CS117192A3 - SUBSTITUTED 3-(PYRIDINYLAMINO)INDOLES AND BENZO/b/THIOPHENES, PROCESS OFPREPARING SAID COMPOUNDS AND THEIR USE AS MEDICAMENTS - Google Patents

Description

7777- PRAHA í, Ζ&amp;» ί!ΗΗ ' > o '. e Z> rc •C r~-< ΓΠ řsi -<

Substituované 3-(pyridinylam.no)indoly a benzo/ b7thiofeny,způsob přípravy těchto sloučenin a použití jako léčiv.

Oblast techniky

Vynález se týká nových substituovaných 3-(pyridinyl-amino)indolů a benzo/ b7thiofenů, způsobu přípravy těchtosloučenin a použití těchto sloučenin při léčení různýchpamětových dysfunkcí, jako je například Alzheimerovanemoc, a dále je jich možno použít jako modulátorů funkceneurotransmiterů, antidepresiv, anxiolytik, atypickýchantipsychotik, antiemetik a pro léčení poruch osobnosti.

Podstata vynálezu

Podstatu uvedeného vynálezu tvoří sloučeniny obec-ného vzorce I

řř ve kterém znamená : R atom vodíku, nižší alkylovou skupinu, nižšíalkenylovou skupinu, nižší alkinylovou skupinu, aryl-nižší alkylovou skupinu, amino-nižší alkylovou skupinu, nižšíalkyl-amino-nižší alkylovou skupinu, formylovou skupinu,nižší alkyl-karbonylovou skupinu, amino-nižší alkyl-karbony-lovou skupinu nebo nižší alkoxy-karbonylovou skupinu, skupina -X-Y= představuje \ // N - C/ \ r2 r

\

nebo N - N kde R2 a R^ jsounebo nižší alkylová skupina, nezávisle atom vodíku W znamená atom vodíku, halogenu, hydroxyskupinu,nižší alkoxyskupinu, aryl-nižší alkoxyskupinu nebo

kde R^ je atom vodíku, nižší alkylová skupinanebo aryl-nižší alkylová skupina, je nižší alkylová skupina nebo aryl-nižší alky lová skupina, nebo alternativně celá skupina

/ \

-N O \_y

představuje

kde Rg je atom vodíku, nižší alkylová skupina,arylová skupina nebo aryl-nižší alkylová skupina, a Z je atom vodíku, halogenu, nižší alkylová skupi-na, nitroskupina nebo aminová skupina.

Tyto sloučeniny podle uvedeného vynálezu se pou-žívají při zmírňování různých paměťových dysfunkcí, jako jenapříklad Alzheimerova nemoc, jako modulátorů funkceneurotransmiterů, jako například serotonergických aadrenergických, a jako takové je možno tyto sloučeniny použítjako antidepresiva, anxiolytika, atypická antipsychotika,antiemetika a dále je možno těchto sloučenin použít přiléčení poruch osobnosti (rozpadu osobnosti, jako je napří-klad obsesivní nutkavé poruchy.

Pokud nebude výslovně uvedeno jinak, potom vcelém popisu a v připojených patentových nárocích majípoužité termíny následující význam.

Termínem "nižší alkylová skupina" se míní alky-lová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem,která obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku. Jako příklady těchto nižšíchalkylových skupin je možno uvést methylovou skupinu, ethylo-vou skupinu, n-propylovou skupinu, isopropylovou skupinu,n-butylovou skupinu, isobutylovou skupinu, sekundárníbutylovou skupinu, t-butylovou skupinu a dále pentylovéa hexylové skupiny s přímým nebo rozvětveným řetězcem. Výše uvedeným termínem "halogen" se míní fluor,chlor, brom nebo jod. Výše uvedeným termínem "arylová skupina" se mínífenylová skupina substituovaná žádným, 1 nebo 2 substi-tuenty, přičemž každý z těchto substituentů je vybránze skupiny zahrnující nezávisle nižší alkylovou skupinu,nižší alkoxyskupinu, atom halogenu nebo trifluormethylovouskupinu. V celém popisu uvedeného vynálezu v patentovýchnárocích náleží do rozsahu uvedeného chemického vzorcevšechny stereoisomery, optické isomery a tautomerní isomery,jestliže tyto isomery existují.

Sloučeniny podle uvedeného vynálezu se připravíza použití jednoho nebo více syntetických stupňů, které jsouuvedeny níže. Při popisu těchto syntetických stupňů mají sym-boly R^ až Rg a W , X , Y a Z stejný význam jakobylo shora uvedeno, pokud nebude výslovně uvedeno jinak,a ostatní symboly mají odpovídající význam, jak je to uvedenopři jejich prvním definování. Výchozí 3-aminoindoly obecného vzorce II jemožno připravit postupy známými z dosavadního stavu tech-niky, jako je například postup s použitím redukce 3-nitrosoindolů pomocí NagS^O^ .· V tomto směru je možno poukázat na publikaci "Indoly" , část II, editor tf.J. Houlihan,Wiley-Interscience, New York, 1972 a evropská patentovápřihláška 0 224 830 (1987) .

H Výchozí 3-aminobenzo/~b7thiofeny obecného vzorceIII je možno rovněž připravit metodami běžně známými z do-savadního stavu techniky. V tomto směru je možno poukázatna publikaci : D.E. Boswell a kol., J. Heterocyclic Chem., 5, 69 (1968) , a Heilbron, "Dictionary of Organic Compounds,str. 151 .

R- NH. (III) Výchozí 3-aminoindazoly obecného vzorce IV jemožno rovněž připravit metodami běžně známými z dosavadníhostavu techniky.

R, V tomto směru je možno například poukázat na publikaci :

Virona a kol., J. Heterocyclic Chem., 16, 783 (1989), ve kterése uvádí reakce znázorněná níže, přičemž substituentem R^ jeatom vodíku nebo methylová skupina. 0

Stupeň A :

Sloučenina obecného vzorce II se podle tohoto pro-vedení uvede do reakce s hydrochloridem chlorpyridinu obec-ného vzorce V , přičemž se získá sloučenina obecného vzorce VI.

(V) (VI)

Tato výše uvedená reakce se obvykle provádí veterickém rozpouštědle, jako je například bis(2-methoxy-ethyl)eter, diethyleter, dimethoxyethan, dioxan nebotetrahydrofuran, nebo v polárním aprotickém rozpouštědle,jako je například dimethylformamid, dimethylacetamid,N-methyl-2-pyrrolidon, hexamethylfosforamid nebo dimethyl-sulfoxid, nebo v protickém rozpouštědle, jako je napříkladethanol nebo isopropanol, při teplotě pohybující se v rozmezíod asi 20 °C do asi 150 °C .

Podobným způsobem se sloučenina obecného vzorce IIIuvádí do reakce se sloučeninou obecného vzorce V, přičemžtato reakce se v podstatě provádí stejným způsobem jako bylouvedeno výše, přičemž se získá sloučenina obecného vzorceVII . (III) + (V)

Stupeň B

Podle tohoto provedení se sloučenina obecného vzorce VI uvádí do reakce s nižším alkylesterem kyselinychlormravenčí obecného vzorce

Cl - CO - 0R? kde je nižší alkylová skupina, přičemž se získá sloučenina obecného vzorce VIII . (VI) +

01^

NH2 (VIII)

Tato výše uvedená reakce se v běžném provedení provádí vevhodném rozpouštědle, jako je například dichlormethan vpřítomnosti vhodné bazické sloučeniny, jako je napříkladhydrogenuhličitan sodný nebo triethylamin, a při teplotěpohybující se v rozmezí od asi 20 do asi 60 °C .

Stupeň C :

Podle tohoto provedení se sloučenina obecnéhovzorce VIII uvede do reakce s nižším alkylhalogenidemobecného vzorce R2 - Hal kde R2 nižší alkylová skupina a Hal je chlor nebo brom,nebo s di-nižší alkyl-sulfátem obecného vzorce (r2o)2so2 což se provede běžným způsobem známým z dosavadního stavutechniky, přičemž se připraví sloučenina obecného vzorce IX . R2 - Hal (VIII) + v nebo (R20)2S02 ^0R7

C (IX)

z f nh2

R2 H - 10 -

Tato výše uvedená reakce se provádí obvykle ve vhodném roz-pouštědle, jako je například dimethylformamid nebo tetra-hydrofuran, v přítomnosti vhodné bazické sloučeniny, jako jenapříklad hydrid sodný nebo draselný nebo t-butoxid dra-selný, při teplotě pohybující se v rozmezí od asi 0 doasi 120 °C .

Stupeň D :

Podle tohoto provedení se sloučenina obecného vzor-ce hydrolyzuje, přičemž se připraví sloučenina obecného vzor-ce X . (IX) + OH θ

Tato hydrolýza se provádí v obvyklém provedení tak, že sesměs obsahující sloučeninu obecného vzorce IX , hydroxidalkalického kovu, jako je například hydroxid sočný, a vhodnémedium, jako je například ethanol nebo jiný nižší alkanol,společně s vodou promíchává při teplotě pohybující se v roz-mezí od asi 20 do 100 °C .

Stupeň E : 11 -

Podle tohoto postupu se sloučenina obecného vzor-ce X uvádí do reakce s halogenidovou sloučeninou obecnéhovzorce RQ - Hal ve kterém Rg je nižší alkylová skupina, nižší alkenylováskupina, nižší alkinylová skupina nebo aryl-nižší alkylováskupina, při teplotě pohybující se v rozmezí od asi -10 °C do asi+80 °C , ve výhodném provedení při teplotě v rozmezí odasi 0 °C do asi 25 °C , přičemž se připraví sloučeninaobecného vzorce XI . (X) + Rg-Hal

Tato výše uvedená reakce se obvykle provádí ve vhodném roz-pouštědle, jako je například dimethylformamid, dimethyl-sulfoxid, eterická rozpouštědla nebo aromatické uhlovodíky,v přítomnosti vhodné bazické sloučeniny, jako je napříkladhydrid sodný nebo hydrid draselný nebo t-butoxid draselný.

Sloučenina obecného vzorce X se v alternativním - 12 - provedení uvádí do reakce se sloučeninou obecného vzorce 0

vekterém znamená Alk nižší alkylenovou skupinu, aHal je chlor nebo brom, a běžným způsobem známým z dosavadního stavu techniky sepřipraví sloučenina obecného vzorce XII . Potom se taktozískaná sloučenina obecného vzorce XII zpracovává hydrazinemnebo methylaminem, což se provede opět známým způsobem zdosavadního stavu techniky, přičemž se získá sloučenina obec-ného vzorce XIII . 0

- 13 .

Alk

(XII) nh2 (XIII) NH2NH2 nebo CH^NH2

Alk

Z

Z / nh2R2 / H

Podle dalšího provedení se sloučenina obecnéhovzorce X uvádí do reakce s dihalogen-nižším alkanem obecného vzorce

Hal-Alk-Hal - 14 - což se provede běžným způsobem známým z dosavadního stavutechniky, přičemž se připraví sloučenina obecného vzorceXIV atato sloučenina se potom uvede do reakce se sloučeni-nou obecného vzorce r'nh2 ve kterém Rz představuje atom vodíku nebo nižší alkylovouskupinu,

což se provede opět běžným způsobem známým z dosavadníhostavu techniky, a tímto způsobem se připraví sloučenina obec-ného vzorce XV

Hal

Alk

z / nh2R2 / H

Z /NH2R2 / H (XV) - 15 -

Stupeň F :

Podle tohoto provedení se do reakce uvádí slouče-nina obecného vzorce X (ve které substituent It, může býtatom vodíku, což odpovídá sloučenině obecného vzorce VI)s halogenidem kyseliny obecného vzorce 0

II R_ - C - Hal ve kterém znamená Rg nižší alkylovou skupinu, což se provede běžným způsobem známým z dosavadního stavutechniky a připraví se sloučenina obecného vzorce XVI . 0

II (X) + Rg-C-Hal

Z / nh2 V alternativním provedení tohoto postupu uvedenéhovýše, kdy substituent Rg znamená atom vodíku nebo nižšíalkylovou skupinu, je možno použít anhydridu kyseliny obec-ného vzorce R -CO-O-CO-R- 7 7 přičemž reakce se opět provede běžným způsobem známým z do- - 16 - savadního stavu techniky a dosáhne se stejného cíle. Dále je možno sloučeninu obecného vzorce X uvéstdo reakce se sloučeninou obecného vzorce 0 0

II II RO - C - NH - Alk - 0 - Hal ve kterém R znamená t-butylovou skupinu nebo benzylovouskupinu, což se provede běžným způsobem známým z dosavadního stavutechniky a připraví se sloučenina obecného vzorce XVII apotom se tato sloučenina hydrolyzuje nebo se podrobí katalytické hydrogenolýze, což se provede běžným způsobem známým zdosavadního stavu techniky a připraví se sloučenina obecnéhovzorce XVIII. (X) + RO-C-NH-Alk-C-Hal

R. = H á - 17 - NH<

R< (XVIII) Z / Nřh

R2 X H

V alternativním provedení výše uvedeného postupuse sloučenina obecného vzorce X uvádí do reakce s karboxy-lovou kyselinou obecného vzorce XIX v přítomnesti dicyklo-hexylkarbodiimidu, přičemž se připraví sloučenina obecnéhovzorce XVII 0 0

> (XVII)

Stupen G

Podle tohoto provedení se sloučenina XVIa získanápostupem podle stupně F redukuje pomocí LiAlH^ nebo jinýmvhodným redukčním činidlem, což se provede běžným způsobem zná-mým z dosavadního stavu techniky, a připraví se sloučeninaobecného vzorce XX . - 18 - 0 Rc X / 5

(XVIa) + líaih4 CH2Rg

H (XX)

Stupeň H :

Podle tohoto postupu se sloučenina obecného vzorceVII uvádí do reakce s nižším alkylesterem kyseliny chlor-mravenčí obecného vzorce

Cl - CO - 0R? obvyklým způsobem, v podstatě stejným jako je postupa podlestupně B , přičemž se připraví sloučenina obecného vzorceXXI . - 19 - O.

O

II (VII) + Cl-C-ORy w-

3^N z / nh2 (XXI)

Stupeň I

Podle tohoto postupu se sloučenina obecného vzorceVII uvádí do reakce s halogenidem sloučeniny obecného vzorce

Rg - Hal

což se provede v podstatě stejným způsobem jako je postupuvedený ve stupni E , přičemž se připraví sloučenina obecnéhovzorce XXII

(XXII)

Podle dalšího provedení se sloučenina obecného - 20 vzorce VII uvádí do reakce se sloučeninou obecného vzorce il

N-Alk-Hal přičemž se připraví sloučenina obecného vzorce XXIII a potomse tento produkt zpracuje hydrazinem nebo methylaminem, cožse provede v podstatě stejným způsobem jako to bylo uvedenove stupni E , přičemž se připraví sloučenina obecného vzorceXXIV .

(XXIII) - 21 - NH2NH2 -> nebo CH^NH2 nh2 I (XXIV)

Alk

Podle dalšího provedení se sloučenina obecnéhovzorce VII uvádí do reakce se sloučeninou obecného vzorce

Hal - Alk - Hal přičemž se připraví sloučenina obecného vzorce XXV a taktozískaný produkt se uvede do reakce se sloučeninou obecnéhovzorce r'nh2 což se provede v podstatě stejným způsobem jako je uvedenove stupni E , přičemž se připraví sloučenina obecného vzor-ce XXVI .

Hal

Alk

(XXV) - 22 NHR'

Stupeň J :

Podle tohoto provedení se sloučenina obecného vzor-ce VII uvádí do reakce s halogenidem kyseliny obecnéhovzorce 0

II R9 - C - Hal což se provede v podstatě stejným způsobem jako je to uvede-no ve stupni F , přičemž se připraví sloučenina obecnéhovzorce XXVII. (VII) + R^-C-Hal -> --

(XXVII) - 23 -

Podle dalšího provedení se sloučenina obecnéhovzorce VII uvede do reakce se sloučeninou obecného vzor-ce 0 0

II II RO - C - NH - Alk - C - Hal

přičemž se připraví sloučeninapotom se takto získaný produktkatalytické hydrogenolýze, cožzpůsobem jako ve stupni F , ačenina obecného vzorce XXIX 0 0 il ll (VII) + RO-C-NH-Álk-C-Hal obecného vzorce XXVIII ahydrolyzuje nebo se podrobíse provede v podstatě stejnýmtímto způsobem se získá slou-

hydrolýza nebokatalytickáhydrogenace (XXVIII) - 24 -

Alk

(XXIX)

Podle dalšího provedeníse sloučenina obecného vzor-ce VII uvádí do reakce se sloučeninou obecného vzorceXIX v přítomnosti dicyklohexylkarbodiimidu, což se prová-dí v podstatě stejným způsobem jako je postup podle stupně Fa tímto způsobem se připraví sloučenina obecného vzorceXXVIII .

(XXVIII)

Stupeň K :

Podle tohoto postupu se sloučenina obecného vzorceIV uvádí do reakce se sloučeninou obecného vzorce V , cožse provádí v podstatě stejným způsobem jako v postupu podlestupně A, a tímto způsobem se připraví sloučenina obecnéhovzorce XXX . - 25 - (IV) + (V)

Stupeň L :

Podle tohoto postupu se sloučenina obecného vzorceXXX uvádí do reakce s nižším alkylesterem kyseliny chlor-mravenčí obecného vzorce

Cl - CO - ΟΡγ což se provede v podstatě stejným způsobem jako je postuppopsaný ve stupni B , a tímto způsobem se získá sloučeninaobecného vzorce XXXI . 0

II (XXX) + Cl-C-ORy

(XXXI) - 26 -

Stupeň Μ :

Podle tohoto provedení se sloučenina obecnéhovzorce XXX uvádí do reakce s halogenidovou sloučeninouobecného vzorce

Rg - Hal přičemž se postupuje stejným způsobem jako je popsáno vestupni E a tímto způsobem se připraví sloučenina obecnéhovzorce XXXII . (XXX) + R -Hal

Q

(XXXII) z f NH2

*2 / H

Podle jiného provedení se sloučenina obecného vzor-ce XXX uvádí do reakce se sloučeninou obecného vzorce 0

- Álk - Hal - 27 - za účelem získání sloučeniny obecného vzorce XXXIII apotom se tento produkt zpracovává hydrazinem nebo methyl-aminem, cožse provádí v podstatě stejným způsobem jako je touvedeno ve stupni E a tímto způsobem se připraví sloučeninaobecného vzorce XXXIV . 0 (XXX)

- Alk - Hal

Alk

nh2nh2nebo CH3NH2 - 28 -

(XXXIV)

Podle jiného provedení se sloučenina obecnéhovzorce XXX uvede do reakce se sloučeninou obecného vzor-ce

Hal - Alk - Hal přičemž se získá sloučenina obecného vzorce XXXV a taktozískaný produkt potom reaguje se sloučeninou obecného vzorce r'nh2

což se provede v podstatě stejným způsobem jako to bylo uvedenove stupni E za účelem získání sloučeniny obecného vzorceXXXVI

Hal

Alk (XXX)

Hal-Alk-Hal

(XZXV) - 29 - NHR' r'nh2 ->

Alk

Stupeň N :

Podle tohoto provedení se sloučenina obecného vzor-ce XXX uvádí do reakce s halogenidem kyseliny obecnéhovzorce 0

II

Rg - C - Hal což se provádí v podstatě stejným způsobem jako je uvedenove stupni F , přičemž podle tohoto postupu se získá slouče-nina obecného vzorce XXXVII. (XXX)

Z / nh2 (XXXVII) - 30 -

Podle jiného provedení se sloučenina obecného vzor-ce XXX uvede do reakce se sloučeninou obecného vzorce 0 0

II II RO - C - NH - Alk - C - Hal za účelem získání sloučeniny obecného vzorce XXXVIII', přičemžpotom se takto vyrobený produkt hydrolyzuje, což se provedev podstatě stejným způsobem jako je uvedeno ve stupni Fa tímto způsobem se získá sloučenina obecného vzorce XXXIX. (XXX) +

II

OR

NH

*2 (XXXVIII) hydrolýza nebo katalytická hydrogenolýza - 31 -

(XXXIX)

Podle jiného provedení se sloučenina obecného vzor-ce XXX uvádí do reakce se sloučeninou obecného vzorce XIXv přítomnosti dicyklohexylkarbodiimidu, což se provádív podstatě stejným způsobem jako je uvedeno ve stupni Fza účelem přípravy sloučeniny obecného vzorce XXXVIII.

(XXXVIII)

Pokud se týče výše popsaných syntezních stupňů,tam kde je zapotřebí použít sloučeninu ve které -Z je-NH2 , je možno tuto sloučeninu připravit redukcí odpovída-jící sloučeniny, ve které je skupina -Z zbytek -NO^ ,což se provede za pomoci vhodného redukčního činidla, jakoje například zinek a kyselina chlorovodíková nebo je možnotuto redukci provést katalyticky za pomoci vodíku a vhodnéhokatalyzátoru na bázi vzácného kovu, jako je například pala-dium nebo platina, a tyto postupy se provedeu běžným způsobem - 32 - známým z dosavadního stavu techniky.

Sloučenin obecného vzorce I podle uvedeného vyná-lezu je možno použít pro léčení různých pamětových dysfunkcí,jako je například Alzheimerova nemoc,dále jako modulátorůfunkce neurotransmiterů, jako serotonergní funkce aadrenergni funkce, a dále sloučenin jako takových je možnopoužít jako antidepresiv, anxiolytik, atypických antipsycho-tik, antiemetik a dále pro léčení poruch osobnosti, jako jenapříklad obsesivní nutkavé poruchy. -3 / H_?-8-hydroxy-2-(di-n-propylamino)tetralin ( /vážící se na receptory serotoninu (5HT-^) . H/DPAT ) Cíl postupu : Cílem tohoto testu je určit afinitu testovanýchsloučenin na 5HT^^ receptor v mozku. Předpokládá se, že tentotest je vhodný k tomu, aby byly předběžně odhadnuty slou-čeniny, které mají serotonergní vlastnosti s potenciálnímožností využít těchto sloučenin jako anxiolytik, atypickýchantipsychotik nebo s možností použít tyto sloučeniny k léče-ní poruch osobnosti, jako je například obsesivní nutkaváporucha.

Existence dvou populací receptorů 5HT v mozku krysbyla prokázána pomocí odlišné sensitivity na spiroperidol(1) . Tyto receptory sensitivní na spiroperidol bylyoznačeny jako podskupina 5HT^ a nesensitivní receptorybyly označeny jako podskupina 5HT1g (2) . Ostatní 5HT vazebnámísta (5HT1C , 5HT c, 5ΗΤιρ a 5HT3) byly potom identifi-kovány v různých vzorcích pomocí odlišné sensitivityna antagonisty 5HT (3). Významný pokrok v klasifikováníreceptorů 5HT nastal s identifikací selektivních ligandůpro receptory 5HT^ > /~^h7dPAT (4) . Autoři této publikaceuvádějí, že / 3H?DPAT označoval autoreceptor. Studium lézí - 33 - ukazuje, že receptory značené / ^H/DPAT nejsou koncovýmiautoreceptory, ale mohou být somatodentritickými auto-receptory (5) . I když DPAT snižuje iniciační rychlostv jádru Raphe a inhibuje uvolňování 5HT, skutečné umístěnía funkce je poněkud kontroverzní (6). Tyto studie asensitivita / H/DPAT vážící se na guaninové nukleotidya účinek na adenylátcyklázu naznačují, že DPAT působí jako

agonist na receptoru 5HT

1A (7)

Postup I : A - Reakční činidla 1. Iris pufry, pH 7,7 (a) 57,2 gramu Tris HCl 16,2 gramu Tris báze

objem byl upraven na 1 litr destilovanouvodou (0,5 M Tris pufr, pH 7,7, pufr la) J (b) provedeno zředění 1 : 10 deionizovanou vodou(0,05 M Tris pufr, pH 7,7, pufr lb); (c) 0,05 M Tris pufr, pH 7,7 obsahující 10 /UMpargylinu, 4 mM chloridu vápenatého CaCl^ a0,1 % kyseliny askorbové (pufr lc) j 0,49 mg pargylinhydrochlorid, -111 mg chloridu vápenatého CaC^ , 250 mg kyselina askorbová,

objem upraven na 250 mililitrů pomocí 0,05 M

Tris pufru, pH 7,7 (reakční činidlo lb) J 2. 8-hydroxy/-^H?-DPAT (2-(N,N-di/ 2,3(n)-^H7propylamino)-8-hydroxy-l,2,3,4-tetrahydronaftalen) (160 - 206 €i/mmol)byl získán od firmy Amersham.

Prc stanovení ΙΟ^θ byl 10 nM zásobní roztok upraventak, že 50 /Ul tohoto roztoku bylo napuštěno do každétrubice (konečná koncentrace = 0,5 nM) . 3. Serotoninkreatininsulfát. Byl připraven 0,5 mM zá-sobní roztok v 0,01 N kyselině chlorovodíkové a 20 /ul tohoto roztoku bylo přidáno do 3 trubic za účelem určeni nespecifických vazeb (konečná kon»-. - 34 - centrace = 10 ^uM) . 4. Testované sloučeniny. Pro většinu testů byl připraven1 mM zásobní roztok ve vhodném rozpouštědle a tentozásobní roztok byl postupně zřeďován, takže konečnákoncentrace při provádění těchto testů se pohybovalav rozmezí od 2 x 10~^ do 2 x 10~8 M . Pro každýtest bylo použito sedm koncentrací. Je ovšem možnopoužít vyšších i nižších koncentrací, což závisí naúčinnosti léčivé látky. B. Příprava tkáně.

Samečkové krys druhu Wistar byly usmrceny a potomjím byly odděleny hlavičky. Hipocampy byly vyňaty, zváženy ahomogenizovány ve 20 objemech 0,05 M Tris pufru, pH 7,7.Homogenát byl odstředěn při 48 000 g, což bylo prováděnopo dobu 10 minut, a kapalina nad usazeninou byla oddělena.Takto získané pelety byly resuspendovány v odpovídajícímobjemu 0,05 M Tris pufru, inkubovány při 37 °C po dobu 10minut a potom bylo prováděno opětovně odstřeďování při48 000 g po dobu 10 minut. Konečné membránové pelety bylyresuspendovány v 0,05 M Tris pufru, který obsahoval 4 mMchloridu vápenatého CaCl2 , 0,1 % kyseliny askorbové a 10 yUÍ4 pargylinu. C. Provedení testu. 800 ^ul tkáně 130 /Ul 0,05 M Tris + CaCl2 + pargylin + kyselina askorbová20/Ul vehikulum/5HTAéčivá látka50 χιΐ /"3hZdpaT .

Trubice byly inkubovány po dobu 15 minut při teplotě 25 °C .Test byl zastaven vakuovou filtrací přes filtry Whatman GF/B,které byly potom promyty dvakrát 5 mililitry ledově chladného0,05 M Tris pufru. Tyto filtry byly potom umístěny doscintilačních zkumavek s 10 mililitry scintilačního roztokuLiquiscint a potom bylo provedeno vyhodnocení. - 35 - Výpočet.

Množství specifických vazeb je definováno jakorozdíl mezi celkovým množstvím vazeb a množstvím vazebv přítomnosti 10 5HT. Hodnota ΙΟ^θ byla vypočítána zprocentuálního množství specifických vazeb pro každou kon-centraci sloučeniny.

Postup II : A. Reakční činidla 1. Tris pufry, pH 7,7 (a) 57,2 gramu Tris HC1, 16,2 gramu Tris báze, objem byl upraven na 1 litr destilovanouvodou (0,5 M Tris pufr, pH 7,7, pufr la) * (b) provedeno zředění 1 : 10 destilovanou vodou(0,05 M Tris pufr, pH 7,7 při 25 °C , pufr lb) j (c) 0,05 M Tris pufr, pH 7,7 obsahující 10 yUMpargylinu, 4 mM chloridu vápenatého CaC^a 0,1 % kyseliny askorbové (pufr lc) J0,49 mg pargylinhydrochloridu , 110,99 mg chloridu vápenatého CaC^ , 250 mg kyseliny askorbové , objem upraven na 250 mililitrů pomocí 0,05 MTris pufru, pH 7,7 (pufr lb) ] 2. 8-hydroxy/~^H?-DPAT (2-N,N-di/”2,3(n)-^H7propylamino)-8-hydroxy-l,2,3,4-tetrahydronaftalen) 7 (160 - 206 Ci/mmol) byl získán od firmy Amersham.

Pro stanovení hodnot Ι0(-θ : ^H-DPAT byl upravenna koncentraci 3,3 nM ve Tris pufru (lc), takže přivložení 150 yUl do každé trubice bylo dosaženo konečnékoncentrace 0,5 nM při 1 ml testu. 3. Serotoninkreatininsulfát byl získán od firmy SigmaChemical Company. Serotoninkreatinin byl upraven nakoncentraci 100 ve Tris pufru (lc) . Sto ^ulbylo vloženo do každé ze tří trubic pro stanovení - 36 - nespecifických vazeb (tímto byla dosažena celková konečnákoncentrace 10 yuM pro 1 ml test ) . 4. Testované sloučeniny. Pro většinu testů byl připraven 100 yuM zásobní roztok ve vhodném rozpouštědle a tento zásobní roztok byl potom postupně zřeďován Tris pufrem

(lc), takže konečná dosažená koncentrace se pohybovala-5 -S v rozmezí od 10 do 10 při kombinování 100· yUlsloučeniny s celkově 1 ml testovacího roztoku. Pro každýtest byly studovány charakteristiky sedmi koncentrací,přičemž je ovšem možno použít vyšších i nižších koncentrací v závislosti na účinnosti sloučeniny. B. Příprava tkáně .

Samečkové krys druhu Wistar byly usmrceny a potomjím byly odděleny hlavičky, přičemž byl vyňat hyppocamus atento byl homogenizován ve 20 objemech ledově chladného0,05 M Tris pufru, pH 7,7 (lb). Tento homogenát byl potomodstřeďován při 48 000 g po dobu 10 minut při teplotě4° C . Výsledná peleta byla znovu homogenizována v čerstvémTris pufru (lb) , inkubována při 37 °C po dobu 10 minut apotom bylo provedeno opětovné odstřeďování při 48 000 g podobu 10 minut. Takto získaná konečná membránová peleta bylapotom opětně suspendována ve 0,05 M Tris pufru (lc), kterýobsahoval chlorid vápenatý CaC^ v koncentraci 4 mM ,dále 0,1 % kyseliny askorbové a 10 yuM pargýylinu. Množstvíspecifických vazeb bylo přibližně 90 % z celkového množstvívázaných ligandů. C. Provedení testu. 750 /Ul tkáně, 150 /ui /"3h7dpat , 100 /Ul vehikula (pro celkové množství vazeb) nebo 100 yuM serotoninkreatininsulfátu (pro nespecifické vazby)nebo vhodná koncentrace sloučeniny.

Trubice byly inkubovány po dobu 15 minut při teplotě 25 °C . - 37 -

Test byl zastaven vakuovou filtrací přes filtry WhatmanGF/B , které byly potom promyty dvakrát 5 mililitry ledověchladného 0,05 M Tris pufru (lb). Tyto filtry byly potomumístěny do scintilačních zkumavek společně s 10 mililitryscintilačního roztoku Liquiscint a potom bylo provedenovyhodnocení. Množství specifických vazeb je derinováno jakorozdíl mezi celkovým množstvím vazeb v nepřítomnosti-a v přítomnosti 10 yuM serotoninkreatininsulfátu. HodnotaIC5Q byla vypočátána z procentuálního množství specifickýchvazeb pro každou koncentraci sloučeniny.

Bylo zjištěno, že hodnota pro / ^H/DPAT vazbuje 1,3 nM , což bylo provedeno Scarchardovou analýzouexperimentu s nasyceným receptorem. Hodnota řL může býtvypočítána podle Cheng-Prusoffovy rovnice : K. = IC5O/1 * LAj,

Odkazy na literaturu : 1. Pedigo, N.W., Yammamura, J.I. a Nelson, D.L. :

Discrimination of multiple /~^H?5-hydroxytryptaminebinding sites by the nauroleptic spiperone in rat brain. J. Neurochem. 36 : 220 - 226 (1981) . 2. Middlemis, D.N. a Fozard J.R. : 8-Hydroxy-2-(di-n-propylamino)tetralin discriminates between subtypes ofthe 5HT^ recognition site. Eur. J. Pharmacol., 90 : 151 - 152 (1983) . 3. Peroutka, S.J. : Pharmacological differentiation andcharacterization of 5-HT^ , 5-HT^g and 5-HT^ bindingsites in rat frontal cortex. J. Neurochem. 47 : 529 - 540(1986) . 4. Peroutka, S.J. : 5-Hydroxytryptamine receptor subtypes :molecular, biochemical and physiological characterizationTINS 11 : 496 - 500 (1988) . - 38 - 5. Gozlan, H., El Mestikawy, S., Píchat, L. Glowinsky, J. a

Hamon, M. : Identification of presynaptic serotonin autoreceptors 3 using a new ligand H-DPAT. Nátuře 305 : 140 - 142 (1983). 6. Verge, D., Daval, G., Marcinkiewicz, M. Patey, A., El Mestikawy, H. Gozlan a Hamon, M. : Quantitative autoradiagraphy of multiple 5-HT^ receptor subtypes in the brain of control oř 5,7-dihydřoxytryptamine-třeatedrats, J. Neurosci. 6 : 3474 - 3482 (1986). 7. Schlegel, R. a Peroutka, S.J. : Nucleotide interactionswith 5-HT^^ binding sites directly labeled by /~^hZ-S-hydroxy-2-(di-n-propylamino)tetralin (/~^h7-8-0H-DPAT).Biochem. Pharmacol. 35 1943 - 1949 (1986) . 8. Dourish C.T., Hutson, P.H. and Curzon, G. : Putative anxiolytics 8-OH-DPAT, buspirone and TVX Q 7821 are agonistsat autoreceptors in the raphe nucleus. TIPS 7 : 212 - 214 (1986) . 9. Iversen, S.D. : 5HT and anxiety. Neuropharmacol. 23 : 1553 - 1560 (1984) . 10. Traber J. and Glaser, T. : 5HT^^ receptor-related anxioliticsTIPS 8 : 432 - 437 (1987) . 11. Peroutka, S.J. : Selective interaction of novelanxiolytics with 5-hydroxytryptamine^^ receptors. Biol.Psychiatry. 20 : 971 - 979 (1985) . 3 H-GR 65630 vážící se na membrány krysího entorhinálníhocortexu : Test na vazbu receptoru 5HT^ Cíl postupu : Cílem tohoto testu je určit afinitu testovanýchsloučenin na 5HT^ vazebná místa v mozku. Předpokládá se, - 39 - že tento test je vhodný k předběžnému odhadu schopnostisloučenin projevovat entiemetické, anxiolytické neboatypické antipsychotické účinky. V současné době se všeobecně uznává, že existujítři různé podtypy receptorů pro neurotransmiter serotonin(5 HT) ’ 5HT^ , 5HT£ a 5HT^ . Tato 5HT^ a 5HT£ vaznámísta byla již velice dobře charakterizována a dálepodrozdělena na základě hodnot získaných při vazebnýchtestech a testech na funkční aktivitu (1,2) . Na druhéstraně 5HT^ vazebná místa jsou charakterizována teprve vposlední době. Původně se předpokládalo, že 5ΗΤ^ vaznámísta existují pouze na periferii. (3). Ovšem s nedávnýmzavedením léčivých prostředků představujících potentní aselektivní 5HT^ antagonisty, jako jsou například GR 65630,zacopride, ICS 205 930 a MDL 72222, se ukázalo na základěprovedených vazebných testů, že 5HT^ vazebná místa jsourovněž rozmístěna ve vybraných oblastech mozku (4, 5, 6).Nejvyšší úroveň vazebných míst 5HT^ byla zaznamenána vlimbických oblastech mozku obsahujících dopamin (entorhinálnícortex, amygdala, nucleus accumbens a tuberculum olfactorium(čichový výběžek) (4) . Kromě toho, že projevují selektivníschopnost vazby v oblastech bohatých na dopamin, uvádí seo 5HT3 antagonistech, že mají schopnost blokovat modelychování spojené s jistými návykovými látkami (nikotin amorfium) a dále, že jsou účinné při provádění behaviorálníchtestech přepovídajících anxiolytickou aktivitu. Na základětěchto výsledků selektivních regionálních vazeb a behaviorál-ních studií (studií chování) je možno vyvozovat, že 5HT^antagonisty mohou být therapeuticky přínosné u takovýchstavů onemocnění, o kterých se předpokládá, že jsou spojenés nadměrnou dopaminergní aktivitou, jako jsou napříkladschizofrenie a drogová závislost. - 40

Postup : A. Reakční činidla 1. 0,05 M Krebs-Hepesův pufr, pH 7,4 , 11,92 gramu Hepesovo činidlo, 10,52 gramu chlorid sodný NaCl, 0,373 gramu chlorid draselný KC1, 0,277 gramu chlorid vápenatý, CaClg, 0,244 gramu hexahydrát chloridu horečnatého MgCl2.6H20objem se upraví na 1 litr destilovanou vodou,hodnota pH se upraví na 7,4 (při teplotě 4 °C)pomocí 5 N hydroxidu sodného NaOH . 2. / ^H?-GR6563O (87,0 Ci/mmol) byl získán od firmy

New England Neclear. Pro stanovení hodnoty 10,.-_3 50 byl tento / H/-GR6563O upraven na koncentraci1,0 nM v Krebs-Hepesovu pufru, takže jestliže se100 /Ul přidá do každé trubice potom se dosáhnekonečné koncentrace 0,4 nM při každém 250 ^ultestu. 3. Zacopridemaleát byl získán od firmy ResearchBiochemicals lne. Tento zacopridemaleát byl upravenna koncentraci 500 yuM v Krebs-Hepesovu pufru. Dokaždé ze tří trubic bylo přidáno 50 ^ul pro stanovenínespecifických vazeb (dosažena konečná koncentrace100 yuM při 250 yUl testu). 4. Testované sloučeniny : Pro většinu testů byl při-praven 50 yuM zásobní roztok ve vhodném rozpouštědlea tento zásobní roztok byl postupně zřeďovánKrebs-Hepesovým pufrem, takže jestliže bylo 50 yUltestované sloučeniny kombinováno s celkem 250 /Ultestovacího roztoku, potom bylo dosaženo konečnékoncentrace v rozmezí od 10-7 do 10” . V každém testu bylo zkoumáno sedm charakteristických koncen-trací, je ovšem možno použít vyšších i nižších kon-centrací, což závisí na účinnosti dané sloučeniny. 41 B. Příprava tkáně.

Samečkové krys druhu Wistar (o hmotnosti v rozmezíod 150 do 2C0 gramu) byly usmrceny a potom jím bylyodděleny hlavičky, přičemž entorhinální cortex byl vyjmut,zvážen a potom homogenizován v 1C objemech ledově chlad-ného 0,05 M Krebs-Hepesova pufru a hodnota pH byla 7,4Takto získaný homogenát byl potom odstřeďován při48 000 g po dobu 15 minut při teplotě 4 °C . Takto získanépeleta byla potom znovu homogenizována v čerstvém Krebs-Hepesovu pufru a potom bylo prováděno znovu odstřelovánípři 48 000 g po dobu 15 minut při teplotě 4 °C . Taktozískaná konečná peleta byla potom opětovně suspendována vpůvodním objemu ledově chladného Krebs-Hepesova pufru. Tímto způsobem bylo dosaženo konečné tkáňové koncentra-ce v rozmezí od 1,2 do 1,6 mg/ml a přídavek v testu byl100 yul . Množství specifických vazeb bylo přibližně vrozsahu 55 až 65 % z celkového množství vázanýchligandů. C. Provedení testu. 100 /Ul tkáňové suspenze, 100 /Ul /'3H?-GR6563O , 50 yUl vehikula (pro určení celkového rozsahu vazeb) nebo500 yuM zacopridemaleát (pro určení nespecifických vazeb)nebo vhodná koncentrace sloučeniny.

Trubice se vzorky byly udržovány na ledu při přidávánílátek, přičemž ptom bylo provedeno zpracování ve víru apotom byly tyto vzorky inkubovány při kontinuálním protře-pávání po dobu 30 minut při teplotě 37 °C . Na konci tétoinkubační periody byl tento inkubát zředěn 5 mililitryledově chladného Krebs-Hepesova pufru a potom bylo okamži-tě provedeno vakuové filtrování za pomoci filtrů WhatmanGF/B, po kterém následovalo dvojí promývání pomocí 5 mililitrůledově chladného Krebs-Hepesova pufru. Tyto filtry bylypotom usušeny a vyhodnoceny ve 10 mililitrech scintilačního - 42 kapalného roztoku. Specifická úroveň GR 65630 vazeb je definována jako rozdíl mezi celkovou úrovní vazeb a úrovnívazeb v přítomnosti 100 ^uM zacopridu. Hodnoty ΙΟ,-θ bylyvyhodnoceny provedením log-probitové analýzi na počítači.

Odkazy na literaturu : 1. Peroutka, S.J. 5-Hydroxytryptamine receptor subtýpes :Molecular biochemical and physiological characterization.

Tends In Neuroscienee 11 : 496 - 500 (1988) . 2. Watling, K.J. 5HT^ receptor agonists and antagonists.Neurotransmission 3 : 1-4 (1989) . 3. Costell, B., Naylor, R.J. a Tyers, M.B. Recent advancesin the neuropharmacology of 5HT^ agonists and antagonists.Rev. Neuroscienee 2 : 41 - 65 (1988) . 4. Kilpatrick, G.J., Jones, B.P. a Tyers, M.B. Identificationand distribution of 5HT^ receptors in rat brain radioligand£inding. Nátuře 330 : 746 - 748 (1987) . 5. Barnes, N.M., Costell, B. a Naylor, R.J. / ^H?Zacopride :Ligand for the Identification of 5HT^ recognition sites. J. Pharm. Pharmacol. 40 : 548 - 551 (1988) . 6. Watling, K.J., Aspley, S., Swain, C.J. a Saunders, J./~^H?Quaternised ICS 205 - 930 labels 5HT^ receptor bindingsites in rat brain. Eur. J. Pharmacol. 149 : 397 - 398(1988) . ^H-Serotoninový obrat v synaptosomech celého krysího mozku. Cíl postupu

Tento test se používá jako biochemický sereenovýtest pro sloučeniny, které blokují absorpci serotoninu (5HT),a které mohou být vhodné jako antidepresiva a jako látky - 43 - pro léčení poruch osobnosti, jako jsou například obsesivnínutkavé poruchy.

Asberg a spolupracovníci poukázali na to, že sub-jekty se serotonergní hypofunkcí představují biochemickoupodskupinu pacientů s depresí (1), zatímco jiní (2)uvádí, že změněná serotogenní funkce určuje změny náladyspojené s poruchami afektu. I když role 5HT v etiologiideprese není zcela jasná je zřejmé, že mnohá antidepresivníléčiva blokují reabsorpci 5HT, respektive mechanizmus tétoreabsorpce. Při testech vytváření vazeb na receptor in vitrobylo prokázáno, že / ^H7-imipramine vyznačuje místa absorpce5HT (10) . Trazodone a zimelióine představují klinickyúčinná antidepresiva (3) s velice dobrým selektivnímúčinkem na 5HT absorpci (4,5) . V poslední době bylo zjiš-těno, že fluoxetine představuje jak selektivní tak i účinnýinhibitor absorpce 5HT . V literatuře (6,7) byl charakterizován Z"^h7-5HTtransport v CNS tkáni, přičemž bylo zjištěno, že je saturo-vatelný, že je závislý na sodíku a na teplotě a že jeinhibován Strophantinem G (ouabain), metabolickými inhibitory,tryptaminovými analogy (8) a tricyklickými antidepresanty(terciární aminy>> sekundární aminy) (9). Absorpce/ ^H7-5HT může být rovněž použita jako markér pro serotoninovánervová zakončení.

Postup : A. Testovaná zvířata : samečkové krys druhu Wistar CR(o hmotnosti 100 - 125 gramů) . B. Reakční činidla 1. Krebs-Henseleitův hydrogenuhličitanový pufr,pH 7,4 (KHBB) : provedena úprava na 1 litr zásobního roztokuobsahující následující soli : - 44 - g/i mM NaCl 6,92 119,4 KC1 0,35 4,7 MgS04 . 7H20 0,29 1,2 KH PO NaHCO-j 0,16 2,2 0,10 24,9 CaCl2 0,14 1,3 Před použitím se přidá - dextroza 2 mg/ml 11,1 Iproniazidfosfát 0,30 mg/ml 0,1

Provedeno aerování po dobu 60 minut za pomoci95 % O2/5 % C02 , úprava pH (7,4 - 0,1 ) . 2. Roztok 0,32 M sacharozy : 21,9 gramu sacharozy,objem upraven na 200 mililitrů. 3. Serotonincreatininsulfát byl získán od firmy SigmaChemical Co. Připraven 0,1 mM zásobní roztok úpravouza pomoci 0,01 N kyseliny chlorovodíkové. Tentoroztok byl použit pro zředění specifické aktivityradiooznačeného 5HT . — 3 4. 5-/”l,2- H(N)7-Hydroxytryptamincreatininsulfát (Serotonin),specifická aktivita 20 - 30 Ci/mmol, byl získán od firmy New England Nuclear.

Konečná požadovaná koncentrace ^H-5HT v tomto testuje 50 nM . ZřeSovací faktor je 0,8 . To znamená, žeKHBB je upraven tak, aby obsahoval 62,5 nM / ^h7-5HT. Přidáno ke 100 mililitrů KHBB :

A) 56,1 yul 0,1 mM 5HT = 56,1 nM

B) + 0,64 nmolu ^H-5HT = 6,4 nM

62,5 nM +vypočtený objem přidaný na základě specifickéaktivity ^H-5HT .

5. Pro většinu prováděných testů byl připraven 1 mM - 45 - zásobní roztok testované sloučeniny ve vhodném rozpouštěd le a tento zásobní roztok byl postupně zřežován tak, aby konečná koncentrace se u testovaného roztoku-8 *5 pohybovala v rozmezí od 2 x 10 do 2 x 10 M .

Pro každý test bylo použito sedm koncentrací. Je ovšemmožno použít vyšších i nižších koncentrací vzávislostina účinnosti testovaných sloučenin. C. Příprava tkáně .

Samečkové krys druhu Wistar byly usmrceny, byly jímodděleny hlavičky a mozek byl okamžitě vyjmut. Celý mozek bezmozečku byl zvážen a potom homogenizován v 9 objemechledově chladného 0,32 M roztoku sacharozy, přičemž bylopoužito Potter-Elvejhemova homogenizéru. Homogenizacije třeba provést 4-5 pohyby nahoru a dolů při středníchrychlostech aby byla minimalizována synaptosomní lýza. Tentohomogenát byl potom odstředěn při 1000 g, což bylo prová-děno po dobu 10 minut při teplotě v rozmezí od 0 do 4 °C .Kapalina nad pevným podílem (S^) byla dekantována a použitapro absorpční experimenty. D. Provedení testu . 800 yul KHBB + /“3h7-5HT , 20 úl vehikula nebo vhodné koncentrace testované sloučeniny, 200 yul tkáňové suspenze.

Trubice byly inkubovány při teplotě 37 °C a pod atmosférou95 % O2/5 % CO^ po dobu 5 minut. Pro každý test byly3 trubice inkubovány]s 20 yul vehikula při teplotě 0 °Cna ledové lázni. Po inkubování byly všechny trubice okamžitěodstřelovány, což bylo prováděno při 4000 g po dobu lOminut.Kapalina nad pevným podílem byla odsáta a pelety bylyrozpuštěny přídavkem 1 mililitru rozpouštěcího činidla(Triton X-100 + 50 % EtOH ,1:4 obj./obj.) . Tyto trubicebyly potom intenzivně zpracovávány vířením, potom byla pro-vedena dekantace do scintilačních zkumavek a vyhodnocení - 46 - v 10 mililitrech scintilačního vyhodnocovacího roztoku

Liquiscint. Aktivní spotřeba (absorpce) je rozdíl mezi cpm při teplotě 37 °C a 0 °C . Procentuální hodnota inhibice při každé koncentraci sloučeniny byla stanovena jako průměr ze tří stanovení. Hodnoty IC__ byly vyhodnoceny50 z log-probitové analýzi.

Odkazy na literaturu : 1. Asberg, M., Thoren, P. Traskman, L., Bertilsson, L. aRingberger, V. OSerotonin depression : - A biochemicalsubgroup within the affective disorders, Science 191 : 478 - 480 (1975) . 2. De Montigy, C. - Enhancement of 5HT neurotransmissionby antidepressant treatments. J. Physiol. (Paříž) 77 : 455 - 461 (1980 ) . 3. Feighner, J.P. Clinical efficacy of the newer antidepressantsJ. Clin. Psychopharmacol. 1, 235 - 265 (1981). 4. Ogren, S.O., Rosa, S.B. , Halí, H., Holm, A,C. a Renyi, A.L.The pharmacology of zimelidine : A 5HT selective reuptakeinhibitor. Acta Psychiat. Scand. 290 : 127 - 151 (1981). 5. Clements-Jewry, S., Robson, P.A. a Chidley, L.J.

Biochemical investigations into the mode of action of trazodone. Neuropharmacol. 19 : 1165 - 1173 (1980) . 6. Ross, S.B. Neuronal transport of 5-hydroxytryptamine.Pharmacol. 21 : 123 - 131 (1980) . 7. Shaskan, E.G. a Snyder, S.H. Kinetics of serotonin accumulation into slices from rat brain : Relationship tocatecholamine uptake. J. Pharmacol. Exp. Ther. 175 : 404 - 418 (1970) . 8. Hora, S.A. Structure activity relations for the inhibitionof 5HT uptake into rat hypothalamic homogenates by serotoninand tryptamine analoques. J. Neurochem. 21 : 883 - 888(1973) . - 47 - 9. Hora, S.S. a Trace, R.C.A.M. Structure-activity relationsfor the inhibition of 5-hydroxytryptamine uptake bytricyclic antidepressant into synaptosomes fromserotonergic neurones in rat brain bomogenates. Brit. J.Pharmacol. 51 : 399 - 403 (1974) . 10. Langer, S.Z., Moret, C., Raisman, R., Dubocovich, M.L.a Briley M. High affinity / ^H/imipramine binding in-rathypothalamus : Association with uptake of serotonin but notnorepinephrine. Science 210 : 1133 - 1135 (1980) . Výsledky těchto tří výše uvedených testovacíchmetod jsou uvedeny v následující tabulce 1 pro reprezen-tativní sloučeniny podle uvedeného vynálezu. 48 ι

O 3 3 -P Φ CO co 3 1 XI X 3 o o X Φ XD CJ > •H O X 3 •H •H X 3 3 O (—I -P

S o ir\ O(—)

CO

CM Λ irc m rP co

O θ' O

CM Λ

CO 3

CO

X

N 3 S C3 CM co O 3 x\ m O > -P \ O, Lí\ O r4 C3 Φ O EH O ir\ W Φ O ICC 3 M

CO c

CO

X

CM Z-X CO 3 s > O -P <J5 Cl, —» i—i Φ O A O IP, K Φ O LP, 3 H

CM co 00 'd- O tr\

co θ' O

i—I

COΛ4i—I3XCOH

CO 3

•K

3φK?3o|—i•CO

O a

•H a

cO

rH

Φ Φ 3 3 3 •H •H •H Ό CM 0 r-4 •H Φ CM Φ CO >3 3 r-1 3 CM 3 3 -P ř>5 O O CM •H Ct o. O, Ό 3 c~ O, Ή H 1 3 Ή «3 3 3 •Φ -H O, N O •P 1 ra XI O rH •H 1 X 3 t—i X Ej c3 i—1 CQ s O O - 49 Účinná množství sloučenin podle uvedeného vyná-lezu je možno podávat pacientům libovolnými různými způ-soby, jako je například orální podávání těchto látekve formě kapslí nebo tablet, parenterální podávánítěchto látek ve formě sterilních roztoků nebo suspenzí,a v některých případech je možno tyto látky podávatintravenozně ve formě sterilních roztoků. Konečnéprodukty, které jsou ve formě volné báze je možno,i kdy jsou samy o sobě účinné, formulovat a podávat veformě jejich farmaceuticky přijatelných adičních solí skyselinami vzhledem k jejich stabilitě, snadnostikrystalování, zvýšené rozoustnosti a podobným dalšímvlastnostem.

Mezi kyseliny, které jsou vhodné k přípravětěchto farmaceuticky přijatelných adičních solí s kyseli-nami, je možno podle uvedeného vynálezu zařadit anorganickékyseliny, jako je například kyselina chlorovodíková,kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina dusičná,kyselina fosforečná a kyselina chloristá, a rovněž tak iorganické kyseliny, jako je například kyselina vinná, kyse-lina citrónová, kyselina octová, kyselina jantarová, kyseli-na maleinová, kyselina fumarová a kyselina štavelová. Účinné látky podle uvedeného vynálezu je možnopodávat orálním způsobem, jako například společně s inertnímředidlem nebo s jedlou nosičovou látkou, nebo je možno tytoúčinné látky uzavřít do formy želatinových kapslí, neboje možno je stlačovat do formy tablet. Pro účely orálníhotherapeutického podávání je možno účinné sloučeniny podleuvedeného vynálezu smíchávat s vehikulem a takto je možnotyto směsi použít ve formě tablet, dražé, kapslí, elixírů,suspenzí, syrupů, oplatek, žvýkacích gum a podobně. Tytopřípravky mohou obsahovat přinejmenším 0,5 % účinnésloučeniny, ovšem toto množství se může značně měnit v - 50 - závislosti na použité konkrétní formě, přičemž obecně je možno uvést, že se množství této účinné látky může pohybovat vrozmezí obvykle od 4 % do asi 70 % hmotnosti celé jednotky.Množství účinné látky v této směsi se volí takové, abybylo možno připravit vhodnou dávkovou formu. Ve výhodnémprovedení podle uvedeného vynálezu se tyto směsi a pří-pravky vyrobí tak, aby orální dávková forma obsahovalaúčinnou látku v množství pohybujícím se v rozmezí od 1,0miligramu do 300 miligramů účinné látky.

Tyto tablety, pilulky, dražé a podobné jinéformy mohou rovněž obsahovat následující látky : pojivovýmateriál, jako je například mikrokrystalická celulóza,tragakantové klé nebo želatina, dále vehikulum, jako jenapříklad škrob nebo laktoza, dále dezintegrační činidlo,jako je například kyselina alginová, Primogel, kukuřičnýškrob a podobné jiné látky, dále mazivo, jako je napříkladstearát hořečnatý nebo Sterotex, dále látka podporujícíklouzání jako je například koloidní oxid křemičitý, a dálesladidla, jako je například sacharoza nebo sacharin. Kromětěchto látek je možno rovněž přidávat aromatizační činidla,jako je například peprmint, methylsalicylát nebo pomeran-čové aroma. V případě, že dávkovou formou je kapsle, potommůže tato forma obsahovat kromě látek výše uvedeného typu,i kapalnou nosičovou látku, jako je například mastný olej.Jiné další dávkové formy mohou obsahovat i jiné dalšímateriály, které modifikují fyzikální formu této dávkovéjednotky, jako je například povlakový materiál. To znamená,že například tablety nebo pilulky mohou být opatřeny povla-kem cukru, šelaku nebo jinými enterosolventními činidly.Syrup může obsahovat kromě použité účinné sloučeninysacharozu nebo sladidlo a dále určité konzervační přísady,barviva, pigmentační přísady a aromatizační látky. Látky,které se používají při přípravě těchto různých dávkovýchforem musí být farmaceuticky čisté a netoxické v množstvích, - 51 - která se používají pro přípravu dané formy.

Pro účely parenterálního terapeutického podáváníje možno účinné sloučeniny podle uvedeného vynálezu formulo-vat do formy roztoků nebo suspenzí. Tyto prostředky obsa-hují přinejmenším asi 0,1 % účinné sloučeniny, ovšemtoto množství se může pohybovat ve velice širokém rozmezíod asi 0,5 % do asi 30 % hmotnostních. Množství účinnésloučeniny v těchto prostředcích je takové, aby byla získánavhodná dávková forma. Ve výhodném provedení podle uvedenéhovynálezu se tyto směsi a přípravky připraví takovým způsobem,aby parenterální dávková jednotka obsahovala 0,5 miligramuaž 100 miligramů účinné látky.

Tyto roztoky nebo suspenze mohou rovněž obsahovatnásledující složky : sterilní ředidlo, jako je napříkladvoda pro injekce, solný roztok, netuhnoucí oleje, polyethylen-glykoly, glycerin, propylenglykol nebo jiná syntetickározpouštědla, dále antibakteriální činidla, jako je napříkladbenzylalkohol nebo methylparabeny, dále antioxidanty, jakoje například kyselina askorbová nebo hydrogensiřičitansodný, dále chelatační činidla, jako je například ethylen-diamintetraoctová kyselina, dále pufry, jako jsou napříkladacetáty, citráty nebo fosfáty a dále činidla pro úpravutonicity, jako je například chlorid sodný nebo dextroza.Parenterální přípravek je možno vložit do injekcí najednopoužití nebo do ampulek pro vícenásobné použití, které jsouvyrobeny ze skla nebo z plastické látky. Dále uvedené sloučeniny představují příklady slou-čenin podle uvedeného vynálezu : 3-(4-pyri dinylamino)-ΙΗ-indol, N-(IH-i nd ol-3-yl) -N- (4-pyri di nyl)prop anami d, 3-(4-pyridinylamino)benzo/~b?thiof en, N-(benzo/ b?thiofen-3-yl) -N-(4-pyridiny1)propanamid,3-(3-fluor-4-pyridinylamino)-lH-indol, - 52 - 3-(propyl-4-pyridinylamino)-ΙΗ-indol, 1-methyl-3-(4-pyridinylamino)-1H-indol, 6-fluor-3-(4-pyridinylamino)benzo/”b7thiof en, 5-fenylmethoxy-3-(4-pyridinylamino)-lH-indol, 5- hydroxy-3-(4-pyridinylamino)-ΙΗ-indol, 6- fluor-3-(propyl-4-pyri dinylamino)benzo/”b7thi ofen, 3-(4-pyridinylamino)benzo/" b7thiofen, 3-(4-pyridinylamino)-lH-indol-5-yl-methylkarbamát, 3-(4-pyri dinylamino)-lH-indol-5-y1-benzylkarbamát, 3-/~ N-propyl-N-(3-fluoř-4-pyri dinyl)ami no7-lH-indol-5-yl-benzylkarbamát, 3-/” N-propyl-N-(3-fluor-4-pyridinyl)amino7-lH-indol, 3-(4-pyridinylamino)-lH-inóazol, 3-/ N-propyl-N-(4-pyridinyl)amino7-lH-indazol, 1 -me thyl -3- (4-py ri dinyl ami no) -1H -i nd az ol, 1- methyl-3-(propyl-4-pyri dinyl)amino-lH-indazol, 2- amino-N-(lH-indol-3-yl)-N-(4-pyri dinyl)acetamid, 2-amino-N-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-N-(4-pyridinyl)acetamid,2-amino-N-(l-methyl-lH-indazol-3-yl)-N-(4-pyridinyl)acetamid,2-amino-N-(lH-indazol-3-yl)-N-(4-pyridinyl)acetamid, a2-amino-N-(benzo/ b7thiofen-3-yl)-N-(4-pyridinyl)acetamid. Příklady provedení vynálezu

Substituované 3-(pyridinylamino)-indoly a benzo/ b7-thiofeny a postup jejich přípravy budou v dalším ilustroványs pomocí příkladů konkrétního provedení, přičemž tytopříklady slouží pouze k ilustrativním účelům a nijak neome-zují rozsah uvedeného vynálezu. Příklad 1

Postup přípravy maleátu 3-(4-pyridinylamino)-lH-indolu. - 53 - Při provádění postupu podle tohoto příkladu bylroztok obsahující 3-aminoindol (v množství 8 gramů) ahydrochlorid 4-chlorpyridinu (v množství 12 gramů) ve150 mililitrech 1-methyl-2-pyrrolidinonu promíchávánpři teplotě pohybující se v rozmezí od 70 do 75 C podobu jedné hodiny, přičemž po tomto intervalu byl přidándalší podíl hydrochloridu 4-chlorpyridinu (v množství4 gramy). Potom byla tato reakční směs promíchávánapo dobu dalších celkem dvou hodin, takto získaná reakčnísměs byla ochlazena, potom byla promíchávána s vodou, pře-vedena do zásaditého stavu přídavkem uhličitanu sodnéhoa potom byla tato reakční směs extrahována ethylesteremkyseliny octové. Získaný organický extrakt byl potompromyt postupně vodou a nasyceným roztokem chloridusočného a potom byl sušen (použito bezvočého síranu ho-řečnatého), potom byl tento podíl zfiltrován a zkoncen-trován na 20 gramů tmavého oleje. Tento olej byl potomeluován na oxidu křemičitém, přičemž jako elučního činidlabylo použito 20 %-ního methanolu v dichlormethanu a použitoumetodou byla HPLC (čili vysokoúčinná kapalinová chromato-grafie) , přičemž tímto postupem bylo získáno 7 gramůtmavého oleje. Tento olej byl potom krystalován z aceto-nitrilu, přičemž shora uvedeným postupem byly získány3 gramy hnědých krystalů. Teplota tání tohoto produktu sepohybovala v rozmezí od 192 do 193 °C . Potom byl podíltohoto produktu (v množství 2,8 gramu) přeáeden namaleátovou sůl v 50 %-ním methanolu v eteru a tímto způsobembylo získáno 3,5 gramu světlých hněčožlutých krystalků.Teplota tání tohoto produktu se pohybovala v rozmezí od149 do 151 °C . Rekrystali žací z 50 %-ního methanolu veteru bylo získáno 3,4 gramu světlých žlutohnědých krystal-ků.

Teplota tání : 149 - 151 °C ;

Analýza pro C17H15N3°4 : - 54 - vypočteno :nalezeno : C = 62,76 %C = 62,85 % H = 4,65 %H = 4,70 % N = 12,92 %N = 12,92 %. Příklad 2

Postup přípravy N-(lH-indol-3-yl)-N-(4-pyridinyl)propan-amidu. Při provádění postupu podle tohoto příkladu byl 3-(4-pyridinylamino)-ΙΗ-indol (v množství 3 gramy) přidándo roztoku, který byl připraven z anhydridu kyseliny propio-nové (v množství 3 gramy), 10 mililitrů dichlormethanu a10 mililitrů toluenu. Takto získaný výsledný roztok bylpotom promícháván po dobu jedné hodiny při teplotě okolí apotom byl promícháván s vodou a potom byl převeden do zásaditého stavu přídavkem uhličitanu sodného. Takto získaný produktbyl potom extrahován dichlormethanem. Organická vrstva bylapotom sušena (za pomoci bezvodého síranu hořečnatého), potombyla zfiltrována a zkoncentrována. Takto získaný zbytekbyl potom eluován na oxidu křemičitém za pomoci 50 %-níhoethylesteru kyseliny octové v dichlormethanu metodoumžikové chromatografie v koloně, přičemž tímto postupembylo získáno 3,5 gramu světle žlutohnědé pevné látky oteplotě tání pohybující se v rozmezí od 166 do 168 °C .

Podíl 1,5 gramu tohoto produktu byl potom rekrystalován zacetonitrilu, přičemž tímto postupem bylo získáno 1,3 gramusvětle žlutohnědých krystalků.

Teplota tání : 168 - 170 °C ;

Analýza pro C16H15V = vypočteno : C - 72,43 % H - 5,70 % N = 15,84 % nalezeno : C = 72,06 % H - 5,69 % N = 15,94 % . - 55 - Příklad 3

Postup přípravy hydrochloridu 3-(3-fluor-4-pyridinyl-amino)-lH-indolu. Při provádění postupu podle tohoto příkladu bylroztok obsahující 3-aminoindol (v množství 7 gramů). ahydrochlorid 4-chlor-3-fluorpyridinu (v množství 13 gramů)ve 200 mililitrech l-methyl-2-pyrrolidinonu promíchávánpři teplotě pohybující se v rozmezí od 75 do 80 °C po dobudvou hodin, přičemž potom byl přidán další podíl hydro-chloridu 4-chlor-3-fluorpyridinu (v množství 5 gramů).

Potom byla takto získaná reakční směs promíchávána po dobucelkem tří hodin a potom byla ochlazena, přičemž potombyla opět promíchávána s vodou, převedena do zásaditéhostavu přídavkem uhličitanu sodného a potom byla tato reakčnísměs extrahována ethylesterem kyseliny octové. Získanáorganická vrstva byla potom sušena (za pomoci bezvodého síranuhořečnatého) a potom byla zfiltrována a zkoncentrována, čímžbylo získáno 20 gramů tmavého oleje. Tento olej byl potomzpracováván na silikagelu, přičemž jako elučního činidlabylo nejdříve použito dichlormethanu a potom 50 %-níhoethylesteru kyseliny octové v dichlormethanu a použitoumetodou byla mžiková chromatografie v koloně. Tímto shora uve-deným postupem bylo připraveno 17 gramů tmavého oleje. Tentoolej byl potom eluován na oxidu křemičitém eterem, přičemžpoužitou metodou byla opět mžiková sloupcová chromatografie,a tímto postupem bylo získáno 10,6 gramu tmavého oleje.

Tento olej byl potom eluován na oxidu křemičitém za pomoci20 %-ního ethylesteru kyseliny octové v dichlormethanuza pomoci metody KPLC (vysokoúčinná kapalinová chromatografie)a tímto postupem bylo získáno 8 gramů tmavého oleje.

Podíl 6 gramů tohoto produktu byl potom převeden na hydro-chloridovou sůl v methanolu a eteru a tímto postupem bylopřipraveno 3,5 gramu pevné látky. Teplota tání tohoto - 56 - produktu bylaván ze směsipřipraveno 2Teplota táníAnalýza pro vypočteno :nalezeno : ^>250 °C .Tento produkt byl potom rekrystalo-30 %-ního methanolu v eteru, přičemž bylo,7 gramu krystalů .

: 256 - 258 °C (za rozkladu) J C13H11C1FN3 : C = 59,21 %C = 59,06 % H = 4,20 %H = 4,14 % N = 15,93 %N = 15,49 % Příklad 4

Postup přípravy maleátu 6-fluor-3-(4-pyridinylamino)benzo/~b?-thiofenu. Při provádění postupu podle tohoto provedení sepostupovalo tak, že roztok obsahující 3-amino-6-fluor-benzo/ b7thiofen (v množství 7 gramů) a hydrochlorid 4-chlorpyridinu (v množství 7 gramů) ve 200 mililitrech l-methyl-2-pyrrolidinonu byl promícháván po dobu jednéhodiny při teplotě pohybující se v rozmezí od 80 do 85 °Ca potom byl tento roztok ochlazen, promíchán s vodou, převedendo zásaditého stavu za pomoci uhličitanu sodného a potombyl tento podíl extrahován ethylesterem kyseliny octové. Získaný organická extrakt byl potom postupně promyt vodou anasyceným roztokem chloridu sodného a potom byl tento podílsušen (použití bezvodého síranu hořečnatého), zfiltrován azkoncentrován na 10 gramů tmavě zbarveného oleje. Tentoolej byl potom eluován za pomoci oxidu křemičitého, přičemžjako elučního činidla bylo použito 10 %-ního methanoluv dichlormethanu a použitou metodou byla HPLC (čili vysoce-účinná kapalinová chromatografie) a tímto shora uvedenýmpostupem bylo získáno 4,7 gramu hnědé pevné látky. Teplotatání tohoto produktu se pohybovala v rozmezí od 102 do 106 °C .Tento produkt byl potom převeden na maleátovou sůl v prostře-dí 20 %-ního methanolu v eteru a okamžitě potom byla prove- - 57 - děna rekrystáL izace z 20 % methanolu v eteru, přičemž tímtoshora uvedeným postupem bylo získáno 2,9 gramu bílýchkrystalků.

Teplota tání : 172 - 174 °G (za rozkladu) J

Analýza pro : vypočteno :nalezeno : C = 56,66 %C = 56,41 % H = 3,64 %H = 3,44 % N = 7,78 % ,N = 7,68 % . Příklad

Postup přípravy hydrochloridu 6-fluor-3-(propyl-4-pyridi-nylamino)benzo/ b/thiofenu. Při provádění postupu podle tohoto provedení bylroztok obsahující 6-fluor-3-(4-pyridinylamino)benzo/ b7-thiofen (v množství 4,2 gramu) ve 20 mililitrechdimethylformamidu pomalu přidáván do suspenze hydridusodného (v množství 0,42 gramu) v 5 mililitrech dimethyl-formamidu. Po vytvoření aniontu byl k tomuto podílu přidánroztok 1-brompropanu (v množství 2,3 gramu) v 10 milili-trech dimethylformamidu. Potom byla takto vytvořená reakčnísměs ponechána stát asi jednu hodinu a potom byla promí-chávána společně s vodou a nakonec byla tato reakční směsextrahována ethylesterem kyseliny octové. Aímto způsobembyl získán organický extrakt, který byl potom postupně pro-myt vodou a potom nasyceným roztokem chloridu sodného,přičemž v dalším postupu byl tento podíl sušen (za pomocisíranu hořečnatého), zfiltrován a nakonec zkoncentrován,přičemž bylo získáno 5 gramů tmavě zbarveného oleje.

Takto vyrobený olej byl potom eluován na silikagelu, přičemžjako elučního činidla bylo použito ethylesteru kyselinyoctové a použitou metodou byla mžiková chromatografiev koloně, a tímto postupem bylo získáno 3,3 gramu žlutéhooleje. Tento olej byl potom převeden na hydrochloridovou - 58 - sůl v prostředí 2C %-ního methanolu v eteru. Výtěžek tohotoshora uvedeného postupu byl 3,3 gramu žlutých krystalků.Teplota tání : 290 - 292 °C (za rozkladu).

Analýza pro C-^H^ClFřkS : vypočteno nalezeno C = 59,53 %C = 59,16 % H = 5,00 %H = 5,00 % N = 8,68 % ,N = 8,26 % .

Claims (8)

1. ' 7. '' C. - 59 Ίΐγι- il ΛΛ3Γ90VλΖΉίγΝ,ν.'. C avgn PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Substituované 3-(pyridinylamino)-indoly abenzo/~b/thiofeny obecného vzorce I

   (I) ve kterém znamená : R^ atom vodíku, nižší alkylovou skupinu, nižšíalkenylovou skupinu, nižší alkinylovou skupinu,ary1-nižšíalkylovou skupinu, amino-nižší alkylovou skupinu, nižšíalky1-amino-nižší alkylovou skupinu, formylovou skupinu,nižší alkyl-karbonylovou skupinu, amino-nižší alkyl-karbo-nylovou skupinu nebo nižší alkoxy-karbonylovou skupinu, skupina -X-Y= znamená \ N / Ro

   \ //S - C \ R nebo \ /N - N / «2 kde R~ a R^nižší alkylovou znamenají nezávisle atom vodíku nebeskupinu, - 60 - W znamená atom vodíku, halogenu, hydroxyskupinu,nižší alkoxyskupinu, aryl-nižší alkoxyskupinu nebo ,R - 0 - G - N X R, kde R^ znamená atom vodíku, nižší alkylovouskupinu nebo aryl nižší alkylovou skupinu, R^ je nižší alkylová skupina nebo aryl-nižší alkylová skupina, nebo alternativně skupina /R4

   jako celek znamená

   /—\ — N N-R, 'VJ 1

   kde Rg je atom vodíku, nižší alkylová skupina,arylová skupinanebo aryl-nižší alkylová skupina, a Z je atom vodíku, halogenu, nižší alkylová skupina,nitroskupina nebo aminová skupina, nebo farmaceuticky přijatelná adiční soli s kyselinami odvozené - 61 - od těchto výšeuvedených sloučenin.
2. 2. Sloučenina podle nároku 1 , ve které znamenáskupina -X-Y= \ // N - C / \ R- nebo R. kde R^ a R^ maJÍ stejný význam jako je uvedeno shora.
3. 3. Sloučenina podle nároku 2 , ve kterém znamenáR^ atom vodíku, nižší alkylovou skupinu, nižší alkyl-karbo-nylovou skupinu, W je atom vodíku nebo halogenu, a Z je atom vodíku nebo halogenu.
4. 4. Sloučenina podle nároku 3 , ve které znamenáW atom vodíku nebo fluoru, a Z je atom vodíku nebo fluoru.
5. 5. Sloučenina podle nároku 4 , která je vybránaze skupiny zahrnující : 3-(4-pyri dinylamino) -ΙΗ-indol, N-(lH-indol-3-y1)-N-(4-pyri di ny1)prop anamid, 3-(3-flu or-4-pyri di nylamino)-1H-i ndol, 6-fluor-3-( 4-pyri dinylamino )benzo/~b7thiofen a 6-fluor-3-(propyl-4-pyridinylamino)benzo/~b7thiofen,a farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami odvozenéod těchto sloučenin.
6. 6. Farmaceutický prostředek, vyznačuji cí se tím, že obsahuje jako účinnou složku sloučeninu podle nároku 1 a dále obsahuje vhodnou nosičovou látku. - 62 -
7. 7. Použití sloučeniny definované v nároku 1 propřípravu léčiva, které má účinnost při léčení dysfukcípaměti, deprese, stavů úzkosti, psychózy, zvracení nebo · obsesivních nutkavých poruch a jejich zmírňováni.
8. 8. Způsob přípravy substituQvaných 3-(pyridyl-- — vzereej. amino)-indolů a benzo/ b/thiofenůY podle nároku 1 , č u j í c í se tím, že zahrnuje reakci slouče niny obecného vzorce V Cl d Z ve kterém Z znamená stejné sýznamy jako v nároku 1 kroměaminoskupiny NH2 , se sloučeninou obecného vzorce II , III nebo IV

   (II)

   (III) - 63 -

   ve kterých mají Rg > ^3 a stejný význam jako bylo uve-deno shora, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I , ve kterém majískupina -X-Y= , W , Z a R^ stejný význam jako v nároku 1 a R^ je atom vodíku , (b) případně se do reakce uvádí sloučenina obecnéhovzorce 1 , ve kterém skupina -X-Y= znamená 0 \ // N - C / \ H R^ a R^ , W a Z mají stejný význam jako bylo uvedeno,se sloučeninou obecného vzorce 0 Cl - C - 0R? ve kterém R? je nižší alkylová skupina, za vzniku sloučeniny obecného vzorce 1 , ve kterémR^ je skupina 0 II - C - 0R? - 64 - kde Ry je nižší alkylová skupina, -X-Y= je skupina / \ H R3 a R^ , W a Z mají stejný význam jako bylo uvedeno, (c) případně se do reakce uvádí sloučenina obecnéhovzorce I , získaná vevýše uvedeném stupni (b) , snižším alkylhalogenidem obecného vzorce R2 - Hal kde R^ je nižší alkylová skupina a Hal je chlor nebo brom,nebo s di-nižší alkyl-sulfátem obecného vzorce (r2o)2so2 za účelem získáno sloučeniny obecného vzorce I , vekterém skupina -X-Y= znamená \ z N - C /r2 kde R2 znamená nižší alkylovou skupinu, R^ , W a Z mají stejný výše uvedený význam, a R, je skupina1 0 II - C - 0R? kde Ry je nižší alkylová skupina, - 65 - (d) případně se hydrolyzuje sloučenina obecného vzor-ce I , získaná shora uvedeným postupem podle provedení (c), za účelem získání sloučeninyskupina -X-Y= znamená obecného vzorce I , ve kterém 0 //

   kde R^ 3e nižší alkylová skupina, R^ , W a Z mají stejný význam jako bylo uvedeno shora, a R je atom vodíku, (e) případně se do reakce uvádí sloučenina obecnéhovzorce I , ve kterém -X-Y= , W a R^ mají stejný výše uve-dený význam , Z má stejný výše uvedený význam s výjimkouaminoskupiny, jestliže je přítomen, znamená nižší alky- lovou skupinu, a R^ je atom vodíku, se sloučeninou obecného vzorce Hg -Hal ve kterém Ro je nižší alkylová skupina, nižší alkenylová O skupina, nižší alkinylová skupina nebo aryl-nižší alkylováskupina, a Hal je chlor nebo brom, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I , ve kterém skupina-X-Y= , W a R^ mají stejný význam jako je uvedenoshora, Z je stejný zbytek jako bylo uvedeno shora svýjimkou aminoskupiny, R£ j jestliže je přítomen, znamenánižší alkylovou skupinu, a Rx má stejný význam jako RQviz výše, (f) případně se do reakce uvádí sloučenina obecného vzorce I , ve kterém -X-Y= , W a R^ mají stejný výše uvedený význam, Z má stejný výše uvedený význam s výjimkou aminoskupiny, jestliže je přítomen, je nižší alkylová skupina a Ry znamená - 66 - atom vodíku, se sloučeninou obecného vzorce O //

   ve kterém znamená Alk nižší alkylenovou skupinu, aHal je chlor nebo brom, za účelem získání sloučeniny obecného vzorce I , ve kterém-X-Y= , W a R^ mají stejný výše uvedený význam, Z mástejný výše uvedený význam ovšem s výjimkou aminoskupiny, R^ , jestliže je přítomen, představuje nižší alkylovouskupinu a R^ je skupina 0 II

   a takto získaná sloučenina se potom zpracuje hydrazinemnebm methylami nem za vzniku sloučeniny obecného vzorce 1ve kterém X-Y= , W a R^ mají stejný význam jako bylouvedeno shora, Z má stejný význam jako bylo uvedeno shoraovšem neznamená aminoskupinu, R£ , jestliže je přítomen,znamená nižší alkylovou skupinu a R^ je amino-nižšíalkylová skupina, (g) případně se do reakce uvádí sloučenina obecného - 67 - vzorce I , ve kterém -X-Y= , W a R-> mají shora uvedenýa význam, Z má shora uvedený význam ovšem neznamená aminoskupinu, > jestliže je přítomen, znamená nižší » alkylovou skupinu a R^ je atom vodíku, se sloučeninou obecného vzorce Hal - Alk - Hal ve kterém Alk znamená nižší alkylenovou skupinu aHal je chlor nebo brom, a potom se zpracovává takto získaný produkt se sloučeninouobecného vzorce r'- nh2 kde R* je atom vodíku nebo nižší alkylová skupina, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I , ve kterém-X-Y= , W a R-, mají shora uvedený význam, Z je stejnýzbytek jako bylo uvedeno shora ovšem s výjimkou aminoskupinyR^ , jestliže je přítomen, znamená nižší alkylovou skupinua R^ je amino-nižší alkylová skupina nebo nižší alkyl-amino-nižší alkylová skupina, (h) případně se do reakce uvádí sloučenina obecnéhovzorce I , ve kterém -X-Y= , W a R^ mají stejný významjako bylo uvedeno shora, Z má stejný význam jako bylouvedeno shora ovšem s výjimkou aminoskupiny, R2 } jestližejepřitomen, znamená nižší alkylovou skupinu a R·^ jeatom vodíku, se sloučeninou obecného vzorce O II R9 - C - Hal nebo - 68 - II R5 - C - O O II c ve kterých R^ znamená nižší alkylovou skupinu a Halje chlor nebo brom, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I , ve kterém -X-Y= , W a R^ mají stejný výše uvedený význam, Z má stejný výšeuvedený význam ovšem neznamená aminoskupinu, R2 » jestližeje přítomen, znamená nižší alkylovou skupinu, a R^ jenižší alkyl-karbonylová skupina, (i) případné se do reakce uvádí sloučenina obecnéhovzorce I , ve kterém -X-Y= , W a Rj mají stejnývýše uvedený význam, Z má stejný výše uvedený význams výjimkou aminoskupiny, R£ , jestliže je přítomen, znamenánižší alkylovou skupinu, a R^ je atom vodíku,se sloučeninou obecného vzorce O 0 II li RO - C - NH - Alk - C - Hal ve kterém R je t-butylová skupina nebo benzylová skupina,Alk je nižší alkylenová skupina a Hal je chlor nebobrom, nebo se sloučeninou obecného vzorce RO - C - NH - Alk - C - OH ve kterém mají R a Alk stejný výše uvedený význam, - 69 - v přítomnosti dicyklohexylkarbodiimidu za vzniku sloučeninyλ obecného vzorce I , ve kterém R-^ představuje skupinu i 0 0 II II - C - Alk - NH - C - OS a potom se podrobí takto získaná sloučenina hydrolýze nebokatalytické hydrogenolýze za vzniku sloučeniny obecnéhovzorce I , ve kterém -X-Y= , V/ a R^ mají stejný výše uvedený význam, Z má stejný výše uvedený význam svýjimkou aminoskupiny, R^ > v případě, že je přítomen, znamenánižší alkylovou skupinu, a R^ je amino-nižší alkyl-karbony-lová skupina, a nebo se (j) případně redukuje sloučenina obecného vzorce I ,ve kterém -X-Y= , W a R^ má stejný význam jako bylo uvedeno shora, Z má stejný význam jako bylo uvedeno shora,ovšem s výjimkou aminoskupiny, R^ , jestliže je přítomen,znamená nižší alkylovou skupinu, a R^ je nižší alkyl-karbonylová skupina, vzodným redukčním činidlem za vzniku sloučeniny obecného vzorceI , ve kterém -X-Y= , W a R^ mají stejný význam jako bylouvedeno shora, Z má stejný význam jako bylo uvedeno shoraovšem s výjimkou aminoskupiny, R£ , jestliže je přítomenznamená nižší alkylovou skupinu a R^ je nižší alkylováskupina. Zastupuje : JUDr. Miloš Všetečka