CH374145A - Procédé de préparation d'un produit hormonal - Google Patents

Description

  Procédé de préparation d'un produit hormonal    On sait que la     cortine    est constituée par l'extrait  total des capsules surrénales et que c'est une hor  mone de constitution complexe pouvant assurer la  survie des organismes privés de surrénales et per  mettant de remédier aux insuffisances surrénales.  C'est de ce fait un produit thérapeutique précieux  qui n'a pu jusqu'ici être produit de manière écono  mique par suite de la petitesse des glandes d'où il  est extrait, après sacrifice de l'animal.  



  L'invention se propose de remédier à ces incon  vénients en fournissant un procédé de préparation  économique d'un produit hormonal ayant les mêmes  propriétés que la     cortine    pour ce qui concerne les  insuffisances surrénales.  



  Il a en effet été découvert que le lait et la ma  melle et la tétine des mammifères, en particulier de  la vache, contiennent     d'importantes    quantités d'un  produit hormonal ayant les mêmes propriétés que la       cortine    que l'on peut extraire facilement, après l'avoir  libérée par acidification de ses combinaisons ou com  plexes avec les lipoprotéines.  



  On se rendra compte aisément des avantages de  l'invention en sachant que deux à trois litres de lait  contiennent autant de produit hormonal     cortinique     que celui que l'on extrait actuellement de la totalité  de l'animal. Par ailleurs, l'extraction du produit hor  monal du lait ne nécessitant pas le sacrifice de l'ani  mal, un même animal peut fournir dans le cours de  son existence une très importante quantité de pro  duit hormonal. Enfin, la mamelle et la tétine fournis  sent une source complémentaire de produit hormo  nal, en plus des capsules surrénales, chez les ani  maux sacrifiés aux fins de boucherie, par exemple.  



  L'extraction du produit hormonal, après sa libé  ration, du lait et de la mamelle et de la tétine des  mammifères est basée sur la solubilité sélective dans  certains solvants miscibles à l'eau, tels que par exem-         ple    les alcools et les cétones, et notamment l'alcool  éthylique et l'acétone, lorsque la température est  basse, entre - 5 et +     2     C en particulier. A tempé  rature élevée, en effet, le produit hormonal a ten  dance à se répartir entre ces solvants et les corps  gras, en sorte qu'une importante partie en est perdue  et ce d'autant plus que la température est plus élevée.  



  Le procédé de préparation du produit hormonal  suivant l'invention est donc remarquable notamment  en ce qu'on traite du lait entier, du petit lait, de la  mamelle ou de la tétine broyée d'un mammifère par  un acide de manière à libérer le produit hormonal  par hydrolyse des complexes dans lesquels il est pré  sent dans ces matières et en ce qu'on soumet la  matière acidifiée à une extraction à basse tempéra  ture, au moyen d'un ou plusieurs solvants du pro  duit hormonal miscibles à l'eau.  



       L'acidification    du lait ou des organes broyés  (mamelle et tétine), qui assure par hydrolyse une  séparation du produit hormonal des complexes ou  combinaisons     lipoïdiques    dans lesquels il est con  tenu, est effectuée avantageusement jusqu'à pH com  pris entre 4,5 et 5. Cette acidification peut se faire  au moyen de tout acide minéral ou organique tel  que l'acide chlorhydrique ou l'acide acétique.  



  L'extraction est, de préférence, faite entre -     5o    C  et +     2     C. Pour assurer un bon contact du solvant,  tel qu'un mélange d'éthanol et d'acétone, avec le  produit à extraire, il convient d'agiter l'ensemble.  Dans le cas où l'on part de lait, ceci provoque la  formation de beurre, qui vient surnager au-dessus  du petit lait contenant le solvant ajouté et l'hor  mone. Ceci assure une séparation naturelle par  décantation de l'extrait cherché. Il faut toutefois  prendre soin de recueillir dans l'extrait la zone de  séparation du beurre et du petit lait riche en hor  mones.      Le beurre prélevé peut être jeté ou bien livré  à la consommation, lorsque l'acidification a été faite  au moyen d'acide acétique.  



  A remarquer que le procédé au lieu d'être appli  qué au lait entier pourrait l'être au petit lait. Ce  dernier mode de mise en     oeuvre    est moins avanta  geux car une grande partie du produit hormonal est  perdue dans la crème.  



  L'extrait obtenu, soit à partir de lait, soit à partir  des organes broyés, peut être filtré toujours à basse  température pour éliminer dans le premier cas la  caséine et dans le second cas les résidus d'organes.  



  A partir de ce stade, la purification de l'extrait  peut être effectuée de la même manière, quel que  soit le produit de départ.  



  Cette purification est avantageusement     basée    sur  des évaporations et des reprises successives avec des  solvants, chaque évaporation étant précédée d'une  filtration pour éliminer les fractions insolubles. Cha  que filtration doit être faite de préférence à basse  température pour éviter qu'une partie du produit  hormonal ne passe dans le résidu insoluble. Les éva  porations et reprises successives sont effectuées jus  qu'à ce que l'on n'obtienne plus de résidu insoluble.  



  A titre d'exemple, les différentes reprises peu  vent être effectuées successivement par l'acétone,  l'acétate d'éthyle, le chloroforme, l'alcool méthyli  que et finalement l'alcool éthylique. La solution du  produit hormonal dans l'alcool éthylique finalement  obtenue contient 70 % du produit hormonal primiti  vement présent. Elle peut être traitée par le réactif  de Girard pour obtenir le produit hormonal sous  forme de corticostéroïdes     cristallisés.    Cette solution  peut également être utilisée telle quelle après dilution  à l'eau sous forme de solution buvable ou injectable.  



  On peut récupérer une grande partie de la frac  tion de produit hormonal perdue au cours des diver  ses opérations dans les résidus solides. A cette fin,  il convient d'hydrolyser ces résidus en     milieu    aqueux  acide de pH 2 environ, puis d'extraire la phase  aqueuse au moyen de l'un des solvants précités. Cet  extrait peut être ajouté à l'extrait principal à un  stade quelconque de la purification. Cette récupé  ration est particulièrement avantageuse sur les rési  dus de l'extraction primaire.  



  On peut ainsi au total obtenir 0,60 à 2 mg de  produit hormonal par litre de lait.  



  L'exemple ci-dessous illustre un mode de mise  en     #uvre    du procédé selon l'invention appliqué au  lait entier.  



  <I>Exemple</I>  a) Extraction  On recueille immédiatement après traite 500     cm3     de lait dans un flacon jaune contenant 250 cm;  d'éthanol et 250     cm:;    d'acétone pure et on acidifie  à pH 4,5 avec de l'acide chlorhydrique. On agite  une demi-heure et on laisse au repos au moins  48 heures à +     2,j    C. On élimine le beurre figé que  l'on jette, en ayant soin de prélever toutefois, en    même temps que la phase aqueuse contenant l'al  cool et l'acétone, la zone de séparation du beurre  et du petit lait..  



  On filtre cette phase aqueuse pour éliminer la  caséine et autres résidus.  



  On reprend ces résidus trois fois avec à chaque  fois un mélange de 250     cm-;    d'éthanol et 250 cm'  d'acétone. Les quatre fractions     éthanolo-acétoniques     sont réunies (2,5 litres au total) et soumises à la  purification.  



  b) Purification  Les extraits     éthanolo-acétoniques    sont évaporés  rapidement au-dessous de 40,,C jusqu'à obtention  d'une masse pâteuse. A cette masse, on ajoute  9 volumes d'acétone (200 à 500     em@i    environ), on  agite et laisse 48 heures en glacière entre 0 et     5     C.  On filtre à cette température. On distille rapidement  à     40-,    C le filtrat jusqu'à siccité. Le produit sec est  repris trois fois avec 5 à 10 cm' d'acétone pure et  les extraits réunis sont laissés 24 heures en glacière  puis filtrés à froid.  



  On chasse l'acétone des extraits filtrés par dis  tillation rapide et on reprend 2 fois le résidu par  10     cm-;    d'acétate d'éthyle. On laisse l'extrait 24 heu  res en glacière et on filtre à froid.  



  L'extrait filtré est évaporé rapidement et le résidu  repris 2 fois par 5     cm-'@    de chloroforme.  



  On laisse l'extrait 24 heures en glacière et on  filtre à froid.  



  L'extrait     chloroformique    filtré est évaporé et le  résidu repris 3 fois avec 2     cm'@    d'alcool méthylique.  On laisse l'extrait méthylique 24 heures en gla  cière, on filtre à froid et on évapore l'alcool méthy  lique.  



  Le résidu est repris par 2     cm:'    d'éthanol absolu.  La solution alcoolique diluée avec de l'eau jusqu'à  une concentration en alcool de 15     %    reste stable  et peut servir à l'administration du produit par voie  orale ou par injection.

Claims (1)

1. REVENDICATION Procédé de préparation d'un produit hormonal ayant la même propriété que la cortine en ce qui concerne l'insuffisance surrénale, caractérisé en ce qu'on traite du lait entier, du petit lait, de la mamelle ou de la tétine broyée d'un mammifère, par un acide de manière à libérer le produit hormonal par hydro lyse des complexes dans lesquels il est présent dans ces matières et en ce qu'on soumet la matière aci difiée à une extraction à basse température, au moyen d'un ou plusieurs solvants miscibles à l'eau. SOUS-REVENDICATIONS 1. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que le traitement avec l'acide est effectué à un pH compris entre 4,5 et 5. 2.

   Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que l'extraction est effectuée à une température comprise entre - 5,, C et + 2,@ C. 3. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que le solvant d'extraction est un alcool. 4. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que le solvant d'extraction est une cétone. 5. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que le solvant d'extraction est un mélange d'étha nol et d'acétone. 6. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce qu'après agitation de la matière première avec le solvant le mélange est laissé au repos à basse température avant séparation de l'extrait. 7.

   Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que le résidu de l'extraction est hydrolysé en milieu aqueux acide, le produit d'hydrolyse est à son tour extrait par un solvant organique, et l'extrait obtenu ajouté à l'extrait primaire à un stade quel conque de sa purification. 8. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que la purification de l'extrait est assurée par des évaporations et des reprises successives avec des sol vants organiques, chaque évaporation étant précé dée d'une filtration pour éliminer les fractions inso lubles. 9. Procédé selon la sous-revendication 8, carac térisé en ce que chaque filtration est effectuée à basse température.