BE562743A

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Publication number: BE562743A
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Description

La présente invention concerne la préparation de compositions hormonales et, plus particulièrement la prépa- ration de compositions oestrogènes pratiquement pures et ne présentant qu'une faible toxicité.

L'invention se propose de fournir un procédé d'obten- tion d'un produit oestrogène à haute activité et de toxicité relativement faible. L'invention vise également la prépara- tion de compositions à partir d'urine équine de pureté. telle que l'on puisse l'utiliser telle quelle en injections intra- veineuses grâce à ce procédé. L'invention vise encore la pré paration d'un produit oestrogène à partir d'urine équine, ne possédant pas d'odeur d'urine et susceptible d'être uti- lisé pour des besoins médicaux topiques; la préparation d'une hormone oestrogène efficace, lorsqu'elle est adminis- trée par voie orale, pour le traitement du syndrome de La ménopause.

On connait des procédés pour l'obtention de composi-

tions oestrogènes à: partir d'urines de juments gravides. Ce- pendant aucun de ces procédés n'est susceptible de donner un produit oestrogène hautement purifié exempt d'impuretés pouvant être toxiques ou un produit pratiquement inodore. De plus, on n'a jusqu'ici décrit aucun procédé pouvant donner un produit oestrogène à partir d'urine de juments gravides ayant une pureté et une teneur en oestrogène telles qu'il puisse être utilisé médicalement par voie intraveineuse.

En plus des oestrogènes conjugués présents dans l'urine des juments gravides, il faut tenir compte des nom- breuses substances naturelles présentes dans l'urine et qui sont rendues physiologiquement non toxiques mais qui devien- nent très toxiques une fois les complexes détruits, ou de cer taines substances comme les composés phénoliques qui sont réduits à l'état de bases libres ou d'acides libres au lieu de sels, soit sous l'action des bactéries, soit par suite du traitement tendant à isoler l'oestrogène actif.

Il est évident qu'une préparation parentérale ne doit pas être toxique aux doses administrées et ce point est particulièrement important dans le cas de préparation devant être administrées par voie intraveineuse. L'obtention d'une préparation médicale administrable par voie intraveineuse à partir d'une urine équine contenant non seulement des propor- tions élevées de diverses protéines mais aussi des pyrogènes, diverses amines et diamines, des composés indoxyliques, ou des phédols et des crésols libres, pose un problème difficile à résoudre; le problème est encore souvent compliqué par la. présence dans les urines de quantités appréciables de bacté- ries contaminantes au moment ou l'on recueille ces urines.

Les procédés connus pour l'extraction d'oestrogènes: conjugués à partir d'urine de juments gravides, tout en don- nant des produits possédant un pouvoir satisfaisant pour certains usages, ne peuvent pas donner des produits suscepti' bles d'être administrés par voie intraveineuse sans autres

traitements. La présente invention vise un nouveau procédé pour l'obtention de préparations spéciales ayant une ooncen- tration élevée en oestrogène et une faible toxicité.

Comme il a été dit ci-dessus, l'invention fournit un procédé per- fectionné pour la fabrication de compositions intraveineuses ainsi que d'autres préparations nécessitant l'application d'oestrogènes conjugués solubles dans l'eau, pratiquement non hydrolysés et hautement actifs, pratiquement exempts de tous éléments toxiques empêchant de les utiliser dans les buts spécifiés.

Pour la mise en oeuvre du procédé perfectionné de l'invention en vue de l'obtention du produit oestrogène recherché, il est tout d'abord nécessaire de partir d.'un concentré oestrogène dérivé d'urine de juments gravides. On peut obtenir le concentré initial par des procédés connus.

Après les opérations préliminaires de concentration et de purification, on soumet le concentré, en dissolution dans un milieu aqueux, à un stade de précipitation par salage au. cours duquel les oestrogènes sont précipités sous une forme relativement pure, en laissant une proportion importante d'impuretés en dissolution dans le milieu liquide.

Le plus ancien procédé pour concentrer tout d'abord les oestrogènes à partir d'urine de juments gravides consiste à effectuer une extraction sélective des oestrogènes en uti- lisant du charbon actif, de la terre à foulon ou autre agent d'adsorption approprié. Les oestrogènes sont sélectivement adsorbés et on les sépare de l'agent d'adsorption par extra.0 tion au moyen d'un solvant organique comme la pyridine, l'a- niline, la morpholine et diverses autres amines organiques.

On applique de préférence comme adsorbant du charbon de bois et comme solvant la pyridine. Après l'extraction au solvant;, on concentre l'extrait par application de la chaleur et on, le purifie de préférence.

Un meilleur procédé pour la concentration des oestro

gènes d'urine de juments gravides consiste à utiliser un sol- vant organique pour l'extraction directe des éléments oestro- gènes de l'urine de juments gravides non hydrolysée. C'est ainsirque l'on peut utiliser le butanol comme agent d'extrac- tion.

Cependant, un. procédé encore plus avantageux pour l'ex- traction au solvant en vue de la concentration initiale, consiste à extraire les substances oestrogènes actives, solu- bles dans l'eau et administrables oralement, d.'une urine équi- ne pratiquement non hydrolysée, en utilisant un solvant orga- nique du type pratiquement insoluble dans l' eau. Le solvant appliqué est un alcool ou une cétone possédant une solubilité dans l'eau inférieure à 6 % environ; le solvant préféré étant l'hexanol bien que d'autres solvants tels que le cyclohexanol, le méthyl-cyclohexanol, la cyclohexanone ou l'isophonone, puissent être utilisés.

Les matières oestrogènes sont sélec- tivement absorbées par le solvant, en laissant pratiquement toutes les matières protéiniques et de fortes proportions d'amines et de diamines de poids moléculaire élevé, Ce procé- dé permet d'obtenir un produit contenant environ 20% ou plus de constituants oestrogènes mais contenant encore des subs- tances susceptibles d'être toxiques.

Selon une variante, au lieu d'utiliser des alcools ou des cétones de solubilité dans l'eau limitée, comme dé- crit ci-dessus, on peut retirer sélectivement les principes oestrogènes d'une urine équine en faisant tout d'abord réagir les oestrogènes pour former des sels d'amine, puis en effec- tuant une extraction au benzène ou au moyen d'un solvant chloré aliphatique.

Ce procédé de concentration implique la réaction des oestrogènes dans l'urine équine avec un@sel d'une base azotée pour former ainsi des sels oestrogènes d'alkylamines, de cycloalkylamines non substitués, d'hydro- carbures amines de composés mono-cyclo aromatique non subs- titués, de p-amino-acétophénone, de diméthyl aminotoluène, de procaïne, de pyridine, d'aminopyridines et de leurs mé-

langes.

Après formation des sels d'amine des oestrogènes conjugués, on les rend solubles dans un solvant organique tel que le benzène ou les hydrocarbures chlorés aliphatiques liquides de faible poids moléculaire, et l'un de ces -solvants séparé sélectivement les oestrogènes des matières indésira- bles provenant de l'urine. Parmi les solvants mentionnés, il est préférable d'utiliser le dichlorure d'éthylène.

Après la concentration obtenue par l'un quelconque des procédés ci-dessus, on sépare les principes oestrogènes du solvant et on peut les traiter pour éliminer les sels minéraux, les phénols odoriférante et autres substances indé- sirables de l'urine, en procédant à d'autres extractions sélectives au solvant. De façon générale, le produit prove- nant de l'un quelconque des procédés de concentration men- tionnés ci-dessus renferme cependant encore des impuretés. rendant le produit dangereux pour être administré par voie itttraveineuse, Le produit contient encore des pyrogènes, des indoxyles et des crésols. On a constaté que ces substances doivent être éliminées pour obtenir un produit suffisamment pur et de faible toxicité, permettant une administration par voie intraveineuse sans risque de provoquer des effets secon- daires.

Le produit partiellement purifié obtenu après avoir procédé aux concentrations par extractions mentionnées ci- dessus, est notablement amélioré par suite d'un traitement au moyen d'une solution aqueuse saturée de sel tel que sulfa- te, phosphate ou chlorure de métal alcalin, les sels de so- dium et de potassium étant les sels préférés. On a constaté que ce stade opératoire conduit à.une précipitation sélective du principe oestrogène, en laissant dans la solution aqueuse pratiquement tou/es les matières toxiques mentionnées ci- dessus. On filtre le précipité et l'extrait au moyen d'une cétone aliphatique contenant une faible proportion d'alcool dissolvant de façon sélective les oestrogènes conjugués à

l'exception de la plus grande proportion du sel minéral uti- lisé pour la précipitation.

Le stade final de l'opération consiste à ajouter de l'eau à la solution de solvant et à concentrer -le produit pour éliminer pratiquement tout le solvant, en laissant le concentré en solution aqueuse. Ce nouveau, produit plus fortement concentré peut être utilisé soit à l'état aqueux pour la préparation du produit intra- veineux, soit 'directement incorporé en solution aqueuse dans un onguent de base, soit séché sous vide de préférence par lyophilisation (séchage par congélation), avant de l'utili- ser dans les buts spécifiés.

Lors du traitement du concentré oestrogène partielle= ment purifié au moyen de la solution saline et lors de tous les stades opératoires suivants, il est nécessaire d'élimi- ner les pyrogènes dans le cas où l'on désire obtenir un produit administrable par voie intraveineuse. Lea appareils et dispositifs en acier inoxydables, et toutes les-verreries, doivent être nettoyés de façon.impeccable pour éviter toute contamination due aux pyrogènes et l'on doit utiliser de l'eau distillée deux fois pour toutes les solutions aqueuses.

En plus de l'élimination des indoxyles et des cré- sols, ainsi que des pyrogènes, un important facteur pour la préparation d'un produit administrable par voie intraveineuse à partir d'une urine équine, est la stabilité du produit.

Dans des extraits plus ou moins bruts, on constate des fac- teurs de stabilité naturelle étant donné que ces produits sont plus stables que les compositions oestrogènes hautement purifiées. Pour la préparation d'un produit administrable par voie intraveineuse en utilisant le nouveau produit à haute teneur en oestrogène, on a constaté qu'il est néoes- saire de disposer d'un agent pour conserver la stabilité des conjugués et éviter leur destruction. Des oestrogènes conju- gués relativement purs sont très instables, surtout en pré- sence d'humidité. En présence d'humidité ou d'autres condi-

tions aqueuses,il se forme un milieu acide détruisant rapi-' dement le produit.

Un facteur important réside dans le fait que l'on ait trouvé que des tampons, susceptibles de mainte- nir un milieu pratiquement neutre de pH compris entre 6,5 et 7,5, évitent la destruction de la composition oestrogène.

Comme tampons ou comme agents stabilisants intéres- sants pour les oestrogènes conjugues de l'invention, on peut citer les sels. de métaux alcalins d'acides organiques ou minéraux susceptibles de maintenir un pH pratiquement neutre compris entre 6,5 et 7,5, de préférence légèrement alcalin.

On peut utiliser tous les sels ou mélanges tampons bien connus à la condition qu'ils ne soient pas toxiques dans les proportions utilisées et qu'ils maintiennent la concentra- tion en ions hydrogène dans la gamme désirée.

Comme mélanges tampons avantageux on peut citer les mélanges de phosphate monosodique ou monopotassique soit avec de l'hydroxyde de sodium ou de potassium soit avec du phosphate disodique ou dipotassique, soit avec du citrate trisodique ou: tripotassique. On peut citer comme autres mé- langes tampons appropriés convenant à l'invention, le phos- phate disodique ou dipotassique avec l'acide ohlorhydrique, sulfurique, citrique ou le citrate disodique ou dipotassi- que; le citrate disodique ou dipotassique avec le citrate trisodique ou tripotassique ou, au lieu de ce dernier, l'hy- droxyde de sodium ou de potassium. On peut également utili- ser le citrate trisodique ou tripotassique avec l'acide citrique, l'acide chlorhydrique ou l'acide sulfurique.

Comme autre exemple, on peut citer le phtalate monopotassique avec l'hydroxyde de sodium ou de potassium ou le phtalate dipo- tassique avec l'acide chlorhydrique ou sulfurique. De nom- breux autres tampons tels que ceux mentionnés dans l'ouvrage "Determination of Hydrogen Ions" de W. M. Clark, peuvent être appliqués en plus de ceux indiqués ci-dessus à la oondi- tion qu'ils ne soient pratiquement pas toxiques et que l'on

obtienne la concentration en ions hydrogène correspondant à la gamme de pH indiquée.

Pour des préparations administrables par voie intra- veineuse, la concentration minimum de stabilisant ou de tam- pon nécessaire pour obtenir une bonne stabilité correspond à une concentration molaire de 1/100. On peut utiliser des proportions beaucoup plus élevées sans effet nuisible et allant jusqu'au. point de déssalage. Une gamme molaire préfé- rée est toutefois comprise entre 1/10 et 1/20. La. concentra- tion molaire est évidement relative à un tampon seul, à une combinaison, ou à un mélange de tampons.

Pour le séchage du concentré oestrogène qui est très hygroscopique, et pour obtenir de plus une masse conve- nant à une injection intraveineuse, il est également néces- saire de prévoir un véhicule qui soit non-toxique et soluble dans les milieux sanguins. Un tel véhicule et adjuvant de séchage est de préférence le lactose bien que l'on puisse également avoir recours au dextrose, au galactose, aux pec- tines, à la gélatine, au dextrane, à la polyvinylpyrrolidone, ou tout autre agent susceptible d'agir comme véhicule pour le principe oestrogène, permettant un séchage facile du pro- duit et possédant les caractéristiques indiquées ci-dessus.

On a constaté que la composition intraveineuse est particulièrement intéressante comme agent hémostatique, par. exemple pour la régularisation des menstruations ou pour le , traitement de pertes de sang trop abondantes. Dans le cas d'hémorragies utérines, le traitement classique consiste soit en un ourettage, lorsqu'une rapide hémostase est néces- saire, ou en une ingestion orale d'oestrogène conjugués, en dehors des cas de crises. Dans ce dernier cas, la régulari- sation de l'écoulement sanguin est efficace au bout de deux à cinq jours.

Par l'administration du produit obtenu.selon l'in- vention, la préparation administrable par.voie intraveineuse

est notablement plus efficace, étant donné que l mostases se produit au bout de deux à huit heures.

La préparation intraveineuse est également intéres- sante pour le traitement de l'artériosclérose. On a constaté qu'une quantité aussi faible qu'un dixième de milligramme par kilogramme du poids du patient, administrée par voie intraveineuse une fois par semaine, rétablit le métabolisme normal du cholestérol et les rapports troublés phospholi- pilles/cholestérol et les rapports alpha-lipo-protéine béta- lipo-protéine. Four ce genre de maladie, les oestrogènes synthétiques sont inefficaces, et les administrations par voie orale ou parentérale exigent une telle concentration que les effets nuisibles qui en résultent empêchent leur utilisation.

Une autre application du produit oestrogène haute- ment purifié réside dans son utilisation, sous forme correc- tement tampons, comme principe de base pour crème ou on- guent en vue du traitement topique de 1 ' Acné vulgaris. Du fait qu'il est exempt d'une proportion importante des matiè- res solides indésirables dérivées de l'urine et du fait surtout qu'il est exempt de phénols et de crésols de faible poids moléculaire, on peut incorporer ce produit oestrogène dans une crème pour des besoins topiques, alors que les an- ciens produits de ce type ont une odeur telle que leur appli- cation comme médicament topique est limitée.

En plus des applications indiquées ci-dessus, le produit oestrogène obtenu selon l'invention peut être admi- nistré par voie orale sous forme de comprimés pour le trai- tement du syndrome de. la ménopause. Pour préparer ces compris més, on combine le produit oestrogène avec un tampon et l'on incorpore une quantité suffisante de véhicule pour fournir un comprimé de dimension et d'activité appropriées.

Les oom- primés contenant de 0,625 à environ 2,5 mg d'oestrogène conjugués, (exprimés en oestrons sulfate de sodium), pris quotidiennement,sont efficaces dans pratiquement tous les'cas

pour agir de façon notable sur les désordres usuels, autono- mes, émotionnels et mentaux dus au syndrome de la ménopause, Les comprimés dans lesquels entre le produit obtenu selon l'invention provoquent moins de réactions secondaires, tel- les que nausées, que les substances obtenues suivant les techniques antérieures.

Pour préparer le produit administrable par voie in- traveineuse, on combine le concentré oestrogène de l'inven- tion avec le tampon et le véhicule soluble dans l'eau et on dissout le tout dans l'eau.. On contrôle soigneusement le pH de la solution et on l'ajuste entre 6,5 et 7,5, de préfé- rence entre 7,2 et 7,4. On filtre la. solution à travers un filtre bactériologique, on la met dans. des fioles et on la sèche par lyophilisation. Ce produit, reconstitué au moyen d'eau stérélisée exempte de pyrogène, convient pour être administré par voie intrave ine us e . pour la préparation, de médicaments topiques, on combine le concentré oestrogène purifié dans un mélangeai ou malaxeurs, avec un onguent de base ou un véhicule de base du genre d'une crème de beauté.

Un'onguent de base typique comprend le monostéarate de glycérol l'alcool cétylique, la glycérine, l'huile de spermacéti, le stéarate de méthy- le, le p-hydroxy-benzoate de méthyle et le p-chloro-métacré- sol. Comme crèmes de base non siccatives, on peut citer, comme mélanges typiques une suspension de glycérol-dioxylde de titane, le silicate d'aluminium mangésium hydraté, le mono-stéarate de glycérol, l'alcool cétylique, la cire d'a- beilles, l'huile de spermacéti, le stéarate de méthyle, une huile minérale lourde, le monostéarate de propylène glycol, le lauryl sulfate de sodium, le benzoate de sodium et le p-hydroxy-benzoate de méthyle.

On peut citer comme autre médicament topique, le médicament du type liquide contenant l'alcool, le glycérol et un tampon de manière à obtenir un pH pratiquement neutre

et de préférence légèrement alcalin.

Les exemples suivants sont donnés à titre purement illustratif et nullement limitatif.

Exemple 1 -
On extrait, au moyen de 150 litres environ d'hexanol,
380 litres d'urine de juments gravides, judicieusement garan- tis contre l'hydrolyse, On élimine l'urine épuisée et on lave l'extrait hexanolique au moyen: ¯de 16 litres environ d'une solution aqueuse à 8 % d'hydroxyde de sodium. On jette la phase aqueuse. On concentre, sous vide, jusqu'à un volume de 7,5 litres l'extrait hexanolique lavé. Au concentré hexa- nolique, on ajoute alors 2 volumes (environ 15 litres) d'hé- xane. On lave ensuite le mélange alcool-hydrocarbure, une fois au moyen de 1,8 litre et deux fois au moyen d'un litre d'eau. Le principe oestrogène passe dans la solution aqueuse et on jette la fraction d'héxane-héxanol. On ajuste le pH du concentré aqueux brut entre 7,0 et 7,5, on y ajoute de la terre de diatomées et on sèche le mélange sous vide.

On dissout le gâteau sec dans une quantité minimum de méthanol puis on concentre sous vide jusqu'à environ un volume de 6 à 10 litres. On verse alors la solution métha- nolique dans 15 volumes d'acétone (15 fois le volume de la solution de méthanol). On filtre le précipité qui se forme, . on lave au moyen de 97 % d'acétone et de 3 % de méthanol, le liquide de lavage étant ajouté au filtrat* On concentre alors le filtrat sous vide jusqu'à, un volume minimum, on y ajoute 10 litres d'eau et on poursuit la concentration pour éliminer les solvants organiques.

On porte le volume du conoentrat à 10-12 litres par addition d'eau. On ajuste le pH de la solution à environ 5,0 par l'addition d'acide chlorhydrique et on lave rapidement la solution acide une fois au moyen d'un quart de volume de benzène et une fois au moyen d'un quart de volume d'éther.

On jette les eaux de lavage. On ajoute de l'eau, on neutra- @
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lise la solution au moyen d'une solution ------------------

d'hydroxyde de sodium et on ajuste le pH à environ 7,5; on distille le produit pour éliminer les solvants organiques et pour réduire le volume du. produit à environ la-12 litres, oelui-ci étant un concentré aqueux partiellement purifié.

A ce concentré aqueux, on ajoute alors 2 volumes (20 à 24 litres) d'une solution saturée de chlorure de so- dium qui précipite le principe actif, On ajoute un adjuvant de filtration tel que de la. terre de diatomées et on sépare le précipité oestrogène du. milieu, aqueux par filtration. on extrait le précipité au moyen de 97 % d'acétone et de 3 % de méthanol. On ajoute de l'eau à la solution organique de solvant et on concentre le mélange sous vide, ce qui donne environ 10 litres d'eau exempte de solvants organiques et contenant les oestrogènes conjugués sous une forme pure. On ajuste :le pH de la solution à environ 7-7,5..

Exemple 2 -
On extrait au moyen de 150 litres environ de dichlo- rure d'éthylène contenant 1 % en poids de dicyclohexylamine, environ 380 litres d'urine de juments gravides judicieuse- ment préservée. On lave l'extrait au solvant à trois repri- ses au moyen de 3,8 litres et une fois au moyen de 1,9 litre d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium à 2%. On lave l'extrait à la solution aqueuse alcaline au moyen d'une peti- te quantité de dichlorure d'éthylène et on jette le solvant chloré épuisé, ainsi que les eaux de lavage. On ajuste le pH de la solution aqueuse à 7,5 et on la.concentre sous vide jusqu'à siocité, ce qui donne un gâteau sec que l'on peut ensuite traiter de la. manière indiquée dans l'exemple 1.

Si on désire avoir une pureté d'environ 90-95 % ou ,plus, on sèche sous vide le concentré final aqueux obtenu par les procédés décrits ci-dessus et on le dissout dans du benzène contenant le pourcentage minimum d'alcool pour la mise en solution. On fait alors passer la solution à travers une colonne d'alumine activée qui retient le principe actif oestrogène. On procède à l'élution avec le même mélange

solvant que celui mentionné, de préférence un hydrocarbure aromatique tel que le benzène, combiné avec un alcool ali- phatique inférieur de 1 à 4 atomes de carbone, l'alcool étant présent dans le mélange à raison d'environ 10-50 % en volume.

On concentre ensuite l'éluat sous vide, on extrait le conaen- tré à l'eau et on le tamponne jusqu'à un pH d'environ 7,5.

Bien que l'on puisse obtenir une pureté d!environ 95 % ou même plus par ce procédé, un. produit ayant une telle pureté n'est pas d'une importance capitale pour les applications décrites.

Exemple 3. -
Pour préparer une formule administrable par voie in- traveineuse, on combine avec un tampon et un véhicule un concentré liquide purifié préparé de la manière décrite dans les exemples 1 et 2 et exempt de pyrogènes, d'indoxyles et de crésols.

On combine avec 62 g de citrate de sodium en disso- lution dans 4 litres d'eau additionnée de 250 g de lactose, 6 à 8 litres environ du concentré oestrogène contenant de 15 à 20 mg par ml d'oestrogènes conjugués (exprimés en oestro- ne Sulfate de sodium). On porte le volume de la solution aqueuse à 20 litres au moyen d'eau distillée deux fois. on ajuste le pH de la solution à environ 7,2-7,4 au moyen d'aci- de chlorhydrique à 5% ou d'hydroxyde de sodium à 5 %. On filtre la solution tamp,onnée à travers un filtre bactériolo- gique, on la met dans des fioles stérélisées et on la. lyo- philise. Ce produit, reconstitué au moyen d'eau distillée deux fois, exempte de pyrogène, est un. médicament efficace administrable par voie intraveineuse.

Exemple 4- -
Pour préparer un médicament topique pour le traite- ment de l'Acné vulgaris, on combine 2,5litres d'oestrogènes conjugués contenant 50 mg par ml (exprimés en oestronesulfa- te de sodium) avec 97 kg d'onguent normal additionné d'une

quantité suffisante de colorant rouge pour conférer au pro-, duit une couleur chair. On ajoute de l'eau en quantité suf- fisante pour porter la. totalité du produit à 100 kg de crème,.

On l'introduit de façon stérile dans des récipients ou tubes; il fournit environ 1,25 mg d'oestrogène conjugués par gramme d'onguent de base.

Exemple 5 -
On prépare un médicament liquide topique convenant aussi pour le 'traitement de l'Acne vulgaris en combinant le concentré liquide purifié oestrogène contenant 93,75 g d'oestrogènes conjugués (exprimés en oestrone. sulfate de sodium) avec 50 litres de glycérol et 2.800 g de citrate de sodium. On ajoute une quantité suffisante d'alcool éthylique à 95 % pour donner une concentration finale en alcool d'en- viron 12,5%. On ajoute de l'eau pour porter le volume du produit à 500 litres et on ajuste enfin le pH à environ
7,3-7,5.

Il va de soi que toute modification utile pourra. être apportée à l'invention.sans sortir de son cadre. C'est ainsi que l'on peut faire appel à d'autres procédés de con- centration des oestrogènes provenant d'urine de juments gra- vides avant l'opération de déssalage, comme indiqué précédem- ment. Quel que soit le procédé de concentration initialement appliqué, le procédé de salage pour l'obtention des oestrogè- nes comme décrit ci-dessus est un facteur nécessaire et im- portant pour l'obtention du produit concentré hautement puri- -fié. La demanderesse a constaté que le produit obtenu selon l'invention contient la plus grande partie des hormones sexuelles femelles sous la forme de suliates.

Les composés identifiés sent les sulfates d'oestrone, d'équiline, d'équi- lénine, de béta-oestradiol; de dihydroéquilénine et de béta- dihydroéquilénine. Ces composés sont combinés avec des ma- tières solides de l'urine relativement non toxiques, la teneur en oestrogène étant au moins égale à 40 % en poids

environ et, comme décrit dans les exemples ci-dessus, cette teneur est comprise entre environ 40 % et environ 50 % en poids et comprend les sulfates d'oestrone, d'équiline, d'al- pha et de béta-dihydroéquiline, d'équilénine, de béta-dihy- droéquilénine et de béta-oestradiol.

Le solvant acétone-alcool méthylique utilisé après le stade de précipitation salin est essentiel pour séparer le principe oestrogène des sels minéraux. A la place de l'a- cétone, on peut avoir recours à touie cétone aliphatique inférieure telle que la méthyléthyl cétone. A la place de .l'alcool méthylique utilisé avec l'acétone, on peut avoir reoours à tout alcool aliphatique inférieur comme l'alcool éthylique, isopropylique ou butylique. Lors de l'extraction au solvant sous des conditions acides, on peut suivant une variante laver la manière oestrogène au moyen de dicnlorure' d'éthylène à la place de benzène et d'éther.

Au lieu d'uti- liser une solution saturée de chlorure de sodium, on peut avoir recours à des solutions saturées d'autres sels de mé- taux alcalins à la. condition que ces sels ne soient relati- vement pas toxiques. Les solutions de sels préférées sont @ les solutions de sulfates, de phosphates et de chlorures de sodium et de potassium.

Comme tampons utilisés pour conférer une stabilité au produit oestrogène, on peut utiliser à la place du citra- te de sodium des exemples, tout tampon non-toxique soluble dans les milieux sanguins et susceptible de donner un pH compris entre 6,5 et ?,5, de préférence un pu légèrement alcalin.

En ce qui concerne le véhioule ou l'agent siccatif, à la place du lactose on peut utiliser toute substance non toxique soluble dans l'eau, soluble.dans le sang et susoep- tiole de donner du corps et d'aider au séchage du produit , ' outre le lactose, les véhicules préférés sont ceux déjà men- tionnés. En ce qui concerne la crème médicamenteuse topique, au lieu de l'onguent de basa du type crème fluide cité dans

les exemples, on peut utiliser une crème non siccative conte- nant les ingrédients normaux et bien connus pour ce Type de produits.

Claims

-R E S U M E - - Procédé d'obtention d'un produit oestrogène de haute activité et pratiquement exempt d'impuretés toxiques à partir d'urine de juments gravides, procédé caractérisé par les points suivants, pris isolément ou en combinaisons : 1. On extrait de l'urine de juments gravides une quan- ti-cé appréciable de l'oestrogene par extraction sélective de façon à obtenir un concentré, on dissout le concentré oes-' trogène dans un milieu aqueux, on ajoute un sel minéral en quantité suffisante pour précipiter les fractions oestrogènes pratiquement exemptes des impuretés initialement présentes' dans le concentré, on recueille le précipité et on en sépare sélectivement des sels minéraux les constituants oestrogènes désirés .

2. Le sel minéral utilisé comme agent de précipita- tion est un sel d'un métal. alcalin de l'acide sulfurique, phosphorique ou chlorhydrique.

3. On sépare le sel minéral dans le précipité sélec- tivement d'avec les constituants oestrogènes en appliquant un solvant organique sélectif des oestrogènes.

4. On sépare le solvant d'avec les constituants oes- trogènes en ajoutant de l'eau à l'extrait au solvant et en distillant le mélange pour éliminer le solvant organique.

- Composition pharmaceutique dérivée d'une urine équine caractérisée par les points suivants, pris isolément ou en combinaisons' : 1. Elle comprend un constituant oestrogène et un agent tampon, ce constituant oestrogène comprenant un mélange d'oestrogènes conjugués solubles dans l'eau de l'urine de juments gravidea sous une forme pratiquement non hydrolysée, <Desc/Clms Page number 17> la teneur en constituant oestrogène étant d'au moins 40 % d'oestrogènes conjugués en poids et ce constituant est prati- quement exempt de pyrogènes, d'indoxyles -et de crésols, ces oestrogènes étant combinés à un agent tampon stabilisant et maintenant la composition sous une forme pratiquement non hydrolysée.

2. L'agent tampon comprend un sel de métal alcalin non toxique susceptible de stabiliser et de maintenir la composition à un pH compris entre environ 6,5 et environ 7,5.

3. La composition renferme également un véhicule, non toxique, pour le constituant thérapeutique.

4. Ce véhicule est soluble dans les milieux sanguins.

5. Ce véhicule est un onguent de base non toxique.