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" Méthode perfectionnée de récupération de la pénicilline à partir de ses solutions aqueuses ".
La présente invention se rapporte à une méthode perfectionnée de récupération de la pénicilline à partir de ses solutions aqueuses.
La substance thérapeutiquement active connue sous le nom de pénicilline est un produit du métabolisme de la croissance de certains champignons du genre penicillium, particulièrement des espèces notatum, crysogenum, etc., dans un milieu de culture approprié . On croit que la substance telle qu'elle est formée dans la liqueur de fer- meentation est un mélange--d'acide organique complexes de nature voisine . Un ne fait généralement aucun effort pour
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isoler ces acides individuellement, les produits du méta- bolisme étant séparés collectivement à l'état de sels alcalins ou alcalino-t erreux, et conditionnés et vendus sous le nom générique de "pénicilline ".
Les méthodes classiques pour l'extraction de la pénicilline à partir des liqueurs de fermentation com- prennent habituellement l'épuisement d'une solution aqueu- se contenant le mélange d'acides "pénicilline " au moyen d'un solvant organique non-polaire non-miscible dans l'eau . Pour augmenter la solubilité des acides dans le solvant non-polaire et rendr)e possible l'extraction d'une forte proportion des constituants utiles de la solution, il est nécessaire de diminuer le degré d'ioni- sation des acides en augmentant la concentration en ions hydrogène de la solution par addition d'un acide fort.
La fig. 1 sert d'illustration au comportement à l'é- gard de la solubilité de la pénicilline dans un système solvant à deux phases ; montre le coefficient de répartition de la pénicilline entre une liqueur typique de fermentation filtrée contenant de la pénicilline et de l'acétate d'amyle, pour différentes valeurs de pH.
La courbe figurant sur le graphique est obtenue par ex- traction de liqueur industrielle de fermentation contenant de la pénicilline au moyen de l'acétate d'amyle, à différentes valeurs de pH, et par détermination de la répartition de la pénicilline dans l'acétate d'amyle et la liqueur de fermentation. La courbe indique par exemple qu'à un pH légèrement supérieur à 4, chaque volume égal d'acétate d'amyle et de liqueur de fermentation contient une quantité égale de pénicilline . D'autre part, à pH 2, chaque centimètre cube d'acétate d'amyle contient
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environ onze fois plus de pénicilline que chaque centi- mètre cube de liqueur de fermentation .
On obtient des courbes semblables en utilisant d'autres solvants non- polaires organiques tels que le chloroforme, l'acétate d'isopropyle, l'alcool butylique, etc., au lieu d'acétate d'amyle . Dans tous les cas on extrait la plus forte proportion de pénicilline d'une liqueur de fermentation dans les conditions de plus forte acidité.
On pourrait considérer comme relativement simple, 'de la considération de la courbe de coefficient de ré- partition, d'extraire la quantité maximum de pénicilline de ses solutions aqueuses en opérant à defaibles valeurs de pH. C'est d'ailleurs ce qu'on fait dans la pratique.
Malheureusement la pénicilline est très instable, partic- lièrement en solutions fortement acides. Bien que la péni- cilline en solutions aqueuses de pH 6 environ soit relativement stable et puisse demeucr à cette valeur de pH pendant plusieurs heures sans subir de sérieuse destruc- tion, à un pH voisin de 2, sa destruction est très rapide et il suffit de quelques minutes pour entraîner la dispa,- rition d'une proportion appréciable de pénicilline . L'ex- . périence a montré que la pénicilline devait être rapide- ment extraite de ses solutions aqueuses à faible pH, dans un temps minimum, si l'on désire obtenir des rende- ments en pénicilline économiques.
La courbe de la figure 1 fait également apparaître qu'il serait possible d'extraire la pénicilline deses so- lutions aqueuses à un pH élevé simplement en utilisant un plus grand volume de solvant. Malheureusement les li- queurs de fermentations contiennent des quantités relati- vement importantes de substances indésirables qui sont également solubles dans les liquides organiques et qui
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doivent être éliminées du produit final. Employer un grand volume de solvants organiques dans des opérations industrielles amènerait simplement la présence de quanti- tés inacceptables de substances autres que la pénicilline dans le produit. Aussi doit-on éviter l'emploi de grandes quantités de solvant dans les opérations industrielles, qui est coûteux et dangereux .
En raison de ces facteurs, il est indiqué d'extraire la plus grande quantité possible de pénicilline avec le minimum de solvant. On a donc été amené à utiliser de petites quantités de solvant organique à de faibles valeurs de pH.
Peut-être la méthode la plus commune d'extraction d'une substance de sa solution aqueuse au moyen d'un liqui- de organique dans lequel il est plus soluble est-elle de mélanger soigneusement les deux liquides et de laisser les deux phases se séparer. de procédé simple n'est pas réalisable à l'échelleindustrielle dans la récupération de la pénicilline des liqueurs de fermentation en raison de la présence dans ces liqueurs de substances qui ten- dent à provoquer l'émulsification . Le temps nécessaire pour briser l'émulsion et obtenir une séparation nette des deux liquides est généralement si long qu'il se produit une destruction considérable de pénicilline à la faible valeur de pH de l'extraction.
Bien qu'il soit d'une pratique courante dans de nom- breuses industries d'extraire une substance soluble d'une phase liquide par une autre en faisant passer les deux liquides en contre-courant à travers une colonne contenant des matières de remplissage, cette technique n'est pas applicable à l'extraction de la pénicilline pour cette raison que si l'on oblige les liquides à passer dans la colonne à une vitesse suffisamment rapide pour réduire
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au minimum la durée de contact de la pénicilline aux faibles valeurs de pH tout en assurant l'extraction com- plète, il se produit une émulsification des deux phases liquides . Si la période de contact est courte, l'extrac- tion n'est en outre pas complète. La colonne simple d'extraction n'est par conséquent pas satisfaisante dans cette opération .
On a donc jugé nécessaire de trou- ver une autre méthode d'extraction de la pénicilline.
Une méthode courante d'extraction de la pénicilline, très employée dans le métier, consiste à mélanger à fond une solution aqueuse de pénicilline de pH 2 environ avec un solvant organique non-miscible , puis à centri- fuger le mélange pour en provoquer la séparation en deux phases . Bien que le centrifugeage abrège considérable- ment le temps d'extraction et réduise les. p ertes de pénicilline causées par la haute acidité de la phase aqueuse, il se produit néanmoins une perte importante de pénicilline par destruction au moyen des acides. Le procédé exige en outre l'emploi et l'immobilisation de centrifugeurs coûteux pour la manipulation des grands volumes de liqueurs que comporte le traitement. De plus la récupération dela pénicilline dans ces cpnditions n'est pas aussi bonne qu'on pourrait le désirer.
La présente invention se propose de fournir un procédé perfectionné permettant l'extraction de pratique- ment la totalité de la pénicilline à partir d'une solu- tion aqueuse, et ne comportant qu'une très faible destruc- tion de pénicilline , au moyen d'un solvant organique non- polaire et non-miscible à l'eau . Elle se propose en outre d'utiliser ce procédé perfectionné en contrecourant.
Suivant l'invention, ce procédé perfectionné de
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récupération de la pénicilline à partir d'une de ses solu- tions aqueuses comprend le réglage de la concentration en ions hydrogène de ladite solution entre 2,8 et 3,5, puis la mise en contact interfacial de la solution acidi- fiée avec un solvant non-polaire et non-miscible dans l'eau, ce qui entraîne la dissolution de la pénicilline contenue dans la phase aqueuse dans le solvant organique, puis la récupération de la pénicilline dudit solvant or- ganique . On peut, si on le désire, augmenter la concentra- tion en ions hydrogène jusqu'à 1,6-2,2 , et l'extraction peut être poursuivie au moyen dudit solvant organique .
Pour assurer une compréhension plus complète de la présente invention, on la décrira en se référant aux fig. 2 et 3 ci-jointes .
La fig. 2 représenteun appareil approprié à la mise en oeuvre du procédé à pH constant compris entre 2,8 et 3,5.
La fig. o représente un appareil approprié pour la mise en oeuvre du procédé dans lequel le pH de la solu- tion partiellement épuisée peut être augmenter.
Dans la fig- 2 on montre une colonne 1 en acier inoxydable, en verre, en céramique ou autre substance non-susceptible de corrosion dans les conditions opéra- toires et dépourvue d'action destructrice sur la pénicilli- ne par contact. Cette colonne est entourée par un système de tuyaux dans lequel peut circuler dela saumureou autre liquide réfrigérant. Elle comporte également une chemise isolante 3.
La partie centrale de la colonne est remplie d'anneaux 4, de spirales, de billes de verre ou toute autre matière de remplissage au travers de laquelle peuvent couler les liqueurs qt qui servent à briser le flux des solutions de
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manière à assurer le contact interfacial entre les deux phases liquides. La colonne est munie de un ou de plusieurs supports 5 pour la matière de remplissage . On a ménagé un trou d'homme 6 qui permet l'inspection et l'entrée dans la colonne.
La solution aqueuse contenant la pénicilline est introduite au sommet de la colonne par le tuyau 7, à un pH de l'ordre de 2,8 à 3,5. Habituellement cette solu- tion aqueuse est ladliqueur de fermentation préalablement traitée pour éliminer les impuretés les plus grossières par filtration à un pH d'environ 6 à 6,5 . Le filtrat est alors acidifié au moyen d'acide sulfurique-ou tout autre acide approprié tel que les acides chlorhydrique, phosphorique, acétique et analogues, ou un agent tampon d'un pH de l'ordre indiqué, puis introduit immédiatement dans la colonne . Dans la pratique le pH est ajusté à la valeur la plus voisine possible de 3.
La/liqueur acidifiée entrant dans la colonne est répartie aussi uniformément que possible par tout disposi- tif approprié de distribution tel qu'une gouttière den- telée 8, laquelle est simplement le prolongement du tuyau 7 dont l'extrémité est partiellement fermée et la partie supérieure est découpée comme le montre la figure.
On introduit par, la base de la colonne au moyen du tuyau 9 de l'acétate d'amyle ou autre liquide arganique non-miscible dans l'eau et dans lequel la pénicilline est soluble . Ce liquide organique est également uniformé- ment réparti dans toute la surface de la colonne par un dispositif distributeur lù semblable au précédent.
Il est bien entendu que dans cet arrangement parti- culier de l'intérieur de l'appareil, le solvant organique
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non-miscible esplus léger que l'eau et peut s'élever dans la colonne à mesureque la phaseaqueuse descend.
Si l'on emploie des solvants organiques plus lourds que l'eau, l'arrangement intérieur de l'appareil est inver- sé.
Pendant la descente de la liqueur de pénicilline dans la colonne, le flux est brisé par les matières deremplis- sage de telle sorte qu'il y a contact interfacial impor- tant avec le solvant organique La vitesse de flux à travers la colonne et la nature de la matière de remplis- sage doivent être telles que le solvant soit/à même de dissoudre la pénicilline . La durée deséjour de la li- queur dans la colonne constitue un point critique en ce que, si le contact avec l'acide est trop prolongé, il se produira une importante décomposition . -si d'autre part on essaye d'accélérer de force la vitesse d'alimentation, il se produit une émulsification, particulièrement avec certains types de liqueuts de fermentation, et la phase acide aqueuse passe avec la solution organique .
La colonne doit donc être construite et fonctionner de manière telle que l'émulsification et le passage de la phase aqueuse dans la phase solvant organique ne soient pas excessifs.
Dans une colonne remplie au moyen d'anneaux de 12,5 mm la vitesse d'introduction de la liqueur de fermentation au sommet de la colonne estd'environ 315 litres par mètre carré de section et par heure, ce qui donne des résultats satisfaisants. a durée possible de séjour de la liqueur dans la colonne dépend dans une certaine mesure de l'efficacité de la colonne et doit être aussi courte que possible.
Dans la colonne particulière ci-dessus mentionnée la li-
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peu queur aqueuse demande un/plus d'une heure pour traverser la colonne .Bien qu'on puisse penser que cette durée est excessive en raison de la rapidité connue de la décomposi- tion de la pénicilline , même à pH 3, on a constaté qu'on obtenait une récupération de l'ordre de 95 % de la théo- rie . Apparemment la majeure partie de la pénicillene contenue dans la liqueur acide est extraite par l'acétate d'amyle avant d'avoir rencontré une chance importante de destruction. D'une manière générale la liqueur peut séjourner dans la colonne dans les conditions exposées de une demi/-heure à deux heures, avac une extraction et des rendements satisfaisants.
La colonne doit travailler à des températures aussi fables que possible, de préférence de l'ordre de 0 à 10 C.
Une installation industrielle dans laquelle la température de la colonne est maintenue à soc. environ donne de très bons résultats .
Une des plus importantes considérations pour le suc- cès de l'opération est le rapport du solvant organique à la liqueur aqueuse de pénicilline . Comme on l'a noté précédemment, l'emploi d'une quantité excessive de sol- vant organique, bien que donnant des rendements plus élevés en pénicilline, entraîne également une augmentation disproportionnée dans la quantité d'impuretés solubles dans le solvant organique, et donc dans le produit final, et conduit à. un volume de solvant inutile pour le traite- ment ultérieur . Il est par conséquent nécessaire d'em- ployer -le rapport le plus petit possible solvant/phase aqueuse. Quand la colonne fonctionne à pH 3 environ, on utilise de préférence environ 0,55 vol. d'acétate d'amy- le par vol. de phase aqueuse .
La quantité d'acétate d'amy-
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le peut toutefois varier de 0,5 à 1 vol. par vol. de li- queur de pénicilline , en donnant de bons résultats.
D'une manière générale on doit utiliser d'autant plus de solvant organique que le pH est plus élevé .
Il est évident qu'on peut employer à la pààee de l'acétate d'amyle, qui constitue le solvant préféré, d'autres solvants organiques non-polaires et non-miscibles à l'eau tels que le chloroforme, l'acétate d'isopropyle, l'alcool butylique, la méthyléthylcétone et analogues.
Le coefficient de répartition de la pénicilline étant différent suivant les divers solvants, il est nécessaire de faire varier la proportion de solvant organique indi- quée ci-dessus pour l'acétate d'amyle . D'une manière générale, la proportion de solvant utilisé par rapport au volume de la phase aqueuse est telle que le liquide orga- nique dissolve la totalité de la pénicilline oontenu dans la solution aqueuse à un pH de l'ordre de 2,8 à 3,5.
La quantité particulière de chaque solvant peut être faci- lement déterminée par la simple expérience.
La phase aqueuse privée de pénicilline est éliminée à la base de la colonne par le tuyau 11 qui peut la condui- re à un appareil de distillation, ou à un égoût, ou à tout autre dispositif.
Le solvant organique non-miscible rassemblé au sommet de la colonne est soutiré par le tuyau 12. La solution peut être envoyée dans un centrifugeur 13 ou quelqu'autre appareil de séparation approprié pour enlever les traces d'eau émulsifiée entraînées dans le solvant organique.
Cette opération n'est pas nécessaire quand la colonne fonc- tionne d'une manièrenormale.
La solution organique est alors envoyée par le tuyau 14 dans un réservoir de mélange 15 équipé au moyen d'un
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agitateur 16, où on la mélange avec un petit volume d'eau, puis on la traite au moyen d'un alcali approprié jusqu' à un pH de 7,5 à 8 environ de manière à transformer la péni- cilline en un sel soluble dans l'eau. Pendant cette opéra- tion le sel passe dans la phase aqueuse.
Si on le désire on peut traiter la solution organi- que avant cette extraction au moyen d'une petite quantité =,1 à 0,3 % en poids- de charbon activé qui adsorbe cer- taines impuretés et donne un produit plus propre séchant plus facilement. Le charbon activé est éliminé immédiate- ment par filtration de la solution organique . Bien que cette opération entraîne la perte de petites quantit,és de pénicilline , cette perte est plus que compensée par les avantages qu'on en retire.
La fig. 3 montre une colonne 21 remplie au moyen d'an- neaux de Raschig, de spirales ou autres formes habituelles de matières de remplissage . La colonne et les anneaux peu- vent être en acier inoxydable, en bois, en verre, en céramique ou autre matière résistant aux acides . La colonne est en deux parties, la partie supérieure étant d'un/volume supérieur à la partie inférieure . Si on le désire, la colonne peut avoir le même diamètre interne dans toute sa longueur mais dans ce cas la section supérieuredoit être plus longue que la ou les sections inférieures.
Des plaques perforées appropriées 23,24 et 25 suppor- tent les matériaux de remplissage contenus dans la calon- ne.
La colonne est également munie dlun tuyau approprié 26 pour l'introduction de la liqueur contenant la pénicilli- ne au sommet de la colonne . Un tuyau 27 placé à la base de la colonne permet l'introduction du solvant organique
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non-miscible à l'eau. Des tuyaux supplémentaires 28 et, si on le désire 29 sont utilisés pour l'introduction de l'acide, comme on l'indiquera par la suite . La phase aqueuse épuisée est soutirée de la colonne par le tuyau 30 et le liquide organique contenant la pénicilline dis- soute par le tuyau 31. Une pompe 32 assure la remise en tirculation d'une partie de la liqueur par les tuyaux 33 et 34, la vanne 35 et le tuyau 36 dans une zone inter- médiaire de la colonne .
La vanne 37 permet le soutirage de tout ou partie déterminée à l'avance de la liqueur par le tuyau 38 à destination d'un dispo sitif approprié de récupération.
Bien qu'elle ne soit pas indispensable dans le pré- sent procédé, on peut adjoindre une centrifugeuse 39 pour l'élimination des traces d'eau entraînées par le liquide organique à la partie supérieure de la colonne . L'eau ainsi éliminée peut être déchargée par le tuyau 40 dans un égoût ou, si son volume le justifie, être renvoyée dans la colonne avec la liqueur de pénicilinne .
Le solvant organique contenant la pécilline est sou- tiré par le tuyau 41 et envoyé dans le réservoir mélangeur 42 où il peut être traité par une petite quantté de charbon activé, puis envoyé par le tuyau 43 dans un filtre (non représenté) ou autre appareil de récupération. Le solvant peut être alors traité au moyen d'une solution étendue d'un alcali pour transformer la pénicilline en sel brut, qu'on peut récupérer ou purifier par les méthodes connues dans cette industrie.
En procédant suivant cette variante de la présente invention la liqueur contenant la pénicilline , qui contient habituellement les microorganismes de la fermen-
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tation, soit qu'elle provienne de flacons, soit de réset- voirs profonds, est filtrée pour éliminer le mycelium puis, si on le désire, soumise à un traitement préliminaire avec une petite quantité de terre à foulon pour éliminer les impuretés les plus facilement adsorbées. La liqueur est alors refroidie entre 2 et 8 C. et ajustée à une acidité correspondant à un pH compris entre 2,8 et 3,5, et de préférence à pH 3, au moyen d'acide sulfurique étendu ou tout autre-', acide minéral fort, puis intro- duite dans la colonne par le tuyau 26.
Simultanément on introduit par le tuyau 27 à la base de la colonne 3.'acétate d'amyle ou autre solvant ncn-mis- cible à l'eau de la pénicilline . On peut employer comme autres solvants organiques l'éther dichlorodiéthylique, le bichlorure d'éthylène, le chlorobenzène, le nitroben- zène , l'acétate d'isopropyle, le chloroforme et analogues.
Le solvant est de préférence préalablement refroidi avant son introduction dans la colonne .
La solution aqueusede pénicillinepassant dans la colonne en direction de la base recontre le flux ascendant de solvant organique . Le remplissage de la colonne assure un contact très intime entre les deux liquides et la péni- cilline est extraite de la phase aqueuse par la phase non- aqueuse, suivant le coefficient de répartition.déterminé par le solvant particulier employé et le pH du système Comme on l'a vu/dans la fig. 1, quand on utilise l'acétate d'amyle et une liqueur de fermentation de pU 3 environ, on trouvera environ 2 p. de la pénicilline totale dans l'acétate d'amyle et 1 p. dans la phase aqueuse par unité de volume égale .
La liqueur aqueuse continuant à des- cendre dans la colonne , et étant à pH 3, la majeure partie de la pénicilline, 80% environ dans les condi- /
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tions favorables, sera épuisée par le solvant organique.
Pour récupérer la pénicilline restante de la phase aqueuse on réduit le pH de cette phase à 1,8-2,2 environ, et de préférence à 2, par addition d'un acide, par exem- ple de l'acide sulfurique 0,5 N. Comme le montre la fig.
1, le coefficient de répartition à ces valeurs plus basses du pH, est tel que le solvant organique extraiera une plus grande partie de pénicilline.
Ainsi qu'on l'a indiqué antérieurement,la destruction de la pénicilline est relativement rapide à ces faibles valeurs de pH. Mais la majeure partie de la pénicilline est extraite par le procédé qu'on vient de décrite à un pH supérieur et ne subit qu'une très faible destruction.L'ac- tion destructrice de l'acide sur la pénicilline ne s'exerce ,donc que sur une petite portion de la pénicilline totale entrant dans la colonne . De plus, il est possible d'extraire davantage de pénicilline de la liqueur en raison du coefficient effectif de répartition qui correspond au pH de la liqueur quittant la colonne, c'est-à-dire à pH 2 environ.
Pour bénéficier à coup sûr des avantages du procédé suivant cette variante, il est nécessaire de maintenir certaines conditions. C'est ainsi que levolume d'acétate d'amyle ou du solvant organique employé quel qu'il soit, doit être aussi faible que possible de telle manière que l'extraction des impuretés contenues dans la liqueur aqueuse soit maintenue é un minimum. D'autre part le volume doit être tel que pratiquement la totalité de la pénicilline soit extraite de la phase aqueuse . Si cette dernière condition n'est pas remplie, la pénicilline est kéhiculée vers la base de la colonne avec la phase aqueuse et éven- tuellement détruite par 1.'acide dans la partie inférieure de la colonne .
Si le pH de la liqueur aqueuse à l'entrée du somment de la colonne est de 3, on doit employer envi-
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ron 1 vol. d'acétate d'amyle pour 2 vol. de liqueur aqueu- se . Si le pH dela liqueur aqueuse est plus élevéil est nécessaire d'employer davantage de solvant organique pour extraire la totalité de la pénicilline . Ceci entraî- ne l'extraction d'une quantité supérieured'impuretés.
La courbe de distribution dépendant du solvant particulier employé et dans une certaine mesure de la nature de la liqueur de fermentation traitée, il est nécessaire de déterminer le rapport optimum liqueur/solvant dans les conditions particulières où l'opération est conduite.En employant l'acétate d'amyle comme solvant et une liqueur aqueuse de pH 2,8 à 3,5 il sera préférable d'utiliser de 1 à 2 vol. de phase aqueuse pour 1 vol. de solvant.
Les dimensions et la nature de la matière de remplis- sage est également d'une importance particulière pour ce qui concerne le réglage du débit à travers la colonne.
Si les dimensions sont trop petites, il seformera une émulsion épaisse qui ne sera pas brisée dans la colonne et entraînera une partie de la solution aqueuse hors de la colonne avec le solvant . D'autre part si les dimen- sions sont trop grandes, le temps de contact interfacial eau-solvant sera trop bref pour une extraction complète.
Un ingénieur chimiste moyennement expérimenté pourra faci- lement déterminer les détails exacts de la longueur de la colonne, les dimensions des matériaux deremplissage, etc.
Une colonne de6,10 m. munie d'anneaux de Raschig, de 9,4 mm. ou de leur équivalent, akec un rapport phase aqueuse/acétate d'amyle de 2/1, un pH de 3 à l'entrée et une vitesse d'alimentation de la colonne de 66,5 litres à l'heure par m2 de surface de la section, fonctionne d'une manière satisfaisante . Le temps exigé pour le passage d'une
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unité de phase aqueuse à travers la colonne est de 2 heures environ. Le rendement est de 95 % de la théorie.
La vitesse de destruction de la pénicilline par les acides étant fortement accélérée quand la température s'élève, on préférera faire travailler la colonne à. des tempérautres/aussi basses que possible, , de préfxrence entre0 et 10 C. On obtient des conditions en faisant passer le solvant et la phase aqueuse dans un réfrigérant avant leur introduction dans la colonne, et en calorifu- geant l'appareil.
Le point d'introduction du supplément d'acide dans la colonne varie considérablement, mais il doit être tel que l'on obtienne préalablement le maximum d'extractiçn aux pH plus élevés. Habituellement l'acide est introduit au quart inférieur de la colonne, mais le point d'intro- duction peut se trouver quelque peut entre la moitié infé- rieure et le dixième inférieur, pour améliorer efficace- ment l'extraction en contre-courant simple.
Comme le montre le dessin, il peut être désirable dans certains cas d'ajouter l'acide en plusieurs points de la colonne, en faisant ainsi varier le pH entre 3,5 et 1,8, en plusieurs stades.
Après traitement à l'eau alcaline, la solution/aqueu- se résultant du traitement dans l'appareil montré dans les fig. 2 et 3 et qui contient plusieurs milliers d'unités Oxford de pénicilline par centimètre cube, est séparée de la phase organique. Cette solution peut être évaporée de manière à donner un produit relativement brut utilisable pour l'administration orale en art vétérinaire.
Pour la préparation d'un produit plus pur convenant à l'administration par voie parentérale , il est bon de ré-épuiser la péniclline à l'état libre au moyen du chloro
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forme. Cette opération peut être 'avantageusement réalisée à pH compris entre 2,8 et 5,5 dans une colonne du type précédemment décrit. Mais cette colonne n'a pas besoin d'être d'aussi grandes dimensions, la phase aqueuse étant beaucoup plus concentrée qu'au début du procédé. La solu- tion chllroformique est soutirée dela colonne, de nouveau mélangée avec un petit volume d'eau, ajustée à pH 8 environ de manière à permettre l'extraction de la pénicilli- ne à l'état de sel solubledans l'eau par la phase aqueuse.
Cette solution aqueuse peut être évaporée de la manière habituelle de manière à fournir un produit degrande puissance suffisamment pur pour l'administration paren- térale.
Le terme "Pénicilline Il est utilisé ici pour dési- gner collectivement les produits bactéricides de composi- tion inconnue qui sont formés par diverses espèces de champignons du genre penicillium par fermentation dans un milieu de culture approprié. Le produit de la fermentation est habituellement un mélange de plusieurs substances distinctes dont les propriétés bactéricides sont de degrés variés. Leurs caractéristiques de solubili- té paraissent être suffisamment semblables pour en permet- tre l'extraction par le procédé ici décrit.
REVENDICATIONS.
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