CH276049A - Procédé de préparation d'acide ptéroylglutamique. - Google Patents

Description

  Procédé de préparation d'acide     ptéroy1glutamique.       La présente invention a pour objet un pro  cédé de préparation d'acide     ptéroylglutamique       qui, dans l'une de ses formes     tautomères    au  moins, répond à, la formule suivante:

    
EMI0001.0004     
    ce procédé étant. caractérisé par le fait que  l'on fait réagir de la     2,4,5-triamino-6-hydroxy-          pyrimidine,    du     2,3-dihy        droxy        acry        lal.déhyde    et  de l'acide     p-aminobenzoylglittamique.dont    l'une  au moins des fonctions acides est bloquée par  un groupement susceptible d'être éliminé par  hydrolyse en régénérant l'acide, et en ce qu'on  hydrolyse le produit de la, réaction pour obte  nir l'acide     ptéroylglutamique.     



  L'acide     ptéroylglutamique    obtenu par le  procédé selon la présente invention est un so  lide jaune à brun rougeâtre difficilement so  luble dans l'eau et les solvants organiques. Cet  acide, comme il est connu, possède des pro  priétés analogues à celles de vitamines et  semble être nécessaire à la vie de certaines  bactéries et d'organismes plus développés du  domaine animal, ou pour en stimuler la crois  sance. Ce composé est en outre utile pour sti  muler la formation d'hémoglobine et pour le  traitement d'anémies     macrocytiques.     



  On peut préparer les sels d'acides de l'acide       ptéroylglutamique    en le traitant par des    acides minéraux forts tels que l'acide chlor  hydrique et l'acide sulfurique. On peut. aussi  en obtenir des sels de bases en le traitant au  moyen d'un alcali approprié, par exemple au  moyen d'un hydroxyde de métal alcalin, d'am  moniaque ou d'une amine. A partir de ces sels  on peut obtenir d'autres sels métalliques con  tenant des cations tels que le zinc, l'argent,  le nickel, le cuivre, le magnésium et le       baryum,    par double décomposition, par exem  ple en traitant une solution d'un sel de métal  alcalin de l'acide     ptéroy1glutamique    par un  sel soluble du cation voulu.  



  Le premier réactif, la     2,4,5-triamino-6-          hydroxy-pyrimidine,    est un composé connu  que l'on peut préparer selon les méthodes déjà  décrites dans la littérature chimique. Il est en  outre bien connu que ce composé existe sous  une ou plusieurs formes tautomères telles que  la     2,4,5-triamino-pyrimidone-6    ou la     2-imino-          4,5-diamino-pyrimidone-6.     



  La forme sous laquelle le composé existe,  c'est-à-dire la forme cétonique ou la forme           énolique,    dépend probablement du     pH    du  milieu dans lequel il est dissout. Chacune de  ces formes tautomères réagissant dans une  même réaction de manière analogue, il est  donc indifférent que l'une ou l'autre soit pré  sente.  



  Le second réactif, le     2,3-dihy        droxy        acryl-          aldéhyde,    qui sera dénommé par la suite      ré-          ductone ,    répond à la formule de constitution  suivante:  
EMI0002.0009     
    Ce composé peut également exister sous une  autre forme tautomère, par exemple sous la  forme cétonique que l'on désigne par     2-oxo-3-          hydroxypropionaldéhyde.    Ici aussi la forme  sous laquelle ledit réactif est présent n'a pas  d'influence sur la réaction.

      Le troisième réactif, constitué d'ordinaire  par un ester ou un amide de l'acide     p-amino-          benzoylgiutamique,    peut être préparé par ac  tion de chlorure de     p-nitrobenzoyle    sur un  ester ou un amide de l'acide     ghitamique    et par       réduction    du groupe nitro en groupe     amino.    Cet  ester peut être un ester partiel (a ou y<B>)\</B> ou un  ester complet (a, y     ),    par exemple un ester     méthy-          liqui,

      éthylique ou     propy        lique.    L'amide peut  être un     a-amide    ou un     ;-amide    ou un     a,,,-amide     ou encore un amide comprenant plusieurs liai  sons     amidiques,    tels que l'acide     p-aminobenzoyl-          y-gIutamylglutamique,    l'acide     p-aminobenzoyl-          y-gltitamyl-y-glutamyiglutamique,

      l'acide     p-          aminobenzoyl    - y -     ghitamy    1-     a-glutamy        iglutami-          que,    l'acide     p-aminobenzoyl-digIutamyl--hitami-          que    ou l'acide     p-aminobenzoyl-a-gIutamyl-a-          glutamylglutamique.     



  La réaction donnant. lieu à la formation  d'acide     ptéroylglutamique    par le procédé selon  la présente invention peut être représentée par  l'équation suivante  
EMI0002.0042     
      où R et R' sont des groupements hydroxyle,       alcoxy    ou     amino,    Fun au moins de ces deux  symboles toutefois représentant un groupe  ment     alcoxy    ou     amino.     



  On peut effectuer la réaction de synthèse  en mélangeant simultanément les trois réactifs  ou en faisant premièrement réagir le second  réactif avec l'un des deux autres puis en ajou  tant, le troisième réactif au mélange réaction  nel, sans isoler les intermédiaires. L'hydrolyse  du produit. de la réaction peut se faire en  milieu acide, en présence par exemple d'acide  sulfurique ou chlorhydrique, ou en milieu  alcalin, en présence par exemple d'hydroxyde  de     sodium    ou de potassium.  



  La réaction de synthèse peut être effec  tuée clans de l'eau ou dans un solvant orga  nique, de préférence dans un liquide organi  que     hy        droxy    lé tel que l'alcool éthylique ou  le glycol éthylénique. On peut également uti  liser     d'autres    solvants tels que l'acétone, le  benzène ou le     formamide.    La température peut  varier entre la température ambiante et 160  C  environ, les températures supérieures à 100  C  étant préférées. Le temps nécessaire pour ache  ver la réaction dépend naturellement de la  température et des autres conditions. Pour  effectuer l'hydrolyse, il est habituellement  nécessaire de chauffer le mélange de la  réaction à une température comprise entre 50  et 100  C.

   Le groupement ester est. facile  ment éliminé par hydrolyse dans un acide ou  un alcali, tandis que le groupement amide  demande plus de temps pour     ôtre    éliminé.  



  On peut effectuer la synthèse dans de  larges limites de     pH.    On obtient. toutefois les  meilleurs résultats en utilisant une solution  sensiblement aqueuse ayant un pH compris  entre 3 et 5.  



  Différentes manières de mettre en     auvre     le procédé selon la présente invention sont  décrites dans les exemples suivants.  



       Exemple   <I>1:</I>  On a dissous 5 g d'ester     y-éth@-lique     d'acide     p-nitro-benzoy        iglutamique    dans 25 cm'  d'éthanol, additionné la solution de 25 cm-'  d'eau et effectué la réduction au moyen de    7 g du couple     zinc-cuivre,    en utilisant de  l'acide chlorhydrique pour maintenir le pH à  environ 3,0. On élimine le zinc par filtration,  on amène le pH de la solution de     l'ester-y-          éthylique    de l'acide     p-aminobenzoylglutami-          que    à 2,5 et on additionne la     solution    de       \?5    cm' d'eau.

   On ajoute 1,6 g de     réductone     et on agite la. solution pendant 20 minutes.  La solution est ensuite refroidie. L'ester       y-éthylique    de L'acide     p-(2,3-diliyclroxy-2-ène-          propylidène-amino)-benzoyigltttamique    obtenu  est isolé, lavé à l'eau et séché. Rendement  5,5 g.  



       3,.5        g    de ce produit et 2,8 g de     2,4,5-tri-          a.mino-6-hy        droxypyrimidine    sont mis en sus  pension dans 18 cm' de glycol     éthylénique    et  chauffés à 135  C pendant 30 minutes. Le  mélange est refroidi, dilué par 2 volumes  d'eau et ensuite de nouveau refroidi, l'ester       y-éthylique    de l'acide     ptéroylglutamique    étant  ensuite isolé. Rendement: 3,7 g. La pureté     dé-          terminêe    par analyse chimique est de 15,8 /o.

    On dissout cette substance dans de l'hydroxyde  de sodium à 0,1 n et on chauffe la solution  à 50  C pendant 30 minutes. L'essai avec  S.     faecalis    R donne la valeur de 17,6      /o-    qui  indique que l'hydrolyse de l'ester en acide       ptéroylglutamique    est complète. L'acide       ptéroy        lglutamique    ainsi obtenu est première  ment dissous dans une solution d'hydroxyde  de sodium 0,2n à une concentration de  400     microgrammes!cm'.    On ajoute ensuite du  chlorure de baryum en quantité     suffisante     pour obtenir une normalité de 0,2, le mélange  étant ensuite agité pendant 10 minutes et  filtré.

   On ajoute de l'alcool éthylique au  filtrat jusqu'à obtention d'une concentration  de     201/o    et, après agitation, on filtre de nou  veau la, solution et on rejette la matière inso  luble, s'il y en a. L'excès de baryum contenu  dans le filtrat est alors précipité par addition  d'une quantité équivalente d'acide sulfurique  en prenant soin de maintenir le mélange  nettement alcalin, si nécessaire par addition  d'hydroxyde de sodium. Après élimination du.  sulfate de baryum, la solution est étendue à  100     microgrammes/em'    de composé actif, puis  ajustée à pH 7,0.

   On filtre de nouveau la      solution et on concentre le filtrat à un volume  tel que la concentration du composé actif soit  de 200     mierogrammesr\cm'.    Cette solution est  épuisée au moyen de 4 portions de 10 parties  en volume de     buta.nol.    Les extraits     butanoli-          ques    sont rejetés. La. phase aqueuse est alors  traitée au moyen d'une quantité -de charbon  actif équivalent au poids total de composé  actif présent. On filtre la solution et on éli  mine le charbon. On ajuste le     pII    du filtrat  à 3,0 et on chauffe pour dissoudre le com  posé actif qui peut précipiter à cette acidité.  On peut ajouter de l'eau, si nécessaire.

   On  laisse alors refroidir la .solution, saturée à       4     C environ et on recueille le produit préci  pité. On peut le faire     recristalliser    en le dis  solvant clans de l'eau chaude ajustée à pH 3,  si on le désire.  



       Exemple     On met en suspension 0,3 g de l'ester     di-          éthylique    d'acide     p-(2,3-dihydroxy-2-ène-          propylidène-amino)-benzoy1glutamique,    ob  tenu selon la méthode de l'exemple 1, et  0,25 g de     2,4,5-triamino-6-hydroxypyrimidine     dans 6 cm" de glycol éthylénique et on chauffe  la suspension à 1350 C pendant 30 minutes.  Ensuite, on la refroidit et on l'additionne de  4 volumes d'eau. Après un nouveau refroi  dissement, le solide est recueilli, lavé et séché.  Rendement: 0,25 g.

   Pureté déterminée par  analyse chimique:     17,10/a.    On dissout ce pro  duit dans de l'hydroxyde de sodium 0,1 n et  on chauffe la solution à 500 C pendant 30 mi  nutes. L'essai avec S.     faecalis    R donne une       valeur        de        21,5        %        qui        indique        que        l'hydrolyse     de l'ester en acide     ptéroylglutamique    est  complète.  



       Exemple   <I>3:</I>  On a dissous 3 g de     p-nitrobenzoy@iso-          glutaminate        éthylique    dans 50     cm3        d'éthanol.     chaud à     900/0,,    additionné la solution de 25 cm'  d'eau et effectué la réduction à. une tempé  rature de 40-500 C et à pH 3,0 en utilisant  4 g du couple zinc-cuivre.

   Après 40 minutes,  on élimine le zinc par filtration et on ajoute  de l'eau à la solution .du     p-aminobenzoyliso-          glutaminate    pour obtenir un volume de  140     eni3.    On ajoute alors 1,2 g de     réductone       et on agite le mélange à la température am  biante pendant plusieurs heures. On laisse  bien refroidir le mélange, le produit. étant  alors recueilli, lavé et séché. Rendement: 2,8 g  de     p-(2,3-dihydroxy        2-èiie-prop@-lidène-amino)-          benzaylisogluta.minate        éthylique.     



  On met en     suspension    2,5 de ce produit  et 2 g de     2,4,5-triamino-6-liydroxy        pyrimidine     dans 13     cm"    de glycol     éthylénique    et on  chauffe la suspension à. 135  C     pendant.    30 mi  nutes. Le     ptéroylisoglutaminate        éthi-lique    est  recueilli, lavé et séché. Rendement: 2,3 g.  Teneur déterminée par analyse chimique:  22 0/a.  



  On dissout ce produit dans de     l'hydroxyde     de sodium 0,25 n et on chauffe la solution à  550 C pendant 1 heure. L'essai avec S.     faecalis          R        .donne        alors        une        valeur        de        12,3        %        qui        in-          dique    que l'hydrolyse de l'ester en acide       ptéroylglutamique    est     incomplète.     



  Le produit obtenu, c'est-à-dire     l'acide,          ptéroylglutamique,    est purifié de la maille     re     suivante: On dissout 2,15; du produit brut  dans 400     em         d'hydroxyde    de sodium 0,2n et  on agite la solution à. 50" C pendant 1 heure.  On ajoute 14,5     cm"    de     chlorure    de calcium à  30 0/0, on élève la. température à 70" C et. on  filtre la solution. On ajoute au filtrat à 50" C  une solution diluée de chlorure de zinc jus  qu'à ce que le pH soit tombé à 10,5.

   On filtre       et        on        ajoute        du        chlorure        de        zinc    à     30        %        jus-          qu'à    ce que le pH ait atteint 6,75. Ce mé  lange est chauffé à. 80" C et filtré. On dissout  le gâteau de filtrage dans 3     cm3    d'acide  chlorhydrique concentré, on traite la solution  au moyen de charbon actif et on filtre. On  ajoute la solution à 30     cm;,    d'eau chaude,  puis on laisse bien refroidir.

   Le produit est  recueilli et dissous .de nouveau dans 2,5     cm:\     d'acide chlorhydrique concentré. La solution  est traitée par du charbon actif et ensuite  filtrée. On ajoute 30 cm" d'eau chaude au  filtrat et on laisse bien     refroidir.    Le produit  est recueilli, lavé à l'eau, au méthanol et à  l'éther et séché. Rendement: 55 mg. Pureté  déterminée par analyse chimique: 840/0.

   Le  spectre d'absorption ultraviolet est caractéris  tique pour l'acide     ptéroylglutamique.    Sous      forme de     solution    dans de l'hydroxyde de  sodium 0,1 n, cet acide présente des maxima  d'absorption à 255 :mu, 285     my    et 365     mcc.     Dans une solution d'acide chlorhydrique<B>0J</B>     n,     le maximum est à 297,5     my.     



  <I>Exemple 4:</I>  On a. mis en suspension 5 g d'amide d'acide       p-nitrobenzoylglutamique    dans 125 cm' d'eau  et on a réduit ce composé au moyen de 7 g  (lu couple     zinc-euivre    en utilisant de l'acide       chlorhydrique    concentré pour maintenir le       liai    de la solution entre 2,5 et 3,0. On élimine  le zinc par filtration et on ajoute 1,7     b    de       réductone    à la solution d'amide d'acide     p-          aininobenzovlglutamique    obtenue. Après avoir  laissé reposer la solution à la. température       ambiante    pendant 30 minutes, on la laisse  refroidir pendant la nuit.

   Rendement: 1,9 g  d'un produit solide qui est l'amide de l'acide  p- (2,3 -     diliydroxy    -     \)-ène-propylidène-        amino        )-          benzoyl-lutamique.       On met en suspension 1,9 g de ce pro  duit et 1,6 g de     2,4,5-triamino-6-hydroxy-          pyrimidine    dans 10 cm' de glycol     éthylénique     et on chauffe la suspension à 135  C pen  dant 30 minutes. Le mélange est alors re  froidi et additionné de 3 volumes d'eau. Le  produit est recueilli, lavé et séché. Rende  ment: 1,5 g.

   Pureté déterminée par analyse       chimique:        17,7        %,     Le produit ainsi obtenu est purifié selon  la méthode décrite dans l'exemple 3. De cette  manière, on obtient 60 mg d'acide     ptéroyl-          glutamique.    Pureté déterminée par analyse  chimique: 83 %. Essai avec S.     faecalis    R: 16  /u,  indiquant une hydrolyse incomplète.

Claims (1)

1. REVENDICATION Procédé de préparation d'acide ptéroyl- glutamique qui, sous l'une de ses formes tautomères au moins, répond à la formule suivante: EMI0005.0031 caractérisé en ce que l'on fait réagir de la 2,4,5-tria.mino-6-liyclroxypyrimidir,.e, du 2,3- diliydroxyacry] aldéhyde et de l'acide p-amino- benzoyIfglut.amique dont l'une au moins des fonctions acides est bloquée par un groupe ment susceptible d'être éliminé par hydrolyse en régénérant l'acide, et en ce qu'on hydro lyse le produit de la,

   réaction pour obtenir l'acide ptéroylglutamique. SOUS-REVENDICATIONS 1. Procédé suivant la revendication, ca ractérisé en ce qu'on fait réagir première ment ledit aldéhyde avec ledit acide, puis ladite pyrimidine sur le produit obtenu. 2. Procédé suivant la revendication, carac térisé en ce qu'on fait réagir premièrement ledit aldéhyde avec ladite py rimidine, puis ledit acide sur le produit obtenu. 3. Procédé suivant la revendication, carac térisé en ce que l'hydrolyse est effectuée en milieu alcalin. 4.

   Procédé suivant la revendication, carac térisé en ce que l'on fait réagir les trois corps susdits à la température ambiante. 5. Procédé suivant la revendication, carac térisé en ce que l'on fait réagir les trois corps susdits à la température de 160 C, en pré sence d'un solvant inerte.