BE461483A - - Google Patents

Description

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  "Procédé pour séparer et purifier les acides   hydrophénantbrènecarboxyliques   stéréoisomères et leurs homologues cycliques" La demanderesse a trouvé qu'on peut séparer et pu- 
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 rifier des acides hydrophénanthréne-2-carbox3Tliquew stéréo- isomères, qui portent un reste hydrocarboné en position 1 et ld cas échéant aussi en position 2, et en position 7 un groupe hydroxyle phénolique nu un groupe pouvant être transformé en un groupe de ce genre, ainsi que leurs homologues cycliques, lorsqu'on traite ces acides ou leurs sels avec des solutions d'un pH variant graduellement, et qu'on soumet le cas échéant les fractions acides obtenues à d'autres procédés de purifi- cation ou de séparation. 



   Les produits initiaux employés dans le procédé de la présente invention peuvent être obtenus par exemple par 

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 fusion alcaline d'hormones oestrogènes, ou aussi suivant le procédé du brevet belge No,456568 du 30 juin 1944, et la demande de brevet numéro   provisoire, 357776   (Case 2258/1-3) du 26 novembre 1945 pour "Procédé de préparation d'acides oxyhydrophénanthrène- carboxyliques ou de leurs dérivés" de la demanderesse, ou par d'autres procédés analogues. 



   On sait que l'oestrone peut être transformée en un acide   monocarboxylique   à action oestrogène, par fusion al- caline, avec ouverture du noyau à 5 chaînons   ( cf .   Mac Cor- quodale,   Levin,   Thayer et Doisy, J.Biol.Chem. 101, 753[1933]. 



  D'après les recherches de la demanderesse, cet acide monocar- boxylique possède la formule: 
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 On obtient aussi ce même acide ou des acides analogues par fu- sion alcaline de l'oeastradiol, de l'équilénine, de la dihydro- équilénine et de corps analogues (cf. brevets   belge 1;0.431709   du 17 Membre 1938 et   français   No.870690 du 7 mars 1941 de la société dite: Schering A.G. ). D'après les modes opératoires décrits, on iso- le dans chacun de ces cas les corps formés en dissolvant la fusion dans de l'eau, en saturant la solution fortement alca- line avec de l'acide carbonique pour séparer les corps initiaux et les corps analogues et en précipitant ce qui reste en solu- tion avec un acide minéral.

   Tandis qu'à partir de l'oestrone et de l'oestradiol, on obtient ainsi un acide homogène, la de- manderesse a constaté qu'il se forme à partir d'hormones oestro- gènes plus non saturées, des mélanges d'acides très impurs. 

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     En   opérant d'après le procédé du brevet français 870.690 précité, on obtient ainsi par exemple à partir de   l'équilénine,   un acide carboxylique fondant à 120-122 , qui, par application buccale à des rats, présente un seuil d'acti- vité de 2,5   @   Suivant le procédé de la présente invention, on précipite avantageusement la solution aqueuse de la fusion 
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 de 1 ' équilénine ou de la dih.ydroé quilénine avec un acide miné- ral, on reprend dans de l'éther et extrait les acides formés avec du carbonate de sodium. En amenant le pH de la solution de carbonate de sodium à environ 7,5, des acides accessoires, inactifs se précipitent et peuvent être filtrés. Dans la solu- tion reste un mélange de 2 acides carboxyliques stéréoisomères optiquement actifs.

   Lorsqu'on abaisse ensuite le pH à environ 5,8 à 6,8, l'isomère sans activité oestrogène se précipite tout d'abord; à l'état pur cet isomère fond à 254-256 . En ajoutant enfin une nouvelle quantité d'un acide minéral, on obtient l'autre isomère très actif ; à l'état pur, cet isomère fond à 161-162 . Le seuil d'activité de cet isomère, par ap- plication buccale, est de 0,05 à   0,1 r   seulement, Cet acide est donc au minimum 25 fois plus actif que l'acide du brevet français 870. 690 précité, fondant à 120-122 .Cet acide ne contient probablement que 4% de fraction active.

   On peut séparer d'une façon tout à fait analogue les acides carboxy- lianes stéréoisomères qu'on obtient par exemple par les modes opératoires du brevet belge   No.456568   précité et de la demande de brevet numéro provisoire 357.776 précitée, de la demanderesse. 



   Au lieu de partir de solutions des sels des mélanges d'acides, on peut aussi traiter les acides solides avec des solutions aqueuses d'un pH croissant,de sorte que tout d'abord 

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 seuls les acides les plus forts, notamment les acides actifs, passent en solution. Dans ce dernier cas il est nécessaire d'opérer à un pH inférieur à 6. Mentionnons en passant que pour produire la solution ou pour la filtration, le pH néces- saire dépend un peu de la concentration emploi des acides à séparer. 



   Pour amener au pH voulu, on peut employer par exemple une solution alcaline à un hydroxyde alcalin, à un carbonate ou à un bicarbonate alcalin, dont le   p   est dans certaines limites d'autant plus élevé, après saturation avec de l'acide carbonique.que la teneur en alcali est plus forte. 



  Mais on peut aussi maintenir le pH constant d'une autre manière connue, par exemple en ajoutant des acides organiques ou in- organiques et/ou de leurs sels. D'une façon tout à fait géné- rale, il faut tenir compte que le pH de la solution tampon employée, suivant sa concentration, est abaissé par l'acide hydrophénanthrène-carboxylique introduit. 



   Les acides   stéré isomères   obtenus par le procédé de la présente invention peuvent encore être soumis à d'autres opérations de purification ou de séparation, par exemple à des reprécipitations, recristallisations, transformations en leurs dérivés, par exemple en éthers-sels ou en éthers-oxydes, ainsi qu'à des adsorptions sélectives. Ces opérations peuvent aussi être employées en combinaisons les unes avec les autres. 



   Les exemples suivants illustrent la présente inven- tion sans toutefois la limiter. 



     Exemple   1 
On chauffe de   l'équilénine   à 270-280 , en 3 portions de chacune 2 g, chaque fois avec un mélange de 100 g d'hydro- xyde de potassium avec 14 ccm d'eau. Après avoir refroidi, on 

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 dissout la fusion dans de l'eau, acidule avec de l'acide chlor- hydrique et reprend dans de l'éther. En secouant la solution éthérée avec une solution diluée de carbonate de sodium et en réacidulant la solution aqueuse alcaline, on obtient un mélange d'acides dont le seuil d'activité dans le test de l'oestrus à des rats est de 2 à 3   #;   ce mélange contient donc 1,6 à 2,3 millions d'unités rat internationales. 



   Dans une solution de ce mélange d'acides dans 10 ccm   d'une   solution saturée de carbonate de sodium et 300 ccm d'eau, on introduit pendant quelques heures du dioxyde de carbone. On filtre ce qui s'est précipité et acidule le filtrat clair avec un acide minéral. On dissout le mélange d'acides ainsi précipi- té dans 3 ccm d'une solution saturée de carbonate de sodium et 100 ccm d'eau et traite de nouveau la solution formée avec du dioxyde de carbone. Au bout de peu de temps il se précipite un acide hydroxylé fondant à 240-250 . Pour le purifier on peut le transformer en éther-oxyde méthylique, éther-sel méthylique, fondant à 99 , en le traitant avec du diazométhane, puis avec du sulfate de diméthyle dans une solution diluée d'hydroxyde de sodium.

   Cet éther-oxyde éther-sel donne par hydrolyse des groupes éther-oxyde et éther-sel, l'acide hydroxylé libre, pur, l'acide iso-bisdéhydro-doisynol fondant à 254-256 , d'un pou- 
21 voir rotatoire [a]D= + 33  (dans de l'alcool). Cet acide est un   stéréoisomère   de l'acide   monocarboxylique   décrit ci- dessous, fondant à 161-162 ; dans le test de l'oestrus cet acide n'agit pas. 



   Le filtrat obtenu dans la préparation de cet iso- acide est acidulé avec un acide minéral, ce qui précipite une poudre incolore, fondant à 130-140 , et dont le seuil d'acti- vité dans le test de l'oestrus à des rats est de 0,1 à 0,2   @   

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 Pour la purifier on transforme aussi cette fraction au moyen de diazométhane et de sulfate de diméthyle en éther-oxyde méthy- lique, éther-sel méthylique.

   On dissout ce produit dans de l'éther de pétrole, filtre sur de l'oxyde d'aluminium et cris- tallise le résidu du filtrat dans du   méthanol.   Le l-éthyl-2- 
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 carbométhoxy-2-méthyl-7-méthoxy-l .2.3.4-tétrahydrophénanthrène ainsi obtenu, fondant à 103-104 , peut être transformé pour ainsi dire quantitativement par exemple en le chauffant avec 4 g de chlorhydrate de pyridine, à 160-180 , en acide 1-éthyl- 
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 2-méthyl-7-OxY-1-2.3.4-tétrahydroph6nanthrène-2-carboxylique libre, l'acide bisdéhydro-doisynol normal,fondant à 161-162, de pouvoir rotatoire [a]20=- 117  (dans de l'alcool). Son seuil d'activité par application buccale à des rats est de 0,05   #;   c'est donc le composé oestrogène qui donne la plus for- te action connue jusqu'à aujourd'hui dans le test de   l'oestrus.   



   Exemple 2 
On chauffe de la dihydroéquilénine à 280-290  en 3 portions de chacune 2 g, chaque fois avec un mélange de 100 g d'hydr oxyde de potassium avec 15 ccm   d' eau.   On sépare ensuite en une fraction soluble et en une fraction insoluble dans une solution de carbonate de sodium, comme on l'a indiqué à   l'exem-   ple 1, ce qui permet d'obtenir un mélange brut d'acides (3,4 g), dont le seuil d'activité au test de l'oestrus est de 0,4   #,   qui confiait donc 8,6 millions d'unités rat internationales. 



   On dissout ce mélange d'acides dans 8 ccm d'une so- lution de carbonate de sodium saturée et 200 ccm d'eau. On ajoute une solution normale d'acide tartrique, jusqu'à ce qu'un pH de 7,5 soit atteint. On filtre le précipité volumineux formé et amène le filtrat clair, au moyen d'une solution d'acide 

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 tartrique, à un pH de 5,8 à 6,8. Il se précipite alors 0,7 à 0,8 g d'acide iso-bisdéhydro-doisynol brut, fondant à 240- 2500. On peut purifier cet acide en passant par son éther- sel éther-oxyde, comme on l'a indiqué à l'exemple 1.

   Du fil- trat, on peut précipiter   avecde   l'acide chlorhydrique une frac- tion   (0,93   g) dont le seuil d'activité au test physiologique est de 0,1   J'et   qui contient donc 7 à 8 millions d'unités rat internationales, c'est-à-dire presque la quantité totale de l'activité contenue dans le produit brut. Cette fraction peut être purifiée par cristallisation, le cas échéant après une estérification et hydrolyse subséquentes, ce qui permet d'obte- nir l'acide bis-déhydro-doisynol normal décrit à l'exemple 1, fondant à 161-162 . 



   Exemple 3 
On chauffe de la dihydroéquilénine à   295-3000,   en 4 portions de chacune 2 g, chaque fois avec un mélange de 100 g d'hydroxyde de potassium avec 14 ccm d'eau, dans un creuset de nickel, pendant 1 1/2 heure, sur un bain de métal. 



  On reprend la fusion obtenue dans de l'eau et ajoute de l'acide chlorhydrique à la solution claire. On extrait à l'éther et secoue la solution éthérée avec une solution diluée de car- bonate de sodium jusqu'à épuisement. Après avoir acidulé la solution alcaline au carbonate de sodium avec de l'acide chlor- hydrique, on obtient 5,4 à 5,6 g de mélange brut d'acides, de couleur foncée. 



   On dissout ce mélange dans 20 ccm d'acétone absolu et coule la solution dans une solution chaude de 5 g de phos- phate trisodique dans 200 ccm d'eau qu'on a amenée à un   p   de 8,2 à 8,4 en ajoutant quelques gouttes d'acide phosphorique. 

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  On laisse refroidir, abandonne quelques heures, filtre pour éliminer les acides accessoires foncés non dissous, acidule le filtrat clair avec un acide minéral (pH environ 7,4) et obtient ainsi 1,9 g d'un produit cristallisé. On dissout ce produit dans 3 ccm d'une solution saturée de carbonate de so- dium et 60 ccm d'eau et fait passer pendant longtemps du di- oxyde de carbone dans cette solution. L'acide iso-bisdéhydro- doisynol fondant à 254-256  se précipite. Le pH de la solution est d'environ 6,5. 



   Au filtrat obtenu, on ajoute une solution diluée d'acide chlorhydrique et peut ainsi obtenir 0,7 g d'acide bis- déhydro-doisynol qu'on peut directement purifier par cristalli- sation dans de l'alcool méthylique dilué. 



   Exemple 4 
On chauffe 2 heures dans un creuset de nickel, à 280 , 2 g de dihydroéquilénine dans un mélange de 80-100 g d'hydroxyde de potassium et 10-15 ccm d'eau. Après avoir re- froidi, on reprend la masse réactionnelle dans de l'eau, aci- dule et extrait avec de   l'éther.   On extrait ensuite les frac- tions acides de la solution éthérée en la secouant avec une solution diluée de carbonate de sodium et précipite la solu- tion obtenue en ajoutant un acide minéral. On obtient ainsi   1,2 -   1,4 g de mélange brut   d'acides.   On dissout ce mélange dans une solution diluée d'hydroxyde de sodium et neutralise avec de l'acide phosphorique jusqu'à réaction neutre à la phénolphtaléine. On ajoute alors une solution tampon au phos- phate de sodium d'un pH de 5,9 , jusqu'à ce que le pH soit tombé à 7,6.

   Il se précipite 0,8 à 0,9 g d'une fraction acide inactive qu'on filtre. Dans le filtrat il ne se trouve prati- 

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 quement plus que les deux acides bisdéhydro-doisynols stéréo- isomères, qu'on peut séparer et purifier comme on l'a indi- qué dans les exemples 2 et 3. 



   On peut aussi éliminer en une opération les frac- tions acides inactives y compris l'acide iso-bisdéhydro- doisynol, en amenant immédiatement la solution alcaline à un hydroxyde alcalin du mélange brut d'acides au pH de 5,8, de façon qu'après avoir séparé les fractions précipitées, seul l'acide bisdéhydro-doisynol normal reste en solution dans le filtrat. 



   On   peut   aussi séparer de cette manière d'autres acides hydrophénanthrène-2-carboxyliques stéréoisomères que les acides 7-oxy-l.2-dialcoyl-hydrophénanthrène-2-carboxyliques mentionnés jusqu'à présent, par exemple les acides 7-oxy-1.2- 
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 cyclopentano-l.2.3.4-tétrahydrophénanthrène-2-carboxyliques, les acides 7-oxy-oetahydro-chrysène-carboxylicues, ainsi que d'autre part les acides hydrophénanthrène-2-carboxyliques qui ne portent pas de reste hydrocarboné en position 2, par exemple 
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 les acides 1-alcoYl-7-OXY-1.2-3.4-tétrahydrophénanthrène-2- carboxyliques ou leurs homologues cycliques. 



   Exemple 5 
On dissout 10 g du mélange des acides bisdéhydro- doisynols synthétiques obtenu d'après les indications du brevet belge No.456568 précité (acides l-éthyl-2-méthyl-   7-oxy-l.2.3.4-tétrahydrophénanthrène-2-carboxyliques),   fondant à   180-212 ,  dans 17,5 com d'une solution 2 n d'hydroxyde de sodium, puis on dilue la solution pratiquement neutre ainsi obtenue avec une solution de 2 à 4 g de carbonate de sodium ( = 1 - 2 équivalents) dans 700 ccm   d'eau.   On introduit du 

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 dioxyde de carbone jusqu'à saturation et filtre l'acide iso-   bisdéhydro-doisynol   racémique, inactif, précipité, fondant à 235-237 . Après avoir acidulé le filtrat, on peut séparer l'acide   bisdéhydro-dois.ynol   normal, racémique, fondant à 204-205 .

   Son seuil d'activité au test de l'oestrus à des rats est de   0,1 #.   Le rendement est quantitatif. 



   Exemple 6. 

**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.

Claims (1)

1. On dissout 2 g d'un mélange des acides 1.2-diéthyl- EMI10.1 7-oxy-1.2.3.4-tétrahydrophénanthréne-2-carboxyliques (obtenu par exemple d'après le brevet belge No. 456568 précité) dans 3 ccm d'une solution saturée de carbonate de sodium et 30 ccm d'eau. Après avoir saturé avec du dioxyde de carbone, on obtient un précipité cristallin (1 g) qui est l'acide iso- EMI10.2 1.2-diéthyl-7-oxy-l. 2.3.4-tétrahydrophénanthrène-2-carboxyli- que inactif, fondant à 267-269 . En ajoutant une solution diluée d'acide chlorhydrique au filtrat, on obtient le com- posé stéréoisomère actif, fondant à 193-195 , en rendement quantitatif . <Desc/Clms Page number 11>

   Revendications: 1.) Un procédé pour séparer et purifier les acides hydrophénanthrène-2-carboxyliques stéréoisomères qui portent en position 1, et le cas échéant aussi en position 2 un reste hydrocarboné, et en position 7 un groupe hydroxyle phénolique ou un groupe pouvant être transformé en un groupe de ce genre, ainsi que leurs homologues cycliques, consistant à traiter progressivement ces acides ou leurs sels avec des solutions d'un pH variant graduellement, et le cas échéant à soumettre les fractions acides obtenues à d'autres procédés de purifi- cation et de séparation.

   2.) Un procédé suivant la revendication 1, consistant à traiter les sels des acides avec des solutions d'un pH di- minuant par degrés.

   3.) Un procédé suivant la revendication 1, consistant à traiter les acides eux-mêmes avec des solution d'un pH aug- mentant par degrés.

   4.) Un procédé suivant la revendication 1, consistant à EMI11.1 opérer à partir des acides 7-oxy-1.2-dialcoyl-hydrophénanthrène- 2-carboxyliques stéréoisomères.