BG61648B1

BG61648B1 - Комплексни соли на хематопорфирин и неговите производни, метод за получаване и терапевтично средство

Info

Publication number: BG61648B1
Application number: BG97030A
Authority: BG
Inventors: Alfreda Graczyk
Original assignee: Wojskowa Akademia Techniczna Im.Jaroslawa Dabrowskiego
Priority date: 1991-10-29
Filing date: 1992-10-28
Publication date: 1998-02-27
Also published as: US5451599A; CZ281694B6; NO300499B1; DK0539960T3; PL165249B1; DE69217819D1; CN1040328C; FI924856A0; BG97030A; EP0539960B1; DE69217819T2; SI9200286B; RU2122003C1; NO924151D0; UA40568C2; PL292220A1; CZ325292A3; NO924151L; FI924856A7; YU48961B

Abstract

Новите комплексни соли се използват като терапевтично средство за откриване и третиране на новообразувания. Те имат обща формула, в която R1 и R2 са идентични или различни и означават СН=СН2, -СН/ОН/-СН3 или -СН/0R3/-CH3 групи, при което R3 е групата, образуваща олигомер, съдържащ етерна или естерна връзка, като тази група съдържа от 1 до 5 идентични или различни единици, произхождащи от изходен мономер със сходна формула, или R1 и R2 са идентични и означават СН/R4/-CH3- групата, в която R4 представлява групите карбоксиметиламино, 1-карбоксипентиламино, 1-карбокси-2-метилпропиламино, 1-карбокси-3-метилбутиламино, 1-карбокси-2-метилбутиламино, 1-карбоксиметилбутиламино, 1-карбокси-2-метилбутиламино, 1-карбоксибутиламино, 1-карбоксипентиламино, 1-карбокси-2-хидроксиетиламино, 1-карбокси-2-хидроксипропиламино, 1-карбокси-2-меркаптоетиламино, 1-карбокси-метилтиопропиламино, 1,2-дикарбоксиетиламино, 1-карбокси-2-карбамоилетиламино, 1,3-дикарбоксипропиламино, 1-карбокси-3-карбамоилпропиламино, 1-карбокси-2-фенилметиламино, 1-карбокси-/4-хидроксифенил/-етиламино, 1-карбокси-2-индолилетиламино, 2-карбокси-пиролидинил, 2-карбокси-4-хидроксипиролидинил, 1-карбокси-5-амино-прентиламино, 1-карбокси-4-гванилил-бутиламино, 1-карбокси-4-хидрокси-5-амино-пентиламино или 1-карбокси-2-1Н-имидазол/-етиламино група; А означава базична аминокиселина; m има стойност от 2 до 6, а n- от 1 до 5. По метода за получаване на комплексните соли реагира базична аминокиселина на хемат

Description

Област на техниката

Изобретението се отнася до комплексни соли на хематопорфирин и неговите производни, до метод за получаване и терапевтично средство.

Новите соли на хематопорфирин и на неговите производни се прилагат за откриване и третиране на новообразувания.

Хематопорфиринът и неговите производни (HPD) служат като фотосенсибилизатори за откриване и разрушаване на новообразувания при хора и животни. Тези съединения се инжектират интравенозно и се транслокират с активен транспорт до различни органи. В здрави тъкани те остават за сравнително кратко време, тъй като се метаболизират и екскретират, докато в неопластични тъкани те се задържат и остават там за няколко дни в непроменено състояние. Този феномен се използва при фотодинамичния метод за диагностициране и за селективно разрушаване на неопластични тъкани. Тъй като всички производни на хематопорфирина са слабо разтворими във вода, получаването на техните водни разтвори е твърде трудно.

Предшестващо състояние на техниката

В “Cancer Research”, v.44, p.1924, 1984 u v.45, p.635, 1985 се съобщава за метод за получаване на хематопорфиринни препарати, които се използват за инжектиране. Според този метод хематопорфириновите производни се разтварят в натриева основа, разбъркват се 1 час и се довеждат до pH около 7,1 с 0,1 N солна киселина.

Недостатък на метода е това, че дори и слабо понижаване на pH под 7,0 причинява преципитиране на съединението.

Крайният разтвор се приготвя чрез добавяне на подходящо количество физиологичен разтвор. Разтворът се стерилизира и се съхранява в запоени ампули. Тези водни разтвори са нестабилни поради склонността на всички хематопорфиринни производни към агрегиране. Според цитираните статии, разт ворите остават стабилни около три месеца, при положение, че бъдат замразени до -20°С на тъмно.

Техническа същност на изобретението

Настоящото изобретение предлага неразтворими във вода комплексни соли на хематопорфирин и на неговите производни, чиито разтвори имат pH между 7,2 до 7,8 (в зависимост от концентрацията), като това позволява бързо приготвяне на разтвор с вода или физиологичен разтвор, както и позволяващ подобра биодостьпност на терапевтичното средство.

Установено е, че терапевтичната активност на новите комплексни соли надвишава тази, например на познатите натриеви соли на хематопорфирина и неговите производни (HpDNa₂). Освен това новите соли инхибират - без ирадиация - развиването на неопластични клетки, както се потвърждава чрез проучвания върху клетъчни линии.

Солите на хематопорфирина и на неговите производни имат обща формула 1

в която R¹ u R² са еднакви или различни и означават групите: -СН=СН2, -СН/ОН/-СН3, -CH/OR³/-CH3, където R³ представлява групата, оформяща олигомера, съдържащ етерни и/ или естерни връзки, които представляват 1 до 5 идентични или различни соли, произхождащи от мономера на формула II

или R¹ u R² са еднакви и означават групата -CH/R⁴/-CH₃, в която R⁴ представлява следните групи: карбоксиметиламино, 1-карбоксиетиламино, 1 -карбокси-2-метил-пропиламино, 1-карбокси-З-метил-бутиламино, 1-карбокси-2-метил-бутиламино, 1-карбокси-бутиламино, 1-карбокси-пентиламино, 1-карбокси2-хидрокси-етиламино, 1 -карбокси-2-хидрокси-пропиламино, 1 -карбокси-2-меркаптоетиламино, 1 -карбокси-3-метилтио-пропиламино, 1,2-дикарбоксиетиламино, 1-карбокси-2-карбамоил-етиламино, 1,3-дикарбокси-пропиламино, 1 -карбокси-3-карбамоил-пропиламино, 1 -карбокси-2-пентил-етиламино, 1 -карбокси2-/4-хидроксифенил/-етиламино, 1 -карбокси2-индолилетиламино, 2-карбокси-пиролидинил, 2-карбокси-4-хидрокси-пиролидинил, 1карбокси-5-амино-пентиламино, 1 -карбокси-4гуанидил-бутиламино, 1 -карбокси-4-хидрокси5-амино-пентиламино или

-карбокси-2-/1 Н-имидазол/-етиламино 5 група; А означава основна аминокиселина; m има стойност от 2 до 6; η е от 1 до 5.

Настоящото изобретение предлага също смеси от соли с формула 1 и агрегати от тези соли. Предпочитани аминокиселини от символ 10 А обхващат тези с изоелектрическа точка, надхвърляща 7 (по-специално 1-аргинин, лизин, хистидин или хидроксилизин). Предпочитани соли включват тези от формула I, в която R¹ и R² са еднакви и означават -СН/R⁴/-СН₃ група15 та и са соли или от формула III, или соли от формула V.

Н₂(?

Н_гр НООС

СН-СНз

СН₃

Н₃С

Н₃С но ο?

Н₂р н₂с

СООН фн? СН₂

NH ΗΝ /=\СНз ^ϋΗсн₂-сн_гс=о .

формула III

Н_г?

ноос

Н₃С

NH HN сн-сн₃он qh₂ сн₃?Н₂СООН н-сн₃ сн₃ формула V

Предпочитани смеси обхващат тези, съдържащи аминокисели соли от хематопорфирин, протопорфирин, винилдеутеропорфирин 45 и дихематопорфирин или възможни техни агрегати.

Съгласно изобретението, при метода за синтезиране на комплексни соли на хематопорфирина и на неговите производни с обща 59 формула I, или смеси от соли с обща формула

I. в която значението на символите е споме- нато по-горе, едно хематопорфириново производно от обща формула IV или една смес от най-малко две производни от обща формула IV

формула IV в която значението на R¹ u R² е както посоченото по-горе при положение, че ако R' u R² означават -CH/R⁴/-CH₃ групата, тогава карбокси групите на R⁴ заместителя могат да бъдат свободни или защитени, реагира с основна аминокиселина със свободни или защитени групи или с техни монохидрохлориди, за предпочитане в органичен разтворител, в смес от органични разтворители или в среда, съдържаща органичен разтворител и вода, или смес от органични разтворители и вода, като, по възможност, групите, защитаващи карбокси функциите, са отстранени и продуктът, който е сол или смес от соли от формула 1, по възможност съдържащ агрегати на соли от формула I, се изолира.

При метода съгласно изобретението реакциите на аминогрупите на аминокиселини с карбокси групи на хематопорфиринови производни образуват йонни системи според уравнението:

-СООН + H₂N-R -> -СОО + ⁺H₃N-R Аминокиселини с изоелектрична точка >7, по-специално аргинин, лизин, хистидин или хидроксилизин, се прилагат като основна аминокиселина.За защита на карбоксигрупите в изходните съединения могат да се използват различни познати блокиращи групи, например тези описани в “Protective Groups in Organic Synthesis”, T.W.Green, John Wiley and Sons, 1981. Тези групи са посочени чрез тези, образуващи алкил, бензил или силил естери, както и чрез други групи, прилагани за защита на карбокси функциите.

Реакцията може да протече в широк температурен интервал, за предпочитане от стайна температура до 100°С, по-специално между 50-70°С. Реакционното време е обикновено от няколко минути до повече от 10 часа.

Предпочитани органични разтворители обхващат амиди, например формамид, диметилформамид, диетилформамид; нитрили, например ацитонитрил, пропионитрил, изобутиронитрил; естери, например етил ацетат; кетони, например ацетон; сулфоксили, например диметилсулфоксид; алкохоли и етил карбонат или техни смеси. Реакцията обикновено се извършва във водно-органична среда.

Блокиращи групи, ако са налице, се отстраняват чрез познати методи, например хидролиза или хидрогенолиза.

Солта или съответна смес от соли с формула I може да се изолира от реакционната смес чрез различни методи, например чрез преципитиране, кристализиране и други познати методи.

Специално се предпочита методът, при който към реакционната смес се добавя разтворител или смес от слабо полярни разтворители, които обаче образуват с използвания разтворител при реакцията хомогенен разтвор в съотношение от 1:1 до 1:5.

Подходящи разтворители са например етил, етер или ацетон.

Получената смес се оставя да престои от няколко часа до повече от 10 за бавно преципитиране на продукта.

Преципитатьт се сепарира чрез филтриране, промива се и се суши под вакуум върху сушилен агент, за предпочитане Р₂О₅. Продуктите са стабилни и не се разтапят. Те трябва да бъдат защитени от светлина.

Стадият на изолиране обхваща по възможност сепариране на продуцираната смес.

Изходните съединения с формула IV са известни. Те могат да се получат от хемин.

Изобретението се отнася също до терапевтично средство за откриване и/или третиране на неоплазми, съдържащо сол с обща формула I, в която значението на символите е посочено по-горе, или смес от най-малко две соли с формула I и възможни техни агрегирания.

Сместа може да съдържа аминокисели соли на хематопорфирин, протопорфирин, винилдеутеропорфирин и дихематопорфирин, или възможни агрегати.

Според изобретението терапевтичното средство може да се състои от сол или смес от соли с формула I в твърдо състояние, за предпочитане съхранявано в стерилно затворен контейнер.

Стерилният затворен контейнер обикновено съдържа солта или сместа от соли в терапевтично ефективна доза. Общо, терапевтичната доза възлиза на 1,5 до 10 mg/kg телесно тегло. От солта, съхранявана в контейнера, могат да се получават твърде бързи стерилни водни разтвори за непосредствен парентерален прием.

Според изобретението терапевтичното средство може също да се получи във формата на готови за използване препарати. В този случай активното вещество, например сол или смес от соли с формула I, се смесва с фармацевтично допустим разредител и/ или носител. Терапевтичното средство се прилага обикновено чрез инжектиране, по-специално интравенозно, но е възможно и интраперитонеално или ректално приложение. Препаратът може да се представи като стерилен воден разтвор, който евентуално може да съдържа освен сол с формула I, също и физиологичен разтвор, ако е необходимо, пропиленгликол. Както е споменато по-горе, тези разтвори могат да се прилагат непосредствено след приготвяне или да се съхраняват в стерилни контейнери.

Според изобретението терапевтичното средство може да се прилага без ирадиация; то е по-ефективно обаче като фотосенсибилизатор при фотодинамичния метод за диагноза и за терапия на новообразувания.

Новите съединения с формула I се изпитват в клетъчни линии. Използват се девет различни неопластични клетъчни линии, които се инкубират 48 часа с различни нови соли на пропопорфирин и с нова сол на обикновено прилаганите HpD препарати (хематопорфиринни производни), получавани според Lipson et al. Всички съединения се използват под формата на водни разтвори при концентрация от 50 mcg/ml.

Извършва се определяне на:

1) Клетъчна флуоресценция (F) след 48 часа от инокулирането, клетките се отмиват, интензитетът на флуоресценцията се измерва във флуоресцентен микроскоп и се изразява върху произволна скала с отчитания от 0 до 4;

2) Процент на живи клетки (Р %) след инкубиране от 48 часа;

3) Коефициент за размножаване на клетки (М) при наличност на различни препарати, изразени като:

Умножен брой клетки в културата с изпитвания препарат при концентрация от 50 mg/ml след 48 часа

М = ±--Умножен брой клетки в контролната култура след 48 часа

Резултатите са представени в таблици 1, 2 и 3. Те показват, че съединенията с формула I се различават по афинитет към различните изпитвани клетъчни линии и изразяват различни ефекти върху тяхното преживяване. Когато са на разположение различни производни, е възможно да се избере едно, което е най-активно срещу даден вид новообразувание, като това разширява обхвата на ефективната терапия.

Използваните символи в таблиците от 1 до 3 представляват следните съединения:

PP/AsP/j/Arg/₂-1 -аргинин di/N-acnapтил/-протопорфиринат

РР/Glu/₂/Arg/₂-1 -аргинин di/N-глутамил/-протопорфиринат

PP/Cys/₂/Arg/₂-l-аргинин di/N-цистеил/-протопорфиринат

РР/А1а/₂/Arg/₂-1 -аргинин di/N-аланил/ -протопорфиринат

РР/Ser/₂/Arg/₂-1 -аргинин di/N-серил/ -протопорфиринат

PP/Lys/₂/Arg/₂-1 -аргинин di/N-лизил/ -протопорфиринат

PP/Arg/j/Arg/j-1-арганин di/N-аргинил/ - протопорфиринат

РР/Тгр/₂/Arg/₂-1 -аргинин di/N-триптофанил/-протопорфиринат

PP/Met/₂/Arg/₂-l-аргинин di/N-метионил/-протопорфиринат

Таблици от 1 до 3 съдържат следните символи на клетъчни линии, използвани при проучвания на антинеопластичните средства:

производни на протопорфирин и на HpD препарат:

Линии неоплазми от човек:

Нер-2 клетки от рак на ларинкса Hela клетки от рак на шийката на матката

КВ клетки от рак на устната кухина

HBT-39/W клетки от рак на гърдата T-47D клетки от рак на гърдата

P3HR1 клетки от лимфаденома по

Буркит

Линии неоплазми от мишка:

GRMT/F6 клетки от рак на млечната жлеза при GR-щам мишки

М_шМТ/С1 клетки от рак на млечната жлеза при С₃Н-щам мишки

МА-104 клетки от рак на ембрионален бъбрек при резус маймуни.

При сравняване с познатите HpD препарати, новите соли проявяват широк обхват на пригодност да проникват в различни типове неопластични клетки и проявяват по-висока ефективност за тяхното разрушаване. Например, при използването на новата 1-аргинин сол на HpD [IIpD/Arg/,], процентът на живи клетки след инкубиране 48 часа (Р %) възли за при Hela линия, МА-104 линия и HBT/W линия съответно на 13, 6 и 0 %, докато при прилагане на известния препарат, например HpD/HpDNa₂/, съответните стойности са много по-високи, възлизащи на 28, 17 и 10 %.

Новите съединения се проучват също и при животни. Избира се съединението PP/Lys/₂/Arg/₂, използвано в пример XVII като едно от най-активните при проучвания на М_т5МТ/ С1 клетъчна линия (рак на млечната жлеза при СЗН мишка), както и PP/Glu/₂/Arg/₂, използвана в пример XV като най-слабо ефективно срещу този тип неоплазма.

При проучвания при животни, мишки СЗН с трансплантиран рак на млечната жлеза, се третират с две от гореспоменатите съединения в доза 10 mg/kg телесно тегло при два варианта: мишки, облъчвани с He-Ne лазер при доза от 150 J/cm² (във фигурата отбелязани с буквата L след символа на съединението) и необлъчени мишки.

Резултатите са отбелязани на фигурата. Те показват, че:

1) Проучванията при животни потвърждават резултатите, получени при експериментите с клетъчна линия;

2) Препаратът PP/Lys/₂/Arg/₂ се оказва най-активен, като удължава най-много преживяването на мишките;

3) Аминокиселите производни на протопорфирина проявяват цитотоксичен ефект върху неопластични клетки. Този ефект е по-силен при облъчени с лазер клетки в сравнение с необлъчените.

Примери за изпълнение на изобретението

Пример 1.

HpD е смес от хематопорфиринови производни като хематопорфирин, протопорфирин, винилдеутеропорфирин, дихематопорфиринов етер или техните агрегации.

Към 1 g HpD със средно молекулно тегло от 600 (1,67 mmol), разтворен в 30 ml диметилформамид (DMF), се добавят 581,8 mg 1-аргинин (3,34 mmol), разтворен в 2 ml вода. Сместа се загрява за 15-20 минути при 60°С във водна баня при интензивно разбъркване. След това се добавя 100 ml ацетон и разбъркването продължава 3 до 4 минути. Разтворът се оставя да престои от 5 до 15 часа. През този период солната смес означавана HpD/Arg/₂ преципитира. Прсципитатьт се отфилтрува, промива се с етер и се изсушава под вакуум. След изсушаването под вакуум, преципитатът е стабилен на въздух; той трябва да бъде защитен от светлина, поради съдържанието на порфиринови производни. Добивът от реакцията е около 75%.

Пример 2. Към 1 g HpD, разтворен в 20 ml формамид се добавят 581,8 mg 1-аргинин, разтворен в 2 ml вода. Разтворът се загрява и се разбърква както в пример 1. След това след охлаждане се добавя 100 ml етилов етер. Разтворът се разбърква и се оставя да престои няколко часа. Образуваният преципитат се отфилтрува, промива се с етер и се изсушава под вакуум. Сместа от соли HpD/Arg/₂се получава в количество от 1264,8 g, което отговаря на добив от 86 %.

Пример 3. Към 1230 mg дилизилпротопорфирин PP/Lys/₂ (1,4 mmol), разтворен в 40 ml формамид, се добавят 490 mg 1-аргинин (2,8 mmol), разтворени в 1,5 ml вода. Сместа се загрява на водна баня при 60°С за около 20 минути. След охлаждане се добавят 100 ml етилетер, разтворът се разбърква и се оставя да престои няколко часа. Образуваният преципитат се промива с етер и се изсушава под вакуум. Продуктът се получава в количество от около 1630 mg, което представлява добив от 90 %. Аналитичните данни за продукта са посочени под номер XXI в таблица 4.

Пример 4. Към 1199,6 mg (1,4 mmol) диглутамилпротопорфирин, разтворен в 60 ml формамид, се добавят 409,3 mg 1-лизин, разтворен в 1,5 ml вода. Разтворът се загрява при 60°С за 30 минути, след което се добавят 120 ml смес от ацетон/етер (1:3). Тогава сместа се разбърква за 10 минути и се оставя да престои няколко часа. Образуваният преципитат се отфилтрува под вакуум, промива се с етилетер и се изсушава под вакуум над Р₂О₅. Количеството на продукта е 1575 mg, което отговаря на 97,8 % добив.

Пример 5. Към 1081,8 mg (1,4 mmol) дисерилпротопорфирин, разтворен в 50 ml формамид, се добавят 490 mg 1-аргинин (2,8 mmol), разтворен в 1,5 ml вода. Разтворът се загрява при 60°С за 30 минути, след което се добавят 120 ml смес от ацетон/етер (1:3). Тогава сместа се разбърква за 50 минути и след това се оставя да престои няколко часа за кристализиране. Образуваният преципитат се отфилтрува и се изсушава под вакуум над Р,О₅. Количеството на продукта е около 1500 mg, което представлява добив от 95,5 %.

Всичките соли, посочени в таблица 4, се приготвят по процедурата, описана в пример 5. Те включват:

РР/Ser/j/Arg/₂-1-аргинин di/N-серил/ -протопорфиринат

РР/Gly/₂/Arg/₂-l-аргинин di/N-глицил/

- п ротопорфиринат

PP/Ala/j/Arg/j-1-аргинин di/N-аланил/ -протопорфиринат

PP/Val/₂/Arg/₂-l-аргинин di/N-валил/ -протопорфиринат

PP/Leu/j/Arg/j-1-аргинин di/N-леуцил/ -протопорфиринат

PP/ILeu/j/Arg/j-1-аргинин di/N-изолеуцил/-протопорфиринат

PP/Phen/₂/Arg/₂-1 -аргинин di/N-фенилаланил / - протопорфиринат

PP/Tyr/₂/Arg/₂-l -аргинин di/N-тирозил/-протопорфиринат

PP/Pro/₂/Arg/₂-l -аргинин di/N-пролил/

- прото порфиринат

РР/РгоОН/₂/Arg/,-1 -аргинин di/N-дихидроксипролил/-протопорфиринат

PP/Trp/,/Arg/,-l-аргинин di/N-триптофанил/-протопорфиринат

РР/Cys/₂/Arg/₂-1 -аргинин di/N-цистеил/-протопорфиринат

РР/Asp/₂/Arg/₂-1 -аргинин di/N-аспартил/-протопорфиринат

PP/Glu/₂/Arg/₂-l-аргинин di/N-глутамил/ -протопорфиринат

РР/Arg/₂/Arg/₂-1 -аргинин di/N-аргинил/-протопорфиринат

PP/Lys/₂/Arg/₂-l-aprKHHH di/N-лизил/ -протопорфиринат

PP/LysOH/₂/Arg/₂-l-аргинин di/N-хидроксилизил/-протопорфиринат

PP/His/₂/Arg/₂-1 -аргинин di/N-хистидил/-протопорфиринат

РР/Asn/₂/Arg/₂-1 -аргинин di/N-acnapгинил/-протопорфиринат

PP/Gln/₂/Arg/₂-l-аргинин di/N-глутаминил/-протопорфиринат

Таблица 1

Г-г <Т 40 ’ 1	Символ на съединението HpD/Arg/,	• (		Клетъчна : MA - 104	ли НИЯ
H e 1 «			CL		PZ
I ^F • 4	_; p% : 13	M 0,14	- F ·	PM 6		M 05	. F	: ?* ·.	M 0,30	F	P*	M 0,250
2	PP/Asp/,/Arg/₅	’ 444	: зв	0,50	* !	17	: 0	52	* 4-	: 55 :	0,55	4	15	0.15
	PP/Glu/₂/Arg/₂.	• 44		0,16.	*···<«·«	.15.	0	16	*« · « « ·	• 45 ;	0,45	4-	.15.
4	PP/Cvs/₂/Arg/₂	* 4·+	: 55	0,43	’ 44 *	11	• 0	16	• -	: 30 :	0,30	-	40	0,40
5	PP/Al«/,/Arg/,	* 4	: 11	0,11	I +♦ I	50	: 0	50	: -	: 30 :	c,jc		15-	0,15
ь	;?/?T7/2/575/2.	• 44	-..55..	.0,50.	-..7...-	0	: ⁰	¹⁶	• +	: 0 :	0		2,5	0.C2
-7	PP/’_lr/,/Arg/₃	• 4*4	• 16	0,16		0	• 0	10	^: -	• 30 ·		-		0,50
3	PP/?-»/,/Arg/,	* -·*	: 5	0,14	‘ 4+	35	. 0	tc	; —		•0			0 OS
9	РР/Arg/,/Arg/,	• ♦ +	: 1	0,28	« +·*		: 0	42	. 4*	. 4		-	Ю	0,10
10 • . .	pp/t7?/г/575/2.	• +*+	^: 62 .......	0,62		25	• 0 . » · »	25		• 50 · t, . , . , .\	0	• . . .	50 ....	0,50 ......
11	PP/Met/₂/Arg/₂	‘ *444	: 5	0,05	* 4·* ‘	22	: 0	33	* *	: 0 :	0	♦	J	0,0c

Таблица 2

Символ на ·..........’..........Клетъчна линия -.·.................................

съединението ‘

KB

HBT -

39/w

: gr

NO

F

•

,P%

M

F

P%

и :

F

: p% : m

*

.1 .

HpD/Arg/, :

♦♦++

9

: o,o6

·· +++

•

0

o ^:

++

• 20 ^: 0,40

......

• · · ·

.........

········

··* * *

• · · ·

··«····

• · · ·

. s

2

РР/Азр/j/Arg/, :

♦+

*

16

: o,i2

* +++

•

•48

*.

0,31:

++

: 25 : o,73

₉

3

pp/ciu/₀/Arg/, :

++++

•

8

0,08

•

66

0,73 ·’

♦

75 ·' 0,75

4

pp/cys/,/Arg/, :

♦

•

12

: 0,12

♦

42

+++

; so : o,75

I

5

PP/Al»/,/Arg/, :

+++

I

0

: o

I ♦♦

17

o,33:

+

: so : 0,50

6

PP/Ser/,/Arg/, ·

♦+

0

·’ 0

++

33

.

0.50 ·'

*

• 12 · 0,12

• ·

. -s .

• · · · «

·’»·····

*·«··»»·

• · · ·

• +

···«*

• · · ·

• «

7

PP/Llz/₂/Arg/_2i_j

12

: o,i2 ·/···«··

* ♦++♦ \ ······ ·

U7

3₁ uu ·

+**

: 25 : o.~5

•

PP/Fen/,/Arg/,

--

12

: o,i2

++4-+

•

11

•

o, 11:

**♦

: o : o

9

.. <'

+

16

• 0,16

• ++++

J...

28

*

.0,28;’

+++

• 12 0.12

10

PP/Trp/j/Arg/, I

nb

Ξ1

: 0.21

* ***+

•

18

0,11 ·

+++

: 62 : 0,62

-

PP/Met/,/Arg/, I

♦+

i

• 0,-.2

ί >♦♦♦

•

3

o, 08:

-*♦*

’. 25 : 0,22

Таблица 3

		Символ на		V	Клетъчна	линия
	•	съединението :		HEp - 2	•	Мж			• T-	47D
No	*		F	• P%	: m :	f :	P%	: m	: f	: p%	*. M
	-	τν 7 гг-г;. ·. ·		• · -......	•.....* * · ·	•...... · ·	···««·	·♦··*·	·'·♦··	/·.···	«.····(·
1		HpD/Arg/₂ ;	+	^: 31	• o,3i :	+♦	33	0,75	- +	• 30	0,66
, · .	+ ·.	. · . · .............	. .«		* ....... *	···►··	♦···»·	···»····	•.....	·»····	’·*·····
2		PP/Asp/,/Arg/, ;			• 0,00 ·	♦ 44	70	• 0,92	* ++4-+		.:.° >.?².
3	•	PP/Glu/₂/Arg/₂	·►*++ '. 15	: 0, os :	+ ++ ί	,..76.	.:. 0,70.	* ++ + »···»·	: 49 f · · · · ·	: o,3o %»··«··
4	z		+++ + · bO	0,32 ·'	+++	40	.2..9-.73.	• ♦	²⁶	: o,84
5	4	PP/Al«/₂/Arg/_2><:	4-4-	: ,²¹	: 0,21 : * /...... · \	++♦ *	86	: 0,34	* ♦*+	: .85.	:.9.92
6		.^(^.:(2(^(2.	*	J 25	.2..9-50.2	. .*.... 2	37.	.9,37.	« +++	: -0	: o,6c
·’		РР/Uz/j/A.-g/j ·	4·+	• 10	• 0,42 ·	++		0,30	* ++	• 57	• 0,92

3	: ^1^2.2(^.(2.	* ' ++	It	: :,08 r · ......	: —++ : 12	:..,9-57,	4* • · ’ * ’	: =^c	: 0,60
9	: PP/Arg/₂/Arg/₂·	• + ·		: 0,14	: +++ : 12	:...9-39.	+++	: 4c	: 0,40
0_	• (2.(172.2.	:--- :		: - · 6	. y- . ;.....	: ..9,93	* . . . . .	• 1. . . . .	; 0, ?
1	: ?°/^Met/,/.1.-3/,	* -+^4,	e	: 1	' *+++ ’ 8 . · ι	: c.oe	+ ++	: ic	: o,^c

Таблица 4

Пример ^{с?,лаол на} голекчлна · ξ съединението^^юрмуда j	Гсам-яоА.'	c	Н	ν :
тегло	: изч. ^χ	Устан.	_ Изч/Устан.	Вз=/.	JCTdS. · >__1
ι: г— :.....з- :	U '	.;....?..	6'	7	а	•9	• ‘ 10 Ϊ
V «PP/Ser^Arg^ '^52^76^Ί4θΐ2 ’	1121,2	: 55,65	55,69	ь,78 :	6,81	17,43	: 17,52;
VI ;PP/Gli/₂/Arg/₂ :	1061,2	: 56,53	56,42	6,78 :	6,71	18,45	: ia,z2:
xif :'pp/Ai»/₂/Arg/₂'	1039,2	• 55,09	55,14	6,97 :	7 ₍ 0^	17,=9	.’ 10,03.·
vat ^PAfci/a/Arg/^CjgHgjN,^ :	1145,3	• 58,67	58,58	7,33 :	7,24	17,11	17,00·
]X . PP/L«Q/2/Arg/^ N^0^2 . X -pp.Zed/^/Arg/^ :^56^75^14^2 :	1173,3 11733	• 59,32 ':‘59,’j2‘	59,24 *·>«·« 59,34	6,39 · ♦ , » . . · » ✓« 6,39 :	6,27 6 ₍ 4⁴	1б,71 'ib’yi	: 16,64; .>·.>... : 16.68.·
X!; :рр/у-«/₂/Аг_г/₂:с_5/4н_гл'л_йо₁₂ :	1241,4	: όΐ,36	61,91	ь, /в :	- ι ”2	15.-З	: is,7$:
x ir:pp/T_Zr/2/Arg/₂:c₆₄H^s_1ito_1Zl :	1273,4	: 00,31	60,39	□ ,44 :	б, 40	15 ⁷ 9	• * 5 > **5 ·
XUI ;PP/Pr./₂/Arg/₂ ^Η^Ν,,,Ο,₂ J	1141,3	J 5β,&3	56,93	7,01 :	7,07	ί?, 1*⁷	• 1=,21
Xi·/ ·ρρ/ργ»φ/₃ · ; ; /Arg/2 *	1175,3	; 57, ·3	57,09	t.8o :	6,72	16 .£7	; )(5,59:
XV	019.Λ	• 6',ЙЧ	6/,72	6,52	6 4.6	16 3S	: 16,79'·
XVI : ;PP/Cys/₂/Arg/₂ · C^H^N^O^S	•1153,3	• 54,01	54,11	6,59 ·	6,64	16,99	J 17,04
XV1I ;pp/M«t/₂/Arg/₂:	•1209,4	: 55,56	55,61	: 6,94 :	7,01	16,20	: 16,27
XV.1H ;PP/Asp/₂/Arg/₂ :	•1177,2	: 55,05	55,11	б,4ь ;	6,52	16,65	: 16,74
ХП :PP/Gld/₂/Arg/₂ : CggHgoN^O^	:1205,3	: 55,75	55,64	‘ 6,64 1	6,53	16,26	: 16,18
XV :PP/Arg/₂/Arg/₂ : Cjg^NgQO^	:1339,4	: 51,96	51,82	: 6,72 :	5 _г 54	20,90	: 20,97 .
XXJ- _-PP/L^z/₂/Arg/₂ . C5_gHg_ON₁gO₁₂	:1203,4	j 57,84	57,89	• 7,4а :	7,53	13,61	: 18,58
XX-'ro ^:PP/LyzJ«/,/Are/_ ; ^{7 2} ^58^0^6^.4	• 1255,4	: 56,34	56,23	: 7,28 :	7,19	1S.1J	. 1fi_T04
X.XMl :pP/Hl»/₂/Arg/₂ : ~_eH_S2V,₃0₁₂	•1221,3	: 50,99	56,39	: =·⁷' :	6,57	20, оЗ	* 'Г* S “ • -ж,<
XXIV ;PP/Asn/₂/Arg/₂ : Cj^gN^O^	•1175	• 55,14	55,19	; 6,64 ·	0,68	19,06	: ^<а·?⁸
xx: ν ·ΡΡ/σΐη/,/ΑΓ2/₂ · с_5бн_гдн₁₆о_1й	1203,3	• 55,95	55,77	6,за ·	ό,81	18,62	• 18,71

Claims

Патентни претенции

1. Комплексна сол на хематопорфирин и неговите производни, имащи обща формула I

в която R, u Rj са еднакви или различни и са -СН=СН₂, -СН/ОН/-СН, или -СН/OR/ -СН₃, където R₃ означава групата, формираща олигомера, съдържащ етерни или естерни връзки, като тази група обхваща от 1 до 5 идентични или различни единици, произхождащи от мономера с формула II

ОН

НтС СН-СМ)

HjC lj____.о<.

HN И

Н<Й 1_/N ч &'^c‘ II λ CH| coat или R, и R₂ са еднакви и означават -

CH/R₄/-CH₃ групата, където R₄ представлява групите: карбоксиметиламино, 1 -карбоксиетиламино, 1-карбокси-2-метил-пропиламино, 1карбокси-3-метил-бутиламино, 1 -карбокси-2метил-бутиламино, 1-карбоксибутиламино, 1карбоксипентиламино, 1 -карбокси-2-хидроксиетиламино, 1 -карбокси-2-хидроксипропиламино, 1-карбокси-2-меркапто-етиламино, 1-карбокси-3-метил-тиопропиламино, 1,2-дикарбокси-етиламино, 1 -карбокси-2-карбамоил-етиламино, 1,3-дикарбоксипропиламино, 1-карбокси-3-карбамоилпропиламино, 1 -карбокси-2-фенил-етиламино, 1 -карбокси-2-/4-хидрокси-фенил / -етиламино, 1 -карбокси-2-индол ил-етиламино, 2-карбокси-пиролидинил, 2-карбокси4-хидрокси-пиролидинил, 1-карбокси-5-аминопснтиламино, 1 -карбокси-4-гуанидил-бутиламино, 1-карбокси-4-хидрокси-5-амино-пентиламино или 1 -карбокси-2-/1 Н-имидазол/-етиламино група; А означава основна аминокиселина; m има стойност от 2 до 6, а и - от 1 до 5.
2. Комплексна сол съгласно претенция 1, при което А означава аргинин, лизин, хистидин или хидроксилизин.
3. Комплексна сол съгласно претенция 1, при което R₂ u R₂ са еднакви и представляват -CH/R₄/-CH₃ група.
4. Комплексна сол съгласно претенция 1, съдържаща най-малко две соли с обща формула I.
5. Комплексна сол съгласно претенции 1 и 4, съдържаща амино кисели соли на хематопорфирин, протопорфирин, винилдеутеропорфирин и хематопорфирин етер.
6. Метод за получаване на нови комплексни соли на хематопорфирин и неговите производни от формула I, или на смеси от соли с обща формула I, в които Rj u Rj са еднакви или различни и представляват -СН=СН₂, СН/ОН/-СН₃ или -CH/OR₃/-CH₃ групи, при което R-j означава група, образуваща олигомер, съдържащ етерни и/или естерни връзки, като тази група обхваща от 1 до 5 еднакви или различни единици, произхождащи от мономера с формула II, или R_t u R₂ са еднакви и представляват -CH/R₄/-CH₃ група, където R₄O3Haчава групите: карбоксиметиламино, 1-карбоксиетиламино, 1-карбокси-2-метил-пропиламино, 1-карбокси-3-метил-бутиламино, 1-карбокси-2-метил-бутиламино, 1 -карбоксибутиламино, 1-карбоксипентиламино, 1-карбокси-2-хидрокси-етиламино, 1 -карбокси-2-хидроксипропиламино, 1 -карбокси-2-меркапто-етиламино, 1 -карбокси-3-метил-тиопропиламино, 1,2-дикарбокси-етиламино, 1 -карбокси-2-карбамоилетиламино, 1,3-дикарбоксипропиламино, 1-карбокси-3-карбамоилпропиламино, 1-карбокси-2фенил-етиламино, 1-карбокси-2-/4-хидроксифенил/-етиламино, 1-карбокси-2-индолилетиламино, 2-карбокси-пиролидинил, 2-карбокси-4-хидрокси-пиролидинил, 1 -карбокси-5аминопентиламино, 1 -карбокси-4-гуанидилбутиламино, 1 -карбокси-4-хидрокси-5-аминопентиламино или 1-карбокси-2-/1 Н-имидазол/ -етил-амино група; където А означава основна аминокиселина; m има стойност от 2 до 6; а η - от 1 до 5, характеризираща се с това, че хематопорфириново производно с обща формула IV или смес от най-малко две производни с обща формула IV

при което R_I u R₂ имат горепосочените значения при положение, че ако R_t u R₂ представляват -CH/R«/-CH₃ група, тогава карбоксигрупите на заместеното R« могат да са свободни или защитени и тогава реагират с основна аминокиселина със свободни или защитени карбокси групи или с техния монохидрохлорид, като по възможност групите, защитаващи карбокси функциите, и продуктът представлява сол с формула 1 или смес соли с формула I.
7. Метод съгласно претенция 6, характеризиращ се с това, че се извършва в органичен разтворител, смес от органични разтворители, в среда, съдържаща органичен разтворител и вода или смес от органични разтворители и вода.
8. Метод съгласно претенция 6, характеризиращ се с това, че като аминокиселина се използва аргинин, лизин, хистидин или хидроксилизин.
9. Метод съгласно претенция 6, характеризиращ се с това, че сместа, съдържаща хематопорфирин, протопорфирин, дивинилдеуте- ропорфирин и хематопорфирин етер реагира с аргинин.
10. Метод съгласно претенция 6, характеризиращ се с това, че солта или сместа от

5 соли се изолира чрез добавяне към реакционната смес на един разтворител с ниска полярност или смес от разтворители, образуващи хомогенен разтвор с разтворителя, използван при реакцията.
11. Терапевтично средство за откриване и/или третиране на новообразувания, характеризиращо се с това, че съдържа сол или смес от най-малко две соли с формула I, при което Rj u R₂, А и m имат значенията, посочени в претенция 1.
12. Терапевтично средство съгласно претенция 11, характеризиращо се с това, че съдържа сол или най-малко две соли с формула I в твърда форма.
13. Терапевтично средство съгласно претенция 11, характеризиращо се с това, че съдържа сол или смес най-малко от две соли с формула 1 и фармакологично приемлив разредител или носител.
14. Терапевтично средство съгласно претенция 11, характеризиращо се с това, че представлява стерилно затворен контейнер, съдържащ сол или смес от най-малко две соли с формула I в твърда форма.