SK362003A3 - Use of strains of the Parapox ovis virus for producing antiviral pharmaceuticals and anticancer pharmaceuticals - Google Patents

Use of strains of the Parapox ovis virus for producing antiviral pharmaceuticals and anticancer pharmaceuticals Download PDF

Info

Publication number
SK362003A3
SK362003A3 SK36-2003A SK362003A SK362003A3 SK 362003 A3 SK362003 A3 SK 362003A3 SK 362003 A SK362003 A SK 362003A SK 362003 A3 SK362003 A3 SK 362003A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
medicaments
manufacture
strains
infections
treatment
Prior art date
Application number
SK36-2003A
Other languages
English (en)
Inventor
Olaf Weber
Tobias Schlapp
Angela Siegling
Andreas Knorr
Claudia Hirth-Dietrich
Gudrun Theiss
Original Assignee
Bayer Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE10122451A external-priority patent/DE10122451A1/de
Application filed by Bayer Ag filed Critical Bayer Ag
Publication of SK362003A3 publication Critical patent/SK362003A3/sk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/12—Keratolytics, e.g. wart or anti-corn preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24211—Parapoxvirus, e.g. Orf virus
    • C12N2710/24232—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Predkladaný vynález sa týka použitia kmeňov Parapoxvirus ovis ako imunoterapeutických prípravkov pre imunodeficiencie infekčnej alebo neinfekčnej povahy, a taktiež použitia kmeňov Parapoxvirus ovis pri liečení nádorových ochorení a vírusových infekcií, a taktiež ochorení, ktoré sprevádzajú takéto infekcie a ďalej sa týka použitia kmeňov Parapoxvirus ovis na výrobu liekov na použitie v humánnej i veterinárnej medicíne.
Predkladaný vynález sa ďalej týka použitia kmeňov Parapoxvirus ovis, a liekových foriem z nich pripravených, ako imunoterapeutických prípravkov alebo imunoprofylaktických činidiel v stresovej metafylaxii na prevenciu, alebo odvrátenie infekčných ochorení nasledujúcich po strese (napr. po operácii), ďalej sa týka ich použitia v profylaxii infekcie, na prevenciu alebo odvrátenie infekčných ochorení ich podávaním pred operáciou alebo intervenciou (napr. pred implantáciou protézy, alebo pred dentálnou intervenciou), a ďalej sa týka ich použitia v metafylaxii infekcie alebo terapii akútnej alebo chronickej vírusovej infekcie, napríklad infekcií dýchacieho traktu, infekcie papilloma vírusom, infekcie herpetickým vírusom, infekcie HIV, a vírusových infekcií vnútorných orgánov ako je napr. infekcia vírusmi hepatitídy, a ďalej ich použitia pri hojení rán, na urýchlenie procesu hojenia rán, a ich použitia na podporu hojenia poranení, ktoré sa zle hoja alebo sa nehoja vôbec (napr. vred predkolenia ), ich použitia pri ochorení ako je sclerosis multiplex, astma, bradavice alebo iné novotvary kože, ich použitia pri ochoreniach celého spektra alergických ochorení, ich použitia pri prevencii nástupu systémových alergií, ich použitia pri topických alergiách a ich použitia na zlepšenie celkového stavu, napríklad u starších pacientov. Kmene Parapoxvirus ovis, ktoré sú použité v kontexte predkladaného vynálezu sú kmene NZ2, NZ-7, NZ-10 a orf-11.
PP 0036-2003
32054/H
Taktiež je možné použitie potomstva týchto kmeňov, ktoré sa získalo pasážovaním a/alebo adaptáciou na konkrétne bunky, napríklad WI-38, MRC-5 alebo Vero bunky, alebo ich častí, alebo fragmentov vírusov týchto kmeňov alebo ich potomstva. Časťami vírusu sa rozumejú genómové alebo subgenómové fragmenty, ktoré sú exprimované pomocou vhodných vektorov, napríklad vírusu vakcínie, vo vhodných systémoch, napríklad kultúre fibroblastových buniek. Fragmenty sa rozumejú frakcie, ktoré sú získané biochemickou purifikáciou, napríklad pomocou chromatografie, z častíc ktoré boli fyzicky rozrušené, napríklad pomocou ultrazvuku.
Predkladaný vynález sa okrem toho týka použitia kmeňov Parapoxvirus ovis na výrobu liekov a farmaceutických prípravkov. Naviac sa vynález týka použitia kmeňov Parapoxvirus ovis, v kombinácii s inými liečivami, na výrobu liekov a farmaceutických prípravkov pre antivírusovú terapiu, alebo protirakovinovú terapiu.
Doterajší stav techniky
Je známe, že latentná a chronická perzistentná vírusová infekcia môže byť aktivovaná, alebo reaktivovaná imunosupresiou, alebo naopak tým, že imunitný systém potlačí akútnu chorobu, ktorá je indukovaná vírusom, ktorý je latentný (napr. latentná infekcia herpetickým vírusom sa znovu objavuje v spojení s imunosupresiou: opary na pere v spojení so stresom alebo podávaním kortizónu). Okrem toho je známe, že chronické perzistentné a latentné vírusové infekcie sú iba ťažko liečiteľné, alebo neliečiteľné použitím zvyčajných antivírusových činidiel na báze nízkomolekulárnych látok.
Dôvodom môže byť absencia vírusovej enzymatickej aktivity spojenej s takýmito infekciami (napríklad absencia akejkoľvek vírusovej polymerázovej aktivity, ktorá má najskôr inkorporovať nukleozidový inhibítor do nukleovej kyseliny tak, aby inhibítor mohol spôsobiť termináciu reťazca vírusovej DNA, ďalej taktiež napríklad absenciu akejkoľvek vírusovej tymidínkinázovej aktivity, ktorá najskôr má, napríklad, fosforylovať antivírusovú zlúčeninu, ktorá sa tak stane aktívnou), alebo inak nedostatok akéhokoľvek rozpoznávania, imunitným
PP 0036-2003
32054/H r · r f systémom hostiteľa, infikovanej alebo degenerovanej bunky, napríklad karcinómovej bunky, alebo vírusových antigénov.
Je taktiež známe, že v spojení s chronickou perzistentnou vírusovou infekciou, môže viesť superinfekcia ďalším vírusom ku vzniku antivírusového účinku namierenému proti chronickému perzistentnému vírusu1). Autori1’ boli schopní demonštrovať závislosť týchto účinkov na interferónoch ako je napr. IFN-γ a TNF-α, ktoré sú vylučované T lymfocytmi, NK bunkami (prirodzené zabíjačské bunky) a makrofágami.
Tieto výsledky boli potvrdené ďalšími, skoršími štúdiami, ktoré dokázali, že cytotoxické T lymfocyty triedy I sú schopné inhibovať hepatocelulárnu expresiu génov HBV v HBV - transgénnej myši, a že k tomuto procesu dochádza bez akejkoľvek deštrukcie pečeňových buniek, a že tento proces bol vyvolaný IFN-γ a TNF-cc2).
Produkt na indukciu „parašpecifickej imunity“, t.j. induktor paraimunity, bol používaný terapeuticky, metafylakticky a profylaktický vo veterinárnej praxi už po relatívne dlhú dobu. Induktory paraimunity sú tvorené napr. chemicky inaktivovaným kmeňom D 1701 Parapoxvirus ovis (DE 3 504 940). BAYPAMUN je produkt, ktorý je pripravený na báze tohto vírusu (Parapoxvirus ovis, kmeň D 1701).
U zvierat inaktivovaný parapoxvirus indukuje nešpecifickú ochranu proti infekcii spôsobovanej širokým spektrom patogénov. Predpokladá sa, že táto ochrana je sprostredkovaná rôznymi mechanizmami tvoriacimi časť endogénneho obranného systému.
Tieto mechanizmy zahŕňajú indukciu interferónu, aktiváciu NK buniek, indukciu „aktivity stimulujúcej kolónie“ (CSA), a stimuláciu proliferácie lymfocytov. Skoršie výskumy mechanizmov pôsobenia dokázali stimulačný účinok interleukínu 2 a interferónu-a3).
PP 0036-2003
32054/H
Na základe vyššie uvedených faktov je zrejmá potreba ďalšieho zlepšenia terapeutického využitia vynikajúcich účinkov Parapoxvirus ovis, aby došlo ku kvalitatívnemu zvýšeniu popísanej generalizovanej indukcie parašpecifickej imunitnej reakcie pomocou Parapoxvirus ovis, kmeň D 1701, a ďalej takého zlepšenia, ktoré by umožnilo dosiahnuť lepšie antivírusové alebo antitumorové účinky pri použití nižších dávok. Terapeutické účinky by taktiež mali mať menej vedľajších neželaných účinkov.
Predmetom vynálezu je teda zlepšenie imunologického účinku Parapoxvírusu. Tento cieľ sa dosiahol použitím kmeňov Parapoxvirus ovis popísaných vo vynáleze namiesto doteraz zvyčajne užívaného kmeňa D 1701.
Podstata vynálezu
Predkladaný vynález sa týka použitia vírusov, ktoré patria taxonomicky k jednému z kmeňov Parapoxvirus ovis NZ2, NZ-7, NZ-10 alebo orf-11 na výrobu liekov proti vírusovým infekciám a karcinómu u ľudí a zvierat.
Vynález sa okrem toho týka použitia potomstva kmeňov podľa vynálezu, ktorého potomstvo je získané pasážovaním, alebo adaptáciou na vhodný bunkový systém, napríklad humánne bunky, ako sú napr. WI-38, MRC-5, opičie bunky ako sú napr. Vero bunky, bovínne (hovädzie) bunky, ako sú napr. BKKI3A47/Reg alebo MDBK, a ovčie bunky ako sú napr. MDOK, na výrobu liekov proti vírusovým infekciám a karcinómu u ľudí a zvierat, a ďalej sa týka taktiež použitia častí, alebo fragmentov týchto kmeňov, a ich pasážovaných a adaptovaných variantov, keď sa časťami rozumejú genómové alebo subgenómové fragmenty, ktoré sú exprimované vo vhodných vektoroch, ako je vírus vakcínie, vo vhodných systémoch, ako je napr. kultúra fibroblastových buniek, a fragmentárni sa rozumejú frakcie, ktoré sú získané biochemickou purifikáciou, ako je napr. chromatografia exprimovaných alebo fyzikálne rozrušených vírusových častíc, na výrobu liekov proti vírusovým infekciám a karcinómu u ľudí a zvierat, a týka sa taktiež použitia jedného z kmeňov Parapoxvirus ovis, a jeho derivátov získaných ako bolo popísané vyššie, na výrobu liekov a farmaceutických prípravkov, ako imunoterapeutických
PP 0036-2003
32054/H r ,- r r prípravkov, alebo imunoprofylaktických činidiel pre autoimúnne ochorenia a pre akútne a chronické vírusové infekcie respiračného traktu a vnútorných orgánov a týka sa aj použitia jedného z kmeňov a jeho derivátov na výrobu liekov a farmaceutických prípravkov pre stresovú metafylaxiu a pre prevenciu alebo odvrátenie infekčných ochorení inasledujúcich po strese, a taktiež v spojení s profylaxiou infekcie v spojení s operáciami a dentálnych intervencií, a týka sa taktiež použití jedného z kmeňov, a z neho pochádzajúcich derivátov, na výrobu liekov a farmaceutických prípravkov na metafylaxiu alebo terapiu akútnej a chronickej vírusovej infekcie, napríklad respiračného traktu, infekcie papilloma vírusu, infekcie vírusmi herpetických skupín, infekcie HIV alebo vírusovej infekcie vnútorných orgánov, ako je napr. infekcia vírusmi hepatitídy, a taktiež použitia v spojení s ochorením ako je napr. sclerosis multiplex, astma, bradavice a iné novotvary kože, a týka sa taktiež použitia jedného z kmeňov, a jeho derivátov, na výrobu liekov a farmaceutických prípravkov na použitie na liečenie zranení, na urýchlenie procesu hojenia rán, a použitia na podporu hojenia rán, ktoré sa hoja iba veľmi zle, alebo sa nehoja vôbec, ako je napr. vred predkolenia, a týka sa taktiež použitia jedného z kmeňov, a jeho derivátov, na výrobu liekov a farmaceutických prípravkov na použitie pri liečení ochorení z celého spektra alergických ochorení, psoriázy, neurodermatitídy a iných autoimúnnych ochorení, ako je napr. lupus erythematodes, a taktiež na zlepšenie stavu, napríklad u starých pacientov, a týka sa taktiež použitia jedného z kmeňov, a jeho derivátov, na výrobu liekov a farmaceutických prípravkov na použitie pri liečení zápalových, degeneratívnych a proliferatívnych ochorení vnútorných orgánov, ako je napríklad Crohnova choroba, ochorenia kože, krvi, centrálneho nervového systému a s ním spojených štruktúr, vrátane oka, a taktiež karcinómu a týka sa taktiež použitia jedného z kmeňov a jeho derivátov, v kombinácii s inými liečivami, na výrobu liekov a farmaceutických prípravkov na antivirusovú terapiu alebo terapiu karcinómov u ľudí a zvierat.
Vynález sa výhodne týka použitia jedného z kmeňov Parapoxvírus ovis v kombinácii s inými liečivami na výrobu liekov a farmaceutických prípravkov
PP 0036-2003
32054/H r η určených na perorálne podávanie, a/alebo prípravkov na perorálne podávanie v liekovej forme rezistentných voči žalúdočným šťavám (enterosolventnej forme).
Kmeň NZ-2 Parapoxvirus ovis uvedený tu ako príklad, bol uložený 10. Júla 2001 v Európskej zbierke bunkových kultúr (European Collectíon Ceel Cultures, Centre for Applied Microbiology and Research, Porton Down, Salisbury, Wiltshire, SP4 OJG, Británia) pod číslom ECACC-01071006.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Ukážka terapeutickej aktivity na systéme transgénnej myši s vírusom hepatitídy B
Transgénne myši s vírusom hepatitídy B (kmeň HBV 1.3 X'tg) boli použité na základný experiment na preukázanie správnosti koncepcie. 7 samcov vo veku 8 až 10 týždňov bolo použitých v každej skupine. Rôzne dávky boli podané intraperitoneálne v objeme 0,15 ml 1. deň (začiatok experimentu) a 4. deň.
Na podávanie boli pripravené nasledujúce riedenia každého vírusového kmeňa pre jednotlivé dávkové skupiny:
1. dávka 1,5 x 106 TCID50
2. dávka 5x105TCID50
3. dávka 1,5 x 105 TCID50
4. dávka 5x104TCID5o
Ako placebo kontrola bol použitý sterilný apyrogénny PBS.
Vírusy boli koncentrované nasledujúcim spôsobom: 500 ml supernatantu získaného z kmeňov Parapoxvirus ovis NZ2 (titer približne 2 x 105
PP 0036-2003
32054/H
TCIDso/ml) a kmeňa Parapoxvirus ovis D 1701 (titer približne 2 x 107 TCID50/ml) boli upravené na rovnaký titer vírusu. Na to bola použitá ultracentrifúga Beckman (SW8 rotor, 28000 RPM, 4°C po dobu 3 hodín). Po centrifugácii boli pelety upravené na titer 1 x 107 TCID50/ml použitím vhodného objemu riediaceho média.
Alikvóty zodpovedajúce dávkam boli použité na overenie spätnou titráciou, ktorá potvrdila titre týchto dávok. Po verifikácii boli odobrané alikvóty a zodpovedajúce dávky boli inaktivované v 56 °C po dobu 1 hodiny.
Riediace médium: 10mlEMEM10x
2,7 ml hydrogénuhličitanu, 2g/l ml % glutamínu
86,3 ml vody dvakrát destilovanej
5. deň boli zvieratá bezbolestne utratené a bola vybratá pečeň a odobratá krv. Približne 20 mg pečene z každého zvieraťa bolo spracovaných pomocou súpravy na izoláciu DNA z tkanív QIAamp (Qiagen, Hilden) a koncentrácia DNA bola stanovaná fotometrický, zatiaľ čo integrita DNA bola overená elektroforézou na 1 % agarózovom géle. DNA bola hybridizovaná s HBV-špecifickou sondou v systéme „dot blot“ hybridizácie. DNA bola ešte predtým podrobená pôsobeniu RNázy (Qiagen, Hilden), aby sa vylúčila kontaminácia signálu spôsobená RNA. 200 pl DNA (10 pg) bolo nanesených na nylonovú membránu (Boehringer Mannheim) a podrobených 4 x pôsobeniu, vždy na 3 minúty, roztoku Soak I (0,5N NaOH, 1M NaCI) a dvakrát Soak II (3M NaCI, 0,5M Tris-HCI, pH 7,4), DNA potom bola tepelne fixovaná v 120 °C pol hodiny a potom prehybridizovaná v 60 °C po dobu 30 minút, v štandardnom hybridizačnom pufre (5xSSC, N-lauroylsarkozín, 0,1% (hmot./obj.) SDS, 0,02% 1x blokovacie činidlo a 100 pg DNA z rybieho sperma/ml) bez sondy. V nasledujúcom kroku bola DNA hybridizovaná so sondou obsahujúcou celý HBV genóm (20-40 ng/ml hybridizačného pufru) značenou náhodnými
PP 0036-2003
32054/H f 8 oligonukleotidovými primérmi. Potom bol filter premývaný v 64 °C po dobu 10 minút v4xSSC/0,1% SDS, potom v2xSSC/0,1% SDS a nakoniec v 1xSSC/0,1% SDS.
Imunologická detekcia bola uskutočnená použitím systému CDP-Star (od firmy Boehringer Mannheim) podľa návodu výrobcu. Zariadenie Lumilmager (Boehringer Mannheim) bolo použité na vyhodnotenie. HBV-špecifická DNA v krvi bola kvantifikovaná pomocou kvantitatívnej PCR (polymerázovej reťazovej reakcie). Plazma bola najskôr izolovaná použitím súpravy HighPure 16 Systém Viral Nucleic Acid Kit (Boehringer Mannheim) a ďalej analyzovaná kvantitatívne pomocou PCR a ďalej vyšetrená pomocou detekčného zariadenia ABI PRISM 7700 Sequence Detection System (PE Applied Biosystems) na HBV-špecifické signály. Pri tom boli použité nasledujúce príméry:
ayw-570f (sense): 5'- CTGTACCAAACCTTCGGACGG - 3 a ayw-670r (antisense): 5'- AGGAGAAACGGGCTGAGGC - 3 a sonda:
ayw-613t: 5'- CCATCATCCTGGGCTTTCGGAAAATT - 3'.
DNA bola implifikovaná v reakcii s objemom 50 μΙ (reakcia obsahovala 1,4 mM každého zdNTP, 4,75 mM MgCI2, 15 pmol každého z primérov a sondu, 5 μΙ 10x PCR pufru [všetky reagencie pre PCR boli zo súpravy TaqMan od firmy Perkin Elmer/Roche Molecular Systems, Inc.] a 1,25 UTaq DNA polymerázy a 0,25 U Amp Erase. Po počiatočnom denaturačnom kroku (10 minút v 95 °C) boli vzorky podrobené 40 cyklom denaturácie (95 °C, 30 sekúnd) a nasadnutí primérov / predlžovanie reťazca (56 °C, minúta). Produkty boli analyzované pomocou štandardného Software ABI PRISM 7700 Sequence Detection System.
Histochemická analýza bola uskutočnená s použitím protilátky proti jadrovému antigénu vírusu hepatitídy B (Dáko). Na tento účel bol jeden pečeňový lalok fixovaný cez noc v 4 % formaldehyde, zaliaty do parafínu
PP 0036-2003
32054/H r · tl · a narezaný (5 μιτι). Po odstránení parafínu a rehydratácii bola endogénna peroxidázová aktivita zastavená na 20 minút aplikáciou 3 % H2O2. Nešpecifická väzba bola blokovaná normálnym ovčím sérom. Rezy boli potom inkubované pri teplote miestnosti po dobu 30 minút s protilátkou, ktorá bola nariedená 1:500. Všetky nasledujúce kroky boli uskutočnené použitím súpravy Vectastain ABC (Vector Laboratories) podľa inštrukcií výrobcu.
Imunitná reakcia bola vizualizovaná pomocou tetrachloridu 3,3'diaminobenzidínu a peroxidu vodíka. Rezy boli kontrastne farbené hematoxylínom / eozínom.
Výsledky boli štatisticky analyzované pomocou analýzy odchýliek a post hoc porovnaním.
Na záver sa dá zhrnúť, že bolo prekvapivo zistené, že keď bol použitý kmeň NZ2, dosiahol sa zosilnený antivírusový účinok, v porovnaní so známym Parapoxvirus ovis kmeňom D 1701. To umožňuje po prvý krát použitie Parapoxvirus ovis na vyvolanie komplexnej účinnosti imunitného systému s intenzitou, ktorá sa významne odlišuje od intenzity účinku dosiahnutého skôr známymi paraimunitnými induktormi.
Získali sa nasledujúce prekvapivé výsledky.
V pečeni - významne vyššia redukcia HBV - špecifická DNA bola pozorovaná u zvierat podrobených pôsobeniu NZ2 v porovnaní so zvieratami podrobenými pôsobeniu D 1701. Antivírusová aktivita NZ2 bola silnejšia ako u D 1701: v skupine s najvyššou dávkou podávania NZ2 redukovalo HBVšpecifickú DNA viac ako 45 krát účinnejšie ako podávanie rovnakých dávok D 1701, zatiaľ čo v skupine s najnižšou dávkou redukovalo dokonca 57 krát účinnejšie.
V plazme - podávanie NZ2 redukovalo HBV-špecifickú DNA, v skupine s najnižšou dávkou redukovalo 10 krát účinnejšie ako podávanie rovnakých
PP 0036-2003
32054/H dávok D 1701. Tým sa dokázalo, že terapeutická účinnosť kmeňa NZ2 Parapoxvirus ovis\e významne vyššia ako u kmeňa D 1701.
Na pripojených obrázkoch je ukázaná redukcia HBV-špecifického signálu v porovnaní s placebo skupinou (tá zodpovedá 100 %).
Obr. 1 ukazuje výsledky liečenia HBV-transgénnej myši použitím kmeňa D 1701 alebo kmeňa NZ2. Zatiaľ čo HBV-špecifická DNA je významne redukovaná v pečeni, vzhľadom k placebo skupine, vo všetkých dávkových skupinách bola redukcia vždy väčšia, keď bol použitý kmeň NZ2 v porovnaní s kmeňom D 1701. Pri najnižších dávkach NZ2 je redukcia HBV-špecifickej DNA významne vyššia ako v prípade ekvivalentnej dávkovej skupiny D 1701.
Obr. 2 ukazuje výsledky získané z plazmy, liečenia HBV-transgénnych myší liečených kmeňom D 1701 alebo kmeňom NZ2. Zatiaľ čo HBV-špecifická DNA je významne redukovaná v plazme, vzhľadom k placebo skupine, vo všetkých dávkových skupinách bola redukcia vždy väčšia, keď bol použitý kmeň NZ2 v porovnaní s kmeňom D 1701. Na rozdiel od najnižšej dávky kmeňa NZ2 najnižšia dávka kmeňa D 1701 už nemala významný antivírusový účinok.
Príklad 2
Indukcia cytokínov
Na experiment boli použité 7 až 8 týždňov staré samice myší Balb/c chované v sterilných podmienkach. Zvieratá boli náhodne rozdelené do skupín, každá po 6 zvieratách. Aplikovaná bola nasledujúca liečebná schéma:
Skupina 1: Placebo
Skupina 2: Parapoxvirus ovis kmeň D 1701,5x104 TCIS5o/dávka
Skupina 3: Parapoxvirus ovis kmeň NZ2, 5x104 TCIS50/dávka
Skupina 4: Placebo
PP 0036-2003
32054/H r r
Skupina 5: Parapoxvirus ovis kmeň D 1701, 5x104 TCISso/dávka
Skupina 6: Parapoxvirus ovis kmeň NZ2, 5x104 TCISso/dávka
Podávaný objem bol 10 ml/kg, pričom dávky boli podávané intraperitoneálne.
Zvieratá v skupinách 1 až 3 boli utratené 6 hodín po podaní, zatiaľ čo zvieratá zo skupín 4 až 6 boli utratené 12 hodín po podaní, peritoneálne bunky sa získali pomocou výplachu ľadovo chladným PBS, a ďalej boli izolované vrátnicové a mezenterické lymfatické uzliny.
Peritoneálne bunky boli komcentrované pomocou centrifugácie (5 minút pri 3000 ot./min. (rpm) a teplote miestnosti v stolnej centrifúge pre Eppendorf skúmavky) a potom boli prenesené do 0,2 ml lyzovacieho pufru (lyzovací roztok: 25 mM citrát sodný, 4 M guanidíniumizotiokyanát, 0,5 % Nlauroylsarkozín), bleskovo zamrazené a uložené v -75°C, pokým neboli použité na prípravu RNA.
Celková RNA bola pripravená kyslou fenol / chloroformovou extrakciou. Vzorky, ktoré boli zmrazené v lyzovacom pufre sa nechali roztopiť pri teplote miestnosti a na extrakciu boli podrobené pôsobeniu nasledujúcich roztokov: 1/10 objemu lyzovacieho pufru 2 M acetát sodný (pH 4,0), 1 objem lyzovacieho pufru vodou saturovaný fenol a 1/5 objemu lyzovacieho pufru chloroform: izoamylalkohol (24:1). Tieto zložky sa miešali na vortexe po dobu 10 sekúnd schladené na konštantnú teplotu po dobu 10 minút na ľade. Fázy boli oddelené centrifugáciou pri 15365 g v 4 °C po 30 minút. Potom bola vodná fáza prenesená do novej kyvety a pridalo sa 8 ml RNA-MATRIX zo súpravy Rnaid Plus (DIANOVA) na izoláciu RNA prítomnej v tejto fáze, a všetko bolo inkubované pri teplote miestnosti po dobu 15 minút. Výsledný komplex RNA/RNA-MATRIX bol peletovaný centrifugáciou pri 7000 g a supernatant bol odstránený. Pelety boli potom dvakrát premyté, vždy 250 ml RNA-WASH (DIANOVA) a po poslednom premytí boli usušené centrifugáciou vo vákuu. RNA bola eluovaná pridaním 20 až 30 ml destilovanej vody bez Rnázy,
PP 0036-2003
32054/H a zahrievaním na teplotu 55 °C po dobu 15 minút. Po centrifugácii pri 7000 g v teplote miestnosti po dobu 1 minúty bola matrica odstránená prenesením RNA roztoku do novej kyvety.
Kvalita RNA bola overená gélovou elektroforézou. RNA bola uložená v 70 °C.
cDNA bola syntetizovaná reverznou transkripciou mRNA s použitím oligo (dT) priméru ako východnej molekuly pre polymerizáciu. V reakčnej zmesi pre syntézu boli prítomné nasledujúce zložky: 200 pg celkovej RNA, 2 μΙ M-MLC reverznej transkriptázy (200 U/ μΙΙ) (GIBCO/BRL), 8 μΙ zodpovedajúceho 5xRT pufru (GIBCO/BRL), 1 μΙ DDT (0,1 M) (GIBCO/BRL), 4 μΙ dNTP (2,5 mM) (SIGMA), 2 μΙ oligo (dT)12-18 primérov (100 pg/ml) (PROMEGA), 1 μΙ inhibítorov Rnázy z humánnej placenty (10000 U/ml) (GIBCO/BRL) a vodu do 40 μΙ celkového objemu. Zmes bola udržovaná pri teplote miestnosti po dobu 10 minút a potom inkubovaná v 37 °C po dobu 45 minút, potom bola zahrievaná v 95 °C po dobu 3 minút a okamžite ochladená na ľade. Takto syntetizovaná cDNA bola uložená v -20 °C.
Kvantita cDNA bola štandardizovaná pomocou bazálneho „housekeeping“ génu (β-aktín). Kvantitatívna PCR bola uskutočnená použitím zariadenia ABI PRISM 7700 Sequence Detection System (PE Applied Biosystems). Boli použité nasledujúce priméry:
β-aktín sense:
antisense:
IFN-γ sense:
antisense:
TNF-α sense:
antisense:
5'-TGG AAT CCT GTG GCA TCC ATG AAA C-3'
5'-TAA AAC GCA GCT CAG TAA CAG TCC G-3
5'-AGC GGC TGA CTG AAC TCA GAT TGT AG-3
5'-GTC-ACA GTT TTC AGC TGT ATA GGG-3'
5'-GGC AGG TCT ACT TTG GAG TCA TTG C-3'
5'-ACA TTC GAG GCT CCA GTG AAT TCG G-3'
PP 0036-2003
32054/H
IL-15 sense: 5'-GCC AAC TGG ATA GAT GTA AGA TAT GAC CT-3' antisense: 5'-CGT GTT GAT GAA CAT TTG GAC AAT GCG TAT-3'
DNA bola implifikovaná v reakcii s objemom 25 μΙ (reakcia obsahoval 1,4 mM každého z dNTP, 4 mM MgCI2, 0,3 μη-ιοΙ každého z primérov a sondy, 2,5 μΙ 10X PCR pufru obsahujúceho SYBR Green [všetky PCR reagencie boli zo súpravy SYBR Green PCR Core Reagencie Kit, Perkin Elmer/Roche Molecular Systems, Inc.] a 1,25 U Taq DNA polymerázy a 0,25 U Amp Erase. Po počiatočnom denaturačnom kroku (95 °C po dobu 10 minút) boli vzorky podrobené 40 cyklom denaturácie (95 °C, 30 s) a nasadnutí / predlžovaní (60 °C, 1,30 minúty). Produkty boli analyzované použitím Software ABI PRISM 7700 Sequence Detection System a výsledky boli analyzované štatisticky pomocou analýzy odchýliek a porovnaním post hoc.
Získali sa nasledujúce prekvapivé výsledky:
1. Po podávaní kmeňa D 1701 alebo kmeňa NZ2 je indukovaná expresia intefrerónu y ako o 6 tak aj o 12 hodine po podaní (viď. obr. 3). V prípade kmeňa NZ2 je táto indukcia významne vyššia ako v porovnaní s placebom tak aj v porovnaní s kmeňom D 1701. Miera expresie interferónu y ktorá je pozorovaná po podávaní D 1701 nie je významne odlišná od placebo kontroly. Obrázok ukazuje hodnoty, ktoré boli namerané nabunkách získaných peritoneálnym výplachom.
2. Po podávaní kmeňa D 1701 bola expresia TNF indukovaná 12 hodín po podávaní, zatiaľ čo po podávaní kmeňa NZ2 bola indukovaná 6 a 12 hodín (pričom o 12. hodine je možné pozorovať zvýšenie v porovnaní s hodnotou o 6 hodine, viď. obr. 4). V prípade kmeňa NZ2 bola indukcia o 6 hodine po podaní významne vyššia ako indukcia pozorovaná v prípade kmeňa D 1701. Obrázok ukazuje hodnoty, ktoré boli namerané na bunkách získaných peritoneálnym výplachom.
PP 0036-2003
32054/H
3. Po podávaní kmeňa D 1701 alebo kmeňa NZ2 bola expresia IL15 indukovaná ako o 6 tak aj o 12 hodine po podaní (viď. obr. 5). V prípade kmeňa NZ2, táto indukcia bola významne väčšia ako o 6 hodine po podaní, ako v prípade kmeňa D 1701, alebo placeba. Hladina expresie IL-15, ktorá bola pozorovaná po podávaní D 1701 nebola významne vyššia ako hladina pozorovaná u placebo kontroly. Obrázok ukazuje hodnoty, ktoré boli namerané na bunkách získaných z peritoneálneho výplachu.
Príklad 3
Demonštrácia terapeutickej účinnosti na nádoroch u „nahých“ myší
Bunky MDA-MB231 (ATCC#HTB26) boli pestované pri 37 °C a za prítomnosti 5 % CO2 v kompletnom médiu (885 DMEM, 10 % FBS, 1% penicilín / streptomycín, 1 % L-glutamín (všetko od firmy Gibco Life Technologies)) v inkubátore. V deň transplantácie dosiahli bunky približne 70 % konfluencie. Bunky boli trypsinizované, premyté HBSS, počítané a nastavené na 2,5 x 107 buniek / ml s použitím vychladeného PBS. Použili sa samice nahých myší NCr (Taconic) vo veku 8 až 10 týždňov a hmotnosťou približne 22 g. Všetky manipulácie so zvieratami boli uskutočňované v sterilných podmienkach. 5 x 106 buniek v celkovom objeme 0,2 ml bolo injikovaných subkutánne do boku. Potom boli myši držané ďalších sedem dní pokým nádory nedosiahli priemernú hmotnosť približne 80 mg. Nádory boli zmerané a myši boli rozdelené náhodne na tri skupiny v každej po 10 zvieratách. Potom bolo jednotlivým skupinám podané:
Skupina 1: Placebo (PBS)
Skupina 2: Parapoxvirus ovis kmeň D 1701
Skupina 3: Parapoxvirus ovis kmeň NZ2
D 1701 bol podaný v dávke 2,5x105 TCID50, zatiaľ čo NZ2 bol podaný v dávke 1x105 TCID50, pričom tieto dávky boli v každom prípade podané
PP 0036-2003
32054/H štyrikrát v intervale troch dní. Nádory boli merané dvakrát týždenne. Významnosť rozdielov bola stanovená Študentovým testom.
Obr. 6 ukazuje priemerné veľkosti nádorov (v miligramoch) u zvierat patriacich do skupiny 1 až 3 po celé experimentálne obdobie (v dňoch). (Použité symboly: skupina 1 - krúžky, skupina 2 - trojuholníčky, skupina 4 štvorčeky).
Prekvapivo bolo zistené, že protinádorová aktivita, ktorá bola štatisticky významná (p<0,05) pri porovnaní s kontrolnou skupinou, bola nájdená v experimentálnom systéme. Kmeň NZ2 bol z tohto hľadiska významne účinnejší ako kmeň D 1701. Na dosiahnutie rovnakého účinku bola potrebná iba približne polovičná dávka NZ2, oproti D 1701
Toto zistenie poskytlo jasné opodstatnenie terapeutickej účinnosti vírusového prípravku podľa predkladaného vynálezu u nahých myší s nádorom.
Nahé myši sú imunodeficientné a nemajú funkčné žiadne T lymfocyty. V tomto experimentálnom systéme je aktivita namierená proti nádorom zrejme sprostredkovaná prirodzenými zabíjačskými (NK) bunkami, inými typmi buniek a priamym účinkom cytokínov / chemokínov. Lepšia účinnosť NZ2 by podľa očakávania bola ešte lepšie preukázateľná v prípade imunitného systému, ktorý by bol kompletný a inaktný.
Príklad 4
Ďalšie biologické rozdiely medzi NZ2 a D 1701
Bolo zistené, že na rozdiel od kmeňa D 1701, Parapoxvirus kmeňa NZ2 môže byť kontinuálne pasážovaný (prenášaný a kultivovaný) na humánnej bunkovej línii. To poukazuje na zásadné rozdiely medzi NZ2 a D 1701 v replikačnom chovaní a/alebo vo vírusových receptoroch.
Adaptácia na humánne bunkové línie je dôležitým predpokladom na produkciu vírusových kmeňov pomocou humánnej bunkovej línie.
PP 0036-2003
32054/H r r
4a. Schopnosť kontinuálneho pasážovania na humánnych bunkách MRC-5
Obr. 7 ukazuje pokus o adaptáciu kmeňov NZ2 a D 1701 na humánnu diploidnú bunkovú líniu MRC-5. MRC-5 je vhodná línia na produkciu biologicky aktívnych zlúčenín a vakcín. Pre oba kmene bol použitý rovnaký počiatočný titer a zodpovedajúce šupernatanty z kultúr pokračovali po 5 pasážach na MRC-5 bunkách. Obrázok ukazuje titer , vTCID50, vzoriek supernatantov z buniek MRC-5, ktoré boli infikované, vynesený do grafu proti počtu uskutočnených pasáží. Iba kmeň NZ2, a nie kmeň D 1701, bol spätne titrovateľný na kultúru bovínnych ľadvinových buniek (BK kloň 3a). To zdôrazňuje zásadnú biologickú odlišnosť týchto dvoch kmeňov v infekčnom a replikačnom chovaní. Tento výsledok súčasne ukazuje, že kmeň NZ2 môže byť replikovaný na širšom hostiteľskom spektre buniek ako kmeň D 1701, čo umožňuje produkčný postup s využitím humánnych buniek.
4b. Schopnosť NZ2 a D 1701 prenosu na bunky WI-38 a BK kloň 3a
Základné biologické odlišnosti medzi kmeňmi NZ2 a D 1701 boli taktiež jasne preukázané pomocou experimentov znázornených na obr. 8 a 9.
Obr. 9 ukazuje titer vírusu získaný v pokuse o pasážovanie D 1701 na bovínne bunky BK kloň 3a a na humánne bunky WI-38, vynesený do grafu proti počtu pasáží. Je vidieť, že D 1701 môže byť kontinuálne pasážovaný na bunkách BK kloň 3a, ale nie na humánnych bunkách WI-38.
Situácia je však celkom odlišná pre kmeň NZ2. Tento kmeň môže byť pasážovaný kontinuálne niekoľko dní ako na bunkách BK kloň 3a tak aj na bunkách WI-38 (viď. obr. 9).
Tieto výsledky taktiež zdôrazňujú významné rozdiely v infekčnom a replikačnom chovaní NZ2 a D 1701.
4c. Účinok NZ2 závislý na dávke v provokačnom teste herpesvírusom nasledujúci po pasážovaní na WI-38.
PP 0036-2003
32054/H r r
Provokačný test herpesvírusom bol uskutočnený na myši, aby sa vyšetrili imunostimulačné vlastnosti kmeňa NZ2, ktorý bol pasážovaný na bunkých WI38. Tri skupiny po 10 zvieratách bolí podrobené pôsobeniu 1 x 104 TCID50, 5 x 104 TCID50 a 1 x 105 TCID50, v danom poradí, zatiaľ čo kontrolná skupina dostala placebo.
Obrázok 10 ukazuje mieru prežitia u týchto štyroch experimentálnych skupín v čase po infekcii herpesvírusom. Prekvapivo sa zistilo, že NZ2 nestratil svoje imunostimulačné vlastnosti ani po pasážovaní na humánnych bunkách WI-38.
Všetky výsledky experimentov v tomto príklade zdôraznili zásadné biologické rozdiely v infekčnom a replikačnom chovaní medzi kmeňmi NZ2 a D 1701. Prekvapivo sa zistilo, že na rozdiel od kmeňa D 1701, prípravok obsahujúci kmeň NZ2 na použitie ako imunomodulátor nie je viazaný na použitie bovínnych ľadvinových buniek ako produkčnej bunkovej línie.
Na základe známych okolností vplyvu Th1 imunitnej reakcie na latentnú chronickú perzistentnú vírusovú infekciu4,51 a taktiež proliferatívne ochorenia, napr. rakovinu8,91, a skutočnosti, že imunomodulačné vlastnosti Parapoxvirus ovis kmeňa NZ2 sú lepšie ako vlastnosti kmeňa Parapoxvirus ovis D 1701, použitie imunomodulačných prípravkov založených na Parapoxvirus ovis kmeňa NZ2 alebo jednom z kmeňov uvedených v popise pre monoterapiu alebo v kombinácii s biologicky aktívnou, napr. antivírusovou alebo inou nízkomolekulárnou zlúčeninou, je možné u ľudí aj u zvierat. Takéto prípravky sú užitočné pri liečení infekcií vírusom hepatitídy B alebo hepatitídy C .alebo ktorýmkoľvek iným patogénom zo skupiny obsahujúcej vírusy hepatitídy, vírusy spôsobujúce vírusové infekcie vnútorných orgánov, infekcie sprevádzajúce iné ochorenia, a taktiež rôzne typy vírusov Herpes simplex (HSV), rôzne typy humánneho papillomavírusu (HPV), vírusu humánnej imunodeficiencie (HIV), vírusu Varicella zoster, humánneho cytomegalovírusu (HCMV), a taktiež zodpovedajúcich vírusov ochorení zvierat.
PP 0036-2003
32054/H .· Γ
A ďalej, na základe mechanizmu účinku, ktorý bol preukázaný vyššie, popísané kmene Parapoxvirus ovis môžu byť použité s určitou vyhliadkou na úspech, pri profylaktickom alebo terapeutickom vyšetrení, konkrétne:
Prevencia opakujúcich sa herpesvírusových infekcií, metafylaxia, t.j. prevencia vzniku vírusovej infekcie (napr. HIV), keď je liečenie prípravkom zahájené okamžite po expozícii7). Na základe mechanizmu účinku je podobne možné použitie aj pri liečení rakoviny8,9).
V závislosti na povahe klinického problému, je terapeutický prípravok založený na parapoxvíruse podávaný buďto systémovo, napríklad intramuskulárne, subkutánne, intraperitoneálne, intravenózne alebo perorálne, alebo lokálne. V prípravku je parapoxvirus prítomný v purifikovanom a lyofilizovanom stave a/alebo je resuspendovaný vo vhodnom rozpúšťadle bezprostredne pred použitím, alebo je prítomný v inej vhodnej formulácii alebo je prítomný v enterosolventnej liekovej forme (t.j. forme odolnej žalúdočným šťavám) alebo inej forme vhodnej pre perorálne podávanie.
Vhodné prípravky môžu byť taktiež pripravené z potomstva NZ2, ktoré sa získa pomocou pasážovania a/alebo adaptácie na konkrétne bunky, napríklad bunky WI-38, MRC-5 aleb Vero, a taktiež z ďalších vyššie spomínaných kmeňov, alebo častí, alebo fragmentov NZ2 a ďalších vyššie spomínaných kmeňov a alebo ich potomstva. Časti sa pritom rozumejú genómové alebo subgenómové fragmenty, ktoré sú exprimované pomocou vhodných vektorov, napríklad vakcínie, vo vhodných systémoch, napríklad fibroblastových bunkových kultúrach, a fragmentárni sa rozumejú frakcie, ktoré sú získané biochemickou purifikáciou, napríklad pomocou chromografie z častíc, ktoré sú rozrušené fyzikálne, napríklad pomocou ultrazvuku.
V tejto súvislosti je potrebné uviesť, že viacnásobné podávanie alebo dlhodobé liečenie v súlade s dlhodobou liečebnou schémou podľa potreby liečeného klinického problému môže byť prípadne nevyhnutné.
PP 0036-2003
32054/H r r.
·’ C ·
Teda použitie v súlade s nasledujúcou konkrétnou schémou sa ukázalo byť sľubné v prípade liečenia rakoviny, napríklad (ale bez akéhokoľvek obmedzenia):
Intramuskulárne podávanie 106 až 107 TCID50 (infekčná dávka pre tkanivovú kultúru) jeden krát za tri dni po dobu 4 týždňov, potom nasledovala prestávka 2 týždne, potom obnovené intramuskulárne podávanie 106 až 107 TCID50 jeden krát za tri dni po dobu 4 týždňov, potom opäť prestávka 2 týždne a v závislosti na závažnosti ochorenia a úspechu terapie môžu byť tieto cykly ďalej doplnené ďalšími cyklami, alternatívne môže byť použitá schéma, keď je prípravok podávaný jedenkrát za 4 až 5 dní po dobu 3 mesiacov.
Tak napríklad v prípade chronickej vírusovej infekcie je dávka 106 až 107 TCID50 podávaná subkutánne v brušnej krajine, alebo intramuskulárne do deltovitého svalu, alebo štvorhlavého svalu, a síce jedenkrát za 3 dni, celkom 5 krát. Je možné sa od tejto schémy odchýliť v závislosti na potrebe vyvolanej chorobou. Pri profylaxii chorôb z prechladnutia môže byť prípravok použitý na kloktanie, ktoré sa má opakovať denne tak dlho, pokým je nebezpečenstvo vzniku choroby.
Na prevenciu infekcií nasledujúcich po chirurgických zákrokoch v ústnej dutine (napr. dentálne operácie) sa má kloktanie prípravkom uskutočňovať po dobu 1 až 2 minút večer pred zákrokom.
PP 0036-2003
32054/H
Odkazy na použitú literatúru:
1. Guidotti, L.G., Borrow, P., Hobbs, m.V., Matzke, B., Gresser, I., Oldstone, M.B.A., and Chisari, F.V. (1996): Viral cross talk: Intercellular inactivation of the hepatitis B vírus during an unrelated viral infection of the liver. proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93.4589-4594.
2. Guidotti, L.G., Ando, K., Hobbs, m.V., Ishikawa, T., Runkel, L., Schreiber, R.D., and Chisari, F.V. (1994): CytotoxicT lymphocytes inhibit hepatitis B virus gene expression by a noncytolytic mechanism in transgenic mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 91:3764-3768.
3. Steinmassl, G., G.Wolf (1990): Bildung von Interleukin 2 und Interferondurch mononukleäre Leukozyten des Schweines nach in vitroStimulation mit verschiedenen Viruspräparaten (Formation of interleukin 2 and interferon by pig mononuclear leukocytes following in-vitro stimulation with various virus preparations). J.Vet.Med. B37,5,321-331.
4. P.Lucin, S. Jonjic, M. Messerle, B. Polic, H. Hengel, U.H. Koszinowski (1994): Late-Phase inhibition of murine cytomegalovirus replication by synergistic action of interferon gamma and tumor necrosis factor alpha. J. Gen. Virol 75:101-110; P.M.
5. Smith, R.M. Wolcott, R. Chervenak, S.R. Jennings (1994): Control of acute cutaneous herpes-simplex virus-lnfection - Τ-cell mediated viral clearance is dependent úpon interferon gamma. Virology 202 (1):76-88].
6. Y.Kawanashi, N.Hayashi, K.Katayama, K. Ueda, T. Takehara, E. Miyoshi, E. Mita, A. Kasahara, H. Fusamoto, T. Kamada (1995): Tumor necrosis factor alpha and interferon gamma inhibit synergistically viral replication in hepatitis B virus replicating cells. J. Medical Virology 47 (3):272:277.
PP 0036-2003
32054/H <·. r r
7. Dhawan, S., L.M. Wahl, A. Heredia, Y.H. Zhang, J.S. Epstein, M.S.Meltzer, I.K. Hewlett (1995): Interferon gamma inhibits HlV-induced invasiveness of Monocytes. J. Leukocyte Biology, 58 (6):713-716.
8. J.F.Bromberg, C.M. Horvath, Z.L. Wen, R.D. Schreiber, J.E. Darnell (1996): Transcriptionally active stati is required for the antiproliferative effects of both interferon alpha and interferon gamma. PNAS 93(15):763-7678.
9. M.KIouche, H.Kirchner, F.Holzel (1994): Antiproliferative effects of interferon gamma in combination with alpha-difluoromethylornithine on human carcinoma celí cultures. J.Cancer Research and Clinical Oncology 120(12):706].
PP 0036-2003
32054/H e C r r.
r,, \
ZOZNAM SEKVENCIÍ <130> Parapoxvirus ovis kmeň NZ2 <140>
<141 >
<160 11 <170 Patentln Ver. 2.1 <210> 1 <211> 25 <212> DNA <213> Mus sp.
<220 <223> Primer pre beta-aktin, antisense <400 1 taaaacgcag ctcagtaaca gtccg 25 <210>2 <211> 25 <212> DNA <213> Mus sp.
<220>
<223> Primer pre beta-aktin, sense <400> 2 tggaatcctg tggcatccat gaaac 25 <210> 3 <211> 26 <212> DNA <213> Hepatitis B vírus <220>
<223> Sonda pre HBV, ayw-613t <400> 3
PP 0036-2003
32054/H f c r ίϊ ccatcatcct gggctttcgg aaaatt 26 <210>4 <211> 19 <212> DNA <213> Hepatitis B vírus <220>
<223> HBV primér, ayw-670r (antisense) <400> 4 aggagaaacg ggctgaggc 19 <210>5 <211> 21 <212> DNA <213> Hepatitis B vírus <220>
<223> HBV primér, ayw-570f (sense) <400>5 ctgtaccaaa ccttcggacg g 21 <210 6 <211> 24 <212> DNA <213> Mus sp.
<220 <223> Primér INF-gamma (antisense) <400 6 gtcacagttt tcagctgtat aggg 24 <210> 7 <211> 26 <212> DNA <213> Mus sp.
<220>
PP 0036-2003
32054/H <223> Primer IFN-gamma (sense) <400> 7 agcggctgac tgaactcaga ttgtag 26 <210> 8 <211> 30 <212> DNA <213> Mus sp.
<220>
<223> Primer IL-15 (antisense) <400> 8 cgtgttgatg aacatttgga caatgcgtat 30
PP 0036-2003
32054/H

Claims (11)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Použitie vírusov, ktoré patria taxonomicky k jednému z kmeňov Parapoxvirus ovis NZ2, NZ-7, NZ-10 aorf-11, na výrobu liekov na liečenie vírusových infekcií a karcinómov u ľudí a zvierat.
  2. 2. Použitie potomstva vírusov podľa nároku 1, ktoré je získané pasážovaním alebo adaptáciou na vhodnom bunkovom systéme, napríklad humánnych bunkách, napr. WI-38, MRC-5 alebo Vero, hovädzích bunkách, napr. BKK13A47/Reg alebo MDBK, alebo ovčích bunkách, napr. MDOK, na výrobu liekov na liečenie vírusových infekcií a karcinómov u ľudí a zvierat.
  3. 3. Použitie časti aleboo fragmentov vírusov podľa nároku 1 a 2, keď časti sú genómové alebo subgenómové fragmenty, ktoré sú exprimované pomocou vhodného vektoru, napr. vírusu vakcínie, vo vhodnom systéme, napr. fibroblastovej bunkovej kultúre, a fragmenty sú frakcie, ktoré sú získané biochemickou purifikáciou, napr. chromatografiou, exprimovaných alebo fyzikálne rozrušených vírusových častíc, na výrobu liekov na liečenie vírusových infekcií a karcinómov u ľudí a zvierat.
  4. 4. Použitie jedného z kmeňov Parapoxvirus ovis podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3 na výrobu liekov a farmaceutických prípravkov vhodných ako imunoterapeutické prípravky alebo imunoprofylaktické činidlá pre autoimunitné ochorenia a pre akútne a chronické vírusové infekcie respiračného traktu a vnútorných orgánov.
  5. 5. Použitie jedného z kmeňov podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3 na výrobu liekov a farmaceutických prípravkov na stresovú metafylaxiu a na zabránenie, alebo odvrátenie infekčnej choroby nasledujúcej po strese
    PP 0036-2003
    32054/H r ¢- r r a taktiež na profylaxiu infekcie spojenej s operáciami a dentálnymi intervenciami.
    í
  6. 6. Použitie jedného z kmeňov podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3 na výrobu liekov a farmaceutických prípravkov na použitie pri metafylaxii infekcií alebo terapii akútnych vírusových infekcií, napríklad infekcií respiračného traktu, infekcií papilloma vírusom, infekcií herpetickými vírusmi, infekcie HIV alebo vírusových infekcií vnútorných orgánov, napr. vírusmi hepatitídy, a taktiež na použitie pri ochoreniach ako je napr. sclerosis multiplex, astma, bradavice a iné novotvary kože.
  7. 7. Použitie jedného z kmeňov podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3 na výrobu liekov a farmaceutických prípravkov na použitie pri liečení poranení, na urýchlenie procesu hojenia rán, a použitie na podporu hojenia rán, ktoré sa zle hoja, alebo sa nehoja vôbec, ako napr. vred predkolenia.
  8. 8. Použitie jedného z kmeňov podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3 na výrobu liekov a farmaceutických prípravkov na použitie pri liečení celého spektra alergických ochorení, psoriázy, neurodermatitídy a iných autoimunitných ochorení, napr. lupus erythematodes, a taktiež na zlepšenie kvality života u pacientov staršieho veku.
  9. 9. Použitie jedného z kmeňov podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3 na výrobu liekov a farmaceutických prípravkov na použitie pri liečení zápalových, degeneratívnych a proliferatívnych ochorení vnútorných orgánov, ako je napr. Crohnova choroba, choroby kože, krvi, centrálneho nervového systému a s ním súvisiacich štruktúr, vrátane oka, a taktiež rakoviny.
  10. 10. Použitie jedného z kmeňov podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3 v kombinácii s inými liečivami na výrobu liekov a farmaceutických prípravkov na použitie pri antivírusovej alebo protirakovinovej terapii u ľudí a zvierat
    PP 0036-2003
    32054/H
  11. 11. Použitie jedného z kmeňov Parapoxvirus ovis podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3 v kombinácii s inými liečivami na výrobu liekov a farmaceutických prípravkov na perorálne podávanie a/alebo liekových foriem rezistentných voči žalúdočným šťavám na perorálne podávanie.
SK36-2003A 2000-07-11 2001-07-11 Use of strains of the Parapox ovis virus for producing antiviral pharmaceuticals and anticancer pharmaceuticals SK362003A3 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE10033582 2000-07-11
DE10122451A DE10122451A1 (de) 2000-07-11 2001-05-09 Verwendung von Stämmen des Parapoxvirus ovis zur Herstellung von antiviralen Arzneimitteln und Arzneimitteln gegen Krebs
PCT/EP2001/007991 WO2002004002A2 (de) 2000-07-11 2001-07-11 Verwendung von stämmen des parapoxvirus ovis zur herstellung von antiviralen arzneimitteln und arzneimitteln gegen krebs

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK362003A3 true SK362003A3 (en) 2003-07-01

Family

ID=26006335

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK36-2003A SK362003A3 (en) 2000-07-11 2001-07-11 Use of strains of the Parapox ovis virus for producing antiviral pharmaceuticals and anticancer pharmaceuticals

Country Status (36)

Country Link
US (1) US6685950B2 (sk)
EP (1) EP1303286B1 (sk)
JP (1) JP5037775B2 (sk)
CN (1) CN1455674B (sk)
AR (1) AR029954A1 (sk)
AT (1) ATE324115T1 (sk)
AU (2) AU7063101A (sk)
BG (1) BG107448A (sk)
CA (1) CA2415397C (sk)
CY (1) CY1105408T1 (sk)
CZ (1) CZ200371A3 (sk)
DE (1) DE50109630D1 (sk)
DK (2) DK1303286T3 (sk)
EE (1) EE200300018A (sk)
ES (1) ES2262663T3 (sk)
FI (1) FI20030037A7 (sk)
GB (1) GB2381454B8 (sk)
HK (1) HK1054329B (sk)
HR (1) HRP20030096A2 (sk)
HU (1) HUP0400479A3 (sk)
IL (1) IL153643A0 (sk)
LT (1) LT5079B (sk)
LU (1) LU90997B1 (sk)
LV (1) LV12990B (sk)
MA (1) MA26927A1 (sk)
MX (1) MXPA03000279A (sk)
NO (1) NO20030082L (sk)
NZ (1) NZ523534A (sk)
PL (1) PL366397A1 (sk)
PT (1) PT1303286E (sk)
RU (1) RU2003104525A (sk)
SE (1) SE0300034L (sk)
SI (1) SI21122A (sk)
SK (1) SK362003A3 (sk)
UY (1) UY26832A1 (sk)
WO (1) WO2002004002A2 (sk)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19922407A1 (de) * 1999-05-14 2000-11-16 Bayer Ag Organ-, gewebs- und zellspezifisches Immuntherapeutikum für chronische virale Infektionen, sowie entzündliche, degenerative und proliferative Erkrankungen insbesondere der Leber sowie Krebs auf der Basis von rekombinantem Parapoxvirus
PL212047B1 (pl) * 2000-11-23 2012-08-31 Bavarian Nordic As Zmodyfikowany wirus krowianki szczepu Ankara MVA-BN i jego pochodna, genom i zawierające je kompozycja farmaceutyczna, zwłaszcza szczepionka oraz ich zastosowania
US7628980B2 (en) * 2000-11-23 2009-12-08 Bavarian Nordic A/S Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates
US7097842B2 (en) * 2000-11-23 2006-08-29 Bavarian Nordic A/S Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates
NZ512341A (en) * 2001-06-13 2004-02-27 Bayer Ag Polynucleotides between 15 and 100 base pairs in length coding for parapoxvirus ovis (PPVO)/vaccinia virus recombinant (VVOV) viral genome fragments
US6844000B2 (en) * 2001-12-07 2005-01-18 Bayer Pharmaceuticals Corporation Use of Parapox B2L protein to treat cancer and modify immune responses
NZ536592A (en) * 2002-04-19 2007-01-26 Bavarian Nordic As Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates
JP2005537793A (ja) * 2002-09-05 2005-12-15 バヴァリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ 無血清条件下で初代細胞を培養する方法及びウイルスを増幅させる方法
CA2573204C (en) * 2004-07-13 2011-09-20 Aicuris Gmbh & Co. Kg Parapoxviruses in combination with other antiviral agents for the treatment of hiv/aids
PT1951274E (pt) * 2005-11-24 2009-12-14 Aicuris Gmbh & Co Kg Parapoxvírus em combinação com agentes quimioterapêuticos citotóxicos clássicos como bioquimioterapia para o tratamento de cancro
JP5004990B2 (ja) * 2009-03-31 2012-08-22 アイキュリス・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング・ウント・コムパニー・コマンディットゲゼルシャフト パラポックスウイルス・オヴィスの組換えタンパク質およびそれ由来の医薬組成物
NZ599677A (en) * 2009-12-18 2014-10-31 Bavarian Nordic As Production of ifn-lambda by conventional dendritic cells and uses thereof
JP5699093B2 (ja) * 2012-01-05 2015-04-08 アイキュリス・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング・ウント・コムパニー・コマンディットゲゼルシャフトＡｉＣｕｒｉｓ ＧｍｂＨ ＆ Ｃｏ． ＫＧ パラポックスウイルス・オヴィスの組換えタンパク質およびそれ由来の医薬組成物
TW201919675A (zh) * 2017-09-07 2019-06-01 德商艾庫瑞斯公司 使用羊副痘疹病毒(Parapoxvirus ovis；PPVO)及至少一種額外抗病毒藥之經B型肝炎病毒(HBV)感染之個體之組合療法
WO2023083943A1 (en) * 2021-11-10 2023-05-19 Aicuris Gmbh & Co. Kg Parapoxvirus for preparing for and treatment of respiratory virus infections in combination with antivirals
WO2023083950A1 (en) * 2021-11-10 2023-05-19 Aicuris Gmbh & Co. Kg Parapoxvirus for preparing for and treatment of respiratory virus infections in combination with immunomodulators

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2714665A1 (de) * 1977-04-01 1978-10-05 Mayr Anton Praeparat zur behandlung von herpes zoster und anderen herpes-infektionen, sowie verfahren zu seiner herstellung
DE3504940C2 (de) * 1984-02-17 1997-11-06 Bayer Ag Multipotente Paramunitätsmediatoren, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Mediatoren enthaltende Arzneimittel
US5443964A (en) * 1987-08-10 1995-08-22 Duke University Poxvirus insertion/expression vector
DE4405841C1 (de) * 1994-02-23 1995-01-05 Mayr Anton Prof Dr Med Vet Dr Multipotente Paramunitätsinducer auf der Basis von Kombinationen von Pockenviruskomponenten, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel
US5648101A (en) * 1994-11-14 1997-07-15 Tawashi; Rashad Drug delivery of nitric oxide
CA2247336C (en) * 1996-02-28 2008-06-17 Bayer Aktiengesellschaft Parapoxviruses containing foreign dna, their production and their use in vaccines
EP0904393A4 (en) * 1996-03-29 1999-09-08 Univ Otago PARAPOXVIRUS VECTORS
DK0885013T3 (da) * 1996-04-15 2001-11-05 Anton Prof Dr Med Vet Dr Mayr Anvendelse af multipotente paramunitetsinducere fra svækkede, ikke-immunogene poxvirus eller parapoxvirus til fremstilling af lægemidler
SE9700617D0 (sv) * 1997-02-21 1997-02-21 Kjell Alving New composition
DE19843222A1 (de) * 1998-09-22 2000-03-30 Hassan Jomaa Verwendung von phosphororganischen Verbindungen zur therapeutischen und prophylaktischen Behandlung von Infektionen
AU775956B2 (en) * 1998-11-02 2004-08-19 Otago Innovation Limited Vascular endothelial growth factor-like protein from ORF virus NZ2 binds and activates mammalian VEGF receptor-2

Also Published As

Publication number Publication date
SE0300034L (sv) 2003-03-03
NZ523534A (en) 2005-02-25
ATE324115T1 (de) 2006-05-15
GB0302630D0 (en) 2003-03-12
AR029954A1 (es) 2003-07-23
FI20030037L (fi) 2003-03-10
HK1054329B (zh) 2005-10-07
CA2415397A1 (en) 2002-01-17
GB2381454A (en) 2003-05-07
NO20030082D0 (no) 2003-01-08
NO20030082L (no) 2003-01-08
JP2004517807A (ja) 2004-06-17
HUP0400479A2 (hu) 2004-06-28
AU7063101A (en) 2002-01-21
LT2003009A (en) 2003-08-25
WO2002004002A3 (de) 2002-10-31
EP1303286B1 (de) 2006-04-26
AU2001270631B2 (en) 2005-07-07
US20030021769A1 (en) 2003-01-30
DK1303286T3 (da) 2006-08-28
MXPA03000279A (es) 2004-04-05
SE0300034D0 (sv) 2003-01-10
PL366397A1 (pl) 2005-01-24
HK1054329A1 (en) 2003-11-28
PT1303286E (pt) 2006-08-31
HRP20030096A2 (en) 2005-02-28
CN1455674A (zh) 2003-11-12
DE50109630D1 (de) 2006-06-01
FI20030037A7 (fi) 2003-03-10
MA26927A1 (fr) 2004-12-20
CA2415397C (en) 2011-04-26
BG107448A (bg) 2003-11-28
IL153643A0 (en) 2003-07-06
GB2381454B8 (en) 2007-10-23
CN1455674B (zh) 2019-03-29
UY26832A1 (es) 2002-01-31
CZ200371A3 (cs) 2003-04-16
LT5079B (lt) 2003-12-29
ES2262663T3 (es) 2006-12-01
HUP0400479A3 (en) 2006-02-28
EP1303286A2 (de) 2003-04-23
DK200300015A (da) 2003-03-07
SI21122A (sl) 2003-08-31
GB2381454A8 (en) 2007-10-23
CY1105408T1 (el) 2010-04-28
WO2002004002A2 (de) 2002-01-17
GB2381454B (en) 2004-11-24
LU90997B1 (en) 2003-01-08
LV12990B (en) 2003-08-20
JP5037775B2 (ja) 2012-10-03
US6685950B2 (en) 2004-02-03
RU2003104525A (ru) 2004-06-27
EE200300018A (et) 2004-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6685950B2 (en) Methods of treating viral infections
WO2008140621A2 (en) Transgenic oncolytic viruses and uses thereof
EP3778882A1 (en) Recombinant oncolytic virus composition and use thereof
Alfano et al. New players in cytokine control of HIV infection
US12509662B2 (en) Generation regulatable fusogenic oncolytic herpes simplex virus type 1 virus and methods of use
JP2012121902A (ja) 抗ウイルス薬および癌に対する医薬を製造するためのパラポックスウイルスｏｖｉｓ株の使用
WO2020106566A1 (en) Regulatable fusogenic oncolytic herpes simplex virus type 1 virus and methods of use
EP1951274B1 (en) Parapoxviruses in combination with classical cytotoxic chemotherapeutic agents as biochemotherapy for the treatment of cancer
CN118127004A (zh) 靶向HSV必需基因的gRNA、CRISPR/Cas基因编辑系统、递送系统及应用
HK1060063A (en) Use of strains of the parapox ovis virus for producing antiviral pharmaceuticals and anticancer pharmaceuticals
DE19922407A1 (de) Organ-, gewebs- und zellspezifisches Immuntherapeutikum für chronische virale Infektionen, sowie entzündliche, degenerative und proliferative Erkrankungen insbesondere der Leber sowie Krebs auf der Basis von rekombinantem Parapoxvirus
CN111053784A (zh) 黄芩苷在制备用于鸡马立克氏病的药物中的应用
CN118078824B (zh) 抗马立克氏病病毒的药物以及ra190或甘草酸及其联合使用在药物制备中的应用
CN112691094B (zh) 防治病毒的新型化合物及其应用
CN119709635A (zh) 一种单纯疱疹病毒株及其用途
EP2952182B1 (en) Compounds and methods for increasing the immune response to papillomavirus
CN121160640A (zh) 一种重组溶瘤病毒及其应用
Underwood et al. Ganciclovir (GCV) resistance due to a new mutation in the
DIMITRIADIS Konstantinos T. PAPAZISIS1 Panajiota BOURA2 Periklis FOUKAS3
Kruse et al. Selective Induction of Apoptosis in

Legal Events

Date Code Title Description
FC9A Refused patent application