UA129012C2

UA129012C2 - Аналог інкретину та його застосування

Info

Publication number: UA129012C2
Application number: UAA202002925A
Authority: UA
Inventors: Хорхе Алсіна-Фернандес; Хорхе Алсина-Фернандес; Тамер Коскан; Лілі Го; Лили Го; Хончан Цюй
Original assignee: Елі Ліллі Енд Компані; Эли Лилли Энд Компани
Priority date: 2017-12-21
Filing date: 2018-12-14
Publication date: 2024-12-25
Also published as: FI3727426T3; EP4691555A2; ES3061179T3; JP6961838B2; WO2019125938A1; IL275468B1; MY199143A; JOP20200137B1; BR112020010244A2; PE20210162A1; IL325353A; JP2022033724A; IL275468B2; KR102622642B1; PT3727426T; JP7658877B2; CO2020006255A2; PL3727426T3; US12365716B2; CA3084005A1

Abstract

Винахід стосується аналога інкретину, який виявляє активність на кожному з рецепторів GIP, GLP-1 та глюкагону. Аналог інкретину має структурні особливості, які забезпечують збалансовану активність і більш тривалу дію на кожному з цих рецепторів. Також винахід стосується способу лікування захворювань, таких як цукровий діабет, дисліпідемія, жирова хвороба печінки, метаболічний синдром, неалкогольний стеатогепатит та ожиріння.

Description

Цей винахід стосується аналогів інкретину, які виявляють активність на кожному з рецепторів глюкозозалежного інсулінотропного поліпептиду (СІР), глюкагоноподібного пептиду-!і ((3ІР-1) та глюкагону. Аналоги інкретину, розкриті у цьому описі, можуть мати структурні особливості, які забезпечують збалансовану активність і більш тривалу дію на кожному з цих рецепторів. Такі аналоги інкретину можуть бути корисними для лікування розладів, таких як цукровий діабет 2 типу (Т2ОМ), дисліпідемія, метаболічний синдром, неалкогольна жирова хвороба печінки (МАРІ 0), неалкогольний стеатогепатит (МА5Н) та/або ожиріння.

За останні кілька десятиріч поширеність діабету продовжує зростати. Цукровий діабет 2 типу (Т2ОМ) є найбільш поширеною формою діабету, яка становить близько 90 95 всіх випадків діабету.

Т2ОМ характеризується високими рівнями глюкози в крові, які спричинюються резистентністю до інсуліну. Чинний стандарт лікування Т2ОМ включає дієту та фізичні вправи, а також лікування пероральними та ін'єкційними лікарськими засобами, що знижують рівень глюкози, в тому числі лікарськими засобами на основі інкретину, такими як агоністи рецепторів СІ Р-1.

СІ Р-1 являє собою З3Зб-амінокислотний пептид, основний біологічно активний фрагмент якого утворюється у вигляді 30-амінокислотного амідованого на С-кінці пептиду (СІ Р-І7-зв; 5ЕО ІО МО: г), який стимулює глюкозозалежну секрецію інсуліну, і який запобігає гіперглікемії у діабетиків. На цей час для лікування Т2ОМ доступні різні аналоги СІ Р-1, в тому числі дулаглутид (диїадішіає), ексенатид (ехепаїйає) і ліраглутид (Ігадішіає). Однак дози багатьох наявних у продажу агоністів рецепторів С Р-1 обмежені шлунково-кишковими побічними ефектами, такими як нудота та блювота. Коли лікування пероральними лікарськими препаратами та терапевтичними засобами на основі інкретину виявляється недостатнім, розглядають лікування інсуліном. Незважаючи на наявні варіанти лікування, значна кількість осіб, які одержують схвалені лікарські засоби, не досягають заданих рівнів контролю глікемії (дивись, наприклад, Сазаадгапавє еї а!. (2013) Оіарбеїтез Саге 36:2271-2279).

Неконтрольований діабет може призвести до виникнення однієї або декількох умов, що впливають на захворюваність та смертність таких осіб. Одним з основних факторів ризику Т2ОМ є ожиріння, і більшість осіб з Т2ОМ (-9095) мають надмірну масу тіла або страждають на ожиріння.

Задокументовано, що зниження ожиріння в організмі призведе до поліпшення супутніх захворювань, пов'язаних з ожирінням, в тому числі гіперглікемія та серцево-судинні явища. Тому для кращого лікування захворювань необхідними є лікарські засоби, ефективні для регулювання рівня глюкози та зниження маси тіла.

З огляду на це, до нових лікарських засобів, що досліджуються, належать сполуки, які мають активність не лише на рецепторах СІ Р-1, але також активність на одному або декількох інших рецепторах, таких як рецептори СІР та/або глюкагону. Фактично деякі сполуки були описані як такі, що мають потрійну агоністичну активність (тобто активність на кожному з рецепторів СІР, (І Р-1 та глюкагону). Наприклад, у публікації міжнародної заявки на винахід МО 2015/067716 описані аналоги глюкагону, які мають потрійну агоністичну активність. Аналогічно, у публікації міжнародної заявки на винахід М/О 2016/198624 описані аналоги ексендину-4, який сам по собі є аналогом ОСІ Р-1, які демонструють потрійну агоністичну активність. Так само, у кожній з публікацій міжнародних заявок на винахід МО 2014/049610 та УМО 2017/116204 описані різноманітні аналоги, які мають потрійну агоністичну активність. Більше того, у публікації міжнародної заявки на винахід М/О 2017/153375 описані коагоністи глюкагону та С Р-1, які також заявляються як такі, що мають СР активність.

Тим не менш, залишається потреба у лікарських засобах, зокрема для лікування Т2ОМ, які здатні забезпечити ефективне регулювання рівня глюкози, з ефектом втрати маси тіла та сприятливим профілем побічних ефектів. Існує також потреба в терапевтичних засобах, придатних для застосування, з достатньо тривалим терміном дії, що дозволяє приймати дози не частіше одного разу на день, тричі на тиждень, двічі на тиждень або один раз на тиждень.

Аналоги інкретину, розкриті в цьому описі, призначені для задоволення згаданих вище потреб.

Відповідно, в цьому описі розкриті аналоги інкретину з активністю на кожному з рецепторів (ЗІР, СІ Р-1 та глюкагону. Перевага полягає у тому, що розкриті у цьому описі аналоги інкретину мають збалансовану активність, що дозволяє вводити дози, які забезпечують достатню активність на кожному з рецепторів для забезпечення переваг агонізму такого рецептора, з одночасним уникненням при цьому небажаних побічних ефектів, пов'язаних із занадто великою активністю. Більше того, розкриті у цьому описі аналоги інкретину мають більш тривалий термін дії на кожному з рецепторів

СІР, СІ Р-1 та глюкагону, що дозволяє приймати дози не частіше ніж раз на день, тричі на тиждень, двічі на тиждень або один раз на тиждень. Таким чином, згадані аналоги інкретину призводять до посиленого контролю рівня глюкози, надають переваги для обміну речовин, такі як зниження маси тіла та/або поліпшення складу тіла, ліпідні переваги, такі як зниження рівня пропротеїнової конвертази субтилізин/кексин типу 9 (РС5КОУ), та/або інші переваги, такі як збільшення кісткової маси або формування кісток чи зниження резорбції кісток. У цьому описі також розкриті ефективні лікарські засоби для лікування інших порушень або станів, в тому числі ожиріння, МАРІ 0, МАБН, дисліпідемії та/або порушення обміну речовин.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу наданий аналог інкретину, який має формулу:

УХхгОСТЕТ5ОМБІХіІзі ОКХ:7АХію ох о го АБІЕМІЇ Хов охо се РБЗОХзаАРРРО, де Хо-АЇБ о (альфа- аміноїзомасляна кислота), Хіз-ї або оМеї, Х:і7 - будь-яка амінокислота з функціональною групою, придатною для кон'югації, й при цьому згадана функціональна група кон'югована з Сів6-Сгг жирною кислотою, Х19-О або А, Хго-АЇЬ, «МекК, О або Н, Хгв - Е або А, Хго-й або Аїр, Хза-С або АЇБ (5ЕО І

МО:5), і С-кінцева амінокислота факультативно є амідованою, або його фармацевтично прийнятна сіль.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу наданий спосіб лікування захворювання, такого як дисліпідемія, жирова хвороба печінки, метаболічний синдром, МА5Н, ожиріння та Т2ОМ. Такі способи можуть включати принаймні етап введення особі, яка потребує цього, ефективної кількості аналога інкретину, розкритого у цьому описі. У деяких випадках згаданим захворюванням є жирова хвороба печінки, ожиріння, МА5Н або Т2ОМ.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу аналог інкретину, розкритий у цьому описі, наданий для застосування в терапії. Наприклад, аналог інкретину, розкритий у цьому описі, наданий для застосування в лікуванні захворювання, такого як дисліпідемія, жирова хвороба печінки, метаболічний синдром, МАН, ожиріння і Т2ОМ. У деяких випадках згаданим захворюванням є жирова хвороба печінки, ожиріння, МА5Н або Т2ОМ.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу аналог інкретину, розкритий у цьому описі, наданий для застосування у виробництві лікарського засобу для лікування дисліпідемії, жирової хвороби печінки, метаболічного синдрому, МАБН, ожиріння і Т20ОМ. У деяких випадках згаданим захворюванням є жирова хвороба печінки, ожиріння, МА5Н або Т2ОМ.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу надана фармацевтична композиція, яка містить аналог інкретину, розкритий у цьому описі, і фармацевтично прийнятний носій, розріджувач або наповнювач.

Якщо не визначено інше, усі технічні та наукові терміни, які вжиті в цьому описі, мають загальноприйняте значення, яке зазвичай розуміється фахівцем у галузі, до якої належить цей винахід. Незважаючи на те, що при здійсненні або випробуванні аналогів інкретину, фармацевтичних композицій та способів можуть бути використані будь-які способи і матеріали, аналогічні або еквівалентні описаним, у цьому описі наведений опис способів та матеріалів, яким віддають перевагу.

Більше того, посилання на елемент у однині не виключає можливості наявності більше ніж одного елемента, якщо контекст чітко не вимагає наявності одного і лише одного елемента. Отже, однина зазвичай означає "щонайменше один".

СІР являє собою 42-амінокислотний пептид (5ЕО ІО МО: 4) і є інкретином, який відіграє фізіологічну роль у гомеостазі глюкози через стимулювання секреції інсуліну з бета-клітин підшлункової залози у присутності глюкози.

СІ Р-1 являє собою 36б-амінокислотний пептид (5ЕО І МО: 2) і є інкретином, який стимулює глюкозозалежну секрецію інсуліну, і який, як було показано, запобігає гіперглікемії у діабетиків.

Глюкагон являє собою 29-амінокислотний пептид (5ЕО ІО МО: 1), який допомагає підтримувати рівень глюкози в крові, шляхом зв'язування глюкагоновими рецепторами та їх активування на гепатоцитах, в результаті чого печінка вивільняє глюкозу, яка зберігається у вигляді глікогену, шляхом процесу, який має назву глікогеноліз.

Оксинтомодулін (ОХМ) - З7-амінокислотний пептид, який містить не тільки 29-амінокислотну послідовність глюкагону, але й октапептидний карбоксикінцевий подовжувальний сегмент (5ЕО 10 МО: 3), який активує рецептори як глюкагону, так і СІ Р-1, з дещо більш високою активністю на рецепторі глюкагону у порівнянні з активністю на рецепторі СІ Р-1.

Окрім Т2ОМ, інкретини та їх аналоги, які мають активність на одному або більше з рецепторів (ЗІР,

СІ Р-1 та/або глюкагону, були описані як такі, що мають потенційну терапевтичну цінність при ряді інших станів, захворювань чи розладів, у тому числі, наприклад, при ожирінні, МАРІО та МА5БН, дисліпідемії, метаболічному синдромі, розладах, пов'язаних з кістками, хворобі Альцгеймера та хворобі Паркінсона. Дивись, наприклад, Даї еї аї. (2017) Мої Меїаб. 6:440-446; Сатбропе еї аї!., (2016) /.

Сазігоепієго! Нерайо! 31:23-31; Ріпап еї аї., (2016) Ттепаз Мої Мей. 22:359-376; Сної еї а!., (2017) Роїепі роду меїдні Іо55 апа ейісасу іп а МА5Н апітаї! тоавеї! Бу а помеї! Іопд-асіїпд СІ Р-1/сІисадоп/СІР іпіріе- адопібї (НМ15211), АБА Розіег 1139-Р; Оіпд (2008) У. Вопе Міпег. Не5. 23:536-543; Таї еї аї., (2018)

Вгаіп Без. 1678:64-74; МиїПег еї аї., (2017) Рнузіо! Вем. 97:721-766; Ріпап еї аї., (2013) 5сі. Ттапзі Меа. 5:209; НоіІзснег (2014) Віоспет. бос. Тгап5. 42:593-600.

У значенні, вживаному у цьому описі, "приблизно" означає у межах статистично значущого діапазону значення або значень, таких як, наприклад, заявлена концентрація, довжина, молекулярна маса, рН, ідентичність послідовності, часовий інтервал, температура або об'єм. Таке значення або діапазон може бути в межах порядку величини, типово в межах 20 95, більш типово в межах 10 95 і ще більш типово в межах 5 95 від заданого значення або діапазону. Допустима варіація, що охоплюється терміном "приблизно", залежатиме від конкретної досліджуваної системи і може бути легко оцінена фахівцем у цій галузі.

У значенні, вживаному у цьому описі, і з посиланням на один або більше з рецепторів СІР, СІ Р-1 або глюкагону, терміни "активність", "активувати", "активування" і подібні означають здатність сполуки, такої як розкриті у цьому описі аналоги інкретину, зв'язуватись з та індукувати відповідь на рецепторі (рецепторах), яка визначена із застосуванням досліджень, відомих в цій галузі, таких як іп міго дослідження, описані нижче.

У значенні, вживаному у даному описі, термін "амінокислота з функціональною групою, придатною для кон'югації" означає будь-яку природну або штучну амінокислоту з функціональною групою, яка може бути кон'югована з жирною кислотою за допомогою, наприклад, лінкера. До прикладів таких функціональних груп належать, але без обмеження ними, алкінільні, алкенільні, аміно-, азидо-, бромо- ; карбоксильні, хлоро-, йодо- та тіолові групи. До прикладів природних амінокислот, які містять такі функціональні групи, належать К (аміногрупа), С (тіолова група), Е (карбоксильна група) і 0 (карбоксильна група).

У значенні, вживаному у цьому описі, термін "Стів-Сг2 жирна кислота" означає карбонову кислоту, яка має 16-22 атомів вуглецю. С1і6є-Сгг жирною кислотою, придатною для використання за цим винаходом, може бути насичена одноосновна кислота або насичена двоосновна кислота. У значенні, вживаному у цьому описі, термін "насичена" означає, що жирна кислота не містить подвійних чи потрійних вуглець-вуглецевих зв'язків.

У значенні, вживаному у цьому описі, термін "ефективна кількість" означає кількість, концентрацію або дозу одного або більше аналогів інкретину, розкритих у цьому описі, або їх фармацевтично прийнятної солі, яка при одноразовому або багаторазовому введенні особі, яка цього потребує, забезпечує бажаний результат у такої особи, яку піддають діагностуванню чи лікуванню. Ефективна кількість може бути легко визначена фахівцем у цій галузі із застосуванням відомих методик та шляхом спостереження за результатами, одержаними за аналогічних обставин. При визначенні ефективної кількості для окремої особи враховується ряд факторів, в тому числі, але без обмеження ними, вид ссавця; його розмір, вік та загальний стан здоров'я; конкретне захворювання або розлад, що піддають лікуванню; ступінь охоплення або тяжкість захворювання чи розладу; реакцію окремого пацієнта; конкретний введений аналог інкретину; спосіб введення або застосування лікарського засобу; характеристики біодоступності введеного препарату; вибрану схему прийому лікарського засобу; застосування супутніх лікарських засобів; та інші відповідні обставини.

У значенні, вживаному у цьому описі, термін "подовжена тривалість дії" означає, що афінність зв'язування та активність для аналогу інкретину триває протягом періоду часу, більшого ніж у нативних людських пептидів С1ІР, СІ Р-1 та глюкагону, що дозволяє здійснювати дозування принаймні не частіше ніж один раз на день або навіть тричі на тиждень, двічі на тиждень або один раз на тиждень. Часовий профіль дії аналога інкретину може бути виміряний із застосуванням відомих фармакокінетичних методів тестування, таких як ті, які використані в наведених нижче прикладах.

У значенні, вживаному у цьому описі, термін "аналог інкретину" означає сполуку, яка має структурну схожість з СІР, СІ Р-1 та глюкагоном, але і множинні відмінності, особливо з СІР (5ЕО І

МО: 4), СІ Р-1 (5ЕО ІЮО МО: 2) і глюкагоном (ЗЕО ІЮ МО: І) людини. Аналоги інкретину, розкриті у цьому описі, містять амінокислотні послідовності, завдяки яким згадані сполуки мають афінність до та активність на кожному з рецепторів СІР, СІ Р-1 та глюкагону (тобто потрійну агоністичну активність).

У значенні, вживаному у цьому описі, термін "індивід, який потребує цього" означає ссавця, такого як людина, зі станом, захворюванням, розладом або симптомом, який потребує лікування або терапії, в тому числі, наприклад, таких як перелічені у цьому описі.

У значенні, вживаному у цьому описі, терміни "лікувати", "лікування" або "курс лікування" й подібні означають стримування, уповільнення, зупинення або обернення напрямку розвитку чи тяжкості наявного стану, захворювання, розладу або симптому.

У значенні, вживаному у цьому описі, і з посиланням на аналог інкретину, термін "потрійна агоністична активність" означає аналог інкретину з активністю на кожному з рецепторів СІР, СІ Р-1 та глюкагону, зокрема аналог, що має збалансовану та достатню активність на кожному рецепторі для забезпечення переваги агонізму цього рецептора, уникаючи небажаних побічних ефектів, пов'язаних із занадто великою активністю. Більше того, аналоги інкретину, які мають потрійну агоністичну активність, мають більш тривалу дію на кожному з рецепторів (ЗІР, СІ Р-1 та глюкагону, що надає перевагу, яка дозволяє здійснювати дозування не частіше, ніж раз на день, тричі на тиждень, двічі на тиждень або раз на тиждень.

Структурні особливості аналогів інкретину, розкритих у цьому описі, призводять до того, що аналоги мають активність на кожному з рецепторів СІР, (І Р-1 та глюкагону, достатню для одержання сприятливих результатів активності на кожному рецепторі (тобто потрійної агоністичної активності), але не таку велику активність на будь-якому одному рецепторі, щоб вона пригнічувала активність на двох інших рецепторах, або призводила до небажаних побічних ефектів при введенні дози, достатньої для спричинення активності на всіх трьох рецепторах. До необмежувальних прикладів таких структурних особливостей у певних варіантах здійснення цього винаходу і з посиланням на послідовність ФЕО ІО МО: 5 належать І або осМеї! в положенні 13, які, як було встановлено, сприяють оптимальній активності глюкагону та СІР; Ар в положенні 20, яка, як було встановлено, сприяє оптимальній активності СІР; ацилювання в положенні 17, яке, як було встановлено, сприяє оптимальній активності глюкагону; і М в положенні 25, який, як було виявлено, сприяє оптимальній активності глюкагону та/або СіІіР. До інших прикладів таких структурних особливостей належать розкриті у цьому описі амінокислоти в положеннях 22, 24 та 28-39, які, як було виявлено, сприяють оптимальному зв'язуванню та ефективності на всіх трьох рецепторах.

Структурні особливості аналогів інкретину, розкритих у цьому описі, також призводять до того, Що аналоги мають багато інших корисних властивостей, які мають відношення до їх придатності для застосування як терапевтичних лікарських засобів, в тому числі для поліпшення розчинності аналогів у водних розчинах, поліпшення хімічної та фізичної стабільності композиції, розширення фармакокінетичного профілю та мінімізації потенціалу щодо імуногенності. До необмежувальних прикладів конкретних структурних особливостей, які призводять до таких ознак, належать ацилювання

Сго жирною кислотою в положенні 17, що сприяє оптимальним фармакокінетичним (РК) профілям та придатності для застосування; Аіб оМекК, ОО або Н у положенні 20, що сприяє оптимальним фармакокінетичним профілям та придатності для застосування; та амінокислоти у положеннях 22, 24 та 28-39, які сприяють оптимальній фармакокінетиці, імуногенності, придатності для застосування та стабільності.

Слід зазначити, що вищенаведені списки структурних особливостей наведені як приклад та не є вичерпними, і що поєднання корисних характеристик наведених як приклад аналогів, розкритих у цьому описі, не є результатом будь-якої окремо взятої модифікації, а натомість досягнуто завдяки новим комбінаціям розкритих у цьому описі структурних особливостей. Крім того, вищеописані впливи наведених вище переліків модифікацій не є виключними, оскільки багато з цих модифікацій також чинять інші впливи, важливі для характеристик розкритих у цьому описі сполук, які описані нижче.

Розкриті у цьому описі амінокислотні послідовності аналогів інкретину містять природні амінокислоти, звичайно позначені у цьому описі із використанням стандартних однолітерних кодів (наприклад, І! - лейцин), а також альфа-метилзаміщені залишки природних амінокислот (наприклад, а- мети л лейцин (сМеї!) та ос-метиллізин (сМекК)) та деякі інші штучні амінокислоти, такі як альфа- аміноїзомасляна кислота (АБ). Структури цих амінокислот зображені нижче:

МН. . ре он 7» он . Нм ном р он о о НМ о

Як було зазначено вище, розкриті у цьому описі аналоги інкретину мають структурну схожість з, але й багато структурних відмінностей від, будь-якого з нативних людських пептидів. Наприклад, у порівнянні з нативним людським СІР (5ЕО ІО МО: 4), розкриті у цьому описі аналоги інкретину містять модифікації в одному або більше з положень 2, 3, 7, 13, 14, 17, 18-21, 23-25, 28-29 та 30-42. У деяких випадках розкриті у цьому описі аналоги інкретину містять модифікації амінокислот нативного людського СІР (З5ЕО ІО МО: 4) у кожному з положень 2, 3, 7, 13, 14, 17, 18, 20, 21, 23-25, 29 та 30-42. У певних випадках розкриті у цьому описі аналоги інкретину містять такі модифікації амінокислот: Аїр у положенні 2; ОО у положенні 3; Т у положенні 7; Ї або схМеї! у положенні 13; Її у положенні 14; модифікований залишок К у положенні 17, який модифікований шляхом кон'югації епсилон-аміногрупи бічного ланцюга К із Сі6-Сг»о жирною кислотою, факультативно шляхом використання лінкера; А у положенні 18; А у положенні 21; І у положенні 23; Е у положенні 24; М у положенні 25; С у положенні 29; та заміну амінокислот у положеннях 30-42 такою амінокислотною послідовністю: СРОБОАРРРБ (5ЕО ІО МО: 26) та СРБОБ-АІБ-АРРРБ (5ЕО ІЮО МО: 27) (і скороченими аналогами хвоста). В інших випадках розкриті у цьому описі аналоги інкретину містять модифікації у одному або більше з А у положенні 19; оМекК, АЇб або Н у положенні 20; та Е у положенні 28. В певних випадках розкриті у цьому описі аналоги інкретину є амідованими. На додаток до розкритих у цьому описі модифікацій, розкриті у цьому описі аналоги інкретину можуть містити одну або більше додаткових модифікацій амінокислотних залишків однак, за умови, що згадані аналоги залишаються здатними зв'язуватись з та активувати кожен з рецепторів СІР, СІ Р-1 та глюкагону.

Як було зазначено вище, розкриті у цьому описі аналоги інкретину містять жирнокислотну складову, кон'юговану, наприклад, за допомогою лінкера, з природною або штучною амінокислотою з функціональною групою, придатною для кон'югації. Таку кон'югацію іноді називають ацилюванням. У деяких випадках амінокислотою з функціональною групою, придатною для кон'югації, може бути К, С,

Е ії Ю. У конкретних випадках, амінокислотою з функціональною групою, придатною для кон'югації, є К, де кон'югація відбувається по епсилон-аміногрупі бічного ланцюга К.

Ацилювання розкритих у цьому описі аналогів інкретину відбувається в положенні 17 в послідовності ФЕО ІО МО: 5, яке було визначено як оптимальне місце для включення цієї структурної одиниці. Жирна кислота, і в деяких варіантах здійснення цього винаходу лінкер, діють як сполучні альбуміну і забезпечують можливість для утворення сполук тривалої дії.

В розкритих у цьому описі аналогах інкретину використана С:і6-Сгг жирна кислота, хімічно кон'югована з функціональною групою амінокислоти або безпосередньо зв'язком, або лінкером.

Довжина та склад жирної кислоти впливає на період напіввиведення аналогів інкретину, на їх активність у тваринних моделях іп мімо та на їх розчинність і стабільність. Кон'югація з Сч16-Сг2 насиченою жирною одноосновною або двоосновною кислотою призводить до одержання аналогів інкретину, які демонструють бажаний період напіввиведення, бажану активність у тваринних моделях іп мімо та бажані характеристики розчинності та стабільності.

До прикладів Сів-Сг2 насичених жирних кислот для використання за цим винаходом належать, але без обмеження ними, пальмітинова кислота (гексадеканова кислота) (Сіє одноосновна кислота), гексадекандіоєва кислота (Сіє двоосновна кислота), маргаринова кислота (гептадеканова кислота) (Сі7 одноосновна кислота), гептадекандіоева кислота (С1і7 двоосновна кислота), стеаринова кислота (Сів одноосновна кислота), октадекандіоєва кислота (Сів двоосновна кислота), нонадецилова кислота (нонадеканова кислота) (Сто одноосновна кислота), нонадекандіоєва кислота (Сіо двоосновна кислота), арахінова кислота (ейкозанова кислота) (Сго одноосновна кислота), ейкозандіоєва кислота (Сго двоосновна кислота), генейкозилова кислота (генейкозанова кислота) (Сгі одноосновна кислота), генейкозандіоєву кислоту (Сг: двоосновна кислота), бегенова кислота (докозанова кислота) (Сг одноосновна кислота), докозандіоєва кислота (Сг двоосновна кислота), в тому числі їх розгалужені та заміщені похідні.

У деяких випадках Сів6-Сгг жирною кислотою може бути насичена Сів одноосновна кислота, насичена Сів двоосновна кислота, насичена Сто одноосновна кислота, насичена С:іо двоосновна кислота, насичена Сго одноосновна кислота, насичена Сго двоосновна кислота, а також їх розгалужені та заміщені похідні. У більш конкретних випадках Сі6-Сгг жирною кислотою може бути стеаринова кислота, арахінова кислота та ейкозандіоєва кислота, зокрема, арахінова кислота.

У деяких випадках лінкер може містити від однієї до чотирьох амінокислот, амінополіетиленгліколь карбоксилат або їх суміші. У деяких випадках амінополіетиленгліколь карбоксилат має таку структуру:

Н-МН-СНг-СНг-(О-СНг-СНаг|т-О-(СНег)рь-СО)-ОН, де т становить будь-яке ціле число від 1 до 12, п становить будь-яке ціле число від 1 до 12,ар дорівнює 1 або 2.

У деяких випадках лінкер може мати одну або більше (2-(2-(2-аміноетокси)етокси|Їацетил) складових факультативно в комбінації з однією-чотирма амінокислотами.

У випадках, коли лінкер містить щонайменше одну амінокислоту, згаданою амінокислотою можуть бути один-чотири амінокислотні залишки Сіи або усій. У деяких випадках лінкер може містити один або два амінокислотні залишки Си або усіи, в тому числі їх О-форми. Наприклад, лінкер може містити один або два амінокислотні залишки усій. Альтернативно лінкер може містити від одного до чотирьох амінокислотних залишків (таких як, наприклад, амінокислоти Сі або усій), використовуваних у комбінації з до тридцяти шести (2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил) складовими. Зокрема, лінкером можуть бути комбінації однієї-чотирьох амінокислот (3 або усі та однієї-чотирьох (2-(2-(2- аміноетокси)етокси|Їацетил) складових. В інших випадках лінкер може бути комбінацією однієї або двох амінокислот уСіи та однієї або двох (2-(2-(2- аміноетокси)етокси|ацетил) складових.

У конкретному випадку аналоги інкретину, розкриті у цьому описі, містять лінкерні та жирнокислотні складові, що мають структуру такої формули: (2-(2-(2-аміноетокси)етокси|Іацетил)а-(уСІш)ь-СО-(СНг)-СО2Н, де а становить 0, 1 або 2, 5 становить 1 або 2, і с становить 16 або 18. У конкретному випадку, де а становить 2, Б становить 1, і с становить 18, структура складової зображена нижче: о но о о

Н крути ли о і о о

В іншому конкретному випадку, де а становить 1, Б становить 2, і с становить 18, структура складової зображена нижче:

но. о о о : о Ж А м он пре ту : КК А А поло о 97 он 9 ?

В іншому конкретному випадку, де а становить 0, Б становить 2, і с становить 18, структура складової зображена нижче: но о о о

Али А долу , - М : Н оно о 6) ОН

В іншому конкретному випадку, де а становить 1, Б становить 1, і с становить 18, структура складової зображена нижче: но о о о

ХХ рю Ар Ж А долу х, о м о о

Як показано в хімічних структурах Прикладів 1-20 нижче, описані вище лінкерні та жирнокислотні складові можуть бути зв'язані з епсилон (є)-аміногрупою бічного ланцюга лізину (К).

Афінність аналогів інкретину, розкритих у цьому описі, до кожного з рецепторів СІР, СІ Р-1 та глюкагону може бути визначена із застосуванням методик, відомих в цій галузі для вимірювання рівня зв'язування рецепторів, в тому числі, наприклад, тих, які описані в прикладах нижче, і зазвичай виражається як значення константи інгібування (Кі). Активність розкритих у цьому описі аналогів інкретину на кожному з рецепторів також може бути визначена із застосуванням методик, відомих в цій галузі, в тому числі, наприклад, досліджень активності іп міо, описаних нижче, і зазвичай виражається як значення 5095 ефективної концентрації (ЕС5о), яка являє собою концентрацію сполуки, що викликає напівмаксимальну симуляцію на кривій залежності "доза-ефект".

Розкриті у цьому описі аналоги інкретину можуть входити до складу фармацевтичних композицій, які можна вводити парентеральними шляхами (наприклад, підшкірним, внутрішньовенним, внутрішньоочеревинним, внутрішньом'язовим або трансдермальним). Такі фармацевтичні композиції та методи їх одержання добре відомі в цій галузі. Дивись, наприклад, Ветіпаїоп: Те бсіепсе апа

Ргасіїсе ої Рнаптасу (Тгоу, Еа., 2121 Єайіоп, Гірріпсой, М/Патв 8 УМіКіп5, 2006). У конкретних випадках згадані аналоги інкретину вводять підшкірним шляхом.

Аналоги інкретину, розкриті у цьому описі, можуть вступати в реакцію з будь-якою з ряду неорганічних та органічних кислот/основ та утворювати фармацевтично прийнятні солі приєднання кислоти/основи. Фармацевтично прийнятні солі та загальні методи їх одержання добре відомі в цій галузі (дивись, наприклад, 51їайі, єї аі, Напабсок ої Рнаппасешіса! Заїїв: Ргорепіев, Зеїесіїп апа ве, 279 Демізеа Еайіоп (УМієу-МСН, 2011)). До фармацевтично прийнятних солей для застосування за цим винаходом належать натрієві, трифторацетатні, гідрохлоридні та/або ацетатні солі.

Цим винаходом також надані, і, отже, цей винахід охоплює нові проміжні хімічні речовини та способи синтезу аналогів інкретину, розкритих у цьому описі, або їх фармацевтично прийнятних солей. Проміжні хімічні речовини та аналоги інкретину, розкриті в цьому описі, можуть бути одержані різними методами, відомими в цій галузі. Наприклад, метод застосування хімічного синтезу проілюстрований у Прикладах, наведених нижче. Конкретні етапи синтезу для кожного з описаних шляхів можуть бути скомбіновані по-різному для одержання розкритих у цьому описі аналогів інкретину. Реагенти та вихідні матеріали легко доступні фахівцю в цій галузі.

Деякі аналоги інкретину, розкриті у цьому описі, зазвичай ефективні у широкому діапазоні дозувань. Наприклад, дози для введення один раз на тиждень можуть становити від приблизно 0,01 мг/особа на тиждень до приблизно 30 мг/особа на тиждень, від приблизно 0,1 мг/особа на тиждень до приблизно 10 мг/особа на тиждень або навіть від приблизно 0,1 мг/особа на тиждень до приблизно З мг/особа на тиждень. Таким чином, дози розкритих у цьому описі аналогів інкретину можна вводити щодня, тричі на тиждень, двічі на тиждень або один раз на тиждень, зокрема, вводити один раз на тиждень.

Аналоги інкретину, розкриті у цьому описі, можуть бути застосовані для лікування різних станів, розладів, захворювань або симптомів. Зокрема, надані способи лікування Т2ОМ у особи, які включають принаймні етап введення особі, яка потребує такого лікування, ефективної кількості аналога інкретину, розкритого у цьому описі, або його фармацевтично прийнятної солі.

Також надані способи лікування ожиріння у особи, які включають принаймні етап введення особі,

яка потребує такого лікування, ефективної кількості аналога інкретину, розкритого у цьому описі, або його фармацевтично прийнятної солі.

Також надані способи спричинення нетерапевтичної втрати маси у особи, які включають принаймні етап введення особі, яка потребує такого лікування, ефективної кількості аналога інкретину, розкритого у цьому описі, або його фармацевтично прийнятної солі.

Також надані способи лікування метаболічного синдрому у особи, які включають принаймні етап введення особі, яка потребує такого лікування, ефективної кількості аналога інкретину, розкритого в цьому описі, або його фармацевтично прийнятної солі.

Також надані способи лікування МА5Н у особи, які включають принаймні етап введення особі, яка потребує такого лікування, ефективної кількості аналога інкретину, розкритого у цьому описі, або його фармацевтично прийнятної солі.

Також надані способи лікування неалкогольної жирової хвороби печінки у особи, які включають принаймні етап введення особі, яка потребує такого лікування, ефективної кількості аналога інкретину, розкритого у цьому описі, або його фармацевтично прийнятної солі.

У цих способах ефективність згаданих аналогів інкретину можна оцінити, наприклад, шляхом спостереження значного зниження рівня глюкози в крові, спостереження значного підвищення рівня інсуліну, спостереження значного зниження НБбАЇс та/або спостереження значного зниження маси тіла.

Як альтернатива, розкриті у цьому описі аналоги інкретину або їх фармацевтично прийнятні солі можна застосовувати для підвищення міцності кісток у особи, яка цього потребує. У деяких випадках особа, яка потребує цього, має гіпоостоз або гіпоостеоїдоз, або зазнає лікування від перелому кістки, ортопедичної процедури, ортопедичного протезування, імплантації зубів та/або спондилодезу.

Аналоги інкретину, розкриті у цьому описі, можна також застосовувати для лікування інших розладів, таких як хвороба Паркінсона або хвороба Альцгеймера.

ПЕПТИДНИЙ СИНТЕЗ

Приклад 1

Сполука Прикладу 1 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

У-АЇБ-ОСТЕТ5ОУ5І-оМеї - ОКК(2-(2-(2-2-аміноетокси)етокси|ацетил)2-(уСІц)-СО- (СНег)в-

СО2гНІАО-оМекК-АРІЕМИ ЇЇ А-АЇр-СРБЗБСАРРРБ-МН» (5ЕО ІЮ МО: 7).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу 1 із застосуванням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків АїБр2, «Ме! 13, К17, «МекК20 та Аїр29, де структури цих амінокислотних залишків були розширені: о п о о і а ана МН мн, о о он но. ур веттввнн-я свк--М 5а-М сек отеют ур о о о о о о

Пептидний каркас сполуки Прикладу 1 синтезували із застосуванням хімії флуоренілметилоксикарбонілу (Етос)/трет-бутилу (Ї1Ви) на 12-канальному мультиплексному пептидному синтезаторі Зутрпопу (Ргоївіп Тесппоіодієв, Іпс. Тис5зоп, штат Арізона).

Смола складається з 1 95 зшитого дивінілбензолом (ОМВ) полістиролу (Етос-Віпк-МВНА гом

Ї оадіпу РНезіп, 100-200 меш, ЕМО Міїїроге) при заміщенні 0,3-0,4 мекв/г. Використані типові захисні групи бічного ланцюга. Для лізину в положенні 17 використовували Етос-Ї уз(МН)-ОН), а для тирозину в положенні 1 використовували Вос-ТупціВи)-ОН). Групи Етос видаляли перед кожним етапом сполучення (2 х 7 хв) з використанням 20 95 розчину піперидину в диметилформаміді (ОМЕ). Всі типові амінокислотні сполучення проводили протягом 1 год. для первинного аміну і протягом З год. для вторинного аміну, з використанням однакового молярного співвідношення амінокислоти Етос (0,3

ММ), діїізопропілкарбодіїміду (0,9 мМ) та оксиму (0,9 мМ), при 9-кратному молярному надлишку над теоретичним завантаженням пептидів. Виняток становлять сполучення з Са-метильованими амінокислотами, які сполучали протягом З год. Після завершення синтезу пептидного каркасу, смолу ретельно промивали дихлорметаном (ОСМ) 6 разів, щоб видалити залишковий ОМЕ. Захисну групу

МІ на лізині в положенні 17 селективно видаляли з пептидної смоли, із застосуванням двох обробок

ЗО 95 розчином гексафторізопропанолу (Оакуоса Спетіса!5) в ОСМ (2 х 40-хвилинні обробки).

Подальше приєднання жирнокислотної лінкерної складової здійснювали шляхом сполучення 2-(2- (2-Ртос-аміноетокси)етокси|оцтової кислоти (Етос-АЕЕА-ОН, СпетрРер, Іпс.), а-трет-бутипового складного ефіру Етос-глутамінової кислоти (Етос-сіІШ-ОЇВи, АК Ріапт, Іпс.), моно-ОЇВи-

ейкозандіоєвої кислоти (УУиХхі АррТес, Зпаподаї, Китай). Для кожного сполучення тривалістю 1 год. використовували 3-кратний надлишок реагентів (АА:РУАОР:ОІРЕА-1:1:1 моль/моль).

Після завершення синтезу пептидну смолу промивали ЮОСМ, і потім ретельно висушували на повітрі. Суху смолу обробляли 10 мл розщеплювального коктейлю (трифтороцтова кислота: вода:триізопропілсилан, 95:2,5:2,5 (у об'ємному відношенні)) протягом 2 год. при кімнатній температурі. Смолу відфільтровували, двічі промивали 2 мл (кожного разу) нерозбавленої трифтороцтової кислоти (ТЕА), і об'єднані фільтрати обробляли 5-кратним надлишком холодного діетилового простого ефіру (-20 "С) для осадження неочищеного пептиду. Після цього суспензію пептид/простий ефір центрифугували при 3500 об/хв протягом 2 хв для одержання твердого осаду, супернатант декантували, твердий осад двічі розтирали в порошок з простим ефіром, і сушили іп масо. Неочищений пептид солюбілізували у суміші 20 95 ацетонітрилу/20 95 оцтової кислоти/60 95 води, і очищали із застосуванням рідинної хроматографії високої ефективності з оберненою фазою (АР-НРІ С) на 5 мкм феніл-гексильній препаративній колонці па (21 х 250 мм, РПепотепех) з лінійними градієнтами буферної системи 10095 ацетонітрилу та 0,195 ТЕА/вода (30-50 95 ацетонітрилу за 60 хв). Чистоту пептиду оцінювали із застосуванням аналітичної АР-НРІ С; критерії об'єднання становили 295 95. Виявлено, що чистота основного пулу сполуки Прикладу 1 становила 98,8 95. Подальша ліофілізація кінцевого пулу основного продукту дала згадану ліофілізовану пептидну сіль ТЕА. Молекулярну масу визначали із застосуванням рідинної хроматографії з мас- спектроскопічним детектуванням (10-М5) (спостережувана: М-4Н/4-1226,; обчислена

Ман /4-1226,9).

Приклад 2

Сполука Прикладу 2 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

У-АіЇБ-ОСТЕТ5ОУ5І-сМеї -І ОКК(2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил)-(ус1и)-СО-(СНег) в-

СО2Н)ІАОНАРІЕМІ І А-АІр-аРБЗБЗСОАРРРБ-МН» (5ЕО І МО: 6).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу 2 з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків Аїр2, оМе!13, К17 та Аїр29, де структури цих амінокислотних залишків були розширені: о он о Ії

Н рана; о о он но

СЮ рввтетнвхеу їок--м контек зтномня ур о о о о о

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 2.

Приклад З

Сполука Прикладу З являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

У-Аір-0ОСТЕТ5ОМ5І-оМе! - ОКК((2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил)2-(уСІш)-СО-(СНг)в-СО2Н)АО- о Ме! -АРІЕМІ ГЕСОИРБЗБОСАРРРБ-МН» (5ЕО ІЮ МО: 8).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу З з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків АіЇр2, «Ме!13, К17, та оМекК20, де структури цих амінокислотних залишків були розширені: о он

Ї ЇЇ

Н Н тру мн, їх о о о он но

Су вет гок--м о плення ие о о о о о

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 3.

Приклад 4

Сполука Прикладу 4 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

У-АіБ-ОСТЕТБОоУЗШ ОКК(2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил)-(уСІш)-СО-(СНг)8-СО2Н)ІАО-АЇр-

АРІЕМІ ЇЇ А-Аір-СРУОБИАРРРБ-МН» (5ЕО ІЮО МО: 9).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу 4 з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків Аїр2, К17, Аїр20 та Аїр29, де структури цих амінокислотних залишків були розширені: о он о Г

Н ру о о он но ур воттевнтьк-у юю уки у РЗЗОАРРР Ж о о о о о

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 4.

Приклад 5

Сполука Приклад 5 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

У-Аір-ОСТЕТ5ОМУБІ-оМеї -І ОКК(2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил)2-(уСІи)-СО-(СНг) в-

СО2Н)ААОАНІЕМІ І Е-АЇ-СРОБОАРРРБ-МН» (5ЕО І МО: 10).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу 5 з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків Аїр2, оМе!13, К17 та Аїр29, де структури цих амінокислотних залишків були розширені: о он

Ї ЇЇ

Н Н рити

Н о о о он но

Ср вотитьтн-я ок мання оно ую о о о о о

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 5.

Приклад 6

Сполука Прикладу 6 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

У-Аір-ОСТЕТ5ОМБІ-оМеї -ІОКК ((2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил)2-(уСІШ)-СО-(СНг)в-СО2Н)

ААОАРІЕМ ГГ ЕСИаРБЗБОАРРРБ-МН» (5ЕО ІЮ МО: 11).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу б з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків Аір2, «Ме! 13, та К17, де структури цих амінокислотних залишків були розширені:

о он о Ії н Н рр н о о о он но.

КИ вони ї сок ААОАРІЕМІ ГЕ зни ум о о о о

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 6.

Приклад 7:

Сполука Прикладу 7 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

У-Аір-ОСТЕТБОМБІОКК (2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил)2-(уСІц)-СО-(СНг)ів-СО2Н)АО-оМек-

АРІЕМП ЕС РБОБОАРРРБ-МН» (ЗЕО І МО: 12).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу 7 з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків Аір2, «Ме! 13 та К17, де структури цих амінокислотних залишків були розширені: о он

Ї Її н н рр н о о о он но

КИ рветтввтн-я і гок--М сеплвеуннновномех у у о о о в о

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 7.

Приклад 8

Сполука Прикладу 8 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом: У-АЇір-

ОстТЕТБОУБШІОКК ((2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил)2-(уСІш)-СО-(СНг)8-СО2НІАО-оМек-

АРІЕМП ЕС РБОБОАРРРБ-МН» (ЗЕО І МО: 13).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу 8 з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків Аір2, К17 та оМекг0, де структури цих амінокислотних залишків були розширені: о он о Її

Н Н рттуриу Кн,

Н о о о он но ур ветнвнтькя АОо--М АРІЕХІ ТЕ пн ую нн Н 2 о о о о

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 8.

Приклад 9

Сполука Прикладу 9 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

У-АІБ-ОСТЕТ5ОМУБІ-оМеї - ОКК((-(уСІц)2-СО-(-(СНег)ія--СО2Н) / АОНАРІЕМ ИЇ ЕСаРББОАРРРБ-МН»

(ЗЕО ІО МО: 14).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу 9 з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків АїЇр2, «Ме! 13 та К17, де структури цих амінокислотних залишків були розширені: о ла о он о о

М м

М МН

Й о о он но

Кр вотнтвнн бок--к сонатеулнсонномеє у о о о о

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 9.

Приклад 10

Сполука Прикладу 10 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

У-АЇБ-ОСТЕТ5ОУБІ-сМеї - ОКК ((2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил)-(уСІш)-СО-(СНг)в-

СОгНІАОНАРІЕМ І ЕСОИаРББЗОАРРРБ-МН» (5ЕО ІЮ МО: 15).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу 10 з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків Аір2, «Ме! 13 та К17, де структури цих амінокислотних залишків були розширені: о он о о і а -7е7 7 МН о о он но

СИ рестетнн-у бок--к кенлулновюнотт у о о о о

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 10.

Приклад 11

Сполука Прикладу 11 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

У-Аір-ОСТЕТ5ОМУБІ-оМеї -ГОКК ((2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил)»2-(-("уСІш)-СО-(СНг)ів-СО2Н)АО-

АЇБ-АРІЕМІ ГЕС РББИАРРРБІ-МН» (З5ЕО І МО: 16).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу 11 з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків Аїр2, оМе!13, К17 та АїБр20, де структури цих амінокислотних залишків були розширені:

о он

Ї ЇЇ

Н Н туру

Н о о о он но урні сок А дпулевнвннсю Ме о о о о о

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 11.

Приклад 12

Сполука Прикладу 12 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

У-Аір-ОСТЕТ5ОУБІ-оМе1- ОКК О/((2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил)-(уСІш)-СО-(СНг)18-СО2гН)АО-

АЇБ-АРІЕМІ ГЕСОаРББИАРРРБ-МН»г (ЗЕО ІО МО: 17).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу 12 з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків Аїр2, оМе!13, К17 та Аїр20, де структури цих амінокислотних залишків були розширені: о он

Ї Ї

Н

" соилчитн

Й о о он но р вететеочн сок--к в дденнннном ур о о о о о

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 12.

Приклад 13

Сполука Прикладу 13 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

У-АІБ-ОСТЕТ5ОУ5І-оМе1- ОККО (2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил)-(уСІй)-СО-(СНг)ів-СО2гН)ІАО-

АЇБ-АРІЕМІ ГГ Е-АіЇр-СРУОБОАРРРБ-МН» (5ЕО ІЮ МО: 18).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу 13 з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків Аїр2, «Ме! 13, К17, Аїр20 та Аіїр29, де структури цих амінокислотних залишків були розширені: о он о Її н

М уче о о он но

Кур ветитенноу і сок віп птн ур о о о о о о

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 13.

Приклад 14

Сполука Прикладу 14 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

У-Аір-ОСТЕТ5ОУБІ-оМе1-ГОКК. ((2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил)- (уСІШ)-СО-(СНг)18-СО2Н)АО-

АЇБ-АРІЕМІ ГГ Е-Аір-СРБЗБ-АЇБ-АРРРБ-МН» (ЗЕО І МО: 19).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу 14 з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків Аір2, «Ме! 13, К17, Аір20, Аір29 та АіЬЗ34, де структури цих амінокислотних залишків були розширені: о он о І

Н й учи о о он но

СЮ рве і їок-кК 8 пені пні нн я о о о о о о о

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 14.

Приклад 15

Сполука Прикладу 15 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

У-АіБ-ОСТЕТОУБШІ ОКК ((2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил)2г-(уСІш)-СО-(СНг)1в-СО»Н)ІАО-АЇр-

АРІЕМІ А-АІр-СРОБИАРРРБ-МН»г (5ЕО ІЮ МО: 20).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу 15 з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків Аїр2, К17, Аїр20 та Аїр29, де структури цих амінокислотних залишків були розширені: бокси

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 15.

Приклад 16

Сполука Прикладу 16 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

У-Аір-ОСТЕТБОМБІ ОКК (2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил)2-(уСІи)-СО-(СНг)1в-СО»Н)АО-АЇр-

АРІЕМ ЕС РББИаАРРРБ-МН» (5ЕО ІЮ МО: 21).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу 16 з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків Аір2, К17, та Аїр20, де структури цих амінокислотних залишків були розширені: о он о Її

Н Н тру

Н о о о он 0 но

С урвотитононих -М очи пиннн ую нн Нн нн Н 2 о о о о

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 16.

Приклад 17

Сполука Прикладу 17 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

АРІЕМІЇ Е-Аір-СРУОБИОАРРРБ-МН» (5ЕО ІО МО: 22).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу 17 з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків Аїр2, К17, Аїр20 та Аїр29, де структури цих амінокислотних залишків були розширені: постять

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 17.

Приклад 18

Сполука Прикладу 18 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

У-Аір-ОСТЕТБОМБІ ОКК (2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил-(уСІй)-СО-(СНг)1в-СО2Н)АО-АЇр-

АРІЕМП ЕС РБОБОАРРРБ-МН» (ЗЕО І МО: 23).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу 18 з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків Аїр2, К17, та Аір20, де структури цих амінокислотних залишків були розширені: о он о о о о он но

С рсетиннннниях -М о пеня знюю у

Н Нн Нн Н 2 о о о о

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 18.

Приклад 19

Сполука Прикладу 19 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

У-Аір-ОСТЕТ5оУБИ ОККО (2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил) / -"уУСІШ2а-СО-(СНг)ів-СО2Н)АО-АЇр-

АРІЕМІ Е-АІр-СРУОБИАРРРБ-МН»г (5ЕО ІЮ МО: 24).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу 19 з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків АїЇр2, К17, АЇр2гО апа АїЇр29, де структури цих амінокислотних залишків були розширені: о он о он о її

Н Н

М Коли х, о о о он но

КИ рвотитовнтькся вно еннвют ур о о о о о

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 19.

Приклад 20

Сполука Прикладу 20 являє собою сполуку, охарактеризовану таким описом:

У-Аір-ОСТЕТ5рУБИТОКК ОО(2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил) -«"уСІШ)-СО-(СНг)ів-СО2Н)АО-АЇр-

АРІЕМІ Е-АІр-СРУОБИАРРРБ-МН»г (5ЕО ІЮ МО: 25).

Нижче зображена структура сполуки Прикладу 20 з використанням стандартних однолітерних амінокислотних кодів, за винятком залишків Аїр2г, К17, Аїр20 та Аїр29, де структури цих амінокислотних залишків були розширені: о он о Ії

Н

" сли

Й о о он но ур вчень -- ву урни юю урсеннноння щочи о о о о о

Процеси, аналогічні описаним вище для сполуки Прикладу 1, використовували для синтезу пептидного каркасу, для кон'югації жирнокислотної лінкерної складової, для дослідження чистоти та для підтвердження молекулярної маси сполуки Прикладу 20. ФУНКЦІЇ ІМ МІТНО

Афінність зв'язування

Дослідження конкурентного зв'язування радіоліганду проводили для визначення константи дисоціації у стані рівноваги наведених як приклад сполук та молекул порівняння. У такому дослідженні використовували методи сцинтиляційного дослідження з використанням МіПів (молекулярно- імпринтований полімер) (5РА) та мембрани, приготовані з трансфікованих клітин НЕК293, які надекспресують людський рецептор СІР (СІРА), рецептор СІ Р-1 (СІ Р-18) або людський рецептор глюкагону (Сс9п).

Дослідження проводили у присутності бацитрацину як неспецифічного блокувального засобу для запобігання зв'язуванню ацильованих складових досліджуваних аналогів з білюоовими компонентами, використовуваними у стандартних аналітичних буферах (наприклад, альбуміном).

Криві конкуренції будували як відсоткове специфічне інгібування (вісь у) проти буд концентрації сполуки (вісь х) та аналізували із застосуванням підгонки методом чотирипараметричної нелінійної регресії зі змінним нахилом (АВабзе чи Сепедаїа)» Значення Кі обчислювали за рівнянням

Кі-ІСволІ-(0/Ка)), де ІСво являє собою концентрацію сполуки, яка призводить до 50 95 інгібування зв'язування, О являє собою концентрацію радіоліганду, що використовується в дослідженні, і Ка являє собою константу дисоціації для рецептора та радіоліганда, визначену за результатами дослідження насичувального зв'язування (показано в наведеній нижче Таблиці 1).

Таблиця 1

Константи дисоціації (Ка), визначені за результатами досліджування насичувального зв'язування. вІР-ТВ СІРА

Значення Кі відповідних прикладам аналогів та молекул порівняння наведені в Таблиці 2.

Таблиця 2

Афінність зв'язування іп міїго (Кі) сполук Прикладів та молекул порівняння з людськими СІРА, СІ Р-18 та СссдувА п Кі, НМ (середня квадратична помилка середнього, п

СІРА сіР-ТВ 3,1(0,5,4 нн шин

ПОР нн 0,12(0,02,4 ни пе Р-ї ин шинннншш 1,2(0,2,4

11111111 01111 КунМосередняквадратичнапомилкасереднього,п)../-:/ -ЗСО

ПРИМІТКА: Кваліфікатор (") вказує на те, що дані не досягли 50 95 інгібування відносно максимального зв'язування, в результаті чого Кі обчислювали, використовуючи найвищу концентрацію, випробувану в дослідженні. п-1/х означає, що для вираження середнього значення використовували лише одне значення із загальної кількості повторів (х). Середню квадратичну помилку середнього (ЗЕМ) обчислювали лише тоді, коли існує п-2 або більше некваліфікованих результатів.

Як видно з Таблиці 2, відповідні прикладам аналоги мали афінність зв'язування з кожним з рецепторів СІР, СІ Р-1 та Сса.

Функціональна активність

Функціональну активність визначали у клональних лініях клітин НЕК-293, що експресують СЕК-В-

СІ Р-18- та СсоВ. Кожну лінію клітин, які надекспресують рецептор, обробляли пептидом (20-точкова крива залежності "концентрація-ефект", 2,75-кратне пряме розведення Іарсуїе Еспо) в ОМЕМ (модифіковане за способом Дульбекко середовище Ігла) (Срірбсо, номер за каталогом 31053), доповненому ЇХ СішамАХ мМ ((3ірсо, номер за каталогом 35050), 0,25 95 ЕВ5 (ембріональна бичача сироватка), Ссібсо, номер за каталогом 26400), 0,05 95 фракції М В5А (сироватковий альбумін великої рогатої худоби, сірсо, номер за каталогом 15260), 250 мкМ ІВМХ (З-ізобутил-1-метилксантин) та 20

ММ НЕРЕЗ (Сірсо, номер за каталогом 15630) в аналітичному об'ємі 20 мкл.

Після б0О-хвилинного інкубування при кімнатній температурі одержане збільшення внутрішньоклітинного САМР (циклічний аденозинмонофосфат) кількісно визначали із застосуванням набору для дослідження СізВійо САМР Оупатіс 2 НТАЕ (62АМАРЕ)). Стисло, рівні САМР всередині клітини визначали шляхом додавання спочатку кон'югату САМР-д2 у лізисному буфері з подальшим додаванням антитіла проти САМР-ЕиЗ"-криптату, також у лізисному буфері. Одержаний розчин для конкурентного аналізу інкубували протягом щонайменше 60 хв при кімнатній температурі, після чого виконували детектування із застосуванням приладу РегкіпЕЇІтег Епмівіопе зі збудженням при 320 нм та випромінюванням при 665 нм та 620 нм. Одиниці вимірювання Епмізіоп (випромінювання при 665 нм/б20О0нм х 10000) обернено пропорційні кількості наявного САМР і перетворюються в НМ СсСАМР на лунку із застосуванням стандартної кривої САМР.

Кількість САМР, що утворювалася (нМ) у кожній лунці, перетворювали на відсоток максимальної відповіді, спостережуваної у разі будь-то людського а Р-1(7-36)МН»:, будь-то людського (суд або людського СІР(1-42)МНг. Відносне значення ЕСво отримували із застосуванням нелінійного регресійного аналізу з використанням відсоткової максимальної відповіді у залежності від концентрації доданого пептиду з підгонкою до чотирипараметричного логістичного рівняння.

Дані для відповідних прикладам аналогів та НО1ІР(І-42)УМН», паї Р-І(7-36)МН: і пс показані у наведеній нижче Таблиці 3.

Таблиця З

Функціональна активність САМР (ЕСово) для відповідних прикладам аналогів та молекул порівняння у присутності ЕВ5 та ВБА 11111101 сАМР Ес»; во, нМ(середняквадратичнапомилкасереднього, п). /-/:ЗІ 11111 1711111бсов/ | СІРА | сіРЛА З: 1 йбсд Юот2Б(бобоВобіатЯІгІ111111111111111Ї111111111111 обібамід.//// | -:Г 0/1 о0л33(00082460) | ::К«Ж ССС о пасРЧамід// | 77771711 17 0боБеО(000091,113) 11111111 сАМР ЕЕ; во, нМісередняквадратичнапомилкасереднього, п) -: 11111111 бсов// | 7 СІРВ | сІРлЛА З: оо Прикладуї7їд///177777777717711111111111Ї1111111111111Ї11111

ПРИМІТКА. Визначення ЕС»о людського (1 Р-1 (7-3 6)МНе на людському СІ Р-1В, людського Сса на людському СсоА та людського С1ІР(1-42)МНг на людському СІР-В: діапазони концентрації пептидів становили від 448 пМ до 99,5 нМ. Визначення ЕС5о сполук Прикладів на людському СІ Р-Н, людському СсдА та людському СІР-Е: діапазони концентрації пептидів становили від 51,5 ФМ до 11,4

МКМ.

Як видно з Таблиці 3, у присутності ЕВ5 та В5А, відповідні прикладам аналоги мали агоністичну активність, визначену САМР дослідженням на людських СІР-Н, СІ Р-1А та Ссог, яка є нижчою ніж у нативних лігандів.

Додаткову групу досліджень САМР проводили у клітинах НЕК29З3, які експресують людські рецептори СІ Р-1, СІР та глюкагону. З використанням методів гомогенної флуоресценції з часовим розділенням проводили дослідження для визначення властивої активності відповідних прикладам аналогів та молекул порівняння, які виконували в присутності казеїну (замість сироваткового альбуміну) як неспецифічного блокатора, який не взаємодіє з жирнокислотними компонентами досліджуваних молекул.

Внутрішньоклітинні рівні САМР визначали екстраполяцією із застосуванням стандартної кривої.

Криві залежності "доза-ефект" для сполук будували як відсоток стимуляції, нормалізований до мінімальних (тільки буфер) та максимальних (максимальна концентрація кожного контрольного ліганду) значень, та піддавали аналізу шляхом підгонки із застосуванням чотирипараметричної нелінійної регресії зі змінним нахилом (Сепедаїа бстеєепег 13). ЕС5о являє собою концентрацію сполуки, яка викликає напівмаксимальну симуляцію в кривій залежності "доза-ефект".

Дані показані у наведеній нижче Таблиці 4.

Таблиця 4

Функціональна активація ПИ Р-ІВ, пСІРА, пос в присутності 0,1 95 казеїну

11111111 сАМРЕСсо,.нМ(середняквадратичнапомилкасереднього,п). /-:-Зу( 111117 1111бсоні1111 71717171 біРН | сіРлЛв 1 пбсо | бомле(боозБвив3І ЇЇ о пбібамід,// | 77777771 1711 оиБА(ОЗИМІВ о обіРтламід. | 77777777 171 0063(0,022,197) 11111110 сАМРЕс о, нМуісередняквадратичнапомилкасереднього,п). -:У 11111111 бсавн1 17771111 бРА | 7 сіРЛАв

Як видно з Таблиці 4, відповідні прикладам аналоги стимулюють САМР від людських рецепторів

СІР, СІ Р-1 та глюкагону в присутності 0,1 95 казеїну.

ДОСЛІДЖЕННЯ ІМ МІМО

Дослідження фармакокінетики на пацюках-самцях лінії хХргадне Оаміем

Фармакокінетику відповідних прикладам аналогів оцінювали після одноразового підшкірного введення 100 нМ/кг пацюкам-самцям лінії 5Хргадие Оаулеу. Зразіси крові збирали протягом 120 год., а визначені концентрації в плазмі індивідів використовували для обчислення фармакокінетичних параметрів. Концентрації пептидів (КЗ ЕОТА) в плазмі визначали із застосуванням прийнятного методу І! С/М5 (рідинна хроматографія-мас-спектрометрія), який вимірює інтактну масу аналога.

Кожен пептид і аналог, як внутрішній стандарт, екстрагували зі 100 95 видоспецифічної плазми із застосуванням суміші метанолу з 0,1 95 мурашиної кислоти. Для детектування із застосуванням методу І С/М5 прилад високої роздільної здатності Тпепто О-Ехасіїме комбінували з колонкою Тпепто

Еазу 5ргау РерМар. Середні фармакокінетичні параметри наведені в Таблиці 5.

Таблиця 5

Середні фармакокінетичні параметри пептидів після одноразового підшкірного введення 100 нмоль/кг пацюкам-самцям лінії 5ргадце Самеу

Ти Ттах Стах/О (кг. АШСІМЕ 0 обБз (год... кг. 0 (ею|од| нюдуннолю | ниольлннолю С (плоди шо мів

Прикладу 1 пише зе 91025019

Прикладу З

Прикладу 4

Прикладу 10

Прикладу 11

Прикладу 12

Прикладу 13 рикладу 16 рикладу 18

Скорочення: Т;/2 - період напіввиведення, Т тах - час до досягнення максимальної концентрації,

Стах - максимальна концентрація в плазмі, АОСІМЕ ОО ор5-Асім, розділена на дозу, СІ /Е - кліренс/біодоступність. ПРИМІТКА: Дані наведені у вигляді середнього значення, де пеЗ/група.

Як видно з Таблиці 5, відповідні прикладам аналоги демонстрували розширений фармакокінетичний профіль.

Вплив іп мімо на секрецію інсуліну у пацюків-самців лінії УМівтаг

Тест на толерантність до глюкози при введенні глюкози внутрішньовенним шляхом (іматТт) у пацюків (самці лінії М/істаг) використовували для оцінювання інсулінотропної активності відповідних прикладам аналогів. Семаглутид (зетаадішіде) СІ Р-1 ВА використовували як позитивний контроль.

Пацюків з канюлями, хірургічним шляхом імплантованими в яремну вену та сонну артерію (Епмідо,

Іпаіапароїї5, штат Індіана, ; 280-320 г), поодинці розміщували в полікарбонатних клітках з кришею- фільтром. Пацюків утримували з 12-годинним циклом чергування світла і темряви при 21 "С; тварини отримували ТекКіайд СПіоба! Оієї 2014 (Епмідо, Іпаіапароїїз) та деіонізовану воду ай Прйшт. Пацюків рандомізували за масою тіла, і за 16 год. до введення глюкози підшкірним шляхом вводили відповідні прикладам аналоги у дозі 1,5 мл/кг з подальшим голодуванням. Початкові 211 нМ концентрації відповідних прикладам аналогів розводили у трис-буфері, рН 8,0, до 6,667 нмоль/мл, 2,0 нмоль/мл, 0,667 нмоль/мл, 0,2 нмоль/мл; випробовували дози носій, 1 нмоль/кг, З нмоль/кг і 10 нмоль/кг, а в деяких випадках 0,3 нмоль/кг і 30 нмоль/кг. Семаглутид застосовували як позитивний контроль, і його інсулінотропну дію визначали як під час його окремого випробування (носій та дози 1 нмоль/кг, З нмоль/кг, 10 нмоль/кг та 30 нмоль/кг), так і у зв'язку з кожною послідовністю випробувань відповідних прикладам аналогів (доза 10 нмоль/кг).

Зразок крові часу 0 збирали у пробірки з ЕОТА (етилендіамінтетраоцтова кислота), після чого вводили глюкозу (0,5 мг/кг, 5 мл/кг). Зразки крові відбирали для визначення рівнів глюкози та інсуліну через 2 хв, 4 хв, бхв, 10 хв, 20 хв та 30 хв після внутрішньовенного введення глюкози. Інсулін в плазмі визначали із застосуванням електрохем і люмінесцентного дослідження (Мезо 5саІе, Сайпегзрига, штат Меріленд). Площу під кривою (АС) для інсуліну досліджували і порівнювали з контрольним носієм з п--6 тварин на групу.

Статистичний аналіз проводили за допомогою УМР з однофакторним дисперсійним аналізом (АМОМА) з подальшим порівнянням за критерієм Даннета з контрольним носієм. Дані подані у наведеній нижче Таблиці 6.

Таблиця 6

Вплив носія, семаглутиду та відповідних прикладам аналогів на секрецію інсуліну під час проведення тесту на толерантність до глюкози при введенні глюкози внутрішньовенним шляхом у наркотизованих пацюків лінії УМієтаг введення глюкози (10 нмоль/кг) 11101111 Доза(нмолкд7////://///-:У СЯ 11101111 13 1 ло

ПРИМІТКА: Результати наведені у вигляді середнього значенняхсередня квадратична помилка середнього (5ЕМ) для 6 пацюків на групу. Статистичний тест -однофакторний дисперсійний аналіз (АМОМА) з подальшим порівнянням за критерієм Даннета. "р«0,05 порівняно з носієм; яр«0,05 у порівнянні з семаглутидом.

Як видно з Таблиці 6, відповідні прикладам аналоги показали дозозалежне збільшення секреції інсуліну.

Дослідження на мишах лінії С57ВІ /6 з ожирінням, спричиненим дієтою

Відповідні прикладам аналоги інкретину, охарактеризовані у цьому описі, запропоновані як засіб лікування не тільки діабету, але й метаболічного синдрому, який є сукупністю супутніх захворювань (дисліпідемія, ожиріння, стеатоз печінки тощо), пов'язаних з резистентністю до інсуліну та діабетом.

Для дослідження впливу відповідних прикладам аналогів на такі параметри як втрата маси, метаболізм, склад тіла та стеатоз печінки, їх дозовано вводили мишам лінії С57ВІ /6 з ожирінням, спричиненим дієтою (01ІФО). Ці тварини, хоча і не страждали на діабет, після того як вживали дієту з високим вмістом жиру протягом 18 тижнів, виявляли інсулінорезистентність, дисліпідемію та стеатоз печінки, всі характеристики метаболічного синдрому.

Зокрема, у наведених нижче дослідженнях використовували БІО мишей-самиць лінії С57ВІ /6 віком 24-25 тижнів, які вживали калорійну дієту. Мишей розміщували окремо в приміщенні з контрольованою температурою (24 "С) з 12-годинним циклом чергування світла і темряви (світло о 22:00) та вільним доступом до їжі (1095217) і води. Після принаймні 2-тижневої акліматизації до приміщення, мишей рандомізували за масою їх тіла так, щоб кожна досліджувана група тварин мала однакову масу тіла. Маса тіла варіювалася від 40 г до 51 г.

Всі групи включали 5-6 мишей. Носій, відповідні прикладам аналоги, розчинені у носії (40 мМ Трис-

НСЇІ, рН 8,0), і семаглутид, розчинений у носії, вводили шляхом підшкірної (5С) ін'єкції (10 мл/кг) ай

Прйшт живленим БІО мишам за 30-90 хв до початку циклу темряви кожні З дні протягом 15 днів.

Підшкірні ін'єкції робили в день 1, 4, 7, 10 та 13. Масу тіла та спожитої їжі визначали щодня протягом усього дослідження.

Абсолютні зміни маси тіла обчислювали шляхом віднімання маси тіла однієї і тієї самої тварини до першої ін'єкції носія, аналога або семаглутиду. У дні 0 та 15 загальну жирову компоненту маси тіла визначали із застосуванням ядерного магнітного резонансу (ЯМР) із застосуванням приладу Еспо

Меадіса! Зузіет (Ноизіоп, штат Техас). На 15 день тварин умертвляли перед циклом темряви, печінки видаляли і заморожували. Рівні тригліцеридів печінки, визначені з гомогенатів печінки, зібраних під час умертвіння, і рівні холестерину в плазмі крові вимірювали на біохімічному аналізаторі Ніїасні

Моашіаг Р.

Дані у вигляді середнього значення х середня квадратична помилка середнього (ЕМ) для 5-6 тварин на групу подані у наведених нижче Таблиці 7 та Таблиці 8. Статистичний аналіз проводили із застосуванням дисперсійного аналізу з повторними вимірами з подальшим порівнянням за критерієм

Даннета для декількох порівнянь. Значущі відмінності виявляли при ре0,05.

Таблиця 7. 11111111 Досліджуванадоза.:.777/7/:(/:Н);./:К4НО ССЗ 11111110 Звнмольжг/// | ЛоОнмольжг/// | ЗОнмольжг/З ду Ду порівнянні Ду порівнянні порівнянні| 95 зміна у пор Фо зміна у пор Фо зміна . з носієм (г) з носієм (г) з носієм (г) семелькан! || юзнол| ни: семедняні 1700 мен) звклло тезвиев лан земельні! | | еюню| зюяю! семеро 1700 млини 0010 стеуельквн завод таятия аз тет тзжет

Сполука Прикладу -7,2250,38|-16,58:0,88| -11,8251,72 / -26,8324,04 | -16,48:-1,98 |-37,35:53,91

Сполука Грикладу -8,4020,77|-19,3321,66| -10,3450,69 0 -23,3751,40 | -17,442137 |-46,6053,78

Сполука (урикладу -А,9220,86|-10,14ж1,87 -11,02ж0,77 | -23,8051,25 | -21,12:52,09 шщ

Сполука Грикладу -6,1250,80|-13,38:1,80| -14,7651,06 0 -32,3252,49 | -20,04-2,40 |-45,2654,79

Сполука рикладу -7,ААжО,74|-16,78:1,88| -12,2451,66 0 -28,0854,23 | -16,70-1,67 |-37,4253,58

Сполука г урикладу п -43,16:0,82 | -28,48:2,05 | -19,54ж2,37 |-43,024,59

Сполука прикладу -А,1850,50| -8,98:-1,26 | -10,7651,57 -24,4253,74 | -23,000,59 |-52,141,74 бета | -/ 1-262:049| 2 щ-(/ | 031-125 | 2 щ-х 1549:2,44

ПРИМІТКА: "А у порівнянні з носієм" означає різницю між масою тіла на 15 день між досліджуваними групами та групами, які одержували носій. "95 зміна" означає до виражене у відсотках зниження маси тіла між 1 днем та 15 днем у досліджуваних групах. "Зета" означає семаглутид. Виражене у відсотках зниження маси тіла тварин, які одержували носій, реєстрували, і у кожному дослідженні воно становило менше ніж приблизно 1 95. Дані "А у порівнянні з носієм" та "95 зміна" статистично достовірно відрізнялися (р«0,05) від контролю для сполук всіх Прикладів у всіх перевірених дозах.

Як видно з наведеної вище Таблиці 7, відповідні прикладам аналоги показали дозозалежне зниження маси тіла.

Дані щодо метаболічних параметрів при дозі З нмоль/кг наведено нижче в Таблиці 8.

Таблиця 8

Вплив лікування відповідними прикладам аналогами у дозі З нмоль/кг на рівні глюкози в крові, інсуліну, холестерину, аланінамінотрансферази (АЇ Т) та тригліцеридів печінки після п'ятнадцяти днів лікування

Метаболічні параметри (Середнє «х середня квадратична помилка середнього) . Тригліцериди

Лікування Глюкоза Інсулін В Холестерин АЇ Т (МоОд/л) | печінки (мг/г (мг/дл) плазмі (пг/мл) (мг/дл) тканини) 149,753,09 | 85491265 234,653,42 141,8:11,5 290,4413,3 137,87,34 | 41961014 218,059,23 99,8:14,84 226,423,8

Сполука Прикладу 1|107,454,387| 34395936,4" 191,257,55"7 118,0520,73 150,6537,0"

Сполука Прикладу 7|109,3ж5,787| 26569497 169,2511,797 51,057,78" 97,918,27

Сполука прикладу 109,654,817| 571,4-158,47 0 181,0-46,207 | 77,259,357 | 126,8217,0"

Сполука Прикладу 114,753,0517Ї 15692318,37 0 178,257,957 5624517 | 93,8521,8"

Сполука Грикладу 114,9052,127| 16915231,37 ) 169,058,157 | 58,656,037 | 98213,"

Сполука (урикладу 119,724,197| 29035737,4и | 1922-1144 | 5446,827 | 94,5422,0"

Сполука Грикладу 111,51,777| 19715499,87 | 164,8ж5,857 | 31,4ж2,79" 63,157,3"

Сполука Ггрикладу 110,м1ж3,617| 3227-10707 ) 173,859,327 | 20654435 | 40213,

Сполука г урикладу 102,9-5,377| 1958-460,57 190,0513,717 66,0510,217 | 109,5222,97

ПРИМІТКА: "р«0,05 у порівнянні з групою, яка одержувала носій; однофакторний дисперсійний аналіз, критерій Даннета.

На додаток до значної втрати ваги, як показано в Таблиці 8, відповідні прикладам аналоги знижували рівень глюкози в крові, інсуліну в плазмі (як ознака підвищення чутливості до інсуліну) та холестерину в плазмі, а також покращували стан здоров'я печінки, що демонструється зниженням рівнів у плазмі аланінамінотрансферази (А! Т) та тригліцеридів печінки.

ЗЕО ІО МО: 1 - Людський глюкагон

НБОСТЕТ5ОУБКМІ ОБАВАООЕМОУ ММТ

ЗЕО ІЮ МО: 2 - Людський 1 Р-1 (7-36) амід

НАЕЄСТЕТ5ОМ55МІ ЕСОАДАКЕРІАУЛ УКОВ-МН»

ЗЕО ІО МО: З - Людський ОХМ

НБОСТЕТ5ОУБКМІ ОБАВАОВЕМОМ/ ММТКАМАММІА 5ЗЕО ІО МО: 4 - Людський СПІР

УХАЕСТРІБОУБІАМОКІНООВЕММУИ ГІ АОКакККкМОУКкНМІ ТО

ЗЕО ІО МО: 5 - Аналог інкретину

УХг2ОСТЕТОМУБІХзі ОКХ 17АХ 1 хгоАРІЕМІ І Хов х 2303 РЗЗХзаАРРРБ де:

Хо2-АЇЙб,

Хіз-І або оМеї,

Хі? - будь-яка амінокислота з функціональною групою, придатною д кон'югації, й при цьому згадана функціональна група кон'югована з Сів-Сго жирне кислотою;

Хіо-Фдабо А,

Хго-АЇВ, «Мек, О або Н,

Хгв- Еабо А,

Хго-2 або АБ, та

Хза-О або Аір

ЗЕО ІЮ МО: 6 - Аналог інкретину

У-АЇБ-ОСТЕТ5ОУБІ-сМеї - ОКК ((2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил) -«уСІш)-СО-(СНг) в-

СО2Н)АОНАРІЕМІІ А-Аір-СРУОБОАРРРБІ-МНг

ЗЕО ІО МО: 7 - Аналог інкретину

У-Аір-ОСТЕТ5ОМУБІ-оМеї -ГОКК ((2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил)»г. -"уУСІШ)-СО-(СНг)18-СО2гН)АО- оМек-АРІЕМ ГГ А-Аір-СРОБСОАРРРБ-МН»

ЗЕО ІО МО: 8 - Аналог інкретину

У-Аір-ОСТЕТ5ОМУБІ-оМеї - ОКК((2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил)2- / (уСІШ)-СО-(СНг)18-СО2Н)АО- оМек-АРІЕМ ГЕСОаРББОАРРРБ-МНг

ЗЕО ІО МО: 9 - Аналог інкретину

У-Аір-ОСТЕТБОМБІ ОКК((2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил) -(УСІШ)-СО /-«(СНг)ів-СО»2Н)АО-АЇр-

АРІЕМІІ А-АІ6-СРБОБОАРРРБ-МНг

ЗЕО ІЮ МО: 10 - Аналог інкретину

У-Аір-ФОСТЕТ5ОМУБІ-оМе1 -СОКК ((2-(2-(2- аміноетокси)етокси|ацетил)г -(уСІШ)-СО -«(СНг)ів-СО2Н)

ААОАРІЕМІ І Е-Аір-СРОБОАРРРБ-МН»г

ЗЕО ІО МО: 11 - Аналог інкретину

У-Аір-ОСТЕТ5ОУБІ-оМе1- ОККО (2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил)» -«"уУСІШ)-СО--(СНг)1в-СО2Н)

ААОАРІЕМ ГЕСОРБЗБОАРРРОІ-МН»г

ЗЕО ІО МО: 12 - Аналог інкретину

У-АІБ-ОСТЕТ5ОУ5І-оМе1- ОККО (2-(2-(2-аміноетокси)етокси|Їацетил)г -"уУСІШ)-СО--(СНг)в-СО2Н)

АОНАРІЕМІ ГЕСОРБЗБЗОАРРРБ-МН»г

ЗЕО ІО МО: 13 - Аналог інкретину

У-АІБ-ОСТЕТБОХБШ ОККО (2-(2-(2-аміноетокси)етокси|їацетил)» -(уСІШ)-СО -(СНг)і8--СО2Н) АО- оМек-АРІЕМ ГЕСОаРББОАРРРБ-МНг

ЗЕО ІО МО: 14 - Аналог інкретину

У-Аір-ОСТЕТ5ОМБІ-оМеї -ГОКК(УСІш)2-СО -(СНег)ія--СО»2Н) АОНАРІЕМ Е)ЕСаРЗБОАРРРБ-МН»

ЗЕО ІО МО: 15 - Аналог інкретину

У-АІБ-ОСТЕТ5ОУ5І-оМе1- ОКК о О/0(2-(2-(2-аміноетокси)етоксиЇацетил /--«"уСІШ)-СО--(СНг)в-СО2Н)

АОНАРІЕМІ ГЕСОРБЗБЗОАРРРБ-МН»г

ЗЕО ІЮ МО: 16 - Аналог інкретину

АО-АЇБ-АРІЕМІ ГЕО РБЗБОАРРРБ-МН»г

ЗЕО ІО МО: 17 - Аналог інкретину

У-АІБ-ОСТЕТ5ОУ5І-хМеї -ГОКК ((2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил). -"уУСІш)-СО--(СНг)ів-СО2Н) АО-

АІБ-АРЕМІ ЕСОаРББОАРРРБ-МНг

ЗЕО ІО МО: 18 - Аналог інкретину

У-Аір-ОСТЕТ5ОМУБІ-оМеї -ГОКК ((2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил) -(УСІш)-СО--(СНг)1в-СО2Н) АО-

АІБ-АРІЕМ Е-АЇБ-СРЗОБЗСОАРРРБ-МН»г

ЗЕО ІЮ МО: 19 - Аналог інкретину

АІБ-АРІЕМГ Е-АіЇр-СРББ-АЇВ-АРРРБІ-МН»г

ЗЕО ІЮ МО: 20 - Аналог інкретину

У-Аір-ОСТЕТБОМБІ ОКК ((2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил)»2 -(уУСІшШ)-СО -(СНг)18-СО2Н) АО-АЇр-

АРІЕМІ А-АЇБ-СРОБСОАРРРБІ-МН»

ЗЕО ІЮ МО: 21 - Аналог інкретину

У-АІБ-ОСТЕТБОМБШОКК ((2-(2-(2-аміноетокси)етоксиЇацетил)2. -(уСІШ)-СО -(СНг)ів-СО2Н) АО-АЇр-

АРІЕМП ЕСОаРББОАРРРБ-МН»г

ЗЕО ІЮ МО: 22 - Аналог інкретину

У-АІБ-ОСТЕТБОХБШОКК ((2-(2-(2-аміноетокси)етоксиЇацетил)2. -(уСІШ)-СО -(СНг)1в-СО2Н) АО-АЇр-

АРІЕМЦ Е-АЇ-СРОБСОАРРРБІ-МН»

ЗЕО ІЮ МО: 23 - Аналог інкретину

У-АІБ-ОСТЕТБОХБШІОКК (2-(2-(2-аміноетокси)етокси|ацетил). -"уСІШ)-СО -(СНг)ів-СО2Н). АО-АЇБ-

АРІЕМП ЕСОаРББОАРРРБ-МН»г

ЗЕО ІЮ МО: 24 - Аналог інкретину

У-АІБ-ОСТЕТБОХБШОКК ((2-(2-(2-аміноетокси)етоксиЇацетил). -(уСІШ»-СО -(СНг)1в-СО2Н) АО-АЇр-

АРІЕМЦ Е-АЇ-СРОБСОАРРРБІ-МН»

ЗЕО ІЮ МО: 25 - Аналог інкретину

У-Аір-ОСТЕТБОМБІОКК ((2-(2-(2- аміноетокси)етокси|ацетил) -(уУСІмш)-СО -(СНг)18--СО2Н) АО-АЇр-

АРІЕМЦ Е-АЇ-СРОБСОАРРРБІ-МН»

ЗЕО ІО МО: 26 - Штучна послідовність

СРББОАРРРБ5

ЗЕО І МО: 27 - Штучна послідовність

СРББ-АЇБ-АРРРБ

ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВОСТЕЙ

УМА ОЖА хім м Ми ама их уч подали стати ті е пу м рун «іщмю АНОЛОГИ БЖ ЖИНХ ЖА КК ЗАСТОСУВАННЯ є ул аль

ДК ВІ ІщшЄ «Ед, умо ЗТ Ким

МАЙЯ ШОЕ Ж, А ех ОКУ ТАТ до пк МІ Ку,

АЛ «1

Ух у, в -. же. зке ЗХ иег ЛЕ К. іа баКеціїє Ууєкаїу ех «ЕМО Х

МЕ За дю юя кА ик те «жи ВК

КЕ Пре штрих

У 0 МНИХ Же «Ем хЕ шок з ром чо 3: дм ТУ Ме Каси ут пт Цю Тов ск ам що, хи.

Кіш Беж пів БЕЖ Тих Ббнвб бу Жеж зара обеК Ве цей ЖЕК їм Аже хе х г хх т а ТП А по не п В сх жи й Ме и. ЗАЛ У ую Моя Вих хи Женя Зх

ВИ хх я ОгУк з ЇЖИЩ ІН хща ЗА сш ща М КА КЕ ж Ук дО ря

У щ-

ЕМ Де схух ух сш КЕ су її ;

С Му слу шу «Хо МОм пері

КУМ И Ох

ТЗ г. тя 1 кл СА хо ау сирки си С се и пи лк» Жожаи бек Ж лук. ЖЖ лі

Віз вій бів біу ЖК Бе Те бах дер Майї Мет ек жЖех см: полю їх у

З її зо ХК

Х ХЕ А пря піч ук уз то Іл хх ЖифюАш бах З о ше буті 2 То фол буру

У я хз Ух п х пожежа ї т ; г ту ги дужку

АД ХАДЖ ХЖ ІзМ АВ КЕ СК МІ ЖЮ МУ хи ую щи Же тут р жду ч иа ВІ хаїмх З них бу

КА ях туш до 0 БЕКХ ши Ж ониувих ші ких ТУМНИ ЖНКІ ВЧ шу ту

КИМ З

14 осн ж УК Я у т Ко Мк «сли пт ж в дж ве Явка ки Жду фо су

Ппішо ощуюю. іх х 4 Зі ую Має ой сб Му Тивше СберУє Тов сухо Шх ваш сах Ап ЩА БО Тож их мих бБЖю ше БеЕ мух Кжх фам АБ ОК ї т у 75 шкі дез Мі і су пек Жак бі бек їм МЕ о бах Бу бо бачу ди

ТЕО га УЮ ТАБЮ КІМ жа АЛЬ ДЮ БО меж яТ ХУ МУШОК МКХ

БК: КУ жу хм ах М

Ж киш БЖНЬ СУ ів Аза їх ери й

СА З. ша» а сук ж зи и ЕВ ше вн: Зара Е 2 дних 3 «АЕН 3 бо йо 4 ххх М М жа мк й баз ох Ух М ех тт

МУК фЮМ шАЛЬ їМиуУ СЖМХ ЖЖМВ УА ЖмАК СК МО жМВК о хо МА ех їжа МУК - ту їй 8

Х о; МУ АЙ от ІК и сю Кок туж УМ ЛА ам му Ж шу жд Ку их жу би В хо Жоюолгх

Клео Ніж де поль де ЇЖІ Ха УМ ХФЗ МА КК Атв ля був Ббіш Був

ПІ МЕ КН

Ток жовт п буку їж МІ йо Ж ох лою пл

ХІЖЛЕ МАТ ФМ ОККО сУжі БОМ О БЖНУ АФК с х дог ях як осв « хЖДЛЕКТ От

ХК А МИХ ЗЕ кю я ве ВЕ

Ух ОЛЮту, Мо» ежІжом Утім и жука 0 МЕЧА МСЕ ОВМиСВВ хИЖх лют Узгжоржмт вже Зиму. х ему мі, дом у Ж о Кх хи МЕС ЕУТУМІНО Тем ЖЕНЕВА ВНМУ КМУ ством, «ЕХ

Салют вжи ЩІВ М УІЛИМЮ хешкнвик. ОО ЕЖАОИУМИ ШИБЕЮМІТЬ п кю жі хуя ТК кю

Ме НИ го ЖжІКУЬСУКМУМоХиЯ ТЕ зуседіии сив МІВ вач що ме жінками Ж жертв а ВІ

ЗА ТІ ЛУ ММА хе МНК ОТУМИ ЛЬ «Тих

ЖИ шкі у 0 др фу

ВХ МЕ ІМО ЖКІАМХЕ пекти в прих «Х ГЕ. сш зму с тезами 0 жеецрвих сити ТокУхі сЖЕУгу ож іч МК то

Ук ов о ек З вими ми сю Я ЗУ ле У Х кОм пе ут и мет их пу кою сами МЕ КЕКВ кути, ж жах вия гри ЮА

КОС зам хо учить ТВ Фулуєуию ек мі Міхемух от хг пек хм юихх ту

Ку У ММ елжННМа 5 ВИНИ УМХ СуУтамУ пмамимКиІвиву от дусі схо, ігіМі ЗКУ, мури. ми мури осі жо Віко шУМЕ са Кшжмев. МшоОстЕеМ шле ком оКушниамнкя. ВиВНщНе фі мниіе о м таїна фуд ем ам м ЕД же МУ шенЕКісвальна сума зонч'юсеУшаня з пе хи жирок кис дентомо

СИ УтухУ леж ки

ФУ ЖЕ ФММ мМ ХЖАОЮУМ. ХЕ ААМАТ мл ках ст

УФХ гам Мі кет дух то тиху Ж сдзкулуєі слині Мих сви Ж «ІШНЦХ як Ж тн Ох БЖ КиМУ ю їжа ТКУ Вл сутки

ХЕ кю мив уох суда є имя МЕ КАТ ОВЕ имя ск киці

Кая ТЕ їй

ХІЖЕ ВИМ ТЕХ я Му і

КУКА ту Зх шо тку їюмУжиутті ЛИ ше ди («ам ДІ пе жк Кк Кун цх ТЕ ух пк с у ХОЛ УКИИКХ шу. ЯВЛЯЖ СКМ мам. НИМИ ЖК мим САМ віна Уа кЕУ» нет зажди ре ковим

ЖЕЙЛІ ЖЕО КАЖСВЕ тику, ке тд

МАТКИ ЗИ я КІ секти, жом тиски вати ЛЕДІ, посі коки Ж дими ДО

ЗИМ жмма у мс аЕнамІ я Вел КМ Аю МАМО КУМ ОЕ «ТК ТК

ЕН пси мі м 00Уфри их джу

З шю А ЗВУМО шКехиоЕту скухуту шт ув сш ШІ... ех Зр е тичисммцМмі Ж пух ее Ж спи КМ дих жав Ж пюшеженщмІХ ст неви сом у І» БАХ кт ір бодЕ МИ

ТМ ти 0 фрі КУМ жи мамо ТЕГУ БАХ «суті ху ск че «ВИ» і 4343

Є ЕтУ х Тк зими ТЕ ФММ. ес Ж жк си ХУ «НДУ Ха У смнукенни 55 ввлиш сим іт ат АЮ

СК Е

ХМ хх конк КОТА ск т да Мк а: ах я же ЗТ Фа 3 ж Лов Кз УЖх оз

ГУК Хахз йо сі ня Вії: тТВвЖх чех ЕКО ук ж Кіш Ха сим боже Був

У У я Х х 4

У Е хх ча х м А о чав іш ша Жах ВА Ж т х лах Ві фл лу що Мащо ла фушиу Ххх кава чів ав хай біз Ве Хіш сасп КУ Бай би хви Ха о сму БЕХ БЕХ си У т жи МК. хх я Мох ЖІ Ми ме рути ЖИ сах Аза МІВ ЖІ ВЕЖУ; ЖтщшО сМЗЕ

Зх

УК х

КА ДИ рія ж суд «ЕМ ЗВ ср ета микуМХ, чис ККУ «ХУ циВутНа ПІНУ КВН Те кам кита Кума Ум г КІ. 2» зви дих п: з. зи ра шт ки щит КНхНнХ певен жЖеншайнаУ БОБОУХБУКИАх

СЕУ

ЖАХ МИЛ

УЛ ух Ем ЗИ УХ пе Ам ТАКУ МЕ

ЯК Еу їі

ЕХ ТК зі кт г тот с : : ех шодо 2 птоз 7 джу схвалив ут кю Ха ТОЖ ВИТ МОМ хо ТАНЕ поемою я Че ММК щИМУ ця

ЖИСУНУХУ

«Ех пу сих ЕК еру «лани МЕШУ СЕС ту, а еру жк ТЕО.

Ул тру хо урихизкууиі СК же соти тк рухи в

І Хаш У шлю Н 4 шал солбюоух ВМІННІ ем г, а ба су Ярош сумою ВІКА НИМ ЕХ «ОВТ ххх сити Кит ше МЕЖ БЕБІ КЕ ятки, ут

ЗШ г, В 3

ФМ що Туя о фею 1 шрот швом 0 1 З мед ВИ В шт у У ШРОЖІЖНМНЯ я ОО МОЩІ КА КОВО клік ж щуки

ІЛИК кутову й мое сх Аді К «жуки дивні с вавма нік ец іс Ве Но

«Ех ку яуї кдстодлих див тки чих Ми КУКИ

Ех я їі чик іх.

КЛ хм г меж мі дев чих поліе кі модусу кіМии реф пуп ка Жака У паножежнІ їх дедяє сою А вес вВМмІнсМаслянУ КЕЛНОМЕ тати тах туї зт: ЖЕН «ЕВ МОМ Мих хелуту г гук «ЕЕ ЗМІ 8 ЗУ м 0 буде хр труди 5 с фбдуругиц вами пі пек жишиийи МЕЖ У пПОоЖжОЖжеенІ ах ж щакузвеанЕ зма лосВаНих а тази фо І ліку ск па бро Мор оч сам Мр Ж у М бла Щот Бо

ЖЖ АЗА МАМ ОСЧАД СКМ ТІВ КТ де ве пет шк Кат «еВа п вд МУЗ

Е х МУ КУ ти дім зв о МмМіхй йіїн шлю Мр у М Че) Тед йіїх Жде іх Ку й

Ов Віз бів Ма Аз Бор їв бно ек бо ії йЗЗ Хав пау КжЄ пек їй Ії зп дае гіч За фік КМ: дуках бик ет ші Аза ус КкКО БЕФб ех пе сте 23

КОМИ - ис Ж я, зх

Мекки ве шт те такти СКУ

ЛО ух Тіггоєюсти м смт тв і пли В мух

ЖУК я штжанш пошле ую да

ЗУ ема ринками ПУ МУДІ и З пуху димом уки ки сим нев гену І ЖеНИ МОХУ МУК пр

ХУКК КА хі Му фЕАЧТИВЕ

Тяжко КВАС М. ОМ ОАМИТОМ ІТК. ке гли в «ЕК Елі. Оіхі кт Тит ла мити 7 щреелрі узимку ЕЕ КК ик КВ перу мих «хе хай У подеженкня Зх наелйлс ссосю зльа-с зміни ниеЕ кислу хх

КИ х ких вх лих дис «шхіМ ЖАВ КЕАТУВЕ клютуту КК жу хОяеКА си, «ВШ Ха м гу нві 33 пед сою лива ема трек ДЖ У ХЕМИТМаИУМО ОХ ОМ ЗМУ ММК ПЕН САТ КІТ МАК ко

КК

ХА ще дили мА ВКМ КЕ

ЛЕК ж кА

Ха ТЕР.

Уа Ху мо бутик шо дики сего дочки зауи кН му ЛОМЖОЖеМКІ 5 Ж МЛМ мопс шли мес лкУмнуї у моменту Рі лащозхю. Мами їмо мо бі тя я са шим ФисиЯри аКтсуюек бат ЗаниМшеЗ МБ оп о фаміки іх змінцетовсві еескеві цехи кам мі о КНЕУ КВ

В 1 ; : ї 4 м і се ЕМ

У ок лхии ДИКО ТеТг

Еш МІ ЖЕАТОКЕ пекти скл х тат

УХА ис їх

ХВ Ком тої хурма З хащах сетжмеку лому Ве мою а Кох кате жав ж меня ЙО дина сою пк миня Ук

УТІХ км ших уже ЕМВ «шт МІБЇС КБАТОВК

ЕН Іл Ел

Зк МІ ях БСК

ШЕ де жести АХ жари схем зх Ше не пф пф ФФК МЕ ККУ хх хат М ІМ Жженнл лев оаявлиш «см; адьІйсзамІнпсмаснину Мис УКУ пул

КЕ штучка му пи дише МК БК

ДОчни ха руду

Мк ТОЖ. МІ ша м ше о жі житт СІЮ ше сфлерюу м мів сви З Уго жх пд ЕНЕДУМ сх МОЛІННЯ. А ШО у МІН ЗХ ДЖ

Іру БУ «Ла у зго Мою Ли «ше екю ХУфему ге «их Лету тек же Ж сх дж каже хх їУК Ха й сві ТИЖ бе ТБ реж дво Ту ТК хі Хе ля ЕВ оЗук я ї пт за я ак Клоя жом. їх їх Ул ж им 18 Ина СТ щу Мт ва мо Ж сет АЛЕ сх са ЕЛ зи Ж ие їжа дів шій Хав одіж Же їле Жов Тух фей Сх) Аа Хам щшАіУ Еко яко їй п Пп

Феемо тра Зо их Віру» зи Мк ек пу ів о бтх Бк Бу ОК -х ж чик с чх ж АЖ ОО ку ТУ со м Кв кет прес сим міні МОМ

Же девумдна послідовними

УтУтхЕу

М кт ІМ ММ Її ФІ и КНУ ЄМ и ук мая ММК УЮУЧЯт ОЕМ З БЕЖ НВ КУТУ МІУ Я холу ас ли джипи ітьк чими МЕЖ ВКАТОКЕ мл їз тлу

БК ТК які нт мк з утво сецдуиоу сикинує З. двір вм Не тм по хЗа у тжшсужевні с вничЕш смНМиЗ сумом спамУ жо ХуУ ж ах слЕту я зд омих парт чл МБО БКАТИщХЕ сини ТАМ. жужтий Ах ІК у ТОМУ. 22 ЗМАНОЕ (ШОК ШТ Бе Ми ККУ А ких бюд кАЛЯИЙ си п: вив «и КН Ех сим їх їх сту

КІ 1х:1. мА ту Іршо Зк о улажтютмиї 17 що шаімімие мопертвуї века Ж ж М мий у молКеннА щї шо Ам ЧОо МОДУ ЕНиМКММ БІЖИ пучіі думі укуси чату «хірур Вт дао учи: ср ко о ФА дя

Комо х вишиті аміно среминя сем то дане МУЗ ОО (дя хе я

ЗК кгрр Ми нин В ТММ ЮК а й ов нти СЕЗ Я ДК зМанонтТоОжимі жом іІЗЦцЕтЕмре Кама мМ МК Ам «ДВІ мер муси іме хе «жи МИХ КМКАЖОКХ сиру ехчх Ех

ЕЕ З.М; ., МІ сил Жвш у потКЖЕнННІ СО ямвнажЖ сОБМОКУ довше мех Уя шию тя ст яд СБеВИ т хижі ВМ КЕх ел Е і іл туп жи во ЯУ тей ОДЕЖУ МАЕ Ж ж ща УТ УМ. ММС шКниМ дини

ХО МІ й

Зее о Жац св сіли Мем фі Міею сю бше чю Жаю о бі о Жашйщ Там: дм тм

ТЕ аз ов їУМУу їпХ жа ОжМЗх бах Баш ОЩУХ Зак да Ба БеМм ОБ ля ї й ча ох х М в Ах тлж їх осн Жщю хім Бі. Ті дл Жеу Здм Тахр бі) сі і о Мем щу

МЕ ліз ів Хай пів Бе фі оЗа От УК ме НЕ мо шву їх их ЕХ я о та

М вну я

Серж ліз В х пану жу Тех Шу

МЕЖ сищ Ж АБ и ЖК кт ЛФНЮ

ЗК луги гу

АК З

«ЖІ 5 «ЕІ РЕЖ «Шахи ресів сх оо ШУ УТА БАХ ТАКЕ МЕ АКТИ «БУ тут шк 00 сум духкио сен і ов Мети

Фоми сомитЕТеМА МЕМ ЗА МЖЖНетТМа ХВО рМхНя «ЕЙ я мтІли вИиАжОпвЕ

Еш МІП КБАЖОВЕ я тю м уж ХЕ гі шт Жид кю муці С дама сумую СМастудяі лвохї пуозкдіємдидхю Км их вда у ТМ НУменНМХ с ВНИМ МО сСеДКОа хм ИиАНУ КЕ тУЄх «МШИ отюту пед уиших «хЖів ЗЩН: БЖ ки року ву

ЕК Ку їх Ї хх М Ті

Кия Зх хх смуг юУЮИТІ Я ої мі кук чад путі стр ж ву у полеженнІ М: Є иУМІчнО МодждукананиМм аихучя стелі я ведемо сучки б дк давно Зі с фі ким жрацьх шилом ЗсонедмуноКеутя бучжнли: пазвиюта У ож о зептіКтік

ФІ друк еру Же ВО Ко й ть ху ер В чавІнсотИКИміІ ев, клмі цеху сама на А МИ АВ три ви ет муж ма нсИе ту ши еМоО МЕМУю ТІ Кк ект, п гер тушу М в» їх

Сх здо гоожтих тво умо Ки хх тлу плат, тег з дусвмиг т іт хх 7 жом їЗа дО ТМАІМУЄЕМИОХ ж МИ пом зле еМІ Не У жити ту си окт ме скажи К «ШиМи ОМ КЕАЖОВЕ «Ех 23 іл

Мих її Зі «1 суми Збаркхю хл бпгаеаищої С среди АМКУ щупа УВІ ЛИКУ УХ ЛИ

ЖЖ Шеи ЖЕЕМТЬ дО МЕАИКРОЕЖУІа. МЕМ КОКО ук МИ МТУ МНЕ ОХ УТ ХХ шу

ТУТ кухіяю мдь вВЕш тями ж ВЕ

МУКИ В т, 17 їх

БАНЯ тим. ект Убух ую со ему лкухужи я В Км а зло дежжм ЖЕ феомк м ма, «ши» ек У соби женні ЗХ ж бЗамулисативио зміщеним кННх 5 пд УУ Те тує сту Жим с ре зує біжу ХМ тот Фодукх Лу хожтх хшЖЖЕ жа оп оса Ми ІН дж ще Жах ЖЖ ДЖ БА дЕИХ ДЕЩО АЮ БУ т к т х

М -х Ох я їлку Кім іч вх Ві Тнх Чха М Кк само Жах тим М мо ом її о б ж бою мУШ ЬаЕЕ бАТ АФ пом жЦшж ха ЗАМ ОКУК вМежщ хи се АНУ ЕХКУ ЖЖ ЖЕ

І ж КЗ и ХЕ В ух при Жора ів їУуи них пед сек У а ЖЕО ЕКО гемо -5:25 «хх ха М пек, З хе Ах не: сту тут, суку «иа БВ

Сх ійхечжсрві й їїєзилт і сісуі їх ко мМиешусчмМа ихоЗАХвАхуХ нат уЕх дм чешки син шежичиз семносзінеенеарна копи

НИ хи, ее

Уа яти ВМД УТ сш МУ ХАНА жи Би. яю Ел зкж «Ух Ми оутиукаМі СХ зУєрхоММ о им хх ох сл м кажи уже фу ат жа М ПОТІМ ММ МТМ СИХ пф зміна вУ МУКУ «А ТУ

Зою и

УК фТОМИМ ДМ УМ «жа МІЖИІ ЕД Е

ШО, КО віх я Е.І ий Мих з сірими З жниуцішх оч вщент ета

ОМ И км ж ІОлЛОжЖЕнВІ ж На Сом влвишЕ Семи ке х

ТВ

ОКА МУ

КК, дит: І щеОЗ чек ОК КВ пт чи точ дити гасі лих ях к их пк КІ КІ ях ях ях ких вах: зи мих сем о Іру хижа» ух у МомпсоженнУ Хо? з хАмічно модифівованяМм рію зжозу Кеті Я ХО вкрита хну; с мкм КАХ вжевоч ую меж мі их м В.

ЖЕ ЖУХНЗАЦЛ М ОБМИТИ Я ВАТИ АІшНОКО пава зу М о їютікт и

КД ее меми им У б під Тр ню ВИ ру мус тскхнір емо Ко ЗІчишМліІйв мама мріє пи ше

СЮ Тьмх ут И

У я дж ших ВИК ями МУ щИ КБАЖИКЕ хх, о щ Ух

Хо и ХА ж УК

СМ же М ОПО ВеМНІ М ЖІ ЗМО Фея ВКМ У ЖМОЛХУ

ХМ

Юм -еух ЩОЦІ кед БИ МК

Уют яд гм

Оки А 1

СЯ ух лідкоуУє Му чем УК зх сх ххулуУтУЮ ОМ ую ВУХО срок ММ, винен» жчх У ХеМрУЖИМНнНО ох 5 Ку люЕтатано млн ВУНИ яп їх «ам о тот Хм МШіМм щі Єву ба бук Як щу бу Ше їх Же їм Да луг

УЖ с о джАМ са длХ кКишж МИХ сЗЖх ДЕКО ХУХ шиш Ам мих ме ВЖЕ пух ї 5 18 їх паю ЩО шо ОТ м кт СА ні УМ Я Штурм Комо Жошумю КТ я юю ж же ди тили -ьтш бів вам УМ ВІВ Не ха з ЮшЕ Ба ша пише маш БЖ ж а ца щхї

М хи УМ

Ха іо щі що аг Ку: Же щу

ЛЕК АСУ ФКБшВ жо БЖ КО КЕ

У

С Кх 1

Мина ке тах п шк ЖЕ птудтух и бе ЖК. реж шв ки НН КА

А щИучно тн АЛЮМИМА СИ

ТВ

Бан єтухі ух з, с. сс. ка пу ї сект у Же, щ- пики я ек я Фе

ЄП 0 Коха ЗМІЇ Мур ХУ поли у УМ т тки сих хш жави маенвслеоюааноена кока хювУЖМА пог се мли Дати ТУЮ

ЗА А Мід. ША МА «За (тр, ук ок х тки їх да У ТОНУ ХЕНММ Ж УПМ ОМ: ІДС КЕКВ у КУПКИ ВХ «ВШ шля м ше дмшАННМЕ чиів МІС ЖКАКЧЕК штрих ко тах

ОЕМ СЛ яю І ех со їх мм ОШО пууі счеуид о оу е В ха ще У МИС жеНММ Зло МІЖ пою люди ема «ах

З ой ки июня ат Ух «ші» КО Ех зт нау с «ВІ хг... оку з роз хг : жк

ФО ж тля зх пути 17 м ЖЕ туюя жедТеМУ; щем сСхщи МУа У ПОМ ВКМ 3 ж Хімічно мадишІкаВаниМ шнехсм я : ; їх . х не че ше кукі уза зу их З сгуесіхім см ума Їли с» бе Їй

ММ шах ум пОвенМмХуиМ М фак ЛЕМ ж ж іш гра й прилип куди типи З айс цєстикю о Ї сютокхліж і Ті б У лу ки у зміщімикокосні стилі лиш тинаі ше рама ім и КАЛОМ

М чх

ЖЖ Х я я Ми МудмХ

ТОК ІОВА ие сх. МІ ки Мк ож попка ті жити, в г Дяк ку куки т чик тю. сі г тих ще жЖ у сОопоженвІ й Ю фаАмуть ою МІД я Вітя 3

АЮ Я МА

Поза Жив мі ті МЖщУу: Мі) бум Шик Ма чую Шу їз; Жат тла) й т ми уж за шам щАю ТпХ Кп ТпЖ Бех дев оїУХ ЖЖ лав жав оз йо уд і 5 16 15

То. ЖАХ АО Мн Міс ШУ Тих ху яю тажух дну ЛУ М м ж яю Віри СсЖиу іш мА А с мА: ТТ 005 схАМ УХА дл сх кю сну хх сему

Ух з зв

КМ Б да ху стих й Ух г ех ем 531 за Щи пк Бу ук чаш спа пав КО Боб БО лах си З ди ХЕ «шо Оле пулу, ух сш БЕХ «ТЕТ фата треку ку мих ек ЗМ Жуча пе Хе АИТЕ «ЗА

КТК и я туш екулЕтЖтяния уФжвиссакжежншЖннй КОБЮ УМеМх тк тру захо пуху у хкхаї МАМ ХИЛІСКХ

КСВ р ТІ м Хь.. її

ХУ ою хи тре о дух РИХ ЛИ КК кілУЄІ КМ ек ках ХХ Оу МЛ ЮКИМНЯ х дЕИЩК ЯМУМ Брамс миМ КМУ

СТАЛИ,

Ки М тю м Ма слуєх дл лету

КЕ МЛМ МАЕ УЮМУМХ

НУТИ Кох ких ххх ходжюхих КАЖЕ х У АТ

СТИК Ач зи фл жити Мол хе ти ки уки ютуб ук с клю ж хокИ Хода мб почи же ня. Б Ван ЗМО вив МИША АВ тики пер м уки Ж «иа Мой щих шу ЕС їх

ХА КТК хи А

ЛЕТ тот жо жсустм кім 7 ехо моЗ дл мжелиу хости его пигте пе мех

ЖУК У МО лан АХ ого ІА МЕКО ОА коник шик пет ту туту и ту ати ЕВ Клин при жи Жвих о Вл тя м їх ков ошивилІ шжПоОВлспеЗзаМАНОсКЕУХМ еВ ХхІ МаМЦЮО Му шо зи Кіхкміх давай кс сим ки сим я Мом к ваний ук А КИ ЩІ ВО і и зМмінсстекианісчнжові мив вима Ам М СХ КАСКИ,

Мт

МО

Ух бами и «дав ММ КА пік ТЕХ іх он ПЕСНИ ем Тбтвде слх ххріфивч Я Ж кх Дудик м мамо. М мов кох

Кути ВК оУ МДОНОЖженнХ У б дак денаАХИиНИМ МИЛО МНМ кове пох мм Я «Жак лим тою лом Меч жі ех М ема бот ям Мукуєю о хх Ли. тк Лоу Зх ашЕ А ІМ Мі ЗМ КМ: ЖЖ меш сш УЖ еЖ ДАМ ща ЗМІ ЛЕ му

Ж х хх їі

Жоєда В ою тая до Кт ЖМнО СКбущ йУл ую Мі Жомг Мо кл еЛлмю ЖД. же ою зув Аква дій Мив о АКА Бе жі сум о Жеж З ем бів шу ЩШАУ Бо ше и Ме за

Фжесиє ЖТл у Щ цо Меяу Ун Жмнт их

Хава ші ле Же хе Му ХХ

З ха АК М ха Хх 38 «й ВЖЕ ть ЖИВІ МІУ ОКфили ту ути: хі нКх

ХМ МЕЧЕМ БЕХА КОН У И

ККУ буму жк 0 МЖОреНличЧчни Менші невих МОЮ кх хи сУщя 0 Вфу т дра ткотМи

ХХ Ту БЕХА М. стуку гл їз

Код їх «ух

МУК доти х спитати соту оо в деп у аск тих

ОНИ мед у тОлоеЖжеВнх - ВЛ МАСУ хІ сь ау ВНУ «ях п як дат ЕЕ кош ЖІ КИ штуку, ках рах

ШІ 174514 анан тптке т читав УК. жу Кк вх КІ хи ее духа мМ о мпиисеЖенна ВТ ож хімічно модема ниМ пох оня

Мт урамія сжлопалие ем непусутих місту: МмиМмихухе УМ ж Ін скік очи Мп о ЕМ хі ню КІТ З Дон амікстюоОомсмі еле ксКвіІ цем мвІ Кам мА МИ СОМИ МАЛИ

ВСЯ нся м здтойх ЕП ЦИтТухЕХ

ХИЖІ ях МОЖ КК ІК плутьмя ТАМ укл ви УК. ХХ м Мом Ж о пзуу киці СМ жому их ОД ди

ЖИ МО У ПОМОЖЕ МяМ «о дЕЯщЕ ШоНоОс ле МКК тім

ФУТ

ЗоКкУАОМиК

СЕТ щі. МИ

ХЕ ММ МК

«кру гг ель

БУ ім,

БУ МИ Я РОН 5 ШО ВИК УуІ шим ЗМК НЕНМ

СОКІВ я

ХА ТИХ М

Зам б ті Кк ва их Ме бю фужлх смхажо ших Хр бе Жуме ля ой

ХЕ А ша шАМОХПЖ БО КП ХМК Ос ХХ БИ АФ ОМБеЕМ Ми ВИ ЗУ ї х їй ТУ в Б КУ КЗ тд Ма тлі Ждщ щі Шрим бл хліу Жеи Тащує Там лаз ЇМ і фути МЖуєу дю МАЮ МЕ ДАТО УКХ ЖТАЮЕЮ ОЛИМИ АМО ХМ Юм ОКУ АЄЖУВ мМіЛЛ АЮ МеВ ОКХ УМ хх й лих

Вщ а ХУ

Шевюо їйл щу Шенку феєю и шк

ТЕО ЩІ МІ МЖК М ЖИ СХ ха шу гу. її

Жук як и ЯК

УЖ МХ ртуть тусем

МИ КЕ

КУ Ту. З м І її са ди Же УК і МУК М уж

Ха МИ КИШОК их кох суку о в в НК

ТАК ожину Ми КБУ ВК ковстриАХ дату ск дк лркивж пи вує ки МІ ЕКоТИКЕ яТЕ Ух до С

Лоли ЕК ик отити пох . аж Мекка ЛЬ пух трони ечоуудею у ек он в а сива ин таку Аж жерва их сих жеж У пи Жекик шо Мме ше оК лаеух МЛМ МИ ІА ЛУКОМ кі юх шк и пи юи 0 МІ БиВНИЕ

ЖЖ МІК КБАЖОВК

ТУТ т ГЕО

Хожхфекки КА и хо АЛОКІ пи тю, Ач чи плац то сири г ит с пиво и ко. зем ок.

Фо уу за се пломмУюеннї їі чащис сим: ММ

ХА АКЯ КІФ ОУ ПІММУЮТКМХМ У аВщНс им шив меш шен

АХ и зе хм тки ВИЛО БЖ

ТВ ух Ел соки их МТ... ех Же що рюші. 1 о шої м щг: мм КуресНМ ПІК

Соки ТХУЖІЕ Ж ПУ МЕННИНВИ об о ш шЛМЛАОС ВАДИ ВУЖ ВИНА песто З дет. Ж писанку сві мг тілк вух. Жду люки Ток ос вд пот км ямі ВХх ломи псиМмІіМОКЕУНМЬМ ЗИМ: Ще сещ ов рамах іме На ве ім ТК КК К

ОКУ

«ЕХ куту ечат их жах Ва щу леж уми ПАХ «ШИХ за. шале м ие жо полудеетуєюії Що Фе дугу тити ше з м ку

ХЕФІЮМ. МК ОДУ ТЯЖКО МБ ОСИ ЖИМУ Уж ВХ ДВ КУ одно 24

ХИТ А туга и. Ж М Ск ПА ме Хфч юю ЖК о чеку ум Сх Жіик То Ма Ви

Бо я ох ХМІЛЬ МА Ох МОХ у дл ІМК ОО Ух шо лі Хе ЗАЖИЛО ТУМБІ МУ хх ї ко зх зх х СЕ М Ка слот що що ИН 3 о хо Має С7т.М 3 тах сі Та Ум: 3 (лі жу іх хо стю зу ВІВ ла Вуж ХВ ХІМ да МАМ УЖЕ Ні Мшже Ос УЮ ша юХХюЮ МК

ВН ТЕ З тет фуд М о Мк рн ЗК ми пак сажа Ба Бо Же ще пох

ОКО Е Зх

ЖК ІДАХ Ах

ЕКО «КЕ шим 0 ВИМЕ ж кАх и.

ФВ Моск сич Улт Я уугу по ОМ. хи КУ ВОК КИТ хсжжрехх

МАУ кв ех : -

ЛИЖ МОХУулУшклті ох У хижих МКК а ххх МЕ КЕУМЧчНЕ шпиНВсСАа МИМО КОНКУ «ше

ЩА суд док мух сеЖЕе ІЙ КАРЕ жк їх хх яю ЇЖІ ко уки лит дв ин НН НН в НА ж. А М МОНОМАХ хх ВИД ом льш ами нн КИНЕ коутугря соку

М ие шк ДЛ «їз МІ КЕДЧНИКЕ ек ку їх гл зх пк Кі є КЛІ ям у арка фіктивне МОЗ рек тик пу м ше М их жи ж тм шиЕнІ. Мах вла сс арен мель ІДМ

ФЕМ

НЕ пет ТУ

ЖЕ 0 МЕЖІ КК шт пох яра

СЕК Ат ск ТТ

ММ Зою вет еижЕОМ Я СТ шо ка лу хуя мок вив м ек

ОКХ МУ Ж ТМУБУКшЕМНМ МІ Ж ЖОМУ О ВЕН зкОшаниМм шлам міч Тут Хо пулу фік мМ Ж не угим прзаівеуєти БЖ йо бо Во Ти

Мовою ямАМОУ шле Ну СУЮЧчмс ЛЕМ КУЯ О ЖЖ ЖК Кит ча духів сфе деки Мах я аа А сто ВЕ У Я еВ миски ешивоком цими я і ому А МК Мч мату тек меж зам дк я М ЕЕ чим клю, лу

Кіджхк СЕ

Ух ту хім хо пзжольисетькихі Ж. и. Дюилахикі ми мужа УА ту поту,

МКУ ШКЛО Ж МОМ АЖЕММ лк ОО ЗОЗ КОМУ Я ДЕ КУКЕ кокгудх т тп т

ТО Ел и Женщо лю шу мо Фр М де о пу ом сумує Жан за Мо тла Же Ток

М ЖК схАМОЖМУЮ ХО ВІВ ММ УЮ че ШУ ди Мала Хай б ТМ МК 3 Е її їх в нен Ки нн ко и Чан о НН НН Нв На и я НН

Ммуш шли піп Бл Дів Ба їі б бук бами фам ів Ем ПУ ЖЖ ет зи п Б

АК деге не но о в и с

ЕКО жо ЩО до шале їм ря я КК, З

КІ Хе я КЕ хв Вуме

АЖ КЕ ня Жерокаюио леріечтї пи ажа иМ

ХХ МЕС МЕ НОВ КК МТ

Кт

МИХ я 0 Ємені ММК жія Пуми рим ие ух

ТУ ЗМ ТУМАМа СЛжМК, МІОМИ КЕМОМЕМКкХх я Ку

Хдю ЕМ

ТИ у. Ма ЩЕ ТІМ «ил МИ ВЕБ Х пом КА РК вия Еко куту, гі лгосечяре нн в НН ххх 0 жаме у пшЛОежЖенЖ с МВИМе лено льному БИ ЄУЮиУтУ ення

МИ деккТЮ Я «ат дих

ОКА МІ ЖАВ У кт лю жд Уа уд кх КО 101.33

ФО Жах ха матами З хвіст в ОПк шо ма Ех тех ХУ ЛЮ Од ІВЦ АМОКЕЖХИВИХМ кою ККУ КИМ ТЯ Тк У МКУ КАК

Оу

ЕМ ку щем жди жи ОБЖ КЕ

МУК вх Ку

Куди ших ХК. 031х71 якіх г . рок пк ких я -

ЛУ ох хо ту КЛ ж жк укоих МОУ ехо вх ПІТ ОЖм «хх ху у Шан хХ А Ж МЕЗО ЗДО анЕМмМ МТМ деглк димі свое піІміІС Мі мото ік сМміріуюауєьв СТ: жо фе В ком мшжрАНА шщИиселОонеаВМАМорКУ ХВ Са у ФЕРМІ Є В. МЕЖ ОКХ ххх кохіиннк кгкрихахї потоки о ую сут ЦИ Де Мами ам мем уют р гію пр яо Уд К у яе ж ДОК ЕМ

ЗМО ЕТ КИМ МС кох УНН ие АСВ АКТ

ЕТ. ана штук «крат диму сх МІКС ОБВБАЛТННЕ яю ІЛ ла пк ІЕМ а МА рити, чат ту віх уссмикокс ТК свесрроюит у, потеко ай зжсука т уд желе. : кт пак пох тер укемевко В КК офі уч В п во мовам ее

ЧК ДЗ Ж ПОМОЖЕ МОО м ММА ХОМ: ОБУ ВЕНА МІМІКУ МЕНТИ

Си ххх туру зд се шля КН ОМЕХ «лиш ЯР, др Щоасх лк інуіміІУжЕміІЩЯО ЩО В мік Крат и ПМЖ ХЖО У МЛ КУЮИНІВХ 5 ФІ КУМЕДНІ М

УК 1 бак бом б жо ФУТ сук рн ЗМ ую ри уж: Ме а бах Мам Там зу Ж охо

ТшЖ жа їм ба ХМК о кмш жи ож ле АХ леж МАО ЛУК КИ дак МЛИТХ ї 5 їд їх х Не А Ух плющ мл пеоху а Мк ге: пе. я ти зам Тая ТТ у п бу МЛ о Мих, с меш Мія сім жа й Ме Ті З о ТУуХ ща БМ пів гу щіУ Бук ЗХ

ШО ло з

Жде п ху ДО я Хек мух ШУ соки

ОшжХ ЩА АЙ БТ ЕКО БМ УЖ «ВР 17 гу сх

АКТ Я детрит ууких

МАХ ВРХ кол лу спбоехуку життя у сум и бю 0 ЕМВ а КОЛА ДОН квапль

КД и тух Тв зу тих жати Я Межа же се я ж шк ою «дю буму риана лем івхенемня вору

МЛМ ект щотдми ди км ух «ки ЖІ ЕВАТИКЕ кий сх їх

Іде ХАКІ я 0 ще за о смайдоі Х фшіммдво се: фол і КВТ ах КО

Я ЛЮ Ж ТОМИ сок БМОІДЕ СІМОЦВ МН М ВМ ВХ ОККО шиття жу,

МИ

УМ МЕ сшее ЗЕ УК

Жим БІДИ ВКМ Е кк хіх т «Ек кар...

Сх Жца ота пли 3 0 шах дм схууеумкх др В В ДМ ТМ КЕ ок я ЖК Ж ЗОМ ЕНМХМ що БОЯХ ТХМОЇКа ФПК ВЕК УК ИН ст слютк дати хи сш ЩО мих сотку ах сту сих ЧЕТ. ТЕТ кВ теж У БМОУТПАЖеМЕКА Б зд МАМУ Ве Цу МАМУ ро ком'юкзщма смол амаМс»евУути ЩБАчКИОшо паНММиМ БУ шо виш

ЗМУ ее и дігжкстд тю я Є та и ри юю В 1 до ІХ

МАНКУ СОКАХ МІЖ ге ВМТ у КТ КК АНУ В кут сх дум путь А вати ФВ такту тещі БІОС БККТОЕЕ

Кене т бу чле шк. 12

ШТ Е Тут. пошити ТО мих єм с с. МУ ЮУЙ ВЗ ММ и УК мити уж уми шк У боже нНиХх шо ЕЛЕ СМ Лем Ми ЖЕ у хи зоку КМТ

ТЕ ВЗ» щу шля ке КМУ кт гц га

ЧЕКА іа. (51

МЕ и Ж У ПОопОожжекніІ З ШКЛО МАХ АННХ аг 7 и Її

Мекка лм іо ть Фудз бів о йхк Ду: беж сю Ті Жод бхих ах бив

МУшЖЖ БЕ сао сЗАУ АМХ ЖтТНа КБ о слшкК ІМ ж Х ЖМЖК о лож хо МУ ОХ Ух - к. зе пог

Ж шо Втім тт и бах о ча Ж що з хи Тоухтя Тлдми: їх ТЯ й ух фу ов дій іт ХшАщ Мі ЖІ іш їх ЖЖ ОБЖКХ ФМ їхАМ ОСА са КК ЕІ в га, ща силу хи В мо їни Же Дуо Ме

МЖК Ох АЖ ТК Ж БЕХ ЖІ си за

СОречИня їх

А МИТ ЩІ

«КІ ж «паль» ЕТ зей и я хо ук, УКемухтуКтТи уми и, коїоож хе штучка посилань

ЕК

Еш ЖЕ кВ п ХОЖІА КЕ ШУ СПЕКИ М ОБЖ ІВ ОТ А ІЛОЯ ди ис 0 ІдтТ ВУ «ши МІЖ ВАТИ «аж КЗ їі ідея Їх юю ХК «ШИ Хай м мими 0 жшоелдрвхх св дам Ва едМмімсиеи Ву меле

МИ ТВ ОМ МНВК МНХ ж ВШХМІВХ сим пивом нвОоМисвнМУ КМТУТУ

ХЕ ОТих пеки «ЖЬМ МИ шИх КЕАЧМА

УЛ ТО ю Кох Ку

ЖЖ ХАР. сети си сосажр кемивки кої шийок АОЗУ ФІ кум мк хжка ЯМ У ПОД ЖеНЕХ Я Вл ОК ВЕ НОМ КЕ

ТЕ

А

ОТ ФИТАТЬ ШУ шк БМ БЖ си ута уд та «МТУ сх І7Уї я

Код АТБ. А

ММ х Хом ху зтоумючкет ий СК ох Кл макухи схе кис их М ру

КУЄ мим хЖ БІЛО ЖжевкІ о шЖ ХАМАчЧМОЇ МОДІ ЖОСВаНУуМА ШИ УХИХ сечу? 52 сир зей «жил у музхетя - кож ий гер. и М десу вуду М кер тврьнх тутдужі Ж ддхеім стрів Ж мом Вк А КК,

Фокін мли МміоОЗма Ір шЖм САУ ласий ЗУБ хо іфдхфикх

ЩУКИ мтс уко Урі чн б дохфукаі УТ ня 5 р ТЕМЩИК У З литі амічситикомЕссетоконі ами ні рамні і ее ВЕ ІВ

ХЛ

БК ст шт рути т В «ЕшА МІ КАС

Кк їм сут хору хх Ким г. т ї

ТАК хо: тим жНнХМ «МОНУ Еш СМУОК дв езвВЖИАлрІМИаСНЯВНУ ЕМ ИИ КУ «Ех тушка поютул суто ми кУВУч «ЖАВ МІЖ ЖВБАТІКЕ

Фокс, ім р щцх

МЕККА ЕЕ. МІ

У лея руш о ин не НН о чат Аза ж Косми Х й. щвлщЄє стиМиЗ леви нсомаснпяну мулу

Ек, «нем х шум муть

Тем КУКА отут гчухи шк сах ах. ку ху ху худі У їх дм мч и мокко А помах я хе мих у РМЗ ЖеИКА ди Є ФаАКУЛьЖКВиМ МА дОоВадиМ опт за «ЕЕ КЕЗ сет Ж Фі тт соус ШК скік слкуу пу емо Шу Ж 3 Ж З ких Щлдуг Ток їУук Хав ШІ пух ль ба жав о Хеу Хе Жекх ех іє Ха фе баю Ух

А в ХЕ Кл тк ла МА гли Мр лу ню Кл 14 пух бах Том їі Жах іх Тех шум ме Аіа мі Хав дід Бе їз іч ук їм б бАв Хад 3 Мо ЖЕ ля й зи Я

М ТА що ша гл хи Що дру уче фол ще

ЗЕ ос М мів же КО ГІ Лех й ки ТК зх ку х 5 не лют уки

АЕШшЄ Те кім шщеучна паса щас пу

КЕ

Етюд тихі ннуоумтхк г східною ї око хУ Же аучи хе Зх «ай Синтетечия рекнеівжен ен кими виКхх о Утр

ЕМО

«лих злу фут «ді БІС ЗКАТЦЕЕ шва ки г «ших їі є їх хом их ЛІВ М БМ ЖеКА до ЕМ СОЛО Лотки их СТАВІ МАНОМЯНУ ЕЛ У тут

ХК секта дух утіх едха міш ЕАКОСВЕ сект га хх ен Ак М

ЛЕ т сромихо ях фчхутМмом МОЇ цехом ум тремо --ека ж У ХМщОЖЕВнИХ ХО виде спини де еМмитиц ев

ФАК,

УМХ как МОЗ ВЕЖ шт я са вт х тоже Яр, 7 клин тка хотіти лю хбжіі вах: жах УКВ ую м жжакіх СТИК ке жи уд я Ме У пПОшОЖження 8 ж жащічНо Моди жсовамиМм МОХ

І риси ск з с. їж с сх. с. Я с. т є Кот ко го зим кут кет Ум ВК курчат КО Фуко укі дум мірку лу ха ж кс ЕІНВИЛа шжпоялОзМе Маму ти ФбічноХО пЕмаже ЗУ З іхнриніу

УМ буки т фе УжиуКоМ сих сг Ж хе ум ШИТИ тт ки аМмаунІнтОКиИмК ФЕН ІОЛетМИМа спам км А Ми КК «Еш

Уха «ати тут «ЕЕ щІБС ЕЕАОКЕ ск ех зт «киш жа. ио

ФЛЕШ хх Мука Ммі М оршух стю УЛ гри дику му Мох тих

ККУ ма У пшНоенНя ем МВ Ще СОМ лена МІНМЦОТУ отут.

Км

ЖАТИ чими ЩІ ЖЕБАТЕ што тютк ти Ух

ЖІ іх. ЖІ

Ел Ха мо мполохннї М деле сли Зиелме мів мус поки ТІ У ЛЮКИ же ДЕ: УМО ВАЗИ ММ ЕВ КУМ КУ

Ху куки

СОУ «и фе АтУтт т БІВ БЕМЕУКЕ га их с жим зла, А й ай жо БОЗНоюжМНо ек ЖЕ см сх малу НнияУ МЕС КУ ях ших УМ УМ чини ОМ БЕ мли лях с сла У щі ких змі... З ки ТУ ходу го ті мем СУМ о 0 раси пи ві ХМ піз б У УМА дк КМУ ЖЛАЖНИТь А ОАМАЖООО ЛМУ Ко ЕК В, ХУІНИ МЕД ЕМВ «ал че не

Увагу Ж М (ТЯ яю Мр юю КТ Ям лев Мо Пе Музею Ж лм З ех уч і аг Зі У БИК ЕТЦ ТВ Ж ше як Жеж бі Жде їж пре ІМ

МУК ма ЗАМ УЖ БК ЖЕН УМХ БЖ НВ КшК пе К АВ КК МИХ УМ мВ 4 ме Ам А їв щін ім о Жищ жі Кз б За «ах регу Тез їх її Мах Ен фу Шеум му МАЮ МАМ АНИХ аж жтІБО Ж ЗАМ О ЖУХ ап ХМ М А оз А У МЕТУ ЕЕ

ТО ХО у Сто ох ших, ка ям, и

ІК жд с шЕлІ ммс БЖтЮ ЩЕ як м жу сег ся о

МТЮТ Я

«АК В нти тиме тяж КК

У лю пМсумлаки рої Фу мимо ут

КО. суч ГОЛА ДОВ. «Вс

СУ ютх 00 бум ФМ и Кох і Мк ом ут ож АЖ ЖИ МУХИ ИЙ ДИ ТЕКА ЛОТІВ ЕМШЕЮВКИ УТА МІХ ХОМА стул

М

М с Уутем» шдлтУ

Мк тя 00 АВ а хх

Как МАЖС ЖЕНУЮ РУХ люк, хочу сх сем ііі с нн НН НН кН жен У ИДЛЛУЖНяХ 5 МІМЛІМО ЯМ ие у ММ ТУ сш суть факту зт кох щоки оч Фах Не

ХХ ЗАТ хе

Ку мушу г ОМОЖИяНЬ во Ж Ах іа: МОДНИХ МІ НуМ Пух тпеежіі Х дчетщії триодихе ка о утво і жити Миша Мо о ж 1

От ВЕІЗЦцЦУІ зпснленоезМмінолюици сбаічнсехи зам меш б 11 іх кепі пеки салтси ух, Ж схатихтегютий шу тікати сі КИТИ Шок жан товимі ери киМміднитильй іменно ве (ВХ ІМ кЕОХ «Іі» БІС ЕБАТИВЕ

МЕМ хх г атм

МОЛІ алу яю ММА мк Жиє че уночі СТ пу цих хан Уюх скло мкій смерті рік м хи кі ее Ж пиМмнУуЖшННІ М ПКУ сХнУю зом номалнмуУ КУБІНІУХУ хі ЕТЕХ плтхюь утоми МАУ ку т шт

ЖИ МО ЕБАКОСВЕ или жука сх г «и чим... «кю Б точ. В их ще м й : хх с

ЧЕ сло мтмнхжоУВщі ЗО рам слух дну ді дим пря НИ ке ма Ж село Нна хе ЧЕНІ СІМ ВЛІМЦО ВМ КВАС ЯМУ МВ У «ВЖК «КМ В ВЖа

Є УТЕ СК с тух

ХК б...

ЛЮТ «лецию хо уукихим я ЛК до беж Мом т мк ма мимо ок «ХОМ ше ж сема є фахУуХь МКМ МІФИ ЕНа НК

Тр чл ах хі: бек Мод ж ЖЕ мо Щ пн й аа біз б ПИ, Є її йшх Тов

ТЕЖ зва ХМ ба ЩБХ Бце тТне ЗЕ бев о тую Ж Ав Бе Бе пев о БтЕ з х тк 5

Фхх їх Кв Млох о дТух тою Ля жу. окт Жим М о я тю Же Класи

МУВ вл із ха Азов Б Їфє Бій тех іс ої дів хаз ц5ІУ Ба ЕЕ

У Же З

Ша ТІ т Шрек Ше дід ИН пу лях дова Бут ВЕ МИ ХЕ же їх ска шХ хе аку тах

У ія СК «0 Щі мщх хм пк ту

ЖИ МКУ К ЗІКА М КДУМ МАК Е пк

ЕЕ жк

УЖЕ тм к ких 200 плеча жен ї (киска, . диску иктук її хх МЕТУ Фан АНЖЕНЕАМИ МОВИВ МцАЖ ки кекчя

КИМ шля 0 ух мером ти МЕ ВЕК не ях ку хо ххх.

ААУ сша У ТМложеВнНІі « МЕАЖ см ВпвІа сама НИМ ОсиНВУ КИСЛОТУ нуля киш

Ех, зу жу «ких ОУЖДІ КЖЕ пи ЗУ т

КА МАЕ я Еті

Ши 00 Тако ше смичок ото чім ще кА мое ж

КОХ ше уЛЬ У КОМУ ЕКЯ НИ о т МАМА МОЛ виаМмиМм духи кон ошживиА селом МВОКГУИ (УЧ МИМЦЮКВ зу В смію

ОК Ме МУК МУ Хв Михи я мм мет Ж АОКЮ, дис М я рити ЖАВИ КІ

ИМЕНИ ЖЖ ДАТИ с КТ ТМЯМНЕ іх теми УЖ ОТУТ КОРТ хіт, ох ер Мтшух ВІТ кжЕМв МИ МЕБЖИКЕ ач «ІТ і чия їх 2 «я ЇХ)

слижлюня Сич ом дих сечо х : .

УА САМ Ж МОЛ ЖИНМА шо ЗВЯЕ см шосе щини уми КиМУ чх кЖ Ех нти а ЖИВИ им ОМЕЛИ БІ пккту ки их їкх «хі ,.. 5

УТ ЄМ мг скрипки Ж ше духи кх смути тіих ск ех ПУ

МЖК че М пишшжсКн ях є За Мультик віА Млини ейгехн -х сам ха гляд ин ию КМ хни ку. Ух вк їх з Жди їх ох - тож Жах з х дю ск у ож хро и ухи Щи беж шию ю 3 дум й Хм аз

ТЕЖ АВ ОшАД МмАШ МЖК ОКНФе с9лує ек ваш УМ має лиш сиМа иЩщА ЗЕ ПУБ їх К ЕЕ ях я Бу Ом Б кн нн не на НН о не З НН НН А НН и Но НК ткухх Твен уми

БУВ о Вілю о Хай АХ БЕ біс ба отУХ Би їі Міс щі пі Буш пат соте т з

У пу Ф

Фев їжу й їм м декаж бю птиця

ЕК шіЖ лав 'шкОо ХЕ вКо КЕ п «У я гр яЕтх ху ар ть «ух «жа «при 00 Дам «чиїх ТЕТУ ших пе) Мет щі и «ких ЕКО ПОСТИ. тих. «ЛПІ сиві их ЖИВИМИ АНУ пЕДИМАКуУМЛИХ КМУ Ка ; с Я У шию

СК; «и. МІДС КАТ И

ЕК т ра

ХОДОВА УКХ кю М

ОУН ЄРИ б ЩАИЛАЖИЕТІЕ с. СМІВЛЯЕМКМ КУТУ адьвімусах ХОДІВ БИХКТЛАМИИТКУ дику

ШТ етюд мух КУБА

КАХ МО КЕЙ прут я т яхт БЕ.

КИ ж тожета їх тугожво 7 шо шофкхді юі жауумми туда спите ту

ЕЕ УЗ Ж псовсоженні Її ш КаМАчнО Моди шІЮсоВаАНнИиМ ШИЮ им Ку КУМ гом вд іти Мел хни Мам тий У гм

Ки КНУ ЖОМУ КЧчЄВ ЛДМУ Я ЗУБОМ фштіютію адм пихи жеукюскменя М. б аххаую ий ку ПУ. КІМ Я діри у і ананосхакснІ ок нівме тим кс іронії КО нення

КОМИ слив ж Мао ЕЖАУЧЕК дет гтгух гуру х

СИМ кА ди ХМ у схо МИТ

КИ є неї Я ах У 8 с

Ох жбдюм сли ких уми ен КН дош МЕшЕ м полови хо ол пшеМий па аміни У Вл тУ «ЕД сйю у 0 як ІК Кк хи МІН КАК Е, хОМЖА ШК. ща дО ЛК У МЛН о СЗЖМАМВЯ хИМЕюНМмМИ ФОНИ ЩА НАУ МЖМНКУ

ЕМ ее шими КЕ ше мим ЖЕИХ «Т0те» 138Р5. НМ

ЗВТ Пуми су турок цмо ЗМ о бує жоулінв мишу: пере лою мах

ТОРС СМИО У ЖБЛНОЮеаНиХ СУТ йо сне Жде лМИКижХ пулу нах

Ем сут

ММ ок тане Жди фе МЕ Жвя СР се бує дом сю аю Ж Том: їм) й тліш

МУК жа ОМ озАЖ ТВ РІВ ХлХ Бех аю Тук Зшжх жі ім їз Зшв УТ т х чи Зх 4 т ке Ах

Зло 53 яв хи ща бхрумі Тобшу жя х біки Жошухи Ж оихіх Жни Же ах жу ку

Ах а: сем жа ло УМО А МО ААУ У. х ВН їм сао йаш поау би ЄЕВхЕ сг т с хі ЇХ ХО

ФТЗеоче 851 сх йлх фа у ни ММ ше пох вв Ко БЕО БО Сех хх

М ери у

КІ М

«ЕІ 5 отри, ухик ек 3 кох ТЕ с пух ідозхотуєтим суку ух м. хх МЕТИ РОМ ДН МОГИ

Ух во гли тух гору Іо МедИх МИ ККя ї Кие меч пемзи ешкик 0 МОКАБЕТМЕЯНаХ гени нжемва КНстТмУвцАй «ШТ дж КН шт митом ФЕВ Ук хеши МЕН У БЕВУНКЕ

ЕХ кт тих ох їх їз я іїх1..3х;

М Уко У гру швом жів фейк чу хе я два У положен А с пЕЗдю сміх: льше мінсомаснавУ КиМУ Кю

Вт

КІМ лугу шу жімки «Ей МН ВЕ кт хх га

Сх ІЗ 173 ок хх З хе Її

Усю кої: сем емі 1С хе іїжеічтухиу сіло і фев пуомаяк. хо их ву у кмин А А ШО МЛМ ВАМЕМу ВОМ НаАНа лам г х : ск . - кожи меду дет Ж поход прутів куту. дур соках То хх й Ен дл мтв'шганих пов амАНаж м уч Ма сви жВ Уа В сири пі ціМутеи зовн сам се тюки ЦИ ВХ НИ и зма лис І КІМ мів ОК Ди утіх

МОХИ

ШУ хіт дме ож

Б МІ ВЖЕАУЧИХ

УТ Як І 17535

Хе ТИМ «їм лк С К т пак ла щ сік уеохдкх, сок оха пух лихат дифе чих ких в ом подсоуанвиі й шолащех сок аль ві ном олюдіри ЖІН мах З у киМмгшкенщАХ хи щшляЯк поле зльшВв'сВмІНоМиниНУ ЖИЛИХ «ВЛТЕх

Еш

ЕЕ пет:

Мк Ма МЕ лити ра їз ки 1253. , 35

УК Ми м к сзареюихк ми Же бздумаитхо моди ща мещювмиох дя ех У МмОСдсожжЕМА зу Ж офакулетатеи МАУ ВУНИХ сг гух ких ся З бе а що ср пулу ба бр Же Зуби Хом Жим ТІ Ум: Томи Вс Тан

ЖЖ хо їм са ЦЕ БІТ АМКОлЕХ Бк МУК мих АЖ МІ МУ Би Ж

Е я ЖЕ ще КУ Ам М

Хо Жов Елі Ми пл Ме Ж с ля: хи Жохіз Та «ті І, хз фу пащу

ТЕ ЗАМ Ам жа ло жТнНа ЗА ІЗ Ух Ще ін би Ах ша У КЕ ЕХ иа хх п ж їх я ночь нн А пе іш Ж фею бух Шк лох

АК КУ БА БЖЖШК ХИТ А МОМО ДТ кшм» З чих ших

ФВ 0 пу пір мирт ее,

ЖМАТО щу чнщ ММК МНК АСК

Кен

ЗаЖАЖеХиї мя а отче сили тиху тити, птясео й ке хи? ХЛИДОККМ ЧО МВ ТУ МІХ ТЦК ВУЛ Ж ЦИ

ТЕТ, лах пня меж ФАТИ «я МЕС КАМИ пики КИ г я ї-к31 Ж дк, Яйарио сМю пухких 7 ерюмти юн сизежйтевкию с. ДК прив ве ек ори вх ик

ТА хашщо ж Боже мол СКМ адьщачам ВОМ паМмУ КУБОК ЕУ

ЗОЖуМХ ках ХМ КЕЖ кн с я сля хи: їх стуиу туя У ою 5 кої «ВИ Тих м умллтижєн ЗХ ехо жім дм мі клюЗзМаиМм ВИХ

ТіхЕ мим ж лат жемН 4: шо щаМмІЗнО Медики им хім у учи мозуучлуучт ІА сухості лМвІМУЄУКХ Тука до 0 Лю м

КЖиМоюБивВцА хх ИсМлеМ УВО МилУЯ УМО МАНЕЖ ік ух паї г учинити поляни ки ле ум м ви сажки шия уечзухию Я ум смінстепкхиміссвикиміІвнеумліеімамма іі в М (СИ ІН Е пли кЕуя

КИ мое усю КУЄ как ОМІВО БЕТА

ТИМ СВК иа

МЖК КМ є КАМ ет п с - тик щи ся ї ло сг г х пе хм. в с. Оу сухе мкм НО ут ш доку ко дев ХХ днк ищиМ сттІВЩуКІ: (фл Кі помах МИ Фу УЖЕ К

М а У Полюжшнні «Же ЖдБаЯнЕш сом дну МІНИ нМУ КИСЛОТУ сет,

ЖАХИ кач му кукі ил МІ ЕВ жук істху: зпУхх бесідки? ТАКІ в УКХ

У Тк у. с г. -. с. ск. 1 пак - пгт чо УК п ке ж - г. " юки. к «А ТМКх ж с пе нмі 2 дим помое хчьах ех мед вІ м ЖУ и ЖОоЖх ав У лож жнВІ .шх вам споесею зле мА МОМаслАНУ Ж УХУ сих чи «се БУМ ах мок ОХ МАЮ УМХ ще зт 5 сш Ех ЗП. ту стисле » зх яд ут ОЛЖЛ нполами яті ди, над кіс о их

Ах МИ» у ДМ сш я КУ У На жнсх Міда ик КУ

Така мова 1 и ут Мін я яра Жах кузня Ж Го тод ад вок Фохмсих тТУуж жна Фів тіж ТБ Бе ТВ о щек ДЕ пок МК АЖ ЇХ чі МЕ ПУ ї 5 16 їх чн и НК зу. ж ву ух Тахо Коуза и уч М

БУ Дів біо Жва діа Бе ЩіФ ша ТтЖ ім Їжа жу Ха жу КО ЩЕ тк -д «зх о пк Щі

Фа Ех п т жили я тити си хек їх вія КжОо МЕ КжО мах

У сим ле

АЙ ОО КИ ск, з тах п кв. уд де БЕХ

Ж ля та с Я а пет и.

МІ и ПЕК ЕзА ТАК МЕЖІ йх

НК. жи міма СМР УВИ КТУКЬ вал

ТАМ м - « :

ТОВ ЛЮ пи ММ МУКИ мушок око мих Оу о -мЕтетизаа Беквоанжимирна коМистнукцУх кут

АЛ

ТИМ мч фщшимиу

МІ се т Ух МА, би хех ДО мА м ЖАН МА

КАЖУ тех їх

Зедуж ТАЗ кв ко ся» Жив м Зедиуююняї 0 враняю ро вики мав Хот

ДОК МИХ МІ У УБОЧОЖш ВМ А ВЕЛО СУМОК» УПМ МКМ КРАНУ У ск тух,

МЕЖ

УТ шт УКВ чипіх вн» ВЕ сететьм 17 Ку са Іл ї

ХА Ах т

УТ, ТлУє точи меюжеви Мої 7 хо жил вкл іхатіиь Вк жом Ка ка ха меш У ХНМУ ЕКиХ о о жЖОМУМмишНнОе ВОІВ КИВЗНИМ МляЖІлХ сек дукік о У сетер вх іхеуухкікео м ук: щокою У зх фютхт дес курії У фр кер ігру хріх тв Кіт ем пази То їй Зі шаКожеаМма ь Інна тчи маша паю га Бук З іти т рручимкивнсХ Зиджечіл Я протеолітичної з. бек кг штук ВЕ 1 УМ лі думу и зкевлд т ніх да у - тзішЖеттуйн амінсомжсеснісатоксніви тині іван І ОМ как ду птах пе яр іт ух КМ кі МІС ЕКАТОКЕ ки УТ ситу с їж. и

ТЕ Зоущо У ммзлтужмї М шрот, пи щи сим штук ЩЕ вити и щи

А Кит ТЯ ХУ ФІ МОА КОМ. МО ЖЕК СИХулКІ плюса ЛНМУ МО ЛИНИХ

ЖИ туя меле дин сш МЛС ЕБАТЦВЕ ше гутух «зух

ЛЮ ІІ 3 ши іш, хі ет діт чо типі З шити сему смак угдк хі пнрум кидки уки МУК

РАМ да смоли ннІ М ви са Уюух Ул І МУ ри ОК КК

МАО аж У ХЛНОЛЖеНиХ ди ЖВлЕЖ сю впефе амАКОоМмаснянУ кис сохнух

Си шт тю я, ст ВЖЕ и ТИМ КО туту гл ру чих 1353.

ТІК 00 даму хро лчекптукчутимої СВ бх дух зуєи леми їі Я полі

Хд мех У тКхлюМжЕМмнНіЬ от Є о факУлЕТИТМиКОоО МІН ОВа МУ «дух чу «НЕО ОХлУ смак бум 1 їх пе у. м в Маю що Ма шШащаю Х ак ух У Же их

ІшЖЕЖ Аа ша МАВ УКХ БИ УМ ОХУМК БЖ ОХУК ях АБ ме іши ХвроБух ї х, 15 ЗЕ

Ї Ко їх ях то не то оз Ж жена, Ж Сан ТМжеих Ж єкт Ж тах. де Хо Ще «ес

КУ Ал жів Ха Ата Бе жі сла тУє їз їз ПО Хав щіУ Вб ет хг я пух с ЖЕ о

Ху Мк Мі до фени кох км Фут

ЗХ ЗМУ аж Ко ЕКО КК ЗБЕ оч

У ірУ

ЗОМ Ку «ких 1 мех зу

МА АдУ жо или м ійсбхучіхтх боти тохтуюки і и,

МОМ пуд МЕМ ТІМ ДЖЕ «ЕМ а ЛЕТ ХМ дитя З Мік пихи М чшкі" минути чна рено невих БОоВстТеУКНІХ

ХМ ж г гу Мужит ту ке Жошо біти фічних то х У ЖХухку даю о лімю (аю 5 що фею фах ж Шоу

ОА ЕЕ ОжХ УМВК су сем о К'ЧуУ БЧИХ ЖІМ) хФХ 1 їх 18 ож ТЕ

ОМ кА

Ул Б ходи, Ка шт те УР

КЕ х КЕ

М Я ж пМмтУуєкіїту Стрия пущі ж юю МН СТАЖУ. ТАМИ МК Ко АХ

Вже

ФМ ку УЮт пкт Кит, Я че 4 жах той , хуей полка прю те

Жде екшен Ка мента КОЗКОУКеуУтя

Ток ях ер ка жк дж ж В УВК УКХ тя АЖ ЖЕК МК літу У ж «шиж Е.І поту и зх. -. о й с й ї - м. по -. соя уж. с. сх с ше зе зако ж уз кичя ож тужож о сему «о ив ек ККУ ті еВиоКиВуКх их МИХ ВКМ НМ З Бали СНУ МНаК З Я "вини ВУ Кит у коду сте сах ж ги хв Жено ху бух Мао й б Уч Шут, ант Дод»

АЖ кс ех пек Аа ві жо КО КО ЖЕ 4 в 15

Claims

1. Аналог інкретину, який містить: УХ»ОСТЕТ5ОУ51ІХІ13Ї ОКХ 17АХ19Х20АНКЕХ І 1 ,ХовХоо Ос РУЗХзаАРРРБ, де: Хо - АЬЬ, Хіз - М. або оМеї,, Хі» - К, хімічно модифікована шляхом кон'югації з епсилон-аміногрупою К-бічного ланцюга, із такою структурою: (2-(2-0-аміноетоксі)етоксі |ацетил)а-(уУО1)ь-СО-(СН2О)-СОЗН, де а становить 0, 1 або 2; 5 становить 1 або 2; 1 с - ціле число від Ібдо 18, Хіо - Оабо А, Хоо - АїБ, оМекК, О або Н, Хо» - Е або А, Хоо - СО або АЇБ, Хза- С або ДІБ, та де С-кінцева амінокислота факультативно є амідованою; або його фармацевтично прийнятна сіль.

2. Аналог інкретину за п. 1, який відрізняється тим, що а становить 1.

3. Аналог інкретину за п. 1, який відрізняється тим, що а становить 2.

4. Аналог інкретину за будь-яким з пп. 1-3, який відрізняється тим, що б становить 1.

5. Аналог інкретину за будь-яким з пп. 1-3, який відрізняється тим, що 5 становить 2.

б. Аналог інкретину за будь-яким з пп. 1-5, який відрізняється тим, що с становить 18.

7. Аналог інкретину за будь-яким з пп. 1-6, який відрізняється тим, що Хіз - аМеї..

8. Аналог інкретину за будь-яким з пп. 1-6, який відрізняється тим, що Хіз - І.

9. Аналог інкретину за будь-яким з пп. 1-8, який відрізняється тим, що Хоо - Аіб.

10. Аналог інкретину за будь-яким з пп. 1-9, який відрізняється тим, що Хв - Е.

11. Аналог іІнкретину за будь-яким з пп. 1-10, який відрізняється тим, що Хоо - 0.

12. Аналог іІнкретину за будь-яким з пп. 1-11, який відрізняється тим, що Хза - 0.

13. Аналог іІнкретину за будь-яким з пп. 1-12, який відрізняється тим, що Хі»о - А.

14. Аналог інкретину за п. 1, який відрізняється тим, що а становить 1, Б становить |, с становить 18, Хіз - ОМеї,, Хо - А, Хоо - АїБ, Хов - Е, Хоо - С та Хза4 - О.

15. Аналог інкретину за будь-яким з пп. 1-14 для застосування в лікуванні захворювання, вибраного з групи, яку складають цукровий діабет, дисліпідемія, жирова хвороба печінки, метаболічний синдром, неалкогольний стеатогепатит та ожиріння.

16. Аналог інкретину за будь-яким з пп. 1-14 для застосування в лікуванні цукрового діабету 2 типу.

17. Аналог інкретину, який має формулу, вибрану із групи, яку складають 5ЕО ІЮ МО: 6, ЗЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 9, 5ЕО ІЮ МО: 16, 5ЕО ІЮ МО: 17, 5БО І МО: 18, 5ЕО ІЮ МО: 21 та 5ЕО ІЮ МО: 23.

18. Аналог інкретину за п. 17 для застосування в лікуванні захворювання, вибраного з групи, яку складають цукровий діабет, дисліпідемія, жирова хвороба печінки, метаболічний синдром, неалкогольний стеатогепатит та ожиріння.

19. Аналог інкретину за п. 17 для застосування в лікуванні цукрового діабету 2 типу.

20. Спосіб лікування цукрового діабету, який включає введення особі, яка потребує цього, ефективної кількості аналогу інкретину за будь-яким з пп. 1-14 або 17.

21. Спосіб лікування цукрового діабету 2 типу, який включає введення особі, яка потребує цього, ефективної кількості аналогу інкретину за будь-яким з пп. 1-14 або 17.

22. Спосіб лікування ожиріння, який включає введення особі, яка потребує цього, ефективної кількості аналогу інкретину за будь-яким з пп. 1-14 або 17.

23. Спосіб лікування жирової хвороби печінки, який включає введення особі, яка потребує цього, ефективної кількості аналогу інкретину за будь-яким з пп. 1-14 або 17.

24. Спосіб лікування неалкогольного стеатогепатиту, який включає введення особі, яка потребує цього, ефективної кількості аналогу інкретину за будь-яким з пп. 1-14 або 17.

25. Спосіб лікування дисліпідемії, який включає введення особі, яка потребує цього, ефективної кількості аналогу інкретину за будь-яким з пп. 1-14 або 17.

26. Спосіб лікування метаболічного синдрому, який включає введення особі, яка потребує цього, ефективної кількості аналогу інкретину за будь-яким з пп. 1-14 або 17.

27. Фармацевтична композиція, яка містить: аналог інкретину за будь-яким з пп. 1-14 або 17; 1 фармацевтично прийнятний носій, розріджувач або наповнювач.

28. Застосування аналога інкретину за будь-яким з пп. 1-14 та 17 для виготовлення лікарського засобу для лікування захворювання, вибраного із групи, яку складають цукровий діабет, дисліпідемія, жирова хвороба печінки, метаболічний синдром, неалкогольний стеатогепатит та ожиріння.

29. Застосування аналога інкретину за будь-яким з пп. 1-14 та 17 для виготовлення лікарського засобу для лікування цукрового діабету 2 типу.