BE859236A

BE859236A - Nouveaux antibiotiques anti-fumeurs, de type anthracycline

Info

Publication number: BE859236A
Application number: BE181334A
Authority: BE
Original assignee: Zh Biseibutsu Kagaku Kenkyukai
Priority date: 1976-10-05
Filing date: 1977-09-30
Publication date: 1978-01-16
Also published as: JPS5438104B2; JPS5344555A; ZA775607B

Description


   <EMI ID=1.1> 

  
La présente invention concerne des nouveaux antibiotiques anti-tumeurs de type glycoside d'anthracycline, leur

  
production et leur récupération, ainsi que leur utilisation thérapeutique. Plus particulièrement, l'invention concerne

  
des nouvelles substances antibiotiques anti-tumeurs désignées

  
 <EMI ID=2.1> 

  
procédés pour leur préparation par fermentation de souches

  
 <EMI ID=3.1> 

  
récupération et leur purification, et leur application comme

  
agents chimiothérapoutiques pour l'inhibition de la croissance des tumeurs malignes et pour le traitement de maladies infectieuses provoquées par les bactéries Gram-positives-

  
Divers types de glycosides d'anthracycline ont été

  
trouvés dans le bouillon de culture de micro-organismes, 

  
et ils ont été décrits dans la littérature. Parmi ceux-ci,  <EMI ID=4.1> 

  
nain cliniques de grand intérêt se portant sur la chimiothérapie du cancer.

  
Grâce à des cultures sélectionnées de streptomyces pour des métabolites ayant une activité anti-tumeur, les auteurs de la présente invention ont découvert des nouveaux composés et après purification et carastérisatioa basée sur leurs propriétés physico-chimiques, il s'est confirmé que les antibio-

  
 <EMI ID=5.1> 

  
Les antibiotiques d'anthracycline ayant un groupe aklavinone aglycone sont décrits dans les références suivantes.

  
(a) aclacinomycine A et B dans le bravât des Etats-Unis d'Amérique n[deg.] 3.988.315 et par Oki et al. dans J. Antibiotica
28:830 (1975). (b) Aklavine dans J. Bacteriol. 72:90 (1956).

  
 <EMI ID=6.1> 

  
pyrromycinone aglycone sont décrits dans les références suivantes. 

  
 <EMI ID=7.1> 

  
crits dans les références suivantes.

  
(f) Nogalamycine dans J. Amer. Chem. Soc. 99:542 (1977). 

  
 <EMI ID=8.1> 

  
brevet de la R.F.A. n[deg.] 2.362.707 et dans J. Amer. Chem. Soc.
97:5955 (1975).

  
 <EMI ID=9.1> 

  
Abst. 67:90573z (1967).

  
Pour une illustration complémentaire et des descriptions sommaires des antibiotiques d'anthracycline, voir comme

  
 <EMI ID=10.1> 

  
Collège, Pensylvanie, E.U.A. (1967) :

  

 <EMI ID=11.1> 


  
 <EMI ID=12.1>   <EMI ID=13.1> 

  
anthracyclines et leurs dérivés.

  
La présente invention concerne des nouveaux antibiotiques de type glycoside d'anthracycline, des procédés pour leur préparation, des compositions pharmaceutiques les contenant et l'utilisation de ces antibiotiques ou compositions dans le traitement des infections bactériennes et dans l'inhi. bition.. des tumeurs chez les mammifères. Plus Particulièrement, 

  
 <EMI ID=14.1> 

  
chélation avec des ions métalliques et modes opératoires standards de chromatographie sur colonne.

  
 <EMI ID=15.1>  solides purifiés, de leurs sels et de leurs complexes DMA, ainsi que le procédé de préparation des composés ci-desaus

  
 <EMI ID=16.1>  lyophiliséa après addition d'au moins une substance choisie parai le groupe consistant en acide déoxyribonucléique, glycérol, sucres, amino acides et acides inorganiques ou organiques.

  
La présente invention fournit donc les antibiotiques

  
 <EMI ID=17.1> 

  
qui <EMI ID=18.1>  téries gras-positives ;
(b) sont efficaces pour l'inhibition de la croissance des <EMI ID=19.1> 

  
rouge, a un point de fusion de 152 à 156*C.; est un glycoside d'anthracyclina faiblement basiqua;

  
 <EMI ID=20.1>  

  
 <EMI ID=21.1> 

  
romycinona, ayant la formule empirique 36 il 45-
014 NI

  
 <EMI ID=22.1>  

  
 <EMI ID=23.1> 

  
Fig. 1 présente le spectre d'absorption dans l'ultraviolet et la lumière visible du MA144-G1 dans du méthanol <EMI ID=24.1>  Fig. 2 présente le spectre d'absorption dans l'ultraviolet et la lumière visible du MA144-G2 dans du méthanol <EMI ID=25.1>  <EMI ID=26.1>  <EMI ID=27.1>  <EMI ID=28.1>  Fig. 7 présente le spectre d'absorption dans l'ultraviolet <EMI ID=29.1> 

  
 <EMI ID=30.1>  Fig. 8 présente le spectre d'absorption dans l'ultraviolet et la lumière visible du MA144-U2 dans du méthanol à <EMI ID=31.1>  Fig. 9 présente le spectre d'absorption dans l'ultraviolet et la lumière visible du MA144-T dans du méthanol à <EMI ID=32.1>  <EMI ID=33.1>   <EMI ID=34.1>  lièrement, les composés de la présente invention présentent une activité vis-à-vis des bactéries gram-positives) inhibent la croissance de diverses tumeurs chez les mammifères comme

  
 <EMI ID=35.1> 

  
faible toxicité. Par conséquent, les composés de la présente invention sont utilisables comme agents antibactériens et anti-tumeurs. Les termes" composants MA144 " utilisés ici désignent un antibiotique comprenant, au moins un composé chois:

  
 <EMI ID=36.1> 

  
Ces composés sont produits en cultivant une souche de streptomyces produisant le MAI44 dans une solution aqueuse de carbohydrate contenant des agents nutritifs organiques azotés sous des conditions d'immersion aérobique, ou par réduction chimique et hydrolyse de glycosides d'anthracycline connus et particuliers, ou par conversion enzymatique de glycoside d'anthracycline connus et particuliers. Les composée dans les

  
 <EMI ID=37.1> 

  
et enzymatiques ainsi produits peuvent être extraits et purifiés par des procédés conventionnels utilisés pour l'extraction et la purification d'antibiotiques insolubles dans l'eau.

  
 <EMI ID=38.1> 

  
de solides bruts, de solides purifiés, de leurs sels et de

  
 <EMI ID=39.1> 

  
La production des composés de la présente invention est effectuée par un procédé de fermentation, et plusieurs

  
 <EMI ID=40.1> 

  
Pour la production par fermentation des composés suivant la présente invention, on peut utiliser les souches pro-

  
 <EMI ID=41.1> 

  
ATCC 31273 et leurs mutants.

  
La production de tous les composés de la présente invention est effectuée en cultivant les souches de straptomyces mentionnées ci-dessus dans un milieu aqueux nutritif conventionnel des sources nutritives connues pour les actinomycetes, c.-à-d. des sources de carbone, d'azote et de sels inorganiques. Une culture aérobique immergée est de préférence utilisée pour la production de quantités substantielles

  
 <EMI ID=42.1> 

  
tiques. Les modes opératoires généralement utilisés pour la culture des autres actinomycetes sont applicables à la cul- <EMI ID=43.1> 

  
ses, etc., à l'état brut ou purifié, et des sources d'azote commercialement disponibles comme poudre de soya, extrait

  
 <EMI ID=44.1> 

  
extrait de céréales ou des sels inorganiques comme sulfate d'ammonium, nitrate de sodium ou chlorure d'ammonium. Comme sels inorganiques, on utilise de préférence le chlorure de sodium, le chlorure de potassium, ou des phosphates et on peut aussi ajouter, si nécessaire, des ions métalliques an traces et des agents anti-mousse comme l'Adekanol (marque déposée, Asahi Denka Ind. Co.) ou du silicone (marque dope-

  
 <EMI ID=45.1> 

  
la gamme d'environ 6 à 9. La production des composants MA144 dans le bouillon de culture atteint un maximum après 2 à 7

  
 <EMI ID=46.1> 

  
tion aérobique immergée avec aération et agitation effectués comme dans les exemples donnés ci-dessous.

  
 <EMI ID=47.1> 

  
MA144-M2, MA144-N1, MA144-G1, MA144-G2, MA144-U1, MA144-U2, MA144-Y ou un de leurs mélanges, sont chimiquement convertis en MA144-S1, -S2, -NI ou un de leurs mélanges. Les substances de départ peuvent être utilisées sous forme purifiée, comme

  
 <EMI ID=48.1> 

  
substances contenant les composés de type anthracycline comme bouillons de fermentation ou extraits bruts provenant da ses bouillons.

  
La conversion chimique peut être plus aisément comprise par la lecture du schéma réactionnel suivant  
 <EMI ID=49.1> 
 
 <EMI ID=50.1> 
 <EMI ID=51.1> 

  
parte etc. et on choisit de préférence des conditions permettant d'obtenir un rendement et une vitesse de réaction les plus élevée possible- <EMI ID=52.1>  stances de départ peuvent âtre utilisées sous forme purifiée, comme des sels, ou sous une forme impure, par exemple sous forme de substances contenant les substrats de type anthracycline comme bouillons de fermentation ou extraits bruts provenant de ces bouillons. 

  
La conversion enzymatique peut être plus' aisément comprise par la lecture du schéma réactionnel suivant 
 <EMI ID=53.1> 
  <EMI ID=54.1> 

  
A par le système enzymatique qui est obtenu à partir de mammifères et de microorganismes. Le système enzymatique utilisé

  
 <EMI ID=55.1> 

  
et provenant de tissus de mammifères, par exemple tissus provenant de singes, de chiens, de lapins, de hamsters, de rats

  
 <EMI ID=56.1> 

  
organismes, les souches appartenant aux streptomyces peuvent être utilisées sous forme de bouillon de culture, de suspension de cellules, de cellules sèches, d'un homogénat de cellules, d'enzyme partiellement purifié et d'enzyme immobilisé

  
 <EMI ID=57.1> 

  
tiqua telles que pH, température, concentration du substrat, duréa de la réaction, co-enzyme, etc., dépendent de l'état de l'enzyme, de la substance de départ utilisée, etc. En gé-

  
 <EMI ID=58.1> 

  
lèrent la réaction enzymatique et qui n'inactivent pas le système enzymatique. En général, il est préférable d'utiliser

  
 <EMI ID=59.1>  

  
 <EMI ID=60.1> 

  
solution avec liquide surnageant, d'enzyme partiellement ou totalement purifié et d'enzyme immobilisé obtenu à partir de ces apurées.

  
Les conditions de la réaction enzymatique comme pH, température, concentration du substrat, durée de la réaction, etc.,dépendent de l'état de l'enzyme,, de la substance de départ utilisée, etc. En général, il est préférable de choisir des conditions qui accélèrent la réaction enzymatique et qui n'inhibent pas la réaction enzymatique. En général, il convient d'utiliser une température comprise entre 20 et 50*Ce, un pH de 4,0 à 9,0, une concontration du substrat inférieure à 5 % et une durée de réaction de 10 minutes à 5 heures selon la quantité d'oxygène dissous. La réaction enzymatique deman-

  
 <EMI ID=61.1> 

  
L'activité enzymatique de divers streptomyces utilisés dans la présente invention est donnée ci-dessous. 

  
 <EMI ID=62.1> 

  

 <EMI ID=63.1> 


  
 <EMI ID=64.1> 

  

 <EMI ID=65.1> 


  
 <EMI ID=66.1> 

  
par minute.

  
Pour la purification de l'enzyme provenant des 7 sou-

  
 <EMI ID=67.1> 

  
des procédés conventionnels de purification d'enzyme. Par exemple, la préparation enzymatique purifiée homogénéisée par électrophorèse peut être obtenue à partir du filtrat de culture par précipitation à partir d'une solution de sulfate

  
 <EMI ID=68.1> 

  
dex G-75. Les propriétés générales de l'enzyme purifié obtenu  <EMI ID=69.1> 

  
les suivantes.

  

 <EMI ID=70.1> 


  
 <EMI ID=71.1> 

  
lon peut être filtré et le filtrat peut ensuite être extrait avec un solvant organique non miscible dans l'eau comas chlo-

  
 <EMI ID=72.1> 

  
etc., dans un état neutre à faiblement acide Les composants MA144 dans le mycélium peuvent être récupérés par extraction avec un solvant organique comme chloroforme, acétone, n-butanol, méthanol, éthanol, acétate d'éthyle ou une

  
 <EMI ID=73.1> 

  
ment à partir du bouillon de culture par les modes opératoires d'extraction mentionnés ci-dessus, sans séparation préa-lable du mycélium. Après concentration sous vide, les extraits de MAI 44 peuvent être de nouveau extraits avec un solvant organique non miscible dans l'eau à un pH compris entre 6 et 9 et après concentration sous pression réduite les concentrais

  
 <EMI ID=74.1> 

  
dessus, les composants MA144- peuvent être obtenus sous une forme purifiée. Au lieu d'utiliser un procédé de récupération par extraction avec un solvant pour- récupérer le MA144 du bouillon de culture, on peut employer, seul ou en combinaison avec le procédé d'extraction avec un solvant, une chro-

  
 <EMI ID=75.1> 

  
carbone actif, de l'alumine, de l'acide silicique, ou du dextrane modifié comme celui qui est commercialement disponible

  
 <EMI ID=76.1> 

  
matographie sur liquide en utilisant des solvants organiques appropriés. Les extraies actifs obtenus par ces procédés sont concentrés sous pression réduite et obtenus sous forage de

  
 <EMI ID=77.1> 

  
Les composants MA144 dans les mélanges chimiques et enzymatiques sont extraits après addition d'eau, purifiés et obtenus sous forme d'une poudre brute, suivant les sodés opératoires mentionnés ci-dessus. La solution contenant les

  
 <EMI ID=78.1> 

  
au moins une substance choisie parmi le groupe consistant en sérum, albumine de sérum, globuline, gélatine, glycérol, su-

  
 <EMI ID=79.1> 

  
organiques ou inorganiques comme acide chlorhydrique, acide phosphorique, acide acétique, acide succinique et acide pantothénique.

  
Pour obtenir les composants MA144 individuels, c.-à-d.

  
 <EMI ID=80.1> 

  
cation et une séparation ultérieures peuvent être effectuées en utilisant des techniques de séparation standards comme une chromatographie sur colonne employant divers adsorbants comme acide silicique, dextranes modifiés, résines échangeuses d'ions faiblement acidifiées ou carbone actif, une séparation à contre-courant, uns chromatographie sur liquide en employant des solvants organiques appropriés, ou la chélation avec divers ions métalliques, ou une combinaison de un ou plusieurs des procédés mentionnés ci-dessuso : 

  
 <EMI ID=81.1> 
(Cf. tableaux ci-après.) 
 <EMI ID=82.1> 
 
 <EMI ID=83.1> 
 <EMI ID=84.1>  
 <EMI ID=85.1> 
 
 <EMI ID=86.1> 
 
 <EMI ID=87.1> 
 
 <EMI ID=88.1> 
  <EMI ID=89.1> 
-U2 et -I dans la présente invention a été déterminée comme suit.

  
Après hydrolyse acide avec de l'acide chlorhydrique

  
 <EMI ID=90.1> 

  
ques comme le spectre d'absorption dans les gammes de l'ultraviolet, du visible et de l'infrarouge, le spectre de résonance magnétique nucléaire, le point de fusion, l'analyse élémentaire et les valeurs Rf sur une coucha mince d'acide sili-

  
 <EMI ID=91.1> 
-L, -NI, -SI, -Ul et -Y coïncidaient totalement avec celles de l'aklavinone (Tetrahedron Lett. n[deg.] 8, 28-34, 1960), et <EMI ID=92.1>  mycinone (Chem. Ber. 92, 1880-1903, 1959). D'autre part, les groupas sucres existant dans la fraction soluble dans l'eau des hydrolysats ci-dessus ont été déterminés pas chromatographie en couche mince d'acide silicique (Merck Co.

  
 <EMI ID=93.1> 

  
comparant leurs valeurs Rf avec celles do sucres réels obte-

  
 <EMI ID=94.1> 

  
3592-3594, 1972). Les valeurs Rf des groupes sucres obtenus à partir des composants MA144 sont indiquées dans le tableau

  
 <EMI ID=95.1>  et -U2.  <EMI ID=96.1> 

  
MA144.

  

 <EMI ID=97.1> 


  
 <EMI ID=98.1> 

  
du méthanol contenant de l'acide chlorhydrique 0,01N à

  
 <EMI ID=99.1> 

  
de fusion, les spectres d'absorption IR, UV et lumière visible et le spectre RMN, et les saccharides méthylés cor-

  
 <EMI ID=100.1>   <EMI ID=101.1> 

  
et IR de ces componée et ceux de leur disaccharide méthylé.

  

 <EMI ID=102.1> 


  
 <EMI ID=103.1> 

  
comme suit : 
 <EMI ID=104.1> 
 <EMI ID=105.1> 

  

 <EMI ID=106.1> 
 

  
 <EMI ID=107.1> 

  
pes de groupes sucre : la L-rhodosamina, le 2-déoxy-L-fucose et le L-rhodinose. Afin de déterminer la série sucre, on a effectué une hydrolyse modérée dans de l'acide chlorhydrique

  
 <EMI ID=108.1> 

  
et le L-rhodinose a été libéré et il y a eu formation simultanée de MA144-S1. Donc, la structure chimique du MA144-N1 pout être déterminée comme suit :

  

 <EMI ID=109.1> 


  
 <EMI ID=110.1> 

  
ainsi la structure chimique suivante a été proposée : 

  

 <EMI ID=111.1> 


  
 <EMI ID=112.1> 

  
Sephadex LH-20 (marque déposée) at a été ensuite cristallisé sons ferme de cristaux en aiguilles blanches dans du benzène. Les propriétés physico-chimiques du diaaccharide

  
 <EMI ID=113.1> 

  

 <EMI ID=114.1> 
 

  
 <EMI ID=115.1> 

  
Spectre d'absorption dans l'ultraviolet et la lumière visible (dans du méthanol)  <EMI ID=116.1> 

  
A partir de l'analyse des résultats ci-dessus, la structure du disaccharide méthyle s'est révélée être celle

  
 <EMI ID=117.1>  

  

 <EMI ID=118.1> 


  
 <EMI ID=119.1> 

  

 <EMI ID=120.1> 


  
De nombreux antibiotiques consistant en glycoside

  
 <EMI ID=121.1> 

  
 <EMI ID=122.1> 

  
nus, en ce qui concerne des. caractéristiques telles que formule moléculaire, produits de dégradation par hydrolyse  <EMI ID=123.1> 

  
frarouge, etc., comme décrit ci-dessus. Parmi les glycosides d'anthracycline connus, l'aklavine et la pyrromycine consis-

  
 <EMI ID=124.1> 

  
en trois groupes sucre : le L-cinérulosyl-2-déoxy-L-fucosylL-rhodosaminyl-, le MA144-M1 et -M2 (demande de brevet japo-

  
 <EMI ID=125.1> 

  
même que celui du MA144-N1 dans la présente invention, mais l'aglycone du MA144-N1 est l'aklavinone et se distingue de

  
 <EMI ID=126.1>  sont des nouvelles substances,

  
 <EMI ID=127.1> 

  
présentent des activités anti-microbiennes vis-à-vis de di-

  
 <EMI ID=128.1> 

  
tion minimum des antibiotiques de l'invention, déterminée par la procédé de dilution du bouillon, est indiquée dans le tableau suivant. 

  

 <EMI ID=129.1> 


  

 <EMI ID=130.1> 
 

  
 <EMI ID=131.1> 

  
 <EMI ID=132.1> 

  
le pourcentage de la prolongation do durée de survit) par rapport au témoin a été indiqué dans le tableau suivant

  
 <EMI ID=133.1>   <EMI ID=134.1> 

  

 <EMI ID=135.1> 
 

  
 <EMI ID=136.1> 

  
en culture, spécialement en faibles concentrations, et inhibaient complètement la synthèse RNA. Dans cette expérience,  des cellules L1210 ont été inoculées dans un milieu RPMI

  
 <EMI ID=137.1> 

  
jour les composés de la présente invention en une concentration de 0,1/ug/ml. Dans l'expérience d'incorporation de

  
 <EMI ID=138.1> 

  
RNA ont été indiqués par le pourcentage d'inhibition par rapport au témoin, comme indiqué dans la tableau suivant,

  
A partir des résultats, on peut constater que les composants

  
 <EMI ID=139.1> 

  
de cellules L1210 cultivées, en faiblo concentration. Ces résultats se confirmaient par l'efficacité thérapeutique sur des tumeurs animales expérimentales.,  <EMI ID=140.1> 

  
la synthèse macromoléculaire dans des cellules L1210 cultivées.

  
 <EMI ID=141.1> 

  

 <EMI ID=142.1> 


  
 <EMI ID=143.1> 

  
Gram-positives* 

  
L'invention comprend dans son cadra les compositions pharmaceutiques contenant au moins un des composés antibiotiques mentionnés ci-dessus avec un porteur compatible

  
 <EMI ID=144.1> 

  
être élaborées en n'importe quelle forme pharmaceutique convenant au mode d'administration. Des exemples de telles

  
 <EMI ID=145.1> 

  
 <EMI ID=146.1> 

  
Iules, poudres et granulée, des compositions liquides pour administration par voie orale comme solutions, suspensions, sirops et élixirs et des préparations pour administration par voie parentérale comme solutions stériles, suspensions ou émulsions.

  
Les composés de la présente invention forment des sels par addition d'acide non toxique avec de nombreux réactifs organiques et inorganiques formant des sels et forment des complexes non toxiques avec l'acide désoxyribonucléiqus.

  
 <EMI ID=147.1> 

  
pharMaeeutiquement acceptables comme l'acide sulfurique, phosphorique, chlorhydrique, acétique, propionique, oléique, 

  
 <EMI ID=148.1> 

  
avec l'acide désoxyribonucléique peuvent être utilisés de

  
 <EMI ID=149.1> 

  
Il faut remarquer que les quantités réelles préférées des composés utilisés suivant la présente invention peuvent varier suivant le composé particulier utilisé, la composi-

  
 <EMI ID=150.1> 

  
particulier, le patient et la maladie à traiter. En général, les composants MA144 sont injectés par voie intrapéritoniale, intraveineuse, subcutanée ou locale, ou bien administrés par voie orale chez les animaux et par voia intraveineuse, intrapéritoniale, locale ou orale chez les humains, Les exports en la matière doivent tenir compte de plusieurs fac-

  
 <EMI ID=151.1> 

  
ple, Age, poids du corps, sexe, régime, durée de l'administration, voie de l'administration, vitesse d'excrétion, condition du patient, combinaisons de médicaments, sensibilités réactionnelles, et sévérité de la maladie. L'administration peut être effectuée en continu ou périodiquement, en respectant la dose maximum tolérée. Des taux d'application optimaux pour une gamme donnée de condition peuvent être déterminés par les e xperta en cette matière en utilisant des tests de détermination de dosage conventionnels et en tenant compte des données fournies ci-dessus.

  
Pour une utilisation comme agent anti-bactérien, les composants MA144 sont en général administrés de telle s or te que la concentration de l'ingrédient actif soit plus élevée que la concentration d'inhibition minimum pour l'organisme particulier à traiter.

  
Les exemples suivants sont aonnés à titre d'illustration uniquement, et ils ne limitent en aucun cas le cadre de l'invention.

Exemple 1.

  
On a préparé un milieu nutritif ayant la composition suivante 

  

 <EMI ID=152.1> 


  
Cinquante ml. de ce milieu ont été stérilisés à 120

  
 <EMI ID=153.1> 

  
du milieu) .préalablement stérilisé dans un fermentateur en acier inoxydable de 20 litres ont été aseptiquement inoculés avec 200 ml. de la culture ensemencée ci-dessus. La

  
 <EMI ID=154.1> 

  
agitation (300 tpm) et aération (5 1/min.). Ensuite, 10 litres de cette culture ont été transférés dans 600 litres du milieu préalablement stérilisé, dans un réservoir en acier

  
 <EMI ID=155.1> 

  
Le bouillon de culture obtenu (580 1.) a été ajusté à pH 5,0 avec de l'acide sulfurique et a été filtré avec de la terre diatomée. Le gâteau de filtration rédultant (56 kg) a été mis en suspension dans 50 litres d'acétone et filtré après agitation durant une heure. Le résidu a de nouveau été extrait avec 50 litres d'acétone. les deux extraits ont été concentrés jusqu'à 25 litres sous pression réduite, ajoutés à 20 litres d'acétate d'éthyle et agités. Après séparation de la couche d'acétate d'éthyle en concentrant jusqu'à 1 litre sous pression réduite, le mélange de MA144 brut a été précipité par addition de 15 1. de n-hexane au concentrât, et ensuite 36 grammes d'une poudre rouge ont été obtenus après lavage deux fois avec du n-hexane. D'autre part, le filtrat de culture obtenu ci-dessus a été ajusté

  
à pH 6,8 avec de l'hydroxyde de sodium et a été extrait

  
 <EMI ID=156.1> 

Exemple 2.

  
La poudre brute du mélange de MA144 obtenue à partir du gâteau de filtration comme dans l'exemple 1 (10 grammes) a été dissoute dans 100 ml. de toluène et soumise à chro&#65533;a.tographie sur une colonne (5 x 40 cm.) garnie de 300 go d'acide silicique, et après élimination de l'éluat initial avec

  
 <EMI ID=157.1> 

  
ont été éludes avec du toluène contenant 5 % de méthanol, successivement. Après concentration de chaque fraction obtenue ci-dessus, on a obtenu, par addition de n-hexane, des poudres brutes rouge-orange consistant en 210 mg. d'un mé-

  
 <EMI ID=158.1>  

  
 <EMI ID=159.1> 

  
 <EMI ID=160.1> 

  
à partir du filtrat de culture comme dans l'exemple 1 ont été dissous dans 6 ml. de toluène, soumis à chromatographie sur colonne garnie de 100 g. d'acide silicique et ensuite la

  
 <EMI ID=161.1> 

  
 <EMI ID=162.1> 

  
210 mg de mélange de MA144-G1 et -G2 obtenus dans

  
 <EMI ID=163.1> 

  
te d'éthyle et soumis à chromatographie sur colonne garnis de 30 g. de Column-Lite (marque déposée, Fuji Chem. Co., pour l'acide silicique) et ont été élues avec un mélange d'acétate d'éthyle-méthanol (1:1). La fraction jaune a été concentrée jusqu'à siccité sous pression réduite et le résidu obtenu a été dissous dans 50 ml. de chloroforme, agité

  
 <EMI ID=164.1> 

  
duels, et la coucha de chloroforme a été lavée deux fois avec de l'eau, séchée avec du sulfate de sodium anhydre et ensuite concentrée jusqu'à siccité sous pression réduite.

  
 <EMI ID=165.1> 

  
résultant a été évaporé jusqu'à siccité. dissous dans une petite quantité de chloroforme et débarrassé des ions métalliques résiduels suivant le procédé mentionné plus haut, et

  
 <EMI ID=166.1> 

  
MA144-L. Par le même mode opératoire que celui décrit cidessus pour le MA144-G1 et -G2, on a obtenu une poudre puri- <EMI ID=167.1> 

  
les composés de la présente invention ont été obtenus comme suit en utilisant les souches de Streptomyces indiquées.

  

 <EMI ID=168.1> 


  
 <EMI ID=169.1>  a été stoppée par l'addition de deux volumes d'un mélange de chloroforme/méthanol froid (1:1). Cette solution a été convenablement mélangée et séparée de la couche de chloroforme et la fraction active restant dans la couche aqueuse a été de nouveau extraite avec un volume égal de chloroforme. Les deux couches de chloroforme ont été combinées, concentrées sous pression réduite, appliquées sur des plaques

  
 <EMI ID=170.1> 

  
veloppées avec un mélange de chloroforme méthanol (10:1) pour préparation. Après chromatographie, la bande correspon-

  
 <EMI ID=171.1> 

  
avec un mélange de chloroforme-méthanol (10:1), et concentré sous pression réduite. On a ainsi obtenu 62,3 mg d'une

  
 <EMI ID=172.1> 

  
 <EMI ID=173.1> 

  
Un gramme d'aclacinomycine A a été dissous dans 40 ml. d'acétate d'éthyle, mélangé avec 40 ml. d'eau contenant 100

  
 <EMI ID=174.1> 

  
près déshydratation avec du sulfata de sodium anhydre. Après chromatographie sur une colonne d'acide silicique (colonne de 3 x 20 en.) en utilisant un mélange de toluène-méthanol

  
 <EMI ID=175.1> 

  
de MA144-M. sous forma d'une poudre jaune.

  
 <EMI ID=176.1> 

  
 <EMI ID=177.1>  ont été rassemblées et concentrées sous pression réduite. Les fractions actives contenant le MA144-N1 qui ont été obtenues par chromatographie sur colonne d'acide silicique

  
 <EMI ID=178.1> 

  
toluène (5 : 100) ont été rassemblées, concentrées et ajoutées à du n-hexane. On a ainsi obtenu 237 mg d'une poudre

  
 <EMI ID=179.1> 

Exemple 9.

  
On a préparé &#65533; milieu nutritif ayant la composition  suivante ; 

  

 <EMI ID=180.1> 


  
 <EMI ID=181.1> 

  
en collodion. On a obtenu environ 1.000 unités/ml. d'une préparatioa d'enzyme brut.

  
 <EMI ID=182.1>

Claims

<EMI ID=183.1>

rée ci-dessus et 4.000 ml. d'eau distillée, 100 ml. du mélange réactionnel ont été placés dans un flacon de 500 ml.

<EMI ID=184.1>

teur rotatif. Le pH du mélange réactionnel a été ajusté à

<EMI ID=185.1>

avec 1 litre de toluène et concentré jusqu'à 30 ml. sous pression réduite. Le précipité obtenu par l'addition de 300

<EMI ID=186.1>

200, 100 g.), avec du toluène contenant 1,7 % de méthanol

à 5[deg.]C. Les fractions activez obtenues ont été concentrée*

<EMI ID=187.1>

sous forme d'une poudre jaune.

REVENDICATIONS.

<EMI ID=188.1>

<EMI ID=189.1>

<EMI ID=190.1>

<EMI ID=191.1> <EMI ID=192.1>

drogène ou

<EMI ID=193.1>

<EMI ID=194.1>

2. Glycoside d'anthracycline de formule I suivant la

<EMI ID=195.1>

<EMI ID=196.1>

par

<EMI ID=197.1>

ou un de ses sels non toxiques par addition d'acide ou un

<EMI ID=198.1>

senté par

<EMI ID=199.1>

ou un de ses sels non toxiques par addition d'acide ou un de ses complexes avec l'acide désoxyribonucléique"

4. Glycoside d'anthracycline de formule I, suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le composé est

<EMI ID=200.1>

<EMI ID=201.1>

présenté par

<EMI ID=202.1>

ou un de ses sels non toxiques par addition d'acide ou un de ses complexes avec l'acide désoxyribonucléique. <EMI ID=203.1>

revendication 1, caractérisé en ce que le composé est la MA

<EMI ID=204.1>

<EMI ID=205.1>

<EMI ID=206.1>

ou un de ses sels non toxiques par addition d'acide ou un de ses complexes avec l'acide désoxyribonucléique.

<EMI ID=207.1>

la revendication 1, caractérisé en ce que le composé est le

<EMI ID=208.1>

<EMI ID=209.1>

ses sels non toxiques par addition d'acide ou un de aes complexes avec l'acide désoxyribonucléique.

7. Glycoside d'anthracycline de formule I, suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le composé est

<EMI ID=210.1>

<EMI ID=211.1>

la revendication 1, caractérisé en ce que le composé est

<EMI ID=212.1>

représenté par

<EMI ID=213.1>

<EMI ID=214.1>

la revendication 1, caractérisé en ce que le composé est le

<EMI ID=215.1>

<EMI ID=216.1>

senté par <EMI ID=217.1> ou un de ses sels non toxiques par addition d'acide ou un

<EMI ID=218.1>

10. Glycoside d'anthracycline de formule I, suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le composé est le

<EMI ID=219.1>

<EMI ID=220.1>

<EMI ID=221.1>

ou un de ses sels non toxiques par addition d'acide ou un de ses complexes avec l'acide désoxyribonucléique.

<EMI ID=222.1>

<EMI ID=223.1>

tion 1, ou un de ses sels non toxiques par addition d'acide ou un de ses complexes avec l'acide désoxyribonucléique, en combinaison avec un porteur inerte pharmaceutiquement acceptable ou un diluant approprié pour la forme d'administration souhaités.

12. Composition pharmaceutique sous une forme convenant pour une administration par voie parentérale ou non

<EMI ID=224.1>

prend une quantité efficace pour inhibition de tumeurs d'un glycoside d'anthracycline de formule générale I suivant la revendication 1, ou un de ses sels non toxiques par addition d'acide ou un de ses complexes avec l'acide désoxyribonucléique, en combinaison avec un porteur inerte pharmaceutiquement acceptable ou un diluant approprié pour la forme d'administration souhaitée.

<EMI ID=225.1>

cline de formule générale I : <EMI ID=226.1>

<EMI ID=227.1>

groupe hydroxyle, R2 est un atome d'hydrogène ou

<EMI ID=228.1>

ou

<EMI ID=229.1>

ou un de ses sels non toxiques par addition d'acide ou un

<EMI ID=230.1>

risé en ce qu'on cultive une souche appartenant au type

<EMI ID=231.1>

d'immersion et d'aérobie dans un milieu nutritif contenant une source de carbone, un agent nutritif contenant de l'a-

<EMI ID=232.1>

ce qu'une quantité substantielle de glycosides d'anthracycline soit produite par cet organisme dans le milieu nutritif.

14. Procédé suivant la revendication 13, pour la production de glycosides d'anthracycline de formule I, ca-

<EMI ID=233.1> <EMI ID=234.1>

milieu nutritif sous des conditions d'immersion et d'aérobie jusqu'à ce qu'une quantité substantielle de glycosides d'an-

<EMI ID=235.1>

milieu.de culture.

<EMI ID=236.1>

<EMI ID=237.1>

16. Procédé suivant la revendication 15, caractérisa en ce que le système enzymatique pour conversion est un

<EMI ID=238.1>

<EMI ID=239.1>

enzymes immobilisés.

17. Procédé suivant la revendication 15, caractérisé

<EMI ID=240.1>

homogénat de collulea qui en provient, enzyme partiellement purifié et purifié qui on provient et onsyme immobilisé qui en provient.

<EMI ID=241.1>

l'aclaeinomycine A avec un agent réducteur choisi parmi la groupe consistant on borohydrure de sodium, hydrure de lithium et hydrure d'aluminium.

21. Procédé de préparation du glycoaide d'anthracycline MA 144-31, caractérisé en ce qu'on hydrolyse un compo.56 choisi parmi le groupe consistant en aclacinomycine A, MA

<EMI ID=242.1>

des acides minéraux.

22:.. Procédé de préparation du glycoside d'anthracy-

<EMI ID=243.1>

minéraux.