CH370775A

CH370775A - Verfahren zur Herstellung neuer Ester des Allopregnan-3b,16a-diol-20-ons

Info

Publication number: CH370775A
Application number: CH5402757A
Authority: CH
Inventors: Albert Dr Wettstein; Robert Dr Neher
Original assignee: Ciba Geigy
Priority date: 1957-12-20
Filing date: 1957-12-20
Publication date: 1963-07-31

Description

Verfahren zur Herstellung neuer Ester des Allopregnan-3ss,16a-diol-20-ons Eine grosse Anzahl von Wirkstoffen wurde bereits aus Nebennieren gewonnen. So haben wir vor einigen Jahren zusammen mit T. Reichstein unter anderem Aldosteron isoliert.

Es war bekannt, dass bei einer besonderen Form des familiär angeborenen Adrenogenital-Syndroms grosse Salzverluste auftreten. Es stand die Hypothese zur Diskussion, dass durch die hyperplasierte Neben niere ein Natrium ausscheidender Faktor im über schuss produziert werde. Andere Autoren nahmen dagegen als Ursache eine Nebennierenrinden-Insuffi- zienz mit ungenügender Produktion Natrium retirie- render Steroide, wie z. B. Aldosteron, an.

Wir gingen dann von der Annahme aus, dass ein Natrium aus scheidender Faktor vorliege und suchten seit 1955 systematisch nach einem solchen Wirkstoff. In schwierigen Arbeiten, unter Anwendung von beson deren Isolierungs- und Prüfungsmethoden, gelang es uns, einen Stoff in reiner kristallisierter Form mit dem Schmelzpunkt von 258-260 zu isolieren, der Natrium ausscheidende Eigenschaften aufweist.

Überraschenderweise zeigte sich, dass der neue Wirkstoff Mono- und Diester bildet. Die Esterreste sind z. B. solche von gesättigten oder ungesättigten aliphatischen oder cycloaliphatischen, von aromati schen oder heterocyclischen Carbonsäuren, beispiels weise der Ameisensäure, Essigsäure, Chloressigsäure, Tritluoressigsäure, Carbaminsäuren, Alkoxycarbonsäuren, Propionsäure, der Buttersäuren, Milchsäure, Valeriansäuren,

wie n-Valeriansäure oder Trimethylessigsäure, Diäthylessigsäure, der Capronsäuren, wie ss-Trimethylpropionsäure, der önanth-, Capryl-, Pelargon-, Caprin-, Undecylsäuren, z. B. der Undecylensäure, der Laurin-, Myristin-, Pahnitin- oder Stearinsäuren, z.

B. der Ölsäure, der Crotonsäure, der Undecansäure, der Cyclopentyl-, Cyclohexyl- oder Phenylessigsäuren oder -propionsäuren, der Hexahydrobenzoesäure, Benzoesäure, Phenoxyalkansäuren, wie Phenoxy-essigsäure, p-Chlor-phenoxy-essigsäure, 2,4-Dichlor-phenoxy-essigsäure, 4-tert.-Butyl-phenoxy-essigsäure, 3-Phenoxy-propionsäure,

4-Phenoxy-buttersäure, der Furan-2-carbonsäure, 5-tert.-Butyl-furan-2-carbonsäure, 5-Brom-furan-2-carbonsäure, der Nicotin-, Isonicotinsäure, ferner von Dicarbonsäuren, wie Oxal-, Bernstein-, Malein-, Glutar-, Dimethylglutar-, Pimelin-, Acetondicarbon-, Phthal-, Tetrahydrophthal-, Hexahydrophthal-,

Endomethylen-tetrahydrophthal-, Endomethylen-hexahydrophthal-, Endoxy-hexahydrophthal-, Endoxy-tetrahydrophthalsäure, Camphersäure, Cyclopropandicarbonsäure, Cyclobutandicarbonsäure, Diglykolsäure, Athylenbisglykolsäure, Polyäthylenbisglykolsäuren, Chinolin-, Cinchomeronsäure,

sowie die Polyäthylenglykolmonoalkyläther- halbester der obigen Dicarbonsäuren, von Ketocarbonsäuren, wie ss-Keto-carbonsäuren, z. B. der Acetessig-, Propionylessig-, Butyrylessig- oder Caprionoylessigsäure, von Aminosäuren, wie der Diäthylaminoessig- säure, usw.

Anstelle von Carbonsäureresten können auch solche von Sulfonsäuren, wie der Methansulfonsäure oder Toluolsulfonsäure, ferner von anorganischen Säuren, wie von Phosphor- oder Schwefelsäuren, vorliegen.

Bei der erstmaligen Isolierung des neuen Wirk stoffes konnte aus 1000 kg Schweine-Nebennieren 1 mg der neuen Verbindung in reiner kristallisierter Form gewonnen werden. Auf Grund weiterer Be funde kann der Gehalt an diesem Wirkstoff auf etwa 30 mg pro 1000 kg Nebennieren geschätzt werden. Offensichtlich kommt diese Drüse nicht als Aus gangsstoff in Frage, um den neuen Wirkstoff oder seine Ester als Heilmittel den Kranken zur Ver fügung zu stellen.

Es wurde daher versucht, die Konstitution der reinen kristallisierten Verbindung aufzuklären, um damit eventuell neue Wege zu ihrer Herstellung zu eröffnen. Wie oben dargelegt, zeigte sich, dass der neue Wirkstoff Mono- und Diester bildet. Es wurde dann gefunden, dass diese neue Ver bindung und ihre Ester das Allopregnan-3ss,16a- diol-20-on der Formel
EMI0002.0017
bzw. seine Ester darstellen.

Das obengenannte Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on ist neu. Bekannt ist sein 3ss-Acetat sowie das 3ss,16a- Diacetat. Deren Herstellung erfolgte durch Reduk tion des entsprechenden 3ss-Acetat-16a-benzyläthers und Einwirkung von Acetylierungsmitteln auf das gebildete Allopregnan-3ss,16a-dioxy-20-on-3ss-acetat (H. Hirschmann et a1., J. Org. Chem. 20, 572 [1955]).

Es war aber nicht bekannt, dass diesen Acetaten eine therapeutische Wirkung zukommt. Es konnte daher nicht vermutet werden, dass sie in irgendeinem Zusammenhang mit dem Natrium ausscheidenden Faktor der Nebenniere stehen.

Das erfindungsgemässe Verfahren ist dadurch ge kennzeichnet, dass man Allopregnan-3ss,16a-diol- 20-on der Formel
EMI0002.0034
zu 3- oder 16-Monoestern oder 3,16-Diestern um setzt, wobei die Monoester nur in 16-Stellung und die Diester höchstens einmal den Acetylrest auf weisen. Sie enthalten vorzugsweise die obengenannten Säurereste. Die Veresterung erfolgt nach an sich bekannten Methoden.

So kann man den Wirkstoff mit Säuren, wie den obengenannten, oder ihren funktionellen Derivaten, wie ihren Halogeniden, Anhydriden, Thiolderivaten sowie Ketenen, um setzen. Ferner lassen sich auch Umesterungsmetho- den anwenden.

Durch geeignete Wahl der Reaktions bedingungen und Menge der Mittel gelingt es, den Wirkstoff vollständig oder auch partiell zu ver- estern. Aus den erhaltenen Monoestern lassen sich durch anschliessende Veresterung Diester, deren Acylreste verschieden sein können, herstellen.

Die neuen Ester können als Zwischenprodukte zur Herstellung des Allopregnan-3/3,16a-diol-20-ons, wie z. B. zu dessen Reinigung, dienen. Sie besitzen aber auch, wie der neue Wirkstoff, Natrium aus scheidende Wirkung an der Ratte ohne wesentliche Beeinflussung des Kaliums in der während der Ver suchsdauer ausgeschiedenen Urinmenge. Die Be- stimmung der Elektrolytausscheidung (Natrium und Kalium) und der Wasserausscheidung erfolgt z. B. gemäss den in der Publikation von P. Desaulles und R. Meier (Schweiz. Med. Wschr. 86, Suppl. zu Heft 37, 1060 [1956]) niedergelegten Versuchsbedingun gen.

Besonders wertvoll sind solche Ester, deren Acylrest eine wasserlöslich machende Gruppe, wie die Carboxylgruppe oder eine Aminogruppe, auf weist, wie den Rest der Glutarsäure, Tetrahydro- phthalsäure, oder in erster Linie der Bernsteinsäure, in Form ihrer Salze mit anorganischen oder organi schen Basen, wie ihrer Natrium- oder Triäthanol- aminsalze, oder bei Anwesenheit einer basischen Gruppe in Form ihrer Salze mit Säuren, wie z. B.

mit Halogenwasserstoffsäuren. Sie können daher als Heilmittel, wie zur Herstellung des gestörten Na triumgleichgewichtes, besonders bei Retention von Natrium, z. B. Ödemen, Kreislaufstörungen, incl. Hochdruck, Verwendung finden. Die Diester können auch für die Herstellung der Monoester, z. B. durch Hydrolyse, verwendet werden.

In den nachfolgenden Beispielen sind die Tempe raturen in Celsiusgraden angegeben.

Beispiel 1 100 mg Allopregnan-3ss,16cc-diol-20-on werden mit 4 cm3 Pyridin und 2 cm3 Propionsäureanhydrid kurze Zeit auf 50 erwärmt und dann 60 Stunden bei 20 stehengelassen. Nach Abdestillieren des Pyridins und überschüssigen Säureanhydrides im Vakuum wird mit Wasser versetzt und ausgeäthert. Die ätherische Lösung wäscht man mit verdünnter Salzsäure, verdünnter Natronlauge und Wasser neu tral, trocknet über Natriumsulfat und destilliert das Lösungsmittel ab.

Der Rückstand liefert, aus Me- thanol-Wasser umkristallisiert, das Allopregnan- 3ss,16a-diol-20-on-3ss,16a-dipropionat, F.109-111 . Beispiel 7 0,44 g des in Beispiel 3 beschriebenen Allo- pregnan-3ss,16a-diol-20-on-3-monobenzoats werden in 5 cm3 Pyridin mit 2 g Bernsteinsäure-anhydrid unter Stickstoff 3 Tage bei Raumtemperatur stehen gelassen.

Man giesst in Wasser, nimmt in Essigester auf und wäscht die Lösung mit verdünnter Salzsäure und Wasser pyridinfrei. Nach Trocknen über Na triumsulfat und destillieren des Lösungsmittels er hält man 0,54 g Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on-3- benzoat-16-hemisuccinat.

Beispiel 8 6,6g Allopregnan - 3ss,16a - diol - 20 - on, 6,0 g Tetrahydrophthalsäure-anhydrid und 150 cm3 Pyri- din werden zusammen unter Stickstoff während 4 Stunden zum Sieden erhitzt. Nach Abkühlen destil liert man im Vakuum bei 40-60 Badtemperatur das Pyridin ab. Der Rückstand wird in Essigester auf genommen, der etwas Methanol beigemischt enthält.

Man wäscht den Extrakt mit verdünnter Salzsäure und Wasser pyridinfrei und schüttelt dann die sauren Reaktionsprodukte mittels verdünnter Natriumbikar- bonatlösung aus. Die filtrierten Natriumbikarbonat- auszüge werden mit verdünnter Salzsäure angesäuert. Das ausgefällte Reaktionsprodukt wird abgenutscht, mit Wasser gründlich ausgewaschen und getrocknet. Die Ausbeute beträgt 12,2 g Allopregnan-3ss,16a- diol-20-on-3,16-di-hemitetrahydrophthalat.

Zur Herstellung des wasserlöslichen Dinatrium- salzes des Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on-3,16-di- hemitetrahydrophthalates werden 0,64 g Allopregnan- 3 ss,16a - diol - 20 - on-3,16-di-hemitetrahydrophthalat, gelöst in 5 cm3 Feinsprit unter Eiskühlung mit 20 cm- 0,1n Natronlauge versetzt. Die filtrierte Lö sung wird lyophilisiert nach bekannter Technik.

Man erhält 0,69 g Dinatriumsalz des Allopregnan-3ss,16a- diol-20-on-3,16-di-hemitetrahydrophthalates.

In analoger Weise erhält man aus Allopregnan- 3 ss,16a - diol - 20 - on-3,16-di-hemitetrahydrophthalat und Triäthanolamin das Triäthanolaminsalz des Allopregnan - 3ss,16a - diol - 20 -on-3,16-di-hemitetra- hydrophthalates.

Beispiel 9 3,34 g Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on, 2,2 g t3,ss-Dimethylglutarsäure-anhydrid und 100 cm3 Pyri- din werden unter Stickstoff 6 Stunden zum Sieden erhitzt. Man kühlt ab und dampft die Reaktions lösung im Vakuum bei 40-60 Badtemperatur ein. Der Rückstand wird in Chloroform aufgenommen nud der Extrakt mit verdünnter Salzsäure und Wasser pyridinfrei gewaschen. Die sauren Reaktions produkte zieht man mit verdünnter, eiskalter Na triumbikarbonatlösung aus.

Die filtrierten Natrium bikarbonatauszüge werden mit verdünnter Salzsäure angesäuert. Das ausgefällte Reaktionsprodukt wird abgenutscht, mit Wasser ausgewaschen und getrock net.

Man erhält 6 g Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on- 3,16-di-hemi fl,ss-dimethylglutarat. Zur Herstellung des wasserlöslichen Dinatrium- salzes löst man 6,19g Allopregnan-3ss,16a-diol-20-- on-3,16-di-hemi-ss,ss-dimethylglutarat in 50 cm3 Fein sprit und fügt eisgekühlte 222 cm3 0,1n Natronlauge hinzu. Die filtrierte Lösung wird nach bekannter Technik der Gefriertrocknung unterworfen.

Man er hält 6,6g Dinatriumsalz des Allopregnan-3ss,16a- diol-20-on-3,16-di-hemi-ss,ss-dimethylglutarates.

In analoger Weise erhält man aus Diäthanolamin und Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on-3,16-di-hemi-ss,ss- dimethylglutarat das wasserlösliche Diäthanolamin- salz des Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on-3,16-di-hemi- ss,ss-dimethylglutarates.

Beispiel 10 3,34 g Allopregnan 3ss,16a-diol-20-on, 5 g Di- glykolsäure=anhydrid und 100 cm3 Pyridin werden unter Stickstoff während 6 Stunden zum Sieden er hitzt. Die Aufarbeitung erfolgt gemäss Beispiel 9. Man erhält 5,5 g Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on- 3,16-di-hemidiglykolat.

Zur Herstellung des wasserlöslichen Dinatrium- salzes löst man 5,67 g Allopregnan-3ss,16a-diol-20- on-3,16-di-hemidiglykolat unter Kühlung in 22 cm3 0,1n Natriumbikarbonatlösung auf und lyophilisiert. Die Ausbeute beträgt 6 g Dinatriumsalz des Allo- pregnan - 3 ss,16a-diol-20-on-3,16-di-hemidiglykolates.

In analoger Weise erhält man aus Ephedrin und Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on-3,16-di-hemidiglykolat das Di-ephedrinsalz des Allopregnan-3ss,16a-diol-20- on-3,16-di-hemidiglykolates.

Beispiel 11 0,33g Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on und 0,6 g Camphersäure-anhydrid werden in 25 cm3 Pyridin, das 7 cm3 Triäthylamin beigemengt enthält, unter Stickstoff während 5 Stunden zum Sieden erhitzt. Nach dem Abkühlen dampft man die Lösungsmittel im Vakuum bei 40-60 Badtemperatur ab und nimmt den Rückstand in Essigester-Methanol 9: 1 auf. Die Essigesterlösung wird mit verdünnter Salz säure und Wasser gewaschen.

Man extrahiert die sauren Reaktionsprodukte mittels eiskalter, verdünn ter Natriumbikarbonatlösung. Die Natriumbikarbo- natauszüge werden mit verdünnter Salzsäure ange säuert. Das ausgefällte Reaktionsprodukt wird ab- genutscht, mit Wasser ausgewaschen und getrock net. Die Ausbeute beträgt 0,5 g Allopregnan-3ss,16a- diol-20-on-3,16-di-hemicamphorat.

Beispiel 12 0,335 g Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on, 0,6 g Endoxy - tetrahydro - phthalsäure - anhydrid, 25 cm3 Collidin und 5 cm3 Diäthylamin werden unter Stick stoff während 6 Stunden auf 110-120 erhitzt. Die weitere Aufarbeitung erfolgt nach Beispiel 12. Man erhält 0,6 g Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on-3,16-di- hemi-endoxy-tetrahydrophthalat.

In analoger Weise erhält man aus Allopregnan- 3ss,16a-diol-20-on und Endoxy hexahydro-phthal- säure-anhydrid mit 82% Ausbeute Allopregnan- Beispiel 2 100 mg Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on werden in 4 cm?, Pyridin gelöst und mit 2 cm3 Benzoylchlo- rid in 2 cm3 Benzol versetzt und nach kurzem Er wärmen auf 40 62 Stunden bei 20 stehengelassen.

Nach Abdestillieren des Pyridins im Vakuum wird mit Wasser versetzt, ausgeäthert und wie in Beispiel 1 beschrieben aufgearbeitet. Das erhaltene Allo- pregnan-3ss,16a-diol-20-on-3ss,16a-dibenzoat kristal lisiert aus Methanol oder Benzol-Äther und schmilzt bei 224-226 .

Beispiel 3 500 mg Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on werden in 25 cm- Benzol und 25 cm3 Pyridin mit 0,25 cm3 Benzoylchlorid in 5 ml Benzol 20 Stunden bei 22 stehengelassen. Das Gemisch wird hierauf unter Kühlung mit Methanol versetzt und im Vakuum bis 60 eingedampft.

Der Rückstand wird in Benzol aufgenommen, mit 2n Salzsäure und Wasser neutral gewaschen, getrocknet und an 30 g neutralem Alu- miniumoxyd in Benzol-Petroläther (1 : 1) adsorbiert. Nach Vorwaschen mit Benzol und Benzol-Äther (9: 1) lässt sich das Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on- 3-monobenzoat mit Äther und Methylenchlorid- Aceton (9: 1) eluieren und aus Benzol-Äther um kristallisieren.

50 mg Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on-3ss-mono- benzoat werden in 0,5 em3 Pyridin und 0,2 em3 Acetanhydrid während 20 Stunden bei 20 stehen gelassen. Nach Zufügen von wenig Wasser, Abdamp fen des Pyridins und der Essigsäure im Vakuum wird der Rückstand in Äther gelöst, mit Wasser, verdünnter Salzsäure und Natriumhydrogencarbonat- lösung neutral gewaschen.

Nach Entfernen des Lö sungsmittels liefert der aus Äther-Hexan umkristalli- sierte Rückstand reines Allopregnan-3ss,16a-diol-20- on-3ss-benzoat-16a-acetat.

Beispiel 4 300 mg Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on werden in 20 ml Pyridin gelöst und mit 0,15 cm3 Trimethyl- essigsäurechlorid 60 Stunden bei 20 stehengelassen. Das Gemisch wird mit etwas Methanol versetzt, im Vakuum bis 60 C eingeengt und dann in ätherischer Lösung mit 2n Sodalösung und Wasser neutral ge waschen.

Nach Trocknen über Natriumsulfat und Abdestillieren des Lösungsmittels nimmt man den Rückstand in Benzol auf und chromatographiert an 15 g neutralem Aluminiumoxyd. Nach Vorwaschen mit Benzol und Benzol-Äther (9: 1) lässt sich das Allopregnan - 3ss,16a - diol - 20-on-3 ss-trimethylacetat vom F. 192-198 mit Benzol-Äther (9: 1) und (1 :

1) eluieren und aus Aceton-Äther umkristallisieren.

80 mg Allopregnan-3P,16a-diol-20-on-3ss-mono- trimethylacetat werden in 0,5 cm3 Pyridin und 0,3 cm3 Acetanhydrid 36 Stunden bei 20 stehen gelassen. Nach Zugabe von wenig Wasser und Ab dampfen von Pyridin und Essigsäure wird der Rück stand in Äther aufgenommen, mit verdünnter Salz säure, kalter Sodalösung und Wasser neutral ge- waschen.

Der nach Trocknen und Abdestillieren er haltene Rückstand liefert aus Äther-Hexan um- kristallisiert Allopregnan - 3ss,16a - diol-20-on-3/3-tri- methyl-acetat-16a-acetat.

Beispiel S 50 mg Allopregnan-3fl,16a-diol-20-on werden in 2 cm3 Pyridin gelöst und mit 0,158 cm3 10 % igem Acetanhydrid in Benzol 18 Stunden bei 20 stehen gelassen.

Der nach Aufarbeitung (wie in Beispiel 4) erhaltene, neutrale Rückstand von 51 mg wird an 50 Blatt Whatman-Papier Nr. 1 (Breite 19 cm, Länge 45 cm) mit dem System Petroläther-Benzol- Methanol-Wasser (33 :17 :

40:10) bei 38 C präpara- tiv papierchromatographiert, zur Abtrennung von unumgesetztem Ausgangsmaterial, von 3,16-Diacetat und 3-Monoacetat. Die Zone mit dem Rf-Wert 0,45 bis 60 wird mit Methanol-Wasser eluiert, und nach Eindampfen erhält man das Allopregnan-3ss,16a-diol- 20-on-16a monoacetat in reiner Form vom F.

259 bis 261 durch Umkristallisieren aus Aceton-Äther. In dem angegebenen System wandert diese Verbin dung wie etwa Cortexon, zeigt blaue Antimontri- chlorid-Fluoreszenz (UV.) und gelbe Farbreaktion mit Dinitrophenylhydrazin.

Beispiel 6 2,0 g Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on und 4,8 g Bernsteinsäure-anhydrid werden in 100 cm3 Pyridin während 4 Stunden unter Stickstoff zum Sieden er hitzt.

Die klare Reaktionslösung wird gekühlt und im Vakuum das Pyridin weitgehend abdestilliert. Man löst den kristallinen Rückstand in Chloroform, wäscht den Extrakt zunächst mehrmals mit ver dünnter Salzsäure, dann mit Wasser und zieht die sauren Reaktionsprodukte mit 0,5n Natriumbikarbo- natlösung, die etwas Sodalösung beigemischt enthält, aus. Die alkalischen Extrakte werden mit verdünnter Salzsäure angesäuert und mit Chloroform ausgeschüt telt. Die Chloroformlösung wird mit Wasser gewa schen, über Natriumsulfat getrocknet und einge dampft.

Man erhält 3,12g Allopregnan-3j3,16a-diol- 20-on-3,16-di-hemisuccinat, das nach einmaligem Umkristallisieren aus Essigester bei l95-196 schmilzt. Das Produkt ist löslich in 0,1n Natrium bikarbonatlösung.

Zur Herstellung des wasserlöslichen Natrium salzes werden 0,2 g Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on- 3,16-di-hemisuccinat in 8,0 cm3 0,1n Natriumbi- carbonatlösung gelöst. Die Lösung wird filtriert und lyophilisiert. Man erhält 0,22 g Dinatriumsalz des Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on-3,16-di-hemisuccinats. Das pH der 1 o/oigen wässrigen Lösung liegt bei 6,3, gemessen mit Lyphanpapier Nr. 670.

In analoger Weise erhält man aus Allopregnan-. 3 ss,16a - diol - 20 - on- 3,16-di-hemisuccinat und Tri- äthanolamin das wasserlösliche Triäthanolaminsalz des Allopregnan - 3ss,16a - diol - 20 - on-3,16-di-hemi- succinats. 3ss 16a - diol - 20 - on-3,

16-di-hemi-endoxy-hexahydro- phthalat.

Beispiel 13 0,335 g Allopregnan-3ss,16a-diol-20-on, 0,6 g Endomethylen-tetrahydro phthalsäure-anhydrid und 25 cm3 Collidin werden unter Stickstoff während 8 Stunden auf 1l0-120 erhitzt. Die klare Reaktions lösung wird gekühlt und im Vakuum bei 40-70 Badtemperatur eingeengt. Man nimmt den Rückstand in Essigester-Methanol 9 : 1 auf und wäscht die Lö sung mit verdünnter Salzsäure und Wasser.

Die sauren Reaktionsprodukte werden mit verdünnter Natriumbikarbonatlösung ausgezogen und daraus nach Filtrieren mit verdünnter Salzsäure wieder aus gefällt. Man nutscht ab, wäscht mit Wasser und trocknet. Die Ausbeute beträgt 0,6 g Allopregnan 3ss,16a-diol-20-on-3,16-di-hemi-endomethylen-tetra- hydrophthalat.

In analoger Weise erhält man aus Allopregnan- 3ss,16a-diol-20-on und Endomethylen-hexahydro- phthalsäureanhydrid mit 80% Ausbeute Allopregnan- 3ss,16a - diol-20-on-3,16-di-hemi-endomethylen-hexa- hydro-phthalat.

Beispiel 14 0,335 g Allopregnan - 3ss,16a - diol-20-on und 0,64 g Athylen-bis-glykolsäure-anhydrid werden in 20 cm3 Pyridin gelöst und 9 Stunden unter Stickstoff zum Sieden erhitzt. Die klare, gekühlte Reaktions lösung konzentriert man im Vakuum bei 40-60 Badtemperatur. Der Rückstand wird in Essigester aufgenommen, die Lösung mit verdünnter Salzsäure und Wasser pyridinfrei gewaschen, getrocknet und eingedampft.

Beim Umlösen aus Essigester oder Me- thylenchlorid-Petroläther kristallisiert Allopregnan- 3ss,16a-diol-20-on-3,16-di-hemi-äthylen-bis-glykolat. Beispiel15 0,7 g Polyäthylenglykolmonomethyläther mit einem mittleren Molekulargewicht von 350 werden während 11,Stunden im Vakuum bei 80 getrocknet und mit 0,3g Tetrahydro-phthalsäureanhydrid durch 4stündi- des Erhitzen auf 170 unter Stickstoff umgesetzt,

wo bei nahezu quantitativ Methoxypolyäthylenglykol- 350-hemitetrahydrophthalat entsteht. Die Estersäure wird durch 1stündiges Kochen mit 1 g Thionylchlorid in das Säurechlorid übergeführt und das überschüs sige Thionylchlorid vollständig entfernt.

Das erhaltene Säurechlorid wird in 50 cm3 Benzol gelöst und bei 0 in eine Mischung von 0,3 g Allo- pregnan-3ss,16a-diol-20-on in 50 cm3 Benzol und 50 cm3 Pyridin eingetragen. Man erwärmt langsam auf Raumtemperatur und lässt das Reaktionsgemisch 20 Stunden stehen. Das ausgeschiedene Pyridin- hydrochlorid wird abgetrennt. Das Filtrat schüttelt man hintereinander mit 6 Portionen von je 1 g Alu miniumoxyd. Das Filtrat wird filtriert und vollstän dig eingedampft.

Nach Entfernung der Lösungsmit- telreste im Hochvakuum weist das Produkt eine Reinheit von etwa 90% auf, wie sich aus verglei- chender Papierchromatographie mit Allopregnan- 3ss,16a-diol-20-on ergibt.

Der erhaltene Allopregnan- 3 ss,16a-diol-20-on-3,16-bis-methoxypolyäthylen - gly- kol- 350 -tetrahydrophthalat ist gut wasserlöslich.

Der in den obigen Beispielen verwendete neue Wirkstoff kann z. B. wie folgt aus Nebennieren iso liert werden: 500 kg frische oder tiefgekühlte Rinder- oder Schweine-Nebennieren werden nach einem der be kannten Verfahren, vorzugsweise nach Cartland und Kuizenga (J. Biol. Chem. 116, 57 [1936]) extrahiert, wobei die Entfettung mit Petroläther ausgelassen wird.

Je nach der Qualität der Drüsen erhält man so 4-25 kg Rohextrakt, der sodann durch Verteilung zwischen wässerigem Alkohol, z. B. 60%igem Me- thanol, und Petroläther im Gegenstromverfahren nach Schema 1 gründlich entfettet wird. Die wässe- rig-methanolische Phase extrahiert man hierauf ebenfalls im Gegenstromverfahren zweimal mit dem halben Volumen Chloroform (Schema 1).

Die ver einigten Chloroformlösungen a2 und b2 werden nach Waschen mit verdünnter Salzsäure und Hydrogen karbonatlösung und Trocknen über Natriumsulfit im, Vakuum unter 50 eingedampft. Man erhält auf diese Art 64 g steroidreichen Extrakt A und 47 g steroidarmen Extrakt B. Extrakt A dient als Aus gangsstoff für das vorliegende Verfahren.

64 g des genannten Extraktes A werden einer Chromatographie an 2,0 kg Silicagel mit 201/o Wassergehalt unterworfen, wobei mit Chloroform, Chloroform/Aceton-Gemischen, Aceton und Metha nol eluiert wird.

Vorversuche hatten gezeigt, dass sich die Auftrennung so wesentlich rascher, scho nender und in besserer Ausbeute erreichen lässt als durch Verteilung an Kieselgur. Durchlaufgeschwin- digkeit etwa 1000 ml pro Stunde und Fraktion.

Die mit 1-5% Aceton in Chloroform eluierten Frak- tionen, die Corticosteron, 17-Hydroxy-cortexon (S) und 11-Dehydro-corticosteron enthalten, werden ver- einigt und erneut an 1,

5 kg Silicagel mit 90% Wassergehalt chromatographiert. Der neue Wirkstoff befindet sich in den Fraktionen 6-8, erhalten durch Elution mit 3-4,5% Aceton in Chloroform. Aus Aceton ergeben diese Fraktionen bereits grosse Men gen von Kristalüsaten, welche sich in der Folge als frei vom neuen Wirkstoff erweisen.

Die 9,45 g Mutterlaugen werden einzeln auf Whatmanpapier Nr. 1 (19 X 37 cm) im Chromatoblockverfahren (je 160-170 Blatt pro Block und 10 mg pro Blatt) mit dem System Formamid/Benzol-Chloroform (1:1) aufgetrennt. Dieses Verfahren erweist sich durch scharfe und rasche Auftrennung für die Isolierung des Wirkstoffes als äusserst nützlich.

Die wirkstoff- haltigen Zonen der verschiedenen Blöcke können durch den Farbstoff F5 (4-Nitro-2'-methyl-4'-di- äthanolamino-azobenzol) und durch das im Extrakt befindliche 11- Dehydrocorticosteron (vor dem Wirkstoff laufend) bzw.

Corticosteron und 17-Hy- droxycortexon (knapp hinter dem Wirkstoff laufend) nach Auswertung der einzelnen Blätter in dem Fluoreszenzschirm leicht festgelegt werden, ohne dass auf dieser Reinigungsstufe ein Nachweis des Wirk stoffes selbst mit einer Farbreaktion möglich wäre. Das auf den ausgeschnittenen Zonen befindliche Ma terial wird auf übliche Weise mit wässrigem Methanol eluiert und daraus mit Chloroform zurückgewonnen.

Anschliessend wird im System Propylenglykolj Toluol, und zwar auf einzelnen Blättern, rechro- matographiert; hierbei entwickelt man so lange, bis der Farbstoff F, etwa 3;@ der Papierlänge zurück- gelegt hat. Die Wirkstoffzone befindet sich stets etwa auf halbem Weg zwischen F, und Startlinie und wird durch zwei Linien bei Ri""5 0,35 und RF5 0,6 begrenzt.

Ausser dem Farbstoff ist für die Lokalisie rung des Wirkstoffes in den meisten Fällen auch eine im UV schwach grünlich fluoreszierende Bande knapp hinter der Wirkstoffzone nützlich; im UV bei 240 mu absorbierende Substanzen sind in dieser Rei nigungsstufe nicht mehr nachweisbar. Hingegen ist es nun nach Einwirkung von Antimontrichlorid möglich, den Wirkstoff selbst durch eine schwach blaue bis blauviolette UV-Fluoreszenz sichtbar zii machen.

Das Eluat dieser Zone liefert mit Aceton oder Aceton-Äther-Genvsch leicht ein Rohkristallisat. Durch einmalige Umkristallisation aus Methanol- Aceton und Waschen der Kristalle mit Aceton und Aceton-Äther erhält man den reinen einheitlichen Wirkstoff vom F. 258-260 .

Der Wirkstoff kristalli- siert aus Methanol, Aceton, Äthylacetat, Dioxan oder Tetrahydrofuran, mit oder ohne Zusatz von Wasser, in kleinen dünnen Blättchen. Die Kristalle beginnen ab etwa 210 zu sublimieren, stark ab etwa 230 und schmelzen bei 258-260 ; der Schmelz punkt ist wegen der vorangehenden starken Sublima tion nicht leicht zu bestimmen.

Das UV-Spektrum des Wirkstoffes zeigt keine charakteristische Absorption bei 240 mcc, sondern nur eine sehr schwache bei 287 mci (E i m = l,65). Das IR-Spektrum in Chloroform zeigt charakte ristische Banden bei 2,77 ,cs (OH), 3,43 P und 3,52111 (CH, stark), bei 5,87 ,u (im C=O-Bereich), 6,92u, 7,24,u, 7,40,u und 9,70 ,u.

Der neue Wirkstoff ist von ähnlicher Polarität wie Corticosteron. Nachstehend ist das Resultat einiger Farbreaktionen zusammengestellt (alle An gaben beziehen sich auf 10 ;, Substanz/cm2 Papier).
EMI0006.0052

SbCl3: <SEP> blau <SEP> (UV)
<tb> UV <SEP> (240 <SEP> mu) <SEP> Reduktionsvermögen <SEP> (Blautetrazolium) <SEP> NaOH-Fluoreszenz <SEP> (d4-3-Ketosteroide) <SEP> Dinitrophenylhydrazin <SEP> + <SEP> (gelb)
<tb> Zimmermann <SEP> (17-Ketosteroide) <SEP> Zinntetrachlorid <SEP> J!KJ <SEP> (+ <SEP> Äther) <SEP> FeCl3 <SEP> K3Fe(CN)o <SEP> (auf <SEP> Enole) <SEP> Ninhydrin <SEP> - Schema 1 Entfettung von NN-Rohextrakt 22,5 kg Rohextrakt aus 500 kg Schweine-NN.

Lösen in 200 1 Petroläther und Abfiltrieren von unlöslichen Stoffen.
EMI0006.0056

Gegenstromextraktion <SEP> mit <SEP> 60o/oigem <SEP> wässrigem <SEP> Methanol <SEP> (mit <SEP> 5 <SEP> g <SEP> NaCl,.-'1) <SEP> im
<tb> Luwesta <SEP> EG <SEP> 2006-Extraktor:

<SEP> Durchlaufgeschwindigkeit <SEP> der <SEP> Petrolätherphase
<tb> 600 <SEP> 1!Stunde, <SEP> Temperatur <SEP> 18-31 <SEP> C, <SEP> Volumverhältnis <SEP> der <SEP> wässrigen <SEP> Methanol zu <SEP> den <SEP> Petroläther-Phasen <SEP> 3,6-4,1.
<tb> Passage <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 4 <SEP> Petroläther
<tb> --' <SEP> '--v-@ <SEP> verwerfen
<tb> 100 <SEP> 106
<tb> Methanolauszug <SEP> a <SEP> Methanolauszug <SEP> b
<tb> Waschen <SEP> der <SEP> Methanolauszüge <SEP> mit <SEP> Petroläther <SEP> im <SEP> Luwesta-Extraktor: <SEP> Durch laufgeschwindigkeit <SEP> der <SEP> Methanolphasen <SEP> etwa <SEP> 300 <SEP> 1/Stunde, <SEP> Temperatur <SEP> 25 <SEP> C,
<tb> Volumverhältnis <SEP> von <SEP> a,IPetroläther <SEP> 2,6 <SEP> und <SEP> b(Petroläther <SEP> 3,7.

EMI0007.0001

Methanollösung <SEP> a1 <SEP> Methanollösung <SEP> b1 <SEP> -a <SEP> Petroläther <SEP> verwerfen
<tb> Reextraktion <SEP> der <SEP> gewaschenen <SEP> Methanollösungen <SEP> mit <SEP> Chloroform <SEP> im <SEP> Luwesta Extraktor: <SEP> Durchlaufgeschwindigkeit <SEP> der <SEP> Methanolphasen <SEP> etwa <SEP> 2601/Stunde, <SEP> Tem peratur <SEP> 25 <SEP> C, <SEP> Volumverhältnis <SEP> von <SEP> Chloroformjai <SEP> bzw. <SEP> b1 <SEP> = <SEP> 2,1.
<tb> Chloroformextrakt <SEP> a2 <SEP> Chloroformextrakt <SEP> b2--> <SEP> wässr. <SEP> Methanol <SEP> verwerfen
<tb> Einengen <SEP> der <SEP> Chloroformextrakte <SEP> im <SEP> Vakuum, <SEP> neutral <SEP> waschen, <SEP> trocknen <SEP> und
<tb> eindampfen, <SEP> zuletzt <SEP> im <SEP> Hochvakuum:
<tb> i
<tb> Extrakt <SEP> A: <SEP> 64 <SEP> g <SEP> Extrakt <SEP> B: <SEP> 47 <SEP> g

Claims

PATENTANSPRUCH I Verfahren zur Herstellung von funktionellen Derivaten eines neuen Wirkstoffes aus Nebennieren, dadurch gekennzeichnet, dass man Allopregnan- 3fl,16a-diol-20-on der Formel EMI0007.0004 zu 3- oder 16-Monoestern oder 3,16-Diestern um setzt, wobei die Monoester nur in 16-Stellung und die Diester höchstens einmal den Acetylrest auf weisen. UNTERANSPRÜCHE 1.

Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass man erhaltene 3- oder 16-Mono- ester zu 3,16-Diestern umsetzt, die höchstens einmal den Acetylrest aufweisen. 2. Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass man Allopregnan-3fl,16a-diol- 20-on mit einem niederaliphatischen Säureanhydrid und Pyridin erwärmt und den entsprechenden Diester isoliert. 3.

Verfahren nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man Allopregnan-3fl,16a-diol- 20-on mit einem Carbonsäurechlorid in Gegenwart von Pyridin bei Zimmertemperatur behandelt und den entstandenen Monoester isoliert. 4.

Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass man Allopregnan-3fl,16a-diol- 20-on mit einem Anhydrid einer Dicarbonsäure in Gegenwart von Pyridin umsetzt und den erhaltenen Hemiester der Dicarbonsäure isoliert.

PATENTANSPRUCH 1I Verwendung der nach dem Verfahren gemäss Patentanspruch I hergestellten 3,16 - Diestern des Allopregnan-3f,16a-diol-20-ons zur Herstellung von 3- oder 16-Monoestern durch Hydrolyse.