BRPI0719123A2 - Moduladores de serina-treonina proteína cinase e parp - Google Patents

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BRPI0719123A2
BRPI0719123A2 BRPI0719123-5A BRPI0719123A BRPI0719123A2 BR PI0719123 A2 BRPI0719123 A2 BR PI0719123A2 BR PI0719123 A BRPI0719123 A BR PI0719123A BR PI0719123 A2 BRPI0719123 A2 BR PI0719123A2
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BRPI0719123-5A
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Peter C Chua
Fabrice Pierre
Jeffrey P Whitten
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Cylene Pharmaceuticals Inc
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Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSTOS MODULADORES DE SERINA-TREONINA PROTEÍNA CINASE E PARP, MÉTODOS PARA IDENTIFICAÇÃO DE UMA MOLÉCULA-CANDlDATO QUE INTERAGE COM UMA PROTEÍNA DE PARP, PARA MODULAÇÃO DA ATIVIDADE DE UMA PROTEÍNA DE PARP E PARA INIBIÇÃO DE PROLIFERAÇÃO CELULAR E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA". Referência Cruzada a Pedidos Relacionados
Este pedido reivindica prioridade sob 35 U.S.C. § 119(e) para Pedido Provisional dos Estados Unidos N0 de Série 60/842.061 depositado em 1 de setembro de 2006; Pedido Provisional dos Estados Unidos N0 de Série 60/844.542 depositado em 13 de setembro de 2006; Pedido Provisio- nal dos Estados Unidos N0 de Série 60/846.683 depositado em 22 de se- tembro de 2006; Pedido Provisional dos Estados Unidos N0 de Série 60/873.936 depositado em 7 de dezembro de 2006; e Pedido Provisional dos Estados Unidos N0 de Série 60/859.716 depositado em 19 de março de 2007. Os conteúdos destes documentos estão incorporados aqui por refe- rência em sua totalidade. Campo da Invenção
A presente invenção refere-se em parte a moléculas que têm certas atividades biológicas que incluem, mas não estão limitadas a, inibição de proliferação celular, modulação de atividade de serina-treonina proteína cinase e modulação de atividade de polimerase. As moléculas da invenção podem modular atividade de caseína cinase (CK) (por exemplo, atividade de CK2) e/ou atividade de poli(ADP-ribose)polimerase (PARP). A invenção também refere-se em parte à métodos para emprego de tais moléculas. Descrição da Invenção
A presente invenção em parte fornece compostos químicos que têm certas atividades biológicas que incluem, mas não estão limitadas a, inibição de proliferação celular, inibição de angiogênese, modulação da ati- vidade de proteína cinase e modulação da atividade de polimerase. Certas moléculas podem modular a atividade de caseína cinase 2 (CK2) e/ou uma atividade de poli(ADP-ribose)polimerase (PARP) e podem afetar funções biológicas que incluem mas não estão limitadas a, inibição da transferência de fosfato gama de ATP para um substrato de proteína ou de peptídeo, inibição de angiogênese, inibição de proliferação celular e indução de apoptose celu- lar, por exemplo. A presente invenção também fornece em parte métodos pa- ra a preparação de novos compostos químicos, e análogos destes, e métodos de uso dos antecedentes. São fornecidas também composições compreen- dendo as moléculas acima descritas em combinação com outros agentes, e métodos para uso de tais moléculas em combinação com outros agentes.
Os compostos da invenção têm a fórmula geral (A):
^ 10 em que o grupo rotulado α representa um anel aromático ou heteroaromático de 5 a 6 membros fundido no anel que contém Q1, em que α é um anel de arila de 6 membros opcionalmente contendo um ou mais átomos de nitrogê- nio como membros de anel, ou um anel de arila de cinco membros selecio- nado de tiofeno e tiazol; Q1 é C=X, Q2 é NR5, e a ligação entre Q1 e Q2 é uma ligação úni-
ca; ou Q1 é C-X-R51 Q2 é N, e a ligação entre Q1 e Q2 é uma ligação dupla; e
onde X representa O, S ou NR4, e Z1-Z8 e R4 e R5 são como de- finidos abaixo;
com a condição de que quando Q1 na Fórmula (A) for C-ΝΗΦ, onde Φ é fenila opcionalmente substituída:
se o anel rotulado α for um anel de 6 membros contendo pelo me- nos um N como um membro de anel, pelo menos um R3 presente possa ser um substituinte polar, ou se cada R3 for H, então Φ possa ser substituído; e
se o anel rotulado α for fenila, e três de Z1-Z4 representarem CH, então Z2 não possa ser C-OR", e Z3 não possa ser NH2, NO2, NHC(=0)R" ou NHC(=0)-0R", onde R" é Ci-C4 alquila.
A invenção também inclui os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula (A). Por conseguinte em cada composto da in- venção, Fórmula (A) representa um sistema de anel tricíclico fundido que é ligado por outro Q1 ou Q2 para um grupo R51 que é também descrito abaixo.
Por conseguinte, fornecidos aqui são os compostos de Fórmulas
I, II, Ille IV:
Fórmula I
£ Fórmula
10
15
Fórmula
Fórmula IV
e seus sais, ésteres, pró-fármacos e tautômeros farmaceuticamente aceitá- veis deste; em que:
cada Z1, Z2, Z3, e Z4 é N ou CR3; cada um dentre Z5, Z6, Z7 e Z8 é CR6 ou N; cada R3 e cada R6 são independentemente H ou um grupo C1-C8 alquila, C2-Cs heteroalquila, C2-Cs alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-Ci0 arila, C5-C12 heteroarila, Cr-Ci2 arilalquila, ou Ce-Ci2 heteroarilalquila opcional- mente substituídos,
ou cada R3 e cada R6 podem ser halo, OR1 NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R1 NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, COOR, CONR2, OOCR, COR, ou NO2,
em que cada R é independentemente H ou Ci-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, Ci-C8 acila, C2-Cs heteroacila, C6-C10 arila, C5-Ci0 heteroari- la, C7-C12 arilalquila, ou C6-C12 heteroarilalquila,
e em que dois R no mesmo átomo ou em átomos adjacentes podem ser ligados para formar um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente contendo um ou mais Ν, O ou S;
e cada grupo R, e cada anel formado por ligação de dois grupos R juntos, são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintees se- lecionados de halo, =0, =N-CN, =N-OR', =NR', OR', NR12, SR' SO2R' SO2NR12, NR1SO2R', NR1COOR' NROR' CN, COOR' CONR12, OOCR', COR', e NO2,
em que cada R' é independentemente H, C1-C6 alquila, C2-Ce heteroalquila, C1-C6 acila, C2-Ce heteroacila, C6-C10 arila, C5-Cio heteroarila, C7-12 arilalquila, ou Ce-12 heteroarilalquila cada uma das quais são opcional- mente substituídas com um ou mais grupos selecionados de halo, C1-C4 al- • 15 quila, C1-C4 heteroalquila, C1-C6 acila, C1-C6 heteroacila, hidróxi, amino, e =O;
e em que dois R' podem ser ligados para formar um anel de 3 a 7 membros opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionados de N, OeS,
R4 é H ou membro opcionalmente substituído selecionado do
grupo que consiste em C1-C6 alquila, C2-Ce heteroalquila, e C1-C6 acila;
cada R5 é independentemente H ou um membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em anel Cno alquila, C2-io alquenila, C2.io heteroalquila, C3-8 carboxílico, e anel C3-8 heterocíclico op- cionalmente fundido a um carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente subs- tituído adicional; ou R5 é uma Cno alquila, C2-I0 alquenila, ou C2-I0 heteroal- quila substituída com um anel C3-8 carbocíclico ou anel C3.8 heterocíclico op- cionalmente substituído; e
em cada -NR4R5, R4 e R5 junto com N podem formar um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituído que pode opcionalmente conter um heteroátomo adicional selecionado de N, OeS como um membro de anel; com a condição de que quando -NR4R5 na Fórmula (I) for -ΝΗΦ, onde Φ é fenila opcionalmente substituída:
se pelo menos um dentre Z5-Z8 for N1 pelo menos um R3 presen- te possa ser um substituinte polar, ou se cada R3 for H, então Φ possa ser substituído; e
se cada um dentre Z5-Z8 é CR61 e três dentre Z1-Z4 representam CH1 então Z2 não possa ser C-OR", e Z3 não possa ser NH2, NO2, NHC(=0)R" ou NHC(=0)-0R", onde R" é C1-C4 alquila.
Em certas modalidades, são fornecidos os compostos tendo a estrutura das Fórmulas I1 II, III, e IV, e sais, ésteres e tautômeros farmaceuti- camente aceitáveis destes; em que:
cada Z1, Z2, Z31 e Z4 é N ou CR3; cada um dentre Z5, Z6, Z7 e Z8 é N ou CR6; nenhum, um ou dois dentre Z1-Z4 são N e nenhum, um ou dois dentre Z5-Z8 são N;
cada R3 e cada R6 são independentemente H ou um grupo Ci-Cs alquila opcionalmente substituída, C2-Ce heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2- Ce heteroalquenila, C2-Ce alquinila, C2-C8 heteroalquinila, Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-Ci0 arila, C5-Ci2 heteroarila, C7-Ci2 arilalquila, ou C6-Ci2 he- teroarilalquila,
ou cada R3 e cada R6 são independentemente halo, OR1 NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R1 NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, COOR, CONR2, OOCR, COR, substituinte polar, bioisóstero de carbóxi, COOH ou NO2, em que cada R é independentemente H ou Ci-C8 alquila, C2-C8
heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-Ci0 arila, C5-Ci0 heteroari- la, C7-Ci2 arilalquila, ou C6-C12 heteroarilalquila,
e em que dois R no mesmo átomo ou em átomos adjacentes podem ser ligados para formar um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente contendo um ou mais Ν, O ou S;
e cada grupo R, e cada anel formado por duas ligações dos gru- pos R entre si, são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes selecionados de halo, =0, =N-CN, =N-OR", =NR', OR', NR12, SR', SO2R11 SO2NR12, NR1SO2R1, NR1CONRi2, NR1COORi, NR1COR1, CN, COOR1, CONR12, OOCR1, COR1, e NO2, em que cada R1 é independentemente H, Ci-Ce alquila, C2-Ce
heteroalquila, C1-C6 acila, C2-Ce heteroacila, C6-Ci0 arila, C5-Cio heteroarila, C7-I2 arilalquila, ou C6--I2 heteroarilalquila cada uma das quais são opcional- mente substituídas com um ou mais grupos selecionados de halo, Ci-C4 al- quila, Ci-C4 heteroalquila, CrC6 acila, Ci-C6 heteroacila, hidróxi, amino, e =0;
e onde dois R1 podem ser ligados para formar um anel de 3 a 7 membros opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionados de N, OeS;
R4 é H ou um membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em Ci-C6 alquila, C2-C6 heteroalquila, e Ci-C6 acila;
cada R5 é independentemente H ou um membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em C1-10 alquila, C2_i0 alque- nila, C2_io heteroalquila, anel C3.8 carbocíclico, e anel C3.8 heterocíclico op- cionalmente fundido a um carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente subs- tituído adicional; ou R5 é uma Cno alquila, C2.io alquenila, ou C2.io heteroal- quila substituída com um anel C3.8 carbocíclico ou anel C3-8 heterocíclico op- cionalmente substituídos; e
em cada -NR4R5, R4 e R5 juntos com N podem formar um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituído que pode opcionalmente conter um heteroátomo adicional selecionado de N, OeS como um membro de anel;
com a condição de que quando -NR4R5 na Fórmula (I) for -ΝΗΦ, onde Φ é fenila opcionalmente substituída:
se todos dentre Z5-Z8 são CH ou um dentre Z5-Z8 for N, pelo me- nos um dentre Z1-Z4 é CR3 e pelo menos um R3 possa ser um substituinte não-hidrogênio; ou
se cada R3 é H, então Φ possa ser substituído; ou se todos dentre Z5-Z8 são CH ou um dentre Z5-Z8 for N, então Z2 não é C-OR", e Z3 não é NH2, NO2, NHC(=0)R" ou NHC(=0)-0R", onde R" é Ci-C4 alquila.
Em certas modalidades, A, dois, três ou quatro dentre Z51 Z61 Z7 e Z8 são N. Para as modalidades em que dois dentre Z51 Z6, Z7 e Z8 são N, os átomos de nitrogênio de anel podem ser adjacentes (por exemplo, áto- mos de nitrogênio em Z5 e Z61 Z6 e Z71 ou Z7 e Z8) ou pode ser separado por uma ou duas posições do anel (por exemplo, átomos de nitrogênio em Z5 e Z71 Z6 e Z8 ou Z5 e Z8). Em certas modalidades pelo menos um substituinte R3 é um substituinte polar, tal como um ácido carboxílico ou um sal, um éster ou um bioisóstero deste. Em algumas modalidades, pelo menos um R3 é um substituinte contendo ácido carboxílico ou um bioisóstero de carboxilato, ou um sal ou éster deste, por exemplo. Em algumas modalidades pelo menos, um R3 é um substituinte contendo ácido carboxílico ou um sal deste. A expressão "substituinte polar" tal como empregada aqui refere-
se a qualquer substituinte tendo um dipolo elétrico, e opcionalmente um momento de dipolo (por exemplo, um substituinte polar assimétrico tem um momento de dipolo e um substituinte polar simétrico não tem um momento de dipolo). Substituintes polares incluem substituintes que aceitam ou doam uma ligação de hidrogênio, e grupos que transportam pelo menos uma carga parcial positiva ou negativa em solução aquosa a níveis de pH fisiológico. Em certas modalidades, um substituinte polar é um que pode aceitar ou doar elétrons em uma ligação de hidrogênio não-covalente com outra porção química. Em certas modalidades, um substituinte polar é selecionado de um carbóxi, um bioisóstero de carbóxi ou outra porção derivada de ácido que existe predominantemente como um ânion em um pH que abrange de 7 a 8. Outros substituintes polares incluem, mas não estão limitados a, grupos que contêm um OH ou NH, um oxigênio éter, um nitrogênio amina, um enxofre ou nitrogênio oxidado, uma carbonila, uma nitrila, e um anel heterocíclico contendo nitrogênio ou contendo oxigênio seja aromático ou não-aromático. Em algumas modalidades, o substituinte polar representado por R3 é um carboxilato ou um bioisóstero de carboxilato. "Bioisóstero de carboxilato" ou "bioisóstero de carbóxi" tal como empregado aqui refere-se a uma porção a qual espera-se que seja carrega- da negativamente a um grau substancial em pH fisiológico. Em certas moda- lidades, o bioisóstero de carboxilato é uma porção selecionada do grupo que consiste em:
e sais e pró-fármacos dos antecedentes, em que cada R7 é independente- mente H ou um membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em C1-10 alquila, C2-10 alquenila, C2-10 heteroalquila, anel C3.8 carbocíclico, e anel C3.8 heterocíclico opcionalmente fundidos a um anel car- bocíclico ou heterocíclico adicional opcionalmente substituído; ou R7 é uma C1-10 alquila, C2-10 alquenila, ou C2-10 heteroalquila substituída com um anel C3 -β carbocíclico opcionalmente substituío ou anel C3.8 heterocíclico. Em cer- tas modalidades, o substituinte polar é selecionado do grupo que consiste em ácido carboxílico, éster carboxílico, carboxamida, tetrazol, triazol, carbo- ximetanossulfonamida, oxadiazol, oxotiadiazol, tiazol, aminotiazol e hidroxiti- azol. Em algumas modalidades, pelo menos um R3 presente é um ácido car- boxílico ou um sal, ou éster ou um bioisóstero deste. Em certas modalida- des, pelo menos um R3 presente é um substituinte contendo ácido carboxíli- co ou um sal, éster ou bioisóstero deste. Nas modalidades posteriores, o substituinte R3 pode ser uma C1-C10 alquila ou C1-Cio alquenila ligada a um ácido carboxílico (ou sal, éster ou bioisóstero deste), por exemplo, e em al- gumas modalidades, o substituinte R3 não é -NHCOOCH2CH3.
Em certas modalidades, pelo menos um dentre Z1-Z4 e Z5-Z8 é um átomo de nitrogênio, e um ou mais átomos de nitrogênio de anel podem ser posicionados no anel contendo Z1-Z4 ou no anel contendo Z5-Z8 tal que cada anel seja independentemente um anel de piridina, pirimidina ou anel de piridazina. Por exemplo, um ou mais átomos de nitrogênio com o anel Z5-Z8 podem ser organizados como seguem:
em que cada R6A, R6B, R6C e R60 é independentemente selecionado do substituintes R6 definidos acima com respeito aos compostos de Fórmula I, II, Ill ou IV. Em certas modalidades, nenhum dos dois adjacentes Z1-Z4 ou Z5-Z8 ambos são N.
Um substituinte polar pode estar em qualquer posição no anel contendo Z1-Z4 na Fórmula I, II, Ill ou IV, e o anel pode incluir A, dois, três ou quatro substituintes polares. Em certas modalidades, cada um dentre Z1-Z4 pode ser CR3 e um dos substituintes R3 podem ser um substituinte polar (por exemplo, um éster de ácido carboxilato ou carboxílico, ou um tetrazol) dis- posto em qualquer uma das posições no anel contendo Z1-Z4:
em que R3p é um substituinte polar e cada R3A, R3B, R3C e R30 é selecionado independentemente dos substituintes R31 tal como definido acima com res- peito aos compostos de Fórmula I1 II, Ill ou IV.
Em certas modalidades dos compostos nas Fórmulas preceden- tes, R4 é H. Em algumas modalidades, R4 é H ou CH3 e R5 é um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituído, que pode ser aromático, não- aromático, e carbocíclico ou heterocíclico, ou R5 é um grupo C1-10 alquila substituído com tal um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituídos. Nas modalidades específicas, R5 é um nel carbocíclico ou heterocíclico de cinco, seis ou sete membros opicionalmente substituídos, e algumas vezes é um anel de fenila opcionalmente substituído.
Em algumas modalidades relativas aos compostos de Fórmula I, R4 é H ou CH3 e R5 é uma fenila substituída com um ou mais halogênio (por exemplo, F, Cl) ou substituintes acetileno cujo substituintes algumas vezes estão no anel de fenila na posição 3, posição 4, posição 5, ou combinações destas (por exemplo, na posição 3 e 5).
R5 em certas modalidades é uma Cr2 alquila substituída com um substituinte de anel de fenila, piridila ou morfolino opcionalmente substi- tuído, ou substituído com -NR4R4 onde R4 é como definido acima (por exem- plo, R5 pode ser -N(CH3)2). O grupo polar representado por R3 em algumas
R3C
R3C modalidades é um substituinte de carbóxi, carboxialquila (por exemplo, car- boximetila), tetrazol ou amida (por exemplo, -CONH2). Em outras modalida- des, R3 representa um bioisóstero de carboxilato.
Um substituinte R6 em certas modalidades, tal como R68, algu- mas vezes é um substituinte NR4R5, tal como uma porção -NH-(Ci-C6 alqui- la) (por exemplo, -NH-CH3), por exemplo. Em algumas modalidades, o com- posto tem a estrutura de Fórmula I; R4 é H ou CH3; R5 é um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5, 6, ou sete membros opcionalmente substituídos, e al- gumas vezes é um anel de fenila opcionalmente substituído; e um R3 é um ácido carboxílico ou um sal, um éster ou um bioisóstero de carboxilato. Em algumas modalidades, o composto tem a estrutura de Fórmula I; R4 é H ou CH3; R5 é um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5, 6, ou sete membros opcionalmente substituídos, e algumas vezes é um anel de fenila opcional- mente substituído; e um ou dois dentre Z5, Z6, Z7 e Z8 são N. Em algumas modalidades dos compostos de fórmulas I, II, Ill ou
IV, cada um dentre Z1, Z2, Z3, e Z4 é CR3, e pelo menos um R3 é H, ou pelo menos dois R3 são H. Muitas vezes, pelo menos um R6 é H, ou pelo menos dois R6 são H. Em algumas modalidades, (i) cada Z1, Z2, Z3, Z4, Z5, Z6 e Z8 é CR3 e Z7 é nitrogênio; ou (ii) cada Z11 Z2, Z31 Z4, Z6, Z7 e Z8 é CR3 e Z5 é ni- trogênio; ou (iii) cada Z1, Z21 Z31 Z4, Z6, e Z8 é CR3 e cada um dentre Z5 e Z7 é nitrogênio. Cada R3 e/ou cada R6 presente em certas modalidades é hidro- gênio, a não ser que pelo menos um R3 presente é um substituinte polar. Em algumas modalidades, cada R3A, R3C, R301 R6A, R68, R6C e R60 é H e R38 é um substituinte polar (por exemplo, carboxilato, ácido carboxílico, tetrazol). Fornecido também aqui são os compostos de Fórmula (A) repre-
sentados por uma das Fórmulas V, VI, Vll ou VIII:
NR4R:5
Fórmula V Fórmula Vlll
e sais farmaceuticamente aceitáveis, ésteres, pró-fármacos e tautômeros destes; onde Z11 Z21 Z31 Z41 R4 e R são definidos acima com respeito aos compostos de fórmulas I, II, Ill e IV, e cada R6a e R6b é independentemente selecionado de um substituinte R6 definido acima com respeito aos compos- tos de fórmulas I, II, Ill e IV. Como os compostos de fórmulas I, II, Ill e IV, pelo menos um R3 presente é um substituinte polar, tal como um substituinte polar descrito acima. As modalidades descritas com respeito aos compostos de fórmulas I, II, Ill e IV também podemos ser aplicados a compostos de fórmulas V, VI, Vlle VIII.
Em certas modalidades, fornecidos são os compostos tendo
uma estrutura de Fórmulas V, VI, Vll e VIII, e sais farmaceuticamente aceitá- veis, ésteres e tautômeros destes; em que:
alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-CiO arila, C5-Ci2 heteroarila, C7-Ci2 arilalquila, ou C8-Ci2 heteroarilalquila opcional- mente substituído,
NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R1 SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, COOR, substituinte polar, bioisóstero de carbóxi, CONR2, OOCR, COR, ou NO2,
em que cada R é independentemente H ou CrC8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-Ci0 arila, C5-Ci0 heteroari- la, C7-Ci2 arilalquila, ou C6-Ci2 heteroarilalquila,
15
cada Z1, Z2, Z3, e Z4 são independentemente N ou CR3 e ne- nhum, um ou dois dentre Z1, Z2, Z3, e Z4 é N;
cada R31 R6a e R6b é independentemente H ou um grupo Ci-C8
20
ou cada R3, R6a e R6b independentemente é halo, OR, NR2, e onde dois R no mesmo átomo ou em átomos adjacentes po- dem ser ligados para formar um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente con- tendo um ou mais Ν, O ou S;
e cada grupo R, e cada anel formado por ligação ligação de dois grupos R juntos são opcionalmente substituídos com um ou mais substituin- tes selecionados de halo, =0, =N-CN, =N-OR', =NR', OR', NR12, SR', SO2R', SO2NR12, NR1SO2R', NR'CONR'2, NROOOR', NR1COR', CN, COOR', CONR'2, OOCR', COR', e NO2,
em que cada R' independentemente é H, C1-C6 alquila, C2-Ce heteroalquila, C1-C6 acila, C2-Ce heteroacila, C6-C10 arila, C5-C10 heteroarila, C7-I2 arilalquila, ou C6-i2 heteroarilalquila, cada uma das quais são opcio- nalmente substituídas com um ou mais grupos selecionados de halo, C1-C4 alquila, C1-C4 heteroalquila, C1-C6 acila, C1-C6 heteroacila, hidróxi, amino, e =0;
e onde dois R' podem ser ligados para formar um anel de 3 a 7
membros opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionado de N, OeS,
R4 é H ou membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em C1-C6 alquila, C2-Ce heteroalquila, e C1-C6 acila; cada R5 é independentemente H ou um membro opcionalmente
substituído selecionado do grupo que consiste em Cmo alquila, C2-io alqueni- la, C2-io heteroalquila, C3-8 carbocíclico, e anel C3-8 heterocíclico opcional- mente fundido a um carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente substituído adicional; ou R5 é uma Cmo alquila, C2_i0 alquenila, ou C2-10 heteroalquila substituída com um anel C3.8 carbocíclico ou anel C3-8 heterocíclico opcio- nalmente substituído; e
em cada -NR4R5, R4 e R5 juntos com N podem formar um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituído, que pode opcionalmente con- ter um heteroátomo adicional selecionado de N, O e S como um membro de anel;
contanto que se R5 na Fórmula IV for fenila, fenila substituída, -CH(CH3)-(CH2)3-NEt2, -(CH2)3-piperazina-(CH2)3-NH2, ciclo-hexano ou buti- Ia1 então um ou mais dentre os R3 são uma porção não-hidrogênio.
Em algumas modalidades relativas aos compostos de fórmulas V, VI, Vll e VIII, cada um dentre Z11 Z21 Z31 e Z4 é CR3, e pelo menos um R3 é H, ou pelo menos dois R3 são H. Freqüentemente, pelo menos um dentre R6a e R6b é H, e às vezes cada um dentre R6a e R6b são H. Em certas moda- lidades, cada R3 e/ou cada um dentre R6a e R6b presente são H, a não ser que pelo menos um R3 presente é um substituinte polar. Em algumas moda- lidades, cada R3A, R3C, R3d, R6a e R6b é H e R3b é um substituinte polar (por exemplo, bioisóstero de carboxilato, ácido carboxílico, tetrazol). Em certas modalidades relativas aos compostos de fórmula V,
R4 é H ou CH3 e R5 é um anel carbocíclico ou heterocíclico de cinco, seis ou sete membros opcionalmente substituído (por exemplo, anel de fenila opcio- nalmente substituída). Em algumas modalidades relativas aos compostos de fórmula V, R4 é H ou CH3 e R5 é um anel de fenila substituído com um ou mais halogênio (por exemplo, F, Cl) ou substituintes acetileno, cujo os subs- tituintes algumas vezes estão na posição 3, posição 4 ou posição 5, ou uma combinação destes (por exemplo, as posições 3 e 5). R5 em certas modali- dades é uma C1.3 alquila substituída com um substituinte de fenila, piridila, morfolino ou pirrolila opcionalmente substituídos, ou uma C1.3 alquila substi- tuída com um substituinte de hidroxila ou substituíram com um substituinte de -NR4R4, onde R4 é tal como definido acima (por exemplo, R5 pode ser - N(CH3)2). Um substituinte R6 em certas modalidades, tal como R6a ou R6b, às vezes é um substituinte NR4R5, tal como uma porção de -NH-(Ci-C6 alqui- la) (por exemplo, -NH-CH3), por exemplo. Fornecido também são os compostos das Fórmulas IX, Χ, Xl e
XII:
NR4R5
Fórmula IX
Fórmula X e sais farmaceuticamente aceitáveis, ésteres, pró-fármacos e tautômeros destes; onde Z1, Z2, Z31 Z41 R41 R5 e R6 são definidos acima com respeito aos compostos de fórmulas I, II, Ill e IV. Como com compostos de fórmulas I, II, Ill e IV, pelo menos um R3 presente é um substituinte polar, tal como um substituinte polar descrito acima (por exemplo, ácido carboxílico, carboxilato, tetrazol). Para compostos de fórmula IX, R4 e R5 não são ambos hidrogênio, e independentemente são H, -Y0 ou -LY1 onde Y0 é um anel de 5 membros opcionalmente substituído ou anel de 6 membros opcionalmente substituídos (por exemplo, anel heterocíclico ou anel carbocíclico cada um sendo arila ou não-arila), Y1 é um anel de arila de 5 membros opcionalmente substituídos ou anel de arila 6 membros opcionalmente substituído, e L é um Iigante de C1-C20 alquila ou Iigante C1-C20 alquileno.
Em algumas modalidades, fornecidos são os compostos tendo uma estrutura de Fórmulas IX, Χ, Xl e XII, e sais farmaceuticamente aceitá- veis, ésteres e tautômeros destes; em que:
cada Z1, Z2, Z3, e Z4 é N ou CR3 e nenhum, um ou dois dentre Z1, Z2, Z3, eZ4é N;
cada R3 e R6 é independentemente H ou um grupo Ci-Ce alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-Ci0 arila, C5-Ci2 he- teroarila, C7-Ci2 arilalquila, ou C6-Ci2 heteroarilalquila opcionalmente substi- tuída,
ou cada R3 e R6 podem ser halo, OR, NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR1 SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN1 CO- OR, polar substituinte, bioisóstero de carbóxi, CONR2, OOCR, COR, ou NO2, em que cada R é independentemente H ou Ci-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, CrC8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-C10 arila, C5-C10 heteroari- Ia1 C7-Ci2 arilalquila, ou C8-Ci2 heteroarilalquila,
e onde dois R no mesmo átomo ou nos átomos adjacentes po- dem ser ligados para formar um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente con- tendo um ou mais Ν, O ou S;
e cada grupo R1 e cada anel formado por ligação de dois grupos R juntos, são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes se- lecionados de halo, =0, =N-CN, =N-OR', =NR', OR', NR12, SR', SO2R', SO2NR12, NR1SO2R', NROONRi2, NROOOR', NR1COR', CN, COOR', CONR12, OOCR1, COR', e NO2,
em que cada R' é independentemente que H, Ci-Ce alquila, C2- C8 heteroalquila, C1-C6 acila, C2-C8 heteroacila, C6-C10 arila, C5-Cio heteroa- rila, C7-12 arilalquila, ou C8-I2 heteroarilalquila cada uma das quais são op- cionalmente substituídas com um ou mais grupos selecionados de halo, Ci- C4 alquila, C1-C4 heteroalquila, Ci-Ce acila, C1-C6 heteroacila, hidróxi, amino, e=0;
e em que dois R' podem ser ligados para formar um anel de 3 a 7 membros opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionados de N, OeS;
R4 é H ou membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em C1-C6 alquila, C2-C8 heteroalquila, e Ci-C8 acila;
cada R5 é independentemente H ou um membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em C1-10 alquila, C2.io alqueni- Ia, C2-I0 heteroalquila, anel C3-8 carbocíclico, e anel C3-8 heterocíclico opcio- nalmente fundidos a um carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente substi- tuído adicional; ou R5 é uma Cmo alquila, C2.io alquenila, ou C2.io heteroal- quila substituída com um anel C3.8 carbocíclico ou anel C3.8 heterocíclico op- cionalmente substituídos; e em cada -NR4R51 R4 e R5 juntos com N podem formar um anel
de 3 a 8 membros opcionalmente substituído, que pode opcionalmente con- ter um heteroátomo adicional selecionado de N, O e S como um membro de anel.
As modalidades descritas com relação aos compostos de fórmu-
las que I, II, III, IV, V, VI, Vll e Vlll também podem ser aplicadas aos com- postos de fórmulas IX, Χ, Xl e XII. Em algumas modalidades relativa aos compostos de fórmulas IX, Χ, Xl e XII, cada um dentre Z1, Z2, Z3, e Z4 é CR3, e pelo menos um R3 é H, ou pelo menos dois R3 são H. R6 é freqüentemente H, e em certas modalidades, cada R6 e R3 é H, a não ser que pelo menos um R3 presente é um substituinte polar. Em algumas modalidades, cada R3A, R3C, R3d e R6 é H e R3b é um substituinte polar (por exemplo, carboxilato, ácido carboxílico, tetrazol).
R4 é H ou CH3 e R5 é um anel carbocíclico ou heterocíclico de cinco, seis ou sete membros opcionalmente substituídos (por exemplo, anel de fenila op- cionalmente substituído). Em algumas modalidades relativas aos compostos ■ 15 de fórmula IX, R4 é H ou CH3 e R5 é um anel de fenila substituído com um ou mais halogênio (por exemplo, F, Cl) ou substituintes acetileno cujos substitu- intes algumas vezes estão na posição 3, posição 4 ou posição 5, ou uma combinação destes (por exemplo, as posição 3 e 5). R5 em certas modalida- des é uma C1-3 alquila substituída com uma fenila opcionalmente substituída, piridila, morfolino ou substituinte de pirrolila, ou uma C1-3 alquila substituída com um substituinte hidroxila ou substituída com um substituinte -NR4R4 (por exemplo, -N(CH3)2). R6 em certas modalidades algumas vezes é um substi- tuinte -NR4R5, tal como uma porção de -NH-(Ci-C6 alquila) (por exemplo, -NH-CH3), por exemplo. Fornecido também aqui são os compostos de Fórmulas, XII, XIV,
Em certas modalidades relativas aos compostos de fórmula IX,
XVe XVI:
R8 Fórmula Xlll
1COOH Fórmula XIV destes; em que:
Z5 é N ou CR6a;
cada R6A, R681 R6C e R8 é independentemente H ou um grupo C1-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, C1-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6- C10 arila, C5-C12 heteroarila, C7-C12 arilalquila, ou C6-C12 heteroarilalquila opcionalmente substituídas,
ou cada R6A, R661 R6C e R8 são independentemente halo, CF3, CFN, OR, NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NR- CONR2, NRCOOR, NRCOR, CN1 COOR, bioisóstero de carbóxi, CONR2l OOCR1 COR, ou NO2,
R9 é independentemente um grupo Ci-C8 alquila, C2-Ce hetero- alquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 hetero- alquinila, C1-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C8-Ci0 arila, C5-Ci2 heteroarila, C7- Ci2 arilalquila, ou C8-Ci2 heteroarilalquila opcionalmente substituídos, ou
R9 é independentemente halo, OR, NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R1 SO2NR2l NRSO2R1 NRCONR2l NRCOOR, NRCOR, CN1 CO- OR, CONR2, OOCR, COR, ou NO2, em que cada R é independentemente H ou Ci-C8 alquila, C2-C8
heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, C1-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-C10 arila, C5-C10 heteroari- la, C7-C12 arilalquila, ou C6-C12 heteroarilalquila,
e em que dois R no mesmo átomo ou em átomos adjacentes podem ser ligados para formar um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente contendo um ou mais Ν, O ou S; e cada grupo R, e cada anel formado por ligação de dois grupos R, são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes seleciona- dos de halo, =0, =N-CN1 =N-OR', =NR', OR', NR12, SR11 SO2R', SO2NR12l NR1SO2R11 NR'CONR'2, NR1COOR', NR1COR', CN, COOR', CONR12l OOCR', COR', e NO2l
em que cada R' é independentemente H, Ci-Ce alquila, C2-Ce heteroalquila, Ci-C6 acila, C2-C6 heteroacila, C6-Ci0 arila, C5-Ci0 heteroarila, C7-12 arilalquila, ou C6-I2 heteroarilalquila cada uma das quais são opcional- mente substituídas com um ou mais grupos selecionados de halo, C1-C4 al- quila, C1-C4 heteroalquila, CrC6 acila, Ci-C6 heteroacila, hidróxi, amino, e =0;
e em que dois R' podem ser ligados para formar um anel de 3 a 7 membros opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionado de N, OeS; η é O a 4; e
ρ é O a 4.
Em certas modalidades para compostos de Fórmulas XIII, XIV, XV e XVI, Z5 é N. Em algumas modalidades, R8 é uma porção de carbóxi, tal como um ácido carboxilato ou carboxílico. Em certas modalidades, R9 é se- lecionado de -C=CR, -C=CH, -CH3, -CH2CH3, -CF3, -CFN, -C=N, -OR ou halogênio. Em algumas modalidades R9 é selecionado de halogênio, -CsCR ou -CsCH. Em certas modalidades R9 é selecionado de halogênio ou -CsCH, e em algumas modalidades R9 é halogênio, é cloro, é bromo ou é -CbCH.
Fornecido também aqui é uma composição farmacêutica com-
preendendo um composto descrito aqui e um veículo farmaceuticamente aceitável. Composições farmacêuticas podem ser utilizadas em tratamentos descritos aqui.
Fornecidos também são os métodos para identificação de uma molécula-candidato que interage com uma proteína CK2 ou de PARP, que compreende: contactar uma composição contendo uma proteína CK2 ou de PARP e um composto descrito aqui com uma molécula-candidato sob condi- ções em que o composto e a proteína interage, e determina se a quantidade do composto interage com a proteína, é modulada relativo a uma interação de controle entre o composto e a proteína sem a molécula de candidata, por meio de que uma molécula-candidato que modula a quantidade do composto interagindo com a proteína relativa à interação de controle é identificada co- mo uma molécula-candidato que interage com a proteína. Em certas modali- dades, a proteína é uma proteína CK2, tal como uma proteína CK2 compre- endendo a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, 2 ou 3 ou uma vari- ante substancialmente idêntica desta, por exemplo. SEQ ID NO: 1 (NP 001886; isoforma a de subunidade alfa 1 de caseína ci- nase Il [Homo sapiensl)
1 msgpvpsrar vytdvnthrp reywdyeshv vewgnqddyq lvrklgrgky sevfeainit 61 nnekvvvkil kpvkkkkikr eikilenlrg gpniitladi vkdpvsrtpa Ivfehvnntd 121 fkqlyqtltd ydirfymyei Ikaldychsm gimhrdvkph nvmidhehrk Irlidwglae 181 fyhpgqeynv rvasryfkgp ellvdyqmyd ysldmwslgc mlasmifrke pffhghdnyd 241 qlvriakvlg tedlydyidk ynieldprfn dilgrhsrkr werfvhsenq hlvspealdf 301 Idkllrydhq srltareame hpyfytvvkd qarmgsssmp ggstpvssan mmsgissvpt 361 psplgplags pviaaanplg mpvpaaagaq q
SEQ ID NO: 2 (NP 808227: isoforma a de subunidade alfa 1 de caseína ci- nase Il fHomo sapiensl)
1 msgpvpsrar vytdvnthrp reywdyeshv vewgnqddyq lvrklgrgky sevfeainit 61 nnekvvvkil kpvkkkkikr eikilenlrg gpniitladi vkdpvsrtpa Ivfehvnntd 121 fkqlyqtltd ydirfymyei lkaldychsm gimhrdvkph nvmidhehrk lrlidwglae 181 fyhpgqeynv rvasryfkgp ellvdyqmyd ysldmwslgc mlasmifrke pffhghdnyd 241 qlvriakvlg tedlydyidk ynieldprfn dilgrhsrkr werfvhsenq hlvspealdf 301 ldkllrydhq srltareame hpyfytvvkd qarmgsssmp ggstpvssan mmsgissvpt 361 psplgplags pviaaanplg mpvpaaagaq q
SEQ ID NO: 3 (NP 808228: isoforma b de subunidade alfa 1 de caseína ci- nase Il [Homo sapiensl) 1 myeilkaldy chsmgimhrd vkphnvmidh ehrklrlidw glaefyhpgq eynvrvasry 61 fkgpellvdy qmydysldmw slgcmlasmi frkepffhgh dnydqlvria kvlgtedlyd 121 yidkynield prfndilgrh srkrwerfvh senqhlvspe aldfldkllr ydhqsrltar 181 eamehpyfyt vvkdqarmgs ssmpggstpv ssanmmsgis svptpsplgp lagspviaaa 241 nplgmpvpaa agaqq
Em algumas modalidades, a proteína é uma proteína de PARP1 tal como uma proteína de PARP compreendendo a seqüência de aminoáci- dos de SEQ ID NO: 4 ou uma variante substancialmente idêntica desta, por exemplo.
SEQ ID NO: 4 (NP 001609; família de poli(ADP-ribose)polimerase. membro 1 fHomo sapiensl)
1 maessdklyr veyaksgras ckkcsesipk dslrmaimvq spmfdgkvph wyhfscfwkv 61 ghsi rhpdve vdgfsei rwd dqqkvkktae aggvtgkgqd gigskaektl gdfaaeyaks 121 nrstckgcme kiekgqvrl s kkmvdpekpq lgmidrwyhp gcfvknreel gfrpeysasq 181 Ikgfsllate dkealkkqlp gvksegkrkg devdgvdeva kkkskkekdk dsklekalka 241 qndliwnikd elkkvcstnd lkellifnkq qvpsgesai1 drvadgmvfg allpceecsg 301 qlvfksdayy ctgdvtawtk cmvktqtpnr kewvtpkefr ei sylkklkv kkqdrifppe 361 tsasvaatpp pstasapaav nssasadkpl snmkiItlgk lsrnkdevka mieklggklt 421 gtankaslci stkkevekmn kkmeevkean i rvvsedf1q dvsastkslq elfl ahilsp 481 wgaevkaepv evvaprgksg aalskkskgq vkeeginkse krmkltlkgg aavdpdsgle 541 hsahvlekgg kvfsatlglν divkgtnsyy klqlleddke nrywifrswg rvgtvigsnk 601 Ieqmpskeda i eqfmklyee ktgnawhskn ftkypkkfyp leidygqdee avkkltvnpg 661 tksklpkpvq dli kmi fdve smkkamveye idlqkmplgk lskrqiqaay silsevqqav 721 sqgssdsqil dlsnrfytli phdfgmkkpp llnnadsvqa kvemldnlId i evaysl1rg 781 gsddsskdpi dvnyeklktd i kvvdrdsee aeii rkyvkn thatthsayd 1 evi di f ki e 841 regecqrykp fkqlhnrrll whgsrttnfa gi Isqgl ri a ppeapvtgym fgkgiyfadm 901 vsksanyyht sqgdpiglil lgevalgnmy elkhashisr lpkgkhsvkg lgkttpdpsa 961 nisldgvdvp Igtgissgvi dtsllyneyi vydiaqvnlk yllklkfnfk tslw
Em certas modalidades a proteína está em uma célula ou em um sistema livre de célula. A proteína, o composto ou a molécula em algumas modalidades estão em associação com uma fase sólida. Em certas modali- dades, a interação entre o composto e a proteína é detectada por um rótulo detectável onde em algumas modalidades a proteína compreende um rótulo detectável e em certas modalidades o composto compreende um rótulo de- tectável. A interação entre o composto e a proteína às vezes é detectada sem um rótulo detectável.
São fornecidos também os métodos para modular a atividade de uma proteína CK2 ou proteína de PARP que compreendem contactar um sistema compreendendo a proteína com um composto descrito aqui em uma quantidade eficaz para modular a atividade da proteína. Em certas modali- dades a atividade da proteína é inibida, e às vezes a proteína é uma proteí- na CK2, tal como uma proteína CK2 compreendendo a seqüência de amino- ácidos de SEQ ID NO: 1, 2 ou 3 ou uma variante substancialmente idêntica desta, por exemplo. Em algumas modalidades a proteína é uma proteína de PARP, tal como uma proteína de PARP compreendendo a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4 ou uma variante substancialmente idêntica desta, por exemplo. Em certas modalidades, o sistema é uma célula, e em outras modalidades o sistema é um sistema livre de célula. A proteína ou o composto pode estar em associação com uma fase sólida em certas modali- dades.
São fornecidos também os métodos para inibir a proliferação celular, que compreende contactar as células com um composto descrito aqui em uma quantidade eficaz para inibir a proliferação das células. As cé- lulas às vezes estão em uma linhagem de células, tais como uma linhagem de células de câncer (por exemplo, linhagem de células de câncer de mama, câncer de prostáta, câncer pancreático, câncer de pulmão, câncer hemopoi- ético, câncer colorretal, câncer de pele, câncer de ovário), por exemplo. Em algumas modalidades, a linhagem de células de câncer é uma linhagem de células de câncer de mama, câncer de próstata ou câncer pancreático. As células às vezes estão em um tecido, podem estar em um paciente, às ve- zes estão em um tumor, e algumas vezes estão em um tumor em um paci- ente. Em certas modalidades, o método também ompreende a indução da apoptose celular. As células algumas vezes são de um paciente que tem degeneração macular. São fornecidos também os métodos para tratamento de uma
condição relacionada com proliferação celular anormal compreendendo ad- ministrar um composto descrito aqui a um paciente com necessidade deste em uma quantidade eficaz para tratar a condição proliferativa celular. Em certas modalidades a condição proliferativa celular é um câncer associado a tumor. O câncer às vezes é de mama, próstata, pâncreas, do pulmão, color- retal, pele, ou ovário. Em algumas modalidades, a condição proliferativa ce- Iular é um câncer não-tumoral, tal como um câncer hematopoiético, por e- xemplo. A condição proliferativa celular é a degeneração macular em algu- mas modalidades.
São fornecidos também os métodos para tratamento de câncer ou um distúrbio inflamatório em um paciente com necessidade de tal trata- mento, compreendendo: administrar ao paciente uma quantidade terapeuti- camente eficaz de um agente terapêutico tal como descrito aqui; e adminis- trar ao paciente uma molécula que inibe PARP ou CK2 em uma quantidade que é eficaz para aumentar um efeito desejado do agente terapêutico. O a- gente terapêutico às vezes é um composto de fórmula TA1-1, TA2, TA3-1, TA4-1, TA5-1 ou TA6-1 como descrito aqui, ou um sal farmaceuticamente aceitável de um destes compostos. Em certas modalidades, a molécula que inibe PARP ou CK2 é um composto de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, Χ, Xl ou Xll como descrito aqui, ou um sal farmaceuticamente aceitável des- te. Em algumas modalidades, a molécula que inibe PARP ou CK2 é um composto conhecido mostrado acima, ou um composto em uma das Tabelas fornecidas aqui, ou um sal farmaceuticamente aceitável de um destes com- postos. Em algumas modalidades, o efeito desejado do agente terapêutico que é aumentado pela molécula que inibe PARP ou CK2 é uma redução em proliferação celular. Em certas modalidades, o efeito desejado do agente terapêutico que é aumentado pela molécula que inibe PARP ou CK2 é um aumento em apoptose em pelo menos um tipo de célula. O agente terapêuti- co em certas modalidades é: IX
I H \
N
ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, ou um isômero específico ou mistura de isômeros deste. Em algumas modalidades, o agente terapêutico e a molécula que inibe PARP ou CK2 são administrados substancialmente ao mesmo tempo. O agente terapêutico e a molécula que inibem PARP ou CK2 algumas vezes são simultaneamente usados pelo paciente. O agente terapêutico e a molécula que inibe PARP ou CK2 são combinados em uma composição farmacêutica em certas modalidades. Algumas modalidades são direcionadas a uma composição farmacêutica compreendendo agente tera- pêutico de qualquer uma das fórmulas TA1-1, TA2, TA3-1, TA4-1, TA5-1 ou TA6 misturado com uma molécula que inibe PARP ou CK2, ou um sal far- maceuticamente aceitável deste. Em algumas composições farmacêuticas, a molécula que inibe PARP ou CK2 é um inibidor de PARP e é um composto conhecido mostrado acima, ou é GPI 15427, GPI 16539. Em algumas moda- lidades, a molécula que inibe PARP ou CK2 é um composto de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, Χ, Xl ou Xll tal como descrito aqui, ou um sal farma- ceuticamente aceitável deste. Em algumas modalidades o agente terapêuti- co é um composto de fórmula TA2 ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. Uma composição terapêutica em certas modalidades compreende uma quantidade terapeuticamente efiicaz de um agente terapêutico da fór- mula TA2:
ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, ou uma mistura ou isômero específico de isômeros desta, misturada com uma quantidade de um inibidor de PARP ou um sal farmaceuticamente aceitável de um inibidor de PARP, em que o inibidor de PARP é selecionado do grupo que consiste em GPI 15427, GPI 16539, e os compostos conhecidos mostrados acima; e onde a quantidade do inibidor de PARP ou o sal farmaceuticamente aceitável de um inibidor de PARP é uma quantidade que é eficaz para aumentar um efeito desejado do agente terapêutico.
São também fornecidas as composições que compreendem um composto descrito aqui e uma proteína isolada. A proteína algumas vezes é uma proteína CK2, tal como uma proteína CK2 compreendendo a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, 2 ou 3 ou uma variante substancialmente idêntica destes, por exemplo. Em algumas modalidades, a proteína é uma proteína de PARP, tal como uma proteína de PARP compreendendo a se- qüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4 ou uma variante substancialmente idêntica destes, por exemplo. Certas composições compreendem um com- posto descrito aqui em combinação com uma célula. A célula pode ser de uma linhagem de células, tais como uma linhagem de células de câncer. Nas modalidades posteriores, a linhagem de células de câncer é às vezes um câncer de mama, câncer prostático, câncer pancreático, câncer do pulmão, câncer hemopoiético, câncer colorretal, câncer de pele, linhagem de células de câncer de ovário.
Estas e outras modalidades da invenção são descritas na des- crição que segue. Breve Descrição dos Desenhos Figura 1 descreve dados de ensaio mostrando inibição da ativi-
dade de CK2.
Figuras 2A e 2B mostram as concentrações plasmáticas médias dos compostos descritos aqui ao longo do tempo após administração intra- venosa e oral a camundongos de ICR. Figuras 3A e 3B mostram o volume do tumor ao longo do tempo
e peso de corpo ao longo do tempo, respectivamente, em animais de xeno- enxerto que transportam tumor administrando um composto descrito aqui. Figuras 3C e 3D ilustram efeitos do composto em tumores em animais individuais.
Figuras 4A e 4B mostram volume de tumor ao longo do tempo e peso de corpo ao longo do tempo, respectivamente, em animais de xenoen- xerto que transportam tumor administrando um composto descrito aqui. Modos de Realizar a Invenção
Compostos de fórmulas I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, Χ, XI, XII, XIII, XIV, XV e XVI pode exercer atividades biológicas que incluem, mas não estão limitadas a, inibição de proliferação celular, modulação da atividade de proteína cinase e modulação de atividade de polimerase. Compostos de tais Fórmulas podem modular atividade de CK2 e/ou atividade de PARP, por e- xemplo. Tais compostos por conseguinte podem ser utilizados em aplica- ções múltiplas por uma pessoa versada na técnica. Por exemplo, os com- postos descritos aqui podem constatar empregos que incluem, mas não es- tão limitados a, (i) modulação de atividade de cinase de proteína (por exem- plo, Atividade de CK2), (ii) modulação de atividade de polimerase (por e- xemplo, Atividade de PARP), (iii) modulação de proliferação celulares, (iv) modulação de apoptose, e (v) tratamentos de distúrbio relacionado com pro- liferação celulares (por exemplo, administração sozinha ou coadministração com outra molécula).
"Opcionalmente substituído" tal como empregado aqui indica que o grupo particular ou grupos sendo descritos não podem ter nenhum substi- tuintes de não-hidrogênio, ou o grupo ou grupos podem ter um ou mais substituintes de não-hidrogênio. Se não de outra forma especificado, o nú- mero total de tais substituintes que pode estar presente é igual ao número de átomos de H apresente na forma não-substituída do grupo sendo descri- to. Quando um substituinte opcional é ligado por uma ligação dupla, tal como um oxigênio de carbonila (=0), o grupo leva duas valências disponíveis, desse modo o número total de substituintes que pode ser incluído é reduzido de acordo com o número de valências disponíveis.
Os compostos da invenção têm freqüentemente grupos ionizá- veis a fim de serem capazes de preparação como sais. Neste caso, onde quer que a referência seja feita ao composto, é compreendido na técnica que um sal farmaceuticamente aceitável também pode ser empregado. Es- tes sais podem ser sais de adição de ácido envolvendo ácidos inorgânicos ou orgânicos ou os sais podem, no caso de formas acídicas dos compostos da invenção ser preparados de bases inorgânicas ou orgânicas. Freqüente- mente, os compostos são preparados ou empregados como sais farmaceuti- camente aceitáveis preparados como produtos de adição de ácidos ou ba- ses farmaceuticamente aceitáveis. Ácidos e bases farmaceuticamente acei- táveis adequados são bem-conhecidos na técnica, tais como ácidos clorídri- cos, sulfúricos, hidrômicos, acéticos, láticos, cítricos, ou tartáricos para for- mação de sais de adição de ácido, e hidróxido de potássio, hidróxido de só- dio, hidróxido de amônio, cafeína, várias aminas, e similares para formação de sais básicos. Métodos para preparação dos sais adequados são bem- estabelecidos na técnica. Em alguns casos, os compostos podem conter tanto um grupo funcional acídico quanto um básico em cujo caso eles podem ter dois grupos ionizados e ainda não ter nenhuma carga líquida.
Em alguns casos, os compostos da invenção contêm um ou mais centros quirais. A invenção inclui cada uma das formas de estereoiso- méricas isoladas assim como misturas de estereoisômeros em graus varia- dos de pureza quiral, incluindo misturas racêmicas. Ela também abrange os vários diastereômeros e tautômeros que podem ser formados. Os compos- tos da invenção também podem existir em mais de uma forma tautomérica; a descrição aqui de um tautômero é por conveniência somente, e também é subentendida abranger outros tautômeros da forma mostrada. Tais como empregados aqui, os termos "alquila", "alquenila" e
"alquinila" incluem radicais de hidrocarbila monovalentes de cadeia linear, de cadeia ramificada e cíclicos, e combinações destes, que contêm apenas C e H quando eles forem não-substituídos. Os exemplos compreendem metila, etila, isobutila, ciclo-hexila, ciclopentiletila, 2-propenila, 3-butinila, e similares. O número total de átomos de carbono em cada tal grupo é algumas vezes descrito aqui, por exemplo, quando o grupo pode conter até dez átomos de carbono isto pode ser representado como moC ou como C1-C10 ou Cmq. Quando heteroátomos (Ν, O e S tipicamente) são permitidos substituir áto- mos de carbono como em grupos heteroalquila, por exemplo, os números que descrevem o grupo, embora ainda escritos como por exemplo Ci-C6, representam a soma do número de átomos de carbono no grupo mais o nú- mero de tais heteroátomos que estão incluídos como substitutos para áto- mos de carbono no esqueleto do anel ou cadeia sendo descrita.
Tipicamente, os substituintes de alquila, alquenila e alquinila da invenção contêm moC (alquila) ou 2-10C (alquenila ou alquinila). De preferên- cia, eles contêm ^8C (alquila) ou 2.8C (alquenila ou alquinila). Algumas vezes eles contêm ^C (alquila) ou 2-4C (alquenila ou alquinila). Um único grupo pode incluir mais de um tipo de ligação múltipla, ou mais de uma ligação múltipla; tais grupos estão incluídos na definição do termo "alquenila" quan- do eles contêm pelo menos uma ligação dupla de carbono-carbono, e estão incluídos no termo "alquinila" quando eles contêm pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono.
Grupos alquila, alquenila e alquinila são freqüentemente opcio- nalmente substituídos na medida em que tal substituição faça sentido quimi- camente. Substituintes típicos incluem, mas não estão limitados a, halo, =O, =N-CN1 =N-OR, =NR1 OR, NR2, SR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, C=CR, COOR, CONR2, OOCR, COR, e NO2, em que cada R é independentemente H, Ci-Ce alquila, C2-Ce heteroalquila, Ci- C8 acila, C2-C8 heteroacila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, C6-C10 arila, ou C5-Ci0 heteroarila, e cada R é opcionalmente substituído com halo, =0, =N-CN, =N-OR', =NR', OR', NR12, SR', SO2R', SO2NR12, NR1SO2R', NR'CONR'2, NROOOR', NR1COR', CN, CsCR', COOR', CONR12, OOCR', COR', e NO2, em que cada R' é indepen- dentemente H, Ci-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, CrC8 acila, C2-C8 heteroa- cila, Ce-Ci0 arila ou C5-Ci0 heteroarila. Grupos alquila, alquenila e alquinila também podem ser substituídos por Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-Ci0 arila ou C5-Ci0 heteroarila, cada uma das quais pode ser substituída pelos substituintes que são adequados para o grupo particular.
Substituintes de "acetileno" são grupos 2-i0C alquinila que são opcionalmente substituídos, e são da fórmula -CeC-R3, em que Ra é H ou Ci-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C8-Cio arila, C5-Ci0 heteroarila, C7-Ci2 arilalquila, ou Ce-Ci2 heteroarilalquila, e cada grupo Ra é opcionalmente substituído com um ou mais
substituintes selecionados de halo, =0, =N-CN, =N-OR', =NR', OR', NR12, SR', SO2R', S02NR'2, NR1SO2R', NRiCONR12, NROOOR', NR-COR', CN, COOR', CONR'2, OOCR', COR', e NO2,
em que cada R' é independentemente que H, Ci-C6 alquila, C2- C6 heteroalquila, Ci-C6 acila, C2-C6 heteroacila, C6-Ci0 arila, C5-Ci0 heteroa- rila, C7-I2 arilalquila, ou C6-I2 heteroarilalquila cada uma das quais é opcio- nalmente substituída com um ou mais grupos selecionados de halo, Ci-C4 alquila, Ci-C4 heteroalquila, Ci-C6 acila, Ci-C6 heteroacila, hidróxi, amino, e =0; e em que dois R' podem ser ligados para formar um anel de 3 a 7 mem- bros opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionado de Ν, O e S. Em algumas modalidades, Ra de -CsC-Ra é H ou Me.
"Heteroalquila", "heteroalquenila", e "heteroalquinila" e outras mais são definidas similarmente aos grupos hidrocarbila correspondente (al- quila, alquenila e alquinila), mas os termos 'hetero' refere-se aos grupos que contêm 1-3 O, S ou N heteroátomos ou combinações destes no resíduo do esqueleto; por conseguinte pelo menos um átomo de carbono de um grupo alquila, alquenila, ou alquinila correspondente é substituído por um do hete- roátomos especificados para formar um heteroalquila, heteroalquenila, ou grupo heteroalquinila. Os tamanhos típicos e preferidos para heteroformas dos grupos alquila, alquenila e alquinila são geralmente iguais aos grupos hidrocarbila correspondentes, e os substituintes que podem estar presente nas heteroformas são iguais a aqueles descritos acima para os grupos hi- drocarbila. Por razões de estabilidade química, fica também compreendido que, a menos que de outra forma especificado, tais grupos não incluem mais de dois heteroátomos adjacentes exceto onde um grupo de oxo esteja pre- sente em N ou S como em um grupo nitro ou sulfonila.
Enquanto "alquila" tal como empregado aqui inclui grupos ciclo- alquila e cicloalquilalquila, o termo "cicloalquila" pode ser empregado aqui para descrever um grupo carbocíclico não-aromático que está conectado por um átomo de carbono de anel, e "cicloalquilalquila" pode ser empregado pa- ra descrever um grupo carbocíclico não-aromático que é conectado à molé- cuia por um Iigante de alquila. Semilarmente, "heterociclila" pode ser empre- gado para descrever um grupo cíclico não-aromático que contém um hetero- átomo pelo menos como um membro de anel e que é conectado à molécula por um átomo de anel, que pode ser C ou N; e "heterociclilalquila" pode ser empregado para descrever um tal grupo que é conectado à outra molécula por um ligante. Os tamanhos e substituintes que são adequados para os grupos cicloalquila, cicloalquilalquila, heterociclila, e heterociclilalquila são os mesmos como aqueles descritos acima para os grupos alquila. Tal como empregado aqui, estes termos também incluem anéis que contêm uma liga- ção dupla ou duas, contanto que o anel não seja aromático. Tal como empregado aqui, "acila" abrange grupos que compre-
endem um radical alquila, alquenila, alquinila, arila ou arilalquila ligados a uma das duas posições de valência disponíveis de um átomo de carbono de carbonila, e heteroacila refere-se aos grupos correspondentes onde pelo menos um carbono diferente do carbono de carbonila foi substituído por um heteroátomo selecionado de N, O e S. Por exemplo. Por conseguinte hete- roacila inclui -C(=0)0R e -C(=0)NR2 assim como -C(=0)- heteroarila.
Grupos acila e heteroacila são ligados a qualquer grupo ou mo- lécula para as quais eles estão ligados pela valência ampla do átomo de car- bono de carbonila. Tipicamente, eles são grupos Ci-Ce acila, incluindo gru- pos formila, acetila, pivaloíla, e benzoíla e grupo C2-Ce heteroacila incluindo metoxiacetila, etoxicarbonila, e 4-piridinoíla. Os grupos hidrocarbila, grupos arila, e heteroformas de tais grupos que compreendem um grupo acila ou heteroacila podem ser substituídos com os substituintes descritos aqui como substituintes geralmente adequados para cada um dos componentes corres- pondente do grupo acila ou heteroacila.
A porção "aromática" ou porção "arila" refere-se a uma porção bicíclica fundida ou monocíclica que tem as características assim conhecidas de aromaticidade; exemplos incluem fenila e naftila. Similarmente, "heteroa- romático" e "heteroarila" referem-se a tais sistemas de anéis monocíclicos ou bicíclicos fundidos que contêm como membros de anel um ou mais heteroá- tomos selecionados de O, S e Ν. A inclusão de um heteroátomo permite a aromaticidade em anéis de 5 membros assim como anéis de 6 membros. Sistemas heteroaromáticos típicos incluem grupos C5-Ce aromáticos monocí- clicos tais como piridila, pirimidila, pirazinila, tienila, furanila, pirrolila, pirazoli- la, tiazolila, oxazolila, e imidazolila e as porções bicíclicas fundidas formadas por fusão de um destes grupos monocíclicos com um anel de fenila ou com qualquer um dos grupos monocíclicos heteroaromáticos para formar um gru- po Cs-Cio bicíclico tais como indolila, benzimidazolila, indazolila, benzotriazo- lila, isoquinolila, quinolila, benzotiazolila, benzofuranila, pirazolopiridila, qui- nazolinila, quinoxalinila, cinolinila, e outras mais. Qualquer sistema bicíclico de anel monocíclico ou fundido que tem as características de aromaticidade nos termos de distribuição de elétron ao longo do sistema de anel é incluído nesta definição. Também inclui grupos bicíclicos onde pelo menos o anel que é diretamente ligado ao restante da molécula tem as características de aromaticidade. Tipicamente, os sistemas de anel contêm 5 a 12 átomos de membro de anel. De preferência heteroarilas monocíclicas contêm 5 a 6 membros de anel, e as heteroarilas bicíclicas contêm 8 a 10 membros de anel.
Porções de arila e heteroarila podem ser substituídas com uma variedade de substituintes incluindo CrCs alquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 aiquinila, C5-Ci2 arila, Ci-C8 acila, e heteroformas destas, cada uma das quais pode sozinha ser também substituída; outros substituintes para arila e porções de heteroarila compreendem halo, OR, NR2, SR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, C=CR, COOR, CONR2, OO- CR1 COR, e NO2, em que cada R é independentemente H, Ci-C8 alquila, C2- C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 aiquinila, C2- C8 heteroalquinila, C6-C10 arila, C5-Cio heteroarila, Cr-Ci2 arilalquila, ou Ce- Ci2 heteroarilalquila, e cada R é opcionalmente substituído tal como descrito acima para grupos alquila. Os grupos substituintes em um grupo arila ou he- teroarila podem naturalmente ser substituídos também com os grupos des- critos aqui como adequados para cada tipo de tais substituintes ou para ca- da componente do substituinte. Por conseguinte, por exemplo, um substituin- te de arilalquila pode ser substituídos na porção de arila com substituintes descritos aqui como típicos para grupos arila, e pode ser substituído na por- ção de alquila com substituintes descritos aqui como típicos ou adequados para os grupos alquila.
Similarmente, "arilalquila" e "heteroarilalquila" referem-se a site- mas de anel aromático e heteroaromático que são ligados ao ponto de Iiga- ção através de um grupo de ligação como um alquileno, incluindo Iigantes substituídos ou não-substituídos, saturados ou não-saturados, cíclicos ou acíclicos. Tipicamente o Iigante é CrCe alquila ou uma heteroforma desta. Estes Iigantes também podem incluir um grupo de carbonila, desse modo tornando-os capazes de fornecer substituintes como uma porção de acila ou heteroacila. Um anel de arila ou heteroarila em um grupo arilalquila ou hete- roarilalquila pode ser substituído com os mesmos substituintes descritos a- cima para grupos arila. De preferência, um grupo arilalquila compreende um anel de fenila opcionalmente substituído com os grupos definidos acima para grupos arila e um C1-C4 alquileno que é não-substituído ou é substituído com um ou dois grupos C1-C4 alquila ou grupos heteroalquila onde os grupos al- quila ou heteroalquila podem opcionalmente ciclizar para formar um anel tal como ciclopropano, dioxolano, ou oxaciclopentano. Similarmente, um grupo heteroarilalquila de preferência inclui um grupo C5-C6 monocíclico heteroarila que é opcionalmente substituído com os grupos descritos acima como subs- tituintes típicos em grupos arila e um C1-C4 alquileno que é não-substituído ou é substituídos com um ou dois grupos C1-C4 alquila ou grupos heteroal- quila, ou inclui um anel de fenila opcionalmente substituído ou C5-C6 mono- cíclico heteroarila e um C1-C4 heteroalquileno que é não-substituído ou é substituído com um ou dois grupos C1-C4 alquila ou heteroalquila onde o grupo alquila ou heteroalquila podem opcionalmente ciclizar para formar um anel tal como ciclopropano, dioxolano, ou oxaciclopentano.
Onde um grupo arilalquila ou heteroarilalquila é descrito como opcionalmente substituído, os substituintes podem estar ou na porção alquila ou heteroalquila ou na porção arila ou heteroarila do grupo. Os substituintes opcionalmente presentes na porção alquila ou heteroalquila são iguais como aqueles descritos acima para os grupos alquila geralmente; os substituintes opcionalmente presentes na porção arila ou heteroarila são iguais como a- queles descritos acima para grupos arila geralmente.
Grupos "arilalquila" tal como empregado aqui são grupos hidro- carbila se eles são não-substituído, e são descritos pelo número total de á- tomos de carbono no anel e alquileno ou Iigante similar. Desse modo um grupo benzila é um grupo C7-arilalquila, e feniletila é uma C8-arilalquila.
"Heteroarilalquila" tal como descrito acima refere-se a uma por- ção compreendendo um grupo arila que é ligado por um grupo de ligação, e difere de "arilalquila" em que pelo menos um átomo de anel da porção arila ou um átomo no grupo de ligação é um heteroátomo selecionado de Ν, O e S. Os grupos heteroarilalquila são descritos aqui de acordo com o número total de átomos no anel e Iigante combinado, e eles incluem grupos arila li- gados por um Iigante de heteroalquila; grupos heteroarila ligados por um Ii- gante de hidrocarbonila tal como um alquileno; e grupos heteroarila ligados por um Iigante de heteroalquila. Por conseguinte, por exemplo C7-heteroaril- alquila inclui piridilmetila, fenóxi, e N-pirrolilmetóxi.
"Alquileno" tal como empregado aqui refere-se a um grupo hi- drocarbila divalente; porque é divalente, ele pode ligar dois outros grupos entre si. Tipicamente ele refere-se a -(CHa)n- onde η é 1 a 8 e de preferência η é 1 a 4, embora onde especificado, um alquileno possa ser substituído por outros grupos, e pode ser de outros tamanhos, e as valências amplas não necessitam estar em terminações opostas de uma cadeia. Desse modo - CH(Me)- e -C(Me)2- também podem ser referidos como alquilenos, assim como um grupo cíclico tal como ciclopropan-1,1-dila. Onde um grupo alqui- leno é substituído, os substituintes incluem aqueles tipicamente presente nos grupos alquila tal como descrito aqui.
Em geral, qualquer grupo alquila, alquenila, alquinila, acila, ou arila ou arilalquila ou qualquer heteroforma de um destes grupos que está contida em um substituinte ela própria pode opcionalmente ser substituída por substituintes adicionais. A natureza destes substituintes é similar a aque- las citadas com respeito aos próprios substituintes primários se os substituin- tes não estiverem de outra forma descritos. Desse modo, onde uma modali- dade de, por exemplo, R7 é alquila, esta alquila pode opcionalmente ser substituída pelo substituintes restantes listados como modalidades para R7 onde isto faça sentido químico, e onde isto não questione o limite de tama- nho fornecido para a alquila de per si; por exemplo, alquila substituída por alquila ou por alquenila simplesmente estenderia o limite superior de átomos de carbono para estas modalidades, e não está incluída. Entretanto, alquila substituída por arila, amino, alcóxi, =0, e similares estaria incluída dentro do escopo da invenção, e os átomos destes grupos de substituintes não estão incluídos no número empregado para descrer o grupo alquila, alquenila, etc. que está sendo descrito. Onde nenhum número de substituintes é especifi- cado, cada tal grupo alquila, alquenila, alquinila, acila, ou arila pode ser substituído com vários substituintes de acordo com suas valências disponí- veis; em particular, qualquer um destes grupos pode ser substituído com á- tomos de flúor em qualquer ou todas as suas valências disponíveis, por e- xemplo.
"Heteroforma" tal como empregado aqui refere-se a um derivado
de um grupo tal como uma alquila, arila, ou acila, em que pelo menos um átomo de carbono do grupo carbocíclico designado foi substituído por um heteroátomo selecionado de N, O e S. Por conseguinte as heteroformas de alquila, aiquenila, alquinila, acila, arila, e arilalquila são heteroalquila, hetero- alquenila, heteroalquinila, heteroacila, heteroarila, e heteroarilalquila, respec- tivamente. Fica subentendido que não mais que dois átomos de Ν, O ou S são ordinariamente conectados seqüencialmente, exceto onde um grupo oxo é ligado a N ou S para formar um grupo nitro ou sulfonila.
"Halo", tal como empregado aqui inclui flúor, cloro, bromo e iodo. Flúor e cloro são freqüentemente preferidos.
"Amino" tal como empregado aqui refere-se a NH2, mas onde um amino é descrito como "substituída" ou "opcionalmente substituído", o termo inclui NR'R" em que cada R' e R" é independentemente H1 ou é um grupo alquila, alquenila, alquinila, acila, arila, ou arilalquila ou uma heteroforma de um destes grupos, e cada um dos grupos alquila, alquenila, alquinila, acila, arila, ou arilalquila ou heteroformas de um destes grupos é opcionalmente substituído com o substituintes descrito aqui quando adequado para o grupo correspondente. O termo também inclui formas em que R1 e R" são ligados entre si para formar um anel de 3 a 8 membro que pode ser saturado, não- saturado ou aromático e que contém 1 a 3 heteroátomos independentemen- te selecionados de N, O e S como membros de anel, e que é opcionalmente substituído com os substituintes descritos conforme adequados para grupos alquila ou, se NR'R" é um grupo aromático, é opcionalmente substituído com os substituintes descritos como típicos para grupos de heteroarila.
Tal como empregado aqui, o termo "carbociclo" refere-se a um composto cíclico que contém somente átomos de carbono no anel, enquanto que um "heterociclo" refere-se a um composto cíclico compreendendo um heteroátomo. As estruturas carbocíclicas e heterocíclicas abrangem compos- tos que têm sistemas de anéis monocíclicos, bicíclicos ou múltiplos.
Tal como empregado aqui, o termo "heteroátomo" refere-se a qualquer átomo que não seja carbono ou hidrogênio, tal como nitrogênio, oxigênio ou enxofre.
Exemplos ilustrativos de heterociclos incluem mas não estão limitados a tetra-hidrofurano, 1,3-dioxolano, 2,3-di-hidrofurano, pirano, tetra- hidropirano, benzofurano, isobenzofurano, 1,3-di-hidroisobenzofurano, iso- xazol, 4,5-di-hidroisoxazol, piperidina, pirrolidina, pirrolidin-2-ona, pirrol, piri- dina, pirimidina, octa-hidropirrolo[3,4 b]piridina, piperazina, pirazina, morfoli- na, tiomorfolina, imidazol, imidazolidina-2,4-diona, 1,3-di-hidrobenzimidazol- 2-ona, indol, tiazol, benzotiazol, tiadiazol, tiofeno, tiofeno-tetra-hidro 1,1- dióxido, diazepina, triazol, guanidina, diazabiciclo[2.2.1]heptano, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptano, 2,3,4,4a,9,9a-hexa-hidro-1H-3-carbolina, oxirano, oxetano, tetra-hidropirano, dioxano, lactonas, aziridina, azetidina, piperidina, lactans, e também podem abranger heteroarilas. Outros exemplos ilustrati- vos de heteroarilas incluem mas não estão limitados a furano, pirrol, piridina, pirimidina, imidazol, benzimidazol e triazol.
Tal como empregado aqui, o termo "substituinte inorgânico" refe- re-se a substituintes que não contém carbono ou contém carbono ligado a elementos diferente de hidrogênio (por exemplo, carbono elementar, monó- xido de carbono, dióxido de carbono, e carbonato). Exemplos de substituin- tes inorgânico compreendem mas não estão limitados a nitro, halogênio, a- zido, ciano, sulfonilas, sulfinilas, sulfonatos, fosfato, etc.
Os termos "tratar" e "tratando" tais como empregados aqui refe- rem-se a melhora, alívio, diminuição, e remoção dos sintomas de uma doen- ça ou condição. Uma molécula ou composto candidato descrito aqui pode estar em uma quantidade terapeuticamente eficaz em uma formulação ou medicamento que é uma quantidade que pode conduzir a um efeito biológi- co, tal como apoptose de certas células (por exemplo, células de câncer), redução ou proliferação de certas células, ou conduzir a melhora, alívio, di- minuição, ou remoção dos sintomas de uma doença ou condição, por exem- plo. Os termos também podem referir-se à redução ou interrupção de uma taxa de proliferação de celular (por exemplo, redução ou parada crescimento do tumor) ou redução do número de células de câncer proliferantes (por e- xemplo, remoção de parte ou a totalidade de um tumor). Estes termos tam- bém são aplicáveis à redução de um título de um micro-organismo em um sistema (isto é, célula, tecido, ou paciente) infectado com um micro-organis- mo, redução da taxa de propagação microbiana, redução do número de sin- tomas ou um efeito de um sintoma associado com a infecção microbiana, e/ou que remoção de quantidades detectáveis do micróbio do sistema. E- xemplos de micro-organismo incluem mas não estão limitados a vírus, bacté- ria e fungo.
Tal como empregado aqui, o termo "apoptose" refere-se a uma autodestruição ou programa de suicídio de célula intrínseca. Em resposta a uma provocação de estímulo, as células sofrem uma cascata de eventos incluindo retração celular, formação de flictena de membranas celulares e condensação e fragmentação cromática. Estes eventos culminam em con- versão celular à grupos de partículas ligadas à membrana (corpos apoptóti- cos), que são mais tarde tragados por macrófagos.
A invenção em parte fornece composições farmacêuticas que compreendem pelo menos um composto dentro do escopo da invenção co- mo descrito aqui, e métodos de uso de compostos descritos aqui. Por exem- pio, a invenção fornece em parte métodos para a identificação de uma molé- cula-candidato que interage com uma proteína CK2 ou de PARP, que com- preendem contactar uma composição que contém uma proteína CK2 ou de PARP e uma molécula descrita aqui com uma molécula-candidato e deter- minar se a quantidade da molécula descrita aqui que interage com a proteí- na é modulada, segundo o que uma molécula-candidato que modula a quan- tidade da molécula descrita aqui que interage com a proteína é identificada como uma molécula-candidato que interage com a proteína.
São fornecidos também métodos para a modulação da atividade de uma proteína CK2 ou proteína de PARP, que compreendem contactar um sistema que compreende a proteína com um composto descrito aqui em uma quantidade eficaz para modular (por exemplo, inibir) a atividade da pro- teína. O sistema em tais modalidades pode ser um sistema livre de células ou um sistema compreendendo células. São fornecidos também métodos para a redução da proliferação celular, e opcionalmente indução de apopto- se que compreendem contactar células com um composto descrito aqui em uma quantidade eficaz para reduzir a proliferação das células. As células em tais modalidades podem estar em uma linhagem de células, em um tecido ou em um paciente (por exemplo, um animal de pesquisa ou ser humano). Em modalidades relacionadas, composições são fornecidas compreendendo um composto descrito aqui em combinação com uma proteína ou célula, tal como uma proteína (por exemplo, proteína CK2 ou outra serina-treonina pro- teína cinase ou proteína de PARP isolada) ou uma célula em uma linhagem de células (por exemplo, linhagem de células HCT-116).
São fornecidos também os métodos para a modulação de uma atividade de serina-treonina proteína cinase. Serina-treonina proteína cina- ses catalisam a transferência de um gama fosfato de trifosfato de adenosina para um aminoácido de serina ou treonina em um substrato de peptídeo ou proteína. Desse modo, estão incluídos aqui métodos que compreendem con- tactar um sistema compreendendo uma proteína de serina-treonina proteína cinase com um composto descrito aqui em uma quantidade eficaz para mo- dular (por exemplo, inibir) a atividade da proteína. Em algumas modalidades, a atividade da serina-treonina proteína cinase é a atividade catalítica da pro- teína (por exemplo, catalisação da transferência de um gama fosfato de tri- fosfato de adenosina para um substrato de peptídeo ou proteína). Em certas modalidades, são fornecidos métodos para a identificação de uma molécula- candidato que interage com uma serina-treonina proteína cinase, que com- preendem: contactar uma composição contendo uma serina-treonina proteí- na cinase e um composto descrito aqui com uma molécula-candidato sob de condições nas quais o composto e a proteína interagem, e determinar se a quantidade do composto que interage com a proteína é modulada em rela- ção a uma interação de controle entre o composto e a proteína sem a molé- cula-candidato, segundo o que uma molécula-candidato que modula a quan- tidade do composto interagindo com a proteína em relação à interação de controle é identificada como uma molécula-candidato que interage com a proteína. Sistemas em tais modalidades podem ser um sistema livre de célu- las ou um sistema compreendendo células (por exemplo, in vitro). A proteí- na, o composto ou a molécula em algumas modalidades está em associação com uma fase sólida. Em certas modalidades, a interação entre o composto e a proteína é detectada por um rótulo detectável, onde em algumas modali- dades a proteína compreende um rótulo detectável e em certas modalidades o composto compreende um rótulo detectável. A interação entre o composto e a proteína às vezes é detectada sem um rótulo detectável.
A serina-treonina proteína cinase pode ser de qualquer fonte, tal como um mamífero, macaco ou ser humano, por exemplo. Exemplos de se- rina-treonina proteína cinases que podem ser inibidas por compostos descri- tos aqui incluem sem limitação versões humanas de CK2, CK2a2, Pim-1, CDK1/ciclinaB, c-RAF, Mer, MELK, DYRK2, Flt3, Flt3 (D835Y), Flt4, HIPK3, HIPK2, ZIPK e ZIPK. Uma serina-treonina proteína cinase às vezes é um membro de uma sub-família que contém um ou mais dos aminoácidos se- guintes em posições que correspondem a aquelas listadas em CK2 humana: Ieucina na posição 45, metionina na posição 163 e isoleucina na posição 174. Exemplos de tais proteínas cinases incluem sem limitação versões hu- manas de CK2, STK10, HIPK2, HIPK3, DAPK3, DYK2 e PIM-1. Seqüências de nucleotídeos e de aminoácidos para serina-treonina proteína cinases e reagentes estão publicamente disponíveis (por exemplo, URLs de Rede Mundial ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez/e lnvitrogen.com).
A invenção fornece também em parte métodos para o tratamen- to de uma condição relacionada à proliferação celular anormal. Por exemplo, são fornecidos métodos para o tratamento de uma condição proliferativa ce- lular em um paciente, que compreendem administrar um composto descrito aqui a um paciente com necessidade deste em uma quantidade eficaz para tratar a condição proliferativa celular. O paciente pode ser um animal de pesquisa (por exemplo, roedor, cachorro, gato, macaco), opcionalmente con- tendo um tumor tal como um tumor de xenoenxerto (por exemplo, tumor hu- mano), por exemplo, ou pode ser um ser humano. Uma condição proliferati- va celular às vezes é um câncer tumoral ou não-tumoral, incluindo mas não limitado a, cânceres do colorreto, mama, pulmão, fígado, pâncreas, Iinfono- do, cólon, próstata, cérebro, cabeça e pescoço, pele, fígado, rim, sangue e coração (por exemplo, leucemia, linfoma, carcinoma).
São fornecidos também os métodos para tratamento de uma condição relacionada à inflamação ou dor. Por exemplo, são fornecdios mé- todos de tratamento de dor em um paciente que compreendem administrar um composto descrito aqui a um paciente com necessidade deste em uma quantidade eficaz para tratar a dor. São fornecidos também os métodos de tratamento de inflamação em um paciente, que compreendem administrar um composto descrito aqui a um paciente com necessidade deste em uma quantidade eficaz para tratar a inflamação. O paciente pode ser um animal de pesquisa (por exemplo, roedor, cachorro, gato, macaco), por exemplo, ou pode ser um ser humano. Condições associadas com inflamação e dor in- cluem sem limitação refluxo ácido, azia, acne, alergias e sensibilidades, do- ença de Alzheimer, asma, aterosclerose, bronquite, cardite, doença celíaca, dor crônica, doença de Crohn, cirrose, colite, demência, dermatite, diabetes, olhos secos, edema, enfisema, eczema, fibromialgia, gastroenterite, gengivi- te, doença cardíaca, hepatite, pressão sangüínea alta, resistência à insulina, cistite intersticial, dor de articulação/ artrite/ artrite reumatoide, síndrome me- tabólica (síndrome X), miosite, nefrite, obesidade, osteopenia, osteoporose, doença de Parkinson, doença periodontal, poliarterite, policondrite, psoríase, esclerodermia, sinusite, síndrome de Sjõgren, cólon espástico, candidíase sistêmica, tendinite, infecções do caminho urinário, vaginite, câncer inflama- tório (por exemplo, câncer de mama inflamatório) e outras mais. Métodos para a determinação de efeitos de compostos aqui sob dor ou inflamação são conhecidos. Por exemplo, comportamentos de dor estimulados por for- malina em animais de pesquisa podem ser monitorados depois da adminis- tração de um composto descrito aqui para avaliar o tratamento da dor (por exemplo, Li e outros, Pain 115(1-2): 182-90 (2005)). Também, a modulação de moléculas pró-inflamatórias (por exemplo, IL-8, GRO-alfa, MCP-1, TNFaI- fa e iNOS) pode ser monitorada depois da administração de um composto descrito aqui para avaliar o tratamento da inflamação (por exemplo, Parhar e outros, Int J Colorectal Dis. 22(6): 601-9 (2006)), por exemplo. Por conse- guinte, são fornecidos também métodos para determinar se um composto aqui reduz inflamação ou dor, que compreendem contactar um sistema com um composto descrito aqui em uma quantidade eficaz para modular (por e- xemplo, inibir) a atividade de um sinal de dor ou sinal de inflamação. São fornecidos também os métodos para a identificação de um composto que reduz inflamação ou dor, que compreendem: contactar um sistema com um composto de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, Χ, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI; e detectar um sinal de dor ou sinal de inflamação, segundo o que um composto que modula o sinal de dor em relação a uma molécula de controle é identificado como um composto que reduz inflamação ou dor. Exemplos não limitadores de sinais de dor são comportamentos de dor estimulados por formalina e exemplos de sinais de inflamação incluem sem limitação um ní- vel de uma molécula pró-inflamatória.
A invenção também refere-se em parte a métodos para a modu- lação de angiogênese em um paciente, e métodos para o tratamento de uma condição associada com angiogênese anormal em um paciente. Por conse- guinte, são fornecidos métodos para determinar se um composto aqui modu- la angiogênese, que compreendem contactar um sistema com um composto descrito aqui em uma quantidade eficaz para modular (por exemplo, inibir) angiogênese ou um sinal associado com angiogênese. Sinais associados com angiogênese são níveis de um a fator de crescimento pró-angiogênese tal como VEGF. Métodos para avaliar a modulação de angiogênese também são conhecidos, tal como análise de formação de tubo endotelial humano (Sistema de Angiogênese BD BioCoat® de BD Biosciences). São fornecidos também os métodos para a identificação de um composto que modula angi- ogênese, que compreendem contactar um sistema com um composto de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, Χ, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI; e de- tectar angiogênese no sistema ou um sinal de angiogênese, segundo o que um composto que modula a angiogênese ou sinal de angiogênese em rela- ção a uma molécula de controle é identificado como um composto que mo- dula angiogênese. São fornecidos também os métodos para tratamento de uma condição de angiogênese, que compreendem administrar um composto descrito aqui a um paciente com necessidade deste em uma quantidade efi- caz para tratar a condição de angiogênese. Condições de angiogênese in- cluem sem limitação cânceres de tumores sólidos, doença varicosa e outras mais.
Qualquer formulação adequada de um composto descrito acima pode ser preparada para administração. Qualquer via adequada de adminis- tração pode ser empreda, incluindo, mas não limitada a, vias orais, parente- rais, intravenosas, intramusculares, transdérmicas, tópicas e subcutâneas. Dependendo do paciente a ser tratado, do modo de administração, e do tipo de tratamento desejado - por exemplo, prevenção, profilaxia, terapia; os compostos são formulados de maneiras consoantes com estes parâmetros. A preparação de formulações adequadas para cada via de administração é conhecida na técnica. Um resumo de tais métodos e técnicas de formulação é encontrado em Remington's Pharmaceutical Sciences, edição mais recen- te, Mack Publishing Co., Easton1 PA, o qual está incorporado aqui por refe- rência. A formulação de cada substância ou da combinação de duas subs- tâncias geralmente incluirá um diluente assim como, em alguns casos, adju- vantes, tampões, conservantes e similares. As substâncias a serem adminis- tradas também podem ser administradas em composições lipossômicas ou como microemulsões.
Para injeção, as formulações podem ser preparadas em formas convencionais como soluções ou suspensões líquidas ou como formas sóli- das adequadas para solução ou suspensão em líquido antes da injeção ou como emulsões. Excipientes adequados incluem, por exemplo, água, solu- ção salina, dextrose, glicerol e similares. Tais composições também podem conter quantidades de substâncias auxiliares não-tóxicas tais como agentes umectantes ou emulsificantes, agentes de tamponamento de pH e similares, tais como, por exemplo, acetato de sódio, monolaurato de sorbitano, e assim por diante.
Vários sistemas de liberação prolongada para fármacos também foram planejados, e podem ser aplicados a compostos da invenção. Veja, por exemplo, Patente dos Estados Unidos N0 5.624.677, os métodos da qual estão incorporados aqui por referência. A administração sistêmica também pode incluir métodos relati-
vamente não-invasivos tais como o uso de supositórios, emplastros trans- dérmicos, liberação transmucosa e administração intranasal. A administra- ção oral também é adequada para compostos da invenção. Formas adequa- das incluem xaropes, cápsulas, comprimidos, como é entendido na técnica. Para administração à pacientes animais ou humanos, a dosa-
gem adequada de um composto descrito acima freqüentemente é 0,01 a 15mg/kg, e às vezes 0,1 a 10 mg/kg. Os níveis de dosagem são dependen- tes da natureza da condição, eficácia do fármaco, da condição do paciente, do diagnóstico do médico, e da freqüência e modo de administração; entre- tanto, a otimização de tais parâmetros está dentro do nível ordinário de ver- satilidade na técnica. Combinações Terapêuticas
A invenção fornece métodos para tratar condições tais como câncer e inflamação administrando-se a um paciente com necessidade de tal tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente terapêuti- co que se liga a certos segmentos de DNA e administrando-se ao mesmo paciente um modulador de PARP ou CK2 em uma quantidade que seja efi- caz para realçar a atividade do agente terapêutico. Um modulador de PARP ou CK2 é um agente que inibe ou realça uma atividade biológica de uma proteína de PARP ou uma proteína CK2, e é genericamente referido aqui a seguir como um "modulador". O agente terapêutico e o modulador podem ser administrados juntos, ou como composições farmacêuticas separadas ou misturados em uma única composição farmacêutica. O agente terapêutico e o modulador também podem ser administrados separadamente, inclusive em momentos diferentes e com freqüências diferentes, contanto que o modula- dor seja administrado em um momento que aumente a potência do agente terapêutico. O modulador pode ser administrado por qualquer via conhecida, tal como oral, intravenal, intramuscular, nasalmente, e outras mais; e o agen- te terapêutico também pode ser administrado por qualquer via convencional. Em muitas modalidades, pelo menos um e opcionalmente ambos o modula- dor e o agente terapêutico podem ser administrados oralmente.
Em algumas modalidades, o modulador e o agente terapêutico são administrados ao mesmo tempo, seja em dosagens separadas ou mistu- rados em uma única dosagem. Onde a freqüência de administração dos dois materiais pode ser ajustada para compatibilidade, o modulador e o agente terapêutico são de preferência combinados em uma única composição far- macêutica, de modo que o paciente tratado possa receber uma única dosa- gem oral ou uma única injeção, por exemplo.
A quantidade de cada um destes materiais a ser administrada variará com a via de administração, a condição do paciente, outros tratamen- tos sendo administrados ao paciente, e outros parâmetros. Os agentes tera- pêuticos da invenção podem, certamente, causar múltiplos efeitos deseja- dos; e a quantidade de modulador a ser empregada em combinação com o agente terapêutico deve ser uma quantidade que aumente um ou mais des- tes efeitos desejados. O modulador deve ser administrado em uma quanti- dade que seja eficaz para relaçar um efeito desejado do agente terapêutico. Uma quantidade é "eficaz para realçar um efeito desejado do agente tera- pêutico", tal como empregado aqui, se ela aumenta em pelo menos cerca de 25% pelo menos um dos efeitos desejados do agente terapêutico sozinho. De preferência, ela é uma quantidade que aumenta um efeito desejado do agente terapêutico em pelo menos 50% ou em pelo menos 100% (isto é, dobra a atividade eficaz do agente terapêutico). Em algumas modalidades, ela é uma quantidade que aumenta um efeito desejado do agente terapêuti- co em pelo menos 200%.
A quantidade de um modulador que aumenta um efeito desejado de um agente terapêutico pode ser determinada empregando-se métodos in vitro, tais como ensaios de proliferação celular. Os agentes terapêuticos da invenção são úteis para oporem-se a distúrbios hiperproliferativos tais como câncer, por conseguinte eles reduzem a proliferação celular. Desse modo, por exemplo, uma quantidade adequada de um modulador pode ser a quan- tidade necessária para realçar um efeito anti-proliferativo de um agente tera- pêutico em pelo menos 25% como determinado em um ensaio de prolifera- ção celular.
O modulador empregado na presente invenção realça pelo me- nos um efeito desejado produzido pelo agente terapêutico que é empregado, por conseguinte as combinações da invenção fornecem um efeito sinérgico, não simplesmente um efeito aditivo. Os próprios moduladores são às vezes úteis para o tratamento dos mesmos tipos de condições, e por conseguinte também podem ter algum efeito direto em tais ensaios. Neste caso, a "quan- tidade eficaz para aumentar um efeito desejado" deve ser um realce sinérgi- co da atividade do agente terapêutico que é atribuível ao realce pelo modu- lador de um efeito do agente terapêutico, em vez de um efeito aditivo sim- pies que seria esperado com a administração separada dos dois materiais. Em muitos casos, o modulador pode ser empregado em uma quantidade (concentração) que não se espera ter qualquer efeito visível sobre o pacien- te tratado ou no ensaio in vitro, por conseguinte o efeito aumentado obtido com a combinação é diretamente atribuível a um efeito sinérgico.
A presente invenção inclui métodos e composições para o tra- tamento de um paciente tendo um distúrbio de proliferação celular ou um distúrbio inflamatório com um agente terapêutico como descrito aqui, e um "modulador" descrito acima, onde o momento de administração do modula- dor permite a este realçar um efeito desejado do agente terapêutico.
Os moduladores de PARP e CK2 são conhecidos. Os inibidores de PARP são bem-conhecidos na técnica, e foi mostrado que alguns poten- cializam a atividade de outros fármacos para certos usos. Por exemplo, foi relatado que o tratamento de uma colônia de células de carcinoma com um inibidor de PARP a uma concentração que não teve nenhuma inibição de crescimento substancial ou toxicidade celular sozinho aumentou a atividade dos agentes citotóxicos temozolomida e topotecana substancialmente. C. R.
" 15 Calabrese, e outros, Clin. Câncer Res., vol. 9, 2711-18 Oulho de 2003). A- credita-se que este efeito está relacionado ao papel que PARP desempenha em reparo de DNA: porque PARP promove reparo de DNA danificado, acre- dita-se que ele aumenta os efeitos de compostos que agem danificando o DNA. Estes incluem compostos que alquilam o DNA, os quais podem incluir temozolomida, e inibidores de topoisomerase tais como topotecanos. Id.
A presente invenção refere-se ao uso de um "modulador" tal co- mo descrito acima em combinação com um agente terapêutico que pode agir ligando-se a regiões de DNA que podem formar certas estrutura quadrúplex; os agentes terapêuticos têm atividade de anticâncer isoladamente, mas sua atividade é realçada quando eles são usados em combinação com um mo- dulador. Este efeito sinérgico permite para o agente terapêutico ser adminis- trado em uma dosagem mais baixa embora obentedo-se níveis equivalentes ou mais altos de pelo menos um efeito desejado.
Os agentes terapêuticos da invenção são compostos que ligam a certos motivos em ácidos nucleicos. O agente terapêutico a ser emprega- do pode ser selecionado de várias classes diferentes de compostos, tais como aqueles que se ligam a regiões de formação quadrúplex de DNA. Os agentes terapêuticos são úteis para o tratamento de câncer e outras indica- ções tais como distúrbios inflamatórias, e métodos para produção e uso de- les são conhecidos na técnica. Várias classes preferidas destes agentes te- rapêuticos são descritas abaixo. Cada classe de agentes terapêuticos pode ser empregada em combinação com qualquer inibidor de PARP ativo, inclu- indo mas não limitado a aqueles descritos aqui.
Em um aspecto, o agente terapêutico pode ser um composto de fórmula (TA1-1):
e sais, ésteres e pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis deste;
em que V é H, halo, ou NR1R2;
A é H, flúor, ou NR12;
Zé O, S, NR1 ou CH2;
U é OR2 ou NR1R2;
X é OR2, NR1R21 halo, azido, ou SR2;
η é 1 - 3;
em que em NR1R2, R1 e R2 podem formar uma ligação dupla ou um anel cada dos quais são opcionalmente substituídos;
R1 é H ou um C1-6 alquila;
R2 é H ou uma Cno alquila ou C2.«> alquenila opcionalmente contendo um ou mais heteroátomos não-adjacentes selecionados de N, O, e S, e opcionalmente substituído com um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou R2 é um opcionalmente substituído anel heterocíclico, arila ou heteriarila;
R5 é um substituinte em qualquer posição em W; e é H, OR2, C1-6 alquila, C2-6 alquenila, cada um opcionalmente substituído por halo, =O
o ou um ou mais heteroátomos; ou R5 é um substituinte inorgânico; e
W é uma arila ou heteroarila opcionalmente substituída que pode ser monocíclica ou fundida com um anel único ou múltiplo e opcionalmente contendo um heteroátomo;
ou um composto tendo a fórmula (TA1-2)
>\ w
(TÀ.1-2)
em que V, V, A, X, Z e U são tais como definidos na fórmula TA1-1, e W é selecionado do grupo que consiste em
N'XR5
N^A'
Rs
Ql_2 ~\Q
NX053
R5
Ql ,
- λ2
-vQ3
IN r5
K
Q
;q2
JVW
I
-'.Q3 NX s
R5
'X
Yr5
Y R5
10
O e
em que Q, Q11 Q21 e Q3 são independentemente CH ou N;
Y é independentemente O, CH1 =O ou NR1; e R5 é tal como definido na fórmula 1.
Os compostos desta estrutura, e métodos para preparar e em- pregar, são descritos em Patente dos Estados Unidos N0 . 11/106.909, para Whitten, e outros, que é intitulado "SUBSTITUTED QUINOBENZOXAZINE ANALOGS AND METHODS OF USING THEREOF", e foi arquivado em 15 de abril de 2005.
Em uma modalidade específica dos agentes terapêuticos de fórmula (TA1-1), o agente terapêutico é um composto de fórmula (TA1-1A):
o o 10
15
20
ou um sal, ésteres ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável deste, ou um isômero específico ou mistura de isômeros deste.
Em outro aspecto, o agente terapêutico das combinações da invenção é um composto desta fórmula:
(TÂ3-Í)
e sais, ésteres e pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis deste;
em que V é H, halo, ou NR1R2;
A é H, flúor, ou NR12;
Zé O, S, NR1 ou CH2;
U é OR2 ou NR1R2;
X é OR21 NR1R2, halo, azido, ou SR2;
η é 1 - 3;
onde em NR1R2, R1 e R2 podem formar uma ligação dupla ou um anel, cada um dos quais são opcionalmente substituídos;
R1 é H ou um C1-6 alquila;
R2 é H ou uma Cno alquila ou C2.io alquenila opcionalmente contendo um ou mais heteroátomos não-adjacentes selecionados de N, O, e S, e opcionalmente substituído com um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou R2 é um anel heterocíclico opcionalmente substituído, arila ou heteroarila;
R5 é um substituinte em qualquer posição em W; e é H, OR2, Ci-6 alquila, C2-6 alquenila, cada um opcionalmente substituído por halo, =O ou um ou mais heteroátomos; ou R5 é um substituinte inorgânico; e
W é uma arila ou heteroarila opcionalmente substituída, que po- de ser monocíclica ou fundida com um anel único ou múltiplo e opcionalmen- te contendo um heteroátomo; ou um composto tendo a fórmula (TA3-2) VO0 A.
em que V, A, X, Z e U são tais como definidos na fórmula 1, e W é selecio- nado do grupo que consiste em
r5
N'Xr5
NL A-
r5
QU
r5
m\q3 nr5
Q
;q2
ΛΛ/V
I
-'.Q3 N\, r5
em que Q, Q11 Q21 e Q3 são independentemente CH ou N;
Y é independentemente O, CH1 =O ou NR1; e
R5 é tal como definido na fórmula 1.
A preparação e atividade destes compostos de fórmula (TA3-1) são descritos em Patente dos Estados Unidos N0 . 60/811.992, 8 de junho de 2006, para Nagasawa, e outros, intitulados "QUINOLONE ANALOGS DERIVATIZED WITH SULFONIC ACID, SULFONATE OR SULFONAMIDE".
Em outro aspecto, o agente terapêutico das combinações da invenção é um composto desta fórmula:
(TA4-Í)
e sais, ésteres e pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis deste;
em que Β, X, A, ou V está ausente se Z2, Z31 ou Z4, respectiva- mente, for N, e independentemente H, halo, azido, R2, CH2R21 SR2, OR2 ou NR1R2 se Z21 Z3, ou Z4, respectivamente, é C; ou
A e V, A e X, ou X e B podem formar um anel carbocíclico, anel heterocíclico, arila ou heteroarila cada um dos quais podem ser opcional- mente substituído e/ou fundido com um anel cíclico; Zé O, S, NR1, CH2, ou C=O;
Z11 Z21 Z3 e Z4 são C ou N, contanto que quaisquer de dois N sejam não-adjacentes;
W junto com NeZ formam um anel de 5 ou 6 membros que é fundido com um anel saturado ou não-saturado opcionalmente substituído; o referido anel saturado ou não-saturado pode conter um heteroátomo e mo- nocíclico ou fundido com um úncico ou múltiplos anéis carbocíclicos ou hete- rocíclicos;
U é R21 OR21 NR1R21 NR1-(CR12)n-NR3R4l ou N=CR1R21 onde em N=CR1R2R1 e R2 juntos com C podem formar um anel,
Desde que U não seja H, e quando U for OH1 OR2 ou NH2, então pelo menos um dentre Z1-Z4 é N;
em cada NR1R2, R1 e R2 junto com N pode formar um anel op- cionalmente substituído; em NR3R4, R3 e R4 junto com N pode formar um anel opcional-
mente substituído;
R1 e R3 são independentemente H ou C1-6 alquila; cada R2 é H, ou uma Cmo alquila ou C2_io alquenila cada uma opcionalmente substituída com um halogênio, um ou mais heteroátomos não-adjacentes, um anel carbocíclico, um anel heterocíclico, uma arila ou heteroarila, em que cada anel é opcionalmente substituído; ou R2 é um anel carbocíclico opcionalmente substituído, anel heterocíclico, arila ou heteroari- la;
R4 é H, uma C-mo alquila ou C2.io alquenila opcionalmente con- tendo um ou mais heteroátomos não-adjacentes selecionados de N, O e S, e opcionalmente substituído com um anel carbocíclico ou heterocíclico; R3 e R4 junto com N pode formar um anel opcionalmente substituído;
cada R5 é um substituinte em qualquer posição no anel W; e é H, OR2, amino, alcóxi, amido, halogênio, ciano ou um substituinte inorgânico; ou R5 é Cr6 alquila, C2-6 alquenila, C2-6 alquinila, -CONHR1, cada um opcio- nalmente substituído por halo, carbonila ou um ou mais heteroátomos não- adjacentes; ou dois adjacentes de R5 são ligados para obter um anel hetero- 10
cíclico ou carbocíclico de 5 a 6 membros opcionalmente substituídos que podem ser fundidos a um anel carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente substituído adicional; e né 1 - 6.
Na fórmula acima (TA4-1), B pode estar ausente quando Z1 é N1 ou é H ou um halogênio quando Z1 for C.
Na fórmula acima (TA4-1), Wjunto com NeZ forma um anel de ou 6 membros opcionalmente substituído que é fundido com uma arila ou heteroarila opcionalmente substituída selecionadas do grupo que consiste em:
,V5
(R5)n
N (R5)n
(R5)n Q
Xs
Q (R5)n
CL Jà
(R5)n
em que cada Q1 Q11 Q21 e Q3 é independentemente CH ou N; Y é independentemente O, CH1 C=O ou NR1; η e R5 é tal como definido acima.
Em outras modalidades, W junto com NeZ formam um grupo tendo a fórmula selecionada do grupo que consiste em
10
<tf
(R5)n
<\TJ\S\j
(R5)n
em que Z é O, S, CR11 NR11 ou C=O;
cada Z5 é CR61 NR11 ou C=O, contanto que Z e Z5 se adjacentes 1.
não sejam ambos NR ;
cada R1 é H1 Ci.6 alquila, COR2 ou S(O)pR2 em que ρ é 1-2; R6 é H, ou um substituinte conhecido na técnica, incluindo mas 10
15
20
não limitado a hidroxila, alquila, alcóxi, halo, amino, ou amido; e
o anel S e anel T pode saturado ou não-saturado.
Em algumas modalidades, W junto com NeZ formam um anel de 5 ou 6 membros que é fundido com uma fenila. Em outras modalidades, W junto com NeZ formam um anel de 5 ou 6 membros que é opcionalmente fundido com outro anel, quando U for NR1R2, contanto que U não seja NH2. Em certas modalidades, W junto com NeZ formam um anel de 5 ou 6 membros que não é fundido com outro anel, quando U é NR1R2 (por exem- plo, NH2).
Ainda em outras modalidades, os compostos da presente inven- ção têm a fórmula geral (TA4-2A) ou (TA4-2B):
25
(ΓΑ4-2Α) <TA4-2B)
em que A, B, V, X, U, Z, Z1, Z2, Z3, Z4 e n são tais como descritos para TA4- 1;
Z5 é O, NR1, CR6, OU C=O;
R6 é H, alquila de C1.6, hidroxila, alcóxi, halo, amino ou amido; e
Z e Z5 podem opcionalmente forma um ligação dupla.
Na fórmula acima (TA4-1), (TA4-2A) e (TA4-2B), U podem ser NR1R2, em que R1 é H, e R2 é uma C1-10 alquila opcionalmente substituída com um heteroátomo, uma C3-6 cicloalquila, arila ou um anel de 5 a 14 mem- bros heterocíclico contendo um ou mais N, O ou S. Por exemplo, R2 pode ser uma C1-10 alquila substituída com uma morfolina, tiomorfolina, imidazol, aminoditiadazol, pirrolidina, piperazina, piridina ou piperidina. Em outros e- xemplos, R1 e R2 juntos com N formam uma piperidina, pirrolidina, piperazi- na, morfolina, tiomorfolina, imidazol, ou aminoditiazol opcionalmente substi- tuídos. Os compostos de fórmula (TA4-1), e métodos de produção e uso, são descritos em Patente dos Estados Unidos N0 . 11/228.636, para Whitten, e outros, intitulados QUINOLONE ANALOGS, e arquivado em 16 de setembro de 2005.
Em outro aspecto, o agente terapêutico pode ser combinado
com um inibidor de PARP, pode ser selecionado dos compostos tendo esta fórmula:
e sais, ésteres e pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis deste;
em que V, X, e Y estão ausentes se ligado a um heteroátomo diferente de nitrogênio, e independentemente H, halo, azido, R21 CH2R2, SR2, OR2 ou NR1R2 quando ligado a C ou N; ou
em que V e X, ou X e Y podem formar um anel carbocíclico, anel heterocíclico, arila ou heteroarila cada dos quais podem ser opcionalmente substituídos e/ou fundidos com um anel cíclico;
Z11 Z2 e Z3 são C, N, Oou S;
Z é O, S, NR2l CH2 ou C=O;
W junto com NeZ formam um anel de 5 ou 6 membros opcio- nalmente substituídos que é fundido com uma arila ou heteroarila opcional- mente substituídas, em que a referida arila ou heteroarila podem ser mono- cíclica ou fundidas com um anel único ou múltiplo, e em que o referido anel opcionalmente contém um heteroátomo;
U é-C(=0)R2, -COOR2, -CONR1R2, -CONR1-(CR12)n-NR3R4, SO3R2, SO2NR1R2, SO2NR1NR1R2, SO2NR1OR2, SO2NR1-(CR12)n-NR3R4 ou SO2NR1NR1-(CR12)n-NR3R4 ou SO2NR1 O-(CR12)n-NR3R; em que em cada NR1R21 R1 e R2 juntos com N podem formar um anel opcionalmente substituído;
em NR3R41 R3 e R4 juntos com N podem formar um anel opcio- nalmente substituído;
R1 e R3 são independentemente H ou C1-6 alquila;
cada R2 é H, ou uma C1-10 alquila ou C2-10 alquenila cada um opcionalmente substituído com um halogênio, um ou mais heteroátomos não-adjacentes selecionados de N, O e S, um anel carbocíclico, um anel heterocíclico, uma arila ou heteroarila, em que cada anel é opcionalmente 10 substituído; ou R2 é um anel carbocíclico opcionalmente substituído, anel heterocíclico, arila ou heteroarila; ou R2 é COR1 ou S(O)xR1 em que x é 1-2;
R4 é H, uma Cmo alquila ou C2-10 alquenila opcionalmente con- tendo um ou mais heteroátomos não-adjacentes selecionados de N, O e S, e opcionalmente substituído com um anel carbocíclico ou heterocíclico ou R3 e R4 juntos com N pode formar um anel opcionalmente substituído;
cada R5 é um substituinte em qualquer posição em W; e é H, OR2, amino, alcóxi, amido, halogênio, ciano ou um substituinte inorgânico; ou R5 é C1-6 alquila, C2-6 alquenila, -CONHR1, cada um opcionalmente subs- 20 tituído por halo, carbonila ou um ou mais heteroátomos não-adjacentes; ou dois adjacentes de R5 são ligados para obter um anel carbocíclico ou hete- rocíclico de 5 a 6 membros opcionalmente substituídos, opcionalmente fun- didos com um anel carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente substituído adicional; e 25 n é 1-6.
Na fórmula acima (TA5-1), anel T pode formar um anel de 5 membros opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em: Na fórmula acima (TA5-1), W junto com NeZ pode formar um anel de arila ou heteroarila de 5 ou 6 membros opcionalmente substituídos que são fundidos com uma arila ou heteroarila opcionalmente substituída selecionada do grupo que consiste em ο ο Θ 1 ο
em que cada Q1 Q11 Q21 e Q3 é independentemente CH ou N;
P é independentemente O, CH1 C=O ou NR1;
n e R5 é tal como definido acima.
Em outras modalidades destes compostos, W junto com NeZ pode formar um grupo que tem a fórmula selecionada do grupo que consiste em
/n
M
(R5)n
em que Z é O, S, NR2, CH2 ou C=O;
cada Z4 é CR6, NR2, ou C=O;
R6 é H, ou um substituinte conhecido na técnica, incluindo mas não limitado a hidroxila, alquila, alcóxi, halo, amino, ou amido; e Anel SeM podem ser saturados ou não-saturados.
Em algumas modalidades, W junto com NeZ pode formar um anel de 5 ou 6 membros que é fundido com uma fenila.
Em outras modalidades, os compostos da presente invenção têm a fórmula geral (TA5-2A) ou (TA5-2B):
(TA5-2B) em que U, V, W, X, Y, Z, Z11 Z21 Z31 R5 e n são tais como descritos acima para TA5-1;
Z4 é CR6, NR21 ou C=O; e
Z e Z4 podem opcionalmente formar um ligação dupla.
Na fórmula acima (TA5-1), (TA5-2A) e (TA5-2B), U pode ser
SO2NR1R21 em que R1 é H, e R2 é uma C-mo alquila opcionalmente substituí- da com um heteroátomo, uma C3-6 cicloalquila, arila ou um anel heterocíclico de 5 a 14 membros contendo um ou mais N, O ou S. Por exemplo, R2 pode ser uma Cmo alquila substituída com um morfolina, tiomorfolina, imidazol, 10 aminoditiadazol, pirrolidina, piperazina, piridina ou piperidina opcionalmente substituídas. Em outros exemplos, R1 e R2 juntos com N formam uma piperi- dina, pirrolidina, piperazina, morfolina, tiomorfolina, imidazol, ou aminoditia- zol opcionalmente substituídos.
Em outras modalidades destes compostos, U é SO2NR1-(CR12)n- 15 NR3R4; n é 1-4; cada R1 é H ou alquila; e R3 e R4 em NR3R4 juntos formam uma piperidina, pirrolidina, piperazina, morfolina, tiomorfolina, imidazol, ou aminoditiazol opcionalmente substituídas. Em alguns exemplos, U é SO2NH (CH2)n NR3R4 em que R3 e R4 juntos com N formam uma pirrolidina opcio- nalmente substituída, que pode ser ligado a (CH2)n em qualquer posição no 20 anel de pirrolidina. Em uma modalidade, R3 e R4 juntos com N formam uma pirrolidina substituída por N-metila.
Em uma modalidade, a presente invenção fornece os compostos que têm as fórmula (TA5-1), (TA5-2A) ou (TA5-2B), em que:
cada um dentre V e Y se presente é independentemente H ou halogênio (por exemplo, cloro ou flúor);
X é -(R5)R1R21 em que R5 é C ou N e em que em cada -(R5)R1R21 R1 e R2 juntos podem formar um anel de arila ou heteroarila opcionalmente substituídos;
Z é NH ou N-alquila (por exemplo, N-CH3);
W junto com NeZ formam um anel de 5 ou 6 membros que é
fundido com um anel de arila ou heteroarila opcionalmente substituído; e
U é-S02R5R6-(CH2)n-CHR2-NR3R4, em que R5 é CR1 ou N; R1 é H ou alquila; R6 é H ou Cmo alquila e em que na porção de CHR2-NR3R4 cada R3 ou R4 juntos com C podem formar um anel heterocíclico ou heteroa- rila opcionalmente substituído, ou em que na porção de -CHR2-NR3R4 cada R3 ou R4 juntos com o N podem formar um anel de arila ou heteroarila, car- bocíclico, heterocíclico opcionalmente substituído.
Em outra modalidade, a presente invenção fornece compostos que têm as fórmula (TA5-1), (TA5-2A) ou (TA5-2B), em que:
V e Y se presente é H ou halogênio (por exemplo, cloro ou flúor);
X se presente é -(R5)R1R2, em que R5 é C ou N e em que em cada -(R5)R1R2, R1 e R2 podem formar juntos um anel de arila ou heteroarila opcionalmente substituído;
Z é NH ou N-alquila (por exemplo, N-CH3);
W junto com NeZ formam um anel de 5 ou 6 membros que é fundido com um anel de arila ou heteroarila opcionalmente substituído; e U é-SO2R5R6-(CH2)n-CHR2-NR3R41
R5 é CR1 ou N;
R6 é H ou alquila e em que na porção de -CHR2-NR3R4 cada R3 ou R4 junto com o C podem formar um anel heterocíclico ou de heteroarila opcionalmente substituído, ou em que na porção de -CHR2-NR3R4 cada R3 ou R4 junto com o N podem formar um anel de arila ou heteroarila, carbocí- clico, heterocíclico opcionalmente substituído.
Ainda em outras modalidades, os compostos da presente inven- ção têm a fórmula geral (TA5-3): 10
15
em que U, V, X, Y1 Z, Z1, Z21 Z31 R5 e n são tais como descritos acima.
Ainda em outras modalidades, os compostos da presente inven- ção têm a fórmula geral (TA5-4A) ou (TA5-4B):
/
\ \//
(R5)n
(TA5-4B)
(TA5-4A)
em que U, V, X, Z, R5 e n são tais como descritos acima para TA5-1.
Os compostos de fórmula (TA5-1), e métodos para preparar e usar, são descritos em Patente dos Estados Unidos N0 60/811.990, para Pi- erre, e outros, intitulado "PYRIDINONE ANALOGS", que foram arquivados em 8 de junho de 2006 e em Pedido de Patente Provisória Norte-Americano para Nagasawa, e outros, arquivado no dia 1 de março de 2007, tendo atto- mey docket n° 53223-3003001.
Ainda em outro aspecto, o agente terapêutico para os compos- tos da invenção podem ser um composto da fórmula:
em que X é H, OR2, NR1R2, halogênio, azido, SR2 ou CH2R;
A é H, halogênio, NR1R2, SR2, OR2, CH2R2, azido ou NR1 (CR12)n-NR3R4;
Zé O, S, NR1 ou CH2; U é R2, OR2, NR1R2 ou NR1-(CR12)n-NR3R4 contanto que U não
seja H;
W é uma arila ou heteroarila opcionalmente substituída que pode
ser monocíclica ou fundida com um único anel múltiplo opcionalmente con- 5 tendo um heteroátomo;
em NR3R4 podem independentemente formar um anel de 5 a 6 membros opcionalmente substituídos contendo N1 e opcionalmente O ou S;
alquenila opcionalmente contendo um ou mais heteroátomos não-adjacentes selecionados de N, O, e S1 e opcionalmente substituídos com uma arila substituída ou não-substituída, heteroarila, carbocíclico, ou anel heterocícli- co; ou R2 é uma cicloalquila opcionalmente, anel heterocíclico substituído,
- 15 arila ou heteroarila;
R5 é um substituinte em qualquer posição de W e é H, halo, cia- no, azido, -CONHR1, OR2, ou Cr6 alquila ou C2-6 alquenila, cada um opcio- nalmente substituído por halo, =O ou um ou mais heteroátomos;
Estabelecido que ambos XeA não sejam H, e também etabele- 20 cido que R5 seja ciano ou -CONHR1 quando A for H, halogênio ou NR1R2; ou um composto tendo a fórmula (TA6-1A)
O n
em que R1 e R2 juntos com N em NR1R2, e R3 e R4 juntos com N
10
R1 e R3 são independentemente H ou uma Cr6 alquila; e
R2 e R4 são independentemente H, ou uma Cmo alquila ou C2.io
e sais, ésteres e pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis deste;
A é H, halogênio, azido, SR2, OR2, CH2R2, NR1R2, ou NR1- (CR12)n-NR3R4; Z1 U, W, R11 R2, R3 e R4 são tais como definidos na fórmula TA6-
R5 é um substituinte em qualquer posição de W e é H1 halo, cia- no, azido, -CONHR1, OR2, ou C1-6 alquila ou C2-6 alquenila, cada um opcio- nalmente substituído por halo, =O ou um ou mais heteroátomos;
em que cada porção opcionalmente substituída na fórmula TA6-
1 e -1A é substituída com um ou mais halo, ciano, azido, acetila, amido, OR2, NR1R2, carbamato, Cmo alquila, C2--I0 alquenila, cada um opcionalmen- te substituído por halo, =0, arila ou um ou mais heteroátomos selecionados de N, O e S; ou é substituído com uma arila, um carbocíclico ou um anel he- terocíclico.
Na fórmula acima TA6-1 ou TA6-1A, W pode ser selecionado do grupo que consiste em
o
o \
WW
I
K
Q
Y ^ n^5 R1 αχα^
<Λ^«
em que Q, Q11 Q21 e Q3 são independentemente CH ou N;
Y é independentemente O, CH1 =O ou NR1; e
R5 é tal como definido na fórmula 1.
Em algumas modalidades destes compostos, cada W na fórmula 5 TA6-1 ou TA6-1A acima pode ser um fenila, piridina, bifenila, naftalina, fe- nantrena, quinolina, isoquinolina, quinazolina, cinolina, ftalazina, quinoxalina, indol, benzimidazol, benzoxazol, benztiazol, benzofurano, antrona, xantona, acridona, fluorenona, carbazolila, pirimido[4,3-ò]furan, pirido[4,3, ò]indol, piri- do[2,3, ò]indol, dibenzofurano, acridina ou acridizina. Em uma modalidade, 10 W é uma fenila opcionalmente substituída.
Os compostos de fórmula (TA6-1), e métodos para preparar e empregar, são descritos em Patente dos Estados Unidos N0 11/404.947, pa- ra Whitten, e outros, que foi arquivado no dia 14 de abril de 2006, e é intitu- lado "QUINOBENZOXAZINE ANALOGS AND METHODS OF USING THE- REOF".
A presente invenção utiliza os agentes terapêuticos em combi- nação com pelo menos um modulador. Exemplos de inibidores de PARP são conhecidos na técnica, e são descritos, por exemplo, em C.R. Calebrese, e outros, Clin. Cancer Res. vol. 9, 2711-18 (2003); S.J. Veuger, e outros, Can- cer Res. vol. 63, 6008-15 (2003); C.R. Calabrese e outros, J. Nat'1. Cancer Inst. 96(1), 56-67 (2004); "Potent Novel lnihbitors", Expert Reviewes in Mo- lecular, vol. 7(4) (março de 2005); e P. Jagtap, Nature Rev.: Drug Discovery7 vol. 4, 421-40 (20045). Os inibidores de PARP detectados nestes documen- 5 tos são adequados para uso nos métodos e composições da presente in- venção. Inibidores de PARP adicionais que podem ser empregados incluem, por exemplo, 10-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-2H-7-oxa-1,2-diaza-benzo[de] antracen-3-ona (GPI 15427) e 2-(4-metil-piperazin-1-il)-5H-benzo[c][1,5] naf- tiridin-6-ona (GPI 16539). Veja Di Paola, e outros, Eur. J. Farmacology, 10 527(1-3), 163-71 (2005). Representante, mas não limitando, exemplos de inibidores de PARP que são adequados para uso na invenção compreendem os compostos conhecidos mostrados daqui a seguir, incluindo os sais farma- ceuticamente aceitáveis destes, e isômeros individuais ou misturas de isô- meros deste.
o
o
Indóis de Iactam tricíclicos TI3: R = 4'-F
Benzimidazóis tricíclicos R = H R = 2-CI
AG 14361
R = H R = 3-NH2 R = 2-OH CEP-6800
BGP-15
O
NH
F O
N
DR23I3
'NH
R = CI R = Me
(CH2)3 ,N
N
Cr NH O
" NH N" Me
OH
NU-1025
NU-1085
OH
O
10
Moduladores que podem ser utilizados em combinação com um agente terapêutico descrito acima incluem compostos que têm estruturas de Fórmulas I, II1 III1 IV1 V1 Vl1 Vll1 Vlll1 IX1 X1 Xl ou Xll descritas aqui.
O composto TA1-1 é um agente terapêutico preferido para uso nos métodos e composições da invenção. Mais detalhes em métodos ade- quados para sua formulação e administração são fornecidos em Pedido Pro- visional dos Estados Unidos N0 de Série 60/803,864 para Lim1 e outros, que foi arquivado no dia 3 de junho de 2006.
A invenção Também em parte fornece composições farmacêuti- cas que compreendem pelo menos um agente terapêutico dentro do escopo da invenção como descrito aqui em combinação com pelo menos um modu- lador. Opcionalmente, a composição pode compreender um diluente ou ou- tros excipientes farmaceuticamente aceitáveis.
Para administração a pacientes animas ou humanos, a dosagem adequada do agente terapêutico é tipicamente 0,01-15 mg/kg, de preferência 5 0,1 10 mg/kg. Níveis de dosagens são dependentes da natureza da condi- ção, eficácia de fármaco, a condição do paciente, o diagnóstico do médico, e a frequência e modo de administração; porém, a otimização de tais parâme- tros está dentro do conhecimento comum do versado na técnica.
Similarmente, a dosagem de um modulador, tal como um com- 10 posto de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, Xl ou Xll aqui, é tipicamen- te entre 0,01 a 15 mg/kg, e cerca de 0,1 a 10 mg/kg. Um modulador pode ser separadamente ativo para tratar um câncer. Para terapias de combinação descritas acima, quando empregado em combinação com um agente tera- pêutico, a dosagem de um modulador será frequentemente de duas vezes a
- 15 dez vezes menos que a dosagem requerida quando o modulador for empre- gado sozinho para tratar a mesma condição ou motivo. A determinação de uma quantidade adequada do modulador para o uso em combinação com um agente terapêutico é prontamente determinada por métodos conhecidos na técnica.
20 São fornecidos também os métodos para a modulação da ativi-
dade de uma proteína de PARP, que compreende contactar um sistema in- cluindo a proteína de PARP com uma composição descrita aqui em uma quantidade eficaz para modular (por exemplo, inibir) a atividade da proteína. O sistema em tais modalidades pode ser um sistema livre de células ou um 25 sistema compreendendo células. Também fornecidos são os métodos para reduzir a proliferação celular, e opcionalmente induzir apoptose que compre- ende contactar células com uma composição ou uma terapia de combinação tal como descrito aqui, em que um agente terapêutico é administrado em uma quantidade eficaz para reduzir a proliferação da células, e um inibidor 30 de PARP é administrado em uma quantidade suficiente para aumentar a efi- cácia do agente terapêutico. As células em tais modalidades podem estar em uma linhagem de células, em um tecido ou em um paciente (por exem- pio, um animal ou ser humano de de pesquisa).
A invenção também em parte fornece métodos para tratar uma condição relacionada à proliferação celular anormal. Por exemplo, fornecidos são os métodos para tratar uma condição proliferativa celular em um pacien- 5 te compreendendo administrar um agente terapêutico descritos aqui e um inibidor de PARP descrito aqui para um paciente com necessidade de trata- mento para um distúrbio proliferativo celular; o agente terapêutico e o inibi- dor de PARP são administrados em quantidades eficazes para tratar a con- dição proliferativa celular. O paciente pode ser um animal de pesquisa (por 10 exemplo, roedor, cachorro, gato, macaco), opcionalmente contendo um tu- mor tal como um tumor de xenoenxerto (por exemplo, tumor humano), por exemplo, ou pode ser um humano.
Uma condição proliferativa celular às vezes é um tumor ou cân- cer não-tumoral, incluindo mas não limitado a, cânceres do colorretal, de mama, de pulmão, do fígado, do pâncreas, do linfonodo, do cólon, da prósta- ta, do cérebro, da cabeça e pescoço, de pele, do fígado, do rim, de sangue e coração (por exemplo, leucemia, linfoma, carcinoma).
Qualquer formulação adequada do agente terapêutico e o inibi- dor de PARP pode ser preparada para administração, ou junto ou separa- 20 damente. Qualquer via adequada de administração pode ser empregada para cada componente, incluindo mais não limitado a vias orais, parenterais, intravenosas, intramusculares, transdérmicas, tópicas e subcutâneas. As duas substâncias empregadas juntas (inibidor de PARP e o agente terapêu- tico) podem ser administradas separadamente ou juntas. Quando adminis- 25 tradas juntas, elas podem estar em formas de dosagem separadas, ou elas podem ser combinadas em uma única combinação de fármaco. Desse mo- do, fornecidas aqui são as composições farmacêuticas compreendendo um agente terapêutico tal como descrito aqui e pelo menos um inibidor de PARP, e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
Os exemplos seguintes ilustram e não limitam a invenção. Exemplo 1
Processos para Sintetizar Compostos de Fórmulas I, II. IN e IV Processo 1
5
Ácido 3-bromo-4-piridina carboxílico (3,0 g, 14,9 mmols) em eta- nol (100 mL) foi tratado com ácido sulfúrico concentrado (5 mL).
o
o
OH
A mistura foi conduzida ao refluxo em cujo tempo tudo entrou em
solução. Depois de 12 horas ao refluxo, LCMS indicou que a reação foi con- cluída. A mistura reacional foi resfriada à temperatura ambiente e concentra- 10 da em um evaporador rotatório para um terço de seu volume original. A mis- tura foi diluída então com 250 mL de acetato de etila e lavada duas vezes com bicarbonato de sódio aquoso saturado. A concentração em um evapora- rador rotatório produziu 3,25 g do éster de etila como um óleo amarelado que foi suficientemente puro o bastante para transformações químicas sub- 15 sequentes. LCMS (ESI) 216,2 (M+1)+.
ácido 2-amino-4-metoxicarbonila-fenilborônico (1,04 g, 4,5 mmols), acetato de sódio (1,64 g, 20 mmols), paládio de 1,1'-bis(difenilfosfiino)ferroceno (II) cloreto (complexado com diclorometano) (182 mg, 0,25 mmol) e dimetilfor- 20 mamida (7,5 mL) foram combinados em um frasco. O frasco foi evacuado e depositado com nitrogênio duas vezes e aquecido a 125°C com agitação durante 12 horas ou até que indicado LCMS à ausência de qualquer material de partida. A mistura foi resfriada à temperatura ambiente e água (100 mL) foi adicionada para formar um precipitado marrom. O precipitado foi filtrado 25 para produzir 637 mg de 5-oxo-5,6-di-hidrobenzo[c][2,6]naftiridina-8-carboxi-
o
Carboxilato de 3-bromo-4-piridina de etila 1,15 g, 5,0 mmols), lato de metila. LCMS (ESI) 255,4 (M+1)+.
o
Cl
0
O
O
O
5-Oxo-5,6-di-hidrobenzo[c][2,6]naftiridina-8-carboxilato de metila
(200 mg, 0,787 mmol) foi combinado com oxicloreto de fósforo (1 mL) e a- quecido ao refluxo. Depois de 2 horas, LCMS indicou a ausência de qual- 5 quer material de partida. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi absorvido em diclorometano (50 mL) e lavado duas vezes com bicarbonato de sódio aquoso saturado. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e concentrada em um evaporarador rotatório para produzir 5- clorobenzo[c][2,6]naftiridina-8-carboxilato de metila (140 mg) como um sólido 10 cinzento. LCMS (ESI) 273,3 (M+1)+.
0,074 mmol) foi combinado com anilina (60 mg, 0,65 mmol) e pirrolidinona de N-metila (0,2 mL) em um tubo de micro-ondas e a mistura foi aquecida a 120°C durante 10 minutos em cujo tempo que LCMS indicou que a reação 15 foi concluída como indicada pela ausência de qualquer material de partida. A mistura foi purificada em seguida por HPLC para fornecer o éster (22 mg) ou poderia ser tratada com hidróxido de sódio a 6N para fornecer o ácido (19 mg). LCMS (ESI) 316,3 (M+1)+. 1HRMN (400 MHz, CD3OD) 10,17 (1H, s),
Cl
O
.0
.0
OH
O
O
5-Clorobenzo[c][2,6]naftiridina-8-carboxilato de metila (20 mg,
9,67 (1H, br), 8,99 (1H, d, 5,9 Hz), 8,83 (1H, d, 8,6 Hz), 8,62 (1H, d, 5,9 Hz), 8,24 (1H, d, 1,6 Hz), 8,04 (1H, s), 8,02 (1H, s), 7,93 (1H, dd, 8,2, 1,6 Hz), 7,43 (1H, d, 7,4 Hz), 7,41 (1H, d, 7,4 Hz), 7,10 (1H, m). O O
5-Clorobenzo[c][2,6]naftiridina-8-carboxilato de metila (232 mg
0,853 mmol) foi combinado com meta-cloroanilina (217 mg, 1,71 mmol) e pirrolidinona de N-metila (1 mL) em um frasco e a mistura foi aquecida a 80°C durante 2 horas em cujo tempo LCMS indicou que a reação foi conclu- 5 ida como indicado pela ausência de qualquer material de partida. A mistura foi dissolvido em CH2CI2, lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado e seca sobre Na2SO4. O material foi purificado através de cromatografia ins- tantânea (SiO2, 1:1 a 9:1 gradiente de EtOAc/Hexanos) para obter o éster. O material foi dissolvido em metanol e NaOH aquoso a 6N e a mistura agitada 10 a 50°C durante 30 minutos. Os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi triturado de ácido acético/THF/metanol empregando-se uma mistura de hexano e etilacetato. A filtragem e secagem forneceu 147 mg de ácido 5- (3-clorofenilamino)benzo[c][2,6]naftiridina-8-carboxílico. LCMS (ESI) 350 (M+1)+. 1HRMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,21 (s, 1H), 9,72 (br s, 1H), 9,02
fosfiino)ferroceno (II) cloreto (complexado com diclorometano) (36 mg, 0,05 20 mmol) foram adicionados a uma mistura de carboxilato de 3-bromo-4-piridina de etila (230 mg, 1,0 mmol) e sal de ácido clorídrico ácido 2-amino-4-ciano- fenilborônico (179 mg, 0,9 mmol). A mistura foi conectada a uma bolha de saída e aquecida a 120°C durante 18 horas em cujo tempo análise de LCMS indicou que a reação foi terminada baseada no desaparecimento do material
(d, J = 5,6, 1H), 8,89 (d, J = 8,8, 1H), 8,62 (d, J = 5,6, 1H), 8,31 (br s, 1H), 8,28 (d, J = 1,6, 1H), 8,10 (br d, J = 8, 1H), 7,99 (dd, J = 2, J = 8,4, 1H), 7,46 (t, J = 8,0, 1H), 7,16 (br d, J = 7,2, 1H) ppm.
o
Acetato de sódio (410 mg, 5 mmols) e paládio de 1,1 '-bis (difenil- de partida. Depois de resfriar a temperatura ambiente, água foi adicionada e os sólidos escuros foram filtrados e lavados com diclorometano para forne- cer 5-oxo-5,6-di-hidrobenzo[c][2,6]naftiridina-8-carbonitrila (156 mg) como um sólido cinza que foi suficientemente puro o bastante para transformações químicas subsequentes. LCMS (ESI) 222,4 (M+1)+. 1HRMN (400 MHz1 DM- SO-d6) 12,2 (1H, s), 9,96 (1H, s), 8,90 (1H, d, 5,1 Hz), 8,77 (1H, d, 8,2 Hz),
8,13 (1H, d, 5,1 Hz), 7,73 (1H, dd 8,2, 1,6 Hz), 7,70 (1H, d, 1,6 Hz).
Cl
Il
Oxicloreto de fósforo (2 mL) foi adicionado à 5-oxo-5,6-di- hidrobenzo[c][2,6]naftiridina-8-carbonitrila (150 mg, 0,66 mmol). A mistura foi 10 aquecida ao refluxo durante 3 horas em cujo tempo a análise de LCMS indi- cou a ausência de qualquer que material de partida. Os voláteis foram remo- vidos a vácuo e o produto bruto foi dissolvido em diclorometano, lavado com salmoura e bicarbonato de sódio aquoso saturado e seco sobre sulfato de sódio. Após concentração sob vácuo, o produto bruto foi triturado com aceta- 15 to de etila e hexanos para produzir 5-clorobenzo[c][2,6]naftiridina-8-carbo- nitrila (125 mg). LCMS (ESI) 240,3 (M+1)+.
N
Uma mistura de 5-clorobenzo[c][2,6]naftiridina-8-carbonitrila (30 mg, 0,13 mmol), anilina (60 mg, 0,65 mmol) e dimetilformamida (0,2 mL) foi aquecida a 120°C em um reator de micro-ondas durante 10 minutos. LCMS indicou a ausência do material de partida. A mistura foi diluída com água e deixada descansar durante alguns minutos como 5-(fenilamino)benzo[c]
[2,6]naftiridina-8-carbonitrila (25 mg) precipitada como um sólido esbranqui- çado. LCMS (ESI) 297,3 (M+1)+. ,.JO
Azide de sódio (65 mg, 1 mmol) e cloreto de amônio (53 mg, 1 mmol) foram adicionadas a uma mistura bruta de 5-(fenilamino)benzo[c]
[2,6]naftiridina-8-carbonitrila (25 mg, 0,084 mmol) em dimetilformamida (0,2 mL). A mistura foi aquecida durante 18 horas a 120°C em cujo tempo análise 5 de LCMS indicou a ausência de qualquer material de partida. A mistura foi diluída com água e purificada através de HPLC preparativa para fornecer N- fenil-8-(1H-tetrazol-5-il)benzo[c][2,6]naftiridin-5-amina (14 mg). LCMS (ESI) 340,3 (M+1)+. 1HRMN (400 MHz, CD3OD) 10,11 (1H, s), 8,96 (1H, d, 5,9 Hz), 8,85 (1H, d, 8,2 Hz), 8,53 (1H, d, 5,5 Hz), 8,47 (1H,s), 8,16 (1H, d, 8,6 Hz), 10 7,88 (1H, s), 7,86 (1H, d, 0,8 Hz), 7,57 - 7,51 (3H, m), 7,36 - 7,31 (2H, m).
Compostos representativos são apresentados a seguir na Tabe- la 1A.
Tabela 1A
Composto Peso molecular LCMS (ES) m/z 0 239,2 240 [M+1]+ O O 297,3 298 [M+1]+ O O 297,3 298 [M+1]+ Composto Peso molecular LCMS (ES) m/z 0 263,3 264 [M+1]+ N-N7 O 240,2 241 [M+1]+ nOcJ!x O O 254,2 255 [M+1]+ O I 309,4 310 [M+1]+ ,N. O .JO 314,3 315[M+1]+ O O 321,3 322 [M+1]+ ---^0 ^'lf ^ N-N7 Composto Peso molecular LCMS (ES) m/z .X) 315,3 316 [M+1]+ n^Yi ο I 310,4 311 [M+1]+ N ^ Í^Y^N O íVS 264,3 265 [M+1]+ /N N-N7 „X) 339,4 340 [M+1]+ n^i\ ti ;n N-N I 334,4 335 [M+1]+ N ^ nv^TjL ^if > N-N7 X* 329,4 330 [M+1]+ f-Y^N n^TI 0 Composto Peso molecular LCMS (ES) m/z \ 345,4 346 [M+1]+ O O XXf 367,8 368 [M+1]+ ítV^n n^Vi O Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z XXf 367,76 368 [M+1]+ hn O m 296,33 297 [M+1]+ çh3 291,35 292 [M+1]+ Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z ^vF 381,79 382 [M+1]+ HHXX0>cHa 359,38 360 [M+1]+ ί^^Χγ°'0Η3 O hhXXf 333,32 334 [M+1]+ O HN^v^O 343,38 345 [M+1]+ XX 349,77 350 [M+1]+ UsJCrOH O Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z ihnX-Xf 357,34 358 [Μ+1]+ H-/ JX 391,79 392 [Μ+1]+ L/ Ma 349,77 350 [Μ+1]+ O ksX^OH 339,35 340[Μ+1]+ O XX 373,80 374 [Μ+1]+ ΜΝΤ'^'ΧΙ n^ÇL Γ Il H Ν> Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z c£° 329,35 330 [M+1]+ O ,-O 353,38 354 [M+1]+ íf^i N N LJL X» 377,82 378 [M+1]+ IfrfViN T >--- O-M HN'^s^C^-p 361,37 362 [M+1]+ jf^V^H LsJL^OH G 0Ar. 357,41 358 [M+1 J+ G Jx 351,31 352 [M+1]+ iOl N L5tiJsv^OH Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z Z X 340,33 341 [M+1]+ O O HhlJCXc, 363,80 364 [M+1]+ CXch XX 335,79 336 [M+1]+ UJL^xOH U5JLrOH 417,77 418 [M+1]+ O f 1 356,38 357 [M+1]+ rio. U5JLr OH O Jfx 329,35 330 [M+1]+ CH3 UJLrOH Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z 383,32 384 [M+1]+ A 279,29 280 [M+1]+ HN O Processo 2
O O
Ácido 5-bromopirimidina-4-carboxílico (preparado de acordo com o procedimento descrito em Patente dos Estados Unidos 4,110,450) (1,0 eq,
6,14 g, 30,2 mmols) foi suspenso em CH2Cb (100 ml). Oxalilcloreto (1,1 eq, 5 2,9 ml, 33,0 mmols) foi adicionado seguido por 2 gotas de DMF. A mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente e os voláteis foram removi- dos a vácuo. O resíduo foi levado em MeOH (50 ml) e aquecido. Após eva- poração de MeOH a vácuo o composto foi dissolvido em CH2CI2 e vertido em uma coluna de sílica-gel pré-acondicionada. O material foi eluído empregan- 10 do 20% de acetato de etila em hexano. A evaporação do solvente forneceu metil-5-bromopirimidina-4-carboxilato como um sólido cristalino laranja-claro (2,54 g, 39% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 217 [M]+; 219 [M+2]+; 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) δ 4,04 (s, 3H), 9,02 (s, 1H), 9,21 (s, 1H) ppm. Processo 3
10
15
20
Acetato de sódio (4,0 eq, 1,92 g, 23,41 mmols) e cloreto de pa- ládio (II) de 1,1'-bis(difenilfosfiino)ferroceno (complexado com diclorometano) (0,05 eq, 214 mg, 0,29 mmol) foram adicionados a uma mistura de metil-5- bromopirimidina-4-carboxilato (1,0 eq, 1,27 g, 5,85 mmols), e cloridrato de ácido 2-amino-4-(metoxicarbonila)fenilborônico (1,0 eq, 1,35 g, 5,85 mmols) em DMF anidra (10 ml). A Mistura foi agitada sob atmosfera de nitrogênio a 120°C durante 18 horas. Água e salmoura foram adicionadas e as impurezas sólidas resultantes filtradas. O material foi extraído com CH2CI2 (4 x) e os extratos combinados secos sobre Na2SO4. Depois de evaporação CH2CI2, o DMF restante foi evaporado por aquecimento do resíduo a vácuo. O sólido resultante foi triturado em CH2CI2, filtrado e seco para fornecer 5-oxo-5,6-di- hidropirimido[4,5-c]quinolina-8-carboxilato de metila como um sólido bege (127 mg, 8,5% de rendimento). LCMS (ES): >80% puro, m/z 256 [M+1]+; 1H RMN (DMSO-de, 400 MHz) δ 3,79 (s, 3H), 7,81 (d, J = 8,0, 1H), 8,68 (d, J = 8,8, 1H), 9,49 (s, 1H), 10,19 (s, 1H), 12,37 (s, 1H) ppm.
Processo 4
Cl
Em um frasco, 5-oxo-5,6-di-hidropirimido[4,5-c]quinolina-8- carboxilato de metila (1,0 eq, 151 mg, 0,59 mmol) foi misturado em tolueno (1 ml) com DIEA (1,5 eq, 155 ul, 0,89 mmol) e POCI3 (5 eq, 270 ul, 3,0 mmols). A mistura foi agitada a 120°C durante 1 hora e resfriada até a tem- peratura ambiente. Após adição de gelo e água o composto foi extraído com CH2CI2 (4 x). A solução foi filtrada sobre Na2SO4 e filtrada por um bloco de celite. Após a evaporação dos voláteis, o material foi triturado em uma mistu- ra de acetato de etila e hexanos, filtrada e seca para para produzir 5-cloro- pirimido [4,5-c]quinolina-8-carboxilato de metila como um sólido marrom- 5 claro (115 mg, 71% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 274 [M+1]+. 1H RMN (DMSO-de, 400 MHz) δ 3,96 (s, 3H), 8,37 (dd, J = 1,6, J = 8,4, 1H), 8,60 (d, J = 1,6, 1H), 9,15 (d, J = 8,8, 1H), 9,74 (s, 1H), 10,61 (s, 1H) ppm Processo 5
5-cloropirimido[4,5-c]quinolina-8-carboxilato de metila (10 mg) foi misturado com 3,5-difluoroanilina (100 mg) em NMP (0,1 ml). A mistura foi aquecida sob micro-ondas a 120°C durante 10 minutos. Água foi adicionada e o material extraído com CH2CI2. O solvente foi removido. A trituração em uma mistura de etilacetato e hexano e filtragem forneceu 5-(3,5-difluorofe- nilamino)pirimido[4,5-c]quinolina-8-carboxilato de metila. Este material foi suspenso em uma mistura de 1:1 de THF e MeOH (2 ml) e uma solução a- quosa a 5N e hidróxido de lítio foi adicionado. A mistura foi agitada vigoro- samente à temperatura ambiente durante 5 horas. Água e ácido clorídrico a 6N foram adicionados para induzir a precipitação do material esperado. O sólido foi filtrado, lavado com água, seco e suspenso em MeOH. Filtragem e secagem forneceram ácido 5-(3,5-difluorofenilamino)pirimido[4,5-c] quinoli- na-8-carboxílico como um sólido amarelo (4 mg, 31% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 353 [M+1]+. 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz) δ 6,90 (br t, J = 9,6, 1H), 8,02 (dd, J = 1,6, J = 8,0, 1H), 8,18 (br d, J = 10,8, 2H), 8,34 (d, J = 1,6, 1H), 8,86 (d, J = 8,4, 1H), 9,65 (s, 1H), 10,40 (s, 1H), 10,44 (s, 1H) ppm. Processo 6
Ácido 5-(3-etinilfenilamino)pirimido[4,5-c]quinolina-8-carboxílico foi preparado empregando o mesmo método, a partir de 5-cloropirimido[4,5- c]quinolina-8-carboxilato de metila e 3-etinilanilina. LCMS (ES): 95% puro, 5 m/z 341 [M+1]+. 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz) δ 4,20 (s, 1H), 7,19 (d, J = 7,6, 1H), 7,42 (t, J = 8,0, 1H), 7,99 (dd, J = 1,6, J = 8,4, 1H), 8,30 (d, J = 1,6, 1H), 8,34 (dd, J = 1,6, J = 8,0, 1H), 8,49 (brs, 1H), 8,85 (d, J = 8,8, 1H), 9,65 (s, 1H), 10,11 (s, 1H), 10,43 (s, 1H) ppm.
Análogos representativos (Tabela 1B) foram preparados pelo mesmo método empregando 5-cloropirimido[4,5-c]quinolina-8-carboxilato de metila e aminas adequadas.
Tabela 1B
Estrutura MW LCMS (ES) m/z 0hCH3 382,78 383 [M+1]+ O fY 368,75 369[M+1]+ ΗΝΓ^^α OCX kJL.OH O Estrutura MW LCMS (ES) m/z jOl 334,30 335 [M+1]+ ÚOs U5JL^om O í TV 350,76 351 [M+1]+ O .NiIf P f 384,3114 385[M+1]+ N XjL UsJLf-OH O HnOn6. 339,3501 340[M+1]+ N JL ôOl UJlyNH2 O Processo 7
O O
Metil-5-bromo-2-(metiltio)pirimidina-4-carboxilato foi preparado de acordo com o procedimento empregado no processo 2 para a preparação de metil-5-bromopirimidina-4-carboxilato. LCMS (ES): >90% puro, m/z 263 [M]+, 265 [M+2]+; 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) δ 2,59 (s, 3H), 4,00 (s, 3H), 8,71 (s, 1H) ppm. Processo 8
O
η
Metil-5-bromo-2-(metiltio)pirimidina-4-carboxilato (1,0 eq, 661
mg, 2,52 mmols) foi dissolvido em CH2CI2 (10 ml). Ácido meta-cloro perben- zóico (m-cpba, grau puro 77%, 2,5 eq, 1,42 g, 6,34 mmols) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. À suspensão re- sultante foi adicionado THF anidro (10 ml), cloridrato de metilamina (10 eq, 1,7 g, 25,18 mmols) e DIEA (10 eq, 4,3 ml, 24,69 mmols) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante a noite. Os solventes foram removidos a vácuo antes da adição de CH2CI2 e uma solução de bicarbonato de sódio aquoso saturada. As duas fases foram decantadas e duas extrações de CH2CI2 adicionais foram realizadas. Os extratos combinados foram secos sobre Na2SO4 e os solventes evaporados. A purificação por cromatografia instantânea em sílica-gel (20 a 30% de etilacetato em hexano) forneceu 5- bromo-2-(metilamino)pirimidina-4-carboxilato de metila como um sólido es- branquiçado (461 mg, 75% de rendimento). LCMS (ES): >95% puro, m/z 246 [M]+, 248 [M+2]+.
Processo 9
ládio (II) de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno (complexado com diclorometano) (0,05 eq, 36 mg, 0,049 mmol) foram adicionados a uma mistura de 5-bromo-
2-(metilamino)pirimidina-4-carboxilato de metila (1,0 eq, 240 mg, 0,975 mmol), e cloridrato de ácido 2-amino-4-(metoxicarbonila) fenilborônico (1,0 eq, 226 mg, 0,98 mmol) em DMF anidra (2 ml). A mistura foi agitada sob mi- cro-ondas aquecimento a 120°C durante 10 minutos. A adição de água indu-
o
Acetato de sódio (3,0 eq, 240 mg, 2,93 mmols) e cloreto de pa- 10
15
20
ziu a precipitação do composto esperado que foi filtrado e seco. 3-(metil- amino)-5-oxo-5,6-di-hidropirimido[4,5-c]quinolina-8-carboxilato de metila (57 mg, 21% de rendimento). LCMS (ES): >80% puro, m/z 285 [M+1]+.
Processo 10
Ácido 3-(metilamino)-5-(fenilamino)pirimido[4,5-c]quinolina-8-car- boxílico foi preparado empregando métodos descritos no processo 3 e 4 par- tindo de 3-(metilamino)-5-oxo-5,6-di-hidropirimido[4,5-c]quinolina-8-carboxi- Iato de metila. O produto final foi purificado através de cromatografia instan- tânea e isolado como um sólido amarelo (0,35 mg). LCMS (ES): >95% puro, m/z 346 [M+1]+.
Processo 11 CH3 O
VA
N^Br
O
CH-
Em um recipiente de micro-ondas, 5-bromo-2-(metiltio)pirimidina-
4-carboxilato de metila (1,0 eq, 274 mg, 1,18 mmol), cloridrato de ácido de 2- amino-4-(metoxicarbonila)fenilborônico (1,2 eq, 329 mg, 1,42 mmol), e ace- tato de sódio (3,0 eq, 291 mg, 3,55 mmols) foi misturado em DMF anidra (2 ml). A mistura foi desgaseificada por borbulhamento de gás de nitrogênio na solução durante 10 minutos e a reação aquecida sob micro-ondas a 120°C durante 30 minutos. Após o resfriamento o material esperado precipitou-se de NMP. O sólido foi filtrado, suspenso em água, filtrado e seco. O material foi triturado em AcOEt e o filtrado produz um sólido amarelo. O mesmo pro- cedimento foi repetido 9 vezes empregando a mesma quantidade dos mate- riais para fornecer 3-(metiltio)-5-oxo-5,6-di-hidropirimido[4,5-c] quinolina-8- carboxilato de metila (283 mg, 10% de rendimento). LCMS (ES): >95% puro, m/z 302 [M+1]+, 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz) δ 2,71 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 7,80 (dd, J = 1,6, J = 8,4, 1H), 7,97 (d, J = 1,6, 1H), 8,59 (d, J = 8,8, 1H), 9,98 (s, 1H), 12,34 (s, 1H) ppm.
Processo 12
3-(metiltio)-5-oxo-5,6-di-hidropirimido[4,5-c]quinolina-8-carboxi- Iato de metila (1,0 eq, 279 mg, 0,926 mmol) foi suspenso em tolueno (2 ml). POCb (2 ml) e DIEA (0,5 ml) foi adicionado e a mistura agitada a 120°C du- 10 rante 5 horas. Os voláteis foram removidos a vácuo e CH2CI2 foi adicionado. A fase orgânica foi lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado, lava- da com água e seca sobre NaaSO4. A solução foi filtrada por um bloco de celite e os solventes removidos a vácuo. O material foi triturado em hexano e AcOEt, filtrado e seco para fornecer 5-cloro-3-(metiltio)pirimido[4,5-c] quino- 15 lina-8-carboxilato de metila como um sólido bege (184 mg, 63% de rendi- mento). LCMS (ES): >95% puro, m/z 320 [M+1]+, 322 [M+3]+.
Processo 13
5-cloro-3-(metiltio)pirimido[4,5-c]quinolina-8-carboxilato de metila (1,0 eq, 182 mg, 0,57 mmol) foi misturado com anilina (0,5 ml) em NMP (1ml). A mistura foi aquecida sob de micro-ondas durante 10 minutos a 120°C. Água foi adicionada e 0 sólido resultante filtrado e seco. O composto foi triturada em EtOAc e hexano e filtrado para fornecer 3-(metiltio)-5- (fenilamino)pirimido[4,5-c]quinolina-8-carboxilato de metila como um sólido amarelo. LCMS (ES): >95% puro, m/z 377 [M+1]+. Este material foi suspenso em CH2CI2 (4 ml) e ácido meta-cloroperbenzóico (77% puro 2,5 eq, 165 mg, 5 0,737 mmol) foi adicionado em porções pequenas. Depois de uma hora, uma quantidade adicional (100 mg) de mcpba foi adicionado e a mistura agitada durante 1,5 hora. Após a adição de mais CH2CI2, a fase orgânica foi lavada com água (4 x), seca sobre de Na2SO4 e a solução foi filtrada por um bloco de sílica-gel, eluição com uma mistura de MeOH/CH2CI2. Após evaporação 10 dos solventes, 3-(metilsulfonil)-5-(fenilamino)pirimido[4,5-c]quinolina-8-carbo- xilato de metila foi isolado como um sólido amarelo (166 mg, 72% de rendi- mento). LCMS (ES): >95% puro, m/z 409 [M+1]+, 1H RMN (DMSO-d6, 400 ΜΗζ) δ 3,77 (s, 3H), 3,93 (s, 3H), 7,15 (t, J = 7,2, 1H), 7,45 (t, J = 7,6, 2H), 7,99 (dd, J = 2,0, J = 8,4, 1H), 8,16 (d, J = 7,6, 2H), 8,28 (d, J = 2,0, 1H),
- 15 8,89 (d, J = 8,8, 1H), 9,76 (s, 1H), 10,61 (s, 1H) ppm.
Processo 14
Em um frasco fechado, 3-(metilsulfonil)-5-(fenilamino)pirimido [4,5-c]quino!ina-8-carboxiiato de metila (1,0 eq, 62 mg, 0,152 mmol) foi mis- turado com cloridrato de metilamina (100 mg), DIEA (260 ul) em DMF (1ml).
20 A mistura foi agitada a 60°C durante 40 minutos. A adição de água induziu a precipitação de 3-(metilamino)-5-(fenilamino)pirimido[4,5-c] quinolina-8- carboxilato de metila que foi isolado através de filtragem. Este material foi suspenso em uma mistura de 1:1:1 de THF, MeOH e água (4 ml), e vigoro- samente agitada a 60°C na presença de LiOH (200 mg) durante 1,5 hora.
25 Água e HCI aquoso foram adicionados para alcançar pH = 1. O sólido foi filtrado, seco e triturado em AcOEt/hexanos para fornecer ácido 3-(metilami- no)-5-(fenilamino)pirimido[4,5-c]quinolina-8-carboxílico como um sólido ama- relo (40 mg, 74% de rendimento). LCMS (ES): >95% puro, m/z 346 [M+1]+.
Os análogos seguintes (tabela 1C) foram preparados empregan- do o mesmo método. Após a purificação através de HPLC preparativa e evaporação com Genevac, o material foi isolado como sólido.
Tabela 1C
Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z Y HNjO 371,39 372 [M+1]+ hnYnY^n νΛ\ 0 f ..O 373,41 374 [M+1]+ hYy^n N'tkl O °'CH3 r^J 389,41 390 [M+1]+ ΗΝγΝ^ΑΝ 0 yp-°‘ 375,38 376 [M+1]+ 0 1 Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z JO 389,41 390 [M+1]+ ™γΝ*ΛΝ 0 . ~o 414,46 415 [M+1]+ r^YrS hN^j O h3c^n^/nyny^n 430,50 431 [M+1]+ H,cJ n^VSi ^A^oh O , ~° 444,49 445 [M+1]+ rp-VrS O^j nXL O XD 458,51 459 [M+1]+ O H ""i kN^N^NsSlN n^TI O Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z Y HN 395,41 396 [M+1]+ hnYnY^n %H Ils^JL oh 0 HN "Ca. 397,43 398 [M+1]+ ί^ΝγΝγ^Ν %H H3Cj ΝΆΛ IIn^L °h 0 H HN ^\2 413,43 414 [M+1]+ M___N___-Lkl \ Γ Ύΐ CH Oj νΛΛ CH3 0 H HN^\i 438,48 439 [M+1]+ ^\/N, .N- /Lkl \ II Ί Ϋ CH HNv^J 0 O H "T^K 482,53 483 [M+1]+ ^Ν-^ΝΎΝ_ς >ch nAA1 [IsJLoh 0 CH3 HN^Vjf 369,38 370 [M+1]+ ΗΝγΝ^Α^>εΗ N^yS ll^JL 0H 0 Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z HNjO^ci 405,84 406[M+1]+ O H1C. HnOvf 428,36 429 [M+1]+ 0YnY^n f f νΛ\ O CH, HN 379,80 380 [M+1]+ "Y*An « N"i\ 0 CH3 HN"0^ 393,83 394 [M+1]+ h3c'NYNY^n Cl *L^Ls.°h O HN^Çj^ 365,77 366 [M+1]+ HN N JL Cl 2ΙΝγΙΝγ^Ν nA\ L^L,oh O Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z hn^O^ 407,85 408 [M+1]+ H3CyNyN^n Cl CH3 Ns^lyl Xi^v-OH O Ύ ΗΝ'^^γΡ 439,39 440 [M+1]+ hnYnY^n Ff N-Yi O jOl 393,83 397 [M+1]+ H3C^ hn"^^ci ΗΝγΝγΛΝ n^Vi I^vIlvOH 0 CH3 HN ΌΤ 397,79 398 [M+1]+ ΗΝγΝ^ΑΝ Cl n^tS 0 HN"0^ 383,76 384 [M+1]+ HN N JL Cl 2ιί γΙΝ^/^Ν n^tSl O Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z H HN-O' 423,83 424 [M+1]+ v^YrS 01 n^TwL 0 Η HN-Qt" 441,84 442 [M+1]+ 3 0 γ N Ν"Υι Lvi^krOH 0 H Η?Ά^0Η 427,46 428 [M+1]+ HjC'^0'^-'N Y NN NA\ o hN^Vch 441,48 442 [M+1]+ n^Yi o H 455,51 456 [M+1]+ Η,ΟγΟ^^ΝγΝ^ΑΝ ch3 NsiAA, O Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z XX 439,47 440 [M+1]+ Γ-Ο H νΛ\ l^Av-OH O HN-Cx^ 409,44 410 [M+1]+ AoitOLh ·* n^TI O HnXX-CI 366,76 367 [M+1]+ hoYnt^n νΛ\ ^Av-OH O ,XKch 399,40 400 [M+1]+ hnYnY4^n Ν-Υι ^1°'ch3 0 ° NH1 ^ 450,88 451 [M+1]+ HNY»yWN νΛΛ ^V'CH, 0 Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z ος" 450,94 451 [M+1]+ sYVS n^TI ο Η2Νγ° 436,85 437[M+1]+ HN^-xXI ΗΝγΝ X N-Vi IivXvOH O hT η 437,84 438 [M+1]+ ΗΝγΝ^ΑΝ ΝΛλ UsJLv-OH O CX,° ...A 436,91 437 [M+1]+ YyS n^Vi i5^Av-OH 0 hSc^1 HN^ 324,33 325 [M+1]+ VyS Ν-Υι ^t-XvOH 0 Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z Y HN^ 335,36 336 [M+1]+ ™γΝ*ΛΝ Ν"Τ1 O f\ » hI^ 385,42 386 [M+1]+ n^Vi O η hJ^a 371,39 372 [M+1]+ ούχχ 0 Á 407,37 408[M+1]+ ν'ΥΛ nA-S O ΗΝ^Ό-ρ 389,38 390 [M+1]+ v^VyS Ν^Λγ^ O Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z H 401,42 402 [M+1]+ ^nYnY^n òh3 O v" YyS 386,41 387 [M+1]+ ΝΛ^ O ■AS 385,42 386 [M+1]+ O Ô 365,39 366 [M+1]+ N H I 0 XXf 454,88 455 [M+1]+ HN^-^CI H1C. ^ w M 1 3 N^nV CH3 nJLI 0 Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z nr 523,00 524 [M+1f On h hn"^c, Vn-^n yV^ CH3 N^Li O nF 474,87 475 [M+1]+ r^N HN^^XI V^n^nJ,n νΛ\ Ls^kvJDH O XX 471,87 472 [M+1]+ 3 O HN^^XI H,C* JL N N JL O XYp 463,85 464 [M+1]+ HN^^CI N^TnYnYwV y N'^SrS H3C O nr 474,87 475 [M+1]+ Λ H HN^Aa UCnyN^Xn O Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z rrF 474,87 475[M+1]+ UU^O»N νΛ\ OH O . -O 407,42 408 [M+1]+ a"C& 0 A 340,40 341[M+1]+ HN h3c'sYnY^n nAaI ^Y0XH3 0 CH, 366,42 367 [M+1]+ I 3 HN^/ CH3 N^l Ii5Jlsy0H 0 HN 295,30 296 [M+1]+ Η2ΝγΝ^ΑΝ N^y. lJ^AyOH 0 Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z A 337,38 338 [Μ+1]+ η hT H3C-nYnY^n νΛ\ ^^A^oh O A 309,32 310 [Μ+1]+ H , Ηϊ H3C'NY Y^N Ν-Υι ^1Av-OH O A 323,35 324 [Μ+1]+ CH3 HN h3c'NYNY^n n-Vi liSssAv-OH O ΗΝ^ΟγΡ 399,33 400 [Μ+1]+ HN N JL F ρ 2 Y Y^N N^y1 ^tAv-OH O η η ηϊ 386,41 387 [Μ+1]+ nsM O Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z A 339,35 340 [Μ+1]+ H hiJi Ν-Υι O η » ηι 386,41 387 [Μ+1]+ Ν γ Ν N n^Vi Ι^Λν^ΟΗ O Η 399,45 400 [Μ+1]+ ksJv^OH O A 337,38 338 [Μ+1]+ H Ηϊ Η3ΟγΝΎΝ^ΑΝ CH3 N^LJL l^J^OH O A 439,39 440 [Μ+1]+ _ F „ HN k^JL^OH O Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z N Λ 386,41 387 [Μ+1]+ f 1 h Hi WybY^k n^Yi O A 405,84 406 [Μ+1]+ H hI1 O A 407,37 408 [Μ+1]+ I H hV fYVnYn^ n^yS O A 353,38 354 [Μ+1]+ H H? ΗΟ^^ΝγΝ ± N O A 408,45 409 [Μ+1]+ π H Ηϊ Ο Ν ---ΝγΝγ^Ν n^Vi O Estrutura Peso molecular LCMS (ES) m/z A 367,40 368 [M+1]+ H Ηγ Η30^Ο^^ΝγΝγ^Ν n-Vi O A 399,45 400 [M+1f H3C η ΗΤ χ YrS O N-Vil l^Av-OH O A 395,45 396 [M+1]+ H hIi Η3ΟγΟ^^ΝγΝ^ΑΝ CH3 OH O A 379,41 380 [M+1]+ C\ H hV O ---ΝγΝ·γ^Ν n^Vi 0 A 381,43 382 [M+1]+ H hV h3c^o^^nyn_^n n^Yi ^5xAyOH O Processo 15
Ácido 3-(ciclopropilamino)-5-(3-(trifluorometil)fenilamino)pirimido [4,5-c]quinolina-8-carboxílico (20 mg) foi misturado com 2 equivalentes de uma amina primária apropriada em NMP (0,5 ml). HOBt (14 mg), trietilamina 5 (13 uL) e EDCI (18 mg) foram adicionados e a mistura foi agitada a 70°C durante 1 hora. Água e HCI foram adicionados e o material foi isolado atra- vés de filtragem. Este protocolo foi empregado para preparar os compostos mostradas na tabela 1D.
Tabela 1D
Estrutura MW LCMS (ES) m/z LL ^ 438,41 439 [M+1]+ W Z /\ ^ W0 suLrO I \_/ i~\ ! I Y hn-CL-f 478,47 479 [M+1]+ hnYnY^n Ff S V Ácido 3-(ciclopropilamino)-5-(3-(trifluorometil)fenilamino)pirimido [4,5-c]quinolina-8-carboxílico (100 mg, 0,23 mmol) foi reagido com azida de difenilfosforila (50 ul, 0,23 mmol) e trietilamina (34 ul, 0,23 mmol) em isopro- 5 panol (8 ml). A mistura foi agitada a 95°C durante 3 horas. Os solventes fo- ram removidos e o resíduo dividido entre água e etilacetato. A camada orgâ- nica foi seca sobre de Na2SO4 e os solventes removidos a vácuo. A adição de CH2CI2 induziu a formação de um sólido que foi filtrado e seco para for- necer 3-(ciclopropilamino)-5-(3-(trifluorometil)fenilamino)pirimido[4,5-c] qui- 10 nolin-8-ilcarbamato de isopropila. LCMS (ES): 90% puro, m/z 497 [M+1]+. Exemplo 2
Processos por Sintetizar os Compostos de fórmulas V. VI. VII e Vlll Processo 1
O o
Ácido 2-bromo-3-tiofeno carboxílico (1,0 eq, 12,56 g, 60,66 mmols) foi suspenso em CH2CI2 (200 ml). Cloreto de Oxalila (1,1 eq, 5,9 ml,
67,16 mmols) e 5 gotas de DMF foram adicionados, induzindo a formação de gás. A mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente e os volá- teis foram removidos a vácuo. O sólido resultante foi suspenso em metanol seco (150 ml) e a mistura aquecida para ebulição. A evaporação dos solven- tes forneceu carboxilato de 2-bromo-3-tiofeno de metila (13,16 g, 98% de rendimento) como um óleo marrom bruto. LCMS (ES): 99% puro, m/z não detectado; 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) δ 3,88 (s, 3H), 7,23 (d, J = 5,6, 1H), 7,56 (d, J = 5,6, 1H) ppm.
Processo 2
o
.CH,
Br
Em um recipiente de micro-ondas, carboxilato de 2-bromo-3- tiofeno de metila (1,0 eq, 260 mg, 1,18 mmol), cloridrato de ácido 2-amino-4- 10 (metoxicarbonil)fenilborônico (1,1 eq, 300 mg, 1,30 mmol), acetato de sódio (3,0 eq, 292 mg, 3,56 mmols) e PdCI2(dppf) (0,05 eq, 31 mg, 0,059 mmol) foram misturados juntos com DMF anidra (2 ml). A mistura foi aquecida em um forno de micro-ondas a 120°C durante 10 minutos. Água foi adicionada e
o sólido filtrado e seco. O material foi suspenso em CH2CI2, filtrado e seco 15 para fornecer 4-oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c]quinolina-7-carboxilato de metila como um sólido amarelo (152 mg, 50% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 260 [M+1]+; 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) δ 3, 99 (s, 3H), 7,54 (d, J = 5,2, 1H), 7,79 (d, J = 4,8, 1H), 7,86 (d, J = 8,4, 1H), 7,91 (dd, J = 8,4, J = 1,6, 1H), 8,03 (d, J = 1,2, 1H) ppm.
Processo 3
4-oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c]quinolina-7-carboxilato de metila (1,0 eq, 618 mg, 2,38 mmols) foi suspenso em 10 ml de uma mistura de MeOH1 THF1 e água (1:1:1, v:v:v). LiOH (2,0 eq, 114 mg, 4,76 mmols) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. Uma quantidade adicional de LiOH (114 mg) foi adicionado e a mistura foi agitada durante uma hora. LiOH (50 mg) foi adicionado e a mistura agitada 5 durante umas 2 horas adicionais. Água foi adicionada e a solução filtrada por um bloco de celite. O bloco de celite foi lavado completamente com NaOH a
1 N aquoso. A solução foi acidificada com HCI a 6 N aquoso para induzir a precipitação do material esperado. Filtragem e secagem forneceram ácido 4- oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c]quinolina-7-carboxílico como um sólido amarelo 10 (562 mg, 96% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 246 [M+1]+; 1H RMN (DMSO-de, 400 MHz) δ 7,61 (d, J = 5,2, 1H), 7,73 (dd, J = 1,6, J = 8,0, 1H), 7,88 (d, J = 5,6, 1H), 7,92 (d, J = 8,4, 1H), 8,02 (d, J = 1,6, 1H), 11,92 (s, 1H), 13,21 (br. s, 1H) ppm.
Processo 4
Ácido 4-oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c]quinolina-7-carboxílico (1,0
eq, 38 mg, 0,155 mmol) foi suspenso em dioxano (1 ml). LiAIH4 (7,0 eq, 40 mg, 1,05 mmol) foi adicionado e a mistura agitada a 100°C durante 45 minu- tos. Água foi adicionada, em seguida MeOH e CH2CI2. Os sais sólidos foram filtrados e lavados com MeOH e CH2CI2. Após evaporação dos voláteis in 20 vácuo, o material foi dissolvido em uma mistura de NMP, MeOH e água e foi purificado através de HPLC preparativa. Evaporação de Genevac forneceu 7-(hidroximetil)tieno[3,2-c]quinolin-4(5H)-ona como um sólido esbranquiçado (12 mg, 34%). LCMS (ES): 95% puro, m/z 232 [M+1]+; 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz) δ 4,56 (s, 2H), 7,15 (d, J = 7,6, 1H), 7,39 (br s, 1H), 7,55 (d, J = 25 5,2, 1H), 7,73 (d, J = 5,2, 1H), 7,76 (d, J = 8,0, 1H), 11,73 (s, 1H) ppm. Processo 5
O O
4-oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c]quinolina-7-carboxilato de metila (1,0 eq, 17 mg, 0,066 mmol) foi suspenso em uma mistura de clorofórmio (0,3 ml) e ácido acético (0,1 ml). NBS foi adicionado (9,5 eq, 112 mg, 0,63 5 mmol) e a mistura agitada a 70°C durante 16 horas. Água e amônia aquosa foram adicionadas e o material foi extraído com CH2CI2 (2 x). Os extratos combinados foram secos sobre de Na2SO4 e o solvente removido a vácuo para fornecer 2-bromo-4-oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c]quinolina-7-carboxilato de metila (17 mg, 76%). LCMS (ES): >85% puro, m/z 338 [M]+, 340 [M+2]+;
-10 1H RMN (CDCI3/CD3OD, 9:1, 400 MHz) δ 3,99 (s, 3H), 7,30 (m, 1H), 7,69 (d, J = 8,4, 1H), 7,45 (m, 1H), 7,88 (br d, J = 8, 1H), 8,05 (br s, 1H) ppm. Processo 6
o o
2-bromo-4-oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c]quinolina-7-carboxilato de metila (1,0 eq, 17 mg, 0,050 mmol) foi suspenso em uma mistura de 1:1:1 de 15 MeOH/THF/água (0,6 ml). LiOH (39 mg) foi adicionado e a mistura agitada à temperatura ambiente durante uma hora. Água e HCI a 6N foram adiciona- dos e os precipitados resultantes foram filtrados. O material foi purificado através de HPLC preparativa. Evaporação em Genevac forneceu ácido 2- bromo-4-oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c]quinolina-7-carboxílico como um sólido 20 (2,1 mg, 13% de rendimento). LCMS (ES): >95% puro, m/z 324 [M]+, 326[M+2]+; 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,75 (s, 1H), 7,75 (dd, J = 1,6, J = 8,0, 1H), 7,90 (d, J = 8,4, 1H), 8,03 (d, J = 1,6, 1H), 12,06 (s, 1H) ppm. Processo 7
O
° CH3
Em um recipiente fechado, 4-oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c] quinoli- na-7-carboxilato de metila (44 mg, 0,170 mmol) foi suspenso em amônia a- quosa concentrada (1ml). A mistura foi agitada durante a noite a 100°C. Na- OH a 1N aquoso foi adicionado e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. O sólido foi filtrado e seco para fornecer 4-oxo-4,5-di- hidrotieno[3,2-c]quinolina-7-carboxamida como um sólido marrom (13 mg, 32% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 245 [M+1]+.
Processo 8
NH2
(HO)2B^Jx
U
Em um recipiente de micro-ondas, carboxilato de 2-bromo-3-
tiofeno de metila (1,0 eq, 64 mg, 0,29 mmol), ácido 2-amino fenil borônico (1,2 eq, 48 mg, 0,35 mmol), acetato de sódio (3,0 eq, 71 mg, 0,86 mmol) e PdCbídppf) (0,1 eq, 15 mg, 0,028 mmol) foram misturados juntos em DMF anidra (0,2 ml). A mistura foi aquecida em um forno de micro-ondas a 120°C 15 durante 5 minutos. O material foi purificado através de HPLC preparativa. Acetonitrila foi evaporada, e o composto foi extraído com CH2CI2 (3 x). Os extratos combinados foram lavados com água, secos sobre de Na2SO4, e os solventes removidos a vácuo. A recristalização em EtOH forneceu tieno[3,2- c]quinolin-4(5H)-ona como um sólido cristalino castanho (7 mg, 12% de ren- 20 dimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 202 [M+1]+; 1H RMN (CDCI3/CD3OD, 9:1, 400 MHz) δ 7,28 (m, 1H), 7,33 (m, 1H), 7,43 - 7,50 (m, 2H), 7,74 (d, J = 4,4, 1H), 7,82 (d, J = 7,6, 1H) ppm Processo 9
ο
ο
Br
+
(HO)2B
NH2 HCI
Em um recipiente de micro-ondas, carboxilato de 2-bromo-3-
tiofeno de metila (1,0 eq, 250 mg, 1,13 mmol), HCI de ácido 2-amino-3- cianofenila borônico (1,1 eq, 250 mg, 1,24 mmol), acetato de sódio (3,0 eq, 5 278 mg, 3,39 mmols) e PdCbídppf) (0,007 eq, 4,3 mg, 0,0082 mmol) foram juntos misturados em DMF anidra (2,5 ml). A mistura foi aquecida em um forno de micro-ondas a 120°C durante 10 minutos. Água foi adicionada e o material extraído com CH2CI2. Os extratos orgânicos foram lavados com salmoura, secos sobre Is^SO4 e os solventes removidos a vácuo. O sólido 10 resultante foi submetido a tratamento de som em AcOEt, filtrado e seco para fornecer 4-oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c]quinolina-7-carbonitrila como um sólido bege (121 mg, 48% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 227 [M+1]+. Processo 10
mg, 0,088 mmol) foi dissolvido em DMF anidra (0,15 ml). Azida de sódio (4,0 eq, 23 mg, 0,354 mmol) e cloreto de amônio (4,0 eq, 19 mg, 0,354 mmol) foram adicionados e a mistura agitada durante a noite a 120°C. A mistura reacional foi resfriada e água foi adicionada. A adição de HCI a 6N aquoso induziu formação de um precipitado. Após a filtragem e secagem a vácuo, 7- 20 (1H-tetrazol-5-il)tieno[3,2-c]quinolin-4(5H)-ona foi isolado como um sólido esverdeado (18 mg, 76% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 270
O
r\
4-oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c]quinolina-7-carbonitrila (1,0 eq, 20
[M+1]+, 242 [M+1-N2]+; 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,64 (d, J = 5,2, 1H), 7,86 (dd, J = 1,6, J = 8,4, 1H), 7,89 (d, J = 5,2, 1H), 8,09 (d, J = 8,0, 1H), 8,16 (d, J = 1,6, 1H), 12,03 (s, 1H) ppm. Processo 11
4-oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c]quinolina-7-carboxilato de metila (1,0 eq, 18 mg, 0,069 mmol) foi dissolvido em DMF anidra (0,4 ml). K2CO3 (7,0 eq, 70 mg, 0,506 mmol) e 3-bromo-1-propanol (16 eq, 100 ul, 1,144 mmol) foi adicionado e a mistura agitada a 100°C durante 1,5 hora. Após a adição de água, a mistura foi extraída com CH2CI2. Os extratos combinados foram secos sobre Na2SO4 e os solventes removidos a vácuo. Os compostos 8 e 9 foram separados através de TLC preparatório em sílica-gel (eluídos _ 10 duas vezes com 30% de AcOEt em hexano, em seguida uma vez com 50% de AcOEt em hexano). O composto menos polar é 4-(3-hidroxipropóxi) tie- no[3,2-c]quinolina-7-carboxilato de metila (12 mg). LCMS (ES): 80% puro, m/z 318 [M+1]+. O composto mais polar é 4-(3-hidroxipropil)-4-oxo-4,5-di- hidrotieno[3,2-c]quinolina-7-carboxilato de metila (19 mg). LCMS (ES): 80% puro, m/z 318 [M+1]+. Os dois compostos foram empregados à seguinte eta- pa sem qualquer purificação adicional.
Processo 12
O O
5-(3-hidroxipropil)-4-oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c]quinolina-7-car- boxilato de metila (1,0 eq, 19 mg, 0,060 mmol) foi dissolvido em uma mistura 20 de 1:1:1 de THF, MeOH e água (0,5 ml). LiOH (40 mg) foi adicionado e a mistura resultante agitada à temperatura ambiente durante 1,5 hora. Água, MeOH e HCI foram adicionados e a solução purificada através de HPLC preparativa. Evaporação em Genevac forneceu ácido 5-(3-hidroxipropil)-4- oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c]quinolina-7-carboxilico como um sólido branco (4 mg, 22% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 304 [M+1]+. 1H RMN (CDCI3/CD3OD, 9:1, 400 MHz) δ 2,08 (qi, J = 6,0, 2H), 3,61 (t, J = 5,2, 2H), 5 4,62 (t, J = 6,0, 2H), 7,53 (d, J = 5,2, 1H), 7,77 (d, J = 5,2, 1H), 7,93 (d, J = 8,0, 1H), 7,99 (dd, J = 1,2, J = 8,4, 1H), 8,26 (d, J = 0,8, 1H) ppm.
Processo 13
4-(3-hidroxipropóxi)tieno[3,2-c]quinolina-7-carboxilato de metila foi preparado de acordo com o procedimento empregado no processo 12. Ácido 4-(3-hidroxipropóxi)tieno[3,2-c]quinolina-7-carboxílico foi isolado como um sólido (3 mg, 26% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 304 [M+1]+.
Processo 14
5-(2-(dimetilamino)etil)-4-oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c]quinolina-7- carboxilato de metila foi preparado de acordo com o procedimento emprega- do no processo 11 partindo de 4-oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c]quinolina-7-car- boxilato de metila e cloreto de 2-dimetilaminoetila. LCMS (ES): 95% puro, m/z 331 [M+1]+. Processo 15
10
15
20
.CF3CO2H
Ácido 5-(2-(dimetilamino)etil)-4-oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c] qui- nolina-7-carboxílico foi preparado de acordo com o procedimento empregado no processo 12. HPLC preparatória e preparação em evaporação de gene- vac forneceram o material como um sal de TFA. LCMS (ES): 95% puro, m/z 317 [M+1f, 1H RMN (CDCI3/CD3OD, 9:1, 400 MHz) δ 3,06 (s, 6H), 3,50 (t, J = 7,6, 2H), 4,88 (t, J = 7,6, 2H), 7,53 (d, J = 5,2, 1H), 7,73 (d, J = 5,6, 1H), 7,89 (d, J = 8,4, 1H), 7,95 (br d, J = 8,4, 1H), 8,2 (br s, 1H) ppm.
Processo 16
Cl
'CH,
4-oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c]quinolina-7-carboxilato (1,0 eq, 1,50 g, 5,79 mmols) foi suspenso em tolueno seco (15 ml). POCI3 (1,2 eq, 0,64 mmol, 6,99 mmols) e DIEA (0,8 eq, 0,81 mmol, 4,65 mmols) foi adicionado e a mistura agitada vigorosamente a 120°C durante 3 horas sob de atmosfera de nitrogênio. A mistura foi hidrolisada por adição de gelo e água. O com- posto foi extraído com CH2CI2 (4 x). Os extratos combinados foram secos sobre Na2SO4 e a solução preta filtrada por um bloco de celite. Após a eva- poração dos voláteis a vácuo, o sólido resultante foi triturado em uma mistu- ra de AcOEt e hexano. Filtragem e secagem forneceu 4-clorotieno[3,2-c] quinolina-7-carboxilato de metila como um sólido amarelo fofo (1,14 g, 71% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 278 [M+1]+, 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) δ 4,01 (s, 3H), 7,72 (d, J = 4,8, 1H), 7,74 (d, J = 5,2, 1H), 8,14 (d, J = 8,4, 1H), 8,25 (d, J = 8,4, 1H), 8,85 (d, J = 1,6, 1H) ppm. Processo 17
O
Cl
4-clorotieno[3,2-c]quinolina foi preparada de acordo com o pro-
cedimento empregado no processo 16, a partir de tieno[3,2-c]quinolin-4(5H)- ona. 4-clorotieno[3,2-c]quinolina foi isolada como um sólido (71 mg, 93% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 220 [M+1]+, 223 [M+3]+.
Processo 18
do com o procedimento no processo 16. 4-Clorotieno[3,2-c]quinolina-7- carbonitrila foi isolada como um sólido amarelo fofo (833 mg, 77% de rendi- mento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 245 [M+1f, 247 [M+3]+.
Processo 19
mmol), anilina (0,1 ml) e NMP (0,1 ml) foram misturados em um frasco. A mistura foi aquecida em um forno de micro-ondas a 120°C durante 10 minu- tos. Água foi adicionada e o sólido 4-(fenilamino)tieno[3,2-c]quinolina-7- carbonitrila resultante foi filtrado e seco. LCMS (ES): 95% puro, m/z 302 [M+1]+.
o
Cl
4-clorotieno[3,2-c]quinolina-7-carbonitrila foi preparada de acor-
N
4-clorotieno[3,2-c]quinolina-7-carbonitrila (1,0 eq, 23 mg, 0,094 Processo 20
4-(fenilamino)tieno[3,2-c]quinolina-7-carbonitrila (34 mg, 0,113 mmol) foi dissolvida em NMP (0,3 ml). 30% de H2O2 aquosa (0,2 ml) foi adi- cionada seguida por adição de NaOH a 6N (50 ul). A mistura foi agitada a 5 50°C durante 2 horas. Uma quantidade extra de 30% de H2O2 aquosa (0,3 ml) e NaOH a 6N (100 ul) foi adicionada e uma conversão a 70% foi alcan- çada depois de 30 minutos. Água foi adicionada e o sólido filtrado e seco. O material foi também reagido sob as mesmas condições a fim de alcançar uma transformação completa. 4-(fenilamino)tieno[3,2-c]quinolina-7-carboxa-
- 10 mida foi isolada como um sólido (30 mg, 83% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 320 [M+1]+.
Processo 21
4-(fenilamino)tieno[3,2-c]quinolina-7-carboxamida (28 mg, 0,088 mmol) foi suspensa em dimetilacetal de Ν,Ν-dimetilformamida e a mistura 15 agitada a 80°C sob atmosfera de nitrogênio durante 2 horas. Os voláteis fo- ram removidos a vácuo. Ácido acético (0,5 ml) e hidrazina anidra (0,1 ml) e a mistura agitada a 115°C durante 1 hora. Água e salmoura foram adicionadas e o sólido filtrado. O material foi purificado através de HPLC preparativa. A evaporação de Genevac e a trituração em AcOEt/hexanos produziu N-fenil- 20 7-(4H-1,2,4-triazol-3-il)tieno[3,2-c]quinolin-4-amina como um sólido esbran- quiçado (9 mg, 30% de rendimento). LCMS (ES): 94% puro, m/z 344 [M+1]+. Processo 22
4-(fenilamino)tieno[3,2-c]quinolina-7-carbonitrila (1,0 eq, 27 mg, 0,0897 mmol) e cloridrato de hidroxilamina (10 eq, 62 mg, 0,892 mmol) e 5 K2CO3 (10 eq, 124 mg, 0,896 mmol) foram misturados em EtOH (0,5 ml) e a mistura aquecida sob micro-ondas a 100°C durante 10 minutos. O sólido foi removido através de filtragem e lavado com EtOH. Os solventes foram re- movidos a vácuo. O material bruto foi suspenso em clorofórmio (0,5 ml). Clo- roformiato de etila (20 ul) e trietilamina (20 ul) foram adicionados e a mistura
- 10 agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. CH2CI2 foi adicionado e a fase orgânica foi lavada com salmoura. A fase orgânica foi seca sobre Na2SO4 e o solvente removido. O material bruto foi suspenso em NMP (1 ml) e aquecido sob micro-ondas a 160°C durante 10 minutos. O material foi puri- ficado através de HPLC preparatória. Evaporação em Genevac forneceu 3- 15 (4-(fenilamino)tieno[3,2-c]quinolin-7-il)-1,2,4-oxadiazol-5(4H)-ona como um sólido esbranquiçado (7 mg, 22% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 361 [M+1]+.
Processo 23
4-clorotieno[3,2-c]quinolina-7-carbonitrila (1,0 eq, 23 mg, 0,094 20 mmol), anilina (0,1 ml) e NMP (0,1 ml) foram misturados em um frasco. A mistura foi aquecida em um forno de micro-ondas a 120°C durante 10 minu- tos. Água foi adicionada e o sólido 4-(fenilamino)tieno[3,2-c]quinolina-7- carbonitrila resultante foi filtrado e foi seco. LCMS (ES): 95% puro, m/z 302 [M+1]+. Este material foi misturado em um frasco com DMF (0,5 ml), NH4CI 5 (50 mg) e NaN3 (50 mg). A mistura foi agitada a 120°C durante 3 horas. A- pós a adição de água e filtragem, N-fenil-7-(1H-tetrazol-5-il)tieno[3,2- c]quinolin-4-amina foi isolada como um sólido bege (13 mg, 41% de rendi- mento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 345 [M+1]\ 317 [M+1-N2]+. 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,07 (t, J = 7,2, 1H), 7,40 (t, J = 7,6, 2H), 8,00 (dd, J 10 = 1,6, J = 8,4, 1H), 8,04 (d, J = 5,2, 1H), 8,10 (dd, J = 1,2, J = 8,8, 2H), 8,19 (d, J = 8,0, 1H), 8,25 (d, J = 5,6, 1H), 8,43 (d, J = 1,6, 1H), 9,34 (s, 1H) ppm.
Análogos representativos (Tabela 1C) foram preparados pelo mesmos método de uso de 4-clorotieno[3,2-c]quinolina-7-carbonitrila e ami- nas adequadas. As temperaturas de reação empregadas para as reações de 15 micro-ondas variaram de 120°C a 180°C. Após síntese dos tetrazóis os ma- teriais foram isolados através de HPLC preparativa/ evaporação em Gene- vac. Em alguns exemplos, os materiais precipitaram-se após a adição de água à mistura reacional e foram isolados através de filtragem.
Tabela 1C
Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z H 339,42 340 [M+1f n-\ Ph3 's-J N CH3 \=N hnVn /=lH 362,38 363 [M+1]+ hnVn Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z “Π 396,83 397 [M+1]+ s-f /N P 374,42 375 [M+1]+ H3C |=N hn'n:N ^sJ-Oa 378,84 379 [M+1]+ v( \=N Hn.n,n ^V-í M CH3 408,86 409 [M+1]+ s-iy ci ^=N hn'n'N H,C-0 404,45 405 [M+1]+ S-f /N P )=\ H3C \=N hn.n.n Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z H1N-Q ] 428,39 429 [M+1]+ 0^F H nV-N N -N N HN"^J^ PH3 402,47 403 [M+1]+ f^V^N ° CH3 s---v-C H VN nT 'n ™'N CTCH3 404,45 405 [M+1]+ HN "VA ^sJ O-CH3 u> Ό H \---N X:n nO:F 392,41 393 [M+1]+ ^sJ Q-CH3 \ Fn s-\J QrB νΓν'ν hn-0'°'ch* 374,42 375 [M+1]+ OriN S-il \\ H V-N N -N ™'N Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z HN "\J/ 388,45 389 [M+1]+ OrcN s--- H \-N x> HN O0pTF 428,39 429 [M+1]+ O/ N O H V-N N N "'N HN-XjT ' 450,52 451 [M+1]+ Ot^n s---ν-Λ O H nV-N N 'N "'N J^jr0OH3 404,45 405 [M+1]+ HN-^VJC 3 0 S-jfj ^ h \---N N N N M 416,46 417 [M+1]+ I O =XjJ* \^í> Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z ΗΝ-'-νΑ _ 412,39 413 [Μ+1]+ OrY^ X\ H V-N ί> ιν'Ν ην-Λ^-Λ 374,42 375 [Μ+1]+ J ^V-OH f Pn s~\^l Ο H V-N N 'Ν ιν'Ν ην·Λ^1 386,47 387 [Μ+1]+ ΓΥ^ν ^ch3 S-Ol H3C Vi H V-N N N Ν'Ν ΗΝ^Ο^ 378,84 379 [Μ+1]+ Cl Ha Va η \---N N ·Ν ™'Ν CrV ° CH· 401,44 402 [Μ+1]+ ^Ca η γ-Ν Ν. 'Ν ιν'Ν Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z ΠΝ Ά>Λ 423,47 424 [M+1]+ ,S'NH2 CP,n 0S Vi H V-N NU 'Ν N ΡΗ3 401,44 402 [M+1]+ __I CrV η ° Ot H V-N N -N ν'Ν ΗΝ"0^ 423,29 424 [M+1]+ Br ν-Q* O H V-N N N ™'Ν HN 'ζΧ 362,38 363 [M+1]+ <f^Y^ N F s-\i VA H V-N N 'Ν ν'Ν HN^C^ 358,42 359 [M+1]+ CH3 s v( Q H V-N r ν N Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z vO 369,40 370 [M+1]+ N Oli N I H XX - 388,45 389 [M+1]+ HN^^O CH3 fr; I H H N N-N hNO-ch* 372,45 373 [M+1]+ <Πΐ Ϊ sV\ I I H a "N N-N ,JOO 358,42 359 [M+1]+ OiΙΪ s^yS I H l "N N-N Ff 446,84 447 [M+1]+ <Tll Ϊ S-VS ULa a "N N-N Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z XXcI 388,45 389 [M+1]+ HN^xS)' 3 <fj I ^Í-n'N j0Co> 388,40 389 [M+1]+ fl 1 I h a "N N-N -JCt^ 402,43 403 [M+1]+ <Πι Ϊ I I H 1V11V-N. a "N N-N ^N'CH3 353,44 354 [M+1]+ J -3 <fj Ϊ T I H I ^ N-N Cl Λ. fil 396,83 397 [M+1]+ V ,N n'N H N Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z OlX 368,41 369 [M+1]+ Γ ,N N-M H N HN-Ó^F 380,37 381 [M+1]+ <fj 1 sLl N-N' Processo 24
4-clorotieno[3,2-c]quinolina (23 mg) foi misturada com anilina (0,1 ml) e NMP (0,1 ml) e a mistura foi aquecida em um forno de micro- ondas a 120°C durante 10 minutos. NMP (0,8 ml) foi adicionado e o compos- 5 to purificado através de HPLC preparativa. A evaporação de Genevac forne- ceu N-feniltieno[3,2-c]quinolin-4-amina como um sólido rosado (31 mg, quan- tidade). LCMS (ES): 95% puro, m/z 277 [M+1]+.
Processo 25
CH3
I ·* N1 ,N1-dimetil-N2-(tieno[3,2-c]quinolin-4-il)etano-1,2-diamina foi
preparada de acordo com o procedimento no processo 24 empregando de Ν,Ν-dimetiletileno diamina. HPLC preparativa e evaporação de Genevac produziram o material esperado como um sal de TFA. LCMS (ES): 95% pu- ro, m/z 272 [M+1]+.
Processo 26
suspenso em NMP (0,1 ml) e piridina de 3-aminometila (0,1 ml). A mistura foi aquecida em um forno de micro-ondas a 120°C durante 10 minutos. A mistu- 10 ra reacional foi dissolvida em uma mistura de NMP e MeOH e o intermediá- rio de éster purificado através de HPLC preparativa. Após evaporação de Genevac dos solventes, o sólido resultante foi dissolvido em uma mistura de 1:1 de THF e MeOH (0,6 ml). LiOH aquoso a 5N (0,2 ml) foi adicionado e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 17 horas. Água e HCI aquo- 15 so foram adicionados e a solução de ácido 4-(piridin-3-ilmetilamino)tieno[3,2- c]quinolina-7-carboxílico foi purificada através de HPLC preparativa. A remo- ção dos solventes por evaporação de Genevac forneceu o ácido 4-(piridin-3- ilmetilamino)tieno[3,2-c]quinolina-7-carboxílico composto como um sólido branco (10 mg, 62% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 336 [M+1]+.
mesmo método, empregando 4-clorotieno[3,2-c]quinolina-7-carboxilato e aminas apropriadas. As temperaturas de reação empregadas para as rea- ções de micro-ondas variaram de 120°C a 180°C. Após hidrólise dos éste- res, os materiais foram isolados através de HPLC preparativa/ evaporação
Cl
1H RMN (CDCI3, 400 MHz) δ 5,23 (s, 2H), 7,71 - 7,78 (m, 4H), 8,11 (d, J = 5,6, 1H), 8,47 (d, J = 8,0, 1H), 8,49 (d, J = 0,8, 1H), 8,62 (d, J = 5,2, 1H),
8,97 (s, 1H) ppm.
Análogos representativos (Tabela 2) foram preparados pelo de Genevac. Em alguns exemplos, os materiais precipitaram depois da acidi- ficação da mistura de hidrólise e foram isolado através de filtragem.
Tabela 2
Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z OH 302,35 303 [M+1]+ N---/ HO H ^0H 288,32 289 [M+1]+ N---' r*° HO CH3 315,39 316 [M+1]+ H /-fK J CH3 HO H_P 335,38 336 [M+1]+ N HO Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z r 320,37 321 [M+1]+ HO hvO 357,43 358 [M+1]+ HO /"N 335,38 336 [M+1]+ S3 HO CH- 350,39 351 [M+1]+ / 3 ✓νΙ^ Co HO ^v-I1hQ 336,36 337 [M+1]+ S_^ N OH HO Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z PH3 380,42 381 [M+1]+ O H >=\ PH 3 Vo HO N-7 341,43 342 [M+1]+ HO O 314,36 315 [M+1]+ N ^Vo HO Tisi0 348,42 349 [M+1]+ HO HO ^ 302,31 303 [M+1]+ N=O ^V0 HO Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z fVi H 360,39 361 [M+1]+ S_ V---C \=° HO 0 <^v-( ΥΛ 298,36 299 [M+1]+ HO Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z H3C' /=X 334,39 335 [M+1]+ ssJ-ÍJ çry r*° HO ZsJ-O"11 338,36 339 [M+1]+ HO --- 372,80 373 [M+1]+ vC V0 HO Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z H,C 334,39 335 [M+1]+ νΛ HO S-β N O-CH3 350,39 351 [M+1]+ N=O HO CH- 348,42 349 [M+1]+ νΛ V0 HO Qlj 354,81 355 [M+1]+ r50 HO νΛ 356,35 357 [M+1]+ ^'''"N==O HO Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z í-< 284,33 285 [M+1f Cr? HO Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z Ç-ζ) 346,40 347 [M+1]+ HO HN CH3 384,84 385 [M+1]+ Cl \ W N S~\JL HO HO 336,36 337 [M+1]+ HN ^%jl Ori » S_vA HO H /=\ /---\ 405,47 406 [M+1]+ /N \i W° YA v^y0 HO Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z H,C-0 380,42 381 [M+1]+ O-^ s-f /N P H3C ^^y=.o HO ΛΟ 334,39 335 [M+1]+ v( Ti0 H3C'0 's Jf F 356,35 357 [M+1]+ T0 HO fyl^Q 338,36 339 [M+1]+ s---F Ts0 HO s-í/ Cl 354,81 355 [M+1]+ r° HO Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z s-íj ci 372,80 373 [M+1]+ HO <ytQ 364,42 365 [M+1]+ W N /A CH3 Ts0 HO Cry^o 412,46 413 [M+1]+ Ts0 HO J Oh, 377,42 378 [M+1f HO ^nJhQ 399,44 400 [M+1]+ \jJ\N .S-NH2 /ss^s °' v^y0 HO Ç_T> \ 345,37 346 [M+1]+ T=sX ^yo HO Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z '8-Γ> ν 344,39 345 [M+1]+ T=^ CH Ts0 HO HNXXBr 399,26 400 [M+1]+ <fj Ϊ O ΗΝ'^^α 372,80 373 [M+1]+ <nrSF s Tfll Ιν!ΐγΟΗ O ..JOi 359,40 360 [M+1]+ <fj Ϊ sITil O HNJC^cH3 334,39 335 [M+1f <Πι 1 sIiIl O Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z hn"^U 359,40 360 [M+1]+ Oi 1 sVi ο --Oo 396,46 397 [M+1]+ O A h 413,47 414 [M+1]+ HN^^S'N'CH3 I OO OuL s Ill O JOy 388,36 389 [M+1]+ OfS f s IU O ^ 348,42 349 [M+1]+ Ofl s IUl O Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z I 446,26 447 [M+1]+ _- ο \T0 ν» HN^Y^F 356,35 357 [M+1]+ <íyS F s WAv-OH 0 Xf 406,35 407 [M+1]+ <fli sITil I^V0H O 0^.0H 382,37 383 [M+1]+ hn-0-f <fi 1 s fj I^vXvOH 0 pXl 356,35 357 [M+1]+ HN^^F ocx IvVoh 0 Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z HN-O-s-^ 439,51 440 [M+1]+ CfS 00 s Iil 0 _ I 389,26 390 [M+1f O O Vw I 356,35 357 [M+1]+ Li. O “■"0 X 372,80 373 [M+1]+ u- O ^LrO Vw N 363,37 364 [M+1]+ Il Hn-O^f <fi 1 S Ill 0 Processo 27
Ácido 4-(fenilamino)tieno[3,2-c]quinolina-7-carboxílico (6 mg) foi reagido com sulfonamida de metila (120 mg), EDCI (80 mg) e DMAP (20 mg) em DMF anidra (0,5 ml). Depois de 5 horas, foi adicionada água e a solução sujeitou a HPLC preparativa. Evaporação de Genevac proveu N-(metil- sulfonil)-4-(fenilamino)tieno[3,2-c]quinolina-7-carboxamida como um sólido (6 mg, 81% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 398 [M+1]+.
Processo 28
Em um frasco, ácido 4-oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2-c]quinolina-7- carboxílico (1,0 eq, 20 mg, 0,081 mmol), mono-hidrato de N-hidroxiben- zotriazol (2,0 eq, 22 mg, 0162 mmol), para-metoxibenzilamina (2,0 eq, 21 ul, 0,162 mmol) e trietilamina (2,0 eq, 23 ul, 0,165 mmol) foram dissolvidos em DMF anidra (0,5 ml). EDCI (2,0 eq 31 mg, 0,162 mmol) foi adicionado e a mistura reaciona! foi agitada durante a noite a 70°C. MeOH (0,5 ml) e água (2 ml) foram adicionados e o precipitado resultante filtrado e seco. O material foi triturado em AcOEt, filtrado e seco para fornecer um sólido esbranquiçado (19 mg, 65% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 365 [M+1]+, 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz) δ 3,71 (s, 3H), 4,40 (d, J = 6,0, 2H), 6,88 (d, J = 8,8, 2H), 7,24 (d, J = 8,8, 2H), 7,60 (d, J = 5,6, 1H), 7,69 (dd, J = 1,6, J = 8,0, 1H), 7,84 (d, J = 5,6, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,91 (d, J = 8,8, 1H), 9,11 (t, J = 5,6, 1H)ppm
Os análogos representativos seguintes (Tabela 3) foram prepa- rados por estes processos, empregando ácido 4-oxo-4,5-di-hidrotieno[3,2- c]quinolina-7-carboxílico e aminas apropriadas. Em alguns exemplos, os ma- teriais foram purificados através de HPLC preparativa e foram isolados como sólidos secos após evaporação de Genevac.
Tabela 3
Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z o 315,39 316 [M+1]+ ,---N H,C / H N H3C O O CH 372,44 373 [M+1]+ Vo H~C J. H3^jT0 H3C O CTVh 320,37 321 [M+1]+ HN D O QfV 316,33 316 [M+1]+ HN \. H3C J °Λ Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z 0 327,38 328 [M+1]+ *ν-Γ ^y0 HN V=N D 0 380,42 381 [M+1]+ QfV HN P-Q H3C p H3C 0 405,47 406 [M+1]+ CrV HN O Q 0 321,35 322 [M+1]+ QfV HN D Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z 0 350,39 351 [M+1]+ CrV T0 HN Η·νΟ ο 354,81 355 [M+1]+ mTV * Vo HN O Cl O 338,38 339 [M+1]+ CTVh HN V Ν---^ O 357,43 358 [M+1]+ Crr HN ί ■ Q jO 314,36 315 [M+1]+ I O Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z 0 's-Inh η \=° O 413,49 414 [M+1]+ N 0=( O H3C^fv 3 Cff3H3 O S-(/NH yj) O 427,52 428 [M+1]+ ηΓ H3C O S-ZJih ζ-Λ 364,42 365 [M+1]+ HN ) /^VQ Vi ch^ O '8_(μη 339,37 340 [M+1]+ HN ίΓ^ y ν H3C 0 rados a partir de seus ésteres de metila correspondentes descritos na Tabe- la 3. Os compostos foram preparados de acordo com o procedimento de hi- drólise utilizado para o composto 15.
Tabela 4
Estrutura M.W. LCMS (ES) m/z 0 CrV 364,37 365 [M+1]+ HN vD HO O CTjih ^y0 302,31 303 [M+1]+ HN O "í 0 1 Os análogos representativos seguintes (Tabela 5) foram prepa- rados a partir de seus ésteres de terc-butila correspondentes ou precursores de N-Boc protegidos descritos na Tabela 3. Os precursores foram tratados com ácido trifluoroacético a 30% em CH2CI2 durante 2 horas. A remoção dos voláteis a vácuo forneceu os materiais esperados.
Tabela 5
Processo 29
3-(7-(1H-tetrazol-5-il)tieno[3,2-c]quinolin-4-ilamino)benzoato de etila (1,0 eq, 7,6 mg, 0,018 mmol) foi suspenso em uma mistura de 1:1:1 de THF, MeOH e água. Hidróxido de lítio foi adicionado (40 mg, 1,66 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. Água e ácido clorídrico foram adicionados e o sólido resultante filtrado e seco para produ- zir ácido 3-(7-(1H-tetrazol-5-il)tieno[3,2-c]quinolin-4-ilamino)benzóico como um sólido. LCMS (ES): 95% puro, m/z 389 [M+1]+.
Os análogos representativos seguintes (tabela 6) foram prepara-
dos por reação de ácido 3-(7-(1H-tetrazol-5-il)tieno[3,2-c]quinolin-4-ilamino) benzóico e aminas apropriadas empregando o procedimento descrito no procedimento 28. Os materiais foram purificados através de HPLC preparati- va e foram isolados como sólidos secos após evaporação de Genevac.
Tabela 6
Estrutura MW LCMS (ES) m/z _ Xs o 429,50 430 [M+1]+ frj I H Ύ "N N-N ΗΝ-θγθ° 457,51 458 [M+1]+ orS 0 I P N-N hmOyW"» 458,54 459 [M+1]+ f-A» 0 S'Tíil H N « ;n N-N Estrutura MW LCMS (ES) m/z ΗΝΌγϋ^Λο.0Η, 459,48 460 [M+1]+ <fTfS ° S Li H « ,N N-N /Y^N ° ° CH3 515,59 516 [M+1f s-kA H N T ,N N-N ΗΝΌγΐυΟι 478,53 479 [M+1]+ orS 0 SZ\ H W 'N N-N A 'Hs 415,47 416 [M+1]+ hn^^Yn'ch3 ^N ° sLi H a "N N-N Ϊ ° 427,48 428 [M+1]+ sIi H AA^-N T :'N N-N Estrutura MW LCMS (ES) m/z Ch3 482,52 483 [M+1]+ Γ I H fo ° S[i H \\ N N-N ΗΝ-Ογ^ο-ΟΗ, 445,50 446 [M+1]+ <fTfS 0 sLi H 1, "N N-N fV^N ° 498,56 499 [M+1]+ sVi h T ;n N-N Processo 30
Os análogos representativos seguintes (tabela 7) foram prepara- dos por reação de ácido 3-(7-(metoxicarbonil)tieno[3,2-c]quinolin-4-ilamino) benzóico e as aminas apropriadas empregando condições de reação descri- tas no procedimento 28. Hidrólise do éster empregando condições descritas no processo 29 produziu os análogos seguintes. Tabela 7
Estrutura MW LCMS (ES) m/z (O 405,47 406 [M+1]+ I O S XZX X V=Q o ΗΝ^Ο-γΟ 433,48 434 [M+1]+ OkX ° ^Av-OH 0 J^b 439,49 440 [M+1]+ 0 o=< 1 ZI ó HnOyN-A0H 421,43 422 [M+1]+ ° s ifll O jCO___^·Ν'εΗ3 434,51 435 [M+1]+ O CH, <fj 1 sIil ^5A-OH O Estrutura MW LCMS (ES) m/z _ X o N^y 446,50 447 [M+1]+ <fj Ϊ o nX^tL^V· 491,56 492 [M+1]+ /Y4N ° ° CH> sVi ^vJ1VyqH O JL JL J^Jn 454,50 455 [M+1]+ HN Y ^ <fY^ ° sTil O n 'Ha 391,44 392 [M+1]+ HN^^lTN'CH3 ^Λν 0 W^s<0H O /Τι Ϊ 0 403,45 404 [M+1]+ sIiIl O Estrutura MW LCMS (ES) m/z CH3 458,49 459 [M+1]+ rii η Γο A.· sVl WuJVoh 0 HNj^Yi3-O'™» 421,47 422 [M+1]+ <flfS 0 s iTll l^Av-OH O ..OyO1" 474,53 475 [M+1]+ ° O Processo 31
Os análogos representativos seguintes (tabela 8) foram prepara- dos por reação de ácido 2-(3-(7-(metoxicarbonil)tieno[3,2-c]quinolin-4- ilamino)fenil)acético e as aminas apropriadas empregando condições de re- ação descritas no processo 30. Tabela 8
Estrutura MW LCMS (ES) m/z Π ff ?H3 448,54 449 [M+1]+ HnW1N^Vn-CHj Ϊ H 3 cri sVi 0 ηνΧΧαν-^ 417,48 418 [M+1]+ I ^ <fTi sIil 0 <fj Ϊ 392,43 393 [M+1]+ sFIl kjSraCH3 0 HNXXJyCH3 405,47 406 [M+1]+ /^Λ-μ CH3 sVi W^voh 0 HN^0^AN'CH3 391,44 392 [M+1f X H <Πι Ϊ U^Av-OH 0 Exemplo 3
Processos para Sintetização de Compostos de Fórmulas IX, X. Xl e Xll Processo 1
O
Η2ΝΛΧ^°
Br o Br
2-amino-4-bromotiazol-4-carboxilato de metila (1,0 eq, 100 mg, 5 0,42 mmol) foi dissolvido em DMF anidra (0,8 ml). A mistura foi aquecida a 80°C sob atmosfera de nitrogênio. À mistura quente, uma solução de nitrito de terc-butila (1,2 eq, 60 ul, 0,50 mmol) em DMF (0,8 ml) foi adicionada gota a gota. Depois de alguns minutos, ausência da evolução de gás indicou con- clusão da reação. A mistura foi resfriada e vertida sobre uma coluna de síli- 10 ca-gel pré-carregada. A cromatografia instantânea empregando hexanos, em seguida AcOEt/hexanos (2:8), forneceu 5-bromotiazol-4-carboxilato de metila como um sólido amarelo (49 mg, 53% de rendimento). LCMS (ES): 95% pu- ro, m/z 222 [M]+, 224 [M+2]+.
Processo 2
O
OH NH2-HCl HO^ '
Em um recipiente de micro-ondas, 5-bromotiazol-4-carboxilato
de metila (1,0 eq, 97 mg, 0,44 mmol), HCI de ácido borônico de fenila 2- amino-3-metoxicarbonila (1,1 eq, 111 mg, 0,48 mmol), acetato de sódio (3,0 eq, 107 mg, 1,31 mmol) e PdCI2(dppf) (0,05 eq, 11 mg, 0,022 mmol) foram misturados junto em DMF anidra (1 ml). A mistura foi aquecida em um forno 20 de micro-ondas a 120°C durante 10 minutos. Água foi adicionada e o materi- al extraído com CH2CI2. O extratos combinados foram lavados com salmou- ra, secos sobre Na2SO4 e os solventes removidos por evaporação. O mate- rial foi dissolvido em uma mistura de CH2CI2 e MeOH e a solução filtrada através de uma almofada de celite. A evaporação dos voláteis forneceu 4- oxo-4,5-di-hidrotiazolo[4,5-c]quinolina-7-carboxilato de metila bruto como um sólido preto (44 mg, 39% de rendimento). Uma pequena parte do composto foi submetida a HPLC preparativa para propósito analítico. LCMS (ES): 95% puro, m/z 261 [M+1]+.
Processo 3
(35 mg, 0,12 mmol) e LiOH (60 mg, 0,83 mmol) foram agitados em uma mis- tura (1:1:1, v:v:v) de THF, MeOH e água (0,6 ml) durante 2 horas. NaOH a- 10 quoso a 6N foi adicionado e a solução filtrada através de celite. A solução foi acidificada e o sólido resultante filtrado. Purificação de HPLC preparativa e evaporação de genevac forneceram ácido 4-oxo-4,5-di-hidrotiazolo[4,5-c] quinolina-7-carboxílico como um sólido branco (0,8 mg). LCMS (ES): 95% puro, m/z 247 [M+1]+.
Processo 4
8,44 mmols) foi dissolvido em CH2CI2 (4 ml). Anidrido acético (1,5 eq, 1,2 ml, 12,66 mmols) e trietilamina (1,1 eq, 1,3 ml, 9,28 mmols) foram adicionados e a mistura agitada a 100°C durante uma hora. O sólido resultante foi filtrado, triturado em AcOEt e em seguida filtrado novamente. Após secagem, 2- acetamido-5-bromotiazol-4-carboxilato de metila foi isolado como um sólido
bege (1,81 g, 77% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 280 [M+1]+. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) δ 2,25 (s, 3H), 3,95 (s, 3H) ppm.
O
O
.0
OH
4-oxo-4,5-di-hidrotiazolo[4,5-c]quinolina-7-carboxilato de metila
O
o
2-amino-4-bromotiazol-4-carboxilato de metila (1,0 eq, 2,0 g, Processo 5
AcHN—^
OH NH2-HCI
n'CH3 À ° A HO
Br
2-acetamido-4-oxo-4,5-di-hidrotiazolo[4,5-c]quinolina-7- carboxilato de metila foi preparado de acordo com o procedimento emprega- do no procedimento 2, a partir de 2-acetamido-5-bromotiazol-4-carboxilato de metila. 2-acetamido-4-oxo-4,5-di-hidrotiazolo[4,5-c]quinolina-7-carboxilato de metila foi isolado como um sólido preto (106 mg, 37% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 318 [M+1]+.
Processo 6
Acido 2-acetamido-4-oxo-4,5-di-hidrotiazolo[4,5-c]quinolina-7- 10 carboxílico foi preparado de acordo com o procedimento no processo 3, a partir de 2-acetamido-4-oxo-4,5-di-hidrotiazolo[4,5-c]quinolina-7-carboxilato de metila. ácido acetamido-4-oxo-4,5-di-hidrotiazolo[4,5-c]quinolina-7-carbo- xílico foi isolado como um sólido preto (14 mg, 44% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, m/z 304 [M+1]+, 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz) δ 2,22 (s, 15 3H), 7,74 (dd, J = 1,2, J = 8,0, 1H), 7,89 (d, J = 8,4, 1H), 8,03 (d, J = 1,6, 1H), 12,07 (s, 1H), 12,80 (s, 1H) ppm.
Processo 7
Ácido 2-acetamido-4-oxo-4,5-di-hidrotiazolo[4,5-c]quinolina-7- carboxílico (102 mg, 0,34 mmol) foi agitado a 120°C em HCI a 6N aquoso durante a noite. Água foi adicionada e o composto foi filtrado e seco para fornecer ácido 2-amino-4-oxo-4,5-di-hidrotiazolo[4,5-c]quinolina-7-carboxílico como um sólido preto (76 mg, 86% de rendimento). LCMS (ES): 95% puro, 5 m/z 262 [M+1]+, 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,60 (d, J = 8,4, 1H), 7,70 (dd, J = 1,2, J = 8,0, 1H), 7,99 (d, J = 1,2, 1H), 11,94 (s, 1H) ppm.
Processo 8
o Cl
4-oxo-4,5-di-hidrotiazolo[4,5-c]quinolina-7-carboxilato de metila (1,0 eq, 0,62 g, 2,38 mmols) foi suspenso em tolueno. DIEA (1,5 eq, 122 ul, 10 3,57 mmols) e POCI3 (2,3 eq, 507 ul, 5,47 mmols) foram adicionados e a mistura vigorosamente agitada a 120°C durante 1 hora. Água, gelo e CH2CI2 foram adicionados e a emulsão resultante filtrada através de celite. A fase orgânica foi decantada e a fase aquosa extraída também com CH2Cb- Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre Na2SO4 e o solvente re- 15 movido a vácuo para produzir 4-clorotiazolo[4,5-c]quinolina-7-carboxilato de metila (0,31 g, 47% de rendimento). LCMS (ES): > 90% puro, m/z 279 [M+1]+.
Processo 9
Em um recipiente de micro-ondas, 4-clorotiazolo[4,5-c]quinolina- 7-carboxilato de metila (1,0 eq, 23 mg, 0,084 mmol) e anilina (13 eq, 0,1 ml, 1,1 mmol) foram misturados em NMP (0,1 ml). A mistura foi aquecida em um forno de micro-ondas a 120°C durante 10 minutos. O éster de intermediário foi purificado através de HPLC preparativa e isolado como um sólido depois da evaporação de genevac. O sólido foi agitado em uma mistura (1:1:1, 5 v:v:v) de THF, MeOH e água (0,6 ml) com LiOH (41 mg) à temperatura am- biente durante 2 horas. HCI e água foram adicionados, os solventes orgâni- cos foram evaporados e a solução deixada descansar durante 2 horas. O precipitado que lentamente formou-se foi filtrado e seco para produzir ácido 4-(fenilamino)tiazolo[4,5-c]quinolina-7-carboxílico como um sólido (8% de 10 rendimento durante 2 etapas). LCMS (ES): > 95% puro, m/z 322 [M+1]+.
Análogos representativos (Tabela 9) foram preparados pelo mesmo processo empregando 4-clorotiazolo[4,5-c]quinolina-7-carboxilato de metila e aminas apropriadas. As temperaturas de reação empregadas para as reações de micro-ondas variadas de 120°C a 180°C. Após síntese dos 15 compostos finais, os materiais foram isolados através de HPLC preparativa/ evaporação de Genevac. Em alguns exemplos, os materiais precipitaram depois da acidificação e foram isolados através de filtragem.
Tabela 9
Estrutura MW LCMS (ES) m/z HN-O^ch 345,37 346 [M+1]+ O I sTil O JX 339,34 340 [M+1]+ Π Ϊ sVi O Estrutura MW LCMS (ES) m/z ην'^'χι 373,79 374 [M+1]+ π I sIiIl O HN O 3 351,38 352 [M+1f <A 1 s^Yi O Exemplo 4
Modulação de CK2 e atividade de PARP em ensaios in vitro de célula livre
Atividade modulatória de compostos descritos aqui foi avaliada in vitro em ensaios de célula livre CK2. Atividade modulatória de compostos descritos aqui também são avaliadas in vitro em ensaios de célula livre PARP. Estes ensaios são descritos daqui em seguida.
Ensaio de CK2
Compostos de teste em solução aquosa foram adicionados em um volume de 10 microlitros, a uma mistura reacional compreendendo 10 10 microlitros de Tampão de Diluição de Ensaio (ADB; MOPS a 20 mM, pH 7,2, beta-glicerolfosfato a 25 mM, EGTA a 5 mM, ortovanadato de sódio e ditio- treitol a 1 mM), 10 microlitros de peptídeo de substrato (RRRDDDSDDD, dissolvido em ADB a uma concentração de 1 mM), 10 microlitros de CK2 humano recombinante (25 ng dissolvidos em ADB; no interior). Reações fo- 15 ram iniciadas pela adição de 10 microlitros de Solução de ATP (90% de Mg- Cl2 a 75 mM, 75 micromolar de ATP dissolvidos em ADB; 10% de [γ-33Ρ]ΑΤΡ (matéria-prima 1 mCi/100 μΙ; 3000 Ci/mmol (Perkin Elmer) e mantidas duran- te 10 minutos a 30 graus C. As reações foram extintas com 100 microlitros de ácido fosfórico a 0,75%, em seguida transferidas e filtradas através de uma placa de filtro de fosfocelulose (Millipore). Depois de lavar cada poço 5 vezes com ácido fosfórico a 0,75%, a placa foi seca sob vácuo durante 5 minutos e, seguindo a adição de 15 ul de fluido de cintilação para cada poço, a radioatividade residual foi medida empregando um contador Iuminescente 5 Wallac.
Ensaio de PARP
Ensaios de PARP são administrados empregando um kit de en- saio de PARP quimioluminescente (Trevigen). Brevemente, reações são e- xecutadas em poços de separação revestidos de histona, por adição de 10 10 microlitros de composto de teste dissolvidos em Tampão 1X PARP (prepa- rado misturando 20X Tampão de PARP diluído com água de pureza eleva- da) e 15 microlitros de enzima de PARP-HSA diluídos (diluídos em tampão de 1X PARP, 0,1 unidade por poço) a 25 microlitros de coquetel de PARP (preparado de coquetel de 10X PARP e 10X DNA ativado, ambos 2,5 micro- 15 litros por poço e 20 microlitros por poço de tampão de 1X PARP). As rea- ções são incubadas à temperatura ambiente durante 60 minutos, em segui- da o líquido foi removido. Depois de lavar os poços quatro vezes com PBS (200 ul), 50 microlitros de solução de STREP-HRP (Rábano picante peroxi- dase) (diluída 500 vezes em diluente 1X Strep) foram adicionados e as rea- 20 ções foram deixadas incubar durante 30 minutos à temperatura ambiente. O líquido foi removido e, depois de lavar os poços quatro vezes com PBS (200 ul), 50 microlitros de cada um de PeroxyGIo AeB (substrato de Rábano pi- cante peroxidase Quimioluminescente) são adicionados e a quimiolumines- cência resultante quantificada no leitor de placa SpectraMax M5.
Tabelas 10 a 15 apresentam efeitos modulatórios de compostos
em atividade de CK2. Tabela 10
Composto Inibição de CK2 Inibição de PARP 0 28% (a 5 μΜ) IC50 = 0,070 μΜ O O 29% (a 5 μΜ) IC5o = 0,060 μΜ O Uv° 38% (a 5 μΜ) IC50 = 0,40 μΜ O O IC50 = 2 μΜ IC5o = 0,030 μΜ > O IC50 = 0,18 μΜ IC5o = 1,0 μΜ rVS O O IC5O = 2,5 μΜ IC5o = 0,80 μΜ ^iT°v O I IC5o = 1,0 μΜ 15% (a 1 μΜ) .N- O Composto Inibição de CK2 Inibição de PARP .JO IC50 = 1,6 μΜ 9% (a 1 μΜ) O O 16% (a 2,5 μΜ) 33% (a 1 μΜ) ^YN> N-N .JO IC50 = 0,013 μΜ [j^^j^N i^yo o I 96% (a 1 μΜ) N ^ ^N nvv^lS l^Av-0 O OlX 46% (a 1 μΜ) //n ^ N .O 78% (a 1 μΜ) ^N lVvN « > N-N Tabela 11
Estrutura CK2 IC50 (uM) % de inibição de CK2 uM 2,5 uM 1,0 uM OH 1,2 S CrS HO Cl > 10 H3C'0 OH > 10 N---^ HO S=O H OH 0,67 HO Estrutura CK2 IC50 (uM) % de inibição de CK2 uM 2,5 uM 1,0 uM H ^0H 1,1 N---' HO CH, 0,27 H /■"N' J 3 H=O HO nPN 0,95 r° HO ,^O 0,32 v( ^y0 HO .P 0,9 ^v( r° HO Estrutura CK2 IC50 (uM) % de inibição de CK2 uM 2,5 uM 1,0 uM H ^NW0 1,22 N---' λ---' r0 HO r~ N 0,43 .9 N r^° HO CH, 0,55 / 3 s-O ^o HO fyJ-Q 0,35 S-// N OH HO CH, 2 / «P O H )=\ PH3 N-^O CTS r HO Estrutura CK2 IC50 (uM) % de inibição de CK2 uM 2,5 uM 1,0 uM N-V 84% \=° HO Cl > 5 Cl 63% >Λ 0% PH3 0% O 28% CçS r° HO Estrutura CK2 IC50 (uM) % de inibição de CK2 uM 2,5 uM 1,0 uM uO 78% HO HO Λ 0% H T° N HO H-CO 0% / N AH η HO 0 29% \=° HO ^-O 0,19 Y\ \=N hn'n:N Estrutura CK2 IC50 (uM) % de inibição de CK2 uM 2,5 uM 1,0 uM H3C /=\ 1,5 >Λ HO OrS 0,31 Jssi0 HO s~\X 0,15 r HO H1C 1,1 _K> ΛΛ ^jYo HO S_A N O-CH3 0,12 Tss0 HO Estrutura CK2 IC50 (uM) % de inibição de CK2 uM 2,5 uM 1,0 uM CH- 18% sJtO y\ Vo HO ΥΛ 0,21 ^Vo HO v( 0,67 V0 HO Vo 0,97 HO PD 0,58 O/ n s---ν-Λ HO Estrutura CK2 IC50 (uM) % de inibição de CK2 uM 2,5 uM 1,0 uM CO 0,43 \^.V) HO 0,82 HN 'Kjl OrtN s~\~Á HO ^<>v> 1,17 v( 0 HO HX-O 0,43 s-f Γ p r®\ H;,c V0 HO ✓vfO 5% Qf> ^Vo H3C'0 Estrutura CK2 IC50 (uM) % de inibição de CK2 uM 2,5 uM 1,0 uM HN 0% I Λ-ΝΗ 0'S4 CH3 PH3 0% H /-*{ .N CH3 *N H 70% CH3 S_^ N CH3 *\=N hn.nn S-O 0% ^J-G 0% s-O V0 H2N Estrutura CK2 IC50 (uM) % de inibição de CK2 uM 2,5 uM 1,0 uM ^χ-Ο 0% νΛ S= lH HN^-N νΛ 0% S=N hV 0 νΑ 71% X=N hn.n,n rJt<^ 84% (A-4 N---' s ΥΛ S=lH HNv N N <yW 80% s -I t1 p ( / H "X=N HN'n'N Estrutura CK2 IC50 (uM) % de inibição de CK2 uM 2,5 uM 1,0 uM νΑ 77% \=N hnVn m M CH3 75% S_^ N Cl VnI hn.n,n H-C-O 61% s-í Ii P Hsc \=iN hn.n,n HN^Çj^ F 65% /Vi ° Sc H \---N NL N N HN-^J^ yCH 3 68% ° CH3 S~\^U \\ H V-N nT 'n "'N Estrutura CK2 IC50 (uM) % de inibição de CK2 uM 2,5 uM 1,0 uM 0'CH3 77% ηνΛλ n^0-CH3 sXX \i H nWN Z .N ,n'N CO 60% I O LL \ hnO'°'CH» s---^V-4 H Vn nT -N n'N /v°-ch3 Ot^n s---v-( o« Vn X;n ™-0'Χ O/ N s---VU Q H Vn nL -n "'N Estrutura CK2 IC50 (uM) % de inibição de CK2 uM 2,5 uM 1,0 uM HN -^\jT N S---V-( Q H ÍTN' Nk -N N CO I 9 0-0 \^V) CO I O HN^VA _ S~\-Á \Λ H V-N r ■ n ,n'N HN^vA "V vVOH f Pn s---ν-Λ H Vn Nk 'N in'N Estrutura CK2 IC50 (uM) % de inibição de CK2 uM 2,5 uM 1,0 uM CO Λ Cl v( H TTn' N. -·Ν Cq or ch> VJ H ]TN' N. -.N in'N ΗΝ^νΛ ^S'NH2 \Xj 6 VX H )TN' N„ -N "'NI HN^fj^. PH3 OriN HO S-\J Q H V-N NL ·Ν N Estrutura CK2 IC50 (uM) % de inibição de CK2 uM 2,5 uM 1,0 uM HN AH Br Q H )TN' N ·Ν in'N £> τι HN^C^ CHa (s-Tr Qv H Vn N 'N CO Λγ^ν s---v---C O H \---N Nk ·N N A Tabela 12 mostra efeitos modulatórios de compostos em PARP e CK2. Tabela 12
Estrutura % de inibição % inibição PARP % de inibição CK2 de PARP de PARP IC50 de CK2 IC50 @ 20 uM @ 1 uM (uM) @ 10 uM (uM) O O 0 s-f%H O 85 S-Tjh /-N H3C / H N H3C 0 90 58 1 77 4 fYjNH ^'''"X==O HO O 84 27 17 CTLnh H3CO O 84 39 5 Br^V^ S-Zlm Vo HO Estrutura % de inibição % inibição PARP % de inibição CK2 de PARP de PARP IC50 de CK2 IC50 @ 20 uM @ 1 uM (uM) @ 10 uM (uM) 0 82 40 8 CTjh f-N Cr° HaC Γ H 3è^° H3C 0 22 0 22 HN D O 93 47 10 CTjih ^yo HN H3C- 2 O 95 35 16 CrV Ço HO Estrutura % de inibição % inibição PARP % de inibição CK2 de PARP de PARP IC50 de CK2 IC50 @ 20 uM @ 1 uM (uM) @ 10 uM (uM) 0 97 31 12 S-Tj H r° HN HQ-I0 O 52 0 10 QfV ^ViIO HN N=N O O 32 0 3 QfV O HN Λ H3C p H3C O 37 0 -3 HN O Q Estrutura % de inibição % inibição PARP % de inibição CK2 de PARP de PARP IC50 de CK2 IC50 @ 20 uM @ 1 uM (uM) @ 10 uM (uM) O 62 0 -9 cr> Vo HN D 0 24 0 -7 MfV HN HsCo-0 O 55 0 -10 fV\jH HN Q Cl U x) XZ I 97 83 0,2 7 Estrutura % de inibição % inibição PARP % de inibição CK2 de PARP de PARP IC50 de CK2 IC50 @20 uM @ 1 uM (uM) @ 10 uM (uM) O 96 77 0,5 -9 Cf,» HN I Q 0 95 82 0,4 2 CTjih ^y0 O p 88 65 1 -34 S-Tjh HN H3C^ O 83 55 1 -24 CTjih Ti0 HN VN U Estrutura % de inibição % inibição PARP % de inibição CK2 de PARP de PARP IC50 de CK2 IC50 @ 20 uM @ 1 uM (uM) @ 10 uM (uM) 0 93 65 0,4 -19 CT_VH HN í 0 H3C O 67 15 -22 S-Oih HN Qr0-. 0 CH3 0 97 89 0,2 3 CTjh r5:0 H P-N 3 CH3 0 94 71 0,3 7 CTjih O N 0^> CH3 Estrutura % de inibição % inibição PARP % de inibição CK2 de PARP de PARP IC50 de CK2 ICso @20 uM @ 1 uM (uM) @ 10 uM (uM) 0 90 69 0,5 0 C-Tjjh Vo HN V 0 36 14 Wj/NH HN O O -1 CrV HN ó 0 24 5 fYjNH HN vO H3C'0 Estrutura % de inibição % inibição PARP % de inibição CK2 de PARP de PARP IC50 de CK2 IC50 @ 20 uM @ 1 uM (uM) @ 10 uM (uM) O -16 fV\H HN vO H3C'0 O 72 0,3 -25 QfV O N O H,C"N 3 Cff3H3 O 49 10 CTV O HN H3C Estrutura % de inibição % inibição PARP % de inibição CK2 de PARP de PARP IC50 de CK2 IC50 @ 20 uM @ 1 uM (uM) @ 10 uM (uM) 0 1 >° O HN H3C CO 27 8 O 67 0,5 -13 ®V-(NH y:lO HN H3C^O S
Estrutura % de inibição % inibição PARP % de inibição CK2 de PARP de PARP IC50 de CK2 IC50 @ 20 uM @ 1 uM (uM) @ 10 uM (uM) 0 45 1 =AJih 0 HN H3C'0 O 71 1 3 CTjNH HN NesV O 0 64 0,5 1 &Λνη ^y0 HN iD O 75 1 -13 sAfV r° HN 6 N Estrutura % de inibição % inibição PARP % de inibição CK2 de PARP de PARP IC50 de CK2 IC50 @ 20 uM @ 1 uM (uM) @ 10 uM (uM) 0 71 -24 0Λη V0 HN ò 0 29 -1 HN Q, O «■5-S 0 'b 0 96 0,03 -27 CÇV O N H 0 96 0,02 -3 0Λ» P H2N Estrutura % de inibição % inibição PARP % de inibição CK2 de PARP de PARP IC50 de CK2 IC50 @20 uM @ 1 uM (uM) @ 10 uM (uM) 0 12 41 WJnh r^° HN vO HO O 79 0,06 -14 Ctr H2N 0 74 0,4 3 QfV HO O 21 48 2,8 S_^0H vA^O HO O 51 0,5 -5 ntV lsJS5. 39 86 0,9 155^VnNH N=N Estrutura % de inibição % inibição PARP % de inibição CK2 de PARP de PARP IC5O de CK2 IC50 @ 20 uM @ 1 uM (uM) @ 10 uM (uM) O 5 44 12,5 PH3 s---ff ,n^n Cfí Ch3 HO Cl 18 18 ^-ó H3CO O 40 S~r=K^ ^OH y^o H3C'0 Tabela 13
Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) JO 0,006 0,01 l^Av-OH O CH, 0,025 0,019 1 3 ___ N HN^^ 'CH3 if^l N k^A^-OH O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) ..-O 0,07 0,06 n^VSi ULn T ;n Ν'Ν ?H3 0,311 0,13 CH3 rV^N N^A UUn T ;n N-N' ..JO 0,113 0,2 ffV^N n^Vi ^Y°'ch3 0 hn-0-o'CH3 0,004 0,007 0 jOCf 0,004 0,006 HN^^CI N^y1 O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) JO CH, I 3 ISl HN^'-' 'CH3 XXf 1,469 1,661 HN^^CI fíV^N n^á ^lf0'CH3 O J^b 25 O O / V O O oF ω1 χχρ HN^^CI f^ri ^Sr0-CH, o Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) _ X 0,01 Ul O O ML? K X \_/ /Λ W ..JO s-rcH- HNXXF 0,005 íT^i N n^Vi l^AvXOH 0 jO 0,003 νΛΛ lsSs^Av-OH 0 HNXXCI 0,002 ksj^A^OH O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) Cl 0,651 rvS kjV0OH, O HnXj^f 0,006 íYS n-Vi ^í-A^OH O hnXXf 0,006 lflYSi N-Vl lVl1s-OH 0 HN^^Xci 0,007 ifYi 1^Av-OH 0 hA« 0,006 f Ί I WJkv-OH 0 Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) hnXXf 0,047 |íV>N n^VSi T )n N~n' XIci 0,052 HN"^S íi^V^N ULn n-n"N jO 0,019 CH3 HN^5^ ™γΝγ^Ν n^Vi O Xrci 0,007 L^L'°h O H5X^ch 0,003 m^Yi l^AvOH O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) HNXXCi 0,045 Ιί-γ^ ^XO 0,009 N^y1 ^iAvQH O XX 0,005 ί^Ύ^Ν i^Av^oh ο XX 0,007 n^Vi Ι^Ι^,ΟΗ O ^xro 0,016 "'Λόγ« O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) Ν-Υι 0,005 ο hn-O^cn 0,004 n^Vi O hnO^ci > 0,5 n^Vi O jO >0,5 CH3 HN WSf Nvril CH3 1 ^^Sr° O jQ >0,5 CH3 HN 0IyYS n^\A CH3 uu> O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) JO >0,5 CH3 HN^^ HN γ N<sAn ^jV0-CHs O HNiXi^CI 0,711 X) 0,018 CH3 HN hVnY^n n^TI O Y hnX) 0,027 ΗΝγΝγ4Ν n^Vi Vi1Y0h O jo 0,051 hnYnY^n n^Yi l^Av-OH O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) °'ch3 0,069 ^ HN"Ü hnYnY^n n^Vi O °H r^j| 0,02 ΗΝγΝγ4Ν O "\ JO 0,026 ΗΝγ»γςΝ n^Vi O „ JD 0,056 OrVvS hnV^j nV^AvA kíJk^OH O . JO 0,163 H,C^N----NYNr^¥ H,cJ n^VSi KJK.OH O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ΑΤΡ) (20 um ΑΤΡ) 0~Χα. 0,107 O η 0,089 η η ηι n^Vi O Y HN^Çj^ 0,046 hnYnY^n \η ÜJL OH 0 HN^i 0,06 ^ΝγΝγ^Ν ^CH H3Cj ΝΆΛ Ilv^JL 0Η 0 HN^xJv 0,04 |^ΝγΝγ^Ν \η Oj ν-ΑΛ CH3 1<^ν0Η 0 Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) H hn^4±2 0,144 ^VnYnYv ch HNv^l NnII lí^l OH O O H HyO. 0,25 n^StS O 9H3 HN^vi 0,009 ΗΝγΝγ^Ν %H νΛ^ O «Όγ; 0,018 ίΤ^ι N F N-Vi ^1Av-OH 0 HN^C^CI 0,013 0 Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) ΗΝ'-Ο^γ'" 0,011 ίΓΝγ^ϊ Fp O H*S HnXX^f > 0,75 0YnY^n f f n^Vi 1^Av-OH O ÇH, HN-Ca 0,018 ΗΝγΝ^ΑΝ Cl N^y. l^AvOH O CH3 HN^^C^ >0,75 N N JL Cl H3C' γ Y^N ν'αΛ O HN^C^ 0,004 HN N JL Cl n^y "Y^ μ n^TI liXjAvOH O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) HN^Çj^ 0,134 Η3ΟγΝγΝγςΝ C CH3 WA^OH 0 Y HnOyf 0,009 ™γΝγ4Ν Fp «Jyk 0 jTjl 0,03 h3c^ ΗΝ'^^α ΗΝγΝγΛΝ n^AJ^ WAv-OH 0 CH3 HN^ÇjT 0,02 HN N JL Cl N-VS U^k/OH O HN^Çj^ 0,007 Η2ΝγΝ_4Ν Cl \^\^0H O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) H ΗνΌ” 0,083 LsiAv-OH 0 ΗΗ'ζΧ 0,052 H3C. ^___Ν. ,N___-Lki Cl 3 0 γ N nAS ^Αγ- OH 0 Η hJ^A=H 0,171 Η,οΛο'^ΝγΝγ^Ν nAS lL^kvOH O hN-C^ch 0,107 Η3θ^-Οχ^ν^ΝγΝ<!ΑΝ JJkrS LviAv-OH O πν'ΧΧ^οη 0,349 ch3 n^V-A WAv-OH O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) r-o HnO^ch 0,114 \Α^ΝγΝΐΐΝ ^=Lv-OH O jOl 0,05 ^ΝγΥ^Ν nAS 0 HN-^Xci 0,214 hoYnY^n n^YI 0 HN^CX Cl 0,172 H3CyNy^n n^Vi 0 HA9 JO^ch > 0,75 HN N >k nAil ^Y°'ch3 0 Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ΑΤΡ) (20 um ΑΤΡ) 0Xnh2 XX > 0,75 \| ΗΝ'·^-'"ΧΙ hnYnY^n kjV0-CH1 0 ος° ^ > 0,75 5ϊνΛ N^y1 ^aT0-CH1 O Η2Νγ0 η 0,028 ΗΝ^^ΧΙ ΗΝγΝ^ΛΝ O O O 0,021 M^rO X \_/ ΙΛ )=ζ O /- Z § ος° > 0,75 syVS N-Vl O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ΑΤΡ) (20 um ATP) HN^ 0,493 0yYS n^TI O Y HN^ 0,006 hnYnY^n n-Vi O OLvXi 0,059 "''Xlr. O H 0,026 σγώ kJL^OH O -A7 >0,75 fí^AN ν'αΛ Ι^Χ,ΟΗ O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) HnX^ch3 0,006 n^Vi O mO^L 0,011 I Ff V^OH O HN^X= 0,102 ^vS ν'ΑΛ O H hnX^-f 0,086 v^yYS n^L 1Lj^LvOH O hnX^o 0,134 NYN.a 6h3 ^av-Oh O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) hPtTiJ 0,018 ^ VyS O h "fY*\ 0,035 v'YrS N^ll lIvi^Lv-OH O C°) >0,75 N H I \t"ysÀ nAS 1L^Av-OH 0 XTf 0,168 hn^-^xi H,C. ^ N N Jl 3 Ν^^ΝγΝγ^Ν CH3 N^i 1^1.^ O nrF 0,686 On h hJ^ci \>.N. μ N Y n^^' ^ Y^n CH3 N^iJLX H^L^oih 0 Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) nrF 0,356 ^ N H HN'^/^C| 0 h30O ΗΝ'^^α 0,103 Η3°'0^^-N y N N nIT4I LviAv-OH O Y HnO1Yf > 0,75 HBYNs/n F F n^Yi 1^Ay-NH2 O Y HnOVf >0,75 ΗΝγΝ A F F N^A1A Y HnO1Yf >0,75 hnYnAn Ff n^Vi h ^AtnOH1 O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) XTf 0,513 N^N N 1 NvT li T 7 y n^A hSc O nrF 0,027 rNi η hV^ci n^VS ι^Α,οη O JOCf n^1 h hn^^ci ^^nynY^n n^VS lIs^VrOH O „ JO 0,185 Cr’ra, HvAn1Z0h O A 0,016 HN |f^AN nA\ O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) Y HnOvf > 0,75 ™γΝγ4Ν pF N^A O CH3 LJL x jl ^^N O CH3 H 3 A > 0,75 HN h3c'sYnY^n n^VS IL n vY CH3 O CH3 > 0,75 hn"^n'ch3 n^Vi I^AvOH O A 0,023 HN Η2ΝγΝ_4Ν n-Vi O A 0,015 H HN H3c^NYNY^N N"Vl VAs^OH O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) A 0,014 η Ηγ hjC'NYN^n O A >0,75 CH3 HN h3c'nYnY^n N-Yi l^XvOH O hAch 0,087 li" Ii V1V^nh2 0 Y ΗΝ-θγΡ > 0,75 ΗΝγΝ^Χ F F VS 0 WIn^CH1 H 3 HnOyf 0,014 H2NyN^A F F n^Vi ^À^OH 0 Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ΑΤΡ) (20 um ATP) O H Hf 0,093 nvsVi O A 0,01 H Ηγ ΗΟ^^ΝγΝγ^Ν n^Yi O Λ 0,035 Γ,ϊ η Hy ^Α^γγ4Ν Ν'"ΤΊ 1^AvOH O Η hV^ 0,033 α^ΝιΛ I^JLrOH O A 0,02 H H? Η3°γΝγΝγ^Ν CH3 Nv^kJs. O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) A 0,198 F F η 0 N A Γ 1 h hT ^ΝγΝαΝ N-Yl VAv-OH 0 A H Htl 0XTmXVj- kJL/OH O I H H? TYn^ 1 Ϊ VAv-OH O A H Ηϊ ΗΟ^.ΝγΝ^ΑΝ Ν-Υι VAv-OH O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ΑΤΡ) (20 um ATP) A /-V H H¥ O Ν^"^ΝγΝγ^Ν "Tl 0 .Λ H Ηΐ H3C^ Ο^Υγ^Ν nLJI 1VHyoh 0 A H3C η Ηϊ O n^tS VAv^OH O A η Ηγ H 3C O VsZ^vvZ N ^ CH3 NnAJ\ O A η η k Ηι 0'^^ΝγΝγ^Ν OH O Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 um ATP) H hiT n^Vi 0 Tabela 14
Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 uM ATP) OH 0,995 1,2 HO Cl r'° H3C'0 OH Ho ^yo N n^n H Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50(UM) (15 uM ATP) (20 uM ATP) OH 0,748 0,67 Ti0 HO H /"0H 1,258 1,1 N---' HO PH3 0,102 0,277 H f" .N CH3 CTS 0 HO hP 0,622 0,872 ^yA HO ^sJO 0,092 0,31 Cq HO Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50(UM) (15 uM ATP) (20 uM ATP) .P 0,367 0,9 N >° HO H ^NW0 0,922 1,22 N---' N---' HO N 0,168 0,518 .9 ^~Ó V0 HO CH, 0,171 0,55 / 3 νΛ r50 HO rJ^ 0,507 0,369 S---( N OH HO Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50(UM) (15 uM ΑΤΡ) (20 uM ATP) CH, 0,771 2 / O O H >=\ PH 3 v( HO H^O 0,231 0,28 ^Ac=O HO Cl Cl ®-Γ^ νΛ CH3 H N CH3 Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ΑΤΡ) (20 uM ΑΤΡ) Cj N \Λ HO 0,516 1,006 Q HO HO H T° N Ca HO Η-ζΟ Ori η s---1 \Λ Γ HO O ^ν( HO Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 uM ATP) >Λ 0,096 0,189 \=N hn.n,n H*c· /“\ 1,5 ^J y-Λ Ts0 HO HO 0,219 0,31 rJ^F 0,15 --- ® ΥΛ ^Vo HO H-C 1,1 ^K> YA r° HO Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 uM ATP) S-J N O-CH3 0,12 HO CH, νΛ HO ^sJ-Q-01 0,21 νΛ vX=O HO νΛ 0,67 Ts0 HO Y 12, r\ 0,97 \-Á ^'r=í0 HO Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50(UM) (15 uM ATP) (20 uM ATP) Co 0,32 0,58 ^yo HO ^'^sJC CHa 0,131 0,43 HO HO HN ^\jl fy^n 0,257 0,82 HO /v IOO 0,666 1,17 v( ^^r50 HO H3C-O » \_ s-Ζ /N P 0,238 0,431 H3C /^0 HO Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 uM ATP) νΛ r50 H3C'0 HN^O Or-S s---vA Q / ,Vnh Os^ CH3 CH3 ^CH3 CrS CO to 0,252 0,31 δ-δ z- W1 vA Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50(UM) (15 uM ATP) (20 uM ATP) ^JO S-O H2N S-O T=1H HNv^N x-o S-O hnY0 0 ^bÇ)~T 0,371 0,372 S-O HN. -N N (-Π 0,194 0,382 hn.nn Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50(UM) (15 uM ATP) (20 uM ATP) S-T /N P 0,172 0,3 hSc \=N ην'ν·'Ν HhQhci 0,233 0,407 vA \=N hn.n,n ^ JK>* 0,256 0,462 OfS d * \=N hn'n:n H,C-0 0,358 10 S-f /N P 7=\ h^c /=1H hn'n'N LL 0,611 0,392 Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 uM ATP) HN /CH3 0,42 0,27 0 cH3 s~\x H V-N N 'N N'N 0'CH3 0,348 0,35 HN ^O-chS sXX \Λ H \---N <Tn'n ^or 0,812 0,89 M °-CHs O H V-N r .N "'N J^/T0'CH 3 O^N s---V^/ O h V-N nT n N CO ^-tf* Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50(UM) (15 uM ΑΤΡ) (20 uM ΑΤΡ) Ό H V-N N -N "'N H ]ΓΝ' Ν. -·Ν N /V0'CH3 xrv Jj 'o Crs CH3 H V-N Nk N N Η N CrS 0 0^CH3 Xl H V-N I ,N ν'Ν ηνΧλ. c 0,458 0,406 ΟΧν s---ν-( ζχ H V-N Σ N N Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50(UM) (15 uM ATP) (20 uM ATP) & p 0,154 0,216 o X s -í? Η3° \Λ H \-N Im N HN^Ci 0,129 0,181 Cl \jÇr XX H VN X:n CT> ° CH> 0,171 0,283 Vi H V-N N N N'N ηνΑ>Λ 0,198 0,268 .S-NH2 CPn O3 H V-N r -N ™'N Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50(UM) (15 uM ATP) (20 uM ATP) ,CH3 0,485 0,524 OrtN s-í(/ Q H Vn r.>i in'N CO 0,122 0,14 HN^Çj^ 0,075 0,096 fY^N f S--- \i H VN Nk 'N ™'N HN^C^ 0,235 0,375 /V^ CHs s vC Q H \---N nT 'n N s~\^á Q H VN N >N Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50(UM) (15 uM ATP) (20 uM ATP) HN^O^O---CH3 0,346 0,423 fTff sA*A I Η 1V11. N HN N-N AJA^CH3 0,358 0,509 <ΠIl sA*A I I H JOQ fi 1 sAijiS I H VvN l „N N-N ΗΝ-Ογ·= pF <fi 1 sA-iA I I H rrCH* HN^O'0”· ^N sAA Iih V\.N » ,N N-N Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 uM ATP) jOC0> Ofi s"S^Si I I H 1V1VN S "N N-N joo 0,29 0,63 I I H a "N N-N ^n'ch» HNJ 6h» fff I H Wn Ύ "N N-N HnXXyOH 0,135 ofS 0 S [JL H VV-N η ;n N-N s-(f F 0,07 ^y0 HO Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50(UM) (15 uM ATP) (20 uM ATP) <yi~Q 0,068 s-f/1 f r5=0 HO <yí“Q 0,032 s-ÍJ C1 ^Vo HO S-If Cl 0,07 r° HO N 0-\ 0,126 y==\ cH3 HO Cry^o 0,395 HO Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50(UM) (15 uM ATP) (20 uM ATP) tf ^CH, 0,129 HO rrí"^ 0,103 N ,S-NH2 yÁ °'θ Ts0 HO í^}\ 0,081 0 HO IJr^N V 0,028 b Ny5J CH y^o HO HN^^yNv/VCH3 0,38 o <fl Ϊ s-VH I H a "N N-N Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50 (uM) (15 uM ATP) (20 uM ATP) η,Α,Ο 0,502 ofS 0 SLi H T N N-N hnOy"---n'ch> 0,549 <fY^N ° ÒHí s Ύ^Κι H VVn u ;n N-N HN-OySA™' 0,24 Ol i ° sLi H S-nN <fY^N ° ° °H> S^ViSi H u ;n N-N HnOth^On 0,363 ^N ° H T 'N N-N Estrutura CK2: IC50 (uM) CK2: IC50(UM) (15 uM ATP) (20 uM ATP) n -Hs 0,318 ΗΝ^ΑγΝ'0Η3 ofS 0 sXjI H u ;n N-N ΗΝ^^γΝ 0,237 Ol ϊ ° sTjI H « „N N-N CH3 0,288 n h io A. 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Exemplo 5
Atividade Modulatória de Proliferação Celular
Um protocolo de ensaio de proliferação celular representativo empregando corante Azul Alamar (armazenado a 4°C, uso de 20 ul por po- ço) é descrito aqui em seguida.
Conjunto de placa de 96 poços e tratamento com compostos
a. Dividir e tripsinizar as células.
b. Contar células empregando hemocitômetro.
c. Semear 4.000 - 5.000 células por poço em 100 μΙ de meio e semear em uma placa de 96 poços de acordo com o seguinte planejamento
de placa. Adicionar meio de cultura de células somente aos poços B10 a B12. Os poços B1 a B9 tiveram células mas nenhum composto adicionado.
1 23 456 789 10 11 12 A VAZIO B NENHUM COMPOSTO ADICIONADO Meio Somente C 10nM 100 nM 1 uM 10 uM Controle D 10nM 100 nM 1 uM 10 uM Compl E 10nM 100 nM 1 uM 10 uM Comp2 F 10 nM 100 nM 1 uM 10 uM Comp3 G 10 nM 100 nM 1 uM 10 uM Comp4 H VAZIO
d. Adicionar 100 μΙ de diluição de fármaco de 2X a cada poço em uma concentração mostrada no planejamento da placa acima referido. Ao mesmo tempo, adicionar 100 μΙ de meio nos poços de controle (poços B10 a Β12). O volume total é 200 μΙ/poço.
e. Incubar quatro (4) dias a 37°C, CO2 a 5% em uma incubadora
umedecida.
f. Adicionar 20 μΙ de reagente Azul Alamar a cada poço.
g. Incubar durante quatro (4) horas a 37°C, CO2 a 5% em uma
incubadora umedecida.
h. Registrar a fluorescência a um comprimento de onda de exci- tação de 544 nm e comprimento de onda de emissão de 590 nM empregan- do-se uma leitora de microplaca. Nos ensaios, as células são cultivadas com um composto de
teste durante aproximadamente quatro dias, o corante é em seguida adicio- nado as células e fluorescência do corante não reduzido é detectada depois de aproximadamente quatro horas. Diferentes tipos de células podem ser utilizados nos ensaios (por exemplo, células de carcinoma colorretal humano - 15 HCT-116, células de câncer prostático humano PC-3 e células de carcinoma pancreático humano MiaPaca). Os efeitos antiproliferativos de compostos representativos são fornecidos aqui em seguida. CD
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408 « Tabela 19 - continuação
Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) ICs0 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) A549 MCF-7 LNCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 h T^l 7,12 ν'λΛ O HN^C^T 12,63 H3C^xv___N.___N___Aikl Cl 3 O Y Y^N n^tSl 1\Av-oh 0 409 • 4 Tabela 19 - continuação
Estrutura IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) A549 MCF-7 LNCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 H hnO-^ch 31,58 h.c^o^VVS n^ti iIsAzoh 0 HN^X^CH 5,22 H3Cs/O^N^NsS1n "AS O 410 Tabela 19 - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC£0 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) A549 MCF-7 LNCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 HN^X^cH 7,05 H3CyO^^N^N^AN CH3 O XX 8,38 Λ9 H hV^Xh n^Vi 1IA-OH O Tabela 19 - continuação Estrutura IC50 (UM) IC50 (uM) IC53 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC5o (uM) A549 MCF-7 LMCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 A H 2,63 O HN-X^ci >50 hY*An νΆι l^Av-OH O Tabela 19 - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) A549 MCF-7 LNCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 η 5,48 ΗΝ'^'ΧΙ Η,ογΝγ4Ν Ν-Υι 1V11Yoh O H»c'o ηνΌ^ >50 hnYnY^n ^V°'CH, O 413 Tabela 19 - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC5,, (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC5o (uM) A549 MCF-7 LNCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 T2 Xx 27,18 hnYnY^n n'"Yi ^Y0-CH3 O <r> 7,23 X O / O )=o \-tO X \_/ >=2 O ,---CO tf Tabela 19 - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) A549 MCF-7 LMCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 ¥γ° ^jj >50 kj HN^Aa ΗΝγΝ^ΑΝ O hT jQl >50 hnYnY^n O Tabela 19 - continuação Estrutura IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) A549 MCF-7 LNCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 O1" ^ >50 sYnY^n n^Vi O H3C^ HN^ >50 0YnV^N n^Vi i^AyOH O Y HN^a 7,22 hnYnY1sN O Tabela 19 - continuação Estrutura IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC5o (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) A549 MCF-7 LMCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 A 23,54 H H1 N IJl O A 6,88 H Hf| (TYnYnY4J O Tabela 19 - continuação Estrutura IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) A549 MCF-7 LNCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 A >50 Il^iI N n^TI O Hn-XXch3 17,50 íí^l N I^AvOH O Tabela 19 - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) ICfl0 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) A549 MCF-7 LNCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 ««O*; 13,02 JL ff kA^OH O H 23,04 ^ΝγΝγ^Ν ΝνΛΛ HsAz0h O Tabela 19 - continuação Estrutura IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC5o (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) Α549 MCF-7 LNCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 H hnO"f 12,77 nASl O ΗΝ'^'Ο 20,11 ÍH» n^tS Ls-Av-OH O v" YyS > 50 LsjAyoh 0 420 Tabela 19 - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) A549 MCF-7 LNCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 Η ΗΪ^Π >50 n^ySl O Ô >50 N H I v^YyS N-Yi O Tabela 19 - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC53 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) A549 MCF-7 LMCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 jOCf >50 H-Cs N N A CH3 NsvjArAs O frF 9,66 On H HN^kCI VnV^N N In CH3 NsAA kAxzOH 0 422 Tabela 19 - continuação Estrutura IC50 (UM) IC50 (uM) IC53 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) A549 MCF-7 LNCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 rxF 33,72 f^N HN^^XI "Λ\ OH 0 XIf 25,43 h,cn An n JL 3 ο^™γΝγ^Ν n^TI l^Av-OH 0 423 Tabela 19 - continuação Estrutura IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) A549 MCF-7 LNCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 Y HnO1Yf >50 hY<>An Ff n^TI O Y hnOyF 39,84 ΗΝγΝ^ΧΝ FF "Λλ I v 424 Tabela 19 - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) ICf0 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) A549 MCF-7 LNCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 Y hnOyf 10,47 hnYnY^n Ff N^A1A I I H CH3 O .. >50 H3C ν^γΟΗ O 425 Tabela 19 - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) A549 MCF-7 LNCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 fNl H Ηϊ" Cl 5,48 lVAv-OH O n:F 12,11 ΗΝ'^'ΧΙ WVnA νΛ\ lVAv-OH O 426 • · * Tabela 19 - continuação
Estrutura IC50 (UM) IC50 (uM) ICil0 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) A549 MCF-7 LNCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 . 19,23 αία O A >50 HN A kz\z0H O CO 4,27 X CO O u. O > 2“ Η-Γ0 X \_/ 427 Tabela 19 - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) A549 MCF-7 LNCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 A 34,23 HN h3c'sYnY^n N-YS lAraCH, 0 CH3 >50 hn^^n'ch, WAvOH O 428 Tabela 19 - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) A549 MCF-7 LNCaP MDAMB231 Raji HL-60 K-562 Y hnOyf 2,52 hYy^n fF N^A1A I I H ^ΑγΝ^-γ0^Η3 0 o A >50 HN Η2ΝγΝγ4Ν n^Vi O A 4,36 H Ηΐ H3c-^NYNY^N n^Vi VLoh 0 429 Tabela 19b Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 COL0205 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 „-0 10,85 8,92 > 50 20,65 3,84 37,52 n^Yi O XXf 1,50 2,20 1,84 7,33 8,69 íYn n^Vi O 430 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 COL0205 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 xxF 3,55 3,37 íVS n^TI O JO iT^l N n^Yi SVCH3 O-N Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC60 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 HN-OvF 12,78 (f^l N N"^Ti O n 46,85 iT^i N nJti kA^OH 0 432 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 COL0205 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 HN''C/^CI 2,75 1,96 17,81 9,03 0,53 10,26 1,56 10,46 ίί-γ^ n^Yi O ΗΝ'ύ'ρ 3,34 5,69 9,34 6,98 1,08 4,19 12,43 rVS O 433 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 COL0205 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 hnXXf 3,48 6,16 3,79 14,37 6,16 16,96 N-Vi 0 hn-X^ci 1,48 8,62 18,67 8,97 4,10 12,97 irV^ nAi O 434 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 COL0205 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 nAch 2,58 7,04 2,34 20,17 0,64 7,33 12,44 8,81 íYf n^ti O HNXXF >50 ΝΛλ ULh T ,N N-N 435 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 COL0205 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 jOcci >50 HN^S íf^i N ULh J0 1,83 9,56 15,88 1,06 4,06 15,34 5,68 CH3 HN^^ hY*An O 436 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Ü5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 XTci 6,38 1,57 25,80 15,33 9,10 26,85 íf^í N L^v-OH O hn^O^ch 3,70 4,44 4,07 23,38 0,73 13,78 45,47 N^y1 0 437 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 CQL0205 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 hnXX-ci >50 (ί^Ί N νΛΛ 1ULn n-nN N^y1 >50 >50 O jOi 24,34 28,07 34,02 n^TI O 438 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 XX 3,29 28,20 31,26 lVN^OH O ,OiTXi 23,43 34,43 16,36 “Ύι - O 439 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 COL0205 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 HN-íÍX 1,63 3,62 24,00 10,10 7,53 16,64 ιΓ^ι N Nlll 0 HnX^cn 3,62 >50 41,82 nAi ^ΛγΟΗ O 440 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 Y hnO 2,16 5,02 hnYnY^n n^Vi O P JO 5,83 4,28 hnYnY^n k^AyOH O Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 0'CH3 r^fi 3,92 32,63 hnXJ hnYnY^n n^Vi 1V^OH O 0H í^l 23,53 >50 hnYnY^n n^Vi O 442 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 ..X) 9,41 34,16 hnYnY^n i^i O , JO 8,36 >50 οτΝγΝΛ HNv^J LJLoh O 443 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 . --O 10,70 >50 h3c^n^/nyny^n HsC^ IvVoh O „ JO 4,67 27,45 rt~YY% O^j n^VsSi O 444 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 CQL0205 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 N-Yi 1,65 >50 ^/γΟΗ O Y HN^CX 1,05 5,79 ΗΝγΝγ^Μ \h IWI °H O HN -Ca 3,00 8,12 [^ΝγΝγ^Ν \H H3C n^VS Iii °H O 445 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 HN "Ca 1,17 4,61 Ι^ΝγΝγ^Ν ^CH n^yS CH3 O H hn^Va. 25,31 >50 f^VNYNY^N Xh HNvxJ N-^N^L O 446 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 O H »τΟί 3,60 11,24 Yy% \h n^yL °h 0 CH, HN-Asjf 1,60 13,76 ΗΝγΝγ^Ν^0Η nAS IIJLoh 0 447 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 ΗΝ-ΟγΡ 2,60 17,87 IT^55iIn F nWI O hnX^ci 1,95 4,61 νΆι O 448 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 ΗΝ"Ογρ 4,31 35,20 N JL F F íí Ί T O HsC. „nAJL.F 49,61 >50 °γΝγ^Ν F F nWI O 449 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 CH3 HN^Q. 2,56 8,30 HN N Jk Cl νΛΛ O CH3 HN^Qi 42,69 >50 N N Jk Cl H3C' Y Y^N nWSl O 450 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 ΗΜ'ζΧ 0,61 3,62 Η2Νγ.γςΝ Cl O Η HN^O^ 36,90 33,21 H3CtNyN^An C CH3 N^AvA. O Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 Y HnO1Yf 10,01 2,03 hnYnY^n Ff n^Yi O jCl 2,37 1,61 H3C-V| hn^^ci ΗΝγΝγ4Ν "^Vi O 452 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 CH3 HN^Or 1,46 >50 HN N Cl ν-Λ\ Ιί^νγΟΗ O ΗΝ^Ό^ 0,70 8,03 Η2ΝγΝ_4Ν Cl νΛ\ S^v,OH O 453 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 H 9,48 8,53 AYv Cl lIs^jSs-OH O H 1,61 >50 H,C_^v___N. -N___λ Cl ν^Λ O 454 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 H 0,69 2,41 H3C O"*'---YV-S ν^ύΗ «!sA^oh 0 H3Cv^O.------ 0,48 1,04 iInsA^oh 0 455 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 hn^^ch 0,97 3,10 H3C V^O N γ ^ CH3 O jOl 1,20 6,66 r-o H hn^^ch ^/nYnY^n n^t\ IlsZvOH O 456 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 hnX^^. 0,82 1,30 AU I CH X^vOH O HNXXCi 15,85 >50 hoYnY^n ^iAv-0H O 457 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 Η3θγΝγ!*Ν 8,88 >50 nJyi O «ΑΧ*,* 40,00 >50 hnYnY^n ^Y0-CH3 O 458 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 0C xx 2,62 25,46 hnYnY^n ν'λΛ W0OHi O oÇ ^ 2,12 3,48 sYnY^n l^Y0OHj O 459 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 Η2ΝγΟ 20,85 >50 ^ HN^^XI ΗΝγΝ^ΛΝ N"Vi O hT jQl 43,49 >50 ΗΝγΝ^ΛΝ nJLA O 460 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 OC1" ^ 45,33 >50 YyS O hSc^i HN^ 48,86 >50 °yYS N-Vi O Y HN^a 2,59 2,60 hnYnY^n O Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 A 10,92 25,80 O H hXa 3,92 4,02 OkCxx O A 38,07 >50 i^A^oh 0 462 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 HnX^ch3 2,23 37,95 (í^l m O ÍV-N f 2,60 27,16 n-Yi I^AvOH O 463 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 H 14,89 16,11 V^YtS O H hnX^f 9,89 2,81 V^YyS νΛ\ lX^v-OH O 464 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 ^Y*An 6h3 8,68 3,48 n^S O /υΫϊ ^ >50 >50 O H Η?~]Π 22,32 19,13 /υΛ ^ ^jAy-OH 0 465 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 0 >50 >50 O XTf 1,52 44,94 h,cn ^wnI CH3 NsAx O 466 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 nrF 3,34 10,51 On h Hf^cl M M JL Y n^v^nyiY^n CH3 O nF 11,12 >50 Ι**Α^ΝγΝγ4Ν νΛ\ O 467 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 CQL0205 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 jOCf 2,86 41,52 H,CX Av N N 3 inYinY^N νΛ\ lL^Av-OH O Y HkAtf 0,33 >50 hnYnY^n Ff ujTl WAv^nh2 0 468 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 Y HN^Oyf 2,73 16,03 hYY^n Ff XXrN Y hnX\-f 3,00 18,92 hnYnY^n Ff I I H 1^Vn-CH, O 469 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IO50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 ^"XXl >50 >50 H3C O nrF 3,16 20,88 rNi η h^ci ^-nYnY^n n^tSl O 470 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 ncF 7,33 ι**Α/ΝγΝγ^Ν n^TI O . »-0 40,09 3,72 σχα, ^AvOH O Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 A 49,04 >50 HN (Í^Y^N O Y ΗΝΌγΡ 0,90 9,88 hnYnY^n Ff O CH3 Γ JL I JL ^^N^O CH3 H 3 472 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (UM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 A 7,39 >50 HN H3CTsYnY^N 3 O CH, 13,03 >50 I 3 hn^Sn/N'ch, ^AvS O 473 Tabela 19b - continuação Estrutura IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) IC50 (uM) BxPC3 C0L02Q5 PanCI SK-OV-3 MCF-10A H460 HT29 HL-60/MX2 Y hNOyf 8,76 0,44 hnYnY^n Ff "Λλ T 1 H A 43,80 >50 HN Η2Νγγ^Ν νΛ^ι 0 A 5,58 1,33 η 7 H3c^NyV^N n^Vi 0 474 Exemplo 6
Modulação de Atividade de CK2 Endóqena
A linhagem de células T Jurkat de leucemia humana foi mantida em RPMI 1640 (Cambrex) suplementado com soro de bezerro fetal a 10% e Gentamicina a 50 ng/ml. Antes do tratamento, as células foram lavadas, res- suspensas a uma densidade de cerca de 106 células/mililitro em meio con- tendo soro de bezerro fetal a 1% e incubadas na presença de quantidades indicadas de fármacos durante duas horas. As células foram recuperadas através de centrifugação, Iisadas empregando-se um tampão hipotônico (Tris/HCI a 20 mM pH 7,4; EDTA a 2 mM; EGTA a 5 mM; mercaptoetanol a mM; NaF a 10 mM; ácido ocadaico a 1 uM; glicerol a 10% v/v; NP-40 a 0,05%; Coquetel de Inibidor de Protease a 1%) e a proteína do Iisado purifi- cado foi diluída a 1 micrograma por microlitro em Tampão de Diluição de En- saio (ADB; MOPS a 20mM, pH 7,2, β-glicerolfosfato a 25 mM, EGTA a 5 mM, ortovanadato de sódio a 1 mM e ditiotreitol a 1 mM). A 20 microlitros de proteína diluída foram adicionados 10 microlitros de peptídeo de substrato (RRRDDDSDDD, dissolvido em ADB a uma concentração de 1 mM) e 10 microlitros de coquetel de Inibidor de PKA (Upstate). A reações foram inicia- das pela adição de 10 microlitros de Solução de ATP (90% de MgCI2 a 75 mM, ATP a 100 uM dissolvido em ADB; 10% de [gama-33P]ATP (matéria- prima 1 mCi/100 microlitros; 3000 Ci/mmol (Perkin Elmer)) e mantidas duran- te 15 minutos a 32 graus C. As reações foram extintas com 100 microlitros de ácido fosfórico a 0,75%, e em seguida transferidas e filtradas através de uma placa de filtro de fosfocelulose (Millipore). Após a lavagem de cada po- ço 5 vezes com ácido fosfórico a 0,75%, a radioatividade residual foi medida empregando-se um contador de luminescência Wallac.
As atividades moduladoras de dois compostos avaliadas pelo ensaio são mostradas na Figura 1. As estruturas dos compostos são forne- cidas abaixo: Composto 1
Composto 2.
Como mostrado na Figura 1, cada uma dos dois compostos ini- biu significativamente a atividade de CK2 endógena quando comparado ao controle não tratado. Cada um dos dois compostos também inibiu mais po- tentemente a atividade de CK2 endógena quando comparado ao composto de referência 4,5,6,7-tetrabromobenzotriazol (TBB), um conhecido inibidor de CK2 (Ruzzene e outros, Biochem J. 15: 364(Pt 1):41-7 (2002)).
Tabela 20: Modulação de atividade de CK2 endógena
Estrutura Modulação de atividade de CK2 endógena IC5o (uM) ΗΝΧΧρ 25,8 (1 ! s l*il 0 S-íf F 4,338 Tl0 HO Estrutura Modulação de atividade de CK2 endógena IC50 (uM) 's JN F 3,564 ^'''X==O HO Q}\ 10,66 HO ^ss=C CH 8,36 ^'''Xs=O HO CH, 50 H >/ K N-7 CH3 Tsi0 HO ^JK) 15,7 ΥΛ \=° HO Estrutura Modulação de atividade de CK2 endógena IC5o (uM) v( 50 /=1H HNv^N íb 9,59 O NjO, Η 37,89 H \-N N -N N HN^Çj( 4,426 f S~\^L Q H V-N I ,N "'N Cl 0,58 ΗΝ-^Í^CI /Tl 1 sVi O Tabela 20b: Modulação de atividade de CK2 endógena
Estrutura Modulação de atividade de CK2 endógena IC50 (uM) .,JO 7,4 "''Tl O CH, > 50 I 3 HKTx^ CH3 n^TI O ...X) 19,87 IiN N-Yi ^Y0-CH3 O XX CH 2,325 HN^^O' 3 N^Vl k^Av/OH O XYp 0,464 HN^^CI AAn n^Vi W^v-OH O Estrutura Modulação de atividade de CK2 endógena IC50 (uM) χγ 7,066 n^Vi kjSr0-CH1 O XX CH >50 Hnx^aO' 3 íf^l N h^yx ^V'CH, O XYf >50 HNT^XI NJSv^> m ijA^, 0 /Yf 1,056 HIM^^XI lfYS n^Yi O HNXXF 2,933 N-Yi ^Av-OH O Estrutura Modulação de atividade de CK2 endógena IC50 (uM) X) 0,688 n^Y1 O ΗΝΧΧ0Ι 0,1 n^Yi 0 UM^Xf 0,269 λΛ ^Av-OH 0 HN-CXF 0,026 rNrS n^Yi i^Av.oh 0 J^ch 0,098 ί'Γί n^Vi 0 Estrutura Modulação de atividade de CK2 endógena IC5o (uM) HNXX 0,63 fíV-N ναΛ ULh H > N-N JOCci 0,22 HN^^S ΝΛλ ULn T > N-N XTc' 0,017 ^ 1 (Tt^ L^yoh O f-V^N 0,07 N^AJ\ U5^Av-OH 0 HN'''CX'ci 1,016 ΝΛλ ULn 11 ‘n N-N' Estrutura Modulação de atividade de CK2 endógena IC50 (uM) XX 0,64 ίί^Υ^Ν n^TI ^uAv-OH 0 XX 3,6 írV>N "Λ\ 0 rXTO 2,5 N^1nA kAyOH O Á 1,351 íí^^l N N^l l^Av-OH O hn^VA. 0,01 ,N. .N. A111 ^ I^ γ -N xCH Ch3 LL0h O Estrutura Modulação de atividade de CK2 endógena IC50 (uM) v^yVS 0,01 0 HnX^f 0,098 ínyS Fp n^TI O HN^C^ 0,044 Η2ΝγΝΎ^Ν Cl "aCV O Y HnOyf 0,01 HN N JL F p ΜΝγ Y^M h n^Vi 0 jOl 0,01 H3C^| hn'^/^ci ΗΝγΝγλΝ N"Vi 0 Estrutura Modulação de atividade de CK2 endógena IC50 (uM) HN-Ot" 0,044 Η2Νγγ4Ν Cl 'ί,Α,ΟΗ O η η N-Ctf 0,03 ^ΝγΝ%Α Cl N-AA O HN^G^ 0.047 h3cx^nyny^n Cl Κ^γΟΗ O H I CH 0,172 Η30^0^^ΝγΝγ^Ν Ν^τ\ O XX 0,011 Γ9 H HÍ^^CH hJy\ O Estrutura Modulação de atividade de CK2 endógena IC50 (uM) XX 0,027 A H 7^>ch νΛ\ O Avaliação de Propriedades Farmacocinéticas
As propriedades farmacocinéticas dos fármacos foram investi- gadas em camundongos ICR em seguida a um bolo intravenoso (IV) e doses orais (PO) de fármaco a 5 mg/kg e 25 mg/kg respectivamente. As amostras 5 de sangue foram coletadas em tempos predeterminados e o plasma separa- do. O plasma foi separado das amostras de sangue coletadas em 5, 15 e 30 minutos e 1, 2, 4, 8 e 24 horas após a dose.
Os níveis de fármacos fcrsm quantificados peio método de LC/MS/MS descrito abaixo. A análise farmacocinética não compartimental foi 10 aplicada para a administração intravenosa. Uma régua trapezoidal linear foi empregada para computar AUC(0-24). O ti/2 e OC terminais foram calculados empregando-se os últimos três e os primeiros três pontos de dados, respec- tivamente.
A bioanálise foi executada empregando-se um instrumento de LC/MS/MS Quattro Micro no modo de detecção de MRM com um padrão interno (IS). Em resumo, amostras de plasma de 15 μΙ_ foram preparadas para análise empregando-se precipitação de proteína com 120 pL de aceto- nitrila. Os sobrenadantes foram transferidos para uma placa de 96 poços e submetidos à análise de LC-MS/MS empregando-se uma coluna PoIar-RP HPLC Phenomenex. As fases móveis foram NH4HCO3 a 10 mM em água (Solução A) e NH4HCO3 a 10 mM em metanol (Solução B). A coluna foi inici- almente equilibrada com 25% de Solução-B e a seguir com 100% de Solu- ção B durante 5 minutos. O método teve uma faixa dinâmica de 1 a 10.000 ng/mL. A quantificação dos analitos foi executada no modo de batelada com duas curvas de calibração de suporte de acordo com a lista de amostra bio- analítica.
Os perfis farmacocinéticos e parâmetros farmacocinéticos esti- mados do composto A1 abaixo são mostrados na Figura 2A e na Tabela 21.
Tabela 21. Parâmetros farmacocinéticos estimados após dosagem intrave- nosa e oral a 5 e 25 mg/kg, respectivamente.
Parâmetro PK IV PO Unidades Dose 5 25 mg/kg AUC(o-e h) 2910 1580 AUC(0“24 H) 3337 2915 nn h rp!"1 \J ...... AUC(O-Inf) 3364 3149 ng.h.ml'1 Cmax-obs N/A 343 ng/mL CpO-exp 13201 N/A ng/mL Tmax N/A 0,25 hr Kel 0,1586 0,1076 hr'1 t 1/2 4,4 6,4 hr Vd 9,4 N/A L/kg CLs 1,5 N/A L/kg/hr F(0-8 H) N/A 10,9 % F(0-inf h) N/A 18,7 % Os perfis farmacocinéticos e parâmetros farmacocinéticos esti- mados do composto de teste abaixo são mostrados na Figura 2B e Tabela 22. Tabela 22. Parâmetros farmacocinéticos estimados após dose IV e PO
Parâmetro PK IV PO Unidade Dose 3,4 24,5 mg/kg AUC(o-8 h) 3716 6005 AUC(0“24 H) 4806 9120 ng.h.ml'1 AUC(O-Inf) 4898 10895 ng.h.ml"1 Cmax-obs 4744 1600,5 ng/mL CpO-exp 5631 N/A ng/mL Tmax N/A 0,5 hr Kel 0,1418 0,0594 hr'1 t 1/2 4,9 11,7 hr Vd 4,9 N/A L/kg CLs 0,7 N/A L/kg/hr F(0-24 H) N/A 26,5 % F(O-Inf) N/A 31,1 % Exemplo 8
Avaliação de Eficácia do Composto em Supressão de Tumor
A atividade in vivo do composto A1 e composto A2 (mostrada 5 anteriormente) foi avaliada por administração intravenosa e oral a camun- dongos de xenoenxerto transportando tumor. Os experimentos in vivo segui- ram protocolos aprovados pelo comitê de uso e cuidado animal. Camundon- gos nu/nu NCr fêmeas foram adquiridos de Taconic Farms e alojados em grupo em um sistema de prateleira ventilado em um ciclo de Iuz de 12/12.
Todos os materiais do alojamento e a água foram autoclavados antes do uso. Os camundongos foram alimentados ad Iibitum com uma comida de laboratório gama-irradiada e água acidificada. Os animais foram manipula- dos sob capuzes de fluxo laminar.
O tamanho do tumor (mm3) foi calculado empregando a fórmula (I x w2)/2 onde w = largura e I = comprimento em mm do tumor. O peso do tumor foi estimado com a suposição de que 1 mg é equivalente a 1 mm3 de 5 volume de tumor.
Para administração intravenosa do composto A1, os animais fo- ram inoculados subcutaneamente no flanco direito com 5 x 106 células Mia- Paca. Os tumores foram monitorados duas vezes por semana e depois dia- riamente quando eles atingiram o tamanho apropriado para estudo. No dia 1 10 do estudo, os animais foram randomizados em n=5 grupos de tratamento com tamanhos de tumor médios por grupo 160 mm3.
15
Grp 1 Média 160,966 UTC Grp 2 Média 161,816 Gemzar Grp 3 Média 161,807 Composto de CK2 a 30 mg/kg Grp 4 Média 159,621 Composto de CK2 a 60 mg/kg % Dif. 1,363 SD 1,034. Os animais receberam 14 doses de Veículo, Gemzar a 100 mg/kg Q3D ou composto A1 a ou 30 mg/kg ou 60 mg/kg por administração 20 intravenosa QD. As medições de volume de tumor (Figura 3A) e peso corpo- ral (Figura 3B) foram registradas nos dias 3, 6, 8, 10, 13 e 15. Fotografias de animais de controle não tratados específicos e animais administrados com composto A1 a 60 mg/kg são mostradas nas Figuras 3C e 3D. O composto A1 é referido como "inibidor de CK2" nas Figuras 3A, 3B, 3C e 3D.
O composto A1 também foi administrado oralmente a animais de
xenoenxerto de MiaPaca e inibiu o crescimento do tumor. O composto A1 foi formulado como um sal de sódio a 10 mg/mL com PEG 300 a 2% e tampo- nado para pH 8,4 empregando tampão de fosfato de sódio. O composto A1 quando administrado oralmente a animais a uma dose de 100 mg/kg QDx8 e 30 em seguida 200 mg/kg QDx5 inibiu significativamente o crescimento de tu- mor em relação a um grupo de controle não tratado. Gemzar® administrado a uma dose de 80 mg/kg IP Q3D foi empregado como um controle positivo. O composto A1 também foi liberado por administração oral a 100 mg/kg a animais transportando xenoenxertos de MCF-7 e a 150 mg/kg a animais transportando xenoenxertos de PC-3, e em ambos os grupos de estudos, inibiu significativamente o crescimento do tumor.
Também foi determinado que o composto A1 reduziu a atividade
de CK2 em tumores. Avaliação da atividade de CK2 em tumores revelou que tumores de animais tratados com composto A1 tinham cerca de 40% da ati- vidade de CK2 de tumores de animais não tratados com o composto A1 ou tratados com Gemzar®.
A distribuição do composto A1 no plasma e tumores dos animais
foi avaliada. Em animais administrados com o composto A1 a 30 mg/kg IV, composto A1 a 60 mg/kg IV e composto A1 a 200 mg/kg oralmente, cerca de 6,8, 2,2 e 9,5 micromolares do composto A1, respectivamente, foram identi- ficados no plasma, e cerca de 42,9, 7,0 e 6,4 micromolares do composto A1, respectivamente, foram identificados em tumores.
O manchamento de caspase também foi avaliado como um bio- marcador para tratamento com o composto A1 de tumores. Em animais tra- tados com 60 mg/kg do composto A1 por administração IV, os níveis de manchamento celular de caspase-3 foram quatro vezes maiores do que em 20 células de controle não tratadas. Estes resultados sugerem que o mancha- mento de caspase-3 pode ser um biomarcador útil para monitorar a inibição da proliferação celular e a inibição de tumor.
Para avaliação do composto A2, o composto foi liberado por administração intravenosa e intraperitoneal a camundongos de xenoenxerto 25 tranportando tumor. Os animais foram inoculados subcutaneamente no flan- co direito com 5 x 106 células de BC-PC3. Os tumores foram monitorados duas vezes por semana e em seguida diariamente quando eles atingiram o tamanho apropriado para estudo. No Dia 1 do estudo, os animais foram ran- domizados em n=8 grupos de tratamento (n = 5 para grupos de controle po- 30 sitivo e negativos) com tamanhos de tumor médios por grupo de 97 mm3.
Grp 1 Médio 97,80 UTC
Grp 2 Médio 96,95 Gemzar Q3D Grp 3 Médio 96,68 50 mg/kg CX-5011 IV BID x 10 dias Grp 4 Médio 98,95 60 mg/kg CX-5011 IV QD x 17 dias Grp 5 Médio 96,51 100 mg/kg CX-5011 IP BID x 17 dias % Dif 2,50 5 SD 1,01
Os animais receberam 17 doses de Veículo, Gemzar a 100 mg/kg Q3D ou composto em administração intravenosa de 60 mg/kg QD ou administração intraperitoneal de 100 mg/kg BID. Um grupo ( n° 3) recebeu 10 doses de composto em administração intravenosa de 50 mg/kg BID. As 10 medições de volume de tumor e peso corporal foram registradas nos dias 1, 4, 7, 11, 13, 15, e 18, e os dados mostraram que o composto A2 inibiu signi- ficativamente a progressão de tumor (Figura 4A) embora não alterando signi- ficativamente o peso corporal (Figura 4B). A liberação do composto A2 para animais transportando xenoenxertos de MiaPaca por administração IV a 50 e 15 60 mg/kg e por administração IP a 100 mg/kg inibiu significativamente a pro- gressão do íumor. Também, a liberação do composto A2 para animais transportando xenoenxertos de MDA-MB-231 por administração IV a 30 e 60 mg/kg e por administração oral a 200 mg/kg inibiu significativamente a pro- gressão do tumor. A liberação do composto A2 para animais transportando 20 xenoenxertos de MiaPaca por administração oral a 100 mg/kg QDx8 e 200 mg/kg QDx6 inibiu significativamente a progressão do tumor. Um sal de me- glumina do composto A2 em pH 10,0 e a 10 mg/mL foi utilizado como uma formulação oral para os estudos.
Os estudos farmacocinéticos de tumor do composto A2 foram 25 executados nos quais 30 mg/kg do composto foram dosados IV QDx6. A- mostras de plasma, sangue e tumor foram extraídas no dia 1, 4 e 6 e três animais sacrificados para cada ponto do tempo. O estado estável foi alcan- çado depois de aproximadamente três dias, a declividade terminal diminui, a meia-vida aproximadamente dobra, a concentração mínima foi 4 - 5 vezes 30 mais alta depois de seis dias e não houve nenhuma diferença significante entre os dias 4 e 6.
A liberação do composto A3 para animais transportando xeno- enxertos de MiaPaca por administração IV também inibiu significativamente a progressão do tumor.
dade moduladora in vitro contra proteína cinases diferentes de CK2. A análise in vitro é conduzida empregando protocolos conhecidos (por exemplo, protocolos de ensaio descritos no endereço de web mundial upstate.com/img/pdf/KP_AssayProtocol_Booklet_v3.pdf). Os com- 10 postos descritos aqui são analisados nos ensaios e priorizados com base na atividade moduladora contra proteína cinases diferentes de CK2 e especifi- cidade quanto a CK2 ou PARP.
Exemplo 10
Avaliação da inibição de angiogênese através de ensaio de formação de tu- bo endotelial
empregando-se o Sistema de Angiogênese BD BioCoat® de 96 poços de BD Biosciences, empregando o protocolo indicado pelo fabricante.
150 ul de meio contendo FBS a 10% a 4 x 105 células/ml em cada um dos 96 poços da placa revestida com matrigel na presença ou ausência de várias concentrações de composto A2. A placa foi incubada durante 18 horas a 37°C. As células foram manchadas com calceína AM e os resultados visuali- zados por microscopia fluorescente ou por contraste de fase. Foi observado 25 que o composto A2 inibiu a formação de tubo no ensaio descrito acima em uma faixa de concentração de 1 a 5 μΜ.
5
Um ensaio de formação de tubo endotelial humano foi executado
Em resumo, células de HUVEC (de ATCC) foram suspensas em Exemplo 11
Modulação de atividade de proteína cinase em ensaio in vitro livre de células Em um ensaio de PIM-1, compostos de teste em solução aquosa são adicionados a um volume de 5 ul, a uma mistura reacional compreen- dendo 5 ul de tampão de Reação de 5x (MOPS a 40 mM, pH 7,0, EDTA a 1 mM), 2,5 ul de solução de PIM-1 humano recombinante (10 ng), 2,5 ul de peptídeo de substrato (KKRNRTLTK) e 10 ul de solução de ATP - 98% (Mg- CI2 a 75 mM, ATP a 37,5 uM) 2% ([γ-33Ρ]ΑΤΡ: 3000 Ci/mmol - Perkin El- mer). As reações são incubadas durante 10 minutos a 30°C, extinguidas com 100 ul de ácido fosfórico a 0,75%, em seguida transferidas e filtradas através de uma placa de filtro de Fosfocelulose (Millipore). Depois de lavar cada poço 5 vezes com ácido fosfórico a 0,75%, fluido de Cintilação (15 ul) é adicionado a cada poço. A radioatividade residual é medida empregando um contador de luminescência. O composto A2 inibiu PIM-1 com IC5o =189 NM. O composto A2 foi testado também quanto a sua atividade con-
tra outras proteína cinases. Os seguintes dados de IC50 de inibição de cinase foram determinados empregando ensaios de cinase radiométricos padroni- zados para cada cinase individual, o que acarreta necessariamente ligação de filtro de proteínas de substrato rotuladas por 33P pela cinase de interesse. 20 Cada valor de IC50 foi determinado em uma faixa de 10 concentrações de fármaco. As condições de reação são disponibilizadas pela URL upsta- te.com/discovery/services/IC50_profiler.q.
Cinase IC50 (nM) CDK1/cic!inaB(h) 226 CK2(h) 2 CK2a2(h) 1 c-RAF(h) > 1,000 DYRK2(h) 354 Flt3(h) 721 Flt4(h) 815 HIPK3(h) 56 ZIPK(h) 34 Os seguintes dados de inibição de cinase foram determinados em- pregando ensaios de cinase radiométricos padronizados para cada cinase indi- vidual, o que acarreta necessariamente ligação de filtro de proteínas de subs- trato rotuladas 33P pela cinase de interesse. Cada porcentagem de atividade foi 5 determinada em concentração de 0,5 μΜ do fármaco. As condições de reação estão disponíveis na URL upstate.com/discovery/services/IC50_profiler.q.
Cinase % de atividade a 0,5 μΜ CK2a2(h) -7 CK2(h) -2 Flt4(h) -1 HIPK3(h) 10 HIPK2(h) 11 ZIPK(h) 12 Flt3(D835Y)(h) 17 Pim-1(h) 27 Flt3(h) 42 Mer(h) 46 MELK(h) 49 DYRK2(h) 50 CDK1/ciclinaB(h) 52 GSK3p(h) 56 MSK2(h) 56 DRAK1(h) 62 CDK2/ciclinaA(h) 63 Lck(h) 63 Mnk2(h) 63 SRPK1(h) 66 KDR(h) 67 c-RAF(h) 69 IGF-1R(h) 73 CDK7/ciclinaH/MAT 1 (h) 77 Cinase % de atividade a 0,5 μΜ NEK2(h) 77 Rsk1(h) 78 EGFR(L861Q)(h) 79 MLK1(h) 80 p70S6K(h) 80 LOK(h) 84 EGFR(L858R)(h) 89 PKA(h) 90 TrkA(h) 90 Abl(h) 91 EGFR(T790M)(h) 92 PRAK(h) 93 Aurora-A(h) 94 Flt1(h) 95 MAPK1(h) 95 MST1(h) 96 FAK(h) 97 ROCK-I(h) 97 CHK1(h) 99 EphA7(h) 99 JAK2(h) 99 PKCa(h) 99 Tie2(h) 99 Blk(m) 100 CDK9/ciclina T1(h) 100 CK1y3(h) 100 cKit(D816H)(h) 101 IKKa(h) 101 Src(1-530)(h) 101 TAK1(h) 101 Cinase % de atividade a 0,5 μΜ Fer(h) 103 FGFR1(h) 103 CaMKI(h) 104 PKBa(h) 104 CK1y1(h) 105 IR(h) 105 PKG1a(h) 105 eEF-2K(h) 106 Plk3(h) 106 Ron(h) 106 CK1y2(h) 107 FGFR2(h) 107 MAPKAP-K2(h) 107 PKD2(h) 107 ARK5(h) 108 CDK6/ciclinaD3(h) 108 DDR2(h) 109 Lyn(h) 109 PDGFRa(h) 109 PDGFRa(D842V)(h) 109 Rse(h) 109 Yes(h) 109 BRK(h) 110 PDGFRp(h) 110 PDK1(h) 110 Ros(h) 110 cKit(V560G)(h) 111 Hck(h) 111 PKC0(h) 111 ALK(h) 112 Cinase % de atividade a 0,5 μΜ PAK2(h) 112 cKit(h) 114 Fyn(h) 114 ASK1(h) 116 Snk(h) 117 Bmx(h) 118 ZAP-70(h) 118 IRAK4(h) 119 EGFR(T790M,L858R)(h) 121 Met(h) 122 EGFR(h) 123 EphA5(h) 125 ErbB4(h) 126 MKK7p(h) 133 MEK1(h) 136 Fes(h) 139 EphB4(h) 144 CSK(h) 146 Fms(h) 174 A totalidade de cada patente, pedido de patente, publicação e documento referenciados aqui por meio deste está incorporada por referên- cia. A citação das patentes, pedidos de patente, publicações e documentos acima referidos não é uma admissão de que qualquer dos antecedentes seja 5 técnica anterior pertinente, nem constitui qualquer admissão quanto ao con- teúdo ou data destas publicações ou documentos.
Modificações podem ser feitas aos antecedentes sem se afastar dos aspectos básicos da invenção. Embora a invenção tenha sido descrita com detalhes substanciais com referência a uma ou mais modalidades es- 10 pecíficas, aqueles versados na técnica reconhecerão que mudanças podem ser feitas às modalidades especificamente descritas neste pedido, e ainda estas modificações e melhorias estão dentro do escopo e espírito da inven- 10
ção. A invenção descrita ilustrativamente aqui pode ser adequadamente pra- ticada na ausência de qualquer (quaisquer) elemento(s) não especificamente descritos aqui. Desse modo, por exemplo, em cada exemplo aqui qualquer um dos termos "compreendendo", "consistindo essencialmente em", e "con- sistindo em" podem ser substituídos por qualquer um dos outros dois termos. Desse modo, os termos e expressões que foram empregados são usados como termos de descrição e não de limitação, os equivalentes das caracte- rísticas mostrados e descritos, ou porções desta, não estão excluídas, e é reconhecido que várias modificações são possíveis dentro do escopo da in- venção. Modalidades da invenção são apresentadas nos aspectos seguin- tes.
A1. Um composto tendo uma estrutura da Fórmula I, II, Ill ou IV:
NR4Fl5 n
e sais, ésteres e tautômeros farmaceuticamente aceitáveis deste; em que:
Fórmula Il
Fórmula Ill
Fórmula IV
cada Z1, Z21 Z3, e Z4 é N ou CR3;
cada um dentre Z5, Z6, Z7 e Z8 é N ou CR6;
nenhum, um ou dois de Z1-Z4 é N são nenhum, um ou dois de
cada R3 e cada R6 são independentemente H ou um grupo Ci-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, CrC8 acila, C2-C8 heteroacila, C8-Cio arila, Cs-Ci2 heteroarila, C7-Ci2 arilalquila, ou Ce-Ci2 heteroarilalquila opcional- mente substituído,
ou cada R3 e cada R6 é independentemente halo, OR, NR2,
NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, COOR, CONR2, OOCR, COR, substituinte polar, bioisóstero de carbóxi, COOH ou NO2,
em que cada R é independentemente H ou Ci-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C8-Cio arila, C5-Cio heteroari- la, C7-Ci2 arilalquila, ou C8-Ci2 heteroarilalquila,
e em que dois R no mesmo átomo ou em átomos adjacentes podem ser ligados para formar um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente contendo um ou mais N, O ou S;
s cada grupo R, e cada anel formado por ligação de dois grupos R, é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados de halo, =0, =N-CN, =N-OR', = NR', OR', NR12, SR', SO2R', SO2NR12, NR1SO2R1, NR1CONRi2, NR1COORi, NR1COR1, CN, COOR1, CONR12, OOCR1, COR1, e NO2,
em que cada R1 é independentemente H, C1-C6 alquila, C2-C8 heteroalquila, Ci-C6 acila, C2-C6 heteroacila, C6-Cio arila, C5-Ci0 heteroarila, C7-I2 arilalquila, ou C6-12 heteroarilalquila, cada um dos quais é opcionalmen- te substituído com um ou mais grupos selecionados de halo, Ci-C4 alquila, Ci-C4 heteroalquila, CrC6 acila, C1-C6 heteroacila, hidróxi, amino, e =O;
e em que dois R1 podem ser unidos para formar um anel de 3 a 7 membros opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionados de N, OeS;
R4 é H ou um membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em CrC6 alquila, C2-C6 heteroalquila, e CrC6 acila;
cada R5 é independentemente H ou um membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em Cmo alquila, C2.io alqueni- Ia, C2-10 heteroalquila, anel C3.8 carbocíclico, e anel C3.8 heterocíclico opcio- nalmente fundidos a um carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente substi- tuído adicional; ou R5 é uma C1-I0 alquila, C2.10 alquenila, ou C2-I0 heteroal- quila substituído com um anel C3.8 carbocíclico opcionalmente substituído ou anel C3.8 heterocíclico; e
em cada -NR4R5, R4 e R5 junto com N podem formar um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituído, que pode opcionalmente conter um heteroátomo adicional selecionado de N, O e S como um membro de anel;
com a condição de que quando -NR4R5 na Fórmula (I) for -ΝΗΦ,
onde Φ é fenila opcionalmente substituída:
se todos de Z5-Z8 forem CH ou um dentre Z5-Z8 for N, pelo me- nos um dentre Z1-Z4 seja CR3 e pelo menos um R3 possa ser um substituinte não hidrogênio; ou se cada R3 for H, então Φ possa ser substituído; ou
se todos de Z5-Z8 íorem CH ou um de Z0-Z0 for N, então Z2 não seja C-OR", e Z3 não seja NH2, NO2, NHC(=0)R" ou NHC(=0)-0R", onde R" é C1-C4 alquila.
A2. O composto da modalidade A1, em que o substituinte polar é um substituinte que tem um dipolo elétrico, e opcionalmente um momento de dipolo.
A3. O composto da modalidade A1 ou A2, em que o substituinte polar aceita ou doa uma ligação de hidrogênio.
A4. O composto de qualquer uma das modalidades A1 - A3, em que o substituinte polar é selecionado de um carbóxi, um bioisóstero de car- bóxi ou outra porção derivada de ácido que existe predominantemente como um ânion em um pH de cerca de 7 a 8.
A5. O composto de qualquer uma das modalidades A1 - A3, em que 0 substituinte polar contém um OH ou NH, um oxigênio de éter, um ni- trogênio de amina, um enxofre ou nitrogênio oxidado, uma carbonila, uma nitrila, e um anel heterocíclico contendo nitrogênio ou contendo oxigênio seja aromático ou não-aromático. Α6. O composto de qualquer uma das modalidades A1 - A5, em que o substituinte polar é um carboxilato.
A7. O composto de qualquer uma das modalidades A1 - A5, em que o substituinte polar é um carboxilato ou ácido carboxílico.
que o substituinte polar é um bioisóstero de carbóxi selecionado do grupo que consiste em:
e sais do anterior, em que cada R7 é independentemente H ou um membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em C1-10 alqui-
Ia, C2-10 alquenila, C2-10 heteroalquila, anel C3-8 carbocíclico, e anel C3.8 hete- rocíclico opcionalmente fundido a um anel carbocíclico ou heterocíclico op- cionalmente substituído adicionai; ou R7 é uma C1-10 alquila, C2-10 alquenila, ou C2-10 heteroalquila substituída com um anel C3.8 carbocíclico opcional- mente substituído ou anel C3-S heterocíclico.
A9. O composto de qualquer uma das modalidades A1 - A3, em
que o substituinte polar é selecionado do grupo que consiste em ácido car- boxílico, éster carboxílico, carboxamida, tetrazol, triazol, carboximetanossul- fonamida, oxadiazol, oxotiadiazol, tiazol, aminotiazol e hidroxitiazol.
que o substituinte polar está em uma posição no anel que contém Z1-Z4.
5
A8. O composto de qualquer uma das modalidades A1 - A3, em
ο
A10. O composto de qualquer uma das modalidades A1 - A9, em Al 1. O composto de qualquer uma das modalidades A1 - A10, em que o anel que contém Z1-Z4 inclui um, dois, três ou quatro substituintes polares.
A12. O composto de qualquer uma das modalidades A1 - A10,
polar.
A13. O composto de qualquer uma das modalidades A1 - A10, em que o anel que contém Z1-Z4 é selecionado de um das estruturas seguin- tes
em que R3p é um substituinte polar e cada R3A, R3b, R3C e R30 é selecionado independentemente de substituintes R3.
A15. O composto da modalidade A14, o anel que contém Z1-Z4 ou o anel que contém Z5-Z8 é independentemente um anel de piridina, piri- midina ou piridazina opcionalmente substituído.
A16. O composto da modalidade A14, em que o anel que con- tém Z5-Z8 é selecionado do grupo que consiste em
em que cada um de Z1-Z4 é CR3 e um dos substituintes R3 é um substituinte
e
A14. O composto de qualquer uma das modalidades A1 - A10 em que pelo menos um de Z1-Z4 e Z5-Z8 é um átomo de nitrogênio. 10
15
em que cada R6A, R6B, R6C e R60 é selecionado independentemente ue substituintes R6 definidos na modalidade A1.
A17. O composto de qualquer uma das modalidades A1 - A17, em que R4 é H.
A18. O composto de qualquer uma das modalidades A1 - A17, em que R5 é um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituído.
A19. O composto de qualquer uma das modalidades A1 - A17, em que R5 é um grupo Cmo alquila substituído com um anel de 3 a 8 mem- bros opcionalmente substituído.
A20. O composto da modalidade A18, em que R5 é um anel car- bocíclico ou heterocíclico de seis membros opcionalmente substituído.
A21. O composto da modalidade A20, em que R5 é um anel de fenila opcionalmente substituído.
A22. O composto da modalidade A21, em que o composto tem uma estrutura de Fórmula I, R4 é H ou CH3 e R5 é uma fenila substituída com um ou mais substituintes halogênio ou acetileno.
A23. O composto da modalidade A22, em que o um ou mais ha- logênio ou substituintes acetileno estão no anel de fenila na posição 3, posi- ção 4 ou posição 5, ou combinações destes.
A24. O composto de qualquer uma das modalidades A1 - A17, em que R5 é uma C1.3 alquila substituída com um substituinte de anel de fe- nila, piridila ou morfolino opcionalmente substituído, ou substituído com -NR4R5 (por exemplo, -N(Chhh).
A25. O composto da modalidade A1, em que o substituinte polar é um substituinte de carbóxi, carboxialquila (por exemplo, carboximetila), tetrazol ou amida (por exemplo, -CONH2).
A26. O composto da modalidade A1, em que o substituinte R6 é
um substituinte NR4R5.
A27. O composto da modalidade A26, em que o substituinte R6 é uma porção de -NH-(Ci-C6 alquila).
A28. O composto da modalidade A1, em que cada um dentre Z1, Z2, Z3, e Z4 é CR3.
A29. O composto da modaiidade A1, em que pelo menos um R3 éH.
A30. O composto da modalidade A1, em que pelo menos dois R3
são H.
A31. O composto da modalidade A1, em que pelo menos um R6
é H.
A32. O composto da modalidade A1, em que pelo menos dois
R6 são H.
A33. O composto da modalidade A13, em que cada R3A, R3C e R30 é H e R3b é um substituinte polar.
A34. Uma composição que compreende um composto da moda- lidade A1 e um veículo farmaceuticamente aceitável.
BI. Um composto tendo uma estrutura de Fórmula V, VI, Vll ou
VIII: Fórmula V
0 Zr5 I I I 11 2S*"* JfA SR® VvIf ZV-Z’ Jf Γ Fórmula Vll
e sais, ésteres e tautômeros farmaceuticamente aceitáveis deste; em que:
cada Z11 Z2, Z31 e Z4 são independentemente N ou CR3 e ne- nhum, um ou dois dentre Z11 Z21 Z31 e Z4 é N;
cada um R3, R6a e R6b é independentemente H ou um grupo Cr Cs alquila, C2-Ce heteroalquila, C2-Ce alquenila, C2-Cs heteroalquenila, C2-Cs alquinila, C2-C8 heteroalquinila, Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-C10 arila, C5-Ci2 heteroarila, C7-Ci2 arilalquila, ou Ce-Ci2 heteroarilalquila opcional- mente substituído,
ou cada R3, R6a e R6b é independentemente halo, OR, NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, COOR, substituinte polar, bioisóstero de carbóxi, CONR2, OOCR, COR, ou NO2,
em que cada R é independentemente H ou Ci-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, CrC8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-Cio arila, C5-C10 heteroari- la, C7-Ci2 arilalquila, ou C6-Ci2 heteroarilalquila,
e em que dois R no mesmo átomo ou em átomos adjacentes pode ser ligado para formar um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente con- tendo um ou mais N, O ou S;
e cada grupo R, e cada anel formado por ligação de dois grupos R juntos, é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecio- nados de halo, =0, =N-CN, =N-OR', = NR', OR', NR12, SR', SO2R', SO2NR12, NR1SO2R', NROONR'2, NR1COOR', NR1COR', CN, COOR', CONR12, OOCR', COR', e NO2,
em que cada R' é independentemente H, Ci-Cô alquila, C2-C6
heteroalquila, Ci-C6 acila, C2-C6 heteroacila, C6-Cio arila, C5-Cio heteroarila, C7-I2 arilalquila, ou C6-I2 heteroarilalquila, cada um dos quais é opcionalmen- te substituído com um ou mais grupos selecionados de halo, C1-C4 alquila, C1-C4 heteroalquila, CrC6 acila, CrC6 heteroacila, hidróxi, amino, e =0;
e em que dois R' podem ser ligados para formar um anel de 3 a
7 membros opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionados de N, OeS,
R4 é H ou membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em CrC6 alquila, C2-C6 heteroalquila, e CrC6 acila;
cada R5 é independentemente H ou um membro opcionalmente
substituído selecionado do grupo que consiste em Cmo alquila, C2.io alqueni- la, C2.io heteroalquila, anel C3.8 carbocíclico, e anel C3.8 heterocíclico opcio- nalmente fundidos a um carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente substi- tuído adicional; ou R5 é uma Cm0 alquila, C2_io alquenila, ou C2.io heteroal- 20 quila substituída com um anel C3-8 carbocíclico opcionalmente substituído ou anel C3.8 heterocíclico; e
em cada -NR4R5, R4 e R5 junto com N podem formar um anel de
3 a 8 membros opcionalmente substituído, que pode opcionalmente conter um heteroátomo adicional selecionado de N, OeS como um membro de anel;
com a condição de que se R5 na Fórmula IV for fenila, fenila substituída, -CH(CH3)-(CH2)3-NEt2, -(CH2)3-piperazina-(CH2)3-NH2, ciclo- hexano ou butila, então um ou mais do presente R3 seja uma porção de não hidrogênio.
B2. O composto da modalidade B1, com a condição de que pelo
menos um presente R3 seja um substituinte polar.
B3. O composto da modalidade B1, em que o substituinte polar aceita ou doa uma ligação de hidrogênio.
B4. O composto da modalidade B1, em que o substituinte polar é selecionado de um carbóxi, um bioisóstero de carbóxi ou outra porção de ácido derivado que existe predominantemente como um ânion para um pH de cerca de 7 a 8.
B5. O composto da modalidade B1, em que o substituinte polar contém um OH ou NH, um oxigênio de éter, um nitrogênio de amina, um en- xofre ou nitrogênio oxidado, uma carbonila, uma nitrila, e um anel heterocí- clico contendo nitrogênio ou contendo oxigênio seja aromático ou não- aromático.
B6. O composto da modalidade B1, em que o substituinte polar é um ácido carboxílico, ou um sal, um éster ou um bioisóstero deste.
B7. O composto da modalidade B6, em que o substituinte polar é um ácido carboxílico ou um sal deste.
B8. O composto da modalidade B1, em que o substituinte polar é
um bioisóstero selecionado do grupe que consiste em:
e sais do anterior, em que cada R7 é independentemente H ou um membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em Cm0 alqui- la, C2-io alquenila, C2-I0 heteroalquila, anel C3.8 carbocíclico, e anel C3-8 hete- rocíclico opcionalmente fundido a um anel carbocíclico ou heterocíclico op- cionalmente substituído adicional; ou R7 é uma C1-10 alquila, C2.io alquenila, 10
15
ou C2-10 heteroalquila substituída com um anel C3.8 carbocíclico opcional- mente substituído ou anel C3.8 heterocíclico.
B9. O composto da modalidade B1, em que o substituinte polar é selecionado do grupo que consiste em ácido carboxílico, éster carboxílico, carboxamida, tetrazol, triazol, carboximetanossulfonamida, oxadiazol, oxoti- adiazol, tiazol, aminotiazol e hidroxitiazol.
B10. O composto de qualquer uma das modalidades B1 - B9, em que o substituinte polar está em uma posição no anel que contém Z1-Z4.
B11. O composto de qualquer uma das modalidades B1 - B10, em que o anel que contém Z1-Z4 inclui um, dois, três ou quatro substituintes polares.
B12. O composto de qualquer uma das modalidades B1 - B9, em que cada um de Z1-Z4 é CR3 e um dos substituintes R3 é um substituinte po- lar.
B13. O composto de qualquer uma das modalidades B1 - B9, em aue o anel aue contém Z1-Z4 é selecionado He uma das estruturas seoulntes
R3c
R3 P
20
p3C
em que R3p é um substituinte polar e cada R3A, R38, R3C e R30 é selecionado independentemente de substituintes R3.
B14. O composto de qualquer uma das modalidades B1 - B13, em que pelo menos um de Z1-Z4 é um átomo de nitrogênio.
B15. O composto da modalidade B14, o anel contendo Z1-Z4 é independentemente um anel de piridina, pirimidina ou piridazina opcional- mente substituído.
B16. O composto de qualquer uma das modalidades B1 - B15, em que R4 é H.
B17. O composto de qualquer uma das modalidades B1 - B16, em que R5 é um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituído.
B18. O composto de qualquer uma das modalidades B1 - B16, em que R5 é um grupo Cm0 alquila substituído com um anel de 3 a 8 mem- bros opcionalmente substituído.
B19. O composto da modalidade B18, em que R5 é um anel car- bocíclico ou heterocíclico de seis membros opcionalmente substituído.
B20. O composto da modalidade B19, em que R5 é um anel de fenila opcionalmente substituído.
B21. O composto da modalidade B20, em que o composto tem uma estrutura de Fórmula V, R4 é H ou CH3 e R5 é uma fenila substituída com um ou mais substituintes halogênio ou acetileno.
B22. O composto da modalidade B21, em que um ou mais subs- tituintes halogênio ou acetileno estão no anel de fenila na posição 3, posição
4 ou posição 5, ou combinações destes.
B23. O composto de qualquer uma das modalidades B1 - B16, em que R5 é uma Cr3 alquila substituída com um substituinte de anel de fenila, piridila ou morfolino opcionalmente substituído, ou substituído com -NR4R5 (por exemplo, -N(CH3)2).
B24. O composto da modalidade B1, em que o substituinte polar é um substituinte de carbóxi, carboxialquila (por exemplo, carboximetila), tetrazol ou amida (por exemplo, -CONH2).
B25. O composto da modalidade B1, em que o substituinte R6 é um substituinte NR4R5.
B26. O composto da modalidade B25, em que o substituinte R6 é uma porção de -NH-(CrCe alquila).
B27. O composto da modalidade B1, em que cada um de Z1, Z2,
Z3, e Z4 é CR3.
B28. O composto da modalidade B1, em que pelo menos um R3 10
é Η.
são Η.
R6a e R68 é Η.
B29. O composto da modalidade B1, em que pelo menos dois R2
B30. O composto da modalidade B1, em que pelo menos um de
B31. O composto da modalidade B1, em que cada um de R6a e
R6b é H.
B32. O composto da modalidade B13, em que cada R3a1 R3C1
R301 R6a e R6b é H e Rjb é um substituinte polar.
>3B
XII.
Cl Um composto tendo uma estrutura de Fórmula IX, X, Xl ou
MR4Rs
15
2? Fórmula Xl
ZVsk Za
Fórmula Xll
20
e sais, ésteres e tautômeros farmaceuticamente aceitáveis deste; em que:
cada Z1, Z2, Z3, e Z4 é N ou CR3 e nenhum, um ou dois de Z1, Z2, Z3, e Z4 é N;
cada R3 e R6 é independentemente H ou um grupo Ci-Cs alquila, C2-Cs heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-Cs heteroalquenila, C2-Cs alquinila, C2-C8 heteroalquinila, Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-Ci0 arila, C5-Ci2 he- teroarila, C7-Ci2 arilalquila, ou C6-Ci2 heteroarilalquila opcionalmente substi- tuído,
ou cada um R3 e R6 pode ser halo, OR, NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R1 SO2NR2, NRSO2R1 NRCONR2l NRCOOR1 NRCOR1 CN1 COOR1 substituinte polar, bioisóstero de carbóxi, CONR2, OOCR1 COR1 ou NO2l
em que cada R é independentemente H ou Ci-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-Cio arila, C5-Ci0 heteroari- la, C7-Ci2 arilalquila, ou C6-Ci2 heteroarilalquila,
e em que dois R no mesmo átomo ou em átomos adjacentes podem ser ligados para formar um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente contendo um ou mais N, O ou S;
e cada grupo R, e cada anel formado por ligação de dois grupos R juntos, é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecio- nados de halo, =0, =N-CN, =N-OR', = NR', OR', NR12, SR', SO2R', SO2NR12, NR1SO2R', NR'CONR'2, NROOOR', NR1COR', CN1 COOR', CONR12, OOCR1, COR1, e NO2,
em que cada R' é independentemente H, Ci-C6 alquila, C2-C6 heteroalquila, CrC6 acila, C2-C6 heteroacila, C6-Cio arila, C5-Cio heteroarila, C7-I2 arilalquila, ou C6-I2 heteroarilalquila, cada um dos quais é opcionalmen- te substituído com um ou mais grupos selecionados de halo, CrC4 alquila, C1-C4 heteroalquila, C1-C6 acila, C1-C6 heteroacila, hidróxi, amino, e =0;
e em que dois R' podem ser ligados para formar um anel de 3 a 7 membros opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionados de N, OeS;
R4 é H ou membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em C1-C6 alquila, C2-C6 heteroalquila, e C1-C6 acila;
cada R5 é independentemente H ou um membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em Cmo alquila, C2^o alqueni- la, C2^o heteroalquila, anel C3-8 carbocíclico, e anel C3-8 heterocíclico opcio- nalmente fundidos a um carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente substi- 30 tuído adicional; ou R5 é uma C-M0 alquila, C2-10 alquenila, ou C2^o heteroal- quila substituída com um anel C3.8 carbocíclico opcionalmente substituído ou anel C3-8 heterocíclico; e em cada -NR4R51 R4 e R5 junto com N podem formar um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituído, que pode opcionalmente conter um heteroátomo adicional selecionado de N, OeS como um membro de anel.
C2. O composto da modalidade C1, com a condição de que pelo
menos um presente R3 seja um substituinte polar.
C3. O composto da modalidade C1, em que o substituinte polar aceita ou doa uma ligação de hidrogênio.
CA. O composto da modalidade C1, em que o substituinte polar é selecionado de um carbóxi, um bioisóstero de carbóxi ou outra porção de- rivada de ácido que existe predominantemente como um ânion em um pH de cerca de 7 a 8.
C5. O composto da modalidade C1, em que o substituinte polar contém um OH ou NH, um oxigênio de éter, um nitrogênio de amina, um en- xofre ou nitrogênio oxidado, uma carbonila, uma nitrila, e um anel heterocí- clico contendo nitrogênio ou contendo oxigênio se aromático ou não- aromático.
C6. O composto da modalidade C1, em que o substituinte polar é um carboxilato.
C7. O composto da modalidade C1, em que o substituinte polar
é um ácido carboxílico.
C8. O composto da modalidade C1, em que o substituinte polar é um bioisóstero selecionado do grupo que consiste em: e sais do anterior, em que cada R7 é independentemente H ou um membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em C1-10 alqui- la, C2-10 alquenila, C2-10 heteroalquila, anel C3.8 carbocíclico, e anel C3.8 hete- rocíclico opcionalmente fundido a um anel carbocíclico ou heterocíclico op- 5 cionalmente substituído adicional; ou R7 é uma C1-I0 alquila, C2-10 alquenila, ou C2-10 heteroalquila substituída com um anel C3.8 carbocíclico opcional- mente substituído ou anel C3.8 heterocíclico.
C9. O composto da modalidade C1, em que o substituinte polar é selecionado do grupo que consiste em ácido carboxílico, éster carboxílico, carboxamida, teírazoi, triazoi, carboximetanossuifonamida, oxadiazol, oxoti- adiazol, tiazol, aminotiazol e hidroxitiazol.
C10. O composto de qualquer uma das modalidades C1 - C9, em que o substituinte polar está em uma posição no anel que contém Z1-Z4.
C11. O composto da modalidade C10, em que o anel que con- tém Z1-Z4 inclui dois, três ou quatro substituintes polares.
C12. O composto de qualquer uma das modalidades C1 - C9, em que cada um de Z1-Z4 é CR3 e um dos substituintes R3 é um substituinte polar.
C13. O composto da modalidade C1, em que o anel que contém Z1-Z4 é selecionado de uma das estruturas seguintes em que R3p é um substituinte polar e cada R3A, R381 R3C e R30 é selecionado independentemente de substituintes R3.
C14. O composto de qualquer uma das modalidades C1 - C13, em que pelo menos um dentre Z1-Z4 é um átomo de nitrogênio.
C15. O composto da modalidade C14, o anel que contém Z1-Z4 é
independentemente um anel de piridina, pirimidina ou piridazina opcional- mente substituído.
C16. O composto de qualquer uma das modalidades C1 - C15, em que R4 é H.
C17. O composto de qualquer uma das modalidades C1 - C16,
em que R5 é um anel de 3 a δ membros opcionalmente substituído.
C18. O composto de qualquer uma das modalidades C1 - C16, em que R5 é um grupo C-M0 alquila substituído com um anel de 3 a 8 mem- bros opcionalmente substituído.
C19. O composto da modalidade C18, em que R5 é um anel car-
bocíclico ou heterocíclico de seis membros opcionalmente substituído.
C20. O composto da modalidade C19, em que R5 é um anel de fenila opcionalmente substituído.
C21. O composto da modalidade C20, em que o composto tem
uma estrutura de Fórmula IX, R4 é H ou CH3 e R5 é uma fenila substituída com um ou mais substituintes halogênio ou acetileno.
C22. O composto da modalidade C21, em que o um ou mais substituintes halogênio ou acetileno estão no anel de fenila na posição 3, posição 4 ou posição 5, ou composições deste.
C23. O composto de qualquer uma das modalidades C1 - C16,
em que R5 é uma Cr3 alquila substituída com um substituinte de anel de fenila, piridila ou morfolino opcionalmente substituído, ou substituído com -NR4R5 (por exemplo, -N(CH3)2). C24. O composto da modalidade C1, em que o substituinte polar é um substituinte de carbóxi, carboxialquila (por exemplo, carboximetila), tetrazol ou amida (por exemplo, - CONH2).
C25. O composto da modalidade C1, em que o substituinte R6 é um substituinte NR4R5.
C26. O composto da modalidade C25, em que o substituinte R6 é uma porção de -NH-(Ci-C6 alquila).
C27. O composto da modalidade C1, em que cada um de Z1, Z2, Z3, e Z4 é CR3.
C28. O composto da modalidade C1, em que pelo menos um R3
é H.
R3 são H.
C29. O composto da modalidade C1, em que pelo menos dois
C30. O composto da modalidade C1, em que R6 é H.
C31. O composto da modalidade C13, em que cada R3A, R3C,
R3d e R6 é H e R3b é um substituinte polar.
C32. O composto da modalidade C1, em que o composto tem uma estrutura de Fórmula IX, R4 e R5 não são ambos hidrogênio, e R4 e R5 são independentemente H, -Y0 ou - LY1, em que Y0 é um anel de 5 membros 20 opcionalmente substituído ou anel de 6 membros opcionalmente substituído, Y1 é um anel de arila de 5 membros opcionalmente substituído ou anel de arila de 6 membros opcionalmente substituído, e L é um Iigante de C1-C20 alquila ou Iigante de C1-C20 alquileno.
C33. O composto da modalidade C1, com a condição de que se R5 na Fórmula IX for fenila, fenila substituída, -CH(CH3)-(CH2)3-NEt2, -(CH2)3-Piperazina-(CH2)3-NH2, ciclo-hexano ou butila, então um ou mais do presente R3 é uma porção de não hidrogênio.
C34. Uma composição farmacêutica compreendendo um com- posto da modalidade C1 e um veículo farmaceuticamente aceitável.
E1. Um método para identificar uma molécula-candidato que in-
terage com uma proteína de PARP, que compreende
contactar uma composição que contém uma proteína de PARP e um composto tendo uma estrutura de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI com uma molécula-candidato sob condições nas quais o composto e a proteína interagem, e
determinar se a quantidade do composto que interage com a proteína é modulada relativa a uma interação de controle entre o composto e a proteína sem a molécula-candidato, por meio de que uma molécula- candidato que modula a quantidade do composto interagindo com a proteína relativa à interação de controle é identificada como uma molécula-candidato que interage com a proteína.
E2. O método da modalidade E1, em que a proteína de PARP compreende a seqüência de aminoácido de SEQ ID NO: 1 ou uma variante substancialmente idêntica deste.
E3. O método da modalidade E1 ou E2, em que a proteína está em uma célula.
E4. O método de qualquer uma das modalidades E1 - E3, em que a proteína está em um sistema livre de célula.
E5. O método de qualquer uma das modalidades E1 - E4, em que a proteína, o composto ou a molécula está em associação com uma fa- se sólida.
E6. O método de qualquer uma das modalidades E1 - E5, em que a interação entre o composto e a proteína é detectada por meio de um rótulo detectável.
E7. O método da modalidade E6, em que a proteína compreen- de um rótulo detectável.
E8. O método da modalidade E6, em que o composto compre- ende um rótulo detectável.
E9. O método de qualquer uma das modalidades E1 - E5, em que a interação entre o composto e a proteína é detectada sem um rótulo detectável.
F1. Um método para modulação da atividade de uma proteína de PARP, que compreende contactar um sistema compreendendo a proteína com um composto tendo uma estrutura de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI em uma quantidade eficaz para modula- ção da atividade da proteína.
F2. O método da modalidade F1, em que a atividade da proteína
é inibida.
F3. O método de F1 ou F2, em que o sistema é uma célula.
F4. O método de qualquer uma das modalidades F1 - F3, em que o sistema é um sistema livre de célula.
F5. O método de qualquer uma das modalidades F1 - F4, em que a proteína ou o composto está em associação com uma fase sólida.
G1. Um método para inibição de proliferação de célula, que
compreende contactação de células com um composto tendo uma estrutura de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI em uma quantidade eficaz para inibir a proliferação das células.
G2. O método da modalidade G1, em que as células estão em uma linhagem de célula.
G3. O método da modalidade G2, em que as células estão em uma linhagem de célula de câncer.
G4. O método da modalidade G3, em que a linhagem de célula de câncer é uma linhagem de célula de câncer de mama, câncer prostático, câncer pancreático, câncer do pulmão, câncer hemopoético, câncer colorre- tal, câncer de pele, câncer de ovário.
G5. O método da modalidade G4, em que a linhagem de célula de câncer é uma linhagem de célula de câncer de mama, câncer prostático ou câncer pancreático.
G6. O método da modalidade G1, em que as células estão em
um tecido.
G7. O método da modalidade G1, em que as células estão em um indivíduo.
G8. O método da modalidade G1, em que as células estão em
um tumor.
G9. O método da modalidade G1, em que as células estão em um tumor em um indivíduo. G10. O método de qualquer uma das modalidades G1 - G9, que também compreende indução de apoptose celular.
G11. O método da modalidade G1, em que as células são de um olho de um indivíduo tendo degeneração macular.
G12. O método da modalidade G1, em que as células estão em
um indivíduo tendo degeneração macular.
H1. Um método para tratar de uma condição relacionada à proli- feração de célula aberrante que compreende administração de um composto tendo uma estrutura de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI a um indivíduo com necessidade deste em uma quantidade eficaz para tratar a condição proliferativa celular.
H2. O método da modalidade H1, em que a condição proliferati- va de célula é um câncer associado a tumor.
H3. O método da modalidade H1 ou H2, em que o câncer é da mama, próstata, pâncreas, pulmão, colorreto, pele, ou ovário.
H4. O método da modalidade H1, em que a condição celular pro- liferativa é um câncer de não-tumor.
H5. O método da modalidade H4, em que o câncer de não-tumor é um câncer hemopoético.
H6. O método da modalidade H1, em que a condição celular pro-
liferativa é degeneração macular.
11. Um método para tratar câncer ou um distúrbio inflamatório em um indivíduo com necessidade de tal tratamento, compreendendo:
administrar ao indivíduo um quantidade terapeuticamente eficaz de um agente terapêutico que tem uma estrutura de Fórmula I, II, III, IV, V,
VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI ou um sal farmaceuticamente aceitável deste; e
administrar ao indivíduo uma molécula que inibe PARP ou CK2 em uma quantidade que é eficaz para aumentar um efeito desejado do agen- te terapêutico.
12. O método da modalidade 11, em que a molécula que inibe PARP ou CK2 é um composto tendo uma estrutura de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
13. 0 método da modalidade 11, em que o agente terapêutico é:
o o
N N
H \
ou um isômero ou mistura específica de isômeros deste, ou um sal farma- ceuticamente aceitável deste.
14. O método de qualquer uma das modalidades 11 - 13, em que o agente terapêutico e a molécula que inibem PARP ou CK2 são administra- dos substancialmente ao mesmo tempo.
15. O método de qualquer uma das modalidades 11 - 13, em que o agente terapêutico e molécula que inibe PARr ou CK2 são simultanea- mente empregados pelo indivíduo.
16. O método de qualquer uma das modalidades 11 - 13, em que o agente terapêutico e a molécula que inibe PARP ou CK2 são combinados em uma composição farmacêutica.
17. Uma composição farmacêutica compreendendo um agente
terapêutico de qualquer uma das fórmulas TA1-1, TA2, TA3-1, TA4-1, TA5-1 ou TA6 misturado com uma molécula que inibe PARP ou CK2, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
18. A composição farmacêutica da modalidade 17, em que a mo- lécula que inibe PARP ou CK2 é um inibidor de PARP e é um composto co- nhecido mostrado acima, ou é GPI 15427, GPI 16539.
19. A composição farmacêutica da modalidade 17, em que a mo- lécula que inibe PARP ou CK2 é um composto da Fórmula I, II, III, IV, V, VI,
VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI tal como descrito aqui, ou um sal
farmaceuticamente aceitável deste.
110. A composição farmacêutica da modalidade 19, em que o a- gente terapêutico é um composto de fórmula TA2 ou um sal farmacêutica- mente aceitável deste.
111. Uma composição terapêutica compreendendo: uma quantidade terapeuticamente eficaz de agente terapêutico da fórmula TA2:
ou um isômero ou mistura específica de isômeros deste, ou um sal farma- ceuticamente aceitável deste,
misturado com uma quantidade de um inibidor de PARP ou um sal farmaceuticamente aceitável de um inibidor de PARP, em que o inibidor de PARP é selecionado do grupo que consiste em GPI 15427, GPI 16539, e os compostos conhecidos mostrados acima; e
em que a quantidade do inibidor de PARP ou o sal farmaceuti- camente aceitável de um inibidor de PARP é uma quantidade que é eficaz para aumentar um efeito desejado do agente terapêutico.
M1. Um composto tendo uma estrutura das Fórmulas XIII, XIV,
XVe XVI:
COOH Fórmula XIV e sais, ésteres, pró-fármacos e tautômeros farmaceuticamente aceitáveis deste; em que:
Z5 é N ou CR6a;
cada um R6A, R681 R6C e R8 é independentemente H ou um gru- po Ci-Ca alquila, C2-Ce heteroalquila, C2-Ce alquenila, C2-Cs heteroalquenila, C2-Cs alquinila, C2-Cs heteroalquinila, Ci-Cs acila, C2-Cs heteroacila, Ce-Cio arila, C5-Ci2 heteroarila, C7-Ci2 arilalquila, ou C8-C12 heteroarilalquila opcio- nalmente substituído,
ou cada R6A, R68, R6C e R8 é independentemente halo, CF3, CFN, OR, NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R1 SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, COOR, bioisóstero de carbóxi, CONR2, OOCR, COR, ou NO2,
R9 é independentemente um grupo Ci-C8 alquila, C2-C8 hetero- alquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 hetero- alquinila, Ci-Ce acila, C2-Ce heteroacila, C8-Ci0 arila, C5-Ci2 heteroarila, C7- Ci2 arilalquila, ou Ce-Ci2 heteroarilalquila opcionalmente substituído, ou
R9 é independentemente halo, OR, NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, CO- OR, CONR2, OOCR, COR, ou NO2,
em que cada R é independentemente H ou Ci-Ce alquila, C2-Ce
heteroalquila, C2-Ce alquenila, C2-Ce heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C8-Ci0 arila, C5-Ci0 heteroari- la, C7-C12 arilalquila, ou C8-C12 heteroarilalquila,
e em que dois R no mesmo átomo ou em átomos adjacentes podem ser ligados para formar um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente contendo um ou mais N, O ou S; e cada grupo R, e cada anel formado por ligação de dois grupos R juntos, é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecio- nados de halo, =0, =N-CN, =N-OR', = NR', OR', NR'2, SR', SO2R', SO2NR12, NR1SO2R', NR'CONR'2i NROOOR1, NR1COR1, CN1 COOR1, CONR12, OOCR', COR', e NO2,
em que cada R' é independentemente H, Ci-C6 alquila, C2-C6 heteroalquila, Ci-C6 acila, C2-C6 heteroacila, C6-Ci0 arila, C5-Ci0 heteroarila, C7-12 arilalquila, ou C6-I2 heteroarilalquila, cada um dos quais é opcionalmen- te substituído com um ou mais grupos selecionados de halo, Ci-C4 alquila, CrC4 heteroalquila, CrC6 acila, CrC6 heteroacila, hidróxi, amino, e =0;
e em que dois R' podem ser ligados para formar um anel de 3 a 7 membros opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionados de N, OeS;
n é O a 4; e p é O a 4.
M2. O composto da modalidade M1, em que Z5 é N.
M3. O composto da modalidade M1, em que R8 é uma porção de carbóxi ou bioisóstero de carbóxi.
M4. O composto da modalidade M3, em que a porção de carbóxi é um carboxilato ou ácido carboxílico.
M5. O composto da modalidade M1, em que R9 é selecionado de -C=CR, -C=CH, -CH3, -CH2CH3, -CF3, -CFN, -C=N, -OR e halogênio.
M6. O composto da modalidade M5, em que R9 é selecionado de halogênio, -C=CR ou -C=CH.
M7. O composto da modalidade M6, em que R9 é halogênio.
M8. O composto da modalidade M7, em que R9 é cloro.
M9. O composto da modalidade M7, em que R9 é bromo.
M10. O composto da modalidade M6, em que R9 é -C=CH.
M11. O composto da modalidade M8, que tem a estrutura se-
guinte O
Μ12. O composto da modalidade M10, que tem a estrutura se-
guinte.
M13. O composto da modalidade M1, em que p é um ou dois. M14. O composto da modalidade M1. em que p é um.
M15. O composto da modalidade M1, em que n é um ou dois.
M16. O composto da modalidade M1, em que n é um.
NI. Um método para identificação de uma molécula-candidato que interage com uma serina treonina proteína cinase, que compreende:
contactar uma composição que contém uma serina treonina pro- teína cinase e um composto tendo uma estrutura de Fórmula I, II, III, IV, V,
VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI sob condições nas quais o composto e a proteína interagem com uma molécula-candidato, e
determinar se a quantidade do composto que interage com a proteína é modulada relativa a uma interação de controle entre o composto e 15 a proteína sem a molécula-candidato, por meio de que uma molécula- candidato que modula a quantidade do composto interagindo com a proteína relativa para a interação de controle é identificada como uma molécula- candidato que interage com a proteína.
N2. O método da modalidade N1, em que a serina treonina pro- teína cinase é uma serina treonina proteína cinase humana.
N3. O método da modalidade N1, em que a serina treonina pro- teína cinase é selecionada do grupo que consiste em CK2, CK2a2, Pim-1, CDK1/ciclinaB, c-RAF, Mer, MELK, DYRK2, Flt3, Flt3 (D835Y), Flt4, HIPK3, HIPK2, ZIPKeZIPK.
N4. O método da modalidade N1, em que a serina treonina pro- teína cinase contém um ou mais dos aminoácidos seguintes nas posições que correspondem àquelas listadas em CK2 humano: Ieucina na posição 45, metionina na posição 163 e isoleucina na posição 174.
N5. O método da modalidade N4, em que a serina treonina pro- teína cinase é selecionada do grupo que consiste em CK2, STK10, HIPK2, HIPK3, DAPK3, DYK2 e PIM-1.
N6. O método da modalidade N1, em que a proteína, o compos- to ou a molécula está em associação com uma fase sólida.
N7. O método da modalidade N1, em que a interação entre o composto e a proteína é detectada por um rótulo detectável.
01. Um método para modulação de uma atividade de serina tre-
onina proteína cinase, que compreende contactar um sistema compreen- dendo uma proteína serina treonina proteína cinase com um composto de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI em uma quantidade eficaz para modulação da atividade da proteína.
02. O método da modalidade 01, em que a atividade de proteí-
na cinase é a transferência de um gama fosfato de trifosfato de adenosina para um peptídeo ou substrato de proteína.
P1. Um método para tratamento de dor ou inflamação em um indivíduo, que compreende administração de um composto de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI a um indivíduo com necessidade deste em uma quantidade eficaz para tratar a dor ou a inflama- ção.
P2. Um método para identificação de um composto que reduz inflamação ou dor, que compreende:
contactar um sistema com um composto de Fórmula I, II, III, IV,
V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI; e
detectar um sinal de dor ou sinal de inflamação no sistema, por meio de que um composto que modula o sinal de dor ou sinal de inflamação relativo a uma molécula de controle é identificado como um composto que reduz inflamação da dor.
P3. Um método para inibição de angiogênese em um indivíduo, que compreende administração a um composto de Fórmula I, II, III, IV, V, VI,
VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI a um indivíduo com necessidade deste em uma quantidade eficaz para inibir a angiogênese.
P4. Um método para identificar um composto que modula angio- gênese, que compreende contactar um sistema com um composto de Fór- mula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI; e
detectar angiogênese ou um sinal de angiogênese no sistema, por meio de que um composto que modula o angiogênese ou sinal de angio- gênese relativo a uma molécula de controle é identificado como um compos- to que modula angiogênese.
Q1. Um composto de fórmula (A):
em que o grupo rotulado α representa um anel aromático ou heteroaromático de 5 - 6 membros fundido sobre o anel que contém Q1, em que α é um anel de arila de 6 membros opcionalmente contendo um ou mais átomos de ni- trogênio como membros de anel, ou um anel de arila de cinco membros se- lecionado de tiofeno e tiazol;
Q1 é C=X, Q2 é NR5, e a ligação entre Q1 e Q2 é uma ligação única; ou Q1 é C-X-R5, Q2 é N, e a ligação entre Q1 e Q2 é uma dupla liga- ção; e
em que X representa O, S ou NR4;
cada Z1, Z2, Z3, e Z4 é N ou CR3 e um ou mais de Z1, Z2, Z3, e Z4
éCR3; cada um de Z51 Z6, Z7 e Z8 é CR6 ou N;
cada R3 e cada R6 é independentemente H ou um grupo Ci-Cs alquila, C2-Cs heteroalquila, C2-Cs alquenila, C2-Cs heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-C10 arila, C5-Ci2 heteroarila, C7-C12 arilalquila, ou C6-C12 heteroarilalquila opcional- mente substituído,
ou cada R3 e cada R6 podem ser halo, OR, NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, COOR, CONR2, OOCR, COR, ou NO2,
em que cada R é independentemente H ou C1-C8 alquila, C2-C8
heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, C1-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-C1O arila, C5-C10 heteroari- la, C7-C12 arilalquila, ou C6-C12 heteroarilalquila,
e em que dois R no mesmo átomo ou em átomos adjacentes podem ser ligados para formar um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente contendo um ou mais N, O ou S;
e cada grupo R, e cada anel formado por ligação de dois grupos R juntos, é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecio- nados de halo, =0, =N-CN, =N-OR', = NR', OR', NR12, SR', SO2R', SO2NR12, NR1SO2R', NROONRi2, NR1COORi, NR1COR1, CN, COOR1, CONR12, OOCR', COR', e NO2,
em que cada R' é independentemente H, C1-C6 alquila, C2-C6 heteroalquila, CrC6 acila, C2-C6 heteroacila, C6-C10 arila, C5-C10 heteroarila, C7--I2 arilalquila, ou C6-12 heteroarilalquila, cada um dos quais é opcionalmen- te substituído com um ou mais grupos selecionados de halo, C1-C4 alquila, C1-C4 heteroalquila, C1-C6 acila, C1-C6 heteroacila, hidróxi, amino, e =O;
e em que dois R' podem ser ligados para formar um anel de 3 a 7 membros opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionados de N, OeS,
R4 é H ou membro opcionalmente substituído selecionado do
grupo que consiste em C1-C6 alquila, C2-C6 heteroalquila, e C1-C6 acila;
cada R5 é independentemente H ou um membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em Cmo alquila, C2-10 alqueni- la, C2-10 heteroalquila, anel C3-8 carbocíclico, e anel C3.8 heterocíclico opcio- nalmente fundidos a um carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente substi- tuído adicional; ou R5 é uma Cmo alquila, C2-10 alquenila, ou C2-10 heteroal- 5 quila substituída com um anel C3.8 carbocíclico opcionalmente substituído ou anel C3-S heterocíclico; e
em cada -NR4R51 R4 e R5 junto com N podem formar um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituído, que pode opcionalmente conter um heteroátomo adicional selecionado de N, O e S como um membro de anel;
ou um sal farmaceuticamente aceitável, éster ou pró-fármaco
deste;
com a condição de que quando Q1 na Fórmula (A) for C-ΝΗφ, em que φ é fenila opcionalmente substituída:
se o anel rotulado α for um anel de seis membros que contém pelo menos um N como um membro de anel, pelo menos um R3 presente pode ser um substituinte polar, ou se cada R3 for ligação de dois grupo H, então φ deve ser substituído; e se o anel rotulado α é fenila, e três de Z1-Z4 representam CH,
então Z2 não pode ser C OR", e Z3 não pode ser NH2, NO2, NHC(=0)R" ou NHC(=0)-0R", em que R" é C1-C4 alquila.

Claims (112)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta uma estrutura de Fórmula I, II, III ou IV: <formula>formula see original document page 529</formula> e sais, ésteres e tautômeros farmaceuticamente aceitáveis deste; em que: cada Z1, Z2, Z3, e Z4 é N ou CR3; cada um dentre Z5, Z6, Z7 e Z8 é N ou CR6; nenhum, um ou dois de Z1-Z4 são N e nenhum, um ou dois de Z5-Z8 são N; cada R3 e cada R6 é independentemente H ou um grupo Ci-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-Ci0 arila, C5-Ci2 heteroarila, C7-Ci2 arilalquila, ou C6-Ci2 heteroarilalquila opcionalmente substituído, ou cada R3 e cada um R6 é independentemente halo, OR, NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, S02R, S02NR2, NRS02R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, COOR, CONR2, OOCR, COR, substituinte polar, bioisóstero de carbóxi, COOH ou N02, em que cada R é independentemente H ou Ci-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, C1-Cs acila, C2-C8 heteroacila, Ce-C1O arila, C5-C10 heteroari- la, C7-C12 arilalquila, ou C6-C12 heteroarilalquila, e em que dois R no mesmo átomo ou em átomos adjacentes podem ser ligados para formar um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente contendo um ou mais N, O ou S; e cada grupo R, e cada anel formado por ligação de dois grupos R, é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados de halo, =0, =N-CN, =N-OR', =NR', OR', NR12, SR', SO2R', SO2NR12, NR1SO2R1, NR1CONRi2, NR1COORi, NR1COR1, CN, COOR1, CONR12, OOCR', COR', e NO2, em que cada R' é independentemente H, C1-C6 alquila, C2-C6 heteroalquila, C1-C6 acila, C2-C6 heteroacila, C6-C10 arila, C5-C10 heteroarila, C7-C12 arilalquila, ou C6-C12 heteroarilalquila, cada um dos quais é opcional- mente substituído com um ou mais grupos selecionados de halo, C1-C4 al- quila, C1-C4 heteroalquila, C1-C6 acila. C1-C6 heteroacila, hidróxi, amino, e =0; e em que dois R' podem ser ligados para formar um anel de 3 a 7 membros opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionados de N, OeS; R4 é H ou um membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em C1-C6 alquila, C2-C6 heteroalquila, e C1-C6 acila; cada R5 é independentemente H ou um membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em C1-C10 alquila, C2-C10 al- quenila, C2-C10 heteroalquila, anel C3-C8 carbocíclico, e anel C3-C8 heterocí- clico opcionalmente fundido a um anel carbocíclico ou heterocíclico opcio- nalmente substituído adicional; ou R5 é uma C1-C10 alquila, C2-C10 alquenila, ou C2-C10 heteroalquila substituída com um anel C3-C8 carbocíclico opcio- nalmente substituído ou anel C3-C8 heterocíclico; e em cada -NR4R5, R4 e R5 junto com N podem formar um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituído, que pode opcionalmente conter um heteroátomo adicional selecionado de N, O e S como um membro de anel; com a condição de que quando -NR4R5 na Fórmula (I) for -ΝΗφ, onde φ é fenila opcionalmente substituída: se todos de Z5-Z8 forem CH ou um de Z5-Z8 for N1 pelo menos um de Z1-Z4 for CR3 e pelo menos um R3 possa ser um substituinte não hi- drogênio; ou se cada R3 for H, então φ possa ser substituído; ou se todos de Z5-Z8 forem CH ou um de Z5-Z8 for N1 então Z2 não seja C-OR", e Z3 não seja NH2, NO2, NHC(=0)R" ou NHC(=0)-0R", em que R" é C1-C4 alquila.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pe- lo fato de que o pelo menos um dentre R3 ou R6 é um substituinte polar, em que o referido substituinte polar é um ácido carboxílico, sal de carboxilato, éster, carboxamida, tetrazol ou bioisóstero de carbóxi.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pe- Io fato de que pelo menos um R3 é um substituinte polar.
4. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pe- lo fato de que o anel que contém Z1-Z4 é selecionado de uma das estruturas seguintes <formula>formula see original document page 531</formula> em que R3p é um substituinte polar e cada R3A, R3B, R3c e R30 é independen- temente selecionado de substituintes R3.
5. Composto de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pe- lo fato de que cada R3A, R3c e R30 é H e R3b é um substituinte polar.
6. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pe- lo fato de que pelo menos um de Z1-Z4 e Z5-Z8 é um átomo de nitrogênio.
7. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pe- lo fato de que R4 é H.
8. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pe- lo fato de que R5 é um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituído.
9. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pe- lo fato de que R5 é um grupo Cmo alquila substituído com um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituído.
10. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R5 é um anel carbocíclico ou heterocíclico de seis membros opcionalmente substituído.
11. Composto de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que R5 é um anel de fenila opcionalmente substituído.
12. Composto de acordo com a reivindicação 11: caracterizado pelo fato de que o composto tem uma estrutura de Fórmula I, R4 é H ou CH3 e R5 é uma fenila substituída com um ou mais substituintes halogênio ou a- cetileno.
13. Composto de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que um ou mais substituintes halogênio ou acetileno estão no anel de fenila na posição 3, posição 4 ou posição 5, ou combinações deste.
14. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R5 é uma C^3 alquila substituída com um substituinte de anel de fenila, piridila ou morfolino opcionalmente substituído, ou substituído com -NR4R5.
15. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o substituinte R6 é um substituinte de NR4R5.
16. Composto de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o substituinte R6 é uma porção de -NH-(Ci-C6 alquila) ou - NH-(C3-Ce cicloalquila).
17. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta uma es- trutura de Fórmula V, VI, Vll ou VIII: <formula>formula see original document page 533</formula> e sais, ésteres e tautômeros farmaceuticamente aceitáveis deste; em que: cada Z1, Z21 Z3, e Z4 é independentemente N ou CR3 e nenhum, um ou dois de Z11 Z21 Z3, e Z4 é N; cada R3, R6a e R68 é independentemente H ou um grupo Ci-Cs alquila, C2-Cs heteroalquila, C2-Cs alquenila, C2-Cs heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, CrC8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-Ci0 arila, C5-Ci2 heteroarila, C7-Ci2 arilalquila, ou C6-Ci2 heteroarilalquila opcional- mente substituído, ou cada R3, R6a e R6B é independentemente halo, OR, NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R1 SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, COOR, substituinte polar, bioisóstero de carbóxi, CONR2, OOCR, COR, ou NO2, em que cada R é independentemente H ou CrC8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, CrC8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-Ci0 arila, C5-Ci0 heteroari- la, C7-Ci2 arilalquila, ou C6-C12 heteroarilalquila, e em que dois R no mesmo átomo ou em átomos adjacentes podem ser ligados para formar um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente contendo um ou mais N, O ou S; e cada grupo R1 e cada anel formado por ligação de dois grupos R juntos, é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecio- nados de halo, =0, =N-CN, =N-OR', =NR', OR', NR12, SR', SO2R', SO2NR12, NR1SO2R', NR’CONR'2, NR1COOR', NROOR', CN, COOR', CONR'2, OOCR', COR', e NO2, em que cada R' é independentemente H, Ci-C6 alquila, C2-C6 heteroalquila, Ci-C6 acila, C2-C6 heteroacila, C6-Cio arila, C5-Cio heteroarila, C7-Ci2 arilalquila, ou C6-Ci2 heteroarilalquila cada dos quais são opcional- mente substituídos com um ou mais grupos selecionados de halo, Ci-C4 al- quila, Ci-C4 heteroalquila, CrC6 acila, Ci-C6 heteroacila, hidróxi, amino, e =0; e em que dois R' podem ser ligados para formar um anel de 3 a 7 membros opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionados de N, OeS, R4 é H ou membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em Ci-C6 alquila, C2-C6 heteroalquila, e Ci-C6 acila; cada R5 é independentemente H ou um membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em C1.C10 alquila, C2-Cio al- quenila, C2-Cio heteroalquila, anel C3-C8 carbocíclico, e anel C3-C8 heterocí- clico opcionalmente fundidos a um carbocíclico ou heterocíclico opcional- mente substituído adicional; ou R5 é uma C1.C10 alquila, C2-Cio alquenila, ou C2-Ci0 heteroalquila substituído com um anel C3-Ce carbocíclico opcional- mente substituído ou anel C3-C8 heterocíclico; e em cada - NR4R5, R4 e R5 junto com N podem formar um anel de3 a 8 membros opcionalmente substituído, que pode opcionalmente conter um heteroátomo adicional selecionado de N, O e S como um membro de anel; com a condição de que se R5 na Fórmula IV é fenila, fenila subs- tituída, -CH(CH3)-(CH2)3-NEt2, -(CH2)3-piperazina-(CH2)3-NH2, ciclo-hexanos ou butila, então um ou mais do R3 presente seja uma porção de não hidro- gênio.
18. Composto de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um de R3 ou R6a ou R6b é um substituinte po- lar, em que o referido substituinte polar é um ácido carboxílico, sal de carbo- xilato, éster, carboxamida, tetrazol ou bioisóstero de carbóxi.
19. Composto de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que pelo menos um R3 é um substituinte polar.
20. Composto de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o anel que contém Z1-Z4 é selecionado de uma das estrutu- ras seguintes <formula>formula see original document page 535</formula> em que R3p é um substituinte polar e cada um R3A, R3B, R3c e R30 é inde- pendentemente selecionado de substituintes R3.
21. Composto de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que cada um R3A, R3c e R30 é H e R3b é um substituinte polar.
22. Composto de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que pelo menos um de Z1-Z4 é N.
23. Composto de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que R5 é um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituído.
24. Composto de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que R5 é um grupo C1-C10 alquila substituído com um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituído.
25. Composto de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que R5 é um anel carbocíclico ou heterocíclico de seis membros opcionalmente substituído.
26. Composto de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que R5 é um anel de fenila opcionalmente substituído.
27. Composto de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o composto tem uma estrutura de Fórmula V, R4 é H ou CH3 e R5 é uma fenila substituída com um ou mais substituintes de halogênio ou acetileno.
28. Composto de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que um ou mais substituintes halogênio ou acetileno estão no anel de fenila na posição 3, posição 4 ou posição 5, ou combinações destes.
29. Composto de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que R5 é uma CrC3 alquila substituída com um substituinte de anel de fenila, piridila ou morfolino opcionalmente substituído, ou substituído com -NR4R5.
30. Composto de acordo com a reivindicação 17: caracterizado pelo fato de que o substituinte R6 é um substituinte de NR4R5.
31. Composto de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que o substituinte R6 é uma porção de NH-(CrC6 alquila) ou - NH-(C3-Cs cicloalquila).
32. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta uma es- trutura de Fórmula IX, X, Xl ou XII: <formula>formula see original document page 536</formula> <formula>formula see original document page 537</formula> e sais, ésteres e tautômeros farmaceuticamente aceitáveis deste; em que: cada um Z11 Z21 Z31 e Z4 é N ou CR3 e nenhum, um ou dois de Z11Z21 Z31 e Z4 é N; cada R3 e R6 é independentemente H ou um grupo Ci-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-Ci0 arila, C5-Ci2 he- teroarila, C7-Ci2 arilalquila, ou C6-Ci2 heteroarilalquila opcionalmente substi- tuído, ou cada R3 e R6 pode ser halo, OR, NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, CO- OR, substituinte polar, bioisóstero de carbóxi, CONR2, OOCR, COR, ou NO2, em que cada R é independentemente H ou Ci-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, CrC8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-Cio arila, C5-Cio heteroari- la, C7-Ci2 arilalquila, ou C6-C12 heteroarilalquila, e em que dois R no mesmo átomo ou em átomos adjacentes podem ser ligados para formar um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente contendo um ou mais N, O ou S; e cada grupo R, e cada anel formado por ligação de dois grupos R, é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados de halo, =0, =N-CN, =N-OR', =NR', OR', NR12, SR1, SO2R1, SO2NR12, NR1SO2R1, NR1CONRi2, NR1COOR', NR'COR', CN, COOR1, CONR'2, OOCR', COR', e NO2, em que cada R' é independentemente H, C1-C6 alquila, C2-C6 heteroalquila, C1-C6 acila, C2-C6 heteroacila, C6-C1Q arila, C5-C1Q heteroarila, C7-Ci2 arilalquila, ou C6-Ci2 heteroarilalquila, cada um dos quais é opcional- mente substituído com um ou mais grupos selecionados de halo, C1-C4 al- quila, C1-C4 heteroalquila, CrC6 acila, CrC6 heteroacila, hidróxi, amino, e =0; e em que dois R' podem ser ligados para formar um anel de 3 a 7 membros opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionados de N, OeS; R4 é H ou membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em CrC6 alquila, C2-C6 heteroalquila, e CrC6 acila; cada R5 é independentemente H ou um membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em C1.C10 alquila, C2-Cio al- quenila, C2-Cio heteroalquila, anel C3.Ce carbocíclico, e anel C3.Cs heterocí- clico opcionalmente fundidos a um carbocíclico ou heterocíclico opcional- mente substituído adicional; ou R5 é uma C1.C10 alquila, C2-Ci0 alquenila, ou C2-Cio heteroalquila substituída com um anel C3-C8 carbocíclico opcional- mente substituído ou anel C3-C8 heterocíclico; e em cada -NR4R5, R4 e R5 junto com N podem formar um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituído que pode opcionalmente conter um heteroátomo adicional selecionado de N, O e S como um membro de anel.
33. Composto de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que pelo menos um de R3 ou R6 compreende um substituinte polar, em que 0 referido substituinte polar é um ácido carboxílico, sal de car- boxilato, éster, carboxamida, tetrazol ou bioisóstero de carbóxi.
34. Composto de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que pelo menos um R3 é um substituinte polar.
35. Composto de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que o anel que contém Z1-Z4 é selecionado de uma das estrutu- ras seguintes <formula>formula see original document page 539</formula> em que R3p é um substituinte polar e cada R3A, R3b1 R3c e R30 é independen- temente selecionado de substituintes R3.
36. Composto de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que cada R3A, R3c e R30 é H e R3b é um substituinte polar.
37. Ccmpcstc de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que pelo menos um de Z1-Z4 é N.
38. Composto de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que R4 é H.
39. Composto de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que R5 é um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituído.
40. Composto de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que R5 é um grupo C1.C10 alquila substituído com um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituído.
41. Composto de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que R5 é um anel carbocíclico ou heterocíclico de seis membros opcionalmente substituído.
42. Composto de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que R5 é um anel de fenila opcionalmente substituído.
43. Composto de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo fato de que o composto tem uma estrutura de Fórmula IX, R4 é H ou CH3 e R5 é uma fenila substituída com um ou mais substituintes de halogê- nio ou acetileno.
44. Composto de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que o um ou mais substituintes halogênio ou acetileno estão no anel de fenila na posição 3, posição 4 ou posição 5, ou combinações destes.
45. Composto de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que R5 é uma Ci-C3 alquila substituída com um substituinte de anel de fenila, piridila ou morfolino opcionalmente substituído, ou substituído com -NR4R5.
46. Composto de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que o substituinte R6 é um substituinte de NR4R5.
47. Composto de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo fato de que o substituinte R6 é uma porção de -NH-(Ci-C6 alquila) ou - NH-(C3-C8 cicloalquila).
48. Composto de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que o composto tem uma estrutura de Fórmula IX, R4 e R5 não são ambos hidrogênio, e R4 e R5 são independentemente H. - Y0 ou - LY1, em que Y0 é um anel de 5 membros opcionalmente substituído ou anel de 6 membros opcionalmente substituído, Y1 é um anel de arila de 5 membros opcionalmente substituído ou anel de arila de 6 membros opcionalmente substituído, e L é um Iigante de C1-C20 alquila ou Iigante de C1-C20 alquileno.
49. Composto de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que apresenta a condição de que se R5 na Fórmula IX for fenila, fenila substituída, -CH(CH3)-(CH2)3-NEt2, -(CH2)3-piperazina-(CH2)3-NH2, ci- clo-hexanos ou butila, então um ou mais do R3 presente seja uma porção de não hidrogênio.
50. Método para identificação de uma molécula-candidato que in- terage com uma proteína de PARP, caracterizado pelo fato de que compre- ende: contactar uma composição que contém uma proteína de PARP e um composto tendo uma estrutura de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI com uma molécula-candidato sob condições nas quais o composto e a proteína interagem, e determinar se a quantidade do composto que interage com a proteína é modulada relativa a uma interação de controle entre o composto e a proteína sem a molécula-candidato, por meio de que uma molécula- candidato que modula a quantidade do composto interagindo com a proteína relativa à interação de controle é identificada como uma molécula-candidato que interage com a proteína.
51. Método de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que a proteína de PARP compreende a seqüência de aminoácido de SEQ ID NO: 4 ou uma variante substancialmente idêntica deste.
52. Método de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que a proteína está em uma célula.
53. Método de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que a proteína está em um sistema livre de célula.
54. Método de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que a proteína, o composto ou a molécula está em associação com uma fase sólida.
55. Método de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que a interação entre o composto e a proteína é detectada por meio de um rótulo detectável.
56. Método de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que a interação entre o composto e a proteína é detectada sem um rótulo detectável.
57. Método para modulação da atividade de uma proteína de PARP, caracterizado pelo fato de que compreende contactar um sistema compreendendo a proteína com um composto tendo uma estrutura de Fór- mula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI em uma quantidade eficaz para modulação da atividade da proteína.
58. Método de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que a atividade da proteína é inibida.
59. Método de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que o sistema é uma célula.
60. Método de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que o sistema é um sistema livre de célula.
61. Método para inibição de proliferação celular, caracterizado pelo fato de que compreende contactar células com um composto tendo uma estrutura de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI em uma quantidade eficaz para inibir proliferação das células.
62. Método de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo fato de que as células estão em uma linhagem de célula de câncer.
63. Método de acordo com a reivindicação 62, caracterizado pelo fato de que a linhagem de célula de câncer é uma linhagem de célula de câncer de mama, câncer prostático, câncer pancreático, câncer do pulmão, câncer hemopoético, câncer colorretal, câncer de pele, câncer de ovário.
64. Método de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo fato de que as células estão em um tumor em um indivíduo.
65. Método de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo fato de que o contato das células com um composto tendo uma estrutura de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XV! induz apoptose de célula.
66. Método de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo fato de que as células são de um olho de um indivíduo tendo degeneração macular.
67. Método de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo fato de que as células estão em um indivíduo tendo degeneração macular.
68. Método para tratar uma condição relacionada à proliferação de célula aberrante, caracterizado pelo fato de que compreende administra- ção de um composto tendo uma estrutura de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI a um indivíduo com necessidade des- te em uma quantidade eficaz para tratar a condição celular proliferativa.
69. Método de acordo com a reivindicação 68, caracterizado pelo fato de que a condição celular proliferativa é um câncer associado com tu- mor.
70. Método de acordo com a reivindicação 69, caracterizado pelo fato de que o câncer é da mama, próstata, pâncreas, pulmão, colorreto, pele, ou ovário.
71. Método de acordo com a reivindicação 68, caracterizado pelo fato de que a condição celular proliferativa é um câncer de não tumor.
72. Método de acordo com a reivindicação 71, caracterizado pelo fato de que o câncer de não tumor é um câncer hematopoético.
73. Método de acordo com a reivindicação 68, caracterizado pelo fato de que a condição celular proliferativa é generação de macular.
74. Método para tratar câncer ou um distúrbio inflamatório em um indivíduo com necessidade de tal tratamento, caracterizado pelo fato de compreende: administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente efi- caz de um agente terapêutico que tem uma estrutura de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI ou um sal farmaceutica- mente aceitável deste; e administrar ao indivíduo uma molécula que inibe PARP ou CK2 em uma quantidade que seja eficaz para aumentar um efeito desejado do agente terapêutico.
75. Método de acordo com a reivindicação 74, caracterizado pe- lo fato de que a molécula que inibe PARP ou CK2 é um composto tendo uma estrutura de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
76. Método de acordo com a reivindicação 74, caracterizado pe- lo fato de que o agente terapêutico é: <formula>formula see original document page 543</formula> ou um isômero específico ou mistura de isômeros deste, ou um sal farma- ceuticamente aceitável deste.
77. Método de acordo com a reivindicação 74, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico e a molécula que inibe PARP ou CK2 são administradas substancialmente ao mesmo tempo.
78. Método de acordo com a reivindicação 74, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico e a molécula que inibe PARP ou CK2 são simultaneamente empregados pelo indivíduo.
79. Método de acordo com a reivindicação 74, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico e a molécula que inibe PARP ou CK2 são combinados em uma composição farmacêutica.
80. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um agente terapêutico como definido em qualquer uma das fórmulas TA1-1, TA2, TA3-1, TA4-1, TA5-1, ou TA6, misturada com uma mo- lécula que inibe PARP ou CK2, ou um sal farmaceuticamente aceitável des- te.
81. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 80, caracterizada pelo fato de que a molécula que inibe PARP ou CK2 é um ini- bidor de PARP, ou é GPI 15427, GPI 16539.
82. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 80, caracterizada pelo fato de que a molécula que inibe PARP ou CK2 é um composto de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI tal como descrito aqui, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
83. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 80, caracterizada pelo fato de que o agente terapêutico é um composto da fór- mula TA2 ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
84. Composição terapêutica, caracterizada pelo fato de que compreende: um quantidade terapeuticamente eficaz de um agente terapêuti- co da fórmula TA2: <formula>formula see original document page 544</formula> ou um isômero específico ou mistura de isômeros deste, ou um sal farma- ceuticamente aceitável deste, misturado com uma quantidade de um inibidor de PARP ou um sal farmaceuticamente aceitável de um inibidor de PARP, em que o inibidor de PARP é selecionado do grupo que consiste em GPI 15427, GPI 16539, e os compostos conhecidos mostrados acima; e em que a quantidade do inibidor de PARP ou o sal farmaceuti- camente aceitável de um inibidor de PARP é uma quantidade que é eficaz para aumentar um efeito desejado do agente terapêutico.
85. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta uma estrutura de Fórmulas XIII, XIV, XV ou XVI: <formula>formula see original document page 545</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável deste; em que: Z5 é N ou CR6a; cada R , R , R e R é independentemente H ou um grupo C1-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, C1-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C8-C1O arila, C5-C12 heteroarila, C7-C12 arilalquila, ou C6-C12 heteroarilalquila opcio- nalmente substituído, ou cada R6A, R6B, R6c e R8 é independentemente halo, CF3, CFN, OR, NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NR- CONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, COOR, bioisóstero de carbóxi, CONR2, OOCR, COR, ou NO2, R9 é independentemente um grupo Ci-C8 alquila, C2-C8 hetero- alquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 hetero- alquinila, Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-Ci0 arila, C5-C12 heteroarila, C7- Ci2 arilalquila, ou C6-Ci2 heteroarilalquila opcionalmente substituído, ou R9 é independentemente halo, OR, NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, CO- OR, CONR2, OOCR, COR, ou NO2, em que cada R é independentemente H ou CrC8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-Ci0 arila, Cs-Ci0 heteroari- Ia, C7-Ci2 arilalquila, ou C6-Ci2 heteroarilalquila, e em que dois R no mesmo átomo ou em átomos adjacentes podem ser ligados para formar um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente contendo um ou mais N, O ou S; e cada grupo R, e cada anel formado por ligação de dois grupos R, é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados de halo, =0, =N-CN, =N-OR', =NR', OR', NR12, SR', SO2R', SO2NR12, NR1SO2R1, NR1CONRi2, NR1COORi, NR1COR1, CN, COOR1, CONR12, OOCR1, COR1, e NO2, em que cada R1 é independentemente H, Ci-C6 alquila, C2-C6 heteroalquila, Ci-C6 acila, C2-C6 heteroacila, C6-Ci0 arila, C5-Ci0 heteroarila, C7-C12 arilalquila, ou C6-C12 heteroarilalquila, cada um dos quais é opcional- mente substituído com um ou mais grupos selecionados de halo, C1-C4 al- quila, C1-C4 heteroalquila, C1-C6 acila, C1-C6 heteroacila, hidróxi, amino, e =0; e em que dois R1 podem ser ligados para formar um anel de 3 a 7 membros opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionado de N, OeS; n é O a 4; e p é O a 4.
86. Composto de acordo com a reivindicação 85, caracterizado pelo fato de que Z5 é N.
87. Composto de acordo com a reivindicação 85, caracterizado pelo fato de que R8 é uma porção de carbóxi ou bioisóstero de carbóxi.
88. Composto de acordo com a reivindicação 87, caracterizado pelo fato de que a porção de carbóxi é um carboxilato ou ácido carboxílico.
89. Composto de acordo com a reivindicação 85, caracterizado pelo fato de que R9 é selecionado de -C=CR, -C=CH, -CH3, -CH2CH3, -CF3, -CFN, -C=N, -OR e halogênio.
90. Composto de acordo com a reivindicação 89, caracterizado pelo fato de que R9 é selecionado de halogênio, -C=CR ou -C=CH.
91. Composto de acordo com a reivindicação 90, caracterizado pelo fato de que R9 é halogênio.
92. Composto de acordo com a reivindicação 91, caracterizado pelo fato de que R9 é cloro.
93. Composto de acordo com a reivindicação 91, caracterizado pelo fato de que R9 é bromo.
94. Composto de acordo com a reivindicação 90, caracterizado pelo fato de que R9 é - C=CH.
95. Composto de acordo com a reivindicação 92, caracterizado pelo fato de que apresenta a estrutura seguinte:
96. Composto de acordo com a reivindicação 90, caracterizado pelo fato de que apresenta a estrutura seguinte: <formula>formula see original document page 548</formula>
97. Composto de acordo com a reivindicação 90, caracterizado pelo fato de que p é um ou dois.
98. Composto de acordo com a reivindicação 90, caracterizado pelo fato de que p é um.
99. Composto de acordo com a reivindicação 90, caracterizado pelo fato de que n é um ou dois.
100. Composto de acordo com a reivindicação 90, caracterizado pelo fato de que n é um.
101. Método para identificação de uma molécula-candidato que interage com uma serina treonina proteína cinase, caracterizado pelo fato de que compreende: contactar uma composição que contém um serina treonina prote- ína cinase e um composto tendo uma estrutura de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI sob condições nas quais o com- posto e a proteína interagem com uma molécula-candidato, e determinar se a quantidade do composto que interage com a proteína é modulada relativa a uma interação de controle entre o composto e a proteína sem a molécula-candidato, por meio de que uma molécula- candidato que modula a quantidade do composto interagindo com a proteína relativa à interação de controle é identificada como uma molécula-candidato que interage com a proteína.
102. Método de acordo com a reivindicação 101, caracterizado pelo fato de que a serina treonina proteína cinase é uma serina treonina pro- teína cinase humana.
103. Método de acordo com a reivindicação 101, caracterizado pelo fato de que a serina treonina proteína cinase é selecionada do grupo que consiste em CK2, CK2a2, Pim-1, CDK1/ciclinaB, c-RAF, Mer, MELK, DYRK2, Flt3, Flt3 (D835Y), Flt4, HIPK3, HIPK2, ZIPK e ZIPK.
104. Método de acordo com a reivindicação 101, caracterizado pelo fato de que a serina treonina proteína cinase contém um ou mais dos seguintes aminoácidos nas posições que correspondem àquelas listadas em CK2 humano: Ieucina na posição 45, metionina na posição 163 e isoleucina na posição 174.
105. Método de acordo com a reivindicação 104, caracterizado pelo fato de que a serina treonina proteína cinase é selecionada do grupo que consiste em CK2, STK10, HIPK2, HIPK3, DAPK3, DYK2 e PIM-1.
106. Método de acordo com a reivindicação 101, caracterizado pelo fato de que a proteína, o composto ou a molécula está em associação com uma fase sólida.
107. Método de acordo com a reivindicação 101, caracterizado pelo fato de que a interação entre o composto e a proteína é detectada por meio de um rótulo detectável.
108. Método para modulação de uma atividade de serina treoni- na proteína cinase, caracterizado pelo fato de que compreende contactar um sistema compreendendo uma proteína de serina treonina proteína cinase com um composto de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI em uma quantidade eficaz para modulação da atividade da proteína.
109. Método de acordo com a reivindicação 108, caracterizado pelo fato de que a atividade de proteína cinase é a transferência de um ga- ma fosfato de trifosfato de adenosina para um peptídeo ou substrato de pro- teína.
110. Método para tratamento de dor ou inflamação em um indiví- duo, caracterizado pelo fato de que compreende administração de um com- posto de Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI a um indivíduo com necessidade deste em uma quantidade eficaz para tratar a dor ou a inflamação.
111. Método para inibição de angiogênese em um indivíduo, ca- racterizado pelo fato de que compreende a administração de um composto de Fórmula I, II, NI, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV ou XVI a um indivíduo com necessidade deste em uma quantidade eficaz para inibir a angiogênese.
112. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreendendo um composto de fórmula (A): <formula>formula see original document page 550</formula> em que o grupo rotulado α representa um anel aromático ou heteroaromático de 5 - 6 membros fundido sobre o anel que contém Q11 em que α é um anel de arila de 6 membros opcionalmente contendo um ou mais átomos de ni- trogênio como membros de anel, ou um anel de arila de cinco de membros selecionados de tiofeno e tiazol; Q1 é C=X, Q2 é NR5, e a ligação entre Q1 e Q2 é uma ligação única; ou Q1 é C-X-R5, Q2 é N, e a ligação entre Q1 e Q2 é uma dupla liga- ção; e em que X representa O, S ou NR4; cada Z1, Z2, Z3, e Z4 é N ou CR3 e um ou mais de Z1, Z2, Z3, e Z4 éCR3; cada de Z5, Z6, Z7 e Z8 é CR6 ou N; cada R3 e cada R6 é independentemente H ou um grupo Ci-Cs alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, Ci-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-Ci0 arila, C5-Ci2 heteroarila, C7-Ci2 arilalquila, ou C6-Ci2 heteroarilalquila opcional- mente substituído, ou cada R3 e cada R6 pode ser halo, OR1 NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, COOR, CONR2, OOCR, COR, ou NO2, em que cada R é independentemente H ou CrC8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, CrC8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-C10 arila, C5-C10 heteroari- Ia1 C7-Ci2 arilalquila, ou C6-Ci2 heteroarilalquila, e em que dois R no mesmo átomo ou em átomos adjacentes podem ser ligados para formar um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente contendo um ou mais N, O ou S; e cada grupo R, e cada anel formado por ligação de dois grupos R juntos, é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecio- nados de halo, =0, =N-CN, =N-OR', =NR', OR', NR12, SR', SO2R', SO2NR12, NR1SO2R', NR'CONR'2, NR'COOR', NR1COR', CN, COOR', CONR12, OOCR', COR', e NO2, em que cada R' é independentemente H, C1-C6 alquila, C2-C6 heteroalquila, CrC6 acila, C2-C6 heteroacila, C6-Cio arila, C5-C10 heteroarila, C7-Ci2 arilalquila, ou C6-Ci2 heteroarilalquila, cada um dos quais é opcional- mente substituído com um ou mais grupos selecionados de halo, C1-C4 al- quila, C1-C4 heteroalquila, CrC6 acila, CrC6 heteroacila, hidróxi, amino, e =0; e em que dois R' pode ser ligado para formar um anel de 3 a 7 membros opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionado de N, O e S, R4 é H ou membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em CrC6 alquila, C2-C6 heteroalquila, e CrC6 acila; cada R5 é independentemente H ou um membro opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em C1.C10 alquila, C2-C1O al- quenila, C2-Ci0 heteroalquila, anel C8-C8 carbocíclico, e anel C3-C8 heterocí- clico opcionalmente fundidos a um carbocíclico ou heterocíclico opcional- mente substituído adicional; ou R5 é uma C1-C10 alquila, C2-Cio alquenila, ou C2-Cio heteroalquila substituído com um anel C8-C8 carbocíclico opcional- mente substituído ou anel C8-C8 heterocíclico; e em cada -NR4R5, R4 e R5 junto com N podem formar um anel de 3 a 8 membros opcionalmente substituído, que pode opcionalmente conter um heteroátomo adicional selecionado de N, O e S como um membro de anel; ou um sal, éster ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável deste; com a condição de que quando Q1 na Fórmula (A) for C-NΗΦ, onde Φ é fenila opcionalmente substituída: se o anel rotulado α for um anel de seis membros que contém pelo menos um N como um membro de anel, pelo menos um R3 presente possa ser um substituinte polar, ou se cada R3 for H1 então Φ possa ser substituído; e se o anel rotulado α for fenila, e três de Z1-Z4 representarem CH, então Z2 não possa ser C-OR", e Z3 não possa ser Nhh, NO2, NHC(=0)R" ou NHC(=0)-0R", em que R" é CrC4 alquila; misturado com pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.
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