TW200522976A

TW200522976A - Novel plasma protein affinity tags

Info

Publication number: TW200522976A
Application number: TW093128122A
Authority: TW
Inventors: Florencio Zaragoza Dorwald; Bernd Peschke
Original assignee: Novo Nordisk As
Priority date: 2003-09-19
Filing date: 2004-09-17
Publication date: 2005-07-16
Also published as: WO2005028516A3; US20100184641A1; EP1667724A2; US7897560B2; JP2007537981A; WO2005028516A2; US20070105750A1

Description

200522976 九、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明關於新穎藥物遞送系統，其係以對漿液蛋白質 -有南親合性之新穎化合物（=親合標籤）為主。合標籤可與治療上具活性之化合、奶鍵聯，並稭此經由可逆至激液蛋白質而增加彼等於血聚中的半衰期。【先前技術】吾？二希望使已禮定濃度之所給予化合物在血流中間。例如當投予免疫原且希望獲得強免疫反望如此。目前尚未有共同可接受用治療劑時即希之血管内半衰期的策略。 "壬何類型化合物量正物活性之内源性狀類及蛋白質的數 m 為執行人類基因組探勘之結果。由專之生物活性，許多此等肽類及蛋白質在理論上可用做為治療劑。然而内源性肽 Μ买貝通吊不適合做為藥物者，因為此等肽類由於會被職快速分解且跃择，濾及排放於尿液中而往往具有；月、過 (佐貝爾等人，〜心…衣期。其他文獻

Med. Chew. Lett. 200¾ , iq 已顯示，所給予肽類之血漿半衰期° ，狀類可逆性接附至漿液蛋白質猎將此 ,^ θ ^ 白或加瑪-破|白 ❹地增加。人類血清白蛋白⑽S)具有（例如）一週以上之半衰期。此可逆性接附需 m . 裡此夠與治瘁密丨丨餘外，且/、在與該治療劑結合時仍 '、才仍對白蛋白具有高結合親合 200522976 性之化合物（=親合標籤）。因此，可通用之親合標籤將引起廣泛興趣，尤其可做為具潛力的藥物遞送系統。許多已知最具潛力之白蛋白—配體為羧酸類例如脂肪酸、芳基乙酸類（例如酮洛芬）或碘芬酸、或二羧酸類例如3-羧基-4-曱基-5-丙基—2-呋喃丙酸彳⑶叮^克拉奇威等人 Biochemical Pharmacology 2⑽2、β4，··

co0h 酮洛芬

CO.H

碘芬酸 CMPF 然而’所有呈現於此等化合物中之結構特性皆負責結合’且當此等結構特性受化學修料其對HAS之親合性會減低。因此，前述該等酸類之酷類或醯胺對has之親合性將顯著較低。此原因乃在於叛酸官能性會與存在浆液蛋白質中之驗性胺基酸形成強離子鍵，而因此負責大部分與該蛋白質之結合。於是’如何使已知、具強HAS-結合性之羧酸與治療劑結合而不喪失其對HAS之所需要親合性並非顯 =。但是盈需達成此目的之方法，因為許多可與聚液地=口之^構上多樣化竣酸為已知’因此無需再繁複已^ 合物。而且，許多具^ 一結合性之幾酸為現。之樂物，且其代謝物已顯示為醫藥上及毒物學上可接受者。 :發明欲提供藉由將諸如蛋白質、肽類或小分子藥物㈣白質結合’能夠可逆地結合至-或數種 200522976 =液蛋白f之多用途治療劑遞送系統。吾等已設計出-種 :夠將已知、漿液-蛋白結合性鲮酸與廣泛各種治療性肽類 :蛋白質，或與任何需要長期呈現已確定濃度之其他類化 “勿共價結合的新穎鍵聯策略。此策略包含將該浆液—蛋白結合性崎化成㈣模擬物（具有PKa值介於—5至+7之乂使月b在血漿中顯著被離子化。此類羧酸模擬物可上例如）4 ’醯基磺醯胺，其含有能使該酸模擬物共價結 p療知之額外& A基。若選擇適宜之酸模擬物，則此、建驷策略應$會顯著破壞該漿液—蛋白結合性酸類之結構例如，舲醯基磺醯胺酸性與羧酸類似，且在生理pH值下會被去質子化並帶負電荷（B.J·貝克斯，J.A·艾爾曼， •版 Ο復 S〇c· 1994 ， 116 ， 11171-11172)。

親合標籤 X =間隔區 Y =連接物 Y1 =反應性官能基 r/C〇2H 漿液蛋白具有高親性之羧酸然而，括（例如） X ς、/Ρ R yS'X-Y—治療劑對漿液蛋白質具有高親合性之新穎治療劑其他魏酸模擬物亦可適用於上述目的。此等包亞醯胺類、醯基脲及醯基胺基甲酸酯類。

X 一丫一治療劑間隔區連接物 r，c〇2h 對聚液蛋白質具有高親合性之羧酸或者，缺-電子、經胺基取代之雜環類或芳烴類之醯基化衍生物亦具有足夠酸性於血漿中去質子化，而因此亦包 200522976 含於本發明範圍内

R ,c〇2h 對漿液蛋白質具有高親合性之羧酸 X Z R N"、X-丫一治療劑 Η X =間隔區 Υ =連接物 ζ =缺電子亞芳基或雜亞芳基做為項選擇，對毁液蛋白質具有高親合性之缓酸用於將fL基乙酸衍生物、3_酮基羧酸衍生物或另一種在 :置2接附有拉電子基團M之乙酸衍生物進行醯基化。基團Μ可為（例如）氕、 ^ 鼠 CN、-C0-烷基、一co—芳基、 —C〇2-烧基、一ν〇2、-ςη 立甘 02 S〇2-方基、-S〇2-烷基等類。所成之產物將，、有強C-H-酸性且為古疮必模擬物。 "性且為间度烯酵化，而因此亦能做為羧酸 r，C〇2H 對漿液蛋白質具有南親合性之羧酸

Μ V V1

Xc間隔區 Y1 =反應性官能基 M=拉電子基團 OH 〇 -Υ-治療劑如上述所例舉說明者，該酸模擬物與治療劑之間可存 :有視需要之間隔【χ及連接物γ以使該親合標籤共價接，至該治療劑。此二基團將在衆液-蛋白質結合片段與治療 d之間產生距離。連接物γ可源自任何能夠與其不會載^ 肢内以顯著速率裂解之治療劑形成共價、代謝上穩定鍵結的具反應性官能基Y1。具反應性官能基υ1包括（但不限定於）羧酸、胺類、硫醇、異硫代氰酸酯、異氰酸酯、氯甲次Sg 0琥珀酿亞胺基碳酸酯、環氧化物、續醯基氯、烧 2Ό0522976 缺-電子烯類、或其他相接物γ亦可含關之“基。或者，連療劑於活體内緩慢釋出。此類代★射才不織之治如）存在於草此… ㉝代。射上不穩疋之鍵結係（例基甲酸酯中。化物、羧酸酯類或胺、刀之/口療性標靶物及視間隔區X之長卢^ =之治療劑可能會在編蛋白質結合時展長^ 加標籤之治療劑會在與⑽蛋白質 -而僅加“治療劑之未結合部份才會展現 “的生物活性。所有此等不同特性皆涵括於本發明之範【發明内容】發明概述 ^發明係關於用以增加藥劑之血管内半衰期的方法，其特徵在於將該藥劑轉化成具通式（I)之化合物：〇 R G χ—γ—藥劑（|) 其中 R】為具有羧酸I^-C〇2H之基團，其R】—c〇2H可與漿液蛋白質可逆地結合， G為NH或C腳，其中W為氫、氟、氰基、硝基、c(=〇)_e、 SC = 〇)2-E2、S( = 0)-E3、芳基或 Ch-烷基，其中E、E、及E3獨立地代表c!-6_烷基、芳基、雜芳基烷氧基、胺基、Cl-6-烷基-胺基或二-Ch-烷基-胺 200522976 基， Z 為 s=o、s㈣）2、C㈣）、c(=〇)〇、c(=〇)NR2、或視需要經CHi基、w n氰基或雜亞芳基取代之亞芳基，該雜亞芳基視需要經Clt燒基、函素、硝基或代，其中R2代表氫、氰基或Ci 6-烷基， # X代表鍵結或間隔區，視需要地選自Ci—C2。—亞烷基、亞方基、雜亞芳I、Cl-C2Q〜全氟亞烷基或其組合、或 -[(CQ2)nA]m(CQ2)p- '[(CQ2)nA]„(CQ2)p-[(CQ2)nE]m(CQ2)p_，其巾或 nAm獨立地為卜2G\P獨立地為（M0，各A及E獨立地為-〇〜s〜nr3_、_N(c 或 P(OR6)(〇)-，其中、；及立地代表氫或Ci 6_燒基，各Q獨立地為氫或氟， γ代表能夠做為與藥劑鍵聯之連接物的官能基，視需要地選自-cc、_c(=s)—、_nr7(c=〇)— _〇c(=〇)_、 NR (c=s)—、_CH2_、—ch(〇h)_、_s(=〇)2、，9—s(*—、、-s-s-，其中 R、R及R獨立地代表氫或Ci 6_烷基，且術$ t劑”意指希望於血漿中延長其半衰期之化合物。、本务明亦關於用以增加治療劑之血管内半衰期的方 $其#徵在於將該治療劑轉化成具通式⑴）之化合物： 200522976 〇 R1^\rz、x-Y—治療劑（II) 其中R、G、Z、X及Y係如上述所定義。本發明亦關於具通式（I)之化合物： Ο ζ R1/^T、Χ—Υ—藥劑（|) 其中 R1為具有羧酸r1—c(m之基團，其ri—ccm可與漿液蛋白質可逆地結合， G為NH或CHW，其中w為氫、氟、氰基、硝基、c( = 〇) —E1、 = E2、Sb〇)-E3、芳基或 Ci 6-烷基， -、中E、E、及E3獨立地代表Cl_6 —烷基、芳基、雜芳基Cl-6-烷氧基、胺基、Cm-烷基-胺基或二—Ch —烷基一胺基，妹 z 為 s=0、s(=0)2、c(4)、c(=0)0、C(=0)NR2、或視需 2經基、*素、硝基、氰基或雜亞芳基取代之亞芳 :’該雜亞芳基視需要M C1_6-烷基、_素、硝基或氰基取 '、中R代表氫、氰基或c^6-烧基， # X代表鍵結或間隔區，視需要地選自Cl —c『亞烷基、5 土1隹亞芳基、Cl — C2°〜全氟亞烧基或其組合、^ -[(CQ2)nA]m(CQ2)p- -[(CQ2)nA]B(CQ2)p-[(CQ2)nE]m(CQ2)p_^t ' °及m獨立地為卜2〇且P獨立地為0-10， 200522976 各A及E獨立地為-〇—、mN(⑽4)_、_pR5(〇)_ 或 P(OR6)(〇)-，其中獨立地代表氫或c】 6_烷基，各Q獨立地為氫或氟， γ代表能夠做為與藥劑鍵聯之連接物的宫能基，視需要地選自-c(--〇)-、-c(=s)_、_NR7(C=〇c(=〇)… (C = S)-、-CH2_、_CH(〇H)_、—s(=〇)2、迎 Μ ㈣）2、 -s-、-s-s-，其中 R、R8及R9獨立地代表氬或G 6_烷基，合物且術語“藥劑，，意指希望於血聚中延長其半衰期之化本發明亦關於具通式（II)之化合物：〇 (II) R1又〆Z、 R G X - Y—治療劑其"1、G、Z、)(及γ係如上述所定義。本發明亦關於肖合> 士 π D 口各根據本杳明之化合物的物，及根據本發明之化人西糸、、且成化σ物用於製備治療疾病用醫藥品之用途。 ^ 定義本說明書中，下列術語具有所指定之定義：付°。’°療冑冑指能夠引發生物反應之肽類蛋白質、小分子藥物或任何其他類化合物。肽類蛋白術語“治療性多肽，，用於本文意用途或已研發用扒、Λ * π知甲用於治療研七用於治療用途之多肽。 12 200522976 術語“多肽”及“肽類”用於本文意指由至少五個藉由肽鍵連結之組成胺基酸所組成的化合物。組成胺基酸可選自由遺傳密碼編碼之胺基酸，且彼等可為非由遺傳密碼編碼之天然胺基酸以及合成型胺基酸。非由遺傳密碼編碼之天然胺基酸為例如經基脯胺酸、γ—緩基谷胺酸、鳥胺酸、石粦酸絲胺酸、D-丙胺酸及D-谷胺酸。合成型胺基酸包含藉由化學合成製得之胺基酸，亦即由遺傳密碼所編碼之胺基酸的D-異構物例如D-丙胺酸與D-亮胺酸、Aib ( α-胺基異丁酸）、Abu (α-胺基丁酸）、Tle (第三—丁基甘胺酸）、 _ β-丙胺酸、3-胺基曱基苯甲酸、鄰胺基苯甲酸。術語“類似物，，用於本文係指多肽類似物，意為其中该肽類之一或多個胺基酸殘基已被其他胺基酸殘基取代，且/或其中一或多個胺基酸殘基已從該肽類刪除，且/或其中或多個胺基酸殘基已添加至該肽類之經修飾狀類。此類胺基酸殘基之刪除或添加作用可發生於該肽之I末端及 /或該肽之C-末端。兩種不同且簡單之系統常用於描述類似物：例如 Arg34-GLP-1(7-37)或 K34R-GLP-1(7-37)命名為其籲中位置1-6之胺基酸已被刪除，且位置34之天然賴胺酸/已被精胺酸取代之GLP-1類似物（根據IUPAC-IUB命名原則使用胺基酸之標準單字母縮寫）。術語“衍生物，，用於本文與肽類相關意指經化學方式修飾之肽類或其類似物，其中至少一個取代物並不存在兮未經修飾之肽類或其類似物中，亦即，其已經共價修飾之狀類。代表性修飾為醯胺、碳水化合物、烷基、醯基、妒 13 200522976 類等。一項GLP-K7-37)衍生物之實例為

Arg，Lys (N -(γ-Glu(Na-十六烧醯基）））—GLP-1(7-37)。術語GLP—1肽”用於本文意指GLP-1(7-37)、GLP-1 類似物、GLP-1衍生物或GLP-1類似物之衍生物。於一項具體態樣中GLP-1肽為向胰島素劑。術語“向胰島素劑，，用於本文意指其為人類GLp — 丨受體促動劑之化合物，亦即，一種於含有人類GLp-1受體之適宜培養基中刺激cAMP形成的化合物。向胰島素劑之功效係藉由從下述之劑量—反應曲線計算出EC5。值而測定得。將表現所選殖人類GLP-1受體之幼倉鼠腎臟（ΒΗΚ)細胞

(ΒΗΚ-467-1 2Α)生長於添加 1〇〇 !u/mL 青霉素、1〇〇 m/mL 鏈莓素、10%胎牛血清及1 mg/m Geneticin g-418 (生命科技）之DMEM培養基中。藉由置於緩衝液（1〇⑽Tris —HC1、 30 mM NaCl及1 mM二硫蘇糖醇，ρΗ 7· 4，含有（額外）5 mg/L 亮抑蛋白酶（Sigma，聖路易市，M0，USA)、5 rag/L胃抑蛋白酶（Sigma)、100 mg/L 桿菌肽（Sigma)及 16 mg/L 抑蛋白酶肽（Calbiochem-Novabiochem，洛裘拉市，CA))中進行均質化而製備得質膜。將均質液置於41w/v%蔗糖上層進行離心。將介於兩層液面間之白色條帶稀釋於緩衝液中並離心之。將質膜儲放於-80°C下待用。功能性受體分析係藉由測量cAMP呈現對來自向胰島素劑刺激之反應而完成。於96-槽微量滴定平盤中以總體積為 140微升且各組成中濃度為：5〇遞Tris-Hn、i EGTa、 1· 5 mM MgS〇4、1· 7 mM ATP、20 mM GTP、2 mM 3-異丁基]〜 14 200522976 甲基黃嘌呤（IBMX)、〇.〇i%Tween-2〇，ρΗ7·4下進行培育。將欲受測試其促動劑活性之化合物溶解並稀釋於緩衝液中。GTP係現配用於各項實驗：將2· 5 pg膜加至各槽中並將混合物於室溫下伴隨搖晃培育於黑暗中達分鐘。以添加25被升0· 5 M HC1而終止反應。藉由閃爍近似分析法（Rpa 542，Amersham，UK)測量所形成之cAMP。對個別化合物繪製劑量-反應曲線，並使用GraphPad Prissm軟體計算得EC5〇值。術語—2肽”用於本文意指（JLP-2(1-33)、GLP-2 類似物、GLP-2衍生物或Glp-2類似物之衍生物。術語“ exendin-4肽，，用於本文意指exendin-4 (1-39)、exendin-4 類似物、exendin-4 衍生物或 exendin-4 類似物之衍生物。於一項具體態樣中exendin —4肽為向胰島素劑。術語“DPP-IV受保護”用於本文關於多肽係意指多肽已經化學方式修飾以使該化合物具有對漿液肽酶二肽醯胺基肽酶-4 (DPP-4)之抗性。漿液中之])PP-IV酵素已知涉及數種肽類激素，例如GLP-1、GLP-2、Exendin-4等類之分角午。因此，可致力於研發對DPP-1V所介導水解作用敏感之多肽的類似物及衍生物以減低其受DPP- IV降解之速率。將等量肽類（5 nmol )與i微升相當於酵素活性為5 mU 之經純化二肽醯胺基肽酶^於3rCT培育於1〇〇微升〇 ;1 Μ三乙胺-HC1緩衝液，pH 7. 4中10-180分鐘。藉由添加5 微升1 0%三氟乙酸測定酵素反應，然後將肽類降解產物分離 15 200522976 並使用HPLC分析定量。一種用於完成此項分析之方法為·· 將混合物加樣於Vydac C18寬孔（30 nm孔，5 μιη顆粒） 25Οχ4. 6 mm管柱上並以流速為1 ml /miη伴隨乙腈溶於〇 1 % 三氟乙酸之線性逐步梯度（0%乙腈3分鐘，〇_24%乙膳Η 分鐘，24-48%乙腈1分鐘），根據席袼等人，Regul· ^的 1 999 ; 79:93-1 02 及曼特萊等人，Eur. j· Bi〇chem. 1 993，·

21 4:829-35所述進行溶析。肽類及其降解產物可藉由比等於220 nm之吸光度（肽鍵）偵測得，並由其相對於標準物之高峰面積的積分定量。估算於導致少於1〇%肽被水解之培育期間點，肽類被二肽醯胺基肽酶IV水解之速率。術語“鹵素”意指F、Cl、Br或I。術語“Cl_6 —烷基”用於本文意指具有1至Θ個碳原子之飽和、支鏈、直鏈或環狀烴基。代表性實例包#(但不限定於）f基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二-丁基、第三-丁基、正戊基、異戊基、新戊基、第三一戊基、正己基、異己基、環己基等類。

新戊氧基、第三_戊氧基等類。中Ch-烧基係如上所定義。代表性實例包括（但不限定甲氧基、乙氧基、i丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異] 基、第二-丁氧基、第三_丁氧基、正戊氧基、異編正己氧基、異己氧基、環己氧基術語〔卜3。- *完基”用於太令立4 用於本文思指具有1至30個碳原子之

飽和、支鏈、直鏈或環妝挪I ^ L 辰狀垤基。非限制性實例包括乙基、 16 200522976 辛基、十六院基、7-乙基十六院基、環戊院并菲基等類。術語“Cl_30_全敦烧基”用於本文意指具有！至⑽個碳原子而其中全部氫原子皆由氟原子取代之飽和、支鏈、直鏈或環狀烴基。非限制性實例包括三氟甲基、五氟乙基、七氟丙基、九氟丁基、全氟異戊基、或全氟環己基。土術語“芳基，，用於本文意欲包括碳環類芳環系例如苯基、聯苯基、蔡基、戀基、菲基、苟基、玲基、并環戊二烯基、奥基等類。芳基亦欲包括前述碳環系之部分氯化衍。此類部分氫化衍生物之非限制性實例為L 2,以―四氫萘基、1，4-二氫萘基等類。，術語“亞芳基，，用於本文意欲包括芳煙_衍生其團例如1，2-亞苯基、；[3一亞笑其土 + 土亞本基、L 4-亞苯基、12一亞笼基、1，4-亞萘基等類。疋術語“雜亞茅基”用於本文意欲包括雜芳雙基團例如1，2,4_毗唑 ^ 呢2,5 一基、咪唑-1，2-二基、噻唑 -2, 4-二基等類。術語“芳氧基”用於太立、本文思扎基團-〇一芳基其中芳基係如上所疋義。非限制性一貧# 丨貫例為本氧基、桌氧基、憩氧基、非虱基、知氧基、茚氧基等類。 ^雜芳基”用於本文意欲包括含有-或多個選自鼠氧及硫之雜原子的雜王班采S ^ s / •基、聘唾基、噬。坐Α :哀糸例如呋喃基、噻吩基、 ,〇 , _ 土咪唑基、異0§唑基、異噻唑基、 -二 t；坐基、1 9 /1 - t 。密❿㈣基：；2:基：u基、卩比❿^^ ，Z，3 二畊基、l，2,4 —三明:基、H5 — 17 200522976 12,4-聘二唑基、ι，2,5-聘二 2, 3-噻二唑基、丨，2, 4-噻二唑三畊基、1，2, 3-腭二唑基、唑基、1，3, 4-腭二唑基、1，

基1，2, $噻一唑基、1，3, 4-噻二唑基、四唑基、噻二啡基、麵基、異_基、苯并肤喃基、苯并瞳吩基、嘲唾基、苯并㈣基、苯并―基、料異㈣基、苯并聘嗤基、苯开謂峻基m、喹㈣基、喹啡基嗤咐基、異喹：基、喹喔啉基、15-二氮雜萘基、碟啶基咔唑基、氮雜筆基、二氮轉基、D丫絲等類。雜芳基亦欲包括前述雜環系之部分氫化衍生物。此類部分氫化衍线之非限制性實例A 2, 3-二氫苯并呋D南基、批略啉基，嗤咐基、 2’ 3-__風#基 ' ’呆咐基、d定基聘嗤咐*、氧雜基等類。 ’ 某些上述所定義之術語可能在結構式中出現不只一 -人，且各術語之出現應獨立個別定義之。

術語“視需要經取代”用於本文意指所指基團係未經取代或經-或多個特定取代基取代。#所指基團經_或多個取代基取代時，該等取代基可為相同或相異。發明詳述於一方面本發明係關於增加藥劑之血管内半衰期的方法，其特徵在於將該藥劑轉化成具通式（之化合物：

X 一 Y—藥齊J (|) 其中，其R -cow能夠與漿液 R為具有緩酸jR1 — C〇2H之基團 18 200522976 蛋白質可逆地結合， G為NH或CHW，其中w為氫、氟、氰基、硝基、CkCO-E1、 S( = 0)2-E2、S( = 〇)-E3、芳基或 Ch-烷基，其中E、E2、及E3獨立地代表Ci-e-競•基、芳基、雜芳基、c卜r燒氧基、胺基、Ch_烷基—胺基或二一Ch一烷基一胺基， Z 為 S = 〇、S(:0)2、C( = 〇)、c( = 0)0、C( = 0)NR2、或視需要經Cl-6 —烷基、鹵素、硝基、氰基或雜亞芳基取代之亞芳

基，該雜亞芳基視需要經Cie_烷基、鹵素、硝基或氰基取代，其中R代表氫、氰基或Cl烷基， “ x代表鐽結或間隔區，視需要地選自Crc『亞烧基、亞方基#亞芳基、c「c2。-全說亞烧基或其組合、或 - [(CQ2)nA]m(CQ2)p— 、 -[(CQ2)nA]m(CQ2)p-[(CQ2)nE]m(CQ2)p_ } ^ 獨立地為卜2^^獨立地為0-10，

各A及E獨立地為—〇〜、— 或明”(〇)-，其中 NR''-N(C0R4)-'-pR5(0)- R:〇R4、R5及R6獨立地代表氫或Ch-燒基，各Q獨立地為氫或氟，

γ代表能夠做為與藥劑M 地選自二鍵秘之連接物的官能基’視需要 NRscc C( —S)〜、〜NR7(〇0)—、—0C(=0)一、 -NR (C-S)-、—CH2—、—CH( -S-、-S-S· 其中、-S( = 〇)2、-NR9-S(=〇)2—、 19 200522976 R、R8及R9獨立地代表氫或Ci 6-烷基，且術語“藥劑”意指希望於血漿中延長其半衰期之化合物。於另一方面本發明係關於增加治療劑之血管内半衰期的方法，其特徵在於將該治療劑轉化成具通式（1丨）之化合物：〇 ,Λ .ζ R G 、χ - γ—治療劑（II) 其中R1、G、Ζ、X及γ係如上述所定義。於一項具體態樣中，本發明係關於一種方法其中該治療劑為生物聚合物。於另一項具體態樣中，本發明係關於一種方法其中該治療劑為多肽。於另一項具體態樣中，本發明係關於一種方法其中該治療劑為小分子藥物，例如具有分子量小於1 500 Da之藥物。於一方面’本發明係關於製備根據式（〗）或（丨丨）之化合物的方法’其包含將該藥劑或治療劑與具通式（丨丨丨）之化合物反應〇 r1^^tz、x - γ1 (in) 於本發明一項具體態樣中，Y1為能夠與化合物進行鍵-形成反應而產生具通式（I)化合物之官能基，γΐ視需要地選自-C( = 〇) —L、-C( = s)-L、一NR2(〇0)-L、-〇C(:〇)-L、 -NR2(〇S)-L、-C(H2)-L、-C(Ch-烷基）（：〇)、_CH( = 〇)、 20 200522976 -S( = 〇)2-L、-NR2-s( = 〇)2-l、-SH-、-S-L、NCO、-NCS、-NCNR2、 -NC 、 —0—NH2 ，其中 L為供親核性置換之脫離基，視需要地選自羥基、鹵素、2, 6-二氯苄醯基、新戊醯基、2-或4-硝基苯氧基、2, 4一二硝基苯氧基、苯并三唑-卜基氧基、4_苯并三唑_3-基氧基、Ci-6-烷氧羰基氧基、4一氧_3, 4 —二氫-L 2, 3一苯并三唑一3一基氧基、全氟苯氧基、咪唑基、2,5-二氧吡咯啶—丨—基氧基、 1，3-二氧-2, 3-二氫y-H-異吲哚—2 —基氧基、2, 4, β —三氯苯氧基或疊氮化物，且其中R2代表氫、氰基或Ci6_烷基。於另一方面本發明係關於具通式（1丨丨）之化合物： 1 z R1 入 G，Z、x - γ1 (III) 其中R、G、Z、X及γ1係如上述所定義。

於另一方面本發明係關於根據式丨、π或ιπ中任者之化合物’其中相對應之酸RI_c〇2H具有對人類血清白白之結合親合常數低於約10 μΜ或低於約i 於本發明一項具體態樣中，R1係選自 C】-『院基，視需要地經一或多個_c〇2H、—s〇3H、―⑼瓜 -somm鹵素或芳基取代，該芳基視需地經-C〇2H、-S〇3H、-P〇2〇h、 ύυ2·2、-随2、-OH、-SH、鹵素取代，或 C"。-全u基’視需要地經—或多個心 -P〇2〇H、-S〇2NH2、-随2、〜〇Η、-ςΗ 上 ± SH、_素或芳基取代，該基視需要地經-CO2H、-SO3H、-ΡΠ rm r, 、-S〇2NH2、- 〇Η -SH、或鹵素取代。 21 200522976

於本發明另一項具體態樣中，RI τ 遥自直鏈烷基、支鏈烧基、具有ω -羧酸基之基團、部份或—入， |切或凡全虱化之環戊烷并菲骨架。於本發明另一項具體態樣中，丨 T R -C〇2H係選自芳基乙酸、碘芬酸或二羧酸類。於本發明又一項具體態樣中，Ri — rn H^ * τ κ L〇2H為蒙1洛芬或3-羧基—4 -甲基一5 —丙基—2-呋喃丙酸（CmpF)。於又另一項具體態樣中，Ri呈右 /、有6至40個碳原子、8 至26個碳原子或8至20個碳原子。於又另m態樣中，R1係肽類，例如包含少於4〇個胺基酸殘基之肽類。許多與人類血清白蛋白可逆社人之小分子肽類為該項技藝已知者（參見例如’丹尼斯U等人，J. Bi〇1. Chem. 277(38)，2〇〇2, 35〇35 35〇⑴.。於本發明另一項具體態樣中，G為NH。於本發明另一項具體態樣中，Z為S卜〇)2。於又另一項具體態樣中，q為Η。於本發明又另一項具體態樣中，Α及Ε皆為—〇一。於本發明又另一項具體態樣中，η為2。於又另一項具體態樣中，本發明係關於根據式I、η ==1中任—者之化合物’其中χ為具有分子量範圍介於、勺80 Da至約1 000 Da，或範圍介於約8〇 “至約別〇 μ 之間隔區。於本發明又另一項具體態樣中，該治療劑為生物聚合物0 22 200522976 於本發明又另一項具體態樣中，該治療劑為多狀。於本發明又另一項具體態樣中，該治療劑為藉由該多肽中賴胺酸殘基之ε-胺基接附至Y上的多狀。於本發明又另一項具體態樣中，該治療劑為藉由選自半胱胺酸、谷胺酸及天冬胺酸之胺基酸殘基接附至γ上的多肽。於本發明一項具體態樣中，該治療劑為GLp-1 n太。於本發明另一項具體態樣中，該治療劑為選^

GLP-U7-35) 、GLP-K7-36) 、GLP-l(7-36)_ 醯胺、 GLP-1(7-37)、GLP-l(7-38)、GLP-K7-39)、GLP_1(7_4〇) GLP-1(7-41)或其類似物之GLP-1肽。於本發明一項具體態樣中，該治療劑為包含不多於4 五個相較於GLP-1(7-37) (SEQ ID Ν〇·丨）已經置換、添办或刪除之胺基酸殘基，或包含不多於十個相較方 GLP-K7-37) (SEQ ID Ν0. μ經置換、添加或刪除之堪基酸殘基的之GLP-1肽。

於本發明另一項具體態樣中’該治療劑為包含不多求六個相較於GLP-1(7 —37)⑽IDN〇. η已經置換、添力或刪除之胺基酸殘基的之GLp—丨肽。於本發明另—項具體態樣中，該治療劑為包含不多於個非由遺傳密碼所編碼之胺基酸殘基的之讥㈠肽。 r"p=發明另一項具體態樣中，該治療劑請_"太; 係DPPIV-受保護之GLP-1目太。於本發明一項具體態樣中’該治療劑為其包含位… 23 200522976 置8之Aib殘基之GLP-1肽。於本發明一項具體態樣中，該治療劑為GLP-1肽其中位於該GLP-1化合物位置7之胺基酸殘基係選自D-組胺酸、去胺基-組胺酸、2-胺基-組胺酸、β-羥基-組胺酸、高組胺酸、Να-乙醯基-組胺酸、α-氟甲基-組胺酸及α-甲基-組胺酸。於本發明一項具體態樣中，該治療劑為GLP-1肽其包含具式 IV 之胺基酸序列：

Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaaie -Ser-Xaau -Xaai9 - Xaa2〇-Glu-Xaa22 - Xaa23-Ala-Xaa25 - Xaa26 - Xaa27 - Phe -1 1 e-Xaa3〇-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34 - Xaa35-Xaa36-Xaa3 7-Xaass - Xaa 39-Xaa4〇-Xaa4i-Xaa42 - Xaa43 - Xaa44*~Xaa45 - Xaa46 式（IV) (SEQ ID No: 2) 其中

Xaa?為L-組胺酸、D_組胺酸、去胺基-組胺酸、2-胺基 -組胺酸、β-羥基-組胺酸、高組胺酸、Να-乙醯基-組胺酸、 α-氟曱基-組胺酸、α-曱基-組胺酸、3-吡啶基丙胺酸、2-吡啶基丙胺酸及4-吡啶基丙胺酸；

Xaas 為 Ala、Gly、Val、Leu、lie、Lys、Aib、（1-胺基環丙基）羧酸、（1-胺基環丁基）羧酸、（卜胺基環戊基）羧酸、（卜胺基環己基）羧酸、（1-胺基環庚基）羧酸、或（1一胺基環辛基）幾酸；

Xaaie 為 Va 1 或 Leu ;

Xaau 為 Ser、Lys 或 Arg ; 24 200522976

Xaai9 為 Tyr 或 Gin ;

Xaa2〇為 Leu 或 Met ;

Xaa22 為 Gly、Glu 或 Aib ;

Xaa23 為 Gin、Glu、Lys 或 Arg ;

Xaa25 為 Ala 或 Val ;

Xaa26 為 Lys、Glu 或 Arg ;

Xaa27 為 Glu 或 Leu ;

Xaa3D 為 Ala、Glu 或 Arg ;

Xaa33 為 Val 或 Lys ; ·

Xaa34 為 Lys、Glu、Asn 或 Arg ;

Xaa35 為 Gly 或 Aib ;

Xaa36 為 Arg、Gly 或 Lys ;

Xaa” 為 Gly、Ala、Glu、Pro、Lys、醯胺或不存在；

Xaa38為Lys、Ser、S篮胺或不存在；

Xaa39為Ser、Lys、醯胺或不存在；

Xaa〇為Gly、醯胺或不存在；

Xaa41為Ala、醯胺或不存在；鲁

Xaa42為Pro、醯胺或不存在；

Xaa43為pro、醯胺或不存在；

Xaa“為pro、醯胺或不存在；

Xaan為ser、醯胺或不存在；

Xaa“為醯胺或不存在；其條件為若 Xaa38、Xaa39、xaa4。、Xaa4i、、以心、

Xaa“、Xaa45sl Xaa“不存在’則其下游各胺基酸亦不存在。 25 200522976 於本發明一項具體態樣中，該治療劑為GLP-1肽其包含具式 V 之胺基酸序列：

Xaa?-Xaas-G1u-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaau- 式（V) (SEQ ID No: 3) 其中

Xaa?為L-組胺酸、D-組胺酸、去胺基-組胺酸、2-胺基 -組胺酸、β -經基-組胺酸、高組胺酸、Ν α -乙醯基-組胺酸、 α-氟甲基組胺酸、α-甲基-組胺酸、3-批。定基丙胺酸、3-毗啶基丙胺酸及4-吡啶基丙胺酸；

Xaa8 為 Ala 、 Gly 、 Val 、 Leu 、 lie 、 Lys 、 Aib 、（1-胺基環丙基）羧酸、（1-胺基環丁基）羧酸、（1-胺基環戊基）羧酸、U-胺基環己基）羧酸、U-胺基環庚基）羧酸、或（卜胺基環辛基）缓酸；

Xaai8 為 Ser、Lys 或 Arg ;

Xaa22 為 Gly、Glu 或 Aib ;

Xaa23 為 Gin、Glu、Lys 或 Arg ;

Xaa26 為 Lys、Glu 或 Arg ;

Xaas。為 Ala、Glu 或 Arg ;

Xaa34 為 Lys、Glu 或 Arg ;

Xaa35 為 Gly 或 Aib ;

Xaa36 為 Arg 或 Lys ;

Xaa” 為 Gly、Ala、Glu 或 Lys ;

Xaa38為Lys、酉藍胺或不存在； 26 200522976 於本發明另一項具體態樣中，該治療劑為GLP-1肽其係選自 Arg34GLP-1(7-37)、Lys38Arg26’34-GLP-l(7-38)、

LyS38Arg 2 6,3 4 -GLP-l(7-38)，OH、Lys36Arg 2 6,3 4 -GLP-l(7-36)、

Aib 8,2 2,3 5 GLP-l(7-37)、Aib8’35GLP-l(7-37)、 Aib8,22GLP-l(7-37)、Aib8’2 2,3 5 Ax*g26’34Lys38GLIM(7-38)、

Aib8,35Arg2 6,3 4 Lys38GLP -1 (7-3 8)、

Aib8,22Arg26’34Lys38GLP-l (7-3 8)、

Aib 8,2 2,3 5 Arg 2 6,3 4 Lys38GLP-l (7-3 8)、 Aib8,35Arg26’34Lys38GLP-l(7-3 8)、

Aib 8,2 2,3 5 Arg26Lys38GLP· 1 (7·3 8)、 Aib8,35Arg26Lys38GLP-l(7-38)、

Aib8,22Arg26Lys38GLP-l(7-38)、

Aib8’2 2,3 5 Arg34Lys38GLP -1 (7-3 8)、

Aib8,35Arg34Lys38GLP -1(7-38)、

Aib8’22Arg34Lys38GLP-l(7-38)、

Aib8’22’35Ala37Lys38GLP-l(7-3 8)、 Aib8,35Ala37Lys38GLP-l(7-38)、

Aib8,22Ala37Lys38GLP-l(7-38)、Aib 8,2 2,3 5 Lys37GLp](7-37)、 Aib8,35Lys37GLP-l(7-3 7：^Aib8,22LyS37GLP-l(7d8)。於本發明另一項具體態樣中，該治療劑為Glp- 1肽其係藉由相對於胺基酸序列SEQ ID No : 1之位置23、26、34、 3 6或3 8的胺基酸殘基接附至γ上。於本發明另一項具體態樣中，該治療劑為GLP-1肽其係 exendin-4 (SEQ ID No: 4)。方；本發明另一項具體態樣中，該治療劑為GLp-丨肽其係Z P -1 〇，亦即 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPSKKKKKK- 27 200522976 && 月女（SEQ ID No: 5)。於本發明另一項具體態樣中，該治療劑為GLp_"太其中f-C㈣）-G-Z_X-Y-係接附至該GLP，之端胺基酸殘基上。於本發明另一項具體態樣中，該治療劑為GLP—i S太其中第二R】-C(.G_Z一χ_γ—部份係接附至非為c_端胺基酸殘基之另一胺基酸殘基上。 ’該治療劑為GLP-2肽。 ’該治療劑為GLP-2肽其於本發明另一項具體態樣中於本發明另一項具體態樣中係DPPIV-受保護之GLP-2肽。於本發明另一項具體態樣中，該治療劑為GLP-2肽其係 Gly2-GLP-2(卜33)。於本發明另一項具體態樣中，該治療劑為glp_2肽其係 Lys17Arg3°-GLP-2(卜33)。於本發明另一項具體態樣中，該根據式丨或ΠΙ之化合物為If17-(6-((2-(3-(苄醯基）苯基）丙醯基胺基）磺醯基）己醯基）[1^^，Αγ，](^Ρ-2(1-33)或#(月桂醯基胺磺醯 · 基）苄基-[Glu3，Gln17]GLP-2(l-33)。於本發明另一項具體態樣中，該治療性多肽為人類胰島素或其類似物。於本發明另一項具體態樣中，該治療性多肽係選自 AspB28-人類胰島素、LysB28, ProB29〜人類胰島素、LysB3, g1ub29一人類胰島素、Gly⑴，ArgB' Arg_-人類胰島素及去（B3〇)人類胰島素。 28 200522976 方、本發明另一項具體恶樣中，該治療性多肽為人類生長激素或其類似物。於本發明另一項具體態樣中，該治療性多肽為甲狀旁腺素或其類似物。於本發明另一項具體態樣中，該治療性多肽為人類促滤泡激素或其類似物。於本發明另一項具體態樣中，該治療性多肽具有莫耳量小於100 kDa，小於50 kDa或小於10 kDa。於本發明另一項具體態樣中，該治療性多肽係選自血 _ 小板-衍生生長因子（PDGF)、轉化生長因子α (TGF —、轉化生長因子β (TGF-β)、上皮生長因子（EGF)、血管内皮生長因子（VEGF)、生長調節素例如胰島素生長因子^ (1〇?-1)、胰島素生長因子11(1(^一11)、紅血球生成素 (EPO)、血小板生成素（TP〇)或血管生成素、干擾素、原—尿激酶、尿激酶、組織纖溶酶原激活劑（t_PA)、纖溶酶原激活劑抑制劑1、纖溶酶原激活劑抑制劑2、von Wi丨丨ebrand1：因子、細胞因子例如間白素如間白素（IL) i、IL一 1Ra、IL_2、 · IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、 II-16、IL-17、iL-18、IL-20 或 IL-21、群落刺激因子（CSF) 如GM-CSF、幹細胞因子、腫瘤壞死因子如TNF-a、淋巴毒素-α、淋巴毒素-β、（；D40L或CD30L、蛋白酶抑制劑例如抑蛋白酶肽、諸如超氧化物歧化酶、天冬醯胺酶、精胺酸酶、精胺酸脫胺酶、腺苷脫胺酶、核糖核酸酶、過氧化氫酶、尿酸酶、膽紅素氧化酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、鹼性磷 29 200522976 酸酶、β-葡糖醛酸酶、嘌呤核苷磷阿片樣物質例如㈣肽、腦賴^凝血酶之酵素、素或神經肽類例如降鈣素、昇糖激：仃片樣物質、激 I、月泌辛、你瞥卜日舍缩膽囊肽、促黃體素、促性腺素釋放激素、絨毛減性腺素、促腎上腺皮質素釋放因子、催產素、抗利尿素、促甲狀腺激素 b 、鬆弛辛、催乳辛、肤vv B4. 甲狀腺素釋放激素、 CAR上：二狀Y、姨多狀、肥胖抑制素、

了待因與女非他命調節之轉錄產物）、⑽相關肽、 Penlipin、黑質皮質素（黑細胞— 职素-濃縮激素、鈉尿肽類、越固酮調節素:、：：二M S H、黑糊精、血管活性腸狀（Vlp)、样””'素、 (PACAP)、鈴蟾肽、^化酶活化多肽白、可一、下1:=胸腺素、肝素-結合蛋、……丄驷釋放因子、褪黑素及其類似物。 =夕狀可經由傳統肽類合成，例如使用 :二學之固相_合成或其他已建立之技術製得(參見例如格林與伍特斯，“右德人士山

利父子，1 999 )。錢合成中之保護基，，，約翰威 .可藉由其包含將含有編碼該多肽之舰序列且能夠 =二：的宿主細胞培養於適宜營養培養基中及於可促而H 之條件下，然後將所成之肽類從培養物回收而衣備侍治療性多肽。於於培養該等細胞之培養基可為任何適用於生長宿主細胞之習用土立| | 一〇土，例如含有適當補充物之基本培養基或複合培養基。摘舍+立兰e ^ I且丨。養基可購自商業供應商或可根據已公 30 200522976 開製法中）。與培養對於胞微過濾化，例過濾層離出上自培養或其先製備得然後可基分離外產物、超過如離子析術、清液之基之細驅物。

j如載列於美國模式培養物保存所之目錄習知程序包括以離心或過遽 '將宿主細胞 :而，由細胞產生之肽類自培養基回收得。、系藉由過濾、官柱層析術或沈;殿法，例如，、寺電點沈殿、經由各種層析術程序之純父換層析術、厭水性相互反應層析術、凝膠親合性層析術等（視標的多肽類型而定）單組成。對於胞内或壁膜間隙產物，係將分離胞進仃分解或透化並萃取以回收得產物多肽編碼治療性多狀之DNA序列可適宜地為基因組或識來源，例如係藉由基因組或cDNA基因庫並使用合成型寡核，酸探針根據標準技術（參見，例如，山姆布克，了，弗里 tEF與馬尼提斯，τ，分子選殖：實驗室手冊，冷泉港實一版、、丑、力，1 9 8 9 )之雜父作用篩檢出編碼完整或部

份該肽類之DNA序列。編碼該多肽之DNA序列亦可藉由已建立之標準方法，例如由博凱吉與卡魯特，Tetrahedron Letters 22 ( 1 981 )，1 859-1 869所述之磷酸醯胺化方法，或由馬蒂斯等人，EMB0 journal 3 (1984)，8(Π-805所述方法以a成方式製備得。DNA序列亦可藉由使用特定引子之來a酿鍵反應製備得，例如於美國專利46 8 3，2 〇 2或齊木等人，Science 239 ( 1 988)，487-491 中所述者。亦可將DNA序列插入任何可方便用於進行重組關A程序之載體中，而載體之選擇往往取決於其欲被導入之宿主 31 200522976

細胞。因此，葡體可或π A 色體外完整性存在1 ° '丁硬製之載體’亦即其係以染外…存在，其複製與染色體複製獨立之載… 如質體。或者，載體可載肢，例田”被導入佰主細胞入入伤主細胞基因組中，並與其 ^口進複製的載體。斤1入之染色體-同進行豆父表現載體其中編碼該多狀之DNA序列係 ==議轉錄所需之額外片段，例如啟動子鍵聯啟動子可為任何於所選宿主細胞中展現轉錄活性之驗

列’且可街生自編碼與宿主細胞同源或異源之蛋因。用於主導編碼本發明肽類之舰於各種宿主細胞中; 行轉錄的適宜啟動早盔# 5 站力子為该項技藝所熟知，參見例如，山士布克等人（如前述）。若需要，編碼多狀之麵序列亦可操作地與適宜終結子*腺苦化5fl就、轉錄增效子序列及轉譯增效子序列連、、口本备明之重組载體可進一步包含能使載體於指定宿主細胞中複製之DNA序列。

-亦可已έ可供述擇之標記，例如其產物可互補宿 ^缺陷，$可供精藥物（例如节青霉素、肯那$素、四娘素、氣霉素、新霉素、潮霉素或胺甲蝶呤）抗性之基因。對於大規模製造，可供選擇之標記較佳地不為抗生素抗生，例如畲載體用於大規模製程時較佳地將存在載體中之抗生素抗性基因剔除。用以將抗生素抗性基因從載體清除之方法為该項技藝已知者，參見例如美國專利6,358,705，其以引用方式併入本案作為參考。 32 200522976 為指導本發明本體狀類進入宿主細胞之分泌途徑，可於重組載體中提供分泌訊號序列（已知亦稱做引導序列、如原序列或前序列）。將分泌訊號序列以正確讀框連接至編碼該肽之DNA序列。分泌訊號序列一般係位於相對編碼 ϋ亥狀之DNA序列的5 ’端。分泌訊號序列可為正常與該狀締合者，或可源自編碼另一分泌型蛋白質之基因。用於分別將編碼本發明肽類之DNA序列、啟動子與視而要地終結子及/或分泌訊號序列接合，以及將彼等插入含有供複製所需之資訊的適宜載體中之程序為習於該項技藝者所熟知（參見例如，山姆布克等人（如前述））。其中導入DNA序列或重組載體之宿主細胞可為任何能夠製造本發明肽類之細胞，且包括細菌、酵母、真菌及高 f真核細胞。該項技藝中已熟知且已使用之適宜宿主細胞

戶、例為（非限制於）大腸桿菌、釀酒酵母菌或哺乳動物BHK 或CH0細胞系。於另一方面’本發明關於選自下列之化合物：

，及 33 200522976

0 p Η 於另一方面，本發明關於選自下列之化合物：

用於藉由將該治療性多肽以該化合物衍生化而改變該治療性多肽之藥物動力學特性的用途。

含有根據本發明化合物之醫藥組成物可藉由習知技術，例如於雷明頓製藥科學，1 9 8 5或於雷明頓：製藥科學及實施，第1 9版，1 9 9 5所述者製備得。本發明之一目的欲提供含有以濃度為約0. 1 mg/ml 至約 2 5 m g / m 1存在之根據本發明化合物的醫藥調合物，且其中該調合物具有pH值為約2. 0至1 0. 0。該調合物可進一步包含緩衝系統、防腐劑、等張性劑、螯合劑、安定劑及界面活性劑。 34 200522976 於本發明一項具體態樣中，該醫藥調合物為水性調合物，亦即包含水之調合物。此類調合物代表性地為溶液或懸浮液。於本發明另一項具體態樣中，該調合物為水性溶液。術語“水性調合物”係定義為包含至少 50%w/w水之調合物。同樣，術語“水性溶液”係定義為包含至少 50%w/w水之溶液，而術語“水性懸浮液”係定義為包含至少5 0 % w / w水之懸浮液。於另一項具體態樣中，該醫藥調合物為凍乾調合物，其於使用前可由醫師或患者自行添加溶劑及/或稀麵釋劑。於另一項具體態樣中，該醫藥調合物為立即可用之乾燥調合物（例如經冷凍乾燥或喷霧乾燥）無需經任何預先溶解。於本發明另一方面係關於包含根據本發明化合物之水溶液及緩衝液之醫藥調合物，其中該化合物係以 0. 1 mg/ml或以上之濃度存在，且其中該調合物具有pH 值為約2. 0至約1 0 . 0。 _ 於本發明另一方面係關於包含根據本發明化合物之水溶液及緩衝液之醫藥調合物，其中該化合物係以 0.1 mg/ml或以上之濃度存在5且其中該調合物具有pH 值為約7. 0至約8. 5。於本發明另一項具體態樣中，該調合物之pH值係選自下歹ij : 2 · 0、2 · 1、2 · 2、2 · 3、2 · 4、2. 5、2. 6、2 · 7、 2.8、2.9、3.0、3」、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、 35 200522976 3.8、 3.9、4.0、4」、[2、4.3、4.4、4.5、[6、4.7、 4.8、 4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、 5.8、 5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6·6λ 6.7、 6.8、 6.9、7.0、7」、7.2、7.3、7.4、7.5、7,6、7.7、 7.8H 8.0、8」、8.2、8.3、8.4H 8.6、8小 8.8、 8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、 9. 8 ^ 9. 9 A 10.0° 於本發明又一項具體態樣中，該緩衝劑係選自醋酸鈉、碳酸鈉、檸檬酸鹽、甘胺醯甘胺酸、組胺酸、甘胺酸、賴胺酸、精胺酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸鈉及參（羥甲基）-胺基甲烷、二（羥乙基）甘胺酸、麥黃酮、蘋果酸、琥珀酸、馬來酸、延胡索酸、酒石酸、天冬胺酸或其混合物。此等特定緩衝劑各構成本發明之其他替代具體態樣。於本發明又一項具體態樣中，該調合物進一步包含醫藥上可接受之防腐劑。於本發明又一項具體態樣中，該防腐劑係選自酚、鄰-曱苯酚、間-曱苯酚、對-甲苯酚、對-羥苯甲酸曱酯、對-羥苯甲酸丙酯、2 -苯氧基乙醇、對-羥苯甲酸丁酯、2 -苯基乙醇、苯甲醇、氣丁醇、及硫柳汞、溴硝丙二醇、苯曱酸、醯亞胺脲、氯己定、去氫乙酸鈉、氯甲苯酚、對-羥苯曱酸乙酯、苯索氯銨、甘油基對氯苯醚（3對-氯苯氧基丙烷-1，2-二醇）或其混合物。於本發明又一項具體態樣中，防腐劑係以0. 1 mg/ml至2 0 mg/ml之濃度存在。於本發明又一項具體態 36 200522976 樣中，防腐劑係以G〗mg/m〗至5 mg/ml之濃度存在。於本毛月又項具體恶樣中，防腐劑係以5 mg/m 1至1 〇 mg/ml之濃度存在。於本發明又一項具體態樣中，防腐劑係以10 mg/ml至20 mg/ml之濃度存在。此等特定防腐μ]各構成本發明之其他替代具體態樣。防腐劑於醫藥組成物中之用途為習於該項技藝人士已熟知。為方便請參考雷明頓：製藥科學及實施，第19版，1 9 95。方、本务明又一項具體態樣中，該調合物進一步包含等張劑。於本發明又一項 # _并鹽類（例如氯化納）、唐=s劑係選自甘胺酸、L-組胺酸、精月西醇、胺基酸（例如卜 '、月女-义、賴胺酸、異亮胺酸、天夂月女k、色胺酸、蘇胺酸）、丙二醇(丙二醇）” 3?類（例如丙三醇(甘油）、乙二醇（例如PEG400 )或1醇、U —丁二醇）、聚如單-、雙-或多糖類、或物了使用任何糖類例葡萄糖、甘露糖、山半糖：：聚糖，包括例如果糖、海藻糖、右旋糖針、二二糖、麥芽糖、乳糖、嚴糖、澱粉、羥乙基：殿於及焱私、糊精、環糊精、可溶性〇基灰如及竣曱基纖維 a。樣中糖類添加物^ $ μ ; 項具體態山梨糖醇、肌醇、 j如，甘露糖醇、糖醇。於-項具體態樣矛％、木糖醇及阿拉伯糖頌或糖醇類可個別或組#醇。如述要該糖類或糖醇可溶解里並無限定，只解於液體製劑中且其劑量不會有 37 200522976

害地影響使用本發明方法所達成之安定功效。於一項且體態樣中，糖類或糖醇濃度係介於約！ mg/mi'至'I” •ng/ml之間。於本發明又一項具體態樣中，等張劑係以 1 mg/ml至50 mg/ml之濃度存在。於本發明又—項呈體態樣中，等張劑係以！ mg/mlS 7 „g/ml之濃度存;^ 於本發明X-項具體態樣中，#張劑係以8叫^至24 mg/ml之濃度存在。於本發明又一項具體態樣中，等張劑係以25 mg/ml至50 mg/ml之濃度存在。此等特定等張劑各構成本發明之其他替代具體態樣。等張劑於醫藥、且成物中之用途為習於該項技藝人士已熟知。往參考雷明頓：製藥科學及實施，第19版，"Μ。叫於本發明又一項具體態樣中，該調合物進一步包含螯合劑。於本發明又一項具體態樣中，該整合劑係選自乙一胺四乙酸（EDTA)之鹽類、檸檬酸及天冬胺酸、及其混合物。於本發明又一項具體態樣中，整合劑係以 mg/ml至5 rag/ml之濃度存在。於本發明又—項具體態樣中，等張劑係以mg/ml至2 mg/inl之濃度存在。方；本發明又一項具體態樣中，等張劑係以2至$ mg/ml之濃度“。此等特定螯合劑各構成本發明之其他替代具體態樣。螯合劑於醫藥組成物中之用途為習於員技☆人士已热知。為方便請參考雷明頓：製藥科學及實施，第19版，1995。

於本發明又一項具體態樣中，該調合物進一步包含女疋d。女疋劑各構成本發明之其他替代具體態樣。為 38 200522976 方便請參考雷明頓：製藥科學及實施，第1 9版，1 995。更特別地，本發明之組成物為經安定化之液體醫藥組成物其治療活性組成包括可能在儲放於液體醫藥調合物期間出現聚集體形成之多狀。“聚集體形成”意指於多肽分子間發生物理交互作用而導致寡聚物（可能仍然為可溶性）或自溶液沈澱出之大型可見聚集體形成。 “在儲放期間”意指一旦經製備得之液體醫藥組成物或調合物並未立即投藥予患者。而是，在製備後經包裝儲放於液體形式、冷凍狀態或呈供稍後再重建成為液體形式或其他適用於投藥予患者之形式的乾燥形式。“乾燥形式”意指液體醫藥組成物或調合物藉由冷凍乾燥 (亦即，凍乾；參見例如威廉斯與波利（ 1 984 ) J. Parenteral Sci· Technol. 38:48-59 )、喷霧乾燥（參見馬特斯（1991)於喷霧-乾燥手冊（第5版；Longman科學與技術，艾瑟茲，U· K· )，pp· 49 1 -676 ;布羅海得等人（1992) Drug Devel. Ind. Pharm. 18:1169-1206; 及穆蒙哈勒等人（ 1 9 94 ) Pharm. Res. 11:12-20)或風乾（卡本特與克羅U 988 )低溫生物學25 ; 459-470 ;及羅瑟（1 991) Biopharm· 4 ·· 47-53 )進行乾燥。由多駄在液體組成物儲放期間造成之聚集體形成可能有害地影響該多肽的生物活性，而導致該醫藥組成物之治療功效喪失。而且，聚集體形成可能會造成其他問題例如當含有多肽之醫藥組成物係使用灌流系統投藥時之導管、薄膜或幫浦阻塞。 39 200522976 多本=明之醫藥組成物可進一步包含足夠量減低由 ^ 成物儲放期間造成之聚集體形成的胺基酸鹼、土 ‘驗類意指胺基酸或胺基酸組合物，其中任何所給定来、之基馱係以其游離態鹼類形式或以其鹽 t形式ΐ在。若使用胺基酸組合物，則所有胺基酸可能白以彼等之游離態鹼類形式存在、全部可能皆以彼等之鹽類形式存在、或有些可能以彼等之游離態鹼類形式存在而其他係以彼等之鹽類形式存在。於一項具體態樣中，用於製備本發明組成物之胺基酸為該等含有帶電荷鲁側鏈者，例如精胺酸、賴胺酸、天冬胺酸及谷胺酸。於項具體恶樣中，用於製備本發明組成物之胺基酸為甘胺酸。特定胺基酸（例如曱硫胺酸、組胺酸、咪唑、精月*酸、賴胺酸、異亮胺酸、天冬胺酸、色胺酸、蘇胺酸及其混合物）之任何立體異構物（亦即L或D)或此等立體異構物之組合物可存在於本發明醫藥組成物中，只要該特定胺基酸係以其游離態鹼類形式或其鹽類形式存在。於一項具體態樣中係使用L_立體異構物。本發明 _ 組成物亦可與此等胺基酸之類似物調合。“胺基酸類似物意指呈現欲減低由多肽在本發明液體醫藥組成物储放期間造成之聚集體形成的所希望功效之天然胺基酸衍生物。適宜之精胺酸類似物包括（例如）胺基胍、鳥胺酸及N-單乙基L-精胺酸，適宜之甲硫胺酸類似物包括S-乙基高半胱胺酸及S-丁基高半胱胺酸，而適宜之半脱胺酸類似物包括S-甲基L半胱胺酸。如同其他胺 40 200522976 基酸類，胺基酸類似物係以彼等之游 :鹽類形式併入"物中。於本發明又_項具體態:: 中，所使用胺基酸或胺基酸類似物濃度為足以 7 遲蛋白質聚集者。或延

:本發明又一項具體態樣中，可添加甲硫胺酸（或 J a硫胺基酸或胺基酸類似物）以當作用為治療劑之 =肽、’田胞3至少-個易被氧化之甲硫胺酸殘基的多肽吋可抑制甲硫胺醆殘基氧化成甲硫胺酸亞礪。“抑制” 意：歷時發生最少甲硫胺酸已氧化物種之累積。抑制甲爪妝酉夂氧化可使多肽更能保持其適當分子形式。可使用甲=胺酸之任何立體異構物（卜D或其混合物）。所添加量應為足以抑制甲硫胺酸殘基氧化之量，以使甲硫胺酸亞楓含量達到管理機構可接受之程度。代表性地，此 =組成物含有不多於約1Q%至約3()%甲硫胺酸亞砸。一般，此可藉由添加甲硫胺酸而使所添加之甲硫胺酸對曱瓜月女@夂殘基之比例範圍介於約卜i至約_ 〇 : 1，例如 1 0 ·· 1至約1 0 0 ·· 1而達成。本卷月又一項具體態樣中，調合物進一步包含選自高分子量聚合物或低分子量化合物之安定劑。於本發

員具肢悲'樣中，安定劑係選自聚乙二醇（例如PEG 3 3 5 0 ) > ψ γ ^ ^ 伞知辱（PVA)、聚乙烯基吡咯啶酮、羧基/羥基纖維素f其街生物（例如HPC、HPC-SL、HPC-L及 HPMC )、環糊精、含硫物質例如單硫代甘油、硫代乙醇 U甲基硫代乙醇、及不同鹽類（例如氣化納）。此 41 200522976 等特定安定劑各構成本發明之其他替代具體態樣。、醫樂組成物亦可包含額外安定劑，其進一步增加其中冶療活性多肽之穩定性。本發明特別興趣之安定劑包括（=限疋於）曱硫胺酸與EDTA，其保護多肽對抗甲硫胺酸氧化，以及非雜工从 ^ 、及非離子性界面活性劑，其保護多肽對抗與冷凍—解凍或機械性剪力有關的聚集發生。、於本發明又一項具體態樣中，調合物進一步包含界面L刈於本發明又一項具體態樣中，界面活性劑係、自/月:副、乙氧基化萬麻子油、$二醇化甘油醋類、〆·方—單甘油S曰類、脫水山梨糖醇脂肪酸酯類、聚氧丙烯1氧乙烯肷段聚合物（例如泊咯沙姆如piur〇nic@ F68柏各4姆188及407、Triton X-1〇〇)、聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯與聚乙烯衍生物例如煶基化及烷氧基化衍生物（吐溫類，例如heen-2〇、 keen 4〇、Tween —80及Bri卜35 )、單甘油酯類或其乙氧土彳々生物、二甘油酯類或其聚氧乙烯衍生物、醇 ^甘/由、卵磷脂與磷脂類（例如磷脂醯絲胺酸、磷脂驢膽驗、碌脂乙醇胺、磷脂醯肌醇、二磷脂醯甘油及神、、二鞘、脂）、磷脂類衍生物（例如二棕櫚醯基磷脂酸）與/合血^知類（例如棕櫊醯基溶血磷脂醯基-L-絲胺酸與乙醇胺、膽鹼、絲胺酸或蘇胺酸之卜醯基_sn —甘油一3一 *此0日）、及溶血磷脂醯基與磷脂醯基膽鹼之烷基、烷氧土（纟元基) 、：I：完氧基（烧基_)—衍生物，例如溶血&知蜢基膽鹼、二棕櫊醯基脂醯基膽鹼與極性頭部基 42 200522976

團（亦即膽驗、乙醇胺、磷脂酸、絲胺酸、蘇胺酸、甘油、肌醇及帶正電之D0DAC、D0MA、DCP、BISHOP、溶血填脂龜基絲胺酸與溶血磷脂醯基蘇胺酸）之月桂醯基與肉豆謹酸基衍生物、及甘油磷脂類（例如腦磷脂）、甘油糖脂類（例如毗喃半乳糖苷）、神經鞘糖脂類（例如神經fe、神經鞘糖苷）、十二烷基磷酸膽鹼、雞蛋溶血卵磷脂、褐霉酸衍生物—（例如牛磺醯—二氫褐霉酸鈉等）、長鏈脂肪酸及其C6 —C12鹽類（例如油酸與辛酸）、酉胜基肉鹼及衍生物、賴胺酸、精胺酸或組胺酸之N〇c 一醯基化衍生物、或賴胺酸或精胺酸之側鏈醯基化衍生物、包含賴胺酸、精胺酸或組胺酸與中性或酸性胺基酸任意、、且。之一肽類之IT-醯基化衍生物、包含中性胺基酸與兩種页電何胺基酸任意組合之三肽類之醯基化衍生物DSS (琥珀辛酯鈉，CAS登錄號[57了 —1卜了])、琥珀辛@曰鈣（CAS登錄唬[1 28-49-4 ])、琥珀辛酯鉀（CAS 登錄號[749一。9 —〇])、SDS (十二燒基硫酸鈉或月桂基硫酸納）、辛酸納、膽酸或其衍生物、膽汁酸及其鹽類與甘油或牛磺酸共軛物、烏索去氧膽酸、膽酸鈉、去氧膽酸納、牛石㈣膽酸納、甘胺膽酸鈉、N-十六烧基H 一甲基j〜銨根-1 —丙磺酸酯、陰離子（烷基—芳基一磺酷類）單價界面活性劑酸

、兩性離子界面活性劑（例如N 烧基_N，N〜-甲其一 q 日一一曱基3一鉍根—1 —丙磺酸酯、3-氯醯胺基一} 丙基一甲基-3一銨根―丨—丙磺酸酯 (四級錢驗類陽離子界面活性劑例如溴化鯨臘基-三甲銨、氯化鯨臘 43 200522976 基毗錠）、非離子界面活性劑（例如十二烷基卜卜毗喃葡萄糖苷）、泊咯胺類（例如Tetr〇nic，s)其為由依序將環氧丙燒及環氧乙烧加成至伸乙二銨而衍生得之四官能性嵌段共聚物’或者界面活性劑可選自咪唑啉衍生物，或其混合物。此等特定界面活性劑各構成本發明之其他替代具體態樣。 —界面/舌性劑於醫藥組成物中之用途為習於該項技

•人士已熱知。為方便請參考雷明頓：製藥科學及實施’第19版，1995。用於非經腸道投藥GLp-i化合物之組成物可依（如如）W0 03/0 02 1 36中所述製備得。本發明之肽類§藥調合物中可存在其他成份。此等額外成份可包括溼潤劑、乳化劑、抗氧化劑、填充劑、張劑、螯合劑、金屬離子、含油載劑、蛋白質（例如人類血清自蛋自、明膠或蛋自質）及兩性離子（例如胺基酸如甜菜苷、牛磺酸、精胺酸甘胺酸、賴胺酸及

、、且胺I )。此等額外成份（當然）應不會有害地影響本兔明西藥調合物之整體穩定性。 έ有根據本發明化合物之醫藥組成物可於數種部才又某予舄要此項治療之患才’例如於局部如皮膚及黏膜部位投藥，於繞道吸收之部位投藥，例如施藥於動脈、靜脈、心臟中，以及於涉及吸收之部位投藥，例如施樂於皮膚、肌肉或腹部中。根據本發明醫藥組成物之投藥可經由數種投藥途 44 200522976 徑，例如，杳部、舌下、口部、口内、口服、胃腸内、鼻部、肺部（例如經由支氣管及肺胞或其組合）、表皮、真皮、穿皮、陰道、直腸、眼部（例如經由結締組織）、尿道、及#經腸道投藥予需要此項治療之患者。

本發明之組成物可以數種劑量形式進行投藥，例如呈溶液、懸浮液、乳液、微乳液、多層次乳液、泡沫、膏藥、膏劑、硬嘗、軟貧、片劑、胞膜片劑、洗液、膠囊（例如硬明膠勝囊與軟明膠膠囊）、拴劑、直腸膠囊、滴劑、凝膠、喷霧劑、粉末、氣溶膠、吸入劑、眼用滴劑、眼藥膏、注射溶液、原位變形溶液（例如原位膠凝、原位凝結、原位沈殿、原位結晶）、灌流溶液及植入物。

本發明錤成物可進一步經由共價、厭水性及靜電交互作用化合於（或接附至）藥物載體、藥物遞送系統及進階型藥物遞送系統，以進一步增強化合物之穩定性、增加生物町利用性、增加溶解度、減低有害影響、達到習於該項技藝人士已熟知之計時療法、及增加患者順從度或以上之任意組合。載體、藥物遞送系統及進階型藥物遞送系統之實例包括（但不限定於）聚合物例如纖維素及衍生物、多糖類例如右旋糖及衍生物、澱粉及衍生物、聚（乙烯醇）、丙烯酸酯及曱基丙烯酸酯聚合物、聚乳酸與聚乙醇酸及其嵌段共聚物、聚乙二醇質例如白蛋白載體蛋白人士已熟知之體、奈米粒子、'疑膠類例如熱膠凝系統如習於該項技嵌丰η Χ ^ &共聚物系統、微膠團、微脂粒、微球 /夜您結晶及其分散液、習於該項技藝人 45 200522976 士已熟知呈脂質—水系統之相性狀的L2相及其分散液、聚合型微膠團、多層吹驾丨、、在白我受丨於人礼液、自我礼化、自我微乳化型乳液、環糊精及其衍生物、及樹狀聚合物。本發明組成物可用於供使用例如定劑量吸入器、乾粉吸入器及霧化器（皆為習於該項技藝人士已熟知之裝置）而進行肺部投藥該化合之固體、半固體、粉末及溶液調合物。

本發明組成物特別可用於含受控、持續、延長、延遲、及緩慢釋放藥物遞送系統之調合物。更特別地，但不限定於，組成物可用於習於該項技藝人士已熟知之非經腸道受控釋放及持續釋放系統（該二系統促使投藥數里減少許多倍）。甚至更佳地為以皮下投藥之受控釋放及持續釋放系統。無意限制本發明之範圍，有用之受控釋放系統及組成物實例為水凝膠、含油凝膠、液態結曰曰、聚合型微膠團、微球體、奈米粒子。

製造可用於本發明組成物之受控釋放系統的方法包括（但不限定於）結晶、冷凝、共結晶、沈澱、共沈長、乳化、分散、咼壓均質化、膠封、噴霧乾燥、微量膠封、凝聚、相分離、溶劑蒸發產生微球體、射出及超 5品界流體處理法。一般參見醫藥受控釋放手冊（尉斯， D.L.編著，Marcel Dekker，紐約，2000)及藥物與製藥科學，99卷：蛋白質調合物及遞送（麥可那利，E.j. 編著，Marcel Dekker，紐約，2 0 0 0 ) 〇非經腸道投藥可經由以注射筒（視需要地筆狀注射 46 200522976 器）等方式進行之皮下、肌肉内、腹膜内或靜脈内注射而完成。或者，非經腸道投藥可經由灌流泵之方式完成。視需要地組成物可為用以使根據本發明之化合物以鼻部或肺部喷霧形式投藥之溶液或懸浮液。又視需要地，可將含有本發明化合物之醫藥組成物適用經穿皮投藥，例如經由無針注射或自貼布（視需要地為離子電泳貼布）或經黏膜（例如口腔）投藥。術語“安定化調合物”意指具有增加物理穩定性、化學穩定性或增加物理及化學穩定性之調合物。術語蛋白質調合物之“物理穩定性”用於本文意指蛋白質在暴露至熱-機械壓力及/或與去安定之界面或表面（例如厭水性表面及界面）交互作用時易形成該蛋白質之生物不活性且/或不溶性聚集體的傾向。水性蛋白質調合物之物理穩定性係藉由將充入適當容器（例如藥筒或藥瓶）之調合物於不同溫度下暴露至機械/物理壓力（例如攪動）不同時間後以目測檢驗及混濁度測量之方式進行評估。調合物之目測檢驗係於尖銳聚焦之光線中伴隨黑暗背景而完成。調合物之混濁度係以目測混濁度分數範圍例如以0至3分（調合物顯示無混濁相當於目測分數為0分，而調合物在日光下顯示可目見之混濁相當於目測分數為3分）為基準而特徵化。當調合物在日光下顯示可目見之混濁度時，以蛋白質聚集現象觀點而言其即被歸為物理上不安定。或者，調合物之混濁度可藉由習於該項技藝人士已熟知之簡單混濁度測 47 200522976

量進行評估。水性蛋白質調合物之物理穩定性亦可藉由使用蛋白質之構象狀態的分光劑或探針進行評估。探針車父佳為優先與该蛋白質之非-自然構象結合的小分子。一項蛋白質結構之小分子分光探針的實例為 Thiof lavin T。Thiof lavin T為一種已廣泛用於偵測殺粉狀蛋白原纖之螢光染料。當原纖（及可能其他蛋白質組恶亦然）出現時，Thiof lavin τ於約45〇 nm處產生新的激發極大值，並且當與原纖蛋白質形式結合時會於約48 2 nm處增強發射。未結合之Thi〇f lavin τ基本上於该等波長處不會產生螢光。其他小分子可用做為偵測蛋白質結構從天然改變 :’、、卩天…、狀恶之棟針。例如“厭水性區塊，，探針可優 f二蛋白貝已顯露出之厭水性區塊結合。厭水性區塊一般包埋於天麸壯能疋a所兄 …、心蛋貝之四級結構中，但會在蛋白質開始展開或變性時例為〗.，、、員露出未。此等小分子分光探針之實

其他分光二染料，例如憩、吖啶、菲咯啉等類。酸（如笨而十為金屬月女基酸錯合物，例如厭水性胺基酸等類以胺酸、亮胺酸、異亮胺酸、甲硫料及綠胺、；之鈷金屬錯合物。術語蛋白質調人物夕“ 指蛋白質# & 口化學穩定性”用於本文意貝結構中化學j£ _ 成’相較於天然蛋白質:;改變導致化學分解產物形能增加免疫原特性：能喪失生物效能且/或可端視天然| ^所义成各種不同化學分解產物，貝之類型與特質以及蛋白質所暴露之環 48 200522976 境而定。大多可能無法完全避免消除化學分解，且在蛋白質調合物儲放及使用時常見到化學分解產物量増加亦為習於該項技藝人士所熟知。大多數蛋白質溶液進行脫胺作用（係一種其中位於谷胺醯胺基或天冬醯胺基殘基之側鏈驢胺基被水解而形成自由態羧酸的過程）。其他分解途徑包含咼分子量轉化產物形成，其中二或多個蛋白分子經由轉胺基作用及/或二硫化物交互作用彼此共價結合導致共價結合雙聚體、募聚體及聚合物分解產物％成{蛋白質製藥之穩定性，Aherm. T· J·與Manning 參 [C，戶/e;?㈣於焱，紐約玉992 )。（例如甲硫胺酸殘基之）氧化可意指化學分解之其他變異形式。蛋白質調合物之化學安定性可藉由於暴露至不同環境條件後之各種不同時間點測量化學分解產物量而進行評估（化學分解產物之形成往往可能隨著例如溫度增加而加速進行）° ¥藉由視分子大小及/或電荷而定使用各種層析技術（例如SEC-HPLC及/或RP-HPLC)進行分解產物之分離而測定個別化學分解產物的含量。參因此，如上所述，“經安定化調合物，，意指具有增加物理穩定性、增加化學穩定性或增加物理及化學穩定陡之5周合物。一般，調合物在使用及儲放（依從所建議使用與儲放條件）期間必須為安定直到達有效期限為止。 ’ 於本發明一項具體態樣中，包含根據本發明化合物之凋b物係呈安定達超過6週使用期及超過3年儲放 49 200522976 期。項具體態樣中’包含根據本發明化人物之調合物係呈忠a、去口女疋達超過4週使用期及超過3年儲放期。於本發明y 一項具體態樣中，包含根據本發明人物之調合物係呈忠—、去 σ 女疋達超過4週使用期及超過兩年儲放於本發明Ψ 二又另一項具體態樣中，包含根據本發明合物之调合物係呈取6

疋達超過2週使用期及超過兩年放期。丁本發明係關於根據本發明化人製備醫藥品之用途。知5化。物用於本發明—項貝/、體怨樣中，其中治療之根據本發明化人舲必m 、㈠為GLP-1 1匕合物係用於製備供、、Λ 症、第2型糖尿病、葡萄# ρ備么/σ療或預防高血舻脒佇、古Α颅 v 扣σ 第1型糖尿病肥肸症同血壓、X徵候群、血内動脈粥樣硬化、心肌梗塞、冠灿、哥疾病

饮基旭狀心臟病與其他新也其病、中風、發炎性腸徵候群、洁 ’ g 4化不良及胃潰瘍的醫品0 5其中治療劑為GLP-1 備供延遲或預防第2型於本發明另一項具體態樣中肽之根據本發明化合物係用於製糖尿病發展的醫藥品。

〆、甲^療查,ί为> ΓΜ D Ί 肽之根據本發明化合物係用於穿、马GLP-I 衣備供減少食物攝取、減 50 200522976 低β-細胞调亡、增進β'細胞功能與β'細胞質恢復對β-細胞葡萄糖之敏感性的醫藥品。或於本發明另一項具體態樣中，係 GL”狀之根據本發明化合物用於製傷療劑為、衣W供治療小腊料群、發炎性腸徵候群或揭限性回腸炎之醫藥品的用途，、於本發項具體態樣中U於其中治療劑為胰島素肽之根據本發明化合物用於製備供治療第尿病、第2型糖尿病或β'細胞缺陷之醫藥品的用途。以根據本發明化合物進行之治療亦可與第二或多種樂學上…之物質，例如選自抗糖尿病劑、抗肥胖劑、貪食調節劑、抗高血塵劑、供治療及/或預防因糖尿病引起或相關之併發症的藥劑、及供治療及/或預防因肥胖症引起或相關之併發症的藥劑。此等藥學上具活性之物質實例為：胰島素、GLp]促動劑、績醯腺:雙胍、megHtimdes、糖苷酶抑制劑、升糖激素拮抗劑、 DPP 1 v (-肽基肽酶-1V )抑制劑、涉及刺激糖類生成及/或糖解作用之肝臟酵素的抑制劑、葡萄糖吸收調節劑、改變脂質代謝之化合物例如抗高血脂劑如HMG C〇A抑制劑（抑制素）、減少食物攝取之化合物、遣促動劑及作用於β-細胞ATP_依賴性奸離子通道之藥劑；考萊稀胺、降膽寧、氯貝特、吉非貝齊、洛伐他汀、普伐他汀、昔伐他丨丁、丙丁酚、右旋曱狀腺素、 netegllnide、repagllnide、卜阻斷劑例如阿普洛爾、阿替洛爾、普萃洛爾盘美吝、、么/ 曰疋 m，、夹夕洛爾、ACE：(血管緊張肽轉 51 200522976 化酵素）抑制劑例如貝那普利、卡托普利、依那普利、福森普利、賴諾普利、阿拉普利、奎那普利與雷米普利、鈣離子通道阻斷劑例如硝苯吡啶、非洛地平、尼卡地平、伊拉地平、尼莫地平、地爾硫簞與凡拉帕米、及以一阻斷劑例如多沙唑畊、烏拉地爾、布拉唑啡與特拉唾畊；CART (受可卡因安非他命調節之轉錄物）促動劑、 NPY (神經狀Y)拮抗劑、MC4 (促黑皮質素4)促動劑、〇rexin拮抗劑、TNF (腫瘤壞死因子）促動劑、CRF (促腎上腺皮質素釋放因子）促動劑、CRF Bp (黑色素細月包 -刺激激素）拮抗劑、MCH (黑色素細胞-濃縮激素）拮抗劑、CCK (膽囊收縮素）促動劑、5 —經色胺再—吸收抑制劑、5-羥色胺與去曱腎上腺素再-吸收抑制劑、卜羥色胺與去甲腎上腺素能化合物、5HT ( 5-羥色胺）促動劑铃墙狀促動劑、ga 1 an i η拮抗劑、生長激素、生長激素釋放化合物、TRH (促甲狀腺釋放激素）促動劑、 UCP 2或3 (解偶聯蛋白質2或3 )調節劑、肥胖抑制素促動別、DA促動劑（溴麥角環肽、doprexin )、脂酶/ φ 殿粉酶抑制劑、RXR (類視黃素X受體）調節劑、Tr ρ 拮抗劑；組織胺H3拮抗劑。應了解，根據本發明化合物與一或多種上述化合物及視需要地一或多種其他藥學上具活性物質之組合被認為係包含於本發明範圍内。本發明進一步藉由以下實施例例舉說明，然而，不應認為係用以限制本發明之範圍。前述及下列實施例中 52 200522976 所揭示之性質可（f八如4贫丨、，甘y 為用於、刀別地及以其任何組合形式以其各種形式實施本發明之物質。【實施方式] DBU ： DCM ：貫施例中下列術語欲具有以下一般定義 1，8-重氮二環[5·4〇]十7—烯二氯曱烷 DMA ： DMF : DMS0 ： %’二甲基乙醯胺見^二甲基甲醯胺二曱亞礪

EDC : 多'乙基—妒-（3-二曱胺基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽 HOAt : 3 —羥基〜狀-[1，2, 3]三唑并[4, 51]毗啶，4〜氮—3一說基苯并三σ坐 HOBt : 羥基苯并三唑，卜羥基苯并三唑 NMP : ，甲基吡咯啶烷酮 NMR光譜係於Bruker 300 MHz及400 MHz儀器上進行記錄。HPLC MS 係於 perkin Elmer 儀器（API 1〇〇)進行。

使用購自默克-日立（HibarTM RT250-4，Lichrosorb™ RP 18’ 5.0 μιη，4.0x250 mm，30 分鐘内梯度溶析，20% 至 8 0 %乙腈溶於水，1 · 〇 m 1 /m i η，於2 54 nm下偵測）及瓦特斯（Symmetry™，C18，3·5 μπι，3·0χ150 襲，15 分鐘内梯度溶析，5%至90%乙腈溶於水，1· 0 ml/min，於214 nm下偵測）之HPLC-系統。又，另使用設定下列狀況之HPLC方法h8 :

逆相分析係使用於214、254、276及301 nm下之UV 53 200522976 偵測，於218TP54 4· 6 mmxl50 _ 〇 18二氧化石夕管柱上，於42°C下以1 ml/min進行溶析而完成。管柱係以5%乙腈、 85%水及1 0%含〇· 5%二氟乙酸溶於水之溶液平衡並經由乙腈、85%水及10%含0· 5%三氟乙酸溶於水之溶液至9〇%乙膳及1 0 %含0 · 5 /二氣乙酸之溶液之線性梯度歷時1 $分鐘進行溶析。又，另使用設定下列狀況之HPLC方法A : RP-分析係使用配合Waters 9 96二極管射線摘測器之

Waters 2 690 系統完成。於 214、254、276 及 301 nm 下於 218TP54 4.6 miiix250 mm5pC-18 二氧化矽管柱（分離集團，

Hesperia)上，於42°C下以1 ml/miri進行溶析而收集得 UV偵測。管柱係以5%乙腈（+0.1% TFA)溶於TFA水溶液 (0.1%)平衡，於注入後，將樣本經由〇%至乙腈（+〇 1% TFA)溶於TFA水溶液（〇· 1%)之梯度於50分鐘内進行溶析。一般製程（A) 根據本發明之式（I)化合物可藉由一般製程（A)製備

得：

r^C〇2H

1. CDJ.THF

.PG 3. 去供護 4. 活化

藥劑 I 9wp R1 入N，S、X-Y-藥劑 Η 將漿液蛋白質結合酸類溶於溶劑（例如THF)中並以稍 U過塁之羰基二咪唑處理。當酸咪唾化物形成完全時，將具通式H2N-S(〇)2-X-Y-PG ( PG =保護基）磺醯胺加至反應混合物中’隨後再將適宜鹼類例如])BU加入。當反應達完全 54 200522976 時，將溶劑蒸發並將產物以萃取及管柱層析術純化。然後將所成之中間物去保護、活化並接著以藥劑或其部伤經保遵之々ί生物處理而（於最終去保護作用後）產生所希望的物質。實施例1 6-[2-(3-节醯基苯基）丙醯基胺績醯基]己酸第一步驟：6 -硫己酸乙醋

Na2S03, H2° 然後 EtOH，HCI

C〇2H 195.05 9w〇 H〇'SC〇2Et 224.28

將含6-溴己酸（9· 75克，50.0毫莫耳）、亞硫酸鈉（25·2 克，200毫莫耳）及水（100毫升）之混合物於1〇〇ct下攪拌過夜。然後將混合物藉由添加濃氫氯酸水溶液（35毫升）酸化，並置於減壓下濃縮。將乙醇加至殘餘物，並再次將混合物濃縮。將殘餘物再懸浮於乙醇中，並將鹽類以過渡去除。將濾液濃縮，並將殘餘物藉由以甲苯三倍共沸濃縮進行乾燥。獲得13.4克（定量）呈油體之標題化合物。鲁 NMR (CDCh) δ 1.27 (t，/=? Hz，3H)，1·50 (m， 2H) ’ 1· 68 (in，2H)，1· 87 (m，2H)，2· 36 (m，2H)， (s ， br ， 2H)。弟一步驟· 6 -氯石黃醯基己酸乙醋 55 200522976 SOCI2 -> 〇wp l_IQ ^ ^ C〇2Et 224.28

O

Cl〆 C〇2Et 242.72 將如一反應之產物（13 · 4克，極大5 〇毫莫耳）溶解於亞硫醯氣（50毫升）並加熱至迴流過夜。將混合物濃縮，並將殘餘物與曱苯共蒸發三次而產生丨3· 4克（定量）標題化合物。 4 NMR (CDC13) δ 1. 26 (t，/= 7 Hz，3H)，1· 52 (m 2H)，1· 68 (m，2H)，1. 97 (m，2I〇 U Ct，/= γ Hz

2H)，3.54 (t，/=7 Hz，2H)，4·13 (四重峰，/=7 Hz 2H) 〇弟二步驟·· 6 -胺績醯基己酸乙醋 NH3, h2o ---> 9w〇 CI ^ S c〇2Et 242.72 0W/0 H2N，S、^^\/C02Et 223.29 將前一反應之產物（13·4克，極大5〇毫莫耳）溶解於氨水（80耄升，25% NH3)並令其於室溫下靜置1〇分鐘。將此合物於減壓下濃縮，並將殘餘物藉由與乙醇重複甲苯共療發進行乾燥。然後將殘餘物於飽和NaHC〇3水溶液與二硫甲烷間進行分配。將二氣甲烷相以水萃洗一次，以Mgs⑴ 乾燥，並濃縮而產生2.55克（23%)磺醯胺。 Η _ (CDCL·) δ 1· 26 (t，/= 7 Hz，3H)，1· 50 (m， 2H)，i· 68 (m，2H)，1· 89 (m，2H)，2· 32 (t，/= 7 Hz， 2H) ’ 3. 12 (t，/= 7 Hz，2H)，4· 12 (四重峰，/= 7 Hz， 2H)，4· 55 (br s，2H)。 56 200522976 第四步驟：6、酸乙S旨 12〜（3 -节醯基苯基）丙醯基胺磺醯基]己

Ph

〇 y〇 223.29

S\^v^\^CO; ,Et 459.56 將 HOAt( 2·〇4 多 u 見，15·〇 * 莫耳）及 EDC(2.88 克，15·Ι 宅莫耳）加入外消旋西疋嗣洛分（3.81克，15.0毫莫耳）存名二氯曱烧（50毫升、— 1 ^ <懸洋液中，並將混合物持續攪拌直到形成澄清溶液。將溶於二氣曱烧之6_胺確醯基己酸乙黯 (2.23克，1〇.〇毫莫耳）及DIpEA ( 2 56毫升）加至此溶液中，並將混合物於室溫下攪拌3天。將混合物以i N Hc: 水洛液萃洗，通過MgS〇4乾燥，並濃縮。藉由管柱層析術绅化而產生2· 0克（44% )標題化合物。經由製備型hplc獲得分析樣本。

】H NMR (CDCh) δ 1.23 (t，/=7 Hz，3H)，139 (m， 2H)，1. 52 (d，/= 7 Hz，3H)，ι· 62 (m，2H)，2· 24 (t，A 7 Hz，2H) ’ 3. 38 (t，7 Hz，2H)，3· 79 (四重峰，厂 7 Hz，1H)，4·09 (四重峰，/=7 Hz，2H)，7·45 - 7.69 (m，6Η)，7· 78 (m，3Η)，8· 85 (br s，1Η)。第五步驟：1 : 6-[2-(3-苄醯基苯基）丙醯基胺磺醯基] 已酸

57 200522976

KOH 459.56

9>P 431.51 將氫氧化鉀水溶液（15 克，2·18毫莫耳）溶於乙醇（5〇 °)力二入該醋類（1. 合物於室溫下授拌過夜 $ ^液巾，並將语得之濾液乾燥(MgS〇4)並濃二取广人’並將組告之標題酸。生0.85克（91%)呈油體

Η 臟（CDC13) δ 1.42 (m ， 2H) ， j 3H)’ U2 (m，2H)，2.29 .(，厂？ Hz, -Ηζ，2Η)，3·79 (四重 7 : Ζ’2Η)，3·38“， > /-7 Hz > 1H) . 7.42-7.66 (m，6H)，7.78 (m，3H)，9 〇5 (計 s，⑻。實施例2 於位置1 7經得自實施例1夕舻苴— 、 J 1之―基％酿胺醯化之GLP-2 類似物·· 1^7-(6-((2-(3-1^ _ Aτ 、丁基）本基）丙醯基胺基）磺醯基）己醯基）[Lys17, Arg3°]GLP-2(1-33) 經使用FM0C-保護策略之標準肽類-化學（其為習於該項技藝人士已知且描述於例如波坦斯基與波坦斯基，肽類合成之實施，Springer出版，第2版，柏林1 994 )後製備付樹脂（加樣：1 · 0 5 毫莫耳 /克）

Fmoc-His(Boc)-Ala-Asp(O^Bu)-Gly-Ser(iBu)-Phe-Ser(t

Bu)-Asp(0 iBu)-Glu(0 iBu)-Met-Asn(Trt)-Thr(iBu)-11e-

Leu -

Asp(0 iBu)-Asn(Trt)-Lys(Mtt)~Ala-Ala-Arg(Pmc)- 58 200522976

Asp(0iBu)-Phe-Ile-Asn(Trt)-Trp(Boc)-Leu-Ile-Gl n(Trt)-

ThrUBu)-Arg(Pmc)-Ile-ThrUBu)-Asp((UBu)-0-Wan g。將該樹脂（大約〇· 1毫莫耳）懸浮於二氣甲烷（2〇毫升）中。將溶劑去除。將三氟乙酸（2%)與三異丙基矽烷（2%)溶於二氣甲烧（1 0毫升）之溶液加至該樹脂。將反應容器於室溫下搖晃1 0分鐘。將液體去除。重複此後述程序四次。將樹脂以尤#二甲基甲醯胺（3x10毫升）及二氯曱烷（3χ 10毫升）洗滌。將6-[2-(3-苄醯基苯基）丙醯基胺磺醯基] 己酸（0.17克’ 0.4毫莫耳）溶於火ι二甲基甲醯胺（5 晕升）之溶液加至該樹脂。將1 -經基苯并三嗤（HOBt，0 · 0 61 克，0. 4毫莫耳）溶於况#-二甲基曱醯胺（5毫升）之溶液加至該樹脂。將二異丙基碳化二亞醯胺（D〗C，〇 · 〇 6毫升， 0.4毫莫耳）及乙基二異丙胺（0137毫升，〇8毫莫耳）洛於二氣甲烧（1 〇毫升）之溶液加至該樹脂。將反應容界於室溫下搖晃1 6小時。將液體去除。將樹脂以％二曱基曱醯胺（3x10毫升）及二氣甲烷（3χ10毫升）洗滌。以哌咬（20%)溶於愚，二甲基甲醯胺之溶液，使用習於該項技藝人士已知且描述於波坦斯基與波坦斯基，肽類合成之實施，Springer出版，第2版，柏林1 994之程序將Fm〇c一基團移除。使用含水（2· 5%)及三異丙基矽烷（2· 5%)溶於三氣乙酸之溶液經由習於該項技藝人士已知且描述於波坦斯基與波坦斯基，肽類合成之實施，Springer出版，第2版，柏林1 9 9 4之程序將肽類從樹脂移出。 59 200522976 將化合物藉由逆相HPLC使用30 - 80%乙腈存於水之梯度，於以三氟乙酸（〇 ·丨％)酸化之環境中進行純化。 MS ·· 1 408· 8 及 1 056. 9。 HPLC ·· 29· 99 min (方法 A) 實施例3 6-[2-(3-苄醯基苯基）丙醯基胺磺醯基]丁酸第一步驟：4-胺磺醯基丁酸甲酯 ^ P HC(OMe)3, MeOH h2n，s、"^^c〇2H ^ 167.18

H0N 〇Ο 181.21 將含4-胺磺醯基丁酸（2· 53克，15. 1毫莫耳）、甲醇 (25毫升）、三甲基原甲酸（1〇毫升，大約5當量）及聚苯乙烯-結合之曱苯磺酸（0.58克）之混合物於60°C下攪拌。經1 9小時後將混合物傾倒出與催化劑分離並濃縮而產生2· 70克（99%)呈油體之標題酯類。 NMR (CDC13) δ 1.92 (m ， 2H) ， 2·49 (t ， /二 7 Hz ， 2H)，3. 00 (m，2H)，3· 60 (s，2H)，6· 82 (br s，2H)。第二步驟：6-[2-(3-苄醯基苯基）丙醯基胺磺醯基]丁酸曱酉旨

co2h 〇w〇 181.21

417.48 將羰基二咪唑（1· 94克，12. 0毫莫耳）加入酮洛芬（2· 66 克，1 0 · 5毫莫耳）溶於THF ( 3 0毫升）之溶液中。將洛液 200522976 於室溫下攪拌20小時再於60°C下攪拌30分鐘。然後將4-胺磺醯基丁酸曱酯（1. 74克，9 · 6 0毫莫耳）溶於THF ( 1 0 毫升）之溶液加入，隨後再加入DBU (1.70毫升，11.4毫莫耳）。將混合物於60°C下攪拌25小時，濃縮，並將殘餘物與水（100毫升）及IN HC1 ( 50毫升）混合。將產物以乙酸乙酯萃取兩次’並將組合之萃取物以鹽水及碳酸氫鈉飽和水溶液萃洗，通過MgS(h乾燥，並濃縮。將殘餘物藉由管柱層析術（45克矽石凝膠，梯度溶析庚烷/乙酸乙酯）純化而產生1 · 20克（30% )呈油體之標題化合物。 fJMR (DMSO) δ 1. 39 (d，7= 7 Hz，3H)，1· 78 (m， 2H)，2. 39 (t，/= 7 Hz，2H)，3. 38 (t，7 Hz，2H)， 3· 55 (s，3H)，3. 87 (四重峰，/= 7 Hz，iH)，7· 51—7· 78 (m ， 9H) ， 11. 91 (br s ， 1H)。第三步驟·· 6-[2-(3-苄醯基苯基）丙醯基胺磺醯基]丁酸

403.45 (1 · 0毫升）之溶醯基]丁酸曱I旨將氫氧化鈉（〇· 40克，10毫莫耳）溶於水液加入6-[2-(3 -节醢基苯基）丙醢基胺石黃 (0.73克，1.75毫莫耳）溶於甲醇（5毫升）之溶液中。將混合物於室溫下攪拌2小時。將1N氫氯酸（1〇毫升）及水（毫升）加入，並將產物以乙酸乙酯萃取：★ ^ 一 — 人。將組合得之 61 200522976 萃取液以鹽水萃洗，通過MgS〇4乾燥並濃縮，而產生〇 65克 (92%)呈泡沫之標題化合物。 NMR (DMS0) δ 1. 39 (d，/= 7 Hz，3H)，1 78 (in， 2H)，2· 33 (t，/= 7 Hz，2H)，3· 38 (t，/= 7 Hz，2H)， 3· 86 (四重峰，/=7 Hz，1H)，7. 5卜7. 76 (m，9H)，1189 (br s，1H)，12. 21 (br s，1H)。實施例4 4 -（標櫚醯基胺績醯基）丁酸〇

256.43

OH 9wp H2l^S、^\/C〇2Me 181.21

419.62

步驟1 :

將草醯氣（0.56毫升，6.53毫莫耳）加入標搁酸（ι. 克，6·51毫莫耳）存於甲苯（U毫升）之懸浮液中。 45分鐘後將所成之澄清溶液加至含有[胺續醯基丁酸甲 0.91克，5. 02毫莫耳）之燒瓶中，並將混合物以峨5 毫升）稀釋。將dmAP(1.90克，155毫莫耳）以小量逐加入此混合物中。將混合物於室溫下攪拌19小時。將含 (100毫升）及IN HC1 (20毫升）之混合物加入，隨後

Ac，/则萃取，將組合得之萃取液以鹽水萃洗，乾燥邮⑹ 並於減壓下濃縮。將所成之固體（2 26克）從熱Ac〇Et (大約10宅升）再結晶，而產生159克（76%)呈幾近無色固 62 200522976 體之甲酯，mp ·· 1 00- 1 03°C。 NMR (DMS0-d6) δ 0· 84 (m，3H)，1_ 23 (br s，24H) 1. 49 (m，2H)，1· 88 (m，2H)，2· 24 (t，/=： 7 Hz，2H)， 2.49 (t，/=7 Hz，2H)，3.38 (m，2H)，3·59 (s，3H)， 11·58 (s ， 1H)。步驟2 :皂化

405.60 將NaOH ( 0· 54克，13· 5毫莫耳）溶於水（L 〇毫升）之溶液加至該曱酯（0· 84克，2· 〇〇毫莫耳）存於甲醇（1〇毫升）之懸浮液。將混合物於室溫下攪拌4小時。將含水 (30毫升）與1NHC1 (20毫升）之混合物加入，並將產物藉由過濾法分離。從沸騰之MeCN ( 50毫升）再結晶而產生〇_64克（79%)呈無色板塊之標題化合物。Mp. : 156—157 °C。 · 4 NMR (DMSO-de) δ 0· 85 (m，3H)，1. 23 (br s，24H)， !· 49 (m，2H)，1· 85 (m，2H)，2· 25 (t，/= 7 Hz，2H)， 2.39 (t，/=7 Hz，2H)，11.15 (s，ih)。實施例5 4 (4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,9 —h 三 H 壬酿基胺石黃醯基）丁酸步驟1 : 63 200522976

392.11

H2N Ο ο 181.21

OMe 555.31

將 4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,9—十三氟壬酸（3〇克，7·83 *莫耳）與硫醯氯（20毫升）混合並於80°C下名拌1 · 5 j日守將處合物濃縮並將殘餘物以甲苯反萃取一次將殘餘液體溶解於㈣（5毫升）中並將此溶液加至4—胺与醯基丁酸甲酯（1·15克，6·35毫莫耳）溶於dcm(5毫升之溶2中。將DMAP(2.34克，19·3毫莫耳）伴隨充分攪封以小里逐次加入此混合物中。在添加時混合物變得黏稠，再將額外DCM ( 1 Q冑升）加入。將所成之混合物於室溫下授拌6 6小日守，藉此將其轉變成黑色。將含水（1 〇〇毫升）與IN HC1 ( 30毫升）之混合物加入，並將產物萃取（

AcOEt ;在開始發生強烈乳化）。將組合得之萃取液以萃洗 (2x鹽水）’乾燥（MgSCh)，並於減壓下濃縮而產生183克 (52%)呈稍微粉紅色固體之甲酯，师：143 —145 °C。 NMR (DMS0-d6) δ 1· 91 (m ， 2H) ， 2·47-2· 62 (m ， 4H)’ 3.41 (m，2H)，3·59 (s，3H)，11·87 (s，1H)。步驟2 :皂化

OMe 555.31

541.28 將1〇11(0.54克，13.5毫莫耳）溶於水（1.()毫升）之溶 64 200522976 液加至該甲酯（1· 11克，2· 0毫莫耳）存於Me〇H ( 7· 〇毫升）之懸浮液。將混合物於室溫下攪拌3小時丨5分鐘。將含水（3 0毫升）與1N HC1 ( 2 0毫升）之混合物加入，並將產物藉由過渡法分離。從M e C Ν (大約5毫升）於—2 〇 °c下再結晶產生0. 77克（71%)呈無色固體之標題化合物。Μ· ρ·: 1 75-1 80〇C。 4 NMR (DMSO-de) δ 1. 88 (m，2H)，2· 38 (t，/= 7 Hz， 2H) ’ 2. 45-2. 62 (m ’ 2H) ’ 2· 66 (m，2H)，3. 39 (m，2H)， 11.85 (s ， 1H) ， 12.24 (s ， 1H)。實施例6 Νδ17-(月桂醯基胺磺醯基）苄基 -[Glu3, Gln17]GLP - 2U - 33) 步驟1 : f十二醯基-4-甲基苯磺醯胺

將對-曱苯磺醯胺（ 980毫克，5.7毫莫耳）與月桂酸針（3_29克，8·59毫莫耳）溶於乙腈（1〇〇毫升）之溶液加熱至60°C。將濃硫酸（ 0.0 09毫升，〇·17毫莫耳）加入。將反應合物熱至6 0 C達1小時’接著於室溫下靜置1 β小時。將水（300毫升）加入。將沈澱藉由過濾法分離。將其懸浮於庚烷中。將固體藉由過濾法分離而得2· 63克十二醯基- 4 -曱基笨石黃酿胺。 NMR (DMSO-d6) δ 0· 85 (t，3H) ; 1·〇〇 —l 45 (m， 65 200522976 18H) ; 2·20 (t，2H) ; 2·40 (s，3H) ; 7·40 (d，2H) ; 7.80 (d ， 2Η) ; 11· 90 (br ， 1Η)。步驟2 : 4-溴甲基—肸（十二醯基）苯磺醯胺

於80°C下，將N—溴琥珀醯亞胺（1· 43克，8. 06毫莫耳）及過氧化二苄醯基（62毫克，〇·25毫莫耳）依序加至妗十二醯基-4-甲基苯磺醯胺（3克，8·48毫莫耳）溶於四氯甲烷（75毫升）之溶液中。將反應混合物加熱i小時至 80C。將另一份過氧化二苄醯基（1〇〇毫克，〇 41亳莫耳）加入。將反應混合物再另加熱2小時至8 〇〇c。將其冷卻至室溫並靜置1 6小時。將乙酸乙酯（丨〇〇毫升）及庚烷（i 〇〇宅升）加入。將固體藉由過濾法去除。將溶劑從濾液移除而得4· 1 9克粗製4-溴曱基（十二醯基）苯磺醯胺，其未經進一步純化直接用於下一步驟。 NMR (DMSO-d6) δ 〇· 80 (t ， 3H) ; 1.00-1·90 (m ， 18H); 3.35 (m，2H); 4.80 (s，2H); 7·70 (d，2H); 7·9〇 (d ， 2H) ; 11.1 (br ， 1H)。步驟3: (4-(十二醯基胺磺醯基）苯甲基）胺基甲酸第三-丁酯 66 200522976 •WJ〇^hnA^^^CH3 ch3 ο 將4-溴甲基(十二醯基）苯磺醯胺（21克，4·86毫莫耳）溶於％’二甲基曱醯胺（20毫升）之溶液逐滴加至含25%氨水（4毫升）及屎f二曱基曱醯胺（ι〇毫升）之此口物中。將混合物於室溫下攪拌1小時。將溶劑於真空中私除。將殘餘物溶解於丨N氫氧化鈉水溶液（25毫升， 25毫莫耳）及四氫呋喃（25毫升）中。將二碳酸二—第三一丁酯（1. 88克，8· 63毫莫耳）加入。將反應混合物於室溫下攪拌1 6小日守。將其以乙酸乙酯（丨〇〇毫升）稀釋並以工⑽ 硫酸氫鈉水溶液（100毫升）萃洗。將水相以乙酸乙酯（2 x50耄升）萃取。將組合得之有機層以碳酸氫鈉飽和水溶液 (1 0 0毫升）萃洗並通過硫酸鈉乾燥。將溶劑於真空中移除。將粗製產物藉由於二氧化矽（40克）上使用乙酸乙酯/ 庚烧（1 : 2)作為溶析劑進行閃速層析術，而得1 7〇毫克 (4 —(十二醯基胺石黃醯基）苯曱基）胺基甲酸第三—丁酉旨。 (CDCh) δ 0· 85 (t，3H) ; 1· 10-1· 70 (m，18H); 2· 25 (t，2H) ; 4· 40 (d，2H) ; 5· 00 (br，1H) ; 7. 45 (d， 2H) ; 8· 05 (d，2H) ; 8. 15 (br，1H)。步驟4 ·· 4-胺基甲基-（十二醯基）苯磺醯胺

67 200522976 於室溫下將三氟乙酸（25毫升）加至（4-(十二醯基胺石黃酿基）苯甲基）胺基曱酸第三-丁酯（170毫克，0. 40毫莫耳）溶於二氣甲烷（25毫升）之溶液中。將混合物於室溫下授拌1小時。將溶劑於真空中移除。重複後述程序一次而付0.19克4 -胺基甲基（十二龜基）苯磺醯胺之三i乙酸鹽。 4 NMR (DMS〇-d6) δ 〇· 85 (t，3H) ; 1·05-1·50 (m， 18H) ; 2· 20 (t，2H) ; 4· 10 (s，2H) ; 7· 70 (d，2H) ; 7· 95 (d，2H) ; 8· 25 (br，3H) ; 12. 10 (br，1H)。 _ 步驟5 : 將具有[Glu3, Gln17]GLP-2序列之樹脂-結合肽（其中天冬胺酸係受保護為第三-丁基酯，蘇胺酸係受保護為第三一丁基_，賴胺酸係受保護為第三—丁基胺基甲酸酯，谷胺醯胺係受保護為第三-丁基醯胺，色胺酸係受保護為第三一丁基胺基甲酸酯，天冬醯胺係受保護為第三-丁基醯胺，精胺酸係受保護為五甲基苯并二氫呋喃基磺醯基衍生物，位於位置17之谷胺酸係受保護為卜甲基―丨—苯基乙酯，位於位籲置3及9之谷胺酸係受保護為第三-丁基酯，且組胺酸係於二側鏈及阿伐-胺基上受保護為第三-丁基胺基曱酸酯）使用於自動肽類-合成儀上進行之標準FMOC-化學製備於Wang 樹脂。將該樹脂以含2%三氟乙酸溶液與2%三異丙基矽烷溶方；一氯甲纟兀（10毫升）之溶液處理1 〇分鐘五次。將樹脂以，曱基吡咯啶酮（3x10毫升）及二氯甲烷（3χ1〇毫升）洗滌。將卜經基苯并三唾（32毫克，〇·21毫莫耳）溶於妗 68 200522976 甲基Dit咯啶酮（7毫升）之溶液加入。將4-胺基甲基—#_(十二醯基）苯磺醯胺之三氟乙酸鹽（2〇2毫克，〇· 42毫莫耳）溶於一氯甲烷（7毫升）之溶液加入。依序將二異丙基碳化二亞醯胺（ 0.033毫升，0.21毫莫耳）及乙基二異丙胺（〇179 笔升’ 1 · 05耄莫耳）加入。將混合物於室溫下搖晃1 6小時。將液體去除。將樹脂以妗甲基毗咯啶酮（3χ1〇毫升）及接著以二氯甲烷（5x10毫升）洗滌。將含三氟乙酸（1〇· 6毫升）、水（0.265毫升）與三異丙基矽烷（〇·265毫升）之混合物加至該樹脂。將樹脂於室溫下搖晃15小時。將液體收集並濃縮至大約3毫升。將乙醚（5〇毫升）加入。將沈澱藉由離心及傾析法分離。將粗製產物藉由HpLc (使用 C18管柱並施予30-55%乙腈存於水之梯度，於〇1%三氟乙酸緩衝液中進行）純化而得標題化合物。質量光譜與所預期之產物符合。 MS : 1383 ; 1038 。 HPLC: 10.35 min (方法〇2-b4-3) HPLC -方法 02-b4-3 : RP-分析係使用於配合Waters 2487雙條帶偵測器之 Alliance Waters 2695系統進行。UV偵測係使用 Symmetry3 00 C-18，3. 5 μιη，3. 6 mmxl50 mm 管柱收集得。將化合物上，於5-90%乙腈、90-0水及5%三氟乙酸存於水之線性梯度以流速為i· 0 ml/min歷時15分鐘進行溶析。 69 6^522976 - 1 序列表

5 <110> Novo Nordisk A/S 10 心新穎的發液蛋白質親合標籤 <130> 6699 15

<140> 6699.010-DK <141> 2003-11-25 20 <160> 5 25 <170> Patentln 第 3 · 1 片反 30 <210> 1 <211> 31

35 <212> PRT <213> 人類 40 <400> 1

His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 15 10 15 45

Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30 <210> 2 50 2⑽522976 <211> 40 <212> PRT 5 <213> 合成型構築體 10 <220> <221> 錯編_特徵 <222> (1) · · (1) 15 <223>位置1之Xaa爲L-組胺酸、D-組胺酸、去胺基-組胺酸、2-胺基-組胺 .酸、β-羥基-組胺酸、高組胺酸、Ν-α-乙醯基-組胺酸、α-氟甲基-組胺酸、a-甲基-組胺酸、3_毗啶基丙胺酸、毗啶基丙胺酸、或4-毗啶基丙胺酸 <220> 25 30 <221>錯編—特徵 <222> (2) . . (2) <223>位置1之Xaa爲L-組胺酸、D-組胺酸、去胺基-組胺酸、2-胺基-組胺酸：β-羥基-組胺酸、高組胺酸、Ν-α-乙醯基-組胺酸、α-氟甲基-組胺酸、α-甲基-組胺酸、3-毗啶基丙胺酸、2_毗啶基丙胺酸、或4_毗啶基丙胺酸 35 <220> <221>錯編_特徵 <222> (2)..(2) 40 <223> 位置 2 之 Xaa 爲 Ala、Gly、Va卜 Leu、lie、Lys、Aib、（卜胺基環丙基)羧酸、（1-胺基環丁基)羧酸、（卜胺基環戊基)羧酸、（卜胺基環己基)羧酸、 (1-胺基環庚基)羧酸、或（1-胺基環辛基)羧酸 45 <220> <221>錯編—特徵 50 6β| 00322976 • 3 <222> (10) . . (10) <223> 位置 1 0 之 Xaa 爲 Val 或 Leu 5 <220> <221>錯編_特徵 10 <222> (12) . . (12) <223> 位置 12 之 Xaa 爲 Ser、Lys 或 Arg 15 <220> <221>錯編_特徵 20 <222> (13)…（13) <223> 位置 13 之 Xaa 爲 Tyr 或 Gin . 25 <220> <221>錯編—特徵 30 — <222> (14) . . (14) <223> 位置 14 之 Xaa 爲 Leu 或 Met 35 <220> <221>錯編_特徵 40 <222> (16) . . (16) <223> 位置 16 之 Xaa 爲 Gly、Glu 或 Aib 45 <220> <221>錯編—特徵 50 — <222> (17) . . (17) <223> 位置 17 之 Xaa 爲 Gin、Glu、Lys 或 Arg <220> 46^@0§22976 5 10 <221>錯編_特徵 <222> (19) . . (19) <223> 位置 19 之 Xaa 爲 Ala 或 Val 15 20 <220> <221>錯編—特徵 <222> (20) . . (20) <223> 位置 20 之 Xaa 爲 Lys、Glu 或 Arg 25 30 <220> <221>錯編—特徵 <222> (21) . . (21) <223> 位置 2 1 之 Xaa 爲 Glu 或 Leu 35 40 <220> <221> 錯編_特徵 <222> (24) · . (24) <223> 位置 24 之 Xaa 爲 Ala、Glu 或 Arg 45 50 <220> <221> 錯編_特徵 <222> (27)…（27) <223> 位置 27 之 Xaa 爲 Val 或 Lys <220> 5 662腦22976 <221> 錯編_特徵 5 <222> (28) . . (28) "<223> 位置 28 之 Xaa 爲 Lys、Glu、Asn 或 Arg 10 <220> <221> 錯編_特徵 15 <222> (29)..(29) <223> 位置29之Xaa爲Gly或Aib 20 <220> <221> 錯編_特徵 25 <222> (30)..(30) <223> 位置30之Xaa爲Arg、Gly或Lys 30 <220> <221> 錯編_特徵 35 <222> (31)..(31) <223> 位置31之Xaa爲Gly、Ala、Glu、Pro ' Lys、醯胺或不存在 40 <220> 45 <221> 錯編_特徵 <222> (32)..(32) <223> 位置32之Xaa爲Lys、Ser、醯胺或不存在 50 6 2獅22976 <220> 5 <221>錯編-特徵 <222> (33).·(33) <223>位置33之Xaa爲Ser、Lys、醯胺或不存在 10 <220> <221>錯編__特徵 15 <222> (34) . · (34) <223>位置34之Xaa爲Gly、醯胺或不存在 20 <220> <221:錯編_特徵 25 <222> (35) . . (35) <223>位置35之Xaa爲Ala、酸胺或不存在 30 <220> < 2 21 > 錯編—特徵 35 <222> (36)..(36) <223>位置36之Xaa爲Pro、醯胺或不存在 40 <220> <221>錯編_特徵 45 <222> (37) . . (37) <223>位置37之Xaa爲Pro、醯胺或不存在 <220> 50 7669 急 00522976 <'z21> 錯編寺徵 <222> (38) · .(38) 5 <223> 位置 38之Xaa爲Pro、醯胺或不存在 <220>10 <221>錯編j寺徵 <222> (39) . . (39) 15 <223>位置39之Xaa爲Ser、醯胺或不存在 <220> 20 25 <221>錯編—特徵 <222> (40) ... (40) <223> 位置40之Xaa爲醯胺或不存在 30 <400> 2 Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Glu Xaa 15 10 15 35

Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Phe lie Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 40 45

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 40 <210> 3 <211> 32 <212> PRT <213> 合成型構築體 50 2^0522976 ^ 8 <220> <221>錯編—特徵 , - -1 5 <222> (2) · . (2) <223> 位置 2 之 Xaa 爲 Ala、Gly、Val、Leu、lie、Lys、Aib、（1-胺基環丙 - 基)竣酸、（1-胺基環丁基)羧酸、（卜胺基環戊基)羧酸、（1-胺基環己基)羧酸、 10 (卜胺基環庚基)羧酸、或（1-胺基環辛基)羧酸 15 <220> <221>錯編_特徵 <222> (1)..(1) 20 <223>位置1之Xaa爲L-組胺酸、D-組胺酸、去胺基-組胺酸、2-胺基·組胺酸、β-羥基-組胺酸、高組胺酸、N-ot-乙醯基-組胺酸、α-氟甲基-組胺酸、α- 甲基組胺酸、3_毗啶基丙胺酸、2-毗啶基丙胺酸、或4-毗啶基丙胺酸 25 <220> 30 <221>錯編_特徵 <222> (12)..(12) <223> 位置 12 之 Xaa 爲 Ser、Lys 或 Arg 40 45 <220> <221>錯編—特徵 <222> (16)..(16) <223> 位置 16 之 Xaa 爲 Gly ' Glu 或 Aib <220> <221>錯編_特徵 <222> (17)..(17) 50 92W522976 <223> 位置 17 之 Xaa 爲 Gin、Glu、Lys 或 Arg 5 <220> <221> 錯編_特徵 <222> (20) . . (20) 10 <223> 位置20之Xaa爲Lys、Glu或Arg 15 <220> <221> 錯編_特徵 <222> (24) · · (24) 20 <223> 位置24之Xaa爲Ala、Glu或Arg 25 <220> <221> 錯編_特徵 <222> (28) . . (28) 30 <223> 位置28之Xaa爲Lys、Glu或Arg 35 <220> <221> 錯編_特徵 <222> (29)..(29) 40 <223> 位置29之Xaa爲Gly或Aib 45 <220> <221> 錯編_特徵 <222> (30) · . (30) 50 <223> 位置3〇之Xaa爲Arg或Ly <220> 10 2W5^2976 5 <221> 錯編 _特徵 <222> (31) · · (31) 10 <223> 位置 31 之 Xaa 爲 Gly 、Ala、Glu 或 Lys <220> 15 <221> 錯編_ _特徵 <222> (32). .(32) 20 <223> 位置 32 之 Xaa 爲 Lys . 、醯胺或不存在 <400> 3 25 Xaa Xaa Glu 1 Gly Thr Phe 5 Thr Ser Asp Val Ser Xaa Tyr Leu Glu Xaa 10 15 30 Xaa Ala Ala 20 Xaa Glu Phe lie Xaa Trp Leu Val Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 25 30 <210> 4 35 <211> 39 <212> PRT 40 <213> 美國毒蜥 <220> 45 <221> MOD一 RES <222> (39). .(39) 50 <223> 羧基之醯胺化 <400> 4 11 2Θθ5°22976

His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gin Met Glu Glu 15 10 15 5

Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 10 15 20

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 5 <211> 44 <212> PRT <213>合成型構築體 <220> <221> MOD—RES <222> (44) · · (44) <223> 羧基之醯胺化 25 30 <400> 5 35

His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gin Met Glu Glu 15 10 15 40 Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Ser Lys Lys Lys Lys Lys Lys 45 35 40

Claims

200522976 十、申請專利範圍： 1· 一種增加藥劑之血管内半衰期的方法，其特徵在於將該藥劑轉化成具通式（1)之化合物： —γ—藥劑（|) 其中 R1為具有羧酸rlc〇2H之基團，其Rl-C(M能夠與漿液蛋白質可逆地結合， G為NH或CHW，其中W為氫、氟、氰基、硝基、（:（=0)11、 = E2、S( = 0)-E3、芳基或 Ch-烷基，其中E1、E2、及E3獨立地代表c〗-6-烷基、芳基、雜芳基、Ci_6-烷氧基、胺基、L-e-烷基-胺基或二—(^_6-烷基一胺基， Z 為 S = 0、S( = 0)2、C(=0)、c( = 0)0、C( = 〇)NR2、或視需要經C!-6-烷基、鹵素、硝基、氰基或雜亞芳基取代之亞芳基’该雜亞芳基視需要經C1 -6 -烧基、1¾素、硝基或氰基取代， # 其中R2代表氫、氰基或Cl-6 -烧基， X代表鍵結或間隔區’視需要地選自C 1 - C 2 0 -亞烧基、亞芳基、雜亞芳基、Ci-C2。-全氟亞烧基或其組合、或 [(CQ2 ) n A ] m ( CQ2 ) p- 、 ^ —[(CQ2)nA]m(CQ2)P - [(CQ2)nE]m(CQ2)p-，其中 π及πι獨立地為1 - 2 0且p獨立地為0 -1 〇，各 A 及 E獨立地為-〇-、-S-、-NR3-、-N(COR4)-、—pr5(q)一 70 200522976 或 P(〇R6)(0)-，其中 R3、R4、R5及r獨立地代表氫或Ci-6_烷基，各Q獨立地為氫或氟， γ代表能夠做為與藥劑鍵聯之連接物的官能基，視需要地選自-c(=o)-、-c(=s)_、_NR7(C=0)_、_〇c(=〇)_、 -NR8(C=S)-、_ch2-、_CH⑽）_、_s㈣）2、_nr9_s(=〇)2—、 —s— 、 —s—s—，其中 R7、Rs及R6獨立地代表氫或Cl_6-烷基，且術5吾藥劑意指希望於血漿中延長其半衰期之化鲁合物。 2· —種增加治療劑之血管内半衰期的方法，其特徵在於將該藥劑轉化成具通式（1丨）之化合物： R1

X- Y—治療劑 (II)

/、中R、G、Z、X及Y係如申請專利範圍第丨項中所定

3·根據申請專利範圍第2項之方法，其中該治療生物聚合物。為 4·根據申請專利範圍第2項之方法，其中該治療多肽。、5·根據申請專利範圍第2項之方法，其中該治療劑為小分子藥物，例如具有分子量小於1 500 Da之藥物。 6· 一種具通式（I)之化合物： 71 200522976 ο 7 R1 G'、χ-γ—藥劑（I) 其中 R1為具有羧酸RLCO2!!之基團，其R1-COd能夠與浆液蛋白質可逆地結合， G為NH或CHW’其中W為氮、氣、氣基、硝基、C( = 〇)一e1、 S(-0)2-E、SC^O)-E3、芳基或 Ci-6_烧基，

其中E1、E2、及E3獨立地代表C^-烷基、芳基、雜芳基、Cl_6-：i元氧基、胺基、Ci_6-炫基-胺基或二-Cl_6-院基一胺基， Z 為 s = 0、S( = 0)2、c( = 0)、c( = 0)0、C(=0)NR2、或視需要經Ch-烷基、鹵素、硝基、氰基或雜亞芳基取代之亞芳基，忒雜亞芳基視需要經Cn —烷基、鹵素、硝基或氰基取代，其中R2代表氫、氰基或Cl_6-烷基， X代表鍵結或間隔區，視需要地選自Ci—C2。—亞烷基、芳基、雜亞芳基、Ci-r\ >v a-

万丞 u 全氟亞烷基或其組合、 -[(CQ2)nA ]m(CQ2)p- -[(CQ〇nA]m(CQ2)p - [(CQ2)nE]ffi(CQ2)r，其中 η及m獨立地為1一2〇且雄且P獨立地為0-10，各A及E獨立地為—〇 —、 / -、一 n(C0R4)-、-PR5 ⑺ 或 P(OR6)(〇)-，其中〃 w R3、R4、R5及R6獨立地代々η 代表虱或C】-6-烷基，各Q獨立地為氫或氟， Y代表能夠做為與該藥劑鍵^之連接物的官能基，視 72 200522976 要地選自〜c(:〇)-、-C(=s)-、 _NR8(C = S)〜、-CH2-、-CH(0i〇-、 -s-、-s-s〜，其中一NR7(〇0)-、-〇c(=〇)—、 _S( = 0)2-、—NR9—s( = 〇)2一、合物尺、κ及R6獨立地代表氫或C卜6一统基，且術語“藥劑，，意指希望於血漿中延長其半衰期之〇化 7· 一種具通式（II)之化合物： R1

X - Y—治療劑

其中R1、G、Z、X及Y係如申請專利範圍第6項中所定義。 •種製備根據申請專利範圍第6或7項之化合物的方法，其包含將該藥劑或治療劑與具通式（Ιπ)之化合物反應〇 U 7 R1Ag 乂、X-Y1 (III)

其中R1、G、Z、及X係如申請專利範圍第6項中所定義，且 Y1為能夠與化合物進行鍵—形成反應而產生具通式（】）化合物之官能基，γΐ視需要地選自—c( = 〇)-L、—c( = s) —l、 -NR2(O0)-L、-〇C( = 〇)-l、-NR2(OS)-L、-C(H2)-L — C(Ch-烧基）（=0)、-CH(二0)、—s( = 〇)2 —L、—nr2-S( = 0)2-L、-SH-、 -S-L、-NCO、-NCS、-NCNR2、-NC、-0-NH2，其中 L為供親核性置換之脫離基，視需要地選自羥基、鹵 73 200522976 素、2, 6-二氯苄醯基、新戊醯基、2 —或4 —硝基苯氧基、2, 4-二硝基笨氧基、笨并三唑-1-基氧基、4-苯并三唑-3-基氧基、Ci-6-烷氧羰基氧基、4_氧_3,4-二氫-丨，2, 3 —苯并三唑一卜基氧基、全氟苯氧基、咪唑基、2, 5 —二氧吡咯啶—卜基氧基、 1，3-二氧-2,3-二氫4—H_異吲哚-2 —基氧基、2,4,6 —三氯苯氧基或疊氮化物，且其中R2代表氫、氰基或Cl_6-烷基。 9· 一種具通式（III)之化合物： R ‘、X - γ1 (III) 其中R、G、z、及X係如申請專利範圍第6項中所定義，且Y1係如申請專利範圍第8項中所定義。 10.根據中請專利範圍第6、7或9項中任—項之化合物，其中相對應之酸^㈣具有對人類血清白蛋白之結合親合常數低於約1 ο μΜ或低於約i 。 ⑴根據中請專利範圍第6_7或第9項中任—項之化合物，其中R1係選自 Cl_3〇-烷基，視需要地經一飞夕個一C〇2H、-SOsH、-P〇2〇H、 -S〇2NH2、-NH2、-OH、-SH、南素 ^ rn „ 〒^方基取代，該芳基視需要地經-C(M、-S〇3H、〜P〇2〇I1、〜s〇2N 函素取代，或崎、，2、-0H、_SH、或 C卜3〇-全氟烷基，視需要地細一 ττ ^ 二或多個、C〇2H、-S〇3H、 -P〇2〇H、-S〇2NH2、-NH2、-OH、-SH、a 本斗〜 ^ 鹵素或芳基取代，該芳基視舄要地經-C〇2H、-s〇3H、〜Pn mj Ρ0_、-S_2、—NH2、—0H、 74 200522976 12.根據申請專利範圍第6_7或9項中任一項之化合物，其中R1係選自直鏈烷基、支鏈烷基、具有0_羧酸基之基團、部份或完全氫化之環戊烷并菲骨架。物，=·根據申請專利範圍帛6_7或9項中任一項之化合 :、R CChH係選自芳基乙酸、碘芬酸或二羧酸類。 4 ·根據申請專利節衝赞為H〜寻才』乾圍苐13項之化合物，其中R1 一C〇2i] /σ分或3-羧基—4-甲美—石盆on+ 1 r 土丙基-2-咲σ南丙酸（CMPF)。

*艮據申請專利範圊證物，其中D1 乾圍弟6 —7或9項中任一項之化合或從8至？/、有攸6至4〇個碳原子、從8至26個碳原子 2〇個碳原子。物，其6中：t:請專利範圍* 6~7或9項中任-項之化合 _7或 9項中任一項之化卜7或 9項中任一項之w >一7或 9項中任一項之代 17.根據由太類例如包含少於40個胺基酸殘基之肽1 根據申請專利範圍第物’其中G為NH。物 /申“利範圍第 ^ 中 z 為 S(=0)2。物

9·根據申請專利範圍第其中Q為Η。 20·根據申含主査立丨Μ ^ 物，其中Α Θ 1乾圍第6-7 4 9項中任一項之 ^ 及Ε皆為—Q一。 21 ·根據Φ + 物，其中Λ §月寻利範圍第Μ或9項中任一項之 A根據申請專利範圍第Μ或9項中任一項之 75 200522976 物其中X為具有分子量範圍介於約80 Da至約1 000 Da，或範圍介於約80 Da至約300 Da之間隔區。 23·根據申請專利範圍第7或9項之化合物，其中該治療劑為生物聚合物。 24.根據申請專利範圍第7或9項之化合物，其中該治療劑為多狀。 ^ 25·根據申請專利範圍第24項之化合物，其中該多肽係、二由ϋ亥夕狀中賴胺酸殘基之ε -胺基接附至γ上。 26·根據申請專利範圍第24項之化合物，其中該多肽 ⑩ 係經由選自半胱胺酸、谷胺酸及天冬胺酸之胺基酸殘基接附至Υ上。 27·根據申請專利範圍第24項之化合物，其中該治療性多肽為GLP-1肽。 28·根據申請專利範圍第27項之化合物，其中該glph 狀係選自 GLP-1(7-35)、GLP-1(7-36)、GLP-1(7-36)-醯胺、 GLP-1(7-37)、GLP-1(7-38)、GLP-K7-39)、GLP-1(7-40)、 GLP~1(7-41)或其類似物。修 29·根據申請專利範圍第27項之化合物，其中該GLpq 肽包含不多於十五個相較於GLP-1(7-3Ό (SEQ ID NO. 1) 已經置換、添加或刪除之胺基酸殘基，或包含不多於十個相較於GLP-1(7-37) (SEQ ID NO· 1)已經置換、添加或刪除之胺基酸殘基。 30·根據申請專利範圍第29項之化合物，其中該GLP-1 肽包含不多於六個相較於GLP-l(7-37) (SEQ ID NO. 1)已 76 200522976 經置換、添加或刪除之胺基酸殘基。 31·根據申肽包含不多於 GLP-1 肽。請專利範圍第29項之化合物’其中該GLP-1 4個非由遺傳密韻編碼之胺基酸殘基的之 / 3 2.根據申請專利_ 2 9項之化合物，其中該G L P - i 肽係DPPIV-受保護之glp—1肽。 33.根據申請專利範圍第29項之化合物，其中該θα」 3太包δ位於位置8之Aib殘基。

34·根據申請專利範圍第27項之化合物，其中位於該 LP 1化a物位置7之胺基酸殘基係選自卜組胺酸、去胺基組胺齩、2-胺基-組胺酸、β-羥基—組胺酸、高組胺酸、 Ν乙基組胺酸、α-氟甲基-組胺酸及α一甲基-組胺酸。 3 5 ·根據申請專利範圍第2 7項之化合物，其中該多肽為其包含具式（IV)之胺基酸序列之GLP-1肽：

Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaai6-Ser-Xaai8-Xaa19-Xaa2〇-Glu-Xaa2 2-Xaa2 3-Ala-Xaa2 5-Xaa2 6-Xaa27-Phe-Ile-Xaa3〇-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xa a37-Xaa38-Xaa39-Xaa4〇-Xaa41-Xaa4 2-Xaa43-Xaa44- Xaa45~Xaa45 式（IV) (SEQ ID No: 2) 其中 Xaa?為L-組胺酸、D-組胺酸、去胺基-組胺酸、2-胺基〜組胺酸、β-羥基-組胺酸、高組胺酸、Να_乙醯基-組胺酸、氟曱基-組胺酸、α-甲基-組胺酸、3_Di;t啶基丙胺酸、2-吡啶基丙胺酸或4-毗啶基丙胺酸； 77 200522976 Xaas 為 Ala 、 Gly 、 Val 、 Leu 、 Ile 、 Lys 、 Aib 、（1-胺基環丙基）羧酸、（1-胺基環丁基）羧酸、（1_胺基環戊基）羧酸、（1-胺基環己基）羧酸、（1-胺基環庚基）羧酸、或π一胺基環辛基）羧酸； Xaaie 為 Val 或 Leu ; Xaais 為 Ser、Lys 或 Arg ; Xaai9 為 Tyr 或 G1 η ; Xaa2〇為 Leu 或 Met ;

Xaa22 為 Gly、Glu 或 Aib ; Xaa23 為 Gin、Glu、Lys 或 Arg ; Xaa25 為 Ala 或 Val ; Xaa26 為 Lys、Glu 或 Arg ; Xaa27 為 g 1 u 或 Leu ; Xaa3〇為 Ala、Glu 或 Arg ; Xaa33 為 Va 1 或 Lys ; Xaa34 為 Lys、Glu、Asn 或 Arg ;

Xaa35 為 Gly 或 Aib ; Xaa36 為 Arg、Gly 或 Lys ; Xaa37 為 Gly、Ala、Glu、Pro、Lys、醯胺或不存在； Xaa38為LyS、Ser、醯胺或不存在； Xaa3 9為ser、Lys、醯胺或不存在； Xaa4。為Gly、醯胺或不存在； Xaan為Ala、醯胺或不存在； Xaa42為Pr〇、醯胺或不存在； 78 200522976 Xaa。為Pro、醯胺或不存在； Xaa“為Pro '醯胺或不存在； Xaa45為Ser、醯胺或不存在； Xaa“為酿胺或不存在；其條件為若 Xaa38、Xaa39、xaa4。、Xaa4i、Xaa42、Xaa43、 Xaa“、Xaa“或Xaa46不存在，則其下游各胺基酸亦不存在。 36·根據申請專利範圍第27項之化合物，其中該多肽為其包含具式（V)胺基酸序列之 glp-1肽： Xaa?-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser- Xaa18-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Ala-Xaa26-Glu-Phe-Il e-Xaa3〇-Trp-Leu-Val-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38 式（V) (SEQ ID No· 3) 其中 Xaa?為L-組胺酸、D-組胺酸、去胺基-組胺酸、2-胺基 -組胺酸、β-羥基-組胺酸、高組胺酸、Να-乙醯基-組胺酸、 α-氟曱基-組胺酸、α—曱基—組胺酸、3_[]比啶基丙胺酸、2-吡啶基丙胺酸或4-毗啶基丙胺酸； Xaas 為 Ala 、 Gly 、 Val 、 Leu 、 Ile 、 Lys 、 Aib 、（1-胺基環丙基）羧酸、U-胺基環丁基）羧酸、（卜胺基環戊基）羧酸、（1-胺基環己基）羧酸、U-胺基環庚基）羧酸、或（卜胺基環辛基）羧酸； Xaau 為 Ser、Lys 或 Arg ; Xaa22 為 G1 y、G1 ii 或 Aib ; Xaa23 為 Gin、Glu、Lys 或 Arg ; Xaa26 為 Lys、Glu 或 Arg ; 200522976 Xaa3〇為 Ala、Glu 或 Arg ; Xaas4 % Lys、Glu 或 Arg ; Xaa35 為 Gly 或 Aib ; Xaa36 為 Arg 或 Lys ; Xaa37 為 Gly、Ala、Glu 或 Lys ; Xaa38為Lys、醯胺或不存在。 37.根據申請專利範圍第27項之化合物，其中該 GLP-1肽係選自 Arg34GLP-l(7-37)、Lys38Arg2 6,3 4 -GLP-l(7-38)、 φ Lys38Arg2 6,3 4 -GLP-l(7-38)-OH、 Lys36Arg 2 6,3 4 -GLP-l(7-36)、Aib 8,2 2,3 5 GLP-l(7 - 37)、 Aib8,35GLP-l(7-37)、Aib8,22GLP-l(7-37)、 Aib 8,2 2,3 5 Arg 2 6,3 4 Lys38GLP-l (7-3 8)、 Aib8,35Arg 2 6,3 4 Lys38GLP -1 (7-3 8)、 Aib8,22Arg 2 6,3 4 Lys38GLP -1 (7-3 8)、 Aib 8,2 2,3 5 Arg 2 6,3 4 Lys38GLP -1 (7-3 8)、 Aib8，3 5 Arg 2 6,3 4 Lys3 8GLP -1 (7-3 8)、 Aib 8,2 2,3 5 Arg26Lys38GLP-l(7-38)、 Aib8,35Arg26Lys38GLP-l(7-38)、 Aib8,22Arg26Lys38GLP-l(7-38)、 Aib 8 , 2 2,3 5 Arg34Lys38GLP -1 (7-3 8)、 Aib8,35Arg34Lys38GLP-l(7-38)、 Aib8,22Arg34Lys38GLP-l(7-38)、 Aib8,22,35Ala37Lys38GLP-l(7-38)、 Aib8,35Ala37Lys38GLP-l(7-38)、 Aib8,22Ala37Lys38GLP-l(7-38)、 Aib 8,2 2,3 5 Lys37GLP-l(7-37)、Aib8,35Lys37GLP-l(7-37)及 Aib8,22Lys37GLP-l(7-38)。 80 200522976 38. 根據申請專利範圍第27項之化合物，其中該GLP -1 肽係藉由相對於胺基酸序列SEQ ID No: 1之位置23、26、 3 4、3 6或3 8的胺基酸殘基接附至γ上。 39. 根據申請專利範圍第27項之化合物，其中該GLP-1 肽係 exendin-4 (SEQ ID No: 4)。 40 ·根據申清專利範圍第27項之化合物，其中該GLP -1 肽為 ZP-10 ，亦即 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPSKKKKKK-醯胺 (SEQ ID No: 5)。 41·根據申請專利範圍第27項之化合物，其中 R1 -C( = 0)-G-Z-X-Y-係接附至該GLP—丨肽之c —端胺基酸殘基上。 4 2 ·根據申請專利範圍第41項之化合物，其中第二 R1 -c( = 0)-G-Z-X-Y-部份係接附至非為c—端胺基酸殘基之另一胺基酸殘基上。 43·根據申請專利範圍第24項之化合物，其中該治療性多肽為GLP-2肽。 4 4 ·根據申清專利範圍第4 3項之化合物，其中該g l p 一 2 肽係DPPIV-受保護之GLP-2肽。 45·根據申請專利範圍第43項之化合物，其中該glp一2 肽係 Gly2-GLP-2(卜 33)。 46.根據申請專利範圍第43項之化合物，其中該Glp-2 肽係 Lys17Arg3LGLP-2(卜33)。 47·根據申請專利範圍第43項之化合物，其為 81 200522976 Nel7-(6-((2-(3~(苄醯基）苯基）丙醯基胺基）磺醯基）己醯基）[Lys17, Arg3°]GLp-2U-33)或#7-（月桂醯基胺磺醯基）苄基-[Glu3, Gln17]GLP-2(l-33)。 48·根據申請專利範圍第24項之化合物，其中該治療性多肽為人類胰島素或其類似物。 4 9.根據申凊專利範圍第4 8項之化合物，其中該治療性夕肽係選自AspB28-人類胰島素、LysB28, ProB29-人類騰島素、Lys'Glu629-人類胰島素、Glym，ArgB31，ArgB32—人類胰島素及去（B30)人類胰島素。 5〇·根據申請專利範圍第24項之化合物，其中該治療性多肽為人類生長激素或其類似物。 51 ·根據申請專利範圍第2 4項之化合物，其中該治療性多肽為甲狀旁腺素或其類似物。 5 2 ·根據申睛專利範圍第2 4項之化合物，其中該治療性多狀為人類促濾泡激素或其類似物。 53·根據申請專利範圍第24項之化合物，其中該治療性多肽具有莫耳量小於100 kDa，小於5〇 kDa或小於1〇 kDa。 54·根據申請專利範圍第24項之化合物，其中該治療陘夕肽係遥自生長因子例如血小板-衍生之生長因子 (PDGF)、轉化生長因子α (TGF — a)、轉化生長因子β (TGF β)、上皮生長因子（egf)、血管内皮生長因子（vegf)、生長調節素例如胰島素生長因子！（IGFM)、胰島素生長因子II (IGF-II)、紅血球生成素（EP〇)、血小板生成素（τρ〇) 或血管生成素、干擾素、原_尿激酶、尿激酶、組織纖溶酶 82 加522976 原激活劑（t-PA)、纖溶酶原激活劑抑制劑1、纖溶酶原激活劑抑制劑2、von Wi 1 lebrandt因子、細胞因子例如間白素如間白素（IL) 1、IL-IRa、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、 IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-20

或IL-21、群落刺激因子（CSF)如GM-CSF、幹細胞因子、腫瘤壞死因子如TNF-α、淋巴毒素-α、淋巴毒素-β、CD40L或 CD3 0L、蛋白酶抑制劑例如抑蛋白酶肽、酵素例如超氧化物歧化酶、天冬醯胺酶、精胺酸酶、精胺酸脫胺酶、腺苷脫月女fe、核糖核酸酶、過氧化氫酶、尿酸酶、膽紅素氧化酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、鹼性磷酸酶、卜葡糖醛酸酶、嘌呤核苷磷酸酶或類凝血酶、阿片樣物質例如内啡肽、腦啡肽或非天然阿片樣物質、激素或神經肽類例如降鈣素、昇糖激素、胃泌素、促腎上腺皮質素（ACTH)、縮膽囊肽、促黃體素、促性腺素釋放激素、絨毛膜促性腺素、促腎上腺皮質素釋放因+、血管加壓素、催產素、抗利尿素、促甲狀腺激素、促曱狀腺素釋放激素、鬆弛素、催乳素、肽γγ、神經肽[胰多肽、肥胖抑制素、CART (受可待因與安非他命調節之轉錄產物）、CART相關肽、perilipin、黑質皮質素（黑細胞-刺激激素）例如MC_4、黑素_濃縮激:、'納展肽類、醛固酮調節★、内皮素、腸泌素、糊精、血管活性腸肽（VIP)、垂體腺每酸環化酶活化多肽（PACAP)、鈴_肽、類-鈴蟾肽肽類、胸腺辛 ^ ^ ^ 肝素—結合蛋白、可溶性Π)4、下丘腦釋放因子、祯Μ喜η # Μ卞祕黑素及其類似物。 55. 一種化合物，其係選自 83 200522976

^ .種根據申請專利範圍第55項之化合物用藥物動力學特二=生化而改變該治療性多狀之或項種中醫广：成物，其包含根射 :丨—項之化合物及醫藥上可接受之賦形劑。 ^ . · X康申請專利範圍第57項之醫藥組成物，| 於非經腸道投藥。 ”適用 59β種根據申請專利範圍第6-7或10-54項中任τ5 之化合物用於 # r任一項、I備醫樂品之用途。 6n據中請專利範圍第27_42項中任一項之化合於製備供治：成$艰^ a 初用受性損宝、：…向血糖症、帛2型糖展病、葡萄糖耐、σ弟1型糖尿病、肥胖症、高血壓、χ徵候群、月旨里常么士、， -Π3. 曰/、㊆、結缔組織疾病、動脈粥樣硬化、心肌梗塞、冠狀 84 200522976 發炎性腸徵候群、消化心臟病與其他新血管疾病、中風、不良及胃潰瘍的醫藥品之用途。 27-42項中任一項之化合物之預防第2型糖尿病發展的醫 61 ·根據申清專利範圍第用途，其係用於製備供延遲或藥品。 62.根據申請專利範圍第27-42項中任一項之化合物用於製備供減少食物攝取、減低β—細胞凋亡、增進p_細胞功

月b與β -細胞貝里、及/或恢復對β —細胞之葡萄糖敏感性的醫藥品之用途。 63·根據申請專利範圍第43-47項中任一項之化合物用於製備供治療小腸徵候群、發炎性腸徵候群或侷限性回腸炎之醫藥品的用途。 64·根據申請專利範圍第48-49項中任一項之化合物用於製備供治療第1型糖尿病、第2型糖尿病或β-細胞缺陷之醫藥品的用途。

益 85 200522976· 七、指定代表圖·· (一）本案指定代表圖為：第（無）圖。 (二）本代表圖之元件符號簡單說明：無八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： 1人 -、χ-γ—藥齊J (I)

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