BRPI0509976B1

BRPI0509976B1 - Uso de derivados de alfa-aminoamidas no tratamento de síndrome das pernas inquietas

Info

Publication number: BRPI0509976B1
Application number: BRPI0509976-5A
Authority: BR
Inventors: Claudia Besana; Elena Barbanti; Emanuela Izzo; Florian Thaler; Ruggero Fariello; Patricia Salvati; Luca Benatti
Original assignee: Newron Pharmaceuticals S.P.A
Priority date: 2004-04-22
Filing date: 2005-04-19
Publication date: 2020-10-06
Also published as: DE602005009162D1; EP1900362B1; PL1737438T3; SI1737438T1; IL178732A0; BRPI0509976B8; NO20064732L; NO337900B1; HRP20080593T3; AU2005235428A1; US8697738B2; DE602005025941D1; RU2403030C2; HRP20110230T1; IL178732A; BRPI0509976A; RS50667B; CY1108494T1; DK1737438T3; HK1099216A1

Abstract

DERIVADOS DE ALFA-AMINOAMIDAS ÚTEIS NO TRATAMENTO DE SÍNDROME DAS PERNAS INQUIETAS E DISTÚRBIOS DE DEPENDÊNCIA A DROGAS. A presente invenção refere-se ao uso de certos derivados de alfa-aminoamidas no tratamento de RLS e distúrbios de dependência a drogas. Os compostos desta invenção são capazes de reduzir ou mesmo parar os sintomas de RLS e distúrbios de dependência a drogas substancialmente sem efeitos colaterais.

Description

[0001] A presente invenção refere-se a derivados de a- aminoamidas, uma classe química de inibidores de monoamina oxidase B (MAOB), bloquteadores de canais de sódio, inibidores de reabsorção de dopamina e moduladores de níveis de glutamato, para uso no tratamento de Síndrome das Pernas Inquietas (RLS) e distúrbios de dependência a drogas.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0002] Síndrome das Pernas Inquietas (RLS) é uma entidade clínica reconhecida e bem definida caracterizada por sensações desagradáveis e profundas de calafrio, ardor e puxão nas pernas, entre os joelhos e os tornozelos e menos freqüentemente nos braços. Os sintomas estão presentes quando os membros se encontram em repouso, particularmente à tarde e à noite, e são geralmente aliviados por movimento. A conseqüência é o aparecimento de distúrbios do sono, latência de sono prolongada, diminuição no tempo total de sono com redução ou ausência de sono lento em ondas e diminuição de eficiência do sono.

[0003] Estudos epidemiológicos verificaram que RLS é comum com números de prevalência na vida de adultos os quais variam de 9% a 15% da população geral (Phillips, B. Epidemiology of restless legs syndrome in adults (Epidemiologia de síndrome das pernas inquietas em adultos). Archives of Internal Medicine 160 (14) 2137- 2141 2000). Os Critérios Internacionais de Grupos de Estudos de RLS (1995) definem pacientes de RLS como apresentando os seguintes sintomas (Walters, AS. Toward a better definition of the Restless Legs Syndrome (Para uma melhor definição da Síndrome das Pernas Inquietas). Movement Disorders 10 (5) 634-642 1995):

[0004] Desejo de movimentar os membros associado a parestesias ou disestesias.

[0005] Instabilidade psicomotora (durante insônia, os pacientes movimentam os membros na tentativa de aliviar o desconforto).

[0006] Os sintomas pioram ou se apresentam exclusivamente em repouso com alívio pelo menos parcial e temporário através de atividade.

[0007] Os sintomas pioram à tarde ou à noite.

[0008] Outras características comuns são distúrbios do sono, movimentos periódicos dos membros durante o sono (PLMS) e movimento involuntário similar enquanto desperto (Walters, AS. Toward a better definition of the Restless Legs Syndrome (Para uma melhor definição da Sindrome das Pernas Inquietas). Movement Disorders 10 (5) 634-642 1995).

[0009] O número de PLMs e parâmetros relacionados são considerados como sendo um marcador da gravidade de RLS, uma vez que PLMs são freqüentemente associados a excitações sexuais ou despertamentos noturnos.

[00010] Devido a problemas durante o sono e de insônia, pessoas com RLS poderão ter dificuldades em suas atividades de trabalho, vida social e de recreação.

[00011] A patogênese de RLS permanece desconhecida, mas a evidência atual favorece uma desinibição de estimuladores do sistema nervoso central normal, provavelmente governados por múltiplas influências. Estudos tomográficos de emissão de positrons (PET) em RLS sustentam o papel do sistema dopaminérgico na patogênese dos distúrbio. Turjanski e outros descrevem que absorção de 18F-dopa tanto caudada quanto do putâmen foi moderadamente reduzida em pacientes de RLS em comparação com indivíduos de controle, e isso atingiu significância (p = 0,04) no putâmen. O mesmo estudo demonstrou uma redução significativa na ligação de receptores de dopamina D2 no putâmen nesses pacientes (Turjanski, N. Neurology 52 932-937 1999). Similarmente, Ruottinen e outros estudaram um grupo de pacientes de RLS com experiência terapêutica anterior e demonstraram uma diminuição de 11% na absorção de 18F-dopa no putâmen e de 12% no núcleo caudado (Ruottinen, HM. Neurology54 502-504 2000). Esses dados são sugestivos de uma disfunção dopaminérgica pré-sináptica estriatal moderada.

[00012] Nenhum agente é correntemente indicado para o tratamento de RLS nos Estados Unidos, embora Restex®, uma preparação de L-dopa, tenha sido recentemente lançado na Alemanha. Os outros produtos usados para tratar sintomas de RLS incluem opiatos, benzodiazepinas e alguns anticonvulsivos. Agonistas de dopamina, tais como cabergolina, pramipexol e ropinirol, têm sido também propostos para tratamento de RLS. Todos esses tratamentos apresentam desvantagens tais como efeitos colaterais, interações, curta duração de ação e abuso potencial. A evidência disponível sugere que um déficit de sistema dopaminérgico desempenha um importante papel em RLS. Uma vez que inibidores de MAOB afetam o metabolismo de dopamina, conduzindo a um prolongamento do curso de tempo de dopamina em seu receptor, propomos o uso de derivados de a-amino no tratamento de RLS. Outros distúrbios, onde um déficit no sistema dopaminérgico desempenha um importante papel, são os distúrbios de dependência a drogas que podem ser definidos como comportamento patológico caracterizado por busca e consumo compulsivos de droga. Acredita-se que uso contínuo de droga cause alterações funcionais prolongadas nos circuitos neurais envolvidos em motivação as quais podem conduzir a dependência, desejo mórbido e recaída.

[00013] Drogas de abuso tipicamente diferentes (anfetamina, cocaína, heroína, nicotina, álcool), mesmo com alvo molecular primário diferente, apresentam a ação comum de aumentar transmissão de dopamina no sistema mesolímbico. Diferentes abordagens têm sido usadas no tratamento de distúrbios de dependência a drogas e a maior parte delas tem como alvo modular o sistema dopaminérgico.

[00014] Inibidores de MAOB afetam o metabolismo de dopamina em seres humanos e primatas, conduzindo a um prolongamento do curso de tempo de dopamina em seus receptores. Tem sido mostrado que o uso de inibidor de MAOB é benéfico no tratamento de patologias onde um déficit dopaminérgico está presente como em PD.

[00015] Novas evidências sustentam a hipótese de que inibidores de MAOB podem ser benéficos no tratamento de distúrbios de dependência a drogas. Estudos realizados em ratos e em seres humanos mostraram que selegilina (um inibidor específico de MAOB) apresenta um efeito anti-reforço moderado durante desintoxicação de cocaína e poderá melhorar déficits de dopamina durante retirada que se acredita contribuam para episódios de recaída (Schiffer e outros, 2003 Synapse 48:35-8).

[00016] Recentemente, observa-se que fumantes apresentam uma reduzida atividade de MAOB nas plaquetas e no cérebro. Formulou-se a hipótese de que atividade de MAOB reduzida no cérebro está envolvida em aumento das propriedades de dependência a nicotina. Em um estudo de centros múltiplos de fase II, lazabemida, um outro inibidor de MAOB (200 mg/dia), parece aumentar a porcentagem de cessação de fumar (de 17 para 30%) (Berlin e outros, 2002 Addiction 97:1347-1354).

[00017] Além disso, mostra-se que também bloqueadores de canais de Na podem ser eficazes no tratamento de distúrbios de dependência a drogas. Na verdade, um estudo clínico recente mostrou que topimarato (um bloqueador de canais de Na) é eficaz no tratamento de dependência de álcool (Johnson e outros, 2003, The Lancet 361: 1677-1685).

[00018] Tratamentos correntes de distúrbios de dependência a drogas incluem drogas antidepressivas, agonistas de receptores de opiato como metadona, antagonistas de receptores de opiato e agonistas parciais como naltrexona e buprenorfina, benzodiazepinas e dissulfiram para desintoxicação de álcool. Desvantagens desses tratamentos incluem diversos efeitos colaterais e ainda uma eficácia terapêutica insatisfatória.

[00019] Uma vez que há evidências de que compostos com atividade de inibição de MAOB e compostos com atividade bloqueadora de canais de Na podem ser eficazes no tratamento de distúrbios de dependência a drogas, é proposto o uso de derivados de a-amino, uma classe química de inibidores de monoamina oxidase B (MAOB) e bloqueadores de canais de sódio desta invenção, no tratamento de distúrbios de dependência a drogas.

[00020] WO90/14334, WO94/22808, W097/05102, WO97/0511 e WO99/35215, cujos textos são incorporados aqui como referência, descrevem compostos de benzilaminopropionamida substituída ativos no sistema nervoso central e úteis como agentes antiepilépticos, antiParkinson, neuroprotetores, antidepressivos e hinópticos antiespasmódicos (vide também Pevarello, P. e outros (1998), J. Med. Chemistry,41:579-590). WO99/35125 e WO99/35123 descrevem compostos de benzilaminopropanamida substituída ativos no sistema nervoso central e úteis como agentes analgésicos.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

[00021] A presente invenção proporciona métodos rápidos e altamente eficazes para tratar RLS e distúrbios de dependência a drogas utilizando, in vivo, certos compostos de cc-aminoamida em uma terapia que é uma alternativa superior a tratamentos existentes.

[00022] Em uma modalidade, a invenção inclui o uso de pelo menos uma droga que é um composto de a-aminoamida de fórmula (I):

onde: • A é um grupo -(CH2)n-X-, onde n é um número inteiro de 0 a 5, XéCH2, -O-, -S- ou -NH-; • s é 1 ou 2; • R é um anel furila, tienila ou piridila ou um anel fenila, opcionalmente substituídos por um ou dois substituintes independentemente selecionados de halogênio, hidróxi, ciano, Ci-Ce alquila, Ci-Cβ alcóxi ou trifluormetila; • Ri é hidrogênio ou C-i-Ce alquila ou C3-C7 cicloalquila; .R2 E R3 são independentemente selecionados de hidrogênio; C1-C4 alquila, opcionalmente substituída por hidróxi ou fenila; fenila, opcionalmente substituída por um ou dois substituintes independentemente selecionados de Ci-Ce alquila, halogênio, hidróxi, Ci-Ce alcóxi ou trifluormetila; ou R2 e R3, tomados com 0 átomo de carbono ao qual se ligam, formam um anel C3-C6 cicloalquila; e • R4, Rs são, independentemente, hidrogênio, Ci-Cβ alquila ou C3-C7 cicloalquila; ou R4 e R5, tomados juntamente com 0 átomo de nitrogênio ao qual se ligam, formam um anel heterocíclico saturado de 5-7 átomos; ou isômeros, misturas e sais farmaceuticamente aceitáveis do composto para a preparação de um medicamento para 0 tratamento dos sintomas de Síndrome das Pernas Inquietas e distúrbios de dependência a drogas.

[00023] Os grupos alquila e alcóxi podem ser ramificados ou podem ser grupos de cadeia normal.

[00024] Sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da invenção incluem, por exemplo, sais de adição de ácidos com ácidos inorgânicos, por exemplo ácidos nítrico, clorídrico, bromídrico, sulfúrico e fosfórico e similares, ou ácidos orgânicos, por exemplo ácidos acético, propiônico, glicólico, láctico, oxálico, malônico, málico, tartárico, cítrico, succínico, benzóico, cinâmico, mandélico, metanossulfônico, p-toluenossulfônico e salicílico, e similares.

[00025] Alguns dos compostos de fórmula (I) podem ter átomos de carbono assimétricos, e, portanto, podem existir como misturas racêmicas ou como isômeros ópticos individuais (enanciômeros). Conseqüentemente, o termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" da a- aminoamida de fórmula (I) significa também incluir em seu escopo todos os isômeros possíveis e suas misturas, e qualquer metabólito, bioprecursor e/ou pró-droga farmaceuticamente aceitáveis, isto é, um composto que apresenta uma fórmula estrutural diferente daquela da a-aminoamida de fórmula (I), e todavia é direta ou indiretamente convertido in vivo em um composto que apresenta fórmula (I), após administração a um mamífero, particularmente um ser humano.

[00026] Compostos de fórmula (I) preferidos são aqueles onde A é um grupo escolhido de -CH2-, -CH2-CH2-, -CH2-S-, -CH2-CH2-S- e - (CH2)n-O-, onde n é um número inteiro de 1 a 5; • s é 1 ou 2; • R é um anel fenila, opcionalmente substituído por um ou dois substituintes independentemente selecionados de halogênio, trifluormetila, metóxi ou anel tienila; • Ri é hidrogênio ou C1-C4 alquila; • um de R2 e R3 é hidrogênio e 0 outro é C1-C4 alquila, opcionalmente substituída por hidróxi ou fenila, opcionalmente substituída por um ou dois átomos de halogênio, ou R2 θ R3 são ambos metila, ou juntamente podem formar com o átomo ao qual se ligam um anel ciclopropila ou um anel ciclopentila; e • R4, Rs são hidrogênio ou C1-C4 alquila, ou, juntamente com 0 átomo de nitrogênio ao qual se ligam, formam um anel pirrolidina ou um anel piperidina, e os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos.

[00027] Exemplos de compostos de fórmula (I) específicos - que podem ser usados isoladamente ou em combinação com outros compostos de fórmula (I) - em uma quantidade eficaz para tratar RLS e distúrbios de dependência a drogas em um paciente incluem: 2-(4-Benziloxibenzilamino)propanamida; 2-[4-(2-Metoxibenzilóxi)-benzilamino]propanamida; 2-[4-(2-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]propanamida; (S)-(+)-2-[4-(2-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]propanamida; 2-[4-(2-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]-2-metil-propanamida; 2-[4-(2-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]-N-metil-propanamida; N-{2-[4-(2-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]}propionil-pirrolidina; 2-[4-(3-Metoxibenzilóxi)-benzilamino]propanamida; 2-[4-(3-Cianobenzilóxi)-benzilamino]propanamida; 2-[4-(3-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]propanamida; (S)-(+)-2-[4-(3-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]propanamida; 2-[4-(3-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]-2-metil-propanamida; 2-[4-(3-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]-N-metil-propanamida; N-{2-[4-(3-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]}propionil-pirrolidina; 2-[4-(4-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]propanamida; 2-[4-(3-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]-2-metil-propanamida; 2-[4-(2-Clorobenzilóxi)-benzilamino]propanamida; 2-[4-(3-Clorobenzilóxi)-benzilamino]propanamida; 2-(4-Benziloxibenzilamino)-3-hidróxi-propanamida; 2-[4-(2-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]-3-hidróxi-propanamida; 2-[4-(3-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]-3-hidróxi-propanamida; 2-(4-Benziloxibenzilamino)-3-hidróxi-N-metil-propanamida; 2-[4-(2-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]-3-hidróxi-N-metil- propanamida; 2-[4-(3-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]-3-hidróxi-N-metil- propanamida; 2-[4-(2-Clorobenzilóxi)-benzilamino]-3-hidróxi-N-metil- propanamida; 2-[4-(3-Cianobenzilóxi)-benzilamino]-3-hidróxi-N-metil- propanamida; 2-[4-(3-Cianobenzilóxi)-benzilamino]-2-metil-3-hidróxi-N- metil-propanamida; 2-[4-(3-Clorobenzilóxi)-feniletilamino]propanamida; 2-{4-[2-(3-Fluorfenil)-etilóxi]benzilamino}propanamida; 2-{4-[2-(3-Fluorfenil)-etil]benzilamino}propanamida; 2-[N-(4-Benziloxibenzil)-N-metilamino]propanamida; 2-{4-[(3-Clorobenzilóxi)-feniletil]-amino}propanamida; 2-[4-Benziltiobenzilamino]propanamida; 2-[4-(2-FluoRbenziltio)-benzilamino]propanamida; 2-[4-(3-FluoRbenziltio)-benzilamino]propanamida; 2-[4-(3-Fenilpropilóxi)-benzilamino]propanamida; 2-[4-(4-Fenilbutilóxi)-benzilamino]propanamida; 2-[4-(5-Fenilpentilóxi)-benzilamino]propanamida; 2-(4-Benziloxibenzilamino)-3-fenil-N-metil-propanamida; 2-(4-Benziloxibenzilamino)-3-metil-N-metil-butanamida; 2-(4-Benziloxibenzilamino)-2-fenil-acetamida; 2-[4-(2-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]-2-fenil-acetamida; 2-[4-(3-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]-2-fenil-acetamida; 2-[4-(2-Fluorbenzilóxi)-benzil-N-metilamino]-2-fenil- acetamida; 2-[4-(3-Fluorbenzilóxi)-benzil-N-metilamino]-2-fenil- acetamida; 2-[4-(3-Clorobenzilóxi)-benzilamino]-2-fenil-acetamida; 2-[4-(2-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]-2-(2-fluorfenil)- acetamida; 2-[4-(2-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]-2-(3-fluorfenil)- acetamida; 2-[4-(3-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]-2-(2-fluorfenil)- acetamida; 2-[4-(3-Fluorbenzilóxi)-benzilamino]-2-(3-fluorfenil)- acetamida; 2-[4-(3-Clorobenzilóxi)-benzilamino]-2-(3-fluorfenil)- acetamida; 2-(4-(2-Tienilóxi)-benzilamino)propanamida; ou isômeros, misturas e sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos.

[00028] Compostos de fórmula (I) preferidos, que podem ser usados isoladamente ou em combinação com outros compostos de fórmula (I), em uma quantidade eficaz para tratar um ou mais sintomas de RLS ou de distúrbios de dependência a drogas em um paciente são (S)-(+)-2-[4-(2-fluorbenzilóxi)-benzilamino]propanamida ou (S)-(+)-2-[4- (3-fluorbenzilóxi)-benzilamino]propanamida.

[00029] Em uma modalidade, o paciente que é tratado é um mamífero, incluindo seres humanos, com necessidade de alívio ou inibição de sintomas de um ou mais sintomas de RLS ou de distúrbios de dependência a drogas.

[00030] Particularmente, o mamífero com necessidade do tratamento mencionado acima sofre administração de uma dose de uma oc-aminoamida de fórmula (I) conforme acima definida, dose esta que varia de cerca de 0,3 a cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dia. "Tratamento", como usado neste relatório descritivo, inclui qualquer cuidado por meio de procedimentos ou aplicações a um mamífero, e particularmente um ser humano, em relação a quem se pretende a) prevenir que a doença ou distúrbio ocorra em um indivíduo que pode ser predisposto à doença/distúrbio, mas que ainda não foi diagnosticado como a tendo; b) inibir a doença/distúrbio, ou condição, isto é, interrompendo seu desenvolvimento; ou c) aliviar a doença/distúrbio, ou condição, isto é, levando à regressão da doença/distúrbio, ou condição.

[00031] Condição de RLS e de distúrbios de dependência a drogas em um mamífero, incluindo humanos, pode assim ser inibida ou aliviada.

[00032] Exemplos de sintomas de RLS são instabilidade psicomotora, calafrio, ardor ou sensações de puxão profundo nas pernas, entre os joelhos e os tornozelos. Sonolência e distúrbios do sono são conseqüências diretas dos sintomas descritos anteriormente.

[00033] Exemplos de distúrbios de dependência a drogas são abuso de droga, alcoolismo grave, síndrome de deficiência de recompensa (RDS).

[00034] Em um outro aspecto, a invenção inclui uma a-aminoamida de fórmula (I), administrada como agente ativo de uma composição farmaceuticamente aceitável que apresenta atividade no tratamento de RLS e distúrbios de dependência a drogas, que pode ser preparada por procedimentos convencionais, por exemplo misturando o agente ativo com um veículo ou materiais para excipiente orgânicos e/ou inorgânicos farmaceuticamente aceitáveis e terapeuticamente inertes.

[00035] Compostos de fórmula (I) preferidos, usados em uma quantidade eficaz para tratar RLS ou distúrbios de dependência a drogas em um paciente são (S)-(+)-2-[4-(2-fluorbenzilóxi)- benzilamino]propanamida ou (S)-(+)-2-[4-(3-fluorbenzilóxi)- benzilamino]propanamida. Os compostos de fórmula (I), e os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, poderão ser obtidos através de processos bem conhecidos conforme descrito nos pedidos de patente citados acima.

[00036] "Terapia de combinação" (ou "co-terapia") inclui a administração de um composto de alfa-aminoamida de fórmula (I) da invenção e pelo menos um segundo agente, por exemplo: - agonistas de dopamina tais como bromocriptina, cabergolina, lisurida, pergolida, ropinirol, apomorfina, sumanirol, rotigotina, talipexol, diidroergocriptina e pramipexol, - levodopa, levodopa mais carbidopa (SINEMET®), levodopa mais carbidopa de liberação controlada (SINEMET-CR®), levodopa mais benserazida (MADOPAR®), levodopa mais benserazida de liberação controlada (MADOPAR-HBS), - inibidores de COMT tais como tolcapone e entacapone, - STALEVO®, Amantadine - e agentes anticolinérgicos, como parte de um regime de tratamento específico destinado a proporcionar o efeito benéfico da co-ação desses agentes terapêuticos. Benefícios de tais combinações incluem redução da dose de agentes convencionais (isto é, agentes diferentes dos agentes da presente invenção) com conseqüente redução dos efeitos colaterais desses agentes convencionais. O efeito benéfico da combinação inclui, mas sem se limitar à mesma, co-ação farmacocinética ou farmacodinâmica que resulta da combinação de agentes terapêuticos. Administração desses agentes terapêuticos em combinação tipicamente é realizada durante um período de tempo (usualmente minutos, horas, dias ou semanas, dependendo da combinação selecionada). "Terapia de combinação" poderá pretender, mas geralmente não pretende, abranger a administração de dois ou mais desses agentes terapêuticos como parte de regimes de monoterapia separados que incidental e arbritariamente resultam nas combinações contempladas pela presente invenção. "Terapia de combinação" pretende abranger administração desses agentes terapêuticos de maneira seqüencial, isto é, onde cada agente terapêutico é administrado em tempos diferentes, bem como administração desses agentes terapêuticos, ou pelo menos dois dos agentes terapêuticos, de maneira substancialmente simultânea. Administração substancialmente simultânea pode ser realizada, por exemplo, administrando ao indivíduo uma única cápsula apresentando uma proporção fixa de cada agente terapêutico ou em cápsulas simples múltiplas para cada um dos agentes terapêuticos. Administração seqüencial ou substancialmente simultânea de cada agente terapêutico pode ser efetuada através de qualquer via apropriada, incluindo, mas sem se limitar às mesmas, vias orais, vias intravenosas, vias intramusculares e absorção direta através de tecidos de membrana mucosa. Os agentes terapêuticos podem ser administrados pela mesma via ou por vias diferentes. Por exemplo, um primeiro agente terapêutico da combinação selecionado poderá ser administrado por injeção intravenosa enquanto os outros agentes terapêuticos da combinação poderão ser administrados oralmente.

[00037] Alternativamente, por exemplo, todos os agentes terapêuticos poderão ser administrados oralmente ou todos os agentes terapêuticos poderão ser administrados por injeção intravenosa. A seqüência em que os agentes terapêuticos são administrados não é estritamente crítica. "Terapia de combinação" também pode abranger a administração dos agentes terapêuticos conforme descrito acima em combinação adicional com outros ingredientes biologicamente ativos e terapias não com drogas (por exemplo, cirurgia ou tratamento através de radiação). Onde a terapia de combinação compreende adicionalmente um tratamento não-droga, esse tratamento não-droga poderá ser conduzido em qualquer tempo adequado, contanto que um efeito benéfico da co-ação da combinação dos agentes terapêuticos e do tratamento não-droga seja obtido. Por exemplo, em casos apropriados, o efeito benéfico é todavia obtido quando o tratamento não-droga é temporariamente removido da administração dos agentes terapêuticos, talvez por dias ou mesmo semanas.

[00038] As composições de a-aminoamida da invenção podem ser administradas sob várias formas de dosagem, por exemplo oralmente, na forma de comprimidos, trociscos, cápsulas, comprimidos revestidos com açúcar ou película, soluções líquidas, emulsões ou suspensões; retalmente, na forma de supositórios; parenteralmente, por exemplo por injeção intramuscular ou intravenosa ou infusão; e transdermicamente na forma de um emplastro, pomada, emulsão, loção, solução, gel, creme e spray nasal.

[00039] Veículo ou materiais para excipiente orgânicos e/ou inorgânicos farmaceuticamente aceitáveis e terapeuticamente inertes adequados úteis na preparação dessa composição incluem, por exemplo, água, gelatina, goma arábica, lactose, amido, celulose, estearato de magnésio, talco, óleos vegetais, ciclodextrinas, polialquilenoglicóis e similares. As composições de a-aminoamida de fórmula (I) podem ser esterilizadas e poderão conter componentes adicionais, bem conhecidos daqueles versados no estado da técnica, tais como, por exemplo, conservantes, estabilizantes, agentes de umectação ou emulsificação, por exemplo óleo de parafina, monooleato de manida, sais para ajustar pressão osmótica, tampões e similares.

[00040] Adicionalmente, as formas orais sólidas podem conter, juntamente com o agente ativo, diluentes, por exemplo lactose, dextrose, sacarose, celulose, amido de milho ou amido de batata; lubrificantes, por exemplo sílica, talco, ácido esteárico, estearato de magnésio ou de cálcio, e/ou polietilenoglicóis; agentes de ligação, por exemplo amidos, gomas arábicas, gelatina, metilcelulose, carboximetilcelulose ou polivinilpirrolidona; agentes de desagregação, por exemplo um amido, ácido algínico, alginatos ou amido glicolato de sódio; misturas efervescentes; substâncias corantes; edulcorantes; agentes de umectação tais como lecitina, polissorbatos, laurilsulfatos; e, em geral, substâncias não-tóxicas e farmacologicamente inativas usadas em formulações farmacêuticas. As formulações farmacêuticas poderão ser produzidas sob qualquer maneira conhecida, por exemplo por meio de processos de mistura, granulação, produção de comprimidos, revestimento com açúcar ou revestimento com película.

[00041] As formulações orais compreendem formulações de liberação sustentada que podem ser preparadas de maneira convencional, por exemplo aplicando um revestimento entérico em comprimidos e grânulos.

[00042] A dispersão líquida para administração oral poderá ser, por exemplo, xaropes, emulsões e suspensão. Os xaropes poderão adicionalmente conter como veículo, por exemplo, sacarose ou sacarose com glicerina e/ou manitol e/ou sorbitol.

[00043] Suspensões e emulsões poderão conter como veículo, por exemplo, uma goma natural, ágar, alginato de sódio, pectina, metilcelulose, carboximetilcelulose ou álcool polivinílico. As suspensões ou soluções para injeções intramusculares poderão conter, juntamente com o composto ativo, um veículo farmaceuticamente aceitável, por exemplo água estéril, óleo de oliva, oleato de etila, glicóis, por exemplo propilenoglicol, e, se desejado, uma quantidade adequada de cloridreto de lidocaína. As soluções para injeções intravenosas ou infusão poderão conter como veículo, por exemplo, água estéril ou, preferencialmente, poderão ser na forma de soluções salinas estéreis, aquosas ou isotônicas.

[00044] Os supositórios poderão conter, juntamente com o agente ativo, um veículo farmaceuticamente aceitável, por exemplo manteiga de cacau, polietilenoglicol, um tensoativo de éster de polioxietileno sorbitano ácido graxo ou lecitina.

[00045] Composições que incluem cc-aminoamidas de fórmula (I) são geralmente na forma de uma dose unitária que contém, por exemplo, 20 a 7.000 mg de ingrediente ativo por forma de dosagem unitária. Tratamento adequado é dado 1 ou 2 ou 3 vezes diariamente, dependendo da taxa de depuração. Conseqüentemente, a dose desejada poderá se apresentar em uma dose única ou como doses divididas administradas em intervalos apropriados, por exemplo duas a quatro doses ou mais subdoses por dia.

[00046] As composições farmacêuticas que incluem uma a- aminoamida de fórmula (I) podem conter, por dosagem unitária, por exemplo cápsula, comprimido, injeção em pó, colher de chá (medida), supositório e similares, de cerca de 20 a 7.000 mg do ingrediente ativo.

[00047] Doses ótimas terapeuticamente eficazes a serem administradas poderão ser prontamente determinadas por aqueles versados no estado da técnica e variarão, basicamente, com a força da preparação, com o modo de administração e com o avanço da condição inflamatória ou distúrbio tratado. Adicionalmente, fatores associados ao indivíduo particular que é tratado, incluindo idade, peso dieta do indivíduo e tempo de administração, resultarão na necessidade de ajustar a dose em um nível apropriado terapeuticamente eficaz.

[00048] As vantagens derivadas dos usos e dos métodos da invenção conforme acima definida são muitas e incluem a possibilidade de tratar basicamente todos os tipos de sintomas de RLS e de distúrbios de dependência a drogas.

EXEMPLO 1 Estudo Aberto de RLS

[00049] Em um estudo aberto conduzido em 10 pacientes com RLS idiopática, 2 semanas de administração de (S)-(+)-2-[4-(3- fluorbenzilóxi)-benzilamino]-propanamida 10 mg/matriz resultou eficaz em melhorar sintomas de RLS. Pacientes foram incluídos no estudo se eles preenchessem os critérios mínimos de diagnóstico de acordo com o Grupo de Estudo Internacional de RLS. Sintomas dos pacientes tinham de interferir com início ou manutenção do sono por pelo menos 6 meses e pelo menos 15 noites durante as últimas 12 semanas, e eles deveriam apresentar escore de IRLS 10 (International Restless Legs Syndrome)(Síndrome das Pernas Inquietas Internacional) igual ou maior que 15 sob avaliação de referência. Exame físico, testes bioquímicos e hematológicos de laboratório e eletrocardiograma foram realizados para assegurar que critérios de seleção fossem preenchidos. Polissonografia foi efetuada por 2 noites sob referência e 2 noites no término de tratamento, a fim de verificar os efeitos de (S)- (+)-2-[4-(3-fluorbenzilóxi)benzilamino]propanamida no sono. Mediu-se a eficácia através das seguintes escalas de avaliação: International Restless Legs Syndrome10 (IRLS 10) Síndrome das Pernas Inquietas Internacional 10, Restless Legs Syndrome Quality of Life (RLS QoL) Qualidade de Vida de Síndrome das Pernas Inquietas, Work Productivity and Activity Impairment Questionnaire (WPAI RLS) (Questionário de Diminuição na Produtividade e Atividade no Trabalho) e Clinical Global Impression(Impressão Clínica Global) (CGI parte I e CGI parte II).

[00050] Pacientes tratados com (S)-(+)-2-[4-(3-fluorbenzilóxi)- benzilamino]-propanamida mostrou uma melhora significativa em sintomas de RLS.

[00051] Comparando o tratamento após 2 semanas escore com linha de referência um, uma tendência é mostrada na taxa de diminuição em todas as escalas de avaliação consideradas.

[00052] Nesse grupo de paciente (S)-(+)-2-[4-(3-fluorbenzilóxi)- benzilamino] propanamida foi bem tolerada e nenhum evento adverso foi registrado.

Resultados

[00053] Os 10 pacientes incorporados nesse estudo demonstraram uma melhoria significativa em todas as escalas de avaliação usadas.

[00054] Dez dos 10 pacientes incorporados foram considerados elegíveis para a análise de eficácia; todos eles completaram o período de tratamento planejado de 14 + 3 dias. Valores de linha de referência para demografia mostraram 70% de fêmeas incorporadas e uma idade média de 61,30 anos, com doenças concomitantes de linha de referência muito raras, e nenhuma anormalidade no exame físico. Quando a doença principal, foi considerada severa em 70% de pacientes de acordo com os critérios de CGI e confirmada por escore de IRLS-10, com um impacto na atividade diária, que podia ser quantificada (de acordo com resultados de WPAI-RLS e RLS-QoLQ) em cerca de 1/3 dos desempenhos usuais. Registro de PSG sugeriu um efeito da doença no sono, conforme testificado por valores de linha de referência de índice de Agitações PLM (índice de Despertamento PLM) de 8,90, Eficiência do Sono 72,62 e número de despertamento durante o sono.

[00055] CGI parte I apresentou uma melhoria impressiva na situação de doença em 60% de pacientes com doença estável nos outros 40% (figura 1). Essas alterações obtiveram significância estatística (P = 0,031).

[00056] CGI parte II apresentou uma melhoria de qualquer classificação em 90% de pacientes, e apenas um paciente (10%) foi considerado apresentar nenhuma alteração (vide tabela I). Tabela I. Alterações de CGI parte II de visita antecipada.

[00057] A escala IRLS-10 tinha melhoria estatisticamente significativa de escore total (p = 0,002) com redução de escore em todos os pacientes; essa melhoria foi confirmada na análise de subitens através de melhoria de "características de diagnóstico" (p = 0,002) e "impacto de doença" (p = 0,003) atingindo a significância estatística, e através dessas de "características associadas", e "severidade" próxima de significância (tab. II). Tabela II. Escore de IRLS 10

[00058] RLS-QoLQ apresentava uma diminuição significativa no escore total (p = 0,002) conforme mostrado na figura 2.

[00059] WPAI-RLS apresentava uma melhoria no item 6 que fornece sugestão de melhoria observada na capacidade de pacientes de conduzir suas atividades diárias; de fato há uma redução estatisticamente significativa (p = 0,005) da alteração de 34% a 22% conforme mostrada na figura 3.

[00060] Registro polissonográfico (PSG) apresentava melhoria estatisticamente significativa versus linha de referência em índice PLM (Vigília + Sono), índice PLM de Vigília, índice PLM de Sono e através de tendência nos outros parâmetros de PSG, sem modificação global na arquitetura de sono conforme mostrada nas figura 4, figura 5 e figura 6.

[00061] Em conclusão, esse ensaio revelou que (S)-(+)-2-[4-(3- fluorbenzilóxi)-benzilamino]propanamida apresenta um bom perfil de segurança e proporcionou evidência de uma melhoria observada na doença e suas manifestações clínicas. Essa evidência foi fortificada por medida objetiva instrumental de doença correlata (isto é, PSG).

[00062] Para estudos de dependência alguns modelos animais foram usados para testar a eficácia de compostos de teste. Em particular, foram realizados os seguintes testes. Verificou-se que os compostos de teste diminuem o efeito comportamental de alguma droga de abuso em diferentes modelos animais, demonstrando efeito terapêutico potencial em distúrbio de dependência a droga.

EXEMPLO 2 Estudo de Interação de Cocaína em camundongos

[00063] Tipicamente, drogas psicoestimulantes de dependência como anfetamina e cocaína induzem um aumento na atividade locomotora em roedores e primatas. Alguns compostos com propriedades antidependentes potenciais podem impedir o aumento na atividade locomotora induzida por drogas psicoestimulantes. (Katz JL, Kopajtic TA, Myers KA, Mitkus RJ, Chider M, Behavioral effects of cocaine: interactions with D1 dopaminergic antagonists and agonists in mice and squirrel monkeys(Efeitos comportamentais de cocaína: interações com antagonistas e agonistas dopaminérgicos D1 em camundongos e macacos-de-cheiro (squirrel monkeys) (Saimiri sciureus) J. Pharmacol. Exp. ThenOutubro de 1999; 291(1):265-79).

[00064] O efeito de compostos de teste é avaliado em um modelo camundongo de aumento de locomoção induzida por cocaína.

Método Objetos de Experiência: Camundongos Swiss-Webster,machos

[00065] Aparelhos: câmaras de fotocélulas automatizadas.

[00066] Drogas: cocaína 20 mg/kg é administrada i.p., compostos de teste dissolvidos em veículo são administrados i.p. sob diferentes doses (10-100 mg/kg) adequadas antes de cocaína.

[00067] Teste comportamental: animais (8 por grupo de experimento) receberam injeção de cocaína i.p. (20 mg/kg) ou solução salina e os compostos de teste (10-100 mg/kg ip.) ou seu veículo e atividade locomotora é registrada por 1 hora.

Análise de dados

[00068] Curso de tempo: para veículo, cocaína separada, e cada dose de composto de teste isolado + cocaína, a atividade média (+ SEM) para cada período de 10 minutos é plotada.

[00069] Efeito máximo: O período de tempo de 30 minutos, no qual cocaína (20 mg/kg) produz a atividade máxima é usado para determinar o efeito do composto de teste. Uma transformação log 10 das contagens médias do período de 30 minutos para animais individuais é realizada a fim de homogeneizar variações para análises subseqüentes. Uma análise estatística ANOVA é realizada e veículo e cada dose do composto de teste + cocaína para cocaína isolada é comparada para determinar efeitos significativos de dose (p<0,05). Uma análise de regressão linear dos quadrados mínimos é conduzida; a contagem média do período de 30 minutos é retrocedida através de objetos de experiência durante a parte descendente da curva contra a dose log 10 do composto de teste. A AD50 (dose que atenua estimulação induzida por cocaína por 50%) é determinada a partir da análise de regressão linear.

EXEMPLO 3 Ensaio de discriminação da droga em ratos

[00070] As tarefas de Discriminação a Droga é um procedimento para a avaliação da capacidade de um composto substituir uma droga psicoativa (tal como droga de abuso). Os ratos aprendem a utilizar estímulos interoceptivos de droga a sinal, o qual de duas ou três manipulandas produzirão transferências de alimentos (aprendizagem dependente de estado). Essas tarefas constituem o melhor modelo animal para examinar efeitos "subjetivos" de droga. Adicionalmente, procedimentos de DD poderão apresentar a capacidade em certos exemplos de independentemente medir diversos efeitos subjetivos diferentes de uma droga, incluindo alguns que promovem abuso de droga (euforigênico) e outros que detêm abuso de droga (nociceptivo).

[00071] Os efeitos de potencialização ou prevenção no abuso de droga dos compostos de teste são avaliados em um modelo de teste de discriminação a cocaína em ratos.

[00072] (Colpaert FC (1986) Drug discrimination: behavioral, pharmacological and molecular mechanisms of discriminative drug effects, in Behavioral Analysis of Drug Dependence, (Discriminação a droga: Mecanismos comportamentais, farmacológicos e moleculares de efeitos discriminativos a droga, em análise comportamental de Dependência a Droga), Goldberg SR e Stolerman IP eds., pp. 161- 193, Academic Press, Orlando).

Métodos Objetos de experiência.

[00073] São conduzidos estudos em ratos Sprague-Dawley. Todos os animais são alojados em um viveiro de temperatura e umidade controladas com um ciclo de 12 horas luz/escuro (luzes em 7:00 AM). Todos os experimentos são conduzidos durante a fase clara do ciclo luz/escuro, entre 8:00 AM e 3:00 PM. Os ratos foram mantidos em aproximadamente 80-85% ad. lib. de peso corporal.

[00074] Discriminação a Cocaína. Os ratos são alimentados diariamente de cerca de 15 g de comida de laboratório padrão pelo menos 30 minutos após teste que os mantinham em seus pesos individuais em todo o estudo. Os animais são testados diariamente em câmaras de condicionamento operantes em duas alavancas que são alojadas dentro de cercados que atenuam luz e som. Ruído branco está presente em todo o teste para mascarar sons externos. Iluminação ambiente é através de uma lâmpada no centro da superfície do painel frontal (luz ambiente). As alavancas são ajustadas 17 cm separadamente, com pares de lâmpadas (diodos que emitem luz) acima de cada uma das alavancas, também no painel frontal. Respostas reforçadas dispensam um pélete de 45 mg em uma bandeja de alimentos centralizada entre as alavancas no painel dianteiro da câmara. Os animais são inicialmente treinados para pressionar ambas as alavancas sob um programa de razão fixa em resposta 10 (FR 10) de reforço alimentar e para discriminar injeções i.p. de 29 ptmol/kg de cocaína (10 mg/kg) de injeções i.p. de solução salina. Após injeção de cocaína, respostas em apenas uma alavanca são reforçadas; após injeção de solução salina, respostas na outra alavanca são reforçadas. A atribuição de alavancas apropriadas com cocaína e solução salina foi contrabalanceada através de ratos. Imediatamente após injeção, os ratos são colocados no interior das câmaras de experimento. Um período de intervalo de 5 minutos, durante o qual luz ambiente e LEDS são extintos e respostas não tiveram conseqüências programadas, precede a iluminação da luz ambiente e os LEDs. Apenas respostas na alavanca apropriada são reforçadas, e respostas na alavanca inadequada restabelecem a exigência de resposta de FR. Cada apresentação de alimento é seguida por um período de intervalo de 20 segundos durante o qual todas as luzes são desligadas, e resposta não teve conseqüências programadas. Sessões terminam após 20 apresentações de alimento ou 20 minutos, qualquer que ocorra primeiro. Sessões de treino com injeções de cocaína (C) e solução salina (S) são conduzidas diariamente 5 dias por semana e ordem em uma seqüência dupla de alternação (por exemplo, SCCS).

[00075] Teste é iniciado quando desempenhos atingem critérios de pelo menos 85% de resposta apropriada total e durante o primeiro FR 10 da sessão sobre quatro sessões consecutivas. Doses selecionadas dos compostos de teste foram administradas p.o. sob diferentes tempos até 360 minutos após injeção para examinar o curso de tempo dos efeitos de estímulo discriminativo. Após uma sessão de teste, exige-se que um animal satisfaça os critérios de desempenho acima mencionado durante duas sessões consecutivas de treino (cocaína e solução salina) que devem ser testadas novamente. Sessões de teste repetidas são conduzidas, com pelo menos duas sessões de treino entre testes, até que todos os efeitos totais de dose sejam determinados em cada animal. Sessões de teste são idênticas a sessões de treino, com exceção de que 20 respostas consecutivas em cada alavanca sejam reforçadas.

[00076] Para cada um dos ratos estudados no procedimento de discriminação a cocaína, a taxa total de resposta e a porcentagem de respostas que ocorrem na alavanca apropriada com cocaína são calculadas. Os valores médios são calculados para cada medida em cada dose de droga testada. Se menos que uma metade dos ratos responderam sob uma dose particular, nenhum valor médio é calculado para porcentagem de resposta apropriada de cocaína nessa dose. Pelo menos 20% de resposta apropriada de cocaína são adotados como um critério conservativo sob os quais assumem uma diferença significativa de solução salina; 80% ou mais de resposta apropriada de cocaína são tomados como similares à dose de treino de cocaína, e níveis intermediários de resposta apropriada de cocaína são considerados substituição parcial.

[00077] Análises de Dados. Resultados de estudos de discriminação a cocaína são avaliados com dados coletados durante a sessão total que dura um máximo de 20 minutos.

[00078] Se, e animal individual não completa um programa de razão fixa durante teste, seus dados são incluídos na média para taxa de resposta, mas não incluídos na média para porcentagem de resposta de alavanca com cocaína. Um valor de ED50 é calculado usando análise de regressão linear para esses compostos de teste que substituem cocaína (> 80% de resposta de droga apropriada). Para esses compostos de teste que substituem parcialmente (>20% e <80% de resposta de droga apropriada) para cocaína, a dose menor que produz substituição máxima e qual porcentagem é dada. Para esses compostos que não substituem cocaína (<20% de resposta apropriada de droga), a dose maior testada é calculada.

EXEMPLO 4 Teste de auto-administracão de droga em ratos

[00079] Teste de auto-administração de droga é um método amplamente usado para estudar as propriedades de reforço de uma droga (tal como cocaína) e os efeitos de vários compostos nessas propriedades de recompensa. Nesse teste, o rato é treinado para "trabalhar" a fim de receber administração oral ou intravenosa de drogas. Esse método comportamental permite avaliar se um composto de teste apresenta um efeito nas propriedades de reforço de uma droga de dependência. (Caine S.B.; Lintz R.; Koob G.F.: Intravenous drug self-administration techniques in animals. In: Behavioral Neuroscience'. A Practical Approach. Ed. por A. Sahgal pp. 117-143, Oxford University Press, Nova Iorque, 1993; Fischman MW, Behavioral Pharmacology of Cocaine. J. Clin. Psychiatry. Fev. 1988; Supl. 49: 7- 10).

Método Objetos de Experiência

[00080] Ratos Sprague-Dawely,pesando 350-400 g são alojados (3) em uma gaiola e proporcionados com acesso a alimento e água à vontade (ad. libitum)e mantidos em um ciclo de 12 horas luz-escuro (luzes em 7:00 am-7:00 pm).

Auto-administração

[00081] Todos os animais são cirurgicamente implantados com um cateter de veia jugular silástica crônica sob anestesia de cetamina (60 mg/kg I.P.) e pentobarbital sódio (20 mg/kg i.p.). O catéter passado subcutaneamente a uma parte exposta do crânio onde é afixado com acrílico dentário a quatro parafusos de aço inoxidável embutidos no crânio. Quando da sessão de auto-administração (normalmente 6 dias por semana), o cateter é conectado a um sistema giratório através de uma mola de metal que é por sua vez conectada a uma bomba de infusão.

[00082] Sete dias após cirurgia, os animais são deixados 2 horas de acesso cada dia a uma alavanca de metal montada na parede lateral de uma gaiola de condicionamento operante padrão, 3 cm do fundo da gaiola. A exigência de força para pressionar a alavanca é uma média de 30 gramas (uma faixa de 25 a 35 gramas em diferentes gaiolas). As próprias gaiolas são alojadas no interior de câmaras atenuadas de som. Duas alavancas estão presentes em cada câmara operante, uma alavanca resultou em uma infusão de droga, enquanto a outra permaneceu inativa totalmente em todas as sessões. Uma prensa de alavanca ativa resultou em uma injeção intravenosa de 0,1 ml de cloridreto de cocaína (0,50 mg/kg/injeção) dissolvida em 0,9% de solução salina fisiológica e transferida por um período de 4 s. Um sistema giratório permite movimento livre do animal na gaiola. Coincidente com o início da injeção, uma luz de estímulo localizada 1 cm acima da alavanca na mesma parede lateral da câmara operante é ligada por 20 segundos durante esse tempo a alavanca torna-se inativa. Prensas de alavanca durante o período quando a luz de sinal não é acesa foram reforçadas em um programa de reforço contínuo (razão fixa em 1, FR-1). Uma vez que os animais demonstraram consumo estável de droga por três dias (uma faixa menor que 15% do consumo diário por três dias), o programa de auto-administração é mudado para um FR10 até estabilização (15-20 dias) e em seguida inicia-se o estudo. Em um dia de teste, os animais são pré-tratados i.p. imediatamente antes do início da sessão com o composto de teste. Diferentes doses de composto de teste são usadas. Cada dose é testada apenas uma vez em relação a cada animal usando um projeto quadrado latino. Pelo menos dois dias de auto-administração de referência separados de dias de teste de droga.

Análise de dados

[00083] O número total de estímulos reforçadores adquiridos durante a sessão de 120 minutos é registrado e análise estatística dos dados é computada usando uma análise de variação fatorial unidirecional com medidas repetidas (ANOVA) ou teste t de Student onde apropriado. Comparações individuais de médias são feitas usando um teste de Newman-Keuls a posteriori.

EXEMPLO 5 Sensibilização comportamental induzida por cocaína em ratos

[00084] Dependência a droga é um comportamento patológico caracterizado por procura e consumo compulsivos de droga. Um modelo animal dessas alterações comportamentais é o aumento de longa duração na atividade locomotora induzido por administração repetida de drogas psicoestimulante em roedores (Robinson e outros, 1993) conhecido como sensibilização comportamental induzida por droga. O efeito de compostos de teste são avaliados em um modelo de sensibilização comportamental induzida por cocaína em ratos.

Método Objetos de Experiência. São usados ratos Wistar pesando 200-250 g recém-chegados. Aparelho de atividade locomotora.

[00085] Atividade locomotora é medida em dezesseis gaiolas idênticas suspensas com arame de metal cada uma medindo 36 cm (L) x 25 cm (W) x 20 cm (H). Cada gaiola continha dois conjuntos de fotocélulas de emissor-detector infravermelho posicionados junto do eixo de comprimento de 1 cm acima do assoalho da grade e 8 cm da parte frontal e posterior da gaiola. Ruído de fundo é proporcionado por um gerador de ruído branco. Movimento dentro das gaiolas produziu interrupções de fotocélulas que são automaticamente registradas por um computador IBM compatível.

Procedimento de sensibilização e tratamento.

[00086] Os animais são habituados às câmaras de atividade locomotora por 2-3 dias consecutivos antes do experimento. Os ratos receberam 5 injeções de cocaína i.p. diariamente (15 mg/kg) ou solução salina e o composto de teste (40-100 mg/kg i.p.) ou seu veículo, e atividade locomotora é registrada por 3 horas. Dez dias após a última injeção de cocaína ou solução salina (15o dia), os animais são desafiados com 15 mg/kg de cocaína na ausência do composto de teste e atividade locomotora é novamente monitorada por 3 horas.

[00087] Pelo quinto dia de tratamento com cocaína, os animais pré- tratados i.p. com veículo mostraram um aumento na resposta locomotora (20% mais do que o primeiro dia, p < 0,05). Dez dias após a última injeção de cocaína ou solução salina, os animais são desafiados com 15 mg/kg de cocaína na ausência do composto de teste e atividade locomotora é novamente monitorada por 3 horas. Espera-se que os ratos anteriormente tratados com cocaína e que não tinham recebido o composto de teste mostrem um aumento na resposta de atividade locomotora para cocaína (30% mais do que o primeiro dia, p < 0,05). Se os ratos que tinham sido pré-tratados com o composto de teste durante o tratamento de 5 dias com cocaína não mostrassem um aumento na atividade locomotora, considera-se que o composto de teste apresente um efeito na prevenção de dependência a drogas psicoestimulantes. (Koob, G.F., Sanna, P.P &Bloom, F.E. Neuron.21, 467-476 1998; Robinson T.E. & Berridge K.C. The neural basis of drug craving: an incentive-sensitization theory of addiction. (A base neural de desejo de droga: uma teoria incentiva de sensibilização de dependência. Brain Res. Rev. 18, 247-91, 1993).

Análise de dados.

[00088] Dados (número total de interrupções de feixes em 3 horas) são analisados usando um ANOVA de duas vias com medidas repetidas em um fator, incluindo os quatro grupos experimentais (isto é, solução salina/veículo, solução salina/composto de teste, cocaína/veículo e cocaina/composto de teste) e dois pontos de tempo (1o. dia e 5o. dia) seguido por uma análise simples de efeitos. Um segundo ANOVA de duas vias com medidas repetidas em um fator é usado para comparar o 1o. dia e o dia de desafio seguido por um teste de Newman-Keuls post hoc.

EXEMPLO 6 Ensaios de Discriminação a Droga em Macacos

[00089] Discriminação a cocaína é um ensaio comportamental extensivamente usado para avaliar medicações candidatas de tratamento. Determina-se nesse procedimento a potência e curso de tempo dos efeitos comportamentais tal como cocaína, produzidos por uma administração aguda do composto de teste. Especificamente, o composto de teste é administrado separado ou como um pré- tratamento para cocaína em macacos rhesustreinados para discriminar 0,4 mg/kg de cocaína de solução salina.

Método Objetos de Experiência.

[00090] Os objetos são macacos rhesusmachos adultos (Macaca mulatta). Os macacos são mantidos em uma dieta de 3-4 biscoitos por macaco (Purina Monkey Chow Jumbo No. 5037) e um pedaço de fruta fresca por dia além de bolinhas (péletes) com aroma de frutas transferidas durante sessões operantes. Água é livremente disponível para todos os macacos em todos os tempos. Os macacos são alojados em um ambiente de umidade e temperatura controladas com ciclo de 12 horas luz-escuro (luz em 7:00 am a 7:00 pm).

Aparelho.

[00091] Cada macaco é alojado individualmente em uma câmara de aço inoxidável bem ventilada (56 x 71 x 69 cm). As gaiolas de abrigo de todos os macacos são modificadas para incluir um painel operante (28 x 28 cm) montado na parede frontal. Três chaves de seção quadrada de resposta translúcida (6,4 x 6,4 cm) são dispostas 2,54 cm separadamente em uma fila horizontal 3,2 cm do topo do painel operante. Cada chave pode ser transiluminada por luzes de estímulo vermelha ou verde (Superbright LEDs).O painel operante também suporta um dispensador de pélete externamente montado (Gerbrands, Modelo G5210) que transfere 1 g de bolinhas (pélete) de alimento para um receptáculo de alimento montado na gaiola abaixo do painel de resposta operante. Operação dos painéis operantes e coleta de dados são realizadas com um computador localizado em um ambiente separado.

Treino de Discriminação.

[00092] Procedimentos de discriminação a droga são similares àqueles usados em outros estudos (Lamas X, Negus SS, Hall E. e Mello NK (1995) Relationship between the discriminative stimulus effects and plasma concentrations of intramuscular cocaine in rhesus monkeys(Relação entre os efeitos de estímulo discriminativo e concentrações plasmáticas de cocaína intramuscular em macacos rhesus). Psychopharmacology121: 331-338; Negus SS, Mello NK, Portoghese PS, Lukas SE e Mendelson JH (1995). Role of delta opioid receptors in the reinforcing and discriminative stimulus effects of cocaine in rhesus monkeys(Papel de receptores de delta opióide no reforço e efeitos de estímulo discriminativo de cocaína em macacos rhesus. J. Pharmacol. Exp. Then 273: 1245-1256; Negus SS, Mello NK, Lamas X e Mendelson JH (1996) Acute and chronic effects of flupenthixol on the discriminative stimulus and reinforcing effects of cocaine in rhesus monkeys(Efeitos agudos e crônicos de flupentixol sobre o estímulo discriminativo e efeitos de reforço de cocaína em macacos rhesus. J. Pharmacol. Exp. Then 278: 879-890.

[00093] Sessões de discriminação consistem em ciclos múltiplos e são conduzidas em 5 dias/semana. Cada ciclo consistiu em um período de intervalo de 15 minutos seguido por um período de resposta de 5 minutos. Durante o intervalo, todas as luzes de estímulo são desligadas e respostas não tiveram conseqüências programadas. Durante o período de resposta, as chaves direita e esquerda de respostas são transiluminadas vermelha ou verde, e os macacos podem receber até 10 péletes de alimento por resposta sob um programa de razão fixa (FR) 30 de apresentação de alimento. Para um grupo de macacos, a chave esquerda é iluminada verde e a chave direita é iluminada vermelha. Para o outro grupo de macacos, as cores das chaves de resposta são invertidas. A chave central não é iluminada em qualquer tempo, e resposta na chave central não teve conseqüências programadas. Se todos os péletes de alimento disponíveis são transferidos antes do término do período de resposta de 5 minutos, as luzes de estímulo transiluminando as chaves de resposta são desligadas, e resposta não teve conseqüências programadas para o restante desse período de resposta. Em dias de treino, macacos são fornecidos com uma injeção i.m. de solução salina ou 0,40 mg/kg de cocaína 5 minutos após o início de cada período de intervalo (isto é, 10 minutos antes do período de resposta). Após administração de solução salina, resposta em apenas a chave verde (a chave de solução salina apropriada) produz alimento, considerando que após administração de 0,40 mg/kg de cocaína, apenas resposta na chave vermelha (a chave de droga apropriada) produz alimento. Respostas na chave inadequada restabelecem a exigência de FR na chave apropriada. Sessões diárias consistem em um a cinco ciclos, e se a dose de treino de cocaína é administrada, ela é administrada apenas durante o último ciclo. Desse modo, dias de treino consistem em 0-5 ciclos de solução salina seguidos por 0-1 ciclos de droga.

[00094] Durante o período de resposta de cada ciclo, três variáveis dependentes são determinadas: 1) porcentagem de resposta de injeção apropriada antes de transferência do primeiro estímulo reforçador [(respostas de injeção apropriada emitidas antes do primeiro estímulo reforçador/respostas totais emitidas antes do primeiro estímulo reforçador) x 100]; 2) porcentagem de resposta de injeção apropriada para o período total de resposta [(respostas de injeção apropriada emitidas durante período de resposta/respostas totais emitidas durante período de resposta) x 100]; e 3) taxa de resposta (respostas totais emitidas durante período de resposta/ luzes de estímulo de tempo total foram iluminadas). Os macacos são considerados apresentar discriminação adquirida por cocaína quando os seguintes três critérios são satisfeitos para sete de oito sessões consecutivas de treino: 1) a porcentagem de resposta de injeção apropriada antes de transferência do primeiro estímulo reforçador é maior ou igual a 80% para todos os ciclos; 2) a porcentagem de resposta apropriada de injeção para o ciclo total é maior ou igual a 90% para todos os ciclos; e 3) pelo menos um pélete é adquirido durante todos os ciclos de treino.

Teste de Discriminação.

[00095] Uma vez que os macacos satisfazem níveis de critério de discriminação a cocaína, inicia-se o teste. Sessões de teste são idênticas a sessões de treino exceto que resposta em cada chave produziu alimento, e cocaína ou compostos de teste são administrados conforme descritos abaixo. Duas séries de experimentos são conduzidas para caracterizar os efeitos de composto de teste administrado separado ou como um pré-tratamento para cocaína. Na primeira série de experimentos, determina-se o curso de tempo dos efeitos do composto de teste isolado. Uma única dose do composto de teste (1 - 100 mg/kg) é administrada no início da sessão de teste, e períodos de respostas de 5 minutos começam após 10, 30, 100 e 300 minutos. Na segunda série de experimentos, determinam-se os efeitos do pré-tratamento com composto de teste na discriminação a cocaína. Uma única dose do composto de teste é administrada em um tempo apropriado antes de uma sessão de teste em que uma curva cumulativa de dose-efeito de cocaína é determinada (0,013 - 1,3 mg/kg). Em geral, a droga de teste é avaliada até que doses produzem uma alteração significativa na curva de dose-efeito de cocaína, ou diminuem taxas de resposta a menos de média 0,1 de respostas/seg. sobre a sessão total.

Análise de Dados.

[00096] A porcentagem de resposta de cocaína apropriada (para o período de resposta total) e taxas de respostas são plotadas como uma função do tempo após administração do composto de teste (para estudos tempo-curso) ou a dose cumulativa de cocaína (para estudos de pré-tratamento com composto de teste). Uma porcentagem de resposta de cocaína apropriada em relação a um dado ciclo foi incluída na análise apenas se o macaco emite pelo 30 respostas durante o ciclo (isto é, respostas suficientes para resultar na transferência de um estímulo reforçador). Valores de ED50 são definidos como a dose de composto de teste ou cocaína que produz 50% de resposta de cocaína apropriada, e são calculados através de interpolação linear a partir de curvas de dose-efeito em objeto de experiência individual. Para cada composto de teste, os valores de ED50 são calculados a partir de dados obtidos no tempo aproximado de efeito máximo.

EXEMPLO 7 Teste de Auto-Administração de Droga em Macacos

[00097] Procedimentos de auto-administração em animais de laboratório são freqüentemente usados para avaliar medicações candidatas para manejar dependência a cocaína e drogas psicomotoras estimulantes correlatas. Usualmente, experimentos são conduzidos para determinar como drogas alteram taxas de respostas ou o número de injeções i.v. sob um único programa, com conseqüência de reforço a um número de respostas fixo ou progressivamente crescente, isto é, programas de razão fixa (FR) ou razão progressiva (Mello NK e Negus SS (1996). Preclinical evaluation of pharmacotherapies for treatment of cocaine and opioid abuse using drug self administration procedures(Avaliação pré-clínica de farmacoterapias para tratamento de abuso de cocaína e opióide usando procedimentos de auto-administração de drogas). Neuropsychopharmacology 14:375-424). Nessa pesquisa, a comparação de alterações no comportamento e desempenho de auto- administração i.v. mantidas por um outro estímulo reforçador tal como transferência de alimento pode proporcionar uma medida de seletividade comportamental nos efeitos de uma medicação candidata (Woolverton WL (1996) Intravenous self-administration of cocaine under concurrent VI schedules of reinforcement(Auto-administração intravenosa de cocaína sob programas de reforço concorrentes VI) Psychopharmacology 127:195-203; Negus SS, Brandt MR e Mello NK (1999) Effects of the long-acting monoamine reuptake inhibitor indatraline on cocaine self-administration in rhesus monkeys(Efeitos da indatralina inibidora de reabsorção de monoamina de longa ação em auto-administração de cocaína em macacos rhesus). J. Pharmacol. Exp. Ther.291:60-69; Caine SB, Negus SS e Mello NK (2000) Effects of dopamine D1-like and D2-like agonists on cocaine selfadministration in rhesus monkeys: rapid assessment of cocaine doseeffect functions(Efeitos de agonistas tal como D1 e D2 dopamina em auto-administração de cocaína em macacos rhesus:avaliação rápida de funções de dose-efeito de cocaína). Psychopharmacology 148:41- 51).

Método Objetos de Experiência.

[00098] Os objetos são macacos rhesus machos adultos {Macaca mulatta). Os macacos são mantidos em uma dieta de 3-4 biscoitos por macaco {Purina Monkey Chow JumboN°. 5037) e um pedaço de fruta fresca por dia além de bolinhas (péletes) com aroma de frutas transferidas durante sessões operantes. Água é livremente disponível para todos os macacos em todos os tempos. Os macacos são alojados em um ambiente de umidade e temperatura controladas com ciclo de 12 horas luz-escuro, (luz em 7:00 am a 7:00 pm).

Procedimentos cirúrgicos.

[00099] Cateteres de borracha de silicone lúmen duplo (i.d. 0,7 mm; o.d. 2,0 mm) foram implantados na veia jugular ou femoral e passados na região medioescapular. Todos os procedimentos cirúrgicos são realizados sob condições assépticas. Os macacos são inicialmente sedados com cetamina (5 mg/kg) e anestesia é induzida com tiopental sódico (10 mg/kg, i.v.). Além disso, os macacos são tratados com 0,05 mg/kg de atropina para reduzir salivação. Seguindo inserção de tubo traqueal, anestesia é mantida com isoflurano (1-1,5% em oxigênio). Após cirurgia, aspirina ou acetaminofeno (80-160 mg/dia, p.o.) é administrada por 3 dias. Um antibiótico, penicilina procaína G (300.000 U/dia, i.m.), é administrado a cada dia por 5 dias. O cateter i.v. é protegido por um sistema de corrente (tether)que consiste em um revestimento de náilon feito sob medida conectado a um cabo flexível de aço inoxidável e conexão rotativa acionada a fluido (Lomir Biomedical, Malone,NI). Esse sistema de corda (tether)flexível permitiu que os macacos se movessem livremente. Patência do cateter é periodicamente avaliada por administração i.v. de um barbitúrico de curta ação, metoexital (3 mg/kg, i.v.). O cateter é considerado ser patente se administração i.v. de metoexital produzisse uma perda de tensão muscular dentro de 10 s.

Aparelho comportamental.

[000100] Cada macaco é alojado individualmente em uma câmara de aço inoxidável bem ventilada (64 x 64 x 79 cm). As gaiolas de abrigo de todos os macacos são modificadas para incluir um painel operante (28 x 28 cm) montado na parede frontal. Três chaves de seção quadrada de resposta translúcida (6,4 x 6,4 cm) são dispostas 2,54 cm à parte em uma fila horizontal de 3,2 cm do topo do painel operante. Cada chave pode ser transiluminada por luzes de estímulo vermelhas ou verdes (Superbright LED’s).O painel operante também suporta um dispensador de pélete externamente montado que transfere 1 g de péletes de alimento com aroma de fruta para um receptáculo de alimento montado na gaiola abaixo do painel operante de resposta. Além disso, duas bombas de seringa (modelo B5P-IE; Braintree Scientific, Braintree, MA, ou modelo 980210; Harvard Apparatus, South Natick, MA) são montadas acima de cada gaiola para transferência de solução salina ou soluções de droga através dos dois lúmenes dos cateteres i.v. Operação dos painéis operantes e coleta de dados foram realizadas com um computador localizado em um ambiente separado.

Procedimentos de Treino Inicial.

[000101] Procedimentos para a avaliação de respostas mantidas de cocaína e alimento foram similares àqueles usados em outros estudos (Negus SS, Mello NK, Portoghese PS e Lin CE (1997) Effects of kappa opioids on cocaine self-administration by rhesus monkeys(Efeitos de kappaopióides em auto-administração de cocaína por macacos rhesus), J. Pharmacol. Exp. Then 282:44-45; Negus SS, Mello NK, Portoghese OS, Lukas SE e Mendelson JH (1995). Role of delta opioid receptors in the reinforcing and discriminative stimulus effects of cocaine in rhesus monkeys(Papel de receptores delta opióide no reforço e efeitos de estímulo discriminativo de cocaína em macacos rhesus), J. Pharmacol. Exp. Then 273:1245-1256). Sob um protocolo básico, alimento e injeções i.v. são disponíveis durante três componentes alternados. Tanto alimento quanto injeções i.v. são disponíveis sob um programa de reforço FR30. Uma luz vermelha é associada à transferência de alimento e uma luz verde é associada a injeções com droga. O alimento e componente de droga são separados por um intervalo de 5 minutos. A sessão total de alimento- droga-alimento dura 120 minutos e é conduzida diariamente de 3-5 pm. Durante treino, a solução disponível para auto-administração durante o componente de droga é alternada entre 0,032 mg/kg/injeção de cocaína e solução salina. Os macacos são treinados até que eles satisfaçam os seguintes critérios para auto-administração estável de cocaína: 1) 3 dias consecutivos durante os quais a taxa de resposta no curso do componente de droga de cada sessão difere não mais de 20% da taxa média de resposta do componente de droga; 2) extinção rápida de solução salina conforme indicada por uma diminuição nas taxas de respostas de componente de droga no primeiro dia de substituição de solução salina.

Teste de Auto-administração de Droga.

[000102] Uma vez que macacos satisfazem os critérios para altos níveis estáveis de auto-administração de cocaína e alimentos, teste é iniciado usando sessões de substituições em que diferentes doses de cocaína (0,00032-0,1 mg/kg/injeção) são substituídas para as condições de dose de treino solução salina/cocaína. A dose de manutenção de cocaína foi reinstalada após cada teste de substituição por um período de pelo menos 4 dias e até que o número de estímulos reforçadores por dia mantido por cocaína e alimento retornasse a níveis de linhas de referência.

Avaliação do composto de teste.

[000103] Compostos de teste são avaliados usando um teste de procedimento de pré-tratamento. Um primeiro experimento examina os efeitos de tratamento não-contingente com solução salina ou composto de teste em respostas de alimento e cocaína. Os compostos de teste são administrados i.m. (ou i.p. e p.o.) antes da sessão. Os compostos de teste serão administrados até que doses produzem um desvio estatístico significativo no membro de ascensão de curva de dose-efeito de auto-administração de cocaína, ou eliminam resposta durante o primeiro componente de alimento. Em um segundo experimento, pelo menos três doses de compostos de teste são avaliadas como pré-tratamentos para uma dose unitária de cocaína no pico da curva de dose-efeito de cocaína. Esses estudos iniciais são usados para identificar uma dose do composto de teste que é comportamentalmente ativa no procedimento de auto-administração de droga. Uma vez que uma dose comportamentalmente ativa foi identificada, essa dose é administrada como um pré-tratamento para uma faixa de diferentes doses unitárias de cocaína. Dessa maneira, pode-se determinar o efeito de uma dose comportamentalmente ativa da droga de teste sobre a curva total de dose-efeito de cocaína. Outras doses dos compostos de teste podem ser também testadas.

Análise de Dados.

[000104] Os números totais de injeções ou péletes de alimentos transferidos por dia foram determinados como taxa de resposta. Dados para os efeitos do composto de teste sobre auto-administração de cocaína são avaliados usando um ANOVA de um ou dois fatores. Um ANOVA significativo foi seguido por comparação de meios individuais usando o teste de Duncan post hoc.O critério para significância foi ajustado em p< 0,05.

Claims

1. Uso do composto: (S)-(+)-2-[4-(3-fluorbenzilóxi)-benzilamino]propanamida; ou (S)-(+)-2-[4-(2-fluorbenzilóxi)-benzilamino]propanamida; ou de sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para tratamento de Síndrome das Pernas Inquietas (RLS).

2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é (S)-(+)-2-[4-(2-fluorbenzilóxi)- benzilamino]propanamida.

3. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é (S)-(+)-2-[4-(3-fluorbenzilóxi)- benzilamino]propanamida.

4. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de ser em combinação com agonistas de dopamina e/ou com levodopa, carbidopa, benserazida e combinações dos mesmos.

5. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o referido medicamento é administrado em uma dose que varia de 0,3 a 100 mg/kg de peso corporal por dia.