WO1998024467A1

WO1998024467A1 - Remedies for fulminant hepatitis

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Publication number: WO1998024467A1
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Authority: WO
Inventors: Toshikazu Nakamura; Kunio Matsumoto; Kenichiro Kosai
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Publication date: 1998-06-11
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Also published as: JP4463885B2; JPH10167982A

Description

― 明細書劇症肝炎疾患治療剤技術分野

本発明は劇症肝炎疾患治療剤に関する。より詳細には、肝実質細胞増殖因子（Hepatocyte Growth Factor, 以下、 H G Fという）を有効成分として含有し、劇症肝炎の治療及び予防に有用な劇症肝炎疾患治療剤に関する。背景技術

肝臓は糖新生、アミノ酸代謝、脂質代謝、さらには血漿蛋白の合成、分泌、胆汁の生成分泌、解毒、エネルギー源としての糖の貯蔵、ビタミン類の貯蔵など多くの生理機能を有する生体にとって必須の臓器である。この臓器はウィルス感染や長期にわたるアルコール摂取などが原因で肝炎を発症する。

劇症肝炎は、肝炎ウィルスや薬物が原因となって、肝細胞の広帆な壊死と脱落をきたす重篤な肝障害で致命率が高い。第 1 2回犬山シンポジウム ( 1 9 8 1年 8月）の診断基準では、激症肝炎とは、肝炎のうち症状発現後約 8週間以内に高度の肝機能障害に基づいて肝性昏睡をきたし、プロ卜ロンビン時間 4 0 %以下を示すものとされ、そのうちには発現後 1 0日以内に脳症が発現する急性型と 1 1 日以後に発現する亜急性型がある。臨床像では肝炎症状発現後、数日以内に黄疸が高度となり、急速に意識障害を伴ってくる。早期から出血傾向を伴い、肝濁音界の縮小もみられる。血清総ピリルビン値は 1 O mg/dl以上の場合が多く、血清卜ランスアミナーゼ値は初期には著しい高値を示すが、数日中に著しく下降する。プロトロンビン値は 4 0 %以下と著名な低下を示す。脳浮腫、消化管出血、腎不全、血管内凝固症候群、全身感染症を伴いやすく、これらの合併症が死因となることが多い。予後は極めて不良で、日本での生存率は 2 0— 3 0 %である。治療としては、確立された治療法はなく、全身的な管理が必要とされているのが現状である。血漿交換、-交換輸血、人工肝補助装置、およびグルカゴン · インスリン療法などが行われている。このように、この劇症肝炎を治療する治療剤がないのが現状と言っても過言ではない。血漿交換については、日本国内において約 8 0 %で施行されているが、施行群と非施行群の間にほとんど生存率の差は認められていない。また、グルカゴン ♦ インスリン療法も 9 0 例で施行されているが、施行群と非施行群間にあまリ生存率の差はない。特殊組成ァミノ酸投与もほとんどの例で施行されているが、ほとんど両群間に生存率の差はない。つまり、この間 8割の症例が日本において代表的な治療法である血漿交換、グルカゴン · インスリン療法、特殊組成アミノ酸療法が施行されていながら、そのような治療が行われる前に比べてほとんど生存率が上がっていないということになり、その効果について非常に懐疑的にならざるを得ない現状である。

劇症肝炎は、 1 9 8 1年の犬山シンポジウムの診断基準によれば、肝炎のうち症状発現 8週以内に高度の肝機能障害に基づいて、 I I度以上の昏睡とプロトロンビン時間（PT)が 4 0 %に低下する症例と定義されている。肝臓は予備能の大きい臓器であるので、 3割ぐらい残っていれば普通は十分代償されている。しかし、それ以下になると肝不全といって肝臓の機能の不全の状態が起こってくる。

具体的には肝臓の機能は物質を合成する機能と、物質を代謝する機能のニ大機能に大別できる。その機能の不全状態が起こるために合成能低下の表現として PTが低下する。 PTは凝固因子のうちの I， I I， V, VI I及び Xの 5つの凝固因子総体の機能を測る検査だが、その全てがともに肝臓でつくられている。その内、特に第 VI I因子は半減期が短く、大体数時間で半減する。すなわち合成能が低下すると第 VI I因子が初期から低下し、それを含む PT時間が低下する。もう一つは、解毒代謝機能の低下のため昏睡が発現する。 I I度以上とした理由は I度の場合には主治医の主観が判定に入るので、 I I度以上を有意とされた。

その原因疾患は日本では肝炎が大半である。肝炎はウィルス性も薬剤性肝炎も含まれる。また、日本以外の国では劇症肝炎は急性肝炎の範疇の疾患と考えているが、日本の場合 H B Vキャリアが多数存在し、キャリアの劇症化もまれに見られる。キャリアの場合肝炎の発症時期が不明であり、ウィルスを持っている限り慢性肝炎があリ得るし、それが劇症化することもある。

一方、日本以外の国、例えばイギリスではウィルスが半分弱で半分強は薬剤性である。特にイギリスではウィルスがパラセタモール、つまりァセトァミノフエトンという鎮痛解熱剤を自殺目的で服用することによる劇症肝炎が多い。通常、臨床的に経験される薬剤性肝障害はむしろアレルギー性の肝炎が多く、この際は投与量も少なくて肝障害がおこり、原因となる薬剤を除去しても既に炎症維持機転が作動しておリ、直ちに肝障害が終息するわけにはいかない。

肝炎が劇症化する機序については 2つの条件があると言われている。 1 つは多くの肝細胞に感染が生じていること。他のもう 1つは非常に強い細胞障害性 Tリンパ球の免疫応答があって旺盛に肝細胞が破壌される点である。つまり、多くの肝細胞が感染を受けているということと、免疫応答が激しくて肝細胞破壊がひどい、という 2つ要因がないと劇症肝炎は起こらないとされている。この理論を基礎に考えると、 A型肝炎ウィルスは排除が速いので感染があるところまで拡大するうちに排除反応が起こってきて排除されてしまい、劇症化しないで急性肝炎として治ってしまう。 C型肝炎ウィルスの場合は、多くの肝細胞まで感染が進行する、宿主の免疫応答をあまり強く惹起しないウィルスなので劇症化しにくい。 B型肝炎は中間的でウィルスの感染が広がるし、免疫応答もかなり強いので、もっとも劇症化しやすいと、理解されている。

1 9 7 2年病理学者の Kerrらが、「核の凝集や断片化」を特徴とする細胞死の形態を記載し、アポトーシス（apoptosi s)と呼称した。これ以降細胞死は、ネクロシス（necrosis, 壊死）とアポトーシス（apoptosis, 自死）の 2つに分けられることになつた。ネクロシスはウィルス、虚血、毒物といった病理的、非生理的な要因でおこり、形態的には細胞質 ·核 · ミ卜コンドリアの膨張の後、細胞膜が破綻する像を示す。これに対し、アポ卜一シスは生理的な死であり、細胞が情報を自ら総合的に判断して、細胞に内蔵されている自死装置の発動により起こると考えられる。そして核の濃縮と断片化という形態的特徴と、 DNAの断片化という生化学的な特徴を示す。また別な言い方をすれば、遺伝子に支配された死がアポトーシスであり、遺伝子の支配を受けない死がネクロシスである。

近年、分子生物学の進歩によリアポトーシスの遺伝子レベルでの解析が進み、アポ卜一シスの疾患との関係も注目されている。肝臓では、ウィルス肝炎などでよく見られる好酸性ボディ (acidophi l ic body)が実は肝細胞のアポ卜一シスであること、ウィルス肝炎の代表的な細胞死の断片的ネク口シス（piecemeal necrosis)の主体が実はネクロシスではなくアポトーシスであることなどが示され、また多くの肝疾患にアポトーシスが関与していることが示唆されている。特にアポトーシスを引き起こす系として、 Fa s/Fasリガンドの系は最も研究が進んでおり、 1993年に長田らが、抗 Fas抗体のマウスの腹腔内投与により広範な肝細胞死を引き起こすことを報告し、 Fasシステムが劇症肝炎の原因となりえるのではないかという可能性を示した（Nature, 364, 806， 1993) 。

いずれにしても劇症肝炎は、日本では 9 0 %以上がウィルス性であり急性型で致死率が 5 0 %以上、亜急性型だと致死率は 9 0 %以上を越える。しかも、予後不良の疾患であり、その成因の解明、そして有効な治療法の開発が切に望まれている。

本発明者等は、かかる観点から、アポトーシスによる肝障害、すなわち Fas誘起アポトーシス及びそれに伴う肝障害に対して H G Fが抑制、改善あるいは予防の作用を有することを見出し、 H G Fが劇症肝炎疾患の予防治療に有用であることが判明した。

上記の H G Fは肝実質細胞を in vitroで増殖させる因子として見出されたタンパク質である（Biochem. Biophys. Res. Commun. , 122, 1450, 198 4， Proc. Natl . Acad. Sci . USA, 83, 6489， 1986, FEBS Letter, 22, 31

1， 1987, Nature, 342. 440, 1989， Proc. Natl . Acad. Sci . USA, 87, 3 200, 1990) 。肝実質細胞を特異的に増殖させる因子として発見された H G Fは、本発明者らをはじめとする多くの研究者による最近の研究成果によって、生体内で組織傷害治癒などの種々の活性を示していることが明らかとなリ、研究対象としてのみならずヒトゃ動物の治療薬などへの応用に期待が集まている。

H G Fは主に間葉系の細胞により産生されていることが解明されており、近隣細胞から必要に応じて HGFが供給される、所謂パラクリン機構が成立していることが明らかにされている。しかしながら、肝臓や腎臓に傷害を受けたとき、傷害を受けていない臓器、例えば肺などにおいても HGF の産生が高まることから、所謂ェンドクリン機構によっても HGFが供給されていると考えられる。

このような HGFの受容体に関して、最近の研究から、 c-Met原腫瘍遺伝子が HGF受容体をコードしていることが確定的になった (Bottaro et al., Science 251, 802-804, 1991; Naldini et al., Oncogene 6， 501-

504， 1991) 。発明の開示

上述のように HGFに関して多くの知見が得られているが、 HGFがァポトーシスによる肝障害に対して、抑制、改善あるいは予防が可能であることは従来知られていない新知見である。本発明はかかる知見に基づいてなされたもので、本発明は新規な劇症肝炎疾患治療剤を提供することを目的とする。

即ち、本発明は、 HGFを有効成分として含有することを特徴とする劇症肝炎疾患治療剤であり、特にアポ卜一シスによる肝障害を主体とする劇症肝炎疾患に対する劇症肝炎疾患治療剤ある。

また、本発明の他の発明は、有効量の HGFを投与することからなる劇症肝炎疾患の治療法；及び劇症肝炎疾患治療剤を製造するための HGFの使用である。図面の簡単な説明

図 1は、試験例 1のマウスの肝の病理組織標本の顕微鏡写真の一例を示すものである。図 1において、 A及び Bは倍率 1 00倍、 Cは倍率 200 倍の顕微鏡写真である。

図 2は、試験例 2における HGF投与群のマウスの肝の病理組織標本の顕微鏡写真である。図 2において、 Aは試験 No. 1 6のマウスの肝の病理組織標本の顕微鏡写真（倍率 200倍）、 Bは試験 No. 1 9のマウスの肝の病理組織標本の顕微鏡写真（倍率 1 00倍）である。

図 3は、試験例 2における食塩水投与群（コントロール）のマウス（試験 No. 14のマウス）の肝の病理組織標本の顕微鏡写真である。図 3において、 Aは倍率 1 00倍、 Bは倍率 200倍である。発明を実施するための最良の形態

本発明で使用される HGFとしては、医薬として使用できる程度に精製されたものであれば、種々の方法で調製されたものを使用することができる。

HGFの調製方法としては、各種の方法が知られている。例えば、ラッ卜、ゥシ、ゥマ、ヒッジなどの哺乳動物の肝臓、脾臓、肺臓、骨髄、脳、腎臓、胎盤等の臓器、血小板、白血球等の血液細胞や血漿、血清などから抽出、精製して得ることができる（FEBS Letters, 224, 311, 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 5844, 1989など参照) 。

また、 HGFを産生する初代培養細胞や株化細胞を培養し、培養物（培養上清、培養細胞等）から分離精製して HGFを得ることもできる。あるいは遺伝子工学的手法により HGFをコ一ドする遺伝子を適切なベクターに組込み、これを適当な宿主に挿入して形質転換し、この形質転換体の培養上清から目的とする組換え H G Fを得ることができる（例えば、 Nature, 342, 440, 1989，日本特開平 5-111383号公報、 Biochem. Biophys. Res, Commun. , 163, 967， 1989など参照）。上記の宿主細胞は特に限定されず、従来から遺伝子工学的手法で用いられている各種の宿主細胞、例えば、大腸菌、枯草菌、酵母、糸状菌、植物又は動物細胞などを用いることができる。

より具体的には HGFを生体組織から抽出精製する方法としては、例えばラットに四塩化炭素を腹腔内投与し、肝炎状態にしたラッ卜の肝臓を抽出して摘出して粉砕し、 S-セファロース、へパリンセファロ一スなどのゲルカラムクロマトグラフィー、 HPLC等の通常の蛋白質精製法にて精製することができる。

また、遺伝子組換え法を用い、ヒト HGFのアミノ酸をコードする遺伝子を、ゥシパピ口一マウィルス DNAなどのべクターに組み込んだ発現べクタ一によって動物細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（CH0) 細胞、マウス C127細胞、サル COS細胞などを形質転換し、その培養上清より得ることができる。

かくして得られた HGFは、 HGFと実質的に同効である限り、そのァミノ酸配列の一部が欠失又は他のアミノ酸により置換されていたり、他のァミノ酸配列が一部挿入されたり、 N末端及び/又は C末端に 1又は 2以上のアミノ酸が結合していたり、あるいは糖鎖が同様に欠失、置換及び/又は付加されていてもよい。

本発明の治療剤は上記の HGFを有効成分とし、 HGFは後記試験例に示されるように、肝実質細胞を増殖させることにより、アポトーシスによる肝障害に対して HGFの抑制、改善あるいは予防の効果を有する。更に、 HGFは障害を受けていない組織には作用を示さず、障害を受けている組織にのみ作用するので、副作用を惹起するおそれが少ないという特長を有する。従って、本発明の治療剤は、劇症肝炎疾患、特に肝実質細胞の増殖を主体とする病変の治療 ·予防に有効である。

本発明の治療剤は、ヒ卜の他、各種の哺乳動物（例えば、ゥシ、ゥマ、ブタ、ヒヅジ、ィヌ、ネコ等）における肝障害に起因する種々の疾患の治療 ·予防に適用される。

本発明の治療剤は種々の製剤形態（例えば、液剤、固形剤、カプセル剤等）をとりうるが、一般的には有効成分である HGFのみ又はそれと慣用の担体と共に注射剤、吸入剤、坐剤又は経口剤とされる。当該注射剤は常法により調製することができ、例えば、 HGFを適切な溶剤（例えば、滅菌された水、緩衝液、生理食塩水等）に溶解した後、フィルタ一等で濾過して滅菌し、次いで無菌的な容器に充填することにより調製することができる。注射剤中の HGF含量としては、通常 0.0002-0.2(w/v%)程度、好ましくは 0.001-0. l(w/v%)程度に調整される。また、経口薬としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、軟又は硬カプセル剤、液剤、乳剤、懸濁剤、シロップ剤などの剤形に製剤化され、これらの製剤は製剤化の常法に準じて調製することができる。坐剤も慣用の基剤（例えば、カカオ脂、ラウリン脂、グリセ口ゼラチン、マクロゴール、ウイテツプゾル等）を用いた製剤上の常法によって調製することができる。また、吸入剤も製剤上の常套手段に準じて調製することができる。

製剤中の H G F含量は、剤形、適用疾患などに応じて適宜調整することができる。

製剤化に際して、好ましくは安定化剤が添加され、安定化剤としては、例えば、アルブミン、グロブリン、ゼラチン、グリシン、マンニトール、グルコース、デキストラン、ソルビトール、エチレングリコールなどが挙げられる。さらに、本発明の製剤は製剤化に必要な添加物、例えば、賦形剤、溶解補助剤、酸化防止剤、無痛化剤、等張化剤等を含んでいてもよい。液状製剤とした場合には凍結保存、又は凍結乾燥等により水分を除去して保存するのが望ましい。凍結乾燥製剤は、用時に注射用蒸留水などを加え、再溶解して使用される。

本発明の治療剤は、その製剤形態に応じた適当な投与経路により投与され得る。例えば、注射剤の形態にして静脈、動脈、皮下、筋肉内などに投与することができる。その投与量は、患者の症状、年齢、体重などにより適宜調整されるが、通常、 H G Fとして 0. 05mg- 500mg、好ましくは lmg-10 Onigであり、これを 1 日 1回ないし数回に分けて、又は持続的に投与するのが適当である。産業上の利用可能性

本発明において、有効成分である H G Fは、劇症肝炎の原因とされているアポト一シスによる肝障害、すなわち Fas誘起アポトーシス及びそれに伴う肝障害に対して抑制、改善あるいは予防の作用を有する。従って、本発明の治療剤は、前述した劇症肝炎疾患の治療♦予防に有効である。更に、 H G Fは、障害を受けている組織のみに作用するので、副作用の少ない薬剤を得ることができるという効果を奏する。実施例

以下、実験例及び実施例に基づいて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。

試験例 1

アポトーシス肝障害の基礎条件設定

長田らによって検討されたアポ卜一シスによる肝細胞死の試験では、 3- 5週令の BALB/Cマウスを使用して、 Jo- 2抗体（Fas抗体） 100 !^及び10_/6^ を腹腔内投与している（Nature, 364, 806, 1993) 。本試験においては、 H G F投与によるアポトーシス肝障害の抑制効果を判定するための至適の抗体投与量設定し、またアポ卜一シス肝障害の個体間のばらつきを最小にするために基礎条件を設定した。

材料として Jo- 2抗体（Fas抗体）、 BALB/Cマウス雄（8週令）を使用した。方法は以下のとおりである。

Jo- 2抗体投与量として、マウス当たり Jo- 2抗体

gを腹腔内（i.p.) 投与（マウス 2匹）、また Jo-2抗体 (マウス 2匹）、 2 も (マウス 3 匹）、 l g (マウス 3匹）を尾静脈（i.v.) 投与、さらにコントロールとして食塩水を i.v.投与（マウス 1匹）した。 Jo-2抗体あるいは食塩水を投与し、 6時間後に尾静脈より採血し、 2 4時間後に剖検、組織を採取した。検討項目としては、肝機能マ一カーとして、 GPT， TP, ALB, GOTを測定し、肝臓の一部を 1 0 %ホルマリン固定して、顕微鏡下 H &E染色による肝障害の判定、さらにアポ卜一シスの評価を行った。また、肝臓の一部は凍結して、 DNA抽出し、電気泳動法により DNAの断片化解析を行った。 DN A抽出と DNA断片化の解析は以下のとおりである。

1 ) 凍結肝 B蔵 20- 30mgを 2ndの cell lysis buffer (320mM Saccharose, 5mM MgCl₂, lOmM Tris-HCl, 1% Triton X- 100， pH 7.5)でホモジナイズした。

2 ) 20mg/ml Proteaseを 100 μ 1加え、 50°Cで 2時間インキュベートした。 3 ) RNase Aを 200 g/mlになるように加え、さらに 50°Cで 1時間インキュベートした。

4 ) 500μ 1をとりイソプロパノール沈殿させ、エタノール洗浄し、 20μ 1 Τ Ε緩衝液に溶解した。 5) ェチジゥムブ口マイド含 ¾ァガロースで全量（20 μΐ)を電気泳動し、 D ΝΑ断片化をみた。

結果を表 1及び図 1 (病理組織標本の顕微鏡写真）に示す。

表 1に示されたように基礎条件の設定の結果としては、 5 tg i.v.又は i. p.投与が最適であった。

図 1に肝の病理組織標本の顕微鏡写真の一例を示す。図において、 A及び Bは倍率 1 00倍、 Cは倍率 2 00倍の顕微鏡写真である。図に示されるように、肝の病理組織では、 Jo-2抗体投与で誘起されるアポ卜一シスは、 Zone U門脈域周囲の肝細胞）から起こり、 Jo-2抗体量の増加により Zone 1から Zone 2, Zone 3 (中心静脈周囲の肝細胞）までアポトーシスが延び、壊死の程度が進み、広範囲、びまん性にほぼ全ての肝細胞がアポトーシスによる壊死に陥ることが判明した。

表 1

N o . J o - - 2 肝組織 D Ν Α断片 G Ρ Τ

(mg) *肝障害 *ア^卜―シス 6 h r 24 η r

1 5 i .P. + + 1 082

2 5 i • P. 9 組織不良 1 34 256

»3 5 i . V. + +十 + + +十広範な肝細胞壊死 n. d . 63 8 80

4 5 i . v. ほぼ正常 23

5 2 i . v. + + + 比較的広範な肝細胞壊死十？ 28830 1 2592

6 2 i . V. ほぼ正常 60 1 34

7 2 i . . + + Zone 1肝細胞アポト一シス

8 1 i .V. + + +十 Zone 1肝細胞好酸性変化 1 64 6

9 1 i . V. + /- 十 Zone 1肝細胞好酸性変化 54 1

10 1 i . V. + + + + + focal apoptotic area, macroph + 240 肝障害、アポトーシスの程度の評価

十：軽微、十+ :中程度、十十+ :重篤、十十 +十：極めて重篤

**3 6時間の採血後に死亡、組織採取。

試験例 2 —

HGF投与によるアポ卜一シス肝障害の抑制効果

HGFカ^ as誘起ァポト一シスによる肝障害を抑制できるかどう力、、 in vivoで検目可した。

材料として Jo-2抗体（Fas抗体）、 BALB/Cマウス雄（ 8週令）及び組換ぇヒ卜 H G F (human recombinant HGF)を使用した。方法は以下のとおりである。

Jo - 2抗体投与量として、マウス当たり 5μ_βを腹腔内（i.p.) 投与（マウス 9匹）した。 Jo- 2抗体投与 6時間前に、 HGF (マウス 4匹）あるいはコントロールとして食塩水（マウス 5匹）を i.p.投与した。さらに、抗体投与時、抗体投与 6時間後、 1 2時間後に連続して HGFあるいは食塩水の i.p.投与を行った。 Jo-2抗体投与 1 2時間後に尾静脈より採血し、 24 時間後に剖検、組織を採取した。検討項目としては、肝機能マーカーとして、 GPTを測定し、肝臓の一部を 1 0%ホルマリン固定して、顕微鏡下 H &E染色による肝障害の判定、さらにアポト一シスの評価を行った。

結果を表 2並びに図 2及び 3 (病理組織標本の顕微鏡写真）に示す。なお、図 2は HGF投与群のマウスの肝の病理組織標本の顕微鏡写真であり、 Aは試験 No. 1 6のマウスの肝の病理組織標本の顕微鏡写真（倍率 20 0倍）、 Bは試験 No. 1 9のマウスの肝の病理組織標本の顕微鏡写真 (倍率 1 00倍）である。また、図 3は食塩水投与群（コントロース）のマウス（試験 No. 1 4のマウス）の肝の病理組織標本の顕微鏡写真であリ、 Aは倍率 1 00倍、 Bは倍率 200倍である。

表 2に示されたように、 H G F投与マウスは 4例とも肝機能 GPTが低値を示した。また、図 2に示されるように、アポト一シスによる肝障害は明らかに抑制された。一方、 HGFの代わりに食塩水を投与したマウスは 1 例が Jo-2抗体投与後 8時間に死亡したが、その肝組織は広範性びまん性にほとんどの肝細胞がアポトーシスによる壊死の状態を呈しており、肝不全による死亡であった。また、残りの 4例でも肝機能 GPTが高値を示した。更に、図 3に示されるように、門脈域周囲（Zone 1)から中間帯（Zone 2)にかけて、著明な肝細胞のアポトーシスとそれによる細胞死という肝病理組織像を呈する重度の肝障害を伴っていた。

以上の結果から、 HGFは Fas抗体によって誘起されるアポトーシス肝障害を抑制することが認められた。

表 2

試験 N o . G P T

1 2 h r 24 h r

1 1 食塩水死亡

1 2 投与群 1 0 1 1 0 246 0

1 3 (3ン卜 1 27 7 0 35 1 0

1 4 ロール） 7 9 02 26 2 3

1 5 4030 1 67 7

1 6 33 4 6

1 7 HGF ぐ 30 8 3

1 8 投与群 1 60 7 2

1 9 < 1 5 1 3 8 実施例 1

生理食塩水 1 00m 1中に HGF 1 mg、マンニトール 1 g及びポリソルべ一ト 80 1 0 mgを含む溶液を無菌的に調製し、 1 m lずつバイァルに分注した後、凍結乾燥して密封することにより凍結乾燥製剤を得た。実施例 2

0. 02 Mリン酸緩衝液（ 0. 1 5 M N a C 1及び 0. 0 1 %ポリソルベー卜 80含有、 pH 7. 4) 1 00 m 1中に HGF 1 mg及びヒ卜血清アルブミン 1 00 mgを含む水溶液を無菌的に調製し、 1 m lずつバイアルに分注した後、凍結乾燥して密封することにより凍結乾燥製剤を得た _:

Claims

― 請求の範囲

1. 肝実質細胞増殖因子を有効成分として含有することを特徴とする劇症肝炎疾患治療剤。

2. 劇症肝炎疾患が、アポトーシスによる肝障害を主体とする劇症肝炎疾患である請求項 1記載の劇症肝炎疾患治療剤。

3. H G Fがヒ卜組換え H G Fである請求項 1記載の劇症肝炎疾患治療剤 _c

4. 有効量の HGFを投与することからなる劇症肝炎疾患の治療方法。

5. H G Fがヒ卜組換え H G Fである請求項 4記載の劇症肝炎疾患の治療方法。

6. 劇症肝炎疾患治療剤を製造するための HGFの使用。

7. HGFがヒト組換え HGFである請求項 6記載の HGFの使用。