TH53372A - ลำดับนิวคลีโอไทด์ใหม่ซึ่งใส่รหัสสำหรับจีน pgsA2 - Google Patents

Abstract

DC60 (03/07/44) การประดิษฐ์สัมพันธ์กับคอรินิฟอร์มแบคทีเรียมที่ดัดแปลงทางพันธุกรรม จีน pgsA2 ของ แบคทีเรียมนี้ได้รับ การทำให้เพิ่มขึ้น และพอลินิวคลิโอไทด์ที่แยกได้ซึ่ง ใส่รหัสสำหรับซีดีพี- ไดเอซิลกลีเซอรอล-กลีเซอรอล- 3-ฟอสเฟท 3-ฟอสฟาทิดิลทรานสเฟอเรสจากคอริ นิฟอร์มแบคทีเรีย และกระบวนการสำหรับการเตรียม โดยการหมักของ กรด L-อะมิโน ด้วยการเพิ่มขึ้นของ จีน pgsA2 ในแบคทีเรีย และการใช้ของพอลินิวคลิโอ ไทด์เป็นไพรเมอร์หรือโพรบการทำให้ผสมกัน การประดิษฐ์สัมพันธ์กับคอรินิฟอร์มแบคทีเรียมที่ดัดแปลงทางพันธุกรรม จีน pgsA2 ของ แบคทีเรียมนี้ได้รับ การทำให้เพิ่มขึ้น และพอลินิวคลิโอไทด์ที่แยกได้ซึ่ง ใส่รหัสสำหรับซีดีพี- ไดเอซิลกลีเซอรอล-กลีเซอรอล- 3-ฟอสเฟท 3-ฟอสฟาทิดิลทรานสเฟอเรสจากคอริ นิฟอร์มแบคทีเรีย และกระบวนการสำหรับการเตรียม โดยการหมักของ กรด L-อะมิโน ด้วยการเพิ่มขึ้นของ จีน pgsA2 ในแบคทีเรีย และการใช้ของพอลินิวคลิโอ ไทด์เป็นไพรเมอร์หรือโพรบการทำให้ผสมกัน

Claims (19)

1. คอรินิฟอร์มแบคทีเรียมที่ดัดแปลงทางพันธุกรรมซึ่งมีจีน pgsA2 ซึ่งใส่รหัสสำหรับ ซีดีพี-ไดเอซิลกลีเซอ รอล-กลีเซอรอล-3-ฟอสเฟท 3-ฟอสฟาทิดิลทรานส เฟอเรสได้รับการทำให้เพิ่ม ขึ้น

2. คอรินิฟอร์มแบคทีเรียมที่ดัดแปลงทางพันธุกรรมดังที่ถือ สิทธิในข้อถือสิทธิข้อ 1 ซึ่ง แบคทีเรียมเริ่มต้น (แบบชนิด เกิดขึ้นเอง) ได้รับการเลือกจากกลุ่มซึ่งประกอบด้วย คอรินิ แบคทีเรียม กลูทามิคุม (ATCC13032) คอรินิแบคทีเรียม แอซิ โทกลูทามิคุม (ATCC15806) คอรินิแบคทีเรียม แอซิโทแอซิโดฟิ ลุม ( ATCC13870) คอรินิแบคทีเรียม เทอร์โมอะมิโนจินิส (FERM BP-1539) คอรินิ แบคทีเรียม เมแลสซิโคลา (ATCC17965) บรีวิแบคทีเรียม ฟลาวุม (ATCC14067) บรีวิแบคทีเรียม แลก โทเฟอร์เมนทุม (ATCC13869) และบรีวิแบคทีเรียม ไดวาริคาทุม (ATCC14020) หรือได้รับการ เลือกจากกลุ่มซึ่ง ประกอบด้วย คอรินิแบคทีเรียม กลูทามิคุม FERM-P 1709 บรีวิ แบคทีเรียม ฟลาวุม FERM-P 1708 บรีวิแบคทีเรียม แลกโท เฟอร์เมนทุม FERM-P 1712 คอรินิแบคทีเรียม กลูทามิ คุม FERM-P 6463 คอรินิแบคทีเรียม กลูทามิคุม FERM-P 6464 และคอรินิแบคทีเรียม กลูทามิคุม DSM5715

3. คอรินิฟอร์มแบคทีเรียมที่ดัดแปลงทางพันธุกรรมดังที่ถือ สิทธิในข้อถือสิทธิข้อ 1 ซึ่ง การเพิ่มขึ้นของจีน pgsA2 ได้ รับการทำให้สำเร็จโดยการแสดงออกมากเกินของจีน โดยเฉพาะ อย่างยิ่ง ในการเพิ่มจำนวนสำเนาของจีน โดยการเลือกตัวส่ง เสริมที่แรงหรือบริเวณการควบคุมเหนือกรอบการ อ่าน โดยการก ลายของตัวส่งเสริม บริเวณการควบคุมหรือสถานที่ยึดเหนี่ยวไร โบโซม โดยการใส่ แคสเซทท์การแสดงออกที่เหมาะสมเหนือจีนโครง สร้างหรือโดยการใส่ตัวส่งเสริมที่เหนี่ยวนำได้ โดย การทำให้ชีวิต ของเอ็มอาร์เอ็นเอที่สอดคล้องกันยาวขึ้น โดยการเสื่อมที่ลด ลงของโปรตีนที่แสดงออก หรือ โดยการรวมกันของหลายวิธีที่เป็น ไปได้เหล่านี้

4. คอรินิฟอร์มแบคทีเรียมที่ดัดแปลงทางพันธุกรรมดังที่ถือ สิทธิในข้อใดข้อหนึ่งของ ข้อถือสิทธิข้อ 1 ถึง 3 ซึ่งสาย เชื้อได้รับการแปลงด้วยพลาสมิดเวกเตอร์และพลาสมิดเวกเตอร์ มีลำดับ นิวคลิโอไทด์ ซึ่งใส่รหัสสำหรับ pgsA2

5. คอรินิฟอร์มแบคทีเรียมที่ดัดแปลงทางพันธุกรรมดังที่ถือ สิทธิในข้อใดข้อหนึ่งของ ข้อถือสิทธิข้อ 1 ถึง 4 ซึ่งสอดคล้องทางจีโนไทป์กับสายเชื้อคอริ นิแบคทีเรียม กลูทามิคุม DSM13251

6. พอลินิวคลิโอไทด์ที่แยกได้จากคอรินิฟอร์มแบคทีเรียซึ่ง ประกอบรวมด้วยลำดับ พอลินิวคลิโอไทด์ที่เลือกจากกลุ่มซึ่ง ประกอบด้วย a) พอลินิวคลิโอไทด์ซึ่งเป็นกำเนิดเดียวกันที่ระดับของ อย่างน้อยที่สุด 70% กับพอลินิวคลิ โอไทด์ ซึ่งใส่รหัส สำหรับพอลิเพปไทด์ ซึ่งประกอบรวมด้วยลำดับกรดอะมิโนของ SEQ ID เลขที่ 2 หรือประกอบด้วยสิ่งนี้ b) พอลินิวคลิโอไทด์ซึ่งใส่รหัสสำหรับพอลิเพปไทด์ซึ่ง ประกอบรวมด้วยลำดับกรดอะมิโน ซึ่งเป็นกำเนิดเดียวกันที่ ระดับอย่างน้อยที่สุด 70% กับลำดับกรดอะมิโนของ SEQ ID เลข ที่ 2 c) พอลินิวคลิโอไทด์ซึ่งเสริมซึ่งกันและกันกับพอลินิวคลิไอ โอไทด์ของ a) หรือ b) และ d) พอลินิวคลิโอไทด์ซึ่งประกอบรวมด้วยอย่างน้อยที่สุด 15 นิวคลิโอไทด์ที่ต่อเนื่องกันของ ลำดับพอลินิวคลิโอไทด์ของ a) b) หรือ c)

7. พอลินิวคลิโอไทด์ดังที่ถือสิทธิในข้อถือสิทธิข้อ 6 ซึ่งพอลินิวคลิโอไทด์ อย่างที่ควร เลือกใช้เป็น รีคอมบิแนนท์ดีเอ็นเอซึ่งมีความสามารถในการถ่ายแบบในคอริ นิฟอร์มแบคทีเรีย

8. พอลินิวคลีโอไทด์ดังที่ถือสิทธิในข้อถือสิทธิข้อ 6 ซึ่งพอลิ นิวคลิโอไทด์ คือ อาร์เอ็น เอ

9. ดีเอ็นเอที่ถือสิทธิในข้อถือสิทธิข้อ 7 ซึ่งมีความสามารถ ในการถ่ายแบบ ซึ่ง ประกอบรวมด้วย (i) ลำดันิวคลิโอไทด์ที่แสดงใน SEQ ID เลชที่ 1 หรือ (ii) อย่างน้อยที่สุด 1 ลำดับ ซึ่งสอดคล้องกับลำดับ (i) ใน เนื้อความของการเสื่อมของ รหัสทางพันธุกรรม หรือ (iii) อย่างน้อยที่สุด 1 ลำดับ ซึ่งทำให้ผสมกับลำดับที่ เสริมซึ่งกันและกันกับลำดับ (i) หรือ (ii) และอย่างเป็นทาง เลือก (iv) การกลายของฟังก์ชันเป็นกลางใน (i) ซึ่งนำไปสู่กรดอะมิ โนที่มีกำเนิดเดียวกัน

10. ลำดับพอลินิวคลิโอไทด์ดังที่ถือสิทธิในข้อถือสิทธิข้อ 7,8 หรือ 9 ข้อใดข้อหนึ่ง ซึ่ง ประกอบรวมด้วยรหัสสำหรับพอลิเพป ไทด์ซึ่งมีลำดับกรดอะมิโน SEQ ID เลขที่ 2

11. กระบวนการสำหรับการเตรียมโดยการหมักของกรด L-อะมิโน ซึ่งขั้นตอนต่อไปนี้ ได้รับการทำให้สำเร็จ a) การหมักของคอรินิฟอร์มแบคทีเรียซึ่งผลิตกรด L-อะมิโนและ ซึ่งอย่างน้อยที่สุดมีจีน pgsA2 หรือลำดับนิวคลิโอไทด์ซึ่ง ใส่รหัสสำหรับจีนได้รับการทำให้เพิ่มขึ้น โดยเฉพาะ อย่าง ยิ่งได้รับการทำให้แสดงออกมากเกิน b) การทำให้เข้มข้นของกรด L-อะมิโนในตัวกลางหรือในเซลล์ของ แบคทีเรีย และ c) การแยกกรด L-อะมิโน

12. กระบวนการดังที่ถือสิทธิในข้อถือสิทธิข้อ 11 ซึ่งสาย เชื้อดังที่ถือสิทธิในข้อใดข้อ หนึ่งของข้อถือสิทธิข้อ 1 ถึง 5 ได้รับการใช้

13. กระบวนการดังที่ถือสิทธิในข้อถือสิทธิข้อ 11 หรือ 12 ซึ่งจีนอื่น ๆ ซึ่งใส่รหัส สำหรับโปรตีนของวิถีทางชีว สังเคราะห์ของกรด L-อะมิโนที่ต้องการ ได้รับการทำให้เพิ่ม ขึ้นอีกด้วย ในแบคทีเรีย

14. กระบวนการดังที่ถือสิทธิในข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิ ข้อ 11 ถึง 13 ซึ่งวิถีทาง เมแทบอลิกซึ่งลดการก่อเกิดกรดอะ มิโนที่ต้องการได้รับการกำจัดอย่างน้อยที่สุดบางส่วนใน แบคทีเรีย

15. กระบวนการดังที่ถือสิทธิในข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิ ข้อ 12 ถึง 15 ซึ่งกรด อะมิโนที่เตรียมได้ คือ L-ไลซีน

16. กระบวนการดังที่ถือสิทธิในข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิ ข้อ 11 ถึง 15 ซึ่งสำหรับ การเตรียมไลซีน แบคทีเรียซึ่งมี จีน 1 ชนิดหรือมากกว่าซึ่งเลือกจากกลุ่มซึ่งประกอบด้วย a) จีน dapA ซึ่งใส่รหัสสำหรับไดไฮโดรไดพิคอลิเนทซินเธส b) จีน dapE ซึ่งใส่รหัสสำหรับซักซินิลไดอะมิโนไพมิเลทดี ซักซินิเลส c) จีน lysC ซึ่งใส่รหัสสำหรับแอสพาร์เททไคเนสที่ต้านทาน การให้กลับ d) จีน tpi ซึ่งใส่รหัสสำหรับไทรโอสฟอสเฟทไอโซเมอเรส e) จีน gap ซึ่งใส่รหัสสำหรับกลีเซอแรลดีไฮด์ 3-ฟอสเฟสดี ไฮโดรจิเนส f) จีน pgk ซึ่งใส่รหัสสำหรับ 3-ฟอสฟอกลีเซอเรทไคเนส g) จีน pyc ซึ่งใส่รหัสสำหรับไพรูเวทคาร์บอกซิเลส h) จีน mqo ซึ่งใส่รหัสสำหรับมาเลท : ควิโนนออกซิโดรีดัก เทส i) จีน lysE ซึ่งใส่รหัสสำหรับการส่งออกไลซีน ได้รับการทำให้เพิ่มขึ้น โดยเฉพาะอย่างยิ่งได้รับการทำให้ แสดงออกมากเกินหรือขยายที่เวลา เดียวกันได้รับการหมัก

17. กระบวนการดังที่ถือสิทธิในข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิ ข้อ 11 ถึง 16 ซึ่งสำหรับ การเตรียม L-ไลซีน แบคทีเรียซึ่ง จีน 1 ชนิดหรือมากกว่าที่เลือกจากกลุ่มซึ่งประกอบด้วย a) จีน pck ซึ่งใส่รหัสสำหรับฟอสฟออีนอลไพรูเวทคาร์บอกซิ ไคเนส b) จีน pgi ซึ่งใสรหัสสำหรับ กลูโคส 6-ฟอสเฟทไอโซเมอเรส c) จีน poxB ซึ่งใส่รหัสสำหรับไพรูเวทออกซิเดส ได้รับการทำ ให้อ่อนฤทธิ์ลงที่เวลาเดียวกันได้รับการหมัก

18. การใช้ของลำดับพอลินิวคลิโอไทด์ หรือส่วนของลำดับพอลิ นิวคลิโอไทด์ ดังที่ถือ สิทธิในข้อถือสิทธิข้อ 6 เป็นไพรเ มอร์สำหรับการเตรียม ดีเอ็นเอของจีน ซึ่งใส่รหัสสำหรับซีดี พี- ไดเอซิลกลีเซอรอล-กลีเซอร์รอล-3-ฟอสเฟท 3-ฟอสฟาทิดิลท รานสเฟอเรส โดยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิ เมอร์

19. การใช้ของลำดับพอลินิวคลิโอไทด์ดังที่ถือสิทธิในข้อถือ สิทธิข้อ 6 เป็นโพรบการทำ ให้ผสมกันสำหรับการแยกของซีดีเอ็น เอ หรือ จีน ซึ่งมีฮอมอลอจีสูงกับลำดับของจีน PgsA2