<Desc/Clms Page number 1>
Perfectionnements à la production des sels d'ammonium de pénicilline.
Cette invention concerne la production et la purification des sels ammoniques des acides de pénicilline.
Les sels ammoniques purs de pénicilline ont une valeur clinique par eux-mêmes ou peuvent être utilisés comme produits intermédiaires dans la production, par des moyens connus, des sels de sodium, potassium, calcium et autres sels de pénicilline de va- leur clinique, d'un degré de pureté élevé.
Dans la préparation de sels ammoniques de pénicilline, on rencontre fréquemment des difficultés pour obtenir des rendements satisfaisants en un produit solide filtrable de pureté raisonnable.
On pourrait croire que les sels ammoniques de pénicilline peuvent être préparés et séparés de façon satisfaisante par simple addition d'ammoniaque, gazeuse ou liquide, ou en solution aqueuse ou dans des solvants organiques à des solutions de pénicilline sans se' placer dans des conditions particulières quelconques.
Il n'en est toutefois
<Desc/Clms Page number 2>
pas ainsi et, à moins de choisir très soigneusement les condi- tions, on risque d'obtenir de faibles rendements, et les pro- duits sonttrès difficiles à séparer et leur puretéainsi que leur séparabilité varient fortement de l'une à l'autre char- ge de la pénicilline traitée. C'est le cas notamment lorsque les solutions de pénicilline traitéesne sont que modérément pu- res, car plus elles contiennent d'impuretés, plus grande est la probabilité de formation de matières gommeuses.
T.Tn autre inconvé- nient de l'emploi d'ammoniaque gazeuse ou liquide pour la préci- pitation de pénicilline d'ammonium réside en ce que ces substances ne peuvent être aisément manipulées ou dosées sans faire usage d'un équipement spécial, relativement compliqué. Evidemment, 1''emploi d'une solution aqueuse concentrée d'ammoniaque ne donne paslieu aux mêmes inconvénients.
La présente invention a pour objet un procédé pour la préparation de pénicilline d'ammonium avec de bons rendements, tel qu'il n'y ait que peu de variation de la qualité du pro- duit d'une charge à l'autre et que, de plus, la pénicilline d'ammonium soit obtenue sou,. une forme soluble aisément filtra- ble.
Suivant ce procédé perfectionné de production des sels d'ammonium des acides de pénicilline, on ajoute lentement, en remuant,, une solution aqueuse d'ammoniaque d'une concentration supérieure à 20% en poids par poids d'ammoniaque, à à une solu- tion de pénicilline dans un solvant organique défini ci-dessous;
, contenant une petite proportion d'un alcool aliphatique infé- rieur, en Quantité ne dépassant pas environ 10% en volume par volume du solvant organique de la pénicilline, et on sépare le
<Desc/Clms Page number 3>
sel d'ammonium brut précipité de la solution résultante.,
La solution de pénicilline dans le solvant organique à partir de laquelle la pénicilline d'ammonium est précipitée, consiste en formes acides de pénicilline en solution dans un solvant organique dans lequel le sel d'ammonium de pénicilline est sensiblement insoluble, qui est sensiblement immiscible à l'eau et a un poids spécifique inférieur à celui de l'eau.
En disant que le 'sel d'ammonium de pénicilline est sensiblement in- soluble dans le solvant organique, il faut comprendre que le sel d'ammonium, préparé par l'addition d'ammoniaque à la solu- tion de pénicilline dans le solvant organique, est sensiblement complètement précipité de cette solution. Des savants particu- ' lièrement appropriés à ce but sont l'acétate de butyle, l'acétate d'amyle et la méthyl-isobutyl cétone.
Il est à remarquer que le chloroforme ne convient'pas comme solvant pour cette opération, car l'ammoniaque aqueuse et le précipité flottent à sa surface et sont difficiles à séparer, et que, de plus, la solubilité dé la pénicilline d'ammonium dans le,chloroforme est fortement accrue en présence d'alcools inférieure, et que par conséquent les rendements ne sont pas très élevés. Cette solution de péni- cilline dans le solvant organique peut être obtenue, par exemple, par extraction de la bouillie obtenue dans une opération de fermentation pour la-production de pénicilline, réglée à une valeur de pH convenable, par un solvant organique de la pénicil- line, puis l'extraction de la couche de solvant séparée conte- nant la pénicilline par une solution aqueuse d'un alcali.
La phase aqueuse séparée contenant le sel alcalin de pénicilline peut alors être réglée'à une valeur convenable du pH et être finalement extraite dans le solvant désiré.
Un autre procédé d'obtention de solution convenable de pénicilline comprend une série'd'opérations analogues à celle - décrite plus haut, mais dans :laquelle différents solvants organi-
<Desc/Clms Page number 4>
ques sont utilisés pour les deux traitements d'extraction. Par exemple, l'acétate de butyle normal peut être employé pour la première extraction et la méthyl-isobutyl cétone pour la seconde extraction.
Un procédé encore différent comprend un traitement d'extraction unique de la bouillie par un solvant organique pour donner une solution qui est évaporée ou concentrée d'autre façon par des moyens connus, pour donner une solution relative- ment concentrée de pénicilline dans un solvant organique. Chacun des traitements d'extraction peut être effectué, par exemple, dans un appareil d'agitation à étage unique ou d'une manière continue à contre-courant.
L'alcool aliphatique inférieur qui est ajouté à la solu- tion de pénicilline dans le solvant organique peut comprendre n'importe quel alcool monohydrique aliphatique saturé à moins de 5 atomes de carbone, et cet alcool est de préférence le métha- nol, l'éthanol ou le butanol. Le but de cette addition de l'alcool à la solution de pénicilline est de maintenir en solu- tion toute impureté de nature gommeuse ainsi que toute quantité d'eau pouvant se séparer au cours de l'addition de l'ammoniaque aqueuseconcentrée.
Les résultats obtenus par le procédé de la présente in- irention varient suivant la nature et la concentration de la solution utilisée. de pénicilline dans le solvant organique, et avec l'alcool particulier employé et même avec la quantité de l'alcool particulier employé. On préfère cependant, lorsqu'on utilise une solution dans un solvant organique contenant de l'eau, employer 2% en volume par volume d'alcool méthylique ou éthylique ou 5% de butanol normal, et lorsqu'on utilise une solution de pénicilline dans un solvant organique anhydre, em- ployer 5% d'alcool méthylique ou éthylique ou 10% d'alcool buty- ligue normal.
L'utilisation de concentrations supérieures à 10% de ces alcools ne donne aucune amélioration des rendements obtenus, et peut môme donner lieu à des rendements moindres car
<Desc/Clms Page number 5>
l'augmentation de la quantité d'alcool utilisée peut provoquer une augmentation de la solubilité du sel d'ammonium dans le sol- vant organique employé. Par conséquent,l'emploi de l'alcool en quantité supérieure à 10% n'est pas nécessaire, ni désirable ni économique. Il faut cependant remarquer que, bien que l'emploi de quantités déterminées de méthanol, éthanol et butanol soit préféré plus haut, des résultats satisfaisants peuvent aussi être obtenus lorsqu'on emploie des quantités différentes de ces alcools et de propanol.
L'avantage résultant de la précipitation du sel d'ammonium en présence de ces alcools est très réel, car lorsque la précipitation est effectuée en l'absence de ces alcools, le précipité obtenu, d'ordinaire, a une couleur jaune foncé, est gommeux et très difficile à filtrer. Cet avantage est aussi re- présenté dans le tableau suivant:.
EMI5.1
Soi 0---C-one entra tion ombre de endemeni--NitûrF
EMI5.2
<tb> de <SEP> d'alcool <SEP> % <SEP> phases <SEP> après <SEP> de <SEP> récupe- <SEP> du
<tb> pénicilline <SEP> vol/vol <SEP> addition <SEP> de <SEP> ration <SEP> de <SEP> précipi-
<tb> ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯l'ammoniaque <SEP> pénicilline <SEP> té
<tb>
<tb> Anhydre <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> 95 <SEP> Jaune <SEP> foncé, <SEP> gom-
<tb>
EMI5.3
meux fil- rùêùx, film
EMI5.4
<tb> trant <SEP> mal
<tb>
<tb> id. <SEP> 5% <SEP> d'alcool <SEP> 1 <SEP> 90 <SEP> Jaune <SEP> paie
<tb> méthylique <SEP> facile <SEP> à
<tb> filtrer
<tb>
<tb> id. <SEP> 5% <SEP> alcool <SEP> 1 <SEP> 90 <SEP> id.
<tb> éthylique
<tb>
<tb> id. <SEP> 10% <SEP> alcool
<tb> butylique <SEP> 1 <SEP> 90 <SEP> id.
<tb>
<tb>
<tb>
Humide <SEP> 0 <SEP> 2 <SEP> 80 <SEP> Jaune <SEP> fonce, <SEP> gommeux <SEP>
<tb> filtrant
<tb> mal.
<tb>
<tb> id. <SEP> 2% <SEP> d'alcool <SEP> Jaune <SEP> pale
<tb> méthylique <SEP> 1 <SEP> 65 <SEP> filtrant
<tb> bien
<tb>
<tb> id. <SEP> 5% <SEP> alcool
<tb> méthylique <SEP> 1 <SEP> 60 <SEP> id.
<tb>
<Desc/Clms Page number 6>
Les résultats dans chaque cas ont été obtenus par addition d'ammoniaque aqueuse de poids spécifique 0,880 à une solution de pénicilline dans 1-'acétate de butyle normal d'une concentra- tion de 10.000 unités Oxford par millilitre, les conditions d' addition d'ammoniaque étant les mêmes et la totalité de l'am- moniaque étantajoutée en une fois, lentement, en remuant.
Un voit que les meilleurs résultats sont obtenus lorsque la solution de pénicilline dans le solvant organique est anhy- dre et contient 5% d'alcool méthylique ou éthylique ou 10% d'alcool butylique. L'élimination de l'eau de la solution de pénicilline dans le solvant organique peut avoit lieu par distillation azéotropique ou par séchage de la solution au moyen de sulfate de sodium anhydre, bien que ce moyen soit moins efficace que la distillation azéotropique.
Il est à remarquer qu'il est essentiel d'ajouter l'ammo- niaque aqueuse à la solution de pénicilline lentement en remuant, car autrement l'ammoniaque peut se déposer dans le fond de l'ap- pareil et le risque de la formation de gommes est fortement accru, même en présence d'une certaine quantité d'un alcool aliphatique inférieur.
De plus, la concentration de l'ammonia- que aqueuse est nécessairement supérieure à 20% en poids, la con- centration maximum étant du reste de 35% en poids, car lorsqu'on utilise de 1' ammoniaque d'une concentration Inférieure à 20% en poids, le rendement en pénicilline d'ammonium est sensiblement moindre que celui obtenu avec de l'ammoniaque d'une concentration supérieure à 20% en poids. L'emploi d'ammoniaque anhydre gazeuse ou liquide donne lieu à de faibles rendements à cause des concen- trations locales élevées d'ammoniaque obtenues, et de l? absence de toute quantité d'eau pour aider à la répartition mécanique.
La. quantité d'ammoniaque ajoutée à la pénicilline est de préférence comprise entre, 1,0 et 1,3 fois celle équivalant aux acides de pénicilline dans la'solution lorsque la solution
<Desc/Clms Page number 7>
de pénicilline dans le solvant organique est raisonnablement pure. Cependant, lors du traitement de solutions impures de pé- nicilline, telles qu'obtenues par extraction unique d'une bouillie par un solvant organique, particulièrement lorsqu'un utilise une matière de composition variable telle que des li- queurs de trempage de blé, comme matière nutritive dans la bouillie, une quantité d'ammoniaque notablement plus élevée est nécessaire, car il est nécessaire de neutraliser les impuretés acidiques pouvant être présentes dans la solution.
Ainsi, dans certains cas, il est nécessaire d'ajouter jusqu'à 2,7 équivalents d'ammoniaque avant que la solution de pénicilline dans le sol- vant organique ne soit neutralisée. L'addition d'ammoniaque en excès sur celle nécessaire à la neutralisation de la solution, bien que pouvant donner lieu à un rendement de récupération plus élevée a également pour résultat d'augmenter le dépôt d'im- puretés colorées et autres.
La légère diminution du rendement de la récupération pro-' voquée par l'addition limitée d'ammoniaque peut être évitée par extraction des liqueurs mères obtenues après séparation du sel d'ammonium précipité par une petite quantité d'alcali aqueux, séparation de la phase aqueuse contenant le sel alcalin de pé- nicilline dissous, acidification de la phase aqueuse séparée. et extraction des acides de pénicilline libérés par une petite quantité d'un solvant approprié tel que cette solution puisse être retournée au premier¯étage du traitement.
Lorsqu'il est,fait ici mention d'équivalents d'ammonia- que, on se base sur la quantité d'ammoniaque équivalant aux aci- des de pénicilline présents dans la solution, qui peuvent être déterminés par des essais chimiques ou biologiques. Dans certains cas, malgré la présence d'alcool,.en particulier lorsqu'il existe une concentration anormalement élevée .d'impuretés dans la so- lution, l'addition de 1'ammoniaque aqueuse concentrée
<Desc/Clms Page number 8>
peut provoquer d'abord la précipitation de ces impuretés, d'abi- tude sous forme de gommes. Dans ce cas, le précipité gommeux doit être enlevé par filtration et une quantité plus grande d'am- moniaque gazeuse, équivalant approximativement aux acides de pénicilline restant en solution, doit être ajoutée.
Suivant une variante, la pénicilline d'ammonium est précipitée par fractions de la solution en ajoutant l'ammoniaque aqueuse par portions, et séparant le précipité formé après l'addition de chaque portion d'ammoniaque. Cependant, il a été trouvé que cette précipita- tion fractionnée, bien qu'elle puisse aider à la séparation de précipités impurs, foncés, gommeux après l'addition des premiè- res portions d'ammoniaque, ne permet pas de séparation réelle aisée des pénicillines individuelles.
Un procédé à suivre, don- nant des résultats très satisfaisants, consiste par conséquent à ajouter une première portion d'ammoniaque aqueuse pour effec- tuer une séparation préalable de précipité foncé, gommeux;, impur, dans le cas où cela se présente, puis à précipiter la masse de la pénicilline par de l'ammoniaque aqueuse concentrée.
Par conséquent, lorsqu'on applique le procédé sur une grande échelle, il est avantageux d'effectuer un essai prélimi- naire à petite échelle sur la solution particulière de pénicil- line à traiter pour déterminer si une séparation préalable d'un précipité gommeux est nécessaire, et si tel est le cas, pour déterminer la, quantité d'ammoniaque qui doit être ajoutée pour effectuer la séparation de ce précipité gommeux,en produisant en même temps une précipitation aussi minime que possible de la pénicilline sous forme du sel d'ammonium.
il n'est pas possible autrement d'estimer la quantité d'ammoniaque nécessaire dans chaque cas à l'exécution de cette séparation préliminaire car les impuretés présentes dans la solution de la bouillie varient d'une fermentation à l'autre, particulièrement dans le cas où des matières de compositions variables telles que des liqueurs de trempage de blé sont utilisées comme milieu de fermentation.
<Desc/Clms Page number 9>
La nature de la pénicilline d'ammonium précipitée dépend largement du procédé particulier appliqué; dans le cas où'des gommes ayant pu se former sont séparées au préalable, et où l'ammoniaque restante est ensuite ajoutéelentement en remuant, on obtient un précipité aisément filtrable, friable, qui est cristallin ou amorphe suivant les conditions exactes appliquées.
Il est connu d'âpres les travaux de WEIMARN et consorts que la concentration et la rapidité de mélange des réactifs jouent un rôle important dans la détermination de la dimension des particules des précipités. Ainsi, un mélange rapide de so- lutions concentrées tend à produire un précipité.colloïdal amor- phe, ou microcristallin, tandis qu'un mélange lent en solutions diluées tend à produire la formation de grands cristaux. En conséquence, il a été trouvé qu'en utilisant des solutions aussi diluées que possible sans réduction sensible de la production de précipité par suite de sa solubilité, la couleur et les di- mensions des cristaux du précipité obtenu dans ces conditions sont beaucoup meilleures que lorsqu'on emploie des solutions plus concentrées.
Le sel d'ammonium précipité est séparé du sol- vant, par exemple au moyen d'un filtre centrifuge, et peut être lavé par un peu de mélange de solvant frais et d'alcool..
La liqueur mère, après séparation du sel, contient une petite quantité de pénicilline, qui peut être récupérée en trai- tant la solution par un peu d'alcali aqueux, séparant la phase aqueuse contenant le sel alcalin de pénicilline dissous, acidi- fiant la phase aqueuse séparée et extrayant les acides de pé- nicilline libérés par une petite quantité d'un solvant appro- prié, et retournant cette solution à un étage antérieur de la fabrication.
Les solvants qui sont employés dans les opérations peu- vent être récupérés de toute façon connue. La séparation par distillation, par exemple, ne présente aucune difficulté.sé- rieuse lorsqu'on fait usage d'une solution de pénicilline dans
<Desc/Clms Page number 10>
de l'acétate de butyle normal, et de méthanol, thanol ou butanol en présence d'eau., malgré lexistence connue de certains mélanges binaires et ternaires à point d'ébullition constant.
Le state suivant de l'opération est la purification des sels d'ammonium de pénicilline ainsi obtenus, qui peut être réa.lisée par leur reprécipitation à partir d'acétone aqueuse par addition d'acétone anhydre. Ceci est possible parce que les sels purs sont très solubles dans l'acétone aqueuse contenant une quantité notable d'eau, mais que la solubilité diminue à mesure que la proportion d'eau est réduite, et est pratiquement nulle dans l'acétone anhydre. Le précipité est amorphe, si l'addition d'acétone anhydre est trop rapide, mais est cristallin si l'addi- ti.on s'effectue suffisamment lentement en remuant. L'addition d'une petite quantité de pénicilline d'ammonium cristalline comme germes peut être avantageuse, mais n'est en général pas nécessaire.
L'addition d'acétone est de préférence continuée jusqu'à ce que la concentration de la solution ait atteint 95% d'acétone et 5% d'eau en volume, après quoi le précipité est séparé, par exemple au moyen d'un filtre centrifuge, puis est lavé par un mélange d'acétone-eau contenant 95% d'acétone. Il a été trouvé que les meilleurs résultats, tels qu'indiqués plus haut, sont obtenus à cet étage du procédé lorsque l'addition d'acétone anhydre à la solution acétoniaue aqueuse de la pénicilline d'ammonium est continuée jusqu'à ce que la concentration finale en acétone at- teigne 95% d'acétone.
L'arrêt de l'addition d'acétone anhydre à une concentration finale plus basse donne lieu à des pertes appréciables lors de la précipitation de la pénicilline d'ammo- nium par suite de sa solubilité dans le mélange acétone-eau, tandis que, d'autre pa.rt, l'addition d'acétone jusqu'à une con- centration supérieure à 95%, bien qu'ayant pour résultat d'obte- nir une précipitation plus importante, donne des produits plus fortement colorés et moins purs.
<Desc/Clms Page number 11>
Ce procédé de reprécipitation peut être répété une ou plusieurs fois suivant le degré de pureté désiré, mais il a été trouvé qu'en général une précipitation suffit pour donner un produit cristallisé blanc de grande pureté donnant .une solution incolore ou à peu près incolore par dissolution dans l'eau.
Les exemples qui suivent illustrent des modes de réalisa- tion de l'invention, toutes les opérations étant effectuées à la température ordinaire.
EXEMPLE 1.-
250 ml..d'alcool méthylique sont ajoutés à 5 litres d'ex- traits obtenus par l'acétate de.butyle normal anhydre, provenant de bouillies brutes produites par fermentation et contenant 8,000 unités Oxford de pénicilline par millilitre de bouillie et 750 unités Oxford de pénicilline par milligramme de matières solides totales. De l'ammoniaque aque de poids spécifique 0,880 est ajout lentement en remuant, en quantité équivalente à, la pénicilline présente. Un précipité jaune pâle, aisément filtrable et friable est obtenu, qui est séparé dans un filtre centrifuge et lavé avec un peu de mélange d'alcool méthylique- acétate de butyle contenant 5% d'alcool méthylique en volume.
Ce précipité est trouvé contenir 1.100 unités Oxford de pénicil- line par milligramme de matières solides totales, ce qui présente un rendement de récupération de pénicilline, à cet étage, de plus de 88%. Il est redissou: pour donner une solution à peu près saturée dans un mélange d'acétone-eau contenant 80% d'acéto- ne en volume, et on ajoute de l'acétone anhydre lentement en re- muant pour amorcer la reprécipitation à une concentration mini- mum en acétone, l'addition étant arrêtée lorsque la teneur en acétone du mélange atteint 95% en volume. Un précipité blanc, cristallisé, aisément filtrable.est obtenu et séparé au moyen d'un filtre centrifuge.
Il est lavé par un mélange d'eau- acétone contenant 95% d'acétone en volume, séché à l'air et contient 1.600 unités Oxford de pénicilline par milligramme de
<Desc/Clms Page number 12>
matières solides totales, ce qui représente un rendement d'obten- tion de pénicilline à ce stade de l'opération de 55%. Une nou- velle précipitation similaire à partir d'acétone donne un pro- duit renfermant 1650 unités Oxford par milligramme, qui repré- sente un rendement d'obtention de pénicilline à ce stade de 85%.
EXEMPLE 8.-
500 ml. d'alcool butylique normal sont ajoutés à 5 litres d'extrait par l'acétate de butyle normal anhydre, provenant de bouillies brutes produites par fermentation et contenant 8.000 unités Oxford de pénicilline par millilitre de bouillie et 750 unités Oxford de pénicilline par milligramme de matières soli- des totales. De l'ammoniaque aqueuse de poids spécifique 0,92 est a joutes lentement en remuant en quantité équivalente à la pénicil- line présente. On obtient un précipité jaune pâle, friable, ai- sément filtrable, qu'on sépare dans un filtre centrifuge et lave avec un peu de mélange d'acétate de butyle-alcool butylique contenant 10% d'alcool butylique en volume. Le rendement de la récupération de pénicilline à cette opération est de 90%.
Le précipitéestredissous pour donner une solution à peu près saturée, dans un mélange acétone-eau contenant 85% d'acétone en volume, et on ajoute lentement de l'acétone anhydre en remuant pour amorcer la reprécipitation à une concentration minimum en acétone, et arrête l'addition d'acétone lorsque la teneur en acétone du mélange atteint 95% en volume. Un précipité blanc cristallin, aisément filtrable, est obtenu et séparé dans un filtre à vide, et lavé avec un mélange d'acétone-eau contenant
95% d'acétone en volume,puis séché à l'air.
EXEMPLE 3. -
200 ml. d'alcool méthylique sont ajoutés à 4 litres de solution dans l'acétate de butyle normal anhydre, de pénicilli- ne contenant 12,900 unités Oxford par millilitre de solution, déterminées par essai biologique.. De l'ammoniaque aqueuse de den- sité 0,880 est ajoutée en petites parties aliquotes à cette solu-
<Desc/Clms Page number 13>
tion, le précipité formé après chaque addition est séparé de la solution restante dans un filtre à vide, chaque précipité étant ensuite lavé par un peu de mélange d'acétate de butyle-alcool -.méthylique contenant 5% d'alcool méthylique en volume.
Les préci- pités individuels sont ensuite pesés et examinés au point de vue de leur teneur totale en pénicilline et de leur teneur en péni- cilline G par la méthode de MERCK à la N-éthyl-pipéridine. Les résultats obtenus sont donnés dans le tableau suivant:
EMI13.1
Equivalents " Pénicilline %'eni-
EMI13.2
<tb> Fraction <SEP> d'ammonia- <SEP> Précipite <SEP> totale <SEP> dans <SEP> cilline;
<tb> que <SEP> ajoutés <SEP> grs. <SEP> Nature <SEP> le <SEP> précipité <SEP> G <SEP> dans
<tb> % <SEP> poids/poids <SEP> la <SEP> pénicilline
<tb>
EMI13.3
¯¯¯¯¯. ,¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯.¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯totale <'J
EMI13.4
<tb> 1 <SEP> 0.23 <SEP> - <SEP> -
<tb>
<tb>
<tb> 2 <SEP> 0.46 <SEP> 3.66 <SEP> jaune-brun) <SEP> 88 <SEP> 77-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 3 <SEP> 0. <SEP> 69 <SEP> 6.82 <SEP> jaune <SEP> aisé- <SEP> 93 <SEP> 85. <SEP> 8
<tb>
<tb> ment
<tb>
<tb>
<tb> 4 <SEP> .0.92 <SEP> 4.18¯ <SEP> jaune <SEP> 87 <SEP> 89.4
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 5 <SEP> 1.15 <SEP> 6.83 <SEP> .jaune <SEP> tra- <SEP> 85.2 <SEP> 69.2 <SEP> ' <SEP>
<tb>
<tb> ble.
<tb>
<tb>
6 <SEP> 1.38 <SEP> .4.44 <SEP> jaune <SEP> 75.2 <SEP> 68. <SEP> 0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 7 <SEP> 1.60 <SEP> 1. <SEP> 50 <SEP> brun <SEP> 61.0 <SEP> 50.0 <SEP> .' <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 8 <SEP> 1.83 <SEP> traces <SEP> gommes <SEP> rouges <SEP> - <SEP> -
<tb>
On remarque d'âpres ce tableau, qu'en réunissant les fractions 2-6,on obtient de la pénicilline d'ammonium de bonnes pureté et couleur. La pénicilline d'ammonium totale ainsi ob- tenue peut être ensuite précipitée comme décrit dans les exem- ples précédents.
EXEMPLE 4. - ,
Une solution de pénicilline dans l'acétate de butyle normal anhydre est obtenue par extraction de pénicilline d'une bouillie de fermentation dans un solvant organique, suivie d'extraction de la pénicilline de cette solution dans ce sol- vant organique dans une solution alcaline aqueuse, acidifica- tion puis extraction'de cette solution aqueuse par de l'acétate
<Desc/Clms Page number 14>
de butyle normal. La. solution ainsi obtenue est déshydratée par distillation azéotropique dans un évaporateur de verre à pelli- cule tombante, est ainsi concentrée à la moitié de son volume;, et la solution concentrée est finalement portée à son volume d'origine par de l'acétate de butyle normal anhydre.
A 10 litres de cette solution de pénicilline dans l'acétate de butyle normal anhydre, on ajoute 500 ml. d'alcool éthylique, puis 0,2 équiva- lent d'ammoniaque aqueuse de poids spécifique 0.882 est ajou- té à cette solution et le précipité brut de couleur foncée qui se forme est séparé. Une nouvelle quantité de 1,3 équivalent d'ammoniaque aqueuse de la même concentration est alors ajoutée lentement en remuant à la solution.,, et le précipité jaune formé est filtré. Le précipité séparé est alors purifié par deux pré- cipitations à partir d'acétone, effectuées exactement de la même manière que dans l'exemple 1, et donne une pénicilline d'ammo- nium blanche cristalline avec un rendement total de 40%.
Les liqueurs mères de la solution dans l'acétate de bu- tyle normal, après la précipitation du sel d'ammonium, sont extrai- tes par une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium pour enlever tou te pénicilline restant dans la solution, et cette solution aqueu- se est acidifiée et extraite dans de l'acétate de butyle normale cette solution faisant retour au premier stade de l'opération, avec la charge suivante.
Les liaueurs mères d'acétone sont évaporées sous vide- en présence d'un tampon de phosphate,la pénicilline est extraite dans du butanol normal au pH 6 puis est réextraite dans de l'eau; la solution aqueuse obtenue est réglée au pH 2 et extraite dans l'acétate de butyle. Cette solution dans l'acétate de bu,tyle,, après déshydratation et traitement au carbone, si on le désire, peut aussi être retournée au premier stade du procédé avec la charge suivante.