BE563714A - - Google Patents

Description

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   La présente invention est -relative à la préparation d'hormone du type de la cortine. 



   On sait que la cortine, est constituée par l'extrait total des capsules surrénales et que c'est une hormone de constitution complexe pouvant assurer la survie des organismes privés de surrénales et permettant de remédier aux insuffisances surrénales. C'est de ce fait   .un   produit thérapeutique précieux qui n'a pu jusqu'ici être produit de manière économique par suite de la petitesse des glandes   d'au   il est extrait, après sacrifice de l'animal. 



   L'invention se propose de remédier à ces inconvénients en fournissant un procédé de préparation économique d'une hormone du type de la   cortine     bénéfi-     ciant   des mêmes propriétés avantageuses pour ce qui 

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 concerne les insuffisances surrénales que la cortine. 



   Il a en effet été découvert selon l'inven- tion que le lait et la mamelle et la tétine des mammi- fères , en particulier de la vache, contiennent d'im- portantes quantités d'hormone du type de la cortine que l'on peut extraire facilement. 



   On se rendra compte aisément des avanta- ges de l'invention en sachant que deux à trois litres de lait contiennent autant d'hormone cortinique que celle que l'on extrait actuellement de la totalité de l'ani- mal, Par ailleurs, l'extraction de l'hormone du lait ne nécessitant pas le sacrifice de l'animal, un même animal peut fournir dans le cours de son existence une très importante quantité d'hormone, Enfin, la mamelle et la tétine fournissent une source complémentaire d'hor- mone, en plus des capsules surrénales, chez les animaux sacrifiés aux fins de boucherie par exemple. 



   L'extraction de l'hormone du lait et de la mamelle et de la tétine des mammifères est basée sur . la solubilité sélective de l'hormone dans   les*solvants   des stéroïdes miscibles à l'eau, tels que les alcools et les cétones, et notamment l'alcool éthylique et l'acé- tone, lorsque la température est basse, entre - 5 et + 2 C en particulier. A température élevée, en effet, l'hormone a tendance à se répartir entre ces solvants et les corps gras, en sorte qu'une importante partie en est perdue et ce d'autant plus que la température est plus élevée. 



   Le procédé de préparation de l'hormone de type cortinique suivant l'invention est donc reùarquable notamment en ce qu'il consiste à extraire le lait ou la mamelle et la tétine d'un   mammifère,à   basse   tempé-   

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 rature, de préférence entre -5  et +2 C, au moyen d'un solvant des stéroïdes miscibles à l'eau, à séparer l'ex- trait ainsi obtenu et à le purifier. 



   L'extraction de l'hormone peut se faire au pH naturel du lait et des organes broyés (mamelle et tétine) prélevé, sur l'animal. Elle est toutefois favo- risée par.acidification à pH   4,5   à 5, qui assure une séparation de l'hormone des complexes lipoîdiques dans lesquels elle est contenue. Cette acidification peut se faire au moyen de tout acide minéral ou organique tel que l'acide chlorhydrique ou l'acide acétique. 



    @  
Pour assurer un bon contact du solvant, tel qu'un mélange d'éthanol et d'acétone,avec le produit à extraire, il convient d'agiter l'ensemble.Dans le cas où l'on part de lait, ceci provoque la formation de beurre, qui vient surnager au-dessus du petit lait con- tenant le solvant ajouté et l'hormone, Ceci assure une séparation naturelle par décantation de l'extrait cher- ché. Il faut toutefois prendre soin de. recueillir dans l'extrait la zone de séparation du beurre et du petit lait riche en hormone. 



   Le beurre prélevé peut être jeté ou bien livré à la consommation, lorsqu'il n'y a pas eu acidifi- cation   ou que   cette acidification a été faite au moyen d'acide acétique. 



   A remarquer que le .procédé au lieu d'être appliqué au lait entier pourrait l'être au petit lait.Ce dernier mode de mise en oeuvre, moins avantageux car une grande partie de l'hormone serait perdue dans la crème, n'en tombe pas moins sous le coup de l'invention et le terme "lait" utilisé ici vise aussi bien le lait entier que le lait écrémé. 

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   L'extrait obtenu, soit à partir de lait, soit à partir des organes broyés, est filtré toujours à basse température pour éliminer dans le premier cas la caséine et dans le second cas les résidus d'organes. 



   A partir de ce stade, la purification de l'extrait est effectuée de la même manière ,quel que soit le produit de départ. 



   Cette purification est basée sur des éva- porations et des reprises successives avec des solvants, chaque évaporation étant précédée d'une filtration pour éliminer les fractions insolubles. Chaque filtration doit être faite de préférence à basse température pour éviter qu'une partie de l'hormone ne passe dans le résidu.inso- lubie. Les évaporations et reprises successives sont   ef-     jusqu@à que l@o n' és*ldu fectuées jusqu'à ce que l'on/obtienne plus de résidu   insoluble. 



   A titre d'exemple, les différentes reprises de l'hormone peuvent être effectuées successivement par l'acétone, l'acétate d'éthyle, le chloroforme,   l'alcool   méthylique et finalement l'alcool éthylique. La solution de l'hormone dans l'alcool éthylique finalement obtenue contient 70 % de l'hormone primitivement présente. Elle peut être traitée par le réactif de Girard pour obtenir l'hormone sous forme de corticostéroïdes cristallisés. 



   Cette solution peut également être utilisée telle quelle après dilution à l'eau sous forme de solution buvable ou injectable,   -'On   peut récupérer'une grande partie de la fraction d'hormone perdue au cours des diverses opéra- tions dans les résidus solides. A cette fin ,il convient d'hydrolyser ces résidus en milieu aqueux acide de   pH   2 environ, puis d'extraire la phase aqueuse au moyen de 

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 l'un des solvants   précités.   Cet extrait peut être ajouté à l'extrait principal à un stade quelconque de la puri- fication. Cette récupération est particulièrement avan- tageuse sur les résidus de l'extraction primaire. 



   On peut ainsi au total obtenir 0,60 à
2 mg d'hormone par litre de lait. 



   1.,L'exemple ci-dessous illustre un mode . de mise en oeuvre du procédé selon l'invention appliqué au lait entier. 



    Exemple    .- a)   Extraction. 



   On recueille immédiatement après traite
500 cm3 de lait dans un flacon jaune contenant 250 cm3 d'éthanol et 250 cm3 d'acétone pure et on acidifie à pH 4,5 avec de l'acide chlorhydrique. On agite une demi-heure et on laisse au repos au moins 48 heures à +2 C. On élimine le beurre figé que l'on jette, en ayant soin de prélever toutefois, en même temps que la phase aqueuse contenant l'alcool et l'acétone,la zone de sé- paration du beurre et du petit   lait.   



   On filtre cette phase aqueuse pour éli- miner la caséine et autres résidus. 



   On reprend ces résidus trois fois avec à chaque fois un mélange de 250 cm3 d'éthanol et 250 cm3 d'acétone.Les quatre fractions éthanolo-acétoniques sont réunies (2,5. litres au total) et soumises à la purifica- tion. b)Purification. 



   Les extraits éthanolo-acétoniques sont évaporés rapidement au-dessous de 40 C jusqu'à obtention d'une masse pâteuse. A cette masse, on ajoute 9 volumes d'acétone (200 à 500 cm3   environ'),   on agite et laisse
48 heures en glacière entre 0 et   5 C.On   filtre à cette 

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 température* On distille rapidement à 40 C le filtrat jusqu'à siccité. Le produit sec est repris trois fois - ¯ avec 5à 10 cm3 d'acétone pure et les extraits réunis sont laissés 24 heures en glacière puis filtrés à froid: 
On chasse l'acétone des extraits filtrés par distillation rapide et on reprend 2 fois le résidu par 
10 cm3 d'acétate d'éthyle. On laisse l'extrait 24 heu- res en glacière et on filtre à froid. 



   L'extrait filtré est évaporé rapidement et le résidu repris 2 fois par 5 cm3 de chloroforme. 



   On laisse l'extrait 24 heures en glacière      et on filtre à froid. 



   L'extrait chloroformique filtré est éva- poré et le résidu repris 3 fois avec 2 cm3 d'alcool méthylique. 



   On laisse l'extrait méthylique 24 heures en glacière, on filtre à froid et on évapore l'alcool méthy- lique. 



   Le résidu est repris par.2 cm3 d'éthanol absolu.La solution alcoolique diluée avec de l'eau jus- qu'à une concentration en alcool de   15 %   reste stable et peut servir à l'administration du produit par voie orale ou par injection. 



     Bien entendu, l'invention n'est pas li mitée aux modes de mise en oeuvres décrits qui n'ont été donnés qu'à titre d'exemples.

Claims (1)

1. REVENDICATIONS 1.- Procédé de préparation d'hormone du type de la cortine, caractérisé en ce qu'il consiste à extraire le lait ou la mamelle et la tétine d'un mammi- fère à basse température, de préférence entre -5 et +2 C, au moyen d'un solvant des stéroïdes Miscible' à l'eau, à séparer l'extrait ainsi obtenu et à le purifier.

   2. - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'extraction est effectuée après acidification à pH 4,5 à 5 au moyen d'un acide minéral ou organique.

   3.- Procède selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le solvant'extraction est un alcool, une cétone ou un mélange des deux, tel qu'un mélange d'éhanol et d'acétone.

   4.-Procédé selon l'une quelconque des re- 'vendications précédentes caractérisé en ce qu'après agitation de/la matière première avec le solvant, le mélan@e est laissé au repos'à basse température avant séparation de l'extrait.

   5. - Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que le résidu de l'extraction esthydrolysé en milieu aqueux acide, le produit d'hydrolyse est à son tour extrait par un solvant, tel que l'acétate d'éthyle et le chloroforme, et l'extrait obtenu ajouté à l'extrait primaire à un stade quelconque de sa purification.

   6. - Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que la purification de l'extrait est assurée par des évaporations et des reprises successives avec des solvants, chaque évaporation étant précédée d'une filtration pour <Desc/Clms Page number 8> éliminer les fractions insolubles.

   7. - Procédé selon la revendication 6,ca- ractérisé en ce que chaque filtration est effectuée à basse température..

   8. - Proc4dé selon la revendication 6,ca- ractérisé en ce que les solvants utilisés pour la puri- fication sont l'acétone, 3'acétate d'éthyle,,le chlorofor- me, l'alcool méthylique, l'alcool éthylique ou un mélan- ge de plusieurs d'entre eux.

   9.- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'au - stade ultime de-la purification l'hormone est dissoute dans de l'alcool éthylique et la solution est diluée avec de l'eau en donnant une composition administrable stable.

   10. - Procédé de préparation d'hormone du type de la cortine, en substance comme décrit en se référant notamment aux exemples.

   11.- Hormone du type de la cortine prépa- rée selon le procédé suivant l'une quelconque des reven- dications 1 à 10.