CZ20032515A3

CZ20032515A3 - Isoxazolinové deriváty jako anti-depresivní činidla

Info

Publication number: CZ20032515A3
Application number: CZ20032515A
Authority: CZ
Inventors: José Ignacio Andrés-Gil; Francisco Javier Fernández-Gadea; Manuel Jesús Alcázar-Vaca; José Maria Cid-Nunez; Joaquin Pastor-Fernandez; Antonius Adrianus Hendrikus Petrus Megens; Godelieve Irma Christine Maria Heylen; Xavier Jean Michel Langlois; Margaretha Henrica Maria Bakker; Thomas Horst Wolfgang Steckler
Original assignee: Janssen Pharmaceutica N. V.
Priority date: 2001-02-21
Filing date: 2002-02-13
Publication date: 2003-12-17
Also published as: DK1368358T3; IL157470A; NZ526741A; MXPA03007432A; PT1368358E; KR100848898B1; HUP0303270A2; NO20033700L; AR035685A1; CA2437505A1; HRP20030647A2; NO20033700D0; WO2002066484A1; CA2437505C; PL363264A1; CN1492871A; IL157470A0; ES2271230T3; JP3953424B2; DE60214138T2

Description

Oblast vynálezu

Předkládaný vynález se týká substituovaných derivátů isoxazolinu majících antidepresivní aktivitu a/nebo anxiolytickou aktivitu a/nebo aktivitu ovlivňující.tělesnou hmotnost, způsobů jejich přípravy, farmaceutických prostředků obsahujících tyto sloučeniny a, jejich použití v medicíně, a jejich použití v medicíně, zejména pro léčbu depresí, úzkosti, poruch souvisejících se stresem asociovaných s depresí a/nebo úzkostí a poruch příjmu potravy, včetně anorexia nervosa abulimia.

Předkládaný vynález- se také týká nových kombinací substituovaných derivátů isoxazolinu majících antidepresivní aktivitu a/nebo anxiolytickou aktivitu a/nebo aktivitu ovlivňující tělesnou hmotnost s antidepresivy, anxiolytiky a/nebo antipsychotiky.

Dosavadní stav techniky

Deriváty tetrahydronaftalenu’a indanu vykazující, antidepresivní aktivitu jsou známé z EP-361 577 Bl. Tyto sloučeniny jsou obvykle blokátory zpětného vychytávání monoaminu s další antagonistickou aktivitou na a₂adrenoceptorech a vykazují antidepresivní aktivitu bez toho, že by byly sedativní. ·

Problémy související se stávajícími sloučeninami spočívají v to, že tyto sloučeniny mají významné nežádoucí účinky, jako je nausea, excitace, zrychlený tep a snížení sexuálních funkcí. Dále mají dlouhou dobu, obvykle 3-4 týdny, do nástupu odpovědi.

• ·· ·

Cílem předkládaného vynálezu je poskytnout nové deriváty mající antidepresivní a/nebo anxiolytickou aktivitu a/nebo aktivitu ovlivňující tělesnou hmotnost, konkrétně sloučeniny, které nemají výše uvedené nevýhody.

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká nových isoxazolinových derivátů obecného vzorce (I)

jejich farmaceuticky přijatelných adičních solí s kyselinami nebo bázemi, jejich stereochemicky isomerických forem a Noxidových forem, kde:

X je CH₂, N-R⁷,'S nebo 0;

R⁷ je vybrán ze skupiny zahrnující vodík, alkyl, fenyl, fenylalkyl', alkylkarbonyl, alkyloxykarbonyl a mono- a dialkylaminokarbonyl, kde fenylové a alkylové skupiny jsou volitelně substituované jedním nebo více halogenovými atomy;

R¹; a R² jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny zahrnující vodík, hydroxy, kyano, halogen, OSO₂H, OSO2CH3, fenyl, fenylalkyl, alkyloxy, al·kyl·oxyal·kyloxy, alkyloxyalkyloxyalkyloxy, tetrahydrofuranyloxy, alkylkarbonyloxy, alkylthio, alkyloxyalkylkarbonyloxy, pyridinylkarbonyloxy, alkylkarbonyloxyalkyloxy, alkyloxykarbonyloxy, alkenyloxy, alkenylkarbonyloxy a monoand dialkylaminoalkyloxy, kde alkylové a arylové radikály jsou volitelně Substituované jedním nebo více hydroxy ·· ·* ·· ··· • · · » · · · • · · · ·· · · « • ··· · ····· ·

skupinami nebo halogenovými atomy nebo amino skupinami; nebo R¹ a R² mohou dohromady tvořit bivalentní radikál -R^x-R²vybraný ze skupiny zahrnující -CH₂-CH₂-O-, -O-CH₂-CH₂-, -0-CH2-0-, -CH₂-O-CH₂- a -O-CH₂-CH₂-O-;

a a b jsou centra asymetrie;

(CH₂)_m je přímý uhlovodíkový řetězec tvořený m atomy uhlíku, kde m je celé číslo od 1 do 4;

Pir je volitelně substituovaný radikál vzorce (Ha), (IIB) nebo (IIC)

(a) (b) kde:

každý R⁸ je nezávisle hydroxy, amino, nitro, n ie celé číslo od 1

vybrán ze skupiny zahrnující vodík, kyan, halogen a alkyl; do 5;

R⁹ je vybrán ze skupiny zahrnující vodík, alkyl a .formyl; a R³ je volitelně substituovaný aromatický homocyklický nebo heterocyklický kruhový systém dohromady s volitelně substituovaným a částečně nebo zcela hydrogenovaný uhlovodíkový řetězec délky 1 až 6 atomů, kde uvedený kruhový systém je navázán na Pir radikál a může obsahovat jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny zahrnující 0, N a S.

Přesněji se předkládaný vynález týká sloučenin vzorce (I), kde R³ je radikál vzorce (lila), (Illb)' a (IIIc) • · · ·

(a) (b) (c) kde:

d je jednoduchá vazba a Z je bivalentní radikál vybraný ze skupiny zahrnující -CH₂-, -C(=0)-, -CH(OH)-, -C(=N-OH)~, —CH(alkyl)-, -0-, -S-, -S(=0), -NH- a —SH-; nebo d je dvojná vazba a Z je trivalentní radikál vzorce =CH- nebo =C(alkyl)-;

A je 5-nebo β-členný aromatický homocyklický nebo heterocyklický kruh vybraný ze skupiny zahrnující fenyl, pyranyl, pyridyl, pyrazínyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, thienyl, isothiazolyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, furanyl, oxadiazolyl a isoxazolyl;

p je celé číslo od 0 do 4; q je celé číslo od 0 do 7;

R⁴ je vybrán ze skupiny zahrnující vodík, alkyl, fenyl, bifenyl, naftyl, halogen a kyan, kde alkylové a arylové radikály jsou volitelně substituované jedním nebo více hydroxy skupinami nebo halogenovými atomy nebo amino skupinami;

R⁵ je stejný jako R⁴; nebo

R⁴ a R⁵ mohou dohromady tvořit bivalentní radikál -R⁴-R⁵vybraný ze skupiny zahrnující -CH₂-, =CH-, -CH₂-CH₂-,

-CH=CH~, -0-,. -NH-, N-, -S-, -CH₂N (-alkyl)-, -CH=N-, -CH₂O- a -OCH₂-;

každý'R⁶ je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující vodík, hydroxy, amino, nitro, kyan, halogen, karboxyl, alkyl, fenyl, alkyloxy, fenyloxy, alkylkarbonyloxy, alkyloxykarbonyl, alkylthio, mono- a dialkylamino, alkylkarbonylamino, mono- a dialkylaminokarbonyl, mono- a dialkylaminokarbonyloxy, mono- a dialkylaminoalkyloxy, kde alkylové a arylové radikály jsou volitelně substituované ·· ·· ·· ·· • 9·«··· * ··· 9*9 9 9 9 · • 9 9 9 999999 9 9 ·· ·· 9.9 999 • · · · · ·· 99 99 • ·· · jedním nebo více hydroxy skupinami nebo halogenovými atomy nebo amino skupinami; nebo dva sousední radikály R⁶ mohou tvořit bivalentní radikál —R⁶-R⁶- vybraný ze skupiny zahrnující -CH2-CH2-O-,

-O-CH2-CH2-, -O-CH2-C( = 0)-O-CH2-O-, -CH2-O-CH2-, -O-CH2-CH2-O-, -CH=CH-CH=CH-, -CH=CH-CH=N-, -CH=CH-N=CH-, -CH=N-CH=CH-, -N=CH-CH=CH-, -CH₂-GH₂-CH₂-, -CH₂-. CH₂-C (=0) - a -CH₂-CH₂-CH2-CH₂-; a

R¹⁰ je vybrán ze skupiny zahrnující vodík, alkyl, fenylalkyl a fenyl. '

Výhodně se předkládaný vynález týká těch sloučenin, kde X=O nebo NH; R¹ a R² jsou oba alkyloxy; m = 1; Pir je radikál vzorce (Ha) , kde R⁸ je vodík a n =4; R³ je radikál vzorce (Illb), kde Z je =CH-,' d je dvojná vazba, A je fenylový kruh, R⁴ je alkyl a R¹⁰ je vodík.

Výhodněji se předkládaný vynález týká těch sloučenin, kde X=0, R¹ a R² jsou oba methoxy; m = 1; Pir je radikál vzorce (Ha) , kde R⁸ je vodík a n = 4; R³.je radikál vzorce (Illb) , kde Z je =CH-, d dvojná vazba, A je fenylový kruh, R⁴ je methyl a R¹⁰ je vodík.

V předkládaném vynálezu je alkyl nasycený uhlovodíkový radikál s přímým nebo rozvětveným řetězcem mající 1 až 6 atomů uhlíku, například methyl, ethyl, propyl, butyl, 1methylpropyl, 1,1-dimethylethyl, pentyl, hexyl; nebo je alkyl cyklický, nasycený uhlovodíkový radikál mající od 3 do 6 atomů uhlíku, například cyklopropyl, methylcyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl a cyklohexyl. Halogen je genericky fluor, chlor, brom a jod. Alkylové radikály jsou volitelně substituované jedním nebo více halogenovými atomy, například polyhalogenalkylové radikály, například difluormethyl a trifluormethyl.

« ·* · » ·» ·« ···· •94 · · · · · · «

44·· · 4 · · · · * •4 · · · ······ · * ··· * · · · · « · ···.·· 44 ·· · · · ·

Farmaceuticky přijatelné soli jsou definovány jako terapeuticky aktivní netoxické soli, které mohou tvořit sloučeniny vzorce (I). Uvedené soli mohou být získány reakcí baze sloučeniny vzorce· (I) s vhodnými kyselinami, například anorganickými kyselinami, například hydrohalogenovými kyselinami, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina dusičná a kyselina fosforečná; organickými kyselinami, jako je například kyselina octová, kyselina hydroxyoctová, kyselina propanová, kyselina mléčná, kyselina pyrohroznová, kyselina šťavelová, kyselina malonová, kyselina jantarová, kyselina maleinová, kyselina fumarová, kyselina jablečná, kyselina vinná, kyselina citrónová, kyselina methansulfonová, kyselina ethansulfonová, kyselina benzensulfonová, kyselina ptoluensulfonová, kyselina cyklámová, kyselina salicylová, kyselina p-aminosalicylová a kyselina pamoová.

Sloučeniny vzorce (I) obsahující acidické protony mohou být také přeměněny na své terapeuticky aktivní netoxické adiční soli s kovy nebo aminy, reakcí s vhodnými organickými nebo anorganickými bázemi. Mezi vhodné baze patří, například, ammoniové soli, soli alkalický zemin a kovů alkalických zemin, zejména soli lithia, sodíku, draslíku, hořčíku a vápníku, soli s organickými bázemi, například benzathinem, N-methyl-D-glukaminem, hybraminové soli a soli s aminokyselinami, například argininem a lysinem.

Naopak, uvedené soli mohou být přeměněny na volné formy reakcí s vhodnou kyselinou nebo baží.

Termín adiční sůl, jak je použit v předkládaném, vynálezu, zahrnuje též solváty, které mohou sloučeniny vzorce (I), stejně jako jejich soli, tvořit. Takovými solváty jsou, ♦ · ·· φ φ ·· φφφφ • · « · Φ · Φ ·· ΦΦΦΦ φφφ •·Φ ΦΦΦΦΦΦ φ φ • Φ Φ Φ ΦΦΦΦ •Φ ΦΦ ΦΦ ΦΦ φφ například, hydráty a alkoholáty.

N-oxidové formy sloučenin vzorce (I) jsou ty sloučeniny vzorce (I), kde je jeden nebo několik atomů dusíku oxidovaný na takzvaný N-oxid, zejména ty N-oxidy, kde jeden nebo více dusíků piperazinylového radikálu jsou N-oxidované.

Termín stereochemicky isomerické formy, jak je zde použit, označuje všechny možné isomerické formy, které mohou mít sloučeniny vzorce (I). Pokud není uvedeno jinak, tak jsou chemické názvy sloučenin směsi všech možných stereochemicky isomerických forem, kde uvedené směsi obsahují všechny diastereomery a enantíomery základní molekulární struktury. Přesněji, stereogenní centra mohou mít R-nebo S-konfiguraci; substituenty na bivalentních cyklických (částečně) nasycených radikálech mohou m.ít cis nebo trans konfiguraci. Sloučeniny obsahující dvojnou vazbu mohou mít E- nebo Z-stereochemickou konfiguraci na této dvojné vazbě. Stereochemicky isomerní formy sloučenin vzorce (I) spadají do rozsahu předkládaného vynálezu.

Podle CAS nomenklatury, pokud molekula obsahuje dvě stereogenní centra známé absolutní konfigurace, tak se označení R a S přiřadí (podle Cahn-Ingold-Prelog sekvenčního pravidla) chirálnímu centru s nejnižším číslem, které je referenčním centrem. Konfigurace druhého stereogenního centra se označí za použití relativních symbolů [R*,R*] nebo [R*,S*], kde R* je vždy specifickováno jako referenční centrum a [R*,R*] indikuje centra se stejnou chiralitou a [R*,S*] indikuje centra s různou chiralitou. Například, jestliže má chirální centrum v molekule s nejnižším číslem konfiguraci S a druhé centrum má konfiguraci R, tak bude stereo deskriptor S-[R*,S*]. V případě, že se použije a a β: poloha substituentu o nejvyšší prioritě na asymetrickém • · * · • * ~

AA ····

A ··

atomu uhlíku v kruhovém systému majícím nejnižší číslo kruhu je vždy označena jako a poloha střední .roviny dané kruhovým systémem. Poloha substituentu nejvyšší priority na druhém asymetrickém uhlíkovém atomu kruhového systému (atom vodíku ve sloučeninách obecného vzorce (I)) vzhledem k poloze substituentu nejvyšší priority na referenčním atomu je označena a, jestliže je na stejné straně střední roviny dané kruhovým systémem, nebo je označena β, jestliže je na opačně straně střední roviny dané kruhovým systémem.

Sloučeniny vzorce (I) a některé meziprodukty mají ve své struktuře alespoň dvě stereogenní centra, která jsou označená ve vzorci (I) a a b. V důsledku syntetické dráhy použité pro syntézu tricyklického systému je konfigurace těchto dvou asymetrických center a a b předem určena tak, že relativní konfigurace centra a je S* a centra b je R*.

Vynález také zahrnuje deriváty (obvykle označované jako proléčiva) farmakologicky aktivních sloučenin podle předkládaného vynálezu, které jsou degradovány in vivo za zisku sloučenin podle předkládaného vynálezu. Proléčiva mají obvykle (ale ne vždy) menší účinnost na cílovém receptoru než sloučeniny, na které jsou degradovány. Proléčiva jsou zejména účinná tehdy, když má daná sloučenina fyzikální nebo chemické vlastnosti, které činí její podání obtížným nebo nemožným. Například může být daná sloučenina pouze špatně rozpustná., nebo může být špatně transportována přes slizniční epitel, nebo může mít nežádoucí krátký plasmatický poločas. Další popis proléčiv je uveden v Stella, V. J. et al., Prodrugs, Drug Delivery Systems, 1985, str. 112-176, a Drugs, 1985, 29, str. 455-473.

Proléčiva farmakologicky aktivních sloučenin podle předkládaného vynálezu budou obvykle sloučeniny vzorce (I), ’ ·· * ♦ · « ♦ · · · • ·»· · · jejich farmaceuticky přijatelné .adiční soli s kyselinami nebo bázemi, jejich stereochemicky isomerické formy a jejich N-oxidové formy, mající kyselou skupinu, která je esterifikována nebo amidována. Mezi takové esterifikované kyselé skupiny patří skupiny vzorce -COOR^X, kde R^x je Cl₆alkyl, fenyl, benzyl nebo jedna z následujících skupin:

í Xz

Mezi amidovahé skupiny patří skupiny vzorce —C0NR^yR^z, kde R^Y je H, Cl-6alkyl, fenyl nebo benzyl a R^z je —OH, H, Cl_ ₆alkyl, fenyl nebo benzyl.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu obsahující amino skupinu mohou být derivatizovány s ketonem nebo aldehydem, jako je formaldehyd, za zisku Mannichovi baze. Tato baze bude ve vodném roztoku hydrolyzovat s kinetikou prvního řádu.

Sloučeniny vzorce (I), připravené ve způsobu popsaném dále, mohou být syntetizovány ve formě racemických směsí enantiomerů, 'které mohou být separovány jeden od druhého za použití způsobů·známých v oboru. Racemické sloučeniny vzorce (I) mohou být přeměněny na příslušné diastereomerické soli reakcí s vhodnou chirální kyselinou. Uvedené diastereomerické soli se potom separují, například selektivní nebo frakční krystalizací, a enantiomery se z nich uvolní za použití alkalických činidel. Alternativní způsob separování enantiomerických forem sloučeniny vzorce (I) zahrnuje kapalinovou chromatografií za použití chirální stacionární fáze. Uvedené čisté stereochemicky izomerické formy mohou být také odvozeny od příslušných výchozích materiálů, za podmínky, že reakce probíhají

0000 stereospecificky. Výhodně se v případě požadování specifického stereoizomerů uvedená sloučenina syntetizuje stereospecifickým způsobem přípravy. Tyto způsoby výhodně využívají enantiomericky čisté výchozí materiály.

• 0 0 0 0 0 0 * •00 0 0 0 0 0 « «

000 0 00000 0 0 ·· ·♦ 0 0000 • 0· 00 ·0 0« 00

Překvapivě bylo zjišětno, že sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou selektivní inhibitory zpětného vychytávání serotoninu (5-HT) a dále mají antagonistickou aktivitu na a₂~adrenoceptoru a vykazují silnou antidepresivní a/nebo anxiolytickou aktivitu a/nebo aktivitu ovlivňující tělesnou hmotnost bez toho, že by byly sedativní. V důsledku své inhibiční aktivity ve zpětném vychytávání serotoninu (5-HT) a antagonistické aktivity na ot₂-adrenoceptoru jsou sloučeniny podle předkládaného vynálezu také vhodné pro léčbu a/nebo profylaxi onemocnění, u kterých může být jedna nebo obě tyto aktivity terapeuticky použitelná. Konkrétně, sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být vhodné pro léčbu a/nebo profylaxi následujících onemocnění:

• Onemocnění centrálního nervového systému, včetně:

• Afektivních poruch, zejména depresivní poruchy, deprese s nebo bez psychotických rysů, melancholických rysů, katatonických rysů, atypických rysů s poporodním vznikem a, v případě recidivujících epizod, s.nebo bez sezónního výskytu, dysthymické poruchy, bipolární poruchy I typu, bipolární poruchy II typu, cyklothymické poruchy, recidivujících krátkých depresivních poruch, smíšené afektivní poruchy, nespecifickované bipolární poruchy, poruch nálady způsobených celkovým zdravotním stavem, poruch nálady indukovaných substancemi, nespecifikovaných poruch nálady, sezónních afektivních poruch a premenstruační dysforie.

·« ««·· • úzkostných poruch, včetně panické ataky, agorafóbie, panické poruchy bez agorafóbie, agorafóbie bez anamnesy . panické ataky, specifické fóbie, sociální fóbie, obscesivně-kompulzivní poruchy, posttraumatické stresové poruchy, akutního stresu, generalizované úzkosti, úzkosti způsobené celkovým zdravotním stavem, úzkosti indukované substancemi a nespecifikované úzkosti.

• poruch souvisejících se stresem asociovaných s depresí a/nebo úzkostí, včetně akutní stresové reakce, poruch přizpůsobivosti (krátké depresivní reakce, dlouhodobé depresivní reakce, smíšené úzkostné a'depresivní reakce, poruch přizpůsobivosti s predominancí jiných emocí, poruch přizpůsobivosti s predominancí poruch chování, poruch přizpůsobivosti se změnami emocí a chování, poruch přizpůsobivosti s jinými převládajícími příznaky) a jiných reakcí na těžký stres.

• demencí, amnesivních poruch a kognitivních poruch bez bližšího upřesnění, zejména demencí způsobených degenerativními poruchami, lézemi, traumaty, infekcemi, cévními onemocněními, toxiny, anoxií, deficitem vitamínů nebo endokrinními poruchami, nebo amnestické poruchy způsobené alkoholem nebo jinými příčinami deficitu thiaminu,.bilaterálního poškození temporálního laloku způsobeného herpetickou encefalitidou·a jinými limbickými encefalitidami, ztrátami neuronů sekundárními k anoxií /hypoglykemii/těžkými křečemi a chirurgickým zákrokem, degenerativními chorobami, cévními chorobami nebo patologiemi okolo III komory.

• kognitivních poruch způsobených narušením kognitivních funkcí způsobeným jinými onemocněními.

» poruch osobnosti, včetně paranoidní psychosy, schizoidní psychózy, schizotypické psychózy, antisociální

00 • Μ ·« « 0 · · · · 0 • 0 · 0 ·· 0 0 000000 0 0 • 0 0 0 0 0 0 00 00 00 00 psychózy, hraničních psychóz, histrionické psychózy, narcismu, avoidantní psychózy, poruch·osobnosti se závislostí, obsesivně-kompulsivní psychózy a blíže nespecifickované psychózy.

• schizoafektivních poruch vznikajících z různých příčin, včetně schizoafektivních poruch manického typu, depresivního typu, smíšeného typu, paranoidní, disorganizované, katatonické, nediferencované a residuální schizofrenie, schizophreniformní psychózy, schizoafektivní psychózy, desilusní poruchy, přechodné psychózy, společných psychos, substancemi indukované psychózy a a blíže nespecifikované psychózy.

• akinesie, akineticko-rigidních syndromů, dyskinesie a léky indukovaného parkinsonismu, syndromu Gilles de la Tourette a jeho příznaků, tremoru, chorey, myoklonů, tiků a dystonie.

• poruchy pozornosti/hyperaktivity (ADHD).

• Parkinsonovi nemoci, léky indukovaného Parkinsonismu, post-encefalitického Parkinsonismu, progresivní supranukleární obrny, povšechné systémové atrofie, kortikobazální degenerace, komplexu parkinsonismus-ALS a k-alcifikace bazálních ganglií.

• Demence Alzheimerova typu, s časným, nebo pozdním nástupem, s depresivní náladou.

• Poruch chování při demenci a mentální, retardaci, včetně neklidu a agitace.

• Extra-pyramidových pohybových příznaků.

·· ···0 ♦ ·· • * * · · • · · · · • ··· · · · • 9 9 9

»♦·· • Downova syndromu.

• Akathisie.

• poruch příjmu potravy, včetně anorexia nervosa, atypické anorexia nervosa, bulimia nervosa, atypické bulimia nervosa, přejídání asociovaného s jinými psychologickými poruchami, zvracení asociovaného s jinými psychologickými poruchami a nespecifikovaných poruch příjmu potravy.

• ADS-asociované demence.

• Chronických bolestí, včetně neuropatické bolesti, záěntlivé bolesti, nádorové bolesti a post-operační bolesti po chirurgickém výkonu, včetně dentálního chirurgického výkonu. Tyto indikace mohou také zahrnovat akutní bolesti, bolesti kosterních svalů, bolesti dolní části zad, bolesti horních končetin, fibromyalgíe a myofasciální bolestivé syndromy, orofaciální bolesti, abdominální bolesti, fantomové bolesti; tic douloureux a atypické bolesti obličeje, poranění nervových kořenů a arachnoiditida, geriatrické bolesti, centrální bolesti a zánětlivé bolesti.

• Neurodegenerativní onemocnění; včetně Alzheimerovi nemoci, Huntingtonovi chorey, Creutzfeld-Jacobovi nemoci, Pickovi nemoci, demyelinizačních onemocnění, jako je roztroušená sklerosa a ALS, jiných neuropatií a neuralgií, roztroušené sklerosy, amyotrofické laterální sklerosy, mrtvice a traumatu hlavy.

závislostí, včetně:

*· ·Φ· · • φφ φφ φφ φφφ φφφφ Φ· φ • φφφ φφφφ Φ· φ φ φ φφφ φ φφφ φφφ ·

Μ φφφφφ · ΦΦΦ· • ΦΦ φφ φφ φφ φφ φφ • závislosti na návykových látkách, s nebo bez psychologické závislosti, zejména tehdy, kdy návykovou látkou je alkohol, amfetaminy, amfetaminu podobné substance, kofein, kanabis, kokain, halucinogeny, inhalační látky, nikotin, opioidy, fencyklidin, sloučeniny podobné fenylcyklidinu, sedativa-hypnotika, benzodiazepiny a/nebo jiné substance, a zejména pro léčbu abstinenčních příznaků při odvykání závislosti na výše uvedených substancích a alkoholového deliria.

• poruch nálady způsobených alkoholem, amfetaminy, kofeinem, kanabis, kokainem, halucinogeny, inhalačními látkami, nikotinem, opioidy, fencyklidinem, sedativy, hypnotiky, anxiolitiky a jinými substancemi.

• úzkostných poruch indukovaných alkoholem, amfetaminy, kofeinem, kanabis, kokainem, halucinogeny, inhalačními látkami, nikotinem, opioidy, fencyklidinem, sedativy, hypnotiky, anxiolitiky a jinými substancemi a poruch přizpůsobivosti s úzkostí.

• odvykání kouření.

* ovlivnění tělesné hmotnosti, zejména obezity.

• poruch spánku, včetně • Dyssomnie a/nebo parasomnie jako primárních poruch spánku, poruch spánku souvisejících s jinou duševní poruchou, poruch spánku souvisejících s celkovým zdravotním stavem a poruch spánku indukovaných substancemi.

• poruch cirkadiárního rytmu.

• zlepšení kvality spánku.

• 44		*4	• 4		» 4
• 4	•	•	• 4	4	4
• **·	•	•	• 4	•	•
• · ·	•	•	•	*	•
♦ 4 *·		»4	• ·		4 ·

·*· · • Sexuální dysfunkce, včetně poruch sexuálního apetitu, poruch sexuálního vzrušení, poruch orgasmu, sexuálních bolestivých poruch, sexuální dysfunkce způsobené celkovým zdravotním stavem, sexuální dysfunkce indukované substancemi a blíže nespecifickované sexuální dysfunkce.

Předkládaný vynález se také týká sloučenin vzorce (I) jak byly popsány výše, jejich farmaceuticky přijatelných adičních solí s kyselinami nebo bázemi, jejich stereochemicky isomerických forem, jejich N-oxidových forem, stejně jako jejich proléčiv, pro použití jako léčiva. Dále se předkládaný vynález týká použití sloučenin vzorce (I), jejich farmaceuticky přijatelných adičních solí s kyselinami nebo bázemi, jejich stereochemicky isomerických forem, jejich N-oxidových forem a jejich proléčiv, pro výrobu léčiva pro léčbu depresí, úzkostných poruch a poruch příjmu potravy, nebo obecněji jakékoliv poruchy uvedené výše.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být vhodné jako pomocná léčba a/nebo profylaxe výše uvedených onemocnění v kombinaci s antidepresivy, anxiolytiky- a/nebo antipsychotiky, které jsou v současnosti dostupné nebo vyvíjené, nebo které budou dostupné v budoucnu, pro zlepšení účinnosti nebo nástupu účinku. Toto se hodnotí na modelech na hlodavcích, na kterých byla prokázána účinnost antidepresiv, anxiolyt-ik a/nebo antipsychotik. Například se sloučeniny hodnotí v kombinaci s antidepresivy, anxiolytiky a/nebo antipsychotiky na zmírnění stresem-indukované hypertermie.

Předkládaný vynález se také týká farmaceutického prostředku obsahujícího sloučeniny podle předkládaného vynálezu a jednu nebo více dalších sloučenin vybraných ze

Α» ·Α*Α

AA AA * A A

A A A • · AA • ’ A AA AA

AAA A A »

A A A ·

A A AA skupiny zahrnující antidepresiva, anxiolytika a antipsychotika, stejně jako použití takových prostředků pro přípravu léku pro zlepšení účinnosti a/nebo nástupu účinku při léčbě deprese a/nebo úzkosti.

In vitro testy s vazbou na receptor a neurotransmiterový transportér a těsty přenosu signálu mohou být použity pro testování antagonistické aktivity sloučenin podle předkládaného vynálezu na a₂-adrenoceptoru a inhibiční aktivitu na zpětné vychytávání serotoninu (5-HT). Jako znamení centrální penetrace a potenciálu blokovat a₂adrenoceptory a serotoninové transportéry, v příslušném pořadí, může být použit test obsazení oc₂-adrenoceptoru a serotoninového transportéru ex vivo. Pro'důkaz oc₂adrenoceptorového antagonismu in vivo může být použito testu reverse ztráty správných reflexů, která je pozorována u krys po podkožní injekci nebo orální dávce sloučeniny před intravenosním podání medetomidinu u krys (medetomidinovýtest). Jako důkaz inhibiční aktivity pro zpětné vychytávání serotoninu (5-HT) může být použito inhibice škubání hlavy a excitace u krys po podkožní injekci nebo orálním podání sloučenina před podkožním podání p-chloramfetaminu u krys (pCA-test).

Vynález se také týká prostředků obsahujících farmaceuticky přijatelných nosič a - jako aktivní složku terapeuticky účinné množství sloučeniny podle předkládaného vynálezu. Sloučeniny podle předkládaného vynálezu nebo jakékoliv jejich podskupiny mohou být pro podání formulovány do různých farmaceutických forem. Jako vhodné kompozice mohou být uvedeny všechny kompozice obvykle používané pro systémové podávání léků. Pro přípravu farmaceutického prostředku podle předkládaného vynálezu se účinné množství konkrétní sloučeniny, volitelně ve formě adiční soli, smísí ·· •

• 44 • 4 • 4 • 4 • 9 ·τ ·· ···· • * · · » · · • · · tt · · · » · · ··· · · · · • · · · ♦ · · ·· «· ·· »· s farmaceuticky přijatelným nosičem, kde tento nosič může mít různé formy podle požadovaného způsobu podání. Tyto farmaceutické prostředky jsou výhodně ve formě dávkových jednotek, konkrétně ve formě vhodné pro orální, rektální, perkutánní nebo parenterální injekcí, nebo pro inhalační podání. Například, při přípravě orálních prostředků může být použito jakékoliv obvyklé farmaceutické medium, jako je, například, voda, glykoly, oleje, alkoholy a podobně v případě orálních kapalných přípravků, jako jsou suspenze, sirupy, elixíry, emulze a roztoky; nebo pevné nosiče, jako jsou škroby, sacharidy, kaolin, ředidla, kluzná činidla, pojivá, činidla podporující rozpadavost a podobně v případě prášků, pilulek, kapslí a tablet. Z důvodu snadného podání jsou tablety a kapsle nej výhodnějšími orálními, dávkovými formami a těchto formách jsou obvykle použity pevné farmaceutické nosiče. Pro parenterální prostředky je nosičem obvykle sterilní voda, alespoň z větší části, ačkoliv mohou být použity i další složky, jako například složky zvyšující rozpustnost. Například mohou být připraveny injekční roztoky, ve kterých je nosičem salinický roztok, roztok glukosy nebo směs salinického roztoku a glukosy..Také mohou být připraveny injekční suspenze a v nich se použijí kapalné nosiče, suspendační činidla a podobně. Vynález také zahrnuje pevné přípravky, které jsou určeny pro přeměnění na kapalné formy těsně před aplikací. V prostředcích vhodných pro perkutánní podání nosič volitelně obsahuje činidlo zlepšující penetraci a/nebo vhodné smáčivé činidlo, volitelně v kombinaci s vhodnými přísadami jakéhokoliv charakteru v minoritních podílech, kde tyto přísady nejsou významněji škodlivé pro kůži. Uvedené přísady mohou usnadňovat podání do kůže a/nebo mohou být užitečné při přípravě požadovaných prostředků. Tyto prostředky mohou být podány různými způsoby, například jako transdermální náplasti, nanesením na kůži nebo ve formě masti.

·· · · · • · ·· «

Zejména· výhodné je připravit výše uvedené farmaceutické prostředky ve formě dávkových jednotek vhodných pro podání obsahujících jednotnou dávku. Dávková jednotka je diskrétní jednotka obsahující vhodnou dávku, a každá jednotka obsahuje předem určené množství aktivní složky vypočtené pro produkování požadovaného terapeutického efektu, společně s farmaceuticky přijatelným nosičem. Příklady takových dávkových jednotek jsou tablety (včetně dělených nebo potahovaných tablet), kapsle, pilulky, sáčky s práškem, medicinální oplatky, čípky, injekční roztoky nebo suspenze a podobně, a jejich segregované násobky.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být připraveny postupnými kroky, kde každý z těchto kroků je známý odborníkům v oboru.

Konkrétně, sloučeniny vzorce (I) sPir-radikálem vzorce (Ha) mohou být připraveny nukleofilní substituční reakcí se substituovaným piperazinem vzorce (V) na meziproduktu vzorce (IV). Tyto reakce mohou být provedeny v rozpouštědle inertním pro reakci, jako je dioxan, methylisobutylketon nebo Ν,N'-dimethylformamid, za přítomnosti vhodné baze, jako je uhličitan draselný, uhličitan sodný nebo triethylamin, nebo i bez baze, za použití nadbytku činidla vzorce (V). Výhodné reakční.teploty jsou v rozmezí 100°C a 150°C.

(IV) (V) (^VI)

Ve sloučenině (IV) znamená L jakoukoliv vhodnou reaktivní odštěpitelnou skupinu, konkrétně halogen, jako je chlor, • · · · · a ·· ····

brom nebo jod, nebo sulfonyloxy skupinu, jako je methylsulfonyloxy nebo 4-methylbenzenesulfonyloxy skupina.

Sloučeniny vzorce (I) s Pir-radikálem vzorce (Ha) mohou být také připraveny 2-stupňovou reakcí, ve které meziprodukt vzorce (IV) nejprve reaguje s substituovaným piperazinem vzorce (VII) a potom se do molekuly vloží R³-radikál.

Reakční podmínky jsou podobné jako podmínky popsané výše pro sloučeniny vzorce (VI).

(R⁸)n

Ve sloučenině (IV) znamená L jakoukoliv vhodnou reaktivní odštěpitelnou skupinu, konkrétně halogen, jako je chlor, brom nebo jod, nebo sulfonyloxy skupinu, jako je methylsulfonyloxy nebo 4-methylbenzenesulfonyloxy skupina.

V meziproduktu (VII) může být také chráněna jedna dusíková funkce, například terč.butyloxykarbonylovou skupinou.

2)

Ve sloučenině (IV) znamená L jakoukoliv vhodnou reaktivní odštěpitelnou skupinu, konkrétně halogen, jako je chlor, brom nebo jod, nebo sulfonyloxy skupinu, jako je methylsulfonyloxy nebo 4-methylbenzenesulfonyloxy skupina. Také R³CHO může být použit jako sloučenina (IX).

Sloučeniny vzorce (I) s Pir-radikálem· vzorce (II) mohou být také připraveny 2-stupňovým reakčním schématem, ve kterém meziprodukt vzorce (Vlil) reaguje s kyselinou vzorce (X), a potom se proveden redukce karbonylové skupiny meziproduktu (XI). Reakce stupně 1 mohou být provedeny v inertním rozpouštědle, jako je chloroform, dichlormethan, tetrahydrofuran, dimethylformamid nebo jejich směs za použití jakékoliv metody známé odborníkům v oboru, za použití kondenzačních činidel, jako je 1,1'karbonyldiimidazol, Ν,N'-dicyklohexylkarbodiimid nebo za použití dřívější transformace karboxylové kyseliny vzorce (X) ’na příslušný chlorid kyseliny. Reakce uvedené ve stupni 2 mohou být provedeny za použití vhodného redukčního činidla, jako je hydrid lithno-hlinitý nebo hydrid hlinitý, ve vhodném rozpouštědle, například tetrahydrofuranu. Obecně se tyto reakce provedou při teplotách v rozmezí od —20°C do teploty místnosti.

stupeň.1) (Vni) (X) (XI)

(stupeň 2) (ΧΠ) (XI)

V meziproduktech (XI) a (XII) znamená skupina A volitelně substituovaný aromatický homocyklický nebo heterocyklický

·· · • · kruhový systém včetně částečně nebo zcela hydrogenovaného uhlovodíkového řetězce délky maximálně 5 atomů, kde. jeden nebo více atomů uhlíku může být nahrazen jedním nebo více atomy vybranými ze skupiny zahrnující kyslík, dusík a síru,prostřednictvím kterého je kruhový systém navázán na Pir radikál, který byl definován výše.

Substituenty R¹ a R² mohou být změněny nebo konvertovány mezi sebou za použití způsobů známých v oboru, jako je demethylace, acylace, esterifikace, aminace a amidace.

Výchozí materiály a některé meziprodukty jsou sloučeniny, které jsou buď komerčně dostupné nebo mohou být připraveny za použití běžných reakčních způsobů známých v oboru. Například, meziprodukty vzorce (IV), kde X=0, mohou, být připraveny podle následujícího reakčního schématu (schéma 1) :

Schéma 1

(XIV) ^/CHO / ^stuP^{eň la}>

(XV)

V meziproduktu (XIV) znamená L jakoukoliv vhodnou reaktivní odštěpitelnou skupinu, konkrétně halogen,, jako je chlor, brom nebo jod, nebo sulfonyloxy skupinu, jako je methylsulfonyloxy nebo 4-methylbenzenesulfonyloxy skupina. Dále, Alk v meziproduktu (XIV) znamená jakoukoliv Ci-6 alkylskupinu, zejména ethylovou skupinu, a m je stejný, jak je definován pro vzorec (I).

Meziprodukty vzorce (IV), kde X=NH, mohou být také připraveny způsobem stejným jako je způsob výše uvedeného stupně 1, s podmínkou, že meziprodukt (XIII) je nahrazen jeho aminovým analogem (XVI), výhodně s aminovou skupinou chráněnou např. COCF₃- skupinou. Alkylační stupen může být proveden v inertním rozpouštědle, například, tetrahydrofuranu nebo dimethylformamidu, za přítomnosti silné baze, jako je hydrid sodný nebo draselný, a adice korunkového etheru, jako je 18-korunkový-6 nebo 15-korunkový -5. Výhodné reakční teploty jsou v rozmezí mezi teplotou místnosti a 60°C.

CHO +

NHCOC&

CHO '(stupeň lb)

I

F3COC

Rl (XVI) (XIV) (XVII) z^/CHO '^x^\^_(C^₁ ^CQ2A,k (XVII)

(stupeň 2)

Meziprodukty vzorce (XVII) se konvertují na oximy vzorce (XVIII) za použití technik známých v oboru, jako je použití hydroXylaminhydrochloridu za přítomnosti NaHCO₃ nebo pyridinu v inertním rozpouštědle, například ethanolu. Meziprodukt (XVIII) se· oxiduje na nitril-oxíd a in šitu se provede intramolekulová cykloadice, za zisku sloučeniny vzorce (XIX). Tato oxidace může být provedena za použití roztoku chlornanu sodného za přítomnosti triethylaminu v inertním rozpouštědle, jako je dichlormethan, při teplotě místnosti. Oxidace může být také provedena za použití chloraminu-T (Nchior-4-methyl-benzensulfonamid, sodná sůl) , míšením a zahříváním v rozpouštědle, jako je refluxující ethanol.

V tomto stupni se vytvoří dvě stereocentra a a b vzorce (I).

C=NOH _X/^^(CH₂)ý?°^2AI,< (XVHI)

(stupeň 3)

Příprava sloučeniny vzorce (XX) může být provedena za použití postupů známých v oboru, například redukcí karbonylové sloučeniny vzorce (XIX) za přítomnosti vhodného redukčního činidla, například, borohydridu sodného, ve vhodném rozpouštědle, jako je voda, alkohol, tetrahydrofuran nebo jejich směs, obvykle pří teplotě místnosti.

Meziprodukt vzorce (IV) může být připraven z meziproduktu vzorce (XX) za použití standardních technik. Tak reakce s methanesulfonylchloridem nebo 4-methylbenzensulfonylchloridem za přítomnosti baze, jako je triethylamin, v inertním rozpouštědle, například dichlormethanu, při reakční teplotě v rozmezí 0°C až teplota místnosti, vedou k zisku příslušného sulfonyloxy derivátu meziproduktu (IV). Mohou být -také připraveny příslušné halogenové deriváty, například reakcí meziproduktu vzorce (XX) s trifenylfosfinem, za přítomnosti tetrachlormethanu, v inertním rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran, za míšení směsi a zahřívání při teplotě • · zpětného toku.

(XX)

(stupeň 5)

Je jasné, že v uvedených a následujících reakcích mohou být reakční produkty izolovány z reakčního media a - když je to nutné - mohou být přečištěny za použití technik dobře známých v oboru, jako je extrakce, krystalizace a chromatografie. Dále je jasné, že reakčni produkty, které existuji ve více než jedné enatiomerické formě, mohou být izolovány ze směsi za použití dobře známých technik, jako je zejména preparativní chromatografie, jako je preparativní HPLC. Obvykle mohou být meziprodukty (IV) a finální sloučeniny vzorce (I) separovány do svých enantiomerických forem.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu, kde X=CH₂, mohou být připraveny podle následujícího reakčního schématu (Schéma 2), kde meziprodukt vzorce (V) je nejprve Nalkylován s dihalogenovým derivátem vzorce (XX) za použití standardních technik, za přítomnosti nebo absence baze a v inertním rozpouštědle, jako je chloroform, dichlormethan nebo 1,2-dichlorethan, a při reakční teplotě v rozmezí od teploty místnosti do 80°C, za zisku meziproduktu vzorce (XXI). Aldehyd vzorce (XXII) reaguje s terč.butylaminem v aprotickém rozpouštědle, jako je toluen, za míšení a zahřívání při teplotě zpětného toku s odstraňováním vody, za použití standardního přístroje, jako je Dean-Starkův odlučovač vody, za zisku iminu vzorce (XXIV). C-alkylace ···· meziproduktu vzorce (XXIV) s meziproduktem vzorce (XXI) může být provedena za přítomnosti alkyl-lithného derivátu, jako je n-butyllithium, v inertní atmosféře a v suchém inertním rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran, při nízkých teplotách v rozmezí —78°C a 0°C, za zisku meziproduktu vzorce (XXV) . Meziprodukt vzořce (XXVI) může být připraven reakcí sloučeniny vzorce (XXV) s hydroxylaminem, za přítomnosti baze, jako je hydrogenuhličitan sodný, v rozpouštědle jako je nižší alkylalkohol, například ethanol, obvykle při teplotě místnosti. Nakonec může být provedena oxidace oximového derivátu vzorce (XXVI) na jeho nitril-oxid a následná in šitu cykloadice za zisku sloučeniny vzorce (XXVII), za použití standardních technik, jako jsou techniky popsané výše pro meziprodukt vzorce (XVIII), za zisku sloučenin vzorce (XIX).

Schéma 2 (R®)n (R®)n + cr '(ch₂);

xi b r *- CI^X^^X{CH₂)Sr^N^^J (stupeň 1) (V) tXX)AXXf)-nh₂

(stupeň 2) (ΧΧΠ) (xxm) (XXIV)

cr

(stupeň 3) ····

(XXVI)

(XXVI) (ΧΧνΠ)

Je jasné, že reakční stupně pospané výše mohou být upraveny pro specifické reakční produkty. Popsané reakční stupně mohou být provedeny jakýmkoliv způsobem známým odborníkům v oboru, včetně reakcí na pevné fázi nebo v roztoku, kdy v reakcích na pevné fázi jsou reakční produkty navázané na pryskyřici a jsou - v konečném štěpení - uvolňovány z pryskyřice. Příklady takových provedení jsou popsány dále v oddíle příklady provedení vynálezu.

Sloučenina kyselina 3,3a,4,5-tetrahydronafto[1,2c]isoxazol-3-octová (vzorec (IV), kde každý z R¹ a R² jsou H, m=0, X=CH₂ a L=COOH) byla popsána v Synthetic Communications, 27(16), 2733-2742 (1997) jako meziprodukt pro syntézu protizánětlivých, analgetických a antipyretických sloučenin a je vyloučena z patentové ochrany.

Následující příklady dokreslují předkládaný vynález a nijak neomezují jeho rozsah.

Příklady provedení vynálezu

Č9slování uhlíků kruhu pro sloučeniny vzorce (I) použité v předkládaném vynálezu je následující:

·· φφφφ

Φ φφ φφ φ • φφφ φ φ φφφ φφ • Φ φ · • φφφ · φφφφ · • φ ΦΦΦ·· • · · · φφ φφ φφ

U některých sloučenin nebyla absolutní stereochemická konfigurace stereogenních atomů uhlíku experimentálně určena. V těchto případech je stereochemicky isomerická forma, která byla izolována jako první, označena jako A a druhá jako B, bez dalšího odkazu na skutečnou stereochemickou konfiguraci. Nicméně, uvedené izomery A a B mohou být jednoznačně charakterizovány odborníkem v oboru za použití způsobů známých v oboru, jako je, například, rentgenová difrakce. Stereogenní centra a a b ve vzorci (I) mají příslušná čísla kruhu 3a a 3.

DMF je zde definován jako N,N-dimethylformamid, DIPE je zde definován jako diisopropylether a THF je zde . definován jako tetrahydrofuran.

A. Příprava meziproduktů

Příklad Al.a '

Příprava meziproduktu 1

Roztok methyl esteru kyseliny 4-brom-2-butenové (0,1647 mol) v DMF (50 ml) se přidá po kapkách do směsi 2-hydroxy4,5-dimethoxy-benzaldehydu (0,0823 mol) a K₂CO₃ (0,1647 mol) v DMF (200 ml). Reakční směs se mísí po dobu 2 hodin při teplotě místnosti, přefiltruje se a filtrát se· odpaří do «

• · ····

sucha. Zbytek se promyje v 10% vodném roztoku NaOH a potom se extrahuje CH₂C1₂. Separovaná organická vrstva se suší (Na₂SO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se promyje diethyletherem a potom se suší. Výtěžek: 20 g meziproduktu 1 (87%) .

Příklad Al.b

Příprava meziproduktu 2 .OH

Hydroxylamin (0,045 mol) se přidá do roztoku meziproduktu 1 (0,041 mol) v ethanolu (150 ml). Přidá se pyridin (57 ml). Reakční směs se mísí po dobu 2 hodin při teplotě místnosti, potom se nalije do vody a okyselí se koncentrovanou HCl.

Tato směs se extrahuje CH₂C1₂. Separovaná organická vrstva se suší (Na₂SO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 11,7 g (96%, surový výtěžek). Vzorek (2 g) se přečistí vysoce výkonou kapalinovou chromatografií přes silikagel (eluens: CH₂C1₂/CH₃OH 95/5). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek.se promyje diethyletherem a potom se suší. Výtěžek: 0,9 g meziproduktu 2.

Příklad Al.c

Příprava meziproduktu 3

NaOCl, 5% (130 ml), se přidá po kapkách do směsi meziproduktu 2 (0,037 mol) a Et₃N (1 ml) v CH₂C1₂ (220 ml). Reakční směs se mísí po dobu 4 hodin při teplotě místnosti, potom se promyje vodou, suší se (Na₂SO₄) , přefiltruje se a filtrát se odpaří. Zbytek se přečistí chromatografií přes krátkou otevřenou silikagelovou kolonu (eluens: CH₂Gl₂/244 • 444 • *4

4 • 444 «44 • 4 4 • •4 44

4 4 • 444

4 ·♦ 44 propanon 100/0 a 95/5). Požadované frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 5,8 g (54%, použije se v dalším stupni bez dalšího přečioštění). Vzorek (2 g) se rekrystalizuje z EtOAc. Sraženina se odfiltruje a suší se. Výtěžek: 1,7 g meziproduktu 3.

Příklad Al.d

Příprava meziproduktu 4

-OH

NaBH₄ (0,043 mol) se přidá po částech do roztoku meziproduktu 3 (0,017 mol) v THF (50 ml) a H₂0 (5 ml), směs se mísí a ochladí se v ledové lázni. Získaná reakční směs se mísí po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Za míšení se během 30 minut přidá 2-propanon. Reakční směs se promyje vodou a extrahuje se CH₂C1₂. Separovaná organická vrstva se promyje solankou, suší se (Na₂SO₄), přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se přečistí chromatografií přes krátkou otevřenou silikagelovou kolonu (eluens: CH₂C1₂/CH3OH 95/5) a vysoce výkonou kapalinovou chromatografií přes silikagel (eluens: CH₂C1₂/CH₃OH 98/2). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Vzorek (1,8 g) se zpracuje diethyletherem a potom se suší. Výtěžek:

1,2 g meziproduktu 4 (59%).

Příklad Al.e

Příprava meziproduktu 5

Et₃N (0,016 mel) se přidá do roztoku meziproduktu 4 (připraveného podle příkladu A3) (0,0109 mol) v CH₂C1₂ (60 ml). Směs se ochladí v ledové lázni. Přidá se methansulfonylchlorid (0,012 mol) a získaná reakční směs se mísí po dobu 30 min. Potom se směs promyje vodou, suší se (Na₂SO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek:

3,5 g meziproduktu 5 (82%, použije se v dalším reakčním stupni bez dalšího přečištění).

»· ·*♦·

Příklad Al.f

Příprava meziproduktu 6

Reakce probíhá v atmosféře N₂. BBr₃ (0,04368 mol) se přidá po kapkách do míšeného roztoku meziproduktu 5 (připraveného podle příkladu Al.e) (0,00873 mol) v CH₂C1₂ (100 ml) a směs se ochladí na -78 °C. Reakční směs se nechá zahřát na -40 °C a míšení pokračuje po dobu 2 hodin při -40 °C. Potom se směs nalije na led-vodu a extrahuje se CH₂C1₂. Separovaná organická vrstva se suší (MgSO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se přečistí rychlou chromatografií na silikagelové koloně (eluens: CH₂C1₂/CH₃OH 97/3), potom HPLC (eluens: CH₂C1₂/CH₃OH 99,5/0,5 až 90/10). Odeberou se dvě skupiny frakcí obsahující produkt a jejich rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 0,750 g meziproduktu 6 (26%).

Příklad Al.g

Příprava meziproduktu 7

Směs meziproduktu 5 (připraveného podle příkladu Aid) (0,0422 mol) a piperazinu (0,1267 mol) v 1·, 4-dioxanu (15 ml) se mísí po dobu 2 hodin při teplotě 100 °C. Rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se promyje vodou a extrahuje se CH₂C1₂. Separovaná organická vrstva se suší (Na₂SO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 13 g meziproduktu 7 (NMR: 85%) .

·· 4444

4

4« •

• 4« ·

4 • » » 44 « · · «

4 4 « * 44 4 · 4 • 4 · »44 «

Příklad Al.h

Příprava meziproduktu

Meziprodukt 5 (připravený podle příkladu Al.e) (200 g,

0,58 mol) se separuje na své enantiomery chirální chromatografií na koloně LC1 10-2 se stacionární fází CHIRALPAK-AD (2000 g, plnící tlak: 45 bar (4,5 MPa), rozsah detektoru: 2,56, vlnová délka: 240 nm, teplota: 30 °C; nástřikový roztok: 200 g v 8,4 1 CH₃CN; potom se přidá 19,6 1 methanolu (.+2% ethanolu) , potom filtrace; nástřikový obj . : 700 ml; eluens: .CH3OH/CH3CN 70/30 obj./obj.). Odeberou se dvě skupiny frakcí obsahující produkt a jejich rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 95 g meziproduktu 8.

Příklad Al.i

Příprava meziproduktu

Směs meziproduktu 8 (připraveného podle příkladu Al.h) (0,0728 mol) a 1-(terč.butyloxykarbonyl)piperazinu (0,087 mol) v dioxanu (500 ml) se mísí a zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 4 hodin. Rozpouštědlo se odpaří a přidá se CH₂C1₂. Dále se přidá H₂0 a NaOH (50%) a směs se extrahuje CH₂C1_2; Separovaná organická vrstva se suší (MgSO₄) a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Získá se meziprodukt 9.

Příklad Al.i

Příprava meziproduktu 10 2

Směs meziproduktu 9 (0,003 18 mol) a kyseliny 2,2,2trifluoroctové (189 ml) v CH₂C1₂ (500 ml)· se mísí po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří a ·* ·44· • · * • · *♦ 4« «

zbytek se rozpustí v CH₂C1₂. Přidá se NaOH (50%) a směs se extrahuje. Separovaná organická vrstva se suší (MgSO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem (eluens: CH₂C1₂/(MeOH/NH₃) 100/0;95/5). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 14,32 g meziproduktu 10 (59%).

Příklad Al.k '

Příprava meziproduktu 11

Směs meziproduktu 10 (0,00599 mol), l-chlor-2-propanonu (0,00599 mol) a K₂C0₃ (0,01199 mol) v DMF (200 ml) se mísí po dobu 24 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se rozpustí v CH₂Ci₂. Organický roztok se promyje vodou, suší se (MgSO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Výtěžek: (kvantitavitní výtěžek) meziprodukt 11.

Příklad Al.1 8

Příprava meziproduktu 12

Reakce· probíhá v atmosféře N₂. Směs kyseliny 3,4dihydro-2-naftalenkarboxylové (0,0043 mol) a 1,1'karbonylbis [lH-imidazolu] (0,0047 mol) v CH₂C1₂ se mísí po dobu jedné hodiny při teplotě místnosti. Přidá se roztok meziproduktu 7 (připraveného podle příkladu Al.g) (0,0043 mol) v CH₂C1₂ a získaný reakční roztok se mísí po dobu ± 24 hodin při teplotě místnosti. Roztok se promyje vodou a potom se extrahuje CH₂C1₂. Separovaná organická vrstva se suší (Na₂SO₄), přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se přečistí chromatografií na krátké otevřené silikagelové koloně (eluens: CH2CI2/CH3OH 97/3). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 0,4 g meziproduktu 12

(22%).

Příklad Al.m

Příprava meziproduktu 13

Ethenyltrifenylfosfoniumbromid (0,0025 mol) se přidá do roztoku meziproduktu 7 (připraveného podle příkladu Al.g) (0,003 mol) v CH₂C1₂ (20 ml). Reakční směs se mísí po dobu 4 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří za redukovaného, tlaku. Výtěžek: 2,2 g meziproduktu 13, který se použije v následujícím reakčnim stupni bez dalšího přečištění·.

Příklad Al.n o

Příprava meziproduktu 14

Do roztoku kyseliny (E)-3-jod-2-methylpropenové (0,009 mol) v suchém CH2CI2 (100 ml) při teplotě místnosti v proudu N₂ se přidá 1,1'-karbonyIbis[lH-imidazol) (0,0099 mol). Směs se mísí po dobu 1 hodiny a potom se přidá meziprodukt 7 (připravený podle příkladu Al.g) (0,009 mol). Reakční směs se mísí při teplotě místnosti po dobu 16 hodin, promyje se H₂0 a solankou, suší se (Na₂SO₄) a rozpouštědlo se odpaří za redukovaného tlaku. Zbytek (bílá pěna) se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem .(eluens :

CH₂Cl₂/MeOH 99/1). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 3,82 g meziproduktu 14 (bílá pevná látka,

81%) .

Příklad Al.o

Příprava meziproduktu 15

Roztok LiAlH₄, 1,0 M/THF (0,00848 mol) v THF (100 ml) se mísí a zahřívá při teplotě zpětného toku v proudu N₂ při teplotě -20°C. AICI3 (0,0093 mol) se přidá v jednom podíle a získaná směs se mísí pří teplotě -20°C po dobu 10 minut. Po kapkách se přidá roztok meziproduktu 14 (připraveného podle příkladu Al.n) (0,0077 mol) v THF (100 ml) a získaná směs se mísí při -20°C po dobu 1 hodiny. Nasycený 20% roztok NH₄C1 se přidá po kapkách při -10°C a reakční směs se nechá zahřát na teplotu místnosti. H₂0 se přidá do suspenze a ta se extrahuje CH₂C1₂. Separovaná organická vrstva se suší (Na₂SO₄) a rozpouštědlo se odpaří za redukovaného tlaku. Zbytek se zpracuje Et₂0 a suší se. Výtěžek: 3,73g meziproduktu .15 (bílý pevný materiál, 94%).

Příklad Al.p

Příprava meziproduktu 16

Směs meziproduktu 7 (připraveného podle příkladu Al.g) (0,015 mol), l-chlor-2-propanonu (0,015 mol) a K₂C0₃ (0,030 mol) v CH₃CN (60 ml) se mísí po dobu 24 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se rozdělí mezi vodu a CH₂C1₂. Separovaná organická vrstva se suší (Na₂SO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem (eluens: CH₂C1₂/CH3OH 95/5). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 4,79 g meziproduktu 16 (82%).

Příklad Al.q • ·

Příprava meziproduktu 17

NaBH₄ (0,0128 mol) se přidá po částech do roztoku meziproduktu 16 (připraveného podle příkladu Al.p) (0,0051 mol) a H₂0 (3,2 ml) v THF (40,5 ml), při teplotě 0 °C. ' Reakční směs se mísí přes noc při teplotě místnosti, potom se zpracuje 10% vodným roztokem NH₄C1. Tato směs se extrahuje CH2CI2. Separovaná organická vrstva se suší, přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH2CI2/CH3OH 97/3). Požadované frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 1,6 g meziproduktu· 17 (80%).

Příklad Al.r

Příprava meziproduktu 18

OH

Meziprodukt 7 (připravený podle příkladu Al.g) (0,03 mol) se rozpustí v CH₃CN (200 ml) a přidá se K₂C0₃ (0,27 ml).

Přidá se oxiranmethanol (0,27 mol) a reakční směs se mísí přes víkend při teplotě 60 °C. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se rozdělí mezi vodu a CH2CI2. Organická vrstva se separuje, suší se (Na₂SO4) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří ze redukovaného tlaku. Zbytek se přečistí· preparativní HPLC ((1) eluens: CH₂C1₂/(CH₃OH/NH₃) 95/5, potom (2) eluens: CH₂C1₂/CH₃OH 90/10). Frakce s. produktem se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 7,5 g (61%) čistého meziproduktu 18 a 3,5 g směsi výchozích materiálů/cílové sloučeniny (1/1).

Příklad Al.s • · • · · · • · · « ·

Příprava meziproduktu 19

• ·

Meziprodukt 18 (připravený podle příkladu Al.r) (0,0012 mol) se rozpustí v CH₂C1₂ (20 ml). Přidá se roztok sodné soli kyseliny jodisté (0,0024 mol) v NaHCO₃/H₂0 (q.s.) a získaná reakční směs se důkladně mísí po dobu 2 hodin. Směs se rozdělí mezi vodu a CH₂C1₂. Separovaná organická vrstva se promyje solankou, suší se (Na₂SO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Výtěžek: 0,430 g meziproduktu 19 (kvantitativní výtěžek: použije se v následujícím reakčním stupni bez dalšího přečištění).

Příklad A2. a

Příprava meziproduktu 20

Reakce probíhá v atmosféře N₂. Roztok 2,2,2-trifluor-N(2-formylfenyl)-acetamidu (0,1869 mol) v DMF (375 ml) se přidá po kapkách do NaH (0,2055 mol) v DMF (375 ml). Směs se mísí po dobu 30 minut při teplotě místnosti. Po kapkách se přidá roztok methylesteru kyseliny 4-brom-3-butenové (0,2803 mol) v DMF (200 ml). Potom se přidá 18-crown-6 (katalytické množství). Získaná reakční směs se mísí po dobu 2 hodin při teplotě 60 °C a potom přes noc při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se promyje vodou a extrahuje se CH₂C1₂. Separovaná organická vrstva se suší (Na₂SO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH₂Cl2/hexan 90/10, 100/0 a s CH₂Cl2/2-propanonem 96/4, 90/10 a 80/20). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 44,37 g meziproduktu 20 (75%, použije se v následujícím reakčním stupni bez dalšího přečištění).

Příklad A2.b

Příprava meziproduktu 21

Hydroxylamin (0,169 mol) a pyridin (0,211 mol) se přidají do roztoku meziproduktu 20 (připraveného podle příkladu A2.a) (0,1407 mol) v ethanolu (450 ml) a získaná reakční směs se mísí po dobu 3 hodin při teplotě místnosti. Směs se promyje 10% roztokem kyseliny citrónové a potom se extrahuje CH2CI2. Separovaná organická vrstva se suší (Na₂SO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek:

45,76 g meziproduktu 21 (98%, použije se v následujícím

(0,0658 mol) a N-chlor-4-methyl-benzensulfonamidu, sodné soli (0,0658 mol) v ethanolu (500 ml) se mísí a zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 2 hodin. Směs se zahustí ve vakuu, přefiltruje se přes dikalit a filtrát se promyje vodou a solankou a potom se extrahuje CH₂C1₂. Separovaná organická vrs'tva se suší (Na₂SO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se Odpaří. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií na silikagelové koloně (eluens:

CH₂Cl₂/2-propanon 100/0, 96/4, 90/10 a 80/20). Požadované frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek (sirup) se krystalizuje z hexanu, potom se promyje DIPE a suší se..

Výtěžek: 12,32 g meziproduktu 22 (57%).

Příklad A2.d • · ·

Příprava meziproduktu 23

Ν-Ο

•OH

Η

NaBH₄ (0,0289· mol) se přidá po částech do směsi meziproduktu 22 (připraveného podle příkladu A2.c) (0,0116 mol) v THF (81 ml) a H₂0 (6,8 ml), směs se mísí a ochladí se v ledové lázni. Získaná reakční směs se mísí přes noc při teplotě místnosti. Směs se zpracuje nasyceným vodným roztokem NH₄C1 a potom se extrahuje EtOAc. Separovaná organická vrstva se suší (Na₂SO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se promyje CH₂C1₂ a potom se rekrystalituje z EtOAc. Sraženina se odfiltruje a suší se. Výtěžek: 0,9 g meziproduktu 23 (38%).

Příklad A2.e •Cl

Příprava meziproduktu 24 ||

Směs meziproduktu 23 (připraveného podle příkladu A2.d) (0,001468 mol) a trifenylfosfinu (0,001909 mol) tetrachlormethanu (30 ml) a THF (20 ml) se mísí a zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 3 hodin. Rozpouštědlo se odpaří do sucha. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH₂Cl₂/hexan 90/10, potom 100/0). Požadovaná frakce se odebere a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se rekrystalizuje z methanolu. Sraženina se odfiltruje a suší se. Výtěžek: 2,6 g meziproduktu 24 (79%).

Příklad A3.a .

Příprava meziproduktu 25

1,1-dimethylethyl-l-piperazinkarboxylát (0,02 mol) se přidá po částech do roztoku 1,4-dichlor-2-butenu (0,025 mol) • ·

• · · « · · « · · t · · • ··· · · · · • · » · · · ·· · · · · · · v CHCI3 (60 ml). Reakční směs se mísí po dobu 24 hodin při teplotě místnosti, potom se mísí a zahřívá při teplotě zpětného toku po odbu 24 hodin. Reakce se utlumí nasyceným vodným roztokem NaHCO₃, suší se (Na₂SO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo .se odpaří. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH₂Cl₂/EtOAc) ., Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 2,2 g meziproduktu 25 (40%).

Příklad A3.b

Reakce se provede pod proudem N₂. Směs NaH, 60% (0,0579 mol) a 18-crown-6 (katalytické množství) v THF (25 ml) se ochladí. Po částech se' přidá směs 2-amino-4,5dimethoxybenzaldehydu (0,0579 mol) v THF (50 ml). Reakční směs se mísí při teplotě místnosti po dobu 30 min. Po částech se přidá směs meziproduktu 25 (připraveného podle příkladu A3.a) (0,0386 mol) v THF (50 ml). Směs se mísí při teplotě místnosti po dobu 3 dnů a. potom se zpracuje NH₄C1 (10%). Směs se extrahuje CH₂C1₂. Organická vrstva se separuje, suší se, přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří do sucha. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem (eluens: ΟΗ₂Ο1₂/ΟΗ₃ΟΗ 99/1 a 98/2). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 5,5 g meziproduktu 26 (23%).

4·

4 (připraveného podle příkladu A2.b) (0,02'mol) v THF (80 ml) a 18-crown-6 (katalytické množství) se po částech přidá do směsi NaH, 60% (0,03 mol), v THF (20 ml). Směs se mísí při teplotě místnosti po dobu 20 min. Po částech se přidá anhydrid kyseliny trifluoroctové (0,022 mol). Směs se mísí při teplotě místnosti po dobu 3 hodin, zpracuje se roztokem NH₄C1 (20%) a potom se extrahuje CH2CI2 a rozpouštědlo se odpaří do sucha. Zbytek se přečistí chromatografií s krátkou silikagelovou kolonou (CH₂C1₂/CH₃OH 99/1 a 98/2). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 5,3 g meziproduktu 27 (58%).

Příklad A3.d

Směs meziproduktu 27 (připraveného podle příkladu A3.c) (0,0115 mol), hydroxylaminu (0,0126 mol) a NaHCO₃ (0,023 mol) v absolutním ethanoíu (60 ml) se mísí při teplotě místnosti po dobu 24 hodin, odfiltruje se a rozpouštědlo se odpaří do sucha. Výtěžek: 5,8 g meziproduktu 28 (95%).

Příklad A3.e

Příprava meziproduktu 29

l-chlor-2,5-pyrrolidindien (0,0272 mol) se přidá po částech do roztoku meziproduktu 28 (připraveného podle příkladu A3.d) (0,0109 mol) v CH₂C1₂ (100 ml). Směs se mísí při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. Et₃N (0,0272 mol) se přidá po kapkách. Směs se mísí při teplotě místnosti přes noc, reakce se utlumí 10% roztokem K₂C0₃, potom se extrahuje a rozpouštědlo se odpaří do sucha. Výtěžek: meziprodukt 29.

Příklad A3.f

Příprava meziproduktu 30

Směs meziproduktu 29 (připraveného podle příkladu A3.e) (0,0109 mol) a LiOH (0,0119 mol) v H₂0 (17,5 ml) a 1,4dioxanu (70 ml) se mísí při teplotě místnosti po dobu 3 hodin. Směs se zpracuje roztokem NaOH (2N) a potom se extrahuje CH2CI2. Rozpouštědlo se odpaří do sucha. Zbytek se přečistí chromatografií s krátkým sloupcem (eluens: CH2CI2/CH3OH 98/2). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 2,07 g meziproduktu 30. (45%).

Příklad A3.g

Příprava meziproduktu 31

Kyselina trifluoroctová (7,9 ml) se přidá po kapkách do roztoku meziproduktu 30 (0,0047 mol) v CH₂C1₂ (33 ml). Směs se mísí při teplotě místnosti po dobu 3 hodin, ochladí se a alkalizuje se 50% roztokem NaOH. Směs se extrahuje a rozpouštědlo se odpaří do sucha. Výtěžek: 1,6 g sloučeniny (100%).

Příklad A4.a

Příprava meziproduktu 32

E

1,4-dichlor-2-buten· (0,03 mol) se přidá do směsi l-(2naftylmethyl)piperazinu (0,025 mol) a NaHCO₃ (0,025 mol) v « ··

CH₂C1₂ (75 ml). Reakční směs se mísí po dobu 24 hodin při teplotě místnosti. Pevný materiál, se odfiltruje, promyje se dalším CH₂C1₂ a organický roztok se promyje 10% roztokem Na₂CO₃, suší se (Na₂SO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH₂Cl₂/EtOAc/2propanon). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 3,4 g meziproduktu 32 (43%).

Příklad A4.b

Příprava meziproduktu 33

Roztok NS (0,0546 mol) a terč.butylaminu (0,0983 mol) v toluenu (75 ml) se mísí a zahřívá při teplotě .zpětného toku po dobu 24 hodin za použití Dean-Stark wvodního separačního přístroje. Rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se přečistí by destilací (bp při 0,5 mm Hg: 75 °C) . Výtěžek: 8,1 g · meziproduktu 33 (72%).

Příklad A4.c

Příprava meziproduktu 34

Reakce probíhá v atmosféře N₂. n-BuLi (0,014 mol) se přidá po kapkách do roztoku meziproduktu 33 (připraveného podle příkladu A4.a) (0,0125 mol) a 2,2,6,6tetramethylpiperidinu (0,0012 mol) v suchém THF (25 ml) a směs se mísí při teplotě -78 °C. Směs se mísí po dobu 3 hodin při teplotě -10 °C. Roztok meziproduktu 32 (připraveného podle příkladu A4.b) (0,0083 mol) v suchém THF (25 ml) se přidá po částech při -10 °C. Reakční směs se mísí po dobu 24 hodin při teplotě místnosti, potom se reakce utlumí NH4CI (10%) a organická vrstva se separuje. Vodná ·· «·· · vrstva se extrahuje CH₂C1₂. Kombinované organické vrstvy se suší (Na₂SO₄) , přefiltrují se a rozpouštědlo se odpaří.

Výtěžek: 5,6 g meziproduktu 34 (100%) ··· «· • · · · • · · · • · · ··· • · · • · · ♦ · * · • · · · ·· ·♦

Příklad A4 . d

Příprava meziproduktu 35

NaHCO₃ (0,015 mol) a hydroxylamin (0,0125 mol) se přidají do roztoku meziproduktu 34 (připraveného podle příkladu A4.c) (0,0083 mol) v absolutním ethanolu (50 ml). Reakční směs se mísí po dobu 24 hodin při teplotě místnosti. Přidá se CH₂C1₂ a pevný materiál se odfiltruje a promyje se CH₂C1₂. Rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se odebere do CH₂C1₂ a promyje se 10% Na₂CO₃ a solankou. Organická vrstva se separuje, suší se (Na₂SO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH₂Cl₂/EtOAc/2propanon). Požadované frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 0,9 g meziproduktu 35 (24%).

Příklad A5.a o

	^lií-⁰ II Ί T	\| y O(t-butyl)
Příprava sloučeniny 36	O (j

Směs A (0,029 mol) a meziproduktu 5 (připraveného podle příkladu Al.e) (0,0058 mol) v 1,4-dioxanu (5 ml).se mísí po dobu 6 hodin při 100 °C. Rozpouštědlo se.odpaří. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH₂C1₂/CH₃OH 98/2 - 97/3). Frakce obsahující' produkt se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 3,3 g meziproduktu 36.

Příklad A5.b • « • 111

Příprava sloučeniny 37

Kyselina trifluoroctové (11,7 ml) se přidá po kapkách do roztoku meziproduktu 36 (připraveného podle příkladu A5.f) (0,0071 mol) v CHC1₃ (50 ml) a získaná reakční směs se mísí po dobu 3 hodin-při ± 10 °C. Reakční směs se ochladí, potom se dále alkalizuje 50% NaOH. Tato směs se extrahuje a rozpouštědlo extraktu se odpaří. Výtěžek: 2,5 g meziproduktu 37 (kvantitativní výtěžek; použije se v následujícím reakčním stupni bez dalšího přečištění).

B. Příprava konečných sloučenin

Příklad Bl.a

Příprava sloučeniny 1

Směs meziproduktu 5 (připraveného podle příkladu Al.e) (0,0291 mol) a 1-(3-fenyl-2-propenyl)-piperazinu (0,0582 mol) se zahřívá po dobu 2 hodin při 100 °C. Surová reakční směs se promyje vodou a extrahuje se CH2CI2. Separovaná organická vrstva se suší (Na₂SO₄) ,' přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH₂C1₂/CH₃OH 95/5) a HPLC přes silikagel (eluens: CH₂C1₂/CH₃OH 80/20). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Tato frakce se separuje na své optické enantiomery chromatografií na chirální koloně přes Chiralpak AD (eluens: C₂H5OH/CH₃CN 90/10). (B)-enantiomerické frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se rozpustí v methanolu a přemění se na sůl kyseliny chlorovodíkové (1:2). Sraženina se odfiltruje a.suší se. Výtěžek: 2,47 g sloučeniny 1.

Příklad Bl,.b • AAA • AA AA AA A«

AAA AAAA AA aaaa aaaa a · · • · aaa a aaa aaa a • AA AA A AAAA

AAA A· ·· A· ·· ··

Příprava sloučenina 2

Směs meziproduktu 5 (připraveného podle příkladu Al.e) (0,0044 mol) a (3-fenyl-2-propenyl)-piperazinu· (0,0087 mol) se mísí po dobu 2 hodin při 100 °C. Reakční směs se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH2CI2/CH3OH 95/5), potom vysoce výkonou kapalinovou chromatografií přes silikagel (eluens: CH2CI2/CH3OH 96/4). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek (1,4 g) se zpracuje diethyletherem a potom se suší. Výtěžek:

1,2 g sloučeniny 2 (60%).

Příklad Bl.c

Příprava sloučeniny 3

Směs meziproduktu 6 (0,00227 mol), (E) 1-(2-methyl-3fenyl-2-propenyl)piperazinu (0,00273 mol) a NaHCO₃ (0,00455 mol) v dioxanu (30 ml) se mísí a zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 48 hodin. Rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se rozpustí v CH2CI2. Organický roztok se promyje vodou, suší se (MgSO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH₂C1₂/(CH3OH/NH3) 99/1), potom HPLC (eluens: CH₂C1₂/CH₃OH 99,5/0,5 až 98/2). Požadované frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 0,17 g sloučeniny 3.

Příklad Bl.d

Příprava sloučeniny 4

O-

’N'

B-CIS *· 9 99 9

Směs meziproduktu 8 (připraveného podle příkladu Al.h) (0,0058 mol) a • 0* ·· 99

9 9 9 9 9

00· 0 «0 * • 0 0·0 0 0*0

0 0 0 0 0 ··· «0 0« ··

(Ο,ΟΊΙβ mol) v dioxanu (10 ml) se mísí a zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 8 hodin, potom se mísí přes noc při teplotě místnosti, potom se mísí a zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 18 hodin. Směs se zpracuje H₂0 a extrahuje se CH₂C1₂. Rozpouštědlo separované organické vrstvy se odpaří. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem (eluens : CH₂Cl₂/MeOH 97/3). Požadované frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se zpracuje diethyletherem a potom se suší. Výtěžek: 0,9 g sloučeniny 4 (33%) .

Příklad Bl.e

Příprava sloučenina 5

Směs meziproduktu 10 (0,0029 mol) , yy (připraveného podle příkladu Al.i) (0,0058 mol),

AcOH (0,48 g) a (AcO)₃BHNa (0,4 g) v 1,2-dichlorethanu (20 ml) se mísí a zahřívá při teplotě zpětného toku přes noc. Směs se zpracuje H₂0 a extrahuje se. Rozpouštědlo separované organické vrstvy se odpaří. Zbytek se přečistí chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH₂Cl₂/MeOH 97/3). Požadované frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se zpracuje diethyletherem a potom se suší. Výtěžek: 1,07 g sloučeniny 5 (82%).

Příklad Bl.f • «

Příprava sloučeniny 6 • 99

9

9 9 »

9 9

99 99

9 9 9 9 9 * 9 9 9 9

9 999 9 9 « « · · · 9

99 99

Směs sloučeniny 3 (připravené podle příkladu Bl) (0,00020 mol), acetylchloridu (0,00024 mol) a Et₃N (0,00061 mol) v chloroformu (10 ml) se mísí při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. Přidá se voda a tato směs se extrahuje CH₂C1₂. Separovaná organická vrstva se suší (MgSO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se přečistí CC-TLC na Chromatotron (eluens: CH₂C1₂/CH₃OH 97/3; potom 99/1). Požadované frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 0,022 g sloučeniny 6.

Příklad Bl.g

Příprava sloučeniny 7

Příprava sloučenina 8

Sloučenina 2 (připravená podle příkladu Bl.b) (0., 0022 mol) se separuje a přečistí se na své optické enantíomery chromatografií na chirální koloně přes Chiralpak AD (eluens: C2H5OH/CH3CN 90/10). Odeberou se dvě skupiny frakcí a jejich rozpouštědla se odpaří. Výtěžek: ± 1,5 g frakce 1 (LCI čistoat: > 99,5%) a ± 1,5 g frakce 2 (LCI čistota: >99,5%). Frakce 1 se krystalizuje zpracováním s hexanem a míšením přes noc. Sraženina se odfiltruje a suší se. Výtěžek: 1,08 g sloučeniny 7 (mazlavá pevná látka). Frakce 2 se krystalizuje reakcí s E.tOAc a míšením přes noc. Sraženina se odfiltruje a suší se. Výtěžek: 0,54 g sloučeniny 8 (mazlavá pevná látka).

Příklad B2.a ** » » · · · • 0 ·

Příprava sloučeniny ý · · 0 » • « · » 0·0 0 · · · · ·

Směs meziproduktu 24 (připraveného podle příkladu A2.e) (0,0022 mol), 1-(2-naftalenylmethyl)-piperazinu, (0,0044 mol) a KI (katalytického množství) v 1,4-dioxanu (2,5 ml) se mísí a zahřívá při teplotě zpětného toku přes noc. Reakční směs se promyje vodou a tato směs se extrahuje CH₂C1₂. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH₂C1₂/CH₃OH 98/2), potom HPLC (eluens: CH₂C1₂/(CH3OH/NH3) 96/4). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se zpracuje DIPE, přefiltruje se a suší se. Výtěžek: 0,3 g sloučeniny 9 (30%).

Příklad B2.b

Příprava sloučeriiny 10

Reakce probíhá v atmosféře N₂. Roztok sloučeniny 9 (připravené podle příkladu B2.a) (0,0012 mol) v suchém THF (3 ml) a 18-crown-6 (katalytické množství) se pomalu přidá do roztoku of NaH, 60% (0,0018 mol) v suchém THF (2 ml). Reakční směs se mísí po dobu 30 min při teplotě místnosti. Acetylchlorid (0,0013 mol) se přidá po kapkách a reakční směs se mísí po dobu 3 hodin při teplotě místnosti.

Reakční směs se zpracuje vodným roztokem NH₄C1 a extrahuje se CH₂C1₂. Separovaná organická vrstva se suší, přefiltruje se .a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií á krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH₂C1₂/CH₃OH 98/2) a potom HPLC (eluens: CH₂C1₂/(CH3OH/NH3) 98/2). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 0,26 g sloučeniny 10 (52%).

0000

0 0 • · 0 • 0 0* • · 0 » · · 0 »0

00«

000 000 * 0 0 0 0 0

00 00

Příklad B3.a

Příprava sloučeniny 11

Směs meziproduktu 31 (připraveného podle příkladu A3.g) (0,0045 mol), (E)-(3-chlor-2-methyl-l-propenyl)-benzenu (0,0037 mol) a K2CO3 (0,0037 mol) v DMF (15 ml) se mísí při teplotě 7 0°C po dobu 2 hodin. Směs se promyje vodou a potom se extrahuje CH2CI2. Organická vrstva se separuje, suší se, přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se přečistí chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH2CI2/CH3OH 98/2). Požadovaná frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se znovu přečistí HPLC (eluens: CH₂C1₂/(CH3OH/NH3) 98/2). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se zpracuje DIPE. Sraženina se odfiltruje a suší se. Výtěžek: 0,34 g sloučeniny 11 (20%) .

Příklad B3. b

Příprava sloučeniny 12

Příprava sloučeniny 13

Sloučenina 11 (připravená podle příkladu B3 . a) (0,00605 mol) se přečistí vysoce výkonnou kapalinovou chromatografií přes Chiralcel OJ (eluens: hexan/MeOH/EtOH.20/24/56). Požadované frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek frakce A a B. Frakce A se přečistí vysoce výkonou kapalinovou chromatografií přes RP BDS C18 (eluens: (0,5% • · • · · • 4 4 4 · 44444

NH₄OAc v H₂0/CH₃CN (90/10) )/MeOH 70/30). Čisté frakce se odeberou a. organické rozpouštědlo se odpaří. Vodná vrstva se se extrahuje CH2CI2. Separovaná organická vrstva se suší (MgSO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se mísí v hexanu a sraženina se odfiltruje. Výtěžek: 0,69 g sloučeniny 12. Frakce B se přečistí by vysoce výkonou kapalinovou chromatografií přes RP BDS C18 (eluens: (0,5% NH₄OAc v H₂0/CH₃CN (90/10))/MeOH 70/30). Čisté frakce se odeberou a organické rozpouštědlo se odpaří. Vodná vrstva se extrahuje CH₂C1₂·. Separovaná organická vrstva se suší (MgSO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se mísí v hexanu a sraženina se odfiltruje. Výtěžek: 0,67 g sloučeniny 13.

Příklad 4

Příprava sloučeniny 14

X⁰'

Reakce se provede na pevné fázi za použití Quest 210 syntezátoru (Argonaut Technologies, San Carlos, USA). N,Ndiisopropylethylamin (0,0036 mol) se přidá do suspenze

(0,0006 mol) v acetonitrilu (4 ml).

Přidá se 1-(2-chlorfenylmethyl)piperazin (0,0012 mol) a získaná reakční směs se mísí po dobu 20 hodin při teplotě 80 °C. Potom se každá reakční nádoba přefiltruje a filtrát se odpaří. Zbytek se přečistí HPLC. Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 0,102 g'sloučeniny 14.

Příklad B5.a

Příprava sloučeniny 15 • 4 ·

4 4·· • ·

Směs meziproduktu 7 (připraveného podle příkladu Al.g) (0,0036 mol), 2-(brommethyl)naftalenu (0,0055 mol) a K₂C0₃(0,0055 mol) v MIK (15 ml) se mísí po dobu ± 24 hodin při 100 °C. Surová reakční směs se promyje vodou a potom se extrahuje CH₂C1₂. Separovaná organická vrstva se suší (Na₂SO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se přečistí vysoce výkonnou kapalinovou chromatografií přes silikagel (2x) ((I) eluens: CH₂C1₂/CH₃OH 95/5; (II) eluens:

CH₂C1₂/(CH₃OH/NH₃) 98/2). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 0,2 g sloučeniny 15 (11%).

Příklad B5.b

Příprava sloučeniny 16

Příprava sloučeniny 17

Sloučenina 15 (připraveného podle příkladu B5.a) (0,0106 mol) se separuje na své enantiomery na chromatografické koloně (eluens: hexan/C₂H₅OH, gradient 30/70 až 0/100; kolona: CHIRALPAK AD 1000 A 20 μιη DIACEL) . Dvě čisté frakce se odeberou a jejich rozpouštědla se odpaří. Zbytek se rozpustí v CH₃OH a přemění se na sůl kyseliny chlorovodíkově (1:2). Sraženina se odfiltruje a suší se. Výtěžek: 2,08g sloučeniny 16 (36%) a 2,19 g sloučeniny 17 (38%).

Příklad B6 • · ·

Příprava sloučeniny 18 • ·

• ·

Směs meziproduktu 7 (připraveného podle příkladu Al.g) (0,0045 mol), 2-methyl-3-(3-thienyl)-2-propenalu (0,00675 mol), NaBN(OAc)₃ (0,00675 mol) a HOAc (2 kapky) v 1,2dichloroethanu (30 ml) se mísí přes noc při teplotě místnosti. Přidá se nasycený vodný roztok NH₄C1 a tato směs se extrahuje CH₂Cl2. Separovaná organická vrstva se suší (MgSO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří ve'vakuu. Zbytek se přečistí rychlou chromatografií na silikagelové koloně (eluens: CH₂C1₂/(CH3OH/NH3) 97/3) , potom HPLC (eluens: CH₂C1₂/ (CH₃OH/NH₃) 99/1 až 98/2). Frakce obsahující produkt se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 0,965 g sloučeniny 18 (46%; obsahující též 3% (Z) izomeru!)·

Příklad B7

Příprava sloučeniny 19

Směs meziproduktu 10 (připraveného podle příkladu Al.j) (0,003 mol), 4-chlorbenzaidehydu (0,0045 mol) a (AcO)₃BHNa (0,0045 mol) v 1,2-dichlorethanu (30 ml) se mísí a zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Přidá se nasycený vodný roztok NH₄C1 a směs se extrahuje CH₂C1₂. Separovaná organická vrstva se suší (MgSO₄) , přefiltruje sé a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH₂C1₂/(MeOH/NH₃) 97/3). Požadovaná frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se vysráží z DIPE. Výtěžek: 1,180 g sloučeniny 19 (57%) .

Příklad B8 • 4 • ·

Příprava sloučenina 20

2-methylbenzaldehydu (0,00108 mol) a NaOCH₃, 30%, v CH₃OH (0,0.0108 mol) v suchém CH₃OH (8 ml) se mísí po dobu. 16 hodin při 65 °C (reakce se provede na pevné fázi za použití Quest 210 syntezátoru (Argonaut Technologies, San Carlos, USA)). Směs se přefiltruje a filtrát se přečistí HPLC (eluens: CH2CI2/ (CH3OH/NH3) 98/2). Požadované frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří.. Výtěžek: 0,032 g sloučeniny 20.

Příklad B9

Příprava sloučeniny 21

cis

Reakce probíhá v atmosféře N₂. Roztok LiAlH₄, 1 M/THF (0,8 ml),, se mísí při -20 °C. A1C1₃ (0,0009 mol) se přidá, v jednom podílu. Získaný roztok se mísí po dobu 10 minut při -20 °C. Roztok meziproduktu 12 (připraveného podle příkladu Al.l) (0,0008 mol) v suchém THF (5 ml) se přidá po kapkách a získaná reakční směs se mísí po dobu 1 hodiny při -20 °C. Potom se opatrně přidá, nasycený vodný roztok NH₄C1. Reakční směs se promyje vodou a potom se extrahuje CH₂C1₂. Separovaná organická vrstva se suší (Na₂SO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se'odpaří. Zbytek se zpracuje etherem. Zbytek (0,13 g) se přečistí na CC-TLC Chromatotron (eluens:

frakce se odeberou a rozpouštědlo g sloučeniny 21 (30%).

• ·· ·

CH₂C1₂/CH₃OH 97/3) . Čisté se odpaří.. Výtěžek: 0,09

Příklad BIO

Příprava sloučeniny 22

Reakce probíhá pod proudem Ň₂. Směs meziproduktu 13 (připraveného podle příkladu Al.m) (0,001 mol) v suchém CH₃OH (20 ml) se mísí při teplotě místnosti. Přidá se 30% NaOCH₃ v CH₃OH (0,002 mol). Přidá se 5-indankarboxaldehyd (0,002 mol) a získaná reakční směs se mísí a zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 16 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na teplotu místnosti. Přidá se 20% NH₄C1 a tato směs se extrahuje CH₂C1₂. Separovaná organická vrstva se promyje vodou, solankou, suší se (Na₂SO₄), přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří ze redukovaného tlaku. Zbytek se přečistí chromatografií s krátkým sloupcem a CC-TLC (eluens: CH₂C1₂/CH₃OH 98/2). Frakce obsahující produkt se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 0,035 g sloučeniny 22 (7,2%, světle hnědý pevný materiál).

Příklad Bil

Příprava sloučeniny 23

Směs meziproduktu 15 (připraveného podle příkladu Al.o) (0,00136 mol), 2-(trimethylstannyl)pyridinu (0,0027 mol) a Pd(PPh₃)₄ (0,00013 mol) v toluenu (20 ml) se zahřívá při 100 °C. Reakční směs se mísí po dobu 16 hodin a nechá se vychladnout na teplotu místnosti. Přidá se H₂O a směs se extrahuje CH₂CÍ₂. Separovaná organická vrstva se odebere, promyje se H₂0 a solankou, suší se (Na₂SO₄) a rozpouštědlo se • · ·

·. · odpaří ze redukovaného tlaku. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH₂Cl₂/MeOH 98/2). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Získaný zbytek se přečistí CC-TLC na Chromatotron (eluens: CH₂Cl₂/MeOH 98/2). Čisté frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 0,044 g sloučeniny 23 (světle hnědý pevný materiál, 7%).

Příklad B12

Příprava sloučeniny 24

Reakce probíhá v atmosféře N₂. n-BuLi, 2,5 M/hexany (0,0062 mol) se přidá po kapkách do míšeného roztok (pfluorbenzy.l) trif enylf osfoniumchloridu (0,0062 mol) v THF (20 ml). Směs se mísí po dobu 15 min. Roztok meziproduktu 11 (připraveného podle příkladu Al.k) (0,00514 mol) v THF (20 ml) se přidá po kapkách. Reakční směs se mísí po dobu 16 hodin při 50 °C. Přidá se voda a tato směs se extrahuje Et₂O. Separovaná organická vrstva se suší (MgSOU , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH₂C1₂/CH₃OH 97/3), potom HPLC (eluens:

CH₂C1₂/(CH3OH/NH3) 99/1) pro separaci (E)/(Z) izomeru. Dvě skupiny frakcí obsahujících produkt se odeberou a jejich rozpouštědla se.odpaří. Výtěžek: 0,651 g sloučeniny 24 (26%, (E) ) .

Příklad B13

Příprava sloučeniny 25

Pryskyřice

Br(0,0016 mol; 1,5 mmol/g) se • · · • · ·

Suspenduje v THF. Přidá se 1,6 M BuLi (0,0015 mol) a směs se mísí po'dobu 15 min. Směs se přefiltruje a zbytek na filtru (pryskyřici) se promyje bezvodým THF (3 x). Pryskyřice se suspenduje v THF (5 ml). Přidá se meziprodukt 19 (připravený podle příkladu Al.s) (0,0004 mol) a reakční směs se mísí přes’ noc při 100 °C. Směs se ochladí, přefiltruje se a filtrát se odpaří ve.vakuu. Zbytek se přečistí preparativní HPLC (eluens: CH2CI2/(CH3OH/NH3) 97/3). Frakce obsahující produkt se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 0,168 g sloučeniny 25.

Příklad B 14

Příprava sloučeniny 26

Směs meziproduktu 16 (připraveného podle příkladu Al.p) (0,0025 mol), benzenaminu (0,0028 mol) a NaBH₄ (0,0028 mol) v HOAc (50 ml) se mísí po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Přidá se vodný roztok NH₄OH. Tato směs se extrahuje CH₂C1₂. Separovaná organická vrstva se suší (MgSO₄) , přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH₂C1₂/(CH3OH/NH3) 99/1), potom rychlou chromatografií přes silikagel (eluens: CH₂C1₂/(CH3OH/NH3) 98/2). Frakce obsahující produkt se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 0,181 g sloučeniny 26 (15%).

Příklad B15

Příprava sloučeniny 27 • · • ♦ • · · • · ·

(0,0018 mol) se přidá po kapkách do roztoku meziproduktu 17 (připraveného podle příkladu Al.q) (0,0012 mol), 3-fluorfenolu (0,0018 mol) a PPh₃, pol. (0, 0024 mol) v suchém THF (10 ml), v atmosféře N₂. Reakční směs se mísí přes noc při teplotě místnosti. Směs se přefiltruje, promyje se CH₂C1₂ a CH₃OH a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH₂Cl₂/EtOAc 2/1 a CH₂C1₂/CH₃OH 96/4), potom rychlou chromatografií přes silikagel (eluens.: CH₂C1₂/CH₃OH 97/3). Frakce obsahující produkt se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek: 0,29 g sloučeniny 27 (50%).

Příklad B16

Příprava sloučeniny 28

NaClO (4%) (0,005 mol) se přidá do roztoku meziproduktu (připraveného podle příkladu A4.d) (0,002 mol) v CH₂C1₂ (10 ml). Reakční směs se mísí po dobu 4 hodin při teplotě místnosti. Přidá se Et₃N (0,004 mol) a reakční směs se mísí po dobu 24 hodin při teplotě místnosti. Organická vrstva se separuje, promyje se Na₂SO₃ (10%), suší se (Na₂SO₄) , . přefiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: EtOAc a CH₂C1₂/CH₃OH 95/5). Požadované frakce se odeberou a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se odebere do diethyletheru, potom se přefiltruje přes dikalit a filtrát se odpaří. Zbytek se rozpustí v diethyletheru a přemění se na sůl kyseliny chlorovodíkové (1:2). Sraženina se odfiltruje, promyje se 2-propanonem a diethyletherem a suší se. Výtěžek: 0,15 g sloučeniny 28 (15%).

·»·*

9 9 • 9 99

Příklad B17

Příprava sloučeniny 29

Směs meziproduktu 37 (připraveného podle příkladu A5.g) (0,006 mol) a 2-(brommethyl)naftalenu (0,003 mol) v dioxanu (40 ml) se misí při 100 °C po dobu 6 hodin, potom přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se zpracuje 10% vodným roztokem K₂C0₃ a potom se extrahuje CH₂C1₂. Separovaná organická vrstva se odpaří. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií s krátkým sloupcem silikagelu (eluens: CH₂C1₂/CH₃OH 95/5 a 90/10 a CH₂C1₂/(CH₃OH/NH₃) 95/5). Frakce obsahující. produkt se odeberou a rozpouštědlo se odpaří . Zbytek (1,49 g) se zpracuje diethyletherem a potom se suší. Výtěžek: 0,8 g sloučeniny 29 (53%).

V následujících tabulkách (tabulky 1-5) je uvedeno mnoho sloučenin, které byly připraveny podle výše uvedených příkladů. Všechny sloučeniny byly také testovány.na svou farmakologickou aktivitu.

• ·* ·

Tabulka 1

Slouč.

nr.

285

Př. č.

Bla/Blb

B4

B7

B4

R⁸ a b c d

H

R³

H

H ·· · • · ► · · · ·« ♦♦

Fyzik, data a stereochemické usp.

CF,

•Cl

Cl

Br

cis cis (B-cis)

B-cis ' · ' '·’· · 0 0 0'0· '·’ • 0 0

0 0 • 00 · • 0 · 0 • · 0· • ··« ♦·· · « · · · · · ·*· « · · · · * • 00 ·· ·* ** '—<c’O -—

X

φφφ · φ φ · • ·Μ Φ · ♦ * • Φ Φ Φ · · ··*

Φ Φ · Φ Φ Φ

ΦΦΦ ΦΦ Φ· ♦ ·

Φ Φ φ Φ

Φ Φ

Φ Φ ··♦·

• · · ·-'

φ • φ >»» /Λ-< ~ /Ί-1 φ φ φ φ φφφ

ΦΦ φφ

'•'·’·4'4'·'· ·’··'· • > ♦ 4··· 4 4 ·

444 4 4 4 4 4 4 ♦

4 4 4 4 4 444 4 4 · · • 44 44 4 4444

444 44 44 44 ·· ·· ”>«-··· 65

> Φ • ΦΦ ··

ΦΦΦ Φ 4 φφ ·'··»' ·> · · * φ · φ φ · · • · » · ·« φφ

• *0 '· 0

0

69• ·· 00 · • ··· • · ·

0 0 ··· »* • e·' ··>»·· • · · · • · · · • · ··· ·

0*

0'0' >0 '0·'

·· ·· ·· ·· ···· • ······ · • · · · · · · ·· · • ··· ······ · · ·· ·· · ···· ·· β · ·· ·· ··

71• · * · · · · • · · · · · · • · · · · ······ · · • · · ·· · ···· • · · · · ·· · · · · ti

·· · · ·· ·· ···· • ······ · ··· ···· ·· φ • · · · · φφφ φφφ φ ····· · · ·· φφ φφ

73___σττυΎ

' 0 · ·'* ·······'·*·· · ·'··' «'··'· · ·*· · 0 « 4 · · « ••04 0 00 0 0 0 « •0 0·0 «·«··« » >

•»' · '· · · ···· • » · · « · • · · · · · • 999 9 9 9 9 • 9 9 · · 9

9 9 9 99 9 9

'77 • · · · ► · * 9 > · · · » · · · · » · 9 • · · ·

78.

♦ * · ·· · · · · ·«· · * · · ♦ · < · · · · • »♦ · · ·· · · · · ♦ · ♦ · · *····· · · 9 · · 9 · · · · · · ··· ·· ·· · · · · « ·

• · ·' ·'·«'·*

• · ·*· φφφ* φ « · ···♦ φφφ* · · · • · * * ♦ φφφφφφ Φ φ

9 9 ΦΦ φ ΦΦΦΦ • φ φ · · φ * φφ φφ φφ

999 ·· ·* ' «'«'♦· ·· 9 9 9 9 ♦ · 9 9 9 « « « 999 9f999« 9 9 • · «9 · «999 *· ·· ·9 «· «9

'·' ’♦· '·· AA......A » 'Ί·'·'··'' •« A A A * · A A A • ♦·· A A A · · · A

A A AAA AAAAAA A A

AAA AA A AAAA •AA AA AA AA aa AA

Tabulka 2A

Sloiič.	Př. č.	R¹	R²	R⁴	R⁶	Fyzik data
209	Bla/Blb	H	H	H		cis, E
263	Bla/Blb	H	H	H	c-COOMe	[3a(E),3a a]
254	Bla/Blb	H	F	ch₃		[3a(E),3a a]
232	Bif	H	OH	H		[3a(E),3a a]
237	Bif	H	OH	ch₃		[3a(E),3a a]
217	Bla/Blb	H	och₃	H		[3a(E),3a a]
229	Blg	H	och₃	H		[A-[3a(E),3a a]]; ,HC1(1:2)
230	Blg	H	. och₃	H		[B-[3a(E),3aa]];’ .HC1(1:2)
328	Blg	H	och₃	ch₃		[3a(E),3a a]
239	Bif	H	oc₂h,och₃	ch₃		[3a(E),3a a]
231	Bla/Blb	H	och₂oc₂h,och₃	H		[3a(E),3a a]
236	Bla/Blb	H	OCH₂OC₂HtOCH₃	ch₃		[3a(E),3a a]
	Bit	H	LKJ2.H4UC2.ti4U c₂h₄	UHT		a);. HCI(1:2)
238	Bif	H	O(C=O)NHC₂H₅	CH₃		[3a(E),3a a]
233	Bif	H	O(C=O)CH₃	H		[3a(E),3a a)
240	Bif	H	O(C=O)CH₃	ch₃		[3a(E),3a a]
248	Bif	H	O(C=O)C₂Hj	ch₃		[3a(E),3a a]
249	Bif	H	O(C=O)CH₂OCH₃	ch₃		[3a(E),3a a]
250	Bif	H	-Λι	ch₃		[3a(E),3a a]
329	Bif	H	OC(=O)C(CH₃)₃	ch₃		[3a(E),3a a]
251	Bif	H	-X*	ch₃		[3a(E),3a a]
243	Bif	H	θ-Ό	ch₃		[3a(E),3a a]

0· · · • · · ·

0 0 ·

0 0 000

0 0 ·· 00

0000 • 0 •

•00 • 0

000 • ♦ • 0

0 0

0 0 0*0 0

0 0 0

00 a

•	Slouč.	Př. č.	R¹	R²	R⁴	R⁶	Fyzik data
	330	Blf	H		CH₃		[3a(E),3a a]
-				M
	242	Blf	H	OC₂H,N(CH₃)₂	ch₃		[3a(E),3a a]
	260	Blf	H	oso₂h	ch₃		[3a(E),3a a]
	211	Bla/Blb	Cl	H	H		[3a(E),3a a]
	246	Bla/Blb	Cl	OCH₃	ch₃		[3a(E),3aa]
	212	Bla/Blb	Br	H	H		[3a(E),3aa]
	•214-	Blg	Br	H	H		[A-[3a(E),3a a]]
	215	Blg	Br	H	H		[B-[3a(E),3a aj)
	'235 ·	Bla/Blb	F	F	ch₃		[3a(E),3a a] · ·
	241 '	Blf	F	och₃	ch₃		[3a(E),3a a].,
	216	Blf	i feny'	H	H		[3a(E),3a a]
	219	Bla/Blb	ch₃	H	H		[3a(E),3aa]
	244	Blf	F	SCH₃	ch₃		[3a(E),3aa]
-	331	Blf	OH	OH	ch₃		[B-[3a(E),3a a] ]

	255	Blc	OH	och₃	ch₃		[3a(E),3a a]
	257	Blf	O(C=O)CH₃	OCHj	ch₃		[3a(E),3a a]
	332	Blf	0C₂H,OC(=O)	och₃	ch₃		[3a(E),3a a]
			-ch₃
	333	Blf	O(C=O)CH₃	OCH₃	ch₃		[B-[3a(E),3a a]]
	213	Bla/Blb	och₃	H	H		[3a(E),3a a]
	3	Blc	och₃	OH	ch₃		[3a(E),3a a]
	6	Blf	OCR,	O(C=O)CH₃	ch₃		(3a(E),3a a]
	334	Blf	.. och₃	O(C=O)CH₃	ch₃	b-F	[B-[3a(E),3a a]]
	335	Blf	och₃	O(C=O)CH₃	ch₃	c-F	[B-[3a(E),3a a]]
	336	Blf	och₃	O(C=O)CH₃	H	c-F	[B-[3a(E),3a a])
	337	Blf	och₃	^0^<\|	ch₃	c-F	[B-[3a(E),3a a)]

*0 *· ·♦ • · · * · ♦ ♦ • 000 · · 0 · 0 0 0

0· * 0 0 0 000 000 0 • 00 00 0 0 0 0 0 •00 00 0· 00 00 00

	Slouč.	Ρϊ. δ·	R¹	R²	R⁴	R⁶	Fyzik data
	338	Blf	och₃	Ά	ch₃		[B-[3a(E),3a a]]
	339	Blf	OCH₃	o Άλ	ch₃		[B-[3a(E),3a a]]
				M
	340	Blf	OCHj	0C(=0)NHC₂H_s	ch₃		[B-[3a(E),3a a])
	341	Blf	och₃	OC₂H₅N(CH₃)₂	ch₃		[B-[3a(E),3a a]]
	342 ,	Blf	och₃	och₂oc₂h₄och₃	ch₃		[B-[3a(E),3a a]]
	343	Blf· t	och₃	OC(=O)OCH₃	ch₃		[B-[3a(E),3a a])
	344	Blf	och₃	och₂ch=ch₂	ch₃		[B-[3a(E),3a a]]
	345	Blf	och₃	och₂ch₂oh	CH₃		[B-[3ct(E),3a a]]
							HC1(1:2)
	346	Blf	och₃	oso₂-ch₃	ch₃		(B-[3a(E),3a a]]
	348	Blf	och₃	H	ch₃		[3a(E),3a a]]
	349	Blf	och₃	fenyll	ch₃		[3a(E),3a a]]
-	350	Blf	OCH-i	SCHí	CH·,		f3afE1.3a all
							trifluoracetát ,
-							.......-0A.

«4 ► 44 44 444 4 «·4 «4 « • · 4 4« « • ··· «44 4 • 4 4 4 4 4 •4 44 44 .zuiOÚ /

Tabulka 2B a

Slouč.	Př. č.	R⁷·	R¹	R²	R⁴	R⁶	Fyzik data
210	B2a	H	H	H	H		[3a(E),3a a]
234	B2a	H	H	H	ch₃		[3a(E),3a a]
256	Bla/Blb	H	och₃	och₃	H		[3a(E),3aa]
351	Bla/Blb	H	och₃	och₃	H	b-F	[3a(E),3a a]
352	Bla/Blb	H	och₃	och₃	H	b-F	[A-[3a(E),3a a]]
353	Bla/Blb	H	och₃	och₃	H	b-F	[B-[3<X(E),3a ct]]
354	Bla/Blb	H	och₃	. och₃	H	c-F	[3a(E),3aa]
258	Bla/Blb	H	och₃	och₃	H		[3a(E),3a a]
12	B3b	H	och₃	och₃	ch₃		[Á-[3a(E),3a a]]
253	B3b	H	očh₃	och₃	ch₃		[B-[3a(E),3a a]]
11	B3a	H	och₃	och₃	ch₃		[3a(E),3a a]
223	B16	H	och₃	och₃	H		[3a(E),3a a]
261	Bif	H	H	och₃	ch₃		[3a(E),3aa]
228	B2b	ch₃	H	H	H		(3a(E),3a a]
252	B3a	CHj	' OCH₃	uCH₃	CHj		[3®CE)^aTq-
259	Bla/Blb	benzyl	H	och₃	ch₃		[3a(E),3a a]
222	B16	C(=O)CF₃	och₃	och₃	H		[3a(E),3a a]
224	B2b	C(=O)CF₃	H	H	H		[3a(E),3a a]
225	B2b	C(=O)CH₃	H	H	H		[3a(E),3a a]
226	B2b	0 it 'OCjHj	H	H	H		[3a(E),3a a)
227	B2b	s ' 'nHC₂H<	H	H	H		[3a(E),3a a]

• 44' ¢+ ·'*·♦' « 4 · 4 4 ·· 4 4 4 4 '4444’

Tabulka 2C

Sloučí	Př. č.	R¹	R²	R⁴ '	Fyzik data
220	B16	H	och₃	H	[3a(E),3a a]; ,HC1(1:2)
218	B5a	H	H	H	(3a(E),3a a]

··* 9 9

9 • 9 ·· ·· ·»<< • · • 9 • «

• 9 9 9

9 9 · • * · · 9 9

9 9

9 9 9 ··

9 9 • 99

9 9 « • · · »

99

·' · · »* ’ ' 4* ' · ♦>· 9'*·' 999 9’ ·· · ·«···· · • ··> « · · · · · « • 9 · 9 * · 999 9 9 9 9

999 99 9 9999 ♦ ·· 9« 99 99 99 99

Slouč	Př. č.	R¹	R²	R³	Fyzik data
376	Bif	och₃	OCHj		[B-[3a(E),3a a]]
377	Bif	OCHj	och₃		[B-[3a(E),3a a]]
378	Bif	OCH₃	och₃		[B-[3a(E),3a a]]

Tabulka 3B

* ·' · ·* -	• “ ♦·*' ···	' ·« '	··<♦
• ·	• · · ·	» 4	«
• ···	• * · ·	• ·	9

• · ·	4 · >	4 ·	9 9
*· ·«	·» ·«	99	99

«'· 44 ··· • · • 4 • 4 »4 • 4 • 4

4

4« • 4444'

4 • 4 • 4

4 4

44 υ/

Tabulka 3C

1-] SIouč.	— Př. č. .	R¹	R²	R³	Fyzik data
28	B16	H	och₃		cis;HCl(l:2)

Tabulka 4

	— Slouč. nr.	— Př. č. ·	R¹	R³	Fyzik data
277 278	Bia/Blb Bla/Blb	0 □	'OO	cis; .HC1(1:2) [3<x(E),3a a]; ,HCI(1:2)
-	279	Bla/Blb	2H₂		(3a(E),3a a]

• ·· ·· ·· ·· ···· ··· ······ · • ··· · · · · · · · • · · · · · ··· * · · · • · · ·· · ·*·· ··« ·* ·· ·· «« ··

Tabulka 5 (CH₂)

'0' '0'

C. Farmakologické příklady

Příklad Cl: Vazebné experimenty pro podtypy ct₂-adrenergního receptorů a pro 5—HT transportér

Úvod

Interakce sloučeniny vzorce (I) s ct₂-receptory a h5-HTtransportéry se.hodnotí v in vitro radioligandových vazebných pokusech. Obecně, nízké koncentrace radioaktivně značeného ligandu s vysokou vazebnou afinitou pro konkrétní receptor nebo transportér se inkubují se vzorkem tkáně bohaté na dané receptory nebo transportéry nebo s přípravkem buněk exprimujících klonované lidské receptory v pufrovaném mediu. Během inkubace se radioaktivní ligand naváže na receptor nebo transportér. Když se dosáhne rovnováhy vazby, tak se radioaktivita navázaná na receptor separuje od nenavázané radioaktivity a odečte se aktivita navázaná na receptor nebo transportér. Interakce testovaných sloučenin • · • · • · ····· · • · · · • ·· ·· ♦« s receptorem se hodnotí v pokusech s kompetiční vazbou.

Různé koncentrace testované sloučeniny se přidávají do inkubační směsi obsahující receptor nebo transportér a rádioligand. Testovaná sloučenina se v závislosti na své vazebné afinitě a koncentraci váže na radioligand.

Radioligand použitý pro vazbu na hct_2A, ha_2B a ha_2c receptor byl ·[³H]-raulwolscin a pro h5-HT transportér [³H] paroxetin.

Buněčná kultura a membránové přípravky

CHO buňky, stabilně transfektované cDNA pro lidské adrenergní -a_2A, ^-cc₂b nebo -a_2c receptory se kultivovaly v Dulbeccově Modifikovaném Eaglově Mediu (DMEM)/živné směsi Ham's F12 (poměr 1:1)(Gibco, Gent-Belgium) doplněné 10% teplem inaktivovaným fetálním telecím sérem (Life Technologies, Merelbeke-Belgium) a antibiotiky (100 IU/ml penicilinu G, 100 μς/ιηΐ streptomycin-sulfátu, 110 μ9/ιη1 kyseliny pyrohroznové a 100 μς/ιηΐ L-glutaminu) . Jeden den před odběrem se buňky indukovaly 5 mM natrium-butyrátu. Po dosažení 80-90% konfluence se buňky odebraly ve fosfátem pufrovaném salinickém roztoku bez Ca²⁺ a Mg²⁺ a získaly se odstředěním při 1500 x g po dobu 10 min. · Buňky se homogenizovaly v Tris-HCl 50 mM za použití Ultraturrax homogenizačního přístroje a odstředily se během 10 minut při 23500 x g. Peleta se promyla jednou resuspendováním a rehomogenizací a finální peleta se resuspendovala v TrisHCl, rozdělila se do 1 ml podílů a uskladnila se při —70°C.

Vazebné pokusy pro podtypy a₂-adrenergních receptorů

Membrány se roztavily a rehomogenizovaly se v inkubačním pufru (glycylglycin 25 mM, pH 8,0). V celkovém objemu 500 μΐ se 2-10 μg proteinu inkubovalo s [³H]raulwolscinem (NET-722)

(New England Nuclear, USA) (konečná koncentrace 1 nM) s nebo bez kompetitoru po dobu 60 minut při 25°C a potom se provedla rychlá filtrace přes GF/B filtr za použiti Filtermate 196 přístroje (Packard, Meriden, CT). Filtry se důkladně promylý ledově chladným promývacím pufrem (Tris-HCl 50 mM pH 7,4). Radioaktivita navázaná na filtr se určila spočítáním scintilací na Topcount (Packard, Meriden, CT) a výsledný se vyjádřily v pulsech za minutu (cpm).

Nespecifická vazba se určila za přítomnosti 1 μΜ oxymetazolinu pro ha_2A- a ha_2B receptory a 1 pM spiroxatrinu pro ha_2c receptory.

Vazebné pokusy pro 5—HT transportér

Lidské trombocytární membrány (Oceanix Biosciences Corporation, Hanover, MD, USA) se roztavily, naředily se v pufru (Tris-HCl 50 mM, 120 mM NaCl a 5 mM KC1) a rychle (max 3 s) se homogenizovaly v Ultraturrax homogenizačním přístroji. V celkovém objemu 250 μΐ se 50-100 μς proteinu inkubovalo s [³H]paroxetinem (NET-869) (New England Nuclear, USA) (konečná koncentrace 0,5 nM) s nebo bez kompetitoru po dobu 60 min při 25 °C. Inkubace se ukončila rychlou filtrací inkubační směsi přes GF/B filtry, předem zvlhčené 0', 1% polyethyleneaminem, za použití Filtermatel96 přístroje (Packard, Meriden, CT). Filtry se důkladně promyly ledově chladným pufrem a radioaktivita na filtrech se odečetla na Topcount kapalinovém scintilačním čítači (Packard, Meriden, CT). Data se vyjádřila' jako cpm. Imipramin (v konečné koncentraci 1 μΜ) se použil pro stanovení nespecifické vazby.

Analýza dat a výsledky

Data z testů za přítomnosti sloučeniny se vypočetla jako • · • · • · · · • ·

• · · · · • · · · · • · · · · • · · · ··· · · · · · · procento celkové vazby změřené za absence testované sloučeniny. Automaticky se generovaly inhibiční křivky, znázorňující závislost celkové vazby na log 'hodnotě koncentrace testované sloučeniny, a sigmoidální inhibiční křivky se konstruovaly za použití lineární regrese. Hodnoty IC₅₀ testovaných sloučenin se určily z jednotlivých křivek.

Všechny sloučeniny vzorce (I) produkovaly inhibicí alespoň na ha_2A místě (ale často také na hct_2B a ha₂c místech) a simultánně na 5-HT transportéru, kde tato inhibice byla více než 50% (pICso) při koncentracích mezi 10^_s M a 10~⁹ M a byla závislá na koncentraci. Pro vybrané sloučeniny, které pokrývají většinu různých provedení vzorce (I), jsou výsledky testů in vitro uvedeny v tabulce 6.

• · · · • · · · ···· · · · · • · · · · · · · · • · · · · · ··· ·· ·· ··

Tabulka 6: Některé výsledky pokusů in vitro (hodnoty pIC₅₀) . n.d.: nebylo stanoveno.

Sloučenina č	^h«2A	^ha2B	^h«2C	5HTT
1	8,20	8,49	8,96	8,29
3	8,63	8,59	8,73	7,79
8	8,34	8,14	7,92	7,75
9	7_t99	8,33	6,97	8,80
14	6,37	6,19	6,58	6,44
15	7,90	7,84	7,94	7,77
16	8,27	8,21	8,17	8,43
21	8,79	7,73	8,98	8,92
24	7,86	8,41	8,54	8,26
26	6_f28	6,99	6,61	6,17
27	8,39	8,22	8,81	7,74
28	8,11	7,74	7,15	8,36
29	6,33	6,66	6,72	8,26
31	6,10	6,20	6_ř00	6,30
32	7,90	7,84	7,94	7,77
41	7,80	8,30	7,90	8,50
		7 10		o sn
	OfVy	‘i^U
45	7,24	7,15	7,36	7,16
47	6,18	6,35	6,07	7,30
48	7,88	8,24	8_P36	6,90
54	7,72	7,42	7,44	7,38
65	7,88	7,74	8,29	8,29
72	7,33	6,75	7,18	8,,16
76	7,14	7,05	7,60	8,80
79	6,00	6,00	6_z00	6,00
81	6,00	6,00	6,00	6,84
90	6,71	6,00	7,04	6,52

• · · · ·

97.

97	6.00	6,00	6,00	6.45
110	7,16	6,95	7,46	7,52
125	7,25	6,85	7,46	7,87
127	6,85	6,91	7,59	7,20
129	7,91	8,01	8,17	8,55
143	7,11	7,60	7,63	7,62
154	7,27	7,39	7,06	7,05
157	7,87	7,28	7,13	7,48
181	6,55	6,11	6/49	7,63
185	6,84	7,11	7,53	7,90
195	8,34	8,80	8,68	8,70
196	7,84	8,44	8,09	8/41
199	8,92	9,00	8,78	7,89
201	8,36	8,49	8^34	8/12
217	8,78	8,21	7,85	7,27
218	6,74	6,88	5,90	6,34
220	8,12	7,85	7,36	7,18
224	6,96	7,66	7,13	7,31
226	00	7,09	6,96	8,08
233	8,33	8,20	7,94	7,36
234	8,57	8,88	oo	7,71
237	V¹.	8,90	8,93	7,94
238	8,56	8,62	8,59	8,07
239	9,31	8,62	9,54	7,85
241	7,78	8,13	8,20	7,01
242	9.49 1	9,44	8,97	7,95
243	8,27	7,77	8,29	6,75
244	8,42	8,13	8,87	6_ř90
246	7,55	7,90	7,86	7,50
250	8,40	8,17	8,48	7,09
251	8,43	8,31	8,26	6,89

98·· ’ ·· ' ’ ·'···' • · · · · · 0 • · · 0 · · · • ······ · 0 • · · 0 · · · • · · · 0· ··

253	8,24	7,94	7,98	6.60
257	7,52	8,37	8,65	7,46
260	8,61	8,21	8,59	7,22
265	8,46	7,68	7,56	7,83
266	7,84	7,80	7,45	8,88
267	Ol 00	7,90	8,55	8,30
268	9,00	8,26	8,05	8,24
271	8,41	7,86	7,37	8,53
272	6,50	7,57	6,87	8,32
273	8,11	7,68	7,51	7,88
277	8,61	8,10	7,77	6,97
278	8,49	8,14	8,16	6,61
279	8,45	8,03	8,24	7,45
280	7,04	6,35	M²	8,09
281	7,Q5	7,19	7,31	7,25 ·
282	7,66	7,26	7,64	8,06
283	7,00	7,33	7,13	8,89
285	6,22	6,24	6,44	6,59
291	6,07	6,00	6,00	6,00
296	6,12	6,39	6,14	6_f06
300	6,46	6,03	6,20	6,14
304	7,71	7,23	7,19	W.......
309	7,30	n.d.	7,23	6,41
310	6,67	n.d.	7/19	6^.06
312	8,08	n.d.	8,20	7,62
314	7,95	8,16	8,19	8/)6
316	7,98	6,76	6,92	6_?39
320	8_Z23	7,70	8,17	V⁹
323	8,21	n.d.	8,02	7^82
329	7,70	7,56	7,74	7,48
332	8_Z35	n.d.	9,22	7,23
333	8,32	8,42	8,33	7_Z52

• ·· ·

334	8,57	n.d.	8,64	7,58
337	7,68	n.d.	7,88	7,88
340	9,00	n.d.	8,42	7,64
341	8,44	n.d.	8,91	8,66
342	8,07	n.d.	9,79	7,76
343	8,63	n.d.	8,91	7,43
344	8,45	n.d.	8,68	8,00
346	8,65	n.d.	8,91	8,37
348	8,92	n.d.	8,88	7,75
350	8,39	n.d.	8,68	7,69
351	7,95	8,16	8,19	8,06
355	8,29	n.d.	8,15	7,87
358	8,83	n.d.	8,49	. 7,43
359	8,10	n.d.	8,46	7,35
361	7,90	n.d.	8,51	8,38
366	7,89	n.d.	• 8,48	7,94
379	7,56	7,71	7,39	7,46
380	7,78	8,35	7,99	7,63

Příklad C2-: Určení antagonismu pro a₂ receptor a inhibice zpětného vychytávání serotoninu (5-HT) in vivo

A. Medetomidinový test

Nástup a konec medetomidinem (0,10 mg/kg, i.v.) indukované ztráty vzpřimování se zaznamenával u samců Wiga krys, kteří byli na lačno přes noc (200-250 g). Intenzita ztráty vzpřimování se skórovala následujícím způsobem: 0 = normální chování, 1 = mírná ataxie, 2 = výraznější ataxie, 3 = ztráta vzpřimování na dobu <5 min, 4 = ztráta vzpřimování na dobu > 5 mm. Za standardních podmínek se podala testovaná sloučenina nebo rozpouštědlo (s.c. nebo p.o.) 1 hodinu před medetomidinem. Kriteria pro antagonismus indukovaný lékem byla: (1) antagonismus ztráty vzpřimování: trvání = 0 min • · ···· • · ·

100 (1,4% falešně pozitivních kontrol; n = 74) (2) reverse ataxie: skóre < 2 (0% falešně pozitivních). Kriteria pro lékem lékem indukovanou potenciaci: ztráta vzpřimovacího reflexu na dobu delší než 120 min (0% falešně pozitivních). Centrálně působící antagonisté ct2~adrenergního receptoru nebo činidla stimulující chování antagonizují ztrátu vzpřimování; sedativní sloučeniny mohou způsobit prodloužení účinku.

Byla provedena následující pozorování: nástup ztráty vzpřimování (min), konec ztráty vzpřimování (min) a intenzita ztráty vzpřimování (skóre 0-4). Pozorování byla provedena 1 hodinu po s.c. (roztoky) nebo p.o. (suspenze) podání, v příslušném pořadí. Počáteční dávka byla 10 mg/kg (Odkazy: Berger, U.V., Grzanna, R., Molliver, M.E., Exp. . Neurol. 103, 111-115 (1989), Fuller, R.W., Perry, K.W., Molloy, B.B.. Eur. J. Pharmacol. 33, 119-124 (1975) a Lassen, B.J., Psychopharmacol. 57, 15 1-153 (1978)).

B. pCA-test

Použily se samci Wiga krys (tělesná hmotnost: 200±20 g). Jednu hodinu po podání testované sloučeniny nebo rozpouštědla se roztok pCA injikoval podkožně (5 mg/kg; 10 ml/kg). 45 minut po pCA injekci se se počítaly záškuby hlavy (HTW) a excitace (EXC) se skórovala v průběhu tří následných 5 minutových intervalů (začínajících v 45, 50 a 55 minutě po podání pCA. Skóre bylo určeno zkušeným pozorovatelem podle stupnice: 0 = nepřítomné nebo pochybné, 1 = přítomné, 2 = výrazné, 3 = maximální. Pro statistickou analýzu se záškuby hlavy pozorované během 15 minutové pozorovací doby sečetly. Pro jiný fenomén se použil medián tří 5-minutových intervalů.

·« «· ·· ···· • · · · · · · • · · · » · ·

101

Standardní pozorování se provedla 1 hodinu po s.c. nebo p.o. podání. Výchozí dávka byla obvykle 10 mg/kg. Dávky byly nejprve podány 2 zvířatům. Když obě zvířata jevila aktivitu alespoň v jednom pozorování, byla sloučenina považována za aktivní a testování se opakovalo při 4-krát nižší dávce.

Když byla aktivita přítomná pouze u jednoho ze dvou zvířat, tak se provedl test na dalším zvířeti. Když byla u tohoto dalšího zvířete.aktivita přítomná, tak se tato sloučenina také považovala za aktivní a testování se opakovalo při 4krát nižší, dávce. Ve všech dalších případech se sloučenina považovala za inaktivní při daném způsobu podání-dávce-době podání (Odkazy: Janssen, P.A.J., Niemegeers, C.J.E.,

Awouters, F., Schellekens, K.H.L., Megens, A.A.H.P., Meert, T.FJ. Pharmacol. Exp. Therap. 244, 685-693 (1988)).

Výsledky

Velké množství sloučenin podle předkládaného vynálezu vykazovalo centrální aktivitu (minimální efektivní dávku) jak v medetomidinovém testu, tak v pCA-testu, menší nebo rovnu 10 mg/kg.

Příklad C3.: [³⁵S]GTPyS vazebný test

Membrány CHO buněčné linie exprimující hoc_2A adrenoceptor se roztavily a rehomogenizovaly se v 20 mM Hepes pufru. Inkubační medium obsahovalo: 20 mM Hepes pufr, pH 7,5, 1 μΜ GDP, 3 mM MgCl₂, 100 mM NaCl, 0,25 nM [³⁵S]GTPyS a 10 pg proteinu na jakmu 96-jamkové plotny. Antagonisté a referenční agonista noradrenalin (3 μΜ) se přidaly 20 minut před [³⁵S]GTPyS. Inkubace (20 minut, 37°C) se ukončila rychlou filtrací přes GF/B filtry a vazba se kvantifikovala kapalinovou scintilací.

• · • · * · • · ·· ·· ·· • · ·· · • · · · · * · • · · · · «♦· • · · · · ·· ·· ··

102

Výsledky

Žádná ze sloučenin podle předkládaného vynálezu hodnocené v GTPyS vazebném testu nevykazovala významné zvýšení vazby [³⁵S] GTPyS na hct_2A receptor do 10 μΜ. Všechny sloučeniny hodnocené v testu byly schopné inhibovat noradrenalinemindukované zvýšení vazby [³⁵S] GTPyS, což ukazuje jejich antagonistické chování na tomto receptoru.

Claims

Patentové nároky • * ··· · ·♦ ·* -• · · · · · · • · ♦ · · · · • 9 949 9 9 · · • · · 9 4 9 9

44 ·· ·♦ ··

Λ&νΐ ~ Η 7C~ její farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami nebo bázemi, její stereochemicky isomerické formy a ,N-oxidové formy, kde:

X je CH₂, N-R⁷,'S nebo O;

R⁷ je vybrán ze skupiny zahrnující vodík, alkyl, fenyl, fenylalkyl, alkylkarbonyl, alkyloxykarbonyl a mono- a dialkylaminokarbonyl, kde fenylové a alkylové skupiny jsou volitelně substituované jedním nebo více halogenovými atomy;

R¹ a R² jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny zahrnující vodík, hydroxy, kyano, halogen, OSO₂H, OSO₂CH₃, fenyl, fenylalkyl, alkyloxy, alkyloxyalkyloxy, alkyloxyalkyloxyalkyloxy, tetrahydrofuranyloxy, alkylkarbonyloxy, alkylthio, alkyloxyalkylkarbonyloxy, pyridinylkarbonyloxy, alkylkarbonyloxyalkyloxy, alkyloxykarbonyloxy, alkenyloxy, alkenylkarbonyloxy a monoand dialkylaminoalkyloxy, kde alkylové a arylové radikály jsou volitelně substituované jedním nebo více hydroxy skupinami nebo halogenovými atomy nebo amino skupinami; nebo

R¹ a R² mohou dohromady tvořit bivalentní radikál -R¹-R²vybraný ze skupiny zahrnující -CH₂-CH₂-O-, -O-CH₂-CH₂-, —O-CH₂—O—, -CH₂-O-CH₂- a -O-CH₂-CH₂-O-;

a a b jsou centra asymetrie;

(CH₂) _m je přímý uhlovodíkový řetězec tvořený m atomy uhlíku, kde m je celé číslo od 1 do 4;

Pír je volitelně substituovaný radikál vzorce (Ha), (IIB) nebo (IIC)

4« 4444

444 4 4 4 4 4 • 444 4 444 4 4

104

Ν'

N (R®)n (b) <Ř⁸)n (a) (H)

4 4

4 4 ·

44 44 kde:

každý R⁸ je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující vodík, hydroxy, amino, nitro, kyan, halogen a alkyl;

n je celé číslo od 1 do 5;

R⁹ je vybrán ze skupiny zahrnující vodík, alkyl a formyl;

R³ je volitelně substituovaný aromatický homocyklický nebo heterocyklický kruhový systém dohromady s volitelně substituovaným a částečně nebo zcela hydrogenovaný uhlovodíkový řetězec délky 1 až 6 atomů, kde uvedený kruhový systém je navázán na Pir radikál a může obsahovat jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny zahrnující 0, N a S.
2. Sloučenina podle nároku 1, (lila), (Illb) a (IIIc) kde R³ je radikál vzorce (a) (b) (c) kde:

d je jednoduchá vazba, když Z je bivalentní radikál vybraný ze skupiny zahrnující -CH₂-, -C(=Ó)-, -CH(OH)-, -C(=N-OH)-, • · • ·· · ·· · · · • ·

105 —CH(alkyl)-, -0-, -S-, -S(=0), -NH- a —SH-; nebo d je dvojná vazba a Z je trivalentní radikál vzorce =CH- nebo =C(alkyl)-;

A je 5-nebo 6-členný aromatický homocyklický nebo heterocyklický kruh vybraný ze skupiny zahrnující fenyl, pyranyl, pyridyl, pyrazinyl, pyriiŘidinyl, pyridazinyl, thienyl, isothiazolyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, furanyl, oxadiazolyi a isoxazolyl;

p je celé číslo od 0 do 4; q je celé číslo od 0 do 7;

R⁴ je vybrán ze skupiny zahrnující vodík, alkyl, fenyl, bifenyl, naftyl, halogen a kyan, kde alkylové a arylové radikály jsou volitelně substituované jedním nebo více hydroxy skupinami nebo halogenovými atomy nebo amino skupinami;

R⁵ je stejný jako R⁴; nebo

R⁴ a R⁵ mohou dohromady tvořit bivalentní radikál -R⁴-R⁵vybraný ze skupiny zahrnující -CH₂-, =CH-, -CH₂-CH₂-,

-CH=CH~, -0-, -NH-, N-, -S-, -CH₂N (-alkyl)-CH=N-, -CH₂O- a

-och₂-;

každý R⁶ je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující vodík, hydroxy, amino,.nitro, kyan, halogen, karboxyl, alkyl, fenyl, alkyloxy, fenyloxy, alkylkarbonyloxy, alkyloxyka.rbonyl, alkylthio, mono- a dialkylamino, alkylkarbonylamino, mono- a dialkylaminokarbonyl, mono- a dialkylaminokarbonyloxy, mono- a dialkylaminaalkyloxy, kde alkylové a arylové radikály jsou volitelně substituované jedním nebo více hydroxy skupinami nebo halogenovými atomy nebo amino skupinami; nebo dva sousední radikály R⁶ mohou tvořit bivalentní radikál —R⁶-R⁶- vybraný ze skupiny zahrnující -CH₂-CH₂-0-, — 0—CH₂—CH₂—, -0-CH₂-C( = 0)-, -0-CH2-O-, -CH2-O-CH2-,

-0-CH₂—CH2-0-, -CH=CH-ČH=CH-, -CH=CH-CH=N-, -CH=CH-N=CH-, -CH=N-CH=CH-,. -N=CH-CH=CH-, -CH₂-CH₂-CH₂-, -CH₂-. CH₂-C (=0) - a -CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-; a »* ·*·«

106 • · · · · · · • ··*«·· · · • · · · · * · #· *· ·· ··

R¹⁰ je vybrán ze skupiny zahrnující vodík, alkyl, fenylalkyl a fenyl.
3. Sloučenina podle nároku 2, kd e X=0 nebo NH; R¹ a R² jsou oba alkyloxy; m = 1; Pir je radikál vzorce (Ha) , kde R⁸ je vodík a n = 4; R³ je radikál vzorce (Illb), kde Z je =CH-> d je dvojná vazba, A je fenylový kruh, R⁴ je alkyl a R^{9 10} je vodík.
4. Sloučenina podle jakéhokoliv z nároků 1-3 pro použití jako léčivo.
5. Sloučenina, která je degradována in vivo za vzniku sloučeniny podle jakéhokoliv z nároků 1-3.
6. Farmaceutický prostředek vyznačující se t í 'm, že obsahuje farmaceuticky přijatelný nosič a' jako aktivní složku terapeuticky účinné množství sloučeniny podle jakéhokoliv z nároků 1-3 nebo sloučeniny podle nároku 5.
7. Způsob přípravy farmaceutického prostředku podle nároku 6 vyznačuj ící se tím, že zahrnuje smísení sloučeniny podle jakéhokoliv z nároků 1-3 nebo sloučeniny podle nároku 5 a farmaceuticky přijatelného nosiče.
8. Použití sloučeniny podle jakéhokoliv z nároků 1-3 nebo sloučeniny podle nároku 5 pro výrobu léčiva pro léčbu deprese, úzkosti a poruch tělesné hmotnosti.
9. Farmaceutický prostředek vyznačující se tím, že obsahuje farmaceuticky přijatelný nosič a jako aktivní složku terapeuticky účinné množství sloučeniny podle jakéhokoliv z nároků 1-3 nebo sloučeniny podle nároku 5 a jednu nebo více dalších sloučenin vybraných ze skupiny • 9 • 9 · *»· 9 9·« «9 ··

9 9 · ·

9 * · ·

9 9 9 · 4

107 zahrnující antidepresiva, anxiolytika a antipsychotika.
10. Použití farmaceutického prostředku podle nároku 9 pro výrobu léčiva pro zlepšení účinnosti a/nebo nástupu účinku při léčbě deprese, úzkosti nebo poruch tělesné hmotnosti.
11. Použití sloučeniny podle jakéhokoliv z nároků 1-3 nebo sloučeniny podle nároku 5 pro výrobu léku pro léčbu deprese, úzkosti nebo poruch tělesné hmotnosti, kde uvedená léčba zahrnuje simultánní nebo sekvenční podání sloučeniny podle jakéhokoliv z nároků 1-3 nebo sloučeniny podle nároku 5 a jedné nebo více dalších sloučenin vybraných ze skupiny zahrnující antidepresiva, anxiolytika a antipsychotika.
12. Použití jedné nebo více sloučenin vybraných ze skupiny zahrnující antidepresiva, anxiolytika a antipsychotika pro výrobu léčiva pro léčbu deprese, úzkosti nebo poruch tělesné hmotnosti, kde uvedená léčba zahrnuje simultáni nebo sekvenční podání jedné nebo více dalších sloučenin vybraných ze skupiny zahrnující antidepresiva, anxiolytika a antipsychotika a sloučeniny podle jakéhokoliv z nároků 1-3 nebo sloučeniny podle nároku 5.
13. Použití farmaceutického prostředku podle nároku 9 pro zlepšení účinnosti a/nebo nástupu účinku při léčbě deprese, úzkosti nebo poruch tělesné hmotnosti.
14. Způsob přípravy farmaceutického prostředku podle nároku 9 vyznačující se tím, že zahrnuje smísení sloučeniny podle jakéhokoliv z nároků 1-3 nebo sloučeniny podle nároku 5 a sloučeniny vybrané ze skupiny zahrnující antidepresiva, anxiolytika a antipsychotika a farmaceuticky přijatelného nosiče.

0 0

0 0

0 ·
15. Způsob přípravy sloučeniny podle jakéhokoliv z nároků 1

-3vyzna.čující se tím, že zahrnuje reakci sloučeniny vzorce (IV) se sloučeninou vzorce (V) nebo vzorce (VII).

108

00 ·· ** ρ »000 • 0 0 · · · ·

0 000 · 0 · · • 0 0 0 ·

0 00 ♦ · ··

0·00
16. ' Sloučenina obecného vzorce (IV) kde R¹, R², X a m jsou definovány ve vzorci (I) a L je odštěpiteiná skupina, s vyloučením kyseliny 3,3a,4,5tetrahydronafto[l, 2-c] isoxazol-3-octové.

(VIU) kde R¹, R², X, m, R⁸ a n' jsou stejné, jak jsou definovány pro vzorec (I).
18. Sloučenina podle nároku 16, kde L je vybrán ze skupiny zahrnující OSO2C6H4 (CH₃) , OSO₂CH₃, Cl, Br a I.