SU730295A3 - Способ получени циклического тетрадекапептида или его солей - Google Patents

Description

Изобретение относится к способу получения нового циклического тетоадекапептида формулы Н-Э-Вал-Гли-1|-Цис-11-Лиз-1. - Асп- U-Фен-Ь -Фен - Ь-Трп-L-Лиз-L-Tpe-Ь-Фен-Ь-Тре-Ь -Cep-V- 5

-Цис-ОН (Д-Вал'-соматостатина)или ёго солей — биологически активных соединений, которые могут найти применение .в медицине..

Известен способ замыкания дисульфидного мостика между двумя сульфигидрильными группами,присутствующих в молекуле полипептида цистеинов путем окисления кислородом воздуха, '’широко использующийся в пептидной химии (1].

Цель изобретения - получение нового циклического тетрадекапептида или его солей, обладающих интересными фармакологическими свойствами.

Это достигается известным спо- ** собом получения циклического тетрадекапептида формулы 1: H-D-Ban-L-Гли-L -Цис- Ь-Лиз-Ь-Дсп-Ь-Фен-Ь -Фен-L -ТРп-и-Лиз-L-Тре-Ь-Фен-О-Тре-Ъ-Сер-L-Цис-ОН или его солей, заключаю- щийся в том, что соответствующий прямоцепочечный тетрадекапептид формулы II: Н-О-Вал-Гли-Ъ-Цис-Ь- -Лиз-L-Acn-L -Фен-L-Фен-Ь-Трп-Ь-Лиз- „ -и~Тре-Ь-Фен-Ь-Тре-1| -Cep-L-Цис- ОН подвергают взаимодействию с окисляющим агентом.

Кроме тоге, в качестве окисляющего агента используют кислород воздуха.

Для получения продукта формулы I тетрадекапептид с линейной цепью обрабатывают в условиях, которые вызывают его окисление, путем превращения двух сульфгидрильных групп, присутствующих в молекуле по одной у каждой цистеинильной половины, в дисульфидный мостик. Это может быть осуществлено путем обработки разбавленного раствора линейного гетрадекапептида любым из разнообразных окисляющих агентов, включая, например, йод и ферроцианид калия. Воздух также, может применяться в качестве окисляющего агента, pH смеси при этом обычно от 2,5 до 9,0 и предпочтительнее от 7,0 до 7,6. Когда в качестве окисляющего агента применяют воздух, то концентрация раствора пептида составляет обычно не более 0,4 мг пептида на миллилитр раствора и обычно около 50 мг/мл.

Фармацевтически приемлемые нетоксич ные аддитивные кислотные соли включают соли органических и неорганичес3 ких кислот, например, хлористоводородной, серной, сульфоновой, винной, фумаровой, бромистоводородной, гликолевой, лимонной , малеиновой, фосфорной янтарной, уксусной, азотной бензойной, аскорбиновой, пара-толуолсульфоновой, сульфобензоловой, сульфонафталиновой и пропионовой, тельнее аддитивные соли, из уксусной кислоты. Любая численных солейможет быть обычным методом.

П р и м е р. Окисление -соматостатин.

Раствор восстановленного Д-Вал*-соматостатина (374 мл, теоретически 175 мг) разбавляют 147 мл 0,2 М уксусной кислоты и 2967 мл дистиллированной *50 мкг/мл до 6,7 добавляют концентрированную гидроокись аммония. Раствор перемешивают при комнатной температуре в темноте 64 ч. Титрованием по Эллману показывают окончание окисления.

Смесь концентрируют в вакууме до 10 мл. Концентрат разбавляют Ю мл ледяной уксусной кислоты и обессоливают, пропуская через колонку с Сефадесом С-25 F (размеры колонки 5,0x90 см); продукт элюируют при температуре 26°С дегазированной 50%-ной уксусной кислотой, скорость элюирования: 246 мл/ч, объем собираемых фракций — 16,4 мл, За ходом очистки . следят по поглощению фракций при 280 мкм. Фракции О 49-64 (787— 1050 мл) собирают, лиофилизуют в темноте, Сухой продукт растворяют в 15 мл дегазированной 0,2 М уксусной кислоты и раствор помещают в колонку с сефадексом С-25 г. Хроматографирование ведут в следующих условиях: растворитель — дегазирования 0,2 М уксусная кислота, температура 26 С, скорость потока 475 мл/ч, объем собираемых фракций - 16,6 мл, размер колонки 5,0x150· см. За ходом хроматографии следят спектрофотометрически при 280 ммк. Собирают фракции №№ 157-172 (2590-2855 мл), пик 2667 и 280 ммк, объединенные фракции лио'филизуют досуха в темноте. Методом ультрафиолетовой спектроскопии показано присутствие в сухой массе 95 мг продукта (выход из восстановленной формы 54,3%).

Полученный продукт растворяют в 5 мЯ .50%-ной уксусной кислоты и

Предпочтиполучаемые из пёреполучена в Д-Валводы для достижения концентрации Для доведения pH смеси вновь хроматографируют в колонке с сефадексом С-25 F. В следующих условиях: дегазированная 50%-ная уксусная кислота, температура 26°С, скорость потока 53,2 мл/ч, объем фракций 8,87 мл, размеры колонки 2,5x180 см.

Мера поглощения света при 280 ммк каждой фракции, нанесенная в зависимости от номера фракции, показывает на кривой один большой, пик. Фракции №№ 58-60 (488-532 мл), пик 505 при 280 ммк объединяют , лиофилизуют в темноте· досуха. _2б

Получают продукт с ( </_D — -42,1° (с=1%, в уксусной кислоте), аминокислотный анализ: 0,98 Вал, 1,1 2 Цис, 1,81 2 Лиз, 0,95 Асп, 2_f94 3 Фен, 0,80 Трп, 1,91 2 Тре,.0,85 Сер. Отношение (Гли+Лиэ):3=1.

Проведены следующие три 21 часовых гидролиза:

1) в присутствии диметилсульфоксида для окисления цистеина в цистеиновую кислоту;

2) удаление тиогликолевой кислоты

3) без удаления или окисления

Все полученные величины — средние значения трех гидролизов, за исключением следующих: Цис и Сер только 1/ и 2/; Трп только 2/, Фен’только 2/ и 3/.

Claims (2)

1. Формула изобретения

   1. Способ получения циклического тетрадекапептида формулы 1: H-D-Вал-Гли-и-Цис-Ц-Лиз-L-Асп-б-Фен-Ц-Фен-

   -U-Tpn-C-Лиз-Ь-Тре-Ц-Фен-t-Тре-Ь-Cep-U-Цис— ОН или его солей, о тличающийся тем, что соответствующий прямоцепочечный тетрадекапептид формулы И: Н-О-Вал-Гли-Ь-Цис-Ъ-Лиз-L-Acn-L-Фен-Ц-Фен-Ъ-ТРп-t-Лиз-L-Tpe-L -Фен-Ь-Тре-.Ц-Сер-Ь-Цис-ОН подвергают взаимодействию с окисляющим агентом.
2. 2. Способ поп.1, отличающий с я тем, что в качестве окисляющего агента используют кислород воздуха.