemu je R<6>-F ili -<18>F; i R<7>je vodonik, halogen, cijano, ili nitro.

1

pri čemu je R<6>-F ili -<18>F; i R<7>je vodonik, halogen, cijano, ili nitro.

pri čemu je R<6>-F ili -<18>F; i R<7>je vodonik, halogen, cijano, ili nitro.

pri čemu je R<6>-F ili -<18>F; i R<7>je vodonik, halogen, cijano, ili nitro.

pri čemu je R<6>-F ili -<18>F.

pri čemu je R<6>-F ili -<18>F.

pri čemu je R<6>-F.

1

pri čemu je R<6>-<18>F.

ili

pri čemu je R<6>-F ili -<18>F.

1

pri čemu je R<6>-F ili -<18>F.

pri čemu je R<6>-F ili -<18>F.

pri čemu je R<6>-F.

pri čemu je R<6>-<18>F.

1

pri čemu je R<6>-F.

pri čemu je R<6>-<18>F.

1

U određenim primerima izvođenja jedinjenja formula (I), (I\a) i (Ib), m je odabrano od jedne od sledećih grupa (2a)-(2o):

[0027]

U određenim primerima izvođenja jedinjenja formula (I), (I\a) i (Ib), svako n je nezavisno odabrano od jedne od sledećih grupa (3a)-(3x):

[0028]

1

U određenim primerima izvođenja jedinjenja formula (I), (I\a) i (Ib), svako R<2>je nezavisno odabrano od jedne od sledećih grupa (4a)-(4v):

[0029]

(4a) vodonik ili C1-C6alkil.

(4b) vodonik ili metil, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, sek-butil, izo-butil, terc-butil, npentil, izopentil, neopentil ili n-heksil.

(4c) vodonik.

(4d) C1-C6alkil.

(4e) metil, etil, n-propil, n-butil, n-pentil ili n-heksil.

(4f) izo-propil, sek-butil, izo-butil, terc-butil, izopentil ili neopentil.

(4g) metil, etil ili n-propil.

(4h) n-propil, izo-propil, n-butil, sek-butil, izo-butil ili terc-butil.

(4i) metil, etil ili n-propil.

(4j) metil ili etil.

(4k) metil.

(4l) etil.

(4m) n-propil.

(4n) izo-propil.

(4o) n-butil.

(4p) sek-butil.

(4q) izo-butil.

(4r) terc-butil.

(4s) n-pentil.

(4t) izopentil.

(4u) neopentil.

2

(4v) n-heksil.

U određenim primerima izvođenja jedinjenja formula (I), (I\a) i (Ib), svako R<2>je nezavisno odabrano od jedne od sledećih grupa (5a)-(5w):

[0030]

(5a) vodonik ili zaštitna grupa koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od alkila, alkenila, haloalkila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, o-nitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, p-nitrobenzila, p-metoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksibenzila, i piperonila, poželjno koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od metila, etila, propila, izopropila, terc-butila, alila, trifluorometila, trifluoroetila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, o-nitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, p-nitrobenzila, pmetoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksibenzila, i piperonila.

(5b) vodonik.

(5c) zaštitna grupa koja je odabrana iz grupe koja sa sastoji od alkila, alkenila, haloalkila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, o-nitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, p-nitrobenzila, p-metoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksibenzila, i piperonila, poželjno koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od metila, etila, propila, izopropila, terc-butila, alila, trifluorometila, trifluoroetila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, o-nitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, p-nitrobenzila, pmetoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksi-benzila, i piperonila.

(5d) alkil, alkenil, haloalkil, benzil, trifenilmetil (tritil), difenilmetil, o-nitrobenzil, 2,4,6-trimetilbenzil, p-bromobenzil, p-nitrobenzil, p-metoksibenzil (PMB), 2,6-dimetoksibenzil, 4-(metilsulfinil)benzil, 4-sulfobenzil, 4-azidometoksibenzil, ili piperonil.

(5e) alkil, alkenil ili haloalkil.

(5f) benzil, trifenilmetil (tritil), difenilmetil, o-nitrobenzil, 2,4,6-trimetilbenzil, pbromobenzil, p-nitrobenzil, p-metoksibenzil (PMB), 2,6-dimetoksibenzil, 4-(metilsulfinil)benzil, 4-sulfobenzil, 4-azidometoksibenzil, ili piperonil.

(5g) metil, etil, propil, izopropil, terc-butil, alil, trifluorometil ili trifluoroetil.

(5h) trifenilmetil (tritil), difenilmetil, o-nitrobenzil, 2,4,6-trimetilbenzil, p-bromobenzil, p-nitrobenzil, p-metoksibenzil (PMB), 2,6-dimetoksibenzil, 4-(metilsulfinil)benzil, 4-sulfobenzil, 4-azidometoksibenzil ili piperonil.

(5i) metil, etil, propil, izopropil, terc-butil ili benzil.

(5j) o-nitrobenzil, 2,4,6-trimetilbenzil, p-bromobenzil, p-nitrobenzil, p-metoksibenzil (PMB) ili 2,6-dimetoksibenzil.

(5k) metil.

(5l) etil.

(5m) propil.

(5n) izopropil.

(5o) o-nitrobenzil.

(5p) 2,4,6-trimetilbenzil.

(5q) p-bromobenzil.

(5r) p-nitrobenzil.

(5s) p-metoksibenzil (PMB).

(5t) 2,6-dimetoksibenzil.

(5u) terc-butil ili benzil.

(5v) terc-butil.

(5w) benzil.

[0031] Rodovi jedinjenja u skladu sa ovim aspektom pronalaska takođe uključuju one u kojima je R<1>bilo koje od (1a)-(1kk), m je bilo koje od (2a)-(2o), svako n je nezavisno bilo koje od (3a)-(3x), svako R<2>je nezavisno bilo koje od (4a)-(4v), i svako R je nezavisno bilo koje od (5a)-(5w). Reprezentativni, ali neisključujući primeri opisani su u sledećem paragrafu.

[0032] Posebni primeri izvođenja u skladu sa ovim aspektom pronalaska uključuju jedinjenja Formule (I) kao što je definisano u svakom od sledećih redova, u kojima je svaki unos broj grupe kao što je prethodno definisano (npr. (4k) označava da je R<2>metil), i crtica "-" označava da je varijabla kao što je definisano za formulu (I) ili da je definisano u skladu sa bilo kojom primenljivom definicijom varijable koja je prethodno navedena (npr. kada je ćelija u R<1>koloni "-", R<1>se može definisati kao za Formulu (I) ili bilo koju od definicija (1a)-(1kk)).

2

2

[0033] Jedinjenja strukturnih formula (I), (I\a) i (Ib) imaju tri hiralna centra. U skladu sa tim, u sledećem aspektu, predmetna objava sadrži jedinjenja formule (I), (I\a) i (Ib) formule

(Ia<∗>) ili (Ib<∗>), respektivno:

2

i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu su R<1>, m, n, R<2>i R definisani u skladu sa bilo kojim primerima izvođenja koji su prethodno opisani za formule (I), (I\a) i (Ib), i jedan, dva ili tri hiralnih centara 1<∗>, 2<∗>, i 3<∗>nisu racemski. To jest, na primer, jedinjenja u skladu sa ovim aspektom imaju strukturnu formulu (Ia<∗>) ili (Ib<∗>) pri čemu je R<1>bilo koje od (1a)-(1kk), m je bilo koje od (2a)-(2o), svako n je nezavisno bilo koje od (3a)-(3x), svako R<2>je nezavisno bilo koje od (4a)-(4v), i svako R je nezavisno bilo koje od (5a)-(5w) i jedan, dva ili tri od 1<∗>, 2<∗>, i 3<∗>su enantiomerno obogaćeni (ovde definisano kao da imaju >50% R ili S stereohemije) ili enantiomerno čisti (ovde definisano kao da imaju više od 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, ili 99% R ili S stereohemije).

[0034] U strukturama (I<∗>), (Ia<∗>) i (Ib<∗>), 1<∗>, 2<∗>, i 3<∗>su hiralni centri koji su nezavisno u S ili R stereokonfiguraciji. Stoga, jedinjenja u skladu sa ovim aspektom uključuju ona sa sledećim kombinacijama stereokonfiguracija, i njihove smeše:

2

[0035] U primeru izvođenja bilo kojih od prethodnih primera izvođenja jedinjenja formule (I<∗>), jedinjenje je formule (Ic):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0036] U primeru izvođenja bilo kojih od prethodnih primera izvođenja jedinjenja formule (Ia<∗>), jedinjenje je formule (Id):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0037] U sledećem primeru izvođenja, jedinjenje formule (I) je

2

ili njihova druga farmaceutski prihvatljiva so, kao što je, na primer, natrijum.

[0038] U sledećem primeru izvođenja, jedinjenje formule (I) je

2

ili njihova druga farmaceutski prihvatljiva so, kao što je, na primer, natrijum.

[0039] Takođe su objavljena jedinjenja formule (II):

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su definicije L, R<2>, i R prethodno definisane za jedinjenje formule (I) i uključuju jedinjenja u kojima je m bilo koje od (2a)-(2o), svako n je nezavisno bilo koje od (3a)-(3x), svako R<2>je nezavisno bilo koje od (4a)-(4v), i svako R je nezavisno bilo koje od (5a)-(5w).

U određenim primerima izvođenja, jedinjenje za formulu (II) je formule (IIa):

[0040]

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su definicije m, n, R<2>, i R prethodno definisane za jedinjenje formule (I).

U određenim primerima izvođenja, jedinjenje za formulu (II) je formule (IIb):

[0041]

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su definicije m, n, R<2>, i R prethodno definisane za jedinjenje formule (II).

1

[0042] U nekim primerima izvođenja jedinjenja formule (IIb), m je 1, i svako R i R<2>je vodonik. U drugim primerima izvođenja, m je 2, i svako R i R<2>su vodonik.

[0043] Rodovi jedinjenja u skladu sa ovim aspektom pronalaska takođe uključuju one u kojima je m bilo koje od (2a)-(2o), svako n je nezavisno bilo koje od (3a)-(3x), R<2>je bilo koje od (4a)-(4v), i svako R je nezavisno bilo koje od (5a)-(5w). Reprezentativni, ali neisključujući primeri opisani su u sledećem paragrafu.

[0044] Posebni primeri izvođenja u skladu sa ovim aspektom pronalaska uključuju jedinjenja formule (II) kao što je definisano u svakom od sledećih redova, u kojima je svaki unos broj grupe kao što je prethodno definisano (npr. (4k) označava da je R<2>metil), i crtica "-" označava da je varijabla kao što je definisano za formulu (II) ili da je definisano u skladu sa bilo kojom primenljivom definicijom varijable koja je prethodno navedena (npr. kada je ćelija u m koloni "-", m se može definisati kao za formulu (II) ili bilo koju od definicija (2a)-(2o)).

2

[0045] U posebnim primerima izvođenja jedinjenja formula (II), (IIa) i (IIb), jedinjenje može biti formule (II<∗>), (IIa<∗>) ili (IIb<∗>):

4

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su m, n, R<2>, i R kao što je definisano u skladu sa bilo kojim primerima izvođenja koji su prethodno opisani za formule (II), (IIa) i (IIb), i stereokonfiguracije 1<∗>, 2<∗>, i 3<∗>su kao što je prethodno definisano za jedinjenja formula (I<∗>), (Ia<∗>) i (Ib<∗>).

[0046] U primeru izvođenja bilo kog od prethodnih primera izvođenja jedinjenja formule (IIa<∗>), jedinjenje može biti formule (IIc):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0047] U primeru izvođenja bilo kog od prethodnih primera izvođenja jedinjenja formule (IIb<∗>), jedinjenje može biti formule (IId):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0048] U sledećem primeru izvođenja, jedinjenje formule (II) je

ili njihova druga farmaceutski prihvatljiva so, kao što je, na primer, natrijum.

[0049] U sledećem primeru izvođenja, jedinjenje formule (II) je

ili njihova druga farmaceutski prihvatljiva so, kao što je, na primer, natrijum.

[0050] Takođe su objavljena jedinjenja koja su u obliku formule (III),

ili njene farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu su definicije L, R<2>, i R prethodno definisane za jedinjenje formule (I), i uključuju jedinjenja u kojima je m bilo koje od (2a)-(2o), svako n je nezavisno bilo koje od (3a)-(3x), svako R<2>je nezavisno bilo koje od (4a)-(4v), i svako R je nezavisno bilo koje od (5a)-(5w). R<3>je fenil ili piridil; pri čemu je fenil ili piridil supstituisan sa odlazećom grupom i opciono supstituisan sa drugom grupom koja je odabrana od halogena, cijano, i nitro.

[0051] "Odlazeća grupa" kao što se ovde upotrebljava, je hemijski entitet koji je sposoban da se izmesti iz fenilnog ili piridilnog prstena pod SNAr uslovima kao što je poznato onima sa iskustvom u struci. Na primer, videti March, J., Advanced Organic Chemistry, 4th Ed. (1992), na stranama 642-644. Odlazeće grupe uključuju, ali nisu ograničene na nitro, trimetilstanil, benzotriazol-1-iloksi, halogen (npr. hloro, bromo, jodo), C1-C10alkilsulfonat (npr. mezilat (CH3S(O)2O-)), C1-C10haloalkilsulfonat (npr. triflat (CF3S(O)2O-), nonaflat (CF3CF2CF2CF2S(O)2O-)), ili fenilsulfonat (npr. bezilat), pri čemu je fenil opciono supstituisan sa 1, 2, ili 3 grupe koje su svaka nezavisno halogen ili C1-C4alkil (npr. 2,4,6-trimetilbenzensulfonat, ili 2,4,6-triizopropilbenzensulfonat). "Odlazeća grupa" takođe može biti amonijumova so formule -N(R<x>)(R<y>)(R<z>)]<+>[X]-, pri čemu su R<x>, R<y>, i R<z>nezavisno vodonik, ili alkil (npr. metil, etil, propil), i X je konjugat baza jake kiseline. Opcije za X uključuju, ali nisu ograničene na, halogen (npr. hloro, bromo, jodo), C1-C10alkilsulfonat (npr. mezilat (CH3S(O)2O-)), C1-C10haloalkilsulfonat (npr. triflat (CF3S(O)2O-), nonaflat (CF3CF2CF2CF2S(O)2O-)), ili fenilsulfonat (npr. bezilat), pri čemu je fenil opciono supstituisan sa 1, 2, ili 3 grupe koje su svaka nezavisno halogen ili C1-C4alkil (npr. 2,4,6-trimetilbenzensulfonat, ili 2,4,6-triizopropilbenzensulfonat). "Trialkilamonijumova so" je amonijumova so gde R<x>, R<y>, i R<z>nisu vodonik, i X je kao što je prethodno opisano.

"Trimetilamonijumova so" je trialkilamonijumova so gde su R<x>, R<y>, i R<z>metil, i X je kao što je prethodno opisano.

[0052] U jednom primeru izvođenja bilo kojih prethodnih primera izvođenja formule (III), odlazeća grupa je halogen (npr. hloro) ili trialkilamonijum (npr. trimetilamonijum).

U određenim primerima izvođenja jedinjenja formule (III), jedinjenje je formule (IIIa):

[0053]

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su definicije m, n, R<2>, i R prethodno definisane za jedinjenje formule (I).

U određenim primerima izvođenja jedinjenja formule (III), jedinjenje je formule (IIIb):

[0054]

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0055] U nekim primerima izvođenja jedinjenja formule (IIIb), m je 1, i svako R i R<2>su vodonik. U drugim primerima izvođenja, m je 2, i svako R i R<2>su vodonik.

U određenim primerima izvođenja jedinjenja formula (III), (IIIa) i (IIIb), R<3>je odabrano iz jedne od sledećih grupa (6a)-(6ss):

�

�

�

�

�

�

�

�

[0057] Rodovi jedinjenja u skladu sa ovim aspektom pronalaska takođe uključuju one u kojima je R<3>bilo koje od (6a)-(6ss), m je bilo koje od (2a)-(2o), svako n je nezavisno bilo koje od (3a)-(3x), svako R<2>je nezavisno bilo koje od (4a)-(4v), i svako R je nezavisno bilo koje od (5a)-(5w). Reprezentativni, ali neisključujući primeri opisani su u sledećem paragrafu.

[0058] Posebni primeri izvođenja u skladu sa ovim aspektom pronalaska uključuju jedinjenja formule (III) kao što je definisano u svakom od sledećih redova, u kojima je svaki unos broj grupe kao što je prethodno definisano (npr. (4k) označava da je R<2>metil), i crtica "-" označava da je varijabla kao što je definisano za formulu (III) ili da je definisano u skladu sa bilo kojom primenljivom definicijom varijable koja je prethodno navedena (npr. kada je ćelija u R<3>koloni "-", R<3>se može definisati kao za formulu (III) ili bilo koju od definicija (6a)-(6ss)).

2

4

[0059] U posebnim primerima izvođenja jedinjenja formula (III), (IIIa) i (IIIb), jedinjenje može biti formule (III<∗>), (IIIa<∗>) ili (IIIb<∗>):

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su R<3>, m, n, R<2>, i R kao što je definisano u skladu sa bilo kojim od primera izvođenja koji su prethodno opisani za formule (III), (IIIa) i (IIIb), i stereokonfiguracije 1<∗>, 2<∗>, i 3<∗>su kao što je prethodno definisano za jedinjenja formula (I<∗>), (Ia<∗>) i (Ib<∗>).

[0060] U primeru izvođenja bilo kog od prethodnih primera izvođenja jedinjenja formule (IIIa<∗>), jedinjenje može biti formule (IIIc):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0061] U primeru izvođenja bilo kog od prethodnih primera izvođenja jedinjenja formule (IIIb<∗>), jedinjenje može biti formule (IIId):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0062] U sledećem primeru izvođenja, jedinjenje formule (III) je

ili njihova druga farmaceutski prihvatljiva so, kao što je, na primer, natrijum.

[0063] U sledećem primeru izvođenja, jedinjenje formule (III) je

ili njihova druga farmaceutski prihvatljiva so, kao što je, na primer, natrijum.

[0064] Jedinjenja formule (I) mogu se pripremiti pomoću postupka koji sadrži: dovođenje u kontakt jedinjenja formule (III):

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu

definicije L, R<2>, i R su prethodno definisane za jedinjenje formule (I) i uključuju jedinjenja u kojima je m bilo koje od (2a)-(2o), svako n je nezavisno bilo koje od (3a)-(3x), svako R<2>je nezavisno bilo koje od (4a)-(4v), i svako R je nezavisno bilo koje od (5a)-(5w), i R<3>je fenil ili piridil; pri čemu je fenil ili piridil supstituisan sa odlazećom grupom i opciono supstituisan sa drugom grupom koja je odabrana od halogena, cijano, i nitro, što uključuje jedinjenja u kojima je R<3>bilo koje od (6a)-(6ss); sa izvorom fluorida ili radiofluorida.

[0065] U jednom primeru izvođenja, izvor radiofluorida je Na<18>F, K<18>F, Cs<18>F, tetra(C1-C6)alkilamonijum<18>F fluorid, ili tetra(C1-C6)alkilfosfonijum<18>F fluorid. U sledećem primeru izvođenja, izvor fluorida je NaF, KF, CsF, tetra(C1-C6)alkilamonijum fluorid, ili tetra(C1-C6)alkilfosfonijum fluorid.

[0066] U drugim primerima izvođenja, baza se može upotrebljavati u kombinaciji sa izvorom fluorida ili radiofluorida. Pogodne baze uključuju, ali nisu ograničene na, kalijum karbonat, kalijum bikarbonat, kalijum oksalat, kalijum sulfonate, kalijum terc-alkoksilate, cezijum karbonat, cezijum bikarbonat, tetrabutilamonijum hidroksid (TBAOH), tetrabutilamonijum bikarbonat (TBAHCO3), i tetrabutilamonijum mezilat (TBAOMs).

[0067] Kako bi se povećala reaktivnost fluorida, može se dodati katalizator fazne transformacije kao što je aminopolietar ili krunski etar, na primer, 4,7,13,16,21,24-heksaoksa-1,10-diazabiciklo[8,8,8]heksakozan (Kryptofix 2.2.2; K222) i reakcija se izvesti u aprotičnom rastvaraču.

[0068] Tretman sa anjonom fluorida ili radiofluorida može se izvršiti u prisustvu pogodnog organskog rastvarača kao što je acetonitril, dimetilformamid, dimetilacetamid, dimetil sulfoksid, tetrahidrofuran, dioksan, 1,2 dimetoksietan, etanol, metanol, izopropanol, nbutanol, t-butanol, amil alkohol, sulfolan, N-metilpirolidon, toluen, benzen, dihlorobenzeni, dihlorometan, ksileni, ili njihove smeše, na ne-ekstremnoj temperaturi, na primer, 15 °C do 180 °C, poželjno na temperaturi okoline do povišene temperature, kao što je 20 °C do 150 °C; ili 20 °C do 120 °C; ili 20 °C do 100 °C; ili 20 °C do 70 °C. Reakcioni rastvor se može zagrevati upotrebom mikrotalasnog zračenja tokom oko 1 minuta do oko 1 sata; na primer, oko 5 do 15 minuta.

[0069] U jednom primeru izvođenja, baza koja se upotrebljava u kombinaciji sa izvorom fluorida ili radiofluorida je cezijum karbonat ili tetrabutilamonijum bikarbonat. U jednom primeru izvođenja, baza koja se upotrebljava u kombinaciji sa izvorom fluorida ili radiofluorida je cezijum karbonat. U jednom primeru izvođenja, baza koja se upotrebljava u kombinaciji sa izvorom fluorida ili radiofluorida je tetrabutilamonijum bikarbonat.

[0070] U jednom primeru izvođenja, baza koja se upotrebljava u kombinaciji sa izvorom fluorida ili radiofluorida je cezijum karbonat ili tetrabutilamonijum bikarbonat na temperaturi između oko 50 i 70 °C. U jednom primeru izvođenja, baza koja se upotrebljava u kombinaciji sa izvorom fluorida ili radiofluorida je cezijum karbonat na temperaturi između oko 50 i 70 °C. U jednom primeru izvođenja, baza koja se upotrebljava u kombinaciji sa izvorom fluorida ili radiofluorida je tetrabutilamonijum bikarbonat na temperaturi između oko 50 i 70 °C.

[0071] U sledećem primeru izvođenja, baza koja se upotrebljava u kombinaciji sa izvorom fluorida ili radiofluorida je tetrabutilamonijum hidroksid. U sledećem primeru izvođenja, baza koja se upotrebljava u kombinaciji sa izvorom fluorida ili radiofluorida je tetrabutilamonijum hidroksid na temperaturi između oko 90 °C i 110 °C (npr. 100 °C). U sledećem primeru izvođenja, baza koja se upotrebljava u kombinaciji sa izvorom fluorida ili radiofluorida je tetrabutilamonijum hidroksid na temperaturi između oko 90 °C i 110 °C (npr.100 °C), gde se temperatura održava tokom oko 5 minuta do oko 15 minuta (npr. oko 10 min.).

[0072] Nakon reakcije, višak anjona fluorida ili radiofluorida može se opciono ukloniti iz rastvora jedinjenja obeleženog fluoridom ili radiofluoridom na bilo koji pogodan način, na primer pomoću destilacije, hromatografije kao što je hromatografija na silika gelu i C-18 hromatografija na reverznim fazama, ili alternativno jonoizmenjivačkom hromatografijom ili apsorbentima čvrste faze, na primer anjonskom izmenjivačkom smolom ili kvaternarnom alkilovanom amino smolom.

[0073] Anjonska izmenjivačka smola je smola koja sadrži katjonsku grupu, tipično amino grupe koje su protonovane kako bi dale amonijumovu so ili kvaternarne alkilovane amino grupe, koje privlače i zadržavaju anjone koji su prisutni u rastvoru koji okružuje navedenu smolu.

[0074] Smola je organski polimer ili funkcionalizovani silicijum dioksid koji je nerastvorljiv u većini organskih rastvarača, vodenih rastvora i njihovih smeša.

[0075] Kvaternarna alkilovana amino smola je smola koja je funkcionalizovana sa jednom ili više amino grupa i ove amino grupe su nezavisno supstituisane sa tri alkil ili alkilaril grupe ili njihovom smešom kako bi se dobila amonijumova so (N<+>R<1>R<2>R<3>R<4>) pri čemu je R<1>smola. R<2>, R<3>i R<4>mogu biti metil, etil, propil, butil, benzil, etilfenil.

[0076] Na primer, može se upotrebljavati smola ili čvrsta supstanca koja omogućava hvatanje<18>F fluorida, kao što su QMA ili PS-30 patrona. U drugim primerima, hromatografija preko SepPak<™>patrona (Waters Corp., Milford, MA; npr. C18Silica, Florisil<™>, ili Alumina A, B, N hemije) može se upotrebljavati kao što je poznato onima sa iskustvom u struci. Pogodne jonoizmenjivačke smole uključuju BIO-RAD AG 1-X8 ili Waters QMA i pogodni apsorbenti čvrste faze uključuju glinicu.

[0077] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (Ia):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, može se pripremiti pomoću postupka koji sadrži: dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IIIa):

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, sa izvorom fluorida ili radiofluorida kao što je ovde opisano.

[0078] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (Ib):

1

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, može se pripremiti pomoću postupka koji sadrži: dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IIIb):

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, sa izvorom fluorida ili radiofluorida kao što je ovde opisano.

[0079] U nekim primerima izvođenja, postupak se upotrebljava za pripremu jedinjenja formule (Ib) pri čemu je m 1, i svako R i R<2>su vodonik, postupak sadrži: dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IIIb), pri čemu je m 1, i svako R i R<2>su vodonik, sa izvorom fluorida ili radiofluorida kao što je ovde opisano. U drugim primerima izvođenja, m je 2, i svako R i R<2>su vodonik.

[0080] U sledećem aspektu, predmetna objava sadrži jedinjenja koja su

2

ili njihova druga farmaceutski prihvatljiva so, kao što je, na primer, natrijum.

[0081] Jedinjenja formule (I) pripremaju se pomoću postupka koji sadrži: dovođenje u kontakt jedinjenja formule (II),

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu su definicije L, R<2>, i R prethodno definisane za jedinjenje formule (I), i uključuju jedinjenja u kojima je R<2>bilo koje od (4a)-(4v), i R je bilo koje od (5a)-(5w);

sa jedinjenjem formule (IV):

pri čemu je R<5>R<1>, pri čemu je R<1>fenil ili piridil; pri čemu je fenil ili piridil supstituisan sa [F]- ili [<18>F]-fluoro grupom i opciono supstituisan sa drugom grupom koja je odabrana od halogena, cijano i nitro, ili bilo koje od grupa (1a)-(1ii).

[0082] U nekim primerima izvođenja, jedinjenja formule (I\a) pripremaju se pomoću postupka koji sadrži:

dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IIa),

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu su definicije n, m, R<2>, i R prethodno definisane za jedinjenje formule (I), i uključuju jedinjenja u kojima je m bilo koje od (2a)-(2o), svako n je nezavisno bilo koje od (3a)-(3x), svako R<2>je nezavisno bilo koje od (4a)-(4v), i svako R je nezavisno bilo koje od (5a)-(5w);

sa jedinjenjem formule (IV).

[0083] U nekim primerima izvođenja, jedinjenja formule (Ib) pripremaju se pomoću postupka koji sadrži:

dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IIb),

4

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu su definicije m, R<2>, i R prethodno definisane za jedinjenje formule (I), i uključuju jedinjenja u kojima je m bilo koje od (2a)-(2o), svako R<2>je nezavisno bilo koje od (4a)-(4v), i svako R je nezavisno bilo koje od (5a)-(5w);

sa jedinjenjem formule (IV).

[0084] Jedinjenja formule (I), pri čemu je najmanje jedno R vodonik, pripremaju se pomoću postupka koji sadrži:

uklanjanje zaštite jedinjenja formule (I),

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:

definicije R<1>, m, n, R<2>, i R su prethodno definisane za jedinjenje formule (I), i uključuju jedinjenja u kojima je R<1>bilo koje od (1a)-(1kk), m je bilo koje od (2a )-(2o), svako n je nezavisno bilo koje od (3a)-(3x), svako R<2>je nezavisno bilo koje od (4a)-(4v), i svako R je nezavisno bilo koje od (5a)-(5w), pri čemu je najmanje jedno R zaštitna grupa koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od alkila, alkenila, haloalkila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, o-nitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, pnitrobenzila, p-metoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksibenzila, i piperonila, poželjno koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od metila, etila, propila, izopropila, terc-butila, alila, trifluorometila, trifluoroetila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, o-nitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, p-nitrobenzila, p-metoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksi-benzila, i piperonila,

pod uslovima pogodnim za uklanjanje najmanje jedne od zaštitnih grupa.

[0085] Kao što bi bilo jasno onom sa iskustvom u struci, uklanjanje zaštitnih grupa iz prethodnog rezultuje formiranjem odgovarajućeg jedinjenja u kome je R vodonik, ili njegove soli (npr. jedinjenje formule (I) gde je najmanje jedno R vodonik).

[0086] Kada je R t-butil grupa, postupak se može održavati u anhidrovanim uslovima kako bi se sprečila degradacija jedinjenja, pošto je poznato da je fosforamidatna funkcionalna grupa nestabilna u vodenoj kiseloj sredini. U različitim primerima izvođenja, svaki od sledećih uslova uklanjanja zaštite može se koristiti za uklanjanje t-butil grupa:

i) Dovođenje u kontakt jedinjenja sa kiselinom koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od trifluorosirćetne kiseline, hlorovodonične kiseline, mravlje kiseline, glacijalne sirćetne kiseline, hlorosirćetne kiseline, i njihovih smeša;

ii) Dovođenje u kontakt jedinjenja sa kiselinom (koja je odabrana kao u (i)) u rastvaraču koji je odabran iz grupe koja se sastoji od dietil etra, etil acetata, dioksana, 1,2-dihloroetana, dihlorometana, t-butanola, glikol dietra (glyme), metil t-butiletra, tetrahidrofurana, i njihovih smeša;

iii) Dovođenje u kontakt jedinjenja sa čistom kiselinom;

iv) Dovođenje u kontakt jedinjenja kao u bilo kom od prethodnih sa čistačem, kao što je, ali nije ograničeno na trietilsilan (TES);

v) Dovođenje u kontakt jedinjenja kao u bilo kom od prethodnih na temperaturi između sobne temperature (npr.25 °C) i 180 °C;

vi) Dovođenje u kontakt jedinjenja kao u bilo kom od prethodnih sa zagrevanjem u mikrotalasnoj pećnici;

vii) Dovođenje u kontakt jedinjenja sa bazom kao što je, ali nije ograničeno na, NaOH;

viii) Dovođenje u kontakt jedinjenja kao u bilo kom od prethodnih, gde je reakciji omogućeno da se odvija tokom vremenskog perioda između oko 15 sekundi i 15 minuta;

ix) Dovođenje u kontakt jedinjenja sa trimetilsilil jodidom (TMS-I, može se formirati in situ od trimetilsilil hlorida i natrijum jodida);

x) Dovođenje u kontakt jedinjenja sa trimetilsilil triflatom (TMSOTf) i trietilaminom (TEA);

xi) Dovođenje u kontakt jedinjenja sa kvinolinom na povišenim temperaturama, npr. većim od 150 °C, kao što je 180 °C; ili

xii) Dovođenje u kontakt jedinjenja sa LiI u etil acetatu.

[0087] U određenim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa mravljom kiselinom. U određenim drugim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa čistom mravljom kiselinom.

[0088] U određenim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa mravljom kiselinom na temperaturi između oko sobne temperature (npr. 25 °C) i 100 °C. U određenim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa mravljom kiselinom na temperaturi između oko sobne temperature (npr. 25 °C) i 75 °C. U određenim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa mravljom kiselinom na temperaturi između oko 35 °C i 75 °C. U određenim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa mravljom kiselinom na temperaturi između oko 40 °C i 60 °C. U određenim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa mravljom kiselinom na temperaturi između oko 45 °C i 55 °C.

[0089] U određenim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa čistom mravljom kiselinom na temperaturi između oko sobne temperature (npr. 25 °C) i 100 °C. U određenim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa čistom mravljom kiselinom na temperaturi između oko sobne temperature (npr. 25 °C) i 75 °C. U određenim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa čistom mravljom kiselinom na temperaturi između oko 35 °C i 75 °C. U određenim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa čistom mravljom kiselinom na temperaturi između oko 40 °C i 60 °C. U određenim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa čistom mravljom kiselinom na temperaturi između oko 45 °C i 55 °C.

[0090] U bilo kom od prethodnih primera izvođenja upotrebom mravlje kiseline ili čiste mravlje kiseline, jedinjenje se može zagrevati na željenoj temperaturi (npr. između oko 45 °C i 55 °C) tokom vremenskog perioda između oko 15 sekundi i 15 minuta. U određenom primeru izvođenja, zagrevanje je tokom između oko 15 sekundi i 10 minuta; ili 15 sekundi i 8 minuta; ili 1 minuta i 8 minuta; ili 2 minuta i 8 minuta; ili 3 minuta i 8 minuta; ili 4 minuta i 6 minuta; ili oko 5 minuta. Nakon završetka željenog vremenskog perioda za zagrevanje jedinjenja, bilo koji rastvarači i/ili kiseline mogu biti uklonjeni iz reakcione smeše postupcima koji su poznati onima sa iskustvom u struci, kao što je uklanjanje in vacuo ili pomoću pročišćavanja reakcione smeše inertnim gasom, kao što su Ar, He, ili N2.

[0091] U određenim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa trifluorosirćetnom kiselinom. U određenim drugim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa trifluorosirćetnom kiselinom u rastvaraču. U određenim primerima izvođenja, rastvarač je 1,2-dihloroetan.

[0092] U određenim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa trifluorosirćetnom kiselinom i čistačem, kao što je trietilsilan. U određenim drugim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa trifluorosirćetnom kiselinom i trietilsilanom u rastvaraču. U određenim primerima izvođenja, rastvarač je 1,2-dihloroetan.

[0093] U određenim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa trifluorosirćetnom kiselinom i trietilsilanom u 1,2-dihloroetanu na temperaturi između oko sobne temperature (npr. 25 °C) i 150 °C. U određenim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa trifluorosirćetnom kiselinom i trietilsilanom u 1,2-dihloroetanu na temperaturi između oko 50 °C i 150 °C. U određenim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa trifluorosirćetnom kiselinom i trietilsilanom u 1,2-dihloroetanu na temperaturi između oko 75 °C i 125 °C. U određenim primerima izvođenja, uslovi uključuju dovođenje u kontakt jedinjenja sa trifluorosirćetnom kiselinom i trietilsilanom u 1,2-dihloroetanu na temperaturi između oko 90 °C i 110 °C.

[0094] U bilo kom od prethodnih primera izvođenja upotrebom trifluorosirćetne kiseline i opciono trietilsilana, jedinjenje se može zagrevati na željenoj temperaturi (npr. između oko 90 °C i 10 °C) tokom vremenskog perioda između oko 15 sekundi i 15 minuta. U određenom primeru izvođenja, zagrevanje je tokom između oko 1 minuta i 15 minuta; ili oko 1 minuta i 12 minuta; ili 5 minuta i 15 minuta; ili 5 minuta i 12 minuta; ili 7 minuta i 12 minuta; ili 9 minuta i 11 minuta; ili oko 10 minuta. Nakon završetka željenog vremenskog perioda za zagrevanje jedinjenja, bilo koji rastvarači i/ili kiseline mogu biti uklonjeni iz reakcione smeše postupcima koji su poznati onima sa iskustvom u struci, kao što je uklanjanje in vacuo ili pomoću pročišćavanja reakcione smeše inertnim gasom, kao što su Ar ili N2.

[0095] U određenim primerima izvođenja, svako R je benzil, trifenilmetil (tritil), difenilmetil, o-nitrobenzil, 2,4,6-trimetilbenzil, p-bromobenzil, p-nitrobenzil, p-metoksibenzil (PMB), 2,6-dimetoksibenzil, 4-(metilsulfinil)benzil, 4-sulfobenzil, 4-azidometoksibenzil, ili piperonil. U određenim drugim primerima izvođenja, svako R je benzil. U drugim primerima izvođenja, svako R je trifenilmetil (tritil), difenilmetil, o-nitrobenzil, 2,4,6-trimetilbenzil, p-bromobenzil, p-nitrobenzil, p-metoksibenzil (PMB), 2,6-dimetoksibenzil, 4-(metilsulfinil)benzil, 4-sulfobenzil, 4-azidometoksibenzil, ili piperonil.

[0096] Kada je R benzil, trifenilmetil (tritil), difenilmetil, o-nitrobenzil, 2,4,6-trimetilbenzil, p-bromobenzil, p-nitrobenzil, p-metoksibenzil (PMB), 2,6-dimetoksibenzil, 4-(metilsulfinil)benzil, 4-sulfobenzil, 4-azidometoksibenzil, ili piperonil, pogodni uslovi uklanjanja zaštite uključuju, ali nisu ograničeni na, uslove hidrogenolize (npr. H2 i Pd/C) ili katalitički transfer vodonika upotrebom amonijum formata i Pd/C. Mogu se upotrebljavati i drugi katalizatori hidrogenacije koji su poznati onima sa iskustvom u struci.

[0097] U određenim primerima izvođenja, mogu se upotrebljavati alternativni izvori vodonika uključujući, ali ne ograničavajući se na amonijum format, natrijum format, ili mravlju kiselinu sa trietilaminom. U određenim primerima izvođenja, izvor vodonika je amonijum format.

[0098] Hidrogenacija se može preduzeti u pogodnom rastvaraču, koji je odabran od, ali nije ograničen na, etanol, tetrahidrofuran, vodu, ili fosfatom puferisani fiziološki rastvor, ili njihove smeše.

[0099] Na primer, u određenim primerima izvođenja, uklanjanje zaštite može se postaviti u patronu gde je Pd/C katalizator napunjen u sloju ili raspoređen u inertnom materijalu, a zatim se halogenisani ili radio obeleženi uzorak (npr. koji sadrži -F ili -<18>F) rastvoren u rastvaraču (kao što je etanol), dodatno rastvori u amonijum formatu i ispira kroz patronu kako bi se dobio materijal bez zaštite bez potrebe za dodatnim prečišćavanjem.

[0100] U bilo kom od prethodnih primera izvođenja koji upotrebljavaju Pd/C kao katalizator za uklanjanje zaštite, može se upotrebljavati 5 - 10 tež. % Pd/C. U određenim primerima izvođenja, upotrebljava se 10 tež. % Pd/C. Može se upotrebljavati oko 0,01 do oko 0,40 molarnih ekvivalenata Pd/C za jedinjenje sa kojeg se uklanja zaštita. U određenim primerima izvođenja, upotrebljava se oko 0,01 do oko 0,30 molarnih ekvivalenata. U drugim primerima izvođenja, oko 0,01 do oko 0,20 molarnih ekvivalenata; ili 0,01 do oko 0,10 molarnih ekvivalenata; oko 0,05 do oko 0,40 molarnih ekvivalenata; ili oko 0,05 do oko 0,30 molarnih ekvivalenata; ili oko 0,05 do oko 0,20 molarnih ekvivalenata; ili oko 0,05 do oko 0,10 molarnih ekvivalenata; ili oko 0,075 do oko 0,40 molarnih ekvivalenata; ili oko 0,075 do oko 0,30; ili oko 0,075 do oko 0,20 molarnih ekvivalenata; ili se upotrebljava oko 0,075 do oko 0,10 molarnih ekvivalenata.

[0101] Dodatno, u bilo kom od prethodnih primera izvođenja koji upotrebljavaju Pd/C kao katalizator za uklanjanje zaštite, manje od oko 20%<18>F obeleživača se uklanja iz jedinjenja tokom koraka uklanjanja zaštite. To jest, pri uklanjanju benzil grupa, prinos reakcionog koraka je veći od oko 80%.

[0102] U drugim primerima izvođenja, manje od oko 10%<18>F obeleživača se uklanja iz jedinjenja tokom koraka uklanjanja zaštite (prinos veći od oko 90%). U drugim primerima izvođenja, manje od oko 5%<18>F obeleživača se uklanja iz jedinjenja tokom koraka uklanjanja zaštite (prinos veći od oko 95%). U drugim primerima izvođenja, manje od oko 3%<18>F obeleživača se uklanja iz jedinjenja tokom koraka uklanjanja zaštite (prinos veći od oko 97%). U drugim primerima izvođenja, manje od oko 2%<18>F obeleživača se uklanja iz jedinjenja tokom koraka uklanjanja zaštite (prinos veći od oko 98%). U drugim primerima izvođenja, manje od oko 1%<18>F obeleživača se uklanja iz jedinjenja tokom koraka uklanjanja zaštite (prinos veći od oko 99%). U drugim primerima izvođenja, suštinski nijedan<18>F obeleživač se ne uklanja iz jedinjenja tokom koraka uklanjanja zaštite (suštinski kvantitativni prinos).

[0103] U drugim primerima izvođenja, uklanjanje zaštite može da se završi za manje od oko 30 minuta. Na primer, korak uklanjanja zaštite može da se završi za manje od oko 20 minuta, ili oko 15 minuta, ili oko 10 minuta. U nekim drugim primerima izvođenja, uklanjanje zaštite može da se završi za između oko 1 minuta i oko 30 minuta; ili oko 1 minuta i oko 20 minuta; ili oko 1 minuta i oko 15 minuta; ili oko 1 minuta i oko 10 minuta; ili oko 5 minuta i oko 30 minuta; ili oko 5 minuta i oko 20 minuta; ili oko 5 minuta i oko 15 minuta; ili oko 5 minuta i oko 10 minuta.

[0104] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (Ia):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu

definicije R<1>, m, n, R<2>, i R su prethodno definisane za jedinjenje formule (I), i uključuju jedinjenja u kojima je R<1>bilo koje od (1a)-(1kk), m je bilo koje od (2a)-(2o), svako n je nezavisno bilo koje od (3a)-(3x), svako R<2>je nezavisno bilo koje od (4a)-(4v), i svako R je nezavisno bilo koje od (5a)-(5w), pri čemu je najmanje jedno R vodonik, priprema se postupkom koji sadrži:

uklanjanje zaštite jedinjenja formule (Ia),

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu

definicije R<1>, m, n, R<2>, i R su prethodno definisane za jedinjenje formule (I), i uključuju jedinjenja u kojima je R<1>bilo koje od (1a)-(1kk), m je bilo koje od (2a)-(2o), svako n je nezavisno bilo koje od (3a)-(3x), svako R<2>je nezavisno bilo koje od (4a)-(4v), i svako R je nezavisno bilo koje od (5a)-(5w), pri čemu je najmanje jedno R zaštitna grupa koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od alkila, alkenila, haloalkila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, o-nitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, pnitrobenzila, p-metoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksibenzila, i piperonila, poželjno koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od metila, etila, propila, izopropila, terc-butila, alila, trifluorometila, trifluoroetila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, o-nitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, p-nitrobenzila, p-metoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksi-benzila, i piperonila;

pod uslovima pogodnim za uklanjanje najmanje jedne od zaštitnih grupa.

[0105] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (Ib):

1

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su definicije R<1>, m, R<2>, i R prethodno definisane za jedinjenje formule (I), i uključuju jedinjenja u kojima je R<1>bilo koje od (1a)-(1kk), m je bilo koje od (2a)-(2o), svako R<2>je nezavisno bilo koje od (4a)-(4v), i svako R je nezavisno bilo koje od (5a)-(5w), pri čemu je najmanje jedno R vodonik, priprema se postupkom koji sadrži:

uklanjanje zaštite jedinjenja formule (Ib),

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu

definicije R<1>, m, R<2>, i R su prethodno definisane za jedinjenje formule (I), i uključuju jedinjenja u kojima je R<1>bilo koje od (1a)-(1kk), m je bilo koje od (2a)-(2o), svako R<2>je nezavisno bilo koje od (4a)-(4v), i svako R je nezavisno bilo koje od (5a)-(5w), pri čemu je najmanje jedno R zaštitna grupa koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od alkila, alkenila, haloalkila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, o-nitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, p-nitrobenzila, p-metoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksibenzila, i piperonila, poželjno koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od metila, etila, propila, izopropila, terc-butila, alila, trifluorometila, trifluoroetila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, o-nitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, p-nitrobenzila, pmetoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksi-benzila, i piperonila;

pod uslovima pogodnim za uklanjanje najmanje jedne od zaštitnih grupa.

[0106] U nekim primerima izvođenja, postupak se upotrebljava za pripremu jedinjenja formule (Ib) pri čemu je m 1, i svako R i R<2>su vodonik. U drugim primerima izvođenja, m je 2, i svako R i R<2>su vodonik.

2

[0107] U posebnim primerima izvođenja, jedinjenje je

ili njihova druga farmaceutski prihvatljiva so, kao što je, na primer, natrijum.

[0108] U svakom od aspekata i primera izvođenja koji su prethodno opisani gde je L grupa formule

predmetna objava takođe sadrži analog onog primera izvođenja u kome je L linker koji sadrži funkcionalnu grupu formule -NH-CH2CH2-(OCH2CH2-)y-C(O)- y je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12.

[0109] Kako bi se izbegla zabuna, "linearna dužina lanca" označava broj atoma u lancu i dodatno je definisana sledećim primerima. Na primer, linker L formule

[0110] u kome je m 2 i svako n je 6, dužina linearnog lanca je 16 atoma. Standardni i rutinski postupci mogu se upotrebljavati za pravljenje jedinjenja sa prethodnim linkerima.

Prednosti direktnog<18>F obeležavanja PSMA inhibitora.

[0111] Jedinjenja koja su ovde opisana u primerima sadrže radioobeleženu viseću grupu koja je povezana sa roditeljskom fosforamidatnom strukturom (PMSA inhibitor ili njegov fragment) putem linkera formule:

gde je linker povezan sa visećom grupom preko amidne veze. Iako se u literaturi mogu pronaći primeri struktura takvih visećih grupa samih (koje nisu prikačene za roditeljsku fosforamidatnu strukturu preko amidno-vezanog linkera) kao supstrata za supstituciju fluorida (<18>F ili<19>F), nekoliko primera ima linker koji povezuje fosforamidatnu roditeljsku strukturu i viseću grupu preko linkera povezanog sa visećom grupom preko amidne veze. Reaktivnost fluorida sa visećim grupama samim ili bez amidno-vezanog linkera ne dozvoljava da se predvidi da li će se isti rezultati dobiti kada je amidno-vezani linker prisutan na visećoj grupi.

4

U stvari, pronašli smo da u nekim slučajevima, literaturni prethodnik za reakciju fluorida sa visećom grupom samom nije korelisao sa našim rezultatima kada je ta viseća grupa bila prikačena preko amidne veze za model peptidnog mimika.

[0112] Zaštitne grupe na PSMA inhibitoru, kao što su benzil i t-butil grupe, mogu kasnije da se uklone posle inkorporacije radiooobeleživača (<18>F) na viseću grupu. Štaviše, kada je radiooobeleživač inkorporisan u viseću grupu prikačenu za prekursor PSMA inhibitora, poslednji korak uklanjanja zaštite može ukloniti sve zaštitne grupe na PSMA inhibitoru u jednom koraku (npr. t-butil ili benzil estri).

[0113] Za maksimalnu korisnost kao obeležena proba za PET, (1) reakcija uklanjanja zaštite je po mogućstvu brza, npr. dešava se unutar dela poluživota radionuklida na visećoj grupi (npr. t1/2≈ 110 min. za<18>F ); i (2) uslovi uklanjanja zaštite ne bi trebalo da rezultuju gubitkom radiooobeleživača na visećoj grupi.

[0114] Ovde se može ukloniti zaštita jedinjenja, na primer, upotrebom katalitičkog transfera vodonika. Poznato je da konvencionalna hidrogenoliza sa H2gasom i Pd/C rezultuje dehalogenacijom na aromatičnim prstenovima. U stvari, uočili smo ovo sa visećim grupama supstituisanim sa F na model jedinjenjima. Međutim, pronašli smo uslove za katalitičke transfere vodonika u kojima je defluorizacija minimalizovana i reakcija je završena unutar 20 min, i tako malo kao što je 6 min bez gubitka F.

[0115] Defluorizacija se može minimalizovati i/ili izbeći kontrolisanjem količine katalizatora (Pd/C) koji se upotrebljava u koraku uklanjanja zaštite. U model eksperimentima,

sa fluoro-nikotinamid derivatom glutamat dibenzil estra pronašli smo da je sa 0,1 molarnog ekvivalenta Pd (upotrebom 10% Pd/C) uklanjanje zaštitnih benzil grupa unutar 10 minuta i nije uočena defluorizacija. Međutim, upotrebom 0,4 ekvivalenta Pd, uklanjanje zaštitnih benzil estara završeno je unutar 3 minuta, ali je uočeno 10% defluorizacije.

[0116] Ovakvi optimizovani prinosi dozvoljavaju upotrebu manje svakog početnog materijala (tj. PSMA inhibitora koji ima odlazeću grupu) i izvora<18>F anjona, dok i dalje obezbeđuju krajnji radioobeleženi proizvod sa visokim prinosom.

[0117] Korišćenjem postupaka koji su ovde opisani, vreme i hemijski i hromatografski koraci koji su uključeni posle obeležavanja mogu se skratiti za korak u poređenju sa postupcima koji upotrebljavaju fluorom-18 obeležen N-sukcinimidil benzoat (SFB) kao što je opisano u Lapi, S.E., et al., J. Nucl. Med.2009, 50(12), 2042.

Postupci snimanja

[0118] U sledećem aspektu, predmetni pronalazak sadrži postupke za detektovanje i/ili identifikovanje ćelija koje prezentuju PSMA koji sadrže dovođenje u kontakt ćelije za koju se sumnja da prezentuje PSMA sa jedinjenjem kao što je prethodno diskutovano, ili kompozicijom koja sadrži jedinjenje.

[0119] U jednom primeru izvođenja, postupci su pogodni za studije snimanja PSMA inhibitora, na primer, proučavanjem kompetitivnog vezivanja ne-radioobeleženih inhibitora.

[0120] U još sledećem primeru izvođenja, postupci su pogodni za snimanje kancera, tumora ili neoplazme. U dodatnom primeru izvođenja, kancer je odabran od kancera oka ili okularnog kancera, rektalnog kancera, kancera kolona, kancera grlića materice, kancera prostate, kancera dojke i kancera mokraćne bešike, oralnog kancera, benignih i malignih tumora, kancera želuca, kancera jetre, kancera pankreasa, kancera pluća, tela materice (corpus uteri), kancera jajnika, kancera prostate, kancera testisa, renalnog kancera, kancera mozga (npr. gliomi), kancera grla, melanoma kože, akutne limfocitne leukemije, akutne mijelogene leukemije, Juingovog (Ewing’s) sarkoma, Kapošijevog (Kaposi’s) sarkoma, karcinoma bazalnih ćelija i karcinoma pločastih ćelija, sitnoćelijskog kancera pluća, horiokarcinoma, rabdomiosarkoma, angiosarkoma, hemangioendotelioma, Vilmsovog (Wilms’) tumora, neuroblastoma, kancera usta/farinksa, kancera jednjaka, kancera larinksa, limfoma, neurofibromatoze, tuberozne skleroze, hemangioma, i limfangiogeneze.

[0121] Postupci su pogodni za snimanje bilo kog fiziološkog procesa ili odlike u koje je uključen PSMA. Tipično, postupci snimanja pogodni su za identifikaciju oblasti tkiva ili ciljeva koji eksprimiraju visoke koncentracije PSMA. Tipične primene uključuju snimanje glutamatergične neurotransmisije, presinaptičke glutamatergične neurotransmisije, malignih tumora ili kancera koji eksprimiraju PSMA, kancera prostate (uključujući metastazirani kancer prostate), i angiogeneze. Suštinski svi čvrsti tumori eksprimiraju PSMA u neovaskulaturi. Prema tome, predmetni postupci se mogu upotrebljavati za snimanje skoro svih čvrstih tumora uključujući pluća, renalne ćelije, glioblastom, pankreas, mokraćnu bešiku, sarkom, angiosarkom melanom, dojku, kolon, germinativne ćelije, feohromocitom, jednjak i želudac. Takođe, određene benigne lezije i tkiva uključujući endometrijum, švanom i Baretov (Barrett’s) jednjak mogu se snimiti u skladu sa predmetnim postupcima.

[0122] U određenim primerima izvođenja, radioobeleženo jedinjenje se detektuje pomoću pozitronske emisione tomografije (PET).

[0123] U određenim drugim primerima izvođenja, radioobeleženo jedinjenje se detektuje pomoću pozitronske emisione tomografije - kompjuterizovane tomografije (PET/CT).

[0124] U jednom primeru izvođenja, subjekt postupaka može biti čovek, pacov, miš, mačka, pas, konj, ovca, krava, majmun, ptica, ili vodozemac. U sledećem primeru izvođenja, ćelija je in vivo ili in vitro. U određenim primerima izvođenja, ćelije koje se snimaju ili detektuju su in vivo.

[0125] Tipični subjekti kojima se jedinjenja koja su ovde opisana mogu primenjivati biće sisari, posebno primati, naročito ljudi. Za veterinarske primene, biće pogodan širok spektar subjekata, npr. stoka kao što su goveda, ovce, koze, krave, svinje i slično; živina kao što su pilići, patke, guske, ćurke, i slično; i domaće životinje, posebno kućni ljubimci kao što su psi i mačke. Za dijagnostičke ili istraživačke primene, širok spektar sisara biće pogodni subjekti uključujući glodare (npr. miševe, pacove, hrčke), zečeve, primate, i svinje kao što su svinje parene u srodstvu i slično. Pored toga, za in vitro primene, kao što su in vitro dijagnostičke i istraživačke primene, telesne tečnosti i uzorci ćelija prethodno navedenih subjekata biće pogodni za upotrebu kao što su sisarski, posebno primata kao što su ljudi, uzorci krvi, urina ili tkiva, ili krv, urin ili uzorci tkiva životinja pomenutih za veterinarske primene.

[0126] U određenim primerima izvođenja, može se obezbediti komplet koji sadrži od oko 1 do oko 30 mCi radionuklid-obeleženog agensa za snimanje koji je prethodno opisan, u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem. Agens za snimanje i nosač mogu biti obezbeđeni u rastvoru ili u liofilizovanom obliku. Kada su agens za snimanje i nosač kompleta u liofilizovanom obliku, komplet može opciono da sadrži sterilni i fiziološki prihvatljiv medijum za rekonstituciju kao što je voda, fiziološki rastvor, puferisani fiziološki rastvor, i slično. Komplet može da obezbedi jedinjenje, kao što je prethodno diskutovano, u rastvoru ili u liofilizovanom obliku, i ove komponente kompleta mogu opciono da sadrže stabilizatore kao što su NaCl, silikat, fosfatni puferi, askorbinska kiselina, gentizinska kiselina, i slično. Dodatna stabilizacija komponenti kompleta može se obezbediti u ovom primeru izvođenja, na primer, obezbeđivanjem redukcionog agensa u obliku otpornom na oksidaciju. Određivanje i optimizacija takvih stabilizatora i postupaka stabilizacije su unutar nivoa veštine u struci.

[0127] U određenim primerima izvođenja, komplet obezbeđuje ne-radioobeleženi prekursor koji je za kombinovanje sa radioobeleženim reagensom na licu mesta, kao što je Na[<18>F] ili K[<18>F].

[0128] Radioobeležena jedinjenja ovde (tj. agensi za snimanje) mogu da se upotrebljavaju u skladu sa postupcima koji su ovde opisani od strane onih sa iskustvom u struci. Snimci se mogu generisati na osnovu razlika u prostornoj distribuciji agenasa za snimanje koji se akumuliraju na mestu kada se dovede u kontakt sa PSMA. Prostorna distribucija se može izmeriti upotrebom bilo kog sredstva pogodnog za određeni obeleživač, na primer, PET aparata. Stepen akumulacije agensa za snimanje može se kvantifikovati upotrebom poznatih postupaka za kvantifikovanje radioaktivnih emisija. Posebno koristan pristup snimanja koristi više od jednog agensa za snimanje za izvođenje simultanih studija.

[0129] Generalno, subjektu se primenjuje detektabilno efikasna količina agensa za snimanje. Kao što se ovde upotrebljava, "detektabilno efikasna količina" agensa za snimanje je količina dovoljna da se dobije prihvatljiv snimak upotrebom opreme koja je dostupna za kliničku upotrebu. Detektabilno efikasna količina agensa za snimanje može se primeniti u više od jedne injekcije. Detektabilno efikasna količina agensa za snimanje može da varira u zavisnosti od faktora kao što su stepen podložnosti pojedinca, starost, pol, i težina pojedinca, idiosinkratični odgovori pojedinca, i dozimetrija. Detektabilno efikasne količine agensa za snimanje takođe mogu da variraju u zavisnosti od faktora vezanih za instrument i film. Optimizacija takvih faktora je unutar nivoa veštine u struci.

[0130] Količina agensa za snimanje koji se upotrebljava u dijagnostičke svrhe i trajanje studije snimanja zavisiće od radionuklida koji se upotrebljava za obeležavanje agensa, telesne mase pacijenta, prirode i ozbiljnosti stanja koje se leči, prirode terapijskih tretmana kojima je pacijent podvrgnut, i od idiosinkratičnih odgovora pacijenta. Na kraju, nadležni lekar će odlučiti o količini agensa za snimanje koja će se primeniti svakom pojedinačnom pacijentu i o trajanju studije snimanja. U određenim primerima izvođenja, bezbedna i dovoljna količina jedinjenja ovde može biti u opsegu od oko 0,01 mg do oko 200 mg po dozi.

Definicije

[0131] Jedinjenja koja su ovde opisana mogu imati jedan ili više naelektrisanih atoma. Na primer, jedinjenja mogu biti cviterjonska, ali mogu biti sveukupno neutralna. Drugi primeri izvođenja mogu imati jednu ili više naelektrisanih grupa, u zavisnosti od pH i drugih faktora. U ovim primerima izvođenja, jedinjenje može biti povezano sa pogodnim kontrajonom. U struci je dobro poznato kako se pripremaju soli ili izmenjuju kontrajoni. Generalno, takve soli se mogu pripremiti reagovanjem oblika slobodne kiseline ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze (kao što su Na, Ca, Mg, ili K hidroksid, karbonat, bikarbonat, ili slično), ili reagovanjem oblika slobodne baze ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće kiseline. Takve reakcije se tipično sprovode u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u smeši ova dva. Kontrajoni se mogu promeniti, na primer, jonoizmenjivačkim tehnikama kao što je jonoizmenjivačka hromatografija. Svi cviterjoni, soli i kontrajoni su namenjeni, osim ukoliko je kontrajon ili so specifično naznačena. U određenim primerima izvođenja, so ili kontrajon mogu biti farmaceutski prihvatljivi za primenu subjektu. Farmaceutski prihvatljive soli biće razmatrane kasnije.

[0132] Termin "zaštitna grupa" kada se upotrebljava sa postupcima iz patentnih zahteva, ima obim i ograničenja kao što je definisano u patentnim zahtevima 1-3. U nekim primerima izvođenja, "zaštitna grupa" se introdukuje u fosfornu kiselinu kako bi se obezbedio estar. Ove "zaštitne grupe" uključuju, ali nisu ograničene na, acetil, benzolil, p-metoksibenzil etar i pivolil.

[0133] U nekim primerima izvođenja, "zaštitna grupa" se upotrebljava za introdukovanje in vivo hidrolizabilnog estra, koji je farmaceutski prihvatljiv estar koji se može hidrolizovati u organizmu koji se leči, poželjno humanom ili životinjskom telu, kako bi se proizvela roditeljska kiselina ili alkohol. Pogodni farmaceutski prihvatljivi estri za karboksilne i fosforne kiseline uključuju C1-6-alkoksimetil estre (npr. metoksimetil), C1-6-alkanoiloksimetil estre (npr. na primer, pivaloiloksimetil), ftalidil estre, C3-8-cikloalkoksikarboniloksiC1-6-alkil estre (npr. 1-cikloheksilkarboniloksietil); 1,3-dioksolen-2-onilmetil estre (npr. 5-metil-1,3-dioksolen-2-onilmetil); i C1-6-alkoksikarboniloksietil estre (npr. 1-metoksikarboniloksietil) i mogu se formirati na bilo kojoj odgovarajućoj grupi karboksilne ili fosforne kiseline u jedinjenjima iz ove objave.

[0134] In vivo hidrolizabilni estar jedinjenja iz predmetne objave koji sadrži hidroksi grupu (npr. fosforna kiselina) uključuje neorganske estre kao što su fosfatni estri i α-aciloksialkil etri i srodna jedinjenja koja kao rezultat in vivo hidrolize razlaganja estra daju roditeljsku hidroksi grupu. Primeri α-aciloksialkil etara uključuju acetoksimetoksi i 2,2-dimetilpropioniloksimetoksi. Izbor in vivo grupa koje formiraju hidrolizabilni estar za hidroksi uključuje alkanoil, benzoil, fenilacetil i supstituisani benzoil i fenilacetil, alkoksikarbonil (kako bi se dobili estri alkil karbonata), dialkilkarbamoil i N-(N,N-dialkilaminoetil)-N-alkilkarbamoil (kako bi se dobili karbamati), N,N-dialkilaminoacetil i karboksiacetil. Primeri supstituenata na benzoilu uključuju morfolino i piperazino povezane sa atoma azota u prstenu putem metilenske grupe za 3- ili 4- poziciju benzoil prstena. Pogodna vrednost za in vivo hidrolizabilni amid jedinjenja iz predmetne objave koje sadrži karboksi grupu je, na primer, N-C1-6-alkil ili N,N-di-C1-6-alkil amid kao što su N-metil, N-etil, N-propil, N,N-dimetil, N-etil-N-metil ili N,N-dietil amid.

[0135] U drugim primerima izvođenja, jedinjenja iz predmetne objave koja sadrže najmanje jedan hidrolizabilni estar mogu se upotrebljavati kao "prolekovi". Termin "prolek" je namenjen da predstavlja kovalentno povezane nosače, koji su sposobni da oslobode aktivni sastojak kada se prolek primenjuje subjektu sisaru. Oslobađanje aktivnog sastojka se dešava in vivo. Prolekovi se mogu pripremiti tehnikama koje su poznate onima sa iskustvom u struci. Ove tehnike generalno modifikuju odgovarajuće funkcionalne grupe u datom jedinjenju. Ove modifikovane funkcionalne grupe međutim regenerišu originalne funkcionalne grupe rutinskom manipulacijom ili in vivo. Prolekovi jedinjenja iz predmetne objave uključuju jedinjenja u kojima je modifikovana amino, hidroksilna, karboksilna ili slična grupa. Primeri prolekova uključuju, ali nisu ograničeni na estre (npr. acetat, format, i benzoat), karbamate (npr. N,N-dimetilaminokarbonil), amide (npr. trifluoroacetilamino, acetilamino, i slično), i slično. Kompletna rasprava o prolekovima nalazi se u Huttunen, K. M. i Rautio J. Current Topics in Medicinal Chemistry, 2011, 11, 2265-2287 i Stella, V. J. et al. (2007). Prodrugs: Challenges and Awards Part 1. New York: Springer.

[0136] Termin "alkil" kao što se ovde upotrebljava, označava ugljovodonik ravnog ili razgranatog lanca koji sadrži od 1 do 10 atoma ugljenika, osim ukoliko nije drugačije specificirano. Reprezentativni primeri alkila uključuju, ali nisu ograničeni na, metil, etil, npropil, izo-propil, n-butil, sek-butil, izobutil, terc-butil, n-pentil, izopentil, neopentil, n-heksil, 3-metilheksil, 2,2-dimetilpentil, 2,3-dimetilpentil, n-heptil, n-oktil, n-nonil, i n-decil.

[0137] Termin "alkenil" je namenjen da označi nezasićenu alifatičnu grupu ravnog ili razgranatog lanca sa jednom ili više ugljenik-ugljenik dvostrukih veza, koja ima od 2 do 12 atoma ugljenika, poželjno 2-8 atoma ugljenika, i poželjnije 2-6 atoma ugljenika. Poželjne alkenil grupe uključuju, bez ograničenja, etenil, propenil, butenil, pentenil, i heksenil.

[0138] Termin "haloalkil kao što se ovde upotrebljava, označava alkil grupu, kao što je ovde definisano, supstituisanu sa jednom ili više (npr.1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, ili 9) halogenih grupa (tj. F, Cl, Br, i/ili I). Primeri haloalkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hlorometil, dihlorometil, trihlorometil, i n-nonafluorobutil.

[0139] Kao što se ovde upotrebljava, termin "ćelija" se podrazumeva da označava ćeliju koja je in vitro, ex vivo ili in vivo. U nekim primerima izvođenja, ex vivo ćelija može biti deo uzorka tkiva koji je disekovan iz organizma kao što je sisar. U nekim primerima izvođenja, in vitro ćelija može biti ćelija u ćelijskoj kulturi. U nekim primerima izvođenja, in vivo ćelija je ćelija koja živi u organizmu kao što je sisar.

[0140] Kao što se ovde upotrebljava, termin "dovođenje u kontakt" označava spajanje naznačenih funkcionalnih grupa u in vitro sistemu ili in vivo sistemu. Na primer, "dovođenje u kontakt" PSMA sa jedinjenjem uključuje primenu jedinjenja koje je ovde opisano pojedincu ili pacijentu, kao što je čovek, kao i, na primer, introdukovanje jedinjenja u uzorak koji sadrži ćelijski ili prečišćeni preparat koji sadrži PSMA. Kada su funkcionalne grupe dve reaktivne hemijske vrste, "dovođenje u kontakt" uključuje interakciju dve funkcionalne grupe u svrhu hemijske reakcije (tj. raskidanje i formiranje veze). Na primer, "dovođenje u kontakt" jedinjenja koje je ovde opisano koje sadrži nukleofilnu grupu (npr. amin) sa jedinjenjem koje je ovde opisano koje sadrži elektrofilnu grupu (npr. odlazeću grupu vezanu za fenil prsten ili karbonil) rezultovalo bi izmeštanjem odlazeće grupe i formiranjem nove veze između nukleofila i atoma prethodno vezanog za odlazeću grupu.

[0141] Kao što se ovde upotrebljava, termin "farmaceutski prihvatljiva so" označava i farmaceutski prihvatljive kisele i bazne adicione soli i solvate. Takve farmaceutski prihvatljive soli uključuju soli kiselina kao što su hlorovodonična, fosforna, bromovodonična, sumporna, sulfinska, mravlja, trifluorometansulfonska (tj. triflatična), toluensulfonska, metansulfonska, metil sulfonat, azotna, benzoeva, limunska, vinska, maleinska, jodovodonična, alkanska kao što je sirćetna, HOOC-(CH2)n-COOH gde je n 0-4, i slično. "Farmaceutski prihvatljive soli" takođe uključuju, na primer, soli formirane kvaternizacijom (npr. alkilacijom) pogodnog mesta u samom jedinjenju, kao što je metilacija dimetilamina kako bi se formirala trimetilamonijum grupa. U takvim slučajevima, kontrajon može biti, na primer, ali nije ograničen na, hlorid, fosfat, hidrogen fosfat, bromid, sulfat, hidrogen sulfat, sulfinat, format, trifluorometansulfonat (tj. triflat), toluensulfonat, metansulfonat, metil sulfonat, nitrat, benzoat, citrat, tartarat, maleat, jodid, acetat, i slično. Netoksične farmaceutske bazne adicione soli uključuju soli baza kao što su natrijum, kalijum, kalcijum, amonijum, i slično. U određenim primerima izvođenja, farmaceutski prihvatljiva so je kalijumova so. Oni sa iskustvom u struci prepoznaće širok spektar netoksičnih farmaceutski prihvatljivih adicionih soli.

[0142] Farmaceutske kompozicije pogodne za parenteralnu primenu, kao što je, na primer, intraartikularnim (u zglobove), intravenskim, intramuskularnim, intradermalnim, intraperitonealnim i subkutanim putevima, uključuju vodene i nevodene, izotonične sterilne injekcione rastvore, koji mogu da sadrže antioksidanse, pufere, bakteriostate, i rastvore koji čine formulaciju izotoničnom sa krvlju primaoca kome je namenjena, i vodene i nevodene

1

sterilne suspenzije koje mogu da uključuju agense za suspendovanje, solubilizatore, agense za zgušnjavanje, stabilizatore, i konzervanse. Kompozicije se mogu primenjivati, na primer, intravenskom infuzijom, oralno, topikalno, intraperitonealno, intravezikalno ili intratekalno.

[0143] U određenim primerima izvođenja, "farmaceutski prihvatljiv nosač" označava biokompatibilni rastvor, uzimajući u obzir sterilnost, p[Eta], izotoničnost, stabilnost, i slično i može uključivati bilo koji i sve rastvarače, razblaživače (uključujući sterilni fiziološki rastvor, injekciju natrijum hlorida, Ringerovu (Ringer’s) injekciju, injekciju dekstroze, injekciju dekstroze i natrijum hlorida, laktatnu Ringerovu injekciju i druge vodene puferisane rastvore), disperzioni medijum, obloge, antibakterijske i antifungalne agense, izotonične agense, i slično. Farmaceutski prihvatljivi nosač može takođe da sadrži stabilizatore, konzervanse, antioksidanse, ili druge aditive, koji su dobro poznati onima sa iskustvom u struci, ili drugi vehikulum koji je poznat u struci.

PRIMERI

Primer 1 Sinteza CTT1298 K soli

[0144]

[0145] Jedinjenje A - Boc-Glu(OBn) (1 g, 1 ekviv.) i N-metilmorfolin (3,55 mmol, 1,2 ekviv.) rastvoreni su u 3 ml glikol dietra i mešani na -15 °C. Zatim je dodat izobutiloksihlorid (2,96 mmol, 1 ekviv.) i mešano je tokom dodatnih 15 min. Rezultujući beli talog je izfiltriran i dodat je NaBH4(4,44 mmol, 1,5 ekviv.) u filtrat zajedno sa 4 ml vode i mešano je tokom 15 min. Reakciona smeša je rastvorena u EtOAc i ekstrahovana tri puta sa slanim rastvorom. Organski sloj je osušen preko Mg2SO4i evaporisan na rotacionom evaporatoru na 40 °C. Sušenjem je dobijen čist proizvod (0,726 g, 76%). Karakterizacija je potvrdila formiranje Jedinjenja A (Bergman, Y. Tetrahedron asimmetry, 19 (2008), 2861-63).

2

[0146] Jedinjenje B - U flask od 100 ml koji je osušen plamenom, uzeto je 10 ml suvog DCM, isprano argonom i ohlađeno preko suvog leda. Dodati su PCl2OBn (2,31 mM, 1,5 ekviv.) i trietilamin (1,855 mM, 1,2 ekviv.) i mešano je. A (1,56 mM, 1 ekviv.) je rastvoreno u 10 ml DCM i dodato u reakcionu smešu u delovima. Posle kompletnog dodavanja, suvi led je zamenjen ledenim kupatilom i mešano je tokom 5 h. Dodata je 1:1 smeša voda:ACN i mešano je tokom dopunskog 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana, rastvorena u EtOAc i isprana sa 10% HCl, 10% NaHCO3i slanim rastvorom. Organski sloj je osušen, koncentrovan kako bi se uklonio rastvarač i osušen preko noći. Sirovi fosfit je rastvoren u 10 ml suvog ACN, ispran argonom, ohlađen na ledu i dodato je 5 ml CCl4. NH2-Glu(OBn)2(1,546 mM, 1 ekviv.) i TEA (4,638 mM, 3,2 ekviv.) rastvoreni su u 10 ml ACN i dodavani fosfitu u delovima i mešano je tokom 5 h. Reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena upotrebom hromatografije na C18 koloni upotrebom 80:20 MeOH:voda kao mobilne faze. Jedinjenje B je dobijeno kao bledožuto ulje (prinos 36,7%).<1>HNMR (300 MHz, CDCl3): δ 2,04 (s, 9H), 2,05-2,06 (m, 3H), 2,07 (m, 2H), 2,09 (m, 2H), 3,48-3,52 (m, 1H), 3,91 (t, 2H), 4,94 (m, 2H), 5,07 (m, 2H), 7,30-7,31 (m, 20H).<13>C NMR (300 MHz, CDCl3): δ 28,5, 28,9, 30,0, 53,8, 53,9, 66,6, 66,7, 67,2, 67,5, 76,9, 77,3, 77,7, 135,5, 154,8, 172,61, 172,65.<31>P NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8,41, 8,44. ESI masena spektroskopija (M+H): izračunato X, pronađeno X za C43H51N2O11P<+>.

[0147] Jedinjenje C - Boc-Glu(OBn) (0,6 g, 1 ekviv.) je rastvoren u 3 ml suvog DMF u flasku koji je osušen plamenom i ispran argonom. Dodati su HBTU (1,95 mmol, 1,1 ekviv.) i trietilamin (1,95 mmol, 1,1 ekviv.) i mešani tokom 30 minuta radi preaktivacije karboksilne kiseline. U odvojenom flasku, B je rastvoreno u 2 ml suvog DCM, isprano argonom i ohlađeno preko ledenog kupatila. Dodato je 1 ml suve TFA i mešano tokom 15 min. DCM je zatim izevaporisan, reakciona smeša je rastvorena u etil acetatu i isprana sa 10% NaHCO3(do pH neutralizacije), slanim rastvorom i organski sloj je osušen na anhidrovanom Na2SO4. Zatim je ponovo rastvoren u 2 ml suvog DMF dodatog u flask sa preaktiviranom kiselinom i mešan preko noći pod argonom. Reakciona smeša je rastvorena u etil acetatu, i isprana sa 10% NaHCO3i slanim rastvorom. Organski sloj je osušen preko Na2SO4i osušen pod vakuumom. Prečišćavanje je sprovedeno upotrebom C18 hromatografije na reverznim fazama sa 80% MeOH-voda kao mobilnom fazom. Jedinjenje C je izolovano u prinosu od 29%.

<1>HNMR (300 MHz, CDCl3): δ 1,41 (s, 9H), 2,59-2,69 (m, 4H), 1,85-1,91 (m, 2H), 2,06-2,15 (m, 2H), 2,25-2,30 (m, 2H), 2,36-2,41 (m, 2H), 3,59 (m, 1H), 3,93 (t, 2H), 4,29 (m, 1H), 4,53 (m, 1H), 4,91-5,00 (m, 2H), 5,04-5,14 (m, 8H), 5,49 (d, 1H, -NH), 6,63 (d, 1H, -NH), 6,74 (d, 1H, -NH), 7,28-7,32 (m, 25H).<13>C NMR (300 MHz, CDCl3): δ 28,5, 28,9, 30,0, 53,8, 53,9, 66,6, 66,7, 67,2, 67,5, 76,9, 77,3, 77,7, 135,5, 154,8, 172,61, 172,65.<31>P NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8,48. ESI masena spektroskopija (M+Na): izračunato 1021,08, pronađeno 1044,4 za C55H64N3O14P<+>.

[0148] Jedinjenje D - Priprema i prečišćavanje Jedinjenja D sprovedeno je slično kao kod Jedinjenja C. CBz-AH-OH (AH=aminoheksanska kiselina) (0,1 g, 0,264 mmol) je preaktivirano sa HBTU (0,29 mmol, 1,1 ekviv.) i TEA (0,29 mmol, 1,1 ekviv.). Jedinjenje C

4

je tretirano sa smešom suvih TFA/DCM kao u prethodnom slučaju radi uklanjanja zaštitne N-terminusne Boc-grupe i zatim je dodato u flask sa aktiviranim CBz-AH-OH. Prečišćavanje je sprovedeno upotrebom C18 hromatografije na reverznim fazama sa 80% MeOH-voda kao mobilnom fazom. Jedinjenje D je izolovano u prinosu od 49%.<1>HNMR (300 MHz, CDCl3): δ 1,36-1,39 (m, 2H), 1,57-1,65 (m, 8H), 1,83 (m, 2H), 2,08 (m, 4H), 2,18-2,27 (m, 4H), 2,37 (m, 2H), 3,38 (m, 1H), 3,64 (m, 1H), 3,88 (t, 2H), 4,49 (m, 1H), 4,91-4,94 (m, 2H), 5,03-5,11 (m, 8H), 6,78 (d, 1H, -NH), 6,85 (d, 1H, -NH), 6,92 (d, 1H, -NH), 7,00-7,05 (t, 2H), 7,25-7,30 (m, 25H), 7,78-7,82 (dd, 2H).<13>C NMR (300 MHz, CDCl3): δ 28,5, 28,9, 30,0, 53,8, 53,9, 66,6, 66,7, 67,2, 67,5, 76,9, 77,3, 77,7, 135,5, 154,8, 172,61, 172,65.<31>P NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8,38, 8,41. ESI masena spektroskopija (M+Na): izračunato 1021,08, pronađeno 1044,4 za C55H64N3O14P<+>.

[0149] CTT1298 K so (E) - U rastvor Jedinjenja D (0,160 g, 0,124 mmol) u THF (1 ml), dodati su 10% Pd/C (16 mg), K2CO3(0,044 mg, 0,318 mmol) i H2O (1 ml). Smeša je snažno mešana, pročišćena argonom (g), i zatim napunjena sa H2(g) pod pritiskom balona preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvor je filtriran kroz PTFE disk za filtraciju sa mikroporama od 0,2 mm (Whatman). Rastvarač je uklonjen in vacuo kako bi se dobila bela čvrsta supstanca, CTT1298 K so u prinosu od 87%.

Primer 2 Sinteza CTT1057 K soli (G)

[0150]

[0151] Boc grupa je uklonjena iz Jedinjenja C sa smešom suvih TFA/DCM i zatim je reagovano sa p-fluorobenzamidoaminoheksanskom kiselinom (F') (0,150 mg, 0,592 mmol), preaktiviranom sa HBTU (0,651 mmol, 1,1 ekviv.) i TEA (0,651 mmol, 1,1 ekviv.). Prečišćavanje je sprovedeno upotrebom C18 hromatografije na reverznim fazama sa 80% MeOH-voda kao mobilnom fazom. Jedinjenje F je izolovano u prinosu od 29%.<1>HNMR (300 MHz, CDCl3): δ 1,36-1,39 (m, 2H), 1,57-1,65 (m, 8H), 1,83 (m, 2H), 2,08 (m, 4H), 2,18-2,27 (m, 4H), 2,37 (m, 2H), 3,38 (m, 1H), 3,64 (m, 1H), 3,88 (t, 2H), 4,49 (m, 1H), 4,91-4,94 (m, 2H), 5,03-5,11 (m, 8H), 6,78 (d, 1H, -NH), 6,85 (d, 1H, -NH), 6,92 (d, 1H, -NH), 7,00-7,05 (t, 2H), 7,25-7,30 (m, 25H), 7,78-7,82 (dd, 2H).<13>C NMR (300 MHz, CDCl3): δ 28,5, 28,9, 30,0, 53,8, 53,9, 66,6, 66,7, 67,2, 67,5, 76,9, 77,3, 77,7, 135,5, 154,8, 172,61, 172,65.<31>P NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8,38, 8,41. ESI masena spektroskopija (M+Na): izračunato 1021,08, pronađeno 1044,4 za C55H64N3O14P<+>.

[0152] Sinteza za Jedinjenje G je sprovedena upotrebom procedure koja je upotrebljena za sintezu Jedinjenja D. U rastvor Jedinjenja F (0,070 g, 0,061 mmol) u THF (1 ml), dodati su 10% Pd/C (7 mg), K2CO3(0,021 mg, 0,156 mmol) i H2O (1 ml). CTT1057 K so (G) je izolovana u prinosu od 94%.<1>HNMR (300 MHz, D2O): δ 1,18 (m, 4h), 1,42 (m, 8H), 1,68 (m, 4H), 1,90 (m, 4H), 2,11 (m, 4H), 3,20 (t, 4H), 3,56 (m, 1H), 3,85 (m, 4H), 3,91 (m, 4H), 6,97-7,06 (m, 4H), 7,52-7,57 (m, 4H).<31>P NMR (300 MHz, D2O): δ 8,44. HR masena spektroskopija: izračunato 820,31, pronađeno 820,4 (M+H), 858,9 (M+K) za C28H40FN4O14P<+>.

Primer 3 Sinteza CTT1299 K soli (I)

[0153]

[0154] Jedinjenje H - CBz-AH2-kiselina (AH=aminoheksanska kiselina) (0,1 g, 0,264 mmol) je preaktivirana sa HBTU (0,29 mmol, 1,1 ekviv.) i TEA (0,29 mmol, 1,1 ekviv.). Jedinjenje C je tretirano sa smešom suvih TFA/DCM kao u prethodnom slučaju radi uklanjanja zaštitne N-terminusne Boc-grupe i zatim je dodato u flask sa aktiviranom CBzAH2-kiselinom. Prečišćavanje je sprovedeno upotrebom C18 hromatografije na reverznim fazama sa 80% MeOH-voda kao mobilnom fazom. Jedinjenje H je izolovano u prinosu od 49%.<1>HNMR (300 MHz, CDCl3): δ 1,28-1,30 (m, 4H), 1,41-1,46 (m, 4H), 1,56-1,61 (m, 6H), 1,86-1,89 (m, 2H), 2,09-2,27 (m, 10H), 2,37-2,39 (m, 2H), 3,12-3,18 (m, 4H), 3,74 (m, 1H), 3,89 (m, 2H), 4,51 (m, 2H), 4,91-4,96 (m, 2H), 5,05-5,11 (m, 10H), 5,95 (d, 1H, -NH), 6,98 (d, 1H, -NH), 7,03 (d, 1H, -NH), 7,27-7,31 (m, 27H).<31>P NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8,47. ESI masena spektroskopija: izračunato 1281,4, pronađeno 1282,4 (M+H), 1305,6 (M+Na) za C70H84N5O16P<+>.

[0155] CTT1299 K so (I) - U rastvor fosforamidata zaštićenog benzil estrom (H) (0,160 g, 0,124 mmol) u THF (1 ml), dodati su 10% Pd/C (16 mg), K2CO3(0,044 mg, 0,318 mmol) i H2O (1 ml). Smeša je snažno mešana, pročišćena argonom (g), i zatim napunjena sa H2(g) pod pritiskom balona preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvor je filtriran kroz PTFE disk za filtraciju sa mikroporama od 0,2 mm (Whatman). Rastvarač je uklonjen in vacuo kako bi se dobila bela čvrsta supstanca, Jedinjenje I u prinosu od 87%.<1>HNMR (300 MHz, D2O): δ 1,14-1,19 (m, 2H), 1,36 (m, 4H), 1,38-1,50 (m, 10H), 1,59-1,68 (m, 2H), 1,89 (m, 2H), 1,99-2,19 (m, 8H), 2,86 (t, 2H), 3,34 (m, 1H), 3,56 (dd, 1H), 3,94 (m, 3H).<31>P NMR (300 MHz, D2O): δ 8,43. HR masena spektroskopija: izračunato 698,30, pronađeno 698,35 (M+H) za C27H49N5O14P<+>.

Primer 4 Sinteza CTT1059 K soli (J)

[0156]

[0157] CTT1059 K so (J) - Rastvor I (0,028 g, 0,003 mmol, 1,5 ekviv.) je napravljen u 500 μl 100 mmol KHCO3i dodat je sukcinimidil estar p-fluorobenzoeve kiseline (0,005 g, 1 ekviv.) u 400 μl THF i mešano je tokom 5 h. Nereagovani I je očišćen mešanjem sa 5 mg Siizocijanat smole (SiliCycle, Inc., Quebec, Kanada) preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvor je zatim centrifugiran (7800 rcf, 10 min) i supernatant je liofilizovan u tubi za mikrocentrifugu od 2 ml. Nereagovani i/ili hidrolizovani SFB je uklonjen sukcesivnom trituracijom liofilizovane čvrste supstance sa obrocima od 1 ml DMSO i centrifugiranjem smeše (16,200 rcf, 1 min) posle svakog ispiranja; ovaj postupak je ponovljen 10 puta. Rezultujuća čvrsta supstanca je osušena in vacuo obezbeđujući željeni 4-fluorobenzamidofosforamidat J u kvantitativnom prinosu.<1>HNMR (300 MHz, D2O): δ 1,09-1,19 (m, 2H), 1,16-1,24 (m, 6H), 1,30-1,35 (m, 2H), 1,41-1,45 (m, 5H), 1,61-1,68 (m, 5H), 1,99-2,07 (m, 6H), 2,14-2,21 (m, 2H), 2,91-2,95 (m, 2H), 3,16-3,21 (m, 2H), 3,25-3,33 (m, 2H), 3,54-3,56 (m, 2H), 3,87-3,96 (m, 2H), 7,02-7,08 (m, 2H), 7,56-7,61 (m, 2H).<31>P NMR (300 MHz, D2O): δ 8,43. HR masena spektroskopija: izračunato 820,38, pronađeno 820,43 (M+H) i 858,40 (M+K) za C34H51N5FO15P<+>.

Primer 5 Sinteza [<18>F]CTT1059 K soli (K)

[0158]

[0159] [<18>F]CTT1059 K so (K) je sintetisana procedurom sličnom sintezi Jedinjenja J, osim što je sukcinimidil estar p-<18>fluorobenzoeve kiseline upotrebljen umesto sukcinimidil estra pfluorobenzoeve kiseline.

Primer 6 Sinteza [<18>F]CTT1057 K soli (L)

[0160]

[0161] [<18>F]CTT1057 K so (L) je sintetisana procedurom sličnom sintezi Jedinjenja J, osim što je Jedinjenje E upotrebljeno umesto Jedinjenja I, i sukcinimidil estar p-<18>fluorobenzoeve kiseline upotrebljen je umesto sukcinimidil estra p-fluorobenzoeve kiseline.

Primer 7 Kiselinska stabilnost jedinjenja na bazi 2-(3-hidroksipropil)-glicina

[0162]

[0163] Studije kiselinske stabilnosti izvedene na CTT1054, CTT1000, i CTT1297 odredile su da CTT1297 ima poboljšanu kiselinsku i baznu stabilnost u odnosu na CTT1054 i CTT1000. Očekivalo se da će zamena serinskog ostatka u CTT1054 sa ostatkom homoserina (CTT1000) ili 2-(3-hidroksipropil)-glicina (CTT1297) učiniti CTT1297 i CTT1000 manje sklonim betaeliminaciji fosfatne grupe. Međutim, nije se očekivala dramatično poboljšana kiselinska stabilnost CTT1297 u odnosu na CTT1054, pa čak i CTT1000. CTT1297 je stabilan tokom 8 sati na pH 3, gde se CTT1054 razlaže pri pH 6 i CTT1000 počinje da se razlaže pri pH 4,5.

<31>P NMR podaci dobijeni tokom 8 sati za CTT1054 (pH 6) i CTT1297 (pH 4, 3, i 2), i CTT1000 (pH 4,5) pokazani su na Slikama 1-7.

[0164] Procedure za određivanje pH stabilnosti pomoću<31>P NMR detaljno su opisane kao što sledi. Uzorak (~4 mg) je rastvoren puferom (~1 ml 1 M rastvora) što je rezultovalo približno 5 mM rastvorom analita. pH je podešena prema potrebi (npr. sa HCl) i to vreme je definisano kao t = 0. Dobijeni su inicijalni<31>P NMR spektri (t ~ 0,5 h) i uzimani svakog sata (1-8 h). Eksterna referenca za<31>P NMR bio je trifenilfosfin oksid (27 ppm).

Primer 8 Interakcije vezivanja u PSMA - kristalne strukture

[0165]

[0166] Dobijene su rendgenske kristalne strukture CTT1055 i CTT1057 kokristalizovane sa vanćelijskim domenom PSMA, i otkrile su neočekivane dopunske interakcije vezivanja za CTT1057. Specifično, otkriveno je da linker aminoheksanske kiseline u CTT1057 omogućava p-fluorobenzamid grupi da indukuje dopunsku interakciju vezivanja sa nedavno identifikovanim udaljenim aren-vezujućim mestom (Zhang, A.X., et al., A remote arenebinding site on prostate specific membrane antigen revealed by antibody-recruiting small molecules. J. Am. Chem. Soc., 2010, 132(36): p. 12711-6.). Zhang i saradnici su saopštili da se aren-vezujuće mesto indukuje sa dinitrofenil prstenom povezanim sa supstratom koji prepoznaje jedinjenje sa triazol-oksietilenskim linkerima različite dužine. Nije bilo predvidljivo iz Zhang jedinjenja, u kojima je dinitrofenil interagovao sa udaljenim arenvezujućim mestom, da li će jedinjenje koje prezentuje fluorofenilnu funkcionalnu grupu (npr. CTT1057) na sličan način interagovati sa udaljenim aren-vezujućim mestom. Postoje velike sterične i elektronske razlike između dinitrofenil prstena koje upotrebljava Zhang i pfluorobenzamida iz jedinjenja koja su opisana u predmetnoj objavi. Pored toga, nije bilo predviđeno da se dužina, konfiguracija i interaktivna svojstva triazol-oksietilen linkera koje koriste Zhang i saradnici mogu postići sa alifatičnim linkerom kao što je aminoheksanska kiselina koja je pronađena u CTT1057. Kristalne strukture CTT1055 i CTT1057 vezane u PSMA pokazane su na Slikama 8 i 9 kako bi ilustrovale različite režime vezivanja.

[0167] Postoje male razlike u pozicioniranju između AH linkera i P1 karboksilata u CTT1057 u poređenju sa CTT1056 i CTT1059. Dok P1 karboksilat CTT1056 i CTT1059 interaguje direktno i sa Arg534 i Arg536, odgovarajući deo u CTT1057 je pomeren za približno 1,1 Å (za atom ugljenika P1 karboksilata), angažujući samo NH1 iz Arg536 (3,1 Å) (Slika 13).

[0168] Najvažnija i najistaknutija razlika u pozicioniranju distalnih komponenti inhibitora pronađena je u lipofilnom aminoheksanskom linkeru i fluoro-fenil prstenu. Za CTT1056, rastojanje između linkera i distalnog prstena je približno 13 Å. Distalna fluoro-benzoil grupa je pozicionirana paralelno sa guanidinijum grupom Arg463 na rastojanju od približno 4,0 Å sa slabim π-katjon interakcijama u aren-vezujućem mestu kao što se vidi u CTT1057 (Slika 13, A). Za CTT1057, terminusna fluoro-benzoilna funkcionalnost je uglavljena u aren-vezujujući usek koji je lociran na "ulaznom poklopcu" enzima koji je oblikovan bočnim lancima Trp541 i Arg511 sa strane i Arg463 bočnim lancem na dnu. Ravan fluoro-benzoilnog prstena je praktično paralelna i sa indol i guanidinijum grupama Trp541 i Arg511, respektivno, i oba ova ostatka doprinose vezivanju inhibitora (Slika 13, B). Konačno, u slučaju CTT1059 sa najdužim linkerom (približno 28 Å) distalni deo inhibitora se uopšte ne vidi u elektronskoj gustini (Slika 13, C).

Primer 9 In vitro i in vivo performanse

[0169]

[0170] In vitro i in vivo performanse agenasa za PET snimanje koji sadrže 2-(3-hidroksipropil)-glicin ostatak ([<18>F]CTT1056, [<18>F]CTT1057, i [<18>F]CTT1059) određene su i upoređene sa agensima za PET snimanje koji sadrže ostatak homoserina ([<18>F]CTT1055 i [<18>F]CTT1060). Eksperimenti PET snimanja i biodistribucije izvedeni su u skladu sa procedurama prema PSMA-targeted SPECT agents: Mode of Binding effect on in vitro Performance. Nedrow-Byers, J.R.; Moore, A.L.; Ganguly, T.; Hopkins, M.R.; Fulton, M.D.;

1

Benny, P.D.; Berkman, C.E. The Prostate. 2012 (u štampi, PMID: 22911263, doi: 10.1002/pros.22575). Dok su sva jedinjenja pokazala ireverzibilne režime vezivanja konzistentne za ovu klasu jedinjenja i pokazala slične ICso vrednosti, za agense koji sadrže 2-(3-hidroksipropil)-glicin uočeni su poboljšani tumor:krv odnosi (Tabela 1). [<18>F]CTT1055 i [<18>F]CTT1060 rezultati snimanja i biodistribucije dobijeni su upotrebom LNCaP ksenografta tumora u mišjim modelima, dok su [<18>F]CTT1056, [<18>F]CTT1057, i [<18>F]CTT1059 rezultati snimanja i biodistribucije dobijeni upotrebom CWR2RV1 ksenografta tumora u mišjim modelima. Saopšteno je da je PSMA ekspresija u CWR22RV1 ksenograftima znatno niža u poređenju sa LNCaP ksenograftima (Regino, C.A., et al., Preclinical evaluation of a monoclonal antibody (3C6) specific for prostate-specific membrane antigen. Curr Radiopharm, 2009.2(1): p. 9-17.). Stoga se očekivalo da će vrednosti tumorskog preuzimanja u CWR22RV1 ksenograftima biti niže od vrednosti preuzimanja za LNCaP ksenografte. Uprkos nižoj PSMA ekspresiji u 22RV1 ksenograftima, zbirni rezultati otkrivaju odličnu biodistribuciju (Slike 10A i 10B) i PET snimke ksenografta tumora (CWR22RV1 ćelije) za [<18>F]CTT1057 i [<18>F]CTT1059 (Slike 11 i 12, respektivno) u poređenju sa agensima 1. i 2. generacije [<18>F]CTT1055 i [<18>F]CTT1060, respektivno.

2

Primer 10 In vitro ćelijsko preuzimanje i internalizacija CTT1059

[0171] Ćelijsko preuzimanje i internalizacija izmereni su za CTT1059 u skladu sa procedurama prema PSMA-targeted SPECT agents: Mode of Binding effect on in vitro Performance. Nedrow-Byers, J.R.; Moore, A.L.; Ganguly, T.; Hopkins, M.R.; Fulton, M.D.; Benny, P.D.; Berkman, C.E. The Prostate. 2012 (u štampi, PMID: 22911263, doi: 10.1002/pros.22575). Rezultati su u Tabeli 2.

Tabela 2. In vitro ćelijsko preuzimanje i internalizacija CTT1059.

Primer 11 In vitro studija preuzimanja i internalizacije

[0172] Jedinjenja [<18>F]CTT1056, [<18>F]CTT1057 i [<18>F]CTT1059 demonstrirala su specifičnost za PSMA pošto je preuzimanje uočeno u CWR22Rv1 (PSMA+) ćelijama, ali ne i u PC3 (PSMA-) ćelijama. Već 1 h nakon inkubacije, [<18>F]CTT1059 je pokazalo statistički značajno veće preuzimanje u poređenju sa [<18>F]CTT1056 i [<18>F]CTT1057 pomoću studentovog t-testa sa P vrednostima od <0,0001, i [<18>F]CTT1057 preuzimanje je takođe statistički veće od [<18>F]CTT1056 sa P vrednošću od 0,0012. Isti trend je uočen na 2 h sa P vrednostima od <0,0001, <0,0001 i 0,0002, respektivno. Aktivnost izmerena u CWR22Rv1 ćelijama ili internalizacija [<18>F]CTT1056, [<18>F]CTT1057 i [<18>F]CTT1059 na 1 h bile su 80,7%, 81,4% i 84,9% respektivno, i na 2 h bile su 94,2%, 84,2% i 91,3%, respektivno (Tabela 3).

4

[<18>F]CTT1056, [<18>F]CTT1057 i [<18>F]CTT1059 su internalizovana sličnom stopom unutar 1 h od inkubacije u CWR22Rv1 bez statistički značajne razlike. Međutim, na 2 h stopa internalizacije postala je značajnija između [<18>F]CTT1056 i [<18>F]CTT1057 (P <0,0001) kao i između [<18>F]CTT1057 i [<18>F]CTT1059 (P = 0,0002) ali manjeg stepena između [<18>F]CTT1056 i [<18>F]CTT1059 (P = 0,014).

Tabela 3. Podaci o ćelijskom preuzimanju u PSMA+ CWR22Rv1 i PSMA- PC3 ćelijskim linijama i podaci o internalizaciji u PSMA+ CWR22Rv1 ćelijskim linijama za [<18>F]CTT1056,

[<18>F]CTT1057 i [<18>F]CTT1059 na 1 h i 2 h.

Primer 12 In vivo snimanje i biodistribucija

[0173] Preuzimanje [<18>F]CTT1056, [<18>F]CTT1057 i [<18>F]CTT1059 na 1 h nakon injekcije u CWR22Rv1 (PSMA+) tumor bilo je 1,54 ± 0,40, 3,16 ± 0,39 i 2,92 ± 0,30%ID/g sa tumorprema-krvi odnosom od 10, 20 i 24, respektivno. Na 2 h nakon injekcije, tumorske akumulacije bile su 1,57 ± 0,50, 1,65 ± 0,32 i 1,86 ± 0,14%ID/g sa tumor-prema-krvi odnosom od 26, 64 i 70, respektivno. Preuzimanje [<18>F]CTT1056, [<18>F]CTT1057 i [<18>F]CTT1059 u bubrezima na 1 h nakon injekcije bilo je 8,94 ± 2,93, 24,38 ± 3,72 i 5,87 ± 0,67%ID/g, respektivno, i na 2 h bilo je 9,97 ± 2,81, 21,54 ± 6,12 i 7,13 ± 1,45%ID/g, respektivno. Za PC3 (PSMA-) ksenograft mišje modele, tumorsko preuzimanje je bilo slično pozadinskom preuzimanju/preuzimanju u organ koji nije cilj, dok je preuzimanje u bubrezima za [<18>F]CTT1056, [<18>F]CTT1057 i [<18>F]CTT1059 na 2 h nakon injekcije bilo 5,64 ± 2,41, 18,98 ± 4,75 i 4,44 ± 1,03%ID/g, respektivno,

[0174] Kao što je pokazano na microPET/CT snimcima (Slika 14), bilo je tumorskog preuzimanja [<18>F]CTT1056, [<18>F]CTT1057 i [<18>F]CTT1059 markera u CWR22Rv1 (PSMA+) ćelijama na 2 h nakon injekcije, ali ne i u PC3 (PSMA-) tumorima. Dok je postojalo očekivano preuzimanje svih jedinjenja u bubrezima, u svim ostalim organima uočeno je minimalno preuzimanje.

Primer 13 In vitro preuzimanje i internalizacija

[0175] Western blot analiza je potvrdila oko 5 puta veću ekspresiju PSMA u LNCaP ćelijama u poređenju sa CWR22Rv1 ćelijama. GADPH je služio kao kontrola punjenja proteina. (Odeljak-4 u Dodatnom materijalu). Ova razlika u nivoima ekspresije PSMA između dve ćelijske linije takođe se ogleda i u vrednostima ćelijskog preuzimanja [<18>F]CTT1057 u ovim ćelijskim linijama. Povećano preuzimanje u PSMA(+), LNCaP i CWR22Rv1 ćelije uočeno je tokom 4 h inkubacije sa [<18>F]CTT1057 (Tabela 5). Procenat preuzimanja u LNCaP ćelijama pokazao je povećanje od oko 1,5 puta od 1 do 4 h, dok je onaj u CWR22Rv1 ćelijama pokazao povećanje preuzimanja od 2 puta na 4 h u odnosu na 1 h. Na 4 h, LNCaP ćelije su pokazale 8,74% preuzimanja, pet puta veće nego u CWR22Rv1 ćelijama (1,32%) u istoj vremenskoj tački. PC3 ćelije su pokazale malo ili nimalo preuzimanja na 1 i 4 h.

[0176] Internalizacija [<18>F]CTT1057 u LNCaP ćelijama na 1 h bila je 93% aktivnosti asocirane sa ćelijama i 92% na 4 h (Tabela 5). CWR22Rv1 ćelije, koje su upotrebljene kao ksenografti tumora za in vivo snimanje i biodistribuciju, pokazale su 81% internalizacije na 1 h i 91% na 4 h. Ovi rezultati sugerišu da je internalizacija radiomarkera brza i skoro potpuna unutar 1 h.

Tabela 5. Podaci o ćelijskom preuzimanju i internalizaciji za [<18>F]CTT1057 u PSMA(+) i PSMA(-) ćelijskim linijama.

Primer 14 Ex vivo snimanje i biodistribucija

[0177] Podaci o ex vivo biodistribuciji potvrdili su nalaze snimanja (Sl.15). Došlo je do brzog preuzimanja markera u PSMA pozitivnom tumoru unutar prvog sata sa značajnim klirensom iz krvi i drugih ne-PSMA tkiva tokom studije od 4 h. Na 1 h nakon injekcije, akumulacija u PSMA(+) tumoru bila je 2,35 ± 0,91%ID/g sa tumor-prema-krvi odnosom od 22:1. Na 4 h nakon injekcije, akumulacija u tumoru ostala je na 2,33 ± 0,50%ID/g, dok je 10-struki klirens iz krvi obezbedio tumor-prema-krvi odnos od 265:1. Bubrezi su pokazali očekivano visoko preuzimanje i zadržavanje markera sa 18,12 ± 2,21%ID/g i 17,17 ± 4,13%ID/g na 1 i 4 h, respektivno. Ograničeno preuzimanje u kostima ukazalo je da je marker stabilan na metaboličku defluorizaciju. Specifičnost [<18>F]CTT1057 za PSMA demonstrirana je pomoću kompetitivne studije sa analogom Jedinjenja C kome je uklonjena zaštita koji je injektiran sat pre primene [<18>F]CTT1057. Nakon blokiranja, tumorsko preuzimanje i preuzimanje u bubrezima značajno je smanjeno za 67% (p = 0,0010) i 91% (p = 0,0003), respektivno.

Claims (15)

1. Patentni zahtevi 1. Postupak pripreme formule (I)

   ili njene farmaceutski prihvatljive soli, postupak je naznačen time što sadrži dovođenje u kontakt jedinjenja formule (III):

   ili njegove farmaceutski prihvatljive soli sa izvorom fluorida ili radiofluorida, pri čemu L je linker koji sadrži funkcionalnu grupu formule -NH-CH2CH2-(OCH2CH2-)y-C(O)- ili grupu formule

   pri čemu y je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12; m je 1, 2, 3, ili 4; svako n je nezavisno 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12; R<1>je fenil ili piridil; pri čemu je fenil ili piridil supstituisan sa [F]- ili [<18>F]-fluoro grupom i opciono supstituisan sa drugom grupom koja je odabrana od halogena, cijano, i nitro; svako R<2>je nezavisno vodonik ili C1-C6alkil; R<3>je fenil ili piridil; pri čemu je fenil ili piridil supstituisan sa odlazećom grupom i opciono supstituisan sa drugom grupom koja je odabrana od halogena, cijano, i nitro; i svako R je nezavisno vodonik ili zaštitna grupa koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od alkila, alkenila, haloalkila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, o-nitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, p-nitrobenzila, pmetoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksibenzila, i piperonila, poželjno koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od metila, etila, propila, izopropila, terc-butila, alila, trifluorometila, trifluoroetila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, onitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, p-nitrobenzila, pmetoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksi-benzila, i piperonila; pod uslovom da kada je L grupa formule

   m·(n+2) je veće od ili jednako 3 i manje od ili jednako 21.
2. 2. Postupak pripreme formule (I) 1 1

   ili njene farmaceutski prihvatljive soli, postupak je naznačen time što sadrži dovođenje u kontakt jedinjenja formule (II),

   ili njegove farmaceutski prihvatljive soli sa jedinjenjem formule (IV),

   pri čemu L je linker koji sadrži funkcionalnu grupu formule -NH-CH2CH2-(OCH2CH2-)y-C(O)- ili grupu formule 1 2

   pri čemu y je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12; m je 1, 2, 3, ili 4; svako n je nezavisno 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12; R<1>je fenil ili piridil; pri čemu je fenil ili piridil supstituisan sa [F]- ili [<18>F]-fluoro grupom i opciono supstituisan sa drugom grupom koja je odabrana od halogena, cijano, i nitro; svako R<2>je nezavisno vodonik ili C1-C6alkil; R<5>je R<1>; i svako R je nezavisno vodonik ili zaštitna grupa koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od alkila, alkenila, haloalkila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, o-nitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, p-nitrobenzila, pmetoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksibenzila, i piperonila, poželjno koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od metila, etila, propila, izopropila, terc-butila, alila, trifluorometila, trifluoroetila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, onitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, p-nitrobenzila, pmetoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksi-benzila, i piperonila; pod uslovom da kada je L grupa formule

   m·(n+2) je veće od ili jednako 3 i manje od ili jednako 21. 1
3. 3. Postupak za detektovanje i/ili identifikovanje ćelija koje prezentuju PSMA naznačen time što sadrži dovođenje u kontakt ćelije za koju se sumnja da prezentuje PSMA sa jedinjenjem formule (I)

   ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, pri čemu L je linker koji sadrži funkcionalnu grupu formule -NH-CH2CH2-(OCH2CH2-)y-C(O) ili grupu formule

   pri čemu y je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12; m je 1, 2, 3, ili 4; svako n je nezavisno 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12; R<1>je fenil ili piridil; pri čemu je fenil ili piridil supstituisan sa [F]- ili [<18>F]-fluoro grupom i opciono supstituisan sa drugom grupom koja je odabrana od halogena, cijano, i nitro; svako R<2>je nezavisno vodonik ili C1-C6alkil; i svako R je nezavisno vodonik ili zaštitna grupa koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od alkila, alkenila, haloalkila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, 1 4 o-nitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, p-nitrobenzila, pmetoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksibenzila, i piperonila, poželjno koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od metila, etila, propila, izopropila, terc-butila, alila, trifluorometila, trifluoroetila, benzila, trifenilmetila (tritila), difenilmetila, onitrobenzila, 2,4,6-trimetilbenzila, p-bromobenzila, p-nitrobenzila, pmetoksibenzila (PMB), 2,6-dimetoksibenzila, 4-(metilsulfinil)benzila, 4-sulfobenzila, 4-azidometoksi-benzila, i piperonila; pod uslovom da kada je L grupa formule

   m·(n+2) je veće od ili jednako 3 i manje od ili jednako 21.
4. 4. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, naznačeno time što je jedinjenje formule (Ic):

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
5. 5. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, naznačeno time što (i) svako R je vodonik; i/ili (ii) svako R<2>je vodonik. 1
6. 6. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, naznačeno time što je m 1 ili 2.
7. 7. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6, naznačeno time što je jedinjenje formule (Id):

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
8. 8. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1-7, naznačeno time što je R<1>:

   pri čemu X je vodonik ili hloro; i Y je N ili CH.
9. 9. Postupak prema patentnom zahtevu 8, naznačeno time što (i) X je vodonik i Y je CH; (ii) X je vodonik i Y je N; (iii) X je hloro i Y je N; ili (iv) X je hloro i Y je CH. 1
10. 10. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, naznačeno time što je jedinjenje formule (I):

    1

    �

    �

    ili njihova farmaceutski prihvatljiva so.
11. 11. Postupak prema patentnom zahtevu 1 ili 2, ili bilo kom od patentnih zahteva 4-10 kada zavise od patentnog zahteva 1 ili 2, naznačeno time što je izvor radiofluorida Na<18>F, K<18>F, Cs<18>F, tetra(C1-C6)alkilamonijum<18>F fluorid, ili tetra(C1-C6)alkilfosfonijum<18>F fluorid.
12. 12. Postupak prema patentnom zahtevu 1 ili 2, ili bilo kom od patentnih zahteva 4-10 kada zavise od patentnog zahteva 1 ili 2, naznačeno time što je izvor fluorida NaF, KF, CsF, tetra(C1-C6)alkilamonijum fluorid, ili tetra(C1-C6)alkilfosfonijum fluorid.
13. 13. Postupak prema patentnom zahtevu 3, ili bilo kom od patentnih zahteva 4-10 kada zavise od patentnog zahteva 3, naznačeno time što je ćelija iz neoplazme.
14. 14. Postupak prema patentnom zahtevu 13, naznačeno time što je neoplazma kancer.
15. 15. Postupak prema patentnom zahtevu 14, naznačeno time što je kancer odabran od kancera oka ili okularnog kancera, rektalnog kancera, kancera kolona, kancera grlića materice, kancera prostate, kancera dojke, kancera mokraćne bešike, oralnog kancera, benignih tumora, malignih tumora, kancera želuca, kancera jetre, kancera pankreasa, kancera pluća, tela materice, kancera jajnika, kancera prostate, kancera testisa, renalnog kancera, kancera mozga (npr. gliomi), kancera grla, melanoma kože, akutne limfocitne leukemije, akutne mijelogene leukemije, Juingovog sarkoma, Kapošijevog sarkoma, karcinoma bazalnih ćelija, karcinoma pločastih ćelija, sitnoćelijskog kancera pluća, horiokarcinoma, rabdomiosarkoma, angiosarkoma, hemangioendotelioma, Vilmsovog tumora, neuroblastoma, kancera usta/farinksa, kancera jednjaka, kancera larinksa, limfoma, neurofibromatoze, tuberozne skleroze, hemangioma, i limfangiogeneze.