BRPI0615049B1 - Processo para a preparação de um conjugado de anticorpo- maitansinóide - Google Patents

Processo para a preparação de um conjugado de anticorpo- maitansinóide Download PDF

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Yong Wang
Shengjin Jin
Deborah H. Meshulam
Godfrey W. Amphlett
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Abstract

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE CONJUGADOS DE MEDICAMENTO PURIFICADO A invenção fornece um processo para a preparação de um agente de ligação a célula quimicamente unido a um medicamento. O processo compreende a ligação de forma covalente de um ligante a um agente de ligação a célula, uma etapa de purificação, conjugação de um medicamento ao agente de ligação a célula e uma etapa de purificação subseqüente.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO
Esta invenção pertence a um processo para a preparação de conjugados de pureza e estabilidade substancialmente elevadas, em que os conjugados compreendem um agente de ligação celular quimicamente unido a um fármaco.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
O tratamento de câncer progrediu significativamente com o desenvolvimento de substâncias farmacêuticas que se direcionam eficientemente e matam células cancerosas. Para essa finalidade, os pesquisadores se beneficiaram dos receptores e antígenos da superfície celular expressos seletivamente por células cancerosas para o desenvolvimento de fármacos que se baseiam em anticorpos que se ligam a antígenos com especificidade tumoral ou associados a tumores. A esse respeito, moléculas citotóxicas como, por exemplo, toxinas de bactérias e de plantas, radionuclídeos, e certos fármacos quimioterápicos, foram ligadas quimicamente a anticorpos monoclonais que se ligam a antígenos de superfície celular com especificidade tumoral ou associados a tumores (veja, por exemplo, Pedidos de Patente Internacional WO 00/02587, WO 02/060955 e WO 02/092127, Patentes U.S. 5.475.092, 6.340.701 e 6.171.586, Publicação do Pedido de Patente U.S. N° 2003/0004210 A1, e Ghetie e cols., J. Immunol. Methods, 112: 267-277 (1988)). Tais compostos são tipicamente denominados toxinas, radionuclídeos e “conjugados” de fármacos, respectivamente. Frequentemente, eles também são denominados imunoconjugados, radioimunoconjugados e imunotoxinas. A morte da célula tumoral ocorre mediante a ligação do conjugado de fármaco a uma célula tumoral e liberação e/ou ativação da atividade citotóxica do fármaco. A seletividade gerada pelos conjugados de fármacos minimiza a toxicidade para as células normais aumentando, dessa forma, a tolerabilidade do fármaco no paciente.
Processos para a conjugação de anticorpos a agentes citotóxicos contendo sulfidril como, por exemplo, maitansinóides, foram descritos previamente (veja, por exemplo, Patentes U.S. 5.208.020, 5.416.064 e 6.441.163). Por exemplo, as Patentes U.S. 5.208.020 e 5.416.064 revelam um processo para a fabricação de conjugados anticorpo- maitansinóide, em que o anticorpo inicialmente é modificado com um reagente heterobifuncional, como descritos nas Patentes U.S. 4.149.003, 4.563.304 e na Publicação do Pedido de Patente U.S. N° 2004/0241174 A1. As Patentes U.S. 5.208.020 e 5.416.064 ainda descrevem a conjugação de um anticorpo modificado com um excesso de um agente citotóxico contendo sulfidril em pH 7, seguido por purificação em colunas de cromatografia SephadexTM G25. A purificação de conjugados de anticorpo-fármaco por cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) também foi descrita (veja, por exemplo, Liu e cols., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93: 8.618-8.623 (1996), e Chari e cols., Cancer Research, 52: 127-131 (1992)).
Os processos que foram descritos previamente para a fabricação dos conjugados de anticorpo-fármaco são complexos, pois são sobrecarregados com etapas que são de realização trabalhosa ou que produzem imunoconjugados que são menos puros ou menos estáveis do que os otimamente desejados. Por exemplo, a conjugação em um pH entre 6,0 e 6,5 não é ótima para a produção de conjugados puros e estáveis. Além disso, a reações de conjugação sob essas condições são geralmente lentas e ineficientes, levando à necessidade de um tempo excessivo e grande uso de material.
Seria desejável modificar ou eliminar uma ou mais etapas de fabricação, sem comprometer a qualidade do produto, por exemplo, sua pureza e/ou estabilidade. Seria ainda desejável ter opções de purificação adicionais além daquelas que foram até hoje descritas na medida em que algumas opções serão mais eficazes com certas combinações de agentes de ligação celular, ligantes e fármacos, do que com outras.
Tendo em vista o que foi apresentado anteriormente, há uma necessidade na técnica do desenvolvimento de métodos aperfeiçoados de preparação de composições de conjugado de agente de ligação celular-fármaco que sejam de pureza substancialmente elevada e, ao mesmo tempo, possuam uma estabilidade maior. A invenção fornece um método desse tipo. Essas e outras vantagens da invenção, bem como características adicionais da invenção, ficarão evidentes a partir da descrição da invenção aqui fornecida.
BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO
A invenção fornece um processo para a preparação de um conjugado de pureza e estabilidade substancialmente elevadas que compreende um agente de ligação celular quimicamente unido a um fármaco. O processo compreende: (a) o contato de um agente de ligação celular com um reagente de entrecruzamento bifuncional para anexar de forma covalente um ligante ao agente de ligação celular e dessa forma preparar uma primeira mistura que compreende os agentes de ligação celular que têm ligantes ligados a eles, (b) submissão da primeira mistura à filtração de fluxo tangencial, cromatografia adsortiva, filtração adsortiva, precipitação seletiva, ou combinação destas e, dessa forma, preparar uma primeira mistura purificada de agentes de ligação celular que têm ligantes ligados a eles, (c) conjugação de um fármaco aos agentes de ligação celular que têm ligantes ligados a eles na primeira mistura purificada por reação dos agentes de ligação celular que têm ligantes ligados a eles com um fármaco em uma solução que tem um pH de cerca de 4 a cerca de 9, para preparar uma segunda mistura que compreende: (i) agente de ligação celular quimicamente unido através do ligante ao fármaco, (ii) fármaco livre, e (iii) subprodutos da reação, e (d) submissão da segunda mistura à filtração de fluxo tangencial, cromatografia adsortiva, filtração adsortiva, precipitação seletiva, ou combinação destas, para purificar os agentes de ligação celular quimicamente unidos através dos ligantes ao fármaco dos outros componentes da segunda mistura e, dessa forma, preparar uma segunda mistura purificada.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
A invenção fornece um processo para a preparação de conjugados de agente de ligação celular-fármaco de pureza e estabilidade substancialmente elevadas. Essas composições podem ser usadas para o tratamento de doenças por causa da pureza e estabilidade elevadas dos conjugados. Composições que compreendem um agente de ligação celular como, por exemplo, um anticorpo, quimicamente unido a um fármaco como, por exemplo, maitansinóide, são descritas, por exemplo, na Publicação do Pedido de Patente U.S. N° 2004/0241174 A1. Nesse contexto, pureza substancialmente elevada é considerada como sendo: (a) maior que 90%, preferivelmente maior que 95%, das espécies conjugadas são monoméricas e/ou (b) o nível de fármaco livre na preparação de conjugado é de menos de 2% (em relação ao fármaco total).
A esse respeito, o processo da invenção compreende: (a) a modificação do agente de ligação celular com um reagente de entrecruzamento bifuncional para anexar de forma covalente um ligante ao agente de ligação celular e, dessa forma, preparar uma primeira mistura que compreende os agentes de ligação celular que têm ligantes ligados a eles, (b) submissão da primeira mistura à filtração de fluxo tangencial, cromatografia adsortiva, filtração adsortiva, precipitação seletiva, ou combinações destas, para purificar os agentes de ligação celular que têm ligantes ligados a eles dos outros componentes da primeira mistura e, dessa forma, preparar uma primeira mistura purificada de agentes de ligação celular que têm ligantes ligados a eles, (c) conjugação de um fármaco aos agentes de ligação celular que têm ligantes ligados a eles na primeira mistura purificada, por reação dos agentes de ligação celular que têm ligantes ligados a eles com o fármaco, em uma solução que tem um pH de cerca de 4 a cerca de 9, para preparar uma segunda mistura que compreende: (i) agente de ligação celular quimicamente unido através do ligante ao fármaco, (ii) fármaco livre, e (iii) subprodutos da reação, e (d) submissão da segunda mistura à filtração de fluxo tangencial, cromatografia adsortiva, filtração adsortiva, precipitação seletiva, ou combinação destas, para a remoção dos fármacos não conjugados, reagentes e subprodutos, bem como para se obter conjugados substancialmente purificados de agente de ligação celular-fármaco.
Preferivelmente, utiliza-se filtração de fluxo tangencial (TFF, também conhecida como filtração de fluxo cruzado, ultrafiltração e diafiltração) e/ou resinas de cromatografia adsortiva nas etapas de purificação. No entanto, quando se usa TFF na primeira etapa de purificação (etapa b), na (etapa c), é utilizada uma conjugação em pH de 6,0-6,5, e uma resina de cromatografia adsortiva é utilizada na segunda etapa de purificação (etapa d), preferindo-se que a resina de cromatografia adsortiva não seja uma resina de troca iônica. Em outras modalidades preferidas, TFF é utilizada em ambas as etapas de purificação, ou resinas de cromatografia adsortiva são utilizadas em ambas as etapas de purificação. Alternativamente, uma resina de cromatografia adsortiva é utilizada na primeira etapa de purificação e TFF é utilizada na segunda etapa de purificação. Também pode ser utilizada uma combinação de TFF e uma resina de cromatografia adsortiva na primeira e/ou segunda etapa de purificação.
Qualquer sistema de TFF adequado pode ser utilizado, incluindo um sistema do tipo Pellicon (Millipore, Billerica, MA), um sistema de Cassete Sartocon (Sartorius AG, Edgewood, NY) e um sistema do tipo Centrasette (Pall Corp., East Hills, NY).
Qualquer resina de cromatografia adsortiva adequada pode ser utilizada. Resinas de cromatografia adsortiva preferidas incluem resinas para cromatografia com hidroxiapatita, cromatografia de indução de carga hidrofóbica (HCIC), cromatografia de interação hidrofóbica (HIC), cromatografia de troca iônica, cromatografia de troca iônica de modo misto, cromatografia por afinidade de metal imobilizado (IMAC), cromatografia de ligante de corante, cromatografia por afinidade, cromatografia de fase reversa, e combinações destas. Exemplos de resinas de hidroxiapatita adequadas incluem hidroxiapatita cerâmica (CHT Tipo I e Tipo II, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA), hidroxiapatita HA Ultrogel (Pall Corp., East Hills, NY) e fluorapatita cerâmica (CFT Tipo I e Tipo II, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Um exemplo de uma resina de HCIC adequada é a resina MEP Hypercel (Pall Corp., East Hills, NY). Exemplos de resinas de HIC adequadas incluem resinas de Butil-Sefarose, Hexil-Sefarose, Fenil-Sefarose e Octil Sefarose (todas de GE Healthcare, Piscataway, NJ), bem como as resinas Macro-prep Metil e Macro-Prep t-Butil (Biorad Laboratories, Hercules, CA). Exemplos de resinas de troca iônica adequadas incluem as resinas SP-Sefarose, CM- Sefarose e Q-Sefarose (todas de GE Healthcare, Piscataway, NJ) e a resina Unosphere S (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Um exemplo de trocador iônicos do modo misto adequado inclui a resina Bakerbond ABx (JT Baker, Phillipsburg NJ). Exemplos de resinas de IMAC adequadas incluem resina Quelante de Sefarose (GE Healthcare, Piscataway, NJ) e a resina Profinity IMAC (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Exemplos de resinas de ligante de corante adequadas incluem a resina Blue Sefarose (GE Healthcare, Piscataway, NJ) e a resina Affi-gel Blue (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Exemplos de resinas de afinidade adequadas incluem a resina Proteína A Sefarose (por exemplo, MabSelect, GE Healthcare, Piscataway, NJ), em que o agente de ligação celular é um anticorpo, e resinas de afinidade de lectina, por exemplo, a resina Lentil Lectina Sefarose (GE Healthcare, Piscataway, NJ), em que o agente de ligação celular abriga sítios de ligação de lectina apropriados. Alternativamente, pode ser usado um anticorpo específico para o agente de ligação celular. Um anticorpo desse tipo pode ser imobilizado, por exemplo, à resina de Fluxo Rápido Sefarose 4 (GE Healthcare, Piscataway, NJ). Exemplos de resinas de fase reversa adequadas incluem as resinas C4, C8 e C18 (Grace Vydac, Hesperia, CA).
De acordo com o método da invenção, é produzida uma primeira mistura que compreende o agente de ligação celular que tem ligantes ligados a ele, além dos reagentes e outros subprodutos. A purificação do agente de ligação celular modificado dos reagentes e subprodutos é realizada por submissão da primeira mistura e um processo de purificação. A esse respeito, a primeira mistura pode ser purificada com o uso de filtração de fluxo tangencial (TFF), por exemplo, um processo de filtração de fluxo tangencial baseada em membrana, cromatografia adsortiva, filtração adsortiva ou precipitação seletiva, ou qualquer outro processo de purificação adequado, bem como combinações destes. Essa primeira etapa de purificação fornece uma primeira mistura purificada, ou seja, uma concentração aumentada dos agentes de ligação celular que têm ligantes ligados a eles e uma quantidade diminuída de reagente de entrecruzamento bifuncional não ligado, quando comparada com a primeira mistura, antes da purificação de acordo com a invenção.
Após a purificação da primeira mistura para se obter uma primeira mistura purificada de agentes de ligação celular que tem ligantes ligados a eles, um fármaco é conjugado aos agentes de ligação celular que têm ligantes ligados a eles na primeira mistura purificada por reação dos agentes de ligação celular que têm ligantes ligados a eles com um fármaco, em uma solução que possui um pH de cerca de 4 a cerca de 9, gerando uma segunda mistura que compreende: (i) o agente de ligação celular quimicamente acoplado através do ligante ao fármaco, (ii) fármaco livre, e (iii) são produzidos subprodutos da reação. Embora a reação de conjugação seja realizada em um pH de cerca de 4 a cerca de pH 9, a reação é realizada preferivelmente em um pH de cerca de 6 ou abaixo, ou em um pH de cerca de 6,5 ou mais, mais preferivelmente em um pH de cerca de 4 a cerca de 6, ou em um pH de cerca de 6,5 a cerca de 9 e, especialmente, em um pH de 4 a menos de 6, ou em um pH de maior que 6,5 a 9. Quando a etapa de conjugação é realizada em um pH de cerca de 6,5 ou mais, um pouco dos fármacos contendo sulfidril pode tender a dimerizar por formação de ligação dissulfeto. A remoção de metais residuais e/ou de oxigênio da mistura de reação, além da adição opcional de antioxidantes, ou o uso de ligantes com mais grupos abandonadores reativos, ou a adição de fármaco em mais de uma alíquota, pode ser necessária para permitir uma reação eficiente em uma situação como esta.
Opcionalmente, a purificação do agente de ligação celular modificado pode ser omitida. Nesta situação, o fármaco pode ser adicionado simultaneamente ao reagente de entrecruzamento ou em algum momento mais tarde, por exemplo, 1, 2, 3 ou mais horas após a adição do reagente de entrecruzamento ao agente de ligação celular.
O método da invenção pode opcionalmente incluir a adição de sacarose à etapa de conjugação usada no método da invenção para aumentar a solubilidade e recuperar os conjugados de agente de ligação celular-fármaco. De preferência, a sacarose é adicionada em uma concentração de cerca de 0,1% (p/v) a cerca de 20% (p/v) (por exemplo, cerca de 0,1% (p/v), 1% (p/v), 5% (p/v), 10% (p/v), 15% (p/v) ou 20% (p/v)). Preferivelmente, a sacarose é adicionada em uma concentração de cerca de 1% (p/v) a 10% (p/v) (por exemplo, cerca de 2% (p/v), cerca de 4% (p/v), cerca de 6% (p/v) ou cerca de 8% (p/v)). Além disso, a reação de conjugação também pode compreender a adição de um agente de tamponamento. Pode ser utilizado qualquer agente de tamponamento adequado conhecido na técnica. Agentes de tamponamento adequados incluem, por exemplo, um tampão de citrato, um tampão de acetato, um tampão de succinato e um tampão de fosfato.
Após a etapa de conjugação, a segunda mistura é submetida a uma etapa de purificação. A esse respeito, a segunda mistura pode ser purificada com o uso de filtração de fluxo tangencial (TFF), por exemplo, um processo de filtração de fluxo tangencial baseada em membrana, cromatografia adsortiva, filtração absorvente, precipitação seletiva, ou qualquer outro processo de purificação adequado, bem como combinações destes, que são apresentados nessa especificação. Essa segunda etapa de purificação fornece uma segunda mistura purificada, ou seja, uma concentração aumentada dos agentes de ligação celular quimicamente unidos através dos ligantes ao fármaco, e uma quantidade diminuída de um ou mais outros componentes da segunda mistura, quando comparada com a segunda mistura, antes da purificação de acordo com a invenção.
O agente de ligação celular pode ser qualquer agente adequado que se ligue a uma célula, típica e preferivelmente, uma célula animal (por exemplo, uma célula humana). O agente de ligação celular preferivelmente é um peptídeo ou um polipeptídeo. Agentes de ligação celular adequados incluem, por exemplo, anticorpos (por exemplo, anticorpos monoclonais e fragmentos destes), linfocinas, hormônios, fatores do crescimento, moléculas de transporte de nutrientes (por exemplo, transferrina), e qualquer outro agente ou molécula que se ligue especificamente a uma molécula-alvo na superfície de uma célula.
O termo “anticorpo”, como aqui usado, refere-se a qualquer imunoglobulina, qualquer fragmento de imunoglobulina, por exemplo, Fab, F(ab’)2, dsFv, sFv, diabodies e triabodies, ou quimeras de imunoglobulinas, que podem se ligar a um antígeno na superfície de uma célula (por exemplo, que contenha uma região determinante de complementaridade (CDR)). Qualquer anticorpo adequado pode ser usado como agente de ligação celular. Aqueles habilitados na técnica observarão que a seleção de um anticorpo apropriado dependerá da população de células visada. A esse respeito, o tipo e o número de moléculas da superfície celular (ou seja, antígenos) que são seletivamente expressos em uma população de células em particular (típica e preferivelmente uma população de células doentes) determinarão a seleção de um anticorpo apropriado para uso na composição da invenção. São conhecidos perfis de expressão da superfície celular para uma ampla gama de tipos de células, incluindo tipos de células tumorais ou, se desconhecidos, pode ser determinado com a utilização de técnicas rotineiras de biologia molecular e histoquímica.
O anticorpo pode ser policlonal ou monoclonal, mas é, mais preferivelmente, um anticorpo monoclonal. Como aqui usados, anticorpos “policlonais” referem-se às populações heterogêneas de moléculas de anticorpo, tipicamente contidas no soro de animais imunizados. Anticorpos “monoclonais” referem-se às populações homogêneas de moléculas de anticorpo que são específicas para um antígeno em particular. Anticorpos monoclonais são tipicamente produzidos por um único clone de linfócitos B (“células B”). Anticorpos monoclonais podem ser obtidos com o uso de diversas tecnologias conhecidas por aqueles habilitados na técnica, incluindo a tecnologia padronizada de hibridoma (veja, por exemplo, Kohler e Milstein, Eur. Immunol., 5: 511-519 (1976), Harlow e Linha (eds.), “Antibodies: A Laboratory Manual”, CSH Press (1988) e C.A. Janeway e cols. (eds.), Immunobiology, 5a Ed., Garland Publishing, Nova York, NY (2001)). Resumidamente, o método de hibridoma de produção de anticorpos monoclonais tipicamente envolve a injeção em qualquer animal adequado, típica e preferivelmente um camundongo, de um antígeno (ou seja, um “imunógeno”). O animal é subsequentemente sacrificado, e as células B isoladas de seu baço são fundidas às células de mieloma humano. É produzida uma célula híbrida (ou seja, um “hibridoma”), que se prolifera indefinidamente e secreta continuamente altas titulações de um anticorpo com a especificidade desejada in vitro. Qualquer método apropriado conhecido na técnica pode ser usado para identificar células de hibridoma que produzem um anticorpo com a especificidade desejada. Tais métodos incluem, por exemplo, ensaio imunoabsorvente ligado à enzima (ELISA), análise Western blot, e radioimunoensaio. A população de hibridomas é rastreada para isolar clones individuais, cada um dos quais secreta uma única espécie de anticorpo para o antígeno. Como cada hibridoma é um clone derivado da fusão com uma única célula B, todas as moléculas de anticorpo que ele produz são idênticas em termos de estrutura, incluindo seu sítio de ligação de antígeno e isótipo. Os anticorpos monoclonais também podem ser gerados com a utilização de outras técnicas adequadas, incluindo a tecnologia de EBV- hibridoma (veja, por exemplo, Haskard e Archer, Immnunol. Methods, 74(2): 361-67 (1984), e Roder e cols., Methods Enzymol., 121: 140-67 (1986)), sistemas de expressão de vetor de bacteriófago (veja, por exemplo, Huse e cols., Science, 246: 1.275-81 (1989)), ou bibliotecas de exibição de fago que compreendem fragmentos de anticorpo, por exemplo, Fab e scFv (região variável de cadeia única) (veja, por exemplo, as Patentes U.S. 5.885.793 e 5.969.108, e Pedidos de Patente Internacional WO 92/01047 e WO 99/06587).
O anticorpo monoclonal pode ser isolado de, ou produzido em, qualquer animal adequado, mas é preferivelmente produzido em um mamífero, mais preferivelmente um camundongo ou um ser humano e, principalmente, um ser humano. Métodos para a produção de um anticorpo em camundongos são bem conhecidos por aqueles habilitados na técnica, e são aqui descritos. Com relação aos anticorpos humanos, aqueles habilitados na técnica observarão que anticorpos policlonais podem ser isolados do soro de indivíduos humanos vacinados ou imunizados com um antígeno apropriado. Alternativamente, anticorpos humanos podem ser gerados por adaptação de técnicas conhecidas para a produção de anticorpos humanos em animais não humanos como, por exemplo, camundongos (veja, por exemplo, as Patentes U.S. 5.545.806, 5.569.825 e 5.714.352, e a Publicação do Pedido de Patente U.S. N° 2002/0197266 A1).
Embora sendo a escolha ideal para aplicações terapêuticas em seres humanos, os anticorpos humanos, particularmente os anticorpos humanos monoclonais, tipicamente são mais difíceis de serem gerados do que anticorpos monoclonais de camundongos. Anticorpos monoclonais de camundongos, no entanto, induzem uma rápida resposta de anticorpos pelo hospedeiro quando administrados a seres humanos, o que pode reduzir o potencial terapêutico ou diagnóstico do conjugado de anticorpo-fármaco. Para contornar essas complicações, um anticorpo monoclonal preferivelmente não é reconhecido como “estranho” pelo sistema imunológico humano.
Para essa finalidade, a exibição de fago pode ser usada para gerar o anticorpo. A esse respeito, bibliotecas de fago que codificam domínios variáveis (V) de ligação de antígeno de anticorpos podem ser geradas com o uso de técnicas padronizadas de biologia molecular e DNA recombinante (veja, por exemplo, Sambrook e cols. (eds.), “Molecular Cloning, A Laboratory Manual”, 3a Edição, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Nova York (2001)). Fagos que codifica uma região variável com a especificidade desejada são selecionados quanto à ligação específica ao antígeno desejado, e é reconstituído um anticorpo humano completo que compreende o domínio variável selecionado. Sequências de ácido nucléico que codificam o anticorpo reconstituído são introduzidas em uma linhagem celular adequada, por exemplo, uma célula de mieloma usada para a produção de hibridoma, de forma que anticorpos humanos que possuam as características de anticorpos monoclonais sejam secretados pela célula (veja, por exemplo, Janeway e cols., supra, Huse e cols., supra e Patente U.S. 6.265.150). Alternativamente, podem ser gerados anticorpos monoclonais por camundongos que são transgênicos para genes específicos da cadeia pesada e leve de imunoglobulina humana. Tais métodos são conhecidos na técnica e descritos, por exemplo, nas Patentes U.S. 5.545.806 e 5.569.825, e Janeway e cols., supra.
De preferência, o anticorpo é um anticorpo humanizado. Como aqui usado, um anticorpo “humanizado” é aquele em que as regiões determinantes de complementaridade (CDR) de um anticorpo monoclonal de camundongo, que formam as alças de ligação de antígeno do anticorpo, são enxertados na estrutura central de uma molécula de anticorpo humano. Em função da similaridade das estruturas centrais de anticorpos de camundongo e humanos, é geralmente aceito na técnica que essa abordagem produz um anticorpo monoclonal que é antigenicamente idêntico a um anticorpo humano, mas que se liga ao mesmo antígeno que o anticorpo monoclonal de camundongo do qual as sequências da CDR foram derivadas. Métodos para a geração de anticorpos humanizados são bem conhecidos na técnica, e são descritos detalhadamente, por exemplo, em Janeway e cols., supra, nas Patentes U.S. 5.225.539, 5.585.089 e 5.693.761, na Patente Européia N° 0239400 BI e na Patente do Reino Unido N° 2188638. Anticorpos humanizados também podem ser gerados com o uso da tecnologia de revestimento da superfície do anticorpo descrita na Patente U.S. 5.639.641 e Pedersen e cols., J. Mol. Biol., 235: 959-973 (1994). Embora o anticorpo empregado no conjugado da composição da invenção seja, de preferência, um anticorpo monoclonal humanizado, um anticorpo monoclonal humano e um anticorpo monoclonal de camundongo, como descritos acima, também estão incluídos no escopo da invenção.
Fragmentos de anticorpo que possuem pelo menos um sítio de ligação de antígeno e, portanto, reconhecem e se ligam a pelo menos um antígeno ou receptor presente na superfície de uma célula-alvo, também estão incluídos no escopo da invenção. A esse respeito, a clivagem proteolítica de uma molécula de anticorpo intacta pode produzir diversos fragmentos de anticorpo que retêm a habilidade para reconhecer e se ligar aos antígenos. Por exemplo, a digestão limitada de uma molécula de anticorpo com a protease papaína produz tipicamente três fragmentos, dois dos quais são idênticos, e são denominados fragmentos Fab, na medida em que retêm a atividade de ligação de antígeno da molécula de anticorpo original. A clivagem de uma molécula de anticorpo com a enzima pepsina normalmente produz dois fragmentos de anticorpo, um dos quais retém ambos os braços de ligação de antígeno da molécula de anticorpo e é, portanto, denominado fragmento F(ab’)2. A redução de um fragmento F(ab’)2 com ditiotreitol ou mercaptoetilamina produz um fragmento denominado fragmento Fab’. Um fragmento de anticorpo de fragmento da região variável de cadeia única (sFv), que consiste em um fragmento Fab truncado que compreende o domínio variável (V) de uma cadeia pesada de anticorpo ligada a um domínio V de uma cadeia leve de anticorpo por meio de um peptídeo sintético, pode ser gerado com o uso de técnicas rotineiras de tecnologia de DNA recombinante (veja, por exemplo, Janeway e cols., supra). Da mesma forma, fragmentos da região variável estabilizados por dissulfeto (dsFv) podem ser preparados por tecnologia de DNA recombinante (veja, por exemplo, Reiter e cols., Protein Engineering, 7: 697704 (1994)). Fragmentos de anticorpo no contexto da invenção, no entanto, não se limitam a esses tipos exemplares de fragmentos de anticorpo. Qualquer fragmento de anticorpo adequado que reconheça e se ligue a um receptor ou antígeno da superfície celular desejado pode ser empregado. Fragmentos de anticorpo são ainda descritos, por exemplo, em Parham, J. Immunol., 131: 2.895-2.902 (1983), Spring e cols., J. Immunol., 113: 470-478 (1974) e Nisonoff e cols., Arch. Biochem. Biophys., 89: 230-244 (1960). A ligação anticorpo-antígeno pode ser testada com o uso de qualquer método adequado conhecido na técnica como, por exemplo, radioimunoensaio (RIA), ELISA, Western blot, imunoprecipitação e ensaios de inibição competitiva (veja, por exemplo, Janeway e cols., supra e a Publicação do Pedido de Patente U.S. N° 2002/0197266 A1).
Além disso, o anticorpo pode ser um anticorpo quimérico ou um fragmento de ligação de antígeno deste. O termo “quimérico” significa que o anticorpo compreende pelo menos duas imunoglobulinas, ou fragmentos destas, obtidas ou derivadas de pelo menos duas espécies diferentes (por exemplo, duas imunoglobulinas diferentes como, por exemplo, uma região constante de imunoglobulina humana combinada a uma região variável de imunoglobulina murídea). O anticorpo também pode ser um anticorpo de domínio (dAb) ou um fragmento de ligação de antígeno deste como, por exemplo, um anticorpo de camelídeo (veja, por exemplo, Desmyter e cols., Nature Struct. Biol., 3: 752, (1996)), ou um anticorpo de tubarão como, por exemplo, um novo receptor de antígeno (IgNAR) (veja, por exemplo, Greenberg e cols., Nature, 374: 168 (1995), e Stanfield e cols., Science, 305: 1.770-1.773 (2004)).
Qualquer anticorpo adequado pode ser usado no contexto da invenção. Por exemplo, o anticorpo monoclonal J5 é um anticorpo IgG2a murídeo que é específico para antígeno comum da leucemia linfoblástica aguda (CALLA) (Ritz e cols., Nature, 283: 583-585 (1980)), e pode ser usado para visar células que expressam CALLA (por exemplo, células de leucemia linfoblástica aguda). O anticorpo monoclonal MY9 é um anticorpo IgG1 murídeo que se liga especificamente ao antígeno CD33 (Griffin e cols., Leukemia Res., 8: 521 (1984)), e pode ser usado para visar células que expressam CD33 (por exemplo, células de leucemia mielógena aguda (LMA)).
Da mesma forma, o anticorpo monoclonal anti-B4 (também conhecido como B4) é um anticorpo IgG1 murídeo que se liga ao antígeno CD19 em células B (Nadler e cols., J. Immunol., 131: 244-250 (1983)), e pode ser usado para visar células B ou células doentes que expressam CD19 (por exemplo, células de linfoma não Hodgkin e células de leucemia linfoblástica crônica). N901 é um anticorpo monoclonal murídeo que se liga ao antígeno CD56 (molécula de adesão de célula neural) encontrado em células de origem neuroendócrina, incluindo tumor pulmonar de pequenas células, que pode ser usado no conjugado para direcionar os fármacos às células de origem neuroendócrina. Os anticorpos J5, MY9 e B4 preferivelmente têm sua superfície retrabalhada ou são humanizados, antes de seu uso como parte do conjugado. O tratamento da superfície ou a humanização de anticorpos é descrito, por exemplo, em Roguska e cols., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91: 969-73 (1994).
Além disso, o anticorpo monoclonal C242 se liga ao antígeno CanAg (veja, por exemplo, a Patente U.S. 5.552.293), e pode ser usado para direcionar o conjugado aos tumores que expressam CanAg, por exemplo, câncer cólon-retal, pancreático, pulmonar de células não pequenas e gástrico. HuC242 é uma forma humanizada do anticorpo monoclonal C242 (veja, por exemplo, a Patente U.S. 5.552.293). O hibridoma do qual HuC242 é produzido é depositado com o Número de Identificação no ECACC 90012601. HuC242 pode ser preparado com o uso da metodologia de enxerto de CDR (veja, por exemplo, as Patentes U.S. 5.585.089, 5.693.761 e 5.693.762) ou com a tecnologia de revestimento da superfície (veja, por exemplo, a Patente U.S. 5.639.641). HuC242 pode ser usado para direcionar o conjugado às células tumorais que expressam o antígeno CanAg como, por exemplo, células de câncer cólon-retal, pancreático, pulmonar de células não pequenas e gástrico.
Para ter como alvo uma célula cancerosa de câncer ovariano e de próstata, um anticorpo anti-MUC1 pode ser usado como agente de ligação celular no conjugado. Anticorpos anti-MUC1 incluem, por exemplo, anti-HMFG-2 (veja, por exemplo, Taylor-Papadimitriou e cols., Int. J. Cancer, 28: 17-21 (1981)), hCTMO1 (veja, por exemplo, van Hof e cols., Cancer Res., 56: 5.179-5.185 (1996)) e DS6. Células de câncer de próstata também podem ser visadas pelo conjugado com o uso de um anti-antígeno de membrana específico para a próstata (PSMA) como o agente de ligação celular, por exemplo, J591 (veja, por exemplo, Liu e cols., Cancer Res., 57: 3.629-3.634 (1997)). Além disso, células cancerosas que expressam o antígeno Her2, por exemplo, de células de câncer de mama, de próstata e de ovário, podem ser direcionadas com o uso do anticorpo trastuzumab. Anticorpos anti-IGF-IR que se ligam ao receptor do fator de crescimento insulina-like também podem ser usados no conjugado.
Anticorpos particularmente preferidos são anticorpos monoclonais humanizados, cujos exemplos incluem huN901, huMy9-6, huB4, huC242, trastuzumab, bivatuzumab, sibrotuzumab e rituximab (veja, por exemplo, as Patentes U.S. 5.639.641 e 5.665.357, Pedido Provisório de Patente U.S. N° 60/424.332 (que está relacionado à Publicação do Pedido de Patente U.S. N° 2005/0118183 A1), Pedido de Patente Internacional WO 02/16401, Pedersen e cols., supra, Roguska e cols., supra, Liu e cols., supra, Nadler e cols., supra, Colomer e cols., Cancer Invest., 19: 49-56 (2001), Heider e cols., Eur. J. Cancer, 31A: 2.385-2.391 (1995), Welt e cols., J. Clin. Oncol., 12: 1.193-1.203 (1994) e Maloney e cols., Blood, 90: 2.188-2.195 (1997)). Principalmente, o anticorpo é o anticorpo monoclonal humanizado huN901 ou o anticorpo monoclonal humanizado huMy9-6. Outros anticorpos preferidos incluem CNTO95, huDS6, huB4 e huC242. Outros anticorpos monoclonais humanizados são conhecidos na técnica e podem ser usados relacionados à invenção.
Embora o agente de ligação celular seja preferivelmente um anticorpo, o agente de ligação celular também pode ser outra molécula que não um anticorpo. Moléculas adequadas que não sejam anticorpo incluem, por exemplo, interferons (por exemplo, interferon alfa, beta ou gama), linfocinas (por exemplo, interleucina 2 (IL-2), IL- 3, IL-4 ou IL-6), hormônios (por exemplo, insulina), fatores do crescimento (por exemplo, EGF, TGF-alfa, FGF e VEGF), fatores de estimulação de colônias (por exemplo, G- CSF, M-CSF e GM-CSF (veja, por exemplo, Burgess, Immunology Today, 5: 155-158 (1984))), somatostatina e transferrina (veja, por exemplo, O’Keefe e cols., Biol. Chem., 260: 932937 (1985)). Por exemplo, GM-CSF, que se liga às células mielóides, pode ser usado como agente de ligação celular que tem como alvo células de leucemia mielógena aguda. Além disso, IL-2, que se liga às células T ativadas, pode ser usada para a prevenção de rejeição a enxerto de transplante, para terapia e prevenção da doença enxerto versus hospedeiro e para o tratamento de leucemia aguda de células T. O fator de crescimento epidérmico (EGF) pode ser usado para ter como alvo cânceres de células escamosas como, por exemplo, câncer de pulmão e câncer da cabeça e pescoço. Somatostatina pode ser usada para ter como alvo células de neuroblastoma e outros tipos de células tumorais.
O conjugado pode compreender qualquer fármaco adequado, tipicamente um agente citotóxico. O termo “agente citotóxico”, como aqui usado, refere-se a qualquer composto que resulte na morte de uma célula, induza morte celular ou diminua a viabilidade celular. Agentes citotóxicos adequados incluem, por exemplo, maitansinóides e análogos de maitansinóide, taxóides, CC-1065 e análogos de CC-1065, e dolastatina e análogos de dolastatina. Em uma modalidade preferida da invenção, o agente citotóxico é um maitansinóide, incluindo maitansinol e análogos de maitansinol. Maitansinóides são compostos que inibem a formação de microtúbulos e são altamente tóxicos para células de mamíferos. Exemplos de análogos de maitansinol adequados incluem aqueles que possuem um anel aromático modificado e aqueles que possuem modificações em outras posições. Esses maitansinóides são descritos, por exemplo, nas Patentes U.S. 4.256.746, 4.294.757, 4.307.016, 4.313.946, 4.315.929, 4.322.348, 4.331.598, 4.361.650, 4.362.663, 4.364.866, 4.424.219, 4.371.533, 4.450.254, 5.475.092, 5.585.499, 5.846.545 e 6.333.410.
Exemplos de análogos de maitansinol que possuem um anel aromático modificado incluem: (1) C-19-decloro (Patente U.S. 4.256.746) (preparado por redução LAH de ansamitocina P2), (2) C-20-hidróxi (ou C-20-demetil) +/-C- 19-decloro (Patentes U.S. 4.361.650 e 4.307.016) (preparado por desmetilação com o uso de Streptomyces ou Actinomyces ou desclorinação com o uso de LAH), e (3) C-20-demetóxi, C- 20-acilóxi (-OCOR), +/-decloro (Patente U.S. 4,294,757) (preparado por acilação com o uso de cloretos de acila).
Exemplos de análogos de maitansinol que possuem modificações de outras posições diferentes de um anel aromático incluem: (1) C-9-SH (Patente U.S. 4.424.219) (preparado por uma reação de maitansinol com H2S ou P2S5), (2) C-14-alcoximetil (demetóxi/CH2OR) (Patente U.S. 4.331.598), (3) C-14-hidroximetil ou aciloximetil (CH2OH ou CH2OAc) (Patente U.S. 4.450.254) (preparado por Nocardia), (4) C-15-hidróxi/acilóxi (Patente U.S. 4.364.866) (preparado pela conversão de maitansinol por Streptomyces), (5) C-15-metóxi (Patentes U.S. 4.313.946 e 4.315.929) (isolado de Trewia nudiflora), (6) C-18-N-demetil (Patentes U.S. 4.362.663 e 4.322.348) (preparado pela desmetilação de maitansinol por Streptomyces) e (7) 4,5-desóxi (Patente U.S. 4.371.533) (preparado pelo tricloreto de titânio/redução LAH de maitansinol).
Em uma modalidade preferida da invenção, o conjugado utiliza o maitansinóide contendo tiol DM1, também conhecido como N2’-deacetil-N2’-(3-mercapto-1-oxopropil)-maitansina, como agente citotóxico. A estrutura de DM1 é representada pela fórmula (I):
Figure img0001
Em outra modalidade preferida da invenção, o conjugado utiliza o maitansinóide contendo tiol DM4, também conhecido como N2’-deacetil-N2’-(4-metil-4-mercapto-loxopentil)- maitansina, como agente citotóxico. A estrutura de DM4 é representada pela fórmula (II):
Figure img0002
Outras maitansinas podem ser usadas no contexto da invenção, incluindo, por exemplo, maitansinóides contendo tiol e dissulfeto que abrigam uma substituição mono ou di- alquil no átomo de carbono que abriga o átomo de enxofre. É particularmente preferido um maitansinóide que possui na posição C-3: (a) funcionalidade C-14 hidroximetil, C-15 hidróxi ou C-20 desmetil, e (b) uma cadeia lateral acilada de aminoácido com um grupo acil que abriga um grupo sulfidril inibido, em que o átomo de carbono do grupo acil que abriga a funcionalidade tiol possui um ou dois substituintes, os referidos substituintes sendo CH3, C2H5, alquil ou alquenil linear ou ramificado que possui de 1 a 10 átomos de carbono, alquil ou alquenil cíclico que possui de 3 a 10 átomos de carbono, fenil, fenil substituído ou radical heterocíclico aromático ou heterocicloalquil, e ainda em que um dos substituintes pode ser H, e em que o grupo acil possui um comprimento da cadeia linear de pelo menos três átomos de carbono entre a funcionalidade carbonil e o átomo de enxofre.
Maitansinas adicionais para uso no contexto da invenção incluem compostos representados pela fórmula (III) :
Figure img0003
em que Y’ representa (CR7R8)I (CR9=CRio)pC=CqAo (CR5R6)mDu (CRii=CRi2)r (C=C) sBt (CR3R4 )n-CR1R2SZ, em que R1 e R2 são, cada um independentemente, CH3, C2H5, alquil ou alquenil linear que possui de i a i0 átomos de carbono, alquil ou alquenil ramificado ou cíclico que possui de 3 a i0 átomos de carbono, fenil, fenil substituído ou radical heterocíclico aromático ou heterocicloalquil, e em que R2 também pode ser H, em que A, B, D são cicloalquil ou cicloalquenil que possui de 3-i0 átomos de carbono, aril simples ou substituído, ou radical heterocíclico aromático ou heterocicloalquil, em que R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, Ri0, Rii e Ri2 são, cada um independentemente, H, CH3, C2H5, alquil ou alquenil linear que possui de i a i0 átomos de carbono, alquil ou alquenil ramificado ou cíclico que possui de 3 a i0 átomos de carbono, fenil, fenil substituído ou radical heterocíclico aromático ou heterocicloalquil, em que l, m, n, o, p, q, r, s e t são, cada um independentemente, zero ou um número inteiro de 1 a 5, desde que pelo menos dois de l, m, n, o, p, q, r, s e t não sejam zero em um momento, e em que Z é H, SR ou COR, em que R é alquil ou alquenil linear que possui de 1 a 10 átomos de carbono, alquil ou alquenil ramificado ou cíclico que possui de 3 a 10 átomos de carbono, ou aril simples ou substituído ou radical heterocíclico aromático ou heterocicloalquil.
Modalidades preferidas da fórmula (III) incluem compostos de fórmula (III) em que: (a) R1 é H, R2 é metil e Z é H, (b) R1 e R2 são metil e Z é H, (c) R1 é H, R2 é metil e Z é —SCH3, e (d) R1 e R2 são metil e Z é —SCH3.
Essas maitansinas adicionais também incluem compostos representados pela fórmula (IV-L), (IV-D) ou (IV-D,L):
Figure img0004
em que Y representa (CR7R8)l(CR5R6)m(CR3R4)nCR1R2SZ, em que R1 e R2 são, cada um independentemente, CH3, C2H5, alquil linear ou alquenil que possui de 1 a 10 átomos de carbono, alquil ou alquenil ramificado ou cíclico que possui de 3 a 10 átomos de carbono, fenil, fenil substituído ou radical heterocíclico aromático ou heterocicloalquil, e em que R2 também pode ser H, em que R3, R4, R5, R6, R7 e R8 são, cada um independentemente, H, CH3, C2H5, alquil ou alquenil linear que possui de 1 a 10 átomos de carbono, alquil ou alquenil ramificado ou cíclico que possui de 3 a 10 átomos de carbono, fenil, fenil substituído ou radical heterocíclico aromático ou heterocicloalquil, em que l, m e n são, cada um independentemente, um número inteiro de 1 a 5 e, além disso, n pode ser zero, em que Z é H, SR, ou COR em que R é alquil ou alquenil linear ou ramificado que possui de 1 a 10 átomos de carbono, alquil ou alquenil cíclico que possui de 3 a 10 átomos de carbono, ou aril simples ou substituído ou radical heterocíclico aromático ou heterocicloalquil, e em que May representa um maitansinóide que abriga a cadeia lateral em C-3, C-14 hidroximetil, C-15 hidróxi, ou C-20 desmetil.
Modalidades preferidas das fórmulas (IV-L), (IV-D) e (IV-D,L) incluem compostos de fórmulas (IV-L), (IV-D) e (IV-D,L) em que: (a) R1 é H, R2 é metil, R5, R6, R7 e R8 são, cada um, H, l e m são, cada um, 1, n é 0 e Z é H; (b) R1 e R2 são metil, R5, R6, R7, R8 são, cada um, H, l e m são 4, n é 0 e Z é H; (c) R1 é H, R2 é metil, R5, R6, R7 e R8 são, cada um, H, l e m são, cada um, 1, n é 0 e Z é -SCH3; ou (d) R1 e R2 são metil, R5, R6, R7, R8 são, cada um, H, l e m são 1, n é 0 e Z é -SCH3. De preferência, o agente citotóxico é representado pela fórmula (IV-L).
Maitansinas preferidas adicionais também incluem compostos representados pela fórmula (V):
Figure img0005
em que Y representa (CR7R8)l(CR5R6)m(CR3R4)nCR1R2SZ, em que R1 e R2 são, cada um independentemente, CH3, C2H5, alquil linear ou alquenil que possui de 1 a 10 átomos de carbono, alquil ou alquenil ramificado ou cíclico que possui de 3 a 10 átomos de carbono, fenil, fenil substituído ou radical heterocíclico aromático ou heterocicloalquil, e em que R2 também pode ser H, em que R3, R4, R5, R6, R7 e R8 são, cada um independentemente, H, CH3, C2H5, alquil ou alquenil linear que possui de 1 a 10 átomos de carbono, alquil ou alquenil ramificado ou cíclico que possui de 3 a 10 átomos de carbono, fenil, fenil substituído ou radical heterocíclico aromático ou heterocicloalquil, em que l, m e n são, cada um independentemente, um número inteiro de 1 a 5 e, além disso, n pode ser zero, e em que Z é H, SR ou COR, em que R é alquil ou alquenil linear que possui de 1 a 10 átomos de carbono, alquil ou alquenil ramificado ou cíclico que possui de 3 a 10 átomos de carbono, ou aril simples ou substituído ou radical heterocíclico aromático ou heterocicloalquil.
Modalidades preferidas da fórmula (V) incluem compostos de fórmula (V), em que: (a) R1 é H, R2 é metil, R5, R6, R7 e R8 são, cada um, H; l e m são, cada um, 1; n é 0; e Z é H; (b) R1 e R2 são metil; R5, R6, R7, R8 são, cada um, H, l e m são 1; n é 0; e Z é H; (c) R1 é H, R2 é metil, R5, R6, R7 e R8 são, cada um, H, l e m são, cada um, 1, n é 0 e Z é —SCH3; ou (d) R1 e R2 são metil, R5, R6, R7, R8 são, cada um, H, l e m são 1, n é 0 e Z é -SCH3. Adicionalmente, maitansinas preferidas incluem compostos representados pela fórmula (VI-L), (VI-D) ou (VI- D,L):
Figure img0006
em que Y2 representa (CR7R8)l(CR5R6)m(CR3R4)nCR1R2SZ2, em que R1 e R2 são, cada um independentemente, CH3, C2H5, alquil ou alquenil linear que possui de 1 a 10 átomos de carbono, alquil ou alquenil ramificado ou cíclico que possui de 3 a 10 átomos de carbono, fenil, fenil substituído ou radical heterocíclico aromático ou heterocicloalquil, e em que R2 também pode ser H, em que R3, R4, R5, R6, R7 e R8 são, cada um independentemente, H, CH3, C2H5, alquil ou alquenil linear cíclico que possui de 1 a 10 átomos de carbono, alquil ou alquenil ramificado ou cíclico que possui de 3 a 10 átomos de carbono, fenil, fenil substituído ou radical heterocíclico aromático ou heterocicloalquil, em que l, m e n são, cada um independentemente, um número inteiro de 1 a 5 e, além disso, n pode ser zero, em que Z2 é SR ou COR, em que R é alquil ou alquenil linear que possui de 1 a 10 átomos de carbono, alquil ou alquenil ramificado ou cíclico que possui de 3 a 10 átomos de carbono, ou aril simples ou substituído ou radical heterocíclico aromático ou heterocicloalquil, e em que May é um maitansinóide.
Maitansinas preferidas adicionais incluem compostos representados pela fórmula (VII):
Figure img0007
em que Y2’ representa (CR7R8) l ( CR9=CR10 ) p (C=C) qAo (CR5R6) mDu ( CR11=CR12 ) r ( C=C ) sBt (CR3R4)n CR1R2SZ2, em que R1 e R2 são, cada um independentemente, CH3, C2H5, alquil ou alquenil linear ou ramificado que possui de 1 a 10 átomos de carbono, alquil ou alquenil cíclico que possui de 3 a 10 átomos de carbono, fenil, fenil substituído ou radical heterocíclico aromático ou heterocicloalquil e, além disso, R2 pode ser H, em que A, B e D, cada um independentemente, são cicloalquil ou cicloalquenil que possui 3 a 10 átomos de carbono, aril simples ou substituído ou radical heterocíclico aromático ou heterocicloalquil, em que R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11 e R12 são, cada um independentemente, H, CH3, C2H5, alquil ou alquenil linear que possui de 1 a 10 átomos de carbono, alquil ou alquenil ramificado ou cíclico que possui de 3 a 10 átomos de carbono, fenil, fenil substituído ou radical heterocíclico aromático ou heterocicloalquil, em que l, m, n, o, p, q, r, s e t são, cada um independentemente, zero ou um número inteiro de 1 a 5, desde que pelo menos dois de l, m, n, o, p, q, r, s e t não sejam zero em um momento, e em que Z2 é SR ou -COR, em que R é alquil ou alquenil linear que possui de 1 a 10 átomos de carbono, alquil ou alquenil ramificado ou cíclico que possui de 3 a 10 átomos de carbono ou aril simples ou substituído ou radical heterocíclico aromático ou heterocicloalquil.
Modalidades preferidas da fórmula (VII) incluem compostos de fórmula (VII), em que R1 é H e R2 é metil. Além de maitansinóides, o agente citotóxico usado no conjugado pode ser um taxano ou derivado deste. Taxanos são uma família de compostos que inclui paclitaxel (Taxol®), um produto natural citotóxico, e docetaxel (Taxotere®), um derivado semi-sintético, ambos usados amplamente no tratamento de câncer. Taxanos são venenos do fuso mitótico que inibem a despolimerização da tubulina, causando a morte celular. Embora docetaxel e paclitaxel sejam agentes úteis no tratamento de câncer, sua atividade antitumoral é limitada por causa de sua toxicidade inespecífica para as células normais. Além disso, os próprios compostos como paclitaxel e docetaxel não são suficientemente potentes para serem usados em conjugados de agentes de ligação celular. Um taxano preferido para uso na preparação de um conjugado citotóxico é o taxano de fórmula (VIII):
Figure img0008
Métodos para a síntese de taxanos que podem ser usados no contexto da invenção, juntamente com métodos para a conjugação de taxanos aos agentes de ligação celular como, por exemplo, anticorpos, são descritos detalhadamente nas Patentes U.S. 5.416.064, 5.475.092, 6.340.701, 6.372.738, 6.436.931, 6.596.757, 6.706.708 e 6.716.821, e na Publicação do Pedido de Patente U.S. N° 2004/0024049 A1.
O agente citotóxico também pode ser CC-1065 ou um derivado deste. CC-1065 é um antibiótico antitumoral potente isolado do caldo de cultura de Streptomyces zelensis. CC-1065 é cerca de 1.000 vezes mais potente in vitro do que os fármacos anticancerígenos comumente usados como, por exemplo, doxorrubicina, metotrexato e vincristina (Bhuyan e cols., Cancer Res., 42: 3.532-3.537 (1982)). CC1065 e seus análogos são revelados nas Patentes U.S. 5.585.499, 5.846.545, 6.340.701 e 6.372.738. A potência citotóxica de CC-1065 foi correlacionada com sua atividade alquilante e com sua atividade de ligação de DNA ou de intercalar DNA. Essas duas atividades residem em partes separadas da molécula. A esse respeito, a atividade alquilante é contida na subunidade ciclopropapirroloindol (CPI), e a atividade de ligação de DNA reside em duas subunidades de pirroloindol de CC-1065.
Vários análogos de CC-1065 são conhecidos na técnica e também podem ser usados como agente citotóxico no conjugado (veja, por exemplo, Warpehoski e cols., J. Med. Chem., 31: 590-603 (1988)). Foi desenvolvida uma série de análogos de CC-1065 em que a porção CPI é substituída por uma porção ciclopropabenzindol (CBI) (Boger e cols., J. Org. Chem., 55: 5.823-5.833 (1990), e Boger e cols., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1: 115-120 (1991)). Esses análogos de CC-1065 mantêm a alta potência in vitro do fármaco original, sem causar toxicidade retardada em camundongos. Como CC-1065, esses compostos são agentes alquilantes que se ligam de forma covalente ao sulco menor do DNA para causar a morte celular.
A eficácia terapêutica de análogos de CC-1065 pode ser grandemente aumentada trocando-se a distribuição in vivo através da liberação direcionada ao local de um tumor, resultando em uma menor toxicidade de tecidos não visados e, portanto, menor toxicidade sistêmica. Para essa finalidade, foram gerados conjugados de análogos e derivados de CC-1065 com agentes de ligação celular que se dirigem especificamente às células tumorais (veja, por exemplo, Patentes U.S. 5.475.092, 5.585.499 e 5.846.545). Esses conjugados tipicamente exibem citotoxicidade específica para o alvo elevada in vitro, e atividade antitumoral em modelos de autoenxerto de tumor humano em camundongos (veja, por exemplo, Chari e cols., Cancer Res., 55: 4.079-4.084 (1995)).
Métodos para a síntese de análogos de CC-1065 são descritos com detalhes nas Patentes U.S. 5.475.092. 5.585.499. 5.846.545. 6.534.660. 6.586.618 e 6.756.397 e na Publicação do Pedido de Patente U.S. N° 2003/0195365 A1.
Medicamentos como metotrexato, daunorrubicina, doxorrubicina, vincristina, vinblastina, melfalan, mitomicina C, clorambucil, caliqueamicina, tubulisina e análogos de tubulisina, duocarmicina e análogos de duocarmicina, dolastatina e análogos de dolastatina também podem ser usados no contexto da invenção. Compostos de doxorrubicina e daunorrubicina (veja, por exemplo, Patente U.S. 6.630.579) também podem ser usados como fármacos.
Os conjugados de fármacos podem ser preparados por métodos in vitro. A fim de ligar um fármaco ou pró-fármaco ao anticorpo, é utilizado um grupo de ligação. Grupos de ligação adequados são bem conhecidos na técnica, e incluem grupos dissulfeto, grupos ácidos lábeis, grupos fotolábeis, grupos peptidase lábeis e grupos esterase lábeis. Grupos de ligação preferidos são grupos dissulfeto. Por exemplo, os conjugados podem ser construídos com o uso de uma reação de troca de dissulfeto entre o anticorpo e o fármaco ou pró- fármaco. As moléculas do fármaco também podem ser ligadas a um agente de ligação celular através de uma molécula transportadora intermediária como, por exemplo, albumina sérica.
De acordo com a invenção, o agente de ligação celular é modificado por reação de um reagente de entrecruzamento bifuncional com o agente de ligação celular resultando, dessa forma, na adesão covalente de uma molécula vinculadora ao agente de ligação celular. Como aqui usado, um “reagente de entrecruzamento bifuncional” é qualquer porção química que se liga de forma covalente um agente de ligação celular a um fármaco como, por exemplo, os fármacos aqui descritos. Em uma modalidade preferida da invenção, uma porção da porção de ligação é fornecida pelo fármaco. A esse respeito, o fármaco compreende uma porção de ligação que é parte de uma molécula vinculadora maior que é usada para unir o agente de ligação celular ao fármaco. Por exemplo, para formar o maitansinóide DM1, a cadeia lateral no grupo C-3 hidroxil de maitansina é modificada para ter um grupo sulfidril (SH) livre. Essa forma tiolada de maitansina pode reagir com um agente de ligação celular modificado para formar um conjugado. Portanto, o ligante final é montado a partir de dois componentes, um deles sendo fornecido pelo reagente de entrecruzamento, enquanto o outro é fornecido pela cadeia lateral de DM1.
Qualquer reagente de entrecruzamento bifuncional adequado pode ser usado em relação à invenção, desde que o reagente ligante permita a retenção da atividade terapêutica, por exemplo, as características de citotoxicidade e de direcionamento do fármaco e do agente de ligação celular, respectivamente. Preferivelmente, a molécula vinculadora une o fármaco ao agente de ligação celular através de ligações químicas (as descrito acima), de tal forma que o fármaco e o agente de ligação celular sejam acoplados quimicamente (por exemplo, ligado de forma covalente) entre eles. Preferivelmente, o reagente de ligação é um ligante passível de clivagem. Mais preferivelmente, o ligante é clivado sob condições suaves, ou seja, condições dentro de uma célula sob as quais a atividade do fármaco não é afetada. Exemplos de ligantes cliváveis adequados incluem ligantes de dissulfeto, ligantes ácidos lábeis, ligantes fotolábeis, ligantes de peptidase lábeis e ligantes de esterase lábeis. Ligantes que contêm dissulfeto são ligantes cliváveis através de troca de dissulfeto, o que pode ocorrer sob condições fisiológicas. Ligantes ácidos lábeis são ligantes cliváveis em pH ácido. Por exemplo, certos compartimentos intracelulares como, por exemplo, endossomos e lisossomos, possuem um pH ácido (pH 4-5), e fornecem condições adequadas para a clivagem de ligantes ácidos lábeis. Ligantes fotolábeis são úteis na superfície corporal e em muitas cavidades do corpo que são acessíveis à luz. Além disso, a luz infravermelha pode penetra no tecido. Ligantes de peptidase lábeis podem ser usados para clivar certos peptídeos dentro ou fora das células (veja, por exemplo, Trouet e cols., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79: 626-629 (1982) e Umemoto e cols., Int. J. Cancer, 43: 677-684 (1989)).
De preferência, o fármaco é ligado a um agente de ligação celular através de uma ligação dissulfeto. A molécula vinculadora compreende um grupo químico reativo que pode reagir com o agente de ligação celular. Grupos químicos reativos preferidos para reação com o agente de ligação celular são ésteres de N-succinimidil e ésteres de N-sulfossuccinimidil. Adicionalmente, a molécula vinculadora compreende um grupo químico reativo, preferivelmente um grupo ditiopiridil, que pode reagir com o fármaco para formar uma ligação dissulfeto. Moléculas vinculadoras particularmente preferidas incluem, por exemplo, N-succinimidil 3-(2-piridilditio)propionato (SPDP) (veja, por exemplo, Carlsson e cols., Biochem. J., 173: 723-737 (1978)), N-succinimidil 4-(2-piridilditio)butanoato (SPDB) (veja, por exemplo, a Patente U.S. 4.563.304), N- succinimidil 4-(2-piridilditio)pentanoato (SPP) (veja, por exemplo, número de registro CAS 341498-08-6) e outros agentes de entrecruzamento que são descritos na Patente U.S. 6.913.748, que é aqui incorporada em sua totalidade por referência).
Embora sejam usados preferivelmente ligantes cliváveis preferivelmente no método da invenção, um ligante não clivável também pode ser usado para gerar os conjugados descritos acima. Um ligante não clivável é qualquer porção química que é capaz de se ligar um fármaco como, por exemplo, um maitansinóide, um taxano ou um análogo de CC1065, a um agente de ligação celular de forma estável e covalente. Portanto, ligantes não cliváveis são substancialmente resistentes à clivagem induzida por ácido, à clivagem induzida pela luz, à clivagem induzida por peptidase, à clivagem induzida por esterase e à clivagem por ligação dissulfeto, em condições sob as quais o fármaco ou o agente de ligação celular permanece ativo.
Reagentes de entrecruzamento adequados que formam ligantes não cliváveis entre um fármaco e o agente de ligação celular são bem conhecidos na técnica. Exemplos de ligantes não cliváveis incluem ligantes que possuem uma porção éster de N-succinimidil ou éster de N- sulfossuccinimidil para reação com o agente de ligação celular, além de uma porção com base em maleimido ou haloacetil para reação com o fármaco. Reagentes de entrecruzamento que compreendem uma porção com base em maleimido incluem N-succinimidil 4-(maleimidometil) ciclohexanocarboxilato (SMCC), N-succinimidil-4-(N- maleimidometil)-ciclohexano-1-carbóxi-(6-amidocaproato), que é um análogo de “cadeia longa” de SMCC (LC-SMCC), éster de ácido K-maleimidoundecanóico de N-succinimidil (KMUA), éster de ácido y-maleimidobutírico de N-succinimidil (GMBS), N-hidroxisuccinimida éster de ácido ε- maleimidocapróico (EMCS), éster de m-maleimidobenzoil-N- hidroxisuccinimida (MBS), éster de N-(a-maleimidoacetoxi)- succinimida (AMAS), succinimidil-6-(β- maleimidopropionamido)hexanoato (SMPH), N-succinimidil 4- (p-maleimidofenil)-butirato (SMPB) e N-(p- maleimidofenil)isocianato (PMPI). Reagentes de entrecruzamento que compreendem uma porção com base em haloacetil incluem N-succinimidil-4-(iodoacetil)- aminobenzoato (STAB), N-succinimidil iodoacetato (SIA), N- succinimidil bromoacetato (SBA), e N-succinimidil 3- (bromoacetamido)propionato (SBAP).
Outros reagentes de entrecruzamento desprovidos de um átomo de enxofre que formam ligantes não cliváveis também podem ser usados no método da invenção. Esses ligantes podem ser derivados de porções com base no ácido dicarboxílico. Porções com base no ácido dicarboxílico adequadas incluem, sem limitação, ácidos a,ro- dicarboxílicos da fórmula geral (IX):
Figure img0009
em que X é um grupo alquil, alquenil ou alquinil linear ou ramificado que possui 2 a 20 átomos de carbono, Y é um grupo cicloalquil ou cicloalquenil que abriga 3 a 10 átomos de carbono, Z é um grupo aromático substituído ou não substituído que abriga 6 a 10 átomos de carbono, ou um grupo heterocíclico substituído ou não substituído em que o heteroátomo é selecionado de N, O ou S, e em que l, m e n são, cada um, 0 ou 1, desde que l, m e n não sejam todos zero ao mesmo tempo.
Muitos dos ligantes não cliváveis aqui revelados são descritos em detalhes no Pedido de Patente U.S. N° 10/960.602, que corresponde à Publicação do Pedido de Patente U.S. N° 2005/0169933 A1.
Alternativamente, como revelado na Patente U.S. 6.441.163 B1, o fármaco inicialmente pode ser modificado para introduzir um éster reativo adequado para reagir com um agente de ligação celular. A reação desses maitansinóides que contêm uma porção ligante ativada com um agente de ligação celular fornece outro método de produção de um conjugado de agente de ligação celular clivável ou não clivável-maitansinóide.
Informações adicionais relacionadas aos maitansinóides, aos agentes citotóxicos que o compreendem, aos conjugados de fármacos e aos métodos de preparação relacionados são reveladas no Pedido de Patente U.S. N° 11/352.121 e no Pedido de Patente U.S. N° 10/849.136, que corresponde à Publicação do Pedido de Patente U.S. N° 2004/0235840 A1.
Os exemplos a seguir ilustram adicionalmente a invenção, mas, evidentemente, não devem ser considerados de forma alguma como limitantes de seu escopo.
EXEMPLO 1
Esse exemplo demonstra a purificação de um anticorpo modificado com a reagente de modificação heterobifuncional com a utilização de TFF.
O anticorpo monoclonal huN901 (concentração final de 8 mg/ml) foi incubado com N-succinimidil 4-(2- piridilditio)pentanoato (SPP, excesso molar de 5,6 vezes) por aproximadamente 180 minutos a 20°C em 50 mM de tampão de fosfato de potássio (pH 7,5) contendo 50 mM de NaCl, 2 mM de EDTA e etanol 5%. Em um primeiro grupo, a mistura de reação foi purificada com o uso de uma coluna de resina SephadexTM G25F equilibrada e eluída em 50 mM de tampão de fosfato de potássio (pH 6,5) contendo 50 mM de NaCl e 2 mM de EDTA. Em um segundo grupo, a mistura de reação foi purificada com o uso de um sistema de TFF Pellicon XL (Millipore, Billerica, MA), e o anticorpo foi diafiltrado (5 volumes) em 50 mM de fosfato de potássio, 50 mM de NaCl (pH 6,5) e 2 mM de EDTA, com a utilização de uma membrana com valor de corte do peso molecular de 10.000 (UltracelTM membrana de celulose regenerada, Millipore, Billerica, MA). Ambas as amostras foram conjugadas com DM1 (excesso molar de 1,7 vez em relação ao ligante não ligado) por 18 horas em pH 6,5 em tampão de fosfato de potássio contendo 50 mM de NaCl e uma concentração final de DMA 3%.
Em ambos os grupos, foram determinados os rendimentos por espectrofotometria (comprimento de onda de 280 nm) para a etapa combinada de modificação e purificação. As proporções de ligante/anticorpo também foram determinadas por tratamento com ditiotreitol para liberar piridina-2- tiona, que possui um coeficiente de extinção de 8.080 M-1cm- 1 a 343 nM. As proporções de medicamento/anticorpo foram determinadas por espectrofotometria (comprimentos de onda de 280 nm e 252 nm) para a etapa de conjugação. Além disso, a remoção de espécies de pequena molécula relacionadas a SPP foi medida por HPLC Hisep.
Os dados resultantes são apresentados na Tabela 1. Tabela 1: Métodos de purificação para huN901 modificado com o uso de G-25F versus TFF
Figure img0010
Como mostrado na Tabela 1, o uso de TFF gera produto conjugado de fármaco de qualidade pelo menos equivalente ao processo de cromatografia não adsortiva (G25) sendo, porém, mais conveniente e escalonável.
EXEMPLO 2
Esse exemplo demonstra a purificação de um anticorpo modificado com um reagente de modificação heterobifuncional com a utilização de cromatografia adsortiva.
O anticorpo huB4 foi modificado com N-succinimidil 4- (2-piridilditio)butanoato (SPDB, excesso molar de 5,4 vezes) por 120 minutos em temperatura ambiente em 50 mM de tampão de fosfato de potássio (pH 6,5) contendo 50 mM de NaCl, 2 mM de EDTA e etanol 5%. Em um primeiro grupo, a mistura de reação foi purificada com o uso da resina SephadexTM G25F, como descrito no Exemplo 1. Em um segundo grupo, a mistura de reação foi carregada em uma coluna de hidroxiapatita cerâmica (CHT, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA), que foi equilibrada em 12,5 mM de tampão de fosfato de potássio (pH 6,5) e eluída com 80 mM de tampão de fosfato de potássio (pH 6,5).
Em ambos os grupos, os rendimentos e as proporções de ligante/anticorpo foram determinados como descrito no Exemplo 1. O primeiro grupo teve um rendimento de 91% e uma proporção de ligante/anticorpo de 4,2. O segundo grupo teve um rendimento de 89% e uma proporção de ligante/anticorpo de 4,2.
O anticorpo CNTO95 (concentração final de 10 mg/ml) foi modificado com N-succinimidil 4-(2- piridilditio)butanoato (SPDB, excesso molar de 4,5 vezes) por 120 minutos a 20°C em 10 mM de tampão de fosfato de sódio (pH 7,5), contendo 2,7% de sacarose e etanol 5%. Em um primeiro grupo, a mistura de reação foi purificada com o uso de resina SephadexTM G25F em 12,5 mM de tampão de fosfato de potássio (pH 6,6) contendo 12,5 mM de NaCl e 0,5 mM de EDTA. Em um segundo grupo, a mistura de reação foi carregada em uma coluna de SP Sefarose Fast Flow (GE Healthcare, Piscataway, NJ), que foi equilibrada em 10 mM de tampão de fosfato de sódio (pH 7,5), e eluída com 50 mM de tampão de fosfato de potássio (pH 7,5) contendo 50 mM de NaCl.
Em ambos os grupos, os rendimentos e as proporções de ligante/anticorpo foram determinados como descrito no Exemplo I. O primeiro grupo teve um rendimento de 96% e uma proporção de ligante/anticorpo de 4,0. O segundo grupo teve um rendimento de 97% e uma proporção de ligante/anticorpo de 4,1.
Os dados obtidos nesse exemplo demonstram que a cromatografia adsortiva pode ser usada para purificar um anticorpo modificado com um reagente de modificação heterobifuncional.
EXEMPLO 3
Esse exemplo demonstra os efeitos benéficos da conjugação de um anticorpo modificado com um fármaco em um pH de acima 6,5.
Em um primeiro experimento, o anticorpo CNTO95 foi modificado e purificado como descrito no Exemplo 2. O anticorpo modificado foi então dividido em dois grupos. No primeiro grupo, a conjugação foi realizada em 12,5 mM de fosfato de potássio em pH 6,5 contendo 12,5 mM de NaCl, 0,5 mM de EDTA, DMA 3% e excesso molar de 1,7 vez de fármaco por ligante a 20°C. No segundo grupo, a reação de conjugação ocorreu em pH 7,5. O anticorpo conjugado foi purificado sobre colunas NAP-10.
A proporção de fármaco/anticorpo foi medida para ambos os grupos. Os dados resultantes são apresentados na Tabela 2. Tabela 2: Proporção de medicamento/anticorpo na reação de conjugação de pH 6,5 versus 7,5
Figure img0011
Figure img0012
Como mostrado pelos dados apresentados na Tabela 2, conjugação evolui mais rápido em pH 7,5 do que em pH 6,5.
Em um segundo experimento, o anticorpo monoclonal humanizado huB4 foi modificado com: (a) um excesso molar de 4,9 vezes de SPDB em relação ao anticorpo, ou (b) um excesso molar 4,8 vezes de SPDB em relação ao anticorpo. Em ambas as situações, a reação ocorreu em 50 mM de fosfato de potássio, 50 mM de cloreto de potássio e 2 mM de EDTA (pH 6,5) em etanol 5% por um total de 120 minutos em temperatura ambiente. A amostra (a) foi purificada sobre uma coluna de resina SephadexTM G25F equilibrada em 50 mM de fosfato de potássio, 50 mM de cloreto de sódio e 2 mM de EDTA em pH 6,5. A amostra (b) foi purificada de forma equivalente, exceto que o tampão de cromatografia foi ajustado ao pH 7,5. Ambas as amostras foram conjugadas com DM4 (excesso molar de 1,7 vez em relação ao ligante ligado) por 18 horas em temperatura ambiente, em uma concentração final de dimetilacetamida (DMA) de 3%.
Portanto, a amostra (a) foi conjugada em pH 6,5, e a amostra (b) foi conjugada em pH 7,5. As amostras foram então purificadas sobre uma coluna de resina SephadexTM G25F equilibrada em 9,6 mM de fosfato de potássio e 4,2 mM de cloreto de sódio em pH 6,5. Ambas as amostras foram incubadas a 4°C por até 7 meses e submetidas à análise de fármaco livre liberado em intervalos. Os dados resultantes são apresentados na Tabela 3. Tabela 3: Liberação de medicamento livre ao longo de tempo por amostras conjugadas em pH 6,5 e 7,5
Figure img0013
Como mostrado pelos dados apresentados na Tabela 3, a liberação de fármaco livre é substancialmente mais lenta pela amostra (b), que foi conjugada em pH 7,5 em relação à amostra (a), que foi conjugada em pH 6,5. Consequentemente, o produto de conjugado de fármaco preparado em pH 7,5 demonstrou ser estável com relação à liberação de fármaco livre ao longo do tempo, comparado ao produto conjugado de fármaco preparado em pH 6,5. A conjugação em pH 7,5 também mostrou uma melhor incorporação de fármaco do que em pH 6,5 fazendo, dessa forma, com que menos fármaco seja utilizado.
EXEMPLO 4
Esse exemplo demonstra os efeitos benéficos da conjugação de um anticorpo modificado com um fármaco em um pH abaixo de 6,0.
O anticorpo monoclonal huN901 (concentração final de 8 mg/ml) foi incubado com N-succinimidil 4-(2- piridilditio)pentanoato (SPP, excesso molar de 5,6 vezes) por aproximadamente 180 minutos a 20°C em 50 mM de tampão de fosfato de potássio (pH 7,5) contendo 50 mM de NaCl, 2 mM de EDTA e etanol 5%. Em um primeiro grupo, a mistura de reação foi purificada com o uso de uma coluna de resina SephadexTM G25F equilibrada e eluída em 50 mM de tampão de citrato de sódio (pH 5,0) contendo 50 mM de NaCl e 2 mM de EDTA. Em um segundo grupo, a mistura de reação foi purificada com o uso de uma coluna de resina SephadexTM G25F equilibrada e eluída em 50 mM de tampão de fosfato de potássio (pH 6,5) contendo 50 mM de NaCl e 2 mM de EDTA. Ambas as amostras foram conjugadas com DM4 (excesso molar de 1,7 vez em relação ao ligante ligado) por 3, 19, 25, 48, e 120 horas em temperatura ambiente, em uma concentração final de dimetilacetamida (DMA) de 3%.
Portanto, o primeiro grupo de amostras foi conjugado em 50 mM de tampão de citrato de sódio (pH 5,0) contendo 50 mM de NaCl e 2 mM de EDTA, e o segundo grupo de amostras foi conjugado em 50 mM de tampão de fosfato de sódio (pH 6,5), contendo 50 mM de NaCl e 2 mM de EDTA. As amostras foram então purificadas com o uso de uma coluna de resina SephadexTM G25F equilibrada e eluída em 50 mM de tampão de fosfato de potássio (pH 6,5) contendo 50 mM de NaCl.
Em ambos os grupos, as proporções de ligante/anticorpo foram determinadas por tratamento com ditiotreitol para liberar piridina-2-tiona, que possui um coeficiente de extinção de 8.080 M-1cm-1 a 343 nM. As proporções de medicamento/anticorpo foram determinadas por espectrofotometria (comprimentos de onda de 280 nm e 252 nm) para a etapa de conjugação.
O primeiro grupo teve uma proporção de ligante/anticorpo de 4,3. O segundo grupo teve uma proporção de ligante/anticorpo de 4,2.
As proporções de fármaco/anticorpo ao longo do tempo para os dois grupos são apresentadas na Tabela 4. Tabela 4: Taxa de incorporação de DM1 em huN901 modificado por SPP em função do pH da conjugação
Figure img0014
Como fica evidente a partir dos dados apresentados na Tabela 4, o conjugado feito por conjugação do anticorpo modificado com o fármaco em um pH de 5,0 alcança um nível maior e mais estável de fármaco ligado durante a evolução 5 da reação de conjugação do que o conjugado feito em um pH de conjugação de 6,5. Além do aumento da estabilidade, os resultados indicam que um nível maior de fármaco/anticorpo é alcançado mediante a conjugação em pH 5,0 do que quando se utiliza a mesma quantidade de fármaco em um pH de 10 conjugação de 6,5, indicando, dessa forma, uma utilização mais eficiente de fármaco em pH 5,0.
Em ambos os grupos, as quantidades de monômero conjugado foram determinadas ao longo do tempo. Os dados resultantes são apresentados na Tabela 5. 15 Tabela 5: Efeito do pH da conjugação no nível de monômero conjugado durante a conjugação de huN901 modificado por SPP com DM1
Figure img0015
Figure img0016
Como fica evidente a partir dos dados apresentados na Tabela 5, o conjugado feito por conjugação do anticorpo modificado com o fármaco em um pH de 5,0 tem um nível maior de monômero conjugado do que o conjugado feito em um pH de conjugação de 6,5.
EXEMPLO 5
Esse exemplo demonstra ainda os benefícios da conjugação de um fármaco a um anticorpo modificado em um pH de menos que 6.
O anticorpo BIWA 4 foi modificado com SPP (excesso molar de SPP, como mostrado na Tabela 6) por 120-140 minutos em temperatura ambiente em 50 mM de tampão de fosfato de potássio (pH 6,5), 50 mM de NaCl, 2 mM de EDTA e etanol 5%. Alíquotas do anticorpo modificado foram purificadas em colunas NAP 25 separadas equilibradas em tampões que possuem vários valores de pH (pH 4,6 — 6,5). Os tampões de pH 4,6 — 5,9 eram compostos por 35 mM de citrato de sódio, 150 mM de cloreto de sódio e 2 mM de EDTA. O tampão de pH 6,5 era composto por PBS com 2 mM de EDTA.
O anticorpo modificado em cada pH foi conjugado com DM1 (excesso molar de 1,7 vez em relação ao ligante) em dimetilacetamida (DMA, concentração final de 3%). Após incubação por 17-18 horas em temperatura ambiente, as amostras de anticorpo conjugado foram purificadas por cromatografia em colunas NAP 25 equilibradas em PBS (pH 6,5). As proporções de ligante/anticorpo (L/A na Tabela 6) foram determinadas por tratamento com ditiotreitol para liberar piridina-2-tiona, que possui um coeficiente de extinção de 8.080 M-1cm-1 a 343 nM. As proporções de medicamento/anticorpo foram determinadas por espectrofotometria (comprimentos de onda de 280 nm e 252 nm) para a etapa de conjugação. O monômero conjugado, as espécies de alto peso molecular e as espécies de baixo peso molecular foram determinados por SEC-HPLC com o uso de uma coluna TSKG3000SWXL equilibrada e desenvolvida em 0,2 M de tampão de fosfato de potássio (pH 7,0) contendo 0,2 M de cloreto de potássio e isopropanol 20%.
Os resultados dessa análise são apresentados na Tabela 6. Tabela 6: Características do produto de conjugado de fármaco Medicamento em relação ao pH
Figure img0017
Os dados apresentados na Tabela 6 demonstram que a conjugação de SPP-BIWA 4 modificado com DM1 foi eficiente em um pH abaixo de 6,0, comparada com a conjugação em pH 6,5. As quantidades de ligante e fármaco, especificamente ligante SPP e DM1, necessárias para alcançar uma proporção final de fármaco/anticorpo em particular foram reduzidas e em pH mais baixo. Além disso, os níveis de monômero conjugado, das espécies de alto peso molecular e das espécies de baixo peso molecular foram melhores, e os rendimentos melhoraram em pH mais baixo.
EXEMPLO 6
Esse exemplo demonstra que a etapa para a purificação do anticorpo modificado pode opcionalmente ser eliminada. O fármaco pode ser adicionado simultaneamente ao reagente bifuncional de modificação ou em algum momento mais tarde.
Como exemplo de adição de fármaco após o reagente de modificação, o anticorpo humanizado monoclonal CNTO95 foi modificado em uma concentração de 20 mg/ml com o reagente bifuncional de modificação SPDB em um excesso molar de SPDB em relação ao anticorpo de 4,6 por 120 minutos a 20°C. O tampão de modificação era composto por 44 mM de tampão de fosfato (pH 7,5) contendo 5,3% de sacarose e etanol 5%. Uma alíquota do anticorpo modificado foi purificada sobre resina SephadexTM G25F (processo-padrão de quatro etapas), equilibrada e eluída em 12,5 mM de tampão de fosfato de potássio (pH 7,5) contendo 12,5 mM de NaCl, e foi subsequentemente conjugada com DM4 (excesso molar de 1,7 vez de fármaco em relação ao ligante ligado) em uma concentração final de anticorpo modificado de 10 mg/ml em 12,5 mM de tampão de fosfato de potássio (pH 7,5) contendo 12,5 mM de NaCl e DMA 10% por 20 horas em temperatura ambiente. Uma segunda alíquota do anticorpo modificado foi conjugada imediatamente no final da reação de modificação de 120 minutos (processo de três etapas), sem ser adicionalmente purificada.
As concentrações de proteína e de tampão da mistura de reação de modificação foram ajustadas para gerar uma concentração de proteína modificada de 10 mg/ml e uma composição de tampão de 28 mM de fosfato de potássio (pH 7,5) contendo 5,9 mM de NaCl e 2,7% de sacarose. A seguir, foi acrescentado DM4 (excesso molar de 1,7 vez em relação ao SPDB de partida), e o DMA foi ajustado até uma concentração final de 10%. Após incubação de 20 horas em temperatura ambiente, ambas as alíquotas de anticorpo conjugado foram purificadas em resina SephadexTM G25F equilibrada em 10 mM de histidina e 10% de sacarose em pH 5,5.
As proporções de ligante/anticorpo (L/A) foram determinadas por tratamento com ditiotreitol para liberar piridina-2-tiona, que possui um coeficiente de extinção de 8.080 M-1cm-1 a 343 nM. As proporções e o rendimento de medicamento/anticorpo (D/A) foram determinados por espectrofotometria (comprimentos de onda de 280 nm e 252 nm) para a etapa de conjugação. As percentagens de monômero foram testadas por SEC-HPLC. As percentagens de fármaco livre foram testadas por HPLC em uma coluna Hisep. Os resultados dessas análises são apresentados na Tabela 7. Tabela 7: Eliminação opcional da etapa de purificação para anticorpo modificado
Figure img0018
Como demonstrado pelos resultados apresentados na Tabela 7, a etapa para a purificação do anticorpo modificado pode ser eliminada no contexto da invenção.
EXEMPLO 7
Esse exemplo demonstra um meio aperfeiçoado de purificação de anticorpo que foi modificado com um reagente de modificação heterobifuncional e depois conjugado com um maitansinóide.
O anticorpo huN901 modificado com SPP (excesso molar de 7 vezes) e purificado em resina SephadexTM, como descrito no Exemplo 1, foi conjugado com o maitansinóide DM1 (excesso molar de 1,7 vez em relação ao ligante, dissolvido em dimetilacetamida (DMA), concentração final de 3%).
Uma primeira amostra do conjugado foi purificada por cromatografia-padrão em resina SephadexTM G25F em tampão de soro fisiológico fosfatado (PBS, pH 6,5).
Uma segunda amostra do conjugado foi purificada por um sistema de TFF Pellicon XL (Millipore, Billerica, MA), como descrito no Exemplo 1.
Uma terceira amostra do conjugado foi purificada com o uso de uma coluna de resina MEP Hypercell equilibrada em 50 mM de Tris (pH 8,0), e eluída com 50 mM de acetato de sódio (pH 4,0).
Uma quarta amostra do conjugado foi purificada com o uso de uma coluna de resina UNOsphere S equilibrada em 50 mM de fosfato de sódio (pH 6,5), e eluída com 0,2 M de NaCl e 50 mM de fosfato de sódio (pH 6,5). Uma quinta amostra do conjugado foi purificada com o uso de uma coluna de resina CHT (Bio-Rad Laboratories,
Hercules, CA) equilibrada em 50 mM de fosfato de sódio (pH 6,5), e eluída com 0,3 M de NaCl e 50 mM de fosfato de sódio (pH 6,5).
Uma sexta amostra do conjugado foi purificada com o uso de uma coluna de resina SP Sefarose equilibrada em 35 mM de citrato de sódio, 10 mM de cloreto de sódio (pH 5,0), e eluída com 0,25 M de NaCl, 35 mM de citrato de sódio (pH 5,0).
O monômero conjugado foi determinado por SEC-HPLC com o uso de uma coluna de resina TSKG3000SWxL equilibrada e desenvolvida em 0,2 M de tampão de fosfato de potássio em pH 7,0, contendo 0,2 M de cloreto de potássio e isopropanol 20%. O rendimento da etapa de conjugação foi determinado dividindo-se o rendimento de anticorpo conjugado pela quantidade de anticorpo modificado que foi conjugada (determinada por espectrofotometria em um comprimento de onda de 280 nm).
Os resultados dessas análises são apresentados na Tabela 8. Tabela 8: Comparação da etapa purificação da conjugação
Figure img0019
Os resultados na Tabela 8 mostram que todos os métodos de purificação da invenção (grupos 2-6) geraram rendimentos similares àqueles obtidos com o processo de controle (grupo 1). Cada método cromatográfico da invenção gerou uma melhora no nível de monômero conjugado e pode ser facilmente escalonado.
Além da CHT (hidroxiapatita cerâmica), CFT (fluorapatita cerâmica) também pode ser usado sob condições cromatográficas similares. Alternativamente, tanto a resina CHT quanto a resina CFT podem ser usadas no modo não adsortivo, na medida em que o produto desejado (substancialmente conjugado monomérico) não é retido pelas resinas, enquanto as espécies de alto peso molecular são retidas e, assim, separadas do produto desejado.
Embora uma composição padronizada de tampão/solvente para conjugação compreenda DMA 3%, 50 mM de fosfato de potássio, 50 mM de NaCl e 2 mM de EDTA em pH 6,5 (como utilizada no Exemplo 1), outras composições são mais compatíveis com algumas das etapas cromatográficas aqui descritas, e fornecem outros benefícios em relação ao processo padronizado. Por exemplo, a conjugação pode ser realizada em DMA 3%, 12,5 mM de fosfato de potássio, 12,5 mM de NaCl e 0,5 mM de EDTA em pH 6,5. Sob essas condições, a quantidade de DM4 incorporada em relação à quantidade de ligante incorporada no anticorpo huB4 foi cerca de 10% maior do que para as condições padronizadas. Além disso, essas condições são mais compatíveis com a carga em resinas como, por exemplo, resinas de troca catiônica e CHT.
Todas as referências, incluindo publicações, pedidos de patentes e patentes aqui citados, são aqui incorporados por referência, na mesma extensão como se cada referência fosse individual e especificamente indicada para ser incorporada por referência e fosse aqui apresentada em sua totalidade.
O uso de os termos “um”, “uma”, “o” e “a” e referentes similares no contexto da descrição da invenção (especialmente no contexto das reivindicações a seguir) devem ser considerados como englobando as formas tanto no singular quanto no plural, a menos que aqui especificado de forma diferente ou claramente contraindicado pelo contexto. Os termos “que compreende”, “que possui”, “que inclui” e “contendo” devem ser considerados como termos em aberto (ou seja, que significam “que incluem sem limitação”), a menos que observado de forma diferente. A citação neste pedido de intervalos de valores visa simplesmente a servir como um método abreviado de se referir individualmente a cada valor separado incluído no intervalo, a menos que aqui especificado de forma diferente, e cada valor separado é incorporado na especificação como se fosse individualmente aqui citado. Todos os métodos aqui descritos podem ser realizados em qualquer ordem adequada, a menos que aqui especificado de forma diferente ou de algum outro modo claramente contraindicado pelo contexto. O uso de qualquer um e de todos os exemplos ou linguagem exemplar (por exemplo, “tal como”) aqui fornecidos, visa simplesmente a melhor esclarecer a invenção, e não impõe uma limitação ao escopo da invenção, a menos que especificado de forma diferente. Nenhuma linguagem na especificação deve ser considerada como indicativa de qualquer elemento não reivindicado como sendo essencial à prática da invenção.
São aqui descritas modalidades preferidas da invenção, incluindo o melhor modo conhecido pelos inventores para a prática da invenção. Variações dessas modalidades preferidas podem se tornar evidentes para aqueles 5 habilitados na técnica mediante a leitura da descrição apresentada anteriormente. Os inventores esperam que aqueles habilitados na técnica empreguem essas variações da forma adequada, e os inventores desejam que a invenção seja praticada de uma forma diferente daquelas aqui descritas especificamente. Consequentemente, essa invenção inclui todas as modificações e equivalentes do assunto em tela citados nas reivindicações em anexo da forma permitida pelas leis aplicáveis. Além disso, qualquer combinação dos elementos descritos acima, em todas as variações possíveis destes, é englobada pela invenção, a menos que aqui especificado de forma diferente ou de algum outro modo claramente contraindicado pelo contexto.

Claims (15)

1. Processo para a preparação de um conjugado de anticorpo-maitansinóide caracterizado por compreender as etapas de: (a) contato de um anticorpo com um reagente de entrecruzamento bifuncional para anexar de forma covalente um ligante ao anticorpo e dessa forma preparar uma primeira mistura que compreende os anticorpos que têm ligantes ligados a ele, (b) submissão da primeira mistura à filtração de fluxo tangencial, precipitação seletiva, filtração adsortiva ou cromatografia adsortiva e dessa forma preparar uma primeira mistura purificada de anticorpos que têm ligantes ligados a ele, (c) conjugação de um maitansinóide aos anticorpos que têm ligantes ligados a ele na primeira mistura purificada por reação dos anticorpos que têm ligantes ligados a ele com um maitansinóide em uma solução que tem um pH de 4,0 a 9,0 para preparar uma segunda mistura que compreende (i) anticorpo quimicamente unido através do ligante ao maitansinóide, (ii) maitansinóide e (iii) subprodutos da reação, e (d) submissão da segunda mistura a uma filtração de fluxo tangencial para purificar os anticorpos quimicamente unidos através dos ligantes ao maitansinóide dos outros componentes da segunda mistura e dessa forma preparar uma segunda mistura purificada de anticorpos quimicamente unidos através dos ligantes ao maitansinóide.
2. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a cromatografia adsortiva é selecionada do grupo que consiste em hidroxiapatita, cromatografia de indução de carga hidrofóbica (HCIC), cromatografia de interação hidrofóbica (HIC), cromatografia de troca iônica, cromatografia de troca iônica de modo misto, cromatografia por afinidade de metal imobilizado (IMAC), cromatografia de ligante de corante, cromatografia por afinidade, cromatografia de fase reversa, e combinações dessas.
3. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que filtração de fluxo tangencial é utilizada na etapa (b).
4. Processo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a cromatografia adsortiva é utilizada na etapa (b).
5. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a solução na etapa (c) tem um pH de 4 a 6,0.
6. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a solução na etapa (c) tem um pH de 6,5 a 9.
7. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a solução na etapa (c) compreende sacarose.
8. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a solução na etapa (c) também compreende um agente de tamponamento selecionado do grupo que consiste em um tampão de citrato, um tampão de acetato, um tampão de succinato e um tampão de fosfato.
9. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
10. Processo, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal humanizado.
11. Processo, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é selecionado do grupo que consiste em huN901, huMy9-6, huB4, huC242, trastuzumab, bivatuzumab, sibrotuzumab, CNTO95, huDS6 e rituximab.
12. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o maitansinóide compreende um grupo tiol.
13. Processo, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o maitansinóide é DM1.
14. Processo, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o maitansinóide é DM4.
15. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o agente de ligação a célula é quimicamente ligado ao medicamento via ligações químicas selecionadas do grupo que consiste em ligações de dissulfeto, ligações instáveis em ácido, ligações foto-instáveis, ligações instáveis de peptidase, ligações de tioéter, e ligações instáveis de esterase.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
US7589180B2 (en) 2001-05-11 2009-09-15 Abbott Laboratories Inc. Specific binding proteins and uses thereof
JP5149620B2 (ja) 2004-07-23 2013-02-20 エンドサイト，インコーポレイテッド ２価リンカーおよびその結合体
US20110166319A1 (en) * 2005-02-11 2011-07-07 Immunogen, Inc. Process for preparing purified drug conjugates
EP3539572A1 (en) 2005-08-24 2019-09-18 ImmunoGen, Inc. Process for preparing maytansinoid antibody conjugates
EP2126127B1 (en) * 2007-01-25 2016-09-28 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Use of anti-egfr antibodies in treatment of egfr mutant mediated disease
NZ580132A (en) 2007-03-14 2012-11-30 Endocyte Inc Binding ligand linked drug delivery conjugates of tubulysins to vitamins
CA2680854C (en) 2007-03-15 2017-02-14 Ludwig Institute For Cancer Research Treatment method using egfr antibodies and src inhibitors and related formulations
US9877965B2 (en) 2007-06-25 2018-01-30 Endocyte, Inc. Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation
CN104383553A (zh) 2007-06-25 2015-03-04 恩多塞特公司 含有亲水性间隔区接头的共轭物
US9283276B2 (en) 2007-08-14 2016-03-15 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. Monoclonal antibody 175 targeting the EGF receptor and derivatives and uses thereof
EP2281006B1 (en) 2008-04-30 2017-08-02 Immunogen, Inc. Cross-linkers and their uses
US20100092495A1 (en) * 2008-04-30 2010-04-15 Immunogen Inc. Potent cell-binding agent drug conjugates
JP5863640B2 (ja) * 2009-04-29 2016-02-16 バイオ−ラッド ラボラトリーズ インコーポレーティッド 免疫複合体の精製
EP2437790B1 (en) 2009-06-03 2019-02-20 Immunogen, Inc. Conjugation methods
US20110076232A1 (en) * 2009-09-29 2011-03-31 Ludwig Institute For Cancer Research Specific binding proteins and uses thereof
UY32913A (es) * 2009-10-02 2011-04-29 Sanofi Aventis Nuevos maitansinoides y el uso de dichos maitansinoides para preparar conjugados con un anticuero
US9173961B2 (en) 2010-02-10 2015-11-03 Immunogen, Inc. CD20 antibodies and uses thereof
WO2012075037A1 (en) 2010-11-30 2012-06-07 Genentech, Inc. Low affinity blood brain barrier receptor antibodies and uses therefor
KR20140010076A (ko) 2011-02-15 2014-01-23 이뮤노젠 아이엔씨 세포독성 벤조다이아제핀 유도체
WO2012135517A2 (en) 2011-03-29 2012-10-04 Immunogen, Inc. Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
TR201902180T4 (tr) * 2011-03-29 2019-03-21 Immunogen Inc Tek adimli bi̇r i̇şlem i̇le maytansi̇noi̇d anti̇kor konjugatlarinin hazirlanmasi
CN103619357A (zh) * 2011-03-29 2014-03-05 伊缪诺金公司 用于制造具有改善的同质性的缀合物的方法
EP3501546A3 (de) 2011-04-21 2019-09-18 Seattle Genetics, Inc. Cystein-wirkstoff konjugate und ihre verwendung
MX350954B (es) 2011-06-21 2017-09-26 Immunogen Inc Derivados de maitansinoides novedosos con enlazador de peptido y conjugados de estos.
AU2012352210A1 (en) * 2011-12-13 2014-07-24 Immunogen, Inc. Use of N-hydroxysuccinimide to improve conjugate stability
US10080805B2 (en) 2012-02-24 2018-09-25 Purdue Research Foundation Cholecystokinin B receptor targeting for imaging and therapy
US20140080175A1 (en) 2012-03-29 2014-03-20 Endocyte, Inc. Processes for preparing tubulysin derivatives and conjugates thereof
CA2869704A1 (en) * 2012-04-04 2013-10-10 Perseus Proteomics Inc. Drug conjugate comprising anti-cdh3 (pcadherin) antibody
WO2013151649A1 (en) 2012-04-04 2013-10-10 Sialix Inc Glycan-interacting compounds
HK1211208A1 (zh) 2012-08-22 2016-05-20 Immunogen, Inc. 細胞毒性苯並二氮呯衍生物
WO2014055842A1 (en) * 2012-10-04 2014-04-10 Immunogen, Inc. Process for preparing stable antibody maytansinoid conjugates
CN105208876A (zh) * 2012-10-04 2015-12-30 伊缪诺金公司 离子交换膜的从细胞结合剂细胞毒性剂缀合物中去除杂质的用途
RU2661083C2 (ru) * 2012-10-04 2018-07-11 Иммуноджен, Инк. Использование пвдф-мембраны для очистки конъюгатов клеточно-связывающий агент - цитотоксический агент
WO2014058947A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Sanofi Compositions and methods for treating cancer using pi3k inhibitor and anti-cd19 maytansinoid immunoconjugate
JP2015536323A (ja) 2012-10-16 2015-12-21 エンドサイト・インコーポレイテッドＥｎｄｏｃｙｔｅ， Ｉｎｃ． 非天然アミノ酸を含む薬物送達結合体および使用方法
WO2014089177A2 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines
HK1219422A1 (zh) 2013-02-28 2017-04-07 Immunogen, Inc. 包含细胞结合剂及细胞毒素剂的轭合物
EP2961435B1 (en) 2013-02-28 2019-05-01 ImmunoGen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
US9498532B2 (en) 2013-03-13 2016-11-22 Novartis Ag Antibody drug conjugates
EP3964237B1 (en) * 2013-03-15 2026-02-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Biologically active molecules, conjugates thereof, and therapeutic uses
BR112015021134A2 (pt) 2013-03-15 2017-10-10 Novartis Ag conjugados de fármaco e anticorpo
AU2014262566A1 (en) * 2013-05-08 2015-11-12 Zymeworks Inc. Bispecific HER2 and HER3 antigen binding constructs
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
US10208125B2 (en) 2013-07-15 2019-02-19 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Anti-mucin 1 binding agents and uses thereof
WO2015038984A2 (en) 2013-09-12 2015-03-19 Halozyme, Inc. Modified anti-epidermal growth factor receptor antibodies and methods of use thereof
TWI541022B (zh) 2013-12-18 2016-07-11 應克隆公司 針對纖維母細胞生長因子受體－３（ｆｇｆｒ３）之化合物及治療方法
CA2934617A1 (en) 2013-12-23 2015-07-02 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Antibody drug conjugates (adcs) with kinesin spindle protein (ksp)
EP3160513B1 (en) 2014-06-30 2020-02-12 Glykos Finland Oy Saccharide derivative of a toxic payload and antibody conjugates thereof
WO2016004048A2 (en) 2014-06-30 2016-01-07 Blend Therapeutics, Inc. Targeted conjugates and particles and formulations thereof
PE20170903A1 (es) 2014-08-12 2017-07-12 Novartis Ag Conjugados de farmacos con anticuerpos anti-cdh6
AU2015311951B2 (en) * 2014-09-02 2021-04-08 Immunogen, Inc. Methods for formulating antibody drug conjugate compositions
PT3189056T (pt) 2014-09-03 2020-09-04 Immunogen Inc Derivados citotóxicos de benzodiazepina
TW201613930A (en) 2014-09-03 2016-04-16 Immunogen Inc Cytotoxic benzodiazepine derivatives
CN104208719B (zh) * 2014-09-24 2017-05-03 北京天广实生物技术股份有限公司 一种抗体偶联药物的阳离子交换层析纯化方法
US20170306046A1 (en) 2014-11-12 2017-10-26 Siamab Therapeutics, Inc. Glycan-interacting compounds and methods of use
EP3217962A4 (en) * 2014-11-13 2018-06-27 The Curators of the University of Missouri Multiple human antibody-nanoparticle conjugates and methods of formation
TW201711702A (zh) 2015-06-04 2017-04-01 應克隆公司 使用針對纖維母細胞生長因子受體３（ｆｇｆｒ３）之化合物的療法
WO2016203432A1 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Novartis Ag Antibody drug conjugates
AU2016282723B2 (en) 2015-06-22 2021-09-23 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Antibody drug conjugates (ADCs) and antibody prodrug conjugates (APDCs) with enzymatically cleavable groups
WO2017060322A2 (en) 2015-10-10 2017-04-13 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Ptefb-inhibitor-adc
HK1259311A1 (zh) * 2015-10-28 2019-11-29 Tva (Abc), Llc Sstr靶向綴合物及其顆粒和製劑
CN108463248B (zh) 2015-11-12 2022-10-21 西雅图基因公司 聚糖相互作用化合物及使用方法
FR3045058B1 (fr) * 2015-12-11 2017-12-29 Ifp Energies Now Nouvelles polyamines, leur procede de synthese et leur utilisation pour l'elimination selective de l'h2s d'un effluent gazeux comprenant du co2
WO2017161206A1 (en) 2016-03-16 2017-09-21 Halozyme, Inc. Conjugates containing conditionally active antibodies or antigen-binding fragments thereof, and methods of use
JP7251981B2 (ja) 2016-03-24 2023-04-04 バイエル ファーマ アクチエンゲゼルシャフト 酵素開裂基を有する細胞毒性活性剤のプロドラッグ
US10918627B2 (en) 2016-05-11 2021-02-16 Massachusetts Institute Of Technology Convergent and enantioselective total synthesis of Communesin analogs
WO2017216028A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Specific antibody-drug-conjugates (adcs) with ksp inhibitors and anti-cd123-antibodies
EP3541847A4 (en) 2016-11-17 2020-07-08 Seattle Genetics, Inc. COMPOUNDS INTERACTING WITH GLYCANE AND METHODS OF USE
JP7350313B2 (ja) 2016-12-16 2023-09-26 ブルーフィン バイオメディシン， インコーポレイテッド 抗ｃｕｂドメイン含有タンパク質１（ｃｄｃｐ１）抗体、抗体薬物コンジュゲート、およびその使用方法
WO2018114804A1 (de) 2016-12-21 2018-06-28 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Spezifische antikörper-wirkstoff-konjugate (adcs) mit ksp-inhibitoren
KR102556826B1 (ko) 2016-12-21 2023-07-18 바이엘 파마 악티엔게젤샤프트 효소적으로 절단가능한 기를 갖는 항체 약물 접합체 (adc)
CA3047491A1 (en) 2016-12-21 2018-06-28 Bayer Aktiengesellschaft Prodrugs of cytotoxic active agents having enzymatically cleavable groups
JOP20190187A1 (ar) 2017-02-03 2019-08-01 Novartis Ag مترافقات عقار جسم مضاد لـ ccr7
EP3589319A4 (en) 2017-03-03 2021-07-14 Seagen Inc. GLYCAN INTERACTING COMPOUNDS AND METHOD OF USE
EP3603663A4 (en) * 2017-03-30 2020-04-08 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. PROCESS FOR THE PREPARATION OF ANTIBODY CONJUGATE
WO2018185618A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Novartis Ag Anti-cdh6 antibody drug conjugates and anti-gitr antibody combinations and methods of treatment
TW201839001A (zh) 2017-04-20 2018-11-01 美商伊繆諾金公司 細胞毒性苯并二氮平衍生物及其綴合物
US20180311375A1 (en) * 2017-04-27 2018-11-01 Cadila Healthcare Limited Process of preparing antibody-drug conjugate
US11932650B2 (en) 2017-05-11 2024-03-19 Massachusetts Institute Of Technology Potent agelastatin derivatives as modulators for cancer invasion and metastasis
US10640508B2 (en) 2017-10-13 2020-05-05 Massachusetts Institute Of Technology Diazene directed modular synthesis of compounds with quaternary carbon centers
WO2019105835A1 (en) 2017-11-29 2019-06-06 Bayer Consumer Care Ag Combinations of copanlisib and anetumab ravtansine
EP3732178A1 (en) 2017-12-28 2020-11-04 ImmunoGen, Inc. Benzodiazepine derivatives
CA3087993A1 (en) * 2018-01-12 2019-07-18 Immunogen, Inc. Methods for antibody drug conjugation, purification, and formulation
EP3552631A1 (en) 2018-04-10 2019-10-16 Inatherys Antibody-drug conjugates and their uses for the treatment of cancer
BR112021001194A2 (pt) 2018-07-25 2021-04-27 Daiichi Sankyo Company, Limited métodos para produzir um conjugado anticorpo-fármaco e para produzir uma composição farmacêutica
TWI824043B (zh) 2018-10-25 2023-12-01 西班牙商瑪製藥股份有限公司 藥物抗體共軛物
EP3947395A1 (en) 2019-03-29 2022-02-09 ImmunoGen, Inc. Cytotoxic bis-benzodiazepine derivatives and conjugates thereof with cell-binding agents for inhibiting abnormal cell growth or for treating proliferative diseases
HUE065484T2 (hu) 2019-04-26 2024-05-28 Immunogen Inc Camptothecin-származékok
WO2020234114A1 (en) 2019-05-21 2020-11-26 Bayer Aktiengesellschaft A novel stable high concentration formulation for anetumab ravtansine
US11535634B2 (en) 2019-06-05 2022-12-27 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates, and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines and uses thereof
PH12022550037A1 (en) 2019-07-10 2023-04-12 Cybrexa 3 Inc Peptide conjugates of microtubule-targeting agents as therapeutics
KR20220052918A (ko) 2019-07-10 2022-04-28 싸이브렉사 2, 인크. 치료제로서의 사이토톡신의 펩티드 접합체
EP4025253B1 (en) 2019-09-05 2024-03-20 Pharma Mar, S.A. Drug antibody conjugates
CN113125732B (zh) * 2019-12-31 2023-08-08 科美博阳诊断技术(上海)有限公司 一种白介素6的均相检测试剂盒及其应用
CA3175426A1 (en) 2020-04-21 2021-10-28 Alfonso Latorre Lozano Drug antibody conjugates
US20230181756A1 (en) 2020-04-30 2023-06-15 Novartis Ag Ccr7 antibody drug conjugates for treating cancer
US12030888B2 (en) 2021-02-24 2024-07-09 Massachusetts Institute Of Technology Himastatin derivatives, and processes of preparation thereof, and uses thereof
WO2023157989A1 (ko) 2022-02-17 2023-08-24 주식회사 노벨티노빌리티 항체-약물 접합체
WO2024246657A1 (en) * 2023-05-29 2024-12-05 Intas Pharmaceuticals Ltd. Method for conjugation and purification of antibody drug conjugate
WO2025005240A1 (ja) 2023-06-30 2025-01-02 第一三共株式会社 活性炭材料を使用する精製工程を含む抗体－薬物コンジュゲートの製造方法
WO2025019790A1 (en) 2023-07-19 2025-01-23 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with trop-2 targeting adc
WO2025027529A1 (en) 2023-07-31 2025-02-06 Advesya Anti-il-1rap antibody drug conjugates and methods of use thereof
WO2025126157A1 (en) 2023-12-15 2025-06-19 Advesya Anti-il-1rap binding domains and antibody-drug conjugates thereof
WO2025192691A1 (ja) * 2024-03-14 2025-09-18 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物

Family Cites Families (163)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US585499A (en) * 1897-06-29 Oil-can
US585089A (en) * 1897-06-22 durey
US552293A (en) * 1895-12-31 ktjhn
SE430062B (sv) 1977-03-04 1983-10-17 Pharmacia Fine Chemicals Ab Kopplings- eller tioleringsreagens
US4137230A (en) 1977-11-14 1979-01-30 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for the production of maytansinoids
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) * 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
WO1982001188A1 (en) * 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4315929A (en) * 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4563304A (en) 1981-02-27 1986-01-07 Pharmacia Fine Chemicals Ab Pyridine compounds modifying proteins, polypeptides or polysaccharides
JPS57192389A (en) * 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4664911A (en) * 1983-06-21 1987-05-12 Board Of Regents, University Of Texas System Immunotoxin conjugates employing toxin B chain moieties
DE3584012D1 (de) 1985-01-22 1991-10-10 Saint Gobain Vitrage Verfahren zur herstellung eines pulvers auf basis von indium-formiat zur herstellung einer duennen beschichtung auf einem substrat, insbesondere auf glas.
GB8600582D0 (en) * 1986-01-10 1986-02-19 Ca Minister Nat Defence Purifying biological materials
US5225539A (en) * 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US4859449A (en) 1987-09-14 1989-08-22 Center For Molecular Medicine And Immunology Modified antibodies for enhanced hepatocyte clearance
US5241078A (en) * 1988-06-14 1993-08-31 Cetus Oncology Coupling agents and sterically hindered disulfide linked conjugates prepared therefrom
US5024834A (en) * 1988-07-12 1991-06-18 Cetus Corporation Thioether linked immunotoxin conjugates
CA2006408A1 (en) 1988-12-27 1990-06-27 Susumu Iwasa Bispecific monoclonal antibody, its production and use
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5714149A (en) 1989-02-10 1998-02-03 Celltech Therapeutics Limited Crosslinked antibodies and processes for their preparation
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US6316003B1 (en) 1989-12-21 2001-11-13 Whitehead Institute For Biomedical Research Tat-derived transport polypeptides
US5137877B1 (en) 1990-05-14 1996-01-30 Bristol Myers Squibb Co Bifunctional linking compounds conjugates and methods for their production
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5545806A (en) * 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
AU8507191A (en) * 1990-08-29 1992-03-30 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5256294A (en) 1990-09-17 1993-10-26 Genentech, Inc. Tangential flow filtration process and apparatus
CA2048078A1 (en) 1990-11-15 1992-05-16 Wolfgang A. Wrasidlo Chemical modification of antibodies for creation of immunoconjugates
US5252714A (en) 1990-11-28 1993-10-12 The University Of Alabama In Huntsville Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde
SE9102074D0 (sv) 1991-07-03 1991-07-03 Kabi Pharmacia Ab Tomour antigen specific antibody
SE470006B (sv) 1991-09-26 1993-10-25 Corline Systems Ab Nytt konjugat, dess framställning och användning samt substrat preparerat med konjugatet
PT1696031E (pt) 1991-12-02 2010-06-25 Medical Res Council Produção de auto-anticorpos a partir de reportórios de segmentos de anticorpo e exibidos em fagos
CA2076465C (en) 1992-03-25 2002-11-26 Ravi V. J. Chari Cell binding agent conjugates of analogues and derivatives of cc-1065
US5639641A (en) * 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US5556623A (en) 1993-03-30 1996-09-17 Eli Lilly And Company Antibody-drug conjugates
GB9320575D0 (en) 1993-10-06 1993-11-24 Amp Gmbh Coaxial connector having improved locking mechanism
IL111748A0 (en) 1993-12-03 1995-01-24 Zeneca Ltd Proteins
DE19503164A1 (de) * 1994-02-04 1995-08-10 Siemens Comp Inc Optisch gekoppelte Datenanschalteanordnung und Gabelschaltung
US5747446A (en) 1994-03-22 1998-05-05 Beth Israel Deaconess Medical Center Modified polypeptides with increased biological activity
US5580853A (en) * 1994-03-22 1996-12-03 New England Deaconess Hospital Modified polypeptides with increased biological activity
US5919758A (en) 1994-03-22 1999-07-06 Beth Israel Deaconess Medical Center Modified polypeptides with altered biological activity
US5612474A (en) 1994-06-30 1997-03-18 Eli Lilly And Company Acid labile immunoconjugate intermediates
AU5908296A (en) 1995-05-31 1996-12-24 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods for targeted delivery of effector m olecules
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
GB9610992D0 (en) 1996-05-24 1996-07-31 Glaxo Group Ltd Concentrated antibody preparation
US6340461B1 (en) 1996-12-17 2002-01-22 David Stephen Terman Superantigen based methods and compositions for treatment of diseases
US6462070B1 (en) 1997-03-06 2002-10-08 The General Hospital Corporation Photosensitizer conjugates for pathogen targeting
US6371975B2 (en) 1998-11-06 2002-04-16 Neomend, Inc. Compositions, systems, and methods for creating in situ, chemically cross-linked, mechanical barriers
EP1012280B1 (en) 1997-06-11 2004-11-10 Borean Pharma A/S Trimerising module
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
US5958677A (en) 1997-07-28 1999-09-28 The New York Blood Center, Inc. Method for purifying viral nucleic acids
CA2297070A1 (en) 1997-08-01 1999-02-11 Morphosys Ag Novel method and phage for the identification of nucleic acid sequences encoding members of a multimeric (poly)peptide complex
US5965714A (en) * 1997-10-02 1999-10-12 Connaught Laboratories, Inc. Method for the covalent attachment of polysaccharides to protein molecules
KR100680014B1 (ko) 1997-10-03 2007-02-09 갈레니카 파마슈티칼스 인크. 이민 형성 폴리사카라이드, 이의 제조 방법 및 이것의 아쥬반트 및 면역자극제로서의 용도
US6121236A (en) 1998-03-24 2000-09-19 The Children's Medical Center Corporation Multivalent ligands which modulate angiogenesis
US5963761A (en) * 1998-04-15 1999-10-05 Xerox Corporation Area coverage sensor calibration and algorithm for seam detection noise eliminator on a seamed photoreceptor
WO1999055715A2 (en) 1998-04-28 1999-11-04 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Polysaccharide-antigen conjugates
US5981564A (en) 1998-07-01 1999-11-09 Universite Laval Water-soluble derivatives of paclitaxel, method for producing same and uses thereof
AU750414B2 (en) 1998-07-13 2002-07-18 Board Of Regents, The University Of Texas System Cancer treatment methods using therapeutic conjugates that bind to aminophospholipids
AUPQ014799A0 (en) 1999-05-04 1999-05-27 Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited Amplification of folate-mediated targeting to tumor cells using polymers
CA2385528C (en) * 1999-10-01 2013-12-10 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
ES2276708T3 (es) * 1999-11-24 2007-07-01 Immunogen, Inc. Agentes citotoxicos que comprenden taxanos y su uso terapeutico.
ES2274823T3 (es) 1999-12-29 2007-06-01 Immunogen, Inc. Agentes cototoxicos que comprenden doxorrubicinas y daunorrubicinas y su utilizacion terapeutica.
EP1257289A1 (en) * 2000-02-08 2002-11-20 The Penn State Research Foundation Immunotherapy using interleukin 13 receptor subunit alpha 2
US7097840B2 (en) 2000-03-16 2006-08-29 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
US6632979B2 (en) 2000-03-16 2003-10-14 Genentech, Inc. Rodent HER2 tumor model
EP1316119A4 (en) 2000-07-24 2009-02-11 Microcell Corp MICROCELLULAR ELECTROCHEMICAL DEVICES AND ARRANGEMENTS AND CORRESPONDING MANUFACTURING METHOD
US6596503B1 (en) 2000-08-18 2003-07-22 East Carolina University Monoclonal antibody DS6, tumor-associated antigen CA6, and methods of use thereof
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
US20060062786A1 (en) 2000-11-08 2006-03-23 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors
KR20030091978A (ko) 2001-01-29 2003-12-03 아이덱 파마슈티칼즈 코포레이션 변형된 항체 및 사용 방법
WO2002098885A1 (en) 2001-02-07 2002-12-12 Beth Israel Deaconess Medical Center Modified psma ligands and uses related thereto
CA2444483A1 (en) 2001-04-26 2002-11-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Diagnostic imaging compositions, their methods of synthesis and use
WO2002092127A1 (en) 2001-05-11 2002-11-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Anti-cd26 monoclonal antibodies as therapy for diseases associated with cells expressing cd26
EP1258255A1 (en) 2001-05-18 2002-11-20 Boehringer Ingelheim International GmbH Conjugates of an antibody to CD44 and a maytansinoid
US6441163B1 (en) * 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
JP4619651B2 (ja) * 2001-06-01 2011-01-26 コーネル・リサーチ・ファンデーション・インコーポレイテッド 前立腺特異的膜抗原に対する修飾抗体およびその使用
US6576802B2 (en) 2001-06-04 2003-06-10 Shell Oil Company One-step production of 1, 3-propanediol from ethylene oxide and syngas with a catalyst with a phospholanoalkane ligand
JP2005532415A (ja) 2001-12-11 2005-10-27 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド スタフィロコッカス・アウレウスエキソポリサッカライド及び方法
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
WO2003057163A2 (en) * 2002-01-03 2003-07-17 Smithkline Beecham Corporation Methods for preparing immunoconjugates
US7591994B2 (en) 2002-12-13 2009-09-22 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US8877901B2 (en) 2002-12-13 2014-11-04 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US6534660B1 (en) 2002-04-05 2003-03-18 Immunogen, Inc. CC-1065 analog synthesis
US6756397B2 (en) 2002-04-05 2004-06-29 Immunogen, Inc. Prodrugs of CC-1065 analogs
DK1501369T3 (en) 2002-04-26 2015-09-28 Genentech Inc Non-affinity purification of proteins
SG187991A1 (en) 2002-05-02 2013-03-28 Wyeth Corp Calicheamicin derivative-carrier conjugates
US20090068178A1 (en) 2002-05-08 2009-03-12 Genentech, Inc. Compositions and Methods for the Treatment of Tumor of Hematopoietic Origin
US6596757B1 (en) 2002-05-14 2003-07-22 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use
EP1551875A4 (en) 2002-06-21 2006-06-28 Biogen Idec Inc TAMPON PREPARATIONS FOR CONCENTRATING ANTIBODIES AND METHODS FOR USE THEREOF
US7390898B2 (en) 2002-08-02 2008-06-24 Immunogen Inc. Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use
ES2361739T3 (es) 2002-08-16 2011-06-21 Immunogen, Inc. Reticulantes con elevada reactividad y solubilidad y su uso en la preparación de conjugados para el suministro dirigido de fármacos de molécula pequeña.
ATE409048T1 (de) 2002-10-08 2008-10-15 Fresenius Kabi De Gmbh Pharmazeutisch aktive oligosaccharid-conjugate
DK3299463T3 (da) 2002-10-30 2020-12-07 Nuevolution As Enzymatisk kodning
HUE026914T2 (en) 2002-11-07 2016-08-29 Immunogen Inc Anti-CD33 antibodies and a method of treating acute myeloid leukemia
US7374762B2 (en) 2003-05-14 2008-05-20 Immunogen, Inc. Drug conjugate composition
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
KR101145506B1 (ko) 2003-05-20 2012-05-15 이뮤노젠 아이엔씨 새로운 메이탠시노이드를 포함하는 개선된 세포독성체
US7736644B2 (en) 2003-06-27 2010-06-15 Amgen Fremont Inc. Antibodies directed to the deletion mutants of epidermal growth factor receptor and uses thereof
US20050074425A1 (en) 2003-07-02 2005-04-07 Polycord, Inc. Method for delivering polymerized therapeutic agent compositions and compositions thereof
CN1878568A (zh) 2003-11-05 2006-12-13 盘林京有限公司 Cdim结合抗体的增强的b细胞细胞毒性
US20050175619A1 (en) * 2004-02-05 2005-08-11 Robert Duffy Methods of producing antibody conjugates
US20110064754A1 (en) 2005-03-03 2011-03-17 Center For Molecular Medicine And Immunology Immunoconjugates Comprising Poxvirus-Derived Peptides and Antibodies Against Antigen-Presenting Cells for Subunit-Based Poxvirus Vaccines
WO2005094882A1 (en) * 2004-03-03 2005-10-13 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Modified antibodies to prostate-specific membrane antigen and uses thereof
JP2008505853A (ja) 2004-04-13 2008-02-28 クインテセンス バイオサイエンシーズ インコーポレーティッド 細胞傷害性薬剤としての非天然のリボヌクレアーゼ複合体
US20060073528A1 (en) 2004-05-14 2006-04-06 Jean-Michel Lecerf Measurement methods
US7691962B2 (en) 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
US7517903B2 (en) 2004-05-19 2009-04-14 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates
MXPA06014065A (es) 2004-06-01 2007-01-31 Genentech Inc Conjugados de droga-anticuerpo y metodos.
US7313946B2 (en) * 2004-07-15 2008-01-01 Matsuo Electric Co., Ltd. Moisture detector
SV2006002258A (es) 2004-10-08 2006-09-19 Wyeth Corp Inmunoterapia de trastornos autoinmunes
AU2005316844A1 (en) 2004-11-29 2006-06-22 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibodies and immunoconjugates
US7408030B2 (en) * 2005-01-13 2008-08-05 North Carolina State University Purification of immunoglobulins using affinity chromatography and peptide ligands
US20110166319A1 (en) 2005-02-11 2011-07-07 Immunogen, Inc. Process for preparing purified drug conjugates
JP5165387B2 (ja) 2005-02-11 2013-03-21 イムノゲン インコーポレーティッド 安定な薬物複合体を調製するための方法
WO2006113623A2 (en) 2005-04-15 2006-10-26 Immunogen, Inc. Elimination of heterogeneous or mixed cell population in tumors
GB2427360A (en) 2005-06-22 2006-12-27 Complex Biosystems Gmbh Aliphatic prodrug linker
JP5436856B2 (ja) 2005-07-15 2014-03-05 アンジオケム インコーポレーティッド 薬学的複合体における担体としてのアプロチニンポリペプチドの使用
WO2007019232A2 (en) 2005-08-03 2007-02-15 Immunogen, Inc. Immunoconjugate formulations
EP3539572A1 (en) * 2005-08-24 2019-09-18 ImmunoGen, Inc. Process for preparing maytansinoid antibody conjugates
WO2007034495A2 (en) 2005-09-22 2007-03-29 Hadasit Medical Research Services & Development Limited Dextran and arabinogalactan conjugates of therapeutically active compounds
AU2006294554B2 (en) 2005-09-26 2013-03-21 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Antibody-drug conjugates and methods of use
JP5199108B2 (ja) 2005-11-14 2013-05-15 ユニヴァーシティー オブ サザン カリフォルニア インテグリン結合小分子
US7964415B2 (en) 2006-04-26 2011-06-21 Cardiogenics Inc. Stable water-soluble polyethylenimine conjugates and methods of use thereof
US7307016B1 (en) * 2006-06-07 2007-12-11 Grace Semiconductor Manufacturing Corporation Method of processing metal surface in dual damascene manufacturing
EA020324B1 (ru) 2006-07-18 2014-10-30 Санофи-Авентис АНТИТЕЛА К РЕЦЕПТОРУ ЭФРИНА EphA2 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
US20080213349A1 (en) 2006-09-11 2008-09-04 Deepak Ramesh Thakker Liposome Complexes Containing Pharmaceutical Agents and Methods
US8969532B2 (en) 2006-10-03 2015-03-03 Novo Nordisk A/S Methods for the purification of polypeptide conjugates comprising polyalkylene oxide using hydrophobic interaction chromatography
SI2019104T1 (sl) 2007-07-19 2013-12-31 Sanofi Citotoksična sredstva, ki obsegajo nove tomaimicinske derivate, in njihova terapevtska uporaba
EP2281006B1 (en) 2008-04-30 2017-08-02 Immunogen, Inc. Cross-linkers and their uses
RU2487877C2 (ru) 2008-04-30 2013-07-20 Иммьюноджен, Инк. Высокоэффективные конъюгаты и гидрофильные сшивающие агенты (линкеры)
GB0811743D0 (en) 2008-06-26 2008-07-30 Hemosol Biopharma Inc Composition
CN102215820A (zh) 2008-11-17 2011-10-12 安龙制药公司 用于核酸输送系统的可释放融合脂质
CN102365021B (zh) 2009-02-05 2015-07-15 伊缪诺金公司 新型苯并二氮杂*衍生物
EP2437790B1 (en) 2009-06-03 2019-02-20 Immunogen, Inc. Conjugation methods
FR2947269B1 (fr) 2009-06-29 2013-01-18 Sanofi Aventis Nouveaux composes anticancereux
UY32914A (es) 2009-10-02 2011-04-29 Sanofi Aventis Anticuerpos que se usan específicamente al receptor epha2
AR080301A1 (es) 2010-02-24 2012-03-28 Immunogen Inc Anticuerpos e inmunoconjugados del receptor 1 de folato y sus usos
KR20110103182A (ko) 2010-03-12 2011-09-20 삼성전자주식회사 입체 영상 표시 장치
US20120149732A1 (en) 2010-12-14 2012-06-14 Alexander Chucholowski Multifunctional linkers and methods for the use thereof
KR20140010076A (ko) 2011-02-15 2014-01-23 이뮤노젠 아이엔씨 세포독성 벤조다이아제핀 유도체
WO2012135517A2 (en) 2011-03-29 2012-10-04 Immunogen, Inc. Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
CN103619357A (zh) 2011-03-29 2014-03-05 伊缪诺金公司 用于制造具有改善的同质性的缀合物的方法
TR201902180T4 (tr) 2011-03-29 2019-03-21 Immunogen Inc Tek adimli bi̇r i̇şlem i̇le maytansi̇noi̇d anti̇kor konjugatlarinin hazirlanmasi
PL2694106T3 (pl) 2011-04-01 2018-06-29 Immunogen, Inc. Sposoby zwiększania skuteczności terapii przeciwnowotworowej opartej na receptorze folr1
US20130071482A1 (en) 2011-09-20 2013-03-21 The University Of Kentucky Research Foundation Block copolymer cross-linked nanoassemblies as modular delivery vehicles
AU2012352210A1 (en) 2011-12-13 2014-07-24 Immunogen, Inc. Use of N-hydroxysuccinimide to improve conjugate stability
RU2661083C2 (ru) 2012-10-04 2018-07-11 Иммуноджен, Инк. Использование пвдф-мембраны для очистки конъюгатов клеточно-связывающий агент - цитотоксический агент
CN105208876A (zh) 2012-10-04 2015-12-30 伊缪诺金公司 离子交换膜的从细胞结合剂细胞毒性剂缀合物中去除杂质的用途
WO2014055842A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Immunogen, Inc. Process for preparing stable antibody maytansinoid conjugates
WO2014086835A1 (en) 2012-12-05 2014-06-12 Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg Conjugates of proteins and multivalent cell-penetrating peptides and their uses

Also Published As

Publication number Publication date
EA200800657A1 (ru) 2008-08-29
EP2399609B1 (en) 2015-03-18
IL305084A (en) 2023-10-01
US20190030177A1 (en) 2019-01-31
US7811572B2 (en) 2010-10-12
CA2620343C (en) 2013-01-08
US20110021744A1 (en) 2011-01-27
IL282138B2 (en) 2024-01-01
IL248076A0 (en) 2016-11-30
PL1928503T3 (pl) 2012-12-31
IL189461A (en) 2013-07-31
DK1928503T3 (da) 2012-10-15
IL189461A0 (en) 2008-08-07
IL226985A0 (en) 2013-07-31
NZ565964A (en) 2011-11-25
HK1120407A1 (en) 2009-04-03
CN102989000A (zh) 2013-03-27
JP2014196307A (ja) 2014-10-16
AU2006283726C1 (en) 2015-05-07
CA3000520C (en) 2023-04-04
CA3190867A1 (en) 2007-03-01
CN102989000B (zh) 2016-04-20
CA3000520A1 (en) 2007-03-01
NZ595430A (en) 2013-05-31
IL282138A (en) 2021-05-31
ES2533992T3 (es) 2015-04-16
KR20080034476A (ko) 2008-04-21
EP1928503A2 (en) 2008-06-11
IL248076B (en) 2021-04-29
EP3539572A1 (en) 2019-09-18
CR20150350A (es) 2015-08-20
US20130281678A1 (en) 2013-10-24
CR9742A (es) 2008-09-29
CN101267841B (zh) 2012-10-10
HRP20120794T1 (hr) 2012-11-30
JP5738248B2 (ja) 2015-06-17
WO2007024536A3 (en) 2007-07-05
IL226985A (en) 2016-10-31
IL220816A0 (en) 2012-08-30
US20230158168A1 (en) 2023-05-25
EP1928503B1 (en) 2012-10-03
IL282138B1 (en) 2023-09-01
PT1928503E (pt) 2012-10-19
HK1165329A1 (en) 2012-10-05
CA2620343A1 (en) 2007-03-01
SI1928503T1 (sl) 2012-11-30
JP5350792B2 (ja) 2013-11-27
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