WO2004018481A2 - Derives du gossypol, leurs procedes d'obtention, et leurs utilisations - Google Patents

Derives du gossypol, leurs procedes d'obtention, et leurs utilisations Download PDF

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WO2004018481A2
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Robert Michelot
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D339/00—Heterocyclic compounds containing rings having two sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D339/08—Six-membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D339/00—Heterocyclic compounds containing rings having two sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D339/02—Five-membered rings
    • C07D339/06—Five-membered rings having the hetero atoms in positions 1 and 3, e.g. cyclic dithiocarbonates

Definitions

  • the subject of the present invention is gossypol derivatives, and more particularly thioderives, in particular 1,3-dithiolane and 1,3-dithiane, gossypol, gossypolone, and methyl ethers of gossypol, as well as their processes. production and their uses, in particular in pharmaceutical compositions intended for the treatment of cancers.
  • Gossypol is generally extracted from cotton seeds of the genus gossypium (family of malvaceae). The content varies from 0.1 to 0.64% depending on the variety of gossypium.
  • gossypol The first extraction of gossypol was carried out roughly by Kuhlmann in 1861, he called the substance "blue cotton grains". In 1866 Longmore found that cottonseed oil contains a colored compound, isolated as a brown solid, which is unquestionably impure gossypol. It was not until 1899 that Marchlewski obtained the pure crystalline form, extracted from cotton seeds, which he called gossypol (Adams RC et al., 1960 (s) ).
  • the gossypol molecule is in the form of two symmetrical naphthalene subunits, which are each substituted by three phenolic functions and one aldehyde function.
  • Gossypol is mainly abundant in the bark of thephesia populnea and certain varieties of cotton (gossypium hirsutum), while the levorotatory isomer ((-) gossypol) is predominant in other varieties of cotton such as gossypium barbadense (Zhou RH & Lin XD, 1988; Cass QB et al., 1991).
  • Gossypol has many biological activities. If it was first studied mainly for its contraceptive properties, it is currently its antitumor activities that interest doctors. As its toxicity at high doses is not negligible and leads to multiple side effects in humans, research has focused on derivatives that are more selective and more toxic to cancer cells.
  • gossypol derivatives The numerous bibliographic data on the activities of gossypol derivatives indicate that the activity is linked to the presence on the binaphthalene system of free phenolic groups in 6.6 ′ and 7.7 ′. In fact, blocking these phenol functions in methoxyether derivatives abolishes all toxicity.
  • the toxicity of gossypol is also associated with aldehyde functions or the presence of an electrophilic function such as an enamine in the same position. It is easy to imagine that this electrophilic center can bind with a number of nucleophilic entities playing an important role in the biological environment. For example, the amino groups of lysine in proteins or peptides easily couple with gossypol.
  • the object of the invention is to provide new gossypol derivatives which have the advantage of not being toxic at the doses used for the human or animal body, and of being modified in contact with nitronium ions which may be specifically present in the body.
  • tumor level in the form of highly cytotoxic compounds and therefore capable of specifically killing tumor cells
  • the invention also aims to provide new methods for synthesizing the above-mentioned derivatives.
  • the invention also aims to provide new pharmaceutical compositions, in particular in the context of the treatment of cancers, having the advantage of not being toxic at the doses used for the organism, and of exerting their cytotoxic effect only on contact with cancer cells.
  • n 2 represents 0 or 1
  • n 2 represents 0 or 1
  • R 2 and R- t represent H
  • W represents a cycle of the following formula: ⁇ , C ⁇ H j2 -)
  • N is an integer from 2 to 5, and preferably n represents 2 or 3,
  • A represents O
  • d and f represent a double bond
  • e represents a single bond
  • A represents OH, d and f represent a single bond, and e represents a double bond,
  • A represents a group ORi or OR 3 as defined below, and W represents in association with Y a group of the following formula:
  • ni is an integer from 2 to 5, and preferably neither represents 2 or 3
  • Ri, R 2 , R 3 , and Ri independently of each other, represent a hydrogen atom, or an alkyl group of 1 to 3 carbon atoms, in particular a methyl group.
  • a more particular subject of the invention is the compounds of formula (la) mentioned above, and as such those of formula (Ia-1) below:
  • hydrocarbon chain - (CH) n - is as defined above.
  • a more particular subject of the invention is the compounds of formula (Ia-3) below:
  • the subject of the invention is more particularly the dithiane ylidene derivative of gossypol of the following formula:
  • the above-mentioned compounds of formula (la) are in the form of levorotatory enantiomers (-), or of dextrorotatory enantiomers (+), or in the form of a racemic mixture comprising respectively approximately 50% of (-) enantiomers, and approximately 50% enantiomers (+).
  • the above-mentioned compounds of formula (la) are in the form of levorotatory enantiomers (-).
  • a more particular subject of the invention is the above-mentioned compounds of formula (Ib) below:
  • Ri and R 3 represent a methyl group
  • R 2 and R- t represent a hydrogen atom
  • R 2 , R 3 , and i represent a methyl group.
  • the above-mentioned compounds of formula (I) are characterized in that they are linked to a polymer having a trophism for tumors, if necessary via a spacer.
  • the subject of the invention is more particularly the above-mentioned compounds of formula (I), characterized in that the spacer linked to a polymer having a trophism for tumors, is linked to one or more of the phenolic groups capable of '' be present on said compounds, or is linked to the hydrocarbon chain (s) present on these compounds, in particular in the case of compounds of formula (Ib) in which Ri, R 2 , R 3 , and Rj, are all different from l 'hydrogen.
  • the aforementioned spacer consists of a hydrocarbon or peptide chain chosen from those of the following formulas:
  • the above-mentioned polymer having a trophism for tumors is chosen from Carboxymethyl dextran (CM) or N- (2-hydroxypropyl) methacrylamide (HPMA), and are linked to the NH function of the spacer.
  • CM Carboxymethyl dextran
  • HPMA N- (2-hydroxypropyl) methacrylamide
  • Such polymers are described in particular in the following articles: M. Harada, H. Sakakibara, T. Yano, T. Suzuki and S. Okuno, Determinants for the drug release from T-0128, comptothecin analogue carboxymethyl dextran conjugate ournal of Controlled Release (2000), 69, 399-412; R. Duncan, S. Gac-Breton, R. Keane, R. Musila, YN Sat, R. Satchi and F. Searle, Polymer-drug conjugates, PDEPT and PELT: basic principles for design and transfer from the laboratory to clinic, Journal of Controlled Release (2001
  • the subject of the invention is also any pharmaceutical composition, characterized in that it comprises at least one compound of the above-mentioned formula (I), where appropriate in combination with a polymer as defined above, in combination with a pharmaceutically acceptable vehicle. .
  • compositions of the invention are in a form intended for intravenous administration.
  • the invention more particularly relates to any pharmaceutical composition as defined above, and characterized in that the unit dose of compounds of formula (I) as active ingredient of said compositions, is approximately 1 mg / kg / day, around 25 mg / kg / day.
  • a more particular subject of the invention is the use of a compound of the above-mentioned formula (I), where appropriate in combination with a polymer as defined above, for the preparation of a medicament intended for the treatment of cancers in humans or animals, and more particularly solid tumors, such as human adrenocortical carcinoma, human glioma, human breast cancer, melanoma, or prostate cancer.
  • solid tumors such as human adrenocortical carcinoma, human glioma, human breast cancer, melanoma, or prostate cancer.
  • the invention also relates to the use of compounds of the above-mentioned formula (I), as intermediates for the synthesis of new gossypol and gossypolone derivatives.
  • a subject of the invention is also a process for the preparation of compounds of the above-mentioned formula (I), characterized in that it comprises the treatment of gossypol or gossypolone, or of alkyl ether derivatives thereof, where appropriate one or more several hydroxyl functions are substituted by an alkyl group of 1 to 3 carbon atoms, in particular a methyl group, with a dithiol of formula HS (CH 2 ) n SH in which n represents an integer of 2 to 5, in the presence of BF 3. And 2 O.
  • the compounds of formula (la) are obtained by reaction of the dithiol of formula defined above, in the presence of BF 3. And 2 O, with the gossypol or the gossypolone grouped together in the following formula (II) :
  • the compounds of formula (Ia-3) are advantageously obtained by treatment of the compounds of formula (Ia-1) with nitrosium fluoroborate.
  • the compounds of formula (Ib) are obtained by reaction of the dithiol of formula defined above, in the presence of BF 3. Et 2 O, of tetramethyl ether or of hexamethyl ether of gossypol grouped in the following formula (III)
  • HPLC analyzes were carried out on a chain consisting of a SpectraSYSTEM TM PIOOOXR pump, a Rheodyne valve mjector, a Waters® 996 PDA diode array detector and in reverse phase on Alltima C18, 5 ⁇ m columns, (4.6mm x 250mm) and Alltima C8, 5 ⁇ m, (4.6mm x 250mm) according to the following isocratic conditions:
  • the capacity coefficient k 'of the synthesized products is indicated. It corresponds to the report
  • Tr-To / To Tr and To being the product retention times and the zero retention time, respectively
  • Masses are expressed in unit of mass per elementary charge (m / z)
  • Proton NMR spectra (1 H NMR) were carried out in solution in deuterated solvents and recorded on Br ⁇ cker AM-200 at 200 MHz, AM-250 at 250 MHz, AM-300 at 300 MHz, AM-400 at 400 MHz .
  • the chemical shifts ( ⁇ ) are expressed in part per million (ppm) compared to the tetramethylsilane (TMS) taken as internal reference.
  • the coupling constants (J) are given in Hertz (Hz).
  • the characterizations are reported as follows: ⁇ : chemical shift in ppm (multiplicity, number of protons, attribution).
  • the abbreviations s, si, d, dd, t, q, m mean respectively: singlet, broad singlet, doublet, doublet doublet, triplet, quadruplet and multiplet.
  • the carbon NMR spectra were carried out in solution in deuterated solvents and recorded on Br ⁇ cker AM-200 type devices at 50.2 MHz, AM-250 at 62.5 MHz, AM-300 at 75 MHz, AM -400 to 100MHz.
  • the chemical shifts are expressed in ppm taking the central peak of the deuterated solvent as a reference. Many products have been correlated to allow signal allocation.
  • the solvents used are chloroform (CDC1 3 ), methanol (CD 3 OD) or DMSO (DMSO d 6 ) deuterated.
  • the crushing of the cotton seeds + fluff was carried out with a crusher provided with a large grid, the diameter of the holes in the "grid is 2.5 cm; knife length: 19 cm.
  • the separation of the crushed seeds from the fluff has was made using a sieve; mesh diameter: 0.5 cm.
  • the grinding was carried out on a knife mill provided with a small grid diameter of the grid holes 3 mm, length of the blades 4 cm.
  • the extraction was carried out using a Soxhlet, the tube of which can contain 1 kg of cotton seed powder, fitted with a 4-liter three-necked flask and an electric boiler (bain-marie) adjusted to 40-60 ° C.
  • This operation is repeated three times in order to recover the maximum of seeds.
  • the seeds are then ground using a small grinder. Deoiling is carried out by Soxhlet extraction with petroleum ether: 1 kg of ground seeds is introduced into the Soxhlet tube and 2.5 liters of petroleum ether in the flask. The oil is removed at a gentle boil (40 ° C) for 16 hours. At the end of this stage, the powder, wrung, left the Soxhlet and dried in ambient air.
  • gossypol is carried out under the same conditions with ethyl ether.
  • the crushed de-oiled and dried seeds 2.5 liters of ethyl ether are introduced into the Soxhlet flask, in order to avoid possible oxidation of the product, a medium boiling (40 ° C.) is maintained for 16 hours.
  • the ethereal extract is then filtered.
  • the filtrate is concentrated as much as possible in a rotary evaporator at room temperature.
  • 20 ml of glacial acetic acid and 100 ml of anhydrous ethyl ether to the concentrate: immediately a deposit of acetic gossypol begins to form, seal the flask well and protect it with aluminum foil to avoid any oxidation and the effects of light. It is left in a cold room and filtered after 24 hours.
  • the precipitate obtained is washed with petroleum ether and is dried in a desiccator over P 2 O 5 and under vacuum.
  • reaction was carried out by the method written by Haas et al. (Hass RH & Shirley DA, 1965).
  • 1.5 g (2.59 mmol) of gossypol are dissolved in a mixture of 75 ml of acetone and 150 ml of glacial acetic acid.
  • the reaction mixture is heated in a water bath (60-70 ° C) by adding 112.5 ml (42 mmol) of the 10% aqueous solution of iron chloride, for 15 minutes. Then, the reaction mixture is allowed to cool to room temperature, 200 ml of water are then added to form a black precipitate which contains the iron salt and which is separated by filtration.
  • R ' H
  • R CH 3 Tetramethyl ether of Gossypol
  • R' CH 3 Hexamethyl ether of Gossypol
  • reaction mixture is washed with 5% NaHCO 3 ( 3 ⁇ 20 ml), with water (3 times) and is dried over sodium sulfate, filtered and evaporated under reduced pressure to give a green residue.
  • the residue is taken up in ether and reprecipitated in hexane.
  • Product form light green amorphous solid.
  • Gossypol dithiane 6 is transformed, under the action of nitrosonium fluoroborate, into a new derivative 12 of toxicity comparable to that of gossypol.
  • Table 1 Toxicity of thioderivatives on KB cells Toxicity of thioderivatives in the presence of an NO donor.
  • nitric oxide when linked to the heme of cytochromes can be considered as a potential nitronium ion, an intermediary in the formation of mtrosothiols.
  • the experiment was carried out by incubating gossypol dithiane 6 simultaneously with dipropylenetetramine nonoate (DPTA NONOate).
  • gossypol derivatives The toxicity of gossypol derivatives has often been attributed to the presence of dialdehyde which can possibly bridge enzymes or nucleic acids.
  • Nitric oxide is produced in large quantities by macrophages activated in an inflammatory response against bacteria, viruses or tumor cells. NO is particularly abundant in the vicinity of solid tumors which are very vascular and for which it plays a fundamental role in angiogenesis and vascular permeability.
  • NO can also, in the biological medium, reveal the toxicity, close to the tumors of derivatives whose toxicity is suitably masked by combination with sulfur.
  • the KB cell line was cultivated in MEM (minimal essential medium, with Earle's knows solution) purchased from Seromed, containing 10% fetal bovine serum, 2 mM L-glutamine, 60 u / ml of penicillin G and streptomycin sulfate and 40 ⁇ g / ml gentamycin.
  • MEM minimal essential medium, with Earle's knows solution
  • the KB cells were cultured as monolayers in 24-well Nunc plastic microplates (25,000 cells seeded per well in 1 ml of culture medium).
  • DMSO dimethylsulfoxide
  • the final concentrations measured were in the range 0.5 ⁇ M to 10 ⁇ M and the measurements were made in duplicates in each microplate.
  • the IC 50s were calculated by interpolation between the percentages of cells killed as a function of the concentration of the derivative studied.
  • the KB cells were cultured as described above, in the presence of fetal bovine serum. After 24 h of incubation at 37 ° C, 6 and the nonoate were added simultaneously to the cultures. Standard and control samples were incorporated into each microplate to determine the viability of the cultures with the nonoate, with 6, or without any added product. The percentage of cell destruction was determined as above after a 48 h incubation at 37 ° C.

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Abstract

La présente invention a pour objet des dérivés du gossypol, et plus particulièrement des thiodérivés, notamment 1,3-dithiolane et 1,3-dithiane, du gossypol, de la gossypolone, et des méthyle éthers du gossypol, ainsi que leurs procédés d'obtention, et leurs utilisations, notamment dans des compositions pharmaceutiques destinées au traitement des cancers.

Description

DERIVES DU GOSSYPOL, LEURS PROCEDES D'OBTENTION, ET LEURS UTILISATIONS
La présente invention a pour objet des dérivés du gossypol, et plus particulièrement des thiodérivés, notamment 1,3-dithiolane et 1,3-dithiane, du gossypol, de la gossypolone, et des méthyle ethers du gossypol, ainsi que leurs procédés d'obtention, et leurs utilisations, notamment dans des compositions pharmaceutiques destinées au traitement des cancers.
Le gossypol est généralement extrait des graines de cotonnier du genre gossypium (famille des malvacées). La teneur varie de 0,1 à 0,64% selon la variété du gossypium.
La première extraction du gossypol fut réalisée grossièrement par Kuhlmann en 1861, il appela la substance «bleu des grains de coton ». En 1866, Longmore constata que l'huile des graines du coton contient un composé coloré, isolé sous forme d'un solide brun et qui est indiscutablement du gossypol impur. Ce n'est qu'en 1899 que Marchlewski obtint la forme cristalline pure, extraite des graines de coton, qu'il appela gossypol (Adams RC et al., 1960 (s)).
S'inspirant des travaux de leurs prédécesseurs, Withers et Carruth, en 1915, améliorèrent d'une manière significative l'extraction du gossypol et leur méthode reste encore de nos jours un des meilleurs procédés utilisés (Adams RC et al., 1960 (s)).
La molécule du gossypol se présente sous forme de deux sous-unités naphtaléniques symétriques, qui sont substituées chacune par trois fonctions phénoliques et une fonction aldéhyde.
Elle existe sous trois formes tautomères représentées par les formules suivantes : formes aldéhydique, hemiacétalique et quinone-méthinique. Sa masse molaire est de : 518.5 (C30H30O8).
Figure imgf000003_0001
Forme aldéhydique
Figure imgf000003_0002
Forme hémiacétalique Forme quinone-méthinique formes tautomères du gossypol
L'analyse du pouvoir rotatoire du gossypol, a révélé la présence de deux isomères. Le (+) gossypol est principalement abondant dans l'écorce du thephesia populnea et certaines variétés de cotonniers (gossypium hirsutum), tandis que l'isomère lévogyre (le (-) gossypol) est prépondérant dans d'autres variétés de cotonniers telles que le gossypium barbadense (Zhou RH & Lin XD, 1988; Cass QB ét al., 1991).
La méthode utilisée pour la mesure de l'excès énantiomérique dans les graines des différents cotonniers est celle que Matlin et Zhou ont appliquée à partir de bases de Schiff chirales du gossypol (+) ou (-) en effectuant leur séparation par HPLC (Zhou RH & Lin XD,1988; Matlin SA et al, 1984; Fish RG et al., 1995)}
Le gossypol possède de nombreuses activités biologiques. S'il fut d'abord étudié principalement pour ses propriétés contraceptives ce sont actuellement ses activités antitumorales qui intéressent les médecins. Comme sa toxicité à doses élevées n'est pas négligeable et entraîne de multiples effets secondaires chez l'Homme, la recherche s'est orientée vers des dérivés plus sélectifs et plus toxiques pour les cellules cancéreuses.
Les nombreuses données bibliographiques sur les activités des dérivés du gossypol indiquent que l'activité est liée à la présence sur le système binaphtalénique des groupements phénoliques libres en 6,6' et 7,7'. En effet, le blocage de ces fonctions phénol, dans les dérivés méthoxyethers, abolit toute toxicité. La toxicité du gossypol est aussi associée aux fonctions aldéhydes ou à la présence d'une fonction électrophile comme une enamine dans la même position. On imagine facilement que ce centre électrophile peut se lier avec nombre d'entités nucléophiles jouant un rôle important dans le milieu biologique. Par exemple, les groupements amino de la lysine des protéines ou des peptides se couplent facilement avec le gossypol.
L'invention a pour but de fournir de nouveaux dérivés de gossypol présentant l'avantage de ne pas être toxiques aux doses utilisées pour l'organisme humain ou animal, et d'être modifiés au contact des ions nitronium susceptibles d'être spécifiquement présents au niveau des tumeurs, sous forme de composés fortement cytotoxiques et donc capables de tuer spécifiquement les cellules tumorales
L'invention a également pour but de fournir de nouveaux procédés de synthèse des dérivés susmentionnés.
L'invention a aussi pour but de fournir de nouvelles compositions pharmaceutiques, notamment dans le cadre du traitement des cancers, présentant l'avantage de ne pas être toxiques aux doses utilisées pour l'organisme, et de n'exercer leur effet cytotoxique qu'au contact des cellules cancéreuses.
L'invention a pour objet les composés de formule générale (I) suivante :
Figure imgf000004_0001
dans laquelle n2 représente 0 ou 1, et :
- lorsque n représente 0, alors R2 et R-t représentent H, et W représente un cycle de formule suivante : Λ ,CτHj2 -)
S--- S ce qui correspond à des composés de formule (la) suivante
Figure imgf000005_0001
dans laquelle :
• A représente O ou OH,
• n est un nombre entier de 2 à 5, et de préférence n représente 2 ou 3,
• Y représente C-OH, ou C=O.
• Z représente CH, ou C=O, sous réserve que lorsque :
* A représente O, d et f représentent une double liaison, et e représente une simple liaison,
* A représente OH, d et f représentent une simple liaison, et e représente une double liaison,
* Y représente C-OH, alors Z représente CH, a et c représentent une double liaison, et b représente une simple liaison,
* Y représente C=O, alors Z représente C=O, a et c représentent une simple liaison, et b représente une double liaison, ι
- et lorsque n2 représente 1, alors A représente un groupe ORi ou OR3 tel que défini ci-après, et W représente en association avec Y un groupe de formule suivante :
Figure imgf000005_0002
ce qui correspond à des composés αe formule (Ib) suivante
Figure imgf000006_0001
dans laquelle :
• ni est un nombre entier de 2 à 5, et de préférence ni représente 2 ou 3,
• Ri, R2, R3, et R-i, indépendamment les uns des autres, représentent un atome d'hydrogène, ou un groupe alkyle de 1 à 3 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle.
L'invention a plus particulièrement pour objet les composés de formule (la) susmentionnée, et à ce titre ceux de formule (Ia-1) suivante :
Figure imgf000006_0002
dans laquelle la chaîne hydrocarbonée -(CH )n- est telle que définie ci-dessus.
L'invention a plus particulièrement pour objet encore Iles composés de formule
(Ia-2) suivante :
Figure imgf000006_0003
dans laquelle la chaîne hydrocarbonée -(CH2)n- est telle que définie ci-dessus. L'invention concerne plus particulièrement les composés susmentionnés de formule (Ia-1) ou (Ia-2) dans laquelle n = 2, lesdits composés étant respectivement désignés dithiolanes de gossypol ou de gossypolone.
L'invention concerne plus particulièrement encore les composés susmentionnés de formule (Ia-1) ou (Ia-2) dans laquelle n = 3, lesdits composés étant respectivement désignés dithianes de gossypol ou de gossypolone.
L'invention a plus particulièrement pour objet les composés de formule (Ia-3) suivante :
Figure imgf000007_0001
dans laquelle la chaîne hydrocarbonée -(CH2)n- est telle que définie ci-dessus. A ce titre, l'invention a plus particulièrement pour objet le dérivé dithiane ylidène du gossypol de formule suivante :
Figure imgf000007_0002
Les composés susmentionnés de formule (la) sont sous forme d'énantiomères lévogyres (-), ou d'énantiomères dextrogyres (+), ou sous forme d'un mélange racémique comprenant respectivement environ 50% d'énantiomères (-), et environ 50% d'énantiomères (+).
Avantageusement, les composés susmentionnés de formule (la) sont sous forme d'énantiomères lévogyres (-). L'invention a plus particulièrement pour objet les composés susmentionnés de formule (Ib) suivante :
Figure imgf000008_0001
dans laquelle :
• ni représente 2 ou 3,
• Ri et R3 représentent un groupe méthyle, et R2 et R-t représentent un atome d'hydrogène,
• ou Ri, R2, R3, et i représentent un groupe méthyle. Avantageusement, les composés de formule (I) susmentionnés sont caractérisés en ce qu'ils sont liés à un polymère ayant un trophisme pour les tumeurs, le cas échéant par l'intermédiaire d'un espaceur.
A ce titre, l'invention a plus particulièrement pour objet les composés susmentiomiés de formule (I), caractérisés en ce que l'espaceur relié à un polymère ayant un trophisme pour les tumeurs, est lié à un ou plusieurs des groupements phénoliques susceptibles d'être présents sur lesdits composés, ou est lié à la ou les chaînes hydrocarbonées présentes sur ces composés, notamment dans le cas des composés de formule (Ib) dans laquelle Ri, R2, R3, et Rj, sont tous différents de l'hydrogène. f
Avantageusement,, l'espaceur susmentionné est constitué d'une chaîne hydrocarbonée ou peptidique choisie parmi celles de formules suivantes :
* -NH-(CH2)p-CO- dans laquelle p représente un nombre entier de 2 à 5,
* -NH-AA-(AA)q-AA-CO- dans laquelle q représente un nombre entier de 2 à 5 et AA est un résidu acide aminé naturel ou non.
Avantageusement encore, le polymère susmentionné ayant un trophisme pour les tumeurs est choisi parmi le Carboxymethyl dextran (CM) ou le N-(2-hydroxypropyl) methacrylamide (HPMA), et sont liés à la fonction NH de l'espaceur. De tels polymères sont décrits notamment dans les articles suivants : M. Harada, H. Sakakibara, T. Yano, T. Suzuki and S. Okuno, Déterminants for the drug release from T-0128, comptothecin analogue carboxymethyl dextran conjugate ournal of Controlled Release (2000), 69, 399-412; R. Duncan, S. Gac-Breton, R. Keane, R. Musila, Y.N. Sat, R. Satchi and F. Searle, Polymer-drug conjugates, PDEPT and PELT : basic principles for design and transfer from the laboratory to clinic, Journal of Controlled Release (2001), 74, 135- 146.
L'invention a également pour objet toute composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de formule (I) susmentionnée, le cas échéant en association avec un polymère tel que défini ci-dessus, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Avantageusement, les compositions pharmaceutiques susmentionnées de l'invention se présentent sous une forme destinée à l'admimstration par voie intraveineuse.
A ce titre, l'invention a plus particulièrement pour objet toute composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus, et caractérisée en ce que la dose unitaire en composés de formule (I) en tant que principe actif desdites compositions, est d'environ 1 mg/kg/jour, à environ 25 mg/kg/jour.
L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation d'un composé de formule (I) susmentionnée, le cas échéant en association avec un polymère tel que défini ci-dessus, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des cancers chez l'homme ou l'animal, et plus particulièrement des tumeurs solides, tels que le carcinome adrénocortical humain, le gliome humain, le cancer du sein humain, le mélanome, ou le cancer de la prostate.
L'invention concerne également l'utilisation de composés de formule (I) susmentionnée, en tant qu'intermédiaires de synthèse de nouveaux dérivés du gossypol et de la gossypolone.
L'invention a également pour objet un procédé de préparation de composés de formule (I) susmentionnée, caractérisé en ce qu'il comprend le traitement du gossypol ou de la gossypolone, ou de dérivés alkyle ethers de ces derniers dont le cas échéant une ou plusieurs fonctions hydroxyles sont substituées par un groupe alkyle de 1 à 3 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, avec un dithiol de formule HS(CH2)nSH dans laquelle n représente un nombre entier de 2 à 5, en présence de BF3.Et2O. A titre d'illustration, les composés de formule (la) sont obtenus par réaction du dithiol de formule définie ci-dessus, en présence de BF3.Et2O, avec le gossypol ou la gossypolone regroupés dans la formule (II) suivante :
Figure imgf000010_0001
dans laquelle Y et Z sont tels que définis ci-dessus, ce qui conduit aux composés de formule (Ia-1) lorsque Y représente C-OH, Z représente CH, a et c représentent une double liaison, et b représente une simple liaison, ou aux composés de formule (Ia-2) lorsque Y et Z représentent C=O, a et c représentent une simple liaison, et b représente une double liaison.
Les composés de formule (Ia-3) sont avantageusement obtenus par traitement des composés de formule (Ia-1) avec du fluoroborate de nitrosium.
A titre d'illustration encore, les composés de formule (Ib) sont obtenus par réaction du dithiol de formule définie ci-dessus, en présence de BF3.Et2O, du tétraméthyle éther ou de l'hexaméthyle éther du gossypol regroupés dans la formule (III) suivante
Figure imgf000010_0002
le tétraméthyle éther du gossypol correspondant au composé de formule (III) susmentionnée dans laquelle R' = H et R = CH3, et l'hexaméthyle éther du gossypol correspondant au composé de formule (III) susmentionnée dans laquelle R' = R = CH3, ce qui conduit à l'obtention des composés de formule (Ib) susmentionnée.
L'invention sera davantage illustrée à l'aide de la description détaillée qui suit de la synthèse des composés de formule (I) susmentionnée, et de l'étude de l'activité biologique de ces composés sur des cellules KB de carcinome humain. A. Appareillage
1. Chromatographie Liquide à Haute Performance analytique (HPLC analytique)
Les analyses HPLC ont été réalisées sur une chaîne constituée d'une pompe SpectraSYSTEM™ PIOOOXR, d'un mjecteur-vanne Rheodyne, d'un détecteur à barette de diodes Waters® 996 PDA et en phase inverse sur des colonnes Alltima C18, 5μm, (4,6mm x 250mm) et Alltima C8, 5μm, (4,6mm x 250mm) suivant les conditions isocratiques suivantes :
(I) : A/B = 7/93, débit : lml/mn
(II) : A/B = 10/90, débit : lml/mn
(III) : A/B = 20/80, débit : lml/mn
Avec A = 5% Acétonitrile + 95% Eau + 0,1% TFA B = 100% Acétonitrile + 0,1% TFA
Le coefficient de capacité k' des produits synthétisés est indiqué. Il correspond au rapport
Tr-To/To (Tr et To étant les temps de rétention du produit et le temps de rétention nul, respectivement)
2. Spectrométrie de Masse
Les spectres de masse (SM) ont été enregistrés sur les spectromètres suivants :
- AEI MS-50 pour l'impact électronique (IE)
- AE MS-9 pour l'ionisation chimique (IC)
- KRATOS MS-80 RF pour la technique de Fast Atom Bombardaient (FAB)
- Navigator-Thermoquest pour l'ionisation par électrospray (ESI)
- HPLC couplée à la masse (LC-MS) :
LC : Type de colonne Cl 8 - 4,6 mm d.i Volume injecté : 20μl Débit : lml/min Solvants : A/B = 20/80 avec A = 5% Acétonitrile + 95% Eau + 0,1% TFA B = 100% Acétonitrile + 0,1% TFA UV : λ = 263 nm ESI-MS : Débit : 300μl/min Cône :20 V Capillaire : 3,5kV Temp. : 180°C Pression N2 : 6 bar
Les masses sont exprimées en unité de masse par charge élémentaire (m/z)
3. Spectroscopie de Résonance Magnétique Nucléaire
Les spectres de RMN du proton (RMN 1H) ont été réalisés en solution dans des solvants deutériés et enregistrés sur des appareils de type Brϋcker AM-200 à 200MHz, AM-250 à 250MHz, AM-300 à 300MHz, AM-400 à 400MHz. Les déplacements chimiques (δ) sont exprimés en partie par million (ppm) par rapport au tétraméthylsilane (TMS) pris comme référence interne. Les constantes de couplage (J) sont donnérs en Hertz (Hz). Les caractérisations sont rapportées de la façon suivante : δ : déplacement chimique en ppm (multiplicité, nombre de protons, attribution). Les abréviations s, si, d, dd, t, q, m signifient respectivement : singulet, singulet large, doublet, doublet de doublet, triplet, quadruplet et multiplet.
Les spectres de RMN du carbone (RMN C) ont été réalisés en solution dans des solvants deutériés et enregistrés sur des appareils de type Brϋcker AM-200 à 50,2MHz, AM-250 à 62,5MHz, AM-300 à 75MHz, AM-400 à 100MHz. Les déplacements chimiques sont exprimés en ppm en prenant le pic central du solvant deutérié comme référence. Une corrélation a été effectuée sur de nombreux produits afin de permettre l'attribution de signaux.
Les solvants utilisés sont le chloroforme (CDC13), le méthanol (CD3OD) ou le DMSO (DMSO d6) deutériés.
Le nom des molécules a été déterminé selon la nomenclature IUPAC, en anglais, par le logiciel Autonom 1.1 (Beilstein Institut). B. Extraction et Purification du Gossypol
Nous avons choisi la méthode de Carruth (1918) que nous avons améliorée.
Méthode d'extraction du Gossypol de Carruth modifiée
Le concassage des graines de coton + bourre a été effectué avec un broyeur muni d'une grosse grille, le diamètre des trous de" la grille est de 2.5 cm ; longueur des couteaux : 19 cm. La séparation des graines concassées de la bourre a été faite à l'aide d'un tamis ; diamètre des mailles : 0,5 cm.
Le broyage a été réalisé sur un broyeur à couteaux muni d'une petite grille diamètre des trous de la grille 3 mm, longueur des couteaux 4 cm.
L'extraction a été faite à l'aide d'un Soxhlet dont le tube peut contenir 1 kg de poudre de graines de coton, muni d'un ballon tricol de 4 litres et d'un bouilleur électrique (bain-marie) réglé vers 40-60°C.
On commence par concasser les graines avec le gros broyeur puis on sépare par tamisage la bourre des graines concassées.
On renouvelle cette opération trois fois afin de récupérer le maximum de graines.
Les graines sont ensuite broyées à l'aide d'un broyeur à petite grille. On effectue un déshuilage par extraction au Soxhlet avec de l'éther de pétrole : lKg de graines broyées est introduit dans le tube du Soxhlet et 2,5 litres d'éther de pétrole dans le ballon. Le déshuilage se fait à douce ébullition (40°C), pendant 16 heures. A la fin de cette étape, la poudre, essorée, sortie du Soxhlet et séchée à l'.air ambiant.
L'extraction du gossypol se fait dans les mêmes conditions avec de l'éther éthylique. Les graines broyées déshuilées et séchées. On introduit dans le ballon du Soxhlet 2,5 litres d'éther éthylique, afin d'éviter une oxydation éventuelle du produit, une ébullition moyenne (40°C) est maintenue pendant 16 heures.
L'extrait éthéré est ensuite filtré. Le filtrat est concentré au maximum au rotavapor à température ambiante. On ajoute ensuite au concentrât 20 ml d'acide acétique glacial et 100 ml d'éther éthylique anhydre : aussitôt un dépôt de gossypol acétique commence à se former, on bouche bien le ballon et on le protège avec une feuille d'aluminium pour éviter toute oxydation et les effets de la lumière. On laisse en chambre froide et on filtre après 24h. Le précipité obtenu est lavé à l'éther de pétrole et est séché au dessicateur sur P2O5 et sous vide.
On ajoute 10 ml d'heptane au filtrat et on évapore à nouveau pour entrainer l'excès d'acide acétique par évaporation et on le traite par le même protocole que ci- dessus. Cette méthode d'extraction est illustrée dans le schéma suivant :
Schéma Extraction par la méthode de Carruth modifiée
Graines + Bourres
Concassage
Tamisage
Graines concassées
Broyage
Graines en poudre
Stockage au froid
Déshuilage par éther de pétrole (Soxhlet) et essorage
Huile
Extraction à l'éther (Soxhlet)
Gossypol
Concentration Extrait éthéré
+ AcOH glac.
+ Ether
Gossypol acétique (précipité) purifications (lavage sol, éther)
Au commencement de notre travail, nous avons obtenu une moyenne de 2,1 g de gossypol acétique extrait par kg d'amandes de coton d'origine camerounaise. Par la suite, nous avons amélioré les conditions de l'extraction (1 à 2 supplémentaires) et de la précipitation du gossypol acétique (à l'obscurité en chambre froide, évaporation à l'abri de la lumière) pour obtenir des rendements plus proches de 5,1 g de gossypol acétique par kg d'amandes. L'analyse par HPLC de même que la RMN, confirment la pureté du produit obtenu.
Analyse et caractéristiques du gossypol
L'analyse de la pureté du gossypol a été entreprise par HPLC analytique dans des conditions suivantes (voir figure 1) :
- Colonne : Alltima Cl 8, 5μm, (4,6mm x 250mm)
- (III) : A/B≈ 20/80, avec A = 5%ACN + 95%H2O + 0,1%TFA ; B = 100% ACN + 0,1%TFA.
- Débit = lml/mn, Pression = 2140 psi.
- k'(III) = 4,38.
1,6, 7,1 ',6', 7' - Hexahydroxy - 5,5'~ diisopropyl -3,3' - Diméthyl - [2,2 '] - binaphthalényl - 8,8'- Dicarbaldéhyde (Gossypol)
Composé n°l
Figure imgf000015_0001
C3oH30O8
MW = 518,5 (gossypol acétique MW = 578,6)
Forme du produit : solide amorphe jaune.
IR (CHC13) vmax cm"1 : 3504 (OH), 1712 (CHO). SM (FAB) m/z :„525 (M+Li) ; 501 (MH-H2O).
RMN 1H (300MHz, CDC13) : 1,54 (d, 12H5 2 HC-CÇgsk), 2,14 (s, 6H, 2 Ar-ÇHj), 3,90 (m, 2H, 2 HÇ_-(CH3)2), 5,93 (s, 2H, 2 OH en positions 1,1'), 6,51 (s, 2H, 2 OH en positions 6,6'), 7,80 (s, 2H, 2 Ar-H), 11,12 (s, 2H, 2 ÇHO), 15,13 (s, 2H, 2 OH en positions 7,7').
RMN 1 "3/C (75MHz, CDC13) : 20,3 (HC-(ÇH3)2 ; Ar-ÇH3), 27,9 (HÇ_-(CH3)2), 114,7 ; 115,8 ; 118,2 ; 119,7 ; 129,8 ; 133,7 ; 134,2 ; 143,5 ; 150,5 ; 156,2 (carbones du noyau naphtalénique), 199,4 (ÇHO).
C. Oxydation du Gossypol : synthèse de la Gossypolone Composé n° 2
Figure imgf000016_0001
Gossypolone
, 7,6', 7' - Tétrahydroxy - 5,5'- diisopropyl - 3,3'- diméthyl - 1,4,1 ',4'- tetraoxo - ,4,1 ',4' - tétrahydro - [2,2'Jbinaphthalényl - 8,8'- dicarbaldéhyde (Gossypolone)
Réaction : la réaction a été effectuée par la méthode écrite par Haas et al. (Hass RH & Shirley DA, 1965). 1,5g (2,59 mmol) du gossypol sont dissous dans un mélange de 75mL d'acétone et de 150mL d'acide acétique glacial. Le mélange réactionnel est chauffé dans un bain-marie (60-70°C) en ajoutant 112,5mL (42 mmol) de la solution aqueuse 10% de chlorure de fer, pendant 15 minutes. Ensuite, le mélange réactionnel est laissé ref oidir à température ambiante, 200mL d'eau sont alors ajoutés pour former un précipité noir qui contient le sel de fer et qui est séparé par la filtration. Le résidu obtenu est traité avec l'acide sulfurique 20%, la phase aqueuse est extraite par l'éther, les phases organiques sont réunies, lavées, séchées sur sulfate de sodium, filtrées et évaporées sous pression réduite. Le produit brut est purifié par une précipitation dans chloroforme/hexane. O 2004 0
16
Figure imgf000017_0001
C3oH26θ8
MW= 546,5
Forme du produit : solide amorphe vert foncé
Condition de HPLC analytique :
- Colonne : Alltima Cl 8, 5μm, (4,6mm x 250mm)
- (III) : A/B = 20/80, avec A = 5% ACN + 95% H2O + 0,1% TFA ; B = 100% ACN + 0,1% TFA.
- Débit = 1 ml/mn, Pression = 2140 psi.
- k' (III) = 2,75
HPLC de la Gossypolone (Figure 2)
Rendement : 85% (1,2g)
IR (CHC13) vraax cm-1 : 3514 (OH), 1640 (C=O).
SM (FAB) m z : 553 (M+Li).
RMN 1H (300MHz, CDC13) : 1,52 (d, 12H, 2 HC-(ÇH3)2), 2,14 (s, 6H, 2 Ar-ÇH3), 4,11 (m, 2H, 2 HÇ-(CH3)2), 6,61 (s, 2H, 2 OH en positions 6,6'), 11,62 (s, 2H, 2 ÇHO), 13,13 (s, 2H, 2 OH en positions 7,7') ;
RMN 13C (300MHz, CDC13) : 19,8 (Ar-ÇH3) 19,9 (HC-(CH3)2), 28,8 (HÇ-(CH3)2)- 116,1 ; 127,2 ; 127,8 ; 138,3 ; 141,7 ; 147,4 ; 149,5 ; 152,6 (carbones du noyau naphtalénique), 184,6 ; 186,7 (C=O du groupement quinonique), 198,6 (ÇHO). D. Protection du Gossypol par méthylation des groupes phénoliques
Figure imgf000018_0001
R'=H, R= CH3 Tétraméthyle éther du Gossypol R ', R- CH3 Hexaméthyle éther du Gossypol
1. Synthèse du tétraméthyle éther du Gossypol Composé n° 3
5,5' - diisopropyl - 2,4,2 4' - tétraméthoxy - 7,7' - diméthyl - 2H,2 'H - [8,8 ']bi[naphtho [l,8-bc]furanyl] - 3,3'- diol
Réaction : par le sulfate de méthyle en présence de méthylate de potassium dans le méthanol ( Morris et al, 1937)). On dissout lg (1,73 mmole) de gossypol acétique dans 5 ml de méthanol et 5 ml de sulfate de méthyle, on chauffe très légèrement au bain marie puis, lorsque tout est dissous, on ajoute 7 ml de potasse méthanolique à 10% goutte à goutte. Il faut éviter que le mélange réactionnel ne soit trop basique. L'adjonction de potasse (0,5 ml 15 minutes) est une phase critique dont dépendra la pureté du produit. On laisse la réaction se poursuivre pendant la nuit. La couleur du mélange réactionnel devient brun foncé et un précipité de sulfate de potassium est formé. Au matin, on détruit le sulfate de méthyle en excès par une solution aqueuse de soude à 10%. Un précipité est formé, on le sépare par filtration .puis le lave avec du méthanol froid. L'analyse HPLC indique la présence d'un seul produit.
Figure imgf000018_0002
C34H38O8
MW ≈ 574,7
Forme du produit : solide amorphe blanc.
Condition de HPLC analytique :
- Colonne : Alltima Cl 8, 5μm, (4,6mm x 250mm)
- (II) : A/B = 10/90, avec A = 5% ACN + 95% H2O + 0.1% TFA ; B = 100% ACN + 0.1% TFA.
- Débit = lml/mn, Pression = 1500psi.
- k'(II) = 2,82
Rendement : 85% (0,85g).
SM (FAB) m/z : 575 (MH+).
RMN 1H (300MHz, CDC13) : 1,52 (d, 12H, 2 HC-(ÇH3)2), 2,29 (s, 6H, 2 Ar-ÇHs), 3,83 (m, 2H, 2 HÇ-(CH3)2), 3,28 (s, 6H, 2 O-HC-OÇH3), 4,19 (s, 6H, 2 OÇH3 en positions 7,7'), 6,28 (s, 2H, 2 OH 6,6' en positions), 7,1 (s, 2H, 2 O-HC-O- OCH3),
7,42 (s, 2H, 2 Ar-H).
RMN 13C (300MHz, CDC13) : 20,6 (HC-(ÇH3)2), 21,0 (Ar-ÇH3), 26,8 (HÇ-(CH3)2), 51,7 (O-HC-OÇH3) ; 58,2 (OÇH3 7,7' en positions) ; 107,5 (O-HÇ-O-OCH3), 109,0 ; 113,3 ; 114,1 ; 121,0 ; 125,3 ; 126,6 ; 136,9 ; 141,7 ; 145,7 ; -.55,3 (carbones du noyau naphtalénique).
2. Synthèse du Hexaméthyle éther du Gossypol Composé n° 4
5,5'- diisopropyl - 2,34,2', 3 ',4' - hexaméthoxy - 7,7' - diméthyl- 2H,2'H-[8,8']bi [naphtho[l,8-bc]furanyl]
Réaction : On dissout 2g (3,46mmole) de gossypol acétique dans 20 ml de méthanol et 20 ml de sulfate de méthyle, on chauffe au bain-marie puis, lorsque tout est dissous, on ajoute 32 ml de potasse méthanolique à 10 % goutte à goutte. Le mélange réactionnel devient basique puis rapidement très acide après chaque ajout de potasse méthanolique. L'apparition de l'acidité est de moins en moins rapide. Finalement, le mélange réactionnel est soumis à une agitation magnétique sous argon, pendant 48h à température ambiante. Ensuite, le sulfate de méthyle en excès est décomposé par une solution aqueuse de soude à 10%, un précipité blanc est formé, on l'isole par filtration puis le lave avec du méthanol froid.
L'analyse HPLC indique la présence de 2 produits, l'un d'eux étant majoritaire (72,5%). Un essai de séparation sur gel de silice L= 50 cm, d = 2,1 cm ; toluène éther 9/1) a permis de séparer deux fractions de même masse (MH+ = 603)
Figure imgf000020_0001
MW ≈ 602,7
Forme du produit : solide amorphe blanc.
Condition de HPLC analytique :
- Colonne : Alltima Cl 8, 5μm, (4,6mm x 250mm)
- (II) : A/B = 10/90, avec A = 5% ACN + 95% H2O + 0,1% TFA ; B ≈ 100% ACN + 0,1% TFA.
- Débit = lml/mn, Pression = 1500 psi.
- k'(II) = 6,14 (83%) ; 6,53 (17%)
Rendement : 76,9% (1,6g)
SM (FAB) m/z : 603 (MH+). RMN H (300MHz, CDC13) : 1,54 (d, 12H, 2 HC-(ÇH3)2), 2,32 (m, 6H, 2 Ar-ÇHa), 3,31 - 3,46 (m, 6H, 2 O-HC-OÇH3), 3,83 - 4,19 (m, 14H, 2 HC-(CH3 4 OCH3 en positions 6,7,6',7'), 6,95 - 7,06 (m, 2H, 2 O-HÇ-O- OCH3), 7,48 (m, 2H, 2 Ar-H).
RMN 13C (75MHz, CDC13) : 21,1 (Ar-ÇH3), 22,1 (HC-(ÇH3)2), 27,1 (HÇ-(CH3)2), 52,4 & 52,7 (O-HC-OÇH3) ; 54,0 & 54,4 (OÇH3 en positions 7,7'), 58,2 & 58,5 (0ÇH3 en positions 6,&), 61,4 (O-HÇ-O-OCH3), 108,5 & 108,7 ; 110,4 ; 115,0 & 115,2 ; 116,5 ; 123,7 ; 124,9 & 125,1 ; 136,6, 136,7 & 137,0 ; 147,6 ; 150,0 ; 154,9 (carbones du noyau naphtalénique).
E. Dérivés 1,3-Dithiane , 1-3-Dithiolane du Gossypol et de la Gossypolone - Dérivés thioethers des dérivés méthyles ethers du Gossypol
Dérivés 1,3-Dithiane, 1,3-Dithiolane du Gossypol
Figure imgf000021_0001
n=2, 1,3-Dithiolane du Gossypol n=3, 1,3-Dithiane du Gossypol
Méthode générale : A une solution de lg (1,73 mmole) de gossypol acétique dissous dans 40mL d'éther a été ajouté 3.eqv de dithioethane (dithiopropane). Le mélange réactionnel est refroidi à -20°C, puis, on ajoute goutte à goutte l.eqv de BF .OEt2. Ensuite, ce mélange est soumis à une agitation magnétique, en l'absence de lumière et sous argon, pendant 24h à température ambiante. Au matin, le précipité jaune formé est séparé par filtration, lavé avec d'éther.
La pureté de ces produits est évaluée par HPLC analytique dans des conditions suivantes : Condition de HPLC analytique :
- Colonne : Alltima Cl 8, 5μm, (4,6mm x 250mm)
- (III) A/B = 20/80, avec A = 5% ACN+ 95% H2O+ 0.1% TFA ; B =100% ACN+ 0,1% TFA.
- Débit : lml/mn, Pression = 2140 psi.
8,8' - Bis - [l,3]dithiolan - 2 -yl - 5,5' - Diisopropyl - 3,3' - diméthyl - [2,2'Jbinaphthalényl - 1,6, 7,1 ',6' , 7' - hexaol (GDTE)
Composé n° 5
C3 H38O S4
MW = 670,9
Forme du produit : solide amorphe jaune.
HPLC du 1,3-Dithiolane du Gossypol (Figure 3)
Rendement : 67% (778 mg)
HPLC : k' (ffl) ≈ 9,17
SM (ESI) m z : 699 (M-H") RMN 1H (400MHz, CDC13) : 1,54 (d, 12H, 2 HC-(ÇH )2), 2,00 (s, 6H, 2 Ar-ÇHs), 3,31 ; 3,65 (dd, 8H, 2 C-S-CH2-CH2-S), 3,94 (m, 2H, 2 HÇ-(CH3)2), 7,51 (s, 2H, 2 Ar; H), 8,13 (s, 2H, 2 S-HÇ-S), 7,96, 8,29, 8,63 (si, 6H, 6 OH en positions U',6,6',7,7').
RMN 13C (100MHz, CDC13) : 20,4 (Ar-ÇH3), 20,6 (HC-(ÇH3)2), 26,2 (HÇ-(CH3)2), 39,7(C-S-ÇH2-ÇH2-S) ; 50,6 (S-HÇ-S) ; 111,7 (C-8), 115,4 (C-4), 117,4 & 117,6 (C-2 & C-9), 125,7 (C-5), 129,2 (C-10), 132,3 (C-3), 143,9 (C-6), 146,0 (C-7), 150,7 (C-l).
8,8' - Bis - [l,3]dithian - 2 -yl - 5,5' - Diisopropyl - 3,3' - diméthyl - [2,2'Jbinaphthalényl 1,6, 7,1 ',6' , 7' - hexaol (GDTP)
Composé n° 6
Figure imgf000023_0001
1,3-Dithiane du Gossypol
C36H 2O6S
MW = 698,9
Forme du produit : solide amorphe jaune.
Rendement : 93% (1,12g)
HPLC : k' (III) = 10,25
SM (ESI) m/z : 721 (M+Na)
RMN XH (400MHz, CDC13) : 1,47 (d, 12H, 2 HC-(CH3 2), 1,74 ; 2.15 (m, 4H, 2 C-S- CH2-ÇH2-CH2-S), 1,96 (s, 6H, 2 Ar-ÇHs), 2,93 (m, 8H, 2 C-S-CH2-CH?-CH2-S), 3,87 (m, 2H, 2 HÇ-(CH3)2)5 7,55 (s, 2H, 2 Ar -ÏÏ), 7,83 (s, 2H, 2 S-HÇ-S) ; 7,77, 8,25, 8,63 (si, 6H, 6 OH en positions 1,1 ',6,6', 7,7'). RMN 13C (100MHz, CDC13) : 20,4 (Ar-ÇHβ , 20,5(HC-(ÇH3», 26,2 (HÇ-(CH3)2), 25,0 (C-S-CH2-ÇH2-CH2-S), 31,6 (C-S-ÇH2-CH2-ÇH2-S), 45,7 (S-HÇ-S), 111,4 (C-8), 115,6, 115,7 (C-4 & C-9), 117,9 (C-2), 125,6 (C-5), 129,4 (C-10), 132,4 (C-3), 143,7 (C-6), 146,7 (C-7), 150,7 (C-l).
2. Dérivés 1,3-Dithiane du GQSSVΏQI à partir de t'anhvdroεossvpol
Figure imgf000024_0001
Anhydrogossypol HS(CHJ3SH
Figure imgf000024_0002
1,3-Dithiane du Gossypol
Réaction :
Synthèse d' anhydrogossypol : Dans des conditions anhydres, HC1 gaz est passé sur la surface d'une solution de 2,5g de pyridine anhydre dans 12,5g de toluène anhydre jusqu'à ce que le sel précipité de chlorure de pyridinium ne se forme plus. Ensuite, on ajoute 50ûmg (0,87 mmole) de gossypol acétique dans 70mL de toluène, le mélange réactionnel est soumis à une agitation magnétique, sous l'azote, chauffé à 110°C. Après 3h de la réaction, on arrête la réaction. Par CCM, on constate qu'il n'y a plus de gossypol et un seul produit est formé.
Synthèse du 1,3-dithiane du gossypol : on suppose que le rendement de cette réaction est 100%, On ajoute 262μL (2,61 mmol) de dithiopropane dans ce mélange réactionnel d' anhydrogossypol. Ce mélange est laissé sous agitation magnétique pendant la nuit à température ambiante. Au matin, le précipité jaune formé est séparé par filtration, lavé avec hexane.
Les analyses de RMN, masse et HPLC analytique prouvent que ce produit possède les mêmes caractéristiques que celles du 1,3-dithiane du gossypol.
3. Dérivés thioethers des dérivés méthylés ethers du Gossypol
Figure imgf000025_0001
R=H; R'=CH3 Tétraméthyle éther du Gossypol R ', R= CH3 Hexaméthyle éther du Gossypol
Méthode générale : A une solution de 0,1- 1M de l.eqv de dérivés méthyle ethers du gossypol dans le chloroforme a été ajouté 3.eqv de dithioethane (dithiopropane). Le mélange réactionnel est refroidi à -20°C, puis, on ajoute goutte à goutte l.eqv de BF3.OEt2. Ensuite, ce mélange est soumis à une agitation magnétique, en l'absence de lumière et sous argon, pendant 24h à température ambiante. Au matin, le précipité formé est séparé par filtration, lavé avec l'hexane. Ce précipité peut être purifié par une précipitation dans un mélange de chloroforme et hexane
La pureté de ces produits est contrôlée par HPLC analytique dans des conditions suivantes :
Condition de l'HPLC analytique :
- Colonne : Alltima Cl 8, 5μm, (4,6mm x 250mm)
- (II) A B = 10/90, avec A = 5% ACN+ 95% H2O+ 0,1% TFA ; B =100% ACN+ 0,1% TFA. Débit : lml/mn, Pression = 1500 psi.
Composé n° 7 (pas de nomenclature accessible)
Figure imgf000026_0001
C3 H36O6S2
MW = 604,7
Forme du produit : solide amorphe blanc.
Rendement : 24,2%
HPLC : k' (II) ≈ 3,82
SM (El) m/z : 605 (MH+)
RMN 1H (300MHz, CDC13) : 1,41 (d, 12H, 2 HC-CCRO 2,30 (s, 6H, 2 Ar-ÇHj), 2,61, 2,95 (d, 4H, C-S-CH?-CH2-S1 3,66 (m, 2H, 2 HÇ-(CH3)2), 4,10 (s, 6H, 2 OÇH3 en positions 7,7'), 6,18 (s, 2H, 2 OH en positions 6,6'), 6,98 (s, 2H, 2 O-HÇ-S), 7,30 (s, 2H, 2 Ar;H).
RMN 13C (75MHz, CDC13) : 20,7 (HC-(ÇH3)2 ; Ar-ÇH3), 26,9 (HÇ-(CH3)2), 30,7 (C-S- ÇH2-ÇH2-S), 59,3 (OÇH3 en positions 7,7'), 90,2 (O-HÇ-S), 109,4 (C-2), 114,2 (C-4), 118,2 (C-8), 121,2 (C-9), 125,8, 126,1 (C-5, C-10), 137,2 (C-3), 139,8 (C-7), 146,4 (C- 6), 156,5 (C-l). Composé n° 8 (pas de nomenclature accessible)
Figure imgf000027_0001
MW = 618,8
Forme du produit : solide amorphe blanc.
Rendement : 60,3%.
HPLC : k' (II) = 4,09
SM (ESI) m/z : 619 (MH)
RMN 1H (300MHz, CDC13) : 1,43 (d, 12H, 2 HC-fCRQA 1,67 (m, 4H, S-CH -CH1- CH2-S), 2,14 (s, 6H, 2 Ar-ÇHs), 2,98 8c 3,02 (m, 4H, S-CH2-CH7-CH2-SV 3,72 (m, 2H, 2 HÇ-(CH3)2), 4,09 (s, 6H, 2 OÇH3 en positions 7,7'), 7,31 (s, 2H, 2 Ar-H), 7,39 (s, 2H, 2 O-HÇ-S), 8,60 (s, 2H, 2 OH en positions 6,6').
RMN 13C (75MHz, CDC13) : 20,3 (Ar-ÇH3), 20,5 (HC-(ÇH3)2), 25,9 (HÇ-(CH3)2), 27,0 (S-ÇH2-CH2-ÇH2-S), 27,6 (S-CH2-ÇH2-CH2-S), 58,2 (OÇH3 en positions 7,7'), 88,6 (O-HÇ-S), 108,9 (C-2), 113,4 (C-4), 118,1 (C-8), 120,6 (C-9), 125,1, 125,2 (C-5, C-10), 136,2 (C-3), 140,5 (C-7), 147,1 (C-6), 155,1 (C-l). Composé n° 9 (pas de nomenclature accessible)
Figure imgf000028_0001
MW = 646 ,8
Forme du produit : solide amorphe blanc.
Rendement : 27 ?3%.
HPLC : k' (II) = 10,71
SM (ESI) m/z : 647 (MH+)
RMN 1H (400MHz, CDC13) : 1,51 (d, 12H, 2 HC-fCH^A 2,24 (s, 6H, 2 Ar-ÇHs), 1,76 (m, 2H, C-S-CH2-ÇH2-CH2-S), 3,04 ; 3,34 (m, 4H, C-S-ÇH2-CH2-ÇH2-S), 3,82 (m, 2H, 2 HÇ-(CH3)2), 3,87 (s, 6H, 2 OÇH3 en positions 6,6'), 4,13 (s, 6H, 2 OÇH3 en positions 7,7'), 7,12 (s, 2H, 2 O-HÇ-S), 7,44 (s, 2H, 2 Ar-H).
RMN 13C (300MHz, CDCI3) : 20,9 (Ar-ÇH3), 22,0 (HC-(ÇH3)2), 27,1 (HÇ-(CH3)2, C- S-CH2-ÇH2-CH2-S), 27,5 (C-S-ÇH2-CH2-ÇH2-S), 59,2 (OÇH3 en positions 7,7'), 61,4 (OÇH3 en positions 6,6'), 89,5 (O-HÇ-S), 111,0 (C-2), 115,7 (C-4), 121,4 (C-8), 124,0 (C-9), 125,9 (C-10), 136,0 (C-5), 137,1 (C-3), 145,2 (C-7), 151,0 (C-6), 155,5 (C-l). 4. Dérivés 1,3-Dithiane. 1,3-Dithiolane de la Gossypolone
Figure imgf000029_0001
n=2, 1,3-Dithiolane de la Gossypolone n=3, 1,3-Dithiane de la Gossypolone
Méthode générale : A une solution de 1g (1,83 mmole) de gossypolone dissoute dans 50mL de chloroforme a été ajouté 3.eqv de dithioethane (dithiopropane). Le mélange réactionnel est refroidi à -20°C, puis, on ajoute goutte à goutte l.eqv de BF3.OEt2. Ensuite, ce mélange est soumis à une agitation magnétique, en l'absence de lumière et sous argon, pendant 24h à température ambiante. On vérifie que la réaction est terminée, l'HPLC du mélange réactionnel donne un seul pic, et le pic de la gossypolone de départ a disparu. Le mélange réactionnel est lavé avec NaHCO3 5% (3X20mL), à l'eau (3 fois) et est séché sur sulfate de sodium, filtré et évaporé sous pression réduite pour donner un résidu vert. Le résidu est repris dans l'éther et reprécipité dans l'hexane.
La pureté de ces produits est analysée par l'HPLC analytique dans des conditions suivantes : Conditions de l'HPLC analytique :
- Colonne : Alltima Cl 8, 5μm, (4,6mm x 250mm)
- (III) : A/B = 20/80, avec A = 5% ACN + 95% H2O + 0.1% TFA ; B =100% ACN + 0.1% TFA.
- Débit = lml/mn, Pression = 2140 psi.
Figure imgf000030_0001
Composé n° 10
Figure imgf000030_0002
C34H34O8S4
MW = 698,8
Forme du produit : solide amorphe vert clair
Rendement : 65% (830mg)
HPLC : k' (III) = 4,70
SM (ESI) m/z : 697 (M-H")
RMN 1H (300MHz, CDC13) : 1,43 (d, 12H, 2 HC-(.CH3)2), 1,99 (s, 6H, 2 Ar-ÇHa), 3,40, 3,58 (m, 8H, 2 C-S-CH.-CH7-S 4,03 (m, 2H, 2 HÇ-(CH3)2), 7,15 (s, 2H, 2 S- HÇ-S), 6,63, 8,89 (si, 4H, 4 OH en positions 6,6', 7,7').
RMN 13C (75MHz, CDCI3) : 14,4 (Ar-ÇH3), 19,4 & 19,6 (HC-(ÇH3)2), 28,2 (HÇ- (CH3)2), 39,8 ; 40,0 (C-S-ÇH2-ÇH2-S), 50,1 (S-HÇ-S), 119,9 (C-8), 125,5 (C-9), 128,8 (C-10), 136,8 (C-5), 139,4 (C-2), 145,8 (C-3), 147,2 (C-7), 149,7 (C-6), 185,4 (C-1), 187,6 (C-4). 8,8' - Bis - [l,3]dithian - 2 -yl- 6,7, 6', 7' - tetrahydroxy - 5,5' - diisopropyl - 3,3' - diméthyl - [2,2 '[binaphthalényl - 1,4,1 ',4'- tétraone
Composé n° 11
Figure imgf000031_0002
C36H38O8S4
MW= 726,9
Forme du produit : solide amorphe vert clair.
Rendement : 89% (1,18g)
HPLC : k' (III) = 5,97
SM (ESI) m/z : 749 (M+Na).
RMN 1H (400MHz, CDC13) : 1,43 (dd, 12H, 2
Figure imgf000031_0001
1,99 (s, 6H, 2 Ar-ÇHj), 1,87 ; 2,15 (m, 4H, 2 C-S-CH2-ÇH2-CH2-S), 2,85 ; 3,10 (m^ 8H, 2 C-S-ÇHi-CH -OEk- S), 4,02 (m, 2H, 2 HÇ-(CH3)2), 7,23 (s, 2H, 2 S-HÇ-S), 6,57 ; 8,18 (si, 4H, 4 OH en positions 6,6', 1,7').
RMN 13C (100MHz, CDC13) : 14,5 (Ar-ÇH3), 19,9 & 20,0 (HC-(CH3)2), 28,2 (HÇ- (CH3)2), 24,8 (C-S-CH2-ÇH2-CH2-S), 31,2 (C-S-ÇH2-CH2-ÇH2-S), 43,1 (S-HÇ-S), 121,5 (C-8), 123,4 (C-9), 128,8 (C-10), 136,8 (C-5), 139,4 (C-2), 145,9 (C-3), 147,0 (C- 7), 149,5 (C-6), 185,3 (C-1), 187,8 (C-4). Composé n° 12
Le gossypol dithiane 6 se transforme, sous l'action du fluoroborate de nitrosonium, en un nouveau dérivé 12 de toxicité comparable à celle du gossypol.
dérivé 12
Figure imgf000032_0001
'-Dimercaptomethylene-8-[l,3]dithian-2-ylidene-l,6,l',6'-tetrahydroxy-5,5'~diisopropyl- ,3 >-dimethyl-8H,8 'H-[2,2 'Jbinaphthalenyl-7, 7'-dione (12a) .
150 microlitres d'une solution contenant 20mg de NO+,BF4 " dans 400 microlitres de CH2C12 and 50 micro litres de DMF sont versés dans une solution de 150mg de 1,3 dithiane gossypol 6 dans 15 ml de DMF à température ambiante. L'évolution de la réaction est suivie par HPLC et, après 24h, 6 donne 12 (68%>). Le dérivé 12 a été séparé par HPLC préparative pour les études structurales qui indiquent la présence majoritaire de la forme 12a :
HPLC Rendement 14 %. : k'(II) : 3,19 ; ESI-MS : m/z 694 (M)
1H RMN (400MHz, CDC13) δ 1,53 (d, 12H, 2 HC-fCH^), 1,99 (s, 6H, 2 Ar-ÇHs) 13C RMN (100MHz, CDC13) δ 20,3-20,7 (Ar-ÇHs), 21,3-21,4 (HC-OQHs», 28,1-28,2 (HÇ-(CH3)2), 27,0 (C-S-CH2-ÇH2-CH2-S), 29,6-30,0 (C-S-ÇH2-CH2-ÇH2-S), 41,9 ; 65,1 (S-HÇ-S), 107,9-149,9 ; 173,0 & 187,8 (noyau naphthalene)
F/ BIOLOGIE
Activités biologiques
La toxicité sur cellules KB est reportée dans le tableau 1. Nous avons vérifié que le fait de masquer les groupements aldéhydes du gossypol ou de la gossypolone entrainait une importante diminution de la toxicité cellulaire (100 fois pour le gossypol dithiane 6 et 10 fois pour le dithiane de la gossypolone 11).
Le blocage des groupes phénols entraîne une diminution totale de la toxicité pour les dérivés thiomethoxy 7, 8 et 9.
Figure imgf000033_0001
Tableau 1. Toxicité des thiodérivés sur les cellules KB Toxicité des thiodérivés en présence d'un donneur de NO.
Dithianes et dithiolanes réagissent facilement avec un donneur d'ions nitronium NO+ dans un solvant organique. Lorsque le mélange réactionnel est versé dans l'eau, l'intermédiaire issu du dithiane de la gossypolone donne à nouveau la gossypolone tandis que le dithiane du gossypol conduit, après les mêmes opérations, à un produit nouveau 12, ayant à peu près la même toxicité que le gossypol (tableau 1). Dans tous les cas, la protection par formation de dithiane réduit considérablement la toxicité, laquelle est restaurée par l'action de l'ion nitronium suivie de l'hydrolyse des intermédiaires.
Dans le milieu biologique, l'oxyde nitrique, lorsqu'il est lié au hème des cytochromes peut être considéré comme un ion nitronium potentiel, un intermédiaire de la formation des mtrosothiols.
. NO + Fe3+ - [NO-Fe3+] -» [NO+] + Fe2+ NO+ + R-S" ^ RS-NO
La très faible toxicité des thiodérivés du gossypol sur les cellules KB nous a encouragés a examiner cette toxicité en présence d'un donneur de NO dans un milieu de culture cellulaire.
L'expérience a été réalisée en incubant le gossypol dithiane 6 simultanément avec le dipropylènetetramine nonoate (DPTA NONOate).
Nous avons observé que le nonoate, à des concentrations non toxiques pour les cellules KB, augmentait significativement la toxicité de 6 (tablbau 2)
Figure imgf000034_0001
Tableau 2. Toxicité de 6 en présence de DPTA NONOate Conclusion
La toxicité des dérivés du gossypol a souvent été attribuée à la présence du dialdéhyde qui peut éventuellement ponter des enzymes ou des acides nucléiques.
Nos résultats ajoutent à ces hypothèses la possibilité pour les dithiols de se coupler au gossypol. Ainsi, les groupements dithiols dans les enzymes natives pourraient lier irréversiblement le gossypol, ce qui contribuerait à sa toxicité.
L'oxyde nitrique est produit en quantités importantes par les macrophages activés dans une réponse inflammatoire contre des bactéries, des virus ou des cellules tumorales. NO est particulièrement abondant au voisinage des tumeurs solides qui sont très vascularisées et pour lesquelles il joue un rôle fondamental dans l'angiogenèse et la perméabilité vasculaire.
Dans ces conditions, NO peut aussi, dans le milieu biologique, révéler la toxicité, à proximité des tumeurs de dérivés dont la toxicité est convenablement masquée par combinaison avec le soufre. Nous proposons ainsi une voie nouvelle pour cibler la cytotoxicité envers des cellules qui expriment NO ou bien se développent dans de fortes concentrations d'oxyde nitrique.
Partie expérimentale biologique
Les activités cytotoxiques in vitro de tous les thiodérivés du gossypol ont été mesurées sur des cellules KB (carcinome de l' épidémie buccal humain) en provenance de l' American Type Culture Collection.
La lignée de cellules KB a été cultivée dans MEM (minimal essential médium, with Earle's sait solution) acheté chez Seromed, contenant 10% sérum fœtal bovin, 2 mM de L-glutamine, 60 u/ml de pénicilline G et streptomycine sulfate et 40 μg/ml de gentamycine. Pour les essais, les cellules KB ont été cultivées à l'état de monocouches dans des microplaques plastiques Nunc à 24 puits (25,000 cellules ensemencées par puits dans 1 ml de milieu de culture). Les produits ont été dissous dans le dimethylsulfoxide (DMSO), et des dilutions en cascades ont été faites dans ce solvant puis ajoutées dans les cultures à raison de lOμl par puits, immédiatement après avoir rincé les cellules et ajouté un nouveau milieu de culture (concentration finale du DMSO < 1%). Des cultures de contrôle ont reçu une dilution équivalente de DMSO.
Toutes les cultures ont été incubées à 37°C sous une atmosphère 95% air- 5% CO2 dans un incubateur humide. Après 3 jours d'incubation la viabilité des cellules en monocouche a été évaluée en ajoutant dans chaque puits lOOμl d'une solution à 0.02% dans le milieu de culture de rouge neutre vital et après une nouvelle incubation de 8 à 16 h. Après lavage par du tampon phosphate et lyse des cellules avec une solution à 1% de sodium lauryl-dodecyl sulfate, une mesure photométrique du colorant extrait a été réalisée à 540nm avec un lecteur de microplaques Uniskam-II (Labosystems, Life Sciences International).
Pour la plupart des dérivés étudiés, les concentrations finales mesurées étaient dans l'intervalle 0,5 μM à lOμM et les mesures ont été faites en duplicates dans chaque microplaque. Les ICso ont été calculés par interpolation entre les pourcentages de cellules tuées en fonction de la concentration du dérivé étudié.
Pour étudier l'effet du DPTA NONOate sur la toxicité du dérivé 6, les cellules KB ont été cultivées comme décrit ci-dessus, en présence de sérum fœtal bovin. Après 24 h d'incubation à 37°C, 6 et le nonoate ont été ajoutés simultanément aux cultures. Des échantillons standard et de contrôle ont été incorporés dans chaque microplaque pour déterminer la viabilité des cultures avec le nonoate, avec 6, ou sans aucun produit ajouté. Le pourcentage de destruction des cellules a été déterminé comme précédemment après une incubation de 48 h à 37°C.
LEGENDE DES FIGURES
- Figure 1 : HPLC du gossypol
- Figure 2 : HPLC de la gossypolone
- Figure 3 : HPLC du 1,3-dithiolane du gossypol
- Figure 4 : HPLC du 1,3-dithiane du gossypol
- Figure 5 : HPLC du composé n° 8
- Figure 6 : HPLC du composé n° 9
- Figure 7 : HPLC du 1,3-dithiolane de la gossypolone
- Figure 8 : HPLC du 1,3-dithiane de la gossypolone
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York C, Surya Prakash GK, Olah GA, (1996), Tetrahedron, 52(1), 9-14, Desulfurative fluorination using Nitrosonium tetrafluoroborate and pyridinium polyQiydrogen fluoride).

Claims

REVENDICATIONS
Composés de formule générale (I) suivante :
Figure imgf000040_0001
dans laquelle n2 représente 0 ou 1, et :
- lorsque n2 représente 0, alors R2 et t représentent H, et W représente un cycle de formule suivante :
Figure imgf000040_0002
ce qui correspond à des composés de formule (la) suivante :
Figure imgf000040_0003
dans laquelle :
• A représente O ou OH,
• n est un nombre entier de 2 à 5, et de préférence n représente 2 ou 3,
• Y représente C-OH, ou C=O,
• Z représente CH, ou C=O, sous réserve que lorsque :
* A représente O, d et f représentent une double liaison, et e représente une simple liaison, * A représente OH, d et f représentent une simple liaison, et e représente une double liaison,
* Y représente C-OH, alors Z représente CH, a et c représentent une double liaison, et b représente une simple liaison,
* Y représente C=O, alors Z représente C=O, a et c représentent une simple liaison, et b représente une double liaison,
- et lorsque n2 représente 1, alors A représente un groupe ORi ou OR3 tel que défini ci-après, et W représente en association avec Y un groupe de formule suivante :
Figure imgf000041_0001
ce qui correspond à des composés de formule (Ib) suivante :
Figure imgf000041_0002
dans laquelle :
• ni est un nombre entier de 2 à 5, et de préférence ni représente 2 ou 3,
• Ri, R2, R3, et 4, indépendamment les uns des autres, représentent un atome d'hydrogène, ou un groupe alkyle de 1 à 3 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle.
2. Composés selon la revendication 1, de formule (Ia-1) suivante :
Figure imgf000041_0003
dans laquelle la chaîne hydrocarbonée -(CH2)n- est telle que définie dans la revendication 1.
Composés selon la revendication 1, de formule (Ia-2) suivante :
Figure imgf000042_0001
dans laquelle la chaîne hydrocarbonée -(CH2)n- est telle que définie dans la revendication 1.
4. Composés selon l'une des revendications 1 à 3, de formule (Ia-1) ou (Ia-2) dans laquelle n = 2, lesdits composés étant respectivement désignés dithiolanes de gossypol ou de gossypolone.
5. Composés selon l'une des revendications 1 à 3, de formule (Ia-1) ou (Ia-2) dans laquelle n = 3, lesdits composés étant respectivement désignés dithianes de gossypol ou de gossypolone.
6. Composés selon la revendication 1, de formule (Ia-3) suivante
Figure imgf000042_0002
dans laquelle la chaîne hydrocarbonée -(CH2)n- est telle que définie dans la revendication 1.
7. Composés selon l'une des revendications 1 à 6, sous forme d'énantiomères lévogyres (-), ou d'énantiomères dextrogyres (+), ou sous forme d'un mélange racémique comprenant respectivement environ 50% d'énantiomères (-), et environ 50% d'énantiomères (+).
8. Composés selon l'une des revendications 1 à 7, sous forme d'énantiomères lévogyres (-).
9. Composés selon la revendication 1, de formule (Ib) suivante :
Figure imgf000043_0001
dans laquelle :
• ni représente 2 ou 3,
• Ri et R3 représentent un groupe méthyle, et R2 et f représentent un atome d'hydrogène,
• ou Ri, R2, R3, et représentent un groupe méthyle.
10. Composés selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisés en ce qu'ils sont liés à un polymère ayant un trophisme pour les tumeurs, le cas échéant par l'intermédiaire d'un espaceur.
11. Composés selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisés en ce que l'espaceur relié à un polymère ayant un trophisme pour les tumeurs, est lié à un ou plusieurs des groupements phénoliques susceptibles d'être présents sur lesdits composés, ou est lié à la ou les chaînes hydrocarbonées présentes sur ces composés, notamment dans le cas des composés de formule (Ib) dans laquelle Ri, R2, R3, et R-i, sont tous différents de l'hydrogène.
12. Composés selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisé en ce que l'espaceur est constitué d'une chaîne hydrocarbonée ou peptidique choisie parmi celles de formules suivantes :
* -NH-(CH2)p-CO- dans laquelle p représente un nombre entier de 2 à 5,
* -NH-AA-(AA)q-AA-CO- dans laquelle q représente un nombre entier de 2 à 5 et AA est un résidu acide aminé naturel ou non.
13. Composés selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisés en ce que le polymère ayant un trophisme pour les tumeurs est choisi parmi le Carboxymethyl dextran (CM) ou le N-(2-hydroxypropyl) methacrylamide (HPMA), et sont hés à la fonction NH de l'espaceur.
14. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé selon l'une des revendications 1 à 13, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
15. Composition pharmaceutique selon la revendication 14, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme destinée à radministration par voie intraveineuse.
16. Composition pharmaceutique selon la revendication 14 ou 15, caractérisée en ce que la dose unitaire en composés de formule (I) en tant que principe actif desdites compositions, est d'environ 1 mg/kg/jour, à environ 25 mg/kg/jour.
17. Utilisation d'un composé selon l'une des revendications 1 à 13, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des cancers chez l'homme ou l'animal, et plus particulièrement des tumeurs solides, tels que le carcinome adrénocortical humain, le gliome humain, le cancer du sein humain, le mélanome, ou le cancer de la prostate.
18. Utilisation d'un composé selon l'une des revendications 1 à 13, en tant qu'intermédiaires de synthèse de nouveaux dérivés du gossypol et de la gossypolone.
19. Procédé de préparation de composés selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce qu'il comprend le traitement du gossypol ou de la gossypolone, dont le cas échéant une ou plusieurs fonctions hydroxyles sont substituées par un groupe alkyle de 1 à 3 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, avec un dithiol de formule HS(CH2)nSH dans laquelle n représente un nombre entier de 2 à 5, en présence de BF3.Et2O.
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