<EMI ID=1.1>
<EMI ID=2.1> protozoaires.
L'invention fournit un nouveau composé de formule
<EMI ID=3.1>
formule dans laquelle
Z est choisi dans le groupe comprenant
<EMI ID=4.1>
<EMI ID=5.1>
<EMI ID=6.1>
et leurs sels non toxiques acceptables sur le plan pharmacologique.
La présente invention fournit également un procédé de préparation d'un composé de formule I qui comprend la réaction d'un composé de formule
<EMI ID=7.1>
formule dans laquelle R est comme il.est défini dans la formule 1 avec (a) un acide organique, un anhydride organique ou un anhydride chloroacétique, ou (b) lorsque Z est
<EMI ID=8.1>
formules dans lesquelles R<3> est l'hydrogène, R4 est différent de l'hydrogène,
<EMI ID=9.1>
de formule II avec un orthoformiate de trialkyle pour donner un composé de formule
<EMI ID=10.1>
formule dans laquelle le groupement alkyle est un groupement alkyle en C1-C3 puis la réaction du composé de formule III avec une amine primaire organique.
De nombreuses recherches ont été effectuées pour développer des agents de lutte contre des bactéries et des protozoaires. Par conséquent, des composés et des procédés de lutte contre Escherichia coli, Pasteurella multocida, Salmonella typhimurium, T. vaginalis, et des organismes semblables ont été le sujet de recherches très étendues.
<EMI ID=11.1>
8 août 1973, décrit des pyrazole-pyrimidinones substitués par le groupement 5-nitro-furyle, des procédés de préparation des composés, et des médicaments les contenant comme composés actifs. On pense que les composés présentent
une activité en tant qu'agents anti-bactériens, en tant qu'agents anthelminthiques, anti-protozoaires, en tant que coccidiostats, agents anti-malariens, trypanic�des, et anti-mycoplasmes.
De même on trouve dans l'art antérieur, le brevet des E.U.A. N[deg.] 3 711 493
VU/
<EMI ID=12.1>
isoxazaline-3-yle et des procédés pour leur préparation. On pense que les composés sont actifs comme agents trichomonocides et comme agents antitrypanosomiase.
En plus, on trouve dans l'art antérieur, le brevet de la R.F.A.
N[deg.] 2 218 717, qui est également identifié par Derwent N[deg.] 74757T, brevet qui décrit des dérivés substitués par le groupement 5-nitrofuryle des aminopyrazolopyrimidines et des procédés pour leur préparation. On pense que les composés présentent une activité coccidiostatique, trypanocidale, anti-bactérienne, anti-mycosique, anti-mycoplasmique, anthelminthique, anti-protozoaire, et anti-malarienne, avec un large spectre et une très faible toxicité. Les composés compris dans ce brevet sont représentés à titre d'exemple par la
<EMI ID=13.1>
Une autre référence de l'art antérieur est le brevet des E.U.A.
N[deg.] 3 772 294 (13 novembre 1973) qui envisage un procédé de préparation de
<EMI ID=14.1>
positions 4,6. On pense que ces composés peuvent être utilisés dans le traitement de la goutte.
Une autre référence de l'art antérieur est le brevet des E.U.A.
N[deg.] 3 755 324 (28 août 1973). qui envisage des composés de la classe de la 3-
<EMI ID=15.1>
qu'ils présentent des propriétés anti-microbiennes et qu'ils sont utilisables pour le traitement des infections de l'appareil urinaire chez les mammifères.
Une autre référence de l'art antérieur est le brevet du Royaume-Uni
N[deg.] 1 353 892, publié le 22 mai 1974, qui envisage des nitroimidazolyl-triazolopyridazines, dont on prétend qu'elles sont actives comme agents anti-microbiens à la fois in vitro et in vivo, particulièrement vis à vis de Trichomonades et Salmonella.
Les composés décrits dans l'art antérieur précédent diffèrent d'une manière significative du point de vue de leur structure des composés de la présente invention.
Les composés de la présente invention sont actifs en tant qu'agents anti-bactériens et agents anti-protozoaires. Les composés sont actifs vis à vis de différents organismes, comprenant Escherichia coli, Pasteurella multocida,
<EMI ID=16.1>
Treponema hyodysenteriae, et Trichomonas vaginalis.
Les composés plus particulièrement préférés comprennent ceux dans lesquels
Z est
<EMI ID=17.1>
<EMI ID=18.1>
<EMI ID=19.1>
<EMI ID=20.1>
R4 est l'hydrogène, un groupement alkyle en CI-C4 ;
<EMI ID=21.1>
<EMI ID=22.1>
R est NH ou l'oxygène ;
n est égal à 1, 2, 3, ou 4 ;
et leurs sels non toxiques, acceptables sur le plan pharmaceutique.
<EMI ID=23.1>
radical hydrocarboné saturé en chaîne droite ou ramifiée tel que le groupement méthyle, éthyle, n-propyle, ou isopropyle.
<EMI ID=24.1>
radical hydrocarboné saturé à chaîne droite ou ramifiée tel que le groupement méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, butyle secondaire, isobutyle, ou t-butyle.
Un groupement hydroxyalkyle en C1-C3 est le groupement hydroxymêthyle, hydroxyéthyle ou hydroxypropyle.
Un groupement haloalkyle en C1-C3 est un groupement halométhyle, haloéthyle ou halopropyle.
Halo représente le brome, le chlore, le fluor , ou l'iode.
On démontre l'activité des composés de formule 1 in vitro vis à vis
du groupe suivant de micro-organismes, dont de nombreux sont des microorganismes pathogènes importants des animaux :
<EMI ID=25.1>
<EMI ID=26.1>
On synthétise facilement les composés de formule 1 en utilisant le
<EMI ID=27.1>
Par conséquent, on réalise la synthèse de certains composés, par exemple, ceux dans lesquels Z est
<EMI ID=28.1>
formule dans laquelle R3 et R4 sont l'hydrogène, et R5 est
l'oxygène, en chauffant, c'est-à-dire en mettant sous reflux, un mélange de
<EMI ID=29.1>
d'un acide organique approprié, tel que de l'acide formique, pendant une période de temps suffisante pour achever la réaction. Cette période de temps varie d'environ 2 heures à environ 24 heures. Après avoir mis sous reflux pendant la période de temps nécessaire, on refroidit le mélange réactionnel produit et on élimine sous vide le solvant pour obtenir un résidu. On recristallise le résidu dans un solvant approprié pour obtenir le produit souhaité. Des solvants appropriés pour la recristallisation comprennent le diméthylformamide, l'éthanol absolu commercial, et des produits semblables.
Ce procédé général est plus particulièrement représenté par l'exemple suivant :
on chauffe sous reflux un mélange de 5-amino-1-méthyl-3-(1-méthyl-5-
<EMI ID=30.1>
de l'acide formique à 90 %, et on maintient le reflux pendant environ 2 heures. On refroidit le mélange réactionnel produit, et on élimine le solvant sous vide, pour laisser un résidu. On recristallise le résidu dans un solvant approprié, dans cet exemple, le diméthylformamide, pour obtenir un produit présentant un point de fusion d'environ 291-292[deg.]C, et identifié par analyse élémentaire et spectre RMN comme étant la 1-méthyl-3-(1-méthyl-5-nitroimidazol-
<EMI ID=31.1>
On réalise la synthèse des autres composés, par exemple, lorsque Z dans la formule aénériaue est
<EMI ID=32.1>
<EMI ID=33.1>
R' est l'oxygène, en chauffant et en mettant sous reflux un mélange du 5-amino-1-méthyl-3-(1-méthyl-5-nitro-2-imidazolyl)pyrazole-4-carbonitrile intermédiaire et d'un anhydride d'acide organique approprié, tel que
<EMI ID=34.1>
4-carbonitrile, c'est-à-dire qu'on le chauffe à la température du reflux
du mélange réactionnel; pendant environ 24 heures. On laisse refroidir le mélange rëactionnel produit à température-ambiante et on élimine par filtration les cristaux qui se forment. On recristallise les cristaux dans
un solvant approprié, dans ce cas, de l'éthanol absolu commercial, pour obtenir un produit présentant un point de fusion d'environ 243-245[deg.]C, et que l'on
<EMI ID=35.1>
On obtient le composé dans lequel Z dans la formule générique est
<EMI ID=36.1>
0
<EMI ID=37.1>
près semblableà celui qui vient d'être décrit. Dans cette préparation, on
met sout reflux (on fait bouillir) du 5-amino-1-méthyl-3-(!-méthyl-5-nitro-2imidazolyl)pyrazole-4-carbonitrile avec de l'anhydride chloroacétique en présence de quelques gouttes d'acide sulfurique concentré dans un solvant approprié, tel que le benzène, pendant environ 24 heures. On refroidit ensuite le mélange réactionnel produit et on le filtre. On recristallise le solide brut ainsi obtenu dans un solvant approprié tel que de l'alcool absolu commercial, pour obtenir un produit présentant un point de fusion d'environ 217-218[deg.]C
(Décomposition).On identifie le produit par analyse élémentaire et spectre RMN comme étant l'ester chloroacétique de la 6-(chlorométhyl)-6,7-dihydro-6-
<EMI ID=38.1>
pyrimidin-4-(5H)-one. Dans ce cas, l'acide sulfurique agit comme catalyseur de réaction entre l'anhydride d'acide et l'aminopyrazole carbonitrile pour obtenir l'ester.
On synthétise également d'autres composés, en particulier ceux dans lesquels Z dans la formule générique est
<EMI ID=39.1>
<EMI ID=40.1> diméthylpropylènediamine asymétrique, la diéthyléthylènediamine asymétrique,
la 4-pyridylméthylamine, la N-(2-aminoéthyl)morpholine et des amines semblables. Le temps de réaction varie d'environ 10'minutes à environ 24 heures, en fonction de la nature et de l'identité des réactifs. La température de réaction varie
de la température ambiante à la température de reflux, c'est-à-dire, la
<EMI ID=41.1>
on refroidit et on filtre le mélange de produits de réaction, et on recristallise le solide obtenu dans un solvant approprié tel que le diméthylformamide. Cette synthèse est illustrée comme suit :
On agite à température ambiante pendant environ 10 minutes un mélange
<EMI ID=42.1>
formimidate de méthyle, de n-propylamine, et d'éthanol. On filtre le mélange de produits de réaction et on recristallise le produit que l'on obtient dans un solvant approprié tel que le diméthylformamide. Le produit obtenu présente un point de fusion d'environ 239-240[deg.]C, et on l'identifie par analyse élémen-
<EMI ID=43.1>
On réalise la synthèse des composés dans lesquels Z dans la formule
<EMI ID=44.1>
R6 étant un groupement amino ou hydrazino, en général en faisant réagir le
<EMI ID=45.1>
de l'hydroxyde d'ammonium concentré ou de l'hydrazine, dans un solvant tel que l'éthanol, à la température de reflux du mélange, pendant environ 1 heure. On filtre ensuite le mélange de produits de réaction et on purifie le produit solide par recristallisation. Cette préparation est illustrée comme suit, lorsque R6 dans le produit est le groupement amino.
On chauffe à température de reflux sous un condenseur à reflux pendant
<EMI ID=46.1> <EMI ID=47.1>
mélange de produits de réaction et on recristallise le produit solide qui est obtenu dans un solvant approprié, dans ce cas, le diméthylformamide. Le produit obtenu présente un point de fusion d'environ 317-318[deg.]C (décomposition), et on l'identifie par analyse élémentaire et ses spectres infra-rouges et
<EMI ID=48.1>
1H-[3,4-d]pyrimidine et d'anhydride acétique pendant environ 22 heures. On refroidit et on filtre le mélange réactionnel, On recristallise le solide ainsi obtenu dans un solvant approprié tel que le diméthylformamide pour obtenir un produit cristallin présentant un point de fusion d'environ 284-286[deg.]C, produit que l'on identifie par analyse élémentaire et spectre RMN comme étant le N-
<EMI ID=49.1>
acétamide.
<EMI ID=50.1>
<EMI ID=51.1>
<EMI ID=52.1>
et de carbonate de sodium, dans un solvant constitué de volumes égaux d'éthanol et d'eau, sous reflux, et on poursuit le reflux du mélange pendant environ
1,5 heure. Ensuite, on refroidit et on filtre le mélange de produits de réaction. On purifie le produit solide ainsi obtenu en le dissolvant dans l'eau chaude, puis en refroidissant et en acidifiant, en utilisant un acide fort tel que l'acide sulfurique concentré, l'acide chlorhydrique concentré, l'acide bromhydrique concentré, ou l'acide phosphorique concentré. L'acidification provoque la précipitation d'un solide bleu-gris. On recueille par filtration le solide bleu-gris et on le recristallise dans le diméthylformamide pour obtenir un produit présentant un point de fusion d'environ 240-241[deg.]C. On identifie
<EMI ID=53.1>
<EMI ID=54.1>
On prépare le composé dans lequel Z dans la formule générique est
<EMI ID=55.1>
<EMI ID=56.1> <EMI ID=57.1>
<EMI ID=58.1>
<EMI ID=59.1>
l'aminoacétaldéhyde, et d'éthanol absolu de qualité commerciale à température ambiante pendant environ 2 heures. Au bout de cette période, on filtre le mélange de produits de réaction. On recristallise le produit solide obtenu
dans le diméthylformamide pour obtenir un produit cristallin présentant un point de fusion d'environ 160-164[deg.]C. On identifie le produit par analyse élémentaire et son spectre RMN comme étant le diéthylacétal du 4-imino-1-méthyl-
<EMI ID=60.1>
acétaldéhyde.
<EMI ID=61.1>
des procédés bien connus des techniciens. Par exemple, on réalise en général la préparation du chlorhydrate en mettant en suspension ou en dissolvant la pyrazolopyrimidine substituée dans de l'éther
<EMI ID=62.1>
bain d'eau et de glace, et en faisant barboter de l'acide chlorhydrique dans le mélange pendant environ 15 minutes, tout en maintenant la température du mélange à environ 0[deg.]C. Au bout de ce temps, on bouche le récipient contenant le mélange du produit de réaction et on le maintient à 0[deg.]C pendant environ 1 heure. On filtre ensuite le mélange pour isoler le produit solide, qui est pur du point de vue analytique, et est identifié par son point de fusion, son
<EMI ID=63.1>
On réalise en général la préparation des sels d'addition de l'acide nitrique, de l'acide sulfurique ou de l'acide phosphorique des composés en mettant en suspension ou en dissolvant la pyrazolopyrimidine substituée dans un solvant approprié, tel que le méthanol, et en ajoutant goutte à goutte au mélange sous agitation l'acide sulfurique, nitrique ou phosphorique (acide phosphorique à
85%). On agite ensuite le mélange à température ambiante pendant une à trois heures de plus. On filtre ensuite le mélange, et on lave au méthanol le solide qui est recueilli. On identifie le produit
<EMI ID=64.1>
On peut préparer d'autres sels d'addition acide appropriés en utilisant des acides tels que l'acide bromhydrique.
<EMI ID=65.1>
méthyl-5-nitro-2-imidazolyl)pyrazole-4-carbonitrile, utilisé dans la synthèse des composés, est décrite dans la demande de brevet
On synthétise facilement cet intermédiaire, le 5-amino-
<EMI ID=66.1>
en partant du 2-méthyl-5-nitroimidazole commercialement disponible. On fait réagir le 2-méthyl-5-nitroimidazole avec un agent d'alkylation approprié, tel que le sulfate de diméthyle, dans un solvant approprié, par exemple le benzène, pour obtenir le composé identifié comme étant le 1,2-diméthyl-5-nitroimidazole. On fait réagir à son tour ce dernier composé avec le benzaldéhyde en présence d'une base, par exemple l'éthylate de sodium dans l'éthanol -absolu, pour obtenir le 1-méthyl-5-nitro-2-styrylimidazole.
L'étape suivante de la synthèse de l'intermédiaire est <EMI ID=67.1>
dazole. On peut réaliser cette oxydation à l'aide d'un des nombreux oxydants appropriés pour l'oxydation de ce type de liaison en un groupement aldéhyde.(formyle).
Selon l'un des procédés, on peut réaliser l'oxydation
en traitant le 1-méthyl-5-nitro-2-styrylimidazole, mis en suspension dans un solvant approprié, par l'ozone, au voisinage de la température ambiante. Des solvants appropriés comprennent le méthanol, un mélange de méthanol et d'eau, ou un mélange de méthanol, de dichlorure de méthylène et d'eau, et des mélanges semblables.
Un autre procédé d'oxydation du groupement styryle est décrit par Henry et coll., dans le brevet des E.U.A. N[deg.] 3.472.864
(14 octobre 1969). Ces auteurs décrivent l'utilisation d'un système d'oxydation comprenant un periodate de métal alcalin et du tétraoxyde d'osmium dans un milieu solvant aqueux approprié, de préférence l'eau et le 1,2-diméthoxyéthane, à une température comprise entre environ 20 et 35[deg.]C, pendant une période d'environ 10 à 20 heures.
L'étape suivante dans la préparation du composé intermédiaire comprend la réaction du 1-méthyl-5-nitroimidazole-2-carboxaldéhyde, préparé comme décrit ci-dessus, avec une hydrazine substituée de formule H2N-NHR, formule dans laquelle R représente
<EMI ID=68.1>
<EMI ID=69.1>
chloroforme, à la température de reflux, pour obtenir une 1-méthyl5-nitroimidazole-2-carboxaldéhyde-alkyl ou (alkyl substitué) hydrazone. Des hydrazines substituées appropriées pour l'utilisation dans cette réaction comprennent la méthylhydrazine, l'éthylhydrazine, la n-propylhydrazine, l'isopropylhydrazine, le 2-hydroxyéthylhydrazine, et des hydrazines semblables. Les conditions de réaction sont les mêmes pour toutes les hydrazines. Par conséquent, par
<EMI ID=70.1>
thyl-5-nitroimidazole-2-carboxaldéhyde dans le chloroforme comme solvant, on obtient la 1-méthyl-5-nitroimidazole-2-carboxaldéhyde méthyl hydrazone.
L'hydrazone ainsi formée est à son tour mise à réagir avec la N-bromosuccinimide au voisinage de la température ambiante dans un solvant approprié, tel que le chloroforme, pour donner l'alkyl ou (alkyl substitué)hydrazone du bromure de 1-méthyl-5-
<EMI ID=71.1> <EMI ID=72.1>
hydrazone avec la N-bromosuccinimide à température ambiante dans le chloroforme comme solvant, on obtient la méthylhydrazone du bromure de 1-méthyl-5-nitroimidazole-2-carbonyle.
Cette hydrazone bromo-substituée est instable et présente des propriétés vésicantes et lacrymogènes. Elle est donc par conséquent utilisée immédiatement sans isolement ou purification excessive. On met en suspension l'hydrazone bromo-substituée dans un solvant approprié, par exemple le méthanol absolu, et on y ajoute du malononitrile. On ajoute au mélange ainsi formé de la triéthylamine dissoute dans le méthanol absolu, tout en maintenant la température du mélange réactionnel à environ 10-20[deg.]C par tout moyen de refroidissement approprié. Cette réaction est légèrement exothermique et il est nécessaire de refroidir pour maintenir la température souhaitée. Au fur et à mesure que la'réaction se produit, la suspension jaune initiale se dissout et est remplacée par une autre suspension pendant une période d'environ une à environ deux heures.
Le produit solide dans cette deuxième suspension est le produit souhaité, et on l'élimine par filtration, on le lave au méthanol et à l'eau puis on le sèche. Par exemple, lorsque l'on uti-
,du
<EMI ID=73.1>
2-imidazolyl)pyrazole-4-carbonitrile.
On prépare les 1-imidazolylpyrazoles substitués par un
<EMI ID=74.1>
5-nitro-2-imidazolyl)-pyrazole-4-carbonitrile, par réaction du composé hydroxyalkylé correspondant avec un agent d'halogénation tel que le trichlorure de phosphore, le tribromure de phosphore, le trifluorure de phosphore, le chlorure de thionyle et des agents sem-
<EMI ID=75.1>
éthyl)-3-(1-méthyl-5-nitro-2-imidazolyl)pyrazole-4-carbonitrile avec le chlorure de thionyle dans un solvant inerte tel que le benzène, en présence d'une petite quantité de diméthylformamide pour
<EMI ID=76.1>
lyl)pyrazole-4-carbonitrile.
On obtient les autres intermédiaires, les formimidates,
<EMI ID=77.1> <EMI ID=78.1>
avec des ortho esters tels que l'orthoformiate de triméthyle, l'orthoformiate de triéthyle, l'orthoformiate de tri(n-butyle),
et des produits semblables, en présence d'une petite quantité d'anhydride acétique. D'autres ortho esters que l'on peut faire réagir avec l'un des 5-amino-pyrazole-4-carbonitriles comprennent l'orthoformiate d'allyle, l'orthoformiate de tri(2-chloroéthyle), l'orthoformiate de triisobutyle, l'orthoformiate de tri(2-éthylhexyle), et des produits semblables. Par conséquent, par exemple,
<EMI ID=79.1>
2-imidazolyl)pyrazole-4-carbonitrile, l'orthoformiate de triméthyle, et une petite quantité d'anhydride acétique, le produit obte-
<EMI ID=80.1>
Les préparations suivantes illustrent la synthèse des composés intermédiaires.
Préparation 1
<EMI ID=81.1>
bonitrile
A une solution de 5g (0,0394 mole) de 2-méthyl-5-nitroimidazole dans 100 ml de benzène à reflux, on ajoute, goutte à goutte, une solution de 5 g (0,0394 mole) de sulfate de diméthyle dans
10 ml de benzène. On maintient le mélange réactionnel sous reflux pendant une nuit. Ensuite on le refroidit et on y ajoute goutte à goutte une solution de 6 g de carbonate de potassium dans 6 ml d'eau. On agite le mélange pendant une heure puis on filtre. On sépare les couches organique et aqueuse du filtrat et on extrait
la couche aqueuse avec 2 x 50 ml de benzène. On combine l'extrait au benzène avec la couche organique de départ et on sèche sur sulfate de magnésium anhydre. On élimine par filtration l'agent de dessiccation. On concentre le filtrat sous vide pour obtenir un produit présentant un point de fusion d'environ 135 à 138[deg.]C. On l'identifie comme étant le 1,2-diméthyl-5-nitroimidazole. Poids :
4 g.
Dans un ballon à fond rond d'une capacité de 10 litres muni d'un agitateur mécanique, d'un condenseur à reflux et d'un dispositif d'introduction, on place 705 g (5,0 moles) de 1,2-diméthyl-5-nitroimidazole et 3,75 litres d'éthanol absolu. On met en solution par agitation. On ajoute rapidement à la solution ainsi préparée 685 g (6,5 moles) de benzaldéhyde. On ajoute rapidement à <EMI ID=82.1>
tion étant réalisée à.température ambiante. On agite le mélange réactionnel et on le chauffe à environ 70[deg.]C pendant une période d'environ 90 minutes. A la température de 40[deg.]C, la couleur devient brun foncé . Au bout de 90 minutes, on refroidit le mélange de produit de réaction pendant 90 minutes, en immergeant le ballon de réaction dans un bain d'eau glacée. Il se forme un précipité. On filtre le mélange brun. On lave le produit cristallin quatre fois avec un mélange de glace, d'eau-, et d'éthanol, dans un rapport 1:1:1 en utilisant un litre de mélange. On sèche le produit cristallin à l'air à 100[deg.]C. On l'identifie comme étant le 1-méthyl-5nitro-2-styrylimidazole. Il présente un point de fusion d'environ
191-192[deg.]C. Poids : 582 g.
Dans un ballon à fond rond à trois tubulures d'une capacité de 5 litres muni d'un agitateur et d'un tube d'introduction de gaz, on prépare une solution de 454 g (2,0 moles) de 1-méthyl5-nitro-2-styrylimidazole dans un mélange de 2,5 litres de méthanol, de 1,5 litre de dichlorométhane, et de 200 ml d'eau. On maintient le ballon à la température ambiante à l'aide d'un bain d'eau. On fait passer à travers la solution un mélange d'ozone et d'oxy-
<EMI ID=83.1>
les la formation de l'ozonide par chromatographie gaz liquide
(CGL) et chromatographie en couche mince (CCM). Le temps d'ozonolyse total est d'environ 25 heures, temps au bout duquel la solution est devenue d'une couleur jaune pâle.
Dans un ballon à fond rond d'une capacité de 10 litres on agite une solution de 594 g d'iodure de sodium.dans 2 litres d'eau et 400 ml d'acide acétique, tandis que l'on verse la solution d'ozonolyse assez rapidement, en maintenant la température en dessous de 40[deg.]C au moyen d'un bain d'eau et de glace. Après avoir agité le mélange pendant environ 10 minutes, on ajoute une solution de métabisulfite de sodium (192 g dans 2 litres d'eau) pour éliminer l'iode libre et obtenir dans la solution résultante une coloration jaune. On agite le mélange pendant environ une heure de plus. On filtre ensuite le mélange et on jette les cristaux jaunes. On concentre le filtrat sous vide à environ un tiers de son volume
et on le neutralise à pH 6,5 par addition de bicarbonate de sodium solide sous agitation. Ceci nécessite environ 300 g de bicarbonate de sodium. On extrait le mélange avec 4 x 700 ml chaque fois d'a-
<EMI ID=84.1> <EMI ID=85.1> ne par filtration l'agent de dessiccation et on concentre le filtrat sous vide pour obtenir un solide collant. On reprend ce solide dans environ 2,5 litres de n-hexane et on place le mélange sous reflux pendant environ 15 minutes. On élimine par filtration le solide brun résiduel. Par refroidissement, le filtrat dépose des cristaux jaunes que l'on élimine par filtration et que l'on sèche sous vide
à 40[deg.]C. On utilise d'une manière répétée le filtrat pour chauffer
à reflux le solide brun résiduel précédent de la même manière que précédemment jusqu'à ce que l'on ait réalisé quatre extractions semblables. On obtient une quantité totale d'environ 146 g de produit présentant un point de fusion d'environ 81-83[deg.]C, et on l'iden-
<EMI ID=86.1>
On fait bouillir sous reflux pendant environ 2 heures un mélange de 23,5 g (0,152 mole) de 1-méthyl-5-nitroimidazole-2-carboxaldéhyde et de 7,0 g (0,152 mole) de méthyl hydrazine dans 300
ml de chloroforme. On évapore à siccité le mélange de produits de réaction pour obtenir un solide jaune brillant pesant environ
25,5 g. Un petit échantillon cristallisé dans l'éthanol présente
un point de fusion d'environ 175[deg.]C. On l'identifie comme étant la 1-méthyl-5-nitroimidazole-2-carboxaldéhyde méthyl hydrazone.
A une solution agitée de 23,5 g (0,128 mole) de 1-méthyl5-nitroimidazole-2-carboxaldéhyde méthyl hydrazone dans 200 ml de chloroforme on ajoute lentement, à température ambiante, 22,9 g
(0,128 mole) de N-bromosuccinimide. La réaction est légèrement exothermique et on maintient à la température interne en dessous
de 30[deg.]C à l'aide d'un refroidissement externe approprié. Après
avoir agité pendant environ deux heures, on élimine sous vide le chloroforme qui a servi de solvant et on extrait le résidu avec
5 x 100 ml de tétrachlorure de carbone chaud. On jette le résidu insoluble et on concentre les extraits combinés de tétrachlorure
i de carbone pour obtenir un solide jaune brillant, identifié com- :'
<EMI ID=87.1>
2-carbonyle. Une chromatographie sur couche mince montre que le produit est presque pur. Rendement 31,0 g.
Ce composé est instable et présente des propriétés vésicantes et lacrymogènes. On l'utilise immédiatement sans purification ultérieure dans l'étape suivante de préparation.
On met en suspension dans 250 ml de méthanol absolu la bromo-hydrazone ainsi préparée, 31,0 g (0,118 mole), et on ajoute ' <EMI ID=88.1> à goutte au mélange une solution de 12 g (0,118 mole) de triéthylamine dans 25 ml de méthanol tout en maintenant la température du
<EMI ID=89.1>
exothermique.
La suspension jaune initiale se dissout et elle est remplacée par une autre suspension pendant une période d'environ 1 à
2 heures. Au bout de ce temps, on filtre le mélange de produit de réaction et on récupère le produit solide. On lave le solide au méthanol, puis à l'eau et on le sèche. Ce produit solide présente un point de fusion supérieur à 300[deg.]C et pèse environ 23 g. On l'iden-
<EMI ID=90.1>
zolyl)pyrazole-4-carbonitrile. Le produit tel qu'il est isolé est analytiquement pur.
Préparation 2
<EMI ID=91.1>
zole-4-carbonitrile
On fait bouillir sous reflux pendant environ 2 heures
<EMI ID=92.1>
carboxaldêhyde et de 7,6 g (0,1 mole) de 2-hydroxyëthyl hydrazine dans 300 ml de chloroforme. On évapore à siccité sous vide le mélange de produit de réaction pour obtenir un produit pesant 21,3 g et présentant un point de fusion d'environ 122-129[deg.]C. On identifie
<EMI ID=93.1>
de 2-hydroxyéthyl hydrazone. Un petit échantillon recristallisé dans l'eau présente un point de fusion d'environ 136-140[deg.]C.
A une solution agitée de 21,3 g (0,1 mole) de 1-méthyl5-nitro-2-imidazolecarboxaldéhyde 2-hydroxyéthyl hydrazone (préparée ci-dessus) dans 200 ml de chloroforme, on ajoute par petites parties, tout en maintenant la température en dessous de 30[deg.]C,
17,8 g (0,1 mole) de N-bromosuccinimide. On agite le mélange réactionnel pendant environ 3 heures à environ 25[deg.]C. On concentre le mélange de produits de réaction sous vide et on extrait le résidu huit fois avec 500 ml chaque fois de tétrachlorure de carbone chaud. On concentre sous vide les extraits combinés au tétrachlorure de carbone pour obtenir un solide jaune brillant, identifié comme
<EMI ID=94.1>
imidazole-2-caroonyle. Le produit présente un point de fusion d'environ
85-94[deg.]C, et pèse 20,7 g.
On met en suspension la bromo-hydrazone ainsi préparée, <EMI ID=95.1> <EMI ID=96.1>
ce mélange une solution de 7,3 g de triéthylamine dans 15 ml de méthanol absolu, tout en maintenant la température de réaction à
<EMI ID=97.1>
Il se forme un précipité dense que l'on élimine par filtration au bout d'environ 1 heure et que l'on lave.avec une petite quantité d'éthanol absolu commercial. Le produit présente
<EMI ID=98.1>
le.
Préparation 3
<EMI ID=99.1>
zole-4-carbonitrile
On chauffe et met sous reflux pendant environ 24 heures
<EMI ID=100.1>
tro-2-imidazolyl)pyrazole-4-carbonitrile (préparé ci-dessus), de 25 ml de chlorure de thionyle, de deux gouttes de diméthylformamide, et de 5 ml de benzène. On concentre sous vide le mélange de produits de réaction pour obtenir comme résidu un produit gommeux rouge. On triture ce résidu avec de l'éthanol absolu commercial pour obtenir un solide jaune pesant environ 0,7 g et présentant un point de fusion d'environ 226-228[deg.]C. On l'identifie par analyse élémentaire et spectre RMN comme le 5-amino-l-(2-chloro-
<EMI ID=101.1>
bonitrile
On met sous reflux pendant environ 24 heures un mélange de 5,0 g (0,0322 mole) de 1-méthyl-5-nitroimidazole-2-carboxaldéhyde, de 3,4 g (0,0322 mole) d'oxalate d'ëthyl hydrazine et de 3,3 g (0,322 mole) de triéthylamine dans 100 ml de chloroforme. On refroidit le mélange de produits de réaction, on le met en suspension avec environ 25 ml d'eau et on filtre le mélange pour obtenir un solide jaune. Une chromatographie en couche mince d'un échantillon du solide jaune en utilisant un mélange acétate d'éthyle-benzène dans un rapport 1:1 montre une tache jaune principale plus deux impuretés à l'état de tracess'éluantplus vite. On utilise sans purification ultérieure le produit, qui est la 1-méthyl- <EMI ID=102.1>
5-nitroimidazole-2-carboxaldéhyde éthyl hydrazone.
A une solution agitée de 6,8 g (0,0322 mole) de 1-méthyl5-nitroimidazole-2-carboxaldéhyde éthyl hydrazone et de 100 ml de chloroforme, on ajoute en discontinu 5,8 g (0,0322 mole) de N-bromosuccinimide, tout en maintenant la température du mélange réactionnel en dessous de 30[deg.]C. Après avoir agité à température ambiante pendant environ 3 heures, on concentre sous vide le mélange de produit de réaction. On extrait le résidu qui est obtenu 3 fois avec 250 ml chaque fois de tétrachlorure de carbone chaud. On concentre sous vide les extraits combinés au tétrachlorure de carbone pour obtenir un solide jaune qui pèse 6,3 g. On utilise sans purification ultérieure dans l'étape suivante de préparation le compo-
<EMI ID=103.1>
2-carbonyle.
On met en suspension la bromo-hydrazone ainsi préparée, 6,3 g (0,0228 mole) dans 75 ml de méthanol absolu, et on ajoute en discontinu 1,5 g (0,0228 mole) de malononitrile. On maintient la température à environ 10-20[deg.]C à l'aide d'un bain d'eau et de glace. Après la fin de l'addition, on agite le mélange de produits de réaction pendant environ 1 heure à température ambiante. On filtre le mélange de produits de réaction. On recristallise le produit solide que l'on récupère dans le diméthylformamide pour obtenir un solide jaune pesant 2,3 g, qui présente un point de fusion d'environ 284-
285[deg.]C, et que l'on identifie par analyse élémentaire et spectre
<EMI ID=104.1>
lyl)pyrazole-4-carbonitrile.
Préparation 5
<EMI ID=105.1>
formimidate de méthyle
On met sous reflux pendant environ 24 heures un mélange
<EMI ID=106.1>
le-4-carbonitrile, de 12 ml d'orthoformiate de triméthyle et de
1 ml d'anhydride acétique, et puis on laisse refroidir. On filtre le mélange de produitsde réaction. On recristallise le produit solide qui a été recueilli par filtration dans l'éthanol absolu commercial pour obtenir un produit présentant un point de fusion d'environ 184-185[deg.]C. On identifie le produit par analyse élémentaire
<EMI ID=107.1>
<EMI ID=108.1> <EMI ID=109.1>
cédemment dans la préparation 5, et en utilisant des produits de départ appropriés, on prépare des intermédiaires formimidates homologues supplémentaires suivants :
<EMI ID=110.1>
d'environ 120-121[deg.]C. Le produit est identifié par analyse élémentaire et spectre RMN.
<EMI ID=111.1>
viron 131-133[deg.]C. Le produit est identifié par analyse élémentaire
<EMI ID=112.1>
<EMI ID=113.1>
fusion d'environ 169-171[deg.]C. Le produit est identifié par analyse élémentaire .
<EMI ID=114.1>
d'environ 134-136[deg.]C. Le produit est identifié par analyse élémentaire .
<EMI ID=115.1>
sion d'environ 93-94[deg.]C. Le produit est identifié par analyse élémentaire .
Les exemples suivants illustrent la synthèse des composés.
Exemple 1
<EMI ID=116.1>
midine-4(5H)-one
On met sous reflux pendant environ 2 heures un mélange
<EMI ID=117.1>
razole-4-carbonitrile et de 25 ml d'acide fornique à 90%. On refroidit le mélange de produits de réaction et on élimine le solvant sous vide. On recristallise le résidu qui pèse 1,2 g dans le diméthylformamide pour obtenir un produit ayant un point de fusion d'environ 291-292[deg.]C, et que l'on identifie par analyse élémentai-
<EMI ID=118.1> <EMI ID=119.1>
razole-4-carbonitrile et de 25 ml d'anhydride propionique puis on refroidit. La solution foncée laisse déposer lentement des cristaux. On recristallise les cristaux dans de l'éthanol absolu commercial pour obtenir un produit présentant un point de fusion d'environ
243-245[deg.]C, et que l'on identifie par analyse élémentaire comme
<EMI ID=120.1>
Exemple 3
Ester chloroacétique de la 6-(chloromêthyl)-6,7-dihydrc-
<EMI ID=121.1>
razole-4-carbonitrile, de 3,5 g d'anhydride chloroacétique, de 10 gouttes d'acide sulfurique concentré, et de 20 ml de benzène. On refroidit le mélange de produits de réaction et on le filtre pour obtenir un solide brut. On recristallise ce solide dans de l'éthanol absolu commercial pour obtenir des cristaux blancs présentant un point de fusion d'environ 217-218[deg.]C, avec décomposition, et que
<EMI ID=122.1>
<EMI ID=123.1>
pyrimidine-4(5H)-one.
Exemple 4
<EMI ID=124.1>
10 ml d'hydroxyde d'ammonium concentré. On refroidit le mélange de produit de réaction et on le filtre pour obtenir un solide jaune. On recristallise le solide dans le diméthylformamide pour obtenir un produit présentant un point de fusion d'environ d'environ 317-
318[deg.]C, avec décomposition et que l'on identifie par spectre infrarouge et RMN, de même que par analyses élémentaires, comme étant
<EMI ID=125.1>
4a. On prépare le chlorhydrate de ce composé comme suit : <EMI ID=126.1>
70 ml d'éther sec et on fait barboter de l'acide chlorhydrique à travers le mélange pendant environ 15 minutes tout en refroidissant le mélange dans un bain d'eau et de glace à environ 0[deg.]C, temps pendant lequel la suspension jaune change de couleur et devient rose. On bouche le mélange de produit de réaction et on le laisse pendant une heure à 0[deg.]C. On filtre le mélange pour obtenir des cristaux rose- pâle présentant un point de fusion d'environ 268-
269[deg.]C décomposition, et pesant environ 1,2 g. On identifie le produit par analyses élémentaires et spectre RMN comme étant le chlo-
<EMI ID=127.1>
lH-pyrazolo [3,4-d] pyrimidine.
4b. On prépare le sulfate de ce composé comme suit :
<EMI ID=128.1>
de méthanol, on ajoute goutte à goutte 0,72 g d'acide sulfurique concentré. On agite le mélange à température ambiante pendant environ 2 à 3 heures. On filtre le mélange de produit de réaction. Le solide obtenu présente un point de fusion d'environ 222-229[deg.]C, et on l'identifie par analyse élémentaire et spectre RMN et IR
<EMI ID=129.1>
de n-propylamine, et de 10 ml d'éthanol. On filtre le mélange du produit de réaction et on recristallise le solide que l'on récupère dans le diméthylformamide pour obtenir un produit présentant un point de fusion d'environ 239-140[deg.]C. On identifie le produit par spectre RMN et analyse élémentaire comme étant la 4,5-dihy-
<EMI ID=130.1>
5a. On prépare le chlorhydrate du composé précédent de la manière suivante :
On prépare une suspension de 0,45 g de 4,5-dihydro-4-
<EMI ID=131.1> <EMI ID=132.1>
<EMI ID=133.1>
<EMI ID=134.1>
15 minutes de l'acide chlorhydrique. On bouche ensuite le flacon
<EMI ID=135.1>
mélange pour obtenir 0,4 g de solide présentant un point de fusion d'environ 230-231[deg.]C. On identifie le solide par analysé élémentaire comme étant le chlorhydrate de la 4,5-dihydro-4-imino-1-méthyl-
<EMI ID=136.1>
midine.
On prépare d'autres sels d'addition acide du composé de l'Exemple 5 en suivant le procédé général de l'Exemple 4b, et en utilisant les acides appropriés.
<EMI ID=137.1>
présentant un point de fusion d'environ 209-212[deg.]C. Le produit est
<EMI ID=138.1>
5c. Monosulfate de la 4,5-dihydro-4-imino-1-méthyl-3-
<EMI ID=139.1>
dine, présentant un point de fusion d'environ 255-257[deg.]C. Le produit est identifié par analyse élémentaire .
Exemple 6
<EMI ID=140.1>
On met sous reflux pendant environ 1,5 heure un mélange
<EMI ID=141.1>
de carbonate de sodium, de 20 ml d'éthanol, et de 20 ml d'eau. On refroidit le mélange du produit de réaction et on le filtre pour obtenir un solide brut.- On dissout le produit dans de l'eau chaude, on refroidit la solution, et on l'acidifie par de l'acide sulfurique concentré pour obtenir un précipité bleu-gris. On élimine par filtration ce précipité et on le recristallise dans le diméthylformamide pour obtenir un produit présentant un point de fusion d'environ 240-241[deg.]C. On identifie le produit par analyse élémentaire
<EMI ID=142.1>
En suivant le même procédé général que celui décrit précédemment dans l'Exemple 6 et en utilisant des produits de départ appropriés, on prépare le composé supplémentaire suivant :
<EMI ID=143.1> <EMI ID=144.1> d'environ 207-208[deg.]C (décomposition). Le produit est identifié par spectre RMN et analyse élémentaire .
Exemple 7
<EMI ID=145.1>
aqueuse à 70%, et de 20 ml d'éthanol. On refroidit le mélange de produit de réaction et on le filtre pour obtenir un solide vert pâle.
On recristallise le solide dans la pyridine pour obtenir un produit présentant un point de fusion d'environ 279-281[deg.]C. On identifie le produit par spectre infrarouge comme étant la 5-
<EMI ID=146.1>
éthylènediamine. asymétrique et de 30 ml d'éthanol. On filtre le mélange de produit de réaction et on recristallise le solide que l'on récupère dans le diméthylformamide pour obtenir un produit présentant un point de fusion d'environ 192-194[deg.]C. On identifie le produit par analyse élémentaire et spectre RMN comme étant la
<EMI ID=147.1>
En suivant le procédé général de l'Exemple 8, et en utilisant des produits de départ appropriés, on prépare de nouveaux composés supplémentaires, qui sont représentés dans la liste suivante :
<EMI ID=148.1>
ne, présentant un point de fusion d'environ 146-148[deg.]C. On identifie le produit par analyse élémentaire et spectre RMN.
<EMI ID=149.1> <EMI ID=150.1>
point de fusion d'environ 272-274[deg.]C. On identifie le produit par analyse élémentaire .
<EMI ID=151.1>
présentant un point de fusion d'environ 110-114[deg.]C. On identifie le produit par analyse élémentaire .
<EMI ID=152.1>
sentant un point de fusion d'environ 256-258[deg.]C. On identifie le produit par analysé élémentaire et spectre RMN.
<EMI ID=153.1>
sentant un point de fusion d'environ 248-249[deg.]C décomposition. On identifie le produit par analyse élémentaire et spectre RMN et IR.
<EMI ID=154.1>
sentant un point de fusion d'environ 231-233[deg.]C On identifie le produit par spectre RMN et IR et par analyse élémentaire .
En utilisant la base (8) préparée ci-dessus, on prépare le sel d'addition acide suivant, identifié comme étant 8g :
8g. On prépare une suspension de 0,6 g de 5-�2-(dimé-
<EMI ID=155.1>
anhydre, on la refroidit à 0[deg.]C dans un bain d'eau et de glace, et on fait barboter à travers la suspension agitée de l'acide chlorhydrique pendant environ 15 minutes. Au bout de ce temps, on bouche le flacon et on abandonne le mélange réactionnel à 0[deg.]C pendant environ une heure. On filtre ensuite le mélange et on lave le solide que l'on a recueilli sur le filtre avec de l'éther anhydre pour obtenir une poudre entièrement blanche présentant un point de fusion d'environ 251-252[deg.]C décomposition. On identifie le produit par analyse élémentaire et spectre RMN comme étant le di-
<EMI ID=156.1>
midine.
En utilisant la base (8a) préparée ci-dessus, on prépare les sels d'addition acide suivants, identifiés par 8h et 8i :
<EMI ID=157.1> <EMI ID=158.1>
<EMI ID=159.1>
166[deg.]C. On identifie le produit par analyse élémentaire et spectre RMN.
<EMI ID=160.1>
234[deg.]C. On identifie le produit par analyse élémentaire et spectre RMN.
En utilisant la base (8d) préparée ci-dessus, on prépare les sels d'addition acide suivants, identifiés par 8j, 8k et 81 :
8j. On refroidit à 0[deg.]C un mélange de 0,94 g de 4,5-dihy-
<EMI ID=161.1>
dre, sous agitation, et on fait barboter'pendant environ 15 minutes à travers le mélange de l'acide chlorhydrique sec. On bouche ensuite le flacon et on le maintient à 0[deg.]C pendant environ une heure. On filtre le mélange pour obtenir 1,1 g d'un solide jaune présentant un point de fusion d'environ 233-234[deg.]C, décomposition. On identifie le solide jaune par analyse élémentaire comme étant le
<EMI ID=162.1>
dine.
8k. A une suspension de 0,7 g de 4,5-dihydro-4-imino-1-
<EMI ID=163.1>
d'acide phosphorique à 85%. On agite le mélange pendant environ 3
<EMI ID=164.1>
réaction et on lave le solide sur le filtre avec une petite quantité de méthanol. On recristallise le solide dans le méthanol pour obtenir un produit pesant environ 0,4 g et présentant un point de fusion d'environ 198-202[deg.]C. On identifie le produit par analyse élémentaire comme étant le diphosphate de la 4,5-dihydro-4-imino-
<EMI ID=165.1>
On identifie le produit par spectre RMN et analyse élémentaire .
En utilisant la base (8e) préparée ci-dessus, on prépare les sels d'addition acide suivants, identifiés par 8m et 8n :
8m. Dinitrate de la 4,5-dihydro-4-imino-l-méthyl-3-(l-
<EMI ID=166.1>
<EMI ID=167.1>
<EMI ID=168.1>
En utilisant la base (8f) préparée ci-dessus, on prépare les sels d'addition acide suivants, identifiés par 80, 8p et 8q.
<EMI ID=169.1>
Le produit est identifié par analyse élémentaire .
8p. Triphosphate de la 4,5-dihydro-4-imino-1-méthyl-3-
(1-méthyl-5-nitroimidazol-2-yl)-5-(3-pyridylméthyl)-lH-pyrazolo
<EMI ID=170.1>
On identifie le produit par spectre RMN et analyse élémentaire .
Exemple 9
<EMI ID=171.1>
et de 10 ml d'éthanol. On filtre le mélange de produit de réaction et on recristallise le solide que l'on a recueilli dans le diméthylformamide pour obtenir un solide jaune présentant un point de fusion d'environ 246-248[deg.]C. On identifie le produit par analyse
<EMI ID=172.1>
<EMI ID=173.1>
On prépare des sels d'addition acide de ce composé de la manière suivante :
9a. A une suspension de 0,5 g de 4-hydrazino-1-méthyl-
<EMI ID=174.1>
dans 25 ml de méthanol on ajoute goutte à goutte 0,4 g d'acide
<EMI ID=175.1> <EMI ID=176.1>
pendant environ 2 heures. On filtre le mélange de produit de réaction et on lave le solide obtenu sur le filtre avec un peu de méthanol. Le solide pèse 0,5 g et présente un point de fusion d'environ 222-225[deg.]C. On identifie le solide par analyse élémentaire et spectre RMN comme étant le monophosphate de la 4-hydrazino-1-mé-
<EMI ID=177.1>
point de fusion d'environ 248-250[deg.]C. On identifie le produit par
<EMI ID=178.1>
Exemple 10
<EMI ID=179.1>
amine (diméthylaminopropylènediamine asymétrique ), et de 50 ml
<EMI ID=180.1>
de produit de réaction. On recristallise le produit que l'on a récupéré dans le diméthylformamide pour obtenir un produit présentant un point de fusion d'environ 151-154[deg.]C. On identifie le pro-
<EMI ID=181.1>
10a. On maintient à 0[deg.]C un mélange de 0,72 g de la base libre préparé ci-dessus, et de 65 ml d'éther anhydre, tout en faisant passer à travers le mélange pendant environ 15 minutes de l'acide chlorhydrique sec. On bouche le flacon avec son contenu et on l'abandonne pendant une heure à 0[deg.]C. On filtre le mélange pour obtenir 1 g d'un solide hygroscopique présentant un point de fusion d'environ 266-268[deg.]C, décomposition. On identifie le produit par analyse élémentaire comme étant le monohydrate du dichlorhydrate
<EMI ID=182.1> <EMI ID=183.1> froidit et on filtre le mélange de produit de réaction. On recristallise le produit obtenu dans le diméthylformamide pour obtenir
<EMI ID=184.1>
Exemple 12
1,5-dihydro-1-méthyl-3-(1-méthyl-5-nitroimidazol-2-yl)-6-(trifluo-
<EMI ID=185.1>
bonitrile et de 25 ml d'anhydride trifluoroacétique. On recristallise le solide dans le méthanol pour obtenir deux produits. Le produit de point de fusion plus élevé présente un point de fusion d'environ 284-286[deg.]C. On l'identifie par analyse élémentaire comme
<EMI ID=186.1>
duit; de point de fusion inférieur, présente un point de fusion d'environ 225-228[deg.]C, est identifié par analyse élémentaire comme
<EMI ID=187.1>
4-carbonitrile, de 10 ml d'acide sulfurique concentré, et de 20 ml d'éthanol absolu. On refroidit ensuite le mélange de produit de réaction et on y ajoute 50 ml d'eau. On identifie le produit brut
<EMI ID=188.1>
5-nitro-2-imidazolyl)pyrazole-4-carboxamide présentant un point de fusion d'environ 249-250[deg.]C. On utilise ce produit sans purification ultérieure.
On chauffe à reflux pendant environ 6 heures un mélange de 1 g du carboxamide préparé ci-dessus et de 10 ml d'anhydride acétique. On concentre le mélange de produit de réaction sous vide. On recristallise le résidu dans l'éthanol pour obtenir un produit présentant un point de fusion d'environ 287-288[deg.]C avec décomposition. On identifie par analyse élémentaire comme étant la 1,5- <EMI ID=189.1>
thyl-5-nitro-2-imidazolyl)pyrazol-5-yl]formimidate de méthyle, de 1,7 g de diéthyl acétal de l'amirioacétaldéhyde, et de 30 ml d'éthanol absolu commercial. Au bout de ce temps on filtre le mélange du produit de réaction. On recristallise le produit que l'on a recueilli dans le diméthylformamide pour obtenir un produit cristallin présentant un point de fusion d'environ 160-164[deg.]C. On identifie le
<EMI ID=190.1>
<EMI ID=191.1>
midine
On agite au voisinage de la température ambiante pendant
<EMI ID=192.1>
de N(2-aminoéthyl)morpholine , et de 50 ml d'éthanol absolu commercial. Au bout de ce temps, on filtre le mélange de produit de réaction. On recristallise le solide que l'on a recueilli dans le diméthylformamide pour obtenir un produit présentant un point de
<EMI ID=193.1>
<EMI ID=194.1>
15a. On prépare le dichlorhydrate du composé précédent de la manière suivante :
On refroidit à environ 0[deg.]C une suspension de 0,8 g du composé dans 65 ml d'éther éthylique anhydre, et on maintient cette
<EMI ID=195.1>
dre à travers la suspension pendant environ 15 minutes. On bouche ensuite le flacon et on l'abandonne à environ 0[deg.]C pendant environ une heure. On filtre ensuite le mélange pour obtenir 0,9 g d'un solide présentant un point de fusion d'environ 256-257[deg.]C avec décomposition.On identifie le solide par analyse élémentaire comme <EMI ID=196.1>
En suivant le procédé général de l'Exemple 8i, on prépare d'autres sels d'addition acide de la base précédente (15) de la manière suivante :
<EMI ID=197.1>
185[deg.]C. On identifie le produit par analyse élémentaire .
Des représentants de la série présente des composés ont montré in vitro une activité vis-à-vis d'un certain nombre d'oraanismes, dont de nombreux d'entre eux sont des organismes pathogènes importants pour les animaux. On a déterminé l'activité antimicrobienne in vitro des nitroimidazoles en utilisant l'essai de dilution du tube.
Expérience 1
On détermine l'efficacité des nouveaux composés vis-à-vis de la bactérie Escherichia coli, de la manière suivante :
Cette bactérie, Escherichia coli, croît rapidement pour
<EMI ID=198.1>
cultures très visibles après une courte période d'incubation. Dans la réalisation d'essai, on met à solution un échantillon de 5,0 mg de la pyrazolopyrimidine dans 5,0 ml de diméthylsulfoxyde
(DMSO). On ajoute cette solution à 45,0 ml d'un bouillon stérile de Mueller-Hinton pour donner une concentration de 100 mcg/ml du composé. On prépare une série de dilutions à deux fois de ce mélange en quantités de 5,0 ml en utilisant le bouillon de MuellerHinton comme diluant, les dilutions finales étant comprises entre
100,0 et 0,78 mcg/ml. On inclut un tube témoin contenant 5,0 ml du bouillon de Mueller-Hinton. En utilisant une pipette d'une capacité de 1,0 ml, on inocule chaque tube d'essai avec une goutte d'une dilution à 10-4,0 de la bactérie Escherichia coli préparée dans le bouillon de Mueller-Hinton.
On incube ensuite les tubes d'essai à environ 36[deg.]C pendant 20-22 heures, et on prend la concentration inhibitrice minimale (CIM) du composé d'essai peur cette bactérie comme étant la concentration qui empêche complètement une croissance visible.
L'exemple précédent sert à illustrer le procédé d'essai général utilisé. Les techniciens comprendront qu'il est nécessaire d'introduire des variantes dans certaines parties du procédé, en fonction de^ l'organisme spécifique examiné. Par conséquent, dans l'utilisation de certaines bactéries, telles que pasteurella, dont la culture est relativement peuvisible, on utilise un inoculum moins dilué. Avec certaines autres bactéries, le temps d'incubation nécessaire pour la croissance est considérablement plus long que 24 heures, à savoir 36 à 96 heures. De même, de telles variations nécessaires dans le temps d'incubation nécessaire pour la croissance sont bien connues des techniciens familiers des procédés d'essai biologique.
Une autre variante dans l'essai décrit précédemment comprend l'utilisation avec certains mycoplasmes d'un indicateur de variation de pH, par exemple le rouge de phénol dans le milieu mycoplasmique spécifique. On détecte l'inhibition ou la prévention de la croissance par l'absence de changement de couleur.
Les résultats des essais des composés représentatifs, identifiés ci-dessus, sont représentés dans le tableau suivant. Dans le tableau, la colonne 1 permet d'identifier le composé d'essai, et les colonnes 2 à 15 donnent les valeurs CIM en mcg/ml des composés individuels vis-à-vis des organismes individuels à l'essai.
On identifie les composés examinés en se référant aux numéros des exemples décrits dans la préparation des composés.
<EMI ID=199.1>
<EMI ID=200.1>
<EMI ID=201.1>
<EMI ID=202.1>
<EMI ID=203.1>
<EMI ID=204.1>
<EMI ID=205.1>
<EMI ID=206.1>
Expérience 2
On étudie l'efficacité des composés vis-à-vis des maladies provoquées chez les souris par Pasteurella multocida lorsqu'ils sont administrés par injection.
On utilise des souris femelles Swiss pesant de 15 à
<EMI ID=207.1>
dans 0,5 ml de diméthyl sulfoxyde, et on ajoute cette solution à 9,5 ml d'une suspension de carboxyméthylcellulose de sodium. On injecte par voie intrapéritonéaleà des groupes de 5 souris chacun 0,1 ml à chacune des souris du composé d'essai préparé ci-dessus. Cette préparation donne une teneur d'essai de 2,5 mg par kg
de poids corporel de souris. On examine les composés à des teneurs de 1,25, 2,5, 5,0 mg par kilogramme de poids corporel de souris, et on prépare de la même manière les préparations d'essai pour les teneurs de 1,25 et 5,0 mg/kg. Immédiatement après avoir reçu le composé d'essai, on inocule des souris par voie sous-cutanée, en
<EMI ID=208.1>
bouillon de culture de tryptose âgé de 16 à 20 heures de Pasteurella multocida à raison de 0,1 ml par souris. On inocule également des groupements semblables de souris témoins non traitées, l'inoculation étant réalisée par voie sous-cutanée. On observe journellement les groupes de souris du point de vue de la mortalité et
de la mortalité totale des groupements traités, comparées avec celles qui se produisent dans les groupes témoins non traités par le médicament. Les résultats sont exposés dans le Tableau 2 suivant. On identifie chaque composé d'essai par le numéro de l'exemple
qui décrit sa préparation.
Dans le tableau, la colonne 1 donne le composé d'essai; la colonne 2, le dosage du composé d'essai en mg/kg de poids corporel de souris ; la colonne 3, la dilution de l'organisme inoculé ; et la colonne 4, le rapport du nombre de souris survivant à l'essai pour chaque dosage et la dilution d'inoculation par rapport au nombre de souris examinées à chaque dosage et à chaque dilution d'inoculation, que l'on appelle le rapport de survie.
Table 2
<EMI ID=209.1>
Table 2 (suite)
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Table 2 (suite)
<EMI ID=211.1>
<EMI ID=212.1>
On réalise une comparaison de l'activité in vivo d'un composé et de la nitrofurazolidone (Furacine) lorsque l'on pratique l'administration dans l'eau de boisson pour le traitement des maladies de Pasteurella multocida chez la souris. Le composé utilisé dans cette étude est le diphosphate de la 4,5-dihydro-4-imino-l-
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tion N[deg.] 8k. On réalise l'essai ae la manière suivante.
On divise un groupe de vingt souris femelles blanches, chacune pesant environ 15 à 20 g, en quatre groupes de cinq souris chacun, et on donne à chaque groupe une eau d'alimentation contenant :
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On inocule les groupes recevant chacun des traitements
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bouillon de culture âgé de 16 à 20 heures de P. multocida. On inocule des groupements non traités de souris avec des dilutions suivant les logarithmes de 10 du même bouillon de culture en utili-
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chacun des groupements traités de celle du groupe témoin de souris, on obtient un chiffre appelé l'indice de protection. Plus l'indice de protection est élevé en valeur, plus le composé est actif vis-àvis de la maladie.
Les résultats sont décrits dans le tableau qui suit. Dans le tableau, la colonne 1 donne le traitement ; la colonne 2
<EMI ID=220.1>
nue.
<EMI ID=221.1>
<EMI ID=222.1>
Expérience 4
On détermine l'activité in vitro de certains des composés vis-à-vis de deux organismes bactériens pathogènes des poissons en utilisant un bouillon de culture de tryptose et le système normal d'essai par dilution de tube. On prépare des doubles dilutions dans l'intervalle de 100,0 à 0,78 mcg/ml de chacun des composés d'essai dans des quantités de 5 ml de bouillon de culture de tryptose. On inocule ensuite chaque tube dans la série avec une goutte provenant d'une culture du bouillon âgé de 24 heures soit de Pseudomonas sp. soit d'uns souche d'Aeromonas liquefaciens. On incube les
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gistre les concentration inhibitrices minimales (CIM).
Les résultats sont reportés dans le tableau 4 suivant. La colonne 1 donne les composés d'essai identifiés par le numéro de l'exemple de leur préparation ; la colonne 2 donne les valeurs CIM pour la variété Pseudomonas ; et la colonne 3 donne la valeur de CIM pour Aeromonas liquefaciens.
Tableau 4
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Expérience 5
On examine un certain nombre de composés représentatifs, à savoir, 5b, 8 et 15b, du point de vue de leur activité in vitro <EMI ID=225.1>
des plaques de gélose contenant du sang. Chaque plaque préparée contient 20 ml d'une gélose de soja trypticase (Baltimore Biological Laboratory (BBL) ) avec 5,0 g/1 d'extrait de levure (Dif-
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des boîtes de Pétri en plastique stérile de dimension 15 x 100 mm. On réalise l'incubation à 37[deg.]C pendant quatre jours dans des conditions anaerobies en utilisant le système BBL Gas Pak.
On prépare les concentrations des composés d'essai dans cet essai initial à des dilutions comprises entre 2000 mcg/ml et 7,8 mcg/ml. On réalise le procédé d'essai de la manière suivante. On mélange 5 ml d'une concentration vingt fois supérieure dans le bouillon de tryptose (Difco) de chacun des composés d'essai stérilisés par filtration dans une série de ballons contenant 90 ml de gélose de soja trypticase fondue.avec l'extrait de levure. On ajoute ensuite 5 ml de sang de cheval par flacon. On utilise ensuite les contenus de ces flacons pour préparer une série de plaques d'agar à base de sang en diluant par deux foix successivement
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On obtient les tréponèmes pour l'inoculation de ces pla-
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surface d'une plaque sur laquelle on a propagé les tréponèmes. On utilise un tampon stérile de coton pour retirer les tréponèmes de l'agar. On dilue ensuite cette suspension à 100 fois sa valeur et on inocule chacune.des plaques contenant les composés d'essai avec 0,01 ml de même que les plaques témoins qui ne contiennent pas de composés d'essai. On répand l'inoculum de telle sorte qu'il recouvre la surface de chaque plaque, en utilisant pour se faire et pour chaque plaque une pipette en matière plastique stérile courbée. On incube les plaques à environ 36[deg.]C pendant 4 jours puis on examine la croissance des tréponèmes La concentration inhibitrice minimale (CIM) de chaque composé d'essai est la concentration qui empêche la croissance des tréponèmes.
Tous ces composés représentatifs empêchent la croissance des tréponèmesà chacune des concentrations examinées, et la valeur CIM de ces composés est inférieure ou égale à 1,56 mcg/ml.
Certains des composés sont actifs in vivo vis-à-vis de Salmonella typhimurium chez les poulets lorsqu'on les administre aux poulets par voie sous-cutanée.
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rium chez les poulets.
Certains de ces composés sont actifs à la fois in vitro et in vivo vis-à-vis de Trichomonas vaginalis. Ces composés sont : la
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(5H)-one.
Compte tenu des activités de ces composés dans les essais décrits précédemment, on peut utiliser les composés pour lutter
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rium. On peut également utiliser les composés pour combattre des bactéries pathogènes de poisson identifiées comme étant respecti-
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multocida ou T. vaginalis chez les animaux, on peut formuler les
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nistrer par injection. On peut également administrer les composés par voie orale, par exemple, dans l'eau de boisson des animaux
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lets en incorporant le composé dans la ration d'alimentation normale et en laissant les poulets se nourrir ad libitum. On incorpore le produit dans l'alimentation à des teneurs efficaces appropriées
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tion.
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1. Composé de formule
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formule dans laquelle
z est choisi dans le groupe comprenant
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X est le brome, le chlore, le fluor ou l'iode ;
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octadécényle,
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R est NH ou l'oxygène; �7
R est NH2, NHCOCH3, NHCHC02H, ou NHNH2 ;
<EMI ID=248.1>
n est égal à 1, 2, 3 ou 4 ;
et ses sels non toxiques acceptables sur le plan pharmaceutique.