CH389828A - Procédé d'obtention d'un produit oestrogénique - Google Patents

Description

  <B>Procédé</B>     d'obtention   <B>d'un produit</B>     oestrogénique       La présente invention se rapporte à un procédé  d'obtention d'un produit     oestrogénique    présentant une  activité élevée et pratiquement exempt d'impuretés  toxiques, à partir d'urine de juments gravides.  



  Grâce à la présente invention, on peut     obtenir    un  produit hormonal     oestrogénique        qui,    appliqué par voie  buccale, est efficace dans le traitement du syndrome  de ménopause.  



  On     connaît    déjà des procédés pour la     préparation     de compositions     oestrogénique    hydrosolubles à partir  de l'urine de juments gravides. Toutefois, aucun de  ces procédés ne permet de produire un produit     oestro-          génique    hautement     purifié,    exempt     d'impuretés    poten  tiellement toxiques, ou un produit pratiquement ino  dore.

   De plus, on ne connaît aucun procédé pour pré  parer, à partir de l'urine de juments gravides, un pro  duit     aestrogénique    qui présente une pureté et une  teneur en     oestrogènes    telles qu'il soit apte à être utilisé  comme médicament applicable par voie intraveineuse.  



  Le premier procédé connu pour l'obtention de       concentrats        d'oestrogènes    à partir d'urine de juments  gravides comprenait une extraction sélective des     oes-          trogènes    à l'aide de charbon activé, de     terre    à foulon  ou d'un autre agent adsorbant approprié.

   Les     oestro-          gènes    étaient sélectivement     .adsorbés    et ensuite     extraits     de l'agent     adsorbant    à     l'aide    ,d'un solvant     organique          tel    que la     pyridine,    l'aniline, la     morpholine    ou     diffé-          rentes    amines organiques. On utilisait, de préférence,  le charbon de bois comme agent absorbant et la     pyri-          dine    comme solvant.

   Après l'extraction à l'aide du  solvant, l'extrait était concentré par chauffage et, de  préférence, purifié.  



  En outre, il y a lieu de tenir compte du fait que       l'urine    de juments gravides renferme, en plus des       oestrogènes    conjugués, de nombreuses     substances     naturelles qui ont été rendues non toxiques physiolo-         giquement,    mais qui deviennent fortement toxiques  lorsque les complexes sont décomposés ou lorsque  certaines de ces substances, telles que les composés       phénoliques,    sont transformées en bases ou acides  libres au lieu de sels, soit par une action bactérienne,  soit par le     traitement        effectué    en vue d'isoler les prin  cipes     aestrogéniques.     



  Il est évident qu'une préparation destinée à       l'application    parentérale doit être non toxique aux  doses envisagées, en particulier lorsqu'il s'agit d'une  préparation destinée à être appliquée par voie     intra-          veineuse.    L'obtention d'un médicament pour l'appli  cation intraveineuse à     partir    d'urine équine qui con  tient non seulement des quantités élevées de protéines  étrangères, mais aussi des substances pyrogènes,  diverses amines et diamines, de     l'indoxyle,    ou des  composés phénoliques et     crésyliques        libres,    constitue  un problème difficile à résoudre.

   Souvent, ce pro  blème se complique du fait de la présence     d7impure-          tés    bactériennes considérables dans le liquide urinaire  à l'instant où il est recueilli.  



  Par extraction des     oestrogènes    conjugués à partir  de l'urine de juments gravides, selon les procédés con  nus, on     obtient    des produits qui possèdent une acti  vité     suffisante    pour certaines     applications,    mais qui  sont inutilisables, dans les traitements ultérieurs, pour  l'application par voie intraveineuse.  



  La présente invention a pour objet un nouveau  procédé d'obtention d'un produit     aestrogénique    pré  sentant une activité élevée et pratiquement exempt  d'impuretés toxiques, à     partir    d'urine de juments gra  vides, selon lequel une quantité substantielle de la  teneur en matières     oestrogéniques    est extraite à partir  de l'urine de juments gravides à l'aide d'agents  d'extraction sélective pour obtenir un     concentrat    #s-           trogénique,    ce procédé étant caractérisé par le fait  qu'on dissout ledit     concentrat        oestrogénique,

      encore  contaminé par des impuretés toxiques consistant en  des     sels        d'acides        sulfuriques    phénoliques     et/au        créso-          liques,    dans un     milieu    aqueux, on ajuste ce     concen-          trat    aqueux à un pH de 7,0 à 7,5, on en sépare les  impuretés     #strogéniques    inactives et on met en réac  tion la solution résultante avec un acide pour en abais  ser le pH à une valeur de 5 environ,

   de façon à trans  former les impuretés dans la forme libre d'acides sul-    Lors de la     mise    en     eeuvre    du présent procédé a lieu une réaction chimique     consistant    en la transforma  tion des sels d'acide sulfuriques     phénoliques    et     crésoliques    et de cations     inorganiques    ou organiques représen  tés par le symbole   X   en des acides     sulfuriques    phénoliques ou     crésoliques    libres correspondants suivant       l'équation     
EMI0002.0023     
  
    @_ <SEP> XCl
<tb>  J <SEP> phénols <SEP> l <SEP> phénols <SEP> @ <SEP> XOSO@ <SEP> crésols <SEP> l <SEP> + <SEP> HCl <SEP> 

  HOSO; <SEP> I <SEP> crésols       Une méthode pour la concentration préliminaire  des     cestrogènes    dans l'urine de juments gravides repose  sur l'utilisation d'un solvant organique pour extraire  directement les     principes        #strogéniques    à     partir          d'urine    non hydrolysée de juments     gravides.    Comme  agent d'extraction, on peut     utiliser    le     butanol.    Pour la       concentration.        préliminaire,

      il est toutefois préférable  d'opérer selon un procédé d'extraction dans lequel les  substances     #strogéniques    hydrosolubles, actives lors  de l'application     par    voie buccale, sont extraites à par  tir d'urine équine pratiquement non hydrolysée, à  l'aide d'un solvant     organique    pratiquement insoluble  dans l'eau.

   Comme solvant, on utilise un alcool ou  une cétone présentant une     solubilité    dans l'eau de       moins        de    6     %        environ.        L'hexanol        constitue        un        sol-          vant    préféré, bien que l'on puisse aussi utiliser d'autres  solvants     tels    que le     cyclohexanol,    le     méthyl-cyclo-          hexanol,

      la     cyclohexanone    ou     l'isophorone.    Les  matières     #strogéniques    sont extraites sélectivement  par le solvant. Pratiquement la totalité de la matière       protéinique    et de grandes quantités d'amines et de  diamines aliphatiques à poids moléculaire élevé sont  ainsi éliminées.

   Par ce procédé, on obtient un produit       contenant        environ        20        %        ou        un        peu        plus        de        substan-          ces        oestrogéniques,    mais renfermant toujours encore  des substances potentiellement toxiques.  



  Au lieu d'utiliser des alcools ou des cétones dont  la solubilité dans l'eau est limitée, on peut extraire les  substances     #strogéniques    à partir d'urine équine en  faisant réagir d'abord les     substances        #strogéniques          pour    les transformer en sels d'amines et en épuisant  ensuite le mélange avec du benzène ou un solvant  aliphatique chloré.

   Cette méthode de concentration       comporte    la réaction des substances     #strogéniques     présentes dans l'urine équine avec un sel d'une base  azotée pour former les sels     #strogéniques        (Talkyl-          amines,    de     cycloalkylamines    non substituées,     d'amines     d'hydrocarbures aromatiques monocycliques non  substituées, de     p-amino-acétophénone,    de     diméthyl-          aminotoluène,    de     procaine,    de     pyridine,

          d'a!minopyri-          dines    et de mélanges de ces composés. La formation  des sels     d'amines    des     oestrogènes        conjugés    a pour effet         furiques    phénoliques et/ou     crésoliques,    on lave les  produits de réaction dans un solvant organique pour  en éliminer lesdits acides libres, on neutralise la solu  tion restante qui comprend les matières     oestrogéniques,

       et on met en présence lesdites matières     #strogéniques     avec une solution saturée d'un sel inorganique pour en  précipiter les fractions     #strogéniques    sous forme d'un  sel de sulfates     oestrogéniques,    on recueille ledit préci  pité et on en sépare sélectivement les composants     oes-          trogéniques    désirés.    de rendre solubles les     oestrogènes    dans un solvant  organique, par exemple dans le benzène ou dans des  hydrocarbures aliphatiques chlorés liquides à poids  moléculaire bas.

   Ces solvants séparent sélectivement  les substances     oestrogènes    d'avec les matières urinaires       indésirées.    On utilise de préférence le     dichlorure     d'éthylène comme solvant.  



  Après l'opération de concentration selon l'une ou  l'autre des méthodes décrites ci-dessus, on sépare les  facteurs     #strogéniques    d'avec le solvant. On peut  traiter les substances     #strogéniques    séparées de  manière à en éliminer encore une certaine proportion  d'impuretés, en effectuant d'autres extractions sélec  tives à l'aide de solvants. Toutefois, le produit obtenu  renferme encore des impuretés qui le rendent poten  tiellement dangereux dans l'application intraveineuse,  notamment des sels     sulfuriques        phénoliques    et/ou       crésyliques,    qu'il faut éliminer.  



  L'ajustement du pH d'une solution aqueuse du  produit     partiellement    purifié, à environ 5,0,a pour  effet d'hydrolyser les sels précités, ce qui donne les  acides     sulfuriques    libres des phénols et/ou des cré  sols libres, acides qui peuvent être extraits par un sol  vant organique, lipophile, pratiquement insoluble  dans l'eau     tel    que le benzène ou l'éther. D'autre part,  les esters de substances     #strogéniques    avec des acides  présents physiologiquement dans les     concentrats        aes-          trogé@niques    ci-dessus ne sont pas hydrolysés à cette  valeur de pH et restent donc inchangés dans la phase  aqueuse.  



  Le produit obtenu est soumis à un traitement par  une solution saline aqueuse saturée, en     utilisant    par  exemple un sulfate, un phosphate ou un chlorure de  métal alcalin, les sels sodiques et potassiques étant  préférés. Ce traitement a pour effet de précipiter  sélectivement les substances     oestrogéniques,    pratique  ment toutes les matières toxiques mentionnées ci-des  sus étant retenues dans la solution aqueuse. On sépare  le précipité par filtration et l'épuise avec une cétone  aliphatique contenant une petite quantité d'un alcool  qui dissout     sélectivement    les     oestrogènes    conjugués à  l'exclusion de la majeure partie du sel inorganique      utilisé pour la précipitation.

   Finalement, on ajoute de  l'eau à la solution dans le solvant et on concentre le  produit pour éliminer pratiquement la totalité du sol  vant et obtenir le     concentrat    sous forme de solution  aqueuse. Le produit hautement concentré obtenu peut  être soit utilisé sous forme aqueuse dans la prépara  tion d'un produit destiné à l'application par voie       intraveineuse,    soit incorporé directement, sous forme  de solution aqueuse, dans une matière de base pour  pommades. On peut aussi sécher le produit dans le  vide, de préférence par lyophilisation (séchage à partir  de l'état congelé), avant de l'utiliser pour l'application  particulière prévue.  



  Si l'on veut obtenir un produit utilisable pour  l'application intraveineuse, il est nécessaire d'exclure  et d'éliminer les matières pyrogènes dans le traite  ment du     concentrat        oestrogénique        partiellement    puri  fié avec la solution saline et dans toutes les opérations  suivantes. Les récipients et les instruments en acier  inoxydable et en verre utilisés pour les différentes  opérations doivent être absolument propres,     afin     d'éviter une contamination par des agents pyrogènes.  Pour toutes les solutions aqueuses, il faut utiliser de  l'eau doublement distillée.  



  Un autre facteur qui joue un rôle important dans  la préparation d'un produit destiné à l'application  intraveineuse, à partir d'urine équine, est celui de la  stabilité. Il est probable que des agents stabilisants  sont présents dans les extraits bruts puisque ces der  niers sont plus stables que les compositions     oestrogé-          niques    présentant un degré de purification plus élevé.

    On a trouvé que, dans la préparation d'un produit  destiné à l'application intraveineuse, en     utilisant    le  produit     cestrogénique    hautement actif obtenu par le  présent procédé, il est nécessaire d'ajouter     un    agent  stabilisant pour maintenir la stabilité des     cestrogènes     conjugués et empêcher leur décomposition. Les     aes-          trogènes    conjugués sont très instables à l'état relati  vement pur, particulièrement en présence d'humidité.  En présence d'humidité ou dans un     milieux    aqueux,  il se forme de l'acide qui détruit rapidement le pro  duit.

   On a découvert le fait important que des agents       tampon    capables de     maintenir    un milieu pratique  ment neutre avec un pH compris entre environ 6,5  et 7.5 empêchent la décomposition de la composition       cestrogénique.     



  Comme agents     tampon    ou stabilisants pour le  produit     oestrogénique    obtenu selon la présente inven  tion, on peut utiliser des sels alcalins d'acides organi  ques ou inorganiques capables de     maintenir    un pH  pratiquement neutre entre les limites de 6,5 et 7,5  environ, de préférence du côté faiblement     alcalin.    On  peut utiliser les sels ou les mélanges de sels tampon       connus,    à condition que ceux-ci soient pratique  ment non toxiques dans les quantités utilisées .et soient  capables de maintenir la concentration voulue en ions  hydrogène.  



  A titre d'exemples de mélanges tampon préférés,  on peut citer les mélanges constitués par le phosphate       monosodique    ou     monopotassique    et l'hydroxyde de    sodium ou de potassium, le phosphate     disodique    ou       dipotassique    ou le citrate     trisodique    ou     tripotassique.     Un autre mélange tampon utilisable pour stabiliser le  produit obtenu conformément à la présente     invention     est constitué par le phosphate     monosodique    ou     mono-          potassique    et soit l'acide chlorhydrique, l'acide sul  furique, l'acide citrique,

   soit le     citrate        disodique    ou       dipotassique.    On peut aussi utiliser un mélange tam  pon constitué par le citrate     disodique    ou     dipotassique     et le citrate     trisodique    ou     tripotassique    ou, au lieu de  ce dernier, l'hydroxyde de sodium ou de potassium.  On peut en outre utiliser un mélange constitué par le  citrate     trisodique    ou     tripo:tassique    et l'acide citrique,  l'acide chlorhydrique ou l'acide sulfurique.

   Un  mélange constitué par le     phtalate        monopotassique    et  l'hydroxyde de sodium ou l'hydroxyde de potassium  ou par le     phtalate        dipotassique    et l'acide chlorhydri  que ou l'acide sulfurique est également efficace. Outre  les mélanges mentionnés, on peut utiliser de nom  breux autres agents tampon tels qu'ils sont décrits  dans le texte intitulé       Determination    of     Hydrogen     Ions   par W. M. Clark, à condition que ces agents  soient     pratiquement    non toxiques et fournissent une  concentration en ions hydrogène dans la gamme de  pH indiquée.  



  Dans le cas de préparations destinées à l'appli  cation intraveineuse, la concentration     minimum     d'agent tampon ou stabilisant nécessaire pour obtenir  un effet de stabilisation satisfaisant est de 0,01 mole.  On peut utiliser des quantités sensiblement supérieu  res allant jusqu'au point de     relargage,    sans observer  d'effets préjudiciables. La gamme des concentrations  préférée est toutefois comprise entre 0,1 et 0,2 mole  environ. La concentration molaire se rapporte soit à  un agent tampon unique soit à une combinaison ou  un mélange d'agents tampon.  



  Afin de rendre possible le séchage du concentrai       aestrogénique    qui est très hygroscopique et d'obtenir  le volume nécessaire pour des injections intraveineu  ses, il convient d'ajouter un support non     toxique    et  soluble dans le liquide sanguin. A titre de support et  d'agent auxiliaire de séchage, on utilise de préférence  le lactose. On peut toutefois aussi utiliser le dextrose,  le galactose, la pectine, la gélatine, le     dextrane,    la       polyvinylpyrrolidone    ou tout autre agent capable de  servir comme support pour les substances     oestrogéni-          ques,    de rendre possible le séchage du produit et pos  sédant les caractéristiques mentionnées ci-dessus.  



  On a trouvé que la composition destinée à l'usage  intraveineux est particulièrement     utile    comme agent       hémostatique,    par exemple dans le     traitement    de  l'hémorragie utérine fonctionnelle ou, de manière  générale, dans le traitement d'hémorragies excessives.  Dans le cas de l'hémorragie utérine fonctionnelle, le  traitement usuel consiste soit en un curetage qui  nécessite une hémostase rapide ou en l'ingestion buc  cale de substances     oestrogéniques    lorsqu'il ne s'agit  pas d'un cas urgent. Dans ce dernier cas,     l'effet     hémostatique se produit dans l'espace de 2 à 5 jours.

        Si l'on utilise le produit     aestrogénique    obtenu con  formément à la présente invention, la préparation  destinée à l'usage intraveineux est notablement plus  efficace puisque l'hémostase se produit dans l'espace  de 2 à 8 heures.  



  La préparation intraveineuse est également utilisa  ble dans le traitement de l'athérosclérose.  



  On a trouvé qu'une quantité aussi faible que 0,1  mg environ par kg de poids corporel,     administrée    par  voie intraveineuse une fois par semaine, normalise le  métabolisme     cholestérinique    et restaure les rapports  perturbés des phospholipides au cholestérol et les  rapports des     a-lipo-protéines    aux     (3-lipo-protéines.     Dans le cas de ces troubles, les     oestrogènes    synthéti  ques sont inefficaces, tandis que les     aestrogènes    desti  nés à l'usage buccal ou parentéral nécessitent des  doses si élevées que les effets secondaires préjudicia  bles en résultant rendent impossible leur utilisation.  



  Le produit     cestrogénique    hautement purifié, obtenu  suivant la présente invention, peut aussi être ajouté,  à l'état convenablement tamponné, dans un support  d'onguent ou de pommade pour le traitement local  de     l'Acne        vulgaris.    Grâce à l'absence d'une majeure  partie des solides urinaires indésirables et surtout  grâce à     l'absence    de phénols et de     crésols    à poids  moléculaire bas, le produit     oestrogénique    obtenu sui  vant l'invention peut être incorporé dans une pom  made destinée à l'usage local, tandis que les produits  antérieurs de ce type     étaient    trop malodorants pour  servir de médicaments topiques.  



  Le produit     #strogénique    obtenu suivant l'inven  tion est en outre utilisable sous forme de comprimés  applicables par voie     buccale    dans le traitement du  syndrome de ménopause. Pour préparer les compri  més, on mélange le produit     orstrogénique    avec un  agent tampon et on ajoute un     support    en quantité       suffisante    pour obtenir des comprimés présentant les  dimensions et l'activité voulues.

   Des comprimés con  tenant environ 0;625 à 2,5 mg     d'oestrogènes    conju  gués (ce poids se     rapportant    au sel sodique du     sul-          tate        d'oestrone),        administrés        journellement,    ont été  efficaces pratiquement dans chaque cas et ont procuré  un soulagement notable quant aux troubles autono  mes, émotifs et [mentaux accompagnant le syndrome  de ménopause. Les comprimés renfermant le produit  obtenu suivant la présente invention provoquent  moins de réactions secondaires, telles que des nau  sées, que les produits antérieurs.  



  Pour préparer le produit destiné à l'usage intra  veineux, on mélange le     concentrat        oestrogénique     obtenu suivant la présente invention avec l'agent tam  pon et le     support    hydrosoluble, tout deux dissous  dans de l'eau. Le pH de la solution est soigneusement  contrôlé et ajusté entre 6,5 et 7,5, de préférence entre  7,2 et 7,4 environ. La solution est filtrée à travers un  filtre bactériologique,     placée    dans des     flacons    et sé  chée par lyophilisation. Lorsqu'il est reconstitué avec  de l'eau stérile exempte d'agents pyrogènes, ce pro  duit est utilisable pour des injections intraveineuses.

      Pour préparer des médicaments topiques, on  mélange le     concentrat        cestrogénique    purifié, dans un  mélangeur ou malaxeur, avec une base d'onguents  ou de pommades. A titre d'exemple d'une base d'on  guent on citera le mélange constitué par du     mono-          stéarate    de glycérine, de l'alcool     cétylique,    de la gly  cérine, du blanc de baleine, du stéarate de méthyle, du       p-hydroxy-benzoate    de méthyle et du     p-chloro-m-          crésol.    A titre de base pour une pommade non  séchante, on peut utiliser, par exemple, un mélange  composé d'une suspension de dioxyde de titane dans  la glycérine,

   le silicate d'aluminium et de magnésium  hydraté, de     monostéarate    de glycérine,     d'alcool        céty-          lique,    de cire d'abeilles, de blanc de baleine, de     stéa-          rate    de méthyle, d'huile minérale lourde, de     mono-          stéarat;,    de propylène-glycol, de sulfate de     lauryle     sodique, de benzoate de sodium et de     p-hydroxy-          benzoate    de méthyle.  



  Une autre forme de médicament topique est la  forme liquide contenant de l'alcool, de la glycérine et  un agent tampon destiné à maintenir le pH à proxi  mité du point de neutralité et, de préférence, du côté  faiblement alcalin.  



  La présente invention sera illustrée de manière  plus détaillée dans les exemples suivants.  



  <I>Exemple 1</I>  On soumet 379 litres d'urine de juments gravides,  convenablement conservés pour empêcher l'hydrolyse,  à une extraction avec 151 litres     d'hexanol.    On rejette  l'urine épuisée et on lave l'extrait     hexanolique    avec       15,1        litres        d'une        solution    à 8     %        de        soude        caustique     dans de l'eau. On rejette la phase aqueuse.     L'hexanol     lavé est ensuite concentré dans le vide jusqu'à un  volume de 7,57 litres.

   On ajoute au concentre 2  volumes (environ 15,1 litres)     d'hexane.    On lave le  mélange     alcool-hydrocarbure    une fois avec 1,89 litre  et deux fois avec 0,95 litre d'eau. Les principes     #stro-          géniques    se trouvent dans la phase aqueuse. On  rejette la phase     hexane-hexanol.    On ajuste le     concen-          trat    aqueux brut à un pH compris entre 7,0 et 7,5, on  ajoute de la terre     d'infusoires    et on sèche le mélange  dans le vide.  



  On dissout le gâteau séché dans du méthanol,  puis on filtre pour éliminer 1a terre d'infusoires et  on concentre la solution dans le vide jusqu'à un  volume de 6 à 10 litres environ.  



  On verse ensuite la solution     méthanolique    dans  15 volumes d'acétone (15 X le volume de la solution       méthanolique).    Les impuretés     oestro-géniquement     inactives précipitées sont séparées par filtration et  lavées avec un mélange composé de 97 % d'acétone  et 3 % de méthanol. On ajoute le liquide de lavage  au filtrat. On concentre le filtrat, dans le vide, jusqu'à  un faible volume, on ajoute 10 litres d'eau et on  concentre de nouveau pour éliminer les     solvants     organiques.  



  On ajoute de l'eau au     concentrat    pour obtenir  un volume de 10 à 12 litres. On ajuste le pH de la  solution à environ 5,0 à l'aide d'acide chlorhydrique      et on lave rapidement -la solution acide une fois avec  0,25 volume de benzène et une fois avec 0,25 vo  lume d'éther pour éliminer des impuretés     phénoli-          ques    principalement odorantes. On rejette les     liquides     de lavage. On ajoute de l'eau, on neutralise et ajuste  la solution à un pH de 7,5 environ à l'aide d'une  solution de soude caustique et on distille le produit  pour éliminer les     solvants    organiques et obtenir un  concentra aqueux     partiellement    purifié d'un volume  de 10 à 12 litres environ.  



  On ajoute au     concentrat    aqueux deux volumes  (20 à 24 litres) d'une solution de     chlorure    de sodium  saturée pour     précipiter    les     principes    actifs. On ajoute  un agent     auxiliaire    de filtration, par exemple de la  terre     d'infusoires,    et on sépare le précipité     oestrogé-          nique    du milieu aqueux par filtration.

   On épuise     ce          précipité        avec        un        mélange        composé        de        97        %        d'acé-          tone        et    3     %        de        méthanol.        On        ajoute        de        l'eau    à     la     solution organique et on     concentre    

  le mélange dans  le vide pour obtenir environ 9,5 litres d'une solution  organique exempte d'eau et contenant les     oestrogènes     conjugués sous forme     purifiée.    Le pH de la solution  est ajusté à 7,0-7,5 environ.  



  <I>Exemple 2</I>  On soumet environ 379 litres d'urine de juments  gravides, convenablement conservés, à une extrac  tion avec 151 litres de     dichlorure    d'éthylène     conte-          nant    1     %        en        poids        d'acétate        de        dicyclohexylamine.     On lave l'extrait organique 3 fois avec 3,79 litres et       une        fois        avec        1,

  89        litre        d'une        solution    à 2     %        de     soude caustique dans de     l'eau.    On lave l'extrait  aqueux     alcalin    avec une petite quantité de     dichlorure     d'éthylène et on rejette le solvant chloré épuisé et le  liquide de lavage. La solution aqueuse est ajustée à  un pH de 7,5 et     concentrée    dans le vide jusqu'à  siccité. On obtient un gâteau sec que l'on peut     traiter     de la manière     décrite    dans l'exemple précédent.  



  Si l'on désire     obtenir    un produit présentant une  pureté de 90-95 0/0 ou quelque peu plus élevée, on  sèche dans le vide le concentra aqueux final     obtenu     comme     décrit    ci-dessus et on dissout le résidu dans  du benzène contenant une quantité d'alcool juste  suffisante pour     effectuer    la     dissolution.    On fait ensuite  passer la solution à travers une colonne     d'alumine     activée laquelle retient les principes     oestrogéniques.     On effectue     l'élution    à l'aide du même mélange de  solvants, de     préférence    un mélange composé d'un  hydrocarbure aromatique,

   par exemple le benzène, et  d'un alcool aliphatique     inférieur    renfermant de 1 à 4  atomes de carbone, l'alcool étant     présent    dans ce       mélange        en        quantité        de        10-50        %        en        volume        environ.     Ensuite, on concentre     l'éluat    dans le vide, on reprend  le concentra dans de l'eau et on tamponne la solu  tion à un pH de 7,5 environ.

   De     cette    manière, on  peut obtenir un produit     présentant    une pureté de       95        %        environ        ou        même        supérieure.        Pour        les        appli-          cations    prévues, il n'est     toutefois    pas -absolument  nécessaire d'utiliser un produit présentant un degré  de pureté si élevé.

      Pour préparer une     préparation    utilisable pour       l'application        intraveineuse,    on mélange un concentras       liquide    purifié,     obtenu    comme     décrit        dans    les exem  ples 1 et 2 et exempt d'agents pyrogènes,     d'indoxyle     et de composés     crésyliques,        avec    un agent tampon et  un support.  



  On mélange environ 6 à 8 litres du     concentrat          oestrogénique        contenant    15 à 20 mg     d'oestrogènes     conjugués par cc (ce poids étant     rapporté    au sel  sodique du sulfate     d'#strone)    avec une solution de  62 g de citrate de sodium     dans    4     litres    d'eau à  laquelle ont été ajoutés 250 g de lactose.

   On porte  le volume de la solution aqueuse à 20     litres        avec    de  l'eau     doublement        distillée.    On ajuste le pH de la  solution à environ 7,2-7,4 à l'aide     d'acide    chlorhy  drique à 5 0/0 ou de soude caustique, selon les     néces-          sit6s.    La solution tamponnée est ensuite filtrée à  travers un filtre bactériologique, placée dans des     fla-          cons        stérilisés    et lyophilisée.

   Ce produit, lorsqu'il  est reconstitué avec     de    ,l'eau doublement     distillée,     exempte d'agents pyrogènes, constitue un médicament  intraveineux efficace.  



  Pour     préparer    un     médicament    topique destiné au  traitement de     l'Acne        vulgaris,    on mélange 2,5     litres     d'un     concentrat    contenant 50 mg     d'aestrogènes    conju  gués par     cc        (ce    poids étant rapporté au sel sodique  du sulfate     d'oestrone)    avec 97 kg d'une base d'onguent       conventionnelle    à laquelle on a ajouté suffisamment  de matière     colorante    rouge pour donner au produit  une couleur chair. On ajoute au mélange de l'eau  pour obtenir 100 kg de crème.

   On     place    cette crème  dans des pots ou des tubes. La crème renferme envi  ron 1,25 mg     d'cestrogènes    conjugués par gramme de  support.  



  Pour     obtenir    un médicament topique liquide des  tiné au traitement de     l'Acne        vulgar        is,    on mélange le       concentrat        oestrogénique    liquide purifié contenant  93,75 g     d'oestrogènes        conjugués        (ce    poids étant rap  porté au sel sodique du     sulfate        d'#strone)    avec 50  litres de     glycérine    et 2800 g de citrate de sodium.

   On       ajoute        suffisamment        d'alcool        éthylique    à     95        %        pour     obtenir une     concentration    alcoolique     finale    -de       12,5        %        environ.        On        ajoute        de        l'eau        pour        porter        le     volume du produit à 500 litres.

   Finalement on ajuste  le produit à un pH compris entre 7,3 et 7,5 environ.  



  On a trouvé que le produit obtenu selon la pré  sente invention contient la majorité Ces hormones       sexuelles        féminines    sous forme de     sulfates.    Ainsi, on  a identifié les     sulfates        d'oestrone    de     l'équiline,    de       l'équilénine,    du     P-#stradiol,    de la     dihydroéquilénine     et de la     (1-dihydroéquilénine.    Ces     substances    sont  mélangées à -des     solides    urinaires relativement non  toxiques,

   la teneur en     substances        strogéniques        étant          d'au        moins        40'%        en        poids.        Comme        on        l'a        indiqué     dans les exemples     précédents,

      cette teneur varie entre       environ        40        et        50        %        en        poids        et        se        compose        des        sul-          fates    de     l'#strone,        l'équiline,    l'a- et la     (3-dihydroéqui-          line,        l'équilénine,

      la     P-dihydroéquilénine et le     P-oes-          tradiol.         Au     lieu        d'utiliser    le mélange acétone-alcool  méthylique, après l'opération de     relargage,    pour     s6pa-          rer    les substances     oestrogéniques    d'avec les     sels    inor  ganiques, on peut     utiliser    le mélange d'une autre  cétone     aliphatique    inférieure, par exemple la     méthyl-          éthylcétone,    avec un autre alcool aliphatique infé  rieur,

   par exemple l'alcool éthylique,     isopropylique     ou butylique. Pour laver la matière     oestrogénique,     lors de l'extraction sous des     conditions        acides,    on  peut     utiliser    le     dichiorure    d'éthylène au lieu de ben  zène et d'éther. Au lieu d'une solution de chlorure  de sodium saturée, on peut utiliser des solutions  saturées d'autres sels de métaux alcalins, à condi  tion que ces sels soient relativement non toxiques.  On préfère utiliser des solutions saturées des sulfates,  phosphates et chlorures du sodium et du potassium.  



  A titre d'agent tampon destiné à     stabiliser    le  produit     aestrogénique,    on peut     utiliser,    au lieu du       citrate    de sodium, tout agent tampon non toxique  qui est soluble dans les     fluides    sanguins et est capa  ble de     fournir    un pH compris entre 6,5 et 7,5 envi  ron, de préférence du côté faiblement alcalin. A titre  de support ou d'agent de séchage, on peut utiliser,  au lieu du lactose, toute matière non toxique hydro  soluble, soluble dans les fluides     sanguins    et capable  de donner du     corps    au     produit    et de faciliter le  séchage de celui-ci.

   En plus du lactose, d'autres  matières de support ont déjà été mentionnées plus  haut. Pour la préparation du médicament topique  sous forme de crème, on peut utiliser, au lieu d'une  base d'onguent du type des crèmes     résorbables,    une  crème non séchante contenant les ingrédients usuels,  utilisés pour ce type de produits.

Claims (1)

1. REVENDICATION Procédé d'obtention d'un produit ees@trogénique présentant une activité élevée et pratiquement exempt d'impuretés toxiques, à partir d'urine de juments gravides, selon lequel une quantité substantielle de la teneur en matières #strogéniques est extraite à par- tir de l'urine de juments gravides à l'aide d'agents d'extraction sélective.

   pour obtenir un concentra #strogénique, caractérisé en ce qu'on dissout ledit concentrat oestrogénique, encore contaminé par des impuretés toxiques consistant en des sels d'acides sulfuriques phénoliques et/ou crésoliques, dans un milieu aqueux, on ajuste ce concentrat aqueux à un pH de 7,0 à 7,5, on en sépare les impuretés oestro- géniques inactives et on met en réaction la solution résultante avec un acide pour en abaisser le pH à une valeur de 5 environ,

   de façon à transformer les impuretés dans la forme libre d'acides sulfuriques phénoliques et/ou crésoliques, on lave les produits de réaction dans un solvant organique pour en éli miner lesdits acides libres, on neutralise la solution restante qui comprend les matières oestrogéniques, et on met en présence lesdites matières #strogéniques avec une solution saturée d'un sel inorganique pour en précipiter les fractions #strogéniques sous forme d'un sel de sulfates oestrogéniques,

   on recueille ledit précipité et on en sépare sélectivement les compo- sants #strogéniques désirés. SOUS-REVENDICATIONS 1. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce que ledit sel inorganique est un sel alcalin de l'acide sulfurique, phosphorique ou chlorhydrique. 2. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce que le sel présent dans le précipité est sélective ment séparé des composés #strogéniques à l'aide d'un solvant organique.. 3.

   Procédé suivant la revendication et la sous- revendication 2, caractérisé en ce qu'on sépare le solvant organique d'avec les composants oestrogéni- ques en ajoutant de l'eau à l'extrait et en distillant le mélange pour éliminer le solvant organique.