BE817472Q - Procede pour la purification d'inhibiteurs de la kallikreine et de la trypsine - Google Patents

Description

  BAYER AKTIENGESELLSCHAFT

  
L'invention concerne un procédé pour la purification à l'échelle industrielle d'inhibiteurs de la kallikréine et de la trypsine à partir de solutions aqueuses de ceux-ci, pour obtenir un produit à usage thérapeutique injectable directement, même à doses élevées, par exemple

  
par perfusion intraveineuse lente. 

  
Des procédés pour l'extraction et la purification de ces inhibiteurs sont par exemple décrits dans les brevets allemands No 950.959 ; 954.284 ; 956.097 ;
1.011.576 ; 1.014.288 ; 1.148.352 au nom de Farbenfabriken Bayer A.G. et dans le brevet français No 1.566.777 déposé le 15 mars 1968 au nom de la demanderesse.

  
Dans le passé, la purification de l'inhibiteur de la kallikréine et de la trypsine, extrait d'organes d'animaux, jusqu'à un degré de pureté acceptable aux fins thérapeutiques, était effectuée au moyen de résines échangeuses d'ions appropriées, ou à l'aide de réactifs spécifi-

  
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tannique, avec formation de complexes suivie d'une scission. Ces procédés impliquaient des opérations longues et relativement laborieuses, surtout du fait de la nécessité d'opérations successives de séparation,

  
Or, on a découvert que cet inhibiteur est soluble à un pH neutre ou légèrement acide, compris entre 5,5 et 7, dans des solutions pratiquement saturées de sels minéraux, par exemple, de chlorure de sodium et qu'on peut le faire précipiter quantitativement à partir de ces solutions, à la température ambiantr, par abaissement du pH jusqu'à des valeurs comprises entre 1 et 3.

  
Le procédé selon l'invention pour la purification d'inhibiteurs de la kallikréine et de la trypsine, mis en oeuvre à la température ambiante, comprend les opérations suivantes :
a) addition à la solution aqueuse de l'inhibiteur brut, à un pH compris entre 5,5 et 7 et sous agitation d'un sel inorganique, jusqu'à un degré de saturation compris entre
80 % et 100 % ; b) filtration ; c) déplacement du pH du liquide de filtration jusqu'à une valeur comprise entre 1 et 3, par addition d'un aciie minéral, ce qui produit une précipitation quantitative

  
de l'inhibiteur ; d) filtration et récupération de l'inhibiteur ainsi précipité e) mise en suspension à la concentration voulue dans un véhicule aqueux rendu bactériostatique par un agent de conservation approprié et dissolution par neutralisation ;

  
et f) filtration stérilisante.

  
Le liquide de filtration obtenu constitue la solution d'inhibiteur qui se prête à une utilisation thérapeutique.

  
Il est important de noter que le produit obtenu est caractérisé par l'absence de substances susceptibles de provoquer des réactions allergiques et un choc anaphylactique, ainsi que de substances pyrogènes. En outre, il y a lieu de noter que le produit obtenu est parfaitement incolore, notamment si l'on répète le traitement de solubilisation et de précipitation ultérieure du principe actif, et que l'on peut préparer avec ce produit des solutions aqueuses en toutes concentrations voulues. Le rendement quantitatif du produit est très élevé, pratiquement supérieur à 80 % par rapport à l'activité initiale, même à la suite de précipitations répétées, avec un degré de pureté supérieur à dix fois environ la pureté du produit de départ.

  
On comprendra mieux le procédé faisant l'objet

  
 <EMI ID=2.1> 

  
Exemple

  
Une soluticn aqueuse d'inhibiteur de la kallikréine, contenant 23 000 KIU/ml , avec une pureté de

  
 <EMI ID=3.1> 

Claims (1)

1. sodium à raison de 357 g/1, à la température ambiante et sous agitation.

   Après avoir maintenu l'agitation pendant 3 h au moins, on ajoute de la "Celite", agent qui favorise la filtration, et l'on filtre sur un entonnoir Buchner.

   On lave la plaque filtrante avec une solution saturée de chlorure de sodium. Le premier et le second filtrats réunis sont amenés à un pH égal à 2 par addition de HC1 1 : 1 en volume. On laisse reposer pendant 12 h en armoire frigorifique. On filtre sur Buchner, après addition de "Celite" et on lave la plaque filtrante avec une solution saturée de chlorure de sodium. <EMI ID=4.1>

   ensuite mis en suspension dans une quantité d'eau convenablement calculée pour l'obtention de la concentration finale voulue.

   On neutralise par NaOH à 40 % et on filtre pour éliminer la "Celite".

   On obtient finalement une solution d'inhibiteur ayant une pureté de l'ordre de 1 KIU/01/ug de substance organique sèche. Le rendement obtenu est de 95 % par rapport à l'activité initiale.

   Il est du reste bien entendu que le mode de réalisation de l'invention qui a été décrit ci-dessus, à propos de l'exemple présenté, a été donné à titre purement indicatif et nullement limitatif et que de nombreuses modifications peuvent être apportées sans que l'on s'écarte pour cela du cadre de la présente invention.

   REVENDICATIONS

   1. Procédé pour la purification d'un inhibiteur de la kallikréine possédant également un effet antitryptique et obtenu à partir de tissus animaux, ledit procédé étant mis en oeuvre à la température ambiante et étant caractérisé par le fait : qu'on ajoute à la solution aqueuse

   <EMI ID=5.1>

   agitation un sel inorganique, jusqu'à un degré de saturation

   <EMI ID=6.1>

   pH du filtrat jusqu'à une valeur comprise entre 1 et 3, par addition d'un acide minéral, ce qui provoque une précipitation quantitative de l'inhibiteur ; qu'on récupère l'inhibiteur ainsi précipité par filtration ; qu'on le met ensuite

   en suspension à la concentration voulue dans un véhicule aqueux rendu bactériostatique par un agent de conservation approprié ; qu'on rend ensuite ledit inhibiteur soluble dans ledit véhicule aqueux par neutralisation de ce véhicule ; et qu'on filtre enfin la solution obtenue pour éliminer les impuretés non solubles qu'elle contient.

   2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'on utilise comme sel organique le chlorure de sodium.

   3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'on utilise comme acide minéral l'acide chlorhydrique.