BE825194A

BE825194A - Hydrazide de n-benzene-sulfonyl-beta-alanine comme agent immunosupressif sur et actif

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Publication number: BE825194A
Application number: BE2054129A
Authority: BE
Priority date: 1975-02-05
Filing date: 1975-02-05
Publication date: 1975-05-29

Description


   <EMI ID=1.1> 

  
immunosuppressif sQr et actif" La présente invention est relative à un médicament de grande valeur à administrer par la voie orale et contenant

  
 <EMI ID=2.1> 

  
tuant efficace. Le médicament conforme à l'invention est

  
utile, comme agent immunosuppressif, pour la suppression des maladies dites auto-immunes, telles que les syndromes néphrétiques, les rhumatismes articulaires et les lupus erythematosus de l'organisme, etc.

  
En outre, il est possible de diminuer ou d'abaisser

  
la dose du corticostéroïde par l'emploi du KH-125 chez un patient qui a longtemps été traité avec cette hormone.

  
L'invention se rapporte à des compositions pharmaceutiques; plus particulièrement, elle concerne des compositions pharmaceutiques utiles pour la suppression des maladies dites auto-immunes.

  
Des médicaments immunosuppressifs, tels que la 6-mercaptopurine, l'azathioprine et la cyclophosphamide, ont été utilisés cliniquement pour le traitement des rhumatismes articulaires, des syndromes néphrétiques, de l'hépatite et de l'anémie hémolytique, toutes affections qui ont été considérées comme appartenant aux maladies dites auto-immunes. Toutefois, la haute toxicité de ces médicaments a rendu difficile leur utilisation clinique, en particulier leur prescription à plusieurs reprises pour un patient pendant un temps prolongé. Par conséquent, la mise au point d'un nouvel agent immunosuppressif,

  
dont la marge de sécurité est plus grande, sans réduire ses effets thérapeutiques, a longuement été attendue.

  
Les recherches qui ont conduit à la découverte de la présente invention, ont mis en cause les dérivés des hydrazides des amino-acides dotés d'une puissante activité immunosuppressive et d'une faible toxicité. 

  
Au cours d'un essai pour tenter de découvrir un agent immunosuppressif à toxicité abaissée, environ cinquante hydrazidas d'acide, principalement des dérivés des hydrazides des amino-acides, ont été synthétisés et triés en ce qui concerne leur aptitude à supprimer la formation d'anticorps pour les érythrocytes du mouton chez les souris. Au cours de ces recherches, on a constaté que l'hydrazide de N-benzènesulfonyl-B-alanine (KH-125) possédait la plus puissante activité immunosuppressive et une toxicité aiguë assez basse parmi les composés soumis à l'essai. D'autres études pharmacologiques et toxicologiques détaillées ont été effectuées sur

  
le KH-125.

  
Au cours des études pharmacologiques détaillées, il s'est confirmé que le KH-125 a la propriété de supprimer, chez les rats,l'arthrite adjuvante, ainsi que la néphrite

  
 <EMI ID=3.1> 

  
ont été évaluées par des essais de toxicité chronique et subaiguë chez les rats, par des études tératologiques chez les rats et les lapins et également par des essais favorisant le cancer chez lessouris et les rats. D'après ces études,

  
on a observé que le KH-125 a une toxicité cnnsidérablement plus basse que celle des agents immunosuppressifs bien connus. En outre, le KH-125 n'exerce aucun effet tératogène ou cancérigène, ces deux effets étant inévitablement partagés par les médicaments immunosuppressifs existants, tels que la cyclophosphamide, la 6-mercaptopurine, etc.

  
Avant que le composé conforme à l'invention puisse être utilisé médicalement, il doit bien entendu être transformé en une composition pharmaceutique par association avec un véhicule pharmaceutique approprié.

  
Par le terme "pharmaceutique" utilisé dans le présent mémoire, on entend exclure toute possibilité par laquelle la nature du véhicule, considéré, bien entendu, en rapport avec la voie selon laquelle on se propose d'administrer la composition, pourrait être nuisible plutôt que favorable.

  
Le choix d'un mode de présentation approprié, conjointement avec un véhicule adéquat, est considéré comme rentrant dans la compétence des spécialistes habitués à la préparation de formulations pharmaceutiques.

  
Par conséquent, il est proposé, grâce à la présente invention, une composition pharmaceutique qui comprend un

  
 <EMI ID=4.1> 

  
avec un véhicule pharmaceutique approprié.

  
Les compositions de l'invention peuvent être administrées oralement et,eu égard à ces modes,le "véhicule pharmaceutique" est préférablement: l'excipient ingestible d'un comprimé, d'un comprimé revêtu,d'une pilule ou d'un comprimé sublingual;le conteneur ingestible d'une capsule ou d'un cachet; le support solide,pulvérulent et ingestible d'une poudre; ou le milieu liquide ingestible d'un sirop, d'une solution, d'une suspension ou d'un élixir.

  
Aux dessins annexés:
la figure 1 montre les effets prophylactiques du KH-125 et du 6-MP sur l'arthrite adjuvante. Les médicaments ont été administrés oralement une fois par jour pendant 17 jours en partant du jour de l'injection de l'adjuvant.

  
&#65533;
- A, B : Modifications du gonflement du pied ayant subi  l'injection d'adjuvant;
- C, D : Modifications du gonflement du pied n'ayant pas subi l'injection d'adjuvant;
- E : Etat de l'arthrite 21 jours après l'injection d'adjuvant; <EMI ID=5.1>  La figure 2 montre l'effet du KH-125 sur l'indice des fusions, l'épaisseur de la membrane de base et sur l'urée protéique chez les rats néphrétiques. L'urée protéique a été mesurée 18 jours après l'injection de la néphrétoxine; ensuite, les rats ont été tués deux jours après pour l'examen au microscope électronique. Les lignes verticales montrent l'erreur normalisée.

  
 <EMI ID=6.1> 

  
respectivement.

  

 <EMI ID=7.1> 


  
La figure 3 est une comparaison du KH-125 avec d'autres agents immunosuppressifs en ce qui concerne l'indice des fusions,l'épaisseur de la membrane de base et l'urée protéique. L'urée protéique a été mesurée 18 jours après l'injection de la néphrétoxine; ensuite, les rats néphrétiques ont été tués trois jours après pour l'examen au microscope électronique. Voir légendes de la figure 2 pour d'autres détails.

  
 <EMI ID=8.1> 

  
but de mettre en évidence la présente invention, sans cependant la limiter à ceux-ci.

  
Exemple 1 : Préparation de l'hydrazide de N-benzène-sulfonyl-8-

  
alanine

  
A une solution de 7,5 g d'ester éthylique de N-benzènesulfonyl-B-alanine dans 20 ml d'éthanol,on ajoute lentement 2,1 g

  
 <EMI ID=9.1> 

  
reflux pendant 6 heures.Après refroidissement,les cristaux sépa-  rés par précipitation sont recueillis et recristallisés dans de 

  
 <EMI ID=10.1> 

  
alanine sous la forme de plaquettes incolores d'un point de fusion de 135 à 137[deg.]C. 

  

 <EMI ID=11.1> 

Exemple 2 :

  
Des comprimés sont préparés par mélange et granulation des constituants suivants, conformément aux techniques pharmaceutiques connues.

  

 <EMI ID=12.1> 

Exemple 3 :

  
Des comprimés sont préparés par mélange, granulation, moulage par pression et revêtement des constituants suivants, conformément aux techniques pharmaceutiques connues :

  

 <EMI ID=13.1> 

Exemple 4 :

  
Des capsules sont préparées, conformément aux techniques pharmaceutiques connues, par exemple, en utilisant les constituants suivants :

  

 <EMI ID=14.1> 
 

Exemple 5 :

  
Une composition pulvérulente est préparée à partir des constituants suivants, conformément aux techniques pharmaceutiques connues :

  

 <EMI ID=15.1> 

Exemple 6 :

  
Une suspension à administrer par la voie orale est préparée à partir des constituants suivants, conformément aux techniques pharmaceutiques connues.

  

 <EMI ID=16.1> 

Exemple 7 :

  
Des granules sont préparés à partir des constituants suivants, conformément aux techniques pharmaceutiques connues.

  

 <EMI ID=17.1> 


  
Expérience A : Toxicité aiguë de l'hydrazide de N-benzène-

  
 <EMI ID=18.1> 

  
La toxicité aiguë du KH-125 a été étudiée chez les rats de Wistar et les souris ddY des deux sexes. Les valeurs

  
 <EMI ID=19.1> 

  
suivantes : 

  
1520 (p.o.), 1230 (i.p.) et 1150 (s.c.) pour les souris mâles;

  
1570 (p.o.), 1410 (i.p.) et 1440 (s.c.) pour les souris femelles;

  
>4000 (p.o.), 2150 (i.p.) et >4000 (s.c.) pour les rats;

  
>4000 (p.o.), 2580 (i.p.) et >4000 (s.c.) pour les rates. Aucune différence de sexe concernant la toxicité aiguë n'a été apparenteExpérience B : Etude de la toxicité chronique de l'hydrazide

  
 <EMI ID=20.1> 

  
L'étude de la toxicité chronique du KH-125 a été effectuée sur des rats de Wistar des deux sexes. Les rats ont été traités oralement avec du KH-125 pendant 6 mois à des niveaux de dose de 0 (témoin), 10, 20 et 40 mg/kg/jour.

  
Tous les rats étaient vivants après un traitement de

  
6 mois avec le KH-125. Le gain de poids est légèrement inhibé dans les groupes à 40 mg/kg/jour. Les découvertes hématologiques ont révélé une dimunition, dépendant de la dose, de l'hémoglobine et du nombre des érythrocytes. Aucun changement sensible n'a été observé en ce qui concerne les activités enzymatiques du sérum par le traitement avec le KH-125, sauf qu'on a constaté de légères augmentations, mais dépendant de la dose, du S-GOT et du S-GPT. Aucun effet important sur les symptômes généraux, l'absorption d'aliments, l'analyse d'urine et le fractionnement de la protéine de sérum n'a été observé. Aucun  effet toxique, qui pourrait être attribué au médicament, n'a  été détecté au cours des examens histopathologiques.

  
Expérience C : Effet suppressif de l'hydrazide de N-benzène-

  
sulfonyl-s-alanine (KH-125) sur la production d'anticorps pour les érythrocytes du mouton L'effet du KH-125 sur la production d'anticorps chez les souris ddY a été examiné par la technique des plaquettes

  
de Cunningham et Szenberg (Immunology, 14, 599, 1968) et comparé avec d:'autres agents.

  
Les souris ont été immunisées par une injection intra-/

  
veineuse d'érythrocytes de mouton lavés (4 x 108 cellules/ souris). L'administration du KH-125 s'est faite oralement pendant 4 jours consécutifs, à partir du jour de l'injection d'antigène. Les cellules formant plaque 19S (PFC) ont été comptées 4 jours après l'immunisation. Comme indiqué au tableau 1, le KH-125 supprime, en fonction de la dose, l'apparition des PFC 19S.

  
Au cours de l'expérience comparative, des agents d'essai ont été administrés par la voie du péritoine pendant

  
8 jours consécutifs, en commençant un jour avant l'immunisation. Des PFC 7S ont été comptés 9 jours après l'immunisation. Comme indiqué au tableau 2, l'effet suppressif du KH-125 sur l'apparition des PFC 7S est supérieur à celui de la prednisolone ou de la 6-mercaptopurine, mais est moins efficace que celui

  
de la cyclophosphamide. 

  

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 <EMI ID=26.1> 
 

  
Expérience D : Effet suppressif de l'hydrazide de N-benzène-

  
sulfonyl-6-alanine (KH-125) sur l'arthrite adjuvante chez les rats

  
L'effet du KH-125 sur l'arthrite adjuvante chez les rats a été comparé avec celui de la 6-mercaptopurine. Les rats de Sprague-Dawley ont reçu une seule injection intradermique de 0,1 ml d'une suspension d'huile paraffinique liquide de Mycobacterium tuberculosis (concentration: 5 mg/ml) dans

  
la zone subplantaire d'une patte arrière droite. Des agents d'essai ont été administrés oralement une fois par jour pendant
17 jours, à partir du jour de l'injection d'adjuvant. Les volumes des pieds arrière droit et gauche ont été déterminés volumétriquement en immergeant les pieds dans l'eau. L'état de l'arthrite a été obtenu par observation visuelle et a

  
été gradué de 0 à 4+.

  
Au cours de l'expérience prophylactique sur l'arthrite adjuvante le KH-125 et la 6-mercaptopurine suppriment, en fonction de la dose, le gonflement des pieds ayant subi ou

  
non une injection d'adjuvant, ainsi que l'accroissement de l'activité de l'arthrite (figure 1). Trois des 7 rats traités avec 30 mg/kg/jour de 6-mercaptopurine sont morts au cours

  
de l'expérience, mais ceux qui ont reçu une dose de l'ordre

  
de 80 mg/kg/jour de KH-125 ont survécu pendant la période d'essai entière. La comparaison entre les deux médicaments

  
eu égard à la marge de sécurité - c'est-à-dire la dose maximale tolérée par administrations répétées par rapport à la dose efficace pour la suppression de l'arthrite adjuvante - a montré que le KH-125 peut être considéré comme étant environ 3 fois aussi sur que la 6-mercaptopurine.

  
La recrudescence de l'augmentation du pied, se produisant après le retrait du KH-125, n'est pas importante. 

  
Expérience E : Effet suppressif de l'hydrazine de N-benzène-

  
 <EMI ID=27.1> 

  
néphrétoxique des rats

  
L'effet du KH-125 sur la néphrite néphrétoxique des rats de Wistar a été évalué en partant des trois points ci-après :

  
1) mesures des protéines de l'urine;

  
2) découvertes au microscope électronique; et

  
3) découvertes au microscope lumineux.

  
Les rats néphrétiques ont étépréparés conformément à la méthode de Shibata (The Saishin-Igaku, 20, 1089, 1965).

  
Au cours d'une expérience prophylactique, le KH-125

  
a été administré oralement deux fois par jour pendant 18 jours au cours d'une période de 21 jours, en commençant 2 jours avant l'injection de néphrétoxine et en terminant 18 jours après l'injection. La protéine d'urine a été mesurée 18 jours

  
après l'injection de néphrétoxine; ensuite, les rats néphrétiques ont été tués 2 jours après pour des examnns histopathologiques. Comme représenté à la figure 2, l'urée protéique a diminué, en fonction de la dose, grâce au traitement avec le KH-125. Dans les découvertes au microscope électronique, on

  
a observé que l'indice des fusions des traitements des pieds épithéliaux a été amélioré et que l'épaississement de la membrane de base glomérulaire a été supprimé par le traitement avec le KH-125. Les découvertes au microscope lumineux ont montré également une bonne amélioration de la néphrite ches les animaux traités avec le KH-125.

  
Au cours d'une expérience comparative, des agents d'essai ont été administrés une fois par jour: KH-125, 15 jours pendant 0 à 10 et 15 à 18 jours (p.o.); 6-mercaptopurine

  
 <EMI ID=28.1> 

  
11 jours pendant 0 à 10 jours (i.p.); et prednisolone, 11  <EMI ID=29.1> 

  
animaux ont été tués 3 jours après pour des examens histopathologiques. Comme indiqué à la figure 3, la néphrite néphrétoxique est efficacement supprimée en grande partie dans le groupe traité avec le KH-125 comme le montre la diminution de l'urée protéinique, l'amélioration de l'indice des fusions des procédés des pieds épithéliaux et la suppression de l'épaississement

  
de la membrane de base glomérulaire.

REVENDICATIONS

  
1.- Composition pharmaceutique se présentant sous la

  
forme d'une unité de dosage orale, caractérisée en ce qu'elle comprend un support pharmaceutique et environ 1 à 400 mg par unité d'hydrazide de N-benzène-sulfonyl-B-alanine.

Claims

2.- Composition pharmaceutique suivant la revendication 1, caractérisée en ce qu'un support solide pharmaceutique

est utilisé.

3.- Composition pharmaceutique suivant la revendication 1, caractérisée en ce qu'un support pharmaceutique liquide est utilisé.

4.- Procédé de traitement du corps humain pour supprimer <EMI ID=30.1>

articulaire, le lupus erythematosus de l'organisme, la purpura idiopathique thrombocytopénique, l'anémie hémolythique, l'hépatite chronique, la néphrose, la néphrite chronique, la colite ulcérative, la myasthenia gravis et la polynévrite, caractérisé

en ce qu'il consiste à administrer une composition suivant la revendication 1.

5.- Procédé de traitement du corps humain pour supprimer et améliorer les maladies auto-immunes, notamment le rhumatisme articulaire, le lupus erythematosus de l'organisme,la purpura idiopathique thrombocytopénique, l'anémie hémolytique, l'hépatite chronique, la néphrose, la néphrite chronique,

la colite ulcérative, la myasthenia gravis et la polynévrite, caractérisé en ce qu'il consiste à administrer une composition thérapeutique se présentant sous la forme d'une unité de dosage orale comprenant un support pharmaceutique et l'hydrazide de N-benzène-sulfonyl-B-alanine.

6.- Hydrazide de N-benzène-sulfonyl-B-alanine comme agent immunosuppressif sûr et actif, substantiellement tel que décrit précédemment et illustré aux dessins annexés.