BE678863A - - Google Patents

Description

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   La présente a pour but de rectifier des erreurs matérielles commises dans l'exécution de la spécification. En effet, il y aurait lieu d'effectuer les modifications ci-après : Page 1, lignes 4 et 5 :" Insuffisants " doit se lire " Insuffisances " ; , page 2, ligne   28 :   il y a lieu de remplacer 96  par 95 . 



   Ceci se justifie amplement par la   spéci-   fication, notamment   à -la   ligne- 4 de la page   2.   



   Le soussigné n'ignore pas qu'aucun document joint au dossier d'un brevet d'invention ne peut être de nature à apporter, soit à la description, soit aux dessins, des modifications de fond et déclare que le contenu de cette note n'apporte pas de telles modifications et n'a d'autre objet que de signaler une ou plusieurs erreurs maté-   rielles.   



   Il reconnaît que le contenu de cette note ne peut avoir pour effet de rendre valable, totalement ou partiellement, le brevet N  PV. 26.190 si celui-ci ne l'était pas en tout ou en partie en vertu de la législation actuellement en vigueur. 

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   Il autorise l'administration à joindre cette note au dossier du brevet et à en délivrer photccopie. 



   Pour la bonne règle,il nous serait agrble si vous vouliez bien nous accuser réception de la présente, stipulant que les rectifications sont admisas pour valoir comme de droit. 



   A vous lire, nous vous prions   d'agrée:,   Monsieur le Ministre, l'assurance de notre considération très distinguée. 

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 Georges, Boris WAGNER et Pierre Marcel MAGNIN, 
La présente invention a pour objet un nouveau produit hormonal extrait du thymus des mammifères et qui est efficace dans le traitement des états de fatigue et de la faiblesse de l'incursion diaphragmatique des   insuf-     fisants   respiratoires chroniques. 



   Le produit hormonal de l'invention est un cristalloïde se présentant normalement sous la forme d'une poudre jaunâtre, très fine, composée de cristaux polygonaux de faible épaisseur, ayant un diamètre moyen de 15 à 20 microns, présentant des côtés à peu près égaux et groupés en amas. 



   Le produit de l'invention fond avec décomposition entre 180 et 200 C; toutefois une petite fraction (constituée probablement par une impureté minérale) reste infusible jusqu'à plus de 310 C;
La température de sublimation sous vide sous une pression de 10   mm-Hg,   dans un bain de Wood, est de 

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 185 C, le produit de sublimation étant formé de crist ax étoiles. 



   Le produit hormonal de l'invention est   solfie   dans l'eau, l'éthanol à 95  et les solutions   aqueuse?   N/10   d'HCl   et   NaOH.   Il est insoluble dans le   méthane'.,   le benzène, l'hexane, le tétrachlorure de carbone,   Il     dioxanne,   le nitrobenzène, l'éther éthylique, le   cl@oro-   forme, le trichloréthylène, le butanol et l'huile l'arachide. 



   L'analyse chimique révèle en particul.er la présence de groupes acide carboxylique   (techniore   de F. Feigl, V. Auger et Frehden), et notamment de groupes acides aminés (technique de W. Koenigs - S.N. Chakravarti et Roy pour les acides   [alpha]   et $ aminés primaires aliphatiques et technique de S. Ohkuma pour les acides aminés   tertiaires),   cette présence d'acides aminés étant confirmée par la chromatographie. 



   Le produit de l'invention est obtenu à partir de thymus de mammifères (par exemple de veaux) par un procédé d'extraction à l'éthanol avec des stades de puri- fication à l'éther de pétrole et à l'alcool éthylique absolu.. 



   On prépare d'abord un produit brut d'extrac- tion en traitant une pulpe obtenue par broyage de thymus avec de l'éthanol, on reprend à l'eau ce produit brut, on concentre à sec la solution obtenueaprès élimination de la fraction insoluble, on reprend par de l'éthanol   à  
96  la poudre obtenue, on refroidit la fraction soluble jusqu'à une température de -15 C environ, on enlève le précipité par filtration, on évapore à sec le filtrat qu'on épuise ensuite à l'éther de pétrole puis à l'étha- nol absolu et on recueille le produit insoluble restant que l'on sèche sous vide et qui constitue le produit 

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 hormonal de l'invention. 



   On donnera ci-après, à titre purement illustra- tif et non limitatif, un exemple détaillé de préparation du produit de l'invention. 



     Exemple :  *. On prélève une quantité de l'ordre de 16 Kg. de thymus de veaux sains fraîchement abattus et on les con- débarrassé   serve   au froid. On les lave, nettoie,/des parties grais- seuses et on dénude les glandes, toutes ces opérations étant effectuées dans la glace. 



   On broie les glandes, on ajoute de l'éthanol   (1   litre d'alcool   à   95  pour 1 kg de pulpe de thymus) 
0 - 5 C. On laisse macérer au froid pendant 72 heures   à   une température inférieure à + 5 C avec agitation pendant la journée et refroidissement à - 5  à - 10 C pendant la nuit. 



   Ou sépare les graisses   surnageantes   puis on centrifuge ce qui donne un filtrat que l'on évapore   à   sec sous vide. On obtient ainsi 160 g environ d'une poudre qui constitue le produit brut d'extraction. 



     On   reprend cette poudre par 500 cm3 d'eau, on filtre l'insoluble et on recueille le filtrat que l'on évapore à sec pour donner 150 g environ de poudre. 



     On   reprend cette poudre par 3 litres d'éthanol à   9@ à   une température de 55 C environ. On laisse macé- rer   .endant   quatre jours à température ambiante (+ 25 C envoion) en agitant pendant 8 heures chaque jour. On   fil@e   le précipité   formé   et on refroidit le filtrat jus-   qu' t-   15 C en 48 heures. On filtre le précipité et on évacre à sec le filtrat ce qui fournit un produit de corestance pâteuse pesant 59 grammes environ. 



   On épuise ce produit pâteux plusieurs fois av   (de   l'éther de pétrole sous agitation mécanique jus- qu Obtention d'un liquide clair (2 litres d'éther de 

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 pétrole sont nécessaires). On sépare le proluit   insolu-   ble pesant 58 g environ. On épuise ensuite   :lusieurs   fois ce produit par de l'éthanol absolu à tepérature ambiante en agitant (1 litre   d'alcool   au totel). On filtre pour éliminer le filtrat et on recueil.le   l'inso-   luble que l'on sèche sous vide. On obtient 48 g en- viron d'une poudre jaunâtre cristalline qui constitue le produit hormonal de l'invention. 



   On donnera ci-après des résultats d'essais pharmacologiques effectués avec le produit de l'inven- tion. 



  1 - Toxicité   ai sue :     LD 50 par voie intraveineuse chez la soumis 200 mg/kg LD 50 par voie intraveineuse ' chez le rat ................ 300 mg/kg LD 50 par voie sous-cutanée chez la souris 2.500 mg/kg   .2 - Toxicité   subchronioue :   
Pas de toxicité   a@ant   entraîné la mort ou des incapacités fonctionnelles après deux mois d'administration aux doses efficaces. 



   Il est à signaler que l'activité des animaux traités est plus élevée durant les jours qui suivent 1'administration. 



  3 - Epreuve de fatigue : 
Epreuve des grimpers comparés. 



   Cette épreuve est décrite ci-après ainsi que l'appareillage nécessaire pour sa mise en oeuvre. a) Appareillage : 
Une échelle souple sans fin, tournant sur un axe muni d'un compte-tours et d'un système de contrepoids, est entraînée par un animal lesté (poids à la queue). 



     L'échelle   est semi-immergée dans un bac à eau   thermostatée     à   28 C. 

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 b) Méthode :
Après un premier grimper de cinq minutes, utilisé comme référence, l'enimal (rat whistar de 300 g environ) est ensuite fatigua par une épreuve de nage contrôlée et forcée d'une   durés   de 15 minutes; il est ensuite soumis à une seconde épreuve de grimper de cinq minutes. 



   Lors de cette seconde épreuve, l'animal fatigué n'a plus la force suffisante pour maintenir sa tête hors de l'eau en grimpant à l'échelle, dans les mêmes conditions de lestage et de contrepoids qu'au cours de la première épreuve. Un nombre important de tours de l'échelle et de l'axe s'effectueront donc avec l'animal immergé. 



   Si l'état d'épuisement est avancé, l'animal ne pourra généralement pas effectuer l'épreuve durant cinq minutes. 



   On définit le coefficient de fatigue QF comme le rapport pour cent entre le nombre de tours effec- tués avec la tête immergée et le nombre total de tours. 



   Il évolue entre 0 et 100   %.   Le coefficient d'épuisement en pbur cent, QE? est calculé empiriquement sur des sé- ries d'animaux témoins et il est représentatif de l'in- capacité de l'animal à tenir le temps d'épreuve. 



   On a déterminé l'évolution en fonction du temps de   QF   et QE sur quatre séries de rats (7 sujets par série) auxquels on a administré 2 mg/kg du produit hormonal de l'invention par voie parentérale (1 ml) et quatre séries de rats témoins ayant reçu 1 ml de sérum physiologique. Les résultats sont donnés au Tableau I ci-dessous : 

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 EMI8.1 
 
<tb> 
<tb> QF <SEP> QE <SEP> QF <SEP> QE
<tb> 
 
 EMI8.2 
 Epreuve #########################'" 
 EMI8.3 
 
<tb> 
<tb> témoins <SEP> (sérum <SEP> phy- <SEP> traité .
<tb> 



  Biologique)
<tb> Avant <SEP> injection <SEP> 35 <SEP> % <SEP> 0 <SEP> 24 <SEP> % <SEP> 0
<tb> 15 <SEP> mn <SEP> après <SEP> 60 <SEP> % <SEP> 0 <SEP> 59 <SEP> % <SEP> 0
<tb> 
 
 EMI8.4 
 z, h après $7 32% 33% 11% 24 h après z 25% 17 0 z.$ h après Ô0% 23 20 0 5 jours après. 30% 0 le.. ,5 % 0 ............  W- Les recherchée des demandeurs sir le fonction- 
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 nement du muscle strié ont montré que l'hr,oxie et l'hyper- capnie entraînent la synthèse de corps doués de propriétés curarisantes' que l'on peut classer,   coeurs   les curares du 
 EMI8.6 
 commerce, en curarimimétiques et acétylcholinomimétiques. .Des enzymes président à cette synthèse. L'hormone du thy- 
 EMI8.7 
 mus.freine l'activité de ces enzymes, la frénation pouvant atteindre l'inhibition totale selon le taux circulant d'hormone. 



   D'autre part, l'involution du thymus chez l'homme dès l'âge de 15 ans est un phénomène connu. 



   Le rapport poids moyen du thymus/poids du sujet passe de 3500 mg/kg à la naissance, à 500 mg/kg à 15 ans, à 320   mg/kg     à   25 ans, à 220 mg/kg à 40 ans,   et à   70 à 80 mg/kg à 70 ans. 



   Il ressort de ce qui précède que le taux circulant d'hormone naturelle du thymus dans le sang diminue sensiblement avec l'âge et que la résistance du sujet à la fatigue et à certains états pathologiques dûs aux phénomènes de curarisation évolue avec   l'âge.   

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   Dans le cas de la faiblesse de l'incursion diaphragmatique des insuffisants respiratoires chroniques, on observe 0 % de cas entre 30 et 39 ans, 29 % entre 40 et 49 ans, 47 % entre 50 et 59 ans,   etc..,   la faiblesse étant de plus en plus intense au fur et à mesure que le sujet vieillit et secrète de moins en moins d'hormone. 



   Le produit hormonal de l'invention permet de lutter efficacement contre les états de fatigue et de faiblesse de l'incursion diaphragmatique. Son administration vise à réaliser, en fournissant un appoint à l'hormone sécrétée par le thymus du sujet, un taux circulant optimal. Pour cela, on réalisera une posologie d'attaque progressive, suivie d'une posologie d'entretien permettant de maintenir le taux optimal. 



   Ceci est réalisé avantageusement par une administration de 0,1   mg/kg/jour   à 1 mg/kg/jour du produit de l'invention, par voie parentérale (intraveineuse, intramusculaire ou sous-cutanée), orale ou rectale. 



   Pour effectuer cette administration, on présente le produit de l'invention sous forme d'une composition pharmaceutique dans laquelle le produit hormonal de l'invention est associé aux véhicules et excipients appropriés aux formes pharmaceutiques désirées. Parmi celles-ci, on citera notamment les ampoules injectables où le produit est dissous dans du sérum physiologique ou de l'eau apyrogène, les dragées   glutinisées,   les com- primés sublinguaux et les suppositoires. 



   On notera enfin que le produit hormonal de l'invention se différencie nettement des extraits de thymus décrits antérieurement que l'on rappellera briè- vement ci-dessous ; 

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1 /   RAHANDRAHA   et RATSIMAMANGA (Bulletin le la Société de Chimie Biologique, 1953, tome I, pagf 301) décrivent un corticoïde isolé du thymus de rats achltes et d'embryons de porcins et de bovins, soluble dans l'alcool méthylique, ayant un point de fusion de 147 -   150 C   et donnant une réaction positive avec tous les réactifs classiques permettant la détection des propriétés réductrices des   corticostérofdes.   



   2 / SZENT-GYORGYI   ("SCIENCE",   28 JUIN 1963, page 1391) a isolé de l'aorte de veau   deux normones,   la Rétine et la Promine, qu'il dit être abondantes dans le thymus de veau. Le procédé d'extraction fait apparaître la Rétine comme soluble dans le méthanol, le chloroforme, le butanol, l'huile d'arachida,l'eau à pH 4. La Promine est soluble dans l'eau à pH 7, le méthanol et le chloroforme . 



   Bien entendu, l'invention n'est pas limitée aux modes d'exécution décrits qui n'ont été donnés qu'à titre d'exemples. 



   REVENDICATIONS. 



  1. Produit hormonal consistant en le produit obtenu par extraction à l'éthanol à basse température de thymus de mammifères et purification de l'extrait brut ainsi obtenu. 

**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.

Claims (1)

1. 2. Produit hormonal constitué par un extrait cristallin de thymus de mammifères, présentant des groupes acide carboxylique et aminoacide, obtenu par extraction à l'éthanol, fondant à 180-200 C, se sublimant à 185 C sous 10 mm de mercure, soluble dans l'eau et l'étha- nol à 95 et insoluble dans le méthanol, le benzène, le tétrachlorure de carbone, l'éther éthylique, le chloro- forme, le butanol et l'huile d'arachide. <Desc/Clms Page number 11>

   3, Produit hormonal institué par le produit d'extraction de thymus de mammifères, obtenu par un procédé comprenant les stades suivants : broyage et macération du thymus dans l'éthanol à 95 , récupération de la fraction liquide, évaporation à sec dudit liquide et purification de la poudre de produit brut obtenue par dissolution de celle-ci dans l'eau, filtration, évaporation du filtrat, dissolution du produit obtenu dans l'éthanol à 95 et refroidissement de la solution jusqu'à -15 C environ, filtration et récupération d'un filtrat purifié, évaporation à sec dudit filtrat purifiée extraction du filtrat purifié séché à l'éther de pétrole puis à l'éthanol absolu et récupération du produit cristallin restant consti- tuant le produit hormonal désiré.

   4. Produit hormonal constitué par un extrait cristallin de thymus de mammifères présentant des groupes acide carboxylique et aminoacide, obtenu par extraction à l'éthanol, fondant à 180-200 C, se subli- mant à 185 C sous 10 mm de mercure, soluble dans l'eau et l'éthanol à 95 et insoluble dans le méthanol, le benzène, le tétrachlorure de carbone, l'éther éthylique, le chloroforme, le butanol et l'huile d'arachide, ledit extrait étant obtenu par un procédé comprenant les sta- des suivants :

   broyage et macération du thymus dans l'éthanol à 95 récupération de la fraction liquide, évaporation à sec dudit liquide et purification de la poudre de produit brut obtenue par dissolution de celle-ci dans l'eau, filtration, évaporation du filtrat, dissolution du produit obtenu dans l'éthanol à 95 et refroidissement de la solution jusqu'à -15 C environ, filtration et récupération d'un filtrat purifié, évapo- ration à sec dudit filtrat purifié, extraction du fil- <Desc/Clms Page number 12> trat purifié séché à :,'éther de pétrole puis à l'éthanol absolu et récupération du produit cristallin restant constituant le produit hormonal désiré.

   5. Procédé de ;raitement des états de fatigue et de faiblesse de l'incursion diaphragmatique des insuffi- sants respiratoires chroniques consistant à administrer à des patients souffrant des dits états de 0,1 mg/kg/jour à, 1 mg/kg/Jour d'un produit hormonal consistant en le produit obtenu par extraction à l'éthanol à basse tempé- rature de thymus de mammifères et purification de l'ex- trait brut ainsi obtenu.

   6. , Procédé de traitement des états de fatigue et de faiblesse de l'incursion diaphragmatique des insuffi- sants respiratoires chroniques consistant à administrer à des pationts souffrant desdits états de 0,1 mg/kg/jour à 1 mg/kg/jour d'un produit hormonal constitué par un extrait cristallin de thymus de mammifères présentant des groupes acide carboxylique et aminoacide, obtenu par extraction à l'éthanol, fondant à 180-200 C, se sublimant à 185 C sous 10 mm de mercure, soluble dans l'eau et l'éthanoi à 95 et insoluble dans le méthanol, le benzène, le tétrachlorure de carbone, l'éther éthylique, le chloro- forme, le butanol et l'huile d'arachide. ' 7.

   Procédé de traitement des états de fatigue et de faiblesse de l'incursion diaphragmatique des insuffi- sants respiratoires chroniques consistant à administrer à des patients souffrant desdits états de 0,1 mg/kg/jour à 1 mg/kg/jour d'un produit hormonal constitué par le . produit d'extraction de thymus de mammifères obtenu par un procédé comprenant les stades suivants :

   broyage et macération du thymus dans l'éthanol à 95 récupération de la fraction liquide, évaporation à sec dudit liquide <Desc/Clms Page number 13> et purification de la poudre de produit brut obtenue par dissolution de celle-ci dans l'eau, filtration, évaporation du filtrat, dissolution du produit obtenu dans l'éthanol à 95 et refroidissement de la solution jusqu'à -15 C environ, filtration et récupération d'un filtrat purifié, évaporation à sec dudit filtrat purifié, extraction du filtrat purifié séché à l'éther de pétrole puis à l'éthanol absolu et récupération du produit cristallin restant constituant le produit hormonal désiré.

   8. Procédé de traitement des états de fatigue et de faiblesse de l'incursion diaphragmatique des insuffisants respiratoires chroniques consistant à administrer à des patients souffrant desdits états de 0,1 mg/kg/jour à 1 mg/kg/jour d'un produit hormonal constitué par un extrait cristallin de thymus de mammifères présentant des groupes acide carboxylique et aminoacide, obtenu par extraction à l'éthanol, fondant à 180 -200 C, se sublimant à 185 C sous 10 mm de mercure, soluble dans l'eau et l'éthanol à 95 et insoluble dans le méthanol, le benzène, le tétrachlorure de carbone, l'éther éthylique, le chloroforme, le butanol et l'huile d'arachide, ledit extrait étant obtenu par un procédé comprenant les sta- des suivants :

   broyage et macération du thymus dans l'éthanol à 95 , récupération de la fraction liquide, évaporation à sec dudit liquide et purification de la poudre de produit brut obtenue par dissolution de cel- le-ci dans l'eau, filtration, évaporation du filtrat, dissolution du produit obtenu dans l'éthanol à 95 et refroidissement de la solution jusqu'à -15 C environ, filtration et récupération d'un filtrat purifié, évapo- ration à sec dudit filtrat purifié, extraction du fil- trat purifié, séché à l'éther de pétrole puis à l'étha- nol absolu et récupération du produit cristallin restant <Desc/Clms Page number 14> constituant le produit hormonal désiré.