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  PROCEDE POUR LA PREPARATION DE DERIVES HYDROSOLUBLES STABLES DE L'   ADRENOCHROME.   



   La présente invention concerne un procédé pour la préparation de dérivés hydrosolubles stables de l'adrénochrome, susceptibles d'applica- tions thérapeutiques. 



   Ainsi que l'on sait,l'adrénochrome ou   N-méthyl-2.3-dihydro-3-   hydroxy-5.6- quinoneindol, hémostatique puissant, est malheureusement très instable, de sorte qu'il est difficule, voire même pratiquement impos- sible, de l'utiliser tel quel   en-thérapeutique.ou   de le conserver, en vue d'utilisations thérapeutiques. 



   Suivant les brevets belges   452.374   et 505.022 de la Demanderesse, on a néanmoins réussi déjà à tirer parti des propriétéspharmacologiques de l'adrénochrome et,en particulier, de son action hémostatique, en employant cette substance sous forme de dérivés stables, que l'on obtient en la conden- sant par.un de ses deux atomes d'oxygène quinoniques, avec des   réactifs;.;azotés,   spécifiques de la fonction carbonyle, tels des sels   d'hydroxylamine,   de semi- carbazide, de   phénylhydrazine   etc. 



   Bien que très peu solubles dans l'eau, ces dérivés stables, qui malgré la transformation chimique subie, ont conservé 'les propriétés pharma- cologiques de l'adrénochrome, le sont cependant suffisamment pour que notam- ment la semicarbazone et la   monoxime   de l'adrénochrome aient pu trouver de nombreuses applications, dans la pratique médicale, principalement comme hémostatiques puissants. 



   L'étude expérimentale et l'application pratique de ces dérivés ayant permis de leur trouver encore d'autres propriétés thérapeutiquement utilisables, telles une action dynamogène, une action vitaminique P, une action stimulante hormonale, etc. les domaines d'utilisation des produits en question se sont considérablement élargis. Pour certaines de ces nouvel- les utilisations, où il serait utile de pouvoir employer sous un faible volu - me des doses plus importantes de produit, la solubilité insuffisante dans l'eau de ces dérivés (inférieure à 10/00 peut ne pas permettre, cependant, 

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 d'atteindre les concentrations désirables en principes actifs. 



   Il a déjà été proposé dans le brevet américain   2.581.850   de pré- parer des solutions plus concentrées de semicarbazone et de monoxime de l'ad- réhochrome par dissolution conjointe d'une de ces substances avec un sel solubilisant, tel le salicylate de sodium. Il est à remarquer toutefois que, par ce moyen de solubilisation, d'ordre purement physique, la solubilité reste assez limitée, surtout s'il s'agit de ne pas adjoindre, au produit actif, de trop grandes quantités d'agent solubilisant inerte ou éventuelle- ment même nuisible   à   son action thérapeutique ou à   l'organisme     à   traiter. 



   La présente invention indique une méthode différente, de nature chimique, pour préparer directement des dérivés stables de   l'adrénochrome,   solubles dans l'eau et doués encore dès propriétés pharmacologiques de l'ad- rénochrome ou de ses dérivés peu solubles, précédemment employés déjà ou signalés dans la littérature scientifique.

   Cette méthode consiste à intro- -duire dans la molécule-même des dérivés stables de l'adrénochrome, une fonction   solubilisante,   en l'espèce une fonction sulfonate, en traitant par du bisulfite alcalin,   l'adrénochrome   ou des dérivés de l'adrénochrome sub- stitués à l'azote par un groupe autre que méthyle (désignés ci-après comme 
 EMI2.1 
 "dérivés autrement substitués). tels que le N-isopropyl-2.3-dihydro-3hydroxy- 5.6-quinone indol et autres dérivés substitués connus, avant d'en effectuer la condensation avec un réactif azoté, spécifique de la fonction carbonyle. 



   On obtient ainsi, sans nécessité d'isoler   intermédiairement   le produit de réaction de l'adrénochrome avec le bisulfite, des dérivés parfai- tement hydrosolubles de   l'adrénochrome,   qui se comportent comme des produits d'addition d'un bisulfite alcalin à des dérivés de l'adrénochrome tels que   l'oxime,   la semicarbazone, la   thiosemicarbazone,   les oxamazones, les diverses hydrazones (acéthydrazones,   arylhydrazones,   etc). 



   Dans les cas particuliers de la semicarbazone et de l'oxime de   l'adrénochrome,   les composés d'addition se formant avec le bisulfite de sodium 
 EMI2.2 
 c.à.d. le 2.3 - dihyoo-3-bydrcxy-5-semiearbazido-6-oxo-indol+5-sulfonate so- dique et le 2o3-dihydro-3-hydrczy-5-hydroxamino-6-oxo-indol-5-sulfonate sodi- que peuvent être représentés par les formules ci-après :

   
 EMI2.3 
 

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Pour la préparation de ces composés d'addition, on peut, suivant l'invention, oxyder par des méthodes connues l'adrénaline (ou un homologue de l'adrénaline) en adrénochrome (ou dérivé autrement substitué)   et.) soit   isoler ce dernier, avant de,le traiter par du bisulfite et un réactif azoté spécifique de la fonction carbonyle, soit directement traiter, par ces deux réactifs, la solution oxydée d'adrénaline, sans en séparer au préala- ble l'adrénochrome (ou le dérivé autrement substitué) obtenu intermédiaire- ment. 



   Le réactif azoté   p.ex.,la   semicarbazide ou l'hydroxylamine peut être mis en oeuvre en milieu alcalinneutre ou acide, sous forme soit de base libre, soit de sel, de préférence de chlorhydrate. 



   Les exemples ci-après, non limitatifs, illustrent ces diverses variantes du mode de préparation de dérivés hydrosolubles stables de l'adré- nochrome. 



   Exemples : 
 EMI3.1 
 I. Prüaration de 2o3Mihvdro-3-hvdroxv-5-semiearbazido-6-oXo-±z= dol-5-sulfonate sodiaue au départ d'adrénaline. a) avec séparation internédiaire,de 1'adrénochrome : 
On dissout, à 35 C, 25 gr. d'adrénaline dans un mélange de 600 cm3 de méthanol,14 cm3 d'acide formique à   98%,   40 cm3 d'eau'et 40 cm3 de formiate d'éthyle ou de formiate de méthyle; refroidit dans un bain de glace fondante et ajoute, d'un seul jet et en agitant vigoureusement, 100 gr d'o- xyde d'argent. 



   Après 1 minute de contact, sous agitation, on sépare rapidement   l'insolùble   par essorage, refroidit la solution   à - 20    C pendant une 1/2 heure environ et essore l'adrénochrome qui se sépare de la solution. On   ob-   tient ainsi 18 gr d'adrénochrome brut que l'on purifie par dissolution dans du méthanol et recristallisation par refroidissement. 



   On dissout dans 50 à 60 cm3 d'eau 5 gr d'adrénochrome ainsi puri- fié et ajoute à cette solution, rapidement filtrée, au besoin, du bisulfite sodique sec jusqu'à'virage de la coloration du rouge au vert pomme, soit 2,5 gr environ. On ajoute ensuite à cette'solution du composé bisulfitique de l'adrénochrome une solution fraîchement préparée et filtrée de 4 gr de chlorhydrate de semicarbazide et 4 gr d'acétate sodique dans 20 cm3 d'eau et laisse évoluer la coloration du vert initial à l'orange clair, ce qui dure- 1 heure environ.

   Après repos de 15 heures, la   coloration   de la solution s'é- tant stabilisée, on récupère le composé d'addition bisulfitique de la   semicar-   bazone de   l'adrénochrome   dissous, en évaporant d'abord 65% de l'eau au bain- marie   à 40 C,   sous une pression de 7 à 8 m/m, dans un   courant.d'azote   intro- duit par un tube capillaire. Par refroidissement à 0 C, de la solution ainsi concentrée, on obtient le produit brut que l'on essore et purifie en le dis- solvant   à   raison-de 15 gr dans 100 cm3 d'eau et en ajoutant à 1 volume de cette solution 3 volumes de méthanol.

   Après 18 heures de repos en récipient bouché, on essore, lave sur filtre par du méthanol aqueux à 30% et sèche sous vide, en présence d'anhydride phosphorique, le précipité obtenu de 
 EMI3.2 
 2.3-dihydro-3-hydroXY-5-semicarbazido-6-oiço-indol-5-sulfonate sodique . b) saris s ation intermédiaire -de l'Il adiénochr2ae. 



   On dissout, à 35 C, 20 gr d'adrénaline dans 400 cm3 d'eau, ad- ditionnée de 30 cm3 d'acide formique à 98%. Tout en agitant vigoureusement, on introduit d'un seul coup 80 gr d'oxyde d'argent et 160 cm3 d'eau glacée, essore rapidement, après 1 minute 30 secondes de durée totale de l'oxydation, traite le filtrat par une solution saturée de 30 gr de chlorure de sodium et sépare par essorage le chlorure d'argent précipité.

   A la solution d'adré- nochrome ainsi obtenue, on ajoute directement 8 à 9 gr de bisulfite de sodium, jusqu'à virage de la coloration au vert pomme et filtre la solution de la combinaison bisulfitique dans une solution (éventuellement filtrée au préa- lable) de-15 gr de chlorhydrate de semicarbazide, 15 gr d'acétate de sodium dans 75 cm3 d'eau..Après concentration de la solution, comme 'dans l'exemple 

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 1, sous vide, entre 25-30 C, dans un courant d'azote, on fait cristalliser 
 EMI4.1 
 la combinaison bisulfitique de la semicarbazone de l'adrén.oahrome, essore et sèche sous vide, en présence d'anhydride phosphorique. 



   Le produit que l'on obtient d'après ces deux méthodes a un point de fusion supérieur à 330 C et est soluble dans l'eau à 18 C à raison de 15 
 EMI4.2 
 gr par 100 cm3 d'eau. A l'état solide, il présente une couleur:03aune-ver- dâtre très pâle, et en solution aqueuse une couleur brun clair. 



   A l'analyse par micro-Dumas, on a trouvé   16,16%   N, contre   16,46%   théoriquement et 6,66% Na contre 6,6% théoriquement. 



   L'activité hémostatique de ce composé déterminée par la modifi- cation du temps de saignement moyen sur   l'oreille   de lapin, l heure après in -   jection   d'une dôse de   10 # gr/kg   d'après la technique de J. Roskam et L.   Pau-   
 EMI4.3 
 wen-(drcha Int. Pharm. Thér. j2 N  50-1937) ressort nettement du tableau ci- après (l'éeart statistique y étant de   #   16 secondes). 
 EMI4.4 
 
<tb> 



  N  <SEP> Temps <SEP> de <SEP> saignement <SEP> : <SEP> Modification
<tb> Avant <SEP> Après <SEP> en <SEP> min. <SEP> et <SEP> sec.: <SEP> en%
<tb> 
 
 EMI4.5 
 1 3' 45tt 3' 15" -0'30" 13 2 2-' lOn 1' 14" -0' 56tel 4,3 3 2y 2711 1' 15" -1' l2ll 49 
 EMI4.6 
 
<tb> 2' <SEP> 44" <SEP> 1' <SEP> ,on <SEP> -1' <SEP> 04" <SEP> 39
<tb> 
 
 EMI4.7 
 5 2' 15 1' 15 -1' 00" 45 6 3' zp 2' 41" -oJ' 39" 20 Moyennes : ; 1 . : , arithmét. 2'47" 1-' 54 -p' 53" 35 
 EMI4.8 
 II. Préparation de 2.3- dihvdro - 3 - hv*oxv- 5 - hvdroramino -   6 -   oxo - indol - 5 - sulfonate sodique. 



   On dissout   le79   gr d'adrénochrome dans 75 cm3 d'eau et ajoute progressivement du bisulfite sodique à   92%   jusqu'à virage de la coloration au vert pompe (soit 1,1 gr environ). 



   On filtre la solution du composé bisulfitique de l'adrénochrome ainsi obtenue, dans une solution de 6,2 gr de chlorhydrate   d'hydroxylamine   dans 20 cm3- d'eau,   ajustée   au pH de   7.,5¯par   du carbonate sodique, ce qui fait'passer la coloration à l'orange foncé., et qui, s'intensifiant encore pendant 15-heures reste ensuite stable. 



   Après 24 heures de repos, on concentre la solution au bain-marie à 40 C, sous 7   à   8 mm jusqu'à cristallisation nette. On refroidit à 20 , sépare la solution d'avec les cristaux de sels inorganiques et continue   l'opé-   ration de concentration dans les mêmes conditions, jusqu'à réduction du volu- me de la solution à 20 cm3. Par recristallisation, dans un mélange d'eau et d'acétone, du dépôt orangé foncé qui se sépare de la solution, on obtient le composé bisulfitique de l'oxime de   l'adrénochrome   sous forme de longues aiguilles rouges, se décomposant au-dessus de 300 C, solubles dans l'eau à 22 C à raison de 25 gr par 100 cm3 et contenant   9,45%   N (contre 9,396 % théoriquement).

Claims

,RESUME L'invention a pour objet : I) Un-procédé pour la préparation de dérivés hydrosolubles stables de l'adrénochrome.susceptibles d'applications thérapeutiques, remarquable <Desc/Clms Page number 5> par les caractéristiques ci-après, s'appliquant séparément ou en combinai- son.

1) On introduit dans un produit de condensation d'une molécule d'adrénochrome avec une molécule d'un réactif azoté, spécifique de la fonc- tion carbonyle, un groupe sulfonate, en traitant une solution d'adrénochrome par un bisulfite alcalin, en léger excès, avant condensation avec le réac- tif azoté.

2) La solution d'adrénochrome est préparée par dissolution d'ad- rénochrome dans de l'eau, 3) La solution d'adrénochrome est préparée par oxydation d'ad- rénaline en milieu aqueux et séparation de l'insoluble, 4) Le bisulfite alcalin est ajouté à l'état solide, à la solu- tion d'adrénochrome.

5) Le bisulfite alcalin est ajouté à l'état de solution à la solution d'adrénochrome.

6) Le bisulfite alcalin employé est le bisulfite de sodium.

7) Le réactif azoté spécifique,de la fonction carbonyle employé est une base azotée ou un sel,de préférence le chlorhydrate, d'une base azotée susceptible de se condenser avec l'adrénochrome en un dérivé stable.

8) Le réactif azoté est employé en solution aqueuse, de préfé- rence tamponnée.

9) La solution du réactif azoté est tamponnée par de l'acétate de sodium.

10) Le réactif azoté est le chlorhydrate de semicarbazide.

Il) Le réactif azoté est le chlorhydrate d'hydroxylamine.

B) A titre de produits industriels nouveaux : les sulfonates de produits de condensation de l'adrénochrome avec des réactifs azotés, spécifiques de la fonction carbonyle et plus particulièrement le 2. 3 - di- hydro- 3 - hydroxy- 5 - semicarbazido 6 - oxo indol - 5 - sulfonate sodique et le 2.3 - dihydro - 3 - hydroxy-5- hydroxamino - 6 oxo- indol - 5- sul- fonate sodique.