CH323517A

CH323517A - Procédé de préparation d'un sulfate purifié de chlortétracycline

Info

Publication number: CH323517A
Authority: CH
Inventors: Richard Harmes Edward
Original assignee: American Cyanamid Co
Priority date: 1949-08-20
Filing date: 1950-08-19
Publication date: 1957-07-31

Description


  Procédé de préparation d'un     sulfate        purifié    de     chlortétracycline       La présente invention est relative à un  procédé de préparation d'un sulfate purifié de       chlortétracycline    à partir d'une matière im  pure contenant de la     chlortétracycline    sous  une forme autre que le     sulfate.     



  Le microorganisme appelé<I>Streptomyces</I>       aureof        aciens    produit pendant sa croissance de  la     chlortétracycline,    une     subtance    vendue dans  le commerce sous la marque de fabrique   au  réomycine     >>,

      qui présente une remarquable ac  tivité antibiotique dans un domaine thérapeu  tique beaucoup plus étendu que les autres an  tibiotiques antérieurement connus et qui ré  pond à la formule suivante  
EMI0001.0012     
    Des détails sur le     microorganisme    et les  propriétés de la     chlortétracycline    sont donnés  dans les       Annals    of the New York     Academy     of Sciences  , volume 51, article 2,     nov.    1948.  



  Le procédé suivant l'invention est caracté  risé en ce qu'on prépare à     partir    de ladite ma-         tière    impure contenant de la     chlortétracycline     sous une forme autre que le     sulfate,    une solu  tion aqueuse présentant un<I>pH</I> inférieur à 4 et  contenant au moins 0,3 mg de     chlortétracycline     sous forme de sel d'acide par     cm3,    on mélange  cette solution, débarrassée de toute matière       insoluble,

      avec un solvant organique et     un    sul  fate soluble dans l'eau pour provoquer la sé  paration de     sulfate    de     chlortétracycline    et on  isole le produit obtenu.  



  La matière impure de départ renfermant  de la     chlortétracycline    peut être un mélange de  fermentation provenant de la culture d'un       microorganisme        producteur    de     chlort6tracy-          cline    dans un milieu     nutritif    aqueux, ou un  produit solide renfermant de la     chlortétracy-          cline    et des impuretés provenant de la fermen  tation, obtenu comme produit     intermédiaire     dans l'élaboration d'un mélange de fermenta  tion.

   Pour préparer la solution aqueuse pré  sentant un<I>pH</I> inférieur à 4 et contenant au  moins 0,3 mg de     chlortétracycline    par     cm3,    on  peut procéder selon les méthodes décrites dans  le brevet principal.  



  La     solution    aqueuse acide contenant la       chlortétracycline    doit avoir un<I>pH</I> inférieur à  4. Si le<I>pH</I> était supérieur à 4, les     caractéTis-          tiques    de     solubilité    de la-     chlortétracycline    ne  seraient pas assez favorables. Un     compromis         raisonnable au point de vue économique con  siste à préparer une solution acide présentant  un<I>pH</I> de 1 à 2, de préférence de 1,5.  



  Au cas où la     solution    aqueuse contenant  la     chlortétracycline    sous forme d'un sel acide  n'est pas suffisamment concentrée, on peut la  concentrer d'une manière analogue à celle dé  crite dans le brevet     principal.        Il    est également  préférable de continuer la concentration jus  qu'à ce que la     concentration    en     chlortétracy-          cline    dans la phase aqueuse soit de 3 à 30 mg  par     cm3.     



  Parmi les solvants     organiques    les plus     utiles,     on peut citer les alcools à chaîne moyenne. Les  alcools inférieurs tendent à être plus solubles  dans l'eau qu'il n'est désirable.  



  Les alcools méthylique et éthylique provo  quent la séparation de la     chlortétracyclme,     mais non la formation de deux phases distinc  tes aux températures et concentrations usuel  les.  



  Des solvants tels que l'alcool butylique  normal, l'alcool     butylique    tertiaire, l'alcool     bu-          tylique    secondaire, l'alcool     amylique,    l'alcool       hexylique,    l'alcool     octylique,    l'alcool     capryli-          que,    le     décanol,    etc., forment tous deux pha  ses et permettent la séparation du     sulfate    de       chlortétracycline    à la     surface    de séparation  liquide-solvant.

   Les alcools supérieurs au     dé-          canol    tendent à devenir plus visqueux et plus  difficiles à manipuler. Les     cellosolves    et d'au  tres alcools polyvalents et leurs esters sont  également satisfaisants. Pour des raisons éco  nomiques on utilisera, de préférence, le     buta-          nol    en une quantité juste suffisante pour for  mer une phase séparée, comme indiqué dans  le brevet principal.  



  <I>Exemple 1</I>       Acidification   <I>directe</I>  A 4,9 litres d'un mélange de fermentation  contenant de la     chlortétracycline,    on ajoute  135 cm- d'acide sulfurique<I>6N,</I> ce qui abaisse  le<I>pH à</I> 1,45. On agite le mélange pour assu  rer un mélange intime et la     dissolution    de toute  la     chlortétracycline.    A 3000     cm3    de la solution  résultante on ajoute 300 g de l'adjuvant de fil-         tration    marque       Hy-Flo        Supercel      et on fil  tre sur papier, puis on lave le résidu avec de  l'eau acidulée.

   On place le filtrat dans une co  lonne à distillation sous vide et on distille à  une température allant de 25 à 300 C sous  vide, jusqu'à obtention de 550     cm3    de     concen-          trat    dont le<I>pH</I> est de 1,4 et la concentration  en     chlortétracycline    de 3200     -y    par     cm3.    On  en conserve 50     cm8    comme échantillon d'essai  et on ajoute aux 500     cm3    restants 25     em3    d'al  cool butylique normal et 125 g de     sulfate          d'ammonium.    On agite le mélange à la tempé  rature ambiante pendant une demi-heure,

   puis  on le conserve jusqu'au lendemain à     2o    C. On  recueille le sulfate de     chlortétracycline    sur un       entonnoir    Büchner, on le lave d'abord avec  une petite quantité d'alcool puis avec de l'eau  distillée, et on sèche sous vide le     sulfate    de       chlortétracycline    ainsi isolé. On obtient un  rendement de 4,5 g en produit dont la pureté  correspond à 325 y par milligramme.  



  <I>Exemple 2</I>  <I>Procédé alcali - acide</I>  A 30 litres d'un mélange de fermentation  contenant de la     chlortétracycline    et provenant  directement des récipients de fermentation, à  un<I>pH</I> de 6,3, on ajoute 125     cm3    d'un lait de  chaux à 10 % et 300 g de l'adjuvant de filtra  tion marque       Hy-Flo        Supercel         .    On agite à  température     ambiante    pendant 10 minutes, on  filtre la matière résultante<I>à pH</I> 8,8 et on lave  le gâteau avec de l'eau.

   A 6 litres d'eau on  ajoute 250     cm3    d'un mélange d'acide     sulfurique     et d'eau 1 :4 on chauffe l'eau acidifiée à  500 C et on y ajoute le gâteau de filtration  préparé ci-dessus. On abaisse le<I>pH</I> d'approxi  mativement 4,0 à 1,35 en ajoutant de l'acide       sulfurique    1 : 4 supplémentaire, 250     cm3    étant  approximativement nécessaires. On agite le  mélange à 45 -     50     C pendant 10 minutes et  on le filtre.

   On extrait encore le gâteau résiduel  par de l'eau additionnée d'acide     sulfurique    pour  maintenir le<I>pH à</I> 1,45, le gâteau étant agité  10 minutes et la matière     refiltrée.    On rejette le  gâteau et on trouve qu'il y a 15,5 litres d'ex  traits.

   On distille sous vide 10 litres des ex  traits refroidis, dans une colonne en verre et      acier inoxydable, à une température comprise  entre 30 et     36o    C, jusqu'à 2600     cm3.    A ce  concentrai ainsi préparé ayant maintenant un  <I>pH</I> de 1 et une     concentration    en     chlortétracy-          cline    de 460     -y    par     cm3,    on ajoute 150     cm3    de       butanol    normal, et 1 kg de     sulfate    d'ammo  nium. On agite le mélange pendant 30 minutes  et on le garde dans une pièce refroidie à     2-5,1    C  jusqu'au lendemain.

   On lave le     sulfate    de       chlortétracycline    formé à l'éthanol, puis deux  fois à l'eau, puis encore à     l'éthanol    jusqu'à ce  que l'alcool de lavage ait une couleur     claire.        Le     volume total d'eaux de lavage est de 110     cm3     et le volume total d'alcool de lavage est de  120     cm3.    On obtient 1:1,5 g de     sulfate    de     chlor-          tétracycline    présentant une pureté correspon  dant à 820 y par     milligramme.     



  <I>Exemples 3 à 5</I>  On ajuste le<I>pH</I> d'un mélange de fermen  tation à 8,5 au moyen d'hydroxyde de sodium  10 N et on filtre le précipité. On introduit le  gâteau de filtrage dans un volume d'eau équi  valent à 20      /o    du volume du mélange de dé  part. On ajoute suffisamment d'acide chlorhy  drique pour abaisser le<I>pH</I> à environ 1,5 et  ensuite on filtre le mélange obtenu. On concen  tre l'extrait par distillation sous vide à une  température comprise entre 30 et 400 C jus  qu'à ce qu'il ne présente plus que 25     -()/o    de  son volume initial.  



  A des portions égales du filtrat concentré  dont le<I>pH</I> est de 1,9 et la concentration en       chlortétracycline    de 5150     -y    par     cm3,    on ajoute  une série de sels en une quantité telle que la  phase liquide soit à peu près saturée de sel res  pectif, la quantité de sel à     ajouter    variant selon  la solubilité des sels respectifs.

   On ajoute, dans       chaque        cas,    5     %        en        volume        de        butanol        au        li-          quide    additionné du sel. Le mélange est re  froidi et agité. Dans chaque cas la     chlortétra-          cycline    se sépare.

    
EMI0003.0041     
  
    <I>Exemple <SEP> Sel <SEP> forme <SEP> de <SEP> la <SEP> chlorté-</I>
<tb>  <I>N  <SEP> tracycline <SEP> isolée</I>
<tb>  3 <SEP> sulfate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> sulfate <SEP> amorphe
<tb>  4 <SEP> sulfate <SEP> d'ammonium <SEP> sulfate <SEP> amorphe
<tb>  5 <SEP> sulfate <SEP> de <SEP> lithium <SEP> sulfate <SEP> amorphe       On peut isoler le     sulfate    de     chlortétracy-          cline    obtenu et le     transformer    en un     chlor-          ydrate        cristallin    en dissolvant le     sulfate    dans de  l'éthanol aqueux et en ajoutant de l'acide chlor  hydrique concentré.  



  Les exemples précédents se rapportent à  des modes d'exécution préférés du procédé sui  vant l'invention, dans lesquels la     chlortétracy-          cline    est obtenue à partir de la liqueur de fer  mentation. Ces modes d'exécution peuvent ce  pendant être modifiés en ce qui concerne les  concentrations, les températures et d'autres  conditions opératoires, conformément aux va  riations des souches de microorganismes uti  lisés pour la fermentation, des degrés de pu  reté etc. On peut, naturellement, opérer à des  températures supérieures et     utiliser    des concen  trations supérieures ou inférieures, ce qui, évi  demment, a des répercussions sur le rendement.

Claims

REVENDICATION Procédé de préparation d'un sulfate puri fié de chlortétracycline à partir d'une matière impure contenant de la chlortétracycline sous une forme autre que le sulfate, caractérisé en ce qu'on prépare, à partir de ladite matière, une solution aqueuse présentant unpH infé rieur à 4 et contenant au moins 0,3 mg de chlortétracycline sous forme de sel d'acide par cm3, on mélange cette solution, débarras sée de toute matière insoluble,

avec un solvant organique et un sulfate soluble dans l'eau pour provoquer la séparation de sulfate de chlorté- tracycline et on isole le produit solide obtenu. SOUS-REVENDICATIONS 1. Procédé suivant la revendication, carac térisé en ce que le sulfate est utilisé en quan tité suffisante pour saturer pratiquement la so lution aqueuse. 2.

Procédé selon la revendication, caracté risé en ce qu'on prépare ladite solution à par tir d'un mélange de fermentation provenant de la culture d'un microorganisme producteur de chlortétracycline dans un milieu nutritif aqueux en acidifiant ce mélange afin d'abaisser sonpH au-dessous dé 4, en éliminant toutes les ma- tières non dissoutes et en concentrant la solu tion aqueuse résultante jusqu'à ce qu'elle con tienne au moins 0,3 mg/cm3 de chlortétracy- cline sous forme de sel d'acide. 3.

Procédé selon la revendication, carac térisé en ce qu'on prépare ladite solution à par tir d'un mélange de fermentation provenant de la culture d'un microorganisme producteur de chlortétracycline dans un milieu nutritif aqueux en ajoutant à ce mélange un alcali en présence de cations alcalino-terreux pour éle ver lepH au-dessus de 6, en séparant les so lides résultants contenant la chlortétracycline, puis en ajoutant à ceux-ci un acide et de l'eau pour obtenir ladite solution aqueuse à unpH inférieur à 4. 4. Procédé suivant la revendication et la sous-revendication 3, caractérisé en ce qu'on ajoute audit mélange un alcali en présence de cations alcalino-terreux pour élever lepH à 6-11. 5.

Procédé selon la revendication, caracté risé en ce qu'on prépare ladite solution à par tir d'un mélange de fermentation provenant de la culture d'un microorganisme producteur de chlortétracycline dans un milieu nutritif aqueux, en ajoutant à ce mélange un alcali pour élever lepH au-dessus de 6, en séparant les solides résultants contenant la chlortétracycline, en ajoutant à ceux-ci un solvant organique dissol- vant la chlortétracycline en présence d'eau, en éliminant ce solvant, et en ajoutant au résidu un acide pour produire ladite solution aqueuse à unpH inférieur à 4. 6.

Procédé suivant la revendication et la sous-revendication 5, caractérisé en ce qu'on ajoute audit mélange un alcali pour élever le pH à 6 -11. 7. Procédé selon la revendication et les sous-revendications 5 et 6, caractérisé en ce qu'on élimine ledit solvant organique par dis tillation à une température inférieure à 500 C. 8. Procédé selon la revendication et la sous-revendication 2, caractérisé en ce qu'on effectue la concentration par distillation sous vide, jusqu'à ce que la solution contienne entre 0,3 et 30,0 mg de chlortétracycline par cm3. 9. Procédé selon la revendication, caracté risé en ce qu'on prépare une solution acide dont lepH est compris entre 1 et 4. 10.

Procédé selon la revendication, carac térisé en ce qu'on utilise comme solvant or ganique un alcool aliphatique. 11. Procédé selon la revendication et la sous-revendication 10, caractérisé en ce que ledit alcool est le butanol et qu'il est ajouté à la solution en une quantité ne dépassant pas 10 % en volume.