BG97371A

BG97371A - Антинеопластичен хемотерапевтик от растителен произход, притежаващ висока селективност и силно понижена токсичност и метод за неговото получаване

Info

Publication number: BG97371A
Application number: BG97371A
Authority: BG
Inventors: Claudio D'arrigo
Original assignee: Claudio D'arrigo
Priority date: 1991-05-29
Filing date: 1993-01-28
Publication date: 1994-03-24
Also published as: AU2150692A; JPH05507735A; RO109815B1; CA2087600C; IE921545A1; NO309306B1; PL168348B1; AU654034B2; FI101042B; EP0541780A1; DK0541780T3; DE69213886D1; MX9202547A; RU2104707C1; DE69213886T2; PT100526A; IT1245700B; EP0541780B1; PL297647A1; HU9300244D0

Abstract

Антинеопластичният химиотерапевтик включва активни вещества с антинеопластично действие, екстрахирани от растения от семейство Pittosporacea, или препарати на основата на поне едно вещество или състав, съдържащи се в посочените екстракти. В сравнение с други известни антитуморни лекарства той показва по-висока селективност по отношение на изродените клетки и по-малко разсейване успоредно с метаболизма на здравите клетки. Методът за екстракция и разделяне на компонентите на екстрактите намира приложение за получаване на антинеопластични лекарства или медикаменти за лечение на други патологии. 38 претенции

Description

АНТИНЕОПЛАСТИЧЕН ХЕМОТЕРАПЕВТИК ОТ РАСТИТЕЛЕН

ПРОИЗХОД, ПРИТЕЖАВАЩ ВИСОКА ССЛВКТИРПОСТ И СИЛНО· ПОНИЖЕНА

ТОКСИЧНОСТ И МЕТОД ЗА НЕГОВОТО ПОЛУЧАВАНЕ

Предмет на настоящето изобретение са вещества и състави, притежаващи антинеопластична активност, екстрахирани от растения от семейство Pittospora'cea, фармацевтични препарати на основата на поне едно от споменатите вещества и състави, метод за тяхното екстрахиране и, респективно техни рецептури.

Както е известно, една от наи-перспективните насоки в изследването на неопластичните заболявания, поне от теоретична гледна точка, е антитуморната хемотерапия. Антипролиферационните агенти, изолирани до сега, са от наи-различен произход и с различни химични характеристики. Сред тези агенти са, също така, различни растителни екстракти като colchicine и vincaleucoblastin, първият екстрахиран от Col chicum Autumnale, а вторият от Vinca Rosea. Въпреки, че тези вещества повече или по-малко се отличават със специфична антитуморна активност, тяхната селективност по отношение на изродените клетки обикновено е твърде лоша. Опасността от възможното им разсейване успоредно с метаболизма на здравите клетки е важна пречка за тяхната широка употреба.

Изненадващо е установено, че с помощта на настоящето изобретение, осигуряващо хемотерапевтичен антинеопластичен агент на основата на активен компонент от растителен произход с високо селективна антитуморна активност и много по-ниска в сравнение с други антитуморни лекарства токсичност, е възможно да се превъзмогнат гореспоменатите ограничения.

Преди всичко, обект на настоящето изобретение е метод за получаване на вещества и/или състави, притежаващи антинеопластична активност, характеризиращ се с това, че части и/или продукти на растения от семейство Pittosporacea, в които и да е стадии на тяхното развитие или зрелост, се подлагат на следната обработка: а? екстракция на компонентите чрез накисване в органичен разтворител;

възможно разбъркване или разклащане на разтвора, съдържащ екстракта с друг разтворител, поне частично смесваем с

първия с цел разделяне на компонентите на екстракта в образуваните Фази;

в2) възможна обработка на всяка фаза, независимо една от друга, с поне една органична течност със свойства на разтворител по отношение на поне един от компонентите на екстракта, последвана от филтруване на всяка суспензия, която може да се образува, отделяне на твърдата фаза и внимателно пречистване;

гЗ възможно разделяне на компонентите вьв всяка от течните фази; и дЗ отделяне на разделените компоненти с антинеопластична активност от тези без антинеопластична активност.

Екстрактите могат да се сушат и пречистват преди всеки следващ етап на метода.

Растенията от семейство Pittosporacea са за предпочитане от рода Pittosporum. В този аспект растенията могат да бъдат подбрани например от групата, съдържаща Pittosporum ondulatum, Pittosporum coriaceum, Pittosporum viridicolor, Pittosporum rhombipholium, Pittosporum eugenoides, Pittosporum crossifolium и Pittosporum Tobira и техни комбинации.

Разтворителят може да бъде алкохол. Добри резултати са получени при използване на етилов алкохол.

Обемното съотношение между органичния разтворител и обработваните части на растенията е за предпочитане между 1:10 и 10: 1.

Времето за обработка е за предпочитане между 5 минути и 3 месеца. Температурата на обработка може да варира за предпочитане между 5°С и 100°С.

За предпочитане е компонентите на екстракта да се раз делят хроматографски. Добри резултати са получени при из

ползване на колонна хроматография през силикагел или препаративна колонна HPLC.

Екстракцията може да се осъществи с помощта на етанол и времената на задържане при отделяне на компонентите посредством HPLC са около следните стойности: 1.157, 1.545, 1.883, 2.051, 2.273, 2.572 и 2.743.

СТрябва да се уточни, че аналитичните тестове, и в този случаи и при следващите, се извършват на хроматограф PerkinElmer 250 снабден с колона 125 mm 4 mm RP 18 с подвижна Фаза, съдържаща метанол и вода в съотношение 80:20 и дължина на вълната равна на 210 nm).

След екстракцията с етанол, така полученият разтвор се разклаща с хлороформ до получаване на две фази, алкохол-хло роформена фаза с интензивен зелен цвят и водна фаза с оранжево-жълт цвят. В този случай, компонентите с антинеопластична активност се намират в алкохол-хлороформената фаза. Отделянето на компонентите с антинеопластична активност се

извършва хроматографски след изсушаване на алкохол-хлороФормената фаза и разтваряне в метанол. При хроматографиране на метанолния разтвор чрез HPLC се отделят компонентите, които имат времена на задържане около 1.969, 2.296 и 2.756.

Алкохол-хлороформеният разтвор може да се концентрира чрез изпарение и да се прибави изопропилов алкохол за образуване на суспензия, която се филтрува, твърдата фаза се изсушава термично и се разпрашава в хаван. След последващо разтваряне в етанол-вода, се пречиства през хроматографска колона с активен въглен. Двете твърди Фракции Сзамърсена и чиста), разтворени в етанол-вода или метанол могат да се хроматографмрат посредством HPLC като се отделят компонен-

тите, които имат времена на задържане около 1.157, 1.545 и

2. 264.

Изобретението също така се отнася до самите вещества и състави, което е следствие от факта, че те могат да се получат по описания по-горе метод.

Предмет на настоящето изобретение са също така вещества и състави, притежаващи антинеопластична активност, характеризиращи се с това, че могат да бъдат получени по описания по-горе метод.

От веществата и съставите, притежаващи антинеопластична активност могат да се получат соли, съединения и комплекси, с цел първите да станат водоразтворими.

Настоящето изобретение още се отнася до фармацевтични препарати, характеризиращи се с това, че съдържат поне един активен компонент - вещество или състав, избран от групата вещества или състави, или комбинация от тях, притежаващи антинеопластична активност и, които са получени по описания по-горе метод.

фармацевтичният препарат може да бъде подбран от групата, съдържаща воден разтвор за парентерална употреба, капсули за орално приемане, свещички за ректално приемане, овули за поставяне във вагината, унгвенти, мехлеми, кремове и гелове.

Водният разтвор може да се постави в ампули. Всяка ампула съдържа между 0.1 и 2. 5 g активен елемент, за предпочитане между 0.1 и 1.5 g и наи-вече между 0.2 и 1.0 g активен елемент.

В случая, когато фармацевтичният препарат е под формата на капсули, всяка капсула съдържа 0.2-2.0 g активен елемент, за предпочитане 0.8-1.2 g активен елемент.

В случая, когато Фармацевтичният препарат е под Формата на свещички за ректална употреба, всяка свещичка съдържа между 0.2 и 2.5 д активен елемент, за предпочитане между 0.3 и 1.0 g или между 1.2 и 1.7 g активен елемент.

В случая, когато Фармацевтичният препарат е под Формата на овули за поставяне във вагината, всяка овула съдържа между 0.1 и 2.5 g активен елемент, за предпочитане между 0.5 и 2.5 g и наи-вече между 0.3 и 1.7 g активен елемент.

В случая, когато Фармацевтичният препарат е под Формата на унгвент, мехлем, крем или гел, локалният носител съдържа между 0.5 и 12 % активен елемент, за предпочитане между 3 и 7 % активен елемент.

Изобретението се отнася също така и до употребата на компонентите, получени чрез екстракция и разделяне съгласно описания по-горе метод, сами или в комбинация, за получаване на медикаменти за лечение на различни патологии, различни от неопластичните.

До тук бяха описани обектите на изобретението най-общо. С помощта на следващите примери ще бъде представено детайлно описание на целта, характеристиките, предимствата и методите за приложение на изобретението.

ПРИМЕР 1

Метод за екстракция и пречистване на активните елементи 1 kg зелени плодове от Pittosporum Tobiга се смилат фино и се заливат при стайна температура с такова количество

О етилов алкохол 95 достатъчно да покрие смлените плодове Соколо 1:1 об.X Сместа се оставя да кисне в продължение поне на 30 дни, след което се филтрува. 1000 ml от алкохолния екстракт, получен, както е описано по-горе, се поставя в делителна Фуния заедно със същия обем хлороформ. След няколкократно разбъркване настъпва разделяне, което завършва след 24 часа разбъркване: от долната част на Фунията се отделя алкохол-хлороФорменият интензивно зелен разтвор; в горната част на Фунията се образува воден разтвор с жълто-оранжев цвят Соранжева разтворима Фракция = OSF) на водоразтворими вещества, екстрахирани от водата, която първоначално се намира в плодовете. OSF е в количество около 20 обемни % и се

образува почти изключително от компонентите с време на задържане при HPLC 1.141 С3,45% площ), 1.440 С24.46% площ) и 1.593 С61.93% площ). OSF субстанцията, равна на приблизително 73 тегловни % сухо вещество от обшия алкохолен екстракт се образува като жълтеникаво бял прах, които е не само на-

пълно неактивен спрямо експерименталните тумори, но подпомага тяхното развитие, като го ускорява. Следователно тази субстанция се отстранява. Останалият алкохол-хлороформен разтвор се изпарява при 30°С в ротационен вакуумизпарител и се суши. Получава се аморфно вещество, тъмнозелено на цвят, което, когато се разтвори в метанол Cl mg/ml) и се анализира посредством HPLC, показва забележима концентрация на активни пикове с времена на задържане от 1.969 С7.83% площ) до 2.296 С40.12% площ) до 2.756 С1.47% площ).

ПРИМЕР 2

Метод за пречистване на активните съставки

Алкохол-хлороФорменият разтвор, останал от обработката, описана в Пример 1 Сцелия алкохолен екстракт без OSF) се изпарява в колба в ротационен вакуумизпарител при 45°С, докато се концентрира до обем около 30 ml Сприблизително 1/35 от първоначалния алкохолен екстракт). Тогава към колба та се прибавя изопропилов алкохол в количество равно на 30 % от общия първоначален алкохолен екстракт С300 ml?. Образува се суспензия тъй като част от веществата, получени в общото количество алкохолен екстракт без OSF, е разтворима и в етанол и в метанол, но вече не се разтваря в изопропанол.

Така получената суспензия се филтрува през бързофилтруващ филтър. Утайката, която остава върху филтъра се суши при температура 45°С. След като се изсуши се разпрашава в порцеланов хаван. Така се получават приблизително 1500 mg жълто-зеленикав прах. Този прах Скоито по-нататък ще наричаме CIDI?, разтворен в метанол и изследван посредством обичаен HPLC метод показва времена на задържане 1.157 С78.83% площ?, 1.545 С16. 25% площ? и 2.264 С4.91% площ?.

Възможно е, при използване на Supercosil LC-NH^-S/uсферична колона, подвижна фаза CH₃CN“H₂O СЗ: 12) за скорост на изтичане 1.5 ml/m и UV детектор при 217 nm да се получат следните стойности на времената на задържане: 1.889 Сконцентрация 53.88?; 2.640 С20.89?; 3.145 С4.61?; 3.420 С5.08?; 3.942 С6.16?; 4.722 С4.53?; 5.255 С3.253?; 6.287 С0. 90? и 6.982 С0.66?.

При използване на Chromopack-Lichrosorb RP 18-10/uнерегулярна колона, със същите елуент, скорост на изтичане и маркер, се получават следните пикове: 1.460 Сконцентрация 65.98?; 1.965 С20. 87?; 2.535 С1.86?; 2.704 С2.05?; 3.097 С1.74?; 3.395 С3.38?; 4.324 С0. 85? ; 4.609 С0.93?; 9.597 С0.88?; 10.017 С1.42?.

При калциниране веществото CIDI показва наличие на 3.17% утайка. Елементният анализ в тегловни % Сбез да се смята утайката? е следният: С 54.25 %; Н 7.58 %; 0 38.17 %, които съответства на емпирична формула близка до С₁₅Н₂₅0₇ ^и

т.т. Сразя.) 196-222°С. В инфрачервения спектър СспектроФотометър за ИЧС Perkin-Elmer мед. 683) в среда на КВг, концентрация 1 mg/100 mg, се наблюдават следните ивици:

3400 cm ¹ валентни асоциирани 0Н; 2960 cm ¹ асиметрични валентни СН3; 2920 cm асиметрични валентни СН2; 1720 cm валентни С=0; 1610 cm ¹ асиметрични валентни С=0 на С00 ; 1460 cm^-1 вибрационни СН3; 1380 cm ¹ вибрационни СН₃Стипични за 0С0СН₃^; 1250 cm ¹ вибрационни 0Н; 1150, 1080 и

1040 cm валентни С-0.

UV спектър Сспектрофотометър UV-vis Perkin-Elmer мод.

Lambda 5) :

1) Разтвор в СН₃ОН~Н₂О С4:1), концентрация 6.10 ² mg/ml: максимална абсорбция при 202 nm; абсорбцията бързо намалява до 260 nm, остава постоянна в областта 260-330 nm, и след това отново намалява;

2) Разтвор в CH₃CN~H₂O С3:1), концентрация 6.10 ² mg/ml; абсорбцията бързо намалява от 200 до 260 nm, остава постоянна между 260 и 330 nm, и след това отново намалява.

CIDI под Формата на прах е неразтворим в ацетон, бензол, хлороформ, етилов етер, петролеев етер, етилов алкохол,

изопропилов алкохол; разтворим е в метанол и вода.

Водният разтвор на CIDI има pH 6.5.

LD^q върху мишки: CD-I CICR) BR е 1274.9 mg/kg Сбазови граници 1041.2-1561.0 mg/kg) орално и 25 mg/kg Сбазови граници 23.0-27.2 mg/kg) интраперитонеално.

ПРИМЕР 3

Следваш метод за пречистване на активните съставки g CIDI под Формата на прах, получен по метода съгласно Примери 1 и 2 се разтваря в 1000 ml разтвор на етилов алкохол и вода (4:12), като се получава 1%-ен разтвор със зелен цвят. Приготвя се хроматограоска колона с порест сепаратор с диаметър 4.5 cm. Върху сепаратора се поставя слои от памучна вата, а върху него слои пясък с височина приблизително 3 cm. След това се излива суспензия, съдържаща 35 g активен въглен в етанол. Когато активният въглерод се уп-

лътни добре, разтворът на CIDI прах (разтворен, както е описано по-горе2) се пропуска през хроматографската колона. Когато целият разтвор на CIDI премине през хроматографската колона, колоната се промива чрез пропускане на 1000 ml чист разтворител (етилов алкохол-вода 4:12).

Получава се прозрачен, безцветен разтвор, които се кон

центрира максимално в ротационен вакуумизпарител при температура 45°С.

След прибавяне на изопропилов алкохол настъпва кристализация. След сушене, отново в ротационен вакуумизпарител и разпрашаване в хаван, се получава бял прах, които по-нататък 2ше наричаме чист CIDI. Чистият CIDI съответства на 60 тегловни % CIDI.

Чистият CIDI прах, разтворен в метанол и изследван посредством HPLC метод, показва два основни пика с времена на задържане 1.131 (87.54% площ} и 1.551 (6.16% площ?.

Обратно, HPLC с UV детектор при 217 nm, подвижна Фаза CH₃CN“H₂0 (3:12), скорост на изтичане 1.5 ml/m показва следните RT (основните пикове2):

12) При използване на Supercosil LC-NH ~5/u-сферична колона: с

1.885 (концентрация 19.602); 16.259 (концентрация 67.512);

22) При използване на Chromopack-Lichrosorb RP 18-10/ц-нерегулярна колона: 1.617 (концентрация 87.742); 1.985 (3.692) и 2.134 (2.202).

(.

Чистият CI DI представлява бяло водоразтворимо твърдо вещество, което има утайка при калциниране 3.05 %. Елементният анализ в тегловни % Сбез да се смята утайката) е следният: С 48.82 %; Н 7.06 %; 0 44.12 %, които съответства на емпирична Формула близка до С_вН_1оО^ и т.т. Сразл.) 205~255°С.

Инфрачервеният спектър е практически еднакъв с този на продукта CIDI.

UV спектър СспектроФотометър UV-vis Perkin-Elmer мод. Lambda 5):

1) Разтвор в СН₃0Н^_Н₂0 С4:1D, концентрация 6.10 ² mg/ml: максимална абсорбция при 203 nm; абсорбцията бързо намалява, практически никаква абсорбция не се наблюдава над 260 nm;

2) Разтвор в CH₃CN“H₂0 С3:1), концентрация 6.10 mg/ml; абсорбцията бързо намалява от 200 до 260 nm, след това остава постоянна близко до нулата.

Разтворимостта на чистия CIDI е съшата като тази на CIDI, както и pH на водния разтвор е съшият.

Интраперитонеалната на чисти CIDI върху мишки:

CD-I CICR) BR е 20.2 rng/kg Сбазови граници 17.8-22.0 mg/kg).

ЯМР спектри на CIDI и чист CIDI:

ЯМР спектрите са получени на апарат Bruker АС 200 при 200 MHz Спротонен) и 50 MHz Свъглероден). Пробите се приготвят чрез разтваряне на 90 mg продукт в 0.6 ml DMSO-66 при прибавяне на 10 mg натриева сол на З-Стриметилсилил) пропансулФонова киселина CDSS) като вътрешен стандарт.

При Н спектрите се акумулират 1000 сканирания чрез използване на импулс 30°; FID е предмет на Gaussian усилване за да се увеличи разделителната способност. Обменът на под11 нижни протони се извършва чрез прибавяне на D₂0 ⁺ CF₃C00H·

При С спектрите се акумулират 6300 сканирания CCIDI) о и 14900 сканирания Счист CIDID чрез използване на импулс 90 с хетероядрено декуплиране в CPD.

От Н спектрите се вижда наличие на различни подвижни протони в областта 3-5 ppm. Забелязва се наличие на редица протони от алкилен тип, алкидните протони намаляват в пониските области. Възможно е присъствие на винилови протони;

13^ и отсъствие на ароматни протони. С спектрите потвърждават горепосочените данни с наличието на голям брои повече или по-малко заместени алкидни въглеродни атоми. Забелязва се наличие на няколко пика във виниловата област и няколко пика в карбонилната област като карбонилните групи са от киселинен или естерен тип.

Спектрите доказват отсъствие на съществени разлики между двете смеси. Възможна е разлика в процентно отношение между различните компоненти.

ПРИМЕР 4

Метод за хроматограрско разделяне на активните съставки Алкохол-хлороФорменият екстракт, получен съгласно

Пример 1 се изсушава в ротационен вакуумизпарител и се разтваря в малко количество метанол С100 ml). Този разтвор се подлага на хроматографско разделяне, както през колона със силикагел, така и много внимателно, през препаративна HPLC колона. Така се получават чисти Фракции, които, както е описано по-горе, съответстват на пикове 1.157, 1.545, 1.883, 2.051, 2.273, 2.572 и 2.743.

ПРИМЕР 5

Тестове за потвърждаване на антинеопластичната активност in vitro и in vivo

Веществата и/или съставите, получени съгласно предишните примери, които са или разтворими, или солюбилизирани с помощта на повърхностно-активни вещества CPolisorbato 80 или Oeronol) във вода, показват забележима антинеопластична ак-

тивност, заедно с приемливо ниво на токсичност и отсъствие на имуноподтискаща активност. Наблюдава се селективна спрямо туморните клетки антинеопластична активност, на хистологично ниво, както in vitro, така и in vivo, чрез доказано изменение в туморните клетки, което се проявява в увеличаване на обема, слепване, обръщане и скъсване на клетъчната мембрана, напълно безжизнена цитоплазма съпроводена с хипохромия на ядрения хроматин и слаби нуклеоли. Доказателство за високата селективност, постигната от тези вещества е Фактът, че всички посочени по-горе поражения на клетките напълно отсъстват при нормалните клетки, които са подложени на същото

третиране.

In vivo, антинеопластичната активност на веществата, описани по-горе е изпитана върху Sa 180 на Швейцарска мишка (’Swiss mouse), като най-общо се прилагат в граници от 2 до 25 mg/kg/смъртоносна доза, в зависимост от използваното вещество, приемано интраперитонеално в продължение на 8 последователни дни, като се започне от деня след трансплантацията. В сравнение със средния период на преживяване 25. 8 дни при контролните животни, отхвърлянето на тумора се наблюдава при 90 % от третираните животни, които определено се считат, че са преживели.

За терапевтични цели, веществата съгласно настоящето изобретение и техните соли, съединения или комплекси, за предпочитане се използват под формата на воден разтвор за интрамускулни, ендовенозни или ендокавитарни инжекции.

Claims

ПАТЕНТНИ ПРЕТЕНЦИИ

1. Метод за получаване на вещества и/или състави, притежаващи антинеопластична активност, характеризираш се с това, че части и/или продукти на растения от семейство

Pittosporacea, в които и да е стадии на тяхното развитие или зрелост, се подлагат на следната обработка:

а) екстракция на компонентите чрез накисване в органичен разтворител;

6D възможно разбъркване или разклащане на разтвора, съдържащ екстракта с друг разтворител, поне частично смесваем с първия с цел разделяне на компонентите на екстракта в образуваните Фази;

вЗ възможна обработка на всяка Фаза, независимо една от друга, с поне една органична течност със свойства на разтворител по отношение на поне един от компонентите на екстракта, последвана от филтруване на всяка суспензия, която може да се образува и разтваряне на твърдата Фаза в подходящ разтворител;

г) възможно разделяне на компонентите във всяка от течните Фази; и д2) отделяне на разделените компоненти с антинеопластична активност от тези без антинеопластична активност, възможно изсушаване на споменатите екстракти и пречистване преди всеки следващ етап на метода.
2. Метод съгласно претенция 1, характеризираш се с това, че растенията принадлежат на рода Pittosporum.
3. Метод съгласно претенция 2, характеризиращ се с това, че растенията са подбрани от групата, съдържаща Pittosporum ondulatum, Pittosporum coriaceum, Pittosporum virjdi color, Pittosporum rhombiphol ium, Pittosporum eugenoides, Pittosporum crossifolium и Pittosporum Tobira и техни комбинации.
4. Метод съгласно коя да е от предишните претенции, характеризиращ се с това, че разтворителят е подбран от групата на алкохолите.
5 Метод съгласно претенция 4, характеризиращ се с това, че алкохолът е етанол.
6. Метод съгласно коя да е от предишните претенции, характеризираш се с това, че обемното съотношение между органичния разтворител и обработваните части на растението е между 1:10 и 10: 1.
7. Метод съгласно коя да е от предишните претенции, характеризиращ се с това, че времето за обработка е между 5 минути и 3 месеца.
8. Метод съгласно коя да е от предишните претенции, характеризиращ се с това, че температурата на обработка се поддържа между 5 С и 100 С.
9. Метод съгласно коя да е от предишните претенции, характеризиращ се с това, че разделянето на компонентите на екстракта се извършва хроматографски.
10. Метод съгласно претенция 9, характеризиращ се с това, че разделянето на екстрахираните компоненти се извършва през колона със силикагел.
11. Метод съгласно претенция 9, характеризиращ се с това, че разделянето на екстрахираните компоненти се извършва посредством препаративна колонна HPLC.
12. Метод съгласно коя да е от предишните претенции, характеризиращ се с това, че екстракцията се извършва с помощта на етанол и времената на задържане при отделяне на компонентите посредством HPLC са около следните стойности: 1.157, 1.545, 1.883, 2.051, 2.273, 2.572 и 2.743.
13. Метод съгласно коя да е от предишните претенции, характеризиращ се с това, че екстракцията се извършва с помощта на етанол, полученият разтвор се разклаща с хлороформ до образуване на две Фази, алкохол-хлороформената фаза с интензивен зелен цвят, а водната фаза с жълто-оранжев цвят, като компонентите, притежаващи антинеопластична активност се намират в интензивната зелена фаза.
14. Метод съгласно претенция 13, характеризиращ се с това, че разделянето на компонентите, притежаващи антинеопластична активност се извършва хроматографски след изсушаване на алкохол-хлороформената фаза и разтваряне в метанол.
15. Метод съгласно претенция 14, характеризиращ се с това, че разделянето на компонентите, притежаващи антинеопластична активност се извършва посредством HPLC като се отделят компонентите с времена на задържане 1.969, 2.296 и 2.756.
16. Метод съгласно претенция 13, характеризиращ се с това, че алкохол-хлороформеният разтвор се изпарява докато обемът му се намали до около 1/35 от обема на изходния алкохолен разтвор, прибавя се изопропилов алкохол за получаване на суспензия, която се филтрува. твърдата Фаза се изсушава термично и се разпрашава като се получава зеленикав прах.
17. Метод съгласно претенция 16, характеризиращ се с това, че твърдата Фаза, разтворена в етилов алкохол-вода С4:1) преминава през хроматографска колона с активен въглен, като се получава прозрачен, безцветен разтвор, които, когато се концентрира, кристализира при прибавяне на изопропилов алкохол и се суши, като се получава бял прах, които при използване на HPLC показва два основни пика с времена на задържане 1.131 С87.54% площ} и 1.551 С6.16% площЗ.
18. Метод съгласно претенции 16 и 17, характеризиращ се с това, че компонентите на твърдото вещество разтворено в метанол се разделят чрез HPLC, като се отделят компонентите с времена на задържане 1.157, 1.545 и 2.264.
19. Вещества и състави, характеризиращи се с това, че могат да се получат по метода съгласно претенции 1 до 18.
20. Вещества и състави, притежаващи антинеопластична активност, характеризиращи се с това, че могат да се получат по метода съгласно претенции 1 до 18.
21. Вещества и състави, притежаващи антинеопластична активност съгласно претенция 20 под форма избрана от групата, съдържаща соли, съединения, комплекси и комбинации от тях, с цел да бъдат водоразтворими.
22. фармацевтичен препарат, характеризиращ се с това, че съдържа поне един от активните компоненти, вещества и състави, подбрани от групата продукти, притежаващи антинеопластична активност и които могат да се получат по метода съгласно претенции 1 до 18.
23. фармацевтичен препарат съгласно претенция 22, характеризиращ се с това, че се получава под Формата на воден разтвор за парентерална употреба.
24. фармацевтичен препарат съгласно претенция 22, характеризиращ се с това, че се получава под Формата на капсули за орално приемане.
25. фармацевтичен препарат съгласно претенция 22, характеризиращ се с това, че се получава под Формата на свещички за ректално приемане.
26. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 22, характеризиращ се с това, че се получава под Формата на овули за поставяне във вагината.
27. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 22, характеризиращ се с това, че се получава под Формата на унгвент, мехлем, крем или гел.
28. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 23, характеризиращ се с това, че се получава в ампули, всяка ампула съдържа между 0.1 и 2.5 g активен елемент.
29. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 28, характеризиращ се с това, че всяка ампула съдържа за предпочитане между 0.1 и 1.5 g и наи-вече между 0.2 и 1.0 g акти вен елемент.
30. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 24, характеризираш се с това, че се получава под Формата на капсули, всяка капсула съдържа между 0.1 и 2. 0 g активен елемент.
31. фармацевтичен препарат съгласно претенция 30, характеризиращ се с това, че всяка капсула съдържа от 0.8 до

1.2 g активен елемент.
32. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 25, характеризиращ се с това, че се получава под Формата на свещички за ректална употреба, всяка свешичка съдържа между 0.2 и 2.5 g активен елемент.
33. фармацевтичен препарат съгласно претенция 32, характеризиращ се с това, че всяка свещичка съдържа между 0.3 и 1.0 д, или между 1.2 и 1.7 g активен елемент.
34. фармацевтичен препарат съгласно претенция 26, характеризиращ се с това, че се получава под Формата на овули за поставяне във вагината, всяка овула съдържа между 0.1 и с.6 g активен елемент.
35. фармацевтичен препарат съгласно претенция 34, характеризиращ се с това, че всяка овула съдържа за предпочитане между 0.5 и 2.5 q и наи-вече между 0.3 и 1.7 q активен елемент.
36. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 27, характеризиращ се с това, че се получава под формата на унгвент, мехлем, крем или гел с инертен носител за локална употреба, съдържащ между 0.5 и 12 % активен елемент.
37. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 36, характеризиращ се с това, че носителят за локална употреба съдържа между 3 и 7 тегловни % активен елемент.
38. Употреба на получените по метода съгласно претенции 1 до 18 съединения - единични или в комбинация - за получаване на лекарства за лечение на патологии различни от нео- пластичните.