UA74071C2 - Method of assay; device for the realization of the method (variants); assay cartridge (variants) - Google Patents

Description

яку тестують, а тому вона призначена для використання в апараті для проведення аналізів в умовах стаціонарних лабораторій.

В основу винаходу поставлено технічну задачу створити таку касету для проведення аналізів, в якій введення нових елементів дозволило б при використанні винаходу забезпечити досягнення технічного результату, що полягає в розширенні різноманітності варіантів виконання аналізів, особливо тих, що надають кількісні результати, у місці доглядання пацієнта.

Найбільш близьким за сукупністю ознак до пристрою для проведення аналізів, що заявляється, є вибраний за найближчий аналог пристрій для проведення аналізів, що призначений для використання в апараті для проведення аналізів, який призначений для здійснення відомого способу аналізу. Відомий пристрій для проведення аналізів містить тримач касети для проведення аналізівд влаштований для прийому згаданої касети, і детектор випромінювання. В процесі аналізу тестовий реагент переносять з контейнера у піпетку і далі у комірку касети та зчитують результати взаємодії рідини і тестового реагенту.

За цими результатами роблять висновок про присутність компонента, стосовно якого проводять аналіз, у рідині зразка (патент США Ме5138868, 501С25/00, 18.08.98).

У пристрої для проведення аналізів, що заявляється, та вибраному найближчому аналогу збігаються такі суттєві ознаки: обидва пристрої містять тримач касети для проведення аналізів, влаштований для прийому згаданої касети, і детектор випромінювання.

Одержанню очікуваного технічного результату при використанні найближчого аналога перешкоджають такі причини. Відомий пристрій для проведення аналізів є частиною апарата для проведення аналізів в лабораторних умовах й призначений для оперування з касетою, призначеною для розташування у ній зразка рідини, яку тестують, а тому цей пристрій не забезпечує різноманітність варіантів виконання аналізів, особливо тих, що надають кількісні результати, у місці доглядання пацієнта.

В основу винаходу поставлено технічну задачу створити такий пристрій для проведення аналізів, в якому введення нових елементів, нове взаємне розташування елементів, форма їх виконання та взаємозв'язок дозволили б при використанні винаходу забезпечити досягнення технічного результату, що полягає в розширенні різноманітності варіантів виконання аналізів, особливо тих, що надають кількісні результати, у місці доглядання пацієнта.

З точки зору одного аспекту винаходом пропонується апарат для проведення аналізів, переважно апарат для проведення діагностичних аналізів, який включає піпетку, яка має ближній кінець та дальній кінець, джерело тиску газу, касету для проведення аналізів, яка містить принаймні одну комірку, та пристрій для проведення аналізів, який містить тримач згаданої касети, влаштований для її прийому, і детектор випромінювання. У відповідності з винаходом касета для проведення аналізів містить принаймні другу комірку та згадану піпетку, пристосовану до розташування у принаймні двох згаданих комірках, причому згаданий дальній кінець піпетки закритий проникною для рідини мембраною, а пристрій для проведення аналізів містить привід для розташовування піпетки згаданої касети у вибраних комірках згаданої касети під час дії та згадане джерело тиску газу, виконане у вигляді сполучного джерела тиску газу, пристосованого до сполучання з піпеткою згаданої касети при розташуванні останньої у тримачі касети, а детектор випромінювання спроможний визначати випромінювання з комірки згаданої касети або зі згаданої піпетки.

З точки зору наступного аспекту винаходом пропонується варіант апарату для проведення аналізів, який включає піпетку, яка має ближній кінець та дальній кінець, джерело тиску газу, касету для проведення аналізів, яка містить принаймні одну комірку, та пристрій для проведення аналізів, який містить тримач згаданої касети, влаштований для її прийому, і детектор випромінювання. У відповідності з винаходом касета для проведення аналізів містить згадану піпетку, пристосовану до розташування у принаймні одній згаданій комірці, причому згадана піпетка має капілярний наконечник, а пристрій для проведення аналізів містить привід для розташовування піпетки згаданої касети у вибраних комірках згаданої касети під час дії та згадане джерело тиску газу, виконане у вигляді сполучного джерела тиску газу, пристосованого до сполучання з піпеткою згаданої касети при розташуванні останньої у тримачі касети, а детектор випромінювання спроможний визначати випромінювання з комірки згаданої касети або зі згаданої піпетки.

З точки зору ще одного аспекту винаходом пропонується ще один варіант апарату для проведення аналізів, який включає піпетку, яка має ближній кінець та дальній кінець, джерело тиску газу, касету для проведення аналізів, яка містить принаймні одну комірку, та пристрій для проведення аналізів, який містить тримач згаданої касети, влаштований для її прийому, і детектор випромінювання. У відповідності з винаходом касета для проведення аналізів містить згадану піпетку, пристосовану до розташування у принаймні одній згаданій комірці, при цьому принаймні одна згадана комірка має дві паралельні площинні бічні стінки, з'єднані стінкою основи, яка містить принаймні одну площинну лицеву сторону, нормаль до поверхні якої є копланарною до та неперпендикулярною до нормалей до паралельних площинних поверхонь згаданих бічних стінок, а пристрій для проведення аналізів містить привід для розташовування піпетки згаданої касети у вибраних комірках згаданої касети під час дії та згадане джерело тиску газу, виконане у вигляді сполучного джерела тиску газу, пристосованого до сполучання з піпеткою згаданої касети при розташуванні останньої у тримачі касети, а детектор випромінювання спроможний визначати випромінювання з комірки згаданої касети або зі згаданої піпетки. У цьому аспекті основа комірки є переважно площинною, нахиленою під кутом до горизонталі, як описано вище, та комірка є переважно прямокутною у поперечному перерізі. Касета, крім того, переважно містить принаймні одну піпетку з капілярним наконечником та/або піпетку з наконечником з мембраною, знов як описано вище.

В окремих випадках використання апарат для проведення аналізу, що заявляється за кожним із вищезазначених варіантів, характеризується тим, що: - згадана касета містить піпетку з капілярним наконечником та піпетку з наконечником з проникною для рідини мембраною; - згадана касета додатково містить піпетку з наконечником з проникною для рідини мембраною; - згадана касета містить піпетку, дальній кінець якої закритий нахиленою проникною для рідини мембраною; - згадана нахилена проникна для рідини мембрана лежить у площині під кутом 20-40" до осі піпетки; - згадана касета містить піпетку з наконечником з проникною для рідини мембраною, мембранний кінець якого має прямокутний поперечний переріз; - згадана касета містить рознімні основу та кришку, при цьому згадані комірки розташовані у згаданій основі, а згадана кришка влаштована так, щоб утримувати згадану піпетку; - згадана кришка містить засіб для прийому піпетки з капілярним наконечником; - принаймні одна зі згаданих комірок закрита на її верхньому кінці ламким ущільненням, а згадана кришка має ніж для пробивання згаданого ущільнення; - згадана основа містить поглинальний пристрій для витирання, влаштований для витирання зовнішньої сторони піпетки з капілярним наконечником, вставленої у нього; - згадана касета містить піпетку з наконечником з проникною для рідини мембраною, ближній кінець якої закритий пробійною самоущільнювальною мембраною; - комірки у згаданій касеті влаштовано в один ряд; - згаданий детектор випромінювання включає цифрову камеру; - стінка основи принаймні однієї з комірок у згаданій касеті є площинною та неперпендикулярною до суміжних бічних стінок комірки; - згаданий апарат містить джерело світла, влаштоване для освітлення згаданої касети; - згаданий апарат містить магніт; - згаданий апарат містить нагрівач, влаштований для нагрівання згаданої касети; - згаданий апарат містить керуючий пристрій, влаштований для керування виконанням аналізу згаданим апаратом; - згадане сполучне джерело тиску газу містить поршень, розташований усередині циліндричного корпусу, та привідний двигун, влаштований для приведення до руху згаданого поршня; - принаймні одна зі згаданих комірок містить реагент для проведення аналізу об'єкта аналізу у біологічному зразку або властивості біологічного зразка; - принаймні одна зі згаданих комірок містить реагент для проведення аналізу на визначення часу згортання крові або зразка, що походить з крові; - принаймні одна зі згаданих комірок містить реагент для проведення аналізу білкового об'єкта зразка рідини тіла або зразка, що походить з рідини тіла.

При використанні апарата для проведення аналізів, що заявляється, очікується досягнення технічного результату, що полягає в розширенні різноманітності варіантів виконання аналізів, особливо тих, що надають кількісні результати, у місці доглядання пацієнта.

З точки зору одного аспекту винаходом пропонується касета для проведення аналізів, яка містить принаймні одну комірку. У відповідності з винаходом згадана касета містить другу комірку та піпетку, пристосовану до розташування у принаймні двох згаданих комірках, при цьому згадана піпетка має ближній кінець та дальній кінець, причому згаданий дальній кінець піпетки закритий проникною для рідини мембраною.

З точки зору наступного аспекту винаходом пропонується варіант касети для проведення аналізів, яка містить принаймні одну комірку. У відповідності з винаходом згадана касета містить піпетку, пристосовану до розташування у принаймні одній згаданій комірці, причому згадана піпетка має капілярний наконечник.

З точки зору ще одного аспекту винаходом пропонується ще один варіант касети для проведення аналізів, яка містить принаймні одну комірку. У відповідності з винаходом згадана касета містить піпетку, пристосовану до розташування у принаймні одній згаданій комірці, при цьому принаймні одна згадана комірка має дві паралельні площинні бічні стінки, з'єднані стінкою основи, яка містить принаймні одну площинну лицеву сторону, нормаль до поверхні якої є копланарною до та неперпендикулярною до нормалей до паралельних площинних поверхонь згаданих бічних стінок.

В окремих випадках використання касета для проведення аналізу, що заявляється за кожним із вищезазначених варіантів, характеризується тим, що: - згадана касета містить піпетку з капілярним наконечником та піпетку з наконечником з проникною для рідини мембраною; - згадана касета додатково містить піпетку з наконечником з проникною для рідини мембраною; - згадана касета містить піпетку, дальній кінець якої закритий нахиленою проникною для рідини мембраною; - згадана нахилена проникна для рідини мембрана лежить у площині під кутом 20-40" до осі піпетки; - згадана касета містить піпетку з наконечником з проникною для рідини мембраною, мембранний кінець якого має прямокутний поперечний переріз; - що згадана касета містить рознімні основу та кришку, при цьому згадані комірки розташовані у згаданій основі, а згадана кришка влаштована так, щоб утримувати згадану піпетку; - згадана кришка містить засіб для прийому піпетки з капілярним наконечником; - принаймні одна зі згаданих комірок закрита на її верхньому кінці ламким ущільненням, а згадана кришка має ніж для пробивання згаданого ущільнення; - згадана основа містить поглинальний пристрій для витирання, влаштований для витирання зовнішньої сторони піпетки з капілярним наконечником, вставленої у нього; - згадана касета містить піпетку з наконечником з проникною для рідини мембраною, ближній кінець якої закритий пробійною самоущільнювальною мембраною; - комірки у згаданій касеті влаштовано в один ряд; - принаймні одна зі згаданих комірок містить реагент для аналізу.

При використанні в апараті для проведення аналізів касети, що заявляється, очікується досягнення технічного результату, що полягає в розширенні різноманітності варіантів виконання аналізів, особливо тих, що надають кількісні результати, у місці доглядання пацієнта.

З точки зору іще подальшого аспекту винаходом пропонується пристрій для проведення аналізів, який містить тримач касети для проведення аналізів, влаштований для прийому згаданої касети, і детектор випромінювання. У відповідності з винаходом пристрій містить привід для розташовування піпетки згаданої касети у вибраних комірках згаданої касети під час дії та джерело тиску газу, виконане у вигляді сполучного джерела тиску газу, пристосованого до сполучання.з піпеткою згаданої касети при розташуванні останньої у тримачі касети, а детектор випромінювання спроможний визначати випромінювання з комірки згаданої касети або зі згаданої піпетки.

В окремих випадках використання пристрій для проведення аналізу, що заявляється, характеризується тим, що: - згаданий детектор випромінювання включає цифрову камеру; - згаданий пристрій містить джерело світла, влаштоване для освітлення згаданої касети; - згаданий пристрій містить магніт; - згаданий пристрій містить нагрівач, влаштований для нагрівання згаданої касети; - згаданий пристрій містить керуючий пристрій, влаштований для керування виконанням аналізу; - згадане сполучне джерело тиску газу містить поршень, розташований усередині циліндричного корпусу, та привідний двигун, влаштований для приведення до руху згаданого поршня.

При використанні в апараті для проведення аналізів пристрою для проведення аналізів, що заявляється, очікується досягнення технічного результату, що полягає в розширенні різноманітності варіантів виконання аналізів, особливо тих, що надають кількісні результати, у місці доглядання пацієнта.

Таким чином, комбінація пристрою для проведення аналізів та касети для проведення аналізів за винаходом являє собою апарат для проведення аналізів згідно з винаходом.

Застосування піпеток з наконечником з мембраною в аналізах є також новим та складає іще один аспект винаходу. З точки зору цього аспекту винаходом пропонується спосіб аналізу, при якому переносять рідину з контейнера у піпетку і здійснюють зчитування результатів взаємодії рідини і тестового реагенту. У відповідності з винаходом у способі використовують піпетку, дальній кінець якої, крізь який примушують рідину проходити, закритий проникною для рідини мембраною.

При використанні способу аналізу, що заявляється, шляхом здійснення його апаратом для проведення аналізів, що заявляється, очікується досягнення технічного результату, що полягає в розширення різноманітності варіантів виконання аналізів, особливо тих, що надають кількісні результати, у місці доглядання пацієнта.

Між суттєвими ознаками групи об'єктів винаходу, що заявляються, і технічним результатом, що досягається, існує такий причинно-наслідковий зв'язок.

Піпетка - це трубка з отвором на одному кінці (дальньому кінці), у який рідина може поступати при прикладанні зниженого тиску на іншому кінці (ближньому кінці). В апараті, на який посилалися вище, дальній кінець піпетки закінчується (є закритим) проникною для рідини мембраною. Ближній кінець цієї піпетки може бути відкритим або закритим, проте, якщо він є закритим, то це повинно виконуватися деяким засобом, який дозволяє прикладати тиск, який є необхідним для того, щоб піпетка функціонувала як піпетка. В одному варіанті здійснення винаходу, ближній кінець закритої мембраною піпетки є закритим самоущільнювальною мембраною (наприклад, гумовою прокладкою), яку можна пробити, а тиск можна прикладати через порожню голку, вставлену крізь мембрану. Альтернативно, ближній кінець можна закривати знімним ковпачком або пробкою, яка знімається, щоб прикласти тиск, або можна закривати ламким ущільненням, яке ламають, щоб прикласти тиск.

Касета для проведення аналізів переважно постачається користувачеві попередньо заповненою реагентами, необхідними для проведення певного аналізу або аналізів, які виконуються із застосуванням цієї касети. Якщо потребується два або більше реагентів та якщо їх не слід змішувати перед виконанням аналізу, ними можна попередньо заповнити різні комірки у касеті. Звичайно комірки будуть попередньо заповнені такими реагентами у виміряних кількостях. Такі реагенти можуть, наприклад, бути рідинами, порошками, гранулами, покриттями на стінках комірок, покриттями на гранулах або матеріалами, якими просочена мембрана піпетки або матеріалами, зафіксованими на мембрані піпетки. Там, де реагенти є рідинами, або там, де вони є схильними до руйнування під впливом повітря або вологи, касету можна герметично закрити, щоб запобігти витіканню рідини або доступу повітря або вологи до чутливого реагенту.

Така герметичність досягається шляхом створення касети з основою, що містить комірку, та кришкою, що покриває комірку, та, якщо необхідно, шляхом розташування непроникного для рідини ущільнення, наприклад, О-подібного кільця, між отворами комірки в основі та кришці, що покриває комірку, та, якщо бажано, шляхом розташування знімного ущільнення, наприклад, клейкої ущільнювальної стрічки, навколо зовнішнього з'єднання між кришкою та основою. В іншому більш переважному варіанті здійснення винаходу одну або більше комірок перед застосуванням можна закрити фольгою: у цьому варіанті здійснення винаходу кришка, що покриває комірку, переважно є обладнаною ножами фольгового ущільнення для різання фольгових ущільнень, що покривають комірки, щоб можна було вставити піпетку в ці комірки.

Альтернативно, кришка може мати пружний матеріал у тих місцях, що відповідають верхнім кінцям комірок (або тільки комірок, що містять рідину), так що коли кришку та основу стискають разом, на верхніх кінцях комірок утворюється непроникне для рідини ущільнення. Такий матеріал може бути, наприклад, шаром, нанесеним на кришку або дисками або прокладками, прикріпленими (наприклад, привареними або приклеєними) до кришки. В одному варіанті здійснення винаходу нижня поверхня кришки має пружні виступи, які спроможні функціонувати як пробки для комірок. Таким чином, пробки служать для утримання кришки та основи разом до початку застосування водяної пари (при 23"С та 8595-вій відносній вологості, яку вимірюють згідно з СІМ 53122 на зразку 80х80хХ1ММ), яка б становила менш ніж 0,2г мм м? доба", більш переважно менш ніж 0,05г мм м? доба".

Звичайно, комірки будуть мати внутрішній діаметр від З до 20мм, особливо від 5 до 15мм, та об'єм від 01 до Бмл, особливо 0,5 -1,5мл.

Піпетка з наконечником з мембраною у касеті за винаходом є переважно циліндричною, та мембрана переважно знаходиться у одному кінці або більш переважно покриває його. Інший, відкритий, кінець переважно має форму під практично герметичне для газу приєднання до сполучного джерела тиску.

Піпетка може бути виготовленою з будь-якого прийнятного матеріалу, проте перевага віддається прозорій пластмасі або склу. Мембрана може приєднуватися до піпетки будь-яким придатним способом, наприклад, шляхом зварювання (наприклад, ультразвуковим зварюванням або термічним зварюванням), приклеювання, розплавлення гранульованого попередника мембрани тощо.

Сама мембрана може бути виготовленою з будь-якого придатного матеріалу, наприклад, пластмаси

(наприклад, з нейлону, полісульфонів тощо), скла (наприклад, скловолокна), металу тощо. Проте, особлива перевага віддається целюлозним мембранам (наприклад, зміцненій нітроцелюлозі), тому що на таких матеріалах відносно просто фіксувати антитіла або інші реагенти аналізу.

У різних варіантах здійснення винаходу мембрана є переважно площинною та перпендикулярною до осі піпетки, такі мембрани є особливо ефективними для видалення рідини з горизонтальної комірки з плоским або вгнутим дном.

Мембрана, проте, може альтернативно та більш переважно бути площинною, проте знаходитися під кутом до осі піпетки, наприклад, до 85" від перпендикуляру, більш переважно 50 - 70" від перпендикуляру, особливо біля 60" від перпендикуляру, тобто переважно згадана нахилена проникна для рідини мембрана лежить у площині під кутом 20 - 40" до осі піпетки. Якщо піпетка та одна або більше комірок є прямокутними (наприклад, квадратними) у поперечному перерізі, переважно, щоб мембрана була нахиленою під кутом, та основа однієї або більше таких комірок також була під нахиленою кутом, так щоб бути практично паралельною до мембрани, коли піпетка знаходиться у цій комірці.

Застосування нахиленої під кутом мембрани є особливо переважним, тому що при певній площі поперечного перерізу певної піпетки площа поверхні мембрани збільшується тим більше, чим під більшим кутом від горизонталі вона знаходиться, тим самим збільшуючи площу поверхні, яку слід зчитувати або за якою здійснюють моніторинг під час аналізу. Найбільш дивно, що нахилені мембрани не тільки дозволяють поглинати крізь мембрану практично увесь вміст комірки з відповідною формою, але вони зумовлюють і те, що поглинання є однорідним крізь мембрану товщину в основі комірки (тобто між бічною стороною та нахиленою основою). Отже, довжину шляху світла крізь комірку можна збільшити або зменшити шляхом переміщення видимої секції уверх та униз. Таким чином, наприклад, чим вище оптична густина вмісту комірок, тим коротшу довжину шляху можна обрати.

Крім того, шляхом вимірювання значення прозорості для світла на двох або більше шляхах різної довжини (наприклад, або у межах, або поза межами нахиленої частини основи комірки) можна визначити та скоректувати вплив стінок комірок на сигнал, що визначається.

Якщо слід визначити розсіяне світло (наприклад, якщо зразок, який зчитується, містить частинки або агломерати або є флуоресцентним або фосфоресцентним), знов буде бажаним застосовувати комірки з прямокутним поперечним перерізом, де падаюче світло спрямовано перпендикулярно до однієї пари стінок комірки, а розсіяне світло визначається детектором (наприклад, цифровою камерою), спрямованим на одну з інших стінок. Якщо касета містить розташовані в один ряд комірки, комірка для зчитування для вимірювань розсіювання світла знаходиться переважно на одному з кінців ряду.

Застосування нахилених під кутом стінок комірок є також новим та складає наступні аспекти винаходу.

Окрім піпетки з наконечником з мембраною касети за винаходом можуть містити іще одну або більше піпеток, які знов переважно утримуються кришкою касети, наприклад, для вимірювання точного об'єму реагенту або зразка або для змішування реагентів та зразків. В одному переважному варіанті здійснення винаходу касета містить піпетку з капілярним наконечником, яка всмоктує бажану кількість рідини зі зразка завдяки капілярному ефекту. Особливо бажано, коли касета містить капілярний отвір у камері більш широкого внутрішнього діаметру, так щоб внаслідок капілярного ефекту заповнювався лише капілярний наконечник. Коли наконечник вилучений з рідини, яка його оточувала, вміст наконечника можна потім впорснути у комірку касети під тиском або всмоктати далі у піпетку за межу капілярного наконечника та камери.

В іншому аспекті винаходу касета може включати піпетку з капілярним наконечником замість піпетки з наконечником з мембраною. Як буде далі обговорюватися, таку касету можна, наприклад, застосовувати для аналізу на визначення часу коагуляції.

Зовнішній діаметр піпетки з наконечником з мембраною переважно є принаймні на 0,дмм, наприклад, на 1-5мм, особливо на 1,5-2,5мм меншим за внутрішній діаметр комірок, так щоб сприяти протіканню газу між стінкою комірки та піпеткою під час перенесення рідини крізь мембрану піпетки та щоб забезпечити практично повне підіймання рідини з комірок. Проміжок також дозволяє комірці містити рідину (наприклад, 200мкл) та піпетку з наконечником з мембраною перед підійманням рідини у піпетку.

Незважаючи на те, що піпетка та комірки можуть мати однакову форму поперечного перерізу (тобто кільцеву, квадратну тощо), іноді може бути переважним, щоб їхні форми незначно різнилися, наприклад, щоб одна форма була кільцевою, а інша овальною, тому що це зменшує ризик того, що внаслідок всмоктування піпетка з наконечником з мембраною буде утримуватися завдяки присмоктуванню до дна комірки. Цю проблему можна також вирішити, зробивши наконечник піпетки або утворити дзеркальну поверхню (наприклад, пластмасову призматичну поверхню) під дном комірки зчитування, яка відбиває світло з дна комірки зчитування, наприклад, з вертикалі до горизонталі. Таким чином, немає необхідності розташовувати детектор нижче касети, завдяки чому можна вирішити проблеми, пов'язані з осадженням пилу або рідини на детекторі. Як у випадку з лінзою Френеля, призму можна подібним чином виготовити, як інтегральну комбінацію паралельних окремих призматичних елементів. Цю призматичну структуру у описі цього винаходу позначено як "призма Френеля", та такі призми та способи їх застосування, наприклад, як модифікаторів оптичного шляху в оптичному апараті, наприклад, пристрої для проведення аналізів, складають наступні аспекти цього винаходу. Деформування зображення внаслідок деформації поверхні, яку часто можна спостерігати у пластмасових формовках з товщиною більш ніж декілька міліметрів, зменшується або його можна уникнути завдяки застосуванню пластмасової призми Френеля на відміну від традиційної пластмасової призми, що має площу поверхні з таким самим кутом падіння світла. Отже, застосування призми Френеля, утвореної в основі касети з метою досягти відбиття світла, є особливо переважним у пристроях за винаходом. Звичайна "призма Френеля" - це структура з прозорого матеріалу, східчаста з одного боку та плоска з іншого - світло, що перпендикулярно падає на горизонтальну частину сходинки, внутрішньо відбивається плоскою поверхнею та виходить перпендикулярно крізь вертикальну частину сходинки. Завдяки цьому ефекту вона функціонує як дзеркало. Проте, у випадку з нахиленою мембраною потреба у такій призмі Френеля взагалі відпаде.

У касеті за винаходом ближній або "відкритий" кінець принаймні однієї піпетки переважно закривається пружною самоущільнювальною мембраною, наприклад, гумовою мембраною, яку можна проткнути порожньою голкою, щоб надати можливості прикласти тиск газу. У цьому варіанті здійснення винаходу резервуар для відпрацьованої рідини переважно розташовують у піпетці між наконечником піпетки та пружною мембраною. При такому варіанті здійснення винаходу рідина у касеті може всмоктуватися у резервуар для відпрацьованої рідини під час або наприкінці виконання аналізу, так що касету, яку застосовують, можна видалити та розташувати, уникаючи при цьому витоку відпрацьованої рідини.

Сполучне джерело тиску газу в пристррі для проведення аналізу за винаходом примушує рідину проходити крізь згадану мембрану і може, наприклад, включати помпу, та трубку від помпи до місця приєднання касети, та необов'язково принаймні один резервуар, та двопозиційний або багатопозиційний клапан. Застосування резервуара, який, наприклад, має об'єм в один або більше літрів, та переважно принаймні двох резервуарів дозволяє прикладати тиск, який є більшим. Касету можна потім закрити та розташувати у пристрої для проведення аналізів. Другий капіляр або одна з комірок у касеті покрита агентом, що сприяє згортанню (наприклад, тканинним фактором), та рідкий зразок може контактувати з ним завдяки прикладанню тиску, нижчого або вищого за тиск навколишнього середовища, відповідно до відкритого кінця піпетки. У першому випадку тиск примушує зразок втягуватися крізь камеру в другий капіляр та тим самим контактувати з агентом, що сприяє коагуляції. У другому випадку тиск, що прикладається, витісняє зразок у покриту агентом комірку. Якщо бажано, у другому випадку зразок та агент, що сприяє коагуляції, можна змішати, втягнувши назад у піпетку та витискуючи знов один або більше разів.

Після цього зразок втягується крізь капілярний наконечник та камеру в другий капіляр. В обох випадках за рухом зразка у другому капілярі під дією прикладеного тиску слідкує детектор -коагуляція буде тривати доти, доки рух не буде далі визначатися. Для цього може бути необхідним, щоб зразок переміщувався назад та уперед у другому капілярі завдяки переміжному прикладанню вищого та нижчого за тиск навколишнього середовища тиску.

Отже треба відзначити, що один й той же самий капіляр можна застосовувати як для набирання зразка (наприклад, крові), так і для змішування його з одним або більше реагентів (наприклад, шляхом накачування його у комірку касети та всмоктування з неї).

У будь-якому випадку, для вимірювання тривалості коагуляції важливо, щоб температура зразка регулювалася, а тому бажано, щоб пристрій, наприклад, у тримачі касети, був обладнаним приладом регулювання температури, наприклад, нагрівачем з термостатом, джерелом гарячого повітря тощо.

В альтернативному варіанті здійснення винаходу тривалість згортання крові або плазми можна визначити шляхом розташування зразка у комірці, що містить спінювач, та шляхом слідкування за швидкістю підйому генерованих бульбашок із застосуванням цифрової камери.

Якщо застосовується піпетка з капілярним наконечником, то може бути бажаним, щоб її влаштовували окремо від касети, так щоб вона була спроможна до розташування у комірці та до сполучання зі сполучним джерелом тиску.

Такі піпетки з капілярним наконечником та їх застосування у поєднанні з касетами для проведення аналізів складають наступні аспекти винаходу.

З точки зору іще одного аспекту винаходом також пропонується касета для проведення аналізів, яка містить принаймні одну, а переважно принаймні дві комірки та піпетку, спроможну до розташування у принаймні одній, а переважно у принаймні двох згаданих комірках при цьому згадана піпетка має капілярний наконечник.

Застосування піпеток у касетах для проведення аналізів за винаходом, отже, надає можливість вводити досліджувані зразки у комірки касети, перемішувати реагенти або реагенти та зразок у комірках, переносити рідини з однієї комірки в іншу тощо. Шляхом закачування рідин у піпетку та викачування рідин з неї в одній комірці можна покращити однорідність рідин, що змішуються, а завдяки прокачуванню рідин назад та уперед крізь мембрану піпетки, що містить реагент, можна збільшити тривалість реакції з реагентом.

Шляхом зміни швидкості, з якою рідина прокачується крізь мембрану піпетки, що містить реагент, можна також змінювати час взаємодії з реагентом. Отже, формат піпетки та касети зумовлює велику різноманітність варіантів виконання аналізів.

Якщо касета для проведення аналізів містить піпетку з капілялрним наконечником, наприклад для перенесення зразків крові, часто бажано видаляти надлишок рідини із зовнішньої поверхні капіляра. У таких випадках переважно, щоб одна з комірок була обладнана поглинальним пристроєм для витирання піпетки, уздовж якого можна протягнути капілярний наконечник, так щоб пристрій для витирання поглинав рідину, розташовану на зовнішній поверхні капіляра. Цей пристрій для витирання, наприклад, може приймати форму поглинальної прокладки, розташованої на верхньому кінці комірки або поряд з ним, наприклад, О- подібної прокладки, переважно з канавкою у основі Ш. При такому варіанті здійснення винаходу, коли капіляр витягують з комірки, його можна розташувати збоку, так щоб капілярний наконечник увійшов у канавку. Оскільки таке переміщення може виникнути до того, як піпетку з мембранним наконечником повністю витягнуть з потрапить в основу комірки. Другу піпетку з капілярним наконечником, закріплену на кришці, можна потім застосовувати, щоб забрати фільтрат назад після того, як піпетку та подовження піпетки буде вилучено з комірки. Таким чином, маючи на початку зразок крові, можна отримати зразок нерозведеної плазми.

Поряд з подовженнями піпеток, пристроями для витирання капіляру тощо, інші деталі можна розташувати у межах комірок касети. Отже, наприклад, комірка для прийому капіляру зі зразком може містити іще одну фіксовану або знімну комірку, що містить висушений реагент, так щоб зразок та цей реагент можна було б змішати на початку виконання аналізу.

Апарат, пристрій та касета за винаходом призначені для застосування у способах аналізу. Такі способи, що застосовують апарат, пристрій або касети за винаходом, складають наступні аспекти винаходу.

Незважаючи на те, що винахід є особливо придатним для медичних діагностичних аналізів, його також можна застосовувати для інших аналізів, наприклад, для проведення аналізів навколишнього середовища, харчових продуктів, тощо, включаючи аналізи зразків виробничих процесів. Він є особливо придатним для такого застосування, тому що касети та пристрої можна виготовити так, щоб вони були достатньо компактними, тобто щоб вони були повністю переносними, наприклад, щоб максимальний розмір пристрою (без будь-яких з'єднань із зовнішнім обладнанням або джерелами енергії) не перебільшував ЗО см, більш переважно - 20см.

З точки зору іншого аспекту винаходом також пропонується застосування апарата за винаходом для проведення аналізу об'єкта аналізу у біологічному зразку або властивості біологічного зразка, наприклад, для проведення аналізу на визначення часу згортання крові або зразка, що походить з крові, або для проведення аналізу білкового об'єкта зразка рідини тіла або зразка, що походить з рідини тіла.

Документи, на які посилаються, включено в цей опис шляхом посилання.

Приклади апарата та способів згідно з винаходом буде далі проілюстровано з посиланням на наступні необмежувальні приклади та креслення, що їх супроводжують, де:

Фігура 1 - це схематичний поперечний переріз касети за винаходом;

Фігура 2 - це схематичний частковий поперечний переріз касети за винаходом;

Фігура З - це схематичний частковий поперечний переріз касети за винаходом;

Фігура 4 - це схематичне зображення апарата за винаходом;

Фігура 5 - це схематичний поперечний переріз касети за винаходом;

Фігури 6 та 7 демонструють криві залежності "доза-ефект" для аналізів з прикладів 1 та 2;

Фігура 8 демонструє результати аналізу з прикладу 3;

Фігури 9 - 19 - це схематичні зображення подальших варіантів здійснення касет за винаходом, у яких комірки розташовані в один ряд;

Фігура 20 - це схематичне зображення, яке демонструє, як рухомий магніт можна застосовувати для відокремлення магнітних полімерних кульок від зразка у комірці касети за винаходом;

Фігура 21 - це схематичне зображення, що демонструє, як паперову стрічку можна застосовувати для витирання надлишку рідини ззовні капілярної піпетки у касеті за винаходом;

Фігури 22 - 25 - це схематичне зображення, що демонструє, як закритий мембраною резервуар для відпрацьованої рідини може утворювати частину піпетки у касеті за винаходом;

Фігура 26 - це схематичний повздовжній переріз піпетки з капілярним наконечником для застосування у касеті для проведення аналізів за винаходом.

Звернемося до Фігури 1. На ній зображено основу 1 прозорої пластмасової циліндричної касети, що містить циліндричні комірки 2 (тільки дві з них зображено), розташовані по колу навколо вісі З касети. Над основою 1 касети знаходиться кришка 5 касети. Горловини кожної комірки закриваються ущільненнями 4, прикріпленими до кришки 5. Кришка 5 також утримує піпетку б, при цьому ззовні кришки встановлене подовження відкритого кінця 7 піпетки для сполучного джерела тиску, а кінець наконечника піпетки з мембраною 8 розташовується у комірці 2 основи 1. Отвір 9 для введення зразка також знаходиться у кришці 5. Отвір 9 та піпетка 6 утримуються у заданому положенні відносно комірки 2 завдяки виступам та/або заглибинам 10, 11, 12, 13 для стикування. Подібні виступи та/або заглибини 14 для стикування (зображені як заглибини) влаштовано в основі 1 та кришці 5, що дозволяє основі та кришці приєднуватися до тримача касети та приводу (не зображено) апарата для проведення аналізів. Основа та кришка обладнані фланцями 15 для зціплення з роз'єднувачем (не зображено), який відштовхує одне від одного основу та ущільнення кришки перед початком виконання аналізу. Зображено, що піпетка та отвір для введення зразка закриваються знімними ущільненнями 16 у вигляді стрічок. Вони видаляються перед застосуванням касети. Вид аналізу, для якого призначається касета, позначається штрих-кодовою наклейкою 17 на боці основи.

На Фігурі 2 касету з фігури 1 зображено в іншому положенні для зчитування результатів аналізу в кінці виконання аналізу. У цьому положенні показано, що комірки 18 та 19 відрізняються від комірок 2 на Фігурі 1.

Комірка 18 - це "комірка для зчитування", яка має пластмасову призму 20, розташовану біля її основи, та частина шляху світла від мембрани до детектора зображена пунктирною лінією 21. Показано, що піпетка 6 містить реагент 22, що застосовується. Показано, що джерело світла 44 розташовано усередині аксіального каналу 45 в основі касети.

На Фігурі З зображено інший варіант здійснення касети з фігури 2, у якому дно комірки 18 для зчитування є східчастим, а основа нижче комірки 183 для зчитування є нахиленою, що разом утворює призму Френеля 29. Джерело світла 46 пристосовано для освітлення мембрани. У цьому варіанті здійснення також зображено піпетку, яка має відносно великий об'єм камери 47. Це сприяє утриманню у піпетці рідин, які застосовуються у аналізі.

На фігурі 4 компоненти апарата за винаходом - касету та пристрій для проведення аналізу - зображено схематично. Касета 23 (з основою 1, кришкою 5 та піпеткою б) утримується за допомогою тримача 24 касети пристрою для проведення аналізу та приводиться до руху завдяки приводу 25. Піпетка 6 приєднана через трубки 26 до поршневої помпи 27, яка приводиться до руху двигуном 28. Детектором є цифрова камера 32, влаштована для детектування світла з комірки зчитування касети 23, коли аналіз завершено, а джерела світла 44 та 46 з джерелом живлення 34 застосовуються для освітлення комірки зчитування.

Роботою приводу 25, двигуна 28, камери 32 та джерела живлення 34 керує комп'ютер 35, який виводить кінцеву інформацію на монітор/лринтер 36 або на віддалений комп'ютер 37 (наприклад, шляхом інфрачервоного бездротового зв'язку). Камера 32, джерела світла 44 та 46, тримач 24 та касета 23 знаходяться усередині непроникної для світла камери 38, що має отвір 39 для завантаження та розвантаження касети.

Фігура 5 зображує поперечний переріз альтернативної піпетки з капілярним наконечником, яку можна застосовувати у касетах за винаходом.

Відкритий кінець 7 піпетки влаштований так, щоб приєднуватися до сполучного джерела тиску. Інший кінець піпетки має капілярний наконечник 40, що сполучається з камерою 41, а потім через іще один синусоїдальний капіляр 42 з відкритим кінцем 7. Частина 43 основи комірки 2 покрита агентом, що сприяє коагуляції, наприклад, тканинним фактором. Занурення капілярного наконечника 40 у кров або плазму примушує зразок фіксованого об'єму втягуватися завдяки капілярної дії. Вилучення піпетки із зразка подальшим всмоктуванням зразка назад у капіляр або всмоктування у капіляр зразка після тканинного фактору прискорює початок коагуляції, та цифрову камеру можна застосовувати для визначення часу, при якому рух зразка уздовж капіляра 42 ефективно припиняється, тобто для визначення часу коагуляції.

На фігурах 9-19 зображено альтернативні влаштування касети для проведення аналізів, у якій комірки розташовані у ряд.

Фігура 9 зображує знімну піпетку 50 з капілярним наконечником, яку можна занурити у рідину, щоб узяти зразок. Навантажену піпетку можна потім вставити в отвір 51 у кришці 52 касети, тим самим поміщаючи капілярний наконечник у кінцеву комірку в основі 53 касети. Відкритий верхній кінець піпетки 50 має такі прорізи 54, що, коли оператор з'єднує піпетку з основою та кришкою касети шляхом натискання на верхівку піпетки, це не підвищує тиск у піпетці та не витискує передчасно деяку кількість або увесь зразок. Фігура 10 демонструє касету з фігури 9, зібрану після вставлення піпетки із зразком, тобто на етапі, коли касета готова для розташування в апараті за винаходом.

Під час виконання аналізу основа та кришка касети будуть відокремлюватися шляхом виведення із зчепленого стану механізму защіпки 74. Роз'єднана касета зображена на фігурі 11. Зображено, що кришка 52 касети має піпетку 50 з капілярним наконечником та піпетку 55 з наконечником з мембраною. Піпетка 55 з наконечником з мембраною є прямокутною у поперечному перерізі та має зрізаний під кутом наконечник 56. Для ясності мембрану, що покриває відкритий нижній кінець піпетки 55, не зображено. Зображено, що основа 53 касети має шість комірок 57 - 62, які усі є практично прямокутними у поперечному перерізі. Для того, щоб здійснити витирання капілярного наконечника, частина верхньої секції стінки між комірками 57 та 58 відсутня. Як зображено на фіг. 12, основи 63 комірок 59-62 є нахиленими під кутом так, що вони є паралельними до наконечника 56 піпетки з наконечником з мембраною. Комірки 59-62 закриті тонкою плівкою на їхніх верхніх кінцях. Тонка плівка пробивається під час виконання аналізу пробійниками 64, які спочатку кріпляться у кришці касети (дивись Фігуру 13). Окремі пробійники з'єднані разом у рядок 65, зображений на фігурі 14. Кожен пробійник, який може бути металевим, проте переважно - пластмасовим, є прямокутним у поперечному перерізі порожнім циліндром з крайкою 6б ножа на нижньому кінці та фланцями 67 на верхньому кінці, що дозволяють основі касети утримувати пробійник, коли його з'єднують з основою (як зображено на фігурі 15). Внутрішній поперечний переріз пробійників має таку форму, щоб вони діяли як напрямні для піпеток.

Фігура 16 демонструє основу та кришку касети, що відокремлюються зі зміщенням, щоб капілярний наконечник піпетки 50 контактував з поглинальним пристроєм 68 для витирання, розташованим угорі комірки 57. Як зображено, піпетка 55 з наконечником з мембраною частково зміщена від комірки 58 у комірку 57.

Фігури 17 та 18 - це тривимірні зображення вузлів основи та кришки касети з подовженнями 69 та 70 піпетки, які під час застосування будуть розташовуватися у комірці (57), у яку піпетка 50 зі зразком первинно вводиться. У випадку фігури 13 подовження 70 піпетки служить для перетворення піпетки зі зразком у піпетку з наконечником з мембраною, наприклад, щоб зразок можна було фільтрувати.

На фігурі 19 зображено нижні кінці трьох комірок, влаштованих для виконання аналізу згортання крові.

Вони мають на фігурах 19(А) та 19(В) сталеву кульку 72, яку можна переміщувати уздовж основи комірки, а на фігурі 19(С) полімерну кульку 73, яка буде спливати на поверхню зразка доти, доки він буде залишатися рідким.

Після виконання аналізу із застосуванням касет з фігур 9-19 поглинальну стрічку переважно вставляють в отвір 51 у кришці касети так, щоб запобігти будь-якому просочуванню рідини, що залишилася у комірках 58-62. Альтернативно, отвір може бути закритим подовженим "поршнем", який застосовують для продавлювання пробійників крізь фольгові ущільнення комірок 58-62.

На фігурі 20 зображено комірку 75 у касеті за винаходом. Ця комірка містить рідину 76, яка містить магнітні полімерні кульки. Для того, щоб відокремити кульки від рідини під час виконання аналізу (наприклад, як у прикладі 12, який описано нижче), магніт 77 переміщують з позиції (А), у якій він є віддаленим від комірки, у позицію (В), у якій він контактує зі стінкою комірки. Піпетку з наконечником з мембраною можна потім вставити у комірку та застосовувати, щоб забрати назад рідину, яка залишилася поза магнітними кульками.

На Фігурі 21 схематично зображено касету 78 за винаходом з розташованими у один ряд комірками 79 - 84, кінець однієї, 79, з яких влаштований для прийому капілярного наконечника 85 зі зразком, який зображено. Усередині комірки 79 розташовують М-подібно зігнений поглинальний папір 86, так що після вставлення капілярного наконечника 85 у комірку 79 боки капіляру витираються.

На Фігурах 22 - 25 частково та схематично зображено касету 87 за винаходом, яка має піпетку 88 з капілярним наконечником та піпетку 89 з наконечником з мембраною у кришці 90 касети. Піпетка 89 з наконечником з мембраною має ближче до її ближнього кінця резервуар 91 для відпрацьованої рідини, та коли вона знаходиться у межах кришки 90 касети, резервуар закривається самоущільнювальною гумовою прокладкою 92. Якщо треба прикласти тиск до ближнього кінця піпетки 89 з наконечником з мембраною, то це виконується шляхом пробивання прокладки 92 порожньою голкою 93, приєднаною до сполучного джерела тиску (не зображено).

На Фігурі 26 зображено піпетку 94 з капілярним наконечником, яка пропонується як частина касети для проведення аналізів за винаходом. Користувачеві піпетка 94 постачається як піпетка, знімним чином розташована в одній комірці, наприклад, як піпетка 50 у комірці 57 у варіанті здійснення з Фігури 11. Дальній кінець 95 піпетки 94 має рукав 96, який оточує та щільно насаджений на капілярний наконечник і закінчується на одному рівні з кінцем капіляру. Верхній кінець рукава 96 має здатний до деформування фланець 97, який можна проштовхувати у відповідний фланець у комірці, так щоб закрити рукав у комірці.

Під час застосування піпетку з капілярним наконечником вилучають з касети разом з приєднаним рукавом 96, який занурюють у рідкий зразок, щоб набрати рідину у капілярний наконечник, та переміщують у комірку і притискують, щоб закрити рукав у комірці. Касету можна потім завантажити у пристрій для проведення аналізів, та під час виконання аналізу відокремлення основи та кришки касети служить для роз'єднання рукава та капіляру.

Приклад 1

Аналіз на С-реакційноздатний білок у сироватці

Зразки об'ємом 1мкл крові людини, з доданим очищеним С-реакційноздатним білком до концентрації від 0 до 16бОмг/л, розташовують у комірці з закругленим дном та внутрішнім діаметром 9мм (у касеті для проведення аналізів, що є еквівалентною до касети з фігури 1), яка містить 200мкл розведеної водою рідини (ЗОмММ боратного буфера, рн 8,0, що містить 0,0195 маса/об'єм цитрату натрію, 0,0295 маса/об'єм макмз та дезоксихолат).

Піпетку з наконечником з мембраною, що має зовнішній діаметр 7,2мм, опускають у комірку, що містить зразок, та до відкритого кінця піпетки прикладають тиск, нижчий за тиск навколишнього середовища, примушуючи вміст комірки текти крізь мембрану у піпетку. У цьому прикладі мембрана піпетки - це лист нітроцелюлози, на якому зафіксовано моноклональне антитіло анти-С-реакційноздатного білка (яке приготували за стандартними способами).

Піпетку потім вилучають з комірки та опускають у другу комірку такої ж самої конфігурації, що містить 200мкл водної дисперсії золотих мікрокульок (середній діаметр 4,5нм, концентрація (оптична густина при 540нм) приблизно 3, що відповідає концентрації антитіла приблизно 50мкг/мл у 50мММ боратного буфера, рн 8,05, що містить 20мМ масі, 0,0595 маса/об'єм МамМз та 0,195 маса/об'єм бичачого сироваткового альбуміну), кон'югованих за традиційним способом 35 тв отв ів 1233 ди іч я я и ий Ти 1 и» ук Я й ит, их - дм те А Ще ЧК ї- | ! | т. чне й -я тя па о У ве | о зклКг? «ШЕ: чо шкі ой ву о зл о А ря 28 ке

Фі

Ди 7 ї. пити А жі к Ки ди у ка

ПІВ ра й ді Ева а

І Р Я - | зо !

ОКУХІг а її ; ДЯ т Ке ! -3 я Ь

ЩЕ рі А сь. 71 ни зо шин:

Фіг 47 , Й 4 Потуттяя ТУРИ лий тя ї ре й й, р р й Й Ка пови пи я

Де

Й :

Я: і Ч т Кл ї ще й З ,. і о К у: ки :чщ ше кн

ЕН хо і

З Б ще - 1 Еж че з, ль Лу ке

Н 23 " / /

І уч фіг, З вх я? -- КЕ Ес У и ООН ОЗ

ЩЕ одн вт Ей пон -32 б м Енн З зр ТІ дощ зв і З 51 1) ПК ення ТЕ сект КЕТІ ПЕК очи й оче з

За

Фіг 4 й

В: і і й раки Яр» Й й

А р Ка ак у, у 7, ї м ж Кий гад !

М пед иидлоия Гий ві й Щ----Х

К кі хо ї г Б в Н 1 че а І і: Я що | че мч я я ї то що я 2 Ж ше ин Вл ня і в» 11 кю зв У і 2

Фіг. 8

ЗБОЮ др тт няння

Е г ра я 2000 фронтит з а і | в. ся нини нн

КЗ І в ! ві сі ! овен нн г | ра

ЕН ій | і ге ан в

Й фонтан тут ртутні й 28 340 по 80 400 320 340 55

С-рзакційноздатний білок (мг)

Фіг 6

Воза-вфеки альбумін у сечі

ТВО ренту пен ерннтнннттня т З 8 їбщю пиши пили ние дент й 1408. пивних шини дрантя пен г

Кс нини і -йЯ

КЕ Що !

З 1 - і о ОО Єр феттттютттттрентттнянятннтя (

Ж в птн пи ВИ киев хх ь зок птн

ВО др няня нн п ' діння повно пн нвовн укн повинно а Би Мк. їза го

Ак»збумін у сені (агіт

Фіг? тн а ще

ЖЖтх аЕ и

ЕЕ й, і 558 | ат

БІ ст пі

ЩОБ біти - 8 ха р Я /-- Ж е 34 - (АХ 4 - - -- 5

НИ ее рн ння й сон пов зн пи АННИ,

З т 4 й З 73 12 18 те снікононаго гимогтобіну у засхльному гемоглобіні,

ВЕРХ, варіант Віс Бай «Вік; В 58 : З зр не

ЩІ І

, ї. 5о ще це

Ї і Еш п ши пабі дж родео

К ме дак Щ

Я - р-н 3 о су | х

М й де ситу З

АЧИИ | сн а нт гла

Ин ! І -р-з

І нн пов

Фіг. З

Маша и и нан і торент 5а-ї 1 Х 4 сн ЕН

ОА - о !

У

Ше | і і тя / ; і

І. ще руде дит «вік. 10 соди інж дчйасннн щі Ц -- Ве

І ї ши Її 1 Ї ре

ЩІ Н ШУ оту Ц-- НІ ше

СИ АН- кс вия г М

ІН. й й те ві че 50. І

БВ з

З МИ й вч що ет щ. Е пунк

Сх Но - в кт се | ! чі ! ї і ЩІ рей і МИТИ я ріг ши а ї есте КО ет у 1: ооо копав нЙ й т ЩІ НЩ | ко

М Шо НЕ и ЕЕ ВН ЕН І; НА дон ро і ї чій хто МН и НІ нн не: НИ НЕ НЕ Н ЕЮ

Ж: ПИ ЯН НК ВИ НН НЕ ! І кН гі ще нини не НЕ Я и шини шина нн ! ІЙ Н ї у о не не МО

І | п х Мр ийх пй НА Му

Зк НН НН Не: І ДЕ ИН, й І Ко з; п НІ що шин прин лен жк ВИН ов НИ ДНЯ й ие ТЕ одн іх ! КО шин

Мсплдн «фіг 2

ШІ

Ек ф. за у Ша р-- ус -

Я дак що о. у і Є тн х ше Ух х ; ши я МА сус В Ессе, я СО Ка аа 8 | га Се она пише ас ле ле

НН 1 в СУ Ук БРА хх

ДЕ і Ше зи

Ще мае й і ше шк й ще у ій і КЕ

ЦЗ цн х А ! що і сн НН рн фіг вв шин і є НІ і А МЕ ша р р - ІМ Ма ше я ес СОН ке ух, ла іс

Фіг 14 й

Я, і . Шу « ея їй «У ще і

Пенн ! і шШя ЩІ

Фіг 18 /й ТЕ 5 рентою у нин АННИ ї І Ж : ях і Ії ик

Ж ЧІ Ох м шиї

І ве: ЛІ т ! 5а

ЦЯ вне! ровно ств АОС

І НО у ! щ- ї ! 0000 Шу пов ни

Фіг 18 пий

ШТ з са

Й, .

ІЙ кшве сов ще х | ї

І о рей

Фік 17

Ще 57. | - п

ЩІ

. . т ї- чок

І Ї ЇЇ ТОП пен (с

Фіг 19

В

(їх) (в)

КЕ

ЩІ їх я

Фік. 20 во

КН ніш ст

І

7 ю в 83 в фіг, 21 жор яв 4 У 4 а

АС фе п ди вжи М Ст воском

Ко дн У !

М Ме дна и

Фіг. 2 с

М

Фк. 23 Б т ЕТ з да сети

М і. Ка о іш шия

Ш й

ТБ, КО щи зв З

ШІ ТБ55-526

З

48 ща

Фіг 24 ;

Тр-з

СІ ЗА те шити оця 5: М

Фіг. 25 ; шк ій

Те ву х ї у Я де

Фіг. 265